ES2214037T3 - Compuestos alcaloides de aminoimiquinona y aminoquinina como inhibidores de caspasa. - Google Patents
Compuestos alcaloides de aminoimiquinona y aminoquinina como inhibidores de caspasa.Info
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Abstract
Un compuesto que tiene la siguiente fórmula estructural: en la que R1 es NH u O; R2 es OZ; R3 es OZ; R4 es H o R; R5 es NH2, NR2, u OZ; y R6 es H o X; en la que Z se selecciona del grupo formado por H, R, COR, mesilo, tosilo, glutamilo, succinilo, y malonilo; R se selecciona del grupo formado por alquilo C1 a C8, fenilo, y bencilo; y X es Cl, Br, o I.
Description
Compuestos alcaloides de aminoimiquinona y
aminoquinina como inhibidores de caspasa.
La presente invención se refiere a compuestos que
se pueden usar como agentes anti-inflamatorios,
inmunomoduladores, neuroprotectores, y anticancerígenos, y a
composiciones que contienen tales compuestos como ingredientes
activos. Más particularmente, la invención concierne a compuestos
alcaloides de aminoquinona y aminoiminoquinona derivados de
triptamina biológicamente activos, composiciones farmacéuticas que
contienen estos compuestos, usos de éstos, y procedimientos para
producir los compuestos.
La prevención y control de la inflamación es de
importancia fundamental para el mantenimiento de la salud humana y
animal, y se ha dedicado mucha investigación al desarrollo de
compuestos que tienen propiedades
anti-inflamatorias. Se han desarrollado ciertos
procedimientos y composiciones químicas que ayudan en la inhibición
o control de la inflamación, pero se necesitan procedimientos y
composiciones anti-inflamatorias adicionales.
También es de gran importancia para el
mantenimiento de una buena salud el control de la proliferación
celular patológica como la que ocurre en caso de cáncer. Se han
dedicado considerables recursos e investigación en oncología y
medidas antitumorales incluyendo quimioterapia. Mientras se han
desarrollado ciertos procedimientos y composiciones químicas que
ayudan en la inhibición, remisión, o control del crecimiento de, por
ejemplo, tumores, se necesitan nuevos procedimientos y composiciones
anticancerígenos.
Un área adicional de gran importancia en el
cuidado de la salud humana y animal es la inmunomodulación. Los
compuestos y composiciones inmunomoduladoras, son útiles para
modular o regular funciones inmunológicas en animales. Los
inmunomoduladores pueden ser inmunoestimulantes para aumentar las
inmunidades para, o iniciar la curación de, ciertas enfermedades y
trastornos. A la inversa, los inmunomoduladores pueden ser
inmunoinhibidores o inmunosupresores para prevenir ciertas
reacciones inmunes no deseables del cuerpo a materiales extraños, o
para prevenir o mejorar reacciones autoinmunes o enfermedades.
Se ha encontrado que los inmunomoduladores son
útiles para tratar enfermedades autoinmunes sistémicas, como lupus
eritematoso y diabetes, así como enfermedades de inmunodeficiencia.
Además, los inmunomoduladores pueden ser útiles para inmunoterapia
de cáncer o para prevenir rechazos de órganos u otros tejidos
extraños en trasplantes, por ejemplo, riñón, corazón, o médula
ósea.
Se han descubierto varios compuestos
inmunomoduladores, incluyendo FK506, derivados dipeptídicos de ácido
muramílico, levamisol, niridazol, oxisurano, flagyl, interferones,
interleucinas, leucotrienos, corticosteroides, y ciclosporinas. Se
ha encontrado que, sin embargo, muchos de estos compuestos tienen
efectos secundarios indeseables y/o una alta toxicidad. Se necesitan
por lo tanto nuevos compuestos inmunomoduladores para proporcionar
un intervalo más amplio de función inmunomoduladora para áreas
específicas con un mínimo de efectos secundarios indeseables.
Se ha encontrado que algunos productos y
organismos naturales son fuentes potenciales para moléculas químicas
que tienen actividades biológicas útiles. Se ha probado que una de
tales fuentes son las esponjas marinas, y varias publicaciones han
editado la descripción de compuestos orgánicos derivados de esponjas
marinas. Tales publicaciones incluyen Scheuer, P. J., Ed.
(1978-1983) Marine Natural Products, Chemical and
Biological Perspectives, Academia Press, Nueva York; Faulkner,
D. (1998) J. Nat. Prod. Rep. 15:113-158;
(1997) J. Nat. Prod. Rep. 14:259-302; (1996)
J. Nat. Prop. Rep. 13:75-125; (1995) J.
Nat. Prop. Rep. 12:223-269; (1994) J. Nat.
Prop. Rep. 11:355-394; (1993) J. Nat. Prop.
Rep. 10:497-539; (1992) J. Nat. Prop.
Rep. 9:323-364; (1991) J. Nat. Prop. Rep.
8:97-147; (1990) J. Nat. Prop. Rep.
7:269-309; (1988) J. Nat. Prop. Rep.
5:613-663; (1987) J. Nat. Prop. Rep.
4:539:576; (1986) J. Nat. Prop. Rep. 3:1-33;
(1984) J. Nat. Prop. Rep. 1:551-598; y
Uemura, D.,K. Takahashi, T. Yamamoto, C. Katayama, J. Tanaka, Y.
Okumura, Y. Hirata (1985) J. Am. Chem. Soc.
107:4796-4798.
Utilizando esponjas como material originario y
complementado por nuevos procedimientos de producción sintéticos, se
han proporcionado a la técnica nuevas clases de compuestos
biológicamente activos y nuevas composiciones farmacéuticas. Sin
embargo, como se indicó anteriormente, hay una gran necesidad de
compuestos adicionales útiles en el tratamiento de varios estados
patológicos.
La presente invención afecta a compuestos
alcaloides de aminoiminoquinona y aminoquinona derivados de
triptamina. Específicamente se ejemplifican en la presente memoria
descriptiva secobatzelinas A y B, así como composiciones que
contienen estos compuestos. Otros aspectos de la invención actual se
refieren a los procedimientos de preparación y el uso de los
compuestos.
En una realización preferida los compuestos de la
presente invención son útiles como inhibidores de enzimas
biológicamente importantes asociadas con procesos inflamatorios y
neurodegenerativos. La capacidad de los compuestos de la presente
invención para inhibir caspasa (CPP32) hace a estos compuestos
útiles en el tratamiento de diversas enfermedades inflamatorias
agudas y crónicas incluyendo, pero no limitándose a, pancreatitis,
artritis reumatoide, osteoartritis, asma, enfermedad inflamatoria
del intestino, psoriasis y en ciertos trastornos neurológicos como
la enfermedad de Alzheimer.
En una segunda realización preferida, los
compuestos de la presente invención se pueden usar para inhibir la
proliferación celular patológica como la asociada con cáncer. En una
realización adicional, se puede encontrar que los compuestos de la
presente invención son útiles en la modulación inmune y, más
específicamente, supresión inmune.
Secobatzelina A (alcaloide de aminoiminoquinona)
tiene similitudes estructurales con las isobatzelinas
A-D previamente conocidas, una clase de compuestos
que tienen un esqueleto carbonado de aminioiminoquinona derivado de
pirrolo[4,3,2,-de]quinolina. Sin embargo,
secobatzelina A posee un pirroloaminoiminoquinona inusual con un
sistema de esqueleto carbonado que no se ha presentado previamente a
partir de una fuente natural. Secobatzelina A ha mostrado una fuerte
actividad biológica contra la enzima CPP32 con un valor de
CI_{50} de 0,02 \mug/ml y actividad anticancerígena
significativa contra leucemia murina P388 (CI_{50} = 0,06
\mug/ml) y adenocarcinoma de pulmón humano A549 (CI_{50} = 0,04
\mug/ml). Las secobatzelinas A y B se pueden aislar a partir de
esponjas marinas del género Batzella como se describe en la
presente memoria descriptiva.
La figura 1 muestra fórmulas estructurales de
secobatzelina A y B y sus diacetatos.
La figura 2 es un esquema que muestra el
aislamiento de secobatzelinas A y B a partir de una fuente de
esponja marina.
La presente invención afecta a compuestos
alcaloides de aminoiminoquinona y aminoquinona derivados de
triptamina llamados secobatzelinas, y análogos de éstos. Otros
aspectos de la presente invención se refieren a composiciones que
contienen las secobatzelinas así como procedimientos de preparación
y uso de los compuestos. En una realización, los compuestos de la
presente invención se pueden usar como inhibidores de enzimas
biológicamente importantes. En una realización específica, los
compuestos de la presente invención se pueden usar para inhibir la
inflamación y/o neurodegeneración.
Una realización específica de la presente
invención se refiere al uso de compuestos de la presente invención
como inhibidores de caspasa. Los inhibidores de caspasa son útiles
en el tratamiento de diversas enfermedades inflamatorias graves y
crónicas como pancreatitis, artritis reumatoide, osteoartritis,
asma, enfermedad inflamatoria del intestino, psoriasis y ciertos
trastornos neurológicos como la enfermedad de Alzheimer.
Las caspasas, que incluyen CPP32, son un grupo de
al menos diez proteasas de cisteína (también conocidas como enzimas
conversoras de la interleucina-2 o ICE_{2}), que
desempeñan un papel principal en el mecanismo de muerte celular
programado conocido como apoptosis (Patel, T., G. J. Gores, S. H.
Kaufmann [1996] FASEB 10:587-597). Estas
enzimas son los homólogos en mamíferos del producto genético
ced-3 que modula los procesos apoptóticos en el
nematodo Caernorhabditis elegans (Schwartz, L. M., C. E.
Milligan [1996] Trends Neursci 19:555-562).
Las mutaciones en ced-3 previenen la apoptosis
durante el desarrollo normal del nematodo y en mamíferos,
inhibidores de caspasa-3 (CPP32) han mostrado que
previenen la muerte mediada por apoptosis en varias líneas celulares
y en varios tejidos (Schwartz, L. M., C. E. Milligan [1996]
Trends Neursci 19:555-562, Milligan, C.E., D.
Prevette, H. Yaginuma, S. Homma, C. Cardwell, L. C. Fritz, K. J.
Tomaselli, R. W. Oppenheim, L. M. Schwartz [1995] Neuron
15:385-393).
Los mecanismos apoptóticos desempeñan papeles
importantes en el desarrollo normal del repertorio inmune y en
remodelación de tejidos durante el desarrollo embriónico tanto en
vertebrados como en invertebrados (Kerr, J. F. R., A. H. Wyllie, A.
R. Currie [1972] Br. J. Cancer 26:239-257).
Sin embargo, se ha implicado apoptosis anormal en varios estados de
enfermedad humana y experimental. Por ejemplo, en daño grave en el
SNC seguido de ataque hipóxico-isquémico en ratones,
hay evidencia de que la apoptosis inducida por caspasa es el factor
principal en la destrucción neuronal (Hara, H., R. M. Friedlander,
V. Gagliardini, C. Ayata, K. Fink, Z. Huang, M.
Shimizu-Sasamata, J. Yuan, M. A. Moskowitz [1997]
Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 94:2007-2012).
Además, las caspasas han estado implicadas en trastornos
neurodegenerativos crónicos, lo que sugeriría su importancia en la
patogénesis de esclerosis lateral amiotrófica (ELA) y en la
enfermedad de Alzheimer (Friendlander, R. M., R. H. Brown, V.
Gagliardini, J. Wang, J. Yuan [1997] Nature 388:31; Kim, T.
-W., W. H. Pettingell, Y. -K. Jung, D. M. Kovacs, R. E. Tanzi [1997]
Science 277:373-376). La
caspasa-3 (CPP32) también se ha mostrado implicada
en la estimulación de la secreción de IL-8 de los
sinoviocitos en artritis reumatoide que sirve para aumentar la
inflamación de las articulaciones y el progreso de la enfermedad
(Sekine, C., H. Yagita, T. Kobata, T. Hasunuma, K. Nishioka, K.
Okumura [1996] Biochem. Biophys. Res. Commun.
228:14-20). Por lo tanto, los inhibidores de las
actividades enzimáticas de caspasa se pueden usar para reducir el
daño patológico inducido por los sucesos apoptóticos mediados por
caspasa.
En una realización específica adicional, los
compuestos de la presente invención se pueden usar para tratar la
proliferación celular en humanos o en otros animales. De este modo,
las composiciones y procedimientos de la presente invención se
pueden usar en el tratamiento de un animal (incluyendo humanos) que
hospeda células cancerígenas incluyendo, por ejemplo, la inhibición
del crecimiento de las células tumorales en un huésped mamífero. Más
particularmente, los presentes compuestos se pueden usar para
inhibir en un humano el crecimiento de células tumorales, incluyendo
células de tumores de mama, colon, SNC, ovario, renal, próstata, o
pulmón, así como células de leucemia o melanoma humanas. La
capacidad para lograr actividad anticancerígena mostrada por los
presentes compuestos conduciría a una persona de habilidad normal en
la técnica a reconocer la aplicabilidad de los presentes compuestos,
composiciones, y procedimientos para tipos adicionales de cánceres
como se describe en la presente memoria descriptiva.
De acuerdo con la presente invención, los
procedimientos para inhibir tumores en un huésped incluyen poner en
contacto las células tumorales con una cantidad efectiva de las
nuevas composiciones farmacéuticas de la invención. Las células
tumorales inhibidas por la invención son aquellas que son
susceptibles a los presentes compuestos descritos en la presente
memoria descriptiva o composiciones que comprenden esos
compuestos.
La presente invención además hace referencia al
uso de los presentes compuestos como inmunomoduladores. En una
realización, la presente invención hace referencia al uso
inmunosupresor de los presentes compuestos. Estos compuestos se
pueden usar para reducir, suprimir, inhibir, o prevenir respuestas
inmunes no deseadas. Ventajosamente, esta inmunosupresión se puede
lograr sin citotoxicidad. De este modo, los compuestos de la
presente invención son útiles para tratamientos de humanos o
animales que requieren inmunosupresión. Los ejemplos de las
dolencias para las que la inmunosupresión es deseable incluyen, pero
no se limitan a, tratamiento de prevención de enfermedades
autoinmunes como diabetes, lupus y artritis reumatoide. La
inmunosupresión también se necesita frecuentemente junto con
trasplantes de órganos. Los agentes inmunosupresores también se
pueden utilizar cuando un humano o animal ha sido, o puede estar,
expuesto a superantígenos u otros factores conocidos por causar
sobreestimulación del sistema inmune. Los compuestos de la presente
invención también son útiles como patrones para evaluar la actividad
de otros agentes inmunosupresores putativos.
En una realización específica, se ha encontrado
que los compuestos de la presente invención inhiben calcineurina. La
calcineurina es una enzima y un miembro de la familia de
serina/treonina fosfatasa de proteínas de transducción de señales
celulares. La calcineurina está reconocida por ser una molécula de
señalización principal que regula la capacidad de respuesta inmune.
La actividad de la calcineurina fosfatasa se inhibe a través de una
asociación con un complejo formado por el inmunosupresor FK506 y una
proteína intracelular, FKBP-12 (Proteína de Unión
FK506), que da como resultado inmunosupresión. Por lo tanto, los
inhibidores de calcineurina, como los compuestos de la presente
invención, se pueden usar para inhibir la capacidad de respuesta
inmune a través de la inhibición de la actividad de fosfatasa
asociada a calcineurina. La inhibición de la capacidad de respuesta
inmune mediante los presentes compuestos es útil para el tratamiento
de dolencias que incluyen enfermedad autoinmune sistémica,
enfermedades de inmunodeficiencia, inmunoterapia de cáncer o para
prevenir rechazos de órganos extraños o de otros tejidos en
trasplantes (es decir, riñón, corazón, pulmones, colon, hígado, o
médula ósea).
La secobatzelina A (aminoiminoquinona) y
secobatzelina B (aminoquinona), aisladas a partir de esponjas
marinas, se muestran en la figura 1 como Estructuras 1 y 2,
respectivamente. La acetilación de secobatzelina A proporciona el
diacetato mostrado como Estructura 3 en la figura 1. La acetilación
de secobatzelina B proporciona el diacetato mostrado como Estructura
4 en la figura 1.
Las esponjas marinas, a partir de las cuales se
pueden aislar los compuestos de la presente invención, se pueden
recolectar de las Bahamas, Bimini Norte, oeste de Alice Town
(latitud 25º 44,288' N; longitud 79º 18,981' O). Por ejemplo, se
obtuvo una muestra a la profundidad de 138,7 metros. Hábitat: 10
grados de pendiente de arena con pequeñas rocas aisladas. Sustrato:
Roca. Morfología: colchón incrustrante grueso con papila. Color
interno y externo: negro. Otro sitio de recolección es el Gran Banco
de Bahamas occidental (latitud 25º 23,921' N; longitud 79º 14,104'
O). Otra muestra se recogió a 152,5 m. Hábitat: 60 grados de
pendiente de arena y cascote. Sustratos: cascote. Morfología:
colchón incrustrante grueso con papila. Color externo: marrón oscuro
y color interno: marrón. Descripción taxonómica detallada:
Especie - no descrita
Esta esponja ha sido asignada al género
Batzella, como se describe y se trata por Van Socst y
col., 1996, pp 95-97 (Buletin de l'Institut
Royal des Sciences Naturelles de Belgique, Biologie, 66 suppl:
89-101). La esponja tiene un ectosoma desmontable y
un esqueleto de espícula de estrongilos de categoría de tamaño uno.
Algunos de los estrongilos tienen puntas malformadas. La esponja
incorpora sedimento en su esqueleto. Hay numerosas papilas dispersas
sobre la superficie de la esponja. La esponja es marrón oscuro
cuando esta viva, marrón cuando se preserva en etanol. Las muestras
de referencia taxonómicas se han depositado en el Harbor Branch
Oceanographic Institution Museum, números de catálogo 003:00930
(25-VIII-94-1-001)
y 003:00931
(26-VIII-94-4-003).
Los especímenes certificados se preservan en etanol al 70% con una
vida útil en depósito esperada de al menos 30 años y son accesibles
para aquellos expertos en la materia con, por ejemplo, fines de
identificación taxonómica.
Los compuestos de la presente invención se pueden
representar por la siguiente fórmula general:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R^{1} es NH u
O;
R^{2} es OZ;
R^{3} es OZ;
R^{4} es H o R;
R^{5} es NH_{2}, NR_{2}, u OZ; y
R^{6} es H o X;
en la que Z se selecciona del grupo formado por
H, R, COR, mesilo, tosilo, glutamilo, succinilo, y malonilo;
R se selecciona del grupo formado por alquilo
C_{1} a C_{8}, fenilo, y bencilo; y
X es Cl, Br, o I.
En la presente memoria descriptiva se
ejemplifican específicamente los compuestos que tienen las
siguientes estructuras:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La Estructura 1 es secobatzelina A y la
Estructura 2 es secobatzelina B. Incluidas dentro del alcance de la
presente invención están las sales de las Estructuras protonadas 1 y
2. Estas sales pueden ser, por ejemplo, Cl^{-}; Br^{-};
CH_{3}COO^{-}; HSO_{3}O^{-}, citrato u oxalato.
La acilación (OH-OCOR) se puede
conseguir mediante, por ejemplo, tratar un compuesto con una mezcla
de anhídrido de alquilo y piridina (1:1) a temperatura ambiente
durante la noche o manteniendo a 60ºC durante \sim 4
horas.
horas.
La alquilación (NH-NR^{4} o
NH_{2} - NR^{5}) se puede conseguir, por ejemplo, llevando a
reflujo el compuesto en acetona seca con RI (yoduro de alquilo) en
presencia de K_{2}CO_{3} anhidro.
La hidrogenolisis (Cl-H) se puede
lograr al agitar un compuesto en etanol en una atmósfera de H_{2}
a 345 kPa en presencia del catalizador de vanadio al 10% sobre
carbón activado.
La conversión de
(R^{5}=NH_{2}-OH) se puede lograr mediante
diazotización de un compuesto a 5ºC seguido del calentamiento del
producto diazotizado durante unas pocas horas en presencia de
etanol.
Una realización preferida es secobatzelina A
(Estructura 1) y su diacetato (Estructura 3):
| Secobatzelina A (1) | R^{1}=NH, R^{2}=OH, R^{3}=OH, R^{4}=H, R^{5}=NH_{2}, R^{6}=Cl |
| Diacetato (3) | R^{1}=NH, R^{2}=OCOR, R^{3}=OCOR, R^{4}=H, R^{5}=NH_{2}, R^{6}=Cl |
Una segunda realización preferida es
secobatzelina B (Estructura 2) y su diacetato (Estructura 4):
| Secobatzelina B (2) | R^{1}=O, R^{2}=OH, R^{3}=OH, R^{4}=H, R^{5}=NH_{2}, R^{6}=Cl |
| Diacetato (4) | R^{1}=O, R^{2}=OCOR, R^{3}=OCOR, R^{4}=H, R^{5}=NH_{2}, R^{6}=Cl |
Las realizaciones preferidas adicionales incluyen
compuestos en los que los grupos R se seleccionan,
independientemente, de los grupos formados por alquilo
C_{1}-C_{8} y fenilo; Z se selecciona entre
mesilo, tosilo, glutamilo, succinilo y malonilo; y X se selecciona
entre Cl, Br, o I. Los análogos específicos de la presente invención
son los
siguientes:
siguientes:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
Las células P388 se pueden obtener del National
Cancer Institute, Bethesda, MD, y las células A549 se pueden obtener
de la American Type Culture Collection, Rockville, MD. Todas las
líneas celulares se mantienen en un medio 1640 de Roswell Park
Memorial Institute (RPMI) complementado con suero de cría de bovino.
Todas las líneas celulares se cultivaron en matraces de cultivo de
tejido de plástico y se mantuvieron en un incubador a 37ºC en aire
humidificado que contiene CO_{2} al 5%. Antes del ensayo, se
subcultivaron cultivos de reserva libre de antibiótico de cada una
de las líneas celulares hasta 10^{6} células/ml mediante dilución
en medio de crecimiento fresco en intervalos de 2 a 3 días.
Para evaluar los efectos antiproliferativos de
los agentes contra la línea celular P388, se establecieron cultivos
de 200 \mul (placas de cultivo de tejido de 96 pocillos, Nunc,
Dinamarca) a 1 x 10^{5} células/ml en un medio libre de
medicamento que contiene el agente de prueba a 10,0, 1,0, 0,10 y
0,010 \mug/ml. El disolvente para todas las diluciones es etanol.
Todos los cultivos experimentales se iniciaron en un medio que
contiene sulfato de Gentamicina (50 \mug/ml; Schering Corporation,
Kenilworth, NJ). Tras una exposición de 48 horas, las células P388
se enumeraron usando bromuro de
3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazolio
(MTT) como se describe a continuación.
Se utilizaron procedimientos similares para
células A549 que requieren una exposición de 48 h adicional antes de
la adición de MTT. Los resultados se expresan como porcentaje de
inhibición en comparación al control negativo (sin medicamento). Los
controles de medicamento positivos se incluyen para monitorizar la
sensibilidad al medicamento de cada una de las líneas celulares.
Éstos incluyen las diluciones variantes de
5-fluorouracilo, adriamicina, metotrexato y
vinblastina.
Para cuantificar los efectos en la proliferación
celular y los valores de CI_{50}resultantes, se añadieron 75
\mul de medio de crecimiento caliente que contiene 5 mg/ml de MTT
en cada pocillo, los cultivos se devuelven al incubador, y se
dejaron como están durante 90 minutos. Para cuantificar
espectrofotométricamente la formación de formazán reducido, las
placas se centrifugan (900 x g 5 minutos), los cultivos de fluidos
se retiraron mediante aspiración, y se añadieron 200 \mul de
isopropanol acidificado (2 ml de HCl concentrado/litro de
isopropanol) por pocillo. La absorbancia de las soluciones
resultantes se mide a 570 nm con un lector de placa (MR700
Microplate Reader, Dynatech Laboratories, Chantilly, VA). La
absorbancia de los pocillos de prueba se divide por la absorbancia
de los pocillos libres de medicamento, y la concentración del agente
que da como resultado un 50% de la absorbancia de cultivos sin
tratar (CI_{50}) se determina mediante regresión lineal de datos
transformados por logit. Se ha observado rutinariamente una relación
lineal entre el número de células tumorales y producción de formazán
sobre el intervalo de densidades celulares observado en esos
experimentos. Los cuatro controles de medicamento patrones
(indicados anteriormente) se incluyen en cada ensayo como un control
para monitorizar la sensibilidad del medicamento de cada una de las
líneas celulares y los valores de CI_{50} se determinan para cada
combinación de medicamento-célula.
Estos ensayos miden la capacidad de los
extractos/compuestos puros para inhibir la capacidad de respuesta
inmune alogénica (RLM) y afectar la viabilidad de los linfocitos no
estimulados. Estos procedimientos generales se describen en los
siguientes: Longley, R. E., D. Caddigan, D. Harmody, M. Gunasekera y
S. P. Gunasekera (1991) Transplantation 52:
650-656.
Este ensayo se basa en las propiedades de
extractos/compuestos puros que sirven como agentes activos de la
proteína quinasa C (PKC) para inducir o inhibir la adherencia de
células de linfoma murino EL-4.IL-2
en superficies plásticas. La metodología general de este ensayo se
describe en detalle en el siguiente: Longley, R. E. y D. Harmody
(1991) J. Antibiotics 44:93-102.
Cada uno de los siguientes ensayos se llevaron a
cabo usando un sistema de manejo de líquidos automatizados Tecan
8051 o Tecan Megaflex. Los extractos de organismos marinos se
analizaron a 5 \mug/ml para todos los ensayos excepto DPP IV y LAR
que se analizaron a 50 \mug/ml. La inhibición de la actividad de
enzima encontrada en presencia de extracto se comparó con la de un
control no inhibido. Los extractos que inhibieron la enzima > 50%
se volvieron a analizar por triplicado para confirmar la
actividad.
Se preparó CD45 como una fracción de membrana a
partir de células Jurkat (clon E6-1). Las células se
cultivaron en un medio de RPMI-1640 complementado
con suero de bovino fetal al 10% y L-glutamina,
lisadas en tampón de lisis hipotónico (Tris-HCl 25
mM, sacarosa 25 mM, EDTA 0,1 mM, MgCl_{2} 5 mM, ditiotreitol 5 mM,
fluoruro de fenilmetano sulfonilo 1 mM y leupeptina 10 \mug/ml, pH
7,5) y se centrifugaron a 500 x g durante 5 minutos. El sobrenadante
se centrifugó entonces a 100.000 x g durante 1 h. La pastilla, que
contiene CD45, se resuspendió en tampón de ensayo (acetato sódico
100 mM, EDTA 1 mM, pH 6,0) y se almacenó a -80ºC.
El ensayo se basó en lo descrito por Imoto y
col. (Imotok, M. H., H. Kakeya, T. Sawa, C. Hayashi, M. Hamada,
T. Takeuchi y K. Umezawa "Dephostin, a novel protein tyrosine
phosphatase inhibitor produced by Streptomyces I. Taxonomy,
isolation and characterization" J. Antibiotics
46:1342-1346) y se llevó a cabo en un volumen total
de 50 \mul. La suspensión de membrana CD45 (1 \mug de
proteína/pocillo) se incubó en tampón de ensayo a 37ºC con
o-fosfotirosina 2,5 mM como sustrato. Las muestras
de prueba se incluyeron según se requiera. La reacción se terminó
mediante la adición de HClO_{4} al 5% (150 \mul). Se midió el
fosfato inorgánico liberado mediante el cambio en la absorbancia a
620 nm tras la adición de 50 \mul de reactivo colorante
(H_{2}SO_{4} 6 N, 1 mg/ml de verde de malachita, molibdato de
amonio al 2,5% y Tween 20 al 0,2%).
Se preparó calmodulina a partir de cerebro bovino
según el procedimiento de Wallace y col. (Wallace, R. W., E.
A. Tallant y W. Y. Chung [1983] "Assay of calmodulin by Ca^{2+}
dependent phosphodiesterase" Meth. Enzymol.
102:244-286). La calmodulina se usó directamente o
se juntó con sefarosa-4B para formar la columna de
afinidad calmodulina-sefarosa necesaria para el
aislamiento de calcineurina. Se preparó calcineurina a partir de
cerebro bovino según el procedimiento de Tallant y col.
(Tallant, E. A., R. W. Wallace y W. Y. Chung [1983] "Purification
and radioimmunoassay of calmodulin-dependant protein
phosphatase from bovine brain" Meth. Enzymol.
102:244-286), se concentró, se tomaron alícuotas y
se almacenó a -80ºC.
Se analizó la actividad de la calcineurina en
placas de microvaloración de 96 pocillos en un volumen final de 50
\mul. Cada pocillo contenía Tris-HCl 50 mM pH 7,5,
MnCl_{2} 0,5 mM, CaCl_{2} 0,05 mM, DTT 1 mM, fosfato de
p-nitrofenilo 50 mM (pNPP), calcineurina 0,3 \mug,
un exceso de cinco veces de calmodulina, y muestras de prueba o
compuestos de control. Las placas se incubaron a 30ºC durante 60
min. Se determinó el p-nitrofenol liberado por el
cambio en la absorbancia a 405 nm.
Se preparó cdc25A como una proteína recombinante
expresada en Escherichia coli. La actividad de la fosfatasa
de la enzima se analizó en un volumen final de 200 \mul en placas
de 96 pocillos mediante el procedimiento de Baratte y col.
(Baratte, B., L. Mejier, K. Galatnikov y D. Beach (1992)
"Screening for antimitotic compounds using the cdc25 tyrosine
phosphatase, an activator of the mitosis-inducing
p34^{cdc2}/cyclin B^{cdc13} protein kinase" Anticancer
Research 12:873-880). Cada pocillo contenía
Tris-HCl 50 mM pH 8,0, NaCl 50 mM, EDTA 1 mM, DTT
15 mM, pNPP 50 mM hasta 10 \mug de proteína recombinante y
muestras de prueba o controles. Las placas se incubaron a 37ºC
durante 90 minutos y el p-nitrofenol liberado se
determinó mediante el cambio en la absorbancia a 405 nm. El ensayo
(Patente de Estados Unidos Núm. 5.294.538 concedida a Mitotix, Inc.,
Cambridge, MA) es usado por HBOI con licencia de Mitotix.
Se produjo DPP IV humano recombinante a través de
la expresión transitoria de una construcción de plásmido DPP IV
humano transfectado en células COS-7 mediante
electroporación. La actividad de pepsidasa de esta enzima se
determinó en solución salina de tampón fosfato (PBS) en un volumen
final de 200 \mul en placas de 96 pocillos. Cada pocillo contenía
gly-pro-pNA 200 mM como sustrato, 10
\mul de DPP IV recombinante y muestras de prueba o controles. Se
determinó la p-nitroanilina liberada por el cambio
en la absorbancia a 405 nm tras una incubación de 60 min a 37ºC.
Se evaluó aminopeptidasa N usando un ensayo de
captura inmunoabsorbente ligado a enzima (ELISA). Brevemente, las
placas de 96 pocillos se recubrieron con inmunoglobulinas
anti-ratón de cabra (Sigma #M4169). Tras una
incubación durante la noche las placas se lavaron tres veces con
PBS-0,1% Tritón X-100. El anticuerpo
secundario (captura) se añadió entonces a la placa (100
\mul/pocillo, 3,7 \mug/ml; antihumano MY7, Coulter Corporation)
y se incubaron durante 3 horas a temperatura ambiente. Las placas se
lavaron tres veces con PBS-0,1% Tritón
X-100. La fuente de aminopeptidasa N fue la línea
celular KG-1, 100 \mul de una dilución apropiada
del lisato celular KG-1 se añadió a cada pocillo, se
incubaron durante 3 horas y se lavaron entonces una última vez. El
ensayo de enzima se llevó a cabo en PBS en un volumen final de 200
\mul con ala-pNA 200 \muM como sustrato y
muestras de prueba o controles. Se determinó la
p-nitroanilina liberada por el cambio en la
absorbancia a 405 nm tras una incubación de 18 h a 37ºC.
Se tomaron alícuotas de las muestras de prueba en
las placas de microvaloración de 96 pocillos y se dejaron secar al
aire. Se diluyó la enzima CPP32 de reserva (BASF, Worcester, MA) al
añadir 10 \mul de la enzima a 17 ml del tampón de reacción (Hepes
50 mM pH 7,5; glicerol al 10%; ditiotreitol 5 mM; EDTA 0,5 mM). Se
añadió un volumen de 180 \mul de la enzima diluida a los pocillos
que contienen las muestras de prueba secas, o a los pocillos vacíos
(control). Los contenidos de los pocillos de microvaloración se
mezclaron al agitar en un agitador de placas. Las placas se
incubaron a 30ºC durante 5 minutos. Se añadió un volumen de 20
\mul de sustrato (Ac-DEVD-pNA) a
cada pocillo que dio como resultado una concentración final de 25
\muM. Los controles para cada placa estuvieron formados por un
control inhibidor (concentración final de DEVD-CHO
50 nM); control positivo (enzima y sustrato) y control negativo
(sustrato y tampón de reacción). Las placas se recubrieron con papel
de aluminio y se mezclaron usando un agitador de placa durante 5 min
y entonces se incubaron a 30ºC durante 30 minutos. Las placas se
leyeron usando un lector de placas con absorbancia medida a 405 nm.
Los datos se expresaron como porcentaje de inhibición al comparar
los valores de absorbancia de las muestras de prueba con aquellos
del control positivo (sin muestra). La determinación de la CI_{50}
se definió como la concentración de muestra/compuesto puro que dio
como resultado una inhibición de 50% del valor de absorbancia de
enzima-sustrato.
Se tomaron alícuotas de las muestras de prueba en
las placas de microvaloración de 96 pocillos y se dejaron secar al
aire. Se diluyó la enzima ICE de reserva (BASF, Worcester, MA) en
tampón de reacción (Hepes 50 mM pH 7,5; glicerol al 10%;
ditiotreitol 5 mM; EDTA 0,5 mM y
\beta-mercaptoetanol 5 mM) hasta una concentración
que proporcionó un aumento mínimo de 0,1 unidades de densidad óptica
después de 30 minutos de tiempo de reacción. La enzima ICE diluida
se incubó a temperatura ambiente durante 5 minutos antes de tomar
alícuotas de 180 \mul en cada pocillo de muestra. Las placas se
incubaron a 30ºC durante 5 minutos tras una breve mezcla de los
contenidos del pocillo al agitar en un agitador de placa. Se añadió
un volumen de 20 \mul de enzima sustrato
(Ac-YVAD-pNA) a cada pocillo que dio
como resultado una concentración final de 50 \muM. Los controles
para cada placa estuvieron formados por un control inhibidor
(concentración final de YVAD-CHO 50 mM); control
positivo (enzima y sustrato) y control negativo (sustrato y tampón
de reacción). Las placas se recubrieron con papel de aluminio y se
mezclaron usando un agitador de placa durante 5 min y entonces se
incubaron a 30ºC durante 30 minutos. Las placas se leyeron usando un
lector de placas con absorbancia medida a 405 nm. Los datos se
expresaron como porcentaje de inhibición al comparar los valores de
absorbancia de las muestras de prueba con aquellos del control
positivo (sin muestra). La determinación de la CI_{50} se definió
como la concentración de la muestra o compuesto puro que dio como
resultado una inhibición de 50% del valor de absorbancia de
enzima-sustrato.
A continuación hay ejemplos que ilustran
procedimientos para poner en práctica la invención. Todos los
porcentajes son en peso y todas las proporciones de la mezcla de
disolvente son en volumen a menos que se indique lo contrario.
La figura 2 muestra un esquema para el
aislamiento de los presentes compuestos a partir de una esponja
marina
Estructura 1
Compuesto no cristalino coloreado naranja oscuro,
pf > 300ºC, (\alpha)_{D} - 135º (c 0,01,
CH_{3}OH)
Peso molecular 255 (257 para el isótopo de
Cl)
Fórmula molecular
C_{10}H_{11}ClN_{3}O_{3} (HRFABMS, NBA) m/z, 256,055,
\Delta 6 mmu y 358,051, \Delta 5 mmu para M+H
UV (MeOH) \lambdamax 322 (\varepsilon
10.100), 233 (13.600), 203 (15.700) nm
IR (KBr) \nu max 3237, 2917, 1658, 1611, 1585,
1500, 1408, 1360,1024, y 752 cm^{-1}
RMN ^{1}H (500 MHz, DMSO-d _{6})
\delta 12,5 (1H, s a , NH-1), 9,80 (1H, s a,
NH-10), 7,16 (1H, s, H-2), 6,55
(2H, s a, NH-11), 4,67 (1H, t, J=6,1 Hz,
H-8), 3,49 (2H, d, J=6,1 Hz,
H-9)
RMN ^{13}C (90,5 MHz, DMSO-d _{6})
\delta 169,3 (s, C-7), 158,0 (s,
C-4),141,2 (s, C-6), 127,1 (s,
C-7a), 127,1 (s, C-3), 125,8 (d,
C-2), 124,4 (s, C-3a), 103,9 (s,
C-5), 67,8 (d, C-8), 65,4 (t,
C-9)
Estructura 2
Compuesto no cristalino rojo, pf > 300ºC,
(\alpha)_{D} - 18º (c 0,01, CH_{3}OH)
Peso molecular 256 (258 para el isótopo de
Cl)
Fórmula molecular
C_{10}H_{10}ClN_{2}O_{4} (HRFABMS, bala mágica) m/z
débil 257,043, 259,040 para M+H
UV (MeOH) \lambdamax 335 (\varepsilon
21.200), 245sh (10.200), 203 (21.200)nm
IR (KBr) \nu max 3456, 3347, 2918, 1667, 1623,
1580, 1549, 1509,1408, 1351, 1290, 1060, 890 y 830 cm^{-1}
RMN ^{1}H (360 MHz, CD_{3}COCD_{3} y
DMSO-d_{6} al 10%) \delta 7,18 (1H,
s,H-2), 6,63 (1H, s a, NH), 4,90 (1H, dd,
J=6,6, 4,7 Hz, H-8), 3,65 (1H, dd,
J=10,8, 4,7 Hz, H-9), 3,50 (1H, dd,
J=10,8. 6.6 Hz, H-9).
RMN ^{1}H (500 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 12,63 (1H, s a , H-1), 7,11 (1H, s,
H-2), 7,09 (2H, s a, NH-11), 5,10
(1H, d, J=5,5 Hz, OH-8), 4,87 (1H, ddd,
J=6, 5,5, 5,5 Hz, H-8), 4,57 (1H, t,
J=6,0 Hz, OH-9), 3,49 (1H, ddd, J=9,
5,5,6 Hz, H-9), 3,27 (1H, ddd, J=9, 5,5, 6
Hz, H-9).
RMN ^{13}C (125,7 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 175,8 (s, C-4), 169,5 (s,
C-7),145,9 (s, C-6), 129,0 (s,
C-3), 127,5 (s, C-7a), 126,3 (d,
C-2), 122,5 (s, C-3a), 104,9 (s,
C-5), 67,5 (d, C-8), 66,0 (t,
C-9).
Los datos de actividad biológica para estos
compuestos son los siguientes:
CaN, I=75% a 5 \mug/ml
CaN, I=46% a 0,5 \mug/ml
CaN, CI_{50}=0,55 \mug/ml
ApN, I=54,9% a 5 \mug/ml
P388, CI_{50}=0,06 \mug/ml
A549, CI_{50}=0,04 \mug/ml
EL-4, adhesión inh.
MLR, CI_{50}=0,68 \mug/ml
LCV, CI_{50}=1,4 \mug/ml
ICE, no detectado
CPP32, I=86,5% a 5 \mug/ml
CPP32, I=76,2% a 0,5 \mug/ml
CPP32, CI_{50}=0,02 \mug/ml
CaN, I=43% a 5 \mug/ml
CaN, I=22% a 0,5 \mug/ml
CaN, CI_{50}=2,21 \mug/ml
P388, CI_{50}=1,22 \mug/ml
A549, CI_{50}=2,86 \mug/ml
Acetilación de 18SG541 (secobatzelina A): una
solución de 18SG541 (10,0 mg) en piridina (1,5 ml) y anhídrido
acético (0,5 ml) se agitó a 50ºC durante 4 horas. El disolvente se
eliminó en vacío, y el aceite resultante se purificó mediante HPLC
(SiO_{2}, 5 mm, 250 x 10 mm) con 2% de MeOH/CH_{2}Cl_{2} para
proporcionar diacetatos puros.
18SG791 (Estructura 3) (misma que diacetato de
18SG541)
Compuesto no cristalino coloreado naranja oscuro,
pf 169-70ºC, (\alpha)_{D} - 24º (c 0,01,
CH_{3}OH)
Peso molecular 339 (341 para el isótopo de
Cl)
Fórmula molecular
C_{14}H_{14}ClN_{3}O_{5} (HRFABMS, NBA) m/z, 340,054,
\Delta 2 mmu y 342,047, \Delta 5 mmu para M+H
UV (MeOH) \lambda max 320 (\varepsilon
12.900), 227 (21.100), 203 (23.200) nm
IR (puro) \nu max 3225, 2930, 1726, 1651, 1623,
1229, 1216, 1021, y 765 cm^{-1}
RMN ^{1}H (500 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 12,65 (1H, s a , NH-1), 10,15 (1H,s a,
NH-10), 7,27 (1H, s, H-2), 6,55
(1H, t, J=6,7 Hz, H-8), 6,41 (2H, s a,
NH-11), 4,30 (2H, dd, J=11,1, 6,7 Hz), 2,06
(3H, s, OAc), 1,98 (3H, s OAc).
RMN ^{13}C (125,7 MHz, CDCl_{3} /
10%CD_{3}OD) \delta 171,1 (s, OAc), 170,2 (s, OAc), 169,9 (s,
C-7), 157,4 (s, C-4), 139,5 (s,
C-6), 127,3 (s, C-7a), 125,1 (d,
C-2), 124,1 (s, C-3a), 120,8 (s,
C-3), 107,3 (s, C-5), 68,2 (d,
C-8), 64,9 (t,C-9), 20,8 (q, OAc),
20,6 (q, OAc).
RMN ^{13}C (125,7 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 169,8 (s, OAc), 169,5 (s, C-7), 169,4 (s,
OAc), 157,2 (s, C-4), 140,2 (s,
C-6), 127,0 (s, C-7a), 125,6 (d,
C-2), 124,0 (s, C-3a), 120,1 (s,
C-3), 104,1 (s, C-5), 67,5 (d,
C-8), 64,9 (t, C-9), 20,6 (q, OAc),
20,3 (q, OAc).
18SG792 (Estructura 4) (misma que diacetato de
18SG542)
Compuesto no cristalino rosa oscuro, pf
170-171ºC
Peso molecular 340 (342 para el isótopo de
Cl)
Fórmula molecular
C_{14}H_{13}ClN_{2}O_{6}
UV (MeOH) \lambda max 342 (\varepsilon
5.400), 303 (14.300), 238 (18.700), 205 (19.500) nm
IR (puro) \nu max 3162, 2930, 1733, 1677, 1605,
1402, 1242, 1232, y 1042 cm^{-1}
RMN ^{1}H (500 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 12,80 (1H, s a , NH-1), 7,28 (1H,
s,H-2), 7,13 (2H, s a, NH-11), 6,30
(1H, dd, J=6,3, 6,2 Hz, H-8), 4,27 (2H,
m,H-9), 2,04 (3H, s, OAc), 1,98 (3H, s OAc).
RMN ^{13}C (125,7 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 175,2 (s, C-4), 170,0 (2C, s, OAc), 169,6
(s, C-7), 145,9 (s, C-6), 128,0 (s,
C-7a), 126,5 (s, C-2), 122,4 (d,
C-3a), 121,4 (s, C-3), 105,1 (s,
C-5), 66,8 (d, C-8), 64,3 (t,
C-9), 20,8 (q, OAc), 20,6 (q, OAc).
Los compuestos de la invención son útiles para
varios fines no terapéuticos y terapéuticos. Resulta evidente a
partir del ensayo que los compuestos de la invención son eficaces
para usos anti-inflamatorios, neuroprotectores,
anti-proliferativos, e inmunomoduladores.
Puede contemplarse la aplicación terapéutica de
los nuevos compuestos y composiciones que los contienen para que se
logre mediante cualquier procedimiento terapéutico y técnica actual
o posiblemente conocida en este momento para aquellos expertos en la
materia. Además, los compuestos de la invención se han usado como
materiales de partida o intermedios para la preparación de otros
compuestos y composiciones útiles.
En una realización, cuando se usan como agentes
anti-inflamatorios, los compuestos de la presente
invención se administran en una loción u otra preparación cosmética.
La administración se realiza directamente sobre la piel donde se
desea la actividad anti-inflamatoria.
Debido a las propiedades antiproliferativas de
los compuestos, éstos son útiles para prevenir el crecimiento
celular no deseado en una gran variedad de ajustes incluyendo usos
in vitro. También son útiles como patrones para enseñar
demostraciones. También se pueden usar como filtros ultravioletas en
la industria de plásticos ya que absorben eficazmente los rayos UV.
Como se describe en la presente memoria descriptiva, también son
útiles profiláctica y terapéuticamente para tratar células
cancerígenas en animales y humanos.
En otra realización, los compuestos de la
presente invención tienen actividad inmunomoduladora efectiva.
Específicamente, son útiles para regular respuestas inmunes en
animales y humanos. De este modo, las composiciones farmacéuticas
que contienen los compuestos de la invención como ingredientes
activos son útiles en el tratamiento profiláctico o terapéutico de
una respuesta inmunomoduladora en humanos u otros mamíferos.
En una realización, los compuestos de la presente
invención se pueden usar para la modulación de la actividad de las
células T. De este modo, un aspecto de la presente invención está
relacionado con la supresión in vivo en humanos de la
respuesta de células T, por ejemplo, trasplante y
autoinmunidad.
La administración de la dosificación a un huésped
en las indicaciones anteriores dependerá de la identidad de la
dolencia a tratar, el tipo de huésped implicado, su edad, peso,
salud, tipo de tratamiento concurrente, si lo hubiera, frecuencia de
tratamiento, y velocidad terapéutica.
Los compuestos de la presente invención se pueden
formular según los procedimientos conocidos para preparar
composiciones farmacéuticamente útiles. Las formulaciones se
describen en detalle en varias fuentes que son muy conocidas y están
fácilmente disponibles para aquellos expertos en la materia. Por
ejemplo, Remington's Pharmaceutical Science de E. W. Martin
describe formulaciones que se pueden usar en relación con la
presente invención. En general, las composiciones de la presente
invención se formularán de modo que se combine una cantidad efectiva
del compuesto(s) bioactivo(s) con un vehículo adecuado
para facilitar la administración efectiva de la composición.
De acuerdo con la invención, las composiciones
farmacéuticas que comprenden, como ingrediente activo, una cantidad
efectiva de uno o más de los presentes compuestos y uno o más de los
vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables, no tóxicos,
pueden ser usados por personas de una habilidad normal en la
técnica. Además, la composición farmacéutica puede comprender uno o
más de los compuestos de la invención, como un primer ingrediente
activo más un segundo ingrediente activo que comprende, por ejemplo,
un compuesto anti-inflamatorio,
anti-proliferativo, o inmunomodulador conocido en la
técnica. Los medicamentos anti-inflamatorios
conocidos en la técnica incluyen, pero no se limitan a, los
medicamentos anti-inflamatorios esteroideos y los
medicamentos anti-inflamatorios no esteroideos
(NSAIDs).
De acuerdo con esta invención, se administran
secuencial o concurrentemente al paciente cantidades
farmacéuticamente efectivas de un agente biológicamente activo
previamente conocido y los compuestos de aminoiminoquinona y/o
aminoquinona (o secobatzelinas) de la presente invención. El modo
más eficaz de administración y régimen de dosificación de los
compuestos de la presente invención dependerá del tipo de dolencia a
tratar, la gravedad y el tratamiento de esa dolencia, terapia
previa, el estado de salud del paciente, y la respuesta a los
compuestos y la opinión del médico que lo trata. Las composiciones
de la presente invención se pueden administrar al paciente de una
vez o durante una serie de tratamientos.
Preferiblemente, las composiciones de la presente
invención, y cualquier agente secundario se administran de manera
secuencial al paciente, siendo administrado el segundo agente antes,
después, o ambos antes y después del tratamiento con el
compuesto(s) de aminoiminoquinona y/o aminoquinona. La
administración secuencial implica el tratamiento con el segundo
agente al menos el mismo día (dentro de 24 horas) de tratamiento con
el compuesto de la presente invención y puede implicar tratamiento
continuado con el segundo agente en días en los que no se
administre(n) el compuesto(s) de la invención actual.
Se pueden usar modos convencionales de administración y regímenes de
administración convencionales de agentes activos (véase Gilman, A.
G. y col. [eds.] The Farmacological Basis of
Therapeutics, pp. 697-713, 1482,
1489-91 [1980]; Physicians Desk Referente,
Edición de 1986). Por ejemplo, se puede administrar indometacina por
vía oral a una dosificación de aproximadamente 25-50
mg, tres veces al día. También se pueden usar dosis más elevadas.
Alternativamente, se pueden usar aspirina (aproximadamente
1500-2000 mg/día), ibuprofeno (aproximadamente
1200-3200 mg/día), o dosis terapéuticas
convencionales de otros agentes. Se pueden valorar las
dosificaciones de agentes activos en el paciente individual.
Según una realización de esta invención, el
paciente puede recibir tratamientos concurrentes con un segundo
ingrediente activo y composiciones que comprenden los compuestos de
la presente invención. Por ejemplo, se prefiere la inyección local,
intralesional, o intravenosa de las aminoiminoquinonas y/o
aminoquinonas (véase Gilman y col., supra en pp.
1290-91). Los agentes se pueden administrar mediante
inyección subcutánea, implante de liberación lenta subcutáneo, o por
vía oral.
Alternativamente, el paciente puede recibir una
composición que comprende una combinación de uno o más compuestos de
la presente invención y un segundo agente activo según modos de
administración de agentes convencionales que muestran actividad
antibacteriana, anticancerígena, inmunomoduladora, antitumoral, o
anti-inflamatoria. Éstos incluyen, por ejemplo,
rutas de administración parenteral, subcutánea, intravenosa, o
intralesional.
Las composiciones usadas en estas terapias
también pueden estar en diversas formas. Éstas incluyen, por
ejemplo, formas de dosificación sólidas,
semi-sólidas, y líquidas, como comprimidos,
píldoras, gránulos, soluciones o suspensiones líquidas,
supositorios, soluciones inyectables e infusibles. La forma
preferida depende del modo de administración y aplicación
terapéutica deseados. Las composiciones también incluyen
preferiblemente vehículos farmacéuticamente aceptables
convencionales y adyuvantes que son conocidos por aquellos expertos
en la materia. Preferiblemente, las composiciones de la invención
están en la forma de una dosis unitaria y se administrarán
normalmente al paciente una o más veces al día.
Los compuestos de la presente invención también
se pueden administrar utilizando tecnología de liposomas, cápsulas
de liberación lenta, bombas implantables, y recipientes
biodegradables. Estos procedimientos de suministro pueden
proporcionar, ventajosamente, una dosificación uniforme durante un
periodo de tiempo prolongado.
Los ejemplos de tales vehículos o diluyentes
incluyen etanol, dimetil sulfóxido, glicerol, sílice, alúmina,
almidón, y vehículos y diluyentes equivalentes. Mientras las
cantidades efectivas puedan variar, como varían las dolencias en las
que se usan las composiciones, una dosificación mínima requerida
para actividad anti-inflamatoria está generalmente
entre 0,01 y 100 \mug del compuesto. Para proporcionar la
administración de tales dosificaciones para el tratamiento
terapéutico deseado, las nuevas composiciones farmacéuticas de la
invención comprenderán ventajosamente entre aproximadamente 0,1% y
45%, y especialmente, 1 y 15% en peso del total de uno o más de los
nuevos compuestos basados en el peso de la composición total
incluyendo vehículo o diluyente.
Ilustrativamente, los niveles de dosificación de
los ingredientes activos administrados pueden ser: intravenosa, 0,01
a aproximadamente 50 mg/kg; intraperitoneal, 0,01 a aproximadamente
100 mg/kg; subcutánea, 0,01 a aproximadamente 100 mg/kg;
intramuscular, 0,01 a aproximadamente 100 mg/kg; vía oral 0,01 a
aproximadamente 200 mg/kg, y preferiblemente aproximadamente 1 a 100
mg/kg; instilación nasal, 0,01 a aproximadamente 50 mg/kg; y
aerosol, 0,01 a aproximadamente 50 mg/kg de peso (corporal) del
animal.
Una vez ha ocurrido la mejora del estado del
paciente, se administra si es necesario una dosis de mantenimiento.
Posteriormente, la dosificación o la frecuencia de administración, o
ambas, se pueden reducir, en función de los síntomas, hasta un nivel
en el que se mantiene el estado mejorado. Cuando los síntomas se han
aliviado hasta el nivel deseado, el tratamiento debe cesar. Los
pacientes pueden, sin embargo, requerir un tratamiento intermitente
en una base a largo plazo si hay alguna recurrencia de síntomas de
enfermedad.
Claims (14)
1. Un compuesto que tiene la siguiente fórmula
estructural:
en la que R^{1} es NH u
O;
R^{2} es OZ;
R^{3} es OZ;
R^{4} es H o R;
R^{5} es NH_{2}, NR_{2}, u OZ; y
R^{6} es H o X;
en la que Z se selecciona del grupo formado por
H, R, COR, mesilo, tosilo, glutamilo, succinilo, y malonilo;
R se selecciona del grupo formado por alquilo
C_{1} a C_{8}, fenilo, y bencilo; y X es Cl, Br, o I.
2. El compuesto, según la reivindicación 1, que
es Secobatzelina A, es decir, en el que R^{1} es NH; R^{2} es
OH; R^{3} es OH; R^{4} es H; R^{5} es NH_{2} y R^{6} es
Cl; o una sal de éste.
3. El compuesto, según la reivindicación 1, en el
que R^{1} es NH; R^{2} es OCOR; R^{3} es OCOR; R^{4} es H;
R^{5} es NH_{2} y R^{6} es Cl.
4. El compuesto, según la reivindicación 1, que
es Secobatzelina B, es decir, en el que R^{1} es O; R^{2} es OH;
R^{3} es OH; R^{4} es H; R^{5} es NH_{2} y R^{6} es Cl; o
una sal de éste.
5. El compuesto, según la reivindicación 1, en el
que R^{1} es O; R^{2} es OCOR; R^{3} es OCOR; R^{4} es H;
R^{5} es NH_{2} y R^{6} es Cl.
6. El compuesto, según la reivindicación 1, en el
que dicho compuesto se selecciona del grupo constituido por:
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\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
7. Uso de un compuesto según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6, para la fabricación de un medicamento para
inhibir la inflamación.
8. Uso de un compuesto según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6, para la fabricación de un medicamento para
inhibir la proliferación de células cancerígenas.
9. Uso según la reivindicación 8, en el que las
células cancerígenas se seleccionan entre células cancerígenas de
mama, colon, renal, ovario, próstata, sistema nervioso central
(SNC), pulmón, leucemia y melanoma.
10. Uso de un compuesto según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6, para la fabricación de un medicamento para
modular la respuesta inmune de un animal.
11. Uso de un compuesto según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6, para la fabricación de un medicamento para
la fabricación de un medicamento para inhibir una caspasa.
12. Uso de un compuesto según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6, para la fabricación de un medicamento para
tratar un trastorno neurodegenerativo.
13. Uso según la reivindicación 12, en el que el
trastorno neurodegenerativo es ELA o enfermedad de Alzheimer.
14. Uso de un compuesto según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6, para la fabricación de un medicamento para
inhibir la actividad de calcineurina.
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