ES2230604T3

ES2230604T3 - Tratamiento morfogenetico de la insuficiencia renal cronica.

Info

Publication number: ES2230604T3
Application number: ES97922726T
Authority: ES
Inventors: Kuber T. Sampath; Charles M. Cohen; Slobodan Vukicevic
Original assignee: Curis Inc
Current assignee: Curis Inc
Priority date: 1996-05-06
Filing date: 1997-05-06
Publication date: 2005-05-01
Anticipated expiration: 2017-05-06
Also published as: JP2009185076A; US20050143304A1; EP0910400A1; DE69730966D1; EP0910400B1; ATE245997T1; DK0910400T3; CA2254954C; CA2254953A1; US8017580B2; US6861404B1; JP2000510835A; JP5247593B2; WO1997041880A1; EP0914146B1; DE69730966T2; ES2203803T3; EP0914146A1; AU2832297A; US20100291170A1

Abstract

LA PRESENTE INVENCION PROPORCIONA PROCEDIMIENTOS PARA EL TRATAMIENTO, Y PRODUCTOS FARMACEUTICOS QUE PUEDEN UTILIZARSE EN EL TRATAMIENTO, DE SUJETOS MAMIFEROS QUE SUFREN, O TIENEN EL RIESGO DE SUFRIR, INSUFICIENCIA RENAL CRONICA, O QUE SE ENCUENTRAN EN RIESGO DE NECESITAR UNA TERAPIA DE SUSTITUCION RENAL. LOS PROCEDIMIENTOS INCLUYEN LA ADMINISTRACION DE CIERTAS PROTEINAS DE, O BASADAS EN, LA FAMILIA DE PROTEINAS OSTEOGENICAS/PROTEINAS MORFOGENETICAS OSEAS (OP/BMP) DE LA SUPERFAMILIA TGF BE DE PROTEINAS, O LA ADMINISTRACION DE CIERTOS MORFOGENES, INDUCTORES DE DICHOS MORFOGENES, AGONISTAS DE LOS RECEPTORES DE LOS MORFOGENES CORRESPONDIENTES, O IMPLANTACION DE CELULAS RENALES INDUCIDAS CON DICHOS MORFOGENES. LOS MORFOGENES UTILES EN LA INVENCION SON IGUALMENTE MIEMBROS DE LA FAMILIA DE PROTEINAS OP/BMP O SE BASAN EN ELLA.

Description

Tratamiento morfogenético de la insuficiencia renal crónica.

Campo de la invención

La presente invención se refiere generalmente a métodos de tratamiento para enfermedad renal. En particular, la invención hace referencia a métodos de tratamiento para situaciones que ponen a los mamíferos, incluyendo los seres humanos, en o con riego de insuficiencia renal crónica. Los métodos implican, con carácter preferente, la administración de ciertas proteínas de la familia de las proteínas osteogénicas/proteínas morfogenéticas para los huesos (OP/BMP) dentro de la súper familia TGF-\beta de proteínas. Más generalmente, los métodos implican la administración de determinados morfógenos, inductores de estos morfógenos o agonistas de los correspondientes receptores de morfógenos o la implantación de células renales inducidas con estos morfógenos.

Antecedentes de la invención

El sistema renal de los mamíferos desempeña unos roles primarios tanto en la eliminación de los productos de desecho catabólicos del torrente sanguíneo como en el mantenimiento de equilibrio de fluidos y electrólitos en el cuerpo. Por consiguiente las insuficiencias renales son situaciones o circunstancias con amenaza de la vida, en las cuales la formación creciente de los catabolitos y otra toxinas, y/o el desarrollo de significativos desequilibrios en electrolitos o en fluidos, podría llevar a la insuficiencia de otros órganos importantes y a la muerte. Como materia o asunto general, la insuficiencia renal se clasifica como "aguda" o "crónica". Como se detallará más adelante, las diferencias entre estás dos situaciones no son solamente un asunto de gravedad o de rapidez, sino, más bien, reflejan unas diferencias en etiología, pronóstico y tratamiento.

Insuficiencia renal aguda

La insuficiencia renal aguda se define como una cesación abrupta o una reducción sustancial y, en tanto como el 90-95% de los casos, pudiera ser secundario a un trauma, cirugía u otra circunstancia médica aguda. La insuficiencia renal aguda podría ser debida a causas pre-renales (por ejemplo, capacidad cardiaca decrecida, hipovolemia, resistencia vascular alterada) o a causas post-renales (por ejemplo, obstrucciones o constricciones de los uréteres, vejiga o uretra), que no implican o afectan directamente a los riñones y que, si se tratan rápidamente, no comportarán una pérdida significante de nefrones u otro daño a los riñones. Como carácter alternativo, la insuficiencia renal aguda pudiera deberse a causas renales intrínsecas, que implican un ataque directo o lesión a los riñones, y que podían acarrear o suponer un daño permanente a los nefrones o a otras estructuras del riñón. Las causas intrínsecas de la insuficiencia renal aguda incluyen, pero no se limitan a las enfermedades infecciosas (por ejemplo, diversas infecciones bacterianas, víricas o parasíticas), enfermedades inflamatorias (por ejemplo, glomerulonefritis, lupus eritematoso sistemático), isquemia (por ejemplo, oclusión de la arteria renal), síndromes tóxicos (por ejemplo, envenenamiento con metales pesados, efectos colaterales o secundarios de tratamientos antimicrobianos o quimioterapia), y traumas directos.

El diagnóstico y tratamiento de la insuficiencia renal aguda es tan variada como sus causas. En pacientes humanos, la oliguria (producción de orina 400 ml/día) o la anuria (producción de orina 50 ml/día) pudieran estar presentes en el 50-70% de los casos, los niveles de BUN podrían subir a 10-20 mg/dl/día o más rápidamente, los niveles de creatinina de plasma podrían ascender a 0,5-1,0 mg/dl/día, y la acidosis metabólica está casi siempre presente. Si no se tratan, los desequilibrios de electrolitos y de fluidos (por ejemplo, hipercalemia, acidosis, edema) asociados a insuficiencia renal aguda pudieran dar lugar a arritmia con amenaza de la vida, insuficiencia cardiaca congestiva o insuficiencias sistemáticas de múltiples órganos. Las terapias actuales se dirigen típicamente a las causas subyacentes de la insuficiencia renal aguda (por ejemplo, causas pre-renales, post-renales o causas infecciosas) y al tratamiento de las complicaciones. Debido a la gravedad de la insuficiencia renal aguda, los episodios raramente duran más tiempo que varias semanas sin mortalidad y se tratan sobre la base de paciente hospitalizado.

Insuficiencia renal crónica

La insuficiencia renal crónica se pudiera definir como una reducción progresiva, permanente y significativa, de la tasa o índice de filtración glomerular (GFR) debido a una pérdida significante y continuada de nefrones. La insuficiencia renal crónica comienza típicamente a partir de un momento en el que una insuficiencia renal crónica (esto es, un decrecimiento permanente en la función renal de, al menos, el 50-60%) ha resultado de algún ataque o traumatismo a los tejidos renales, el cual ha causado una pérdida significativa de unidades de nefrones. El ataque o traumatismo inicial pudiera o no pudiera haber sido asociado a un episodio de insuficiencia renal aguda. Independientemente de la naturaleza del traumatismo o ataque inicial, la insuficiencia renal crónica manifiesta una "trayectoria común final" de signos y síntomas a medida que se pierden nefrones y va a menos progresivamente GFR. Esta deterioración progresiva de la función renales lenta, durando típicamente muchos años o décadas en pacientes humanos, pero, al parecer, inevitable.

La fase precoz o inicial de la insuficiencia renal crónica comienza típicamente cuando GRF ha sido reducido a aproximadamente una tercera parte del valor normal (por ejemplo, 30-40 ml/min para una adulto medio). Como consecuencia de la pérdida significante de nefrones, y en un aparente "conato" de mantener la GFR global con menos nefrones, se incremente la GFR de nefrones únicos medios (SNGFR) mediante adaptaciones de los nefrones remanentes tanto en el nivel estructural como funcional. Una manifestación estructural de esta adaptación, fácilmente detectable por medio de examen microscópico de muestras de biopsia, es una "hipertrofia compensativa" tanto de los glomérulos como de los túbulos de riñón, un proceso que literalmente aumenta el volumen de filtrado, que se puede producir por cada nefrón remanente merced al agrandamiento literal de los glomérulos y túbulos. Por cierto que, como consecuencia de la hipertrofia de los mearos colectores, la orina del individuo con insuficiencia renal crónica frecuentemente contiene unos "Moldes" amplios, típicamente 2-6 veces el diámetro normal, que ayudan en el diagnóstico y también han sido referenciados como "moldes de insuficiencia renal". Al mismo tiempo se dan cambios funcionales a los nefrones remanentes, tales como absorción decrecida o secreción incrementada de solutos excrementados normalmente, que podrían ser respuestas a cambios hormonales o de paracrina en cualquier parte del cuerpo (por ejemplo niveles crecientes de la hormona paratiroidea (PTH) en respuesta a cambios de nivel séricos de calcio y
fosfato).

Estas adaptaciones en la insuficiencia renal crónica de la fase precoz o temprana no son afortunados en la restauración completa de GFR o de otros parámetros de la función renal y, de hecho, someten a los nefrones remanentes a un riesgo de pérdida aumentado. Por ejemplo, la SNGFR incrementada se asocia a esfuerzos mecánicos sobre el glomérulo debido a hipertensión e hiperfusión.

La pérdida de integridad de las junturas de los podocitos conduce a una permeabilidad aumentada del glomerulo hasta macromoléculas o "falta de estanqueidad de la cápsula glomerular". También se observan efectos proliferativos en las células mesangenciales, epiteliales y endoteliales así como aumentos en la deposición de colágeno y de otras proteínas matriz. La esclerosis tanto de los glomérulos como de los túbulos es otro síntoma común de los nefrones hipertrofiados y se incrementa al riesgo de coagulación en el glomérulo. En particular, estas adaptaciones de los nefrones remanentes, empujando la SNGFR bien más allá de su nivel normal, realmente disminuyen la capacidad de los nefrones remanentes de responder a los cambios agudos en agua, soluto o cargas de ácidos y, por consiguiente, incrementan realmente la probabilidad de una pérdida adicional de nefrones.

A medida que progresa la insuficiencia renal crónica y la GFR continúa bajando al menos el 10% del valor normal (por ejemplo, 5-10 ml/min), el individuo entra en la insuficiencia renal de la fase final (ERSD). Durante esta fase, la incapacidad de los nefrones remanentes de eliminar adecuadamente los productos de desecho de la sangre, aunque reteniendo los productos útiles y manteniendo equilibro de fluidos y electrolitos, lleva a una mengua rápida, en la que muchos sistemas de órganos, y en particular el sistema cardiovascular, podrían comenzar a fallar. Por ejemplo, los niveles de BUN y de creatinina podrían ascender y, con niveles de BUN de 60-100 mg/dl y niveles de creatinina sérica de 8-12 mg/dl, se desarrollará típicamente un síndrome urémico, en el que los riñones no pueden eliminar por más tiempo los productos finales del metabolismo del nitrógeno. En este momento la insuficiencia renal progresará rápidamente hacia la muerte a no ser que el individuo reciba terapia sustitutoria renal (es decir, hemodiálisis crónica, diálisis peritoneal continua o transplante de riñón).

Aproximadamente 600 pacientes por millón reciben diálisis crónica cada año en los Estados Unidos, en un costo medio que se aproxima a 60.000-80.000 \textdollar por paciente y por año. De los nuevos casos de enfermedad renal en fase dinal, cada año, aproximadamente el 28-33% se deben a nefropatía diabética (o glomerulopatía diabética o hipertrofia renal diabética), el 24-29% se deben a nefroesclerosis hipersensitiva (o glomeruloesclerosis hiperactiva) y el 16-22% se deben a glomerulonefritis. La tasa de supervivencia de 5 años para todos los pacientes de diálisis crónica es aproximadamente de un 40%, pero para los pacientes mayores de 65 años, la tasa desciende aproximadamente al 20%.

Sorfógenos y factores del crecimiento

Un gran número de proteínas se han identificado actualmente, las cuales parecen actuar como factores morfogenéticos o factores de crecimiento, regulando la proliferación de las células. Típicamente estos factores de crecimiento ejercen sus efectos sobre conjuntos o subconjunto específicos de células o tejidos. Por consiguiente, por ejemplo, factores de crecimiento epidérmico, factores de crecimiento neurológico, factores de crecimiento fibroblástico, diversas hormonas y muchas otras proteínas que inducen o inhiben la proliferación o diferenciación de las células, han sido identificados parecen afectar algún tipo de células.

Un grupo de proteínas morfogenéticas, referenciadas en este caso como "morfógenos", incluye miembro de la familia de las proteínas osteogenéticas/proteínas morfogenéticas para huesos (OP/BMPs), las cuales se identifican inicialmente por su habilidad de inducir la morfogénesis ectópica, endocondral ósea. La subsiguiente caracterización de las secuencias del ácido nucleico y de los aminoácidos de los BMPs los ha mostrado ser un subgrupo de la súper familia TGF-\beta de los factores de crecimiento. En la actualidad miembros de esta familia morfógena han demostrado incluir la proteína-1 osteogénica de mamíferos (OP-1, también conocida como BMP-7), la proteína-2 osteogénica (OP-2), proteína-3 osteogénica (OP-3), la BMP-2 (también conocida como BMP-2A o CBMP-2A) las BMP-3 y BMP-4 (también conocida como BMP-2B o CBMP-2B) las BMP-5, BMP-6, Vgr-1 y la GDF-1 así como el homólogo Vgl Xenopus los homógolos de la Drosophila DPP y 60SA. Los miembros de esta familia codifican con polipéptidos secretados, que comparten las características estructurales comunes y que se procesan similarmente partiendo de pero proteínas para producir proteínas maduras con terminal carboxi, que tiene un patrón conservado de cisteínas. Las formas activas de estas proteínas o homodímeros ligados por disulfuros de un único miembro de familia o heterodímeros de dos diferentes miembros (véase por ejemplo, Massague (1990) Annu. Rev. Cell Biol. 6597; Sampath et al. (1980) H.Bio.Chem. 265:13198).

Los miembros de la familia morfógena de proteínas se expresan en una variedad de tejidos durante su desarrollo. El o la BMP-3, por ejemplo, ha sido mostrada para ser expresada en el desarrollo del pulmón y riñón humanos (Vukicevic et al. (1994) J. Histochem. Cytochem. 42:869-875), la BMP-4 ha sido mostrada para ser expresada en el desarrollo de miembros del cuerpo, corazón, procesos faciales y mesenquima condensada, asociada con folículos de bigotes tempranos en ratones embriónicos (Jones, et al. (1991) develop 111:531-542), y la OP-1 (BMP-7) se ha evidenciado inmunohistoquímicamente estar asociada a membranas de basamento en embriones humanos, incluyendo las del desarrollo de los pulmones, páncreas, piel y túbulos convolutos o circunvolucionados de los riñones (vilicevic, et al. (1994) Biochem. Biophys Res. Commun. 198:693-700). Algunos de los morfógenos (por ejemplo, OP-2 y BMP-2) No fueron detectados en los análisis de los tejidos adultos, sugiriendo solamente un rol evolutivo precoz para estos morfógenos (Ozkaynak, et al. (1992) J. Biol. Chem. 267:25220-25227). Por contraste, en los riñones de los ratones adultos han sido observados elevados niveles de la expresión murina OP-1 (Ozkaynak, et al. (1991) Biochem. Biophys. Res. Commun. 179.116-123). Esto sugiere un posible rol para la OP-1 sintetizada en el riñón como un regulador de paracrina del crecimiento de los huesos y seria consecuente con el rol de los riñones tanto en la regulación del calcio como en homeótasis de los huesos.

Una gran variedad de factores del crecimiento han sido considerados que pudieran participar en la regulación del crecimiento y reparación de los tejidos renales (revisando en, por ejemplo, Toback (1992) Kidney Intl. 41.2226-246). Por ejemplo, las EGF, TGF-\alpha, TGF-\beta, IGF-II, PDGF, FGF, Renin/Angiotensin II, IL-1 y la OP-1 han sido descubiertas en su totalidad para ser expresadas por diversas células renales adultas y tener efecto sobre la proliferación de células renales (véase, Toback (1992) supra, Ozkay-nak, et al. (1991) supra). Además se ha comprobado que algunas de estas se expresan en el riñón en desarrollo, en inclusión de IGF-I, TGF-\beta y OP-1 (revisado en, por ejemplo, Bard et al. (1994) Mech Develop. 48:3-11).

De manera interesante, se ha puesto de manifiesto en un sistema de cultivo orgánico metanéfricos que retarda el crecimiento global y la diferenciación segmental de todos los segmentos de nefrones en desarrollo excepto los túbulo distales precoz de la rama ascendente gruesa (Avner y Sweeney (1990) Pediatr Nephrol. 4:372-377). Además se ha comprobado que la expresión de la TGF-\beta se incrementa en algunos modelos de enfermedad renal, insinuando que los aumentos por medio de la TGF-\beta en la síntesis de los comprobantes de la matriz extracelular podrían estar implicados en la etiología de la nefropatía diabética (o glomerulopatía diabética o hipertrofia renal diabética), fibrosis renal, glomeruloesclerosis y glomerulonefritis, fibrosis intersticial y nefroesclerisis hipertensiva (Shankland, et al. (1994) Kindley Intl. 46:430-442; Yamamoto, et al. (1994) Kindley Intl. 45:916-927 Yamamoto, et al. (1993) PNAS 90:1814-1818; Tamaki, et al. (1994) Kidney Intl. 45:525-536; Border, et al. (1990) Nature 346 371-374; Hamaguchi, et al. (1995) Hypertension 26:199-207).

También es de interés el hecho que los niveles de suero de la hormona del crecimiento humano (GH) se elevan en individuos con insuficiencia renal crónica (Wright et al. (1968) Lancet 2:798; Samaan and Freeman (1970) Metabolism 19:102). Se ha evidenciado que la GH recombinante ayuda a mantener el equilibrio proteínico en pacientes desnutridos con insuficiencia renal crónica y a promover el crecimiento "cach-up" en niños con deficiencia renal crónica. Se ha sugerido o insinuado que estos efectos son proporcionados por la IGF-I (véase, por ejemplo, Kopple (1992) Miner. Electrolyte Metab. 18:269-275). Aunque algunos estudios han evidenciado que la administración de IGF-I aumenta el flujo del plasma renal y la GFR en pacientes con insuficiencia renal crónica (por ejemplo, Guler, et al. (1989) PNAS 86:2868-2872; Hirschberg, et al. (1993) Kidney Intl. 43:387-397) otros estudios han puesto de manifiesto que este efecto es meramente transitorio (Miller et al. (1994) Kidney Intl. 46:201-207).

Por consiguiente aunque algunos factores de crecimiento se han manifestado ser expresados tanto en tejidos renales en desarrollo como adultos, y, aunque, al menos uno ha manifestado aumentar la función renal a corto plazo, todavía ninguno ha demostrado ser de beneficio terapéutico en la prevención, inhibición o retardo de la pérdida progresiva de la función renal que caracteriza la insuficiencia renal crónica. Por consiguiente, hay una necesidad permanente de tratamientos, que prevendrán la pérdida progresiva de la función renal, la cual hace que cientos de miles de pacientes se conviertan en dependientes de diálisis crónica, y que da por resultado las muertes prematuras de decenas de miles al año.

Resumen de la invención

La siguiente invención está destinada a métodos de tratamiento y a preparaciones farmacéuticas para uso en el tratamiento de individuos mamíferos en o con riesgo de insuficiencia renal crónica o con riesgo de la necesidad de una terapia sustitutiva renal. Este tipo de individuos incluye personas ya aquejadas de la insuficiencia renal crónica, y/o que ya han recibido terapia sustitutiva renal, así como cualquier individuo que razonablemente prefiera sufrir una pérdida progresiva de la función renal asociada a la pérdida progresiva de las unidades de nefrones en el funcionamiento. Si un sujeto particular o concreto se haya en riesgo es una determinación que pudiera hacerse rutinariamente por una persona de pericia ordinaria en la técnica relevante médica o veterinaria. Los individuos en o con riesgo de insuficiencia renal crónica o con riesgo de necesidad de terapia sustitutiva renal, incluyen pero no se limitan a las siguientes: individuos que podrían ser considerados como aquejados de insuficiencia renal crónica, enfermedad renal en fase final, nefropatía diabética crónica, nefroesclerosis hipertensiva, glomerulonefrítis crónica, nefritis hereditaria y/o displasia renal; individuos que tiene una biopsia que indica hipertrofia glomerular, hipertrofia tubular, glomerulo-esclerosis crónica y/o esclerosis tubulo intersticial crónica; individuos que tienen exploración por ultrasonidos, MRI, CAT, u otro examen no invasivo que india la fibrosis renal; individuos que tienen un número inusual de moldes amplios (broad cats) presentes en el sedimento urinario; individuo que tiene una GFR que con carácter de cronicidad es menor de aprox. El 50%, y más concretamente menor que aprox. El 40%, 30% o 20%, de la GFR esperada para el individuo; individuos masculinos humanos con un peso corporal de, al menos, unos 50 Kg. y con una GFR, que con carácter de cronicidad es menor de unos 50 ml/min, y más concretamente menor de unos 40 ml/min, 30 ml/min o 20 ml/min; individuos femeninos humanos con un peso de, al menos unos 40 Kg. y con una GFR, que con carácter de cronicidad es menor de unos 40 ml/min. Y más concretamente menor de unos 30 ml/min, 20 ml/min o 10 ml/min; individuos que posean un número de unidades de nefrones funcionales poseídas por un individuo sano, pero, por otra parte, similar; individuos que tiene un solo riñón e individuos que son receptores de un transplante de riñón.

Los métodos y las composiciones de esta invención se aprovechan en parte, del descubrimiento de que determinadas proteínas de origen eucariotico se pudieran usar como agentes terapéuticos renales en el tratamiento de sujetos con riesgo, como queda definido aquí, de insuficiencia renal crónica o la necesidad de terapia sustitutiva renal. Generalmente, estos agentes terapéuticos renales son proteínas o se basan en proteínas, que son miembros de la familia de las proteínas, proteínas osteogénetica/proteínas morfogenéticas para huesos (OP/BMP). Así pues, los agentes terapéuticos renales OP/BMP de la invención incluyen polipéptidos o variantes funcionales de polipéptidos, que comprenden al menos, el dominio de seis o siete cisteínas con terminal C de una proteína de mamíferos seleccionada del grupo, que consta de OP-1, OP-2, OP-3, BMP2, BMP3, BMP4, BMP5, BMP6, BMP9, y proteínas que exhiben, al menos, 70% o, más preferentemente, 75% u 80% de homología de secuencia de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos del dominio de siete cisterna) de la OP-1 Humana; y que son (a) capaces de inducir condrogénesis en el ensayo ectópico de huesos de Reddi-Sampath (Samphath and Reddi (1981), Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 78:7599-7603) o un ensayo sustancialmente equivalente (b) de prevenir, inhibir, retardar o aliviar significativamente la pérdida progresiva de la función renal en un modelo animal estándar de insuficiencia renal crónica, o (c) capaz de causar una mejoría clínicamente importante en un marcador estándar de la función renal cuando se administran a un mamífero en o con riesgo de insuficiencia renal crónica más generalmente, la invención se encarga del uso de "morfógenos" que son proteínas diméricas que inducen la mofogénesis, de una o más células, tejidos u órganos eucarióticos (por ejemplo, de mamíferos). De particular interés en este caso son los morfógenos que inducen la morfogénesis, al menos, de tejido renal de mamíferos, incluyendo la formación de epitelio renal funcional y, en particular, epitelio glomerular y tubular funcionales. Los morfógenos comprenden un par de polipéptidos que, cuando están plegados, adoptan una configuración suficiente para la proteína dimérica resultante de sonsacar respuesta morfogenéticas en células y tejidos, que presentan receptores específicos para dicho morfógeno. Esto es, los morfógenos inducen generalmente la totalidad de las siguientes funciones biológicas en un ambiente morfogenéticamente permisivo; estimulando la proliferación de células progenitoras; y estimulando la diferenciación de células progenitoras; estimulando la proliferación de células diferenciadas y apoyando el crecimiento y el mantenimiento de células diferenciadas. Las células "progenitor" son células no comprometidas que son capaces de diferenciar en uno o más tipos específicos de células diferenciadas, en función de su repertorio genómico y de la especificalidad del tejido del ambiente permisivo en que se induce la morfogénesis. Además, los morfógenos pueden retardar o mitigar la iniciación de pérdida de la función del fenotipo y/o tejido asociada a la senescencia o quietud. Además, los morfógenos pueden seguir estimulando la expresión fenotípica de las células diferenciadas, incluyendo la expresión de las propiedades metabóricas y/o funcionales, por ejemplo, secretorias, de las mismas. Además los morfógenos pueden inducir la rediferenciación de células comprometidas bajo unas condiciones ambientales apropiadas. Como queda indicado más arriba, los morfógenos que inducen la proliferación y/o la diferenciación, al menos, de tejido renal de mamíferos, y/o apoyen el crecimiento, el mantenimiento y/o las propiedades funcionales de nefrones de mamíferos, son de particular interés en este caso.

En este caso la forma de realización preferidas, el par de polipéptido morfógenos tiene sendas secuencias de aminoácidos, comprendiendo una secuencia que comparte una relación definida con una secuencia de aminoácidos de un morfógeno de referencia. En este caso, los polipéptidos morfógenos preferidos comparten una relación definida con una secuencia presente en la OP-1, SEQ ID NO:4 morfogenéticamente activa, Sin embargo, una o más de las secuencias naturales o biosintéticas expuestas en esta memoria descriptiva podrían ser utilizadas de modo similar como una secuencia de referencia. Los polipéptidos morfógenos comparten una relación definida con, al menos, el dominio de seis cisteínas con terminal C de la OP-1 humana, residuos 43-139 de SEQ ID NO.4. Con carácter preferente, los polipéptidos morfógenos comparten una relación definida con, al menos, el dominio de siete cisteínas con el terminal C de la OP-1 humana, residuos 38-139 de SEQ ID NO:4. Esto es los polipéptidos morfógenos preferidos en una proteína dimérica con actividad morfogénica comprenden una secuencia respectivamente, la cual corresponde a una secuencia de referencia o es funcionalmente equivalente a la misma.

Las secuencias funcionalmente equivalentes incluyen disposiciones funcionalmente equivalentes de residuos de cisteína situados dentro de la secuencia de referencia, incluyendo inserciones supresiones de aminoácidos, que alteran la disposición lineal de estas cisteínas, pero no afectan materialmente a su relación en la estructura plegada de la proteína morfogenética dimérica, incluyendo su capacidad de formar tales enlaces de disulfuros en intra o intercadena que pudieran ser necesarios para la actividad morfogenética. Además, las secuencias funcionalmente equivalentes incluyen aquellas en las cuales uno o más residuos de aminoácidos difieren del correspondiente residuo de una secuencia morfógena de referencia, por ejemplo, el dominio de siete cisteínas con terminal C (o "esqueleto") de la OP-1 humana, siempre que esta diferencia no destruya la actividad morfogenética. Por consiguiente, se prefieren sustituciones conservativas de los correspondientes aminoácidos en la secuencia de referencia. Los residuos de aminoácidos que son "substituciones conservativas" para los correspondientes residuos en una secuencia de referencia son los que son similares físicamente o funcionalmente a los correspondientes residuos de referencia, por ejemplo, que tiene tamaño, forma, carga eléctrica, propiedades químicas similares, incluyendo la capacidad de formar enlaces covalentes o de hidrógeno o similares. Sustituciones conservativa particularmente preferidas son las que cumplen los criterios definidos para una "mutación de puntos aceptada" en Dayhoff et al. (1978),5 Atlas of Protein Sequence and Structure, Suppl 3, ch. 22 (pp. 354-352), Natl. Biomed. Res. Found., Washington, D.C. 20007, cuya doctrina se incorpora como referencia.

En determinadas formas de realización, un polipéptido sospechoso de ser funcionalmente equivalente a un polipéptido morfógeno de referencia se alinea con el mismo haciendo uso del método de Needleman, et al. (1970) J.Mol.Biol. 48:443-453, llevados a cabo convenientemente mediante programas de ordenador, tales como el Align programa (DNAstar, Inc.). Como queda indicado más arriba, los intersticios internos y las inserciones de aminoácidos en la secuencia candidata se ningunean para fines de cálculo de la relación definida, convencionalmente expresada como nivel de homología o identidad de la secuencia de aminoácidos, entre las secuencias candidatas y la de referencia. En este contexto la "homología de secuencia de aminoácidos" pretende significar la similaridad de la secuencia de aminoácidos. Las secuencias homólogas comparten residuos de aminoácidos idénticos o similares, donde los residuos similares son sustituciones conservativas para, o "mutaciones de puntos permitidas" de, correspondientes residuos de aminoácidos en una secuencia de referencia alineada. Así pues, una secuencia de polipéptidos candidata, que comparte un 70% de homología de aminoácidos con una secuencia de referencia es una secuencia en la cual un 70% de los residuos alineados son idénticos a/o son substituciones conservativas de los correspondientes residuos en una secuencia de referencia.

De particular interés en este caso son los morfógenos, que se suministran al riñón, inducen o mantiene el estado normal de diferenciación y crecimiento de las unidades de nefrones. De aún más particular interés en este caso son los morógenos que, cuando se administran a un mamífero, previene, inhiben o retrasan el desarrollo de la hipertrofia compensatoria, incluyendo la hipertrofia glomerular y/o la hipertrofia tubular. Este tipo de morfógenos se puede emplear para tratar un mamífero en o con riesgo de insuficiencia renal crónica mediante la prevención, inhibición o retardo de la pérdida progresiva de las unidades de nefrones funcionales y la consiguiente pérdida progresiva de la función renal.

Con carácter alternativo, la presente invención se puede practicar con métodos y composiciones, que comprenden un agente estimulador de morfógenos o un inductor de morfógenos. Un "inductor de morfógenos" es un compuesto que estimula in vivo la producción, por ejemplo, expresión, de una concentración terapéuticamente efectiva de un morfógeno endógeno en el cuerpo del mamífero suficiente para regenerar o mantener el tejido renal y/o inhibir la pérdida adicional del mismo. Esta clase de compuestos pretenden incluir sustancias que, cuando se administran al mamífero, actúan sobre las células de tejido(s) u órgano(s) que normalmente son componentes para producir y/o secrectar un morfógeno codificado dentro del genoma del mamífero, y que hace que se altere o modifique el nivel endógeno del morfógeno en el cuerpo del mamífero. Los morfógenos endógenos o administrados pueden actuar como factores, paracrina o autocrina. Esto es, los morfógenos endógenos pueden ser sintetizados por las células en las que se inducen respuestas morfogenéticas, por células vecinas o por células de un tejido distante, en las cuales las circunstancias el morfógeno endógeno secretado se transporta al lugar de morfogénesis, por ejemplo, mediante el torrente sanguíneo del individuo. En el caso de formas de realización preferidos, el agente estimula la expresión y/o secreción de un morfógeno endógeno a fin de aumentar las cantidades del mismo en los tejidos renales.

En el caso de otras formas de realización, un agente que actúa como un agonista de un receptor de morfógenos pudiera ser administrado en vez del morfógeno en sí. Un agonista de un receptor quiere decir un compuesto que se enlaza al receptor y para este tipo de enlace tiene un resultado funcional similar al enlace del ligando endrógeno, natural del receptor. Esto es, el compuesto, previa interacción con el receptor, debe producir los mismos o sustancialmente similares efectos de la transmembrana y/o intracelulares que el ligando endógeno. Así pues, un agonista de un receptor de morfógenos se enlaza al receptor y este tipo de enlace tiene el mismo o similar efecto funcional que el enlace de morfógenos (por ejemplo, la inducción de morfogénesis). La actividad o potencia agonista puede ser menor que la del ligando natural, caso en el cual se dice que el agonista es un "agonista parcial", o puede ser igual o mayor que la del ligando natural, caso en el cual se dice que ser un "agonista completo". Así pues, por ejemplo, un péptido pequeño u otra molécula, que puede imitar la actividad de un morfógeno en enlazar y en activar el receptor de morfógenos. Preferentemente el agonista es un agonista completo, agonistas parciales receptores de morfógenos también podrían ser empleados de forma ventajosa. En la técnica son conocidos unos métodos de identificación de este tipo de agonistas e incluyen ensayos para compuestos que inducen respuestas por medio de morfógenos (por ejemplo, la inducción de la diferenciación de mesenquima metanefrico, la inducción de la formación de huesos endocondral y similares). Un agente de esta clase también pudiera ser referenciado como un morfógeno "mimico", "mimético" o "análogo".

Los agentes terapéuticos renales OP/BMP o los morfógenos, inductores de morfógenos y agonistas de receptores de morfógenos de la invención, podrían ser administrados por cualquier vía de administración, que es compatible con el agente seleccionado, podrían ser formulados con cualquier vector o portador aceptable farmacéuticamente, apropiado a la vía de administración. Vías preferidas de administración parenteral y, en particular, intravenosa, intraperitonial e intracapsular renal. Los tratamientos también son realizados preferentemente durante un periodo de tiempo prolongado sobre la base de un paciente ambulante. Las dosis diarias de los agentes terapéuticos renales se esperan que estén dentro del rango de unos 0,01-100 \mug/kg peso del cuerpo, y más preferentemente alrededor de 10-300 \mug/kg de peso del cuerpo, aunque las dosis exactas variarán en función del agente terepéutico renal concreto y el estado e historia médicos del individuo concreto.

Finalmente, en el caso de todavía otras formas de realización, se podrán implantar células renales en el riñón de un individuo en o con de insuficiencia renal crónica, o con riesgo de necesitar terapia sustitutiva renal, a fin de servir de una fuente de morfógeno y/o proveer una fuente de tejido renal funcional, adicional. Estas células podrían ser células progenitoras mesenquimales renales, o células progenitoras mesenquimales renales, que han sido inducidas a experimentar o sufrir una diferenciación metanéfrica. Estas células pudieran ser derivadas de un donante (por ejemplo, donante coincidente en el tipo de tejido, hermano o hermana, gemelo idéntico), podrían ser derivadas de un cultivo de tejidos (por ejemplo, cultiva del mesenquima renal no diferenciado, cultivo de tejido renal fetal), o pudiera ser extraídos del individuo y después ser reimplantados después de la proliferación y/o diferenciación. Con carácter preferencial, las células se inducen a experimentar una diferenciación metanéfrica mediante tratamiento con un morfógeno (por ejemplo OP-1) antes o después de la implantación.

Los tratamientos de la presente invención son útiles en la prevención, inhibición o retardo de la pérdida progresiva de la función renal, que tipifican a la insuficiencia renal crónica. Como tales son de gran valor la prevención o retraso de la necesidad de diálisis crónica o terapia sustitutoria renal en individuos con insuficiencia renal crónica, en la reducción de la frecuencia necesaria de diálisis renal crónica en individuos con enfermedad renal en fase final. Con tales, son útiles en la prolongación de las vidas y en el mantenimiento de la calidad de la vida de individuos con riesgo de, o ya aquejados de, insuficiencia renal crónica.

Breve descripción de las figuras

Figura 1:Esta figura es una gráfica de barras, que muestra niveles medios de creatinina de suero para grupos de ratas operadas en ficción (SHAM) o parcialmente nefrectomizadas ("Nx Contr" y "OP-1"), 5-6 meses de post-cirugía, las ratas recibieron inyecciones de excipiente únicamente ("Nx control" y "SHAM") o 1, 3, 10 ó 50 \mug/kg de peso del cuerpo de OP-1 soluble ("OP-1") tres veces semanalmente durante 4-8 semanas.

Figura 2: Esta figura es una gráfica de barras que muestra niveles medios de una urea sérica para grupos de ratas operadas en ficción ("SHAM") o parcialmente nefronizadas ("Nx Contr" y "OP-1"). 5-6 meses de post-cirugía, las ratas recibieron inyecciones de excipientes únicamente ("Nx control" y "SHAM") o 1,2,3,10 o 50 \mug/kg de peso del cuerpo OP-1 soluble tres veces semanalmente durante 4-8 semanas.

Figura 3. Los paneles A-C de esta figura son micrografías de tejido renal procedente de ratas con un aumento de 10 x. (A) Tejido renal procedente de ratas operadas en ficción. (B) Tejido procedente de rata con insuficiencia renal crónica después de 5/6 nefrectomía (Nx control). (C) Tejido procedente de rata tratada con OP-1 después de 5/6 nefrectomía.

Figura 4. Los paneles A-C de esta figura son micrografías de tejido renal procedente de ratas con un aumento de 40 x (A) Tejido procedente de rata operada en ficción. (B) Tejido procedente de rata con insuficiencia renal crónica después de 5/6 nefrectomías (Nx control). (C) Tejido procedente de rata tratada con OP-1 después de 5/6 nefrectomías.

Figura 5. Esta figura es una gráfica lineal que muestra niveles medios de creatinina sérica durante 9 semanas para grupos de ratas parcialmente nefrectomizadas. 2-3 semanas de postcirugía, las ratas recibieron inyecciones de excipiente únicamente ("Control" 9 o 10 mug/kg de peso del cuerpo de OP-1 soluble ("OP-1") 3 veces por semana.

Figura 6. Esta figura es una gráfica lineal que muestra tasas medias de aclaración de creatinina como una medida de la GFR durante 8 semanas para grupos de ratas parcialmente nefectomizadas 2-3 semanas de postcirugía, las ratas recibieron inyecciones de excipiente únicamente ("Control" o 10 \mug/kg de peso del cuerpo OP-1 ("OP-1") soluble tres veces por semana.

Figura 7: Los paneles de 7-1 a 7-12 de esta figura son una alineación tubular de las secuencias de aminoácidos de diversos morfógenos naturales con una secuencia de referencia preferida de la OP-1 humana, residuos 38-139 de SEQ ID NO.4. Los polipéptidos de morfógenos representados gráficamente es esta figura también se identifican en el listado de secuencias.

Descripción detallada de la invención Definiciones

A fin de exponer más clara y concisamente el asunto de la invención reivindicada, las siguientes definiciones se facilitan para los términos específicos usados en la siguiente descripción escrita y en las reivindicaciones anexas.

Agente terapéutico renal. Como se emplea aquí el termino "agente terapéutico renal" quiere decir un polipéptido o una variante funcional de un polipéptido, que comprende, al menos, el dominio de seis o siete cisteínas con terminal en C de una proteína de mamífero seleccionada del grupo que consta de OP-1, OP-2, OP-3, BMP2, BMP3, BMP4, BMP5, BMP6, BMP9 y proteínas que exhiben, al menos, un 70% o, más preferente, 75% u 80% de homología de secuencias de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos del dominio de siete cisteínas de la OP-1 humana, y que es (a) capaz de inducir condrogénesis en el ensayo de huesos ectópico de Reddi-Sampath (Sampath and Reddi (1981), Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 78:7599-7603) o un ensayo substancialmente equivalente, (b) capaz de prevenir, inhibir, retardar o aliviar la pérdida progresiva de la función renal en un modelo animal estándar con insuficiencia renal crónica, o (c) capaz de causar una mejoría clínicamente significativa en un marcador estándar de la función renal cuando se administre a un mamífero en o con riesgo de insuficiencia renal crónica. Como se utiliza aquí, una "homología" porcentual entre dos secuencias de aminoácidos indica el porcentaje de residuos de aminoácidos que son idénticos o similares entre las secuencias y, como se emplea aquí, los residuos son "sustituciones conservativas", que satisfacen los criterios definidos para una "mutación de puntos aceptada" en Dayhoff at el. (1978) Atlas of Protein Séquense and Structure Vol. 5 (Suppl. 3), pp. 354-352, Natl. Biomed. Res. Found., Washington, D.C.

Eficacia terapéutica. Como se emplea aquí, una agente terapéutico renal se dice tener "eficacia terapéutica", y una cantidad del agente se dice ser "terapéuticamente efectiva", si la administración de esta cantidad del agente es suficiente para causar una mejoría clínicamente en-un marcador estándar de la función renal cuando se administra a un individuo mamífero (por ejemplo, un paciente humano) en o con riesgo de insuficiencia renal crónica. Este tipo de marcadores son bien conocidos en la bibliografía médica incluyen, sin limitarse a, unas tasas de aumento en la creatinina del suero, mediciones estáticas de BUN, mediciones estáticas de creatinina del suero, tasas de filtración glomerular (GFR), ratios de BUN/creatinina, concentraciones séricas del sodio (Na+), ratios de orina/plasma para creatinina, ratios de orina/plasma para urea, osmalidad de la orina, producción diaria de orina y similares (véase por ejemplo, Brenner y Lazarus (1994), in Harrison's Principies of Internal Medicine, 13th edition, isselbacher et al., eds., McGraw Hill Text, New York; Luke and Strom (1994), in Internal Medicine, 4th Editión, J.H. Stein, ed., Mosby-Year Book, Inc. St. Louis.)

Tasa de filtración glomerular (GFR). La "tasa de filtración glomerular" o "GFR" es proporcional a la tasa de aclaración en la orina de una sustancia hueso-plasma, que no se enlaza mediante las proteínas del suero, se filtra libremente a través de los glomérulos y no se secreta ni se reabsorbe por los túbulos renales. Así pues, como se emplea aquí la GFR se define preferentemente por la ecuación:

GFR = \frac{U_{conc X} V}{P_{conc}}

En la que U_{conc} es la concentración de la orina del marcador, P_{conc} es la concentración de plasma del marcador y V es la tasa de flujo de orina en ml/min. De manera optativa, La GFR se corrige para el área superficial del cuerpo. Así pues, los valores de la GFR usados aquí se podrán considerar como expresados en unidades de ml/min/1,73 m^{2}.

La medida preferida de la GFR es la aclaración de la insulina pero, debido a la dificultad de medir las concentraciones de esta sustancia, se utiliza típicamente la aclaración de la creatinina en determinaciones clínicas. Por ejemplo, par un varón humano sano, (70 kg, 20-40 años), de talla media, se espera que una GFR típica medida mediante aclaración de la creatinina sea aproximadamente de 125 ml/min con concentraciones de plasma de la creatinina de 0,7-1,5 mg/dl. Para una mujer de talla media comparable, se espera que una GFR típica medida mediante aclaración de la creatinina sea aproximadamente 115 ml/min con niveles de creatinina de 0,5-1,3 mg/dl. Durante momentos o periodos de tiempo de buena salud, los valores de la GFR humana son relativamente estables hasta alrededor de los 40 años, cuando la GFR comienza generalmente a decrecer con la edad. Para individuos que sobrevivirán a la edad de 85 o 90 años, la GFR se podría reducir al 50% de los valores comparables a la edad de 40 años.

Tasa de infiltración glomerular esperada (GFR_{esp}). Una estimación o evaluación de la "GFR esperada" o "GFR_{esp}" se pudiera proveer en la base a consideraciones de edad, peso, sexo, extensión de la superficie corporal del individuo, y grado de musculatura así como concentración del plasma de algunos compuestos marcadores (por ejemplo, creatinina) como queda determinado mediante análisis de sangre. Así pues, como un ejemplo, se podría estimar una GFR_{esp} como:

GFR_{esp}\approx \frac{(140 - edad) \ x \ peso \ (Kg)}{72 \ x \ P_{conc} \ (mg/dl)}

Esta evaluación estimativa no toma en consideración factores como extensión de la superficie, grado de musculatura o grasa porcentual. Sin embargo, al usar niveles de creatinina del plasma como marcador, esta fórmula ha sido empleada para varones humanos como un medio poco costosa de evaluar la GFR. Como la creatinina se produce por los músculos estriados, la GFR esperada o GFR_{esp} de hembras humanas se evaluó mediante la misma ecuación multiplicada por 0,85 para explicar las diferencias esperadas en masa muscular. (véase Lemann, et al. (1990) Am. J. Kidney Dis. 16(3): 236-243.)

Molde amplio. El examen microscópico de sedimento urinario para la presencia de elementos formados es un procedimiento estándar en urinalisis.

Entre los elementos formados, que pudieran presentarse en la orina están las masas cilíndricas de materiales agutinados, que típicamente representan un molde o "cast" del diámetro interior o paso de un tubo convoluto distal o de un túbulo colector. En individuo humanos sanos, esta clase de moldes suelen tener un diámetro de 15-25 \mum. Sin embargo en individuos con insuficiencia renal crónica la hipertrofia de los túbulos pudiera dar lugar a la presencia de "moldes amplios" o "moldes de insuficiencia renal", los cuales son de 2-6 veces el diámetro de los moldes normales y muchas veces tiene una apariencia cérea homogénea. Así pues, como se usa aquí, un "molde amplio" equivale a un sedimento urinario que tiene un diámetro de 2-6 veces el normal o alrededor de 30-150 \mum para moldes humanos.

Crónico. Como se emplea aquí con respecto a las indicaciones clínicas tales como moldes o cilindros urinarios, GFR medida u otros marcadores de la función renal, "crónico" quiere decir la persistencia durante un periodo de, al menos, tres, y más preferentemente, al menos, seis meses. Así pues, por ejemplo, un individuo con una GFR medida con carácter crónico por debajo del 50% de GFR_{esp} es un individuo, en el cual ha sido medida la GFR y se ha comprobado que está por debajo del 50% de la GFR_{esp} en, al menos, dos mediciones separadas por, al menos, tres, y más preferentemente, por, al menos, seis meses, y para el cual no hay ninguna razón médicamente sólida para creer que la GFR esta sustancialmente (por ejemplo, 10%) más alta durante el periodo de la intervención.

Individuos en o con riesgo de insuficiencia renal crónica. Como se usa aquí, se dice estar en o con riesgo de insuficiencia renal crónica, o con riesgo de la necesidad de terapia sustitutoria renal, si razonablemente se espera que el individuo sufra una pérdida progresiva de la función renal asociada con la pérdida progresiva del funcionamiento de las unidades de néfrones.

Si un individuo concreto está en o con riesgo de insuficiencia renal crónicas una determinación, que se podría hacer rutinariamente por una persona de pericia ordinaria en la técnica médica o veterinaria relevante. Individuos en o con riesgo de insuficiencia renal crónica o con riego de la necesidad de terapia sustitutoria renal, incluyen, pero se limitan a lo siguiente: individuos que pudieran ser considerados como aquejados de insuficiencia renal crónica, enfermedad renal en fase final, nefropatía, nefroesclerosis hipertensiva, glomerulonefrítis crónica, nefritis hereditaria y/o displasia renal; individuos que tienen una biopsia que indica hipertrofia glomerular, hipertrofia tubular, glomeruesclerosis crónica y/o esclerosis tubulointersticial crónica; individuos que tienen una exploración por ultrasonidos, MRI, CAT u otro examen no invasivo, que indica fibrosis renal; individuos que tienen un número inusual de moldes amplios o cilindros grandes (broad casts) presentes en el sedimento urinario; individuo que tienen una GFR que, con carácter crónico, menor que aprox. Un 50%, y más particularmente menor de aproximadamente 40%, 30% o 20%, de la GFR esperada para el individuo; varones humanos que pesan, al menos, alrededor de 50 kgs y tiene una GFR, que es con carácter crónico, menor de unos 50 ml/min, y más particularmente menos de unos 40 ml/min, 30 ml/min o 20 ml/min; hembras humanas que pesan, al menos 40 Kgs y tiene una GFR que es, con carácter crónico, menor de 40 ml/min, y más concretamente, menor de unos ml/min, 20 ml/min o 10 ml/min, individuos que poseen un número de unidades de nefrones funcionales que es menos de aproximadamente un 50% y más concretamente menor de aproximadamente 40%, 30% o 20%, del numero de unidades de nefrones funcionales poseídas por un individuo sano, pero por lo demás similar, individuos que tienen un solo riñón e individuos que son receptores de transplante de riñón.

II Descripción de los modos de realización preferidos A. Generalidades

La presente invención depende, en parte descubrimiento sorprendente de que la administración de determinados terapéuticos renales basados en proteínas a individuos en o con riesgo de insuficiencia renal crónica, puede reducir las tasas de mortalidad y/o morbidez, y prevenir o inhibir, retardar o aliviar la pérdida progresiva de la función renal, que caracteriza a la insuficiencia renal. Con carácter alternativo o además, la administración de los agentes terapéuticos renales de la presente invención puede prevenir, inhibir o retardar la pérdida progresiva de unidades de nefrones funcionales y la mengua progresiva en la tasa de filtración glomerular (GFR), que lenta pero inevitablemente conduce a la necesidad de terapia sustitutiva renal (es decir, transplante renal o diálisis crónica)o la muerte en el caso de formas de realización preferidas, los agentes terapéuticos de la invención son miembros de la familia de proteínas osteogénicas/proteínas morfogenéticas para huesos (OP/BMP) dentro de la superficie de proteinas TGF-\beta.

B. Agentes terapéuticos renales

Los agentes terapéuticos renales de la siguiente invención son proteínas naturales o variantes funcionales de proteínas naturales en la familia de proteínas osteogenéticas/proteínas morfogenéticas para huesos (OP/BMP) dentro de la superfamilia de proteínas TGF-\beta. Esto es estas proteínas forman un subgrupo distintivo referenciado aquí como la familia OP/BMP, dentro del agrupamiento evolutivo suelto de proteínas relacionadas con las secuencias conocidas como la superfamilia TGF-\beta. Los miembros de esta familia de proteínas comprenden polipéptidos secretados que comparten características estructurales comunes y que se procesan o elaboran similarmente partiendo de una pro-proteína para producir una proteína madura con terminal carboxi. Dentro de la proteína, todo los miembros comparten un patrón (pattern) conservado de seis o siete cisteínas, que definen un dominio de 97-106 aminoácidos, y la forma activa de estas proteínas es o un homodímero, enlazado a disulfuros, de único miembro de la familia o un heterodímero de dos diferentes miembros. (véase, por ejemplo, Massague (1990, Annu. Rev. Cell Biol. 6:597; Sampath et al. (1990), J. Biol. Chem. 265:13198). Por ejemplo, en su forma madura, nativa, la OP-1 humana de fuente natural es un dímero glicosilado que típicamente un peso molecular aparente de unos 30-36 kDa como queda determinado por los SDS-PAGE. Cuando se reduce, la proteína de 30 kDa da origen a dos subunidades de péptidos glicosilados que tienen unos pesos moleculares aparentes de unos 16 kDa y 18 kDa. La proteína no glicosada tiene un peso molecular aparente de unos 27 kDa. Cuando se reduce, la proteína de 27 kDa da origen a dos cadenas de polipéptidos no glicosilados, que tienen unos pesos moleculares de unos 14 kDa a 16 kDa.

Típicamente, las proteinas naturales OP/BMP se trasladan como un precursos, que tiene una secuencia de péptidos de señal con terminal N, un dominio "pro" y un dominio de proteinas "maduras". El péptido de señal es típicamente menor de 30 residuos y se divide rápidamente después de su traslación a un lugar de disociación que se puede predecir mediante el uso del método de Von Heihne (1986), Nucleic Acids Research 14:4683-4691. El dominio "pro" es variable tanto en secuencia como en longitud, extendiéndose desde aproximadamente 200 hasta más de 400 residuos. El dominio "pro" se divide o disocia para producir el dominio con terminal C "maduro" de, aproximadamente 115-180 residuos, que incluye el dominio con terminal C de seis o siete cisteínas conservado de 97-106 residuos. Como se usa aquí, la "forma pro" de un miembro de la familia OP/BMP se refiere a una proteína que comprende un par plegado de polipéptidos, comprendiendo cada uno un dominio pro en asociación covalente o no covalente con los dominios maduros de los polipéptidos OP/MBP. Típicamente, la forma pro de la proteína es más soluble que la forma madura bajo condiciones fisiológicas. La forma pro parece ser la forma primaria secretada de las células cultivadas de mamíferos. La "forma madura" de la proteína se refiere al dominio con terminal C maduro que no se asocia ni covalentemente ni no covalentemente, con el dominio pro. Cualquier preparación de OP-1 se considera con tener forma madura cuando la cantidad de dominio pro en la preparación no es más del 5% de la cantidad de dominio con terminal C "maduro".

Los miembros de la familia OP/BMP útiles aquí incluyen cualquiera de las proteínas naturales conocidas, que incluyen la contraparte filogenética, alélica y otras variantes de la misma, producidas tanto de fuente natural como de forma biosintética (por ejemplo, incluyendo "muteínas" o "proteínas mutantes") así como nuevos miembros activos de la familia OP/BMP de proteínas.

Secuencias particularmente útiles incluyen las que comprenden los dominios de siete cisteínas con terminal C de mamíferos, preferentemente humanos, las OP-1, OP-2, OP-3, BMP2, BMP3, BMP4, BMP5, BMP6, BMP8 y BMP9 humanas. Otras proteínas útiles en la práctica de la invención incluyen formas activas de GDF-5, GDF-6, GDF-7, DPP, Vgl, Vgr-1, 60ª, GDF-1, GDF-3, GDF-5, GDF-6, GDF-7, BMP10, BMP11, BMP13, BMP15, UNIVIN, NODAL, SCREW, ADMP o NURAL y variantes de secuencias de aminoácidos de las mismas. En el caso de una forma de realización corrientemente preferida, los agentes terapéuticos renales de la invención se seleccionan de cualquiera de: OP-1, OP-2, OP-3, BMP2, BMP3, BMP4, BMP5, BMP6 y BMP9.

Publicaciones que dan a conocer estas secuencias así como sus propiedades químicas y físicas, incluyen: OP-1 y OP-2: US Pat. Nº 5,011,691, US Pat. Nº 5,266,683, y Ozkaynak (1990), EMBO J. 9:2085-2093; OP-3: WO 94/10203; BMP2, BMP3 y BMP4: US Pat. Nº 5,013,649, WO91/18098, WO88/00205, y Wozney (1988), Science 242:1528-1534; BMP5 y BMP6: WO90/11366 y Celeste (1991), Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 87:9843-9847; Vgr-1: Lyons (1989), Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 86: 4554-4558; DPP: Padgett (1987), Nature 325:81-84; Vgl: Weeks (1987), Cell 51: 861-867; BMP-9: WO95/33830; BMP10: WO94/26893, BMP-11: WO94/26892; BMP12: WO95/16035; BMP-13: WO95/16035; GDF-1: WO92/00382 y Lee (1991), Proc. Natl. Acad. Sci. (USA), 88: 4250-4254; GDF-8: WO/94/21681; GDF-9: WO94/15966; GDF-10: WO95/10539; GDF-11: WO96/01845; BMP-15: WO96/36710; MP121: WO96/01316; GDF-5 (CDMP-1, MP52): WO94/15949, WO96/14335, WO93/16099 y Storm (1994), Nature 368:639-643; GDF-6 (CDMP-2, BMP13): WO95/01801, WO96/14335 y WO95/10635; GDF-7(CDMP-3, BMP12): WO95/10802 y WO95/10635, BMP-3b: Takao (1996), Biochem, Biophvs Res. Comm. 219:656-662; GDF-3: WO94/
15965; 60ª: Blaster (1993), Cell 73:687-702 y número de acceso al GenBank nº L12032. En el caso de otra forma de realización, las proteínas útiles incluyen construcciones biosintéticamente activas, incluyendo proteínas biosintéticas noveles y proteínas quiméricas destinadas a usar secuencias procedentes de dos o más conocidas proteínas de la familia OP/BMP. Véase asimismo las construcciones biosintéticas dadas a conocer en la US Pat. Nº 5,011,691, cuya divulgación se incorpora aquí por referencia (por ejemplo, COP-1, COP-3, COP-4, COP-5, COP-7 y COP-16).

En el caso de otras formas de realización, los agentes terapéuticos renales útiles en este contexto incluyen proteínas terapéuticamente efectivas, en las cuales las secuencias de aminoácidos comprenden una secuencia que comparte, al menos, el 70% de la "homología" de la secuencia de aminoácidos y, de preferencia, el 75% u 80% de homología, con el dominio de siete cisteínas con termical C presente en las formas activas de la OP-1 humana (es decir, residuos 330-431, como queda representado en SEQ ID NO: 2 de US Pat Nº 5,266,683). En otras formas de realización preferidas, los agentes terapéuticos renales útiles en este contexto incluyen proteínas terapéuticamente efectivas, en las cuales las secuencias de aminoácidos comprenden una secuencia que comparte, al menos, el 60% de la identidad de las secuencias de aminoácidos y, preferentemente, el 65% o 70% de la identidad con el dominio de siete cisteínas con terminal C presente en las formas activas de la OP-1 humana. Así pues, una secuencia de aminoácidos candidatos propuesta o proyectada para tener eficacia terapéutica en la presente invención puede ser alineada con la secuencia de aminoácidos del dominio de siete cisteínas con terminal C de la OP-1 humana haciendo uso del método de Needleman (1970), J. Mol. Biol.. 48: 443-453, implementado convenientemente mediante programas por ordenador, tales como Align program (DNAstar, Inc.). Como se comprenderá por aquellas personas especialistas en la técnica, las secuencias homólogas o funcionalmente equivalentes incluyen unas disposiciones funcionalmente equivalentes de los residuos de cisteína dentro del dominio de las cisteínas conservadas, con la inclusión de las inserciones o supresiones de aminoácidos, que modifican la disposición lineal de estas cisteínas, pero no afectan materialmente a su relación en la estructura plegada de la proteína dimérica, con la inclusión de capacidad de formar tales enlaces de disulfuros intra o intercadena como pudieran ser necesarios para la actividad biológica. Por consiguiente, se ningunean los intersticios internos y las inserciones de aminoácidos en la secuencia candidata para fines de calcular el nivel de la homología o identidad de las secuencias de aminoácidos entre las secuencias candidata y de
referencia.

La "homología de las secuencias de aminoácidos" se sobrentienden aquí incluir tanto la identidad como la similaridad de las secuencias de aminoácidos. Así pues, como se usa en este contexto, una "homología" porcentual entre dos secuencias de aminoácidos indica el porcentaje de residuos de aminoácidos que son idénticos o similares entre las secuencias. Los residuos "similares" son "sustituciones conservativas", que satisfacen los criterios definidos por una "mutación de puntos aceptada" en Dayhoff (1978) Atlas of Protein séquense and structure, vol. 5 (Supl.3), pags. 354-352, Natl. Biomed. Res. Found., Washington, D.C. Así pues, las "sustituciones conservativas" son residuos que son física o funcionalmente similares a los correspondientes residuos de referencia, que tienen tamaño, forma, carga eléctrica, y/o propiedades químicas similares, tales como la capacidad de formar covalentes o de hidrógeno, o similares. Ejemplos de sustituciones conservativas incluyen la sustitución de un aminoácido por otro con características similares, por ejemplo, sustituciones dentro de los siguientes grupos: (a) valina, glicina; (b) glicina, alanina; (c) valina, isoleucina, leucina; (d) ácido aspártico, ácido glutámico; (e) asparagina, glutamina; (f) serina, treonina; (g) lisina, arginina, metionina; y (h) fenilanina, tirosina. El término "sustitución conservativa" o "variación conservativa" también incluye el uso de un aminoácido sustituido en lugar de un aminoácido padre o principal no sustituido en una cadena de polipéptido dada, siempre que la cadena resultante de polipéptidos sustituida también tenga eficacia terapéutica en la presente invención.

Los agentes terapéuticos renales de la invención también se caracterizan por unas actividades biológicas que podrán ser fácilmente averiguadas por las personas especializadas en la técnica. Específicamente, un agente terapéutico renal de la presente invención es (a) capaz de inducir condrogénesis en el ensayo ectópico de huesos de Reddi-Sampath (Sampath and Reddi 1981), Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 78:7599-7603 o un ensayo sustancialmente equivalente, (b) capaz de prevenir, inhibir, retardar o aliviar significativamente la pérdida progresiva de la función renal en un modelo animal estándar de insuficiencia renal crónica, o (c) capaz de causar una mejoría clínicamente significante en un marcador estándar de la función renal cuando se administran a un mamífero en o con riesgo de insuficiencia renal crónica.

El ensayo estópico de huesos de Reddi-Sampath es bien conocido en la técnica como un ensayo de la actividad condrogénica. El ensayo, que se puede realizar fácilmente, se describe en, por ejemplo, Sampath y Reddi (1981), Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 78:7599-7603; y Wozney (1989), "Proteínas Morfogenéticas para huesos", Progreso en la Investigación de los Factores del Crecimiento 1: 267-280. Muchos ensayos equivalentes, que utilizan otros animales y lugares de tejidos, se podrán emplear o desarrollar por aquellas personas especialistas en la técnica para evaluar la actividad biológica de los agentes terapéuticos renales de la presente invención. Véanse, por ejemplo, los ensayos biológicos descritos en la U.S. Pat. Nº 5,226,683.

Los agentes terapéuticos renales de la presente invención también pueden ser verificados en modelos animales de insuficiencia renal crónica. Los modelos de mamíferos de insuficiencia renal crónica en, por ejemplo, ratones, ratas, cobayas, gatos, perros, ovejas, cabras, cerdos, vacas, caballos y primates no humanos pueden crear y causar una lesión apropiada directa o indirectamente o traumatismo a los tejidos renales del animal. Modelos de animales de insuficiencia renal crónica se podrán crear, por ejemplo, realizando una nefrectomía parcial (por ejemplo, 5/65, que reduce el número de unidades de nefrones en funcionamiento a un nivel que inicia la hipertrofia renal compensatoria, la pérdida ulterior de nefrones y la mengua progresiva en la función renal, que caracteriza a la insuficiencia renal crónica.

Finalmente, los agentes terapéuticos renales de la presente invención pueden ser evaluados para su eficacia terapéutica en producir una mejoría clínicamente significante en un marcador estándar de la función renal cuando se administran a un individuo mamífero (por ejemplo, un paciente humano) en o con riesgo de insuficiencia renal crónica. Esta clase de marcadores de la función renal son bien conocidos en la bibliografía médica e incluyen, sin limitarse a, tasas de incremento en los niveles de BUN, tasas de incremento en la creatinina del suero, mediciones estáticas de la creatinina del suero, tasas de filtración glomerular (GFR), ratios de BUN/creatinina, concentraciones séricas de sodio (Na+), ratios de orina/plasma para creatinina, ratios de orina/plasma para la urea, osmalilidad de la orina, producción diaria de orina y similares (ver, por ejemplo, Brenner y Lazarus (1994), en Harrison's Principies of Internal Medicine, 13th edition, Isselbacher, eds., McGraw Hill Text, New York; luke and Strom (1994), in Internal Medicine, 4th Edition, J.H. Stein, ed., Mosby-Year Book, Inc. St. Louis).

Los agentes terapéuticos renales contemplados en este contexto pueden ser expresados partiendo de cDNA genómico intacto o truncado o de DNAs sintéticas en células huésped o anfitrión procarióticas o eucarióticas. Las proteínas diméricas se pueden aislar de los medios de cultivo y/o volver a plegar y dimerizar in vitro para formar composiciones biológicamente activas. Se pueden formar in vitro heterodímero mediante la combinación de cadenas de polipéptidos separados, distintos. Alternativamente, se pueden formar en una única célula mediante la coexpresión de ácidos nucleicos que codifican cadenas de polipéptidos separados distintos. Véase, por ejemplo, WO93/09229, o US Pat. Nº 5,411,941, algunos protocolos de producción de proteínas heterodímeas recombinantes, ejemplares. Las células huésped o anfitrión corrientemente preferidas incluyen, sin limitación, procariotes con inclusión de E.coli, o eucariotes que incluyen levadura, Saccharomyces, células de insectos o células de mamíferos, tales como CHO, COS o BSC células. Una persona especialista en la técnica advertirá que otras células huésped o anfitrión pueden ser usadas ventajosamente. Descripciones detalladas de las proteínas útiles en la práctica de esta invención, que incluyen como hacer, usar y comprobar para su actividad con condrogénica, se dan a conocer en numerosas publicaciones, con inclusión de US Pat. Nº 5,266,683 y 5,011,691, cuyas explicaciones se incorporan como referencia.

C. Morfógenos, inductores y agonistas

La tabla 1, más abajo, compendia diversos miembros naturales de la familia OP/BMP identificados hasta la fecha, con inclusión de su nomenclatura como se usa en este contexto, sus referencias del Listado de Secuencias y fuentes de publicación para las secuencias de aminoácidos para las proteínas de longitud completa no incluidas en el Listado de Secuencias. Cada uno de los términos genéricos expresados en la tabla 1 está destinado y debería ser sobreentendido a abarcar las proteínas terapéuticamente efectivas expresadas partiendo de los ácidos nucleicos, que codifican la secuencia identificada, mencionada más adelante y consignada en el Listado de Secuencias, o un fragmento activo o precursor de las mismas, o un equivalente funcional de las mismas tal como una variante natural o biosintética. Las variantes naturales incluyen formas de variantes alélicas aisladas de otras individuales de una única especie biológica así como variantes de especies (homólogos) aisladas de especies biológicas distintas filogenéticamente.

TABLA 1

1

TABLA 1 (continuación)

2

TABLA 1 (continuación)

3

Como se representa gráficamente en la figura 7, las proteínas OP-2 y OP-3 tienen un residuo de cisteínas adicionales en la región con terminal C conservada (véase por ejemplo residuo 41 de SEQ ID NOs: 6 y 7). La proteína GDF-1 tiene un inserto de cuatro aminoácidos dentro del dominio de cisteínas con terminal C conservado (residuos 44-47 de SEQW ID NO:13). Además, las proteínas BMP-2 y BMP-4 están perdiendo un residuo de aminoácidos dentro del dominio de cisteínas. Así pues, el alineamiento de estas secuencias de aminoácidos en la figura 7 ilustra los principios de alineamiento usados aquí con respecto a la secuencia de referencia preferida de la OP-1 humana, residuos 38-139 de SEQ ID NO:4.

Además de los agentes terapéuticos renales de las OP/BMP descritos en la sección previa, la presente invención podría ser practicada mediante el empleo de "morfógenos", como quedan definidos en este estudio. Los morfógenos útiles en la presente invención incluyen aquellos en los que las secuencias de aminoácidos de los polipéptidos morfógenos comprenden una secuencia que comparte, al menos, el 70% de la homología o "similaridad" de las secuencias de aminoácidos, y preferentemente el 80% de homología o similaridad con una secuencia de referencia seleccionada de entre los miembros precedentes de la familia de las OP/BMP naturales. Con carácter preferente, la proteína de referencia es la OP-1 humana, y la secuencia de referencia de la misma es el dominio de siete cisteínas con terminal C, presente en las formas activas de la OP-1 humana, residuos 38-139 de SEG ID NO:4. Por consiguiente, los morfógenos útiles en este caso incluyen contraparte filogenética, alélica y otras variantes de la secuencia de referencia preferida, ya sean producidas naturalmente o biosintéticamente (por ejemplo, con inclusión de "muteínas" o "proteínas mutantes", así como miembros noveles de la familia OP-BMP de proteínas expuestas e identificadas mas arriba, por ejemplo, en conexión con la tabla 1. Determinados polipéptidos morfógenos preferidos particularmente comparten, al menos, el 65% de identidad de aminoácidos con la secuencia de referencia preferida de la OP-1 humana, aún más preferentemente, al menos, el 65% de la identidad de los aminoácidos con
ella.

En el caso de otras formas de realización preferidas, los polipéptidos morfógenos útiles en la presente invención se definen por una secuencia genérica de aminoácidos. Por ejemplo, la Secuencia Genérica 7 (SEQ ID NO:1) y la Secuencia Genérica 8 (SEQ ID NO:2) dadas a conocer más abajo, acomodan las homologías compartidas entre los miembros preferidos de la familia de proteínas OP/BMP identificados hasta la fecha, con inclusión de, al menos, OP-1, OP-2, OP-3, BMP-2, BMP-3, BMP-4, 60A, DPP, Vg1, BMP-5, BMP-6, Vgr-1 y GDF-1 (SEQ ID NOs: 4-15, 24 y 26-29). Las secuencias genéricas incluyen la identidad de aminoácidos compartida por estas secuencias en el dominio con terminal C, definido por los dominios de seis y siete cisteínas (Secuencias Genéricas 7 y 8 respectivamente), así como los residuos alternativos para las posiciones variables dentro de la secuencia. Las secuencias genéricas proveen un dominio apropiado de cisteínas donde los enlaces de disulfuros Inter-o-intramoleculares pueden formar y contener determinados aminoácidos críticos probablemente para ejercer su influencia sobre la estructura terciaria de las proteínas plegadas. Además, las secuencias genéricas admiten unas cisteínas adicionales en posición 41 (Secuencia Genérica 7) o posición 46 (Secuencia Genérica 8), rodeando de este modo las secuencias activas de la OP-2 y la OP-3.

Secuencia Genérica 7

4

Donde cada Xaa independientemente es seleccionada de un grupo de uno o más aminoácidos definidos como:

"Res." significa "residuo" y Xaa a res.2 = (Tyr o Lys); Xaa a res.3 = Val o lie), Xaa a res.4 = (Ser, Asp o Glu); Xaa a res.6 = (Arg, Gin, Ser, Lys o Ala); Xaa a res.7 = (Asp o Glu); Xaa a res.8 = (Leu, Val o Ile); Xaa a res. 11 = (Gin, Leu, Asp, His, Asn o Ser); Xaa a res.12 = (Asp, Arg, Asn o Glu); Xaa a res. 13 = (Trp o Ser); Xaa a res.14 = (lie o Val); Xaa a res.15 = (Ile o Val); Xaa a res.16 (Ala o Ser); Xaa a res. 18 = (Glu, Gin, Leu, Lys, Pro or Arg); Xaa a res.19 = (Gly o Ser); Xaa a res.20 = (Tyr o Phe); Xaa a res.21 = (Ala, Ser, Asp, Met, His, Gin, Leu o Gly); Xaa a res.23 = (Tyr, Asn o Phe); Xaa a res.26 = (Glu, His, Tyr, Asp, Gin, Ala o Ser); Xaa a res.28 = (Glu, Lys, Asp, Gin o Ala); Xaa a res.30 = (Ala, Ser, Pro, Gin, Ile o Asn); Xaa a res.31 =- (Phe, Leu or Tyr); Xaa a res.33 = (Leu, Val o Met); Xaa a res.34 = (Asn, Asp, Ala, Thr o Pro); Xaa a res.35 = (Ser, Asp, Glu, Leu, Ala o Lys); Xaa a res.36 = (Tyr, Cys, His, Ser o lie); Xaa a res.37 = (Met, Phe, Gly o Leu); Xaa a res.38 = (Asn, Ser o Lys), Xaa a res.39 = (Ala, Ser, Gly o Pro); Xaa a res.40 = (Thr, Leu o Ser); Xaa a res.44 = (lie, Val o Thr); Xaa a res.45 = (Val, Leu, Met o Ile); Xaa a res.46 = (Gin o Arg); Xaa a res.47 = (Thr, Ala o Ser); Xaa a res.48 = (Leu o Ile); Xaa a res.49 = (Val o Met); Xaa a res.50 = (His, Asn o Arg); Xaa a res.51 = (Phe, Leu, Asn, Ser, Ala o Val); Xaa a res.52 = (Ile, Met, Asn, Ala, Val, Gly o Leu); Xaa a res.53 = (Asn, Lys, Ala, Glu, Gly o Phe); Xaa a res.54 = (Pro, Ser o Val); Xaa a res.55 = (Glu, Asp, Asn, Gly, Val, Pro o Lys); Xaa a res.56 = (Thr, Ala, Val, Lys, Asp, Tyr, Ser, Gly, Ile o His); Xaa a res. 57= (Val, Ala o lie); Xaa a res.58 = (Pro o Asp); Xaa a res.59 = (Lys, Leu o Glu); Xaa a res.60 = (Pro, Val o Ala); Xaa a res.63 = (Ala o Val); Xaa a res.65 = (Thr, Ala o Glu); Xaa a res.66 = (Gin, Lys, Arg o Glu); Xaa a res. 67 = (Leu, Met o Val); Xaa a res.68 = (Asn, Ser, Asp o Gly); Xaa a res.69 = (Ala, Pro o Ser); Xaa a res.70 = (He, Thr, Val o Leu); Xaa a res.71 = (Ser, Ala o Pro); Xaa a res.72 = (Val, Leu, Met o Ile); Xaa a res.74 = (Tyr o Phe); Xaa a res.75 = (Phe, Tyr, Leu o His); Xaa a res.76 = (Asp, Asn o Leu); Xaa a res.77 = (Asp, Glu, Asn, Arg o Ser); Xaa a res.78 = (Ser, Gin, Asn, Tyr o Asp); Xaa a res.79 = (Ser, Asn, Asp, Glu o Lys); Xaa a res.80 = (Asn, Thr o Lys); Xaa a res.82 = (Ile, Val o Asn); Xaa a res.84 = (Lys o Arg); Xaa a res.85 = (Lys, Asn, Gin, His, Arg o Val); Xaa a res.86 = (Tyr, Glu o His); Xaa a res.87 = (Arg, Gin, Glu o Pro); Xaa a res. 88 = (Asn, Glu, Trp o Asp); Xaa a res. 90 = (Val, Thr, Ala o Ile); Xaa a res.92 = (Arg, Lys, Val, Asp, Gin o Glu); Xaa a res 93 = (Ala, Gly, Glu o Ser); Xaa a res.95 = (Gly o Ala) y Xaa a res.97 = (His o Arg).

La secuencia genérica 8 (SEG IN NO:2) incluye la totalidad de la secuencia Genérica 7 y además, incluye la siguiente secuencia (SEQ ID NO: 14) en su término N:

5

Por consiguiente, comenzando con el residuo 7, cada "Xaa" en la Secuencia Genérica 8 es un aminoácido especificado definido como para la Secuencia Genérica 7, con la distinción o diferencia de que cada número de residuo descrito para la Secuencia Genérica 7 se desvía en cinco en la Secuencia Genérica 8. Así pues, "Xaa en res.2=(Tir o Lis)" en la Secuencia Genérica 7 se refiere a Xaa en res. 7 en la Secuencia Genérica 8. En la Secuencia Genérica 8, Xaa en res. 2= (Lis, Arg, Ala o Gln), Xaa en res. 3 = (Lis, Arg o Met); Xaa en res. 4= (His. Arg o Gln); y Xaa en res. 5 = (Glu, Ser, His, Gli, Arg, Pro, Tr o Tir).

Como queda indicado más arriba, determinadas secuencias de polipéptidos morfógenos corrientemente preferidos, útiles en esta invención tienen más del 60% de identidad, preferiblemente más del 65% de identidad, con la secuencia de aminoácidos, que define la secuencia de referencia preferida de hOP-1. Estas secuencias particularmente preferidas incluyen variantes de contraparte filogenéticas y alélicas de las proteínas OP-1 y OP-2, con inclusión de la proteína 60A de Drosophila. Por consiguiente en ciertas formas de realización particularmente preferidas, morfógenos útiles incluyen proteínas activas, que comprenden pares de cadenas de polipéptidos dentro de la secuencia de aminoácidos genéricos referenciada aquí como "OPX" (SEQ ID NO:3), que define el dominio de las siete cisteínas y acomoda las homologías entre algunas variantes identificadas de OP-1 y OP-2. Como queda descrito en esta memoria, cada Xaa en una posición dada con carácter independiente se selecciona de entre los residuos que se presentan en la correspondiente posición en la secuencia con terminal C de la OP-1 u OP-2 humanas o de ratones (véase SEQ ID NOs:4-7 y/o SEQ ID NOs: 15-22).

En el caso de otras formas de realización preferidas, los polipéptidos morfógenos útiles tienen secuencias de animoácidos, que comprenden una secuencia codificada por un ácido nucleico, se híbrida bajo condiciones de hibridación rigurosas, en DNA o RNA, que codifica las secuencias morfógenas de referencia, por ejemplo, secuencias con terminal C que definen los siete dominios con terminal C conservados en la OP-1 u OP-2, por ejemplo los nucleótidos 1036-1341 y los nucleótidos 1390-1695 de SEQ ID NO: 15 y 19 respectivamente. Como se usan aquí, las condiciones de hibridación rigurosas se definen como hibridación de acuerdo con técnicas conocidas en un 40% formamida, 5 X SSPE, solución de Denhardt 5 X y un 0,1% SDS a 37ºC durante la noche y lavado en 0,1 X SSPE, 0,1% de SDS a 50º.

Como queda indicado más arriba, los morfógenos útiles en la presente invención generalmente son proteínas diméricas que comprenden un par plegado de los susodichos polipéptidos. Los morfógenos son inactivos cuando se reducen, pero son activos como homodímeros oxidizados y cuando se oxidizan en combinación con otros morfógenos de esta invención para producir heterodímeros. Así pues, los miembros de un par plegado de polipéptidos morfógenos en una proteína morfogénicamente activa se pueden seleccionar, con carácter independiente, de cualquiera de los polipéptidos morfógenos específicos mencionados anteriormente. Como queda indicado más arriba, una proteína, es morfogénica generalmente si induce la cascada evolutiva de eventos celulares y moleculares que culminan en la formación de nuevo tejido específico de órganos. Los morfógenos generalmente son capaces de inducir la totalidad de las siguientes funciones biológicas e un medio morfogénicamente permisivo: la estimulación de la proliferación de células progenitoras; la estimulación de la diferenciación de células progenitoras y el apoyo al crecimiento y mantenimiento de células diferenciadas.

Los morfógenos útiles en los métodos, composiciones y dispositivos de esta invención incluyen proteínas que comprenden cualquiera de las cadenas de polipéptidos descritas más arriba, tanto se aíslen de fuentes naturales como si se producen mediante DMA recombinante u otras técnicas sintéticas, e incluye variantes de contra-partes alélicas y filogenéticas de estas proteínas así como variantes biosintéticas (muteínas) de las mismas, y diversas construcciones truncadas, y de fusión. Las variables mutantes de supresión o adición también se conciben ser activas, con inclusión de aquellas que pudieran modificar o alterar el dominio de seis o siete cisteinas con terminal C conservado, siempre que la alteración no rompa funcionalmente la relación de estas cisteínas con la estructura plegada. Por consiguiente, esta clase de formas activas se consideran el equivalente de las construcciones específicamente descritas, dadas a conocer aquí. Las proteínas podrían incluir formas que tienen patrohes (patterns) varianntes de glicosilación, términos N variables, una familia de proteínas relacionadas, que tienen regiones de homología de secuencias de aminoácidos, y formas activas truncadas o mutadas de proteínas naturales o biosinéticas, producidas mediante expresión de DNA recombinante en células anfitrión u hospedantes.

La figura 7 expone una alineación de las secuencias de aminoácidos de las regiones activas de proteínas naturales, que han sido identificadas o apreciadas aquí como agentes terapéuticos renales OP/BMP, con inclusión de la OP-1 humana (hOP-1, SEQ ID NOs:4 y 15-16) ratón OP-1 (mOP-1, SEQ ID NOs: 5 y 17-18) humana y de ratones OP-2 (SEQ ID NOs: 6, 7, y 19-22) OP-3 de ratón (SEQ ID NOs: 25-26), BMP-2 (SEQ IF NO: 8), BMP-4 (SEQ ID NO: 9), BMP-3 (SEQ ID NO: 27), DPP (procedente de Drosophila. SEQ ID NO:10), Vgl, (procedente de Xenopus, SEQ ID NO: 11), Vgr-1 (procedente de ratón, SEQ ID NO: 12) GDF-1 (procedente de ratón y/o humana, SEQ ID NOs: 13,30 y 31), proteína 60A (procedente de Drosophila, SEQ ID NOs: 23 y 24), BMP-5 (SEQ ID NO:28) y BMP-6 (SEQ ID NO: 29). Las secuencias se alinean esencialmente siguiendo el método, de Needleman et al. (1970) J.Mol. Biol., 48: 443-453, calculado mediante el uso del Align Program (DNAstar, Inc.): En la figura 7, el aminoácido en esta posición es el mismo que el correspondiente aminoácido en hOP-1. Tres rayas indican que no hay presencia alguna de aminoácidos en esta posición, y se incluyen para fines de ilustrar homologías.

Por ejemplo, el residuo aminoácido 60 de la BMP-2 (CBMP-2A) y BMP-4 (CBMP-2B) está "extraviado". Por supuesto, ambas de estas secuencias de aminoácidos en esta región comprenden Asn-Ser (residuos 58, 59), con BMP-2 después, que comprende Lis e Ile, mientras que la BMP-4 comprende Ser e Ile. La figura también ilustra la manipulación de inserciones en la secuencia de aminoácidos morfógenos: entre los residuos 56 y 57 de la BMP-3 existe un residuo de Val insertado; entre los residuos 53 y 44 de la GDF-1 se inserta la secuencia de aminoácido Gli-Gli-Pro-Pro. Se prescinde de tales desviaciones de la secuencia de morfógenos de referencia para fines de cálculo de la relación definida entre, por ejemplo, GDF-1 y hOP-1.

Como se evidencia de las comparaciones de las secuencias de aminoácidos expuestas en la figura 7, se pueden hacer cambios significativos de los aminoácidos partiendo de la secuencia de referencia aunque reteniendo su actividad. Por ejemplo, aunque la secuencia de proteínas GDF-1 representada gráficamente en la figura 7 sólo comparte alrededor del 50% de la identidad de aminoácidos con la secuencia de las hOP-1 descrita en estas líneas, la secuencia de las GDF-1 comparte más del 70% de la homología (6 "similaridad") de la. secuencia de amino-ácidos con la secuencia de las hOP-1, en las cuales la "homología" o "similaridad" incluye sustituciones de aminoácidos conservativas permitidas dentro de la secuencia alineada, por ejemplo, como queda definido por Dayhoff et al. (1979) Atlas de. la Secuencia y estructura de las Proteínas Suppl. 3, pp. 345-362, (M.O. Dayhoff, ed. Natl. BioMed. Res Found; Washington DC).

Por lo tanto, en algún otro aspecto preferido, la invención incluye morfógenos, que comprenden especies de cadenas de polipéptidos que tiene la secuencia genérica de aminoácidos referenciada en este caso como "OPX", la cual define el dominio de siete cisteínas y acomoda las identidades, y homologías entre las diversas proteínas OP-1 y OP-2 identificadas. La OPX se presenta, en SEQ ID. NO:3. Como queda descrito anteriormente, cada Xaa en una posición, con carácter independiente, se selecciona de entre los residuos que aparecen en la correspondiente posición en la secuencia con terminal C de la OP-1 u OP-2 humana o de ratones (véase figura 7, y SEQ ID NOs: 4-7 y/o SEQ ID NOs: 15-22).

En el caso de otro conjunto o serie de formas de realización, se podrá administrar a un mamífero una cantidad efectiva de un agente capaz de estimular o inducir la expresión endógena aumentada de un agente terapéutico renal OP/BMP o morfógeno. Por ejemplo, un agente capaz de estimular o inducir la producción de OP-1 y/o la secreción del tejido renal se podría proveer a un mamífero, por ejemplo, mediante administración sistémica al mamífero o mediante administración directa del agente estimulador de morfógenos al tejido renal. Alternativamente, el agente estimulador de morfógenos o "inductor de morfógenos" pudiera inducir la expresión de morfógenos y/o la secreción en un punto o sitio distante (por ejemplo, en un lugar del tejido que no sea tejido renal), con el morfógeno expresado que circula hacia el tejido renal. Un método para identificar y comprobar los agentes capaces de modular los niveles de morfógenos endógenos en un tejido dado se describe detalladamente en las aplicaciones publicadas W093/05172 y W093/05751, cuya doctrina se incorpora a esta memoria como referencia. Brevemente, los compuestos candidatos se pueden identificar y verificar mediante incubación in vitro con un tejido o células de prueba, o una línea de células cultivadas, derivadas de las mismas, para un período de tiempo suficiente para permitir que el compuesto afecte a la producción, es decir, la expresión y/o secreción, de un morfógeno producido por las células de este tejido.

En este caso, el tejido idóneo o las células cultivadas de un tejido adecuado, se pueden seleccionar, preferentemente, de epitelio renal, fibroblastos y osteoblastos.

En caso de otra serie de formas de realización, un agente, que actúa como un agonista de un agente terapéutico renal OP/BMP o receptor de morfógenos se podría administrar en vez del agente terapéutico renal OP/BMP o morfógeno en sí. Este tipo de agente también pudiera ser referido a un morfógeno "Mímico", "mimético" o "análogo". Así pues, por ejemplo, un péptido pequeño u otra molécula que puede imitar la actividad de un agente terapéutico renal OP/BMP o morfógeno en enlazar y en activar el agente terapéutico renal OP/BMP, o el receptor del morfógeno se podrá emplear como un equivalente del agente terapéutico renal OP/BMP o morfógeno. De preferencia, el agonista es un agonista completo, pero también se pueden emplear ventajosamente agonistas de receptores parciales. Métodos de identificación esta clase de agonistas son conocidos en la técnica e incluyen ensayos para compuestos, que inducen respuestas por medio de morfógenos (por ejemplo, la inducción de la diferenciación del mesenquima metanéfrico, la inducción de formación ósea endocondral). Por ejemplo, métodos de identificación de los inductores morfógenos o agonistas de receptores de morfógenos se podrán encontrar en U.S. Ser. no 08/478,097, registrado el 7 de junio de 1995 y U,S. Ser. No 08/507, 598, registrado el 26 de julio de 1995, cuyas divulgaciones se incorporan a este estudio como referencia.

Finalmente, en el caso de otras formas de realización, se podrán implantar células en el riñón de un individuo en o con riesgo de insuficiencia renal crónica, o con riesgo de necesitar terapia sustitutoria renal, a fin de servir de una fuente de agente terapéutico renal OP/BMP o morfógeno y/o proveer una fuente de tejido renal funcional, adicional. Este tipo de células pudieran ser células anfitrionas o donantes, que normalmente expresan los agentes terapéuticos renales OP/BMP o morfógenos, o que han sido tratadas con agentes terapéticos renales OP/BMP o con morfógenos.

D. Individuos para el tratamiento

Como un asunto o materia general, los métodos de la presente invención se podrán utilizar para cualquier individuo o sujeto mamífero en o con riesgo de insuficiencia renal crónica, o con riesgo de la necesidad de terapia sustitutoria renal (es decir, diálisis crónica o transplante renal). Los sujetos mamíferos, que pudieran ser tratados de conformidad con los métodos de la invención, incluyen, pero no se limitan a, individuos humanos o pacientes. Sin embargo, además, la invención podría ser empleada en el tratamiento de mamíferos domesticados, que se mantienen como compañeros del hombre (por ejemplo, perros, gatos, caballos), los que tienen un valor comercial importante (por ejemplo, vacas lecheras, ganado para carne, animales para la práctica de deportes), los que tienen un valor científico importante (por ejemplo, especímenes en cautividad o en libertad de especies en peligro de extinción), o los que de otra parte, tienen valor. Además, como un asunto o materia general, los individuos para tratamiento con los métodos de la presente invención necesitan no presentar indicaciones para tratamiento con un agente terapéutico renal OP/BMP o morfógeno distintas que aquellas indicaciones asociadas al riesgo de insuficiencia renal crónica. Esto es, los individuos para tratamiento se esperan libres, de otro modo, de indicaciones para tratamiento de conformidad con la presente invención. En algún número de casos, sin embargo, los individuos pudieran presentarse con otros síntomas (por ejemplo, osteodistrofia) para los cuales sería indicado el tratamiento con un agente terapético renal OP/BMP o morfógeno. En tales casos, el tratamiento se ajustaría adecuadamente a fin de evitar una posología o dosificación excesiva.

Cualquier persona de pericia ordinaria en las técnicas médicas o veterinarias está experimentada para reconocer individuos o sujetos, que puedan estar en riesgo sustancial de insuficiencia renal crónica o en riesgo sustancial de la necesidad de terapia sustitutoria renal. En particular, se espera que pruebas clínicas y no clínicas así como la experiencia acumulada, en relación a lo dado a conocer actualmente y a otros métodos de tratamiento, informen a los profesionales expertos en la decisión de si un individuo dado se halla en o con riego de insuficiencia renal crónica o con riego de necesitar terapia sustitutiva renal, y si cualquier tratamiento concreto se adecua mejor a las necesidades del individuo, con inclusión del tratamiento de acuerdo con la presente invención.

Como una materia general, un individuo mamífero podrá ser considerado como estando en o con riesgo de insuficiencia renal crónica, o con riego de necesitar terapia sustitutoria renal, si este individuo ya ha sido diagnosticado como aquejado de, o sería considerado como estando aquejado de, una situación que típicamente lleva a la pérdida progresiva de la función renal asociada a la pérdida progresiva del funcionamiento de las unidades de nefrones. Tales estados incluyen, pero no se limitan a, insuficiencia renal crónica, enfermedad renal en fase final, nefropatía diabética crónica, nefroesclerosis hipertensiva glomérulonefritis crónica, nefritis hereditaria, displasia renal y similares. Estas y otras enfermedades y estados conocidos en la técnica, típicamente conducen a una pérdida progresiva del funcionamiento de los nefrones y a la iniciación de una insuficiencia renal crónica.

Con frecuencia, una persona de pericia en las técnicas médicas o veterinaria; podría basar un pronóstico, diagnóstico o decisión del tratamiento en un examen de una muestra de biopsia renal. Estas biopsias proporcionan un cúmulo de información útil en el diagnóstico de trastornos o desarreglos del riñón, pero debido a la agresividad del procedimiento y al trauma adicional a un riñón presumiblemente enfermo, pudieran no ser apropiadas para todos los individuos. Sin embargo, individuos en o con riesgo de insuficiencia renal crónica, o con riesgo de necesitar una terapia sustitutoria renal, podrían ser reconocidos mediante las indicaciones histológicas de las biopsias renales que incluyen pero NO se restringan a, la hipertrofia glomerular, la hipertrofia tubular, la glomeruloesclerosis, la esclerosis túbulointersticial y similares.

Técnicas menos invasivas para determinar la morfología del riñón incluyen MRI, CAT y exploraciones mediante ultrasonidos. También son disponibles técnicas de exploración que emplean agentes de contraste o de reproducción de imágenes (por ejemplo, tintes radioactivos, pero, debería ser tenido en cuenta, algunos de éstos son particularmente tóxicos a los tejidos renales y, por consiguiente, su uso pudiera desaconsejarse en individuos en o con riesgo de insuficiencia renal crónica.

Este tipo de técnicas de exploración no invasivas podrán ser empleadas para detectar situaciones o estados tales como fibrosis o esclerosis renal, necrosis renal focal, quistes renales e hipertrofia voluminosa renal, que pondrán a un individuo en o con riesgo de insuficiencia renal crónica, o con riesgo de necesitar la terapia sustitutiva renal.

Con bastante frecuencia, el pronóstico, el diagnóstico y/o las decisiones de tratamiento se basan en indicaciones clínicas de la función renal. Una indicación de esta índole es la presencia, en el sedimento urinario, de un número inusual de moldes (casts) "amplios" o de "insuficiencia renal", lo cual es indicativo de una hipertrofia tubular y sugiere la hipertrofia renal compensatoria, que tipifica a la insuficiencia renal crónica. Una mejor indicación de la función renal es la tasa de flujo glomerular (GFR), que se puede medir directamente mediante la cuantificación de la tasa de aclaramiento (clearance) de marcadores particulares, o que se pueda inferir de mediciones indirectas.

Debería advertirse que la presente invención no se dirige a la medición de la GFR o al diagnóstico de la insuficiencia renal crónica. Los métodos de tratamiento de la presente invención, necesitan, por consiguiente, no ser restringidos a individuos que se presentan con cualesquiera medidas particulares de la GFR, o cualquier otro marcador de la función renal. Realmente no es necesario que la GFR de un individuo o cualquier otro marcador particular de la función renal se determinen antes de practicar o de poner en práctica los tratamientos de la presente invención.

Sin embargo, la medición de la GFR se considera que es un medio preferido de determinación de la función renal.

Como es bien conocido en la técnica, la GFR refleja la tasa de aclaramiento (clearance) de un compuesto de referencia o marcador desde el plasma a la orina. El compuesto marcador, objeto de consideración, es típicamente uno que filtra libremente por los glomérulos, pero que no se secreta o reabsorbe activamente por los túbulos renales, y que no se enlaza significativamente por las proteínas en circulación. La tasa de aclaramiento (clearance) se define típicamente mediante la fórmula, presentada más arriba, la cual hace relación al volumen de orina producida en un período de veinte horas, ya las concentraciones relativas del marcador en la orina y plasma. Para ser más exactos, la GFR también debería ser corregida para la extensión superficial del cuerpo. El compuesto de referencia "estándar oro" es la inulina a causa de sus propiedades de filtración, y falta de enlace sérico. Sin embargo, la concentración de este compuesto es difícil de cuantificar en la sangre u orina. Por consiguiente, las tasas de aclaramiento (clearance de otros compuestos, incluyendo el p-aminohipurato (PAH) y la creatinina, se utilizan "frecuentemente en lugar de la inulina. Además, con frecuencia se emplean diversas fórmulas que tratan de simplificar la estimación de la GFR real mediante la omisión" de consideraciones de las concentraciones de orina reales del marcador, los volúmenes diarios reales de orina producida o el área real de la superficie corporal. Estos valores pudieran ser reemplazados por evaluaciones estimativas basadas en otros factores, por valores de la línea de base establecidos para el mismo individuo, o por valores estándar para individuos similares. Estas evaluaciones estimativas deberán ser usadas con precaución, no obstante, ya que pueden acarrear supuestos inapropiados en base a la función renal de individuos normales o sanos.

Diversos métodos y formulas han sido desarrollados en la técnica, que describen un valor esperado de la GFR para un individuo sano con ciertas características. En particular, se dispone de formulas que proporcionan un valor esperado de la GFR, basado en niveles de creatinina del plasma, edad, peso y sexo. Más abajo se presenta una fórmula de este género para una GFR esperada. Por supuesto, se podrían emplear otras fórmulas y se podrían preparar tablas de valores estándar para individuos de una edad, peso, sexo, y/o concentración de creatinina del plasma dados. Actualmente también hay disponibles en la técnica métodos más recientes de medir o evaluar la GFR (por ejemplo, usando las tecnologías de NMR o MRI), y se podrían usar de conformidad con la presente invención (véase por ejemplo, U.S. Pat. Nos. 5,100,646 y 5,335,660).

Como una materia general, independientemente de la manera en que se mide o evalúa la GFR, un individuo podrá ser considerado estar en o con riesgo de insuficiencia renal crónica, o con riesgo de necesitar terapia sustitutoria renal, cuando el individuo tiene una GFR, que, de manera crónica, menor de aproximadamente el 50% de la GFR esperada para este sujeto. El riesgo se considera mayor a medida que cae más bajo la GFR. Así pues, un sujeto o individuo se considera crecientemente con riesgo si tiene una GFR, que, de manera crónica, es menor del 40%, 30% o 20% aproximadamente la GFR esperada.

Como un asunto o materia general, independientemente de la manera en que se mida o evalúe la GFR, un individuo varón humano con un peso de, al menos, unos 50 kgs pudiera considerarse estar en o con riesgo de insuficiencia renal crónica, o con riesgo de necesitar terapia substitutiva renal, cuando el individuo tiene una GFR, que es, de manera crónica, menor de unos 50 ml/min. El riesgo se considera mayor a medida que la GFR cae más bajo. Así pues, un individuo se considera crecientemente con riesgo BÍ tiene una GFR que es, de manera crónica, menor de unos 40, 30 o 20 ml/min.

Como una materia o asunto general, independientemente de la manera en que se mida o evalúe la GFR, una hembra humana con un peso de, al menos, unos 40 kgs., pudiera considerarse estar en o con riesgo de insuficiencia renal crónica, o con riesgo de necesitar terapia substitutiva renal cuando el individuo tiene una GFR, que de manera crónica, es menor de unos 40 ml/min. El riesgo es considerado mayor a medida que desciende la GFR. Así pues, un individuo se considera crecientemente con riesgo si tiene una GFR, que, de manera crónica, es menor de unos 30, 20, 10 ml/min.

Mediante un empleo de una variedad de métodos, con inclusión de los exámenes biológicos, procedimientos de exploración no invasivos, evaluaciones de indicadores clínicos y otras técnicas descritas más arriba y conocidas en el arte, los profesionales médicos y veterinarios podrán proveer evaluaciones del número de unidades de nefrones en funcionamiento, que un individuo posee, o el porcentaje de unidades de nefrones en funcionamiento, que un individuo posee en relación a un individuo sano, pero, de otra manera, similar (por ejemplo, un individuo de la misma especie de aproximadamente la misma edad, peso y sexo). Así pues, por ejemplo, una biopsia pudiera revelar un decrecimiento en la densidad de los nefrones funcionales o la visualización de imágenes con agentes filtrados podrían indicar pérdidas del tejido renal funcional y/o la capacidad de filtrado. Mediciones o estimaciones de esta naturaleza proporcionan otros medios de expresión cuando un individuo está en o con riesgo de insuficiencia renal crónica, o con riesgo de necesitar terapia sustitutoria renal. Así pues, como un asunto general, un individuo podría considerarse estar en o con riesgo de insuficiencia renal crónica, o con riesgo de necesitar terapia sustitutoria renal, si este sujeto o individuo posee un número de unidades de nefrones funcionales, que en menor del 50% aproximadamente del número de unidades de nefrones funcionales de un individuo sano, pero, si no, similar.

Como anteriormente, el riesgo se considera mayor a medida que sigue decreciendo el número de nefrones funcionales. Así pues, un individuo se considera crecientemente con riesgo si tiene un número de nefrones funcionales que es menor de alrededor del 40%, 30% o 20% del número para un individuos similar, pero sano.

Finalmente, se debería advertir que los individuos que poseen un único riñón, independientemente de la manera de pérdida del otro riñón (por ejemplo, traumatismo físico, eliminación quirúrgica, defecto de nacimiento), pudieran ser considerados a primera vista (prima facie) con riesgo de insuficiencia renal crónica, o la necesidad de terapia sustitutoria renal. Esto es particularmente cierto para aquellos individuos, en los cuales se ha perdido un riñón debido a una enfermedad o situación, que pudiera aquejar al riñón remanente. Similarmente, los individuos que ya son receptores de un transplante renal o que ya están recibiendo diálisis crónica (por ejemplo, hemodiálisis crónica o diálisis peritoneal ambulatoria continua) podrán considerarse prima facie a primera vista estar con riesgo de insuficiencia renal crónica, o la necesidad de terapia sustitutoria renal ulterior o adicional.

E. Formulaciones y Métodos de Tratamiento

Los agentes terapéuticos OP/BMP, los morfógenos, los inductores morfógenos o los agonistas de receptores morfógenos de la presente invención se podrán administrar por cualquier vía que sea compatible con el morfógeno, inductor o agonista concretos empleados. Así pues, una administración apropiada pudiera ser oral o parenteral con inclusión de intravenosa, intraperitoneal y vías de administración intracapsulares renales. Además, la administración podría ser mediante inyecciones periódicas de una pildora del agente, o podría hacerse continua mediante administración intravenosa o intraperitoneal desde un reservorio o depósito que es externo (por ejemplo, una bolsa i.v.) o interno (por ejemplo, un implante bioerosionable).

Los agentes terapéuticos de la invención se podrán proporcionar a un individuo con ayuda de unos medios adecuados, con preferencia directamente (por ejemplo, localmente, como mediante inyección o administración tópica a un lugar (locus) de tejido) o sistémicamente (por ejemplo, parenteral u oralmente. En aquellos casos en los que el agente se ha de proveer parenteralmente, tal como vía intravenosa, subcutánea, intramuscular, intraorbital, oftálmica, intraventricular, intracraneal, intracapsular, intraespinal, intracisternal, intraperitoneal, bucal, rectal, vaginal, intranasal o mediante administración de aerosoles, el agente, de preferencia, comprende parte de una solución acuosa. La solución es fisiológicamente aceptable de modo que, además del suministro del deseado agente al paciente, la solución no afecte adversamente al equilibrio de electrolitos y/o volumen del paciente, de otra manera. Así pues, el medio acuoso para el agente podría comprender salina fisiológica normal (por ejemplo, 9,85% de NaCl, 0,15M, pH 7-7,4). Este tipo de solución acuosa que contiene el agente, se puede hacer, por ejemplo, mediante la disolución del agente en un 50% de etanol, que contiene acetonítrico en 0,1% de ácido trifluoroacético (TFA) o 0,1% de HCl, o disolventes equivalentes.

A continuación se añade un volumen de la solución resultante, por ejemplo, a diez volúmenes de salina tamponada con fosfato (PBS), que, además, pudiera incluir 0,1-0,2% de albúmina de suero humano (HSA). La solución resultante, con carácter preferente, se agita extensivamente.

Si se desea, un agente podría hacerse más soluble mediante su asociación con una molécula idónea. Por ejemplo, asociación de la OP/BMP madura o dímero morfógeno con el dominio pro da por resultado la forma pro de la proteína, la cual típicamente es más soluble y/o susceptible de dispersión en soluciones fisiológicas que la correspondiente forma madura. De hecho, se cree que las proteínas endógenas OP/BMP son transportadas (por ejemplo, secretadas y diseminadas)en el cuerpo de los mamíferos en esta forma.

Esta forma soluble de la proteína se puede conseguir partiendo del medio de cultivo de células de mamíferos, por ejemplo, células transfectadas con codificación de ácidos nucleicos y capaz de expresar la proteína OP/BMP o el morfogeno.

Con carácter alternativo, una especie soluble puede ser formulada mediante el complejamiento del dímero maduro (o un fragmento activo del mismo) con un dominio pro o un fragmento del mismo que aumenta la solubilidad (descrito más enteramente más abajo).

Otra molécula capaz de aumentar la solubilidad y particularmente útil para las administraciones orales, es la caseína. Por ejemplo, la adición de un 0,2% de caseína incrementa la solubilidad de la forma activa madura de la OP-1 en un 80%. También podrían resultar útiles otros componentes encontrados en la leche y/o diversas proteínas del suero.

Finalmente, como queda indicado más arriba, en el caso de otras series de modos de realización se podrían implantar células renales en el riñón de un individuo en o con riesgo de insuficiencia renal crónica, o con riesgo de necesitar terapia sustitutiva renal, a fin de servir de fuente de un agente terapéutico renal OP/BMP o mofógeno y/o a fin de proveer una fuente de tejido renal funcional adicional. Estas células podrán ser cualesquiera células de mamífero compatibles, con inclusión de las células progenitor mesenquimales renales, o células progenitor mesenquimales renales, que han sido inducidas a experimentar una diferenciación metanéfrica. Estas células pudieran ser derivadas de un donante (por ejemplo, un donante coincidente con el tipo de tejido, hermano o hermana, mellizos o gemelos idénticos), pudieran ser derivadas de un cultivo histológico (por ejemplo, cultivo de mesenquima renal no diferenciado, cultivo de tejido renal fetal), o podría ser explantado del individuo y luego ser reimplantado después de su proliferación y/o diferenciación. De preferencia, las células se inducen a experimentar una diferenciación metanéfrica mediante tratamiento con un agente terapéutico renal OP/BMP o morfógeno (por ejemplo, OP-1) antes o después de su implantación.

Así pues, por ejemplo, las células progenitor mesenquimales renales se podrían explantar de un individuo, permitir o hacer proliferar in vitro, para ser inducidas a sufrir una diferenciación metanefrítica mediante un tratamiento con morfógenos, y ser reimplantadas donde pudieran proveer una fuente de morfógeno y/o diferenciarse además en el tejido renal funcional.

De preferencia, la invención provee su uso en la fabricación de un medicamento en que el medicamento es idóneo para su administración oral o parenteral, por ejemplo:

(i) intravenosa o (ii) intraperitoneal o (iii) a la cápsula renal; o (iv) en que se ha implantado una prótesis en dicho mamífero para dicha administración (con carácter optativo, en que dicha prótesis es una prótesis intravenosa, una prótesis intraperitoneal o una prótesis intracapsular renal) o (v) mediante un dispositivo implantado.

La práctica de la invención, con inclusión de los aspectos preferidos adicionales y formas de realización de la misma, será comprendida todavía más completamente partiendo de los siguientes ejemplos, que se presentan en este caso para ilustración únicamente y no serían interpretados como limitadores de la invención en cualquier
modo.

Ejemplos Modelo de Riñón Remanente en Ratas

Una nefrectomía parcial (5/6) de ratas o un modelo de riñón remanente de ratas (RRKM) se empleó esencialmente como se describe en (Vukicevic et al. (1987) et al. J. Bone Minera Res 2: 533).

Ratas macho (de 2-3 meses, con un peso de unos 150-200 g) se sometieron a una nefrectomía unilateral (riñón izquierdo o derecho). Después de aproximadamente una semana, 2/3 del riñón remanente fue eliminado quirúrgicamente. Inmediatamente después de la cirugía, la creatinina del plasma y los niveles de BUN se elevaron dramáticamente debido a la pérdida de masa renal y de su función. Durante las próximas semanas de esta fase de insuficiencia "aguda", la creatinina del plasma y los niveles de BUN de los animales supervivientes descienden un poco hacia valores normales, pero siguen siendo elevados.

Luego la función renal parece mantenerse relativamente constante o estable durante un período de duración variable. Después de este momento, los animales entran en un período de insuficiencia renal crónica, en el cual existe una merma o declinación esencialmente lineal en la función renal que termina en muerte.

Como controles quirúrgicos, las ratas adicionales se sometieron a una operación "de ficción o simulación", en la cual se descapsularon los riñones, pero no se eliminó el tejido renal.

Modelo de Intervención para insuficiencia Renal Crónica

En el caso de este modelo, tanto las ratas nefrectomizadas y operadas de ficción se mantuvieron durante aproximadamente 5-6 meses después de la intervención quirúrgica. En este momento, los animales nefrectomizados supervivientes habían pasado la fase estable y habían presentado o registrado la insuficiencia renal crónica.

Las ratas se dividieron en 8 grupos con 12 ratas en cada grupo. Dos grupos de ratas nefrectomizadas se usaron como controles (controles NX), con uno de aquellos grupos que no recibieron ningún tratamiento en absoluto, mientras que el otro recibió inyecciones de solamente el tampón excipiente. Además, dos grupos de ratas operadas en ficción o simulación se usaron como controles (controles de ficción), con un grupo que recibió únicamente el tampón excipiente, mientras que el otro recibió la OP-1 (sOP-1) soluble en 10 mg/kg de peso del cuerpo. Se emplearon cuatro grupos experimentales de ratas nefrectomizadas, que recibieron la sOP-1 en 1, 3, 10 ó 50 \mug/kg de peso del cuerpo mediante inyección intraperitoneal (animales OP-1 Nx).

Las ratas tratadas con la OP-1 y únicamente con expediente recibieron tres inyecciones por semana durante 4-8 semanas. El volumen total de inyección fue de 300 \mul. No se observaron diferencias significativas estadísticamente entre los dos grupos de control o entre los dos grupos de control de ficción o simulación.

Comparado con el grupo de ficción que recibió solamente el excipiente, el control Nx que recibió únicamente el excipiente, demostró creatinina del suero significativamente (p < 0,01) elevada (figura 1) al final del estudio, indicando una pérdida significante de la función renal. Aunque las ratas nefrectomizadas tratadas con un peso corporal de 1 ó 3 \mug/kg la sOp-1 no mostró creatinina del suero significativamente reducida cuando se compara con el control Nx, las ratas nefrectomizadas tratadas con sOP-1 en dosis de 10 ó 50 \mug/kg de peso corporal mostraron reducciones significantes (p < 0,05) en los valores de creatinina (figura 1). Se observaron resultados similares para niveles de urea en el suero: aunque las ratas nefrectomizadas tratadas con 1 ó 3 \mug/kg de peso corporal la sOP-1 no mostró urea en el suero reducida significativamente al ser comparado con el control Nx, las ratas nefrectomizadas tratadas con la sOP-1 en dosis de 10 ó 50 \mug/kgs de peso corporal mostraron reducciones significantes (p< 0,01) en los valores de urea en el suero (figura 2). Todas las ratas nefrectomizadas mostraron urea en el suero significativamente (p < 0,01) más alta al ser comparado con las ratas operadas en ficción o simulación (figura 2).

Las indicaciones histológicas indican que en contraste con el grupo de control Nx tratadas con excipiente, las ratas nefrectomizadas tratadas con la OP-1 exhiben una histología glomerular relativamente normal. La figura 3, por ejemplo, presenta muestras renales típicas procedentes de (A) riñón normal de rata, (B) animales de control Nx no tratados y (C) ratas nefrectomizadas tratadas con la OP-1 bajo un bajo aumento 10x). La figura 4 muestra muestra similares bajo un aumento más alto (40x) el análisis histomorfométrico indica que las ratas Nx OP-1 mostraron una incidencia reducida de la esclerosis glomerular y el colapso en bucle, esclerosis relativamente dispersa o difusa y microaneurismas, y glomérulos más viables comparado con las ratas de control Nx (tabla 2).

Durante este estudio no murió ninguna de las ratas en cualquier grupo.

Modelo Profiláctico para la insuficiencia Renal Crónica

Las ratas se sometieron a nefrectomías parciales u operadas en ficción como se describe más arriba. En el caso de este modelo, a fin de verificar la capacidad de los agentes terapéuticos renales OP/BMP de prevenir, inhibir o retrasar la iniciación de la insuficiencia renal crónica, las ratas se dejaron reponer durante aproximadamente dos semanas después de la intervención quirúrgica antes de la iniciación de la terapia de la OP-1. En este momento, los animales supervivientes pasaron la fase aguda de la insuficiencia renal y aún no habían presentado o registrado la insuficiencia renal crónica.

Las ratas se dividieron en dos grupos de 15 a 20 ratas. Un grupo recibió solamente el tampón excipiente (control Nx) mientras que el otro recibió el tratamiento de la OP-1 con 10 \mug/kg de peso corporal dado intraperitonealmente tres veces por semana. Administración de la OP-1 o del excipiente continuada durante un período de aproximadamente 8-9 semanas.

Durante semanas 1-5 de tratamiento, ambos grupos mostraron elevada creatinina en el suero (>100 \mumol/L) en relación con los controles de operadas en ficción o simulación (35 \pm 7 \mumol/L). En unas 5 semanas, ambos grupos comenzaron a mostrar un ascenso en la creatinina en el suero sugiriendo la iniciación de insuficiencia renal progresiva o crónica. Sin embargo el ascenso en la creatinina del suero fue marcadamente menos rápida en el grupo tratado con la OP-1 y fue significativamente inferior que en los controles Nx (figura 5: p < 0,02 en las semanas 6 y 8; p < 0,01 en las semanas 7 y 9). Asimismo se observaron resultados similares en los valores BUN del
suero.

Más importante, las mediciones de la GFR, basadas en los valores de la creatinina en el suero y en la orina, mostraron una disminución altamente significante en ambos grupos de ratas nefrectomizadas (< 1,8 ml/min) en relación con los controles de operadas en ficción o simulación (4,7 \pm 1,1 ml/min). La GFR en ambos grupos continúa descendiendo durante las semanas 1-3 de tratamiento. En aproximadamente tres semanas, sin embargo, se estabilizó la GFR en el grupo tratado con la OP-1 mientras que la mengua o declinación en la función renal continuó en los controles Nx. En la semana 5, la diferencia en los valores de la GFR entre las ratas tratadas con la OP-1 y las del control Nx se ha vuelto estadísticamente significante a medida que (p < 0,02). Esta diferencia en la GFR continuó menguando en la semana 6; p < 0,001 en las semanas 7 y 8), a medida que los controles Nx continuaron declinando, pero las tratadas con la OP-1 se mantuvieron estables (figura 6), Al finalizar las 9 semanas, el 40% de ratas del control Nx murieron mientras que no ha muerto ninguna de las ratas tratadas con la OP-1.

La evaluación histológica de las secciones de tejido confirmaron que las ratas tratadas con la OP-1 mostraron una mayor preservación o mantenimiento de glomérulos así como unas estructuras de túbulos proximales (próximos al cuerpo) y distales. Había asimismo signos en las ratas tratadas con la OP-1 de condensaciones mesenquimales nefrogénicas y la aparición de estructuras nefrogénicas evolutivas. La tabla 2 recoge los resultados de varias medidas histomorfométricas cuantitativas estándar (por ejemplo, tinción PAS de la matriz extracelular) y semicuantitativas (por ejemplo, ranking visual) obtenidas para cortes de tejido procedentes de ratas tratadas con OP-1 y de control Nx. Estos resultados indican que el tratamiento con la OP-1 de ratas nefroctomizadas dió como resultado una mejoría global (o degeneración reducida) de la morfología histológica de los riñones, espesamiento mesangial o perivascular aumentado, esclerosis glomerular decrecida y colapso en bucle decrecido, presencia decrecida, de esclerosis diseminada o difusa y microaneurismas así como un incremento o aumento en glomérulos
viables.

TABLA 2

6

Equivalentes

La invención pudiera configurarse en otras formas específicas sin apartarse del espíritu o características esenciales de la misma. Por consiguiente, las formas de realización precedentes se han de considerar en todos los aspectos ilustrativos antes que limitadores de la invención descrita en esta Memoria. Así pues, el ámbito de la invención queda indicado por las reivindicaciones anexas mas bien que por la descripción precedente, y todos los cambios que vienen dentro del significado y rango de equivalencia de las reivindicaciones se destinan a ser comprendidos en este contexto.

(1) Información General

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(i): Solicitante:

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(A): Nombre: CREATIVE MIOMOLECULES, INC.

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(B): Calle: 45 South Street

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(C): Ciudad: HOPKINTON

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(D): Estado: MA

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(E): País: USA

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(F): Código Postal (ZIP): 01748

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(G): Teléfono: 1-508-435-9001

\vskip0.500000\baselineskip

(H): Telefax: 1-508-435-0454

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(I): Telex:

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(ii): Título "TRATAMIENTO MORFOGENÉTICO DE LA INSUFICIENCIA RENAL CRÓNICA"

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(iii): Número de secuencias: 31

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(iv): Dirección de correspondencia:

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(A): Nombre: CREATIVE MIOMOLECULES, INC.

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(B): Calle: 45 South Street

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(C): Ciudad: HOPKINTON

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(D): Estado: MA

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(E): País: USA

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(F): (ZIP): 01748

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(v): Formato legible por ordenador:

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(A): Formato de medio: disquete

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(B): Ordenador: IBM PC compatible

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(C): Sistema Operativo: PC-DOS/MS-DOS

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(D): Programa: Patent In Release # 1.0, Versión #1.25

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(vi): Datos de la Solicitud actual:

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(A): Número de Solicitud:

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(B): Fecha de presentación:

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(C): Clasificación:

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(vii): Datos de la Solicitud prioritaria:

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(A): Número de solicitud: US 08/643,321

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(B): Fecha de solicitud 6-MAYO-1996

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(viii): Información del Agente:

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(A): Nombre: TWOMEY, MICHAEL J

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(B): Nº de Registro: 38,349

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(C): Nº de referencia /documento: CRP-118PC

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(ix): Información telecomunicaciones:

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(A): Teléfono: 617/248-7000

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(B): Telefax: 617/248-7100

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(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 1

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(i): Características de la secuencia

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(A): Longitud: 97 amino ácidos

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(B): Tipo: amino ácido

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(C): Filamento: único

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(D): Topología: lineal

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(ii): Tipo de molécula: Proteína

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(ix): Característica:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Nombre/Clave: Proteína

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(B): Localización: 1..97

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(C): Otra Información: Etiqueta = Genérica Seq-7 Nota: Donde cada Xaa es independientemente seleccionado de un grupo de uno o más amino ácidos especificados tal y como están definidos en la memoria.

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(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO:1

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7

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(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 2

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(i): Características de la secuencia

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(A): Longitud: 102 amino ácidos

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(B): Tipo: amino ácido

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(C): Filamento: único

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(D): Topología: lineal

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(ii): Tipo de molécula: Proteína

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): Característica:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Nombre/Clave: Proteína

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(B): Localización: 1..102

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Otra Información: Etiqueta = Genérica Seq-7 Nota: Donde cada Xaa es independientemente seleccionado de un grupo de uno o más amino ácidos especificados tal y como están definidos en la memoria.

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 2

8

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(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 3

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(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 102 amino ácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: amino ácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

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(ii): Tipo de molécula: Proteína

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(ix): Característica:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Nombre/Clave: Proteína

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(B): Localización: 1..102

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 3

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9

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\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 4

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

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(A): Longitud: 139 amino ácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: amino ácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): Filamento: único

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): Tipo de molécula: Proteína

\vskip0.800000\baselineskip

(vi): Fuente original:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Organismo: Homo sapiens

\vskip0.500000\baselineskip

(F): Tipo de tejido: Hippocampus

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): Característica:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Nombre/Clave: Proteína

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Localización: 1..139

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Otra Información: Etiqueta = hOP-1-MATURE

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 4

\vskip1.000000\baselineskip

10

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 5

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 139 amino ácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: amino ácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): Filamento: único

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): Tipo de molécula: Proteína

\vskip0.800000\baselineskip

(vii): Fuente original:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Organismo: MURIDAE

\vskip0.500000\baselineskip

(F): Tipo de tejido: EMBRYO

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): Característica:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Nombre/Clave: Proteína

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Localización: 1..139

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Otra Información: Etiqueta = MOP-1-MATURE

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 5

\vskip1.000000\baselineskip

11

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 6

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 139 amino ácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: amino ácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): Filamento: único

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): Tipo de molécula: Proteína

\vskip0.800000\baselineskip

(vi): Fuente original:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Organismo: Homo sapiens

\vskip0.500000\baselineskip

(F): Tipo de tejido: Hippocampus

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): Característica:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Nombre/Clave: Proteína

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Localización: 1..139

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Otra Información: Etiqueta = hOP-2-MATURE

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 6

12

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 7

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 139 amino ácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: amino ácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): Filamento: único

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): Tipo de molécula: Proteína

\vskip0.800000\baselineskip

(vi): Fuente original:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Organismo: MURIDAE

\vskip0.500000\baselineskip

(F): Tipo de tejido: EMBRYO

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): Característica:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Nombre/Clave: Proteína

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Localización: 1..139

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Otra Información: Etiqueta = MOP-2-MATURE

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 7

13

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 8

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 101 amino ácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: amino ácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): Filamento: único

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): Tipo de molécula: Proteína

\vskip0.800000\baselineskip

(vi): Fuente original:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Organismo: BOVINAE

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): Característica:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Nombre/Clave: Proteína

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Localización: 1..101

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Otra Información: Etiqueta = CBMP-2A-FX

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 8

14

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 9

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 101 amino ácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: amino ácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): Filamento: único

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): Tipo de molécula: Proteína

\vskip0.800000\baselineskip

(vi): Fuente original:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Organismo: Homo sapiens

\vskip0.500000\baselineskip

(F): Tipo de tejido: Hippocampus

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): Característica:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Nombre/Clave: Proteína

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Localización: 1..101

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Otra Información: Etiqueta = CBMP-2B-FX

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 9

\vskip1.000000\baselineskip

15

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 10

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 102 amino ácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: amino ácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): Filamento: único

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): Tipo de molécula: Proteína

\vskip0.800000\baselineskip

(vi): Fuente original:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Organismo: DROSOPHILA MELANOGASTER

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): Característica:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Nombre/Clave: Proteína

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Localización: 1..101

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Otra Información: Etiqueta = DPP-FX

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 10

\vskip1.000000\baselineskip

16

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 11

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 102 amino ácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: amino ácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): Filamento: único

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): Tipo de molécula: Proteína

\vskip0.800000\baselineskip

(vi): Fuente original:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Organismo: XENOPUS

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): Característica:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Nombre/Clave: Proteína

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Localización: 1..102

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Otra Información: Etiqueta = VGL-FX

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 11

\vskip1.000000\baselineskip

17

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 12

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 102 amino ácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: amino ácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): Filamento: único

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): Tipo de molécula: Proteína

\vskip0.800000\baselineskip

(vi): Fuente original:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Organismo: MURIDAE

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): Característica:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Nombre/Clave: Proteína

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Localización: 1..102

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Otra Información: Etiqueta = VGR-1-FX

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 12

\vskip1.000000\baselineskip

18

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 13

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 139 amino ácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: amino ácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): Filamento: único

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): Tipo de molécula: Proteína

\vskip0.800000\baselineskip

(iii): Hipotético: No

\vskip0.800000\baselineskip

(iv): Antisentido: No

\vskip0.800000\baselineskip

(vi): Fuente original:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Organismo: Horno sapiens

\vskip0.500000\baselineskip

(F): Tipo de tejido: Cerebro

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): Característica:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Nombre/Clave: Proteína

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Localización: 1..106

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Otra Información: Etiqueta = "GDF-1(Fx)"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 13

\vskip1.000000\baselineskip

19

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 14

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 5 amino ácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: amino ácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): Filamento: único

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): Tipo de molécula: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 14

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Cys Xaa Xaa Xaa Xaa}

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 15

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 1822 amino ácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: ácido nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C): Filamento: único

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): Tipo de molécula: cDNA

\vskip0.800000\baselineskip

(iii): Hipotético: NO

\vskip0.800000\baselineskip

(iv): Antisentido: NO

\vskip0.800000\baselineskip

(vi): Fuente original:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Organismo: Homo sapiens

\vskip0.500000\baselineskip

(F): Tipo de tejido: Hipocampus

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): Característica:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Nombre/Clave: CDS

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Localización: 49..1341

\vskip0.500000\baselineskip

(C): Método de identificación: Experimental

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Otra Información: función = "Proteína osteogénica" /Producto = "OP1" / Evidencia= EXPERIMENTAL/ nombre estándar = "OP1"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 15

\vskip1.000000\baselineskip

20

21

22

\vskip1.000000\baselineskip

23

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 16

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 431 amino ácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: amino ácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): Tipo de molécula: Proteína

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 16

\vskip1.000000\baselineskip

24

25

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 17

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 1873 base par

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: ácido nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C): Filamento: único

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iii): Tipo de molécula: cDNA

\vskip0.800000\baselineskip

(iv): Hipotético: No

\vskip0.800000\baselineskip

(v): Antisentido: No

\vskip0.800000\baselineskip

(vi): Fuente original:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Organismo: MURIDAE

\vskip0.500000\baselineskip

(F): Tipo de tejido: EMBRYO

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): Característica:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Nombre/Clave: CDS

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Localización: 104..1393

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Otra Información: /Función="Proteína osteogénica" /producto="MOP1"/nota= "MOP1 (CD-NA)"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 17

\vskip1.000000\baselineskip

26

27

28

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 18

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 430 amino ácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: ácido nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(vi): Tipo de molécula: Proteína

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 18

\vskip1.000000\baselineskip

29

30

31

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 19

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 1723 base par

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: ácido nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C): Filamento: único

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(vii): Tipo de molécula: cDNA

\vskip0.800000\baselineskip

(vi): Fuente original:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Organismo: Horno sapiens

\vskip0.500000\baselineskip

(F): Tipo de tejido: HIPPOCAMPUS

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): Característica:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Nombre/Clave: CDS

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Localización: 490..1696

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Otra Información: /Función= "Proteína osteogénica" /producto="hOP2-PP"/nota="hOP2 (cDNA)"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 19

\vskip1.000000\baselineskip

32

33

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 20

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 402 amino ácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: amino ácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: línea

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): Tipo de molécula: Proteína

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 20

\vskip1.000000\baselineskip

34

35

36

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 21

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 1926 base par

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: ácido nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C): Filamento: único

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(vi): Fuente original:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Organismo: MURIDAE

\vskip0.500000\baselineskip

(F): Tipo de tejido: EMBRYO

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): Característica:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Nombre/Clave: CDS

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Localización: 93..1289

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Otra Información: /Función= "Proteína osteogénica" /producto="mOP2-PP"/nota= "mOP2 cDNA"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 21

\vskip1.000000\baselineskip

37

38

39

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 22

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 399 amino ácido

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: amino ácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): Tipo de molécula: Proteína

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 22

\vskip1.000000\baselineskip

40

41

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 23

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 1368 base par

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: ácido nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C): Filamento: único

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): Tipo de molécula: cDNA

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): Característica:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Nombre/Clave: CDS

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Localización: 1..1368

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Otra Información: / etiqueta = "60A"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 23

\vskip1.000000\baselineskip

42

43

44

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 24

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 455 amino ácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: ácido nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): Tipo de molécula: cDNA

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 24

\vskip1.000000\baselineskip

45

46

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 25

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 1674 base par

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: ácido nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C): Filamento: único

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): Tipo de molécula: Proteína

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): Característica:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Nombre/Clave: CDS

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Localización: 69..1268

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Otra Información: /Nota= "mOP3-PP"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 25

\vskip1.000000\baselineskip

47

48

49

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 26

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 399 amino ácido

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: amino ácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): Tipo de molécula: Proteína

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 26

\vskip1.000000\baselineskip

50

51

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ. ID NO: 27

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 104 amino ácido

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: amino ácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): Filamento: único

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): Tipo de molécula: Proteína

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): Característica:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Nombre/Clave: Proteína

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Localización: 1..104

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Otra Información: /Nota ="BMP3"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 27

\vskip1.000000\baselineskip

52

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 28

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 102 amino ácido

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: amino ácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): Filamento: único

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): Tipo de molécula: Proteína

\vskip0.800000\baselineskip

(vi): Fuente original:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Organismo: Horno sapiens

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): Característica:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Nombre/Clave: Proteína

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Localización: 1..102

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Otra Información: /Nota="BMP5"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 28

\vskip1.000000\baselineskip

53

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 29

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 102 amino ácido

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: amino ácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): Filamento: único

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): Tipo de molécula: Proteína

\vskip0.800000\baselineskip

(vi): Fuente original:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Organismo: Homo sapiens

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): Característica:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Nombre/Clave: Proteína

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Localización: 1..102

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Otra Información: /Nota="BMP6"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 29

\vskip1.000000\baselineskip

54

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 30

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 1247 base par

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: ácido nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C): Filamento: único

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): Tipo de molécula: cDNA

\vskip0.800000\baselineskip

(vi): Fuente original:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Organismo: Horno sapiens

\vskip0.500000\baselineskip

(F): Tipo de tejido: Cerebro

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): Característica:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Nombre/Clave: CDS

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Localización: 84..1199

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Otra Información: /producto="GDF1"/nota="GDF-1 CDNA"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 30

\vskip1.000000\baselineskip

55

56

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 31

\vskip0.800000\baselineskip

(i): Características de la secuencia

\vskip0.500000\baselineskip

(A): Longitud: 372 amino ácido

\vskip0.500000\baselineskip

(B): Tipo: amino ácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): Tipo de molécula: Proteína

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 31

\vskip1.000000\baselineskip

57

58

Claims

1. Uso de:

(a): Un agente terapéutico renal o un morfógeno de la OP/BMP (proteína osteógena/Proteína morfogenética para huesos); o

(b): Un inductor de la expresión endógena de un morfógeno de un agente terapéutico OP/BMP; o

(c): Un agonista de un receptor de un morfógeno o de un agente terapéutico renal OP/BMP; o

(d): de células progenitor mesenquimales renales

para la fabricación de un medicamento para su empleo en el tratamiento o la profilaxis de la insuficiencia renal crónica en un mamífero.

2. Uso, según la reivindicación 1 (d), que comprende los siguientes pasos adicionales:

(a): Inducir una diferenciación metanéfrica de dichas células mediante la puesta en contacto de dichas células con un agente terapéutico renal OP/BMP o con un morfógeno; o

(b): Inducir una diferenciación metanéfritica de dichas células mediante la puesta en contacto de dichas células con un inductor de un morfógeno o de un agente terapéutico renal OP/BMP; o

(c): Inducir la diferenciación metanéfrica de dichas células mediante la puesta en contacto de dichas células con un agonista de un receptor o de un agente terapéutico renal OP/BMP.

3. Uso de:

(a): Un agente terapéutico renal OP/BMP o de un morfógeno; o

(b): Un inductor de la expresión endógena de un agente terapéutico renal OP/BMP o de un morfógeno; o

(c): Un agonista de un receptor de un agente terapéutico renal OP/BMP o de un morfógeno

para la fabricación de un medicamento destinado a retardar la necesidad de un tratamiento de diálisis crónica o a reducir la frecuencia de dicho tratamiento.

4. Uso, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el cual:

(a): Dicho mamífero está aquejado de una afección seleccionada de entre el grupo que comprende una insuficiencia renal crónica, una enfermedad renal en la fase final, una nefropatía diabética crónica, una nefropatía glomerular diabética, una nefroesclerosis hipertensiva, una glomérulo-esclerosis hipertensiva, una glomerulonefritis crónica, una nefritis hereditaria y una displasia renal; y/o

(b): El examen de una biopsia renal de dicho mamífero indica que dicho mamífero está aquejado de una afección o estado patológico seleccionada de entre el grupo, que comprende una hipertrofia glomerular, una hipertrofia tubular, una glomeruloesclerosis y una esclerosis túbulo-intersticial; o

(c): El examen de dicho mamífero indica una fibrosis renal.

5. Uso según la reivindicación 4, en el cual

(a): Dicho examen es una exploración por ultrasonidos, MRI (visualización de imágenes mediante resonancia magnética o CAT (tomografía asistida por computadora) de dicho mamífero; o

(b): Dicho mamífero posee un número de unidades de nefrones funcionales que es menor de aproximadamente el 50% de un número de unidades de nefrones funcionales presentes en un mamífero que tienen unos riñones sanos e intactos; o

(c): Dicho mamífero posee un número de unidades de nefrones funcionales que es menor de aproximadamente el 40% de un número de unidades de nefrones funcionales presentes en un mamífero que tiene unos riñones sanos e intactos; o

(d): dicho mamífero posee un número de unidades de nefrones funcionales, que es menor de aproximadamente el 30% de un número de unidades de nefrones funcionales presentes en un mamífero que tiene unos riñones sanos e intactos; o

(e): Dicho mamífero posee un número de unidades de nefrones funcionales que es menor, aproximadamente, el 20% de un número de unidades de nefrones funcionales presentes en un mamífero que tiene unos riñones sanos e intactos

6. Uso, según la reivindicación 4 o 5, en el cual

(a): Dicho mamífero es un receptor de un transplante de riñón; o

(b): Dicho mamífero no posee más que un riñón; o

(c): el examen de un sedimento urinario de dicho mamífero indica la presencia de moles amplios o cilindros grandes (broad cast).

7. Uso, según una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6, en el cual

(a): Dicho mamífero tiene una GFR (tasa de infiltración glomelurar) que representa de manera crónica; menos de aproximadamente el 50% de una GFResp para dicho mamífero; o

(b): Dicho mamífero tiene una GFR que representa, de manera crónica, menos de, aproximadamente, el 40% de una GFResp para dicho mamífero; o

(c): Dicho mamífero tiene una GFR que representa, de manera crónica, menos de, aproximadamente, el 30% de una GFResp dicho mamífero.

(d): Dicho mamífero tiene una GFR que representa, de manera crónica, menos de, aproximadamente, el 20% de una GFResp para dicho mamífero.

8. Uso, según una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 7; en el cual

(a): Dicho mamífero es un ser humano de sexo masculino, que pesa, al menos, alrededor de 50 Kg y presenta una GFR tasa de filtración glomerular) la cual es, de manera crónica, inferior a 50 ml/minuto; o

(b): dicho mamífero es un ser humano de sexo masculino, que pesa, al menos, alrededor de 50 Kg y presenta una GFR, la cual es, de manera crónica, inferior a unos 40 ml/minuto; o

(c): dicho mamífero es un ser humano de sexo masculino, que pesa al menos alrededor de 50 Kg y presenta una GFR, la cual es, de manera crónica, inferior a 30 ml/min; o

(d): dicho mamífero es un ser humano de sexo masculino, que pesa, al menos, unos 50 Kg y presenta una GFR, la cual es, de manera crónica, inferior a 20 ml/minuto.

9. Uso, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 7, en el cual

(a): Dicho mamífero es un ser humano de sexo femenino, con un peso de, al menos, unos 40 Kg y que tiene una GFR (tasa de filtración glomerular, la cual es, de manera crónica, inferior a unos 40 ml/minuto; o

(b): Dicho mamífero es un ser humano de sexo femenino, con un peso de, al menos 40 Kg y que tiene una GFR, la cual es de manera crónica, inferior a unos 30 ml/minuto; o

(c): Dicho mamífero es un ser humano de sexo femenino, con un peso de al menos, unos 50 Kg y que tiene una GFR, la cual, es de manera crónica, inferior a unos 20 ml/minuto; o

(d): Dicho mamífero es un ser humano de sexo femenino, con un peso de, al menos 50 Kg y que tiene una GFR, la cual es, de manera crónica, inferior a unos 10 ml/minuto.

10. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 9, en el cual

(a): Dicho tratamiento reduce los contenidos o niveles de creatinina del suero en dicho mamífero, en una cantidad de al menos, un 5% durante un periodo de tiempo de 3 meses; o

(b): Antes de dicho tratamiento dicho mamífero presentaba un descenso crónico en un indicador clínico de la función renal; y después de al menos, unos 3 meses de dicho tratamiento, dicho indicador se estabiliza.

11. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 10, en el cual dicho medicamento es apropiado para su administración por vía oral o por vía parenteral, por ejemplo:

(i): por vía intravenosa; o

(ii): por vía intraperitoneal; o

(iii): en la cápsula renal (Cápsula adiposa perirenalis), o

(iv): en el cual ha sido implantada una prótesis en el interior de dicho mamífero para dicha administración (siendo eventualmente dicha prótesis una prótesis intravenosa,una prótesis intraperitoneal o una prótesis intracapsular renal), o

(v): por medio de un dispositivo implantado

12. Uso o utilización según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 11, en el cual se efectúa dicha administración

(a): Al menos una vez por semana durante un espacio de tiempo de, al menos un mes; o

(b): Al menos, una vez por mes durante un periodo de tiempo de al menos, un año más o menos; o

(c): A razón de una posología de unos 0,001-1000 \mug/kg del peso corporal de dicho mamífero; o

(d): A razón de una posología de unos 10-300 \mug/kg del peso corporal de dicho mamífero.

13. Uso o empleo de un agente terapéutico renal OP/BMP o de un morfógeno para la preparación de un medicamento destinado a favorecer, promover o fomentar una diferenciación metanéfrica de células progenitor mesenquimatosas

14. Utilización o uso, según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes en el cual dicho agente terapéutico renal:

(a): Comprende un polipéptido, que consta de, al menos, un dominio de cisteínas con terminal "C" de una proteína seleccionada de entre un polipéptido seleccionado de entre el grupo que comprende OP-1, OP-2, OP-3, BMP2, BMP3, BMP4, BMP5, BMP6 y BMP9; o

(b): Comprende un polipéptido, que consta de, al menos, un dominio de cisteínas con terminal C de una proteína seleccionada de entre una forma soluble de la OP-1 humana, o

(c): Comprende un polipéptido, que tiene, al menos, una homología del 70% con una secuencia de aminoácidos de un dominio de siete cisteínas con terminal C de la OP-1 humana, por ejemplo, presentando dicho polipéptido, al menos:

(i): 75% de la homología con una secuencia de aminoácidos de un dominio de siete cisteínas con terminal C de la OP-1 humana; o

(ii): 80% de la homología con una secuencia de aminoácidos de un dominio de siete cisteínas con terminal C de la OP-1 humana; o

(iii): 60% de la identidad con una secuencia de aminoácidos de un dominio de siete cisteínas con terminal C de la OP-1 humana; o

(iv): 65% de identidad con una secuencia de aminoácidos de un dominio de siete cisteínas con terminal C de la OP-1 humana; o

(v): 70% de identidad con una secuencia de aminoácidos de un dominio de siete cisteínas con terminal C.

15. Uso o utilización según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el cual dicho agente terapéutico renal

(a): Induce una condrogénesis en un ensayo ectópico de huesos.

(b): Previene, inhibe, retarda o alivia la pérdida de la función renal en un modelo animal de insuficiencia renal crónica; o

(c): Provoca una mejoría clínicamente significativa en un marcador estándar de la función renal cuando se administra a un mamífero que sufre una insuficiencia renal crónica o manifiesta un riesgo frente a dicha afección.

16. Uso o utilización, según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el cual dicho agente renal se selecciona o escoge de entre el grupo de las proteínas osteógenas u osteogénicas y de las proteínas morfogenéticas de los huesos humano.