ES2201151T3

ES2201151T3 - `3-bencil-benzofuranos alfa-sustituidos.

Info

Publication number: ES2201151T3
Application number: ES96301538T
Authority: ES
Inventors: Brian Stephen Muehl
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 1995-03-10
Filing date: 1996-03-06
Publication date: 2004-03-16
Anticipated expiration: 2016-03-06
Also published as: ATE243206T1; DE69628688D1; EP0731098A1; EP0731098B1; DE69628688T2; US5705507A; JPH08283254A; CA2171399A1

Abstract

LA INVENCION CONCIERNE A LOS CAMPOS DE FARMACIA Y QUIMICA ORGANICA Y PROPORCIONA NUEVOS BENZOFURANO -BENCIL-3 QUE SON {AL}-SUSTITUIDOS CON ETER, TIOETER, AMINO, CIANO HIDRACINA Y HALO LOS CUALES SON USADOS PARA EL TRATAMIENTO DE LAS DIFERENTES INDICACIONES MEDICAS ASOCIADAS CON EL SINDROME POSMENOPAUSIA, BIEN COMO ENFERMEDADES DEPENDIENTES DE ESTROGENO, INCLUYENDO CANCER DE PECHO, UTERO Y CERVICALES. LA PRESENTE INVENCION INFORMA POSTERIORMENTE PARA COMPUESTOS INTERMEDIOS Y PROCESOS USADOS PARA PREPARAR EL COMPUESTO ACTIVO FARMACEUTICO, DE LA PRESENTE INVENCION Y DE LAS COMPOSICIONES FARMACEUTICAS.

Description

3-Bencil-benzofuranos \alpha-sustituidos.

Esta invención se refiere a los campos de la química farmacéutica y orgánica y proporciona 3-bencilbenzofuranos nuevos que son \alpha-sustituidos con éter, tioéter, amina, hidracina, ciano o halo, que son útiles para el tratamiento de las diversas indicaciones médicas asociadas con el síndrome posmenopáusico, así como enfermedades estrógeno dependientes que incluyen cáncer de mama, útero y cuello de útero. Además, la presente invención se refiere a compuestos intermedios y procedimientos útiles para preparar los compuestos farmacéuticamente activos de la presente invención y composiciones farmacéuticas.

J. Med. Chem., Vol. 32 Nº 8, agosto de 1989, Washington Estados Unidos, pp. 1700-1707 (Durani y col.) describe un estudio de actividad de estructura de diferentes antiestrógenos que incluye derivados de 2-fenil-3-benzoilbenzofurano. Los derivados de benzofurano descritos en esta memoria descriptiva tienen como una unión atípica con el receptor de estrógenos.

El documento de Estados Unidos 5354861 describe un grupo de 2-(bencil)-3-(fenil sustituido)benzofuranos como agentes antitumorales e hipocolesterolémicos.

"El síndrome posmenopáusico" es una expresión usada para describir diversos estados patológicos que afectan frecuentemente a mujeres que han entrado en o completado la metamorfosis fisiológica conocida como menopausia. Aunque se contemplan numerosas patologías mediante el uso de esta expresión, tres efectos principales del síndrome posmenopáusico son la fuente de la mayor preocupación a largo plazo: osteoporosis, efectos cardiovasculares tales como hiperlipidemia, y cáncer estrógeno dependiente, particularmente cáncer de mama y de útero.

La osteoporosis describe un grupo de enfermedades que surgen de diversas etiologías, pero que se caracterizan por la pérdida neta de masa ósea por unidad de volumen. La consecuencia de esta pérdida de masa ósea y que da como resultado la fractura ósea es el fallo del esqueleto para proporcionar soporte estructural adecuado para el cuerpo. Uno de los tipos más comunes de osteoporosis es el asociado con la menopausia. La mayoría de las mujeres pierden entre aproximadamente 20% a aproximadamente 60% de la masa ósea en el compartimiento trabecular del hueso entre 3 y 6 años después del cese de la menstruación. Esta rápida pérdida se asocia generalmente con un incremento de la resorción y formación ósea. Sin embargo, el ciclo resortivo es más dominante y el resultado es una pérdida neta de masa ósea. La osteoporosis es una enfermedad común y grave entre las mujeres posmenopáusicas.

Se estima que existen 25 millones de mujeres, solamente en Estados Unidos, que están afectadas por esta enfermedad. Los resultados de osteoporosis son personalmente nocivos y también justifican una gran pérdida económica debido a su cronicidad y la necesidad de soporte amplio y a largo plazo (hospitalización y asistencia y cuidado en casa) de las secuelas de la enfermedad. Esto es especialmente verdad en pacientes más ancianos. Adicionalmente, aunque la osteoporosis se piensa que no es generalmente un estado amenazador para la vida, entre un 20% y 30% de la tasa de mortalidad se relaciona con fracturas de cadera en mujeres ancianas. Un gran porcentaje de esta tasa de mortalidad se puede asociar directamente con osteoporosis posmenopáusica.

El tejido más vulnerable en el hueso a efectos de la osteoporosis posmenopáusica es el hueso trabecular. Este tejido a menudo se refiere como al hueso esponjoso o poroso y se concentra particularmente cerca de los extremos del hueso (cerca de las articulaciones) y en las vértebras de la columna vertebral. El tejido trabecular se caracteriza por pequeñas estructuras osteoides que se interconectan una con otra, así como el tejido cortical más sólido y denso que forma la superficie exterior y estructura central del hueso. Esta malla interconectada de trabéculos proporciona soporte lateral a la estructura cortical exterior y es crítica para la resistencia biomecánica de la estructura en conjunto. En la osteoporosis posmenopáusica, es, principalmente, la resorción neta y pérdida de los trabéculos lo que conduce al fallo y fractura del hueso. A la luz de la pérdida de los trabéculos en las mujeres posmenopáusicas, no es sorprendente que las fracturas más comunes sean las asociadas a los huesos que dependen altamente del soporte trabecular, por ejemplo, las vertebras, el cuello de los huesos que soportan peso tal como el fémur y el antebrazo. Sin duda, fractura de la cadera, fracturas de Colles y fracturas de aplastamiento de vértebras son marcas del comienzo de la osteoporosis posmenopáusica.

En este momento, el único procedimiento generalmente aceptado para el tratamiento de la osteoporosis posmenopáusica es la terapia de sustitución de estrógenos. Aunque la terapia es generalmente exitosa, la conformidad del paciente del paciente con la terapia es baja principalmente porque el tratamiento de estrógenos produce frecuentemente efectos secundarios indeseables.

Durante toda la etapa premenopáusica, la mayoría de las mujeres tienen menos incidencia de enfermedad cardiovascular que los hombres de la misma edad. Sin embargo, después de la menopausia la tasa de enfermedad cardiovascular en mujeres se incrementa ligeramente para igualar la tasa observada en hombres. Esta pérdida de protección se ha relacionado a la pérdida de estrógeno y, en particular, a la pérdida de la capacidad del estrógeno de regular los niveles de lípidos en suero. La naturaleza de la capacidad del estrógeno de regular los lípidos en suero. La naturaleza de la capacidad de los estrógenos para regular los lípidos en suero no se entiende bien, pero hasta la fecha la evidencia indica que el estrógeno puede regular los receptores de lípidos de baja densidad (abreviadamente LDL) en el
hígado para eliminar el exceso de colesterol. Adicionalmente, el estrógeno parece tener algún efecto en la biosíntesis de colesterol y otros efectos beneficiosos en la salud cardiovascular.

Se ha descrito en la bibliografía que las mujeres posmenopáusicas que tienen terapia de sustitución de estrógenos tienen un regreso a los niveles de lípidos en suero hasta concentraciones del estado premenopáusico. De este modo, el estrógeno parecería ser un tratamiento razonable para este estado. Sin embargo, los efectos secundarios de la terapia de sustitución de estrógenos no son aceptables para muchas mujeres, de este modo se limita el uso de esta terapia. Una terapia ideal de este estado debería ser un agente que regulara el nivel de lípidos en suero como hace el estrógeno, pero estaría desprovisto de los efectos secundarios y riesgos asociados con la terapia de estrógenos.

La tercera patología principal asociada con el síndrome posmenopáusico es el cáncer de mama estrógeno dependiente y, en un menor grado, los cánceres estrógeno dependiente de otros órganos, en particular el útero. Aunque dichos neoplasmas no se limitan solamente a las mujeres posmenopáusicas, prevalecen más en la población mayor posmenopáusica. La quimioterapia actual de estos cánceres depende altamente del uso de los compuestos antiestrógenos tales como, por ejemplo, el tamoxifeno. Aunque dicha mezcla de agonista antagonistas tienen efectos beneficiosos en el tratamiento de estos cánceres y los efectos secundarios estrogénicos son tolerables en las situaciones agudas amenazadoras de la vida, no son ideales. Por ejemplo, estos agentes pueden tener efectos estimulantes sobre ciertas poblaciones de células cancerosas en el útero debido a sus propiedades estrogénicas (agonista) y por lo tanto pueden ser contraproducentes en algunos casos. Una terapia mejor para el tratamiento de estos cánceres sería un agente que sea un compuesto anti-estrógeno que tiene propiedades insignificantes o ninguna de agonistas de estrógenos en tejidos reproductores.

En respuesta a la clara necesidad de nuevos agentes farmacéuticos que sean capaces de aliviar los síntomas de, entre otros, el síndrome posmenopáusico, la presente invención proporciona nuevos compuestos, composiciones farmacéuticas de los mismos y procedimientos para utilizar dichos compuestos en el tratamiento del síndrome posmenopáusico y otros estados patológicos relativos a los estrógenos tales como los mencionados más adelante.

La fibrosis uterina (enfermedad fibroide uterina) es un problema clínico antiguo y siempre presente que se conoce bajo una diversidad de nombres incluyendo enfermedad fibroide uterina, hipertrofia uterina, leiomioma uterino, hipertrofia miometrial, fibrosis uterina y metritis fibrótica. Esencialmente, la fibrosis uterina es un estado en el que existe una deposición inapropiada del tejido fibrótico en la pared del útero.

Este estado es una causa de dismenorrea e infertilidad en las mujeres. Se sabe muy poco sobre la causa exacta de este estado pero la evidencia sugiere que es una respuesta inapropiada del tejido fibroide al estrógeno. Dicho estado se ha producido en conejos mediante administraciones diarias de de estrógenos durante 3 meses. En cobayas, el estado se ha producido mediante la administración diaria de estrógeno durante cuatro horas. Además, en ratas, el estrógeno ocasiona una hipertrofia similar.

El tratamiento más común de la fibrosis uterina implica procedimientos quirúrgicos tanto costosos como algunas veces fuente de complicaciones tales como la formación de adherencias abdominales e infecciones. En algunos pacientes, la cirugía inicial en solamente un tratamiento temporal y los tumores fibroides vuelven a desarrollarse. En esos casos se realiza una histeroctomía que acaba eficazmente con los tumores fibroides pero también con la vida reproductora del paciente. También, se pueden administrar antagonistas de hormonas que liberan gonadotropina, todavía su uso es moderado por el hecho de que ellos pueden conducir a osteoporosis. De este modo, existe una necesidad de nuevos procedimientos para tratar la fibrosis uterina y los procedimientos de la presente invención satisfacen esa necesidad.

La endometriosis es un estado de dismenorrea grave que se acompaña de dolor grave, sangría en las masas endometriales o cavidad peritoneal y conduce a menudo a infertilidad. La causa de los síntomas de este estado parece ser los desarrollos endometriales ectópicos que responden inadecuadamente al control normal hormonal y se localizan en tejidos inadecuados. Debido a las localizaciones inadecuadas de crecimiento endometrial, el tejido parece iniciar respuestas locales de tipo inflamatorio que ocasionan infiltración de macrófagos y una cascada de acontecimientos que conducen a la iniciación de la respuesta dolorosa. La etiología exacta de esta enfermedad no se conoce bien y su tratamiento mediante terapia hormonal es diverso, escasamente definido y marcado por numerosos efectos secundarios no deseados y quizás peligrosos.

Uno de los tratamientos de esta enfermedad es el uso de estrógeno a baja dosis para suprimir el crecimiento endometrial mediante un efecto de retroalimentación negativo en la liberación de la gonadotropina central y la posterior producción ovárica de estrógeno; sin embargo, en algunos casos es necesario el uso continuo de estrógeno para controlar los síntomas. A menudo este uso de estrógeno puede conducir a efectos secundarios indeseables e incluso riesgo de cáncer endometrial.

Otro tratamiento consiste en la continua administración de progestinas que provoca amenorrea y mediante la supresión de la producción de estrógenos por el ovario pueden ocasionar regresiones de los desarrollos endometriales. El uso de terapia de progestinas crónica está acompañado frecuentemente de los efectos secundarios desagradables del SNC de las progestinas y a menudo conduce a infertilidad debido a la supresión de la función ovárica.

Un tercer tratamiento consiste en la administración de andrógenos débiles que son eficaces para el control de la endometriosis; sin embargo, inducen efectos masculinizantes graves. Varios de estos tratamientos para endometriosis también se han implicado en la causa de un grado suave de pérdida ósea que sigue a la terapia. Por lo tanto, se desean nuevos procedimientos para tratar la endometriosis.

La proliferación de las células del músculo liso de la aorta juega un papel importante en enfermedades tales como aterosclerosis y reestenosis. La reestenosis vascular posterior a la angioplastia coronaria transluminal percutánea (abreviadamente PTCA) se ha mostrado que es una respuesta tisular caracterizada por una fase temprana y tardía. La fase temprana que tiene lugar entre horas y días después de PTCA se debe a trombosis con algunos vasoespasmos mientras la fase tardía parece estar dominada por una proliferación excesiva y migración de células del músculo liso de aorta. En esta enfermedad, la motilidad y colonización celular incrementada mediante dichas células musculares y macrófagos contribuyen significativamente a la patogénesis de la enfermedad. La proliferación excesiva y migración de células de músculo liso vascular de la aorta puede ser el mecanismo principal de la reoclusión de arterias coronarias que sigua a PTCA, aterectomía, angioplastia por láser y cirugía de implante de derivación de arteria. Véase "Intimal Proliferation of Smooth Muscle Cells as an Explanation for Recurrent Coronary Artery Stenosis after Percutaneous Transluminal Coronary Angioplasty," Austin y col., Journal of the American College of Cardiology, 8, 369-375 (agosto 1985).

La reestenosis vascular permanece como una complicación principal a largo plazo que sigue a la intervención quirúrgica de arterias bloqueadas por angioplastia coronaria transluminal percutánea (abreviadamente PTCA), aterectomía, angioplastia por láser y cirugía de implante de derivación de arteria. En aproximadamente 35% de los pacientes que se someten a PTCA, se produce reoclusión dentro de tres a seis meses después del procedimiento. Las estrategias actuales para tratar reestenosis vascular incluyen intervención mecánica mediante dispositivos tales como stents o terapias farmacológicas que incluyen heparina, heparina de bajo peso molecular, cumarina, aspirina, aceite de pescado, antagonista de calcio, esteroides y prostaciclina. Estas estrategias han fracasado para frenar la velocidad de reoclusión y han sido ineficaces para el tratamiento y prevención de reestenosis vascular. Véase "Prevention of Restenosis after Percutaneous Transluminal Coronary Angioplasty: The Search for a "Magic Bullet"," Hermans y col., American Heart Journal, 122: 171-187 (Julio 1991).

En la patogénesis de reestenosis se produce proliferación y migración de células excesivas como resultado de factores de crecimiento producidos por constituyentes celulares en sangre y la pared de los vasos arteriales dañados que median la proliferación de células de músculo liso en reestenosis vascular.

Los agentes que inhiben la proliferación y/o migración de células del músculo liso de aorta son útiles en el tratamiento y prevención de reestenosis. La presente invención tiene en cuenta el uso de compuestos como inhibidores de proliferación de células del músculo liso de aorta y de este modo inhibidores de reestenosis.

La presente invención se refiere a compuestos de fórmula

1

en la que R_{1} es H, OH, OCO-alquilo (C_{1}-C_{6}), OCO-arilo, OSO_{2}-alquilo (C_{4}-C_{6}), OCOO-alquilo(C_{1}-C_{6}), OCOO-arilo, OCONH-alquilo (C_{1}-C_{6}), u OCON-(alquilo (C_{1}-C_{6}))_{2};

R_{2} es arilo, alquilo (C_{1}-C_{6}), cicloalquilo (C_{3}-C_{6}) o 4-ciclohexanol;

R_{3} es O(CH_{2})_{2} u O(CH_{2})_{3};

R_{4} y R_{5} son opcionalmente CO(CH_{2})_{3}, CO(CH_{2})_{4}, alquilo (C_{1}-C_{6}), o R_{4} y R_{5} se combinan para formar, con el nitrógeno al que se unen, piperidina, morfolina, pirrolidina, 3-metilpirrolidina, 3,3-dimetilpirrolidina, 3,4-dimetilpirrolidina, azepina o pipecolina;

\newpage

R_{6} es O-alquilo (C_{1}-C_{6}), O-arilo, O-(alquil(C_{1}-C_{6}) arilo), OCH_{2}CH_{2}ciano, O-(alquil(C_{1}-C_{6}) alcohol (C_{1}-C_{6})), OSO_{2}CH_{3}, OSO_{2}C_{6}H_{4}CH_{3}, SH, S-alquilo (C_{1}-C_{6}), ciano, halo,

2

en la que cada uno de R_{7} y R_{8} se toman separadamente y representa H, alquilo (C_{1}-C_{6}), 2-hidroxietilo o 2-fluoroetilo, o tanto R_{7} como R_{8} se toman juntos con el nitrógeno y forman un anillo que es pirrolidina, piperidina, azepina o morfolina y que se puede sustituir opcionalmente con uno o dos grupos metilo, o

3

en la que cada uno de R_{10} y R_{11} se toman separadamente y representa H o C_{1}-C_{2}, o tanto R_{10} como R_{11} se toman juntos con el nitrógeno y representan un anillo que es una pirrolidina, piperidina, azepina o morfolina y que se puede sustituir opcionalmente con uno o dos grupos metilo y R_{12} es hidrógeno, metilo o etilo; y

sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Además la presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas que contienen compuestos de fórmula I, que contienen opcionalmente estrógeno o progestina y el uso de dichos compuestos, solos o en combinación con estrógeno o progestina para aliviar los síntomas del síndrome posmenopáusico, particularmente osteoporosis, estados patológicos relativos cardiovasculares y cáncer estrógeno dependiente. Como se utiliza en esta memoria descriptiva, el término "estrógeno" incluye compuestos esteroides que tienen actividad estrogénica tal como por ejemplo, 17\beta-estradiol, estrona, estrógeno conjugado (Premarina®), estrógeno equino, 17\beta-etinilestradiol y los similares. Como se utiliza en esta memoria descriptiva el término "progestina" incluye compuestos que tienen actividad progestacional tal como, por ejemplo, progesterona, noretilnodrel, nogestrel, acetato de megestrol, noretindrona y los similares.

Los compuestos de la presente invención también son útiles para inhibir la enfermedad fibroide uterina y endometriosis en mujeres y proliferación de células del músculo liso de aorta, en particular reestenosis en seres humanos.

Un aspecto de la presente invención incluye compuestos de fórmula I

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en la que R_{1} es H, OH, OCO-alquilo (C_{1}-C_{6}), OCO-arilo, OSO_{2}-alquilo (C_{4}-C_{6}), OCOO-alquilo (C_{1}-C_{6}) u OCOO-arilo, OCONH-alquilo (C_{1}-C_{6}), u OCON-(alquilo (C_{1}-C_{6}))_{2};

R_{2} es arilo, alquilo (C_{1}-C_{6}), cicloalquilo (C_{3}-C_{6}) ó 4-ciclohexanol;

R_{3} es O(CH_{2})_{2} u O(CH_{2})_{3};

\newpage

R_{6} es O-alquilo (C_{1}-C_{6}), O-arilo, O-(alquil (C_{1}-C_{6}) arilo), OCH_{2}CH_{2}ciano, O-(alquil (C_{1}-C_{6}) alcohol (C_{1}-C_{6})), OSO_{2}CH_{3}, OSO_{2}C_{6}H_{4}CH_{3}, SH, S-alquilo (C_{1}-C_{6}), ciano, halo,

5

en la que cada uno de R_{7} y R_{8} se toma separadamente y representa H, alquilo (C_{1}-C_{6}), 2-hidroxietilo o 2-fluoroetilo, o tanto R_{7} como R_{8} se toman juntos con el nitrógeno y forman un anillo que es pirrolidina, piperidina, azepina o morfolina y que se puede sustituir opcionalmente con uno o dos grupos metilo, o

6

sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Los términos generales usados utilizados en la descripción de los compuestos descritos en esta memoria descriptiva tienen sus significados habituales. Por ejemplo, "alquilo" se refiere a cadenas alifáticas lineales o ramificadas de 1 a 6 átomos de carbono que incluye metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, n-butilo, pentilo, isopentilo, hexilo, isohexilo y los similares. El término "arilo" se refiere a fenilo y fenilo sustituido una vez o dos veces con alquilo, alcoxi (C_{1}-C_{6}), hidroxi, nitro o halo. "Halo" incluye bromo, cloro, yodo y fluoro. El término "alquil (C_{1}-C_{6}) arilo" se refiere a una cadena alquilo sustituida con arilo. El término "alquil (C_{1}-C_{6}) alcohol (C_{1}-C_{6})" se refiere a una cadena alquilo sustituida con un alcohol (C_{1}-C_{6}), tal como metanol, etanol, 1-propanol y 1-butanol.

Los compuestos de la presente invención se pueden fabricar según procedimientos establecidos, tales como los detallados en la patente de Estados Unidos Nº 4.133.814 y la patente de Estados Unidos Nº 4.418.068. Los ejemplos de la preparación de compuestos análogos se proporcionan en las patentes de Estados Unidos descritas anteriormente.

En los procedimientos para preparar los compuestos de la presente invención, el material de partida es un compuesto de fórmula II

7

en la que

R es un grupo protector de hidroxi capaz de resistir la reducción mediante un agente reductor; y

R_{3}, R_{4} y R_{5} son como se ha definido anteriormente;

o una sal del mismo.

Los compuestos de fórmula II se conocen en la técnica.

En general, un precursor de fórmula III

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se prepara mediante procedimientos conocidos. Típicamente, los dos grupos hidroxi se protegen mediante grupos protectores de hidroxi conocidos que son capaces de resistir acilación en condiciones Friedel-Crafts estándar (formando los grupos protectores R de los compuestos de fórmula II) y posterior reducción mediante un fuerte agente reductor. Los grupos protectores de hidroxi preferidos son alquilo (C_{1}-C_{4}) y se prefiere especialmente metilo. Véase, por ejemplo, las patentes de Estados Unidos incorporadas anteriormente, J. W. Barton, "Protective Groups in Organic Chemistry", (ed.) J. G. W. McOmie, Plenum Press, Nueva York, NY, 1973, capítulo 2 y T. W. Green, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons. Nueva York, NY, 1981, capítulo 7.

Después de la preparación del precursor protegido deseado de fórmula III el precursor se acila utilizando condiciones Friedel-Crafts estándar con un compuesto de fórmula IV

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en la que

R_{3}, R_{4} y R_{5} son como se ha definido anteriormente; y

R* es cloro, bromo, yodo o un grupo éster activador. La preparación de los compuestos de fórmula IV, así como los procedimientos de acilación preferidos se describen en las patentes de Estados Unidos incorporadas anteriormente. Cuando cada uno de R_{4} y R_{5} no se combinan se prefieren alquilo (C_{1}-C_{4}), metilo y etilo. Cuando R_{4} y R_{5} se combinan se prefieren 1-piperidinil y 1-pirrolidinil. De éstos, se prefiere especialmente el resto piperidino.

Después de la acilación y, de esta manera, la preparación de un compuesto de fórmula II, los compuestos con un \alpha-carbinol se preparan mediante la adición de un compuesto de fórmula II o una sal del mismo a un disolvente apropiado y después hacer reaccionar el compuesto de fórmula II con un agente reductor tal como, por ejemplo, hidruro de litio y aluminio (abreviadamente LAH) en un gas inerte tal como nitrógeno.

La cantidad de agente reductor utilizada en esta reacción es una cantidad suficiente para reducir el grupo carbonilo de fórmula II para formar un carbinol de fórmula IIa:

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en la que R_{3}, R_{4} y R son como se ha definido anteriormente, o una sal del mismo.

En general, se utiliza un exceso liberal del agente reductor por equivalente del sustrato.

Los disolventes adecuados incluyen cualquier disolvente o mezcla de disolventes que permanecerán inertes en condiciones reductoras. Los disolventes adecuados incluyen éter dietílico, dioxano y tetrahidrofurano (abreviadamente THF). Se prefiere la forma anhidra de estos disolventes y se prefiere especialmente THF anhidro.

La temperatura empleada en esta etapa es la que es suficiente para efectuar la realización de la reacción de reducción. En general es adecuada la temperatura ambiente en el intervalo entre aproximadamente 17ºC y aproximadamente 25ºC.

El transcurso del tiempo de esta etapa es la duración necesaria para que se produzca la reacción. Típicamente, esta reacción lleva entre aproximadamente 1 hora y aproximadamente 20 horas. El tiempo óptimo se puede determinar controlando el progreso de la reacción mediante técnicas cromatográficas convencionales.

Los productos de \alpha-carbinol de esta reacción se pueden extraer esencialmente mediante el procedimiento descrito en la preparación 1 más adelante. Los siguientes esquemas ilustran la preparación de los compuestos de fórmula I.

(Esquema 1 pasa a página siguiente)

\newpage

Esquema 1

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La disposición que se establece en el esquema 1 se puede utilizar para la preparación de los compuestos del \alpha-éter \alpha-tioéter. En el caso de las sustituciones de éter el \alpha-carbinol se somete a un ácido tal como ácido trifluoroacético en un disolvente adecuado tal como cloruro de metileno a aproximadamente temperatura ambiente. Posteriormente se añade un precursor de alcoholéter (R_{6a}H) y los grupos protectores de hidroxi se retiran mediante la metodología conocida. En el precursor de alcoholéter R_{6a} es O-alquilo (C_{1}-C_{6}), O-arilo, O-(alquil (C_{1}-C_{6}) arilo), OCH_{2}CH_{2}ciano u O-(alquil (C_{1}-C_{6}) alcohol (C_{1}-C_{6})).

Para la sustitución de tioéter, se somete otra vez el compuesto de \alpha-carbinol a un ácido tal como ácido trifluoroacético en un disolvente orgánico a temperatura ambiente. Posteriormente se añade un precursor de tioltioéter (R_{6b}H) y los grupos protectores de hidroxi se retiran mediante la metodología conocida. En el precursor de tioltioéter R_{6b} es OSO_{2}CH_{3}, OSO_{2}C_{6}H_{4}CH_{3}, SH ó S-alquilo (C_{1}-C_{6}).

Esquema 2

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El esquema 2 anterior se puede utilizar para la preparación de las \alpha-sustituciones amino, hidrazino, ciano y halo. En el caso de la sustitución amino e hidrazino, el \alpha-carbinol se somete a un agente o agentes deshidratantes tales como cloruro de metanosulfonilo y trietilamina en un disolvente tal como cloruro de metileno a aproximadamente 0ºC. Posteriormente se añade un precursor amino o hidrazino a temperatura ambiente:

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En caso del ciano se utilizan de nuevo un agente o agentes deshidratantes como se ha mencionado anteriormente y se añade un precursor de ciano tal como cianuro de potasio así como un ligando tal como un éter corona, en particular 18-corona-6 para ayudar en la solubilidad. Para la sustitución halo-\alpha se usa de nuevo un agente o agentes deshidratantes y posteriormente se añade un precursor de halo, tal como una sal que contenga halo, tal como LiF, así como un disolvente tal como un éter corona, en particular 12- corona-4 para ayudar en la solubilidad.

Se preparan otros compuestos mediante la sustitución de los grupos hidroxi 4'- y 6'- con un resto diferente, tal como -O-CO-alquilo (C_{1}-C_{6}), -O-CO-Ar en el que Ar es opcionalmente fenilo sustituido u -O-SO_{2}-alquilo (C_{4}-C_{6}) mediante procedimientos bien conocidos. Véase, por ejemplo, la patente de Estados Unidos Nº 4.358.593 anterior.

Por ejemplo, cuando se desea un grupo -O-CO-alquilo (C_{1}-C_{6}) u -O-CO-Ar, el compuesto de dihidroxi de fórmula I se hace reaccionar con un agente tal como cloruro de acilo, bromuro, cianuro o azida o con un anhídrido adecuado o mezclado con anhídrido. Las reacciones se llevan a cabo convenientemente en un disolvente básico tal como piridina, lutidina, quinolina o isoquinolina, o en un disolvente de amina terciaria tal como trietilamina, tributilamina, metilpiperidina y los similares. La reacción también se puede llevar a cabo en un disolvente inerte tal como acetato de etilo, dimetilformamida, dimetilsulfóxido, dioxano, dimetoxietano, acetonitrilo, acetona, metiletilcetona y los similares a los que se ha añadido al menos un equivalente de un captador de ácido tal como una amina terciaria. Si se desea se pueden utilizar catalizadores de acilación tales como 4-dimetilaminopiridina o 4-pirrolidinopiridina. Véase, por ejemplo, Haslam y col., Tetrahedron, 36: 2409-2433 (1980).

Las reacciones de acilación que proporcionan los grupos R_{1} y R_{2} anteriormente mencionados se llevan a cabo a temperaturas moderadas en el intervalo entre aproximadamente -25ºC y aproximadamente 100ºC, frecuentemente en una atmósfera inerte tal como gas nitrógeno. Sin embargo, la temperatura ambiente es usualmente adecuada para la reacción que se lleva a cabo.

Dichas acilaciones del grupo hidroxi se pueden realizar mediante reacciones catalizadas por ácido de los ácidos carboxílicos adecuados en disolventes orgánicos inertes o calor. Se usan los catalizadores ácidos tales como ácido sulfúrico, ácido polifosfórico, ácido metanosulfónico y los similares.

También se pueden proporcionar los grupos R_{1} y R_{2} mediante la formación de un éster activo del ácido adecuado, tales como los ésteres formados mediante dichos reactivos conocidos tales como diciclohexilcarbodiimida, acilimidazoles, nitrofenoles, pentaclorofenol, N-hidroxisuccinimida y 1-hidroxibenzotriazol. Véase, por ejemplo, Bull. Chem. Soc. Japan, 38: 1979 (1965) y Chem. Ber., 788 y 2024 (1970).

Cada una de las técnicas anteriores que proporcionan los grupos R_{1} y R_{2} se lleva a cabo en disolventes como se ha descrito anteriormente. Estas técnicas que no producen un producto ácido en el curso de la reacción, por supuesto, no necesitan el uso de un captador de ácidos en la mezcla de reacción.

Cuando se desea un compuesto de fórmula I en el que R_{1} y R_{2} es -O-SO_{2}- alquilo (C_{4}-C_{6}) el compuesto dihidroxi de fórmula I se hace reaccionar con, por ejemplo, un derivado del ácido sulfónico adecuado tal como un cloruro, bromuro de sulfonilo o una sal de amonio de sulfonilo, como enseñaron King y Monoir, J. Am. Chem. Soc., 97: 2566-2567 (1975). El compuesto dihidroxi también se puede hacer reaccionar con el anhídrido sulfónico adecuado. Dichas reacciones se llevan a cabo en condiciones tales como se explicaron anteriormente en la descripción de la reacción con haluros de ácidos y los similares.

Además, después los compuestos de fórmula I se pueden formar según se desee. Las preparaciones específicas de los compuestos de la presente invención se describen más adelante. Las modificaciones a los procedimientos anteriores pueden ser necesarias para acomodar las funcionalidades reactivas de sustituyentes particulares. Dichas modificaciones serían ambas evidentes para, y fácilmente determinadas por los expertos en la técnica.

Aunque la forma exenta de base de los compuestos de fórmula I se puede utilizar en los procedimientos de la presente invención, se prefiere preparar y usar una forma de sal farmacéuticamente aceptable. De este modo, los compuestos utilizados en los procedimientos de esta invención forman principalmente sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables con una amplia diversidad de ácidos orgánicos e inorgánicos e incluyen las sales fisiológicamente aceptables de los mismos que se utilizan a menudo en la química farmacéutica. Dichas sales son también parte de esta invención. Los ácidos inorgánicos típicos utilizados para formar dichas sales incluyen clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, nítrico, sulfúrico, fosfórico, hipofosfórico y los similares. También se pueden utilizar las sales derivadas de ácidos orgánicos tales como ácidos alifáticos mono y dicarboxílicos, ácidos alcanoicos fenil sustituidos, ácidos hidroxialcanoicos e hidroxialcanodicos, ácidos aromáticos, ácidos sulfónicos alifáticos y aromáticos. De este modo dichas sales farmacéuticamente aceptables incluyen acetato, fenilacetato, trifluoroacetato, acrilato, ascorbato, benzoato, clorobenzoato, dinitrobenzoato, hidroxibenzoato, metoxibenzoato, metilbenzoato, o-acetoxibenzoato, naftaleno-2-benzoato, bromuro, isobutirato, fenilbutirato, \beta-hidroxibutirato, butino-1,4-dioato, hexino-1,4-dioato, caprato, caprilato, cloruro, cinamato, citrato, formiato, fumarato, glicolato, heptanoato, hipurato, lactato, malato, maleato, hidroximaleato, malonato, mandelato, mesilato, nicotinato, isonicotinato, nitrato, oxalato, ftalato, tereftalato, fosfato, fosfato monoácido, fosfato diácido, metafosfato, pirofosfato, propiolato, propionato, fenilpropionato, salicilato, sebacato, succinato, suberato, sulfato, bisulfato, pirosulfato, sulfito, bisulfito, sulfonato, bencenosulfonato, p-bromofenilsulfonato, clorobencenosulfonato, etanosulfonato, 2-hidroxietanosulfonato, metanosulfonato, naftaleno-1-sulfonato, naftaleno-2-sulfonato, p-toluenosulfonato, xilenosulfonato, tartrato y los similares. Una sal preferida es la sal clorhidrato.

Las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables se forman típicamente haciendo reaccionar un compuesto de fórmula I con una cantidad equimolar o exceso de ácido. En general los reactivos se combinan en un disolvente mutuo tal como éter dietílico o acetato de etilo. La sal normalmente precipita en solución entre aproximadamente una hora y 10 días y de puede aislar mediante filtración o el disolvente se puede destilar a partir de medios convencionales.

En general las sales farmacéuticamente aceptables tienen características de solubilidad potenciadas comparadas con el compuesto del que derivan y, de esta manera a menudo se puede formular más fácilmente tanto en forma líquida como en emulsión.

Los siguientes ejemplos se presentan para ilustrar adicionalmente la preparación de los compuestos de la presente invención.

Preparación 1

14

A una suspensión de hidruro de aluminio y litio (1,1 g, 29,0 mmoles) en tetrahidrofurano (175 ml) a 0ºC se añade gota a gota una solución de la cetona (8,00 g, 11,6 mmoles) en tetrahidrofurano (500 ml). Se agita la mezcla durante 1 hora a 0ºC, después se inactiva gota a gota con agua (1,1 ml), NaOH 15% (p/p) (4,4 ml) y agua (1,1 ml). Esta suspensión se filtra a través de celite y se evapora hasta sequedad (gel de sílice, MeOH/CHCl_{3}) para proporcionar el producto deseado en forma de una espuma blanca (5,2 g 65%). La ^{1}H-RMN es consistente con la estructura; DC (EM) 687 (M-); análisis elemental para C_{40}H_{57}NO_{5}Si_{2} calculado / encontrado C 69,82/70,00, H 8,35/8,36, N 2,04/2,02.

Ejemplo 1

15

A una solución del compuesto de la preparación 1 (2,0 g, 2,9 mmoles) en CH_{2}Cl_{2} (100 ml) a temperatura ambiente se añade ácido trilfuoroacético (0,34 ml, 4,35 mmoles). Se añade a esta solución en agitación MeOH (0,17 ml, 4,35 mmoles). Se agita la solución resultante durante una noche y después se lava dos veces con NaHCO_{3}, dos veces con salmuera, se seca (Na_{2}SO_{4}), se filtra y se evapora hasta sequedad. Se disuelve el aceite pardo resultante en tetrahidrofurano (100 ml) y se añade a temperatura ambiente HF/NaF (12,0 ml de un tampón pH = 5 hecho de NaF 7,0 g, 48% de HF (acuoso) 0,21 ml y 50 ml de agua). Se agita esta mezcla durante una noche a reflujo. Se lava la solución orgánica dos veces con salmuera, se seca (Na_{2}SO_{4}), se filtra y se evapora hasta sequedad. Se purifica la espuma blanca resultante mediante cromatografía radial (gradiente de MeOH/CHCl_{3}) para producir el producto deseado en forma de un sólido marrón (1,3 g, 80%). La ^{1}H-RMN es consistente con la estructura; DC (EM) 490 (M+); análisis elemental para C_{29}H_{31}NO_{4}S calculado / encontrado C 71,14/71,21, H 6,38/6,43, N 2,86/3,12

Ejemplo 2

16

Se emplea el procedimiento del ejemplo 1 utilizando el compuesto de la preparación 1 (1,45 g, 2,1 mmoles), ácido trifluoroacético (0,26 ml, 3,15 mmoles), EtOH (0,19 ml, 2,13 mmoles), CH_{2}Cl_{2} (40 ml), Bu_{4}NF (3,6 ml de una solución 1,0 M en tetrahidrofurano, 3,6 mmoles) y tetrahidrofurano (50 ml). Se lava la mezcla cuatro veces con salmuera (porciones de 300 ml). Se purifica mediante cromatografía radial (gradiente de MeOH/CHCl_{3}/hexanos);

Ejemplo 3

17

Se emplea el procedimiento del ejemplo 1 utilizando el compuesto de la preparación 1 (1,0 g, 0,98 mmoles), ácido trifluoroacético (0,12 ml, 1,5 mmoles), n-PrOH (0,055 ml, 1,5 mmoles), CH_{2}Cl_{2} (60 ml), Bu_{4}NF (2,4 ml de una solución 1,0 M en tetrahidrofurano, 2,4 mmoles) y CH_{2}Cl_{2} (20 ml). Se purifica la mezcla mediante cromatografía radial (gradiente de MeOH/CHCl_{3}/hexanos).

Ejemplo 4

18

Se emplea el procedimiento del ejemplo 1 utilizando el compuesto de la preparación 1 (1,45 g, 2,1 mmoles), ácido trifluoroacético (0,24 ml, 3,0 mmoles), i-PrOH (0,24 ml, 3,0 mmoles), CH_{2}Cl_{2} (40 ml), Bu_{4}NF (3,8 ml de una solución 1,0 M en tetrahidrofurano, 3,8 mmoles) y tetrahidrofurano (40 ml). Se purifica la mezcla mediante cromatografía radial (gradiente de MeOH/CHCl_{3}/hexanos).

Ejemplo 5

19

Se emplea el procedimiento del ejemplo 1 utilizando el compuesto de la preparación 1 (1,45 g, 2,1 mmoles), ácido trifluoroacético (0,24 ml, 3,0 mmoles), n-BuOH (0,29 ml, 3,0 mmoles), CH_{2}Cl_{2} (40 ml), Bu_{4}NF (3,8 ml de una solución 1,0 M en tetrahidrofurano, 3,8 mmoles) y tetrahidrofurano (40 ml). Se purifica la mezcla mediante cromatografía radial (gradiente de MeOH/CHCl_{3}/hexanos), después se disuelve en tetrahidrofurano destilado (50 ml) y se lava exhaustivamente con salmuera y se seca (Na_{2}SO_{4}), se filtra y se evapora para proporcionar el producto deseado.

Ejemplo 6

20

Se emplea el procedimiento del ejemplo 1 utilizando el compuesto de la preparación 1 (1,45 g, 2,1 mmoles), ácido trifluoroacético (0,24 ml, 3,0 mmoles), BzOH (0,32 ml, 3,0 mmoles), CH_{2}Cl_{2} (40 ml), Bu_{4}NF (4,0 ml de una solución 1,0 M en tetrahidrofurano, 4,0 mmoles) y tetrahidrofurano (40 ml). Se purifica la mezcla mediante cromatografía radial (MeOH/CHCl_{3}/hexanos), después se disuelve en tetrahidrofurano destilado (50 ml) y se lava exhaustivamente con salmuera y se seca (Na_{2}SO_{4}), se filtra y se evapora para proporcionar el producto deseado.

Ejemplo 7

21

Se emplea el procedimiento del ejemplo 1 utilizando el compuesto de la preparación 1 (1,45 g, 2,1 mmoles), ácido trifluoroacético (0,24 ml, 3,0 mmoles), 3-hidroxipropionitrilo (0,22 ml, 3,0 mmoles), CH_{2}Cl_{2} (40 ml), Bu_{4}NF (3,6 ml de una solución 1,0 M en tetrahidrofurano, 3,6 mmoles) y tetrahidrofurano (40 ml). Se purifica la mezcla mediante cromatografía radial (MeOH/CHCl_{3}/hexanos), después se disuelve en tetrahidrofurano destilado (50 ml) y se lava exhaustivamente con salmuera y se seca (Na_{2}SO_{4}), se filtra y se evapora para proporcionar el producto deseado.

Ejemplo 8

22

Se emplea el procedimiento del ejemplo 1 utilizando el compuesto de la preparación 1 (1,45 g, 2,1 mmoles), ácido trifluoroacético (0,24 ml, 3,0 mmoles), etilenglicol (0,18 ml, 3,0 mmoles), CH_{2}Cl_{2} (100 ml), Bu_{4}NF (4,0 ml de una solución 1,0 M en tetrahidrofurano, 4,0 mmoles) y tetrahidrofurano (100 ml). Se purifica la mezcla mediante cromatografía radial (MeOH/CHCl_{3}/hexanos), después se disuelve en tetrahidrofurano destilado (50 ml) y se lava exhaustivamente con salmuera y se seca (Na_{2}SO_{4}), se filtra y se evapora para proporcionar el producto deseado.

Ejemplo 9

23

Se emplea el procedimiento del ejemplo 1 utilizando el compuesto de la preparación 1 (1,45 g, 2,1 mmoles), ácido trifluoroacético (0,24 ml, 3,0 mmoles), CH_{2}Cl_{2} (40 ml), MeSH (gas burbujeado durante 10 minutos), Bu_{4}NF (4,2 ml de una solución 1,0 M en tetrahidrofurano, 4,2 mmoles) y tetrahidrofurano (50 ml). Se purifica la mezcla mediante cromatografía radial (MeOH/CHCl_{3}/hexanos), después se disuelve en tetrahidrofurano destilado (50 ml) y se lava exhaustivamente con salmuera y se seca (Na_{2}SO_{4}), se filtra y se evapora para proporcionar el producto deseado.

Ejemplo 10

24

Se emplea el procedimiento del ejemplo 1 utilizando el compuesto de la preparación 1 (1,45 g, 2,1 mmoles), ácido trifluoroacético (0,24 ml, 3,0 mmoles), CH_{2}Cl_{2} (50 ml), EtSH (gas burbujeado durante 10 minutos), Bu_{4}NF (3,6 ml de una solución 1,0 M en tetrahidrofurano, 3,6 mmoles) y tetrahidrofurano (50 ml). Se purifica la mezcla mediante cromatografía radial (MeOH/CHCl_{3}/hexanos), después se disuelve en tetrahidrofurano destilado (50 ml) y se lava exhaustivamente con salmuera y se seca (Na_{2}SO_{4}), se filtra y se evapora para proporcionar el producto deseado.

Ejemplo 11

25

A una solución del compuesto de la preparación 1 (1,93 g, 2,8 mmoles) en CH_{2}Cl_{2} (100 ml) a 0ºC se añade Et3N (1,6 ml, 11,4 mmoles) y cloruro de mesilo (0,26 ml, 1,23 mmoles). Se agita esta solución a 0ºC durante 15 minutos, después se burbujea Me_{2}HN durante 10 minutos y se agita la mezcla de reacción durante una noche. La mezcla de reacción se lava dos veces con NaHCO_{3}, dos veces con salmuera, se seca (Na_{2}SO_{4}), se filtra y se evapora hasta sequedad. Se disuelve el material resultante en tetrahidrofurano (40 ml) y se añade a 0ºC Bu_{4}NF (5,8 ml de una solución 1,0 M en tetrahidrofurano, 5,8 mmoles). Se lava la solución orgánica dos veces con salmuera, se seca (Na_{2}SO_{4}), se filtra y se evapora hasta sequedad. Se purifica el material resultante mediante cromatografía radial (gradiente de MeOH/CHCl_{3}/hexanos) se evapora y se disuelve en tetrahidofurano (50 ml), se lava dos veces con salmuera, se seca (Na_{2}SO_{4}), se filtra y se evapora para proporcionar el producto deseado.

Ejemplo 12

26

A una solución del compuesto de la preparación 1 (2,0 g, 2,9 mmoles) en CH_{2}Cl_{2} (100 ml) a 0ºC se añade Et_{3}N (1,6 ml, 11,4 mmoles) y cloruro de mesilo (0,26 ml, 3,5 mmoles). Se agita esta solución a 0ºC durante 15 minutos, después se burbujea MeH_{2}N durante 10 minutos y se agita la mezcla de reacción durante una noche. La mezcla de reacción se lava dos veces con NaHCO_{3}, dos veces con salmuera, se seca (Na_{2}SO_{4}), se filtra y se evapora hasta sequedad. Se disuelve el aceite marrón resultante en tetrahidrofurano (100 ml) y se añade a temperatura ambiente HF/NaF (12,0 ml de un tampón pH = 5 hecho de 7,0 g de NaF, 0,21 ml de HF al 48% (acuoso) y 50 ml de agua). Se agita esta mezcla durante una noche a reflujo. Se lava la solución orgánica dos veces con salmuera, se seca (Na_{2}SO_{4}), se filtra y se evapora hasta sequedad. Se purifica la espuma blanca resultante mediante cromatografía radial (gradiente de MeOH/CHCl_{3}) se disuelve en EtOAc (50 ml) y se burbujea HCl. Se filtra el precipitado blanco resultante para producir el producto deseado en forma de un sólido blanco (1,04 g, 65%). La ^{1}H-RMN es consistente con la estructura; espectrometría de masas de alta resolución, calculado para C_{30}H_{35}N_{2}O_{3}S = 503,2368, encontrado 503,2331.

Ejemplo 13

27

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Se emplea el procedimiento del ejemplo 11 utilizando el compuesto de la preparación 1 (0,5 g, 0,7 mmoles), Et_{3}N (0,5 ml, 3,5 mmoles), cloruro de mesilo (0,07 ml, 0,8 mmoles) y tetrahidrofurano (25 ml). Se añade a esta solución a 0ºC una suspensión de KCN (0,46 g, 7,0 mmoles) y 18-corona-6 (0,93 g, 2,5 mmoles en tetrahidrofurano (75 ml). Se calienta a reflujo la suspensión resultante durante 20 horas, se lava dos veces con salmuera, se seca (Na_{2}SO_{4}), se filtra y se evapora hasta sequedad. Se purifica la mezcla resultante mediante cromatografía radial (gradiente de MeOH/CHCl_{3}/hexanos.

Ejemplo 14

28

A una solución del compuesto de la preparación 1 (2,0 g, 3,0 mmoles) en CH_{2}Cl_{2} (100 ml) a 0ºC se añade Et_{3}N (1,6 ml, 11,6 mmoles) y cloruro de mesilo (0,27 ml, 3,5 mmoles). Se agita esta solución a 0ºC durante 15 minutos, después se añade pirrolidina (1,21 ml, 14,5 mmoles) y se agita la mezcla de reacción durante una noche. La mezcla de reacción se lava dos veces con NaHCO_{3}, dos veces con salmuera, se seca (Na_{2}SO_{4}), se filtra y se evapora hasta sequedad. Se disuelve el producto bruto resultante en tetrahidrofurano (100 ml) y se añade a temperatura ambiente HF/NaF (12,0 ml de un tampón pH = 5 hecho de 7,0 g de NaF, 0,21 ml de HF al 48% (acuoso) y 50 ml de agua). Se agita esta mezcla durante una noche a reflujo. Se lava la solución orgánica dos veces con salmuera, se seca (Na_{2}SO_{4}), se filtra y se evapora hasta sequedad. Se purifica la mezcla resultante mediante cromatografía radial (gradiente de MeOH/CHCl_{3}) y se evapora hasta sequedad. Se disuelve el compuesto resultante en EtOAc (125 ml) y se burbujea HCl durante 10 minutos, y se filtra el precipitado resultante y se seca en una estufa de vacío.

Ejemplo 15

29

El compuesto de la preparación 1 (2,0 g, 2,9 mmoles), Et_{3}N (1,6 ml, 11,6 mmoles), cloruro de mesilo (0,27 ml, 3,5 mmoles), hexametilenimina (1,6 ml, 14,5 mmoles), CH_{2}Cl_{2} (100 ml), HF/NaF (12,0 ml de un tampón pH = 5 hecho de (7,0 g) de NaF, HF (12,0 ml 48% (acuoso) y agua (50 ml). Purificado mediante cromatografía radial (gradiente de MeOH/CHCl_{3}/NH_{3}).

Ejemplo 16

30

El compuesto de la preparación 1 (2,0 g, 2,9 mmoles), Et_{3}N (1,6 ml, 11,6 mmoles), cloruro de mesilo (0,27 ml, 3,5 mmoles), 2-etanolamina (0,9 ml, 14,5 mmoles), CH_{2}Cl_{2} (100 ml), HF/NaF (12,0 ml de un tampón pH = 5 hecho de NaF (7,0 g), HF (12,0 ml 48% (acuoso) y agua (50 ml), tetrahidrofurano (50 ml). Purificado mediante cromatografía radial (gradiente de MeOH/CHCl_{3}).

Ejemplo 17

31

El compuesto de la preparación 1 (2,0 g, 32,9 mmoles), Et3N (1,6 ml, 11,6 mmoles), cloruro de mesilo (0,27 ml, 3,5 mmoles), clorhidrato de 2-fluoroetilamina (1,15 ml, 11,6 mmoles), CH_{2}Cl_{2} (100 ml), HF/NaF (12,0 ml de un tampón pH = 5 hecho de NaF (7,0 g), HF (12,0 ml 48% (acuoso) y agua (50 ml), tetrahidrofurano (150 ml). Purificado mediante cromatografía radial (gradiente de MeOH/CHCl_{3}/NH_{3}).

Ejemplo 18

32

El compuesto de la preparación 1 (2,0 g, 2,9 mmoles), Et_{3}N (1,6 ml, 11,6 mmoles), cloruro de mesilo (0,29 ml, 3,5 mmoles), N-aminopiperidina (1,6 ml, 14,5 mmoles), CH_{2}Cl_{2} (100 ml), HF/NaF (12,0 ml de un tampón pH = 5 hecho de NaF (7,0 g), HF (12,0 ml 48% (acuoso) y agua (50 ml), tetrahidrofurano (50 ml). Purificado mediante cromatografía radial (gradiente de MeOH/CHCl_{3}/NH_{3}).

Procedimiento de ensayo

Procedimiento de preparación general

En los ejemplos que ilustran los procedimientos, se utilizó un modelo posmenopáusico en el que se determinaron los efectos o diferentes tratamientos sobre los lípidos circulantes.

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Hembras de rata Sprague Dawley de setenta y cinco día de edad (intervalo de peso entre 200 y 225 g) se obtuvieron de los laboratorios Charles River (Portage, NI). Los animales bien se ovariectomizaron bilateralmente (abreviadamente OVX) o se expusieron a un procedimiento quirúrgico Sham en los laboratorios Charles River y seguidamente se enviaron después de una semana. Tras la recepción, se introdujeron en jaulas metálicas colgantes en grupos de 3 ó 4 por jaula teniendo acceso ad limitum al alimento (contenido en calcio aproximadamente 0,5%) y agua durante una semana. Se mantuvo la temperatura ambiente entre 22,2º \pm 1,7ºC con una mínima humedad relativa de 40%. El fotoperíodo en la habitación era 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad.

Recogida de tejidos de régimen de dosificación

Después de un período de aclimatación de una semana (por lo tanto, dos semanas después de OVX) se comenzó la dosificación diaria con el compuesto de ensayo. Se proporciona oralmente 17\Box-etinilestradiol o el compuesto de ensayo, a menos que se establezca de otra manera, en forma de una suspensión en carboximetilcelulosa al 1% o se disuelve en ciclodextrina al 20%. Se administra la dosificación a los animales diariamente durante 4 días. Después del régimen de dosificación se pesan y se anestesian los animales con una mezcla de cetamina: xilazina (2:1, v:v) y se recoge mediante punción cardiaca una muestra de sangre Después se sacrifican los animales mediante asfixia con CO_{2}, se retira el útero mediante una incisión central y se determina un peso húmedo uterino.

Análisis de colesterol

Se deja que las muestras de sangre coagulen a temperatura ambiente durante 2 horas y se obtiene suero después de centrifugación durante 10 minutos a 300 rpm. Se determina el colesterol en suero utilizando un ensayo de colesterol de alto rendimiento Boehringer Mannheim Diagnostics. Abreviadamente el colesterol se oxida a colest-4-en-3-ona y peróxido de hidrógeno. Después el peróxido de hidrógeno se hace reaccionar con fenol y 4-aminofenazona en presencia de peroxidasa para producir un tinte de p-quinonaimina, que se lee espectrfotométricamente a 500 nm. Después la concentración de colesterol se calcula frente a una curva estándar. El ensayo completo se automatiza utilizando un Biomek Automated Workstation.

Ensayo de peroxidadsa de eosinófilos uterinos (abreviadamente EPO)

Se mantiene los úteros a 4ºC hasta el momento del análisis enzimático. Después los úteros se homogenizan en 50 volúmenes de tampón Tris 50 mM (pH - 8,0) que contiene 0,005% de triton X-100. Después de la adición de peróxido de oxígeno al 0,01% y O-fenilendiamina 10 mM (concentraciones finales) en tampón Tris, se controla el incremento en absorbancia durante un minuto a 450 nm. La presencia de eosinófilos en el útero es una indicación de la actividad estrogénica de un compuesto. Se determina la velocidad máxima de un intervalo de 15 segundos sobre la inicial, porción lineal de la curva de reacción.

Fuente del compuesto

Se obtiene 17\alpha-etinilestradiol de Sigma Chemical Co., San Luis, MO.

Influencia de los compuestos de fórmula I sobre el colesterol en suero

Los datos presentados en la tabla 1 más adelante muestran los resultados cuando las ratas se tratan con determinados compuestos de la presente invención.

TABLA 1

Compuesto	Colesterol en suero
	DE_{50} (mg/kg)
Ejemplo 1	10,0
Ejemplo 12	N. D. a 10,0;
	no analizado
	a dosis más altas

Procedimiento de análisis de osteoporosis

Siguiendo el procedimiento de preparación general, más adelante, se trataron las ratas diariamente durante 35 días (6 ratas por grupo de tratamiento) y se sacrificaron mediante asfixia por dióxido de carbono el día 36. El período de tiempo de 35 días es suficiente para permitir una máxima reducción en la densidad ósea, medida como se ha descrito en esta memoria descriptiva. En el momento del sacrificio, se separan los úteros, se diseccionan exentos de tejidos extraños y el contenido del fluido se expulsa antes de de la determinación del peso húmedo con el fin de confirmar la deficiencia de estrógenos asociada con la ovariectomía completa. El peso uterino se reduce rutinariamente aproximadamente 75% en respuesta a la ovariectomía. Después los úteros se colocan en formalina neutra al 10% tamponada para permitir el análisis histológico posterior.

Los fémures derechos se retiran y se digitalizan los rayos X generados y se analizan mediante un programa de análisis de imagen (NIH image) en la metáfisis distal. El aspecto proximal de las tibias de estos animales se escanean también mediante tomografía computarizada cuantitativa.

De acuerdo con los procedimientos anteriores, los compuestos de la presente invención se administran oralmente a los animales de ensayo. Se indica un impacto positivo en el ensayo anterior mediante una inhibición en la pérdida ósea proporcionado por los compuestos de fórmula 1.

Ensayo de proliferación MCF – 7

Se mantienen células de adenocarcinoma de mama MCF - 7 (ATCC HTB 22) en MEM (medio esencial mínimo, exento de rojo fenol, Sigma, San Luis, MO) complementado con 10% de suero bovino fetal (abreviadamente FBS) (v/v), L-glutamina (2 mM), piruvato sódico (1 mM), HEPES {(N-[2-hidroxietil]piperacina-N'-[ácido 2-etanosulfónico] 10 mM}, aminoácidos no esenciales e insulina bovina (1 ug/ml) (medio de mantenimiento). Diez días antes del ensayo se cambian las células MCF - 7 al medio de mantenimiento complementado con medio de ensayo suero bovino fetal tratado con carbón vegetal revestido con dextrano al 10% (abreviadamente DCC - FBS) en lugar de FBS al 10% para vaciar las reservas internas de esteroides. Se retiran las células MCF - 7 de los matraces de mantenimiento utilizando medio de disociación celular (HBSS exento de Ca++/Mg++ (exento de rojo fenol) complementedo HEPES 10 mM y EDTA 2 mM). Se lavan las células dos veces con medio de ensayo y se ajustan hasta 80.000 células/ml. Se añaden aproximadamente 100 \mul (8.000 células) a los pocillos de microcultivo de fondo plano (Costar 3596) y se incuban a 37ºC en un incubador humidificado con CO_{2} al 5% durante 48 horas para permitir la adherencia y el equilibrio de las células después de la transferencia. Se preparan diluciones en serie de los fármacos o DMSO como un control de diluyentes en medio de ensayo y se transfieren 50 \mul a microcultivos triplicados seguido de 50 \mul de medio de ensayo para un volumen final de 200 \mul. Después durante 48 horas adicionales a 37ºC en un incubador humidificado con CO_{2} al 5%, se pulsan los microcultivos con timidina tritiada (1 uCi/pocillo) durante 4 horas. Se terminan los cultivos mediante congelación a -70ºC durante 24 horas seguido de descongelación y recogida de microcultivos usando un Skatron Semiautomatic Cell Harvester. Se recuentan las muestras mediante centelleo líquido usando un contador Wallac BetaPlace \beta. La actividad de los compuestos de fórmula 1 se muestra mediante su entrada en este ensayo. Los resultados de la tabla 2 más adelante muestran la DE_{50} de determinados compuestos de la presente invención.

TABLA 2

Compuesto (referencia de ejemplo)	DE_{50} nM
1	40
12	300

Inhibición de tumores de mama inducido por DMBA

Los tumores de mama estrógeno dependientes se producen en hembras de ratas Sprague Dawley que se compran en industrias Harlan, Indianápolis, Indiana. A los aproximadamente 55 días de edad, las ratas reciben un alimento oral único de 20 mg de 7,12-dimetilbenz[a]antraceno (abreviadamente DMBA). Aproximadamente 6 semanas después de la administración de DMBA, se palpan las glándulas mamarias a intervalos semanales para la aparición de tumores. Siempre que aparezcan uno o más tumores, se miden los diámetros más largo y más corto de cada tumor con un calibre métrico, se registran las medidas y ese animal se selecciona para experimentación. Se intentan distribuir uniformemente los diversos tamaños de tumores en los grupos tratados y de control de manera que los tamaños medios de tumores se distribuyen equivalentemente entre los grupos de ensayo. Los grupos de control y los grupos de ensayo para cada experimento contienen 5 a 9 animales.

Los compuestos de fórmula I se administran bien mediante inyecciones intraperitoneales en goma arábiga al 2% u oralmente. Los compuestos administrados oralmente bien se disuelven o se suspenden en 0,2 ml de aceite de maíz. Cada tratamiento, incluyendo los tratamientos de control de goma arábiga y aceite de maíz, se administra una vez diariamente a cada animal de ensayo. Después de la medición inicial de los tumores y selección de los animales de ensayo, se miden los tumores cada semana mediante el procedimiento mencionado anteriormente. El tratamiento y las mediciones de los animales continúan durante 3 a 5 semanas en cuyo momento se determinan las áreas finales de los tumores. Para cada tratamiento del compuesto y de control, se determina la superficie media del tumor.

Procedimientos de ensayo de fibrosis uterina Ensayo 1

Se administra un compuesto de la presente invención a entre 3 y 20 mujeres que tienen fibrosis uterina. La cantidad de compuesto administrado está entre 0,1 y 1000 mg/día, y el período de administración es tres meses.

Se observan las mujeres durante el período de administración y hasta tres meses después de la discontinuación de la administración para los efectos sobre fibrosis uterina.

Ensayo 2

Se utiliza el mismo procedimiento que en el ensayo 1 excepto que el período de administración es 6 meses.

Ensayo 3

Se utiliza el mismo procedimiento que en el ensayo 1 excepto que el período de administración es 1 año.

Ensayo 4 A. Inducción de tumores fibroides en cobaya.

Se usa estimulación prolongada de estrógenos para inducir leiomioma en hembras de cobayas maduras sexualmente. Se administra la dosificación a los animales con estradiol 3 - 5 veces por semana mediante inyección durante 2 - 4 meses o hasta que aparecen los tumores. Los tratamientos que constan de un compuesto de la invención o vehículo se administran diariamente durante 3 - 16 semanas y después se sacrifican los animales y se recogen los úteros y se analizan para regresión de tumores.

B. Implantación de tejido fibroide uterino humano en ratones desnudos.

Tejido de leiomiomas humanos se implantan en la cavidad peritoneal y o miometrio uterino de hembras sexualmente maduras, castradas de ratones desnudos. Se suministra estrógeno exógeno para inducir crecimiento del tejido explantado. En algunos casos, las células tumorales recogidas se cultivan in vitro antes de la implantación. Se suministra tratamiento consistente de un compuesto de la presente invención o vehículo mediante lavado gástrico en base diaria durante 3 - 16 semanas y se retiran los implantes y se miden el crecimiento o regresión. En el momento del sacrificio, se recogen los úteros para valorar en estado del órgano.

Ensayo 5

A. Se recoge tejido de tumores fibroides uterino humanos y se mantiene in vitro en forma de cultivos no transformados principalmente. Se presionan especimenes quirúrgicos a través de una malla o tamiz estéril, o alternativamente se desgarran aparte del tejido circundante para producir una suspensión celular única. Se mantienen las células en medio que contiene suero al 10% y antibiótico. Se determinan las velocidades de crecimiento en presencia y ausencia de estrógeno. Se ensayan las células para su capacidad para producir componente de complemento C3 y su respuesta a factores de crecimiento y hormona de crecimiento. Los cultivos in vitro se valoran para su respuesta proliferativa después del tratamiento con progestinas, GnRH, un compuesto de la presente y vehículo. Los niveles de receptores de hormonas esteroides se valoran semanalmente para determinar si las características celulares importantes se mantienen in vitro. Se utilizan los tejidos de 5 - 25 pacientes.

La actividad en al menos uno de los ensayos anteriores indica que los compuestos de la presente invención son potenciales en el tratamiento de fibrosis uterina.

Procedimiento de ensayo de endometriosis

En los ensayos 1 y 2, se pueden examinar los efectos el día 14 y día 21 de la administración de los compuestos de la presente invención en el crecimiento de tejido endometrial explantado.

Ensayo 1

Se usan doce a treinta hembras de rata adultas de la estirpe CD como animales de ensayo. Se dividen en tres grupos de números iguales. Se controla el ciclo estrual de todos los animales. El día proestrual se realiza cirugía en cada hembra. Las hembras de cada grupo tienen la trompa uterina izquierda extraída, seccionada en pequeños cuadros y los cuadros están ligeramente suturados en diversos sitios adyacentes al flujo sanguíneo mesentérico. Además, las hembras del grupo 2 tienen extraídos los ovarios.

El día siguiente a la cirugía los animales de los grupos 1 y 2 reciben inyecciones intraperitoneales de agua durante 14 días mientras los animales del grupo 3 reciben inyecciones intraperitoneales de 1,0 mg de un compuesto de la presente invención por kilogramo de peso corporal con la misma duración. Después de 14 días de tratamiento se sacrifica cada hembra y se extraen los explantes endometriales, glándulas suprarrenales, permaneciendo el útero y los ovarios, cuando sea aplicable y se preparan para examen histológico. Se pesan los ovarios y glándulas suprarrenales.

Ensayo 2

Se usan doce a treinta hembras de rata adultas de la estirpe CD como animales de ensayo. Se dividen en dos grupos iguales. Se controla el ciclo estrual de todos los animales. El día proestrual se realiza cirugía en cada hembra. Las hembras de cada grupo tienen la trompa uterina izquierda extraída, seccionada en pequeños cuadros y los cuadros están ligeramente suturados en diversos sitios adyacentes a flujo sanguíneo mesentérico.

Aproximadamente 50 días después de la cirugía, los animales asignados al grupo 1 reciben inyecciones intraperitoneales de agua durante 21 días mientras los animales del grupo 2 reciben inyecciones intraperitoneales de 1,0 mg de un compuesto de la presente invención por kilogramo de peso corporal con la misma duración. Después de 21 días de tratamiento se sacrifica cada hembra y se extraen los explantes endometriales y glándulas suprarrenales y se pesan. Se miden los explantes como una indicación de crecimiento. Se controlan los ciclos estruales.

Ensayo 3 A. Inducción quirúrgica de endometriosis

Se usan autoinjertos de tejido endometrial para inducir endometriosis en ratas y/o conejos. Hembras de animales en madurez reproductiva se sometieron se sometieron a ooforectomía bilateral y se les suministra estrógeno exógenamente proporcionando de esta manera un nivel específico y constante de hormona. El tejido endometrial autólogo se implanta en el peritoneo de 5 - 150 animales y se les suministra estrógeno para inducir crecimiento del tejido explantado. El tratamiento que consiste en un compuesto de la presente invención se suministra mediante un lavado gástrico en base diaria durante 3 - 16 semanas, se retiran los implantes y se miden para crecimiento o regresión. En el momento del sacrificio, se recoge la trompa intacta del útero para valorar el estado del endometrio.

B. Implantación de tejido endometrial humano en ratones desnudos.

Tejido de las lesiones endometriales humanas se implantó en el peritoneo de hembras sexualmente maduras, castradas de ratones desnudos. Se les suministra estrógeno exógeno para inducir el crecimiento del tejido explantado. En algunos casos las células endometriales recogidas se cultivan in vivo antes del implante. El tratamiento que consiste en un compuesto de la presente invención suministrado mediante lavado gástrico en base diaria durante 3 - 16 semanas, y los implantes se retiran y se miden para crecimiento o regresión. En el momento del sacrificio, los úteros se recogen para valorar el estatus del endometrio intacto.

Ensayo 4

A. Se recoge tejido de lesiones endometriales humanas y se mantiene in vitro en forma de cultivos no transformados principalmente. Se presionan especímenes quirúrgicos a través de una malla o tamiz estéril, o alternativamente se desgarran aparte del tejido circundante para producir una suspensión celular única. Se mantienen las células en medio que contiene suero al 10% y antibiótico. Se determinan las velocidades de crecimiento en presencia y ausencia de estrógeno. Se ensayan las células para su capacidad para producir componente de complemento C3 y su respuesta a factores de crecimiento y hormona de crecimiento. Se valoran los cultivos in vitro para su respuesta proliferativa después del tratamiento con progestinas, GnRH, un compuesto de la presente y vehículo. Los niveles de receptores de hormonas esteroides se valoran semanalmente para determinar si las características celulares importantes se mantienen in vitro. Se utiliza el tejido de 5 – 25 pacientes.

La actividad en cualquiera de los ensayos anteriores indica que los compuestos de la presente invención son potenciales en el tratamiento de la endometriosis.

Inhibición de proliferación de células lisas de la aorta/procedimiento de ensayo de reestenosis

Los compuestos de la presente invención tienen la capacidad de inhibir la proliferación de células lisas de la aorta. Esto se puede demostrar mediante el uso de células lisas cultivadas derivadas de aorta de conejo, siendo determinada la proliferación mediante le medición de la síntesis de DNA. Las células se obtienen mediante el procedimiento de explante como se describe en Ross, J. of Cell Bio. 50: 172 (1971). Se siembran las células en placas de microtitulación de 96 pocillos durante cinco días. Los cultivos se hacen confluentes y se detiene el crecimiento. Después las células se transfieren a medio de Eagle modificado por Dulbecco (abreviadamente DMEM) que contenía 0,5% - 2% plasma pobre en plaquetas, L-glutamina 2 mM, 100 U/ml de penicilina, 100 mg /ml de estreptomicina, 1 mC/ml de ^{3}H-timidina, 20 ng/ml de factor de crecimiento derivado de plaquetas y concentraciones variables de los presentes compuestos. Se prepara solución madre de los compuestos en dimetilsulfóxido y después se diluye hasta una concentración apropiada (0,01 - 30 mM) en el anterior medio de ensayo. Después las células se incuban a 37ºC durante 24 horas en 5% de CO_{2}/95% de aire. Al final de las 24 horas, se fijan las células en metanol. La incorporación de ^{3}H-timidina en DNA se determina después mediante recuento por centelleo como se describe en Bonin y col., Exp. Cel Res. 181: 475-482 (1989).

La inhibición de la proliferación de las células de músculo liso de aorta mediante los compuestos de la presente invención se demuestran adicionalmente mediante la determinación de sus efectos en el crecimiento exponencial de las células. Las células de músculo liso de aortas de conejo se sembraron en placas de cultivo de tejido de 12 pocillos en DMEM que contenía 10% de suero fetal bovino, L-glutamina 2 mM, 100 U/ml de penicilina, 100 mg /ml de estreptomicina. Después de 24 horas, se adjuntaron las células y el medio se sustituyó con DMEM que contenía 10% de suero, L-glutamina 2 mM, 100 U/ml de penicilina, 100 mg/ml de estreptomicina y concentraciones deseadas de los compuestos. Se dejó que las células se desarrollaran durante cuatro días. Se trataron las células con tripsina y se determinó el número de células en cada cultivo mediante recuento usando un contador ZM-Coulter.

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La actividad de los ensayos anteriores indica que los compuestos de la presente invención son potenciales en el tratamiento de la reestenosis.

La presente invención también proporciona un procedimiento para aliviar el síndrome posmenopáusico en mujeres que comprende el procedimiento anteriormente mencionado usando los compuestos de fórmula I y además comprende la administración a una mujer de una cantidad eficaz de estrógeno o progestina. Estos tratamientos son particularmente útiles para tratar osteoporosis y reducir el colesterol en suero porque el paciente recibirá los beneficios de cada agente farmacéutico mientras los compuestos de la presente invención inhibirían los efectos secundarios indeseables de estrógeno y progestina. La actividad de estos tratamientos de combinación en cualquiera de los ensayos posmenopáusicos, más adelante, indica que los tratamientos de combinación son útiles para aliviar los síntomas posmenopáusicos en mujeres.

Están comercialmente disponibles diversas formas de estrógeno y progestina. Los agentes a base de estrógeno incluyen, por ejemplo, estrógeno etinilo (0,01 - 0,03 mg/día), mestranol (0,05 - 0,15 mg/día) y hormonas estrogénicas conjugadas tales como Premarin® (Wyeth - Ayerst; 0,3 - 2,5 mg/día). Los agentes a base de progestina incluyen, por ejemplo, medroxiprogesterona tal como Provera® (Upjohn; 2,5 – 10 mg/día), noretilnodrel (1,0 - 10,0 mg/día) y nonetindrona (0,5 - 2,0 mg/día). Un compuesto preferido a base de estrógeno es Premarin, y noretilnodrel y noretindrona son agentes preferidos a base de progestina.

El procedimiento de administración de cada agente a base de estrógeno y progestina es consistente con el que se conoce en la técnica. Para la mayoría de los procedimientos de la presente invenció, los compuestos de fórmula I se administran continuamente, desde 1 a 3 veces al día. Sin embargo, la terapia cíclica puede ser especialmente útil el tratamiento de endometriosis o se puede usar agudamente durante los ataque de dolor de la enfermedad. En el caso de reestenosis, la terapia se puede limitar a intervalos cortos (1 - 6 meses) que siguen a los procedimiento médicos tales como angioplastia.

Como se utiliza en esta memoria descriptiva, la expresión "cantidad eficaz" significa una cantidad de compuesto de la presente invención que es capaz de aliviar los síntomas de los diversos estados patológicos descritos en esta memoria descriptiva. La dosis específica de un compuesto administrado según esta invención, naturalmente, se determinará por las circunstancias particulares que rodean el caso incluyendo, por ejemplo, el compuesto administrado, la vía de administración, el estado en que se encuentra el paciente y el estado patológico que se está tratando. Una dosis típica diaria contendrá un nivel de dosificación no tóxico de entre aproximadamente 5 mg y aproximadamente 600 mg/díada un compuesto de la presente invención. Las dosis diarias preferidas generalmente estarán entre aproximadamente 15 mg y aproximadamente 80 mg/día.

Los compuestos de esta invención se pueden administrar mediante una diversidad de vías que incluyen oral, rectal, transdermal, subcutánea, intravenosa, intramuscular e intranasal. Preferiblemente estos compuestos se formulas antes de la administración, la selección de la cual la decidirá el médico asistente. De este modo, otro aspecto de presente invención es una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, opcionalmente conteniendo una cantidad eficaz de estrógeno o predestina y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

El total de los ingredientes activos en dichas formulaciones comprende entre 0,1% y 99.9% en peso de la formulación. Por "farmacéuticamente estable" se entiende que el vehículo, diluyente, excipientes y sal debe ser compatible con los otros ingredientes de la formulación y no deletéreo para el receptor del mismo.

Las formulaciones farmacéuticas de la presente invención se pueden preparar mediante procedimientos conocidos en la técnica usando ingredientes bien conocidos y fácilmente disponibles. Por ejemplo, los compuestos de fórmula I, con o sin un compuesto de estrógeno o progestina, se pueden formular con excipientes, diluyentes o vehículos comunes y formar comprimidos, cápsulas, suspensiones, polvos y los similares. Ejemplos de excipientes, diluyentes o vehículos que son adecuados para dichas formulaciones incluyen los siguientes: cargas y extendedores tales como almidón, azúcares, manitol y derivados silícicos; agentes aglutinantes tales como carboximetilcelulosa y otros derivados de celulosa, alginatos, gelatina y poli (pirrolidona de vinilo); agentes humectantes tales como glicerol; agentes disgregantes tal como carbonato cálcico y bicarbonato sódico; agentes para retardar la disolución tales como parafina; aceleradores de resorción tales como compuestos de amonio cuaternario; agentes tensioactivos tales como alcohol cetílico, monoestearato de glicerol; vehículos de adsorción tales como caolín y bentonita; y lubricantes tales como talco, calcio y estearato de magnesio y polietilglicoles sólidos.

Los compuestos también se pueden formular en forma de elixires o soluciones para administración oral conveniente o en forma de soluciones adecuadas para administración parenteral, por ejemplo, por vías intramuscular, subcutánea o intravenosa. Adicionalmente, los compuestos se adaptan bien a formulación como formas de dosificación sostenida y las similares. También las formulaciones se pueden constituir para que liberen el ingrediente activo solamente o preferiblemente en un lugar fisiológico particular, posiblemente durante un período de tiempo. Los recubrimientos, envolturas y matrices protectoras se pueden fabricar, por ejemplo, a partir de sustancias poliméricas o ceras.

Los compuestos de fórmula I, solos o en combinación con un agente farmacéutico de la presente invención, generalmente se administrarán en una formulación conveniente. Los siguientes ejemplos de formulación son solamente ilustrativos.

Formulaciones

En las formulaciones que siguen, "ingrediente activo" significa un compuesto de fórmula I, o una sal o solvato del mismo.

Formulación 1 Cápsulas de gelatina

Las cápsulas duras de gelatina se preparan utilizando lo siguiente:

Ingrediente	Cantidad (mg/cápsula)
Ingrediente activo	0,1 - 1000
Almidón, NF	0 - 650
Polvo que puede fluir de almidón	0 - 650
Fluido de silicona 350 centistokes	0 - 15

La formulación anterior se puede cambiar en conformidad con las variaciones razonables proporcionadas.

Una formulación de comprimidos se prepara utilizando los ingredientes siguientes

Formulación 2

Comprimidos

Ingrediente	Cantidad (mg/comprimido)
Ingrediente activo	2,5 - 1000
Celulosa microcristalina	200 - 650
Dióxido de silicio, pirógeno	10 - 650
Ácido esteárico	5 - 15

Se mezclan los componentes y se comprimen para formar comprimidos.

Alternativamente, los comprimidos que contienen cada uno 2,5 - 1000 mg de ingrediente activo se fabrican como sigue:

Formulación 3

Comprimidos

Ingrediente	Cantidad (mg/comprimido)
Ingrediente activo	25 - 1000
Almidón	45
Celulosa microcristalina	35
Poli (pirrolidona de vinilo)	4
(en forma de solución al 10% en agua)
Carboximetilcelulosa de sodio	4,5
Estearato de magnesio	0,5
Talco	1

El ingrediente activo, almidón, y celulosa se pasan a través de un tamiz (malla Nº 45 de Estados Unidos) 4 x 10^{-4} m de apertura y se mezclan completamente. Se mezcla la solución de poli (pirrolidona de vinilo) con los polvos resultantes que se pasan después a través de un tamiz (malla Nº 14 de Estados Unidos) 1,25 x 10^{-3} m de apertura. Los gránulos así producidos se secan a 50ºC - 60ºC y se pasa a través de un tamiz (malla Nº 18 de Estados Unidos) 10^{-3} m de apertura. El carboximetil de sodio, almidón, estearato de magnesio y talco, previamente pasados a través de (tamiz Nº 60 de Estados Unidos) 2,5 x 10^{-4} m de apertura se añaden seguidamente a los gránulos que, después de mezclar, se comprimen en una máquina de comprimidos para formar comprimidos.

Las suspensiones que contiene cada una 0,1 - 1000 mg de medicamento por 5 ml se fabrican como sigue:

Formulación 4

Suspensiones

Ingrediente	Cantidad (mg/5 ml)
Ingrediente activo	0,1 - 1000 mg
Carboximetilcelulosa de sodio	50 mg
Jarabe	1,25 mg
Ácido benzoico en solución	0,10 ml
Aromatizante	c. s.
Colorante	c. s.
Agua purificada hasta	5 ml

El medicamento se pasa a través de un tamiz (malla Nº 45 de Estados Unidos) 4 x 10^{-4} m de apertura y se mezcla con la carboximetilcelulosa de sodio y jarabe para formar una pasta suave. La solución de ácido benzoico, aromatizante y colorante se diluye con algo del agua y se añaden con agitación. Después se añade suficiente agua para producir el volumen requerido.

Una solución de aerosol se prepara conteniendo los siguientes ingredientes:

Formulación 5

Aerosol

Ingrediente	Cantidad (% en peso)
Ingrediente activo	0,25
Etanol	25,75
Propelente 22 (clorodifluorometano)	70,00

El ingrediente activo se mezcla con etanol y la mezcla se añade a una porción del propelente 22, se enfría hasta 30ºC y se transfiere hasta un dispositivo de llenado. Después la cantidad requerida se introduce en un recipiente de acero inoxidable y se diluye con el resto del propulsor. Después las unidades de válvula se ajustan al recipiente.

Los supositorios se preparan como sigue:

Formulación 6

Supositorios

Ingrediente	Cantidad (mg/supositorio)
Ingrediente activo	250
Glicéridos de ácidos grasos saturados	2000

El ingrediente activo se pasa a través de un tamiz (malla Nº 60 de Estados Unidos) 2,5 x 10^{-4} m de apertura y se suspende en los glicéridos de ácidos grasos saturados previamente fundidos utilizando el mínimo calor necesario. Después la mezclase vierte en un molde de supositorio de 2 g de capacidad nominal y se deja enfriar.

Una formulación intravenosa se formula como sigue:

Formulación 7

Solución intravenosa

Ingrediente	Cantidad
Ingrediente activo	50 mg
Solución salina isotónica	1000 ml

La solución de los ingredientes anteriores se administra intravenosamente a un paciente a una velocidad de aproximadamente 1 ml por minuto.

Formulación 8

Cápsula de combinación I

Ingrediente	Cantidad (mg/cápsula)
Ingrediente activo	50
Premarin	1
Avicel pH 101	50
Almidón 1500	117,50
Aceite de silicona	2
Tween 80	0,25
Cab - O - Sil	0,25

Formulación 9

Cápsula de combinación II

Ingrediente	Cantidad (mg/cápsula)
Ingrediente activo	50
Noretilnodrel	5
Avicel pH 101	82,50
Almidón 1500	90
Aceite de silicona	2
Tween 80	0,50

Formulación 10

Comprimido de combinación

Ingrediente	Cantidad (mg/cápsula)
Ingrediente activo	50
Premarin	1
Almidón de maíz NF	50
Providona, K29 – 32	6
Avicel pH 101	41,50
Almidón 102	136,50
Crospovidona XL10	2,50
Estearato de magnesio	0,50
Cab-O-Sil	0,50

Claims

1. Un compuesto de fórmula I

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en la que R_{1} es H, OH, OCO-alquilo (C_{1}-C_{6}), OCO-arilo, OSO_{2}-alquilo (C_{4}-C_{6}), OCOO-alquilo (C_{1}-C_{6}), OCOO-arilo, OCONH-alquilo (C_{1}-C_{6}), u OCON-(alquilo (C_{1}- C_{6}))_{2};

R_{3} es O(CH_{2})_{2} u O(CH_{2})_{3};

R_{4} y R_{5} son opcionalmente CO(CH_{2})_{2} CH_{3}, CO(CH_{2})_{3} CH_{3}, alquilo (C_{1}-C_{6}), o R_{4} y R_{5} se combinan para formar, con el nitrógeno al que se unen, piperidina, morfolina, pirrolidina, 3-metilpirrolidina, 3,3-dimetilpirrolidina, 3,4-dimetilpirrolidina, azepina o pipecolina;

R_{6} es OH, O-alquilo (C_{1}-C_{6}), O-arilo, O-(alquil (C_{1}- C_{6})arilo), OCH_{2}CH_{2}ciano, O-(alquil (C_{1}-C_{6}) alcohol (C{1}-C{6})), OSO_{2}CH_{3}, OSO_{2}C_{6}H_{4}CH_{3}, SH, S-alquilo (C_{1}-C_{6}), ciano, halo,

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en la que cada uno de R_{10} y R_{11} se toman separadamente y representa H o C_{1}-C_{2}, o tanto R_{10} como R_{11} se toman juntos con el nitrógeno y representan un anillo que es una pirrolidina, piperidina, azepina o morfolina y que se puede sustituir opcionalmente con uno o dos grupos metilo y R_{12} es hidrógeno, metilo o etilo y

sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R_{6} es -OH, -OCH_{3}, -OCH_{2}CH_{3}, -O(CH_{2})_{2}CH_{3},
- O(CH_{2})_{3}CH_{3}, -O-CH_{2}-fenilo, -O(CH_{2})_{2}OH, -SCH_{3}, -SCH_{2}CH_{3}, -N(CH_{3})_{2}, -NHCH_{3}, o ciano.

3. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según la reivindicación 1, y, opcionalmente una cantidad eficaz de estrógeno o progestina, en combinación con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

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4. Un artículo de fabricación que comprende material de embalaje y un agente farmacéutico contenido dentro de dicho material de embalaje, en el que dicho agente farmacéutico es eficaz para el tratamiento de una enfermedad seleccionada de 1) una diversa indicación médica asociada con síndrome posmenopáusico, y 2) enfermedades estrógeno dependientes y en el que dicho material de embalaje comprende una etiqueta que indica que dicho agente farmacéutico se puede utilizar para tratar una de dichas enfermedades, en el que dicho agente farmacéutico se selecciona del grupo constituido por un compuesto de fórmula (I) de la reivindicación 1.

5. Un compuesto de fórmula I como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 para uso en el alivio de los síntomas del síndrome posmenopáusico.

6. Un compuesto de fórmula I como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 para uso en el estado patológico del síndrome posmenopáusico de osteoporosis.

7. Un compuesto de fórmula I como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 para uso en el estado patológico del síndrome posmenopáusico relativo a una enfermedad cardiovascular.

8. Un compuesto de fórmula I como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 para uso en la inhibición de la enfermedad de la fibroide uterina.

9. Un compuesto de fórmula I como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 para uso en la inhibición de la endometriosis.

10. Un compuesto de fórmula I como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 para uso en la proliferación de las células del músculo liso aórtico.