FR2841555A1

FR2841555A1 - Nouveaux composes, utilisables en tant qu'agents antioxydants dans des compositions pharmaceutiques, cosmetiques ou alimentaires et leur procede de preparation

Info

Publication number: FR2841555A1
Application number: FR0208081A
Authority: FR
Inventors: Charles Mioskowski; Gall Thierry Le; Marine Desage; Stephane Meunier; Stephanie Nowaczyk; Frederic Taran
Original assignee: Centre National de la Recherche Scientifique CNRS; Commissariat a lEnergie Atomique CEA
Current assignee: Centre National de la Recherche Scientifique CNRS; Commissariat a lEnergie Atomique et aux Energies Alternatives CEA
Priority date: 2002-06-28
Filing date: 2002-06-28
Publication date: 2004-01-02
Anticipated expiration: 2022-06-28
Also published as: EP1517902A2; WO2004002953A3; JP2006507226A; US20110098351A1; WO2004002953A2; AU2003258827A1; AU2003258827A8; FR2841555B1; CA2490677A1

Abstract

La présente invention a pour objet de nouveaux composés, pouvant être utilisés en tant qu'agents antioxydants dans des compositions pharmaceutiques, cosmétiques ou dans des produits alimentaires, lesdits composés comportant un noyau naphtalène sur lequel est greffé deux motifs lactones.

Description

NOUVEAUX COMPOSÉS, UTILISABLES EN TANT QU'AGENTS
ANTIOXYDANTS DANS DES COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES,
COSMÉTIQUES OU ALIMENTAIRES ET LEUR PROCÉDÉ DE
PRÉPARATION
DESCRIPTION DOMAINE TECHNIQUE
La présente invention a pour objet de nouveaux composés, pouvant être utilisés en tant qu'agents antioxydants dans des compositions pharmaceutiques, dans des compositions cosmétiques et dans des compositions alimentaires ainsi que leur procédé de préparation.

ETAT DE LA TECHNIQUE
Les antioxydants ont pour particularité de capter les radicaux libres, qui sont des molécules très réactives intervenant dans de nombreuses pathologies, en particulier celles découlant d'un stress oxydant, comme par exemple, les maladies cardiovasculaires et le diabète.

Ainsi, certains antioxydants peuvent être utilisés pour leur activité anti-inflammatoire, en particulier les antioxydants permettant d'inhiber la production de cytokines pro-inflammatoires tels que le facteur TNF-(X, dans les macrophages et les monocytes.

Les antioxydants peuvent également intervenir dans la protection des cellules, en limitant le déclenchement du programme génétique de mort

cellulaire ou apoptose, pouvant être engendré par une accumulation de radicaux libres.

Plusieurs antioxydants d'origine naturelle ont fait l'objet également d'évaluations quant à leur action contre le cancer. Ainsi, dans l'article de M. Jang et al, Cancer Chemoprotective Activity of Resveratrol, a natural product derived from grapes , Science 1997,275, 218-220 [1], le résvératrol, une phytoalexine antioxydante extraite du raisin est décrite comme présentant une activité préventive contre le cancer sur des modèles animaux. L'article de M.V Eberhardt et al. Antioxydant Activity of Fresh Apples , Nature 2000,405, 903-904 [2] démontre que des extraits de pomme testés sur des lignées cellulaires anticancéreuses engendrent, de même, une activité antiproliférative in vitro de ces lignées.

Enfin, des études, telles que celles publiées dans l'article de T. Finkel et al. Oxydants, Oxidative Stress and the biology of ageing , Nature 2000,408, 239-247 [3] ont également mis en évidence les liens entre stress oxydant et vieillissement cellulaire. De ce fait, on peut envisager d'incorporer des antioxydants dans des compositions cosmétiques, destinés à capter les radicaux libres responsables, notamment de l'apparition de rides.

EXPOSÉ DE L'INVENTION
Le but de la présente invention est de proposer de nouveaux composés, utilisables en tant qu'agents antioxydants ainsi qu'un procédé de préparation de ces composés et également des

compositions pharmaceutiques, cosmétiques, et alimentaires comprenant ces agents.

Ainsi, la présente invention a pour objet des composés répondant à la formule (I) suivante :

dans laquelle les Ri, R6, R7 et R8, identiques ou différents, représentent H,-OH ou OR9 R2 représente H, -OH ou -OR9, R3 représente H, Rg, -CO2R9 ou -CO-NHR10' ou R2 et R3 forment ensemble un groupe -0-CO-, les R4 et R5, identiques ou différents, représentent H ou R9, Rg représentant un groupe alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 20 atomes de carbone, R10 représentant Rg ou -(CH2)a-NH-(CH2)b-NH2, a et b étant des entiers allant de 2 à 4 et leurs sels, à l'exception du composé dans lequel R2 et R3 forment ensemble un groupe -0-CO-, les R4, R5, R6 et R8 représentent H, les Ri et R7 représentent-OH et du disel de potassium correspondant à ce composé, à l'exception du composé dans lequel R2 et R3 forment ensemble un groupe -O-CO-, les R1 et R7 représentent -OCH3, les R4 et R5 représentent -CH3 et les R6 et Ra représentent H et à l'exception du composé

dans lequel les R1, R2 et R7 représentent -O-CH3, R3 représente -CO2CH3, les R4 et R5 représentent CH3 et les R6 et R8 représentent H.

L'invention comprend également les sels éventuels correspondant à ces composés.

On entend, selon l'invention, par sels les composés de structure ionique résultant de l'action d'une base minérale sur le ou les protons labiles du composé.

Ainsi, lorsque R4 et R5 représentent H dans le composé selon l'invention, les sels correspondants peuvent se présenter sous les formes suivantes :

A pouvant représenter un métal alcalin, tel que Na+, K+, un ammonium NH4+.

Dans la formule (I),lorsque R2 et R3 forment ensemble un groupement -0-CO-, le composé répond à la formule (II) suivante :

les R1 R4, R5, R6 et R8 répondant à la même définition que celle donnée précédemment. Ces composés, notamment de part la présence d'un motif cyclique central avec un cycle lactone se caractérisent par un pouvoir antioxydant particulièrement efficace.

Dans la formule (I) , les R2 et R3 peuvent également former indépendamment des radicaux identiques ou différents, tels que des atomes d'hydrogène. A titre d'exemple, on peut citer le composé de formule (III) suivante :

dans laquelle les Rl, R2, R3, R6 et R8 représentent H, les R4 et R5 représentent CH3 (désigné par Me dans la formule ci-dessus), les R7 représentent -OCH3 (désigné par-OMe dans la formule ci-dessus).

En ce qui concerne le groupe Rg, représentant un groupe alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 20 atomes de carbone, on peut citer, à titre d'exemples, le groupe méthyle, éthyle, n-propyle, n-butyle, t-butyle.

La présente invention a également pour objet un procédé de préparation de composés de formule (I) suivante :

dans laquelle les Ri, R6, R7 et R8 identiques ou différents, représentent H,-OH ou OR9, R2 représente H, -OH ou -ORg, R3 représente H, Rg, -C02R9 ou -CO-NH-R10 ou R2 et R3 forment ensemble un groupe -0-CO-, les R4 et R5, identiques ou différents, représentent H ou Rg, Rg représentant un groupe alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 20 atomes de carbone, R10 représentant Rg ou -(CH2)a-NH-(CH2)b-NH2 avec a et b étant des entiers allant de 2 à 4, et leurs sels, ledit procédé consistant à faire réagir un composé de formule (IV) suivante :

dans lequel les R1, R2 et R3 ont la même définition que celle donnée précédemment, les R11, R12 représentent B(OR13) (OR,4) ou -Sn(Ri5)3, les R13 et R14, identiques ou

différents, représentent H ou un groupe alkyle de 1 à 7 atomes de carbone ou les Ri3 et R14 forment ensemble un groupe alkylène linéaire ou ramifié, R15 représente un groupe méthyle ou butyle, avec un composé de formule (V) suivante :

les R4, R5, R6, R7 et R8 répondant à la même définition que celle donnée précédemment et X étant un groupe partant, ladite réaction s'effectuant en présence d'une base, d'un catalyseur à base de platine ou palladium et étant suivie éventuellement d'une étape de traitement destinée à obtenir les sels correspondants.

Lorsque R13 et R14 forment ensemble un groupe linéaire ou ramifié, ce groupe comprend, par exemple, de 2 à 3 atomes de carbone, tel que les groupes -CH2-CH2-, -CH2CH2-CH2-, -C (CH3) 2-C (CH3) 2-, -CH(Ph)-CH2-CH(Ph)-, Ph représentant un groupement phényle.

De préférence, le groupe partant X est choisi parmi le groupe comprenant les halogènes tels que F, Cl, Br, I, le triflate -O-S02CF3.

Selon l'invention, le catalyseur à base de platine ou palladium est choisi de manière à obtenir une réaction de couplage entre le composé de formule (IV) et le composé de formule (V). De préférence, ce

catalyseur est un complexe de platine ou palladium, tel que le dichlorobis(triphénylphosphine)palladium PdCl2(PPh3)2, le tétrakis(triphénylphosphine)palladium Pd(PPh3)4.

Selon l'invention, la base utilisée dans le cadre de ce procédé est une base choisie, par exemple, parmi NaOH, Ba(OH)2, Na2C03, K2C03, Cs2CO3, K3P04, CH3COONa, CH3COOK, CH30Na, CH3CH20Na, les amines telles que la triéthylamine.

L'éventuelle étape destinée à obtenir les sels adéquats consiste, une fois le produit de formule (I) obtenu, à traiter ce produit, par exemple par une base minérale. Ainsi, lorsque les R5 représentent H, un traitement par une solution d'hydroxyde de potassium permet obtenir le disel de potassium correspondant, qui n'est autre qu'un dicarboxylate de potassium.

On note que le procédé selon l'invention peut comporter éventuellement des étapes de protection des fonctions sensibles aux conditions réactionnelles, ces fonctions étant ensuite déprotégées en fin dudit procédé.

De manière plus détaillée, le procédé de préparation des composés de formule (I) consiste, tout d'abord, à mélanger les réactifs répondant aux formules (IV) et (V) avec le catalyseur adéquat , dans un solvant aprotique, par exemple le tétrahydrofurane (THF), sous atmosphère de gaz inerte. Ensuite, après homogénéisation du mélange réactionnel, on introduit une base, par exemple, du bicarbonate de sodium. Le

mélange réactionnel est ensuite porté à reflux sous agitation vigoureuse pendant une durée adéquate (c'est- à-dire la durée nécessaire à l'obtention du composé de formule (I), l'avancement de la réaction pouvant être suivi par des techniques classiques telles que la chromatographie sur couche mince). Le mélange réactionnel est alors traité par ajout d'eau. La phase aqueuse est extraite avec un solvant organique, par exemple du dichlorométhane. Les phases organiques sont réunies, séchées puis concentrées. Le produit obtenu est finalement purifié par des techniques classiques telles que la chromatographie sur colonne.

Le procédé de préparation des composés conformes à l'invention met en jeu des composés de formule (IV) et (V), qui peuvent être disponibles commercialement ou préparés avant la mise en #uvre du procédé de l'invention
Ainsi, le composé de formule (IV), avec R11 et R12 représentant -B(ORi3) (OR14), peut être obtenu en faisant réagir un composé dérivé du naphtalène de formule (VI) :

les R1, R2 et R3 ayant la même définition que celle donnée précédemment et les Y identiques ou différents

étant des groupes partants choisis, par exemple, parmi les halogènes tels que le fluor, chlore, brome, iode, le triflate -O-SO2-CF3, avec un composé boré de formules :

R13 et R14 ayant la même signification que celle donnée ci-dessus, ladite réaction s'effectuant en présence d'une base et d'un catalyseur à base de platine ou de palladium tel que le 1,1'bis(diphénylphosphino)ferrocène dichloropalladium ou PdCl2(dppf), dppf signifiant le 1,1'- bis(diphénylphosphino)ferrocène.

Le composé de formule (V) peut être obtenu par un procédé comprenant la succession d'étapes suivantes : a) réaction d'un phénylacétate de formule (VII) suivante :

les R5, R6, R7 et R8 ayant la même déf inition que celle donnée précédemment, en milieu basique, avec un [alpha]- alcoxyacétate d'alkyle de formule R40-CH2-CO-OAlk, R4 répondant à la même définition que celle donnée précédemment, le groupement Alk étant un groupement alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 20 atomes de carbone, pour former un composé de formule (VIII) suivante :

b) réaction du composé (VIII), en milieu basique avec un composé silylé de formule (R16) 3SiHal, R16 étant un groupe alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 4 atomes de carbone, Hal étant un groupe halogène, tel que F, Cl, Br, I afin d'obtenir un composé disilylé de formule (IX) :

c) réaction de cyclisation du composé (IX) avec le chlorure d'oxalyle (ClCO)2, pour former le composé de formule (X) :

d) réaction du composé (X) avec un réactif apte à former avec le-OH du cycle lactone un groupe partant X afin d'obtenir le composé de formule (V).

A titre d'exemples, ce groupe partant X peut être choisi parmi les groupes de formule -O-SO2-CF3 ou -O-SO2-(CF2)n-CF3 avec n étant un entier allant de 1 à 8.

On note que les composés comportant dans les formules ci-dessus, des liaisons symbolisées par : # peuvent être utilisés dans le cadre de ce procédé sous leurs différentes formes isomères.

Ainsi, dans l'étape a), la réaction s'effectue dans un milieu basique, ce milieu étant destiné à déprotoner le groupement -CH2- situé en position a du groupement -CO2R5 du composé (VII). Ce milieu basique peut être par exemple une solution de diisopropylamidure de lithium (ou LDA). L'espèce réactive ainsi formée peut se condenser avec l'aalcoxyacétate d'alkyle pour donner le produit (VIII).

Les étapes b) et c), qui consistent à synthétiser un composé 1,3-bis(trialkylsiloxy)-1,3-butadiène (IX), suivi d'une cyclisation sont adaptées des travaux de Langer, tels que ceux explicités dans la publication Domino Reaction of 1,3-bis(trimethylsilyloxy)-1,3dienes with Oxalyl Chloride : General and Stereoselective Synthesis of y-Alkylidenebutenolides P.Langer et al., Chem.Eur.J.2000, 6, N 7, 3204-3214 [6] .

Enfin, l'étape d) peut s'envisager selon tout type de réactions à la portée de l'homme de l'art, lesdites réactions permettant de convertir le groupement-OH en groupement réactif tel qu'un triflate ou un fluoroalkylsulfonate -SO2-(CF2)n-CF3 avec n étant un entier allant de 1 à 8.

A titre d'exemple, lorsque le groupe partant X est un groupe triflate (symbolisé par OTf), le composé faisant partie des composés de formule (V) , référencé 5a, peut être synthétisé selon le schéma réactionnel particulier suivant :

Selon ce schéma de synthèse particulier, le triflate (Sa) est préparé à partir de l'alcool

correspondant (X) par traitement avec l'anhydride triflique (Tf20), en présence d'une base telle que la pyridine. L'alcool (X) provient de la réaction d'un 1,3-bis(triméthylsiloxy)-1,3-butadiène (9a) convenablement substitué avec le chlorure d'oxalyle, catalysée par du triflate de méthyle. Cette réaction de cyclisation, ainsi que la préparation du 1,3bis(triméthylsiloxy)-1,3-butadiène (9a) sont adaptés des travaux de Langer, tels que ceux mentionnés cidessus. Le -cétoester (VIII) précurseur du 1,3bis(triméthylsiloxy)-1,3-butadiène (9a) est obtenu par réaction de l'énolate lithié formé à partir du phénylacétate correspondant (VII) avec un aalcoxyacétate de méthyle.

Les composés selon la présente invention peuvent être utilisés en particulier pour leur activité antioxydante.

Ainsi, la présente invention a également pour objet des agents antioxydants de formule (I) suivante :

dans laquelle les R1, R6, R7 et R8, identiques ou différents, représentent H,-OH ou OR9, R2 représente H, -OH ou -OR9, R3 représente H, Rg, -CO2R9 ou -CO-NHR10, ou R2 et R3 forment ensemble un groupe -0-CO-, les R4 et R5, identiques ou différents, représentent H ou R9, Rg représentant un groupe alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 20 atomes de carbone, R10 représentant Rg ou -(CH2)a-NH-(CH2)b-NH2 avec a et b étant des entiers allant de 2 à 4, et leurs sels.

Lorsque R2 et R3 forment ensemble -0-CO-, l'agent antioxydant présente une structure chimique identique à celle du composé de formule (II) définie ci-dessus.

Parmi ces agents de formule (II), on peut citer l'agent connu sous la terminologie de norbadione A, pour laquelle les Ri et R7 représentent-OH, les R4, R5, R6 et R8 représentent H. La norbadione A peut être représentée par la formule (XI) suivante :

On peut citer également, parmi les agents antioxydants selon l'invention, la norbadione A sous forme de disel potassique, qui peut être ainsi représentée par la formule (XII) suivante (présentant deux formes (a) et (b)) :

La norbadione A est un produit naturel, qui a été extrait à ce jour de deux espèces de champignons. Elle constitue l'un des pigments du chapeau du bolet bai (Xerocomus badius), qui est une espèce comestible très appréciée, tel que cela est décrit dans l'article Pigments from the cap cuticle of the Bay Boletus , Angew.Chem.Int.Ed.Engl.23(1984),n 6 [4]. On la trouve également dans le pisolithe des sables (Pisolithus tinctorius), comme l'indique l'article intitulé A naphtalenoid pulvinic acid derivative from the Fungus Pisolithus Tinctorius , Phytochemistry, vol 24, n 6, pp 1351-1354,1985 [5].

La norbadione A est extraite de ces champignons sous forme de disel de potassium (formule XII) et peut être convertie en le diacide correspondant (formule XI) par traitement avec une solution d'acide chlorhydrique.

Grâce à leurs propriétés antioxydantes particulièrement efficaces, ces agents antioxydants de formule (I) peuvent entrer dans des compositions pharmaceutiques, comprenant au moins un des agents antioxydants selon l'invention et un véhicule pharmaceutiquement acceptable.

On entend par véhicule pharmaceutiquement acceptable un matériel, qui peut être administré à un individu en même temps que l'agent antioxydant et qui ne comporte pas d'effet biologique indésirable.

Ces compositions peuvent être utilisées pour le traitement des maladies découlant d'un stress oxydant.

Ainsi, ces compositions pharmaceutiques comprenant les agents selon l'invention peuvent être utilisées pour le traitement de maladies inflammatoires, en particulier les maladies se traduisant, en réaction à un allergisant, par la production de cytokines.

Par exemple, des compositions pharmaceutiques comprenant de la norbadione sous forme de diacide (formule XI) ou de disel (formule XII) contribuent, de façon dose-dépendante à diminuer la production de cytokines TNF-a et IL-10 d'un hôte infecté par un allergisant tel qu'un liposaccharide, ce qui montre que les agents antioxydants, selon la présente invention, présentent une activité antiinflammatoire.

Ces compositions pharmaceutiques peuvent être également utilisées pour assurer un effet protecteur de cellules vis-à-vis d'une apoptose consécutive à une accumulation de radicaux libres au sein desdites cellules.

Ainsi, ces compositions peuvent être utilisées pour le maintien en survie de cellules soumises à un rayonnement ionisant induisant la production de radicaux libres.

De ce fait, ces compositions sont aptes à contrer les effets d'un rayonnement ionisant ou d'un rayonnement ultra-violet envers des cellules soumises audit rayonnement, du fait que les agents antioxydants selon la présente invention incorporés dans ces

compositions captent les radicaux formés par action dudit rayonnement sur ces cellules.

Ces compositions peuvent également être utilisées pour le maintien en survie de cellules saines soumises à l'action de médicaments induisant la production de radicaux libres.

De ce fait, ces compositions peuvent atténuer la cytotoxicité de médicaments, engendrant par leurs effets secondaires, un stress oxydant.

De plus amples détails concernant l'activité de ces compositions incorporant des agents selon l'invention tels que mentionnés ci-dessus seront explicités dans la partie détaillée de la description.

La présente invention a également pour objet des compositions cosmétiques incorporant au moins un agent antioxydant selon l'invention, ladite composition comprenant, en outre un véhicule cosmétiquement acceptable.

Ces compositions cosmétiques peuvent se présenter sous différentes formes, telles que des crèmes, huiles.., destinées à un usage topique cutané, le rôle des agents antioxydants étant de piéger les radicaux libres au niveau de la surface cutanée sur laquelle est appliquée la composition cosmétique. Les compositions selon l'invention contribuent ainsi à ralentir le processus de vieillissement cutané, engendré notamment par l'accumulation de radicaux libres.

Enfin, la présente invention a pour objet des compositions alimentaires, comprenant en tant qu'additifs au moins un agent antioxydant selon l'invention. Les agents antioxydants selon la présente invention peuvent être utilisés, en particulier, en tant qu'additifs dans des compositions alimentaires aptes à produire facilement des radicaux libres, tels que les huiles, le beurre.

Des agents antioxydants particulièrement efficaces pouvant entrer dans les compositions pharmaceutiques, cosmétiques ou alimentaires, correspondent aux agents de formule (XI) ou (XII), tel que définis ci-dessus.

D'autres avantages et caractéristiques de la présente invention apparaîtront encore à la lecture de la description qui suit, donnée à titre illustratif et non limitatif en référence aux dessins annexés.

Brève description des dessins.

- les figures 1,2 et 3 sont des graphiques illustrant l'activité antioxydante de la norbadione A sous forme de disel potassique vis-à-vis d'antioxydants classiques par suivi de la dégradation de la thymidine soumise à un stress oxydant de nature radiative (rayons y émis par le 137CS sur la figure 1 ou rayons UV sur la figure 2) ou chimique (figure
3) ;

les figures 4 et 5 sont des graphiques illustrant l'effet antiinflammatoire de la norbadione A sous forme de diacide (figures 4) ou de disel potassique (figures 5) par mesure de la production de certaines cytokines par des cellules soumises à un allergisant ; la figure 6 est un graphique illustrant l'activité protectrice de la norbadione A sous forme de diacide ou de disel vis-à-vis de cellules soumises à un rayonnement ionisant ; la figure 7 est un graphique illustrant l'activité protectrice de la norbadione A sous forme de diacide ou de disel vis-à-vis de cellules soumises à l'action du cisplatine ; la figure 8 est un graphique qui représente la contraction vasculaire d'anneaux d'aorte de rat C(g) (g signifiant gramme) en fonction de la concentration en pyrrogallol [Pyr] ( M), en l'absence de norbadione A et en présence de norbadione A 100 M ; la figure 9 est un graphique représentant le taux de relaxation vasculaire des anneaux R(%) en fonction de la concentration en Sin-1 [Sin-1] ( M) en l'absence de norbadione A et en présence de norbadione A 100 M).

EXPOSE DETAILLE DE L'INVENTION
Les exemples 1 à 5 illustrent les propriétés de la norbadione A sous forme de diacide ou de disel, découlant de leur activité antioxydantes.

L'exemple 6 illustre un exemple de synthèse totale d'un composé de formule (III) présentant également une activité antioxydante.

Exemple 1. Evaluation de l'activité antioxydante de la norbadione A.

L'évaluation de l'activité antioxydante du disel potassique de la norbadione A a été effectuée par un test de criblage in vitro.

Ce test est basé sur le suivi de la dégradation de la thymidine soumise à différents stress oxydants en présence de différents agents antioxydants, qui sont la norbadione A sous forme de disel potassique (intitulée Nor-B sur les figures 1 à 3) conforme à l'invention, et les agents antioxydants suivants : quercétine (1), fisétine (2), myricétine (3), catéchine (4), 7-hydroxy-4-méthyl-8-nitrocoumarine (5), Trolox (6) sur les figures 1 à 3.

En présence d'un antioxydant, la thymidine est protégée de manière plus ou moins efficace selon la nature dudit antioxydant. L'efficacité de l'antioxydant est quantifiée en dosant la thymidine restante (quantifiée en % en ordonnée du graphique) à l'aide d'un dosage immunoenzymatique, du type ELISA dit par compétition . Ce dosage ELISA consiste à réaliser une compétition de liaison à un anticorps monoclonal spécifique de la thymidine fixé sur une phase solide, entre la thymidine restante à la fin du test et la thymidine marquée par une enzyme (l'acétylcholine estérase). Après lavage, l'enzyme fixée est quantifiée

par détection colorimétrique à l'aide du diacide 5,5'dithio-bis(2-nitrobenzoïque) (dit réactif d'Ellman) et en présence d'acétylcholine.

Trois séries de tests ont été mises en #uvre : - une première série consistant à doser la thymidine restante suite à une irradiation gamma (pendant 3H30) induite par du césium 137, ladite thymidine étant présente en début de test à une concentration de 15 M avec une concentration d'antioxydant de 12 M (figure 1); - une deuxième série consistant à doser la thymidine restante suite à une irradiation ultraviolette à 254 nm (1,75J/cm2 en présence de H202 5mM, ladite thymidine étant présente en début de test à une concentration de 70 M avec une concentration d'antioxydant de 100 M (figure 2) ; - une troisième série consistant à doser la thymidine restante soumise à un stress chimique oxydant (réactif de Fenton FeS04/EDTA 0,35mM en présence de H2O2 35mM) , ladite thymidine étant présente en début de test à une concentration de 70 M avec une concentration d' antioxydant de 20 M (figure 3) .

Les résultats de ces tests sont regroupés respectivement, pour la première série sur la figure 1, pour la deuxième série sur la figure 2, pour la troisième série sur la figure 3.

Les figures 1 à 3 montrent explicitement que la norbadione A présente le meilleur pouvoir antioxydant (ce dernier étant quantifié par la mesure du pourcentage de thymidine restante après action du

stress oxydant, % représenté en ordonnée des graphiques des figures 1 à 3) par comparaison, par exemple, avec la quercétine (1) issue du thé ou du vin réputée pour sa propriété antioxydante puissante et par comparaisons avec les autres agents antioxydants classiques (2), (3) , (4), (5) et (6) .

EXEMPLE 2. Evaluation du pouvoir anti-inflammatoire de la norbadione.

Dans cet exemple, on démontre l'effet biologique antiinflammatoire induit par l'activité antioxydante de la norbadione A sous forme de diacide ou de disel potassique, en détectant les cytokines produites par des cellules de type monocytes lors d'un traitement par un liposaccharide allergisant. Ce liposaccharide est une endotoxine située sur la membrane externe des bactéries Gram-négatives. En particulier, il stimule la production de cytokines proinflammatoires par les cellules mononucléaires (monocytes, macrophages) de l'hôte infecté.

Si en présence du produit à tester, une modification de la production des cytokines est mise en évidence, on en déduit que le produit présente un activité anti-inflammatoire.

Ce test est effectué de la façon suivante.

Des cellules sanguines humaines de donneurs sains (dites PBMC pour 'peripheral blood mononuclear cells') sont incubées avec la norbadione A ou B à des

concentrations croissantes (de 10-8 M à 10-5 M) avec ou activation simultanée par le lipopolysaccharide de Salmonella abortus equi à la concentration de 5 g.mL-1, dans des plaques de culture de 24 puits, pendant 24 heures à 37 C, dans une atmosphère humidifiée de 5% en CO2 et 95% en air. Après incubation, le surnageant est enlevé et stocké à -20 C jusqu'à réalisation du test.

Plus précisément, la détection des cytokines présentes dans les échantillons est mesurée à l'aide d'un dosage ELISA cytométrique de type sandwich . Des microparticules (billes) de polystyrène (de 6 types différents, chacunes étant marquées par une quantité différente de colorant fluorescent dont la longueur d'onde d'émission FL-3 est d'environ 650 nm) sont couplées à un anticorps spécifique de l'une des 2 cytokines TNFa, IL-2, IL- 10. On obtient ainsi des anticorps de type Ac-PS. Lors de l'incubation, les cytokines présentes dans l'échantillon se lient aux anticorps Ac-PS. Les cytokines capturées sont détectées à l'aide d'un test immunologique mené directement, qui utilise 2 anticorps spécifiques de chaque cytokine couplés à de la phycoérythrine qui émet à une longueur d'onde FL-2 d'environ 585 nm (Ac-PE). Après lavage de l'excès de Ac-PE, la présence des cytokines est mesurée par cytométrie en flux.

On mesure la fluorescence selon les 6 intensités de fluorescence FL-3 et selon la longueur d'onde FL-2. L'intensité de la fluorescence FL-2 permet de déterminer la quantité de chaque cytokine présente

dans l'échantillon (par comparaison avec des courbes standards.

De plus amples informations concernant cette technique sont disponibles dans l'article de Cook et al, Journal of Immunological Methods, 2001,254, pages 109-118 [7]
Les résultats de ces tests sont regroupés sur les figures 4 à 5 qui représentent le pourcentage de réponse noté % (c'est-à-dire la quantité de cytokine observée par rapport à la quantité observée lors d'un contrôle où le produit n'a pas été ajouté) en fonction de la concentration (en nM) de norbadione A sous forme de diacide ou de disel potassique, noté [Nor-A] ou [Nor-B] sur lesdites figures.

En présence de norbadione sous forme de diacide (Nor-A) (figure 4), ou de norbadione sous forme de disel potassique, (Nor-B) (figure 5), les tests ont mis en évidence une réduction significative dosedépendante de la production de cytokines TNF-a et IL- 10, ce qui prouve l'effet anti-inflammatoire de la norbadione.

EXEMPLE 3. Evaluation de l'activité de protection des cellules par la norbadione, lesdites cellules étant soumises à un rayonnement ionisant.

Ce test consiste à mesurer, en présence ou en l'absence de la norbadione sous forme A sous forme de diacide ou de disel potassique, le taux de survie de cellules traitées par un rayonnement ionisant, à l'aide

d'indicateurs sélectifs de certains organites cellulaires tels que les mitochondries.

Des échantillons de norbadione sous forme A ou B sont ajoutés à des cultures de cellules RDM4 (lymphomes de souris AKR) à des concentrations croissantes (de 0,12 à 20 g/mL), deux heures avant l'irradiation. Celle-ci est réalisée par exposition de plaques microtests contenant les cellules à des rayons X de 15 MV, à 8 Gy, le milieu de culture étant inchangé.

Le nombre de cellules vivantes est déterminé au sixième jour au moyen du test Uptiblue (qui consiste à mesurer l'activité mitochondriale des cellules). Le réactif Uptiblue (réazurine, encore commercialisé sous la marque ALAMAR BLUE) est un indicateur coloré d'oxydoréduction. La réazurine (bleue et non fluorescente) est réduite en résorufine (rose et fluorescente) par les cellules vivantes.

Expérimentalement, l'Uptiblue (dilué au 1/4 dans le milieu de culture) est ajouté aux cellules à raison de 20 L par puits de 200 L. Après une incubation de 4 heures à 37 C, on mesure la fluorescence à une longueur d'onde de 590 nm, après excitation à une longueur d'onde de 530 nm à l'aide d'un lecteur de microplaques en fluorescence (Fluorolite 1000, Dynex). L'intensité de fluorescence est proportionnelle au nombre de cellules vivantes.

Elle est exprimée en unité arbitraire de fluorescence . Cette valeur dépend du réglage de l'appareil (notamment de la tension) et du bruit de

fond (du à la fluorescence émise par des puits ne contenant pas de cellules, mais contenant de l'Utpiblue). Cette dernière valeur est soustraite des valeurs expérimentales.

Les résultats de ce test sont regroupés sur la figure 6, qui représente la fluorescence observée permettant de quantifier le nombre de cellules vivantes, ladite fluorescence étant exprimée en unités arbitraires de fluorescence en ordonnée du graphique en fonction de la concentration en norbadione A sous forme de diacide ou de disel potassique, notée [Nor-A] ou [Nor-B] (en g/ml). Sur cette figure, on constate une forte augmentation du nombre de cellules vivantes en fonction de la concentration de la norbadione.

Cependant, à partir d'une concentration en norbadione de 20 g/mL, cette valeur diminue fortement.

On en déduit ainsi, que la nordadione, sous sa forme de disel ou de diacide, protège les cellules contre les rayonnements ionisants, de manière significative et dose-dépendante.

On peut noter que, sans irradiation, la norbadione A est sans effet sur la croissance et la viabilité des cellules RDM4, même à 20 g/mL.

EXEMPLE 4. Evaluation de l'activité de protection des cellules par la norbadione, lesdites cellules étant soumises à l'action du cisplatine.

Ce test consiste à mesurer, en présence de norbadione A sous forme de diacide ou de disel

potassique, le taux de survie de cellules traitées par le cisplatine.

Des cellules K1 de carcinomes thyroïdiens humains sont cultivées dans des plaques microtest de 96 puits à font plat en présence d'une concentration unique (20 g/mL). de norbadione A sous forme de diacide ou de disel potassique. Après deux heures, un agent génotoxique, le cisplatine, est ajouté au milieu de culture à des concentrations croissantes (de 12 à 100 M). Deux jours plus tard, le nombre de cellules est déterminé au moyen du test à la sulforhodamine B (dite SRB), qui mesure la quantité de protéines cellulaires.

La sulforhodamine B (dite SRB) est un colorant anionique se fixant de façon électrostatique aux protéines cellulaires. Ce test est fréquemment utilisé pour l'évaluation des activités cytotoxiques et cytostatiques de nouvelles drogues antitumorales.

De plus amples informations concernant cette technique sont disponibles dans l'article de Papazisis et col Optimization of the sulforhodamine B colorimetric assay , J.Immunol.Meth, 208, pages 151- 158,1997 [8].

Les résultats de ce test sont regroupés sur la figure 7, qui représente la fluorescence observée près addition de SRB (exprimée en unités arbitraires de fluorescence) en fonction de la concentration en cisplatine (en M).

D'après cette figure, l'on peut constater que la cytotoxicité du cisplatine est très nettement atténuée par la présence de norbadione sous forme de disel( courbe a) ou de diacide (courbe b) , par rapport

au cas où la cytotoxicité du cisplatine est évaluée en l'absence de norbadione (courbes c et d).

Cette activité de protection des cellules vis-à-vis du cisplatine découle de l'activité antioxydante de la norbadione.

EXEMPLE 5 - Effets de la norbadione sur les anneaux d'aorte de rat.

Cet exemple a pour objectif de montrer l'activité antioxydante de la norbadione A sous forme de disel potassique sur les anneaux d'aorte de rat.

Ces séries de tests mettent en évidence l'activité antioxydante de la norbadione A sur les anneaux d'aorte de rat.

Au cours d'une première série de tests, on soumet, dans un premier temps, des anneaux d'aorte de rat, au pyrogallol, générateur de radicaux superoxydes, ces radicaux induisant une contraction des anneaux d'aorte de rat et on mesure, en l'absence de norbadione le taux de contraction de ces anneaux.

Dans un deuxième temps, on réitère les mêmes opérations, dans les mêmes conditions que celles mentionnées ci-dessus, cette fois en présence de norbadione.

Les résultats sont regroupés sur la figure 8, qui représente le taux de contraction vasculaire des anneaux C (g) fonction de la concentration en pyrrogallol [Pyr] ( M), en l'absence de norbadione A

(courbe a) et en présence de norbadione A à la concentration de 100 M (courbe b) .

L'on constate que la courbe (a) est située au-dessus de la courbe (b), ce qui signifie que la contraction des anneaux d'aorte provoquée par le pyrogallol est supprimée en présence de norbadione A, du fait que la norbadione capte les espèces oxygénées réactives radicalaires engendrées par le pyrogallol.

Au cours d'une deuxième série de tests, on soumet des anneaux d'aorte de rat, au SYN-1 (3morpholino-sydnonimime), générateur de radicaux NO, induisant une relaxation des anneaux d'aorte de rat et on mesure le taux de relaxation de ces anneaux. En présence de norbadione, on mesure, dans les mêmes conditions que celles mentionnées ci-dessus, le taux de relaxation des anneaux. Les résultats sont reportés sur la figure 9, qui représente le taux de relaxation vasculaire des anneaux R (%) en fonction de la concentration en Sin-1 [Sin-1] ( M) en l'absence de norbadione A (courbe a) et en présence de norbadione A 100 M) (courbe b).

L'on constate que la courbe (a) est située en-dessous de la courbe (b), ce qui signifie que la relaxation des anneaux d'aorte provoquée par le SYN-1 est amoindrie en présence de norbadione, du fait que la norbadione capte partiellement les radicaux NO.

EXEMPLE 6-Préparation du composé de formule (III)
Cet exemple présente un exemple de préparation d'un composé de formule (III) :

Ce composé répond à la formule (I) dans laquelle les R1, R2, R3, R6 et R8 représentent H, les R4 et R5 représentent -CH3, les R7 représentent -OCH3.

La synthèse de ce composé correspond au schéma réactionnel suivant :

0 Me0 C02Me C02Me 1) i-Pr2NLi, -78 C f"] THF ).J 2) MeO-CHrCO2Me \ H T H H H OMe OMe (Sa) (7a) 11) Et3N, Me3SiCI 1) Et3N, Me3SiC1 2) i-Pr2NLi, -78 C suivi de Me3S'C' OSiMe3 OMe Me0 k - OSiMe3 MeO" ,<CO MeO H .. (CICO)2 Me3SiOTf (0,3 éq.) MeOZC OMe CH2C,-78 C \..

Me02C OMe ome CH2CI2, -78 C OMe H (10a) (9b) Tf2 Tf2o Tfo Pyridine Me0 Me02C MeOzC orme (5b) H

suivi d'un couplage dit de Suzuki pour former la molécule de formule (III), le couplage étant précédé de la synthèse du composé (4a) :

a)Préparation du composé (8a).

Dans un bicol de 100 mL, le 4méthoxyphénylacétate de méthyle (7a) (4,7 mL ; 29,6 mmol ; 2éq) est dissous dans le THF (15 mL) et le mélange est refroidi vers -70 C. Une solution de diisopropylamidure de lithium 2M dans l'heptane (15 mL ; 30 mmol ; 2éq) est ajoutée goutte à goutte à la seringue et le mélange est maintenu 1 heure vers -70 C.

Le méthoxyacétate de méthyle (1,5 mL ; 15 mmol ; 1 éq) est additionné à la seringue et on laisse réagir 5 heures en revenant lentement à température ambiante.

Après hydrolyse par une solution saturée de chlorure d'ammonium, la phase aqueuse est extraite 3 fois au dichlorométhane, séchée sur MgS04 et filtrée. Après évaporation, on obtient une huile orange que l'on

chromatographie sur colonne de silice (éluant . pentane/acétate d'éthyle : 8/2). On isole ainsi 2,93 g de produit. Aspect : solide jaune, Tfusion : 44 C, Rendement : 77%.

RMN 1H (CDC13) : 8= 3,37 (s, 3H, OMe) ; 3,75 (s, 3H, OMe) ; 3, 81 (s, 3H, C02Me) ; 4, 06 et 4,10 (AB, JAB=17,1 Hz, 2H, CH2) ; 4,90 (s, 1H, CH) ; 6,91 (d, J=8,5 Hz, 2H, Ph) ; 7,26 (d, J=8,5Hz, 2H, Ph) .

RMN 13C (CDC13): #= 52,5 ; 55,2 ; 59,3 ; 59,8 ; 69,6 ; 113,6 ; 114,2 ; 123,7 ; 130,6 ; 132,0 ; 159,5 ; 169,0 ; 202,0.

IR (KBr, cm-1) : 1612 ; 1741 ; 2836 ; 2960 ; 3013 ; 3434.

Analyse élémentaire (%) : calculée pour C13H16O5 : C=61,90 ; H=6,39 ; trouvée C=62,03 ; H=6,44. b)Préparation du composé (9b).

Le produit de condensation (8a) préparé cidessus (5,65 g ; 22,4 mmol ; 1 éq) est dissous dans le THF (47 mL) dans un ballon de 100 mL. La triéthylamine (3,7 mL ; 26,6 mmol ; 1,2 éq.) puis le chlorure de triméthylsilyle (3,7 mL ; 29 mmol ; 1,3 éq. ) sont ajoutés à la seringue. On observe immédiatement la formation d'un précipité blanc. On laisse réagir une nuit à température ambiante. Après évaporation du THF, le résidu est repris dans le pentane. Le précipité

formé est filtré sur fritté puis sur millipore 5 m et rincé au pentane. Après évaporation, 7,28 g d'une huile orange sont obtenus.

Le dérivé monosilylé obtenu (7,27 g ; 22,4 mmol ; léq.) est placé dans un ballon de 100 mL et dissous dans le THF (33 mL). Le mélange est refroidi vers -70 C. Une solution de LDA (lithium diisopropylamidure) 2M dans l'heptane (11,2 mL ; 22,4 mmol ; 1 éq. ) est ajoutée goutte à goutte à la seringue et le mélange est maintenu 1 heure vers -70 C. Le chlorure de triméthylsilyle (3,4 mL ; 26,7 mmol ; 1,2 éq. ) est additionné à la seringue et le mélange est ramené à la température ambiante en 3 heures. Après évaporation du THF, le résidu est repris dans le pentane et le précipité blanc formé est filtré sur fritté puis sur millipore 5 m. Après concentration, 8,52 g d'une huile orange sont obtenus. Rendement = 95 %. Deux isomères géométriques sont présents dans cet échantillon.

RMN 1H (CDC13) : #= 0,04 (s, 9H, OSiMe3 isomère majoritaire) ; 0,05 (s, 9H, OSiMe3 isomère minoritaire) ; 0,28 (s, 9H, OSiMe3 isomère minoritaire) ; 0,30 (s, 9H, OSiMe3 isomère majoritaire) ; 3,46 (s, 3H, OMe isomère majoritaire) ; 3,49 (s, 3H, OMe isomère minoritaire) ; 3,51 (s, 3H, OMe isomère minoritaire) ; 3,56 (s, 3H, OMe isomère majoritaire) ; 3,80 (2s, 2*3H, OMe isomère minoritaire et Orne isomère majoritaire) ; 5,62 (s, 1H, CH ismoère majoritaire) ; 5,95 (s, 1H, CH ismoère minoritaire) ; 6,83 (d, J=8,5 Hz, 2H, Ph) ; 7,24-7,31 (m, 2H, Ph) .

c) Préparation du composé (10a) .

Dans un tricol de 1 L, le dérivé bis-silylé (9b) préparé ci-dessus (8,52 g ; 21,4 mmol ; 1 éq.) est dissous dans du dichlorométhane (400 mL) et le mélange est refroidi vers-70 C. Le chlorure d'oxalyle (2,5 mL ; 28,6 mmol ; 1,3 éq.) est ajouté à la seringue et le milieu devient orange. Une solution de triflate de triméthylsilyle (1,2 mL ; 6,6 mmol ; 0,3 éq. ) dans le dichlorométhane (120 mL) est coulée par une ampoule à additionner en une heure. Le bain froid est saturé de carboglace pour que le milieu réactionnel revienne très lentement à température ambiante au cours de la nuit. Après hydrolyse par une solution saturée de NaCl, on extrait 3 fois avec du dichlorométhane, on sèche sur MgS04, on filtre et on concentre. On récupère 7,95 g d'un solide marron. Après chromatographie sur colonne de silice (éluant : acétate d'éthyle/pentane : 1/1), on obtient 3,53 g de produit (5'). Aspect : solide jaune, Tfusion= 160 C, Rendement= 54 %, isomère (E).

RMN 1H (CD30D) : #= 3,85 (s, 3H, OMe ou C02Me) ; 3,87 (s, 3H, C02Me ou OMe) ; 4,16 (s, 3H, OMe phényle) ; 6,96-9,99 (m, 2H, Ph) ; 7,47-7,50 (m, 2H, Ph).

RMN 13C (acétone-d6) . #= 52,3 ; 55, 2 ; 59,8 ; 113,5 ; 114,5 ; 124,6 ; 130,6 ; 131,7 ; 139,9 ; 143,3 ; 160,4 ; 164,5 ; 167,3.

IR (KBr, cm-1) . 1667 ; 1731 ; 3239 ; 3295.

Analyse élémentaire (%) : calculée pour C15H14O7 : C=58,82 ; H=4,61 ; trouvée C=59,07 ; H= 4,92. d) Préparation du composé (5b).

Dans un ballon de 250 mL, l'alcool (10a) préparé ci-dessus (3,24 g ; 10,6 mmol ; 1 éq.) est mis en suspension dans le dichlorométhane (100 mL) et le mélange est refroidi vers -70 C. La pyridine (2,2 mL ; 27 mmol ; 2,5 éq. ) puis l'anhydride triflique (2,2 mL ; 13 mmol ; 1,2 éq. ) sont ajoutés à la seringue. Après retour à température ambiante en 6 heures, le mélange est hydrolysé, lavé 3 fois à l'eau, séché sur MgS04, filtré et concentré. Après chromatographie sur colonne de silice (éluant : dichlorométhane), on isole 3,14 g de triflate (VI) . Aspect : solide jaune ; Tfusion=93 C : Rendement=68%, isomère (E).

RMN 1H (CDC13) : #= 3,85 (s, 3H, OMe) ; 3,90 (s, 3H, OMe) ; 4,29 (s, 3H, OMe) ; 6,94 (d, J=9,2 Hz, 2H, Ph).

RMN 13C (CDC13): #= 53,1 ; 55,5 ; 61,1 ; 114, 6 ; 116,4 ; 120,6 ; 122,6 ; 129,4 ; 131,4 ; 135,7 ; 155,8 ; 161,3 ; 166,1.

Masse [m/z(%)] : 456 (100) (M+NH4+) ; 439 (11) (M+1).

IR (KBr, cm-1) : 1604 ; 1643 ; 1667 ; 1733 ; 1744 ; 1783 ; 1802 ; 2961.

e) Préparation du composé (4a).

Le bistriflate dérivé du 1,7dihydroxynaphtalène (157 mg ; 0,98 mmol), le pinacolborane (0,44 mL ; 3 mmol), le PdCl2 (44 mg ; 0,06 mmol), la triéthylamine (0,84 mL ; 6 mmol) et le dioxane préalablement dégazé (8 mL) sont introduits dans un bicol de 50 mL et placés sous atmosphère d'argon. On porte à reflux pendant 2 heures sous agitation. Après hydrolyse par 20 mL d'eau, la phase aqueuse est extraite 3 fois avec du dichlorométhane.

Les phases organiques sont réunies, séchées sur MgS04, filtrées et concentrées. Une chromatographie sur colonne de silice (éluant : hexane/acétate d'éthyle : 8/2) permet d'isoler 104 mg de dérivé boré Rendement=43%.

RMN 1H (CDC13) : #= 1,43 et 1,49 (2s, chacun 12H, Me) ; 7,55 (t , 1H , J=6,7 Hz , g) ; 7,88 (m , 2H) ; 7,97 (d , 1H , J=6,7 Hz) ; 8,09 (d , 1H , J=6,7 Hz) ; 9,31 (s , 1H) .

RMN 13C (CDC13) #= 24,8 ; 83,6 ; 126,9 ; 128,2 ; 125,7 ; 127,2 ; 129,8 ; 130,1 ; 130,9 ; 134,7 ; 136,0 ; 136,5.

f) Préparation du composé final (III).

Le triflate (VI) préparé ci-dessus (214 mg ; 0,488 mmol ; 2,1 éq. ), le 1,7-bis(4,4,5,5tétraméthyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)naphatlène (89 mg ; 0,234 mmol ; 1 éq. ), le dichlorobis(triphénylphosphine)palladium (19 mg ; 0,003 mmol ; 0,1 éq.) et 20 mL de THF préalablement dégazé sont introduits dans un bicol de 50 mL et placés sous atmosphère d'argon. Une solution aqueuse 2M de bicarbonate de sodium (4,8 mL) est ajoutée. On porte à reflux pendant 3 heures. Après hydrolyse par 30 mL d'eau, la phase aqueuse est extraite 3 fois avec du dichlorométhane. Les phases organiques sont réunies, séchées sur MgS04, filtrées et concentrées. Une chromatographie sur colonne de silice (éluant : hexane/acétate d'éthyle : 6/4) permet d'isoler 104 mg de composé (). Aspect : solide jaune. Rendement : 63%.

RMN 1H (CDC13): #= 3,63 (s, 3H, OMe énolique) ; 3,80 (s, 3H, OMe phénolique ; 3,86 3,87 ; 3,90 ; 3, 92 (4s, 3H chacun, OMe phénoliques, C02Me) 6,94-6,99 (m, 4H, CHCOMe) ; 7,57-7,59 (m, 2H) ; 7,66-7,74 (m, 5H) ; 7,90 (s, 1H) ; 7,96-7,99 (m, 2H) .

RMN 13C (CDC13) : #= 52, 6 ; 55, 2 ; 60,6 ; 61,5 ; 103,4 ; 106,5 ; 114,1 ; 116,9 ; 123,2 ; 125,9 ; 126,5 ; 127,3 ; 127,5 ; 128,7 ; 129,3 ; 130,1 ; 130,6 ; 130,7 ; 131,3 ; 133,1 ; 139,4 ; 139,5 ; 160,3 ; 163,0 ; 164,0 ; 166,8 ; 168,0.

Analyse élémentaire (%) : calculée pour C40H32O12 : C=68,18 ; H=4,58 ; trouvée C=68,03 ; H=4,83.

Références citées.

[1] M.Jang et al, Cancer Chemoprotective Activity of
Resveratrol, a natural product derived from grapes , Science 1997, 275, 218-220 ; [2] M. V Eberhardt et al. Antioxydant Activity of
Fresh Apples , Nature 2000,405, 903-904 ; [3] T.Finkel et al. Oxydants, Oxidative Stress and the biology of ageing , Nature 2000,408, 239-
247 ; [4] Pigments from the cap cuticle of the Bay

Boletus , Angew.Chem.Int.Ed.Engl.23(1984),n 6 ; [5] A naphtalenoid pulvinic acid derivative from the
Fungus Pisolithus Tinctorius , Phytochemistry, vol
24, n 6, pp 1351-1354, 1985 ; [6] P.Langer et al., Domino Reaction of 1,3- bis(trimethylsilyloxy)-1,3-dienes with Oxalyl
Chloride : General and Stereoselective Synthesis of y-Alkylidenebutenolides Chem.Eur.J.2000, 6, N 7,
3204-3214;

[7] Cook et al, Journal of Immunological Methods, 2001,
254, pages 109-118 ; [8] Papazisis et col Optimization of the sulforhodamine B colorimetric assay , J.Immunol.Meth, 208, pages 151-158, 1997 [8].

Claims

REVENDICATIONS

1. Composé répondant à la formule (I) suivante :

dans laquelle les R1, R6, R7 et R8, identiques ou différents, représentent H,-OH ou OR9, R2 représente H, -OH ou -OR9, R3 représente H, Rg, -CO2R9 ou -CO-NHR10, ou R2 et R3 forment ensemble un groupe -O-CO-, les R4 et R5, identiques ou différents, représentent H ou R9, Rg représentant un groupe alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 20 atomes de carbone, R10 représentant R9 ou -(CH2)a-NH-(CH2)b-NH2, a et b étant des entiers allant de 2 à 4 et leurs sels, à l'exception du composé dans lequel R2 et R3 forment ensemble un groupe -O-CO-, les R4, R5, R6 et Re représentent H, les R1 et R7 représentent-OH et du disel de potassium correspondant à ce composé, à l'exception du composé dans lequel R2 et R3 forment ensemble un groupe -O-CO-, les R1 et R7 représentent -OCH3, les R4 et R5 représentent-CH3 et les R6 et R8 représentent H et à l'exception du composé dans lequel les R1, R2 et R7 représentent -O-CH3, R3

représente -C02CH3, les R4 et R5 représentent CH3 et les R6 et R8 représentent H.

2. Composé selon la revendication 1, pour lequel R2 et R3 forment ensemble un groupement -0-CO-, ledit composé répondant à la formule (II) suivante :

les Ri, R4, R5, R6, R7 et Ra ayant la même définition que celle donnée dans la revendication 1.

3. Composé répondant à la formule (III) suivante :

4. Procédé de préparation de composés de formule (I) suivante :

dans laquelle les R1, R6, R7 et R8, identiques ou différents, représentent H,-OH ou OR9, R2 représente H, -OH ou -OR9, R3 représente H, Rg, -CO2R9 ou -CO-NH-R10 ou R2 et R3 forment ensemble un groupe -0-CO-, les R4 et R5, identiques ou différents, représentent H ou R9, Rg représentant un groupe alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 20 atomes de carbone, R10 représentant R9 ou -(CH2)a-NH-(CH2)b-NH2 avec a et b étant des entiers allant de 2 à 4, et leurs sels, ledit procédé consistant à faire réagir un composé de formule (IV) suivante :

les R4, R5, R6, R7 et R8 répondant à la même définition que celle de la revendication 1 et X étant un groupe partant, ladite réaction s'effectuant en présence d'une base, d'un catalyseur à base de platine ou palladium et étant suivie éventuellement d'une étape de traitement destinée à obtenir les sels adéquats.

Ri, R2 et R3 ayant la même définition que celle donnée dans la revendication 1, les R11, R12 représentent - B(OR13) (ORl4) ou -Sn(R15)3, les R13 et R14, identiques ou différents, représentent H ou un groupe alkyle de 1 à 7 atomes de carbone ou les R13 et R14 forment ensemble un groupe alkylène linéaire ou ramifié, R15 représente un groupe méthyle ou butyle, avec un composé de formule (V) suivante :

5. Procédé de préparation selon la revendication 4, dans lequel le catalyseur à base de platine est le dichlorobis(triphénylphosphine)palladium.

6. Procédé de préparation selon la revendication 4 ou 5, dans lequel le composé intermédiaire (IV), avec R11 et R12 représentant -

les R1, R2 et R3 ayant la même définition que celle donnée dans la revendication 1 et les Y identiques ou différents étant des groupes partants choisis, par exemple, parmi les halogènes tels que le fluor, chlore, brome, iode, le triflate -O-SO2-CF3, avec un composé boré de formules :

B(OR13) (OR14) , est préparé par réaction d'un composé dérivé du naphtalène de formule (VI) :

7. Procédé de préparation selon l'une quelconque des revendications 4 à 6, dans lequel le

R13 et R14 ayant la même signification que celle donnée dans la revendication 4, en présence d'une base ou d'un catalyseur à base de platine ou de palladium

b) réaction du composé (VIII), en milieu basique avec un composé silylé de formule (R16)3SiHal, R16 étant un groupe alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 4

les R5, R6, R7 et R8, ayant la même définition que celle donnée dans la revendication 1, en milieu basique, avec un a-alcoxyacétate d' alkyle b de formule R40-CH2-COOAlk, R4 répondant à la même définition que celle donnée dans la revendication 1, le groupement Alk étant un groupement alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 20 atomes de carbone, pour former un composé de formule (VIII) suivante :

composé intermédiaire (V) est préparé par la succession d'étapes suivantes : a)réaction d'un phénylacétate de formule (VII) suivante :

d) réaction du composé avec un réactif apte à former avec le-OH du cycle lactone un groupe partant afin d'obtenir la composé de formule (V).

atomes de carbone, Hal étant un groupe halogène, tel que F, Cl, Br, I afin d'obtenir un composé disilylé de formule (IX) :

8. Agent antioxydant de formule (I) suivante :

dans laquelle les R1, R6, R7 et R8, identiques ou différents, représentent H,-OH ou OR9, R2 représente H, -OH ou -OR9, R3 représente H, Rg, -CO2R9 ou -CO-NHR10, ou R2 et R3 forment ensemble un groupe -0-CO-, les R4 et Rs, identiques ou différents, représentent H ou R9, Rg représentant un groupe alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 20 atomes de carbone, R10 représentant Rg ou -(CH2)a-NH-(CH2)b-NH2 avec a et b étant des entiers allant de 2 à 4, et leurs sels.

9. Agent antioxydant selon la revendication 8, pour lequel R2 et R3 forment ensemble un groupement - 0-CO-, répondant à la formule (II) suivante :

les Rl, R4, R5, R6, R7 et R8 ayant la même définition que celle donnée dans la revendication 8.

10. Agent antioxydant selon la revendication 9, dans lequel les R4, Rs, R6 et R8 correspondent à un atome d'hydrogène, les R1 et R7 représentent -OH, ledit composé répondant à la formule (XI) suivante :

11. Agent antioxydant selon la revendication 10, correspondant au disel potassique du composé de formule (XI) de la revendication 10, ledit disel, existant sous deux formes (a) et (b) répondant à la formule (XII) suivante :

12. Composition pharmaceutique comprenant au moins un agent antioxydant selon l'une quelconque des revendications 8 à 11 et un véhicule pharmaceutiquement acceptable.

13. Composition pharmaceutique selon la revendication 12, utilisable pour le traitement de maladies inflammatoires.

14. Composition pharmaceutique selon la revendication 12, utilisable pour le maintien en survie de cellules soumises à un rayonnement ionisant induisant la production de radicaux libres.

15. Composition pharmaceutique selon la revendication 12, utilisable pour le maintien en survie de cellules saines soumises à l'action de médicaments induisant la production de radicaux libres.

16. Composition cosmétique comprenant au moins un agent antioxydant selon l'une quelconque des revendications 8 à 11 et un véhicule cosmétiquement acceptable.

17. Composition alimentaire comprenant en tant qu'additifs au moins un agent antioxydant selon l'une quelconque des revendications 8 à 11.

18. Composition selon l'une quelconque des revendications 12 à 17, comprenant un agent antioxydant

de formule (XI) tel que définie dans la revendication 10.

19. Composition selon l'une quelconque des revendications 12 à 17, comprenant un agent antioxydant de formule (XII) tel que définie dans la revendication 11.