ES2210747T3 - Agentes antitromboticos. - Google Patents
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Abstract
Un compuesto de fórmula I (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) en la que E es CH o CReen la que Re es metilo, metoxi o halo; R denota 0, 1 ó 2 sustituyentes sobre el anillo benzo independientemente seleccionados de entre halo, metilo, etilo, hidroxi, metoxi, carbamoílo, aminometilo e hidroximetilo; R1 es R1a, R1b, o R1c en los que R1a es -CH2-Rr, en el que Rr es 5-tetrazolilo, 2-carboxipirrolidin-1-ilo o 2-[[alcoxi(C1-4)]carbonil]pirrolidin-1-ilo; 2-carboxi-5-oxopirrolidin-1-ilo o 2-[[alcoxi(C1-4)]carbonil]-5-oxopirrolidin-1-ilo; R1b es -X1-(CH2)s-NRsRt en el que X1 es un enlace directo, metileno u O; s es 1 ó 2; con la condición de que cuando s es 1, entonces X1 es un enlace directo, y con la condición adicional de que la cadena -(CH2)s- puede soportar uno o o dos sustituyentes metilo o etilo o puede ser parte de un trans-1, 2-ciclohexanodiílo; y Rs y Rt son independientemente hidrógeno o alquilo (C1-3) o el grupo NRsRt es pirrolidino, piperidino, morfolino, 1-imidazolilo, 1-pirazolilo, 1, 2, 4triazol-1-ilo, o bencilamino; y R1c es -X1-(CH2)s-NRsRt en el que X1 es un enlace directo, metileno u O; s es 1 ó 2; con la condición de que cuando s es 1, entonces X1 es un enlace directo, y con la condición adicional de que la cadena -(CH2)s- puede soportar uno o o dossustituyentes metilo o etilo o puede ser parte de un trans-1, 2-ciclohexanodiílo; y el grupo NRsRt es 2-oxopirrolidin1-ilo, 2, 5-dioxopirrolidin-1-ilo, 2-oxooxazolidin-3-ilo, 2-oxoimidazolidin-1-ilo, 3-metil-2-oxoimidazolidin-1-ilo, 2oxopirrolidin-3-ilo, 1-metil-2-oxopirrolidin-3-ilo, 1-tetrazolilo, metilsulfonilamino o fenilsulfonilamino; y R2 es R2a, R2b, o R2c.
Description
Agentes antitrombóticos.
Esta invención se refiere a inhibidores de
trombina que son anticoagulantes útiles en mamíferos. En particular,
esta invención se refiere a derivados heterocíclicos que presentan
una alta actividad anticoagulante y actividad antitrombótica. De
esta forma, esta invención se refiere a nuevos inhibidores de
trombina, composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos
como ingredientes activos, y el uso de los compuestos para la
fabricación de anticoagulantes para la profilaxis y el tratamiento
de trastornos tromboembólicos tales como trombosis venosa, embolia
pulmonar, trombosis arterial, en particular isquemia de miocardio,
infarto de miocardio y trombosis cerebral, estados generales
hipercoagulables y estados locales hipercoagulables, tales como
después de una angioplastia y operaciones de bypass coronario, y
lesión de tejido generalizada relacionada con el proceso
inflamatorio. Además, los agentes antitrombóticos son útiles como
anticoagulantes en aplicaciones in vitro.
El proceso de coagulación de la sangre,
trombosis, se desencadena mediante una compleja cascada proteolítica
que conduce a la formación de trombina. La trombina retira
proteolíticamente los péptidos de activación de las cadenas
A\alpha y B\beta del fibrinógeno, que es soluble en el plasma
sanguíneo, iniciando la formación de fibrina insoluble.
La anticoagulación actualmente se consigue
mediante la administración de heparinas y cumarinas. El control
farmacológico parenteral de la coagulación y la trombosis se basa en
la inhibición de la trombina a través del uso de heparinas.
Las heparinas actúan indirectamente sobre la
trombina acelerando el efecto inhibidor de la antitrombina III
endógena (el principal inhibidor fisiológico de la trombina). Las
heparinas pueden ser un tratamiento ineficaz debido a que los
niveles de antitrombina III varían en el plasma y porque la trombina
unida a coágulo parece ser resistente a este mecanismo indirecto.
Los niveles de heparina deben controlarse con ensayos de coagulación
(particularmente el ensayo de tiempo de tromboplastina parcial
activada (APTT)) ya que se cree que los ensayos de coagulación están
asociados con la eficacia y con la seguridad. Las cumarinas impiden
la generación de trombina bloqueando la
gamma-carboxilación postraduccional en la síntesis
de protrombina y otras proteínas de este tipo. Por su mecanismo de
acción, el efecto de las cumarinas sólo se puede desarrollar
lentamente, 6-24 horas después de la administración.
Además, no son anticoagulantes selectivos. Las cumarinas requieren
también un control con ensayos de coagulación (particularmente el
ensayo de tiempo de protrombina (abreviadamente en inglés PT)).
Recientemente, ha crecido el interés en moléculas
sintéticas pequeñas que demuestran una potente inhibición directa de
trombina. Véase, por ejemplo, Robert M. Scarborough, Annual
Reports in Medicinal Chemistry, (1995), 30,
71-80.
Aunque las heparinas y cumarinas son
anticoagulantes eficaces, no han aparecido todavía fármacos
comerciales a partir de moléculas sintéticas pequeñas; y a pesar de
la promesa constante de esta clase de compuestos, existe todavía la
necesidad de anticoagulantes que actúen selectivamente sobre la
trombina, y que, independientemente de la antitrombina III, ejerzan
acción inhibidora poco tiempo después de su administración,
preferiblemente mediante vía oral, y no interfieran con la lisis de
coágulos de sangre, que se requiere para mantener la hemostasis.
La presente invención se refiere al
descubrimiento de que los compuestos de la presente invención, tal
como se define más adelante, son inhibidores potentes de trombina
que pueden presentar una alta biodisponibilidad y farmacocinéticas
favorables después de su administración oral.
De acuerdo con la invención se proporciona un
compuesto de fórmula I (o una sal farmacéuticamente aceptable del
mismo) para uso en la inhibición de la trombina.
En la que
E es CH o CR^{e} en la que R^{e} es metilo,
metoxi o halo;
R denota 0, 1 ó 2 sustituyentes sobre el anillo
benzo independientemente seleccionados de entre halo, metilo, etilo,
hidroxi, metoxi, carbamoílo, aminometilo e hidroximetilo;
R^{1} es R^{1a}, R^{1b}, o R^{1c} en los
que
R^{1a} es -CH_{2}-R^{r}, en
el que R^{r} es 5-tetrazolilo,
2-carboxipirrolidin-1-ilo
o
2-[[alcoxi(C1-4)]carbonil]pirrolidin-1-ilo;
2-carboxi-5-oxopirrolidin-1-ilo
o
2-[[alcoxi(C1-4)]carbonil]-5-oxopirrolidin-1-ilo;
R^{1b} es
-X^{1}-(CH_{2})_{s}-NR^{s}R^{t} en
el que X^{1} es un enlace directo, metileno u O; s es 1 ó 2; con
la condición de que cuando s es 1, entonces X^{1} es un enlace
directo, y con la condición adicional de que la cadena
-(CH_{2})_{s}- puede soportar uno o dos sustituyentes
metilo o etilo o puede ser parte de un
trans-1,2-ciclohexanodiílo; y R^{s} y
R^{t} son independientemente hidrógeno o alquilo
(C1-3) o el grupo NR^{s}R^{t} es pirrolidino,
piperidino, morfolino, 1-imidazolilo,
1-pirazolilo,
1,2,4-triazol-1-ilo,
o bencilamino; y
R^{1c} es
-X^{1}-(CH_{2})_{s}-NR^{s}R^{t} en
el que X^{1} es un enlace directo, metileno u O; s es 1 ó 2; con
la condición de que cuando s es 1, entonces X^{1} es un enlace
directo, y con la condición adicional de que la cadena
-(CH_{2})_{s}- puede soportar uno o dos sustituyentes
metilo o etilo o puede ser parte de un
trans-1,2-ciclohexanodiílo; y el grupo
NR^{s}R^{t} es
2-oxopirrolidin-1-ilo,
2,5-dioxopirrolidin-1-ilo,
2-oxooxazolidin-3-ilo,
2-oxoimidazolidin-1-ilo,
3-metil-2-oxoimidazolidin-1-ilo,
2-oxopirrolidin-3-ilo,
1-metil-2-oxopirrolidin-3-ilo,
1-tetrazolilo, metilsulfonilamino o
fenilsulfonilamino; y
R^{2} es R^{2a}, R^{2b}, o R^{2c} en los
que
R^{2a}es
-X^{2}-(CH_{2})_{n}-R^{f} en el que
X^{2} es un enlace directo, metileno u O; n es 1, 2 ó 3; y R^{f}
es 5-tetrazolilo, carboxi,
[alcoxi(C1-4)]carbonilo o hidroximetilo; o
(con la condición de que cuando n es 1, X^{2} es un enlace
directo) R^{f} es
2-carboxipirrolidin-1-ilo,
2-[[alcoxi(C1-4)]carbonil]pirrolidin-1-ilo,
(carboximetil)amino,
[[alcoxi(C1-4)]carbonilmetil]amino,
(4-carboximetilimidazol-1-il)amino,
[4-[[alcoxi(C1-4)]carbonilmetil]imidazol-1-il]amino,
(4-carboxibencil)amino,
[4-[[alcoxi(C1-4)]carbonil]bencil]amino,
(3-amino-1,4-dioxo-4-hidroxibutil)amino
o
[3-amino-1,4-dioxo-[alcoxi(C1-4)]butil]amino;
R^{2b} es
-X^{2}-(CH_{2})_{m}-NR^{a}R^{b} en
el que X^{2} es un enlace directo, metileno, O o S; m es 1, 2, 3,
4 ó 5; con la condición de que cuando m es 1, entonces X^{2} es un
enlace directo; y R^{a} y R^{b} son independientemente
hidrógeno, o alquilo(C1-3), o uno de R^{a}
y R^{b} es hidrógeno o metilo y el otro es t-butilo,
bencilo, o piridilmetilo; o el grupo NR^{a}R^{b} es pirrolidino,
piperidino, morfolino, 1-imidazolilo,
1-pirazolilo, o
1,2,4-triazol-4-ilo;
o
R^{2b} es
-[X^{2}-(CH_{2})_{n}]_{p}-N(R^{a})-CO-A
en el que X^{2} es un enlace directo, metileno u O; n es 1, 2, 3 ó
4; p es 0 ó 1, R^{a} es hidrógeno o metilo; y
-CO-A es un grupo
\alpha-aminoacilo natural o no natural, que puede
soportar uno o más grupos protectores farmacéuticamente aceptables y
puede estar sustituido adicionalmente sobre el nitrógeno
\alpha;
y
R^{2c} es hidrógeno, o
R^{2c} es
-NR^{a}-CO-(CH_{2})_{m}-R^{b}
o -O-CH_{2}-R^{b} en el que m es
0 ó 1, R^{a} es hidrógeno o metilo, y R^{b} es un anillo de
fórmula XII o fórmula XIII
\vskip1.000000\baselineskip
en la que G es O, S, NH o CH_{2} y R^{c} es
hidrógeno o metilo, y L es NR^{f} o CH_{2} y R^{f} es
hidrógeno o metilo; o
R^{2c} es -NHCOR^{g} en el que R^{g} es un
anillo heteroaromático de cinco miembros que presenta 2 heteroátomos
seleccionados de entre O, S y N y en el que el grupo carbonilo está
unido a un carbono de anillo situado entre un heteroátomo de anillo
y otro carbono de anillo; o
R^{2c} es
-(CH_{2})_{n}-R^{h},
-O-(CH_{2})_{n}-R^{h} o
-NH-(CH_{2})_{n}-R^{h} en el que n es
0, 1, o 2 y R^{h} es ciclopentilo, ciano o -CONR^{i}R^{j} en
el que R^{i} y R^{j} son independientemente hidrógeno o metilo o
el grupo NR^{i}R^{j} es pirrolidino, piperidino, o morfolino;
o
R^{2c} es
-X^{2}-(CH_{2})_{p}-R^{k}, o
-O-CH_{2}-CH(CH_{3})-R^{k}
en el que X^{2} es un enlace directo, metileno u O y p es 1, 2 ó
3, con la condición de que cuando p es 1, entonces X^{2} es un
enlace directo, y R^{k} es
2-oxopirrolidin-1-ilo
o NHCOR^{m} en el que R^{m} es
alquilo(C1-3), fenilo o piridilo; o
\newpage
R^{2c} es
-NH-CO-NR^{i}R^{j} en el que
R^{i} y R^{j} son independientemente hidrógeno o metilo o el
grupo NR^{i}R^{j} es pirrolidino, piperidino, o morfolino; o
R^{2c} es
-O-CO-NR^{p}R^{q} en el que
R^{p} y R^{q} son independientemente hidrógeno, metilo o etilo o
el grupo NR^{p}R^{q} es pirrolidino, piperidino, o morfolino;
o
R^{2c} es
-NH-SO_{2}-R^{r} en el que
R^{r} es alquilo(C1-3) o fenilo; y
con la condición de que o R^{1} es R^{1b} o
R^{2} es R^{2b}.
El grupo \alpha-aminoacilo
-CO-A puede representarse de forma conveniente como
-CO-CH(R^{b})-NR^{f}R^{g},
o puede denotarse mediante la nomenclatura convencional de
aminoácidos. De esta forma, -CO-A puede ser un grupo
\alpha-aminoacilo derivado de un
\alpha-aminoácido seleccionado de entre glicina,
alanina, valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, tirosina,
serina, treonina, metionina, cisteína, prolina, ácido
azetidina-2-carboxílico, ácido
pipecólico, ácido aspártico, asparginina, ácido glutámico,
glutamina, lisina, arginina, histidina, etc. en los que un grupo
amino puede soportar, por ejemplo, un grupo protector
t-butoxicarbonilo; un grupo carboxilo puede protegerse como
su alquil(C1-4)éster; un grupo hidroxi puede
soportar, por ejemplo, un grupo protector de tipo bencilo; y un
grupo tiol puede soportar, por ejemplo, un grupo protector de tipo
t-butilo. Además, cuando -CO-A se representa
como
-CO-CH(R^{b})-NR^{f}R^{g},
cada uno de R^{f} y R^{g} puede ser hidrógeno o metilo, o
-NR^{f}R^{g} puede ser un grupo pirrolidino, piperidino,
morfolino o
1,1-dioxotiomorfolin-4-ilo
(y R^{b} denota la cadena lateral o la cadena lateral protegida de
un grupo \alpha-aminoacilo tal y como se define
anteriormente).
Un compuesto particular de fórmula I es un
compuesto de fórmula Ia
en la
que
E es CH o CR^{e} en el que R^{e} es metilo,
metoxi o halo;
R^{1} es
-X^{1}-(CH_{2})_{s}-NR^{s}R^{t} en
el que X^{1} es un enlace directo, metileno u O; s es 1 ó 2; con
la condición de que cuando s es 1, entonces X^{1} es un enlace
directo; y R^{s} y R^{t} son independientemente hidrógeno o
alquilo(C1-3) o el grupo NR^{s}R^{t} es
pirrolidino, piperidino, morfolino, 1-imidazolilo,
1-pirazolilo,
1,2,4-triazol-1-ilo,
o bencilamino;
R^{2} es hidrógeno o
-X^{2}-(CH_{2})_{m}-NR^{a}R^{b} en
el que X^{2} es un enlace directo, metileno, O o S; m es 1, 2, 3,
4 ó 5; con la condición de que cuando m es 1, entonces X^{2} es un
enlace directo; y R^{a} y R^{b} son independientemente hidrógeno
o alquilo(C1-3) o el grupo NR^{a}R^{b} es
pirrolidino, piperidino, morfolino, 1-imidazolilo,
1-pirazolilo, N-(1,2,4-triazolilo),
o
2-oxopirrolidin-1-ilo;
y
R^{5} es hidrógeno, hidroxi o metoxi.
Un valor particular para
-X^{1}-(CH_{2})_{s}-NR^{s}R^{t} es
-CH_{2}-NR^{s}R^{t} en el que NR^{s}R^{t}
es pirrolidino, 1-imidazolilo,
1-pirazolilo,
1,2,4-triazol-4-ilo,
o bencilamino o es
-O-(CH_{2})_{2}-NR^{s}R^{t} en el que
NR^{s}R^{t} es pirrolidino, y más particularmente, es
-CH_{2}-NR^{s}R^{t}.
Un valor particular para R^{2} es
-O-(CH_{2})_{2}-NR^{a}R^{b} en el que
NR^{a}R^{b} es pirrolidino, 1-pirazolilo o
2-oxopirrolidin-1-ilo.
Un valor particular para R^{5} es hidroxi.
La presente invención proporciona también un
compuesto inhibidor de la trombina de fórmula I que tiene cualquiera
de las definiciones anteriores para uso en la inhibición de la
coagulación en un mamífero.
La presente invención proporciona además un
compuesto inhibidor de trombina de fórmula I que tiene cualquiera de
las definiciones anteriores para uso en la inhibición de trombina en
un mamífero.
Además, la presente invención proporciona un
compuesto inhibidor de trombina de fórmula I que tiene cualquiera de
las definiciones anteriores para uso en el tratamiento de un
trastorno tromboembólico en un mamífero.
Además, se proporciona el uso de un compuesto
inhibidor de trombina de fórmula I que tiene cualquiera de las
definiciones anteriores para la fabricación de un medicamento para
el tratamiento de un trastorno tromboembólico.
Como aspecto adicional de la invención, se
proporciona un profármaco (o una sal farmacéuticamente aceptable del
mismo) de cualquiera de los compuestos inhibidores de trombina
descritos anteriormente de fórmula I que formará un profármaco. (Se
reconocerá que un compuesto inhibidor de trombina de fórmula I puede
servir también como profármaco para un compuesto inhibidor de
trombina de fórmula I diferente).
Como un rasgo adicional de la invención se
proporciona una formulación farmacéutica que comprende en asociación
con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente
aceptables, un profármaco de un compuesto inhibidor de trombina de
fórmula I (o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) tal y
como se proporciona en cualquiera de las descripciones
anteriores.
En general, se cree que los compuestos
inhibidores de trombina de fórmula I son novedosos y, por tanto,
constituyen un aspecto adicional de la invención. De esta forma, de
acuerdo con la invención, se proporciona un nuevo compuesto de
fórmula I (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) de
acuerdo con cualquiera de las definiciones anteriores de un
compuesto de fórmula I, con la condición de que el compuesto no es
aquel que no sea novedoso. Una sal farmacéuticamente aceptable de un
agente antitrombótico de la presente invención incluye una que es
una sal de adición de ácidos preparada con un ácido que proporciona
un anión farmacéuticamente aceptable o una que es una sal preparada
con una base que proporciona un catión farmacéuticamente aceptable.
Más adelante en esta memoria se proporcionan ejemplos de tales
ácidos. De esta forma, una sal farmacéuticamente aceptable de un
nuevo compuesto de fórmula I, tal y como se define anteriormente,
proporciona un aspecto particular de la invención.
Como aspecto adicional de la invención se
proporciona una formulación farmacéutica que comprende en asociación
con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable,
un nuevo compuesto de fórmula I (o una sal farmacéuticamente
aceptable del mismo) tal y como se proporciona en cualquiera de las
descripciones anteriores.
En esta memoria descriptiva, se usan las
siguientes definiciones, a menos que se describa de otra forma: halo
es fluoro, cloro, bromo o yodo. Alquilo, alcoxi, etc. denotan tanto
grupos lineales como ramificados; pero la referencia a un radical
individual como "propilo" abarca sólo el radical de cadena
lineal ("normal"), estando específicamente designado un isómero
de cadena ramificada tal como "isopropilo".
Se apreciará que ciertos compuestos de fórmula I
(o sales o profármacos, etc.) pueden existir en, y aislarse en,
formas isoméricas, incluyendo los isómeros cis o
trans, así como las formas ópticamente activas, racémicas, o
diastereoisoméricas. Se ha de entender que la presente invención
abarca un compuesto de fórmula I como una mezcla de
diastereoisómeros, así como en la forma de un diastereoisómero
individual, y que la presente invención abarca un compuesto de
fórmula I como una mezcla de enantiómeros, así como en la forma de
un enantiómero individual, poseyendo cualquiera de estas mezclas o
formas propiedades inhibidoras frente a la trombina, siendo bien
conocido en la técnica cómo preparar o aislar formas particulares y
cómo determinar propiedades inhibidoras frente a trombina mediante
ensayos convencionales incluyendo los descritos más adelante.
Además, un compuesto de fórmula I (o sal o
profármaco, etc.) puede exhibir polimorfismo o puede formar un
solvato con agua o un disolvente orgánico. La presente invención
abarca también cualquiera de dichas formas polimórficas, cualquier
solvato o cualquier mezcla de los mismos.
Los valores particulares para los radicales,
sustituyentes e intervalos enumerados más adelante en la memoria,
son sólo ilustrativos, y no excluyen otros valores definidos u otros
valores dentro de los intervalos definidos para los radicales y
sustituyentes.
Un valor particular para un grupo
alquilo(C1-3) es metilo, etilo, propilo o
isopropilo; para un grupo alquilo(C1-4) es
metilo, etilo, propilo, isopropilo o butilo; y para un grupo
alcoxi(C1-4) es metoxi, etoxi, isopropoxi o
t-butoxi.
Un compuesto de fórmula I puede prepararse
mediante procedimientos que incluyen procesos conocidos en la
técnica química para la producción de compuestos conocidos de
fórmula I o de compuestos análogos estructuralmente o mediante un
nuevo proceso descrito en la presente memoria. Un procedimiento para
un nuevo compuesto de fórmula I (o una sal farmacéuticamente
aceptable del mismo), nuevos procedimientos para un compuesto de
fórmula I y nuevos intermedios para la fabricación de un compuesto
de fórmula I, como se define anteriormente, proporcionan
características adicionales de la invención y se ilustran mediante
los siguientes procedimientos en los que los significados de los
radicales genéricos son tal y como se definieron anteriormente, a
menos que se especifique de otra forma. Se reconocerá que puede
preferirse o ser necesario preparar un compuesto de fórmula I en el
que un grupo funcional se proteja usando un grupo protector
convencional, para después retirar el grupo protector y proporcionar
el compuesto de fórmula I.
En general, un compuesto de fórmula I puede
prepararse de acuerdo con una de las rutas reseñadas en el esquema
I, que ilustra la preparación de un compuesto de fórmula I en el que
existe un grupo Q en la posición 5, y descrito en los ejemplos, en
los que cada Q, Q^{2}, Q^{3} y Q^{5}, respectivamente,
representa un valor definido para los grupos R, R^{2}, R^{3} y
R^{5}, una versión protegida de dicho grupo, o resto que puede
elaborarse adicionalmente en dicho grupo. La conversión final de un
grupo Q, Q^{2}, Q^{3} o Q^{5} en R, R^{2}, R^{3} o R^{5}
se lleva a cabo en un momento conveniente, coherente con la química
empleada.
\newpage
Esquema
I
De esta forma, se proporciona un procedimiento
para preparar un nuevo compuesto de fórmula I (o una sal
farmacéuticamente aceptable del mismo) como se proporciona en
cualquiera de las descripciones anteriores que se selecciona de
cualquiera de los descritos en los ejemplos, incluyendo,
ciclar una amida correspondiente de fórmula
II
(o para un compuesto de fórmula Ia, un compuesto
de fórmula
IIa)
\vskip1.000000\baselineskip
mediante calentamiento, por ejemplo en un
disolvente inerte como se describe en los ejemplos más adelante;
después, para cualquiera de los procedimientos
anteriores, cuando un grupo funcional está protegido usando un grupo
protector, se retira el grupo protector;
después, para cualquiera de los procedimientos
anteriores, cuando se requiere una sal farmacéuticamente aceptable
de un compuesto de fórmula I, puede obtenerse haciendo reaccionar la
forma ácida o básica de dicho compuesto de fórmula I con una base o
ácido proporcionando un contraión fisiológicamente aceptable o
mediante cualquier otro procedimiento convencional.
Nuevos intermedios o compuestos materiales de
partida, tales como una amida de fórmula II proporcionan un aspecto
adicional de la invención.
Como se mencionó anteriormente, un compuesto
correspondiente a un compuesto de fórmula I pero en el que un grupo
funcional está protegido puede servir como un intermedio para un
compuesto de fórmula I. Por consiguiente, tales intermedios
protegidos para un nuevo compuesto de fórmula I proporcionan
aspectos adicionales de la invención. De esta forma, como un aspecto
particular de la invención, se proporciona un compuesto
correspondiente a un nuevo compuesto de fórmula I como se define
anteriormente en el que R (por ejemplo R^{5}) es hidroxi, pero en
el que el sustituyente correspondiente es -OR^{p} en lugar de
hidroxi, en el que R^{p} es un grupo protector de fenol diferente
de metilo. Los grupos protectores de fenol son bien conocidos en la
técnica, por ejemplo, como se describe en T.W. Greene y P.G.M. Wuts,
"Protecting Groups in Organic Synthesis" (1991). Los valores
particulares de R^{p} incluyen, por ejemplo, bencilo y alilo.
Además, R^{p} puede designar una resina funcionalizada, por
ejemplo como se describe en H.V. Meyers, y col., Molecular
Diversity, (1995), 1, 13-20.
Como se mencionó anteriormente, la invención
incluye sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos
inhibidores de trombina definidos mediante la fórmula I anterior. Un
compuesto particular de esta invención que posee uno o más grupos
funcionales suficientemente básicos reaccionarán con cualquiera de
entre un número de ácidos inorgánicos y orgánicos proporcionando un
contraión fisiológicamente aceptable para formar una sal
farmacéuticamente aceptable. Los ácidos empleados habitualmente para
formar sales de adición de ácidos farmacéuticamente aceptables son
ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico,
ácido yodhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, y similares, y
ácidos orgánicos tales como ácido p-oluenosulfónico, ácido
metanosulfónico, ácido oxálico, ácido
p-bromobencenosulfónico, ácido carbónico, ácido succínico,
ácido cítrico, ácido benzoico, ácido acético, y similares. Por
tanto, ejemplos de dichas sales farmacéuticamente aceptables son
sulfato, pirosulfato, bisulfato, sulfito, bisulfito, fosfato,
fosfato monoácido, fosfato diácido, metafosfato, pirofosfato,
cloruro, bromuro, yoduro, acetato, propionato, decanoato, caprilato,
acrilato, formiato, isobutirato, caproato, heptanoato, propiolato,
oxalato, malonato, succinato, suberato, sebacato, fumarato,
maleato, butin-1,4-dioato,
hexin-1,6-dioato, benzoato,
clorobenzoato, metilbenzoato, dinitrobenzoato, hidroxibenzoato,
metoxibenzoato, ftalato, sulfonato, xilenosulfonato, fenilacetato,
fenilpropionato, fenilbutirato, citrato, lactato,
gamma-hidroxibutirato, glicolato, tartrato,
metanosulfonato, propanosulfonato,
naftaleno-1-sulfonato,
naftaleno-2-sulfonato, mandelato, y
similares. Las sales de adición de ácidos farmacéuticamente
aceptables preferidas incluyen aquellas formadas con ácidos
minerales tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, y ácido
sulfúrico.
Un compuesto de fórmula I que es ácido forma
sales con bases farmacéuticamente aceptables. Una sal
farmacéuticamente aceptable de ese tipo puede prepararse con una
base que proporcione un catión farmacéuticamente aceptable, que
incluye sales de metales alcalinos (especialmente sodio y potasio),
sales de metales alcalinos térreos (especialmente calcio y
magnesio), sales de aluminio y sales de amonio, así como sales
preparadas a partir de bases orgánicas fisiológicamente aceptables
tales como trietilamina, morfolina, piperidina y trietanolamina. Las
formas de sales de potasio y sodio son particularmente
preferidas.
Si no están disponibles comercialmente, los
materiales de partida necesarios para la preparación de un compuesto
de fórmula I pueden prepararse mediante procedimientos que se
seleccionan a partir de técnicas convencionales de la química
orgánica, incluyendo sustitución y transformación aromática y
heteroaromática, a partir de técnicas que son análogas a las
síntesis de compuestos estructuralmente similares conocidos, y
técnicas que son análogas a los procedimientos descritos
anteriormente o procedimientos descritos en los ejemplos. Será
evidente para un experto en la técnica que está disponible una
diversidad de secuencias para la preparación de los materiales de
partida. Los materiales de partida que son nuevos proporcionan otro
aspecto de la invención.
Se conocen bien en la técnica procedimientos
selectivos de protección y desprotección para la preparación de
compuestos tales como aquellos de fórmula I discutida
anteriormente.
De forma general, los compuestos de la invención
se aíslan mejor en forma de sales de adición de ácidos. Las sales de
los compuestos de fórmula I formadas con ácidos tales como aquellos
mencionados anteriormente son útiles como sales farmacéuticamente
aceptables para la administración de los agentes antitrombóticos y
para la preparación de formulaciones de estos agentes. Otras sales
de adición de ácidos pueden prepararse y usarse en el aislamiento y
purificación de los compuestos.
Como se mencionó anteriormente, los isómeros y
diastereoisómeros ópticamente activos de los compuestos de fórmula I
se consideran también parte de esta invención. Dichos isómeros
ópticamente activos pueden prepararse a partir de sus precursores
ópticamente activos respectivos mediante procedimientos descritos
anteriormente, o por resolución de las mezclas racémicas. Esta
resolución se puede llevar a cabo mediante derivatización con un
reactivo quiral seguido de cromatografía o por cristalización
repetida. La retirada del auxiliar quiral mediante procedimientos
convencionales proporciona isómeros de los compuestos de la
invención sustancialmente ópticamente puros o sus precursores.
Pueden obtenerse detalles adicionales con respecto a las
resoluciones en Jacques, y col., Enantiomers, Racemates, and
Resolutions, John Wiley & Sons, 1981.
Se cree que los compuestos de la invención
inhiben selectivamente la trombina respecto a otras proteinasas y
proteínas no enzimáticas implicadas en la coagulación sanguínea sin
interferencia apreciable con la capacidad natural del cuerpo de
lisar los coágulos (los compuestos tienen un bajo efecto inhibidor
sobre la fibrinolisis). Además, dicha selectividad se cree que
permite el uso de agentes trombolíticos sin interferir
sustancialmente con la trombolisis y fibrinolisis.
La invención en uno de sus aspectos proporciona
un compuesto de fórmula I para uso en la inhibición de trombina en
mamíferos.
En otro de sus aspectos, la invención proporciona
un compuesto de fórmula I para uso en el tratamiento de un trastorno
tromboembólico en un mamífero.
La invención en otro de sus aspectos proporciona
un compuesto de fórmula I para uso en la inhibición de la
coagulación en mamíferos.
El tratamiento de la inhibición de trombina, de
la inhibición de la coagulación y el tratamiento del trastorno
tromboembólico contemplados por el presente uso incluyen el
tratamiento médico terapéutico y/o profiláctico según sea
apropiado.
En una realización adicional la invención se
refiere al tratamiento, en un humano o animal, de afecciones donde
se requiere la inhibición de trombina. Los compuestos de invención
se espera que sean útiles en animales, incluyendo el hombre, en el
tratamiento o profilaxis de la trombosis y de la hipercoagulabilidad
en sangre y tejidos. Los trastornos en los que los compuestos
presentan utilidad potencial son en el tratamiento o profilaxis de
trombosis e hipercoagulabilidad en sangre y tejidos. Los trastornos
en los que los compuestos presentan una potencial utilidad, en el
tratamiento y/o profilaxis, incluyen trombosis venosa y embolia
pulmonar, trombosis arterial, tal como isquemia de miocardio,
infarto de miocardio, angina inestable, apoplejía basada en
trombosis y trombosis arterial periférica. Además, los compuestos
presentan utilidad esperada en el tratamiento o profilaxis de
trastornos ateroscleróticos (enfermedades) tales como enfermedad
arterial coronaria, enfermedad arterial cerebral y enfermedad
arterial periférica. Además, se espera que los compuestos sean
útiles junto con agentes trombolíticos en el infarto de miocardio.
Además, los compuestos presentan utilidad esperada en la profilaxis
para la reoclusión después de trombolisis, angioplastia transluminal
percutánea (PTCA) y operaciones de bypass coronario. Además, los
compuestos presentan utilidad esperada en la prevención de
retrombosis después de microcirujía. Además, se espera que los
compuestos sean útiles en el tratamiento anticoagulante en relación
con órganos y válvulas cardíacas artificiales. Además, los
compuestos presentan utilidad esperada en el tratamiento
anticoagulante en la hemodiálisis y en la coagulación intravascular
diseminada. Una utilidad esperada adicional es en el lavado de
catéteres y dispositivos mecánicos usados en pacientes in
vivo, y como un anticoagulante para la conservación in
vitro de la sangre, plasma y otros productos sanguíneos. Además,
los compuestos presentan utilidad esperada en otras enfermedades
donde la coagulación de la sangre podría ser un proceso de
contribución fundamental o una fuente de patología secundaria, tal
como cáncer, incluyendo metástasis, enfermedades inflamatorias,
incluyendo artritis, y diabetes. El compuesto anticoagulante se
administra oralmente, parenteralmente, por ejemplo mediante infusión
intravenosa (iv), inyección intramuscular (im) o subcutáneamente
(sc).
La dosis específica de un compuesto administrado
según esta invención para obtener efectos terapéuticos y/o
profilácticos estará, por supuesto, determinada por las
circunstancias particulares que rodean el caso, incluyendo por
ejemplo, el compuesto administrado, la tasa de administración, la
vía de administración, y la afección que se esté tratando.
Una dosis diaria típica para cada una de las
utilidades anteriores está entre aproximadamente 0,01 mg/kg y
aproximadamente 1000 mg/kg. El régimen de dosis puede variar, por
ejemplo para uso profiláctico puede administrarse una única dosis
diaria o múltiples dosis tal como puede ser apropiado 3 ó 5 veces al
día. En situaciones de cuidados intensivos un compuesto de la
invención se administra por vía de infusión iv a una tasa de entre
aproximadamente 0,01 mg/kg/h y aproximadamente 20 mg/kg/h y
preferiblemente entre aproximadamente 0,1 mg/kg/h y aproximadamente
5 mg/kg/h.
El uso de esta invención también se practica
junto con un agente de lisis de coágulos, por ejemplo un activador
de plasminógeno de tejido (t-PA),
t-PA modificado, estreptoquinasa o uroquinasa. En
los casos en los que se ha producido la formación de coágulo y una
arteria o vena está bloqueada total o parcialmente, normalmente se
emplea, un agente de lisis de coágulo. Un compuesto de la invención
puede administrarse antes de o junto con el agente de lisis o
después de su uso, y preferiblemente se administra además junto con
aspirina para prevenir la reaparición de la formación de
coágulos.
El uso de esta invención se practica también
junto con un antagonista de receptor de glicoproteína de plaquetas
(IIb/IIIa), que inhibe la agregación plaquetaria. Un compuesto de la
invención puede administrase antes de o junto con el antagonista
IIb/IIIa o después de su uso para prevenir la aparición o
reaparición de la formación de coágulos.
El uso de esta invención se practica también
junto con aspirina. Un compuesto de esta invención puede
administrarse antes de o junto con aspirina o después de su uso para
prevenir la aparición o reaparición de la formación de coágulos.
Como se mencionó anteriormente, se administra preferiblemente un
compuesto de la presente invención junto con un agente de lisis de
coágulos y aspirina.
Esta invención proporciona también formulaciones
farmacéuticas para uso en el procedimiento terapéutico descrito
anteriormente. Las formulaciones farmacéuticas de la invención
comprenden una cantidad eficaz inhibidora de trombina de un
compuesto de fórmula I en asociación con un vehículo, excipiente o
diluyente farmacéuticamente aceptable. Para administración oral el
compuesto antitrombótico se formula en cápsulas de gelatina o
comprimidos que pueden contener excipientes tales como agentes
aglutinantes, lubricantes, disgregantes y similares. Para
administración parenteral el antitrombótico se formula en un
diluyente farmacéuticamente aceptable por ejemplo solución salina
fisiológica (0,9 por ciento), dextrosa (5 por ciento), solución de
Ringer y similares.
El compuesto de la presente invención puede
formularse en formulaciones de dosificación unitaria que comprenden
una dosis entre aproximadamente 0,1 mg y aproximadamente 1000 mg.
Preferiblemente el compuesto está en la forma de una sal
farmacéuticamente aceptable tal como por ejemplo la sal sulfato, sal
acetato o una sal fosfato. Un ejemplo de una formulación de
dosificación unitaria comprende 5 mg de un compuesto de la presente
invención en forma de una sal farmacéuticamente aceptable en una
ampolla de vidrio estéril de 10 ml. Otro ejemplo de una formulación
de dosificación unitaria comprende aproximadamente 10 mg de un
compuesto de la presente invención en forma de una sal
farmacéuticamente aceptable en 20 ml de solución salina isotónica
contenida en una ampolla estéril.
Los compuestos pueden administrarse mediante una
diversidad de vías incluyendo la vía oral, rectal, transdérmica,
subcutánea, intravenosa, intramuscular e intranasal. Los compuestos
de la presente invención se formulan preferiblemente antes de la
administración. Otra realización de la presente invención es una
formulación farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un
nuevo compuesto de fórmula I o una sal o solvato farmacéuticamente
aceptables del mismo en asociación con un vehículo, diluyente o
excipiente farmacéuticamente aceptable para los mismos.
El ingrediente activo en dichas formulaciones
comprende desde un 0,1 por ciento a un 99,9 por ciento en peso de la
formulación. Por "farmacéuticamente aceptable" se entiende que
el vehículo, diluyente o excipiente debe ser compatible con los
otros ingredientes de la formulación y no debe ser perjudicial para
el receptor del mismo.
Las presentes formulaciones farmacéuticas se
preparan mediante procedimientos conocidos usando ingredientes bien
conocidos y de fácil disponibilidad. Las composiciones de esta
invención pueden formularse de forma que proporcionen una liberación
rápida, sostenida o retardada del ingrediente activo después de la
administración al paciente empleando procedimientos bien conocidos
en la técnica. Al preparar las composiciones de la presente
invención, el ingrediente activo estará normalmente mezclado con un
vehículo, o diluido por un vehículo, o incluido en un vehículo que
puede estar en forma de una cápsula, bolsita, papel u otro envase.
Cuando el vehículo sirve como diluyente, puede ser un material
sólido, semisólido o líquido que actúa como un vehículo, excipiente
o medio para el ingrediente activo. De esta forma, las composiciones
pueden estar en la forma de comprimidos, píldoras, polvos, grageas,
bolsitas, sellos, elixires, suspensiones, emulsiones, soluciones,
jarabes, aerosoles, (en forma de sólido o en un medio líquido),
cápsulas de gelatina dura y blanda, supositorios, soluciones
inyectables estériles, polvos envasados estériles, y similares.
Los siguientes ejemplos de formulación son
solamente ilustrativos y no se pretende que limiten el alcance de la
invención en modo alguno. "Ingrediente activo", por supuesto,
significa un compuesto de acuerdo con la fórmula I o una sal o
solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.
\newpage
Formulación
1
Cápsulas de gelatina dura se preparan usando los
siguientes ingredientes:
| Cantidad | ||
| (mg/cápsula) | ||
| Ingrediente activo | 250 | |
| Almidón, seco | 200 | |
| Estearato de magnesio | 10 | |
| Total | 460 | mg |
Formulación
2
Un comprimido se prepara usando los ingredientes
siguientes:
| Cantidad | ||
| (mg/comprimido) | ||
| Ingrediente activo | 250 | |
| Celulosa microcristalina | 400 | |
| Dióxido de silicio, pirólisis | 10 | |
| Ácido esteárico | 5 | |
| Total | 665 | mg |
Los componentes se mezclan y se comprimen para
formar comprimidos de 665 mg de peso cada uno.
Formulación
3
Una solución de aerosol se prepara de forma que
contenga los siguientes componentes:
| Peso | |
| Ingrediente activo | 0,25 |
| Etanol | 25,75 |
| Propelente 22 | 70,00 |
| (clorodifluorometano) | |
| Total | 100,00 |
El compuesto activo se mezcla con etanol y la
mezcla se añade a una parte del propelente 22, se enfría a -30ºC y
se transfiere a un dispositivo de llenado. La cantidad requerida se
introduce después en un recipiente de acero inoxidable y se diluye
con el resto del propelente. Las unidades de válvula se ajustan
posteriormente al recipiente.
Formulación
4
Se preparan comprimidos, conteniendo 60 mg de
ingrediente activo cada uno, de la siguiente forma:
| Ingrediente activo | 60 mg |
| Almidón | 45 mg |
| Celulosa microcristalina | 35 mg |
| Polivinilpirrolidona (como solución al 10% en agua) | 4mg |
| Carboximetil almidón sódico | 4,5 mg |
| Estearato de magnesio | 0,5 mg |
| Talco | 1 mg |
| Total | 150 mg |
El ingrediente activo, almidón y celulosan se
pasan a través de un tamiz de EE.UU. de malla nº 45 y se mezclan
concienzudamente. La solución acuosa que contiene
polivinilpirrolidona se mezcla con el polvo resultante, y la mezcla
entonces se hace pasar a través de un tamiz de EE.UU. de malla nº
14. Los gránulos producidos de esta manera se secan a 50ºC y se
hacen pasar a través de un tamiz de EE.UU. de malla nº 18. El
carboximetil almidón sódico, estearato de magnesio y talco, pasados
previamente a través de un tamiz de EE.UU. de malla nº 60, se añaden
después a los gránulos que, después de mezclarse, se comprimen en
una máquina formadora de comprimidos para dar lugar a comprimidos de
150 mg de peso cada uno.
Formulación
5
Se preparan cápsulas, conteniendo cada una 80 mg
de ingrediente activo, de la siguiente manera:
| Ingrediente activo | 80 mg |
| Almidón | 59 mg |
| Celulosa microcristalina | 59 mg |
| Estearato de magnesio | 2 mg |
| Total | 200 mg |
El ingrediente activo, celulosa, almidón y
estearato de magnesio se mezclan, se hacen pasar a través de un
tamiz de EE.UU. de malla nº 45 y se introducen en cápsulas de
gelatina dura en cantidades de 200 mg.
Formulación
6
Se preparan supositorios, conteniendo cada uno
225 mg de ingrediente activo, de la siguiente manera:
| Ingrediente activo | 225 mg |
| Glicéridos de ácidos grasos saturados | 2.000 mg |
| Total | 2.225 mg |
El ingrediente activo se hace pasar a través de
un tamiz de EE.UU. de malla nº 60 y se suspende en los glicéridos de
ácidos grasos saturados previamente fundidos usando el calor mínimo
necesario. La mezcla después se vierte en un molde de supositorio de
2 gramos de capacidad nominal y se deja enfriar.
Formulación
7
Se preparan suspensiones, conteniendo cada una 50
mg del ingrediente activo por cada 5 ml de dosis, de la siguiente
manera:
| Ingrediente activo | 50 mg |
| Carboximetil celulosa sódica | 50 mg |
| Jarabe | 1,25 ml |
| Solución de ácido benzoico | 0,10 ml |
| Aromas | c.s. |
| Color | c.s. |
| Agua purificada hasta el total | 5 ml |
El ingrediente activo se hace pasar a través de
un tamiz de EE.UU. de malla nº 45 y se mezcla con la carboximetil
celulosa sódica y el jarabe para formar una pasta lisa. La solución
de ácido benzoico, el aroma y el color se diluyen con una parte del
agua y se añaden con agitación. Después se añade agua suficiente
para producir el volumen requerido.
Formulación
8
Se puede preparar una formulación intravenosa de
la siguiente manera:
| Ingrediente activo | 100 mg |
| Solución salina isotónica | 1.000 ml |
La solución de los ingredientes anteriores se
administra generalmente por vía intravenosa a un sujeto a una tasa
de 1 ml por minuto.
\newpage
La capacidad de los compuestos de la presente
invención de ser inhibidores de trombina eficaces y oralmente
activos se evalúa en uno o más de los siguientes ensayos.
Los compuestos proporcionados por la invención
(fórmula I) inhiben selectivamente la acción de la trombina en los
mamíferos. La inhibición de la trombina se demuestra mediante la
inhibición in vitro de la actividad amidasa de la trombina
medida en un ensayo en el que la trombina hidroliza el sustrato
cromogénico,
N-benzoil-L-fenilalanil-L-valil-L-arginil-p-nitroanilida,
N-benzoil-L-Phe-L-Val-L-Arg-p-nitroanilida.
El ensayo se lleva a cabo mezclando 50 \mul de
tampón (Tris 0,03 M, NaCl 0,15 M, pH 7,4) con 25 \mul de solución
de trombina humana (trombina humana purificada, Enzyme Research
Laboratories, South Bend, Indiana, a 8 unidades NIH/ml) y 25 \mul
de compuesto de ensayo en un disolvente (metanol acuoso al 50%
(v:v)). Después se añaden 150 \mul de una solución acuosa del
sustrato cromogénico (a 0,25 mg/ml) y se miden las tasas de
hidrólisis del sustrato controlando las reacciones a 405 nm para la
liberación de p-nitroanilina. Se construyen curvas patrón
representando la concentración de trombina libre frente a la tasa de
hidrólisis. Las tasas de hidrólisis observadas con los compuestos de
ensayo se convierten después en valores de "trombina libre" en
los ensayos respectivos mediante el uso de curvas patrón. La
trombina unida (unida al compuesto de ensayo) se calcula restando la
cantidad de trombina libre observada en cada ensayo de la cantidad
inicial conocida de trombina usada en el ensayo. La cantidad de
inhibidor libre en cada ensayo se calcula restando el número de
moles de trombina unida del número de moles del inhibidor añadido
(compuesto de ensayo).
El valor Kass es la constante de equilibrio
hipotética para la reacción entre la trombina y el compuesto de
ensayo (I).
Trombina + I \
\rightleftarrows \ Trombina -
I
Kass = \frac{[Trombina -
I]}{[(Trombina) \ X \
(I)]}
Kass se calcula para un intervalo de
concentraciones de los compuestos de ensayo y el valor medio se
expresa en unidades de litros por mol. En general, un compuesto
inhibidor de trombina de fórmula I de la presente invención exhibe
un valor de Kass de 0,05 X 10^{6} l/mol o mucho mayor.
Siguiendo sustancialmente los procedimientos
descritos anteriormente para la trombina humana, y usando otras
serina proteasas del sistema de coagulación sanguíneo humano y
usando serina proteasas del sistema fibrinolítico, con los sustratos
cromogénicos apropiados, identificados a continuación, se evalúa la
selectividad de los compuestos de la presente invención con respecto
a las serina proteasas del factor de coagulación y con respecto a
las serina proteasas fibrinolíticas así como su falta de
interferencia sustancial con la fibrinolisis de coágulos en el
plasma humano.
Los factores humanos X, Xa, IXa, XIa y XIIa se
compran en Enzyme Research Laboratories, South Bend, Indiana; la
uroquinasa humana en Leo Pharmaceuticals, Dinamarca; y la proteína C
activada recombinante (aPC) se prepara en Eli Lilly y Co. de acuerdo
sustancialmente con la patente de EE.UU. 4.981.952. Sustratos
cromogénicos:
N-benzoil-Ile-Glu-Gly-Arg-p-nitroanilida
(para el factor Xa);
N-Cbz-D-Arg-Gly-Arg-p-nitroanilida
(para el ensayo del factor IXa como el sustrato factor Xa);
Piroglutamil-Pro-Arg-p-nitroanilida
(para el factor XIa y para aPC);
H-D-Pro-Phe-Arg-p-nitroanilida
(para el factor XIIa); y
Piroglutamil-Gly-Arg-p-nitroanilida
(para uroquinasa); se compran en Kabi Vitrum, Estocolmo, Suecia, o
en Midwest Biotech, Fishers, Indiana. La tripsina bovina se compra
en Worthington Biochemicals, Freehold, Nueva Jersey, y la calicreína
plasmática humana de Kabi Vitrum, Estocolmo, Suecia. El sustrato
cromogénico
H-D-Pro-Phe-Arg-p-nitroanilida
para la calicreína plasmática se compra en Kabi Vitrum, Estocolmo,
Suecia.
N-Benzoil-Phe-Val-Arg-p-nitroanilida,
el sustrato para la trombina humana y para la tripsina, se sintetiza
de acuerdo con los procedimientos descritos anteriormente para los
compuestos de la presente invención, usando procedimientos conocidos
de acoplamiento de péptidos a partir de reactivos disponibles en el
mercado, o comprados en Midwest Biotech, Fishers, Indiana.
La fibrinolisina humana se compra en Boehringer
Mannheim, Indianapolis, Indiana; nt-PA se compra
como referencia de actividad de cadena única en American
Diagnostica, Greenwich, Connecticut; t-PA6
modificado (mt-PA6) se prepara en Eli Lilly y
Compañía mediante procedimientos conocidos en la técnica (véase,
Burck, y col., J. Biol. Chem., 265,
5120-5177 (1990). El sustrato cromogénico de
fibrinolisina
H-D-Val-Leu-Lys-p-nitroanilida
y el sustrato activador de plasminógeno tisular
(t-PA)
H-D-Ile-Pro-Arg-p-nitroanilida
se compran en Kabi Vitrum, Estocolmo, Suecia.
En los sustratos cromogénicos descritos
anteriormente los símbolos de tres letras Ile, Glu, Gly, Pro, Arg,
Phe, Val, Leu y Lys se usan para indicar el grupo aminoácido
correspondiente isoleucina, ácido glutámico, glicina, prolina,
arginina, fenilalanina, valina, leucina y lisina,
respectivamente.
Los inhibidores de trombina preferiblemente
deberían respetar la fibrinolisis inducida por la uroquinasa, el
activador de plasminógeno tisular (t-PA) y la
estreptoquinasa. Esto es importante para el uso terapéutico de
dichos agentes como adjuntos a la terapia trombolítica con
estreptoquinasa, t-PA o uroquinasa y para el uso de
dichos agentes como agentes antitrombóticos que respetan la
fibrinolisis endógena (con respecto a t-PA y
uroquinasa). Además de no interferir con la actividad amidasa de las
proteasas fibrinolíticas, dicho respeto por el sistema fibrinolítico
puede estudiarse mediante el uso de coágulos de plasma humano y sus
lisis mediante los activadores de plasminógeno fibrinolíticos
respectivos.
El plasma de perros se obtiene de perros de caza
de raza mixta conscientes (de cualquier sexo, de Butler Farms,
Clyde, Nueva York, EE.UU.) por punción en las venas en citrato al
3,8 por ciento. El fibrinógeno se prepara a partir de plasma recién
obtenido de perro y el fibrinógeno humano se prepara a partir de
anticoagulante sanguíneo humano (solución
citrato-dextrosa) dentro de su fecha de caducidad en
la fracción I-2 de acuerdo con los procedimientos y
especificaciones previos. Smith, Biochem. J., 185,
1-11 (1980); y Smith, y col., Biochemistry,
11, 2958-2967 (1972). El fibrinógeno humano
(98 por ciento puro/exento de fibrinolisina) es de American
Diagnostica, Greenwich, Connecticut. El marcaje isotópico de las
preparaciones I-2 de fibrinógeno se realiza como se
reseñó anteriormente. Smith, y col., Biochemistry, 11,
2958-2967 (1972). La uroquinasa se compra en Leo
Pharmaceuticals, Dinamarca, en forma de 2200 unidades Ploug/vial. La
estreptoquinasa se compra de Hoechst-Roussel
Pharmaceuticals, Somerville, Nueva Jersey.
Los coágulos plasmáticos humanos se forman en
microtubos de ensayo añadiendo 50 \mul de trombina (73 unidades
NIH/ml) a 100 \mul de plasma humano que contiene 0,0229 \muCi de
fibrinógeno marcado con ^{125}I. La lisis de coágulos se estudia
mediante solapamiento de los coágulos con 50 \mul de uroquinasa o
estreptoquinasa (50, 100, o 1000 unidades/ml) e incubando durante 20
horas a temperatura ambiente. Después de la incubación el entubado
se centrifuga en una microcentrífuga Beckman. Se añaden 25 \mul de
sobrenadante a 1,0 ml de volumen de tampón tris 0,03 M/NaCl 0,15 M
para el recuento gamma. Los controles de recuento de lisis al 100%
se obtienen omitiendo la trombina (y sustituyendo el tampón). Se
evalúa la posible interferencia de los inhibidores de trombina con
la fibrinolisis incluyendo los compuestos en las soluciones de
solapamiento a concentraciones de 1, 5, y 10 \mug/ml. Se estiman
aproximaciones groseras de los valores de CI_{50} mediante
extrapolaciones lineales a partir de datos puntuales a un valor que
representaría el 50 por ciento de lisis para esa concentración
particular de agente fibrinolítico.
El plasma de perro y de rata se obtienen de
perros de caza de raza mixta conscientes (de cualquier sexo, Butler
Farms, Clyde, Nueva York, EE.UU.) o de ratas macho
Sprague-Dawley anestesiadas (Harlan
Sprague-Dawley, Inc., Indianapolis, Indiana, EE.UU.)
mediante punción venosa en citrato al 3,8 por ciento. El fibrinógeno
se prepara a partir de anticoagulante sanguíneo humano (solución
citrato-dextrosa) dentro de la fecha de caducidad en
la fracción I-2 de acuerdo con los procedimientos y
especificaciones previas. Smith, Biochem. J., 185,
1-11 (1980); y Smith, y col., Biochemistry,
11, 2958-2967 (1972). El fibrinógeno humano
se compra también en forma de 98 por ciento puro/exento de
fibrinolisina de American Diagnostica, Greenwich, Connecticut. Los
reactivos de coagulación actina, tromboplastina, innovina y plasma
humano se obtienen de Baxter Healthcare Corp., Dade Division, Miami,
Florida. La trombina bovina se obtiene de
Parke-Davis (Detroit, Michigan) y se usa para
ensayos de coagulación en plasma.
Los procedimientos de ensayo de coagulación son
tal y como se han descrito previamente. Smith, y col., Thrombosis
Research, 50, 163-174 (1988). Se usa para
todas las mediciones del ensayo de coagulación un instrumento de
coagulación CoAScreener (American LABor, Inc.). El tiempo de
protrombina (PT) se mide añadiendo 0,05 ml de solución salina y 0,05
ml de reactivo Tromboplastina-C o reactivo de factor
tisular humano recombinante (Innovina) a 0,05 ml de plasma de
ensayo. El tiempo de tromboplastina parcial activada (APTT) se mide
incubando 0,05 ml de plasma de ensayo con 0,05 ml de reactivo Actina
durante 120 segundos seguido de 0,05 ml de CaCl_{2} (0,02 M). El
tiempo de trombina (TT) se mide añadiendo 0,05 ml de solución salina
y 0,05 ml de trombina (10 unidades NIH/ml) a 0,05 ml de plasma de
ensayo. Los compuestos de fórmula I se añaden al plasma humano o
animal en un amplio intervalo de concentraciones para determinar los
efectos de prolongación sobre los ensayos APTT, PT y TT. Se realizan
extrapolaciones lineales para estimar las concentraciones requeridas
para duplicar el tiempo de formación de coágulos para cada
ensayo.
Se anestesian ratas
Sprague-Dawley macho (350-425 g,
Harlan Sprague Dawley Inc., Indianapolis, IN) con xilazina (20
mg/kg, s.c.) y cetamina (120 mg/kg, s.c.) y se mantienen en una
atmósfera de agua caliente (37ºC). Se insertan cánula(s) en
la(s) vena(s) yugular(es) para permitir las
infusiones.
La vena yugular izquierda y la arteria carótida
derecha se canulizan con cánulas de polietileno PE 60 de 20 cm de
longitud. Para completar el circuito de derivación
arterio-venoso se ajusta por fricción entre las
secciones mayores una sección central de 6 cm de cánula más larga
(PE 190) con un hilo de algodón (5 cm) en el lumen. Se hace circular
sangre a través de la derivación durante 15 minutos antes de que se
retire el hilo cuidadosamente y se pese. El peso del hilo húmedo se
resta del peso total del hilo más el trombo (véase J.R. Smith, Br
J Pharmacol, 77:29, 1982). En este modelo los compuestos
preferidos de la presente invención reducen el peso neto del coágulo
hasta aproximadamente el 25-30% del control, o
incluso inferior, a una dosis i.v. de 33,176 \mumol/kg/h.
Las arterias carótidas se aíslan mediante una
incisión en la línea media cervical ventral. Se coloca un termopar
bajo cada arteria y se registra la temperatura del vaso de forma
continua en un registrador tipo diagrama de barras. Se coloca un
manguito de tubos (0,058 de d.i. x 0,077 de d.e. x 4 mm, Baxter Med.
Calidad Silicona), cortado longitudinalmente, alrededor de cada
carótida directamente sobre el termopar. Se disuelve el hexahidrato
de FeCl_{3} en agua y la concentración (20%) se expresa en
términos del peso real de FeCl_{3} sólo. Para lesionar la arteria
e inducir la trombosis, se pipetean 2,85 \mul en el manguito para
lavar la arteria por encima de la sonda del termopar. La oclusión
arterial se indica mediante una rápida caída de la temperatura. El
tiempo para la oclusión se da en minutos y representa el tiempo
transcurrido entre la aplicación de FeCl_{3} y la rápida caída de
la temperatura en el vaso (véase K.D. Kurz, Thromb. Res.,
60:269, 1990).
Los datos in vitro sugieren que los
inhibidores de trombina inhiben la trombina y, a mayores
concentraciones, pueden inhibir otras serina proteasas, tales como
activador de plasminógeno tisular y fibrinolisina. Para evaluar si
los compuestos inhiben la fibrinolisis in vivo, se determina
la tasa de trombolisis espontánea implantando un coágulo de sangre
total marcado en la circulación pulmonar. Se mezcla rápidamente
sangre de rata (1 ml) con trombina bovina (4 IU, Parke Davis) y
fibrinógeno humano ^{125}I (5 \muci, ICN), inmediatamente se
recoge en entubado silastic y se incuba a 37ºC durante una hora. Los
trombos madurados se expulsan del entubado, se cortan en segmentos
de 1 cm, se lavan tres veces en solución salina normal y cada
segmento se cuenta en un contador gamma. Se aspira un segmento con
recuentos conocidos en un catéter que posteriormente se implanta en
la vena yugular. El extremo del catéter se adelanta hasta los
alrededores de la aurícula derecha y el coágulo se expulsa para que
flote en la circulación pulmonar. Una hora después del implante, el
corazón y los pulmones se recogen y se cuentan por separado. La
trombolisis se expresa como un porcentaje donde:
Trombolisis % =
\frac{(cpm \ inyectado - cpm \ pulmón) \ x \ 100}{cpm \
inyectado}
La disolución fibrinolítica del coágulo
implantado tiene lugar de forma dependiente del tiempo (véase J.P.
Clozel, Cardiovas. Pharmacol., 12:520, 1988).
El tiempo de trombina en plasma (TT) y el tiempo
de tromboplastina parcial activada (APTT) se miden con un
fibrómetro. Se recogen muestras de sangre a partir de un catéter
yugular y se recogen en una jeringuilla que contiene citrato sódico
(3,8 por ciento, 1 parte en 9 partes de sangre). Para medir el TT,
se mezcla plasma de rata (0,1 ml) con solución salina (0,1 ml) y
trombina bovina (0,1 ml, 30 U/ml en tampón Tris; Parke Davis) a
37ºC. Para medir APTT, se incuban plasma (0,1 ml) y solución APTT
(0,1 ml, Organon Teknika) durante 5 minutos (37ºC) y se añade
CaCl_{2} (0,1 ml, 0,025 M) para comenzar la coagulación. Los
ensayos se realizan por duplicado y se promedian.
Para una medida de la biodisponibilidad, el
tiempo de trombina en plasma (TT) sirve como un sustituto para el
ensayo del compuesto precursor asumiendo que los incrementos
observados en TT resultan de la inhibición de trombina por parte
sólo del precursor. El transcurso en el tiempo del efecto del
inhibidor de trombina bajo TT se determina después de la
administración por inyección venosa ultrarrápida i.v. para
anestesiar a las ratas y después del tratamiento oral de las ratas
conscientes en ayunas. Debido a las limitaciones del volumen
sanguíneo y el número de puntos necesarios para determinar la
cinética desde el momento del tratamiento hasta el momento en que la
respuesta vuelve a los valores del pretratamiento, se usan dos
poblaciones de ratas. Cada población muestra representa puntos
temporales secuenciales alternados. El TT medio a lo largo del
transcurso del tiempo se usa para calcular el área bajo la curva
(AUC). El índice de biodisponibilidad se calcula mediante la fórmula
mostrada a continuación y se expresa como el porcentaje de la
actividad relativa.
El área bajo la curva (AUC) de la cinética del TT
plasmático se determina y se ajusta para la dosis. Este índice de
biodisponibilidad se denomina "Actividad Relativa %" y se
calcula de la siguiente forma:
Actividad Relativa %
= \frac{AUC \ po}{AUC \ iv}
\hskip0.3cmx
\hskip0.3cm\frac{Dosis \ iv}{Dosis \ po} \ x \ 100
Las soluciones de compuestos se preparan de nuevo
cada día en solución salina normal y se inyectan en forma de
inyección venosa ultrarrápida o se administran por infusión
empezando 15 minutos antes y continuando a lo largo de la
perturbación experimental que son 15 minutos en el modelo de
derivación arteriovenoso y 60 minutos en el modelo de FeCl_{3} de
lesión arterial y en el modelo de trombolisis espontánea. El volumen
de la inyección venosa ultrarrápida es 1 ml/kg para i.v. y 5 ml/kg
para p.o., y el volumen de infusión es 3 ml/hora.
Los resultados se expresan como medias +/- ETM.
El análisis de una vía de la varianza se usa para detectar
diferencias estadísticamente significativas y después se aplica la
prueba de Dunnett para determinar qué medias son diferentes. El
nivel de significación para el rechazo de la hipótesis nula de
medias iguales es p < 0,05.
Se dejan en ayunas durante toda una noche perros
macho (Beagles; 18 meses-2 años;
12-13 kg, Marshall Farms, North Rose, Nueva York
14516) y 240 minutos después de la dosificación se alimentan con
dieta de prescripción certificada Purina (Purina Mills, St. Louis,
Missouri). El agua está disponible a voluntad. La temperatura
ambiente se mantiene entre 19-23ºC; humedad relativa
es del 45-50%; y con luz desde las
06:00-18:00 horas.
El compuesto de ensayo se formula inmediatamente
antes de la dosificación disolviéndolo en solución salina estéril al
0,9 por ciento para dar una preparación de 5 mg/ml. A los perros se
les administra una única dosis de 2 mg/kg de compuesto de ensayo por
sonda oral. Se recogen muestras de sangre (4,5 ml) de la vena
cefálica 0,25, 0,5, 0,75, 1, 2, 3, 4 y 6 horas después de la
dosificación. Se recogen las muestras en tubos Vacutainer (sistema
de tubos al vacío) citrados y se mantienen en hielo antes de la
reducción a plasma por centrifugación. Las muestras de plasma se
analizan por EM HPLC. La concentración en plasma de los compuestos
de ensayo se registra y se usa para calcular los parámetros
farmacocinéticos: constante de velocidad de eliminación, Ke;
eliminación total, Clt; volumen de distribución, V_{D}; tiempo de
la concentración máxima del compuesto de ensayo en plasma,
T_{max}; concentración máxima del compuesto de ensayo de
T_{max}, C_{max}; semivida en plasma, t_{0,5}; área bajo la
curva, A.U.C.; fracción del compuesto de ensayo absorbido, F.
La preparación e instrumentación quirúrgicas de
los perros es como se describe en Jackson, y col.,
Circulation, 82, 930-940 (1990). Se
anestesian perros de caza de raza mixta (de 6-7
meses de edad, de cualquier sexo, Butler Farms, Clyde, Nueva York,
EE.UU.) con pentobarbital sódico (30 mg/kg por vía intravenosa,
i.v.), se les intuba y se ventilan con aire ambiental. El volumen de
corriente y las tasas respiratorias se ajustan para mantener las
presiones PO_{2}, PCO_{2} y el pH sanguíneos dentro de los
límites normales. Se insertan electrodos de aguja subdérmicos para
el registro de un ECG (electrocardiograma) de derivación II.
La vena yugular izquierda y la arteria carótida
común se aíslan a través de una incisión en el lateral medio
izquierdo del cuello. Se mide continuamente la presión arterial
sanguínea (ABP) con un transductor Millar precalibrado (modelo
(MPC-500, Millar Instruments, Houston, TX, EE.UU.)
insertado en la arteria carótida. Se inserta una cánula en la vena
yugular para tomar muestras de sangre durante el experimento.
Además, se introducen cánulas en las venas femorales de ambas patas
traseras para administrar el compuesto de ensayo.
Se realiza una toracotomía del lado izquierdo en
el quinto espacio intercostal, y el corazón se suspende en una cuna
pericárdica. Se aísla un segmento de 1 a 2 centímetros de la arteria
coronaria circunfleja izquierda (LCX) proximal a la primera rama
ventricular diagonal principal. Se inserta un electrodo anódico de
alambre con extremo de aguja de calibre 26 (recubierto con Teflon,
alambre de cobre plateado de calibre 30) de 3-4 mm
de longitud en la LCX y se sitúa en contacto con la superficie
interna de la arteria (confirmado al final del experimento). El
circuito de estimulación se completa mediante la colocación del
cátodo en un entorno subcutáneo (s.c.). Se coloca un oclusor
plástico ajustable alrededor de la LCX, sobre la región del
electrodo. Se coloca una sonda de flujo electromagnético
precalibrada (Carolina Medical Electronics, King, NC, EE.UU.)
alrededor de la LCX proximal al ánodo para la medición del flujo
sanguíneo coronario (CBF). El oclusor se ajusta para producir una
inhibición del 40-50 por ciento de la respuesta de
flujo sanguíneo hiperémico observada después de 10 segundos de
oclusión mecánica de la LCX. Todas las medidas hemodinámicas y de
ECG se registran y se analizan con un sistema de adquisición de
datos (modelo M3000, Modular Instruments, Malvern, PA, EE.UU.).
Se produce lesión electrolítica de la parte
interna de la LCX por aplicación de una corriente directa de 100
\muA (DC) al ánodo. La corriente se mantiene durante 60 minutos y
después se interrumpe independientemente de si el vaso se ha ocluido
o no. La formación del trombo tiene lugar espontáneamente hasta que
la LCX se ha ocluido totalmente (determinado como CBF cero y un
incremento en el segmento S-T). La administración
del compuesto comienza después de dejar madurar al trombo oclusor
durante una hora. Simultáneamente se inicia una infusión de dos
horas de los compuestos de la presente invención a dosis de 0,5 y 1
mg/kg/hora con una infusión del agente trombolítico (por ejemplo
activador del plasminógeno tisular, estreptoquinasa, APSAC). La
reperfusión continúa durante tres horas después de la administración
del compuesto de ensayo. La reoclusión de las arterias coronarias
después de una trombolisis con éxito se define como CBF cero que
persiste durante al menos 30 minutos.
Los valores de recuentos de célula sanguínea
entera, hemoglobina y hematocrito se determinan sobre una muestra de
40 \mul de sangre citrada (citrada al 3,8 por ciento) (1 parte de
citrato : 9 partes de sangre) con un analizador de hematología
(Cell-Dyn 900, Sequoia-Turner.
Mount View, CA, EE.UU.). Los tiempos de hemorragia patrón de las
encías se determinan con un dispositivo de tiempo de hemorragia
Simplate II (Organon Teknika Durham, N.C., EE.UU.). El dispositivo
se usa para hacer dos incisiones horizontales en la encía de la
mandíbula izquierda superior o inferior del perro. Cada incisión
tiene 3 mm de anchura x 2 mm de profundidad. Se realizan las
incisiones y se usa un cronómetro para determinar cuánto tiempo dura
la hemorragia. Se usa un tapón de algodón para absorber la sangre a
medida que mana de la incisión. El tiempo de hemorragia patrón es el
tiempo desde que se realiza la incisión hasta que se detiene la
hemorragia. Los tiempos de hemorragia se toman justo antes de la
administración del compuesto de ensayo (0 minutos), 60 minutos
durante la infusión, al concluir la administración del compuesto de
ensayo (120 minutos), y al final del experimento.
Todos los datos se analizan mediante un análisis
de una vía de la varianza (ANOVA) seguido de la prueba t a
posteriori de Student-Neuman-Kuels
para determinar el nivel de significación. Las medidas repetidas
ANOVA se usan para determinar las diferencias significativas entre
los puntos temporales durante los experimentos. Los valores se
determinan por ser estadísticamente diferentes al menos al nivel de
p < 0,05. Todos los valores vienen expresados como media +/- ETM.
Todos los estudios se realizan de acuerdo con los principios
directrices de la American Physiological Society. Detalles
adicionales con respecto a los procedimientos se describen en
Jackson, y col., J. Cardiovasc. Pharmacol., (1993),
21, 587-599.
Los siguientes ejemplos se proporcionan para
describir adicionalmente la invención y no se consideran como
limitaciones de la misma.
Las abreviaturas, símbolos y términos usados en
los ejemplos tienen los siguientes significados.
Ac = acetilo
AcOEt = acetato de etilo
AIBN = azobisisobutironitrilo
Anal. = análisis elemental
BAR = Bombardeo por átomos rápidos
(Espectroscopía de masas)
Bn o Bzl = bencilo
Bu = butilo
n-BuLi = butillitio
calcd = calculado
DCC = diciclohexilcarbodiimida
DIBAL-H = hidruro de diisobutil
aluminio
DMF = dimetilformamida
DMSO = dimetilsulfóxido
EMAR = espectro de masas de alta resolución
EMDC = espectro de masas por desorción de
campo
Et = etilo
Et_{3}N = trietilamina
Et_{2}O = dietiléter
EtOH = etanol
EtSH = etanotiol
Hex = hexanos
HOAt =
1-hidroxi-7-azabenzotriazol
HPLC = Cromatografía líquida de alta
resolución
HPLCFI = Cromatografía líquida de alta resolución
de fase inversa
i-PrOH = isopropanol
IR = Espectro infrarrojo
LAH = hidruro de litio y aluminio
Me = metilo
MeI = yoduro de metilo
MeOH = metanol
MP = material de partida
MPLC = cromatografía líquida de presión media
NBS = N-bromosuccinimida
Ph = fenilo
PPA = ácido polifosfórico
i-Pr = isopropilo
RMN = Resonancia Magnética Nuclear
Sal de Rochelle = tartrato de sodio y potasio
SiO_{2} = gel de sílice
TBS = terc-butildimetilsililo
TEA = trietilamina
Temp. = temperatura
TFA = ácido trifluoroacético
THF = tetrahidrofurano
TIPS = triisopropilsililo
TLC = cromatografía en capa fina
Ácido tríflico = ácido
trifluorometanosulfónico.
A menos que se establezca de otra forma, los
ajustes de pH y los tratamientos se realizan con soluciones acuosas
ácidas o básicas. CLprep indica cromatografía líquida preparativa
usando cartuchos de sílice "Prep Pak (TM)"; cromatografía
radial indica cromatografía preparativa usando un instrumento
"Chromatotron (TM)".
Una mezcla del ácido
4-metilsalicílico (20 g, 131,5 mmol), CH_{3}I
(74,7 g, 526,3 mmol), K_{2}CO_{3} (36,2 g, 262 mmol) y acetona
(250 ml) se mantuvo a reflujo durante cuatro días. Después de
filtrar, el filtrado se concentró a presión reducida y el residuo
resultante se recogió en Et_{2}O y se lavó con NaOH 2N. El
extracto orgánico se concentró a presión reducida. A partir de este
material bruto, se recogieron 10 gramos (55,6 mmol) en CCl_{4}
(100 ml) y N-bromosuccinimida (10,8 g, 61,1 mmol) y
se añadió una cantidad catalítica de AIBN. La mezcla se calentó a
reflujo durante cuatro horas y después se diluyó diez veces con
Et_{2}O. Los extractos orgánicos se lavaron con NaOH al 25%
(acuoso) y se concentró a presión reducida. El producto bruto se
recristalizó con AcOEt-hexanos para dar 14,2 g (99%)
del bromuro deseado.
^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta
7,77 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 6,99 (s, 1H),
4,47 (s, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,91 (s, 3H).
A
4-amino-3-nitrofenol
(20 g, 128,9 mmol) se le añadió cloruro de
terc-butildimetilsililo (21,5 g, 142,9 mmol), imidazol (13,3
g, 194,8 mmol), y DMF (100 ml). La mezcla se agitó a temperatura
ambiente durante tres horas y después se diluyó con Et_{2}O y se
lavó con H_{2}O. Los extractos orgánicos se concentraron a presión
reducida y el sólido resultante se recristalizó con
Et_{2}O-H_{2}O; dando lugar a 26,5 g (76%) de
producto.
^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta
7,56 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,95 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 6,70 (d, J = 9,0
Hz, 1H), 0,97 (s, 9H), 0,19 (s, 6H); EMDC 268.
Al bromuro (ejemplo 1, parte A; 2,5 g, 9,65 mmol)
se le añadió K_{2}CO_{3} (0,89 g, 6,44 mmol), anilina (ejemplo
1, parte B; 1,72 g, 6,44 mmol), y CH_{3}CN (30 ml). La mezcla se
calentó a 80ºC durante una noche. Después de diluir 20 veces con
AcOEt, los extractos orgánicos se lavaron con H_{2}O y se
concentraron a presión reducida para dar 1,5 gramos (52%) del
producto deseado después de llevar a cabo una purificación por
cromatografía ultrarrápida (SiO_{2}, 7:1
hexanos-AcOEt).
^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta
8,2 (s, 1H), 7,8 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 7,05
(d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,95 (m, 2H), 6,63 (d, J = 13,8 Hz, 1H), 4,55
(d, J = 9 Hz, 2H), 3,92 (s, 3H), 3,88 (s, 3H), 0,95 (s, 9H), 0,20
(s, 6H); EMDC 446.
Al compuesto nitro anterior (ejemplo 1, parte C;
0,5 g, 1,11 mmol) se le añadió catalizador PtO_{2} (catalizador de
Adam) (0,025 g) y EtOH (absoluto, 40 ml). La mezcla se agitó
rápidamente en atmósfera de hidrógeno (mediante globo) durante 1,5
horas y después el catalizador se retiró por filtración sobre un
lecho de tierra de diatomeas. El filtrado se concentró a presión
reducida para dar 460 mg (99%) del producto deseado.
^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta
7,77 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 6,47 (d, J = 8,3
Hz, 1H), 6,29 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 6,22 (dd, J = 2,6, 8,3 Hz, 1H),
4,27 (s, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 0,96 (s, 9H), 0,15 (s,
6H); EMDC 416.
Al ácido
4-[2-(1-pirrolidinil)etoxi]benzoico
(350 mg, 1,29 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (2 ml) se le añadió cloruro
de oxalilo (327 mg, 2,58 mmol) y una cantidad catalítica de DMF. La
mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una hora y después se
concentró a presión reducida. El cloruro de ácido se secó, a vacío,
durante una noche. A la anilina (ejemplo 1, parte D; 0,49 g, 1,17
mmol), en piridina (0,158 g, 2,34 mmol) y CH_{2}Cl_{2} (3 ml) a
0ºC y bajo atmósfera de nitrógeno, se le añadió gota a gota el
cloruro de ácido formado previamente (véase ejemplo 5, parte D) en 4
ml de CH_{2}Cl_{2}. Al completarse la adición, la mezcla se
agitó durante quince minutos a temperatura ambiente y después la
reacción se inactivó mediante la adición de disolución saturada de
NaHCO_{3}. El producto se extrajo con AcOEt, los extractos
orgánicos se lavaron con H_{2}O, y se concentraron a presión
reducida para dar lugar a 583 mg del producto deseado después de la
purificación por cromatografía ultrarrápida (SiO_{2}, MeOH al 10%
en CHCl_{3}).
^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta
8,31 (s, 1H), 7,81 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 7,8 Hz, 1H),
7,27 (s, 2H), 6,94 (m, 4H), 6,65 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,57 (dd, J =
2,6, 8,5 Hz, 1H), 4,27 (s, 2H), 4,15 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 3,86 (s,
3H), 3,81 (s, 3H), 2,93 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 2,65 (s, 4H), 1,83 (s,
4H), 0,96 (s, 9H), 0,17 (s, 6H); EMDC 633.
A la amida anterior (ejemplo 1, parte E; 3,95 g,
6,23 mmol) se le añadió o-xileno (50 ml) y la mezcla se
calentó a reflujo durante una noche. Después de concentrar la mezcla
a presión reducida el residuo resultante se purificó por
cromatografía ultrarrápida (SiO_{2}, MeOH al 5% en CHCl_{3} con
Et_{3}N añadido al 1% v/v); dando lugar a 3,1 g (82%) del producto
deseado.
^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta
7,78 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,58 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,31 (d, J = 2,3
Hz, 1H), 6,99 (m, 3H), 6,80 (dd, J = 2,26, 8,67 Hz, 1H), 6,76 (d, J
= 9,4 Hz, 1H), 6,67 (s, 1H), 5,41 (s, 2H), 4,24 (t, J = 7,1 Hz, 2H),
3,90 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,05 (t, J = 7,16 Hz, 2H), 2,78 (s, 4H),
1,89 (s, 4H), 1,02 (s, 9H), 0,23 (s, 6H); EMDC 615.
A LAH, (31 mg, 0,829 mmol), en THF (10 ml) a 0ºC
y bajo atmósfera de N_{2}, se le añadió el éster (ejemplo 1, parte
F; 0,51 g, 0,829 mmol). La mezcla se agitó durante 25 minutos a 0ºC
y después 25 minutos a temperatura ambiente. Después de inactivar
secuencialmente la mezcla con 30 \mul de H_{2}O, 30 \mul de
NaOH al 15%, y 90 \mul de H_{2}O, la mezcla se agitó durante 1
hora y las sales de aluminio resultantes se retiraron por filtración
sobre un lecho de tierra de diatomeas, seguido de lavados con AcOEt
(3 x 25 ml). El filtrado se concentró después a presión reducida y
el residuo resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida
(SiO_{2}, MeOH al 10% en CHCl_{3}); para dar lugar a 283 mg
(58%) del alcohol bencílico deseado.
^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta
7,58 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,27 (m, 2H), 6,96 (m, 3H), 6,76 (dd, J =
2,3, 6,5 Hz, 1H), 6,67 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,55 (s, 1H), 5,35 (s,
2H), 4,66 (s, 2H), 4,14 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 3,68 (s, 3H), 2,92 (t,
J = 5,7 Hz, 2H), 2,65 (s, 4H), 1,81 (s, 4H), 1,01 (s, 9H), 0,23 (s,
6H); EMDC 587.
Al alcohol bencílico (ejemplo 1, parte G; 50 mg,
0,085 mmol) se le añadió CBr_{4} (42 mg, 0,128 mmol), PPh_{3}
(29 mg, 0,128 mmol) y THF (0,5 ml). La mezcla se agitó a temperatura
ambiente durante 45 minutos y después se añadió la sal de sodio de
1,2,4-triazol (17 mg, 0,255 mmol), en THF (1 ml). La
sal de sodio del triazol se preparó añadiendo el mismo número de
equivalentes de NaH (60%) al triazol en THF y la mezcla se agitó
durante 45 minutos. Después de la adición del triazol, la mezcla se
agitó durante 3 horas y después se diluyó 25 veces con AcOEt. Los
extractos orgánicos se lavaron con H_{2}O y se concentraron a
presión reducida. El residuo resultante se purificó por
cromatografía ultrarrápida (SiO_{2}, MeOH al 15% en CHCl_{3}).
Este compuesto después se recogió en TFA (2 ml), se dejó reposar
durante 1 hora y después se concentró a presión reducida. El
material después se recogió en AcOEt, se añadieron 2 equivalentes de
ácido oxálico 0,1 N (en AcOEt) y el sólido resultante se recogió por
centrifugación; dando lugar a 10 mg de un sólido blanco (17%).
^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta
8,14 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,57 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,36 (s, 1H),
7,20 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,96 (d, J = 8,7
Hz, 2H), 6,83 (dd, J = 2,0, 8,6 Hz, 1H), 6,73 (d, J = 8,4 Hz, 1H),
6,63 (s, 1H), 5,38 (s, 2H), 5,35 (s, 2H), 4,17 (t, J = 5,9 Hz, 2H),
3,73 (s, 3H), 2,97 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 2,71 (s, 4H), 1,87 (s, 4H);
EM BAR 525,3 (M+1).
Al alcohol bencílico (ejemplo 1, parte G; 310 mg,
0,528 mmol) se le añadió CBr_{4} (262 mg, 0,792 mmol), PPh_{3}
(179 mg, 0,792 mmol), y THF (1 ml). La mezcla se agitó a temperatura
ambiente durante una hora y después se añadió una mezcla de la sal
sódica de imidazol (108 mg, 1,58 mmol, en 2,5 ml de THF), formada
previamente durante una hora a partir de una cantidad equimolar de
NaH en THF. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente
durante 3,5 horas y después se diluyó 25 veces con AcOEt. Los
extractos orgánicos se lavaron con H_{2}O y se concentraron a
presión reducida. El material se purificó mediante cromatografía
ultrarrápida (SiO_{2}, MeOH al 10% en CHCl_{3}). Al sólido
resultante se le añadió TBAF 1,0 M (0,31 ml, 0,314 mmol) y la
solución se agitó a temperatura ambiente durante 2,5 horas. Después
de diluir 25 veces con AcOEt, los extractos orgánicos se lavaron con
H_{2}O y se concentraron a presión reducida. El residuo resultante
se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (SiO_{2}, MeOH al
15% en CHCl_{3}). Después de recoger la espuma resultante en AcOEt
(5 ml), la sal dioxalato se formó añadiendo 2 equivalentes de ácido
oxálico 0,1 N (en AcOEt) y se recogió el sólido blanquecino (77 mg,
37%) mediante centrifugación.
^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta
7,52 (m, 3H), 7,04 (d, J = 6,3 Hz, 2H), 6,92 (m, 6H), 6,59 (s, 2H),
5,29 (s, 2H), 5,04 (s, 2H), 4,21 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 3,69 (s, 3H),
3,09 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 2,89 (s, 4H), 1,91 (s, 4H).
El compuesto del título se preparó con un
rendimiento del 67% a partir del alcohol bencílico (ejemplo 1, parte
G) y la sal sódica de pirazol esencialmente siguiendo el
procedimiento detallado en el ejemplo 2.
^{1}H-RMN (CD_{3}OD) \delta
7,75 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,62 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,48 (m, 2H),
7,27 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,12 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,05 (d, J = 8,4
Hz, 1H), 6,86 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 6,60 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,28
(s, 1H), 5,66 (s, 2H), 5,29 (s, 2H), 4,46 (s, 2H), 3,78 (s, 3H),
3,70 (m a, 2H), 3,68 (t, J = 3,7 Hz, 2H), 3,30 (m a, 2H), 2,10 (s,
4H); EM BAR 524,4 (M+1).
Al alcohol bencílico (ejemplo 1, parte G, 50 mg,
0,085 mmol) se le añadió N-óxido de N-metilmorfolina
(15 mg, 0,128 mmol), tamiz molecular de 4\ring{A} (43 mg,
pulverizado), perrutenato de tetrapropilamonio (1,5 mg, 0,05 mmol) y
CH_{2}Cl_{2} (0,25 ml). La mezcla se agitó, bajo atmósfera de
nitrógeno, durante 35 minutos y después se diluyó 25 veces con
AcOEt. La suspensión se filtró a través de un lecho de gel de sílice
60, se lavó con AcOEt (25 ml) y el filtrado se concentró a presión
reducida. Al aldehído resultante se le añadió NaCNBH_{3} (6 mg,
0,091 mmol), AcOH al 10% en MeOH (0,28 ml) y bencilamina (18 mg,
0,175 mmol) en MeOH (0,28 ml). La mezcla se agitó a temperatura
ambiente durante una hora y después se concentró a presión reducida.
Después de recoger el residuo resultante en AcOEt (25 ml), los
extractos orgánicos se lavaron con solución saturada de NaHCO_{3}
y H_{2}O y se concentraron a presión reducida. El material se
purificó por cromatografía ultrarrápida (SiO_{2}, MeOH al 15% en
CHCl_{3}); para dar 22 mg (38%).
^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta
7,62 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,21-7,35 (m, 7H), 7,03
(d, J = 8,6 Hz, 2H), 6,98 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,78 (dd, J = 2,1,
8,8 Hz, 1H), 6,68 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,57 (s, 1H), 5,38 (s, 2H),
4,18 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 3,81 (s, 2H), 3,79 (s, 2H), 3,68 (s, 3H),
2,97 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 2,69 (s, 4H), 1,85 (s, 4H), 1,01 (s, 9H),
0,23 (s, 6H); EMDC 677,2 (M+1).
A la amina bencílica (ejemplo 4, parte A; 20 mg,
0,03 mmol) se le añadió HCl 6 N (1 ml) y la mezcla se agitó a
temperatura ambiente durante una hora. La solución se diluyó con 5
ml de H_{2}O, se lavó con Et_{2}O, y la fase acuosa se concentró
a presión reducida; dando lugar a 17 mg (89%) del producto
deseado.
^{1}H-RMN (CD_{3}OD) \delta
7,83 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,43-7,55 (m, 5H), 7,34
(t, J = 5,1 Hz, 3H), 7,15 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 7,1 Hz,
1H), 7,00 (s, 1H), 6,71 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 5,76 (s, 2H), 4,51 (s,
2H), 4,22 (s, 2H), 4,14 (s, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,73 (s, 4H), 3,28
(s, 2H), 2,07-2,2 (d a, 4H); EM BAR 563,4 (M+1).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución del ácido
4-hidroxibenzoico (138 g, 1,00 mol) en metanol (1000
ml) se le añadió ácido sulfúrico concentrado (20 ml), después la
reacción se calentó a reflujo durante 20 horas. La mezcla de
reacción se concentró a la mitad del volumen original a presión
reducida y después se repartió con acetato de etilo (1000 ml) y agua
(1000 ml). La fase orgánica se lavó con hidróxido sódico acuoso 1N
(2 x 300 ml), agua (300 ml), salmuera (300 ml) y después se secó
(MgSO_{4}). El disolvente se retiró a presión reducida para dar el
éster en forma de sólido blanco (106,62 g, 70%) después de secar a
vacío y a temperatura ambiente.
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl_{3})
\delta 7,98 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 6,88 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 5,47
(s, 1H), 3,91 (s, 3H).
A una solución de
4-hidroxibenzoato de metilo (4,56 g, 30 mmol) en DMF
seco (60 ml) se añadió carbonato de cesio (31,3 g, 96 mmol, 3,2
equivalentes) y clorhidrato de
1-(2-cloroetil)pirrolidina (8,1 g, 48 mmol,
1,6 equivalentes). La reacción se calentó a 80ºC durante 20 horas.
La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y después se
añadió agua (240 ml). La mezcla se repartió con acetato de etilo
(250 ml). La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (50 ml).
Los extractos combinados se lavaron con agua (240 ml), salmuera (50
ml), se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y después se concentró
hasta sequedad a presión reducida. El residuo se purificó por
cromatografía ultrarrápida (hexano:THF:TEA 90:5:5) para dar el
producto deseado en forma de un aceite (5,3 g, 71%).
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl_{3})
\delta 7,98 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,95 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 4,19
(t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,91 (s, 3H), 2,93 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,64 (m
a, 4H), 1,82 (m a, 4H).
Se calentó a reflujo durante 18 horas
4-[2-(1-pirrolidinil)etoxi]benzoato de
metilo (5,3 g, 21,2 mmol) en HCl acuoso 1N (50 ml). La mezcla de
reacción se lavó con acetato de etilo (2 x 20 ml). El disolvente
acuoso se retiró a presión reducida para dar el ácido deseado en
forma de un sólido blanco (5,55 g, 96%) después de haberlo secado a
vacío y a temperatura ambiente.
^{1}H-RMN (300 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta 7,87 (d, J = 8,6 Hz, 2H),
7,05 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 4,18 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,58 (m, 4H),
3,10 (m a, 2H), 2,00 (m a, 2H), 1,82 (m a, 2H).
A una suspensión del clorhidrato del ácido
4-[2-(1-pirrolidinil)etoxi]benzoico
(750 mg, 2,76 mmol) en diclorometano seco (10 ml) se le añadió
cloruro de oxalilo (0,481 ml, 5,62 mmol, 2,0 equivalentes) y después
una cantidad catalítica de DMF. Después de una hora, la mezcla de
reacción se filtró a través de un lecho de tierra de diatomeas,
posteriormente el disolvente se retiró a presión reducida. El
residuo se trató con exceso de hidróxido de amonio concentrado en
THF (5 ml de cada uno). Las fases se separaron mediante la adición
de salmuera (10 ml); después la fase acuosa se extrajo con THF (2 x
20 ml). Los extractos combinados se concentraron a sequedad a
presión reducida para dar la amida deseada en forma de un sólido
blanco (602 mg, 93%) después de secar a vacío y a temperatura
ambiente.
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl_{3})
\delta 7,78 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,95 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 4,16
(t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,93 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,64 (m a, 4H), 1,82
(m a, 4H).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadió hidruro de litio y aluminio (132 mg,
3,49 mmol, 2,1 equivalentes) a una solución de
4-[2-(1-pirrolidinil)etoxi]benzamida
(389 mg, 1,66 mmol) en THF seco (25 ml) y después la reacción se
calentó a reflujo durante 20 horas. La reacción se dejó enfriar a
temperatura ambiente y después se inactivó con agua (0,250 ml). Se
añadió hidróxido sódico acuoso (0,250 ml de una solución al 15% p/v)
y después agua (0,750 ml) y la reacción se agitó durante 30 minutos.
La mezcla de reacción se pasó a través de un lecho de tierra de
diatomeas que se lavó con THF (3 x 15 ml). Los extractos orgánicos
combinados se concentraron a presión reducida para dar la amina en
forma de aceite (372 mg, >100%) que se usó sin purificación
adicional.
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl_{3})
\delta 7,14 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,82 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 4,02
(t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,17 (s, 2H), 2,82 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,55 (m
a, 4H), 1,74 (m a, 4H).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se combinaron
2-fluoronitrobenceno (0,175 ml, 1,66 mmol, 1,0
equivalentes),
4-[2-(1-pirrolidinil)etoxi]bencilamina
(366 mg, 1,66 mmol) y carbonato potásico anhidro (460 mg, 3,32 mmol,
2,0 equivalentes) en THF seco (16 ml) y después se dejó agitar
durante 18 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se
filtró a través de un lecho de tierra de diatomeas, después el
disolvente se retiró a presión reducida. El aceite bruto se purificó
mediante cromatografía ultrarrápida (eluyendo con CHCl_{3}:MeOH
20:1, TEA al 0,5%) para dar la nitroanilina sustituida en forma de
un aceite amarillo brillante (252 mg, 44%).
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl_{3})
\delta 8,34 (s a, 1H), 8,17 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,37 (t, J = 6,0
Hz, 1H), 7,25 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,91 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,82
(d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,63 (t, J = 9,0 Hz, 1H), 4,45 (d, J = 6,0 Hz,
2H), 4,10 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,90 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,63 (m a,
4H), 1,80 (m a, 4H); EMDC m/e 342,3 (M+H); EM BAR m/e 341,2
(M^{+}).
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Se añadió catalizador de Adam (50 mg, 20% en
peso) a una solución desgasificada de
N-[4-[2-(1-pirrolidinil)etoxi]bencil]-2-nitroanilina
(240 mg, 0,703 mmol) en etanol absoluto (5 ml). La atmósfera se
reemplazó con hidrógeno, después la reacción se agitó vigorosamente
a temperatura ambiente hasta que se consumió todo el compuesto nitro
según se determinó por TLC (CHCl_{3}:MeOH 9:1, TEA al 1%). La
mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de tierra de
diatomeas, después el disolvente se retiró a presión reducida para
dar el producto deseado en forma de un aceite de color amarillo
pardoso (218 mg, 100%).
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl_{3})
\delta 7,30 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,90 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,81
(t, J = 9,0 Hz, 1H), 6,75 (m, 3H), 4,23 (s, 2H), 4,17 (t, J = 6,0
Hz, 2H), 3,00 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,77 (m a, 4H), 1,89 (m a,
4H).
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\vskip1.000000\baselineskip
A una solución de
N^{1}-[4-[2-(1-pirrolidinil)etoxi]bencil]-1,2-bencenodiamina
(220 mg, 0,706 mmol) en diclorometano seco (2 ml) se le añadió
piridina (0,114 ml, 1,41 mmol, 2,0 equivalentes). A la solución
resultante se le añadió una suspensión de cloruro de
4-[2-(1-pirrolidinil)etoxi]benzoílo
(179 mg, 0,706 mmol, 1,0 equivalentes) en diclorometano seco (3 ml),
en porciones, a 0ºC, siguiendo la reacción por TLC (CHCl_{3}:MeOH
9:1, TEA al 1%). Una vez que la anilina se consumió, la reacción se
dejó calentar a temperatura ambiente. La reacción se inactivó
mediante la adición de solución acuosa saturada de bicarbonato
sódico (15 ml) y después se diluyó con acetato de etilo (60 ml). La
fase orgánica se lavó con una disolución acuosa saturada de
bicarbonato sódico (15 ml), agua (15 ml), salmuera (15 ml), se secó
sobre MgSO_{4}, se filtró y después el disolvente se retiró a
presión reducida. El producto deseado se obtuvo después de la
purificación por cromatografía ultrarrápida (eluyendo con
CHCl_{3}:MeOH 20:1, TEA al 0,5%) en forma de una espuma marrón
(361 mg, 97%).
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl_{3})
\delta 8,57 (s a, 1H), 7,83 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,22 (t, J = 9,0
Hz, 1H), 7,18 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,02 (t, J = 9,0 Hz, 1H), 6,82
(d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,75 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,65 (m, 2H), 4,59 (s
a, 1H), 4,17 (s, 2H), 4,02 (m, 4H), 2,90 (m, 4H), 2,66 (m a, 8H),
1,77 (m a, 8H); EMDC m/e 529 (M+1); EMAR BAR calcd. para
C_{32}H_{41}N_{4}O_{3}: 529,3179, encontrado: 529,3170; IR
(CHCl_{3}) 2968, 1662, 1607, 1511, 1474, 1458, 1305, 1248, 1176
cm^{-1}.
El compuesto del título se preparó disolviendo
N^{1}-[4-[2-(1-pirrolidinil)etoxi]bencil]-N^{2}-[4-[2-(1-pirrolidinil)etoxi]benzoil]-1,2-bencenodiamina
(361 mg, 0,683 mmol) en o-xileno (6 ml) y calentando después
a 150ºC, siguiendo la reacción por TLC (CHCl_{3}:MeOH 9:1, TEA al
1%). Una vez que la amida se consumió, la reacción se dejó enfriar a
temperatura ambiente. El disolvente se retiró a presión reducida. El
producto deseado se obtuvo después de purificar por cromatografía
ultrarrápida (eluyendo con CHCl_{3}:MeOH 20:1, TEA al 0,5%) para
dar un cristal (218 mg, 62%) después de la retirada del disolvente a
presión reducida. La sal oxalato se formó por disolución en acetato
de etilo (1 ml) seguido de la adición de una solución de ácido
oxálico en acetato de etilo (0,426 ml de una solución 0,1 M). Se
decantó el sobrenadante situado sobre la goma resultante y después
la goma se lavó con acetato de etilo (2 x 1 ml). La goma se trituró
con éter dietílico para dar un sólido más manejable (185 mg,
57%).
^{1}H-RMN (300 MHz, CD_{3}OD)
\delta 7,75 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,61 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,58
(d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,25 (m, 2H), 7,15
(d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,91 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,88 (d, J = 9,0 Hz,
2H), 5,46 (s, 2H), 4,35 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 4,21 (t, J = 6,0 Hz,
2H), 3,53 (m, 4H), 3,32 (m a, 8H), 2,02 (m a, 8H); EMDC m/e 511,2
(M+1); EMAR BAR calcd. para C_{32}H_{39}N_{4}O_{2}:
511,3037, encontrado: 511,3067; IR (CHCl_{3}) 2969, 1612, 1513,
1460, 1246 cm^{-1}.
Se combinó
3-metoxi-4-[(1-pirrolidinil)metil]benzoato
de metilo (preparado por bromación de
3-metoxi-4-metilbenzoato
de metilo mediante el procedimiento del ejemplo 1, parte A, seguido
del tratamiento con pirrolidina) (11,56 g, 46,4 mmol) con hidróxido
sódico (3,71 g, 92,7 mmol, 2,00 equivalentes) en etanol absoluto (95
ml). Después de 72 horas, la mezcla de reacción se volvió ácida a pH
1 mediante la adición de HCl concentrado. El disolvente se retiró a
presión reducida para dar el clorhidrato del ácido correspondiente
en forma de un sólido blanco (17,92 g, 99%).
^{1}H-RMN (300 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta 7,71 (d, J = 7,6 Hz, 1H),
7,55 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,54 (s, 1H), 4,33 (s, 2H), 3,89 (s, 3H),
3,35 (m a, 2H), 3,05 (m a, 2H), 1,92 (m a, 4H).
Se suspendió clorhidrato del ácido
3-metoxi-4-[(1-pirrolidinil)metil]benzoico
(15,93 g, 41,1 mmol) en diclorometano (200 ml) y se añadieron unas
pocas gotas de DMF. Se añadió gota a gota cloruro de oxalilo (676
mg, 58%) y después la reacción se dejó agitar durante 3 horas
después de completarse la adición. La reacción se filtró a través de
un lecho de tierra de diatomeas, después el disolvente se retiró a
presión reducida. El residuo se trató con exceso de hidróxido
amónico concentrado (20 ml) y THF (40 ml). La fase acuosa se saturó
con cloruro sódico y después se extrajo exhaustivamente con THF (4 x
50 ml). El disolvente se retiró a presión reducida para dar el
producto deseado en forma de un sólido tostado (11,2 g, 99%).
^{1}H-RMN (300 MHz, CHCl_{3})
\delta 7,48 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,26 (d, J = 8,7
Hz, 1H), 6,10 (s a, 1H), 5,65 (s a, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,73 (s, 2H),
2,61 (m a, 4H), 1,83 (m a, 4H); IR (CHCl_{3}) 3009, 2968, 2938,
1673, 1585, 1464, 1414, 1365, 1350, 1250, 1107, 1038 cm^{-1}; EMDC
m/e 234 (M+); Anal. calcd. para C_{13}H_{18}N_{2}O_{2}1/3
H_{2}O: C, 64,98; H, 7,83; N, 11,66; encontrado: C, 64,92; H,
7,54; N, 11,53.
Se combinó
3-metoxi-4-[(1-pirrolidinil)metil]benzamida
(11,2 g, 47,8 mmol) con hidruro de litio y aluminio (3,8 g, 100
mmol, 2,10 equivalentes) en THF seco (320 ml). La reacción se
calentó a reflujo hasta que toda la amida de partida se consumió
según se comprobó por TLC (CHCl_{3}:MeOH 9:1, TEA al 1%). La
mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y después
se añadió lentamente agua (5 ml). Después de 15 minutos, se añadió
hidróxido sódico acuoso (5 ml de solución al 15% p/v) seguido de más
agua (15 ml). Después de 10 minutos, la mezcla de reacción se filtró
a través de un lecho de tierra de diatomeas. El disolvente se retiró
a presión reducida para dar la amina en forma de un aceite de color
ámbar (7,95 g, 76%).
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl_{3})
\delta 7,34 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 6,88
(s, 1H), 3,90 (s, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,69 (s, 2H), 2,60 (m a, 4H),
1,82 (m a, 4H). EMDC m/e 220,1 (M+); IR (CHCl_{3}) 303, 2964,
2937, 2915, 2878, 2804, 1613, 1506, 1464, 1418, 1262, 1109, 1040,
868 cm^{-1}.
Se combinaron
2-fluoronitrobenceno (0,358 ml, 3,4 mmol, 1,0
equivalentes),
3-metoxi-4-[(1-pirrolidinil)metil]bencilamina
(750 mg, 3,4 mmol) y carbonato potásico anhidro (471 mg, 3,4 mmol,
1,0 equivalentes) en THF seco (35 ml) y después se dejó agitar
durante 48 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se
filtró a través de un lecho de tierra de diatomeas, después el
disolvente se retiró a presión reducida. El aceite bruto se purificó
mediante cromatografía ultrarrápida (eluyendo con CHCl_{3}:MeOH
20:1, TEA al 0,5%) para dar el producto deseado en forma de un
aceite naranja brillante (676 mg, 58%).
^{1}H-RMN (300 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta 8,61 (t, J = 5,5 Hz, 1H),
8,08 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,42 (t, J = 8,7 Hz, 1H), 6,95 (s, 1H),
6,94 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,85 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,62 (t, J = 5,5
Hz, 1H), 4,58 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,57 (s, 2H), 3,38
(s a, 1H), 2,46 (m a, 4H), 1,72 (m a, 4H); IR (CHCl_{3}) 1619,
1575, 1512, 1420, 1266, 1244 cm^{-1}; EMDC m/e 341 (M+); EMAR BAR
calcd. para C_{19}H_{24}N_{3}O_{3}: 342,1818; encontrado:
342,1815. Anal. calcd. para C_{19}H_{23}N_{3}O_{3} H_{2}O:
C, 63,49; H, 7,01:; N, 11,69; encontrado: C,63,25; H, 6,53; N,
11,30.
El compuesto del título se preparó mediante la
adición de catalizador de Adam (160 mg, 10% en peso) a una solución
desgasificada de
N-[3-metoxi-4-[(1-pirrolidinil)metil]bencil]-2-nitroanilina
(1,6 g, 4,69 mmol) en etanol absoluto (25 ml). La atmósfera se
reemplazó con hidrógeno, después la reacción se agitó vigorosamente
a temperatura ambiente hasta que se consumió todo el compuesto nitro
según se determinó por TLC (CHCl_{3}:MeOH 9:1, TEA al 1%). La
mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de tierra de
diatomeas, después el disolvente se retiró a presión reducida para
dar la diamina en forma de un aceite de color amarillo pardoso (1,46
g, 100%).
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl_{3})
\delta 7,35 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,93
(s, 1H), 6,85-6,64 (m, 4H), 4,30 (s, 2H), 3,83 (s,
3H), 3,74 (s, 2H), 2,77 (m a, 4H), 1,89 (m a, 4H).
Se combinó 4-hidroxibenzoato de
metilo (5,0 g, 32,86 mmol) con 1,2-dibromoetano (35
ml) y carbonato potásico (6,8 g, 49,23 mmol, 1,5 equivalentes) y
después se calentó a reflujo durante 18 horas. La mezcla de reacción
se concentró a presión reducida y posteriormente el residuo se
repartió entre éter etílico (500 ml) y agua (200 ml). El éter se
extrajo con hidróxido sódico 2N (5 x 50 ml). El disolvente se retiró
a presión reducida para dar el producto deseado en forma de un
sólido blanco (8,47 g, 99%).
^{1}H-RMN (300 MHz, CHCl_{3})
\delta 8,00 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,93 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 4,35
(t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,90 (s, 3H), 3,66 (t, J = 6,0 Hz, 2H).
Se añadió pirazol (788 mg, 11,6 mmol, 3,0
equivalentes) a una suspensión de hidruro sódico (463 mg de una
solución al 60% p/p, 11,6 mmol, 3,0 equivalentes) en THF (10 ml).
Después de una hora, la suspensión de la sal sódica de pirazol
formada de esta manera se añadió a una solución de
4-(2-bromoetoxi)benzoato de metilo (1,0 g,
3,86 mmol) y una cantidad catalítica de yoduro de tetrabutilamonio
en THF seco (10 ml). La reacción se calentó a reflujo durante 18
horas. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida antes
de que el residuo se repartiera entre acetato de etilo (150 ml) e
hidróxido de sodio 2N (50 ml). La fase acuosa se volvió ácida hasta
pH 3 con HCl concentrado, y el sólido resultante se recogió mediante
filtración por succión, después se secó al aire para dar el ácido en
forma de un sólido blanco (690 mg, 77%).
^{1}H-RMN (300 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta 7,83 (d, J = 9,0 Hz, 2H),
7,75 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 6,95 (d, J = 9,0
Hz, 2H), 6,21 (t, J = 1,7 Hz, 1H), 4,48 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 4,37
(t, J = 6,0 Hz, 2H).
Se suspendió el clorhidrato del ácido
3-metoxi-4-[(1-pirrolidinil)metil]benzoico
(250 mg, 1,08 mmol) en diclorometano (10 ml) y se añadió una gota de
DMF. Se añadió gota a gota cloruro de oxalilo (0,197 ml, 2,26 mmol,
2,1 equivalentes) y después la reacción se dejó agitar durante 2
horas después de completarse la adición. La reacción se filtró a
través de un lecho de tierra de diatomeas, después el disolvente se
retiró a presión reducida. El compuesto del título se preparó a
partir de
N^{1}-[3-metoxi-4-[(1-pirrolidinil)metil]bencil]-1,2-bencenodiamina
(parte E anterior) y del cloruro de ácido descrito anteriormente con
un rendimiento del 56% siguiendo esencialmente el mismo
procedimiento que para el ejemplo 5, parte H.
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl_{3})
\delta 8,82 (s a, 1H), 7,94 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,51 (d, J = 1,8
Hz, 1H), 7,50 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,39 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,24
(d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,03 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 6,99 (s, 1H), 6,90
(d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,82 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,67 (t, J = 7,7 Hz,
1H), 6,60 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,23 (t, J = 1,5 Hz, 1H), 4,90 (s a,
1H), 4,49 (t, J = 5,1 Hz, 2H), 4,30 (m, 4H), 4,05 (s, 2H), 3,75 (s,
3H), 3,12 (m a, 4H), 1,94 (m a, 4H).
El compuesto del título se preparó disolviendo
N^{1}-[3-metoxi-4-[(1-pirrolidinil)metil]bencil]-N^{2}-[4-[2-(1-pirazolil)etoxi]benzoil]-1,2-bencenodiamina
(67 mg, 0,127 mmol) en o-xileno (10 ml) y calentando después
a 150ºC durante 18 horas. La reacción se dejó enfriar a temperatura
ambiente, el disolvente se retiró a presión reducida. El residuo se
pasó a través de un lecho de gel de sílice con CHCl_{3}:MeOH 30:1,
TEA al 0,5% para retirar las impurezas no polares. El residuo se
purificó mediante HPLC preparativa en fase inversa para dar el
compuesto del título en forma de la sal diclorhidrato (11 mg,
15%).
^{1}H-RMN (300 MHz, CD_{3}OD)
\delta 8,15 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,88 (d, J = 8,0 Hz, 2H),
7,83-7,78 (m, 2H), 7,77-7,59 (m,
2H), 7,41 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 7,26 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,03 (s,
1H), 6,73 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 6,60 (s, 1H), 5,82 (s, 2H), 4,81 (d,
J = 6,0 Hz, 2H), 4,54 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 4,34 (s, 2H), 3,86 (s,
3H), 3,46 (m a, 2H), 3,17 (m a, 2H), 2,15 (m a, 2H), 2,02 (m a, 2H);
EMDC m/e 508 (M+H).
Se añadió 2-pirrolidinona (0,859
ml, 11,3 mmol, 2,6 equivalentes) a una suspensión de hidruro sódico
(452 mg de una solución al 60% p/p, 11,3 mmol, 2,6 equivalentes) en
THF (10 ml). Después de una hora, la suspensión de la sal sódica de
2-pirrolidinona formada de esta manera se añadió a
una solución de 4-(2-bromoetoxi)benzoato de
metilo (1,17 g, 4,52 mmol) y una cantidad catalítica de yoduro de
tetrabutilamonio en THF seco (10 ml). La reacción se calentó a
reflujo durante 18 horas. La mezcla de reacción se concentró a
presión reducida y después el residuo se repartió entre acetato de
etilo (150 ml) e hidróxido de sodio 2N (50 ml). La fase acuosa se
volvió ácida hasta pH 3 con HCl concentrado, y después el disolvente
se retiró a presión reducida. El sólido resultante se trituró con
acetato de etilo para dar el ácido en forma de un sólido blanco (523
mg, 46%).
^{1}H-RMN (300 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta 7,90 (d, J = 9,0 Hz, 2H),
7,01 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 4,18 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,58 (t, J = 6,0
Hz, 2H), 3,41 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 3,26 (s a, 1H), 2,21 (t, J = 8,0
Hz, 2H), 4,18 (c, J = 8,0 Hz, 2H).
Se añadió cloruro de oxalilo (0,184 ml, 2,1 mmol,
2,1 equivalentes) y después una cantidad catalítica de DMF a una
suspensión del ácido
4-[2-(2-oxopirrolidin-1-il)etoxi]benzoico
(250 mg, 1,0 mmol) en diclorometano seco (10 ml). Después de una
hora, el disolvente se retiró a presión reducida. El residuo se
suspendió en diclorometano seco (9 ml) y después se añadió en
porciones a una solución de
N^{1}-[3-metoxi-4-[(1-pirrolidinil)metil]bencil]-1,2-bencenodiamina
(preparado de acuerdo con el ejemplo 6, parte E) (292 mg, 0,94 mmol,
0,94 equivalentes) en diclorometano seco (1 ml) y piridina (0,182
ml, 2,25 mmol, 2,25 equivalentes) a 0ºC hasta que se consumió toda
la anilina según se comprobó por TLC (CHCl_{3}: MeOH 9:1). La
mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y después
se inactivó mediante la adición de una solución acuosa saturada de
bicarbonato sódico (10 ml). La mezcla de reacción se diluyó con
acetato de etilo (50 ml) y después se separaron las fases. La fase
orgánica se secó (MgSO_{4}), se filtró, y después se concentró a
presión reducida. La amida se obtuvo en forma de una espuma de color
tostado (140 mg, 26%) después de su purificación por cromatografía
ultrarrápida (MeOH 2-10%, TEA al 0,5% en
CHCl_{3}).
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl_{3})
\delta 8,20 (s a, 1H), 7,95 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,59 (d, J = 8,7
Hz, 1H), 7,39-7,25 (m, 2H), 7,15 (t, J = 8,7 Hz,
1H), 7,05 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,98 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,81 (t, J
= 8,7 Hz, 1H), 6,72 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 4,80 (s a, 1H), 4,42 (s,
2H), 4,21 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 3,82 (s, 3H), 3,75 (t, J = 6,0 Hz,
2H), 3,61 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 3,10 (m a, 4H), 2,41 (t, J = 5,9 Hz,
2H), 2,05 (m a, 6H).
El compuesto del título se preparó a partir de
1,2-N-[3-metoxi-4-[(1-pirrolidinil)metil]bencil]-N'-[4-[2-(2-oxopirrolidin-1-il)etoxi]benzoil]fenileno
diamina con un rendimiento del 35% siguiendo esencialmente el mismo
procedimiento que para el ejemplo 5, parte I.
EMDC m/e = 525 (M+H).
A una solución de
N^{1}-[3-metoxi-4-[(1-pirrolidinil)metil]bencil]-1,2-bencenodiamina
(100 mg, 0,32 mmol) en diclorometano seco (5 ml) se le añadió
piridina (0,052 ml, 0,64 mmol, 2,0 equivalentes). La anilina se
trituró con cloruro de benzoílo (0,037 ml, 0,32 mmol, 1,0
equivalentes), en tres porciones, a 0ºC. La mezcla de reacción se
dejó calentar a temperatura ambiente, se diluyó con acetato de etilo
(35 ml) y después se lavó con una solución acuosa saturada de
bicarbonato sódico (20 ml). El residuo se purificó por cromatografía
ultrarrápida (CHCl_{3}:MeOH 20:1, TEA al 0,5%) para dar la amida
intermedia (55 mg, 0,132 mmol, 41%). La amida (55 mg, 0,132 mmol) se
disolvió en o-xileno (1 ml) y después se calentó a 150ºC,
siguiendo la reacción por TLC (CHCl_{3}:MeOH 9:1, TEA al 1%). Una
vez que la amida se consumió, la reacción se dejó enfriar a
temperatura ambiente. El disolvente se retiró a presión reducida.
Después de la purificación por cromatografía ultrarrápida (eluyendo
con CHCl_{3}:MeOH 20:1, TEA al 0,5%) para obtener el bencimidazol
en forma de un cristal (22,2 mg, 43%), se formó la sal oxalato
mediante la disolución en acetato de etilo (1 ml) seguido de la
adición de una solución de ácido oxálico en acetato de etilo (0,558
ml de una solución 0,1 M, 1,0 equivalentes). El disolvente se retiró
a presión reducida para dar la sal del título en forma de un cristal
de color tostado (27 mg, 100%).
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl_{3})
\delta 7,89 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,73-7,69 (m,
2H), 7,43-7,48 (m, 2H), 7,35-7,25
(m, 5H), 6,70 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,44 (s, 2H), 3,71
(s, 2H), 3,67 (s, 3H), 1,83 (m a, 4H), 1,26 (m a, 4H); EMDC m/e
397,2 (M+); EMAR BAR calcd. para C_{26}H_{28}N_{5}O: 398,2239,
encontrado: 398,2232.
Claims (13)
- Un compuesto de fórmula I (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo)
41 en la queE es CH o CR^{e}en la que R^{e} es metilo, metoxi o halo;R denota 0, 1 ó 2 sustituyentes sobre el anillo benzo independientemente seleccionados de entre halo, metilo, etilo, hidroxi, metoxi, carbamoílo, aminometilo e hidroximetilo;R^{1} es R^{1a}, R^{1b}, o R^{1c} en los queR^{1a} es -CH_{2}-R^{r}, en el que R^{r} es 5-tetrazolilo, 2-carboxipirrolidin-1-ilo o 2-[[alcoxi(C1-4)]carbonil]pirrolidin-1-ilo; 2-carboxi-5-oxopirrolidin-1-ilo o 2-[[alcoxi(C1-4)]carbonil]-5-oxopirrolidin-1-ilo;R^{1b} es -X^{1}-(CH_{2})_{s}-NR^{s}R^{t} en el que X^{1} es un enlace directo, metileno u O; s es 1 ó 2; con la condición de que cuando s es 1, entonces X^{1} es un enlace directo, y con la condición adicional de que la cadena -(CH_{2})_{s}- puede soportar uno o dos sustituyentes metilo o etilo o puede ser parte de un trans-1,2-ciclohexanodiílo; y R^{s} y R^{t} son independientemente hidrógeno o alquilo (C1-3) o el grupo NR^{s}R^{t} es pirrolidino, piperidino, morfolino, 1-imidazolilo, 1-pirazolilo, 1,2,4-triazol-1-ilo, o bencilamino; yR^{1c} es -X^{1}-(CH_{2})_{s}-NR^{s}R^{t} en el que X^{1} es un enlace directo, metileno u O; s es 1 ó 2; con la condición de que cuando s es 1, entonces X^{1} es un enlace directo, y con la condición adicional de que la cadena -(CH_{2})_{s}- puede soportar uno o dos sustituyentes metilo o etilo o puede ser parte de un trans-1,2-ciclohexanodiílo; y el grupo NR^{s}R^{t} es 2-oxopirrolidin-1-ilo, 2,5-dioxopirrolidin-1-ilo, 2-oxooxazolidin-3-ilo, 2-oxoimidazolidin-1-ilo, 3-metil-2-oxoimidazolidin-1-ilo, 2-oxopirrolidin-3-ilo, 1-metil-2-oxopirrolidin-3-ilo, 1-tetrazolilo, metilsulfonilamino o fenilsulfonilamino; yR^{2} es R^{2a}, R^{2b}, o R^{2c} en los queR^{2a}es -X^{2}-(CH_{2})_{n}-R^{f} en el que X^{2} es un enlace directo, metileno u O; n es 1, 2 ó 3; y R^{f} es 5-tetrazolilo, carboxi, [alcoxi(C1-4)]carbonilo o hidroximetilo; o (con la condición de que cuando n es 1, X^{2} es un enlace directo) R^{f} es 2-carboxipirrolidin-1-ilo, 2-[[alcoxi(C1-4)]carbonil]pirrolidin-1-ilo, (carboximetil)amino, [[alcoxi(C1-4)]carbonilmetil]amino, (4-carboximetilimidazol-1-il)amino, [4-[[alcoxi(C1-4)]carbonilmetil]imidazol-1-il]amino, (4-carboxibencil)amino, [4-[[alcoxi(C1-4)]carbonil]bencil]amino, (3-amino-1,4-dioxo-4-hidroxibutil)amino o [3-amino-1,4-dioxo-[alcoxi(C1-4)]butil]amino;R^{2b} es -X^{2}-(CH_{2})_{m}-NR^{a}R^{b} en el que X^{2} es un enlace directo, metileno, O o S; m es 1, 2, 3, 4 ó 5; con la condición de que cuando m es 1, entonces X^{2} es un enlace directo; y R^{a} y R^{b} son independientemente hidrógeno, o alquilo(C1-3), o uno de R^{a} y R^{b} es hidrógeno o metilo y el otro es t-butilo, bencilo, o piridilmetilo; o el grupo NR^{a}R^{b} es pirrolidino, piperidino, morfolino, 1-imidazolilo, 1-pirazolilo, o 1,2,4-triazol-4-ilo; oR^{2b} es -[X^{2}-(CH_{2})_{n}]_{p}-N(R^{a})-CO-A en el que X^{2} es un enlace directo, metileno u O; n es 1, 2, 3 ó 4; p es 0 ó 1, R^{a} es hidrógeno o metilo; y -CO-A es un grupo \alpha-aminoacilo natural o no natural, que puede soportar uno o más grupos protectores farmacéuticamente aceptables y puede estar sustituido adicionalmente sobre el nitrógeno \alpha;yR^{2c} es hidrógeno, oR^{2c} es -NR^{a}-CO-(CH_{2})_{m}-R^{b} o -O-CH_{2}-R^{b} en el que m es 0 ó 1, R^{a} es hidrógeno o metilo, y R^{b} es un anillo de fórmula XII o fórmula XIII42 en la que G es O, S, NH o CH_{2} y R^{c} es hidrógeno o metilo, y L es NR^{f} o CH_{2} y R^{f} es hidrógeno o metilo; oR^{2c} es -NHCOR^{g} en el que R^{g} es un anillo heteroaromático de cinco miembros que presenta 2 heteroátomos seleccionados de entre O, S y N y en el que el grupo carbonilo está unido a un carbono de anillo situado entre un heteroátomo de anillo y otro carbono de anillo; oR^{2c} es -(CH_{2})_{n}-R^{h}, -O-(CH_{2})_{n}-R^{h} o -NH-(CH_{2})_{n}-R^{h} en el que n es 0, 1, ó 2 y R^{h} es ciclopentilo, ciano o -CONR^{i}R^{j} en el que R^{i} y R^{j} son independientemente hidrógeno o metilo o el grupo NR^{i}R^{j} es pirrolidino, piperidino, o morfolino; oR^{2c} es -X^{2}-(CH_{2})_{p}-R^{k}, o -O-CH_{2}-CH(CH_{3})-R^{k} en el que X^{2} es un enlace directo, metileno u O y p es 1, 2 ó 3, con la condición de que cuando p es 1, entonces X^{2} es un enlace directo, y R^{k} es 2-oxopirrolidin-1-ilo o NHCOR^{m} en el que R^{m} es alquilo(C1-3), fenilo o piridilo; oR^{2c} es -NH-CO-NR^{i}R^{j} en el que R^{i} y R^{j} son independientemente hidrógeno o metilo o el grupo NR^{i}R^{j} es pirrolidino, piperidino, o morfolino; oR^{2c} es -O-CO-NR^{p}R^{q} en el que R^{p} y R^{q} son independientemente hidrógeno, metilo o etilo o el grupo NR^{p}R^{q} es pirrolidino, piperidino, o morfolino; oR^{2c} es -NH-SO_{2}-R^{r} en el que R^{r} es alquilo(C1-3) o fenilo; ycon la condición de que o R^{1} es R^{1b} o R^{2} es R^{2b}. - 2. El compuesto (o sal del mismo) según lo reivindicado en la reivindicación 1 en el que el grupo \alpha-aminoacilo -CO-A es un grupo \alpha-aminoacilo derivado de un \alpha-aminoácido seleccionado de entre glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, tirosina, serina, treonina, metionina, cisteína, prolina, ácido azetidina-2-carboxílico, ácido pipecólico, ácido aspártico, asparginina, ácido glutámico, glutamina, lisina, arginina e histidina en los que un grupo amino puede soportar un grupo protector t-butoxicarbonilo; un grupo carboxilo puede protegerse como su
\hbox{alquil(C1-4)éster;}un grupo hidroxi puede soportar un grupo protector de tipo bencilo; y un grupo tiol puede soportar un grupo protector de tipo t-butilo; oel grupo \alpha-aminoacilo -CO-A se representa como -CO-CH(R^{b})-NR^{f}R^{g}, en el que R^{b} es la cadena lateral de un grupo \alpha-aminoacilo derivado de un \alpha-aminoácido seleccionado de entre glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, tirosina, serina, treonina, metionina, cisteína, ácido aspártico, asparginina, ácido glutámico, glutamina, lisina, arginina e histidina en los que un grupo amino puede soportar un grupo protector t-butoxicarbonilo; un grupo carboxilo puede protegerse como su alquil(C1-4)éster; un grupo hidroxi puede soportar un grupo protector de tipo bencilo; y un grupo tiol puede soportar un grupo protector de tipo t-butilo; y cada uno de R^{f} y R^{g} es hidrógeno o metilo, o -NR^{f}R^{g} es un grupo pirrolidino, piperidino, morfolino o 1,1-dioxotiomorfolin-4-ilo. - 2. El compuesto (o sal del mismo) según lo reivindicado en la reivindicación 1 en el que el compuesto de fórmula I es un compuesto de fórmula Ia
43 en la queE es CH o CR^{e} en el que R^{e} es metilo, metoxi o halo;R^{1} es -X^{1}-(CH_{2})_{s}-NR^{s}R^{t} en el que X^{1} es un enlace directo, metileno u O; s es 1 ó 2; con la condición de que cuando s es 1, entonces X^{1} es un enlace directo; y R^{s} y R^{t} son independientemente hidrógeno o alquilo(C1-3) o el grupo NR^{s}R^{t} es pirrolidino, piperidino, morfolino, 1-imidazolilo, 1-pirazolilo, 1,2,4-triazol-1-ilo, o bencilamino;R^{2} es hidrógeno o -X^{2}-(CH_{2})_{m}-NR^{a}R^{b} en el que X^{2} es un enlace directo, metileno, O o S; m es 1, 2, 3, 4 ó 5; con la condición de que cuando m es 1, entonces X^{2} es un enlace directo; y R^{a} y R^{b} son independientemente hidrógeno o alquilo(C1-3) o el grupo NR^{a}R^{b} es pirrolidino, piperidino, morfolino, 1-imidazolilo, 1-pirazolilo, N-(1,2,4-triazolilo), o 2-oxopirrolidin-1-ilo; yR^{5} es hidrógeno, hidroxi o metoxi. - 4. El compuesto (o sal del mismo) según lo reivindicado en una cualquiera de las reivindicaciones 1-3 ó 7 en el que -X^{1}-(CH_{2})_{s}-NR^{s}R^{t} es -CH_{2}-NR^{s}R^{t} en el que NR^{s}R^{t} es pirrolidino, 1-imidazolilo, 1-pirazolilo, 1,2,4-triazol-4-ilo, o bencilamino o es -O-(CH_{2})_{2}-NR^{s}R^{t} en el que NR^{s}R^{t} es pirrolidino.
- 5. El compuesto (o sal del mismo) según lo reivindicado en la reivindicación 4 en el que -X^{1}-(CH_{2})_{s}-NR^{s}R^{t} es -CH_{2}-NR^{s}R^{t}.
- 6. El compuesto (o sal del mismo) según lo reivindicado en una cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3-5 en el que R^{2} es -O-(CH_{2})_{2}-NR^{a}R^{b} en el que NR^{a}R^{b} es pirrolidino, 1-pirazolilo o 2-oxopirrolidin-1-ilo.
- 7. El compuesto (o sal del mismo) según lo reivindicado en la reivindicación 3 en el que R^{5} es hidroxi.
- 8. El compuesto (o sal del mismo) según lo reivindicado en una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 en el que halo es fluoro, cloro, bromo o yodo; un grupo alquilo(C1-3) es metilo, etilo, propilo o isopropilo; un grupo alquilo(C1-4) es metilo, etilo, propilo, isopropilo o butilo; y un grupo alcoxi(C1-4) es metoxi, etoxi, isopropoxi o t-butoxi.
- 9. Una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de fórmula I según lo reivindicado en una cualquiera de las reivindicaciones 1-8 que es una sal de adición de ácidos preparada con un ácido que proporciona un anión farmacéuticamente aceptable o que es una sal preparada con una base que proporciona un anión farmacéuticamente aceptable.
- 10. Una formulación farmacéutica que comprende en asociación con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable, un compuesto de fórmula I (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) tal y como se proporciona en una cualquiera de las reivindicaciones 1-9 anteriores.
- 11. Un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula I (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) tal y como se proporciona en una cualquiera de las reivindicaciones 1-9 anteriores que comprendeciclar una amida correspondiente de fórmula II
44 (o para un compuesto de fórmula Ia, un compuesto de fórmula IIa)45 mediante calentamiento,después, cuando un grupo funcional está protegido usando un grupo protector, se retira el grupo protector;después, cuando se requiere una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de fórmula I, se obtiene haciendo reaccionar la forma ácida o básica de dicho compuesto de fórmula I con una base o ácido proporcionando un contraión fisiológicamente aceptable o mediante cualquier otro procedimiento convencional;y en la que E, R, R^{1}, R^{2} y R^{5} presentan cualquiera de los valores definidos en una cualquiera de las reivindicaciones 1-9. - 12. Un compuesto de fórmula I, o sal del mismo, según lo reivindicado en una cualquiera de las reivindicaciones 1-9 para uso como un agente antitrombótico.
- 13. El uso de un compuesto de fórmula I, o sal del mismo, según se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1-9 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno tromboembólico.
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