EP1910329A1 - 4-chromenonyl-1,4-dihydropyridine und ihre verwendung - Google Patents

4-chromenonyl-1,4-dihydropyridine und ihre verwendung

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Publication number
EP1910329A1
EP1910329A1 EP06818226A EP06818226A EP1910329A1 EP 1910329 A1 EP1910329 A1 EP 1910329A1 EP 06818226 A EP06818226 A EP 06818226A EP 06818226 A EP06818226 A EP 06818226A EP 1910329 A1 EP1910329 A1 EP 1910329A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
methyl
mmol
formula
oxo
compound
Prior art date
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Withdrawn
Application number
EP06818226A
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Alexander Kuhl
Peter Kolkhof
Heike Heckroth
Karl-Heinz Schlemmer
Ingo Flamme
Santiago Figueroa Perez
Heike Gielen-Haertwig
Rolf Grosser
Jens-Kerim ERGÜDEN
Dieter Lang
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bayer Intellectual Property GmbH
Original Assignee
Bayer Healthcare AG
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Filing date
Publication date
Application filed by Bayer Healthcare AG filed Critical Bayer Healthcare AG
Publication of EP1910329A1 publication Critical patent/EP1910329A1/de
Withdrawn legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/04—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/38—Drugs for disorders of the endocrine system of the suprarenal hormones
    • A61P5/42—Drugs for disorders of the endocrine system of the suprarenal hormones for decreasing, blocking or antagonising the activity of mineralocorticosteroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives

Definitions

  • the present application relates to novel 4-chromenonyl-l, 4-dihydropyridines, processes for their preparation, their use for the treatment and / or prophylaxis of diseases and their use for the preparation of medicaments for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular of cardiovascular diseases.
  • Aldosterone plays a key role in maintaining fluid and electrolyte homeostasis by promoting sodium retention and potassium secretion in the epithelium of the distal nephron, which helps maintain extracellular volume and thus regulate blood pressure.
  • aldosterone has direct effects on the structure and function of the cardiovascular system, although the underlying mechanisms have not yet been exhaustively clarified [R.E. Booth, J.P. Johnson, J.D. Stockand, ⁇ dv. Physiol. Educ. 26 (1), 8-20 (2002)].
  • Aldosterone is a steroid hormone that is produced in the adrenal cortex. Its production is indirectly regulated quite significantly depending on the kidney perfusion. Each decrease in renal blood flow in the kidney leads to a release of the enzyme renin into the bloodstream. This in turn activates the formation of angiotensin II, which on the one hand narrows the arterial blood vessels, but on the other hand also stimulates the formation of aldosterone in the adrenal cortex.
  • the kidney acts as a blood pressure and thus indirect volume sensor in the bloodstream and counteracts the renin-angiotensin-aldosterone system critical volume losses, on the one hand the blood pressure is increased (angiotensin JJ effect), on the other hand by increased reabsorption of sodium and Water in the kidney of the filling state of the vascular system is compensated again (aldosterone effect).
  • hyperaldosteronism is a crucial component in the pathogenesis and prognosis of heart failure, which may initially be elicited by differential injury, such as a myocardial infarction, myocarditis, or hypertension. This assumption is corroborated by the fact that extensive mortality has been significantly reduced in extensive clinical studies in patients with chronic heart failure or acute myocardial infarction by the use of aldosterone antagonists [B.
  • aldosterone antagonists Another condition typically associated with elevation of plasma aldosterone concentration is advanced cirrhosis of the liver.
  • the cause of the increase in aldosterone is mainly due to the impaired breakdown of aldosterone due to liver dysfunction.
  • Volume overload, edema and hypokalaemia are the typical consequences that can be successfully alleviated in clinical practice by aldosterone antagonists.
  • hyperaldosteronism Much rarer than the forms of hyperaldosteronism listed above are those diseases in which the disorder is found either in the hormone-producing cells of the adrenal gland itself or their number or mass is increased by hyperplasia or proliferation. Adenomas or diffuse hyperplasia of the adrenal cortex are the most common cause of the also called Conn syndrome primary hyperaldosteronism.
  • drug therapy with aldosterone antagonists is in the foreground [HA Kühn, and J. Schirmeister (ed.), Internal Medicine, 4th ed., Springer Verlag, Berlin, 1982].
  • the effects of aldosterone are mediated by the mineralocorticoid receptor located intracellularly in the target cells.
  • aldosterone antagonists like aldosterone, have a basic steroid structure.
  • the applicability of such steroidal antagonists is limited by their interactions with the receptors of other steroid hormones, some of which lead to significant side effects such as gynaecomastia and impotence and the discontinuation of therapy [MA Zaman, S. Oparil, DA Calhoun, Nature Rev. Drug Disc J_, 621-636 (2002)].
  • potent, non-steroidal and mineralocorticoid receptor-selective antagonists offers the opportunity to circumvent this side-effect profile and thereby achieve a clear therapeutic benefit.
  • the object of the present invention is to provide novel compounds which can be used as selective mineralocorticoid receptor antagonists for the treatment of diseases, in particular of cardiovascular diseases.
  • Coronary active 4-aryl-1,4-dihydropyridine derivatives are disclosed in DE 2 003 146. Chromone- and thiochromone-substituted 1,4-dihydropyridines are described in DE 3 311 003-A1 and DE 3 311 005-A1 as cardiotonics and antihypotonics.
  • EP 0 223 744 A2 claims 2-phenyl-chromone-substituted 1,4-dihydropyridine diesters as calcium antagonists.
  • About 4-xanthenonyl-l, 4-dihydropyridine with calcium antagonistic activity is in Medik. Forsch. 42 (6), 797-801 (1992).
  • the present invention relates to compounds of the general formula (I)
  • R 1 and R 2 are identical or different and independently of one another represent (C 1 -C 4 ) -alkyl, trifluoromethyl, cyclopropyl or cyclobutyl
  • R 3 is (C 3 -C 7) -cycloalkyl, fiir (C r C6) alkyl substituted with (C 3 -C 7) cycloalkyl, or may be mono- to trisubstituted by fluorine, or represents phenyl which may be substituted by halogen, cyano, (C 1 -C 4 ) -alkyl, trifluoromethyl, (C 1 -C 4 ) -alkoxy or trifluoromethoxy,
  • R 4 is (C 3 -C 7 ) -cycloalkyl or (C 1 -C 6 ) -alkyl which may be substituted by (C 3 -C 7 ) -cycloalkyl or one to three times by fluorine,
  • R 5 is hydrogen, halogen, cyano, nitro, trifluoromethyl, (C r C 4 ) alkyl or (C 1 -C 4 ) alkoxy
  • R 6 is hydrogen or fluorine
  • Compounds according to the invention are the compounds of the formula (I) and their salts, solvates and solvates of the salts comprising the compounds of the formulas below and their salts, solvates and solvates of the salts and of the formula (I) encompassed by formula (I), hereinafter referred to as exemplary compounds and their salts, solvates and solvates of the salts, as far as the compounds of formula (I), the compounds mentioned below are not already salts, solvates and solvates of the salts.
  • the compounds of the invention may exist in stereoisomeric forms (enantiomers, diastereomers).
  • the invention therefore includes the enantiomers or diastereomers and their respective mixtures. From such mixtures of enantiomers and / or diastereomers, the stereoisomerically uniform components can be isolated in a known manner.
  • the present invention encompasses all tautomeric forms.
  • Suitable salts in the context of the present invention are physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention. Also included are salts which are themselves unsuitable for pharmaceutical applications but can be used, for example, for the isolation or purification of the compounds of the invention.
  • Physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention include acid addition salts of mineral acids, carboxylic acids and sulfonic acids, for example salts of hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, methanesulfonic acid, ethane sulfonic acid, toluenesulfonic acid, benzenesulfonic acid, naphthalenedisulfonic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, propionic acid, lactic acid, tartaric acid, malic acid, citric acid, fumaric acid, maleic acid and benzoic acid.
  • Physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention also include salts of customary bases, such as, by way of example and by way of preference, alkali metal salts (for example sodium and potassium salts), alkaline earth salts (for example calcium and magnesium salts) and ammonium salts derived from ammonia or organic amines having from 1 to 16 carbon atoms, such as, by way of example and by way of illustration, ethylamine, diethylamine, triethylamine, ethyldiisopropylamine, monoethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, dicyclohexylamine, dimethylaminoethanol, procaine, dibenzylamine, N-methylmorpholine, arginine, lysine, ethylenediamine and N-methylpiperidine.
  • customary bases such as, by way of example and by way of preference, alkali metal salts (for example sodium and potassium salts), alkaline earth salts (for example calcium and magnesium salt
  • Solvates in the context of the invention are those forms of the compounds according to the invention which form a complex in the solid or liquid state by coordination with solvent molecules. Hydrates are a special form of solvates that coordinate with water. As solvates, hydrates are preferred in the context of the present invention.
  • the present invention also includes prodrugs of the compounds of the invention.
  • prodrugs includes compounds which may themselves be biologically active or inactive, but which are converted during their residence time in the body into compounds of the invention (for example metabolically or hydrolytically).
  • (CVdV) -AlkVl and (CVCaVlkyl in the context of the invention represent a straight-chain or branched alkyl radical having 1 to 6 or 1 to 4 carbon atoms, preferably a straight-chain or branched alkyl radical having 1 to 4 carbon atoms , Ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, iso-butyl, sec-butyl, tert-butyl, 1-ethyl-propyl, n-pentyl, iso-pentyl and n-hexyl.
  • (C r CY> Cycloalkyl and (C r C 2) cycloalkyl are in the context of the invention represents a saturated monocyclic cycloalkyl group having 3 to 7, 3 to 5 or 5 to 7 carbon atoms. Examples which may preferably be mentioned Cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl and cycloheptyl.
  • (C 1 -C) -alkoxy is a straight-chain or branched alkoxy radical having 1 to 4 carbon atoms. Examples which may be mentioned by way of example include: methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy and tert-butoxy.
  • Halogen in the context of the invention includes fluorine, chlorine, bromine and iodine. Preference is given to fluorine or chlorine.
  • radicals are substituted in the compounds according to the invention, the radicals can, unless otherwise specified, be monosubstituted or polysubstituted. In the context of the present invention, the meaning is independent of each other for all radicals which occur repeatedly. Substitution with one, two or three identical or different substituents is preferred. Very particular preference is given to the substitution with a substituent.
  • R 1 and R 2 are the same or different and are methyl or trifluoromethyl
  • R 3 is (C 5 -C 7) -cycloalkyl, (C r C6) alkyl substituted with (C 3 -C 5) cycloalkyl or mono- to trisubstituted may be substituted by fluorine, or represents phenyl which may be substituted by fluorine, chlorine, trifluoromethyl, methyl, isopropyl, tert-butyl or methoxy,
  • R 4 is (C 3 -C 5 ) -cycloalkyl or (C 1 -C 4 ) -alkyl which may be substituted by (C 3 -C 5 ) -cycloalkyl or one to three times by fluorine,
  • R 5 is hydrogen, fluorine, chlorine, nitro or methyl
  • R 6 is hydrogen or fluorine
  • R 1 is methyl or trifluoromethyl
  • R 2 is methyl
  • R 3 is methyl, trifluoromethyl, isobutyl, isopentyl, cyclobutylmethyl, cyclopentylmethyl, 2- (cyclopropyl) ethyl, 2- (cyclobutyl) -ethyl, 2- (cyclopentyl) -ethyl or phenyl which is in the para-position with fluorine, Trifluoromethyl, methyl or methoxy may be substituted, stands, R 4 is methyl, ethyl, 2,2,2-trifluoroethyl, n-propyl, isopropyl, tert-butyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclopropylmethyl or cyclobutylmethyl,
  • R 5 is hydrogen, fluorine or chlorine
  • R 6 is hydrogen
  • the invention further provides a process for the preparation of the compounds of the formula (I) according to the invention, which comprises reacting compounds of the formula (I)
  • the reactions according to processes [A] and [B] and the second step of processes [C] and [D] are generally carried out in inert solvents, optionally in the presence of an acid, in a temperature range from + 20 ° C to the boiling point of the solvent at normal pressure.
  • Inert solvents for this are, for example, alcohols such as methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol or tert-butanol, or other solvents such as acetonitrile, tetrahydrofuran, dioxane, 1,2-dimethoxyethane, toluene or glacial acetic acid ,
  • the reactions are carried out in ethanol or isopropanol at the respective reflux temperature under atmospheric pressure.
  • the reactions according to processes [A] and [B] are preferably carried out in the presence of an acid such as, for example, acetic acid, trifluoroacetic acid, p-toluenesulfonic acid, methanesulfonic acid or tetrabutylammonium hydrogensulfate; particularly preferred is the addition of acetic acid.
  • an acid such as, for example, acetic acid, trifluoroacetic acid, p-toluenesulfonic acid, methanesulfonic acid or tetrabutylammonium hydrogensulfate; particularly preferred is the addition of acetic acid.
  • the reactions according to the first stage of the processes [C] and [D] are generally carried out in inert solvents, optionally in the presence of a base and / or acid, in a temperature range from +20 0 C to the boiling point of the solvent at atmospheric pressure.
  • Halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, trichloromethane, tetrachloromethane, trichloroethane or 1,2-dichloroethane or other solvents such as acetonitrile, pyridine, benzene, toluene, chlorobenzene or hexane are suitable as inert solvents in this case, for example.
  • the reactions in dichloromethane or toluene preferably take place at the particular reflux temperature under normal pressure.
  • the reactions according to the first step of the processes [C] and [D] are preferably carried out in the presence of an acid in combination with piperidine or pyridine as base and / or a dehydrating agent such as molecular sieve.
  • Suitable acids are, for example, acetic acid or p-toluenesulfonic acid.
  • Particularly preferred is a reaction with the addition of piperidinium acetate in conjunction with molecular sieve.
  • the starting compounds of the formulas (IX) and (X) are known from the literature or obtainable by processes known from the literature [cf. for example, on (IX) and the reaction (DC) ⁇ (II): a) SG Jagadeesh et al., Synth. Commun. 3y. (10), 1547-1557 (2001); b) DE 3 311 005-A1 and literature cited therein; to (X) and the reaction (X) ⁇ (XI) / (XII) ⁇ (ET): a) P. Babin et al., Tetrahedron 37, 1131-1139 (1981); b) RJ. Bestmann, G.
  • the compounds of the formulas (ID), (FV), (V) and (VI) are commercially available, known from the literature or can be prepared by literature methods [for the synthesis of 1,4-dihydropyridines cf. also D.M. Stout, A.I. Meyers, Chem. Rev. 1982, 82, 223-243; H. Meier et al., Liebigs Ann. Chem. 1977, 1888; H. Meier et al., Liebigs Ann. Chem. 1977, 1895 and H. Meier et al., Liebigs Ann. Chem. 1976, 1762].
  • the compounds of the invention act as antagonists of the mineralocorticoid receptor and show an unpredictable, valuable pharmacological activity spectrum. They are suitable therefore for use as a medicament for the treatment and / or prophylaxis of diseases in humans and animals.
  • the compounds according to the invention are suitable for the prophylaxis and / or treatment of various diseases and disease-related conditions, in particular of diseases characterized by or associated with an increase in the plasma aldosterone concentration.
  • diseases and disease-related conditions include: idiopathic primary hyperaldosteronism, hyperaldosteronism in adrenal hyperplasia and / or adrenal adenomas and / or adrenal carcinomas, hyperaldosteronism in cirrhosis, hyperaldosteronism in heart failure and hyperaldosteronism in essential hypertension.
  • the compounds of the present invention are also useful for the prophylaxis of sudden cardiac death in patients at increased risk of dying from sudden cardiac death.
  • patients e.g. suffering from any of the following conditions: hypertension, heart failure, coronary heart disease, stable and unstable angina pectoris, myocardial ischemia, myocardial infarction, shock, atherosclerosis, atrial and ventricular arrhythmia, transient and ischemic attacks, stroke, inflammatory cardiovascular disease, peripheral and cardiovascular disease, peripheral circulatory disorders, pulmonary hypertension, spasms of the coronary arteries and peripheral arteries, thrombosis, thromboembolic disorders and vasculitis.
  • the compounds of the invention may also be used for the prophylaxis and / or treatment of edema formation such as pulmonary edema, renal edema or heart failure edema, and restenoses such as thrombolytic, percutaneous transluminal angioplasties (PTA) and transluminal coronary angioplasties (PTCA). , Heart transplants and bypass operations.
  • edema formation such as pulmonary edema, renal edema or heart failure edema
  • restenoses such as thrombolytic, percutaneous transluminal angioplasties (PTA) and transluminal coronary angioplasties (PTCA).
  • PTA percutaneous transluminal angioplasties
  • PTCA transluminal coronary angioplasties
  • the compounds of the invention are suitable for use as a diuretic and in electrolyte disorders such as hypercalcemia.
  • the compounds of the invention can be used for the prophylaxis and / or treatment of diabetes mellitus and diabetic sequelae such. Neuropathy and nephropathy, acute and chronic renal failure, and chronic renal insufficiency.
  • Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention for the treatment and / or prevention of diseases, in particular the aforementioned diseases.
  • Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention for the manufacture of a medicament for the treatment and / or prevention of diseases, in particular the aforementioned diseases.
  • Another object of the present invention is a method for the treatment and / or prevention of diseases, in particular the aforementioned diseases, using an effective amount of at least one of the inventive compounds.
  • the compounds of the invention may be used alone or as needed in combination with other agents.
  • Another object of the present invention are pharmaceutical compositions containing at least one of the compounds of the invention and one or more other active ingredients, in particular for the treatment and / or prevention of the aforementioned diseases.
  • suitable combination active ingredients are: ACE inhibitors, renin inhibitors, angiotensin H receptor antagonists, beta-blockers, acetylsalicylic acid, diuretics, potassium supplements, calcium antagonists, statins, digitalis (digoxin) derivatives, calcium Sensitizers such as levosimendan, nitrates, anticoagulants, antiarrhythmics, vasodilators and thrombolytics.
  • compositions containing at least one compound of the invention usually together with one or more inert, non-toxic, pharmaceutically suitable excipients, and their use for the purposes mentioned above.
  • the compounds according to the invention can act systemically and / or locally.
  • they may be applied in a suitable manner, e.g. oral, parenteral, pulmonary, nasal, sublingual, lingual, buccal, rectal, dermal, transdermal, conjunctivae otic or as an implant or stent.
  • the compounds according to the invention can be administered in suitable administration forms.
  • the compounds of the invention rapidly and / or modified donating application forms containing the compounds of the invention in crystalline and / or amorphized and / or dissolved form, such as tablets (uncoated or coated Tablets, for example with enteric or delayed-dissolving or insoluble coatings, which control the release of the compound according to the invention), tablets or films / wafers rapidly breaking down in the oral cavity, films / lyophilisates, capsules (for example hard- or Soft gelatin capsules), dragees, granules, pellets, powders, emulsions, suspensions, aerosols or solutions.
  • tablets uncoated or coated Tablets, for example with enteric or delayed-dissolving or insoluble coatings, which control the release of the compound according to the invention
  • tablets or films / wafers rapidly breaking down in the oral cavity
  • films / lyophilisates for example hard- or Soft gelatin capsules
  • dragees dragees, granules, pellets, powders,
  • the parenteral administration can be done bypassing a resorption step (eg, intravenous, intraarterial, intracardiac, intraspinal, or intralumbar) or with involvement of resorption (eg, intramuscular, subcutaneous, intracutaneous, percutaneous, or intraperitoneal).
  • a resorption step eg, intravenous, intraarterial, intracardiac, intraspinal, or intralumbar
  • involvement of resorption eg, intramuscular, subcutaneous, intracutaneous, percutaneous, or intraperitoneal.
  • parenteral administration are suitable as application forms, inter alia, injection and infusion preparations in the form of solutions, suspensions, emulsions, lyophilizates 4 or sterile powders.
  • Inhalation medicines including powder inhalers, nebulizers
  • nasal drops solutions or sprays
  • lingual, sublingual or buccal tablets films / wafers or capsules
  • suppositories ear or ophthalmic preparations
  • vaginal capsules aqueous suspensions (lotions, shake mixtures )
  • lipophilic suspensions ointments
  • creams transdermal therapeutic systems (eg patches)
  • milk pastes, foams, powdered powders, implants or stents.
  • the compounds according to the invention can be converted into the mentioned administration forms. This can be done in a conventional manner by mixing with inert, non-toxic, pharmaceutically suitable excipients.
  • excipients for example microcrystalline cellulose, lactose, mannitol
  • solvents for example liquid polyethylene glycols
  • emulsifiers and dispersants or wetting agents for example sodium dodecyl sulfate, polyoxysorbitanoleate
  • binders for example polyvinylpyrrolidone
  • synthetic and natural polymers for example albumin
  • Stabilizers eg, antioxidants such as ascorbic acid
  • dyes eg, inorganic pigments such as iron oxides
  • flavor and / or odoriferous include, among others.
  • Excipients for example microcrystalline cellulose, lactose, mannitol
  • solvents for example liquid polyethylene glycols
  • emulsifiers and dispersants or wetting agents for example sodium dodecy
  • the dosage is about 0.01 to 100 mg / kg, preferably about 0.01 to 20 mg / kg and most preferably 0.1 to 10 mg / kg of body weight.
  • Device type MS Micromass ZQ
  • Device type HPLC Waters Alliance 2795; Column: Phenomenex Synergi 2 ⁇ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A ⁇ 2.5 min 30% A ⁇ 3.0 min 5% A ⁇ 4.5 min 5% A; Flow: 0.0 min 1 ml / min ⁇ 2.5 min / 3.0 min / 4.5 min 2 ml / min; Oven: 50 ° C .; UV detection: 210 nm.
  • Method 2 (LC-MS):
  • Device type MS Micromass ZQ
  • Device type HPLC HP 1100 Series
  • UV DAD Column: Phenomenex Synergi 2 ⁇ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm
  • Eluent A 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid
  • eluent B 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid
  • Flow 0.0 min 1 ml / min - »2.5 min / 3.0 min / 4.5 min 2 ml / min
  • Oven 50 ° C .
  • UV detection 210 nm.
  • alkenes used as starting or intermediate compounds are in the form of E / Z mixtures.
  • the solvent is removed in vacuo.
  • the residue is taken up in 200 ml of methanol and heated to 80 0 C with 50 ml of 20% hydrochloric acid for 30 min.
  • the solvent is removed in vacuo and the residue is mixed with 400 ml of water. It is extracted several times with dichloromethane. After drying the organic phase over magnesium sulfate, the solvent is removed in vacuo and the residue is purified by column chromatography (eluent: dichloromethane / methanol 98: 2). There are obtained 10.5 g (50.2% of theory) of the title compound as a yellow oil.
  • 1,3-dione is refluxed with 87 mg (0.67 mmol) of ethyl 3-aminocrotonate in 5 ml of 2-propanol overnight.
  • the solvent is removed in vacuo and the residue is purified by preparative HPLC. There are obtained 102 mg (32% of theory) of the title compound.
  • 1,3-dione is refluxed with 94 mg (0.62 mmol) of 3-aminocrotonic acid n-propyl ester in 5 ml of 2-propanol overnight.
  • the solvent is removed in vacuo and the residue is purified by preparative HPLC. There are obtained 108 mg (33% of theory) of the title compound.
  • the title compound is prepared from 75 mg (0.186 mmol) of 8 - [(4 /?) - 3-acetyl-1H-imidazol-1-ylcarbonyO-1-dimethyl-1H-dihydropyridine - ⁇ yll ⁇ -MethylMH-chromo-4-one and 1.5 ml (20 mmol) of (S) - (+) - 2-butanol.
  • step 20d the title compound is prepared from 75 mg (0.186 mmol) of S - [(4R) -3-acetyl-5- (1H-imidazol-1-ylcarbonyl) -2,6-dimethyl-1, 4-dihydropyridin-4-yl] -2-methyl-4H-chromene-4-one and 1.5 ml (20 mmol) of (i?) - (-) - 2-butanol. Yield: 36 mg (47% of theory)
  • Example 32 The preparation is analogous to Example 32 (step 32a) starting from 5- (2-cyclobutylethyl) -3-methylisoxazol [available analogously to C. Kashima et al., Bull. Chem. Soc. Jpn. 46, 310-313 (1973)].
  • MR mineralocorticoid receptor
  • CHO Kl cell line an established chimera system is used in which the ligand-binding domains of human steroid hormone receptors are fused to the DNA binding domain of the yeast transcription factor GAL4.
  • the resulting GAL4 steroid hormone receptor chimeras are co-transfected in the CHO cells with a reporter construct and stably expressed.
  • the GAL4 DNA binding domain (amino acids 1-147) from the vector pFC2-dbd (Stratagene) with the PCR amplified ligand-binding domains of the mineralocorticoid receptor (MR , Amino acids 734-
  • glucocorticoid receptor amino acids 443-777
  • progesterone receptor PR
  • Amino acids 680-933) and the androgen receptor (AR, amino acids 667-919) are cloned in the vector pIRES2 (Clontech).
  • the reporter construct which contains five copies of the GAL4 binding site, upstream of a thymidine kinase promoter, leads to the expression of the firefly
  • Luciferase (Photinus pyralis) after activation and binding of the GAL4 steroid hormone receptor Chimeras by the specific agonists aldosterone (MR), dexamethasone (GR), progesterone (PR) and dihydrotestosterone (AR).
  • MR aldosterone
  • GR dexamethasone
  • PR progesterone
  • AR dihydrotestosterone
  • the MR, GR, PR and AR cells are transplanted into medium (Optimem, 2.5% FCS, 2 mM glutamine, 10 mM HEPES) in 96- (or 384- or 1536-) wells the day before the test. Plated microtiter plates and kept in a cell incubator (96% humidity, 5% v / v CO 2 , 37 ° C). On the test day, the substances to be tested are taken up in the above-mentioned medium and added to the cells. About 10 to 30 minutes after addition of the test substances, the respective specific agonists of the steroid hormone receptors are added. After a further incubation period of 5 to 6 hours, the luciferase activity is measured by means of a video camera. The measured relative light units result in a sigmoidal stimulation curve as a function of the substance concentration. The calculation of the IC 5O values is carried out with the aid of the computer program GraphPad PRISM (Version 3.02).
  • Table A shows the IC 50 values (MR) of representative example compounds:
  • Cerebral cortex membrane preparations from Wistar rats serve as the starting material for a radioactive binding assay, which is described extensively in the literature as a standard assay [Ehlert, FJ, Roeske, WR, Itoga E., Yamamura, HJ., Life Sci. 30, 2191-2202 (1982); Gould, RJ, Murphy, KMM, Snyder, SH, Proc. Natl. Acad. Be. USA 79, 3656-3660] and is used by commercial suppliers (eg MDS Pharma Services) in the context of order investigations.
  • dilution series of the test compounds in DMSO are typically incubated for 90 minutes at 25 ° C in a 50 mM TrisHCl buffer, pH 7.7, with the membrane preparations and the tritium-labeled ligand nitrendipine (0.1 nM) and the specific binding of the test compounds Quantification of the specifically displaced, radiolabeled ligand determined.
  • IC 50 values are determined by a non-linear regression analysis.
  • an IC 50 value of 0.3 nM is determined for a classical dihydropyridine-type calcium antagonist, such as nitrendipine, while investigated examples of the compounds of the invention described herein have IC 50 values of the order of magnitude from 0.8 to 5 ⁇ M and thus have an at least a factor of 1000 decreased affinity for the L-type calcium channel.
  • Compounds with such a low residual binding affinity for the L-type calcium channel no longer show pronounced hemodynamic effects in vivo, which are mediated via the L-type calcium channel.
  • thoracic aorta from male New Zeeland White rabbits is removed and cleaned from surrounding tissue. Then aortic rings of 2 mm in length under an initial tension of 4 g are placed in 10 ml organ baths with Krebs-Henseleit solution heated to 37 ° C. Contractions of 40 mM KCl (submaximal contraction) and 15 mM KCl (minimal contraction) are triggered four times, 45 minutes apart, to train the vessels and produce a stable rest tension. Each contraction is followed by a series of eleven rinse cycles and a thirty minute rest rest period. After the four preliminary runs, the addition of the test substances to the organ baths takes place without further post-tensioning in each case at the beginning of the quiescent phase.
  • the concentration of the test substances increases by a factor of 10 for each of the following four contractions.
  • the difference between the base voltage and the fourth forward contraction value is set to 100%, the following contraction peaks relate to this value.
  • Wistar rats 250-350 g body weight are kept with free access to feed (Altromin) and drinking water. From about 72 hours before the start of the experiment, instead of the normal diet, the animals were given only saline-reduced feed containing 0.02% sodium chloride (ssniff R / MH, 10 mm with 0.02% Na, S0602-E081, ssniff Spezialdi decisiven GmbH , D-59494 Soest). During the experiment, the animals are kept individually for about 24 hours in suitable metabolic cages for rats of this weight class (Tecniplast Germany GmbH, D-82383 Hohenpeissenberg) with free access to salt-reduced feed and drinking water.
  • the substance to be tested is administered to the animals in a volume of 0.5 ml / kg body weight of a suitable solvent in the stomach by means of a gavage.
  • Control animals receive only solvents.
  • Controls and substance tests are carried out in parallel on the same day.
  • Control groups and substance dose groups each consist of 3 to 6 animals.
  • the urine excreted by the animals is continuously collected in a container on the floor of the cage.
  • the urine volume per unit of time is determined separately for each animal, and the concentration of the sodium or potassium ions excreted in the urine is measured by means of standard flame photometric methods. From the measured values, the sodium / potassium quotient is calculated as a measure of the substance effect.
  • the measuring intervals are typically the period up to 8 hours after the start of the test (day interval) and the period from 8 to 24 hours after the start of the test (night interval).
  • the urine is collected and measured every two hours during the day interval.
  • the animals at the beginning of the test and then at intervals of two hours by gavage a defined amount of water supplied.
  • the compounds according to the invention can be converted into pharmaceutical preparations as follows:
  • the mixture of compound of the invention, lactose and starch is granulated with a 5% solution (m / m) of the PVP in water.
  • the granules are mixed after drying with the magnesium stearate for 5 minutes.
  • This mixture is compressed with a conventional tablet press (for the tablet format see above).
  • a pressing force of 15 kN is used as a guideline for the compression.
  • a single dose of 100 mg of the compound of the invention corresponds to 10 ml of oral suspension.
  • the rhodigel is suspended in ethanol, the compound according to the invention is added to the suspension. While stirring, the addition of water. Until the completion of the swelling of Rhodigels is stirred for about 6 h.
  • the compound of the invention is suspended in the mixture of polyethylene glycol and polysorbate with stirring. The stirring is continued until complete dissolution of the compound according to the invention.
  • the compound of the invention is dissolved in a concentration below saturation solubility in a physiologically acceptable solvent (e.g., isotonic saline, glucose solution 5% and / or PEG 400 solution 30%).
  • a physiologically acceptable solvent e.g., isotonic saline, glucose solution 5% and / or PEG 400 solution 30%.
  • the solution is sterile filtered and filled into sterile and pyrogen-free injection containers.

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Abstract

Die vorliegende Anmeldung betrifft neue 4-Chromenonyl-l,4-dihydropyridine'der Formel (I) Verfahren zu ihrer Herstellung, ihre Verwendung zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten, insbesondere von kardiovaskulären Erkrankungen. ( I )

Description

4-Chromenonyl-l,4-dihvdropyridine und ihre Verwendung
Die vorliegende Anmeldung betrifft neue 4-Chromenonyl-l,4-dihydropyridine, Verfahren zu ihrer Herstellung, ihre Verwendung zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krank- heiten, insbesondere von kardiovaskulären Erkrankungen.
Aldosteron spielt eine Schlüsselrolle in der Aufrechterhaltung der Flüssigkeits- und Elektrolythomöostase, indem es im Epithel des distalen Nephrons die Natriumretention und Kaliumsekretion fordert, was zur Konstanthaltung des Extrazellulärvolumens und damit zur Blutdruckregulation beiträgt. Daneben entfaltet Aldosteron direkte Effekte auf die Struktur und Funktion des Herz- und Gefäßsystems, wobei die dafür zugrunde liegenden Mechanismen noch nicht erschöpfend geklärt sind [R.E. Booth, J.P. Johnson, J.D. Stockand, Λdv. Physiol. Educ. 26 (1), 8-20 (2002)].
Aldosteron ist ein Steroidhormon, das in der Nebennierenrinde gebildet wird. Seine Produktion wird indirekt ganz wesentlich in Abhängigkeit von der Nierendurchblutung reguliert. Jede Abnahme der Nierendurchblutung führt in der Niere zu einer Ausschüttung des Enzyms Renin in den Blutkreislauf. Dieses wiederum aktiviert die Bildung von Angiotensin II, das einerseits verengend auf die arteriellen Blutgefäße wirkt, andererseits aber auch die Bildung von Aldosteron in der Nebennierenrinde stimuliert. Somit fungiert die Niere als Blutdruck- und damit indirekter Volumen-Sensor im Blutkreislauf und wirkt über das Renin-Angiotensin-Aldosteron-System kritischen Volumenverlusten entgegen, indem einerseits der Blutdruck gesteigert wird (Angiotensin JJ-Wirkung), andererseits durch verstärkte Rückresorption von Natrium und Wasser in der Niere der Füllungszustand des Gefäßsystems wieder ausgeglichen wird (Aldosteron-Wirkung).
Dieses Regelsystem kann in vielfältiger Weise krankhaft gestört sein. So fuhrt eine chronische Minderdurchblutung der Nieren (z.B. infolge einer Herzinsuffizienz und des hierdurch verursachten Blutrückstaus im Venensystem) zu einer chronisch überhöhten Ausschüttung von Aldosteron. Diese wiederum zieht eine Expansion des Blutvolumens nach sich und verstärkt hiermit die Herzschwäche durch ein Volumenüberangebot an das Herz. Eine Stauung von Blut in den Lungen mit Atemnot und Ödembildung in den Extremitäten sowie Aszites und Pleuraergüsse können die Folge sein; die Nierendurchblutung sinkt weiter ab. Überdies führt die übersteigerte Aldosteron-Wirkung zu einer Minderung der Kalium-Konzentration im Blut und in der Extrazellulärflüssigkeit. In ohne- hin vorgeschädigten Herzmuskeln kann die Unterschreitung eines kritischen Mindestwertes tödlich endende Herzrhythmusstörungen auslösen. Hierin dürfte eine der Hauptursachen des häufig bei Patienten mit Herzinsuffizienz eintretenden plötzlichen Herztodes zu suchen sein. Zusätzlich wird Aldosteron auch für eine Reihe der typischerweise bei Herzinsuffizienten zu beobachtenden Umbauprozesse des Herzmuskels verantwortlich gemacht. Somit ist der Hyperaldo- steronismus eine entscheidende Komponente in der Pathogenese und Prognose der Herzinsuffizienz, die ursprünglich durch unterschiedliche Schädigungen, wie z.B. einen Herzinfarkt, eine Herzmuskelentzündung oder Bluthochdruck, ausgelöst werden kann. Diese Annahme wird durch die Tatsache erhärtet, dass in umfangreichen klinischen Studien in Patientenkollektiven mit chronischer Herzinsuffizienz bzw. nach akutem Myokardinfarkt durch Anwendung von Aldosteron-Antagonisten die Gesamtmortalität deutlich gesenkt wurde [B. Pitt, F. Zannad, WJ. Remme et al., N Engl. J. Med. 34L 709-717 (1999); B. Pitt, W. Remme, F. Zannad et al., N. Engl. J. Med. 348, 1309-1321 (2003)]. Dies konnte unter anderem durch eine Senkung der Inzidenz des plötzlichen Herztodes erreicht werden.
Neueren Studien zufolge findet man auch bei einem nicht unerheblichen Teil der Patienten, die unter einer essentiellen Hypertonie leiden, eine unphysiologische Erhöhung der Aldosteron- Konzentration im Plasma [N.M. Kaplan, The current epidemic ofprimary aldosteronism: Causes and consequences, J. Hypertens. 22, 863-869 (2004)]. Worin die Ursache dieses Hyperaldo- steronismus liegt und ob die Betroffenen eine spezielle Risikogruppe bezüglich des Versterbens am plötzlichen Herztod oder der Entwicklung einer Herzinsuffizienz darstellen, ist nicht bekannt. Es ist jedoch anzunehmen, dass ein im Zusammenhang mit einer essentiellen Hypertonie diagnostizierter Hyperaldosteronismus den Ansatzpunkt für eine kausale und prophylaktisch sinnvolle Therapie bietet.
Ein anderes typischerweise mit Erhöhung der Aldosteron-Konzentration im Plasma einhergehendes Krankheitsbild ist die fortgeschrittene Leberzirrhose. Die Ursache der Aldosteron- erhöhung liegt hier vorwiegend im infolge der Leberfunktionsstörung eingeschränkten Abbau des Aldosterons. Volumenüberlastung, Ödeme und Hypokaliämie sind die typischen Folgen, die in der klinischen Praxis durch Aldosteron-Antagonisten erfolgreich gelindert werden können.
Weitaus seltener als die oben aufgeführten Formen des Hyperaldosteronismus sind solche Krankheitsbilder, bei denen die Störung entweder in den Hormon-produzierenden Zellen der Nebenniere selbst zu finden ist oder deren Anzahl oder Masse durch eine Hyperplasie oder Wucherung vermehrt ist. Adenome oder diffuse Hyperplasien der Nebennierenrinde sind die häufigste Ursache des auch als Conn-Syndrom bezeichneten primären Hyperaldosteronismus. Auch hier steht neben der chirurgischen Entfernung des krankhaften Gewebes die medikamentöse Therapie mit Aldosteron-Antagonisten im Vordergrund [H.A. Kühn, und J. Schirmeister (Hrsg.), Innere Medizin, 4. Aufl., Springer Verlag, Berlin, 1982]. Die Wirkungen von Aldosteron werden über den in den Zielzellen intrazellulär lokalisierten Mineralokorticoid-Rezeptor vermittelt. Die bislang verfugbaren Aldosteron-Antagonisten besitzen wie Aldosteron selbst eine Steroid-Grundstruktur. Begrenzt wird die Anwendbarkeit derartiger steroidaler Antagonisten durch ihre Wechselwirkungen mit den Rezeptoren anderer Steroid- hormone, die zum Teil zu erheblichen Nebenwirkungen wie Gynäkomastie und Impotenz und zum Abbrechen der Therapie führen [M.A. Zaman, S. Oparil, D.A. Calhoun, Nature Rev. Drug Disc. J_, 621-636 (2002)].
Die Anwendung wirkstarker, nicht-steroidaler und für den Mineralokorticoid-Rezeptor selektiver Antagonisten bietet die Möglichkeit, dieses Nebenwirkungsprofil zu umgehen und dadurch einen deutlichen Therapievorteil zu erzielen.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung neuer Verbindungen, die als selektive Mineralokorticoid-Rezeptor-Antagonisten für die Behandlung von Erkrankungen, insbesondere von kardiovaskulären Erkrankungen, eingesetzt werden können.
Koronarwirksame 4-Aryl-l,4-dihydropyridin-Derivate sind in DE 2 003 146 offenbart. Chromon- und Thiochromon-substituierte 1 ,4-Dihydropyridine werden in DE 3 311 003-A1 und DE 3 311 005-A1 als Cardiotonika und Antihypotonika beschrieben. In EP 0 223 744-A2 werden 2-Phenyl- chromon-substituierte 1 ,4-Dihydropyridindiester als Calcium-Antagonisten beansprucht. Über 4- Xanthenonyl-l,4-dihydropyridine mit Calcium-antagonistischer Aktivität wird in Arzneim. Forsch. 42 (6), 797-801 (1992) berichtet.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Verbindungen der allgemeinen Formel (I)
in welcher
R1 und R2 gleich oder verschieden sind und unabhängig voneinander für (Ci-C4)-Alkyl, Trifluor- methyl, Cyclopropyl oder Cyclobutyl stehen, R3 für (C3-C7)-Cycloalkyl, fiir (CrC6)-Alkyl, das mit (C3-C7)-Cycloalkyl oder ein- bis dreifach mit Fluor substituiert sein kann, oder für Phenyl, das mit Halogen, Cyano, (Ci-C4)-Alkyl, Trifluormethyl, (Ci-C4)-Alkoxy oder Trifluormethoxy substituiert sein kann, steht,
R4 für (C3-C7)-Cycloalkyl oder für (C,-C6)-Alkyl, das mit (C3-C7)-Cycloalkyl oder ein- bis dreifach mit Fluor substituiert sein kann, steht,
R5 für Wasserstoff, Halogen, Cyano, Nitro, Trifluormethyl, (CrC4)-Alkyl oder (C1-C4)- Alkoxy steht
und
R6 für Wasserstoff oder Fluor steht,
sowie ihre Salze, Solvate und Solvate der Salze.
Erfindungsgemäße Verbindungen sind die Verbindungen der Formel (I) und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, die von Formel (I) umfassten Verbindungen der nachfolgend genannten Formeln und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze sowie die von Formel (I) umfassten, nachfolgend als Ausführungsbeispiele genannten Verbindungen und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, soweit es sich bei den von Formel (I) umfassten, nachfolgend genannten Verbindungen nicht bereits um Salze, Solvate und Solvate der Salze handelt.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in Abhängigkeit von ihrer Struktur in stereoisomeren Formen (Enantiomere, Diastereomere) existieren. Die Erfindung umfasst deshalb die Enantiomeren oder Diastereomeren und ihre jeweiligen Mischungen. Aus solchen Mischungen von Enantiomeren und/oder Diastereomeren lassen sich die stereoisomer einheitlichen Bestandteile in bekannter Weise isolieren.
Sofern die erfindungsgemäßen Verbindungen in tautomeren Formen vorkommen können, umfasst die vorliegende Erfindung sämtliche tautomere Formen.
Als Salze sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung physiologisch unbedenkliche Salze der er- findungsgemäßen Verbindungen bevorzugt. Umfasst sind auch Salze, die für pharmazeutische Anwendungen selbst nicht geeignet sind, jedoch beispielsweise für die Isolierung oder Reinigung der erfindungsgemäßen Verbindungen verwendet werden können.
Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen Säureadditionssalze von Mineralsäuren, Carbonsäuren und Sulfonsäuren, z.B. Salze der Chlorwasser- stoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Methansulfonsäure, Ethan- sulfonsäure, Toluolsulfonsäure, Benzolsulfonsäure, Naphthalindisulfonsäure, Essigsäure, Trifluor- essigsäure, Propionsäure, Milchsäure, Weinsäure, Äpfelsäure, Zitronensäure, Fumarsäure, Maleinsäure und Benzoesäure.
Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen auch Salze üblicher Basen, wie beispielhaft und vorzugsweise Alkalimetallsalze (z.B. Natrium- und Kaliumsalze), Erdalkalisalze (z.B. Calcium- und Magnesiumsalze) und Ammoniumsalze, abgeleitet von Ammoniak oder organischen Aminen mit 1 bis 16 C-Atomen, wie beispielhaft und vorzugsweise Ethylamin, Diethylamin, Triethylamin, Ethyldiisopropylamin, Monoethanolamin, Diethanolamin, Triethanolamin, Dicyclohexylamin, Dimethylaminoethanol, Prokain, Dibenzylamin, N-Methyl- morpholin, Arginin, Lysin, Ethylendiamin und N-Methylpiperidin.
Als Solvate werden im Rahmen der Erfindung solche Formen der erfindungsgemäßen Verbindungen bezeichnet, welche in festem oder flüssigem Zustand durch Koordination mit Lösungsmittelmolekülen einen Komplex bilden. Hydrate sind eine spezielle Form der Solvate, bei denen die Koordination mit Wasser erfolgt. Als Solvate sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung Hydrate bevorzugt.
Außerdem umfasst die vorliegende Erfindung auch Prodrugs der erfindungsgemäßen Verbindungen. Der Begriff "Prodrugs" umfasst Verbindungen, welche selbst biologisch aktiv oder inaktiv sein können, jedoch während ihrer Verweilzeit im Körper zu erfindungsgemäßen Verbindungen umgesetzt werden (beispielsweise metabolisch oder hydrolytisch).
Im Rahmen der vorliegenden Erfindung haben die Substituenten, soweit nicht anders spezifiziert, die folgende Bedeutung:
(CVdV)-AIkVl und (CVCaVAlkyl stehen im Rahmen der Erfindung für einen geradkettigen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 6 bzw. 1 bis 4 Kohlenstoffatomen. Bevorzugt ist ein geradkettiger oder verzweigter Alkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen. Beispielhaft und vorzugsweise seien genannt: Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, n-Butyl, iso-Butyl, sec.-Butyl, tert.-Butyl, 1-Ethyl- propyl, n-Pentyl, iso-Pentyl und n-Hexyl.
(CVCTΪ-Cycloalkyl. (CrCY>Cvcloalkyl und (CrC2)-Cycloalkyl stehen im Rahmen der Erfindung für eine gesättigte monocyclische Cycloalkylgruppe mit 3 bis 7, 3 bis 5 bzw. 5 bis 7 Kohlenstoffatomen. Beispielhaft und vorzugsweise seien genannt: Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl, Cyclohexyl und Cycloheptyl. (C1-Ci)-AIkOXV steht im Rahmen der Erfindung für einen geradkettigen oder verzweigten Alkoxy- rest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen. Beispielhaft und vorzugsweise seien genannt: Methoxy, Ethoxy, n-Propoxy, Isopropoxy, n-Butoxy und tert.-Butoxy.
Halogen schließt im Rahmen der Erfindung Fluor, Chlor, Brom und Iod ein. Bevorzugt sind Fluor oder Chlor.
Wenn Reste in den erfindungsgemäßen Verbindungen substituiert sind, können die Reste, soweit nicht anders spezifiziert, ein- oder mehrfach substituiert sein. Im Rahmen der vorliegenden Erfindung gilt, dass für alle Reste, die mehrfach auftreten, deren Bedeutung unabhängig voneinander ist. Eine Substitution mit ein, zwei oder drei gleichen oder verschiedenen Substituenten ist bevor- zugt. Ganz besonders bevorzugt ist die Substitution mit einem Substituenten.
Bevorzugt sind Verbindungen der Formel (I), in welcher
R1 und R2 gleich oder verschieden sind und für Methyl oder Trifluormethyl stehen,
R3 für (C5-C7)-Cycloalkyl, für (CrC6)-Alkyl, das mit (C3-C5)-Cycloalkyl oder ein- bis dreifach mit Fluor substituiert sein kann, oder für Phenyl, das mit Fluor, Chlor, Trifluormethyl, Methyl, Isopropyl, tert.-Butyl oder Methoxy substituiert sein kann, steht,
R4 für (C3-C5)-Cycloalkyl oder für (C,-C4)-Alkyl, das mit (C3-C5)-Cycloalkyl oder ein- bis dreifach mit Fluor substituiert sein kann, steht,
R5 für Wasserstoff, Fluor, Chlor, Nitro oder Methyl steht
und
R6 für Wasserstoff oder Fluor steht,
sowie ihre Salze, Solvate und Solvate der Salze.
Besonders bevorzugt sind Verbindungen der Formel (I), in welcher
R1 für Methyl oder Trifluormethyl steht,
R2 für Methyl steht,
R3 für Methyl, Trifluormethyl, Isobutyl, Isopentyl, Cyclobutylmethyl, Cyclopentylmethyl, 2- (Cyclopropyl)-ethyl, 2-(Cyclobutyl)-ethyl, 2-(Cyclopentyl)-ethyl oder für Phenyl, das in para-Position mit Fluor, Trifluormethyl, Methyl oder Methoxy substituiert sein kann, steht, R4 für Methyl, Ethyl, 2,2,2-Trifluorethyl, n-Propyl, Isopropyl, tert.-Butyl, Cyclobutyl, Cyclo- pentyl, Cyclopropylmethyl oder Cyclobutylmethyl steht,
R5 für Wasserstoff, Fluor oder Chlor steht
und
R6 für Wasserstoff steht,
sowie ihre Salze, Solvate und Solvate der Salze.
Die in den jeweiligen Kombinationen bzw. bevorzugten Kombinationen von Resten im einzelnen angegebenen Reste-Definitionen werden unabhängig von den jeweiligen angegebenen Kombinationen der Reste beliebig auch durch Reste-Definitionen anderer Kombinationen ersetzt.
Ganz besonders bevorzugt sind Kombinationen von zwei oder mehreren der oben genannten Vorzugsbereiche.
Weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel (I), dadurch gekennzeichnet, dass man Verbindungen der Formel (H)
in welcher R5 und R6 jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben,
entweder
[A] in einem einstufigen Verfahren (Eintopf-Reaktion) mit einer Verbindung der Formel (IH)
in welcher R und R jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben, - - und einer Verbindung der Formel (FV)
in welcher R und R jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben, umsetzt
oder
[B] in einem einstufigen Verfahren (Eintopf-Reaktion) mit einer Verbindung der Formel (V)
in welcher R und R jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben,
und einer Verbindung der Formel (VI)
in welcher R und R jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben, umsetzt
oder
[C] in einem zweistufigen Verfahren zunächst mit einer Verbindung der Formel (HI) in Verbindungen der Formel (VII)
in welcher R1, R3, R5 und R6 jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben,
überfuhrt und diese dann in einem zweiten Schritt mit einer Verbindung der Formel (TV) umsetzt
oder
[D] in einem zweistufigen Verfahren zunächst mit einer Verbindung der Formel (VI) in Verbindungen der Formel (VIII)
in welcher R , R , R und R jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben,
überführt und diese dann in einem zweiten Schritt mit einer Verbindung der Formel (V) umsetzt,
die resultierenden Verbindungen der Formel (I) gegebenenfalls nach dem Fachmann bekannten Methoden in ihre Enantiomere und/oder Diastereomere trennt und die Verbindungen der Formel (I) gegebenenfalls mit den entsprechenden (i) Lösungsmitteln und/oder (ii) Basen oder Säuren in ihre Solvate, Salze und/oder Solvate der Salze überführt. - - .
In diesen Verfahrensvarianten können gegebenenfalls für die Gruppierung -C(O)-O-R4 zunächst auch leicht spaltbare Carbonsäureester eingesetzt werden, die dann nach dem Fachmann bekannten Methoden gespalten und mit den entsprechenden Alkoholen zu den Verbindungen der Formel (I) umgesetzt werden.
Die Umsetzungen nach Verfahren [A] und [B] sowie der zweiten Stufe der Verfahren [C] und [D] erfolgen im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, gegebenenfalls in Gegenwart einer Säure, in einem Temperaturbereich von +20°C bis zum Siedepunkt des Lösungsmittels bei Normaldruck.
Inerte Lösungsmittel hierfür sind beispielsweise Alkohole wie Methanol, Ethanol, n-Propanol, Iso- propanol, n-Butanol oder ter t.-Butanol, oder andere Lösungsmittel wie Acetonitril, Tetrahydro- furan, Dioxan, 1 ,2-Dimethoxyethan, Toluol oder Eisessig. Bevorzugt werden die Umsetzungen in Ethanol oder Isopropanol bei der jeweiligen Rückfluss-Temperatur unter Normaldruck durchgeführt.
Die Umsetzungen nach Verfahren [A] und [B] werden bevorzugt in Gegenwart einer Säure wie beispielsweise Essigsäure, Trifluoressigsäure, p-Toluolsulfonsäure, Methansulfonsäure oder Tetra- butylammoniumhydrogensulfat durchgeführt; besonders bevorzugt ist der Zusatz von Essigsäure.
Die Umsetzungen gemäß der ersten Stufe der Verfahren [C] und [D] erfolgen im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, gegebenenfalls in Gegenwart einer Base und/oder Säure, in einem Temperaturbereich von +200C bis zum Siedepunkt des Lösungsmittels bei Normaldruck.
Als inerte Lösungsmittel eignen sich hierbei beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Di- chlormethan, Trichlormethan, Tetrachlormethan, Trichlorethan oder 1 ,2-Dichlorethan, oder andere Lösungsmittel wie Acetonitril, Pyridin, Benzol, Toluol, Chlorbenzol oder Hexan. Bevorzugt erfolgen die Umsetzungen in Dichlormethan oder Toluol bei der jeweiligen Rückfluss-Temperatur unter Normaldruck.
Die Umsetzungen gemäß der ersten Stufe der Verfahren [C] und [D] werden bevorzugt in Gegen- wart einer Säure in Kombination mit Piperidin oder Pyridin als Base und/oder einem wasserentziehendem Mittel, wie beispielsweise Molekularsieb, durchgeführt. Als Säuren eignen sich beispielsweise Essigsäure oder p-Toluolsulfonsäure. Besonders bevorzugt ist eine Reaktionsführung unter Zusatz von Piperidiniumacetat in Verbindung mit Molekularsieb.
Die Verbindungen der Formel (H) sind literaturbekannt oder können in Analogie zu literatur- bekannten Verfahren beispielsweise durch Ozonolyse von Verbindungen der Formel (DC)
in welcher R5 und R6 jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben,
oder durch einfache oder doppelte Bromierung von Verbindungen der Formel (X)
in welcher R5 und R6 jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben,
zu Verbindungen der Formel (XI) bzw. (XII)
in welchen R5 und R6 jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben,
und nachfolgende Umsetzung mit N-Methylmorpholin-N-oxid hergestellt werden. Die Ausgangs- Verbindungen der Formeln (IX) und (X) sind literaturbekannt oder nach literaturbekannten Verfahren erhältlich [vgl. z.B. zu (IX) und der Umsetzung (DC) → (II): a) S.G. Jagadeesh et al., Synth. Commun. 3j. (10), 1547-1557 (2001); b) DE 3 311 005-A1 und dort zitierte Literatur; zu (X) und der Umsetzung (X) → (XI)/(XII) → (ET): a) P. Babin et al., Tetrahedron 37, 1131-1139 (1981); b) RJ. Bestmann, G. Schade, Chem. Lett., 997-998 (1983); c) JJ. Ubeda et al., Heterocycles 38, 2677-2690 (1994); d) RJ. Chambers et al., Bioorg. Med. Chem. LeU. 8, 3577-3582 (1998); siehe auch Schemata 1 und 3].
Die Verbindungen der Formeln (ID), (FV), (V) und (VI) sind kommerziell erhältlich, literaturbekannt oder können nach literaturbekannten Methoden hergestellt werden [zur Synthese von 1,4- Dihydropyridinen vgl. auch D. M. Stout, A. I. Meyers, Chem. Rev. 1982, 82, 223-243; H. Meier et al., Liebigs Ann. Chem. 1977, 1888; H. Meier et al., Liebigs Ann. Chem. 1977, 1895 und H. Meier et al., Liebigs Ann. Chem. 1976, 1762].
Die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen kann durch die folgenden Syntheseschemata veranschaulicht werden:
Schema 1
[a): Allylbromid, Kaliumcarbonat, cat. Kaliumiodid, Aceton, Rückfluss; b): 2300C, 4 h; c): Bis- (benzonitril)dichlorpalladium(II), Toluol, 1200C, 16 h; d): Acetylchlorid, Natriumhydrid, THF, 10- 25°C, 16 h; e): 1. Ozon, Dichlormethan, -600C, 30 min; 2. Dimethylsulfid; f): Eisessig, 2-Propanol, Rückfluss, 1O h].
Schema 2
[a): Eisessig, 2-Propanol, Rückfluss; b): Diastereomerentrennung durch Kristallisation; c): DBU, Ethylacetat, RT, 8 h; d): l,l'-Carbonyldiimidazol, THF, 5O0C, 6 h; e): Rückfluss, 3 h]. Schema 3
[a): n-Butyllithium, THF, 600C, 3 h; b): Essigsäureanhydrid, Pyridin, Rückfluss, 6 h; c): konz. H2SO4, HNO3, O0C, 1 h; d): Zinn(II)chlorid-Dihydrat, Ethylacetat, 7O0C; e): tert.-Butylnitrit, Kupfer(II)chlorid, Acetonitril, 65°C; f): N-Bromsuccinimid, AfflΝ, Tetrachlorkohlenstoff, Rückfluss; g): N-Methylmorpholin-N-oxid, Acetonitril, Rückfluss; h): Eisessig, 2-Propanol, Rückfluss].
Die erfindungsgemäßen Verbindungen wirken als Antagonisten des Mineralokorticoid-Rezeptors und zeigen ein nicht vorhersehbares, wertvolles pharmakologisches Wirkspektrum. Sie eignen sich daher zur Verwendung als Arzneimittel zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten bei Menschen und Tieren.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind geeignet für die Prophylaxe und/oder Behandlung von verschiedenen Erkrankungen und krankheitsbedingten Zuständen, insbesondere von Erkrankungen, die durch eine Erhöhung der Aldosteron-Konzentration im Plasma gekennzeichnet sind oder mit ihr einhergehen. Beispielsweise seien genannt: idiopathischer primärer Hyperaldosteronismus, Hyperaldosteronismus bei Nebennierenhyperplasie und/oder Nebennierenadenomen und/oder Nebennierencarzinomen, Hyperaldosteronismus bei Leberzirrhose, Hyperaldosteronismus bei Herzinsuffizienz sowie Hyperaldosteronismus bei essentieller Hypertonie.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind aufgrund ihres Wirkmechanismus ferner geeignet für die Prophylaxe des plötzlichen Herztodes bei Patienten, die unter einem erhöhten Risiko stehen, an einem plötzlichen Herztod zu versterben. Dies sind insbesondere Patienten, die z.B. an einer der folgenden Erkrankungen leiden: Hypertonie, Herzinsuffizienz, koronare Herzerkrankung, stabile und instabile Angina pectoris, myokardiale Ischämie, Myokardinfarkt, Schock, Arteriosklerose, atriale und ventrikuläre Arrhythmie, transitorische und ischämische Attacken, Hirnschlag, entzündliche kardiovaskuläre Erkrankungen, periphere und kardiale Gefäßerkrankungen, periphere Durchblutungsstörungen, pulmonale Hypertonie, Spasmen der Koronararterien und peripherer Arterien, Thrombosen, thromboembolische Erkrankungen sowie Vaskulitis.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können ferner verwendet werden für die Prophylaxe und/ oder Behandlung von Ödembildung wie zum Beispiel pulmonales Ödem, renales Ödem oder Herzinsuffizienz-bedingtes Ödem, und von Restenosen wie nach Thrombolysetherapien, percutan- transluminalen Angioplastien (PTA) und transluminalen Koronarangioplastien (PTCA), Herztransplantationen und Bypass-Operationen.
Weiterhin eignen sich die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Verwendung als Diuretikum und bei Elektrolytstörungen wie zum Beispiel Hyperkalzämie.
Außerdem können die erfindungsgemäßen Verbindungen eingesetzt werden für die Prophylaxe und/oder Behandlung von Diabetes mellitus und diabetischen Folgeerkrankungen wie z.B. Neuropathie und Nephropathie, von akutem und chronischem Nierenversagen sowie der chronischen Niereninsuffizienz.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prävention von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen. Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prävention von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Behandlung und/oder Prä- vention von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen, unter Verwendung einer wirksamen Menge von mindestens einer der erfϊndungsgemäßen Verbindungen.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können allein oder bei Bedarf in Kombination mit anderen Wirkstoffen eingesetzt werden. Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, enthaltend mindestens eine der erfindungsgemäßen Verbindungen und einen oder mehrere weitere Wirkstoffe, insbesondere zur Behandlung und/oder Prävention der zuvor genannten Erkrankungen. Als geeignete Kombinationswirkstoffe seien beispielhaft und vorzugsweise genannt: ACE-Inhibitoren, Renin-Inhibitoren, Angiotensin H-Rezeptor-Antagonisten, Beta-Blocker, Acetylsalicylsäure, Diuretika, Kalium-Supplements, Calcium-Antagonisten, Statine, Digitalis (Digoxin)- Derivate, Calcium-Sensitizer wie Levosimendan, Nitrate, Antikoagulantien, Antiarrhythmika, Vasodilatatoren sowie Thrombolytika.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, die mindestens eine erfindungsgemäße Verbindung, üblicherweise zusammen mit einem oder mehreren inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoffen enthalten, sowie deren Verwendung zu den zuvor genannten Zwecken.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können systemisch und/oder lokal wirken. Zu diesem Zweck können sie auf geeignete Weise appliziert werden, wie z.B. oral, parenteral, pulmonal, nasal, sublingual, lingual, buccal, rectal, dermal, transdermal, conjunctivae otisch oder als Implantat bzw. Stent.
Für diese Applikationswege können die erfϊndungsgemäßen Verbindungen in geeigneten Applika- tionsformen verabreicht werden.
Für die orale Applikation eignen sich nach dem Stand der Technik funktionierende, die erfindungsgemäßen Verbindungen schnell und/oder modifiziert abgebende Applikationsformen, die die erfindungsgemäßen Verbindungen in kristalliner und/oder amorphisierter und/oder gelöster Form enthalten, wie z.B. Tabletten (nicht-überzogene oder überzogene Tabletten, beispielsweise mit magensaftresistenten oder sich verzögert auflösenden oder unlöslichen Überzügen, die die Freisetzung der erfϊndungsgemäßen Verbindung kontrollieren), in der Mundhöhle schnell zerfallende Tabletten oder Filme/Oblaten, Filme/Lyophylisate, Kapseln (beispielsweise Hart- oder Weichgelatinekapseln), Dragees, Granulate, Pellets, Pulver, Emulsionen, Suspensionen, Aerosole oder Lösungen.
Die parenterale Applikation kann unter Umgehung eines Resorptionsschrittes geschehen (z.B. intravenös, intraarteriell, intrakardial, intraspinal oder intralumbal) oder unter Einschaltung einer Resorption (z.B. intramuskulär, subcutan, intracutan, percutan oder intraperitoneal). Für die parenterale Applikation eignen sich als Applikationsformen u.a. Injektions- und Infusionszubereitungen in Form von Lösungen, Suspensionen, Emulsionen, Lyophilisaten4 oder sterilen Pulvern.
Für die sonstigen Applikationswege eignen sich z.B. Inhalationsarzneiformen (u.a. Pulver- inhalatoren, Nebulizer), Nasentropfen, -lösungen oder -sprays, lingual, sublingual oder buccal zu applizierende Tabletten, Filme/Oblaten oder Kapseln, Suppositorien, Ohren- oder Augen- präparationen, Vaginalkapseln, wäßrige Suspensionen (Lotionen, Schüttelmixturen), lipophile Suspensionen, Salben, Cremes, transdermale therapeutische Systeme (z.B. Pflaster), Milch, Pasten, Schäume, Streupuder, Implantate oder Stents.
Bevorzugt sind die orale oder parenterale Applikation, insbesondere die orale Applikation.
Die erfϊndungsgemäßen Verbindungen können in die angeführten Applikationsformen überfuhrt werden. Dies kann in an sich bekannter Weise durch Mischen mit inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoffen geschehen. Zu diesen Hilfsstoffen zählen u.a. Trägerstoffe (beispielsweise mikrokristalline Cellulose, Lactose, Mannitol), Lösungsmittel (z.B. flüssige PoIy- ethylenglycole), Emulgatoren und Dispergier- oder Netzmittel (beispielsweise Natriumdodecyl- sulfat, Polyoxysorbitanoleat), Bindemittel (beispielsweise Polyvinylpyrrolidon), synthetische und natürliche Polymere (beispielsweise Albumin), Stabilisatoren (z.B. Antioxidantien wie beispielsweise Ascorbinsäure), Farbstoffe (z.B. anorganische Pigmente wie beispielsweise Eisenoxide) und Geschmacks- und/oder Geruchskorrigentien.
Im Allgemeinen hat es sich als vorteilhaft erwiesen, bei parenteraler Applikation Mengen von etwa 0.001 bis 1 mg/kg, vorzugsweise etwa 0.01 bis 0.5 mg/kg Körpergewicht zur Erzielung wirksamer Ergebnisse zu verabreichen. Bei oraler Applikation beträgt die Dosierung etwa 0.01 bis 100 mg/kg, vorzugsweise etwa 0.01 bis 20 mg/kg und ganz besonders bevorzugt 0.1 bis 10 mg/kg Körpergewicht.
Trotzdem kann es gegebenenfalls erforderlich sein, von den genannten Mengen abzuweichen, und zwar in Abhängigkeit von Körpergewicht, Applikationsweg, individuellem Verhalten gegenüber dem Wirkstoff, Art der Zubereitung und Zeitpunkt bzw. Intervall, zu welchem die Applikation erfolgt. So kann es in einigen Fällen ausreichend sein, mit weniger als der vorgenannten Mindestmenge auszukommen, während in anderen Fällen die genannte obere Grenze überschritten werden muss. Im Fallender Applikation größerer Mengen kann es empfehlenswert sein, diese in mehreren Einzelgaben über den Tag zu verteilen.
Die nachfolgenden Ausführungsbeispiele erläutern die Erfindung. Die Erfindung ist nicht auf die Beispiele beschränkt.
Die Prozentangaben in den folgenden Tests und Beispielen sind, sofern nicht anders angegeben, Gewichtsprozente; Teile sind Gewichtsteile. Lösungsmittelverhältnisse, Verdünnungsverhältnisse und Konzentrationsangaben von flüssig/flüssig-Lösungen beziehen sich jeweils auf das Volumen.
A. Beispiele
Abkürzungen und Akronyme:
Ac Acetyl
AIBN 2,2'-Azobis-2-methylpropannitril cat. katalytisch
CI chemische Ionisation (bei MS)
DBU 1 ,8-Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-en
DC Dünnschichtchromatographie
DMF Dimethylformamid
DMSO Dimethylsulfoxid d. Th. der Theorie (bei Ausbeute)
ESI Elektrospray-Ionisation (bei MS)
GC-MS Gaschromatographie-gekoppelte Massenspektroskopie h Stunde(n)
HPLC Hochdruck-, Hochleistungsflüssigchromatographie konz konzentriert
LC-MS Flüssigchromatographie-gekoppelte Massenspektroskopie min Minute(n)
MS Massenspektroskopie
NMR Kernresonanzspektroskopie
Rf Rententionsindex (bei DC)
R. Retentionszeit (bei HPLC)
RT Raumtemperatur
THF Tetrahydrofuran
LC-MS-, GC-MS- und HPLC-Methoden:
Methode 1 (LC-MS):
Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: Waters Alliance 2795; Säule: Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A → 2.5 min 30% A → 3.0 min 5% A → 4.5 min 5% A; Fluss: 0.0 min 1 ml/min → 2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 ml/min; Ofen: 500C; UV-Detektion: 210 nm. Methode 2 (LC-MS):
Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; Säule: Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A — > 2.5 min 30% A → 3.0 min 5% A -> 4.5 min 5% A; Fluss: 0.0 min 1 ml/min -».2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 ml/min; Ofen: 500C; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 3 (LC-MS):
Instrument: Micromass Quattro LCZ mit HPLC Agilent Serie 1100; Säule: Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A → 2.5 min 30% A → 3.0 min 5% A → 4.5 min 5% A; Fluss: 0.0 min 1 ml/min → 2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 ml/min; Ofen: 5O0C; UV-Detektion: 208-400 nm.
Methode 4 (HPLC. Enantiomerentrennung):
Säule: Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm, 250 mm x 20 mm; Eluent: iso-Hexan/2-Propanol 75:25 + 2.5% Diethylamin; Temperatur: 35°C; Fluss: 15 ml/min; UV-Detektion: 220 nm.
Methode 5 (HPLC, Enantiomerentrennung):
Säule: KBD 840, 250 mm x 46 mm, basierend auf dem chiralen Selektor Poly(N-methacryloyl-L- leucin-1-menthylamid); Eluent: iso-Hexan/2-Propanol 1 :9; Temperatur: 24°C; Fluss: 1 ml/min; UV-Detektion: 280 nm.
Methode 6 (GC-MS):
Instrument: Micromass GCT, GC 6890; Säule: Restek RTX-35MS, 30 m x 250 μm x 0.25 μm; konstanter Fluss mit Helium: 0.88 ml/min; Ofen: 600C; Inlet: 2500C; Gradient: 600C (0.30 min halten), 50°C/min → 1200C, 16°C/min → 2500C, 30°C/min → 3000C (1.7 min halten). Ausfϊihrungsbeispiele:
Sofern strukturell möglich und falls nicht anders angegeben, liegen die Alkene, die als Ausgangsoder Zwischenverbindungen verwendet werden, als £/Z-Gemische vor.
Allgemeine Vorschrift zur Herstellung von 3-Aminocrotonsäureestern:
Zu einer Lösung des entsprechenden Acetessigsäureesters in Toluol werden 2 Äquivalente Ammo- niumacetat und 0.9 Äquivalente Eisessig gegeben und das Gemisch am Wasserabscheider über Nacht unter Rückfluss gerührt. Nach dem Abkühlen wird die Reaktionslösung mit Essigsäureethyl- ester verdünnt und nacheinander mit Natriumhydrogencarbonat- und Natriumchlorid-Lösung ge- waschen. Die organische Phase wird über Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wird ohne weitere Aufreinigung eingesetzt.
Beispiel 1
Ethyl 5-acetyl-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyridin-3-carboxylat
Stufe Ia):
1 -[2-(Allyloxy)phenyl]ethanon
542 g (3.9 mol) 2-Hydroxyacetophenon werden mit 592 g (4.9 mol) Allylbromid, 1000 g (7.2 mol) Kaliumcarbonat und 13.2 g (79 mmol) Kaliumiodid in 2.4 Liter Aceton 24 h lang zum Rückfluss erhitzt. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur wird filtriert und das Lösungsmittel im Vakuum entfernt. Der Rückstand wird in Toluol gelöst und mit 10%-iger Natronlauge und Wasser gewaschen. Nach Einengen werden 689 g (98% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 2.68 (s, 3H), 4.68 (dd, 2H), 5.89 (dd, 2H), 6.09 (m, IH), 6.99 (dd, 2H), 7.44 (m, IH), 7.71 (d, IH).
Stufe Ib):
l-(3-Allyl-2-hydroxyphenyl)ethanon
160 g (0.9 mol) l-[2-(Allyloxy)phenyl]ethanon werden im Metallbad 4 h lang bei 230-2400C gerührt. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur wird das Produkt über einen Dünnschichtverdampfer bei 1400C und 0.4 mbar destilliert. Es werden 155 g (97% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 2.68 (s, 3H), 3.44 (d, 2H), 5.09 (m, 2H), 6.01 (m, IH), 6.85 (t, IH), 7.38 (dd, IH), 7.62 (dd, IH), 12.61 (s, IH).
Stufe Ic):
l-{2-Hydroxy-3-[(l£)-prop-l-en-l-yl]phenyl}ethanon
40 g (227 mmol) l-(3-Allyl-2-hydroxyphenyl)ethanon werden in 120 ml Toluol gelöst und mit 2.17 g (5.6 mmol) Bis(benzonitril)dichlorpalladium(II) versetzt. Die Reaktionsmischung wird über Nacht auf 1200C erhitzt. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur wird über Kieselgur filtriert und das Lösungsmittel im Vakuum entfernt. Es werden 20.9 g (95% d.Th.) der Titelverbindung erhalten, welche ohne weitere Reinigung in der nächsten Stufe umgesetzt wird.
LC-MS (Methode 1): R, = 2.36 min; [M+H]+ = 177
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 1.91 (dd, 3H), 2.63 (s, 3H), 6.32 (m, IH), 6.73 (dd, IH), 6.85 (t, IH), 7.59 (m, 2H), 12.74 (s, IH).
Stufe Id):
2-Methy l-8-[( 1 £)-prop- 1 -en- 1 -y l]-4H-chromen-4-on
12.52 g (313.2 mmol) 60%-iges Natriumhydrid (Suspension in Mineralöl) werden unter Argon bei 100C in 300 ml absolutem TΗF vorgelegt. Zu der Suspension werden 18.4 g (104.4 mmol) l-{2- Ηydroxy-3-[(l.E)-prop-l-en-l-yl]phenyl}ethanon langsam zugetropft. Nach 15 min werden 9 g (114.9 mmol) Acetylchlorid zugegeben. Die Reaktionsmischung wird über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Man hydrolysiert mit 300 ml Wasser und extrahiert mehrfach mit Ethylacetat. Nach Waschen der organischen Phase mit gesättigter Natriumchlorid-Lösung wird über Natriumsulfat getrocknet. Anschließend wird das Lösungsmittel im Vakuum entfernt. Der Rückstand wird in 200 ml Methanol aufgenommen und mit 50 ml 20%-iger Salzsäure 30 min auf 800C erhitzt. Anschließend wird das Lösungsmittel im Vakuum entfernt und der Rückstand mit 400 ml Wasser versetzt. Es wird mehrfach mit Dichlormethan extrahiert. Nach Trocknen der organischen Phase über Magnesiumsulfat wird das Lösungsmittel im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels Säulenchromatographie gereinigt (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol 98:2). Es werden 10.5 g (50.2% d. Th.) der Titelverbindung als gelbes Öl erhalten.
LC-MS (Methode 3): R, = 2.07 min; [M+H]+ = 201 1H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 1.98 (dd, 3H), 2.43 (s, 3H), 6.18 (s, IH), 6.40 (m, IH), 6.85 (dd, IH), 7.31 (t, IH), 7.72 (dd, IH), 8.05 (dd, IH).
Stufe Ie):
2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd
18.5 g (62.8 mmol) 2-Methyl-8-[(l£)-prop-l-en-l-yl]-4H-chromen-4-on werden in 400 ml Dichlor- methan gelöst und auf -6O0C abgekühlt. In die Reaktionslösung wird 30 min lang Ozon eingeleitet. Anschließend wird die Reaktionsmischung mit Dimethylsulfid versetzt. Nach Erwärmen auf Raumtemperatur wird das Lösungsmittel im Vakuum entfernt und der Rückstand mit wenig Methanol aufgeschlämmt. Nach Filtration wird der verbleibende Feststoff aus Diethylether umkristallisiert. Es werden 9.1 g (77.4% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.
LC-MS (Methode 1): R, = 1.31 min; [M+Η]+ = 189
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 2.48 (s, 3H), 6.27 (s, IH), 7.51 (m, IH), 8.21 (dd, IH), 8.46 (dd, IH), 10.67 (s, IH).
Stufe If):
Ethyl 5-acetyl-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyridin-3-carboxylat
100 mg (0.53 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd werden mit 93.1 mg (0.93 mmol) 2,4-Pentandion, 68.6 mg (0.53 mmol) 3-Aminocrotonsäureethylester und 31.9 mg (0.53 mmol) Essigsäure in 5 ml 2-Propanol gelöst und unter Argon 10 h lang zum Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präparativer ΗPLC gereinigt. Es werden 91 mg (45% d. Th.) der Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 1): R, = 1.71 min; [M+Η]+ = 382
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.01 (t, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 3.91 (q, 2H), 5.44 (s, IH), 6.23 (s, IH), 7.32 (t, IH), 7.58 (dd, IH), 7.79 (dd, IH), 8.98 (s, IH).
Das so erhaltene Racemat wird durch HPLC an chiraler Phase (Methode 4) in die Enantiomeren getrennt:
Enantiomer 1 : R, = 5.043 min;
Enantiomer 2: R1 = 5.433 min.
Eine Einkristall-Röntgenstrukturanalyse ergab für Enantiomer 2 eine (4R)-Konfiguration.
Beispiel 2
Cyclopentyl 5-acetyl-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyridin-3- carboxylat
100 mg (0.53 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd werden mit 93.1 mg (0.93 mmol) 2,4-Pentandion, 89.9 mg (0.53 mmol) 3-Aminocrotonsäurecyclopentylester und 31.9 mg (0.53 mmol) Essigsäure in 5 ml 2-Propanol gelöst und unter Argon 10 h lang zum Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präparativer HPLC gereinigt. Es werden 84 mg (37.5% d. Th.) der Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 1): R, = 2.02 min; [M+H]+ = 422
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 1.19 (m, IH), 1.39 (m, 2H), 1.56 (m, 4H), 1.75 (m, IH), 2.17 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 4.95 (m, IH), 5.38 (s, IH), 6.22 (s, IH), 7.32 (t, IH), 7.58 (dd, IH), 7.80 (dd, IH), 8.96 (s, IH).
Beispiel 3
Isopropyl 5-acetyl-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)- 1 ,4-dihydropyridin-3-carb- oxylat
100 mg (0.53 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd werden mit 93.1 mg (0.93 mmol) 2,4-Pentandion, 76.1 mg (0.53 mmol) 3-Aminocrotonsäureisopropylester und 31.9 mg (0.53 mmol) Essigsäure in 5 ml 2-Propanol gelöst und unter Argon 10 h lang zum Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präparativer ΗPLC gereinigt. Es werden 62 mg (29% d. Th.) der Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 1): R1 = 1.84 min; [M+Η]+ = 396
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 0.84 (d, 3H), 1.13 (d, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.40 (s, 3H), 4.76 (m, IH), 5.41 (s, IH), 6.22 (s, IH), 7.32 (t, IH), 7.58 (dd, IH), 7.80 (dd, IH), 8.94 (s, IH).
Beispiel 4
Methyl 5-acetyl-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyridin-3-carboxy- lat
100 mg (0.53 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd werden mit 93.1 mg (0.93 mmol) 2,4-Pentandion, 61.1 mg (0.53 mmol) 3-Aminocrotonsäuremethylester und 31.9 mg (0.53 mmol) Essigsäure in 5 ml 2-Propanol gelöst und unter Argon 10 h lang zum Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präparativer ΗPLC gereinigt. Es werden 77 mg (39% d. Th.) der Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 1): R, = 1.59 min; [M+Η]+ = 368
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 2.15 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.40 (s, 3H), 3.48 (s, 3H), 5.45 (s, IH), 6.22 (s, IH), 7.32 (t, IH), 7.54 (dd, IH), 7.80 (dd, IH), 9.01 (s, IH).
Beispiel 5
tert.-Butyl 5-acetyl-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyridin-3-carb- oxylat
100 mg (0.53 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd werden mit 93.1 mg (0.93 mmol) 2,4-Pentandion, 83.5 mg (0.53 mmol) 3-Aminocrotonsäure-te/"f.-butylester und 31.9 mg (0.53 mmol) Essigsäure in 5 ml 2-Propanol gelöst und unter Argon 10 h lang zum Rückfluß erhitzt. Das
Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand säulenchromatographisch gereinigt (Laufinittel: Dichlormethan/Methanol 95:5). Es werden 87 mg (40% d. Th.) der Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 1): R, = 1.97 min; [M+H]+ = 410
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 1.25 (s, 9H), 2.16 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.38 (s, 3H), 5.35 (s, IH), 6.22 (s, IH), 7.33 (t, IH), 7.56 (dd, IH), 7.81 (dd, IH), 8.88 (s, IH).
Beispiel 6
Cyclobutyl 5-acetyl-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyridin-3- carboxylat
100 mg (0.53 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd werden mit 93.1 mg (0.93 mmol) 2,4-Pentandion, 82.5 mg (0.53 mmol) 3-Aminocrotonsäurecyclobutylester und 31.9 mg (0.53 mmol) Essigsäure in 5 ml 2-Propanol gelöst und unter Argon 10 h lang zum Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präparativer ΗPLC gereinigt. Es werden 82 mg (37% d. Th.) der Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 1 ): R, = 1.92 min; [M+Η]+ = 408
1H-NMR (300 MHz, DMSO-Cl6): δ = 1.55 (m, 3H), 1.92 (m, IH), 2.04 (m, IH), 2.16 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.23 (m, IH), 2.27 (s, 3H), 2.40 (s, 3H), 4.78 (m, IH), 5.42 (s, IH), 6.23 (s, IH), 7.33 (t, IH), 7.61 (dd, IH), 7.83 (dd, IH), 8.98 (s, IH).
Das so erhaltene Racemat wird durch HPLC an chiraler Phase (Methode 5) in die Enantiomeren getrennt:
Enantiomer 1 : R1 = 5.627 min;
Enantiomer 2: R, = 7.264 min. Beispiel 7
Methyl 2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-5-(trifluoracetyl)-l,4-dihydropyridin-3- carboxylat
100 mg (0.53 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd werden mit 143.3 mg (0.93 mmol) 1,1,1-Trifluoracetylaceton, 61.1 mg (0.53 mmol) 3-Aminocrotonsäuremethylester und 31.9 mg (0.53 mmol) Essigsäure in 5 ml 2-Propanol gelöst und unter Argon 10 h lang zum Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präparativer ΗPLC gereinigt. Es werden 22 mg (9.8% d. Th.) der Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 3): R, = 2.22 min; [M+Η]+ = 422
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 2.26 (s, 3H), 2.38 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 5.29 (s, IH), 6.24 (s, IH), 7.34 (t, IH), 7.49 (dd, IH), 7.84 (dd, IH), 9.96 (s, IH).
Beispiel 8
Isopropyl 2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-5-(trifluoracetyl)-l,4-dihydropyridin- 3 -carboxylat
100 mg (0.53 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd werden mit 143.3 mg (0.93 mmol) 1,1,1-Trifluoracetylaceton, 76.09 mg (0.53 mmol) 3-Aminocrotonsäureisopropylester und 31.9 mg (0.53 mmol) Essigsäure in 5 ml 2-Propanol gelöst und unter Argon 10 h lang zum Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand säulenchromato- graphisch gereinigt (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol 95:5). Es werden 15 mg (6.2% d. Th.) der Titelverbindung als "gelber Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 2): R, = 2.49 min; [M+Η]+ = 450
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.00 (d, 3H), 1.15 (d, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.35 (s, 3H), 2.37 (s, 3H), 4.87 (m, IH), 5.54 (s, IH), 6.24 (s, IH), 7.34 (t, IH), 7.51 (dd, IH), 7.85 (dd, IH), 9.89 (s, IH).
Beispiel 9
Cyclobutyl 2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-5-(trifluoracetyl)-l,4-dihydropyri- din-3-carboxylat
100 mg (0.53 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd werden mit 143.3 mg (0.93 mmol) 1,1,1-Trifluoracetylaceton, 82.4 mg (0.53 mmol) 3-Aminocrotonsäurecyclobutylester und 31.9 mg (0.53 mmol) Essigsäure in 5 ml 2-Propanol gelöst und unter Argon 10 h lang zum Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand säulenchromato- graphisch gereinigt (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol 95:5). Es werden 8 mg (3.2% d. Th.) der Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 2): R, = 2.56 min; [M+Η]+ = 462
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 1.55 (m, IH), 1.69 (m, IH), 1.77 (m, IH), 1.92 (m, IH), 2.16 (m, IH), 2.24 (m, IH), 2.27 (s, 3H), 2.37 (s, 6H), 4.90 (m, IH), 5.55 (s, IH), 6.24 (s, IH), 7.35 (t, IH), 7.52 (dd, IH), 7.85 (dd, IH), 9.93 (s, IH). Beispiel 10
Ethyl 2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-5-(trifluoracetyl)-l,4-dihydropyridin-3- carboxylat
100 mg (0.53 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd werden mit 143.3 mg (0.93 mmol) 1,1,1-Trifluoracetylaceton, 68.6 mg (0.53 mmol) 3-Aminocrotonsäureethylester und 31.9 mg (0.53 mmol) Essigsäure in 5 ml 2-Propanol gelöst und unter Argon 10 h lang zum Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand säulenchromatographisch gereinigt (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol 95:5). Es werden 16 mg (7% d. Th.) der Titelver- bindung als gelber Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 2): R, = 2.38 min; [M+Η]+ = 436
1H-NMR (300 MHz, DMSO-(I6): δ = 1.09 (t, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.37 (s, 3H), 2.38 (s, 3H), 4.05 (q, 2H), 5.58 (s, IH), 6.24 (s, IH), 7.34 (t, IH), 7.48 (dd, IH), 7.84 (dd, IH), 9.93 (s, IH).
Beispiel 11
Ethyl 5-acetyl-2,6-dimethyl-4-(5-fluor-2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyridin-3- carboxylat
Stufe IIa):
5-Fluor-2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd
Die Titelverbindung wird in Analogie zu Beispiel 1, Stufe a-e, ausgehend von 4-Fluor-2-hydroxy- acetophenon erhalten.
LC-MS (Methode 3): R, = 1.47 min; [M+H]+ = 207
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 2.45 (t, 3H), 6.21 (s, IH), 7.15 (dd, IH), 8.20 (dd, IH), 10.57 (s, IH).
Stufe IIb):
3-[(5-Fluor-2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]pentan-2,4-dion
239 mg (1.16 mmol) 5-Fluor-2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd, 0.14 ml (1.28 mmol) 2,4-Pentandion, 0.085 ml (1.45 mmol) Essigsäure und 0.01 ml (0.12 mmol) Piperidin in 25 ml wasserfreiem Dichlormethan werden 3 h lang unter Rückfluß erhitzt. Nach Zugabe von 80 mg Pyridinium-para-Toluolsulfonat und weiteren 12 h Erhitzen unter Rückfluß wird die Reaktionslösung mit Wasser und mit Kochsalz-Lösung gewaschen und eingeengt. Man erhält 308.4 mg (91% d. Th.) eines roten Öls, das direkt weiter umgesetzt wird.
LC-MS (Methode 3): R, = 1.72 min; [M+Η]+ = 289.
Stufe Hc):
Ethyl 5-acetyl-2,6-dimethyl-4-(5-fluor-2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyridin-3- carboxylat
150 mg (0.52 mmol) 3-[(5-Fluor-2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]pentan-2,4-dion werden mit 33.6 mg (0.26 mmol) 3-Aminocrotonsäureethylester in 5 ml 2-Propanol gelöst und unter Argon 3 h lang unter Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand säulenchromatographisch gereinigt (Laufmittel: Ethylacetat/Cyclohexan 2:1). Es werden 50.1 mg (48% d. Th.) der Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten. LC-MS (Methode 3): R, = 1.82 min; [M+H]+ = 400
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 1.14 (t, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 2.37 (s, 3H), 2.38 (s, 3H), 4.07 (q, 2H), 5.53 (s, IH), 5.73 (s, IH), 6.11 (s, IH), 6.91 (t, IH), 7.49 (m, IH).
Beispiel 12
Cyclobutyl 5-acetyl-2,6-dimethyl-4-(5-fluor-2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l ,4-dihydropyri- din-3-carboxylat
150 mg (0.52 mmol) 3-[(5-Fluor-2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]pentan-2,4-dion werden mit 40.4 mg (0.26 mmol) 3-Aminocrotonsäurecyclobutylester in 5 ml 2-Propanol gelöst und unter Argon 3 h lang unter Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand säulenchromatographisch gereinigt (Laufmittel: Ethylacetat/Cyclohexan 2:1). Es werden 54.8 mg (50% d. Th.) der Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 3): R, = 1.97 min; [M+Η]+ = 426
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 1.18 (m, IH), 1.57 (m, 2H), 1.74 (m, 2H), 1.95 (m, IH), 2.22 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.36 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 4.91 (quin, IH), 5.52 (s, IH), 5.79 (s, IH), 6.11 (s, IH), 6.92 (dd, IH), 7.49 (m, IH).
Beispiel 13
Cyclobutyl 5-acetyl-2,6-dimethyl-4-(5,6-difluor-2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydro- pyridin-3-carboxylat
Stufe 13a):
5,6-Difluor-2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd
Die Titelverbindung wird in Analogie zu Beispiel 1, Stufe a-e, ausgehend von 4,5-Difluor-2- hydroxyacetophenon erhalten.
LC-MS (Methode 1): R, = 1.42 min; [M+Η]+ = 225
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 2.48 (s, 3H), 6.20 (s, IH), 8.03 (dd, IH), 10.56 (s, IH).
Stufe J 3b):
3-[(5,6-Difluor-2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]pentan-2,4-dion
250 mg (1.12 mmol) 5,6-Difluor-2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd, 0.14 ml (1.34 mmol) 2,4-Pentandion und 212.1 mg (1.12 mmol) para-Toluolsulfonsäure werden 10 h lang in 100 ml Toluol unter Rückfluß am Wasserabscheider erhitzt. Nach dem Abkühlen wird mit 100 ml Ethyl- acetat versetzt und das Reaktionsgemisch mit Wasser und mit Kochsalz-Lösung gewaschen. Nach Trocknen der organischen Phase und Einengen werden 269.7 mg (79% d. Th.) der Titelverbindung als beigefarbene Kristalle erhalten.
LC-MS (Methode 1): R, = 1.65 min; [M+Η]+ = 307
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 2.29 (s, 3H), 2.42 (s, 3H), 2.47 (s, 3H), 6.17 (s, IH), 7.51 (dd, IH), 7.75 (s, IH).
Stufe 13c):
Cyclobutyl 5-acetyl-2,6-dimethyl-4-(5,6-difluor-2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydro- pyridin-3-carboxylat
80 mg (0.26 mmol) 3-[(5,6-Difluor-2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]pentan-2,4-dion werden mit 40.4 mg (0.26 mmol) 3-Aminocrotonsäurecyclobutylester in 2 ml 2-Propanol gelöst und unter Argon 12 h lang unter Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand säulenchromatographisch gereinigt (Laufmittel: Ethylacetat/Cyclohexan 1 :2). Es werden 31.0 mg (27% d. Th.) der Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 2): R, = 2.24 min; [M+Η]+ = 444
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 1.21 (m, IH), 1.62 (m, 2H), 1.76 (m, 2H), 1.94 (m, IH), 1.94 (s, 3H), 1.97 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 4.96 (quin, IH), 5.54 (s, IH), 5.82 (s, IH), 6.11 (s, IH), 7.36 (dd, IH). Beispiel 14
Ethyl 5-benzoyl-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyridin-3-carboxy- lat
Stufe 14a):
2-[(2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]-l-phenylbutan-l,3-dion
227 mg (1.20 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd, 196 mg (1.20 mmol) 1-Phenyl- butan-l,3-dion, 17 μl (0.3 mmol) Essigsäure und 17 μl (0.3 mmol) Piperidin in 25 ml wasserfreiem Dichlormethan werden nach Zugabe von Molekularsieb 24 h lang unter Rückfluß erhitzt. Nach Abkühlung wird die Suspension abgesaugt und das Filtrat nacheinander mit gesättigter Natriumhydro- gencarbonat-Lösung und gesättigter Kochsalz-Lösung gewaschen. Die organische Phase wird über Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt. Man erhält 353 mg (88% d. Th.) eines gelben Feststoffs, der direkt weiter umgesetzt wird.
LC-MS (Methode 3): R, = 2.06 min; [M+Η]+ = 333. Stufe 14b):
Ethyl 5-benzoyl-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyridin-3-carboxy- lat
353 mg (1.06 mmol) 2-[(2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]-l-phenylbutan-l,3-dion werden mit 137 mg (1.06 mmol) 3-Aminocrotonsäureethylester in 5 ml Ethanol gelöst und unter Argon 24 h lang unter Rückfluß erhitzt. Die Reaktionslösung wird über präparative ΗPLC gereinigt. Nach Einengen der Produktfraktionen und Kristallisieren aus Ethylacetat werden 245 mg (52% d. Th.) der Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 3): R, = 2.16 min; [M+Η]+ = 444
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 0.91 (t, 3H), 1.73 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 2.38 (s, 3H), 3.87 (q, 2H), 5.56 (s, IH), 6.1 1 (s, IH), 7.33 (t, IH), 7.38-7.51 (m, 5H), 7.53 (t, IH), 7.77 (d, 2H), 8.95 (s, IH).
Beispiel 15
Cyclobutyl 5-benzoyl-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyridin-3- carboxylat
340 mg (1.02 mmol) 2-[(2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]-l-phenylbutan-l,3-dion werden mit 156 mg (1.8 mmol) S-Aminocrotonsäurecyclobutylester in 5 ml Ethanol gelöst und unter Argon 24 h lang unter Rückfluß erhitzt. Die Reaktionslösung wird über präparative ΗPLC ge- reinigt. Nach Einengen der Produktfraktionen und Kristallisieren aus Ethylacetat werden 206 mg (43% d. Th.) der Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 2): R, = 2.39 min; [M+Η]+ = 470
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.31-1.58 (m, 3H), 1.47 (m, 2H), 1.71 (s, 3H), 1.76 (m, IH), 1.98 (m, IH), 2.04 (s, 3H), 2.37 (s, 3H), 4.74 (m, IH), 5.56 (s, IH), 6.13 (s, IH), 7.34 (t, IH), 7.38- 7.51 (m, 5H), 7.53 (t, IH), 7.78 (d, 2H), 8.94 (s, IH).
Beispiel 16
n-Propyl 5-benzoyl-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyridin-3-carb- oxylat
250 mg (0.75 mmol) 2-[(2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]-l-phenylbutan-l,3-dion werden mit 143 mg (1.0 mmol) 3-Aminocrotonsäure-n-propylester in 5 ml Ethanol gelöst und unter Argon 24 h lang unter Rückfluß erhitzt. Die Reaktionslösung wird über präparative ΗPLC gerei- nigt. Nach Einengen der Produktfraktionen und Kristallisieren aus Ethylacetat werden 130 mg (38% d. Th.) der Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 2): R, = 2.35 min; [M+H]+ = 458
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.57 (t, 3H), 1.31 (m, 2H), 1.73 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 2.40 (s, 3H), 3.79 (t, 2H), 5.57 (s, IH), 6.10 (s, IH), 7.33 (t, IH), 7.38-7.51 (m, 5H), 7.54 (t, IH), 7.77 (d, 2H), 8.95 (s, IH).
Beispiel 17
Methyl S-benzoyl^ό-dimethyM-^-methyM-oxo^H-chromen-δ-yO-l^-dihydropyridin-S-carb- oxylat
250 mg (0.75 mmol) 2-[(2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]-l-phenylbutan-l,3-dion werden mit 1 16 mg (1.0 mmol) 3-Aminocrotonsäuremethylester in 5 ml Ethanol gelöst und unter Argon 24 h lang unter Rückfluß erhitzt. Die Reaktionslösung wird über präparative ΗPLC gereinigt. Nach Einengen der Produktfraktionen und Kristallisieren aus Ethylacetat werden 158 mg (49% d. Th.) der Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 3): R, = 2.05 min; [M+Η]+ = 430
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 1.71 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.38 (s, 3H), 3.44 (s, 3H), 5.52 (s, IH), 6.10 (s, IH), 7.33 (t, IH), 7.40 (m, 5H), 7.51 (m, IH), 7.78 (d, 2H), 8.97 (s, IH).
Beispiel 18
Ethyl 5-benzoyl-2-methyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-6-(trifluormethyl)-l ,4-dihydro- pyridin-3-carboxylat
Stufe 18a):
4,4,4-Trifluor-2-[(2-methy l-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]- 1 -pheny lbutan- 1 ,3-dion
Eine Lösung von 200 mg (1.06 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd in 20 ml Di- chlormethan wird mit 229.73 mg (1.06 mmol) 4,4,4-Trifluor-l-phenyl-l,3-butandion, 0.08 ml (1.33 mmol) Essigsäure und 0.01 ml (0.11 mmol) Piperidin versetzt und über Nacht am Wasserabscheider unter Rückfluss gerührt. Nach dem Abkühlen wird der Ansatz mit Dichlormethan verdünnt und mit gesättigter Natriumchlorid-Lösung gewaschen. Die organische Phase wird über Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. Es werden 474 mg (>100% d. Th.) des gewünschten Produkts als gelbes Öl erhalten, das roh weiter umgesetzt wird.
LC-MS (Methode 1): R, = 2.12 min;
MS (ESIpos): m/z = 404 [M+Η2O]+.
Stufe 18b):
Ethyl 5-benzoyl-2-methyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-6-(trifluormethyl)-l,4-dihydro- pyridin-3-carboxylat
Eine Lösung von 410 mg (1.06 mmol) 4,4,4-Trifluor-2-[(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)- methylen]-l-phenylbutan-l,3-dion in 10 ml 2-Propanol wird mit 137.3 mg (1.06 mmol) 3-Amino- crotonsäureethylester versetzt und 12 h lang unter Rückfluss gerührt. Nach Abkühlen wird das Reaktionsgemisch eingeengt, der Rückstand in 5 ml Essigsäure aufgenommen und erneut 12 h lang unter Rückfluss gerührt. Die Reaktionslösung wird eingeengt und der Rückstand über präparative ΗPLC gereinigt. Es werden 160.3 mg (30.3% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.
LC-MS (Methode 3): R, = 2.37 min
MS (ESIpos): m/z = 498 [M+Η]+
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 8.0 (d, IH), 7.58 (d, 4H), 7.47 (t, IH), 7.35 (t, IH), 7.32-7.22 (m, IH), 5.95 (s, IH), 5.78 (s, IH), 5.6 (s, IH), 3.95 (q, 2H), 2.58 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 0.96 (t, 3H).
Beispiel 19
Ethyl 5-acetyl-2-methyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-6-(trifluormethyl)-l,4-dihydropyri- din-3-carboxylat
Eine Lösung von 2.1 g (11.16 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd in 60 ml 2-Pro- panol wird mit 1.44 g (1 1.16 mmol) 3-Aminocrotonsäureethylester, 17.2 g (1 1 1.6 mmol) 1,1,1- Trifluor-2,4-pentandion und 0.96 ml (16.74 mmol) Essigsäure versetzt und 12 h lang unter Rück- fluss gerührt. Nach Abkühlen wird das Reaktionsgemisch eingeengt, der Rückstand in 30 ml Essig- säure aufgenommen und erneut 12 h lang unter Rückfluss gerührt. Nach Abkühlen wird der Reaktionsansatz eingeengt und der Rückstand über präparative ΗPLC gereinigt. Die Produktfraktionen werden eingeengt und nochmals über eine Analogix-Kartusche gereinigt (Laufmittel: Cyclohexan/ Essigsäureethylester 2:1). Es werden 0.212 g (4.4% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.
LC-MS (Methode 1): R, = 1.97 min
MS (ESIpos): m/z = 436 [M+Η]+
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 8.1 (d, IH), 7.53 (d, IH), 7.32 (t, IH), 6.2 (s, IH), 5.78 (s, IH), 5.55 (s, IH), 4.0 (q, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.4 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 1.07 (t, 3H).
Beispiel 20
n-Propyl (4/?)-5-acetyl-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyridin-3- carboxylat
Stufe 20a):
(35)-l-Benzyl-2,5-dioxopyrrolidin-3-yl (4/?)-5-acetyl-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chro- men-8-yl)- 1 ,4-dihydropyridin-3-carboxylat
1 g (5.32 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd wird in 25 ml 2-Propanol vorgelegt und mit 0.93 g (9.3 mmol) 2,4-Pentandion und 1.53 g (5.32 mmol) (35)-l-Benzyl-2,5-dioxopyrroli- din-3-yl (2£)-3-aminobut-2-enoat [Darstellung analog zu D. Alker et al., Eur. J. Med. Chem. 26 (9), 907-913 (1991), ausgehend von (35)-l-Benzyl-3-hydroxypyrrolidin-2,5-dion] über Nacht unter Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präpara- tiver ΗPLC gereinigt. Man erhält 950 mg (33% d. Th.) des gewünschten Produkts als 4RMS-DJa- stereomerengemisch.
Durch fraktionierte Kristallisation aus siedendem Ethanol werden anschließend die Diastereomere getrennt. Auf diese Weise werden 290 mg (10.5% d. Th.) der Titelverbindung als reines 4R-Dia- stereomer erhalten.
LC-MS (Methode 1): R, = 1.89 min; [M+Η]+ = 541
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 2.14 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 2.67 (dd, IH), 3.04 (dd, IH), 4.52 (q, 2H), 5.42 (s, IH), 5.49 (dd, IH), 6.19 (s, IH), 7.25 (m, 3H), 7.31 (m, 3H), 7.52 (dd, IH), 7.78 (dd, IH), 9.14 (s, IH).
Stufe 20b):
(4R)-5-Acetyl-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyridin-3-carbon- säure
300 mg (0.555 mmol) (35)-l-Benzyl-2,5-dioxopyrrolidin-3-yl (4/?)-5-acetyl-2,6-dimethyl-4-(2- methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyridin-3-carboxylat werden in 10 ml Ethylacetat gelöst und mit 295.7 mg (1.942 mmol) DBU versetzt. Man rührt 8 h bei Raumtemperatur. An- schließend wird Wasser zugesetzt und der pH-Wert mit 1 N Salzsäure auf pH 4-5 eingestellt. Die wässrige Phase wird abgetrennt und mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden mit gesättigter Natriumchlorid-Lösung gewaschen. Nach Trocknen über Magnesiumsulfat wird das Lösungsmittel im Vakuum entfernt. Das so erhaltene Produkt wird ohne Reinigung weiter umgesetzt.
LC-MS (Methode 1): R1 = 1.17 min; [M+Η]+ = 354.
Stufe 20c):
8-[(4i?)-3-Acetyl-5-(lH-imidazol-l-ylcarbonyl)-2,6-dimethyl-l,4-dihydropyridin-4-yl]-2-methyl- 4H-chromen-4-on
220 mg (0.623 mmol) (4i?)-5-Acetyl-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-di- hydropyridin-3-carbonsäure werden in 20 ml TΗF gelöst. Nach Zugabe von 202 mg (1.245 mmol) l,l'-Carbonyldiimidazol wird 6 h lang auf 5O0C erwärmt. Das Lösungsmittel wird danach im Vakuum entfernt und der Rückstand in Dichlormethan aufgenommen. Nach Waschen mit Wasser und gesättigter Natriumchlorid-Lösung wird die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präparativer HPLC gereinigt. Es werden 90 mg (35.8% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.
LC-MS (Methode 1): R, = 1.23 min; [M+H]+ = 403. -
Stufe 2Od):
n-Propyl (4Λ)-5-acetyl-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyridin-3- carboxylat
75 mg (0.186 mmol) 8-[(4i?)-3-Acetyl-5-(lH-imidazol-l-ylcarbonyl)-2,6-dimethyl-l,4-dihydro- pyridin-4-yl]-2-methyl-4H-chromen-4-on werden unter Argon in 1.5 ml 1-Propanol 3 h lang unter Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präparativer ΗPLC gereinigt. Es werden 34 mg (46% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.
LC-MS (Methode 1): R, = 1.79 min; [M+Η]+ = 396
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 0.66 (t, 3H), 1.42 (m, 2H), 2.17 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 3.86 (m, 2H), 5.45 (s, IH), 6.22 (s, IH), 7.32 (t, IH), 7.56 (dd, IH), 7.81 (dd, IH), 8.99 (s, IH).
Beispiel 21
n-Propyl 5-acetyl-4-(5-chlor-2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-2,6-dimethyl- 1 ,4-dihydropyridin- 3-carboxylat
Stufe 21a):
l-(2-Hydroxy-3-methylphenyl)-2-(triphenylphosphoranyliden)-ethanon
97.3 g (240.7 mmol) Methyltriphenylphosphoniumiodid werden unter Argon in 800 ml absolutem THF langsam mit 206.8 ml (330.9 mmol) einer 1.6 molaren n-Butyllithium-Lösung in n-Hexan versetzt. Man rührt 3 h bei Raumtemperatur. Anschließend werden zu der Reaktionsmischung 20.0 g (120.3 mmol) 2-Hydroxy-3-methylbenzoesäuremethylester in 200 ml absolutem THF getropft. Man rührt 3 h bei 600C nach. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur wird das ausgefallene Lithium- iodid abfiltriert. Das Filtrat wird im Vakuum eingeengt und der Rückstand aus Methanol umkristallisiert. Es werden 27 g (56% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.
LC-MS (Methode 2): R, = 2.12 min; [M+H]+ = 411.
Stufe 21b):
2,8-Dimethyl-4H-chromen-4-on
27.5 g (67 mmol) l-(2-Hydroxy-3-methylphenyl)-2-(triphenylphosphoranyliden)-ethanon werden in 200 ml absolutem Toluol zum Rückfluß erhitzt. Man tropft langsam 13.7 g (134 mmol) Essigsäureanhydrid und 11.1 g (141 mmol) Pyridin zu dieser Lösung. Die Reaktionsmischung wird an- schließend 6 h unter Rückfluß erhitzt. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur wird die Lösung mit gesättigter Natriumcarbonat-Lösung gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand säulenchromatographisch gereinigt (Laufmittel: Cyclohexan/Ethylacetat 7:3 → 4:6). Es werden 7.5 g (64% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.
LC-MS (Methode 3): R, = 1.99 min; [M+H]+ = 175
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 2.41 (s, 3H), 2.44 (s, 3H), 6.24 (s, 3H), 7.34 (t, IH), 7.63 (dd, IH), 7.83 (dd, IH).
Stufe 21c):
2,8-Dimethyl-5-nitro-4H-chromen-4-on
2 g (11.48 mmol) 2,8-Dimethyl-4H-chromen-4-on werden in 15 ml konzentrierter Schwefelsäure gelöst und bei 0°C mit 0.7 g (11.48 mmol) rauchender Salpetersäure versetzt, wobei die Temperatur 5°C nicht überschreiten sollte. Anschließend wird 1 h bei Raumtemperatur nachgerührt. Die Reaktionsmischung wird auf Eiswasser gegossen, wobei ein farbloser Feststoff ausfällt. Dieser wird abfϊltriert und mehrfach mit Wasser und eiskaltem Methanol gewaschen. Es werden 2.3 g (90.8% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.
LC-MS (Methode 2): R, = 1.74 min; [M+Η]+ = 220 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 2.41 (s, 3H), 2.48 (s, 3H), 6.34 (s, IH), 7.65 (d, IH), 7.80 (d, IH).
Stufe 2Id):
5-Amino-2,8-dimethyl-4H-chromen-4-on
1.78 g (8.12 mmol) 2,8-Dimethyl-5-nitro-4H-chromen-4-on werden mit 9.16 g (40.6 mmol) Zmn(II)chlorid-Dihydrat in 70 ml Ethylacetat über Nacht auf 700C erhitzt. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur wird die Reaktionsmischung mit gesättigter Natriumhydrogencarbonat-Lösung auf pH 9-10 gebracht. Nach Filtration über Kieselgur wird die organische Phase abgetrennt und die wässrige Phase mehrfach mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden mit gesättigter Natriumchlorid-Lösung gewaschen. Nach Trocknen über Natriumsulfat wird das Lösungsmittel im Vakuum entfernt. Es werden 1.5 g (99% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.
LC-MS (Methode 1): R. = 1.74 min; [M+Η]+ = 190
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 2.17 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 6.00 (s, IH), 6.42 (d, IH), 7.17 (br. s, 2H), 7.18 (d, IH).
Stufe 2Ie):
5-Chlor-2,8-dimethyl-4H-chromen-4-on
0.42 g (3.9 mmol) Kupfer(ü)chlorid und 0.45 g (3.96 mmol) terf.-Butylnitrit werden in 20 ml Acetonitril vorgelegt und auf 65°C erwärmt. Zu dieser Suspension werden langsam 0.5 g (2.63 mmol) 5-Amino-2,8-dimethyl-4H-chromen-4-on in 10 ml Acetonitril zugetropft. Man rührt 10 min bei 65°C, läßt die Reaktionsmischung dann auf Raumtemperatur abkühlen und setzt anschließend 5 ml konzentrierte Salzsäure zu. Nach Extraktion mit Diethylether werden die vereinigten organischen Phasen mit Wasser gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Nach Entfernen des Lösungsmittels im Vakuum wird das verbleibende Rohprodukt mittels präparativer HPLC gerei- nigt. Man erhält 0.27 g (50% d. Th.) der Titelverbindung.
LC-MS (Methode 3): R, = 2.02 min; [M+H]+ = 209
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 2.36 (s, 3H), 2.38 (s, 3H), 6.20 (s, IH), 7.35 (d, IH), 7.57 (d, IH).
Stufe 211):
5-Chlor-8-(dibrommethyl)-2-methyl-4H-chromen-4-on
120 mg (0.57 mmol) 5-Chlor-2,8-dimethyl-4H-chromen-4-on werden in 20 ml Tetrachlorkohlenstoff gelöst und mit 225 mg (1.26 mmol) N-Bromsuccinimid und 9.4 mg (0.06 mmol) 2,2'-Azobis- 2-methylpropannitril über Nacht unter Rückfluß erhitzt. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur wird der ausgefallene Feststoff abfiltriert und verworfen. Das Filtrat wird im Vakuum eingeengt und der Rückstand ohne Reinigung weiter umgesetzt.
LC-MS (Methode 1): R, = 2.25 min; [M+Η]+ = 365.
Stufe 2Ie):
5-Chlor-2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd
210 mg (0.57 mmol) 5-Chlor-8-(dibrommethyl)-2-methyl-4H-chromen-4-on werden mit 147 mg (1.2 mmol) N-Methylmorpholin-N-oxid unter Zusatz von Molekularsieb in 15 ml Acetonitril über Nacht unter Rückfluß erhitzt. Nach Filtration über Kieselgur wird das Lösungsmittel im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präparativer ΗPLC gereinigt. Es werden 22 mg (17% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.
LC-MS (Methode 3): R, = 1.71 min; [M+Η]+ = 223
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 2.54 (s, 3H), 6.30 (s, IH), 7.56 (d, IH), 8.07 (d, IH), 10.53 (s, IH).
Stufe 21h):
n-Propyl 5-acetyl-4-(5-chlor-2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-2,6-dimethyl-l,4-dihydropyridin- 3-carboxylat
40 mg (0.18 mmol) 5-Chlor-2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd werden mit 31 mg (0.18 mmol) 2,4-Pentandion, 25 mg (0.18 mmol) 3-Aminocrotonsäure-n-propylester und 11 mg (0.18 mmol) Essigsäure in 2 ml 2-Propanol gelöst und unter Argon 10 h lang unter Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präparativer ΗPLC gereinigt. Es werden 33 mg (42% d. Th.) der Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 2): R, = 2.71 min; [M+Η]+ = 430
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 0.69 (t, 3H), 1.43 (m, 2H), 2.16 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.35 (s, 3H), 3.86 (m, 2H), 5.41 (s, IH), 6.19 (s, IH), 7.35 (d, IH), 7.46 (d, IH), 8.98 (s, IH).
Das so erhaltene Racemat wird durch HPLC an chiraler Phase (Methode 4) in die Enantiomeren getrennt: Enantiomer 1 : R, = 3.16 min;
Enantiomer 2: R, = 3.84 min.
Beispiel 22
Ethyl 5-(4-methoxybenzoyl)-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyri- din-3-carboxylat
Stufe 22a):
1 -(4-Methoxyphenyl)-2-[(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]butan- 1 ,3-dion
250 mg (1.32 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd werden mit 281 mg (1.46 mmol) l-(4-Methoxyphenyl)butan-l,3-dion, 100 mg (1.66 mmol) Essigsäure und 11 mg (0.13 mmol) Piperidin in 5 ml Dichlormethan gelöst und unter Argon nach Zugabe von Molekularsieb 4 h lang unter Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird nach Filtration im Vakuum entfernt. Es werden 480 mg (99% d. Th.) der Titelverbindung erhalten, welche ohne weitere Reinigung in der nächsten Stufe eingesetzt wird. LC-MS (Methode 2): R, = 2.12 min; [M+H]+ = 363.
Stufe 22b):
Ethyl 5-(4-methoxybenzoyl)-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)- 1 ,4-dihydropyri- din-3-carboxylat
230 mg (0.63 mmol) l-(4-Methoxyphenyl)-2-[(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]butan- 1,3-dion werden mit 81.9 mg (0.63 mmol) 3-Aminocrotonsäureethylester in 5 ml 2-Propanol über Nacht unter Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präparativer ΗPLC gereinigt. Es werden 50 mg (16% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.
LC-MS (Methode 1): R, = 1.99 min; [M+Η]+ = 474
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 0.91 (t, 3H), 1.68 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.38 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 3.87 (q, 2H), 5.53 (s, IH), 6.11 (s, IH), 6.95 (d, 2H), 7.34 (t, IH), 7.45 (dd, IH), 7.47 (d, 2H), 7.77 (dd, IH), 8.82 (s, IH).
Beispiel 23
n-Propyl 5-(4-methoxybenzoy l)-2,6-dimethy l-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-y I)- 1 ,4-dihydro- pyridin-3-carboxylat
230 mg (0.63 mmol) l-(4-Methoxyphenyl)-2-[(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]butan- 1,3-dion werden mit 90 mg (0.63 mmol) 3-Aminocrotonsäure-n-propylester in 5 ml 2-Propanol über Nacht unter Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präparativer ΗPLC gereinigt. Es werden 74 mg (24% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.
LC-MS (Methode 1): R, = 2.11 min; [M+Η]+ = 488
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 0.56 (t, 3H), 1.31 (m, 2H), 1.68 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 3.80 (t, 2H), 5.54 (s, IH), 6.09 (s, IH), 6.95 (d, 2H), 7.34 (t, IH), 7.44 (dd, IH), 7.47 (d, 2H), 7.75 (dd, IH), 8.83 (s, IH).
Beispiel 24
Ethyl 5-(3-methoxybenzoyl)-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyri- din-3-carboxylat
Stufe 24a):
l-(3-Methoxyphenyl)-2-[(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]butan-l,3-dion
250 mg (1.32 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd werden mit 280.9 mg (1.46 mmol) l-(3-Methoxyphenyl)butan-l,3-dion, 99.7 mg (1.66 mmol) Essigsäure und 11.3 mg (0.13 mmol) Piperidin in 5 ml Dichlormethan gelöst und unter Argon nach Zugabe von Molekularsieb 4 h lang unter Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird nach Filtration im Vakuum entfernt. Es werden 479 mg (98% d. Th.) der Titelverbindung erhalten, welche ohne weitere Reinigung in der nächsten Stufe eingesetzt wird.
LC-MS (Methode 2): R, = 2.18 min; [M+Η]+ = 363.
Stufe 24b):
Ethyl 5-(3-methoxybenzoyl)-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyri- din-3-carboxylat
245 mg (0.67 mmol) l-(3-Methoxyphenyl)-2-[(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]butan-
1,3-dion werden mit 87 mg (0.67 mmol) 3-Aminocrotonsäureethylester in 5 ml 2-Propanol über Nacht unter Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präparativer ΗPLC gereinigt. Es werden 102 mg (32% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.
LC-MS (Methode 3): R, = 2.18 min; [M+Η]+ = 474 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.92 (t, 3H), 1.72 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 2.37 (s, 3H), 3.68 (s, 3H), 3.88 (q, 2H), 5.55 (s, IH), 6.12 (s, IH), 6.87 (m, IH), 7.00 (d, IH), 7.09 (dd, IH), 7.33 (m, 2H), 7.45 (dd, IH), 7.79 (dd, IH), 8.93 (s, IH).
Beispiel 25
n-Propyl 5-(3-methoxybenzoyl)-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l ,4-dihydro- pyridin-3-carboxylat
245 mg (0.67 mmol) l-(3-Methoxyphenyl)-2-[(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]butan- 1,3-dion werden mit 96 mg (0.67 mmol) 3-Aminocrotonsäure-n-propylester in 5 ml 2-Propanol über Nacht unter Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präparativer ΗPLC gereinigt. Es werden 94 mg (28% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.
LC-MS (Methode 3): R, = 2.30 min; [M+Η]+ = 488
1H-NMR (300 MHz, DMSO-dβ): δ = 0.58 (t, 3H), 1.31 (m, 2H), 1.72 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 2.40 (s, 3H), 3.68 (s, 3H), 3.80 (t, 2H), 5.57 (s, IH), 6.11 (s, IH), 6.91 (m, IH), 7.04 (d, IH), 7.1 (dd, IH), 7.34 (m, 2H), 7.44 (dd, IH), 7.77 (dd, IH), 8.95 (s, IH).
Beispiel 26
n-Propyl 5-(2-methoxybenzoyl)-2,6-dimethy l-4-(2-methy l-4-oxo-4H-chromen-8-y I)- 1 ,4-dihydro- pyridin-3-carboxylat
Stufe 26a):
1 -(2-Methoxyphenyl)-2-[(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]butan- 1 ,3-dion
250 mg (1.32 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd werden mit 280.9 mg (1.46 mmol) l-(2-Methoxyphenyl)butan-l,3-dion, 99.7 mg (1.66 mmol) Essigsäure und 11.3 mg (0.13 mmol) Piperidin in 5 ml Dichlormethan gelöst und unter Argon nach Zugabe von Molekularsieb 4 h lang unter Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird nach Filtration im Vakuum entfernt. Es werden 480 mg (99% d. Th.) der Titelverbindung erhalten, welche ohne weitere Reinigung in der nächsten Stufe eingesetzt wird.
LC-MS (Methode 2): R, = 2.08 min; [M+Η]+ = 363.
Stufe 26b):
n-Propy 1 5-(2-methoxybenzoy l)-2,6-dimethy l-4-(2-methy l-4-oxo-4H-chromen-8-yl)- 1 ,4-dihydro- pyridin-3 -carboxy lat
240 mg (0.62 mmol) l-(2-Methoxyphenyl)-2-[(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]butan-
1,3-dion werden mit 94 mg (0.62 mmol) 3-Aminocrotonsäure-n-propylester in 5 ml 2-Propanol über Nacht unter Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präparativer ΗPLC gereinigt. Es werden 108 mg (33% d. Th.) der Titel Verbindung erhalten.
LC-MS (Methode 3): R, = 2.21 min; [M+Η]+ = 488
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 0.64 (t, 3H), 1.37 (m, 2H), 1.89 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 3.50 (s, 3H), 3.81 (m, 2H), 5.43 (s, IH), 6.15 (s, IH), 6.85 (m, 2H), 6.99 (d, IH), 7.27 (m, 2H), 7.36 (m, IH), 7.78 (dd, IH), 8.99 (s, IH).
Beispiel 27
Cyclobutylmethyl 5-acetyl-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyridin- 3-carboxylat
Stufe 27a):
Cyclobutylmethyl 3-oxobutanoat
4.61 ml (35.17 mmol) 2,2,6-Trimeth"yl-l,3-dioxin-4-on und 3.32 ml (35.17 mmol) Cyclobutyl- methanol werden in 20 ml Toluol unter Argon 4 h lang unter Rückfluss gerührt. Das Lösungsmittel wird danach im Vakuum entfernt. Man erhält 7.51 g eines gelbes Öls, welches ohne weitere Reini- gung eingesetzt wird.
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 1.65-1.92 (m, 6H), 2.17 (s, 3H), 2.36 (m, IH), 3.60 (s, 2H), 4.03 (d, 2H).
Stufe 27b):
Cyclobutylmethyl 2-[(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]-3-oxobutanoat
700 mg (3.72 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd, 760 mg (4.46 mmol) Cyclobutylmethyl 3-oxobutanoat, 53 μl (0.93 mmol) Essigsäure und 92 μl (0.93 mmol) Piperidin in 25 ml wasserfreiem Dichlormethan werden nach Zugabe von 4Ä-Molekularsieb (1.5 g) 24 h lang unter Rückfluß erhitzt. Nach Abkühlung wird die Suspension abgesaugt und das Filtrat nachein- ander mit gesättigter Natriumhydrogencarbonat-Lösung und gesättigter Natriumchlorid-Lösung gewaschen. Die organische Phase wird über Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wird durch präparative ΗPLC gereinigt. Man erhält 962 mg (76% d. Th.) der Titelverbindung als /s/Z-Gemisch.
LC-MS (Methode 1): R, = 2.12 und 2.29 min; [M+Η]+ = 341. - -
Stufe 27c):
Cyclobutylmethyl 5-acetyl-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyridin- 3-carboxyIat
960 mg (2.82 mmol) Cyclobutylmethyl 2-[(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]-3-oxobu- tanoat werden mit 279 mg (2.82 mmol) 4-Aminopent-3-en-2-on in 10 ml Ethanol gelöst und unter Argon 24 h lang unter Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand über präparative ΗPLC gereinigt. Nach Einengen der Produktfraktionen und Kristallisieren aus Ethylacetat werden 532 mg (44% d. Th.) der Titelverbindung als weißer Feststoff erhal- ten.
LC-MS (Methode 2): R, = 2.26 min; [M+Η]+ = 422
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 1.51 (m, 2H), 1.62-1.88 (m, 4H), 2.17 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 2.41 (m, IH), 3.89 (m, 2H), 5.43 (s, IH), 6.22 (s, IH), 7.32 (t, IH), 7.54 (t, IH), 7.80 (d, 2H), 9.00 (s, IH).
Beispiel 28
(15)-l-Methylpropyl (4R)-5-acetyl-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-di- hydropyridin-3-carboxylat
Analog zu Beispiel 20, Stufe 2Od), wird die Titelverbindung aus 75 mg (0.186 mmol) 8-[(4/?)-3- Acetyl-S^lH-imidazol-l-ylcarbonyO^jό-dimethyl-l^-dihydropyridin-^yll^-methyMH-chro- men-4-on und 1.5 ml (20 mmol) (S)-(+)-2-Butanol erhalten.
Ausbeute: 56 mg (73% d. Th.)
LC-MS (Methode 1): R4 = 1.85 min; [M+Η]+ = 410
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.80 (m, 6H), 1.46 (m, 2H), 2.17 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 4.64 (m, IH), 5.43 (s, IH), 6.23 (s, IH), 7.32 (t, IH), 7.57 (dd, IH), 7.80 (dd, IH), 8.94 (s, IH).
Beispiel 29
(lR)-l-MethyIpropyl (4Ä)-5-acetyl-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yI)-l,4-di- hydropyridin-3-carboxylat
Analog zu Beispiel 20, Stufe 20d), wird die Titelverbindung aus 75 mg (0.186 mmol) S-[(4R)-3- Acetyl-5-(lH-imidazol-l -ylcarbonyl)-2,6-dimethyl-l ,4-dihydropyridin-4-yl]-2-methyl-4H-chro- men-4-on und 1.5 ml (20 mmol) (i?)-(-)-2-Butanol erhalten. Ausbeute: 36 mg (47% d. Th.)
LC-MS (Methode 1): R, = 1.81 min; [M+H]+ = 410
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 0.30 (m, 3H), 1.10 (d, 3H), 1.27 (m, 2H), 2.17 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.40 (s, 3H), 4.64 (m, IH), 5.43 (s, IH), 6.23 (s, IH), 7.32 (t, IH), 7.57 (dd, IH), 7.80 (dd, IH), 8.94 (s, IH).
Beispiel 30
2,2,2-Trifluor-l -methylethyl 5-acetyl-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l ,4-di- hydropy rid in-3 -carboxy lat
Stufe 30a):
2,2,2-Trifluor-l -methylethyl 3-oxobutanoat
0.3 g (2.6 mmol) l,l,l-Trifluorpropan-2-ol werden in 5 ml Tetrahydrofliran gelöst und mit 26 mg (0.23 mmol) Triethylamin versetzt. Es werden 0.26 g (3.1 mmol) Diketen in 5 ml Tetrahydrofuran zugetropft. Anschließend wird die Reaktionsmischung 4 h lang unter Rückfluss erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt. Das erhaltene Rohprodukt (0.4 g, 76% d. Th.) wird ohne weitere Reinigung in der nächsten Stufe eingesetzt.
Stufe 30b):
2,2,2-Trifluor- 1 -methylethy l-3-aminobut-2-enoat
2.4 g (12 mmol) 2,2,2-Trifluor-l-methylethyl 3-oxobutanoat werden mit 1.8 g (24.6 mmol) Ammo- niumacetat und 0.6 g (11 mmol) Essigsäure unter Zusatz von Molekularsieb 5 h lang auf 1100C erhitzt. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur wird die Reaktionsmischung mit Wasser versetzt und mit Ethylacetat extrahiert. Nach Waschen der organischen Phase mit Wasser und gesättigter Natriumchlorid-Lösung wird über Magnesiumsulfat getrocknet. Nach Filtration wird das Lösungsmittel im Vakuum entfernt. Das erhaltene Rohprodukt (1.5 g, 77% Reinheit, 77% d. Th.) wird ohne weitere Reinigung in der nächsten Stufe eingesetzt.
GC-MS (Methode 6): R, = 4.13 min; [M+H]+ = 198.
Stufe 30c):
2,2,2-Trifluor-l-methylethyl 5-acetyl-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-di- hydropyridin-3-carboxylat
100 mg (0.53 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd werden mit 93 mg (0.93 mmol) 2,4-Pentandion, 105 mg (0.53 mmol) 2,2,2-Trifluor-l-methylethyl-3-aminobut-2-enoat und 23 mg (0.37 mmol) Essigsäure in 5 ml 2-Propanol gelöst und unter Argon 16 h lang unter Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präparativer ΗPLC gereinigt, wobei die Diastereomeren getrennt werden. Es werden insgesamt 84 mg (32% d. Th.) der Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten.
Diastereomer 1 :
LC-MS (Methode 1): R, = 2.01 min; [M+Η]+ = 450 1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 0.98 (d, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.38 (s, 3H), 5.32 (m, IH), 5.44 (s, IH), 6.21 (s, IH), 7.30 (t, IH), 7.56 (dd, IH), 7.80 (dd, IH), 9.18 (s, IH).
Diastereomer 2:
LC-MS (Methode 1 ): R, = 2.05 min; [M+H]+ = 450
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.02 (d, 3H), 2.18 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 2.37 (s, 3H), 5.32 (m, IH), 5.40 (s, IH), 6.22 (s, IH), 7.33 (t, IH), 7.56 (dd, IH), 7.80 (dd, IH), 9.19 (s, IH).
Beispiel 31
Cyclopropylmethyl 5-acetyl-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyri- din-3-carboxylat
Stufe 31a):
Cyclopropylmethyl 3-oxobutanoat
1.84 ml (14.06 mmol) 2,2,6-Trimethyl-l,3-dioxin-4-on und 1.11 ml (14.06 mmol) Cyclopropyl- methanol werden in 15 ml Toluol unter Argon 4 h lang unter Rückfluss gerührt. Das Lösungsmittel wird danach im Vakuum entfernt. Man erhält 2.06 g eines gelben Öls, das ohne weitere Reinigung eingesetzt wird. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.26 (m, 2H), 0.51 (m, 2H), 1.08 (m, IH), 2.18 (s, 3H), 3.60 (s, 2H), 3.89 (d, 2H).
Stufe 31b):
Cyclopropylmethyl 2-[(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]-3-oxobutanoat
500 mg (2.65 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd, 798 mg (2.65 mmol) Cyclopropylmethyl 3-oxobutanoat, 38 μl (0.66 mmol) Essigsäure und 66 μl (0.66 mmol) Piperidin in 25 ml wasserfreiem Dichlormethan werden nach Zugabe von 4Ä-Molekularsieb (1.5 g) 24 h lang unter Rückfluß erhitzt. Nach Abkühlung wird die Suspension abgesaugt und das Filtrat nachein- ander mit gesättigter Natriumhydrogencarbonat-Lösung und gesättigter Natriumchlorid-Lösung gewaschen. Die organische Phase wird über Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wird durch präparative ΗPLC gereinigt. Man erhält 650 mg (74% d. Th.) der Titelverbindung als £/Z-Gemisch..
LC-MS (Methode 1): R1 = 1.91 und 2.07 min; [M+Η]+ = 327.
Stufe 31c):
Cyclopropylmethyl 5-acetyl-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyri- din-3-carboxylat
648 mg (1.98 mmol) Cyclopropylmethyl 2-[(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]-3-oxo- butanoat werden mit 196 mg (1.98 mmol) 4-Aminopent-3-en-2-on in 10 ml Ethanol gelöst und unter Argon 24 h lang unter Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand über präparative ΗPLC gereinigt. Nach Einengen der Produktfraktionen und Kristallisieren aus Ethylacetat werden 327 mg (41% d. Th.) der Titelverbindung als weißer Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 2): R4 = 2.17 min; [M+Η]+ = 408
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 0.03 (m, IH), 0.11 (m, IH), 0.36 (m, 2H), 0.92 (m, IH), 2.16 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 2.38 (s, 3H), 3.73 (d, 2H), 5.45 (s, IH), 6.21 (s, IH), 7.32 (t, IH), 7.59 (t, IH), 7.80 (d, 2H), 8.98 (s, IH).
Beispiel 32
Methyl 2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-5-(4-methylpentanoyl)-l,4-dihydropyri- din-3-carboxylat
Stufe 32a):
2-Amino-7-methyloct-2-en-4-on
3-Methyl-5-(3-methylbutyl)isoxazol (3.90 g, 25.5 mmol) [Synthese analog C. Kashima et al., Bull. Chem. Soc. Jpn. 46, 310-313 (1973)] wird in 80 ml Ethanol vorgelegt, Platin(IV)oxid-Katalysator
(390 mg, 1.72 mmol) zugegeben und der Ansatz anschließend unter Wasserstoff-Normaldruck für
2 h hydriert (leicht exotherme Reaktion). Der Katalysator wird abfiltriert, das Filtrat eingeengt und der Rückstand über eine Biotage-Kartusche 4OM (Laufrnittel: Isohexan/Essigsäureethylester 3:1) chromatographisch gereinigt. Die Produktfraktionen werden eingeengt. Man erhält als Rückstand ein Öl, das nach kurzer Zeit kristallisiert. Man trocknet im Vakuum und erhält 3.41 g (86% d. Th.) der Titelverbindung.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 9.71 (br. s, IH), 5.02 (s, IH), 4.95 (br. s, IH), 2.26 (m, 2H), 1.91 (s, 3H), 1.63-1.42 (m, 3H), 0.89 (d, 6H)
GC-MS (Methode 6): R, = 6.21 min; MS (CIpos): m/z = 156 [M+H]+.
Stufe 32b):
Methyl 2-[(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]-3-oxobutanoat
1 g (5.31 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd, 680 mg (5.84 mmol) Methyl 3-oxo- butanoat, 456 μl (7.97 mmol) Essigsäure und 105 μl (1.06 mmol) Piperidin in 50 ml wasserfreiem Dichlormethan werden 24 h lang am Wasserabscheider unter Rückfluss gerührt. Nach dem Abkühlen wird die Reaktionslösung mit Dichlormethan (100 ml) verdünnt und nacheinander mit ge- sättigter Natriumhydrogencarbonat-Lösung und gesättigter Natriumchlorid-Lösung gewaschen. Die organische Phase wird über Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wird aus Isopropanol umkristallisiert. Man erhält 1.43 g (94% d. Th.) der Titelverbindung als E/Z- Gemisch.
LC-MS (Methode 3): R, = 1.77 und 1.85 min; [M+Hf = 287
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 2.33 (s, 1.5H), 2.42 (s, 1.5H), 2.43 (s, 1.5H), 2.54 (s, 1.5H), 3.67 (m, 1.5H), 3.83 (s, 1.5H), 6.32 (s, 0.5H), 6.33 (s, 0.5H), 7.47 (t, 0.5H), 7.52 (t, 0.5H), 7.65 (dd, 0.5H), 7.65 (dd, 0.5H), 7.98 (s, 0.5H), 8.07 (dd, 0.5H), 8.08 (s, 0.5H), 8.09 (dd, 0.5H).
Stufe 32c):
Methyl 2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-5-(4-methylpentanoyl)-l,4-dihydropyri- din-3-carboxylat
50 mg (0.175 mmol) Methyl 2-[(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]-3-oxobutanoat werden mit 35 mg (0.227 mmol) 2-Amino-7-methyloct-2-en-4-on in 3 ml Ethanol gelöst und unter Argon 24 h lang unter Rückfluss erhitzt. Das Reaktionsgemisch wird über präparative ΗPLC gereinigt. Nach Einengen der Fraktionen werden 45.3 mg (61% d. Th.) der Titelverbindung als weißer Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 2): R, = 2.46 min; [M+Η]+ = 424
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 0.70 (d, 3H), 0.73 (d, 3H), 1.16 (m, IH), 1.22-1.38 (m, 2H), 2.18 (m, IH), 2.20 (s, 3H), 2.26 (m+s, 4H), 2.40 (s, 3H), 2.61 (m, IH), 3.49 (m, 3H), 5.49 (s, IH), 6.23 (s, IH), 7.33 (t, IH), 7.55 (dd, IH), 7.81 (dd, IH), 8.96 (s, IH). Beispiel 33
Methyl 5-(3-cyclobutylpropanoyl)-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydro- pyridin-3-carboxylat
Stufe 33a):
5-Amino- 1 -cyclobutylhex-4-en-3-on
Die Herstellung erfolgt analog zu Beispiel 32 (Stufe 32a) ausgehend von 5-(2-Cyclobutylethyl)-3- methylisoxazol [erhältlich analog zu C. Kashima et al., Bull. Chem. Soc. Jpn. 46, 310-313 (1973)].
GC-MS (Methode 6): R, = 7.82 min; MS (CIpos): m/z = 168 [M+H]+.
Stufe 33b):
Methyl 5-(3-cyclobutylpropanoy l)-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)- 1 ,4-dihydro- pyridin-3-carboxylat
50 mg (0.175 mmol) Methyl 2-[(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]-3-oxobutanoat werden mit 38 mg (0.227 mmol) 5-Amino-l-cyclobutylhex-4-en-3-on in 3 ml Ethanol gelöst und unter Argon 24 h lang unter Rückfluss erhitzt. Das Reaktionsgemisch wird über präparative ΗPLC ge- reinigt. Nach Einengen der Fraktionen werden 43 mg (56% d. Th.) der Titelverbindung als weißer Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 2): R, = 2.53 min; [M+Η]+ = 436
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.33-1.58 (m, 4H), 1.63-1.87 (m, 4H), 1.91-2.05 (m, 2H), 2.18 (m, IH), 2.20 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.40 (s, 3H), 3.49 (m, 3H), 5.47 (s, IH), 6.23 (s, IH), 7.33 (t, IH), 7.54 (dd, IH), 7.81 (dd, 2H), 8.95 (s, IH).
Beispiel 34
Methyl 5-(cyclobuty lacetyl)-2,6-dimethy l-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)- 1 ,4-dihydropyri- din-3-carboxylat
Stufe 34a):
4-Amino- 1 -cyclobuty lpent-3-en-2-on
Die Herstellung erfolgt analog zu Beispiel 32 (Stufe 32a) ausgehend von 5-(Cyclobutylmethyl)-3- methylisoxazol [erhältlich analog zu C. Kashima et al., Bull. Chem. Soc. Jpn. 46, 310-313 (1973)].
GC-MS (Methode 6): R, = 7.03 min; MS (CIpos): m/z = 154 [M+H]+.
Stufe 34b):
Methyl 5-(cyclobutylaceryl)-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyri- din-3-carboxylat
50 mg (0.175 mmol) Methyl 2-[(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]-3-oxobutanoat wer- den mit 34.7 mg (0.227 mmol) 4-Amino-l-cyclobutylpent-3-en-2-on in 3 ml Ethanol gelöst und unter Argon 24 h lang unter Rückfluss erhitzt. Das Reaktionsgemisch wird über präparative ΗPLC gereinigt. Nach Einengen der Fraktionen werden 36 mg (43% d. Th.) der Titelverbindung als weißer Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 2): R, = 2.38 min; [M+Η]+ = 422
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.38 (m, IH), 1.48 (m, IH), 1.57-1.79 (m, 2H), 1.85 (m, IH), 1.94 (m, IH), 2.18 (s, 3H), 2.27 (m+s, 4H), 2.41 (m+s, 4H), 2.80 (m, IH), 3.49 (s, 3H), 5.48 (s, IH), 6.23 (s, IH), 7.33 (t, IH), 7.55 (dd, IH), 7.81 (dd, IH), 8.94 (s, IH).
Beispiel 35
Methyl 2,6-dimethy l-5-(3 -methylbutanoy l)-4-(2-methy l-4-oxo-4H-chromen-8-y I)- 1 ,4-dihydropyri- din-3-carboxylat
Stufe 35a):
2-Amino-6-methylhept-2-en-4-on
Die Herstellung erfolgt analog zu Beispiel 32 (Stufe 32a) ausgehend von 4.50 g (32.3 mmol) 5- Isobutyl-3-methylisoxazol [erhältlich analog zu C. Kashima et al., Bull. Chem. Soc. Jpn. 46, 310- 313 (1973)].
Ausbeute: 4.02 g (88% d. Th.)
GC-MS (Methode 6): R, = 5.30 min; MS (CIpos): m/z = 142 [M+H]+.
Stufe 35b):
Methyl 2,6-dimethy l-5-(3 -methylbutanoyl)-4-(2-methy l-4-oxo-4H-chromen-8-yl)- 1 ,4-dihydropyri- din-3-carboxylat
50 mg (0.175 mmol) Methyl 2-[(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]-3-oxobutanoat werden mit 34.7 mg (0.227 mmol) 2-Amino-6-methylhept-2-en-4-on in 3 ml Ethanol gelöst und unter Argon 24 h lang unter Rückfluss erhitzt. Das Reaktionsgemisch wird über präparative ΗPLC gereinigt. Nach Einengen der Fraktionen werden 36 mg (43% d. Th.) der Titelverbindung als weißer Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 1): R, = 1.97 min; [M+Η]+ = 410
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 0.65 (d, 3H), 0.78 (d, 3H), 1.92 (m, IH), 2.18 (m+s, 4H), 2.27 (m+s, 4H), 2.41 (s, 3H), 2.57 (m, IH), 3.49 (m, 3H), 5.50 (s, IH), 6.24 (s, IH), 7.33 (t, IH), 7.54 (dd, IH), 7.81 (dd, IH), 8.95 (s, IH).
Beispiel 36
Methyl 5-(cyclopentylacety l)-2,6-dimethy l-4-(2-methy l-4-oxo-4H-chromen-8-y I)- 1 ,4-dihydropyri- din-3-carboxylat
Stufe 36a):
4-Amino- 1 -cyclopenty lpent-3-en-2-on
Die Herstellung erfolgt analog zu Beispiel 32 (Stufe 32a) ausgehend von 5-(Cyclopentylmethyl)-3- methylisoxazol [erhältlich analog zu C. Kashima et al., Bull. Chem. Soc. Jpn. 46, 310-313 (1973)].
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 1.07 (m, 2H), 1.50 (m, 4H), 1.67 (m, 2H), 1.81 (s, 3H), 2.11 (m, 3H), 4.87 (s, IH), 7.37 (br. s, IH), 9.51 (br. s, IH). Stufe 36b):
Methy 1 5-(cyclopenty lacety l)-2,6-dimethy l-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-y I)- 1 ,4-dihydropyri- din-3-carboxylat
50 mg (0.175 mmol) Methyl 2-[(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)methylen]-3-oxobutanoat werden mit 38 mg (0.227 mmol) 4-Amino-l-cyclopentylpent-3-en-2-on in 3 ml Ethanol gelöst und unter Argon 24 h lang unter Rückfluss erhitzt. Das Reaktionsgemisch wird über präparative ΗPLC gereinigt. Nach Einengen der Fraktionen werden 43 mg (55% d. Th.) der Titelverbindung als weißer Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 3): R, = 2.34 min; [M+Η]+ = 436
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 0.81 (m, IH), 0.95 (m, IH), 1.08 (m, IH), 1.32-1.71 (m, 5H), 2.03 (m, IH), 2.18 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.31 (m, IH), 2.41 (s, 3H), 2.69 (dd, IH), 3.48 (m, 3H), 5.50 (s, IH), 6.23 (s, IH), 7.33 (t, IH), 7.54 (dd, IH), 7.81 (dd, IH), 8.93 (s, IH).
Beispiel 37
Methyl 2,6-dimethyl-5-(4-methylbenzoyl)-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l ,4-dihydropyri- din-3-carboxylat
Stufe 37a):
3-Methyl-5-(4-methylphenyl)isoxazol
6.23 ml (57.39 mmol) Phenylisocyanat werden bei Raumtemperatur zu einer Lösung von 5 g (43.04 mmol) 1 -Ethinyl-4-methylbenzol, 1 ml (14.34 mmol) Nitroethan und 0.4 ml (2.87 mmol) Triethylamin in 100 ml Benzol getropft. Das Reaktionsgemisch wird danach 12 h lang unter Rück- fluss gerührt. Nach dem Abkühlen wird die Suspension mit Wasser (50 ml) versetzt und 4 h bei Raumtemperatur weitergerührt. Der Niederschlag wird abgesaugt und mit Benzol (10 ml) ge- waschen. Die organische Phase des Filtrats wird abgetrennt, mit Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wird säulenchromatographisch über Kieselgel gereinigt (Laufmittel: Cyclohexan/Essigsäureethylester 6: 1). Es werden 1.13 g (46% d. Th.) der Titelverbindung als farbloses Öl erhalten.
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 2.27 (s, 3H), 2.36 (s, 3H), 6.80 (s, IH), 7.33 (d, 2H), 7.71 (d, 2H).
Stufe 37b):
3-Amino- 1 -(4-methy lpheny l)but-2-en- 1 -on
3-Methyl-5-(4-methylphenyl)isoxazol (1 g, 5.77 mmol) wird in 20 ml Ethanol vorgelegt, Platin- (IV)oxid-Katalysator (100 mg) wird hinzugegeben und der Ansatz anschließend unter Wasserstoff- Normaldruck für 12 h hydriert. Der Katalysator wird abfiltriert und das Filtrat eingeengt. Man erhält 1.02 g (100% d. Th.) der Titelverbindung als weißen Feststoff.
LC-MS (Methode 1): R, = 1.61 min; [M+H]+ = 176.
Stufe 37c):
Methyl 2,6-dimethyI-5-(4-methylbenzoyl)-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyri- din-3-carboxylat
848 mg (4.50 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd werden mit 523 mg (4.50 mmol) Methyl 3-oxobutanoat, 790 mg (4.50 mmol) 3-Amino-l-(4-methylphenyl)but-2-en-l-on und 387 μl (6.72 mmol) Essigsäure in 10 ml 2-Propanol gelöst und unter Argon 30 h lang unter Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präparativer ΗPLC gereinigt. Es werden 961 mg (44% d. Th.) der Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 3): R, = 2.17 min; [M+Η]+ = 444
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 1.75 (s, 3H), 2.03 (s, 3H), 2.35 (s, 3H), 2.50 (s, 3H), 3.54 (m, 3H), 5.59 (s, IH), 5.70 (s, IH), 5.97 (s, IH), 7.11 (d, 2H), 7.27 (t, IH), 7.42 (d, 2H), 7.45 (dd, IH), 7.98 (dd, IH).
Beispiel 38
Ethy 1 2,6-dimethyl-5-(4-methylbenzoy l)-4-(2-methy l-4-oxo-4H-chromen-8-yl)- 1 ,4-dihydropyridin- 3-carboxylat
100 mg (0.53 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd werden mit 69 mg (0.53 mmol) Ethyl 3-oxobutanoat, 93 mg (0.53 mmol) 3-Amino-l-(4-methylphenyl)but-2-en-l-on und 3 μl (0.05 mmol) Essigsäure in 5 ml 2-Propanol gelöst und unter Argon 30 h lang unter Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präparativer ΗPLC gereinigt. Es werden 180 mg (74% d. Th.) der Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 1): R, = 2.12 min; [M+Η]+ = 458
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.90 (t, 3H), 1.69 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 2.35 (s, 3H), 2.38 (s, 3H), 3.86 (q, 2H), 5.54 (s, IH), 6.11 (s, IH), 7.21 (d, 2H), 7.33 (t, IH), 7.35 (d, 2H), 7.45 (dd, IH), 7.77 (dd, IH), 8.88 (s, IH).
Beispiel 39
Propyl 2,6-dimethyl-5-(4-methylbenzoyl)-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyri- din-3-carboxylat
100 mg (0.53 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd werden mit 76 mg (0.53 mmol) n-Propyl 3-oxobutanoat, 93 mg (0.24 mmol) 3-Amino-l-(4-methylphenyl)but-2-en-l-on und 3 μl (0.05 mmol) Essigsäure in 5 ml 2-Propanol gelöst und unter Argon 30 h lang unter Rückfluß er- hitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präparativer HPLC gereinigt. Es werden 173 mg (69% d. Th.) der Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 3): R, = 2.41 min; [M+H]+ = 472
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 0.57 (t, 3H), 1.30 (m, 2H), 1.69 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 2.36 (s, 3H), 2.40 (s, 3H), 3.79 (t, 2H), 5.55 (s, IH), 6.10 (s, IH), 7.21 (d, 2H), 7.34 (t, IH), 7.37 (d, 2H), 7.44 (dd, IH), 7.76 (dd, IH), 8.89 (s, IH).
Beispiel 40
Ethyl 2,6-dimethyl-5-(4-fluorbenzoyl)-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyridin-3- carboxylat
Stufe 40a):
3-Methyl-5-(4-fluorphenyl)isoxazol
2.41 ml (22.19 mmol) Phenylisocyanat werden bei Raumtemperatur zu einer Lösung von 2 g (16.64 mmol) 1 -Ethinyl-4-fluorbenzol, 0.4 ml (5.55 mmol) Nitroethan und 0.15 ml (1.11 mmol) Triethylamin in 40 ml Benzol getropft. Das Reaktionsgemisch wird anschließend 12 h lang unter Rückfluss gerührt. Nach dem Abkühlen wird die Suspension mit Wasser (20 ml) versetzt und 4 h bei Raumtemperatur weitergerührt. Der Niederschlag wird abgesaugt und mit Benzol (10 ml) gewaschen. Die organische Phase des Filtrats wird abgetrennt, mit Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wird säulenchromatographisch über Kieselgel gereinigt (Laufmittel: Cyclohexan/Essigsäureethylester 9:1). Es werden 0.62 g (63% d. Th.) der Titelverbindung als farbloses Öl erhalten.
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 2.28 (s, 3H), 6.87 (s, IH), 7.37 (t, 2H), 7.89 (dd, 2H).
Stufe 40b):
3-Amino-l -(4-fluorphenyl)but-2-en-l -on
3-Methyl-5-(4-fluorphenyl)isoxazol (620 mg, 3.49 mmol) wird in 16 ml Ethanol vorgelegt, Platin- (FV)oxid-Katalysator (62 mg) wird hinzugegeben und der Ansatz anschließend unter Wasserstoff- Normaldruck für 12 h hydriert. Der Katalysator wird abfiltriert und das Filtrat eingeengt. Man er- hält 573 mg (91% d. Th.) der Titelverbindung als weißen Feststoff.
LC-MS (Methode 3): R, = 1.63 min; [M+H]+ = 180.
Stufe 40c):
Ethyl 2,6-dimethyl-5-(4-fluorbenzoyl)-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyridin-3- carboxylat
210 mg (1.1 1 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd werden mit 145 mg (1.11 mmol) Ethyl 3-oxobutanoat, 200 mg (1.1 1 mmol) 3-Amino-l-(4-fluorphenyl)but-2-en-l-on und 6 μl (0.11 mmol) Essigsäure in 10 ml 2-Propanol gelöst und unter Argon 30 h lang unter Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präparativer ΗPLC gereinigt. Es werden 172 mg (33% d. Th.) der Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten. LC-MS (Methode 2): R, = 2.30 min; [M+H]+ = 462
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 0.91 (t, 3H), 1.73 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 2.38 (s, 3H), 3.86 (q, 2H), 5.52 (s, IH), 6.13 (s, IH), 7.25 (t, 2H), 7.33 (t, IH), 7.45 (dd, IH), 7.52 (dd, 2H), 7.78 (dd, IH), 8.96 (s, IH).
Beispiel 41
Propyl 2,6-dimethyl-5-(4-fluorbenzoyl)-4-(2-methy l-4-oxo-4H-chromen-8-yl)- 1 ,4-dihydropyridin- 3-carboxylat
110 mg (0.54 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd werden mit 78 mg (0.54 mmol) n-Propyl 3-oxobutanoat, 97 mg (0.54 mmol) 3-Amino-l-(4-fluorphenyl)but-2-en-l-on und 6 μl (0.05 mmol) Essigsäure in 10 ml 2-Propanol gelöst und unter Argon 30 h lang unter Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präparativer ΗPLC gereinigt. Es werden 228 mg (87% d. Th.) der Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 2): R, = 2.42 min; [M+Η]+ = 476
1H-NMR (300 MHz, DMSO-Cl6): δ = 0.57 (t, 3H), 1.31 (m, 2H), 1.73 (s, 3H), 2.03 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 3.79 (t, 2H), 5.54 (s, IH), 6.12 (s, IH), 7.26 (t, 2H), 7.34 (t, IH), 7.45 (dd, IH), 7.55 (dd, 2H), 7.78 (dd, IH), 8.97 (s, IH).
Beispiel 42
Ethyl 2,6-dimethyl-5-[4-(trifluormethyl)benzoyl]-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-di- hydropyridin-3-carboxylat
Stufe 42a):
3-Methyl-5-[4-(trifluormethyl)phenyl]isoxazol
4.25 ml (39.18 mmol) Phenylisocyanat werden bei Raumtemperatur zu einer Lösung von 5 g (29.38 mmol) l-Ethinyl-4-(trifluormethyl)benzol, 0.7 ml (9.79 mmol) Nitroethan und 0.27 ml (1.95 mmol) Triethylamin in 40 ml Benzol getropft. Das Reaktionsgemisch wird danach 12 h lang unter Rückfluss gerührt. Nach dem Abkühlen wird die Suspension mit Wasser (20 ml) versetzt und 4 h bei Raumtemperatur weitergerührt. Der Niederschlag wird abgesaugt und mit Benzol (10 ml) ge- waschen. Die organische Phase des Filtrats wird abgetrennt, mit Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wird säulenchromatographisch über Kieselgel gereinigt (Laufmittel: Cyclohexan/Essigsäureethylester 9:1). Es werden 1.83 g (82% d. Th.) der Titelverbindung als farbloses Öl erhalten.
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 2.31 (s, 3H), 7.08 (s, IH), 7.89 (d, 2H), 8.05 (d, 2H).
Stufe 42b):
3-Amino-l -[4-(trifluormethyl)phenyl]but-2-en-l -on
3-Methyl-5-[4-(trifluormethyl)phenyl]isoxazol (1.8 g, 7.92 mmol) wird in 20 ml Ethanol vorgelegt, Platin(TV)oxid-Katalysator (180 mg) wird hinzugegeben und der Ansatz anschließend unter Wasserstoff-Normaldruck für 12 h hydriert. Der Katalysator wird abfiltriert und das Filtrat eingeengt. Man erhält 1.72 g (94% d. Th.) der Titelverbindung als weißen Feststoff.
LC-MS (Methode 1): R, = 2.69 min; [M+H]+ = 230.
Stufe 42c):
Ethyl 2,6-dimethyl-5-[4-(trifluormethyl)benzoyl]-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-di- hydropyridin-3-carboxylat
164 mg (0.87 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd werden mit 1 13 mg (0.87 mmol) Ethyl 3-oxobutanoat, 200 mg (0.87 mmol) 3-Amino-l-[4-(trifluormethyl)phenyl]but-2-en-l-on und 5 μl (0.087 mmol) Essigsäure in 8 ml 2-Propanol gelöst und unter Argon 30 h lang unter Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präparativer ΗPLC gereinigt. Es werden 59 mg (13% d. Th.) der Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 3): R, = 2.47 min; [M+Η]+ = 512
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 0.91 (t, 3H), 1.80 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.36 (s, 3H), 3.87 (q, 2H), 5.52 (s, IH), 6.13 (s, IH), 7.33 (t, IH), 7.48 (dd, IH), 7.59 (t, 2H), 7.79 (m, 3H), 9.12 (s, IH).
Beispiel 43
Propyl 2,6-dimethyl-5-[4-(trifluormethyl)benzoyl]-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-di- hydropyridin-3-carboxylat
164 mg (0.87 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd werden mit 125 mg (0.87 mmol) n-Propyl 3-oxobutanoat, 200 mg (0.87 mmol) 3-Amino-l-[4-(trifluormethyl)phenyl]but-2-en-l-on und 5 μl (0.087 mmol) Essigsäure in 8 ml 2-Propanol gelöst und unter Argon 30 h lang unter Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präpara- tiver ΗPLC gereinigt. Es werden 60 mg (13% d. Th.) der Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 1): R, = 2.41 min; [M+Η]+ = 526
1H-NMR (300 MHz, DMSO-Cl6): δ = 0.57 (t, 3H), 1.31 (m, 2H), 1.81 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 3.80 (t, 2H), 5.53 (s, IH), 6.13 (s, IH), 7.33 (t, IH), 7.45 (dd, IH), 7.62 (t, 2H), 7.78 (dd, IH), 7.80 (d, 2H), 9.14 (s, IH).
Beispiel 44
Ethyl 2,6-dimethyl-5-[4-(tert.-butyl)benzoyl]-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)- 1 ,4-dihydro- pyridin-3-carboxylat
Stufe 44a):
3-Methyl-5-[4-(tert.-butyl)phenyl]isoxazol
4.57 ml (42.12 mmol) Phenylisocyanat werden bei Raumtemperatur zu einer Lösung von 5 g (31.59 mmol) l-Ethinyl-4-(te/7.-butyl)benzol, 0.75 ml (10.53 mmol) Nitroethan und 0.29 ml (2.10 mmol) Triethylamin in 100 ml Benzol getropft. Das Reaktionsgemisch wird danach 12 h lang unter Rückfluss gerührt. Nach dem Abkühlen wird die Suspension mit Wasser (50 ml) versetzt und 4 h bei Raumtemperatur weitergerührt. Der Niederschlag wird abgesaugt und mit Benzol (10 ml) gewaschen. Die organische Phase des Filtrats wird abgetrennt, mit Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wird säulenchromatographisch über Kieselgel gereinigt (Laufmittel: Cyclohexan/Essigsäureethylester 9:1). Es werden 989 mg (14% d. Th.) der Titelverbindung als farbloses Öl erhalten.
1H-NMR (300 MHz, DMSO-Cl6): δ = 1.30 (s, 9H), 2.27 (s, 3H), 6.81 (s, IH), 7.54 (d, 2H), 7.74 (d, 2H).
Stufe 44b):
3-Amino- 1 -[4-(tert. -buty l)pheny l]but-2-en- 1 -on
3-Methyl-5-[4-(ter/.-butyl)phenyl]isoxazol (900 mg, 4.18 mmol) wird in 20 ml Ethanol vorgelegt, Platin(rV)oxid-Katalysator (90 mg) wird hinzugegeben und der Ansatz anschließend unter Wasser- stoff-Normaldruck für 12 h hydriert. Der Katalysator wird abfiltriert und das Filtrat eingeengt. Man erhält 897 mg (99% d. Th.) der Titelverbindung als weißen Feststoff.
LC-MS (Methode 3): R, = 2.76 min; [M+H]+ = 218. Stufe 44c):
Ethyl 2,6-dimethyl-5-[4-(terΛ-butyl)benzoyl]-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydro- pyridin-3-carboxylat
100 mg (0.53 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd werden mit 69 mg (0.53 mmol) Ethyl 3-oxobutanoat, 115 mg (0.53 mmol) 3-Amino-l-[4-(tert.-butyl)phenyl]but-2-en-l-on und 5 μl (0.053 mmol) Essigsäure in 8 ml 2-Propanol gelöst und unter Argon 30 h lang unter Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präparativer ΗPLC gereinigt. Es werden 169 mg (64% d. Th.) der Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 3): R, = 2.65 min; [M+Η]+ = 500
1H-NMR (300 MHz, DMSO-(I6): δ = 0.88 (t, 3H), 1.27 (s, 9H), 1.74 (s, 3H), 1.97 (s, 3H), 2.38 (s, 3H), 3.84 (m, 2H), 5.58 (s, IH), 6.10 (s, IH), 7.33 (t, IH), 7.44 (s, 4H), 7.47 (dd, IH), 7.76 (dd, IH), 8.89 (s, IH).
Beispiel 45
Propyl 2,6-dimethyl-5-[4-(terf.-butyl)benzoyl]-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l ,4-dihydro- pyridin-3-carboxylat
100 mg (0.53 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd werden mit 76 mg (0.53 mmol) n-Propyl 3-oxobutanoat, 115 mg (0.53 mmol) 3-Amino-l-[4-(terΛ-butyl)phenyl]but-2-en-l-on und 5 μl (0.053 mmol) Essigsäure in 8 ml 2-Propanol gelöst und unter Argon 30 h lang unter Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand mittels präparativer ΗPLC gereinigt. Es werden 170 mg (62% d. Th.) der Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 2): R, = 2.83 min; [M+Η]+ = 514
1H-ISfMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.57 (t, 3H), 1.27 (m+s, 1 IH), 1.75 (s, 3H), 1.92 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 3.77 (m, 2H), 5.60 (s, IH), 6.08 (s, IH), 7.33 (t, IH), 7.46 (m, 5H), 7.76 (dd, IH), 8.92 (s, IH).
Beispiel 46
2,2,2-Trifluorethy 1 5-acety l-2,6-dimethyl-4-(2-methy l-4-oxo-4H-chromen-8-y I)- 1 ,4-dihydropyri- din-3-carboxylat
Stufe 46a):
2,2,2-Trifluorethyl 3-aminobut-2-enoat
5 g (50 mmol) 2,2,2-Trifluorethanol werden in 30 ml THF gelöst und mit 505 mg (5 mmol) Tri- ethylamin versetzt. Anschließend werden 5.04 g (60 mmol) Diketen in 10 ml THF zugetropft. Die Reaktionsmischung wird dann 4 h zum Rückfluss erhitzt. Danach werden 7.7 g (100 mmol) Ammoniumacetat, 2.8 ml (50 mmol) Essigsäure sowie 10 g 4Ä-Molekularsieb hinzugegeben und die Mischung 5 h lang auf HO0C erhitzt. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur wird die Reaktionsmischung mit Wasser versetzt und mit Ethylacetat extrahiert. Nach Waschen mit Wasser und gesättigter Natriumchlorid-Lösung wird die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand säulenchromatographisch an Kieselgel gereinigt (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol 95:5). Das erhaltene Produkt (8 g, 77% Reinheit, 67% d. Th.) wird ohne weitere Aufreinigung in der Folgestufe eingesetzt.
GC-MS (Methode 6): R, = 3.98 min; [M+H]+ = 183.
Stufe 46b):
2,2,2-Trifluorethyl 5-acetyl-2,6-dimethyl-4-(2-methyl-4-oxo-4H-chromen-8-yl)-l,4-dihydropyri- din-3-carboxylat
100 mg (0.53 mmol) 2-Methyl-4-oxo-4H-chromen-8-carbaldehyd werden mit 93.1 mg (0.93 mmol) 2,4-Pentandion, 97 mg (0.53 mmol) 2,2,2-Trifluorethyl 3-aminobut-2-enoat und 32 μl (0.55 mmol) Essigsäure in 5 ml Isopropanol gelöst und unter Argon 10 h lang unter Rückfluss erhitzt. Das Lösungsmittel wird anschließend im Vakuum entfernt und der Rückstand säulenchromatographisch an Kieselgel gereinigt (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol 95:5). Es werden 28 mg (12% d. Th.) der Titelverbindung als gelber Feststoff erhalten. H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 2.18 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.38 (s, 3H), 4.59 (m, H), 5.45 (s, IH), 6.21 (s, IH), 7.31 (t, IH), 7.55 (dd, IH), 7.80 (dd, IH), 9.22 (s, IH).
B. Bewertung der pharmakologischen Wirksamkeit
Abkürzungen:
DMEM Dulbecco's Modifϊed Eagle Medium
DNA Desoxyribo Nucleic Acid
FCS Fetal CaIf Serum
HEPES 4-(2-Hydroxyethyl)- 1 -piperazin-ethansulfonsäure
PCR Polymerase Chain Reaction
Tris Tris-(hydroxymethyl)-methylamin
Die vorteilhaften pharmakologischen Eigenschaften der erfindungsgemäßen Verbindungen können in folgenden Assays gezeigt werden:
1. Zellulärer in vitro-Test zur Bestimmung der inhibitorischen MR-Aktivität und MR- Selektivität gegenüber anderen Steroidhormon-Rezeptoren
Die Identifizierung von Antagonisten des humanen Mineralokorticoid-Rezeptors (MR) sowie die Quantifizierung der Wirksamkeit der hier beschriebenen Verbindungen erfolgt mit Hilfe einer rekombinanten Zelllinie. Die Zelle leitet sich ursprünglich von einer Ovarepithelzelle des Hamsters ab (Chinese Hamster Ovary, CHO Kl, ATCC: American Type Culture Collection, VA 20108, USA).
In dieser CHO Kl -Zelllinie wird ein etabliertes Chimärensystem verwendet, in dem die Liganden- Bindungsdomänen humaner Steroidhormon-Rezeptoren an die DNA-Bindungsdomäne des Hefe- Transkriptionsfaktors GAL4 fusioniert werden. Die so entstehenden GAL4-Steroidhormonrezep- tor-Chimären werden in den CHO-Zellen mit einem Reporterkonstrukt co-transfiziert und stabil exprimiert.
Klonierungen:
Zur Generierung der GAL4-Steroidhormonrezeptor-Chimären wird die GAL4-DNA-Bindungs- domäne (Aminosäuren 1-147) aus dem Vektor pFC2-dbd (Fa. Stratagene) mit den PCR-amplifi- zierten Liganden-Bindungsdomänen des Mineralokorticoid-Rezeptors (MR, Aminosäuren 734-
985), des Glucokorticoid-Rezeptors (GR, Aminosäuren 443-777), des Progesteron-Rezeptors (PR,
Aminosäuren 680-933) und des Androgen-Rezeptors (AR, Aminosäuren 667-919) in den Vektor pIRES2 (Fa. Clontech) kloniert. Das Reporterkonstrukt, welches fünf Kopien der GAL4-Binde- stelle, vorgeschaltet vor einem Thymidinkinase-Promotor enthält, führt zur Expression der Firefly-
Luciferase (Photinus pyralis) nach Aktivierung und Bindung der GAL4-Steroidhormonrezeptor- Chimären durch die jeweiligen spezifischen Agonisten Aldosteron (MR), Dexamethason (GR), Progesteron (PR) und Dihydrotestosteron (AR).
Testablauf:
Die MR-, GR-, PR- und AR-Zellen werden am Tag vor dem Test in Medium (Optimem, 2.5% FCS, 2 mM Glutamin, 10 mM HEPES) in 96- (oder 384- bzw. 1536-) Loch-Mikrotiterplatten ausplattiert und in einem Zellinkubator (96% Luftfeuchtigkeit, 5% v/v CO2, 37°C) gehalten. Am Testtag werden die zu prüfenden Substanzen in oben genanntem Medium aufgenommen und zu den Zellen hinzugegeben. Etwa 10 bis 30 Minuten nach Zugabe der Testsubstanzen werden die jeweiligen spezifischen Agonisten der Steroidhormon-Rezeptoren hinzugesetzt. Nach einer weiteren Inkubationszeit von 5 bis 6 Stunden wird die Luciferaseaktivität mit Hilfe einer Videokamera gemessen. Die gemessenen relativen Lichteinheiten ergeben in Abhängigkeit von der Substanzkonzentration eine sigmoide Stimulationskurve. Die Berechnung der IC5O- Werte erfolgt mit Hilfe des Computerprogramms GraphPad PRISM (Version 3.02).
Tabelle A zeigt die IC50- Werte (MR) repräsentativer Beispielverbindungen:
Tabelle A
2. In vitro-Test zur Bestimmung möglicher Bindungsaktivität am L-Typ Calcium-Kanal
Membranpräparationen des zerebralen Cortex von Wistar-Ratten dienen als Ausgangsmaterial für einen radioaktiven Bindungstest, der als Standardassay in der Literatur ausführlich beschrieben ist [Ehlert, F.J., Roeske, W.R., Itoga E., Yamamura, HJ., Life Sei. 30, 2191-2202 (1982); Gould, R.J., Murphy, K.M.M., Snyder, S.H., Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 79, 3656-3660] und von kommerziellen Anbietern (z.B. Fa. MDS Pharma Services) im Rahmen von Auftragsuntersuchungen verwendet wird. In diesem Bindungsassay werden Verdünnungsreihen der Testverbindungen in DMSO typischerweise für 90 Minuten bei 25°C in einem 50 mM TrisHCl-Puffer, pH 7.7, mit den Membranpräparationen und dem Tritium-markierten Liganden Nitrendipin (0.1 nM) inkubiert und die spezifische Bindung der Testverbindungen über Quantifizierung des spezifisch verdrängten, radioaktiv markierten Liganden bestimmt. IC50- Werte werden über eine nicht-lineare Regressionsanalyse ermittelt.
In diesem L-Typ Calcium-Kanal-Bindungsassay wird für einen klassischen Calcium-Antagonisten vom Dihydropyridin-Typ, wie z.B. Nitrendipin, ein ICso-Wert von 0.3 nM bestimmt, während untersuchte Beispiele der hier beschriebenen erfindungsgemäßen Verbindungen IC50- Werte in der Grössenordnung von 0.8 bis 5 μM und somit eine mindestens um den Faktor 1000 verminderte Affinität zum L-Typ Calcium-Kanal aufweisen. Verbindungen mit einer solchen geringen Resi- dualbindungsaffinität zum L-Typ Calcium-Kanal zeigen in vivo keine ausgeprägten hämodyna- mischen Effekte mehr, die über den L-Typ Calcium-Kanal vermittelt sind.
3. In vitro-Test zur funktionellen Charakterisierung möglicher Calcium-Kanal- agonistischer oder -antagonistischer Wirkungen von Testverbindungen: Kalium- chlorid-induzierte Stimulation der isolierten Kaninchenaorta
Die frisch isolierte Thoraxaorta von männlichen New Zeeland White-Kaninchen wird entfernt und vom umgebenden Gewebe gereinigt. Dann werden Aortenringe von 2 mm Länge unter einer Anfangsspannung von 4 g in 10 ml-Organbäder mit auf 37°C erwärmter Krebs-Henseleit-Lösung gebracht. Kontraktionen von 40 mM KCl (submaximale Kontraktion) und 15 mM KCl (minimale Kontraktion) werden viermal im Abstand von 45 Minuten ausgelöst, um die Gefäße zu trainieren und eine stabile Ruhespannung zu erzeugen. Jeder Kontraktion folgt eine Serie von elf Spülzyklen und eine Ruhezeit von 30 Minuten bei vorheriger Nachspannung. Nach den vier Vorläufen erfolgt ohne weitere Nachspannung jeweils zu Beginn der Ruhephase die Zugabe der Testsubstanzen in die Organbäder. Die Konzentration der Testsubstanzen erhöht sich bei den vier folgenden Kontraktionen jeweils um den Faktor 10. Zur Wirkungsberechnung wird die Differenz zwischen der Basisspannung und dem vierten Vorlauf-Kontraktionswert als 100% gesetzt, die folgenden Kontraktionsspitzen beziehen sich auf diesen Wert. Diese Versuchsdurchfuhrung ermöglicht die Differenzierung von Calcium-agonistischer (leichte Steigerung bei submaximaler Kontraktion, stärkere Steigerung bei minimaler Kontraktion) und Calcium-antagonistischer Substanzwirkung (Senkung bei submaximaler Kontraktion, stärkere Senkung bei minimaler Kontraktion).
In diesem funktionellen Assay am isolierten Organ wird für einen klassischen Calcium- Antagonisten vom Dihydropyridin-Typ, wie z.B. Nifedipin, «in ICso-Wert von 0.1 nM bis 0.4 nM gemessen, während untersuchte Beispiele der hier beschriebenen erfϊndungsgemäßen Verbindungen IC5o-Werte in der Grössenordnung von 4 bis 25 μM und somit eine mindestens um den Faktor 10000 verminderte Affinität zum L-Typ Calcium-Kanal aufweisen. Verbindungen mit einer solchen geringen Residualbindungsaffinität zum L-Typ Calcium-Kanal zeigen in vivo keine ausge- prägten hämodynamischen Effekte mehr, die über den L-Typ Calcium-Kanal vermittelt sind.
4. In vi'vo-Test zum Nachweis der kardiovaskulären Wirkung: Diurese-Untersuchungen an wachen Ratten in Stoffwechselkäfigen
Wistar-Ratten (250-350 g Körpergwicht) werden mit freiem Zugang zu Futter (Altromin) und Trinkwasser gehalten. Ab ca. 72 Stunden vor Versuchsbeginn erhalten die Tiere anstelle des nor- malen Futters ausschließlich Kochsalz-reduziertes Futter mit einem Gehalt von 0.02% Natriumchlorid (ssniff R/M-H, 10 mm mit 0.02% Na, S0602-E081, Fa. ssniff Spezialdiäten GmbH, D- 59494 Soest). Während des Versuches werden die Tiere für ca. 24 Stunden einzeln in für Ratten dieser Gewichtsklasse geeigneten Stoffwechselkäfigen (Fa. Tecniplast Deutschland GmbH, D- 82383 Hohenpeißenberg) mit freiem Zugang zu Kochsalz-reduziertem Futter und Trinkwasser gehalten. Am Versuchsbeginn wird den Tieren die zu prüfende Substanz in einem Volumen von 0.5 ml/kg Körpergewicht eines geeigneten Lösemittels mittels einer Schlundsonde in den Magen verabreicht. Als Kontrolle dienende Tiere erhalten nur Lösemittel. Kontrollen und Substanz- testungen werden am selben Tag parallel durchgeführt. Kontrollgruppen und Substanz-Dosisgruppen bestehen aus jeweils 3 bis 6 Tieren. Während des Versuchs wird der von den Tieren ausgeschiedene Urin kontinuierlich in einem Auffangbehälter am Käfigboden gesammelt. Für jedes Tier wird gesondert das Urinvolumen pro Zeiteinheit bestimmt und die Konzentration der im Urin ausgeschiedenen Natrium- bzw. Kalium-Ionen mittels flammenphotometrischer Standardmethoden gemessen. Aus den Messwerten wird der Natrium/Kalium-Quotient als ein Maß für die Substanzwirkung berechnet. Die Messintervalle betragen typischerweise den Zeitraum bis zu 8 Stunden nach Versuchsbeginn (Tagintervall) und den Zeitraum von 8 bis 24 Stunden nach Versuchsbeginn (Nachtintervall). In einer abgewandelten Versuchsanordnung wird der Urin während des Tagintervalls im Abstand von zwei Stunden gesammelt und gemessen. Um eine hierfür ausreichende Urinmenge zu erhalten, wird den Tieren zu Versuchsbeginn und dann im Abstand von zwei Stunden per Schlundsonde eine definierte Menge Wasser zugeführt. C. Ausführungsbeispiele für pharmazeutische Zusammensetzungen
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können folgendermaßen in pharmazeutische Zubereitungen überfuhrt werden:
Tablette;
Zusammensetzung:
100 mg der erfindungsgemäßen Verbindung, 50 mg Lactose (Monohydrat), 50 mg Maisstärke (nativ), 10 mg Polyvinylpyrrolidon (PVP 25) (Fa. BASF, Ludwigshafen, Deutschland) und 2 mg Magnesiumstearat.
Tablettengewicht 212 mg. Durchmesser 8 mm, Wölbungsradius 12 mm.
Herstellung:
Die Mischung aus erfindungsgemäßer Verbindung, Lactose und Stärke wird mit einer 5%-igen Lösung (m/m) des PVPs in Wasser granuliert. Das Granulat wird nach dem Trocknen mit dem Magnesiumstearat 5 Minuten gemischt. Diese Mischung wird mit einer üblichen Tablettenpresse verpresst (Format der Tablette siehe oben). Als Richtwert für die Verpressung wird eine Presskraft von 15 kN verwendet.
Oral applizierbare Suspension;
Zusammensetzung:
1000 mg der erfindungsgemäßen Verbindung, 1000 mg Ethanol (96%), 400 mg Rhodigel® (Xanthan gum der Fa. FMC, Pennsylvania, USA) und 99 g Wasser.
Einer Einzeldosis von 100 mg der erfindungsgemäßen Verbindung entsprechen 10 ml orale Suspension.
Herstellung:
Das Rhodigel wird in Ethanol suspendiert, die erfindungsgemäße Verbindung wird der Suspension zugefügt. Unter Rühren erfolgt die Zugabe des Wassers. Bis zum Abschluß der Quellung des Rhodigels wird ca. 6 h gerührt. Oral applizierbare Lösung:
Zusammensetzun g:
500 mg der erfindungsgemäßen Verbindung, 2.5 g Polysorbat und 97 g Polyethylenglycol 400. Einer Einzeldosis von 100 mg der erfindungsgemäßen Verbindung entsprechen 20 g orale Lösung.
Herstellung:
Die erfindungsgemäße Verbindung wird in der Mischung aus Polyethylenglycol und Polysorbat unter Rühren suspendiert. Der Rührvorgang wird bis zur vollständigen Auflösung der erfindungsgemäßen Verbindung fortgesetzt.
i.v.-Lösung:
Die erfindungsgemäße Verbindung wird in einer Konzentration unterhalb der Sättigungslöslichkeit in einem physiologisch verträglichen Lösungsmittel (z.B. isotonische Kochsalzlösung, Glucose- lösung 5% und/oder PEG 400-Lösung 30%) gelöst. Die Lösung wird steril filtriert und in sterile und pyrogenfreie Injektionsbehältnisse abgefüllt.

Claims

Patentansprüche
1. Verbindung der Formel (I)
in welcher
R1 und R2 gleich oder verschieden sind und unabhängig voneinander für (Ci-C4)-Alkyl, Trifluormethyl, Cyclopropyl oder Cyclobutyl stehen,
R3 für (C3-C7)-Cycloalkyl, für (C,-C6)-Alkyl, das mit (C3-C7)-Cycloalkyl oder ein- bis dreifach mit Fluor substituiert sein kann, oder für Phenyl, das mit Halogen, Cyano, (Ci-C4)-Alkyl, Trifluormethyl, (Ci-C4)-Alkoxy oder Trifluormethoxy substituiert sein kann, steht,
R4 für (C3-C7)-Cycloalkyl oder für (Ci-C6)-AIkyl, das mit (C3-C7)-Cycloalkyl oder ein- bis dreifach mit Fluor substituiert sein kann, steht,
R5 für Wasserstoff, Halogen, Cyano, Nitro, Trifluormethyl, oder (Cr C4)-Alkoxy steht
und
R6 für Wasserstoff oder Fluor steht,
sowie ihre Salze, Solvate und Solvate der Salze.
2. Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 1 , in welcher
R1 und R2 gleich oder verschieden sind und für Methyl oder Trifluormethyl stehen, R3 für (C5-C7)-Cycloalkyl, für (CrC6)-Alkyl, das mit (C3-C5)-Cycloalkyl oder ein- bis dreifach mit Fluor substituiert sein kann, oder für Phenyl, das mit Fluor, Chlor, Trifluormethyl, Methyl, Isopropyl, tert.-Butyl oder Methoxy substituiert sein kann, steht,
R4 für (C3-C5)-Cycloalkyl oder für (CrC4)-Alkyl, das mit (C3-C5)-Cycloalkyl oder ein- bis dreifach mit Fluor substituiert sein kann, steht,
R5 für Wasserstoff, Fluor, Chlor, Nitro oder Methyl steht
und
R6 für Wasserstoff oder Fluor steht,
sowie ihre Salze, Solvate und Solvate der Salze.
3. Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 1 oder 2, in welcher
R1 für Methyl oder Trifluormethyl steht,
R2 für Methyl steht,
R3 für Methyl, Trifluormethyl, Isobutyl, Isopentyl, Cyclobutylmethyl, Cyclopentyl- methyl, 2-(Cyclopropyl)-ethyl, 2-(Cyclobutyl)-ethyl, 2-(Cyclopentyl)-ethyl oder für Phenyl, das in para-Position mit Fluor, Trifluormethyl, Methyl oder Methoxy substituiert sein kann, steht,
R4 für Methyl, Ethyl, 2,2,2-Trifluorethyl, n-Propyl, Isopropyl, tert.-Butyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl, Cyclopropylmethyl oder Cyclobutylmethyl steht,
R5 für Wasserstoff, Fluor oder Chlor steht
und
R6 für Wasserstoff steht,
sowie ihre Salze, Solvate und Solvate der Salze.
4. Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel (I), wie in den Ansprüchen 1 bis 3 definiert, dadurch gekennzeichnet, dass man Verbindungen der Formel (II)
in welcher R5 und R6 jeweils die in den Ansprüchen 1 bis 3 angegebenen Bedeutungen haben,
entweder
[A] in einem einstufigen Verfahren (Eintopf-Reaktion) mit einer Verbindung der Formel (πi)
in welcher R1 und R3 jeweils die in den Ansprüchen 1 bis 3 angegebenen Bedeutungen haben,
und einer Verbindung der Formel (IV)
in welcher R >2 _ u_nd t τ R>4 jeweils die in den Ansprüchen 1 bis 3 angegebenen Bedeutungen haben, umsetzt
oder
[B] in einem einstufigen Verfahren (Eintopf-Reaktion) mit einer Verbindung der Formel (V)
in welcher R1 und R3 jeweils die in den Ansprüchen 1 bis 3 angegebenen Bedeutungen haben,
und einer Verbindung der Formel (VI)
in welcher R2 und R4 jeweils die in den Ansprüchen 1 bis 3 angegebenen Bedeutungen haben, umsetzt
oder
[C] in einem zweistufigen Verfahren zunächst mit einer Verbindung der Formel (IH) in Verbindungen der Formel (VE)
in welcher R1, R3, R5 und R6 jeweils die in den Ansprüchen 1 bis 3 angegebenen Bedeutungen haben,
überführt und diese dann in einem zweiten Schritt mit einer Verbindung der Formel (FV) umsetzt
oder [D] in einem zweistufigen Verfahren zunächst mit einer Verbindung der Formel (VI) in Verbindungen der Formel (VHI)
in welcher R2, R4, R5 und R6 jeweils die in den Ansprüchen 1 bis 3 angegebenen Bedeutungen haben,
überfuhrt und diese dann in einem zweiten Schritt mit einer Verbindung der Formel (V) umsetzt.
Verbindung der Formel (I), wie in einem der Ansprüche 1 bis 3 definiert, zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten.
Verwendung einer Verbindung der Formel (I), wie in einem der Ansprüche 1 bis 3 definiert, zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Aldosteronismus, Bluthochdruck, chronischer Herzinsuffizienz, den Folgen eines Myokardinfarkts, Leberzirrhose, Niereninsuffizienz und Hirnschlag.
Arzneimittel enthaltend eine Verbindung der Formel (I), wie in einem der Ansprüche 1 bis 3 definiert, in Kombination mit einem inerten, nicht-toxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoff.
Arzneimittel enthaltend eine Verbindung der Formel (I), wie in einem der Ansprüche 1 bis 3 definiert, in Kombination mit einem weiteren Wirkstoff ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus ACE-Inhibitoren, Renin-Inhibitoren, Angiotensin II-Rezeptor-Antagonisten, Beta-Blocker, Acetylsalicylsäure, Diuretika, Kalium-Supplements, Calcium-Antagonisten, Statine, Digitalis (Digoxin)-Derivate, Calcium-Sensitizer, Nitrate, Antikoagulantien, Anti- arrhythmika, Vasodilatatoren sowie Thrombolytika.
9. Arzneimittel nach Anspruch 7 oder 8 zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Aldosteronismus, Bluthochdruck, chronischer Herzinsuffizienz, den Folgen eines Myokardinfarkts, Leberzirrhose, Niereninsuffizienz und Hirnschlag.
10. Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Aldosteronismus, Bluthochdruck, chronischer Herzinsuffizienz, den Folgen eines Myokardinfarkts, Leberzirrhose, Niereninsuffizienz und Hirnschlag in Menschen und Tieren unter Verwendung einer wirksamen Menge mindestens einer Verbindung der Formel (I), wie in einem der Ansprüche 1 bis 3 definiert, oder eines Arzneimittels, wie in einem der Ansprüche 7 bis 9 definiert.
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