EP3303295A2

EP3303295A2 - Analogues de l'hydroxychloroquine (hcq) depourvus de toxicite retinienne

Info

Publication number: EP3303295A2
Application number: EP16728914.9A
Authority: EP
Inventors: Anne-Sophie Korganow; Pierre Eftekhari; Alain Wagner; Corinne BAEHR
Original assignee: Centre International De Recherche Aux Frontieres de la Chimie; Inoviem Scientific; Centre National de la Recherche Scientifique CNRS; Universite de Strasbourg
Current assignee: Centre International De Recherche Aux Frontieres de la Chimie; Inoviem Scientific; Centre National de la Recherche Scientifique CNRS; Universite de Strasbourg
Priority date: 2015-06-05
Filing date: 2016-06-06
Publication date: 2018-04-11
Also published as: CA2988342A1; WO2016193503A3; US20190062278A1; WO2016193503A2; US10647677B2

Abstract

La présente invention concerne des analogues de I'hydroxychloroquine présentant une activité supérieure à I'hydroxychloroquine mais dépourvu de cytotoxicité rétinienne de formule (I), leurs sels, solvates ou hydrates pharmaceutiquement acceptables : leur procédé de préparation et leur utilisation dans le traitement du lupus érythémateux.

Description

ANALOGUES DE L' HYD ROXYC H LO ROQU I N E (HCQ) DEPOURVUS DE TOXICITE

RETINIENNE

DOMAINE DE L'INVENTION

La présente invention concerne de nouveaux analogues de I Tiydroxychloroquine

(HCQ), leur utilisation dans le traitement des maladies inflammatoires et auto-immunes, en particulier dans le traitement du lupus érythémateux, et du cancer, ainsi que le procédé de préparation de ces composés.

L^'invention concerne également une méthode de criblage de I activité de composés utiles pour le traitement du lupus érythémateux mais ne présentant pas de toxicité rétinienne.

ETAT DE LA TECHNIQUE

Le lupus aussi appelé lupus érythémateux est une pathologie auto-immune chronique dans laquelle un dérèglement du système immunitaire est à I origine de lésions tissulaires. Cette atteinte regroupe plusieurs formes dont le lupus érythémateux subaigu et le lupus érythémateux disséminé (LED). Elle peut toucher différents organes comme la peau, les articulations, les reins, le coeur, les poumons et parfois même le cerveau. Les conséquences à long terme de la pathologie sont graves et peuvent conduire à une insuffisance rénale (30% des cas) nécessitant une dialyse voire une transplantation. La maladie progresse par poussées, les crises étant entrecoupées de périodes de rémission plus ou moins longues.

Selon les organes touchés par la maladie, le lupus peut s exprimer de façon très différente d lin patient à I autre. Des manifestations sévères peuvent être observées chez 50% des patients comme une inflammation des reins (néphrite), des troubles neurologiques (avec psychoses, paralysie, amnésie, dépression, maux de tête etcù ), un manque de globules rouges (anémie) voire de plaquettes (thrombocytopénie). Des formes extrêmement sévères de lupus peuvent mettre en jeu le pronostic vital.

Les causes du lupus sont encore mal connues mais il est établi que I organisme synthétise des auto-anticorps pathogènes qui vont attaquer certains tissus sains. Les antécédents familiaux démontrent que les facteurs génétiques sont réels mais divers facteurs environnementaux contribuent au déclenchement de la pathologie (exposition au soleil, tabac, infection par le virus Epstein Barr notamment). Un Lupus peut également survenir après une prise de médicaments en particulier les interférons alpha utilisées pour le traitement de certains cancers et des hépatites virales chroniques. Ce dernier type d affection est « réversible » car la pathologie disparaît dès lors que le traitement est suspendu. Le diagnostic du Lupus est délicat car les symptômes se confondent avec ceux d autres pathologies. Les atteintes articulaires le font parfois assimiler dans un premier temps à une Polyarthrite Rhumatoïde.

Les bases fondamentales de la pathologie n étant pas établies, les solutions thérapeutiques disponibles actuellement visent surtout à gérer au mieux les symptômes détectés sans en traiter les causes, prévenir les lésions aux organes et minimiser les risques de poussées pendant les périodes de relative stabilité.

Les thérapies actuelles reposent sur la prescription de médicaments antipaludéens (HCQ) et d anti-inflammatoires non stéroïdiens (AINS) pour les formes surtout cutanées et articulaires du lupus, I utilisation de corticoïdes, souvent à fortes doses, puis d agents cytotoxiques pour les formes sévères (persistance des symptômes articulaires ou traitement des formes viscérales) et la prescription d ïmmunosuppresseurs pour les patients insensibles aux traitements antérieurs. Ces divers traitements présentent cependant l^'inconvénient de conduire à des effets secondaires plus ou moins graves.

La prise en charge du patient combine généralement, au cours du temps, différents types de médicaments avec la plupart du temps un traitement de fond basé sur I utilisation de l ^'HCQ. Ces dernières décades, le seul nouveau médicament apparu sur le marché est le Benlysta®, un anticorps monoclonal administré sous forme de perfusion intraveineuse qui empêche la fixation de la protéine endogène BLyS, inhibant ainsi la survie de cellules B et leur différentiation.

Le Benlysta® affiche des limites de performance évidentes et est toujours utilisé en association avec le traitement standard.

Conçus à l'origine pour traiter le paludisme (la malaria), les 4-aminoquinolines se sont avérées efficaces dans le traitement de certains des symptômes du LED, notamment la fatigue, les éruptions cutanées et les douleurs articulaires. La molécule de référence est l îiydroxychloroquine (HCQ, Plaquenil® et génériques) généralement employé à la dose de 400 mg/j. Bien que le mode d action soit encore mal connu, l'HCQ constitue le traitement de référence du lupus cutané chronique.

L^'HCQ présente toutefois I inconvénient de conduire à des effets indésirables. L atteinte la plus fréquente est une atteinte rétinienne liée à la prise prolongée de fortes doses de ce médicament. La molécule s'accumule dans la partie arrière (rétine) ou avant (cornée) de il, provoquant des troubles de l'accommodation pour plus de 10% des patients. Les dépôts rétiniens peuvent conduire à des rétinopathies potentiellement irréversibles et capables d évoluer malgré I arrêt du traitement. Il n existe actuellement aucun traitement à cette rétinopathie toxique. Ces complications oculaires potentielles imposent une surveillance ophtalmique régulière, au moins annuelle.

Il existe donc un besoin pour de nouvelles petites molécules plus efficaces que ΙΊ-ICQ dans le traitement du LED dépourvues de toxicité rétinienne.

Malheureusement le mode d'action de I HCQ reste encore mal connu à ce jour, notamment les cibles thérapeutiques et délétères, responsable de la rétinopathie.

Les inventeurs de la présente invention ont identifié une cible thérapeutique de I HCQ, la myéloperoxidase (MPO) et une cible responsable de la rétinopathie qui est la B-cristalline ( B-C). La mise en évidence de ces deux cibles a permis aux inventeurs de mettre au point de nouveaux analogues de I HCQ possédant une activité inhibitrice de la MPO (cible thérapeutique) supérieure à I HCQ et une activité anti-inflammatoire supérieure à IHCQ mais n ayant pas d affinité pour Γ B-cristalline ( B-C). Ces analogues sont notamment caractérisés par la présence d lin substituant en position 3 du cycle quinoline de I HCQ.

Ainsi, les composés de la présente invention présentent, grâce à une affinité réduite pour Γ B-cristalline, une toxicité plus faible que I HCQ et par conséquent n induisent pas de lésion rétinienne.

Figures : La figure 1 représente le taux de survie des souris ayant été traitées par HCQ

(10mg/kg) et le composé CB 137 (10 mg/kg).

La figure 2 représente le taux de souris traitées par HCQ (10mg/kg) ou CB137 (10mg/kg) présentant des dermatites.

La figure 3 représente deux photographies représentatives d line coupe transversale de rétine.

La figure 4 représente le pourcentage de souris traitées présentant des lésions rétiniennes en fonction du traitement.

La figure 5 représente le nombre de neutrophiles présents dans les poumons des souris traitées par HCQ (10 mg/kg) ou CB 137 (10, 30 et 100mg/kg).

La figure 6 représente des coupes de poumons colorés à I eosine et hématoxyline.

Composés La présente invention concerne donc de nouveaux analogues de I HCQ de formule (I), leurs sels, solvates ou hydrates pharmaceutiquement acceptables, sous la forme d lin énantiomère ou d un mélange d ënantiomères :

dans laquelle U représente :

F, Cl, Br, CN, ou N₃ ;

et V, W, X et Y représentent indépendamment:

i H à condition que V, W, X et Y ne représentent pas tous simultanément H ;

l F, Cl, Br, CN ou N₃ ;

i Si(R^a)(Ft^b)(Ft^c), où

R^a, R^b et R^c, identiques ou différents, représentent un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₃, ou aryle ;

i R , où

R¹ représente un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée méthyle ; un groupement perfluoroalkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C-4, de manière préférée CF₃, CF₂CF₃ ou CH(CF₃)₂ ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; aryle, de préférence phényle ; aralkyle, de préférence benzyle ; ou hétéroaryle ;

i S(0)_nR², où

n = 0, 1 ou 2,

R² représente un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; aryle, de préférence phényle ou tolyle ; aralkyle, de préférence benzyle ; ou hétéroaryle, i NR³R⁴, où

R³ représente H, un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; aryle, de préférence phényle ; aralkyle, de préférence benzyle ; ou hétéroaryle, R⁴ représente H ; un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; aryle, de préférence phényle ; aralkyle, de préférence benzyle ; hétéroaryle ; C(0)-alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; C(0)-cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; C(0)-aryle, de préférence phényle ; C(0)-aralkyle, de préférence benzyle ; C(0)-hétéroaryle ; S0₂-alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; S0₂-cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; S0₂-aryle, de préférence phényle ; S0₂-hétéroaryle ; C(0)N(R⁵)₂ ; où R⁵ est tel que défini pour R³ ; C(0)OR⁶, où R⁶ représente un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; ou aralkyle, de préférence benzyle ; ou R³ et R⁴ peuvent être liés ensemble pour former un cycle non aromatique de 5 à 8 atomes ou un imide cyclique de 5 à 8 chaînons ;

SR⁵, où

R⁵ représente un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée méthyle ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; aryle, de préférence phényle ; aralkyle, de préférence benzyle ; ou hétéroaryle,

C(0)R⁶, où

R⁶ représente un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée méthyle ; alkyle perfluoré, de préférence trifluorométhyle ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; aryle, de préférence phényle ; aralkyle, de préférence benzyle ; hétéroaryle ; O-alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; O-cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; O-aryle, de préférence phényle ; O-aralkyle, de préférence benzyle ; O-hétéroaryle ; ou N(R⁷)(R⁸) ;

à condition que lorsque X représente C(0)R⁶, alors R⁶ représente un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée méthyle ; alkyle perfluoré, de préférence trifluorométhyle ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; aryle, de préférence phényle ; aralkyle, de préférence benzyle ; hétéroaryle ; ou N(R⁷)(R⁸) ;

R⁷ et R⁸, identiques ou différents, représentent H ; un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée méthyle ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; aryle, de préférence phényle ; aralkyle, de préférence benzyle ; ou hétéroaryle ;

OR⁷, où

R⁷ représente : H ; un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée méthyle ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; aryle, de préférence phényle ; aralkyle, de préférence benzyle ; hétéroaryle ; C(0)-alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; C(0)-cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; C(0)-aryle, de préférence phényle ; C(0)-aralkyle, de préférence benzyle ; C(0)-hétéroaryle ; C(0)0-alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; C(0)0-cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; C(0)0-aryle, de préférence phényle ; C(0)0-aralkyle, de préférence benzyle ; C(0)0-hétéroaryle ; (CH₂)_mCCR⁸ ; (CH₂)_PCH=CR⁸ ;

où m = 1 à 6 et p = 1 à 6 ; ou

CH₂OR⁷ ; CH₂SR⁵ ; CH₂NR³R⁴ ; ou CH₂N₃.

Avantageusement U représente Cl et V, W, X et Y représentent indépendamment :

H à condition que V, W, X et Y ne représentent pas tous simultanément H ;

F, Cl, Br, CN ou N₃ ;

Si(R^a)(R^b)(R^c), où

R , où

R¹ représente un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée méthyle ; un groupement perfluoroalkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée CF₃, CF₂CF₃ ou CH(CF₃)₂ ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; aryle, de préférence phényle ; aralkyle, de préférence benzyle ; ou hétéroaryle ;

S(0)_nR², où

n = 0, 1 ou 2,

R² représente un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; aryle, de préférence phényle ou tolyle ; aralkyle, de préférence benzyle ; ou hétéroaryle, NR³R⁴, où

R³ représente H, un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; aryle, de préférence phényle ; aralkyle, de préférence benzyle ; ou hétéroaryle,

R⁴ représente H ; un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; aryle, de préférence phényle ; aralkyle, de préférence benzyle ; hétéroaryle ; C(0)-alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; C(0)-cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; C(0)-aryle, de préférence phényle ; C(0)-aralkyle, de préférence benzyle ; C(0)-hétéroaryle ; S0₂-alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; S0₂-cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; S0₂-aryle, de préférence phényle ; S0₂-hétéroaryle ; C(0)N(R⁵)₂ ; où R⁵ est tel que défini pour R³ ; C(0)OR⁶, où R⁶ représente un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; ou aralkyle, de préférence benzyle ; ou R³ et R⁴ peuvent être liés ensemble pour former un cycle non aromatique de 5 à 8 atomes ou un imide cyclique de 5 à 8 chaînons ;

SR⁵, où

C(0)R⁶, où

OR⁷, où

R⁷ représente : H ; un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée méthyle ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; aryle, de préférence phényle ; aralkyle, de préférence benzyle ; hétéroaryle ; C(0)-alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; C(0)-cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; C(0)-aryle, de préférence phényle ; C(0)-aralkyle, de préférence benzyle ; C(0)-hétéroaryle ; C(0)0-alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; C(0)0-cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; C(0)0-aryle, de préférence phényle ; C(0)0-aralkyle, de préférence benzyle ; C(0)0-hétéroaryle ; (CH₂)_mCCR⁸ ; (CH₂)_PCH=CR⁸ ; où m = 1 à 6 et p = 1 à 6 ; ou

l CH₂OR⁷ ; CH₂SR⁵ ; CH₂NR³R⁴ ; ou CH₂N₃.

Avantageusement U représente Cl,

V, W et Y représentent indépendamment H, F, Cl, Br, CN ou N₃ avantageusement H ou Cl, et

X représente :

i H à condition que V, W, X et Y ne représentent pas tous simultanément H ;

l F, Cl, Br, CN ou N₃ ;

i Si(R^a)(R^b)(R^c), où

t R\ où

R¹ représente un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée méthyle ; un groupement perfluoroalkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à

C₄, de manière préférée CF₃, CF₂CF₃ ou CH(CF₃)₂ ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; aryle, de préférence phényle ; aralkyle, de préférence benzyle ; ou hétéroaryle ;

i S(0)_nR², où

n = 0, 1 ou 2,

R⁴ représente H ; un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; aryle, de préférence phényle ; aralkyle, de préférence benzyle ; hétéroaryle ; C(0)-alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; C(0)-cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; C(0)-aryle, de préférence phényle ;

C(0)-aralkyle, de préférence benzyle ; C(0)-hétéroaryle ; S0₂-alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; S0₂-cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; S0₂-aryle, de préférence phényle ; S0₂-hétéroaryle ; C(0)N(R⁵)₂ ; où R⁵ est tel que défini pour R³ ; C(0)OR⁶, où R⁶ représente un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; ou aralkyle, de préférence benzyle ; ou R³ et R⁴ peuvent être liés ensemble pour former un cycle non aromatique de 5 à 8 atomes ou un imide cyclique de 5 à 8 chaînons ;

SR⁵, où

C(0)R⁶, où

OR⁷, où

où m = 1 à 6 et p = 1 à 6 ; ou

CH₂OR⁷ ; CH₂SR⁵ ; CH₂NR³R⁴ ; ou CH₂N₃. Avantageusement U représente Cl,

V, W et Y représentent indépendamment H, F, Cl, Br, CN ou N_3: avantageusement H ou Cl, et

X représente :

i H à condition que V, W, X et Y ne représentent pas tous simultanément H ;

l F ; Cl ; Br ; ou CN ;

t R\ où

R représente avantageusement, avantageusement un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée méthyle ; un groupement perfluoroalkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée CF₃, CF₂CF₃ ou CH(CF₃)₂ ; ou cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ;

i S(0)_nR², où n = 0, 1 ou 2 et où R² représente avantageusement un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence méthyle ;

i C(0)R⁶, où R⁶ représente un groupement alkyle perfluoré, de préférence trifluorométhyle ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ;

i OR⁷, où R⁷ représente un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée méthyle ; un groupement perfluoroalkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée CF₃, CF₂CF₃ ou CH(CF₃)₂ ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ;

l NR³R⁴ ; où R³ représente un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle et R⁴ représente un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; ou R³ et R⁴ sont liés ensemble pour former un cycle non aromatique de 5 à 8 atomes ou un imide cyclique de 5 à 8 chaînons ; ou

l CH₂OR⁷ où R⁷ représente un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée méthyle ; un groupement perfluoroalkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée CF₃, CF₂CF₃ ou CH(CF₃)₂ ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; (CH₂)_mCCR⁸ ; (CH₂)_pCH=CR⁸ où R⁸ représente H, Si(R^a)(R^b)(R^c), ou R¹ et m = 1 à 6 et p = 1 à 6.

De manière encore plus avantageuse, U représente Cl, V, W et Y représentent H ou Cl et X représente avantageusement : H, F, Cl, Br, CF₃, CN, S0₂CH₃, CH₃, CH₂CH₃, cyclopropyle, C(0)cPr, C(0)CF_3, Si(CH₃)₃, N(CH₃)₂, ou CH₂OCH₂CCH à condition que V, W, X et Y ne représentent pas tous simultanément H. Typiquement, U et V représentent Cl, W et Y représentent H et X représente avantageusement : H, F, Cl, Br, CF₃, CN, S0₂CH₃, CH₃, CH₂CH₃, cyclopropyle, C(0)cPr, C(0)CF_3, Si(CH₃)₃, N(CH₃)₂, ou CH₂OCH₂CCH, avantageusement H. Typiquement, U et W représentent Cl, V et Y représentent H et X représente avantageusement : H, F, Cl, Br, CF₃, CN, S0₂CH₃, CH₃, CH₂CH₃, cyclopropyle, C(0)cPr, C(0)CF_3, Si(CH₃)₃, N(CH₃)₂, ou CH₂OCH₂CCH avantageusement H.

Typiquement, U et Y représentent Cl, V et W représentent H et X représente avantageusement : H, F, Cl, Br, CF₃, CN, S0₂CH₃, CH₃, CH₂CH₃, cyclopropyle, C(0)cPr, C(0)CF_3, Si(CH₃)₃, N(CH₃)₂, ou CH₂OCH₂CCH avantageusement H.

Selon un mode de réalisation particulier, U représente Cl, V, W et Y représentent H et X représente :

i F, Cl, Br, CN, ou N₃ ;

i Si(R^a)(Ft^b)(Ft^c), où

t R¹, où

i S(0)_nR², où

n = 0, 1 ou 2,

SR⁵, où

C(0)R⁶, où

R⁶ représente un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée méthyle ; alkyle perfluoré, de préférence trifluorométhyle ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; aryle, de préférence phényle ; aralkyle, de préférence benzyle ; hétéroaryle ; ou N(R⁷)(R⁸)

OR⁷, où

où m = 1 à 6 et p = 1 à 6 ; ou

CH₂OR⁷ ; CH₂SR⁵ ; CH₂NR³R⁴ ; ou CH₂N₃. De manière avantageuse, U représente Cl, V, W et Y représentent H et X représente avantageusement

l F ; Cl ; Br ; ou CN ;

t R\ où

R¹ représente avantageusement, avantageusement un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée méthyle ; un groupement perfluoroalkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée CF₃, CF₂CF₃ ou CH(CF₃)₂ ; ou cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ;

De manière encore plus avantageuse, U représente Cl, V, W et Y représentent H et X représente avantageusement :

i F ; Cl ; Br ; CN ;

i R¹ , avantageusement un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, ou un groupement alkyle en C₂ à C₆, de préférence en C₂ à C₄, un groupement perfluoroalkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée CF₃, CF₂CF₃ ou CH(CF₃)₂ ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; S(0)_nR², où n = 0, 1 ou 2 et où R² représente avantageusement un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence méthyle ;

C(0)R⁶, où R⁶ représente un groupement alkyle perfluoré, de préférence trifluorométhyle ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ;

OR⁷, où R⁷ représente un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée méthyle ; un groupement perfluoroalkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée CF₃, CF₂CF₃ ou CH(CF₃)₂ ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ;

NR³R⁴ ; où R³ représente un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle et R⁴ représente un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; ou R³ et R⁴ sont liés ensemble pour former un cycle non aromatique de 5 à 8 atomes ou un imide cyclique de 5 à 8 chaînons ; ou

CH₂OR⁷ où R⁷ représente un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée méthyle ; un groupement perfluoroalkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée CF₃, CF₂CF₃ ou CH(CF₃)₂ ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; (CH₂)_mCCR⁸ ; (CH₂)_pCH=CR⁸ où R⁸ représente H, Si(R^a)(R^b)(R^c), ou R¹ et m = 1 à 6 et p = 1 à 6. De manière encore plus avantageuse, U représente Cl, V, W et Y représentent H et X représente avantageusement : F, Cl, Br, CF₃, CN, S0₂CH₃, CH₃, CH₂CH₃, cyclopropyle, C(0)cPr, C(0)CF_3, Si(CH₃)₃, N(CH₃)₂, ou CH₂OCH₂CCH.

Selon une caractéristique particulière de I invention, dans le composé de formule (I), U représente Cl, V, W et Y représentent H et X représente F, Cl, Br, CF₃, CN, S0₂CH₃, CH₂CH₃, cyclopropyle, C(0)cPr, C(0)CF_3, Si(CH₃)₃, N(CH₃)₂, ou CH₂OCH₂CCH.

Selon un autre mode de réalisation particulier de l^'invention, dans le composé de formule (I), U représente Cl, V, W et Y représentent H et X représente :

i CI ; Br ou CN ;

i R¹ , avantageusement un groupement un groupement perfluoroalkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée CF₃, CF₂CF₃ ou CH(CF₃)₂ ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ;

i C(0)R⁶, où R⁶ représente un groupement alkyle perfluoré, de préférence trifluorométhyle ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; l CH₂OR⁷ où R⁷ représente un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée méthyle ; un groupement perfluoroalkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée CF₃, CF₂CF₃ ou CH(CF₃)₂ ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; (CH₂)_mCCFt⁸ ; (CH₂)_pCH=CR⁸ où R⁸ représente H, Si(R^a)(R^b)(R^c), ou R¹ et m = 1 à 6 et p = 1 à 6.

De manière plus avantageuse, dans le composé de formule (I), U représente Cl, V, W et Y représentent H et X représente Cl, Br, CF₃, CN, C(0)cPr, C(0)CF₃, ou CH₂OCH₂CCH.

De manière particulièrement avantageuse, dans le composé de formule (I), U représente Cl, V, W et Y représentent H et X représente Cl.

Selon un autre mode de réalisation particulier de l^'invention, dans le composé de formule (I), U représente Cl, X, W et Y représentent H et V représente Cl.

Selon un autre mode de réalisation particulier de l^'invention, dans le composé de formule (I), U représente Cl, X, V et Y représentent H et W représente Cl.

Selon un autre mode de réalisation particulier de l^'invention, dans le composé de formule (I), U représente Cl, X, V et W représentent H et Y représente Cl.

Selon un autre mode de réalisation particulier de l^'invention, le composé de formule (I) est choisi parmi les composés cités dans le tableau 1 à I exception de IHCQ et de NT36F9 et/ou le composé de formule (I) est choisi parmi les composés cités dans le tableau 2 à I exception de I HCQ.

Avantageusement, le composé de formule (I) est sous forme énantiomériquement pure, c est-à-dire une pureté optique supérieure à 95%, de préférence supérieure à 98%. De préférence, il s agit de I enantiomère (R).

La présente invention concerne également un composé de formule (I) tel que défini ci- dessus pour son utilisation en tant que médicament.

La présente invention concerne avantageusement un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus pour son utilisation en tant qu agent anti-inflammatoire, de préférence pour son utilisation dans le traitement du lupus érythémateux, de manière préférée pour son utilisation dans le traitement du lupus érythémateux disséminé.

La présente invention concerne également un composé de formule (I) tel que défini ci- dessus pour son utilisation dans le traitement des vascularites.

La présente invention est particulièrement adaptée pour son utilisation dans le traitement de I arthrite rhumatoïde. Les composés de formule (I) possèdent des propriétés d Inhibition de I autophagie. La présente invention concerne donc également un composé de formule (I) pour son utilisation dans le traitement du cancer en association avec un agent anticancéreux, notamment le cancer du poumon ou le cancer colorectal.

Définitions :

Dans la présente invention, on entend désigner par « pharmaceutiquement acceptable » ce qui est utile dans la préparation d'une composition pharmaceutique qui est généralement sûr, non toxique et ni biologiquement ni autrement non souhaitable et qui est acceptable pour une utilisation vétérinaire de même que pharmaceutique humaine.

On entend désigner par « sels pharmaceutiquement acceptables » d un composé, des sels qui sont pharmaceutiquement acceptables, comme défini ici, et qui possèdent I activité pharmacologique souhaitée du composé parent. De tels sels comprennent :

(1 ) les hydrates et les solvates,

(2) les sels d addition d acide pharmaceutiquement acceptable formés avec des acides inorganiques pharmaceutiquement acceptables tels que I acide chlorhydrique, I acide bromhydrique, I acide sulfurique, I acide nitrique, I acide phosphorique et similaires ; ou formés avec des acides organiques pharmaceutiquement acceptables tels que I acide acétique, I acide benzènesulfonique, I acide benzoïque, I acide camphresulfonique, I acide citrique, I acide éthane-sulfonique, I acide fumarique, I acide glucoheptonique, I acide gluconique, I acide glutamique, I acide glycolique, I acide hydroxynaphtoïque, l'acide 2- hydroxyéthanesulfonique, I acide lactique, I acide maléique, I acide malique, I acide mandélique, I acide méthanesulfonique, I acide muconique, I acide 2-naphtalènesulfonique, I acide propionique, I acide salicylique, I acide succinique, I acide dibenzoyl-L-tartrique, I acide tartrique, I acide p-toluènesulfonique, I acide triméthylacétique, I acide trifluoroacétique et similaires, ou

(3) les sels d addition de base pharmaceutiquement acceptable formés lorsqu un proton acide présent dans le composé parent est soit remplacé par un ion métallique, par exemple un ion de métal alcalin, un ion de métal alcalino-terreux ou un ion d'aluminium ; soit coordonné avec une base organique ou inorganique pharmaceutiquement acceptable. Les bases organiques acceptables comprennent la diéthanolamine, I ethanolamine, N-méthylglucamine, la triéthanolamine, la trométhamine et similaires. Les bases inorganiques acceptables comprennent I Tiydroxyde d aluminium, I Tiydroxyde de calcium, I Tiydroxyde de potassium, le carbonate de sodium et I Tiydroxyde de sodium. Par groupement « alkyle en Ci à C₆ » , on entend, au sens de la présente invention, une chaîne hydrocarbonée monovalente saturée, linéaire ou ramifiée, comportant 1 à 6, de préférence 1 à 4, atomes de carbone. A titre d exemple, on peut citer les groupes méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, sec-butyle, fert-butyle, pentyle ou encore hexyle.

Le groupement alkyle en Ci à C₆ peut éventuellement être substitué par un ou plusieurs atomes d ^'halogène, notamment de fluor. Il peut s agir en particulier d lin groupe CF₃.

Par groupement « cycloalkyle en C₃ à C₆ », on entend, au sens de la présente invention, une chaîne hydrocarbonée saturée cyclique, comportant 3 à 6 atomes de carbone cycliques. A titre d exemple, on peut citer les groupes cyclopropyle, cyclopentyle et cyclohexyle.

Par « aryle », on entend, au sens de la présente invention, un groupement hydrocarboné aromatique, comportant de préférence de 6 à 10 atomes de carbone, et comprenant un ou plusieurs cycles accolés, comme par exemple un groupement phényle ou naphtyle. Avantageusement, il s agit du phényle. L aryle peut éventuellement substitué par un ou plusieurs groupements, choisis par exemple parmi des groupements alkyles ou O-alkyles comprenant 1 à 4 atomes de carbones, tels que méthyle, éthyle, propyle ou butyle, des halogènes tels que F, ou Cl, des perfluoroalkyles tels que CF₃, N0₂ ou CN.

Par « hétéroaryle » , on entend, au sens de la présente invention, un groupe aromatique comprenant 5 à 10 atomes cycliques dont un ou plusieurs hétéroatomes, avantageusement 1 à 4 et encore plus avantageusement 1 ou 2, tels que par exemple des atomes de soufre, azote ou oxygène, les autres atomes cycliques étant des atomes de carbone. Des exemples de groupes hétéroaryle sont les groupes furyle, thiényle, pyrrolyle, pyridinyle, pyrimidinyle, pyrazolyle, imidazolyle, triazolyle, tétrazolyle ou encore indyle. LTiétéroaryle peut éventuellement substitué par un ou plusieurs groupements, choisis par exemple parmi des groupements alkyles ou O-alkyles comprenant 1 à 4 atomes de carbones, tels que méthyle, éthyle, propyle ou butyle, des halogènes tels que F, ou Cl, N0₂ ou CN.

Par « perfluoroalkyle », on entend au sens de la présente invention une chaîne alkyle telle que définie ci-dessus dans laquelle un ou plusieurs atomes d ^'hydrogène sont remplacés par des atomes de fluor. On peut citer, à titre d exemple, les groupements CF₃, CH₂CF₃ ou CH(CF₃)₂.

Par « cycle non aromatique de 5 à 8 atomes », », on entend, au sens de la présente invention, un cycle de 5 à 8 chaînons, saturé ou non, mais non aromatique, et contenant un ou plusieurs, avantageusement 1 à 4, encore plus avantageusement 1 ou 2, hétéroatomes, tels que par exemple des atomes de soufre, azote ou oxygène. Il peut s agir notamment du groupe pyrrolidinyle, pipéridinyle, pipérazinyle ou morpholinyle. Le cycle non aromatique de 5 à 8 atomes peut éventuellement être substitué par un ou plusieurs groupements, choisis par exemple parmi des groupements alkyles ou O-alkyles comprenant 1 à 4 atomes de carbones, tels que méthyle, éthyle, propyle ou butyle, des halogènes tels que F, ou Cl ou des perfluoroalkyles tels que CF₃, N0₂ ou CN.

Exemples d « imide cyclique de 5 à 8 chaînons » sont par exemple un groupement succinimide ou phthalimide.

Par « aralkyle », on entend, au sens de la présente invention, un groupe aryle, tel que défini ci-dessus, lié à la molécule par l ^'intermédiaire d une chaîne (CrC₆) alkyle, telle que définie ci-dessus. A titre d exemple, on peut citer le groupe benzyle.

Composition pharmaceutique :

La présente invention concerne en outre une composition pharmaceutique comprenant au moins un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus.

La composition pharmaceutique selon l ^'invention peut être formulée pour une administration orale ou sublinguale, destinée aux mammifères, y compris l ^'homme.

L^'ingrédient actif peut être administré sous formes unitaires d ^'administration, en mélange avec des supports pharmaceutiques classiques, aux animaux ou aux êtres humains. Les formes unitaires d administration appropriées comprennent les formes par voie orale telles que les comprimés, les gélules, les poudres, les granules et les solutions ou suspensions orales, et les formes d ^'administration sublinguale et buccale.

Les composés de l ^'invention en tant que principes actifs peuvent être utilisés à des doses comprises entre 0,01 mg et 1000 mg par jour, donnés en une seule dose une fois par jour ou administrés en plusieurs doses tout au long de la journée, par exemple deux fois par jour en doses égales. La dose administrée par jour est avantageusement comprise entre

5 mg et 500 mg, encore plus avantageusement entre 10 mg et 200 mg. La posologie varie selon le traitement et selon I affection en cause et peut être déterminée par I omme du

Métier. Utilisation des composés :

La présente invention concerne en outre des composés de formule (I ), leurs sels, solvates ou hydrates pharmaceutiquement acceptables, sous la forme d un énantiomère ou d un mélange d ënantiomères :

dans laquelle Ui représente :

F, Cl, Br, CN, CF₃, ou N₃ ;

et Vi , Wi, Xi et Yi représentent indépendamment I, N0₂ ou H, à condition que \ , Wi, Xi et Yi ne représentent pas tous simultanément H, pour son utilisation en tant qu agent antiinflammatoire, avantageusement pour son utilisation dans le traitement du lupus érythémateux, plus avantageusement dans le traitement du lupus érythémateux disséminé. De manière avantageuse dans le composé de formule (I), Ui représente Cl, \ , Wi , et Yi représentent H et Xi représente I ou N0_2, pour son utilisation en tant qu agent antiinflammatoire, avantageusement pour son utilisation dans le traitement du lupus érythémateux, plus avantageusement dans le traitement du lupus érythémateux disséminé. La présente invention concerne également des composés de formule (l~) son sel, solvate ou hydrate pharmaceutiquement acceptable, sous la forme d lin énantiomère ou d lin mélange d enantiomères :

dans laquelle U₂ représente

F, Cl, Br, CN, CF₃, ou N₃ ; et V₂, W₂, X₂ et Y₂ représentent indépendamment H, à condition que V₂, W₂, X₂ et Y₂ ne représentent pas tous simultanément H, ou C(0)R⁶, où R⁶ représente O-alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; O-cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; O-aryle, de préférence phényle ; O-aralkyle, de préférence benzyle ; ou O-hétéroaryle ; pour son utilisation dans le traitement du lupus érythémateux, plus avantageusement dans le traitement du lupus érythémateux disséminé.

De manière avantageuse dans le composé de formule (l~) U₂ représente Cl, V₂, W₂, et Y₂ représentent H et X₂ représente C(0)R⁶, où R⁶ représente O-alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; O-cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; O-aryle, de préférence phényle ; O-aralkyle, de préférence benzyle ; ou O-hétéroaryle ; pour son utilisation dans le traitement du lupus érythémateux, plus avantageusement dans le traitement du lupus érythémateux disséminé. De manière avantageuse dans le composé de formule (l~) U₂ représente Cl, V₂, W₂, et Y₂ représentent H et X₂ représente C(0)R⁶, où R⁶ représente O-alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ pour son utilisation dans le traitement du lupus érythémateux, plus avantageusement dans le traitement du lupus érythémateux disséminé. Avantageusement, les composé de formule (I ) ou (l~) sont sous forme énantiomériquement pure, c est-à-dire une pureté optique supérieure à 95%, de préférence supérieure à 98%. De préférence, il s agit de I enantiomère (R).

La présente invention concerne des composés de formule (I) ou (I ^"), tels que définis ci- dessus, pour leur utilisation dans le traitement de diverses maladies auto-immunes ou inflammatoires, notamment dans le traitement du lupus érythémateux disséminé, de la polyarthrite rhumatoïde, d autres formes de polyarthrites, du syndrome des anti-phospholipides, de vascularites d expression cutanée, ou pour leur utilisation dans le traitement des vascularites, notamment liées à la présence d anticorps cytoplasmique anti-30 neutrophile (ANCA), en particulier des anticorps anti-myéloperoxydase (anti-MPO).

La présente invention concerne également des composés de formule (I ) ou (I ^"), tels que définis ci-dessus, pour leur utilisation dans le traitement de diverses atteintes telles que les maladies allergiques (notamment asthme, rhinite allergiques) les maladies auto-immunes (notamment scléroses multiples, arthrite rhumatoïde, Maladie de Crohn, psoriasis), les maladies dégénératives (notamment Maladie d Alzheimer, DMLA, arthropathie chronique dégénérative) ; les maladies métaboliques, (notamment Stéatohépatite non alcoolique, diabète de type II, syndrome métabolique, athéroscléroses, atteintes cardiaques, hypertension), les infections chroniques (notamment infection par le VIH, le HCV, le HBV, le CMV, la tuberculose ou toutes autres infections virales ou bactériennes).

La présente invention concerne également des composés de formule (I ) ou (l ~), tels que définis ci-dessus, pour leur utilisation dans le traitement de diverses maladies inflammatoires en association avec un agent anti-inflammatoire, notamment dans le traitement du lupus érythémateux.

La présente invention concerne également des composés de formule (I ) ou (l ~), tels que définis ci-dessus, pour leur utilisation dans le traitement du cancer telle que le cancer du côlon, du sein, du cerveau et des os (notamment ostéosarcome, chondrosarcome, neuroblastome, adénocarcinome du colon), les leucémies, les cancers du c^" ur (notamment sarcome, myxome, rhabdomyome), du poumon (notamment carcinome bronchique, carcinome alvéolaire, sarcome, lymphome), cancer gastro-intestinal (notamment cancer de sophage, de I estomac, du pancréas, de I intestin), cancer urogénitale (notamment cancer du rein, de I urètre, de la prostate, des testicules, du foie), cancer génital (notamment cancer de I utérus, des ovaires, de la vulve, du vagin), cancer hématologique (notamment maladie d liodgkin, lymphome non-Hodgkinien), et cancer de la peau (notamment mélanome, carcinome épidermoïde, carcinome basocellulaire, carcinome spinocellulaire, lipome, angiome).

La présente invention concerne également des composés de formule (I ) ou (l ~), tels que définis ci-dessus, pour leur utilisation dans le traitement du cancer en association avec un agent anticancéreux, notamment dans le traitement du cancer du poumon ou du cancer colorectal.

Les composés de formule (I), (I) ou (l~) peuvent également être utilisés en tant que traceurs ou sondes pour l ^'imagerie. La présente invention concerne donc en outre I utilisation d lin composé de formule (I), (I ) ou (l ~) en tant que traceur ou sonde pour l ^'imagerie. Les composés sont avantageusement utilisés dans le domaine de la protéomique ou en tant que sonde fluorescente.

Avantageusement, les composés de formule (I), (I ) ou (I ^") utilisés en imagerie sont ceux contenant une fonction alcyne ou azoture N₃. Préparation des composés :

Les inventeurs ont également développé une nouvelle méthode de synthèse utilisant en tant que réactif la 4-hydroxy-7-chloro-quinoline (CAS 86-99-7) selon le schéma réactionnel suivant :

La méthode comprend une première étape d îialogénation de la position 3 du cycle quinoline du composé (II). De telles méthodes sont connues de IHomme du Métier.

Lfialogénation est réalisée avec du N-bromo succinimide, du N-chloro succinimide ou du N-iodo succinimide. Plus avantageusement, l îialogénation est réalisée dans I acide acétique à une température comprise entre 40 et 80 °C, de préférence environ 60 °C.

Dans une seconde étape, le groupement hydroxyle en position 4 du composé (III) est remplacé par un halogène, de préférence un atome de chlore. Avantageusement, cette réaction est réalisée avec du POCI₃. Plus avantageusement, la réaction est effectuée à 100 °C.

L atome de chlore en position 4 de la chloroquinoline (IV) est ensuite remplacé par I aminé. Cette réaction est de préférence réalisée dans un solvant polaire, avantageusement la 1 -méthyl-2-pyrrolidone, à une température comprise entre 150 et 200 °C, avantageusement d environ 160 °C, en présence d line base, avantageusement une aminé tertiaire telle que la diisopropylamine. De manière avantageuse, le chauffage est réalisé par micro-ondes.

L Intermédiaire halogéné (IV) éventuellement protégé peut ensuite servir pour I obtention de certains des composés de formule (I) en utilisant des méthodes classiques pour IHomme du Métier. Un groupement R , tel qu aryle ou alkyle peut par exemple être introduit par une réaction de Suzuki avec un acide arylboronique ou la réaction de Kumada avec un réactif de Grignard. Les groupements perfluoroalkyles, tels que CF₃ peuvent être introduits par une réaction catalysée par le cuivre. Par exemple, le composé dans lequel X = CF₃ est introduit par une réaction entre la quinoline iodée de formule (IV) par une réaction avec du (phen)CuCF₃, dans un solvant polaire tel que le DMF à une température d environ 80 °C.

C est l ajout de la chaîne aromatique R telle que défini dans le schéma réactionnel ci- dessus lors de la dernière étape de synthèse des composés de la présente invention à partir du composé de formule (IV), qui permet d obtenir un mélange racémique ou un mélange sous forme énantiomériquement pure. De préférence, il s agit de I enantiomère (R).

Un groupement OR⁷ ; SR⁵ ou NR³R⁴ peut être introduit par la réaction du dérivé avec I alcool, le sulfide ou l amine correspondante, éventuellement en présence d lin métal de transition en tant que catalyseur ou par voie thermique en présence d line base.

Les composés de formule (I) dans lesquels X représente S(0)_nR², CN ou CO(R⁶) peuvent être préparés selon le schéma réactionnel suivant :

Dans une première étape, on fait réagir les composés (V), (VI) et (VII) à une température entre 1 10 et 150 °C, avantageusement d environ 130 °C.

La cyclisation du composé (VIII) en le composé (IX) est ensuite réalisée dans un solvant aromatique à une température comprise entre 200 et 280 °C, avantageusement environ 250 °C. Avantageusement, le solvant est un mélange de biphényl (Ci₂Hi₀) et de diphényloxide (C12H10O), vendu sous la dénomination commerciale Dowtherm®.

Le groupement hydroxyle du composé (IX) est ensuite remplacé par un halogène, de préférence un atome de chlore. Avantageusement, cette réaction est réalisée avec du POCI₃. Plus avantageusement, la réaction est réalisée à 100 °C pendant 2 heures. L atome de chlore en position 4 de la chloroquinoline (IV) est ensuite remplacé par I aminé. Cette réaction est de préférence réalisée dans un solvant polaire, avantageusement le diméthyl sulfoxyde, à une température comprise entre 150 et 200 °C, avantageusement d environ 160 °C, en présence d line base, avantageusement une aminé tertiaire telle que la diisopropylamine.

De manière avantageuse, le chauffage est réalisé par micro-ondes.

La préparation des composés de formule (I) dans lequel X = C(0)R⁶ peuvent également être réalisée à partir de la 4,7-dichloroquinoline (IV) selon le schéma réactionnel ci-dessous, illustratif de la préparation du composé dans lequel R⁶ = CF₃ :

(XI) (XII) (XIII) (I)

Dans une première étape, I atome de chlore du composé (XI) est substitué par un groupement N(CH₃)₂. La réaction est de préférence réalisée dans un solvant polaire, avantageusement I acétonitrile, à une température comprise entre 40 et 60 °C, avantageusement 50 °C.

Le composé obtenu dans la première étape (XII) est ensuite mis à réagir avec un chlorure d acyle ou un anhydride de formule R⁶C(0)OC(0)R⁶. La réaction est avantageusement réalisée en présence d lin catalyseur, par exemple la 4-diméthylaminopyiridine (DMAP) dans un solvant apolaire, avantageusement le xylène, à une température comprise entre 100 et 180 °C, avantageusement d environ 150 °C.

Dans une troisième étape, le groupement aminé en position 4 du composé de formule (XIII) est substitué par l amine de ΙΊ-ICQ. La réaction est réalisée dans un solvant polaire, avantageusement I acétonitrile, à une température comprise entre 60 et 90 °C, avantageusement à environ 80 °C. Méthode de criblage :

Dans un autre mode de réalisation, la présente invention concerne une méthode d Identification d lin composé utile pour le traitement du lupus érythémateux, avantageusement lupus érythémateux disséminé ou le traitement du cancer, et dépourvu de toxicité rétinienne comprenant les étapes de :

(a) sélectionner un composé test inhibiteur de la MPO,

(b) déterminer la constante d association K_A du composé test avec la B- cristalline, et

(c) sélectionner le composé test n ayant pas d affinité pour la B-cristalline.

La sélection des composés inhibiteurs de la MPO selon I étape (a) est réalisée selon une méthode comprenant les étapes de :

(a1 ) mettre en contact un composé test avec la MPO,

(a2) déterminer I activité de la MPO en présence de ce composé test, (a3) comparer I activité de la MPO en présence de ce composé test avec celle de la MPO en I absence de ce composé test, et

(a4) sélectionner le composé test réduisant I activité de la MPO. L activité de la MPO est mesurée par des méthodes bien connues de IHomme du Métier, en particulier celles présentées dans les exemples de la présente demande.

La détermination de la constante d association K_A du composé test avec la B- cristalline de rétape (b) est réalisée selon une méthode comprenant les étapes de :

(b1 ) mettre en contact un composé test avec la protéine B-cristalline, (b2) déterminer la constante d association K_A du composé test avec la B- cristalline, et

(b3) sélectionner le composé test n ayant pas d affinité pour la B-cristalline.

Au sens de la présente invention, un composé n înteragissant pas avec la B-cristalline est défini comme un composé dont la constante d association K_A est égale à 0.

Par « composé test », on entend, au sens de la présente invention, des composés de différentes natures et origines, en particulier les composés chimiques synthétiques, qui sont testés pour évaluer leur capacité d Inhibition de la MPO et/ou leur affinité pour la B- cristalline. Exemples

Synthèses des composés selon l ^'invention : 1 ) Composé de formule (I) dans lequel X = CN

A une suspension de 4,7-dichloroquinoline-3-carbonitrile (53 mg, 0,23 mmol) dans 1 ,2 mL de Ν,Ν-diméthylformamide sont ajoutés la 2-[(4-aminopentyl)(éthyl)amino]éthan-1 -ol (124 mg, 0,71 mmol) et la triéthylamine (0,12 mL, 0,71 mmol). Le milieu réactionnel est irradié aux micro-ondes 20 min à 180 °C puis dilué dans I acétate d ethyle et lavé trois fois avec une solution de NaCI saturée. La phase organique est séchée sur MgS0₄, filtrée et concentrée puis purifiée sur colonne de silice avec un gradient dichlorométhane/méthanol 10/0 à 80/20. Rendement 57%. Huile incolore ; RMN H (DMSO, 400 MHz) d 1 ,17 (3H, t, J = 7,2 Hz) ; 1 ,38 (3H, d, J = 6,4 Hz) ; 1 ,64-1 ,87 (m, 4H) ; 3,08-3,18 (m, 6H) ; 3,69 (2H, dt, J = 5,1 , 1 ,5 Hz) ; 4,62 (1 H, m) ; 7,71 (1 H, dd, J = 9,1 , 2,3 Hz) ; 7,90 (1 H, d, J = 2,2 Hz) ; 8.18 (1 H, dl, J = 8.1 Hz), 8,59 (1 H, d, J = 9,1 Hz) ; 8,69 (s, 1 H) ; 9,14 (si, 1 H). RMN ³C (DMSO, 100 MHz) : 8,3 ; 19,8 ; 20,9 ; 32,9 ; 47,5 ; 49,8 ; 51 ,5 ; 53,3 ; 55,1 ; 82,6 ; 1 16,8 ; 1 19,1 ; 125,1 ; 126,2 ; 137,0 ; 146,5 ; 151 ,9 ; 154,0.

HRMS calculée pour C₁₉H₂₅CIN₄0 : 360,1707 ; masse trouvée : 360,1717

2) Composé de formule (I) dans lequel X = Cl

A une suspension de 7-chloroquinolin-4-ol (500 mg, 2,78 mmol) dans 20 mL d acide acétique est ajouté le N-chlorosuccinimide (408 mg, 3,06 mmol). La réaction est chauffée à 60 °C pendant 5 heures puis diluée dans I eau et filtrée. Le solide blanc est lavé à I eau et séché sous vide. Rendement 88%. Solide blanc ; RMN H (DMSO, 400 MHz) d 7,40 (1 H, dd, J = 8,8, 2,0 Hz), 7,64 (1 H, d, J = 2,0 Hz), 8,14 (1 H, d, J = 8,8 Hz), 8,45 (1 H, s), 12,24 (1 H, si) ; RMN ³C (DMSO, 100 MHz) d 170,6 ; 139,9 ; 138,5 ; 136,5 ; 127,5 ; 124,2 ; 123,2 ; 1 17,7 ; 1 14,7.

3,7-dichloroquinolin-4-ol

Une suspension de 3,7-dichloroquinolin-4-ol (500 mg, 2,33 mmol) dans 6,5 ml_ de trichlorure de phosphoryle est chauffée à 100 °C pendant 2 heures. Une fois à température ambiante, la solution est versée dans un mélange eau/glace, filtrée et lavée avec une solution de NaHC0₃ saturée puis de l eau. Le solide blanc obtenu est séché et utilisé sans purification supplémentaire.

Rendement 92%. Solide blanc ; RMN H (DMSO, 400 MHz) d 7,88 (1 H, dd, J = 9,1 , 2,2 Hz) ; 8,24 (1 H, d, J = 2,2 Hz) ; 8,26 (1 H, d, J = 9,1 Hz) ; 9,07 (1 H, s) ; RMN ³C (DMSO, 100 MHz) d 124,8 ; 126,0 ; 127,0 ; 128,3 ; 129,7 ; 135,5 ; 138,3 ; 146,7 ; 151 ,0. SM (ESI⁺) : m/z = 232 [M+1 ].

3,4,7-trichlorquinoline

A une suspension de 3,4,7-trichlorquinoline (500 mg, 2,15 mmol) dans 5 ml_ de N-méthyl-2- pyrrolidone sont ajoutés la 2-[(4-aminopentyl)(éthyl)amino]éthan-1 -ol (750 mg, 4,3 mmol) et la triéthylamine (0,6 ml_, 4,3 mmol). Le milieu réactionnel est irradié aux micro-ondes 20 min à 160 °C puis dilué dans I acétate d ëthyle et lavé trois fois avec une solution de NaCI saturée. La phase organique est séchée sur MgS0₄, filtrée et concentrée puis purifiée sur colonne de silice avec un gradient dichlorométhane/méthanol 10/0 à 80/20

Rendement 85%. Huile incolore ; RMN H (DMSO, 400 MHz) d 0,83 (3H, t, J = 7,2 Hz) ; 1 ,26 (3H, d, J = 6,4 Hz) ; 1 ,34-1 ,69 (4H, m) ; 2,29-2,38 (6H, m) ; 3,35 (1 H, m) ; 4,21 -4,31 (2H, m) ; 6,06 (1 H, d, J = 9,5 Hz) ; 7,57 (1 H, dd, J = 9,1 , 2,3 Hz) ; 7,88 (1 H, d, J = 2,3 Hz) ; 8,35 (1 H, d, J = 9,2 Hz) ; 8,49 (1 H, s). RMN ³C (DMSO, 100 MHz) d 1 1 ,4 ; 21 ,8 ; 23,3 ; 35,2 ; 47,4 ; 51 ,7 ; 53,0 ; 55,3 ; 58,9 ; 1 1 1 ,2 ; 120,2 ; 124,9 ; 125,6 ; 127,7 ; 133,7 ; 147,1 ; 147,7 ; 151 ,8.

HRMS calculée pour : 369,1369 ; masse trouvée : 369,1375

3) Composé de formule (I) dans lequel X = I

A une suspension de 7-chloroquinolin-4-ol (500 mg, 2,78 mmol) dans 16 mL d acide acétique est ajouté le N-iodosuccinimide (626 mg, 2,78 mmol). La réaction est chauffée à 60 °C pendant 5 heures puis diluée dans I eau et filtrée. Le solide blanc est lavé à I eau et séché sous vide.

Rendement 87%. Solide blanc ; RMN H (DMSO, 400 MHz) d 7,39 (1 H, dd, J = 8,8, 2,2 Hz) ; 7,62 (1 H, d, J = 2,2 Hz) ; 8,10 (1 H, d, J = 8,8 Hz), 8,55 (s, 1 H) ; 12,21 (si, 1 H) ; RMN ³C (DMSO, 100 MHz) d 81 ,3 ; 1 17,6 ; 120,9 ; 124,4 ; 127,3 ; 140,3 ; 145,3 ; 172,5. SM (ESI⁺) : m/z = 523 [M+1 ]

7-chloro-3-iodoquinolin-4-ol Une suspension de 7-chloro-3-iodoquinolin-4-ol (500 mg, 1 ,64 mmol) dans 4,5 mL de trichlorure de phosphoryle est chauffée à 100 °C pendant 2 heures. Une fois à température ambiante, la solution est versée dans un mélange eau/glace, filtrée et lavée avec une solution de NaHC0₃ saturée puis de I eau. Le solide blanc obtenu est séché et utilisé sans purification supplémentaire.

Rendement 48%. Solide blanc ; RMN H (DMSO, 400 MHz) d 7,78 (1 H, dd, J = 9,1 , 2,2 Hz) ; 8,15 (1 H, d, J = 2,2 Hz) ; 8,23 (1 H, d, J = 9,1 Hz), 9,18 (s, 1 H) ; RMN ³C (DMSO, 100 MHz) d 97,2 ; 125,2 ; 126,5 ; 128,1 ; 129,5 ; 144,9 ; 147,3 ; 158,0. SM (ESI⁺) : m/z = 523 [M+1 ]

4,7-dichloro-3-iodoquinoline

A une solution de 4,7-dichloro-3-iodoquinoline (50 mg, 0,154 mmol) dans 1 ,5 mL de DMF est ajouté le (Phen)CuCF3 (62,8 mg, 0,201 mmol). Après une nuit à 50 °C, 1 éq. de (Phen)CuCF₃ est ajouté et la réaction est poursuivie 6 heures à 80 °C. Le milieu réactionnel est dilué dans lëther et filtré sur de la Célite®. Le filtrat est successivement lavé avec une solution de HCI 1 M, NaHC0₃ et NaCI. La phase organique est séchée sur MgS0₄, filtrée et concentrée. Le brut est purifié sur colonne de silice avec un gradient cyclohexane/EtOAc 10/0 à 50/50.

Rendement 83%. Solide blanc ; SM (EST) : m/z = 266 [M+1 ]

4J-dichloro-3-(trifluoromethyl)quinoline

A une suspension de 4,7-dichloro-3-(trifluorométhyl)quinoline (34 mg, 0,127 mmol) dans 0,6 mL de Ν,Ν-diméthylformamide sont ajoutés le 2-[(4-aminopentyl)(éthyl)amino]éthan-1 -ol (66 mg, 0,38 mmol) et la diisopropyléthylamine (63 nt, 0,38 mmol). Le milieu réactionnel est irradié aux micro-ondes 20 min à 180 °C puis dilué dans I acétate d ethyle et lavé trois fois avec une solution de NaCI saturée. La phase organique est séchée sur MgS0₄, filtrée et concentrée puis purifiée sur colonne de silice avec un gradient dichlorométhane/méthanol 10/0 à 80/20.

Rendement 19%. Huile incolore ; HRMS calculée pour C₁₉H₂₅CIF₃N₃O : 403,1638 ; masse trouvée : 403,1640

4) Composé de formule (I) dans lequel X = C(0)cPr

Une solution de m-Chloroaniline (1 ,36 mL, 12,8 mmol), triméthyl orthoformate (15,37 mmol, 1 ,68 mL) et de méthyl 3-cyclopropyl-3-oxopropanoate (1 ,82 g, 12,8 mmol) est chauffée à 130 °C pendant 5 heures en présence d lin appareil de Dean-Stark. Le brut est purifié sur colonne de silice avec du dichlorométhane.

Rendement 49%. Solide blanc. RMN H (CDCI₃, 400 MHz) d 0,90-0,94 (2H, m) ; 1 ,90-1 ,1 1 (2H, m) ; 3,19-3,25 (1 H, m) ; 3,80 (1 H, s) ; 7,01 (1 H, dd, J = 8,1 , 2,3 Hz) ; 7,1 1 -7,13 (1 H, m) ; 7,16 (1 H, t, J = 2,3 Hz) ; 7,28 (1 H, t, J = 8,1 Hz) ; 8,40 (1 H, d, J = 12,9 Hz) ; 12,73 (1 H, d, J = 12,9 Hz). ³C (CDCI₃, 100 MHz) d 1 1 ,9 ; 18,9 ; 51 ,6 ; 103,7 ; 1 16,1 ; 1 17,8 ; 125,5 ; 131 ,0 ; 135,9 ; 140,6 ; 151 ,0 ; 167,6 ; 202,1 . SM (EST) : m/z = 294 [M+1 ]

méthyl (Z/E)-3-((3-chlorophé nyl)amino)-2- (cyclopropanecarbonyl)acrylate

Une suspension de méthyl (Z/E)-3-((3-chlorophényl)amino)-2-(cyclopropanecarbonyl)acrylate (500 mg, 1 ,7 mmol) dans 5 mL de Dowtherm® est chauffé 3 heures à 250 °C. A température ambiante, le milieu est dilué dans du cyclohexane et filtré. Le solide obtenu est utilisé sans purification supplémentaire.

Rendement 31%. Solide blanc ; RMN H (DMSO, 400 MHz) d 0,92-1 ,00 (4H, m) ; 3,55-3,62 (m, 1 H) ; 7,46 (1 H, dd, J = 8,7, 2,0 Hz) ; 7,68 (1 H, d, J = 2,0 Hz) ; 8,23 (1 H, d, J = 8,7 Hz) ; 8,49 (1 H, s) ; RMN ³C (DMSO, 100 MHz) d 1 1 ,4 ; 19,0 ; 1 18,1 ; 125,1 ; 126,6 ; 128,0 ; 137,0 ; 139,8 ; 144,6 ; 174,7 ; 198,9. SM (ESI⁺) : m/z = 248 [M+1 ]

7-chloro-3-cyclopropanecarbonylquinoline-4-ol Une solution de 7-chloro-3-cyclopropanecarbonylquinoline-4-ol (50 mg, 0,218 mmol) et Ν,Ν-4-triméthylaniline (59 mg, 0,436 mmol) dans 3 ml_ de toluène est chauffée à reflux sous argon. Le trichlorure de phosphoryle (37 mg, 0,239 mmol) est ajouté et la réaction maintenue à reflux 16 heures. Le milieu réactionnel est extrait au dichlorométhane et lavé avec une solution HCI 1 N puis NaCI saturée. La phase organique est séchée sur MgS0₄, filtrée et concentrée. Le produit est purifié par colonne de silice avec du dichlorométhane.

Rendement 90%. Solide blanc. RMN H (DMSO, 400 MHz) d 1 ,22-1 ,24 (4H, m) ; 2,73-2,67 (1 H, m) ; 7,89 (1 H, dd, J = 8,9, 2,2 Hz) ; 8,24 (1 H, d, J = 2,2 Hz) ; 8,37 (1 H, d, J = 8,9 Hz) ; 9,00 (s, 1 H) ; RMN ³C (DMSO, 100 MHz) d 1 1 ,3 ; 19,0 ; 1 18,0 ; 125,0 ; 126,6 ; 128,0 ; 136,9 ; 139,8 ; 144,4 ; 174,7 ; 198,9. HRMS calculée pour C₁₃H₉CI₂NO : 265,0061 ; masse trouvée : 265,0063

4,7-dichloro-3-cyclopropanecarbonylquinoline

A une suspension de 4,7-dichloro-3-cyclopropanecarbonylquinoline (48 mg, 0,180 mmol) dans 1 ,2 mL de Ν,Ν-diméthylformamide sont ajoutés le 2-[(4-aminopentyl)(éthyl)amino]éthan- 1 -ol (94 mg, 0,540 mmol) et la triéthylamine (75 rrL, 0,540 mmol). Le milieu réactionnel est irradié aux micro-ondes 20 min à 180 °C puis dilué dans I acétate d ethyle et lavé trois fois avec une solution de NaCI saturée. La phase organique est séchée sur MgS0₄, filtrée et concentrée puis purifiée sur colonne de silice avec un gradient dichlorométhane/méthanol 10/0 à 80/20.

Rendement 56%. Huile incolore ; RMN H (CDCI₃, 400 MHz) d 1 ,0 (3H, t, J = 7,3 Hz) ; 1 ,03- 1 ,07 (2H, m) ; 1 ,21 -1 ,24 (2H, m) ; 1 ,42 (3H, d, J = 6,5 Hz) ; 1 ,45-1 ,71 (4H, m) ; 2,48 (2H, t, J

= 7,2 Hz) ; 2,54-2,59 (4H, m) ; 2,65-2,71 (1 H, m) ; 3,55 (2H, t, J = 5,4 Hz) ; 4,19-4,26 (1 H, m) ; 7,33 (1 H, dd, J = 9,1 Hz, J = 2,1 Hz) ; 7,91 (1 H, d, J = 2,1 Hz) ; 8,04 (1 H, d, J = 9,1 Hz) ;

9,22 (1 H, s) ; 10,60 (1 H, d, J = 8,7 Hz) ; RMN ³C (CDCI₃, 100 MHz) d 1 1 ,35 ; 1 1 ,45 ; 17,76 ;

22,40 ; 23,58 ; 36,62 ; 47,54 ; 53,01 ; 53,51 ; 55,32 ; 58,36 ; 1 1 1 ,70 ; 1 18,05 ; 125,1 1 ; 127,76 ; 129,00 ; 137,53 ; 151 ,66 ; 153,33 ; 155,85 ; 201 ,44.

HRMS calculée pour C22H30CIN3O2 : 403,2026 ; masse trouvée : 403,2039

5) Composé de formule (I) dans lequel X = C(0)CF₃

Une solution de 1 -[7-chloro-4-(diméthylamino)quinolin-3-yl]-2,2,2-trifluoroéthan-1 -one (100 mg, 0,33 mmol) et 4-aminopentyl)(éthyl)amino]méthanol (58,2 mg, 0,363 mmol) dans 4 mL d acétonitrile est chauffée à 85 °C pendant 16 heures. Le milieu est concentré et le résidu purifié sur colonne de silice avec un mélange dichlorométhane/méthanol 10/0 à 80/20. Rendement 21 %. Huile incolore. RMN H (DMSO, 400 MHz) d 0,89 (3H, t, J = 6,9 Hz) ; 1 ,43 (3H, d, J = 6,5 Hz) ; 1 ,39-1 ,51 (2H, m) ; 1 ,64-1 ,75 (2H, m) ; 2,42-2,54 (6H, m) ; 3,41 (2H, t, J = 6,4 Hz) ; 4,41 -4,44 (1 H, m) ; 7,60 (1 H, dd, J = 9,1 Hz, 2,5 Hz) ; 7,91 (1 H, d, J = 2,5 Hz) ; 8,36 (1 H, d, J = 9,1 Hz) ; 8,73 (1 H, q, J = 2,3 Hz) ; 10,35 (1 H, si) ; RMN ³C (DMSO, 100 MHz) d 1 1 ,1 ; 20,9 ; 28,9 ; 30,3 ; 35,1 ; 47,3 ; 52,6 ; 53,1 ; 55,1 ; 103,9 ; 1 16,6 ; 1 17,0 ; 125,9 ; 128,2 ; 128,9 ; 137,9 ; 150,7 ; 151 ,7 ; 156,9 ; 178,2.

HRMS calculée pour CsoHssCIFsNsOs : 431 ,1587 ; masse trouvée : 431 ,1580

6) Composé de formule (I) dans lequel X = Cl

A une suspension de 3,4,7-trichloroquinoline (50 mg, 0,21 mmol) dans 0,5 mL de N-méthyl-2- pyrrolidone sont ajoutés la (S)-2-[(4-aminopentyl)(éthyl)amino]éthan-1 -ol (75 mg, 0,43 mmol), et la triéthylamine (60 μΐ, 0,43 mmol). Le milieu réactionnel est irradié aux micro-ondes 45 min à 160 °C puis dilué dans I acétate d ëthyle et lavé trois fois avec une solution de NaCI saturée. La phase organique est séchée sur MgS0₄, filtrée, concentrée puis purifiée sur colonne de silice avec un gradient dichlorométhane/méthanol 10/0 à 80/20.

Rendement 94%. Huile incolore ; RMN H (CDCI₃, 400 MHz) d 1,07 (3H, t, J = 7,2 Hz) ; 1,27 (3H, d, J = 6,3 Hz) ; 1,56-1,73 (4H, m) ; 2,59-2,68 (6H, m) ; 3,61 (2H, t, J = 4,5 Hz) ; 4,00- 4,07 (1 H, m) ; 4,47 (1 H, d, J = 9,8 Hz) ; 7,42 (1 H, d, J = 9,1 Hz, 2,3 Hz) ; 7,91 (1 H, d, J = 9,0 Hz) ; 7,96 (1H, d, J = 2,1 Hz) ; 8,57 (1H, s). RMN ³C (CDCI₃, 100 MHz) : 11,08 ; 22,49 ; 23,29; 36,38; 47,97 ; 51,08; 53,46; 54,40 ; 55,76; 58,10; 115,69; 120,59; 124,54 ; 126,71 ; 129,28 ; 135,32; 148,01 ; 148,96; 150,84. HRMS calculée pour C₁₈H₂₅CI₂N₃0 : 369,13747 ; masse trouvée : 369,13797.

7) Composé de formule (I) dans lequel X = Cl A une suspension de 3,4,7-trichloroquinoline (50 mg, 0,21 mmol) dans 0,5 mL de N-méthyl-2- pyrrolidone sont ajoutés la (R)-2-[(4-aminopentyl)(éthyl)amino]éthan-1-ol (75 mg, 0,43 mmol), et la triéthylamine (60 μΐ, 0,43 mmol). Le milieu réactionnel est irradié aux micro-ondes 45 min à 160 °C puis dilué dans I acétate dëthyle et lavé trois fois avec une solution de NaCI saturée. La phase organique est séchée sur MgS0₄, filtrée, concentrée puis purifiée sur colonne de silice avec un gradient dichlorométhane/méthanol 10/0 à 80/20.

Rendement 85%. Huile incolore ; RMN H (CDCI₃, 400 MHz) d 1,08 (3H, t, J = 7,3 Hz) ; 1,29 (3H, d, J = 6,8 Hz) ; 1,59-1,73 (4H, m) ; 2,58-2,70 (6H, m) ; 3,62 (2H, t, J = 4,9 Hz) ; 4,02- 4,09 (1 H, m) ; 4,49 (1 H, d, J = 10Hz) ; 7,43 (1 H, d, J = 9,1 Hz, 2,2 Hz) ; 7,93 (1 H, d, J = 9,1 Hz) ; 7,98 (1H, d, J = 2,2 Hz) ; 8,59 (1H, s). ; RMN ³C (CDCI₃, 100 MHz) : 11,84 ; 20,12 ; 23,95 ; 34,25 ; 47,47 ; 48,87; 53,23 ; 55,21 ; 58,51 ; 100,42 ; 115,03 ; 127,44 ; 129,06 ; 129,26 ; 133,66 ; 150,42 ; 151 ,67 ; 151 ,98 ; HRMS calculée pour C₁₈H₂₅CI₂N₃0 : 369,13747 ; masse trouvée : 369,13792.

Cl N

Ainsi, de manière similaire aux exemples 6) et 7), la préparation de composés selon la présente invention sous forme d lin mélange énantiomériquement pure sera réalisée par l ajout de la chaîne aromatique (R) ou (S)-2-[(4-aminopentyl)(éthyl)amino]éthan-1 -ol lors de la dernière étape de synthèse.

8) Composé de formule (I) dans lequel U et W = Cl A une suspension de 4,5,7-trichloroquinoline (100 mg, 0,43 mmol) dans 1 ml_ de N-méthyl-2- pyrrolidone sont ajoutés la 2-[(4-aminopentyl)(éthyl)amino]éthan-1 -ol (150 mg, 0,86 mmol), et la triéthylamine (120 μΙ_, 0,86 mmol). Le milieu réactionnel est irradié aux micro-ondes 45 min à 160 °C puis dilué dans I acétate d ethyle et lavé trois fois avec une solution de NaCI saturée. La phase organique est séchée sur MgS0₄, filtrée, concentrée puis purifiée sur colonne de silice avec un gradient dichlorométhane/méthanol 10/0 à 80/20.

Rendement 60%. Huile incolore ; RMN H (CDCI₃, 400 MHz) d 1 ,04 (3H, t, J = 7,2 Hz) ; 1 ,33 (3H, d, J = 6,4 Hz) ; 1 ,57-1 ,73 (4H, m) ; 2,52-2,66 (6H, m) ; 3,56 (2H, t, J = 5,3 Hz) ; 3,63- 3,66 (1 H, m) ; 6,38 (1 H, d, J = 5,6 Hz) ; 7,14 (1 H, d, J = 7,4 Hz) ; 7,33 (1 H, d, J = 2,2 Hz) ; 7,84 (1 H, d, J = 2,2 Hz) ; 8,43 (1 H, d, J = 5,6 Hz) ; RMN ³C (CDCI₃, 100 MHz) d 1 1 ,84 ; 20,12 ; 23,95 ; 34,25 ; 47,47 ; 48,87 ; 53,23 ; 55,21 ; 58,51 ; 100,42 ; 1 15,03 ; 127,44 ; 129,06 ; 129,26 ; 133,66 ; 150,42 ; 151 ,67 ; 151 ,98 ; HRMS calculée pour C₁₈H₂₅CI₂N₃0 : 369,13747 ; masse trouvée : 369,13776.

9) Composé de formule (I) dans lequel U et W = Cl

A une suspension de 4,5,7-trichloroquinoline (79 mg, 0,34 mmol) dans 0,5 ml_ de N-méthyl-2- pyrrolidone sont ajoutés la (S)-2-[(4-aminopentyl)(éthyl)amino]éthan-1 -ol (89 mg, 0,51 mmol), et la triéthylamine (95 μΙ_, 0,68 mmol). Le milieu réactionnel est irradié aux micro-ondes

45 min à 160 °C puis dilué dans I acétate d ëthyle et lavé trois fois avec une solution de NaCI saturée. La phase organique est séchée sur MgS0₄, filtrée, concentrée puis purifiée sur colonne de silice avec un gradient dichlorométhane/méthanol 10/0 à 80/20.

Rendement 60%. Huile incolore ; RMN H (CDCI₃, 400 MHz) d 1 ,05 (3H, t, J = 7,2 Hz) ; 1 ,32 (3H, d, J = 6,4 Hz) ; 1 ,59-1 ,71 (4H, m) ; 2,54-2,65 (6H, m) ; 3,58 (2H, t, J = 5,3 Hz) ; 3,62-

3,68 (1 H, m) ; 6,37 (1 H, d, J = 5,6 Hz) ; 7,13 (1 H, d, J = 7,3 Hz) ; 7,31 (1 H, d, J = 2,2 Hz) ;

7,82 (1 H, d, J = 2,2 Hz) ; 8,41 (1 H, d, J = 5,6 Hz) ; RMN ³C (CDCI₃, 100 MHz) d 1 1 ,84 ;

20,12 ; 23,95 ; 34,25 ; 47,47 ; 48,87 ; 53,23 ; 55,21 ; 58,51 ; 100,42 ; 1 15,03 ; 127,44 ;

129,06 ; 129,26 ; 133,66 ; 150,42 ; 151 ,67 ; 151 ,98 ; HRMS calculée pour C₁₈H₂₅CI₂N₃0 : 369,13747 ; masse trouvée : 369,13652.

10) Composé de formule (I) dans lequel U et W = Cl

A une suspension de 4,5,7-trichloroquinoline (100 mg, 0,43 mmol) dans 1 mL de N-méthyl-2- pyrrolidone sont ajoutés la (R)-2-[(4-aminopentyl)(éthyl)amino]éthan-1 -ol (150 mg, 0,86 mmol), et la triéthylamine (120 μΐ, 0,86 mmol). Le milieu réactionnel est irradié aux micro-ondes 45 min à 160 °C puis dilué dans I acétate d ethyle et lavé trois fois avec une solution de NaCI saturée. La phase organique est séchée sur MgS0₄, filtrée, concentrée puis purifiée sur colonne de silice avec un gradient dichlorométhane/méthanol 10/0 à 80/20.

Rendement 60%. Huile incolore ; RMN H (CDCI₃, 400 MHz) d 1 ,05 (3H, t, J = 7,2 Hz) ; 1 ,32

(3H, d, J = 6,4 Hz) ; 1 ,58-1 ,72 (4H, m) ; 2,53-2,67 (6H, m) ; 3,57 (2H, t, J = 5,3 Hz) ; 3,62 3,67 (1 H, m) ; 6,37 (1 H, d, J = 5,6 Hz) ; 7,13 (1 H, d, J = 7,3 Hz) ; 7,32 (1 H, d, J = 2,2 Hz) 7,83 (1H, d, J = 2,2 Hz) ; 8,42 (1H, d, J = 5,6 Hz) ; RMN ³C (CDCI₃, 100 MHz) d 11,84 20,12; 23,95; 34,25 ; 47,47; 48,87; 53,23 ; 55,21 ; 58,51 ; 100,42; 115,03; 127,44 129,06 ; 129,26 ; 133,66 ; 150,42 ; 151,67 ; 151,98 ; HRMS calculée pour C₁₈H₂₅CI₂N₃0 369,13747 ; masse trouvée : 369,1365.

11 ) Composé de formule (I) dans lequel U et V A une suspension de 4,6,7-trichloroquinoline (100 mg, 0,43 mmol) dans 1 mL de N-méthyl-2- pyrrolidone sont ajoutés la 2-[(4-aminopentyl)(éthyl)amino]éthan-1-ol (150 mg, 0,86 mmol), et la triéthylamine (120 ί, 0,86 mmol). Le milieu réactionnel est irradié aux micro-ondes 45 min à 160 °C puis dilué dans I acétate dethyle et lavé trois fois avec une solution de NaCI saturée. La phase organique est séchée sur MgS0₄, filtrée, concentrée puis purifiée sur colonne de silice avec un gradient dichlorométhane/méthanol 10/0 à 80/20.

Rendement 50%. Huile incolore ; RMN H (CDCI₃, 400 MHz) d 1,03 (3H, t, J = 7,2 Hz) ; 1,32 (3H, d, J = 6,4 Hz) ; 1,56-1,73 (4H, m) ; 2,47-2,62 (6H, m) ; 3,59 (2H, t, J = 5,6 Hz) ; 3,66- 3,72 (1H, m) ; 5,10 (1H, d, J = 7,4 Hz) ; 6,40 (1H, d, J = 5,6 Hz) ; 7,94 (1H, s) ; 8,04 (1H, s) ; 8,49 (1 H, d, J = 5,5 Hz). RMN ³C (CDCI₃, 100 MHz) d 11 ,90 ; 20,51 ; 24,23 ; 34,45 ; 47,85 ; 48,67 ; 53,21 ; 55,01 ; 58,66 ; 99,71 ; 118,50 ; 121,49 ; 128,76 ; 131,03 ; 133,43 ; 147,92 ; 148,44 ; 152,33 ; HRMS calculée pour C₁₈H₂₅CI₂N₃0 : 369,13747 ; masse trouvée : 369,13648.

12) Composé de formule (I) dans lequel U et Y = Cl

A une suspension de 4,7,8-trichloroquinoline (100 mg, 0,43 mmol) dans 1 mL de N-méthyl-2- pyrrolidone sont ajoutés la 2-[(4-aminopentyl)(éthyl)amino]éthan-1 -ol (150 mg, 0,86 mmol), et la triéthylamine (120 ί, 0,86 mmol). Le milieu réactionnel est irradié aux micro-ondes 45 min à 160 °C puis dilué dans I acétate d ethyle et lavé trois fois avec une solution de NaCI saturée. La phase organique est séchée sur MgS0₄, filtrée, concentrée puis purifiée sur colonne de silice avec un gradient dichlorométhane/méthanol 10/0 à 80/20.

Rendement 51%. Huile incolore ; RMN H (CDCI₃, 400 MHz) d 1 ,07 (3H, t, J = 7,2 Hz) ; 1 ,30 (3H, d, J = 6,4 Hz) ; 1 ,56-1 ,83 (4H, m) ; 2,58-2,69 (6H, m) ; 3,62 (2H, t, J = 5,4 Hz) ; 3,65-

3,73 (1 H, m) ; 5,40 (1 H, d, J = 7,7 Hz) ; 6,43 (1 H, d, J = 5,5 Hz) ; 7,40 (1 H, d, J = 9,1 Hz) ;

7,80 (1 H, d, J = 9,1 Hz) ; 8,58 (1 H, d, J = 5,5 Hz) ; RMN ³C (CDCI₃, 100 MHz) d 1 1 ,15 ;

20,46 ; 23,72 ; 34,23 ; 48,05 ; 48,75 ; 53,40 ; 55,31 ; 58,29 ; 99,91 ; 1 18,42 ; 1 19,56 ; 125,46 ;

131 ,76 ; 133,89 ; 146,38 ; 149,80 ; 152,22 ; HRMS calculée pour C₁₈H₂₅CI₂N₃0 : 369,13747 ; masse trouvée : 369,1371 1 .

13) Composé de formule (I) dans lequel X=Br

Rendement 88%. Solide blanc ; RMN H (CDCI₃, 400 MHz) d 7,41 (1 H, d, J = 8,7 Hz) ; 7,64 (1 H, s) ; 8,13 (1 H, d, J = 8,8 Hz) ; 8,53 (1 H, s) ; 12,32 (1 H, si) ; RMN ³C (CDCI₃, 100 MHz) d 104,75 ; 1 17,68 ; 122,78 ; 124,33 ; 127,62 ; 136,45 ; 140;04 ; 140,77 ; 170,84 ; SM (EST) : m/z = 257 [M+1 ].

3-bromo-7-chloroquinolin-4-ol

Une suspension de 7-chloro-3-bromoquinolin-4-ol (500 mg, 1 ,64 mmol) dans 4,5 ml_ de trichlorure de phosphoryle est chauffée à 100 °C pendant 2 heures. Une fois à température ambiante, la solution est versée dans un mélange eau/glace, filtrée et lavée avec une solution de NaHC0₃ saturée puis de I eau. Le solide blanc obtenu est séché et utilisé sans purification supplémentaire.

Rendement 90%. Solide blanc ; RMN H (CDCI₃, 400 MHz) d 7,86 (1 H, dd, J = 9,1 , 2,1 Hz) ; 8,22 (1 H, d, J = 2,2 Hz) ; 8,27 (1 H, d, J = 6,1 Hz) 9,12 (1 H, s) ; RMN ³C (CDCI₃, 100 MHz) d 1 18,48 ; 126,08 ; 126,14 ; 129,12 ; 129,79 ; 136,74 ; 141 ,80 ; 147,75 ; 153,10 ; SM (EST) : m/z = 275 [M+1 ].

3-bromo-4,7-dichloroquinoline

A une suspension de 3-bromo-4,7-trichloroquinoline (200 mg, 0,72 mmol) dans 2 mL de N- méthyl-2-pyrrolidone sont ajoutés la 2-[(4-aminopentyl)(éthyl)amino]éthan-1 -ol (188 mg, 1 ,08 mmol), et la triéthylamine (358 ί, 2,16 mmol). Le milieu réactionnel est irradié aux microondes 45 min à 160 °C puis dilué dans I acétate d ethyle et lavé trois fois avec une solution de NaCI saturée. La phase organique est séchée sur MgS0₄, filtrée, concentrée puis purifiée sur colonne de silice avec un gradient dichlorométhane/méthanol 10/0 à 80/20.

Rendement 1 1%. Huile incolore ; RMN H (CDCI₃, 400 MHz) d 1 ,04 (3H, t, J = 7,2 Hz) ; 1 ,28 (3H, d, J = 6,4 Hz) ; 1 ,55-1 ,66 (4H, m), 2,51 -2,54 (2H, m) ; 2,59-2,64 (4H, m) ; 3,58 (t, J = 5,3 Hz, 2H) ; 3,96-4,04 (1 H, m) ; 4,46 (1 H, d, J = 10,3 Hz) ; 7,41 (1 H, dd, J = 9,1 , 2,3 Hz) ; 7,92 (1 H, d, J = 9.1 Hz) ; 7,97 (1 H, d, J = 2,2 Hz) ; 8,69 (1 H, s) ; RMN ³C (CDCI₃, 100 MHz) d 1 1 ,42 ; 22,37 ; 23,59 ; 36,57 ; 47,68 ; 53,29 ; 55,04 ; 55,35 ; 58,28 ; 107,35 ; 120,89 ; 124,89 ; 126,50 ; 129,13 ; 135,36 ; 149,42 ; 149,65 ; 152,69 ; HRMS calculée pour C₁₈H₂₅BrCIN₃0 : 413,0869 ; masse trouvée : 413,0867.

CI N

14) Composé de formule (I) dans lequel X=cPr

La 4,7-dichloro-3-iodoquinoline (350 mg, 1 ,08 mmol) et I acide cyclopropylboronic (139 mg, 1 ,63 mmol) sont mis en solution dans une solution dégazée de THF/K₃P0₄ aqueux 0.5 M (1/2 ; 4 ml/8mL). Le catalyseur XPhos Pd G2 (42 mg, 0,054 mmol) est ajouté sous argon et la réaction est chauffée 2 heures à 80 °C. A température ambiante, Le milieu réactionnel est filtré sur Celite® puis extrait deux fois au dichlorométhane. La phase organique est lavée à l eau et séchée sur MgS0₄, filtrée, concentrée puis purifiée sur colonne de silice avec un gradient cyclohexane / dichlorométhane 5/5 à 2,5/7,5.

Rendement 26%. Huile incolore ; RMN H (CDCI₃, 400 MHz) d 0,89-0,93 (2H, m) ; 1 ,16-1 ,21 (2H, m) ; 2,29-2,36 (1 H, m) ; 7,56 (dd, J = 9,03, 1 ,76 Hz, 1 H) ; 8,05 (1 H, d, J = 2,01 Hz, 1 H), 4,62 (1 H, m) ; 7,71 (1 H, dd, J = 9,1 , 2,3 Hz) ; 7,9 (1 H, d, J = 2,2 Hz) ; 8,18 (1 H, d, J = 8,1 Hz) ; 8,59 (1 H, d, J = 9,1 Hz) ; 8,69 (1 H, s) ; 9,14 (1 H, si) ; RMN ³C (CDCI₃, 100 MHz) d 7,88 ; 12,07 ; 124,68 ; 125,31 ; 128,43 ; 128,52 ; 133,42 ; 135,15 ; 142,06 ; 147,59 ; 149,85 ; SM (ESI⁺) : m/z = 238 [M+1 ].

4,7-dichloro-3-cyclopropylquinoline

A une suspension de 4,7dichloro-3-cyclopropylquinoline (69 mg, 0,29 mmol) dans 0,5 mL de N-méthyl-2-pyrrolidone sont ajoutés la 2-[(4-aminopentyl)(éthyl)amino]éthan-1 -ol (75 mg, 0,43 mmol), et la diisopropyléthylamine (143 μΐ, 0,87 mmol). Le milieu réactionnel est irradié aux micro-ondes 45 min à 160 °C puis dilué dans I acétate d ethyle et lavé trois fois avec une solution de NaCI saturée. La phase organique est déchée sur MgS0₄, filtrée, concentrée puis purifiée sur colonne de silice avec un gradient dichlorométhane/méthanol 10/0 à 80/20.

Rendement 21 %. Huile incolore ; RMN H (CDCI₃, 400 MHz) d 0,68-0,77 (2H, m) ; 1 ,07 (2H, m) ; 1 ,17 (3H, t, J = 7,3 Hz) ; 1 ,26 (1 H, m) ; 1 ,27 (3H, d, J = 6,27) ; 1 ,60-1 ,82 (8H, m) ; 2,72 (2H, m) ; 2,79-2,82 (4H, m) ; 3,72 (2H, m) ; 4,12 (1 H, si) ; 4,61 (1 H, si) ; 7,39 (1 H, dd, J = 9,1 , 2,0 Hz, 1 H) ; 7,94 (1 H, d, J = 9,1 Hz) ; 7,99 (1 H, d, J = 2,0 Hz) ; 8,50 (1 H, s) ; RMN ³C (CDCI₃, 100 MHz) d 6,01 ; 6,06 ; 22,29 ; 30,94 ; 36,14 ; 48,17 ; 53,52 ; 53,64 ; 55,93 ; 57,57 ; 1 19,03 ; 120,47 ; 124,39 ; 125,65 ; 128,19 ; 134,62 ; 151 ,83 ; 152,12 ; HRMS masse calculée pour C₂₁ H₃oCIN₃0 : 375,20774 ; masse trouvée : 375,20701 .

15) Composé de formule (I) dans lequel X= CH₂OCH₂

A une suspension de LiAIH₄ (56 mg, 1 ,49 mmol) dans 30 mL de THF anhydre est ajoutée, à 0 °C, une solution d ethyl-4,7-dichloroquinoline-3-carboxylate (270 mg, 1 mmol) dans 5 mL de THF anhydre. Après 3 heures d agitation à température ambiante, la réaction est neutralisée avec une solution aqueuse de soude 1 N et extraite 5 fois à I acétate d ëthyle. La phase organique est lavée avec une colonne de silice avec un gradient dichlorométhane/méthanol

10/0 à 95/5.

Rendement 50%. Solide blanc ; RMN H (CDCI₃, 400 MHz) d 5,05 (1 H, d, J = 5,7 Hz) ; 7,62 (1 H, dd, J = 9,0 Hz, 2,2 Hz) ; 8,14 (1 H, d, J = 2,0 Hz) ; 8,21 (1 H, d, J = 9,0 Hz) ; 9,02 (1 H, s) ; RMN ³C (CDCI₃, 100 MHz) d 58,98 ; 123,91 ; 125,65 ; 127,94 ; 128,71 ; 132,68 ; 134,74 ; 138,55 ; 147,82 ; 151 ,53 ; SM (EST) : m/z = 228 [M+1 ].

(4,7-dichloroquinolin-3-yl)méthanol A une solution de 4,7-dichloroquinolin-3-yl)méthanol (1 10 mg, 0,48 mmol) dans 8 mL de THF anhydre, à 0 °C, est ajouté par petites portion du NaH (46 mg, 1 ,93 mmol) après 10 min d agitation le 3-bromopropyne (430 mg, 2,9 mmol) est ajouté goutte à goutte. Après une nuit à température ambiante, le milieu est neutralisé avec de la glace, dilué à I acétate d ëthyle et lavé 4 fois avec une solution saturée de NaCI. La phase organique est séchée sur MgS0₄, filtrée et concentré sous vide. Le résidue est purifié sur colonne de silice avec un gradient dichlorométhane/méthanol 10/0 à 90/10.

Rendement 62%. RMN H (CDCI₃, 400 MHz) d 2,54 (1 H, t, J = 2,3 Hz) ; 4,33 (2H, d, J = 2,3 Hz) ; 4,92 (1 H, s) ; 7,6 (1 H, dd, J = 8,9 Hz, 2,1 Hz) ; 8,12 (1 H, d, J = 2,3 Hz) ; 8,19 (1 H, d, J = 8,8 Hz) ; 8,95 (1 H, s).

4,7-dichloro-3-((prop-2-yn-1 -yloxy)méthyl)quinoline

A une suspension de 4,7-dichloro-3-((prop-2-yn-1 -yloxy)méthyl)quinoline (80 mg, 0,30 mmol) dans 1 mL de N-méthyl-2-pyrrolidone sont ajoutés la 2-[(4-aminopentyl)(éthyl)amino]éthan-1 - ol (104 mg, 0,60 mmol), et la triéthylamine (83 μΐ, 0,60 mmol). Le milieu réactionnel est irradié aux micro-ondes 45 min à 160 °C puis dilué dans I acétate d ethyle et lavé trois fois avec une solution de NaCI saturée. La phase organique est séchée sur MgS0₄, filtrée, concentrée puis purifiée sur colonne de silice avec un gradient dichlorométhane/méthanol 10/0 à 80/20.

Rendement 31 %. Huile jaune ; RMN H (CDCI₃, 400 MHz) d 1 ,08 (3H, t, J = 7,1 Hz) ; 1 ,25- 1 ,28 (4H, m) ; 1 ,59-1 ,74 (4H, m) ; 2,63-2,57 (3H, m) ; 2,66-2,72 (4H, m) ; 3,63 (2H, t, J = 4,9

Hz) ; 3,98-4,05 (1 H, m) ; 4,21 (2H, d, J = 2,3 Hz) ; 4,73 (2H, s) ; 4,92 (1 H, d, J = 9,7 Hz) ;

7,38 (1 H, dd, J = 9,4, 2,3 Hz) ; 7,95-7,98 (2H, m) ; 8,48 (1 H, s) ; RMN ³C (CDCI₃, 100 MHz) d

1 1 ,06 ; 22,59 ; 23,40 ; 36,53 ; 47,90 ; 53,39 ; 54,14 ; 55,53 ; 57,24 ; 58,01 ; 68,27 ; 75,92 ;

79,32 ; 1 14,89 ; 1 19,90 ; 125,18 ; 125,76 ; 128,86 ; 135,44 ; 150,76 ; 152,80 ; 152,95 ; HRMS masse calculée pour C22H30CIN3O2 : 403,20265 ; masse trouvée : 403,20029.

Affinité des composés avec la MPO et Γ B-C

A l aide de la technologie de résonance plasmonique de surface (Biacore 3000), les constantes d Interactions entre les analogues de HCQ (HCQa) et les cibles myéloperoxydase (MPO) et Γ B-cristalline ( B-C) ont été mesurées à 25 °C selon 12 séries différentes d expérimentation. Tout d abord, des analogues d UCQ à cinq concentrations différentes (10^~6 à 10^~8 M) ont été injectées à un débit de 10^~6 l/min pendant 250 s sur les cibles MPO et B-C ainsi que sur les témoins ERK1 et ERK2, suivie d line phase de dissociation de 150 s.

Les paramètres cinétiques ont été mesurés en utilisant le logiciel BIAevaluation 4.1 . L ensemble des valeurs d unité de résonnances obtenues avec les témoins ont été soustraites à celles obtenues avec MPO et B-C pour compenser les liaisons non spécifiques. Les résultats de ces tests d affinité sont présentés dans les tableaux 1 et 2.

Les différences des valeurs de Kd pour les enzymes myéloperoxydase (MPO) et B- cristalline ( B-C) dans les tableaux 1 et 2 sont dues à la variabilité des lots commerciaux. Néanmoins, l ëcart entre les Kd des composés HCQ et CB137 reste identique selon ces deux tests.

Tableau 1

Analyses des composés sous forme de sels de sulfate selon la méthode décrite précédemment : Tableau 2

K_d(M) K_d(M)

Molécules Référence

Sur MPO sur crystallin

HCQ

4X10^-6 1x10^"6 commercial

HN^'^ -^ ^^N ^OH

CB137 6X10^-8 3x10^"5

Cl HN^^^^^^N^^^OH

CB300 4X10^-6 2x10^"4 Cl HN^'^^/^^{/ N} ^^OH CB321

7x10^"6 1x10^"5

_C| A_NJ Enantiomère R

H₂aa,

HN^'^ ^/^^{N /X}OH CB323

9X1 0^-8 2x10^"4

Enantiomère R

CB317 9X1 0^-6 1x10^"4

CI

CB341 5X10^-6 2x10^"5

Efficacité de CB137 dans un modèle de lupus

Animaux

Les souris MRL/MPJ - Fas (Ipr) (MRL-lpr) et C57BI/6 pour les expériences comportementales proviennent du Laboratoire Jackson et sont distribuées au hasard en 5 groupes. Tous les animaux ont été maintenus à température contrôlée (23 °C +/- 1 °C) avec un cycle de 12 heures de jour/nuit, eau et nourriture ad libitum. Traitement avec HCQ ou CB137

Les souris ont reçu la dose indiquée d ydroxychloroquine (Tokyo Chemical Industry), CB137 ou véhicule par voie intrapéritonéale (IP), toutes les 24 heures et pendant 5 jours sur une période de 10 semaines. Pour les souris MR pr, le traitement a commencé à 7 semaines d'âge, et s est terminé à 23 semaines d'âge où une proportion importante des souris non traitées sont mortes. Pour les souris C57BI/6, le même programme de traitement a été effectué et les souris ont été sacrifiées après 70 injections IP. HCQ et CB137 ont été à chaque fois fraîchement préparés dans du sérum physiologique et injectés aux souris dans un volume final de 50 μΙ_. les souris MRL/lpr ont été examinés quotidiennement pour détecter des lésions cutanées. Pour l'analyse histologique, les animaux ont été sacrifiés et les tissus ont été rapidement disséqués et post-fixés immédiatement.

Toutes les expériences animales ont été réalisées sous la supervision des enquêteurs autorisés et suivant les règlements actuels de l'UE. Les expériences ont été approuvées par le comité d'éthique local et national sous le numéro d'enregistrement 02.952,01. Survie des souris MRL/lpr (modèle de Lupus)

Les souris ayant reçu une injection i.p. de CB137 à 10 mg/kg ont une survie significativement augmentée par rapport aux souris traitées par HCQ à la même dose (figure 1 ).

Développement de la maladie

Les dermatites sont moins fréquentes chez les souris traitées par CB137 10 mg/kg comparée aux souris contrôle (vehicle) et aux souris traitées par HCQ (10 mg/kg) (figure 2).

Détermination de la rétinopathie Afin de démontrer que I accumulation d UCQ dans la partie arrière (rétine) peut conduire à des rétinopathies, les tests ci-après ont été réalisés.

Test de la falaise visuelle : Des souris ont été placées sur une feuille de verre horizontale sous laquelle on retrouve d'un côté, une surface à texture régulière (un quadrillage) collée immédiatement en dessous du verre et de l'autre côté, la même surface texturée se trouvant beaucoup plus bas que le verre. Le score est basé sur le pourcentage de pas sur la partie élevée et sur la partie au-dessus du vide est calculé.

Test de placement visuel : Des souris sont soulevées par la queue à environ 15 cm de haut puis redescendus de manière décélérée vers le sol. Le score est basé sur la distance entre le nez de la souris et la grille avant que I animal ne tende ses membres antérieurs en direction de la grille.

Histologie : Des souris de 7 semaines ont subi 5 fois par semaine des injections de 10 mg/kg d UCQ ou 5, 10 et 15 mg/kg de I analogue CB137 pendant une durée de 62 jours. Après I attribution d lin numéro, les souris ont été randomisées selon leur poids et traitement. Les souris ont été réparties par 5 dans des cages, une souris ayant été traitée avec le véhicule, une avec HCQ 10 mg/kg, une avec CB137 5 mg/kg, une avec CB137 10 mg/kg et une avec CB137 15 mg/kg. Les souris sont hébergées dans un environnement maintenu à une température de 22 °C, 35-55% d ^'humidité et avec des cycles de lumière/obscurité de 12h.

A la fin de I expérience, les souris sont euthanasiées par dislocation cervicale. Les globes oculaires sont isolés et conservés dans une solution contenant 4% de paraformaldéhyde, 5% de glutaraldéhyde et 0,1 M de cacodylate de sodium pendant une nuit à 4 °C. Les échantillons sont lavés, déshydratés et incrustés dans de la paraffine. Les sections rétiniennes de 4 mm sont colorées avec du bleu de toluidine à 1 % suivi par 1 % de bleu de méthylène. La toxicité rétinienne des échantillons est ensuite déterminée par analyse des coupes au microscope.

L analyse histologique des rétines de souris traitées par HCQ, CB137 montre que HCQ induit des lésions rétiniennes. CB137, quant à lui, n ^'induit pas plus de lésion que chez les souris contrôles (véhicule) (figures 3 et 4). La figure 3 représente deux photographies représentatives d line coupe transversale de rétine (coloration toluidine et bleu de méthylène) avec la photo de gauche représentant la rétine d un souris traitée par 10mg/ kg d UCQ (dommages rétinien indiqués par les flèches), et la photo de droite représentant la rétine saine d line souris traitée par 10mg/kg de CB137.

Efficacité du composé CB137 dans un modèle vascularite

Souris

Des souris femelles de souche C57BI/6 issues du laboratoire Jackson, âgées de 8 à 10 semaines et pesant environ 20 g, sont utilisées dans toutes les expériences. Les souris sont maintenues à une température de 23 °C ± 1 °C avec un cycle lumière/obscurité de 12h. Les souris ont accès à I eau et à la nourriture ad libitum et sont hébergées au moins une semaine avant le début de toutes expériences. Préparation de I anticorps anti-albumine sérique bovine (BSA)

La fraction gamma-globuline d lin sérum hyperimmun provenant d lin lapin immunisé avec de I albumine issu de sérum bovin (BSA) a été obtenu par précipitation au sulfate d ammonium puis la fraction obtenue est dialysée. La concentration en immunoglobulines a été évaluée par un dosage protéique à l aide de la méthode de l'acide bicinchoninique (BCA) (ThermoFisher, Strasbourg, France). L enrichissement de I anticorps anti-BSA a été vérifié par ELISA direct.

Modèle de vascularite pulmonaire induite par des complexes immuns

Un prélèvement de sang rétro-orbital a été réalisé grâce à des capillaires contenant de l îiéparine sur des souris anesthésiées à l îsoflurane la veille de la manipulation. Le lendemain, les souris sont anesthésiées avec un mélange de kétamine et de xylasine (90 mg/kg et 125 mg/kg respectivement). Le complexe immun IgG est induit dans les poumons par instillation intratrachéale de 0,5 mg d anticorps de lapin anti-BSA (MP Biomedicals, Strasbourg, France) et par I administration de 0,5 mg par souris d antigène BSA dans la veine caudale (Warner et al., 2001 and Warren et al.; 1989). Le traitement indiqué (PF-1355, CB137 ou le solvant seul) est administré par voie entérale. Les animaux sont euthanasiés 4 heures après instillation intratrachéale. Prélèvement du fluide broncho-alvéolaire et quantification des cellules.

Les animaux sont euthanasiés 4 heures après I Instillation intratrachéale par une injection létale de pentobarbital. Un prélèvement sanguin sous-mandibulaire est effectué. La cage thoracique est ouverte de manière à révéler les poumons et la trachée. Pour récupérer le fluide broncho-alvéolaire, une sonde est placée dans la trachée et les poumons sont lavés trois fois avec 0,5 mL de solution saline supplémentée de 2,5 mM EDTA à pH 7,4. Les cellules sont centrifugées après chaque lavage. Le surnageant du premier lavage est conservé pour mesurer I activité de la MPO et les surnageants issus des lavages suivants sont éliminés. Les culots cellulaires, pour chaque souris, sont rassemblés et resuspendus dans 200 μΐ de PBS. Les globules rouges sont éliminés à I aide d line solution hypotonique (Lonza, Basel, Switzerland) Le nombre total de cellules, à I exclusion d éventuels globules rouges résiduels et des cellules mortes colorées par le bleu de trypan, est déterminé au microscope optique sur une cellule de Malassez.

Cvtométrie en flux

Les cellules issus des lavages broncho-alvéolaires sont placées dans du PBS supplémenté de 2,5 mM EDTA et 2% de sérum de veau Γ tal et marquées à 4°C pendant 20 minutes à l aide d anticorps monoclonaux directement couplés à un fluorochrome : Rat anti-Mouse F4/80-APC (clone BM8 ; concentration finale 2 Mg/mL ; eBiosciences, Switzerland) ; Rat Anti- Mouse Gr-1 -PE (clone RB6-8C5 ; concentration finale 2 Mg/mL ; BD, USA) et Rat Anti-Mouse CD45-FITC (clone 30F1 1 ; concentration finale 5 Mg/mL ; BD, USA). Les cellules sont ensuite centrifugées (deux minutes à 300g), puis resuspendues dans du PBS supplémenté de 2,5 mM EDTA et 2% de sérum de veau Γ tal, et le marqueur de mort cellulaire 7-AAD (concentration final 1 ,25 Mg/mL ; BD, USA) est ajouté afin d Identifier les cellules mortes. Les données expérimentales sont acquises à I aide du FACSCalibur (BD, USA). L analyse par le logiciel FlowJo (Treestar, OR, USA) permet d exclure les cellules mortes (7-AAD++) et de quantifier les proportions de pneumocytes (CD45-), macrophages (CD45++ F4/80+ Gr-1 +) et neutrophiles (CD45+ F4/80- Gr-1 ++) dans le lavage broncho-alvéolaire.

L^'induction du modèle de vascularite induit une augmentation des neutrophiles présents dans les lavages broncho-alvéolaires. HCQ, semble légèrement augmenter la quantité de neutrophiles par rapport au contrôle +. En revanche, CB137 diminue la quantité de neutrophiles présente dans les poumons (figure 5).

Préparation des coupes de poumons.

Les poumons sont prélevés puis fixés dans du PFA 4% (1 h à température ambiante puis une nuit à 4 °C). Ils sont ensuite lavés dans deux bains de PBS ^"I X pendant 10 minutes. Ils sont déshydratés dans une série de bains d éthanol (2 bains de 15 minutes) de concentration croissante (25%, 50%, 75%, 95% et 100%). Une fois déshydratés, les poumons sont plongés dans deux bains de toluène de 4h puis inclus dans la paraffine. Les blocs de paraffine sont ensuite coupés en coupe de 4 μηη d épaisseur. Les coupes de poumons sont colorées à l îiématoxyline et à Téosine. Les lames sont plongées dans 2 bains de toluène pendant 5 minutes puis dans des bains d alcool de concentrations décroissantes (100%, 95%, 75%, 50% et 25%) pendant 5 minutes chaque bain puis dans 2 bains d eau pendant 5 minutes. Les lames sont ensuite plongées dans une solution d liématoxyline pendant 2,5 minutes et rincées sous un filet d eau pendant 15 minutes. Elles sont ensuite immergées dans un bain d eosine pendant 5 minutes, rincées dans 2 bains d ethanol 100% pendant 30 secondes puis plongées dans 2 bains de toluène pendant 10 minutes.

Une série de coupes a été récupérées pour être colorées au trichrome de Masson à I aide du kit de coloration au trichrome selon Masson de Roth (#7089). La première partie du protocole est la même (toluène, éthanol puis eau). Les lames sont ensuite plongées dans un bain d liématoxyline du kit (solution A + B ratio 1 : 1 ) pendant 2,5 minutes puis rincées sous un filet d eau pendant 15 minutes. Les lames sont plongées successivement dans la coloration de Goldner n°1 (5 minutes) puis dans I acide acétique 1% (30 secondes), la coloration de Goldner n°2 (2 minutes), dans I acide acétique 1 % (30 secondes) la coloration de Goldner n°3 (3 minutes), dans I acide acétique 1 % (2 minutes), dans 2 bains d ëthanol 100% (2 x 3 secondes) et dans 2 bains de toluène (2 x 10 minutes). Analyse histoloqique des coupes de poumons

Les coupes de poumons sont examinées sous un microscope optique (Axio LabA1 de marque Zeiss) pour évaluer I Intensité de I influx de neutrophiles, le niveau d îiémorragie, et repérer les altérations structurales. Un minimum de 10 champs au grossissement 400x est analysé par animal.

Le CB137 et I HCQ permettent d Inhiber les vascularites pulmonaires induites par les complexes immuns. Les souris sont traitées au PBS, à I HCQ (10 mg/kg) ou au CB137 (10, 30 ou 100 mg/kg) per os avant d Induire des vascularites pulmonaires. Brièvement, ces vascularites sont induites en instillant un anticorps anti-BSA (50 μg) dans les poumons et I antigène respectif dans la veine de la queue. Les photos (figure 6) représentent des coupes de poumons colorés à Téosine et hématoxyline. (a) contrôle négatif (b) Induction des complexes immuns (ImmComp) avec le solvant (c) avec 10 mg/kg d HCQ (d) avec 10 mg/kg de CB137 (e) avec 30 mg/kg de CB137 (f) avec 1 00 mg/kg de CB137. Sur la figure 6, les flèches en trait plein indiquent les vaisseaux sanguins. Il faut également noter I afflux important de neutrophiles (identifié par des flèches en pointillé) et l ^'hémorragie dans (b).

Ces résultats indiquent que le composé CB137 limite l ^'inflammation pulmonaire induite par les complexes immuns.

Claims

REVENDICATIONS

1 . Composé de formule (I), son sel, solvate ou hydrate pharmaceutiquement acceptable, sous la forme d lin énantiomère ou d lin mélange d ënantiomères :

dans laquelle U représente :

F, Cl, Br, CN, ou N₃ ;

et V, W, X et Y représentent indépendamment:

i H à condition que V, W, X et Y ne représentent pas tous simultanément H ;

l F, Cl, Br, CN ou N₃ ;

i Si(R^a)(Ft^b)(Ft^c), où

i FT. où

i S(0)_nR², où

n = 0, 1 ou 2,

SR⁵, où

C(0)R⁶, où

R⁶ représente un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée méthyle ; alkyle perfluoré, de préférence trifluoromethyle ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; aryle, de préférence phényle ; aralkyle, de préférence benzyle ; hétéroaryle ; O-alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; O-cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; O-aryle, de préférence phényle ; O-aralkyle, de préférence benzyle ; O-hétéroaryle ; ou N(R⁷)(R⁸) ;

à condition que lorsque X représente C(0)R⁶, alors R⁶ représente un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée méthyle ; alkyle perfluoré, de préférence trifluoromethyle ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; aryle, de préférence phényle ; aralkyle, de préférence benzyle ; hétéroaryle ; ou N(R⁷)(R⁸) ;

OR⁷, où

R⁷ représente : H ; un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée méthyle ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; aryle, de préférence phényle ; aralkyle, de préférence benzyle ; hétéroaryle ; C(0)-alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; C(0)-cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; C(O)- aryle, de préférence phényle ; C(0)-aralkyle, de préférence benzyle ; C(O)- hétéroaryle ; C(0)0-alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; C(0)0-cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; C(0)0-aryle, de préférence phényle ; C(0)0-aralkyle, de préférence benzyle ; C(0)0-hétéroaryle ; (CH₂)_mCCR⁸ ; (CH₂)_PCH=CR⁸ ;

où m = 1 à 6 et p = 1 à 6 ; ou

l CH₂OR⁷ ; CH₂SR⁵ ; CH₂NR³R⁴ ; ou CH₂N₃.

2. Composé de formule (I) selon la revendication 1 dans laquelle

U représente Cl,

V, W et Y représentent H et X représente :

l F, Cl, Br, CN, ou N₃ ;

i Si(R^a)(R^b)(R^c), où

c R¹, où

i S(0)_nR², où

n = 0, 1 ou 2,

R⁴ représente H ; un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; aryle, de préférence phényle ; aralkyle, de préférence benzyle ; hétéroaryle ; C(0)-alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ;

C(0)-cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; C(0)-aryle, de préférence phényle ;

SR⁵, où

C(0)R⁶, où

OR⁷, où

où m = 1 à 6 et p = 1 à 6 ;

CH₂OR⁷ ; CH₂SR⁵ ; CH₂NR³R⁴ ; ou CH₂N₃.

3. Composé de formule (I) selon la revendication 2 dans laquelle X représente : l F ; Cl ; Br ; ou CN ;

L FT . OÙ

R¹ représente avantageusement un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée méthyle ; un groupement perfluoroalkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée CF₃, CF₂CF₃ ou CH(CF₃)₂ ; ou cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ;

S(0)_nR², où R² représente avantageusement un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence méthyle ;

OR₇, où R⁷ représente un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée méthyle ; un groupement perfluoroalkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée CF₃, CF₂CF₃ ou CH(CF₃)₂ ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ;

CH₂OR⁷ où R⁷ représente un groupement alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée méthyle ; un groupement perfluoroalkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄, de manière préférée CF₃, CF₂CF₃ ou CH(CF₃)₂ ; cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; (CH₂)_mCCR⁸ ; (CH₂)_pCH=CR⁸ où R⁸ représente H, Si(R^a)(R^b)(R^c), ou R¹ et m = 1 à 6 et p = 1 à 6.

4. Composé de formule (I) selon la revendication 2 ou 3 dans laquelle X représente F, Cl, Br, CF₃, CN, S0₂CH₃, CH₃, CH₂CH₃, cyclopropyle, C(0)cPr, C(0)CF_3, N(CH₃)₂, OCF₃, ou CH₂OCH₂CCH.

5. Composé de formule (I) selon l une des revendications 1 à 4 pour son utilisation en tant que médicament.

6. Composé de formule (I) pour son utilisation selon la revendication 5 en tant qu agent anti-inflammatoire.

7. Composé de formule (I) pour son utilisation selon la revendication 5 pour son utilisation dans le traitement des vascularites.

8. Composé de formule (I) pour son utilisation selon la revendication 5 dans le traitement du lupus érythémateux.

9. Composé de formule (I) pour son utilisation selon la revendication 5 dans le traitement du cancer en association avec un agent anticancéreux, notamment le cancer colorectal ou le cancer du poumon.

10. Composé de formule (I), son sel, solvate ou hydrate pharmaceutiquement acceptable, sous la forme d lin énantiomère ou d lin mélange d ënantiomères :

dans laquelle Ui représente :

F, Cl, Br, CN, CF₃, ou N₃ ;

et Vi , Wi, Xi et Yi représentent indépendamment I, N0₂ ou H, à condition que \ , Wi, Xi et Yi ne représentent pas tous simultanément H, pour son utilisation en tant qu agent antiinflammatoire.

1 1 . Composé de formule (I) selon la revendication 10 dans laquelle :

Ui représente Cl,

Vi, Wi , et Yi représentent H et Xi représente I ou N0_2, pour son utilisation en tant qu agent anti-inflammatoire.

12. Composé de formule (I ) tel que défini à la revendication 10, son sel, solvate ou hydrate pharmaceutiquement acceptable, sous la forme d lin énantiomère ou d lin mélange d ënantiomères, pour son utilisation dans le traitement du lupus érythémateux.

13. Composé de formule (I ^") son sel, solvate ou hydrate pharmaceutiquement acceptable, sous la forme d lin énantiomère ou d lin mélange d ënantiomères :

dans laquelle U₂ représente :

F, Cl, Br, CN, CF₃, ou N₃ ;

et V₂, W₂, X₂ et Y₂ représentent indépendamment H, à condition que V₂, W₂, X₂ et Y₂ ne représentent pas tous simultanément H, ou C(0)R⁶, où R⁶ représente O-alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; O-cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; O-aryle, de préférence phényle ; O-aralkyle, de préférence benzyle ; ou O-hétéroaryle ; pour son utilisation dans le traitement du lupus érythémateux.

14. Composé de formule (Π selon la revendication 13 dans laquelle :

U₂ représente Cl,

V₂, W₂, et Y₂ représentent H et X₂ représente C(0)R⁶, où R⁶ représente O-alkyle en Ci à C₆, de préférence en Ci à C₄ ; O-cycloalkyle, de préférence cyclopropyle ; O-aryle, de préférence phényle ; O-aralkyle, de préférence benzyle ; ou O-hétéroaryle ; pour son utilisation dans le traitement du lupus érythémateux

15. Composé de formule (I) ou (I ^") tel que défini à la revendication 10 ou 13 pour son utilisation dans le traitement du cancer en association avec un agent anticancéreux, avantageusement dans le traitement du cancer colorectal ou du cancer du poumon.

16. Composé de formule (I) ou (I ^") tel que défini à la revendication 10 ou 13 pour son utilisation dans le traitement des vascularites.