ES2230662T3 - Hexaoxido de arsenico (as4o6) para la utilizacion en la terapia del cancer y composiciones farmaceuticas que lo contienen. - Google Patents

Abstract

LA INVENCION SE REFIERE A LA IDENTIFICACION DEL HD-2, UNA SUBSTANCIA QUIMICA NATURAL QUE SE HA SEPARADO Y PURIFICADO DE UN PRODUCTO NATURAL, EL SINSUK, COMO HEXAOXIDO DE ARSENICO (AS4O6), LA INVENCION TAMBIEN SE REFIERE A UNA EFICACIA TERAPEUTICA COMO MEDICAMENTO ANTICANCERIGENO Y A UNA COMPOSICION FARMACEUTICA. EL HEXAOXIDO DE ARSENICO (AS4O6), UNA SUBSTANCIA QUIMICA NATURAL OBTENIDA DEL SINSUK DESPUES DE ELIMINAR LAS PROPIEDADES TOXICAS, TIENE UNA POTENTE EFICACIA ANTICANCERIGENA DEBIDO A SU CITOTOXICIDAD DIRECTA SOBRE LAS CELULAS TUMORALES Y SUPRIME LA FORMACION DE NUEVOS VASOS SANGUINEOS EN LAS MASAS TUMORALES, LO QUE DA COMO RESULTADO UNA CURACION COMPLETA DE LOS CANCERES MALIGNOS.

Description

Hexaóxido de arsénico (As_{4}O_{6}) para la utilización en la terapia del cáncer y composiciones farmacéuticas que lo contienen.

Campo de la invención

La presente invención se relaciona con la identificación de HD-2, una substancia química natural que fue separada y purificada a partir de un producto natural, el Sinsuk, como hexóxido arsénico (As_{4}O_{6}), y con su eficacia terapéutica como fármaco anticanceroso y su composición farmacéutica y, más concretamente, con los procedimientos de purificación de una substancia química natural (hexóxido de arsénico, As_{4}O_{6}) a partir del Sinsuk, eliminando al mismo tiempo la toxicidad, y con el nuevo efecto anticanceroso del As_{4}O_{6} y su composición farmacéutica por su citotoxicidad directa y supresión de la nueva angiogénesis en y alrededor de los sitios tumorales.

Antecedentes de la invención

En general, se dispone actualmente de diversos fármacos para la quimioterapia anticancerosa. Los agentes alquilantes, tales como la cisplatina y la ciclofosfamida, manifiestan su efecto anticanceroso formando enlaces covalentes con átomos de nitrógeno de los nucleótidos de ADN debido a su propiedad altamente electrofílica del sitio activo. Los antimetabolitos, tales como el 5-fluorouracilo, actúan inhibiendo las enzimas implicadas en la biosíntesis de ácidos nucleicos o insertándose en las estructuras del ADN o del ARN por sí mismos. Algunos antibióticos, tales como la adriamicina, actúan potentemente sobre el ADN para inhibir la función normal, lo que da lugar a la supresión del crecimiento del tumor. Pero todos estos agentes anticancerosos afectan no sólo a las células tumorales patológicas, sino también a las células sanas normales, especialmente a las células de la médula ósea o a los epitelios intestinales con alta velocidad de renovación, lo que causa graves complicaciones y toxicidad, tales como mielosupresión, alopecia, fallo renal, náusea y vómito, neurotoxicidad, etc.

Por otra parte, el arsénico ha sido conocido como carcinógeno ambiental potente, afectando con frecuencia a la piel y al pulmón. Se dice que el arsénico se une a la estructura sulfohidrilo de enzimas para inactivar blancos enzimáticos, para inhibir las reacciones de fosforilación y defosforilación, que son vitales para la regulación de las actividades enzimáticas, y para provocar anormalidades en los cromosomas. Por lo tanto, el arsénico ha sido estudiado principalmente desde el aspecto toxicológico, en relación con estas publicaciones hasta la fecha.

Pero, en el pasado, el arsénico ha sido utilizado como agente terapéutico tanto en la medicina Oriental como Occidental. Especialmente, en la medicina tradicional China, incluyendo la medicina Coreana, el arsénico ha sido prescrito durante mucho tiempo para tratar enfermedades fatales, por ejemplo para erradicar la energía maligna. En las literaturas médicas antiguas de Corea y China, se describe que el arsénico era prescrito como medicina por el nombre de Aungwhang en la página 1234 y por el nombre de Bisang en la página 1237 de la TonEuiBoGam (NamSaDang) o Enciclopedia de Medicina Oriental, donde se describe que el arsénico era prescrito sólo después de reducir su toxicidad, debido a su extrema toxicidad. También se sabía que el arsénico tenía actividad detoxificante frente a diversas substancias tóxicas. Por ejemplo, se usó arsénico en el tratamiento del choongak o vómito y en la erradicación de los espíritus y de la energía maligna. En una literatura antigua de la medicina China (BonChoKangMok (Enciclopedia de Hierbas en Medicina China), páginas 12-16 del vol. 9), se describen indicaciones y acciones farmacológicas del arsénico (por el nombre de whangwoong), donde se dice que el arsénico tiene la acción de purificar la sangre. Por lo tanto, se ha reconocido al arsénico como una medicina activa y se le ha utilizado durante mucho tiempo, pero, en Corea, se reconoce al arsénico como un agente químico posiblemente perjudicial, con características de los metales pesados, y, por consiguiente, su uso es bastante limitado. El arsénico posee algunas características de los metales pesados, aunque no pertenece al grupo de los metales pesados, y, por lo tanto, se le ha evitado en la producción de medicinas. La exposición al arsénico produce anemia, leucopenia y disfunción del riñón y del hígado y la exposición crónica puede tener un efecto carcinogénico.

En la medicina Occidental, se prescribieron los compuestos de arsénico para tratar diversas enfermedades, incluyendo el reumatismo, la sífilis, la psoriasis, etc. y se sabía que una dosis baja de compuestos de arsénico tenía un efecto beneficioso sobre funciones fisiológicas del cuerpo humano, incluyendo la estimulación de la hematopoyesis, lo que coincide con las descripciones de las literaturas antiguas de la medicina Oriental. Pero, en la medicina moderna, las indicaciones para los compuestos de arsénico son muy limitadas. Desde finales del siglo XIX hasta comienzos del siglo XX, se intentó tratar con compuestos de arsénico la leucemia crónica y, después de los años 50, el melarsoprol, un compuesto de arsénico prescrito para la tripanosomiasis Africana, es el único compuesto de arsénico en uso en el momento actual.

En base a estas propiedades farmacológicas del arsénico, se han hecho intentos recientes por desarrollar un nuevo fármaco anticanceroso y, actualmente, algunos estudios están progresando rápidamente en este campo. Después de la Revolución Cultural, China ha hecho considerables esfuerzos por estudiar la medicina tradicional usando las herramientas científicas de la medicina Occidental. Publicaron un informe en 1996, en colaboración con un equipo de investigación Francés, en el que se decía que un trióxido arsénico (As_{2}O_{3}) tenía un excelente efecto en el tratamiento de la leucemia promielocítica. Los investigadores de la medicina Occidental se maravillaron ante este resultado, ya que el trióxido de arsénico era especialmente efectivo en el tratamiento de pacientes con leucemia que habían sido resistentes a la quimioterapia convencional desde que se publicó este artículo y más científicos médicos del Hemisferio Occidental se interesaron en el posible efecto anticanceroso de los compuestos de arsénico. Estimulados por estos resultados, se han hecho considerables esfuerzos para integrar la Medicina Oriental tradicional y la medicina molecular moderna interpretando los resultados de la Medicina Oriental en términos de la quimioterapia anticancerosa moderna de corriente principal. Es extremadamente importante desarrollar nuevos agentes químicos que tengan eficacia anticancerosa efectiva sin efectos colaterales graves. La invención aquí descrita consiguió separar y purificar el ingrediente activo tratando una materia prima natural de arsénico, que había sido usada en la medicina Oriental, a través de múltiples procedimientos. Adicionalmente, un estudio clínico indicó que una composición farmacéutica de hexóxido de arsénico muestra una potente eficacia anticancerosa sin efectos colaterales obvios.

Resumen de la invención

En consecuencia, un primer objeto de la presente invención es proporcionar una substancia química natural, el hexóxido arsénico (As_{4}O_{6}), obtenida del Sinsuk, eliminando al mismo tiempo la toxicidad.

Otro objeto de esta invención es elucidar el mecanismo de acción de la eficacia anticancerosa de la substancia química natural obtenida del Sinsuk.

Otro objeto de la invención es describir el uso de la substancia química natural para la fabricación de una composición farmacéutica, una composición farmacéutica que la contiene, especialmente para la terapia anticancerosa.

Preferiblemente, el As_{4}O_{6} es separado y purificado a partir del Sinsuk.

Según un primer aspecto, la invención proporciona una composición farmacéutica que contiene, como uno de los principios activos, As_{4}O_{6}, preferiblemente separado y purificado a partir de Sinsuk, eventualmente en mezcla con un excipiente farmacéuticamente aceptable.

Según una realización particular de la composición farmacéutica, dicha composición contiene además ingredientes farmacéuticamente activos y, en particular ingredientes activos de la medicina oriental.

Según otra realización de la invención, dicha composición farmacéutica es formulada como composición anticancerosa.

Según una característica específica, dicha composición es formulada para administración oral, o para administración intravenosa.

Según otra realización de la invención, dicha composición es formulada como una composición para el tratamiento del cáncer maligno del útero, o como una composición para el tratamiento del cáncer maligno del pulmón, o como una composición para el tratamiento del cáncer maligno del seno maxilar, o como una composición para el tratamiento del cáncer maligno del riñón, o como una composición para el tratamiento del cáncer maligno de la vejiga de la orina.

Según una segunda realización, la invención se relaciona con un procedimiento para obtener As_{4}O_{6}, consistente en realizar la extracción con solventes polares del Sinsuk al menos una vez, separar el As_{4}O_{6} del solvente y recuperar el As_{4}O_{6} precipitado como una substancia blanca.

Según una realización de procedimiento ventajosa, dicho solvente para realizar la extracción es un alcohol, preferiblemente etanol, y dicho calentamiento es realizado hasta el reflujo de dicho alcohol.

Según otra realización ventajosa de la invención, dicho As_{4}O_{6} precipita añadiendo agua al alcohol tras la extracción del Sinsuk.

Según una realización preferida de procedimiento de la invención, dicho As_{4}O_{6} es además purificado para su detoxificación, en particular calentando dicho As_{4}O_{6} en presencia de sal, NaCl, preferiblemente durante un período de tiempo de más de una hora, y, después de enfriar, se recupera el As_{4}O_{6} detoxificado.

Preferiblemente, dicho calentamiento es realizado a una temperatura alta de detoxificación, preferiblemente en el rango de 600-1.100ºC, más preferiblemente de entre 900-1.100ºC, más preferiblemente a aproximadamente 1.000ºC, en presencia de sal, NaCl, durante más de una hora.

Según un tercer aspecto, la invención se relaciona con el uso de As_{4}O_{6} para la fabricación de una composición farmacéutica, en particular para el tratamiento del cáncer, preferiblemente para el tratamiento del cáncer de útero, de pulmón, de seno maxilar, de riñón o de vejiga de la orina.

Adicionalmente, las Figuras 1 a 62 constituyen una parte integral de la invención y son, por lo tanto, totalmente incorporadas en la presente descripción. Esto es, en particular, aplicable al contenido de la Figura 1.

Así, para conseguir estas ventajas según los fines de la presente invención, según es encarnada y ampliamente descrita, separamos y purificamos primeramente una substancia química natural, HD-2, por calentamiento repetido de Sinsuk que contiene arsénico para eliminar la toxicidad, seguido de análisis de la estructura. La substancia blanca obtenida por este procedimiento fue estudiada en células tumorales clónicas de ratones y de seres humanos para evaluar la eficacia anticancerosa de la substancia y ver si los efectos anticancerosos están causados por la muerte de las células tumorales por un mecanismo de apoptosis. Se evaluó la toxicidad del HD-2 tras administración aguda observando los síntomas clínicos de ratas tras una sola administración oral de una gran dosis y se evaluó la toxicidad del HD-2 tras la administración subaguda observando los síntomas clínicos de las ratas después de una lenta administración oral. Se inyectaron intravenosamente células tumorales clónicas, dirigidas a los pulmones, en ratones y se administró HD-2 oralmente o por vía intravenosa. Después se contó el número de masas tumorales metastáticas en los pulmones para evaluar el efecto inhibitorio de la substancia sobre la metástasis del cáncer. De forma similar, se inocularon intradérmicamente células de melanoma en ratones, seguido de administración oral de HD-2, después de lo cual se investigó el mecanismo anticanceroso del HD-2 contando el número de nuevos vasos sanguíneos formados en o alrededor de las masas tumorales. Se indujo el cáncer por inyección de carcinógeno en ratones y se midió la eficacia supresora de tumores en estos ratones tras la administración oral de HD-2. También estudiamos una composición farmacológica preparada mezclando diversas hierbas de la medicina China con hexóxido de arsénico, que fue administrado oralmente a pacientes de cáncer en fase terminal para evaluar la eficacia anticancerosa.

Resulta de lo anterior que la presente invención proporciona un agente anticanceroso de hexóxido arsénico (As_{4}O_{6}) de una substancia química natural y su composición farmacéutica, consistente en lo siguiente:

1) Separamos y purificamos una substancia química natural de color blanco, el HD-2, por calentamiento repetido de Sinsuk que contenía arsénico y arsénico de grado reactivo, seguido de análisis de la estructura para ver que se correspondía con hexóxido de arsénico, As_{4}O_{6}.

2) Se añadió una substancia química natural, As_{4}O_{6}, obtenida mediante este procedimiento, a medios de cultivo para el crecimiento de células tumorales clónicas de ratones y seres humanos, con objeto de evaluar la eficacia anticancerosa de la substancia.

3) Se estudió el mecanismo anticanceroso del As_{4}O_{6} para examinar si la eficacia anticancerosa era debida a muerte de las células tumorales por un mecanismo de apoptosis.

4) Se administraron diferentes cantidades de una substancia química natural, As_{4}O_{6}, de forma aguda por vía oral a ratas machos y hembras para examinar la toxicidad aguda del hexóxido de arsénico observando las complicaciones manifestadas.

5) Se administró lentamente por vía oral la misma cantidad de una substancia química natural, As_{4}O_{6}, a ratas machos y hembras para examinar la toxicidad subaguda de la invención observando las complicaciones manifestadas.

6) Se inyectaron células tumorales clónicas, dirigidas a los pulmones, por vía intravenosa a ratones y se administró una substancia química natural, As_{4}O_{6}, oralmente o por vía intravenosa. Se contó después el número de masas tumorales metastáticas que aparecían en los pulmones para evaluar el efecto inhibitorio de la substancia sobre la metástasis cancerosa.

7) De forma similar, se inocularon células de melanoma maligno intradérmicamente en ratones, seguido de administración oral de un agente anticanceroso natural, As_{4}O_{6}. Se estudió después el mecanismo anticanceroso midiendo el tamaño de las masas tumorales y contando el número de vasos sanguíneos formados de novo en y alrededor de las masas tumorales.

8) Se inyectó carcinógeno a ratones para inducir tumores malignos y se estudiaron los efectos anticancerosos de un agente anticanceroso natural, As_{4}O_{6}, midiendo la incidencia y el tamaño de tumores en hígado y pulmón.

9) También preparamos una composición farmacéutica añadiendo diversas hierbas de la medicina Oriental a un agente anticanceroso natural, As_{4}O_{6}, en formas diversas (tableta, cápsula y solución).

10) Se administraron tabletas preparadas como se ha descrito antes por vía oral a pacientes con cáncer en fase terminal, portadores de un cáncer maligno de útero, pulmón, seno maxilar, riñón o vejiga de la orina, para evaluar la eficacia terapéutica del As_{4}O_{6}. Se monitorizaron el tamaño de los tumores y los cursos clínicos usando tomografía computerizada (TC) e imagen por resonancia magnética (IRM).

Hay que entender que tanto la descripción general que antecede como la siguiente descripción detallada son ejemplares y explicativas y pretenden proporcionar una mayor explicación de la invención reivindicada.

Breve descripción de los dibujos adjuntos

Los dibujos adjuntos, que se incluyen para facilitar una mayor comprensión de la invención y se incorporan en esta memoria y constituyen una parte de ella, ilustran realizaciones de la invención y, junto con la descripción, sirven para explicar los principios de los dibujos.

En los dibujos:

La Figura 1 muestra procedimientos esquematizados para la separación y la purificación química del Sinsuk.

La Figura 2 muestra el modelo de estructura tridimensional del Sinsuk determinado por análisis de la estructura.

La Figura 3 muestra el curso temporal de la eficacia anticancerosa del Sinsuk (hexóxido arsénico, As_{4}O_{6}) in vitro.

La Figura 4 muestra el resultado de la electroforesis en gel de agarosa, que indica que el efecto anticanceroso de una substancia química natural, As_{4}O_{6}, es debido a un efecto de apoptosis;

La Figura 5 muestra el efecto inhibitorio del As_{4}O_{6} sobre la neovascularización en masas tumorales.

La Figura 6 muestra que el As_{4}O_{6} reduce la incidencia de hepatomas inducidos por un carcinógeno (NDEA).

La Figura 7 muestra que el As_{4}O_{6} reduce la incidencia de cáncer de pulmón inducido por un carcinógeno (NDEA).

La Figura 8 es un barrido de TC (Tomografía Computerizada) que muestra múltiples masas tumorales en el útero.

La Figura 9 es un barrido de TC similar al de la Figura 8, que indica múltiple crecimiento tumoral en el útero.

La Figura 10 es un barrido de TC de un útero aumentado debido a la invasión de células tumorales en la fase terminal del carcinoma de útero.

La Figura 11 es otro barrido de TC de la misma paciente tomado en un ángulo diferente.

La Figura 12 es un barrido de TC de un útero en la fase terminal de un carcinoma uterino, que muestra varias sombras de aire que reflejan perforaciones en la pared uterina. Esto indica la desaparición de la masa tumoral tras la administración de As_{4}O_{6}.

La Figura 13 es un barrido de TC de una paciente con carcinoma de útero en fase terminal, que muestra hallazgos similares a los de la Figura 12.

La Figura 14 es un barrido de TC de una paciente con carcinoma uterino en fase terminal, que manifiesta hallazgos similares a los de la Figura 13.

La Figura 15 es un barrido de TC de una paciente con carcinoma uterino en fase terminal, que manifiesta hallazgos similares a los de la Figura 14.

La Figura 16 es un barrido de IRM (Imagen por Resonancia Magnética) de un útero lleno de materia fecal que ha salido del recto a través de la abertura de la perforación uterina, que se formó después de la desaparición de la masa cancerosa.

La Figura 17 es una imagen de IRM que manifiesta hallazgos similares a los de la Figura 16.

La Figura 18 es una imagen de IRM de un útero tras la curación de la masa tumoral.

La Figura 19 es una imagen de IRM de una paciente con carcinoma uterino en fase terminal, que manifiesta hallazgos similares a los de la Figura 18.

La Figura 20 es una imagen de un paciente con cáncer de pulmón en fase terminal, que muestra los fluidos pleurales que llenan la cavidad pleural derecha causados por cáncer del pulmón derecho.

La Figura 21 es un barrido de TC de un paciente con cáncer de pulmón en fase terminal, que muestra una masa tumoral irregular en el pulmón derecho.

La Figura 22 es un barrido de un paciente con cáncer pulmonar en fase terminal, que muestra nódulos linfáticos aumentados en el mediastino.

La Figura 23 es un barrido de TC del mismo paciente que en la Figura 22.

La Figura 24 es un barrido de TC del mismo paciente que en la Figura 23.

La Figura 25 es un barrido de TC de un paciente con cáncer de pulmón en fase terminal, que indica que el fluido pleural de la cavidad pleural derecha comenzó a reducirse de volumen después de la administración de la composición farmacéutica de As_{4}O_{6}.

La Figura 26 es un barrido de TC de un paciente con cáncer de pulmón en fase terminal, que muestra que el fluido pleural de la cavidad pleural derecha se había absorbido por completo tras la administración de la composición farmacéutica de As_{4}O_{6}.

La Figura 27 es un barrido de TC de un paciente con cáncer de pulmón en fase terminal, que muestra la reducción del nódulo linfático hasta su tamaño normal tras la administración de la composición farmacéutica de As_{4}O_{6}.

La Figura 28 es un barrido de TC que manifiesta los mismos hallazgos que en la Figura 27.

La Figura 29 es un barrido de TC que manifiesta los mismos hallazgos que en la Figura 28.

La Figura 30 es un barrido de TC que manifiesta los mismos hallazgos que en la Figura 29.

La Figura 31 es un barrido de TC de un paciente con cáncer que implica al seno maxilar en fase terminal, que muestra que el seno maxilar derecho estaba lleno de masas tumorales.

La Figura 32 es un barrido de CT del mismo paciente que en la figura 31, tomado desde un ángulo diferente.

La Figura 33 es un barrido de TC de un paciente con un cáncer que implica al seno maxilar, el cual estaba siendo tratado para el cáncer en un hospital.

La Figura 34 es un barrido de TC del mismo paciente que en la Figura 33.

La Figura 35 es un barrido de TC de un paciente con un cáncer que implicaba al seno maxilar en fase terminal, que muestra que las masas cancerosas en la cavidad nasal y el seno maxilar derechos se habían curado tras la administración de la composición farmacéutica de As_{4}O_{6}.

La Figura 36 es un barrido de TC que manifiesta los mismos hallazgos que en la Figura 35.

La Figura 37 es un barrido de TC que manifiesta los mismos hallazgos que en la Figura 36.

La Figura 38 es un barrido de TC que manifiesta los mismos hallazgos que en la Figura 37.

La Figura 39 es un PIV (Pielograma Intravenoso) de un paciente con cáncer de riñón en fase terminal, que muestra una masa tumoral localizada en la pelvis renal izquierda.

La Figura 40 es un PIV del mismo paciente que en la Figura 39.

La Figura 41 es un PIV de un paciente con cáncer de riñón en fase terminal, que muestra una masa tumoral localizada en la pelvis renal izquierda que crece hacia la arteria renal.

La Figura 42 son barridos de TC tomados desde ángulos diferentes de ambos riñones de un paciente con cáncer de riñón en fase terminal.

La Figura 43 son barridos de TC de un paciente con carcinoma renal en fase terminal, que muestra los mismos hallazgos que en la Figura 42.

La Figura 44 son barridos de TC de un paciente con carcinoma renal en fase terminal, que demuestra los mismos hallazgos que en la Figura 43.

La Figura 45 es un barrido de TC de un paciente con carcinoma renal en fase terminal, que muestra la reducción de una masa cancerosa tras la administración de la composición farmacéutica de As_{4}O_{6}.

La Figura 46 es un barrido de TC de un paciente con carcinoma renal en fase terminal, que demuestra los mismos hallazgos que en la Figura 45.

La Figura 47 es un barrido de TC de un paciente con carcinoma renal en fase terminal, que demuestra los mismos hallazgos que en la Figura 46.

La Figura 48 es un barrido de TC de un paciente con carcinoma renal en fase terminal, que demuestra los mismos hallazgos que en la Figura 47.

La Figura 49 es un barrido de TC de un paciente con carcinoma renal en fase terminal, que muestra una marcada reducción de una masa cancerosa en el riñón izquierdo tras la administración de la composición farmacéutica de As_{4}O_{6}.

La Figura 50 es un barrido de TC de un paciente con carcinoma renal en fase terminal, que muestra una mayor reducción de la masa tumoral que en la Figura 49.

La Figura 51 es un barrido de TC de un paciente con carcinoma renal en fase terminal, que muestra que un material de contraste de sombra blanca llenaba el espacio previamente ocupado por una masa tumoral en el riñón izquierdo.

La Figura 52 es un barrido de TC de un paciente con carcinoma renal en fase terminal, que muestra pequeñas masas tumorales que permanecen en el riñón izquierdo y en la pelvis renal izquierda.

La Figura 53 es un barrido de TC de un paciente con cáncer de vejiga de la orina en fase terminal, que demuestra masas tumorales en sombra obscura localizadas en el ángulo derecho y en la pared izquierda de la vejiga de la orina.

La Figura 54 es un barrido de TC que manifiesta los mismos hallazgos que en la figura 53.

La Figura 55 es un barrido de TC de un paciente con cáncer de vejiga en fase terminal, que manifiesta los mismos hallazgos que en la Figura 54, mostrando una masa tumoral en sombra blanca en la pared izquierda de la vejiga.

La Figura 56 es un barrido de TC que manifiesta los mismos hallazgos que en la Figura 55.

La Figura 57 es un barrido de TC de un paciente con cáncer de vejiga en fase terminal, que muestra la desaparición de masas tumorales tras la administración de la composición farmacéutica de As_{4}O_{6}.

La Figura 58 es un barrido de TC de un paciente con cáncer de vejiga en fase terminal, que manifiesta los mismos hallazgos que en la Figura 57.

La Figura 59 es un barrido de TC de un paciente con cáncer de vejiga en fase terminal, que muestra que, después del tratamiento, la vejiga de la orina aparecía normal.

La Figura 60 es un barrido de TC que manifiesta los mismos hallazgos que en la Figura 59.

La Figura 61 es un barrido de TC que manifiesta los mismos hallazgos que en la Figura 60.

La Figura 62 es un barrido de TC que manifiesta los mismos hallazgos que en la Figura 61.

Descripción detallada de la realización preferida

Se hará ahora referencia con detalle a las realizaciones preferidas de la presente invención, de las cuales se ilustran ejemplos en los dibujos adjuntos.

Ejemplo 1 Separación y purificación de una substancia química natural, HD-2

Se calentó una mezcla de 10 g de Sinsuk y 10 ml de etanol (C_{2}H_{5}OH) durante 1 hora y se enfrió luego hasta la temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadió otro volumen de 10 ml de etanol al Sinsuk enfriado y se repitieron el calentamiento y el enfriamiento secuenciales varias veces. Se lavó el producto de este procedimiento en 20 ml de agua destilada con 10 minutos de agitación y 10 minutos de sacudidas y se añadieron 2 ml de agua destilada. Un minuto después, se recogieron los precipitados por decantación. Se repitió este proceso de recogida tres veces. Después de guardar los precipitados lavados a -40ºC durante 24 horas, se descongelaron los precipitados y se vertieron sobre un papel de filtro y se secaron a temperatura ambiente. Se obtuvieron 9 gramos de substancia blanca como producto final purificado.

Se purificó aún la substancia blanca para su detoxificación. Se puso la sal en una porcelana hecha de caolín y se calentó para eliminar el componente acuoso. Después de enfriar a temperatura ambiente, se puso la substancia blanca encima de la sal y se selló con un papel de filtro y se calentó a lo largo de 1 hora. Después de enfriar a temperatura ambiente, se recogió la substancia blanca. Se repitió este proceso más de 2 veces. Finalmente, se obtuvieron 2 gramos de una substancia blanca, a la que se llamó HD-2 (véase la Figura 1).

Ejemplo 2 Análisis estructural de una substancia química natural, HD-2

Se envió la substancia blanca obtenida en el Ejemplo 1 al Instituto Coreano de Ciencia y Tecnología para su análisis estructural, donde se la identificó como una substancia con fórmula empírica As_{4}O_{6} y con la estructura tridimensional mostrada en la Figura 2. En la Tabla 1, se resumen los parámetros físicos y químicos del As_{4}O_{6}. En la Tabla 2, se dan las coordenadas atómicas (x10^{4}) y los parámetros de desplazamiento isotrópico equivalente (\ring{A}^{2} x 10^{3}); en la Tabla 3, las longitudes de enlace (A) y los ángulos de enlace (grado), y en la Tabla 4, los parámetros de desplazamiento anisotrópico.

TABLA 1

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TABLA 2

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TABLA 3

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TABLA 4

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Ejemplo 3 Efecto anticanceroso de HD-2 sobre células tumorales clonadas in vitro

Se evaluó una substancia química natural, el HD-2, obtenida en el Ejemplo 1, en cuanto a su eficacia anticancerosa por examen de la citotoxicidad directa sobre células tumorales clonadas in vitro. Se usó cisplatina como fármaco de control.

Experimento 1

Efecto anticanceroso de HD-2 sobre células tumorales clonadas de ratones y seres humanos

Se cultivaron células tumorales clonadas de leucemia P388, leucemia L1210, linfoma L5178Y, carcinoma Colon 26-M3.1 y melanoma B16-BL6 de ratones y leucemia K562, carcinoma hepático HEP-G2, cáncer de mama Hs578T, adenocarcinoma AN-3-CA, carcinoma de colon DLD y carcinoma epitelioide HeLa de seres humanos en medios de cultivo EMM, DMEM o RMPI-1640 que contenían un 7,5% de suero fetal bovino ("FBS"), según se describe en el manual ATCC. Después de plaquear las células tumorales clonadas en pocillos de ensayo a una densidad de 1x10^{4}/100 \mul, se añadieron varias concentraciones de HD-2 y cisplatina para examinar la citotoxicidad de las dos substancias. Se incubaron las células tumorales en los pocillos de ensayo en una incubadora con un 5% de CO_{2} a 37ºC durante 2 días. La eficacia anticancerosa de las dos substancias está indicada como la concentración de la substancia de ensayo que inhibe el crecimiento de las células tumorales en un 50% (DE_{50}, Dosis efectiva del 50%) en comparación con el crecimiento de las células tumorales control, donde no se añadió ni HD-2 ni cisplatina. Los resultados (resumidos en la Tabla 5) indican que la citotoxicidad directa de HD-2, medida a las 48 horas de incubación, era 50\pm30 (media \pm SD) veces tan alta como la de la cisplatina.

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(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 5

6

Experimento 2

Efecto anticanceroso de HD-2 en células fibroblásticas 3T3

Para un mayor estudio de la citotoxicidad de cada substancia sobre células tumorales clonadas, se cultivaron células fibroblásticas 3T3 en pocillos de ensayo según se ha descrito en el experimento 1. Después de plaquear células fibroblásticas 3T3 en pocillos de ensayo a una densidad de 1x10^{4}/100 \mul, se añadieron diversas concentraciones de HD-2 y cisplatina para examinar los cursos temporales (2, 4 y 6 horas después de la adición) de la citotoxicidad, los cuales fueron medidos por el método XTT. Tal como se muestra en la Figura 3, la cisplatina no mostró ningún efecto citotóxico hasta 24 horas después de la adición, pero el HD-2 demostró un efecto citotóxico que se iniciaba a las 4 horas de la adición. Las DE_{50} del HD-2 fueron de 1,10 \mug/ml y 0,21 \mug/ml a las 4 y a las 6 horas después de la adición, respectivamente, lo que sugiere que el HD-2 mostraba un efecto inhibitorio sobre el crecimiento tumoral desde el comienzo de la fase. En la fase de 34 horas de tratamiento, se observó también el efecto en términos morfológicos. En el grupo de la cisplatina, se observó necrosis parcial de las células tumorales o enlentecimiento del crecimiento tumoral en este momento. Por el contrario, se observó necrosis completa de las células tumorales en el grupo HD-2, para causar cambios obvios en la morfología del tumor (tales como destrucción de las paredes celulares), que dan lugar a pérdida de adhesión de las células cancerosas. Esto indica que el efecto destructor directo del HD-2 se manifiesta en un breve período de administración, en comparación con el efecto de los agentes quimioterápicos convencionales, tales como la cisplatina. La DE_{50} a las 34 horas de la administración era de 60 ng/ml, pero la DE_{50} de la cisplatina no pudo ser determinada, aunque se observó inhibición parcial del crecimiento tumoral a las 24 horas de la administración. Al final del experimento (48 horas después de la administración), las DE_{50} eran de 30 ng/ml y 8 \mug/ml para el HD-2 y la cisplatina, respectivamente. Por lo tanto, la citotoxicidad del HD-2 es aproximadamente 270 veces mayor que la de la cisplatina.

Ejemplo 4 Mecanismo del efecto citotóxico de HD-2

Se siguió investigando la citotoxicidad del HD-2 para examinar si este efecto estaba relacionado con la muerte de las células tumorales por un mecanismo de apoptosis.

Se sembraron células HL-60 a una densidad de 2x10^{4} células/ml y se disolvió una concentración adecuada de HD-2 en medio de cultivo, después de lo cual se añadió cisplatina al grupo control positivo y se añadió medio de cultivo sin cisplatina al grupo control negativo. Se centrifugaron las células después de 24 horas de incubación y se lavaron las células precipitadas con solución tampón fisiológica (PBS) y se incubaron de nuevo en una solución tampón (Tris-ClH 500 mM (pH 9,0), EDTA 20 mM, NaCl 10 mM, 1% de SDS y 500 mg/ml de proteinasa K) a 50ºC durante 24 horas. Se recogió el ADN total usando extracción con fenol del lisado celular obtenido mediante este tratamiento y se cargó en una placa de gel de agarosa para electroforesis. Tal como muestra la Figura 4, se observó segmentación del ADN a \sim180 pb, que es un hallazgo típico de apoptosis, a concentraciones de 2,5 a 25 \mug/ml de
HD-2.

Ejemplo 5 Toxicidad aguda del HD-2

Se evaluó la toxicidad aguda de la administración oral de HD-2 según los criterios de valoración de la toxicidad descritos en el Artículo 96-8 de Notice on Food and Drug Safety (16 de Abril de 1994). Se usaron ratas (cepa Sprague-Dawley) para los experimentos con animales. La dosificación de una sola administración oral variaba entre 0,4 y 1,25 g/kg de peso corporal en ratas machos y entre 0,4 y 0,625 g/kg de peso corporal en ratas hembras. Las condiciones generales de los animales, los síntomas tóxicos y la mortalidad fueron medidos cada hora durante las 6 horas iniciales después de la administración única y una vez al día a continuación durante 14 días. Se midieron los pesos corporales antes de iniciar el estudio, 7 días después de la administración y en la necropsia. Las ratas muertas fueron estudiadas para averiguar la causa de la muerte en la necropsia. Al finalizar el estudio, todas las ratas vivas fueron sacrificadas mediante una sobredosis de anestesia con éter y se examinaron los órganos mayores en cuanto a hallazgos patológicos a simple vista. Con la dosis máxima en ratas machos (1,25 g/kg de peso corporal), la mortalidad alcanzó el 100% durante el período de estudio. Con la dosis alta en las ratas machos (0,85 g/kg de peso corporal), la mortalidad fue del 60% y, con la dosis media (0,8 g/kg de peso corporal), la mortalidad fue del 10%. En las ratas hembras, la mortalidad fue del 100% para el grupo de la dosis máxima (0,625 g/kg de peso corporal), del 80% en el grupo de dosis alta (0,62 g/kg de peso corporal) y del 40% en el grupo de dosis media (0,58 g/kg de peso corporal). Los síntomas clínicos en los 3 días tras la administración oral iban desde depresión dosis-dependiente hasta dispnea. Algunas ratas que manifestaron estos síntomas clínicos murieron, pero otras se recuperaron hasta la condición normal en 2 a 3 días de síntomas clínicos. Los cambios de peso no mostraron ninguna diferencia significativa entre los grupos de estudio y de control en todos los subgrupos de diferentes dosificaciones. La necropsia de las ratas muertas durante el período del estudio reveló hallazgos de estómago dilatado e hígado ingurgitado. No se observaron hallazgos significativos relacionados con la administración de HD-2 en la necropsia de las ratas sacrificadas al finalizar el
estudio.

Con la administración oral de HD-2 en ratas Sprague-Dawley, la DL_{50} (dosis letal del 50%) era de 0,81 g/kg de peso corporal en ratas machos y de 0,58 g/kg de peso corporal en ratas hembras. En la Tabla 6, se resumen los resultados.

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(Tabla pasa a página siguiente)

7

Ejemplo 6 Toxicidad subaguda del HD-2

Se evaluó la toxicidad subaguda de la administración oral de HD-2 según los criterios de valoración de la toxicidad descritos en el Artículo 96-8 de Notice on Food and Drug Safety (16 de Abril de 1994). Se usaron ratas (cepa Sprague-Dawley) para los experimentos, como en el caso de los experimentos de toxicidad aguda. La dosificación de las administraciones orales era de 100 (dosis alta), 10 (dosis media) y 1 mg (dosis baja) por kg de peso corporal, que fueron administrados una vez al día durante 4 semanas (total de 28 administraciones).

Se observaron los siguientes puntos durante el período de estudio.

1) Síntomas generales: Se evaluaron los síntomas generales, tales como anorquidia, salivación, diarrea, vómito, poliuria, anuria y cambios fecales, y la gravedad de estos síntomas una vez al día durante el período de estudio.

2) Consumo de alimento: Se comprobaron dos veces por semana la cantidad de alimento consumido y la cantidad restante por jaula.

3) Consumo de agua: Se comprobaron dos veces por semana la cantidad de agua consumida y la cantidad restante por jaula.

4) Peso: Se midieron los pesos dos veces por semana hasta finalizar el estudio.

5) Urianálisis: Se recogieron muestras de orina durante el período de estudio de 5 ratas seleccionadas al azar por subgrupo de estudio y se registraron el aspecto, el volumen y el color. Utilizando kits de urianálisis (N-multistix de Amersham), se midieron el pH, el peso específico, los leucocitos, las proteínas, los cuerpos cetónicos, el urobilinógeno, la glucosa y el nitrógeno ureico en sangre.

6) Examen del ojo: Se realizó el examen oftalmoscópico de 5 ratas seleccionadas aleatoriamente por subgrupo de estudio para evaluar el aspecto externo, la córnea y el fondo ocular.

7) Análisis hematológico y bioquímico. Se hizo una prueba sanguínea rutinaria para medir el recuento de hematíes, el recuento de leucocitos, la concentración de hemoglobina, el número de monocitos y de linfocitos y el tiempo de coagulación de la sangre. Se hizo un análisis bioquímico del suero para medir la actividad de la albúmina transferasa, de la aspartato transaminasa, de la fosfatasa alcalina y de la albúmina.

8) Tamaño y peso de los órganos: Por cada animal estudiado, se midieron el peso y el tamaño de los órganos principales en relación al peso corporal. Los órganos medidos incluían el hígado, el riñón, el bazo, el corazón, las glándulas adrenales, el cerebro, la glándula tiroidea, los ovarios y los testículos.

9) Examen patológico: Se fijaron los órganos en formalina después de medir el peso y el tamaño y se cortaron los tejidos fijados en cortes de 5 mm usando un microtomo (AO Rotate Microtome) y se tiñeron con hematoxilina y eosina para el estudio microscópico.

Durante el estudio, no se observaron casos fatales y no se observó ningún síntoma clínico específico, incluyendo cambios en el peso y en el consumo de alimento y de agua. Tampoco se observó ninguna anormalidad significativa en el urianálisis y en el examen ocular. El estudio hematológico y bioquímico no mostró ninguna diferencia significativa entre los grupos de estudio y control. En el examen patológico al realizar la necropsia, se observó que había hemosiderina localizada en el citoplasma del epitelio tubular proximal y atrofia del epitelio tubular proximal del riñón en un ligero grado en el grupo de dosis alta (100 mg/kg de peso corporal), pero no en los grupos de dosis media, dosis baja y control. Aparte de esto, no se observó ningún hallazgo patológico dependiente de la dosis o relacionado con la administración de HD-2. Estos resultados están resumidos en la Tabla 7. Por lo tanto, la administración oral de HD-2 de 4 semanas de duración no causó ninguna anormalidad hematológica significativa en el grupo de dosis alta (100 mg/kg de peso corporal), pero se observó un hallazgo patológico leve sugerente de una ligera anormalidad renal. Sin embargo, en el grupo de dosis media no se observó dicha patología.

TABLA 7

8

* Diferencia significativa en comparación con el grupo control (P<0,05)

^{a} Indica la media \pm SD.

Ejemplo 7 Efecto del HD-2 sobre la metástasis del cáncer

Experimento 1

Efecto inhibitorio del HD-2 administrado por vía oral sobre la metástasis del cáncer

Utilizando el modelo en ratón, se evaluó el efecto inhibitorio del HD-2 sobre la metástasis cancerosa con células tumorales clonadas y se comparó con la cisplatina. Como una sola administración de 500 mg/kg de peso corporal al día no tuvo ningún efecto colateral en ratas (véase el Ejemplo 5), se estudió el efecto inhibitorio del HD-2 sobre la metástasis cancerosa empleando una dosis por debajo de 500 mg/kg de peso corporal. Se inocularon células de melanoma B16-BL6 o células de carcinoma colon26-M3.1 en ratones y se contó el número de masas tumorales metastáticas que aparecían en los pulmones. Después de la inoculación de las células tumorales, se administraron diversas dosis de HD-2 o de cisplatina un día después de la inoculación para hallar la concentración óptima para la eficacia antimetastática. A los siete días de la inoculación, se administró HD-2 o cisplatina para medir la eficacia terapéutica sobre la masa tumoral crecida. Como se muestra en la Tabla 8, la administración oral de HD-2 (0,1 a 10 mg) tenía un efecto antimetastático significativo en comparación con el grupo control (grupo de cisplatina). Se observó el pico de actividad a la dosis de 1 mg, con una eficacia anticancerosa muy alta (86%). Al 7º día, cuando las células tumorales inoculadas se habían asentado por completo en los órganos diana, la administración oral de HD-2 demostró una eficacia anticancerosa del 70%. Esto indicaba que la administración oral de HD-2 era bastante efectiva para el tratamiento del cáncer establecido.

TABLA 8

9

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Experimento 2

Efecto inhibitorio del HD-2 administrado por vía intravenosa sobre la metástasis del cáncer

De forma similar al Experimento 1, se comparó el efecto inhibitorio del HD-2 sobre la metástasis cancerosa con la cisplatina usando células tumorales clonadas que poseían una alta capacidad metastática. En este experimento, se administró HD-2 intravenosamente con una dosificación menor de 500 mg/kg de peso corporal al día. Como se resume en la Tabla 9, 10 a 100 \mug de HD-2 tenían una eficacia antimetastática superior al 90%, lo que sugería que el HD-2 era más efectivo que la cisplatina a la misma dosis. Diez microgramos de HD-2 y cisplatina, que se considera como una dosis óptima para inhibir la metástasis anticancerosa al 7º día de la inoculación de las células tumorales, tuvieron un efecto anticanceroso del 67,5% y del 50,0%, respectivamente, cuando se administraron intravenosamente. Esto sugiere que la eficacia anticancerosa del HD-2 es mejor que la de los fármacos anticancerosos convencionales y que el HD-2 es también efectivo en el tratamiento del cáncer totalmente desarrollado en fase terminal.

TABLA 9

10

Ejemplo 8 Mecanismo anticanceroso del HD-2 in vivo

Se estudió el mecanismo in vivo del efecto anticanceroso del HD-2 en ratones. Después de suspender 4x10^{5} células de melanoma B16-BL6 en PBS al 50%, se las inyectó intradérmicamente en 2 sitios del dorso de ratones C57BL/6 de 6 a 7 semanas de edad. A los tres días de la inyección del tumor, se dio un milígramo de HD-2 por vía oral y se midieron el tamaño del melanoma inoculado y el número de vasos sanguíneos en los sitios tumorales y alrededor de ellos. Se trató el grupo control con administración oral de PBS. Como demuestra la Figura 5, el número de nuevos vasos sanguíneos observados en la proliferación y la metástasis del cáncer tendía a disminuir tras la administración de HD-2. También se redujo el tamaño de la masa del tumor sólido significativamente en proporción a la reducción del número de nuevos vasos sanguíneos. Se sugiere que el HD-2 suprime la invasión hacia el interior y la adhesión sobre los tejidos, que se corresponden con la formación de nuevos vasos sanguíneos.

Ejemplo 9 Efecto inhibitorio del HD-2 sobre la oncogénesis inducida por carcinógenos

Para examinar el efecto inhibitorio del HD-2 sobre la oncogénesis inducida por carcinógenos, se inyectó N-nitrosodietilamina (NDEA) como carcinógeno en la cavidad peritoneal de ratones (cepa B6C3F1) a una concentración de 90 mg por kg de peso corporal para inducir cáncer. A las 2, 4, 8, 16 y 32 semanas de la inyección del carcinógeno, se administraron 100 g de HD-2 oralmente y se inyectó la misma cantidad de agua destilada en el grupo control. A las 42 semanas del tratamiento con NDEA, los ratones fueron sacrificados para medir la incidencia y el tamaño de los tumores formados en el pulmón y en el hígado. Como se muestra en la Figura 6, la incidencia de tumor hepático inducido por NDEA se inhibía efectivamente tras la administración oral de HD-2. La incidencia de tumor hepático inducido por NDEA era superior al 90%, pero, después de la administración de HD-2, la incidencia bajó a un 5 a un 22%, a pesar de la variación dependiente del período de administración de HD-2. Por lo tanto, HD-2 inhibía la oncogénesis inducida por carcinógeno en el hígado en un 78 a un 95%. El HD-2 también inhibía el hepatoma espontáneo por completo, cuya incidencia está descrita como del 20% sin administración de HD-2. En el pulmón, el efecto inhibitorio de HD-2 sobre la reducción de la oncogénesis inducida por carcinógeno no era tan dramática como en el hígado. Sin embargo, si se da el HD-2 a las 4 semanas de la inyección de NDEA, la oncogénesis inducida por carcinógeno se inhibía en un 30%. Además, los cánceres espontáneos del pulmón quedaron completamente suprimidos por el HD-2, lo que indica que la administración oral de una dosis adecuada de HD-2 disminuye la incidencia de cánceres espontáneos. Como se muestra en la Figura 7, el número de masas tumorales en el pulmón era de aproximadamente 2 en el grupo de HD-2, en comparación con 7 en el grupo control, lo que apunta a la eficacia del HD-2 en la inhibición de la oncogénesis inducida por carcinógeno. Estos resultados sugieren que el HD-2 era muy efectivo no sólo en el tratamiento, sino también en la prevención de cánceres malignos.

Ejemplo 10 Preparación de composición farmacéutica para terapia anticancerosa

Se mezclaron 5 g de HD-2 con los siguientes ingredientes de la medicina China y se pulverizaron hasta obtener forma de polvo: hodongjoo 7 g, chunsangap 7 g, baekchool 10 g, woowhang 3 g, sahyang 3 g, shingok 5 g, moryo 5 g, yongnyehyang 3 g, yoohyang 5 g, molryak 5 g, baekbongryung 10 g, sangbaekpi 10 g, galgeun 10 g, macheehyun 5 g, ohmeeja 5 g, hyulgal 5 g, seokko 5 g, boongsa 5 g, hansooseok 5 g y ginseng rojo sometido a vapor 7 g. Se añadió agua destilada al polvo para formar píldoras de 1 a 1,5 gramos para administración oral. Se usaron estas píldoras para fabricar tabletas de 1,33 g, convenientes para una sola dosis, que fueron administradas a pacientes de cáncer en fase terminal tres veces al día para hacer un total de 4 gramos al día. La dosis efectiva de HD-2 puede depender de la fracción de fármacos y de la edad, el sexo y las condiciones de salud del paciente. En general, la dosificación usual fue de 50 g por kg de peso corporal, con un límite superior de 160 a 330 g por kg de peso corporal. Aunque se utilizaron ingredientes de la medicina Oriental para preparar la composición farmacéutica para la prueba clínica del HD-2, se puede emplear cualquier composición farmacéutica para este fin. Se puede substituir el hexóxido arsénico (As_{4}O_{6}) químicamente sintetizado por HD-2, que fue preparado por separación y purificación de Sinsuk en este
estudio.

Ejemplo 11 Prueba clínica sobre varias formas de cánceres malignos

Se seleccionaron pacientes de cáncer a quienes se había diagnosticado cáncer de útero, pulmón, seno maxilar, riñón o vejiga de la orina en el hospital mediante exámenes clínicos concienzudos para el estudio y la mayoría estaban en la fase terminal de la enfermedad, con una esperanza de supervivencia de 6 a 12 meses. Después de adquirir el consentimiento del paciente o del cuidador, se administraron las tabletas descritas en el Ejemplo 10 3 veces al día para examinar la eficacia anticancerosa.

Experimento 1

Prueba clínica en una paciente con cáncer de útero

Se diagnosticó a la persona del estudio (EunSook Park) de cáncer de cuello uterino (diagnóstico final: carcinoma de células escamosas) en el Seoul National University Hospital en Octubre de 1993. Incluso tras terapia anticancerosa reiterada (8 veces), las células cancerosas continuaron creciendo e invadieron los nódulos linfáticos, el recto y la vejiga de la orina. Por lo tanto, se recogió orina a través de un tubo insertado en el riñón derecho y la paciente estaba inmovilizada en la cama y no era capaz de ingerir alimento. El doctor la informó de que su esperanza de supervivencia era menor de 3 meses. Se administraron las tabletas descritas en el Ejemplo 10 a EunSook Park durante 3 meses y se siguió el progreso usando topografía computerizada (TC) e imagen por resonancia magnética (IRM). Los barridos de TC (Figuras 8 a 19) indicaron que, tras la desaparición de las masas tumorales, se formaron perforaciones en las paredes del útero, de la vejiga de la orina y del recto y que las heces del recto escapaban hacia el útero a través de las aberturas perforadas, por lo que se hizo una colostomía a la paciente en Enero de 1996.

Experimento 2

Prueba clínica en un paciente con cáncer de pulmón

El sujeto del estudio (KyungJoo Lee) era un varón de 30 años de edad y a quien se había tratado por fiebre y escalofríos con diagnóstico de pneumonía el 19 de Marzo de 1996 sin mejoría alguna de los síntomas. Se le diagnosticó de cáncer de pulmón en fase 4 (diagnóstico final: adenocarcinoma indiferenciado) en el SeongGa Hospital de Bucheon y se confirmó el diagnóstico en el Samsung Medical Center situado en IIWongDong, Seúl, con exámenes completos adicionales. Los doctores le hablaron de su tiempo limitado de vida de 6 a 12 meses. Los barridos de TC (Figuras 21 a 24), tomados el 21 de Marzo de 1996 en el SeongGa Hospital, mostraron una masa tumoral irregular en el pulmón derecho, con la cavidad pleural derecha llena de fluidos pleurales y nódulos linfáticos infartados en el mediastino. Se dieron a KyungJoo las tabletas preparadas como se ha descrito en el Ejemplo 10 durante 8 meses, mientras se hacía un seguimiento del progreso de la enfermedad usando barrido de TC. Como se indica en las Figuras 25 a 30, el tamaño de la masa tumoral se redujo gradualmente hasta desaparecer por completo tras 8 meses de terapia con el
fármaco.

Experimento 3

Prueba clínica en un paciente con cáncer de seno maxilar

El sujeto del estudio (HeeGon Kim) fue diagnosticado de cáncer maligno que involucraba a la cavidad nasal y al seno maxilar derechos (diagnóstico final: cistadenoma adenoide) en 1981, que era inoperable debido a metástasis ósea. Se le había tratado con quimioterapia y terapia de radiación en el CheonJu Jesuit Hospital y en el Seoul University Hospital, pero la enfermedad empeoró. Se le aconsejó que se preparara para su muerte después de un barrido de TC el 5 de Marzo de 1990. Como muestran lo barridos de TC tomados el 31 de marzo de 1990 (Figuras 31 y 32), el seno maxilar derecho estaba lleno de masas tumorales y también se observó una masa tumoral en la cavidad nasal derecha. Los especialistas en cáncer del Seoul National University Hospital prescribieron quimioterapia anticancerosa durante 2 meses, pero los barridos de TC tomados después de completar la quimioterapia indicaron crecimiento adicional de masas tumorales que afectaban a regiones cerebrales próximas, al globo ocular derecho y a la cavidad nasal derecha e izquierda. Se dieron a HeeGon Kim las tabletas preparadas como se ha descrito en el Ejemplo 10 durante 3 meses y se comprobó el progreso de la enfermedad usando barrido de TC el 27 de Febrero de 1991 en el Seoul National University Hospital. Los barridos de TC (Figuras 35 a 38) indicaron que la mayor parte de las masas tumorales habían desaparecido y que la cavidad nasal y el seno maxilar derechos se llenaban con el flujo normal de aire.

Experimento 4

Prueba clínica en un paciente con cáncer de riñón

El sujeto del estudio (YongHa Lee) fue diagnosticado de cáncer renal en fase terminal en el departamento de Urología del Pusan Merinol Hospital tras exámenes concienzudos, que incluían barridos de TC. Rechazó el tratamiento quirúrgico después de hablarle de la baja tasa de supervivencia del 20%, incluso con nefrectomía radical. Los barridos de TC tomados al darle el alta (Figuras 39 a 44) mostraron que el riñón izquierdo aparecía aumentado en comparación con el derecho y que la pelvis renal izquierda no se llenaba con el material de contraste, lo que indicaba una masa tumoral en esa región. Se tomaron pielogramas intravenosos tras la administración de tabletas preparadas como se ha descrito en el Ejemplo 10. Los pielogramas intravenosos (Figuras 45 y 46) indicaron una marcada reducción de la masa tumoral después de 6 meses de terapia con el fármaco y los barridos de TC (Figuras 47 a 50) demostraron una reducción del 80% de la masa tumoral. Se practicó una nefrectomía izquierda en el Pusan Baek Hospital y se confirmó carcinoma de células renales por examen patológico. Con administración de tabletas como se describe en el Ejemplo 10 durante 3 meses, los barridos de TC (Figuras 51 y 52) demostraron sólo una pequeña masa tumoral localizada en el riñón izquierdo y en la pelvis renal, lo que indica que la enfermedad estaba casi curada.

Experimento 5

Prueba clínica en un paciente con cáncer de vejiga de la orina

El sujeto del estudio (DaeJoong Kim) había experimentado disuria desde Junio de 1995 y fue tratado de cistitis sin mejoría alguna. Se le diagnostico de cáncer de vejiga de la orina en el Samsung Medical Center con un examen a fondo que incluía barridos de TC. Con un mayor estudio en el Seoul JoongAng Hospital, los barridos de TC (Figuras 53 a 56) mostraron masas tumorales en sombra obscura en el ángulo derecho y la pared izquierda de la vejiga de la orina y se estimó su tasa de supervivencia en aproximadamente un 20% en un año. Se le trató con tabletas preparadas según se ha descrito en el Ejemplo 10 durante más de 1 año. Los barridos de TC (Figuras 57 y 58), tomados en el Dongin Hospital de KangNeung en Julio de 1996 indicaron que no había evidencia de masas cancerosas y los barridos de TC (Figuras 59 a 62) tomadas en el HyunDae Hospital el 18 de Marzo de 1997 indicaron la curación completa de la enfermedad sin sombra alguna de masas tumorales.

Como se ve en los Ejemplos y en los experimentos antes descritos, el hexóxido de arsénico (As_{4}O_{6}), que fue obtenido por separación y purificación a partir de un material natural, el Sinsuk, tenía una potente eficacia anticancerosa en los experimentos tanto in vivo como in vitro e inhibía la metástasis cancerosa con efectividad en los experimentos con animales. Además, el compuesto de arsénico natural (As_{4}O_{6}) fue mezclado con otros ingredientes de la medicina Oriental para preparar tabletas para administración oral. Las pruebas clínicas en pacientes de cáncer portadores de cáncer de útero, pulmón, seno maxilar, riñón o vejiga de la orina indicaron una marcada inhibición de la proliferación y de la metástasis de las células cancerosas tras la administración de tabletas hechas de As_{4}O_{6}. Esto sugiere que la invención podría ser usada como fármaco anticanceroso efectivo, que puede tener un gran impacto sobre el progreso de la biomedicina.

Será evidente para los expertos en la técnica que se pueden hacer diversas modificaciones y variaciones en un agente para la terapia anticancerosa de hexóxido de arsénico (As_{4}O_{6}) de una substancia química natural y su composición farmacéutica de la presente invención sin desviarse del espíritu o alcance de la invención; por lo tanto, se pretende que la presente invención cubra las modificaciones y variaciones de esta invención siempre que queden dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas y sus equivalentes.

Claims (17)

1. Una composición farmacéutica que contiene, como uno de los ingredientes activos, As_{4}O_{6}, eventualmente en mezcla con un excipiente farmacéutico aceptable.

2. La composición farmacéutica según la reivindicación 1, donde se separa y purifica el As_{4}O_{6} a partir de Sinsuk.

3. La composición farmacéutica de la reivindicación 1 ó 2, que además incluye otros ingredientes farmacéuticos activos, en particular ingredientes activos de la medicina oriental.

4. La composición farmacéutica según las reivindicaciones 1 a 3, donde dicha composición está formulada como composición anticancerosa.

5. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde dicha composición está formulada para administración oral.

6. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde dicha composición está formulada para administración intravenosa.

7. Uso de As_{4}O_{6} como ingrediente activo para la fabricación de una composición farmacéutica según se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 para el tratamiento del cáncer maligno de útero.

8. Uso de As_{4}O_{6} como ingrediente activo para la fabricación de una composición farmacéutica según se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 para el tratamiento del cáncer maligno de pulmón.

9. Uso de As_{4}O_{6} como ingrediente activo para la fabricación de una composición farmacéutica según se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 para el tratamiento del cáncer maligno de seno maxilar.

10. Uso de As_{4}O_{6} como ingrediente activo para la fabricación de una composición farmacéutica según se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 para el tratamiento del cáncer maligno de riñón.

11. Uso de As_{4}O_{6} como ingrediente activo para la fabricación de una composición farmacéutica según se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 para el tratamiento del cáncer maligno de la vejiga de la orina.

12. Un procedimiento para la obtención de As_{4}O_{6}, consistente en realizar la extracción con solventes polares del Sinsuk al menos una vez, calentar, separar el As_{4}O_{6} del solvente y recuperar el precipitado de As_{4}O_{6} como una substancia blanca.

13. El procedimiento de la reivindicación 12, donde dicho solvente para realizar la extracción es un alcohol, preferiblemente etanol, y dicho calentamiento es realizado hasta el reflujo de dicho alcohol.

14. El procedimiento de la reivindicación 13, donde el As_{4}O_{6} precipita añadiendo agua al alcohol tras la extracción del Sinsuk.

15. El procedimiento según una de las reivindicaciones 12 a 14, donde el As_{4}O_{6} es además purificado para su detoxificación, en particular calentando dicho As_{4}O_{6} en presencia de sal, NaCl, preferiblemente durante un período de tiempo de más de una hora, y, después de enfriar, se recupera el As_{4}O_{6} detoxificado.

16. El procedimiento de la reivindicación 15, donde dicho calentamiento es realizado a una alta temperatura de detoxificación, preferiblemente de 600-1.100ºC, más preferiblemente de entre 900 y 1.100ºC, más preferiblemente a aproximadamente 1.000ºC, en presencia de sal, NaCl, durante más de una hora.

17. Uso de As_{4}O_{6} para la fabricación de una composición farmacéutica para el tratamiento del cáncer, preferiblemente para el tratamiento del cáncer de útero, de pulmón, de seno maxilar, de riñón o de vejiga de la orina.