FR2962330A1 - Utilisation cosmetique d'un extrait de banane - Google Patents

Abstract

La présente invention se rapporte à l'utilisation cosmétique d'un extrait de banane pour stimuler la production de collagène de type I. Elle se rapporte également, notamment, à un procédé de prévention ou de traitement cosmétique consistant à appliquer un extrait de banane sur la peau. Elle trouve des applications dans les domaines de la cosmétique.

Description

UTILISATION COSMÉTIQUE D'UN EXTRAIT DE BANANE DESCRIPTION Domaine technique La présente invention se rapporte à l'utilisation cosmétique d'un extrait de Musa sapientum pour stimuler la production de collagène de type 1. Elle se rapporte également, notamment, à un procédé de prévention ou de traitement cosmétique consistant à appliquer un extrait de Musa sapientum sur la peau. Elle trouve des applications dans les domaines de la cosmétique. La peau est un organe très étendu recouvrant toute la surface du corps et totalise chez l'homme adulte une surface d'environ 1,6 mètre carré. Elle a pour fonction de protéger les tissus profonds du milieu extérieur et a une activité notamment au niveau de l'immunité, de la régulation de la température et de la déperdition de fluides. La peau est constituée de trois parties principales. Une partie mince superficielle nommée épiderme, une partie interne et épaisse nommée derme, et une partie profonde et graisseuse nommée hypoderme.

Le derme est séparé de l'épiderme par la « jonction dermoépidermique ». Il se poursuit en profondeur sans limite franche par l'hypoderme. Le rôle du derme est notamment de maintenir la souplesse et la résistance de la peau. Il assure également d'autres fonctions essentielles.

Sa vascularisation importante lui permet de réaliser des échanges nutritifs avec l'épiderme. Elle lui permet aussi d'être riche en cellules immunitaires de type macrophages et cellules dendritiques, acteurs essentiels de la défense immunitaire de la peau. De plus, c'est un tissu innervé possédant des récepteurs sensitifs responsables du sens du toucher. Enfin, il intervient dans les phénomènes de cicatrisation, et de régulation de la prolifération et de la différenciation de kératinocytes en synthétisant des

cytokines et des facteurs de croissance solubles à destination de l'épiderme. Le derme est constitué d'un tissu conjonctif dense, fibreux et élastique, au sein duquel baignent des cellules d'origines mésenchymateuses appelées fibroblastes. Les fibroblastes sont responsables de la synthèse des constituants de la matrice extracellulaire dans laquelle elles baignent. Elles jouent un rôle essentiel dans l'entretien et la régénération de la matrice extracellulaire. La capacité des fibroblastes à synthétiser et à dégrader les 1 o composants de la matrice extracellulaire ou encore à organiser ou à orienter les protéines fibreuses est essentielle dans l'homéostasie du tissu cutané. Cette matrice extracellulaire contribue tout d'abord à donner à la peau ses propriétés mécaniques : élasticité, résistance au choc, etc. Elle 15 est constituée de protéines fibreuses et d'une substance fondamentale. Elle contient également la fibronectine et de la laminine. Les protéines fibreuses sont disposées en vague parallèle à la surface de la peau et comprennent des collagènes et des fibres élastiques, notamment l'élastine et la fibriline. 20 Les collagènes forment une très grande famille. Ce sont des molécules de la matrice extracellulaire composées de trois chaînes polypeptidiques portant la répétition de 3 acides aminés : -Gly-X-Y, où X et Y sont souvent des prolines et hydroxyprolines. Les « fibres de collagène » du derme sont constituées 25 respectivement de collagène I et de collagène III, autour d'un axe composé de collagène V. Les fibrilles de collagène I ont une énorme résistance à la traction, et peuvent donc être étirées sans être cassées. Ces fibrilles se disposent côte à côte en rangées parallèles, appelées fibres de collagène. 30 Le collagène III se compose de trois chaînes al(III) et est prédominant dans la peau foetale et les structures extensibles.

Chez l'adulte, le collagène I est, en moyenne, six fois plus abondant que le collagène III. La proportion de collagène I augmente quand on se rapproche de l'hypoderme. Le rapport collagène de type I / collagène de type III diminue au cours du vieillissement. On assiste notamment à une augmentation exponentielle de pontages chimiques entre les fibres de collagène dus à la réaction de glycation non enzymatique de Maillard. Ce pontage chimique du collagène âgé aboutit à une rigidification croissante des fibres de collagène, ce qui les rend plus résistantes à l'attaque par les collagénases et par les radicaux libres. Sa dégradation et son renouvellement sont ainsi ralenties. L'élastine confère son élasticité au revêtement cutané. Sa synthèse diminue avec l'âge alors que celle de l'élastase augmente. La fibronectine a une capacité à contracter des liaisons non seulement avec la plupart des autres constituants de la matrice extracellulaire, mais également avec des cellules par l'intermédiaire des intégrines présentes à leur surface. La fibronectine se lie également avec des composants du cytosquelette tel que l'actine par l'intermédiaire des protéoglycanes de surface favorisant ainsi l'adhésion cellulaire. La fibronectine est un maillon-clé de l'adhérence des cellules à la 2 0 matrice extracellulaire. Des études in vitro ont montré que la fibronectine se raréfie avec l'âge. La substance fondamentale comprend notamment des protéoglycanes et des glycosaminoglycanes dans laquelle sont noyées les 25 protéines fibreuses. Avec l'âge, les protéoglycanes sont moins synthétisés, leurs relations avec l'eau et les ions sont différentes. Les échanges entre tissu conjonctif et sang sont plus difficiles. La peau perd ainsi sa turgescence. La baisse de la synthèse d'acide hyaluronique s'accentue également avec l'âge et 3o contribue à la perte d'hydratation de la peau. Des glycoprotéines de structure assurent l'interface entre la matrice et les cellules en liant les intégrines membranaires.

L'activité des fibroblastes est intense, notamment au cours des phénomènes de cicatrisation. Lors du vieillissement, le fibroblaste diminue son activité et cette cellule au repos est souvent appelée fibrocyte. Il devient globuleux, avec diminution de son cytoplasme et raréfaction de son réticulum endoplasmique dont les vésicules sont très dispersées. Le cytosquelette prend un aspect fasciculé. Cette cellule n'est alors plus en contact avec le collagène. Certaines anomalies de la communication entre les cellules et la matrice extracellulaire peuvent alors conduire à une pléthore de 1 o modifications qualitatives et quantitatives de la structure de la matrice extracellulaire. On distingue deux types de vieillissement cutané, le vieillissement intrinsèque ou chronologique induit par des processus génétiquement programmés et le vieillissement actinique lié aux expositions solaires. Ce 15 dernier type de vieillissement est également appelé héliodermie. Le vieillissement cutané se caractérise par l'amincissement de l'épaisseur de la peau, avec une perte de 6% de l'épaisseur de la peau dès la naissance tous les dix ans. La modification qualitative de la composition de la matrice 20 extracellulaire cutanée modifie les propriétés mécaniques de la peau dont l'élasticité diminue et qui devient moins résistante à la pression. Cette modification se manifeste également par une perte d'hydratation des tissus. La modification qualitative de la composition de la matrice 25 extracellulaire cutanée est aggravée et accélérée par l'activité catabolique liée à l'âge. En effet, toutes les cellules de l'organisme sont capables de produire des enzymes protéolytiques pouvant s'attaquer à certains des constituants de la matrice extracellulaire comme les fibres de collagène et d'élastine. Ces enzymes sont respectivement appelées collagénases et 30 élastases. Le vieillissement cutané étant notamment lié à une diminution de la quantité de constituants de la matrice extracellulaire, il est nécessaire de

mettre en oeuvre des moyens permettant de stimuler la production de ces constituants. Des recherches importantes ont été menées pour stimuler la production de collagène de type I. II est toutefois nécessaire de trouver d'autres substances capables de stimuler la production de collagène de type I pour ralentir le vieillissement cutané. Pour les mêmes raisons, il est nécessaire de trouver d'autres substances capables de stimuler la production de fibronectine.

Exposé de l'invention La présente invention a précisément pour but de fournir une solution aux problèmes et besoins précités de l'art antérieur. Pour ce faire, la présente invention a notamment pour objet l'utilisation cosmétique d'un extrait de Musa sapientum pour stimuler la production de collagène de type I. Les inventeurs sont les tout premiers à avoir découvert de manière inattendue qu'un extrait de Musa sapientum permet de stimuler la production de collagène de type I et donc de lutter contre le vieillissement cutané. Ainsi, la présente invention permet d'empêcher et/ou de limiter l'apparition des signes du vieillissement cutané. En outre, les inventeurs ont constatés que l'utilisation d'un extrait de Musa sapientum permet notamment, par la stimulation de la production de collagène de type I, de corriger et/ou d'amoindrir ces signes de vieillissement, lorsque la peau présente déjà des signes d'un vieillissement cutané. En outre, de manière avantageuse, selon la présente invention, l'utilisation cosmétique d'un extrait de Musa sapientum stimule en outre la production de fibronectine. Ils sont en plus les tout premiers à avoir observé qu'un extrait de Musa sapientum permet de stimuler simultanément la production de fibronectine.

On entend par « signe(s) du vieillissement cutané », notamment la présence ou l'apparition de fines ridules puis des rides plus ou moins profondes, une désorganisation du grain de la peau avec un microrelief moins uniforme et de nature anisotrope, une perte de fermeté et de tonicité de la peau, une peau sèche, un amincissement de l'épaisseur de la peau, etc. Le genre Musa, de la famille des Musaceae, est originaire de l'Asie méridional, notamment de Malaisie. Le genre comprend trente cinq espèces d'origine asiatique. Musa sapientum est également appelé Musa 1 o paradisiaca. Musa sapientum est une très grande herbe, de 6 à 10 mètres de hauteur, à stolons. Ses feuilles enveloppantes sont pétiolées et forment le « tronc » de la plante. Elles peuvent atteindre jusqu'à 2 mètres de longueur. L'inflorescence est pendante bractée, de forme oblong- 15 lancéolées à oblong-ovales, de couleur rougeâtre à brune et pouvant atteindre jusqu'à 1,5 mètre de long. Les fleurs sont blanches-jaunâtres, de 3 à 4 cm, et forme un calice à 5 dents avec des pétales libre ovale. Le fruit est cylindrique, pouvant atteindre jusqu'à 30 cm et de couleur jaune ou vert selon le degré de maturité. 20 La plante entière de Musa sapientum est riche en tanins, en particulier la sève de la tige. Les tanins sont favorables aux lésions leucodermiques, astringents, antiseptiques et antibiotique. Ils sont appropriés au soin des diarrhées et accélèrent la désintoxication dérivée du métabolisme des germes pathogènes. Les effets anti-diarrhéiques de la 25 banane verte semblent aussi provenir de l'augmentation de la perméabilité de l'intestin grêle qu'elle provoque. L'enveloppe et la pulpe du fruit contiennent de la sérotonine, de la norépinéphrine, de la dopamine et des flavonoïdes. Le fruit vert, appelé « banane verte » est reconnu en tant qu'anti- 30 ulcéreux. Il diminue la sécrétion d'acide et renforce la barrière muqueuse gastrique. Cette activité ulcéro-protectrice serait liée à une activité antioxydante due à la présence de flavonoïdes et disparaît chez le fruit mûr.

La consommation du fruit vert est recommandée contre les diarrhées et les gastrites. Le fruit mûr, très nutritif, est quant à lui riche en minéraux (Ca, P, Fe, Mg, K et Na), et la feuille en acides organiques, notamment en acide citrique, malique, glutamique, oxalique, pyruvique et succinique. Ces acides organiques ont différentes propriétés : l'acide citrique est un anticoagulant, l'acide malique est un désintoxiquant, l'acide glutaminique est un tonique, l'acide oxalique est un agent réducteur de l'oxydation et l'acide succinique est un diurétique et un expectorant. La consommation du fruit mûr est recommandée pour combattre les asthénies et les 1 o faiblesses. Il a été démontré in vitro, que l'extrait aqueux du fruit frais présente une activité contre Bacillus cereus, Bacillus sterethermophillus et Clostridium sporogenes. ln vivo chez des souris normoglycémiques et diabétiques, il a également été constaté qu'un extrait méthanolique de fruits verts mûrs administré à une concentration de 100 à 800 mg/kg par 15 voie orale, induit une réduction de la glycémie, de façon dose dépendante. Le mécanisme de cet effet hypoglycémiant pourrait être lié à la stimulation de la production d'insuline et à l'utilisation du glucose qui en découle.

L'extrait Musa sapientum utilisé dans la présente invention peut, par 20 exemple, provenir des fruits, des feuilles, des fleurs ou des racines de Musa sapientum. L'extrait provient de préférence du fruit, de préférence du fruit en entier, c'est-à-dire avec la peau et la pulpe. L'extrait de Musa sapientum utilisé dans la présente invention peut être un extrait aqueux, hydro-alcoolique ou alcoolique. 25 Quelle que soit la partie de la plante utilisée pour obtenir l'extrait de Musa sapientum, l'extrait peut être obtenu par tout procédé approprié connu de l'homme du métier. Il peut s'agir par exemple d'un procédé comprenant une étape (a) d'extraction hydro-alcoolique de Musa sapientum. 3o Cette étape d'extraction hydro-alcoolique (a) permet solubiliser les substances actives présentes dans Musa sapientum. Elle peut, par exemple, consister en une étape de broyage, pressage, coupe ou en une

combinaison de ces étapes, d'une ou plusieurs parties de Musa sapientum. Cette étape est de préférence suivie d'une infusion des parties de Musa sapientum qui ont été coupées et/ou broyées et/ou pressées dans un milieu aqueux ou hydro-alcoolique.

Alternativement, les étapes de broyage et/ou de pressage et/ou de coupe sont réalisées directement dans un milieu aqueux ou hydroalcoolique. Selon une autre alternative, les étapes de broyage et/ou de pressage et/ou de coupe sont réalisées successivement dans un milieu aqueux puis dans un milieu alcoolique ou dans un milieu hydro-alcoolique. L'étape (a) d'extraction hydro-alcoolique peut être réalisée à toute température permettant de d'extraire les actifs stimulant la production de collagène de type I. Par exemple, L'étape (a) d'extraction hydro-alcoolique est réalisée à température ambiante. On entend par « température ambiante » une température comprise entre 15°C et 35°C, par exemple entre 20°C et 25°C, par exemple à 25°C. L'étape (a) d'extraction hydro-alcoolique peut être réalisée pendant toute durée permettant de d'extraire les actifs stimulant la production de collagène de type I. Par exemple, la durée de l'étape (a) d'extraction hydro-alcoolique peut aller d'une heure à quelques semaines, par exemple de un jour à deux semaines, par exemple de deux jours à cinq jours. Le milieu aqueux peut par exemple être de l'eau. Le milieu hydro-alcoolique peut être, par exemple, un mélange d'eau et d'alcool. Par exemple, le ratio eau/alcool du milieu hydro-alcoolique peut être compris entre 20/80 et 80/20, par exemple entre 40/60 et 60/40, par exemple le ratio eau/alcool peut être de 50/50. Par exemple, l'alcool peut être choisi dans le groupe comprenant l'éthanol. Le milieu alcoolique peut être, par exemple, de l'éthanol. 3o Ainsi, l'extrait de Musa sapientum utilisé dans la présente invention peut, par exemple, être un extrait hydro-alcoolique. L'extrait de Musa

sapientum utilisé dans la présente invention peut également être un extrait aqueux ou un extrait alcoolique. L'extrait de Musa sapientum utilisé dans la présente invention peut être utilisé tel quel pour stimuler la production de collagène de type I, ou être transformé par les étapes suivantes successives à l'étape (a) d'extraction hydro-alcoolique : (b) suppression d'alcool du milieu alcoolique ou du milieu hydroalcoolique, (c) clarification, (d) ajout de polyol, (e) ajout d'eau, (f) filtration. L'étape (b) de suppression d'alcool provenant du milieu alcoolique ou du milieu hydro-alcoolique permet de supprimer la présence d'alcool lorsque celle-ci n'est pas désirable. Elle peut être réalisée par tout moyen connu de l'homme du métier. Par exemple, l'éthanol peut être retiré sous pression réduite, éventuellement accompagné par un chauffage à une température inférieure aux températures de dénaturation des protéines. L'étape (c) de clarification peut être réalisée avant ou après l'étape (b) de suppression d'alcool. Elle permet de séparer les éventuels morceaux de Musa sapientum du milieu contenant les actifs stimulant la production de collagène de type I. Il peut s'agir d'une décantation, d'une filtration, d'une centrifugation ou d'une combinaison de deux ou trois de ces moyens de clarification. Par exemple, la filtration peut être réalisée à travers un filtre dont la taille des pores est comprise entre 10 et 450 micromètres, par exemple entre 20 et 250 micromètres. L'étape (d) d'ajout de polyol peut être réalisée, par exemple, avant ou après l'étape (b) de suppression d'alcool, ou après l'étape (c) de clarification. Elle permet former une composition onctueuse comprenant un extrait de Musa sapientum. Par exemple, le polyol peut être choisi dans le groupe comprenant la glycérine, l'érythriol, le lactitol, le butylène glycol et le propylène glycol. Par exemple, le polyol est la glycérine.

Le polyol peut être ajouté à l'extrait clarifié obtenu à l'étape (c) à une concentration allant de 20% à 80% en poids, par exemple de 40% à 60%, par exemple de 45% à 55% en poids. L'étape (e) d'ajout d'eau peut être réalisée, par exemple, avant et/ou après l'une quelconque des étapes (c) ou (d). Elle permet d'augmenter la fluidité de la composition. Cette étape (e) d'ajout d'eau peut être réalisée précédemment, conjointement ou successivement à l'étape (d) d'ajout de polyol. Par exemple, lorsque de l'eau est ajoutée, sa concentration peut aller de 1% à 40% en poids, par exemple de 5% à 30% en poids, par 1 o exemple de 10% à 25% en poids. L'étape (f) de filtration peut être réalisée, par exemple, avant et/ou après l'une quelconque des étapes (b), (c), (d) ou (e). Elle permet de retenir les éventuelles impuretés présentes dans le mélange d'extrait de Musa sapientum. 15 L'extrait de Musa sapientum peut également être obtenu auprès d'un fournisseur, par exemple la société Botanica GmbH (Sins, Suisse) sous la référence « Green Banana bio Extract 'C'G » ou « Banane Green bio » ou « Article No. P-00021571 ». Pour stimuler la production de collagène de type I et la production de 20 fibronectine, l'extrait de Musa sapientum peut notamment être utilisé seul ou dans une composition cosmétique. Lorsque l'extrait est utilisé dans une composition cosmétique, il peut être utilisé à une concentration allant de 0,01% à 99,9% en poids de la composition cosmétique. Par exemple, la concentration d'extrait de Musa 25 sapientum peut aller de 0,01% à 50%, par exemple de 0,01% à 10%, par exemple de 0,05% à 10%, par exemple de 0,1% à 5% en poids de la composition cosmétique. Selon la présente invention, la stimulation de la production de collagène de type I génère un effet anti-âge. Cet effet anti-âge est renforcé 30 par la stimulation de la production de fibronectine. La présente invention a également pour objet l'utilisation d'un extrait de Musa sapientum pour la fabrication d'une composition cosmétique,

dans laquelle l'extrait de Musa sapientum est destiné à stimuler la production de collagène de type I. En d'autres termes, la présente invention a également pour objet un procédé de fabrication d'une composition cosmétique comprenant une étape d'ajout d'un extrait de Musa sapientum dans un mélange pour former une composition cosmétique, dans laquelle l'extrait de Musa sapientum est destiné à stimuler la production de collagène de type I. Dans ce procédé, l'extrait de Musa sapientum peut, par exemple, être ajouté aux concentrations précitées.

La composition selon l'invention peut encore comprendre un ou plusieurs agents de formulation ou additifs d'usage connu et classique dans les compositions cosmétiques. Il peut s'agir par exemple d'un adoucissant, d'un colorant, d'un filtre solaire, d'un actif filmogène, d'un tensio-actif, d'un conservateur, d'un émulsionnant, d'un glycol, d'une vitamine. Grâce à ces connaissances en matière de cosmétiques, l'homme du métier saura quels agents de formulation ajouter à la composition et en quelles quantités en fonction des propriétés recherchées. La composition cosmétique peut se présenter sous toute forme connue de l'homme du métier. Il peut s'agir, par exemple, d'une forme choisie dans le groupe comprenant une émulsion, un sérum, un gel, un gel moussant et une lotion. Par exemple, l'émulsion peut être une microémulsion ou une nanoémulsion. Par ailleurs, l'émulsion peut être, par exemple, une émulsion eau dans l'huile ou une émulsion huile dans l'eau. A titre d'exemple, l'émulsion peut être, par exemple, un lait. La présente invention a également pour objet un procédé cosmétique de stimulation de la production de collagène de type I consistant à appliquer un extrait de Musa sapientum ou une composition comprenant un extrait de Musa sapientum sur la peau. Par exemple, l'extrait de Musa sapientum ou la composition comprenant un extrait de Musa sapientum est appliquée sur le visage.

Dans ce procédé cosmétique de stimulation de la production de collagène de type I, l'extrait de Musa sapientum ou la composition comprenant un extrait de Musa sapientum stimule en outre la production de fibronectine.

L'extrait de Musa sapientum utilisé dans la présente invention stimule à la fois la synthèse le collagène de type I, qui est le composant majoritaire de la matrice extracellulaire au niveau du derme, et la synthèse de fibronectine, qui renforce l'adhésion cellulaire. Ces propriétés combinées renforcent le rôle raffermissant de l'extrait de Musa sapientum ou d'une composition comprenant cet extrait.

D'autres avantages pourront encore apparaître à l'homme du métier à la lecture des exemples, illustrés par les figures annexées, donnés à titre illustratif.

Brève description des figures - La figure 1 représente un schéma des composants du derme. «Gb » signifie globule blanc, « F » signifie fibroblaste, « Fe » signifie fibre élastique, « Fr » signifie fibre réticulaire, « Fc » signifie fibre de collagène, « Sf » signifie substance fondamentale, « Ça » signifie cellule adipeuse et « Cs » signifie capillaire sanguin. - La figure 2 représente des photographies prises au microscope à fluorescence, au grossissement x200, de cultures de fibroblastes marquées par fluorescence TRITC (en gris clair) et DAPI (en blanc) indiquant respectivement les régions de localisation du collagène de type I et les noyaux cellulaires. Ces photographies ont été réalisées en absence d'extrait de banane verte dans la culture de fibroblastes (2A) ou en présence d'extrait de banane verte aux concentrations de 0,01% (2B), 0,05% (2C) et 0,1% (2D). 3o - La figure 3 représente une comparaison des moyennes de l'intensité (exprimée en unité arbitraire) de la fluorescence (TRITC) du collagène de type 1 (« Col 1 ») par fibroblaste, en fonction de la

concentration en extrait de banane verte. « T » signifie témoin non traité. « Ext » signifie extrait de banane verte. « I / c » signifie intensité par cellule. « T.D. » signifie avec contrôle Test de Dunnett. La figure 4 est un diagramme représentant l'intensité (exprimée en unité arbitraire) de la fluorescence (TRITC) du collagène de type I (« Col I ») par fibroblaste, en fonction de la concentration en extrait de banane verte. « T » signifie témoin non traité. « Ext » signifie extrait de banane verte. « I / c » signifie intensité par cellule. - La figure 5 représente des photographies prises au microscope 1 o à fluorescence, au grossissement x200, de cultures de fibroblastes marquées par fluorescence TRITC (en gris clair) et DAPI (en blanc) indiquant respectivement les régions de localisation de la fibronectine et les noyaux cellulaires. Ces photographies ont été réalisées en absence d'extrait de banane verte dans la culture de fibroblastes (5A) ou en 15 présence d'extrait de banane verte aux concentrations de 0,01% (5B), 0,05% (5C) et 0,1% (5D). - La figure 6 représente une comparaison des moyennes de l'intensité (exprimée en unité arbitraire) de la fluorescence (TRITC) fibronectine (« Fib ») par fibroblaste, en fonction de la concentration en 20 extrait de banane verte. « T » signifie témoin non traité. « Ext » signifie extrait de banane verte. « I / c » signifie intensité par cellule. « T.D. » signifie avec contrôle Test de Dunnett. - La figure 7 est un diagramme représentant l'intensité (exprimée en unité arbitraire) de la fluorescence (TRITC) de la fibronectine (« Fib ») 25 par rapport au nombre de fibroblastes, en fonction de la concentration en extrait de banane verte. « T » signifie témoin non traité. « Ext » signifie extrait de banane verte. « I / c » signifie intensité par cellule. 30 EXEMPLES

Exemple 1 : Extrait de Banane verte On utilise un extrait de banane verte obtenu auprès de la société Botanica GmbH (Sins, Suisse) sous la référence « Green Banana bio Extract 'C'G / Article No. P-00021571 ».

Exemple 2 : Effets d'un extrait de banane verte sur l'élasticité et la fermeté de la peau 1 o Cet exemple vise un type particulier de modification favorisant la perte d'élasticité et de fermeté de la peau à savoir la désorganisation et la raréfaction du collagène et de la fibronectine. L'activité d'extraits de banane verte à différentes concentration sur la sécrétion du collagène de type I et de fibronectine de fibroblastes en 15 culture a été mesurée.

2.1 Culture de fibroblastes : Dans un premier temps, des cultures de fibroblastes humains normaux ont été établies par la méthode des expiants à partir de 20 prélèvement de peau caucasienne saine (plastie abdominale). Les fibroblastes sont cultivés jusqu'à confluence, c'est-à-dire jusqu'à former un tapis cellulaire ne présentant aucune interstice entre chaque cellule, à 37°C, dans un milieu MEM (« Minimum Essential Medium » en anglais) contenant 2mM de L-Glutamine et 10% de sérum de veau foetal, 25 dans une atmosphère saturée en humidité avec 5% de CO2. Les fibroblastes sont ensuite décollés par une solution isotonique tamponnée pH 7.2 de trypsine à o.1% et d'EDTA 0.02%, puis ont été ensemencés dans des plaque de 6 puits avec lamelle de verre à 7.104 cellules par puits dans le milieu MEM. 30 Après 48 heures, ce milieu est remplacé, pour une incubation de 72 heures à l'étude à 37°C, 5%CO2, par un milieu d'incubation MEM ne contenant pas de sérum de veau foetal avec ou sans l'extrait de banane

verte à tester). Les tapis cellulaires obtenus ont ensuite été rincés au méthanol à -20°C avant de procéder à la révélation du collagène de type I ou de la fibronectine par immunofluorescence. Des cultures de fibroblastes ont été réalisées dans des milieux d'incubation comprenant respectivement 0,01%, 0,05% et 0,1% en volume d'extrait de banane verte. Les cultures témoin ne contenaient pas d'extrait de banane verte.

2.2 Immunolocalisation : 1 o Les fibroblastes obtenus au point 2.1 ont été incubés une heure avec un « premier anticorps » dirigé contre le collagène de type I, puis une heure avec un « second anticorps » dirigé contre le « premier anticorps » et couplé au fluorochrome TRITC (« Tetra methyl Rodamine Iso Thio Cyanate »). Le « premier anticorps » a été obtenu auprès de Sigma 15 (référence anti-Colll, C2456). Le « second anticorps » couplé au fluorochrome TRITC a été obtenu auprès de Sigma Chemicon (référence AP124R). Les noyaux cellulaires sont révélés par un marquage au DAPI (Di Amino Pheny Indol) colorant spécifiquement l'ADN par une fluorescence 20 bleue au niveau de la chromatine et des chromosomes. LE DAPI a été obtenus auprès de Sigma (référence D9564). Le même protocole a été réalisé en choisissant comme « premier anticorps » un anticorps dirigé contre la fibronectine obtenu auprès de Sigma (référence F3648). 25 Les lamelles ont ensuite été montées sur lame de verre puis observées au microscope à fluorescence (Nikon Eclipse 50i (marque de commerce)). Plusieurs champs de population cellulaires ont été pris en photo. Les images de fluorescence TRITC ont indiqué les régions de localisation de localisation du collagène de type I ou de fibronectine. Les 3o images de fluorescence DAPI ont indiqué les noyaux cellulaires et donc le nombre de cellules par champ. Les clichés photographiques ont été analysés par le logiciel d'analyse d'images Lucia (Nikon). Les données

obtenues par le logiciel d'analyse d'images Lucia (Nikon) ont ensuite été transférées dans le logiciel JMP (marque de commerce) fourni la société SAS Institute. 2.3 Dosaqe du collaqène : La quantité de collagène de type I sécrétée dans le milieu après incubation avec ou sans extrait de banane verte a été déterminée en mesurant l'intensité de la fluorescence, exprimée en unité de fluorescence (unité arbitraire) par cellule, et par la réalisation d'un test ANOVA (« ANalysis Of Variance » en anglais). L'ensemble des résultats présentés dans les tableaux 1 à 10 ci-dessous ont été fournis par le logiciel JMP (marque de commerce). Cette expérience a été réalisée pour chacun des milieux d'incubation (extrait de banane verte à 0,01 % en volume, extrait de banane verte à 0,05% en volume, extrait de banane verte à 0,1 % en volume, témoin) et est illustrée par la figure 2. Les résultats de cette expérience sont présentés dans les figures 3 et 4 et dans les tableaux 1 à 5 ci-dessous.

Tableau 1 : Analyse de la variance, par rapport à la stimulation de collagène de type I Source Degré(s) Somme des Carré moyen Rapport F Prob. > F de liberté carrés Condition 3 2,0093e+11 6,698e+10 20,8333 <,0001 Résidus 50 1,6075e+11 3,2149e+9 - - Total 53 3,6168e+11 - - - Tableau 2 : Moyennes pour l'ANOVA, par rapport à la stimulation de collagène de type I Niveau Nombre Moyenne Écart-type LIC 95 % LSC 95 % Banane 0,01% 14 275857 15154 245420 306294 Niveau Nombre Moyenne Écart-type LIC 95 % LSC 95 % Banane 0,05% 13 324385 15726 292798 355971 Banane 0,1% 14 384214 15154 353777 414652 Témoin 13 218692 15726 187106 250279 Des comparaisons de moyennes avec un contrôle en utilisant la méthode de Dunnett ont été réalisées avec les paramètres suivants : - Groupe de contrôle = Témoin - 1d 1 = 2,41993 - Alpha = 0,05 Tableau 3 : Comparaison avec un contrôle en utilisant la méthode de Dunnett, par rapport à la stimulation de collagène de type I Niveau Abs(différence)-différence la moins p-value significative Banane 0,1 % 1 e+5 <,0001 Banane 0,05% 51874 <,0001 Banane 0,01 % 4316 0,0311 Témoin -5e+4 1,0000 Tableau 4 : Test de Welch, par rapport à la stimulation de collagène de type I Rapport F Degré(s) de liberté Degré(s) de liberté Prob. > F du numérateur du dénominateur 30,8124 3 27,107 <,0001 Tableau 5 : Effet d'extraits de banane verte sur la production 15 de collagène de type I _ Moyenne / Variation de écart type l'intensité mesurée en 0/0 Témoin 218692 +1- 15726 10 Extrait de banane verte à 275857 +26% 0,01% +1- 15154 Extrait de banane verte à 324385 +48% 0,05% +1- 15726 Extrait de banane verte à 384214 +76% 0,1% +1- 15154 Les extrait de banane verte favorisent de façon surprenante les la synthèse du collagène de type I à toutes les concentrations testées. 2.4 Dosaqe de la fibronectine : La quantité de fibronectine sécrétée dans le milieu après incubation avec ou sans extrait de banane verte a également été déterminée en mesurant l'intensité de la fluorescence, exprimée en unité de fluorescence (unité arbitraire) par cellule, et par la réalisation d'un test ANOVA. 1 o Le calibrage de la mesure de fluorescence a été réalisé de la même qu'à l'exemple 2.3. Cette expérience à été réalisé pour chacun des milieux d'incubation (extrait de banane verte à 0,01 % en volume, extrait de banane verte à 0,05% en volume, extrait de banane verte à 0,1% en volume, témoin) et 15 est illustrée par la figure 5. Les résultats de cette expérience sont présentés dans les figures 6 et 7 et dans les tableaux 6 à 10 ci-dessous. Tableau 6 : Analyse de la variance, par rapport à la stimulation de 20 fibronectine Source Degré(s) Somme Carré moyen Rapport F Prob. > F de liberté des carrés Condition 3 3,8333e+10 1,278e+10 15,2885 <,0001 Résidus 74 6,1847e+10 835771655 - - Total 77 1,0018e+11 - - - Tableau 7 : Moyennes pour l'ANOVA, par rapport à la stimulation de fibronectine Niveau Nombre Moyenne Écart-type LIC 95 % LSC 95 % Banane 0,01% 19 42998,8 6632,3 29784 56214 Banane 0,05% 20 77172,9 6464,4 64292 90054 Banane 0,10/0 20 85999,0 6464,4 73118 98880 témoin 19 33403,5 6632,3 20188 46619 Des comparaisons de moyennes avec un contrôle en utilisant la méthode de Dunnett ont été réalisées avec les paramètres suivants : - Groupe de contrôle = Témoin - ~d = 2,39651 - Alpha = 0,05

1 o Tableau 8 : Comparaison avec un contrôle en utilisant la méthode de Dunnett, par rapport à la stimulation de fibronectine Niveau Abs(différence)-différence la moins P-value significative Banane verte 0,1 % 30400 <,0001 Banane verte 0,05% 21574 <,0001 Banane verte 0,01 % -1 e+4 0,6086 témoin -2e+4 1,0000 Tableau 9 : Test de Welch, par rapport à la stimulation de fibronectine Rapport F Degré(s) de liberté Degré(s) de liberté Prob. > F du numérateur du dénominateur 18,5273 3 40,299 <,0001 Tableau 10 : Effet d'extraits de banane verte sur la production de fibronectine _ Moyenne / Variation de écart type l'intensité mesurée en 0/0 Témoin 33403,5 +1- 6632,3 Extrait de banane verte à 42998,8 +29% 0,01% +1- 6464,4 Extrait de banane verte à 77172,9 +131% 0,05% +1- 6464,4 Extrait de banane verte à 85999,0 +257% 0,1% +/- 6632,3 Les extrait de banane verte favorisent de façon surprenante les la synthèse de fibronectine à toutes les concentrations testées.

Exemple 3 : Exemple d'utilisation d'un extrait de banane verte On applique 2 fois par jour un extrait de banane verte obtenu dans l'exemple 1 sur le visage d'une femme.

Exemple 4 : Exemple de compositions cosmétiques utilisable selon la présente invention Dans ces formulations, l'extrait de banane verte est celui défini dans l'exemple 1.

Les pourcentages des composés sont exprimés en pourcentage en poids de la composition. « Q.S.P » ou « q.s. » signifie « quantité suffisante pour » ou « Quantum satis ». 4.1 Emulsion eau dans l'huile On prépare une émulsion utilisable selon la présente invention par mélange des composés suivants : 5 Composés % PEG 30 DIPOLYHYDROXYSTEARATE 4,00 TRIGLYCERIDES C16-C18 HYDROGENEES 5,00 PEG-45 / DODECYL GLYCOL COPOLYMER 1,20 TRIGLYCERIDES C8C10 19,00 HUILE DE VASELINE FLUIDE 8,00 GLYCOLS 10,00 EXTRAIT DE MUSA SAPIENTUM 1,00 EAU DEMINERALISEE q.s.p. 100 4.2 Lotion On prépare une lotion utilisable selon la présente invention par mélange des composés suivants : Composés % GLYCOLS 2,00 TAMPON 0,40 CHLORURE DE SODIUM 1,00 ETHANOL 5,00 EXTRAIT DE MUSA SAPIENTUM 1,00 TROMETHAMINE 0,80 CONSERVATEURS 0,50 SOLUBILISANT 0,30 PARFUM 0,10 EAU DEMINERALISEE q.s.p. 100 4.3 Gel On prépare un gel utilisable selon la présente invention par mélange des composés suivants : Composés % CARBOXYMETHYLCELLULOSE 0,03 CARBOMER 0,60 SOUDE 0,17 GLYCERINE 5,00 EXTRAIT DE MUSA SAPIENTUM 1,00 D-PANTHENOL 75L 0,30 POLYOSES D'AVOINE 1,00 PALMITATE DE VITAMINE A 0,10 ACETATE DE TOCOPHEROL 0,05 HUILE DE RICIN HYDROGENEE PEG-40 1,35 CHELATANT 0,03 CONSERVATEURS 0,50 COLORANT 0,017 PARFUM 0,30 EAU DEMINERALISEE q.s.p. 1005 4.4 Gel moussant cors et cheveux On prépare un gel moussant utilisable selon la présente invention par mélange des composés suivants : Composés % POLYMERE QUATERNAIRE FILMOGENE 0,20 LAURYL ETHER SULFATE DE SODIUM 30,00 BETAINE 6,00 SEL D'ACIDE GLUTAMIQUE 10,00 SEL D'ACIDE SULFOSUCCINIQUE 10,00 EDT Na2 0,45 LAURAMIDE MIPA 1,00 AGENT FILMOGENE ANTI-STATIQUE 2,00 PANTHENOL 0,05 HUILE DE SILICONE 1,00 EXTRAIT DE MUSA SAPIENTUM 1,00 CONSERVATEURS 0,50 COLORANT 0,10 PARFUM 3,00 EAU DEMINERALISEE q.s.p. 100 4.5 Emulsion huile dans l'eau On prépare une émulsion utilisable selon la présente invention par mélange des composés suivants : Composés % HELIOGEL 0,70 ACRYLOYL DIMETHYLTAURATE/VP 0,50 COPOLYMER 5,00 GLYCOLS CARBOMER 0,50 SOUDE 0,055 CARBOXYMETHYLCELLULOSE 0,30 TRIGLYCERIDE C8 C10 4,50 DICAPRYLYL CARBONATE 6,00 ESTER SYNTHETIQUE 3,00 HUILE DE SILICONE 1,50 ACETATE DE TOCOPHEROL 0,05 D-PANTHENOL 75L 0,20 EXTRAIT DE MUSA SAPIENTUM 1,00 CHELATANT 0,20 CONSERVATEURS 0,10 PARFUM 0,30 EAU DEMINERALISEE q.s.p. 100

4.6 Emulsion PIT On prépare une émulsion utilisable selon la présente invention par mélange des composés suivants : Composés % EMULGADE SEV 2,70 CETEARETH 20 1,30 ISONONANOATE D'ISONONYLE 6,00 CETEARYL ISONONANOATE 4,00 SOUDE 0,25 GLYCOLS 3,00 EXTRAIT DE MUSA SAPIENTUM 1,00 SOLUBILISANT 0,70 CHELATANT 0,20 CONSERVATEURS q.s. PARFUM q.s. EAU DEMINERALISEE q.s.p. 1005

Claims (11)

1. REVENDICATIONS1. Utilisation cosmétique d'un extrait de Musa sapientum pour stimuler la production de collagène de type I.
2. 2. Utilisation selon la revendication 1, dans laquelle l'extrait de Musa sapientum stimule également la production de fibronectine.
3. 3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle l'extrait 1 o de Musa sapientum est un extrait aqueux, hydro-alcoolique ou alcoolique de Musa sapientum.
4. 4. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans laquelle, l'extrait de Musa sapientum est un extrait du fruit de la 15 plante.
5. 5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans laquelle, lorsque l'extrait de Musa sapientum est utilisé dans une composition cosmétique, il est utilisé à une concentration allant de 0,01 % à 20 10% en poids de la composition.
6. 6. Utilisation d'un extrait de Musa sapientum, pour la fabrication d'une composition cosmétique, dans laquelle l'extrait de Musa sapientum est destiné à stimuler la production de collagène de type I.
7. 7. Utilisation selon la revendication 6, dans laquelle l'extrait de Musa sapientum est destiné en outre à stimuler la production de fibronectine. 30
8. 8. Utilisation selon la revendication 6 ou 7, dans laquelle l'extrait de Musa sapientum est présent dans la composition cosmétique à une concentration allant de 0,01% à 10% en poids de la composition. 2510
9. 9. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 6 à 8, dans laquelle la composition cosmétique se présente sous une forme choisie dans le groupe comprenant une émulsion, un gel, un gel moussant et une lotion.
10. 10. Procédé cosmétique de stimulation de la production de collagène de type I consistant à appliquer un extrait de Musa sapientum ou une composition comprenant un extrait de Musa sapientum sur la peau.
11. 11. Procédé selon la revendication 10, quand lequel l'extrait de Musa sapientum ou la composition comprenant un extrait de Musa sapientum stimule en outre la production de fibronectine.