ES2223129T3 - Agentes antitromboticos. - Google Patents
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Abstract
La invención se refiere a nuevos compuestos de fórmula (I) (y sus sales farmacéuticamente aceptables) tales como se definen en la descripción, sus dos procedimientos y intermedios de preparación, a preparaciones farmacéuticas que los contienen y a su utilización como inhibidores de la trombina.
Description
Agentes antitrombóticos.
Esta invención se refiere a inhibidores de
trombina que son anticoagulantes útiles en mamíferos. En particular,
se refiere a derivados heterocíclicos que tienen alta actividad
anticoagulante, y actividad antitrombótica. Por lo tanto, esta
invención se refiere a nuevos inhibidores de trombina, composiciones
farmacéuticas que contienen los compuestos como ingredientes
activos, y al uso de los compuestos como anticoagulantes para la
profilaxis y tratamiento de trastornos tromboembólicos tales como
trombosis venosa, embolia pulmonar, trombosis arterial, en
particular, isquemia miocárdica, infarto de miocardio y trombosis
cerebral, estados hipercoagulables generales y estados
hipercoagulables locales, tales como después de operaciones
angioplastia y derivación coronaria, y lesión de tejidos
generalizada cuando se refiere al proceso inflamatorio. Además, los
agentes antitrombóticos son útiles como anticoagulantes en
aplicaciones in vitro.
El procedimiento de coagulación de la sangre,
trombosis, se desencadena por una cascada proteolítica compleja que
conduce a la formación de trombina. La trombina elimina
protolíticamente la activación de péptidos de las cadenas A\alpha
y las cadenas B\beta del fibrinógeno, que es soluble en el plasma
sanguíneo, iniciando la formación de fibrina insoluble.
Actualmente la anticoagulación se logra por
administración de heparinas y cumarinas. El control farmacológico
parenteral de la coagulación y trombosis, se basa en la inhibición
de trombina mediante el uso de heparinas. Las heparinas actúan
indirectamente sobre la trombina acelerando el efecto inhibidor de
la antitrombina endógena III (el inhibidor fisiológico principal de
la trombina). Debido a que los niveles de antitrombina III varían en
el plasma, y a que la trombina unida al coágulo parece resistente a
este mecanismo indirecto, las heparinas pueden ser un tratamiento
ineficaz. Debido a que se cree que los ensayos de coagulación están
asociados con la eficacia y con la seguridad, los niveles de
heparina se deben controlar con ensayos de coagulación
(particularmente el ensayo de tiempo parcial de tromboplastina
activada (APTT)). Las cumarinas impiden la generación de trombina
bloqueando la gamma-carboxilación postraduccional en
la síntesis de protrombina y otras proteínas de este tipo. Debido a
su mecanismo de acción, el efecto de las cumarinas sólo se puede
desarrollar lentamente, 6-24 horas después de la
administración. Además, no son anticoagulantes selectivos. Las
cumarinas también requieren el control con ensayos de coagulación
(particularmente el ensayo del tiempo de trombina (PT)).
Recientemente, ha crecido el interés por
moléculas sintéticas pequeñas que demuestran una potente inhibición
directa de la trombina. Véase, por ejemplo, Robert M. Scarborough,
Annual Reports in Medicinal Chemistry, (1995), 30,
71-80.
Aunque las heparinas y cumarinas son
anticoagulantes eficaces, todavía no ha surgido un fármaco comercial
de las moléculas sintéticas pequeñas; y a pesar de la continua
promesa de esta clase de compuestos, todavía existe una necesidad de
anticoagulantes que actúen selectivamente sobre la trombina, y que
independientemente de la antitrombina III, ejerzan la acción
inhibidora poco después de la administración, preferiblemente por
una vía oral, y no interfieran con la lisis de los coágulos de
sangre, como se requiere para mantener la hemostasis.
La presente invención se dirige al descubrimiento
de que los compuestos de la presente invención, como se define a
continuación, son potentes inhibidores de la trombina que pueden
tener una alta biodisponibilidad después de la administración
oral.
De acuerdo con la invención, se proporciona un
procedimiento para inhibir la trombina que comprende usar una
cantidad eficaz de un compuesto inhibidor de trombina de fórmula I
(o una de sus sales farmacéuticamente aceptable
en la
que
A es carbonilo o metileno;
D es CH, CR^{d} o N en el que R^{d} es metilo
o metoxi;
E es CH, CR^{e} o N en el que R^{e} es
metilo, metoxi o halógeno;
R^{2} y R^{3} se definen juntos tal que
A. R^{2} es
-X^{2}-(CH_{2})_{m}-NR^{a}R^{b} en
el que X^{2} es un enlace directo, metileno u O; m es 1, 2, 3, 4
ó 5; con la condición de que cuando m es 1, entonces X^{2} es un
enlace directo; y R^{a} y R^{b} son independientemente hidrógeno
o alquilo (C1-3) o el grupo NR^{a}R^{b} es
pirrolidino, piperidino, o morfolino; y
R^{3} es -CH_{2}-R^{c}, en
el que R^{c} es
2-carboxipirrolidin-1-ilo
o
2-[alcoxi(C1-4)]carbonil]pirrolidin-1-ilo;
o
B. R^{2} es
-X^{2}-(CH_{2})_{n}-R^{f} en el que
X^{2} es un enlace directo, metileno u O; n es 1, 2 ó 3; con la
condición de que cuando n es 1, entonces X^{2} es un enlace
directo; y R^{f} es
2-carboxipirrolidin-1-ilo,
2-[alcoxi(C1-4)]carbonil]pirrolidin-1-ilo,
(carboximetil)amino,
[[alcoxi(C1-4)]carbonilmetil]amino,
4-carboximetilimidazol-1-ilo,
4-[[alcoxi(C1-4)carbonilmetil]imidazol-1-ilo,
(4-carboxibencil)amino,
[4-[[alcoxi(C1-4)]lcarbonil]bencil]amino,
(3-amino-1,4-dioxo-4-hidroxibutil)amino
o
[3-amino-1,4-dioxo-4-[alcoxi(C1-4)]-butil]amino;
o R^{2} es
X^{2}-(CH_{2})_{n}-R^{f} en el que
X^{2} es un enlace directo; n es 0; y R^{f}es
(3-amino-1,4-dioxo-4-hidroxibutil)-amino,
[3-amino-1,4-dioxo-4-[alcoxi(C1-4)]butil]amino,
(4-amino-1,5-dioxo-5-hidroxipentil)amino
o
[4-amino-1,5-dioxo-5-[alcoxi(C1-4)]butil]amino;
R^{3} es
-X^{3}-(CH_{2})_{s}-NR^{s}R^{t} en
el que X^{3} es un enlace directo, metileno u O; s es 1 ó 2; con
la condición de que cuando s es 1, entonces X^{3} es un enlace
directo; y R^{s} y R^{t} son independientemente hidrógeno o
alquilo (C1-3) o el grupo NR^{s}R^{t} es
pirrolidino, piperidino o morfolino; y
R^{6} es hidrógeno, hidroxi o metoxi.
Un compuesto inhibidor de trombina particular de
fórmula I (o una de sus sales farmacéuticamente aceptable) es uno en
el que
A es carbonilo o metileno;
D es CH, CR^{d} o N en el que R^{d} es metilo
o metoxi;
E es CH, CR^{e} o N en el que R^{e} es
metilo, metoxi o halógeno;
R^{2} y R^{3} se definen juntos tal que
A. R^{2} es
-X^{2}-(CH_{2})_{m}-NR^{a}R^{b} en
el que X^{2} es un enlace directo, metileno u O; m es 1, 2, 3, 4
ó 5; con la condición de que cuando m es 1, entonces X^{2} es un
enlace directo; y R^{a} y R^{b} son independientemente hidrógeno
o alquilo (C1-3) o el grupo NR^{a}R^{b} es
pirrolidino, piperidino, o morfolino; y
R^{3} es -CH_{2}-R^{c}, en
el que R^{c} es
2-carboxipirrolidin-1-ilo
o
2-[alcoxi(C1-4)]carbonil]pirrolidin-1-ilo;
o
B. R^{2} es
-X^{2}-(CH_{2})_{n}-R^{f} en el que
X^{2} es un enlace directo, metileno u O; n es 1 ó 2; con la
condición de que cuando n es 1, entonces X^{2} es un enlace
directo; y R^{f} es
2-carboxipirrolidin-1-ilo,
2-[alcoxi(C1-4)]carbonil]pirrolidin-1-ilo,
(carboximetil)amino,
[[alcoxi(C1-4)]carbonilmetil]amino,
4-carboximetilimidazol-1-ilo,
4-[[alcoxi(C1-4)carbonilmetil]imidazol-1-ilo,
(4-carboxibencil)amino,
[4-[[alcoxi(C1-4)]lcarbonil]bencil]amino,
(3-amino-1,4-dioxo-4-hidroxibutil)amino
o
[3-amino-1,4-dioxo-4-[alcoxi(C1-4)]-butil]amino;
y
R^{3} es
-X^{3}-(CH_{2})_{s}-NR^{s}R^{t} en
el que X^{3} es un enlace directo, metileno u O; s es 1 ó 2; con
la condición de que cuando s es 1, entonces X^{3} es un enlace
directo; y R^{s} y R^{t} son independientemente hidrógeno o
alquilo (C1-3) o el grupo NR^{s}R^{t} es
pirrolidino, piperidino o morfolino; y
R^{6} es hidrógeno, hidroxi o metoxi.
Un valor particular para D es CH.
Un valor particular para E es CH o CR^{e} en el
que R^{e} es metilo o metoxi.
Un conjunto particular de valores para R^{2} y
R^{3} definidos juntos es R^{2} es
-X^{2}-(CH_{2})_{m}-NR^{a}R^{b} en
el que X^{2} es un enlace directo u O; m es 2; y el grupo
NR^{a}R^{b} es pirrolidino; y R^{3} es
-CH_{2}-R^{c}, en el que R^{c} es
2-carboxipirrolidin-1-ilo.
Otro conjunto particular de valores para R^{2}
y R^{3} definidos juntos es R^{2} es
-X^{2}-(CH_{2})_{n}-R^{f} en el que
X^{2} es un enlace directo u O; n es 2; y R^{f}es
2-carboxipirrolidin-1-ilo
o
2-[alcoxi(C1-4)]carbonil]pirrolidin-1-ilo
(y más particularmente, el alcoxi (C1-4) es
t-butoxi); y R^{3} es pirrolidinometilo,
morfolinometilo o 2-pirrolidinoetoxi.
Un conjunto particular adicional de valores para
R^{2} y R^{3} definidos juntos es R^{2} es
-X^{2}-(CH_{2})_{n}-R^{f} en el que
X^{2} es un enlace directo; n es 0; y R^{f}es
(3-amino-1,4-dioxo-4-hidroxibutil)amino
o
(4-amino-1,5-dioxo-5-hidroxipentil)amino;
y R^{3} es pirrolidinometilo, morfolinometilo o
2-pirrolidinoetoxi.
Un valor particular para R^{6} es hidroxi.
Un valor particular para A es metileno.
Un procedimiento preferido de la invención
incluye uno en el que dicho compuesto de fórmula I es uno de los
descritos en la presente memoria en los Ejemplos 2, 3 y 10.
Otro procedimiento preferido de la invención, es
uno en el que dicho compuesto de fórmula I es uno de los descritos
en la presente memoria en los Ejemplos 19 y 20, particularmente el
Ejemplo 19.
La presente invención también proporciona un
procedimiento para inhibir la coagulación en un mamífero, que
comprende administrar a un mamífero que necesite tratamiento, una
dosis inhibidora de la coagulación de un compuesto inhibidor de
trombina de fórmula I que tiene cualquiera de las definiciones
anteriores.
La presente invención además proporciona un
procedimiento para inhibir la trombina, que comprende administrar a
un mamífero que necesite tratamiento, una dosis inhibidora de
trombina de un compuesto inhibidor de trombina de fórmula I que
tiene cualquiera de las definiciones anteriores.
Además, la presente invención proporciona un
procedimiento para tratar un trastorno tromboembólico que comprende
administrar a un mamífero que necesite tratamiento, una dosis eficaz
de un compuesto inhibidor de trombina de fórmula I que tiene
cualquiera de las definiciones anteriores.
Además, se proporciona el uso de un compuesto
inhibidor de trombina de fórmula I que tiene cualquiera de las
definiciones anteriores para fabricar un medicamento para tratar un
trastorno tromboembólico.
Como un aspecto adicional de la invención, se
proporciona un profármaco (o una de sus sales farmacéuticamente
aceptable) de cualquiera de los compuestos inhibidores de trombina
antes descritos de fórmula I que forme un profármaco. (Se reconocerá
que un compuesto inhibidor de trombina de fórmula I también puede
servir como un profármaco para un compuesto inhibidor de trombina
diferente de fórmula I).
Como una característica adicional de la invención
se proporciona una formulación farmacéutica que comprende asociado
con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable,
un profármaco de un compuesto inhibidor de trombina de fórmula I (o
una de sus sales farmacéuticamente aceptable) como se proporciona en
cualquiera de las descripciones anteriores.
En general, se cree que los compuestos
inhibidores de trombina de fórmula I son nuevos, y por lo tanto,
constituyen un aspecto adicional de la invención. Por lo tanto, de
acuerdo con la invención se proporciona un nuevo compuesto de
fórmula I (o una de sus sales farmacéuticamente aceptable) de
acuerdo con cualquiera de las definiciones anteriores de un
compuesto de fórmula I, con la condición de que el compuesto no sea
uno que no sea nuevo. Una sal farmacéuticamente aceptable de una
diamina antitrombótica de la presente invención incluye una que es
una sal de adición de ácido preparada con un ácido que proporciona
un anión farmacéuticamente aceptable. Por lo tanto, una sal de
adición de ácido de un nuevo compuesto de fórmula I como se ha
proporcionado antes, preparada con un ácido que produce un anión
farmacéuticamente aceptable proporciona un aspecto particular de la
invención. En lo sucesivo se proporcionan ejemplos de dichos
ácidos.
Como un aspecto adicional de la invención se
proporciona una formulación farmacéutica que comprende, asociado con
un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable, un
nuevo compuesto de fórmula I (o una de sus sales farmacéuticamente
aceptable) como se proporciona en cualquiera de las descripciones
anteriores.
En esta memoria descriptiva, se usan las
siguientes definiciones salvo que se describa lo contrario: halógeno
es flúor, cloro, bromo o yodo. Alquilo, alcoxi, etc. indican tanto
grupos lineales como ramificados; pero una referencia a un radical
individual tal como "propilo" abarca sólo el radical de cadena
lineal ("normal"), indicándose específicamente un isómero de
cadena ramificada tal como "isopropilo".
Se comprenderá que algunos compuestos de fórmula
I (o sales o profármacos, etc.) pueden existir, y se pueden aislar,
en formas isómeras, incluyendo isómeros cis o trans, así como formas
ópticamente activas, racémicas o diasteroisómeras. Hay que entender
que la presente invención abarca un compuesto de fórmula I como una
mezcla de diastereoisómeros, así como en forma de un
diastereoisómero individual, y que la presente invención abarca un
compuesto de fórmula I como una mezcla de enantiómeros, así como la
forma de un enantiómero individual, cualquiera de cuyas mezclas o
formas tienen propiedades inhibidoras frente a la trombina, siendo
conocido en la técnica como preparar o aislar formas particulares y
como determinar propiedades inhibidoras contra la trombina por
ensayos patrón, incluyendo los descritos a continuación.
Además, un compuesto de fórmula I (o sal o
profármaco, etc) puede presentar polimorfismo o puede formar un
solvato con agua o un disolvente orgánico. La presente invención
también abarca cualquiera de dichas formas polimorfas, cualquier
solvato o cualquiera de sus mezclas.
A continuación se listan valores particulares
para radicales, sustituyentes, e intervalos, sólo para ilustrar, y
no excluyen otros valores definidos u otros valores en intervalos
definidos para los radicales y sustituyentes.
Un valor particular para un grupo alcoxi
(C1-4) es metoxi, etoxi, isopropoxi, o
t-butoxi, y más particularmente
t-butoxi.
Un compuesto de fórmula I se puede preparar por
procedimientos que incluyen procedimientos conocidos en la técnica
química para producir compuestos conocidos de fórmula I, o
compuestos estructuralmente análogos, o por procedimientos nuevos
descritos en la presente invención. Un procedimiento para un nuevo
compuesto de fórmula I (o una de sus sales farmacéuticamente
aceptable), procedimientos nuevos para un compuesto de fórmula I y
nuevos productos intermedios para preparar un compuesto de fórmula I
como se ha definido antes, proporcionan características adicionales
de la invención y se ilustran por los siguientes procedimientos en
cualquiera de los significados de los radicales genéricos son como
se han definido antes, salvo que se especifique lo contrario. Se
reconocerá que se puede preferir o puede ser necesario preparar un
compuesto de fórmula I en la que un grupo funcional está protegido,
usando un grupo protector convencional, y después eliminar el grupo
protector para proporcionar el compuesto de fórmula
I.
I.
En general, un compuesto de fórmula I se puede
preparar de acuerdo con una de las rutas señaladas en el Esquema I,
y descrita en los ejemplos, en los que cada uno de Q^{2}, Q^{3}
y Q^{6}, respectivamente, representan un valor definido para los
grupos R^{2}, R^{3} y R^{6}, una versión protegida de dicho
grupo, o resto que se puede desarrollar después en dicho grupo. La
conversión final de un grupo Q^{2}, Q^{3} o Q^{6} en R^{2},
R^{3} o R^{6} se lleva a cabo en un punto conveniente, de
acuerdo con la química usada. Se reconocerá que se pueden usar una
serie de rutas diferentes, particularmente las que implican
condensación de una especie organometálica para formar un compuesto
de fórmula C o G en el Esquema I.
Esquema
I
\vskip1.000000\baselineskip
Por lo tanto, se proporciona un procedimiento
para preparar un nuevo compuesto de fórmula I (o una de sus sales
farmacéuticamente aceptable) como se proporciona en cualquiera de
las descripciones anteriores, el cual se selecciona de cualquiera de
los ejemplos descritos, incluyendo,
(a) para un compuesto de fórmula I en la que
R^{c} es
2-[[alcoxi(C1-4)]carbonil]pirrolidin-1-ilo,
alquilar la
2-[[alcoxi(C1-4)]carbonil]pirrolidina,
usando un compuesto correspondiente a un compuesto de fórmula I,
pero en el que R^{c} es un grupo saliente, por ejemplo un grupo
metilsulfoniloxi como se describe en el Ejemplo
9-E;
(b) para un compuesto de fórmula I en la que
R^{2} es -X^{2}-(CH_{2})_{n}-R^{f}
en el que n no es 0, y el átomo que une R^{f} a
-X^{2}-(CH_{2})_{n}- es un nitrógeno básico, alquilar
la correspondiente amina de fórmula H-R^{f} usando
un compuesto correspondiente a un compuesto de fórmula I en la que
R^{f} es un grupo saliente, por ejemplo un grupo metilsulfoniloxi
como se describe en el Ejemplo 1-C;
(c) para un compuesto de fórmula I en la que
R^{2} es -X^{2}-(CH_{2})_{n}-R^{f}
en el que n no es 0 y el átomo que une R^{f} a
-X^{2}-(CH_{2})_{n}- es un grupo imino básico unido a
un grupo metileno (-NH-CH_{2}-) [es decir, R^{f}
es (carboximetil)amino,
[[alcoxi(C1-4)]carbonilmetil]amino,
(4-carboxibencil)amino, o
[4-[[alcoxi(C1-4)]carbonil]bencil]amino],
alquilación reductora de un compuesto correspondiente a un compuesto
de fórmula I, pero en la que R^{f} es un grupo amino, usando el
aldehído requerido, por ejemplo como se describe en el Ejemplo
12;
(d) para un compuesto de fórmula I en la que
R^{2} es –X^{2}-(CH_{2})_{n}-R^{f}
en el que n no es 0 y el átomo que une R^{f} a
-X^{2}-(CH_{2})_{n}- es un nitrógeno de amida, acilar
un compuesto correspondiente a un compuesto de fórmula I pero en la
que R^{f} es un grupo amino, usando el ácido requerido o uno de
sus derivados activados, por ejemplo por acoplamiento usando un
reactivo de carbodiimida como se describe en el Ejemplo 18;
(e) para un compuesto de fórmula I en la que
R^{2} es -X^{2}-(CH_{2})_{n}-R^{f}
en el que n es 0, acilar un compuesto correspondiente a un compuesto
de fórmula I pero en la que R^{2} es un grupo amino, usando el
ácido requerido o uno de sus derivados activados, por ejemplo por
acoplamiento usando un reactivo carbodiimida como se describe en el
Ejemplo 19;
(f) para un compuesto de fórmula I en el que
R^{2} o R^{3} contiene un grupo carboxi, descomponer el éster de
un compuesto de fórmula I correspondiente, en la que R^{2} o
R^{3} contienen un grupo
[alcoxi(C1-4)]carbonilo, usando por ejemplo
la descomposición catalizada por ácido de un éster de
t-butilo como se describe en el Ejemplo 2 o una
hidrólisis catalizada por ácido o base como se describe en el
Ejemplo 11-D o Ejemplo 13;
(g) para un compuesto de fórmula I en la que A es
metileno, eliminación reductora del grupo hidroxi del
correspondiente alcohol de fórmula II, por ejemplo usando un
procedimiento análogo al del Ejemplo 3-A;
y después, para cualquiera de los
procedimientos anteriores, cuando se protege un grupo funcional
usando un grupo protector, eliminar el grupo
protector;
y después, para cualquiera de los procedimientos
anteriores, cuando se requiere una sal farmacéuticamente aceptable
de un compuesto de fórmula I, se puede obtener haciendo reaccionar
la forma básica de dicho compuesto de fórmula I con un ácido
proporcionando un contraión fisiológicamente aceptable, o por
cualquier otro procedimiento convencional.
Tal como se usa en la presente memoria, un grupo
saliente es un resto que es desplazado en una reacción de
sustitución nucleófila, por ejemplo, un grupo halógeno (tal como
cloro, bromo o yodo), un grupo éster sulfonato (tal como
metilsulfoniloxi,
p-toluil-sulfoniloxi o
trifluorometilsulfoniloxi), o la especia reactiva obtenida de tratar
un alcohol con trifenilfosfina, azodicarboxilato de dietilo y
trietilamina (en una reacción de Mitsunobu). Un derivado activado de
un ácido carboxílico incluye, por ejemplo, un éster (tal como un
éster de metilo), un haluro de ácido (tal como un cloruro de ácido),
un éster activado (tal como con
1-hidroxibenzotriazol o
N-hidroxisuccinimida), un anhídrido con un ácido
carboxílico (tal como formado por reacción con cloroformiato de
butilo) o un derivado activado formado por reacción con un reactivo
de acoplamiento (tal como una carbodiimida, por ejemplo con
diciclohexilcarbodiimida o con
1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida).
Los nuevos compuestos intermedios o materiales de
partida tales como un alcohol de fórmula II, proporcionan un aspecto
adicional de la invención. Como se ha indicado antes, un alcohol de
fórmula II se puede obtener por reducción del carbonilo de un
compuesto de fórmula I correspondiente o por condensación de una
especie organometálica con el aldehído requerido.
Como se ha mencionado antes, un compuesto
correspondiente a un compuesto de fórmula I pero en el que un grupo
funcional está protegido, puede servir como un producto intermedio
para un compuesto de fórmula I. De acuerdo con esto, dichos
productos intermedios protegidos para un nuevo compuesto de fórmula
I, proporcionan aspectos adicionales de la invención. Así, como un
aspecto particular de la invención, se proporciona un compuesto
correspondiente a un nuevo compuesto de fórmula I como se ha
definido antes, en la que R^{6} es hidroxi, pero en el que el
correspondiente sustituyente es -OR^{p} en lugar de hidroxi, en el
que R^{p} es un grupo protector de fenol distinto de metilo. Los
grupos protectores de fenol son conocidos en la técnica, por
ejemplo, como se describe en "Potecting Groups in Organic
Synthesis" de T.W. Greene and P.G.M. Wuts, (1991). Entre los
valores particulares de R^{p} se incluyen, por ejemplo, bencilo y
alilo. Además, R^{p} puede indicar una resina funcionalizada, por
ejemplo como se describe en H.V. Meyers, y col., Molecular
Diversity, (1995), 1, 13-20.
Como se ha mencionado antes, la invención incluye
sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos inhibidores de
trombina definidos por la fórmula I anterior. Un compuesto
particular de esta invención tiene uno o más grupos funcionales
suficientemente básicos para reaccionar con cualquiera de una serie
de ácidos inorgánicos y orgánicos que proporcionan un contraión
fisiológicamente aceptable para formar una sal farmacéuticamente
aceptable. Los ácidos normalmente usados para formar sales de
adición de ácido farmacéuticamente aceptables son ácidos inorgánicos
tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido yodhídrico,
ácido sulfúrico, ácido fosfórico, y similares, y ácidos orgánicos
tales como ácido p-toluenosulfónico, ácido
metanosulfónico, ácido oxálico, ácido
p-bromobencenosulfónico, ácido carbónico, ácido
succínico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido acético, y
similares. Por lo tanto, ejemplos de dichas sales farmacéuticamente
aceptables son sulfato, pirosulfato, bisulfato, sulfito, bisulfito,
fosfato, monohidrógenofosfato, dihidrógenofosfato, metafosfato,
pirofosfato, cloruro, bromuro, yoduro, acetato, propionato,
decanoato, caprilato, acrilato, formiato, isobutirato, caproato,
heptanoato, propiolato, oxalato, malonato, succinato, suberato,
sebazato, fumarato, maleato,
butil-1,4-dioato,
hexin-1,6-dioato, benzoato,
clorobenzoato, metilbenzoato, dinitrobenzoato, hidroxibenzoato,
metoxibenzoato, ftalato, sulfonato, xilenosulfonato, fenilacetato,
fenilpropionato, fenilbutirato, citrato, lactato,
gamma-hidroxibutirato, glicolato, tartrato,
metanosulfonato, propanosulfonato,
naftaleno-1-sulfonato,
naftaleno-2-sulfonato, mandelato, y
similares. Entre las sales de adición de ácido farmacéuticamente
aceptables preferidos se incluyen las formadas con ácidos minerales
tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, y ácido
sulfúrico.
Si no están disponibles en el comercio, los
materiales de partida para preparar un compuesto de fórmula I, se
pueden preparar por procedimientos que se seleccionan de técnicas
patrón de química orgánica, incluyendo sustitución y transformación
aromática y heteroaromática, de técnicas que son análogas a las
síntesis de compuestos estructuralmente similares conocidas, y
técnicas que son análogas a los procedimientos antes descritos o
procedimientos descritos en los Ejemplos. Será evidente para un
experto en la técnica que hay disponibles una variedad de secuencias
para preparar los materiales de partida. Los materiales de partida
que son nuevos proporcionan otro aspecto de la invención.
Los procedimientos selectivos para proteger y
desproteger son conocidos en la técnica para preparar compuestos
tales como los correspondientes a un compuesto de fórmula I pero en
la que R^{6} es -OR^{p} como se ha discuto antes. Discuten
procedimientos selectivos para romper éteres de metilo, como se
describe en los ejemplos Jones, y col., J. Med. Chem. (1984),
27, 1057-1066. Por ejemplo, el éter
3-(4-metoxibenzoil)-2-(4-metoxifenil)benzo[b]tiofeno
se puede tratar con tribromuro de boro en diclorometano a -10ºC (1
hora) para proporcionar el monoéter
2-(4-hidroxifenil)-3-(4-metoxibenzoil)benzo[b]tiofeno,
mientras que el tratamiento con tioetóxido sódico da el monoéter
isómero
3-(4-hidroxibenzoil)-2-(4-metoxifenil)benzo[b]tiofeno.
El tratamiento con tribromuro de boro en condiciones menos suaves
(0ºC, 6 horas) o con tricloruro de aluminio y etanotiol rompe ambos
éteres.
Generalmente, los compuestos de la invención se
aíslan mejor en forma de sales de adición de ácido. Las sales de los
compuestos de fórmula I formadas con ácidos tales como los
mencionados antes son útiles como sales farmacéuticamente aceptables
para administrar los agentes antitrombóticos y para preparar
formulaciones de estos agentes. Se pueden preparar y usar otras
sales de adición de ácido en el aislamiento y purificación de los
compuestos.
Como se ha indicado antes, los isómeros
ópticamente activos y diastereoisómeros de los compuestos de fórmula
I también se consideran parte de esta invención. Dichos isómeros
ópticamente activos se pueden preparar a partir de sus precursores
ópticamente activos respectivos por los procedimientos descritos
antes, o por resolución de las mezclas racémicas. Esta resolución se
puede llevar a cabo por derivatización con un reactivo quiral
seguido de cromatografía o por cristalización repetida. La
eliminación del auxiliar quiral por procedimientos patrón
proporciona isómeros sustancialmente ópticamente puros de los
compuestos de la presente invención o sus precursores. Se pueden
obtener detalles adicionales en relación con las resoluciones en
Enantiomers, Racemates, and Resolutions, Jacques y col., John
Wiley & Sons, 1981.
Se cree que los compuestos de la invención
inhiben selectivamente la trombina frente a otras proteinasas y
proteínas no enzimáticas implicadas en la coagulación de la sangre
sin interferencia apreciable con la capacidad natural del cuerpo de
lisar coágulos (los compuestos tienen un bajo efecto inhibidor en la
fibrinolisis). Además, se cree que dicha selectividad permite usar
agentes trombolíticos sin interferencia sustancial con la
trombolisis y fibrinolisis.
La invención en uno de sus aspectos proporciona
un procedimiento para inhibir la trombina en mamíferos, que
comprende administrar a un mamífero que necesite tratamiento una
dosis eficaz (inhibidora de trombina) de un compuesto de fórmula
I.
En otros de sus aspectos, la invención
proporciona un procedimiento para tratar un trastorno tromboembólico
que comprende administrar a un mamífero que necesite tratamiento,
una dosis eficaz (cantidad terapéutica y/o profiláctica el trastorno
tromboembólico) de un compuesto de fórmula I.
La invención en otro de sus aspectos, proporciona
un procedimiento para inhibir la coagulación en mamíferos, que
comprende administrar a un mamífero que necesite tratamiento, una
dosis eficaz (inhibidora de la coagulación) de un compuesto de
fórmula I.
La inhibición de trombina, inhibición de la
coagulación y tratamiento de trastorno tromboembólico contemplados
por el presente procedimiento incluyen tratamiento terapéutico y/o
profiláctico según sea adecuado.
En una realización adicional, la invención se
refiere al tratamiento, en un ser humano o animal, de estados donde
se requiere la inhibición de trombina. Se espera que los compuestos
de la invención sean útiles en animales, incluyendo el hombre, en el
tratamiento o profilaxis de la trombosis e hipercoagulabilidad en la
sangre y tejidos. Los trastornos en los que los compuestos tienen
una utilidad potencial son en el tratamiento o profilaxis de la
trombosis e hipercoagulabilidad en la sangre y tejidos. Entre los
trastornos en los que los compuestos tienen una utilidad potencial,
en el tratamiento y/o profilaxis, se incluyen trombosis venosa y
embolia pulmonar, trombosis arterial, tal como en isquemia
miocárdica, infarto de miocardio, angina inestable, embolia basada
en trombosis y trombosis arterial periférica. Además, los compuestos
tienen la utilidad esperada en el tratamiento o profilaxis de
trastornos (enfermedades) ateroscleróticos tales como enfermedad
arterial coronaria, enfermedad arterial cerebral y enfermedad
arterial periférica. Además, se espera que los compuestos sean
útiles junto con trombolíticos en el infarto de miocardio. Además,
los compuestos tiene la utilidad esperada en la profilaxis para la
reoclusión después de trombolisis, angioplastia transluminal
percutánea (PTCA) y operaciones de derivación coronaria. Además, los
compuestos tienen la utilidad esperada en la prevención de la
retrombosis después de microcirugía. Además, se espera que los
compuestos sean útiles en el tratamiento anticoagulante en conexión
con órganos artificiales y válvulas cardiacas. Además, los
compuestos tienen la utilidad esperada en el tratamiento
anticoagulante en hemodiálisis y coagulación intravascular
diseminada. Una utilidad esperada adicional es en el aclarado de
catéteres y dispositivos mecánicos usados en pacientes in
vivo, y como un anticoagulante para preservar la sangre, plasma
y otros productos sanguíneos in vitro. Todavía además, los
compuestos tienen la utilidad esperada en otras enfermedades donde
la coagulación de la sangre podría ser un procedimiento fundamental
contribuidor o una fuente de patología secundaria, tal como cáncer,
incluyendo metástasis, enfermedades inflamatorias, incluyendo
artritis y diabetes. El compuesto anticoagulante se administra por
vía oral, parenteral, por ejemplo, por infusión intravenosa (iv),
inyección intramuscular (im) o subcutánea (sc).
La dosis específica de un compuesto administrado
de acuerdo con esta invención para obtener efectos terapéuticos y/o
profilácticos, por supuesto, será determinada por las circunstancias
particulares que rodean el caso, incluyendo, por ejemplo, el
compuesto administrado, la tasa de administración, la vía de
administración, y el estado que se está tratando.
Una dosis diaria típica para cada una de las
utilidades anteriores es entre 0,01 mg/kg y aproximadamente 1000
mg/kg. El régimen de dosis puede variar, por ejemplo, para uso
profiláctico se puede administrar una sola dosis diaria, o puede ser
adecuado dosis múltiples tales como 3 ó 5 veces diaria. En
situaciones de cuidado crítico se administra un compuesto de la
invención por infusión iv a una velocidad entre aproximadamente 0,01
mg/kg/h y aproximadamente 20 mg/kg/h y preferiblemente entre
aproximadamente 0,1 mg/kg/h y aproximadamente 5 mg/kg/h.
El procedimiento de esta invención también se
practica junto con un agente de lisis de coágulos, por ejemplo,
activador tisular del plasminógeno (t-PA),
t-PA modificado, estreptoquinasa o uroquinasa. En
los casos en los que se ha producido la formación de coágulo y una
arteria o vena se ha bloqueado, parcialmente o totalmente,
normalmente se usa un agente de lisis de coágulos. Se puede
administrar un compuesto de la invención antes o junto con el agente
de lisis, o después de su uso, y preferiblemente se administra
además junto con aspirina para prevenir que se vuelva a producir la
formación de coágulo.
El procedimiento de esta invención también se
practica junto con un antagonista del receptor de la glicoproteína
plaquetaria (IIb/IIIa), que inhibe la agregación de plaquetas. Se
puede administrar un compuesto de la invención antes o junto con el
antagonista de IIb/IIIa o después de su uso, para prevenir que se
produzca o se vuelva a producir la formación de coágulo.
El procedimiento de esta invención también se
practica junto con aspirina. Se puede administrar un compuesto de la
invención antes o junto con aspirina, o después de su uso, para
prevenir que se produzca o se vuelva a producir la formación de
coágulo. Como se ha expuesto antes, preferiblemente se administra un
compuesto de la presente invención junto con un agente de lisis de
coágulos y aspirina.
Esta invención también proporciona formulaciones
farmacéuticas para usar en el procedimiento terapéutico antes
descrito. Las formulaciones farmacéuticas de la invención comprenden
una cantidad eficaz inhibidora de trombina de un compuesto de
fórmula I asociado con un vehículo, excipiente o diluyente
farmacéuticamente aceptable. Para administración oral, el compuesto
antitrombótico se formula en cápsulas de gelatina o comprimidos que
pueden contener excipientes tales como aglutinantes, lubricantes,
agentes de disgregación y similares. Para administración parenteral,
el antitrombótico se formula en un diluyente farmacéuticamente
aceptable, por ejemplo, solución salina fisiológica (al 0,9 por
ciento), 5 por ciento de dextrosa, solución de Ringer y
similares.
El compuesto de la presente invención se puede
formular en formulaciones de dosificación unitaria que comprenden
una dosis entre aproximadamente 0,1 mg y aproximadamente 1000 mg.
Preferiblemente, el compuesto está en forma de una sal
farmacéuticamente aceptable, tal como por ejemplo la sal de sulfato,
sal de acetato o una sal de fosfato. Un ejemplo de una formulación
de dosificación unitaria comprende 5 mg de un compuesto de la
presente invención en forma de una sal farmacéuticamente aceptable
en una ampolla de vidrio estéril de 10 ml. Otro ejemplo de una
formulación de dosificación unitaria comprende aproximadamente 10 mg
de un compuesto de la presente invención en forma de una sal
farmacéuticamente aceptable en 20 ml de solución salina isotónica
contenida en una ampolla estéril.
Los compuestos se pueden administrar por una
variedad de vías incluyendo vía oral, rectal, transdérmica,
subcutánea, intravenosa, intramuscular e intranasal. Los compuestos
de la presente invención se formulan preferiblemente antes de la
administración. Otra realización de la presente invención es una
formulación farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un
nuevo compuesto de fórmula I o una de sus sales o solvatos
farmacéuticamente aceptable asociado con un vehículo, diluyente o
excipiente farmacéuticamente aceptable para éste.
El ingrediente activo en dichas formulaciones
comprende de 0,1 por ciento a 99,9 por ciento en peso de la
formulación. Por "farmacéuticamente aceptable" se entiende que
el vehículo, diluyente o excipiente debe ser compatible con los
otros ingredientes de la formulación y no perjudicial para su
receptor.
Las formulaciones farmacéuticas presentes, se
preparan por procedimientos conocidos usando ingredientes conocidos
y fácilmente disponibles. Las composiciones de esta invención se
pueden formular para que proporcionen liberación rápida, sostenida o
retardada del ingrediente activo después de la administración al
paciente, usando procedimientos conocidos en la técnica. Cuando se
preparan las composiciones de la presente invención, el ingrediente
activo normalmente se mezclará con un vehículo, o diluirá con un
vehículo, o se encerrará en un vehículo que puede estar en forma de
una cápsula, sobre, papel, u otro envase. Cuando el vehículo sirve
como diluyente, puede ser un material sólido, semisólido o líquido
que actúa como un vehículo, excipiente o medio para el ingrediente
activo. Por lo tanto, las composiciones pueden estar en forma de
comprimidos, píldoras, polvos, pastillas, sobres, sellos, elixires,
suspensiones, emulsiones, soluciones, jarabes, aerosoles (en forma
de un sólido o en un medio líquido), cápsulas de gelatina blanda y
dura, supositorios, soluciones inyectables estériles, polvos
empaquetados estériles, y similares.
Los siguientes ejemplos de formulaciones son sólo
ilustrativos y no se pretende que limiten el alcance de esta
invención de ninguna forma. Por supuesto "ingrediente activo"
significa un compuesto de acuerdo con la Fórmula I o una de sus
sales o solvatos farmacéuticamente aceptable.
Formulación
1
Se preparan cápsulas de gelatina dura usando los
siguientes ingredientes:
| Cantidad (mg/cápsula) | |
| Ingrediente activo | 250 |
| Almidón, seco | 200 |
| Estearato magnésico | 10 |
| Total | \overline{460 \ mg} |
Formulación
2
Se prepara un comprimido usando los siguientes
ingredientes:
| Cantidad (mg/comprimido) | |
| Ingrediente activo | 250 |
| Celulosa, microcristalina | 400 |
| Dióxido de silicio, pirolizado | 10 |
| Ácido esteárico | 5 |
| Total | \overline{665 \ mg} |
Los componentes se mezclan y comprimen para
formar comprimidos que pesa cada uno 665 mg.
\newpage
Formulación
3
Se prepara una solución de aerosol que contiene
los siguientes componentes:
| Peso | |
| Ingrediente activo | 0,25 |
| Etanol | 25,75 |
| Propelente 22 (Clorodifluorometano) | 70,00 |
| Total | \overline{100,00} |
El compuesto activo se mezcla con etanol y la
mezcla se añade a una parte del propelente 22, se enfría a -30ºC y
se transfiere a un dispositivo de carga. Después se suministra la
cantidad requerida a un envase de acero inoxidable con el resto del
propelente. Después se ajustan las unidades de válvula al
envase.
Formulación
4
Los comprimidos, que contiene cada uno 60 mg de
ingrediente activo, se preparan como sigue:
| Ingrediente activo | 60,0 mg |
| Almidón | 45,0 mg |
| Celulosa, microcristalina | 35,0 mg |
| Polivinilpirrolidona (como solución en agua al 10%) | 4,0 mg |
| Carboximetil-almidón sódico | 4,5 mg |
| Estearato magnésico | 0,5 mg |
| Talco | 1,0 mg |
| Total | \overline{150,0 \ mg} |
El ingrediente activo, almidón y celulosa se
pasan por un tamiz U.S. estándar de malla nº 45 y se mezclan
completamente. La solución acuosa que contiene polivinilpirrolidona
se mezcla con el polvo resultante, y después la mezcla se pasa por
un tamiz U.S. estándar de malla nº 14. Los gránulos así producidos
se secan a 50ºC y se pasan por un tamiz U.S. estándar de malla nº
18. Después se añaden a los gránulos el
carboximetil-almidón sódico, estearato magnésico y
talco, previamente pasados por un tamiz U.S. estándar de malla nº
60, los cuales después de mezclar se comprimen en una máquina de
comprimidos para dar comprimidos que pesan cada uno 150 mg.
Formulación
5
Las cápsulas, que contiene cada una 80 mg de
ingrediente activo, se preparan como sigue:
| Ingrediente activo | 80 mg |
| Almidón | 59 mg |
| Celulosa, microcristalina | 59 mg |
| Estearato magnésico | 2 mg |
| Total | \overline{200 \ mg} |
Se mezclan el ingrediente activo, celulosa,
almidón y estearato magnésico, pasado por un tamiz U.S. estándar de
malla nº 45, y se cargan en cápsulas de gelatina dura en cantidades
de 200 mg.
Formulación
6
Los supositorios, que contiene cada uno 225 mg de
ingrediente activo, se preparan como sigue:
| Ingrediente activo | 225 mg |
| Glicéridos de ácidos grasos saturados | 2.000 mg |
| Total | \overline{2\text{.}225 \ mg} |
El ingrediente activo se pasa por un tamiz
estándar U.S. de malla nº 60, y se suspende en los glicéridos de
ácidos grasos saturados previamente fundidos usando el calor mínimo
necesario. Después la mezcla se vierte en un molde de supositorio de
capacidad nominal 2 g y se deja enfriar.
\newpage
Formulación
7
Las suspensiones, que contiene cada una 50 mg de
ingrediente activo por dosis de 5 ml, se preparan como sigue:
| Ingrediente activo | 50 mg |
| Carboximetil-celulosa sódica | 50 mg |
| Jarabe | 1,25 ml |
| Solución de ácido benzoico | 0,10 ml |
| Aroma | v.s. |
| Color | v.s. |
| Agua purificada hasta un total de | 5 ml |
El ingrediente activo se pasa por un tamiz U.S.
estándar de malla nº 45 y se mezcla con la
carboximetil-celulosa sódica y el jarabe para formar
una pasta suave. Se diluyen la solución de ácido benzoico, aroma y
color con una parte del agua y se añaden con agitación. Después se
añade suficiente agua para producir el volumen requerido.
Formulación
8
Una formulación intravenosa se puede preparar
como sigue:
| Ingrediente activo | 100 mg |
| Solución salina isotónica | 1.000 ml |
Generalmente, se administra la solución de los
ingredientes anteriores por vía intravenosa a un sujeto, a una
velocidad de 1 ml por minuto.
La capacidad de los compuestos de la presente
invención de ser un inhibidor de trombina activo por vía oral eficaz
se evalúa en uno o más de los siguientes ensayos.
Los compuestos proporcionados por la invención
(fórmula I) inhiben selectivamente la acción de la trombina en
mamíferos. La inhibición de trombina se demuestra por la inhibición
in vitro de la actividad de amidasa de la trombina mediada en
un ensayo en el que la trombina hidroliza el sustrato cromógeno,
N-benzoil-L-fenilalanil-L-valil-L-arginil-p-nitroanilida,
N-benzoil-L-Phe-L-Val-L-Arg-p-nitroanilida.
El ensayo se lleva a cabo mezclando 50 \mul de
tampón (Tris 0,03 M, NaCl 0,15 M, pH 7,4) con 25 \mul de solución
de trombina humana (trombina humana purificada, Enzyme Research
Laboratories, South Bend, Indiana, con 8 unidades NIH/ml) y 25
\mul de compuesto de ensayo en un disolvente (metanol acuoso al
50% (vol:vol)). Después se añaden 150 \mul de una solución acuosa
del sustrato cromógeno (con 0,25 mg/ml) y se miden las velocidades
de hidrólisis del sustrato siguiendo las reacciones a 405 nm por la
liberación de p-nitroanilina. Se construyen curvas
patrón representando gráficamente la concentración de trombina libre
frente a la velocidad de hidrólisis. Después, las velocidades de
hidrólisis observadas con los compuestos de ensayo se convierten en
valores de "trombina libre" en los ensayos respectivos usando
las curvas patrón. La trombina unida (unida al compuesto de ensayo)
se calcula restando la cantidad de trombina libre observada en cada
ensayo de la cantidad inicial conocida de trombina usada en el
ensayo. La cantidad de inhibidor libre en cada ensayo se calcula
restando el número de moles de trombina unida del número de moles de
inhibidor añadidos (compuesto de ensayo).
El valor de Kaas es la constante de equilibrio
hipotética para la reacción entre la trombina y el compuesto de
ensayo (I).
Trombina + I
\rightleftarrows
Trombina-I
Kaas =
\frac{[Trombina - I]}{[(Trombina) \ x \
(I)]}
Kaas se calcula para un intervalo de
concentraciones de los compuestos de ensayo, y el valor medio se
registra en unidades de litro por mol. En general, un compuesto
inhibidor de trombina de fórmula I de la presente invención presenta
una Kaas de 0,05 x 10^{6} l/mol o mucho mayor.
Siguiendo sustancialmente los procedimientos
descritos antes para la trombina humana, y usando otras
serina-proteasas del sistema de coagulación
sanguíneo humano y usando serina-proteasas del
sistema fibrinolítico humano, con los sustratos cromógenos
adecuados, identificados a continuación, se evalúa la selectividad
de los compuestos de la presente invención con respecto al factor de
coagulación de las serina-proteasas y también se
evalúan las serina-proteasas fibrinolíticas así como
su carencia sustancial de interferencia con la fibrinolisis de
coágulos del plasma humano.
Los factores humanos X, Xa, IXa, XIa y XIIa se
adquieren en Enzyme Research Laboratories, South Bend, Indiana; la
uroquinasa humana en Leo Pharmaceuticals, Dinamarca; y la Proteína C
activada recombinante (aPC) se prepara en Eli Lilly and Co. de
acuerdo sustancialmente con la Patente de EE.UU. 4.981.952. Los
sustratos cromógenos:
N-benzoil-Ile-Glu-Gly-Arg-p-nitroanilida
(factor Xa);
N-Cbz-D-Arg-Gly-Arg-p-nitroanilida
(para el ensayo del factor IXa como sustrato del factor Xa);
Puroglutamilo-Pro-Arg-p-nitroanilida
(para el Factor XIa y para aPC);
H-D-Pro-Phe-Arg-p-nitroanilida
(para el factor XIIa); y
Piroglutamilo-Gly-Arg-p-nitroanilida
(para la uroquinasa), se adquieren en Kabi Vitrum, Estocolmo,
Suecia, o en Midwest Biotech, Fishers, Indiana. La tripsina bovina
se adquiere en Worthington Biochemicals, Freehold, New Jersey, y la
calicreína de plasma humano en Kabi Vitrum, Estocolmo, Suecia. El
sustrato cromógeno
H-D-Pro-Phe-Arg-p-nitroanilida
para la calicreína del plasma se adquiere en Kabi Vitrum,
Estocolmo, Suecia.
N-Benzoil-Phe-Val-Arg-p-nitroanilida,
el sustrato para la trombina humana y para la tripsina, se sintetiza
de acuerdo con procedimientos descritos antes para los compuestos de
la presente invención, usando procedimientos conocidos de
acoplamiento de péptidos a partir de reactivos disponibles en el
comercio, o adquiridos en Midwest Biotech, Fischers, Indiana.
La plasmina humana se adquiere en Boehringer
Mannheim, Indianapolis, Indiana; nt-PA se adquiere
como referencia para la actividad de una sola cadena, en American
Diagnostica, Greenwich, Connecticut; t-PA6
modificado (mt-PA6) se prepara en Eli Lilly and
Company por un procedimiento conocido en la técnica (Véase, Burck y
col., J. Biol. Chem., 265, 5120-5177 (1990).
El sustrato cromógeno de la plasmina
H-D-Val-Leu-Lys-p-nitroanilida
y el sustrato del activador tisular de plasminógeno
(t-PA)
H-D-Ile-Pro-Arg-p-nitroanilida
se adquieren en Kabi Vitrum, Estocolmo, Suecia.
En los sustratos cromógenos antes descritos los
símbolos de tres letras Ile, Glu, Gly, Pro, Arg, Phe, Val, Leu, y
Lys se usan para indicar el correspondiente grupo aminoácido
isoleucina, ácido glutámico, glicina, prolina, arginina,
fenilalanina, valina, leucina, y lisina, respectivamente.
Los inhibidores de la trombina preferiblemente
permitirá la fibrinolisis inducida por uroquinasa, activador tisular
del plasminógeno (t-PA) y estreptoquinasa. Esto será
importante para el uso terapéutico de dichos agentes como un
adyuvante de la terapia trombolítica con estreptoquinasa,
t-PA o uroquinasa, y para el uso de dichos agentes
como agentes antitrombóticos que permiten la fibrinolisis endógena
(con respecto a t-PA y uroquinasa). Además de la
falta de interferencia con la actividad de amidasa de las proteasas
fibrinolíticas, dicho sistema fibrinolítico permitido se puede
estudiar usando coágulos de plasma humano y su lisis con los
respectivos activadores de plasminógeno fibrinolíticos.
Se obtiene plasma de perro, de sabuesos de raza
mezclada consciente (ambos sexos, Butler Farms, Clyde, New York,
EE.UU.) por venopunción en citrato al 3,8 por ciento. Se prepara el
fibrinógeno a partir del plasma de perro reciente y el fibrinógeno
humano se prepara de sangre humana ACD del día de la fracción
I-2 de acuerdo con procedimientos y especificaciones
previas. Smith, Biochem. J., 185, 1-11
(1980); y Smith y col., Biochemistry 11,
2958-2967, (1972). El fibrinógeno humano (98 por
ciento puro/sin plasmina) es de American Diagnostica Greenwich,
Connecticut. El radiomarcado de las preparaciones de fibrinógeno
I-2 se lleva a cabo como se de ha descrito
previamente. Smith y col., Biochemistry, 11,
2958-2967, (1972). La uroquinasa se adquiere en Leo
Pharmaceuticals, Dinamarca, como 2200 unidades Ploug/vial. La
estreptoquinasa se adquiere en Hoechst-Roussel
Pharmaceuticals, Somerville, New Jersey.
Se forman coágulos en plasma humano en microtubos
de ensayo por adición de 50 \mul de trombina (73 unidades NIH/ml)
a 100 \mul de plasma humano que contiene fibrinógeno marcado con
125-yodo 0,0229 \muCi. La lisis del coágulo se
estudia recubriendo los coágulos con 50 \mul de uroquinasa o
estreptoquinasa (50, 100 ó 1000 unidades/ml) e incubando durante 20
horas a temperatura ambiente. Después de incubar, los tubos se
centrifugan en una microfuga Beckman. Se añaden 25 \mul de líquido
sobrenadante a 1,0 ml de volumen de tampón tris 0,03 M/NaCl 0,15 M
para el recuento gamma. Los testigos de recuento de 100 por cien de
lisis se obtienen omitiendo la trombina (y sustituyendo el tampón).
Se evalúa la posible interferencia de los inhibidores de trombina
con la fibrinolisis incluyendo los compuestos en las soluciones
recubiertas con concentraciones de 1, 5 y 10 \mug/ml. Se calculan
aproximaciones de los valores de CI_{50} por extrapolaciones
lineales a partir de los puntos de datos a un valor que
representaría el 50 por ciento de lisis para esa concentración
particular de agente fibrinolítico.
Se obtiene plasma de perro y plasma de rata de
sabuesos raza mezclada conscientes (ambos sexos, Butler Farms,
Clyde, New York, EE.UU.) o de ratas Sprague-Dawley
macho anestesiadas (Harlen Sprague-Dawley, Inc.,
Indianapolis, Indiana, EE.UU.) por venopunción en citrato al 3,8 por
ciento. Se prepara el fibrinógeno a partir de sangre humana ACD del
día de la fracción 1-2 de acuerdo con procedimientos
y especificaciones previas. Smith, Biochem. J., 185,
1-11 (1980); y Smith y col., Biochemistry
11, 2958-2967, (1972). El fibrinógeno humano también
se adquiere al 98 por ciento puro/sin plasmina, de American
Diagnostica Greenwich, Connecticut. Los reactivos de coagulación,
Actina, tromboplastina, Innovin y plasma humano son de Baxter
Healthcare Corp., Dade Division, Miami, Florida. Se usa trombina
bovina de Parke-Davis (Detroit, Michigan) para los
ensayos de coagulación en el plasma.
Los procedimientos de ensayo de coagulación son
como se han descrito previamente. Smith y col., Thrombosis
Research, 50, 163-174 (1988). Se usa un
instrumento de coagulación CoAScreener (American Labor, Inc.) para
las mediciones del ensayo de coagulación. El tiempo de protrombina
(PT) se mide por adición de 0,05 ml de solución salina y 0,05 ml de
reactivo de tromboplastina-C o reactivo de factor
tisular humano recombinante (Innovin) a 0,05 ml de plasma de ensayo.
El tiempo parcial de tromboplastina activada (APTT) se mide por
incubación de 0,05 ml de plasma de ensayo con 0,05 ml de reactivo
Actina durante 120 segundos seguido de 0,05 ml de CaCl_{2} (0,02
M). El tiempo de trombina (TT) se mide por adición de 0,05 ml de
solución salina y 0,05 ml de trombina (10 unidades NIH/ml) a 0,05 ml
de plasma de ensayo. Los compuestos de fórmula I se añaden al plasma
animal o humano en un amplio intervalo de concentraciones para
determinar los efectos de prolongación en los ensayos de APT, PT y
TT. Se llevan a cabo extrapolaciones lineales para calcular las
concentraciones necesarias para duplicar el tiempo de coagulación
para cada ensayo.
Se anestesian ratas Sprague Dawley macho
(350-425 g, Harlan Sprague Dawley Inc. Indianápolis,
IN), con xilazina (20 mg/kg, s.c.) y ketamina (120 mg/kg, s.c.) y se
mantienen sobre una capa de agua caliente (37ºC). Se pone una cánula
en la(s) vena(s) yugular(es) para permitir las
infusiones.
La vena yugular izquierda y arteria carótida
derecha se conectan con una cánula de 20 cm de longitud de tubo de
polietileno PE 60. Un tubo mayor de 6 cm de sección central (PE 190)
con un hilo de algodón (5 cm) en el lumen, se ajusta por fricción
entre las secciones mayores para completar el circuito de derivación
arteriovenoso. La sangre circula por la derivación durante 15 min
antes de quitar con cuidado el hilo y pesarlo. El peso de un hilo
húmedo se resta del peso total del hilo y el trombo (véase J.R.
Smith, Br. J. Pharmacol. 77:29, 1982). En este modelo los
compuestos preferidos de la presente invención reducen el peso neto
del coágulo a aproximadamente 25-30% del testigo, o
incluso menor, con una dosis i.v. de 33,176 \mumoles/kg/h.
Las arterias carótidas se aislan mediante una
incisión cervical ventral de la línea media. Se pone un termopar
debajo de cada arteria y vaso, y se registra la temperatura
continuamente en un registrador de papel continuo. Se pone una
vuelta de tubo (0,058 DI x 0,077 DE x 4 mm, Baxter Med. Grade
Silicone), cortado longitudinalmente, alrededor de cada carótida
directamente encima del termopar. Se disuelve hexahidrato de
FeCl_{3} en agua y la concentración (20 por ciento) se expresa en
términos del peso real de FeCl_{3} sólo. Para lesionar la arteria
e inducir la trombosis, se pipetean 2,85 \mul en la vuelta para
bañar la arteria por encima de la sonda de termopar. La oclusión
arterial es indicada por una rápida disminución de temperatura. El
tiempo de oclusión se registra en minutos y representa el tiempo
transcurrido entre la aplicación de FeCl_{3} y la rápida
disminución de temperatura (véase K.D. Kurz, Thromb. Res.,
60:269, 1990).
Los datos in vitro sugieren que los
inhibidores de trombina inhiben la trombina, y a mayores
concentraciones pueden inhibir otras
serina-proteasas, tales como plasmina y el
activador tisular de plasminógeno. Para evaluar si los compuestos
inhiben la fibrinolisis in vivo, se determina la tasa de
trombolisis espontánea implantando un coágulo de sangre entera
marcado en la circulación pulmonar. Se mezcla sangre de rata (1 ml)
rápidamente con trombina bovina (4 UI, Parke Davis) y fibrinógeno
humano ^{125}I (5 \muCi, ICN), se extrae inmediatamente en tubo
de Silastic y se incuba a 37ºC durante 1 hora. El trombo envejecido
se expele del tubo, se corta en segmentos de 1 cm, se lava 3X en
solución salina normal, y cada segmento se cuenta en un contador
gamma. Un segmento con recuentos conocidos se aspira en un catéter
que posteriormente se implante en la vena yugular. El extremo del
catéter se avanza hasta las cercanías de la aurícula derecha y el
coágulo es expelido para que flote en la circulación pulmonar. Una
hora después del implante, se sacan el corazón y los pulmones y se
hace el recuento por separado. La trombolisis se expresa como un
porcentaje donde:
\text{% de
trombolisis =} \frac{(\text{cpm inyectados – cpm del
pulmón)}}{\text{cpm inyectados}} \ x \
100
La disolución fibrinolítica del coágulo
implantado depende del tiempo (véase J.P. Clozel, Cardiovas.
Pharmacol., 12:520, 1988).
Se miden el tiempo de trombina en el plasma (TT)
y el tiempo parcial de tromboplastina activada (APTT) con un
fibrómetro. Se coge una muestra de sangre de un catéter de la
yugular y se recoge en jeringa que contiene citrato sódico (3,8 por
ciento, 1 parte a 9 partes de sangre). Para medir el TT, se mezcla
plasma de rata (0,1 ml) con solución salina (0,1 ml) y trombina
bovina (0,1 ml, 30 U/ml en tampón TRIS; Parke Davis) a 37ºC. Para el
APTT, se incuban solución de plasma (0,1 ml) y APTT (0,1 ml, Organon
Teknika) durante 5 minutos (37ºC) y se añade CaCl_{2} (0,1 ml,
0,025 M) para empezar la coagulación. Los ensayos se hacen por
duplicado y se hace la media.
Para una medición de la biodisponibilidad, el
tiempo de trombina (TT) en el plasma sirve como sustituto de un
ensayo de compuesto relacionado, suponiendo que los incrementos del
TT observados resultan de la inhibición de la trombina sólo por el
compuesto relacionado. El efecto con el transcurso del tiempo del
inhibidor de trombina en el TT se determina después de la
administración de bolo i.v. a ratas anestesiadas y después de
tratamiento oral de ratas conscientes en ayunas. Debido a las
limitaciones del volumen de sangre y el número de puntos necesarios
para determinar el transcurso del tiempo desde el tiempo de
tratamiento al tiempo en el que la respuesta vuelve a los valores de
pretratamiento, se usan dos poblaciones de ratas. Cada población de
muestra representa puntos de tiempo secuenciales alternantes. El TT
medio en el transcurso del tiempo se usa para calcular el área bajo
la curva (AUC). El índice de biodisponibilidad se calcula por la
fórmula mostrada a continuación y se expresa como porcentaje de
actividad relativa.
El área bajo la curva (AUC) del transcurso del
tiempo de TT en el plasma se determina y ajusta para la dosis. Este
índice de biodisponiblidad se denomina "% de actividad
relativa" y se calcula como
\text{% de
Actividad relativa =} \frac{\text{AUC po}}{\text{AUC iv}} x
\frac{\text{Dosis iv}}{\text{Dosis po}} \ x \
100
Se preparan soluciones de compuestos recientes
diariamente en solución salina normal, y se inyectan en forma de un
bolo o se administran por infusión empezando 15 minutos antes y
continuando a lo largo de la perturbación experimental, que es 15
minutos en el modelo de derivación intravenosa y 60 minutos en el
modelo de FeCl_{3} de lesión arterial, y en el modelo de
trombolisis espontánea. El volumen de inyección del bolo es 1 ml/kg
para i.v., y 5 ml/kg para p.o., y el volumen de infusión es 3
ml/h.
Los resultados se expresan como media +/- ETM. Se
usa el análisis de varianza de una vía para detectar diferencias
estadísticamente significativas, y después se aplica el ensayo de
Dunnett para determinar que medias son diferentes. El nivel de
significancia para el rechazo de la hipótesis nula de igualdad de
medias es P<0,05.
Perros macho (sabuesos; 18 meses - 2 años;
12-13 kg, Marshall Farms, North Rose, New York
14516) se dejan en ayunas toda la noche y se alimentan con dieta de
receta certificada de Purina (Purina Mills, St. Louis, Missouri) 240
minutos después de la dosificación. El agua está disponible a
voluntad. La temperatura ambiente se mantiene entre
19-23ºC; humedad relativa del 45-50
por ciento; y luz de 600-1800 horas.
El compuesto de ensayo se formula inmediatamente
antes de la dosificación disolviéndolo en solución salina estéril al
0,9 por ciento hasta una preparación de 5 mg/ml. A los perros se les
da una sola dosis de 2 mg/kg de compuesto de ensayo por alimentación
con sonda por vía oral. Se cogen muestras de sangre (4,5 ml) de la
vena cefálica a las 0,25, 0,5, 0,75, 1, 2, 3, 4 y 6 horas después de
la dosificación. Se recogen las muestran en tubos Vacutainer con
citrato y se mantienen en hielo antes de la reducción al plasma por
centrifugación. Las muestras de plasma se analizan por
HPLC-MS. Se registra la concentración en el plasma
del compuesto de ensayo y se usa para calcular parámetros
farmacocinéticos: constante de velocidad de reacción, Ke;
aclaramiento total, Cl_{t}; volumen de distribución, V_{D};
tiempo de concentración máxima del compuesto de ensayo en el plasma,
T_{max}; concentración máxima del compuesto de ensayo en el
T_{max}, C_{max}; semivida en el plasma, t_{0,5}; y área bajo
la curva, AUC; fracción de compuesto de ensayo absorbida, F.
La preparación quirúrgica e instrumentación de
los perros son como han descrito Jackson y col., Circulation,
82, 930-940 (1990). Se anestesian sabuesos de raza
mezclada (6-7 meses de edad, ambos sexos, Butler
Farmas, Clyde, New York, EE.UU.) con pentobarbital sódico (30 mg/kg
vía intravenosa, i.v.), se intuban y se ventilan con aire ambiente.
Se ajustan el volumen tidal y velocidades de respiración para
mantener la PO_{2}, PCO_{2} y pH de la sangre dentro de los
límites normales. Se insertan electrodos de aguja subdérmicos para
registrar un ECG lead II.
Se aíslan la vena yugular izquierda y arteria
carótida derecha común mediante una incisión mediolateral izquierda
en el cuello. Se mide la presión arterial (PA) continuamente con un
transductor Millar precalibrado (modelo MPC-500,
Millar instruments, Houston, TX, EE.UU.) insertado en la arteria
carótida. Se pone una cánula en la vena yugular para la toma de
muestras de sangre durante el experimento. Además, se ponen cánulas
en las venas femorales de ambas patas traseras para administrar el
compuesto de ensayo.
Se lleva a cabo una toracotomía izquierda en el
quinto espacio intercostal, y el corazón se suspende en una
horquilla pericárdica. Se aísla un segmento de 1 a 2 cm de la
arteria coronaria circunfleja izquierda (ACI) próxima a la primera
rama ventricular diagonal principal. Se inserta un electrodo anódico
de alambre acabado en una aguja de calibre 26 (revestido de Teflón,
alambre de cobre electrolaminado con plata de calibre 30) de
3-4 mm de longitud en la ACI y se pone en contacto
con la superficie íntima de la arteria (confirmado al final del
experimento). El circuito estimulador se completa poniendo el cátodo
en un sitio subcutáneo (s.c.). Se pone un dispositivo oclusor de
plástico ajustable alrededor de la ACI, en la región del electrodo.
Se pone una sonda de flujo electromagnético precalibrada (Carolina
Medical Electronics, King, NC, EE.UU.) alrededor de la ACI próxima
al ánodo para medir el flujo sanguíneo coronario (FSC). El
dispositivo de oclusión se ajusta para producir un
40-50 por ciento de inhibición de la respuesta del
flujo sanguíneo hiperémico observada, después de 10 s de oclusión
mecánica de la ACI. Todas las mediciones hemodinámicas y ECG se
registran y analizan con un sistema de adquisición de datos (modelo
M3000, Modular Instruments, Malvern, PA, EE.UU.).
Se produce la lesión electrolítica de la íntima
de la ACI aplicando una corriente directa de 100 \muA (CD) en el
ánodo. La corriente se mantiene durante 60 min y después se para se
hayan ocluido o no los vasos. La formación del trombo avanza
espontáneamente hasta que la ACI está totalmente ocluida
(determinado como FSC cero y un aumento en el segmento
S-T). La administración de compuesto empieza después
de dejar que el trombo que ocluye envejezca durante 1 hora. Se
inicia una infusión de 2 horas de los compuestos de la presente
invención, con dosis de 0,5 y 1 mg/kg/hora, simultáneamente con una
infusión de agente trombolítico (por ejemplo, activador tisular del
plasminógeno, estreptoquinasa, APSAC). Se sigue la reperfusión
durante 3 horas después de administrar el compuesto de ensayo. La
reoclusión de las arterias coronarias después de la trombolisis
satisfactoria se define como FSC cero que persistía durante al menos
30 minutos.
Se determinaron los valores de recuentos de
células de sangre entera, hemoglobina, y hematocritos en una muestra
de 40 \mul de sangre con citrato (3,8 por ciento) (1 parte de
citrato : 9 partes de sangre) con un analizador de hematología
(Cell-Dyn 900, Sequoia-Turner. Mount
View, CA, EE.UU.). Los tiempos de sangrado patrón gingivales se
determinan con un dispositivo de tiempo de hemorragia Simplate II
(Organon Teknika Durham, N.C., EE.UU.). El dispositivo se usa para
hacer 2 incisiones horizontales en la encía de la mandíbula
izquierda inferior o superior del perro. Cada incisión es de 3 mm de
ancho x 2 mm de profundidad. Se hacen las incisiones, y se usa un
cronómetro para determinar cuanto tiempo se produce el sangrado. Se
usa una torunda de algodón para absorber la sangre cuando rezuma de
la incisión. El tiempo de hemorragia patrón es el tiempo desde la
incisión hasta parar la hemorragia. Los tiempos de hemorragia se
toman justo antes de administrar el compuesto de ensayo (0 min), a
los 60 min en infusión, cuando se termina de administrar el
compuesto de ensayo (120 min), y al final del experimento. Todos los
datos se analizan por análisis de varianza de una vía (ADEVA)
seguido de ensayos t post hoc de
Student-Neuman-Kuels para
determinar el nivel de significancia. Se usan repetidas mediciones
ADEVA para determinar las diferencias significativas entre los
puntos de tiempo durante los experimentos. Se determina que los
valores son estadísticamente diferentes al menos a nivel de
p<0,5. Todos los valores son media \pm ETM. Todos los estudios
se llevan a cabo de acuerdo con los principios de la Sociedad
Psicológica Americana. Describen más detalles relacionados con los
procedimientos Jackson y col., J. Cardiovasc. Pharmacol.
(1993), 21, 587-599.
Los siguientes ejemplos se proporcionan para
describir la invención con más detalle, y no se deben considerar
limitaciones de ésta.
Las abreviaturas, símbolos y términos usados en
los ejemplos tienen los siguientes significados.
Ac = acetilo
AIBN = azobisisobutironitrilo
Anal. = análisis elemental
Bn o Bzl = bencilo
Bu = butilo
n-BuLi =
butil-litio
Calc. = calculado
DCC = diciclohexilcarbodiimida
DIBAL-H = hidruro de
diisobutil-aluminio
DMF = dimetilformamida
DMSO = dimetilsulfóxido
Et = etilo
EtOAc = acetato de etilo
Et_{3}N = trietilamina
Et_{2}O = éter dietílico
EtOH = etanol
EtSH = etanotiol
FAB = bombardeo de átomos rápidos (Espectroscopía
de masas)
FDMS = espectro de masas de desorción de
campo
Hex = hexanos
HOAt =
1-hidroxi-7-azabenzotriazol
HPLC = cromatografía líquida de alta
resolución
HRMS = espectro de masas de alta resolución
i-PrOH = isopropanol
IR = Espectro de infrarrojo
LAH = hidruro de litio y aluminio
Me = metilo
MeI = yoduro de metilo
MeOH = metanol
MPLC = Cromatografía líquida de presión media
NBS = N-bromosuccinimida
RMN = Resonancia magnética nuclear
Ph = fenilo
PPA = ácido polifosfórico
i-Pr = isopropilo
Sal de Rochelle = tartrato de potasio y sodio
RPHPLC = cromatografía líquida de alta resolución
de fase inversa
SiO_{2} = gel de sílice
MP = material de partida
TBS = terc-butildimetilsililo
TEA = trietilamina
Temp. = temperatura
TFA = ácido trifluoroacético
THF = tetrahidrofurano
TIPS = triisopropilsililo
TLC = cromatografía en capa fina
ácido tríflico = ácido
trifluorometanosulfónico.
Salvo que se exponga lo contrario, los ajustes de
pH y tratamientos son con soluciones acuosas de ácido o base. PrepLC
indica cromatografía líquida preparativa usando cartuchos de sílice
"Prep Pak®"; cromatografía radial indica cromatografía
preparativa usando un instrumento "Chromatotron®".
Se añadió trifluorometanosulfonato de
triisopropilsililo (24,4 ml, 90,7 mmoles) a una solución agitada de
2-(4-bromo-fenoxi)etanol
(15,1 g, 69,8 mmoles) y trietilamina anhidra (19,4 ml, 140 mmoles)
en CH_{2}CI_{2} anhidro (30 ml) a 0ºC en atmósfera de
nitrógeno. La mezcla resultante se agitó durante 1 h. La mezcla se
lavó con solución saturada de NaHCO_{3} (25 ml), se extrajo con
EtOAc (3 x 75 ml), se secó sobre MgSO_{4}, se filtró, se concentró
y se cromatografió en sílice (CH_{2}Cl_{2} en hexanos al 10%)
para dar 23,4 g (90%) del éter de sililo en forma de un líquido
incoloro.
IR (capa fina),2944, 1489 cm^{-1}; FDMS m/e 372
(M^{+}, ^{79}Br) y 374 (M^{+}, ^{81}Br). Análisis calculado
para C_{17}H_{29}BrO_{2}Si: C, 54,68; H, 7,83, Encontrado: C,
54,97; H, 7,55.
El éter de sililo anterior (2,71 g, 7,26 mmoles)
se añadió a una suspensión agitada de cintas de magnesio (164 mg,
6,77 mmoles) en THF anhidro (4 ml) en atmósfera de argón, seguido de
la adición de una viruta pequeña de yodo. La mezcla resultante se
calentó en un baño de aceite a 60-65ºC durante 1,5 h
para formar una solución de Grignard homogénea. La solución de
Grignard se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con THF
anhidro (10 ml) antes de añadirla a una solución agitada de la
6-benciloxi-2-(dimetilamino)benzo[b]tiofen-3-il
3-metoxi-4-[(4-morfolinil)metil]fenil
cetona (2,50 g, 4,84 mmoles) en THF anhidro (10 ml) a 0ºC en
atmósfera de argón. La mezcla resultante se agitó a 0ºC durante 1,5
h, después se hidrolizó con solución acuosa saturada de NH_{4}Cl
(15 ml). Después de extraer con EtOAc (70 ml x 2), las capas
orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron, y se
concentraron para dar un residuo gomoso que se disolvió en THF
anhidro (25 ml) y se trató con fluoruro de tetrabutilamonio (5,80
ml, 1 M en THF) a temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno.
Después de agitar durante 1 h, la mezcla se concentró a vacío; el
residuo se cromatografió en sílice [gradiente MeOH/Et_{3}N (2/1)
en EtOAc 0-30%] para dar 2,61 g (88%) del
ceto-alcohol en forma de una espuma.
IR (puro) 3426 (ancho), 1646, 1605 cm^{-1};
FDMS m/e 609 (M+);
Análisis Calculado para
C_{36}H_{35}NO_{6}S: C, 70,91; H, 5,79; N, 2,30, Encontrado:
C, 70,63; H, 5,65; N, 2,04.
Se añadieron secuencialmente trietilamina anhidra
(1,05 ml, 7,53 mmoles) y cloruro de metanosulfonilo (0,233 ml, 3,01
mmoles) a una solución agitada del ceto-alcohol
anterior (1,53 g, 2,51 mmoles) en diclorometano anhidro (15 ml) a
0ºC en atmósfera de nitrógeno, la mezcla de reacción se dejó agitar
a 0ºC durante 1,5 h. Después de diluir con EtOAc (60 ml), la mezcla
se lavó con agua (20 ml x 2) se secó, se filtró, y se concentró para
dar 1,73 g (100%) del mesilato deseado en forma de una espuma.
Se añadieron éster t-butílico de
(L)-prolina (0,190 ml, 1,16 mmoles) y trietilamina
anhidra (0,25 ml) a una solución agitada del mesilato (320 g, 0,465
mmoles) en DMF seca (2 ml). La mezcla resultante se calentó a 70ºC
durante 36 h. A temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con EtOAc
(30 ml), se lavó con agua (10 ml x 2), se secó sobre MgSO_{4}, se
filtró, concentró y cromatografió en sílice [gradiente
EtOH/Et_{3}N (2/1) en EtOAc 0-5%] para dar 255 mg
(72%) del ceto-éster en forma de una espuma.
IR (puro) 1727, 1647, 1605 cm^{-1}; FDMS m/e
762 (M^{+}).
A una solución agitada del benciloxi-éster
anterior (75 mg, 0,098 mmoles) en THF (3 ml) en atmósfera de
nitrógeno, se añadieron secuencialmente Pd/C al 10% (75 mg) y
solución acuosa de HCO_{2}NH_{4} al 25% (0,4 ml). La mezcla
resultante se agitó con un balón de atmósfera de nitrógeno durante 6
h. Después de filtrar, el filtrado se diluyó con EtOAc, se lavó con
solución semisaturada de NaCl, se secó sobre MgSO_{4} se filtró,
concentró y cromatografió en sílice [gradiente EtOH/Et_{3}N (2/1)
en EtOAc 0-5%] para dar 50 mg (76%) del
hidroxi-éster en forma de una espuma.
Se añadió gota a gota una solución de ácido
oxálico (50 mg, 0,074 mmoles) en EtOAc (3 ml) a una solución agitada
del hidroxi-éster (13,4 mg, 0,148 mmoles) en EtOAc (3 ml). La
suspensión blanca resultante se filtró y el sólido blanco se secó a
60ºC a vacío para proporciona la sal del compuesto (38 mg) en forma
de un sólido amarillento con un rendimiento global de 46% a partir
del benciloxi-éster anterior.
IR (KBr) 3400-2500 (ancho), 1733,
1640, 1606 cm^{-1}; FDMS m/e 673 (M^{+}+ 1 -
2[C_{2}H_{2}O_{4}]); Análisis calculado para
C_{38}H_{44}N_{207}S.2 (C_{2}H_{2}O_{4}): C, 59,15; H,
5,67; N, 3,28. Encontrado: C, 58,94; H, 5,70; N, 3,48.
La
6-benciloxi-2-(dimetilamino)benzo[b]tiofen-3-il
3-metoxi-4-[(4-morfolinil)metil]fenil
cetona usada antes en la parte B, se puede obtener usando un
procedimiento similar al descrito en el siguiente Ejemplo
9-A, pero usando hidrocloruro del ácido
3-metoxi-4-(4-morfolinil)benzoico.
El ácido benzoico se puede obtener de una forma similar a la
preparación descrita en el Ejemplo 5 para el hidrocloruro del ácido
3-metoxi-4-(1-pirrolidinil)benzoico.
Se añadió ácido trifluoroacético (3 ml) a una
solución agitada del ceto-éster del Ejemplo 1 (230 mg, 0,342 mmoles)
en 1,2-dicloroetano anhidro (3 ml) a 0ºC, en
atmósfera de nitrógeno. La solución resultante se agitó a
temperatura ambiente durante 6 h. Después de concentrar, el residuo
gomoso se disolvió en THF (4 ml), y la solución se agitó y trató con
una solución de ácido oxálico (90 mg) en THF/EtOAc (2 ml/2 ml) para
formar una suspensión. Se añadieron 5 ml adicionales de EtOAc a la
suspensión. Después de filtrar y posterior secado a vacío a 50ºC, se
obtuvieron 190 mg (70%) del ceto-ácido en forma de un sólido
amarillento.
IR (KBr) 3400-2500 (ancho), 1726,
1641, 1606 cm^{-1}; FDMS m/e 617 (M^{+}+ 1
-2[C_{2}H_{2}O_{4}]); Análisis calculado para
C_{34}H_{36}N_{2}O_{7}S.1,9 (C_{2}H_{2}O_{4}): C,
57,63; H, 5,09; N, 3,56. Encontrado: C, 57,63; H, 4,98; N, 3,66.
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadió DIBAL-H (5,58 ml, 1 M
en tolueno) a una solución agitada del ceto-alcohol
del Ejemplo 1-B (1,36 g, 2,23 mmoles) en
CH_{2}Cl_{2} anhidro (10 ml) a 0ºC en atmósfera de nitrógeno,
la solución resultante se agitó a 0ºC durante 50 min. La mezcla de
reacción se trató secuencialmente con MeOH (1 ml) y solución acuosa
saturada de la sal de Rochelle (20 ml), y la solución de dos capas
se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 1,5 h. Después
de extraer con EtOAc, la capa orgánica se secó sobre MgSO_{4}, se
filtró y concentró para dar el diol.
El diol anterior se disolvió en CH_{2}Cl_{2}
anhidro (15 ml) y se enfrió a 0ºC antes de tratarlo secuencialmente
con Et_{3}SiH (2,94 ml, 15,6 mmoles) y TFA (1,72 ml, 22,3 mmoles).
La mezcla resultante se agitó a 0ºC durante 1 h. Después de
tratamiento cuidadoso con solución acuosa saturada de NaHCO_{3}
para neutralizar el TFA, la mezcla se dejó calentar a temperatura
ambiente donde se extrajo con EtOAc (60 ml). Las capas orgánicas
combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron, concentraron,
y cromatografiaron en sílice [gradiente EtOH/Et_{3}N (2/1) en
EtOAc 0-5%] para dar el compuesto alcohol en forma
de una espuma (1,05 g) con un rendimiento global de 79% a partir del
ceto-alcohol.
IR (KBr) 3405 (ancho), 1608 cm^{-1}; FDMS m/e
595 (M^{+}); Análisis Calculado para C_{36}H_{37}NO_{5}S: C,
72,58; H, 6,26; N, 2,35. Encontrado: C, 72,87; H, 6,29; N,
2,27.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo
1-C, se obtuvo el benciloxi-éster a partir del
alcohol anterior en forma de una espuma con un rendimiento global de
100%.
IR (puro) 1736, 1608 cm^{-1}; FDMS m/e 749
(M^{+}+1).
Siguiendo el procedimiento de desbencilación
descrito en el Ejemplo 1-D, se obtuvo el
hidroxi-éster a partir del benciloxi-éster anterior en forma de una
espuma con un rendimiento del 89%.
IR (puro) 3200 (ancho), 1732, 1608 cm^{-1};
FDMS m/e 659 (M^{+}+1); Análisis calculado para
C_{38}H_{46}N_{2}O_{6}S: C, 69,27; H, 7,04; N, 4,25,
Encontrado: C, 69,44; H, 7,16; N, 4,52.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo
2, se obtuvo la sal del hidroxi-ácido a partir del hidroxi-éster del
Ejemplo 3, en forma de un sólido blanco con un rendimiento global
de 75%.
IR (KBr) 3400-2500 (ancho), 1726,
1672, 1610 cm^{-1}; FDMS m/e 603
(M^{+}+1-2[C_{2}H_{2}O_{4}]);
Análisis calculado para
C_{34}H_{38}N_{2}O_{6}S.1,7(C_{2}H_{2}O_{4}):
C, 59,43; H, 5,52; N, 3,71. Encontrado: C, 59,42; H, 5,33; N,
4,03.
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
Siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo
1-B, se obtuvo la hidroxi-cetona a
partir del éter de sililo del Ejemplo 1-A y la
6-benciloxi-2-(dimetilamino)benzo[b]tiofen-3-il
3-Metoxi-4-[(1-pirrolidinil)metil]fenil
cetona, en forma de una espuma con un rendimiento global de 73%.
IR (puro) 3364 (ancho), 1651, 1605 cm^{-1};
FDMS m/e 593 (M^{+}); Análisis Calculado para
C_{36}H_{35}NO_{5}S: C, 72,83; H, 5,94; N, 2,35, Encontrado:
C, 72,68; H, 5,89; N, 2,44.
\vskip1.000000\baselineskip
Siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo
1-C, se obtuvo el ceto-éster a partir de la
hidroxi-cetona en forma de una espuma con un
rendimiento global de 98%.
IR (puro) 1732, 1651, 1605 cm^{-1}; FDMS m/e
747 (M^{+} + 1).
Siguiendo el procedimiento de desbencilación
descrito en el Ejemplo 1-D, se obtuvo el
hidroxi-éster a partir del benciloxi-éster anterior, en forma de una
espuma con un rendimiento global de 54%.
IR (puro) 3400 (ancho), 1738, 1651, 1604
cm^{-1}; FDMS m/e 657 (M^{+}+1); Análisis calculado para
C_{38}H_{44}N_{2}O_{6}S: C, 69,49; H, 6,75; N, 4,26,
Encontrado; C, 69,73; H, 6,73; N, 4,10.
La
6-benciloxi-2-(dimetilamino)benzo[b]tiofen-3-il
3-metoxi-4-[(1-pirrolidinil)metil]fenil
cetona usada en la parte A anterior, se puede obtener usando un
procedimiento similar al descrito en el siguiente Ejemplo
9-A, pero usando el hidrocloruro del ácido
3-metoxi-4-[(1-pirrolidinil)metil]benzoico.
El ácido benzoico se puede obtener de una forma similar a la
siguiente preparación.
\newpage
Se combinaron
3-metoxi-4-metilbenzoato
de metilo (9,95 g; 55,2 mmoles) y N-bromosuccinimida
(10,81 g; 60,7 mmoles) en 250 ml de CCl_{4} y se calentaron a
reflujo. Se añadió AIBN (0,75 g; 5,5 mmoles) y la mezcla resultante
se calentó a reflujo durante 8 h. La mezcla se enfrió, después se
filtró y concentró a presión reducida. El residuo se trituró con
hexanos y se filtró para dar el bromo-éster en forma de agujas
blancas (11,7 g; 82% de rendimiento).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 7,63 (d, J =
7,6 Hz, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,41 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 4,56 (s, 2H),
3,98 (s, 3H), 3,94 (s, 3H); FDMS 528 (M+).
Se disolvió
4-bromometil-3-metoxibenzoato
de metilo (1,0 g; 3,9 mmoles) (Parte D) en THF (10 ml) y se añadió
pirrolidina (1,3 ml; 15,4 mmoles) a temperatura ambiente. La mezcla
se agitó toda la noche a temperatura ambiente, y después se vertió
en 50 ml de agua. La extracción se llevó a cabo con EtOAc (4 x 25
ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera y se
secaron pasándolos por sulfato sódico. El compuesto del título se
aisló (0,92 g; 96% de rendimiento) por cromatografía ultrarrápida en
gel de sílice eluyendo con EtOAc (100-95%)/Et_{3}N
(0-5%).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 7,62 (d, J =
7,8 Hz, 1H), 7,51 (s, 1H), 7,43 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 3,90 (s, 3H),
3,87 (s, 3H), 3,69 (s, 2H), 2,57 (m, 4H), 1,79 (m, 4H).
El éster se hidroliza convenientemente usando 1,1
a 1,5 equivalentes de LiOH 1 N en THF/MeOH (3:1) durante 3 h a 50ºC
o toda la noche a temperatura ambiente, seguido de acidificación
cuidadosa a temperatura ambiente con ácido clorhídrico (5 N a 12 N)
y evaporación. El hidrocloruro del ácido benzoico de una de dichas
preparaciones se caracterizó como sigue.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6})
\delta 1,89-1,94 (s ancho, 4H),
3,01-3,05 (s ancho, 2H), 3,26-3,34
(s ancho, 2H), 3,88 (s, 3H), 4,32 (s, 2H), 7,53 (s, 1H), 7,54 (d, J
= 7,7 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 7,7 Hz, 1H); FDMS m/e 235 (M+).
Siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo
2, se obtuvo el ceto-ácido a partir del ceto-éster del Ejemplo 5 en
forma de un sólido amarillento con un rendimiento global de 71%.
IR (KBr) 3400-2500 (ancho), 1726,
1640, 1606 cm^{-1}; FDMS m/e 601 (M^{+}+ 1 -
2[C_{2}H_{2}O_{4}]); Análisis calculado para
C_{34}H_{36}N_{2}O_{6}S.1,7(C_{2}H_{2}O_{4}):
C, 59,59; H, 5,27; N, 3,72. Encontrado: C, 59,55; H, 5,48; N,
3,71.
Siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo
1-C, se obtuvo el ceto-éster a partir de la
6-benciloxi-2-[4-(2-hidroxi)etil)fenil]-benzo[b]tiofen-3-il
3-metoxi-4-[(1-pirrolidinil)metil]fenil
cetona. La cromatografía en columna en sílice [gradiente
25-0% tolueno en EtOAc 75-100%,
después Et_{3}N en EtOAc al 0,5-2%] dio 814 mg
(83%) del producto en forma de un aceite amarillo.
IR (puro) 3021, 1733, 1646, 1601 cm^{-1}; FDMS
m/e 730 (M+); Análisis calculado para
C_{45}H_{50}N_{2}O_{5}S: C, 73,94; H, 6,89; N, 3,83.
Encontrado: C, 74,11; H, 6,71; N, 3,65.
Siguiendo el procedimiento de desbencilación
descrito en el Ejemplo 1-D, se obtuvo el
hidroxi-éster a partir del benciloxi-éster anterior. La
cromatografía en sílice [gradiente EtOH/Et_{3}N (2/1)
0-10%, THF en hexanos 10-30%] dio
429 mg (63%) del producto en forma de un sólido amarillo.
IR (puro) 3450 (ancho), 2971, 1728, 1653, 1597
cm^{-1}; FDMS m/e 641 (M^{+}+1).
La
6-benciloxi-2-[4-(2-hidroxietil)fenil]-benzo[b]tiofen-3-il
3-metoxi-4-[(1-pirrolidinil)metil]-fenil
cetona de la Parte A se obtuvo usando un procedimiento similar al
siguiente.
Se añadió trifluorometanosulfonato de
triisopropilsililo (35,1 ml, 130 mmoles) a una solución agitada de
alcohol 4-bromo-fenetílico (20,2 g,
100 mmoles) y trietilamina anhidra (27,8 ml, 200 mmoles) en
CH_{2}Cl_{2} anhidro (200 ml) a temperatura ambiente en
atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agitó durante 3 h.
Después de diluir con EtOAc (200 ml), la mezcla se lavó con solución
acuosa mezclada de NaHCO_{3} saturado (50 ml) y salmuera (50 ml),
se secó sobre MgSO_{4}, se filtró, concentró y cromatografió en
sílice (gradiente EtOAc en hexanos 0-10%) para dar
33,5 g (94%) del éter de sililo en forma de un aceite.
IR (CHCl_{3}) 2944, 1489 cm^{-1}; RMN ^{1}H
(CDCI_{3}) \delta1,03 (s ancho, 3H), 1,39 (s ancho, 18H), 2,81
(t, J = 6,8 Hz, 2H), 3,86 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 7,11 (d, J = 8,2 Hz,
2H), 7,40 (d, J = 8,2 Hz, 2H); FDMS m/e 356 (M^{+}, ^{79}Br) y
358 (M^{+}, ^{81}Br).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadió el éter de sililo anterior (571 mg,
1,60 mmoles) a una suspensión agitada de cintas de magnesio (36,4
mg, 1,50 mmoles) en THF anhidro (2 ml) en atmósfera de argón,
seguido de la adición de un pequeño cristal de yodo. La mezcla se
calentó en un baño de aceite a 60-65ºC durante 2 h
para formar una solución de Grignard homogénea. La solución de
Grignard se enfrió a temperatura ambiente antes de añadirla a una
solución agitada de la
6-benciloxi-2-(dimetilamino)-benzo[b]tiofen-3-il
3-metoxi-4-[(1-pirrolidinil)metil]fenil
cetona (500 mg, 1,00 mmol) en THFanhidro (4 ml) a 0ºC en atmósfera
de argón. La mezcla resultante se agitó a 0ºC durante 1,5 h, y
después se inactivó con solución acuosa saturada de NH_{4}Cl (5
ml). Después de extraer con EtOAc (25 ml x 2), las capas orgánicas
combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron, y concentraron
para dar un residuo gomoso (597 mg).
El residuo se disolvió en THF anhidro (5 ml) y se
trató con fluoruro de tetrabutilamonio (1,20 ml, 1 M en THF) a
temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno. Después de agitar
durante 1,5 h, la mezcla se concentró a vacío y se cromatografió en
sílice [gradiente de EtOH/Et_{3}N (2/1) en THF/hexanos (1/1)
0-30%] para dar 395 mg (68%) del alcohol en forma de
una espuma.
IR (CHCI_{3}) 2960, 1646, 1601 cm^{-1}; RMN
^{1}H (CDCI_{3}) \delta1,80 (s ancho, 4H), 2,54 (s ancho,
4H), 2,75 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 3,59 (s, 2H), 3,74 (t, J = 6,2 Hz,
2H), 3,79 (s, 3H), 5,18 (s, 2H), 7,05 (d, J = 8,1 Hz, 1H),
7,09-7,50 (m, 13H), 7,74 (d, J = 8,9 Hz, 1H); FDMS
m/e 578 (M+1); Análisis calculado para C_{36}H_{35}NO_{4}S: C,
74,84; H, 6,11; N, 2,42. Encontrado: C, 75,02; H, 6,34; N,
2,50.
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\vskip1.000000\baselineskip
Siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo
2, se obtuvo la sal del hidroxi-ácido a partir del hidroxi-éster del
Ejemplo 7 en forma de un sólido amarillo con un rendimiento global
del 91%.
IR (KBr) 3400 (ancho), 3300-2220
(ancho), 2973, 1726, 1642, 1609 cm^{-1}. FDMS m/e 585 (M^{+}+ 1
- 2[C_{2}H_{2}O_{4}]); Análisis calculado para
C_{34}H_{36}N_{2}O_{5}S.1,5(C_{2}H_{2}O_{4}):
C, 1,74; H, 5,46; N, 3,86. Encontrado: C, 61,93; H, 5,54; N,
3,82.
\newpage
Se añadió cloruro de oxalilo (15,8 ml, 181
mmoles) a una suspensión agitada de ácido
4-bromo-3-metilbenzoico
(6,00 g, 27,9 mmoles) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (40 ml), seguido
de la adición de 2 gotas de DMF. La suspensión se agitó a
temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno durante 6 h, y
después se concentró a sequedad.
Al cloruro de benzoilo bruto suspendido en
clorobenceno anhidro (50 ml) se añadió
6-benciloxi-2-(dimetilamino)benzo[b]tiofeno
(6,33 g, 22,3 mmoles). La mezcla resultante se calentó en un baño de
aceite a 110ºC durante 2 h. A temperatura ambiente, la mezcla se
diluyó con EtOAc (160 ml) antes de ser tratada cuidadosamente con
solución saturada de NaHCO_{3} (50 ml). La capa orgánica se secó
sobre MgSO_{4}, se filtró, se concentró, y se cromatografió en
gel de sílice [gradiente de EtOAc en tolueno 0-5%]
para dar 7,49 g (70%) de la amino-cetona en forma de
una espuma.
IR (puro) 3450, 1623, 1598 cm^{-1}; FDMS m/e
479 (M^{+}, ^{79}Br) y 481 (M^{+}, ^{81}Br); Análisis
calculado para C_{25}H_{22}Br
NO_{2}S: C, 62,50; H, 4,62; N, 2,92. Encontrado: C, 62,77; H, 4,59; N, 2,87.
NO_{2}S: C, 62,50; H, 4,62; N, 2,92. Encontrado: C, 62,77; H, 4,59; N, 2,87.
Se añadió
1-[2-(4-Bromofenoxi)etil]pirrolidina
(3,87 g, 14,3 mmoles) a una suspensión agitada de cintas de magnesio
(307 mg, 12,6 mmoles) en THF anhidro (6 ml) en atmósfera de argón,
seguido de la adición de una pequeña viruta de yodo. La mezcla
resultante se calentó en un baño de aceite a 60-65ºC
durante 1 h para formar una solución de Grignard homogénea. La
solución de Grignard se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó
con THF anhidro (10 ml) antes de añadirla a una solución agitada de
la amino-cetona anterior (4,05 g, 8,42 mmoles) en
THF anhidro (15 ml) a 0ºC en atmósfera de argón. La mezcla
resultante se agitó a 0ºC durante 2 h, y después se inactivó con
solución acuosa saturada de NH_{4}Cl (20 ml). Después de extraer
con EtOAc (70 ml x 2), las capas orgánicas combinadas se secaron
sobre MgSO_{4}, se filtraron, concentraron y cromatografiaron en
sílice [gradiente de Et_{3}N 0-5% hexanos en
tolueno 50-45%] para dar 5,28 g (100%) de la cetona
en forma de un aceite amarillo.
IR (puro) 2953, 1646, 1607 cm^{-1}; FDMS m/e
625 (M^{+}, ^{79}Br) y 627 (M^{+}, ^{81}Br).
A una solución agitada de la cetona anterior
(5,10 g, 8,14 mmoles) en 25 ml de DMF anhidra se añadieron
secuencialmente Pd(OAc)_{2} sólido (190 mg, 0,846
mmoles),
1,3-bis(difenil-fosfino)propano
sólido (349 mg, 0,846 mmoles), 12,5 ml de Et_{3}N y 12,5 ml de
MeOH. La reacción se purgó con CO (g) y se mantuvo con un balón de
atmósfera de CO (g) mientras se calentaba la mezcla resultante a
70ºC durante 8 h. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente,
y después se diluyó con 100 ml de H_{2}O y 200 ml de EtOAc. La
capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 100 ml), después los extractos
orgánicos combinados se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron,
concentraron y cromatografiaron [gradiente EtOH/Et_{3}N
(2-1) 0-5% THF en hexanos
5-25%] para dar 3,26 g (64%) del ceto-éster en forma
de un aceite amarillo.
IR (puro) 2945 (puro), 1724, 1647, 1606
cm^{-1}; FDMS m/e 606 (M^{+}+1).
Siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo
3-A, se obtuvo el alcohol a partir del ceto-éster
anterior. La cromatografía en columna en sílice [gradiente de
Et_{3}N 0-5% EtOAc en hexanos
50-70%, y después Et_{3}N/EtOH (2/1) 10% EtOAc en
hexanos 70%] dio 2,29 g (75%) del producto en forma de una espuma de
color hueso.
IR (puro) 3470 (ancho), 1607 cm^{-1}; FDMS m/e
564 (M^{+}+1); Análisis Calculado para C_{36}H_{37}NO_{3}S:
C, 76,70; H, 6,62; N, 2,48. Encontrado: C, 76,58; H, 6,45; N,
2,46.
Se añadieron secuencialmente trietilamina anhidra
(0,378 ml, 2,72 mmoles) y cloruro de metanosulfonilo (0,105 ml, 1,36
mmoles) a una solución agitada del alcohol anterior (0,510 g, 0,905
mmoles) en diclorometano anhidro (5 ml) a 0ºC en atmósfera de
nitrógeno. La mezcla se agitó durante 1 h a 0ºC antes de tratarla
con el éster t-butílico de la
(L)-prolina (0,370 ml, 2,26 mmoles). El baño frío se
quitó y la mezcla resultante se agitó durante 4 h adicionales.
Después de diluir con CH_{2}Cl_{2}/EtOAc (20 ml/30 ml), la
mezcla se lavó con solución saturada de NaHCO_{3} (20 ml), se
secó, filtró, concentró, y cromatografió en sílice [gradiente
Et_{3}N en EtOAc 0-5%] para dar 395 mg (61%) del
benciloxi-éster en forma de una espuma.
IR (puro) 1727, 1608 cm^{-1}; FDMS m/e 717
(M^{+}+1); Análisis calculado para
C_{45}H_{52}N_{2}O_{4}S: C, 75,38; H, 7,31; N, 3,91.
Encontrado: C, 75,09; H, 7,16; N, 3,74.
Siguiendo el procedimiento de desbencilación
descrito en el Ejemplo 1-D, se obtuvo el
hidroxi-éster a partir del benciloxi-éster anterior en forma de una
espuma con 64% de rendimiento.
IR (puro) 3150 (ancho), 1727, 1608 cm^{-1};
FDMS m/e 627 (M^{+}+1).
El
6-benciloxi-2-(dimetilamino)benzo[b]tiofeno
se preparó de una forma similar a la siguiente.
A una solución de diisopropilamina destilada
(22,9 ml, 175 mmoles) en 400 ml de THF anhidro a -78ºC, se añadió
n-butil-litio en hexanos 1,6 M (100
ml, 160 mmoles) en un periodo de 45 minutos. La mezcla se agitó a
-78ºC durante 1,5 h. A la solución se añadió mediante cánula en un
periodo de 1 h, una solución de
4-benciloxibenzaldehído (30,9 g, 146 mmoles) y
N,N-dimetilformamida (13,7 ml, 160 mmoles) en 100 ml
de THF destilado. La mezcla de reacción se agitó a -78ºC durante 16
h. Después la reacción se inactivó con 500 ml de solución saturada
de NH_{4}Cl. La mezcla se extrajo con EtOAc (3 x 1 litro), y las
capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4} y se
concentraron a presión reducida. Después el residuo se recristalizó
en EtOAc/hexanos para dar 20,0 g (66,5 mmoles, 46%) de un sólido de
color hueso.
P.f. 104-107ºC; FDMS 301
(M^{+}); Anal. calc. para C_{17}H_{19}NO_{2}S: C, 67,75; H,
6,35; N, 4,65. Encontrado: C, 67,61; H, 6,37; N, 4,57.
A una solución de tioacetamida (Parte G) (500 mg,
1,66 mmoles) en 65 ml de dicloroetano seco a temperatura ambiente se
añadió gota a gota ácido metanosulfónico (0,54 ml, 8,3 mmoles). La
mezcla de reacción roja se agitó durante 1,5 h y después se vertió
en 10 ml de solución acuosa saturada de NaHCO_{3}, seguido de
adición de 3 ml de H_{2}O, y se agitó vigorosamente. Después las
capas se separaron y la capa orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se
concentró a presión reducida. Después, el residuo se purificó por
cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, Et_{2}O/hexanos al
10%) para dar 327 mg (1,15 mmoles, 70%) de un sólido blanco.
P.f. 78-81ºC; FDMS 283 (M+);
Análisis calculado para C_{17}H_{17}NOS: C, 72,05; H, 6,05; N,
4,94. Encontrado: C, 72,22; H, 6,15; N, 4,89.
Siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo
2, se obtuvo la sal del hidroxi-ácido a partir del hidroxi-éster del
Ejemplo 9 en forma de un sólido blanco con un rendimiento global de
78%.
IR (KBr) 3400-2500 (ancho), 1715,
1673, 1609 cm^{-1}; FDMS m/e 571 (M^{+}+ 1 -
2[C_{2}H_{2}O_{4}]); Análisis calculado para
C_{34}H_{38}N_{2}O_{4}S.1,7(C_{2}H_{2}O_{4}):
C, 62,06; H, 5,77; N, 3,87. Encontrado: C, 62,18; H, 5,66; N,
3,94.
Una mezcla de 2,00 g (4,66 mmoles) de
2-(4-hidroxifenil)-3-[4-[2-(1-pirrolidinil)etoxi]bencil]benzo[b]tiofeno,
1,86 g (5,12 mmoles) de
1-bromo-2-(terc-butildifenil-sililoxi)etano,
y 1,93 g (14,0 mmoles) de K_{2}CO_{3} en 50 ml de DMF, se
calentó a 50ºC durante 22 h. La reacción se vertió en 250 ml de
H_{2}O y la mezcla se extrajo con EtOAc (3 x 100 ml). Los
extractos orgánicos combinados se lavaron con H_{2}O (2 x 100 ml),
se secaron sobre K_{2}CO_{3}, se filtraron y concentraron a
vacío para dar 4,21 g de un sólido aceitoso. La purificación por
cromatografía ultrarrápida (SiO_{2}; MeOH en CHCl_{3} saturado
con NH_{4}OH al 0,1% después 0,2% y después 0,5%) proporcionó 2,76
g (3,88 mmoles; 83%) del compuesto del título en forma de un
aceite.
FDMS 711 (M^{+}); Análisis calc. para
C_{45}H_{49}NO_{3}S: C, 75,91; H, 6,94; N, 1,97. Encontrado:
C, 76,05; H, 6,98; N, 2,12.
Siguiendo esencialmente las condiciones descritas
en el Ejemplo 1, Parte B, se preparó el compuesto del título en
forma de un sólido a partir del éter de sililo anterior, con 93% de
rendimiento después de cromatografía ultrarrápida (SiO_{2}; MeOH
en CHCl_{3} saturado con NH_{4}OH al 2% y después 4%).
FDMS 473 (M+); Análisis calc. para
C_{29}H_{31}NO_{3}S.C_{2}H_{2}O_{4}: C, 66,06; H, 5,91;
N, 2,49. Encontrado: C, 65,88; H, 5,68; N, 2,58.
Una solución a 0ºC de 500 mg (1,06 mmoles) del
alcohol anterior, 440 mg (3,18 mmoles) de K_{2}CO_{3}, y 1 gota
de TEA en 20 ml de CH_{2}Cl_{2}, se trató con 0,12 ml (1,6
mmoles) de cloruro de metanosulfonilo. La reacción se agitó durante
2 h y se lavó con H_{2}O (2 x 20 ml). La mezcla se secó sobre
K_{2}CO_{3}, se filtró, y se concentró a vacío.
Una suspensión a 0ºC de 100 mg (2,61 mmoles) de
NaH (dispersión en aceite mineral al 60% en peso) se trató con una
solución de 393 mg (2,22 mmoles) de éster metílico del ácido
4-imidazolacético y la mezcla se agitó hasta que
cesó la evolución de gas. La solución resultante se añadió mediante
cánula al mesilato que se formó en el párrafo precedente. La
reacción se agitó a 0ºC durante 1 h y a temperatura ambiente durante
3 h. La mezcla se vertió en salmuera y se separaron las dos capas.
La capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 50 ml). Las capas orgánicas
combinadas se lavaron con H_{2}O (50 ml), se secaron sobre
K_{2}CO_{3}, se filtraron y se concentraron a vacío para dar un
aceite. La purificación por cromatografía radial (SiO_{2}; MeOH en
CHCl_{3} saturado con NH_{4}OH al 5%) proporcionó 257 mg (0,43
mmoles; 41%) de la base libre del compuesto del título. Una parte
del producto se convirtió en la sal de oxalato usando un
procedimiento similar al descrito en el Ejemplo 1-D,
pero usando MeOH como disolvente.
FDMS 596 (M+1); Análisis calc. para
C_{35}H_{37}N_{3}O_{4}S.C_{2}H_{2}O_{4}.1,2 H_{2}O:
C, 62,62; H, 5,90; N, 5,94. Encontrado: C, 62,44; H, 5,58; N,
6,02.
Una parte del éster anterior (200 mg; 0,34
mmoles) se recogió en 5 ml de HCl acuoso 1 N y la solución se
calentó a 50ºC durante 5 h. La solución se liofilizó para dar 199 mg
(95%) del compuesto del título.
FDMS 583 (M+1); Análisis calc. para
C_{34}H_{35}N_{3}O_{4}S.2HCl.0,6H_{2}O: C, 61,37; H, 5,79;
N, 6,31. Encontrado: C, 61,01; H, 6,15; N, S,46.
El material de partida el
2-(4-hidroxifenil)-3-[4-[2-(1-pirrolidinil)-etoxi]bencil]benzo[b]tiofeno
se puede obtener por cualquier de los procedimientos descritos a
continuación.
El compuesto del título se preparó con 91% de
rendimiento a partir del ácido
benzo[b]tiofeno-2-borónico
y 4-bromoanisol usando un procedimiento de
acoplamiento similar al descrito a continuación en el Ejemplo
14-A.
P.f. 188-191ºC; RMN ^{1}H
(DMSO-d_{6}) \delta 7,94 (d, J = 8,0 Hz, 1H),
7,81 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,73 (m, 2H), 7,71 (s, 1H), 7,35 (m, 2H),
7,05 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 3,82 (s, 3H); FDMS 240 (M^{+}; 100);
Análisis Calc. para C_{21}H_{23}NO_{2}S: C, 71,36; H, 6,56;
N, 3,86. Encontrado: C, 71,46; H, 6,60; N, 3,86.
Por conversión del hidrocloruro del ácido
4-[2-(1-pirrolidinil)etoxi]benzoico en
el correspondiente hidrocloruro del cloruro de benzoilo usando
cloruro de tionilo y DMF catalítica en diclorometano a reflujo para
formar el cloruro de benzoilo, seguido de acilación usando
AlCl_{3} en 1,2-dicloroetano a 0ºC, se preparó el
compuesto del título a partir de
2-(4-metoxi-fenil)benzo[b]tiofeno
con 59% de rendimiento en forma de un aceite después de
cromatografía radial (SiO_{2}; gradiente de MeOH en
CH_{2}Cl_{2} 2-5%).
Por escisión del éter metílico de la
2-(4-metoxifenil)-benzo[b]tiofen-3-il
4-[2-(1-pirrolidinil)etoxi]fenil
cetona usando AlCl_{3} (aproximadamente 8 eq.) y EtSH
(aproximadamente 10 eq.) en diclorometano a 0ºC, se obtuvo el
compuesto del título con 33% de rendimiento, en forma de un aceite
después de cromatografía radial (SiO_{2}; gradiente de MeOH en
CH_{2}Cl_{2} 2-10%).
FDMS 443 (M^{+}; 100); Análisis Calc. para
C_{27}H_{25}NO_{3}S: C, 73,11; H, 5,68; N, 3,16. Encontrado:
C, 73,11; H, 5,89; N, 3,20.
Se trató una solución a 0ºC de 7,40 g (16,7
mmoles) de
2-(4-hidroxifenil)benzo[b]tiofen-3-il
4-[2-(1-pirrolidinil)etoxi]-fenil
cetona en 500 ml de THF con 67,0 ml de una solución de
DIBAL-H (1 N en tolueno; 67 mmoles). La reacción se
agitó a 0ºC durante 1 h y después se inactivó por adición cuidadosa
de 50 ml de MeOH. Se añadieron solución acuosa saturada de tartrato
sódico/potásico (200 ml) y EtOAc (200 ml) y la reacción se agitó
vigorosamente durante 1 h. Las dos capas se separaron y la capa
acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 200 ml). Las capas orgánicas
combinadas se secaron (K_{2}CO_{3}), se filtraron y concentraron
a vacío. El residuo se recogió en diclorometano (300 ml). La
solución se enfrió a 0ºC y se trató con 20,0 ml (125 ml) de
trietilsilano seguido de 13,0 ml (168 mmoles) de ácido
trifluoroacético. La reacción se agitó a 0ºC durante 1 h y se vertió
en 250 ml de solución acuosa saturada de NaHCO_{3}. Las dos capas
se separaron y la capa orgánica se secó (K_{2}CO_{3}), se filtró
y se concentraron a vacío para dar 6,53 g de una espuma. La
cromatografía ultrarrápida (SiO_{2}; THF al 25%: TEA al 5%:
hexanos al 70%) proporcionó 5,45 g (12,7 mmoles; 76%) del compuesto
del título en forma de una espuma.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6})
\delta 9,77 (s, 1H), 7,90 (d, J = 8,8 Hz, 1H),
7,93-7,87 (m, 1H), 7,32-7,24 (m,
4H), 6,97 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,86-6,75 (m, 4H),
4,13 (s, 2H), 3,97 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 2,87-2,78
(m, 2H), 2,61-2,52 (m, 4H),
1,69-1,61 (m, 4H).
Se suspendió hidruro sódico (0,69 g de NaH en
aceite mineral al 60%; 17,22 mmoles) en 15 ml de DMF seca en un
matraz secado con llama y cargado con argón. Después de agitar
durante 15 min, se añadió una solución de
4-(1-pirrolidinil)etanol. Después de agitar
durante 15 min y cuando cesó la evolución de gas, se añadió
4-fluorofenil
2-(4-metoxifenil)benzo[b]tiofen-3-il
cetona [preparada por acilación del
2-(4-metoxifenil)benzo[b]tiofeno
con cloruro de 4-fluorobenzoilo] (5,2 g; 14,34
mmoles) en 15 ml de DMF seca. La mezcla se agitó a temperatura
ambiente durante 5 h, y después se vertió en 25 ml de agua. La
extracción se llevó a cabo con EtOAc (4 x 25 ml). Los extractos
orgánicos combinados se lavaron con salmuera y se secaron pasándolos
por sulfato sódico. El compuesto del título (5,12 g; 78% de
rendimiento) se aisló en forma de un aceite incoloro por
cromatografía ultrarrápida en gel de sílice, eluyendo con un
gradiente de EtOAc
(100-85%)/Et_{3}N(0-5%)/MeOH(0-10%).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 7,85 (m, 1H),
7,76 (d, J = 6,3, 2H), 7,63 (m, 1H), 7,36 (m, 4H), 6,77 (d, J =
7,2, 4H), 4,22 (t, J = 5,3, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,04 (t, J = 5,2,
2H), 2,83 (s ancho, 4H), 1,30 (s ancho; 4H); FDMS 457 (M).
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A la cetona anterior (Parte I) (3,12 g; 11,2
mmoles) en 40,0 ml de THF se añadieron 0,42 g (11,2 mmoles) de LAH a
0ºC. El baño se quitó y la mezcla se agitó durante 1 h. La
hidrólisis se llevó a cabo por adición de 0,42 ml de agua, 0,42 ml
de NaOH 5 N, y 1,26 ml de agua, seguido de agitación durante 1 h.
Después la mezcla se filtró y lavó con THF, el filtrado se
concentró; y el carbinol intermedio se secó a vacío durante 25 min.
El carbinol se disolvió en cloruro de metileno (40,0 ml) en
atmósfera de argón y se enfrió en un baño de agua helada. Se añadió
trietilsilano (12,5 ml; 78,3 mmoles), seguido de adición gota a gota
de 8,6 ml (112,0 mmoles de TFA. Después de completar la adición de
TFA, se quitó el baño y se continuó agitando durante 2 h. Se añadió
solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (50 ml), y se llevó a
cabo la extracción con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se
lavaron con salmuera y se secaron pasándolos por sulfato sódico. El
compuesto del título (4,45 g; 90% de rendimiento) se aisló en forma
de un aceite incoloro por cromatografía ultrarrápida en gel de
sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc
(100-95%)/Et_{3}N (0-5%).
RMN ^{1}H (CDCI_{3}) \delta 7,87 (m, 1H),
7,77 (d, J = 6,4, 2H), 7,65 (m, 1H), 7,34 (m, 4H), 6,78 (d, J =
7,4, 4H), 4,20 (s, 2H), 4,15 (t, J = 5,3, 2H), 3,73 (s, 3H), 3,14
(t, J = 5,4, 2H), 2,91 (s ancho, 4H), 1,90 (s ancho, 4H); FDMS 444
(M+1).
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El éter metílico anterior (4,5 g; 10,1 mmoles)
(Parte J) se disolvió en 45 ml de diclorometano en atmósfera de
argón y se enfrió en un baño de agua helada. A éste se añadió
etanodiol (6,0 ml; 81,1 mmoles) y 5,41 g (40,6 mmoles) de cloruro de
aluminio, y la mezcla se agitó en el baño frío durante 1 h. Se
añadió solución saturada de NaHCO_{3}, y se continuó agitando
mientras se templaba a temperatura ambiente durante 1 h. El
compuesto del título (0,23 g; 74% de rendimiento) se aisló por
filtración y se lavó con agua.
RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 7,83 (m, 1H),
7,47 (m, 1H), 7,29 (m, 2H), 6,98 (d, J = 8,5, 2H), 6,83 (m, 4H),
6,69 (d, J = 8,6, 2H), 4,15 (m, 4H), 3,05 (m, 2), 2,85 (s ancho,
4H), 1,31 (s ancho, 4H); FDMS 430 (M+1).
Una mezcla de 2,0 g (4,66 mmoles) de
2-(4-hidroxifenil)-3-[4-[2-(1-pirrolidinil)etoxi]bencil]benzo[b]tiofeno
(Ejemplo 11-D), 1,47 g (5,60 mmoles) de trifenilfosfina, y 0,90 g (5,60 mmoles) de N-t-Boc-aminoetanol en 20 ml de THF, se enfrió a 5ºC y se trató con 0,88 ml (5,60 mmoles) de azodicarboxilato de dietilo. El baño de enfriamiento se quitó y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 23 horas. La mezcla se diluyó con 20 ml de solución saturada de NaCl y se separaron las capas. La capa orgánica se secó sobre K_{2}CO_{3}, se filtró y se concentró a vacío para dar 5,47 g de un aceite. La purificación por cromatografía ultrarrápida (SiO_{2}; MeOH en CHCl_{3} saturado con NH_{4}OH al 2% y después 5%) proporcionó 1,43 g (2,50 mmoles; 54%) de la base libre del compuesto del título en forma de una espuma. El producto se convirtió en la sal de oxalato de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 11-C.
(Ejemplo 11-D), 1,47 g (5,60 mmoles) de trifenilfosfina, y 0,90 g (5,60 mmoles) de N-t-Boc-aminoetanol en 20 ml de THF, se enfrió a 5ºC y se trató con 0,88 ml (5,60 mmoles) de azodicarboxilato de dietilo. El baño de enfriamiento se quitó y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 23 horas. La mezcla se diluyó con 20 ml de solución saturada de NaCl y se separaron las capas. La capa orgánica se secó sobre K_{2}CO_{3}, se filtró y se concentró a vacío para dar 5,47 g de un aceite. La purificación por cromatografía ultrarrápida (SiO_{2}; MeOH en CHCl_{3} saturado con NH_{4}OH al 2% y después 5%) proporcionó 1,43 g (2,50 mmoles; 54%) de la base libre del compuesto del título en forma de una espuma. El producto se convirtió en la sal de oxalato de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 11-C.
FDMS 487 (M+1); Análisis calc. para
C_{34}H_{38}N_{2}O_{10}S: C, 61,25; H, 5,75, N, 4,20.
Encontrado: C, 60,98; H, 5,66; N, 4,00.
Una solución de 1,20 g (2,10 mmoles) del uretano
anterior (Parte B) en 5,0 ml de anisol, se trató con 10,0 ml de TFA.
La reacción se agitó toda la noche y se concentró a vacío. El
residuo se repartió entre 50 ml de HCl acuoso 1 N y 50 ml de
hexanos. La capa acuosa se separó, se lavó con hexanos (2 x 50 ml) y
EtOAc (2 x 50 ml), y se liofilizó para dar 964 mg (1,77 mmoles; 84%)
del compuesto del título.
FDMS 487 (M+1); Análisis calc. para
C_{29}H_{32}N_{2}O_{2}S.2 HCl: C, 63,84; H, 6,28; N, 5,13.
Encontrado: C, 64,14; H, 6,33; N, 5,11.
Se disolvió el
3-[4-[2-(1-pirrolidin-1-il)etoxi]bencil]-2-[4-(2-aminoetoxi)
fenil]benzo[b]tiofeno (146 mg) en diclorometano
(7,0 ml), se trató secuencialmente con glicoxolato de etilo (65
\mul, 50% en tolueno) y triacetoxiborohidruro sódico (84 mg), y se
dejó agitar a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla de
reacción se concentró y se fraccionó por cromatografía en columna
con Et_{3}N:MeOH:EtOAc (5:10:85) seguido de NH_{4}OH:MeOH:EtOAc
(5:10:85) para dar el producto (106 mg).
FDMS m/e: Encontrado 559 (M+H^{+}); RMN ^{1}H
(CDCl_{3}): \delta 7,83 (d, 1H), 7,51 (d, 1H), 7,42 (d, 2H),
7,28 (m, 2H), 7,05 (d, 2H), 6,95 (d, 2H), 6,83 (d, 2H), 4,21 (m,
4H), 4,11 (m, 4H), 3,52 (s, 2H), 3,06 (t, 2H), 2,94 (t, 2H), 2,69
(m, 4H), 1,84 (m, 4H), 1,30 (t, 3H).
Se disolvió el
3-[4-[2-(1-Pirrolidinil)etoxi]bencil]-2-[4-[2-(2-etoxi-2-oxoetilamino)etoxi)fenil]benzo[b]tiofeno
(64 mg) en THF:MeOH:H_{2}O (3:1:1, 3 ml), se trató con
LiOH-H_{2}O (6 mg) y se dejó agitar a temperatura
ambiente durante 17 h. La mezcla de reacción se concentró a presión
reducida. La cromatografía con NH_{4}OH:MeOH:EtOAc (10:20:70)
proporcionó el compuesto del título (50 mg).
FDHS m/e: Encontrado 531 (M+H^{+}); RMN ^{1}H
(CDCl_{3}): \delta 7,72 (m, 1H), 7,44 (m, 1H), 7,29 (m, 4H),
6,93 (d, 2H), 6,84 (d, 2H), 6,70 (d, 2H), 5,80 (m ancho, 1H), 5,69
(m ancho, 1H), 4,10 (m ancho, 2H), 4,08 (s, 2H), 3,53 (m ancho, 2H),
3,24 (m ancho, 2H), 3,01 (m ancho, 2H), 2,83 (m, 4H), 1,84 (m,
4H).
Se disolvieron ácido
benzo[b]tiofen-2-il-borónico
(1,25 g) y 4-bromobencil-nitrilo
(1,51 g) en THF (25 ml), se trataron con una solución de carbonato
sódico en agua (2,0 M, 7,0 ml) y
tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0,25 g) y se dejó
agitar a reflujo en la oscuridad durante 15 h. La mezcla de reacción
enfriada se diluyó con agua (100 ml) y se extrajo con diclorometano
(100 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se secaron con sulfato
sódico y se concentraron. El sólido de color hueso se trituró con
acetato de etilo y el producto se recogió en forma de un precipitado
blanco por centrifugación (1,5 g).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 7,77 (d, 1H),
7,68 (d, 1H), 7,31 (d, 2H), 7,30 (d, 2H), 7,28 (m, 2H), 7,20 (m,
1H), 3,75 (s, 2H).
A una solución del
2-[4-(cianometil)fenil]benzo[b]tiofeno
(265 mg) y cloruro de
4-[2-(1-pirrolidinil)etoxi]benzoilo
(385 mg) en diclorometano (20 ml) a 0ºC en la oscuridad, se añadió
lentamente TiCl_{4} (1,3 ml, puro) en atmósfera de argón. La
mezcla resultante se agitó a 0ºC a temperatura ambiente durante 5,5
h antes de transferirla cuidadosamente a una solución con agitación
de solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (100 ml). Después de
agitar durante 30 min, la mezcla se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3
x 100 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron
(Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a presión reducida. La
cromatografía con Et_{3}N:EtOAc (5%) proporcionó el producto (230
mg).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 7,97(d,
1H), 7,86 (d, 2H), 7,75 (d, 1H), 7,56 (d, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,33
(d, 2H), 6,87 (d, 2H), 4,21 (t, 2H), 3,80 (s, 2H), 3,00 (t, 2H),
2,72 (m, 4H), 1,91 (m, 4H).
Se trató la
2-[4-(cianometil)fenil]benzo[b]tiofen-3-il
4-[2-(1-pirrolidinil)etoxi]fenil
cetona (158 mg) en THF (5,0 ml) con hidruro de litio y aluminio (13
mg) a 0ºC durante 2 h, y después se inactivó con agua (0,5 ml) e
hidróxido sódico (5,0 M, 0,5 ml). Se continuó agitando durante 10
min. La mezcla de reacción se diluyó con salmuera (50 ml) y se
extrajo con diclorometano (3 x 50 ml). Las capas orgánicas
combinadas se secaron con sulfato sódico y se concentraron a vacío
para dar un material amarillo de tipo espuma. Este material se
disolvió en diclorometano (5 ml), se trató con trietilsilano (0,3
ml) y ácido trifluoroacético (0,2 ml) a 0ºC durante 1,5 h, y se
concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con
diclorometano (50 ml x 3) de la solución acuosa saturada de
bicarbonato sódico (50 ml). Las capas orgánicas combinadas se
secaron con sulfato sódico y se concentraron. La cromatografía con
Et_{3}N:EtOAc (0-5%) proporcionó el producto (106
mg).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 7,93 (d, 1H),
7,60 (d, 1H), 7,58 (d, 2H), 7,42 (d, 2H), 7,34 (m, 2H), 7,09 (d,
2H), 6,86 (d, 2H), 4,24 (s, 2H), 4,15 (t, 2H), 3,83 (s, 2H), 2,97
(t, 2H), 2,67 (m, 4H), 1,85 (m, 4H).
El
2-[4-(Cianometil)fenil]-3-[4-[2-(1-pirrolidinil)etoxi]bencil]benzo-[b]tiofeno
(1,39 g) se disolvió en etanol y se calentó a 55ºC antes de
tratarlo con níquel Raney (1 ml de suspensión en agua) seguido de
adición de monohidrato de hidrazina (1,5 ml). La mezcla resultante
se dejó agitar a 55ºC durante 30 min o hasta que paró la evolución
de gas. La mezcla de reacción enfriada se filtró a través de tierra
de diatomeas, y se aclaró con metanol y diclorometano. El filtrado
se diluyó con solución saturada de bicarbonato sódico (50 ml) y se
extrajo con diclorometano (50 ml x 3). Las capas orgánicas
combinadas se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron. La
cromatografía con NH_{4}OH:MeOH:EtOAC (5:10:85) proporcionó el
producto (1,30 g).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 7,89 (d, 1H),
7,54 (d, 1H), 7,49 (d, 2H), 7,30 (m, 4H), 7,09 (d, 2H), 6,86 (d,
2H), 4,27 (s, 2H), 4,11 (t, 2H), 3,04 (t, 2H), 2,92 (t, 2H), 2,82
(m, 2H), 2,65 (m, 4H), 1,84 (m, 4H).
Se disolvió el
3-[4-[2-(1-Pirrolidinil)etoxi]bencil]-2-[4-(2-aminoetil)fenil]benzo[b]tiofeno
(165 mg) en diclorometano (4,0 ml), se trató secuencialmente con
4-metoxicarbonil-benzaldehído (59
mg) y triacetoxiborohidruro sódico (80 mg) y se dejó agitar a
temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla de reacción se concentró
y se fraccionó por cromatografía en columna con Et_{3}N:MeOH:EtOAc
(5:10:85) para proporcionar el producto (74 mg) junto con un
producto secundario el
bis(4-metoxicarbonilbencilo) (68 mg).
FDMS m/e: Encontrado 605 (M+H^{+}); RMN ^{1}H
(CDCl_{3}): \delta 8,12 (d, 2H), 7,95 (d, 1H), 7,62 (d, 1H),
7,55 (d, 2H), 7,48 (d, 2H), 7,40 (m, 4H), 7,16 (d, 2H), 6,92 (d,
2H), 4,35 (s, 2H), 4,21 (t, 2H), 4,01 (s, 3H), 3,97 (s, 2H), 3,02
(m, 6H), 2,82 (m, 4H), 1,93 (m, 4H).
Se disolvió el
3-[4-[2-(1-pirrolidinil)etoxi]bencil]-2-[4-[2-(4-metoxi-carbonilbencilamino)etil]fenil]benzo[b]tiofeno
(47 mg) en THF:MeOH:H_{2}O (3:1:1, 3 ml), se trató con
LiOH-H_{2}O (5 mg) en una porción y se dejó agitar
a temperatura ambiente durante 62 h. La mezcla de reacción se
concentró a presión reducida. La cromatografía con
NH_{4}OH:MeOH:EtOAc (5:10:85) proporcionó el compuesto del título
(32 mg).
FDMS m/e: Encontrado 591 (M+H^{+}); RMN ^{1}H
(CDCl_{3}): \delta 8,02 (d, 2H), 7,96 (d, 1H), 7,62 (d, 1H),
7,52 (d, 2H), 7,40 (m, 4H), 7,28 (d, 2H), 7,16 (d, 2H), 6,85 (d,
2H), 4,37 (m, 2H), 4,30 (s, 2H), 4,01 (s, 2H), 3,30 (m, 2H), 3,20
(m, 4H), 3,03 (m, 4H), 2,03 (m, 4H).
Se disolvió el
3-[4-[2-(1-pirrolidin-1-il)etoxi]bencil]-2-[4-(2-aminoetil)fenil]benzo[b]tiofeno
(140 mg) en diclorometano (7,0 ml), se trató secuencialmente con
una solución de glioxalato de etilo en tolueno (al 50%, 63 \mul) y
triacetoxi-borohidruro sódico (84 mg), y se dejó
agitar a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla de reacción se
concentró y fraccionó por cromatografía en columna con
Et_{3}N:MeOH:EtOAc (5:5:90) para dar el producto (52 mg).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}): \delta 7,85 (d, 1H),
7,50 (d, 1H), 7,46 (d, 2H), 7,28 (m, 4H), 7,06 (d, 2H), 6,83 (d,
2H), 4,24 (s, 2H), 4,19 (c, 2H), 4,10 (t, 2H), 3,45 (s, 2H), 2,93
(m, 4H), 2,67 (m, 4H), 1,83 (m, 4H), 1,28 (t, 3H).
Se disolvió el
3-[4-[2-(1-Pirrolidin1-il)etoxi]bencil]-2-[4-(2-aminoetil)fenil]benzo[b]tiofeno
(210 mg) en THF:
MeOH (5:1, 6,0 ml), se trató secuencialmente con ácido glioxálico (50 mg) y triacetoxi-borohidruro sódico (150 mg), y se dejó agitar a temperatura ambiente durante 5 h. La mezcla de reacción se concentró y fraccionó por cromatografía en columna con NH_{4}OH:MeOH:EtOAc (5:10:85) para proporcionar el producto (97 mg).
MeOH (5:1, 6,0 ml), se trató secuencialmente con ácido glioxálico (50 mg) y triacetoxi-borohidruro sódico (150 mg), y se dejó agitar a temperatura ambiente durante 5 h. La mezcla de reacción se concentró y fraccionó por cromatografía en columna con NH_{4}OH:MeOH:EtOAc (5:10:85) para proporcionar el producto (97 mg).
FDMS m/e: Encontrado 515 (M+H^{+}); RMN ^{1}H
(CDCl_{3}): \delta 7,80 (d, 1H), 7,57 (d, 1H), 7,42 (d, 2H),
7,40 (m, 2H), 7,24 (d, 2H), 7,02 (d, 2H), 6,80 (d, 2H), 4,20 (m,
4H), 3,64 (s ancho, 2H), 3,21 (m, 2H), 3,08 (m, 4H), 2,93 (m, 4H),
1,95 (m, 4H).
Al
2-(4-hidroxifenil)-3-[4-[2-(1-pirrolidinil)-etoxi]bencil]benzo[b]tiofeno
(15 mg, 0,116 mmoles) en THF (0,5 ml) se añadió hexametildisilizano
potásico (KHMDS) (0,5 M en tolueno, 0,255 ml, 0,128 mmoles) y la
mezcla se agitó en atmósfera de N_{2} durante 30 minutos. Se
añadió N-(3-bromopropil)ftalimida (310 mg,
0,116 mmoles) en THF (0,5 ml) y una cantidad catalítica de
Bu_{4}NI a la solución de fenóxido y se calentó a reflujo durante
5 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se diluyó
25 veces con EtOAc, los compuestos orgánicos se lavaron con solución
saturada de NaHCO_{3} (acuoso) y H_{2}O y se concentraron a
presión reducida. El material se purificó por cromatografía
ultrarrápida (SiO_{2}, MeOH en CHCl_{3} al 10%) dando el
compuesto del título con 71% de rendimiento.
RMN ^{1}H (CDCI_{3}) \delta
7,83-7,88 (m, 3H), 7,71-7,75 (m,
2H), 7,50 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 8,5 Hz, 2H),
7,29-7,34 (m, 2H), 7,05 (d, J = 8,2 Hz, 2H),
6,79-6,88 (m, 4H), 4,34 (t, J = 4,1 Hz, 2H), 4,21
(s, 2H), 4,08 (t, J = 3,7, 2H), 3,94 (t, J = 3,0 Hz, 2H), 3,24 (t,
J = 4,0 Hz, 2H), 3,12 (s, 4H), 2,03-2,24 (m, 2H),
2,02 (s, 4H); FDMS 616,3.
A la ftalimida nombrada antes (0,338 g, 0,548
mmoles) en EtOH (3 ml), se añadió H_{2}NNH_{2}.H_{2}O (al 85%,
0,172 ml, 5,48 mmoles) y la mezcla se calentó a 65ºC durante 1 h.
Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se concentró a
presión reducida y el residuo resultante se recogió en EtOAc. Los
compuestos orgánicos se lavaron con solución acuosa saturada de
NaHCO_{3} y H_{2}O y se volvieron a concentrar. El material se
purificó por cromatografía ultrarrápida (SiO_{2}, MeOH en
CHCl_{3} al 10% con Et_{3}N añadida al 1% en vol/vol) para dar
el compuesto del título con 73% de rendimiento.
RMN ^{1}H (CDCI_{3}) \delta 7,82 (d, J =
8,4 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 6,3 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 8,6 Hz, 2H),
7,28 (m, 2H), 7,03 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,91 (d, J = 8,6 Hz, 2H),
6,81 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 4,19 (s, 2H), 4,10 (m, 4H), 3,02 (s, 2H),
2,90 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 2,65 (s, 4H), 2,04 (m, 2H), 1,82 (s, 4H);
FDMS 487 (M+1).
A la amina anterior (31 mg, 0,064 mmoles) se
añadió
N-Boc-L-Asp-\alpha-O-t-Bu
(18 mg, 0,064 mmoles), hidrocloruro de
1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
(25 mg, 0,128 mmoles), una cantidad catalítica de
4-dimetilaminopiridina, y CH_{2}Cl_{2} (0,5
ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos y
después se diluyó 50 veces con EtOAc. Los compuestos orgánicos se
lavaron con solución acuosa saturada de NaHCO_{3}, H_{2}O,
salmuera, y se concentraron a presión reducida. El material se
purificó por cromatografía ultrarrápida (SiO_{2}, MeOH en
CHCl_{3} al 10%) para dar el compuesto del título con 94% de
rendimiento.
RMN ^{1}H (CDCI_{3}) \delta 7,86 (d, J =
6,2 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 7,44 (d, J = 8,6 Hz, 2H),
7,33 (m, 2H), 7,07 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,95 (d, J = 8,6 Hz, 2H),
6,84 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 4,42 (m, 1H), 4,22 (m, 4H), 4,08 (t, J =
5,8 Hz, 2H), 3,49 (c, J = 4,4, 12,5 Hz, 2H), 3,08 (t, J = 4,6 Hz,
2H), 2,73-2,88 (m, 6H), 2,05 (m, 2H), 1,94 (s, 4H),
1,49 (s, 9H), 1,46 (s, 9H); FDMS 758,9 (M + 1).
Al carbamato anterior (38 mg, 0,050 mmoles) se
añadió TFA (2 ml) y la solución se dejó reposar durante 1 h a
temperatura ambiente. Después de concentrar a presión reducida, el
residuo resultante se trituró con Et_{2}O y el sólido de color
hueso se recogió y secó a vacío para dar el compuesto del título con
96% de rendimiento.
RMN ^{1}H (CD_{3}OD) \delta 7,83 (d, J =
7,2 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 7,42 (d, J = 8,7 Hz, 2H),
7,26 (m, 2H), 7,07 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 6,98 (d, J = 8,7 Hz, 2H),
6,89 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 4,25 (m, 5H), 4,06 (t, J = 6,0 Hz, 2H),
3,61 (s ancho, 2H), 3,46 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 3,39 (t, J = 6,9 Hz,
2H), 3,19 (s ancho, 2H), 2,88 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 2,01 (m, 6H); FAB
MS 602,4 (M + 1).
La anilina (54 mg, 0,101 mmoles) [descrita a
continuación en la parte D], éster
\alpha-terc-butílico del ácido
N-terc-butiloxicarbonil-L-aspártico
(29 mg, 0,101 mmol, 1,0 eq,), hidrocloruro de
1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
(39 mg, 0,202 mmoles, 2,0 eq.) y una cantidad catalítica de
4-dimetilaminopiridina, se pusieron en un matraz con
forma de pera, y después se añadió sólo la cantidad suficiente de
diclorometano seco (aproximadamente 1 ml) para permitir la
agitación. Después de 18 h, la mezcla de reacción se diluyó 50 veces
con acetato de etilo y después se repartió con solución acuosa
saturada de bicarbonato sódico (50 ml). Las capas se separaron,
después la capa de acetato de etilo se lavó con agua (25 ml) y
después salmuera (25 ml). El sólido bruto se purificó por
cromatografía ultrarrápida (sílice, metanol/cloroformo al 5%) para
dar 77 mg (95%) del producto deseado en forma de una espuma amarillo
pálido.
FDMS (metanol): m/z = 806; Análisis calculado
para C_{47}H_{55}N_{3}O_{7}S.3/2H_{2}O: C, 67,76; H, 6,90;
N, 5,04. Encontrado: C, 67,74; H, 6,94; N, 5,24.
A una solución del compuesto de la parte A
anterior (121 mg, 0,150 mmoles) en THF (1 ml) se añadió una solución
acuosa de formiato amónico (0,2 ml al 25% peso/vol) y Pd sobre
carbón al 5% (121 mg, 1,0 eq. en peso). La mezcla de reacción se
agitó vigorosamente a temperatura ambiente hasta que el material de
partida se había consumido como indicaba la tlc (CHCl_{3}:MeOH:TEA
9:1:0,1), y después la mezcla de reacción se filtró por una
almohadilla de tierra de diatomeas con THF (10 ml). Los disolventes
se separaron a presión reducida y el residuo bruto se trató con TFA
puro (1 ml) a temperatura ambiente durante 1 h. El disolvente se
separó a presión reducida y después el residuo se purificó por HPLC
preparativa en una columna de fase inversa C_{18}
(VYDAC-C_{18}), eluyendo en 2,5 h con un gradiente
de (HCl acuoso al 0,1%):acetonitrilo de 98:2 a 50:50 para dar el
compuesto del título en forma de su dihidrocloruro.
FDMS (MeOH)m/z = 561.
La anilina, material de partida para la etapa A
anterior, se preparó por procedimientos similares a los
siguientes:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se pusieron virutas de magnesio (0,25 g) en un
matraz de fondo redondo de dos bocas, de 100 ml, equipado con un
refrigerante de reflujo y una barra agitadora magnética. El aparato
entero se secó con llama y se dejó enfriar a temperatura ambiente.
Después se introdujeron THF seco (17 ml) y un pequeño cristal de
yodo seguido de la adición lenta de
4-bromo-N,N-bis(trimetilsilil)anilina
(3,36 g) mientras se agitaba a temperatura ambiente. La mezcla de
reacción se calentó a reflujo suave durante 1,5 h o hasta que las
virutas de magnesio se consumieron completamente para dar una
solución 0,5 M del reactivo de Grignard. Esta solución de Grignard
recién preparada (15 ml) se añadió lentamente a una solución con
agitación de la
6-benciloxi-2-(dimetilamino)-benzo[b]tiofen-3-il
3-metoxi-4-[(1-pirrolidinil)metil]fenil
cetona (véase los Ejemplos 1 y 5, 2,48 g, 5,0 mmoles) en THF (15,0
ml) a 0ºC en atmósfera de argón. La mezcla se agitó a 0ºC durante 3
h antes de inactivarla con solución acuosa saturada de NH_{4}Cl
(50 ml) y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (50 ml x 3). Las capas
orgánicas combinadas se secaron con sulfato sódico y se concentraron
a presión reducida. La cromatografía con
EtOAc-hexano (elución con gradiente
0-100%) proporcionó el compuesto del título
(0,73 g).
(0,73 g).
FDMS m/e: Encontrado 693 (M^{+}); RMN ^{1}H
(CDCl_{3}): \delta 7,74 (d, 1H), 7,55-7,35 (m,
7H), 7,28 (d, 2H), 7,22 (d, 1H), 7,20 (d, 1H), 7,10 (d, 1H), 6,68
(d, 2H), 5,17 (s, 2H), 3,76 (s, 3H), 3,55 (s, 2H), 2,51 (m, 4H),
1,78 (m, 4H), 0,00 (s, 18H).
La
6-Benciloxi-2-[4-[bis(trimetilsilil)amino]fenil]-benzo[b]tiofen-3-il
3-metoxi-4-[(1-pirrolidinil)metil]-fenil
cetona (0,73 g) se disolvió en THF (10 ml), se enfrió a 0ºC en un
baño de hielo antes de tratarla con hidruro de litio y aluminio (110
mg) a 0ºC durante 1 h, después se inactivó con agua (1 ml) e
hidróxido sódico (1,0 M, 1 ml). La agitación se continuó durante 30
min. La mezcla de reacción se diluyó con salmuera (30 ml) y se
extrajo con diclorometano (20 ml x 3). Las capas orgánicas
combinadas se secaron con sulfato sódico y se concentraron a vacío
para dar el alcohol bruto. Este material se disolvió en
diclorometano (15 ml), se trató secuencialmente con trietilsilano
(1,5 ml) y ácido trifluoroacético (1,5 ml), se dejó agitar a
temperatura ambiente durante 1,5 h, y se concentró a presión
reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (20 ml x 3) de la
solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (30 ml). Las capas
orgánicas combinadas se secaron con sulfato sódico y se
concentraron. La cromatografía con Et_{3}N:MeOH:EtOAc (5:5:90)
proporcionó el compuesto del título en forma de una espuma amarilla
(0,53 g).
FDMS m/e: Encontrado 535 (M+H^{+}); RMN ^{1}H
(CDCl_{3}): \delta 7,60-7,45 (m, 7H), 7,30 (d,
2H), 6,98 (d, 1H), 6,70 (m, 4H), 5,13 (s,2H), 4,21 (s, 2H), 3,78 (s,
2H), 3,70 (s, 3H), 3,62 (s, 2H), 2,56 (m, 4H), 1,78 (m, 4H).
A una solución de la anilina (Ejemplo 19, Parte
D, 56 mg, 0,105 mmoles) en CH_{2}Cl_{2} (1 ml) se añadió éster
\alpha-t-butílico del ácido
N-Boc-L-glutámico
(31 mg, 0,105 mmoles), hidrocloruro de
1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
(40 mg, 0,210 mmoles), y una cantidad catalítica de
4-dimetilaminopiridina. La mezcla se agitó a
temperatura ambiente durante 45 minutos y después se diluyó 100
veces con EtOAc. Los compuestos orgánicos se lavaron con H_{2}O,
solución saturada de NaHCO_{3}, salmuera, y se concentraron a
vacío. El residuo bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida
(SiO_{2}, MeOH en CHCl_{3} al 10%), dando 77 mg (90%) del
producto deseado.
RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 9,21 (s, 1H),
7,66 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,37 (m, 10H), 6,99 (dd, J = 8,8, 2,0 Hz,
1H), 6,73 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,65 (s, 1H), 5,41 (d, J = 7,9 Hz,
1H), 5,12 (s, 2H), 4,21 (s, 2H), 3,96 (s, 2H), 3,70 (s, 3H) , 2,96
(s ancho, 4H), 2,46 (t, J = 6,1 Hz, 2H), 2,23 (m, 1H), 1,94 (s
ancho, 4H), 1,89 (m, 1H,), 1,46 (s, 9H), 1,45 (s, 9H); EIMS
820,4.
A 70 mg (0,085 mmoles) del éter bencílico
anterior en MeOH (3 ml) se añadió NH_{4}CO_{2}H (53 mg, 0,850
mmoles), Pd/C al 10% (70 mg), y la mezcla se calentó a reflujo
durante 25 minutos. La solución se dejó enfriar a temperatura
ambiente y el catalizador se separó por filtración por una
almohadilla de tierra de diatomeas. El filtrado se concentró a
vacío, y el residuo resultante se repartió entre EtOAc y solución
saturada de NaHCO_{3}. La capa orgánica después se lavó con
H_{2}O, salmuera, y se concentró a vacío. El residuo resultante se
recogió con TFA, se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, y
después se concentró a vacío. Después de triturar con Et_{2}O, la
sal de TFA se convirtió en la sal de HCl por disolución en HCl 0,1
N, congelación y liofilización para proporcionar el producto del
título en forma de su dihidrocloruro.
RMN ^{1}H (CD_{3}OD) \delta 7,63 (d, J =
8,4 Hz, 2H), 7,39 (m, 3H), 7,26 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,19 (d, J =
2,0 Hz, 1H), 6,85 (s, 1H), 6,76 (m, 2H), 4,27 (s, 2H), 4,25 (s, 2H),
4,09 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,44 (m, 2H), 3,16 (m, 3H),
2,70 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 2,26 (t, 2H), 2,09 (m, 2H), 2,00 (m, 2H);
FAB MS 574,1 (M+1).
Claims (17)
1. Un compuesto de fórmula I (o una de sus sales
farmacéuticamente aceptable)
en la
que
A es carbonilo o metileno;
D es CH, CR^{d} o N en el que R^{d} es metilo
o metoxi;
E es CH, CR^{e} o N en el que R^{e} es
metilo, metoxi o halógeno;
R^{2} y R^{3} se definen juntos tal que
A. R^{2} es
-X^{2}-(CH_{2})_{m}-NR^{a}R^{b} en
el que X^{2} es un enlace directo, metileno u O; m es 1, 2, 3, 4
ó 5; con la condición de que cuando m es 1, entonces X^{2} es un
enlace directo; y R^{a} y R^{b} son independientemente hidrógeno
o alquilo (C1-3) o el grupo NR^{a}R^{b} es
pirrolidino, piperidino, o morfolino; y
R^{3} es -CH_{2}-R^{c}, en
el que R^{c} es
2-carboxipirrolidin-1-ilo
o
2-[alcoxi(C1-4)]carbonil]pirrolidin-1-ilo;
o
B. R^{2} es
-X^{2}-(CH_{2})_{n}-R^{f} en el que
X^{2} es un enlace directo, metileno u O; n es 1, 2 ó 3; con la
condición de que cuando n es 1, entonces X^{2} es un enlace
directo; y R^{f} es
2-carboxipirrolidin-1-ilo,
2-[alcoxi(C1-4)]carbonil]pirrolidin-1-ilo,
(carboximetil)amino,
[[alcoxi(C1-4)]carbonilmetil]amino,
4-carboximetilimidazol-1-ilo,
4-[[alcoxi(C1-4)carbonilmetil]imidazol-1-ilo,
(4-carboxibencil)amino,
[4-[[alcoxi(C1-4)]lcarbonil]bencil]amino,
(3-amino-1,4-dioxo-4-hidroxibutil)amino
o
[3-amino-1,4-dioxo-4-[alcoxi(C1-4)]-butil]amino;
o R^{2} es
-X^{2}-CH_{2})_{n}-R^{f}
en el que X^{2} es un enlace directo; n es 0; y R^{f}es
(3-amino-1,4-dioxo-4-hidroxibutil)-amino,
[3-amino-1,4-dioxo-4-[alcoxi(C1-4)]butil]amino,
(4-amino-1,5-dioxo-5-hidroxipentil]amino
o
[4-amino-1,5-dioxo-5-[alcoxi(C1-4)]butil]amino;
R^{3} es
-X^{3}-(CH_{2})_{s}-NR^{s}R^{t} en
el que X^{3} es un enlace directo, metileno u O; s es 1 ó 2; con
la condición de que cuando s es 1, entonces X^{3} es un enlace
directo; y R^{s} y R^{t} son independientemente hidrógeno o
alquilo (C1-3) o el grupo NR^{s}R^{t} es
pirrolidino, piperidino o morfolino; y
R^{6} es hidrógeno, hidroxi o metoxi.
2. El compuesto de fórmula I (o una de sus sales
farmacéuticamente aceptable) de acuerdo con la reivindicación 1, en
el que
R^{2} y R^{3} se definen juntos tal que
A. R^{2} es
-X^{2}-(CH_{2})_{m}-NR^{a}R^{b} en
el que X^{2} es un enlace directo, metileno u O; m es 1, 2, 3, 4
ó 5; con la condición de que cuando m es 1, entonces X^{2} es un
enlace directo; y R^{a} y R^{b} son independientemente hidrógeno
o alquilo (C1-3) o el grupo NR^{a}R^{b} es
pirrolidino, piperidino, o morfolino; y
R^{3} es -CH_{2}-R^{c}, en
el que R^{c} es
2-carboxipirrolidin-1-ilo
o
2-[alcoxi(C1-4)]carbonil]pirrolidin-1-ilo;
o
B. R^{2} es
-X^{2}-(CH_{2})_{n}-R^{f} en el que
X^{2} es un enlace directo, metileno u O; n es 1 ó 2; con la
condición de que cuando n es 1, entonces X^{2} es un enlace
directo; y R^{f} es
2-carboxipirrolidin-1-ilo,
2-[alcoxi(C1-4)]carbonil]pirrolidin-1-ilo,
(carboximetil)amino,
[[alcoxi(C1-4)]carbonilmetil]amino,
4-carboximetilimidazol-1-ilo,
4-[[alcoxi(C1-4)carbonilmetil]imidazol-1-ilo,
(4-carboxibencil)amino,
[4-[[alcoxi(C1-4)]lcarbonil]bencil]amino,
(3-amino-1,4-dioxo-4-hidroxibutil)amino
o
[3-amino-1,4-dioxo-4-[alcoxi(C1-4)]-butil]amino.
3. El compuesto (o su sal) de acuerdo con la
reivindicación 1 ó 2, en el que D es CH.
\newpage
4. El compuesto (o su sal) de acuerdo con una
cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que E
es CH o CR^{e} en el que R^{e} es metilo o metoxi.
5. El compuesto (o su sal) de acuerdo con una
cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que
R^{2} es
-X^{2}-(CH_{2})_{m}-NR^{a}R^{b} en
el que X^{2} es un enlace directo u O; m es 2; y el grupo
NR^{a}R^{b} es pirrolidino; y R^{3} es
-CH_{2}-R^{c}, en el que R^{c} es
2-carboxipirrolidin-1-ilo.
6. El compuesto (o su sal) de acuerdo con una
cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que
R^{2} es -X^{2}-(CH_{2})_{n}-R^{f}
en el que X^{2} es un enlace directo u O; n es 2; y R^{f} es
2-carboxipirrolidin-1-ilo
o
2-[alcoxi(C1-4)]carbonil]pirrolidin-1-ilo;
y R^{3} es pirrolidinometilo, morfolinometilo o
2-pirrolidinoetoxi.
7. El compuesto (o su sal) de acuerdo con una
cualquiera de las reivindicaciones 1, 3 y 4, en el que R^{2} es
-X^{2}-(CH_{2})
\hbox{ _{n} } -R^{f} en el que
X^{2} es un enlace directo; n es 0; y R^{f} es
(3-amino-1,4-dioxo-4-hidroxibutil)amino
o
(4-amino-1,5-dioxo-5-hidroxipentil)amino;
y R^{3} es pirrolidinometilo, morfolinometilo o
2-pirrolidinoetoxi.8. El compuesto (o su sal) de acuerdo con una
cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que
R^{6} es hidroxi.
9. El compuesto (o su sal) de acuerdo con una
cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en el que A
es metileno.
10. El compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, seleccionado de
(a)
6-hidroxi-2-[4-[2-[2-(S)-(carboxi)pirrolidin-1-il]etoxi]fenil]benzo[b]tiofen-3-il
3-metoxi-4-[(4-morfolinil)metil]fenil
cetona,
(b)
2-[4-[2-[2-(S)-(t-butoxicarbonil)pirrolidin-1-il]etoxi]fenil]-6-hidroxi-3-[3-metoxi-4-[(4-morfolinil)metil]bencil]benzo[b]tiofeno,
y
(c)
6-hidroxi-3-[4-[[2-(S)-(hidroxicarbonil)pirrolidin-1-il]metil]-3-(metil)bencil]-2-[4-[2-(1-pirrolidinil)etoxi]fe-
nil]benzo[b]tiofeno;
nil]benzo[b]tiofeno;
o una de sus sales farmacéuticamente
aceptable.
11. El compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, seleccionado de
(i)
(S)-2-[4-(3-amino-1,4-dioxo-4-hidroxibutil-amino)fenil]-6-hidroxi-3-[3-metoxi-4-[(1-pirrolidinil)metil]bencil]benzo[b]tiofeno
y
(ii)
(S)-2-[5-(4-amino-1,5-dioxo-5-hidroxipentil-amino)fenil]-6-hidroxi-3-[3-metoxi-4-[(1-pirrolidinil)metil]bencil]benzo[b]tiofeno.
o una de sus sales farmacéuticamente
aceptable.
12. El compuesto (o su sal) de acuerdo con una
cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en el que
halógeno es flúor, cloro, bromo o yodo, y un grupo alcoxi
(C1-4) es metoxi, etoxi, isopropoxi o
t-butoxi.
13. La sal de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones 1-12, que es una sal de adición de
ácido preparada con un ácido que proporciona un anión
farmacéuticamente aceptable.
14. Una formulación farmacéutica que comprende,
en asociación con un vehículo, diluyente o excipiente
farmacéuticamente aceptable, un compuesto de fórmula I (o una de sus
sales farmacéuticamente aceptable) según una cualquiera de las
reivindicaciones 1-13.
15. Un compuesto de fórmula I (o una de sus sales
farmacéuticamente aceptable) de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones 1-13 para su uso como un agente
antitrombótico.
16. Un procedimiento para preparar un nuevo
compuesto de fórmula I (o una de sus sales farmacéuticamente
aceptable) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones
1-13, que se selecciona de
(a) para un compuesto de fórmula I, en la que
R^{c} es
2-[[alcoxi(C1-4)]carbonil]pirrolidin-1-ilo,
alquilar la
2-[[alcoxi(C1-4)]carbonil]pirrolidina,
usando un compuesto correspondiente a un compuesto de fórmula I,
pero en el que R^{c} es un grupo saliente;
(b) para un compuesto de fórmula I en la que
R^{2} es -X^{2}-(CH_{2})_{n}-R^{f}
en el que n no es 0, y el átomo que une R^{f} a
-X^{2}-(CH_{2})_{n}- es un nitrógeno básico, alquilar
la correspondiente amina de fórmula H-R^{f} usando
un compuesto correspondiente a un compuesto de fórmula I en la que
R^{f} es un grupo saliente;
(c) para un compuesto de fórmula I en la que
R^{2} es -X^{2}-(CH_{2})_{n}-R^{f}
en el que n no es 0 y el átomo que une R^{f} a
-X^{2}-(CH_{2})_{n}- es un grupo imino básico unido a
un grupo metileno (-NH-CH_{2}-), alquilación
reductora de un compuesto correspondiente a un compuesto de fórmula
I, pero en la que R^{f} es un grupo amino, usando el aldehído
requerido;
(d) para un compuesto de fórmula I en la que
R^{2} es -X^{2}-(CH_{2})_{n}-R^{f}
en el que n no es 0 y el átomo que une R^{f} a
-X^{2}-(CH_{2})_{n}- es un nitrógeno de amida, acilar
un compuesto correspondiente a un compuesto de fórmula I pero en la
que R^{f} es un grupo amino, usando el ácido requerido o uno de
sus derivados activados;
(e) para un compuesto de fórmula I en la que
R^{2} es -X^{2}-(CH_{2})_{n}-R^{f}
en el que n es 0, acilar un compuesto correspondiente a un compuesto
de fórmula I pero en la que R^{2} es un grupo amino, usando el
ácido requerido o uno de sus derivados activados;
(f) para un compuesto de fórmula I en el que
R^{2} o R^{3} contiene un grupo carboxi, descomponer el éster de
un compuesto de fórmula I correspondiente, en la que R^{2} o
R^{3} contienen un grupo
[alcoxi(C1-4)]carbonilo;
(g) para un compuesto de fórmula I en la que A es
metileno, eliminación reductora del grupo hidroxi del
correspondiente alcohol de fórmula II;
y después, para cualquiera de los
procedimientos anteriores, cuando se protege un grupo funcional
usando un grupo protector, eliminar el grupo
protector;
y después, para cualquiera de los procedimientos
anteriores, cuando se requiere una sal farmacéuticamente aceptable
de un compuesto de fórmula I, se puede obtener haciendo reaccionar
la forma básica de dicho compuesto de fórmula I con un ácido,
proporcionando un contraión fisiológicamente aceptable, o por
cualquier otro procedimiento convencional;
y en el que, salvo lo descrito en contra, A, D,
E, R^{2}, R^{3} y R^{6} tienen los valores descritos en
cualquiera de las reivindicaciones 1-13.
17. El uso de un compuesto de fórmula I (o una de
sus sales farmacéuticamente aceptable) de acuerdo con una cualquiera
de las reivindicaciones 1-13 para fabricar un
medicamento para el tratamiento de un trastorno tromboembólico.
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