ES2220753T3 - Derivados de amidoxina del acido propencarboxilico, procedimiento para su preparacion, y composiciones farmaceuticas que los contienen. - Google Patents

Derivados de amidoxina del acido propencarboxilico, procedimiento para su preparacion, y composiciones farmaceuticas que los contienen.

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Balazs Sumegi
Kalman Takacs
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Abstract

Derivado de amidoxamina del ácido propencarboxílico de **fórmula** en la que R representa un grupo alquilo C1-20, un grupo fenilo que está opcionalmente sustituido por 1 a 3 sustituyente(s), en el que el sustituyente es un átomo de halógeno y/o un grupo alquilo C1-2 y/o un grupo alcoxi C1-2 y/o un grupo amino y/o un grupo (alquil C1-4)amino y/o un grupo di(alquil C1-4)amino y/o un grupo (alcanoil C1-4)amino, o R representa un grupo heteracíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que contiene uno o dos átomo(s) de nitrógeno o un átomo de azufre como heteroátomo y dicho grupo heterocíclico está opcionalmente fusionado con uno o más anillo(s) de benceno y/o uno o más grupo(s) heterocíclicos, y R¿ significa un átomo de hidrógeno, o R forma junto con R¿ un grupo cicloalquilo C5-7 opcionalmente fusionado con un anillo bencénico, además los N-óxidos o los isómeros geométricos y/o los isómeros ópticos y/o las sales de adición de ácido farmacéuticamente adecuadas y/o los derivados cuaternarios de los mismos.

Description

Derivados de amidoxima del ácido propencarboxílico, procedimiento para su preparación, y composiciones farmacéuticas que los contienen.
Campo de la invención
La presente invención se refiere a nuevos derivados de amidoxima del ácido propencarboxílico, a un procedimiento para su preparación y a las composiciones farmacéuticas que los contienen. Los nuevos compuestos poseen efectos farmacéuticos valiosos, por lo tanto, se pueden utilizar especialmente en los estados relacionados con la insuficiencia energética de la célula, en estados deficitarios en oxígeno del corazón y del cerebro, en enfermedades neurodegenerativas, en el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias y/o víricas, además de en enfermedades producidas por efectos tóxicos.
Antecedentes de la invención
La preparación de algunos derivados de \Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolina-5-ona se describe en el artículo Chem. Ber., 103, 2330-2335 (1970) sin ninguna referencia a sus posibles efectos biológicos. A partir de los compuestos anteriores, en el artículo Chem. Ber., 108, 1911-1923 (1975) se expone la preparación de los derivados de 5,6-dihidro-4H-1,2,4-oxadiazina, de nuevo sin ninguna referencia a los efectos biológicos.
En el documento WO/A/0014054 se han dado a conocer los derivados del ácido hidroxímico insaturado de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
1
en la que
R_{1} representa un grupo alquilo C_{1-20}, un grupo fenilo opcionalmente sustituido por 1 a 3 sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consta de un grupo alquilo C_{1-2}, un grupo alcoxi C_{1-2}, un átomo de halógeno, un grupo amino, un grupo (alquilo C_{1-4})-amino, un grupo di(alquilo C_{1-4})-amino o un grupo di(alcanoil C_{1-4})amino, además R_{1} representa un grupo heteracíclico saturado o insaturado, con 5 ó 6 elementos que contiene uno o dos átomo(s) de nitrógeno o un átomo de azufre como heteroátomo y
R_{2} significa un átomo de hidrógeno, o
R_{1} forma junto con R_{2} un grupo cicloalquilo C_{5-7} opcionalmente condensado con un anillo bencénico,
Y significa un átomo de hidrógeno, un grupo hidroxi, un grupo alcanoiloxi C_{1-30} o un grupo alqueniloxi C_{3-22},
X es un átomo de halógeno, un grupo hidroxi o un grupo amino,
R_{3} representa un grupo cicloalquilo C_{3-7} o un grupo de fórmula -NR_{4}R_{5}, en la que
R_{4} y R_{5} significan, cada uno, un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C_{1-5}, un grupo alcanoilo C_{1-6}, o
R_{4} y R_{6} forman con el átomo de nitrógeno adyacente un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que puede contener también un átomo de oxígeno y puede estar condensado con un anillo bencénico, en el que el grupo heterocíclico y/o el anillo bencénico puede estar sustituido por uno o dos sustituyente(s) seleccionado(s) de entre el grupo que consta de un grupo alquilo C_{1-2}, un grupo alcoxi C_{1-2}, o un átomo de halógeno,
además de los isómeros geométricos y/o ópticos y/o las sales de adición de ácido farmacéuticamente adecuadas de los mismos con la (adenosin difosfato ribosa) polimerasa (PARP) inhibiendo la actividad.
Los derivados de 1,2,4-oxadiazolina-5-ona con efectos vasodilatadores periféricos, antianginosos y antiarrítmicos son conocidos a partir del documento HU-P nº 179 951. Los derivados de 1,2,4-oxadiazina con efectos vasodilatadores periféricos y reductores de la presión sanguínea, antiarrítmicos, antiflojísticos y diuréticos ligeros son conocidos a partir del documento HU-P nº 180 708. Sin embargo, los derivados conocidos de 1,2,4-oxadiazolina-5-ona y de 1,2,4-oxadiazina no contienen ningún sustituyente alquenilo, es decir no se pueden modificar a partir de la amidoxamina del ácido propencarboxílico.
El problema que debe resolver la presente invención es proporcionar compuestos alternativos que presentan la actividad inhibidora de PARP y, por lo tanto de la utilización en los estados relacionados con la insuficiencia energética de la célula, en las complicaciones de la diabetes, en estados deficitarios en oxígeno del corazón y del cerebro, en enfermedades neurodegenerativas, así como en el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias y/o víricas.
Sumario de la invención
Se observó que se consigue el objetivo anterior, y por lo tanto la invención se refiere a los nuevos derivados de amidoxamina del ácido propencarboxílico de fórmula
2
en la que
R
representa un grupo alquilo C_{1-20}, un grupo fenilo que está opcionalmente sustituido por 1 a 3 sustituyen- te(s), en el que el sustituyente es un átomo de halógeno y/o un grupo alquilo C_{1-2} y/o un grupo alcoxi C_{1-2}, y/o un grupo amino y/o un grupo (alquil C_{1-4})-amino y/o un grupo di(alquil C_{1-4})amino y/o un grupo (alcanoil C_{1-4})amino, o R representa un grupo heteracíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que contiene como heteroátomo uno o dos átomo(s) de nitrógeno o un átomo de azufre y dicho grupo heterocíclico está opcionalmente fusionado con uno o más anillo(s) de benceno y/o uno o más grupo(s) heterocíclicos, y
R'
significa un átomo de hidrógeno, o
R
forma junto con R' un grupo cicloalquilo C_{5-7} opcionalmente fusionado con un anillo bencénico,
R_{4} y R_{5}
representan, cada uno, un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C_{1-5}, un grupo alcanoilo C_{1-5} o un grupo fenilo que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyente(s), en el que el sustituyente es un átomo de halógeno y/o un grupo alquilo C_{1-2} y/o un grupo alcoxi C_{1-2}, o
R_{4} y R_{5}
forman conjuntamente con el átomo de nitrógeno adyacente un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que puede contener como heteroátomo un átomo de nitrógeno adicional y/o un átomo de oxígeno y/o un átomo de azufre y puede estar fusionado con un anillo de benceno, y el grupo heterocíclico y/o el anillo de benceno puede llevar uno o dos sustituyente(s) en el que el sustituyente es un átomo de halógeno y/o un grupo alquilo C_{1-2} y/o un grupo alcoxi C_{1-2},
R_{1} y R_{2}
significan un átomo de hidrógeno, y
R_{3}
significa un átomo de hidrógeno, un grupo hidroxi o un grupo alcoxi C_{1-5}, o
R_{1}
forma junto con R_{2} un grupo carbonilo o un grupo tiocarbonilo cuyo átomo de carbono se une al átomo de oxígeno adyacente a R_{1} y al átomo de nitrógeno adyacente a R_{2}, y
R_{3}
representa un átomo de hidrógeno, un átomo de halógeno, un grupo hidroxi, un grupo alcoxi C_{1-5}, un grupo alquiltio C_{1-5}, un grupo alcanoiloxi C_{1-20}, un grupo alquenoiloxi C_{3-22} que contiene 1 o más doble(s) enlace(s), un grupo metilsulfoaniloxi, un grupo bencensulfoniloxi o un grupo toluensulfoniloxi, o
R_{2}
es un átomo de hidrógeno y
R_{1}
forma junto con R_{3} un enlace covalente entre el átomo de oxígeno adyacente a R_{1} y el átomo de carbono adyacente a R_{3},
además los N-óxidos o los isómeros geométricos y/o los isómeros ópticos y/o las sales de adición de ácido farmacéuticamente adecuadas y/o los derivados cuaternarios de los mismos.
Estos derivados de amidoximina del ácido propencarboxílico se diferencian de los compuestos del documento WO-A-00/14054 en que el presente grupo R_{1} puede no corresponder al grupo -CH_{2}-CHY-CH_{2}-R_{3} del documento WO-A-00/14054 y en que el grupo X en el documento WO-A-00/14054 puede ser halógeno, hidroxi o amino únicamente, es decir puede no estar el presente grupo -NR_{2}-CH_{2}-CHR_{3}-CH_{2}-NR_{4}R_{5}.
Descripción de las formas de realización preferidas
En la descripción y reivindicaciones, un grupo alquilo C_{1-20} significa por ejemplo un grupo metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, tert-butilo, isobutilo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-decilo, dodecilo, hexadecilo, octadecilo, etc.
Un átomo de halógeno es, principalmente, un átomo de flúor, cloro o bromo, preferentemente un átomo de cloro o de bromo.
Un grupo alquilo C_{1-2} es un grupo metilo o etilo, mientras que un grupo alcoxi C_{1-2} es un grupo metoxi o etoxi.
Un grupo alquilo C_{1-4} es un grupo metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, tert-butilo o isobutilo. Un grupo alquilo C_{1-5} puede ser, además de los relacionados anteriormente, también p. ej. un grupo n-pentilo.
Un grupo (alquil C_{1-5})amino es, por ejemplo, un grupo metilamino, etilamino, isopropilamino, etc. Un grupo di(alquil C_{1-4})amino es, por ejemplo, un grupo dimetilamino, dietilamino, metilisopropilamino, etc.
Un grupo alcanoilo C_{1-4} es, preferentemente un grupo formilo, acetilo, n-propionilo o n-butirilo. Un grupo alcanoilo C_{1-5} puede ser, además de los relacionados anteriormente, también p. ej. un grupo n-pentanoilo.
Un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que contiene uno o dos átomo(s) de nitrógeno o un átomo de azufre tal como el heteroátomo es, por ejemplo, un grupo pirrolilo, piratolilo, imidazolilo, tienilo, piridilo, piperidilo, pirimidinilo, piperacinilo, etc.
Un grupo cicloalquilo C_{5-7} opcionalmente fusionado con un anillo bencénico es, por ejemplo un grupo ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, indanilo o tetralinilo.
Un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que puede contener, además del átomo de nitrógeno adyacente a los sustituyentes R_{4} y R_{5}, un átomo de nitrógeno adicional y/o un átomo de oxígeno y/o un átomo de azufre como heteroátomo puede ser, además de los grupos heterocíclicos relacionados anteriormente, p. ej. un grupo morfolino.
Un grupo alcanoiloxi C_{1-20} es, por ejemplo, un grupo formiloxi, acetoxi, propioniloxi, butiriloxi, caproiloxi, palmitoiloxi, estearoiloxi, etc.
Un grupo alqueniloxi C_{3-22} puede contener, en general, 1 a 6 doble(s) enlace(s), y es, preferentemente un grupo linolenoiloxi, linoleiloxi, docosahexaenoliloxi, eicosapentaenoil-oxi o araquidonoiloxi.
Las sales de adición de ácido farmacéuticamente adecuadas de los derivados de amidoximina del ácido propencarboxílico de fórmula I y los N-óxidos de las mismas son las sales de adición de ácido formadas con ácidos inorgánicos tales como el ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, etc., o con ácidos orgánicos tales como ácido acético, ácido fumárico, ácido láctico, ácido tartárico, ácido succínico, ácido málico, ácido bencensulfónico, ácido p-toluensulfónico, etc.
En los derivados cuaternarios de los compuestos de fórmula I y en los N-óxidos de los mismos, uno o más áto-
mo(s) de nitrógeno de la amidoxima del ácido propencarboxílico está en forma cuaternaria, esto es, por ejemplo, un grupo alquilo C_{1-4} adicional o un grupo fenil(alquilo C_{1-4}) está unido al átomo de nitrógeno en cuestión, por lo tanto, dicho átomo de nitrógeno se vuelve de carga positiva. De los átomos de nitrógeno que están presentes en el compuesto de fórmula I, de manera adecuada el adyacente a los sustituyentes R_{4} y R_{5} está en forma cuaternaria. Si, en la fórmula I, R representa un grupo heterocíclico que contiene un átomo de nitrógeno tal como un grupo piridilo, el átomo de nitrógeno de dicho grupo heterocíclico se puede transformar también en cuaternario.
En los N-óxidos de los compuestos de fórmula I, uno o más átomo(s) de nitrógeno está(n) presente(s) en forma ionizada, por lo tanto, también un átomo de oxígeno está unido al átomo de nitrógeno en cuestión. De los átomos de nitrógeno que están presentes en el compuesto de fórmula I, de manera adecuada el adyacente a los sustituyentes R_{4} y R_{5} puede estar presente como N-óxido. Si, en la fórmula I, R representa un grupo heterocíclico que contiene un átomo de nitrógeno tal como un grupo piridilo, el átomo de nitrógeno de dicho grupo heterocíclico puede estar presente también como N-óxido.
Debido al doble enlace presente en la fórmula I, los nuevos derivados del ácido propen-carboxílico de fórmula I así como sus N-óxidos pueden existir en forma de isómeros geométricos, es decir isómeros cis o trans o cualquier mezcla de los mismos. La invención incluye los isómeros geométricos puros y cualquier mezcla de los mismos.
Además de la isomería geométrica, determinados compuestos de fórmula I así como sus N-óxidos contienen uno o más átomo(s) de carbono quiral, por consiguiente, estos compuestos pueden existir en forma de isómeros ópticos, también. La invención incluye asimismo los isómeros ópticos puros y cualquier mezcla de los mismos.
Un subgrupo preferido de los compuestos de la invención consta de los derivados de amidoxima del ácido propencarboxílico de fórmula
3
en la que
R_{1} y R_{2} representan un átomo de hidrógeno,
R_{3} 
\hskip0.7cm
significa un átomo de hidrógeno, un grupo hidroxi o un grupo alcoxi C_{1-5},
R, R', R_{4} y R_{5} son tal como se definieron anteriormente,
además de los N-óxidos o los isómeros geométricos y/o los isómeros ópticos y/o las sales de adición de ácido farmacéuticamente adecuadas y/o sus derivados cuaternarios.
Otro subgrupo preferido de los compuestos de la invención consta de los derivados de oxadiazolina de fórmula
4
en la que
R_{1}
forma junto con R_{2} un grupo carbonilo o un grupo tiocarbonilo cuyo átomo de carbono está unido al átomo de oxígeno adyacente a R_{1} y al átomo de nitrógeno adyacente a R_{2},
R_{3}
representa un átomo de hidrógeno, un átomo de halógeno, un grupo alcanoiloxi, C_{1-20}, un grupo alquenoiloxi C_{3-22} que contiene uno o más enlaces dobles, un grupo de hidroxi, un grupo alcoxi C_{1-5}, un grupo alquiltio C_{1-5}, un grupo metilsulfoniloxi, un grupo bencensulfoniloxi o un grupo toluensulfoniloxi,
X
significa un átomo de oxígeno o un átomo de azufre,
R, R', R_{4} y R_{5}
son tal como se definieron en relación con la fórmula I,
además de los N-óxidos o los isómeros geométricos y/o los isómeros ópticos y/o las sales de adición de ácido farmacéuticamente adecuadas y/o sus derivados cuaternarios.
Un subgrupo adicional preferido de compuestos de la invención consta de los derivados de oxadiazina de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
5
en la que
R_{2}
es un átomo de hidrógeno y
R_{1}
forma junto con R_{3} un enlace covalente entre el átomo de oxígeno adyacente a R_{1} y el átomo de carbono adyacente a R_{3},
R, R', R_{4} y R_{5}
son tal como se definieron en relación en la fórmula I,
además de los N-óxidos o los isómeros geométricos y/o los isómeros ópticos y/o las sales de adición de ácido farmacéuticamente adecuadas y/o sus derivados cuaternarios.
Los derivados de amidoxima del ácido propencarboxílico de fórmula I se preparan de la forma siguiente:
a)
para la preparación de un derivado de la amidoxima del ácido propencarboxílico de fórmula Ia, en la que R_{1}, R_{2} y R_{3} representan un átomo de hidrógeno, R, R', R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, un derivado de propeno de fórmula
6
en la que R, R', R_{3}, R_{4} y R_{5} son tal como se definieron anteriormente, Y significa un átomo de halógeno o un grupo de fórmula -SR_{6}, en la que R_{6} significa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C_{1-4}, reacciona con hidroxilamina; o
b)
para la preparación de un derivado de amidoxima del ácido propencarboxílico de fórmula Ia, en la que R_{1} y R_{2} representan un átomo de hidrógeno, R_{3} significa un átomo de hidrógeno o un grupo hidroxi, R, R', R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, un derivado de oxadiazolina de forma Ib, en la que R, R', R_{3}, R_{4} y R_{5} son tal como se definieron anteriormente, X significa un átomo de oxígeno o un átomo de azufre, reacciona con una solución acuosa de un hidróxido alcalino; o
c)
para la preparación de un derivado de oxidiazolina de fórmula Ib, en la que R_{3} representa un átomo de hidrógeno, X significa un átomo de oxígeno, R, R', R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, un derivado de \Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolina de fórmula
7
en la que R y R' son como se indicó anteriormente, reacciona con un haluro de aminoalquil de fórmula
8
en la que Z significa un átomo de halógeno, R_{3}, R_{4} y R_{5} son tal como se indicó anteriormente; o
d)
para la preparación de un derivado de oxadiazolina de fórmula Ib, en la que R_{3} representa un átomo de hidrógeno o un grupo hidroxi, X significa un átomo de oxígeno, R, R', R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, un derivado de \Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolina de fórmula III, en la que R y R' son tal como se indicó anteriormente, se hace reaccionar con un 1,3-dihalopropano de fórmula
VZ --- CH_{2} --- 
\delm{C}{\delm{\para}{R _{3} }}
H --- CH_{2} --- Z_{1}
en la que Z y Z_{1} representan, cada uno, un átomo de halógeno, R_{3} es tal como se indicó anteriormente y el haluro de \Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolinilalquilo de fórmula
9
en la que R, R', R_{3} y Z son tal como se definieron anteriormente, se hace reaccionar con una amina de fórmula
10
en la que R_{4} y R_{5} son tal como se definieron anteriormente; o
e)
para la preparación de un derivado de oxadiazolina de fórmula Ib, en la que R_{3} representa un grupo hidroxi, X significa un átomo de oxígeno, R, R', R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, un derivado de \Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolina de fórmula III, en la que R y R' son tal como se indicó anteriormente, se hace reaccionar con epiclorohidrina y el cloruro de \Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolinilalquilo formado de fórmula
11
en la que R y R' son tal como se indicó anteriormente, se hace reaccionar con una amina de fórmula VII, en la que R_{4} y R_{5} son tal como se definieron anteriormente; o
f)
para la preparación de un derivado de oxadiazolina de fórmula Ib, en la que R_{3} representa un grupo hidroxi, X significa un átomo de oxígeno, R, R', R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, un cloruro de \Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolinilalquilo de fórmula VIII, en la que R y R' son tal como se indicó anteriormente, se hace reaccionar con un agente aglutinante ácido, y el epóxido formado de fórmula
12
en la que R y R' son tal como se indicó anteriormente, se hace reaccionar con una amina de fórmula VII, en la que R_{4} y R_{5} son tal como se definieron anteriormente; o
g)
para la preparación de un derivado de oxadiazolina de fórmula Ib, en la que R_{3} representa un átomo de hidrógeno o un grupo hidroxi, X significa un átomo de oxígeno o un átomo de azufre, R, R', R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, un derivado de amidoxima del ácido propencarboxílico de fórmula Ia en la que R, R', R_{4} y R_{5} son tal como se definieron anteriormente, se hace reaccionar con un derivado del ácido carbónico de fórmula
XZ_{2} --- 
\delm{C}{\delm{\dpara}{X}}
--- Z_{3}
en la que X es tal como se definió anteriormente, Z_{2} y Z_{3} representan, cada uno, un átomo de halógeno, un grupo alcoxi C_{1-4} o un grupo alquilmercapto C_{1-4}; o
h)
para la preparación de un derivado de oxadiazina de fórmula Ic, en la que R, R', R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, un derivado de oxadiazolina de fórmula Ib, en la que R, R', R_{4} y R_{5} son tal como se indicaron anteriormente, X significa un átomo de oxígeno o un átomo de azufre, R_{3} significa un átomo de halógeno, un grupo metilsulfoniloxi, un grupo bencensulfoniloxi o un grupo toluensulfoniloxi, se hace reaccionar con un hidróxido alcalino en presencia de agua; o
i)
para la preparación de un derivado de oxadiazina de fórmula Ic, en la que R, R', R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, un compuesto cíclico de fórmula
13
en la que R y R' son tal como se definieron anteriormente, R_{7} significa un átomo de halógeno, un grupo metilsulfoniloxi, un grupo bencensulfoniloxi o un grupo toluensulfoniloxi, se hace reaccionar con una amina de fórmula VII, en la que R_{4} y R_{5} son tal como se indicaron anteriormente; o
j)
para la preparación de un derivado cuaternario de fórmula
14
en la que R, R', R_{1}, R_{2},R_{3},R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, R_{8} significa un grupo alquilo C_{1-4} o un grupo fenil(alquilo C_{1-14}), Y representa un átomo de halógeno o un grupo de fórmula R_{8}-SO_{4}, en la que R_{8} es tal como se indicó anteriormente, un derivado de \Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolina de fórmula III, en la que R y R' son tal como se indicó anteriormente, se hace reaccionar con un alquilhaluro cuaternario de fórmula
15
en la que R_{3}, R_{4}, R_{5}, R_{8} e Y son tal como se indicó anteriormente, Z representa un átomo de halógeno; o
k)
para la preparación de un N-óxido de fórmula
16
en la que R, R', R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} son tal como los definidos en relación con la fórmula I, un derivado de \Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolina de fórmula III, en la que R y R' son tal como los indicados anteriormente, se hace reaccionar con un compuesto de fórmula
17
en la que R_{3}, R_{4}, y R_{5} son tal como se indicaron anteriormente, Z significa un átomo de halógeno; y
si se desea, un compuesto obtenido de fórmula Ib, en la que R_{3} representa un grupo hidroxi, R, R', R_{4}, y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, X significa un átomo de oxígeno o un átomo de azufre, se hace reaccionar con un agente de halogenación para tener un compuesto de fórmula Ib, en la que R_{3} es un átomo de halógeno; o
si se desea, un compuesto obtenido de fórmula Ib, en la que R_{3} representa un grupo hidroxi, R, R', R_{4}, y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, X significa un átomo de oxígeno o un átomo de azufre, se hace reaccionar con un haluro de alcanocarboxílico C_{1-20} o un haluro de alquenocarboxílico C_{3-22} que contiene uno o más doble(s) enlace(s) para obtener un compuesto de fórmula Ib, en la R_{3} significa un grupo alcanoiloxi C_{1-20} o un grupo alquenoiloxi C_{3-22}; o
si se desea, un compuesto obtenido de fórmula Ib, en la que R_{3} representa un grupo hidroxi, R, R', R_{4}, y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, X significa un átomo de oxígeno o un átomo de azufre, se hace reaccionar con un haluro de alquilo C_{1-5} para obtener un compuesto de fórmula Ib, en la que R_{3} representa un grupo alcoxi C_{1-5}; o
si se desea, un compuesto obtenido de fórmula Ib, en la que R_{3} representa un grupo halógeno, R, R', R_{4}, y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, X significa un átomo de oxígeno o un átomo de azufre, se hace reaccionar con una sal alcalina de un alcanol C_{1-5} o de un tioalcanol C_{1-5} para obtener un compuesto de fórmula Ib, en la que R_{3} significa un grupo alcoxi C_{1-5} o un grupo alquiltio C_{1-5}; o
si se desea, un compuesto obtenido de fórmula Ib, en la que R_{3} representa un grupo hidroxi, R, R', R_{4}, y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, X significa un átomo de oxígeno o un átomo de azufre, se hace reaccionar con un haluro de metilsulfonilo, un haluro de bencensulfonilo o un haluro de toluensulfonilo para obtener un compuesto de fórmula Ib, en la que R_{3} representa un grupo metilsulfoniloxi, un grupo bencensulfoniloxi o un grupo toluensulfoniloxi; y
si se desea, un compuesto obtenido de fórmula I se hace reaccionar con un ácido inorgánico u orgánico para obtener una sal de adición de ácido farmacéuticamente adecuada o se coloca la base exenta de la sal de adición del ácido del mismo, y/o uno o más átomo(s) de nitrógeno de un compuesto de fórmula I se hace cuaternario con un agente de alquilación, y/o un compuesto de fórmula I se hace reaccionar con un agente oxidante para transformar uno o más átomo(s) de nitrógeno del mismo en N-óxido.
En el procedimiento a) de la invención, la reacción del derivado de propeno de fórmula II con hidroxilamina se realiza en un disolvente o en una mezcla de disolventes utilizando la base hidroxilamina que se puede colocar también in situ exenta de su sal de adición de ácido mediante la adición de una base fuerte. El producto formado de fórmula Ia se separa de manera conocida de por sí, por ejemplo, por cristalización a partir de la mezcla de reacción o por evaporación de la mezcla de reacción o por precipitación de su sal de adición de ácido.
Si se utiliza un derivado de propeno de fórmula II, en la que Y significa un átomo de halógeno, el disolvente es un disolvente orgánico anhidro indiferente, p. ej. un hidrocarburo halogenado tal como cloroformo, diclorometano, etc., un hidrocarburo tal como benceno, tolueno, etc., o cualquier otro disolvente, tal como piridina, empleado normalmente en las reacciones de acilación.
Si se utiliza un derivado de propeno de fórmula II, en la que Y significa un grupo de fórmula -SR_{6}, además de los tipos de disolventes relacionados anteriormente, también se pueden emplear, p. ej., alcanoles como disolvente orgánico.
El derivado de propeno de fórmula II, en la que Y representa un átomo de halógeno, generalmente un átomo de cloro, de hecho, dicho compuesto es un haluro de imidoilo, generalmente un cloruro de imidoilo, se prepara a partir de la correspondiente amida del ácido de fórmula
18
en la que R, R', R_{4}, y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, R_{3} significa un átomo de hidrógeno o un grupo alcoxi C_{1-5}, por reacción con un agente halogenante, de forma adecuada cloruro de tionilo, tricloruro de fósforo, pentacloruro de fósforo, pentacloruro de fósforo, etc., de una manera conocida en la bibliografía.
El derivado de propeno de fórmula II, en el que Y representa un grupo mercapto, se puede preparar, por ejemplo, a partir de la correspondiente amida del ácido de fórmula XVI con pentasulfuro de fósforo en un disolvente orgánico, tal como tolueno, xileno o piridina de una manera conocida en la bibliografía. El derivado de propeno de fórmula II, en la que Y significa un grupo alquiltío, se obtiene haciendo reaccionar el derivado de propeno de fórmula II, en la que Y significa un grupo mercapto, con un agente de alquilación.
En el procedimiento b) de la invención, el anillo de oxadiazolina se abre utilizando el procedimiento conocido en Chem. Ber., 103, 2330-2335 (1970) que consiste en una hidrólisis alcalina en medio acuoso. Como hidróxido alcalino, se utiliza de forma adecuada hidróxido de sodio o hidróxido de potasio, en cuya solución acuosa, si se desea, se añade también un disolvente orgánico, preferentemente un alcohol alifático tal como metanol o etanol. En el procedimiento de la invención, el anillo de oxadiazolina se abre en el punto de ebullición de la mezcla de reacción en un tiempo breve y se obtiene el compuesto de fórmula Ia con buen rendimiento. El producto de reacción se puede separar de una manera conocida por sí misma, tal como se describe en relación con el proceso a).
En el procedimiento c) de la invención, la reacción se realiza en un disolvente orgánico que es indiferente desde el punto de vista de la reacción, en presencia de un agente aglutinante ácido, en general, en el punto de ebullición de la mezcla de reacción. El disolvente orgánico indiferente es, por ejemplo, un alcanol tal como metanol o etanol, un hidrocarburo tal como benceno, tolueno o xileno o una mezcla de los mismos. Como agente aglutinante ácido, se pueden utilizar bases inorgánicas u orgánicas. La mezcla de reacción se puede preparar por los métodos habituales, por ejemplo, se evapora el disolvente y el producto se cristaliza o se precipita su sal de adición de ácido.
Los derivados de \Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolina de fórmula III se pueden preparar a partir de las correspondientes amidoximas por reacción con derivados del ácido carbónico. Algunos representantes de las amidoximas son conocidos a partir del artículo Chem. Rews., 62, 155 (1962). Se pueden preparar nuevas amidoximas a partir del correspondiente nitrilo propencarboxílixo por reacción con hidroxilamina de la manera descrita en el artículo. La mayoría de los aminoalquilhaluros de fórmula IV son compuestos conocidos que están disponibles en el comercio o se pueden preparar de manera sencilla haciendo reaccionar un 1,3-dihalopropano con una amina de fórmula VII.
En el procedimiento d) de la invención, tanto la alquilación, es decir, la reacción de un derivado de \Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolina de fórmula III con un 1,3-dihalopropano de fórmula V, como la aminación, es decir la reacción de un haluro de \Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolinilalquilo de fórmula VI con una amina de fórmula VII, se realiza en un disolvente orgánico que es indiferente desde el punto de vista de la reacción, en presencia de un agente aglutinante ácido, de forma adecuada una base inorgánica tal como hidróxido de sodio o carbonato de sodio, en general en el punto de ebullición de la mezcla de reacción. El haluro de \Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolinilalquilo de fórmula VI que se forma durante la alquilación está cristalizado o se utiliza, después de la evaporación de la mezcla de reacción, sin cristalización, para la reacción de aminación. El producto de reacción formado de fórmula Ib se separa de una manera conocida de por sí utilizando cualquiera de los procedimientos descritos anteriormente. El disolvente orgánico indiferente puede ser un hidrocarburo o un hidrocarburo alifático o aromático halogenado tal como cloroformo, un alcanol tal como metanol o etanol, una cetona tal como acetona o una mezcla de los tipos de disolvente relacionados.
En el procedimiento e) de la invención, la reacción del derivado de \Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolina de fórmula III con epiclorhidrina se realiza en un disolvente orgánico que es indiferente desde el punto de vista de la reacción o en ausencia de cualquier disolvente, preferentemente en exceso de epiclorhidrina, de forma adecuada en el punto de ebullición de la mezcla de reacción. El disolvente orgánico indiferente puede ser, por ejemplo, un hidrocarburo, un éter tal como dioxano, tetrahidrofurano, etc. Se utilizan como catalizador bases tales como hidróxido de sodio, carbonato de sodio, etc.. Después del final de la reacción, se evapora el disolvente y se cristaliza el residuo. El cloruro de \Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolinilalquilo formado de fórmula VIII se hace reaccionar con la amina de fórmula VII de una manera similar a la descrita en la reacción de aminación en el procedimiento d). El producto de reacción formado de fórmula Ib se separa de una manera conocida por sí misma utilizando cualquiera de los procedimientos descritos anteriormente.
En el procedimiento f) de la invención, el agente aglutinante ácido para la preparación del epóxido de fórmula IX es, por ejemplo, un carbonato alcalino tal como carbonato de sodio, carbonato de potasio, etc. o un hidróxido alcalino tal como hidróxido de sodio, hidróxido de potasio, etc. La reacción se lleva a cabo en un disolvente orgánico que es indiferente desde el punto de vista de la reacción, propiamente en el punto de ebullición de la mezcla de reacción. Como disolvente orgánico indiferente, por ejemplo, se utiliza un hidrocarburo, acetona, un éter tal como tetrahidrofurano o dioxano, un hidrocarburo halogenado alifático o aromático, etc. Se filtra la mezcla de reacción, se evapora el filtrado y se cristaliza el epóxido formado de fórmula IX, a continuación se hace reaccionar con la amina de fórmula VII de la manera descrita en el procedimiento d) en relación con la aminación, preferentemente en un alcanol. Como procedimiento alternativo, no se separa el epóxido de fórmula IX sino que se añade directamente la amina de fórmula VII a la mezcla de reacción en la que se ha preparado el epóxido y se calienta más la mezcla de reacción. El producto de reacción formado de fórmula Ib se separa de una manera conocida por sí misma utilizando cualquiera de los procedimientos descritos anteriormente.
En el procedimiento g) de la invención, se puede utilizar cualquier derivado del ácido carbónico o tiocarbónico de fórmula IX para la reacción de cierre del anillo cuyo reactivo sea capaz de formar un grupo carbonilo o tiocarbonilo respectivamente, entre el átomo de oxígeno del grupo hidroxi y el átomo de nitrógeno del grupo amino en el caso de la parte que tiene la fórmula -C(=N-OH)-NH- en la fórmula Ia. Los compuestos adecuados incluyen los haluros del ácido carbónico y del ácido tiocarbónico, tales como el fosgeno y el tiofosgeno, ésteres de haluro, tal como cloroformaro de etilo o clorotioformatos de alquilo o ésteres, tales como carbonatos de dialquilo, mono-, di- y tritiocarbonatos, xantogenatos, etc. Para la reacción de cierre del anillo se utiliza un disolvente orgánico que es indiferente desde el punto de vista de la reacción, sin embargo, la reacción también se puede llevar a cabo en ausencia de cualquier disolvente. La mezcla de reacción se enfría o se calienta, propiamente se forma previamente el cierre del anillo al punto de ebullición de la mezcla de reacción. Se separa el producto de reacción formado de fórmula Ib de forma conocida por sí misma utilizando cualquiera de los procedimientos descritos anteriormente.
Si se utiliza para la reacción un ácido carbónico de fórmula X, en el que uno o ambos Z_{2} y Z_{3} representa(n) un átomo de halógeno, entonces se emplea propiamente un hidrocarburo, un hidrocarburo alifático o aromático halogenado o un éter como disolvente orgánico indiferente. Si tanto Z_{2} como Z_{3} significan un grupo alcoxi o alquilmercapto, entonces el disolvente orgánico indiferente puede ser, además de los relacionados, también alcanol.
En el procedimiento h) de la invención, de hecho, el anillo de oxadiazolina se transforma en un anillo de oxadiazina. Con este objeto se utiliza el procedimiento conocido en Chem. Ber., 108, 1911-1923 (1975). Propiamente, se emplea hidróxido de sodio o hidróxido de potasio como hidróxido alcalino. La reacción se lleva a cabo en la mezcla de un disolvente orgánico, tal como un alcanol y una solución acuosa de un hidróxido alcalino en el punto de ebullición de la mezcla de reacción. El producto de reacción formado de fórmula Ic se separa de una manera conocida por sí misma utilizando cualquiera de los procedimientos descritos anteriormente.
En el procedimiento i) de la invención, la reacción se realiza en un disolvente orgánico que es indiferente desde el punto de vista de la reacción o en una mezcla de varios de dichos disolventes, en presencia o ausencia de un agente aglutinante ácido. El disolvente orgánico indiferente es, por ejemplo, un hidrocarburo, un hidrocarburo alifático o aromático halogenado, un éter o un alcanol, preferentemente butanol. La reacción se puede llevar a cabo también en ausencia de cualquier disolvente orgánico, en este caso se puede utilizar como disolvente un exceso de la amina de fórmula VII. El producto de reacción formado de fórmula Ic se separa de una manera conocida por sí misma utilizando cualquiera de los procedimientos descritos anteriormente.
En los procedimientos j) y k) de la invención, el procedimiento es similar al descrito en el procedimiento c). El alquilhaluro cuaternario de fórmula XIII se prepara convirtiendo en sal cuaternaria el correspondiente aminoalquilhaluro de fórmula IV. El compuesto de fórmula XV se puede preparar a partir del correspondiente aminoalquilhaluro de fórmula IV con un agente oxidante.
Un derivado de oxadiazolina de fórmula Ib, en el que R_{3} significa un grupo hidroxi, se puede transformar en el correspondiente compuesto de fórmula Ib, en el que R_{3} representa un átomo de halógeno, por reacción con un agente halogenante. Se utiliza preferentemente cloruro de tionilo, cloruro de fósforo o pentacloruro de fósforo como agente halogenante y la halogenación se realiza en disolventes orgánicos empleados normalmente en reacciones similares o en ausencia de cualquier disolvente, por ejemplo en un exceso de agente halogenante. La mezcla de reacción se prepara por los procedimientos empleados normalmente después de las reacciones de halogenación.
Un derivado de oxadiazolina de fórmula Ib, en el que R_{3} significa un grupo hidroxi, se puede hacer reaccionar con un derivado de acilación activo de un ácido alcanocarboxílico C_{1-20} o de un ácido alquenocarboxílico C_{3-22} tal como un haluro, anhídrido, azida, etc., o con un haluro de metilsulfonilo, haluro de bencensulfonilo o haluro de toluensulfonilo en un disolvente orgánico indiferente, preferentemente un hidrocarburo aromático o un hidrocarburo aromático o alifático halogenado, en presencia o ausencia de un agente aglutinante ácido. El correspondiente producto de reacción de fórmula Ib que se forma se puede separar por los procedimientos habituales descritos anteriormente.
Un compuesto de fórmula Ib, en el que R_{3} representa un grupo hidroxi, se puede hacer reaccionar con un alquilhaluro C_{1-5} de manera similar. En este caso, uno o más átomo(s) de nitrógeno del compuesto se puede transformar en la sal cuaternaria simultáneamente.
La reacción de un compuesto de fórmula Ib, en la que R_{3} significa un átomo de halógeno, preferentemente un átomo de cloro, con la sal alcalina de un alcanol o tioalcanol se puede realizar desde el punto de vista de la reacción descrita anteriormente.
Si se desea, se transforma un compuesto de fórmula I en una sal de adición de ácido farmacéuticamente adecuada o se coloca exento de la sal de adición de ácido del mismo. Si se utiliza, en la formación de la sal, un ácido orgánico ópticamente activo, por ejemplo, ácido alcanfórico, ácido alcanforsulfónico, ácido tartárico o ácido tartárico modificado, se hace posible la separación de los esteroisómeros de los compuestos con un centro quiral. En este caso, la resolución se realiza de una manera conocida por sí misma por cristalización fraccionada de las sales de adición del ácido formadas con el ácido orgánico ópticamente activo.
Si se desea, uno o más átomo(s) de nitrógeno de un derivado de amidoxima del ácido propencarboxílico de fórmula I se hace cuaternario. Con este objeto, el compuesto de fórmula I se hace reaccionar con un agente de alquilación de fórmula R_{8}-Y, en la que R_{8} representa un grupo alquilo C_{1-4} o un grupo fenil(alquilo C_{1-4}), Y significa un átomo de halógeno, para obtener un derivado cuaternario de fórmula XII, en la que R_{8} e Y son tal como se indicaron anteriormente. La reacción de cuaternarización se puede llevar a cabo también con un sulfato de dialquilo de fórmula (R_{8})_{2}
SO_{4}, en la que R_{8} es tal como se indicó anteriormente. En este último caso, se obtiene un derivado cuaternario de fórmula XII, en el que Y significa un grupo de fórmula R_{8}-SO_{4}. La reacción de cuaternarización se lleva a cabo en un disolvente orgánico indiferente o en ausencia de cualquier disolvente.
Como alternativa, otro átomo de nitrógeno o un átomo de nitrógeno adicional del compuesto de fórmula I también se puede hacer cuaternario. Si, en la fórmula I, R representa un grupo heterocíclico que contiene un átomo de nitrógeno, por ejemplo un grupo piridilo, el átomo de nitrógeno del grupo piridilo se puede hacer cuaternario o este átomo de nitrógeno se puede también hacer cuaternario.
Cuando un compuesto de fórmula I se transforma en un N-óxido, propiamente se oxida el átomo de nitrógeno al que se unen los sustituyentes R_{4} y R_{5}. En este caso, la oxidación se realiza, en general, con peróxido de hidrógeno, preferentemente en una solución que contiene un alcanol, tal como metanol, propiamente a temperatura ambiente. Si, en la fórmula I, R representa un grupo heterocíclico que contiene un átomo de nitrógeno, por ejemplo, un grupo piridilo, el átomo de nitrógeno del grupo piridilo se puede transformar simultáneamente o en lugar del átomo de nitrógeno anterior en N-óxido con un agente oxidante. En este caso, el agente oxidante es, preferentemente un peroxiácido, p. ej. ácido 3-cloro-perbenzoico y la reacción de oxidación se realiza en un disolvente orgánico indiferente, generalmente un hidrocarburo aromático tal como benceno o tolueno, propiamente a temperatura ambiente.
Desde luego, un N-óxido del compuesto de fórmula I se puede transformar también en una sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable o en su derivado cuaternario de una manera conocida por sí misma.
El efecto farmacológico de los compuestos de la invención se determina mediante las pruebas siguientes.
Examen de la inhibición de PARP
Es sabido que las especies con oxígeno reactivo (ROS) p. ej., el radical hidroxi, superóxido, peroxinitrito, hidróxido de hidrógeno se forman continuamente en el organismo vivo [Richter, C., FEBS Lett., 241, 1-5 (1988)] y en baja cantidad desempeñan un papel en el control de importantes procesos fisiológicos [Beck, K.F. et al., J. Exp. Biol., 202, 645-53 (1999); McDonald, L.J. y Murad, F., Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 211, 1-6 (1966)] (tal como en el aneurisma, en la acumulación de plaquetas, en la adherencia de leucocitos). La concentración de las especies de oxígeno reactivo y de oxígeno de nitrógeno es significativamente mayor en las inflamaciones agudas y crónicas, por ejemplo en la mayoría de las enfermedades autoinmunitarias [Taraza, C. et al., Rom. J. Intern. Med., 35, 89-98 (1997)], en el caso de la insuficiencia cardíaca post-isquémica, infarto cerebral (apoplejía) [Brain Pathology, 9, 119-131 (1999)]. El origen de las ROS incluye las células de tejido normal debido, en parte, a los leucocitos y macrófagos presentes en el tejido inflamado, en parte, al efecto inductivo de las citocinas inflamatorias.
Las especies de oxígeno reactivo perjudican, entre otros, al ADN. Se inicia en la célula un proceso defensivo y de reconstrucción complejo por la alteración al ADN. Un elemento importante de este proceso es la activación del enzima poli(adenosin difosfato ribosa)-polimerasa (PARP). PARP es un enzima de disposición nuclear que está presente casi en cada célula en grandes cantidades y cataliza el transporte de la unidad de adenosina difosfato ribosa en el dinucleótido de ácido nicotínico adenina (NAD) a las proteínas y la construcción de cadenas de poli(adenosin difosfato ribosa). Se incluyen los principales substratos del enzima [González, R. et al., Mol. Cell. Biochem., 138, 33-37 (1994)], proteínas nucleares, histonas, topoisomerasa I y II, factores de transcripción. La actividad del enzima PARP se aumenta por un factor de aproximadamente 500 en el caso de una rotura en la cadena de ADN [Menissier de Murcia, J. et al., J. Mol. Biol., 210, 229-233 (1989)]. Una disminución crítica de la concentración de NAD se produce por la activación del enzima PARP debido a una alteración muy extrema del ADN. Como consecuencia, se reduce la síntesis del trifosfato de adenosina (ATP) en la célula y, al mismo tiempo, se hace mayor la utilización de ATP ya que la célula trata de reestablecer la concentración de NAD en la adenosin difosfato ribosa y la amida nicotínica utilizando ATP. Estos procesos biológicos alteran lo importante en la terapia de varias enfermedades, tales como los modelos clínicos autoinmunitarios [Szabó, C. et al., Trends Pharmacol. Sci., 19, 287-98 (1998)], los estados isquémicos del corazón y del cerebro así como las enfermedades neurodegenerativas. El catabolismo de NAD se puede eliminar por inhibición del enzima PARP, reduciendo de este modo las concentraciones de amida nicotínica y de adenosin difosfato ribosa en las células e inhibiendo el consumo de trifosfato de adenosina para la síntesis de NAD; que es como decir, la alteración mencionada anteriormente y la muerte de las células se puede eliminar por inhibición enzimática.
Determinación de la inhibición de PARP, in vitro, en el enzima aislado
Se aisló la poli(adenosin difosfato ribosa)polimerasa del hígado de rata según el artículo de Shah, G.M. [Anal. Biochem., 227, 1-13 (1995)]. Se determinó la actividad de PARP en 130 \mul de mezcla de reacción que se compone de tampón tris-HCl 100 mM, pH 8,0, MgCl_{2}10 mM, glicerol al 10%, DTT 1,5 mM, 100 \mug de (^{32}P) o (^{3}H) NAD+, 10 \mug de ADN activado, 10 \mug de histona. [Tris-HCl es hidrocloruro de tris(hidroximetil)-aminometano]. Después de un tiempo de incubación de 10 minutos, se interrumpió la reacción con ácido perclórico al 8% y se separó la proteína mediante centrifugación (10 minutos, 10.000 x g). Se lavó el precipitado con ácido perclórico al 8% tres veces y se midió la reactividad ligada a la proteína con un contador de centelleo. Los resultados se pueden apreciar en la Tabla I.
TABLA I
Compuesto (Ejemplo n^{o}) PARP I_{0,5} en mg/l
2 9\pm2
3 8\pm1
4 14\pm2
5 13\pm2
6 17\pm3
8 12\pm2
9 7\pm1
10 28\pm4
12 18\pm3
13 20\pm3
14 9\pm2
16 18\pm3
Los datos anteriores proceden de cuatro mediciones en paralelo. En la Tabla I se puede apreciar que una parte de los compuestos probados es un inhibidor de PARP muy bueno (I_{0,5} < 10 mg/l). La parte mayor de los compuestos probados se puede clasificar como buenos inhibidores de PARP (I_{0,5} = 10-28 mg/l).
Efecto de los compuestos de fórmula I en la insuficiencia cardiaca isquémica y en la arritmia por reperfusión
La alteración del músculo cardiaco y la muerte de las células del músculo cardiaco tiene lugar, en la mayoría de los casos, por transtornos de alimentación. La forma más frecuente de trastorno de alimentación es la falta de oxígeno. La alteración del músculo cardiaco que se presenta es la isquemia del músculo cardiaco que se puede formar por hipoxia/anoxia aguda, oclusión coronaria, espasmo o enfermedad coronaria crónica. La parte isquémica del infarto agudo del musculo cardiaco es seguida por una fase del torrente circulatorio en exceso, denominada fase de reperfusión. Como una consecuencia fatal de la reperfusión, pueden aparecer arritmias (taquicardia ventricular implicada y fibrilación). Estas son las primeras manifestaciones de la lesión por reperfusión. La prevención del trastorno del músculo cardiaco por reperfusión mediante administración de fármacos significa la prevención del riesgo mortal del principio del post-infarto.
Se realizaron experimentos en ratas SPRD macho (intervalo de peso corporal aceptable: 300 a 350 g). Se anestesiaron los animales para la administración de pentobarbital [5-etil-5-(-metilbutil)-2,4,6-(1H,3H,5H)-pirimidintriona] (60 mg/kg intraperitoneal) y permanecieron respirando espontáneamente. Los animales respiraron con un respirador (fabricado por Kutesz, Hungarian Academy of Sciences) utilizando una cánula de tráquea insertada después de la traqueotomía. Se controló el patrón principal del ECG II. Se cateterizó la arteria femoral derecha y se conectó a un transductor de presión (BPR-01, Experimetria, Hungría) y a un preamplificador. Se puso en marcha el pulsotacómetro (HG-M, Experimetria, Hungría) mediante la señal de pulsación de la presión sanguínea arterial. Se canuló la vena yugular externa para la administración del fármaco. Después de la toracotomía, se colocó un hilo de seda (trenzado, forrado 4-0) bajo la arteria coronaria anterior izquierda (LAD). Después de un periodo de estabilización de unos pocos minutos, se aplicó una oclusión de 5 min a la arteria LAD seguida de un periodo de reperfusión de 10 min. Se registró el ECG en el estado normal al comienzo y en los periodos anteriores. Se determinó el lapso de tiempo de la taquicardia ventricular y de la fibrilación en s, a partir de los datos de ECG. Además, se registraron las relaciones de supervivencia en los grupos de animales tratados.
Los resultados obtenidos indican que los compuestos de la invención son adecuados para la prevención de la arritmia provocada por reperfusión. Por ejemplo, los animales tratados con el compuesto del Ejemplo 2 han presentado supervivencia mayor del 50% en comparación con el grupo de referencia después de la reperfusión.
Examen de los compuestos de fórmula I en la isquemia cerebral global
Después de un ataque isquémico humano, se destruyen la mayor parte de las células piramidales de la zona CA1 del hipocampo, las demás células de la zona (CA2, CA3) no son tan sensibles [Crain, B.J. et al.: Selective neuronal death after transient forebrain ischemia in the Mongolian gerbil, a silver impregnation study, Neuroscience, 27, 402 (1988)]. Según algunos autores, los trastornos de la memoria están relacionados con la muerte de las células del hipocampo [Walker, A.E. et al.: The national survey of stroke NINCDS, NIH: Clinical findings, Stroke, 12, Supl., 1, 1-44 (1981)]. El sistema nervioso central de los mamíferos no es igualmente sensible a la lesión isquémica. El jerbo de Mongolia (Meriones unguiculatus) es, debido a sus facultades anatómicas, bastante adecuado para el examen de la isquemia cerebral ya que en estas especies el 90% del sistema de anastomosis basilar (Circulus Willisi) falla, por lo tanto, no existe ninguna relación entre la arteria carótida y los sistemas de arterias vertebrales. Por lo tanto, se puede provocar la isquemia común del prosencéfalo presionando la carótida.
El objetivo del ensayo es determinar si los nuevos compuestos de fórmula I poseen un efecto protector en la isquemia cerebral global. Los experimentos se llevaron a cabo en jergos de Mongolia macho. Se anestesiaron los animales con una mezcla de 2% de halotano [2-bromo-2-cloro-1,1,1-trifluoretano], 68% de óxido de nitrógeno y 30% de oxígeno. En la anestesia, se presionó la carótida en ambos lados durante 5 minutos. Las neuronas no se destruyen enseguida, por consiguiente cuatro días de periodo de reperfusión siguieron a la presión (muerte celular de tipo tardío). Al cuarto día después de la intervención, el 80 al 90% de las células estaba dañado en la zona piramidal CA1.
Para determinar las capacidades de aprendizaje y de memoria así como la hipermotilidad, se probaron los animales en un laberinto en Y.
La muerte celular de la zona CA1 se estudió en las secciones histológicas. Se perfundieron los animales con formaldehído tamponado, se extrajo el cerebro y se fijó en formaldehído. Se determinó el crecimiento de las áreas CA1 destruidas en secciones del cerebro después de la tinción.
Se utilizaron los siguientes materiales para las pruebas
YKI-52466 (material de referencia) a una dosis de 40 mg/kg i.p., administrado 30 minutos después de la isquemia; nimodipina [éster 2-metoxietil 1-metiletílico del ácido 1,4-dihidro-2,6-dimetil-4-(3-nitrofenil)-3,5-piridindicarboxílico] (material de referencia) a una dosis de 10 mg/kg i.p., administrado 5 y 30 minutos después de la isquemia;
nuevo compuesto de fórmula I a una dosis de 25 mg/kg i.p., administrado 5 y 30 minutos después de la isquemia.
Grupos de ensayo
-
referencia isquémica,
-
tratado con un material de referencia después de la isquemia,
-
tratado con un material de ensayo después de la isquemia,
-
pseudo-operación.
En las pruebas se pudo demostrar que los compuestos de fórmula I tienen un efecto protector en la isquemia cerebral global.
Efecto de los compuestos de fórmula I frente a enfermedades autoinmunitarias
Una enfermedad autoinmunitaria es una enfermedad en la que el organismo inicia una reacción inmunitaria contra un constituyente normal de éste [Ring, G.H. et al., Semin. Nephrol., 19, 25-33 (1999); Theofilopoulos, A.N., Ann. N.Y. Acad. Sci., 841, 225-235 (1998)]. Las diversas enfermedades autoinmunitarias se diferencian entre sí en el antígeno que inicia el proceso, sin embargo, se puede demostrar una gran similitud en el tejido celular que destruye el mecanismo del proceso autoinmunitario desarrollado [Szabó, C. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95, 3867-3872 (1998)]. Las enfermedades autoinmunitarias incluyen, en primer lugar, las siguientes:
-
enfermedades hormonales: diabetes mellitus dependiente de insulina (IDDM);
-
enfermedades del hígado: hepatitis;
-
enfermedades de la piel: lupus penfigoide vesicular, pénfigo vulgar, psoriasis, escleroderma, vitíligo;
-
enfermedades de órganos formadores de sangre: sarcoidosis;
-
artropatías: artritis reumatoide;
-
enfermedades vasculares: vasculitis, arteritis takayasu, poliarteritis nodular, espondilitis anquilosante;
-
enfermedades intestinales: colitis ulcerosa;
-
enfermedades del sistema vascular y nervioso; esclerosis múltiple, miastemia grave, polineuropatía desmielinizante inflamatoria crónica.
De las enfermedades autoinmunitarias relacionadas se investigó en ratones la prevención de la diabetes mellitus de tipo I provocada por estreptozotocina.
Las células de los islotes de Langerhans del páncreas producen y transfieren la insulina, principal regulador del metabolismo de los carbohidratos en el cuerpo, al torrente sanguíneo. La alteración o la destrucción de las células \beta produce la disminución o el cese de la producción de insulina que conduce al desarrollo de la diabetes mellitus de tipo I. Las células \beta son especialmente sensibles a ROS y a los efectos tóxicos del óxido de nitrógeno. El estudio de la alteración del ADN producido por el óxido de nitrógeno conduce a la suposición de que la activación excesiva del enzima PARP y la disminución de la concentración de NAD son responsables de la muerte de las células \beta [Heller, B. et al., J. Biol. Chem., 270, 11176-180 (1995)]. Con un mecanismo similar, la estreptozotocina (SZ) [2-desoxi-2-(3-metil-3-nitrosoureído)-D-glucopiranosa] está alterando las células \beta productoras de insulina, ofreciendo por lo tanto, un modelo de diabetes de tipo I cuando se utiliza en experimentos con animales [Yamamoto, H. et al., Nature, 294, 284-286 (1981)]. El ADN es alterado por estreptozotocina mediante alquilación y formación de óxido de nitrógeno que produce la activación del enzima PARP, tal como se mencionó anteriormente.
Se examinó si la concentración de glucosa en sangre que aumenta el efecto de una sola dosis de estreptozotocina en ratones podría ser prevenida mediante una sola dosis de los derivados de aminoxima del ácido propencarboxílico de fórmula I. Los experimentos se realizaron en ratones CD-1 macho. Los animales se dividieron en tres grupos cada uno de los cuales constaba de 8 animales. El primer grupo recibió 160 mg/kg de estreptozotocina (Sigma) i.p., el segundo grupo recibió 160 mg/kg de estreptozotocina y 200 mg/kg del compuesto de fórmula I p.o., el tercer grupo sirvió de referencia. Se determinó la concentración de glucosa en sangre al tercer día después del tratamiento. A continuación, se sacrificaron los animales y se extrajeron muestras de suero para la determinación de insulina.
Se observó que el compuesto probado de la invención reducía de forma significativa la concentración de glucosa en sangre aumentada por la adición de estreptozotocina.
Efecto contra la resistencia a la insulina
La diabetes mellitus de tipo II no es dependiente de insulina. Lo esencial del mecanismo patológico de este último tipo es la disminución o pérdida de sensibilidad de la insulina de los tejidos periféricos, especialmente en los músculos estriados (del esqueleto) y en el tejido adiposo. Naturalmente, esta insensibilidad no se puede compensar mediante sobreproducción (hipersecreción) de las células beta del islote de Langerhans. Es importante hacer hincapié en que la resistencia a la insulina, incluso sin el comienzo de la diabetes mellitus real, conduce a varios trastornos reguladores cardiovasculares. Por consiguiente, la resistencia a la insulina es el factor de riesgo independiente de la enfermedad vascular coronaria. Debido a la importancia patofisiológica central de la resistencia a la insulina, las posibilidades farmacoterapéuticas que pretenden el aumento de la sensibilidad de la insulina son muy importantes en la investigación del fármaco. Los únicos fármacos realmente sensibilizadores a la insulina en la práctica clínica son las denominadas tiazolidindionas. Su toxicidad (que principalmente es hepatotoxicidad) es un factor limitante en su utilización. Los sensibilizadores de insulina disminuyen las concentraciones de glucosa, triglicéridos e insulina en sangre mediante un mecanismo que implica un aumento de sensibilidad a la insulina en los tejidos diana (hígado, músculos del esqueleto, adipocitos) [Colca, J.R., y Morton, D.R.: Antihyperglycamic thiazolidines: Ciglitazone and its analogues, in New Antidiabetic Drugs, editado por Bailey, C.J. y Flatt, P.R., Smith-Gordon, Nueva York, 1990, págs.
255-261].
Se investigó si el tratamiento con los compuestos de la invención tenía efecto sobre la sensibilidad a la insulina de los conejos conscientes normales e hipercolesterolémicos. Se colocaron en una jaula conejos blancos de Nueva Zelanda adultos, machos que pesaban de 3 a 3,5 kg, (periodos de 12 horas de luz/oscuridad al día, temperatura de 22 a 25ºC, humedad de 50 a 70%), se alimentaron con comida de laboratorio comercial y se utilizó todo el tiempo agua del grifo a voluntad. El periodo experimental comenzó después de un periodo de dos semanas de adaptación. Los conejos se distribuyeron al azar en dos grupos principales. La mitad de los animales continuó alimentándose con comida de conejos normal, mientras que los animales del segundo grupo se alimentaron con comida enriquecida con 1,5% de colesterol durante un periodo de ocho semanas. Cada grupo principal se dividió en cuatro grupos de tratamiento:
-
grupo no tratado,
-
grupo tratado con un compuesto de la invención, 10 mg/kg i.v. dosis dos veces al día durante 4 días.
-
grupo tratado con 7-nitroindazol como inhibidor de NOS:
-
administración de 5 mg/kg de 7-nitroindazol durante 5 min. precedido de administración de insulina con un intervalo entre las infusiones de 5 min,
-
grupo tratado tanto con 7-nitroindazol como con el compuesto descrito de la invención.
Se anestesiaron los animales y se insertaron catéteres de polietileno en las dos ramas principales de la vena yugular derecha y de la arteria carótida izquierda. Los catéteres se exteriorizaron por el dorso del cuello y se rellenaron con solución salina fisiológica conteniendo heparina.
Estudios en recipiente aislado
De la aorta torácica y de las arterias carótidas de los conejos, se prepararon y montaron horizontalmente anillos de recipiente de 4 mm de longitud en dos ganchos de vidrio con forma de L pequeños de los cuales uno se conectó a un transductor de fuerza (SG-02, Experimetria, Londres, R.U.) para medición y registro de la tensión isométrica. Los experimentos se llevaron a cabo en una cámara del órgano (5 ml) rellena con solución de Krebs gasificada con 95% de oxígeno y 5% de dióxido de carbono. La tensión inicial en descanso se estableció en 20 y 10 mN para los anillos de la aorta y de la carótida, respectivamente. El tiempo de equilibrio ascendió a 60 minutos. Posteriormente, se expusieron los anillos del recipiente a concentraciones recientes de noradrenalina de manera acumulativa. Después de la máxima respuesta, se lavó la noradrenalina en la cámara de órgano hasta que volvió la tensión al nivel de referencia anterior. Para estudiar la reactividad vascular a la acetilcolina, se contrajeron previamente los anillos mediante la concentración EC_{50} de noradrenalina. Después de obtener una contracción adecuada, se expusieron las preparaciones a aumentos acumulativos de cloruro de acetilcolina.
En una segunda serie de estudios de reactividad vascular, un grupo independiente de anillos de la arteria carótida se sometió a la estimulación en campo eléctrico. Después de una tensión inicial fijada de 10 minutos, se dejó que se equilibrasen los anillos durante 1 hora. Las respuestas contráctiles de los dos trenes consecutivos de impulsos de estimulación del campo eléctrico (100 estímulos, 20 V, 0,1 ms y 20 Hz) se estudiaron a continuación. Se repitió a continuación el protocolo de estimulación del campo en presencia de 1 \muM de atropina y 4 \muM de guanetidina ("no adrenérgica no colinérgica" = solución NANC). Se realizó el protocolo global con anillos con el endotelio intacto y en aquellos en los que se había eliminado suavemente la capa endotelial.
Determinación del contenido de GMP (monofosfato de guanilo) cíclico del tejido según Szilvássy [Szilvássy, Z. et al., Coron art. Dis., 4, 443/452 (1993); Am. J. Physiol., 266, H2033-H2041)] :
Se congelaron instantáneamente los anillos musculares con la utilización de una grapa de Wollenberger preenfriada y se pulverizó en nitrógeno líquido. Se homogeneizaron a continuación las muestras en 6% (v/v) de ácido tricloroacético de una cantidad 10 veces mayor que el peso de la muestra en un mortero mantenido previamentea -70ºC. Después de descongelar, se procesaron las muestras a 4ºC. La sedimentación a 15.000 g durante 10 min por medio de una centrifugadora Janetzki K-24 (Leipzig, Alemania) fue seguida de la extracción del sobrenadante con 5 ml de éter saturado con agua en un extractor Wortex durante 5 min. Se eliminó la fracción de éter y se repitió a continuación la extracción cinco veces. A continuación se evaporaron las muestras en nitrógeno y se analizaron los contenidos de GMP cíclico mediante la utilización de kits de radioinmunoanálisis Amersham. Los valores se expresan en pmol/mg de peso de tejido húmedo.
Estudios con grapa euglicémica hiperinsulinémica
Se infundió insulina regular humana a un caudal constante (13 mU/kg) por una de las cánulas venosas durante 120 min. Este caudal de infusión de insulina dio inmunoreactividad a la insulina del plasma de 100 \pm 5 \muM/ml en estado estacionario. Se extrajeron muestras de sangre (0,3 ml) de la cánula arterial para concentración de glucosa en sangre a intervalos de 10 min. La concentración de glucosa en sangre se mantuvo constante (5,5 \pm 0,5 mmol/l) mediante un caudal variable de infusión de glucosa por la segunda cánula venosa. Cuando se estabilizó la glucosa en sangre durante al menos 30 min, se definió esta condición como estado estacionario y se extrajeron más muestras de sangre (0,5 ml) para la determinación de insulina en el plasma a intervalos de 10 min. El caudal de infusión de glucosa durante el estado estacionario se utilizó para caracterizar la sensibilidad a la insulina.
De los exámenes se obtuvieron los resultados siguientes:
1. La respuesta de la relajación a los aumentos acumulativos de la concentración de acetilcolina (1 nm-10 \muM) no se modificó por 1 \muM de los compuestos de la invención en el recipiente de los conejos normales.
2. En la hipercolesterolemia experimental, la vasorelajación por acetilcolina fue significativamente más pequeña en presencia de los compuestos de la invención.
3. La estimulación en campo produjo un aumento en la tensión en los anillos de la arteria carótida incubados en solución de Krebs. En la solución NANC sin embargo, se observó una relajación de la respuesta en respuesta al protocolo de estimulación aplicado. Ninguna respuesta estuvo influida por los compuestos de la invención.
4. La eliminación del endotelio aumentó de forma significativa la contracción producida por la estimulación en campo y disminuyó la relajación de NANC. Los compuestos de la invención aliviaron las contracciones producidas por la estimulación en campo y aumentaron la relajación de NANC en los anillos del recipiente sin endotelio.
5. Las concentraciones producidas por la estimulación en campo aumentaron, mientras que las respuestas a la relajación por NANC se atenuaron en los anillos del recipiente de animales hipercolesterolémicos en comparación con las observadas en las preparaciones de conejos normales. Los compuestos de la invención disminuyeron de forma significativa las contracciones producidas por estimulación eléctrica y amplificaron la respuesta a la relajación por NANC en anillos de conejos hipercolesterolémicos con independencia de la presencia de endotelio.
6. La concentración de GMP cíclico de referencia disminuyó de forma significativa en los anillos de conejos hipercolesterolémicos en comparación con los de los anillos normales. Esta disminución se normalizó casi por incubación con 1 \muM de los compuestos de la invención. Los compuestos probados no tuvieron, sin embargo efecto en el contenido de GMP cíclico restante en los anillos normales. La estimulación en campo produjo un aumento en la concentración de GMP cíclico en las preparaciones de animales normales. En los anillos de conejos hipercolesterolémicos, el protocolo de estimulación aplicado no pudo producir ningún aumento de GMP cíclico. Los compuestos de la invención no tuvieron efecto sobre el aumento producido por la estimulación en campo en el contenido de GMP cíclico del tejido en anillos normales pero se observó un aumento sustancial de GMP cíclico en las preparaciones de conejos hipercolesterolémicos.
7. La exposición a una dieta enriquecida en colesterol produjo una disminución notable en la sensibilidad a la insulina en los conejos conscientes. El tratamiento con los compuestos de la invención durante 4 días reestableció casi la sensibilidad a la insulida en los animales hipercolesterolémicos. Sin embargo, los compuestos de la invención no tuvieron efecto en la sensibilidad a la insulina en los animales normales.
8. 7-nitroindazol, inhibidor de la óxido nítrico sintetasa neural, produjo resistencia a la insulina en animales normales por si mismo. Los compuestos de la invención no pudieron modificar este estado de resistencia a la insulina. Además, 7-nitroindazol bloqueó la resistencia a la insulina mejorando el efecto de los compuestos de la invención en la hipercolesterolemia experimental.
Conclusiones
Los resultados presentados demuestran que los compuestos de la invención aumentan el efecto hipoglicémico de la insulina en el estado resistente a la insulina asociado a hipercolesterolemia experimental en conejos conscientes. Los resultados también proporcionan pruebas de que este efecto sensible a la insulina está muy relacionado con las vías nitrérgicas cuya influencia se ha sugerido recientemente que desempeña un papel principal en la regulación de la sensibilidad de la insulina [Shankar, R.R. et al., Diabetes, 49, 684-687 (2000)]. La regulación neurohormonal hepática de la sensibilidad de la insulina periférica se puede describir de la forma siguiente [Lautt, W.W., Can J. Physiol., 77, 553-562 (1999)]:
- Existe un aumento de la concentración de insulina en sangre después de las comidas.
- En respuesta a este aumento de la concentración de insulina, se activa el reflejo parasimpático hepático.
- Este reflejo produce la liberación de acetilcolina que activa los receptores muscarinérgicos.
- La excitación muscarinérgica conduce a la liberación de óxido de nitrógeno (NO).
- Sólo en estado alimentado, el óxido de nitrógeno produce la liberación de un factor sensibilizador de insulina hepático (HISS) que posee efecto sinérgico de insulina o de tipo insulina.
- HISS aumenta la absorción de glucosa de los músculos del esqueleto.
Este mecanismo de HISS es sensible al bloqueo de la síntesis del óxido de nitrógeno y se puede activar por el donante de NO exógeno. Es muy probable que el mecanismo de HISS esté íntimamente relacionado con la función de las fibras sensibles hepáticas. El aumento después de las comidas de la concentración de insulina en el plasma activa la subpoblación nitrérgica de las fibras del nervio sensorial hepático que produce la liberación de neurotransmisores sensoriales procedente de las fibras vecinas. Estos neurotransmisores sensoriales, mediante su carácter de tipo hormonal, alcanzan el torrente sanguíneo y elevan la sensibilidad de la insulina de los tejidos.
En un trabajo muy reciente Steppan et al. arrojó luz en la conexión perdida entre la obesidad y la resistencia a la insulina [Steppan, C.M. et al., Nature, 409, 307-312 (2001)]. En resumen, los adipocitos producen una hormona denominada resistina. La resistina demostró aumentar la sensibilidad de los tejidos diana (grasa y músculo del esqueleto) al efecto hipoglicémico de la insulina. Por consiguiente, la inhibición farmacológica de la secreción de resistina es un posible nuevo mecanismo de acción para la explotación farmacológica en el tratamiento de la diabetes mellitus no dependiente de la insulina y en el síndrome de resistencia a la insulina. Entre los fármacos conocidos actualmente, los miembros de la familia de la tiazolidindiona pueden inhibir la secreción de insulina mediante el receptor gamma nuclear activador proliferador de peroxisoma en los adipocitos.
Los compuestos de fórmula I ejercen un efecto sobre la sensibilidad a la insulina y son capaces de aliviar la resistencia a la insulina mediante un mecanismo nitrérgico y de neurotransmisores sensoriales. La normalización de la sensibilidad a la insulina tiene un papel etiológico en las enfermedades de elevada morbimortalidad tales como la diabetes de tipo II, la hipertensión, cardiopatía isquémica, obesidad y algunas enfermedades endocrinas.
Utilización de los compuestos de la invención para la prevención de efectos tóxicos 1) Efecto de los compuestos sobre la letalidad provocada por la endotoxina en ratones
El choque séptico es una de las causas más frecuentes de muerte en las unidades de cuidados intensivos. Las infecciones causadas por las bacterias Gram-negativas conducen a hipotensión, a función insuficiente de varios órganos y, por último, al colapso del organismo. Mediante la inyección de lipopolisacárido (LPS), componente de la membrana bacteriana, en animales experimentales, un estado similar al choque y por último, se produce la muerte. LPS activa la familia de la transcripción NF-\kappaB/Rel que regula la producción de diversos transmisores que toman parte en el mecanismo patológico del choque (tales como TNF-\alpha, interleucinas, NO sintetasa) [Oliver, F.J. et al.: Resistance to endotoxic shock as a consequence of defective NF-\kappaB activation in poli(ADP ribosa) polymerase-1 deficient mice, EMBO J., 18 (16), 4446-4454 (1999)]. El gen de PARP-1 está conectado operativamente a NF-\kappaB, de este modo, en ausencia de PARP, las transcripciones que dependen de NF-\kappaB no proceden, por consiguiente, también la liberación de los mediadores de inflamación se regulan por disminución en el choque con endotoxinas. El objetivo del ensayo es determinar si la letalidad causada por la endotoxina se puede prevenir mediante la inhibición de PARP-1 por los compuestos de fórmula I.
Para los experimentos, se emplearon ratones C57BU6 (Charles River Breeding Ltd.). En el ensayo, la dosis y tipo de LPS utilizados fueron idénticos a los descritos en el artículo de Oliver, F.J. mencionado anteriormente: lipopolisacárido de Escherichia coli 0111:B4 (Sigma). En los experimentos, también se utilizó 3-amino-benzamida (Sigma). La supervivencia de 24 horas fue seguida al menos dos veces. Se administraron compuestos de fórmula I a los animales, por vía oral, 1 y 6 horas después del tratamiento con LPS.
Se observó que la letalidad producida por la endotoxina era reducida de forma significativa por los compuestos de fórmula I probados.
2) Efecto de los compuestos sobre la hepatotoxicidad producida por acetaminofeno (paracetamol)
Es sabido que varios antirreumáticos no esteroideos [Peters, M. et al., Clin. Inves., 71, 875-881 (1993)] y analgésicos, respectivamente, presentan hepatotoxicidad importante [Kröger, H. et al., Gen. Pharmac., 27, 167-170 (1996)]. Las insuficiencias hepática y renal están provocadas por una gran dosis de paracetamol [Meredeth, T.J. et al., Arch. Inter: Med., 141, 397-400 (1981)]. Recientemente empezó a ser obvio que los inhibidores de poli(ADP ribosa)-polimerasa eliminen el daño hepático producido por paracetamol [Kröger, H. et al., Gen. Pharmac., 27, 167-170 (1996)]. Es sabido en la bibliografía que paracetamol es el inductor del citocromo P-450. El efecto de paracetamol en el sistema del citocromo P-450 produce quinona iminas reactivas que se unen al grupo sulfhidrilo de las proteínas, resultando de este modo una eliminación rápida del glutatión intracelular [Jollow, D.J. et al., Pharmacol., 12, 251-271 (1974)]. Las proteínas inactivadas conducen a la destrucción de las células del hígado y de la necrosis hepática, respectivamente. El glutatión intracelular es uno de los antioxidantes más importantes y el eliminador más potente de las especies de oxígeno reactivo, respectivamente. La debilidad del sistema protector antioxidante que depende del glutatión conduce a un aumento del nivel intracelular de radicales de oxígeno libre [Miesel, R. et al., Inflamatin, 17, 283-294 (1993)]. Los radicales de oxígeno libre son potentes inductores de PARP que influyen en la traducción posterior de las proteínas. Debido al aumento de la activación de PARP, se eliminan los almacenamientos de NAD de las células y puede comenzar la apoptosis [Hoschino, J. et al., J. Steroid Mol. Biol., 44, 113-119 (1993)]. Por consiguiente, la amida nicotínica, inhibidor selectivo del enzima PARP, suprime la liberación de las enzimas GOT y GPT en el hígado como se muestra en ratones en caso de hepatitis provocada por paracetamol [Kröger, H. y Ehrlich, W. en: L-Tryptophan: Current Prospects in Medicine and Drug Safety, editado por Kochen, W. y Steinhart, H., Verl. Berlín, 1994].
Se examinó si el daño hepático provocado por paracetamol se puede prevenir mediante los nuevos compuestos de fórmula I. El síntoma de daño hepático está caracterizado por un aumento de las concentraciones de los enzimas GOT y GTP provocadas con paracetamol. Se llevaron a cabo los experimentos en ratones NMRI macho de 30 a 40 g de peso corporal. Se pretrataron los animales con los compuestos de fórmula I, por vía oral, durante 7 días. El día 8, se sometieron los ratones a inanición durante 12 horas, a continuación se les administró una dosis p.o. de 500 mg/kg de paracetamol y una dosis dada de un compuesto de fórmula I. Después de 16 horas, se extrajo sangre a los animales hasta la muerte y se midió la actividad de los enzimas GOT y GPT en el suero. Se analizaron los resultados mediante el ensayo no paramétric0 de Mann y Whitney. Como resultados, se dan la media y la desviación estándar en los que p<0,05 se consideró significativa.
Se observó que una sola administración de paracetamol por vía oral aumentaba la actividad de GOT y GPT en el suero de los ratones NMRI macho en comparación con los animales de referencia tratados con solución salina fisiológica. Sin embargo, los compuestos de fórmula I, después de un tratamiento por vía oral que duró 7 días, redujeron la actividad de los enzimas GOT y GPT de forma muy significativa. Por ejemplo, se ha observado el efecto hepatoprotectivo favorable en el caso del compuesto del Ejemplo 12 administrado a una dosis de 50 mg/kg.
3) Efecto de los compuestos sobre la toxicidad de paraquat
Paraquat [1,1'-dimetil-4,4'-dipiridinio], compuesto utilizado al principio como pesticida, ejerce una acción tóxica mediante la formación del radical superóxido. Los enzimas oxidoreductasas que utilizan NADH y NAD(P)H como donantes de electrones intervienen en la formación del radical superóxido. [NAD(P)H es la forma reducida de fosfato del dinucleótido \beta-nicotinamida adenina]. En la transmisión de la respuesta celular a la agresión oxidante producida por paraquat, la proteína p66 desempeña un importante papel [Migligaccio, E. et al., Nature, 402, 309-313]. Los mecanismos que contribuyen a la inactivación del superóxido (tal como el aumento de la concentración en superóxido dismutasa) reducen la toxicidad de paraquat de forma eficaz. El radical superóxido tiene un papel importante en el mecanismo patológico de varias enfermedades (tales como la reoxigenación de la isquemia, infarto, enfermedades inflamatorias). Un modelo sencillo de la carga de superóxido experimentado en estas enfermedades se obtiene mediante la administración de paraquat.
Efecto sobre la toxicidad de paraquat, in vitro
Se cultivaron células de hepatoma Hepa-1 en medio RPMI-1640 complementado con 10% de suero de ternero fetal, mientras las células PC-12 de feocromocitoma de rata se cultivaron en medio RPMI-1640 complementado con 10% de suero de ternero fetal, y 5% de suero de caballo a 37ºC en aire que contiene 5% de dióxido de carbono. Utilizando 100 \mul de medio de cultivo, se colocaron en placas 5 x 10^{3} células en los pocillos de una placa de cultivo Costar de 96 pocillos. Una parte de los cultivos no obtuvo ningún tratamiento y se utilizó como referencia. Se trataron las células en parte con concentraciones crecientes de paraquat, en parte con la misma concentración de paraquat y una concentración de 3,10 y 30 \mug/ml de los compuestos del el ensayo. Se cultivaron las células durante otros 3 días, a continuación se tiñeron con SRB. Las concentraciones de paraquat mayores produjeron la muerte de las células, mientras que las concentraciones menores de paraquat inhibieron parcialmente el crecimiento celular. Se determinó el efecto del compuesto que se debe probar basándose en la disminución de la toxicidad de paraquat.
Efecto sobre la toxicidad de paraquat, in vivo
Paraquat presenta una toxicidad importante en ratones. Una dosis de 70 mg/kg administrada por vía intraperitoneal produjo la muerte de los animales en 2 días. Los mecanismos que moderan la formación del superóxido, la neutralización y los efectos de la agresión oxidante son capaces de reducir la toxicidad de paraquat también in vivo.
Ratones CFLP con un peso corporal de 20 a 22 g se dividieron en grupos que constan de 10 animales y se trataron, por vía intraperitoneal, con 50 y 70 mg/kg de paraquat, respectivamente. Una parte de los grupos se trató también con el compuesto del ensayo 6 horas antes y después de la administración de paraquat. En el caso de los compuestos del ensayo, se empleó una dosis p.o. de 100 mg/kg. Se determinó la eficacia de los compuestos del ensayo basándose en el aumento de la supervivencia de los ratones.
Se observó que los compuestos de fórmula I reducían la toxicidad de paraquat de forma significativa.
Efecto de los compuestos de fórmula I sobre las enfermedades neurodegenerativas
Como se ha mencionado al principio, debido a la alteración del ADN por ROS, el enzima PARP se está activando lo que es seguido por las células que pierden NAD, conduciendo de este modo a la muerte celular. Una velocidad extrema de activación de PARP no se puede observar solamente durante la muerte de las neuronas producida por isquemia de tipo isquemia cerebral, pero se ha demostrado el papel en otras enfermedades neurodegenerativas, tales como la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson y la esclerosis lateral amiotrófica [Love et al., Neuropathol. Appl. Neurobiol., 25, 98-108 (1999); Eliasson et al., Nat. Med., 10, 1089-1095 (1997)].
Efecto sobre la esclerosis lateral amiotrópica experimental
La esclerosis lateral amiotrópica (ALS) es una enfermedad neurodegenerativa progresiva. Es el trastorno más frecuente de las neuronas motrices al comienzo del adulto en los países desarrollados. ALS provocaa la degeneración de las neuronas motrices en el córtex, tronco encefálico y columna vertebral que produce la atrofia muscular del esqueleto, la parálisis y la muerte [Rowland, L.P. en Neurodegenerative diseases, págs. 507-521 (1994)]. En una parte de los casos de ALS, la enfermedad es familiar. Los casos familiares se producen en parte por la mutación sin sentido del gen de la superóxido de Cu/Zn dismutasa-1 (SOD-1) [Deng, R.H. et al., Science, 261, 1047 (1993)]. SOD-1, enzima citoplásmico abundante en el tejido nervioso, desempeña un papel importante en la protección contra la alteración celular producida por los radicales de oxígeno. El enzima mutado mantiene casi un nivel normal de la actividad del enzima. Los estudios in vitro indicaron que las mutaciones de SOD-1 producen una ganancia de función y aumentan la generación de radicales libres.
El ratón transgénico con gen SOD-1 mutado desarrolla síntomas similares a los de ALS. Diversos genes SOD-1 mutados humanos (G93A, V148G) han sido ya sobreexpresados en el ratón transgénico y los modelos de enfermedad generados se aplicaron para identificar el fármaco anti-ALS [Gumey, M.E., J. Neurol. Sci., 152 Supl. 1, 67-73 (1997)].
Prueba en el modelo ALS familiar
Se utilizaron en el estudio ratones transgénicos que sobreexpresan el gen SOD-1 humano mutado (G93A). Los animales se adquirieron en el Jackson Laboratory, U.S.A. El tratamiento con los compuestos de la fórmula I comenzó antes de la aparición de los síntomas de la enfermedad a las 4 semanas de edad. Se aplicaron los compuestos del ensayo una vez al día, por vía oral, en niveles de 3 dosis hasta la terminación del experimento. La evolución de la enfermedad se controló por examen semanal del funcionamiento motor (reflejo de extensión, retículo cardado, ensayo Rotarot), por el tiempo de supervivencia y, a la terminación del experimento (después de 120 días), por examen histológico y bioquímico de las áreas de las neuronas motrices.
Se observó que los compuestos de fórmula I producían un retardo moderado de la aparición del reflejo, de la coordinación y de la insuficiencia de la fuerza muscular en los animales ALS transgénicos. El efecto demostró la dependencia de la dosis. Existía también un retardo en la aparición de la parálisis y de la enfermedad en la etapa final. Los resultados del examen histológico confirmaron el efecto clínico observado del tratamiento. La degeneración y pérdida de las neuronas motrices y de las neuronas de la sustancia negra estaban menos extendidas en el grupo tratado que en el grupo de referencia. Basándose en los resultados se puede esperar que los compuestos de fórmula I tengan un efecto terapéutico favorable en las enfermedades ALS.
Prueba en el modelo ALS autoinmunitario
En el caso de enfermedades ALS esporádicas, no se puede observar ninguna mutación en el gen SOD-1. Este hecho sugiere que otras causas conducen a la misma evolución de la enfermedad. En la mayoría de los pacientes que padecen ALS esporádica, se puede detectar el anticuerpo frente a los canales de calcio. Esta observación confirma el concepto de que un proceso autoinmunitario contra las neuronas motoras y los canales de calcio desempeña un papel principal etiológico en la formación de los casos esporádicos de ALS. En animales experimentales, Engelhardt y colaboradores provocaron una enfermedad que presenta las alteraciones específicas de ALS por inmunización con neuronas motrices, utilizando a continuación suero meramente inmunitario [Engelhardt, J. et al., Synapse, 20, 185-199 (1995)]. Este modelo se utilizó para probar la eficacia del compuesto de fórmula I en las enfermedades ALS esporádicas.
Se inmunizaron cerdos de guinea Hartley con médula espinal del asta anterior bovino homogeneizada. Para la inmunización, se pusieron en suspensión las neuronas motrices en adyuvante completo de Freund (CFA). El tratamiento se realizó mediante 10 inyecciones subcutáneas o intracutáneas, inyectando cada vez 0,1 ml de suspensión. Después de un mes se repitieron las inyecciones, sin embargo, se utilizó adyuvante incompleto de Freund para la preparación de la suspensión. Dos semanas después de la segunda inmunización, durante 1 a 3 días, se desarrolló una debilidad grave en los animales, especialmente en los limbos inferiores. Se interrumpió la ganancia de peso corporal y disminuyó la motilidad. Durante otras dos semanas, el estado de los animales no cambió. A continuación se extrajo sangre a los animales hasta la muerte. La sangre recogida se centrifugó para obtener el suero que se utilizó para provocar ALS en ratones.
Se realizaron pruebas en grupos que constaban de 5 ratones albinos macho (CFLP, 25 a 30 g de peso corporal). Se inyectó 1 ml del suero anterior por vía intraperitoneal a cada animal para alterar las neuronas motrices. Se trató sólo con suero un animal del grupo, mientras que otros grupos de animales se trataron, además de con suero, también con un compuesto del ensayo de fórmula I a una dosis de 100 mg/kg, por vía intraperitoneal. Otros grupos de animales se trataron solo con el compuesto del ensayo de fórmula I sin la inyección de suero.
La motilidad de los animales tratados sólo con suero se hizo lenta, los limbos inferiores se pudieron utilizar solamente con dificultades, a continuación se paralizaron. En el caso de los animales tratados tanto con suero, como con el compuesto de ensayo de fórmula I, no se pudo detectar ningún síntoma de insuficiencia motriz. Lo mismo se experimentó en el caso de los animales tratatos solamente con los compuestos del ensayo de fórmula I. Todo esto sugiere que los compuestos de fórmula I impiden el desarrollo de transtornos motrices que pueden ser provocados por inmunización.
Efecto de la enfermedad de Parkinson en el modelo experimental
La enfermedad de Parkinson (PD) es un transtorno neurodegenerativo y biopático de incapacidad frecuente caracterizado por temblores, bradicinesia, rigidez y dificultades en el equilibrio. Estas anomalías motrices se producen por la disminución de la dopamina del cerebro que procede de la pérdida de las neuronas dopaminérgicas en los niveles compactos de sustancia negra. El análisis de la acción de 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridina (MPTP) con neurotoxicidad selectiva arrojó luz al posible mecanismo patológico de la enfermedad de Parkinson. MPTP provoca las señales motrices parkinsonianas tanto en el hombre como en los animales [Dexter, A. et al., Ann. Neurol., 35, 38-44 (1994)]. El tratamiento con MPTP produce también una pérdida de neuronas dopaminérgicas en los niveles compactos de la substancia negra. Inclusiones eosinófilas de tipo de cuerpo de Lewy aparecen en las neuronas dañadas y la actividad del complejo I mitocondrial también disminuye en estas células. Estas alteraciones son características de la agresión oxidante [Shapira, A. , Adv. Neurol., 69, 161-165 (1996)]. El metabolito biológicamente activo de MPTP es MPP [1-metil-4-fenilpiridina]. MPP inhibe directamente el complejo I en los mitocondrias conduciendo al aumento de la generación del anión superóxido. Los datos indican que la agresión oxidante desempeña un papel central en la patogénesis de la forma natural y de la forma producida por MPTP de la enfermedad de Parkinson. El enzima PARP es activado por la agresión oxidante y el enzima parece que desempeña un papel activo en el mecanismo patológico de la enfermedad de Parkinson. Los ratones inconscientes por PARP presentan una sensibilidad muy reducida frente al efecto de MPTP que provoca la enfermedad de Parkinson [Mandir, A. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96, 5774-5779 (1999)]. Estos descubrimientos sugieren que la inhibición por PARP puede producir efecto terapéutico en la enfermedad de Parkinson.
Los ratones C57BI empleados en los ensayos se adquirieron en Charles River Hungary. Los ratones pesaban 20 g cuando se trataron cuatro veces con 20 mg/kg de MPTP administrado cada vez en intervalos de 2 horas, por vía intraperitoneal. Se administraron compuestos de ensayo por vía oral 30 minutos antes de las inyecciones de MPTP. Los animales de referencia recibieron tratamientos con vehículo en la misma proporción. Siete días después de la inyección de MPTP, se sacrificaron los ratones y se extirparon los cerebros rápidamente. Se diseccionaron los cuerpos estriados en placas de Petri enfriadas con hielo. Se congelaron inmediatamente los tejidos escindidos y se mantuvieron a -80ºC hasta el análisis. Se sometieron a ultrasonidos las muestras de tejido en 50 volúmenes de ácido perclórico 0,1 M para conseguir su homogeneización. Después de la cetrifugación (14.000 x g, 10 min, 4ºC), se inyectaron 20 \mul de sobrenadante en una columna de catecolamina en fase inversa (ESA, Bedford) y se evaluó el contenido en dopamina.
2 horas después del último tratamiento con MPTP, se escindieron el mesencéfelo ventrolateral y el cuerpo estriado y se homogeneizaron en un tampón de sacarosa/DTT, a continuación se centrifugó (14.000 x g, 5 min). Se volvió a poner en suspensión el sedimento en el tampón. Después de la determinación de la concentración de proteínas, se cargó una cantidad igual de proteína en un gel SDS/PAGE. La proteína se transfirió desde el gel a una membrana de nitrocelulosa y se tiñó inmunológicamente con polímero poli(ADP ribosa). Se visualizó la unió específica por quimioluminiscencia.
En los exámenes se observó que el tratamiento con MPTP produjo una disminución drástica (del 80%) en el contenido de dopamina del cuerpo estriado. Los compuestos del ensayo de fórmula I inhibieron parcialmente (del 20 al 40%) la pérdida de dopamina producida por MPTP. El tratamiento con MPTP produjo la aparición de aductos de polímero poli(ADP-ribosa) en el área del cuerpo estriado. El tratamiento correspondiente con los compuestos del ensayo produjo una inhibición de este proceso (del 20 al 70%). Por lo tanto, se puede esperar que los compuestos de fórmula I puedan poseer actividad terapéutica en la enfermedad de Parkinson.
Examen del efecto citoprotector
Algunos fármacos utilizados permanente o frecuentemente pueden producir alteración neuronal como efecto desfavorable. A partir de una larga serie de dichos fármacos que producen este efecto desfavorable (cloranfenicol, dapsona, disulfiram, dicloroacetato, etionamida, glutetimida, aurotiomalato de sodio, hidralazina, isoniazid, metronidazol, nitrofurantoína, óxido nitroso, cisplatino, piridoxina, vincristina) las mejor caracterizadas y expuestas con más frecuencia son las neuropatías producidas por isoniazid, piridoxina, vincristina o cisplatino. El cloranfenicol es el fármaco que puede producir dicha neuropatía, pero este efecto desfavorable puede desaparecer después de la terminación del tratamiento. Sin embargo, en casi todos los casos clínicos, la terminación prematura de la quimioterapia puede impedir el éxito del tratamiento y puede producir la reactivación de la enfermedad. Especialmente alto es el peligro de los cambios de tratamiento terapéutico debido a los efectos secundarios en los casos de quimioterapia anticancerosa. Este hecho da gran importancia a los denominados agentes quimioprotectores o citoprotectores que son capaces de disminuir el efecto desfavorable perjudicial de los fármacos importantes que conservan la vida sin producir ninguna disminución de la eficacia terapéutica.
En los pacientes de cáncer tratados con cisplatino, el efecto secundario principal es la lesión de los nervios periféricos (neuropatía periférica). El comienzo de este efecto secundario puede difucultar la realización del tratamiento con cisplatino, puede poner en peligro el éxito del tratamiento y comunicar calidad de vida a los pacientes. La presencia y grado de la lesión neuronal se puede determinar mediante la medición de la velocidad de conducción del nervio tanto en estudios clínicos como experimentales. El efecto neurotóxico del cisplatino [cis-diamina dicloroplatino] afecta, principalmente, a los nervios periféricos largos con mielina y se manifiesta en la lesión neuronal sensorial (neuropatía sensorial). Hace poco, algunos informes mencionan la neuropatía autonómica y, ocasionalmente, también la neuropatía motriz después del tratamiento con cisplatino. Lesionando directamente los ganglios con raíz dorsal y los nervios sensitivos largos, cisplatino puede producir con frecuencia el transtorno funcional de los nervios sensitivos. En ratas, el tratamiento con cisplatino de larga duración produce la neuropatía sensitiva que se refleja en la ralentización de la velocidad de conducción del nervio sensitivo del nervio isociático de tipo mixto.
Basándose en el modo bioquímico de acción mencionado anteriormente, principalmente impidiendo las lesiones producidas por radicales libres, se creía que los compuestos de fórmula I pueden tener efectos potenciales citoprotectores y pueden evitar los efectos organotóxicos desfavorables de los fármacos anti-tumorales. Por consiguiente, en los experimentos en ratas se administró cisplatino en forma de tratamiento subagudo durante 10 semanas a dosis de 1 y 2 mg/kg i.p., y se observó el desarrollo de la neuropatía periférica. Además, se examinó cómo las diferentes dosis de los compuestos del ensayo influyen en la lesión de la función nerviosa (velocidad de conducción del nervio).
Para detectar la lesión nerviosa sensitiva y motriz producida por cisplatino, se midió la velocidad de conducción nerviosa en la cola de las ratas según el procedimiento de Miyoshi modificado. La modificación consistía en medir la velocidad de conducción del nervio a temperatura ambiente en lugar de a 37ºC. Se determinaron las velocidades de conducción del nervio sensitivo y motriz antes del tratamiento con cisplatino (referencia) y a la 5ª y 10ª semana de tratamiento. Durante la medición, se anestesiaron los animales superficialmente con éter y se colocaron dos pares de electrodos de clavija en el nervio de la cola a una distancia de 50 mm uno del otro. Utilizando la dosis supramáxima al estímulo, se registraron los potenciales de la acción nerviosa aferente (motriz) y aferente (sensitiva). Se determinó la velocidad de conducción autónoma del nervio promediando 10 potenciales de acción utilizando la fórmula
NCV = v/l [m/s],
en la que
v = distancia entre los pares de electrodos activador y registrador en mm,
l = tiempo de latencia del comienzo de la acción potencial en ms,
NCV = velocidad de conducción del nervio en m/s.
En las pruebas se observó que un tratamiento de 10 semanas con 1 y 2 mg/kg de cisplatino i.p. reducía el peso corporal de los animales tratados de forma significativa en comparación con el de los animales de referencia. Esta reducción del peso corporal se experimentó también en el caso de los animales tratados con el compuesto de fórmula I. No hubo diferencia en el comportamiento general entre los animales tratados y no tratados o los animales tratados con cisplatino y un compuesto del ensayo. No hubo diferencia en la NCV de los nervios sensitivos y motores en el grupo de referencia en las tres veces de medición. En los animales tratados con cisplatino, NCV disminuyó de forma unánime y notable a la quinta y también a la décima semana debido al tratamiento con 1 mg/kg de cisplatino. Después del tratamiento con 2 mg/kg de cisplatino, se experimentó una reducción más fuerte de NCV. Se desarrolló también neuropatía en los nervios motores.
En el curso del tratamiento con cisplatino durante 10 semanas, la NCV motriz disminuyó de forma significativa tanto en los grupos de dosis de cisplatino de 1 como de 2 mg/kg. La disminución fue dependiente de la dosis. En los grupos tratados tanto con 1 mg/kg de cisplatino como con un compuesto de fórmula I, la disminución de la velocidad de conducción del nervio sensitivo fue significativamente menor que en el grupo tratado sólo con 1 mg/kg de cisplatino, por lo tanto, esta función neuronal mejoró el tratamiento combinado siguiente. El grado de mejora fue mayor cuanto más fuerte era el grado de lesión. En el grupo tratado tanto con 2 mg/kg de cisplatino como con un compuesto de fórmula I en varias dosis, en la quinta semana la disminución de la velocidad de conducción del nervio sensitivo no se diferenció de la del grupo tratado solamente con 2 mg/kg de cisplatino. En la décima semana, sin embargo, el grupo de animales tratados sólo con 2 mg/kg de cisplatino disminuyó además de forma significativa, mientras que en el caso de los animales tratados tanto con cisplatino como con un compuesto de fórmula I, la disminución fue dependiente de la dosis en comparación con los animales tratados sólo con 2 mg/kg de cisplatino. La disminución de la velocidad de conducción del nervio aferente fue menor al final de la décima semana, especialmente en los grupos tratados también con los compuestos de la invención.
Resumiendo, se puede afirmar que el perjuicio de las velocidades de conducción del nervio sensitivo y motor producido por el tratamiento con cisplatino disminuyó mediante el tratamiento simultáneo con los compuestos de fórmula I, y se evitó la evolución de la lesión desde la quinta a la décima semana. Este efecto protector fue dependiente de la dosis en algunos grupos. Por lo tanto, el efecto neuroprotector de los compuestos de fórmula I se puede demostrar tanto en las funciones nerviosas sensitivas como motrices.
Efecto biológico de la carnitina-palmitoil transferasa (CPTI)
El CPTI es un enzima clave en la regulación del metabolismo de los ácidos grasos. Existen dos posibilidades para los ésteres de coenzima A (CoA) de los ácidos grasos libres (FFA):
1) síntesis de triglicérido mediante reacción con glicerol o
2) oxidación, cuya primera etapa es la formación de acilcamitina por medio del enzima CPTI [véase McGarry, J.D. et al., Diabetes, 5, 271-284 (1989); McGarry, J.D. y Foster, D., Ann. Rev. Biochem., 49, 395-420 (1980)]. El enzima CPTI está localizado en la parte externa de la membrana mitocondrial interna (o en la membrana externa) y cataliza la siguiente reacción:
FFA-CoA + L-carnitina \rightarrow FFA-carnitina + CoA
La inhibición de la oxidación de ácidos grados produce el aumento de la degradación y la oxidación de la glucosa. Este proceso es sumamente significativo y ventajoso, especialmente en la isquemia de miocardio y en la diabetes. Ambos estados patológicos tienen gran morbimortalidad. En la isquemia de miocardio y en la reoxigenación posterior, el aumento en la oxidación de los ácidos grasos es perjudicial debido a la mayor demanda de oxígeno y al efecto de alteración de la membrana de las acilcamitinas formadas [Busselen, P. et al., J. Mol. Cell. Cardiol., 20, 905-916 (1988); Ford, D.A.et al., Biochemistry, 35, 7903-7909 (1996); Reeves, K.A. et al., Pharm. Pharmacol., 48, 245-248 (1995)]. Basándose en varios datos experimentales, actualmente es un hecho aceptado que la activación del metabolismo de la glucosa y la inhibición simultánea de la oxidación de los ácidos grasos tienen un efecto favorable desde el punto de vista tanto de la reconstrucción de la función mecánica del miocardio como de los parámetros del metabolismo (liberación del enzima, peroxidación de lípidos) [Lopaschuk, G.D. et al., Circ. Res., 66, 546-553 (1990); Kennedy, J.A., et al., Biochem. Pharmacol., 52, 273-280 (1996)]. Esta selección del substrato del miocardio es decir, la selección entre glucosa y ácidos grasos se puede conseguir también mediante inhibidores de CPTI, de este modo, la utilizando de la glucosa aumenta y la actividad del miocardio mejora [Lopaschuk, G.D. et al., Circ. Res., 63, 1036-1043 (1988); Carregal, M. et al., Arch. Phys. Biochem., 103, 45-49 (1995); Lopaschuk, G.D. et al., Circ. Res., 65, 378-387 (1989); Pauly, D.F. et al., Circ. Res., 68, 1085-1094 (1991)].
Estos estudios demuestran que el enzima que cataliza la reacción limitante de la velocidad de oxidación de los ácidos grasos puede estar inhibida por los compuestos de fórmula I en un intervalo de concentración sub-milimolar. Los estudios también indican que los compuestos del ensayo influyen en la selección del substrato del corazón y de otros tejidos y, mediante el cambio de selección del substrato, también en las alteraciones post-isquémicas de los tejidos.
Papel biológico de los genes sensibles al oxígeno regulados principalmente por los factores de transcripción de bHLH
La protección frente a los efectos perjudiciales de la hipoxia requiere una serie de reacciones defensivas organizadas tanto al nivel de cada célula como al nivel del organismo completo. El complejo de transcripción HIF-1/ARNT desempeña un papel central pero no exclusivo en la regulación de la expresión de los genes producidos por hipoxia. Los genes regulados de forma coordinada, sensibles al oxígeno incluyen la eritropoyetina que estimula la producción de glóbulos rojos [Wang, G.L. et al., PNAS, 92, 5510 (1995)], VEGF (factor de crecimiento endotelial vascular) que estimula la angiogénesis [Goldberg, M.A. y Schneider, T.J., J. Biol. Chem., 269, 4355 (1994)], enzimas glicolíticas como GAPDH, LDH (lactato deshidrogenasa) [Rolfs, A. et al., J. Biol. Chem., 272, 20055 (1997)], así como el Glut-1 transportador de la glucosa.
Los compuestos de fórmula I son supuestamente los que se unen a los factores de transcripción ARNT y/o HIF-1, por lo tanto pueden influir en la activación de los genes que toman parte en los estados de alarma (sensibles a la hipoxia). Se cree que, mediante esta vía de transducción de señal, los compuestos de la invención expresan a las proteínas del choque térmico que desempeñan un importante papel en las situaciones de alarma.
La síntesis de las proteínas del choque térmico (HSP) está producida por varias agresiones que efectúan las células. Las proteínas del choque térmico ayudan a la supervivencia de las células en situaciones peligrosas y contribuyen a la reparación de algunos daños [Cardiovascular Res., 578 (1993); Neurosci. Lett., 163, 135-137 (1993)].
Los agentes que pueden facilitar la reacción de la alarma en la adaptación a la hipoxia, a la reoxigenación y a reconstruir la reacción de adaptación agotada son potencialmente capaces de disminuir la alteración del tejido producida por hipoxia (acción de reoxigenación con hipoxia) en enfermedades como el infarto, la arterioesclerosis y la diabetes.
Determinación de HSP-70
Se estudió la actividad de HSP-70 mediante el ensayo con gen indicador formando un híbrido de ADN. Se fusionó un gen de una proteína que puede ser detectado por una actividad enzimática que se puede medir bien con la secuencia del activador de HSP-70 que codifica la proteína del choque térmico. Se utilizaron procedimientos biotecnológicos. Se utilizó el enzima luciferasa como gen indicador cuya actividad puede ser bien determinada mediante mediciones de luminiscencia. Si el activador del gen de la enzima luciferasa se sustituye por el activador del gen HSP-70, entonces el cambio de actividad del enzima i de luciferasa, es decir, el cambio de frecuencia de la transcripción del gen se correlaciona con la frecuencia de la transcripción del gen HSP-70 que procede en las circunstancias dadas. De esta manera, si una substancia o proceso influye en la expresión del gen HSP-70, se puede estudiar el efecto mediante la medición de la actividad del enzima luciferasa. Se estudió el efecto de los compuestos del ensayo en la expresión de HSP-70 en dicho sistema experimental.
Para efectuar las mediciones se construyó una molécula circular de ADN de doble cadena, es decir, un plásmido que contiene el gen indicador HSP-70. Se fusionó una secuencia de casi 600 bp de longitud del gen indicador HSP-70 de ratón (dirección 5' desde el punto de partida del gen) con la secuencia de codificación del gen de luciferasa originado a partir de Photymus pyralis. La secuencia del activador aplicada contenía varios puntos de unión a la proteína facilitando la expresión del gen HSP-70. Se construyó la construcción del gen heterólogo activador de HSP-luciferasa en un vector del plásmido basado en pBR que se puede seleccionar para neomicina. Se transfectó este plásmido HSP-70-luciferasa en las células L929 de fibroblasto de ratón. El ensayo se realizó de la forma siguiente:
Se cultivaron células L929 que contienen el plásmido HSP-70-luc en DMEM (medio de Eagle modificado por Dulbecco) enriquecido con FCS (suero de ternero fetal) al 5%. Se colocan 10^{4} células en los pocillos de una placa de cultivo celular Costar de 24 pocillos en 1 ml de medio de cultivo. Las substancias del ensayo se disuelven en PBS (solución salina tamponada con fosfato) a la concentración de 10^{-2} M. Después de la unión de las células (3 a 4 horas después de la colocación en la placa), se administran 10 \mul de solución a los cultivos y se incuban las células durante 30 min a 37ºC en un termostato con CO_{2}. Se cambia a continuación el medio de cultivo por uno reciente (sin sustancia de ensayo), y se deja regenerar las células durante 1 hora a 37ºC, a continuación se lavan una vez con PBS. Después de la eliminación de PBS, se añaden 40 \mul de tampón de lisis 1x a las células y se mantienen las muestras en hielo durante 30 minutos. A continuación se transfieren las células a viales Eppendorf y se centrifugan a 14.000 rpm durante 20 min a 4ºC. Se añade 5 \mul del sobrenadante a 25 \mul de tampón de análisis de luciferasa y se mide la luminiscencia de las muestras durante 25 s en un luminómetro.
Composición del tampón de análisis de luciferasa:
20,00 mM de tricina [N-/2-hidroxi-1,1-bis(hidroximetil)-etil/glicina], pH 7,8,
1,07 mM de (MgCO_{3})_{4} Mg(OH)_{2}\cdot5H_{2}O,
2,67 mM de MgSO_{4},
0,10 mM de EDTA [ácido etilendiamintetraacético],
3,33 mM de DTT,
270 \muM de la sal de litio del coenzima A,
470 \muM de luciferina,
530 \muM de ATP [trifosfato de adenosina].
Composición de tampón de lisis 5\times:
125 mM de tris-H_{3}PO_{4} pH 7,8,
10 mM de CDTA [ácido trans-2-diaminociclohexano-N,N,N',N'-tetraacético],
10 mM de DTT,
50% de glicerol,
5% de Triton X-100.
Estudio de genes sensibles a la hipoxia
Se estudió el efecto de los compuestos de fórmula I en la expresión del gen xenobiótica y en la provocada por hipoxia (1% de oxígeno) en cultivos celulares Hepa y HepG2 en concentraciones de ARNm y proteína. Se observó que los compuestos de fórmula I producían un aumento de 10 veces en la expresión de HSP-70 producida por el metil-colantreno en las células Hepa. Además, los compuestos de la invención aumentan la expresión de los genes sensibles a la hipoxia como VEGF, GAPDH y LDH en respuesta al tratamiento de hipoxia en las células Hepa y HepG2.
Los compuestos de fórmula I aumentan la expresión de varios genes sensibles a la hipoxia en caso de hipoxia. Esto indica que los compuestos del ensayo influyen la vía habitual en la regulación de los genes sensibles al oxígeno. Los compuestos de fórmula I que facilitan la adaptación a la agresión causada por la hipoxia y por hipoxia-reoxigenación son adecuados para la protección contra el efecto perjudicial de la hipoxia y de la reoxigenación de la hipoxia. Es de esperar que los compuestos proporcionen beneficios terapéuticos en condiciones en las que la lesión del tejido está producida por transtornos circulatorios, contracción y espasmo de las arterias, arterioesclerosis, infarto, embolia, trombosis, presión sanguínea baja, choque, quemaduras y congelación. Los compuestos de la invención pueden ser también eficaces en condiciones hipóxicas secundarias asociadas a enfermedades degenerativas y metabólicas (enfermedad de Alzheimer, diabetes).
Efecto en la concentración de enzima LDH en las células HepG2 expuestas a hipoxia
Se cultivaron células HepG2 en medio de cultivo DMEM enriquecido con 10% de FCS en un aire conteniendo 5% de CO_{2} a 37ºC. Se colocaron 10^{5} células en los pocillos de placas de cultivo Costar de 24 pocillos en 1 ml de medio. Al día siguiente, se trataron las células con los compuestos del ensayo a una concentración de 30 \mug/ml, a continuación se expusieron las células a tratamiento de hipoxia (1% de O_{2}, 5% de CO_{2} en gas nitrógeno) durante 24 horas. Una parte de los cultivos de referencia se trataron con agua utilizada como disolvente, otra parte de ellos no se expuso a hipoxia. Al final del tratamiento hipóxico, se eliminó el medio y se lavaron las células dos veces con PBS frío. Se prepararon lisados celulares en Triton X-100 al 0,05% conteniendo tampón fosfato (0,05 M). Después de la centrifugación (2 min, 20.000 x g), se determinó la actividad de LDH del sobrenadante basándose en el consumo de NADH en presencia del sustrato piruvato de sodio.
El tratamiento hipóxico aplicado produjo un aumento al triple del contenido en LDH de las células. Además del tratamiento de hipoxia, los compuestos de fórmula I aumentaron la concentración de LDH de las células de manera aditiva.
Efecto antivírico
El genoma retrovírico consta de una molécula de ARN de una cadena que se replica a través de un ADN intermedio de doble cadena. La inserción del ADN de doble cadena en el genoma huésped es un suceso crítico en el ciclo vital del virus. El mecanismo de inserción es similar al mecanismo de transposición.
El enzima transcriptasa inversa realiza la copia de ADN del ARN vírico. El ADN de doble cadena se sintetiza en el citoplasma de la célula infectada. A continuación, el ADN lineal se transporta al núcleo y una o más copias se integran en el genoma de la célula huésped. La integración está mediada por la enzima integrasa. Cuando se integra el ADN provírico, utiliza los enzimas de las células huésped para producir ARN vírico que sirve como ARNm y como genoma después del concentrado en los viriones.
En el proceso de replicación del virus, la función no afectada de la transcriptasa inversa es esencial. Por lo tanto, la inhibición de la transcriptasa inversa proporciona una manera eficaz de inhibir la replicación de los retrovirus. Aparte de los fármacos anti-VIH disponibles actualmente actúa mediante la inhibición de la transcriptasa inversa. Actualmente, los tratamientos anti-VIH más eficaces están basados en combinaciones de varios fármacos anti-VIH. Uno o dos componentes de estas combinaciones son los inhibidores de transcriptasa inversa. Existen dos tipos principales de inhibidores de transcriptasa inversa. Uno consiste en análogos de nucleósido, el representante mejor conocido de este grupo es la azidotimidina, es decir AZT. Estos compuestos inhiben la actividad enzimática uniéndose al punto de unión del nucleótido. Los análogos de no-nucleósido representan el otro tipo de inhibidores de transcriptasa inversa. Estos compuestos se unen también al enzima, pero no al punto de unión al nucleótido. La unión es específica, relativamente estable y produce la deformación del punto activo del enzima causando una pérdida importante de actividad enzimática.
Se estudió la actividad inhibidora de la transcriptasa inversa de los compuestos de la invención de la forma siguiente. Estos compuestos se pueden clasificar como inhibidores de transcriptasa inversa análogos a los no nucleósidos. Se realizaron pruebas en transcriptasa inversa del virus de leucemia murina de Moloney que se considera un buen modelo del enzima transcriptasa inversa de VIH. El montaje experimental fue el siguiente:
El ensayo mide la incorporación de (3H)dTTP en ADNc utilizando la plantilla poli(dA) y el cebador oligo(dT) 12-18. La reacción se realizó en un volumen de 20 \mul.
Composición de la mezcla de reacción:
2 \mul de tampón 10 \times,
20 \mul de cebador de la plantilla,
5 \muM de dTTP,
2 \muCi de (3H)dTTP,
compuesto de ensayo: disuelto en tampón 1 \times.
La reacción se inició mediante la adición de 5U de transcriptasa inversa.
Compuesto del tampón de transcriptasa inversa 10 X:
500 mM de tris-HCl pH 8,3,
80 mM de MgCl_{2},
300 mM de KCl,
100 mM de DTT.
Se incubó la mezcla de reacción durante 30 min a 37ºC. A continuación, se cargó 15 \mul de la mezcla de reacción en discos de filtro Whatman DE81 que se lavaron, sucesivamente, con tampón de fosfato ácido disódico al 5%, agua y etanol de 96% (v/v). Después del secado, se colocaron los discos del filtro en 5 ml de mezcla de centelleo (OptiPhase HiSafe 3, Wallac), y se midió la radioactividad en un contador de centelleo Packard Tri-Carb 2200 CE.
Se utilizaron dos componentes con actividad inhibidora conocida en los experimentos como referencia positiva: AZT es un nucleósido análogo, en tanto que el compuesto Neviparina es un inhibidor de tipo no nucleósido. Neviparina se une al denominado punto de unión a la benzodiazetina del enzima.
Los resultados experimentales proporcionan las conclusiones siguientes: los compuestos de la invención inhiben la transcriptasa inversa del virus de leucemia murino de Moloney. Se emplearon compuestos de ensayo a concentraciones de 0,2 a 2,0 \mug/ml. Basándose en la actividad inhibidora de la transcriptasa inversa dependiente de la dosis, se puede indicar que el efecto inhibidor de los nuevos compuestos es mayor que el de Neviparina, pero inferior al efecto del análogo del nucleósido AZT. Ya que el enzima utilizado se considera como un modelo verdadero de la transcriptasa inversa de VIH, los resultados observados se pueden considerar como efectos anti-VIH.
Los datos recientes demuestran que PARP es necesario para la integración del genoma vírico en la célula huésped y la inhibición de PARP bloquea la integración del genoma vírico en el ADN huésped. Por esta razón, los inhibidores de PARP no tóxicos pueden inhibir los retrovirus virulentos e interrumpir la propagación de retrovirus tales como VIH y de la hepatitis de tipo no-B.
Basándose en los resultados experimentales anteriores, se puede demostrar que se pueden emplear los compuestos de la invención (debido a su transcriptasa inversa y al efecto inhibidor de PARP) como sustancias antivíricas activas con varios puntos de ataque.
Por lo tanto, los nuevos derivados de amidoxima del ácido propencarboxílico se pueden utilizar como ingredientes activos de composiciones farmacéuticas. Por consiguiente, la invención incluye una composición farmacéutica que comprende un derivado de ácido hidroxímico insaturado de fórmula I o un N-óxido o isómero(s) geométrico(s) y/o isómero(s) óptico(s) o una sal de adición del ácido farmacéuticamente adecuada y/o un derivado cuaternario del mismo como ingrediente activo y uno o más vehículo(s) convencional(es) utilizado(s) en las composiciones farmacéuticas.
La composición farmacéutica de la invención contiene, en general, 0,1 a 95% en peso, preferentemente 1 a 50% en peso, propiamente de 5 a 30% en peso de ingrediente activo y es adecuada para el tratamiento de enfermedades basadas en estados con insuficiencia de oxígeno y de energía, inhibición por PARP, especialmente las enfermedades autoinmunitarias o neurodegenerativas y/o víricas, además para la prevención de efectos tóxicos.
En relación con la invención, el término "ingrediente activo" incluyen un compuesto de fórmula I o un N-óxido del mismo o uno o más isómero(s) geométrico(s) y/o óptico(s) de fórmula I o el N-óxido, una sal de adición de ácido farmacéuticamente adecuada y/o una sal cuaternaria del compuesto de fórmula I o el N-óxido o una sal de adición de ácido farmacéuticamente adecuada y/o una sal cuaternaria de el/los isómero(s) del compuesto de fórmula I o el N-óxido.
La composición farmacéutica de la invención es adecuada para administración por vía oral, parenteral o rectal o para tratamiento local y puede ser sólida o líquida.
Las composiciones farmacéuticas sólidas adecuadas para administración por vía oral pueden ser polvos, cápsulas, comprimidos, comprimidos recubiertos de película, microcápsulas, etc., y pueden comprender agentes aglutinantes tales como gelatina, sorbitol, poli(vinilpirrolidona), etc.; agentes de carga tales como lactosa, glucosa, almidón, fosfato de calcio, etc.; sustancias auxiliares para elaboración de comprimidos tales como estearato de magnesio, talco, poli(etilenglicol), sílice, etc.; agentes humectantes tales como laurilsulfato de sodio, etc. como vehículo.
Las composiciones farmacéuticas líquidas adecuadas para administración por vía oral pueden ser soluciones, suspensiones o emulsiones y pueden comprender, p. ej., agentes de suspensión tales como gelatina, carboximetilcelulosa, etc.; emulsionantes tal como monooleato de sorbitano, etc.; disolventes tales como agua, aceites, glicerol, etilenglicol, etanol, etc.; conservantes tal como p-hidroxibenzoato de metilo, etc. como vehículo.
Las composiciones farmacéutica adecuadas para administración por vía parenteral consisten, en general, en soluciones estériles del ingrediente activo.
Las formas de dosificación relacionadas anteriormente así como otras formas de dosificación son conocidas de por sí, véase p. ej. Remington's Pharmaceutical Sciences, 18ª edición, Mack Publishing Co., Easton, USA (1990).
La composición farmacéutica contiene, en general, la unidad de dosificación. Una dosis típica para pacientes adultos asciende a 0,1 a 1000 mg del compuesto de fórmula I o un N-óxido o una sal de adición del ácido farmacéuticamente adecuada y/o un derivado cuaternario del mismo calculado para 1 kg de peso corporal, al día. La dosis diaria se puede administrar en una o más fracciones. La dosis existente depende de muchos factores y es determinada por el doctor.
La composición farmacéutica se prepara mezclando el ingrediente activo con uno o más vehículo(s) y transformando la mezcla obtenida en una composición farmacéutica de una manera conocida por si misma. Se conocen procedimientos útiles en la bibliografía, p. ej., Remington's Pharmaceutical Sciences, mencionados anteriormente.
Un subgrupo preferido de la composición farmacéutica de la invención contiene un derivado de amidoxima del ácido propencarboxílico del fórmula Ia, en la que R, R', R_{3}, R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula Ia o un N-óxido o el/los isómero(s) geométrico(s) y el/los isómero(s) óptico(s) o una sal de adición del ácido farmacéuticamente adecuada y/o un derivado cuaternario del mismo como ingrediente activo.
Otro subgrupo preferido de la composición farmacéutica de la invención contiene un derivado de amidoxima del ácido propencarboxílico del fórmula Ib, en la que R, R', R_{3}, R_{4}, R_{5} y X son tal como se definieron en relación con la fórmula Ib o un N-óxido o el/los isómero(s) geométrico(s) y el/los isómero(s) óptico(s) o una sal de adición del ácido farmacéuticamente adecuada y/o un derivado cuaternario del mismo como ingrediente activo.
Un subgrupo preferido adicional de la composición farmacéutica de la invención contiene un derivado de amidoxima del ácido propencarboxílico del fórmula Ic, en la que R, R', R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula Ic o un N-óxido o el/los isómero(s) geométrico(s) y el/los isómero(s) óptico(s) o una sal de adición del ácido farmacéuticamente adecuada y/o un derivado cuaternario del mismo como ingrediente activo.
La invención incluye un procedimiento de tratamiento en el que un paciente que padece un estado especialmente relacionado con la insuficiencia de oxígeno y/o la insuficiencia de energía, o una enfermedad basada en la inhibición por PARP, especialmente una enfermedad autoinmunitaria o neurodegenerativa y/o una enfermedad vírica y/o una enfermedad producida por un efecto tóxico se trata con una dosis no tóxica de un derivado de amidoxima del ácido propencarboxílico de fórmula I o un N-óxido o un isómero geométrico y/o isómero óptico o una sal de adición de ácido farmacéuticamente adecuada y/o un derivado cuaternario de la misma.
Además, la invención incluye la utilización de un derivado de amidoxima del ácido propencarboxílico de fórmula I o un N-óxido o un isómero geométrico y/o isómero óptico o una sal de adición de ácido farmacéuticamente adecuada y/o un derivado cuaternario de la misma para la preparación de una composición farmacéutica adecuada para el tratamiento de un estado o enfermedad neurodegenerativa y/o de una enfermedad vírica y/o de una enfermedad producida por un efecto tóxico.
La invención se clarifica más mediante los siguientes Ejemplos.
Ejemplo 1 Hidrocloruro de 3-estiril-4-(3-piperidinopropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona
Se disuelven 0,94 g (0,005 moles) de 3-estiril-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona en 6 ml de acetona, a la solución obtenida se añaden 1,19 g (0,006 moles) de hidrocloruro de 1-cloro-3-piperidinopropano, 0,76 g (0,0055 moles) de carbonato potásico anhidro, 1 ml de metanol y 0,05 g de yoduro potásico. Se calienta la mezcla de reacción a reflujo durante 20 horas, se filtran las sales inorgánicas y se evapora la solución a presión reducida. El producto en bruto, similar a un aceite residual, se disuelve en isopropanol, se acidifica la solución obtenida mediante la adición de cloruro de hidrógeno en isopropanol, la mezcla de reacción se deja en reposo en un frigorífico durante una noche y se filtran los cristales precipitados. De este modo, se obtienen 1,05 g del compuesto del título. Punto de fusión: 203-205ºC.
IR (KBr) \nu = 2550-2650 (NH^{+}), 1768 (CO), 1639 (C=N) cm^{-1}.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta = 1,3-1,85 (6H, m, piperidin-3,4,5-CH_{2}), 2,11 (2H, m, propil-CH_{2}), 2,82 (2H, m, piperidin-CH_{2}), 3,09 (2H, m, -CH_{2}-N), 3,36 (2H, m, piperidin-CH_{2}), 3,87 (2H, m, -O-CH_{2}), 7,12 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,4-7,5 (3H, m, Ar-H), 7,60 (1H, d, Ar-CH=CH), 7,8 (2H, m, ArH), 10,3 (1H, br, ^{+}NH).
Ejemplo 2 Hidrocloruro de 3-estiril-4-(3-piperidino-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona
A)
Se disuelven 2,25 g (0,008 moles) de 3-estiril-4-(3-cloro-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadi-azolin-5-ona en 10 ml de etanol, a la solución obtenida se añaden 0,68 g (0,008 moles) de piperidina, se calienta la mezcla a 50ºC y se añaden, en agitación, una solución de 0,32 g (0,008 moles) de hidróxido de sodio en 2 ml de agua, gota a gota. Se agita la mezcla de reacción a 50-55ºC durante 2 horas más, se filtran los cristales precipitados, se secan, a continuación se disuelven en etanol con calentamiento, y la solución obtenida se acidifica mediante la adición de cloruro de hidrógeno en isopropanol. La mezcla de reacción se deja en reposo en un frigorífico durante una noche, los cristales precipitados se filtran y se secan. De este modo se obtienen 1,09 g del compuesto del título. Punto de fusión: 234-235ºC.
Se preparó 3-estiril-4-(3-cloro-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona utilizado como compuesto de partida por reacción de 3-estiril-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona y epiclorhidrina según el procedimiento descrito en la bibliografía [Chem. Ber., 108, 1911 (1975)].
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta = 1,3-1,9 (6H, m, piperidin-3,4,5-CH_{2}), 2,9-3,6 (6H, m, 3CH_{2}), 3,8 (2H, m, propil-1-CH_{2}), 4,35 (1H, m, -CH-OH), 6,3 (1H, br, OH), 7,19 (1H, d, Ar-CH=CH), 7,37-7,47 (3H, m, Ar-H ), 7,57 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,84 (2H, m, Ar-H), 10,25 (1H, br, ^{+}NH).
B)
Se disuelven 0,65 g (0,0027 moles) de 3-estiril-4-(2,3-epoxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona en 2 ml de metanol y, a la solución obtenida, se añaden 0,24 g (0,0028 moles) de piperidina. La mezcla de reacción que se vuelve caliente se deja reposar durante una hora. Se filtran los cristales precipitados, a continuación se disuelven en isopropanol. Se acidifica la solución mediante adición de cloruro de hidrógeno en isopropanol. De este modo cristaliza, 0,38 g del compuesto del título que es idéntico al compuesto obtenido en el apartado A. Punto de fusión: 234-235ºC. Se prepara 3-estiril-4-(2,3-epoxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona, utilizada como compuesto de partida, de la forma siguiente:
Se disuelven 1,5 g (0,0053 moles) de 3-estiril-4-(3-cloro-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona en 5 ml de acetona, a la solución obtenida se añaden 0,73 g de carbonato potásico anhidro, se hierve la mezcla de reacción a reflujo durante 16 horas, a continuación se filtra y se evapora a presión reducida. De este modo se obtienen 1,41 g de de 3-estiril-4-(2,3-epoxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona en forma de material de tipo aceitoso.
C)
Se disuelven 0,3 g (0,0016 moles) de de 3-estiril-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona en 3 ml de acetona, a la solución obtenida se añaden 0,41 g (0,0019 moles) de hidrocloruro de 3-piperidin-2-hidroxi-1-cloropropano, 0,48 g de carbonato potásico anhidro, 1 ml de metanol y 0,05 g de yoduro potásico. Se hierve a reflujo la mezcla de reacción durante 40 horas, a continuación se filtra y el disolvente se destila a presión reducida. El residuo se disuelve en ácido clorhídrico acuoso al 5%, se filtra la solución y el filtrado se hace alcalino por adición de solución de hidróxido de sodio acuoso al 10%. El producto precipitado se extrae con cloroformo, se seca la solución en sulfato de sodio anhidro, se evapora el disolvente a presión reducida. Se disuelve el residuo en isopropanol y la solución obtenida se acidifica por adición de cloruro de hidrógeno en isopropanol. Se cristaliza 0,18 g de producto que es idéntico al producto del título preparado en el apartado A. Punto de fusión: 234-235ºC.
Ejemplo 3 Hidrocloruro de 3-estiril-4-(3-pirrolidino-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona
Se disuelven 8,4 g (0,03 moles) de 3-estiril-4-(3-cloro-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona en 30 ml de etanol, a la solución obtenida se añaden a continuación 2,55 g (0,036 moles) de pirrolidina, a 60ºC, 1,2 g (0,03 moles) de hidróxido de sodio en 8 ml de agua, gota a gota, en agitación. Se agita la mezcla de reacción a más de 60ºC durante una hora más, a continuación se destila el etanol a presión reducida. Se acidifica el residuo mediante la adición de ácido clorhídrico acuoso, se trata la solución con carbón activado, se filtra y se hace alcalina por adición de una solución acuosa de hidróxido de sodio 2 N. Se extrae con cloroformo la materia aceitosa precipitada, se seca la solución orgánica sobre sulfato de sodio anhidro, se filtra y se evapora. Se disuelve el residuo en isopropanol, se acidifica la solución obtenida mediante la adición de cloruro de hidrógeno en isopropanol. Se filtran los cristales y se secan. De este modo se obtienen 1,8 g del compuesto del título.
Punto de fusión: 188-189ºC.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta = 1,8-2,0 (4H, m, pirrolidina-3,4-CH_{2}), 3,06-3,55 (6H, m, 3CH_{2}), 3,82 (2H, d, propil-1-CH_{2}), 4,21 (1H, m, -CH-OH), 6,25 (1H, d, OH), 7,14 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,4-7,5 (3H, m, Ar-H), 7,58 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,82 (2H, m, Ar-H), 10,3 (1H, br, ^{+}NH).
Ejemplo 4 Hidrocloruro de 3-estiril-4-(3-hexametilenimino-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona
Se hacen reaccionar 2,8 g (0,01 moles) de 3-estiril-4-(3-cloro-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona con 1,19 g (0,012 moles) de hexametilenimina según el procedimiento descrito en el Ejemplo 3. Se precipita el hidrocloruro en una solución isopropanólica mediante la adición de cloruro de hidrógeno en isopropanol. De este modo se obtienen 1,0 g del compuesto del título.
Punto de fusión: 202-203ºC.
^{1}H-RMN (CDCl_{3} + DMSO-d_{6}) \delta = 1,6-2,0 (8H, m, hexametilenimina -3,4,5,6-CH_{2}), 3,1-3,6 (6H, m, 3CH_{2}), 3,8 (2H, m, propil-1-CH_{2}), 4,35 (1H, m, -CH-OH), 6,21 (1H,d, OH), 7,11 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,4 (3H, m, Ar-H), 7,57 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,77 (2H,m, Ar-H), 10,0 (1H, br, ^{+}NH).
Ejemplo 5 Hidrocloruro de 3-estiril-4-(3-morfolino-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona
Se hacen reaccionar 4,2 g (0,015 moles) de 3-estiril-4-(3-cloro-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona con 1,6 g (0,018 moles) de morfolina según el procedimiento descrito en el Ejemplo 3. Se precipita el hidrocloruro en una solución etanólica mediante la adición de cloruro de hidrógeno en isopropanol. De este modo se obtienen 0,67 g del compuesto del título. Punto de fusión: 232-234ºC.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta = 3,1-3,55 (6H, m, morfolin-3,5-CH_{2}, 3CH_{2}), 3,8-4,0 (6H, m, morfolin-2,6-CH_{2}, propil-1-CH_{2}), 4,37 (1H, m, -CH-OH), 6,3 (1H, br, OH), 7,12 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,4 (3H, m, Ar-H), 7,6 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,8 (2H, m, Ar-H), 10,6 (1H, br, ^{+}NH).
Ejemplo 6 Hidrocloruro de 3-estiril-4-[3-(tert-butilamino)-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona
Se hacen reaccionar 6,6 g (0,024 moles) de 3-estiril-4-(3-cloro-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona con 2,63 g (0,036 moles) de tert-butilamina según el procedimiento descrito en el Ejemplo 3. Se precipita el hidrocloruro en una solución isopropanólica mediante la adición de cloruro de hidrógeno en isopropanol. De este modo se obtienen 1,8 g del compuesto del título.
Punto de fusión: 244-246ºC.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta = 1,3 (9H, s, tert-butilo), 2,9-3,15 (2H, m, propil-3CH_{2}), 3,85 (2H, m, propil-1-CH_{2}), 4,15 (1H, m, CH-OH), 6,08 (1H, d, OH), 7,12 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,40 (3H, m, Ar-H), 7,55 (1H, d, Ar-CH=CH), 7,8 (2H, m, Ar-H), 8,55 (1H, br,NH), 8,85 (1H, br, NH).
Ejemplo 7 Dihidrocloruro de 3-estiril-4-[3-(4-metil-1-piperazinil)-2-hidroxipropil]-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona
Se hacen reaccionar 8,4 g (0,03 moles) de 3-estiril-4-(3-cloro-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona con 3,6 g (0,036 moles) de N-propilpiperazina según el procedimiento descrito en el Ejemplo 3. Se precipita el hidrocloruro en una solución isopropanólica mediante la adición de cloruro de hidrógeno en isopropanol. De este modo, se obtienen 2,08 g del compuesto del título.
Punto de fusión: 206-208ºC.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta = 2,77 (3H, s, CH_{3}), 3,0-3,1 (2H, m, propil-3CH_{2}), 3,6 (8H, m, piperazina-CH_{2}), 3,8 (2H, m, propil-1-CH_{2}), 4,23 (1H, m, -CH-OH), 6,2 (1H, br, OH), 7,03 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,4 (3H, m, Ar-H), 7,58 (1H, d, Ar-CH=CH), 7,77 (2H, m, Ar-H), 11,8 (2H, br, ^{+}NH).
Ejemplo 8 Hidrocloruro de 3-estiril-4-[3-(1,2,3,4-tetrahidro-2-isoquinolil)-2-hidroxipropil]-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona
Se hacen reaccionar 2,8 g (0,01 moles) de 3-estiril-4-(3-cloro-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona con 1,6 g (0,012 moles) de 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina según el procedimiento descrito en el Ejemplo 3. Se precipita el hidrocloruro en una solución isopropanólica mediante la adición de cloruro de hidrógeno en isopropanol. De este modo, se obtienen 0,83 g del compuesto del título. Punto de fusión: 208-210ºC.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta = 3,0-3,6 (8H, m, isoquinolina-CH_{2}, propil-3CH_{2}), 3,84 (2H, m, propil-1-CH_{2}), 4,4 (1H, m, -CH-OH), 6,3 (1H, br, OH), 7,13 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,2-7,5 (7H, m, Ar-H), 7,60 (1H, d, Ar-CH=CH), 7,8 (2H, m, Ar-H), 10,6 (1H, br, ^{+}NH).
Ejemplo 9 Hidrocloruro de 3-estiril-4-[3-(2,6-dimetilanilino)-2-hidroxipropil]-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona
Se hacen reaccionar 8,4 g (0,03 moles) de 3-estiril-4-(3-cloro-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona con 4,36 g (0,036 moles) de 2,6-dimetilanilino, en lugar de etanol en 10 ml de metanol, según el procedimiento descrito en el Ejemplo 3. Se precipita el hidrocloruro en una solución isopropanólica mediante la adición de cloruro de hidrógeno en isopropanol, a continuación se recristaliza en una mezcla de un volumen de isopropanol y un volumen de etanol. De este modo, se obtienen 1,62 g del compuesto del título. Punto de fusión: 182-184ºC.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta = 2,44 (6H, s, CH_{3}), 3,16-3,53 (2H, m, propil-3CH_{2}), 3,86 (2H, m, propil-1-CH_{2}), 4,21 (1H, m, CH-OH), 6,0 (1H, br, OH), 7,10 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,14 (3H, m, Ar-H), 7,4-7,5 (3H, m, ArH), 7,59 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,78 (2H, m, ArH), 9,0 (2H, br, ^{+}NH_{2}).
Ejemplo 10 Hidrocloruro de 3-(3,4-dimetoxiestiril)-4-(3-piperidino-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona
Se hacen reaccionar 3,4 g (0,01 moles) de 3-(3,4-dimetoxiestiril)-4-(3-cloro-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona con 1,02 g (0,012 moles) de piperidina según el procedimiento descrito en el Ejemplo 3. Se precipita el hidrocloruro en una solución etanólica mediante la adición de cloruro de hidrógeno en isopropanol. De este modo, se obtienen 1,8 g del compuesto del título. Punto de fusión: 187-188ºC.
^{1}H-RMN (CDCl_{3} + DMSO-d_{6}) \delta = 1,4-2,0 (6H, m, piperidina-3,4,5-CH_{2}), 3,18-3,31 (6H, m, piperidina-2,6-CH_{2}, propil-3CH_{2}), 3,85-3,92 (2H, m, propil-1-CH_{2}), 3,89 (3H, s, -OCH_{3}), 3,96 (3H, s, -OCH_{3}), 4,45 (1H, m, CH-OH), 6,27 (1H, br, OH), 6,93 (1H, m, ArH), 6,98 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,21 (1H, m, Ar-H), 7,42 (1H, m, ArH), 7,48 (1H, d, Ar-CH=CH-), 9,8 (1H, br, ^{+}NH).
Se preparó 3-(3,4-dimetoxiestiril)-4-(3-cloro-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona, utilizada como compuesto de partida, a partir de 3-(3,4-dimetoxiestiril)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona con epiclorhidrinasg el procedimiento conocido en la bibliografía [Chem Ber., 108, 1911 (1975)].
Ejemplo 11 Dihidrocloruro de 3-estiril-4-[3-(1-metil-4-piperazinil)-2-hidroxipropil]-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona
Se hacen reaccionar 2,0 g (0,0059 moles) de 3-(3,4-dimetoxiestiril)-4-(3-cloro-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona con 0,71 g (0,0071 moles) de N-metilpiperazina según el procedimiento descrito en el Ejemplo 3. Se precipita el hidrocloruro en una solución isopropanólica mediante la adición de cloruro de hidrógeno en isopropanol. De este modo, se obtienen 0,8 g del compuesto del título.
Punto de fusión: 192-193ºC.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta = 2,8 (3H, s, N-CH_{3}), 3,2-3,8 (10H, m, piperazina-CH_{2}, propil-3CH_{2}), 3,80 (3H, m, metoxi), 3,83 (2H, m, propil-1-CH_{2}), 3,86 (3H, s, OCH_{3}), 4,31 (1H, m, -CH-OH), 6,3 (1H, br, OH), 7,03 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,30 (1H, m, Ar-H), 7,50 (1H, m, ArH), 7,51 (1H, d, Ar-CH=CH-), 11,8 (2H, br, 2\times^{+}NH).
Ejemplo 12 Amidoxima del ácido N-(3-piperidino-2-hidroxipropil)cinnámico
Se añaden 10 ml de etanol y 10 ml de solución acuosa de hidróxido de sodio al 10% a 1,91g (0,006 moles) de 3-estiril-4-(3-piperidino-2-hidroxi-propil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona preparada según el procedimiento descrito en el Ejemplo 2 y la mezcla de reacción se hierve a reflujo durante 2 horas. Se evapora el etanol a presión reducida, se ajusta el valor del pH del residuo a 8 por adición de ácido clorhídrico. Se decanta la fase sólida del producto parcialmente sólido, se disuelve el residuo en metanol. En la dilución con agua, cristaliza 0,79 g del compuesto del título. Punto de fusión: 114-115ºC.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta = 1,7-1,9 (6H, m, piperidina-3,4,5-CH_{2}), 2,1-2,3 (6H, m, piperidina-2,6-CH_{2}, propil-3-CH_{2}), 3,2-3,33 (2H, m, propil-1-CH_{2}), 3,83 (1H, m, CH-OH), 5,6 (1H, br, OH), 6,55 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,15 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,8-7,32 (3H, m, ArH), 7,44 (2H, m, ArH).
Ejemplo 13 Maleato diácido de la amidoxima del ácido N-(3-morfolino-2-hidropropil)cinnámico
Se añaden 10 ml de etanol y 10 ml de solución acuosa de hidróxido de sodio al 10% a 2,76 g (0,0075 moles) de 3-estiril-4-(3-morfolino-2-hidroxi-propil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona, preparada según el procedimiento descrito en el Ejemplo 5, y la mezcla de reacción se hierve a reflujo durante 2 horas. Se evapora el etanol a presión reducida, se ajusta el valor del pH del residuo a 8 mediante adición de ácido clorhídrico. El producto de tipo aceitoso precipitado se extrae con diclorometano, se seca la solución orgánica sobre sulfato de sodio anhidro, se evapora el disolvente. Se precipita el maleato en una solución de acetona mediante la adición de ácido maleico. De este modo se obtienen 1,1 g del compuesto del título. Punto de fusión: 128-130ºC.
^{1}H-RMN (CDCl_{3} + DMSO-d_{6}) \delta = 2,8-3,2 (6H, morfolina-3,5-CH_{2}, propil-3-CH_{2}-), 3,3-3,8 (6H, m, morfolina-2,6-CH_{2}, propil-1-CH_{2}), 4,10 (1H, m, CH-OH), 6,05 (4H, s, ácido maleico CH), 6,75 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,30 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,3 (3H, m, ArH), 7,50 (2H, m, ArH).
Ejemplo 14 Maleato triácido de la amidoxima del ácido N-[3-(1-metil-4-piperazinil)-2-hidropropil)cinnámico
1,17 g (0,0025 moles) de 3-estiril-4-[3-(4-metil-1-piperazinil)-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona preparada según el procedimiento descrito en el Ejemplo 7, se hacen reaccionar con hidróxido de sodio según el procedimiento descrito en el Ejemplo 13. Se precipita el maleato en una solución de acetona mediante la adición de ácido maleico. De este modo se obtienen 0,63 g del compuesto del título. Punto de fusión: 142-143ºC.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta = 2,7 (3H, s, CH_{3}), 2,5-3,2 (10H, m, piperazina-CH_{2}, propil-3-CH_{2}), 3,31-3,42 (2H, m, propil-1-CH_{2}), 3,81 (1H, m, CH-OH), 6,14 (6H, s, ácido maleico CH), 6,90 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,28 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,4 (3H, m, ArH), 7,65 (2H, m, ArH).
Ejemplo 15 Amidoxima del ácido N-(3-morfolino-2-hidroxipropil)-3,4-dimetoxicinnámico
Se hace reaccionar 3,91 g (0,01 moles) de 3-(3,4-dimetoxiestiril)-4-(3-morfolino-2-hidroxipropil)- )-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona con hidróxido de sodio según el procedimiento descrito en el Ejemplo 13. De este modo se obtienen 1,2 g del compuesto del título como un producto aceitoso.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta = 3,18-3,35 (6H, morfolina-3,5-CH_{2}, propil-3-CH_{2}), 3,60 (2H, m, propil-1-CH_{2}), 3,82 (3H, s, OCH_{3}), 3,86 (3H, s, OCH_{3}), 3,92 (4H, m, morfolina-2,6-CH_{2}), 4,34 (1H, m, -CH-OH), 6,3 (1H, br, -CH-OH), 6,98 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,02 (1H, m, Ar-2H), 7,35 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,40 (1H, m, Ar-6H).
Ejemplo 16 3-estiril-6-(piperidinometil)-4H-5,6-dihidro-1,2,4-oxadiazina
Se añade una mezcla de 33 ml de etanol y 33 ml de solución acuosa de hidróxido de sodio 2N a 1,65 (0,0043 moles) de hidrocloruro de 3-estiril-4-(3-piperidino-2-cloro-propil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona, se hierve la mezcla de reacción a reflujo durante 30 minutos en agitación, a continuación se evapora a presión reducida y el residuo se pone en suspensión en 10 ml de agua. Se filtran los cristales, se lavan con agua y se secan. De este modo, se obtienen 1,06 g del compuesto del título. Punto de fusión: 147-149ºC.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta = 1,3-1,7 (6H, m, piperidina -3,4,5-CH_{2}), 2,3-2,7 (6H, m, piperidina-2,6-CH_{2}, 6-CH_{2}), 3,25-3,6 (2H, m, oxadiazina-5-CH_{2}), 3,95 (1H, m, oxadiazina-6CH), 5,0 (1H, br, oxadiazina-4-NH), 6,5 (1H, d, Ar-CH=CH-), 6,9 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,2-7,5 (5H, m, ArH).
Se prepara el hidrocloruro de 3-estiril-4-(3-piperidino-2-cloropropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona utilizado como compuesto de partida a partir del hidrocloruro 3-estiril-4-(3-piperidino-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona (preparado como se describió en el Ejemplo 2) con cloruro de tionilo según el procedimiento conocido en la bibliografía [Chem. Ber., 108, 1911 (1975)].
Ejemplo 17 Maleato diácido de 3-estiril-6-morfolino-metil-4H-5,6-dihidro-1,2,4-oxadiazina
Se añaden 9 ml de etanol y 9 ml de solución acuosa de hidróxido de sodio al 10%,1,5 g (0,0039 moles) de hidrocloruro de 3-estiril-4-(3-morfolino-2-cloro-propil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona y la mezcla de reacción se hierve a reflujo durante 2 horas. Se evapora el etanol a presión reducida, se acidifica el residuo con ácido clorhídrico al 5%. Se trata la solución obtenida con carbón activado, se filtra y se hace alcalina por adición de una solución acuosa de hidróxido de sodio al 10%. Se extrae con cloroformo la materia aceitosa precipitada, se seca la fase orgánica sobre sulfato de sodio anhidro, se filtra y se evapora el disolvente. Se disuelve el residuo en acetato de etilo y se añade una solución de 0,66 g de ácido maleico en acetato de etilo. De este modo, se obtiene 1,0 g del producto del título. Punto de fusión: 137ºC.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta = 3,1-3,44 (8H, m, 5-CH_{2}, 6-CH_{2}, morfolina-3- y -5-CH_{2}), 3,83 (4H, m, morfolina-2- y -6-CH_{2}), 4,08 (1H, m, 6-CH), 6,18 (4H, s, ácido maleico CH), 6,43 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,25 (1H, br, 4H), 7,33-7,51 (5H, m, 5 Ar-H), 13-14 (br, ácido maleico OH).
Se prepara hidrocloruro de 3-estiril-4-(3-morfolino-2-cloropropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona utilizado como compuesto de partida a partir de hidrocloruro 3-estiril-4-(3-morfolino-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona (preparado como se describió en el Ejemplo 5) calentándolo con cloruro de tionilo, evaporando a continuación la mezcla de reacción.
Ejemplo 18 Maleato diácido de 3-estiril-6-(1,2,3,4-tetrahidro-2-isoquinolil)-metil-4H-5,6-dihidro-1,2,4-oxadiazina
Se añaden 8 ml de etanol y 8 ml de solución acuosa de hidróxido de sodio al 10% a 1,1 g (0,0025 moles) de hidrocloruro de 3-estiril-4-[3--(1,2,3,4-tetrahidro-2-isoquinolil)-2-cloropropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona y la mezcla de reacción se hierve a reflujo durante media hora. Se evapora el etanol a presión reducida y se disuelve el residuo con ácido clorhídrico al 5%. Se trata la solución obtenida con carbón activado, se filtra, se hace alcalina por adición de una solución acuosa de hidróxido de sodio al 10% y se extrae con acetato de etilo. Se secan las soluciones de acetato de etilo combinadas sobre sulfato de sodio anhidro, se filtran y se evaporan. Se disuelve el residuo en acetato de etilo y se añade 0,36 g de ácido maleico a la solución obtenida. De este modo, se obtienen 0,55 g del producto del título. Punto de fusión: 151-153ºC.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta = 3,10 (2H, m, isoquinolina-4-CH_{2}), 3,15-3,50 (2H, m, oxadiazina-5-CH_{2}), 3,28-3,39 (2H, m, oxadiazina-6-CH_{2}-N=), 3,44-3,6 (2H, m, isoquinolina-3-CH_{2}), 4,2 (1H, m, oxadiazina-6-CH), 4,4 (2H, m, isoquinolina-1-CH_{2}), 6,13 (4H, s, ácido maleico CH), 6,44 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,15 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,2-7,33 (4H, m, isoquinolina Ar-H), 7,33-7,52 (5H, m, fenil Ar-H).
Ejemplo 19 Hidrocloruro de 3-(3,4-dimetoxiestiril)-4-[3-(tert.-butilamino)-2-hidroxipropil]-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona
Se disuelven 8,54 g (0,025 moles) de 3-(3,4-dimetoxiestiril)-4-(3-cloro-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona en 40 ml de acetona y, a la solución obtenida, se añaden 3,46 g (0,025 moles) de carbonato potásico anhidro. Se hierve a reflujo la mezcla de reacción durante 6 horas, a continuación se enfría, se separan las sales inorgánicas por filtración, se evapora el disolvente a presión reducida. El residuo de evaporación se agita con 25 ml de metanol para favorecer la cristalización. De este modo, se obtienen 6,5 g de 3-(3,4-dimetoxiestiril)-4-(2,3-epoxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona. Punto de fusión: 113-115ºC.
Se añaden 15 ml de metanol y 0,73 g (0,01 moles) de tert-butilamina a 3,04 g (0,01 moles) de 3-(3,4-dimetoxiestiril)-4-(2,3-epoxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona, la mezcla de reacción se hierve a reflujo durante 4 horas, a continuación se evapora el disolvente a presión reducida. Se disuelve el residuo en 10 ml de ácido clorhídrico al 5%, y se decanta la solución del residuo que no se redisolvió. La solución acuosa se hace alcalina mediante la adición de solución acuosa de hidróxido de sodio al 10%, el aceite formado se disuelve en diclorometano, se seca la solución sobre sulfato de sodio anhidro, se filtra y el disolvente se evapora a presión reducida. Se obtienen 1,7 g del producto aceitoso cuyo hidrocloruro se precipita en etanol por adición de isopropanol que contiene hidruro de hidrógeno. De este modo, se obtienen 1,0 g del compuesto del título. Punto de fusión: 225-227ºC.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta = 1,3 (9H, s, 3xCH_{3}), 2,93-3,17 (2H, m, propil-3-CH_{2}), 3,80 (3H, s, -OCH_{3}), 3,85 (3H, s, -OCH_{3}), 3,9 (2H, d, propil-1-CH_{2}), 4,16 (1H, m, -CH-OH), 6,12 (1H, d, -OH), 7,03 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,51 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,00 (1H, m, ArH), 7,29 (1H, m, ArH), 7,49 (1H, m, ArH), 8,58 (1H, br, NH), 8,86 (1H, br, NH).
Ejemplo 20 Hidrocloruro de 3-(3,4-dimetoxiestiril)-4-(3-morfolino-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona
Se hacen reaccionar 3,04 g (0,01 moles) de 3-(3,4-dimetoxiestiril)-4-(2,3-epoxi-propil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona (preparado según se describió en el Ejemplo 19) con 0,96 g (0,011 moles) de morfolina de la manera descrita en el Ejemplo 19. De este modo, se obtienen 0,8 g del compuesto del título. Punto de fusión: 228-230ºC.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta = 3,2-3,34 (6H, m, morfolin-3,5-CH_{2}, propil-3-CH_{2}), 3,82 (3H, s, -OCH_{3}), 3,86 (2H, d, propil-1-CH_{2}), 3,88 (3H, s, -OCH_{3}), 3,90 (4H, m, morfolin-2,6-CH_{2}), 4,43 (1H, m, -CH-OH), 6,4 (1H, br, -OH), 7,0 (1H, d, ArH), 7,03 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,29 (1H, m, ArH), 7,48 (1H, m, ArH), 7,50 (1H, d, Ar-CH=CH-), 10,7 (1H, br, +NH).
Ejemplo 21 Amidoxima del ácido N-[3-(2,6-dimetilanilino)-2-hidroxipropil]-cinnámico
Se sigue el procedimiento descrito en el Ejemplo 12 con la diferencia de que se utilizan como compuesto de partida 1,5 g (0,004 moles) de 3-estiril-4-[3-(2,6-dimetilanilino)-2-hidroxipropil]-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona (preparado según el Ejemplo 9). De este modo, se obtienen 0,55 g del compuesto de partida. Punto de fusión: 143-144ºC.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta = 2,20 (6H, s, 2xCH_{3}), 2,82-3,03 (2H, m, propil-3-CH_{2}), 3,15-3,27 (2H, m, propil-1-CH_{2}), 3,64 (1H, m, -CH-OH), 3,80 (1H, m, NH-anilina), 5,15 (1H, br, -CH-OH), 5,58 (1H, br, NH-amidoxima), 6,68 (1H, d, Ar-CH=CH-), 6,69 (1H, m, ArH), 6,90 (2H, m, ArH), 7,01 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,25-7,55 (5H, m, ArH), 9,57 (1H, s, =N-OH).
Ejemplo 22 Amidoxima del ácido N-(3-pirrolidino-2-hidroxipropil)-cinnámico
Se sigue el procedimiento descrito en el Ejemplo 12 con la diferencia de que se utilizan 1,23 g (0,0035 moles) de hidrocloruro de 3-estiril-4-(3-pirrolidino-2-hidroxipropil]-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona (preparado según el Ejemplo 3) como compuesto de partida. De este modo, se obtienen 0,65 g del compuesto de partida. Punto de fusión: 139-141ºC (en etanol al 96%).
^{1}H-RMN (CDCl_{3} + DMSO-d_{6}) \delta = 1,75 (4H, m, pirrolidin-3,4-CH_{2}), 2,50-2,64 (6H, m, pirrolidin-2,5-CH_{2},propil-3-CH_{2}), 3,2-3,35 (2H, m, propil-1-CH_{2}), 3,75 (1H, m, CH-OH), 5,6 (1H, t, NH), 6,58 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,08 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,25-7,45 (5H, m, ArH), 9,0 (1H, br, =N-OH).

Claims (22)

1. Derivado de amidoxamina del ácido propencarboxílico de fórmula
34
en la que
R
representa un grupo alquilo C_{1-20}, un grupo fenilo que está opcionalmente sustituido por 1 a 3 sustituyen- te(s), en el que el sustituyente es un átomo de halógeno y/o un grupo alquilo C_{1-2} y/o un grupo alcoxi C_{1-2} y/o un grupo amino y/o un grupo (alquil C_{1-4})amino y/o un grupo di(alquil C_{1-4})amino y/o un grupo (alcanoil C_{1-4})amino, o R representa un grupo heteracíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que contiene uno o dos átomo(s) de nitrógeno o un átomo de azufre como heteroátomo y dicho grupo heterocíclico está opcionalmente fusionado con uno o más anillo(s) de benceno y/o uno o más grupo(s) heterocíclicos, y
R'
significa un átomo de hidrógeno, o
R
forma junto con R' un grupo cicloalquilo C_{5-7} opcionalmente fusionado con un anillo bencénico,
R_{4} y R_{5}
representan, cada uno, un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C_{1-5}, un grupo alcanoilo C_{1-5} o un grupo fenilo que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyente(s), en el que el sustituyente es un átomo de halógeno y/o un grupo alquilo C_{1-2} y/o un grupo alcoxi C_{1-2}, o
R_{4} y R_{5}
forman conjuntamente con el átomo de nitrógeno adyacente un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que puede contener un átomo de nitrógeno adicional y/o un átomo de oxígeno y/o un átomo de azufre como heteroátomo y puede estar fusionado con un anillo de benceno, y el grupo heterocíclico y/o el anillo de benceno puede llevar uno o dos sustituyente(s) en el que el sustituyente es un átomo de halógeno y/o un grupo alquilo C_{1-2} y/o un grupo alcoxi C_{1-2},
R_{1} y R_{2}
significan un átomo de hidrógeno, y
R_{3}
significa un átomo de hidrógeno, un grupo hidroxi o un grupo alcoxi C_{1-5}, o
R_{1}
forma junto con R_{2} un grupo carbonilo o un grupo tiocarbonilo cuyo átomo de carbono se une al átomo de oxígeno adyacente a R_{1} y al átomo de nitrógeno adyacente a R_{2}, y
R_{3}
representa un átomo de hidrógeno, un átomo de halógeno, un grupo hidroxi, un grupo alcoxi C_{1-5}, un grupo alquiltio C_{1-5}, un grupo alcanoiloxi C_{1-20}, un grupo alquenoiloxi C_{3-22} que contiene 1 o más doble(s) enlace(s), un grupo metilsulfoaniloxi, un grupo bencensulfoniloxi o un grupo toluensulfoniloxi, o
R_{2}
es un átomo de hidrógeno y
R_{1}
forma junto con R_{3} un enlace covalente entre el átomo de oxígeno adyacente a R_{1} y el átomo de carbono adyacente a R_{3},
además los N-óxidos o los isómeros geométricos y/o los isómeros ópticos y/o las sales de adición de ácido farmacéuticamente adecuadas y/o los derivados cuaternarios de los mismos.
2. Derivado de amidoxima del ácido propencarboxílico de fórmula
19
según la reivindicación 1, en la que
R_{1} y R_{2}
representan un átomo de hidrógeno,
R_{3}
significa un átomo de hidrógeno, un grupo hidroxi o un grupo alcoxi C_{1-5},
R, R', R_{4} y R_{5}
son tal como se definieron en la reivindicación 1,
además los N-óxidos o los isómeros geométricos y/o los isómeros ópticos y/o las sales de adición de ácido farmacéuticamente adecuadas y/o sus derivados cuaternarios.
3. Derivado de oxadiazolina de fórmula
20
según la reivindicación 1, en la que
R_{1}
forma junto con R_{2} un grupo carbonilo o un grupo tiocarbonilo cuyo átomo de carbono está unido al átomo de oxígeno adyacente a R_{1} y al átomo de nitrógeno adyacente a R_{2},
R_{3}
representa un átomo de hidrógeno, un átomo de halógeno, un grupo de hidroxi, un grupo alcoxi C_{1-5}, un grupo alquiltio C_{1-5}, un grupo alcanoiloxi C_{1-20}, un grupo alquenoiloxi C_{3-22} que contiene uno o más enlaces dobles; un grupo metilsulfoniloxi, un grupo bencensulfoniloxi o un grupo toluensulfoniloxi,
X
significa un átomo de oxígeno o un átomo de azufre,
R, R', R_{4} y R_{5}
son tal como se definieron en relación con la reivindicación 1,
además los N-óxidos o los isómeros geométricos y/o los isómeros ópticos y/o las sales de adición de ácido farmacéuticamente adecuadas y/o sus derivados cuaternarios.
4. Derivado de oxadiazina de fórmula
21
según la reivindicación 1, en la que
R_{2}
es un átomo de hidrógeno y
R_{1}
forma junto con R_{3} un enlace covalente entre el átomo de oxígeno adyacente a R_{1} y el átomo de carbono adyacente a R_{3},
R, R', R_{4} y R_{5}
son tal como se definieron en relación en la reivindicación 1,
además los N-óxidos o los isómeros geométricos y/o los isómeros ópticos y/o las sales de adición de ácido farmacéuticamente adecuadas y/o sus derivados cuaternarios.
5. Procedimiento para la preparación de un derivado de amidoxima del ácido propencarboxílico de fórmula I, en el que R, R', R_{1},R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en la reivindicación 1, además los N-óxidos, las sales de adición de ácido farmacéuticamente adecuadas y los derivados cuaternarios de los mismos, caracterizados porque:
a) para la preparación de un derivado de la amidoxima del ácido propencarboxílico de fórmula Ia, en la que R_{1}, R_{2} y R_{3} representan un átomo de hidrógeno, R, R', R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, un derivado de propeno de fórmula
22
en la que R, R', R_{3}, R_{4} y R_{5} son tal como se definieron anteriormente, Y significa un átomo de halógeno o un grupo de fórmula -SR_{6}, en la que R_{6} significa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C_{1-4}, reacciona con hidroxilamina; o
b) para la preparación de un derivado de amidoxima del ácido propencarboxílico de fórmula Ia, en la que R_{1} y R_{2} representan un átomo de hidrógeno, R_{3} significa un átomo de hidrógeno o un grupo hidroxi, R, R', R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, un derivado de oxadiazolina de forma Ib, en la que R, R', R_{3}, R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I,, X significa un átomo de oxígeno o un átomo de azufre, reacciona con una solución acuosa de un hidróxido alcalino; o
c) para la preparación de un derivado de oxidiazolina de fórmula Ib, en la que R_{3} representa un átomo de hidrógeno, X significa un átomo de oxígeno, R, R', R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, un derivado de \Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolina de fórmula
23
en la que R y R' son como se indicó anteriormente, se hace reaccionar con un haluro de aminoalquil de fórmula
24
en la que Z significa un átomo de halógeno, R_{3}, R_{4} y R_{5} son tal como se indicó anteriormente; o
d) para la preparación de un derivado de oxadiazolina de fórmula Ib, en la que R_{3} representa un átomo de hidrógeno o un grupo hidroxi, X significa un átomo de oxígeno, R, R', R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, un derivado de \Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolina de fórmula III, en la que R y R' son tal como se indicó anteriormente, se hace reaccionar con un 1,3-dihalopropano de fórmula
VZ --- CH_{2} --- 
\delm{C}{\delm{\para}{R _{3} }}
H --- CH_{2} --- Z_{1}
en la que Z y Z_{1} representan, cada uno, un átomo de halógeno, R_{3} es tal como se indicó anteriormente y el haluro de \Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolinilalquilo de fórmula
25
en la que R, R', R_{3} y Z son tal como se definieron anteriormente, se hace reaccionar con una amina de fórmula
26
en la que R_{4} y R_{5} son tal como se definieron anteriormente; o
e) para la preparación de un derivado de oxadiazolina de fórmula Ib, en la que R_{3} representa un grupo hidroxi, X significa un átomo de oxígeno, R, R', R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, un derivado de \Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolina de fórmula III, en la que R y R' son tal como se indicó anteriormente, se hace reaccionar con epiclorohidrina y el cloruro de \Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolinilalquilo de fórmula
27
en la que R y R' son tal como se indicó anteriormente, se hace reaccionar con una amina de fórmula VII, en la que R_{4} y R_{5} son tal como se definieron anteriormente; o
f) para la preparación de un derivado de oxadiazolina de fórmula Ib, en la que R_{3} representa un grupo hidroxi, X significa un átomo de oxígeno, R, R', R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, un cloruro de \Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolinilalquilo de fórmula VIII, en la que R y R' son tal como se indicó anteriormente, se hace reaccionar con un agente aglutinante ácido, y el epóxido formado de fórmula
28
en la que R y R' son tal como se indicó anteriormente, se hace reaccionar con una amina de fórmula VII, en la que R_{4} y R_{5} son tal como se definieron anteriormente; o
g) para la preparación de un derivado de oxadiazolina de fórmula Ib, en la que R_{3} representa un átomo de hidrógeno o un grupo hidroxi, X significa un átomo de oxígeno o un átomo de azufre, R, R', R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, un derivado de amidoxima del ácido propencarboxílico de fórmula Ia en la que R, R', R_{3}, R_{4} y R_{5} son tal como se definieron anteriormente, se hace reaccionar con un derivado del ácido carbónico de fórmula
XZ_{2} --- 
\delm{C}{\delm{\dpara}{\delm{X}{}}}
--- Z_{3}
en la que X es tal como se definió anteriormente, Z_{2} y Z_{3} representan, cada uno, un átomo de halógeno, un grupo alcoxi C_{1-4} o un grupo alquilmercapto C_{1-4}; o
h) para la preparación de un derivado de oxadiazina de fórmula Ic, en la que R, R', R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, un derivado de oxadiazolina de fórmula Ib, en la que R, R', R_{4} y R_{5} son tal como se indicaron anteriormente, X significa un átomo de oxígeno o un átomo de azufre, R_{3} significa un átomo de halógeno, un grupo metilsulfoniloxi, un grupo bencensulfoniloxi o un grupo toluensulfoniloxi, se hace reaccionar con un hidróxido alcalino en presencia de agua; o
i) para la preparación de un derivado de oxadiazina de fórmula Ic, en la que R, R', R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, un compuesto cíclico de fórmula
29
en la que R y R' son tal como se definieron anteriormente, R_{7} significa un átomo de halógeno, un grupo metilsulfoniloxi, un grupo bencensulfoniloxi o un grupo toluensulfoniloxi, se hace reaccionar con una amina de fórmula VII, en la que R_{4} y R_{5} son tal como se indicaron anteriormente; o
j) para la preparación de un derivado cuaternario de fórmula
30
en la que R, R', R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, R_{8} significa un grupo alquilo C_{1-4} o un grupo fenil(alquilo C_{1-14}), Y representa un átomo de halógeno o un grupo de fórmula R_{8}-SO_{4}, en el que R_{8} es tal como el indicado anteriormente, un derivado de \Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolina de fórmula III, en la que R y R' son como los indicados anteriormente, se hace reaccionar con un alquilhaluro cuaternario de fórmula
31
en la que R_{3}, R_{4}, R_{5}, R_{8} e Y son como los indicados anteriormente, Z representa un átomo de halógeno; o
k) para la preparación de un N-óxido de fórmula
32
en la que R, R', R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} son como los definidos en relación con la fórmula I, un derivado de \Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolina de fórmula III, en la que R y R' son como los indicados anteriormente, se hace reaccionar con un compuesto de fórmula
33
en la que R_{3}, R_{4}, y R_{5} son tal como se indicaron anteriormente, Z significa un átomo de halógeno; y
si se desea, un compuesto obtenido de fórmula Ib, en la que R_{3} representa un grupo hidroxi, R, R', R_{4}, y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, X significa un átomo de oxígeno o un átomo de azufre, se hace reaccionar con un agente de halogenación para tener un compuesto de fórmula Ib, en la que R_{3} es un átomo de halógeno; o
si se desea, un compuesto obtenido de fórmula Ib, en la que R_{3} representa un grupo hidroxi, R, R', R_{4}, y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, X significa un átomo de oxígeno o un átomo de azufre, se hace reaccionar con un haluro de alcanocarboxílico C_{1-20} o un haluro de alquenocarboxílico C_{3-22}que contiene uno o más doble(s) enlace(s) para obtener un compuesto de fórmula Ib, en la R_{3} significa un grupo alcanoiloxi C_{1-20} o un grupo alquenoiloxi C_{3-22}; o
si se desea, un compuesto obtenido de fórmula Ib, en la que R_{3} representa un grupo hidroxi, R, R', R_{4}, y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, X significa un átomo de oxígeno o un átomo de azufre, se hace reaccionar con un haluro de alquilo C_{1-5} para obtener un compuesto de fórmula Ib, en la que R_{3} representa un grupo alcoxi C_{1-5}; o
si se desea, un compuesto obtenido de fórmula Ib, en la que R_{3} representa un grupo halógeno, R, R', R_{4}, y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, X significa un átomo de oxígeno o un átomo de azufre, se hace reaccionar con una sal alcalina de un alcanol C_{1-5} o de un tioalcanol C_{1-5} para obtener un compuesto de fórmula Ib, en la que R_{3} significa un grupo alcoxi C_{1-5} o un grupo alquiltio C_{1-5}; o
si se desea, un compuesto obtenido de fórmula Ib, en la que R_{3} representa un grupo hidroxi, R, R', R_{4}, y R_{5} son tal como se definieron en relación con la fórmula I, X significa un átomo de oxígeno o un átomo de azufre, se hace reaccionar con un haluro de metilsulfonilo, un haluro de bencensulfonilo o un haluro de toluensulfonilo para obtener un compuesto de fórmula Ib, en la que R_{3} representa un grupo metilsulfoniloxi, un grupo bencensulfoniloxi o un grupo toluensulfoniloxi; y
si se desea, un compuesto obtenido de fórmula I se hace reaccionar con un ácido inorgánico u orgánico para obtener una sal de adición de ácido farmacéuticamente adecuada o se coloca la base exenta de la sal de adición del ácido del mismo, y/o uno o más átomo(s) de nitrógeno de un compuesto de fórmula I se hace cuaternario con un agente de alquilación, y/o un compuesto de fórmula I se hace reaccionar con un agente oxidante para transformar uno o más átomo(s) de nitrógeno del mismo en N-óxido.
6. Composición farmacéutica que comprende un derivado de amidoxima del ácido propencarboxílico de fórmula I, en la que R, R', R_{1},R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en la reivindicación 1, o un N-óxido o un(os) isóme-
ro(s) geométrico(s) y/o un(os) isómero(s) óptico(s) o una sal de adición del ácido farmacéuticamente adecuada y/o un derivado cuaternario de la misma como ingrediente activo y uno o más vehículo(s) convencional(es).
7. Composición farmacéutica según la reivindicación 6, que comprende un derivado de amidoxima del ácido propencarboxílico de fórmula Ia, en la que R, R', R_{3}, R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en la reivindicación 2, o un N-óxido o un(os) isómero(s) geométrico(s) y/o un(os) isómero(s) óptico(s) o una sal de adición del ácido farmacéuticamente adecuada y/o un derivado cuaternario de la misma como ingrediente activo.
8. Composición farmacéutica según la reivindicación 6, que comprende un derivado de oxadiazolina de fórmula Ib, en la que R, R', R_{3}, R_{4} y R_{5} y X son tal como se definieron en la reivindicación 3, o un N-óxido o un(os) isóme-
ro(s) geométrico(s) y/o un(os) isómero(s) óptico(s) o una sal de adición del ácido farmacéuticamente adecuada y/o un derivado cuaternario de la misma como ingrediente activo.
9. Composición farmacéutica según la reivindicación 6, que comprende un derivado de oxadiazolina de fórmula Ic, en la que R, R', R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en la reivindicación 4, o un N-óxido o un(os) isómero(s) geométrico(s) y/o un(os) isómero(s) óptico(s) o una sal de adición del ácido farmacéuticamente adecuada y/o un derivado cuaternario de la misma como ingrediente activo.
10. Utilización de un derivado de amidoxima del ácido propencarboxílico de fórmula I, en la que R, R', R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} son tal como se definieron en la reivindicación 1, o un N-óxido o un(os) isómero(s) geométrico(s) y/o
un(os) isómero(s) óptico(s) o una sal de adición del ácido farmacéuticamente adecuada y/o un derivado cuaternario de la misma para la preparación de una composición farmacéutica adecuada para el tratamiento de un estado relacionado con la insuficiencia de oxígeno y/o con la insuficiencia energética, en una enfermedad basada en la inhibición de PARP, especialmente en una enfermedad autoinmunitaria o neurodegenerativa y/o en una enfermedad vírica y/o en una enfermedad producida por un efecto tóxico.
11. Hidrocloruro de 3-estiril-4-(3-piperidino-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona.
12. Hidrocloruro de 3-estiril-4-(3-pirrolidino-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona.
13. Hidrocloruro de 3-estiril-4-(3-hexametilenino-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadia-zolin-5-ona.
14. Hidrocloruro de 3-estiril-4-(3-morfolino-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona.
15. Hidrocloruro de 3-estiril-4-[3-(tert-butilamino)-2-hidroxipropil]-\Delta^{2}-1,2,4-oxadia-zolin-5-ona.
16. Hidrocloruro de 3-estiril-4-[3-(1,2,3,4-tetrahidro-2-isoquinolil)-2-hidroxipropil]-\Delta^{2} -1,2,4-oxadiazolin-5-ona.
17. Hidrocloruro de 3-estiril-4-[3-(2,6-dimetilanilino)-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona.
18. Hidrocloruro de 3-(3,4-dimetoxiestiril-4-(3-piperidino-2-hidroxipropil)-\Delta^{2}-1,2,4-oxadiazolin-5-ona.
19. Amidoxima del ácido N-(3-piperidino-2-hidroxipropil)cinnámico.
20. Maleato hidrógeno de la amidoxima del ácido N-(3-morfolino-2-hidroxipropil)cinnámico.
21. Maleato hidrógeno de la amidoxima del ácido N-[3-(1-metil-4-piperazinil)-2-hidroxipropil)cinnámico.
22. 3-estiril-6-(piperidinometil)-4H-5,6-dihidro-1,2,4-oxadiazina.
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