EP2364136A1 - Utilisation cosmetique d'activateurs de l'autophagie des cellules cutanees - Google Patents

Utilisation cosmetique d'activateurs de l'autophagie des cellules cutanees

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EP2364136A1
EP2364136A1 EP09801742A EP09801742A EP2364136A1 EP 2364136 A1 EP2364136 A1 EP 2364136A1 EP 09801742 A EP09801742 A EP 09801742A EP 09801742 A EP09801742 A EP 09801742A EP 2364136 A1 EP2364136 A1 EP 2364136A1
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EP
European Patent Office
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skin
autophagy
activator
cosmetic
expression
Prior art date
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Withdrawn
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EP09801742A
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German (de)
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Jean Paufique
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Societe Industrielle Limousine dApplication Biologique SA SILAB
Original Assignee
Societe Industrielle Limousine dApplication Biologique SA SILAB
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Publication date
Application filed by Societe Industrielle Limousine dApplication Biologique SA SILAB filed Critical Societe Industrielle Limousine dApplication Biologique SA SILAB
Publication of EP2364136A1 publication Critical patent/EP2364136A1/fr
Withdrawn legal-status Critical Current

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Definitions

  • the present invention relates to the use in a cosmetic composition of an activator of autophagy of skin cells as a cosmetic active ingredient.
  • the invention also relates to cosmetic compositions comprising at least one autophagic activator for skin cells as a cosmetic active ingredient and a cosmetic process for detoxifying the skin and / or for preventing or combating cutaneous aging, comprising: topical application to the skin of such compositions.
  • the skin, organ of contact with the environment, is constantly subjected to external and internal aggression, which threatens its balance and modifies its appearance.
  • UV radiation ultraviolet
  • various cutaneous manifestations such as actinic erythema, solar elastosis or the premature appearance of the effects of skin aging: the skin becomes loose, deeply wrinkled, rough, dry, strewn with hypopigmented or hyperpigmented spots and dilated vessels.
  • These manifestations which reflect profound structural changes in the skin tissue, are unsightly and unsightly and many people tend to want to fade them. This is why the objective of the present invention is to provide an effective means for protecting the skin against the aggressions likely to alter its proper functioning and its appearance, and to fight against the resulting manifestations.
  • the present invention proposes using as a cosmetic active ingredient in a cosmetic composition at least one activator of the autophagy of skin cells, in particular keratinocytes and fibroblasts.
  • the use of at least one autophagic activator for cutaneous cells makes it possible to fight against the accumulation of deleterious molecules in the cutaneous cells produced in the event of stress and thus to fight against the resulting manifestations.
  • the invention relates to the use in a cosmetic composition of at least one autophagic activator of skin cells, in particular keratinocytes and / or fibroblasts, as an active ingredient, for detoxifying skin cells. , fight against aging of the skin, restructure the skin, moisturize and protect the stratum corneum, increase cell renewal, protect cells from the harmful effects of UVA and UVB radiation and limit inflammation phenomena.
  • the invention relates to the use in a cosmetic composition of at least one activator of autophagy of skin cells, as an active ingredient for detoxifying skin cells and / or to fight against skin aging.
  • a cosmetic composition of at least one activator of autophagy of skin cells as an active ingredient for detoxifying skin cells and / or to fight against skin aging.
  • the use according to the invention makes it possible to increase the elimination of damaged molecules, to detoxify the skin and to limit skin aging. Indeed, under certain conditions, especially with age and overexposure to the sun, the skin cells are no longer able to evacuate the molecules damaged by radiation and various stresses. The cells are engorged by these damaged molecules and by free radicals.
  • the cosmetic use of autophagic activators of cutaneous cells according to the invention It helps to limit this cellular engorgement and to rid the cells of deleterious and useless elements that hinder its optimal functioning by accumulating.
  • the invention also relates to a cosmetic composition for topical application to the skin comprising, in a physiologically acceptable medium, an effective amount of at least one autophagic activator for cutaneous cells chosen from active principles derived from Lithothamnium calcareum, Melilotus off icinalis. , Citrus limonum, Candida saitoana, Lens culinaris, Averrhoa carambola, Momordica charantia, Yarrowia lipolytica and at least one cosmetic adjuvant.
  • the autophagic activator of the cutaneous cells is present in an amount of between 0.1 and 15% by weight relative to the total weight of the composition.
  • the invention also relates to a cosmetic process for detoxifying the skin and / or for preventing or combating cutaneous aging, comprising the topical application to the skin of a composition comprising at least one activator of the autophagy of the skin. skin cells.
  • a cosmetic process for detoxifying the skin and / or for preventing or combating cutaneous aging comprising the topical application to the skin of a composition comprising at least one activator of the autophagy of the skin. skin cells.
  • the present invention therefore relates to the use in a cosmetic composition of an activator of autophagy, as a cosmetic active ingredient.
  • Autophagy is a mechanism for recycling and detoxifying constituents and cellular organelles.
  • autophagy can regulate, repair and eliminate long-lived proteins in cells, thus ensuring control during the differentiation and aging of human skin.
  • the mechanism of autophagy comprises four stages: the initiation, the formation of an initial vacuole, called autophagosome, which sequesters the cytoplasmic material, the maturation of the autophagosome in vacuole degraded and fusion with the lysosome, until the degradation of the sequestered material.
  • a skin cell autophagic activator useful according to the invention may be an active ingredient having a stimulating activity for the expression of MAP-LC3 (microtubule-associated membrane protein) microtubule-associated membrane proteins. and / or ATG5-12 ("Autophagy-related genes", autophagy genes) of skin cells.
  • MAP-LC3 microtubule-associated membrane protein
  • ATG5-12 Autophagy-related genes
  • the first step of autophagy is the formation of a multimembrane structure, called phagophore, whose origin remains unknown. This structure extends to form the autophagosome that sequesters the cytoplasmic material. The autophagosome fuses with the lysosome and its contents are then degraded by the lysosomal enzymes. During the formation of the autophagosome, ATG proteins are recruited from the cytoplasm and transitably associate with the autophagosomal membrane. This process involves mainly three protein complexes: the class III PI (3) K associated with the Bécline 1 protein and two conjugation systems.
  • the early event in the induction of autophagosome formation is the production of phosphatidyl inositol 3-phosphate by the Bécline 1-PI (3) K class III complex which allows the recruitment of the first ATG12-ATG5 conjugation system , also noted ATG5-12.
  • the latter allows the conjugation of phosphatidyl ethanolamine (PE) to the MAP-LC3 protein to form the MAP-LC3-PE conjugate, which is then recruited to the autophagosomal membrane.
  • PE phosphatidyl ethanolamine
  • YATG5-12 is precursor to MAP-LC3 and phosphatidyl ethanolamine (PE) conjugation.
  • Map-LC3 are 15kDa proteins found in mammals. They are involved in the formation of autophagosome membranes. There are two forms: a cystolic form the LC3-I and a form bound to the LC3-II membrane.
  • Map-LC3 are first cleaved, directly after their synthesis, at their C-terminal part to give the LC3-I cystolic form. During autophagy, LC3-I is converted to LC3-II, and proteins associate with autophagic vacuoles.
  • an active ingredient exhibiting an activity stimulating the expression of MAP-LC3 and / or AT65-12 of the cells of the skin makes it possible to stimulate the formation of the autophagosome and therefore to stimulate the formation of the autophagosome. autophagy of the skin cells.
  • an activator of skin cell autophagy useful according to the invention may be an active ingredient inhibiting the activation of phosphorylated mTOR.
  • MTOR mammalian target of rapamycin
  • mammalian rapamycin target is a molecule involved in the initiation of autophagosome formation and acts as a sensor for ATP and regulating amino acids. the balance between nutrient availability and cell growth.
  • mTOR When the amount of nutrients is sufficient, mTOR is phosphorylated on the 2448 seine and transmits a positive signal activating cell growth and inhibiting autophagy. In the opposite case, that is to say in conditions of nutritional deprivation or starvation, this phosphorylation disappears in favor of a phosphorylation of threonine 2446, which allows the lifting of the inhibition of autophagy. The mechanism of autophagy is therefore initiated when there is dephosphorylation of mTOR on serine 2448.
  • a stimulator of the autophagic activity of cutaneous cells useful according to the invention may be an active ingredient having a stimulating activity for the expression of p53 protein, AMPK and / or DRAM.
  • the p53 protein is a major stress protein, capable in particular of: activating DRAM (Damage Regulated Autophagy Modulator) protein, a protein directly involved in the initiation of the mechanism of autophagy, and
  • AMPK protein kinase
  • the cosmetic use of an active ingredient having an activity stimulating the expression of the phosphorylated p53 protein, DRAM and / or AMPK of the skin cells makes it possible to promote the initiation of autophagy , to mobilize the formation of autophagosomes and thus to stimulate the autophagy of skin cells.
  • the cellular consequence of an activation of the mechanism of autophagy by an active principle having a stimulating activity of the expression of MAP-LC3, ATG5-12, phosphorylated p53 protein, DRAM and / or AMPK and or having a phosphorylated mTOR inhibitory activity is a better detoxification of cells, that is to say a decrease in reactive oxygen species and degenerate macromolecules blocked in cutaneous cells.
  • the stimulator of the autophagic activity of cutaneous cells useful according to the invention is an active ingredient derived from at least one plant, an alga or a yeast.
  • the autophagy activator is an active ingredient derived from at least one algae of the genus Lithothamnium calcareum, or from a plant chosen from Melilotus officinalis, Citrus limonum, Lens culinaris, Averrhoa carambola, Momordica charantia or a yeast selected from Candida saitoana and Yarrowia lipolytica.
  • the autophagic activator of cutaneous cells is capable of being selected by a test carried out on cutaneous cell cultures comprising the following steps: - culture of cutaneous cells, keratinocytes or fibroblasts, in a suitable culture medium,
  • DRAM and / or AMPK by said cells and comparison of the results with those obtained on cultures of cutaneous cells not treated with the extract to be tested. If there is an increase in the expression of MAP-LC3, of ATG5-l2 phosphorylated protein p53, DRAM protein and / or AMPK I 1, and / or a decrease in phosphorylated mTOR, then the principle tested active can be used in a cosmetic composition as an activator of autophagy of skin cells.
  • the protocol consists in submitting normal human HaCaT keratinocytes or keratinocytes to nutrient stress, that is to say to an absence of growth factors, for a certain time and to evaluate the expression of several markers of autophagy during cellular recovery.
  • the protocol is as follows:
  • the cells are cultured for several times (from 0.5h to 24h) in a state of nutritional stress, after these times of cultures in a state of nutritive stress, withdrawal of the non-nutritive culture medium and replacement with complete culture medium, and finally evaluation of the autophagy state of the cutaneous cells by evaluation of the expression of MAP-LC3 , AT65-12 complex, phosphorylated mTOR, phosphorylated p53, DRAM and phosphorylated AMPK after cell recovery.
  • MAP-LC3 after nutritional stress It is possible to evaluate the autophagy of cutaneous cells by visualizing the expression of the MAP-LC3 protein by immunofluorescent labeling.
  • the expression of MAP-LC3 was evaluated on skin cell cultures of HaCaT lines and on normal human keratinocytes after different contact times of nutrient stress.
  • the immunolabeling results being qualitative, several levels of expression of MAP-LC3 were defined:
  • This marking is observable from 1 hour and up to 3 hours of starvation.
  • the conditions of nutritive stress thus make it possible to induce a phenomenon of the autophagic type, visualized by the expression ATG5-12.
  • phosphorylated mTOR expression was evaluated on skin cell cultures of HaCaT lines and on normal human keratinocytes after different culture times under nutrient stress.
  • the expression of phosphorylated mTOR is presented in the table below in percentage relative to the control (without nutritional stress).
  • This experiment showed a clear decrease of the phosphorylated mTOR protein visible as early as 8 hours of deprivation, in cutaneous skin cell cultures subjected to starvation.
  • the conditions of nutritive stress thus make it possible to induce autophagy on cutaneous cell cultures, visualized by the decrease in the expression of phosphorylated mTOR.
  • the evaluation of the expression of the phosphorylated p53 protein was evaluated on skin cell cultures of HaCaT lines and on normal human keratinocytes after different culture times in a state of nutritional stress.
  • the expression of phosphorylated p53 is presented in the table below in percentage relative to the control (without nutritional stress).
  • This experiment showed a clear increase in the expression of the phosphorylated p53 protein visible as early as 1 hour, in starved cell cultures.
  • the conditions of nutritive stress thus make it possible to induce an autophagic type phenomenon on cutaneous cell cultures, visualized by the increase in the expression of the phosphorylated p53 protein.
  • This experiment showed a marked increase in the expression of the DRAM protein after 0.5 hour of culture in a state of nutritional stress.
  • the expression of the DRAM protein becomes maximal after 1.5 hours of culture in a state of nutritional stress. This coincides with the kinetics of expression of the p53 protein which reaches its maximum after one hour of nutrient stress.
  • the conditions of nutritive stress thus make it possible to induce an autophagic type phenomenon on skin cell cultures, visualized by the increase of the expression of the DRAM protein.
  • autophagy is possible, as in the case of nutritional stress, by the evaluation of different proteins such as MAP-LC3, the ATG5-12 complex, the phosphorylated mTOR protein, the phosphorylated p53 protein, the DRAM protein or the phosphorylated AMPK protein.
  • autophagic expression of cutaneous cells was investigated by analyzing the expression of MAP-LC3, phosphorylated p53 protein and DRAM protein in stressed skin cell cultures.
  • the operating protocol is as follows: - cell cultures for 24 hours in complete culture medium
  • MAP-LC3 expression was analyzed under these moderate stress conditions (125 ⁇ M and 250 ⁇ M of hydrogen peroxide HzOz) on HaCaT keratinocyte cultures and on normal human keratinocytes.
  • the immunolabeling results being qualitative, several levels of AT65-12 expression were defined:
  • MAP-LC3 at the level of the cytoplasm of the cells from 0.5 hour of recovery which becomes maximum after 1.5 hours, then decreases from 2 hours of recovery.
  • the conditions of nutritive and oxidative stress thus make it possible to induce a phenomenon of the autophagic type, visualized by the increase of the expression of MAP-LC3 in the cutaneous cells.
  • DRAM protein It is also possible to evaluate the autophagy of stressed skin cells by visualizing the expression of the DRAM protein by Western Blott. The evaluation of DRAM expression was therefore analyzed under these conditions of moderate stress with 125 ⁇ M of HzO 2 , on HaCaT keratinocyte cultures and on normal human keratinocytes. The expression of DRAM is presented in the following table in percentage relative to the control (without stress).
  • so-called young skin cells show an increase in MAP-LC3 expression when subjected to moderate oxidative stress (125, 250, see 400 ⁇ M). When subjected to significant oxidative stress (600 and 1000 ⁇ m), they are placed in apoptosis. The so-called aged skin cells do not exhibit the same increase in MAP-LC3 expression when subjected to the same moderate oxidative stress.
  • the screening is carried out according to the protocol of nutritive and oxidative stress presented in point 2.1, starting from active ingredients derived from plants, algae or yeasts.
  • the evaluation of the effect of active principles on cutaneous skin autophagy was performed by analyzing the expression of the MAP-LC3 protein in skin cell cultures subjected to nutritive and oxidative stress.
  • the test protocol is as follows: - cell cultures for 24 hours in complete culture medium,
  • the main active ingredients are:
  • the invention also covers cosmetic compositions including at least one active ingredient acting on the autophagy of cutaneous cells in different galenic forms, adapted for topical administration to the skin.
  • compositions may especially be in the form of creams, oil-in-water emulsions, water-in-oil emulsions, multiple emulsions, solutions, suspensions or powders. They can be more or less fluid and have the appearance of a cream, a lotion, a milk, a serum, an ointment, a gel, a paste or a foam, or in solid form.
  • compositions contain between 0.01 and 15% by weight of active principle (s) acting on autophagy cutaneous cells according to the present invention, preferably between 1% and 4%.
  • active principle s
  • Expert cream a composition containing between 0.01 and 15% by weight of active principle (s) acting on autophagy cutaneous cells according to the present invention, preferably between 1% and 4%.
  • An example of a cream comprising an active ingredient extracted from lemon as presented in point 4 may have the following composition:
  • An example of a cream comprising an active ingredient extracted from Lithothamnium as presented in point 4 can have the following composition:
  • Night cream An example of a cream comprising an active ingredient extracted from Melilothus as presented in point 4, may have the following composition: A. Water QSP 100% Carbopol ETD 2020 (Noveon) 0.4%
  • An example of a cream comprising an active ingredient extracted from Candida saitoana as presented in point 4 may have the following composition: A. Water QSP 100%

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Abstract

L'objet de l'invention est l'utilisation dans une composition cosmétique d'une quantité efficace d'au moins un activateur de l'autophagie des cellules cutanées comme principe actif cosmétique. L'invention concerne également des compositions cosmétique comprenant d'au moins un activateur de l'autophagie des cellules cutanées comme principe actif 5 cosmétique, et un procédécosmétique pour détoxifierla peau et/ou pour prévenir ou lutter contre le vieillissement cutané.

Description

UTILISATION COSMÉTIQUE D' ACTIV ATEURS DE L'AUTOPHAGIE DES CELLULES CUTANEES
La présente invention concerne l'utilisation dans une composition cosmétique, d'un activateur de l'autophagie des cellules de la peau comme principe actif cosmétique.
L'invention vise également des compositions cosmétiques comprenant au moins un activateur de l'autophagie des cellules de la peau comme principe actif cosmétique ainsi qu'un procédé cosmétique pour détoxifier la peau et/ou pour prévenir ou lutter contre le vieillissement cutané, comprenant l'application topique sur la peau de telles compositions. La peau, organe de contact avec l'environnement, est constamment soumise à des agressions, tant externes qu'internes, qui menacent son équilibre et modifient son aspect.
On sait par exemple que l'exposition excessive aux rayons ultraviolets (UV) se traduit par diverses manifestations cutanées, comme des érythèmes actiniques, de l'élastose solaire ou encore l'apparition prématurée des effets du vieillissement cutané : la peau devient lâche, profondément ridée, rugueuse, sèche, parsemée de taches hypopigmentées ou hyperpigmentées et de vaisseaux dilatés. Ces manifestations, qui reflètent de profonds changements structuraux dans le tissu cutané, sont inesthétiques et disgracieuses et beaucoup de gens ont tendance à vouloir les estomper. C'est pourquoi l'objectif de la présente invention est de proposer un moyen efficace pour protéger la peau contre les agressions susceptibles d'altérer son bon fonctionnement et son aspect, et pour lutter contre les manifestations qui en découlent. Pour y répondre, la présente invention propose d'utiliser comme principe actif cosmétique dans une composition cosmétique au moins un activateur de l'autophagie des cellules de la peau, en particulier des kératinocytes et des fibroblastes. En effet, l'utilisation d'au moins un activateur de l'autophagie des cellules cutanées permet de lutter contre l'accumulation de molécules délétères dans les cellules cutanées produites en cas de stress et ainsi lutter contre les manifestations qui en découlent. En particulier, l'invention vise l'utilisation dans une composition cosmétique d'au moins un activateur de l'autophagie des cellules de la peau, en particulier des kératinocytes et/ou des fibroblastes, comme principe actif, pour détoxif ier les cellules cutanées, lutter contre le vieillissement de la peau, restructurer la peau, hydrater et protéger la couche cornée, augmenter le renouvellement cellulaire, protéger les cellules des effets néfastes des radiations UVA et UVB et limiter les phénomènes d'inflammation.
Préférentiellement, l'invention vise l'utilisation dans une composition cosmétique d'au moins un activateur de l'autophagie des cellules de la peau, comme principe actif destiné à détoxifier les cellules de la peau et/ou lutter contre le vieillissement cutané. Avantageusement, en augmentant le mécanisme d'autophagie dans les cellules cutanées, l'utilisation selon l'invention permet d'augmenter l'élimination des molécules endommagées, de détoxifier la peau et de limiter le vieillissement cutané. En effet, dans certaines conditions, en particulier asec l'âge et la surexposition au soleil, les cellules de la peau ne sont plus en état d'évacuer les molécules endommagées par les radiations et les stress divers. Les cellules sont engorgées par ces molécules endommagées et par des radicaux libres. L'utilisation cosmétique d'activateurs de l'autophagie des cellules cutanées selon l'invention permet de limiter cet engorgement cellulaire et de débarrasser les cellules d'éléments délétères et inutiles qui entravent son fonctionnement optimal en s'accumulant.
L'invention vise également une composition cosmétique pour application topique sur la peau comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, une quantité efficace d'au moins un activateur de l'autophagie des cellules cutanées choisi parmi des principes actifs issus de Lithothamnium calcareum, Melilotus off icinalis, Citrus limonum, Candida saitoana, Lens culinaris, Averrhoa carambola, Momordica charantia, Yarrowia lipolytica et au moins un adjuvant cosmétique. Préférentiellement l'activateur de l'autophagie des cellules cutanées est présent en une quantité comprise entre 0,1 et 15% en poids par rapport au poids total de la composition.
Enfin l'invention a également pour objet un procédé cosmétique pour détoxif ier la peau et/ou pour prévenir ou lutter contre le vieillissement cutané, comprenant l'application topique sur la peau d'une composition comprenant au moins un activateur de l'autophagie des cellules de la peau. L'invention est maintenant décrite en détail.
La présente invention vise donc l'utilisation dans une composition cosmétique d'un activateur de l'autophagie, en tant que principe actif cosmétique. L'autophagie est un mécanisme de recyclage et de détoxification des constituants et des organites cellulaires. L'autophagie permet notamment de réguler, réparer et éliminer les protéines de longue durée de vie dans les cellules, assurant ainsi un contrôle au cours de la différenciation et du vieillissement de la peau humaine. Sur le plan cellulaire, le mécanisme d'autophagie, comprend quatre étapes : l'initiation, la formation d'une vacuole initiale, nommée autophagosome, qui séquestre le matériel cytoplasmique, la maturation de l'autophagosome en vacuole dégrαdαtive et la fusion avec le lysosome, jusqu'à la dégradation du matériel séquestré.
Selon un premier aspect, un activateur de l'autophagie des cellules cutanées utile selon l'invention peut être un principe actif présentant une activité stimulatrice de l'expression des MAP-LC3 (« microtubule-associated membrane protein » protéines membranaires associées aux microtubules) et/ou des ATG5-12 (« Autophagy-related gènes », gènes de l'autophagie) des cellules de la peau. En effet, la formation de l'autophagosome, étape essentielle dans le mécanisme de l'autophagie, implique deux systèmes de conjugaison : le complexe ATG5-12 et les MAP-LC3.
La première étape de l'autophagie est la formation d'une structure multimembranaire, appelée phagophore, dont l'origine reste inconnue. Cette structure s'étend pour former l'autophagosome qui séquestre du matériel cytoplasmique. L'autophagosome fusionne avec le lysosome et son contenu est ensuite dégradé par les enzymes lysosomales. Au cours de la formation de l'autophagosome, des protéines ATG sont recrutées à partir du cytoplasme et s'associent trans itoirement avec la membrane autophagosomale. Ce processus fait intervenir principalement trois complexes protéiques : la PI(3)K de classe III associée à la protéine Bécline 1 et deux systèmes de conjugaison. L'événement précoce dans l'induction de la formation de l'autophagosome est la production de phosphatidyl inositol 3-phosphate par le complexe Bécline 1-PI(3)K de classe III qui permet le recrutement du premier système de conjugaison ATG12-ATG5, noté aussi ATG5-12. Ce dernier, permet, à son tour, la conjugaison de la phosphatidyl éthanolamine (PE) à la protéine MAP-LC3 pour former le conjugué MAP-LC3 - PE, qui est alors recruté à la membrane autophagosomale. Les gènes ATG sont donc impliqués dans la formation de l'autophagosome et
YATG5-12 est précurseur de la conjugaison MAP-LC3 et phosphatidyl éthanolamine (PE).
Les Map-LC3 sont des protéines de 15kDa présentes chez les mammifères. Elles sont mises en jeu au moment de la formation des membranes des autophagosomes. Il en existe deux formes : une forme cystolique les LC3-I et une forme liée à la membrane LC3-II.
Les Map-LC3 sont dans un premier temps clivées, directement après leur synthèse, au niveau de leur partie C- terminale afin de donner la forme cystolique LC3-I. Au cours de l'autophagie, LC3-I est converti en LC3-II, et les protéines s'associent aux vacuoles autophagiques.
Ainsi, l'utilisation d'un principe actif présentant une activité stimulatrice de l'expression des MAP-LC3 et/ou des AT65-12 des cellules de la peau, permet de stimuler la formation de l'autophagosome et donc de stimuler l'autophagie des cellules de la peau.
Selon un deuxième aspect, un activateur de l'autophagie des cellules cutanées utile selon l'invention peut être un principe actif inhibant l'activation de mTOR phosphorylée.
Le complexe mTOR (« mammalian Target Of Rapamycine" ou cible de la rapamycine des mammif ières) est une molécule intervenant dans l'initiation de la formation de l'autophagosome. Il joue un rôle de senseur de l'ATP et des acides aminés régulant l'équilibre entre la disponibilité des nutriments et la croissance cellulaire.
Lorsque la quantité de nutriments est suffisante, mTOR est phosphorylée sur la senne 2448 et transmet un signal positif activant la croissance cellulaire et inhibant l'autophagie. Dans le cas contraire, c'est-à-dire en conditions de privation nutritionnelle ou starvation, cette phosphorylation disparaît au profit d'une phosphorylation de la thréonine 2446, ce qui permet la levée de l'inhibition de l'autophagie. Le mécanisme de l'autophagie est donc initié lorsqu'il y a déphosphorylation de mTOR sur la serine 2448.
Ainsi, l'utilisation cosmétique d'un actif inhibiteur de l'activité de mTOR dans les cellules de la peau permet de favoriser l'initiation de l'autophagie, de mobiliser la formation des autophagosomes et donc de stimuler l'autophagie des cellules de la peau. Selon un dernier aspect, un stimulateur de l'activité autophagique des cellules cutanées utile selon l'invention peut être un principe actif présentant une activité stimulatrice de l'expression de la protéine p53, de l'AMPK et/ou de DRAM. La protéine p53 est une protéine majeure du stress, capable notamment : - d'activer la protéine DRAM (« Damage Regulated Autophagy Modulator » modulateur des dommages régulés par autophagie), une protéine directement impliquée dans l'initiation du mécanisme de l'autophagie, et
- d'inhiber mTOR par le biais de l'activation d'un protéine kinase, l'AMPK. L'activation de DRAM et/ou de l'AMPK, soit directement, soit par le biais de la p53 permet donc de stimuler l'autophagie.
Ainsi, l'utilisation cosmétique d'un principe actif présentant une activité stimulatrice de l'expression de la protéine p53 phosphorylée, de DRAM et/ou de l'AMPK des cellules de la peau, permet de favoriser l'initiation de l'autophagie, de mobiliser la formation des autophagosomes et donc de stimuler l'autophagie des cellules de la peau.
La conséquence cellulaire d'une activation du mécanisme de l'autophagie par un principe actif présentant une activité stimulatrice de l'expression des MAP-LC3, des ATG5-12, de la protéine p53 phosphorylée, de DRAM et/ou de l'AMPK et/ou présentant une activité inhibitrice de mTOR phosphorylée, est une meilleure détoxification des cellules, c'est-à-dire une diminution des espèces oxygénées réactives et des macromolécules dégénérées bloquées dans les cellules cutanées. Préférentiellement le stimulateur de l'activité autophagique des cellules cutanées utile selon l'invention est un principe actif issu d'au moins une plante, une algue ou une levure.
De façon préférée, l'activateur de l'autophagie est un principe actif issu d'au moins une algue du genre Lithothamnium calcareum, ou d'une plante choisie parmi Melilotus officinalis, Citrus limonum, Lens culinaris, Averrhoa carambola, Momordica charantia ou d'une levure choisie parmi Candida saitoana et Yarrowia lipolytica.
Selon un aspect de l'invention, l'activateur de l'autophagie des cellules cutanées est susceptible d'être sélectionné par un test réalisé sur des cultures de cellules cutanées comprenant les étapes suivantes : - culture de cellules cutanées, kératinocytes ou fibroblastes, dans un milieu de culture adapté,
- retrait du milieu de culture et remplacement par un milieu de culture comprenant un agent stressant induisant un stress nutritif et/ou oxydât if, - ajout d'un principe actif issu de plante, d'algue ou de levure à tester dans le milieu de culture,
- retrait de l'agent oxydant et remplacement du milieu de culture par un milieu de culture comprenant le principe actif, et
- analyse de l'expression de MAP-LC3, d'ATG5-12, de mTOR phosphorylée, de la protéine p53 phosphorylée, de l'expression de la protéine
DRAM et/ou de l'AMPK par lesdites cellules, et comparaison des résultats avec ceux obtenus sur des cultures de cellules cutanées non traitées avec l'extrait à tester. Si on constate une augmentation de l'expression de MAP-LC3, d'ATG5-l2, de la protéine p53 phosphorylée, de la protéine DRAM et/ou de I1AMPK, et/ou une diminution de mTOR phosphorylée, alors le principe actif testé peut être utilisé dans une composition cosmétique en tant qu'activateur de l'autophagie des cellules de la peau.
Pour illustrer l'invention, plusieurs principe actifs ont été testés pour étudier leur capacité à augmenter l'autophagie des cellules cutanées. Tout d'abord il a été vérifié que l'induction d'un stress au niveau des cellules de la peau entraînait bien une augmentation de l'autophagie. II a ensuite été comparé le niveau d'autophagie de cellules jeunes et âgées soumises aux mêmes stress oxydatifs et nutritifs.
Enfin des principes actifs ont été sélectionnés par la mise en oeuvre du procédé test selon l'invention.
1/ Visualisation de l'autophaqiβ des cellules cutanées après un stress nutritif
Le protocole réalisé consiste à soumettre des cultures de kératinocytes type HaCaT ou kératinocytes humains normaux à un stress nutritif, c'est-à-dire à une absence de facteurs de croissance, pendant un certain temps et à évaluer l'expression de plusieurs marqueurs de l'autophagie au cours de la récupération cellulaire.
Le protocole est le suivant :
- cultures de cellules de la peau pendant 24 heures en milieu de culture complet (avec facteurs de croissance)
- retrait du milieu de culture complet et remplacement par un milieu de culture non nutritif (sans facteur de croissance). Les cellules sont cultivées pendant plusieurs temps (de 0,5h à 24h) en état de stress nutritif, après ces temps de cultures en état de stress nutritif, retrait du milieu de culture non nutritif et remplacement par du milieu de culture complet, et enfin évaluation de l'état d'autophagie des cellules cutanées par évaluation de l'expression de MAP-LC3, du complexe AT65-12, de mTOR phosphorylée, de p53 phosphorylée, de DRAM et de AMPK phosphorylée après récupération cellulaire.
1.1/ Evaluation de l'expression de MAP-LC3 après un stress nutritif II est possible d'évaluer l'autophagie des cellules cutanées en visualisant l'expression de la protéine MAP-LC3 par marquage immunof luorescent. L'expression de MAP-LC3 a été évaluée sur des cultures de cellules cutanées de lignées HaCaT et sur des kératinocytes humains normaux après différents temps de contact du stress nutritif. Les résultats d'immunomarquage étant qualitatif, il a été défini plusieurs niveaux d'expression des MAP-LC3 :
- très faible détection d'immunoréactivité
- faible détection d'immunoréactivité ±
- moyenne détection d'immunoréactivité +
- forte détection d'immunoréactivité ++ Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau suivant
Lors de la culture des kératinocytes HaCaT en état de stress nutritif, on observe l'apparition nette d'un marquage ponctiforme MAP-LC3 au niveau du cytoplasme des cellules. Ce marquage traduit la formation d'autophagosomes dans les kératinocytes soumis au stress nutritif. Ce marquage est observable dès 2 heures de starvation et atteint un maximum après 4 heures de starvation.
Ces conditions de stress nutritif permettent donc d'induire la formation d'autophagosomes et par conséquent une autophagie, visualisée par l'expression de MAP-LC3.
1.2/ Evaluation de l'expression du complexe ATG5-12 après un stress nutritif
II est aussi possible d'évaluer l'autophagie des cellules cutanées en visualisant l'expression du complexe ATG5-12 par marquage immunofluorescence. L'évaluation de l'expression du complexe AT65-12 a été réalisée sur des cultures de cellules cutanées de lignées HaCaT et sur des kératinocytes humains normaux après différents temps de culture en état de stress nutritif. Les résultats d'immunomarquage étant qualitatif, il a été défini plusieurs niveaux d'expression desATG5-12 : - très faible détection d'immunoréactivité
- faible détection d'immunoréactivité ±
- moyenne détection d'immunoréactivité +
- forte détection d'immunoréactivité ++
- très forte détection d'immunoréactivité +++ Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau suivant :
Lors de la culture des kératinocytes HaCaT en état de stress nutritif, on observe l'apparition nette d'un marquage ponctiforme AT65-12 au niveau du cytoplasme des cellules. Ce marquage traduit la formation d'autophagosomes dans les kératinocytes soumis à un stress nutritif.
Ce marquage est observable dès 1 heure et jusqu'à 3 heures de starvation.
Les conditions de stress nutritif permettent donc d'induire un phénomène de type autophagique, visualisé par l'expression ATG5-12.
1.3/ Evaluation de l'expression de mTOR phosphorylée après un stress nutritif
II est aussi possible d'évaluer l'autophagie des cellules cutanées en visualisant l'expression de mTOR phosphorylée par Western Blott.
L'évaluation de l'expression de mTOR phosphorylée a été évaluée sur des cultures de cellules cutanées de lignées HaCaT et sur des kératinocytes humains normaux après différents temps de culture en état de stress nutritif. L'expression de mTOR phosphorylée est présentée dans le tableau ci-après en pourcentage par rapport au témoin (sans stress nutritif).
Cette expérience a montré une nette diminution de la protéine mTOR phosphorylée visible dès 8 heures de privation, dans des cultures de cellules cutanées soumises à une starvation.
Lorsque la protéine mTOR phosphorylée diminue, il y a levée de l'inhibition de l'autophagie.
Les conditions de stress nutritif permettent donc d'induire I' autophagie sur des cultures de cellules cutanées, visualisée par la diminution de l'expression de mTOR phosphorylée.
1.4/ Evaluation de l'expression de p53 phosphorylée après un stress nutritif II est aussi possible d'évaluer l'autophagie des cellules cutanées en visualisant l'expression de la protéine p53 phosphorylée par Western Blott.
L'évaluation de l'expression de la protéine p53 phosphorylée a été évaluée sur des cultures de cellules cutanées de lignées HaCaT et sur des kératinocytes humains normaux après différents temps de culture en état de stress nutritif. L'expression de p53 phosphorylée est présentée dans le tableau ci-après en pourcentage par rapport au témoin (sans stress nutritif).
Cette expérience a montré une nette augmentation de l'expression de la protéine p53 phosphorylée visible dès 1 heure, dans des cultures de cellules soumises à une starvation.
Les conditions de stress nutritif permettent donc d'induire un phénomène de type autophagique sur des cultures de cellules cutanées, visualisé par l'augmentation de l'expression de la protéine p53 phosphorylée.
1.5/ Evaluation de l'expression de la protéine DRAM après un stress nutritif
II est aussi possible d'évaluer l'autophagie des cellules cutanées en visualisant l'expression de la protéine DRAM, par Western Blott, sur des cultures de cellules cutanées de lignées HaCaT et sur des kératinocytes humains normaux après différents temps de culture en état de stress nutritif. L'expression de DRAM est présentée dans le tableau ci-après en pourcentage par rapport au témoin (sans stress nutritif).
Cette expérience α montré une nette augmentation de l'expression de la protéine DRAM après 0,5 heure de culture en état de stress nutritif. L'expression de la protéine DRAM devient maximale après 1,5 heure de culture en état de stress nutritif. Ceci coïncide osec la cinétique d'expression de la protéine p53 qui atteint son maximum après une heure de stress nutritif.
Les conditions de stress nutritif permettent donc d'induire un phénomène de type autophagique sur des cultures de cellules cutanées, visualisé par l'augmentation de l'expression de la protéine DRAM.
1.6/ Evaluation de l'expression de la protéine AMPK phosphorylée après un stress nutritif
II est aussi possible d'évaluer l'autophagie des cellules cutanées en visualisant l'expression de la protéine AMPK phosphorylée, par Western Blott, sur des cultures de cellules cutanées de lignées HaCaT et sur des kératinocytes humains normaux après différents temps de culture en état de stress nutritif. L'expression de DRAM est présentée dans le tableau ci-après en pourcentage par rapport au témoin (sans stress nutritif).
Cette expérience a montré que l'expression de AMPK phosphorylée est augmentée dès 0,5 heure de culture en état de stress nutritif et est maximale à 1,5 heure. Ceci coïncide asec la cinétique d'expression de la protéine p53 qui atteint son maximum après une heure de stress nutritif. Les conditions de stress nutritif permettent donc d'induire un phénomène de type αutophαgique sur des cultures de cellules cutanées, visualisé par l'augmentation de l'expression de la protéine AMPK phosphorylée. Ces études ont donc permis de montrer que le mécanisme d'autophagie peut être indifféremment visualisé sur des cultures de cellules cutanées stressées par l'évaluation de l'expression de différentes protéines comme MAP-LC3, le complexe AT65-12, de mTOR phosphorylée, la protéine p53 phosphorylée, la protéine DRAM ou la protéine AMPK phosphorylée.
2/ Visualisation de l'autophaqiβ des cellules cutanées après un stress nutritif et oxydatif
La visualisation de l'autophagie est possible, comme dans le cas du stress nutritif, par l'évaluation de différentes protéines telles que MAP-LC3, le complexe ATG5-12, la protéine mTOR phosphorylée, la protéine p53 phosphorylée, la protéine DRAM ou la protéine AMPK phosphorylée. Dans cette expérience, l'expression de l'autophagie des cellules cutanées a été étudiée en analysant l'expression de MAP-LC3, de la protéine p53 phosphorylée et de la protéine DRAM dans les cultures de cellules cutanées stressées. Le protocole opératoire est le suivant : - cultures de cellules pendant 24 heures en milieu de culture complet
- retrait du milieu de culture et remplacement avec du milieu de culture non nutritif contenant l'agent oxydant H2O2 pendant 3 h (différentes doses de H2O2 - 125μM et/ou 250μM - ont été testées).
- retrait de l'agent oxydant et du milieu de culture non nutritif, remplacement par du milieu de culture complet sans oxydant.
- Evaluation de l'expression de MAP-LC3, de la protéine p53 phosphorylée ou de la protéine DRAM après récupération cellulaire. Plusieurs temps de récupération ont été choisis (0,5 heure, 1 heure, 1,5 heure ou 2 heures de récupération).
2.1/ Evaluation de l'expression MAP-LC3 après un stress nutritif et oxydât if
II est possible d'évaluer l'autophagie des cellules cutanées stressées en visualisant l'expression de la protéine MAP-LC3, par marquage immunofluorescent.
L'évaluation de l'expression MAP-LC3 a été analysée dans ces conditions de stress modéré (125μM et 250μM de peroxyde d'hydrogène HzOz) sur des cultures de kératinocytes HaCaT et sur des kératinocytes humains normaux. Les résultats d'immunomarquage étant qualitatifs, il a été défini plusieurs niveaux d'expression des AT65-12 :
- très faible détection d'immunoréactivité
- faible détection d'immunoréactivité ±
- moyenne détection d'immunoréactivité +
- forte détection d'immunoréactivité ++
- très forte détection d'immunoréactivité +++
Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau suivant :
Pour la dose 125μM de stress oxydatif , on observe le marquage ponctiforme de
MAP-LC3 au niveau du cytoplasme des cellules dès 0,5 heure de récupération qui devient maximum après 1,5 heure, puis s'atténue à partir de 2 heures de récupération.
Pour la dose de 250μM, on constate que ce marquage apparaît dès 0,5 heure, atteint un maximum à 1 heure et s'affaiblit dès 1,5 heure de récupération.
Les conditions de stress nutritif et oxydatif permettent donc d'induire un phénomène de type autophagique, visualisé par l'augmentation de l'expression de MAP-LC3 dans les cellules cutanées.
2.3/ Evaluation de l'expression de la protéine p53 phosphorylée après stress nutritif et oxydatif
II est aussi possible d'évaluer l'autophagie des cellules cutanées stressées en visualisant l'expression de la protéine p53 phosphorylée par Western Blott. L'évaluation de l'expression de la protéine p53 phosphorylée a donc été analysée dans ces conditions de stress modéré asec 125 μM de WzOz, sur des cultures de kératinocytes HaCaT et sur des kératinocytes humains normaux. L'expression de p53 phosphorylée est présentée dans le tableau suivant en pourcentage par rapport au témoin (sans stress).
Pour la dose 125μM de stress nutritif et oxydatif, on observe que le marquage de la protéine p53 phosphorylée est à son maximum après 0,5 heure de récupération, puis s'atténue progressivement. Les conditions de stress oxydαtif permettent donc d'induire un phénomène de type αutophαgique, visualisé par l'augmentation de l'expression de la protéine p53 phosphorylée.
2.4/ Evaluation de l'expression de la protéine DRAM après stress nutritif et oxydât if
II est aussi possible d'évaluer l'autophagie des cellules cutanées stressées en visualisant l'expression de la protéine DRAM par Western Blott. L'évaluation de l'expression de DRAM a donc été analysée dans ces conditions de stress modéré asec 125 μM de HzO2, sur des cultures de kératinocytes HaCaT et sur des kératinocytes humains normaux. L'expression de DRAM est présentée dans le tableau suivant en pourcentage par rapport au témoin (sans stress).
On constate qu'un stress nutritif et oxydatif sur les cultures de cellules cutanées augmentent l'expression de la protéine DRAM.
Pour la dose 125μM de stress oxydatif, on observe que le marquage de la protéine DRAM est à son maximum après 1,5 heure de récupération, puis s'atténue à partir de 2 heures. Les conditions de stress nutritif et oxydatif permettent donc d'induire un phénomène de type autophagique.
Ces études ont donc permis de montrer que le mécanisme d'autophagie peut être visualisé sur des cultures de cellules cutanées stressées par l'évaluation de l'expression de différentes protéines comme MAP-LC3, la protéine p53 phosphorylée ou la protéine DRAM.
3/ Comparaison de l'autophaqiβ dans des cellules jeunes ou âgées Cette étude a pour objectif de comparer le niveau d'autophagie de cellules jeunes (de donneurs d'âge moyen 26 ans) et âgées (de donneurs d'âge moyen 70 ans) soumises aux mêmes stress oxydatifs et nutritifs.
L'évaluation du niveau d'autophagie a été envisagée par l'analyse de l'expression de la protéine MAP-LC3 par Western Blott. Le protocole mis en place est le suivant :
- cultures de cellules dites jeunes ou âgées pendant 24 heures en milieu de culture complet.
- retrait du milieu de culture complet, remplacement asec du milieu de culture non nutritif contenant l'agent oxydant H2O2 pendant 3h à différentes doses
- retrait de l'agent oxydant, remplacement par du milieu de culture complet sans oxydant,
- Evaluation de l'expression de MAP-LC3 après récupération cellulaire.
Les résultats sont décrits dans le tableau ci-dessous en pourcentage par rapport au témoin (sans stress).
Dans les conditions de cette étude, les cellules cutanées dites jeunes montrent une augmentation de l'expression MAP-LC3 lorsqu'elles sont soumises à un stress oxydatif modéré (125, 250, voir 400μM). Lorsqu'elles sont soumis à un stress oxydatif important (600 et lOOOμM), elles se placent en apoptose. Les cellules cutanées dites âgées ne présentent pas la même augmentation de l'expression MAP-LC3 lorsqu'elles sont soumises au même stress oxydatif modéré.
Cette différence de mise en autophagie des cellules âgées par rapport aux cellules jeunes est significative. Cette étude montre donc que des cellules âgées ne sont plus capables de se protéger et de se détoxif ier lors d'un stress nutritif et oxydatif modéré.
4/ Criblage de principes actifs augmentant l'autophaqiβ des cellules cutanées
Le criblage est réalisé selon le protocole de stress nutritif et oxydatif présenté en point 2.1, à partir de principes actifs issus de végétaux, d'algues ou de levures. L'évaluation de l'effet de principes actifs sur l'autophagie des cellules cutanées a été effectuée en analysant l'expression de la protéine MAP-LC3 dans des cultures de cellules cutanées soumises à un stress nutritif et oxydatif. Le protocole de test est le suivant : - cultures de cellules pendant 24 heures en milieu de culture complet,
- retrait du milieu de culture complet, remplacement avec du milieu de culture non nutritif contenant l'agent oxydant H2O2 pendant 3h en présence ou non des principes actifs,
- retrait de l'agent oxydant et du milieu de culture non nutritif, remplacement par du milieu de culture complet en présence ou non des principes actifs, - Evaluation de l'expression de MAP-LC3 après récupération cellulaire par marquage immunof luorescent. Les principes actifs testés on été produits selon le protocole suivant :
- solubilisation de poudre de plante, algue ou levures dans l'eau à raison de 50g/l (m/v),
- hydrolyse enzymatique,
- séparation des phases soluble et insoluble,
- f iltration et f iltration stérilisante. Les principaux principes actifs sont :
Les résultats des principes actifs les plus efficaces sélectionnés et testés en triplicate sont décrits dans le tableau suivant :
Ces principes actifs permettent donc d'augmenter l'autophagie des cellules cutanées soumises à un stress nutritif et oxydatif modéré, et ainsi détoxif ier la peau et prévenir ou lutter contre le vieillissement cutané. Ces principes actifs peuvent être incorporés dans des compositions cosmétiques.
5. Exemples de compositions cosmétiques contenant un principe actif agissant sur l'autophaqie des cellules cutanées
L'invention couvre aussi les compositions cosmétiques incluant au moins un principe actif agissant sur l'autophagie des cellules cutanés dans différentes formes galéniques, adaptées à l'administration par voie topique cutanée.
Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme de crèmes, émulsions huile-dans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples, solutions, suspensions ou poudres. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse, ou sous forme solide.
Ces compositions contiennent entre 0,01 et 15% en poids de principe(s) actif(s) agissant sur l'autophagie des cellules cutanés selon la présente invention, préférentiellement entre 1% et 4%. 5.1. Crème experte
Un exemple de crème comprenant un principe actif extrait de citron tel que présenté au point 4., peut avoir la composition suivante :
A. Eau QSP 100% <9lycerol (Univar) 3.33 %
EDTA 0.13 7
Satialgine (Degussa) 0.66 7 /o Talc (Luzenac) 1%
B. Miglyol 812 (Condea Chemie) 3.33 7 /o Ritaphyl ICS (Rita) 1.33 7
Ritachol SS (Rita) 1.33 7 /o Ipm (Univar) 3.33 7 Ritalan C (Rita) 1.33 7 /o Montanov 14(Seppic) 1.33 7 Lanol 14M (Seppic) 1.33 7 /o
Brij 72 (Uniquema) 1 % Brij 721 (Uniquema) 0.33 7 /o
C. Phénoxyéthanol (Sigma) 0,9°/c > Ethylhexylglycérine (Seppic) 0,1% D . Principe actif issu de Citron selon l'invention 4%
La crème est obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes :
- chauffer A et B à 800C, sous agitation mécanique,
- émulsionner B dans A sous agitation,
- à 300C additionner C dans l'ordre, et - continuer l'homogénéisation jusqu'à ce que la crème soit uniforme. 5.2. Crème αnti-rides
Un exemple de crème comprenant un principe actif extrait de Lithothamnium tel que présenté au point 4., peut avoir la composition suivante :
A. Eau QSP 100% Butylène glycol (Univar) 3%
B. Isohexadecane (Laserson) 5% Rita IPP (Rita) 2% Montanov 202 (Seppic) 3% Arlacel 161 (Uniquema) 1% Ritox 59 (Rita) 1%
Lanette O (Cognis) 1%
C. Phénoxyéthanol (Sigma) 0,9% Ethylhexylglycérine (Seppic) 0,1% DC 200 (Dow Corning) 0.5% Principe actif issu de Lithothamnium selon l'invention 4%
D. Sepigel 305 (Seppic) 4% La crème est obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes :
- mélanger A1 mélanger B et chauffer A et B à 800C, sous agitation mécanique, - émulsionner B dans A sous agitation,
- à 300C additionner C dans l'ordre, et
- continuer l'homogénéisation jusqu'à ce que la crème soit uniforme.
5.3. Crème de Nuit Un exemple de crème comprenant un principe actif extrait de Melilothus tel que présenté au point 4., peut avoir la composition suivante : A. Eau QSP 100% Carbopol ETD 2020 (Noveon) 0.4%
B. alcool cethylique (Stéarinerie Dubois) 3% Alcool stearylique (Stéarinerie Dubois) 3% DUB MCT 5545 (Stéarinerie Dubois) 4.5%
DC 345 (Dow Corning) 7.5%
Monomuls 900 18 (Henkel) 3%
C. Phénoxyéthanol (Sigma) 0,9% Ethylhexylglycérine (Seppic) 0,1% Principe actif issu Melilotus selon l'invention 4%
D. NaOH qsp pH 4.5 La crème est obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes :
- mélanger A, bien disperser le gel et mélanger B,
- chauffer A et B à 800C, - émulsionner B dans A sous agitation,
- à 400C additionner C dans l'ordre,
- continuer l'homogénéisation jusqu'à ce que la crème soit uniforme,
- ajuster le pH avec D, et
- laisser refroidir sous agitation jusqu'à 300C. 5.4. Crème peaux matures
Un exemple de crème comprenant un principe actif extrait de Candida saitoana tel que présenté au point 4., peut avoir la composition suivante : A. Eau QSP 100%
Glycerol (Univar) 1.75% Propylene glycol (Univar) 6.5%
Aculyne 33A (ISP) 2.5%
Carbopol EDT 2020 (Goodrich) 0.5 % B. Cetiol SN (Cognis) 3%
Eumulgine Bl (Cognis) 1.75%
Ritαphyl ICS (Ritα) 3%
Pαtlαc IL (Ritα) 3% Isopropyl myristαte (Univαr) 3%
Montαne 80 (Seppic)) 1.5%
Montαnox 60 (Seppic) 1.5%
DC 345 (Dow Corning) 3%
C. Phénoxyéthαnol (Sigma) 0,9% Ethylhexylglycérine (Seppic) 0,1%
D. Principe actif issu de Candida saitoana 4% NaOH QSP pH 5.5
La crème est obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes :
- mélanger A1 mélanger B, et chauffer A et B à 800C, - émulsionner B dans A sous agitation,
- à 300C additionner C et D,
- ajuster à pH 5.5 avec NaOH, et
- continuer l'homogénéisation jusqu'à ce que la crème soit uniforme.

Claims

REVENDICATIONS
1. Utilisation dans une composition cosmétique d'une quantité efficace d'au moins un activateur de l'autophagie des cellules cutanées comme principe actif cosmétique.
2. Utilisation cosmétique selon la revendication 1, comme principe actif cosmétique destiné à détoxif ier la peau et/ou destiné à prévenir ou lutter contre le vieillissement cutané.
3. Utilisation cosmétique selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que ledit activateur de l'autophagie des cellules cutanées est un principe actif présentant une activité stimulatrice de l'expression des MAP-LC3.
4. Utilisation cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que ledit activateur de l'autophagie des cellules cutanées est un principe actif présentant une activité stimulatrice de l'expression des ATG5-12 des cellules de la peau.
5. Utilisation cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que ledit activateur de l'autophagie des cellules cutanées est un principe actif présentant une activité stimulatrice de l'expression de la protéine p53 phosphorylée.
6. Utilisation cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que ledit activateur de l'autophagie des cellules cutanées est un principe actif présentant une activité stimulatrice de l'expression de DRAM.
7. Utilisation cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que ledit activateur de l'autophagie des cellules cutanées est un principe actif présentant une activité stimulatrice de l'expression de l'AMPK.
8. Utilisation cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que ledit activateur de l'autophagie des cellules cutanées est un principe actif inhibiteur de l'activation de mTOR phosphorylée.
9. Utilisation cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que ledit activateur de l'autophagie agit sur l'activité autophagique des kératinocytes et/ou des f ibroblastes.
10. Utilisation cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que ledit activateur de l'autophagie des cellules cutanées est un principe actif issu d'au moins une plante, une algue ou une levure.
11. Utilisation cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce ledit activateur de l'autophagie des cellules cutanées est un principe actif issu d'au moins une algue du genre Lithothamnium calcareum, ou d'une plante choisie parmi Melilotus officinalis, Citrus limonum, Lens culinaris, Averrhoa carambola, Momordica charantia ou d'une levure choisie parmi Candida saitoana et Yarrowia lipolytica.
12. Composition cosmétique pour application topique sur la peau comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, une quantité efficace d'au moins un activateur de l'autophagie des cellules cutanées choisi parmi des principes actifs issus de Lithothamnium calcareum, Melilotus officinalis, Citrus limonum, Candida saitoana, Lens culinaris, Averrhoa carambola, Momordica charantia, Yarrowia lipolytica et au moins un adjuvant cosmétique.
13. Composition cosmétique selon la revendication 12, caractérisée en ce que ledit activateur de l'autophagie des cellules cutanées est présent en une quantité comprise entre 0,1 et 15% en poids par rapport au poids total de la composition.
14. Procédé cosmétique pour détoxif ier la peau et/ou pour prévenir et/ou lutter contre le vieillissement cutané, comprenant l'application topique sur la peau d'une composition comprenant au moins activateur de l'autophagie des cellules de la peau.
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