ES2201076T3 - Factor-8 de diferenciacion del crecimiento. - Google Patents
Factor-8 de diferenciacion del crecimiento.Info
- Publication number
- ES2201076T3 ES2201076T3 ES94912274T ES94912274T ES2201076T3 ES 2201076 T3 ES2201076 T3 ES 2201076T3 ES 94912274 T ES94912274 T ES 94912274T ES 94912274 T ES94912274 T ES 94912274T ES 2201076 T3 ES2201076 T3 ES 2201076T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- baselineskip
- gdf
- sequence
- seq
- dna
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/495—Transforming growth factor [TGF]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/22—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
SE EXPONE EL FACTOR-8 DE DIFERENCIACION DEL CRECIMIENTO (GDF8), ASI COMO SU SECUENCIA POLINUCLEOTIDA Y SU SECUENCIA AMINOACIDA. TAMBIEN SE EXPONEN METODOS TERAPEUTICOS Y DE DIAGNOSTICO DEL USO DE SECUENCIAS POLINUCLEOTIDAS Y POLIPEPTIDAS DE GDF-8.
Description
Factor-8 de diferenciación del
crecimiento.
La invención se refiere en general a factores de
crecimiento y específicamente a un nuevo miembro de la superfamilia
de factores de crecimiento de transformación beta (TGF- \beta),
que se denomina factor-8 de diferenciación del
crecimiento (GDF-8).
La superfamilia de factores de crecimiento de
transformación \beta (TGF-\beta) incluye un
grupo de proteínas relacionadas estructuralmente que afectan a una
amplia serie de procesos de diferenciación durante el desarrollo
embrionario. La familia incluye la substancia inhibidora mülleriana
(MIS), que se requiere para el desarrollo sexual masculino normal
(Behringer, et al., Nature 345:167, 1990), el producto
génico decapentaplégico de Drosophila (DPP), que se requiere para la
formación del eje dorsal-ventral y la morfogénesis
de los discos imaginales (Padgett, et al., Nature,
325:81-84, 1987), el producto génico
Vg-1 de Xenopus, que se localiza en el polo
vegetativo de los huevos ((Weeks, et al., Cell,
51:861-867, 1987), las activinas (Mason et
al., Biochem, Biophys. Res. Commun.,
135:957-964, 1986), que pueden inducir la
formación del mesodermo y de estructuras anteriores en embriones de
Xenopus (Thomsen, et al., Cell, 63:485, 1990) y las
proteínas morfogenéticas del hueso (BMP, osteogenina,
OP-1), que pueden inducir la formación de novo de
cartílago y de hueso (Sampath, et al., J. Biol. Chem.,
265:13198, 1990). Los TGF-\beta pueden
influir sobre una diversidad de procesos de diferenciación,
incluyendo la adipogénesis, miogénesis, condrogénesis,
hematopoyesis y diferenciación de células epiteliales (como
revisión, véase Massague, Cell 49:437, 1987).
Las proteínas de la familia de
TGF-\beta inicialmente se sintetizan como una
proteína precursora grande que posteriormente experimenta una
escisión proteolítica en un agrupamiento de restos básicos a una
distancia de aproximadamente 110-140 aminoácidos del
extremo C. Todas las regiones C-terminales, o
regiones maduras, de las proteínas están relacionadas
estructuralmente y los diferentes miembros de la familia pueden
clasificarse en distintos subgrupos basándose en el grado de
homología. Aunque las homologías dentro de subgrupos particulares
varían desde una identidad de secuencias de aminoácidos del 70% al
90%, las homologías entre subgrupos son significativamente
inferiores, variando sólo generalmente de un 20 a un 50%. En
cualquier caso, la especie activa parece ser un dímero unido por
enlaces disulfuro de fragmentos C-terminales.
Ciertos estudios han demostrado que cuando la región pro de un
miembro de la familia de TGF-\beta se coexpresa
con una región madura de otro miembro de la familia de
TGF-\beta, se produce una dimerización
intracelular y la secreción de homodímeros biológicamente activos
(Gray, A., y Maston, A., Science, 247:1328, 1990). Otros
estudios de Hammonds, et al., (Molec. Endocrin. 5: 149,
1991) demostraron que el uso de la región pro de
BMP-2 combinada con la región madura de
BMP-4 conducía a una expresión espectacularmente
mejorada de la BMP-4 madura. Para la mayoría de los
miembros de la familia que se han estudiado, se ha descubierto que
las especies homodiméricas son biológicamente activas, pero para
otros miembros de la familia, como las inhibinas (Ling, et al.,
Nature, 321:779, 1986) y los TGF-\beta
(Cheifetz, et al., Cell, 48:409, 1987), también se han
detectado heterodímeros, y éstos parecen tener diferentes
propiedades biológicas que los homodímeros respectivos.
La identificación de nuevos factores que
presenten especificidad de tejido en su modelo de expresión
proporcionará una mayor compresión del desarrollo y función de ese
tejido.
La presente invención proporciona una secuencia
polinucleotídica que codifica un polipéptido del
factor-8 de diferenciación del crecimiento
(GDF-8) como se indica en las reivindicaciones
1-4.
La presente invención también proporciona un
vector de expresión como se indica en las reivindicaciones
5-7, así como una célula hospedadora como se indica
en las reivindicaciones 8-9.
La presente invención proporciona el polipéptido
GDF-8 o un fragmento funcional del mismo como se
indica en la reivindicación 10, y un método para la producción del
polipéptido GDF-8 o el fragmento funcional del mismo
como se indica en la reivindicación 11.
La presente invención proporciona anticuerpos o
fragmentos de los mismos como se indica en las reivindicaciones
12-13, y una composición de diagnóstico como se
indica en la reivindicación 14.
La presente invención proporciona un método para
detectar un trastorno de la proliferación celular como se indica en
las reivindicaciones 15-18.
La presente invención proporciona una secuencia
antisentido como se indica en la reivindicación 19 y un ribozima
como se indica en la reivindicación 20.
La presente invención proporciona una composición
terapéutica como se indica en la reivindicación 21 y el uso de un
anticuerpo o un fragmento del mismo, una secuencia antisentido o
una ribozima, como se indica en las reivindicaciones
22-38.
La figura 1 es una transferencia de Northern que
muestra la expresión del ARNm de GDF-8 en tejidos
adultos. La sonda era un clon de GDF-8 murino
parcial.
La figura 2 muestra las secuencias de nucleótidos
y de aminoácidos prevista del GDF-8 murino (figura
2a) y del GDF-8 humano (figura 2b). Los supuestos
sitios de procesamiento dibásicos en la secuencia murina están
recuadrados.
La figura 3 muestra la alineación de las
secuencias C-terminales de GDF-8
con otros miembros de la superfamilia de
TGF-\beta. Los restos de cisteína conservados
están recuadrados. Las rayas denotan huecos introducidos para
maximizar la alineación.
La figura 4 muestra homologías de aminoácidos
entre diferentes miembros de la superfamilia de
TGF-\beta. Los números representan porcentajes de
identidades de aminoácidos entre cada par calculados desde la
primera cisteína conservada hasta el extremo C. Los recuadros
representan homologías entre miembros muy relacionados dentro de
subgrupos particulares.
La figura 5 muestra la secuencia de
GDF-8. Se muestran las secuencias de nucleótidos y
de aminoácidos del ADNc de GDF-8 murino (figura 5a)
y humano (figura 5b). Los números indican las posiciones de los
nucleótidos con respecto al extremo 5'. Las señales de
glicosilación unidas a N consenso están sombreadas. Los supuestos
sitios de escisión proteolítica RXXR están recuadrados.
La figura 6 muestra un perfil de hidropaticidad
de GDF-8. Se calcularon los valores medios de
hidrofobia para el GDF-8 murino (figura 6a) y humano
(figura 6b) usando el método de Kyte y Doolittle (J. Mol. Biol.,
157:105-132, 1982). Los números positivos
indican una hidrofobia creciente.
La figura 7 muestra una comparación de las
secuencias de aminoácidos del GDF-8 murino y
humano. La secuencia murina prevista se muestra en las líneas
superiores y la secuencia humana prevista se muestra en las líneas
inferiores. Los números indican las posiciones de los aminoácidos
con respecto al extremo N. Las identidades entre las dos secuencias
se denotan por una línea vertical.
La figura 8 muestra la expresión de
GDF-8 en bacterias. Se indujeron células BL21 (DE3)
(pLysS) que llevaban un plásmido de expresión
pRSET/GDF-8 con
isopropiltio-\beta-galactósido, y
la proteína de fusión GDF-8 se purificó por
cromatografía de quelatos metálicos. Calles: total = lisado celular
total; soluble = fracción de proteína soluble; insoluble = fracción
de proteína insoluble (resuspendida en Tris 10 mM pH 8,0, fosfato
sódico 50 mM, urea 8 M y
\beta-mercaptoetanol 10 mM [tampón B]) introducida en la columna; sedimento = fracción de proteína insoluble desechada antes de cargar la columna; flujo = proteínas no unidas por la columna; lavados = lavados realizados en tampón B a los valores de pH indicados. A la derecha se muestran las posiciones de patrones de peso molecular. La flecha indica la posición de la proteína de fusión de GDF-8.
\beta-mercaptoetanol 10 mM [tampón B]) introducida en la columna; sedimento = fracción de proteína insoluble desechada antes de cargar la columna; flujo = proteínas no unidas por la columna; lavados = lavados realizados en tampón B a los valores de pH indicados. A la derecha se muestran las posiciones de patrones de peso molecular. La flecha indica la posición de la proteína de fusión de GDF-8.
La figura 9 muestra la expresión de
GDF-8 en células de mamífero. Se transfectaron
células de ovario de hámster chino con plásmidos de expresión
pMSXND/GDF-8 y se seleccionaron en G418. Se
concentraron medios acondicionados de células resistentes a G418
(preparadas a partir de células transfectadas con construcciones en
las que el GDF-8 se clonó en la orientación
antisentido o con sentido), se sometieron a electroforesis en
condiciones reductoras, se sometieron a inmunotransferencia y se
sondaron con anticuerpos anti-GDF-8
y [^{125}I] yodoproteína A. La flecha indica la posición de la
proteína GDF-8 procesada.
La figura 10 muestra la expresión del ARNm de
GDF-8. Se sometieron a electroforesis en geles de
formaldehído ARN seleccionados con respecto a poli A (5 \mug de
cada uno) preparados a partir de tejidos adultos (figura 10a) o a
partir de placentas y embriones (figura 10b) a los días indicados
de gestación, se sometieron a inmunotransferencia y se sondaron con
GDF-8 murino de longitud completa.
La figura 11 muestra la localización cromosómica
del GDF-8 humano. Se sometieron a PCR muestras de
ADN preparadas a partir de líneas híbridas de células somáticas
humanas/de roedor, se sometieron a electroforesis en geles de
agarosa, se sometieron a inmunotransferencia y se sondaron. El
cromosoma humano contenido en cada una de las líneas de células
híbridas se identifica en la parte superior de cada una de las
primeras 24 calles (1-22, X e Y). En las calles
denominadas, M, CHO y H, la plantilla de ADN de partida era ADN
genómico total procedente de ratón, hámster y ser humano,
respectivamente. En calle marcada como B1, no se usó ninguna
plantilla de ADN. Los números de la izquierda indican las
movilidades de los patrones de ADN.
La presente invención proporciona un factor de
crecimiento y diferenciación, GDF-8, y una
secuencia polinucleotídica que codifica GDF-8.
GDF-8 se expresa a niveles máximos en el músculo y
a niveles inferiores en el tejido adiposo. En una realización, la
invención proporciona un método para la detección de un trastorno
de la proliferación celular de origen muscular, nervioso o adiposo
que está asociado con la expresión de GDF-8. En otra
realización, la invención proporciona un método para tratar un
trastorno de la proliferación celular por medio del uso de un agente
que reprime o potencia la actividad de GDF-8.
La superfamilia de TGF-\beta
consta de polipéptidos multifuncionales que controlan la
proliferación, diferenciación y otras funciones en muchos tipos
celulares. Muchos de los péptidos tienen efectos reguladores, tanto
positivos como negativos, sobre otros factores de crecimiento
peptídicos. La homología estructural entre la proteína
GDF-8 de esta invención y los miembros de la
familia de TGF-\beta indica que
GDF-8 es un nuevo miembro de la familia de factores
de crecimiento y diferenciación. Basándose en las actividades
conocidas de muchos de los otros miembros, puede esperarse que el
GDF-8 también posea actividades biológicas que lo
hagan útil como reactivo de diagnóstico y terapéutico.
En particular, ciertos miembros de esta
superfamilia tienen modelos de expresión o poseen actividades que
están relacionadas con la función del sistema nervioso. Por
ejemplo, se ha demostrado que las inhibinas y las activinas se
expresan en el cerebro (Meunier, et al., Proc. Natl. Acad. Sci.,
Estados Unidos, 85:247, 1988; Sawchenko, et al., Nature,
334:615, 1988) y se ha demostrado que la activina es capaz
de funcionar como una molécula de supervivencia de células nerviosas
(Schubert, et al., Nature, 344:868, 1990). Otro miembro de
la familia, particularmente el GDF-1, es específico
para el sistema nervioso en su modelo de expresión (Lee, S.J.,
Proc. Natl. Acad. Sci., Estados Unidos, 88:4250, 1991), y
también se sabe que ciertos miembros distintos de la familia, tales
como Vgr-1 (Lyons, et al., Proc. Natl. Acad. Sci.,
Estados Unidos, 86, 4554, 1989; Jones, et al., Development,
111:531, 1991), OP-1 (Ozkaynak, et al., J.
Biol. Chem., 267:25220, 1992) y BMP-4 (Jones,
et al., Development, 111:531, 1991) se expresan en el
sistema nervioso. Como se sabe que el músculo esquelético produce un
factor o factores que promueven la supervivencia de neuronas
motoras (Brown, Trends Neurosci., 7:10, 1984), la expresión
de GDF-8 en el músculo sugiere que una actividad de
GDF-8 puede ser como un factor trófico para las
neuronas. A este respecto, el GDF-8 puede tener
aplicaciones en el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas,
tales como la esclerosis lateral amiotrófica, o en el mantenimiento
de células o tejidos en cultivo antes del transplante.
El GDF-8 también puede tener
aplicaciones en el tratamiento de procesos de enfermedad en los que
está implicado el músculo, tales como enfermedades
musculodegenerativas o en la reparación de tejidos dañados debido a
traumatismos. A este respecto, muchos otros miembros de la familia
de TGF-\beta también son mediadores importantes de
la reparación de tejidos. Se ha demostrado que el
TGF-\beta tiene efectos notables sobre la
formación de colágeno y que produce una respuesta angiogénica
sorprendente en el ratón recién nacido (Roberts, et al., Proc. Natl.
Acad. Sci., Estados Unidos 83:4167, 1986). También se ha
demostrado que el TGF-\beta inhibe la
diferenciación de mioblastos en cultivo (Massague, et al., Proc.
Natl. Acad. Sci., Estados Unidos 83:8206, 1986). Además, como
los mioblastos pueden usarse como vehículo para suministrar genes
al músculo para una terapia génica, las propiedades del
GDF-8 podrían explotarse para mantener las células
antes de un trasplante o para potenciar la eficacia del proceso de
fusión.
La expresión de GDF-8 en tejido
adiposo también suscita la posibilidad de aplicaciones para el
GDF-8 en el tratamiento de la obesidad o de
trastornos relacionados con la proliferación anormal de adipocitos.
A este respecto, se ha demostrado que el TGF-\beta
es un potente inhibidor de la diferenciación de adipocitos in
vitro (Ignotz y Massague, Proc. Natl. Acad. Sci., Estados
Unidos 82:8530, 1985).
La expresión "substancialmente puro", como
se usa en este documento, se refiere al GDF-8 que
está substancialmente exento de otras proteínas, lípidos,
carbohidratos y otros materiales con los que está asociado de forma
natural. Un especialista en la técnica puede purificar el
GDF-8 usando técnicas convencionales para la
purificación de proteínas. El polipéptido substancialmente puro
producirá una sola banda principal en un gel de poliacrilamida no
reductor. La pureza del polipéptido GDF-8 también
puede determinarse por medio del análisis de la secuencia de
aminoácidos amino-terminal. El polipéptido
GDF-8 incluye fragmentos funcionales del
polipéptido, siempre que se conserve la actividad del
GDF-8. En la invención se incluye péptidos más
pequeños que contienen la actividad biológica del
GDF-8.
GDF-8.
La invención proporciona polinucleótidos que
codifican la proteína GDF-8. Estos polinucleótidos
incluyen secuencias de ADN, ADNc y ARN que codifican
GDF-8. Se entiende que en este documento, se
incluyen todos los polinucleótidos que codifican todo o una porción
de GDF-8, como se indica en la reivindicaciones
1-4, siempre que codifiquen un polipéptido con la
actividad de GDF-8. Tales polinucleótidos incluyen
polinucleótidos naturales, sintéticos y manipulados
intencionadamente. Por ejemplo, el polinucleótido
GDF-8 puede someterse a una mutagénesis de
localización dirigida. La secuencia de polinucleótidos para
GDF-8 también incluye secuencias antisentido. Los
polinucleótidos de la invención incluyen secuencias que están
degeneradas como resultado del código genético. Hay 20 aminoácidos
naturales, la mayoría de los cuales se especifican por más de un
codón. Por lo tanto, en la invención se incluyen todas las
secuencias de nucleótidos degeneradas siempre que la secuencia de
aminoácidos del polipéptido GDF-8 codificado por la
secuencia de nucleótidos permanezca funcionalmente inalterada.
En este documento se describe específicamente una
secuencia de ADN genómico que contiene una porción del gen de
GDF-8. La secuencia contiene una fase de lectura
abierta correspondiente a la región C-terminal
prevista de la proteína precursora de GDF-8. Se
prevé que el polipéptido codificado contenga dos sitios de
procesamiento proteolítico potenciales (KR y RR). La escisión del
precursor en el sitio cadena abajo generaría un fragmento
C-terminal maduro biológicamente activo de 109
aminoácidos con un peso molecular previsto de aproximadamente
12.400. También se describen secuencias de ADNc de
GDF-8 murino y humano de longitud completa. La
proteína
pre-pro-GDF-8 murina
tiene una longitud de 376 aminoácidos, que se codifica por una
secuencia de nucleótidos de 2676 pares de bases, comenzando en el
nucleótido 104 y extendiéndose hasta un codón stop TGA en el
nucleótido 1232. La proteína GDF-8 humana tiene 375
aminoácidos y se codifica por una secuencia de 2743 pares de bases,
comenzando la fase de lectura abierta en el nucleótido 59 y
extendiéndose hasta el nucleótido 1184.
La región C-terminal de
GDF-8 después del supuesto sitio de procesamiento
proteolítico muestra una homología significativa con los miembros
conocidos de la superfamilia de TGF-\beta. La
secuencia de GDF-8 contiene la mayoría de los restos
que están muy conservados en otros miembros de la familia (véase la
figura 3). Al igual que los TGF-\beta y las
inhibinas \beta, GDF-8 contiene un par extra de
restos de cisteína además de las 7 cisteínas encontradas en
prácticamente todos los demás miembros de la familia. Entre los
miembros de la familia conocidos, GDF-8 es el más
homologo a Vgr-1 (identidad de secuencia del 45%)
(véase la figura 4).
Ciertas modificaciones minoritarias de la
secuencia de aminoácidos primaria de GDF-8
recombinante pueden producir proteínas con una actividad
substancialmente equivalente en comparación con el polipéptido
GDF-8 descrito en este documento. Tales
modificaciones pueden ser deliberadas, tal como por mutagénesis de
localización dirigida, o pueden ser espontáneas. Todos los
polipéptidos producidos por estas modificaciones se incluyen en este
documento siempre que aún exista la actividad biológica de
GDF-8. Además, la deleción de uno o más aminoácidos
también puede ocasionar una modificación de la estructura de la
molécula resultante sin alterar significativamente su actividad
biológica. Esto puede conducir al desarrollo de una molécula activa
más pequeña que tendría una mayor utilidad. Por ejemplo, se pueden
retirar los aminoácidos amino o carboxi terminales que no se
requieren para la actividad biológica del
GDF-8.
La secuencia de nucleótidos que codifica el
polipéptido GDF-8 de la invención incluye la
secuencia descrita y variaciones conservativas de la misma. La
expresión "variación conservativa", como se usa en este
documento, denota el reemplazo de un resto aminoacídico por otro
resto biológicamente similar. Los ejemplos de variaciones
conservativas incluyen la substitución de un resto hidrófobo tal
como isoleucina, valina, leucina o metionina por otro, o la
substitución de un resto polar por otro, tal como la substitución
de lisina por arginina, ácido aspártico por glutámico o asparagina
por glutamina, y similares. La expresión "variación
conservativa" también incluye el uso de un aminoácido substituido
en lugar de un aminoácido parenteral no substituido siempre que los
anticuerpos inducidos contra el polipéptido substituido también
presenten una reacción inmunológica con el polipéptido no
substituido.
Las secuencias de ADN de la invención pueden
obtenerse por varios métodos. Por ejemplo, el ADN puede aislarse
usando técnicas de hibridación que son bien conocidas en la
técnica. Éstas incluyen, pero sin limitación: 1) hibridación de
bibliotecas de ADN genómico o ADNc con sondas para detectar
secuencias de nucleótidos homólogas, 2) reacción en cadena de la
polimerasa (PCR) sobre el ADN genómico o el ADNc usando cebadores
capaces de hibridar con la secuencia de ADN de interés, y 3)
selección con anticuerpos de bibliotecas de expresión para detectar
fragmentos de ADN clonados con características estructurales
compartidas.
Preferiblemente, el polinucleótido
GDF-8 de la invención procede de un organismo de
mamífero y, aún más preferiblemente, de un ratón, rata o ser humano.
Los procedimientos de selección que se basan en la hibridación de
ácidos nucleicos hacen posible aislar cualquier secuencia génica de
cualquier organismo, siempre que esté disponible la sonda apropiada.
Pueden sintetizarse químicamente sondas oligonucleotídicas que
correspondan a una parte de la secuencia que codifica la proteína en
cuestión. Esto requiere que se conozcan tramos oligopeptídicos
cortos de la secuencia de aminoácidos. La secuencia de ADN que
codifica la proteína puede deducirse a partir del código genético,
sin embargo, debe tenerse encuentra la degeneración del código. Es
posible realizar una reacción de adición mixta cuando la secuencia
es degenerada. Esto incluye una mezcla heterogénea de ADN de doble
cadena desnaturalizado. Para tal selección, la hibridación
preferiblemente se realiza en ADN monocatenario o ADN bicatenario
desnaturalizado. La hibridación es particularmente útil en la
detección de clones de ADNc derivados de fuentes donde está
presente una cantidad extremadamente baja de secuencias de ARNm en
relación con el polipéptido de interés. En otras palabras, por
medio del uso de condiciones de hibridación rigurosas dirigidas a
evitar la unión no específica, es posible, por ejemplo, permitir la
visualización autorradiográfica de un clon de ADNc específico por
medio de la hibridación del ADN diana con esa única sonda en la
mezcla que es su complemento completo (Wallace, et al., Nucl. Acid.
Res., 9:879, 1981).
El desarrollo de secuencias de ADN específicas
que codifican GDF-8 también pueden obtenerse por:
1) aislamiento de secuencias de ADN bicatenarias a partir del ADN
genómico; 2) fabricación química de una secuencia de ADN para
proporcionar los codones necesarios para el polipéptido de interés;
y 3) síntesis in vitro de una secuencia de ADN de doble
cadena por transcripción inversa del ARNm aislado a partir de una
célula donadora eucariota. En el último caso, finalmente se forma
un complemento de ADN bicatenario de ARNm que generalmente se
denomina ADNc.
De los tres métodos indicados anteriormente para
desarrollar secuencias de ADN específicas para uso en
procedimientos recombinantes, el menos común es el aislamiento de
aislados de ADN genómico. Esto es así especialmente cuando es
deseable obtener la expresión microbiana de polipéptidos de
mamífero debido a la presencia de intrones.
La síntesis de secuencias de ADN frecuentemente
es el método elegido cuando se conoce la secuencia entera de restos
aminoacídicos del producto polipeptídico deseado. Cuando no se
conoce la secuencia entera de restos aminoacídicos del polipéptido
deseado, no es posible la síntesis directa de secuencias de ADN y
el método elegido es la síntesis de secuencias de ADNc. Entre los
procedimientos convencionales para aislar secuencias de ADNc de
interés, se encuentra la formación de bibliotecas de ADNc que
llevan plásmidos o fagos que proceden de la transcripción inversa
del ARNm que es abundante en células donadoras que tienen un alto
nivel de expresión genética. Cuando se usa en combinación con la
tecnología de reacción en cadena de la polimerasa, pueden clonarse
incluso productos de expresión raros. En los casos en los que se
conocen porciones significativas de la secuencia de aminoácidos del
polipéptido, puede emplearse la producción de secuencias de sonda de
ADN o ARN monocatenarias o bicatenarias marcadas que duplican una
secuencia supuestamente presente en el ADNc diana en procedimientos
de hibridación de ADN/ADN que se realizan en copias clonadas del
ADNc que se han desnaturalizado en una forma monocatenaria (Jay, et
al., Nucl. Acid. Res., 11:2325, 1983).
En una biblioteca de expresión de ADNc, tal como
lambda gt11, pueden seleccionarse indirectamente péptidos
GDF-8 con al menos un epítopo, usando anticuerpos
específicos para GDF-8. Tales anticuerpos pueden
obtenerse policlonal o monoclonalmente y usarse para detectar el
producto de expresión indicativo de la presencia del ADNc de
GDF-8.
Pueden expresarse secuencias de ADN que codifican
GDF-8 in vitro por transferencia de ADN al
interior de una célula hospedadora adecuada. Las "células
hospedadoras" son células en las que puede propagarse un vector
y en las que puede expresarse su ADN. La expresión también incluye
cualquier progenie de la célula hospedadora en cuestión. Se entiende
que toda la progenie puede no ser idéntica a la célula parental, ya
que puede haber mutaciones que se producen durante la replicación.
Sin embargo, cuando se usa la expresión "célula hospedadora" se
incluye tal progenie.
En la técnica se conocen métodos de transferencia
estable, lo que significa que el ADN extraño se mantiene de forma
continuada en el hospedador.
En la presente invención, las secuencias
polinucleotídicas de GDF-8 pueden insertarse en un
vector de expresión recombinante. La expresión "vector de
expresión recombinante" se refiere a un plásmido, virus u otro
vehículo conocido en la técnica que se haya manipulado por inserción
o incorporación de las secuencias genéticas de
GDF-8. Tales vectores de expresión contienen una
secuencia promotora que facilita la transcripción eficaz de la
secuencia genética insertada del hospedador. El vector de expresión
típicamente contiene un origen de replicación, un promotor, así como
genes específicos que permiten la selección fenotípica de las
células transformadas. Los vectores adecuados para uso en la
presente invención incluyen, pero sin limitación, el vector de
expresión basado en T7 para la expresión en bacterias (Rosenberg,
et al., Gene, 56:125, 1987), el vector de expresión pMSXND
para la expresión en células de mamífero (Lee y Nathans, J. Biol.
Chem., 263:3521, 1988) y vectores derivados de baculovirus
para la expresión en células de insectos. El segmento de ADN puede
estar presente en el vector unido operativamente a elementos
reguladores, por ejemplo, un promotor, (por ejemplo, los promotores
de T7, metalotioneína I o polihedrina).
Las secuencias polinucleotídicas que codifican
GDF-8 pueden expresarse en procariotas o
eucariotas. Los hospedadores pueden incluir organismos microbianos,
levaduras, insectos y mamíferos. En la técnica son bien conocidos
los métodos de expresión de secuencias de ADN que tienen secuencias
eucariotas o virales en procariotas. En la técnica se conocen
vectores de ADN plasmídico y viral biológicamente funcionales
capaces de expresarse y replicarse en un hospedador. Tales vectores
se usan para incorporar secuencias de ADN de la invención.
Preferiblemente, la región C-terminal madura de
GDF-8 se expresa a partir de un clon de ADNc que
contiene la secuencia codificante entera de GDF-8.
Como alternativa, la porción C-terminal de
GDF-8 puede expresarse como una proteína de fusión
con la región pro de otro miembro de la familia de
TGF-\beta o co-expresarse con otra
región pro (véase, por ejemplo, Hammonds, et al., Molec. Endocrin.
5: 149, 1991; Gray, A., y Mason, A., Science,
247:1328, 1990).
La transformación de una célula hospedadora con
ADN recombinante puede realizarse por técnicas convencionales que
son bien conocidas para los especialistas en la técnica. Cuando el
hospedador es procariota, tal como E. coli, pueden prepararse
células competentes capaces de absorber ADN a partir de células
recogidas después de una fase de crecimiento exponencial y
posteriormente pueden tratarse por el método de CaCl_{2} usando
procedimientos bien conocidos en la técnica. Como alternativa,
pueden usarse MgCl_{2} o RbCl. Si se desea, la transformación
también puede realizarse después de formar un protoplasto de la
célula hospedadora.
Cuando el hospedador es un eucariota, pueden
usarse métodos de transfección de ADN tales como
co-precipitados de fosfato cálcico, procedimientos
mecánicos convencionales tales como microinyección,
electroporación, inserción de un plásmido encerrado en liposomas, o
vectores virales. Las células eucariotas también pueden
cotransformarse con secuencias de ADN que codifiquen el
GDF-8 de la invención, y una segunda molécula de
ADN extraña que codifique un fenotipo selectivo, tal como el gen de
la timidina quinasa del herpes simple. Otro método es el uso de un
vector eucariota viral, tal como el virus simiano 40 (SV40) o el
virus del papiloma bovino, para infectar o transformar
transitoriamente células eucariotas y expresar la proteína. (Véase,
por ejemplo, Eukaryotic Viral Vectors, Cold Spring Harbor
Laboratory, Gluzman ed., 1982).
El aislamiento y la purificación del polipéptido
microbiano expresado o de fragmentos del mismo proporcionados por
la invención, pueden realizarse por medios convencionales que
incluyen cromatografía preparativa y separaciones inmunológicas que
implican anticuerpos monoclonales o policlonales.
\newpage
La invención incluye anticuerpos inmunorreactivos
con el polipéptido GDF-8 o fragmentos funcionales
del mismo. Se proporcionan anticuerpos que constan esencialmente de
anticuerpos monoclonales reunidos con diferentes especificidades
epitópicas, así como distintas preparaciones de anticuerpos
monoclonales. Los anticuerpos monoclonales se obtienen a partir de
fragmentos de la proteína que contienen antígeno por métodos bien
conocidos por los especialistas en la técnica (Kohler, et al.,
Nature, 256:495, 1975). Debe entenderse que la expresión
anticuerpo, como se usa en esta invención, incluye moléculas
intactas así como fragmentos de las mismas, tales como Fab y
F(ab')_{2}, que son capaces de unirse a un determinante
epitópico en GDF-8.
La expresión "trastorno de la proliferación de
células" se refiere a poblaciones de células malignas así como
no malignas que a menudo parecen diferenciarse del tejido
circundante tanto morfológica como genotípicamente. Las células
malignas (es decir, el cáncer) se desarrollan como resultado de un
proceso de múltiples etapas. El polinucleótido GDF-8
que es una molécula antisentido es útil en el tratamiento de
malignidades de diversos sistemas de órganos, particularmente, por
ejemplo, de células del músculo o del tejido adiposo.
Esencialmente, cualquier trastorno que esté etiológicamente
asociado a una expresión alterada de GDF-8 podría
considerarse susceptible de tratamiento con un reactivo supresor de
GDF-8. Uno de tales trastornos es, por ejemplo, un
trastorno proliferativo de células malignas.
La invención proporciona un método para detectar
un trastorno de la proliferación de células del tejido muscular o
adiposo que comprende poner en contacto un anticuerpo anti-
GDF-8 con una célula que se sospecha que tiene un
trastorno asociado con GDF-8 y detectar la unión al
anticuerpo. El anticuerpo reactivo con GDF-8 se
marca con un compuesto que permite la detección de la unión a
GDF-8. Para los fines de la invención, puede usarse
un anticuerpo específico para el polipéptido GDF-8
para detectar el nivel de GDF-8 en fluidos
biológicos y tejidos. Puede usarse cualquier muestra que contenga
una cantidad detectable de antígeno. Una muestra preferida de esta
invención es el tejido muscular. El nivel de GDF-8
en las células sospechosas puede compararse con el nivel en una
célula normal para determinar si el sujeto tiene un trastorno de la
proliferación celular asociado con GDF-8.
Preferiblemente, el sujeto es un ser humano.
Los anticuerpos de la invención pueden usarse en
cualquier sujeto en el que sea deseable administrar inmunodiagnosis
o inmunoterapia in vitro o in vivo. Los anticuerpos de
la invención son adecuados para uso, por ejemplo, en inmunoensayos
en los que pueden utilizarse en fase líquida o unidos a un soporte
en fase sólida. Además, en estos inmunoensayos los anticuerpos
pueden marcarse de forma detectable de diversas formas. Los
ejemplos de tipos de inmunoensayos que pueden utilizar anticuerpos
de la invención son inmunoensayos competitivos y no competitivos en
un formato directo o indirecto. Son ejemplos de tales inmunoensayos
el radioinmunoensayo (RIA) y el ensayo de sandwich (inmunométrico).
La detección de los antígenos usando los anticuerpos de la invención
puede realizarse utilizando inmunoensayos que se realizan en modos
de avance, inverso o simultáneo, incluyendo ensayos
inmunohistoquímicos en muestras fisiológicas. Los especialistas en
la técnica conocerán, o pueden averiguar fácilmente, otros formatos
de inmunoensayo sin una experimentación indebida.
Los anticuerpos de la invención puede unirse a
muchos soportes diferentes y usarse para detectar la presencia de
un antígeno que comprende el polipéptido de la invención. Los
ejemplos de soportes bien conocidos incluyen vidrio, poliestireno,
polipropileno, polietileno, dextrano, nylon, amilasas, celulosas
naturales y modificadas, poliacrilamidas, agarosas y magnetita. La
naturaleza del soporte puede ser soluble o insoluble para los fines
de la invención. Los especialistas en la técnica conocerán otros
soportes adecuados para unir anticuerpos, o podrán determinarlos
usando una experimentación rutinaria.
Hay muchos marcadores diferentes y métodos de
marcaje conocidos para los especialistas habituales en la técnica.
Los ejemplos de los tipos de marcadores que pueden usarse en la
presente invención incluyen enzimas, radioisótopos, compuestos
fluorescentes, metales coloidales, compuestos quimioluminiscentes,
compuestos fosforescentes y compuestos bioluminiscentes. Los
especialistas habituales en la técnica conocerán otros marcadores
adecuados para la unión al anticuerpo, o podrán determinarlos
usando una experimentación rutinaria.
Otra técnica que también puede producir una mayor
sensibilidad consta del acoplamiento de los anticuerpos haptenos de
bajo peso molecular. Estos haptenos después pueden detectarse
específicamente por medio de una segunda reacción. Por ejemplo, es
común usar haptenos tales como biotina, que reacciona con avidina,
o dinitrofenilo, puridoxal y fluoresceína, que puede reaccionar con
anticuerpos anti-hapteno específicos.
En el uso de los anticuerpos monoclonales de la
invención para la detección in vivo del antígeno, el
anticuerpo marcado de forma detectable recibe una dosis que es
eficaz desde el punto de vista diagnóstico. La expresión "eficaz
desde el punto de vista diagnóstico" significa que la cantidad
de anticuerpo monoclonal marcado de forma detectable se administra
en una cantidad suficiente como para permitir la detección del
sitio que tiene el antígeno que comprende un polipéptido de la
invención para el que son específicos los anticuerpos
monoclonales.
La concentración de anticuerpo monoclonal marcado
de forma detectable que se administra debe ser suficiente de tal
forma que la unión a las células que tienen el polipéptido sea
detectable en comparación con el nivel de fondo. Además, es deseable
que el anticuerpo monoclonal marcado de forma detectable se retire
rápidamente del sistema circulatorio para proporcionar la mejor
relación entre la señal diana y la señal de fondo.
En general, la dosificación del anticuerpo
monoclonal marcado de forma detectable para la diagnosis in
vivo variará dependiendo de factores tales como la edad, el sexo
y el grado de enfermedad del individuo. Tales dosificaciones pueden
variar, por ejemplo, dependiendo de si se administran múltiples
inyecciones, de la carga antigénica y de otros factores conocidos
por los especialistas en la técnica.
Para la formación de imágenes de diagnóstico
in vivo, el tipo de instrumento de detección disponible es
un factor importante en la selección de un radioisótopo dado. El
radioisótopo elegido debe tener un tipo de desintegración que sea
detectable para un tipo de instrumento dado. Otro factor importante
en la selección de un radioisótopo para la diagnosis in vivo
es que se minimice la radiación perjudicial con respecto al
hospedador. Idealmente, un radioisótopo usado para la formación de
imágenes in vivo carecerá de emisión de partículas, pero
producirá un gran número de fotones en el intervalo de 140- 250 keV,
que puede detectarse fácilmente por cámaras gamma
convencionales.
En el caso de los radioisótopos de diagnosis
in vivo, pueden unirse a inmunoglobulinas directa o
indirectamente por medio del uso de un grupo funcional intermedio.
Los grupos funcionales intermedios que a menudo se usan para unir
radioisótopos que existen como iones metálicos a inmunoglobulinas
son agentes quelantes bifuncionales tales como el ácido
dietilentriaminopentaacético (DTPA) y el ácido
etilendiaminotetraacético (EDTA), y moléculas similares. Son
ejemplos típicos de iones metálicos que pueden unirse a los
anticuerpos monoclonales de la invención ^{111}In, ^{97}Ru,
^{67}Ga, ^{68}Ga, ^{72}As, ^{89}Zr y ^{201}Tl.
Los anticuerpos monoclonales de la invención
también pueden marcarse con un isótopo paramagnético para fines de
diagnosis in vivo, como en la formación de imágenes de
resonancia magnética (MRI) o resonancia del espín electrónico (ESR).
En general, puede utilizarse cualquier método convencional para
visualizar imágenes de diagnóstico. Normalmente se usan
radioisótopos de emisión gamma y de positrones para la formación de
imágenes con una cámara e isótopos paramagnéticos para MRI. Los
elementos que son particularmente útiles en tales técnicas incluyen
^{157}Gd, ^{55}Mn, ^{162}Dy, ^{52}Cr y ^{56}Fe.
Los anticuerpos monoclonales de la invención
pueden usarse in vitro e in vivo para controlar el
curso de la mejora de una enfermedad asociada con
GDF-8 en un sujeto. De esta manera, por ejemplo,
midiendo el aumento o la reducción en el número de células que
expresan el antígeno que comprende un polipéptido de la invención o
los cambios de la concentración de tal antígeno presente en
diversos fluidos corporales, sería posible determinar si un régimen
terapéutico particular destinado a mejorar la enfermedad asociada
con GDF-8 es eficaz. La expresión "mejorar" se
refiere a una reducción del efecto perjudicial de la enfermedad
asociada con GDF-8 en el sujeto que recibe la
terapia.
La presente invención identifica una secuencia de
nucleótidos que puede expresarse de una manera alterada en
comparación con la expresión en una célula normal, por lo tanto, es
posible diseñar técnicas terapéuticas o de diagnóstico apropiadas
dirigidas a esta secuencia. De esta manera, cuando un trastorno de
la proliferación celular está asociado con la expresión de
GDF-8, pueden usarse secuencias de ácido nucleico
que interfieren con la expresión de GDF-8 a nivel de
la traducción. Esta estrategia utiliza, por ejemplo, un ácido
nucleico antisentido y ribozimas para bloquear la traducción de un
ARNm de GDF-8 específico, enmascarando ese ARNm con
un ácido nucleico antisentido o escindiéndolo con una ribozima.
Tales trastornos incluyen, por ejemplo, enfermedades
neurodegenerativas.
Los ácidos nucleicos antisentido son moléculas de
ADN o ARN que son complementarias a al menos una porción de una
molécula de ARNm específica (Weintraub, Scientific American,
262:40, 1990). En la célula, los ácidos nucleicos antisentido
hibridan con el ARNm correspondiente, formando una molécula
bicatenaria. Los ácidos nucleicos antisentido interfieren con la
traducción del ARNm, ya que la célula no traducirá un ARNm que sea
bicatenario. Se prefieren los oligómeros antisentido de
aproximadamente 15 nucleótidos, ya que se sintetizan fácilmente y es
menos probable que produzcan problemas que las moléculas mayores
cuando se introducen en la célula productora de
GDF-8 diana. El uso de métodos antisentido para
inhibir la traducción in vitro de genes es bien conocido en
la técnica (Marcus-Sakura, Anal. Biochem.,
172:289, 1988).
Las ribozimas son moléculas de ARN que poseen la
capacidad de escindir específicamente otro ARN monocatenario de una
manera análoga a las endonucleasas de restricción de ADN. Por medio
de la modificación de secuencias de nucleótidos que codifican estos
ARN, es posible obtener por ingeniería genética moléculas que
reconozcan secuencias de nucleótidos específicas en una molécula de
ARN y que la escindan (Cech, J. Amer. Med. Assn., 260:3030,
1988). Una ventaja principal de esta estrategia es que, como son
específicos de secuencia, sólo se inactivan los ARNm con secuencias
particulares.
Hay dos tipos básicos de ribozimas,
particularmente de tipo Tetrahymena (Hasselhoff, Nature,
334:585, 1988) y de tipo de "cabeza de martillo". Las
ribozimas de tipo Tetrahymena reconocen secuencias que tienen una
longitud de cuatro bases, mientras que las ribozimas de tipo de
"cabeza de martillo" reconocen secuencias de
11-18 bases de longitud. Cuanto mayor sea la
secuencia de reconocimiento, mayor probabilidad habrá de que la
secuencia aparezca exclusivamente en las especies de ARNm diana.
Por consiguiente, las ribozimas de tipo de cabeza de martillo son
preferibles a las ribozimas de tipo Tetrahymena para inactivar una
especie de ARNm específica y las secuencias de reconocimiento de 18
bases son preferibles a las secuencias de reconocimiento más
cortas.
La presente invención también proporciona una
terapia génica para el tratamiento de trastornos de la
proliferación celular o inmunológicos que están mediados por la
proteína GDF- 8. Tal terapia conseguiría su efecto terapéutico por
medio de la introducción del polinucleótido GDF-8
antisentido en células que tienen el trastorno proliferativo. El
suministro del polinucleótido GDF-8 antisentido
puede conseguirse usando un vector de expresión recombinante tal
como un virus quimérico o un sistema de dispersión coloidal. Es
especialmente preferido para el suministro terapéutico de secuencias
antisentido el uso de liposomas dirigidos.
Los diversos vectores virales que pueden
utilizarse para la terapia génica como se enseña en este documento
incluyen adenovirus, virus del herpes, vaccinia o, preferiblemente,
un virus de ARN tal como un retrovirus. Preferiblemente, el vector
retroviral es un derivado de un retrovirus murino o aviar. Los
ejemplos de vectores retrovirales en los que puede insertarse un
solo gen extraño incluyen, pero sin limitación: el virus de la
leucemia murina de Moloney (MoMuLV), el virus del sarcoma murino de
Harvey (HaMuSV), el virus del tumor mamario murino (MuMTV), y el
Virus del Sarcoma de Rous (RSV). Otros vectores retrovirales
adicionales pueden incorporar múltiples genes. Todos estos vectores
pueden transferir o incorporar un gen para un marcador selectivo de
forma que puedan identificarse y generarse células transducidas.
Por medio de la inserción de una secuencia de GDF-8
de interés en el vector viral, junto con otro gen que codifica el
ligando para un receptor en una célula diana específica, por
ejemplo, el vector adquiere especificidad de diana. Los vectores
retrovirales pueden adquirir especificidad de diana por medio de la
unión, por ejemplo, de un azúcar, un glicolípido o una proteína. La
dirección preferida se consigue usando un anticuerpo para dirigir
el vector retroviral. Los especialistas en la técnica conocerán o
podrán averiguar fácilmente sin experimentación indebida secuencias
polinucleotídicas específicas que pueden insertarse en el genoma
retroviral o unirse a una envuelta viral para permitir el suministro
con especificidad de diana del vector retroviral que contiene el
polinucleótido GDF-8 antisentido.
Como los retrovirus recombinantes son
defectuosos, requieren ayuda para producir partículas de vector
infecciosas. Esta ayuda puede proporcionarse, por ejemplo, por medio
del uso de líneas de células adyuvantes que contienen plásmidos que
codifican todos los genes estructurales del retrovirus bajo el
control de secuencias reguladoras dentro del LTR. Estos plásmidos
carecen de una secuencia de nucleótidos que permite que el
mecanismo de empaquetamiento reconozca un transcrito de ARN para la
encapsidación. Las líneas de células adyuvantes que tienen
deleciones de la señal de empaquetamiento incluyen, por ejemplo,
pero sin limitación, ? 2, PA317 y PA12. Estas líneas celulares
producen viriones vacíos, ya que no se empaqueta ningún genoma. Si
se introduce un vector retroviral en células en las que la señal de
empaquetamiento está intacta pero los genes estructurales se han
reemplazado por otros genes de interés, el vector puede
empaquetarse y puede producirse el virión del vector.
Como alternativa, pueden transferirse
directamente células NIH 3T3 u otras células de cultivo de tejidos
con plásmidos que codifican los genes estructurales retrovirales
gag, pol y env, por transfección convencional con fosfato cálcico.
Estas células después se transfectan con el plásmido del vector que
contiene los genes de interés. Las células resultantes liberan el
vector retroviral en el medio de cultivo.
Otro sistema de liberación dirigido para
polinucleótidos GDF-8 antisentido es un sistema de
dispersión coloidal. Los sistemas de dispersión coloidales incluyen
complejos macromoleculares, nanocápsulas, microesferas, perlas y
sistemas basados en lípidos que incluyen emulsiones de aceite en
agua, micelas, micelas mixtas y liposomas. El sistema coloidal
preferido de esta invención es un liposoma. Los liposomas son
vesículas de membrana artificiales que son útiles como vehículos de
liberación in vitro e in vivo. Se ha demostrado que
las vesículas unilamelares grandes (LUV), que varían en tamaño de
0,2 a 4,0 \mum, pueden encapsular un porcentaje substancial de un
tampón acuoso que contiene macromoléculas grandes. El ARN, el ADN y
los viriones intactos pueden encapsularse en el interior acuoso y
suministrarse a las células en una forma biológicamente activa
(Fraley, et al., Trends Biochem. Sci., 6:77, 1981). Además
de las células de mamífero, se han usado liposomas para suministrar
polinucleótidos a células vegetales, a levaduras y a células
bacterianas. Para que un liposoma sea un vehículo de transferencia
génica eficaz, deben estar presentes las siguientes características:
(1) la encapsulación de los genes de interés a alta eficacia aunque
sin comprometer su actividad biológica; (2) la unión preferente y
substancial a una célula diana en comparación con células no diana;
(3) el suministro del contenido acuoso de la vesícula al citoplasma
de la célula diana a una alta eficacia; y (4) la expresión correcta
y eficaz de la información genética (Mannino, et al.,
Biotechniques, 6:682, 1988).
La composición del liposoma normalmente es una
combinación de fosfolípidos, particularmente fosfolípidos con una
alta temperatura de transición de fase, normalmente en combinación
con esteroides, especialmente colesterol. También pueden usarse
otros fosfolípidos u otros lípidos. Las características físicas de
los liposomas dependen del pH, de la intensidad iónica y de la
presencia de cationes divalentes.
Los ejemplos de lípidos útiles en la producción
de liposomas incluyen compuestos de fosfatidilo, tales como
fosfatidilglicerol, fosfatidilcolina, fosfatidilserina,
fosfatidiletanolamina, esfingolípidos, cerebrósidos y gangliósidos.
Son particularmente útiles los diacilfosfatidilgliceroles, donde el
resto lipídico contiene de 14 a 18 átomos de carbono,
particularmente de 16 a 18 átomos de carbono, y está saturado. Los
fosfolípidos ilustrativos incluyen fosfatidilcolina de huevo,
dipalmitoilfosfatidilcolina y diestearoilfosfatidilcolina.
La dirección de los liposomas puede clasificarse
basándose en factores anatómicos y mecánicos. La clasificación
anatómica se basa en el nivel de selectividad, por ejemplo, con
especificidad de órganos, con especificidad de células y con
especificidad de orgánulos. La dirección mecánica puede
distinguirse basándose en si es pasiva o activa. La dirección pasiva
utiliza la tendencia natural de los liposomas a distribuirse en
células del sistema reticuloendotelial (RES) en órganos que
contienen capilares sinusoidales. Por otra parte, la dirección
activa implica la alteración del liposoma por acoplamiento del
liposoma a un ligando específico tal como un anticuerpo monoclonal,
azúcar, glicolípido o proteína, o cambiando la composición o el
tamaño del liposoma para conseguir la dirección a órganos y tipos
celulares distintos de los sitios de localización naturales.
La superficie del sistema de liberación dirigido
puede modificarse de una diversidad de formas. En el caso de un
sistema de liberación dirigido por liposomas, pueden incorporarse
grupos lipídicos en la bicapa lipídica del liposoma para mantener el
ligando de dirección en asociación estable con la bicapa liposomal.
Pueden usarse diversos grupos de unión para unir las cadenas
lipídicas al ligando de dirección.
Debido a la expresión de GDF-8 en
el tejido muscular y adiposo, hay una diversidad de aplicaciones
usando el polipéptido, polinucleótido y anticuerpos de la invención,
relacionadas con estos tejidos. Tales aplicaciones incluyen el
tratamiento de trastornos de la proliferación celular que implican
estos y otros tejidos, tales como el tejido neural. Además, el
GDF-8 puede ser útil en diversos procedimientos de
terapia génica.
Los datos del ejemplo 6 demuestran que el gen
GDF-8 humano está localizado en el cromosoma 2.
Comparando la localización cromosómica del GDF-8 con
las posiciones del mapa de diversos trastornos humanos, sería
posible determinar si las mutaciones en el gen GDF-8
están implicadas en la etiología de enfermedades humanas. Por
ejemplo, se ha demostrado que una forma recesiva autosómica de la
esclerosis lateral amiotrófica juvenil se localiza en el cromosoma 2
(Hentati, et al., Neurology, 42 [Suppl.3]:201, 1992). Una
localización más precisa del GDF-8 y el análisis del
ADN de estos pacientes puede indicar que el GDF-8,
de hecho, es el gen afectado en esta enfermedad. Además, el
GDF-8 es útil para distinguir el cromosoma 2 de
otros cromosomas.
Los siguientes ejemplos pretenden ilustrar pero
no limitar la invención. Aunque son típicos de los que podrían
usarse, como alternativa pueden usarse otros procedimientos
conocidos por los especialistas en la técnica.
Para identificar un nuevo miembro de la
superfamilia de TGF-_{\beta}, se diseñaron
oligonucleótidos degenerados que correspondían a dos regiones
conservadas entre los miembros de la familia conocidos: una región
que abarcaba los dos restos de triptófano conservados en todos los
miembros de la familia excepto MIS y otra región que abarcaba los
restos de cisteína intactos cerca del extremo C. Estos cebadores se
usaron para reacciones en cadena de la polimerasa sobre ADN genómico
de ratón seguido de subclonación de los productos de PCR usando
sitios de restricción puestos en los extremos 5' de los cebadores,
selección de colonias de E. coli individuales que llevaban
estos insertos subclonados, y uso de una combinación de análisis de
secuenciación aleatoria e hibridación para eliminar miembros
conocidos de la superfamilia.
GDF-8 se identificó a partir de
una mezcla de productos de PCR obtenidos con los cebadores
SJL141:
5'-CCGGAATTCGGITGG(G/C/A)A(G/A/T/C)(A/G)A(T/C)TGG(A/G)TI
(A/G)TI(T/G)CICC-3'(SEC ID Nº
1)
SJL147:
5'-CCGGAATTC(G/A)CAI(G/C)C(G/A)CA(G/A)CT(G/A/T/C)TCIACI(G/A)(T/C)CAT-3'
(SEC ID Nº 2)
La PCR usando estos cebadores se realizó con 2
\mug de ADN genómico de ratón a 94ºC durante 1 minuto, a 50ºC
durante 2 minutos y a 72ºC durante 2 minutos, durante 40
ciclos.
Se purificaron en gel productos de PCR de
aproximadamente 280 pb, se digirieron con Eco RI, se purificaron en
gel de nuevo y se subclonaron en el vector Bluescript (Stratagene,
San Diego, CA). Se seleccionaron colonias bacterianas que llevaban
subclones individuales en placas de microtitulación de 96 pocillos
y se prepararon múltiples réplicas cultivando las células en placas
sobre nitrocelulosa. Los filtros replicados se hibridaron con sondas
que representaban miembros conocidos de la familia, y se preparó
ADN a partir de colonias que no hibridaban para el análisis de la
secuencia.
La combinación de cebadores de SJL141 y SJL147,
que codifica las secuencias de aminoácidos
GW(H/Q/N/K/D/E)
(D/N)W(V/I/M)(V/I/M)(A/S)P (SEC ID Nº 9) y M(V/I/M/T/A)V(D/E)SC(G/A)C (SEC ID Nº 10), respectivamente, produjo cuatro secuencias identificadas previamente (BMP-4, inhibina \betaB, GDF-3 y GDF-5) y una nueva secuencia, que se denominó GDF-8, entre 110 subclones analizados.
(D/N)W(V/I/M)(V/I/M)(A/S)P (SEC ID Nº 9) y M(V/I/M/T/A)V(D/E)SC(G/A)C (SEC ID Nº 10), respectivamente, produjo cuatro secuencias identificadas previamente (BMP-4, inhibina \betaB, GDF-3 y GDF-5) y una nueva secuencia, que se denominó GDF-8, entre 110 subclones analizados.
El GDF-8 humano se aisló usando
los cebadores:
ACM13:
5'-CGCGGATCCAGAAGTCAAGGRGACACAGACACAC-3'
(SEC ID Nº 3);
y
ACM14:
5'-CGCGGATCCTCCTCATGAGCACCCACAGCGGTC-3'
(SEC ID Nº 4)
La PCR que usaba estos cebadores se realizó con
un \mug de ADN genómico humano a 94ºC durante 1 minuto, a 58ºC
durante 2 minutos y a 72ºC durante 2 minutos, durante 30 ciclos. El
producto de PCR se digirió con Bam HI, se purificó en gel y se
subclonó en el vector Bluescript (Stratagene, San Francisco,
CA).
Para determinar el modelo de expresión de
GDF-8, se seleccionaron muestras de ARN preparadas
a partir de un diversidad de tejidos adultos por análisis de
Northern. El aislamiento de ARN y el análisis de Northern se
realizaron como se ha descrito previamente (Lee, S.J., Mol.
Endocrinol., 4:1034, 1990) con la excepción de que la
hibridación se realizó en 5X SSPE, sulfato de dextrano al 10%,
formamida al 50%, SDS al 1%, 200 \mug/ml de ADN de salmón y 0,1%
de cada uno de los siguientes: albúmina de suero bovino, ficoll y
polivinilpirrolidona. Se sometieron a electroforesis cinco
microgramos de ARN seleccionado con respecto a poli A dos veces
preparado a partir de cada tejido (excepto en el caso del músculo,
para el que sólo se usaron 2 \mug de ARN) en geles de
formaldehído, se sometieron a inmunotransferencia y se sondaron con
GDF-8. Como se muestra en la figura 1, la sonda de
GDF-8 detectó una sola especie de ARNm expresada a
niveles máximos en el músculo y a niveles significativamente menores
en el tejido adiposo.
Para obtener un segmento mayor del gen de
GDF-8, se seleccionó una biblioteca genómica de
ratón con una sonda derivada del producto de PCR de
GDF-8. En la figura 2a se muestra la secuencia
parcial de un clon genómico de GDF-8. La secuencia
contiene una fase de lectura abierta que corresponde a la región
C-terminal prevista de la proteína precursora de
GDF-8. La secuencia de GDF-8
prevista contiene dos sitios de procesamiento proteolítico
potenciales, que están recuadrados. La escisión del precursor en el
segundo de estos sitios generaría un fragmento
C-terminal maduro de 109 aminoácidos de longitud
con un peso molecular previsto de 12.400. La secuencia parcial del
GDF-8 humano se muestra en la figura 2b. Asumiendo
que no hay errores inducidos por PCR durante el aislamiento del clon
humano, las secuencias de aminoácidos humana y de ratón en esta
región tienen una identidad del 100%.
La región C-terminal de
GDF-8 que sigue al supuesto sitio de procesamiento
proteolítico muestra una homología significativa con los miembros
conocidos de la superfamilia de TGF-\beta (figura
3). La figura 3 muestra la alineación de las secuencias
C-terminales de GDF-8 con las
regiones correspondientes de GDF-1 humano (Lee,
Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:4250- 4254, 1991),
BMP-2 y 4 humanos (Wozney, et al., Science,
242:1528-1534, 1988), Vgr-1
humano (Celeste, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA,
87:9843-9847, 1990), OP-1
humano (Ozkaynak, et al., EMBO J.,
9:2085-2093, 1990), BMP-5
humano (Celeste, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA,
87:9843-9847, 1990), BMP-3
humano (Wozney, et al., Science,
242:1528-1534, 1988), MIS humano (Cate, et
al., Cell, 45:685-698, 1986), inhibinas alfa,
\betaA y \betaB humanas (Mason, et al., Biochem, Biophys. Res.
Commun., 135:957-964, 1986),
TGF-\beta1 humano (Derynck, et al., Nature,
316:701-705, 1985),
TGF-\beta2 humano (deMartin, et al., EMBO J.,
6:3673-3677, 1987), y
TGF-\beta3 humano (ten Dijke, et al., Proc. Natl.
Acad. Sci. USA, 85:4715-4719, 1988). Los
restos de cisteína conservados están recuadrados. Las rayas denotan
huecos introducidos para maximizar la alineación.
GDF-8 contiene la mayoría de los
restos que están muy conservados en otros miembros de la familia,
incluyendo los siete restos de cisteína con sus separaciones
características. Al igual que los TGF-\beta y las
inhibinas \beta, el GNF-8 también contiene dos
restos de cisteína adicionales. En el caso del
TGF-\beta2, se sabe que estos dos restos de
cisteína adicionales forman un enlace disulfuro intramolecular
adicional (Daopin, et al., Science, 257:369, 1992;
Schlunegger y Grutter, Nature, 358:430, 1992).
La figura 4 muestra las homologías de aminoácidos
entre los diferentes miembros de la superfamilia de
TGF-\beta. Los números representan los porcentajes
de identidades de aminoácidos entre cada para calculados desde la
primera cisteína conservada hasta el extremo C. Los recuadros
representan homologías entre miembros muy relacionados dentro de
subgrupos particulares. En esta región, GDF-8 es el
más homólogo a Vgr-1 (con una identidad de
secuencias del 45%).
Para aislar clones de ADNc de longitud completa
que codifican GDF-8 murino y humano, se prepararon
bibliotecas de ADNc en el vector lambda ZAP II (Stratagene) usando
ARN preparado a partir de músculo esquelético. A partir de 5 \mug
de ARN seleccionado con respecto a poli A dos veces preparado a
partir de músculo murino y humano, se construyeron bibliotecas de
ADNc que constaban de 4,4 millones y 1,9 millones de fagos
recombinantes, respectivamente, de acuerdo con las instrucciones
proporcionadas por Stratagene. Estas bibliotecas se seleccionaron
sin amplificación. La selección de bibliotecas y la caracterización
de los insertos de ADNc se realizaron como se ha descrito
previamente (Lee, Mol. Endocrinol,
4:1034-1040).
A partir de 2,4 x 10^{6} fagos recombinantes
seleccionados a partir de la biblioteca de ADNc de músculo murino,
se identificaron más de 280 fagos positivos usando una sonda de
GDF-8 murina derivada de un clon genómico, como se
describe en el ejemplo 1. La secuencia de nucleótidos entera del
inserto de ADNc más largo analizado se muestra en la figura 5a y en
la SEC ID Nº 11. La secuencia de 2676 pares de bases contiene una
sola fase de lectura abierta larga que comienza con un codón de
metionina en el nucleótido 104 y que se extiende hasta un codón stop
TGA en el nucleótido 1232. Cadena arriba del supuesto codón de
iniciación de metionina hay un codón stop en fase en el nucleótido
23. la proteína
pre-pro-GDF-8
prevista tiene una longitud de 376 aminoácidos. La secuencia
contiene un núcleo de aminoácidos hidrófobos en el extremo N que
sugiere un péptido señal para la secreción (figura 6a), un sitio de
N-glicosilación potencial en la asparagina 72, un
supuesto sitio de escisión proteolítica RXXR en los aminoácidos
264-267, y una región C-terminal que
muestra una homología significativa con los miembros conocidos de
la superfamilia de TGF-\beta. La escisión de la
proteína precursora en el supuesto sitio RXXR generaría un
fragmento GDF-8 C-terminal maduro
con una longitud de 109 aminoácidos con un peso molecular previsto
de aproximadamente 12.400.
A partir de 1,9 x 10^{6} fagos recombinantes
seleccionados a partir de la biblioteca de ADNc de músculo humano,
se identificaron 4 fagos positivos usando una sonda de
GDF-8 humana obtenida por reacción en cadena de la
polimerasa sobre ADN genómico humano. La secuencia de nucleótidos
entera del inserto de ADNc más largo se muestra en la figura 5b y en
la SEC ID Nº 13. La secuencia de 2743 pares de bases contiene una
sola fase de lectura abierta larga que comienza con un codón de
metionina en el nucleótido 59 y que se extiende hasta un codón stop
TGA en el nucleótido 1184. La proteína
pre-pro-GDF-8
prevista tiene una longitud de 375 aminoácidos. La secuencia
contiene un núcleo de aminoácidos hidrófobos en el extremo N, que
sugiere un péptido señal para la secreción (figura 6b), un sitio de
N-glicosilación potencial en la asparagina 71, y un
supuesto sitio de escisión proteolítica RXXR en los aminoácidos
263-266. La figura 7 muestra una comparación de las
secuencias de aminoácidos de GDF-8 murino
(superior) y humano (inferior) previstas. Los números indican las
posiciones de los aminoácidos con respecto al extremo N. Las
identidades entre las dos secuencias se indican por una línea
vertical. Los GDF-8 murino y humano tienen una
identidad de aproximadamente el 94% en las regiones pro previstas y
una identidad del 100% después de los sitios de escisión RXXR
previstos.
Para preparar anticuerpos contra
GDF-8, el antígeno GDF-8 se expresó
como una proteína de fusión en bacterias. Se insertó una porción de
ADNc de GDF-8 murino que incluía los aminoácidos
268-376 (región madura) en el vector pRSET
(Invitrogen) de tal forma que la secuencia codificante de
GDF-8 se pusiera en fase con el codón de iniciación
de metionina presente en el vector; la construcción resultante creó
una fase de lectura abierta que codificaba una proteína de fusión
con un peso molecular de aproximadamente 16.600. La construcción de
fusión se utilizó para transformar células BL21 (DE3) (pLysS) y la
expresión de la proteína de fusión se indujo por tratamiento con
isopropiltio-\beta- galactósido como se describe
(Rosenberg, et al., Gene, 56:125-135). La
proteína de fusión después se purificó por cromatografía con
quelatos metálicos de acuerdo con las instrucciones proporcionadas
por invitrogen. En la figura 8 se muestra un gel teñido con azul de
Coomassie de proteínas de fusión purificadas y no purificadas.
La proteína de fusión purificada se usó para
inmunizar tanto conejos como pollos. La inmunización de conejos se
realizó por Spring Valley Labs (Sykesville, MD), y la inmunización
de pollos se realizó por HRP, Inc. (Denver, PA). El análisis de
Western de sueros tanto de conejos inmunizados como de pollos
inmunizados demostró la presencia de anticuerpos dirigidos contra la
proteína de fusión.
Para expresar GDF-8 en células de
mamífero, la secuencia de ADNc de GDF-8 murino de
los nucleótidos 48-1303 se clonó en las dos
orientaciones cadena abajo del promotor de la metalotioneína I en
el vector de expresión pMSXND; este vector contiene señales de
procesamiento derivadas de SV40, un gen de la dihidrofolato
reductasa, y un gen que confiere a resistencia al antibiótico G418
(Lee y Nathans, J. Biol. Chem.
263:3251-3527). Las construcciones
resultantes se transfirieron a células de ovario de hámster chino y
los transfectantes estables se seleccionaron en presencia de G418.
Se dializaron dos mililitros de medio acondicionado preparado a
partir de células resistente a G418, se liofilizaron, se sometieron
a electroforesis en condiciones reductoras desnaturalizantes, se
transfirieron a nitrocelulosa y se incubaron con anticuerpos
anti-GDF-8 (descritos anteriormente)
y [^{125}I]yodoproteína A.
Como se muestra en la figura 9, los anticuerpos
GDF-8 de conejo (a una dilución de 1:500)
detectaron una proteína de aproximadamente el peso molecular
previsto para el fragmento C-terminal maduro de
GDF-8 en el medio acondicionado de células
transfectadas con una construcción en la que el
GDF-8 se había clonado en la orientación correcta
(con sentido) con respecto al promotor de metalotioneína (calle 2);
esta banda no se detecto en una muestra similar preparada a partir
de células transfectadas con una construcción de control
antisentido (calle 1). Se obtuvieron resultados similares usando
anticuerpos preparados en pollos. Por lo tanto, el
GDF-8 se secreta y se procesa proteolíticamente por
estas células de mamífero transfectadas.
Para determinar el modelo de
GDF-8, se sometieron a un análisis de Northern 5
\mug de ARN seleccionado con respecto a poli A dos veces preparado
a partir de una diversidad de fuentes de tejido murino. Como se
muestra en la figura 10a (y como se ha demostrado previamente en el
ejemplo 2), la sonda de GDF-8 detectó una sola
especie de ARNm presente casi exclusivamente en el músculo
esquelético entre un gran número de tejidos adultos inspeccionados.
En exposiciones más largas de la misma mancha de transferencia, se
observaron niveles significativamente menores pero detectables de
ARNm de GDF-8 en grasa, cerebro, timo, corazón y
pulmón. Por lo tanto, estos resultados confirman el alto grado de
especificidad de la expresión de GDF-8 en el músculo
esquelético. También se detectó ARNm de GDF-8 en
embriones de ratón a las dos edades gestacionales (día 12,5 y día
18,5 post-coital) examinadas, pero no en placentas
en las diversas fases de desarrollo (figura 10b).
Para establecer la localización cromosómica del
GDF-8, se analizaron muestras de ADN de híbridos de
células somáticas de humano/roedor (Drwinga, et al., Genomics,
16:311- 413, 1993; Dubois y Naylor, Genomics,
16:315-319, 1993) por reacción en cadena de
la polimerasa seguido de transferencia de Southern. La reacción en
cadena de la polimerasa se realizó usando el cebador nº 83, 5'-
CGCGGATCCGTGGATCTAAATGAGAACAGTGAGC-3' (SEC ID Nº 15)
y el cebador nº 84, 5'-
CGCGAATTCTCAGGTAATGATTGTTTCCGTTGTAGCG-3' (SEC ID Nº
16) durante 40 ciclos a 90ºC durante 2 minutos, a 60ºC durante 1
minuto y a 72ºC durante 2 minutos. Estos cebadores corresponden a
los nucleótidos 119 y 143 (flanqueados por una secuencia de
reconocimiento Bam H1), y a los nucleótidos 394 a 418 (flanqueados
por una secuencia de reconocimiento Eco R1), respectivamente, en la
secuencia de ADNc del GDF-8 humano. Los productos de
PCR se sometieron a electroforesis en geles de agarosa, se
sometieron a inmunotransferencia y se sondearon con el
oligonucleótido nº 100,
5'-ACACTAAATCTTCAAGAATA-3' (SEC ID
Nº 17), que corresponde a una secuencia interna a la región
flanqueada por el cebador nº 83 y nº 84. Los filtros se hibridaron
en 6 X SSC, 1 X solución de Denhardt, 100 \mug/ml de ARN de
transferencia de levadura y pirofosfato sódico al 0,05% a 50ºC.
Como se muestra en la figura 11, la sonda con
especificidad humana detectó una banda del tamaño previsto
(aproximadamente 320 pares de bases) en la muestra de control
positivo (ADN genómico humano total) y en una sola muestra de ADN
del panel híbrido de humano/roedor. Esta señal positiva corresponde
al cromosoma 2 humano. El cromosoma humano contenido en cada una de
las líneas de células híbridas se identifica en la parte superior
de cada una de las primeras 24 calles (1-22, X e
Y). En las calles denominadas M, CHO, y H, la plantilla de ADN de
partida era ADN genómico total procedente de ratón, hámster y
humano, respectivamente. En la calle marcada como B1, no se usó
ninguna plantilla de ADN. Los números de la izquierda indican las
movilidades de los patrones de ADN. Estos datos demuestran que el
gen GDF-8 humano está localizado en el cromosoma
2.
La SEC ID Nº 1 es la secuencia de ácido nucleico
para el clon SJL141.
La SEC ID Nº 2 es la secuencia de ácido nucleico
para el clon SJL147.
La SEC ID Nº 3 es la secuencia de ácido nucleico
para el clon ACM13.
La SEC ID Nº 4 es la secuencia de ácido nucleico
para el clon ACM14.
La SEC ID Nº 5 es la secuencia de nucleótidos
parcial y la secuencia de aminoácidos deducida para el
GDF-8 murino.
La SEC ID Nº 6 es la secuencia de aminoácidos
parcial deducida para el GDF-8 murino.
La SEC ID Nº 7 es la secuencia de nucleótidos
parcial y la secuencia de aminoácidos deducida para el
GDF-8 humano.
La SEC ID Nº 8 es la secuencia de aminoácidos
parcial deducida para el GDF-8 humano.
La SEC ID Nº 9 es la secuencia de aminoácidos
para el cebador SJL141.
La SEC ID Nº 10 es la secuencia de aminoácidos
para el cebador SJL147.
La SEC ID Nº 11 es la secuencia de nucleótidos y
de aminoácidos deducida para el GDF-8 murino.
La SEC ID Nº 12 es la secuencia de aminoácidos
deducida para el GDF-8 murino.
La SEC ID Nº 13 es la secuencia de nucleótidos y
de aminoácidos deducida para el GDF-8 humano.
La SEC ID Nº 14 es la secuencia de aminoácidos
deducida para el GDF-8 humano.
Las SEC ID Nº 15 y 16 son secuencias de
nucleótidos para los cebadores nº 83 y nº 84, respectivamente, que
se usaron para localizar el GDF-8 humano en híbridos
de células somáticas de humano/roedor.
La SEC ID Nº 17 es la secuencia de nucleótidos
del oligonucleótido nº 100 que corresponde a una secuencia interna
a la región flanqueada por el cebador nº 83 y nº 84.
\newpage
(1) INFORMACIÓN GENERAL:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- SOLICITANTE: THE JOHNS HOPKINS UNIVERSITY
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TÍTULO DE LA INVENCIÓN: FACTOR-8 DE DIFERENCIACIÓN DEL CRECIMIENTO
\vskip0.666000\baselineskip
- (iii)
- NÚMERO DE SECUENCIAS: 17
\vskip0.666000\baselineskip
- (iv)
- DIRECCIÓN DE CORRESPONDENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- DESTINATARIO: Spensley Horn Jubas & Lubitz
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CALLE: 1880 Century Park East - Suite 500
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: Los Ángeles
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- ESTADO: California
\vskip0.333000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: Estados Unidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL: 90067
\vskip0.666000\baselineskip
- (v)
- FORMA LEGIBLE POR ORDENADOR:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- TIPO DE MEDIO: Disco flexible
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- ORDENADOR: PC IBM compatible
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- SOFTWARE: PatentIn Release Nº. 1.0, Versión Nº. 1.25
\vskip0.666000\baselineskip
- (vi)
- DATOS DE LA SOLICITUD ACTUAL:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NÚMERO DE SOLICITUD: PCT
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- FECHA DE PRESENTACIÓN: 18-MAR-1994
\vskip0.666000\baselineskip
- (viii)
- INFORMACIÓN DEL AGENTE/MANDATARIO:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: Wetherell, Jr., Ph.D., John R.,
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- NÚMERO DE REGISTRO: 31.678
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE REFERENCIA/EXPEDIENTE: FD-3413 CIP PCT
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- INFORMACIÓN DE TELECOMUNICACIÓN:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- TELÉFONO: (619) 455-5100
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- FAX: (619) 455-5110
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 1:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 35 pares de bases
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CADENA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: SJL141
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: base modificada
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..35
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /mod_base= i /nota-``"B" se define como "I" (inosina)''
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 1:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
\dddseqskipCCGGAATTCG GBTGGVANRA YTGGRTBRTB KCBCC
\hfill35
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 2:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 33 pares de bases
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CADENA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: SJL147
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..33
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: base modificada
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..35
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /mod_base= i /nota-``"B" se define como "I" (inosina)''
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 2:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
\dddseqskipCCGGAATTCR CABSCRCARC TNTCBACBRY CAT
\hfill33
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 3:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 32 pares de base
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CADENA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: ACM13
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..32
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 3:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
\dddseqskipCGCGGATCCA GAAGTCAAGG TGACAGACAC AC
\hfill32
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 4:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 33 pares de base
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CADENA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: ACM14
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..33
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 4:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
\dddseqskipCGCGGATCCT CCTCATGAGC ACCCACAGCA GTC
\hfill33
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 5:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 550 pares de base
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CADENA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: GDF-8 de ratón
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 59..436
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 5:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 6:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 126 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 6:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 7:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 326 pares de base
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CADENA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: GDF-8 humano
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 3..326
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 7:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 8:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 108 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 8:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 9:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 9 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CADENA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: SJL141
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Péptido
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..9
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= "His = His, Asn, Lys, Asp o Glu; Asp = Asp o Asn; Val = Val, Ile o Met; Ala = Ala o Ser."
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 9:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Gly Trp His Asp Trp Val Val Ala Pro}
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 10:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 8 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CADENA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: SJL147
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Péptido
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..8
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= "Ile = Ile, Val, Met, Thr o Ala; Asp = Asp o Glu; Gly = Gly o Ala."
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 10:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Met Ile Val Asp Ser Cys Gly Cys}
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 11:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 2676 pares de bases
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CADENA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: GDF-8 Murino
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 104..1231
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 11:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 12:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 376 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 12:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 13:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 2743 pares de base
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CADENA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: GDF Humano
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 59..1183
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 13:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 14:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 375 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 14:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 15:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 34 pares de bases
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CADENA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: Nº83
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..34
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 15:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
\dddseqskipCGCGGATCCG TGGATCTAAA TGAGAACAGT GAGC
\hfill34
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 16:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 37 pares de bases
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CADENA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: Nº84
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..37
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 16:
\vskip0.333000\baselineskip
\dddseqskipCGCGAATTCT CAGGTAATGA TTGTTTCCGT TGTAGCG
\hfill37
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 17:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CADENA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: Nº100
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 17:
\vskip0.333000\baselineskip
\dddseqskipACACTAAATC TTCAAGAATA
\hfill20
(1) INFORMACIÓN GENERAL:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- SOLICITANTE: John Hopkins University Scholl of Medicine 720 Rutland Avenue, Baltimore, Maryland 21205, United States of America
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TÍTULO DE LA INVENCIÓN: FACTOR-8 DE DIFERENCIACIÓN DEL CRECIMIENTO
\vskip0.666000\baselineskip
- (iii)
- NÚMERO DE SECUENCIAS: 32
\vskip0.666000\baselineskip
- (iv)
- FORMA LEGIBLE POR ORDENADOR:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- TIPO DE MEDIO: Disco
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- ORDENADOR: IBM Compatible
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- SISTEMA OPERATIVO: Windows 95
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- SOFTWARE: FastSEQ para Windows Versión 2.0
\vskip0.666000\baselineskip
- (v)
- DATOS DE LA SOLICITUD ACTUAL:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NÚMERO DE SOLICITUD: 08/525.596
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- FECHA DE PRESENTACIÓN: 19-SEP-1995
- C)
- CLASIFICACIÓN:
\vskip0.666000\baselineskip
- (vi)
- DATOS DE LA SOLICITUD ANTERIOR:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NUMERO DE SOLICITUD: PCT/US94/07762
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- FECHA DE PRESENTACIÓN: 08-JUL-1994
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 1:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 35 pares de bases
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CADENA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN genómico
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: SJL141
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Base modificada
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1...35
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 1:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
\dddseqskipCCGGAATTCG GBTGGVANRA YTGGRTBRTB KCBCC
\hfill35
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 2:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 33 pares de bases
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CADENA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN genómico
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: SJL147
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1...33
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 2:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
\dddseqskipCCGGAATTCR CABSCRCARC TNTCBACBRY CAT
\hfill33
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 3:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 32 pares de bases
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CADENA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: ACM13
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1...32
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 3:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
\dddseqskipCGCGGATCCA GAAGTCAAGG TGACAGACAC AC
\hfill32
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 4:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 33 pares de bases
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CADENA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN genómico
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: ACM14
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1...33
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 4:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
\dddseqskipCGCGGATCCT CCTCATGAGC ACCCACAGCG GTC
\hfill33
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 5:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 550 pares de bases
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CADENA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: GDF-8 de ratón
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 59...436
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 5:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 6:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 126 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 6:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 7:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 326 pares de bases
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CADENA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: GDF-8 humano
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 3...326
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 7:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 8:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 108 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 8:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 9:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 9 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: SJL141
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Péptido
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1...9
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= "Xaa en la posición 3=his, Gln, Asn, Lys, Asp o Glu; Xaa en la posición 4=Asp o Asn; Xaa en la posición 6 y 7=Val, Ile o Met; Ala = Xaa en la posición 8=Ala o Ser"
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 9:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Gly Trp Xaa Xaa Trp Xaa Xaa Xaa Pro}
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 10:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 8 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: SJL147
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Péptido
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1...8
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= "Xaa en la posición 2=Ile, Val, Met, Thr o Ala; Xaa en la posición 4=Asp o Glu; Xaa en la posición 7=Gly o Ala"
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 10:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Met Xaa Val Xaa Ser Cys Xaa Cys}
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 11:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 2676 pares de bases
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CADENA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN genómico
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: GDF-8 murino
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 104...1231
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 11:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 12:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 376 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 12:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 13:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 2743 pares de bases
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CADENA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN genómico
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: GDF-8 humano
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 59...1183
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 13:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 14:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 375 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 14:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 15:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 34 pares de bases
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CADENA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN genómico
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: Nº83
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..34
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- OTRAS:
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 15:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
\dddseqskipCGCGGATCCG TGGATCTAAA TGAGAACAGT GAGC
\hfill34
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 16:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 37 pares de bases
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CADENA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN genómico
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: Nº84
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..37
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- OTRAS:
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 16:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
\dddseqskipCGCGAATTCT CAGGTAATGA TTGTTTCCGT TGTAGCG
\hfill37
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 17:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CADENA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN genómico
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: Nº100
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..20
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- OTRAS:
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 17:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
\dddseqskipACACTAAATC TTCAAGAATA
\hfill20
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 18:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 123 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: GDF-1
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Proteína
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..123
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- OTRAS:
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 18:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 19:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 118 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: BMP-2
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Proteína
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..118
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- OTRAS:
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 19:
\newpage
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 20:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 118 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: BMP-4
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Proteína
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..118
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- OTRAS:
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 20:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 21:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 119 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.333000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: Vgr-1
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Proteína
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..119
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- OTRAS:
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 21:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 22:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 119 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: OP-1
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Proteína
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..119
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- OTRAS:
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 22:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 23:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 119 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: BMP-5
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Proteína
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..119
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- OTRAS:
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 23:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 24:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 120 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: BMP-3
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Proteína
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..120
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- OTRAS:
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 24:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 25:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 116 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: MIS
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Proteína
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..116
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- OTRAS:
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 25:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 26:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 122 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: Inhibina-alfa
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Proteína
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..122
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- OTRAS:
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 26:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 27:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 122 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: Inhibina-beta-alfa
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Proteína
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..122
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- OTRAS:
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 27:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 28:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 121 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: Inhibina-beta-alfa
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Proteína
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..121
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- OTRAS:
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 28:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 29:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 115 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: TGF-beta-1
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Proteína
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..115
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- OTRAS:
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 29:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 30:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 115 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: TGF-beta-2
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Proteína
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..115
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- OTRAS:
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 30:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 31:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 115 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CLON: TGF-beta-3
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Proteína
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..115
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- OTRAS:
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 31:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº: 32:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 4 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Péptido
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..118
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- OTRAS: donde X en la posición 2 y 3 es un aminoácido
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 32:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Arg Xaa Xaa Arg}
Claims (38)
1. Una secuencia polinucleotídica que codifica un
polipéptido del factor-8 de diferenciación del
crecimiento (GDF-8) o una parte del mismo,
seleccionada entre el grupo compuesto por:
- (a)
- la SEC ID Nº 11;
- (b)
- los nucleótidos 151 a 1282 de la SEC ID Nº 11;
- (c)
- los nucleótidos 952 a 1282 de la SEC ID Nº 11;
- (d)
- la SEC ID Nº 13;
- (e)
- los nucleótidos 106 a 1233 de la SEC ID Nº 13;
- (f)
- los nucleótidos 904 a 1233 de la SEC ID Nº 13;
- (g)
- secuencias que están degeneradas como resultado del código genético con respecto a las de (a) a (f);
- (h)
- secuencias que son complementarias a las de (a) a (g); y
- (i)
- fragmentos de (a) a (h) que tienen una longitud de al menos 15 bases y que hibridarán selectivamente en condiciones rigurosas con el ADN genómico que codifica la proteína GDF-8 de la SEC ID Nº 12 ó 14.
2. La secuencia polinucleotídica de la
reivindicación 1, donde el polinucleótido se aísla a partir de una
célula de mamífero.
3. El polinucleótido de la reivindicación 2,
donde la célula de mamífero es una célula de ratón, rata o
humana.
4. La secuencia polinucleotídica o fragmentos de
la misma de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que son
secuencias de ADN.
5. Un vector de expresión que incluye una
secuencia de ADN de la reivindicación 4.
6. El vector de la reivindicación 5, que es un
plásmido.
7. El vector de la reivindicación 5, que es un
virus.
8. Una célula hospedadora transformada de forma
estable con el vector de una cualquiera de las reivindicaciones 5 a
7.
9. La célula hospedadora de la reivindicación 8,
donde la célula es procariota o eucariota.
10. GDF-8 o un fragmento
funcional del mismo codificado por un polinucleótido o secuencia de
ADN de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.
11. Un método para la producción del
GDF-8 o un fragmento funcional del mismo de la
reivindicación 10, que comprende cultivar la célula hospedadora de
la reivindicación 8 ó 9 y aislar dicho GDF-8 o un
fragmento funcional del mismo a partir del cultivo.
12. Anticuerpos o fragmentos del mismo reactivos
con el GDF-8 o fragmentos funcionales del mismo de
la reivindicación 10.
13. Los anticuerpos de la reivindicación 12,
donde los anticuerpos son policlonales o monoclonales.
14. Una composición de diagnóstico que comprende
el anticuerpo o fragmento del mismo de la reivindicación 12 ó
13.
15. Un método para detectar un trastorno de la
proliferación celular in vitro, que comprende poner en
contacto el anticuerpo o el fragmento del mismo de la reivindicación
12 o 13 con una muestra de un sujeto que se sospecha que tiene un
trastorno asociado con GDF-8 y detectar la unión
del anticuerpo o el fragmento del mismo.
16. El método de la reivindicación 15, donde la
muestra comprende una célula muscular.
17. El método de la reivindicación 15 ó 16, donde
el anticuerpo o el fragmento del mismo está marcado de forma
detectable.
18. El método de la reivindicación 17, donde el
marcador es un radioisótopo, un compuesto fluorescente, un
compuesto bioluminiscente, un compuesto quimioluminiscente o una
enzima.
19. Una secuencia antisentido que es
complementaria y capaz de hibridar en condiciones rigurosas con al
menos 15 nucleótidos de la secuencia polinucleotídica de una
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.
20. Una ribozima que es capaz de reconocer y
escindir la secuencia polinucleotídica de una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 4.
21. Una composición terapéutica que comprende un
anticuerpo o fragmento del mismo de la reivindicación 12 ó 13, una
secuencia antisentido de la reivindicación 19 o una ribozima de la
reivindicación 20.
22. Uso de un anticuerpo o fragmento del mismo de
la reivindicación 12 ó 13, una secuencia antisentido de la
reivindicación 19 o un ribozima de la reivindicación 20, como
reactivo que suprime la actividad del GDF-8 para la
preparación de una composición para el tratamiento de un trastorno
de la proliferación celular asociado con la expresión de
GDF-8.
23. El uso de la reivindicación 22, donde dicha
célula es una célula muscular.
24. El uso de la reivindicación 22 ó 23, donde el
reactivo que suprime la actividad de GDF-8 se
introduce en una célula usando un vector.
25. El uso de la reivindicación 24, donde el
vector es un sistema de dispersión coloidal.
26. El uso de la reivindicación 25, donde el
sistema de dispersión coloidal es un liposoma.
27. El uso de la reivindicación 26, donde el
liposoma es esencialmente específico de diana.
28. El uso de la reivindicación 26 ó 27, donde el
liposoma está dirigido anatómicamente.
29. El uso de una cualquiera de las
reivindicaciones 26 a 28, donde el liposoma está dirigido
mecánicamente.
30. El uso de la reivindicación 29, donde la
dirección mecánica es pasiva o activa.
31. El uso de la reivindicación 30, donde el
liposoma se dirige activamente por acoplamiento con un resto
seleccionado entre el grupo compuesto por un azúcar, un glicolípido
y una proteína.
32. El uso de la reivindicación 24, donde el
vector es un virus.
33. El uso de la reivindicación 32, donde el
virus es un virus de ARN.
34. El uso de la reivindicación 33, donde el
virus de ARN es un retrovirus.
35. El uso de la reivindicación 34, donde el
retrovirus es esencialmente específico de diana.
36. El uso de la reivindicación 35, donde un
resto para la especificidad por la diana se codifica por un
polinucleótido insertado en el genoma retroviral.
37. El uso de la reivindicación 36, donde un
resto para la especificidad por la diana se selecciona entre el
grupo compuesto por un azúcar, un glicolípido y una proteína.
38. El uso de la reivindicación 31 ó 37, donde la
proteína es un anticuerpo.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US3392393A | 1993-03-19 | 1993-03-19 | |
| US33923 | 1993-03-19 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2201076T3 true ES2201076T3 (es) | 2004-03-16 |
Family
ID=21873232
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES94912274T Expired - Lifetime ES2201076T3 (es) | 1993-03-19 | 1994-03-18 | Factor-8 de diferenciacion del crecimiento. |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (5) | US5827733A (es) |
| EP (2) | EP1333035A3 (es) |
| JP (4) | JPH09507829A (es) |
| CA (1) | CA2157577C (es) |
| DE (1) | DE69432815T2 (es) |
| DK (1) | DK0690873T3 (es) |
| ES (1) | ES2201076T3 (es) |
| WO (1) | WO1994021681A1 (es) |
Families Citing this family (158)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6150328A (en) | 1986-07-01 | 2000-11-21 | Genetics Institute, Inc. | BMP products |
| DE69233022T2 (de) | 1991-11-04 | 2004-02-12 | Genetics Institute, LLC, Cambridge | Rekombinante knochenmorphogenetische protein heterodimere, zusammensetzungen und verfahren zur verwendung |
| US7566768B1 (en) | 1995-10-26 | 2009-07-28 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Promyostatin peptides and methods of using same |
| US5994618A (en) | 1997-02-05 | 1999-11-30 | Johns Hopkins University School Of Medicine | Growth differentiation factor-8 transgenic mice |
| US20030074680A1 (en) * | 1993-03-19 | 2003-04-17 | Johns Hopkins University School Of Medicine | Growth differentiation factor-8 |
| ES2201076T3 (es) * | 1993-03-19 | 2004-03-16 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Factor-8 de diferenciacion del crecimiento. |
| US7393682B1 (en) * | 1993-03-19 | 2008-07-01 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Polynucleotides encoding promyostatin polypeptides |
| US6465239B1 (en) | 1993-03-19 | 2002-10-15 | The John Hopkins University School Of Medicine | Growth differentiation factor-8 nucleic acid and polypeptides from aquatic species and non-human transgenic aquatic species |
| US6607884B1 (en) | 1993-03-19 | 2003-08-19 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Methods of detecting growth differentiation factor-8 |
| KR100227406B1 (ko) | 1993-05-12 | 1999-12-01 | 브루스 엠. 에이센 | Bmp-11 조성물 |
| US6713302B1 (en) | 1993-07-09 | 2004-03-30 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Growth differentiation factor-6 |
| US6291206B1 (en) | 1993-09-17 | 2001-09-18 | Genetics Institute, Inc. | BMP receptor proteins |
| AU689184B2 (en) | 1993-12-07 | 1998-03-26 | Genetics Institute, Llc | BMP-12, BMP-13 and tendon-inducing compositions thereof |
| US7332575B2 (en) | 1994-03-18 | 2008-02-19 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Growth differentiation factor-8 nucleic acid and polypeptide from aquatic species, and transgenic aquatic species |
| DK0776337T3 (da) * | 1994-07-08 | 2005-12-12 | Univ Johns Hopkins Med | Vækstdifferentieringsfaktor-11 |
| US20030167492A1 (en) | 1994-07-08 | 2003-09-04 | Johns Hopkins University School Of Medicine | Transgenic non-human animals expressing a gdf-11 dominant negative polypeptide, and methods of making and using same |
| US6008434A (en) | 1994-07-08 | 1999-12-28 | Johns Hopkins University School Of Medicine | Growth differentiation factor-11 transgenic mice |
| US5846770A (en) * | 1994-11-22 | 1998-12-08 | Genetics Institute, Inc. | DNA molecules encoding human chordin |
| US5635372A (en) * | 1995-05-18 | 1997-06-03 | Genetics Institute, Inc. | BMP-15 compositions |
| HU222664B1 (hu) | 1995-06-05 | 2003-09-29 | Genetics Institute, Llc | Csont morfogenetikus protein (BMP) alkalmazása csont és ín vagy szalag funkcionális összeköttetésének regenerálására |
| US5700774A (en) * | 1996-03-26 | 1997-12-23 | Genetics Institute, Inc. | Compositions comprising bone morphogenic proteins and truncated parathyroid hormone related peptide, and methods of inducing cartilage by administration of same |
| US5965403A (en) * | 1996-09-18 | 1999-10-12 | Genetics Institute, Inc. | Nucleic acids encoding bone morphogenic protein-16 (BMP-16) |
| US7041641B2 (en) | 1997-03-20 | 2006-05-09 | Stryker Corporation | Osteogenic devices and methods of use thereof for repair of endochondral bone and osteochondral defects |
| US20010016646A1 (en) | 1998-03-20 | 2001-08-23 | David C. Rueger | Osteogenic devices and methods of use thereof for repair of endochondral bone, osteochondral and chondral defects |
| EP2309261A1 (en) | 1997-05-30 | 2011-04-13 | Stryker Corporation | Methods for evaluating tissue morphogenesis and morphogenic activity |
| WO1999002667A1 (en) * | 1997-07-14 | 1999-01-21 | University Of Liege | Mutations in the myostation gene cause double-muscling in mammals |
| US6103466A (en) * | 1997-07-14 | 2000-08-15 | University Of Liege | Double-muscling in mammals |
| US20070067859A1 (en) * | 1997-07-14 | 2007-03-22 | Michel Georges | Double-muscling in mammals |
| US6891082B2 (en) * | 1997-08-01 | 2005-05-10 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Transgenic non-human animals expressing a truncated activintype II receptor |
| US6656475B1 (en) * | 1997-08-01 | 2003-12-02 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Growth differentiation factor receptors, agonists and antagonists thereof, and methods of using same |
| US6696260B1 (en) * | 1997-08-01 | 2004-02-24 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Methods to identify growth differentiation factor (GDF) binding proteins |
| US20020052026A1 (en) | 1997-10-08 | 2002-05-02 | Steven M. Vicik | Methods of refolding proteins |
| US6027917A (en) | 1997-12-10 | 2000-02-22 | Genetics Institute, Inc. | Bone morphogenetic protein (BMP)-17 and BMP-18 compositions |
| AU2586199A (en) * | 1998-02-05 | 1999-08-23 | Johns Hopkins University School Of Medicine, The | Growth differentiation factor-8 |
| US6369201B1 (en) * | 1998-02-19 | 2002-04-09 | Metamorphix International, Inc. | Myostatin multimers |
| US6004937A (en) * | 1998-03-09 | 1999-12-21 | Genetics Institute, Inc. | Use of follistatin to modulate growth and differentiation factor 8 [GDF-8] and bone morphogenic protein 11 [BMP-11] |
| AU765214B2 (en) * | 1998-05-06 | 2003-09-11 | Metamorphix International, Inc. | Methods for treating diabetes by inhibiting gdf-8 |
| US7147839B2 (en) | 1998-05-29 | 2006-12-12 | Curis, Inc. | Methods for evaluating tissue morphogenesis and activity |
| AU5542799A (en) * | 1998-07-15 | 2000-02-07 | Metamorphix International, Inc. | Growth differentiation factor promoter and uses therefor |
| EP1147413B1 (en) * | 1999-01-21 | 2006-04-05 | Metamorphix, Inc. | Growth differentiation factor inhibitors and uses therefor |
| US6727224B1 (en) | 1999-02-01 | 2004-04-27 | Genetics Institute, Llc. | Methods and compositions for healing and repair of articular cartilage |
| DE19906096A1 (de) | 1999-02-13 | 2000-08-17 | Walter Sebald | Protein mit einem Heparin-bindenden Epitop |
| US6284882B1 (en) * | 1999-06-10 | 2001-09-04 | Abbott Laboratories | Myostatin gene promoter and inhibition of activation thereof |
| AU4889100A (en) | 1999-07-30 | 2001-02-01 | Pfizer Products Inc. | Myostatin regulatory region, nucleotide sequence determination and methods for its use |
| EP2286847A1 (en) | 1999-10-15 | 2011-02-23 | Genetics Institute, LLC | Formulations of hyaluronic acid for delivery of osteogenic proteins |
| US6756215B1 (en) * | 2000-10-20 | 2004-06-29 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health & Human Services | Functionalized TGF-β fusion proteins |
| US7037501B2 (en) * | 2001-01-04 | 2006-05-02 | Regents Of The University Of Minnesota | Myostatin immnoconjugate |
| TWI329129B (en) | 2001-02-08 | 2010-08-21 | Wyeth Corp | Modified and stabilized gdf propeptides and uses thereof |
| KR100420798B1 (ko) * | 2001-02-10 | 2004-03-02 | (주)알에이싸이언스 | 펩타이드 벡터 |
| US7226587B2 (en) | 2001-06-01 | 2007-06-05 | Wyeth | Compositions and methods for systemic administration of sequences encoding bone morphogenetic proteins |
| TWI267378B (en) | 2001-06-08 | 2006-12-01 | Wyeth Corp | Calcium phosphate delivery vehicles for osteoinductive proteins |
| US7320789B2 (en) * | 2001-09-26 | 2008-01-22 | Wyeth | Antibody inhibitors of GDF-8 and uses thereof |
| US6798160B2 (en) * | 2001-11-02 | 2004-09-28 | Honda Giken Kogyo Kabushiki Kaisha | Electric working machine |
| PL374966A1 (en) * | 2002-02-21 | 2005-11-14 | Wyeth | Follistatin domain containing proteins |
| PL375045A1 (en) * | 2002-02-21 | 2005-11-14 | Wyeth | Gasp1: a follistatin domain containing protein |
| JP2006507356A (ja) * | 2002-09-16 | 2006-03-02 | ワイエス | ミオスタチンのメタロプロテアーゼ活性化およびミオスタチン活性の調節方法 |
| AR047392A1 (es) * | 2002-10-22 | 2006-01-18 | Wyeth Corp | Neutralizacion de anticuerpos contra gdf 8 y su uso para tales fines |
| US20040223966A1 (en) * | 2002-10-25 | 2004-11-11 | Wolfman Neil M. | ActRIIB fusion polypeptides and uses therefor |
| KR20130036378A (ko) | 2002-12-20 | 2013-04-11 | 암겐 인코포레이티드 | 미오스타틴을 저해하는 결합제 |
| WO2004108157A2 (en) | 2003-06-02 | 2004-12-16 | Wyeth | Use of myostatin (gdf8) inhibitors in conjunction with corticosteroids for treating neuromuscular disorders |
| ES2282904T3 (es) | 2003-09-12 | 2007-10-16 | Wyeth | Barras solidas de fosfato calcico inyectables para el suministro de proteinas osteogenicas. |
| SG153874A1 (en) | 2003-12-31 | 2009-07-29 | Schering Plough Ltd | Neutralizing epitope-based growth enhancing vaccine |
| PL1737734T3 (pl) | 2004-03-10 | 2011-02-28 | Scil Tech Gmbh | Powlekane implanty, ich wytwarzanie i zastosowanie |
| US20070178095A1 (en) * | 2004-03-23 | 2007-08-02 | Eli Lilly And Company | Anti-myostatin antibodies |
| JP4688483B2 (ja) * | 2004-04-15 | 2011-05-25 | 株式会社テクノネットワーク四国 | フォリスタチン変異体ポリペプチド |
| EP1740609A2 (en) | 2004-04-27 | 2007-01-10 | Research Development Foundation | Antagonism of tgf-beta superfamily receptor signaling |
| CA2567405A1 (en) | 2004-05-25 | 2005-12-08 | Stryker Corporation | Use of morphogenic proteins for treating cartilage defects |
| US20060034831A1 (en) * | 2004-08-12 | 2006-02-16 | Wyeth | Combination therapy for diabetes, obesity and cardiovascular diseases using GDF-8 inhibitors |
| US7473678B2 (en) | 2004-10-14 | 2009-01-06 | Biomimetic Therapeutics, Inc. | Platelet-derived growth factor compositions and methods of use thereof |
| MX2007008132A (es) * | 2004-12-30 | 2007-07-20 | Schering Plough Ltd | Vacuna para aumentar el crecimiento basada en epitopes neutralizantes. |
| US20060166251A1 (en) * | 2005-01-26 | 2006-07-27 | Archambault Joanne M | Use of sFRPs as markers of BMP activity |
| ES2852549T3 (es) | 2005-02-09 | 2021-09-13 | Sarepta Therapeutics Inc | Composición antisentido para tratamiento de la atrofia muscular |
| BRPI0609439A2 (pt) * | 2005-03-23 | 2010-04-06 | Wyeth Corp | detecção de uma resposta imunológica a agentes moduladores de gdf-8 |
| US20060239951A1 (en) * | 2005-03-30 | 2006-10-26 | Alexandre Valentin | Methods for stimulating hair growth by administering BMPs |
| EP1915397B1 (en) | 2005-08-19 | 2015-01-14 | Wyeth LLC | Antagonist antibodies against gdf-8 and uses in treatment of als and other gdf-8-associated disorders |
| ES2533464T3 (es) * | 2005-10-06 | 2015-04-10 | Eli Lilly And Company | Anticuerpos anti-miostatina |
| UA92504C2 (en) | 2005-10-12 | 2010-11-10 | Эли Лилли Энд Компани | Anti-myostatin monoclonal antibody |
| US8067562B2 (en) | 2005-11-01 | 2011-11-29 | Amgen Inc. | Isolated nucleic acid molecule comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:1 |
| US8147860B2 (en) | 2005-12-06 | 2012-04-03 | Etex Corporation | Porous calcium phosphate bone material |
| CA2632544C (en) * | 2005-12-06 | 2014-09-23 | Amgen Inc. | Use of myostatin antagonist for treating the effects of hypogonadism |
| ES2427993T3 (es) | 2006-02-09 | 2013-11-05 | Biomimetic Therapeutics, Llc | Composiciones y métodos para el tratamiento de hueso |
| IN2014DN10515A (es) | 2006-03-31 | 2015-08-21 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | |
| US20090298761A1 (en) | 2006-05-17 | 2009-12-03 | Donald Engelman | Methods of treating cartilage defects using a soluble morphogenic protein complex |
| US9642891B2 (en) | 2006-06-30 | 2017-05-09 | Biomimetic Therapeutics, Llc | Compositions and methods for treating rotator cuff injuries |
| US9161967B2 (en) | 2006-06-30 | 2015-10-20 | Biomimetic Therapeutics, Llc | Compositions and methods for treating the vertebral column |
| US8524265B2 (en) | 2006-08-17 | 2013-09-03 | Warsaw Orthopedic, Inc. | Medical implant sheets useful for tissue regeneration |
| UA98308C2 (en) | 2006-09-05 | 2012-05-10 | Эли Лилли Энд Компани | Anti-myostatin antibody |
| AU2007234612B2 (en) | 2006-12-14 | 2013-06-27 | Johnson & Johnson Regenerative Therapeutics, Llc | Protein stabilization formulations |
| ES2447516T3 (es) | 2006-12-21 | 2014-03-12 | Stryker Corporation | Formulaciones de liberación sostenida que comprenden cristales BMP-7 |
| US8501678B2 (en) | 2007-03-06 | 2013-08-06 | Atara Biotherapeutics, Inc. | Variant activin receptor polypeptides and uses thereof |
| TW201718635A (zh) | 2007-03-06 | 2017-06-01 | 安美基公司 | 變異之活動素受體多肽及其用途 |
| US8236751B2 (en) * | 2007-03-07 | 2012-08-07 | The Johns Hopkins University | Methods of increasing muscle mass using follistatin-like related gene (FLRG) |
| US7678764B2 (en) | 2007-06-29 | 2010-03-16 | Johnson & Johnson Regenerative Therapeutics, Llc | Protein formulations for use at elevated temperatures |
| GB0715087D0 (en) | 2007-08-03 | 2007-09-12 | Summit Corp Plc | Drug combinations for the treatment of duchenne muscular dystrophy |
| PE20090510A1 (es) | 2007-08-03 | 2009-05-22 | Summit Corp Plc | Combinaciones de drogas para el tratamiento de la distrofia muscular de duchenne |
| US8058237B2 (en) | 2007-08-07 | 2011-11-15 | Advanced Technologies & Regenerative Medicine, LLC | Stable composition of GDF-5 and method of storage |
| MX336725B (es) | 2007-09-26 | 2016-01-28 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Metodo de modificacion del punto isoelectrico de anticuerpos medinate la sustitucion de aminoacidos en region de determinacion de complementariedad (cdr). |
| CA2718592A1 (en) | 2008-02-13 | 2009-08-20 | Keith Hruska | Method of treating vascular sclerosis |
| WO2009111793A2 (en) | 2008-03-07 | 2009-09-11 | Myoscience, Inc. | Subdermal tissue remodeling using myostatin, methods and related systems |
| TWI700293B (zh) | 2008-04-11 | 2020-08-01 | 日商中外製藥股份有限公司 | 重複結合複數個抗原的抗體 |
| WO2009129101A1 (en) | 2008-04-14 | 2009-10-22 | Advanced Technologies And Regenerative Medicine, Llc | Liquid buffered gdf-5 formulations |
| MX2011002555A (es) | 2008-09-09 | 2011-08-03 | Biomimetic Therapeutics Inc | Composiciones de factor de crecimiento derivadas de plaquetas y metodo para el tratamiento de lesiones de tendon y ligamentos. |
| KR20170105124A (ko) | 2008-11-26 | 2017-09-18 | 암젠 인크 | 액티빈 ｉｉｂ 수용체 폴리펩타이드의 변이체 및 이의 용도 |
| UY32341A (es) | 2008-12-19 | 2010-07-30 | Glaxo Group Ltd | Proteínas de unión antígeno novedosas |
| JP5819734B2 (ja) | 2009-02-12 | 2015-11-24 | ストライカー コーポレイションＳｔｒｙｋｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ | ＴＧＦ−βスーパーファミリーメンバー含有タンパク質の最小に侵襲性の全身送達のための組成物および方法 |
| CA2752157A1 (en) | 2009-02-12 | 2010-08-19 | Stryker Corporation | Peripheral administration of proteins including tgf-.beta. superfamily members for systemic treatment of disorders and disease |
| US20120148539A1 (en) | 2009-03-24 | 2012-06-14 | Moulay Hicham Alaoui-Ismaili | Methods and Compositions for Tissue Engineering |
| US8609127B2 (en) | 2009-04-03 | 2013-12-17 | Warsaw Orthopedic, Inc. | Medical implant with bioactive material and method of making the medical implant |
| WO2010144696A1 (en) | 2009-06-11 | 2010-12-16 | Burnham Institute For Medical Research | Directed differentiation of stem cells |
| WO2011031856A1 (en) | 2009-09-09 | 2011-03-17 | Stryker Corporation | Bmp -7 for use in treating pain induced by injuries and diseases of an articular joint |
| ES2387379T3 (es) | 2009-09-17 | 2012-09-21 | Stryker Corporation | Tampones para controlar el pH de las proteínas morfogenéticas óseas |
| AU2010341565A1 (en) | 2009-12-22 | 2012-07-12 | Stryker Corporation | BMP-7 variants with reduced immunogenicity |
| WO2011103598A1 (en) | 2010-02-22 | 2011-08-25 | Biomimetic Therapeutics, Inc. | Platelet-derived growth factor compositions and methods for the treatment of tendinopathies |
| JO3340B1 (ar) | 2010-05-26 | 2019-03-13 | Regeneron Pharma | مضادات حيوية لـعامل تمايز النمو 8 البشري |
| UY33421A (es) | 2010-06-03 | 2011-12-30 | Glaxo Wellcome House | Proteinas de union al antígeno humanizados |
| SG187867A1 (en) | 2010-08-16 | 2013-03-28 | Amgen Inc | Antibodies that bind myostatin, compositions and methods |
| US9688735B2 (en) | 2010-08-20 | 2017-06-27 | Wyeth Llc | Designer osteogenic proteins |
| CN103079585B (zh) | 2010-08-20 | 2015-09-30 | 惠氏有限责任公司 | 经设计的成骨蛋白 |
| KR102568454B1 (ko) | 2010-11-30 | 2023-08-18 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 복수 분자의 항원에 반복해서 결합하는 항원 결합 분자 |
| US20130085139A1 (en) | 2011-10-04 | 2013-04-04 | Royal Holloway And Bedford New College | Oligomers |
| RS56796B1 (sr) | 2011-11-14 | 2018-04-30 | Regeneron Pharma | Kompozicije i postupci za uvećanje mišićne mase i jačine mišića specifičnim antagonizovanjem gdf8 i/ili aktivina a |
| CN104379159A (zh) | 2011-12-19 | 2015-02-25 | 安姆根公司 | 变体激活素受体多肽,单独或与化疗结合,及其用途 |
| CN104487453B (zh) | 2012-06-15 | 2018-09-28 | 辉瑞公司 | 经改良的抗gdf-8的拮抗剂抗体及其用途 |
| WO2014012101A1 (en) | 2012-07-13 | 2014-01-16 | Trustees Of Tufts College | Silk powder compaction for production of constructs with high mechanical strength and stiffness |
| EP2880053B8 (en) | 2012-08-01 | 2020-04-15 | Ikaika Therapeutics, LLC | Mitigating tissue damage and fibrosis via anti-ltbp4 antibody |
| TWI855488B (zh) | 2012-08-24 | 2024-09-11 | 日商中外製藥股份有限公司 | FcγRIIb特異性Fc區域變異體 |
| EP3597747B1 (en) | 2012-08-24 | 2023-03-15 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Mouse fcgammarii-specific fc antibody |
| US8853154B2 (en) | 2012-09-13 | 2014-10-07 | Bristol-Myers Squibb Company | Fibronectin based scaffold domain proteins that bind to myostatin |
| AU2014212014A1 (en) | 2013-02-01 | 2015-08-27 | Amgen Inc. | Administration of an anti-activin-A compound to a subject |
| AU2014250434B2 (en) | 2013-04-02 | 2019-08-08 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Fc region variant |
| SMT202100008T1 (it) | 2013-05-06 | 2021-03-15 | Scholar Rock Inc | Composizioni e metodi per la modulazione di fattore di crescita |
| TW201920262A (zh) | 2013-07-30 | 2019-06-01 | 美商再生元醫藥公司 | 抗活化素ａ之抗體及其用途 |
| WO2016073906A2 (en) * | 2014-11-06 | 2016-05-12 | Scholar Rock, Inc. | Transforming growth factor-related immunoassays |
| EP3215175A4 (en) | 2014-11-06 | 2018-06-27 | Scholar Rock, Inc. | Anti-pro/latent-myostatin antibodies and uses thereof |
| TWI656133B (zh) | 2014-12-19 | 2019-04-11 | 日商中外製藥股份有限公司 | 抗肌抑素之抗體、含變異Ｆｃ區域之多胜肽及使用方法 |
| WO2016125495A1 (en) | 2015-02-05 | 2016-08-11 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antibodies comprising an ion concentration dependent antigen-binding domain, fc region variants, il-8-binding antibodies, and uses therof |
| MA41795A (fr) | 2015-03-18 | 2018-01-23 | Sarepta Therapeutics Inc | Exclusion d'un exon induite par des composés antisens dans la myostatine |
| JP6877357B2 (ja) | 2015-04-15 | 2021-05-26 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． | Ｇｄｆ８阻害剤を用いて、強度及び機能を増加させる方法 |
| IL305148A (en) | 2015-09-15 | 2023-10-01 | Scholar Rock Inc | Anti-pro/hidden myostatin antibodies and their uses |
| WO2017062835A2 (en) | 2015-10-09 | 2017-04-13 | Sarepta Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for treating duchenne muscular dystrophy and related disorders |
| EP3821880A1 (en) | 2015-10-26 | 2021-05-19 | President and Fellows of Harvard College | Oxidized polysaccharides and methods of use thereof |
| AR107078A1 (es) | 2015-12-18 | 2018-03-21 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Anticuerpo antimiostatina, polipéptidos que contienen regiones fc variantes así como métodos de uso |
| WO2017110981A1 (en) | 2015-12-25 | 2017-06-29 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Anti-myostatin antibodies and methods of use |
| JP2019504064A (ja) | 2016-01-08 | 2019-02-14 | スカラー ロック インコーポレイテッドＳｃｈｏｌａｒ Ｒｏｃｋ，Ｉｎｃ． | 抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体およびその使用方法 |
| EP3785728A3 (en) | 2016-06-13 | 2021-04-28 | Scholar Rock, Inc. | Use of myostatin inhibitors and combination therapies |
| KR102306744B1 (ko) | 2016-06-17 | 2021-09-28 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 항-마이오스타틴 항체 및 사용 방법 |
| CN109689099B (zh) | 2016-08-05 | 2023-02-28 | 中外制药株式会社 | 用于预防或治疗il-8相关疾病的组合物 |
| JP7198757B2 (ja) | 2017-01-06 | 2023-01-04 | スカラー ロック インコーポレイテッド | ミオスタチン活性化の阻害により代謝疾患を処置するための方法 |
| US11248044B2 (en) | 2018-03-01 | 2022-02-15 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods for altering body composition by administering a GDF8 inhibitor and an Activin A inhibitor |
| PT3773713T (pt) | 2018-04-06 | 2025-07-29 | Regeneron Pharma | Anticorpo agonista do recetor de leptina para usar no aumento da massa óssea num sujeito que sofre de disfunção metabólica ou de hipoleptinemia |
| EP3898672A1 (en) | 2018-12-18 | 2021-10-27 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for enhancing body weight and lean muscle mass using antagonists against leptin receptor, gdf8 and activin a |
| CA3124415A1 (en) | 2018-12-21 | 2020-06-25 | Northwestern University | Use of annexins in preventing and treating muscle membrane injury |
| US20220062299A1 (en) | 2018-12-26 | 2022-03-03 | Northwestern University | Use of glucocorticoid steroids in preventing and treating conditions of muscle wasting, aging and metabolic disorder |
| JP7375525B2 (ja) * | 2019-12-23 | 2023-11-08 | 株式会社島津製作所 | 患者認証システムおよび患者認証方法 |
| JP7397822B2 (ja) * | 2021-05-14 | 2023-12-13 | 花王株式会社 | 口腔用貼付シート |
| KR20250075642A (ko) | 2022-09-21 | 2025-05-28 | 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. | 비만, 당뇨병 및 간 기능 장애를 치료하는 방법 |
| WO2024107652A1 (en) * | 2022-11-14 | 2024-05-23 | John Mansell | Myostatin inhibition |
| CN120677175A (zh) | 2022-12-22 | 2025-09-19 | 供石公司 | 肌生成抑制蛋白活化的选择性和强效抑制剂 |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4766073A (en) * | 1985-02-25 | 1988-08-23 | Zymogenetics Inc. | Expression of biologically active PDGF analogs in eucaryotic cells |
| US5350836A (en) * | 1989-10-12 | 1994-09-27 | Ohio University | Growth hormone antagonists |
| ATE131872T1 (de) | 1989-11-22 | 1996-01-15 | Genentech Inc | Latenz assoziierte peptide und deren verwendung |
| AU7312891A (en) * | 1990-02-12 | 1991-09-03 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Satellite cell proliferation in adult skeletal muscle |
| JP3415643B2 (ja) * | 1992-12-04 | 2003-06-09 | 株式会社ミノファーゲン製薬 | 筋ジストロフィー症治療薬 |
| ES2201076T3 (es) * | 1993-03-19 | 2004-03-16 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Factor-8 de diferenciacion del crecimiento. |
| US5994618A (en) * | 1997-02-05 | 1999-11-30 | Johns Hopkins University School Of Medicine | Growth differentiation factor-8 transgenic mice |
| DK0776337T3 (da) | 1994-07-08 | 2005-12-12 | Univ Johns Hopkins Med | Vækstdifferentieringsfaktor-11 |
| US5616561A (en) | 1995-03-31 | 1997-04-01 | Regents Of The University Of California | TGF-β antagonists as mitigators of radiation-induced tissue damage |
| WO1998033887A1 (en) | 1997-02-05 | 1998-08-06 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Growth differentiation factor-8 |
| WO1999002667A1 (en) | 1997-07-14 | 1999-01-21 | University Of Liege | Mutations in the myostation gene cause double-muscling in mammals |
| US6656475B1 (en) * | 1997-08-01 | 2003-12-02 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Growth differentiation factor receptors, agonists and antagonists thereof, and methods of using same |
| AU2586199A (en) | 1998-02-05 | 1999-08-23 | Johns Hopkins University School Of Medicine, The | Growth differentiation factor-8 |
| US6369201B1 (en) | 1998-02-19 | 2002-04-09 | Metamorphix International, Inc. | Myostatin multimers |
-
1994
- 1994-03-18 ES ES94912274T patent/ES2201076T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-03-18 EP EP03006413A patent/EP1333035A3/en not_active Ceased
- 1994-03-18 WO PCT/US1994/003019 patent/WO1994021681A1/en not_active Ceased
- 1994-03-18 DK DK94912274T patent/DK0690873T3/da active
- 1994-03-18 DE DE69432815T patent/DE69432815T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-03-18 EP EP94912274A patent/EP0690873B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-03-18 JP JP6521293A patent/JPH09507829A/ja active Pending
- 1994-03-18 CA CA002157577A patent/CA2157577C/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-03-18 US US08/525,596 patent/US5827733A/en not_active Expired - Lifetime
-
1998
- 1998-10-23 US US09/177,860 patent/US6096506A/en not_active Expired - Lifetime
-
2000
- 2000-08-01 US US09/629,938 patent/US6500664B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-12-31 US US10/335,483 patent/US7179884B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2004
- 2004-01-06 JP JP2004001012A patent/JP2004121265A/ja active Pending
-
2005
- 2005-11-10 JP JP2005326630A patent/JP2006117682A/ja active Pending
-
2007
- 2007-01-29 US US11/700,267 patent/US7534432B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-05-09 JP JP2007125060A patent/JP2007306920A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US6500664B1 (en) | 2002-12-31 |
| US7179884B2 (en) | 2007-02-20 |
| EP0690873B1 (en) | 2003-06-11 |
| EP1333035A2 (en) | 2003-08-06 |
| JP2007306920A (ja) | 2007-11-29 |
| DK0690873T3 (da) | 2003-09-29 |
| US6096506A (en) | 2000-08-01 |
| JP2006117682A (ja) | 2006-05-11 |
| DE69432815T2 (de) | 2003-12-11 |
| DE69432815D1 (de) | 2003-07-17 |
| CA2157577C (en) | 2009-11-17 |
| JPH09507829A (ja) | 1997-08-12 |
| EP0690873A4 (en) | 2000-11-22 |
| US7534432B2 (en) | 2009-05-19 |
| EP0690873A1 (en) | 1996-01-10 |
| US5827733A (en) | 1998-10-27 |
| US20030120058A1 (en) | 2003-06-26 |
| EP1333035A3 (en) | 2004-07-07 |
| WO1994021681A1 (en) | 1994-09-29 |
| CA2157577A1 (en) | 1994-09-29 |
| JP2004121265A (ja) | 2004-04-22 |
| US20070185321A1 (en) | 2007-08-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2201076T3 (es) | Factor-8 de diferenciacion del crecimiento. | |
| ES2251721T3 (es) | Factor-11 de diferenciacion del crecimiento. | |
| US6204047B1 (en) | Growth differentiation factor-10 | |
| US5770444A (en) | Growth differentiation factor-6 | |
| US7074574B2 (en) | Method of detecting growth differentiation factor-7 (GDF-7) using GDF-7 antibodies | |
| EP0770089B1 (en) | Growth differentiation factor-12 | |
| US6524802B1 (en) | Methods of detecting growth differentiation factor-14 | |
| US6391565B2 (en) | Methods of detecting growth differentiation factor-3 | |
| US6713302B1 (en) | Growth differentiation factor-6 | |
| US20040043025A1 (en) | Growth differentiation factor-12 | |
| US20020107369A1 (en) | Growth differentiation factor-10 | |
| HK1059441A (en) | Growth differentiation factor-8 | |
| HK1065064A (en) | Growth differentation factor-7 |