ES2203803T3 - Terapias para la insuficiencia renal cronica. - Google Patents

Abstract

LA INVENCION SUMINISTRA UN PROCEDIMIENTOS Y PRODUCTOS FARMACEUTICOS PARA SU USO EN EL TRATAMIENTO DE MAMIFEROS CON FALLO RENAL CRONICO O CON RIEGO DE CONTRAERLO, O CON RIESGO DE NECESIDAD DE TERAPIA DE SUSTITUCION RENAL. LOS PROCEDIMIENTOS COMPRENDEN LA ADMINISTRACION DE CIERTAS PROTEINAS DE, O BASADAS EN LA FAMILIA DE LAS PROTEINAS OSTEOGENICAS/PROTEINAS MORFOGENETICAS DEL HUESO (OP/BMP) DENTRO DE LA SUPERFAMILIA DE PROTEINAS DEL TGF- BE .

Description

Terapias para la insuficiencia renal crónica.

Campo de la invención

La presente invención se refiere al uso de ciertas proteínas de la familia de proteínas osteogénicas/ proteínas inorfogenéticas del hueso, dentro de la superfamilia de proteínas TGF-\beta, para la preparación de medicamentos para la profilaxis del tratamiento de insuficiencias renales crónicas en un mamífero.

Antecedentes de la invención

El sistema renal de los mamíferos tiene un papel principal tanto en la eliminación de productos de desecho catabólicos del torrente sanguíneo como en el mantenimiento de los equilibrios de fluidos y electrolitos en el cuerpo. Las insuficiencias renales crónicas son, por lo tanto, condiciones que amenazan la vida en las cuales el aumento de catabolitos y otras toxinas, y/o el desarrollo de desajustes importantes en electrolitos o fluidos pueden conducir a insuficiencias de otros sistemas de órganos principales y la muerte. Por regla general, las insuficiencias renales se clasifican como "agudas" o "crónicas". Tal como se detalla abajo, una insuficiencia renal crónica es una enfermedad que debilita y que amenaza la vida para la cual no existe ningún tratamiento adecuado.

Insuficiencias renales crónicas

Las insuficiencias renales crónicas pueden definirse como una reducción progresiva, permanente y significativa de la velocidad de filtración glomerular (GFR) debido a una pérdida significativa y continua de nefrones. Las insuficiencias renales crónicas comienzan típicamente desde un momento en el cual se ha producido una insuficiencia renal crónica (i.e. decrecimiento permanente de la función renal de al menos 50-60%) debida a algún daño en los tejidos renales que ha causado una pérdida significativa de unidades nefrónicas. El daño inicial puede o no estar asociado a un episodio de insuficiencia renal aguda. Independientemente de la naturaleza del daño inicial, la insuficiencia renal crónica manifiesta un "camino final común" de signos y síntomas según se van perdiendo nefrones progresivamente y decrece progresivamente la GRF. Este deterioro progresivo de la función renal es lento, durando típicamente muchos años o décadas en los pacientes humanos, pero aparentemente inevitable.

La etapa inicial de las insuficiencias renales crónicas comienza típicamente cuando la GFR se ha reducido hasta aproximadamente un tercio de lo normal (e.g., 30-40 ml/min para un adulto humano promedio). Como resultado de la pérdida significativa de nefrones, y en un aparente "intento" de mantener la GFR total con menos nefrones, la GFR promedio de un único nefrón (SNGFR) aumenta, adaptando los nefrones que quedan tanto a nivel estructural como funcional. Una de las manifestaciones estructurales de esta adaptación, fácilmente detectable mediante examen con microscopio de muestras de biopsia, es una "hipertrofia compensatoria" tanto de los glomérulos como de los túbulos del riñón, proceso que aumenta literalmente el volumen de filtrado que puede producirse por cada nefrón que queda, mediante alargamiento literal de los glomérulos y los túbulos. Verdaderamente, como resultado de la hipertrofia o dilatación de los conductos colectores, la orina de los sujetos con insuficiencias renales crónicas normalmente contiene cilindros grandes, típicamente con un diámetro 2-6 veces el normal, que ayudan al diagnóstico y que también se han denominado "sedimentos de problemas renales". Al mismo tiempo, hay cambios funcionales en los nefrones que quedan, tales como un decrecimiento de la absorción o un aumento de la secreción de los solutos excretados normalmente, que pueden responder a cambios hormonales o paracrinos en algún otro lugar del cuerpo humano (e.g., aumento de los niveles de la hormona paratiroide (PTH) como respuesta a cambios en los niveles de calcio y fosfato en el suero).

Estas adaptaciones en las etapas iniciales de las insuficiencias renales crónicas no consiguen restaurar completamente la GFR u otros parámetros de la función renal y, de hecho, someten a los nefrones que quedan a un riesgo de pérdida mayor. Por ejemplo, el aumento de la SNGFR está asociado con un stress mecánico sobre los glomérulos debido a la hipertensión y la hiperperfusión. La pérdida de integridad de las uniones de los podocitos conduce a un aumento de la permeabilidad de los glomérulos a las macromoléculas o "pérdida" de la cápsula glomerular. También se observan efectos de proliferación en células mesangiales, epiteliales y endoteliales, así como un aumento en la deposición de colágeno y otras proteínas estructurales. Otros síntomas comunes de los nefrones hipertrofiados son la esclerosis tanto de los glomérulos como de los túbulos, y el riesgo de coagulación en el glomérulo aumenta. En particular, estas adaptaciones de los nefrones que quedan mediante el aumento de la SNGFR mucho más allá de su nivel normal, en realidad disminuye la capacidad de los nefrones que quedan para responder a cambios agudos en el suministro de agua, soluto o ácido y, por lo tanto, en realidad aumenta la probabilidad de una pérdida de nefrones adicional.

Según van progresando los problemas renales, y continúa decreciendo la GFR hasta ser menos de 10% del valor normal (e.g., 5-10 ml/min), el sujeto entra en una enfermedad renal terminal (ESRD). Durante esta fase, la incapacidad de los nefrones que quedan para eliminar adecuadamente los productos de deshecho de la sangre, mientras que se retienen los productos útiles y se mantiene el balance de fluido y electrolitos, conduce a un declive rápido en el cual muchos sistemas de órganos, y particularmente el sistema cardiovascular, puede comenzar a fallar. Por ejemplo, se debe esperar que los niveles de BUN y creatinina aumenten y, cuando los niveles de BUN alcanzan los 60-100 mg/dL y niveles de creatinina en suero de 8-12 mg/dL, se desarrollará típicamente un síndrome urémico en el cual los riñones no pueden eliminar más los productos finales del metabolismo de nitrógeno. En este punto, los problemas renales progresarán rápidamente hasta la muerte, a menos que el sujeto reciba una terapia de trasplante renal (i.e., hemodiálisis crónica, diálisis peritoneal continua, o trasplante de riñón).

Aproximadamente cada año 600 pacientes por millón reciben diálisis crónica en los Estados Unidos, con un coste promedio aproximado de

\textdollar

60.000-

\textdollar

80.000 por paciente y año. De los casos nuevos de enfermedades renales terminales cada año, aproximadamente 28-33% se deben a una nefropatía diabética (o glomerulopatía diabética o hipertrofia renal diabética), 24-29% se deben a una nefroesclerosis hipertensiva (o glomeruloesclerosis hipertensiva), y 15-22% se deben a una glomerulonefritis. La tasa de supervivencia de cinco años para todos los pacientes de diálisis crónicos es aproximadamente 40%, pero para los pacientes por encima de 65 años, la tasa disminuye hasta un 20% aproximadamente.

Por tanto, todavía queda una necesidad de tratamientos que prevendrán la pérdida progresiva de la función renal, que ha causado la dependencia de casi dos cientos mil pacientes sólo en los Estados Unidos a las diálisis crónicas, y que ha dado lugar a la muerte prematura de decenas de miles cada año.

Compendio de la invención

La presente invención se dirige al uso de preparaciones farmacéuticas para la preparación de medicamentos para el tratamiento de sujetos mamíferos que tienen, o corren riesgo de, insuficiencia renal, o que corren riesgo de la necesidad de terapia de trasplante renal. Tales sujetos incluyen los sujetos que sufren ya de insuficiencia renal crónica, o que han recibido ya una terapia de trasplante renal, o como cualquier sujeto que tiene una probabilidad razonable de sufrir una pérdida progresiva de la función renal asociada con la pérdida progresiva de unidades nefrónicas funcionales. Un experto normal en medicina o en veterinaria puede determinar de manera rutinaria si un sujeto particular corre riesgo. Los sujetos que tienen, o corren riesgo de, insuficiencia renal o que corren riesgo de necesidad de terapia de trasplante renal, incluyen, pero no se limitan a, los siguientes: sujetos que se pueden considerar como aquejados de una insuficiencia renal crónica, una enfermedad renal terminal, una nefropatía diabética crónica, una nefroesclerosis hipertensiva, una glomérulonefritis crónica, una nefritis hereditaria, y/o una displasia renal; sujetos que tienen una biopsia que indica una hipertrofia glomerular, una hipertrofia tubular, una glomerulosclerosis crónica, y/o una esclerosis tubulointersticial; sujetos que tienen una exploración por ultrasonidos, IRM, TAC, u otro examen no invasivo que indica una fibrosis renal; sujetos que tienen una cantidad fuera de lo común de cilindros grandes presentes en los sedimentos orinales; sujetos que tienen un GFR que es crónicamente menor que aproximadamente 50%, y más particularmente menor que aproximadamente 40%, 30% o 20%, del GFR esperado para el sujeto; hombres que pesan al menos aproximadamente 50 kg y que tienen un GFR que es crónicamente menor que aproximadamente 50 ml/min, y más particularmente menor de aproximadamente 40 ml/min, 30 ml/min o 20 ml/min; mujeres que pesan al menos aproximadamente 40 kg y que tienen un GFR que es crónicamente menor que aproximadamente 40 ml/min, y más particularmente menor que aproximadamente 30 ml/min, 20 ml/min o 10 ml/min; sujetos que poseen una cantidad de unidades nefrónicas funcionales menor que aproximadamente 50%, y más particularmente menor que aproximadamente 40%, 30% o 20% de la cantidad de unidades nefrónicas funcionales que posee un sujeto sano pero por lo demás similar; sujetos que tienen un solo riñón; y sujetos que son receptores de trasplante de riñón.

Los usos de esta invención sacan en parte partido del descubrimiento de que ciertas proteínas de origen eucariótico, definidas aquí como agentes terapéuticos renales, y que incluyen miembros de la familia de proteínas osteogénicas/proteínas morfogenéticas del hueso (OP/BMP), pueden emplearse en el tratamiento del sujeto que corre riesgo, tal como se define aquí, de insuficiencia crónica renal, o necesita una terapia de trasplante renal. Agentes terapéuticos útiles incluyen polipéptidos, o variantes funcionales de polipéptidos, que comprenden al menos un dominio C-terminal que contiene seis o siete cisteínas de una proteína de mamífero seleccionada del grupo que consiste en OP-1, OP-2, OP-3, BMP2, BMP3, BMP4, BMP5, BMP6, BMP9, y proteínas que presentan una secuencia de aminoácidos con una homología de al menos 70% o, más preferiblemente, 75% o 80% con una secuencia de aminoácidos de un dominio que contiene siete cisteínas de OP-1 humana; y que son (a) capaces de inducir condrogénesis en un ensayo del hueso ectópico de Reddi-Sampath (Sampath y Reddi (1981), Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 78: 7599-7603) o un ensayo sustancialmente equivalente, (b) capaces de evitar, inhibir, retrasar o aliviar significativamente la pérdida progresiva de la función renal en un modelo animal estándar con insuficiencia renal crónica, o (c) capaces de provocar una mejora clínica significativa en un marcador estándar de la función renal cuando se administra a un mamífero que tiene, o que corre el riesgo de tener, una insuficiencia renal crónica.

Los agentes terapéuticos renales de la invención se pueden administrar mediante cualquier vía de administración que sea compatible con el agente seleccionado, y se puedan formular con cualquier vehículo farmacéuticamente aceptable por la vía de administración. Las vías de administración preferidas son parenterales, en particular, intravenosa, intraperitoneal, e intracapsular renal. Los tratamientos se llevan a cabo preferiblemente durante un periodo extenso, sobre pacientes externos. Se espera que las dosis diarias de agentes terapéuticos se encuentren en el intervalo de aproximadamente 0,01-1.000 \mug/kg de peso corporal, y más preferiblemente aproximadamente 10-300 \mug/kg de peso corporal, aunque las dosis precisas variarán dependiendo del agente terapéutico renal particular empleado y de la dolencia médica y del historial del sujeto particular.

Los usos de la presente invención son útiles para prevenir, inhibir o retrasar la pérdida progresiva de las unidades nefrónicas funcionales, y la consiguiente pérdida progresiva de la función renal, lo que es representativo de una insuficiencia renal. Como tal, tienen un valor considerable para evitar o retrasar la necesidad de diálisis crónica o de terapia de trasplante renal para los sujetos con insuficiencia renal crónica, o reducir la frecuencia necesaria de diálisis renal crónica en sujetos con una enfermedad renal terminal. Como tal, son útiles para alargar sus vidas, y para mantener la calidad de vida de sujetos que corren riesgo de, o que sufren ya, de una insuficiencia renal crónica.

Breve descripción de las figuras

Figura 1. Esta figura es un gráfico de barras que muestra los niveles de creatitina en suero promedio para grupos de ratas operadas de manera simulada ("SHAM") o parcialmente nefrectomizadas ("Nx Contr" y "OP-1"). Después de 5-6 meses de la operación las ratas recibieron inyecciones de vehículo sólo ("Nx control" y "SHAM") o 1, 3, 10 ó 50 \mug/kg de peso corporal de OP-1 soluble ("OP-1") tres veces a la semana durante 4-8 semanas.

Figura 2. Esta figura es un gráfico de barras que muestra los niveles de urea en suero promedios de grupos de ratas operadas de manera simulada ("SHAM") o parcialmente nefrectomizadas ("Nx Contr" y "OP-1"). Después de 5-6 meses de la operación las ratas recibieron inyecciones de vehículo sólo ("Nx control" y "SHAM") o 1, 3, 10 ó 50 \mug/kg de peso corporal de OP-1 soluble ("OP-1") tres veces a la semana durante 4-8 semanas.

Figura 3. Los paneles A y B de esta figura son micrografías de tejido renal de ratas con una ampliación x10. (A) El tejido de la rata con insuficiencia renal crónica después de 5/6 nefrectomía (Nx control). (B) El tejido de la rata tratado con OP-1 después de 5/6 nefrectomía.

Figura 4. Los paneles A y B de esta figura son micrografías de un tejido renal de ratas con una ampliación x40. (A) El tejido de la rata con insuficiencia renal crónica después de 5/6 nefrectomía (Nx control). (B) El tejido de la rata tratado con OP-1 después de 5/6 nefrectomía.

Figura 5. Esta figura es un gráfico de líneas que muestra los niveles de creatinina en suero promedio durante 9 semanas para grupos de ratas parcialmente nefrectomizadas. Después de 2-3 semanas de la operación, las ratas recibieron inyecciones de vehículo sólo ("Control") o 10 \mug/kg de peso corporal de OP-1 soluble ("OP-1") tres veces a la semana.

Figura 6. Esta figura es un gráfico de líneas que muestra las velocidades de limpieza de creatinina promedio como una medida de GFR durante 8 semanas de grupos de ratas parcialmente nefrectomizadas. Después de 2-3 semanas de la operación, las ratas recibieron inyecciones de vehículo sólo ("Control") o 10 \mug/kg de peso corporal de OP-1 soluble ("OP-1") tres veces a la semana.

Descripción detallada de la invención I.Definiciones

Con objeto de resaltar más claramente y concisamente el tema de las reivindicaciones de la invención, se proporcionan las siguientes definiciones para los términos específicos utilizados en la siguiente descripción escrita y las reivindicaciones apéndices.

Agente terapeútico renal

Tal como se utiliza aquí, el término "agente terapeútico renal" significa un polipéptido, o una variante funcional de un polipéptido, que comprende al menos un dominio C-terminal que contiene seis o siete cisteínas de una proteína de mamíferos seleccionada del grupo que consiste en OP-1, OP-2, OP-3, BMP2, BMP3, BMP4, BMP5, BMP6, BMP9, y proteínas con una secuencia de aminoácidos que presentan una homología de al menos 70%, o más preferiblemente 75%, o 80% con una secuencia de aminoácidos de un dominio que contiene siete cisteínas de OP-1 humana; y que es (a) capaz de inducir condrogénesis en un ensayo del hueso ectópico de Reddi-Sampath (Sampath and Reddi (1981), Proc. Nat. Acad. Sci. (USA) 78:7599-7603) o un ensayo sustancialmente equivalente, (b) capaz de evitar, inhibir, retrasar o aliviar significativamente la pérdida progresiva de función renal en un modelo animal estándar con insuficiencia renal crónica, o (c) capaz de causar una mejora significativa clínicamente en un marcador estándar de la función renal cuando se administra a un mamífero con, o con riesgo de, insuficiencia renal crónica. Tal como se utiliza aquí, un porcentaje de "homología" entre dos secuencias de aminoácidos indica el porcentaje de residuos de aminoácidos que son idénticos o similares entre las secuencias y, tal como se utiliza aquí, residuos "similares" son "sustituciones conservadoras" que cumplen los criterios definidos para una "mutación puntual aceptada" en Dayhoff et al. (1978), Atlas of Protein Sequence and Structure Vol. 5 (Suppl. 3), pp. 354-352, Natl. Biomed. Res. Found.,Washighton, D. C.

Eficacia terapéutica

Tal como se utiliza aquí, un agente terapéutico renal de la invención se dice que tiene una "eficacia terapéutica", y una cantidad de agente se dice que es "efectiva terapéuticamente", si la administración de esa cantidad de agente es suficiente para causar una mejora clínicamente significativa en un marcador estándar de la función renal cuando se administra a un sujeto mamífero (e.g. un paciente humano) con, o con riesgo de, insuficiencia renal crónica. Tales marcadores de la función renal son conocidos en la blibliografía médica e incluyen a, sin limitarse a, las velocidades de aumento de los niveles de BUN, velocidades de aumento de la creatitina en suero, medidas estáticas de BUN, medidas estáticas de creatitina en suero, velocidades de filtración glomerular (GFR), relaciones de BUN/creatinina, concentraciones de sodio (Na+) en suero, relaciones orina/plasma para creatinina, relaciones orina/plasma para urea, osmolalidad de la orina, producción de orina diaria, y similares (ver, por ejemplo, Brenner and Lazarus (1994),en Harrison's Principles of Internal Medicine, 13th edition, Isselbacher et al., eds., McGraw Hill Text, New York; Luke and Strom (1994), en Internal Medicine, 4th Edition, J.H. Stein, ed., Mosby-Year Book, Inc. St. Louis.)

Velocidad de filtración glomerular (GFR)

La "velocidad de filtración glomerular" o "GFR" es proporcional a la velocidad de limpieza en la orina de una sustancia arrastrada por el plasma que no está unida a las proteínas del suero, que está filtrada libremente a través de los glomérulos, y no es secretada ni reabsorbida por los túbulos renales. Así, y tal como se utiliza aquí, la GFR se define preferiblemente mediante la siguiente ecuación:

GFR = \frac{Uconc \ x \ V}{Pconc}

donde U_{conc} es la concentración del marcador, P_{conc} es la concentración en plasma del marcador, y V es el caudal de orina en ml/min. Opcionalmente, la GFR se corrige para el área de la superficie del cuerpo. Así, los valores de GFR utilizados aquí pueden considerarse que estén en unidades de ml/min/1,73m^{2}.

La medida preferida de GFR es la desaparición de la inulina pero, debido a las dificultades en la medida de las concentraciones de esta sustancia, se utiliza típicamente en los protocolos clínicos la desaparición de la creatinina. Por ejemplo, para un tamaño promedio, un hombre sano (70 kg, 20-40 años), una GFR típica medida mediante la desaparición de la creatinina se espera que sea aproximadamente 125 ml/min, con concentraciones en el plasma de creatinina de 0,7-1,5 mg/dL. Para una mujer de tamaño promedio comparable, una medida de GFR típica medida mediante la desaparición de la creatinina se espera que sea aproximadamente 115 ml/min, con niveles de creatinina de 0,5-1,3 mg/dL. Durante los periodos de buena salud, los valores de GFR humana son relativamente estables hasta aproximadamente la edad de 40, cuando la GFR típicamente comienza a descender con la edad. Para sujetos que sobreviven hasta la edad de 85 ó 90, la GFR puede reducirse hasta 50% de los valores comparables a la edad de 40.

Velocidad de filtración glomerular esperada (GFR_{exp})

Se puede proporcionar una estimación de la "GFR esperada" o "GFR_{exp}" en base a consideraciones de edad del sujeto, peso, sexo, área de la superficie del cuerpo, y grado de musculatura, y concentración en el plasma de algunos compuestos marcadores (e.g. creatinina) determinado mediante un análisis de sangre. Así, como ejemplo, una GFR esperado o GFR_{exp} se puede estimar como:

GFR_{exp} = \frac{(140-edad) \ x \ peso \ (kg)}{72 \ x \ Pconc \ (mg/dl)}

Esta estimación no considera factores tales como área de la superficie, grado de musculatura, o porcentaje de grasa corporal. De todas formas, utilizando los niveles de creatinina en plasma como el marcador, esta fórmula se ha empleado para hombres como una manera barata de estimar GFR. Debido a que la creatinina se produce en el músculo estriado, la GFR esperada o GFR_{exp} en mujeres se estima mediante la misma ecuación multiplicada por 0,85, para tener en cuenta diferencias esperadas en la masa muscular. (Ver Lemann,et al. (1990) Am. J. Kidney Dis. 16(3):236-243).

Cilindros grandes

Uno de los procedimientos estándar en urinálisis consiste en el examen mediante microscopio de los sedimentos urinarios para detectar la presencia de elementos formados. Entre los elementos formados que pueden estar presentes en la orina están las masas cilíndricas de materiales aglutinados que representan típicamente un molde o "sedimento" del conducto de un túbulo contorneado distal o túbulo colector. En sujetos humanos sanos, tales moldes tienen típicamente un diámetro de 15-25 \mum. En sujetos con insuficiencias renales crónicas, sin embargo, la hipertrofia de los túbulos puede dar como resultado la presencia de "cilindros grandes" o "cilindros de insuficiencia renal" que son 2-6 veces el diámetro de cilindros normales y a menudo tienen una apariencia cerosa homogénea. Así, tal como se utiliza aquí, un "cilindro grande" significa un sedimento urinario con un diámetro 2-6 veces el normal, o aproximadamente 30-150 \mum para cilindros humanos.

Crónico

Tal como se utiliza aquí con respecto a las indicaciones clínicas tales como cilindros urinarios, las medidas de GFR u otros marcadores de la función renal, "crónico" significa persistencia durante un periodo de al menos tres, o más preferiblemente, al menos seis meses. Así, por ejemplo, un sujeto con una GFR medida crónicamente por debajo de 50% de la GFR_{exp} es un sujeto en el que se ha medido la GFR y se ha encontrado que está por debajo de 50% de GFR_{exp} en al menos dos medidas separadas en al menos tres, y más preferiblemente en al menos seis meses, y para el cual no hay razones médicas validas para creer que la GFR era sustancialmente (e.g. 10%) más alta durante el transcurso de este periodo.

Sujetos con, o con riesgo de, insuficiencia renal crónica

Tal como se utiliza aquí, se dice que un sujeto tiene o, tiene riesgo de, una insuficiencia renal crónica, o con un riesgo de necesitar una terapia de trasplante renal (i.e. hemodiálisis crónica, diálisis peritoneal continua, o trasplante de riñón), si razonablemente se espera que el sujeto va a sufrir una pérdida progresiva de la función renal asociada con la pérdida progresiva de las unidades nefrónicas funcionales. Un médico o un veterinario puede determinar de manera rutinaria si un sujeto en particular tiene, o tiene riesgo de, insuficiencia renal crónica. Sujetos que tienen, o sufren riesgo de, insuficiencia renal crónica, o un riesgo de necesitar una terapia de trasplante renal, incluyen pero no se limitan a los siguientes: sujetos que pueden considerarse como aquejados de una insuficiencia renal crónica, una enfermedad renal terminal, una nefropatía diabética crónica, una nefroesclerosis hipertensiva, una glomérulonefritis crónica, una nefritis hereditaria, y/o una displasia renal; sujetos que tienen una biopsia que indica una hipertrofia glomerular, una hipertrofia tubular, una gloméruloesclerosis crónica, y/o una esclerosis túbulointersticial; sujetos que tienen una exploración por ultrasonidos, IRM, TAC, u otro examen no invasivo que indica una fibrosis renal; sujetos que tienen una cantidad fuera de lo común de cilindros grandes presentes en los sedimentos de la orina; sujetos que tienen un GFR que es crónicamente menor que aproximadamente 50%, y más particularmente menor que aproximadamente 40%, 30% o 20%, del GFR esperado para el sujeto; hombres que pesan al menos aproximadamente 50 kg y que tienen un GFR que es crónicamente menor que aproximadamente 50 ml/min, y más particularmente menor que aproximadamente 40 ml/min, 30 ml/min o 20 ml/min; mujeres que pesan al menos aproximadamente 40 kg y que tienen un GFR que es crónicamente menor que aproximadamente 40 ml/min, y más particularmente menor que aproximadamente 30 ml/min, 20 ml/min o 10 ml/min; sujetos que poseen una cantidad de unidades nefrónicas funcionales menor que aproximadamente 50%, y más particularmente menor que aproximadamente 40%, 30% o 20% de la cantidad de unidades nefrónicas funcionales que posee un sujeto sano, pero por lo demás sujetos similares; sujetos que tienen un sólo riñón; y sujetos que son receptores de trasplante de riñón.

II. Descripción de las realizaciones preferidas A. General

La presente invención depende, en parte, del descubrimiento sorprendente de que la administración de ciertos agentes terapéuticos renales basados en proteínas a sujetos con, o con riesgo de, insuficiencia renal crónica puede reducir las tasas de mortalidad y/o morbilidad y, evitar, inhibir, retrasar o aliviar la pérdida progresiva de la función renal que caracteriza la insuficiencia renal crónica. Alternativamente, o además, la administración de los agentes terapéuticos renales de la presente invención puede evitar, inhibir o retrasar la pérdida progresiva de unidades nefrónicas funcionales y el declive progresivo en la velocidad de filtración glomerular (GFR), que conduce lenta pero inevitablemente a una necesidad de terapia de trasplante renal (i.e. trasplante renal o diálisis crónica) o la muerte. En las realizaciones preferidas, los agentes terapéuticos de la invención son miembros de familia de las proteínas osteogénicas/proteínas morfogenéticas del hueso (OP/BMP) dentro de la superfamilia de proteínas TGF-\beta.

B. Agentes terapéuticos renales

Los agentes terapéuticos renales de la presente invención son proteínas de origen natural, o variantes funcionales de las proteínas de origen natural, dentro de la familia de las proteínas osteogénicas/proteínas morfogenéticas del hueso (OP/BMP) dentro de la superfamilia de proteínas TGF-\beta. Esto es, estas proteínas forman un subgrupo diferente, referido aquí como la "familia OP/BMP", dentro del agrupamiento evolutivo poco preciso de proteínas con una secuencia relacionada, conocido como la superfamilia TGF- \beta. Miembros de esta familia de proteínas comprenden polipéptidos secretados que comparten características estructurales comunes, y que se procesan de una manera similar a partir de una pro-proteína para dar lugar a una proteína madura carboxi-terminal. En la proteína madura, todos los miembros comparten un patrón que conserva de seis o siete residuos de cisteína que definen un dominio de 97-106 aminoácidos, y la forma activa de estas proteínas es bien un homodímero unido por un disulfuro o un miembro de la familia único, o un heterodímero con dos miembros diferentes (ver, e.g. Massague (1990), Ann. Rev. Cell Biol. 6:597; Sampath et al. (1990), J. Biol. Chem., 265:13198). Por ejemplo, en su madurez, la forma nativa de la OP-1 humana de origen natural es un dímero glicosilado que tiene típicamente un peso molecular aparente de aproximadamente 30-36 kDa determinado mediante SDS-PAGE. Cuando se reduce, la proteína de 30 kDa da lugar a dos subunidades peptídicas glicosiladas con pesos moleculares aparentes de aproximadamente 16 kDa y 18 kDa. La proteína no glicosilada tiene un peso molecular aparente de aproximadamente 27 kDa. Cuando se reduce, la proteína de 27 kDa da lugar a dos cadenas polipeptídicas no glicosiladas con pesos moleculares de aproximadamente 14 kDa a 16 kDa.

Típicamente, las proteínas OP/BMP de origen natural se traducen como un precursor que tiene una secuencia de péptidos señal N-terminal, un "pro"dominio, y un dominio de proteína "madura". El péptido señal tiene típicamente menos de 30 residuos, y puede romperse rápidamente después de la traducción en un sitio de ruptura que puede predecirse utilizando el método de Von Heijne (1986), Nucleic Acid Research 14:4683-4691. El "pro"dominio es variable, tanto en secuencia como en longitud, variando desde aproximadamente 200 a por encima de 400 residuos. El pro dominio se rompe para dar lugar al dominio C-terminal "maduro" de aproximadamente 115-180 residuos, que incluye el dominio C-terminal que se conserva que contiene seis o siete cisteínas de 97-106 residuos. Tal como se utiliza aquí, la "pro forma" de un miembro de la familia OP/BMP se refiere a una proteína que comprende un par de polipéptidos plegados, comprendiendo cada uno de ellos un pro dominio asociado bien de manera covalente o no covalente con los dominios maduros del polipéptido OP/BMP. Típicamente, la pro forma de la proteína es más soluble que la forma madura bajo condiciones fisiológicas. La pro forma parece ser la forma primaria secretada a partir de células de mamíferos cultivadas. La "forma madura" de la proteína se refiere al dominio C-terminal maduro que no está asociado, ni covalente ni no covalentemente con el pro dominio. Se considera que cualquier preparación de OP-1 contiene la forma madura cuando la cantidad de pro domino en la preparación no es mayor que 5% de la cantidad de dominio C-terminal "maduro".

Los miembros de la familia OP/BMP útiles aquí incluyen cualquiera de las proteínas nativas de origen natural conocidas, incluyendo sus equivalentes alélicos, filogenéticos y sus otras variantes, tanto de fuente natural o producidas biosintéticamente (e.g., incluyendo "muteínas" o "proteínas mutantes"), como nuevos miembros activos de la familia de proteínas OP/BMP.

Secuencias particularmente útiles incluyen las que comprenden dominios C-terminales que contienen siete cisteínas de mamíferos, preferiblemente humanas, OP-1, OP-2, OP-3, BMP2, BMP3, BMP4, BMP5, BMP6, BMP8 y BMP9 humanas. Otras proteínas útiles en la práctica de la invención incluyen las formas activas de GDF-5, GDF-6, GDF-7, DPP, Vg1, Vgr-1, 60A, GDF-1, GDF-3, GDF-5, GDF-6, GDF-7, BMP10, BMP11, BMP13, BMP15, UNIVIN, NODAL, SCREW, ADMP o NURAL y variantes de la secuencia de aminoácidos de las mismas. En una realización en este momento preferida, se seleccionan los agentes terapéuticos renales de la invención entre cualquiera de: OP-1, OP-2, OP-3, BMP2, BMP3, BMP4, BMP5, BMP6, y BMP9.

Las publicaciones que describen estas secuencias, así como sus propiedades químicas y físicas, incluyen: OP-1 y OP-2: Patente EE.UU. No. 5.011.691, Patente EE.UU. No. 5.266.683, y Ozkaynak et al. (1990), EMBO J. 9:2085-2093; OP-3: WO94/10203; BMP2, BMP3, y BMP4: Patente EE.UU. No. 5.013.649, WO91/18098, WO88/00205, y Wozney et al. (1988), Science 242:1528-1534; BMP5 y BMP6: WO90/11366 y Celeste et al. (1991), Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 87:9843-9847; Vgr-1: Lyons et al. (1989), Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 86:4554-4558; DPP: Padgett et al. (1987), Nature 325:81-84; Vg1: Weeks (1987), Cell 51:861-867; BMP-9: WO/33830; BMP10: WO94/26893; BMP-11: WO94/26892; BMP12: WO95/16035; BMP-13: WO95/16035; GDF-1: WO92/00382 y Lee et al. (1991), Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 88:4250-4254; GDF-8: WO94/21681; GDF-9: WO94/15966; GDF-10: WO95/10539; GDF-11: WO96/01845; BMP-15: WO96/36710; MP121: WO96/01316; GDF-5 (CDMP-1, MP52): WO94/15949, WO96/14335, WO93/1609 y Storm et al. (1994), Nature 368:639-643; GDF-6 (CDMP-2, BMP13): WO95/01801, WO96/14335 y WO95/10635; GDF-7 (CDMP-3, BMP12): WO95/10802 y WO95/10635; BMP-3b: Takao, et al. (1996), Biochem. Biophys. Res. Com. 219:656-662; GDF-3: WO94/15965; 60a: Blaster et al. (1993), Cell 73:687-702 y numero de acceso GenBank L12032. En otra realización, las proteínas útiles incluyen constructores biosintéticos biológicamente activos, incluyendo proteínas biosintéticas nuevas y proteínas quiméricas diseñadas utilizando secuencias de dos o más familias de proteínas OP/BMP. Ver también los constructores biosintéticos descritos en la patente de EE.UU. No. 5.011.691, cuya descripción se incorpora aquí mediante una referencia (e.g., COP-1, COP-3, COP-4, COP-5, COP-7, y COP-16).

En otras realizaciones preferidas, los agentes terapéuticos renales útiles aquí incluyen proteínas efectivas en las cuales las secuencias de aminoácido comprenden una secuencia que comparte al menos 70% de la secuencia de aminoácidos "homóloga" y, preferiblemente 75% o 85% de homología con el dominio C-terminal que contiene siete cisteínas presente en las formas activas de OP-1 humana (i.e., residuos 330-431, tal como se muestra en SEQ ID NO: 2 de patente de EE.UU. No. 5.266.783). En otra realización preferida, los agentes terapéuticos renales útiles aquí incluyen proteínas efectivas en las cuales la secuencia de aminoácidos comprenden una secuencia que comparte al menos 60% de la identidad de secuencia de aminoácidos y, preferiblemente, 65% o 70% de identidad con el dominio C-terminal que contiene siete cisteínas presente en las formas activas de OP-1 humana. Así, una secuencia de aminoácidos candidata aunque tenga una eficacia terapéutica en la presente invención, puede alinearse con la secuencia de aminoácidos del dominio C-terminal que contiene siete cisteínas de OP-1 humana utilizando el método de Needleman et al. (1970), J. Mol. Biol. 48:443-453, implementado convenientemente mediante programas informáticos tales como el programa Align (DNAstar, Inc.). Como se entenderá por los expertos en la técnica, las secuencias homólogas o funcionalmente equivalentes incluyen disposiciones funcionalmente equivalentes de los residuos de cisteínas dentro del esqueleto de cisteína que se conserva, incluyendo inserciones o eliminaciones de aminoácidos que alteran la disposición lineal de esas cisteínas, pero que no dificultan materialmente su relación en la estructura plegada de la proteína dimérica, incluyendo su capacidad para formar enlaces disulfuro intra- o inter-cadena, tal como puede ser necesario para la actividad biológica. Por lo tanto, los intervalos internos y las inserciones de aminoácidos en la secuencia candidata se ignoran para calcular el nivel de homología de secuencia de aminoácidos o identidad entre el candidato y las secuencias referencia.

"Homología de secuencia de aminoácidos" se entiende aquí que incluye tanto la identidad de la secuencia de aminoácidos como su similitud. Así, tal como se usa aquí, un porcentaje de "homología" entre las secuencias de aminoácidos indica el porcentaje de residuos de aminoácidos que son idénticos o similares entre las secuencias. Residuos "similares" son "sustituciones conservadoras" que satisfacen los criterios definidos para un "punto de mutación aceptado" en Dayhoff et al. (1978), Atlas of Protein Sequence and Structure Vol. 5 (Suppl. 3), pp. 354-352, Natl. Biomed. Res. Found, Washington, D.C. Así, "sustituciones conservadoras" son residuos que son similares físicamente o funcionalmente a los correspondientes residuos referencia, con un tamaño similar, forma, carga eléctrica, y/o propiedades químicas tales como capacidad para formar enlaces covalentes o de hidrógeno, o similares. Ejemplos de sustituciones conservadoras incluyen la sustitución de un aminoácido por otro con características similares, e.g., sustituciones dentro de los siguientes grupos: (a) valina, glicina; (b) glicina, alanina; (c) valina, isoleucina, leucina; (d) ácido aspártico, ácido glutámico; (e) asparagina, glutamina; (f) serina, treonina; (g) lisina, arginina, metionina; y (h) fenilalanina, tirosina. El término "sustitución conservadora" o "variación conservadora" también incluye el uso de un aminoácido sustituido en lugar de un aminoácido no sustituido en una cadena de polipéptido dada, teniendo en cuenta que la cadena de polipéptido resultante también tiene una eficacia terapéutica en la presente invención.

Los agentes terapéuticos renales de la invención también se caracterizan por presentar actividades biológicas que pueden deducirse fácilmente por los expertos en el campo. Específicamente, un agente terapéutico renal de la presente invención es (a) capaz de inducir condrogénesis en un ensayo del hueso ectópico de Reddi-Sampath (Sampath y Reddi (1981), Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 78:7599-7603) o una prueba sustancialmente equivalente, (b) capaz de evitar, inhibir, retrasar o aliviar significativamente la pérdida progresiva de función renal en un animal modelo estándar con insuficiencia renal crónica, o (c) capaz de causar una mejora clínicamente significativa en un marcador estándar de la función renal cuando se administra a un mamífero con, o con riesgo de, insuficiencia renal crónica.

El ensayo del hueso ectópico de Reddi-Sampath es bien conocido en el campo como una prueba de la actividad condrogénica. El ensayo, que se puede realizar fácilmente, se describe y se discute en, por ejemplo, Sampath and Reddi (1981), Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 78:7599-7603; y Wozney (1989), "Bone Morphogenetic Proteins", Progress in Growth Factor Research 1:267-280. Utilizando otros animales y zonas de tejido, los expertos en el área pueden emplear o desarrollar muchos ensayos equivalentes para evaluar la actividad biológica de los agentes terapéuticos renales de la presente invención. Ver, por ejemplo, las bio pruebas descritas en la patente U.S. No. 5.226.683.

Los agentes terapéuticos renales de la presente invención también pueden probarse en animales modelo de insuficiencia renal crónica. Se pueden crear modelos de mamíferos de insuficiencia renal crónica en, por ejemplo, ratones, ratas, cerdos de guinea, perros, ovejas, cabras, cerdos, vacas, caballos, y primates no-humanos causando un daño directo o indirecto o insulto a los tejidos renales del animal. Los animales modelo de insuficiencia renal crónica pueden, por ejemplo, crearse llevando a cabo una nefrectomía parcial (e.g., 5/6), que reduce el número de unidades nefrónicas funcionando hasta un nivel que inicia una hipertrofia renal compensatoria, de nuevo pérdida de nefrones, y un declive progresivo de la función renal que caracteriza el insuficiencia renal crónica.

Finalmente, los agentes terapéuticos renales de la presente invención pueden evaluarse por su eficacia terapéutica causando una mejora clínicamente significativa en un marcador estándar de la función renal cuando se administra a sujetos mamíferos (e.g. pacientes humanos) con, o con riesgo de, insuficiencia renal crónica. Tales marcadores de la función renal son bien conocidos en la bibliografía médica e incluyen, sin limitarse a, velocidades del incremento de los niveles BUN, velocidades del incremento en el suero de creatinina, medidas estáticas de BUN, medidas estáticas de la creatinina en suero, velocidades de filtración glomerular (GFR), relaciones de BUN/creatinina, concentraciones de sodio (Na+) en suero, relaciones orina/plasma para creatinina, relaciones orina/plasma para urena, osmolalidad de la orina, salida diaria de orina, y similares (ver, por ejemplo, Brenner y Lazarus (1994), en Harrison's Principles of Internal Medicine, 13th edition, Isselbacher et al., eds., McGraw Hill Text, New York; Luke and Strom (1994), en Internal Medicine, 4th Edition, J.H. Stein, ed., Mosby-Year Book, Inc. St Louis).

Los agentes terapéuticos renales contemplados aquí pueden expresarse mediante genómica intacta o truncada o cDNA o a partir de DNAs sintéticos en células anfitrionas procarióticas o eucarióticas. Las proteínas diméricas pueden aislarse a partir de medios de cultivo y/o replegadas y dimerizadas in vitro para formar composiciones biológicamente activas. Los heterodímeros pueden formarse in vitro combinando por separado cadenas de polipéptido distintas. Alternativamente, los heterodímeros pueden formarse en una única célula mediante co-expresión de ácidos nucléicos que codifica por separado cadenas de polipéptido distintas. Ver, por ejemplo, WO93/09229, o patente U.S. No. 5.411.941, para varios protocolos ejemplarizantes de la producción de proteínas heterodiméricas recombinantes. Actualmente las células anfitrionas preferidas incluyen, sin limitación, procarióticas que incluyen E. coli, o eucarióticas que incluyen almidón, Sacccharomyces, células de insectos, o células de mamíferos, tales como células de CHO, COS o BSC. El experto en el campo se dará cuenta que pueden utilizarse de manera ventajosa otras células anfitrionas. Descripciones detalladas de las proteínas útiles en la práctica de esta invención, que incluye cómo hacer, usar y probarlas para la actividad condrogénica se describen en numerosas publicaciones, incluyendo la patente U.S.Nos. 5.266.683 y 5.011.691, cuyas descripciones se incorporan aquí mediante referencia.

C. Sujetos para el tratamiento

De manera general, los métodos de la presente invención pueden utilizarse con sujetos mamíferos con, o con riesgo de, insuficiencia renal crónica, o con riesgo de necesitar una terapia de trasplante renal (i.e. diálisis crónica o trasplante renal). Los sujetos mamíferos que pueden tratarse de acuerdo a los métodos de la invención incluyen, pero no se limitan a, sujetos humanos o pacientes. Además, sin embargo, la invención puede emplearse en el tratamiento de mamíferos domesticados cuidados por compañeros humanos (e.g., perros, gatos, caballos), que tienen un valor comercial importante (e.g., vacas lecheras, ganado, animales de deporte), que tienen un valor científico importante (e.g. especímenes en cautividad o en libertad de especies en extinción), o que tienen otro valor. Adicionalmente, de manera general, los sujetos para el tratamiento con los métodos de la presente invención necesitan no presentar indicaciones para el tratamiento con los agentes terapéuticos renales de la invención aparte de las indicaciones asociadas con el riesgo de insuficiencia renal crónica. Es decir, se espera que los sujetos para el tratamiento estén libres de indicaciones para el tratamiento con los agentes terapéuticos renales de la invención. En algunos casos, sin embargo, los sujetos pueden presentar otros síntomas (e.g., osteodistrofia) para los cuales estaría indicado el tratamiento con los agentes de la presente invención. En esos casos, el tratamiento debería ajustarse teniendo esto en cuenta para evitar una dosificación excesiva.

Un médico o veterinario con una experiencia normal está formado para reconocer los sujetos que pueden correr un riesgo sustancial de insuficiencia renal crónica, o que corren riesgo sustancial de necesitar una terapia de trasplante renal. Particularmente, se espera que, tanto los ensayos clínicos y no clínicos, como la experiencia acumulada en relación con los métodos descritos aquí y con otros métodos de tratamiento, informen al profesional con experiencia para decidir si un sujeto dado tiene, o corre el riesgo de tener, un insuficiencia renal crónica, o corre el riesgo de necesitar una terapia de trasplante renal, o si algún tratamiento particular es más adecuado a las necesidades del sujeto, incluyendo el tratamiento de acuerdo con la presente invención.

Como regla general, un sujeto mamífero puede considerarse que tiene, o corre el riesgo de tener, una insuficiencia renal crónica, o corre el riesgo de necesitar una terapia de trasplante renal, si se ha diagnosticado ya que este sujeto está afectado de, o podría considerarse como siendo afectado de, una dolencia que conduce típicamente a la pérdida progresiva de la función renal asociada a la pérdida progresiva de las unidades nefrónicas funcionales. Tales condiciones incluyen, pero no se limitan a, insuficiencia renal crónica, enfermedad renal terminal, nefropatía diabética crónica, nefrosclerosis hipertensiva, glomerulonefritis crónica, nefritis hereditaria, displasia renal y similares. Estas, y otras enfermedades y condiciones conocidas en la técnica, conducen típicamente a la pérdida progresiva de los nefrones funcionales y a la aparición de un insuficiencia renal crónica.

Frecuentemente, un médico o veterinario con experiencia puede fundamentar un pronóstico, diagnóstico o decisión de tratamiento después del examen de una muestra de biopsia renal. Tales biopsias proporcionan una riqueza de información útiles para diagnosticar los desórdenes del riñón pero, como consecuencia del procedimiento invasivo y del trauma adicional al presunto riñón no enfermo, puede no ser apropiado para todos los sujetos. Sin embargo, los sujetos que tienen, o que corren el riesgo de tener, un insuficiencia renal crónica, o que corren el riesgo de necesitar una terapia de trasplante renal, pueden reconocerse mediante las indicaciones histológicas de las biopsias renales incluyendo, pero sin limitarse a, la hipertrofia glomerular, la hipertrofia tubular, la gloméruloesclerosis, la esclerosis túbulointersticial, y similares.

Las técnicas menos invasivas para evaluar la morfología del riñón incluyen la exploración por ultrasonidos, IRM y TAC. También existen técnicas de exploración disponibles que emplean agentes de contraste o de imagen (e.g. colorantes radioactivos) pero, se debe resaltar que algunos de ellos son particularmente tóxicos para los tejidos y estructuras renales y, por lo tanto, su uso puede ser desaconsejado en sujetos con, o que corren el riesgo de, insuficiencia renal crónica. Tales técnicas de exploración invasivas pueden emplearse para detectar casos tales como una fibrosis o esclerosis renal, una necrosis renal focalizada, una cistitis renal, y una hipertrofia renal grave que llevará al sujeto a, o a correr el riesgo de, una insuficiencia renal crónica, o a correr el riesgo de una necesidad de una terapia de trasplante renal.

Bastante frecuentemente, las decisiones de prognosis, diagnosis y/o tratamiento se basan en indicaciones clínicas de la función renal. Una de tales indicaciones es la presencia en el sedimento de la orina de un número inusual de "cilindros grandes" o "cilindros de insuficiencia renal", que son indicativos de una hipertrofia tubular y sugiere una hipertrofia renal compensatoria típica de la insuficiencia renal crónica. Una mejor indicación de la función renal es el caudal glomerular (GFR), que puede medirse directamente cuantificando la velocidad de desaparición de marcadores particulares, o que puede inferirse mediante medidas indirectas.

Debe puntualizarse que la presente invención no está dirigida a la medida de GFR o a la diagnosis de insuficiencia renal crónica. Los métodos de tratamiento de la presente invención, por lo tanto, necesitan no estar restringidos a sujetos que presentan unas medidas particulares de GFR, o cualquier otro marcador particular de la función renal. Efectivamente, no es necesario determinar el GFR de un sujeto, o cualquier otro marcador particular de la función renal, antes de practicar los tratamientos de la presente invención. De todas formas, la medida del GFR se considera una de las formas preferidas para evaluar la función renal.

Tal como es bien conocido en la técnica, el GFR refleja la velocidad de limpieza de un compuesto referencia o marcador desde el plasma a la orina. El compuesto marcador a considerar es típicamente uno que se filtra libremente por los glomérulos, pero que no se secreta activamente o se reabsorbe por los túbulos renales, y que no está unido significativamente por las proteínas que circulan. La velocidad de limpieza se define típicamente mediante la fórmula presentada arriba, que se refiere al volumen de orina producida en un periodo de veinticuatro horas, y las concentraciones relativas del marcador en la orina y en el plasma. Para ser más exacto, el GFR también debería corregirse según el área de superficie corporal. El compuesto referencia "estándar de oro" es la inulina, debido a sus propiedades de filtración y ausencia de unión al suero. La concentración de este compuesto en sangre u orina es, sin embargo, difícil de cuantificar. Por tanto, en vez de la inulina se utilizan a menudo las velocidades de limpieza de otros compuestos, que incluyen el p-aminohipurato (PAH) y creatinina.. Además, a menudo se emplean diversas fórmulas que intentan simplificar la estimación del verdadero GFR, omitiendo consideraciones como las concentraciones reales de orina del marcador, volúmenes diarios de orina producidos, o el verdadero área de la superficie corporal. Estos valores pueden reemplazarse por valores estimados, basados en otros factores, mediante los valores de base establecidos para el mismo sujeto, o mediante valores estándar para sujetos similares. Sin embargo, estos valores estimados deberían usarse con precaución, debido a que pueden implicar asunciones inapropiadas basadas en la función renal de sujetos normales o sanos.

En la técnica se han desarrollado diversos métodos y fórmulas que describen un valor esperado de GFR para un sujeto sano con ciertas características. En particular, existen fórmulas disponibles que proporcionan un valor esperado del GFR basadas en los niveles de creatinina en el plasma, edad, peso y sexo. Una de tales fórmulas para un GFR esperado se presenta arriba. Se pueden emplear, por supuesto, otras fórmulas, y se pueden hacer tablas de valores estándar para sujetos de una edad, peso, sexo y/o concentración de creatinina en plasma dados. En la actualidad, también existen disponibles en la técnica nuevos métodos para medir o estimar el GFR (e.g. utilizando tecnologías de NMR o MRI), y pueden usarse de acuerdo con la presente invención (ver, e.g., patente U.S. Nº 5.100.646 y 5.335.660).

De manera general, independientemente de la forma como se mida o estime el GFR, un sujeto puede considerarse que tiene, o corre el riesgo de tener, una insuficiencia renal crónica, o tiene un riesgo de necesitar una terapia de trasplante renal, cuando el sujeto tiene un GFR que es crónicamente menor que aproximadamente el 50% del GFR esperado para el sujeto. El riesgo se considera mayor cuando el GFR desciende por debajo de ese valor. Así, de manera creciente, se considera que un sujeto tiene riesgo, cuando éste tiene un GFR que es crónicamente menor que aproximadamente 40%, 30% o 20% del GFR esperado.

De manera general, independientemente de la forma como se mida o estime el GFR, un hombre, que pesa al menos aproximadamente 50 kg puede considerarse que tiene, o corre el riesgo de tener, una insuficiencia renal crónica, o un riesgo de necesitar una terapia de trasplante renal, cuando tiene un GFR que es crónicamente menor que aproximadamente 50 ml/min. El riesgo se considera mayor cuando el GFR desciende por debajo de ese valor. Así, de manera creciente, se considera que un sujeto tiene riesgo, cuando éste tiene un GFR que es crónicamente menor que aproximadamente 40, 30 o 20 ml/min.

De manera general, independientemente de la forma como se mida o estime el GFR, una mujer, que pesa al menos aproximadamente 40 kg puede considerarse que tiene, o corre el riesgo de tener, una insuficiencia renal crónica, o un riesgo de necesitar una terapia de trasplante renal, cuando tiene un GFR que es crónicamente menor que aproximadamente 40 ml/min. El riesgo se considera mayor cuando el GFR desciende por debajo de ese valor. Así, de manera creciente, se considera que un sujeto tiene riesgo, cuando éste tiene un GFR que es crónicamente menor que aproximadamente 30, 20 o 10 ml/min.

Mediante el empleo de una variedad de métodos, incluyendo los exámenes histológicos, los procedimientos de exploración no invasivos, evaluaciones de los indicadores clínicos, y otras técnicas descritas arriba y conocidas en el campo, los médicos y veterinarios pueden estimar tanto el número de unidades nefrónicas que posee un sujeto, o el porcentaje de unidades nefrónicas funcionando que posee un sujeto en relación con un sujeto similar sano (e.g. sujeto conespecífico de aproximadamente la misma edad, peso y sexo). Así, por ejemplo, una biopsia puede revelar una disminución en la densidad de nefrones funcionales, o tener una imagen con agentes filtrados que indican pérdidas de tejido renal funcional y/o capacidad de filtración. Tales medidas o estimaciones proporcionan otros medios para expresar cuando un sujeto tiene o, corre el riesgo de tener, una insuficiencia renal crónica, o un riesgo de necesitar una terapia de trasplante renal. Así, de manera general, un sujeto se puede considerar que tiene o, corre el riesgo de tener, una insuficiencia renal crónica, o con un riesgo de necesitar una terapia de trasplante renal, si el sujeto posee un número de unidades nefrónicas funcionales que es menor que aproximadamente 50% del número de unidades nefrónicas funcionales de un sujeto similar, pero sano. Como arriba, el riesgo se considera mayor cuando el número de nefrones funcionales es menor que aproximadamente 40, 30, o 20% del número para un sujeto similar, pero sano.

Finalmente, debería resaltarse que los sujetos que poseen un sólo riñón, independientemente de la manera cómo se ha perdido el otro riñón (e.g., trauma físico, eliminación quirúrgica, defecto de nacimiento), pueden considerarse prima facie con riesgo de insuficiencia renal crónica, o necesidad de una terapia de trasplante renal. Esto es particularmente así para aquellos sujetos que han perdido un riñón debido a una enfermedad o dolencia que puede afectar el riñón que queda. De manera similar, los sujetos que ya son receptores de un trasplante renal, o que son ya receptores de una diálisis crónica (e.g., hemodiálisis crónica o diálisis peritoneal ambulatoria continua) pueden considerarse prima facie con riesgo de insuficiencia renal crónica, o necesidad para una terapia de trasplante renal adicional.

D. Formulaciones y métodos de tratamiento

Los agentes terapéuticos renales de la presente invención pueden ser administrados por cualquier ruta que sea compatible con el agente terapéutico renal empleado. Así, según sea apropiado, la administración puede ser oral o parenteral, incluyendo intravenosa, intraperitoneal, y rutas de administración renales intracapsulares. Además, la administración puede ser mediante inyecciones periódicas de un bolo alimenticio del agente terapéutico renal, o puede hacerse más continua mediante administración intravenosa o intraperitoneal a partir de un reservorio que es externo (e.g., una bolsa i.v.) o interna (e.g., un implante biodegradable o una bomba implantada).

Los agentes terapéuticos renales de la invención se pueden proporcionar a un individuo mediante los medios adecuados, preferiblemente directamente (e.g., localmente, tal como mediante inyección o administración tópica sobre un tejido localizado) o sistémicamente (e.g., parenteralmente, u oralmente). Cuando el agente se proporciona parenteralmente, tal como administración por vía intravenosa, subcutánea, o intramuscular, el agente preferiblemente comprende parte de una disolución acuosa. La solución es aceptable fisiológicamente de tal manera que además de la entrega del agente deseado al sujeto, la solución no afecta de una manera adversa el equilibrio electrolito y/o volumen del sujeto. Así, el medio acuoso para el agente puede comprender sal fisiológica normal (e.g., 9,85% NaCl, 0,15M, pH 7-7,4).

Si se desea, un agente terapéutico renal dado u otro agente se puede hacer más soluble mediante asociación con una molécula adecuada. Por ejemplo, la asociación de un dímero OP/BMP maduro con un prodominio OP/BMP da como resultado la proforma del agente terapéutico renal, que típicamente es más soluble o dispersable en soluciones fisiológicas que la correspondiente forma madura. De hecho, se piensa que los miembros endógenos de la familia OP/BMP son transportados (e.g., secretados y circulados) en el cuerpo de los mamíferos de esta forma. Esta forma soluble de la proteína puede obtenerse a partir de medios de cultivo de células de mamíferos que secretan OP/BMP, e.g., células transfectadas con ácidos nucléicos que codifican y para expresar la proteína. Alternativamente, se puede formular una especie soluble por complejación del dímero maduro (o un fragmento activo de él) con un prodominio o un fragmento de él que aumenta la solubilidad (descrito en más detalle abajo). Otra molécula capaz de aumentar la solubilidad y que es particularmente útil para administraciones orales, es la caseína. Por ejemplo, la adición de 0,2% de caseína aumenta la solubilidad de la forma activa madura de OP-1 en un 80%. También pueden ser útiles otros componentes que se encuentran en la leche y/o varias proteínas del suero.

Pueden prepararse disoluciones útiles para administración parenteral mediante cualquiera de los métodos bien conocidos en el campo farmacéutico, descritos, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences (Gennaro, A., ed.), Mack Pub., 1990.

Alternativamente, los agentes descritos aquí pueden administrarse oralmente. La administración oral de proteínas como agentes terapéuticos no se practica generalmente debido a que la mayoría de las proteínas son fácilmente degradadas por las enzimas y ácidos digestivos en el sistema digestivo de los mamíferos antes de que puedan ser absorbidas en la corriente sanguínea. Sin embargo, los agentes terapéuticos renales descritos aquí son típicamente estables a los ácidos y resistentes a las proteasas (ver, por ejemplo, Patente U.S. Nº 4.968.590). Además, al menos uno de estos agentes terapéuticos renales OP-1, se ha identificado en extracto de glándulas mamarias, calostro y leche de 57 días. Además, la OP-1 purificada a partir del extracto de glándulas mamarias es terapéuticamente eficaz y también se detecta en la corriente sanguínea. Finalmente, la forma de OP-1 soluble, e.g., OP-1 madura asociada con el prodominio, es terapéuticamente eficaz. Estos resultados, así como los descritos en los ejemplos posteriores, indican que la administración oral y parenteral son medios viables para la administración de los agentes terapéuticos renales de la invención a un individuo. Además, mientras que las formas maduras de ciertos agentes terapéuticos descritos aquí son típicamente poco solubles, la forma encontrada en la leche (y extracto de glándulas mamarias y calostro) es muy soluble, probablemente debido a la asociación de la forma madura, terapéuticamente eficaz, con parte o todo el prodominio de la secuencia intacta y/o por asociación con uno o más componentes de la leche. En consecuencia, los compuestos que se proporcionan aquí también pueden asociarse con moléculas capaces de aumentar su solubilidad in vitro o in vivo.

Los compuestos que se proporcionan aquí también pueden asociarse con moléculas capaces de dirigir el agente terapéutico renal al tejido deseado. Por ejemplo, puede utilizarse un anticuerpo, fragmento de anticuerpo, u otra proteína complejante, que interacciona específicamente con la superficie de una molécula en las células del tejido deseado. Se pueden diseñar moléculas directoras útiles, por ejemplo, utilizando la tecnología del sitio de unión de una única cadena descrito, por ejemplo, en la patente U.S. Nº 5.091.513.

Tal como el experto normal en la técnica apreciará, las composiciones formuladas contienen cantidades efectivas terapéuticamente del agente terapéutico renal. Esto es, contienen cantidades que proporcionan concentraciones apropiadas del agente a los tejidos renales durante un tiempo suficiente como para prevenir, inhibir, retrasar o aliviar la pérdida permanente y progresiva de la función renal, o dicho de otra manera, proporcionar una eficacia terapéutica. Tal como los expertos en la técnica apreciarán, la concentración de los compuestos descritos en una composición terapéutica de la presente invención variarán dependiendo de diversos factores, que incluyen la eficacia biológica del agente seleccionado, las características químicas (e.g., hidrofobicidad) de los compuestos empleados, la formulación de los compuestos excipientes, la ruta de administración, y el tratamiento previsto, incluyendo si el ingrediente activo se administrará directamente a un riñón o cápsula renal, o si se administrará sistémicamente. La dosis de administración preferida también depende probablemente de variables tales como la dolencia de los tejidos renales, grado de pérdida de la función renal, y el estado de salud general del sujeto en particular. Las dosis pueden administrarse de manera continua, o diaria, pero normalmente se prefiere que las dosis se administren en una sola vez, dos veces o tres veces por semana, durante un periodo tan largo como dure la respuesta satisfactoria (medido, por ejemplo, por la estabilización y/o mejora de la función renal mediante marcadores médicos apropiados, y/o índices de calidad de vida). También pueden emplearse dosis menos frecuentes, por ejemplo, dosis mensuales. De otro modo, para los sujetos que pudieran requerir sesiones de hemodiálisis continuas, bi-semanales o tri-semanales, infusiones intravenosas o intraperitoneales continuas, bi-semanales o tri-semanales no se consideran excesivamente inconvenientes. Además, puede ser aconsejable implantar una endoprótesis semi- permanente para facilitar las infusiones frecuentes (e.g., intravenoso, intraperitoneal o intracapsular).

Los agentes terapéuticos renales de la invención pueden, por supuesto, administrarse solos o en combinación con otras moléculas que se sabe son beneficiosas en el tratamiento de las dolencias descritas aquí. Cuando se utilizan en combinación con otros agentes, puede estar aconsejado alterar en consecuencia las dosis de los agentes terapéuticos renales de la presente invención.

La práctica de la invención, incluyendo los aspectos adicionales preferidos y las realizaciones de ellos, se entenderá todavía más a partir de los siguientes ejemplos que se presentan aquí solamente para ilustrar y no deberían interpretarse como limitativos de la invención de ninguna manera.

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Ejemplos Modelo de riñón remanente de rata

Se empleó una nefrectomía parcial de rata (5/6) o modelo de riñón remanente de rata (RRKM) esencialmente tal como está descrito (Vukicevic, et al. (1987) J. Bone Mineral Res. 2:533). Las ratas machos (2-3 meses de edad, que pesan aproximadamente 150-200 g) se sometieron a una nefrectomía unilateral (bien del riñón derecho o del izquierdo). Después de aproximadamente una semana, se eliminó quirúrgicamente 2/3 del riñón que quedaba. Inmediatamente después de la operación, los niveles de creatinina y BUN en el plasma crecieron dramáticamente debido a la pérdida de la masa y función renal. Durante varias de las semanas siguientes de esta fase de insuficiencia "aguda", los niveles de creatinina y BUN en el plasma de los animales que supervivientes disminuyeron en cierto modo hasta valores normales, pero permaneciendo elevados. La función renal entonces parece permanecer relativamente constante o estable durante un periodo de duración variable. Después de este punto, los animales entran en un periodo de insuficiencia renal crónica, en el cual hay un declive esencialmente lineal de la función renal, que termina en la muerte.

Como controles quirúrgicos, se sometieron ratas adicionales a una operación "simulada", en la cual los riñones se descapsularon, pero no se eliminó tejido renal.

Modelo de intervención para la insuficiencia renal crónica

En este modelo, tanto las ratas nefrectomizadas como las operadas de manera simulada se mantuvieron durante 5-6 meses después de la operación. En este punto, los animales nefrectomizados supervivientes habían pasado la fase estable, y habían entrado en una insuficiencia renal crónica.

Las ratas se dividieron en 8 grupos con 12 ratas en cada grupo. Se utilizaron dos grupos de ratas nefrectomizadas como control (controles Nx), sin que uno de esos grupos recibiese tratamiento alguno, mientras que el otro recibió solamente inyecciones del vehículo tampón. Además, dos grupos de ratas operadas de manera simulada se utilizaron como controles (controles simulados), recibiendo uno de esos grupos solamente el vehículo tampón, mientras que el otro recibió 10 \mug/kg de peso corporal de OP-1 soluble (sOP-1). Se emplearon cuatro grupos experimentales de ratas nefrectomizadas, recibiendo 1, 3, 10 o 50 \mug/kg de peso corporal de sOP-1 mediante inyección intraperitoneal (animales OP-1 Nx). Las ratas tratadas con OP-1 y vehículo solo recibieron tres inyecciones por semana durante 4-8 semanas. El volumen total de la inyección era 300 \mul. No se observaron diferencias significativas entre los dos grupos de control Nx o entre los dos grupos de control simulado.

Comparadas con el grupo simulado que recibe sólo vehículo, el control Nx que recibe sólo vehículo mostró una creatinina en suero significativamente elevada (p < 0,01) (Figura 1) al final del estudio, indicando una pérdida significativa de función renal. Aunque las ratas nefrectomizadas tratadas bien con 1 o 3 \mug/kg de peso corporal de sOP-1 no mostraron una creatinina en suero significativamente reducida cuando se comparó con el control Nx, las ratas nefrectomizadas tratadas con sOP-1, con dosis de 10 o 50 \mug/kg de peso corporal mostraron una reducción significativa (p < 0,05) en los valores de creatinina (Figura 1). Se observaron resultados similares para los niveles de urea en suero: Aunque las tratas nefrectomizadas tratadas con 1 o 3 \mug/kg de peso corporal de sOP- 1 no mostraron una urea en suero significativamente reducida cuando se compararon con el control Nx, las ratas nefrectomizadas tratadas con sOP-1, con dosis de 10 o 50 \mug/kg de peso corporal mostraron unas reducciones significativas (p < 0,01) en los valores de urea en suero (Figura 2). Todas las ratas nefrectommizadas mostraron una urea en suero significativamente más alta (p < 0,01) cuando se compararon con las ratas operadas de manera simulada (Figura 2).

Las observaciones histológicas indican que, en contraste con el grupo control Nx tratado con vehículo, las ratas nefrectomizadas tratadas con OP-1 muestran una histología glomerular relativamente normal. La Figura 3, por ejemplo, muestra muestras renales típicas de (A) animales control Nx no tratados, y (B) ratas nefrectomizadas tratadas con OP-1 con poca ampliación (10x). La Figura 4 muestra muestras similares con una ampliación mayor (40x). Los análisis histomorfométricos indican que las ratas Nx OP-1 mostraron una incidencia reducida de esclerosis glomerular y colapso de bucle, una esclerosis relativamente esparcida y microaneurismias, y más glomérulos viables comparados con los de las ratas control Nx (Tabla 1).

Ninguna de las ratas murió en ninguno de los grupos durante este estudio.

Modelo profiláctico para la insuficiencia renal crónica

Las ratas se sometieron a nefrectomías parciales o operaciones simuladas tal como las descritas anteriormente. En este modelo, con objeto de probar la capacidad de los agentes terapéuticos renales OP/BMP para prevenir, inhibir o retrasar la iniciación de la insuficiencia renal crónica, se permitió que las ratas se recuperasen durante aproximadamente dos semanas después de la cirugía antes de la iniciación de la terapia OP-1. En este punto, los animales supervivientes habían superado la fase de insuficiencia renal aguda y no habían entrado todavía en la insuficiencia renal crónica.

Las ratas se dividieron en dos grupos de 15-20 ratas. Un grupo recibía solo tampón vehículo (control Nx) mientras que el otro recibía un tratamiento de OP-1 de 10 \mug/kg de peso corporal, suministrado intraperitonealmente tres veces a la semana. La administración de OP-1 o de vehículo continuó durante un periodo de aproximadamente 8-9 semanas.

Durante las semanas 1-5 de tratamiento, ambos grupos mostraron una creatinina en suero elevada (> 100 \mumol/L) relativo a los controles operados de manera simulada (35\pm7 \mumol/L). A las aproximadamente 5 semanas, ambos grupos comenzaron a mostrar un aumento en la creatinina en el suero, sugiriendo la aparición de una insuficiencia renal progresiva o crónica. El aumento en la creatinina en el suero fue, sin embargo, marcadamente menos rápido en el grupo tratado con OP-1, y significativamente más bajo que en los controles Nx (Figura 5: p < 0,02 a las semanas 6 y 8; p < 0,01 a las semanas 7 y 9). Se observaron también resultados similares en los valores de BUN en suero.

Más importante, las medidas de GFR basadas en los valores de creatinina en suero y orina mostraban un descenso muy significativo en ambos grupos de ratas nefrectomizadas (< 1,8 ml/min) en relación con los controles operados de manera simulada (4,7 \pm 1,1 ml/min). El GFR de ambos grupos continuó disminuyendo durante las semanas 1-3 de tratamiento. A las tres semanas aproximadamente, sin embargo, el GFR en el grupo tratado con OP-1 se estabilizó, mientras que el declive de la función renal continuó en los controles Nx. Alrededor de la semana 5, se había hecho estadísticamente significativa la diferencia entre los valores de GFR entre las ratas tratadas con OP-1 y las control Nx (p < 0,02). Esta diferencia en el GFR continuó aumentando en el tiempo (p < 0,01 a la semana 6; p < 0,001 a las semanas 7 y 8) según los controles Nx continuaban en declive, pero las ratas tratadas con OP-1 permanecieron estables (Figura 6). Alrededor del final de la semana 9, 40% de las ratas control Nx se murieron, mientras que ninguna de las ratas tratadas con OP-1 habían muerto.

La evaluación histológica de secciones de tejidos confirmaron que las ratas tratadas con OP-1 mostraron una mayor conservación o mantenimiento de los glomérulos, así como las estructuras tubulares proximales y distales. También había signos en las ratas tratadas con OP-1 de condensaciones mesenquinales nefrogénicas y la aparición de estructuras nefrogénicas desarrolladas. La Tabla 1 muestra los resultados de varios estándares cualitativos (e.g., matriz extracelular teñida con PAS) y semi-cuantitativos (e.g., clasificación visual), medidas histomorfométricas obtenidas para rodajas de tejido de las ratas control Nx y las Nx tratadas con OP-1. Estos resultados indican que el tratamiento con OP-1 de las ratas nefrectomizadas daba como resultado una mejora general (o degeneración reducida) de la morfología del tejido del riñón, grosor mesangial o perivascular aumentado, esclerosis glomerular y colapso de bucle disminuido, presencia de esclerosis "exparcida" y microaneurismias disminuidas, y un aumento de glomérulos viables.

Grupo	Histología	Grosor	Esclerosis Glomerular	Esclerosis Scattered	Ausencia de Glomérulos
	normal	Mesangial	y Colapso de Bucle	y Microaneurismias	Viables
Control	2,58\pm0,22	27,3\pm2,4	26,5\pm3,5	34,7\pm4,2	8,9\pm0,7
(N=15)
OP-1	11,41\pm1,1	58,6\pm3,2	14,7\pm1,3	11,8\pm1,1	2,5\pm0,2
(N=20)
Importancia	p < 0,01	p < 0,01	p < 0,02	p < 0,01	p < 0,01

Equivalentes

La invención puede ser realizada en otras formas específicas. Las realizaciones anteriores por lo tanto tienen que ser consideradas a todos los respectos ilustrativas más que limitativas de la invención descrita aquí. Así, el alcance de la invención está indicado en las reivindicaciones adjuntas.

Claims (15)

1. El uso de una proteína osteogénica/proteína morfogenética del hueso (OP/BMP) para la fabricación de un medicamento para

(a) la profilaxis o el tratamiento de insuficiencia renal crónica en mamíferos; o

(b) retrasar la necesidad de, o reducir la frecuencia de tratamientos de diálisis crónica.

2. El uso de la reivindicación 1, en el que la mencionada OP/BMP

(a) comprende un polipéptido que consiste en al menos un dominio C- terminal rico en cisteínas de una proteína seleccionada de un polipéptido seleccionado de OP-1, OP-2, OP-3, BMP2, BMP3, BMP4, BMP5, BMP6, y BMP9; o

(b) comprende un polipéptido que consiste al menos en un dominio C- terminal rico en cisteínas de una proteína seleccionada de OP-1 humana; o

(c) comprende un polipéptido que tiene al menos 70% de homología con una secuencia de aminoácidos de un dominio C-terminal que contiene siete cisteínas de OP-1 humana (por ejemplo, en el que el polipéptido tiene:

(i)

al menos 75% de homología con una secuencia de aminoácidos de un dominio C-terminal que contiene siete cisteínas de OP-1 humana; o

(ii)

al menos 80% de homología con una secuencia de aminoácidos de un dominio C-terminal que contiene siete cisteínas de OP-1 humana; o

(iii)

al menos 60% de identidad con una secuencia de aminoácidos de un dominio C-terminal que contiene siete cisteínas de OP-1 humana; o

(iv)

al menos 65% de identidad con una secuencia de aminoácidos de un dominio C-terminal que contiene siete cisteínas de OP-1 humana; o

(v)

al menos 70% de identidad con una secuencia de aminoácidos de un dominio C-terminal que contiene siete cisteínas de OP-1 humana.

3. El uso de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que la mencionada OP/BMP

(a) induce condrogénesis en un ensayo del hueso ectópico;

(b) evita, inhibe, retrasa o alivia la pérdida de la función renal en un modelo de animal con insuficiencia renal crónica; o

(c) causa una mejora significativa clínicamente en un marcador estándar de la función renal cuando se administra a mamíferos con, o que corren el riesgo de, insuficiencia renal crónica; o

(d) se selecciona de proteínas osteogénicas humanas y proteínas morfogenéticas del hueso humanas.

4. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que:

(a) el mencionado mamífero está afectado de una dolencia seleccionada de insuficiencia renal crónica, enfermedad renal terminal, nefropatía diabética crónica, glomerulopatía diabética, hipertrofia renal diabética, nefroesclerosis hipertensiva, glomeruloesclerosis hipertensiva, glomerulonefritis crónica, nefritis hereditaria, y displasia renal; o

(b) el examen de una biopsia renal del mencionado mamífero indica que el mencionado mamífero está afectado de una dolencia seleccionada de hipertrofia glomerular, hipertrofia tubular, glomeruloesclerosis, y esclerosis túbulointersticial; o

(c) el examen del mencionado mamífero indica una fibrosis renal.

5. El uso de la reivindicación 4, en el que,

(a) el mencionado examen es una exploración por ultrasonidos, IRM o TAC del mencionado mamífero; o

(b) el mencionado mamífero posee un número de unidades nefrónicas funcionales que es menor que aproximadamente 50% de un número de unidades nefrónicas funcionales presentes en un mamífero que tiene unos riñones sanos intactos; o

(c) el mencionado mamífero posee un número de unidades nefrónicas funcionales que es menor que aproximadamente 40% de un número de unidades nefrónicas funcionales presentes en un mamífero que tiene unos riñones sanos intactos; o

(d) el mencionado mamífero posee un número de unidades nefrónicas funcionales que es menor que aproximadamente 30% de un número de unidades nefrónicas funcionales presentes en un mamífero que tiene unos riñones sanos intactos; o

(e) el mencionado mamífero posee un número de unidades nefrónicas que es menor que aproximadamente 20% de un número de unidades nefrónicas funcionales presentes en un mamífero que tiene unos riñones sanos intactos.

6. El uso de la reivindicación 4 ó 5, en el que,

(a) el mencionado mamífero es un receptor de trasplante de riñón; o

(b) el mencionado mamífero posee sólo un riñón; o

(c) el examen de los sedimentos urinarios del mencionado mamífero indica la presencia de cilindros grandes.

7. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6, en el que,

(a) el mencionado mamífero tiene un GFR que es crónicamente menor que aproximadamente 50% de un GFR_{exp} para el mencionado mamífero, o

(b) el mencionado mamífero tiene un GFR que es crónicamente menor que aproximadamente 40% de un GFR_{exp} para el mencionado mamífero, o

(c) el mencionado mamífero tiene un GFR que es crónicamente menor que aproximadamente 30% de un GFR_{exp} para el mencionado mamífero, o

(d) el mencionado mamífero tiene un GFR que es crónicamente menor que aproximadamente 20% de un GFR_{exp} para el mencionado mamífero.

8. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 7, en el que,

(a) el mencionado mamífero es un hombre con un peso de al menos aproximadamente 50 kg y tiene un GFR que es crónicamente menor que aproximadamente 50 ml/min; o

(b) el mencionado mamífero es un hombre con un peso de al menos aproximadamente 50 kg y tiene un GFR que es crónicamente menor que aproximadamente 40 ml/min; o

(c) el mencionado mamífero es un hombre con un peso de al menos aproximadamente 50 kg y tiene un GFR que es crónicamente menor que aproximadamente 30 ml/min; o

(d) el mencionado mamífero es un hombre con un peso de al menos aproximadamente 50 kg y tiene un GFR que es crónicamente menor que aproximadamente 20 ml/min.

9. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 8, en el que,

(a) el mencionado mamífero es una mujer con un peso de al menos aproximadamente 40 kg y tiene un GFR que es crónicamente menor que aproximadamente 40 ml/min;

(b) el mencionado mamífero es una mujer con un peso de al menos aproximadamente 40 kg y tiene un GFR que es crónicamente menor que aproximadamente 30 ml/min;

(c) el mencionado mamífero es una mujer con un peso de al menos aproximadamente 40 kg y tiene un GFR que es crónicamente menor que aproximadamente 20 ml/min;

(d) el mencionado mamífero es una mujer con un peso de al menos aproximadamente 40 kg y tiene un GFR que es crónicamente menor que aproximadamente 10 ml/min.

10. El uso de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, para reducir al menos aproximadamente 5% durante 3 meses los niveles de creatinina en suero del mamífero mencionado.

11. El uso de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, para estabilizar un indicador clínico de la función renal después de aproximadamente 3 meses de tratamiento, comparado con el declive del mencionado indicador antes del tratamiento.

12. El uso de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el mencionado medicamento se ha de administrar:

(a) oralmente; o

(b) parenteralmente, por ejemplo, intravenosamente, intraperitonealmente o en la cápsula renal.

13. El uso de la reivindicación 12, en el que se ha implantado una endoprótesis en el mencionado mamífero para la mencionada administración, en el que por ejemplo la mencionada endoprótesis es:

(a) una endoprótesis intravenosa; o

(b) una endoprótesis intraperitoneal; o

(c) una endoprótesis intracapsular renal.

14. El uso de la reivindicación 12, en el que la mencionada administración es mediante un dispositivo implantado.

15. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la mencionada administración es

(a) al menos una vez a la semana durante un periodo de al menos aproximadamente un mes; o

(b) al menos una vez al mes durante un periodo de al menos aproximadamente un año;

(c) con una dosis de aproximadamente 0,01-1.200 \mug/kg de peso corporal del mencionado mamífero (por ejemplo, una dosis de aproximadamente 10-300 \mug/kg de peso corporal del mencionado mamífero.