ES2206891T3 - Conjugados bioreductivos para el direccionamiento de medicamentos. - Google Patents
Conjugados bioreductivos para el direccionamiento de medicamentos.Info
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Abstract
La invención proporciona un procedimiento para marcar un fármaco en áreas de tejido hipóxico y/o isquémico dentro del cuerpo en el que la especie de fármaco deseado está unida a un portador bioreductor no citotóxico. La invención también proporciona un nuevo bioreductor conjugado que comprende un medio bioreductor no citotóxico con al menos un agente terapéutico unido a este. Los compuestos de la invención son particularmente adecuados para el tratamiento de la artritis reumatoide y otros trastornos artríticos, como la diabetes, arteriosclerosis, apoplejía, sepsis, enfermedad de Alzheimner y otros trastornos neurológicos, cáncer, enfermedades de los riñones, digestivas, de hígado, periodontitis crónica o isquemia que aparecen tras el trasplante de tejidos.
Description
Conjugados bioreductivos para el direccionamiento
de medicamentos.
La presente invención se refiere a conjugados de
fármacos bioreductivos para su uso en la dirección de agentes
terapéuticos hacia regiones localizadas de tejido hipóxico y/o
isquémico en el cuerpo.
Se ha demostrado una tensión de oxígeno reducida
(hipoxia) en una variedad de tipos de tumores. En realidad, se ha
sospechado durante mucho tiempo que la deficiencia de oxígeno en
tumores puede ser un factor limitante en el control de tumores por
radioterapia. De forma relativamente reciente, se ha explotado la
presencia de hipoxia en tumores en su tratamiento.
Los fármacos bioreductivos requieren una
reducción metabólica para generar metabolitos citotóxicos. Este
procedimiento es facilitado por la presencia de reductasas
apropiadas y por las condiciones de menor cantidad de oxígeno
presente en algún tejido canceroso (hipóxico) en comparación con un
tejido normal (normóxico). Como resultado, se ha propuesto un
número de fármacos bioreductivos capaces de producir metabolitos
citotóxicos bajo condiciones hipóxicas para uso en combinación con
el tratamiento con radioterapia de tumores.
Se conoce un número de compuestos bioreductivos
que actúan como potentes agentes alquilantes después de sufrir una
reducción in vivo. Ejemplos de agentes alquilantes
bioreductivos incluyen compuestos tales como enaminas activadas,
quinona metides vinilóga, quinona metides simple y
\alpha-metilen lactonas o lactamas. La
bioactivación de dichos compuestos produce especies que son
deficientes en electrones y que son capaces de uniones covalentes a
un centro nucleofílico o una biomolécula, tal como el DNA.
Los fármacos más bioreductivos que han sido
desarrollados para uso en el tratamiento de tumores muestran un
potencial de "captura" óptimo cuando la hipoxia es profunda
(pO_{2} < 12 mm Hg) y esto se cree que constituye la base para
su selectividad por los tejidos cancerosos en oposición a los
tejidos normales.
También se han propuesto los fármacos
bioreductivos para su uso en varios métodos para la detección de
células hipóxicas en tumores. De este modo, el tratamiento por
radioterapia puede ser optimizado para pacientes individuales sobre
la base del estado del oxígeno en sus tumores.
La patente
US-A-5086068 describe el uso de
compuestos nitroaromáticos en la detección de células hipóxicas en
tejido normal y de tumor. Se utilizó un conjugado inmunogénico que
comprende un compuesto nitroaromático y un soporte que inducía una
respuesta inmune in vitro para aumentar los anticuerpos
específicos para el compuesto nitroaromático. Estos anticuerpos son
utilizados a su vez para detectar la presencia de tejido hipóxico
después de la administración in vivo del compuesto
nitroaromático.
También se han descrito un número de métodos para
detectar la presencia de células hipóxicas en tumores utilizando un
2-nitroimidazol marcado en el que los fragmentos
marcados del compuesto de nitroimidazol se unen a macromoléculas
celulares. Más recientemente, se ha sugerido el uso de un hapteno
detectable de forma immunológica tal como la teofilina unida de
forma covalente a un 2-nitroimidazol como un método
de identificar células hipóxicas (ver Brit. J. Cancer 63:
119-125, 1991 & 72:
1462-1468, 1995, y Anti-Cancer Drug
Design 10: 227-241, 1995). La bioreducción
del nitroimidazol conduce a la unión de los metabolitos
bioreductivos, y por tanto la cadena lateral de teofilina, a
moléculas intracelulares. A continuación se utilizaron técnicas
inmunoquímicas para teñir y, de este modo localizar, aquellas
células que contienen la teofilina unida.
En la patente
US-A-5387692 se han descrito otros
agentes que comprenden una mitad bioreductiva, por ej., el
2-nitroimidazol, para el diagnóstico o tratamiento
de las células hipóxicas.
En el Índice Merck, 1989, registro 4369 describe
que la Glutationa tiene un papel metabólico en la terapia
antineoplástica. En el Chemical Abstracts, 1990, vol 112 (11), AN
90:91313 (Ollinger y col.) se describe un estudio de las
propiedades redox de la
5,8-dihidroxi-1,4-naftaquinona
y describe las propiedades redox de la misma y de otros conjugados
de glutationa-quinina.
Se han descrito un número de agentes
bioreductivos para su uso en la liberación de fármacos citotóxicos
al tejido del tumor hipóxico en el que la activación bioreductiva
en el sitio del tumor da lugar a la liberación selectiva del
fármaco. Sin embargo, después de la liberación del fármaco el
compuesto bioreductivo que permanece en los tejidos es en sí mismo
un agente alquilante potencial y por lo tanto citotóxico, con lo que
da lugar dicho sistema completamente inadecuado para uso como un
vehículo de liberación de fármaco no-citotóxico en
enfermedades distintas del cáncer. Se han descrito los agentes de
liberación del fármaco bioreductivo selectivos de la hipoxia
propuestos para uso en la terapia antitumoral, por ejemplo, en
Dissabs. 87: 31004, 1987 y en J. Med. Chem. 34:
2933-2935, 1991.
En Dissabs. 87: 31004, 1987, Berglund y Carpino
describen derivados de ácido alcoxi- y aminoquinona designados para
uso como agentes de liberación de fármacos bioreductivos. La
reducción del grupo quinona a un grupo hidroquinona inestable
conduce a la ciclación intramolecular para formar una lactona con
liberación concurrente del fármaco activo.
En J. Med. Chem. 34: 2933-2935,
1991, Harfenist y col. describen un compuesto de
ciclofosfamida modificado que contiene un grupo nitro que es
susceptible de reducción. La reducción del grupo nitro incrementa la
basicidad de un átomo de nitrógeno adyacente que a continuación
inicia la \beta-eliminación de las especies de
ciclofosfamida activas.
También se han propuesto los sistemas de
liberación que utilizan la bioreducción para liberar unas especies
de fármacos no-citotóxicoas. Por ejemplo, se ha
descrito un sistema de liberación basado en un ácido quinona
propiónico (ver Pharmaceutical Research 8 (3):
323-330, 1991) en el que la benzoquinona actúa como
el activador y la mitad del ácido propiónico permite la unión tanto
a una mitad amina (por ej., un inhibidor de enzima) como a un
alcohol (por ej. un esteroide). La activación de dos electrones del
activador de benzoquinona facilita la ciclación intramolecular
generando una lactona estable, un procedimiento que da lugar a la
eliminación de las especies de fármaco. Sin embargo, la lactona
producida es en sí misma un agente alquilante potencial. Este
sistema es de este modo inadecuado para su uso como un sistema de
liberación de un fármaco no-citotóxico. Además, en
solución acuosa en ausencia de un agente de reducción la lactona
producida después de la liberación del fármaco es muy inestable y
sufre degradación. La inestabilidad de este sistema de profármaco
en solución acuosa impide por ello su uso para la liberación del
fármaco in vivo.
En Proceedings of the American Association for
Cancer Research Annual Meeting, San Diego, CA,
12-16 Abril, 1997, no. 2894 se describe un ejemplo
adicional de un sistema de liberación que genera un subproducto de
tipo lactona. Se describe la activación redox de los profármacos de
melfalan bioreductivos conformacionalmente impedidos que implican
la reducción de un grupo quinona seguido por la ciclación
intramolecular que implica la hidroquinona resultante para formar
una lactona y liberación de las especies de melfalan activas.
Un primer aspecto de la presente invención
proporciona un conjugado bioreductivo que comprende una mitad
bioreductiva no-citotóxica que le une a al menos un
agente terapéutico, y sales del mismo, de modo que dicho conjugado
sea de tal modo que en la bioreducción se libere el agente
terapéutico con generación de unas especies que tengan un centro
alquilante de modo que dichas especies sufren una reacción de auto
alquilación para generar un residuo no-citotóxico
de la mitad bioreductiva.
Un segundo aspecto de la presente invención
proporciona un conjugado bioreductivo que comprende una mitad
bioreductiva no-citotóxica que une el mismo a al
menos un agente terapéutico, y sales del mismo, de modo que dicho
conjugado sea de tal modo que en la bioreducción el agente
terapéutico se libere con generación de unas especies que tengan un
centro alquilante estéricamente impedido para impedir la
alquilación de las biomoléculas.
El uso de un conjugado bioreductivo de acuerdo
con la presente invención facilita de este modo un método mejorado
para la dirección específica de un fármaco a áreas de tejido
hipóxico y/o isquémico, por ej., células, tejidos y/o órganos, en
el cuerpo en que las especies de fármaco deseadas se unen a un
compuesto bioreductivo no-citotóxico o soporte. En
este método, se minimiza cualquier interacción directa del soporte
con el ADN u otras biomoléculas, evitando de este modo potenciales
efectos mutagénicos secundarios.
En particular el uso de un conjugado bioreductivo
de acuerdo con la presente invención proporciona un método capaz de
dirigir fármacos a los sitios de inflamación dentro del cuerpo
asociados con hipoxia y/o isquemia, por ej., al sinovio en el
tratamiento de la artritis reumatoidea. Este método no sólo tiene
el efecto de reducir el riesgo de efectos secundarios sistémicos del
fármaco, sino que también incrementa el efecto terapéutico del
fármaco.
Los conjugados bioreductivos de acuerdo con la
invención son sustancialmente estables en un entorno oxigenado. Sin
embargo, en un entorno hipóxico o isquémico, la activación
reductiva da lugar a la liberación del agente terapéutico a partir
de la mitad bioreductiva y de este modo su liberación dirigida al
sitio de la hipoxia o isquemia que puede ser un órgano, tejido,
célula o grupo de células. En general, en la bioreducción la mitad
bioreductiva sufrirá un reordenamiento intramolecular o una reacción
de ciclación intramolecular que a su vez proporcionan la liberación
del agente terapéutico en el sitio objetivo.
Tal como se utiliza en el presente documento, el
término "mitad bioreductiva" pretende definir cualquier
molécula que sea reducida en presencia de enzimas reductoras o
reductasas. Por ejemplo, una mitad bioreductiva puede ser cualquier
molécula sustancialmente no reactiva que en presencia de reductasas
sea convertida en una forma más reactiva. Las mitades bioreductivas
preferidas para uso en la invención son aquellas que en la
activación reductiva se hacen ricas en electrones y que por ello
son capaces de un reordenamiento de la unión intramolecular para
liberar un agente terapéutico.
Tal como se utiliza en el presente documento,
"una mitad bioreductiva no-citotóxica" se
utiliza para definir cualquier mitad bioreductiva que tenga una
actividad in vivo sustancialmente no citotóxica. De este
modo, se pretende que la mitad bioreductiva para su uso de acuerdo
con la invención sea no sólo no-citotóxica en sí
misma, sino que ésta produzca especies sustancialmente no
citotóxicas siguiendo la activación bioreductiva. Por "no
citotóxica" se quiere significar que la mitad bioreductiva no
interacciona directamente con el ADN. Preferiblemente, la mitad
bioreductiva es sustancialmente no mutagénica. De este modo, se
pretende que la mitad bioreductiva funcione principalmente como un
soporte no citotóxico o un agente dirigido para las especies de
fármaco que, después de la liberación del fármaco en el sitio
objetivo, es eliminado del cuerpo en ausencia de cualquiera de los
efectos secundarios no deseados.
\newpage
Los conjugados bioreductivos de acuerdo con la
invención tienen un efecto dirigido en los tejidos que tienen
actividad de la reductasa. Se cree que esto es una consecuencia del
metabolismo hipóxico y/o una oxigenación reducida de dichos
tejidos.
En un alcance de la invención se proporcionan
conjugados bioreductivos de fórmula (I):
(I)A(B)_{n}
en donde A es una mitad bioreductiva no
citotóxica, cada B es independientemente el residuo de un agente
terapéutico, y n es un número entero, preferiblemente entre 1 y 3,
particularmente
1.
A y B son conjugados de forma estable en un
entorno oxigenado y son de tal modo que A es
no-citóxico y B cuando se conjuga con A es no
citotóxico. En la activación reductiva de A, A y B de forma
separada y A es en sí misma tanto una especie estable, no
citotóxica o, más preferiblemente, A reacciona con si misma para
formar unas especies estables, no citotóxicas.
Los compuestos preferidos para uso de acuerdo con
la invención son aquellos que tienen la capacidad de penetrar en
los tejidos pobremente perfundidos y que sólo liberan el fármaco
activo en un entorno hipóxico y/o isquémico.
Se conoce un gran número de agentes bioreductivos
de estructura diversa. Estos incluyen quinonas, compuestos nitro
aromáticos y N-óxidos. Tal como se ha mencionado anteriormente,
aquellos que se pretendan utilizar de acuerdo con la invención
deben ser sustancialmente no citotóxicos siguiendo la activación
bioreductiva. Esto puede conseguirse en un número de vías.
En el primer aspecto de la invención, puede
reducirse la citotoxicidad de la mitad bioreductiva proporcionando
un centro nucleofílico dentro del propio compuesto bioreductivo.
Con la liberación del fármaco se forma un centro alquilante. Sin
embargo, la proximidad del centro nucleofílico asegura que la
alquilación intramolecular se produce con preferencia a la
alquilación de cualquier biomolécula tal como el ADN. De este modo,
se forman especies sustancialmente no citotóxicas. Dichos sistemas
pueden ser referidos como
"auto-alquilantes".
Ejemplos de grupos ricos en electrones capaces de
actuar como una mitad nucleofílica en el compuesto bioreductivo
incluyen átomos de oxígeno, azufre y nitrógeno. De este modo, por
ejemplo, la inclusión de un grupo amino, tio o hidroxilo
posicionado de forma adecuada en el compuesto bioreductivo
favorecerá la alquilación intramolecular dando lugar a un producto
no citotóxico con la liberación del fármaco en el sitio de la
hipoxia/isquemia. Las mitades nucleofílicas adecuadas que pueden
estar presentes en la mitad bioreductiva incluyen -OH, -SH,
-NH_{2} y -NHR en la que R es alquilo de
C_{1-6}, por ejemplo alquilo de
C_{1-3}. Otras mitades nucleofílicas adecuadas
serán conocidas para los expertos en el estado de la técnica.
De forma alternativa, en el segundo aspecto de la
invención, el compuesto bioreductivo para uso en la invención puede
hacerse no citotóxico siguiendo la liberación del fármaco por medio
de la introducción del impedimento estérico capaz de presentar un
bloqueo físico al ataque sobre el bioreductivo por cualquier
nucleófilo. De este modo, la presencia de un grupo voluminoso tanto
en el mismo como en una proximidad cercana a cualquier centro
alquilante potencial generado en la mitad bioreductiva que sigue a
la liberación del fármaco sirve para abolir la reactividad
alquilante y de este modo prevenir la alquilación de cualquier
biomolécula. Ejemplos de grupos que pueden ser utilizados de este
modo incluyen grupos lineales o, más preferiblemente, ramificados,
alquilos de C_{4-20} o alquenilo, por ej., tert.
butilo. Otros grupos capaces de proporcionar impedimento estérico
serán conocidos por los expertos en el estado de la técnica.
Conjugados bioreductivos particularmente
preferidos de acuerdo con la invención incluyen compuestos de
fórmula II:
\newpage
(en donde
R^{1} y R^{2}representan de forma
independiente átomos de hidrógeno o halógeno, o un grupo R, OR, SR,
NHR, NR_{2}, CO_{2}R o CONHR;
o, de forma alternativa, R^{1} y R^{2} junto
con los átomos de carbono que forman parte del anillo forman un
anillo de 5-7 miembros, preferiblemente de 5- o
6-miembros, carbocíclico o heterocíclico
opcionalmente sustituido en sí mismo por uno o más átomos de
halógeno, o por uno o más grupo seleccionados entre R, OR, SR, NHR,
NR_{2}, CO_{2}R y CONHR;
Z representa un grupo alquilo, alquenilo, arilo o
aralquilo que opcionalmente tiene al menos un grupo OH, SH,
NH_{2} o NHR^{7} en el que R^{7} es un grupo alquilo;
R^{3}, R^{4}, R^{5} y R^{6} representan
de forma independiente átomos de hidrógeno o un grupo alquilo o
alquenilo;
cada grupo R representa de forma independiente un
átomo de hidrógeno, un grupo alquilo o alquenilo;
E representa el residuo de un agente terapéutico
a ser liberado, unido de forma opcional a través del grupo de unión
(grupo puente) L;
m = 0, 1, 2 ó 3, preferiblemente 1;
p = 0 ó 2, preferiblemente 0;
con la condición de que cuando m = 1 entonces p =
0)
o una sal del mismo.
Los compuestos preferidos de fórmula II incluyen
aquellos en donde Z representa un grupo de fórmula
(CH_{2})_{n}XH en el que n = 0, 1, 2 ó 3,
preferiblemente 0; y X representa un átomo de oxígeno o de azufre o,
preferiblemente, X representa un grupo de fórmula NY en donde Y
representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo. Dichos
compuestos pueden actuar como sistemas
"auto-alquilantes".
Los compuestos particularmente preferidos de
fórmula II son aquellos en los que Z representa un grupo de la
fórmula (CH_{2})_{n}XH en el que X representa un grupo
amino;
R^{1} y R^{2} representa cada uno de ellos
grupos alcoxi o, junto con los átomos de carbono que forman parte
del anillo, R^{1} y R^{2} forman un anillo de benceno;
R^{3}, R^{4}, R^{5} y R^{6} representan
cada uno de ellos átomos de hidrógeno; y
n = 0, m = 1 y p = 0.
De forma alternativa, en relación con los
compuestos de fórmula II, particularmente cuando Z es diferente de
un grupo de fórmula (CH_{2})_{n}XH, la reducción de la
quinona a su forma de hidroquinona puede facilitar una reacción de
ciclación intramolecular a través del grupo hidroxi presente en el
anillo de hidroquinona y la subsiguiente eliminación de las especies
del fármaco. El éter cíclico resultante es no citotóxico.
El esquema de reacción 1 que se muestra a
continuación ilustra la preparación de un conjugado bioreductivo
preferido de fórmula II en el que R^{1}, R^{2} y Z son tal como
se han definido anteriormente. Tal como se ha observado, la
activación bioreductiva del conjugado da lugar a la formación de un
éter cíclico que es un análogo de la vitamina E y no citotóxico.
\newpage
Esquema
1
Otros conjugados bioreductivos de acuerdo con la
invención incluyen aquellos
compuestos de fórmula
III:
(en donde
P y Q junto con los átomos de carbono del anillo
que interviene forman un anillo de quinona o de indoloquinona, un
compuesto nitroaromático, de N-óxido o diazoaromático,
opcionalmente sustituido en sí mismo por uno o más átomos de
halógeno, o por uno o más grupos seleccionados entre R, OR, SR, NHR,
NR_{2}, CO_{2}R y CONHR;
R^{1} representa un átomo de hidrógeno o de
halógeno, o un grupo R, OR, SR, NHR, NR_{2}, CO_{2}R o
CONHR;
R^{3}, R^{4} y R^{5} representan de forma
independiente átomos de hidrógeno o un grupo alquilo o
alquenilo;
cada grupo R representa de forma independiente un
átomo de hidrógeno, un grupo alquilo o alquenilo;
E representa el residuo de un agente terapéutico
a liberar, opcionalmente unido a través de un grupo de unión
L);
o una sal del mismo.
Los compuestos preferidos de fórmula III son
aquellos en los que P y Q junto con los átomos de carbono que
intervienen en el anillo forman un anillo de quinona o de
indolquinona; y
R^{1}, R^{3}, R^{4} y R^{5} representan
cada uno de ellos átomos de hidrógeno o grupos metilo.
Para actuar como sistemas
"auto-alquilantes", el heteroátomo rico en
electrones presente en la forma reducida del sistema del anillo de
los compuestos de fórmula III debe tener preferiblemente no más de
6 enlaces entre el átomo de carbono unido al agente terapéutico,
E.
Otros conjugados bioreductivos de acuerdo con la
invención incluyen los compuestos de
fórmula IV:
(en donde
S y T junto con los átomos de carbono que
intervienen en el anillo forman un anillo de quinona o de
iminoquinona, un nitroaromático o un N-óxido, por ej., un compuesto
aromático N-óxido, opcionalmente sustituido en sí mismo por uno o
más átomos de halógeno, o por uno o más grupos seleccionados entre
R, OR, SR, NHR, NR_{2}, CO_{2}R y CONHR;
Z representa un grupo alquilo, alquenilo, arilo o
aralquilo que opcionalmente posee al menos un grupo OH, SH,
NH_{2} o NHR^{6} en el que R^{6} es un grupo alquilo;
R^{7} representa un grupo alquilo,
preferiblemente un alquilo de C_{1-2};
R^{3}, R^{4} y R^{5} representan de forma
independiente átomos de hidrógeno o un grupo alquilo o
alquenilo;
cada grupo R representa de forma independiente un
átomo de hidrógeno, un grupo alquilo o alquenilo;
q = 0, 1, 2 ó 3, preferiblemente 0 ó 1;
E representa el residuo de un agente terapéutico
a liberar, opcionalmente unido a través de un grupo puente L);
o una sal del mismo.
Los compuestos preferidos de fórmula IV son
aquellos en los que S y T junto con los átomos de carbono que
intervienen en el anillo forman un compuesto de quinona o de
N-óxido;
R^{3}, R^{4} y R^{5} representan cada uno
de ellos átomos de hidrógeno;
R^{7} es metilo;
Z representa un grupo de fórmula
(CH_{2})_{n}XH en donde X representa un átomo de oxígeno
o de azufre o, preferiblemente, un grupo de fórmula NY en el que Y
representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo, y n = 0, 1, 2 ó
3; y
q = 0 ó 1.
En relación con los compuestos de fórmula IV, la
actividad alquilante puede ser efectivamente abolida después de la
liberación del fármaco por selección como grupo Z de un grupo
voluminoso capaz de proporcionar impedimento estérico. En dichos
casos, Z es preferiblemente un grupo alquilo de
C_{4-20} o alquenilo lineal o, más
preferiblemente, ramificado. De forma alternativa, dichos
compuestos pueden actuar como sistemas "auto alquilantes" en
los casos en que Z representa un grupo de fórmula
(CH_{2})_{n}XH.
En cada uno de los compuestos de las fórmulas
generales anteriores II-IV, los sustituyentes R,
R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4}, R^{5}, R^{6} y R^{7}
pueden ser seleccionados para proporcionar el conjugado con óptimo
potencial redox, solubilidad, especificidad por las enzimas,
etc.
Tal como se ha utilizado en el presente
documento, el término "grupo heterocíclico" pretende definir
un grupo carbocíclico interrumpido por al menos un heteroátomo
seleccionado entre oxígeno, azufre y nitrógeno.
Ejemplos de anillos carbocíclicos o heteocíclicos
preferidos incluyen anillos de benceno, piridina, pirrol, furano,
piracina, piperidina, piperacina, pirrolidina, morfolina y
tiomorfolina.
En cada uno de los compuestos de las fórmulas
II-IV, los átomos de halógeno preferidos son el
flúor y el cloro.
En los conjugados bioreductivos de la invención,
cualquier mitad alquilo o alquenilo, a no ser que se especifique de
otro modo puede ser una cadena lineal o ramificada y contiene de
forma preferible entre 1 y 8, más preferiblemente entre 1 y 6, y de
forma especialmente preferible entre 1 y 4, átomos de carbono. Las
mitades arilo, a no ser que se establezca de otro modo, contienen de
forma preferible entre 5 y 12 átomos en el anillo y comprenden de
forma especialmente preferible anillos de fenilo.
Las sales preferidas de los compuestos de las
fórmulas I-IV son aquellas que son adecuadas para
la administración a pacientes y que por lo tanto son sales
farmacéuticamente o fisiológicamente aceptables. Dichas sales pueden
ser formadas con varios ácidos inorgánicos y orgánicos e incluyen
las sales de amonio, de metales alcalinos y de metales alcalino
térreos.
Las reductasas conocidas a implicar en la
activación de los compuestos bioreductivos incluyen la diaforasa
DT, el citocromo P450, la reductasa del citocromo P450 dependiente
del NADPH y la oxidasa de la xantina. La facilidad de la reducción
de cualquier agente bioreductivo dado dependerá de su capacidad
para actuar como un sustrato para las reductasas intracelulares y
los niveles de expresión de dichas enzimas dentro del tipo de célula
en particular. La selección del compuesto bioreductivo para uso en
la invención dependerá de este modo del tipo de enzimas presentes
en el sitio objetivo. En efecto, puede ser útil para determinar las
actividades de la enzima relativas en los tejidos objetivo de los
pacientes individuales antes del inicio del tratamiento.
Es claramente deseable que el conjugado
bioreductivo alcance el sitio objetivo intacto. Ya que la
bioreducción del conjugado es dependiente del potencial redox de la
mitad bioreductiva presente, ésta puede ser seleccionada de modo
que sea menos susceptible a la reducción por sistemas omnipresentes
tales como el NADH o el NADPH, con lo que se incrementan las
posibilidades de que el conjugado alcance el sitio objetivo todavía
intacto. En general, aquellos compuestos bioreductivos que tienen un
potencial redox óptimo serán más selectivos en dirigirse a las
células hipóxicas y de este modo son los preferidos para el uso en
la invención.
Ejemplos de compuestos bioreductivos preferidos
para su uso en la invención incluyen las quinonas, naftoquinonas,
indolquinonas y quinolino quinonas y sus derivados. El núcleo de
quinona deficiente en electrones en dichos compuestos sufre
fácilmente una reducción in vivo para formar la
correspondiente hidroquinona rica en electrones que a su vez es
capaz de reordenamiento intramolecular para liberar el fármaco. Las
quinonas particularmente preferidas incluyen las
1,4-benzoquinonas y las naftoquinonas en las que el
anillo de quinona soporta de forma opcional un grupo hidroxi o
alquenilo sustituido con amino, por ej., un grupo propenilo, y una
mitad nucleofílica adyacente, por ej., un grupo amino. Las
indoloquinonas son substratos particularmente buenos para la
diaforasa DT, un enzima que se encuentra comúnmente en la mayor
parte de los tejidos.
En el esquema de reacción 2 que se presenta a
continuación se muestra un conjugado bioreductivo preferido de
forma particular de acuerdo con la invención en el que la mitad
bioreductiva es una 1,4-benzoquinona y el agente
terapéutico es la dexametasona, un agente
anti-inflamatorio que puede ser utilizado en el
tratamiento de la artritis reumatoidea.
Esquema
2
Se considera que la invención tiene utilidad en
relación con la liberación de un amplio margen de agentes
terapéuticos. Las expresiones "agente terapéutico" y
"fármaco" se utilizan en el presente documento de forma
intercambiable y se pretende que definan cualquier átomo, ion o
molécula que sea capaz de producir in vivo un efecto
detectable por cualquier examen químico, físico o biológico. En
general, el agente terapéutico será cualquier sustancia que pueda
ser administrada a un cuerpo animal humano o no humano para producir
un efecto deseado, normalmente beneficioso, y puede ser un agente
que tenga tanto un efecto terapéutico como profiláctico.
Ejemplos de agentes terapéuticos adecuados para
uso de acuerdo con la invención incluyen agentes en todas las
mayores áreas terapéuticas incluyendo
anti-infecciosas tales como los agentes antibióticos
y antivirales, analgésicos, anestésicos e
anti-inflamatorios. También pueden ser utilizados
los anti-neoplásticos, incluyendo agentes
citotóxicos conocidos. La selección exacta del agente terapéutico
dependerá naturalmente de la aplicación terapéutica deseada.
Aunque en general es deseable que el agente
terapéutico sea en sí mismo no citotóxico, el soporte bioreductivo
puede ser utilizado para liberar los agentes citotóxicos, por ej.,
en el tratamiento anti-tumoral.
Ejemplos de otros agentes terapéuticos para uso
de acuerdo con la invención incluyen agentes administrados al
cuerpo humano o animal para objetivos de diagnóstico, por ej., para
uso en técnicas de toma de imágenes radiológicas. En este aspecto,
un esteroide marcado isotópicamente puede estar unido a un
compuesto bioreductivo no citotóxico para uso en la detección de
células hipóxicas en tejidos tumorales.
Los métodos para unir compuestos bioreductivos a
un agente terapéutico se encuentran al alcance del experto en la
materia. En general, los conjugados de acuerdo con la invención
pueden ser preparados por unión de una mitad bioreductiva no
citotóxica a al menos un agente terapéutico. La unión del agente
terapéutico a la mitad bioreductiva puede ser efectuada a través de
cualquier grupo reactivo y las técnicas de acoplamiento estándar son
conocidas en el estado de la técnica. Las condiciones de reacción
preferidas, por ej., temperatura, disolventes, etc. dependen en
primer lugar de los reactivos particulares y pueden ser fácilmente
determinadas por los expertos en la materia. En general, cualquier
grupo reactivo presente, por ej. amino, carboxi, etc. será
protegido durante el acoplamiento del bioreductivo con el agente
terapéutico, aunque es posible dejar algunos grupos sin proteger.
Después del acoplamiento, el compuesto resultante puede ser
purificado, por ej. por cromatografía.
La mitad bioreductiva puede ser unida
directamente al agente terapéutico o puede ser unida por un grupo
de unión, L. La unión entre el bioreductivo y el agente terapéutico
puede ser efectuada a través de cualquier grupo reactivo presente
en la mitad bioreductiva, por ej. una amina primaria, carboxilato,
alcohol, tiolato, etc. De forma preferible, la mitad bioreductiva
está unida al agente terapéutico a través de un enlace de tipo
éster, fosfato éster, éter, amina, tiol o tiol éster o cualquier
combinación de los mismos.
El grupo de unión sirve para unir la mitad
bioreductiva a al menos un agente terapéutico. Además de cumplir
este papel como grupo de unión, el grupo puente puede ser
seleccionado para proporcionar un conjugado bioreductivo que tenga
las características deseadas. Por ejemplo, la selección apropiada de
un grupo de unión puede servir para incrementar la resistencia del
conjugado al metabolismo no bioreductivo y/o incrementar la
liberación de la molécula de fármaco al sitio objetivo. También
puede ser posible optimizar el potencial redox, la especificidad
por la enzima o el tejido, o la solubilidad del conjugado por
unirse a, o por incorporar el grupo de unión a mitades
seleccionadas de forma apropiada, por ej. grupos que son el tejido
objetivo. De este modo, la facilidad para alterar la naturaleza del
grupo de unión proporciona la posibilidad de alterar las
propiedades físicoquímicas, por ej. solubilidad, y las propiedades
biológicas, por ej. biodistribución, del conjugado bioreductivo.
Sin embargo, la función primaria del grupo de unión es enlazar
directamente el compuesto bioreductivo y el fármaco.
Los grupos de unión L particularmente adecuados
para su uso en la invención para aquellos fármacos que tienen un
grupo -OH o -SH libre incluyen los siguientes en los que E
representa el residuo de unas especies de fármaco:
-O-CO-(CH_{2})_{n}-CO-X-E
y
(en donde n es un número entero comprendido entre
1 y 3;
X representa un átomo de azufre u oxígeno que
puede formar parte de la molécula del fármaco E;
y R^{8} y R^{9} representan cada uno de ellos
de forma independiente F o Cl).
El bioreductivo en sí mismo puede ser sintetizado
de acuerdo con las técnicas de síntesis convencionales. Las
técnicas para la síntesis de quinonas, en particular de
indoloquinonas está descrita por ejemplo en el J. Org. Chem.
50: 4276-4281 (1985).
Visto desde un aspecto adicional la invención
proporciona un procedimiento para la preparación de un conjugado
bioreductivo que comprende una mitad bioreductiva no citotóxica que
une la misma a al menos un agente terapéutico, de modo que dicho
procedimiento comprende la unión de al menos un agente terapéutico
a una mitad bioreductiva no citotóxica.
Se cree que hay muchas condiciones que pueden
beneficiarse del sistema de liberación del fármaco de la invención.
Estas son condiciones principalmente asociadas con hipoxia y/o
isquemia. La hipoxia es cualquier estado en el que una cantidad
fisiológicamente inadecuada de oxígeno está disponible para, o es
utilizada por, cualquier tejido o grupo de tejidos dado dentro del
cuerpo. La isquemia es una disminución local en el aporte de sangre
a cualquier tejido en el cuerpo y puede aumentar como resultado de
la obstrucción en el flujo de la sangre arterial o la
vasoconstricción. En general, la isquemia conducirá en último lugar
a la hipoxia.
En un entorno clínico, los tejidos pueden hacerse
hipóxicos y/o isquémicos como resultado de un número de diferentes
condiciones en el cuerpo. La reducción del aporte de sangre a los
tejidos del cuerpo tienen el efecto de inducir isquemia, por
ejemplo en la arteriosclerosis, diabetes o después del trasplante
de tejido u órgano. La respuesta inflamatoria o cancerosa también
puede conducir al sobrecrecimiento físico o metabólico de su aporte
vascular, conduciendo de nuevo a isquemia y/o hipoxia.
Los ejemplos de estados no limitantes que pueden
ser tratados utilizando los conjugados bioreductivos de la
invención incluyen condiciones inflamatorias, por ej. artritis
reumatoidea, y otros estados artríticos tales como osteoartritis,
diabetes, arteriosclerosis, apoplejía, sepsis, enfermedad de
Alzheimer y otras enfermedades neurológicas, cáncer, enfermedad de
riñón, enfermedades digestivas y enfermedad del hígado. Otros
estados de interés incluyen periodontitis crónica e isquemia
producida después de un transplante de tejido.
Los conjugados bioreductivos de la invención
pueden también pueden tener uso en el tratamiento de un amplio
margen de estados inflamatorios de los tejidos blandos. En el caso
de ciertos estados inflamatorios del aparato gastrointestinal, las
secciones del aparato gastrointestinal se vuelven hipóxicas. Otros
estados inflamatorios que pueden ser tratados de acuerdo con la
invención incluyen de este modo trastornos gastrointestinales tales
como la enfermedad de Crohn.
Los compuestos de la invención también pueden ser
utilizados en el tratamiento de trastornos musculares asociados con
la hipoxia y/o la isquemia.
Se cree que muchos fármacos conocidos pueden
tener efectos terapéuticos mejorados si se liberan de forma
selectiva al tejido isquémico/hipóxico. Por ejemplo, después de un
ataque cerebral, se reduce la perfusión cerebral y el cerebro sufre
una respuesta inflamatoria. La unión del vasodilatador, tal como un
generador de óxido nítrico, o un agente
anti-inflamatorio, tal como un esteroide, a un
agente bioreductivo serviría de este modo para incrementar el
índice terapéutico del fármaco.
Es conocido que la artritis reumatoidea está
asociada con inflamación sinovial crónica y una débil perfusión de
los tejidos sinoviales. Sin embargo, ahora hemos descubierto que en
pacientes que sufren artritis reumatoidea los tejidos sinoviales
son en muchos casos profundamente hipóxicos (pO_{2} < 12 mm
Hg). También se ha encontrado que dichos tejidos contienen niveles
altos de reductasas. Aunque no se desea estar ligado a
consideraciones teóricas, se cree que hay bolsillos en el sinovio
que son hipóxicos y que son las células hipóxicas en el sinovio las
que son principalmente responsables de la inflamación asociada con
la artritis reumatoidea. La unión de un agente
anti-inflamatorio, tal como un agente
anti-inflamatorio no esteroideo, por ej.
dexametasona, un esteroide o un inhibidor de óxido nítrico serviría
de este modo para incrementar en gran manera el índice terapéutico
del agente activo en el tratamiento de la artritis reumatoidea,
mientras que al mismo tiempo reduciría el riesgo de efectos
secundarios sistémicos. Los NSAIDs basados en un débil acidez que
sufren una captura de iones en el tejido acidótico son considerados
particularmente adecuados.
Después del transplante y del rechazo de tejido,
tanto la isquemia como la respuesta
inmunológica-inflamatoria pueden contribuir a la
hipoxia del tejido. De nuevo, dichas condiciones pueden ser
tratadas de este modo utilizando un conjugado de la invención en el
que se une una mitad bioreductiva a un vasodilatador o a un
anti-inflamatorio o supresor inmunológico.
Se cree que muchas de las complicaciones básicas
de la diabetes son debidas a su patología básica a la hipoxia. En
efecto, en muchos casos los diabéticos muestran una
arteriosclerosis acelerada. De este modo la presente invención
puede ser utilizada en el tratamiento de la diabetes por unión al
fármaco, tal como un inhibidor de la fosfodiesterasa, a una mitad
bioreductiva no citotóxica.
También se cree que los tejidos hipóxicos están
presentes en la periodontitis crónica, un estado asociado con la
inflamación severa del periodontio. La unión de un antibiótico u
otro fármaco conocido para el tratamiento de la periodontitis, por
ej. un inhibidor de metaloproteinasa, a un bioreductivo puede de
este modo ser beneficioso en el tratamiento de este estado.
Un ejemplo de un agente que puede ser unido a un
compuesto bioreductivo no citotóxico para uso en el tratamiento de
la diabetes es el dipiridamol.
El conjugado bioreductivo de la invención puede
ser utilizado para dirigir un agente terapéutico a un sitio del
tejido específico dentro del cuerpo, en particular a un sitio de
hipoxia y/o isquemia, por ej. en el tratamiento de la artritis
reumatoidea u otros estados artríticos, diabetes, arteriosclerosis,
apoplejía, sepsis, enfermedad de Alzheimer y otros trastornos
neurológicos, cáncer, enfermedad de riñón, enfermedades digestivas,
enfermedad del hígado, periodontitis crónica o isquemia producida
después del transplante de tejido.
En un alcance preferido la invención proporciona
un conjugado bioreductivo que comprende una mitad bioreductiva no
citotóxica unida a un agente anti inflamatorio para uso en el
tratamiento de la artritis reumatoidea.
Visto desde un aspecto todavía adicional la
invención proporciona el uso de un conjugado bioreductivo tal como
se define a continuación en la fabricación de un medicamento para
uso como un agente objetivo, en particular como un agente capaz de
dirigirse al sitio de la hipoxia y/o isquemia en el cuerpo, por ej.
en el tratamiento de la artritis reumatoidea y otros estados
artríticos, diabetes, arteriosclerosis, apoplejía, sepsis,
enfermedad de Alzheimer y otros trastornos neurológicos, cáncer,
enfermedad de riñón, enfermedades digestivas, enfermedad del
hígado, periodontitis crónica o isquemia producida después del
transplante de tejido.
Un aspecto todavía adicional de la invención
proporciona una composición farmacéutica que comprende un conjugado
bioreductivo de acuerdo con la invención o una sal
farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con al menos un soporte
o excipiente farmacéutico.
El ingrediente activo en dichas composiciones
puede comprender entre aproximadamente un 0,1% y aproximadamente un
99% en peso de la formulación. Por "farmacéuticamente
aceptable" se quiere significar que el ingrediente debe ser
compatible con otros ingredientes de la composición así como ser
aceptable fisiológicamente al paciente.
Las composiciones farmacéuticas para uso de
acuerdo con la presente invención pueden ser formuladas en un modo
convencional utilizando auxiliares farmacéuticos o veterinarios
asequibles. De este modo el ingrediente activo puede ser
incorporado, opcionalmente junto con otras sustancias activas, con
uno o más soportes convencionales, diluyentes y/o excipientes, para
producir preparaciones galénicas convencionales tales como
comprimidos, pastillas, polvos, grageas, sobres, obleas, elixires,
suspensiones, emulsiones, soluciones, jarabes, aerosoles, cápsulas
de gelatina blanda y dura, supositorios, soluciones inyectables
estériles, polvos envasados de forma estéril, y similares.
Ejemplos de soportes, excipientes y de diluyentes
son la lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, almidones,
goma de acacia, fosfato cálcico, aglinatos, tragacanto, gelatina,
silicato cálcico, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona,
celulosa, jarabe de agua, agua, agua/etanol, agua/glicol,
agua/polietileno, glicol, propilen glicol, metil celulosa,
metilhidroxibenzoatos, propil hidroxibenzoatos, talco, estearato de
magnesio, aceite mineral o sustancias grasas tales como grasas duras
o mezclas adecuadas de los mismos. Las composiciones pueden incluir
de forma adicional agentes lubricantes, agentes humectantes,
agentes emulsionantes, agentes de suspensión, agentes conservantes,
agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, y similares. Las
formulaciones pueden ser formuladas de modo que proporcionen una
liberación rápida, sostenida o retardada del ingrediente activo
después de la administración al paciente por uso de los
procedimientos bien conocidos en el estado de la técnica.
Las composiciones se formulan de forma preferible
en una forma de dosis unitaria, por ej. de modo que cada dosis
comprenda aproximadamente entre 0,1 y aproximadamente 500 mg del
ingrediente activo.
La dosis precisa del ingrediente activo y la
longitud del tratamiento dependerá de un número de factores
incluyendo la edad y el peso del paciente, el estado específico a
tratar y su severidad, y la vía de administración. En general, una
dosis efectiva será del orden de aproximadamente entre 0,01 mg/kg y
aproximadamente 20 mg/kg de peso corporal por día, administrada una
o más veces al día. De este modo, una dosis apropiada para un
adulto puede estar comprendida entre 10 y 100 mg por día, por ej.
entre 20 y 50 mg por día.
La administración puede ser por cualquier método
adecuado conocido en el estado de la técnica, incluyendo por
ejemplo la administración oral, parenteral (por ej. intramuscular,
subcutánea, intraperitoneal o intravenosa), rectal o tópica.
La presente invención se ilustrará ahora de forma
adicional por vía de los siguientes Ejemplos no limitativos y con
referencia a la Figura 1 que se acompaña que muestra el perfil del
producto obtenido en la reducción del conjugado
aspirina-bioreductivo del Ejemplo 5 por el radical
(CH_{3})_{2}C\cdotOH.
Entre los ejemplos de transportadores,
excipientes y eluyentes apropiados se incluyen lactosa, dextrosa,
sucrosa, sorbitol, manitol, almidones, goma de acacia, fosfato de
calcio, aglinatos, tragacanto, gelatina, silicato de calcio,
celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, celulosa, jarabe de
agua, agua, agua/etanol, agua/glicol, agua/polietileno, glicol,
propilenglicol, metil celulosa, metilhidroxibenzoatos,
propilhidroxbenzoatos, talco, estearato de magnesio, aceite mineral
o sustancias grasas, como grasa sólida o una mezcla apropiada de
estos compuestos. Las composiciones pueden incluir de forma
adicional agentes lubricantes, agentes humidificadores, agentes
emulsificantes, agentes suspensores, agentes conservantes, agentes
endulzantes, agentes aromatizantes, y similares. Las formulaciones
pueden formularse de forma que proporcionen una liberación rápida,
sostenida o retrasada del ingrediente activo después de la
administración al paciente mediante la utilización de
procedimientos suficientemente conocidos en el campo de esta
técnica.
Las composiciones se formulan preferentemente en
una forma de dosis unitaria, conteniendo cada dosis, por ejemplo,
desde alrededor de 0.1 hasta alrededor de 500 mg del ingrediente
activo. La dosis precisa del ingrediente activo y la duración del
tratamiento dependerán de cierto número de factores, entre los que
se incluyen la edad y el peso del paciente, la condición específica
que está siendo tratada y su severidad, y la vía de administración.
En general, una dosis efectiva será del orden desde alrededor de
0.01 mg/kg hasta alrededor de 20 mg/kg de peso corporal por día,
administrada una o más veces al día. Así pues, una dosis apropiada
para un adulto puede ser de 10 a 100 mg por día, por ejemplo de 20
a 50 mg por día.
La administración puede llevarse a cabo mediante
cualquier método apropiado conocido en el campo de la técnica,
incluyendo por ejemplo la administración oral, parenteral (por
ejemplo intramuscular, subcutánea, intraperitoneal o intravenosa),
rectal o tópica.
La presente invención puede ilustrarse a
continuación mediante los siguientes Ejemplos no limitantes y en
referencia a la Figura 1 que la acompaña, que muestra el perfil del
producto obtenido en la reducción del conjugado bioreductor de
aspirina del Ejemplo 5 por el radical
(CH_{3})_{2}C\cdotOH.
Paso
1
Se agitan conjuntamente
N,N-dimetilformamida (2 equivalentes) y POCl_{3}.
La solución resultante se añade entonces a una solución de la
amino-dihidro-naftoquinona protegida
(1 equivalente) en 1,2-dicloroetano y se calienta
bajo reflujo durante alrededor de 1½ horas. Seguidamente se enfría
la solución resultante y se añade NaOAc (1M,
100 ml/g quinona) bajo agitación durante 2½ horas. La solución se extrae entonces con EtOAc, se seca y se evapora. A continuación, se purifica el producto resultante (2) mediante cromatografía sobre sílice.
100 ml/g quinona) bajo agitación durante 2½ horas. La solución se extrae entonces con EtOAc, se seca y se evapora. A continuación, se purifica el producto resultante (2) mediante cromatografía sobre sílice.
\newpage
Paso
2
Se agita trietilfosfonoacetato (10.92 mmol) en
dimetilformamida (80 ml). Se añade entonces NaOMe (11 mmol) y la
solución se agita durante ½ hora. El producto (2) (4.27 mmol)
disuelto en dimetilformamida (20 ml) se añade en porciones y la
agitación se mantiene durante otras 2 horas. Seguidamente se diluye
la mezcla con acetato de etilo (300 ml), se lava con
hidrógenocarbonato de sodio acuoso (6 x 100 ml), se seca, se
evapora al vacío y el producto (3) se recristaliza desde acetato de
etilo.
Paso
3
El producto (3) (1.21 mmol) se disuelve en
CH_{2}Cl_{2} anhidro (90 ml) y se añade gota a gota hidruro de
diisobutilaluminio (16.3 ml, 1.5M en tolueno) a -50ºC. Seguidamente
la mezcla se agita durante 3½ horas a -30ºC y se añade FeCl_{3}
(1.0M disuelto en HCl 0.1M, 27 ml) manteniendo la temperatura por
debajo de 0ºC seguido de filtración. El producto resultante se
extrae con CHCl_{3} (4 x 75 ml), se lava con salmuera (50 ml), se
seca y se evapora al vacío. El producto (4) se recristaliza en
etanol.
Paso
4
Se disuelve prednisoleno
21-acetato (1 equivalente) en CH_{2}Cl_{2} seco
(50 ml) y se añade piridina seca (10 ml) bajo atmósfera de
nitrógeno. Seguidamente se agita la solución bajo reflujo durante 2
horas junto con cloruro de succinilo (1.1 equivalentes). A
continuación se enfría ésta y se lava con HCl diluído (0.1M, 20 ml)
seguido de H_{2}O (3 x 30 ml), se seca y se evapora al vacío. El
producto (5) se purifica mediante cromatografía sobre sílice.
Paso
5
Se añaden piridina (6 mmol), dicloruro
N,N'-dimetilfosforamídico (3 mmol) y el producto (4)
a una solución del producto (5) (2 mmol) en
1,2-dimetoxietano (10 ml) a 0ºC. La solución
resultante se agita a temperatura ambiente bajo una atmósfera de
argón durante 16 horas. Éste se vierte en HCl 1N enfriado con hielo
(40 ml) y se extrae con CH_{2}Cl_{2} (4 x 30 ml). Los extractos
combinados se secan con MgSO_{4}, se filtran y se concentran. El
residuo se purifica mediante cromatografía de columna sobre gel de
sílice para dar el producto final (6).
Paso
1
El compuesto (1) (10 mmol) (ver Naylor et al.,
2-Ciclopropyl Indoloquinones and their Analogues As
Bioreductively-Activated Antitumor Agents:
Structure-Activity in vitro and Efficacy
in vivo, J. Med. Chem.:40(15), 1997) se disuelve en
DMF (10 ml) y se añade 3-aminocrotonato de metilo
(50 mmol). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente
durante 18 horas y seguidamente se evapora al vacío y el residuo se
purifica sobre sílice para dar el producto (2).
Paso
2
El derivado aminocrotonato (2) (10 mmol) se
disuelve en CHCl_{3} (300 ml) y EtOH ( 110 ml) y se añade una
solución de Na_{2}S_{2}O_{4} (120 mmol) en H_{2}O (130 ml).
La disolución se agita a temperatura ambiente durante ½ hora y se
separa la capa orgánica, se lava con NaCl saturado (500 ml), se seca
y se evapora. La hidroquinona en bruto se disuelve entonces en
CH_{2}Cl_{2} anhidro (300 ml) bajo argón, se enfría a -30ºC y
se añade gota a gota DIBAL-H (50 ml de una solución
1.5 M en tolueno) de tal manera que la temperatura de la solución
permanece por debajo de -30ºC. Seguidamente se deja que la solución
alcance 0ºC y se agita durante 2½ horas a esta temperatura, y se
añade una solución de la solución de FeCl_{3} (90 ml, 1.0M (0.1M
HCl)). La solución se agita durante 10 minutos a 0ºC y entonces se
añaden CHCl_{3} (500 ml) y H_{2}O (500 ml). La capa acuosa se
extrae con CHCl_{3} (5 x 250 ml) y seguidamente con EtOAc (5 x
250 ml) y las fases orgánicas combinadas se lavan con NaCl saturado
(500 ml), se secan y se evaporan. El residuo se purifica sobre
sílice y se recristaliza desde EtOAc para dar el producto (3) en la
forma de un sólido de color púrpura/rojo.
Paso
3
La indoloquinona (3) (10 mmol) se disuelve en THF
(25 ml) y se añade a una solución (THF, 25 ml) del ácido
carboxílico o fenol del fármaco que va a ser acoplado (1.5
equivalentes), trifenilfosfina (20 mmol) y dietilazodicarboxilato
(20 mmol). Seguidamente se agita la disolución durante toda la noche
a 50ºC, se evapora el disolvente y el producto final residual (4)
se purifica sobre sílice.
Paso
1
Se disuelve
5-metoxi-1-metilindol-2-acetato
de metilo (10 mmol) en THF anhidro (250 ml) y se añade LiAlH_{4}
(100 ml de una solución 1.0M en THF) gota a gota a temperatura
ambiente bajo argón. La solución se agita entonces durante 1 hora a
30ºC y a continuación se añade EtOAc (250 ml), seguido por una
adición gradual de H_{2}O (150 ml). La solución se lava con HCl
(0.1M, 250 ml) y NaCl saturado (250 ml), se seca y se evapora. El
residuo se purifica mediante cromatografía de columna de flash sobre
sílice y seguidamente se recristaliza para dar el producto (2).
Paso
2
Se agitan DMF (100 mmol) y POCl_{3} (25 mmol) a
-5ºC durante ½ hora y seguidamente se añade una solución de (2) (10
mmol en 30 ml de DMF) lentamente, manteniendo la temperatura
alrededor de 0ºC, y a continuación se calienta hasta 40ºC y se
agita durante 1 hora. Seguidamente se añade una mezcla de agua/hielo
(100 ml), seguido de NaOH (37%, 50 ml) y la solución se extrae en
EtOAc, se evapora y el carboxaldehído (3) se purifica mediante
recristalización desde una mezcla de EtOAc/hexano.
Paso
3
A una solución de (3) (10 mmol) en AcOH (50 ml)
enfriado a 5ºC, se le añade gota a gota una mezcla fría (0ºC) de
HNO_{3} fumante (10 ml) en AcOH (30 ml). La solución se agita
durante 1 hora mientras se deja que alcance la temperatura
ambiente, y entonces se vierte en 100 g de hielo picado. Después de
15 minutos de agitación el sólido amarillo resultante se recoge
mediante filtración por succión. El residuo seco se purifica sobre
sílice para dar el producto (4) en la forma de un sólido de color
amarillo.
Paso
4
A una suspensión de (4) (10 mmol) en EtOH (180
ml) se le añade polvo de estaño (40 mmol) y HCl (3.0M, 70 ml) y la
solución se agita a temperatura ambiente durante 1 hora. La
disolución se decanta entonces del exceso de estaño y se neutraliza
con NaHCO_{3} (acuoso) saturado. La suspensión resultante se añade
entonces a un volumen igual de H_{2}O y se extrae con CHCl_{3}
(5x50 ml) y a continuación con EtOAc (5x50ml) y los extractos
combinados se evaporan. El derivado 4-aminoindol
residual se purifica sobre sílice y se utiliza inmediatamente en el
siguiente paso disolviéndolo en Me_{2}CO (250 ml) y añadiendo una
solución de nitrosodisulfonato de potasio ((KSO_{3})NO, sal
de Fremy, 30 mmol) en tampón de NaH_{2}PO_{4}/Na_{2}HPO_{4}
(250 ml, 0.3M, pH 6.0) y la solución se agita a temperatura
ambiente durante 1 hora. El Me_{2}CO se elimina al vacío y el
precipitado de color naranja resultante se recoge mediante
filtración por succión, se lava con H_{2}O y se seca en un horno
al vacío a 45ºC para dar en producto (5) en la forma de un sólido de
color naranja que se recristaliza desde EtOAc.
Paso
5
Se disuelve indoloquinona (5) (10 mmol) en THF
(100 ml) junto con Et_{3}N (10 mmol) y se añade
trimetilclorosilano (1.1 mmol). La disolución se agita a
temperatura ambiente durante 8 horas, se evapora y se purifica sobre
sílice para dar el producto (6).
Paso
6
La indoloquinona protegida (6) (10 mmol) se
disuelve en MeOH anhidro libre de nitrógeno (200 ml) y se añade
NaBH_{4} (30 mmol). Se elimina el gas de la disolución con argón
y se agita durante 5 minutos bajo argón y seguidamente se airea y
se diluye con EtOAc (700 ml) y se lava con H_{2}O (2x250 ml) y a
continuación con NaCl saturado (100 ml). La disolución orgánica seca
se condensa para dar la indoloquinona (7) en la forma de un sólido
de color naranja después de una columna de sílice y/o
recristalización desde EtOAc.
Paso
7
La 3-(hidroximetil)indoloquinona (7) se
disuelve en THF junto con trifenilfosfina (20 mmol) y se añade el
ácido carboxílico o el fenol del fármaco deseado (RCO_{2}H o ROH,
en los cuales R es un fármaco, 1.5 a 5 equivalentes). La disolución
se agita entonces durante toda la noche a 50ºC, se evapora el
disolvente y el residuo se redisuelve en EtOAc. La disolución se
lava entoces con HCl (1.0 M, 50 ml) y H_{2}O (50 ml), se seca y
se evapora. El producto se purifica en sílice y se desprotege
disolviendolo en MeOH anhidro junto con K_{2}CO_{3} (10
mmol)a 0ºC y agitando durante 45 minutos. El producto final
(8) se purifica entonces sobre sílice y se recristaliza desde
EtOAc.
Paso
1
Se añade gradualmente 7-azaindol
(Sigma-Aldrich, 10 mmol) bajo agitación a una
suspensión de NaH (11 mmol) en THF (30 ml). Después de 15 minutos,
se añade yoduro de metilo (10 mmol) y la solución se agita a
temperatura ambiente durante una hora. La solución se enfría a -5ºC
y se añade gradualmente H_{2}O (30 ml), seguido de EtOAc (50 ml).
A continuación se extrae la capa acuosa con EtOAc (3 x 50 ml), se
lava con NaHCO_{3} saturado, NaCl saturado, se secay se evapora.
El residuo se purifica sobre sílice para dar el producto (2).
Paso
2
Se agitan DMF (100 mmol) y POCl_{3} (25 mmol) a
-5ºC durante media hora y a continuación se añade lentamente una
solución de (2) (10 mmol en 30 ml DMF), manteniendo la temperatura
alrededor de 0ºC, y seguidamente se calienta a 40ºC y se agita
durante 1 hora. Seguidamente se añade una mezcla de agua y hielo
(100 ml), seguido de NaOH (37%, 50 ml) y la solución se extrae en
EtOAc, se evapora y el carboxaldehído (3) se purifica mediante
recristalización desde una mezcla de EtOAc/hexano.
Paso
3
se disuelve en
3-formil-7-azaindol
(3) (10 mmol) en MeOH anhidro libre de nitrógeno (200 ml) y se
añade NaBH_{4} (30 mmol). Se eliminan los gases de la solución
con argón y seguidamente se airea, se diluye con EtOAc (700 ml) y se
lava con H_{2}O (2 x 250 ml) y removida durante 5 minutos en
argón y a continuación con NaCl saturado (100 ml). La solución
orgánica seca se condensa para dar el derivado
3-hidroximetílico (4) después de cromatografía de
columna de sílice.
Paso
4
Se disuelve el producto (4) (10 mmol) en KOH (0.5
M, acuoso, 100 ml). Se añade lentamente ácido de Caro
(peroximonosulfato de potasio, Oxone,
2KHSO_{5}\cdotKHSO_{4}\cdotK_{2}SO_{4}, 10 mmol) bajo
agitación y la solución se agita durante 12 horas. La solución se
neutraliza con ácido fosfórico, se evapora y la sal residual se
extrae y se purifica en sílice para dar (5).
Paso
5
Se disuelve en 3-(hidroximetil)indol (5)
(10 mmol) en THF (50 ml) junto con piridina (5 ml) y se añade
cloruro de succinilo (10 mmol) bajo agitación. Después de 1 hora se
añade H_{2}O (50 ml) y la solución se agita durante 1½ horas y se
añade HCl 2.0 M (50 ml). Después de otras 1½ horas la solución se
extrae con Et_{2}O (3 x 100 ml), se seca y se evapora. El ácido
(6) se purifica sobre sílice.
Paso
6
Se disuelve el ácido
azaindol-N-óxido carboxílico (6) (10 mmol) en THF
(25 ml) y se añade a una solución (THF, 25 ml) del esteroide
protegido (1.5 equivalentes), trifenilfosfina (20 mmol) y
dietilazadicarboxilato (20 mmol). La solución se agita durante toda
la noche a 50ºC, se evapora el disolvente y el residuo se
redisuelve en EtOAc. Seguidamente la solución se lava con HCl (1.0M,
50 ml) y NaHCO_{3} saturado (acuoso, 50 ml), se seca y se
evapora. El producto final (7) se purifica en sílice.
Se disolvió
3-hidroximetil-5-metoxi-1,2-dimetilindol-4,7-diona
(0.235g, 1.0 mmol) en diclorometano (anhidro, 25 ml) junto con
piridina (2.5 ml). Seguidamente se añadió cloruro de
2-acetilsaliciloílo (0.237g, 1.2 mmol) y la
solución se calentó a reflujo durante 1½ horas, se enfrió y se
añadió acetato de etilo (100 ml). La disolución se lavó con HCl
(0.1 M, 100 ml) y después con NaCl saturado (100 ml), se secó y se
dejó evaporar. El residuo se purificó sobre gel de sílice,
utilizando como eluyente acetato de etilo para dar el compuesto del
título en la forma de un sólido amarillo (275 mg, rendimiento:
69.3%) que se recristalizó desde acetato de etilo, p.f.
159-161ºC.
^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta
2.27 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 3.90 (s, 3H), 5.47 (s,
2H), 5.63 (s, 1H), 7.01-7.53 (m, 3H) y 7,99 (dd,
J=1.4 y 8,1 Hz, 1H) ppm.
| Análisis: | Encontrado: C 63.81, H 4.81, N 3.71 |
| Calculado: C 63.47, H 4.82, N 3.52% |
Tres grupos de ratas macho albinas Wistar (n=5)
recibieron aire estéril por vía dorsal (día 1). Después de 2 días
se administró una cantidad adicional de 20ml de aire esteril. En el
día 5, se inyectaron directamente en la bolsa de aire 2 ml de
carragenina 1% en salino estéril. Los animales fueron alojados en
jaulas metabólicas.
Se suspendieron 100 mg del conjugado de
indoloquinona-aspirina del Ejemplo en etanol (2
ml). Se disolvieron 50 mg de ácido acetil salicílico en 2 ml de
etanol. Se utilizaron 2 ml de etanol como control. Se añadieron 18
ml de agua estéril a cada muestra.
En el día 9, a cada animal se le inyectaron 4 ml
de la solución de la siguiente forma:
Grupo A - 20 mg de conjugado de
indoloquinona-aspirina
Grupo B - 10 mg de ácido acetilsalicílico
Grupo C - etanol (control)
Los animales fueron devueltos entonces a sus
jaulas por períodos de 2 (nos. 1, 2 y 3 de cada grupo) o bien de 4
horas (nos. 4 y 5 de cada grupo). Una vez transcurrido este período
de tiempo, los animales fueron anestesiados y se les recogió sangre
y sudor. También se recogió la orina disponible.
Los análisis mediante HPLC de las muestras
recogidas mostró que el conjugado bioreductor de ácido
acetilsalicílico se había escindido para liberar el ácido
acetilsalicílico.
La liberación iniciada por reducción de la
aspirina a partir del conjugado de indoloquinona-ácido
acetilsalicílico del Ejemplo 5 se investigó mediante análisis del
producto (HPLC) seguido de radiolisis-\gamma de
soluciones saturadas de NO_{2} que contenían la quinona (100
\muM) y 2-propanol (8.3M, 50%, v/v) a pH 7.4.
El rendimiento químico de la reacción (G) del
radical (CH_{3})_{2}C\cdotOH en mezclas saturadas en
NO_{2} de 2-propanol/agua determinado mediante
reducción de ferricianuro fue de
G((CH_{3})_{2}C\cdotOH) = 0.67 \pm 0.02 \mumol
J^{-1} en 2-propanol/agua (50%, v/v) y 0.72 \pm
0.03 \mumol J^{-1} en 2-propanol 1M
respectivamente. La Figura 1 muestra el perfil de producto obtenido
en la reducción de la quinona por el radical
(CH_{3})_{2}C\cdotOH. La pérdida de la quinona
originada (G(-Q) = 1.63 \pm 0.01 \mumol J^{-1}) ocurre
paralelamente a la formación del grupo saliente aspirina (LG) con
G(LG) = 1.40 \pm 0.15 \mumol J^{-1}.
Los dos picos más importantes que quedan en la
Figura 1 provienen de la reacción del derivado imino resultante con
agua para generar (a) y con el 2-propanol para
generar el éter de isopropilo (b). Ambas quinonas se generaron por
autooxidación de sus respectivas hidroquinonas siguiendo la
inevitable introducción de oxígeno durante el muestreo por
HPLC:
QH_{2} + O_{2} \rightarrow Q
+
H_{2}O_{2}
Tal como se esperaba, los rendimientos relativos
de (a) y (b) dependen de la concentración de alcohol,
desapareciendo virtualmente el producto de alquilación cuando la
radiolisis se llevó a cabo en 2-propanol 1M.
Las soluciones de indolquinona se saturaron con
NO_{2} gaseoso en viales bien ajustados antes de la irradiación
en una fuente de ^{60}Co. Una dosis absorbida de 1 Gy = 0.67
\muM radicales (CH_{3})_{2}C\cdotOH en
2-propanol / agua (50%, v/v) saturado de N_{2}O.
Se utilizó un rango de dosis de 6-6.5 Gy
min^{-1}, determinado mediante dosimetría de Fricke, y los
rendimientos químicos de la radiación se corrigieron para las dosis
absorbidas en las diversas mezclas de alcohol-agua
empleadas.
El análisis del producto después de la
radiolisis-\gamma se llevó a cabo mediante
separación de HPLC por gradiente en una columna de fase reversa
desactivada para bases de 100 mm x 4.6 mm (Hichrom RPB, Hichrom,
Reading, U.K.). Los eluyentes utilizados fueron (A):
KH_{2}PO_{4} (5mM), H_{3}PO_{4} (5 mM), (B):
CH_{3}CN/H_{2}O (3:1, v/v), con una velocidad de flujo de 2
cm^{3} min^{-1}. Uno de los dos siguientes gradientes lineales
se utilizó para cada compuesto: (1) 35-80% de B en
8 min, o (2) 20-50% de B en 5 min. La detección se
realizó a 232 nm utilizando un detector Waters 486 (Watford, U.K.)
y las concentraciones se determinaron a partir de las áreas de pico
utilizando el software Waters Maxima.
Claims (24)
1. Un conjugado bioreductivo que comprende una
mitad bioreductiva no-citotóxica que le une a al
menos un agente terapéutico, y sales del mismo, de modo que dicho
conjugado sea de tal modo que en la bioreducción se libere el agente
terapéutico con generación de unas especies que tengan un centro
alquilante de modo que dichas especies sufran una reacción de auto
alquilación para generar un residuo no-citotóxico
de la mitad bioreductiva.
2. Un conjugado bioreductivo tal como se ha
reivindicado en la reivindicación 1 de fórmula I:
(I)A(B)_{n}
(en donde A es una mitad bioreductiva no
citotóxica, cada B es independientemente el residuo de un agente
terapéutico, y n es un número entero) o una sal del mismo.
3. Un conjugado bioreductivo tal como se ha
reivindicado en la reivindicación 2, en donde en la fórmula I, n
está comprendido entre 1 y 3.
4. Un conjugado bioreductivo tal como se ha
reivindicado en la reivindicación 2 o en la reivindicación 3, en
donde A y B son conjugados de forma estable en un entorno oxigenado
y son de tal modo que después de la activación reductiva de A, A y
B de forma separada y o bien A es en sí misma una especie estable,
no citotóxica o, A reacciona con si misma para formar unas especies
estables, no citotóxicas.
5. Un conjugado bioreductivo tal como se ha
reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde
dicha mitad bioreductiva es sustancialmente no mutagénica.
6. Un conjugado bioreductivo tal como se ha
reivindicado en la reivindicación 1 de fórmula II:
(en donde
R^{1} y R^{2} representan de forma
independiente átomos de hidrógeno o halógeno, o un grupo R, OR, SR,
NHR, NR_{2}, CO_{2}R o CONHR;
o, de forma alternativa, R^{1} y R^{2} junto
con los átomos de carbono que forman parte del anillo forman un
anillo de 5-7 miembros, carbocíclico o
heterocíclico, opcionalmente sustituido en sí mismo por uno o más
átomos de halógeno, o por uno o más grupo seleccionados entre R,
OR, SR, NHR, NR_{2}, CO_{2}R y CONHR;
Z representa un grupo alquilo, alquenilo, arilo o
aralquilo que opcionalmente tiene al menos un grupo OH, SH,
NH_{2} o NHR^{7} en el que R^{7} es un grupo alquilo;
R^{3}, R^{4}, R^{5} y R^{6} representan
de forma independiente átomos de hidrógeno o un grupo alquilo o
alquenilo;
cada grupo R representa de forma independiente un
átomo de hidrógeno, un grupo alquilo o alquenilo;
E representa el residuo de un agente terapéutico
a ser liberado, unido de forma opcional a través del grupo de unión
(grupo puente) L;
m = 0, 1, 2 ó 3; y
p = 0 ó 2;
con la condición de que cuando m = 1 entonces p =
0)
o una sal del mismo.
7. Un conjugado bioreductivo tal como se ha
reivindicado en la reivindicación 6, en donde en la fórmula II:
Z representa un grupo de la fórmula
(CH_{2})_{n}XH;
n = 0, 1, 2 ó 3;
X representa un átomo de oxígeno o de azufre, o
un grupo de fórmula NY en el que Y representa un átomo de hidrógeno
o un grupo alquilo;
o una sal del mismo.
8. Un conjugado bioreductivo tal como se ha
reivindicado en la reivindicación 6, en donde en la fórmula II:
Z representa un grupo de la fórmula
(CH_{2})_{n}XH en el que X representa un grupo
amino;
R^{1} y R^{2} representan cada uno de ellos
grupos alcoxi o, junto con los átomos de carbono que forman parte
del anillo, R^{1} y R^{2} forman un anillo de benceno;
R^{3}, R^{4}, R^{5} y R^{6} representan
cada uno de ellos átomos de hidrógeno; y
n = 0, m = 1 y p = 0;
o una sal del mismo.
9. Un conjugado bioreductivo tal como se ha
reivindicado en la reivindicación 1 de fórmula III:
(en donde
P y Q junto con los átomos de carbono del anillo
que interviene forman un anillo de quinona o de indoloquinona, un
compuesto nitroaromático, de N-óxido o diazoaromático,
opcionalmente sustituido en sí mismo por uno o más átomos de
halógeno, o por uno o más grupos seleccionados entre R, OR, SR, NHR,
NR_{2}, CO_{2}R y CONHR;
R^{1} representa un átomo de hidrógeno o de
halógeno, o un grupo R, OR, SR, NHR, NR_{2}, CO_{2}R o
CONHR;
R^{3}, R^{4} y R^{5} representan de forma
independiente átomos de hidrógeno o un grupo alquilo o
alquenilo;
cada grupo R representa de forma independiente un
átomo de hidrógeno, un grupo alquilo o alquenilo; y
E representa el residuo de un agente terapéutico
a liberar, opcionalmente unido a través de un grupo de unión
L);
o una sal del mismo.
10. Un conjugado bioreductivo tal como se ha
reivindicado en la reivindicación 9, en donde en la fórmula
III:
P y Q junto con los átomos de carbono del anillo
que interviene forman un anillo de quinona o de indoloquinona;
y
R^{1}, R^{3}, R^{4} y R^{5} representan
cada uno de ellos átomos de hidrógeno o grupos metilo;
o una sal del mismo.
11. Un conjugado bioreductivo tal como se ha
reivindicado en la reivindicación 1 de fórmula IV:
(en donde
S y T junto con los átomos de carbono que
intervienen en el anillo forman un anillo de quinona o de
iminoquinona, un compuesto nitroaromático o de N-óxido,
opcionalmente sustituido en sí mismo por uno o más átomos de
halógeno, o por uno o más grupos seleccionados entre R, OR, SR,
NHR, NR_{2}, CO_{2}R y CONHR;
Z representa un grupo alquilo, alquenilo, arilo o
aralquilo que opcionalmente posee al menos un grupo OH, SH,
NH_{2} o NHR^{6} en el que R^{6} es un grupo alquilo;
R^{7} representa un grupo alquilo,;
R^{3}, R^{4} y R^{5} representan de forma
independiente átomos de hidrógeno o un grupo alquilo o
alquenilo;
cada grupo R representa de forma independiente un
átomo de hidrógeno, un grupo alquilo o alquenilo;
q = 0, 1, 2 ó 3; y
E representa el residuo de un agente terapéutico
a liberar, opcionalmente unido a través de un grupo puente L);
o una sal del mismo.
12. Un conjugado bioreductivo tal como se ha
reivindicado en la reivindicación 11, en donde en la fórmula
IV:
S y T junto con los átomos de carbono que
intervienen en el anillo forman un compuesto de quinona o de
N-óxido;
R^{3}, R^{4} y R^{5} representan cada uno
de ellos átomos de hidrógeno;
R^{7} es metilo;
Z representa un grupo de fórmula
(CH_{2})_{n}XH en donde X representa un átomo de oxígeno
o de azufre o X representa un grupo de fórmula NY en el que Y
representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo, y
q = 0 ó 1.
o una sal del mismo.
13. Un conjugado bioreductivo tal como se ha
reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde
dicha mitad bioreductiva comprende una quinona, naftoquinona,
indolquinona, quinolino quinona o un derivado del mismo.
14. Un conjugado bioreductivo tal como se ha
reivindicado en la reivindicación 13, en donde dicha mitad
bioreductiva es una 1,4-benzoquinona, una
naftoquinona, o un derivado del mismo, en el que el anillo de
quinona soporta de forma opcional un grupo alquenilo sustituido con
hidroxi- o amino- y una mitad nucleofílica adyacente.
15. Un conjugado bioreductivo tal como se ha
reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde
dicha mitad bioreductiva es una 1,4-benzoquinona y
el agente terapéutico es la dexametasona.
16. Un conjugado bioreductivo tal como se ha
reivindicado en cualquiera de las anteriores reivindicaciones, en
donde dicha mitad bioreductiva está unida a dicho agente
terapéutico a través de un grupo de unión L que comprende un grupo
éster, fosfato éster, éter, amina, tiol o etiol éster o cualquier
combinación de los mismos.
17. Un conjugado bioreductivo tal como se ha
reivindicado en la reivindicación 15 en donde dicho grupo de unión
L es un grupo de la fórmula:
-O-CO-(CH_{2})_{n}-CO-X-
o
(en donde n es un número entero comprendido entre
1 y 3;
X representa un átomo de azufre u oxígeno; y
R^{8} y R^{9} representan cada uno de ellos
de forma independiente F o Cl).
18. Un conjugado bioreductivo que comprende una
mitad bioreductiva no citotóxica con la unión del mismo a al menos
un agente terapéutico, y sales del mismo, de modo que dicho
conjugado sea de tal modo que en la bioreducción se libere el
agente terapéutico con generación de una especie que tenga un centro
alquilante impedido estéricamente para prevenir la alquilación de
biomoléculas.
19. Un procedimiento para la preparación de un
conjugado bioreductivo tal como se ha reivindicado en cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 18, de modo que dicho procedimiento
comprenda la unión de al menos un agente terapéutico a una mitad
bioreductiva no citotóxica.
20. Una composición farmacéutica que comprende un
conjugado bioreductivo tal como se ha reivindicado en cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 18, o una sal farmacéuticamente aceptable
del mismo, junto con al menos un soporte o excipiente
farmacéutico.
21. Un conjugado bioreductivo tal como se ha
reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18 para uso
en un método de dirigir un agente terapéutico al sitio de la
hipoxia y/o isquemia dentro del cuerpo animal humano o no
humano.
22. Un conjugado bioreductivo tal como se ha
reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18 para uso
en el tratamiento de la artritis reumatoidea u otros estados
artríticos, diabetes, arteriosclerosis, apoplejía, sepsis,
enfermedad de Alzheimer y otros trastornos neurológicos, cáncer,
enfermedad de riñón, enfermedades digestivas, enfermedad del
hígado, periodontitis crónica o isquemia producida después del
transplante de tejido.
23. Uso de un conjugado bioreductivo tal como se
ha reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18 en la
fabricación de un medicamento para uso como un agente objetivo
capaz de dirigir un sitio de hipoxia y/o isquemia dentro del cuerpo
animal humano o no humano.
\newpage
24. Uso tal como se ha reivindicado en la
reivindicación 23 para el tratamiento de la artritis reumatoidea u
otros estados artríticos, diabetes, arteriosclerosis, apoplejía,
sepsis, enfermedad de Alzheimer y otros trastornos neurológicos,
cáncer, enfermedad de riñón, enfermedades digestivas, enfermedad
del hígado, periodontitis crónica o isquemia producida después del
transplante de tejido.
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