ES2215400T3

ES2215400T3 - Derivados insaturados de acido hidroximico utilizados como inhibidores de parp.

Info

Publication number: ES2215400T3
Application number: ES99944721T
Authority: ES
Inventors: Peter Literati Nagy; Balazs; Sumegi; Kalman Takacs
Original assignee: N-Gene Research Laboratories Inc
Current assignee: N-Gene Research Laboratories Inc
Priority date: 1998-09-03
Filing date: 1999-09-02
Publication date: 2004-10-01
Anticipated expiration: 2019-09-02
Also published as: KR20010085760A; AU771782B2; SK2532001A3; DE69914614T2; US6500823B1; PT1115697E; IL141756A; KR100632522B1; NZ510933A; CZ2001705A3; DK1115697T3; EP1115697B1; CN1211353C; PL194275B1; WO2000014054A1; NO20011091D0; AU5753799A; CN1322193A; EP1115697A1; ATE258916T1

Abstract

Derivado insaturado de ácido hidroxímico de fórmula **(fórmula)** en la que R1 representa un grupo alquilo C1-20, un grupo fenilo opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en un grupo alquilo C1-2, un grupo alcoxi C1-2, un átomo de halógeno, un grupo amino, un grupo alquilamino C1, 4, un grupo dialquilamino C1, 4, o un grupo dialcanoilamino C1, 4, representando R1 un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que contiene uno o dos átomos de nitrógeno o un átomo de azufre, como el heteroátomo, y R2 representa un átomo de hidrógeno, o R1 forma conjuntamente con R2 un grupo cicloalquilo C5-7 opcionalmente condensado con un anillo de benceno, Y significa un átomo de hidrógeno, un grupo hidroxi, un grupo alcanoiloxi C1-30 o un grupo alquenoiloxi C3-22, X es un átomo de halógeno, un grupo hidroxi o un grupo amino, R3 representa un grupo cicloalquilo C3-7 o un grupo de fórmula -NR4R5 en la que R4 y R5 significan, independientemente, un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C1-5, un grupo alcanoilo C1-5, o R4 y R5 forman con el átomo adyacente de nitrógeno un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que también puede contener un átomo de oxígeno y puede estar condensado con un anillo de benceno, en el que el grupo heterocíclico y/o anillo de benceno puede estar sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en un grupo alquilo C1-2, un grupo alcoxi C1-2 o un átomo de halógeno, además de isómeros geométricos y/u ópticos, y sales de adición de ácido farmacéuticamente adecuadas del mismo.

Description

Derivados insaturados de ácido hidroxímico utilizados como inhibidores de PARP.

La presente invención se refiere a nuevos derivados insaturados de ácido hidroxímico, a un procedimiento para la preparación de los mismos, y a composiciones farmacéuticas que los contienen. Los nuevos compuestos presentan actividades farmacéuticas valiosas, de este modo pueden utilizarse, debido a su efecto inhibitorio polimerasa poli(adenosina difosfato ribosa), en estados relacionados con deficiencias energéticas de la célula, en complicaciones diabéticas, en estados de deficiencia de oxígeno en corazón y cerebro, en enfermedades neurodegenerativas, así como en el tratamiento de enfermedades autoinmunológicas y/o víricas.

Particularmente, la invención se refiere a nuevos derivados de ácido hidroxímico de fórmula

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en la que

R_{1} representa un grupo alquilo C_{1-20}, un grupo fenilo opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en un grupo alquilo C_{1-2}, un grupo alcoxi C_{1-2}, un átomo de halógeno, un grupo amino, un grupo alquilamino C_{1-4}, un grupo dialquilamino C_{1-4} o un grupo dialcanoilamino C_{1-4}, además R_{1} representa un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que contiene uno o dos átomos de nitrógeno o un átomo de azufre como heteroátomo, y R_{2} representa un átomo de hidrógeno, o R^{1} forma junto a R_{2} un grupo cicloalquilo C_{5-7} opcionalmente condensado con un anillo de benceno,

Y representa un átomo de hidrógeno, un grupo hidroxi, un grupo alcanoiloxi C_{1-30} o un grupo alquenoiloxi C_{3-22},

X representa un átomo de halógeno, un grupo hidroxi o un grupo amino,

R_{3} representa un grupo cicloalquilo C_{3-7} o un grupo de fórmula -NR^{4}R^{5}, en el que

R_{4} y R_{5} representan independientemente un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C_{1-5}, un grupo alcanoilo C_{1-5}, o

R_{4} y R_{5} forman con el átomo adyacente de nitrógeno un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que también puede contener un átomo de oxígeno y puede condensarse con un anillo de benceno, en el que el grupo heterocíclico y/o el anillo de benceno pueden sustituirse por uno o dos sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en un grupo alquilo C_{1-2}, un grupo alcoxi C_{1-2} o un átomo de halógeno,

y sales de adición de ácido farmacéuticamente adecuadas de los mismos.

De la patente húngara nº 177.578 y su equivalente estadounidense nº 4.308.399, se conocen O-/3-(sustitución amino)-2-hidroxi-1-propil/-(sustitución amidoximas) adecuadas para tratar la angiopatía diabética, en las que los sustituyentes de la amidoxima son diferentes de un grupo alquenilo.

Los compuestos conocidos y otros derivados relacionados de ácido hidroxímico también poseen otras actividades biológicas. De esta manera, son adecuados para prevenir y tratar enfermedades de origen mitocondrial (solicitud PCT nº WO 97/13504); incrementar en las células el nivel de proteínas de estrés (solicitud de patente húngara nº P 95 03141), etc.

En la solicitud PCT nº WO 90/08131 se describe un nuevo procedimiento para preparar derivados de amidoxima de fórmula

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en la que R_{1} representa un grupo con 2 a 15 átomos de carbono que puede ser, entre otros, un grupo alquilo insaturado y/o cíclico. En el citado documento los compuestos de fórmula A se tratan como conocidos. Sin embargo, aquellos compuestos de fórmula A en los que R_{1} representa un grupo alquenilo o un grupo cicloalquilideno son compuestos nuevos que todavía no han sido preparados y caracterizados mediante datos identificativos. En los Ejemplos del citado documento, sólo se describen compuestos de fórmula A en los que R_{1} es un grupo piridilo, un grupo clorofenilo, un grupo bencilo o un grupo dimetoxibencilo.

El objetivo de la invención es proporcionar nuevos compuestos que puedan utilizarse para tratar eficazmente los estados relacionados con la deficiencia energética celular, en complicaciones diabéticas, en estados de deficiencia de oxígeno del corazón y cerebro, en enfermedades neurodegenerativas, así como en el tratamiento de enfermedades autoinmunológicas y/o víricas.

Se ha descubierto que el objetivo anterior se consigue con los nuevos derivados insaturados de ácido hidroxímico de fórmula I y sales de adición de ácido farmacéuticamente adecuadas de los mismos.

En la descripción y reivindicaciones, un grupo alquilo C_{1-20} es, por ejemplo, un grupo metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, tert-butilo, isobutilo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-decilo, dodecilo, hexadecilo u octadecilo, etc.

Un grupo alquilo C_{1-2} es un grupo metilo o etilo, mientras que un grupo alcoxi C_{1-2} es un grupo metoxi o etoxi.

Un átomo de halógeno es, principalmente, un átomo de flúor, cloro o bromo, preferentemente un átomo de cloro o un átomo de bromo.

Un grupo alquilo C_{1-4} es un grupo metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, tert-butilo o isobutilo.

Un grupo alquilo C_{1-5} puede incluir, por ejemplo, un grupo n-pentilo además de los mencionados bajo alquilo C_{1-4}.

Un grupo alcanoilo C_{1-4} es preferentemente un grupo formilo, acetilo, propionilo o butirilo.

Un grupo alcanoilo C_{1-5} puede incluir, por ejemplo, un grupo n-pentanoilo además de los mencionados bajo alcanoilo C_{1-4}.

Un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 miembros que contiene uno o dos átomos de nitrógeno o un átomo de azufre como heteroátomo es, por ejemplo, un grupo pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, tienilo, piridilo, piperidilo, pirimidinilo, piperazinilo, etc.

Un grupo cicloalquilo C_{3-7} es, por ejemplo, un grupo ciclopropilo, ciclopentilo, ciclohexilo o cicloheptilo.

Un grupo cicloalquilo C_{5-7} opcionalmente condensado con un anillo de benceno es, por ejemplo, un grupo ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, indanilo o tetralinilo.

Un grupo alcanoiloxi C_{1-30} es, por ejemplo, un grupo formiloxi, acetoxi, propioniloxi, butiriloxi, palmitiloxi o esteriloxi, etc.

Un grupo alquenoiloxi C_{3-22} puede contener 1 a 6 enlaces dobles y puede ser preferentemente un grupo linolenoiloxi, linoloiloxi, docosahexaenoiloxi, eicoxapentaenoiloxi o araquidonoiloxi.

Un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que contiene un átomo de nitrógeno o un átomo de nitrógeno y un átomo de oxígeno como heteroátomo es, por ejemplo, un grupo pirrolilo, piridilo, piperidilo o morfolino.

Las sales de adición de ácido farmacéuticamente adecuadas de los derivados insaturados de ácido hidroxímico de fórmula I son las sales de adición de ácido formadas con ácidos inorgánicos farmacéuticamente adecuadas, tales como los ácidos hidroclórico, sulfúrico, fosfórico, etc., o con ácidos orgánicos farmacéuticamente adecuadas, tales como los ácidos acético, fumárico, láctico, tartárico, succínico, málico, bencenosulfónico, p-toluenosulfónico,
etc.

Debido al enlace doble presente en la fórmula I, los nuevos derivados insaturados de ácido hidroxímico de la invención pueden existir en forma de isómeros geométricos, es decir, isómeros cis o trans o cualquier mezcla de los mismos. La invención incluye los isómeros geométricos puros y las mezclas de los mismos.

Además, determinados compuestos de fórmula I contienen uno o más átomos de carbono quirales, en consecuencia estos compuestos también pueden encontrarse en forma de isómeros ópticos. La invención incluye también los isómeros ópticos y cualquier mezcla de los mismos.

Un subgrupo preferente de los derivados insaturados de ácido hidroxímico de la invención consiste en los compuestos de fórmula I en los que

X representa un grupo amino,

Y representa un grupo hidroxi,

R_{3} representa un grupo cicloalquilo C_{3-7} o un grupo de fórmula -NR^{4}R^{5}, en la que

R_{4} y R_{5} representan independientemente un grupo alcanoilo C_{1-5}, pero uno de ellos también puede ser un átomo de hidrógeno, o

R_{4} y R_{5} forman conjuntamente con el átomo adyacente de nitrógeno, un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que se encuentra condensado con un anillo de benceno y puede contener también un átomo de oxígeno, en el que el grupo heterocíclico y/o anillo de benceno puede sustituirse con uno o dos sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en un grupo alquilo C_{1-2}, un grupo alcoxi C_{1-2} o un átomo de halógeno, y R_{1} representa un grupo alquilo C_{14-20}, un grupo fenilo opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en un grupo alquilo C_{1-2}, un grupo alcoxi C_{1-2}, un átomo de halógeno, un grupo amino, un grupo alquilamino C_{1-4}, un grupo dialquilamino C_{1-4} o un grupo dialquilamino C_{1-4}, además R_{1} representa un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que contiene uno o dos átomos de nitrógeno o un átomo de azufre como heteroátomo, y R_{2} representa un átomo de hidrógeno, o

X representa un átomo de halógeno o un grupo hidroxi,

Y es un átomo de hidrógeno, un grupo hidroxi, un grupo alcanoiloxi C_{1-30} o un grupo alquenoiloxi C_{3-22},

R_{4} y R_{5} forman conjuntamente con el átomo adyacente de nitrógeno un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que también puede contener un átomo de oxígeno y puede condensarse con un anillo de benceno, en el que el grupo heterocíclico y/o anillo benceno puede sustituirse con uno o dos sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en un grupo alquilo C_{1-2}, un grupo alcoxi C_{1-2} o un átomo de halógeno, R_{1} representa un grupo alquilo C_{1-20}, un grupo fenilo opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en un grupo alquilo C_{1-2}, un grupo alcoxi C_{1-2}, un átomo de halógeno, un grupo amino, un grupo alquilamino C_{1-4}, un grupo dialquilamino C_{1-4} o un grupo dialcanoilamino C_{1-4}, además R_{1} representa un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que contiene uno o dos átomos de nitrógeno o un átomo de azufre como el heteroátomo, y

R_{2} representa un átomo de hidrógeno, o

R_{1} forma conjuntamente con R_{2}, un grupo cicloalquilo C_{5-7} opcionalmente condensado con un anillo de benceno,

además de isómeros geométricos y/u ópticos y/o sales de adición de ácido farmacéuticamente adecuadas de los mismos.

Los derivados convenientes de ácido hidroxímico de la invención consisten en compuestos de fórmula I, en los que

R_{1} representa un grupo fenilo opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en un grupo metilo, un grupo metoxi, o un átomo de cloro, además R_{1} representa un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que contiene uno o dos átomos de nitrógeno como el heteroátomo,

R_{2} representa un átomo de hidrógeno,

X representa un grupo amino,

Y es un átomo de hidrógeno o un grupo hidroxi,

R_{3} representa un grupo de fórmula -NR^{4}R^{5}, en el que

R_{4} y R_{5} forman conjuntamente con el átomo adyacente de nitrógeno un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos, además de isómeros geométricos y/u ópticos y/o sales de adición de ácido adecuadas de los mismos.

Los derivados insaturados de ácido hidroxímico especialmente preferentes consisten en los compuestos de fórmula I, en los que

R_{1} representa un grupo piridilo o un grupo fenilo opcionalmente sustituido con 1 a 3 grupos metoxi,

R_{2} representa un átomo de hidrógeno,

X representa un grupo amino,

Y es un átomo de hidrógeno o un grupo hidroxi,

R_{3} representa un grupo pirrolidino, piperidino o morfolino, además de isómeros geométricos y/u ópticos y/o sales de adición de ácido farmacéuticamente adecuadas de los mismos.

Los compuestos de fórmula I de mayor preferencia son:

Dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-piperidino-propil)cinámico;

Hidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-piperidino-propil)-3,4-dimetoxicinámico;

Hidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-piperidino-propil)-3-(3-piridil)acrílico;

Dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-piperidino-2-hidroxipropil)cinámico;

Dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-piperidino-2-hidroxipropil)-3-(3-piridil)acrílico;

Amidoxima de ácido O-(3-tert-butilamino-2-hidroxipropil)cinámico;

Dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-morfolino-2-hidroxipropil)cinámico;

Dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-tert-butilamino-2-hidroxipropil)-3,4-dimetoxicinámico;

Dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-[3-(1,2,3,4-tetrahidro-2-isoquinolil)-2-hidroxipropil]-3,4-dimetoxicinámico;

Dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-[3-(1,2,3,4-tetrahidro-2-isoquinolil)-2-hidroxipropil]-3-(3-piridil)acrílico;

Dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-tert-butilamino-2-hidroxipropil)-3-(3-piridil)acrílico.

Según un aspecto adicional de la invención, los derivados insaturados de ácido hidroxímico de fórmula I se preparan de la manera siguiente:

a) para preparar los compuestos de fórmula I, en los que X representa un grupo amino, R_{1}, R_{2}, R_{3} e Y son como se ha indicado para la fórmula I, una amidoxima de fórmula

3

en la que R_{1} y R_{2} son como se ha indicado anteriormente, se reacciona con un reactivo de fórmula

(III)Z --- CH_{2} ---

\delm{C}{\delm{\para}{Y}}

H—CH_{2} --- R_{3}

en la que Z representa un grupo saliente, preferentemente un átomo de halógeno, Y es como se ha indicado anteriormente; o

b) para preparar los compuestos de fórmula I, en los que X es un grupo amino, Y es un grupo hidroxi, R_{1}, R_{2} y R_{3} son como se ha indicado con referencia a la fórmula I, un reactivo de fórmula III, en la que Z representa un grupo saliente, preferentemente un átomo de cloro, Y es como se ha indicado anteriormente, se reacciona con una base, y el derivado de oxirano obtenido, de fórmula

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en la que R_{3} es como se ha indicado anteriormente, se reacciona con una amidoxima de fórmula II, en la que R_{1} y R_{2} son como se ha indicado anteriormente; o

c) para preparar compuestos de fórmula I, en la que X es un grupo amino, R_{1}, R_{2}, R_{3} e Y son como se ha indicado con referencia a la fórmula I, un nitrilo carboxílico de fórmula

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en la que R_{1} y R_{2} son como se ha indicado anteriormente, se reacciona con un derivado hidroxilamina de fórmula

(VI)H_{2}N --- O --- CH_{2} ---

\delm{C}{\delm{\para}{Y}}

H—CH_{2} --- R_{3}

en la que R_{3} e Y son como se ha indicado anteriormente; o

d) para preparar compuestos de fórmula I, en la que X es un grupo amino, R_{1}, R_{2}, R_{3} e Y son como se ha indicado con referencia a la fórmula I, un derivado reactivo de ácido carboxílico de fórmula

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en la que V es un grupo saliente, R_{1} y R_{2} son como se ha indicado anteriormente, se reacciona con un derivado hidroxilamina de fórmula VI, en la que R_{3} e Y son como se ha indicado anteriormente; o

e) para preparar compuestos de fórmula I, en la que X es un grupo amino, Y es un grupo hidroxi, R_{3} es un grupo de fórmula -NR^{4}R^{5}, en la que R_{1}, R_{2}, R_{4} y R_{5} son como se ha indicado con referencia a la fórmula I, una amidoxima de fórmula II, en la que R_{1} y R_{2} son como se ha indicado anteriormente, se reacciona con epiclorohidrina en presencia de una base, y el epóxido obtenido de fórmula

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en la que R_{1} y R_{2} son como se ha indicado anteriormente, se reacciona con una amina de fórmula HNR^{4}R^{5}, en la que R_{4} y R_{5} son como se ha indicado anteriormente; o

f) para preparar compuestos de fórmula I, en la que X representa un átomo de halógeno, R_{1}, R_{2}, R_{3} e Y son como se ha indicado con referencia a la fórmula I, una oxima O-sustituida de fórmula

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en la que R_{1}, R_{2} y R_{3} son como se ha indicado anteriormente, se reacciona con un agente halogenante;

y, si se desea, un compuesto obtenido de fórmula I, en la que X representa un grupo amino, R_{1}, R_{2}, R_{3} e Y son como se ha indicado para la fórmula I, se convierte a un compuesto correspondiente de fórmula I, en la que X es un átomo de halógeno, mediante diazotación y descomponiendo la sal diazonio obtenida en presencia de un haluro de hidrógeno, o un compuesto obtenido de fórmula I, en la que X es un grupo amino, R_{1}, R_{2}, R_{3} e Y son como se ha indicado para la fórmula I, se convierte mediante diazotización y descomponiendo la sal diazonio obtenida en presencia de ácido fosfórico a un compuesto de fórmula I, en la que X es un hidroxi, y/o un compuesto obtenido de fórmula I, en la que Y representa un grupo hidroxi, R_{1}, R_{2}, R_{3} y X son como se ha indicado para la fórmula I, se reacciona con un agente acilante con el fin de obtener un compuesto de fórmula I, en la que Y representa un grupo alcanoiloxi C_{1-30} o un grupo alquenoiloxi C_{3-22}, y/o una base obtenida de fórmula I se reacciona con un ácido inorgánico u orgánico con el fin de obtener una sal de adición de ácido farmacéuticamente adecuada, o una base de fórmula I se libera de su sal de adición de ácido con una base.

En el procedimiento a) de la invención, la reacción de la amidoxima de fórmula II con el reactivo de fórmula III se lleva a cabo en un disolvente que es indiferente desde el punto de vista de la reacción en presencia de un agente ligante ácido. El disolvente puede ser inorgánico, tal como agua o un disolvente orgánico prótico, tal como alcoholes, por ejemplo metanol o etanol, o un disolvente dipolar aprótico, tal como dimetilformamida, dimetilsulfóxido, etc. Es preferible utilizar mezclas de alcoholes o un alcohol acuoso debido a que tales mezclas disuelven bien los compuestos de partida fuertemente polares.

Puede utilizarse una base inorgánica u orgánica como agente ligante ácido. Como base inorgánica, en general pueden utilizarse hidróxidos, carbonatos, alcoholatos, amidas o hidruros de metales alcalinos o de metales alcalino-térreos, con los que deberían considerarse las propiedades del disolvente utilizado. En medio aprótico, la base también puede ser un compuesto metaloorgánico, por ejemplo butil-litio o fenil-litio. Como base orgánica pueden utilizarse preferentemente las aminas terciarias, tal como trietilamina u otras aminas terciarias de cadena abierta o cíclica.

La reacción de la amidoxima de fórmula II con el reactivo de fórmula III se lleva a cabo generalmente a una temperatura comprendida entre -20ºC y +150ºC y a presión atmosférica o más alta. De hecho, la temperatura real de reacción depende del punto de ebullición del disolvente utilizado. Puede hacerse un seguimiento de la reacción mediante cromatografía en capa fina.

Se conoce una parte de las amidoximas de partida de fórmula II. Los nuevos compuestos pueden prepararse de una manera conocida per se haciendo reaccionar un nitrilo carboxílico de fórmula IV con hidroxilamina. Las nuevas amidoximas de fórmula IV también pueden prepararse mediante otros métodos que se han descrito para preparar amidoximas conocidas (Chem. Reviews, 62, 155 (1962)).

Si se utiliza como el compuesto de partida un reactivo de fórmula III, en la que Z representa un átomo de cloro o bromo, puede añadirse a la mezcla de reacción un catalizador tal como yoduro de potasio o yoduro de sodio.

Si se utiliza un reactivo de fórmula III, en la que Z representa un átomo de halógeno, Y representa un grupo hidroxi, R_{3} significa un grupo de fórmula -NR^{4}R^{5}, dicho reactivo puede reaccionarse con la amidoxima de fórmula II sin separación de la mezcla de reacción en la que se formó, mediante reacción de la amina correspondiente de fórmula HNR^{4}R^{5} con una epihalohidrina, tal como epiclorohidrina. La amina de fórmula HNR^{4}R^{5} se reacciona con la epihalohidrina preferentemente en una solución alcohólica bajo enfriamiento con el fin de obtener una solución del reactivo de fórmula III. La amidoxima de fórmula II puede añadirse directamente a dicha solución.

Las mezclas de reacción se produjeron de una manera conocida per se. En la mayoría de casos, la mezcla de reacción se evaporó y del medio acuoso alcalino se extrajo el producto con un disolvente orgánico inmiscible en agua. A partir de la solución orgánica el producto se cristalizó o separó por evaporación, después se purificó mediante recristalización o formación de una sal de adición de ácido. Los productos aceitosos que no forman ninguna sal cristalina pueden purificarse mediante cromatografía en columna.

En el procedimiento b) de la invención el compuesto de partida es un reactivo de fórmula III, en la que Y es un grupo hidroxi. Después el reactivo se reacciona con una de las bases indicadas en el procedimiento a) con el fin de obtener un derivado de oxirano de fórmula V, en la que R_{3} es como se ha indicado anteriormente, y el derivado de oxirano se reacciona con la amidoxima de fórmula II. Esta última reacción también puede llevarse a cabo en la mezcla de reacción en la que se preparó el derivado de oxirano, o dicho derivado puede separarse (J. Am. Chem. Soc., 80, 1257 (1958)) y reaccionarse con la amidoxima de fórmula II en una etapa separada. Se preparó la mezcla de reacción y se separó el producto como se describe en el procedimiento a).

En el procedimiento c) de la invención la reacción se lleva a cabo en un disolvente orgánico indiferente, preferentemente en un alcohol, convenientemente en el punto de ebullición del disolvente utilizado. Como disolvente puede utilizarse un disolvente orgánico dipolar aprótico, tal como dimetilformamida o dimetilsulfóxido. Los derivados de hidroxilamina de fórmula VI son compuestos conocidos (solicitud publicada de patente alemana nº 26 51 083). Se preparó la mezcla de reacción y se separó el producto como se describe en el procedimiento a).

En el procedimiento d) de la invención, en el caso del derivado reactivo de ácido carboxílico de fórmula VII, el grupo saliente V representa preferentemente un átomo de halógeno o un grupo de fórmula -NH_{2}, -SH, -SR^{6} o -OR^{6}, en las que R_{6} representa un grupo alquilo C_{1-4}. La reacción se lleva a cabo en un disolvente orgánico indiferente, preferentemente en un alcohol. Se preparó la mezcla de reacción y se separó el producto como se describe en el procedimiento a). Los derivados reactivos de ácido carboxílico de fórmula VII y la preparación de los mismos son ampliamente conocidos en la literatura.

En el procedimiento e) de la invención, la reacción de la amidoxima de fórmula II con epiclorohidrina se lleva a cabo en presencia de una base indicada en el procedimiento a) en un disolvente orgánico indiferente. Durante la reacción, se aplica enfriamiento con el fin de evitar cualquier ciclización intramolecular del epóxido de fórmula VII en formación, en la que la ciclización intramolecular lleve a la formación de una 1,2,4-oxadiazina. En general, el epóxido de fórmula VII no se separa sino que se reacciona directamente en la mezcla de reacción en la que se formó, con la amina de fórmula HNR^{4}R^{5}. Se preparó la mezcla de reacción y se separó el producto como se describe en el procedimiento a).

En el procedimiento f) de la invención, la oxima O-sustituida de fórmula IX se halogena en solución utilizando un halógeno elemental, hipohalogenita, N-cloro-succinimida, N-bromosuccinimida, etc. como agente halogenante. Convenientemente, se utilizan hidrocarburos halogenados como disolvente, y la reacción generalmente se lleva a cabo a temperatura ambiente. Se preparó la mezcla de reacción y el producto de fórmula I se separó como se describe en el procedimiento a).

Un compuesto de fórmula I, en la que X representa un grupo amino, puede convertirse en un compuesto correspondiente de fórmula I, en la que X es un átomo de halógeno, mediante diazotización en presencia de un exceso de haluro de hidrógeno. Según este procedimiento, se añadió una solución acuosa de nitrito sódico a una solución de la amidoxima en haluro de hidrógeno, preferentemente a una temperatura comprendida entre -5 y -15ºC. Se produjo gas nitrógeno en la reacción, y la sal diazonio se transformó espontáneamente en el compuesto halogenado correspondiente. También pueden utilizarse nitritos orgánicos en la diazotización, tal como nitrito de isoamilo o nitrito de tert-butilo. Si la amidoxima de partida de fórmula II se disuelve mal en el haluro de hidrógeno acuoso, puede mejorarse la solubilidad mediante la adición de un disolvente orgánico miscible con agua, tal como dioxano. Se agita la mezcla de reacción hasta conseguir la transformación de la sal diazonio y, si se desea, se calienta hasta alcanzar la transformación completa. A continuación, se basifica la mezcla de reacción, se extrae el producto con un disolvente orgánico inmiscible en agua, y la solución se evapora o el producto se cristaliza. Los productos aceitosos pueden purificarse mediante cromatografía de columna. En el caso de los compuestos de fórmula I, en los que la cadena lateral contiene un grupo básico, convenientemente se separa una sal de adición de ácido.

Si la diazotización del compuesto de fórmula I, en la que X representa un grupo amino, se lleva a cabo en presencia de un ácido fosfórico acuoso, se obtiene un compuesto de fórmula I, en la que X representa un grupo hidroxi.

Un compuesto de fórmula I, en la que Y representa un grupo hidroxi, puede reaccionarse con un agente acilante adecuado con el fin de obtener un compuesto de fórmula I, en la que Y representa un grupo alcanoiloxi C_{1-30} o un grupo alquenoiloxi C_{3-22}. El haluro, anhídrido, azida, etc. carboxílico correspondiente puede utilizarse como el agente acilante. La reacción de acilación se lleva a cabo bajo condiciones anhidras en un disolvente orgánico indiferente que no reaccione con los demás compuestos en la mezcla de reacción. Como agente ligante ácido, pueden utilizarse bases inorgánicas u orgánicas, preferentemente trietilamina o piridina. Se preparó la mezcla de reacción como se describe en el procedimiento a).

Si se desea, puede convertirse un compuesto de fórmula I en una sal de adición de ácido farmacéuticamente adecuada o liberarse de su sal. Si durante la formación de sal se utiliza un ácido orgánico ópticamente activo, tal como ácido canfórico, ácido canforsulfónico, ácido tartárico o derivado del mismo, pueden separarse los estereoisómeros de los compuestos que contienen un átomo de carbono quiral. La resolución se lleva a cabo de una manera conocida per se, cristalizando las sales de adición de ácido formadas con el ácido ópticamente activo.

Los derivados insaturados de ácido hidroxímico de fórmula I influyen sobre la reacción de estrés en los sistemas biológicos causada por hipoxia, hipoglucemia intracelular, complicación diabética, especies reactivas de oxígeno (ROS) y compuestos xenobióticos de dos maneras diferentes:

1. A través de la inhibición de los enzimas poli(ADP-ribosa) polimerasa nuclear (PARP) y carnitinpalmitoil transferasa.

2. A través de la modificación de la expresión de genes sensibles al oxígeno regulados por, en primer lugar, factores transcripcionales bHLH (hélice-bucle-hélice básica).

Efecto biológico de la inhibición de la PARP

Se conoce que las especies reactivas de oxígeno (ROS) (por ejemplo, el radical hidroxi, superóxido, peroxinitrito, péroxido de hidrógeno) se forman continuamente en el organismo vivo (Richter, S., FEBS Lett., 241, 1-5 (1988)) y en pequeñas cantidades desempeñan cierto papel en el control de importantes procesos fisiológicos (Beck, K.F. et al., J. Exp. Biol. 202, 645-53 (1999); McDonald, L.J. y Murad, F., Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 211, 1-6 (1996)) (tal como la angiectasia, agregación plaquetaria y adhesión de leucocitos). La concentración de especies reactivas de oxígeno y óxido de nitrógeno es significativamente mayor en las inflamaciones agudas y crónicas, por ejemplo en la mayoría de enfermedades autoinmunológicas (Taraza, C. et al., Rom J. Intern. Med., 35, 89-98 (1997)), en caso de fallo cardíaco postisquémico, cerebro isquémico (infarto). (Brain Pathology, 9, 119-131 (1999)). La fuente de las ROS incluye en parte las células de tejido normal (endotelio) debido al efecto inductivo de las citoquinas inflamatorias (tal como el factor de necrosis tumoral alfa).

Las especies reactivas de oxígeno dañan, entre otras cosas, el ADN. El daño al ADN inicia un complejo proceso defensivo y de reparación en la célula. Una parte importante de este proceso es la activación del enzima poli(adenosina difosfato ribosa)polimerasa (PARP). La PARP es un enzima de organización nuclear que está presente en casi todas las células en grandes cantidades y que cataliza el transporte de las unidades de adenosina difosfato ribosa desde los dinucleótidos de nicotinamida y adenina (NAD) hasta las proteínas. Los sustratos principales del enzima incluyen sí mismo (González, R. et al., Mol. Cell. Biochem., 138, 33-37 (1994), proteínas nucleares, histonas, topoisomerasas I y II y factores transcripcionales. La actividad del enzima PARP se ve potenciada en un factor de aproximadamente 500 en caso de rotura de la cadena de ADN (Mennisier de Murcia, J. et al., J. Mol. Biol., 210, 229-233 (1989)). La activación del enzima PARP en caso de daño extremo en el ADN causa una reducción crítica en la concentración de NAD.

En consecuencia se reduce la síntesis celular de adenosina trifosfato (ATP) y, simultáneamente, aumenta el uso de ATP al intentar la célula recuperar el nivel de NAD a partir de adenosina difosfato ribosa y amida nicotínica con utilización de ATP. Estos procesos bioquímicos perjudican gravemente el estado energético de las células y pueden llevar a su muerte. La inhibición del enzima PARP es importante en la terapia de algunas enfermedades, tal como la enfermedad autoinmunológica (Szabó, C. et al., Trends Pharmacol. Sci., 19, 287-98 (1998)), la enfermedad cardíaca isquémica y las enfermedades neurodegenerativas. Con la inhibición del enzima PARP podemos eliminar el catabolismo del NAD, reducir los niveles de amida nicotínica y de adenosina difosfato ribosa en las células, e inhibir el consumo de adenosina trifosfato para la síntesis de NAD, es decir, con la inhibición del enzima podemos eliminar los daños celulares anteriormente mencionados y la muerte celular.

Parte experimental Inhibición in vitro de PARP en enzima purificado

Se aisló la poli-ADP-ribosa polimerasa a partir de hígado de rata de acuerdo con el artículo Shah, G.M., Anal. Biochem., 227, 1-13 (1995).

Se determinó la activación de PARP en 130 \mul de mezcla de reacción, consistente en: tampón Tris-HCl 100 mM, pH 8,0, MgCl_{2} 10 mM, glicerol al 10%, DTT 1,5 mM, 100 \mug de (32P), o (3H), NAD^{+}, 10 \mug de histona. La reacción se detuvo después de 10 minutos utilizando ácido perclórico al 8%, y se separaron las proteínas por centrifugación (10 minutos, 10.000xg). Se lavó el precipitado con ácido perclórico al 8%, y se midió la radioactividad en las proteínas con un contador de centelleo. En la Tabla 1 se muestran los resultados.

TABLA 1

Compuesto	PARP I_{0,5} mg/l
Ejemplo 1	4,0\pm2
Ejemplo 2	5,2\pm3
Ejemplo 3	2,4\pm2
Ejemplo 4	8,2\pm3
Ejemplo 5	17,7
Ejemplo 6	8\pm4
Ejemplo 7	7\pm3
Ejemplo 8	10\pm5
Ejemplo 9	13\pm5
Ejemplo 10	17\pm4

TABLA 1 (continuación)

Compuesto	PARP I_{0,5} mg/l
Ejemplo 11	18\pm6
Ejemplo 12	8\pm4
Ejemplo 13	12\pm5
Ejemplo 14	13\pm4
Ejemplo 15	19\pm7
Ejemplo 16	18\pm6
Ejemplo 17	15\pm5
Ejemplo 18	34,1
Ejemplo 19	180\pm40
Ejemplo 31	6\pm3
Ejemplo 33	7\pm4

Los resultados anteriores se proporcionan con SEM (error estándar de la media) calculado a partir de cuatro mediciones simultáneas.

Conclusión

En la Tabla 1 puede observarse que una parte importante de los compuestos son inhibidores de PARP muy buenos (I_{0,5})< 10 mg/l. El resto de compuestos, con la excepción del compuesto del Ejemplo 19, el cual es un inhibidor de PARP muy malo, pueden clasificarse como buenos inhibidores de PARP, con I_{0,5} comprendidas entre 10 y 34 mg/l.

Efecto de los derivados insaturados de ácido hidroxímico de fórmula I sobre el fallo cardíaco isquémico y arritmia de reperfusión

El daño al músculo cardíaco y la muerte celular en éste ocurre en la mayoría de casos debido a trastornos alimentarios. La forma más habitual que adopta el trastorno alimentario es la carencia de oxígeno. El daño al músculo cardíaco se desarrolla en isquemia del mismo, la cual puede formarse por hipoxia/anoxia aguda, oclusión coronaria, espasmo, o enfermedad coronaria crónica. La parte isquémica del infarto agudo del músculo cardíaco se ve seguida por una etapa de flujo sanguíneo excesivo, la denominada etapa de reperfusión. Un aspecto desfavorable y potencialmente letal de la reperfusión, en particular en la isquemia miocárdica regional, es la aparición de arritmias inducidas por la reperfusión (taquicardia ventricular y fibrilación implicadas). Éstas son las primeras manifestaciones del daño por reperfusión. Evitar el trastorno de reperfusión del músculo cardíaco implica la prevención del peligro mortal del postinfarto temprano.

Materiales y métodos

Se llevaron a cabo experimentos en ratas SPRD macho (intervalo de peso corporal aceptable: 300-350 g). Se anestesiaron los animales con pentobarbital sódico (Nembutal®: 60 mg/kg intraperitoneal) y se dejaron respirar espontáneamente. Los animales se ventilaron con respirador (MTA Kutesz) mediante cánula traqueal insertada tras traqueotomía. Se realizó un seguimiento del ECG II de derivación estándar. Se cateterizó la arteria femoral derecha y se conectó a un transductor de presión (BPR-01, Experimetria, Hungría) para la medición de la presión sanguínea arterial y del pulso cardíaco, respectivamente. Se canuló la vena yugular externa para la administración de fármaco. Tras la toracotomía se pasó una seda quirúrgica (hilo trenzado, recubierto 4-0) bajo la arteria coronaria anterior izquierda (LAD). Tras un periodo de estabilización de unos minutos, se aplicó una oclusión durante 5 minutos en la arteria LAD, seguido de un periodo de reperfusión de 10 minutos. Se evaluó la tasa de supervivencia. En la Tabla 2 se muestran los resultados obtenidos.

TABLA 2 Efecto de diferentes compuestos sobre la arritmia inducida por la reperfusión

9

Conclusión

Como puede observarse en la Tabla 2, los derivados insaturados de ácido hidroxímico de fórmula I evitan la arritmia causada por reperfusión. En los experimentos de arritmia por reperfusión, de 52 animales en los controles sin tratamiento solamente sobrevivieron 8, lo que representa una tasa de supervivencia del 15%. De los compuestos estudiados, sobresale el del Ejemplo 2, debido a que produjo una supervivencia del 100%. (De los 9 animales, 9 sobrevivieron la arritmia causada por reperfusión). Los compuestos descritos en los Ejemplos 1, 4, 32 y 18 tienen un efecto sobresaliente similar. La conclusión que puede derivarse de los experimentos es que los derivados insaturados de ácido hidroxímico de fórmula I tienen un efecto beneficioso sobre las enfermedades basadas en los fallos cardíacos isquémicos tal como el infarto de miocardio.

Investigación del efecto de los derivados insaturados de ácido hidroxímico de fórmula I frente a las enfermedades autoinmunológicas

Una enfermedad autoinmunológica es una enfermedad en la que el organismo inicia una reacción inmunológica contra un constituyente normal del mismo (Ring, G.H. et al., Semin. Nephrol., 19, 25-33 (1999); Theofilopoulos, A.N., Ann. N.Y. Acad. Sci., 841, 225-35 (1998)). Las diversas enfermedades autoinmunológicas difieren entre sí en el antígeno que inicia el proceso aunque, sin embargo, son muy similares los mecanismos celulares de destrucción de tejidos de los procesos autoinmunológicos que se desarrollan (Szabo, C. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95, 3867-3872 (1998)).

Las enfermedades autoinmunológicas incluyen principalmente las siguientes:

-enfermedades hormonales:	diabetes mellitus dependiente de insulina (IDDM);
-enfermedades hepáticas:	hepatitis;
-enfermedades de la piel:	lupus pemfigoide bullosa, pemfigus vulgar, soriasis,
	escleroderma, vitiligo;
-enfermedades del órgano formador de sangre:	sarcoidosis;
-artropatías:	artritis reumatoide;
-enfermedades vasculares:	vasculitis, arteritis takayasu, poliarteritis nodosa,
	espondilitis anquilosante;
-enfermedades intestinales	colitis ulcerosa
-enfermedades del sistema muscular y nervioso:	esclerosis múltiple, miastenia gravis, polineuropatía
	demielinizante inflamatoria crónica

Investigación de la prevención de la diabetes mellitus de tipo I autoinmunológica inducida por estreptozotocina (SZ) en ratones

La insulina, la cual es la principal reguladora del metabolismo de los hidratos de carbono en el organismo, es producida y transferida al flujo sanguíneo por células del islote de Langerhans en el páncreas. El daño o destrucción de las células \beta provoca la reducción o cese de la producción de insulina, lo que conduce al desarrollo de la diabetes mellitus de tipo 1 (diabetes mellitus dependiente de insulina=IDDM). Las células \beta son especialmente sensibles a las ROS y a los efectos tóxicos del NO. El estudio del daño del ADN causado por NO llevó a suponer que la activación excesiva del enzima PARP y la reducción del nivel de NAD eran los responsables de la muerte de las células \beta (Heller, B. et al., J. Biol. Chem., 270, 176-180 (1995)). Mediante un mecanismo similar, la estreptozotocina (2-desoxi-2-(3-metil-3-nitrosoureido)-D-glucopiranosa) (SZ) daña las células \beta productoras de insulina, ofreciendo el modelo de diabetes de tipo 1 utilizado en experimentos con animales (Yamamoto, H. et al., Nature, 294, 284-286 (1981)). El ADN es dañado por la estreptozotocina mediante la alquilación y formación de NO, que provoca la activación del enzima PARP como se ha descrito anteriormente.

Se examinó la posibilidad de que la diabetes de tipo 1 inducida en ratones pudiese prevenirse con derivados insaturados de ácido hidroxímico de fórmula I con efecto inhibitorio de la PARP.

Los experimentos se llevaron a cabo en ratones CD-1 hembra de peso comprendido entre 17 y 19 g (Charles River, Hungría). Los animales se clasificaron en tres grupos. Cada grupo era de 10 animales. El primer grupo recibió 160 mg/kg de estreptozotocina, y 200 mg/kg del compuesto del Ejemplo 2 p.o., el tercer grupo hizo de control. Se midió la concentración de glucosa en sangre al tercer día. Se sacrificaron los animales, se tomaron muestras de suero para la determinación de la concentración de insulina, y se extrajeron los páncreas para su estudio histológico. En la Tabla 3 se muestran las concentraciones de glucosa en sangre.

TABLA 3 Concentración de glucosa en sangre tras tratamiento SZ y SZ+Ejemplo 2

\text{*}=diferencia significativa respecto al control

GRUPOS	GLUCOSA (media+s.d.)
CONTROL	4,78\pm2,13
SZ	13,03\pm2,09
SZ+Ejemplo 2	8,16\pm0,65
SZ = estreptozotocina

Puede observarse en la Tabla 3 que el compuesto del Ejemplo 2 redujo notablemente la concentración de glucosa en sangre potenciada por la adición de estreptozotocina. De esta manera, los compuestos de fórmula I son adecuados para el tratamiento de la diabetes mellitus dependiente de insulina.

Efecto de los derivados insaturados de ácido hidroxímico de fórmula I sobre las enfermedades neurodegenerativas

Se conoce bien en la literatura, y ha sido descrito en la parte descriptiva anteriormente, que durante el daño del ADN causado por las ROS, ocurre la activación del enzima PARP, seguido de la pérdida celular de NAD que provoca la muerte de las células. La activación de PARP no solamente puede observarse durante la muerte neuronal causada por isquemia, tal como en la isquemia cerebral, sino que tiene un papel demostrado en otras enfermedades neurodegenerativas, tal como en la enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y esclerosis lateral amiotrófica (Love et al., Neuropathol. Appl. Neurobiol., 25, 98-108, 1999; Eliasson et al., Nat. Med., 10, 1089-1095, 1997).

Efecto sobre la esclerosis lateral amiotrófica experimental Introducción

La esclerosis lateral amiotrófica (ALS) es una enfermedad neurodegenerativa progresiva y fatal. Se trata del trastorno neuronal motor de inicio en la edad adulta más común en los países desarrollados. La ALS implica la degeneración de las neuronas motoras en el córtex, tallo cerebral y médula espinal que provocan la atrofia de los músculos esqueléticos, parálisis y la muerte (Rowland, L.P. en Neurodegenerative diseases, pp. 507-521, (1994)). Aproximadamente 10 a 15% de los casos de ALS son hereditarios. El 20% de los casos hereditarios están causados por la mutación sin sentido de la Cu/Zn superóxido dismutasa-1 (SOD-1), un enzima citosólico abundante en el tejido neuronal que desempeña un papel importante en la protección frente al daño celular inducido por los radicales de oxígeno. El enzima mutado mantiene niveles casi normales de actividad enzimática. Algunos estudios in vitro indican que las mutaciones en SOD-1 resultan en un aumento de actividad y potencian la generación de radicales libres. Los ratones transgénicos con SOD-1 mutado desarrollan síntomas similares a los de la ALS. Varios genes SOD-1 humanos mutados (G39A, V148G) ya estaban sobreexpresados en los ratones transgénicos y los modelos de patología generados se aplicaron en la exploración de fármacos anti-ALS (Gurney, M.E., J. Neurol. Sci., 152 Supl. 1: S67-73 (1997)).

Materiales y métodos

En el estudio se utilizaron ratones transgénicos que sobreexpresaban el gen SOD-1 humano mutado (G93A). Los animales se adquirieron en Jackson Laboratory, USA. El tratamiento con los compuestos de fórmula I se inició antes de la aparición de síntomas de la enfermedad a la edad de 4 semanas, y los compuestos se administraron oralmente una vez al día a 3 niveles de dosis hasta el final del experimento. Se realizó un seguimiento de la progresión de la enfermedad mediante el examen semanal del rendimiento motor (reflejo de extensión, loaded grid, ensayo rotarod), mediante el tiempo de supervivencia, y al final del experimento (120 días) mediante el examen histológico y bioquímico de las áreas neurológicas motoras.

Resultados

Los compuestos de fórmula I provocaron un retardo moderado en la aparición del déficit de reflejos, coordinación y fuerza muscular en animales transgénicos con ALS. El efecto demostró ser dosis-dependiente. También se produjo un retardo en la aparición de la parálisis y la aparición de la enfermedad en etapa terminal. Los resultados del examen histológico confirmaron el efecto clínico observado y debido al tratamiento. La degeneración y pérdida de neuronas motoras y de neuronas de la substantia nigra fueron menos extensos en el grupo bajo tratamiento que en el grupo de control.

A partir de los resultados puede esperarse que los compuestos de fórmula I tengan un efecto terapéutico favorable en la ALS.

Efecto sobre el modelo experimental de la enfermedad de Parkinson (PD) Introducción

La enfermedad de Parkinson (PD) es un trastorno neurodegenerativo idiopático inhabilitante habitual caracterizado por temblor, bradiquinesia, rigidez y dificultades en el equilibrio. Dichas anormalidades motoras están causadas por el agotamiento de la dopamina cerebral que resulta de la pérdida de neuronas dopaminérgicas en la substantia nigra pars compacta.

El análisis de la acción de la neurotoxicidad selectiva de la 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridina (MPTP) ha arrojado luz sobre el posible patomecanismo de la PD. La MPTP induce signos motores parkinsonianos en humanos y animales (Dexter, A., et al., Ann. Neurol., 35: 38-44 (1994)). El tratamiento con MPTP también resulta en una pérdida de neuronas dopaminérgicas en la substantia nigra pars compacta. Aparecen inclusiones eosinofílicas similares a cuerpos de Lewy en las neuronas dañadas y también disminuye la actividad del complejo mitocondrial I en dichas células. Estas alteraciones son características del estrés oxidativo (Shapira, A., Adv. Neurol., 69: 161-165 (1996)). El metabolito biológicamente activo del MPTP es el MPP (1-metil-4-fenilpiridinio). El MPP inhibe el complejo I en la mitocondria, provocando un incremento en la generación de anión superóxido. Los datos indican que el estrés oxidativo desempeña un papel central en la patogénesis de la PD en ambas su forma natural y forma inducida por MPTP. La poli(ADP-ribosa)polimerasa (PARP) es activada por el estrés oxidativo y desempeña un papel activo en el patomecanismo de la PD. Los ratones que no expresan PARP muestran una sensibilidad acusadamente reducida frente al efecto inductor de enfermedad de Parkinson de la MPTP (Mandir, A. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96: 5774-5779 (1999)). Estos resultados sugieren que la inhibición de la PARP puede ser un efecto terapéutico en la PD.

Materiales y métodos

Animales: Se adquirieron ratones C57BI macho de Charles River, Hungría.

Inducción de PD en ratones y tratamiento de los animales

Se trataron animales que pesaban 20 g con 4 dosis de 20 mg/kg de MPTP i.p. administradas en intervalos de 2 horas. Se administraron los compuestos de ensayo p.o. 30 minutos antes de las inyecciones de MPTP. Los animales de control recibieron tratamientos con los vehículos con las mismas frecuencias.

Siete días después de la inyección de MPTP se sacrificaron los ratones y se extirparon rápidamente los cerebros y se diseccionaron las estrías en placas de Petri congeladas con hielo. Los tejidos extirpados se congelaron inmediatamente sobre hielo seco y se almacenaron a -80ºC hasta su análisis. Se sonicaron muestras de los tejidos en 50 volúmenes de ácido perclórico 0,1 M. Tras centrifugar (14.000xg, 10 minutos, 4ºC), se inyectaron 20 \mul de sobrenadante en una columna de fase reversa de catecolamina (ESA, Bedford) y se evaluó el contenido de dopamina.

Medición del contenido de polímero poli(ADP-ribosa) mediante transferencia Western

Se extirparon el mesencéfalo ventrolateral y estrías (2 horas tras el último tratamiento con MPTP), se homogeneizaron en tampón (sacarosa/DTT), y se centrifugaron (14.000xg, 5 minutos). Se resuspendió el pellet en tampón. Tras determinar la concentración de proteína (Bradford) se introdujeron alícuotas en un gel SDS/PAGE. Desde el gel, las proteínas se transfirieron a una membrana de nitrocelulosa y se inmunotiñeron para polímero poli(ADP-ribosa). La unión específica se visualizó mediante quimioluminiscencia.

Resultados

El tratamiento con MPTP causó una reducción drástica (80%) en el contenido de dopamina estriatal.

Los compuestos de ensayo de fórmula I inhibieron parcialmente (20-40%) la pérdida de dopamina inducida por la MPTP. El tratamiento con MPTP resultó en la aparición de compuestos de polímero poli(ADP-ribosa) en el área estriatal. El tratamiento concomitante con los compuestos de ensayo provocó la inhibición de este proceso (20-70%). De esta manera, puede esperarse que los compuestos de fórmula I tengan actividad terapéutica en la PD.

Efecto de los compuestos de fórmula I como agentes citoprotectores en los procesos neurodegenerativos inducidos por compuestos tóxicos Introducción

Algunos fármacos utilizados permanente o frecuentemente pueden causar como efecto adverso daños neurológicos que se manifiestan en neuropatías. De entre una larga serie de tales fármacos que causan dicho efecto adverso (cloranfenicol, dapsona, disulfiramo, dicloroacetato, etionamida, glutetimida, hidralazina, isoniazida, litio, metronidazol, nitrofurantoina, óxido nitroso, platino, piridoxina, vincristina), los mejor caracterizados y más aceptados son las neuropatías inducidas por isoniazida, piridoxina, vincristina o cisplatino; el cloranfenicol es un fármaco que puede provocar tales neuropatías, pero el efecto adverso puede desaparecer tras cesar el tratamiento. En casi todos los casos clínicos el cese prematuro de la quimioterapia puede prevenir el éxito del tratamiento y causar un reavivamiento de la enfermedad. El riesgo de tener que cambiar el tratamiento terapéutico debido a efectos colaterales en casos de quimioterapia anticancerosa es especialmente alto. Este hecho confiere gran importancia a los denominados "agentes quimioprotectores", los cuales son capaces de reducir los efectos adversos perjudiciales causados por los fármacos vitales importantes sin causar ninguna reducción en la efectividad terapéutica. En los pacientes de cáncer tratados con cisplatino (cPt), el efecto adverso principal causado por toxicidad y limitante de las dosis es la lesión de los nervios periféricos (neuropatía periférica). La aparición de dicho efecto secundario puede reducir el rendimiento del tratamiento con cisplatino, puede hacer peligrar el éxito del tratamiento, y perjudica la calidad de vida del paciente. Puede determinarse la presencia y grado de lesión neuronal mediante la medición de la velocidad de conducción neuronal en ambos estudio clínico y estudio experimental. El efecto neurotóxico del cisplatino implica principalmente a los grandes nervios periféricos mielinizados y se manifiesta en lesiones neurológicas sensoriales (neuropatía sensorial). Recientemente, algunos trabajos mencionan la presencia después del tratamiento con cPt de neuropatía autonómica y, ocasionalmente, también de neuropatía motora. El cisplatino, a través de la lesión directa de las raíces ganglionares dorsales y de los grandes nervios sensoriales puede causar predominantemente el trastorno funcional de los nervios sensoriales.

En ratas el tratamiento crónico con cPt provoca neuropatía sensorial que se refleja en el enlentecimiento de la velocidad de conducción de nervios sensoriales del nervio ciático (nervio de tipo mixto). El prototipo de compuestos de fórmula I tiene potencial citoprotector y evita los efectos adversos organotóxicos de los fármacos antitumorales a partir del modo de acción bioquímico comentado anteriormente, principalmente a través de la prevención de las lesiones causadas por los radicales libres.

En experimentos con ratas se administró cPt en forma de tratamiento subagudo (durante 10 semanas) en dosis de 1 y 2 mg/kg y se observó el desarrollo de neuropatía periférica y además cómo las diferentes dosis de los compuestos influían sobre las lesiones de la función neuronal (velocidad de conducción nerviosa).

Métodos

Se midieron las lesiones neurológicas sensoriales y motoras inducidas por cPt mediante el registro de la velocidad de conducción nerviosa según el método modificado de Miyoshi. ("Modificado" significa que se midió la velocidad de conducción nerviosa a temperatura ambiente en lugar de a 37ºC). Se midió la velocidad de conducción de nervios sensoriales y motores previamente al tratamiento con cPt (como control) y en la 5º y 10º semana de tratamiento. Durante las mediciones, los animales se anestesiaron superficialmente con éter y se colocaron dos pares de electrodos de dos polos en el nervio de la cola distanciados 50 mm entre sí. Con estímulos supramáximos se registraron los potenciales de acción nerviosos eferentes (motores) y aferentes (sensoriales). Se determinó la velocidad de conducción nerviosa fuera de línea a través del cálculo de la media de 10 potenciales de acción utilizando la expresión siguiente:

NCV = v/l

\hskip1cm

[m/s], en la que

v=distancia [mm] entre accionador y pares de electrodos de registro

l=tiempo de latencia [ms] hasta el inicio del potencial de acción,

NCV=velocidad de conducción nerviosa [m/s].

Resultados

El tratamiento de 10 semanas con 1 y 2 mg/kg de cisplatino i.p. redujo el peso corporal de los animales tratados de manera significativa respecto al peso de los animales de control. Esta reducción en peso corporal también la experimentaron los animales tratados con los compuestos de la invención. No hubo diferencias de comportamiento general entre animales tratados y no tratados, o entre animales tratados con cisplatino y con el nuevo compuesto. No hubo diferencias de NCV de nervios sensoriales y motores en el grupo de control entre los 3 tiempos de medición. En los animales tratados con cisplatino, la NCV se redujo unánime y notablemente en la 5º semana y también en la 10º semana debido al tratamiento con 1 mg/kg de cisplatino. Después del tratamiento con 2 mg/kg de cisplatino se observó una reducción todavía mayor de la NCV. También se desarrollo neuropatía en los nervios motores.

Durante el curso del tratamiento de 10 semanas con cPt la NCV motora se redujo significativamente en ambos grupos de dosis de 1 y 2 mg/kg de cPt. La reducción fue dosis-dependiente. En el grupo tratado con una combinación de 1 mg/kg cPt y el compuesto de fórmula I la reducción en la velocidad de conducción de los nervios motores fue significativamente menor que la del grupo tratado solamente con 1 mg/kg cPt, mejorando de esta manera la función neuronal tras el tratamiento combinado, y el grado de mejora fue mayor cuanto mayor era el grado de la lesión. En el grupo tratado con 2 mg/kg cPt y con compuesto de fórmula I en dosis diferentes la reducción de conducción nerviosa de los animales en la 5º semana no difirió del grupo tratado solamente con 2 mg/kg cPt. En la 10º semana, sin embargo, el grupo de animales tratados solamente con 2 mg/kg cPt había experimentado una reducción adicional significativa, mientras que en los animales tratados con ambos cPt y los compuestos indicados anteriormente la reducción fue dosis-dependiente en comparación con los animales tratados solamente con 2 mg/kg cPt.

La reducción de la velocidad de conducción nerviosa eferente fue menor al final de la 10º semana especialmente en comparación con el grupo tratado en paralelo con cPt y los compuestos en cuestión.

En resumen, puede afirmarse que se redujeron los daños en la NCV sensorial y motora causados por el tratamiento con cPt mediante el tratamiento simultáneo con el compuesto de fórmula I, se detuvo el avance de las lesiones (entre las semanas 5º y 10º). En algunos grupos este efecto protector era dosis-dependiente. El efecto neuroprotector del compuesto de fórmula I puede demostrarse en ambas funciones nerviosas, sensorial y motora.

Efecto biológico de la carnitin-palmitoil transferasa (CPTI)

La CPTI es un enzima clave en la regulación del metabolismo de los ácidos grasos. Existen dos posibilidades para los ésteres de (CoA):

1) síntesis de triglicéridos a través de la reacción con glicerol, o

2) oxidación, la primera etapa de ésta es la formación de acilcarnitina mediante el enzima CPTI (ver McGarry, J.D., Woeltje, K.F., Kuwajima, M. y Foster, D. (1989), Diabetes, 5: 271-284. McGarry, J.D. y Foster, D. (1980), Ann. Rev. Biochem., 49: 395-420). El enzima CPTI está localizado en la parte externa de la membrana mitocondrial interna (o en la membrana mitocondrial externa) y cataliza la reacción siguiente:

FFA-CoA + L-carnitina \rightarrow FFA-carnitina + CoA

La inhibición de la oxidación de los ácidos grasos provoca un aumento de la degradación y oxidación de la glucosa. Esto es extremadamente significativo y ventajoso, especialmente en la isquemia miocárdica y en la diabetes; ambos estados patológicos presentan elevada morbidez y mortalidad. En la isquemia miocárdica y en la posterior reoxigenación, el aumento de la oxidación de ácidos grasos es perjudicial debido a la demanda adicional de oxígeno y al efecto dañino sobre la membrana que presentan las acilcarnitinas que se forman (Busselen, P., Sercu, D. y Verdonck, F. (1988), F. Mol. Cell. Cardiol., 20: 905-916. Ford, D.A., Han, X., Horner, C.C. y Gross, R.W. (1996), Biochemistry, 35: 7903-7909. Reeves, K.A., Dewar, G.H., Rad-Niknam, M. y Woodward, B. (1995), J. Pharm. Pharmacol., 48: 245-248). A partir de diversos datos experimentales en la actualidad se acepta que la activación del metabolismo de la glucosa y la inhibición simultánea de la oxidación de ácidos grasos tiene efectos favorables desde el punto de vista de la restauración de ambos la función mecánica del miocardio y los parámetros metabólicos (liberación de enzimas, peroxidación lipídica). (Lopaschuk, G.D., Spafford, M.A., Davies, N.J. y Wall, S.R. (1990), Circ. Res., 66: 546-553. Kennedy, J.A., Unger, S.A. y Horowitz, J.D. (1996), Biochem. Pharmacol., 52: 273-280). La influencia sobre la selección anterior entre sustratos que realiza el miocardio, es decir, sobre la selección entre glucosa y ácido graso, también puede conseguirse mediante inhibidores de la CPTI, incrementando de esta manera la utilización de la glucosa y mejorando la energética del miocardio. (Lopaschuk, G.D., Wall, S.R., Olley, P.M. y Davies, N.J. (1988), Circ. Res., 63: 1036-1043. Carregal, M., Varela, A., Dalamon, V., Sacks, S. y Savino, E.A. (1995), Arch. Phys. Biochem., 103: 45-49. Lopaschuk, G.D. y Spafford, M. (1989), Circ. Res., 65: 378-387. Pauly, D.F., Kirk, K.A. y McMillin, J.B. (1991), Circ. Res., 68: 1085-1094).

TABLA 4 Determinación de la inhibición de la CPTI

Sustancias	Test CPTI,
	en %
Ninguna	100
Ejemplo 1	60,1 \pm 2,1
Ejemplo 3	68,8 \pm 3,2

Estos datos demuestran que el enzima que cataliza la reacción limitante de la oxidación de ácidos grasos puede inhibirse mediante las sustancias anteriores en un intervalo de concentraciones sub-milimolares. Estos datos también indican que los compuestos de ensayo influyen sobre la selección de sustrato realizada por el corazón y otros tejidos, y a través de la modificación de la selección de sustrato, también influyen sobre las lesiones postisquémicas de los tejidos.

Papel biológico de los genes sensibles al oxígeno regulados principalmente por factores transcripcionales bHLH

La protección frente a los efectos perjudiciales de la hipoxia requiere una serie de reacciones defensivas organizadas a nivel de células individuales y a nivel de todo el organismo. Durante la regulación de la expresión de genes inducidos por hipoxia, el complejo transcripcional HIF-1/ARNT desempeña un papel central aunque no exclusivo. Los genes sensibles al oxígeno regulados coordinadamente incluyen la eritropoyetina, la cual estimula la producción de glóbulos rojos (Wang, G.L. y colaboradores, PNAS, 92: 5510 (1995)), el VEGF (factor de crecimiento endotelial vascular), el cual estimula la angiogénesis (Goldberg, M.A. y Schneider, T.J., J. Biol. Chem., 269: 4355 (1994)), enzimas glicolíticos tal como GAPDH, LDH (lactato deshidrogenasa) (Rolfs, A. y colaboradores, J. Biol. Chem., 272: 200055 (1977)), así como el transportador de glucosa Glut-1.

La síntesis de proteínas de choque térmico (HSP) es inducida por diversos estreses que afectan a las células. Las HSP ayudan a sobrevivir a las células en situaciones peligrosas y contribuyen a la reparación de cualquier daño (Cardiovascular Res., 578 (1993); Neurosci. Lett., 163: 135-137 (1993)).

Los agentes que pueden facilitar la reacción de alarma y adaptación a la hipoxia, a la hipoxia-reoxigenación, y que son capaces de restaurar la reacción de adaptación ya agotada son potencialmente capaces de reducir los daños a tejidos causados por la hipoxia, hipoxia-reoxigenación, en enfermedades tal como el infarto, arterioesclerosis y diabetes.

Sección experimental Evaluación de HSP-70

Se estudió la actividad de la HSP-70 mediante ensayo con gen señalizador formando un ADN híbrido. A la secuencia promotora de HSP-70 que codifica la proteína de choque térmico se fusionó un gen de una proteína que puede detectarse a través de una actividad enzimática fácilmente mensurable. Se utilizaron procedimientos biotecnológicos. Como gen señalizador se utilizó el gen del enzima luciferasa, la actividad del cual puede ser bien determinada mediante medición de luminiscencia. Si se sustituye el promotor del gen del enzima luciferasa por el promotor del gen HSP-70, el cambio en la actividad del enzima luciferasa, es decir el cambio de frecuencia en la transcripción del gen, se correlaciona con la frecuencia de transcripción del gen HSP-70 que tiene lugar bajo las circunstancias dadas. De esta manera, si una sustancia o proceso influye sobre la expresión del gen HJSP-70, el efecto puede estudiarse mediante la medición de la actividad del enzima luciferasa. En tal sistema experimental se estudió el efecto de las sustancias de ensayo sobre la expresión de HSP-70.

Montaje experimental

Se construyó una molécula de ADN circular de doble hebra, es decir un plásmido que contenía el gen señalizador HSP-70, con el fin de realizar las mediciones. Se fusionó una secuencia de casi 600 pb de longitud del promotor del gen HSP-70 de ratón (dirección 5' desde el sitio de inicio del gen) con la secuencia codificante del gen luciferasa de Photymus pyralis. La secuencia promotora utilizada contenía varias sitios de unión a proteínas que facilitaban la expresión del gen HSP-70. Se preparó el constructo génico heterólogo promotor HSP-gen luciferasa en un vector plásmido pBR seleccionable con neomicina. Dicho plásmido HSP-70-luciferasa se transfectó en células de fibroblasto L929 de ratón. El ensayo se llevó a cabo de la manera siguiente.

Se cultivaron las células L929 que contenían el plásmido HSP-70-luc en medio DMEM (medio Eagle modificado por Dulbecco) suplementado con 5% de FCS (suero de feto bovino). Se sembraron 10^{4} células en los pocillos de una placa Costar de cultivo celular de 24 pocillos en 1 ml de medio de cultivo. Se disolvieron las sustancias de ensayo en PBS (solución salina tamponada con fosfato) a una concentración de 10^{-2} M. Tras la adhesión de las células (3-4 horas después de sembrar en las placas), se añadieron 10 \mul de la solución a los cultivos, y se incubaron las células durante 30 minutos a 37ºC en un incubador termostático de CO_{2}. A continuación se sustituyó el medio de cultivo por medio fresco (sin sustancia de ensayo) y se permitió la regeneración de las células durante 1 hora a 37ºC, lavando después una vez con PBS. Tras retirar el PBS, se añadieron a las células 40 \mul de tampón de lisis 1X, y se mantuvieron las muestras en hielo durante 30 minutos. Después, se transfirieron las muestras a viales Eppendorf y se centrifugaron a 14.000 rpm durante 20 minutos a 4ºC. Se añadieron 5 \mul del sobrenadante a 25 \mul de tampón de ensayo luciferasa y se midió la luminiscencia de las muestras durante 25 segundos en un luminómetro. Se resumen los resultados en
la Tabla 5.

Tampón de lisis 5X

Tris-H_{3}PO_{4} 125 mM, pH 7,8

CDTA 10 mM (ácido trans-1,2-diamino-ciclohexano-N,N,N',N'-tetraacético)

DTT 10 mM

glicerol al 50%

Triton X-100 al 5%

Tampón de ensayo de luciferasa

Tricina 20 mM, pH 7,8

(MgCO_{3})_{4}Mg(OH)_{2}5H_{2}O 1,07 mM

MgSO_{4} 2,67 mM

EDTA 0,10 mM

DTT 3,33 mM

Coenzima A-sal litio 270 \muM

Luciferina 470 \muM

ATP 530 \muM

TABLA 5

Sustancia	Actividad
Control	100
Ejemplo 1	107
Ejemplo 3	207
Ejemplo 4	250
Ejemplo 5	199
Ejemplo 6	302
Ejemplo 13	156
Ejemplo 15	115

Estudio de los genes sensibles a la hipoxia Material y métodos

Se estudió el efecto de los compuestos de fórmula I sobre la expresión génica xenobiótica e inducida por hipoxia (1% O_{2}) en cultivos celulares Hepa y HepG2 a nivel de ARNm y de proteínas. Se observó que los compuestos de fórmula I resultaron en un incremento de factor 10 en la expresión de HSP-70 inducida por metilcolantreno en células Hepa. Además, los compuestos de fórmula I incrementaron la expresión de genes sensibles a la hipoxia, tal como VEGF, GAPDH y LDH en respuesta al tratamiento de hipoxia en células Hepa y HepG2.

Los compuestos de fórmula I incrementaron la expresión de varios genes sensibles a la hipoxia en caso de hipoxia. Esto indica que los compuestos influyen sobre las rutas comunes en la regulación de los genes sensibles al oxígeno. Los compuestos de fórmula I que facilitan la adaptación al estrés causado por hipoxia e hipoxia-reoxigenación son adecuados para la protección frente al efecto perjudicial de la hipoxia y la hipoxia-reoxigenación. Es esperable que los compuestos proporcionan beneficios terapéuticos en condiciones en las que el daño a los tejidos está causado por lo siguiente: perturbación circulatoria, constricción y espasmo de arterias, arterioesclerosis, infarto, embolismo, trombosis, hipotensión, shock, quemadura, congelación. Los compuestos de la invención también pueden ser efectivos bajo condiciones hipóxicas secundarias asociadas con enfermedades degenerativas y metabólicas (enfermedad de Alzheimer, diabetes).

Efecto sobre la actividad del enzima LDH en células HepG2 expuestas a hipoxia

Se cultivaron células HepG2 en medio DMEM suplementado con FCS al 10% en aire que contenía 5% de CO_{2} a 37ºC. Se introdujeron 10^{5} células en pocillos de placas de cultivo Costar de 24 pocillos con 1 ml de medio. Al día siguiente se trataron las células con los compuestos de ensayo a una concentración de 30 \mug/ml, después las células se expusieron a hipoxia (1% de O_{2}, 5% de CO_{2} en gas nitrógeno) durante 24 horas. Una parte de los cultivos de control se trataron con agua, utilizada como disolvente, y otra parte de los cultivos no se expuso a hipoxia. Al final del tratamiento hipóxico se retiró el medio y se lavaron las células dos veces con PBS frío. Se prepararon lisados celulares en Triton X-100 al 0,05% que contenía tampón fosfato (0,05 M) y tras centrifugar (2 minutos a 200.000xg) se determinó la actividad de LDH del sobrenadante a partir del consumo de NADH en presencia de sustrato piruvato sódico.

El tratamiento hipóxico aplicado indujo un incremento de 3 veces el contenido de LDH de las células. En la Tabla 6 se muestra la actividad de LDH de las células tratadas con los compuestos de ensayo y se compara con la actividad del control expuesto a hipoxia.

TABLA 6

Compuesto	Contenido relativo
	en LDH (%)
Control hipóxico	100
Ejemplo 2	118
Ejemplo 4	118
Ejemplo 7	141
Ejemplo 8	116
Ejemplo 11	124
Ejemplo 16	120
Ejemplo 17	118
Ejemplo 26	112

Efecto antiviral

El genoma retroviral consiste en una molécula de ARN de una cadena que se replica a través de un intermediario de ADN de doble cadena. La inserción del ADN de doble cadena en el genoma huésped es un suceso crítico en el ciclo vital del virus. El mecanismo de inserción es similar al mecanismo de la transposición. El enzima transcriptasa inversa genera la copia de ADN a partir del ARN viral. El ADN de doble cadena se sintetiza en el citoplasma de la célula infectada. A continuación el ADN lineal es transportado hasta el interior del núcleo y una o más copias de dicho ADN se integran en el genoma de la célula huésped. Una vez integrado el ADN proviral, éste utiliza los enzimas de las células huésped para producir ARN viral que servirá como ARNm y como genoma después del empaquetamiento dentro de viriones.

Durante el proceso de replicación viral, es esencial que la transcriptasa inversa funcione sin perturbaciones. Por lo tanto, la inhibición de la transcriptasa inversa proporciona un modo eficiente de inhibir la replicación de los retrovirus. Una parte de los fármacos anti-HIV disponibles en la actualidad actúan a través de la inhibición de la transcriptasa inversa. Los tratamientos anti-HIV actuales más eficientes se basan en combinaciones de varios fármacos anti-HIV. Uno o dos componentes de dichas combinaciones son inhibidores de la transcriptasa inversa. Existen dos tipos principales de inhibidores de la transcriptasa inversa. Uno de ellos consiste en análogos de nucleósidos, el representante mejor conocido de este grupo es la azidotimidina, AZT. Estos compuestos inhiben la actividad del enzima mediante su unión al sitio de unión de los nucleótidos. Los análogos no nucleósidos representan el otro tipo de inhibidores de la transcriptasa inversa. Dichos compuestos también se unen al enzima pero no al sitio de unión de los nucleótidos. La unión es específica, relativamente estable y resulta en la deformación del sitio activo del enzima, causando una pérdida significativa en la actividad del enzima.

Montaje experimental

Nuestros resultados experimentales muestran que los nuevos compuestos de la invención tienen actividad inhibitoria de la transcriptasa inversa. Los compuestos pueden clasificarse dentro del grupo de inhibidores de tipo no nucleósido de la transcriptasa inversa. Se llevaron a cabo ensayos con la transcriptasa inversa del virus de la leucemia murina de Moloney, la cual se considera un buen modelo de enzima transcriptasa inversa de HIV. A continuación se describe el montaje experimental utilizado.

El ensayo mide la incorporación de (3H)dTTP en el ADNc a partir del molde poli(dA) y con el cebador oligo(dT)12-18. La reacción se llevó a cabo en un volumen de 20 \mul.

Composición de la mezcla de reacción

2 \mul de tampón 10X

20 \mug/ml de molde-cebador

5 \muM de dTTP

2 \muCi de (3H)dTTP

sustancia de ensayo: disuelta en tampón 1X

Se inició la reacción mediante adición de 5U de transcriptasa inversa.

Composición del tampón 10X de la transcriptasa inversa

Tris-HCl 500 mM (pH 8,3)

MgCl_{2} 80 mM

KCl 300 mM

DTT 100 mM

Se incubó la mezcla de reacción durante 40 minutos a 37ºC. A continuación, se filtraron 15 \mul de la mezcla de reacción a través de discos de filtro Whatman DE81 y los filtros se lavaron secuencialmente con tampón hidrogenofosfato disódico al 5%, con agua, y con etanol al 96% (v/v). Tras secar, se introdujeron los filtros en cóctel de centelleo (OptiPhase, HiSafe, Wallac) y se midió la radioactividad en un contador de centelleo Packard Tri-Carb 2200.

Resultados

En los experimentos se utilizaron dos compuestos con actividad inhibitoria conocida como control positivo. El AZT es un análogo nucleósido, mientras que el compuesto Nevirapin es un inhibidor de tipo no nucleósido. La nevirapina se une al denominado sitio de unión benzodiacepina del enzima. Las concentraciones aplicadas de los compuestos de ensayo estaban comprendidas en el intervalo de concentraciones 0,2 a 2 \mug/ml.

En la Tabla 7 se resumen los resultados.

Los resultados experimentales proporcionaron las conclusiones siguientes:

Los compuestos de acuerdo con la invención inhiben la transcriptasa inversa del virus de la leucemia murina de Moloney. A partir de la actividad inhibitoria dosis-dependiente de la transcriptasa inversa, puede afirmarse que el efecto inhibitorio de los compuestos de los Ejemplos 3,4 y 5 es más elevado que el del Nevirapin, pero dicho efecto es menor que el efecto del análogo de nucleósido AZT. Debido a que el enzima utilizado se considera un modelo real de la transcriptasa inversa de HIV, los resultados observados pueden considerarse efectos anti-HIV.

TABLA 7

Sustancias	Concentración	Inhibición del
	(\mug/ml)	enzima (%)
Nevirapin	0,2	21
	2	26
AZT	0,2	84
	8	93
Ejemplo 1	0,2	6
	0,5	29
	1	44
Ejemplo 3	0,5	7
	1,0	45
	2	70

TABLA 7 (continuación)

Sustancias	Concentración	Inhibición del
	(\mug/ml)	enzima (%)
Ejemplo 5	1,0	52
	2,0	57

Datos recientes demuestran que la PARP es necesaria para la integración del genoma viral en la célula huésped y la inhibición de la PARP bloquea la integración del genoma viral en el ADN huésped. Debido a esto, los inhibidores de PARP no tóxicos pueden inhibir los retrovirus virulentos y detener la propagación de retrovirus tal como el HIV y el virus de la hepatitis de tipo no B.

Como se ha indicado anteriormente, se requieren sustancias activas que no sean tóxicas y que sean adecuadas para la inhibición de la PARP. Como puede observarse en la Tabla 1, los compuestos de la invención son fuertes inhibidores de la PARP.

A partir de los resultados experimentales anteriores puede establecerse que los compuestos de la invención, debido a su efecto inhibitorio de la transcriptasa inversa y de la PARP, pueden utilizarse también como sustancias antivirales activas con varios puntos de ataque.

A partir de los resultados anteriormente indicados, los nuevos derivados insaturados de ácido hidroxímico pueden utilizarse como ingredientes activos de las composiciones farmacéuticas. De esta manera la invención incluye una composición farmacéutica que comprende un derivado insaturado de ácido hidroxímico de fórmula I como ingrediente activo, y uno o más excipientes convencionales utilizados en las composiciones farmacéuticas.

La composición farmacéutica de la invención contiene 0,1 a 95% en peso, preferentemente 1 a 50% en peso, convenientemente 5 a 30% en peso del ingrediente activo, y es adecuada para el tratamiento de enfermedades basadas en estados de deficiencia de oxígeno y energía e inhibición de la PARP, especialmente enfermedades autoinmunológicas y neurodegenerativas y/o virales.

La composición farmacéutica de la invención es adecuada para su administración peroral, parenteral o rectal, o para el tratamiento local y puede ser sólida o líquida.

Las composiciones farmacéuticas sólidas adecuadas para su administración peroral pueden ser polvos, cápsulas, tabletas, tabletas recubiertas, microcápsulas, etc., y pueden comprender como excipiente, agentes ligantes, tal como gelatina, sorbitol, polivinilpirrolidona, etc.; agentes de relleno, tal como lactosa, glucosa, almidón, fosfato de calcio, etc.; sustancias auxiliares para formar tabletas, tal como estearato de magnesio, talco, polietilenglicol, sílice, etc.; agentes humectantes, tal como laurilsulfato sódico, etc.

Las composiciones farmacéuticas líquidas adecuadas para su administración peroral pueden ser soluciones, suspensiones o emulsiones y pueden comprender como excipiente, por ejemplo, agentes de suspensión, tal como gelatina, carboximetilcelulosa, etc.; emulsificantes, tal como monooleato de sorbitán, etc.; disolventes, tal como agua, aceites, glicerol, propilenglicol, etanol, etc.; conservantes, tal como metil o propil p-hidroxibenzoato, etc.

Las composiciones farmacéuticas adecuadas para su administración parenteral en general consisten en soluciones estériles del ingrediente activo.

Las formas de dosificación indicadas anteriormente, así como otras formas de dosificación, se conocen per se, por ejemplo, de manuales como Remington's Pharmaceutical Sciences, 18º edición, Mack Publishing Co., Easton, USA (1990).

Las composiciones farmacéuticas de la invención contienen, en general, una dosis unitaria. Una dosis diaria típica para pacientes adultos se encuentra comprendida entre 0,1 y 1.000-mg del compuesto de fórmula I, o de una sal de adición de ácido farmacéuticamente adecuada del mismo, la dosis del cual puede administrarse en una porción o en más de una. La dosis administrada depende de muchos factores y la prescribe el médico.

La composición farmacéutica de la invención se prepara mediante la mezcla de un compuesto de fórmula I, o de una sal de adición de ácido farmacéuticamente adecuada del mismo, con uno o más excipientes, y convirtiendo la mezcla obtenida en una composición farmacéutica de una manera conocida per se. Se conocen métodos útiles en la literatura, por ejemplo, en el manual Remington's Pharmaceutical Sciences.

Convenientemente, la composición farmacéutica de la invención contiene, como ingrediente activo, un derivado insaturado de ácido hidroxímico de fórmula I, además de un isómero geométrico y/u óptico, y/o sal de adición de ácido farmacéuticamente adecuada del mismo, en el que, en la fórmula I,

X representa un grupo amino,

Y representa un grupo hidroxi,

R_{3} significa un grupo cicloalquilo C_{3-7} o un grupo de fórmula -NR^{4}R^{5}, en la que

R_{4} y R_{5} representan, independientemente, un grupo alcanoilo C_{1-5}, aunque uno de ellos también puede ser un átomo de hidrógeno, o

R_{4} y R_{5} forman conjuntamente con el átomo adyacente de hidrógeno un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que se encuentra condensado con un anillo de benceno y que también puede contener un átomo de oxígeno, en el que el grupo heterocíclico y/o anillo de benceno puede sustituirse con uno o dos sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en un grupo alquilo C_{1-2}, un grupo alcoxi C_{1-2}, o un átomo de halógeno, y R_{1} representa un grupo alquilo C_{14-20}, un grupo fenilo opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en un grupo alquilo C_{1-2}, un grupo alcoxi C_{1-2}, un átomo de halógeno, un grupo amino, un grupo alquilamino C_{1-4}, un grupo dialquilamino C_{1-4}, o un grupo dialcanoilamino C_{1-4}, además R_{1} representa un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que contiene uno o dos átomos de nitrógeno o un átomo de azufre como heteroátomo, y

R_{2} representa un átomo de hidrógeno, o

X significa un átomo de halógeno o un grupo hidroxi,

R_{3} significa un grupo cicloalquilo C_{3-7} o un grupo de fórmula -NR^{4}R^{5} en la que

R_{4} y R_{5} representan, independientemente, un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C_{1-5}, un grupo alcanoilo C_{1-5}, o

R_{4} y R_{5} forman conjuntamente con el átomo adyacente de nitrógeno, un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que también puede contener un átomo de oxígeno y puede condensarse con un anillo de benceno, en el que el grupo heterocíclico y/o el anillo de benceno puede sustituirse con uno o dos sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en un grupo alquilo C_{1-2}, un grupo alcoxi C_{1-2}, o un átomo de halógeno,

R_{1} representa un grupo alquilo C_{1-20}, un grupo fenilo opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en un grupo alquilo C_{1-2}, un grupo alcoxi C_{1-2}, un átomo de halógeno, un grupo amino, un grupo alquilamino C_{1-4}, un grupo dialquilamino C_{1-4} o un grupo dialcanoilamino C_{1-4}, además R_{1} representa un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que contiene uno o dos átomos de nitrógeno o un átomo de azufre como el heteroátomo, y

R_{2} representa un átomo de hidrógeno, o

R_{1} forma conjuntamente con R_{2}, un grupo cicloalquilo C_{5-7} opcionalmente condensado con un anillo de benceno.

Una composición farmacéutica preferida de la invención contiene como ingrediente activo un derivado insaturado de ácido hidroxímico de fórmula I, además de un isómero geométrico y/u óptico, y/o una sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable, en el que, en la fórmula I,

R_{1} representa un grupo fenilo opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en un grupo metilo, un grupo metoxi, o un átomo de cloro, además, R_{1} representa un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que contiene uno o dos átomos de nitrógeno como el heteroátomo,

R_{2} representa un átomo de hidrógeno,

X significa un grupo amino,

Y es un átomo de hidrógeno o un grupo hidroxi,

R_{3} significa un grupo de fórmula -NR^{4}R^{5}, en la que

R_{4} y R_{5} forman conjuntamente con el átomo adyacente de nitrógeno un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos.

Una composición farmacéutica especialmente preferida de la invención contiene como ingrediente activo un derivado insaturado de ácido hidroxímico de fórmula I, además de un isómero geométrico y/u óptico, y/o una sal de adición de ácido farmacéuticamente adecuada del mismo, en el que, en la fórmula I,

R_{1} representa un grupo piridilo o un grupo fenilo opcionalmente sustituido por 1 a 3 grupos metoxi,

R_{2} representa un átomo de hidrógeno,

X significa un grupo amino,

Y es un átomo de hidrógeno o un grupo hidroxi,

R_{3} significa un grupo pirrolidino, piperidino o morfolino.

En un método de tratamiento un paciente que sufre de especialmente un estado ligado a la deficiencia energética de la célula, complicaciones diabéticas, un estado de deficiencia de oxígeno del corazón y cerebro, una enfermedad neurodegenerativa, una enfermedad autoinmunológica o viral, se trata con una dosis no tóxica de un derivado insaturado de ácido hidroxímico de fórmula I, o con un isómero geométrico y/o isómero óptico, o con una sal de adición de ácido farmacéuticamente adecuada del mismo.

Además, la invención incluye la utilización de un derivado insaturado de ácido hidroxímico de fórmula I, o de un isómero geométrico y/o isómero óptico, o de una sal de adición de ácido farmacéuticamente adecuada del mismo para la preparación de una composición farmacéutica adecuada para el tratamiento de estados ligados a la deficiencia energética de la célula causada por inhibición de la PARP, complicaciones diabéticas, estados de deficiencia de oxígeno del corazón y del cerebro, enfermedades neurodegenerativas, enfermedades autoinmunológicas y/o virales.

La invención se aclara adicionalmente a través de los Ejemplos siguientes.

Ejemplo 1 Dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-piperidino-propil)-cinámico

Se disolvieron 3,24 g (0,02 moles) de amidoxima de ácido cinámico en la solución de 2,5 g de hidróxido potásico en 12,0 ml de agua. Tras la disolución, se añadieron 4,35 g (0,022 moles) de hidrocloruro de 1-cloro-3-piperidino-propano en 8 ml de metanol. Se agitó la mezcla de reacción durante 48 horas a temperatura ambiente. Tras la adición de 10 ml de solución al 10% de hidróxido sódico, se extrajo la mezcla con 2x70 ml de acetato de etilo. Se combinaron las fases orgánicas, se secaron sobre sulfato sódico anhidro, se decoloraron con carbono y el disolvente se evaporó al vacío. Se disolvió el residuo en 5 ml de isopropanol, y la solución se acidificó bajo enfriamiento con agua helada hasta pH 3,5 mediante adición de isopropanol saturado con ácido hidroclórico. Se filtraron los cristales blancos precipitados, se lavaron con isopropanol frío y se secaron al vacío a 40ºC.

Se obtuvieron 1,7 g de dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-piperidino-propil)-cinámico. P.f.: 185ºC.

^{1}H-NMR (CDCl_{3}, 200 MHz) \delta = 1,4 (2H, m, piperidina 4-CH_{2}), 1,6 (4H, m, piperidina 3 y 5-CH_{2}), 1,93 (2H, O-CH_{2}-CH_{2}), 1,42 (4H, m, piperidina 2 -es 6-CH_{2}), 2,42 (2H, t, CH_{2}-N), 4,1 (2H, t, -O-CH_{2}-), 4,62 (2H, br, NH_{2}) 6,5 (1H, Ar-CH=CH), 6,8 (1H, d, Ar-CH=CH), 7,28-7,42 (5H, m, ArH).

Entre los materiales de partida, hidrocloruro de 1-cloro-3-piperidino-propano está disponible comercialmente. La amidoxima de ácido cinámico se sintetizó a partir de cinamonitrilo con hidroxilamina mediante un método en la literatura (Chem. Reviews, 62, 155 (1962)).

Ejemplo 2 Hidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-piperidino-propil)-3,4-dimetoxicinámico

Mediante la reacción de 4,44 g (0,02 moles) de amidoxima de ácido 3,4-dimetoxicinámico con 4,35 g (0,022 moles) de hidrocloruro de 1-cloro-3-piperidino-propano, se obtuvieron 2,62 g de hidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-piperidino-propil)-3,4-dimetoxicinámico siguiendo el método descrito en el Ejemplo 1.

P.f.: 170-172ºC.

^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}) \delta = 1,3-2,0 (6H, m, piperidina 3,4,5-CH_{2}), 2,12 (2H, m, O-CH_{2}-CH_{2}-), 2,9 (2H, m, piperidin-CH_{2}), 3,17 (2H, m, -CH_{2}-N), 3,4 (2H, m, piperidin-CH_{2}), 3,79 (3H, s, OCH_{3}), 3,80 (3H, s, OCH_{3}), 4,1 (2H, t, O-CH_{2}-), 6,45 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,0 (1H, d, Ar-5H), 7,07 (1H, d, Ar-4H), 7,15 (1H, d, Ar-2H), 7,8 (1H, d, Ar-CH=CH-).

Se preparó amidoxima de ácido 3,4-dimetoxi-cinámico como material de partida mediante la reacción de 3,4-dimetoxicinamonitrilo con hidroxilamina bajo las condiciones habituales en solución de etanol-agua. Se obtuvo 3,4-dimetoxicinamonitrilo a partir de 3,4-dimetoxibenzaldehído con ácido cianoacético en solución de piridina mediante un método en la literatura (J. Am. Chem. Soc., 65, 22 (1943)).

Ejemplo 3 Hidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-(piperidino-propil)-3-(3-piridil)acrílico

Mediante la reacción de 3,26 g (0,02 moles) de amidoxima de ácido 3-(3-piridil)acrílico con 4,35 g (0,022 moles) de hidrocloruro de 1-cloro-3-piperidino-propano, se obtuvieron 2,03 g de hidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-piperidino-propil)-3-(3-piridil)acrílico mediante el método descrito en el Ejemplo 1.

P.f.: 125-127ºC.

^{1}H-NMR (CDCl_{3}) \delta = 1,4 (2H, m, piperidin 4-CH_{2}), 1,6 (4H, m, piperidin 3 y 5-CH_{2}), 1,95 (2H, m, O-CH_{2}-CH_{2}-), 2,42 (4H, m, piperidin 2 -es 6-CH_{2}), 2,42 (2H, t, =N-CH_{2}-), 4,10 (2H, t, O-CH_{2}-CH_{2}-), 4,7 (2H, s, NH_{2}), 6,52 (1H, d, Ar-CH=CH-), 6,8 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,28 (1H, m, Ar-5H), 7,78 (1H, m, Ar-4H), 8,5 (1H, dd, Ar-6H), 8,62 (1H, d, Ar-2H).

Se preparó amidoxima de ácido 3-(3-piridil)acrílico mediante la reacción de 3-(3-piridil)-acrilonitrilo con hidroxilamina bajo las condiciones habituales en solución de etanol-agua. Se obtuvo el 3-(3-piridil)acrilonitrilo a partir de aldehído nicotínico con ácido cianoacético en solución de piridina mediante un método en la literatura (J. Am. Chem. Soc., 65, 22 (1943)).

Ejemplo 4 Dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-piperidino-2-hidroxipropil)cinámico

Se disolvieron 3,56 g (0,022 moles) de amidoxima de ácido cinámico en la solución de 3,7 g de hidróxido potásico en 4 ml de agua. En esta solución se introdujo bajo agitación a 10ºC la solución de 5,6 g (0,026 moles) de hidrocloruro de 1-cloro-3-piperidino-2-propanol disueltos en 4 ml de metanol. Se agitó la mezcla de reacción durante 48 horas bajo atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente. Tras la adición de 10 ml de solución al 10% de hidróxido sódico, se extrajo la mezcla de reacción con 2x70 ml de acetato de metilo. Se secaron las fases orgánicas combinadas sobre sulfato sódico anhidro, se decoloraron con carbono y se evaporó el disolvente. El residuo se disolvió en 5 ml de isopropanol bajo enfriamiento y agitación, se acidificó hasta pH 2,5 mediante la adición de isopropanol saturado con ácido hidroclórico. Se filtraron los cristales precipitados, se lavaron con isopropanol frío y se secaron a 40ºC al vacío. Se obtuvieron 2,4 g de dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-piperidino-2-hidroxipropil)cinámico.

P.f.: 160-162ºC.

^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}) \delta = 1,4-1,9 (6H, br, piperidin-CH_{2}), 3,0 (2H, br, piperidin-CH_{2}), 3,16 (1H, dd, propil-CH), 3,24 (1H, d, propil-CH), 3,4 (2H, br, piperidin-CH_{2}), 3,84 (1H, dd, propil-CH), 4,16 (1H, dd, propil-CH), 4,5 (1H, br, propil-CH), 6,2 (1H, br, OH), 7,1 (1H, d, Ar-CH=CH- ), 7,48 (3H, m, Ar-H), 7,72 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,76 (2H, m, ArH).

Ejemplo 5 Dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-piperidino-2-hidroxipropil)-3-(3-piridil)acrílico

a. Mediante la reacción de 3,58 g (0,022 moles) de amidoxima de ácido 3-(3-piridil)acrílico con 5,6 g (0,026 moles) de hidrocloruro de 1-cloro-3-piperidino-2-propanol, se obtuvieron 3,1 g de dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-piperidino-2-hidroxipropil)-3-(3-piridil)acrílico siguiendo el método descrito en el Ejemplo 4.

P.f.: 165-167ºC.

^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}) \delta = 1,4-2,0 (6H, m, piperidin-CH_{2}), 2,9-3,6 (6H, m, 2 piperidin-CH_{2} es propil-CH_{2}), 3,95 (2H, m, propil-CH_{2}), 4,36 (1H, m, propil-CH), 6,9 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,60 (1H, d, Ar-CH=CH-), 8,02 (1H, dd, ArH), 8,67 (1H, dt, ArH), 8,82 (1H, d, ArH), 9,02 (1H, d, ArH).

b. A la solución de 1,88 g (0,02 moles) de epiclorohidrina en 3 ml de metanol se le introdujeron 1,74 g (0,02 moles) de piperidina bajo agitación y enfriamiento, manteniendo la temperatura de la mezcla de reacción por debajo de 20ºC. Se continuó con la agitación durante 2 horas a temperatura ambiente, se añadió una solución de 2,8 g (0,017 moles) de amidoxima de ácido 3-(3-piridil)acrílico en hidróxido potásico (preparado a partir de 1,25 g de hidróxido potásico y 4 ml de agua) en 15 minutos bajo atmósfera de nitrógeno a 40ºC. Tras agitar a 40ºC bajo atmósfera de nitrógeno, se extrajo la mezcla de reacción con acetato de etilo y se evaporó la solución. Se purificó la base cruda mediante cromatografía de columna (Kieselgel, con acetato de etilo-metanol 5:1). Se obtuvieron 0,9 g de base purificada que se disolvieron en 5 ml de isopropanol y la solución se acidificó con solución isopropanol-ácido hidroclórico hasta pH 2. Precipitaron 0,88 g de dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-piperidino-2-hidroxipropil)-3-(3-piridil)acrílico, que es el mismo producto descrito en el Ejemplo 5.a. P.f.: 165-167ºC.

Ejemplo 6 Amidoxima de ácido O-(3-t-butilamino-2-hidroxipropil)cinámico

Mediante la reacción de 3,56 g (0,022 moles) de amidoxima de ácido cinámico con 5,25 g (0,026 moles) de hidrocloruro de 1-cloro-3-t-butilamino-2-propanol, se obtuvieron 0,76 g de amidoxima de ácido O-(3-t-butilamino-2-hidroxipropil)cinámico como producto aceitoso siguiendo el método descrito en el Ejemplo 4 y omitiendo la formación de sal.

^{1}H-NMR (CDCl_{3}+DMSO) \delta = 1,1 (9H, s, t-butil-CH_{3}), 2,71 (2H, d, -CH_{2}-NH-t-Bu), 3,98 (1H, dd, O-CH_{2}-), 4,08 (1H, dd, O-CH_{2}), 4,10 (1H, m, CH-OH), 6,9 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,15 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,2-7,6 (5H, m, ArH), 10,7 (1H, br, HCl).

Ejemplo 7 Amidoxima de ácido O-(3-morfolino-2-hidroxipropil)cinámico

Mediante la reacción de 3,56 g (0,002 moles) de ácido cinámico-amidoxima con 5,62 g (0,026 moles) de hidrocloruro de 1-cloro-3-morfolino-2-propanol, se obtuvieron 3,24 g de dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-morfolino-2- hidroxipropil)cinámico siguiendo el método descrito en el Ejemplo 4.

P.f.: 176-180ºC.

^{1}H-NMR (DMSO d_{6}) \delta = 3,15-3,20 (3H, m, CH_{2}), 3,37-3,43 (3H, m, CH_{2}), 3,82-4,02 (6H, m, CH_{2}), 4,40-4,46 (1H, m, -CH-OH), 6,60 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,67 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,40-7,47 (3H, m, ArH), 7,53-7,57 (2H, m, Ar-H).

Ejemplo 8 Dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-t-butilamino-2-hidroxipropil)-3,4- dimetoxicinámico

Mediante la reacción de 4,88 g (0,022 moles) de amidoxima de ácido 3,4-dimetoxicinámico con 5,25 g (0,026 moles) de hidrocloruro de 1-cloro-3-t-butilamino-2-propanol, se obtuvieron 1,5 g de dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-t-butilamino-2-hidroxipropil)cinámico siguiendo el método descrito en el Ejemplo 4.

P.f.: 204-205ºC.

^{1}H-NMR (CDCl_{3}+CH_{3}OD) \delta = 1,45 (9H, s, CH_{3}), 3,12-3,26 (2H, m, CH_{2}-NH), 3,90 (3H, s, OCH_{3}), 3,95 (3H, s, OCH_{3}), 4,24-4,30 (2H, m, O-CH_{2}), 6,9 (1H, d, Ar-CH=CH-), 6,9 (1H, s, ArH), 7,24-7,28 (2H, m, Ar-H), 7,6 (1H, d, Ar-CH=CH-).

Ejemplo 9 Hidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-morfolino-2-hidroxipropil)-3,4-dimetoxicinámico

Mediante la reacción de 4,88 g (0,022 moles) de amidoxima de ácido 3,4-dimetoxicinámico con 5,62 g (0,026 moles) de hidrocloruro de 1-cloro-morfolino-2-propanol, se obtuvieron 2,1 g de hidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-morfolino-2-hidroxipropil)-3,4-dimetoxicinámico siguiendo el método descrito en el Ejemplo 4.

P.f.: 139-142ºC.

^{1}H-NMR (DMSO) \delta = 3,2-3,35 (4H, m, 2CH_{2}), 3,65-4,15 (9H, m, 4CH_{2}, CH-OH), 3,76 (3H, s, OCH_{3}), 3,80 (3H, s, OCH_{3}), 6,3 (1H, d, Ar-CH=CH), 6,95-7,10 (3H, m, ArH), 7,12 (1H, d, Ar-CH=CH-).

Ejemplo 10 Hidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-morfolino-2-hidroxipropil)3-(3-piridil)acrílico

Mediante la reacción de 3,58 g (0,022 moles) de amidoxima de ácido 3-(3-piridil)acrílico con 5,62 g (0,026 moles) de hidrocloruro de hidrocloruro de 1-cloro-3-morfolino-2-propanol, se obtuvieron 1,85 g de hidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-morfolino-2-hidroxipropil)-3-(3-piridil)acrílico siguiendo el método descrito en el Ejemplo 4.

P.f.: 114-117ºC.

^{1}H-NMR (DMSO-CDCl_{3}) \delta = 3,17-3,25 (4H, m, 2CH_{2}), 3,92-4,08 (8H, m, 4CH_{2}), 4,40-4,50 (1H, m, CH-OH), 6,82 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,58 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,90 (1H, dd, 5-ArH), 8,51-8,55 (1H, m, 4-ArH), 8,78 (1H, dd, 6-ArH), 8,97 (1H, d, 2-ArH).

Ejemplo 11 Dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-[3-(1,2,3,4-tetrahidro-2-isoquinolil)-2-hidroxipropil]cinámico

Mediante la reacción de 3,56 g (0,022 moles) de amidoxima de ácido cinámico con 6,81 g (0,026 moles) de hidrocloruro de 1-cloro-3-(1,2,3,4-tetrahidro-2-isoquinolil)-2-propanol, se obtuvieron 1,77 g de dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-(1,2,3,4-tetrahidro-2-isoquinolil)-2-hidroxipropil)cinámico siguiendo el método descrito en el Ejemplo 4.

P.f.: 204-206ºC.

^{1}H-NMR (CDCl_{3}+MeOD) \delta = 3,4-3,6 (4H, m, 2CH_{2}), 4,2-4,7 (7H, m, 3CH_{2}, CH-OH), 6,62 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,82 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,19 (1H, s, isoquinolin-ArH), 7,25 (1H, s, isoquinolin-ArH), 7,29-7,32 (2H, m, isoquinolin-ArH), 7,4-7,65 (5H, m, 5-fenil-H).

Ejemplo 12 Dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-[3-(1,2,3,4-tetrahidro-2-isoquinolil)-2-hidroxipropil]-3,4-dimetoxi-cinámico

Mediante la reacción de 4,88 g (0,022 moles) de amidoxima de ácido 3,4-dimetoxicinámico con 6,81 g (0,026 moles) de hidrocloruro de hidrocloruro de 1-cloro-3-(1,2,3,4-tetrahidro-2-isoquinolil)-2-propanol, se obtuvieron 3,62 g de dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-[3-(1,2,3,4-tetrahidro-2-isoquinolil)-2-hidroxipropil]-3,4-dimetoxi-cinámico siguiendo el método descrito en el Ejemplo 4.

P.f.: 193-195ºC.

NMR (CDCl_{3}+MeOD) \delta = 3,4-3,6 (4H, m, 2CH_{2}), 3,9 (6H, s, 2-OCH_{3}), 4,2-4,3 (7H, m, 3CH_{2}, CH-OH), 6,48 (1H, d, Ar-CH=CH-), 6,94 (1H, d, 5-ArH), 7,18 (1H, d, 6-ArH), 7,74 (1H, d, Ar-CH=CH), 7,15-7,35 (4H, m, isoquinolin-ArH).

Ejemplo 13 Dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-(1,2,3,4-tetrahidro-2-isoquinolil)-2-hidroxipropil)-3-(3-piridil)acrílico

Mediante la reacción de 3,58 g (0,022 moles) de amidoxima de ácido 3-(3-piridil)acrílico con 6,81 g de hidrocloruro de 1-cloro-3-(1,2,3,4-tetrahidro-2-isoquinolil)-2-propanol, se obtuvieron 1,5 g de dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-[3-(1,2,3,4-tetrahidro-2-isoquinolil)-2-hidroxipropil]-3-(3-piridil)acrílico siguiendo el método descrito en el Ejemplo 4.

P.f.: 163-165ºC.

^{1}H-NMR (DMSO-d6) \delta =3,0-5,0 (6H, m, isoquinolin 3CH_{2}), 4,04 (1H, dd, propil CH_{2}-N=), 4,07 (1H, dd, propil CH_{2}-N=), 4,40 (2H, dd, -O-CH_{2}-), 4,72 (1H, m, CH-OH), 7,6 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,98 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,1-7,9 (4H, m, ArH), 8,70-9,60 (4H, m, ArH).

Ejemplo 14 Dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-t-butilamino-2-hidroxipropil)-3-(3-piridil)acrílico

Mediante la reacción de 3,58 g (0,022 moles) de amidoxima de ácido 3-(3-piridil)acrílico con 5,25 g (0,026 moles) de hidrocloruro de 1-cloro-3-t-butilamino-2-propanol, se obtuvieron 2,17 g de dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-t-butilamino-2-hidroxipropil)-3-(3-piridil)acrílico siguiendo el método descrito en el Ejemplo 4.

P.f.: 164-166ºC.

^{1}H-NMR (CDCl_{3}+MeOH) \delta = 1,44 (9H, s, 3CH_{3}), 3,05 (1H, dd, -HN-CH_{2}-), 3,23 (1H, dd, -NH-CH_{2}-), 4,23 (1H, dd, -O-CH_{2}), 4,26 (1H, dd, OCH_{2}), 4,42 (1H, m, -CH-OH), 7,18 (1H, d, Ar-CH=CH-), 8,04 (1H, d, Ar-CH=CH-), 8,13 (1H, t, Ar-6H), 8,82 (1H, d, Ar-5H), 8,98 (1H, d, Ar-4H), 9,33 (1H, s, Ar-2H).

Ejemplo 15 Dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-pirrolidino-2-hidroxipropil)cinámico

Mediante la reacción de 3,56 g (0,022 moles) de amidoxima de ácido cinámico con 5,2 g (0,026 moles) de hidrocloruro de 1-cloro-3-pirrolidino-2-propanol, se obtuvieron 0,80 g de dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-3-(pirrolidino-2-hidroxipropil)cinámico siguiendo el método descrito en el Ejemplo 4.

P.f.: 171-175ºC.

^{1}H-NMR (CDCl_{3}+DMSO) \delta = 2,05 (4H, m, pirrolidin 3,4-CH_{2}), 3,15-3,6 (4H, m, pirrolidin 2,5-CH_{2}), 3,7 (2H, m, -CH_{2}-N=), 4,11 (2H, m, O-CH_{2}-), 4,46 (1H, m, CH-OH), 6,67 (1H, d, Ar-CH=CH-), 8,04 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,4-7,6 (5H, m, ArH).

Ejemplo 16 Dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-pirrolidino-2-hidroxipropil)-3,4-dimetoxicinámico

Mediante la reacción de 4,88 g (0,022 moles) de amidoxima de ácido 3,4-dimetoxicinámico con 5,2 g (0,026 moles) de hidrocloruro de 1-cloro-3-pirrolidino-2-propanol, se obtuvieron 3,89 g de dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-pirrolidino-2-hidroxipropil)-3,4-dimetoxicinámico siguiendo el método descrito en el Ejemplo 4.

P.f.: 186-188ºC.

^{1}H-NMR (DMSO) \delta = 1,95 (4H, m, pirrolidino 3,4-CH_{2}), 3,0-3,25 (4H, m, pirrolidin 2,5-CH_{2}), 3,40-3,90 (4H, m, OCH_{2}- es N-CH_{2}), 3,8 (6H, s, 2-OCH_{3}), 4,3 (1H, m, CH-OH),6,65 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,70 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,0-7,17 (3H, m, ArH).

Ejemplo 17 Hidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-pirrolidino-2-hidroxipropil)-3-(3-piridil)acrílico

Mediante la reacción de 3,58 g (0,022 moles) de hidrocloruro de amidoxima de ácido 3-(3-piridil)acrílico con 5,2 g (0,026 moles) de hidrocloruro de 1-cloro-3-pirrolidino-2-propanol, se obtuvieron 2,65 g de hidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-pirrolidino-2-hidroxipropil)-3-(3-piridil)acrílico siguiendo el método descrito en el Ejemplo 4.

P.f.: 125-127ºC.

^{1}H-NMR (DMSO+CDCl_{3}) \delta = 2,07 (4H, m, pirrolidino 3 y 4-CH_{2}), 3,1-3,25 (4H, m, pirrolidino 2 y 5-CH_{2}), 3,70-4,20 (4H, m, OCH_{2}, N-CH_{2}), 4,4 (1H, m, CH-OH), 7,06 (1H, d, Ar-CH=CH-), 8,0 (1H, d, Ar-CH=CH-), 8,05 (1H, t, Ar-5H), 8,68 (1H, d, Ar-4H), 8,88 (1H, d, Ar-6H), 9,07 (1H, s, Ar-2H).

Ejemplo 18 Amidoxima de ácido O-(3-piperidino-2-hidroxipropil)-3,4-dimetoxicinámico

A partir de 10,5 g (0,047 moles) de amidoxima de ácido 3,4-dimetoxicinámico, se obtuvieron 5,4 g de amidoxima de ácido O-(3-piperidino-2-hidroxipropil)-3,4-dimetoxicinámico siguiendo el método descrito en el Ejemplo 5.b y omitiendo la formación de sal. Se precipitó el dihidrocloruro del producto a partir de la solución en isopropanol mediante la adición de ácido hidroclórico disuelto en isopropanol.

P.f.: 190ºC.

^{1}H-NMR (CDCl_{3}+DMSO-d_{6}) \delta = 1,7-2,1 (6H, m, piperidino 3,4,5-CH_{2}), 3,0-3,7 (6H, m, 10),3,9 (6H, s, OCH_{3}), 4,1 (2H, d, -O-CH_{2}-), 4,56 (1H, m, O-CH<), 6,58 (1H, d, Ar-CH=CH-), 6,87 (1H, m, ArH), 7,12 (1H, m, ArH), 7,16 (1H, m, ArH), 7,85 (1H, d, Ar-CH=CH-), + 8,9 (2H, br, NH_{2}), 10,2 (1H, br, NH).

Ejemplo 19 Acetamidoxima de O-(3-piperidino-2-hidroxipropil)ciclohexilideno

Mediante la reacción de 3,39 g (0,022 moles) de acetamidoxima de ciclohexilideno con 5,6 g (0,026 moles) de hidrocloruro de 1-cloro-3-piperidino-2-propanol, se obtuvieron 3 g de producto crudo aceitoso siguiendo el método descrito en el Ejemplo 4 y omitiendo la formación de sal. Se purificó la base cruda mediante cromatografía de columna (Kieselgel, con cloroformo-metanol 9:1). Se obtuvieron 1,6 g de acetamidoxima de O-(3-piperidino-2-hidroxipropil)ciclohexilideno en forma de aceite incoloro.

^{1}H-NMR (CDCl_{3}) \delta = 1,45-1,72 (12H, m, 5 ciclohexano-CH_{2} y piperidino-CH_{2}), 2,0-2,06 (2H, m, N-CH_{2}), 2,5-2,6 (4H, m, piperidino-CH_{2}), 2,65-2,75 (4H, m, piperidino-CH_{2}), 4,10-4,17 (2H, m, OCH_{2}), 4,6 (1H, m, CH-OH), 7,2 (1H, m, =CH-).

Se preparó acetamidoxima de ciclohexilideno, utilizada como material de partida, a partir de acetonitrilo de ciclohexilideno con hidroxilamina bajo las condiciones habituales en solución etanol-agua [Chem. Reviews, 62, 155 (1962)]. El acetonitrilo de ciclohexilideno se obtuvo a partir de ácido cianoacético mediante un método en la literatura [J. Am. Chem. Soc., 65, 22 (1943)].

Ejemplo 20 Cloruro de N-(3-morfolino-2-hidroxi-propoxi)-3-fenil-acrilimidoilo

Se disolvieron 3,78 g (0,01 moles) de dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-morfolino-2-hidroxipropil)cinámico (producto del Ejemplo 7) en 4 ml de ácido hidroclórico concentrado a 5ºC, tras la adición de 5 ml de dioxano la mezcla de reacción se enfrió hasta 0ºC. Bajo agitación, se introdujo una solución de 1,38 g (0,02 moles) de nitrito sódico en 6 ml de agua en 1,5 horas. Se continuó la agitación durante 4 horas a temperatura ambiente, se ajustó el valor de pH de la mezcla a 11 mediante la adición de solución al 10% de hidróxido sódico. Tras la extracción con 2x50 ml de acetato de etilo, las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico anhidro, se decoloraron con carbono y se evaporaron.

Se obtuvieron 1,13 g de cloruro de N-(3-morfolino-2-hidroxi-propoxi)-3-fenil-acrilimidoilo en forma de producto aceitoso.

^{1}H-NMR (CDCl_{3}) \delta = 2,45 (4H, m, morfolin CH_{2}), 2,65 (2H, m, =N-CH_{2}-), 3,73 (4H, m, morfolin CH_{2}), 4,09 (1H, m, CH-OH), 4,28 (2H, m, O-CH_{2}), 6,85 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,30 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,32-7,50 (5H, m, ArH).

Ejemplo 21 Cloruro de N-(3-(1,2,3,4-tetrahidro-2-isoquinolil)-2-hidroxi-propoxi)-3-fenil acrilimidoilo

Siguiendo el método descrito en el Ejemplo 20, se obtuvieron 0,78 g de cloruro de N-(3-(1,2,3,4-tetrahidro-2-isoquinolil)-2-hidroxi-propoxi)-3-fenil acrilimidoilo en forma de producto aceitoso a partir de 4,24 g (0,01 moles) de dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-(1,2,3,4-tetrahidro-2-isoquinolil)-2-hidroxipropil)cinámico (producto del Ejemplo 11).

^{1}H-NMR (CDCl_{3}) \delta = 2,68 (2H, m, isoquinolin CH_{2}), 2,90 (2H, m, CH_{2}), 4,21 (1H, m, CH-OH), 4,30 (2H, m, OCH_{2}), 6,85 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,35 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,15-7,50 (9H, m, ArH).

Ejemplo 22 Cloruro de N-(3-(1,2,3,4-tetrahidro-2-isoquinolil)-2-hidroxi-propoxi)-3-(3,4- dimetoxifenil)acrilimidoilo

Siguiendo el método descrito en el Ejemplo 19, a partir de 1,84 g (0,01 moles) de dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-(1,2,3,4-tetrahidro-2-isoquinolil)-2-hidroxipropil)-3,4-dimetoxicinámico (producto del Ejemplo 12), se obtuvieron 1,2 g de cloruro de N-(3-(1,2,3,4- tetrahidro-2-isoquinolil)-2-hidroxi-propoxi)-3-(3,4-dimetoxifenil)acrilimidoilo en forma de producto aceitoso.

^{1}H-NMR (CDCl_{3}) \delta = 2,65 (2H, m, isoquinolin CH_{2}), 2,90 (2H, m, isoquinolin CH_{2}), 2,92 (2H, m, =N-CH_{2}), 3,90 (2H, m, isoquinolin CH_{2}), 3,91 (3H, s, OCH_{3}), 3,97 (3H, s, OCH_{3}), 4,21 (1H, m, CH-OH), 4,30 (2H, m, OCH_{2}), 6,74 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,2 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,0-7,3 (7H, m, ArH).

Ejemplo 23 Cloruro de N-(3-t-butilamino-2-hidroxi-propoxi)-3-(3,4-dimetoxifenil)acrilimidoilo

Siguiendo el método descrito en el Ejemplo 19, a partir de 4,24 g (0,01 moles) de dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-t-butilamino-2-hidroxipropil)-3,4-dimetoxicinámico (producto del Ejemplo 8), se obtuvieron 0,3 g de cloruro de N-(3-t-butilamino-2-hidroxi-propoxi)-3-(3,4-dimetoxifenil)acrilimidoilo en forma de producto aceitoso.

^{1}H-NMR (DMSO+CDCl_{3}) \delta = 1,35 (9H, s, 3CH_{3}), 3,1 (2H, m, N-CH_{2}-), 3,80 (3H, s, OCH_{3}), 3,85 (3H, s, OCH_{3}), 4,05 (1H, m, CH-OH), 4,3 (2H, m, OCH_{2}), 6,92 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,60 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,0-7,3 (3H, m, ArH).

Ejemplo 24 Cloruro de N-(3-morfolino-2-hidroxi-propoxi)-3-(3,4-dimetoxifenil)acrilimidoilo

Siguiendo el método descrito en el Ejemplo 19, a partir de 4,02 g (0,01 moles) de dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-morfolino-2-hidroxipropil)-3,4-dimetoxicinámico (producto del Ejemplo 9), se obtuvieron 1,08 g de cloruro de N-(3-morfolino-2-hidroxi-propoxi)-3-(3,4-dimetoxifenil)acrilimidoilo en forma de producto aceitoso.

^{1}H-NMR (CDCl_{3}) \delta = 2,45 (4H, m, morfolin CH_{2}), 2,68 (2H, m, =N-CH_{2}-), 3,72 (4H, m, morfolin CH_{2}), 3,90 (6H, s, OCH_{3}), 4,1 (1H, m, CH-OH), 4,25 (2H, m, OCH_{2}), 6,70 (1H, d, Ar-CH=CH-), 6,85 (1H, d, ArH), 7,0-7,08 (2H, m, ArH), 7,22 (1H, d, Ar-CH=CH-).

Ejemplo 25 Cloruro de N-(3-pirrolidino-2-hidroxi-propoxi)-3-(3,4-dimetoxifenil)acrilimidoilo

Siguiendo el método descrito en el Ejemplo 19, a partir de 1,22 g (0,01 moles) de dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-pirrolidino-2-hidroxipropil)-3,4-dimetoxicinámico (producto del Ejemplo 16), se obtuvieron 1,18 g de cloruro de N-(3-pirrolidino-2-hidroxi-propoxi)-3-(3,4-dimetoxifenil)acrilimidoilo en forma de producto aceitoso.

^{1}H-NMR (CDCl_{3}) \delta = 1,75 (4H, m, pirrolidino CH_{2}), 2,42-2,55 (4H, m, pirrolidino CH_{2}), 2,75 (2H, m, =N-CH_{2}), 3,92 (6H, s, OCH_{3}), 4,08 (1H, m, CH-OH), 4,25 (2H, m, -OCH_{2}), 6,74 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,20 (1H, d, Ar-CH

\hbox{=CH-),}

6,9-7,1 (3H, m, ArH). Ejemplo 26 Cloruro de N-(3-pirrolidino-2-hidroxi-propoxi)-3-fenil acrilimidoilo

Siguiendo el método descrito en el Ejemplo 19, a partir de 3,62 g (0,01 moles) de dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-pirrolidino-2-hidroxipropil)cinámico (producto del Ejemplo 15), se obtuvieron 1,03 g de cloruro de N-(3-pirrolidino-2-hidroxi-propoxi)-3-fenil acrilimidoilo en forma de producto aceitoso.

^{1}H-NMR (DMSO) \delta = 1,85 (4H, m, pirrolidin CH2), 2,75-3,60 (6H, m, N-CH_{2}), 4,0-4,2 (3H, m, OCH_{2}, CH-OH), 7,0 (1H, d, Ar-CH=CH), 7,63 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,2-7,7 (5H, m, ArH).

Ejemplo 27 Cloruro de N-(3-pirrolidino-2-hidroxi-propoxi)-3-(3-piridil)acrilimidoilo

Siguiendo el método descrito en el Ejemplo 19, a partir de 3,27 g (0,01 moles) de dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-pirrolidino-2-hidroxipropil)-3-(3-piridil)acrílico (producto del Ejemplo 17), se obtuvieron 1,98 g de cloruro de N-(3-pirrolidino-2-hidroxi-propoxi)-3-(3-piridil)acrilimidoilo en forma de producto aceitoso.

^{1}H-NMR (CDCl_{3}) \delta = 1,79 (4H, m, pirrolidin CH_{2}), 2,40-2,70 (6H, m, =N-CH_{2}-,pirrolidin-CH_{2}), 4,06 (1H, m, CH-OH), 4,27 (2H, m, OCH_{2}), 6,92 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,3 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,25 (1H, m, ArH), 7,80 (1H, d, ArH), 8,50 (1H, m, ArH), 8,70 (1H, s, ArH).

Ejemplo 28 Dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-piperidinopropil)-4-fluorocinámico

Mediante la reacción de 1,80 g (0,01 moles) de amidoxima de ácido 4-fluorocinámico con 2,18 g (0,011 moles) de hidrocloruro de 1-cloro-3-piperidino-propano, se obtuvieron 1,66 g de dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(e-piperidino-propil)-4-fluorocinámico siguiendo el método descrito en el Ejemplo 1.

P.f.: 192-194ºC.

^{1}H-NMR (CDCl_{3}+DMSO-d6) ä = 1,5-2,1 (6H, m, piperidin 3,4,5-CH_{2}), 2,4 (2H, m, O-CH_{2}-CH_{2}-), 2,9-3,6 (4H, m, piperidin-CH_{2}), 3,4 (2H, t, -CH_{2}-N<), 4,2 (2H, t, O-CH_{2}-), 6,65 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,12 (2H, m, Ar-H), 7,58 (2H, m, Ar-H), 7,9 (1H, d, Ar-CH=CH-).

Ejemplo 29 Cloruro de N-(3-piperidino-propoxi)-3-fenil-acrilimidoilo

Siguiendo el método descrito en el Ejemplo 20, a partir de 3,60 g (0,01 moles) de dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-piperidino-propil)cinámico (producto del Ejemplo 1), se obtuvieron 1,43 g de cloruro de N-(3-piperidino-propoxi)-3-fenil-acrilimidoilo en forma de producto aceitoso.

^{1}H-NMR (CDCl_{3}) ä = 1,4 (2H, m, piperidin 4-CH_{2}), 1,6 (4H, m, piperidin 3-es 5-CH_{2}), 1,95 (2H, m, O-CH_{2}-CH_{2}-), 2,4 (6H, m, 11), 4,3 (2H, t, OCH_{2}-), 6,85 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,25 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,3 (3H, m, ArH), 7,45 (2H, m, ArH).

Ejemplo 30 Cloruro de N-(3-piperidino-2-hidroxi-propoxi)-3-fenil-acrilimidoilo

Siguiendo el método descrito en el Ejemplo 20, a partir de 3,76 g (0,01 moles) de dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-piperidino-2-hidroxipropil)cinámico (producto del Ejemplo 4), se obtuvieron 1,28 g de cloruro de N-(3-piperidino-2-hidroxi-propoxi)-3-fenil-acrilimidoilo.

P.f.: 91-92ºC.

^{1}H-NMR (CDCl_{3}) ä = 1,4 (2H, m, piperidin 4-CH_{2}), 1,55 (4H, m, piperidin 3 y 5-CH_{2}), 2,4 (4H, m, piperidin-2,6-CH_{2}), 2,6 (2H, m, CH_{2}-N), 4,1 (1H, m, CH-OH), 4,25 (2H, m, O-CH_{2}), 6,85 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,25 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,35 (3H, m, ArH), 7,45 (2H, m, ArH).

Ejemplo 31 Hidrógenomaleato de cloruro de N-(3-t-butilamino-2-hidroxi-propoxi)-3-(3-piridil)acrilimidoilo

Siguiendo el método descrito en el Ejemplo 20, a partir de 3,65 g (0,01 moles) de dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-t-butilamino-2-hidroxipropil)-3-(3-piridil)acrílico (producto del Ejemplo 14), se obtienen 1,40 g de cloruro de N-(3-t-butilamino-2-hidroxi-propoxi)-3-(3-piridil)acrilimidoilo en forma de producto aceitoso.

El hidrógenomaleato del producto se precipitó a partir de la solución en isopropanol utilizando ácido maleico.

P.f.: 114-116ºC.

^{1}H-NMR (CDCl_{3}+DMSO-d_{6}) ä = 1,35 (9H, s, butil-CH), 3,35 (2H, m, CH_{2}-NH), 4,17 (1H, m, CH-OH), 4,27 (2H, m, O-CH_{2}), 6,10 (2H, s, ácido maleico-CH), 7,10 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,35 (1H, d, Ar-CH=CH), 7,40 (1H, m, Ar-6H), 8,08 (1H, m, Ar-5H), 8,55 (1H, m, Ar-4H), 8,80 (1H, s, Ar-2H).

Ejemplo 32 Hidrógenomaleato de cloruro de N-(3-piperidino-propoxi)-3-(3-piridil)acrilimidoilo

Siguiendo el método descrito en el Ejemplo 20, a partir de 3,61 g (0,01 moles) de dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-piperidino-propil)-3-(3-piridil)acrílico (producto del Ejemplo 3), se obtuvieron 1,65 g de cloruro de N-(3-piperidino-propoxi)-3-(3-piridil)acrilimidoilo en forma de producto aceitoso.

P.f.: 91-92ºC.

^{1}H-NMR (CDCl_{3}) ä = 1,8 (6H, m, piperidin 3,4,5-CH_{2}), 2,2 (4H, m, piperidin 2,6-CH_{2}), 2,5 (2H, m, propil-CH_{2}), 3,05 (2H, m, CH_{2}-N<), 4,25 (2H, m, O-CH_{2}-), 6,2 (2H, s, ácido maleico-CH_{2}), 6,8 (1H, d, Ar-CH=CH), 7,25 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,30 (1H, m, Ar-6H), 7,75 (1H, m, Ar-5H), 8,5 (1H, m, Ar-4H), 8,65 (1H, s, Ar-2H).

Ejemplo 33 Hidrógenomaleato de cloruro de N-(3-morfolino-2-hidroxi-propoxi)-3-(3-piridil)acrilimidoilo

Siguiendo el método descrito en el Ejemplo 20, a partir de 3,42 g (0,01 moles) de dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-morfolino-2-hidroxipropil)-3-(3-piridil)acrílico (producto del Ejemplo 10), se obtuvieron 1,26 g de cloruro de N-(3-morfolino-2-hidroxi-propoxi)-3-(3-piridil)acrilimidoilo en forma de producto aceitoso.

P.f.: 120-124ºC.

^{1}H-NMR (CDCl_{3}+DMSO-d_{6}) ä = 3,1 (6H, m, 3CH_{2}), 3,8 (4H, m, 2CH_{2}), 4,3 (3H, m, CH_{2}, CH), 6,15 (2H, s, ácido maleico-CH), 7,05 (1H, d, Ar-CH=CH), 7,25 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,40 (1H, m, Ar-6H), 8,0 (1H, m, Ar-5H), 8,55 (1H, m, Ar-4H), 8,75 (1H, s, Ar-2H).

Ejemplo 34 Amidoxima de ácido O-(3-piperidino-2-palmitoiloxi-propil)cinámico

Se añadieron 0,4 g de cloruro de palmitoilo a 400 mg (1,33 mmoles) de amidoxima de ácido O-(3-piperidino-2-hidroxipropil)cinámico (producto del Ejemplo 4) disueltos en 5 ml de cloroformo. La mezcla de reacción se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente, se sometió a reflujo durante 0,5 horas, y tras enfriarla se lavó con solución de hidrógenocarbonato sódico, después con agua, y se secó sobre sulfato sódico anhidro. Tras la evaporación del disolvente, se obtuvieron 0,46 g de amidoxima de ácido O-(3-piperidino-2-palmitoiloxi-propil)cinámico en forma de producto aceitoso.

^{1}H-NMR (CDCl_{3}) ä = 0,9 (3H, t, CH_{3}), 1,3-2,3 (34H, m, palmitoil-CH_{2}, piperidino 3,4,5-CH_{2}), 2,55 (4H, m, piperidino 2 y 6-CH_{2}), 2,71 (2H, m, N-CH_{2}-), 4,13 (2H, m, O-CH_{2}-), 4,75 (2H, br, NH_{2}), 5,40 (1H, m, CH-O), 6,46 (1H, d, Ar-CH=CH-), 6,82 (1H, d, Ar-CH=CH-), 7,28-7,43 (5H, m, 5ArH).

Ejemplo 35 Ácido O-(3-piperidino-2-hidroxipropil)-3-(3-piridil)propen-2-hidroxímico

Se disolvieron 1,52 g (0,005 moles) de amidoxima de ácido O-(3-piperidino-2-hidroxipropil)-3-(3-piridil)acrílico (el producto del Ejemplo 5) bajo enfriamiento con hielo en 10 ml de ácido fosfórico al 10%, tras la adición de 4 ml de dioxano enfriado hasta 2ºC. A esta temperatura se introdujo en la mezcla de reacción la solución de 0,95 g de nitrito sódico en 3 ml de agua. Tras agitar durante 1 hora a 5ºC, y durante 2 horas a temperatura ambiente, se basificó mediante adición de solución al 10% de hidróxido sódico y se extrajo con 2x40 ml de acetato de etilo. Se secó la fase orgánica sobre sulfato sódico anhidro, y se evaporó el disolvente.

Se obtuvieron 0,8 g de ácido O-(3-piperidino-2-hidroxipropil)-3-(3-piridil)-propen-2-hidroxímico en forma de producto aceitoso.

Claims

1. Derivado insaturado de ácido hidroxímico de fórmula

12

en la que

R_{1} representa un grupo alquilo C_{1-20}, un grupo fenilo opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en un grupo alquilo C_{1-2}, un grupo alcoxi C_{1-2}, un átomo de halógeno, un grupo amino, un grupo alquilamino C_{1-4}, un grupo dialquilamino C_{1-4}, o un grupo dialcanoilamino C_{1-4}, representando R_{1} un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que contiene uno o dos átomos de nitrógeno o un átomo de azufre, como el heteroátomo, y

R_{2} representa un átomo de hidrógeno, o

R_{1} forma conjuntamente con R_{2} un grupo cicloalquilo C_{5-7} opcionalmente condensado con un anillo de benceno,

Y significa un átomo de hidrógeno, un grupo hidroxi, un grupo alcanoiloxi C_{1-30} o un grupo alquenoiloxi C_{3-22},

X es un átomo de halógeno, un grupo hidroxi o un grupo amino,

R_{3} representa un grupo cicloalquilo C_{3-7} o un grupo de fórmula -NR^{4}R^{5} en la que

R_{4} y R_{5} significan, independientemente, un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C_{1-5}, un grupo alcanoilo C_{1-5}, o

R_{4} y R_{5} forman con el átomo adyacente de nitrógeno un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que también puede contener un átomo de oxígeno y puede estar condensado con un anillo de benceno, en el que el grupo heterocíclico y/o anillo de benceno puede estar sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en un grupo alquilo C_{1-2}, un grupo alcoxi C_{1-2} o un átomo de halógeno,

además de isómeros geométricos y/u ópticos, y sales de adición de ácido farmacéuticamente adecuadas del mismo.

2. Derivado de ácido hidroxímico según la reivindicación 1, en el que en la fórmula I,

X representa un grupo amino,

Y representa un grupo hidroxi

R_{4} y R_{5} representan, independientemente, un grupo alcanoilo C_{1-5}, pero uno de ellos también puede ser un átomo de hidrógeno, o

R_{4} y R_{5} forman conjuntamente con el átomo adyacente de nitrógeno un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que está condensado con un anillo de benceno y puede contener también un átomo de oxígeno, en el que el grupo heterocíclico y/o anillo de benceno puede estar sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en un grupo alquilo C_{1-2}, un grupo alcoxi C_{1-2} o un átomo de halógeno, y R_{1} representa un grupo alquilo C_{14-20}, un grupo fenilo opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en un grupo alquilo C_{1-2}, un grupo alcoxi C_{1-2}, un átomo de halógeno, un grupo amino, un grupo alquilamino C_{1-4}, un grupo dialquilamino C_{1-4} o un grupo dialcanoilamino C_{1-4}, además R_{1} representa un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que contiene uno o dos átomos de nitrógeno o un átomo de azufre como el heteroátomo, y

R_{2} representa un átomo de hidrógeno, o

X significa un átomo de halógeno o un grupo hidroxi,

R_{3} significa un grupo cicloalquilo C_{3-7} o un grupo de fórmula -NR^{4}R^{5} en el que

R_{4} y R_{5} forman conjuntamente con el átomo adyacente de nitrógeno un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que también puede contener un átomo de oxígeno y puede estar condensado con un anillo de benceno, en el que el grupo heterocíclico y/o anillo de benceno puede estar sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en un grupo alquilo C_{1-2}, un grupo alcoxi C_{1-2} o un átomo de halógeno,

R_{2} representa un átomo de hidrógeno, o

además de isómeros geométricos y/u ópticos y/o sales de adición de ácido farmacéuticamente adecuadas del mismo.

3. Derivado de ácido hidroxímico según la reivindicación 1, en el que en la fórmula I

R_{1} representa un grupo fenilo opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en un grupo metilo, un grupo metoxi o un átomo de cloro, además R_{1} representa un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que contiene uno o dos átomos de nitrógeno como el heteroátomo,

R_{2} representa un átomo de hidrógeno,

X significa un grupo amino,

Y es un átomo de hidrógeno o un grupo hidroxi,

R_{3} significa un grupo de fórmula -NR^{4}R^{5}, en el que

R_{4} y R_{5} forman conjuntamente con el átomo adyacente de nitrógeno un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos,

además de isómeros geométricos y/u ópticos, y/o sales de adición de ácido farmacéuticamente adecuadas del mismo.

4. Derivado de ácido hidroxímico según la reivindicación 3, en el que en la fórmula I

R_{2} representa un átomo de hidrógeno,

X significa un grupo amino,

Y es un átomo de hidrógeno o un grupo hidroxi,

R_{3} significa un grupo pirrolidino, piperidino o morfolino,

5. Dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-piperidino-propil)cinámico.

6. Hidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-piperidino-propil)-3,4-dimetoxicinámico.

7. Hidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-piperidino-propil)-3-(3-piridil)acrílico.

8. Dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-piperidino-2-hidroxipropil)cinámico.

9. Dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-piperidino-2-hidroxipropil)-3-(3-piridil)acrílico.

10. Amidoxima de ácido O-(3-tert-butilamino-2-hidroxipropil)cinámico.

11. Dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-morfolino-2-hidroxipropil)cinámico.

12. Dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-tert-butilamino-2-hidroxipropil)-3,4-dimetoxicinámico.

13. Hidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-morfolino-2-hidroxipropil)-3,4-dimetoxicinámico.

14. Dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-[3-(1,2,3,4-tetrahidro-2-isoquinolil)-2-hidroxipropil]-3,4-dimetoxicinámico.

15. Dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-[3-(1,2,3,4-tetrahidro-2-isoquinolil)-2-hidroxipropil]-3-(3-piridil)acrílico.

16. Dihidrocloruro de amidoxima de ácido O-(3-tert-butilamino-2-hidroxipropil)-3-(3-piridil)acrílico.

17. Procedimiento para preparar un derivado insaturado de ácido hidroxímico de fórmula I

13

en la que R_{1}, R_{2}, R_{3}, X e Y se definen en la reivindicación 1, caracterizado porque

a) para preparar los compuestos de fórmula I, en la que X representa un grupo amino, R_{1}, R_{2}, R_{3} e Y son los que se indican para la fórmula I, una amidoxima de fórmula

14

siendo R_{1} y R_{2} como se ha indicado anteriormente, se reacciona con un reactivo de fórmula

(III)Z --- CH_{2} ---

\delm{C}{\delm{\para}{Y}}

H --- CH_{2} --- R_{3}

en la que Z representa un grupo saliente, preferentemente un átomo de halógeno, siendo Y como se ha indicado anteriormente; o

b) para preparar de compuestos de fórmula I, en la que X es un grupo amino, Y es un grupo hidroxi, R_{1}, R_{2} y R_{3} son los que se indican para la fórmula I, un reactivo de fórmula III, en la que Z representa un grupo saliente, preferentemente un átomo de cloro, Y es el indicado anteriormente, se reacciona con una base, y el derivado de oxirano obtenido de fórmula

15

c) para preparar compuestos de fórmula I, en la que X es un grupo amino, R_{1}, R_{2}, R_{3} e Y son como se ha indicado para la fórmula I, un nitrilo carboxílico de fórmula

16

en la que R_{1} y R_{2} son como se ha indicado anteriormente, se reacciona con un derivado de hidroxilamina de fórmula

(VI)H_{2}N --- O --- CH_{2} ---

\delm{C}{\delm{\para}{Y}}

H --- CH_{2} --- R_{3}

en la que R_{3} e Y son como se ha indicado anteriormente; o

d) para preparar compuestos de fórmula I, en la que X es un grupo amino, R_{1}, R_{2}, R_{3} e Y son como se ha indicado para la fórmula I, un derivado reactivo de ácido carboxílico de fórmula

17

en la que V es un grupo saliente, R_{1} y R_{2} son como se ha indicado anteriormente, se reacciona con un derivado de hidroxilamina de fórmula VI, en la que R_{3} e Y son como se ha indicado anteriormente; o

e) para preparar compuestos de fórmula I, en la que X es un grupo amino, Y es un grupo hidroxi, R_{3} es un grupo de fórmula -NR^{4}R^{5}, en la que R_{1}, R_{2}, R_{4} y R_{5} son como se ha indicado para la fórmula I, una amidoxima de fórmula II, en la que R_{1} y R_{2} son como se ha indicado anteriormente, se hace reaccionar con epiclorohidrina en presencia de una base, y el epóxido obtenido de fórmula

18

en la que R_{1} y R_{2} son los indicados anteriormente, se reacciona con una amina de fórmula HNR^{4}R^{5}, en la que R_{4} y R_{5} son como se ha indicado anteriormente; o

f) para preparar compuestos de fórmula I, en la que X representa un átomo de halógeno, R_{1}, R_{2}, R_{3} e Y son como se ha indicado para la fórmula I, una oxima O-sustituida de fórmula

19

en la que R_{1}, R_{2} y R_{3} son como se ha indicado anteriormente, se reacciona con un agente halogenante,

y, si se desea, un compuesto obtenido de fórmula I, en la que X representa un grupo amino, R_{1}, R_{2}, R_{3} e Y son como se ha indicado para la fórmula I, se convierte a un compuesto correspondiente de fórmula I, en la que X es un átomo de halógeno, mediante diazotización y descomposición de la sal diazonio obtenida en presencia de un haluro de hidrógeno, o un compuesto obtenido de fórmula I, en la que X es un grupo amino, R_{1}, R_{2}, R_{3} e Y son como se ha indicado para la fórmula I, se convierte mediante diazotización y descomposición de la sal diazonio obtenida en presencia de ácido fosfórico, a un compuesto de fórmula I, en la que X es un hidroxi y/o un compuesto obtenido de fórmula I, en la que Y representa un grupo hidroxi, R_{1}, R_{2}, R_{3} y X son como se ha indicado para la fórmula I, se reacciona con un agente acilante con el fin de obtener un compuesto de fórmula I, en la que Y representa un grupo alcanoiloxi C_{1-30} o un grupo alquenoiloxi C_{3-22}, y/o una base obtenida de fórmula I se reacciona con un ácido inorgánico u orgánico con el fin de obtener una sal de adición de ácido farmacéuticamente adecuada o una base de fórmula I se libera de su sal de adición e ácido con una base.

18. Composición farmacéutica que comprende un derivado insaturado de ácido hidroxímico de fórmula I

20

en la que

R_{2} representa un átomo de hidrógeno, o

R_{1} forman conjuntamente con R_{2} un grupo cicloalquilo C_{5-7} opcionalmente condensado con un anillo de benceno,

X es un átomo de halógeno, un grupo hidroxi o un grupo amino,

R_{4} y R_{5} forman con el átomo adyacente de nitrógeno un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que también puede contener un átomo de oxígeno y puede estar condensado con un anillo de benceno, en el que el grupo heterocíclico y/o anillo de benceno puede sustituirse con uno o dos sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en un grupo alquilo C_{1-2}, un grupo alcoxi C_{1-2} o un átomo de halógeno,

o un isómero geométrico y/o isómero óptico o una sal de adición de ácido farmacéuticamente adecuada del mismo como el ingrediente activo y uno o más excipientes convencionales.

19. Composición farmacéutica según la reivindicación 18 que comprende un derivado de ácido hidroxímico de fórmula I, en la que

X representa un grupo amino,

Y representa un grupo hidroxi,

R_{4} y R_{5} representa, independientemente, un grupo alcanoilo C_{1-5}, pero uno de ellos también puede ser un átomo de hidrógeno, o

R_{4} y R_{5} forman conjuntamente con el átomo adyacente de nitrógeno un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que está condensado con un anillo de benceno y que también puede contener un átomo de oxígeno, en el que el grupo heterocíclico y/o el anillo de benceno puede sustituirse con uno o dos sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en un grupo alquilo C_{1-2}, un grupo alcoxi C_{1-2} o un átomo de halógeno, y R_{1} representa un grupo alquilo C_{14-20}, un grupo fenilo opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en un grupo alquilo C_{1-2}, un grupo alcoxi C_{1-2}, un átomo de halógeno, un grupo amino, un grupo alquilamino C_{1-4}, un grupo dialquilamino C_{1-4} o un grupo dialcanoilamino C_{1-4}, además R_{1} representa un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que contiene uno o dos átomos de nitrógeno o un átomo de azufre como el heteroátomo, y

R_{2} representa un átomo de hidrógeno, o

X significa un átomo de halógeno o un grupo hidroxi,

R_{4} y R_{5} representa, independientemente, un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C_{1-5}, un grupo alcanoilo C_{1-5}, o

R_{4} y R_{5} forman conjuntamente con el átomo adyacente de nitrógeno un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que también puede contener un átomo de oxígeno y puede estar condensado con un anillo de benceno, en el que el grupo heterocíclico y/o anillo de benceno puede estar sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en un grupo alquilo C_{1-2}, un grupo alcoxi C_{1-2} o un átomo de halógeno, R_{1} representa un grupo alquilo C_{1-20}, un grupo fenilo opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en un grupo alquilo C_{1-2}, un grupo alcoxi C_{1-2}, un átomo de halógeno, un grupo amino, un grupo alquilamino C_{1-4}, un grupo dialquilamino C_{1-4} o un grupo dialcanoilamino C_{1-4}, además R_{1} representa un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que contiene uno o dos átomos de nitrógeno o un átomo de azufre como el heteroátomo, y

R_{2} representa un átomo de hidrógeno, o

o un isómero geométrico y/u óptico o una sal de adición de ácido farmacéuticamente adecuada del mismo como el ingrediente activo.

20. Composición farmacéutica según la reivindicación 19 que comprende un derivado de ácido hidroxímico de fórmula I, en la que

R_{2} representa un átomo de hidrógeno,

X significa un grupo amino,

Y es un átomo de hidrógeno o un grupo hidroxi,

R_{3} significa un grupo de fórmula -NR^{4}R^{5}, en la que

o un isómero geométrico y/o isómero óptico o una sal de adición de ácido farmacéuticamente adecuada del mismo como el ingrediente activo.

21. Composición farmacéutica según la reivindicación 20 que comprende un derivado de ácido hidroxímico de fórmula I, en la que

R_{2} representa un átomo de hidrógeno,

X significa un grupo amino,

Y es un átomo de hidrógeno o un grupo hidroxi,

R_{3} significa un grupo pirrolidino, piperidino o morfolino,

22. Utilización de un derivado insaturado de ácido hidroxímico de fórmula I

21

en la que

R_{2} representa un átomo de hidrógeno, o

X es un átomo de halógeno, un grupo hidroxi o un grupo amino,

R_{4} y R_{5} forman con el átomo adyacente de nitrógeno un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 ó 6 elementos que también puede contener un átomo de oxígeno y puede estar condensado con un anillo de benceno, en el que el grupo heterocíclico y/o el anillo de benceno pueden estar sustituidos con uno o dos sustituyentes seleccionados de entre el grupo que consiste en un grupo alquilo C_{1-2}, un grupo alcoxi C_{1-2} o un átomo de halógeno,

o isómero geométrico y/o isómero óptico y/o sal de adición de ácido farmacéuticamente adecuada del mismo para preparar una composición farmacéutica adecuada para tratar los estados relacionados con la deficiencia energética de la célula causada por la inhibición de la PARP, complicaciones diabéticas, estados de deficiencia de oxígeno del corazón y cerebro, enfermedades neurodegenerativas, autoinmunológicas y/o virales.