ES2210569T3 - Tratamiento de enfermedades utilizando la interleukina-9. - Google Patents

Abstract

Utilización de interleuquina-9 en la preparación de un medicamento para la prevención o el tratamiento de un trastorno autoinmune.

Description

Tratamiento de enfermedades utilizando la interleukina-9.

Campo de la invención

Esta invención está relacionada con la utilización de interleuquina-9 (IL-9) en la preparación de un medicamento para el tratamiento de dolencias patológicas, en particular de enfermedades autoinmunes y de tipo fibroso, en solitario o conjuntamente con otros fármacos.

Antecedentes y estado de la técnica

La interleuquina-9 (en adelante, "IL-9") es una glicoproteína que ha sido aislada a partir de tanto células murinas como humanas. Ver, por ejemplo, la patente de EE.UU. Nº. 5.208.218. Esta referencia describe también moléculas de ácido nucleico aisladas que codifican para la parte proteínica de la molécula y como expresarla.

En las patentes de EE.UU Nºs 5.164.317 (proliferación de mastocitos); 5.246.701 y 5.132.109 (producción reforzadora de IgG y producción inhibidora de IgE), pueden observarse diferentes usos de la molécula, además de su primera utilidad reconocida, que es la de factor de crecimiento de linfocitos T. Entre los ejemplos de la vasta literatura científica sobre la molécula se encuentra Van Snick, et al, J. Exp. Med. 169(1):363-368 (1989) (cDNA para la molécula murina, referenciada más adelante como P40). Houssiau et al, J. Immunol. 148(10): 3147-3151 (dependencia de IL-2 de la expresión de IL-9 en linfocitos T), Renauld et al., Oncogene 9(5):1327-1332 (1994) (efectos sobre los linfomas tímicos); Renauld et al., Blood 85(5): 1300-1305 (1995) (factor antiapóptico para linfoma tímico). Pueden encontrarse artículos de revisión en, por ejemplo, Renauld, et al, Cancer Invest 11(5): 635-640 (1993); Renauld et al, Adv. Immunol 54:79-97 (1993).

No existe literatura acerca de la influencia de la IL-9 sobre los trastornos autoinmunes.

La técnica resulta familiar con un vasto número de trastornos autoinmunes, los cuales se clasifican de diversas maneras. Una manera de clasificarlos es a través del aspecto del sistema más íntimamente involucrado con el trastorno. Por ejemplo, en enfermedades autoinmunes asociadas con respuesta humoral, se encuentran involucrados los linfocitos B. Los anticuerpos son generados frente a moléculas propias, tales como el receptor de acetilcolina (Miastenia de Graves) o el receptor de TSH (enfermedad de Graves). En enfermedades autoinmunes que implican una respuesta celular, los linfocitos T, los macrófagos y las células NK reaccionan con moléculas propias. Entre los ejemplos de estas dolencias se encuentran la diabetes dependiente de insulina y la tiroiditis. Esta familia de enfermedades se origina, entre otras causas, a partir de una desviación del equilibrio Th1/Th2.

Uno de los problemas existentes en el estudio de enfermedades autoinmunes es la ausencia de modelos animales adecuados. Sin un sistema apropiado para estudiar una dolencia en particular, no se pueden extraer conclusiones en lo que hace referencia a la eficacia potencial de un determinado fármaco en un contexto terapéutico.

Sin embargo, existe un modelo animal apropiado para enfermedades mediadas por células y el mismo ha sido utilizado en la descripción que sigue más adelante. Utilizando el caso específico de tiroiditis inducida en un modelo murino, se ha demostrado ahora que la IL-9 presenta eficacia terapéutica en trastornos autoinmunes asociados con Th1. Esta afirmación será demostrada en la descripción detallada de realizaciones preferidas que sigue más adelante.

El modelo murino utilizado en la descripción que sigue más adelante es también uno que puede ser utilizado para estudiar enfermedades tales como la sialoadenitis, la anemia hemolítica autoinmune y otras dolencias. Además, se dispone de un modelo murino que resulta de utilidad a la hora de estudiar patologías relacionadas con fibrosis, tales como la enfermedad pulmonar intersticial. Lo característico de estas patologías relacionadas con fibrosis reside en la inflamación en el órgano o tejido afectado, la cual conduce a la cicatrización y a la distorsión del tejido. Entre los ejemplos de este grupo de patologías se incluyen enfermedades pulmonares intersticiales tales como la silicosis, la asbestosis, la neumonía blanca, la antracosis, la enfermedad de Shaver, etc. Estas dolencias son conocidas como neumoconiosas, (o tuberculosis antracótica), y conllevan inflamación y fibrosis pulmonar, provocada, por ejemplo, por inhalación de partículas minerales finas. Otras dolencias de tipo fibroso incluyen todas las formas de esclerosis, el reumatismo relacionado con fibrosis, tal como la artritis reumatoide crónica, y las fibrosis relacionadas con colágeno, tales como las dolencias que implican queloides, cicatrización, enfermedades renales que implican dolencias relacionadas, etcétera.

Los modelos murinos para estas dolencias se han utilizado, tal como se comprobará infra, para demostrar la eficacia de la IL-9 en su tratamiento.

Breve descripción de las figuras

La Figura 1A muestra el efecto de elevadas dosis de yoduro después de la inducción de bocio en ratones NOD.

La Figura 1B muestra el efecto de la IL-9 sobre ratones NOD tratados con yoduro.

\newpage

La Figura 1C muestra el teñido por parte de linfocitos T CD4^{+} en tiroides de ratones NOD con bocio, después de una dieta elevada en yoduro y sin IL-9.

La Figura 1D es comparable a 1C, pero muestra resultados con IL-9.

Las Figuras 1E y 1F muestran el resultado de experimentos dirigidos a comprobar la terapia con IL-9 a largo plazo.

La Figura 1G muestra resultados paralelos cuando se utilizó IL-9.

La Figura 1H muestra la inducción de tiroiditis en animales previamente recuperados de tiroiditis mediante la administración de IL-9.

Las Figuras 2A y 2B muestran los resultados de biopsias de nódulo linfático diseñadas para medir la activación de linfocitos B a través de inmunoteñido de linfocitos B.

La Figura 3 muestra los resultados de ELISAs, para determinar anticuerpos anti-tiroglobulina en sujetos animales. Leyendo en esta Figura de izquierda a derecha, la misma muestra resultados obtenidos a partir de ratones NOD sin tiroiditis, a partir de ratones NOD que recibieron únicamente yoduro y de ratones que recibieron yoduro e IL-9. Las dos densidades ópticas proceden de dos disoluciones de suero comprobado.

Las Figuras 4A y 4B presentan datos de inmunoteñido para las linfocitos B en la tiroides de ratones FVB. La Figura 4A muestra inmunoteñido sin IL-9 y 4B con el mismo.

La Figura 5 presenta los resultados después de un estudio de islotes de Langerhans, después de la administración de IL-9.

Las Figuras 6A y 6B muestran el efecto de la IL-9 sobre la insulitis pancreática en ratones NOD, en donde 6A muestra islotes de 10 semanas de ratones NOD de 10 semanas de edad los cuales recibieron una dieta elevada en yoduro y exenta de IL-9, y 6B muestra islotes de un ratón NOD de 10 semanas de edad, el cual recibió la dieta HID e IL-9.

Las Figuras 7A y 7B muestran la histología de los pulmones de ratones normales y ratones transgénicos IL-9, los cuales recibieron partículas de sílice intratraquealmente.

La Figura 9 muestra análisis FACS de células presentes en el lavado bronco-alveolar de ratones normales o IL-9, los cuales fueron o no tratados con sílice.

Descripción detallada de las realizaciones preferidas Ejemplo 1

En el experimento que sigue, se utilizaron dos cepas de ratones, a saber, la cepa FVB y la cepa NOD. La cepa de ratones NOD es reconocida como un modelo apropiado para estudios acerca de enfermedades humanas. Ello es debido a que la cepa se refiere a un ratón no obeso, diabético (de ahí la expresión "NOD"), el cual desarrolla de manera espontánea lesiones pancreáticas y de tiroides dimanantes de trastornos autoinmunes, tales como la diabetes. La cepa de ratón resulta también de utilidad como modelo para la patogénesis y la inmunoterapia de enfermedades autoinmunes, tales como enfermedades autoinmunes mediadas por células. Ver, por ejemplo, Many et al., J. Endocrinol 147: 311-320 (1995); Male et al., Advanced Immunology Third Edition (1996), pag 12.15; Kikutani et al., Adv. Immunol 51: 285-322 (1992). De manera específica, en relación con la diabetes autoinmune, la infiltración de células mononucleares de islotes pancreáticos es detectada entre las 4 y las 6 semanas de edad, seguida de la destrucción de linfocitos B de islotes pancreáticos productores de insulina.

Este proceso de inflamación de islotes de Langerhans está asociado con células Th1. Ello conduce, a su vez, a diabetes entre el 70 y el 80% de las hembras y en el 20% de los machos, una vez transcurridas 30 semanas. Esto está apoyado por estudios que muestran la aceleración del inicio después de la administración de IL-12, y la protección con IL-4 o IL-10. Ver, por ejemplo, Trembleau et al., J. Exp. Med. 181; 817-821 (1995); Rapaport et al, J. Exp. Med. 178: 87-89 (1993); Rabinovitch et al., Transplantation 60: 368-374 (1995). Many, et al., supra, sugieren que el mismo mecanismo es el que actúa en la tiroiditis. Por consiguiente, la cepa NOD constituye un modelo adecuado para el trabajo que sigue a continuación.

Se utilizaron ratones NOD hembra de dos meses de edad (haplotipo H-2g), al igual que ratones hembra FVB de dos meses de edad (haplotipo H-2q), como control. Los ratones FVB pueden ser tratados con yodo para desarrollar tiroiditis transitoria, mientras que los ratones NOD desarrollan una forma persistente de la dolencia. Así mismo, la intensidad de la infiltración de linfocitos T CD4^{+} en órganos afectados difiere. Ver infra.

Se consiguió que los ratones padecieran bocio alimentándolos con una dieta baja en yodo (0,1 \mug de yodo al día), suplemantada con propiltiouracilo al 0,25% durante 10 días, seguido únicamente de la dieta baja en yodo por espacio de otros dos días. Los mismos recibieron después elevadas dosis de yodo (10 \mug/día), a través de inyección intraperitoneal, por espacio de 4 días. Cinco ratones de cada una de las cepas recibieron también 1 \mug/día de interleuquina-9 murina recombinante, por espacio de 6 días. La interleuquina-9 fue administrada en 0,2 ml/volumen de PBS, a través de inyección intraperitoneal, empezando dos días antes de administrarse la dieta alta en yodo. En controles, únicamente se administró PBS. La interleuquina-4 (IL-4) se utilizó como control con los ratones NOD.

Después del tratamiento, los ratones fueron anestesiados con una inyección intraperitoneal de 7,5 mg de Nembutal, diluido con solución salina 1/3. Se recogieron muestras de sangre para determinar los niveles de toxinas a través de un radioinmunoensayo y se extrajeron después las glándulas tiroides. Se designó un lóbulo de cada una de las glándulas para análisis morfológico y estereológico y el otro para análisis inmunohistoquímico.

Para llevar a cabo los dos primeros, los lóbulos fueron sumergidos durante dos horas en glutaraldehido al 2,5% en tampón cacodilato 0,1M, fijados posteriormente por espacio de 1 hora en tetróxido de osmio al 1% e incrustados en resina. Se cortaron secciones de un grosor de 0,5 \mum y se tiñeron con azul de toluidina. Se midieron los volúmenes relativos de los diversos componentes glandulares con un microscopio de proyección.

Se llevó a cabo un análisis inmunohistoquímico mediante congelado rápido de los lóbulos en isopentano enfriado en nitrógeno líquido. Se tomaron secciones criostáticas y se utilizaron para el teñido de inmunoperoxidasa, de acuerdo con lo indicado por Touissaint-Demylle et al., Autoimmunity 7:51-62 (1990), utilizando un anticuerpo monoclonal específico para linfocitos T CD4^{+} y uno específico para linfocitos B.

Se evaluaron los números de los tipos de célula (CD4^{+}, B^{+}) a través de aumento (x250), en diez campos microscópicos elegidos a azar, a partir de secciones de tiroide.

Los resultados obtenidos de estos experimentos son presentados en las Figuras 1-5 y en las Tablas 1 y 2, las cuales se discuten infra.

Estos demuestran que la administración de una dosis elevada de yoduro después del tratamiento contra el bocio desarrollaba un potente efecto necrótico sobre las células de la tiroides. Los restos celulares se acumulaban en el interior de la abertura folicular. Después de 4 días de tratamiento, la necrosis celular se asoció con la infiltración intersticial de células inflamatorias.

Después de 6 días de administración de IL-9, la cual se inició dos días antes de que empezase la dieta alta en yoduro, la histología de la tiroides de los ratones FVB resultaba muy similar a la que fue obtenida con únicamente una dieta elevada en yoduro. Los signos de necrosis celular y de tiroiditis resultaban evidentes y el análisis sugería que la IL-9 agravaba la infiltración intersticial de las células inflamatorias. El volumen relativo del intersticio resultaba más elevado que en los ratones control (ratones FVB), los cuales no fueron tratados con IL-9. Ver Tabla 2.

En la Figura 1A puede observarse que en el caso de ratones NOD con bocio, la totalidad de aberturas foliculares estaban llenas de residuos necróticos y el intersticio estaba extensamente infiltrado con células inflamatorias. En contraste con los ratones FVB, la administración de IL-9 a los ratones NOD con bocio evitaba la tiroiditis provocada por tiroides. La Figura 1B muestra que la abertura folicular grande contenía escasos residuos necróticos y se encontraron pocas células inflamatorias en el intersticio. La Tabla 1 muestra que su volumen relativo se reducía significativamente después del tratamiento con IL-9. Los volúmenes relativos de epitelio y de coloide se incrementaron, en comparación con ratones que no habían recibido la IL-9. Se observó también una caída significativa en el peso de tiroides después de la administración de la IL-9.

En lo que concierne al análisis inmunohistoquímico, las células que habían infiltrado la tiroides de ratones FVB con bocio, tratados con el yoduro por espacio de 4 días, eran principalmente APCs positivos de MHC-clase II, al igual que linfocitos T. Los linfocitos T cooperadores CD4^{+} predominaban en este grupo. La administración de IL-9 incrementaba el número de células CD4^{+}, pero incrementaba el número de linfocitos B incluso más. Los datos para ratones NOD se indican en la Tabla 1 y los correspondientes a los ratones FVB en la Tabla 2, que sigue, infra.

Por contraste, la administración de yoduro a ratones NOD daba como resultado la infiltración de numerosos linfocitos T CD4^{+} y escasos linfocitos B. Cuando se administró IL-9, el número de células CD4^{+} infiltrantes se redujo drásticamente. Ver las Figuras 1C y 1D.

TABLA 1

1

\dotable{\tabskip\tabcolsep#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
    \begin{minipage}[t]{150mm} * Promedio ( \pm SD, n=5) peso
tiroides (mg), volúmenes relativos (%) de  los diversos componentes
glandulares y número de células CD4 ^{+}   y B220 ^{+}  por diez 
perfiles foliculares, en tiroides de ratones NOD no tratados y de
ratones NOD  con bocio, tratados durante 4 días con yoduro (HID)
únicamente, con yoduro más  IL-9 o con yoduro más
IL-4.\end{minipage} \cr  * op<0,05 vs.
ratones tratados con HID\cr  * p<0,05 vs. ratones no
tratados\cr}

TABLA 2

2

\dotable{\tabskip\tabcolsep#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
  \begin{minipage}[t]{150mm}* Promedio ( \pm SD, n=5) peso
tiroides (mg), volúmenes relativos (%)  de los diversos componentes
glandulares, y número de células CD4 ^{+}   y B220 ^{+}  por  diez
perfiles foliculares, en tiroides de ratones FVB con bocio, tratados
 durante 4 días con Yoduro (HID) únicamente, o más
IL-9. \end{minipage} \cr  * ºp<0,05 vs.
ratones tratados con
HID\cr}

Estos resultados sugirieron experimentos adicionales para determinar la longitud mínima de tratamiento que produciría el efecto deseado, específicamente, se llevaron a cabo experimentos paralelos en los cuales los originales seis tratamientos diarios se redujeron a cuatro, o a una única inyección. Se obtuvieron resultados similares, indicando que tan solo se necesitaba un tratamiento muy corto. Ver Tabla 1, supra.

El efecto a largo plazo de la terapia con IL-9 fue estudiado analizando glándulas tiroideas de los ratones NOD, sesenta y cuatro días después del tratamiento con la dieta elevada en yoduro descrita supra. El estudio de las glándulas tiroideas se efectuó en paralelo a los presentados supra y los datos representativos se muestran en las Figuras 1E y 1F, mostrando ratones HID y ratones tratados con IL-9, además de la dieta HID. La Figura 1E muestra una tiroiditis marcada, mientras que la biopsia mostrada en la figura 1F muestra una morfología normal y evidencia el hecho de que la IL-9 hizo algo más que retrasar el inicio de procedimientos autoinmunes y, realmente, los bloqueó.

Nuevo soporte para la conclusión de que la IL-9 había suprimido la respuesta autoinmune celular se obtuvo a partir de los datos generados después de la administración de IL-4, conocida por ser un importante factor promotor de TH2. Tal como se comprobará en la Tabla 1, y en la Figura 1G, la IL-4, cuando se administraba utilizando el mismo protocolo que el utilizado para la IL-9, no inhibía la inflamación inducida por yoduro, mientras que se generaba un incremento en los niveles de linfocitos B infiltrantes en la tiroides, a saber, linfocitos B220^{+}.

Todavía se obtuvo nueva evidencia a partir de un estudio en el cual ratones, que habían sido protegidos a través de la administración de IL-9 durante un primer régimen a base de HID, fueron tratados de manera similar, dos meses más tarde. La Figura 1H muestra que no se detectó resistencia frente a tiroiditis inducida por yoduro, indicando esto, por consiguiente, que la IL-9 no apoya una respuesta de memoria protectora. Un análisis posterior de los datos sugiere que se encuentra implicada algún tipo de respuesta de linfocitos B. Por ejemplo, las Figuras 2A y 2B ponen en evidencia la activación de linfocitos B. De manera específica, estas Figuras muestran un análisis de drenaje de nódulos linfáticos de ratones NOD, después de tratamiento con HID en solitario (examinados al cuarto día de tratamiento), y con HID más IL-9 (de nuevo, después de cuatro días). Los centros germinales son ampliados en las figuras 2A y 2B.

Ejemplo 2

Se encontró nueva evidencia acerca del fenómeno discutido anteriormente llevando a cabo un inmunoensayo estándar (un ELISA) en relación con anticuerpos anti-tiroglobulina. Todas las mediciones fueron efectuadas en el cuarto día de, o bien la dieta HID en solitario, o de HID con IL-9. Tal como se muestra en la Figura 3, las medidas se efectuaron en un modelo en el cual la IL-9 se administraba una vez al día durante seis días. Se muestran dos densidades ópticas para dos diluciones diferentes del mismo suero, para ratones NOD sin tiroiditis que recibieron yoduro y no IL-9 y ratones NOD a los cuales se les administró tanto yoduro como IL-9. Estas se indican de izquierda a derecha en la Figura 3.

Ejemplo 3

Las observaciones expuestas supra, sugirieron la extensión a ratones propensos a la enfermedad no autoinmunes. En estos experimentos, ratones de la cepa FVB fueron tratados con la dieta elevada en yoduro, después de lo cual se les alimentó con una dieta generadora de bocio, justo igual que a los ratones NOD.

Se averiguó que, en esta cepa, la administración de IL-9 no modificaba aspectos histológicos de la glándula tiroides e incrementaba también significativamente el volumen relativo del intersticio, provocado moderados incrementos en las células CD4^{+}, y un fuerte incremento en células B220^{+} infiltrantes de B220^{+}. Esto puede ser observado en la Tabla II, supra y en las Figuras 4A y 4B.

En línea con esto, la formación de un centro germinal se incrementó en los nódulos linfáticos drenantes de los ratones FVB, tratados con IL-9, y los ratones mostraban también anticuerpos anti-tiroglobulina después de cuatro días.

Estos datos indican que la IL-9 estimulaba una respuesta de linfocitos B en los animales objeto de prueba.

Un análisis del contenido de tiroxina en plasma mostró que los niveles eran prácticamente los mismos. Los ratones no inyectados con IL-9 presentaban niveles de 2,4 \pm 0,8 ng/ml, mientras que los ratones que había recibido inyecciones de IL-9 mostraron niveles de 2,2 \pm 0,6 ng/ml.

Ejemplo 4

Se llevó a cabo un estudio adicional sobre un modelo murino relacionado con insulitis pancreática. De manera específica, utilizando el modelo supra, se examinaron los páncreas de ratones de 10 semanas de edad, tras 6 días de administración de IL-9. Ver Tabla 3, que sigue a continuación:

\newpage

	Solo yoduro	Yoduro \textamp IL-9
	(5 ratones)	(5 ratones)
Exp. 1	41,14 \pm 8,05	10,9 \pm 4,56
Exp. 2	38,5 \pm 2,4	11,5 \pm 1,2

Un grupo de ratones NOD, a saber, el grupo IL-9, recibió IL-9 (1 \mug/inyección), cada tres días, durante 66 días, pero no tratamiento con yoduro. El segundo grupo recibió o bien únicamente HID o HID más IL-9. Estos ratones NOD fueron sacrificados en el día 6 o en el día 66 del experimento. Esto significaba dos meses después de la finalización del experimento. Tal como muestra la Figura 5, existía todavía un porcentaje significativamente bajo de islotes inflamados. Finalmente, los ratones NOD recibieron tres inyecciones semanales de IL-9, entre las 10 y las 18 semanas de edad. En estos ratones, se incrementaba la protección mediada por IL-9, mostrando inflamación tan solo el 20,9% de los islotes, con lo que se demostraba un efecto protector del fármaco. En las Figuras 6A y 6B, que comparan islotes pancreáticos de ratones NOD tratados y no tratados, se muestra una evidencia adicional de esto.

Ejemplo 5

El ratón FVB utilizado en los experimentos, supra, es un modelo apropiado para el estudio de enfermedades pulmonares intersticiales, tales como la silicosis. Ver, por ejemplo, Kumar, Am. J. Pathol. 135: 605-614 (1989); Suzuki, et al., Thoraz 51: 1036-1042, (1996).

La sílice (DQ12, d50, 2,2 \mum) o la solución salina fue inyectada directamente en el interior de o bien ratones FVB normales o de una cepa transgénica de ratones FVB la cual sobre-expresaba la IL-9. La inyección se llevó a cabo por vía de instilación intratraqueal (100 \mul/ratón). Los animales habían sido anestesiados utilizando 2 mg de fenobarbital con anterioridad al tratamiento, y sus cuellos había sido abiertos mediante cirugía. La sílice fue esterilizada, con anterioridad a su uso, calentándola a 200ºC por espacio de cuatro horas. Esto inactivaba también la endotoxina.

Los ratones recibieron o bien 1 mg o bien 5 mg de sílice en los

100 \muls descritos anteriormente. Los ratones fueron sacrificados o bien a los 60 días o a los 120 días subsiguientes al tratamiento y se llevó a cabo un lavado broncoalveolar a través de la canulación de la tráquea y de la infusión en los pulmones de 1,5 ml de NaCl al 0,9%, seis veces. La deposición de colágeno fue estimada determinando el contenido en hidroxiprolina del pulmón derecho. Esto se consiguió extirpando el pulmón y homogeneizándolo e hidrolizándolo en HCL 6N, durante el transcurso de una noche, a 110ºC, seguido de análisis mediante HPLC. Los pulmones izquierdos fueron extirpados y fijados en solución de Bouin, para llevar a cabo la histopatología. Secciones incrustadas en parafina fueron teñidas con hematoxilina y eosina, tricromo de Masson o toluidina, para llevar a cabo microscopía óptica. El examen histolóico mostraba que rápidamente después de la administración aparecían nódulos celulares múltiples, los cuales se convertían posteriormente en nódulos conteniendo colágeno, con células mesenquimales. Ver las Figuras 7A y 7B, las cuales muestran también que, como contraste, los ratones TGIL-9 ("TGIL-9", es un acrónimo de "IL-9 transgénica") desarrollaban exclusivamente nódulos celulares en las proximidades de los vasos sanguíneos.

La Figura 8, la cual muestra niveles de hidroxiprolina medidos al cabo de transcurridos 2 y cuatro meses desde la administración, confirma este extremo. Tal como se observará a partir de las Figuras, en aquellos ratones que producen IL-9 en exceso, la cantidad de hidroxiprolina es significativamente inferior a los 120 días.

La Tabla 4 resume estos resultados:

TABLA 4

	Ratones normales	TGIL-9
Acumulación de colágeno	+++	-
Localización	Paredes alveolares	Cerca de vasos
Tipos de células	Mezcladas	Linfocitos B

Se ensayó el lavado broncoalveolar y no se observaron diferencias significativas en el número de células cuando se compararon los ratones normales tratados con sílice con los ratones TGIL-9; no obstante, los ratones TGIL-9 mostraron un incremento significativo en el porcentaje de linfocitos, especialmente linfocitos B IgM^{+}. Ver el análisis en la Figura 9. No obstante, el lavado de los ratones normales contenía una mayoría de macrófagos y de neutrófilos. No se observó incremento en los niveles de inmunoglobulina de los ratones TGIL-9. Si bien la presencia de linfocitos B podría estar no relacionada con los efectos anti-fibrosos de la IL-9, está en consonancia con el hecho reconocido de que los linfocitos en el lavado broncoalveolar de pacientes humanos resultan indicativos de buena prognosis. Ver Christman et al., Am. Rev.Resp. Dis. 132:393-399 (1985).

Los datos anteriores muestran que, en modelos animales adecuados, la IL-9 resultaba efectiva en el tratamiento y prevención de patologías autoinmunes asociadas con la glándula tiroides, por ejemplo, con la tiroiditis y con la diabetes. Se muestra también su efecto antifibroso, de nuevo en un modelo animal adecuado. Tal como fue apuntado, supra, los modelos utilizados (ratones NOD y FVB) resultan útiles en el estudio de otras patologías autoinmunes, tales como la tiroiditis y la diabetes autoinmune y enfermedades de tipo fibroso tales como la silicosis. Por consiguiente, un aspecto de la invención consiste en un procedimiento para el tratamiento de los citados trastornos, a través de la administración de una cantidad eficaz de IL-9. El régimen de dosificación puede variar, en función del sujeto y de la gravedad de la dolencia. No obstante, en general, una dosis de entre aproximadamente 500 ng y aproximadamente 50 \mug/kg de peso corporal del sujeto, administrada diariamente, resulta preferida, en especial una dosis de entre aproximadamente 1 \mug y aproximadamente 10 \mug/kg de peso corporal, administrada diariamente. La IL-9 puede ser de origen natural o recombinante de origen, y puede estar o no glicosilada. La citoquina puede ser administrada a través de cualquier modalidad terapéutica estándar, tal como la vía intravenosa, la intraperitoneal, la sublingual, la intradérmica, la subcutánea, la oral, la intratraqueal, la intranasal u otras formas de administración. La IL-9 puede ser administrada en solitario o en combinación con vehículos, adyuvantes, diluyentes, farmacéuticamente aceptables, en forma aerosol, etc. Además, la IL-9 puede ser combinada con uno o más materiales terapéuticamente eficaces para el tratamiento de la dolencia para la cual está siendo utilizada. Muchos fármacos son utilizados para el tratamiento de la diabetes, la tiroiditis y otros trastornos autoinmunes mediados por células, tales como la IL-4. Ver, por ejemplo, Rapoport et al., J. Exp. Med. 178: 87-99 (1993). La IL-9 puede ser combinada con los mismos en composiciones farmacéuticas y/o equipos, en donde la IL-9 terapéuticamente activa y el segundo fármaco pueden ser combinados (tal como una composición), o en forma de equipo, en donde partes separadas de los fármacos se hacen disponibles para su mezclado, a conveniencia del doctor, paciente, etc.

Otros aspectos de esta invención resultarán evidentes a los expertos en la materia y no precisan ser objeto de discusión adicional.

Los términos y expresiones empleadas han sido utilizadas en sentido descriptivo y no limitativo y no existe intención, en el uso de los citados términos y expresiones, de exclusión de ningún equivalente de las características mostradas y descritas o de partes de las mismas, admitiéndose que resulta posible llevar a cabo diversas modificaciones dentro del marco de cobertura de la presente invención.

Claims (13)

1. Utilización de interleuquina-9 en la preparación de un medicamento para la prevención o el tratamiento de un trastorno autoinmune.

2. Utilización según la reivindicación 1, en donde la concentración de interleuquina-9 es suficiente para reducir el número de células CD4^{+} en un sujeto al que se le ha administrado el medicamento.

3. Utilización según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde el medicamento es para la administración junto con un fármaco específico para el tratamiento de una enfermedad autoinmune mediada por células.

4. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el medicamento es para administración dirigida a incrementar la población de linfocitos B en un sujeto.

5. Utilización según la reivindicación 3, en donde el trastorno autoinmune es tiroiditis.

6. Utilización según la reivindicación 3, en donde el trastorno autoinmune es diabetes autoinmune.

7. Utilización de interleuquina-9 en la preparación de un medicamento para la prevención de la formación o la eliminación de la fibrosis.

8. Utilización de interleuquina-9 en la preparación de un medicamento para la prevención o tratamiento de una enfermedad pulmonar intersticial.

9. Utilización según la reivindicación 8, en donde la enfermedad intersticial pulmonar es silicosis.

10. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicha interleuquina-9 es interleuquina-9 humana.

11. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicha interleuquina-9 es obtenible de manera recombinante.

12. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el citado medicamento es para administración intravenosa, intraperitoneal, transdérmica, subcutánea, intratraqueal oral, intranasal o sublingual.

13. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el medicamento es para administración para proporcionar una concentración de interleuquina-9 de entre aproximadamente 500 ng/kg a aproximadamente 50 \mug/kg de peso corporal.