EP1517902A2 - Composes lactones, utilisables en tant qu agents antioxydants dans des compositions pharmaceutiques, cosmetiques ou alimentaires - Google Patents

Composes lactones, utilisables en tant qu agents antioxydants dans des compositions pharmaceutiques, cosmetiques ou alimentaires

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Publication number
EP1517902A2
EP1517902A2 EP03761648A EP03761648A EP1517902A2 EP 1517902 A2 EP1517902 A2 EP 1517902A2 EP 03761648 A EP03761648 A EP 03761648A EP 03761648 A EP03761648 A EP 03761648A EP 1517902 A2 EP1517902 A2 EP 1517902A2
Authority
EP
European Patent Office
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compound
formula
represent
group
different
Prior art date
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Withdrawn
Application number
EP03761648A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Charles Mioskowski
Thierry Le Gall
Marine Desage
Stéphane MEUNIER
Stéphanie NOWACZYK
Frédéric TARAN
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Commissariat a lEnergie Atomique et aux Energies Alternatives CEA
Original Assignee
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Commissariat a lEnergie Atomique CEA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Centre National de la Recherche Scientifique CNRS, Commissariat a lEnergie Atomique CEA filed Critical Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Publication of EP1517902A2 publication Critical patent/EP1517902A2/fr
Withdrawn legal-status Critical Current

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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/77—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D307/92—Naphthofurans; Hydrogenated naphthofurans

Definitions

  • the present invention relates to particular lactone compounds which can be used as antioxidant agents for the manufacture of antioxidant compositions, in particular pharmaceutical, cosmetic or food compositions.
  • the present invention also relates to a process for the preparation of such compounds.
  • the general field of the invention is therefore that of antioxidants.
  • Antioxidants have the particularity of capturing free radicals, which are very reactive molecules involved in many pathologies, in particular pathologies resulting from oxidative stress, such as, for example, inflammatory diseases, cardiovascular diseases, diabetes.
  • antioxidants can be used for their anti-inflammatory activity, in particular the antioxidants making it possible to inhibit the production of pro-inflammatory cytokines such as factor TNF- ⁇ , in macrophages and monocytes.
  • Antioxidants can also intervene in the protection of cells, by limiting the triggering of the genetic program of cell death or apoptosis, which can be caused by an accumulation of free radicals.
  • the object of the present invention is to provide particular lactone compounds, some of which are new, usable, in a particularly effective manner as antioxidant agents for the manufacture of antioxidant compositions, such as pharmaceutical, cosmetic, and food compositions.
  • the aim of the present invention is also to propose a process for the preparation of lactone compounds in accordance with the invention.
  • the present invention relates, according to a first object, to compounds corresponding to the following formula (I):
  • R 2 represents H, -OH or -0R 9 ,.
  • R 3 represents H, R 9 , -C0 2 R 9 or -CO-NHR ⁇ 0 ; or R 2 and R 3 together form -O-CO-;
  • - R 4 and R 5 identical or different, represent H or R 9 ;
  • R 9 represents a linear or branched alkyl group, comprising from 1 to 20 carbon atoms; - Rio represents R 9 or a group - (CH 2 ) a -NH-
  • OCH 3 , R 4 and R 5 represent -CH 3 and R 6 and R 8 represent H;
  • the invention also includes the optional salts corresponding to the compounds as defined above.
  • salts are meant, in the above and what follows, the ionic compounds resulting from the action of a mineral base on the labile proton (s) of a compound of formula (I).
  • the symbol A can represent for the two salt forms mentioned above an alkali metal, such as Na + , K + , an ammonium cation NH 4 + .
  • the potassium disels are in particular those represented by the formula (XII) below.
  • linear or branched alkyl group containing from 1 to 20 carbon atoms means an unsaturated hydrocarbon group such as a methyl, ethyl or propyl group, isopropyl, butyl, isobutyl, tert-butyl.
  • R x , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 and R 8 meeting the same definition as that given above.
  • R 2 and R 3 can also independently form identical or different radicals, such as hydrogen atoms.
  • radicals such as hydrogen atoms.
  • group R 9 representing a linear or branched alkyl group containing from 1 to 20 carbon atoms
  • the present invention also relates to a process for the preparation of compounds of formula (I) below:
  • R 2 represents H, -OH or -OR 9 ;
  • R 3 represents H, R 9 , -C0 2 R 9 or -CO-NHRio; or R 2 and R 3 together form -O-CO-;
  • R 4 and R 5 identical or different, represent H or R 9 ;
  • R 9 represents a linear or branched alkyl group, comprising from 1 to 20 carbon atoms
  • -the Ru, R12 are independently -B (0R ⁇ 3) (0R i4) or -Sn (R ⁇ 5) 3;
  • R i3 and R i4 identical or different, represent H or an alkyl group of 1 to 7 carbon atoms or R ⁇ 3 and R 14 together form a linear or branched alkylene group;
  • R 4 , R 5 , R 6 , R 7 and R 8 correspond to the same definition as that given previously;
  • - X represents a leaving group, said reaction being carried out in the presence of a base and of a catalyst based on platinum or palladium; and optionally a treatment step intended to obtain a salt corresponding to the compound of formula (I).
  • R ⁇ 3 and R i4 together form a linear or branched alkylene group
  • this group includes, for example, from 2 to 3 carbon atoms, such as -CH 2 - CH 2 -, -CH 2 -CH 2 -CH 2 -, -C (CH 3 ) 2 -C (CH 3 ) 2 -, -CH (Ph) -CH 2 - CH (Ph) -, Ph representing a phenyl group.
  • the leaving group X is chosen from halogens such as F, Cl, Br, I, the triflate -0-S0 2 CF 3 , the group of formula -0-S0 2 - (CF 2 ) n - CF 3 with n being an integer ranging from l to 8.
  • the catalyst based on platinum or palladium is chosen so as to obtain a coupling reaction between the compound of formula (IV) and the compound of formula (V).
  • this catalyst is a platinum or palladium complex, such as dichlorobis (triphenylphosphine) alladium PdCl 2 (PPh 3 ) 2 , tetrakis (triphenylphosphine) palladium Pd (PPh 3 ) 4 .
  • the base used in the context of this process is a base chosen, for example, from NaOH, Ba (0H) 2 , Na 2 C0 3 , K 2 C0 3 , CsC0 3 , K 3 P0 4 , CH 3 C00Na, CH 3 C0OK, CH 3 0Na, CH 3 CH 2 0Na, amines such as triethylamine.
  • the possible step intended to obtain the corresponding salts consists, once the compound of formula (I) obtained, in treating this product, for example by reacting on it a mineral base.
  • process according to the invention may possibly include steps for protecting the functions sensitive to the reaction conditions, these functions then being deprotected at the end of the said process. These protection and deprotection steps are steps within the reach of the skilled person.
  • a base is introduced, for example, sodium bicarbonate.
  • reaction mixture is then brought to reflux with vigorous stirring for an adequate time (that is to say the time necessary to obtain the compound of formula (I), the progress of the reaction being able to be followed by techniques. such as thin layer chromatography).
  • reaction mixture is then treated by adding water.
  • aqueous phase is extracted with an organic solvent, for example dichloromethane.
  • organic phases are combined, dried and then concentrated.
  • the product obtained is finally purified by conventional techniques such as column chromatography.
  • the process for the preparation of the compounds according to the invention involves compounds of formula (IV) and (V), which may be commercially available or prepared before the implementation of the process of the invention.
  • the compound of formula (IV), with Ru and R12 representing -B (OR ⁇ 3 ) (0R i4 ), can be obtained by reacting a compound derived from naphthalene of formula (VI):
  • the Y identical or different, represent leaving groups chosen, for example, from halogens such as fluorine, chlorine, bromine, iodine, triflate -0-S0 2 -CF 3 , with a boron compound corresponding to the one of the following formulas:
  • R13 and R i4 having the same meaning as that given above, said reaction being carried out in the presence of a base and of a catalyst based on platinum or palladium such as 1, 1 '-bis (diphenylphosphino) ferrocene dichloropalladium or PdCl 2 (dppf), dppf meaning the
  • R 5 / R 6 , R 7 and R 8 having the same definition as that given above, in basic medium, with an alkyl ⁇ -alkoxyacetate of formula R 4 0-CH 2 -C0-0Alk, R 4 corresponding to the same definition as that given above, the group Alk being a linear or branched alkyl group comprising from 1 to 20 atoms of carbon, at the end of which a compound of formula (VIII) is obtained below:
  • this leaving group X can be chosen from halogens, triflate -O- S0 2 -CF 3 or the group of formula -0-S0 2 - (CF 2 ) n -CF 3 with n being a integer ranging from 1 to 8.
  • step a) the reaction is carried out in a basic medium, this medium being intended to deprotonate the group -CH 2 - located in position ⁇ of the group -CO 2 R5 of the compound (VII).
  • This basic medium can for example be a solution of lithium diisopropylamide (or LDA).
  • LDA lithium diisopropylamide
  • Steps b) and c), which consist in synthesizing a compound 1, 3-bis (trialkylsiloxy) -1, 3-butadiene (IX), followed by cyclization are adapted from Langer's works, such as those explained in the publication "Domino Reaction of 1, 3-bis (trimethylsilyloxy) -1, 3- dienes ith Oxalyl Chloride: General and Stereoselective Synthesis of ⁇ -Alkylidenebutenolides" P.Langer et al., Chem.Eur.J.2000, 6, N ° 7, 3204-3214 [6].
  • step d) can be envisaged according to any type of reaction within the reach of those skilled in the art, said reactions making it possible to convert the group -OH into a reactive group such as a triflate or a fluoroalkylsulfonate -S0 2 - (CF 2 ) n -CF 3 with n being an integer ranging from 1 to 8.
  • a reactive group such as a triflate or a fluoroalkylsulfonate -S0 2 - (CF 2 ) n -CF 3 with n being an integer ranging from 1 to 8.
  • the compound referenced 5a forming part of the compounds of formula (V) can be synthesized according to the following specific reaction scheme:
  • the triflate (5a) is prepared from the corresponding alcohol (X) by treatment with triflic anhydride (Tf 2 0), in the presence of a base such as pyridine.
  • the alcohol (X) comes from the reaction of a 1,3-bis (trimethylsiloxy) -1,3-butadiene (9a) suitably substituted with oxalyl chloride, catalyzed by methyl triflate.
  • This reaction of cyclization, as well as the preparation of 1,3-bis (trimethylsiloxy) -1, 3-butadiene (9a) are adapted from Langer's works, such as those mentioned above.
  • the ⁇ -ketoester (VIII) precursor of 1,3- bis (trimethylsiloxy) -1, 3-butadiene (9a) is obtained by reaction of the lithiated enolate formed from the corresponding phenylacetate (VII) with a ⁇ -alkoxyacetate methyl.
  • the inventors have discovered, surprisingly, that the compounds (I) as defined in the first subject, including the excluded compounds, can be used, effectively, as antioxidant agents for the manufacture of antioxidant compositions.
  • R 2 represents H, -OH or -OR 9 ;
  • R 3 represents H, R 9 , -C0 2 R 9 or -CO-NHRio; or R 2 and R 3 together form -O-CO-;
  • R 4 and R 5 identical or different, represent H or R 9 ;
  • R 9 represents a linear or branched alkyl group, comprising from 1 to 20 carbon atoms; - Ro represents R 9 or a group - (CH 2 ) a -NH-
  • the antioxidant has a chemical structure identical to that of the compound of formula (II) defined above.
  • Norbadione is a natural product, which has been extracted to date from two species of fungi. It constitutes one of the pigments of the hat of the bay bolete (Xerocomus badius), which is a highly appreciated edible species, as described in the article "Pigments from the cap cuticle of the Bay Boletus", Angew.Chem. Int.Ed.Engl.23 (1984), n ° 6 [4].
  • Norbadione is extracted from these mushrooms in the form of potassium disel (formula XII) and can be converted into the corresponding diacid.
  • the inventors have, surprisingly, demonstrated the antioxidant activity of norbadione.
  • the antioxidant agents of formula (I) can be used in the manufacture of antioxidant compositions, in particular pharmaceutical compositions, cosmetic compositions or food compositions.
  • the invention relates to pharmaceutical compositions, comprising at least one antioxidant agent according to the invention as defined previously and a pharmaceutically acceptable vehicle.
  • pharmaceutically acceptable vehicle is intended to mean a vehicle which can be administered to an individual at the same time as the antioxidant agent and which does not have an undesirable biological effect.
  • compositions can be used for the treatment of diseases arising from oxidative stress.
  • compositions comprising the agents according to the invention can be used for the treatment of inflammatory diseases, in particular the diseases resulting, in reaction to an allergen, by the production of cytokines.
  • compositions comprising norbadione in the form of diacid (formula XI) or disel (formula XII) contribute, in a dose-dependent manner to decrease the production of cytokines TNF- ⁇ and IL-10 of an infected host by an allergen such as a liposaccharide, which shows that the antioxidant agents according to the present invention exhibit anti-inflammatory activity.
  • compositions can also be used to ensure a protective effect of cells against apoptosis following an accumulation of free radicals within said cells.
  • these compositions can be used to treat, preventively or curatively, cells or a living organism exposed to ionizing radiation inducing the production of free radicals.
  • these compositions are capable of countering the effects of ionizing radiation (for example, that emanating from an area contaminated by radioactive substances) or of ultraviolet radiation towards cells subjected to said radiation, due to the fact that the antioxidant agents according to the present invention incorporated in these compositions capture the radicals formed by the action of said radiation on these cells or living organisms.
  • These compositions can also be used to inhibit the side effects of a drug inducing the production of free radicals. Therefore, these compositions can reduce the cytotoxicity of drugs, causing by their side effects, oxidative stress, as is the case with cisplatin.
  • the invention relates to the use of an antioxidant agent as defined above for the manufacture of a pharmaceutical composition intended for the treatment of inflammatory diseases.
  • the invention relates to the use of an antioxidant agent as defined above for the manufacture of a pharmaceutical composition intended for the treatment of a living organism exposed to ionizing radiation.
  • the invention finally relates to the use of an antioxidant agent as defined above for the manufacture of a medicament intended to inhibit the side effects of a medicament inducing the production of free radicals.
  • treatment treatment can be preventive but also curative.
  • the present invention also relates to cosmetic compositions incorporating at least one antioxidant agent according to the invention.
  • compositions can be in different forms, such as creams, oils, intended for topical skin use, the role of the antioxidant agents being to trap the free radicals at the level of the skin surface on which the cosmetic composition is applied.
  • the compositions according to the invention thus contribute to slowing down the skin aging process, generated in particular by the accumulation of free radicals.
  • the present invention relates to food compositions, comprising at least one antioxidant agent according to the invention.
  • the agents antioxidants according to the present invention can be used, in particular, as additives in food compositions which can produce, during their aging, free radicals, such as oils, butter.
  • antioxidant agents which can be used in pharmaceutical, cosmetic or food compositions correspond to the agents of formula (XI) or (XII), as defined above.
  • Figures 1, 2 and 3 are graphs illustrating the antioxidant activity of norbadione in the form of potassium disel compared to conventional antioxidants, said antioxidant activity being demonstrated by monitoring the degradation of thymidine subjected to oxidative stress radiative in nature ( ⁇ rays emitted by 137 Cs in Figure 1 or UV rays in Figure 2) or chemical in nature (Figure 3);
  • Figures 4 and 5 are graphs illustrating the anti-inflammatory effect of norbadione in the form of a diacid ( Figures 4) or potassium disel
  • FIG. 5 by measuring the production of certain cytokines by cells subjected to an allergen
  • FIG. 6 is a graph illustrating the protective activity of norbadione in the form of a diacid or potassium disel with respect to cells subjected to ionizing radiation
  • FIG. 7 is a graph illustrating the protective activity of norbadione in the form of a diacid or of potassium disel with respect to cells subjected to the action of cisplatin
  • FIG. 5 by measuring the production of certain cytokines by cells subjected to an allergen
  • FIG. 6 is a graph illustrating the protective activity of norbadione in the form of a diacid or potassium disel with respect to cells subjected to ionizing radiation
  • FIG. 7 is a graph illustrating the protective activity of norbadione in the form of a diacid or of potassium disel with respect to cells subjected to the action of cisplatin
  • FIG. 8 is a graph which represents the vascular contraction of rat aorta rings C (g) (g meaning gram) as a function of the concentration of pyrrogallol [Pyr] ( ⁇ M), in the absence of norbadione and in presence of norbadione 100 ⁇ M;
  • FIG. 9 is a graph representing the rate of vascular relaxation of rat aorta rings R (%) as a function of the concentration of Sin-1 [Sin-1] ( ⁇ M) in the absence of norbadione and in the presence 100 ⁇ M norbadione.
  • Examples 1 to 5 illustrate the antioxidant properties of norbadione in the form of a diacid or a disel.
  • Example 6 illustrates an example of total synthesis of a compound of formula (III) also exhibiting antioxidant activity.
  • the antioxidant activity of the norbadione potassium disel was evaluated by an in vitro screening test.
  • This test is based on monitoring the degradation of thymidine subjected to different oxidative stresses in the presence of different antioxidant agents, which are norbadione in the form of potassium disel.
  • antioxidant agents quercetin (1), fisetin (2), myricetin (3), catechin
  • thymidine In the presence of an antioxidant, thymidine is more or less effectively protected depending on the nature of said antioxidant.
  • the effectiveness of the antioxidant is quantified by measuring the remaining thymidine (quantified in% on the ordinate of the graph) using an enzyme-linked immunosorbent assay, of the ELISA type called "by competition".
  • This ELISA assay consists in performing a competition for binding to a thymidine-specific monoclonal antibody fixed on a solid phase, between the thymidine remaining at the end of the test and the thymidine labeled with an enzyme (acetylcholine esterase).
  • cytokines produced by monocyte-type cells during treatment with an allergenic liposaccharide.
  • This liposaccharide is an endotoxin located on the outer membrane of Gram-negative bacteria. In particular, it stimulates the production of proinflammatory cytokines by mononuclear cells (monocytes, macrophages) of the infected host.
  • PBMC peripheral blood mononuclear cells
  • norbadione in diacid or potassium disel form at increasing concentrations (from 10 "8 M to 10 " 5 M) with or simultaneous activation with the lipopolysaccharide of Salmonella abortus egui at a concentration of 5 ⁇ g.mL "1 , in culture plates 24 wells, for 24 hours at 37 ° C, in a humidified atmosphere of 5% C0 2 and 95% air. After incubation, the supernatant is removed and stored at -20 ° C until the test is carried out.
  • the detection of cytokines present in the samples is measured using a cytometric ELISA assay of the “sandwich” type.
  • Polystyrene microparticles (beads) (of 6 different types, each marked with a different quantity of fluorescent dye whose emission wavelength FL-3 is approximately 650 nm) are coupled to an antibody specific for l 'one of the 2 cytokines TNF ⁇ , IL-2, IL-10.
  • Antibodies of the Ac-PS type are thus obtained.
  • the cytokines present in the sample bind to Ac-PS antibodies.
  • the captured cytokines are detected using a direct immunoassay, which uses 2 antibodies specific for each cytokine coupled to phycoerythrin which emits at an FL-2 wavelength of about 585 nm (Ac-PE ). After washing the excess Ac-PE, the presence of the cytokines is measured by flow cytometry.
  • a direct immunoassay which uses 2 antibodies specific for each cytokine coupled to phycoerythrin which emits at an FL-2 wavelength of about 585 nm (Ac-PE ). After washing the excess Ac-PE, the presence of the cytokines is measured by flow cytometry.
  • the fluorescence is measured according to the 6 fluorescence intensities FL-3 and according to the wavelength FL-2.
  • the intensity of the FL-3 fluorescence makes it possible to determine the quantity of each cytokine present in the sample (by comparison with standard curves). More information about this technique is available in Cook's article et al, Journal of Immunological Methods, 2001, 254, pages 109-118 [7]
  • FIGS. 4 to 5 represent the percentage of response noted% (that is to say the quantity of cytokine observed compared to the quantity observed during a control where the product does not has not been added) as a function of the concentration (in nM) of norbadione in the form of diacid or potassium disel, noted [Nor-A] or [Nor-B] in said figures.
  • EXAMPLE 3 Evaluation of the norbadione protection activity of cells subjected to ionizing radiation.
  • This test consists of measuring, in the presence or absence of norbadione in the form of a diacid or potassium disel, the survival rate of cells treated with ionizing radiation, using selective indicators of certain cellular organelles such than the mitochondria.
  • Samples of norbadione in the diacid or potassium disel form are added to cultures of RDM4 cells (AKR mouse lymphomas) at increasing concentrations (0.12 to 20 ⁇ g / ml), two hours before irradiation. This is carried out by exposure of microtest plates containing the cells to X-rays of 15 MV, at 8 Gy, the culture medium being unchanged.
  • the number of living cells is determined on the sixth day using the Uptiblue test (which measures the mitochondrial activity of the cells).
  • the Uptiblue reagent (reazurine, still marketed under the brand name ALAMAR BLUE) is a colored indicator of redox. Reazurin (blue and non-fluorescent) is reduced to resorufin (pink and fluorescent) by living cells.
  • Uptiblue (diluted 1/4 in the culture medium) is added to the cells at a rate of 20 ⁇ L per well of 200 ⁇ L. After a 4 hour incubation at 37 ° C., the fluorescence is measured at a wavelength of 590 nm, after excitation at a wavelength of 530 nm using a fluorescent microplate reader
  • Fluorolite 1000 (Fluorolite 1000, Dynex). The intensity of fluorescence is proportional to the number of living cells.
  • nordadione in its form of disel or diacid, protects the cells against ionizing radiation, in a significant and dose-dependent manner.
  • norbadione has no effect on the growth and viability of RDM4 cells, even at 20 ⁇ g / ml.
  • This test consists of measuring, in the presence of norbadione in the form of a diacid or potassium disel, the survival rate of cells treated with cisplatin.
  • Ki cells of human thyroid carcinomas are cultured in 96 microtest plates flat well in the presence of a single concentration (20 ⁇ g / mL) of norbadione in the form of diacid or potassium disel.
  • a genotoxic agent, cisplatin is added to the culture medium at increasing concentrations (from 12 to 100 ⁇ M). Two days later, the number of cells is determined using the sulforhodamine B test (called SRB), which measures the amount of cellular protein.
  • SRB sulforhodamine B test
  • SRB Sulforhodamine B
  • FIG. 7 represents the fluorescence observed after addition of SRB (expressed in arbitrary units of fluorescence) as a function of the concentration of cisplatin (in ⁇ M).
  • the purpose of this example is to show the antioxidant activity of norbadione in the form of potassium disel on rat aorta rings.
  • the rat aorta rings are first subjected to pyrogallol, a generator of superoxide radicals, these radicals inducing a contraction of the rat aorta rings and we measure, in the absence of norbadione the rate of contraction of these rings.
  • FIG. 8 represents the rate of vascular contraction of the C rings (g) as a function of the concentration of pyrrogallol [Pyr] ( ⁇ M), in the absence of norbadione (curve a) and in the presence norbadione at a concentration of 100 ⁇ M (curve b). It can be seen that curve (a) is located above curve (b), which means that the contraction of the aorta rings caused by pyrogallol is suppressed in the presence of norbadione, because the norbadione picks up reactive oxygen radical species generated by pyrogallol.
  • the rat aorta rings are subjected to SYN-1 (3-morpholino-sydnonimime), generator of NO radicals, inducing relaxation of the rat aorta rings and the relaxation rate of these rings.
  • SYN-1 3-morpholino-sydnonimime
  • the relaxation rate of the rings is measured, under the same conditions as those mentioned above.
  • FIG. 9 represents the rate of vascular relaxation of the R rings (%) as a function of the concentration of Sin-1 [Sin-1] ( ⁇ M) in the absence of norbadione (curve a) and in the presence of norbadione 100 ⁇ M) (curve b).
  • curve (a) is located below curve (b), which means that the relaxation of the aorta rings caused by SYN-1 is lessened in the presence of norbadione, because the norbadione partially captures the NO radicals.
  • This compound conforms to the general definition of the compounds of formula (I) with the R x , R 2 / R 3 / R 6 and R 8 represent H, the R 4 and R 5 represent - CH 3 , the R 7 represent - OCH 3 .
  • methyl 4- ti ⁇ êthoxyphenylacetate (7a) (4.7 ml; 29.6 mmol; 2 eq) is dissolved in THF (15 ml) and the mixture is cooled to -70 ° C.
  • a solution of 2M lithium diisopropylamide in heptane (15 mL; 30 mmol; 2 eq) is added dropwise to the syringe and the mixture is maintained for 1 hour at around -70 ° C.
  • Methyl methoxyacetate (1.5 mL; 15 mmol; 1 eq) is added to the syringe and the mixture is left to react for 5 hours, slowly returning to room temperature.
  • the condensation product (8a) prepared above (5.65 g; 22.4 mmol; 1 eq) is dissolved in THF (47 mL) in a 100 mL flask.
  • Triethylamine (3.7 mL; 26.6 mmol; 1.2 eq.)
  • trimethylsilyl chloride (3.7 mL; 29 mmol; 1.3 eq.)
  • the residue is taken up in pentane.
  • the precipitate formed is filtered through a frit and then through a 5 ⁇ m millipore and rinsed with pentane. After evaporation, 7.28 g of an orange oil are obtained.
  • the monosilylated derivative obtained (7.27 g; 22.4 mmol; leq.) Is placed in a 100 ml flask and dissolved in THF (33 ml). The mixture is cooled to -70 ° C. A solution of LDA (lithium diisopropylamide) 2M in heptane (11.2 mL; 22.4 mmol; 1 eq.) Is added dropwise to the syringe and the mixture is maintained for 1 hour at -70 ° C. Trimethylsilyl chloride (3.4 mL; 26.7 mmol; 1.2 eq.) Is added to the syringe and the mixture is brought back to room temperature in 3 hours.
  • LDA lithium diisopropylamide

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Abstract

La présente invention a pour objet des composés lactones particuliers, pouvant être utilisés en tant qu'agents antioxydants dans des compositions pharmaceutiques, cosmétiques ou dans des produits alimentaires, lesdits composés comportant un noyau naphtalène sur lequel sont greffés deux motifs lactones.

Description

COMPOSES LACTONES, UTILISABLES EN TANT QU'AGENTS
ANTIOXYDANTS DANS DES COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES,
COSMÉTIQUES OU ALIMENTAIRES ET LEUR PROCÉDÉ DE
PRÉPARATION
DESCRIPTION
DOMAINE TECHNIQUE
La présente invention a trait à des composés lactones particuliers, pouvant être utilisés en tant qu'agents antioxydants pour la fabrication de compositions antioxydantes, en particulier de compositions pharmaceutiques, cosmétiques ou alimentaires .
La présente invention a également trait à un procédé de préparation de tels composés.
Le domaine général de l'invention est donc celui des antioxydants.
ETAT DE LA TECHNIQUE
Les antioxydants ont pour particularité de capter les radicaux libres, qui sont des molécules très réactives intervenant dans de nombreuses pathologies, en particulier les pathologies découlant d'un stress oxydant, comme par exemple, les maladies inflammatoires, les maladies cardiovasculaires, le diabète.
Ainsi, certains antioxydants peuvent être utilisés pour leur activité anti-inflammatoire, en particulier les antioxydants permettant d'inhiber la production de cytokines pro-inflammatoires tels que le facteur TNF-α, dans les macrophages et les monocytes .
Les antioxydants peuvent également intervenir dans la protection des cellules, en limitant le déclenchement du programme génétique de mort cellulaire ou apoptose, pouvant être engendré par une accumulation de radicaux libres.
Plusieurs antioxydants d'origine naturelle ont fait l'objet également d'évaluations quant à leur action contre le cancer. Ainsi, dans l'article de M.Jang et al, « Cancer Chemoprotective Activity of Resveratrol, a natural product derived from grapes », Science 1997, 275, 218-220 [1] , le résvératrol, une phytoalexine antioxydante extraite du raisin est décrite comme présentant une activité préventive contre le cancer sur des modèles animaux. L'article de M.V Eberhardt et al . « Antioxydant Activity of Fresh Apples », Nature 2000, 405, 903-904 [2] démontre que des extraits de pomme testés sur des lignées cellulaires anticancéreuses engendrent, de même, une activité antiprolifêrative in vitro de ces lignées.
Enfin, des études, telles que celles publiées dans l'article de T.Finkel et al. « Oxydants, Oxidative Stress and the biology of ageing », Nature 2000, 408, 239-247 [3] ont également mis en évidence les liens entre stress oxydant et vieillissement cellulaire. De ce fait, on peut envisager d'incorporer des antioxydants dans des compositions cosmétiques, destinés à capter les radicaux libres responsables, notamment de l'apparition de rides. EXPOSE DE L'INVENTION
Le but de la présente invention est de proposer des composés lactones particuliers, dont certains sont nouveaux, utilisables, de manière particulièrement efficaces en tant qu'agents antioxydants pour la fabrication de compositions antioxydantes, telles que des compositions pharmaceutiques, cosmétiques, et alimentaires.
Le but de la présente invention est de proposer également un procédé de préparation de composés lactones conformes à l'invention.
Ainsi, la présente invention a trait, selon un premier objet, à des composés répondant à la formule (I) suivante :
(I) dans laquelle : les Rl7 R6, R7 et R8/ identiques ou différents, représentent H, -OH ou -OR9 ;
R2 représente H, -OH ou -0R9 ,. R3 représente H, R9, -C02R9 ou -CO-NHRι0 ; ou R2 et R3 forment ensemble -O-CO- ; - les R4 et R5, identiques ou différents, représentent H ou R9 ;
- R9 représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié, comportant de 1 à 20 atomes de carbone ; - Rio représente R9 ou un groupe -(CH2)a-NH-
(CH2)b-NH2, avec a et b, identiques ou différents, étant des entiers allant de 2 à 4 ; et les sels de ces composés ; à l'exception : - du composé pour lequel R2 et R3 forment ensemble un groupe -OCO-, les R4, R5, Rβ et R8 représentent H, les Ri et R7 représentent -OH et les disels de potassium correspondant à ce composé ;
- du composé dans lequel R2 et R3 forment ensemble un groupe -O-CO-, les Ri et R7 représentent -
OCH3, les R4 et R5 représentent -CH3 et les R6 et R8 représentent H ;
- du composé dans lequel les Ri, R2 et R7 représentent -0-CH3, R3 représente -C02CH3, les R4 et R5 représentent CH3 et les R6 et R8 représentent H.
Comme cela est mentionné ci-dessus, l'invention comprend également les sels éventuels correspondant aux composés tels que définis ci-dessus.
On entend par sels, dans ce qui précède et ce qui suit, les composés ioniques résultant de l'action d'une base minérale sur le ou les protons labiles d'un composé de formule (I) .
Ainsi, lorsque R5 représente H dans le composé selon l'invention, le sel correspondant se présente sous le forme suivante :
Lorsque R4 représente H dans le composé selon l'invention, le sel correspondant se présente sous le forme suivante :
le symbole A pouvant représenter pour les deux formes salines susmentionnées un métal alcalin, tel que Na+, K+, un cation ammonium NH4 +.
On précise que, pour le premier composé exclu, les disels de potassium sont notamment ceux représentés par la formule (XII) ci-après.
On précise que, selon l'invention, dans ce qui précède et ce qui suit, on entend par groupe alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 20 atomes de carbone, un groupe hydrocarboné insaturé tel qu'un groupe méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, tertiobutyle.
Dans la formule (I), lorsque R2 et R3 forment ensemble un groupement -0-CO-, le composé répond à la formule (II) suivante :
(II)
les Rx, R4, R5, R6, R7 et R8 répondant à la même définition que celle donnée précédemment. Ces composés, notamment de part la présence d'un motif cyclique central avec un cycle lactone se caractérisent par un pouvoir antioxydant particulièrement efficace.
Dans la formule (I) , les R2 et R3 peuvent également former indépendamment des radicaux identiques ou différents, tels que des atomes d'hydrogène. A titre d'exemple, on peut citer le composé de formule (III) suivante :
(III) dans laquelle les Rx, R2, R3, Rg et R8 représentent H, les R4 et R5 représentent CH3 (désigné par Me dans la formule ci-dessus) , les R7 représentent -OCH3 (désigné par -OMe dans la formule ci-dessus) .
En ce qui concerne le groupe R9, représentant un groupe alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 20 atomes de carbone, on peut citer, à titre d'exemples, le groupe méthyle, éthyle, n-propyle, n-butyle, t-butyle.
La présente invention a également pour objet un procédé de préparation de composés de formule (I) suivante :
(I) dans laquelle : les Ri, R6, R7 et R8, identiques ou différents, représentent H, -OH ou -OR9 ;
R2 représente H, -OH ou -OR9 ; R3 représente H, R9, -C02R9 ou -CO-NHRio ; ou R2 et R3 forment ensemble -O-CO- ;
- les R4 et R5, identiques ou différents, représentent H ou R9 ;
- R9 représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié, comportant de 1 à 20 atomes de carbone ;
- Rio représente R9 ou un groupe ~(CH2)a-NH- (CH2)b-NH2, avec a et b, identiques ou différents, étant des entiers allant de 2 à 4 ; et les sels de ces composés, ledit procédé comprenant successivement : - une étape consistant à faire réagir un composé de formule (IV) suivante :
dans laquelle :
-les Ri, R2 et R3 ont la même définition que celle donnée précédemment ;
-les Ru, R12 représentent, indépendamment, -B (0Rι3) (0Ri4) ou -Sn(Rι5)3 ;
-les Ri3 et Ri4, identiques ou différents, représentent H ou un groupe alkyle de 1 à 7 atomes de carbone ou les Rι3 et R14 forment ensemble un groupe alkylene linéaire ou ramifié ;
-Ris représente un groupe méthyle ou butyle, avec un composé de formule (V) suivante :
(V) dans laquelle :
-les R4, R5, R6, R7 et R8 répondent à la même définition que celle donnée précédemment ; - X représente un groupe partant, ladite réaction s 'effectuant en présence d'une base et d'un catalyseur à base de platine ou palladium ; et -éventuellement une étape de traitement destinée à obtenir un sel correspondant au composé de formule (I) . Lorsque Rι3 et Ri4 forment ensemble un groupe alkylene linéaire ou ramifié, ce groupe comprend, par exemple, de 2 à 3 atomes de carbone, tel que les groupes -CH2- CH2-, -CH2-CH2-CH2-, -C(CH3)2-C(CH3)2-, -CH(Ph)-CH2- CH(Ph)-, Ph représentant un groupement phényle .
De préférence, le groupe partant X est choisi parmi les halogènes tels que F, Cl, Br, I, le triflate -0-S02CF3, le groupe de formule -0-S02- (CF2) n- CF3 avec n étant un entier allant de l à 8.
Selon l'invention, le catalyseur à base de platine ou palladium est choisi de manière à obtenir une réaction de couplage entre le composé de formule (IV) et le composé de formule (V) . De préférence, ce catalyseur est un complexe de platine ou palladium, tel que le dichlorobis (triphénylphosphine) alladium PdCl2 (PPh3) 2, le tétrakis (triphénylphosphine) palladium Pd(PPh3)4.
Selon l'invention, la base utilisée dans le cadre de ce procédé est une base choisie, par exemple, parmi NaOH, Ba(0H)2, Na2C03, K2C03, CsC03, K3P04, CH3C00Na, CH3C0OK, CH30Na, CH3CH20Na, les aminés telles que la triéthylamine .
L'éventuelle étape destinée à obtenir les sels correspondants consiste, une fois le composé de formule (I) obtenu, à traiter ce produit, par exemple en faisant réagir sur celui-ci une base minérale.
Ainsi, lorsque les R5 représentent H, un traitement par une solution d'hydroxyde de potassium permet obtenir le disel de potassium correspondant, qui n'est autre qu'un dicarboxylate de potassium.
On note que le procédé selon l'invention peut comporter éventuellement des étapes de protection des fonctions sensibles aux conditions réactionnelles, ces fonctions étant ensuite déprotégées en fin dudit procédé. Ces étapes de protection et de déprotection sont des étapes à la portée de l'homme du métier.
De manière plus détaillée, le procédé de préparation des composés de formule (I) peut se dérouler de la manière suivante .
Dans un premier temps, il est procédé au mélange des réactifs répondant aux formules (IV) et. (V) avec un catalyseur adéquat tel que mentionné ci- dessus , dans un solvant aprotique, par exemple du tétrahydrofurane (THF), sous atmosphère de gaz inerte.
Ensuite, après homogénéisation du mélange réactionnel, on introduit une base, par exemple, du bicarbonate de sodium.
Le mélange réactionnel est ensuite porté à reflux sous agitation vigoureuse pendant une durée adéquate (c'est-à-dire la durée nécessaire à l'obtention du composé de formule (I), l'avancement de la réaction pouvant être suivi par des techniques classiques telles que la chromatographie sur couche mince) .
Le mélange réactionnel est alors traité par ajout d'eau. La phase aqueuse est extraite avec un solvant organique, par exemple du dichlorométhane . Les phases organiques sont réunies, séchëes puis concentrées. Le produit obtenu est finalement purifié par des techniques classiques telles que la chromatographie sur colonne .
Le procédé de préparation des composés conformes à l'invention met en jeu des composés de formule (IV) et (V) , qui peuvent être disponibles commercialement ou préparés avant la mise en œuvre du procédé de l'invention.
Ainsi, le composé de formule (IV) , avec Ru et R12 représentant -B(ORι3) (0Ri4) , peut être obtenu en faisant réagir un composé dérivé du naphtalène de formule (VI) :
(VI)
dans laquelle :
-les Ri, R2 et R3 ont la même définition que celle donnée précédemment ;
- les Y, identiques ou différents, représentent des groupes partants choisis, par exemple, parmi les halogènes tels que le fluor, chlore, brome, iode, le triflate -0-S02-CF3, avec un composé bore répondant à l'une des formules suivantes :
R13 et Ri4 ayant la même signification que celle donnée ci-dessus, ladite réaction s'effectuant en présence d'une base et d'un catalyseur à base de platine ou de palladium tel que le 1, 1 ' -bis (diphénylphosphino) ferrocène dichloropalladium ou PdCl2(dppf), dppf signifiant le
1,1' -bis (diphénylphosphino) ferrocène.
Le composé de formule (V) quant à lui , peut être obtenu par un procédé comprenant la succession d'étapes suivantes : a) réaction d'un phénylacétate de formule (VII) suivante :
(VII)
les R5/ R6, R7 et R8 ayant la même définition que celle donnée précédemment, en milieu basique, avec un α- alcoxyacétate d' alkyle de formule R40-CH2-C0-0Alk, R4 répondant à la même définition que celle donnée précédemment, le groupement Alk étant un groupement alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 20 atomes de carbone, à l'issue de laquelle l'on obtient un composé de formule (VIII) suivante :
(VIII)
b) réaction du composé (VIII) , en milieu basique avec un composé silylé de formule (Rι6)3SiHal, Rι6 étant un groupe alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 4 atomes de carbone, Hal étant un groupe halogène, tel que F, Cl, Br, I, à l'issue de laquelle l'on obtient un composé disilylé de formule (IX) suivante:
(IX)
c) réaction de cyclisation du composé (IX) avec le chlorure d'oxalyle (C1C0)2, à l'issue de laquelle l'on obtient le composé de formule (X) suivante :
(X)
d) réaction du composé (X) avec un réactif apte à former par réaction avec le -OH du cycle lactone un groupe partant X à l'issue de laquelle l'on obtient le composé de formule (V) .
A titre d'exemples, ce groupe partant X peut être choisi parmi les halogènes, le triflate -O- S02-CF3 ou le groupe de formule -0-S02- (CF2)n-CF3 avec n étant un entier allant de 1 à 8.
On note que, dans les formules ci-dessus, les liaisons symbolisées par :
signifient que les composés concernés peuvent exister sous leurs différentes formes isomères.
Ainsi, dans l'étape a), la réaction s'effectue dans un milieu basique, ce milieu étant destiné à déprotoner le groupement -CH2- situé en position α du groupement -CO2R5 du composé (VII) . Ce milieu basique peut être par exemple une solution de diisopropylamidure de lithium (ou LDA) . L'espèce réactive ainsi formée se condense avec l'α- alcoxyacétate d' alkyle pour donner le produit (VIII) . Les étapes b) et c) , qui consistent à synthétiser un composé 1, 3-bis (trialkylsiloxy) -1, 3-butadiêne (IX), suivi d'une cyclisation sont adaptées des travaux de Langer, tels que ceux explicités dans la publication « Domino Reaction of 1, 3-bis (trimethylsilyloxy) -1, 3- dienes ith Oxalyl Chloride : General and Stereoselective Synthesis of γ-Alkylidenebutenolides » P.Langer et al., Chem.Eur.J.2000 , 6, N°7, 3204-3214 [6] .
Enfin, l'étape d) peut s'envisager selon tout type de réactions à la portée de l'homme de l'art, lesdites réactions permettant de convertir le groupement -OH en groupement réactif tel qu'un triflate ou un fluoroalkylsulfonate -S02- (CF2)n-CF3 avec n étant un entier allant de 1 à 8.
A titre d'exemple, lorsque le groupe partant X est un groupe triflate (symbolisé par OTf) , le composé référencé 5a faisant partie des composés de formule (V) , peut être synthétisé selon le schéma réactionnel particulier suivant :
(vm)
(vu) l)Et3N, Me3SiCl 2) i-Pr2Nli, -78°C suivi de Me3SiCl
(9a)
(X)
Selon ce schéma de synthèse particulier, le triflate (5a) est préparé à partir de l'alcool correspondant (X) par traitement avec l'anhydride triflique (Tf20) , en présence d'une base telle que la pyridine. L'alcool (X) provient de la réaction d'un 1, 3-bis (triméthylsiloxy) -1, 3-butadiêne (9a) convenablement substitué avec le chlorure d'oxalyle, catalysée par du triflate de méthyle. Cette réaction de cyclisation, ainsi que la préparation du 1,3- bis (triméthylsiloxy) -1, 3-butadiène (9a) sont adaptés des travaux de Langer, tels que ceux mentionnés ci- dessus. Le β-cétoester (VIII) précurseur du 1,3- bis (triméthylsiloxy) -1, 3-butadiène (9a) est obtenu par réaction de l'enolate lithie formé à partir du phénylacétate correspondant (VII) avec un α- alcoxyacétate de méthyle.
Les inventeurs ont découvert, de manière surprenante, que les composés (I) tels que définis dans le premier objet, y compris les composés exclus, peuvent être utilisés, de manière efficace, en tant qu'agents antioxydants pour la fabrication de compositions antioxydantes .
Ainsi, la présente invention a également pour objet des agents antioxydants de formule (I) suivante :
(D dans laquelle : les Ri, R6, R7 et R8, identiques ou différents, représentent H, -OH ou -OR9 ;
R2 représente H, -OH ou -OR9 ; R3 représente H, R9, -C02R9 ou -CO-NHRio ; ou R2 et R3 forment ensemble -O-CO- ;
- les R4 et R5, identiques ou différents, représentent H ou R9 ;
- R9 représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié, comportant de 1 à 20 atomes de carbone ; - Ro représente R9 ou un groupe -(CH2)a-NH-
(CH2)b-NH2, avec a et b, identiques et différents, étant des entiers allant de 2 à 4 ; et les sels de ceux-ci.
Lorsque R2 et R3 forment ensemble -O-CO-, l'agent antioxydant présente une structure chimique identique à celle du composé de formule (II) définie ci-dessus .
Parmi ces agents de formule (II) , on peut citer la norbadione sous forme diacide, pour laquelle les Ri et R7 représentent -OH, R2 et R3 forment ensemble -O-CO-, les R4, R5, R6 et R8 représentent H. La norbadione sous forme diacide peut être représentée par la formule (XI) suivante :
(XI )
On peut citer également, parmi les agents antioxydants selon l'invention, la norbadione sous forme de disel potassique, qui peut être ainsi représentée par la formule (XII) suivante (pouvant présenter deux formes (a) et (b) ) :
(XII) La norbadione est un produit naturel, qui a été extrait à ce jour de deux espèces de champignons. Elle constitue l'un des pigments du chapeau du bolet bai (Xerocomus badius) , qui est une espèce comestible très appréciée, tel que cela est décrit dans l'article « Pigments from the cap cuticle of the Bay Boletus », Angew.Chem.Int.Ed.Engl.23 (1984) ,n°6 [4]. On la trouve également dans le pisolithe des sables ( Pisolithus tinctorius) , comme l'indique l'article intitulé « A naphtalenoid pulvinic acid derivative from the Fungus Pisolithus Tinctorius », Phytochemis ry, vol 24, n°6, pp 1351-1354, 1985 [5] .
La norbadione est extraite de ces champignons sous forme de disel de potassium (formule XII) et peut être convertie en le diacide correspondant
(formule XI) par traitement avec une solution d'acide chlorhydrique .
Les inventeurs ont, de manière surprenante, mis en évidence l'activité antioxydante de la norbadione.
Grâce à leurs propriétés antioxydantes particulièrement efficaces, les agents antioxydants de formule (I) peuvent entrer dans la fabrication de compositions antioxydantes, en particulier de compositions pharmaceutiques, de compositions cosmétiques ou de compositions alimentaires.
Ainsi, l'invention a trait à des compositions pharmaceutiques, comprenant au moins un agent antioxydant selon l'invention tel que défini précédemment et un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
On entend par véhicule pharmaceutiquement acceptable un véhicule, qui peut être administré à un individu en même temps que l'agent antioxydant et qui ne comporte pas d'effet biologique indésirable.
Ces compositions pharmaceutiques peuvent être utilisées pour le traitement des maladies découlant d'un stress oxydant.
Ainsi, ces compositions pharmaceutiques comprenant les agents selon l'invention peuvent être utilisées pour le traitement de maladies inflammatoires, en particulier les maladies se traduisant, en réaction a un allergisant, par la production de cytokines .
Par exemple, des compositions pharmaceutiques comprenant de la norbadione sous forme de diacide (formule XI) ou de disel (formule XII) contribuent, de façon dose-dépendante à diminuer la production de cytokines TNF-α et IL-10 d'un hôte infecté par un allergisant tel qu'un liposaccharide, ce qui montre que les agents antioxydants, selon la présente invention, présentent une activité anti- inflammatoire.
Ces compositions pharmaceutiques peuvent être également utilisées pour assurer un effet protecteur de cellules vis-à-vis d'une apoptose consécutive à une accumulation de radicaux libres au sein desdites cellules. Ainsi, ces compositions peuvent être utilisées pour traiter, de manière préventive ou curâtive, des cellules ou un organismes vivant exposé (s) à un rayonnement ionisant induisant la production de radicaux libres.
De ce fait, ces compositions sont aptes à contrer les effets d'un rayonnement ionisant (par exemple, celui émanant d'une zone contaminée par des substances radioactives) ou d'un rayonnement ultra- violet envers des cellules soumises audit rayonnement, du fait que les agents antioxydants selon la présente invention incorporés dans ces compositions captent les radicaux formés par action dudit rayonnement sur ces cellules or organismes vivants. Ces compositions peuvent également être utilisées pour inhiber les effets secondaires d'un médicament induisant la production de radicaux libres. De ce fait, ces compositions peuvent atténuer la cytotoxicité de médicaments, engendrant par leurs effets secondaires, un stress oxydant, tel que cela est le cas du cisplatine.
En d'autres termes, l'invention a trait à l'utilisation d'un agent antioxydant tel que défini précédemment pour la fabrication d'une composition pharmaceutique destinée au traitement de maladies inflammatoires.
L'invention a trait à l'utilisation d'un agent antioxydant tel que défini précédemment pour la fabrication d'une composition pharmaceutique destinée au traitement d'un organisme vivant exposé à un rayonnement ionisant . L'invention a enfin trait à l'utilisation d'un agent antioxydant tel que défini précédemment pour la fabrication d'un médicament destiné à inhiber les effets secondaires d'un médicament induisant la production de radicaux libres.
On précise que, selon l'invention, on entend par traitement, un traitement pouvant être' préventif mais également curatif.
De plus amples détails concernant l'activité de ces compositions incorporant des agents antioxydants selon l'invention tels que mentionnés ci- dessus seront explicités dans la partie détaillée de la description.
La présente invention a également pour objet des compositions cosmétiques incorporant au moins un agent antioxydant selon l'invention.
Ces compositions cosmétiques peuvent se présenter sous différentes formes, telles que des crèmes, huiles, destinées à un usage topique cutané, le rôle des agents antioxydants étant de piéger les radicaux libres au niveau de la surface cutanée sur laquelle est appliquée la composition cosmétique. Les compositions selon l'invention contribuent ainsi à ralentir le processus de vieillissement cutané, engendré notamment par l'accumulation de radicaux libres.
Enfin, la présente invention a pour objet des compositions alimentaires, comprenant au moins un agent antioxydant selon l'invention. Les agents antioxydants selon la présente invention peuvent être utilisés, en particulier, en tant qu'additifs dans des compositions alimentaires pouvant produire, lors de leur vieillissement des radicaux libres, tels que les huiles, le beurre.
Des agents antioxydants particulièrement efficaces pouvant entrer dans les compositions pharmaceutiques, cosmétiques ou alimentaires, correspondent aux agents de formule (XI) ou (XII) , tel que définis ci-dessus.
D'autres avantages et caractéristiques de la présente invention apparaîtront encore à la lecture de la description qui suit, donnée à titre illustratif et non limitatif en référence aux dessins annexés.
Brève description des dessins.
les figures 1, 2 et 3 sont des graphiques illustrant l'activité antioxydante de la norbadione sous forme de disel potassique par rapport à des antioxydants classiques, ladite activité antioxydante étant mise en évidence par suivi de la dégradation de la thymidine soumise à un stress oxydant de nature radiative (rayons γ émis par le 137Cs sur la figure 1 ou rayons UV sur la figure 2) ou de nature chimique (figure 3) ; les figures 4 et 5 sont des graphiques illustrant l'effet anti-inflammatoire de la norbadione sous forme de diacide (figures 4) ou de disel potassique
(figures 5) par mesure de la production de certaines cytokines par des cellules soumises à un allergisant ; la figure 6 est un graphique illustrant l'activité protectrice de la norbadione sous forme de diacide ou de disel potassique vis-à-vis de cellules soumises à un rayonnement ionisant ; la figure 7 est un graphique illustrant l'activité protectrice de la norbadione sous forme de diacide ou de disel potassique vis-à-vis de cellules soumises à l'action du cisplatine ; la figure 8 est un graphique qui représente la contraction vasculaire d'anneaux d'aorte de rat C(g) (g signifiant gramme) en fonction de la concentration en pyrrogallol [Pyr] (μM) , en l'absence de norbadione et en présence de norbadione 100 μM ; la figure 9 est un graphique représentant le taux de relaxation vasculaire d' anneaux d'aorte de rat R(%) en fonction de la concentration en Sin-1 [Sin-1] (μM) en l'absence de norbadione et en présence de norbadione 100 μM.
EXPOSE DETAILLE DE L'INVENTION
Les exemples 1 à 5 illustrent les propriétés antioxydantes de la norbadione sous forme de diacide ou de disel.
L'exemple 6 illustre un exemple de synthèse totale d'un composé de formule (III) présentant également une activité antioxydante. Exemple 1. Evaluation de l'activité antioxydante de la norbadione.
L'évaluation de l'activité antioxydante du disel potassique de la norbadione a été effectuée par un test de criblage in vitro.
Ce test est basé sur le suivi de la dégradation de la thymidine soumise à différents stress oxydants en présence de différents agents antioxydants, qui sont la norbadione sous forme de disel potassique
(intitulée Nor-B sur les figures 1 à 3) conforme à l'invention, et les agents antioxydants suivants : quercétine (1) , fisétine (2) , myricétine (3) , catéchine
(4) , 7-hydroxy-4-méthyl-8-nitrocoumarine (5) , Trolox (6) sur les figures 1 à 3.
En présence d'un antioxydant, la thymidine est protégée de manière plus ou moins efficace selon la nature dudit antioxydant. L'efficacité de l' antioxydant est quantifiée en dosant la thymidine restante (quantifiée en % en ordonnée du graphique) à l'aide d'un dosage immunoenzymatique, du type ELISA dit « par compétition ». Ce dosage ELISA consiste à réaliser une compétition de liaison à un anticorps monoclonal spécifique de la thymidine fixé sur une phase solide, entre la thymidine restante à la fin du test et la thymidine marquée par une enzyme (l'acétylcholine esterase). Après lavage, l'enzyme fixée est quantifiée par détection colorimétrique à l'aide du diacide 5,5'- dithio-bis (2-nitrobenzoïque) (dit réactif d'Ellman) et en présence d' acêtylcholine. Trois séries de tests ont été mises en œuvre :
- une première série consistant à doser la thymidine restante suite à une irradiation gamma (pendant 3H30) induite par du césium 137, ladite thymidine étant présente en début de test à une concentration de 15 μM avec une concentration d' antioxydant de 12 μM (figure 1) ;
- une deuxième série consistant à doser la thymidine restante suite à une irradiation ultraviolette à 254 nm (l,75J/cm2) en présence de H202 5mM, ladite thymidine étant présente en début de test à une concentration de 70 μM avec une concentration d' antioxydant de 100 μM (figure 2) ; - une troisième série consistant à doser la thymidine restante soumise à un stress chimique oxydant (réactif de Fenton FeS04/EDTA 0,35mM en présence de H02 35mM) , ladite thymidine étant présente en début de test à une concentration de 70 μM avec une concentration d' antioxydant de 20 μM (figure 3).
Les résultats de ces tests sont regroupés respectivement, pour la première série sur la figure 1, pour la deuxième série sur la figure 2, pour la troisième série sur la figure 3. Les figures 1 à 3 montrent explicitement que la norbadione présente le meilleur pouvoir antioxydant (ce dernier étant quantifié par la mesure du pourcentage de thymidine restante après action du stress oxydant, % représenté en ordonnée des graphiques des figures 1 à 3) par comparaison, par exemple, avec la quercétine (1) issue du thé ou du vin réputée pour sa propriété antioxydante puissante et par comparaisons avec les autres agents antioxydants classiques (2) , (3) , (4) , (5) et (6) .
EXEMPLE 2. Evaluation du pouvoir anti-inflammatoire de la norbadione .
Dans cet exemple, on démontre l'effet biologique antiinflammatoire induit par l'activité antioxydante de la norbadione sous forme de diacide ou de disel potassique, en détectant des cytokines produites par des cellules de type monocytes lors d'un traitement par un liposaccharide allergisant. Ce liposaccharide est une endotoxine située sur la membrane externe des bactéries Gram-négatives . En particulier, il stimule la production de cytokines proinflammatoires par les cellules mononucléaires (monocytes, macrophages) de l'hôte infecté.
Si en présence du produit à tester, une modification de la production des cytokines est mise en évidence, on en déduit que le produit présente un activité anti-inflammatoire.
Ce test est effectué de la façon suivante. Des cellules sanguines humaines de donneurs sains (dites PBMC pour 'peripheral blood mononuclear cells') sont incubées avec la norbadione sous forme diacide ou de disel potassique à des concentrations croissantes (de 10"8 M à 10"5 M) avec ou activation simultanée par le lipopolysaccharide de Salmonella abortus egui à la concentration de 5 μg.mL"1, dans des plaques de culture de 24 puits, pendant 24 heures à 37°C, dans une atmosphère humidifiée de 5% en C02 et 95% en air. Après incubation, le surnageant est enlevé et stocké à -20°C jusqu'à réalisation du test. Plus précisément, la détection des cytokines présentes dans les échantillons est mesurée à l'aide d'un dosage ELISA cytométrique de type « sandwich ». Des microparticules (billes) de polystyrène (de 6 types différents, chacunes étant marquées par une quantité différente de colorant fluorescent dont la longueur d'onde d'émission FL-3 est d'environ 650 nm) sont couplées à un anticorps spécifique de l'une des 2 cytokines TNFα, IL-2, IL- 10. On obtient ainsi des anticorps de type Ac-PS. Lors de l'incubation, les cytokines présentes dans l'échantillon se lient aux anticorps Ac-PS. Les cytokines capturées sont détectées à l'aide d'un test immunologique mené directement, qui utilise 2 anticorps spécifiques de chaque cytokine couplés à de la phycoérythrine qui émet à une longueur d'onde FL-2 d'environ 585 nm (Ac-PE). Après lavage de l'excès de Ac-PE, la présence des cytokines est mesurée par cytométrie en flux.
On mesure la fluorescence selon les 6 intensités de fluorescence FL-3 et selon la longueur d'onde FL-2. L'intensité de la fluorescence FL-3 permet de déterminer la quantité de chaque cytokine présente dans l'échantillon (par comparaison avec des courbes standards) . De plus amples informations concernant cette technique sont disponibles dans l'article de Cook et al, Journal of Immunological Methods, 2001, 254, pages 109-118 [7]
Les résultats de ces tests sont regroupés sur les figures 4 à 5 qui représentent le pourcentage de réponse noté % (c'est-à-dire la quantité de cytokine observée par rapport à la quantité observée lors d'un contrôle où le produit n'a pas été ajouté) en fonction de la concentration (en nM) de norbadione sous forme de diacide ou de disel potassique, noté [Nor-A] ou [Nor-B] sur lesdites figures.
En présence de norbadione sous forme de diacide (Nor-A) (figure 4) , ou de norbadione sous forme de disel potassique, (Nor-B) (figure 5) , les tests ont mis en évidence une réduction significative dose- dépendante de la production de cytokines TNF-α et IL- 10, ce qui prouve l'effet anti-inflammatoire de la norbadione .
EXEMPLE 3. Evaluation de l'activité de protection par la norbadione de cellules soumises à un rayonnement ionisant.
Ce test consiste à mesurer, en présence ou en l'absence de la norbadione sous forme de diacide ou de disel potassique, le taux de survie de cellules traitées par un rayonnement ionisant, à l'aide d'indicateurs sélectifs de certains organites cellulaires tels que les mitochondries .
Des échantillons de norbadione sous forme diacide ou de disel potassique sont ajoutés à des cultures de cellules RDM4 (lymphomes de souris AKR) à des concentrations croissantes (de 0,12 à 20 μg/mL) , deux heures avant l'irradiation. Celle-ci est réalisée par exposition de plaques microtests contenant les cellules à des rayons X de 15 MV, à 8 Gy, le milieu de culture étant inchangé.
Le nombre de cellules vivantes est déterminé au sixième jour au moyen du test Uptiblue (qui consiste à mesurer l'activité mitochondriale des cellules) . Le réactif Uptiblue (réazurine, encore commercialisé sous la marque ALAMAR BLUE) est un indicateur coloré d'oxydoréduction. La réazurine (bleue et non fluorescente) est réduite en résorufine (rose et fluorescente) par les cellules vivantes. Expérimentalement, l' Uptiblue (dilué au 1/4 dans le milieu de culture) est ajouté aux cellules à raison de 20 μL par puits de 200 μL. Après une incubation de 4 heures à 37°C, on mesure la fluorescence à une longueur d'onde de 590 nm, après excitation à une longueur d'onde de 530 nm à l'aide d'un lecteur de microplaques en fluorescence
(Fluorolite 1000, Dynex) . L'intensité de fluorescence est proportionnelle au nombre de cellules vivantes.
Elle est exprimée en « unité arbitraire de fluorescence ». Cette valeur dépend du réglage de l'appareil (notamment de la tension) et du bruit de fond (du à la fluorescence émise par des puits ne contenant pas de cellules, mais contenant de l'Utpiblue) . Cette dernière valeur est soustraite des valeurs expérimentales. Les résultats de ce test sont regroupés sur la figure 6, qui représente la fluorescence observée permettant de quantifier le nombre de cellules vivantes, ladite fluorescence étant exprimée en unités arbitraires de fluorescence en ordonnée du graphique
(U.A.F) en fonction de la concentration en norbadione sous forme de diacide ou de disel potassique, notée
[Nor-A] ou [Nor-B] (en μg/mL) . Sur cette figure, on constate une forte augmentation du nombre de cellules vivantes en fonction de la concentration de la norbadione .
Cependant, à partir d'une concentration en norbadione de 20 μg/mL, cette valeur diminue fortement.
On en déduit ainsi, que la nordadione, sous sa forme de disel ou de diacide, protège les cellules contre les rayonnements ionisants, de manière significative et dose-dépendante.
On peut noter que, sans irradiation, la norbadione est sans effet sur la croissance et la viabilité des cellules RDM4 , même à 20 μg/mL.
EXEMPLE 4. Evaluation de l'activité de protection par la norbadione de cellules soumises à l'action du cisplatine.
Ce test consiste à mesurer, en présence de norbadione sous forme de diacide ou de disel potassique, le taux de survie de cellules traitées par le cisplatine. Des cellules Ki de carcinomes thyroïdiens humains sont cultivées dans des plaques microtest de 96 puits à font plat en présence d'une concentration unique (20 μg/mL) de norbadione sous forme de diacide ou de disel potassique. Après deux heures, un agent génotoxique, le cisplatine, est ajouté au milieu de culture à des concentrations croissantes (de 12 à 100 μM) . Deux jours plus tard, le nombre de cellules est déterminé au moyen du test à la sulforhodamine B (dite SRB), qui mesure la quantité de protéines cellulaires.
La sulforhodamine B (dite SRB) est un colorant anionique se fixant de façon électrostatique aux protéines cellulaires. Ce test est fréquemment utilisé pour l'évaluation des activités cytotoxiques et cytostatiques de nouvelles drogues antitumorales.
De plus amples informations concernant cette technique sont disponibles dans l'article de Papazisis et col « Optimization of the sulforhodamine B colorimetric assay », J. Immunol .Meth, 208-, pages 151- 158, 1997 [8] .
Les résultats de ce test sont regroupés sur la figure 7, qui représente la fluorescence observée près addition de SRB (exprimée en unités arbitraires de fluorescence) en fonction de la concentration en cisplatine (en μM) .
D'après cette figure, l'on peut constater que la cytotoxicite du cisplatine est très nettement atténuée par la présence de norbadione sous forme de disel ( courbe a) ou de diacide (courbe b) , par rapport au cas où la cytotoxicite du cisplatine est évaluée en l'absence de norbadione (courbes c et d) . Cette activité de protection des cellules vis-à-vis du cisplatine découle de l'activité antioxydante de la norbadione .
EXEMPLE 5 - Effets de la norbadione sur les anneaux d'aorte de rat.
Cet exemple a pour objectif de montrer l'activité antioxydante de la norbadione sous forme de disel potassique sur les anneaux d'aorte de rat.
Ces séries de tests mettent en évidence l'activité antioxydante de la norbadione sur les anneaux d'aorte de rat.
Au cours d'une première série de tests, on soumet, dans un premier temps, des anneaux d'aorte de rat, au pyrogallol, générateur de radicaux superoxydes, ces radicaux induisant une contraction des anneaux d'aorte de rat et on mesure, en l'absence de norbadione le taux de contraction de ces anneaux.
Dans un deuxième temps, on réitère les mêmes opérations, dans les mêmes conditions que celles mentionnées ci-dessus, cette fois en présence de norbadione.
•Les résultats sont regroupés sur la figure 8, qui représente le taux de contraction vasculaire des anneaux C(g) en fonction de la concentration en pyrrogallol [Pyr] (μM) , en l'absence de norbadione (courbe a) et en présence de norbadione à la concentration de 100 μM (courbe b) . L'on constate que la courbe (a) est située au-dessus de la courbe (b) , ce qui signifie que la contraction des anneaux d'aorte provoquée par le pyrogallol est supprimée en présence de norbadione, du fait que la norbadione capte les espèces oxygénées réactives radicalaires engendrées par le pyrogallol.
Au cours d'une deuxième série de tests, on soumet des anneaux d'aorte de rat, au SYN-1 (3- morpholino-sydnonimime) , générateur de radicaux NO, induisant une relaxation des anneaux d'aorte de rat et on mesure le taux de relaxation de ces anneaux. En présence de norbadione, on mesure, dans les mêmes conditions que celles mentionnées ci-dessus, le taux de relaxation des anneaux. Les résultats sont reportés sur la figure 9, qui représente le taux de relaxation vasculaire des anneaux R(%) en fonction de la concentration en Sin-1 [Sin-1] (μM) en l'absence de norbadione (courbe a) et en présence de norbadione 100 μM) (courbe b) .
L'on constate que la courbe (a) est située en-dessous de la courbe (b) , ce qui signifie que la relaxation des anneaux d'aorte provoquée par le SYN-1 est amoindrie en présence de norbadione, du fait que la norbadione capte partiellement les radicaux NO.
EXEMPLE 6-Préparation du composé de formule (III)
Cet exemple présente un exemple de préparation d'un composé de formule (III) :
Ce composé est conforme à la définition générale des composés de formule (I) avec les Rx, R2 / R3/ R6 et R8 représentent H, les R4 et R5 représentent - CH3, les R7 représentent -OCH3.
La synthèse de ce composé correspond au schéma réactionnel suivant :
1) Et3N, Me3SiCl
2) i-Pr2NLi, -78°C suivi de Me3SiCl
(9b)
(10a)
suivi d'un couplage dit « de Suzuki » pour former la molécule de formule (III) , le couplage étant précédé de la synthèse du composé (4a) :
On précise que les déplacements chimiques pour les résultats de RMN ^Η et de RMN 13C sont symbolisés par δ et sont exprimés en ppm.
a) Préparation du composé (8a).
Dans un bicol de 100 mL, le 4- tiαêthoxyphénylacétate de méthyle (7a) (4,7 mL ; 29,6 mmol ; 2éq) est dissous dans le THF (15 mL) et le mélange est refroidi vers -70°C. Une solution de diisopropylamidure de lithium 2M dans l'heptane (15 mL ; 30 mmol ; 2éq) est ajoutée goutte à goutte à la seringue et le mélange est maintenu 1 heure vers -70°C. Le méthoxyacétate de méthyle (1,5 mL ; 15 mmol ; 1 éq) est additionné à la seringue et on laisse réagir 5 heures en revenant lentement à température ambiante. Après hydrolyse par une solution saturée de chlorure d'ammonium, la phase aqueuse est extraite 3 fois au dichlorométhane, séchée sur MgS04 et filtrée. Après évaporation, on obtient une huile orange que l'on chromatographie sur colonne de silice (éluant : pentane/acétate d'éthyle : 8/2). On isole ainsi 2,93 g de produit. Aspect : solide jaune, TfUΞion : 44 °C, Rendement : 77%.
RMN ^ (CDC13) : δ= 3,37 (s, 3H, OMe) ; 3,75 (s, 3H, OMe) ; 3,81 (s, 3H, C02Me) ; 4,06 et 4,10 (AB, 0^=17,1 Hz, 2H, CH2) ; 4,90 (s, 1H, CH) ; 6,91 (d, J=8,5 Hz, 2H, Ph) ; 7,26 (d, J=8,5Hz, 2H, Ph) .
RMN 13C (CDCI3) : δ= 52,5 ; 55,2 ; 59,3 ; 59,8 ; 69,6 ; 113,6 ; 114,2 ; 123,7 ; 130,6 ; 132,0 ; 159,5 ; 169,0 ; 202,0.
IR (KBr, cm"1) : 1612 ; 1741 ; 2836 ; 2960 ; 3013 ; 3434.
Analyse élémentaire (%) : calculée pour Cι3Hι605 : C=61,90 ; H=6,39 ; trouvée C=62,03 ; H=6,44.
b) Préparation du composé (9b) .
Le produit de condensation (8a) préparé ci- dessus (5,65 g ; 22,4 mmol ; 1 éq) est dissous dans le THF (47 mL) dans un ballon de 100 mL. La triéthylamine (3,7 mL ; 26,6 mmol ; 1,2 éq.) puis le chlorure de triméthylsilyle (3,7 mL ; 29 mmol ; 1,3 éq.) sont ajoutés à la seringue. On observe immédiatement la formation d'un précipité blanc. On laisse réagir une nuit à température ambiante. Après ëvaporation du THF, le résidu est repris dans le pentane. Le précipité formé est filtré sur fritte puis sur millipore 5 μm et rincé au pentane. Après ëvaporation, 7,28 g d'une huile orange sont obtenus .
Le dérivé monosilylé obtenu (7,27 g ; 22,4 mmol ; léq.) est placé dans un ballon de 100 mL et dissous dans le THF (33 mL) . Le mélange est refroidi vers -70°C. Une solution de LDA (lithium diisopropylamidure) 2M dans l'heptane (11,2 mL ; 22,4 mmol ; 1 éq.) est ajoutée goutte à goutte à la seringue et le mélange est maintenu 1 heure vers -70°C. Le chlorure de triméthylsilyle (3,4 mL ; 26,7 mmol ; 1,2 éq.) est additionné à la seringue et le mélange est ramené à la température ambiante en 3 heures . Après ëvaporation du THF, le résidu est repris dans le pentane et le précipité blanc formé est filtré sur fritte puis sur millipore 5 μm. Après concentration, 8,52 g d'une huile orange sont obtenus. Rendement = 95 %. Deux isomères géométriques sont présents dans cet échantillon.
RMN XE (CDC13) : δ= 0,04 (s, 9H, OSiMe3 isomère majoritaire) , 0,05 (s, 9H, OSiMe3 isomère minoritaire) 0,28 (s, 9H, OSiMe3 isomère minoritaire) 0,30 (s, 9H, OSiMe3 isomère majoritaire) • 3 r46 (s, 3H, OMe isomère majoritaire) ;
3,49 (s, 3H, OMe isomère minoritaire) ; 3,51 (s, 3H, OMe isomère minoritaire) ; 3,56 (s, 3H, OMe isomère majoritaire) ; 3,80 (2s, 2*3H, OMe isomère minoritaire et Orne isomère majoritaire) ; 5,62 (s, 1H, CH ismoère majoritaire) ; 5,95 (s, 1H, CH ismoère minoritaire) ; 6,83 (d, J=8,5 Hz, 2H, Ph) ; 7,24-7,31 (m, 2H, Ph) .
c) Préparation du composé (10a) .
Dans un tricol de 1 L, le dérivé bis-silylé
(9b) préparé ci-dessus (8,52 g ; 21,4 mmol ; 1 éq.) est dissous dans du dichloromethane (400 mL) et le mélange est refroidi vers -70 °C. Le chlorure d'oxalyle (2,5 mL ; 28,6 mmol ; 1,3 éq. ) est ajouté à la seringue et le milieu devient orange. Une solution de triflate de triméthylsilyle (1,2 mL ; 6,6 mmol ; 0,3 éq.) dans le dichloromethane (120 mL) est coulée par une ampoule à additionner en une heure. Le bain froid est saturé de carboglace pour que le milieu réactionnel revienne très lentement à température ambiante au cours de la nuit . Après hydrolyse par une solution saturée de NaCl, on extrait 3 fois avec du dichloromethane, on sèche sur MgS04, on filtre et on concentre. On récupère 7,95 g d'un solide marron. Après chromatographie sur colonne de silice (éluant : acétate d' éthyle/pentane : l/l) , on obtient 3,53 g de produit (5'). Aspect : solide jaune, Tusion≈ 160°C, Rendement= 54 %, isomère (E) .
RMN XH (CD3OD) : δ= 3 , 85 ( s , 3H, OMe ou C02Me) ; 3 , 87 ( s , 3H, C02Me ou OMe ) ; 4 , 16 ( s , 3H, OMe phényle) ; 6 , 96 - 9 , 99 (m, 2H, Ph) ; 7 , 47 -7 , 50 (m, 2H, Ph) . RMN 13C (acétone-d6) : δ= 52,3 ; 55 „2 ; 59,8 ; 113,5 ; 114,5 ; 124,6 ; 130,6 ; 131,7 ; 139,9 ; 143,3 ; 160,4 ;
164.5 ; 167,3.
IR (KBr, cm"1) : 1667 ; 1731 ; 3239 ; 3295. Analyse élémentaire (%) : calculée pour Cι5Hι407 : C=58,82 ; H=4,61 ; trouvée C=59,07 ; H= 4,92.
d) Préparation du composé (5b) .
Dans un ballon de 250 mL, l'alcool (10a) préparé ci-dessus (3,24 g ; 10,6 mmol ; 1 éq. ) est mis en suspension dans le dichloromethane (100 mL) et le mélange est refroidi vers -70°C. La pyridine (2,2 mL ; 27 mmol ; 2,5 éq.) puis l'anhydride triflique (2,2 mL ; 13 mmol ; 1,2 éq.) sont ajoutés à la seringue. Après retour à température ambiante en 6 heures, le mélange est hydrolyse, lavé 3 fois à l'eau, séché sur MgS04, filtré et concentré. Après chromâtographie sur colonne de silice (éluant : dichloromethane), on isole 3,14 g de triflate (VI) . Aspect : solide jaune ; TfUSion=93°C ; Rendement=68%, isomère (E) .
RMN ^Η (CDC13) : δ= 3,85 (s, 3H, OMe) ; 3,90 (s, 3H, OMe) ; 4,29 (s, 3H, OMe) ; 6,94 (d, J=9,2 Hz, 2H, Ph) .
RMN 13C (CDCI3) : δ= 53,1 ; 55,5 ; 61,1 ; 114,6 ; 116,4 ;
120.6 ; 122,6 ; 129,4 ; 131,4 ; 135,7 ; 155,8 ; 161,3 ; 166,1.
Masse [m/z (%) 3 : 456 (100) (M+NH4 +) ; 439 (11) (M+l) . R (KBr, cm"x) 1604 1643 1667 1733 1744
1783 ; 1802 ; 2961,
e) Préparation du composé (4a)
Le bistriflate dérivé du 1,7- dihydroxynaphtalène (157 mg ; 0,98 mmol), le pinacolborane (0,44 mL ; 3 mmol), le PdCl2 (44 mg ; 0,06 mmol), la triéthylamine (0,84 mL ; 6 mmol) et le dioxane préalablement dégazé (8 mL) sont introduits dans un bicol de 50 mL et placés sous atmosphère d'argon. On porte à reflux pendant 2 heures sous agitation. Après hydrolyse par 20 mL d'eau, la phase aqueuse est extraite 3 fois avec du dichloromethane. Les phases organiques sont réunies, séchées sur MgS04, filtrées et concentrées . Une chromâtographie sur colonne de silice (éluant : hexane/acétate d'éthyle : 8/2) permet d'isoler 104 mg de dérivé bore ; Rendement=43% .
RMN XH (CDC13) : δ= 1,43 et 1,49 (2s, chacun 12H, Me) ;
7,55 (t , 1H , J=6,7 Hz , g) ; 7,88 (m , 2H) ; 7,97
(d , 1H , J=6,7 Hz) ; 8,09 (d , 1H , J=6,7 Hz) ; 9,31
(s , 1H) .
RMN 1 C (CDCI3) : δ= 24,8 ; 83,6 ; 126,9 ; 128,2 ; 125,7 ; 127,2 ; 129,8 ; 130,1 ; 130,9 ; 134,7 ; 136,0 ; 136,5. f) Préparation du composé final (III) .
Le triflate (5b) préparé ci-dessus (214 mg ; 0,488 mmol ; 2,1 éq.), le 1, 7-bis (4 , 4 , 5, 5- tétraméthyl-1, 3 ,2-dioxaborolan-2-yl) naphatlène (89 mg ; 0,234 mmol ; 1 éq.) (4b) le dichlorobis (triphénylphosphine) palladium (19 mg ; 0,003 mmol ; 0,1 éq.) et 20 mL de THF préalablement dégazé sont introduits dans un bicol de 50 mL et placés sous atmosphère d'argon. Une solution aqueuse 2M de bicarbonate de sodium (4,8 mL) est ajoutée. On porte à reflux pendant 3 heures. Après hydrolyse par 30 mL d'eau, la phase aqueuse est extraite 3 fois avec du dichloromethane. Les phases organiques sont réunies, séchées sur MgS04, filtrées et concentrées. Une chromâtographie sur colonne de silice (éluant : hexane/acétate d'éthyle : 6/4) permet d'isoler 104 mg de composé () . Aspect : solide jaune. Rendement : 63%.
RMN H (CDC13) : δ= 3,63 (s, 3H, OMe énolique) ; 3,80 (s,
3H, OMe phénolique ; 3,86 ; 3,87 ; 3,90 ; 3,92 (4s, 3H chacun, OMe phénoliques, C02Me) ; 6,94-6,99 (m, 4H,
CHCOMe) ; 7,57-7,59 (m, 2H) ; 7,66-7,74 (m, 5H) ; 7,90
(s, 1H) ; 7,96-7,99 (m, 2H) .
RMN 13C (CDCI3) : δ= 52,6 ; 55,2 ; 60,6 ; 61,5 ; 103,4
106,5 ; 114,1 ; 116,9 ; 123,2 ; 125,9 ; 126,5 ; 127,3
127,5 ; 128,7 ; 129,3 ; 130,1 ; 130,6 ; 130,7 ; 131,3
133,1 ; 139,4 ; 139,5 ; 160,3 ; 163,0 ; 164,0 ; 166,8 168,0 Analyse élémentaire (%) : calculée pour C40H32O12 C=68,18 ; H=4,58 ; trouvée C=68,03 ; H=4,83.
Références citées.
[1] M.Jang et al, « Cancer Chemoprotective Activity of Resveratrol, a natural product derived from grapes », Science 1997, 275, 218-220 ;
[2] M.V Eberhardt et al. « Antioxydant Activity of Fresh Apples », Nature 2000, 405, 903-904 ;
[3] T.Finkel et al. « Oxydants, Oxidative Stress and the biology of ageing », Nature 2000, 408, 239- 247 ;
[4] « Pigments from the cap cuticle of the Bay Boletus », Ange . Chem. Int .Ed.Engl.23 (1984) ,n°6 ;
[5] « A naphtalenoid pulvinic acid dérivâtive from the Fungus Pisolithus Tinctorius », Phytochemistry, vol 24, n°6, pp 1351-1354, 1985 ;
[6] P. Langer et al . , « Domino Reaction of 1,3- bis (trimethylsilyloxy) -1, 3-dienes with Oxalyl
Chloride : General and Stereoselective Synthesis of γ-Alkylidenebutenolides » Chem.Eur . J.2000, 6, N°7,
3204-3214;
[7] Cook et al, Journal of Immunological Methods, 2001, 254, pages 109-118 ; [8] Papazisis et col « Optimization of the sulforhodamine B colorimetric assay », J. Immunol.Meth, 208, pages 151-158, 1997 [8] .

Claims

REVENDICATIONS
1. Composé répondant à la formule (I) suivante :
(I) dans laquelle : les Ri, R6, R7 et R8, identiques ou différents, représentent H, -OH ou -OR9 ;
R représente H, -OH ou -OR9 ; R3 représente H, R9, -C02R9 ou -CO-NHRι0 ; ou R2 et • R3 forment ensemble -O-CO- ;
- les R4 et R5, identiques ou différents, représentent H ou R9 ;
- Rg représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié, comportant de 1 à 20 atomes de carbone ;
- Rio représente R9 ou un groupe -(CH2)a-NH- (CH2)b-NH , avec a et b, identiques ou différents, étant des entiers allant de 2 à 4 ; et les sels de ces composés ; à l'exception :
- du composé pour lequel R2 et R3 forment ensemble un groupe -OCO-, les' R4, R5, Rs et R8 représentent H, les Rx et R7 représentent -OH et les disels de potassium correspondants à ce composé ;
- du composé dans lequel R2 et R3 forment ensemble un groupe -O-CO-, les Rx et R7 représentent - OCH3, les R4 et R5 représentent -CH3 et les R6 et R8 représentent H ;
- du composé dans lequel les Ri, R2 et R7 représentent -0-CH3, R3 représente -C02CH3, les R4 et R5 représentent CH3 et les R6 et R8 représentent H.
2. Composé selon la revendication 1, pour lequel R2 et R3 forment ensemble un groupement -O-CO-, ledit composé répondant à la formule (II) suivante :
(II) les Ri, R4, R5, R6, R7 et R8 ayant la même définition que celle donnée dans la revendication 1.
3. Composé répondant à la formule (III) suivante :
( III )
4. Procédé de préparation d'un composé de formule (I) suivante :
(D
dans laquelle : - les Ri, R6, R7 et R8 , identiques ou différents , représentent H, -OH ou -OR9 ;
R2 représente H, -OH ou -OR9 ; R3 représente H, R9 , -C02R9 ou -CO-NHRι0 ; ou R2 et R3 forment ensemble -O-CO- ; - les R4 et R5 , identiques ou différents , représentent H ou R9 ; - R9 représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié, comportant de 1 à 20 atomes de carbone ;
- Rio représente R9 ou un groupe -(CH2)a-NH- (CH2)b~NH2, avec a et b, identiques ou différents, étant des entiers allant de 2 à 4 ; et les sels de ces composés, ledit procédé comprenant successivement :
- une étape consistant à faire réagir un composé de formule (IV) suivante :
dans laquelle :
-les Ri, R2 et R3 ont la même définition que celle donnée dans la revendication 1; -les Ru, R12 représentent, indépendamment, -B(0Rι3) (0RX4) ou -Sn(Rι5)3 ;
-les R13 et R14, identiques ou différents, représentent H ou un groupe alkyle de 1 à 7 atomes de carbone ou les Ri3 et R14 forment ensemble un groupe alkylene linéaire ou ramifié ;
-Ri5 représente un groupe méthyle ou butyle, avec un composé de formule (V) suivante :
(V) dans laquelle :
-les R4, R5, R6, R7 et R8 répondent à la même définition que celle donnée dans la revendication 1; - X représente un groupe partant, ladite réaction s 'effectuant en présence d'une base et d'un catalyseur à base de platine ou palladium ; et -éventuellement une étape de traitement destinée à obtenir un sel correspondant au composé de formule (I) .
5. Procédé de préparation selon la revendication 4, dans lequel le catalyseur à base de platine est le dichlorobis (triphénylphosphine) palladium.
6. Procédé de préparation selon la revendication 4 ou 5, dans lequel le composé intermédiaire (IV) , avec Ru et R12 représentant B(0Ri3) (0RX4) , est préparé par réaction d'un composé dérivé du naphtalène de formule (VI) :
(VI) dans laquelle :
-les Ri, R2 et R3 ont la même définition que celle donnée dans la revendication 1 ;
- les Y, identiques ou différents, représentent des groupes partants ; avec un composé bore répondant à l'une des formules suivantes :
RX3 et R14 ayant la même signification que celle donnée dans la revendication 4, ladite réaction s'effectuant en présence d'une base et d'un catalyseur à base de platine ou de palladium.
7. Procédé de préparation selon l'une quelconque des revendications 4 à 6, dans lequel le composé intermédiaire (V) est préparé par la succession d'étapes suivantes : a) réaction d'un phénylacëtate de formule (VII) suivante :
(VII) les R5, R6, R7 et R8, ayant la même définition que celle donnée dans la revendication 1, en milieu basique, avec un α-alcoxyacétate d' alkyle de formule R4O-CH2-CO-0Alk, R4 répondant à la même définition que celle donnée dans la revendication 1, le groupement Alk étant un groupement alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 20 atomes de carbone, à l'issue de laquelle l'on obtient un composé de formule (VIII) suivante :
(VIII)
b) réaction du composé (VIII) , en milieu basique avec un composé silylé de formule (Rι6)3SiHal, RιS étant un groupe alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 4 atomes de carbone, Hal étant un groupe halogène, tel que F, Cl, Br, I, à l'issue de laquelle l'on obtient un composé disilylé de formule (IX) :
(IX)
c) réaction de cyclisation du composé (IX) avec le chlorure d'oxalyle (C1C0)2, à l'issue de laquelle l'on obtient le composé de formule (X) :
(X) d) réaction du composé avec un réactif apte à former par réaction avec le -OH du cycle lactone un groupe partant X à l'issue de laquelle l'on obtient le composé de formule (V) .
8. Agent antioxydant de formule (I) suivante
(D dans laquelle : les Ri, R6, R7 et R8, identiques ou différents, représentent H, -OH ou -OR9 ;
- R2 représente H, -OH ou -ORg ;
- R3 représente H, R9, -C02R9 ou -CO-NHRι0 ; ou
- R2 et R3 forment ensemble -O-CO- ;
- les R4 et RΞ, identiques ou différents, représentent H ou R9 ;
- R9 représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié, comportant de 1 à 20 atomes de carbone ;
- Rio représente R9 ou un groupe -(CH2)a-NH- (CH2)b-NH2, avec a et b, identiques ou différents, étant des entiers allant de 2 à 4 ; et les sels de ceux-ci.
9. Agent antioxydant selon la revendication 8, pour lequel R2 et R3 forment ensemble un groupement - 0-CO-, répondant à la formule (II) suivante :
( II )
les Ri, R4, R5, R6, R et R8 ayant la même définition que celle donnée dans la revendication 8.
10. Agent antioxydant selon la revendication 8, dans lequel les R4 R5, R6 et R8 correspondent à un atome d'hydrogène, les Ri et R7 représentent -OH, ledit composé répondant à la formule
(XI) suivante :
(XI )
11. Agent antioxydant selon la revendication 8, correspondant au disel potassique du composé de formule (XI) de la revendication 10, ledit disel, existant sous deux formes (a) et (b) répondant à la formule (XII) suivante :
(a) (b)
(XII)
12. Composition pharmaceutique comprenant au moins un agent antioxydant selon l'une quelconque des revendications 8 à 11 et un véhicule pharmaceutiquement acceptable .
13. Composition cosmétique comprenant au moins un agent antioxydant selon l'une quelconque des revendications 8 à 11.
14. Composition alimentaire comprenant au moins un agent antioxydant selon l'une quelconque des revendications 8 à 11.
15. Utilisation d'un agent antioxydant tel que défini dans les revendications 8 à 11 pour la fabrication d'une composition pharmaceutique destinée au traitement de maladies inflammatoires .
16. Utilisation d'un agent antioxydant tel que défini dans les revendications 8 à 11 pour la fabrication d'une composition pharmaceutique destinée au traitement d'un organisme vivant exposé à un rayonnement ionisant induisant la production de radicaux libres.
17. Utilisation d'un agent antioxydant tel que défini dans les revendications 8 à 11 pour la fabrication d'une composition pharmaceutique destinée à inhiber les effets secondaires d'un médicament induisant la production de radicaux libres.
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