ES2229817T3 - Uso de la tau como un marcador para la deteccion temprana del daño del sistema nervioso central (cns). - Google Patents
Uso de la tau como un marcador para la deteccion temprana del daño del sistema nervioso central (cns).Info
- Publication number
- ES2229817T3 ES2229817T3 ES99968716T ES99968716T ES2229817T3 ES 2229817 T3 ES2229817 T3 ES 2229817T3 ES 99968716 T ES99968716 T ES 99968716T ES 99968716 T ES99968716 T ES 99968716T ES 2229817 T3 ES2229817 T3 ES 2229817T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- tau
- cns
- damage
- brain
- csf
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
- G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Oncology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Carbon And Carbon Compounds (AREA)
- Devices That Are Associated With Refrigeration Equipment (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
- Management, Administration, Business Operations System, And Electronic Commerce (AREA)
- Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
- Analysing Materials By The Use Of Radiation (AREA)
Abstract
Un método para la detección y/o la cuantificación in vitro del daño del CNS en un individuo antes que dicho daño del CNS sea detectable por los métodos de diagnóstico estándares basados en una imagen del cerebro, punción lumbar o fondo de ojo, dicho daño del CNS siendo provocado por un tumor primario del cerebro, benigno o maligno, metástasis del cerebro, quistes derivados de parásitos, hematoma subdural y/o hidrocefalia, por invasión o metástasis del CNS, por organismos, por anoxia o isquemia, por un agente químico el cual es una terapia génica, productos farmacéuticos, quimioterapia, o exposición a compuestos químicos, por agentes físicos, o por una combinación de estos mecanismos, dicho método comprendiendo el paso de determinar el nivel de tau en una muestra de CSF de dicho individuo y compararlo con el nivel de tau en una muestra del CSF de individuos saludables de control, donde un nivel de tau por encima de un valor límite, determinado sobre la base del nivel de tau en una muestra del CSF de los individuos saludables de control, es una indicación de que el individuo tiene un daño cerebral.
Description
Uso de la tau como un marcador para la detección
temprana del daño del sistema nervioso central (CNS).
La presente invención se relaciona con el campo
del daño del CNS. La presente invención se relaciona con un nuevo
método para el diagnóstico temprano del daño del CNS por detección
y/o cuantificación de las tau.
El daño del sistema nervioso central (daño del
CNS) es causado por varios agentes que lo inducen dentro de los
cuales encontramos diferentes procesos de enfermedades, agentes
químicos y físicos, anoxia e isquemia. Los procesos de enfermedades
incluyen las lesiones que ocupan espacio, la invasión o metástasis
del cerebro causada por diferentes malignidades y/o infección por un
número de organismos.
Los tumores del CNS pueden originarse localmente
(tumores primarios) o pueden ser propagados al CNS (metástasis). Los
tumores primarios surgen a partir de células glial (astrocitoma,
oligodendroglioma, glioblastoma), células ependimales (ependimoma) o
tejido de soporte (meningioma, schwannoma, papiloma del plexo
coroideo). En la infancia, los tumores surgen a partir de células
más primitivas (meduloblastoma, neuroblastoma, cordoma). El
astrocitoma o glioblastoma maligno es el tipo más común de tumor
primario en adultos mayores de veinte años. Ambos, los tumores
primarios del CNS malignos y benignos son capaces de producir
deterioro neurológico.
La leucemia es el tipo de cáncer más común en
niños. Durante los últimos veinte años la supervivencia de niños con
leucemia ha mejorado marcadamente basado en el uso rutinario de
quimioterapia intensiva sola o como tratamiento combinado
(radioterapia y quimioterapia). Actualmente el rango de
supervivencia estimado total de 10 años es de alrededor del 75%.
Dado el número creciente de sobrevivientes de leucemia en la
infancia, ha surgido la preocupación en relación con los efectos a
largo plazo de la radioterapia y/o quimioterapia
anti-cáncer que resulta en un posible daño al
sistema nervioso central y es creciente la necesidad de una
determinación cuantitativa temprana de este daño del CNS.
La meningitis bacteriana puede ser definida como
una inflamación en respuesta a una infección bacteriana del
pia-aracnoide y del fluido que reside en el espacio
que este encierra y también del fluido en los ventrículos del
cerebro. La incidencia de la meningitis bacteriana está entre 4.6 y
10 casos por 100000 personas por año. H. influenzae es la
causa más frecuente seguida por N. meningitidis y S.
pneumoniae. Una vez desarrollada, los rasgos distintivos
característicos de la meningitis bacteriana incluyen un incremento
en la presión intracraneal, interrupción de la barrera
sangre-cerebro, edema cerebral, y alteraciones en
el flujo de sangre cerebral. Mientras más larga es la duración de la
meningitis y menos efectivo el tratamiento serán mayores las
posibilidades de que se desarrollen complicaciones y secuelas
neurológicas. Aproximadamente el 10 por ciento de los infantes y
niños que tienen meningitis bacteriana quedarán con perdida
persistente auditiva sensorial unilateral o bilateral.
Aproximadamente el 30% de los niños que han tenido una meningitis
bacteriana luego presentan agudas deficiencias en el aprendizaje.
(Wilson y otros, 1991).
Los virus pueden también afectar el sistema
nervioso central en una variedad de formas que resulta en una
distinción entre meningitis viral, encefalitis viral, mielitis y
enfermedades del CNS debido a la infección lenta del virus. Otras
condiciones que pueden causar daño del CNS son los agentes químicos
tales como productos farmacéuticos, quimioterapia o exposición a
compuestos químicos, y agentes físicos. Las lesiones en la cabeza
son frecuentes en los países industrializados, afectando a muchos
pacientes en la flor de la vida. Para apreciar la magnitud social y
médica de este problema se necesita solo reconocer que casi 10
millones de americanos sufren lesiones de cabeza anualmente,
alrededor del 20% suficientemente serias como para causar daños al
cerebro.
Otra causa del daño del CNS puede ser la anoxia o
la isquemia. La encefalopatía anóxica-isquémica es
una condición desastrosa frecuente y común, causada por la carencia
de oxígeno al cerebro, que resulta de una hipotensión o falla
respiratoria. La apoplejía isquémica aguda causa daño neuronal y es
la mayor causa de impedimento neurológico en la sociedad occidental.
La asfixia perinatal puede estar igualmente asociada con daños del
CNS. Hasta la fecha, la evaluación clínica, electroencefalográfica y
neuroradiológica, junto con los estudios del flujo de sangre
cerebral son los métodos más fácilmente disponibles. Sin embargo una
evaluación temprana y esmerada de la severidad del daño del cerebro
después de un evento hipóxico-isquémico, se mantiene
como uno de los problemas más difíciles en el cuidado neonatal.
Para la detección de la invasión del CNS en los
niños leucémicos los procedimientos de diagnóstico actuales incluyen
la punción lumbar, el fondo de ojo y la imagen del cerebro (Raichle,
1998). Sin embargo, estos métodos de diagnóstico solo permiten la
detección del daño del CNS en una etapa más avanzada mientras que el
daño del CNS ya en curso en las etapas tempranas no puede ser
encontrado por estos métodos. Por lo tanto, existe una necesidad de
métodos de diagnóstico adicionales que permitan una detección
temprana del daño del CNS.
Un número de marcadores neurológicos han
resultado disponibles recientemente los cuales reflejan las
condiciones del sistema nervioso central, que se relacionan con la
muerte de la célula, el crecimiento
axónico/re-inducción, la inflamación y/o la
disfunción de la barrera sangre-cerebro. La proteína
tau asociada a microtúbulos existe en diferentes isoformas, de las
cuales de 4 a 6 son encontradas en el cerebro de un adulto pero
solamente 1 isoforma es detectada en el cerebro fetal. La diversidad
de las isoformas es generada a partir de un único gen en el
cromosoma humano 17 por medio del empalme alterno mRNA (Himmler,
1989; Goedert y otros, 1989; Andreadis y otros, 1992). La
característica más notable de la proteína tau, como se deduce de la
clonación molecular, es un alargamiento de 31 o 32 aminoácidos, que
ocurren en la parte carboxílica-terminal de la
molécula, la cual puede ser repetida 3 o 4 veces. Una diversidad
adicional es generada a través de inserciones de una longitud de 29
o 58 aminoácidos en la parte NH_{2} terminal de las moléculas tau
(Goedert y otros, 1989). In vivo la tau promueve el ensamble
del microtúbulo y la estabilidad en el compartimiento axonal de la
neuronas por interacciones que involucran su dominio de enlace del
microtúbulo el cual está localizado en la región de repetición de la
tau (255-381) (Lewis y otros, 1988). En
circunstancias normales el cerebro de un adulto contiene 2 - 3 moles
de fosfato por mol de tau (Selden y Pollard, 1983;
Ksiezak-Reding y otros, 1992). La fosforilación de
diferentes sitios en las tau normales como ha sido estudiado en
ratas y humanos es dependiente del estado de desarrollo (Lee y
otros, 1991; Bramblett y otros, 1993; Goedert y otros, 1993). Las
variantes de tau de 60, 64 y 68 kDa que surgen como una consecuencia
de la fosforilación han sido detectadas en las áreas del cerebro que
muestran marañas neurofibrilares (Delacourte y otros, 1990; Goedert
y otros, 1992; Flament y Delacourte, 1990; Greenberg y Davies,
1990). Estos cerebros contienen 6-8 moles de fosfato
por mol de tau (Ksiezak-Reding y otros, 1992). En la
tau aislada a partir de los filamentos helicoidales apareados, la
fosforilación puede ocurrir en varias posiciones (Iqbal y otros,
1989; Lee y otros, 1991; Hasegawa y otros, 1992). La detección de la
tau normalmente y anormalmente fosforilada en los extractos del
cerebro es hecha por medio de anticuerpos (Mab Alz50: Ghanbari y
otros, 1990; Mab Ab423: Harrington y otros, 1991; Mab AT120:
Vandermeeren y otros, 1993; Mab AT180; Mab AT270: Solicitud
Internacional publicada bajo el número WO 95/17429 y Mab AT8:
Solicitud Internacional publicada bajo el número WO 93/08302) o por
medio del cambio en el peso molecular (Flament y Delacourte, 1990),
o además por medio de ensayo funcional (Bramblett y otros, 1992).
Una combinación de anticuerpos monoclonales, cada una reconociendo
epitopos específicos de tau, ha sido usada para detectar la
presencia de tau normalmente y anormalmente fosforilada en CSF (Van
de Voorde y otros, 1995). La tau ha sido usada como un marcador para
discriminar la demencia con propiedades esqueleto celulares
alteradas tales como la enfermedad de Alzheimer a partir de sujetos
en edad normal o a partir de pacientes con otros tipos de
demencia.
Es un objetivo de la presente invención
proporcionar
- 1.
- un método para la detección in vitro y/o cuantificación del daño del CNS en un individuo antes que dicho daño del CNS sea detectable por los métodos de diagnóstico estándares basados en la imagen del cerebro, la punción lumbar o el fondo de ojo, dicho daño del CNS siendo causado por un tumor primario del cerebro, benigno o maligno, metástasis del cerebro, quistes derivados de parásitos, hematoma subdural y/o hidrocefalia, por invasión o metástasis del CNS, por organismos, por anoxia o isquemia, por un agente químico el cual es una terapia génica, productos farmacéuticos, quimioterapia o exposición a compuestos químicos, por agentes físicos o por una combinación de estos mecanismos, dicho método comprendiendo el paso de determinar el nivel de tau en una muestra de CSF a partir de dicho individuo y comparándola con el nivel de tau en una muestra de CSF a partir de individuos saludables de control, donde un nivel de tau por encima del valor límite, determinado en base a un nivel de tau en una muestra de CSF a partir de individuos saludables de control, es una indicación de que el individuo presenta daño cerebral.
Es un objetivo más específico de la presente
invención proporcionar un método para la detección temprana y/o
cuantificación del daño del CNS en un individuo, dicho daño del CNS
siendo causado por lesiones que ocupan espacio del CNS, por invasión
o metástasis del CNS, por organismos, por anoxia o isquemia, por
agentes químicos, por agentes físicos, o por una combinación de
estos mecanismos.
Es un objetivo más específico de la presente
invención proporcionar un método para la detección temprana y/o
cuantificación del daño del CNS en un individuo, dicho daño del CNS
siendo causado por un tumor primario del cerebro, benigno o maligno,
metástasis del cerebro o un hematoma subdural.
Es otro objetivo más específico de la presente
invención proporcionar un método para la detección temprana y/o
cuantificación del daño del CNS en un individuo, dicho daño del CNS
siendo causado por invasión del CNS por leucemia, linfoma o cáncer
de mama.
Es otro objetivo más específico de la presente
invención proporcionar un método para la detección temprana y/o
cuantificación del daño del CNS en un individuo, dicho daño del CNS
siendo causado por bacterias o virus que causan encefalitis o
meningitis.
Es otro objetivo más específico de la presente
invención proporcionar un método para la detección temprana y/o
cuantificación del daño del CNS en un individuo, dicho daño del CNS
siendo causado por apoplejía, por infarto cerebral, por hemorragia
cerebral, por trombosis, por asfixia perinatal, por la enfermedad de
Binswanger o por vasculitis.
Es otro objetivo más específico de la presente
invención proporcionar un método para la detección temprana y/o
cuantificación del daño del CNS en un individuo, dicho daño del CNS
siendo causado por quimioterapia.
Es otro objetivo más específico de la presente
invención proporcionar un método para la detección temprana y/o
cuantificación del daño del CNS en un individuo, dicho daño del CNS
siendo causado por trauma, apoplejía, radiación o presión
intracraneal.
Es otro objetivo de la presente invención
proporcionar un método para la detección temprana y/o cuantificación
del daño del CNS en un individuo, dicho daño del CNS siendo causado
por lesiones que ocupan espacio del CNS, por invasión o metástasis
del CNS, por organismos, por anoxia o isquemia, por agentes
químicos, por agentes físicos, o por una combinación de estos
mecanismos para evaluar el efecto del tratamiento sobre dicho daño
del CNS.
Es otro objetivo de la presente invención
proporcionar un método para examinar sistemáticamente o monitorear
el efecto de compuestos que previenen o tratan el daño del CNS.
Se considera que todos los objetivos de la
presente invención son cumplidos por las realizaciones tal y como se
establece a continuación.
La presente invención se relaciona con un método
para la detección temprana y/o cuantificación del daño del CNS en un
individuo, dicho daño del CNS siendo causado por lesiones que ocupan
espacio del CNS, por invasión del CNS, por organismos, por anoxia o
isquemia, por agentes químicos, por agentes físicos, o por una
combinación de estos mecanismos. Este método comprende el paso de
determinar y/o cuantificar el nivel de tau en un individuo y
compararlo con el nivel de tau en individuos saludables de
control.
La presente invención se relaciona con el
hallazgo sorprendente que los niveles tau en las muestras de CSF de
los niños con leucemia están incrementados comparado con los valores
límite superiores de los individuos saludables. Estos niveles de tau
incrementados son una indicación de la invasión latente del sistema
nervioso central y del daño del CNS ya en curso mucho antes que este
daño del CNS pueda ser medido por los procedimientos de diagnóstico
actuales. También en individuos que han sufrido lesiones que ocupan
espacio del CNS, invasión o metástasis del CNS, isquemia, apoplejía
o meningitis, niveles incrementados de tau fueron observados en una
etapa temprana. De acuerdo a esto, la tau puede ser usada como un
marcador específico para la detección temprana del daño del CNS
provocado por la invasión del CNS por leucemia y en general, como un
marcador específico para la detección temprana del daño del CNS
provocado por agentes que dañan el CNS tales como lesión que ocupa
espacio del CNS, invasión o metástasis del CNS, organismos, anoxia o
isquemia, agentes químicos, agentes físicos, o una combinación de
estos mecanismos.
El sistema nervioso central (CNS) es aquella
parte del sistema nervioso la cual, en los vertebrados, consiste del
cerebro y la médula espinal, a la cual los impulsos sensoriales son
transmitidos y desde la cual se distribuyen los impulsos motores, y
la cual supervisa y coordina la actividad del sistema nervioso
central entero.
El término "daño del CNS" se refiere a
cualquier condición del CNS la cual está asociada con un
malfuncionamiento neuronal y que es provocado por un agente de
inducción específico o un agente dañino. Más específicamente, el
daño del CNS se refiere a procesos de enfermedades que incluyen pero
no están limitados a las lesiones que ocupan espacio del CNS,
invasión o metástasis del CNS y/u organismos. Las lesiones que
ocupan espacio pueden ser, por ejemplo, tumores primarios del
cerebro, benignos o malignos, metástasis del cerebro, quistes
derivados de parásitos tales como Taenia solium o
Echinococcus granulosus, hidrocefalia y/o hematoma subdural.
La invasión o metástasis del CNS puede ser provocada por
malignidades tales como leucemia, linfoma, cáncer de mama, cáncer de
pulmón, melanoma y/o malignidades gastrointestinales u otros tipos
de cáncer. Los organismos que pueden infectar el CNS y causar daño
del CNS incluyen pero no están limitados a priones, virus, bacterias
o parásitos. Las bacterias y los virus que infectan el CNS pueden
provocar meningitis, encefalitis, neuroaids o neuroborreliosis.
Ellos incluyen pero no están limitados a la
Neisseria meningitidis, H. influenzae, S. pneumoniae, Herpes
simplex meningoencefalitis y Herpes simplex gluteolis. El
daño del CNS puede también ser provocado por anoxia o isquemia
durante la anestesia, asfixia perinatal, ahogamiento, asma,
apoplejía, infarto cerebral, trombosis, hemorragia cerebral,
envenenamiento con CO, enfermedad de Binswanger y/o vasculitis.
Agentes químicos que provocan el daño del CNS incluyen pero no están
limitados a terapia génica, productos farmacéuticos, quimioterapia y
exposición a compuestos químicos. El daño del CNS puede también ser
provocado por agentes físicos tales como trauma, radiación,
hipotermia, hipertermia, presión intracraneal o apoplejía. Es
también posible que más de uno de los agentes provocadores antes
mencionados sean responsables del daño del CNS.
La presente invención por lo tanto proporciona un
método para la detección temprana y/o la cuantificación de dicho
daño del CNS determinando el valor de tau. "Detección temprana y/o
cuantificación del daño del CNS" significa que el daño del CNS
está determinado por un método que permite que éste sea detectado
antes de que éste fuera detectable por los métodos actuales.
El término "tau" tal y como es referido en
la presente solicitud puede ser cualquier forma de tau, incluyendo
cualquier estado de fosforilación. El nivel de tau es determinado
cualitativamente y/o cuantitativamente como una medida del grado del
daño del CNS. La tau puede ser detectada in vitro así como
in vivo.
El método para la detección temprana in
vitro del daño del CNS en un individuo comprende los pasos de
obtener una muestra de dicho individuo, determinar y/o cuantificar
el nivel de tau en dicha muestra y compararlo con el nivel de tau en
una muestra de individuos saludables de control. El término
"muestra" se refiere a cualquier fuente de material biológico,
por ejemplo fluidos corporales, pelo, células epiteliales, sangre
periférica o cualquier otra muestra comprendiendo la proteína tau.
En una realización preferida, la tau puede ser detectada y/o
cuantificada in vitro por análisis del nivel de tau en la
muestra de fluido corporal del paciente. El término "fluido
corporal" se refiere a todos los fluidos que están presentes en
el cuerpo humano incluyendo pero no limitado a la sangre, linfa,
orina y fluido cerebroespinal (CSF). En una realización más
específica de la presente invención la tau es detectada y/o
cuantificada en una muestra de fluido cerebroespinal tomada del
paciente. En otra realización específica de la invención la tau es
detectada y/o cuantificada en una muestra de los derivados de la
sangre del paciente. La muestra de sangre puede incluir la muestra
completa tal y como es tomada de paciente. Más preferiblemente la
muestra de sangre incluye una muestra de plasma o una muestra de
suero.
La tau puede ser detectada y/o cuantificada por
cualquier método conocido, incluyendo pero no limitado al uso de
anticuerpos, el cambio de peso molecular (Flament y Delacourte,
1990), o por ensayos funcionales (Bramblett y otros, 1992). En una
realización preferida la tau puede ser detectada por inmunoensayo
comprendiendo al menos los pasos siguientes:
- obtener una muestra del paciente; y
- poner dicha muestra en contacto con un
anticuerpo monoclonal (anticuerpo primario o anticuerpo de captura)
que reconoce la tau, siendo adecuado bajo determinadas condiciones
para producir un complejo antígeno-anticuerpo; y
- detectar el enlace inmunológico de dicho
anticuerpo a dicha muestra.
Ventajosamente, el anticuerpo monoclonal usado en
la invención está en un estado inmovilizado o en un soporte
adecuado. Alternativamente, el presente proceso puede ser puesto en
práctica usando cualquier otro formato de inmunoensayo conocido por
la persona experta en el arte.
El proceso para la detección del antígeno puede
entonces ser conducido poniendo juntos dicho complejo
antígeno-anticuerpo formado por el antígeno y el
anticuerpo primario que reconoce la tau con:
- a)
- un anticuerpo secundario (o anticuerpo detector)
- \bullet
- el cual puede ser un anticuerpo monoclonal que reconoce un epitope del complejo anticuerpo primario-tau pero que no reconoce el anticuerpo primario solo, o
- \bullet
- el cual puede ser un anticuerpo policlonal que reconoce un epitope del complejo anticuerpo primario-tau pero que no reconoce el anticuerpo primario solo, con dicho anticuerpo policlonal siendo preferiblemente purificado por cromatografía de inmunoafinidad usando la tau inmovilizada o el complejo anticuerpo primario-tau.
- b)
- un marcador tanto para la identificación o el acoplamiento específico con dicho segundo anticuerpo secundario, siendo dicho marcador cualquier marcador posible conocido por la persona experta en el arte;
- c)
- soluciones buffer salinas apropiadas para llevar a cabo la reacción inmunológica entre el anticuerpo primario y la muestra, entre el anticuerpo secundario y el complejo anticuerpo primario-tau y/o entre el anticuerpo secundario de enlace y el marcador, y,
- d)
- posiblemente también, para propósitos de estandarización, una proteína purificada o péptido sintético reactivo con anticuerpos que reconocen la tau.
Ventajosamente, el anticuerpo secundario por sí
mismo porta un marcador o un grupo para el acople directo o
indirecto con un marcador.
El término "epitope" se refiere a aquella
porción del complejo antígeno-anticuerpo que está
específicamente enlazado por un sitio de
combinación-anticuerpo. Los epitopes pueden ser
determinados por cualquiera de las técnicas conocidas en el arte o
puede ser pronosticado por una variedad de modelos de predicción por
computadora conocidos en el arte.
La expresión "reconocer", "reaccionar
con", "enlace inmunológico" o "producir un complejo
antígeno-anticuerpo" como es usado en la presente
invención es para ser interpretado que el enlace entre el antígeno y
el anticuerpo ocurre bajo todas las condiciones que conciernen a las
propiedades inmunológicas del anticuerpo y el antígeno.
Cualquier anticuerpo monoclonal o policlonal que
reconoce específicamente la tau puede ser usado para la detección de
la tau. Anticuerpos que reconocen específicamente la tau normalmente
y/o anormalmente fosforilada incluyen Alz50 (Ghanbari y otros,
1990), Ab423 (Harrington y otros, 1991), AT8 (Solicitud
Internacional publicada bajo el número WO 93/08302), AT120
(Vandermeeren y otros, 1993); AT180 y AT270 (Solicitud Internacional
publicada bajo el número WO 95/17429) y AT100 (Solicitud
Internacional publicada bajo el número WO 96/04309). Pero también
otros anticuerpos conocidos en el arte que reconocen específicamente
la tau pueden ser usados.
El método para la detección temprana in
vitro y/o la cuantificación del daño del CNS en un individuo
puede también ser usado para evaluar el efecto de un cierto
tratamiento sobre el daño del CNS en dicho individuo. Posibles
tratamientos que pudieran influir en el estado del CNS incluyen pero
no están limitados a tratamientos con fármacos, quimioterapia,
terapia física, incluyendo radioterapia y terapia génica.
El método para la detección temprana in
vivo y/o la cuantificación del daño del CNS en un individuo
comprende los pasos de determinar y/o cuantificar el nivel de tau en
dicho individuo y compararlo con el nivel de tau en individuos
saludables de control. En una realización preferida, la tau puede
ser detectada in vivo por una imagen in vivo. La tau
puede ser visualizada in situ por métodos no invasivos
incluyendo pero no limitados a métodos de imagen del cerebro
descrito por Arbit y otros (1995), Tamada y otros (1995),
Wakabayashi y otros (1995), Huang y otros (1996), Sandrock y otros
(1996), Mariani y otros (1997). Estos métodos de imagen in
vivo pueden permitir la localización y visualización de la tau,
por ejemplo, por el uso de anticuerpos marcados que reconocen la
tau.
La tau puede también ser usada como un marcador
específico para la representación in vivo para evaluar el
efecto de un cierto tratamiento sobre el daño del CNS en un
individuo. Posibles tratamientos que pudieran influenciar el estado
del CNS incluye pero no están limitados a tratamientos con fármacos,
quimioterapia, terapia física, incluyendo radioterapia y terapia
génica.
Cualquier kit que proporcione una herramienta
para la detección de la tau puede ser usado para el diagnóstico del
daño del CNS antes mencionado.
Un kit preferido para el diagnóstico in
vitro del daño del CNS en un individuo provocado por lesiones
que ocupan espacio del CNS, por invasión o metástasis del CNS, por
organismos, por anoxia o isquemia, por agentes químicos, por agentes
físicos, o por una combinación de estos mecanismos está basado en un
inmunoensayo y comprende:
- -
- al menos un anticuerpo monoclonal (anticuerpo primario) el cual forma un complejo inmunológico con un epitope de la proteína tau;
- -
- un anticuerpo secundario
- \bullet
- el cual puede ser un anticuerpo monoclonal que reconoce un epitope del complejo anticuerpo primario-tau pero que no reconoce el anticuerpo primario solo, o
- \bullet
- el cual puede ser un anticuerpo policlonal que reconoce un epitope del complejo anticuerpo primario-tau pero que no reconoce el anticuerpo primario solo, siendo dicho anticuerpo policlonal purificado preferiblemente por cromatografía de inmunoafinidad usando la proteína tau inmovilizada o el complejo anticuerpo primario-tau inmovilizado;
- -
- un marcador tanto para la identificación o acoplamiento específico con dicho segundo anticuerpo secundario;
- -
- soluciones buffer salinas apropiadas para llevar a cabo la reacción inmunológica entre el anticuerpo primario y la muestra, entre el anticuerpo secundario y el complejo anticuerpo primario-tau y/o entre el anticuerpo secundario de enlace y el marcador;
- -
- posiblemente, para propósitos de estandarización, una proteína purificada o péptido sintético que contiene uno o más epitopes tau.
La presente invención también se refiere a un
método para examinar sistemáticamente o monitorear el efecto de los
compuestos los cuales previenen o tratan el daño del CNS que
comprende el paso de determinar el nivel de tau y compararlo al
nivel de tau en una muestra control.
La presente invención será ahora ilustrada con
referencia a los siguientes ejemplos que divulgan realizaciones
particularmente ventajosas. Sin embargo, deber ser notado que estos
ejemplos son ilustrativos y no pueden ser construidos para
restringir la invención en ningún modo.
\dotable{\tabskip\tabcolsep#\hfil\+#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{ \+ \begin{minipage}[t]{150mm} ^{a} 01: prof. P. Cras, Hospital Univer., neurología, Antwerp, Bélgica y Dr. A. Daniels, UIA, Laboratorio de neurobiología, Antwerp, Bélgica; 04: Dr. P.D. Mehta, Inst. Invest. Básica, Staten Island, NY, USA; 05: Dr. A. Ivanoiu, UCL St-Luc, Laboratorio de Neuroquímica, Bruselas, Bélgica; 06: Prof. P.P. De Deyn, UIA, Laboratorio de Neuroquímica, Antwerp, Bélgica; 08: Dr. C. Bancher, Lainz Hospital, Neurología, Viena, Austria; 10: Dr. J. Wiltfang, Universidad de Georg-August, Gerontopsiquiatría, Göttingen, Alemania \end{minipage} \cr \+ ^{b} F: femenino, M: masculino\cr \+ \begin{minipage}[t]{150mm} ^{c} en casos donde factores múltiples pueden contribuir al daño, solo es dado el factor que se supone que sea más relevante. \end{minipage} \cr}
\dotable{\tabskip\tabcolsep#\hfil\+#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{ \+ \begin{minipage}[t]{150mm} ^{a} 01: prof. P. Cras, Hospital Univer., neurología, Antwerp, Bélgica y Dr. A. Daniels, UIA, Laboratorio de neurobiología, Antwerp, Bélgica; 04: Dr. P.D. Mehta, Inst. Invest. Básica, Staten Island, NY, USA; 05: Dr. A. Ivanoiu, UCL St-Luc, Laboratorio de Neuroquímica, Bruselas, Bélgica; 06: Prof. P.P. De Deyn, UIA, Laboratorio de Neuroquímica, Antwerp, Bélgica; 08: Dr. C. Bancher, Lainz Hospital, Neurología, Viena, Austria; 10: Dr. J. Wiltfang, Universidad de Georg-August, Gerontopsiquiatría, Göttingen, Alemania \end{minipage} \cr \+ ^{b} F: femenino, M: masculino\cr \+ \begin{minipage}[t]{150mm} ^{c} en casos donde factores múltiples pueden contribuir al daño, solo es dado el factor que se supone que sea más relevante. \end{minipage} \cr}
\dotable{\tabskip\tabcolsep#\hfil\+#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{ \+ \begin{minipage}[t]{155mm} ^{a} 01: prof. P. Cras, Hospital Univer., neurología, Antwerp, Bélgica y Dr. A. Daniels, UIA, Laboratorio de neurobiología, Antwerp, Bélgica; 04: Dr. P.D. Mehta, Inst. Invest. Básica, Staten Island, NY, USA; 05: Dr. A. Ivanoiu, UCL St-Luc, Laboratorio de Neuroquímica, Bruselas, Bélgica; 06: Prof. P.P. De Deyn, UIA, Laboratorio de Neuroquímica, Antwerp, Bélgica; 08: Dr. C. Bancher, Lainz Hospital, Neurología, Viena, Austria; 10: Dr. J. Wiltfang, Universidad de Georg-August, Gerontopsiquiatría, Göttingen, Alemania \end{minipage} \cr \+ ^{b} F: femenino, M: masculino\cr \+ \begin{minipage}[t]{155mm} ^{c} en casos donde factores múltiples pueden contribuir al daño, solo es dado el factor que se supone que sea más relevante. \end{minipage} \cr}
Figura 1. Los valores de tau en el diagnóstico,
fueron dados antes de cualquier tratamiento: 1. Niños control; 2.
AML; 3. AML-CNS+; 4. CML; 5. MDS; 6.
B-NHL; 7. no-B-ALL;
8. no-B-ALL del CNS+; 9. VHR
no-B-ALL.
Figura 2. Niveles de tau-CSF en
siete pacientes después de una apoplejía isquémica aguda. Las
muestras del CSF fueron colectadas a la entrada (día
0-1), días 2-3, días
7-8, días 21-22 (3 semanas) y día
90-110 (3 meses).
Figura 3. Los niveles de tau-CSF
en el tiempo de máxima liberación con relación al tamaño del infarto
medidos por escáner CT.
Para evaluar la influencia de la quimioterapia en
el daño neuronal, fue realizado un estudio longitudinal, incluyendo
65 niños con leucemia (edades de 2 a 16 años) sin complicación del
sistema nervioso central medible, y tratados de acuerdo a
procedimientos estándares. Un total de 377 muestras de CSF fueron
analizadas. Antes de cada inyección, un pequeño volumen de fluido
fue muestreado para análisis de laboratorio de rutina y el sobrante
fue usado en nuestro estudio. Estos niños estuvieron siendo
diagnosticados y luego tratados por su leucemia en el Hospital
Universitario de Leuven, Bélgica. La proteína tau en el fluido
cerebroespinal fue valorada usando el antígeno INNOTEST hTAU
(Innogenetics, Gent, Bélgica).
Para todos los niños sospechosos de tener
leucemia, fue realizada una punción lumbar antes de comenzar el
tratamiento para detectar la posible presencia de células de
leucemia, indicativas de la invasión del sistema nervioso central.
El nivel de tau medido en ese momento, y por lo tanto antes del
tratamiento, serviría como el nivel de control para comparar los
cambios inducidos por la quimioterapia en los niveles de tau.
Observamos que algunos niños con leucemia tenían
ya muy altos niveles de tau en el diagnóstico a pesar del hecho que
no fueron detectadas células de leucemia en el sistema nervioso
central. Estos niños constituyen un nuevo grupo de riesgo teniendo
daños del CNS inducido por la leucemia o la invasión del cerebro,
los cuales no pueden ser siempre encontrados usando los
procedimientos diagnósticos actuales (imagen del cerebro, punción
lumbar, fondo de ojo). Esto fue además soportado por los niveles de
tau incrementados vistos en un paciente que tiene leucemia con
invasión celular comprobada en el cerebro (células malignas en el
fluido cerebroespinal).
Entre Agosto de 1996 y Junio de 1999, 510
muestras de CSF fueron tomadas de 82 niños siendo tratados por
cáncer en el Departamento de Hemato-oncología
pediátrica de la Universidad Católica de Leuven, Bélgica. Muestras
de CSF fueron solamente tomadas en el curso de las punciones
lumbares programadas (LPs) para la estadificación o el tratamiento
de la malignidad.
Tres grupos de pacientes con malignidades
hematológicas fueron estudiados. El grupo mayor consistió de 48
pacientes con no-B-ALL, tratados de
acuerdo al protocolo EORTC 58881 (tabla 1). De estos niños, 20
tenían blastos CD10(+)(o ALL común), de los cuales dos pacientes
tenían también síndrome Down (DS) y 1 paciente tenía el síndrome de
Brachmann-de Lange; 6 pacientes tenían blastos de
células-B comunes, 2 pacientes tenían blastos de
células-T comunes, 2 pacientes tenían blastos de
células-pro-B, 9 pacientes tenían
blastos de células-pre-B, y 9
pacientes tenían blastos de células-T. Cuarenta y
dos niños tenían leucemia, 6 pacientes tenían el linfoma
no-Hodgkin estado II (1 paciente), Estado III (4
pacientes) o Estado IV (1 paciente). Un paciente tenía
complicaciones evidentes del CNS (CNS+), definidas de acuerdo al
protocolo de estudio con células malignas en el CSF. Cinco pacientes
fueron considerados como pacientes de muy alto riesgo (VHR) de
acuerdo al criterio definido en el protocolo (2 pacientes con
t(9; 22) y 3 pacientes con resistencia corticoide). Como la
primera parte del tratamiento de inducción fue similar al de otros
pacientes, estos fueron incluidos en el análisis de acuerdo a la
quimioterapia de inducción. Veintiocho de los pacientes dentro de
los no-B-ALL podían ser seguidos
longitudinalmente durante su período de tratamiento.
Un segundo grupo de pacientes incluyó 10
pacientes con linfoma no-Hodgkin de
células-B, tratados de acuerdo al protocolo NHL del
grupo de Cáncer en Niños del Reino Unido (UKCCSG 9602) (tabla 2).
Cinco pacientes tenían linfomas de células-B, 3
pacientes tenían linfoma de Burkitt, y 2 pacientes tenían linfoma
anaplástico de célula grande (ALCL). Todos los pacientes fueron
tratados con el mismo protocolo, excepto un paciente el cual tenía
leucemia de célula-B. Seis de estos pacientes fueron
estudiados longitudinalmente. Un tercer grupo de pacientes consistió
de 9 niños con Leucemia del Mieloide
Aguda-mielodisplasia (AML - MDS), de los cuales 2
pacientes tenían complicaciones del CNS y dos pacientes tenían el
síndrome Down. Hubo 3 pacientes con M0, y 1 paciente con cada uno de
los fenotipo M1, M2, M5a o M7. Dos pacientes tenían MDS, de los
cuales uno había desarrollado AML y fue tratado con quimioterapia.
Todos estos pacientes, excepto un paciente con MDS, fueron tratados
de acuerdo al protocolo EORTC 58921 (tabla 3) y 7 pacientes fueron
seguidos longitudinalmente.
Los otros pacientes consistieron de un grupo
heterogéneo de niños (n=9) en los cuales por razones clínicas fue
llevada a cabo una LP. Este grupo incluye 3 niños con meduloblastoma
(estadificación), 2 niños con rabdomiosarcoma (estadificación), 1
niño con histiocitosis de células de Langerhans (LCH,
estadificación), ganglioglioma (estadificación), germinoma
(estadificación), y retinoblastoma con metástasis de CNS
(estadificación y seguimiento). El grupo de control consistió de 4
niños de los cuales el CSF fue tomado como parte del control de
rutina para posibles infecciones virales o bacterianas, pero con
resultados negativos. Un paciente con un retinoblastoma localizado
(estadificación) y uno examinado por linfohistiocitosis
hemofagocítica familiar (HLH) fueron también incluidos en el grupo
de control. Los parientes más cercanos de los pacientes dieron el
consentimiento informado vía oral para la participación en el
estudio.
Muestreo del licor. Fueron realizadas
punciones lumbares justamente antes de la administración IT de los
terapéuticos. Cinco ml de CSF fueron colectados en diferentes tubos
de polipropileno. Una muestra fue centrifugada inmediatamente a 1500
rpm por 2 minutos para eliminar las células y otro material
insoluble. El sobre nadante fue almacenado a -70ºC para análisis
subsecuentes. El número de ciclos congelación /descongelación fue
restringido al mínimo.
Medición de la tau en el CSF. Todos los
análisis bioquímicos para la detección de la tau-CSF
fueron hechos sin conocimiento del diagnóstico clínico. Los factores
que potencialmente pueden traer confusión, tales como el número de
ciclos congelación /descongelación, tipo de recipiente, y volumen de
la muestra por ensayo fueron estandarizados para el estudio del
protocolo completo. Los niveles de tau-CSF fueron
determinados usando un ELISA de doble fase (Antígeno INNOTEST hTAU,
Innogenetics, Gent, Bélgica), que midió la tau total (ambos la tau
normal y la hiperfosforilada). Las muestras fueron analizadas
primeramente solas, al tiempo de cada LP. Después de eso, todas las
muestras derivadas de un paciente fueron analizadas en una
inmunoplaca. El coeficiente de correlación entre los resultados de
la primera y segunda aproximación para un juego de 104 muestras fue
0.091 (95% CI: 0.856 - 0.933). Los incrementos de
tau-CSF descritos en el papel fueron excluidos por
ser incrementos generales de proteínas en el licor.
Los niveles del límite superior normal para la
tau fueron primeramente determinados en muestras de CSF de los 6
niños controles. El valor de tau-CSF medio fue 106.2
pg/ml (95%CI = 34.3-178.0). El valor normal límite
arbitrario fue considerado como 312 pg/ml (medio + 3 SD), el cual
está en el rango de valores observados en adultos (Hulstaert y
otros, 1999). Además, no encontramos una correlación entre los
valores de tau-CSF en el diagnóstico y la edad de
los niños (Pearson r = -0.161, Cl95% = -0.3914 - 0.08836, n=64),
sugiriendo que la edad no tiene influencia en los niveles de
tau-CSF. Los valores de tau-CSF
claramente patológicos pueden ser considerados por encima de 500
pg/ml.
Los niveles de tau en el diagnóstico fueron
analizados para cada subgrupo de pacientes (Fig.1). No hubo
diferencia obvia para los niveles de tau en pacientes con y sin
síndrome de Down (no mostrado). Los dos pacientes con invasión
evidente del CNS (CNS+) tenían niveles de tau-CSF en
el diagnóstico superiores a 312 pg/ml. Sin embargo, los 2 niños con
MDS, 7/28 de los niños con no-B-ALL,
1/4 de los pacientes con no-B-ALL
con criterios de riesgo muy altos, 1/5 de los pacientes con AML, y
2/8 de los pacientes con NHL de células-B tenían un
nivel de tau superior a 312 pg/ml, mientras que usando los
procedimientos de diagnóstico clásicos, la invasión del CNS no fue
detectada. Tres pacientes con elevada presión intracraneal
(meduloblastoma), y un paciente con germinoma, del cual el CSF fue
tomado para estadificación, tuvo altas concentraciones de
tau-CSF (823, 1397, 1500 y 442 pg/ml), en contraste
a un paciente con astrocitoma de grado I el que tuvo un nivel de
tau-CSF normal (97 pg/ml). Un paciente con LCH tuvo
un nivel tau-CSF normal de 112 pg/ml. Dos pacientes
con rabdomiosarcoma podían ser analizados en el diagnóstico: un
paciente con enfermedad en estado I tuvo un nivel de
tau-CSF de 279 pg/ml, el otro paciente con
enfermedad en estado IV tuvo un nivel de 320 pg/ml. Un paciente con
retinoblastoma y complicaciones del CNS tuvo un nivel de
tau-CSF de 1800 pg/ml.
Para 33 pacientes con
no-B-ALL, los niveles de
tau-CSF en el diagnóstico no correlacionaron con la
carga del tumor, como fue reflejado por el conteo de las células
blancas de la sangre (Pearson r = 0.04575, CD95%: -0.3024 - 0.3831)
o suero LDH (Pearson r = -0.03002, CI95%: -0.3696 - 0.3166). En
pacientes con B-NHL, no hubo una correlación
significativa entre el nivel de LDH y de tau-CSF
(Pearson r = -0.3723, CD95%: -0.8532 - 0.4507).
Siete pacientes, 3 hombres y 4 mujeres, de
63-81 años (media SD, 70.7 \pm 7.2 años) con
infarto cerebral admitidos en la Unidad de neurología del Hospital
Universitario de Sahlgren, Göteborg, Suecia, fueron incorporados en
el estudio. Todos los pacientes fueron incluidos dentro de las 72 h
del ataque de apoplejía.
Las muestras de CSF fueron colectadas usando
punción lumbar. 12 ml fueron colectados y congelados en 0.5 ml
alícuotas a -80ºC hasta el análisis. Las muestras de CSF fueron
colectadas a la entrada (día 0-1), día
2-3, día 7-8, día
21-22 (3 semanas) y día 90-110 (3
meses). Los niveles de tau-CSF fueron determinados
usando un ELISA de doble fase (Antígeno INNOTEST hTAU, Innogenetics,
Gent, Bélgica), que midió la tau total (ambas normal e
hiperfosforilada).
La extensión del daño cerebral fue examinado con
tomografía computarizada (CT) del cerebro durante el primer día de
admisión. La clínica de los pacientes fue también examinada usando
el Índice de Escala de Apoplejía Escandinavo (SSI; Grupo de Estudio
de apoplejía Escandinava, 1985) en el ataque de apoplejía y 3 meses
después para el grado de discapacidad con el Índice Bartel (BI;
Mohoney y Barthel, 1965).
Las tau-CSF mostraron un marcado
incremento después de la apoplejía aguda, con un pico después de
1-3 semanas y regreso a la normalidad después de 3
meses (Fig. 2). Hubo también una correlación entre los niveles de
tau-CSF y el tamaño del infarto tal y como fue
medido por el escáner CT (Fig. 3). Estos resultados indican que la
tau-CSF refleja daño neuronal y degeneración y el
nivel en el CSF depende de la cantidad de las células nerviosas
dañadas. En este estudio no se encontró correlación entre el dato
clínico (SSI o BI) y la tau-CSF, probablemente
debido al reducido número de pacientes.
Un estudio multicentral fue llevado a cabo en 8
centros universitarios europeos y 2 norteamericanos involucrados en
la investigación del CSF, basado en CSF residual archivado en los
centros para propósitos de investigación. Las muestras de CSF de
pacientes con un amplio rango de diferentes condiciones neurológicas
fueron incluidas con vistas a dar una idea general acerca de la
especificidad de los cambios del marcador tau en una variedad de
patologías que involucran el CNS. Los controles neurológicos
consistieron en individuos sin daños obvios del CNS (tabla 4).
El estudio fue conducido de acuerdo con las
regulaciones de investigación clínica local. Si fuera requerido, una
aprobación del Comité Ético o Buró de Revisión Institucional
adicional local era obtenida por el investigador antes de comenzar
el estudio.
Las muestras de CSF fueron colectadas usando
punción lumbar (LP). Solo muestras CSF que contenían menos de 500
células de sangre roja por \mul fueron incluidas en el estudio.
Las muestras de CSF fueron centrifugadas a 2000 g por 10 minutos
dentro de las 4 horas posteriores a la LP y conservadas congeladas
sin descongelar las muestras del CSF del centro 01 que habían
experimentado un ciclo adicional de congelación /descongelación
antes del análisis. La concentración de la tau total comprendiendo
la tau normal y la tau de filamentos helicoidales apareados fue
medida en los centros usando una técnica ELISA de doble fase
(Antígeno INNOTEST hTAU, Innogenetics N.V.).
Los niveles tau en las muestras CSF de pacientes
con posible daños del CNS provocado por lesiones que ocupan espacio,
por invasión o metástasis, por sangramiento, infarto o isquemia o
por organismos y niveles tau en muestras CSF de sujetos control son
mostradas en la tabla. El grupo de pacientes que posiblemente habían
contraído daño del CNS por lesiones que ocupan espacio, por invasión
o metástasis, por sangramiento, por infarto o isquemia; o por
organismos mostraron un nivel de tau total más alto que los
pacientes de control neurológico (p = 0.022, prueba bilateral Mann
Whitney).
Andreadis A., Brown W.,
Kosik K. (1992) Structure and novel exons of the human
tau gene. (Estructura y nuevos exones del gen tau humano).
Biochem. 31: 10626-10633.
Arbit E., Cheung N. K., Yeh
S. D., Daghighian F., Shang J.J.,
Cordon-Cardo C., Pentlow K.,
Canete A., Finn R., Larson S.M. (1995)
Quantitative studies of monoclonal antibody targeting to
disialogangliosid GD2 in human brain tumours (Estudios cuantitativos
de anticuerpos monoclonales diana para la disialogangliosida GD2 en
tumores cerebrales humanos). Eur. J. Nucl. Med.
22:419-426.
Bramblett G., Trojanowski J.,
Lee V. (1992) Regions with abundant neurofibrillary
pathology in human brain exhibit a selective reduction in levels of
binding-competent tau and accumulation of abnormal
tau isoforms (A68 proteins) (Regiones con abundante patología
neurofibrilar en el cerebro humano que exhiben una reducción
selectiva en los niveles de la tau de
enlace-competente y acumulación de isoformas tau
anormales (proteínas A68)). Lab Invest. 66:
212-222.
Bramblett G., Goedert M.,
Jakes R., Merrick S., Trojanowski J.,
Lee V. (1993) The abnormal phosphorylation of tau at
Ser396 in Alzheimer's disease recapitulates phosphorylation during
development and contributes to reduced microtubule binding. (La
fosforilación normal de tau en Ser396 en enfermedades de Alzeimer
recapitula la fosforilación durante el desarrollo y contribuye a
reducir el enlace de microtúbulos). Neuron.
10:1089-1099.
Delacourte A., Flament S.,
Dibe E., Hublau P., Sablonniere B.,
Hemon B., Sherrer V., Defossez A. (1990)
Pathological proteins Tau64 and 69 are specifically expressed in the
somatodendritic domain of the degenerating cortical neurons during
Alzheimer's disease (Las proteínas patológicas Tau64 y 69 están
específicamente expresadas en el campo somatodendrítico de la
degeneración de las neuronas corticales durante la enfermedad de
Alzheimer). Acta Neuropathol. 80:
111-117.
Flament S., Delacourte A.
(1990) Tau Marker? (Marcador Tau?). Nature 346:
6279.
Ghanbari H., Kozuk T.,
Miller B., Riesing S. (1990) A sandwich enzyme
immunoassay for detecting and measuring Alzheimer's
disease-associated proteins in human brain tissue
(Un inmunoensayo enzimático de doble fase para detectar y medir las
proteínas asociadas-enfermedad de Alzheimer en
tejido del cerebro humano.) J: Clin. Laboratory Anal. 4:
189-192.
Goedert M., Spillantini M.,
Jakes R., Rutherford D., Crowther R.
(1989) Multiple isoforms of human
microtubule-associated protein tau: sequences and
localisation in neurofibrillary tangles of Alzheimer's disease
(Isoformas múltiples de la proteína tau asociada a micortúbulo
humano: secuencias y localización en marañas neurofibrilares de la
enfermedad de Alzheimer.) Neuron. 3:
519-526.
Goedert M., Cohen E., Jakes
R., Cohen P. (1992) p42 Map kinase phosphorylation
sites in microtubule-associated protein tau one
dephosphorylated by protein phosphatase 2Al: Implications for
Alzheimer's disease (Sitios de fosforilación de la cinasa p42 Map
en la proteína tau asocidada a microtúbulos defosforilada mediante
la fosfatasa de proteína 2Al: implicaciones para la enfermedad de
Alzheimer.) FEBS Lett. 312: 95-99.
Goedert M., Jakes R.,
Crowther R., Six J., Lübke U.,
Vandermeeren M., Cras P., Trojanowski J. Q.,
Lee V. (1993) The abnormal phosphorylation of tau
protein at serine 202 in Alzheimer's disease recapitulates
phosphorylation during development (La fosforilación anormal de la
proteína tau en la serina 202 en enfermedades de Alzheimer
recapitula la fosforilación durante el desarrollo). Proc. Natl.
Acad. Sci. (USA) 90: 5066-5070.
Greenberg S., Davies P.
(1990) A preparation of Alzheimer paired helical filaments
that displays distinct tau proteins by polyacrilamide gel
electrophoresis (Una preparación de filamentos helicoidales
apareados de Alzheimer que exhiben proteínas tau distintivas por
electroforesis en gel de poliacrilamida). Proc. Natl. Acad.
Sci. (USA) 87: 5827-5831.
Harrington C., Mukaetova E.,
Hills R., Edwards P., Montejo de Garcini E.,
Novak M., Wischik C. (1991) Measurement of
distinct immunochemical presentations of tau protein in Alzheimer's
disease. (Medidas de las presentaciones inmunoquímicas distintivas
de la proteína tau en la enfermedad de Alzheimer). Proc. Natl.
Acad. Sci. (USA) 88: 5842-5846.
Hasegawa M.,
Morishima-Kawashima M., Takio K.,
Suzuki M., Titani K., Ihara Y. (1992)
Protein sequence and mass spectrometric analyses of tau in
Alzheimer's disease brain (Secuencia de proteína y análisis de
espectrometría en masa de tau en cerebro de la enfermedad de
Alzheimer). J. Biol. Chem 267: 17047- 17054.
Himmler A. (1989) Structure of the
bovine tau gene: alternatively spliced transcripts (Estructura del
gen tau bovino: transcripciones alternativamente empalmadas).
Mol. Cell. Biol. 9(4):1389-96.
Huang Q., He G., Lan Q.,
Li X., Qian Z. Chen J. Lu Z., Du
Z. (1996) Target imaging diagnosis of human brain glioma.
Clinical analysis of 40 cases (Diagnóstico de imagen resultante del
glioma del cerebro humano. Análisis clínico de 40 casos). Nucl.
Med. Commun. 17:311-316.
Hulstaert F., Blennow K.,
Ivanoiu A., Schoonderwaldt H. C.,
Riemenschneider M., De Deyn P.P., Bancher C.,
Cras P., Wiltfang J., Metha P. D., Iqbal
K., Pottel H., Vanmechelen E., Vanderstichele
H. (1999) Improved discrimination of AD patients using
\beta-amyloid_{(1-42)} and tau
levels in CSF (Discriminación mejorada de pacientes AD usando
\beta-amiloide_{(1-42)} y
niveles tau en CFS). Neurology 52:
1555-1562.
Iqbal K., Grundke- Iqbal I.,
Smith A., George L., Tung Y., Zaidi T.
(1989) Identification and localisation of a Tau peptide to
paired helical filaments of Alzheimer's disease. (Identificación y
localización de un péptido tau para los filamentos helicoidales
apareados de la enfermedad de Alzheimer). Proc. Natl. Acad.
Sci (USA) 86: 5646-5650.
Ksiezak-Reding H.,
Liu W. K., Yen S. H. (1992) Brain (Cerebro)
Res. 597: 209-219.
Lee V., Balin B., Otvos L.,
Trojanowski J. (1991) A68: a major subunit of paired
helical filaments and derivatized forms of normal tau (A68: una
sub-unidad importante de los filamentos helicoidales
apareados y formas derivadas de la tau normal). Science 251
(4994): 675-8.
Lewis S., Wang D., Cowan N.
(1988) Microtubule-associated protein MAP2
shares a microtubule binding motif with tau protein (La proteína
asociada-microtúbulo MAP2 comparte una unidad de
enlace de microtúbulo con la proteína Tau). Science 242:
936-939.
Mariani G., Lasku A., Pau
A., Villa G., Motta C., Calcagno G.,
Taddei G. Z., Castellani P., Syrigos K.,
Dorcaratto A., Epenetos A. A., Zardi L.,
Viale G. A. (1997) A pilot pharmacokinetic and
immunoscintigraphic study with the technetium-99m
labelled monoclonal antibody BC-1 directed against
oncofetal fibronectin in patients with brain tumours (Un estudio
piloto inmunoescintigráfico y farmacocinético con el anticuerpo
monoclonal BC-1 marcado
technetium-99m dirigido contra la fibronectina
oncofetal en pacientes con tumores cerebrales). Cancer 15:
2484-2489.
Mohoney F. I., Barthel D. W.
(1965) Functional evaluation: The Barthel Index (Evaluación
funcional: El Índice Barthel). Md. State. Med. J.24:
61-69.
Raichle M. E. (1998) Behind the
scenes of functional brain imaging: A historical and physiological
perspective (Detrás de la escena de la imagen del cerebro funcional:
Una perspectiva fisiológica e histórica). Proc. Natl. Acad.
Sci. (USA) 95: 765-772.
Sandrock D., Verheggen R.,
Helwig A. T., Munz D. L. Markakis E.,
Emrich D. (1996) Immunoscintigraphy for the detection
of brain abscesses (Inmunoescintigrafía para la detección de absesos
del cerebro). Nucl. Med. Commun. 17:
311-316.
Grupo de Estudio de Apoplejía Escandinavo
(1985) Multicenter trial of hemodilution in ischemic stroke:
Background and study protocol (Ensayo multicentro de hemodilusión en
apoplejía isquémica: Antecedentes y protocolo de estudio).
Stroke 16: 373-403.
Selden S., Pollard T. (1983)
Phosphorylation of microtubule-associated proteins
regulates their interaction with actin filaments (La fosforilación
de las proteínas asociadas a los microtúbulos regulan su interacción
con filamentos de actina). J. Biol. Chem. 258(11):
7064-71.
Tamada K., Fujinaga S.,
Watanabe R., Yamashita R., Takeuchi Y.,
Osano M. (1995) Specific deposition of passively
transferred monoclonal antibodies against herpes simplex virus type
1 in rat brain infected with the virus. (Deposición específica de
anticuerpos monoclonales transferidos pasivamente contra el virus de
herpes simplex tipo 1 en cerebro de rata infectada con el virus).
Microbiol-Immunol. 39:
861-871.
Vandermeeren M., Mercken M.,
Vanmechelen E., Six J., Van de Voorde A.,
Martin J., Cras P. (1993) Detection of tau
proteins in normal and Alzheimer's disease fluid with a sensitive
sandwich enzyme linked assay (Detección de las proteínas tau en
fluido normal y de la enfermedad de Alzheimer con un ensayo de
enlace de una enzima de fase doble sensitiva) J. Neurochem.
61: 1828 - 1834.
Van de Voorde A., Vanmechelen E.,
Vandermeeren M., Dessaint F., Beeckman W.,
Cras P. (1995) Detection of tau in cerebrospinal
fluid. Research Advances in Alzheimer's disease and related
disorders (Detección de tau en el fluido cerebro espinal.
Investigaciones Avanzadas en la enfermedad de Alzheimer y desórdenes
relacionados), Ed. Ibqal, Mortimer, Winblad & Wisniewski, John
Wiley & Sons Ltd.
Wakabayashi T., Yoshida J.,
Okada H., Sugita K., Itoh K., Tadokoro
M., Ohshima M. (1995) Radioimaging of human glioma by
indium-11 labelled G-22
anti-glioma monoclonal antibody (Radioimagen del
glioma humano por el indio-11 marcado como
anticuerpo monoclonal anti-glioma
G-22). Noshuyo-Byori 12:
105-110.
Wilson J.D., Braunwald E.,
Isselbacher K.J., Petersdorf R.G., Martin J.B.,
Fauci A.S., Root R.K. (1991) Harrison's
Principles of internal Medicine (Principios de Harrison de medicina
interna), 12^{ma} Edición, McGraw-Hill Inc, NY,
USA.
Claims (7)
1. Un método para la detección y/o la
cuantificación in vitro del daño del CNS en un individuo
antes que dicho daño del CNS sea detectable por los métodos de
diagnóstico estándares basados en una imagen del cerebro, punción
lumbar o fondo de ojo, dicho daño del CNS siendo provocado por un
tumor primario del cerebro, benigno o maligno, metástasis del
cerebro, quistes derivados de parásitos, hematoma subdural y/o
hidrocefalia, por invasión o metástasis del CNS, por organismos, por
anoxia o isquemia, por un agente químico el cual es una terapia
génica, productos farmacéuticos, quimioterapia, o exposición a
compuestos químicos, por agentes físicos, o por una combinación de
estos mecanismos, dicho método comprendiendo el paso de determinar
el nivel de tau en una muestra de CSF de dicho individuo y
compararlo con el nivel de tau en una muestra del CSF de individuos
saludables de control, donde un nivel de tau por encima de un valor
límite, determinado sobre la base del nivel de tau en una muestra
del CSF de los individuos saludables de control, es una indicación
de que el individuo tiene un daño cerebral.
2. Un método de acuerdo a la reivindicación 1 en
el cual la invasión o metástasis del CNS es por leucemia, linfoma o
cáncer de mama.
3. Un método de acuerdo a la reivindicación 1 en
el cual el organismo es una bacteria o virus que provocan
encefalitis o meningitis.
4. Un método de acuerdo a la reivindicación 1 en
el cual la anoxia o isquemia es provocada por apoplejía, por infarto
cerebral, por hemorragia cerebral, por trombosis, por asfixia
perinatal, por la enfermedad de Binswanger o por vasculitis.
5. Un método de acuerdo a la reivindicación 1 en
el cual el agente físico es un trauma, apoplejía, presión
intracraneal o radiación.
6. Un método de acuerdo a las reivindicaciones 1
a 5 en el cual el daño del CNS es detectado y/o cuantificado con
vistas a evaluar el efecto de un cierto tratamiento en dicho daño
del CNS.
7. Un método de acuerdo a cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6, además caracterizado porque el nivel
de tau es determinado por el uso de un anticuerpo que reconoce la
tau total.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP98870190 | 1998-09-08 | ||
EP98870190 | 1998-09-08 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ES2229817T3 true ES2229817T3 (es) | 2005-04-16 |
Family
ID=8237090
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES99968716T Expired - Lifetime ES2229817T3 (es) | 1998-09-08 | 1999-09-07 | Uso de la tau como un marcador para la deteccion temprana del daño del sistema nervioso central (cns). |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP1112500B1 (es) |
JP (1) | JP4624559B2 (es) |
CN (2) | CN1325491A (es) |
AT (1) | ATE277353T1 (es) |
AU (1) | AU772151B2 (es) |
BR (1) | BR9913112A (es) |
CA (1) | CA2340433A1 (es) |
DE (1) | DE69920487T2 (es) |
ES (1) | ES2229817T3 (es) |
HK (1) | HK1040429B (es) |
WO (1) | WO2000014546A1 (es) |
Families Citing this family (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE60334460D1 (de) | 2002-08-14 | 2010-11-18 | Mitsubishi Chem Medience Corp | Antikörper spezifisch für das tau-protein des zentralen nervensystems |
EP2386864A1 (en) | 2002-10-09 | 2011-11-16 | DMI Biosciences, Inc. | Diagnosis and monitoring of Ischemia |
EP2578692B1 (en) | 2007-04-05 | 2016-06-08 | The J. David Gladstone Institutes | Agents that reduce neuronal overexcitation |
NO2324360T3 (es) | 2008-08-11 | 2018-06-30 | ||
EP2478360B1 (en) | 2009-09-14 | 2018-06-27 | Banyan Biomarkers, Inc. | Autoantibody markers for diagnosis of traumatic brain injury |
RU2449287C1 (ru) * | 2011-03-17 | 2012-04-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Сибирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГОУ ВПО СибГМУ Минздравсоцразвития) | Способ антенатального прогнозирования последствий перинатальных поражений нервной системы у детей |
WO2012142301A2 (en) | 2011-04-12 | 2012-10-18 | Quanterix Corporation | Methods of determining a treatment protocol for and/or a prognosis of a patients recovery from a brain injury |
EP3838921A3 (en) | 2012-07-03 | 2021-09-01 | Washington University | Antibodies to tau |
KR101582387B1 (ko) * | 2013-12-12 | 2016-01-05 | 서울대학교산학협력단 | 뇌전이암 원인종양 진단용 조성물 및 그의 용도 |
TW202136296A (zh) | 2014-06-27 | 2021-10-01 | 美商C2N醫療診斷有限責任公司 | 人類化抗-tau抗體 |
RU2568914C1 (ru) * | 2014-07-31 | 2015-11-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский институт акушерства и педиатрии" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ прогнозирования перинатального поражения цнс у недоношенных новорожденных |
WO2018081649A1 (en) | 2016-10-28 | 2018-05-03 | Banyan Biomarkers, Inc. | Antibodies to ubiquitin c-terminal hydrolase l1 (uch-l1) and glial fibrillary acidic protein (gfap) and related methods |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE69220503T2 (de) * | 1991-10-25 | 1998-02-05 | Innogenetics Nv | Monoklonale Antikörper gegen das mikrotubulusassoziierte Protein Tau. |
EP0673418B1 (en) * | 1992-12-14 | 1998-05-06 | N.V. Innogenetics S.A. | Monoclonal antibodies directed against the microtubule-associated protein tau, hybridomas secreting these antibodies, antigen recognition by these monoclonal antibodies and their applications |
JPH06239899A (ja) * | 1993-02-12 | 1994-08-30 | Teijin Ltd | ヒトタウ蛋白に対する抗体、並びに該抗体を利用する体液中のヒトタウ蛋白の測定方法 |
DE69529906D1 (de) * | 1994-07-29 | 2003-04-17 | Innogenetics Nv | Monoklonale antikörper gegen ein epitop einer gewissen unterklasse oder form von phosphoryliertem tau, hybridome die diese sezernieren,antigenerkennung durch diese antikörper und deren verwendung |
US7427392B1 (en) * | 1994-11-14 | 2008-09-23 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Methods for aiding in the diagnosis of alzheimer's disease by measuring amyloid-β peptide (x-≧41) and tau |
-
1999
- 1999-09-07 JP JP2000569239A patent/JP4624559B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1999-09-07 ES ES99968716T patent/ES2229817T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-07 CN CN99812850A patent/CN1325491A/zh active Pending
- 1999-09-07 AU AU59746/99A patent/AU772151B2/en not_active Expired
- 1999-09-07 CN CN2007101032457A patent/CN101046476B/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-09-07 DE DE69920487T patent/DE69920487T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-07 CA CA002340433A patent/CA2340433A1/en not_active Abandoned
- 1999-09-07 EP EP99968716A patent/EP1112500B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-07 BR BR9913112-9A patent/BR9913112A/pt not_active IP Right Cessation
- 1999-09-07 WO PCT/EP1999/006592 patent/WO2000014546A1/en active IP Right Grant
- 1999-09-07 AT AT99968716T patent/ATE277353T1/de not_active IP Right Cessation
-
2002
- 2002-01-04 HK HK02100080.9A patent/HK1040429B/zh not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE69920487T2 (de) | 2006-03-09 |
BR9913112A (pt) | 2001-05-08 |
HK1040429B (zh) | 2005-08-12 |
EP1112500A1 (en) | 2001-07-04 |
DE69920487D1 (de) | 2004-10-28 |
WO2000014546A1 (en) | 2000-03-16 |
ATE277353T1 (de) | 2004-10-15 |
CN1325491A (zh) | 2001-12-05 |
AU772151B2 (en) | 2004-04-08 |
AU5974699A (en) | 2000-03-27 |
EP1112500B1 (en) | 2004-09-22 |
CN101046476B (zh) | 2013-04-10 |
HK1040429A1 (en) | 2002-06-07 |
CN101046476A (zh) | 2007-10-03 |
JP2002524740A (ja) | 2002-08-06 |
CA2340433A1 (en) | 2000-03-16 |
JP4624559B2 (ja) | 2011-02-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2255280T3 (es) | Diagnostico diferencial de la neurodegeneracion. | |
Lewis et al. | Identification and preliminary characterization of ubiquitin C terminal hydrolase 1 (UCHL1) as a biomarker of neuronal loss in aneurysmal subarachnoid hemorrhage | |
Chalbot et al. | Blood-cerebrospinal fluid barrier permeability in Alzheimer's disease | |
ES2229817T3 (es) | Uso de la tau como un marcador para la deteccion temprana del daño del sistema nervioso central (cns). | |
US8481277B2 (en) | Alzheimer's diagnosis | |
Santos et al. | Detection of amyloid-β oligomers in human cerebrospinal fluid by flow cytometry and fluorescence resonance energy transfer | |
EP3630804A1 (en) | Biomarker levels and neuroimaging for detecting, monitoring and treating brain injury or trauma | |
JP2007517188A (ja) | 発作性脳発射を評価するための免疫吸着血液検査 | |
EP3004382B1 (en) | Method for aiding differential diagnosis of stroke | |
ES2455216T3 (es) | Procedimiento diagnóstico | |
US20080076140A1 (en) | Biomarkers of Alzheimer's Disease | |
Corsini et al. | Intrathecal synthesis of tumor markers is a highly sensitive test in the diagnosis of leptomeningeal metastasis from solid cancers | |
US20050106586A1 (en) | Detection of neurodegenerative diseases | |
JP2024019509A (ja) | アルツハイマー病又は発症前アルツハイマー病の診断用マーカー及び診断用キット、脳内へのアミロイドβタンパク質の蓄積量の評価方法、並びに被験者におけるアルツハイマー病又は発症前アルツハイマー病の検出を補助するためのインビトロの方法 | |
CN101899493A (zh) | 不健康细胞的侦测方法及其应用 | |
KR101809094B1 (ko) | 나이관련 황반변성 또는 당뇨망막병증 진단용 바이오마커 및 이를 이용한 진단 방법 | |
Oudart et al. | Tau protein as a possible marker of cerebrospinal fluid leakage in cerebrospinal fluid rhinorrhoea: A pilot study | |
EP2793028B1 (en) | Thioredoxin-1 as diagnostic marker for ovarian cancer | |
JP4568840B2 (ja) | アルツハイマー病の検査方法 | |
US20200057078A1 (en) | Melanotransferrin for use in the diagnosis of parkinson`s disease | |
WO2024108311A1 (en) | Extracellular vesicles for the diagnosis of alzheimer's disease | |
Dayarathna et al. | Nanoscale flow cytometry‐based quantification of blood‐based extracellular vesicle biomarkers distinguishes MCI and Alzheimer's disease | |
WO2023144765A1 (en) | Phage mediated immuno-pcr for the diagnosis of alzheimer's disease | |
Gupta et al. | P15. 01 Clinical utility of FDG-PET/CT for diagnosis and staging in patients with primary central nervous system lymphoma: prospective single arm study | |
WO2016005916A1 (en) | A method and kit for the detection of a biomarker of thyroid cancer in biological samples |