EP1663264A1 - Verfahren zur herstellung eines mittels aus maden von fliegen zur wundbehandlung und nach diesem verfahren hergestelltes mittel - Google Patents

Verfahren zur herstellung eines mittels aus maden von fliegen zur wundbehandlung und nach diesem verfahren hergestelltes mittel

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EP1663264A1
EP1663264A1 EP04764231A EP04764231A EP1663264A1 EP 1663264 A1 EP1663264 A1 EP 1663264A1 EP 04764231 A EP04764231 A EP 04764231A EP 04764231 A EP04764231 A EP 04764231A EP 1663264 A1 EP1663264 A1 EP 1663264A1
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maggots
wound
bacteriophages
flies
stage
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Wim Fleischmann
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    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents

Definitions

  • the Erf invention relates to a process for the preparation of an agent for the treatment of wounds according to the preamble of claim 5 l r a means for treating wounds according to the preamble to claim 6 and a method for treating wounds according to the preamble of claim 9.
  • maggots of flies in particular the maggots of the Lucilia genus, have an effect which promotes wound healing.
  • the secretion secreted by the living maggots stimulates tissue proliferation, liquefies dead tissue and wound coverings through proteolysis and has an antiseptic effect on certain types of bacteria, e.g. B. streptococci and staphylococci.
  • the use of live maggots for wound treatment is e.g. B. described in DE 199 01 134 AI.
  • the eggs the flies or the maggots are brought into an ambient environment in an early stage of development which interrupts the development cycle.
  • the maggots can be raised in a sterile manner in a commercial company.
  • the eggs or maggots at an early stage of development before their active phase begins are brought into the development-inhibiting environment and packaged under these development-inhibiting conditions.
  • the eggs or the maggots can be transported to the user in this state and can be stored with the manufacturer or the user in this state over a longer period of time.
  • the eggs or maggots are then placed in conditions in which the development cycle continues sets so that the maggots reach their active phase, in which they can be applied to the wound.
  • the invention is based on the object of improving the effectiveness of wound treatment with maggots.
  • the main idea of the invention is to support the maggot therapy by applying bacteriophages.
  • Bacteriophages also known as phages, are viruses whose host cells are bacteria. The phages penetrate the bacteria and multiply inside the bacterial cells. The semi-active phages bring about the lysogenic state in the bacteria, in which the bacteria can survive. The virulent or lytic phages multiply very quickly in the bacterium and destroy it, so that they are released in the subsequent lysis. It is known to use lytic phages to treat bacterial infections. It is necessary to use phages with the highest possible virulence towards the target bacteria. The phages are particularly suitable for treating infections because, in contrast to the broadly used broad-spectrum antibiotics, they hardly cause any side effects due to their high specificity.
  • the phages can also kill germs which are resistant to antibiotics. ka have multiple resistance. It is advantageous here that the phages multiply exponentially very quickly until their food reserve is exhausted, ie there are no longer any target bacteria. In the manner typical for viruses, they can then go into a lifeless state of rest (virions), in which they remain until renewed contact with the specific target bacteria starts their reproduction again.
  • the invention is based on a synergistic interaction between the maggots and the bacteriophages.
  • maggots can move and are used according to the invention as a means of transport and carrier for the phages which bring the immobile phages to the wound areas to be treated. It is important that the maggots prefer in the
  • the phages cannot remove or penetrate wound coverings or other barriers that surround the necrotic and infected tissue.
  • the maggots with their sharp mouth hooks and thorns and their necrolytic secretions attack and remove such wound coverings and barriers, so that the phages can become effective with high efficiency.
  • the phages require an ambient temperature, for example 37 ° C. and prefers an alkaline environment.
  • an ambient temperature for example 37 ° C.
  • the maggots produce an alkaline wound environment with their secretions and cause a temperature increase on the wound surface through their metabolism. The maggots thus create optimal environmental conditions for the multiplication of phages.
  • the antiseptic effect of the gastric secretion is limited to certain pathogens, particularly streptococci and staphylococci. With longer treatment of maggots, the alkaline wound environment can favor superinfection of the wound with gram-negative pathogens such as Pseudomonas and Proteus. These problems of pure maggot therapy can be avoided or at least greatly reduced by contaminating the maggots with selected phages.
  • the antiseptic and antibiotic spectrum of activity of the secretion of the Madden is greatly expanded by the additional application of the phages.
  • the flies For a targeted application of the phages, it is important to breed the flies as sterile as possible, so that the eggs of the flies are preferably already largely germ-free.
  • the maggots are raised from the egg stage under sterile conditions. Contamination with the selected
  • Phage strains can already be carried out in the egg stage or in the subsequent maggot stage. Since the phages remain in their lifeless virion resting state, if none Target bacteria are present, rearing the maggots even with early contamination z. B. possible in the ice stage.
  • the eggs of the flies or the maggots are expediently brought into an ambient environment at a very early stage of development in the manufacturing company, in which the development cycle is stopped.
  • an environment can consist, for example, of a lowering of the temperature, a vacuum or a protective gas atmosphere or a removal of moisture.
  • the eggs or maggots contaminated with the bacteriophages can be stored in the manufacturing company and transported to the user. Further storage is also possible for the user until the maggots are applied for wound treatment.
  • the eggs or the maggots are brought from this development-inhibiting environment into an environment in which the maggots' development cycle can continue so that the maggots can develop briefly into their active phase in which they are to be applied in the wound.
  • the phages can also ensure that the maggot products are kept sterile, which is necessary for therapeutic application.
  • the synergistic effect of the maggot secretion and the bacteriophages can also be exploited in such a way that the maggot secretion and the phages are placed together on a wound insert, which is then applied to the wound surface.
  • the maggot secretion can be separated from the live maggots on the wound insert, can be obtained by rinsing the maggots or can also be extracted from the maggots.
  • the necrolytic effect of the maggot secretion, the dismantling of barrier that impair the phage effect and the alkaline influence of the wound environment also come into play here.

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Abstract

Die Behandlung von Wunden mit Maden von Fliegen wird dadurch verbessert, dass die Maden mit Bakteriophagen kontaminiert werden.

Description

VERFAHREN ZUR HERSTELLUNG EINES MITTELS AUS MADEN VON FLIEGEN ZUR WUNDBEHANDLUNG UND NACH DIESEM VERFAHREN HERGESTELLTES MITTEL
Beschreibung
Die Erf ndung betrifft ein Verfahren zur Herstellung eines Mittels zur Wundbehandlung gemäß dem Oberbegriff des Anspruchs 5 lr ein Mittel zur Wundbehandlung gemäß dem Oberbegriff es Anspruchs 6 sowie ein Verfahren zur Wundbehandlung gemäß dem Oberbegriff des Anspruchs 9.
Es ist bekannt, dass die Maden von Fliegen, insbesondere die0 Maden der Fliegengattung Lucilia eine die Wundheilung fördernde Wirkung haben. Das von den lebenden Maden abgesonderte Sekret stimuliert die Gewebeproliferation, verflüssigt abgestorbenes Gewebe und Wundbeläge durch Proteolyse und hat eine antiseptische Wirkung bei bestimmten Bakterienarten, z. B. Streptokokken und Staphylokokken. Die Verwendung lebender Maden zur Wundbehandlung ist z. B. in der DE 199 01 134 AI beschrieben.
Weiter ist es aus der DE 199 25 996 AI bekannt, die Herstel- lung und Applikation der Maden dadurch zu vereinfachen, dass die Eier: der Fliegen oder die Maden in einem frühen Entwick- lungsstsdium in ein Umgebungsmilieu gebracht werden, welches den Entwicklungszyklus unterbricht . Die Aufzucht der Maden kann auf: diese Weise in einem gewerblichen Unternehmen in ste- riler Weise durchgeführt werden. Die Eier oder die Maden in einem frühen Entwicklungsstadium, bevor ihre aktive Phase einsetzt, werden in das entwicklungshemmende Milieu gebracht und unter diesen entwicklungshemmenden Bedingungen verpackt. Die Eier bzw. die Maden können in diesem Zustand zum Anwender transportiert werden und beim Hersteller oder dem Anwender in diesem Zustand über eine längere Zeitdauer gelagert werden. Vor der Applikation werden die Eier bzw. die Maden dann in Bedingungen gebracht, in denen sich der Entwicklungszyklus fort- setzt, so dass die Maden in ihre aktive Phase gelangen, in welcher sie in die Wunde appliziert werden können.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zu Grunde, die Wirksamkeit der Wundbehandlung mit Maden zu verbessern.
Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß gelöst durch ein Verfahren zur Herstellung eines Mittels zur Wundbehandlung gemäß dem Anspruch 1, durch ein Mittel zur Wundbehandlung gemäß Anspruch 6 und durch • ein Verfahren zur Wundbehandlung gemäß Anspruch 9.
Vorteilhafte Ausführungen der Erfindung sind in den rückbezogenen Unteransprüchen angegeben.
Der wesentliche Gedanke der Erfindung besteht darin, die Madentherapie durch eine Applikation von Bakteriophagen zu unterstützen.
Bakteriophagen, auch als Phagen bezeichnet, sind Viren, deren Wirtszellen Bakterien sind. Die Phagen dringen in die Bakterien ein und vermehren sich im Inneren der Bakterienzellen. Die teiaperenten Phagen führen in den Bakterien den lysogenen Zustand herbei, in welchem das Bakterium überleben kann. Die virulenten oder lytischen Phagen vermehren sich sehr schnell in dem Bakterium und zerstören dieses, so dass sie in der nachfolgenden Lyse freigesetzt werden. Es ist bekannt, lytische Phagen zur Behandlung bakterieller Infektionen einzusetzen. Dabei ist es erforderlich, Phagen mit möglichst hoher Virulenz gegenüber den Zielbakterien zu verwenden. Die Phagen eignen sich besonders für die Infektbehandlung, da sie im Gegensatz zu häufig eingesetzten Breitband-Antibiotika auf Grund ihrer hohen Spezifität kaum Nebenwirkungen verursachen. Insbesondere können die Phagen auch Keime abtöten, die gegenüber Antibioti- ka eine Multiresistenz aufweisen. Vorteilhaft ist dabei, dass sich die Phagen sehr schnell- exponentiell vermehren, bis ihre Nahrungsreserve erschöpft ist, d.h. keine Zielbakterien mehr vorhanden sind. In der für Viren typischen Weise können sie dann in einen leblosen Ruhezustand (Virionen) übergehen, in dem sie verbleiben bis ein erneuter Kontakt mit den spezifischen Zielbakterien ihre Reproduktion wieder in Gang setzt.
Die Erfindung basiert auf einer synergistischen Wechselwirkung zwischen den Maden und den Bakteriophagen.
Die Maden können sich fortbewegen und werden erfindungsgemäß als Transportmittel und Träger für die Phagen verwendet, die die unbeweglichen Phagen an die zu behandelnden Wundbereiche bringen. Dabei ist wichtig, dass die Maden bevorzugt in den
Wundbereichen aktiv werden, in welchen sich nekrotisches Gewebe befindet und daher eine erhöhte Infektionsgefahr besteht. Mittels der Maden ist daher eine lokal gezielte Applikation der Phagen möglich. Dabei hat die Kontamination der Maden mit den Phagen zusätzlich noch den Vorteil, dass die Phagen durch die Wundflüssigkeit nicht weggespült werden können, was ihre Wirksamkeit verbessert.
Die Phagen können Wundbeläge oder andere Barrieren, die das nekrotische und infizierte Gewebe umgeben nicht beseitigen und nicht durchdringen. Hier ergibt sich erfindungsgemäß der Vorteil, dass die Maden mit ihren scharfen Mundhaken und Dornenkränzen und ihrem nekrolytischen Sekret solche Wundbeläge und Barrieren angreifen und beseitigen, so dass die Phagen mit ho- her Effizienz wirksam werden können.
Die Phagen benötigen für ihre Vermehrung und Wirksamkeit eine möglichst genau eingehaltene Umgebungstemperatur z.B. 37 °C und bevorzugt ein alkalisches Milieu. Auch hier ergibt sich erfindungsgemäß die vorteilhafte Wechselwirkung, dass die Maden mit ihrem Sekret ein alkalisches Wundmilieu erzeugen und durch ihren Stoffwechsel eine Temperaturerhöhung an der Wundoberfläche verursachen. Dadurch erzeugen die Maden optimale Umgebungsbedingungen für die Vermehrung der Phagen.
Die antiseptische Wirkung des Madensekrets ist auf bestimmte Erreger beschränkt, insbesondere auf Streptokokken und Staphy- lokokken. Bei längerer Madenbehandlung kann daher durch das alkalische Wundmilieu begünstigt eine Superinfektion der Wunde mit gramnegativen Erregern wie Pseudomonas und Proteus auftreten. Diese Probleme der reinen Madentherapie können durch die Kontamination der Maden mit ausgewählten Phagen vermieden oder zumindest stark verringert werden. Das antiseptische und anti- biotische Wirkungsspektrum des Madensekrets wird durch die zusätzliche Applikation der Phagen stark erweitert.
Um eine optimale Prophylaxe und Therapie von Wundinfektionen zu erreichen, ist es sinnvoll, ein breites Spektrum von spezifischen Phagen zur Verfügung zu stellen, die den unterschiedlichen zu bekämpfenden Bakterien entsprechend ausgewählt werden können. Dadurch ist es auch möglich, Resistenzentwicklungen gegenüber den Phagen zu erschweren.
Für eine gezielte Applikation der Phagen ist es wichtig, die Fliegen möglichst steril zu züchten, so dass vorzugsweise bereits die Eier der Fliegen weitestgehend keimfrei gewonnen werden. Die Aufzucht der Maden aus dem Eistadium erfolgt unter sterilen Bedingungen. Die Kontamination mit den ausgewählten
Phagenstäm en kann bereits im Eistadium oder auch im nachfolgenden Madenstadium durchgeführt werden. Da die Phagen in ihrem leblosen Virionen-Ruhezustand verbleiben, sofern keine Zielbakterien vorhanden sind, ist eine Aufzucht der Maden auch bei einer frühzeitigen Kontamination z. B. im Eistadium möglich.
Zweckmäßigerweise werden die Eier der Fliegen oder die Maden in einem sehr frühen Entwicklungsstand im Herstellerbetrieb in ein Umgebungsmilieu gebracht, in welchem der Entwicklungszyklus gestoppt wird. Ein solches Milieu kann beispielsweise in einer Temperaturerniedrigung, in einem Vakuum oder einer Schutzgasatmosphäre oder in einem Feuchtigkeitsentzug bestehen. In diesem Zustand können die mit den Bakteriophagen kontaminierten Eier oder Maden im Herstellerbetrieb gelagert und zum Anwender transportiert werden. Auch beim Anwender ist eine weitere Lagerung möglich, bis die Maden zur Wundbehandlung ap- pliziert werden. Vor der geplanten Applikation werden die Eier bzw. die Maden im frühen Entwicklungsstand aus diesem entwicklungshemmenden Milieu in eine Umgebung gebracht, in welcher sich der Entwicklungszyklus der Maden fortsetzen kann, so dass die Maden sich kurzfristig bis in ihre aktive Phase entwickeln können, in der sie in die Wunde appliziert werden. Bei der Lagerung und dem Transport können die Phagen zusätzlich auch die Aufrechterhaltung der Keimfreiheit der Madenprodukte sichern, die für die therapeutische Applikation notwendig ist.
Die synergistische Wirkung des Madensekrets und der Bakteriophagen kann auch in der Weise ausgenützt werden, dass das Madensekret und die Phagen gemeinsam auf eine Wundeinlage gebracht werden, die dann auf die Wundoberfläche appliziert wird. Das Madensekret kann von den lebenden Maden auf die Wundeinlage abgesondert werden, kann durch Abspülen der Maden gewonnen werden oder auch aus den Maden extrahiert werden. Die nekrolytische Wirkung des Madensekrets, der Abbau von Barrie- ren, die die Phageneinwirkung behindern, und die alkalische Beeinflussung des Wundmilieus kommen auch hierbei zum Tragen.

Claims

Patentansprüche
1. Verfahren zur Herstellung eines Mittels zur Wundbehandlung, bei welchem aus Eiern von Fliegen Maden gezüchtet werden, die in die zu behandelnde Wunde applizierbar sind, d a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t, dass die Maden mit Bakteriophagen in der Weise kontaminiert werden, dass die applizierbaren Maden Träger der Bakterio- phagen sind.
2. Verfahren nach Anspruch 1 , d a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t, dass zumindest die Aufzucht der Maden aus dem Eistadium un- ter sterilen bzw. keimarmen Bedingungen durchgeführt wird.
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2 , d a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t, dass die Kontamination mit den Bakteriophagen im Eistadium durchgeführt wird.
4. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2 , d a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t, dass die Kontamination mit den Bakteriophagen in einem Entwicklungsstadium der Maden durchgeführt wird, bevor diese für die Wundbehandlung aktiv werden.
5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4, d a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t, dass die Eier oder die Maden in dem frühen Madenstadium mit den Bakteriophagen kontaminiert werden und dass die Eier bzw. die Maden in ihrem frühen Entwicklungsstadium für die Lagerung und/oder den Transport in ein Umgebungsmilieu gebracht werden, in welchem der Entwicklungszyklus zum Stillstand kommt .
6. Mittel zur Wundbehandlung, welches in die zu behandelnde Wunde applizierbare lebende Maden von Fliegen enthält, d a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t, dass die Maden mit Bakteriophagen kontaminiert sind.
7. Mittel nach Anspruch 6, d a d u r c h g e k e n n z e i c h n et, dass die Maden vor der Kontaminierung mit den Bakteriophagen keimfrei sind.
8. Mittel nach Anspruch 6 oder 7, d a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t, dass die Maden im Eistadium bzw. einem frühen Madenstadium mit den Bakteriophagen kontaminiert in einem ihren Entwick- lungszyklus hemmenden Umgebungsmilieu eingeschlossen sind.
9. Verfahren zur Wundbehandlung mit Maden von Fliegen, insbesondere der Gattung Lucilia, bei welchem die Maden lebend in die Wunde appliziert werden, d a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t, dass die Maden mit Bakteriophagen kontaminiert sind und diese Bakteriophagen in die Wunde transportieren.
10 Verfahren nach Anspruch 9, d a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t, dass die Maden in der Wunde ein die Entwicklung der Bakteriopha- gen begünstigendes alkalisches Wundmilieu und eine erhöhte Temperatur erzeugen.
11. Verfahren nach Anspruch 9 oder 10, d a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t, dass die Maden durch ihr Sekret und gegebenenfalls durch ihre Mundhaken Wundbeläge und Bakterien abschirmende Schutzschichten abbauen.
12. Verfahren zur Herstellung eines Mittels zur Wundbehandlung, bei welchem das Sekret der Maden von Fliegen auf eine Wundeinlage aufgebracht wird, d a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t, dass auf die Wundeinlage Bakteriophagen aufgebracht werden.
13. Mittel zur Wundbehandlung, mit einer mit dem Sekret von Maden getränkten Wundeinlage, d a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t, dass die Wundeinlage Bakteriophagen enthält.
14. Verfahren zur Wundbehandlung mit dem Sekret der Maden von Fliegen, d a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t, dass dem Sekret Bakteriophagen zugemischt sind.
EP04764231A 2003-09-10 2004-08-18 Verfahren zur herstellung eines mittels aus maden von fliegen zur wundbehandlung und nach diesem verfahren hergestelltes mittel Withdrawn EP1663264A1 (de)

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