CN110300600A - 利用抗体-药物缀合物和parp抑制剂的组合治疗 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的CD33靶向的抗体‑药物缀合物(ADC)和有效量的聚‑ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂。还提供了包含有效量的CD33靶向的ADC和有效量的PARP抑制剂的药物组合物。

Description

利用抗体-药物缀合物和PARP抑制剂的组合治疗
相关申请
本申请要求于2016年11月2日提交的美国临时专利申请案号62/416,383的优先权，其全部内容明确以引用的方式并入本文中。
序列表
本申请含有已经以ASCII格式电子提交的序列表，并且其全部内容通过引用并入本文。在2017年10月26日创建的所述ASCII拷贝命名为121162-03720_SL.txt，并且大小为27,280字节。
发明背景
急性骨髓性白血病(AML)与骨髓中异常胚细胞的累积相关。急性骨髓性白血病(AML)是成人中最常见类型的白血病之一。仅在美国，每年就鉴别出超过18,000例新的AML病例，并且超过10,000例死亡与AML相关。尽管对化学疗法的初始反应率很高，但许多急性骨髓性白血病(AML)患者未能达到完全缓解。事实上，患有AML的大多数患者自诊断后3-5年内复发。
白血球分化抗原CD33是与唾液酸粘附素家族成员(包括髓磷脂相关糖蛋白和CD22)以及唾液酸粘附素本身具有序列同源性的364氨基酸跨膜糖蛋白(S.Peiper,2002,Leucocyte Typing VII,White Cell Differentiation,Antigens,Proceedings of theSeventh International Workshop and Conference,Oxford University Press,第777页)。
CD33的表达似乎对造血室具有高度特异性，骨髓前体细胞具有强表达(S.Peiper,2002)。其由骨髓祖细胞(例如CFU-GEMM、CFU-GM、CFU-G和BFU-E)、单核细胞/巨噬细胞、粒细胞前体(例如早幼粒细胞和骨髓细胞，但在成熟和分化时，表达减少)和成熟粒细胞(但表达水平较低)表达(S.Peiper,2002)。抗CD33单克隆抗体显示CD33由克隆形成的急性骨髓性白血病(AML)细胞在大于80％的人类病例中表达(LaRussa,V.F.等，1992,Exp.Hematol.20:442-448)。相反，活体外产生“原始群落”(Leary,A.G.等，1987,Blood 69:953)并诱导造血长期骨髓培养(Andrews R.G.等，1989,J.Exp.Med.169:1721；Sutherland,H.J.等，1989,Blood 74:1563)的多潜能造血干细胞似乎缺乏CD33的表达。
由于CD33的选择性表达，已提出将细胞毒性药物与特异性识别和结合CD33的单克隆抗体组合的抗体药物缀合物(下文称为“ADC”)用于选择性靶向AML细胞。预计所述疗法会使干细胞和原始造血祖细胞不受影响。最近，报道了一种利用新颖DNA烷基化剂DGN462的CD33靶向的ADC，其包含含有单亚胺部分的吲哚啉基-苯并二氮呯二聚体(参见，例如，美国专利号8,765,740、8,889,669、9,169,272和9,434,748)，其显示活体外和活体内血液学癌症模型中的抗癌活性。尽管这种ADC显示出巨大的希望，但仍然需要改进的方法来使用ADC来治疗患有癌症、特别是例如AML等血液系统癌症的患者。
发明内容
已知聚-ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂用于治疗实体肿瘤，特别是具有DNA修复缺陷的实体肿瘤。其治疗血液学癌症的效能尚未充分确定。现在已经惊人地发现，与单独的ADC和单独的PAPR抑制剂相比，含有吲哚啉基-苯并二氮呯二聚体细胞毒性酬载的CD33靶向的ADC与PARP抑制剂的组合针对活体外和活体内白血病细胞具有协同效应。举例来说，当用CD33靶向的ADC IMGN779与PARP抑制剂奥拉帕尼(olaparib)的组合治疗人类CD33+急性骨髓性白血病细胞(HEL、MV4-11及HL60)时，观察到癌细胞增殖的协同减少(参见实施例1)。另外，IMGN779与奥拉帕尼的组合i)与单独的药物相比，在急性骨髓性白血病异种移植物动物模型中进一步降低肿瘤负荷(参见实施例2)；和ii)有效抑制来自患有复发性/难治性急性骨髓性白血病的患者的原代细胞的群落形成，所述复发性/难治性急性骨髓性白血病的特征在于复杂核型或FLT-3突变(参见实施例3)。基于这些惊人的发现，本发明提供利用吲哚啉基-苯并二氮呯二聚体细胞毒性酬载的CD33靶向的ADC与本文所述的PARP抑制剂的组合来治疗癌症(例如AML等血液学癌症)的方法。另外，还公开了包含含有吲哚啉基-苯并二氮呯二聚体细胞毒性酬载的CD33靶向的ADC和PARP抑制剂的药物组合物。
本发明的一个实施方案是治疗受试者的癌症的方法。在一个实施方案中，癌症是选自急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、B细胞谱系急性成淋巴细胞性白血病(B ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、毛细胞白血病(HCL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、基础浆细胞样DC赘瘤(BPDCN)白血病、非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphomas，NHL)、套细胞淋巴瘤和霍奇金氏白血病(HL)。在另一实施方案中，癌症是化学疗法敏感的。在另一实施方案中，癌症是化学疗法抗性的。在另一实施方案中，癌症是急性骨髓性白血病(AML)。在另一实施方案中，AML是难治性或复发性急性骨髓性白血病。在另一实施方案中，AML的特征在于P-糖蛋白的过表达；EVI1的过表达；p53变化；DNMT3A突变；FLT3内部串联重复；复杂核型；BRCA1、BRCA2或PALB2的表达降低；或BRCA1、BRCA2或PALB2的突变。所述方法包括以下步骤：向受试者施用有效量的PARP抑制剂和有效量的式(I)的ADC：
或其药学上可接受的盐。N与C之间的双线表示单键或双键，条件为当所述双线是双键时，X不存在，并且Y是氢；并且当所述双线是单键时，X是氢，并且Y是-SO3H。术语“A”是结合至CD33的抗体或抗原结合片段。或者，“A”是特异性结合至CD33的抗体或抗原结合片段，其包含SEQ ID NO:1的重链可变区(VH)互补决定区(CDR)1序列、SEQ ID NO:2的VH CDR2序列和SEQ ID NO:3的VH CDR3序列，以及SEQ ID NO:4的轻链可变区(VL)CDR1序列、SEQ IDNO:5的VL CDR2序列和SEQ ID NO:6的VL CDR3序列。术语“r”是1至10的整数。
在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，其包含与SEQ IDNO:7或9的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。在另一实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，其包含与SEQ ID NO:8或10的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。在另一实施方案中，抗体或其抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:9的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:10的序列的轻链可变区。在另一实施方案中，抗体是huMy9-6。在另一实施方案中，抗体是CDR移植或表面重塑的抗体。
ADC1、ADC2、IMGN779(下文定义)和其药学上可接受的盐是可用于所公开的治疗方法的ADC的具体实例。
“A”如针对式(I)所定义。术语“r”是1至10的整数。制备ADC1、ADC2和IMGN779的方法提供于以下中：美国专利号8,765,740和9,353,127，其整个教导以引用的方式并入本文中。
药学上可接受的盐是那些适用于人类和动物而没有过度毒性、刺激和过敏反应盐。式(I)的ADC(即ADC1、ADC2和IMGN779)的合适的盐的实例公开于美国专利号8,765,740中，其全部教导以引用的方式并入本文中。在一个实施方案中，式(I)的ADC(即ADC1、ADC2和IMGN779)的药学上可接受的盐是钠盐或钾盐。
本发明的另一实施方案是药物组合物，其包含：i)有效量的PARP抑制剂；ii)有效量的式(I)的抗体-药物缀合物(即ADC1、ADC2、IMGN779)或其药学上可接受的盐；和iii)药学上可接受的载体或稀释剂。在一个实施方案中，式(I)的ADC(即ADC1、ADC2和IMGN779)的药学上可接受的盐是钠盐或钾盐。
本发明的另一实施方案是式(I)的抗体-药物缀合物(即ADC1、ADC2、IMGN779)或其药学上可接受的盐，其与PARP抑制剂组合用于治疗患有癌症的受试者。在一个实施方案中，式(I)的ADC(即ADC 1、ADC 2和IMGN779)的药学上可接受的盐是钠盐或钾盐。在一个实施方案中，癌症是选自急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、B细胞谱系急性成淋巴细胞性白血病(B ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、毛细胞白血病(HCL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、基础浆细胞样DC赘瘤(BPDCN)白血病、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、套细胞淋巴瘤和霍奇金氏白血病(HL)。在另一实施方案中，癌症是化学疗法敏感的。在另一实施方案中，癌症是化学疗法抗性的。在另一实施方案中，癌症是急性骨髓性白血病(AML)。在另一实施方案中，AML是难治性或复发性急性骨髓性白血病。在另一实施方案中，AML的特征在于P-糖蛋白的过表达；EVI1的过表达；p53变化；DNMT3A突变；FLT3内部串联重复；复杂核型；BRCA1、BRCA2或PALB2的表达降低；或BRCA1、BRCA2或PALB2的突变。
本发明的另一实施方案是式(I)的抗体-药物缀合物(即ADC1、ADC2、IMGN779)或其药学上可接受的盐用于制造药剂的用途，所述药剂与PARP抑制剂组合用于治疗患有癌症的受试者。在一个实施方案中，式(I)的ADC(即ADC1、ADC2和IMGN779)的药学上可接受的盐是钠盐或钾盐。在另一实施方案中，癌症是选自急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、B细胞谱系急性成淋巴细胞性白血病(B ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、毛细胞白血病(HCL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、基础浆细胞样DC赘瘤(BPDCN)白血病、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、套细胞淋巴瘤和霍奇金氏白血病(HL)。在另一实施方案中，癌症是化学疗法敏感的。在另一实施方案中，癌症是化学疗法抗性的。在另一实施方案中，癌症是急性骨髓性白血病(AML)。在另一实施方案中，AML是难治性或复发性急性骨髓性白血病。在另一实施方案中，AML的特征在于P-糖蛋白的过表达；EVI1的过表达；p53变化；DNMT3A突变；FLT3内部串联重复；复杂核型；BRCA1、BRCA2或PALB2的表达降低；或BRCA1、BRCA2或PALB2的突变。
定义
“IMGN779”意指CD33靶向的ADC，其包含通过可裂解二硫化物接头缀合到DGN462的huMy9-6或Z4681A抗体(即，分别包含具有SEQ ID NO:1-3的序列的重链CDR1-3以及具有SEQID NO:4-6的序列的轻链CDR1-3的抗体；包含具有SEQ ID NO:9的序列的重链可变区以及具有SEQ ID NO:10的序列的轻链可变区的抗体；或具有SEQ ID NO:11的序列的重链序列以及具有SEQ ID NO:12的序列的轻链序列的抗体)。IMGN779可表示为如下文所绘示的ADC3：
或其药学上可接受的盐；或IMGN779还可表示为如下文所绘示的ADC4：
或其药学上可接受的盐；或IMGN779可为ADC3与ADC4或其药学上可接受的盐的组合。
“P-糖蛋白”意指与NCBI登录号NP_001035830处提供的人类序列具有至少约85％氨基酸序列同一性并且在表达其的细胞上赋予多重抗药性的多肽或其片段。下文提供示例性人类P-糖蛋白的序列：
“CD33蛋白”意指与NCBI登录号CAD36509处提供的人类序列具有至少约85％氨基酸序列同一性并且具有抗CD33抗体结合活性的多肽或其片段。下文提供示例性人类CD33氨基酸序列：
“FLT3蛋白”、“FLT3多肽”、“FLT3”、“FLT-3受体”或“FLT-3R”意指与NCBI登录号NP_004110处提供的FLT3酪氨酸激酶受体(还称为FLK-2和STK-1)的人类序列具有至少约85％、90％、95％、99％或100％氨基酸序列同一性并且具有酪氨酸激酶活性(包括受体酪氨酸激酶活性)的多肽或其片段。在一个实施方案中，FLT3氨基酸序列是下文提供的人类FLT3氨基酸序列：
“FLT3-ITD”意指具有内部串联重复(包括但不限于简单串联重复和/或具有插入的串联重复)的FLT3多肽。在各个实施方案中，具有的内部串联重复FLT3多肽是激活的FLT3变体(例如，组成型自磷酸化)。在一些实施方案中,FLT3-ITD包括任何外显子或内含子(包括例如外显子11、外显子11至内含子11，及外显子12、外显子14、外显子14至内含子14以及外显子15)中的串联重复和/或具有插入的串联重复。内部串联重复突变(FLT3-ITD)是约20-25％AML病例中存在的最常见的FLT3突变。患有FLT3-ITD AML的患者预后比具有野生型(WT)FLT3的那些患者更差，复发率增加，并且对化学疗法的反应持续时间缩短。
“类似物”意指不相同但具有类似功能或结构特征的分子。举例来说，多肽类似物保留相应天然多肽的生物活性，同时具有某些生化修饰，相对于天然多肽，其增强类似物的功能。所述生化修饰可以增加类似物的蛋白酶抗性、膜渗透性或半衰期，而不改变例如配体结合。类似物可包括非天然氨基酸。
在本公开中，“包含”(“comprises”、“comprising”)、“含有”和“具有”等等可以具有美国专利法中赋予它们的含义，并且可以意指“包括”(“includes”、“including”)等等；“基本上由……组成”或“基本上组成”同样具有美国专利法中赋予的含义，并且所述术语是开放式的，允许存在多于所述的那些，只要所述的基本或新颖特征并不因存在多于所述而改变，但不包括现有技术实施方案。
“基本上相同”意指与参考氨基酸序列(例如，本文所述的氨基酸序列中的任一者)或核酸序列(例如，本文所述的核酸序列中的任一者)展现至少50％同一性的多肽或核酸分子。优选地，所述序列与用于比较的序列在氨基酸水平或核酸下至少60％、更优选80％或85％且更优选90％、95％或甚至99％相同。
序列同一性通常使用序列分析软件(例如，遗传计算机组的序列分析软件包，University of Wisconsin Biotechnology Center,1710University Avenue,Madison,Wis.53705,BLAST,BESTFIT,GAP，或PILEUP/PRETTYBOX程式)测量。通过将同源性的程度分配给各种取代、缺失和/或其他修饰，所述软件与相同或相似的序列匹配。保守取代通常包括以下组内的取代：甘氨酸、丙氨酸；缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸；天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺；丝氨酸、苏氨酸；赖氨酸、精氨酸；和苯丙氨酸、酪氨酸。在确定同一性程度的示例性方法中，可以使用BLAST程式，其中机率评分在e-3与e-100之间表示密切相关的序列。
“特异性结合”意指识别并结合目标多肽、但基本上不识别和结合样品(例如天然样品)中的其他分子(其通常包括本发明的多肽)的抗体或其片段。
“受试者”是哺乳动物，优选人类，但也可为需要兽医治疗的动物，例如伴侣动物(例如，狗、猫，等等)、农场动物(例如，奶牛、绵羊、猪、马，等等)和实验室动物(例如，老鼠、小鼠、天竺鼠，等等)。
“有效量”意指引发受试者中所需生物反应的ADC或PARP抑制剂的量。所述反应包括缓和所治疗的疾病或病症的症状、抑制或延迟疾病的症状或疾病自身的复发、与不存在治疗相比受试者的长寿增加，或抑制或延迟疾病的症状或疾病自身的进展。ADC或PARP抑制剂的毒性和治疗效能可通过细胞培养和实验动物中的标准医药程序确定。施用于受试者的ADC或PARP抑制剂的有效量将取决于多发性骨髓瘤的阶段、类别和状态以及受试者的特征，例如一般健康状况、年龄、性别、体重和药物耐受性。待施用的ADC或PARP抑制剂的有效量还取决于施用途径和剂型。可以个别地调整剂量和间隔以提供足以维持所需治疗效应的活性化合物的血浆水平。
术语“治疗”(“treatment”、“treat”和“treating”)是指逆转、缓和或抑制如本文所述癌症或其一种或多种症状的进展。
如本文所用，术语“施用”(“administer”、“administering”、“administration”)等等是指可用于使ADC和PARP抑制剂递送到所需生物作用位点的方法。这些方法包括(但不限于)关节内(在关节中)、静脉内、肌内、肿瘤内、真皮内、腹膜内、皮下、经口、局部、鞘内、吸入、经皮、经直肠，等等。可以与本文所述的试剂和方法一起使用的技术可以在以下中找到：例如Goodman和Gilman，The Pharmaceutical Theory of Basis of Therapeutics，当前版；Pergamon；和Remington’s,Pharmaceutical Sciences(当前版)，Mack Publishing公司，Easton,Pa。在一方面中，ADC和/或PARP抑制剂经静脉内施用。
除非明确说明或从上下文可明了，否则如本文所用术语“或”应理解为包括在内。除非明确说明或从上下文可明了，否则如本文所用术语“一”(“a”、“an”)和“所述”应理解为单数或复数。
除非明确说明或从上下文可明了，否则如本文所用术语“约”应理解为在本领域的正常耐受范围内，例如在平均值的2标准偏差范围内。约可以理解为在所述值的10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％或0.01％内。除非从上下文另外明了，否则本文提供的所有数值均由术语约修饰。
本文变量的任何定义中的化学基团的清单的列举包括所述变量作为任何单一基团或所列示基团的组合的定义。本实施方案中对本文变量或方面的描述包括实施方案作为任何单一实施方案或与任何其他实施方案或其部分的组合。
本文提供的任何组合物或方法可以与本文提供的任何其他组合物和方法中的一种或多种组合。
附图说明
图1A显示用500pM IMGN779、50μM奥拉帕尼(Ola)或500pM IMGN779+50μM奥拉帕尼处理的HEL CD33+AML细胞以及通过WST-8试剂测量的对增殖的效应。
图1B显示使用Compusyn软件计算的HEL细胞中IMGN779+奥拉帕尼组合的协同/加和效应。线下方的数据点代表药物对之间的协同作用。
图2A显示用750pM IMGN779、12μM奥拉帕尼(Ola)或750pM IMGN779+12μM奥拉帕尼处理的MV4-11CD33+AML细胞以及通过WST-8试剂测量的对增殖的效应。
图2B显示使用Compusyn软件计算的MV4-11细胞中IMGN779+奥拉帕尼组合的协同/加和效应。线下方的数据点代表药物对之间的协同作用。
图3A显示用25pM IMGN779、10μM奥拉帕尼(Ola)或25μM IMGN779+10μM奥拉帕尼处理的HL60CD33+AML细胞以及通过WST-8试剂测量的对增殖的效应。
图3B显示使用Compusyn软件计算的HL60细胞中IMGN779+奥拉帕尼组合的协同/加和效应。线下方的数据点代表药物对之间的协同作用。
图4显示如通过流式细胞术评价的用500pM IMGN779、50μM奥拉帕尼或500pmIMGN779+50μM奥拉帕尼处理的HEL细胞中的细胞存活率和细胞周期效应。
图5显示用500pM IMGN779、50μM奥拉帕尼或500pm IMGN779+50μM奥拉帕尼处理的HEL细胞中的细胞凋亡百分比。
图6A显示用梯度浓度的奥拉帕尼处理的HEL细胞和在0.5Gy辐射下DNA损伤辐射暴露后对细胞死亡的效应。
图6B显示用梯度浓度的奥拉帕尼处理的HEL细胞和在0.75Gy辐射下DNA损伤辐射暴露后对细胞死亡的效应。
图7A显示在全身性HEL AML异种移植物模型中不同浓度(30μg/kg、60μg/kg和100μg/kg(通过酬载))的IMGN779的抗白血病活性。
图7B显示在投用不同浓度(30μg/kg、60μg/kg和100μg/kg(通过酬载))的媒剂或IMGN779后小鼠第14天的白血病负担。
图7C显示用不同浓度的IMGN779(30μg/kg、60μg/kg和100μg/kg(通过酬载))处理的全身性HEL AML异种移植物模型中的总体存活率。
图8A显示全身性HEL AML异种移植物模型中IMGN779(15μg/kg)、奥拉帕尼(100mg/kg)和IMGN779(15μg/kg)+奥拉帕尼(100mg/kg)的抗白血病活性。
图8B显示在投用媒剂、单独IMGN779(15μg/kg)、单独奥拉帕尼(100mg/kg)或IMGN779((15μg/kg)+奥拉帕尼(100mg/kg)的组合治疗后小鼠第22天的白血病负担。
图8C显示用IMGN779(15μg/kg)、奥拉帕尼(100mg/kg)和IMGN779((15μg/kg)+奥拉帕尼(100mg/kg))处理的全身性HEL AML异种移植物模型中的总体存活率。
图9A显示平板接种后15天使用安装在具有SPOT-Basic成像软件的倒置显微镜上的Spot-RT3照相机量化的CFU测定的结果。捕获每一条件的代表性样品，并平均并报告一式三份孔(+/-标准偏差)。
图9B显示1μM奥拉帕尼、10pM IMGN779和奥拉帕尼(1μM)+IMGN779(10pM)对来自患有复发性/难治性AML的患者的骨髓样品的细胞群落形成的效应。将细胞在37℃下孵育15天，然后使用安装在具有SPOT-Basic成像软件的倒置显微镜上的Spot-RT3照相机量化。显示每一处理条件的代表性样品图像。
图10A和图10B显示在用各种浓度的鲁卡帕尼(rucaparib)、维利帕尼(velparib)、尼拉帕尼(niraparib)、他拉唑帕尼(talazoparib)和奥拉帕尼处理后(A)HEL-luc和(B)HL60细胞系的增殖。
图11A、图11B和图11C显示经以下处理的HEL-luc细胞：800pM IMGN779、0.8μM他拉唑帕尼(Tal)，或800pM IMGN779+0.8μM Tal(图11A)；800pM IMGN779、0.8μM奥拉帕尼(Ola)、800pM IMGN779+0.8μM Ola(图11B)；800pM IMGN779、0.8μM尼拉帕尼(Nir)，或800pMIMGN779+0.8μM Nir(FIG.11C)，以及通过WST-8试剂测量的对增殖的效应。
图12A和图12B显示使用Compusyn软件计算的IMGN779+尼拉帕尼的组合(图12A)以及IMGN779+他拉唑帕尼的组合(图12B)在HEL-luc细胞中的协同/加和效应。线下方的数据点代表药物对之间的协同作用。
图13A、图13B和图13C显示用以下处理的HEL-luc细胞中通过流式细胞术测量的细胞凋亡百分比：800pM IMGN779、0.8μM奥拉帕尼，或800pm IMGN779+0.8μM奥拉帕尼(图13A)；800pM IMGN779、0.8μM他拉帕尼(talaparib)，或800pm IMGN779+0.8μM他拉帕尼(图13B)；以及800pM IMGN779、0.8μM尼拉帕尼，或800pm IMGN779+0.8μM尼拉帕尼(图13C)。
图14A、图14B和图14C显示用以下处理的HEL-luc细胞中通过流式细胞术评价的细胞存活率和细胞周期效应：800pM IMGN779、0.8μM他拉帕尼，或800pm IMGN779+0.8μM他拉帕尼(图14A)；800pM IMGN779、0.8μM奥拉帕尼，或800pm IMGN779+0.8μM奥拉帕尼(图14B)；以及800pM IMGN779、0.8μM尼拉帕尼，或800pm IMGN779+0.8μM尼拉帕尼(图14C)。
图15A、图15B和图15C显示用以下处理的HEL-luc细胞中通过磷酸化H2AX染色的阳性％测量的DNA损害的程度：800pm IMGN779、0.8μM他拉帕尼，或800pm IMGN779+0.8μM他拉帕尼(图15A)；800pM IMGN779、0.8μM奥拉帕尼，或800pm IMGN779+0.8μM奥拉帕尼(图15B)；以及800pM IMGN779、0.8μM尼拉帕尼，或800pm IMGN779+0.8μM尼拉帕尼(图15C)。
具体实施方式
本发明的特征在于通过施用含有吲哚啉基-苯并二氮呯二聚体细胞毒性酬载的CD33靶向的ADC、特别是式(I)的ADC与PARP抑制剂的组合来治疗患有癌症、例如AML等血液学癌症的患者的方法。
本发明至少部分基于以下发现：IMGN779(一种CD33靶向的抗体药物缀合物，其包含通过可裂解二硫化物接头缀合到新颖DNA-烷基化剂DGN462的抗huCD33抗体，还称为huMy9-6或Z4681A)与奥拉帕尼的组合比单独个别药剂在活体外针对原代患者AML细胞并且在活体内针对小鼠中的AML异种移植物的活性更大。
抗CD33抗体
在一个实施方案中，式(I)的ADC(ADC1或ADC2)中的抗体是抗CD33抗体，特别是huMy9-6抗体。
“My9-6”、“鼠类My9-6”和“muMy9-6”是鼠类抗CD33抗体，自其衍生出huMy9-6。相对于轻链和重链可变区的生殖系氨基酸序列、轻链和重链可变区的氨基酸序列、CDR的鉴别、表面氨基酸的鉴别以及其以重组形式表达的方式完全表征My9-6。参见，例如，美国专利号7,557,189；7,342,110；8,119,787；8,337,855和美国专利公开案号20120244171，其各自是全文以引用的方式并入本文中。muMy9-6的氨基酸序列也显示在下表1中。My9-6抗体还在功能上被表征，并显示与CD33阳性细胞表面上的CD33以高亲和力结合。
术语“可变区”在本文中用于描述抗体重链和轻链的某些部分，其在不同抗体中的序列不同并且在每个特定抗体对其抗原的结合和特异性方面相互配合。在整个抗体可变区中，变异性通常不均匀分布。其通常集中在可变区的三个区段中，称为互补决定区(CDR)或超变区，均在轻链和重链可变区中。可变区的更高度保守的部分称为框架区。重链和轻链的可变区包含四个在很大程度上采取β折叠构造的框架区，每个框架区由三个CDR连接，所述三个CDR形成连接β折叠结构的环，并且在一些情形下形成β-折叠结构部分。每条链中的CDR由框架区保持紧密靠近，并且来自另一条链的CDR有助于抗体的抗原结合位点的形成(E.A.Kabat等，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第五版,1991,NIH)。“恒定”区不直接参与抗体与抗原的结合，而是展现各种效应功能，例如使抗体参与抗体依赖性细胞毒性。
表1
还描述了My9-6的人类化型式，本文中不同地命名为“huMy9-6”和“人类化My9-6”。
人类化的目标是降低异种抗体(例如鼠类抗体)的免疫原性，以引入人类，同时维持抗体的完全抗原结合亲和性和特异性。人类化抗体可以使用几种技术(例如表面重修和CDR移植)产生。如本文所用，表面重修技术使用分子建模、统计分析和诱变的组合来改变抗体可变区的非CDR表面以类似于靶宿主的已知抗体的表面。
用于表面重修抗体的策略和方法以及用于降低不同宿主内抗体的免疫原性的其他方法公开于美国专利号5,639,641(Pedersen等)中，其全文以引用方式并入本文中。简单地说，在优选方法中，(1)生成一批抗体重链和轻链可变区的位置对齐，以给出一组重链和轻链可变区框架的表面暴露的位置，其中所有可变区的对齐位置至少约98％相同；(2)针对啮齿类动物抗体(或其片段)定义一组重链和轻链可变区框架表面暴露的氨基酸残基；(3)鉴别与一组啮齿类动物表面暴露的氨基酸残基最紧密相同的一组重链和轻链可变区框架表面暴露的氨基酸残基；(4)步骤(2)中定义的所述组的重链和轻链可变区框架表面暴露的氨基酸残基被步骤(3)中鉴别的所述组的重链和轻链可变区框架表面暴露的氨基酸残基取代，除了那些在啮齿类动物抗体的互补决定区的任何残基的任何原子的5埃内的氨基酸残基；和(5)产生具有结合特异性的人类化啮齿类动物抗体。
抗体可以使用各种其他技术人类化，所述技术包括CDR移植(EP 0 239400；WO 91/09967；美国专利号5,530,101；以及5,585,089)、贴面或表面重修(EP 0 592 106；EP 0 519596；Padlan E.A.,1991,Molecular Immunology28(4/5):489-498；Studnicka G.M.等，1994,Protein Engineering 7(6):805-814；Roguska M.A.等，1994,PNAS 91:969-973)以及链改组(美国专利号5,565,332)。人类抗体可以通过本领域已知的多种方法(包括噬菌体展示方法)制备。还参见美国专利号4,444,887、4,716,111、5,545,806和5,814,318；以及国际专利申请公开案号WO 98/46645、WO 98/50433、WO 98/24893、WO 98/16654、WO 96/34096、WO 96/33735和WO 91/10741(所述参考文献的全文以引用方式并入)。
如本文进一步所描述，通过建模鉴别My9-6的CDR并预测其分子结构。然后制备My9-6抗体，并如例如美国专利号7,342,110和7,557,189中所述完全表征，所述专利以引用方式并入本文中。许多huMy9-6抗体的轻链和重链的氨基酸序列描述于例如美国专利号8,337,855和美国专利公开案号8,765,740中，其各自以引用方式并入本文中。表2中所示的氨基酸序列描述了本发明的huMy9-6抗体。
表2
尽管鼠类My9-6抗体和人类化My9-6抗体的表位结合片段与鼠类My9-6抗体及其人类化型式分开在本文中讨论，但应理解，术语“抗体”或本发明的“抗体”可包括全长muMy9-6和huMy9-6抗体以及这些抗体的表位结合片段。
在另一实施方案中，提供抗体或其表位结合片段，其包含至少一个具有选自由SEQID NO:1-6组成的组的氨基酸序列并且具有结合CD33的能力的互补决定区。
在另一实施方案中，提供包含至少一个重链可变区和至少一个轻链可变区的抗体或其表位结合片段，其中所述重链可变区包含三个具有分别由SEQ ID NO:1-3表示的氨基酸序列的互补决定区，并且其中所述轻链可变区包含三个具有分别由SEQ ID NO:4-6表示的氨基酸序列的互补决定区。
在另一实施方案中，提供具有重链可变区的抗体，所述重链可变区具有与由SEQID NO:7表示的氨基酸序列共享至少90％序列同一性、更优选与SEQ ID NO:7共享95％序列同一性、最优选与SEQ ID NO:7共享100％序列同一性的氨基酸。
类似地，提供具有轻链可变区的抗体，所述轻链可变区具有与由SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列共享至少90％序列同一性、更优选与SEQ ID NO:8共享95％序列同一性、最优选与SEQ ID NO:8共享100％序列同一性的氨基酸。
在另一实施方案中，提供具有人类化(例如，表面重塑的、CDR移植的)重链可变区的抗体，所述重链可变区与由SEQ ID NO:9表示的氨基酸序列共享至少90％序列同一性、更优选与SEQ ID NO:9共享95％序列同一性、最优选与SEQ ID NO:9共享100％序列同一性。
类似地，提供具有人类化(例如，表面重塑的、CDR移植的)轻链可变区的抗体，所述轻链可变区与对应于SEQ ID NO:10的氨基酸序列共享至少90％序列同一性、更优选与SEQID NO:10共享95％序列同一性、最优选与SEQ ID NO:10共享100％序列同一性。在特定实施方案中，抗体包括CDR外的框架区中的保守突变。
如本文所用，“抗体片段”包括保留结合CD33的能力的抗体的任何部分，通常称为“表位结合片段”。抗体片段的实例优选包括(但不限于)Fab、Fab'和F(ab')2、Fd、单链Fv(scFv)、单链抗体、二硫键连接的Fv(sdFv)和包含VL或VH结构域的片段。表位结合片段(包括单链抗体)可包含单独或与下列全部或部分组合的可变区：铰链区、CH1、CH2和CH3结构域。所述片段可含有Fab片段或F(ab')2片段中的一者或两者。优选地，抗体片段含有整个抗体的所有六个CDR，但含有少于所有这些区域(例如三个、四个或五个CDR)的片段也具有功能。此外，功能等同物可为或可组合以下任何一种免疫球蛋白类的成员：IgG、IgM、IgA、IgD或IgE以及其亚类。Fab和F(ab')2片段可以通过蛋白水解裂解使用如木瓜酶(Fab片段)或胃蛋白酶(F(ab')2片段)等酶来产生。单链FV(scFv)片段是含有连接至抗体轻链可变区(VL)的至少一个片段的抗体重链可变区(VH)的至少一个片段的表位结合片段。接头可以是短的、柔性的肽，其被选择以确保(VL)和(VH)区的正确三维折叠一旦其被连接就发生，从而维持整个抗体的靶分子结合特异性。单链抗体片段是从所述整个抗体衍生的。(VL)或(VH)序列的羧基末端可以通过接头共价连接到互补(VL)和(VH)序列的氨基酸末端。单链抗体片段可以通过分子克隆、抗体噬菌体展示文库或所属领域技术人员熟知的类似技术产生。这些蛋白质可以例如在真核细胞或原核细胞(包括细菌)中产生。
本发明的表位结合片段也可以使用本领域已知的各种噬菌体展示方法产生。在噬菌体展示方法中，功能性抗体结构域展示在噬菌体颗粒的表面上，所述噬菌体颗粒携带编码功能性抗体结构域的多核苷酸序列。具体来说，这种噬菌体可用于展示从一系列或组合抗体文库(例如，人类或鼠类)表达的表位结合结构域。表达结合目的抗原的表位结合结构域的噬菌体可以用抗原(例如)使用标记的CD33或结合或捕获到固体表面或珠粒的CD33进行选择或鉴别。这些方法中使用的噬菌体通常是包括fd和M13结合结构域的丝状噬菌体，所述结合结构域从具有Fab、Fv或二硫化物稳定的Fv抗体结构域的噬菌体表达，所述抗体结构域重组融合至噬菌体基因III或基因VIII蛋白。
可用于制备本发明的表位结合片段的噬菌体展示方法的实例包括以下中公开的那些方法：Brinkman等，1995,J.Immunol.Methods 182:41-50；Ames等，1995,J.Immunol.Methods 184:177-186；Kettleborough等，1994,Eur.J.Immunol.24:952-958；Persic等，1997,Gene 187:9-18；Burton等，1994,Advances in Immunology 57:191-280；PCT公开案号PCT/GB91/01134；PCT公开案WO90/02809；WO 91/10737；WO 92/01047；WO 92/18619；WO 93/11236；WO95/15982；WO 95/20401；以及美国专利号5,698,426；5,223,409；5,403,484；5,580,717；5,427,908；5,750,753；5,821,047；5,571,698；5,427,908；5,516,637；5,780,225；5,658,727；5,733,743和5,969,108；其各自是全文以引用的方式并入本文中。
在选择噬菌体后，可以分离编码片段噬菌体的区域，并使用例如如下文详细描述的重组DNA技术通过在选定的宿主(包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、植物细胞、酵母和细菌)中表达用于产生表位结合片段。举例来说，也可以使用本领域中已知的方法采用重组产生Fab、Fab'和F(ab')2片段的技术，所述方法例如以下中公开的那些方法：PCT公开案WO 92/22324；Mullinax等，1992,BioTechniques 12(6):864-869；Sawai等，1995,AJRI34:26-34；以及Better等，1988,Science 240:1041-1043；所述参考文献的全文以引用方式并入。可用于产生单链Fv和抗体的技术的实例包括以下中所描述的那些技术：美国专利号4,946,778和5,258,498；Huston等，1991,Methods in Enzymology 203:46-88；Shu等，1993,PNAS 90:7995-7999；Skerra等，1988,Science 240:1038-1040。
在本发明的范围内还包括My9-6抗体和人类化My9-6抗体的功能等同物。术语“功能等同物”包括具有同源序列的抗体、嵌合抗体、修饰的抗体和人工抗体，例如，其中每个功能等同物通过其结合CD33的能力来定义。所属领域技术人员将理解，称为“抗体片段”的分子组和称为“功能等同物”的组有重叠。
具有同源序列的抗体是与本发明的鼠类My9-6和人类化My9-6抗体的氨基酸序列具有序列同一性或同源性的氨基酸序列的那些抗体。优选地，与本发明的鼠类My9-6和人类化My9-6抗体的可变区的氨基酸序列具有同一性。应用于本文的氨基酸序列的“序列同一性”和“序列同源性”定义为如例如通过根据Pearson和Lipman,Proc.Natl.Acad.Sci.USA85,2444-2448(1988)的FASTA搜索方法所测定，序列与另一氨基酸序列具有至少约90％、91％、92％、93％或94％序列同一性，并且更优选至少约95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。
如本文所用，嵌合抗体是其中抗体的不同部分衍生自不同动物物种的嵌合抗体。举例来说，具有衍生自与人类免疫球蛋白恒定区配对的鼠类单克隆抗体的可变区的抗体。产生嵌合抗体的方法为业内已知。参见(例如)Morrison,1985,Science 229:1202；Oi等，1986,BioTechniques 4:214；Gillies等，1989,J.Immunol.Methods 125:191-202；美国专利号5,807,715；4,816,567；以及4,816,397，其全文以引用的方式并入本文中。
CDR对于表位识别和抗体结合是最重要的。然而，可以对包含CDR的残基进行改变而不干扰抗体识别和结合其同源表位的能力。举例来说，可进行不影响表位识别的变化、但增加抗体对表位的结合亲和性的改变。
因此，在本发明范围内还包括鼠类和人类化抗体的改良形式，其也特异性地识别和结合CD33，优选具有增加的亲和力。
基于一级抗体序列的知识及其性质(例如结合和表达水平)，若干研究调查了在抗体序列的不同位置引入一个或多个氨基酸变化的效应(Yang,W.P.等，1995,J.Mol.Biol.,254,392-403；Rader,C.等，1998,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,95,8910-8915；Vaughan,T.J.等，1998,Nature Biotechnology,16,535-539)。
在这些研究中，通过使用诸如寡核苷酸介导的定点诱变、盒诱变、易错PCR、DNA改组或大肠杆菌的增变菌株等方法改变CDR1、CDR2、CDR3或框架区中重链和轻链基因的序列，产生了一级抗体的等同物(Vaughan,T.J.等，1998,Nature Biotechnology,16,535-539；Adey,N.B.等，1996，第16章，第277-291页，“Phage Display of Peptides and Proteins”，Kay,B.K.等编，Academic Press)。改变一级抗体的序列的这些方法已经改良了二级抗体的亲和力(Gram,H.等，1992,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89,3576-3580；Boder,E.T.等，2000,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,97,10701-10705；Davies,J.和Riechmann,L.,1996,Immunotechnolgy,2,169-179；Thompson,J.等，1996,J.Mol.Biol.,256,77-88；Short,M.K.等，2002,J.Biol.Chem.,277,16365-16370；Furukawa,K.等，2001,J.Biol.Chem.,276,27622-27628)。
通过改变抗体的一个或多个氨基酸残基的类似定向策略，本文(例如，表1和2中)所述的抗体序列可用于研发具有改良功能(包括改良的CD33亲和力)的抗CD33抗体。改良的抗体还包括具有改良特征的那些抗体，其是通过动物免疫、杂交瘤形成和选择具有特定特征的抗体的标准技术来制备。
CD33靶向的抗体药物缀合物
在某些实施方案中，本发明提供治疗受试者的癌症(例如血液学癌症)的方法，其包括向受试者施用有效量的奥拉帕尼或其药学上可接受的盐和有效量的式(I)的ADC：
或其药学上可接受的盐。N与C之间的双线表示单键或双键，条件为当所述双线是双键时，X不存在，并且Y是氢；并且当所述双线是单键时，X是氢，并且Y是-SO3H。术语“A”是特异性结合至CD33的抗体或其抗原结合片段，其包含SEQ ID NO:1的重链可变区(VH)互补决定区(CDR)1序列、SEQ ID NO:2的VH CDR2序列和SEQ ID NO:3的VH CDR3序列，以及SEQID NO:4的轻链可变区(VL)CDR1序列、SEQ ID NO:5的VL CDR2序列和SEQ ID NO:6的VLCDR3序列。术语“r”是1至10的整数。
在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包括包含与SEQ ID NO:7或9的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变区。在另一实施方案中，抗体或其抗原结合片段包括包含与SEQ ID NO:8或10的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变区。在一个实施方案中，抗体是huMy9-6。在另一实施方案中，抗体是CDR移植或表面重塑的抗体。
ADC1、ADC2、IMGN779和其药学上可接受的盐是可用于所公开的治疗方法中的ADC的具体实例。
“A”如针对式(I)所定义。术语“r”是1至10的整数。制备ADC1、ADC2和IMGN779的方法提供于以下中：美国专利号8,765,740和9,353,127，其整个教导以引用的方式并入本文中。
在其他实施方案中，式(I)的ADC(即ADC1或ADC2)的抗体部分是抗CD33抗体，其包含与SEQ ID NO:9具有至少约90％、91％、92％、93％或94％序列同一性且更优选至少约95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区以及与SEQ ID NO:10具有至少约90％、91％、92％、93％或94％序列同一性且更优选至少约95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的轻链可变区。
在特定实施方案中，式(I)的ADC(即ADC1或ADC2)的抗体部分是huMy9-6抗体，也称为“Z4681A”。在具体实施方案中，CD33靶向的ADC是IMGN779。IMGN779包括通过可裂解二硫化物接头缀合到DGN462的huMy9-6或Z4681A抗体。IMGN779可如下文所绘示表示为ADC3：
或其药学上可接受的盐；或IMGN779也可在下文表示为ADC4：
或其药学上可接受的盐；或IMGN可为ADC3与ADC4的组合。
在某些实施方案中，本文所述的缀合物可包括1-10个细胞毒性苯并二氮呯二聚体化合物、2-9个细胞毒性苯并二氮呯二聚体化合物、3-8个细胞毒性苯并二氮呯二聚体化合物、4-7个细胞毒性苯并二氮呯二聚体化合物或5-6个细胞毒性苯并二氮呯二聚体化合物。
在某些实施方案中，包含本文所述的缀合物的组合物每个抗体分子可包括平均1-10个细胞毒性苯并二氮呯二聚体分子。每个抗体分子的细胞毒性苯并二氮呯二聚体分子的平均比率在本文中称为药物抗体比(DAR)。在一个实施方案中，DAR在2-8、3-7、3-5或2.5-3.5之间。
本文所述的细胞毒性苯并二氮呯二聚体化合物和缀合物可以根据以下中所述的方法来制备：美国专利号8,765,740和9,353,127，例如但不限于第[0395]段-第[0397]段及第[0598]段-第[0607]段、图1、15、22、23、38-41、43、48、55和60，以及美国专利号8,765,740的实施例1、6、12、13、20、21、22、23、26-30和32和第[0007]段-第[0105]段、第[0197]段-第[0291]段，图1-11、16、28，以及美国专利号9,353,127的实施例1-7、9-13、15和16。
术语“阳离子”是指带有正电荷的离子。阳离子可为单价的(例如，Na+、K+等)、二价的(例如，Ca2+、Mg2+等)或多价的(例如，Al3+等)。优选地，阳离子为单价的。
短语“药学上可接受的”指示物质或组合物必须在化学上和/或毒理学上与包含调配物的其他成分和/或用其治疗的哺乳动物相容。
本文所用的短语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的药学上可接受的有机盐或无机盐。示例性盐包括(但不限于)硫酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、单宁酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲烷磺酸盐“甲磺酸盐”、乙烷磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、双羟萘酸盐(即，1,1’-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘甲酸盐))、碱金属(例如，钠和钾)盐、碱土金属(例如，镁)盐和铵盐。药学上可接受的盐可包括包含另一分子，例如乙酸根离子、琥珀酸根离子或其他相对离子。相对离子可为稳定母化合物上的电荷的任何有机部分或无机部分。另外，药学上可接受的盐可在其结构中具有超过一个带电原子。多个带电原子是药学上可接受的盐的部分的情况可具有多个相对离子。因此，药学上可接受的盐可具有一个或多个带电原子和/或一个或多个相对离子。在特定实施方案中，药学上可接受的盐是钠盐或钾盐。
如果本发明的化合物是碱，则可以通过本领域可用的任何合适方法制备所需的药学上可接受的盐，例如，用无机酸(例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、磷酸等等)或用有机酸(例如乙酸、马来酸、琥珀酸、苦杏仁酸、延胡索酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水杨酸、吡喃糖苷(例如葡糖醛酸或半乳糖醛酸)、α羟基酸(例如柠檬酸或酒石酸)、氨基酸(例如天冬氨酸或谷氨酸)、芳香族酸(例如苯甲酸或肉桂酸)、磺酸(例如对甲苯磺酸或乙磺酸)或诸如此类)处理游离碱。
如果本发明的化合物是酸，则可以通过任何合适方法制备所需的药学上可接受的盐，例如，用无机碱或有机碱(例如胺(伯胺、仲胺或叔胺)、碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物或诸如此类)处理游离酸。合适的盐的说明性实例包括(但不限于)有机盐，其衍生自氨基酸(例如甘氨酸和精氨酸)、氨、伯胺、仲胺和叔胺，以及环胺(例如哌啶、吗啉和哌嗪)，以及衍生自钠、钙、钾、镁、锰、铁、铜、锌、铝和锂的无机盐。
PARP抑制剂
PARP是指聚-ADP核糖聚合酶的家族，其参与多种DNA相关功能，包括细胞增殖、分化、细胞凋亡、DNA修复，并且还对端粒长度和染色体稳定性有影响(d’Adda di Fagagna等，1999,Nature Gen.,23(1)：76-80)。“PARP抑制剂”是指选择性地与聚-ADP核糖聚合酶结合并降低其活性的物质。在一方面中，公开方法中使用的PARP抑制剂抑制PARP-1或PARP-2。PARP-1是由PARP-1基因编码的聚-ADP核糖聚合酶。(参见NCBI,2016,PARP1poly(ADP-ribose)polymerase 1,[Homo sapiens(human)]。PARP-2是由PARP-1基因编码的聚-ADP核糖聚合酶。(参见NCBI,2016,PARP2poly(ADP-ribose)polymerase 2,[Homo sapiens(human)]。PARP抑制剂可以使用本领域已知的方法鉴别。参见，例如，Cheung等，“Ascintillation proximity assay for poly(ADP-ribose)polymerase,”Anal.Biochem.2000，第282卷，第24-28页。
合适的PARP抑制剂包括设计为苯甲酰胺的类似物的那些物质，其在PARP的催化位点中与天然底物NAD+竞争性结合。这些PARP抑制剂包括(但不限于)苯甲酰胺、喹啉酮和异喹啉酮、苯并吡喃酮、3,5-二碘-4-(4’-甲氧基-3’,5’-二碘-苯氧基)苯甲酸甲酯(US 5,464,871、US 5,670,518、US 5,922,775、US 6,017,958、US 5,736,576和US 5,484,951，其各自是全文以引用方式併入本文中)。其他合适的PARP抑制剂包括各种环状苯酰胺类似物(即内酰胺)，其是在NAD+位点上强效的抑制剂。其他PARP抑制剂包括(但不限于)苯并咪唑和吲哚(例如，参见EP 841924、EP 127052、US 6,100,283、US 6,310,082、US 2002/156050、US 2005/054631、WO 05/012305、WO 99/11628和US2002/028815，其各自是全文以引用方式併入本文中)。
PARP抑制剂可具有以下结构特征：1)酰胺或内酰胺官能团；2)所述酰胺或内酰胺官能团的NH质子可以保存用于有效键合；3)连接至芳香族环的酰胺基团或与芳香族环稠合的内酰胺基团；4)芳香族平面中的酰胺的最佳顺式构象；和5)将单-芳基甲酰胺限制到杂多环内酰胺中(Costantino等，2001,J Med Chem.,44:3786-3794)；Virag等，2002,PharmacolRev.,54:375-29，后者概述各种PARP抑制剂，并且其全文是各自以引用的方式并入本文中。PARP抑制剂的一些实例包括(但不限于)异喹啉酮和二氢异喹啉酮(例如，US 6,664,269和WO 99/11624，其各自是全文以引用方式併入本文中)、烟碱酰胺、3-氨基苯甲酰胺、单芳基酰基和二环、三环或四环内酰胺、啡啶酮(Perkins等，2001,Cancer Res.,61:4175-4183，其全文以引用的方式并入本文中)、3,4-二氢-5-甲基-异喹啉-1(2H)-酮和苯并噁唑-4-甲酰胺(Griffin等，1995,Anticancer Drug Des,10:507-514；Griffin等，1998,J Med Chem,41:5247-5256；和Griffin等，1996,Pharm Sci,2:43-48，其各自是全文以引用方式併入本文中)、二氢异喹啉-1(2H)-酮、1,6-萘啶-5(6H)-酮、喹唑啉-4(3H)-酮、噻吩并[3,4-c]吡啶-4(5H)酮和噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮、1,5-二羟基异喹啉和2-甲基-喹唑啉-4[3H]-酮(Yoshida等，1991,J Antibiot(Tokyo,)44：111-112；Watson等，1998,Bioorg MedChem.,6:721-734；以及White等，2000,J Med Chem.,43:4084-4097，其各自是全文以引用方式併入本文中)、1,8-萘酰亚胺(Banasik等，1992,J Biol Chem,267:1569-1575；Watson等，1998,Bioo 2001,Nat Med.,7：108-1 13；Li等，2001,Bioorg Med Chem Lett.,11:1687-1690 30:1071-1082，其各自是全文以引用方式併入本文中)、四环内酰胺、1,11b-二氢-[1]苯并吡喃并-[4,3,2-de]异喹啉-3[2H]-酮、1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)(Zhang等，2000,Biochem Biophys Res Commun.,278:590-598；以及Mazzon等，2001,Eur J Pharmacol,415:85-94，其各自是全文以引用方式併入本文中)。PARP抑制剂的其他实例包括(但不限于)以下专利中详述的那些PARP抑制剂：US 5,719,151、US5,756,510、US 6,015,827、US 6,100,283、US 6,156,739、US 6,310,082、US6,316,455、US 6,121,278、US 6,201,020、US 6,235,748、6,306,889、US 6,346,536、US 6,380,193、US 6,387,902、US 6,395,749、US 6,426,415、US 6,514,983、US 6,723,733、US 6,448,271、US 6,495,541、US 6,548,494、US 6,500,823、US 6,664,269、US 6,677,333、US 6,903,098、US6,924,284、US 6,989,388、US 6,277,990、US 6,476,048和US 6,531,464，其各自是全文以引用方式併入本文中。PARP抑制剂的额外实例包括(但不限于)以下专利申请公开案中详述的那些PARP抑制剂：US 2004198693Al、US 2004034078A1、US2004248879A1、US2004249841A 2005080096A1、US 2005171101Al、US2005054631A1、WO 05054201A1、WO05054209A1、WO 05054210Al、WO05058843A1、WO 06003146A1、WO 06003147A1、WO06003148A1、WO06003150A1和WO 05097750A1，其各自是全文以引用方式併入本文中。
以下是可用于公开的发明中的PARP抑制剂的具体实例：
(奥拉帕尼)；(他拉唑帕尼)；
(尼拉帕尼)；(维利帕尼)；
(鲁卡帕尼)；
ABT767；和MP-124
或其药学上可接受的盐。在特定实施方案中，本发明提供治疗癌症的方法，其中PARP抑制剂是奥拉帕尼或其药学上可接受的盐。在另一特定实施方案中，本发明提供治疗癌症的方法，其中PARP抑制剂是他拉唑帕尼或其药学上可接受的盐。
治疗应用
本发明提供通过施用CD33靶向的ADC与PARP抑制剂的组合来治疗患有癌症、特别是AML等血液学癌症的患者的方法。如本文所用，“血液学癌症”是在血液形成组织(例如骨髓)中或在免疫系统的细胞中开始的癌症。血液学癌症的实例是白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤。
可以使用公开方法治疗的癌症包括白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。癌症可是化学疗法敏感的；或者，癌症可是化学疗法抗性的。更特定来说，可以使用公开方法治疗的癌症包括成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性前髓细胞性白血病(APL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、急性单核细胞性白血病(AMOL)、毛细胞白血病(HCL)、T细胞前淋巴细胞性白血病(T-PLL)、大颗粒状淋巴细胞性白血病、成人T细胞白血病、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、霍奇金淋巴瘤(结节性硬化型、混合细胞性、富含淋巴细胞性、淋巴细胞耗竭或未耗竭以及结节性淋巴细胞为主的霍奇金淋巴瘤)、非霍奇金淋巴瘤(所有亚型)、慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞性淋巴瘤、B细胞前淋巴细胞性白血病、淋巴浆细胞淋巴瘤(例如华氏巨球蛋白血症( macroglobulinemia))、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞赘瘤(浆细胞骨髓瘤、浆细胞瘤、单克隆免疫球蛋白沉积疾病、重链病)、结外边缘区B细胞淋巴瘤(MALT淋巴瘤)、结节边缘区B细胞淋巴瘤(NMZL)、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、纵膈(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、柏基特淋巴瘤(Burkittlymphoma)/白血病、T细胞前淋巴细胞性白血病、T细胞大颗粒状淋巴细胞性白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T细胞白血病/淋巴瘤、结节外NK/T细胞淋巴瘤(鼻型)、肠病变型T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤、NK母细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿病/塞扎里综合症(sezarysyndrome)、原发性皮肤CD30阳性T细胞淋巴增殖性病症、原发性皮肤退行发育性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞T细胞淋巴瘤、外周T细胞淋巴瘤(非特指型)、退行发育性大细胞淋巴瘤)和多发性骨髓瘤(浆细胞骨髓瘤卡勒氏病(Kahler's disease))。
在另一实施方案中，癌症是选自急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、B细胞谱系急性成淋巴细胞性白血病(B ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、毛细胞白血病(HCL)、骨髓增生异常综合症、基础浆细胞样DC赘瘤(BPDCN)白血病、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、套细胞淋巴瘤和霍奇金氏白血病(HL)。在另一实施方案中，癌症是急性骨髓性白血病(AML)。在另一实施方案中，急性骨髓性白血病是难治性或复发性急性骨髓性白血病。在其他实施方案中，本发明提供患有多抗药性AML的患者的治疗。P-糖蛋白(PGP)(还称为MDR1)是一种170kD的ATP依赖性药物外排泵。其是ABC超家族的成员，并且在多抗药性(MDR)细胞中大量表达并由ABCB1基因产生。表达PGP的AML细胞至少在一定程度上对常规化学治疗剂的治疗具有抗性。因此，本发明还提供治疗表达PGP的AML的方法。
本发明还提供治疗具有至少一个阴性预后因子(例如，P-糖蛋白的过表达、EVI1的过表达、p53变化、DNMT3A突变、FLT3内部串联重复和/或复杂核型)的血液学癌症的方法。在其他实施方案中，本发明还提供治疗BRCA1、BRCA2或PALB2中表达降低或具有BRCA1、BRCA2或PALB2的突变的血液学癌症的方法。在施用CD-33靶向的ADC与PARP抑制剂的组合之前，选择具有至少一个阴性预后因子和/或BRCA1、BRCA2或PALB2的降低的表达或突变的患者也在本发明的范围内。
在特定实施方案中，将CD33靶向的ADC以药学上可接受的剂型施用于受试者。ADC可通过推注静脉内施用或通过在一段时间内连续输注、通过肌内、皮下、关节内、滑膜内、鞘内、经口、局部或吸入途径施用。含有ADC的药物组合物通过肿瘤内、瘤周、病灶内或病灶周围途径施用，以发挥局部和全身治疗效应。
药学上可接受的剂型通常将包括药学上可接受的试剂，例如载体、稀释剂和赋形剂。这些试剂是众所周知的，并且本领域技术人员可以根据临床情况确定最合适的药剂。合适的载体、稀释剂和/或赋形剂的实例包括：(1)杜贝克氏磷酸盐缓冲盐水，pH值是约7.4，含有约1mg/ml至25mg/ml人类血清白蛋白，(2)0.9％盐水(0.9％w/v NaCl)，以及(3)5％(w/v)右旋糖。
当以水性剂型而非被冻干存在时，CD33靶向的ADC通常将以约0.1mg/ml至100mg/ml的浓度配制，但允许在这些范围之外的宽变化。对于疾病的治疗，CD33靶向的ADC的适当剂量将取决于如上文所定义的待治疗的疾病类型、疾病的严重程度和病程、先前治疗的过程、患者的病史和对抗体的反应以及主治医师的自由决定。抗体适当地一次或在一系列治疗中施用于患者。
在公开方法中，ADC和PARP抑制剂组合施用。组合疗法意指包括向单一受试者施用两种或更多种治疗剂，并且打算包括其中药剂通过相同或不同的施用途径或在相同或不同的时间施用的治疗方案。这些术语包括向受试者施用两种或更多种药剂，使得两种药剂和/或其代谢物同时存在于受试者中。其包括在单独的组合物中同时施用、在相同的组合物中同时施用和在不同的组合物中在不同时间施用。
在公开方法和药物组合物中使用的ADC可以针对无菌性和内毒素水平进行测试的溶液或冻干粉末形式供应。合适的药学上可接受的载体、稀释剂和赋形剂是众所周知的，并且本领域技术人员可以根据临床情况确定。
合适的载体、稀释剂和/或赋形剂的实例包括：(1)杜贝克氏磷酸盐缓冲盐水，pH值是约7.4，含有或不含约1mg/ml至25mg/ml的人类血清白蛋白，(2)0.9％盐水(0.9％w/vNaCl)，以及(3)5％(w/v)右旋糖；并且也可含有如色胺等抗氧化剂以及如Tween 20等稳定剂。
公开包括ADC、PARP抑制剂和通常至少一种额外物质(例如药学上可接受的载体或稀释剂)的药物组合物。本发明的药物组合物被配制成与其预期的施用途径相容。在实施方案中，组合物按照常规程序配制成适合于静脉内、皮下、肌内、经口、鼻内或局部施用于人类生物的药物组合物。
提出以下实施例以向本领域普通技术人员提供完整的公开以及如何制备和使用本发明的测定、筛选和治疗方法的描述，并且不旨在限制发明人认为是他们的发明的本发明的范围。
实施例
实施例1.IMGN779与奥拉帕尼的组合显示增强的抗白血病活性，降低细胞存活率，诱导S期阻滞，并增加活体外细胞凋亡
将人类CD33+AML细胞系(HEL、MV4-11和HL60)用对照、IMGN779、奥拉帕尼或IMGN779和奥拉帕尼进行活体处理。通过WST-8试剂测量增殖。使用Compusyn软件计算协同/加性效应。进行流式细胞术以评价细胞凋亡、细胞存活率和细胞周期效应。
IMGN779治疗在所有测试的CD33+人类AML细胞系中诱导显著活体外生长抑制，其具有剂量依赖性。所测试的人类AML细胞系高度表达人类CD33并且观察到IMGN779细胞杀伤是CD33依赖性的。奥拉帕尼还在所有测试的CD33+人类AML细胞系中发挥剂量依赖性活体外生长抑制，并通过DNA损伤修复机制的逆转来诱导人类AML细胞系中的细胞死亡(数据未显示)。利用IMGN779(25pM-750pM)和奥拉帕尼(10-50μM)的组合治疗在相同的细胞系中显著增强了在单一疗法中的抗白血病效应(图1A、图2A和图3A)。IMGN779与奥拉帕尼治疗的组合指数范围为0.7-0.9，与协同效应一致(图1B、图2B和图3B)。与对照和单一药剂治疗相比，IMGN779与奥拉帕尼的组合显著降低了总体细胞存活率，增加了细胞凋亡，并诱导了几乎完全的S期细胞周期阻滞(图4和图5)。也评估在单独奥拉帕尼存在下在DNA损害辐射暴露后对细胞死亡的效应，显示细胞死亡和细胞凋亡的增加与奥拉帕尼浓度的增加有关，这支持了PARP抑制剂的作用机制(图6A和图6B)。
实施例2.IMGN779与奥拉帕尼的组合在全身性AML异种移植物模型中减少了AML负担并延长了存活期
在这些实验中，通过尾静脉将由特征在于高hCD33表达水平的稳定转染的荧光素酶阳性人类AML细胞(HEL)注射到尚不致命辐照的6-8周龄SCID小鼠中。将白血病移植的动物分成由媒剂对照、IMGN779(15mcg/kg)、奥拉帕尼(100mg/kg)或IMGN779+奥拉帕尼(相同剂量)组成的治疗组。通过小的动物生物发光成像每周评估活体内全身性白血病疾病负担。在整个实验中通过临床检查和体重测量确定毒性。总体研究终点是(a)达到总体发病率/死亡率的时间和/或(b)媒剂治疗的小鼠或用单一药剂疗法治疗的小鼠相比白血病疾病负担的变化。在对照组和实验组中使用8-10只小鼠，这是因为已经发现这是使用Cox-Mandel测试确定统计学显著性所需的最小动物数。将利用Stat Prism统计软件进行简单的统计分析。
通过酬载(0.5mg/kg至5mg/kg，通过抗体)以30μg/kg至100μg/kg范围内的单剂量施用的IMGN779在SCID小鼠带有全身性人类CD33+AML(HEL-荧光素酶)异种移植物的SCID小鼠中总体充分耐受。观察到如通过白血病负担减少和总体存活期延长所反映的显著的剂量依赖性抗白血病活性(图7A-图7C)。如图8A-图8C中所示，媒剂治疗(中值是35.3天，p0.0189)、单独IMGN779(中值是40.2天，p 0.0283)或单独奥拉帕尼(中值是33.7天，p0.0009)治疗相比，植入人类AML细胞(HEL-荧光素酶)并用组合IMGN779与奥拉帕尼治疗的小鼠与载体相比显著延长了总体存活期(从接种中值是46.2天)。在治疗第22天，与媒剂或单一疗法相反，如通过组合治疗组小鼠中的全身生物发光通量确定的总体白血病疾病负担显著减少。这些研究的结果表明，IMGN779与奥拉帕尼的组合增强了HEL-荧光素酶全身性AML异种移植物中的抗肿瘤活性。
实施例3.IMGN779与奥拉帕尼的组合增强了原发性AML群落形成的抑制
评估IMGN779在具有已知的CD33表达水平、疾病状态(重新与继发性与难治性/复发性)、核型、分子畸变(即FLT-3和NPM-1突变状态)和对治疗的反应(如果有的话)的高达50个临床注释的患者AML样品中的活体外效能。
使用从多个患者获得的细胞进行短期菌落形成单位(CFU)测定，以评估原发性AML样品中IMGN779的临床前效能。在来自Roswell Park Hematologic Procurement SharedResource的IRB批准的方案下获得冷冻保存的AML患者样品。在测定当天解冻细胞。在同一天使用Quantibright珠粒分析对患者AML样品进行人类CD33分子的表面表达的量化。对解冻的细胞进行总体存活率评估；对具有>50％活细胞的样品进行进一步量化，并活体外暴露于媒剂(PBS)或不同浓度的IMGN779和/或奥拉帕尼达24小时，之后在半固体甲基纤维素培养基中接种13-15天。在甲基纤维素培养接种后13-15天，使用安装在具有SPOT-Basic成像软件的倒置显微镜上的Spot-RT3照相机量化CFU测定。捕获每一条件的代表性样品，并对一式三份孔进行平均化并报告(+/-标准偏差)，如图9A中所见。
建立了用媒剂和各种浓度的单一药剂IMGN779CFU处理的原发性AML样品的CFU测定。提供了关于临床特征(特别是诊断细胞遗传学和FLT-3突变状态)的信息，并由RPCIHematologic Procurement Shared Resource Facility在IRB批准的方案下供应。发现IMGN779在总共15个原发性AML样品中以剂量依赖性方式抑制原发性AML样品群落形成。将IMGN779与奥拉帕尼组合以验证原发性AML样品中组合的协同性质。组合剂量一式三份进行。每一处理条件的代表性样品图像显示在图9B中。使用非配对T测试来确定治疗组之间的显著性。暴露于IMGN779与奥拉帕尼的组合显著抑制了从患有复发性/难治性、FLT3-ITD和/或复杂核型AML的患者(n＝7)的骨髓样品建立的祖细胞的CFU生长。如图9B中所碱，与单一疗法或媒介对照(p<0.001)相比，在组合IMGN779(10pM)和奥拉帕尼(1μM)疗法后观察到活的CFU的统计学显著抑制。这些结果表明，IMGN779与奥拉帕尼的组合可以在临床化学抗性疾病环境中有效。
实施例4.IMGN779与尼拉帕尼以及IMGN779与他拉唑帕尼的组合显示增强的抗白血病活性，诱导S期阻滞，并增加活体外细胞凋亡和DNA损害
将人类CD33+AML细胞系(HEL-luc和HL60)用以不同剂量范围(100pM-1nM)的单独IMGN779以及与以下每种PARP抑制剂组合进行活体处理：鲁卡帕尼、维利帕尼、他拉唑帕尼和尼拉帕尼。在与WST-8试剂一起孵育后测量增殖。使用Compusyn软件在不同药物浓度下计算协同/加和效应。还进行了流式细胞术，用于组合与单一药物治疗后的细胞凋亡、存活率、DNA损害/修复以及细胞周期效应。
HEL-luc和HL60细胞系中鲁卡帕尼、维利帕尼、尼拉帕尼、他拉唑帕尼和奥拉帕尼的治疗显示他拉唑帕尼在所测试的细胞系中是最有效的PARP抑制剂(图10A-图10B，表3)。与相同浓度的奥拉帕尼和尼拉帕尼的组合治疗相比，利用单独他拉唑帕尼(0.8μM)以及与IMGN779(800pM)的组合的组合治疗导致相同细胞系中细胞存活分数的最大降低(图11A-图11C)。通过Compusyn计算的IMGN779+他拉唑帕尼以及IMGN779+尼拉帕尼疗法的组合指数小于1，与协同效应一致(图12A-图12B)。此外，与HEL-luc细胞系中IMGN779+尼拉帕尼以及IMGN779+奥拉帕尼的组合相比，所测试浓度下IMGN779+他拉唑帕尼的组合导致细胞凋亡(图13A-图13C)、S期细胞周期阻滞(图14A-图14C)以及DNA损害(图15A-图15C)的最大增加。这些实验的结果进一步支持PARP抑制剂的作用机制，并支持PARP抑制剂与IMGN779组合用于治疗癌症。
表3.AML细胞系中的PARP抑制剂的IC50值

Claims (35)

1.一种治疗受试者的癌症的方法，其包括以下步骤：向所述受试者施用有效量的聚-ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂以及有效量的式(I)的抗体-药物缀合物
或其药学上可接受的盐，其中：
N与C之间的双线表示单键或双键，条件为当所述双线是双键时，X不存在，并且Y为氢；当所述双线是单键时，X为氢，并且Y为-SO3H；
其中A为特异性结合至CD33的抗体或其抗原结合片段，其包含SEQ ID NO:1的重链可变区(VH)互补决定区(CDR)1序列、SEQ ID NO:2的VH CDR2序列和SEQ ID NO:3的VH CDR3序列，以及SEQ ID NO:4的轻链可变区(VL)CDR1序列、SEQ ID NO:5的VL CDR2序列和SEQ IDNO:6的VL CDR3序列；并且
r为1至10的整数。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述抗体-药物缀合物是ADC1
或其药学上可接受的盐。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述抗体-药物缀合物是ADC2
或其药学上可接受的盐。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述药学上可接受的盐是钠盐或钾盐。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述PARP抑制剂是PARP-1抑制剂。
6.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述PARP抑制剂是PARP-2抑制剂。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述PARP抑制剂选自由以下组成的组：
或其药学上可接受的盐。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述PARP抑制剂是
或其药学上可接受的盐。
9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段包括包含与SEQ ID NO:7或9的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变区。
10.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段包括包含与SEQ ID NO:8或10的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:9的序列的重链可变区以及包含SEQ ID NO:10的序列的轻链可变区。
12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述抗体是huMy9-6。
13.如权利要求12所述的方法，其中所述抗体是CDR移植或表面重塑的抗体。
14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述抗体-药物缀合物是IMGN779。
15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述癌症选自由白血病、淋巴瘤和骨髓瘤组成的组。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的组：急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、B细胞谱系急性成淋巴细胞性白血病(B ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、毛细胞白血病(HCL)、骨髓增生异常综合征(MDS)、基础浆细胞样DC赘瘤(BPDCN)白血病、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、套细胞淋巴瘤和霍奇金氏白血病(HL)。
17.如权利要求16所述的方法，其中所述癌症是急性骨髓性白血病(AML)。
18.如权利要求17所述的方法，其中所述急性骨髓性白血病(AML)是难治性或复发性急性骨髓性白血病。
19.如权利要求17所述的方法，其中所述急性骨髓性白血病(AML)的特征在于P-糖蛋白的过表达；EVI1的过表达；p53变化；DNMT3A突变；FLT3内部串联重复；复杂核型；BRCA1、BRCA2或PALB2的表达降低；或BRCA1、BRCA2或PALB2的突变。
20.如权利要求15-19中任一项所述的方法，其中所述癌症是化学疗法敏感性的。
21.如权利要求15-20中任一项所述的方法，其中所述癌症是化学疗法抗性的。
22.一种药物组合物，其包含：i)有效量的PARP抑制剂；ii)有效量的式(I)的抗体-药物缀合物：
或其药学上可接受的盐；以及iii)药学上可接受的载体或稀释剂；其中：
N与C之间的双线表示单键或双键，条件为当所述双线是双键时，X不存在，并且Y为氢；当所述双线是单键时，X为氢，Y为-SO3H；
其中A为特异性结合至CD33的抗体或其抗原结合片段，其包含SEQ ID NO:1的重链可变区(VH)互补决定区(CDR)1序列、SEQ ID NO:2的VH CDR2序列和SEQ ID NO:3的VH CDR3序列，以及SEQ ID NO:4的轻链可变区(VL)CDR1序列、SEQ ID NO:5的VL CDR2序列和SEQ IDNO:6的VL CDR3序列；并且
r为1至10的整数。
23.如权利要求22所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物是ADC1：
或其药学上可接受的盐。
24.如权利要求22所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物是ADC2：
或其药学上可接受的盐。
25.如权利要求22-24中任一项所述的药物组合物，其中所述药学上可接受的盐是钠盐或钾盐。
26.如权利要求22-25中任一项所述的药物组合物，其中所述PARP抑制剂是PARP-1抑制剂。
27.如权利要求22-25中任一项所述的药物组合物，其中所述PARP抑制剂是PARP-2抑制剂。
28.如权利要求22-27中任一项所述的药物组合物，其中所述PARP抑制剂选自由以下组成的组：
或其药学上可接受的盐。
29.如权利要求28所述的药物组合物，其中所述PARP抑制剂是
或其药学上可接受的盐。
30.如权利要求22-29中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体或其抗原结合片段包括包含与SEQ ID NO:7或9的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变区。
31.如权利要求22-29中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体或其抗原结合片段包括包含与SEQ ID NO:8或10的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
32.如权利要求22-31中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体或其抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:9的序列的重链可变区以及包含SEQ ID NO:10的序列的轻链可变区。
33.如权利要求22-32中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体是huMy9-6。
34.如权利要求22-32中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体是CDR移植或表面重塑的抗体。
35.如权利要求22-34中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物是IMGN779。
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