EP4312972A1 - Composition cosmetique comprenant au moins un extrait de bouleau et au moins un extrait de bourgeon de hetre - Google Patents

Composition cosmetique comprenant au moins un extrait de bouleau et au moins un extrait de bourgeon de hetre

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Publication number
EP4312972A1
EP4312972A1 EP22717861.3A EP22717861A EP4312972A1 EP 4312972 A1 EP4312972 A1 EP 4312972A1 EP 22717861 A EP22717861 A EP 22717861A EP 4312972 A1 EP4312972 A1 EP 4312972A1
Authority
EP
European Patent Office
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extract
composition according
beech
oily
beech bud
Prior art date
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Pending
Application number
EP22717861.3A
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German (de)
English (en)
Inventor
Anne-Sophie NARDY
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Credo SA
Original Assignee
Credo SA
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Publication date
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Pending legal-status Critical Current

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    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
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    • A61K36/185Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/49Fagaceae (Beech family), e.g. oak or chestnut
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    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61QSPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08Anti-ageing preparations

Definitions

  • the invention relates to a cosmetic composition
  • a cosmetic composition comprising at least one extract of birch sap, preferably glycerinated, and at least one extract chosen from an aqueous extract of beech buds and an oily extract of beech buds, and at least least one cosmetically acceptable vehicle.
  • the present invention also relates to a non-therapeutic cosmetic care process comprising the application to the skin or the mucous membranes of a cosmetic composition comprising at least one aqueous extract of beech bud, an oily extract of beech bud and/ or at least one birch extract.
  • a cosmetic composition comprising at least one aqueous extract of beech bud, an oily extract of beech bud and/ or at least one birch extract.
  • the present invention finds an application in the field of cosmetics and dermatology, more particularly skin cosmetics.
  • references in square brackets ([ ]) refer to the list of references at the end of the text.
  • the skin is an organ in its own right that plays an essential role, not only in protecting the body against external aggressions, but also aesthetically and emotionally.
  • the skin is an organ of exchange. Its visual but also tactile aspect occupies a very important place.
  • the skin as an organ is directly exposed to external conditions, including temperature, light, humidity, UV rays and pathogens. Under normal, healthy conditions, many attributes of human skin follow a periodicity: hydration and transepidermal water loss, capillary blood flow, sebum production, temperature, surface pH and rate. keratinocyte proliferation.
  • compositions in the state of the art for the treatment of skin aging and/or for firming the skin.
  • these compositions have relative efficiencies, even disputed in certain cases by consumer associations.
  • the relative effectiveness of the known compositions may be at the origin of a need for individuals to resort to surgical procedures such as the injection of hyaluronic acid and/or botulinum toxin in order to mask wrinkles.
  • a cosmetic composition according to the invention advantageously allows an action on the aesthetics and aging of the skin and/ or its appendages and/or mucous membranes, in particular to provide radiance, suppleness, finesse, smoothing and/or softness.
  • This action can be achieved in particular by stimulating the proliferation/regeneration of epidermal cells, hydration, while protecting against external aggressions (e.g. pollution) or oxidative stress, by strengthening the barrier function of the skin.
  • a subject of the present invention is therefore a cosmetic composition
  • a cosmetic composition comprising at least one extract of birch sap, and at least one extract chosen from an aqueous extract of beech bud and an oily extract of beech bud, and a cosmetically acceptable carrier.
  • the term "birch” means a species of deciduous tree of the Betulaceae family and of the Betula genus. In particular, it can be for example in Europe Betula alba, Betula pendula, Betula pubescens. The sap, leaves and bark have diuretic properties and are generally used in the treatment of skin conditions.
  • the term "beech” or “common beech” (Fagus sylvatica), a species of deciduous trees, native to Europe, belonging to the Fagaceae family. Its astringent bark is used as a febrifuge. In the form of powder, the use of the bark is indicated in the treatment of gout, rheumatism, dropsy, and stubborn skin affections.
  • the bud participates in a "cleansing" of the body which results in a draining and energizing effect.
  • bud extracts are used to energize the skin and improve its radiance, boost cell oxygenation and stimulate their metabolism.
  • extract means any form of extract known to those skilled in the art. It may be, for example, an oily extract, an aqueous extract, a hydro-alcoholic extract, a hydro-glycerine extract, a glycerine extract, a supercritical extract, an essential oil or any mixture thereof.
  • Such extracts can be obtained from any part of a plant, for example flowers or flowering tops, leaves, seeds, roots, stems, pericarp, buds, sap.
  • an “aqueous extract”, in particular an “aqueous extract of beech buds”, can be obtained by any method known to those skilled in the art. It may be, for example, an aqueous extract obtained by aqueous extraction, by hydrodistillation, hydro-glycerine, hydro-glycolic or hydro-alcoholic extraction, extraction with supercritical water. It may be, for example, an aqueous extract obtained according to the process described in the book “Eco-extraction of plants” [1]. It can also be an aqueous extract of beech buds obtained by a supercritical water extraction process. It may also be an aqueous extract of commercially available beech bud.
  • an “oily extract”, in particular an “oily extract of beech buds” can be obtained by any suitable method known to those skilled in the art. It may be for example an oily extract obtained by oily extraction by microwave, by microwave, by supercritical extraction, by maceration in an oily solvent, by oily extraction assisted by ultrasound. It may be for example an oily extract obtained by maceration in a vegetable oil, for example in deodorized sunflower oil, then filtration, for example through a filter comprising pores with a diameter of 0.2 pm. It may be a commercially available oily extract of beech buds.
  • the cosmetic composition according to the invention comprises at least one extract of birch sap and an aqueous extract of beech bud, and optionally an oily extract of beech bud.
  • the cosmetic composition according to the invention comprises at least one birch sap extract, an aqueous extract of beech bud, an oily extract of beech bud, and at least one vehicle cosmetically acceptable.
  • said birch sap extract is a glycerinated extract of birch sap.
  • a "glycerine extract of birch sap” can be obtained by any suitable method known to those skilled in the art. It may be, for example, a glycerine extract obtained by a process comprising maceration of a natural plant extract (e.g. sap) in a mixture of water, alcohol and glycerine. It can also be a mixture of a natural plant extract (e.g. sap) with glycerin.
  • the cosmetic composition according to the invention comprises from 0.2 to 5%, preferably from 0.5 to 2%, preferably 1% by weight of said aqueous extract of beech bud per relative to the total weight of the composition.
  • the cosmetic composition according to the invention comprises from 0.2 to 5%, preferably from 0.5 to 2%, preferably 1% by weight of said oily extract of beech bud per relative to the total weight of the composition.
  • the cosmetic composition according to the invention comprises from 0.5 to 6%, preferably from 1 to 3%, preferably 2% by weight of the said glycerinated extract of birch sap relative to the total weight of the composition.
  • the cosmetic composition according to the invention can be in any suitable form for a cosmetic application.
  • the composition is a composition for topical use. It may be, for example, a composition in a form chosen from an ointment, a cream, an oil, a milk, an ointment, a powder, an impregnated pad, a solution, a gel, a serum, a balm, a butter, a lotion, a suspension, a soap and an emulsion (oil in water, or water in oil, or mixture thereof).
  • These formulations which can be used for the implementation of the present invention are known in the state of the art by the formulators.
  • the cosmetic composition according to the invention may comprise one or more adjuvants known to those skilled in the art. It may be, for example, one or more adjuvant(s) chosen from agents of the ester type, moisturizing agents, water, humectants, conditioning agents, emollient agents, for example vegetable oils, mineral thickening agents, organic thickening agents, associative or not, perfumes, preservatives, ceramides and pseudo-ceramides, vitamins and provitamins, amino acids, proteins, plant extracts, agents sequestering agents, alkanizing agents, acidifying agents, reducing agents, oxidizing agents, mineral fillers, dyes or any other adjuvant that may be cited in the INCI dictionary (International Nomenclature of Cosmetic Ingredients) published by the PCPC (Personal Care Products council).
  • agents of the ester type moisturizing agents, water, humectants, conditioning agents, emollient agents, for example vegetable oils, mineral thickening agents, organic thickening agents, associative
  • the present invention also relates to a device in a form chosen from a jar, a pump bottle, a wipe, a mask, a transdermal device, a patch, a spray, a capsule or a capsule, said device comprising a cosmetic composition according to the invention.
  • the present invention also relates to a non-therapeutic cosmetic care process for improving the appearance of the skin and combating skin aging, comprising the application to the skin and/or its appendages and/or the mucous membranes of a cosmetic composition according to the invention.
  • said application improves hydration, nutrition, oxygenation and stimulation of the protective barrier function of the skin and/or its appendages and/or mucous membranes.
  • EXAMPLE 1 EFFECTS OF COMPOUNDS OILY MACERATE OF BEECH BUDS, AQUEOUS EXTRACT OF BEECH BUDS, SAP OF WHITE BIRCH AND THEIR COMBINATIONS ON THE EXPRRESSION OF GENE IN NORMAL HUMAN EPIDERMAL KERATINOCYTES
  • NHEK normal human epidermal keratinocytes
  • NHEK Normal human epidermal keratinocytes
  • Serum-free medium Keratinocyte-SFM
  • EGF epidermal growth factor
  • EP pituitary extract
  • gentamicin 25 ⁇ g/ml
  • Test medium Serum-free medium (Kératinocyte-SFM) supplemented with gentamicin 25 ⁇ g/ml.
  • the cells were incubated in the presence of WST-8 (highly water-soluble tetrazolium salt) reduced to an orange-colored water-soluble product (formazan) by succinate dehydrogenase (mitochondrial enzyme). This transformation is proportional to the number of living cells and their metabolic activity.
  • the optical density (OD) was measured with a spectrophotometer at 450 nm (VERSAmax, Molecular Devices).
  • the keratinocytes were seeded in 24-well plates and cultured in culture medium for 24 hours then in test medium for an additional 24 hours. After incubation, the culture medium was replaced with test medium containing or without (control) the compounds, the combinations or the solvent control (1% THF) and the cells were incubated for 24 hours.
  • the culture supernatants were removed and the cell layers were rinsed with a solution of phosphate buffered saline (PBS).
  • PBS phosphate buffered saline
  • RNAs extracted from cell layers of each experimental condition were pooled before RNA extraction.
  • RNAs of each sample were extracted using TriPure Isolation Reagent ® according to the protocol recommended by the supplier. The quantity and quality of the RNAs were evaluated by capillary electrophoresis (Bioanalyzer 2100, Agilent).
  • the complementary DNAs (cDNAs) were synthesized by reverse transcription of the total RNAs in the presence of oligo(dT) and the reverse transcriptase enzyme “Transcriptor Reverse Transcriptase” (Roche). The amounts of cDNA were then adjusted before the PCR step.
  • PCR reactions (polymerase chain reaction) were carried out by quantitative PCR (Light Cycler; Roche Molecular Systems Inc.) and according to the procedures recommended by the supplier.
  • reaction mix (final 10ml) for each sample contained:
  • reaction mixture containing the Taq polymerase enzyme, the SYBR Green I marker and MgCL the reaction mixture containing the Taq polymerase enzyme, the SYBR Green I marker and MgCL.
  • the standard error of the mean (sm) represents the standard deviation of the sample mean from the true population mean.
  • the esm is calculated by dividing the Sd by the square root of the sample size.
  • Viability percentage (DOcompound / DOcontrol) x 100
  • Fluorescence incorporation into amplified DNA is measured continuously during PCR cycles. These measurements make it possible to obtain fluorescence intensity curves as a function of the PCR cycles and thus to evaluate a relative expression value for each marker.
  • the number of cycles is determined from the "exit" points of the fluorescence curves. For the same marker analyzed, the later a sample comes out (high number of cycles), the lower the initial number of mRNA copies.
  • the relative expression value is determined by the formula:
  • the "MV200714 - mQPA NHEK-8 custom genes" PCR matrices contain 2 reference genes (housekeeping gene or “housekeeping (HK)") used for data normalization: RPS28 (ribosomal protein S28) and GAPDH (glyceraldehyde-3 -phosphate dehydrogenase).
  • the reference genes selected are genes expressed constitutively and whose level of expression is not or only slightly affected by the treatments.
  • the normalization of the level of expression of the target markers is carried out by comparing their level of expression with the mean expression of these 2 reference genes.
  • RPS28 ribosomal protein S28; GAPDH: glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase; KRT19: keratin 19, type I; KLK7: kallikrein-related peptidase 7; FLG: profilaggrin; AQP3: aquaporin 3 (GUI blood group); S100A7: psoriasin or calcium-binding protein S100 A7; HMOX1: heme oxygenase 1; TGM1: transglutaminase 1
  • the white birch sap compound tested in combination with the oily macerate of beech buds induced an increase in the expression of genes involved in cell proliferation (KRT19), the barrier/hydration function (FLG) as well as the response to stress oxidative and cellular (HMOX1).
  • KRT19 genes involved in cell proliferation
  • FLG barrier/hydration function
  • HMOX1 stress oxidative and cellular
  • the compound white birch sap (tested at 1%), tested in combination with the compound oily macerate of beech buds (tested at 0.1%) induced an effect synergistic on the modulation of the expression of keratinocyte genes in epidermal regeneration, the barrier/hydration function as well as in protection against oxidative stress and therefore against skin ageing.
  • the compound white birch sap (tested at 1%), tested in combination with the compound aqueous extract of beech buds (tested at 0.3%) induced a significant synergistic effect on the modulation of keratinocyte gene expression involved in epidermal regeneration, desquamation, barrier/hydration function as well as in protection against oxidative stress and therefore against skin ageing.
  • EXAMPLE 2 EXAMPLE OF FORMULATION OF A COSMETIC COMPOSITION OF THE INVENTION (DAY FLUID)

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Abstract

L'invention se rapporte à une composition cosmétique comprenant au moins un extrait de sève de bouleau, et au moins un extrait choisi parmi un extrait aqueux de bourgeons de hêtre et un extrait huileux de bourgeons de hêtre, et au moins un véhicule cosmétiquement acceptable.

Description

COMPOSITION COSMETIQUE COMPRENANT AU MOINS UN EXTRAIT DE BOULEAU ET AU MOINS UN EXTRAIT DE BOURGEON DE HETRE
Domaine technique L’invention se rapporte à une composition cosmétique comprenant au moins un extrait de sève de bouleau, de préférence glycériné, et au moins un extrait choisi parmi un extrait aqueux de bourgeons de hêtre et un extrait huileux de bourgeons de hêtre, et au moins un véhicule cosmétiquement acceptable.
La présente invention se rapporte également à un procédé de soin cosmétique non- thérapeutique comprenant l’application sur la peau ou les muqueuses d’une composition cosmétique comprenant au moins un extrait aqueux de bourgeon de hêtre, un extrait huileux de bourgeon de hêtre et/ou au moins un extrait de bouleau. La présente invention trouve une application dans le domaine de la cosmétique et de la dermatologie, plus particulièrement de la cosmétique cutanée. Dans la description ci-dessous, les références entre crochets ([ ]) renvoient à la liste des références à la fin du texte.
Etat de l’art
La peau est un organe à part entière qui joue un rôle essentiel, non seulement dans la protection du corps contre les agressions extérieures, mais aussi sur le plan esthétique et émotionnel. La peau est un organe d’échange. Son aspect visuel mais aussi tactile occupe une place très importante.
La peau en tant qu'organe est directement exposée aux conditions extérieures, y compris la température, la lumière, l'humidité, les rayons UV et les agents pathogènes. Dans des conditions normales et saines, de nombreux attributs de la peau humaine suivent une périodicité: l'hydratation et la perte d'eau transépidermique, le débit sanguin capillaire, la production de sébum, la température, le pH de la surface et le taux de prolifération des kératinocytes.
Avec l’âge, le renouvellement des kératinocytes est considérablement ralenti et la composition protéique de l’enveloppe cornée responsable de la fonction barrière est profondément modifiée. Il est ainsi important de restaurer la prolifération des kératinocytes ainsi que leur potentiel de différenciation dans le but de restaurer l’homéostasie épidermique et la fonction barrière de la peau qui sont perturbées par le vieillissement de la peau. Par ailleurs, il est connu qu’avec l’âge la peau perd de sa fermeté et de son élasticité qui peut être notamment à l’origine de l’apparition de rides tant au niveau du visage que sur l’ensemble du corps.
Il existe dans l’état de la technique de nombreuses compositions cosmétiques pour le traitement du vieillissement cutané et/ou raffermir la peau. Toutefois, ces compositions présentent des efficacités relatives, voire contestées dans certains cas par des associations de consommateurs. L’efficacité relative des compositions connues peuvent être à l’origine d’un besoin pour les individus de recourir à des actes chirurgicaux tels que l’injection d’acide hyaluronique et/ou de toxine botulique afin de masquer les rides.
Description de l’invention
La présente invention a précisément pour but de répondre à ces besoins et inconvénients de l’art antérieur. Les inventeurs de la présente invention sont en effet les tout premiers à avoir mis en évidence, de manière tout à fait inattendue, qu’une composition cosmétique selon l’invention permet avantageusement une action sur l’esthétisme et le vieillissement de la peau et/ou de ses annexes et/ou des muqueuses, notamment pour apporter éclat, souplesse, finesse, lissage et/ou douceur. Cette action peut notamment se réaliser via la stimulation de la prolifération/régénération des cellules épidermiques, l’hydratation, tout en protégeant des agressions extérieures ( e.g . pollution) ou du stress oxydatif, par le renforcement de la fonction barrière de la peau.
La présente invention a donc pour objet une composition cosmétique comprenant au moins un extrait de sève de bouleau, et au moins un extrait choisi parmi un extrait aqueux de bourgeon de hêtre et un extrait huileux de bourgeon de hêtre, et un support cosmétiquement acceptable.
Selon la présente invention, on entend par « bouleau », une espèce d’arbre caduc de la famille des bétulacées et du genre Betula. En particulier, il peut s’agir par exemple en Europe de Betula alba, Betula pendula, Betula pubescens. La sève, les feuilles et l’écorce ont des vertus diurétiques et sont généralement utilisés dans le traitement des affections cutanées.
Selon la présente invention, on entend par « hêtre » ou « hêtre commun » ( Fagus sylvatica), une espèce d'arbres à feuilles caduques, indigène d'Europe, appartenant à la famille des Fagaceae. Son écorce astringente est utilisée comme fébrifuge. Sous forme de poudre, l’usage de l’écorce est indiqué dans le traitement de la goutte, du rhumatisme, des hydropisies, et des affections cutanées rebelles. Connu notamment pour son action ciblée sur les reins et les tissus adipeux, le bourgeon participe à un « nettoyage » de l’organisme ce qui se traduit par un effet drainant et dynamisant. En cosmétique, les extraits de bourgeons sont utilisés pour dynamiser la peau et améliorer son éclat, booster l’oxygénation des cellules et stimuler leur métabolisme.
Selon la présente invention, on entend par « extrait » toute forme d’extrait connu de l’homme du métier. Il peut s’agir par exemple d’un extrait huileux, d’un extrait aqueux, d’un extrait-hydro-alcoolique, d’un extrait hydro-glycériné, d’un extrait glycériné, d’un extrait supercritique, d’une huile essentielle ou un quelconque mélange de ceux-ci. De tels extraits peuvent être obtenus à partir de n’importe quelle partie d’une plante, par exemple de fleurs ou sommités fleuries, feuilles, graines, racines, tiges, péricarpe, de bourgeons, de sève.
Selon la présente invention, un « extrait aqueux », en particulier un « extrait aqueux de bourgeons de hêtre », peut être obtenu par tout procédé connu de l’homme du métier. Il peut s’agir par exemple d’un extrait aqueux obtenu par extraction aqueuse, par hydrodistillation, extraction hydro-glycérinée, hydro-glycolique ou hydro- alcoolique, extraction à l’eau supercritique. Il peut s’agir par exemple d’un extrait aqueux obtenu selon le procédé décrit dans l’ouvrage « Eco-extraction du végétal » [1]. Il peut également s’agir d’un extrait aqueux de bourgeons de hêtre obtenu par un procédé d’extraction à l’eau supercritique. Il peut encore s’agir d’un extrait aqueux de bourgeon de hêtre disponible dans le commerce. Selon la présente invention, un « extrait huileux », en particulier un « extrait huileux de bourgeons de hêtre » peut être obtenu par tout procédé adapté connu de l’homme du métier. Il peut s’agir par exemple d’un extrait huileux obtenu par extraction huileuse par micro-ondes, par hyperfréquence, par extraction supercritique, par macération dans un solvant huileux, par extraction huileuse assistée par ultrasons. Il peut s’agir par exemple d’un extrait huileux obtenu par macération dans une huile végétale, par exemple dans de l’huile de tournesol désodorisée, puis filtration, par exemple à travers un filtre comprenant des pores avec un diamètre de 0,2 pm. Il peut s’agir d’un extrait huileux de bourgeons de hêtre disponible dans le commerce. Selon un mode de réalisation particulier de la présente invention, la composition cosmétique selon l’invention comprend au moins un extrait de sève de bouleau et un extrait aqueux de bourgeon de hêtre, et optionnellement un extrait huileux de bourgeon de hêtre. Selon un autre mode de réalisation particulier de la présente invention, la composition cosmétique selon l’invention comprend au moins un extrait de sève de bouleau, un extrait aqueux de bourgeon de hêtre, un extrait huileux de bourgeon de hêtre, et au moins un véhicule cosmétiquement acceptable.
Selon un mode de réalisation particulier de la présente invention, ledit extrait de sève de bouleau est un extrait glycériné de sève de bouleau.
Selon la présente invention, un « extrait glycériné de sève de bouleau », peut être obtenu par tout procédé adapté connu de l’homme du métier. Il peut s’agir par exemple d’un extrait glycériné obtenu par un procédé comprenant une macération d’un extrait naturel de plante ( e.g . sève) dans un mélange d’eau, d’alcool et de glycérine. Il peut s’agit également d’un mélange d’une extrait naturel de plante (e.g. sève) avec de la glycérine.
Selon un mode de réalisation particulier de la présente invention, la composition cosmétique selon l’invention comprend de 0,2 à 5%, de préférence de 0,5 à 2%, préférentiellement 1% en poids dudit extrait aqueux de bourgeon de hêtre par rapport au poids total de la composition.
Selon un mode de réalisation particulier de la présente invention, la composition cosmétique selon l’invention comprend de 0,2 à 5%, de préférence de 0,5 à 2%, préférentiellement 1% en poids dudit extrait huileux de bourgeon de hêtre par rapport au poids total de la composition. Selon un mode de réalisation particulier de la présente invention, la composition cosmétique selon l’invention comprend de 0,5 à 6%, de préférence de 1 à 3%, préférentiellement 2% en poids dudit extrait glycériné de sève de bouleau par rapport au poids total de la composition.
La composition cosmétique selon l’invention peut se trouver sous toute forme appropriée pour une application cosmétique. Avantageusement, la composition est une composition à usage topique. Il peut s’agir par exemple d’une composition sous une forme choisie parmi un onguent, une crème, une huile, un lait, une pommade, une poudre, un tampon imbibé, une solution, un gel, un sérum, un baume, un beurre, une lotion, une suspension, un savon et une émulsion (huile dans eau, ou eau dans huile, ou mélange de celles-ci). Ces formulations utilisables pour la mise en oeuvre de la présente invention sont connues dans l’état de la technique par les formulateurs.
La composition cosmétique selon l’invention peut comprendre un ou plusieurs adjuvants connus de l’homme du métier. Il peut s’agir par exemple d’un ou plusieurs adjuvant(s) choisi(s) parmi des agents de type esters, des agents hydratants, de l’eau, des agents humectants, des agents conditionneurs, des agents émollients par exemple des huiles végétales, des agents épaississants minéraux, des agents épaississants organiques, associatifs ou non, des parfums, des conservateurs, des céramides, et pseudo-céramides, des vitamines et les provitamines, des acides aminés, des protéines, des extraits végétaux, des agents séquestrants, des agents alcanisants, des agents acidifiants, des agents réducteurs, des agents oxydants, des charges minérales, des colorants ou tout autre adjuvant pouvant être cité dans le dictionnaire INCI (International Nomenclature of Cosmetic Ingrédients) publié par le PCPC (Personal Care Products council).
La présente invention a également pour objet un dispositif se présentant sous une forme choisie parmi un pot, un flacon-pompe, une lingette, un masque, un dispositif transdermique, un patch, un spray, une capsule ou une gélule, ledit dispositif comprenant une composition cosmétique selon l’invention. La présente invention a également pour objet un procédé de soin cosmétique non- thérapeutique pour améliorer l’aspect de la peau et lutter contre le vieillissement cutané, comprenant l’application sur la peau et/ou ses annexes et/ou les muqueuses d’une composition cosmétique selon l’invention. Avantageusement, ladite application améliore l’hydratation, la nutrition, l’oxygénation et la stimulation de la fonction barrière protectrice de la peau et/ou de ses annexes et/ou des muqueuses.
EXEMPLES EXEMPLE 1 : EFFETS DES COMPOSES MACERAT HUILEUX DE BOURGEONS DE HETRE, EXTRAIT AQUEUX DE BOURGEONS DE HÊTRE, SEVE DE BOULEAU BLANC ET DE LEURS ASSOCIATIONS SUR L’EXPRRESSION DE GENES DANS LES KERATINOCYTES EPIDERMIQUES HUMAINS NORMAUX Dans cette étude, les effets des composés macérat huileux de bourgeons de hêtre, extrait aqueux de bourgeons de hêtre, sève de bouleau blanc et des associations macérat huileux de bourgeons de hêtre + sève de bouleau blanc et extrait aqueux de bourgeons de hêtre + sève de bouleau blanc ont été recherchés dans des kératinocytes épidermiques humains normaux (NHEK).
Les effets des composés ont été évalués par RT-qPCR sur l’expression (ARNm) de 8 gènes (dont 2 gènes de référence) sélectionnés pour leur importance dans la physiologie des kératinocytes. MATERIEL ET METHODES
Modèles biologiques
Kératinocytes épidermiques humains normaux (NHEK)
- Type cellulaire : NHEK, référence Bioalternatives : K341 utilisés au 3ème passage - Conditions de culture : 37°C, 5% CO2
- Milieu de culture : Milieu sans sérum (Kératinocyte-SFM) complémenté avec du facteur de croissance épidermique (EGF) 0,25 ng/ml, de l’extrait pituitaire (EP) 25 μg/ml, de la gentamycine 25 μg/ml.
- Milieu d’essai : Milieu sans sérum (Kératinocyte-SFM) complémenté avec de la gentamycine 25 μg/ml.
Composés testés et associations
Tableau 1 Tableau 2
Tests préliminaires de cytotoxicité
- Type cellulaire : NHEK en milieu d’essai
- Temps d’incubation : 24 heures
- Paramètre d’évaluation : réduction de sel monosodique de 2-(2-méthoxy-4- nitrophényl)-3-(4-nitrophényl)-5-(2,4-disulfophényl)-2H-tetrazolium (WST-8) et observations morphologiques au microscope
A la fin du traitement, les cellules ont été incubées en présence de WST-8 (sel de tétrazolium hautement soluble en eau) réduit en un produit hydrosoluble de couleur orange (formazan) par la succinate déshydrogénase (enzyme mitochondriale). Cette transformation est proportionnelle au nombre de cellules vivantes et à leur activité métabolique. La densité optique (DO) a été mesurée avec un spectrophotomètre à 450 nm (VERSAmax, Molecular Devices).
Cultures et traitements
Les kératinocytes ont été ensemencés en plaques 24 puits et cultivés en milieu de culture pendant 24 heures puis en milieu d’essai pendant 24 heures supplémentaires. Après incubation, le milieu de culture a été remplacé par du milieu d’essai contenant ou non (témoin) les composés, les associations ou le contrôle solvant (THF à 1 %) et les cellules ont été incubées pendant 24 heures.
Toutes les conditions ont été réalisées en n=3.
A la fin de l’incubation, les surnageants de culture ont été éliminés et les tapis cellulaires ont été rincés avec une solution de tampon phosphate salin (PBS). Les plaques ont été immédiatement congelées à sec à -80 °C.
Analyse de l’expression différentielle - matrice PCR L’expression des marqueurs a été évaluée par RT-qPCR sur les ARN totaux extraits des tapis cellulaires de chaque condition expérimentale (les répliquats de la même condition expérimentale ont été regroupés avant l’extraction de l’ARN).
L’analyse des transcrits a été réalisée en n=2 à l’aide de « matrices PCR » dédiées à la recherche et adaptées au format « criblage » (marqueurs de matrice PCR quantitative (mQPA) produits par Bioalternatives) et ciblant 8 gènes sélectionnés pour leur importance dans la physiologie du kératinocyte (« MV200714 - mQPA NHEK-8 gènes à façon »). Extraction d’ARN et transcription inverse
Les ARN totaux de chaque échantillon ont été extraits à l’aide de TriPure Isolation Reagent® selon le protocole préconisé par le fournisseur. La quantité et la qualité des ARN ont été évaluées par électrophorèse capillaire (Bioanalyzer 2100, Agilent). Les ADN complémentaires (ADNc) ont été synthétisés par transcription inverse des ARN totaux en présence d’oligo(dT) et de l’enzyme transcriptase inverse « Transcriptor Reverse Transcriptase » (Roche). Les quantités d’ADNc ont ensuite été ajustées avant l’étape de PCR.
PCR quantitative Les réactions de PCR (réaction de polymérase en chaîne) ont été réalisées par PCR quantitative (Light Cycler ; Roche Molecular Systems Inc.) et selon les procédures recommandées par le fournisseur.
Le mélange réactionnel (10ml final) pour chaque échantillon contenait :
- 2, 5mI d’ADNc, - les amorces des différents marqueurs utilisés,
- le mélange réactionnel contenant l’enzyme Taq polymérase, le marqueur SYBR Green I et du MgCL.
Traitement des données Les données brutes ont été transférées et traitées sous le logiciel Microsoft Excel®.
Cytotoxicité préliminaire Formules utilisées dans ce rapport :
Erreur standard de la moyenne : esm=écart-type (Sd) / Vn L’erreur standard de la moyenne (esm) représente l’écart type de la moyenne de l’échantillon par rapport à la moyenne de la vraie population. L’esm est calculé en divisant le Sd par la racine carrée de la taille de l’échantillon.
Pourcentage de viabilité : viabilité(%) = (DOcomposé / DOtémoin) x 100
PCR quantitative
L’incorporation de fluorescence dans l’ADN amplifié est mesurée en continu au cours des cycles de PCR. Ces mesures permettent d’obtenir des courbes d’intensité de la fluorescence en fonction des cycles de PCR et d’évaluer ainsi une valeur d’expression relative pour chaque marqueur.
Le nombre de cycles est déterminé à partir des points de « sortie » des courbes de fluorescence. Pour un même marqueur analysé, plus un échantillon sort tard (nombre de cycles élevé), plus le nombre initial de copies de l’ARNm est faible.
La valeur d’expression relative est déterminée selon la formule :
(1 /2nombre be cvc|6 ) x 106.
Les matrices PCR « MV200714 - mQPA NHEK-8 gènes à façon » contiennent 2 gènes de référence (gène de ménage ou « housekeeping (HK) ») utilisés pour la normalisation des données : RPS28 (protéine ribosomale S28) et GAPDH (glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase). Les gènes de référence sélectionnés sont des gènes exprimés de façon constitutive et dont le niveau d’expression n’est pas ou peu impacté par les traitements. La normalisation du niveau d’expression des marqueurs cibles est réalisée en comparant leur niveau d’expression à la moyenne d’expression de ces 2 gènes de référence.
RESULTATS
Tests préliminaires de cytotoxicité
Les résultats des tests de viabilité au WST-8 et l’observation des tapis cellulaires ont conduit à sélectionner les concentrations à tester dans la suite de l’étude (cf. tableaux 3 à 5 : effets des composés macérat huileux de bourgeons de hêtre, extrait aqueux de bourgeons de hêtre et sève de bouleau blanc sur la viabilité des kératinocytes après 24 heures).
Tableau 3
Tableau 4
Tableau 5 + : population normale ; +/- : réduction de croissance ; - : toxicité ; 0 : mortalité cellulaire
* : modifications morphologiques
Effets sur l’expression de gènes
Le composé macérat huileux de bourgeons de hêtre a été solubilisé en THF, et la concentration finale du composé testée dans l’étude contient 1% de THF. Un contrôle solvant THF 1% a donc été réalisé sur les NHEK. Le THF testé à 1% sur les kératinocytes, n’a pas induit de modification significative sur l’expression des gènes étudiés (cf. tableau 6 ci-dessous : Effets du contrôle solvant (THF) sur l’expression des gènes impliqués dans des kératinocytes épidermiques humains normaux). Tableau 6
HK : de référence
RPS28 : protéine ribosomale S28 ; GAPDH : glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase ; KRT19 : kératine 19, type I ; KLK7 : peptidase 7 apparentée à la kallikréine ; FLG : profilaggrine ; AQP3 : aquaporine 3 (groupe sanguin GUI) ; S100A7 : psoriasine ou protéine S100 liant le calcium A7 ; HMOX1 : hème oxygénase 1 ; TGM1 : transglutaminase 1
Kératinocytes épidermiques humains normaux
Les résultats sont présentés dans les tableaux 7 à 9 (Effets des composés macérat huileux de bourgeons de hêtre, extrait aqueux de bourgeons de hêtre, sève de bouleau blanc et des associations macérat huileux de bourgeons de hêtre + sève de bouleau blanc et extrait aqueux de bourgeons de hêtre + sève de bouleau blanc, sur l’expression des gènes dans des kératinocytes dermiques humains normaux) ci-dessous.
Tableau 7 Tableau 8
Tableau 9
Dans les conditions expérimentales de cette étude, les composés macérat huileux de bourgeons de hêtre (testé à 0,1%), extrait aqueux de bourgeons de hêtre (testé à 0,3%) et sève de bouleau blanc (testé à 1%) n’ont globalement pas modulé l’expression des gènes analysés.
Le composé sève de bouleau blanc testé en combinaison avec le macérat huileux de bourgeons de hêtre a induit une augmentation de l’expression de gènes impliqués dans la prolifération cellulaire (KRT19), la fonction barrière/hydratation (FLG) ainsi que la réponse au stress oxydatif et cellulaire (HMOX1). Le traitement des kératinocytes avec le composé sève de bouleau blanc testé en combinaison avec l’extrait aqueux de bourgeons de hêtre a significativement augmenté l’expression des marqueurs KRT19 (impliqué dans la prolifération cellulaire), KLK7 (impliqué dans la desquamation), FLG (impliqué dans la fonction barrière/hydratation), HMOX1 (impliqué dans la réponse au stress oxydatif et cellulaire) et TGM1 (impliqué dans la fonction barrière).
Dans les conditions expérimentales de cette étude, le composé sève de bouleau blanc (testé à 1%), testé en combinaison avec l’extrait aqueux de bourgeons de hêtre (testé à 0,3%) ou le macérat huileux de bourgeons de hêtre (testé à 0,1%) a montré un important effet synergique sur la modulation de l’expression des gènes des kératinocytes.
CONCLUSION
Le composé sève de bouleau blanc (testé à 1%), testé en combinaison avec le composé macérat huileux de bourgeons de hêtre (testé à 0,1%) a induit un effet synergique sur la modulation de l’expression des gènes des kératinocytes dans la régénération épidermique, la fonction barrière/hydratation ainsi que dans la protection contre le stress oxydatif donc contre le vieillissement cutané.
Le composé sève de bouleau blanc (testé à 1%), testé en combinaison avec le composé extrait aqueux de bourgeons de hêtre (testé à 0,3%) a induit un important effet synergique sur la modulation de l’expression des gènes des kératinocytes impliqués dans la régénération épidermique, la desquamation, la fonction barrière/hydratation ainsi que dans la protection contre le stress oxydatif donc contre le vieillissement cutané.
EXEMPLE 2 : EXEMPLE DE FORMULATION D’UNE COMPOSITION COSMETIQUE DE L’INVENTION (FLUIDE DE JOUR)
Tableau 10
Liste de Références
1. Farid Chemat : Eco-extraction du végétal, Editions Dunod, 2011

Claims

REVENDICATIONS
1 . Composition cosmétique comprenant au moins un extrait de sève de bouleau, et au moins un extrait choisi parmi un extrait aqueux de bourgeon de hêtre et un extrait huileux de bourgeon de hêtre, et au moins un véhicule cosmétiquement acceptable.
2. Composition cosmétique selon la revendication 1 comprenant au moins un extrait de sève de bouleau et un extrait aqueux de bourgeon de hêtre, et optionnellement un extrait huileux de bourgeon de hêtre.
3. Composition selon la revendication 1 ou 2, ladite composition comprenant au moins un extrait de sève de bouleau, un extrait aqueux de bourgeon de hêtre, et un extrait huileux de bourgeon de hêtre.
4. Composition selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, où ledit extrait de sève de bouleau est un extrait glycériné.
5. Composition selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, comprenant de 0,2 à 5% en poids dudit extrait aqueux de bourgeon de hêtre par rapport au poids total de la composition.
6. Composition selon l’une quelconque des revendications 1 à 5, comprenant de 0,2 à 5% en poids dudit extrait huileux de bourgeon de hêtre par rapport au poids total de la composition.
7. Composition selon l’une quelconque des revendications 1 à 6, comprenant de 0,5 à 6% en poids dudit extrait glycériné de sève de bouleau par rapport au poids total de la composition.
8. Composition selon l’une quelconque des revendications 1 à 7, ladite composition étant sous une forme choisie parmi un onguent, une crème, une huile, un lait, une pommade, une poudre, un tampon imbibé, une solution, un gel, un sérum, un baume, un beurre, une lotion, une suspension, un savon et une émulsion.
9. Dispositif se présentant sous une forme choisie parmi un pot, un flacon- pompe, une lingette, un masque, un dispositif transdermique, un patch, un spray, une capsule ou une gélule, ledit dispositif comprenant une composition cosmétique selon l’une quelconque des revendications 1 à 8.
10. Procédé de soin cosmétique non-thérapeutique, comprenant l’application sur la peau et/ou ses annexes et/ou les muqueuses d’une composition cosmétique selon l’une quelconque des revendications 1 à 8.
11. Procédé selon la revendication 10, où ladite application améliore l’hydratation, la nutrition, l’oxygénation et la stimulation de la fonction barrière protectrice de la peau et/ou de ses annexes et/ou des muqueuses.
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