EP1480971A1 - Isochinolinderivate - Google Patents

Isochinolinderivate

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Publication number
EP1480971A1
EP1480971A1 EP03714735A EP03714735A EP1480971A1 EP 1480971 A1 EP1480971 A1 EP 1480971A1 EP 03714735 A EP03714735 A EP 03714735A EP 03714735 A EP03714735 A EP 03714735A EP 1480971 A1 EP1480971 A1 EP 1480971A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
formula
compounds
acid
solvates
physiologically acceptable
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP03714735A
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Matthias Wiesner
Simon Goodman
Horst Kessler
Georgette Thumshirn
Dirk Weber
Dirk Gottschling
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Merck Patent GmbH
Original Assignee
Merck Patent GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Merck Patent GmbH filed Critical Merck Patent GmbH
Publication of EP1480971A1 publication Critical patent/EP1480971A1/de
Withdrawn legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
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    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
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    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D217/00—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems
    • C07D217/12—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems with radicals, substituted by hetero atoms, attached to carbon atoms of the nitrogen-containing ring
    • C07D217/14—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems with radicals, substituted by hetero atoms, attached to carbon atoms of the nitrogen-containing ring other than aralkyl radicals
    • C07D217/16—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems with radicals, substituted by hetero atoms, attached to carbon atoms of the nitrogen-containing ring other than aralkyl radicals substituted by oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links

Definitions

  • the invention relates to compounds of the general formula
  • R, R each independently of one another H, A, OH, OA, arylalkyl, shark, -CO-A, CN, N0 2 , NHR 3 , COOA, COOH, S0 2 A, CF 3 or OCF 3 ,
  • R each independently of one another H or A
  • R, R each independently of one another H, A, -CO-A, N0 2 or CN,
  • n, p independently of one another are 1, 2 or 3,
  • the object of the invention was to find new compounds with valuable properties, in particular those which are used for the production of medicaments.
  • the compounds of the formula I and their salts have very valuable pharmacological properties with good tolerability. Above all, they act as integrin inhibitors, in particular inhibiting the interactions of the ⁇ v, ⁇ 3, ⁇ 5 or ⁇ 6 integrin receptors with ligands, such as e.g. the binding of fibrinogen to the integrin receptor.
  • Integrins belong to the family of heterodimeric class I transmembrane receptors, which play an important role in numerous cell matrix or cell-cell adhesion processes (Tuckwell et al., 1996, Symp. Soc. Exp. Biol. 47) , They can be roughly divided into three classes: the ⁇ 1 integrins, which are receptors for the extracellular matrix, the ⁇ 2 integrins, which can be activated on leukocytes and are "triggered” during inflammatory processes, and the ⁇ v integrins, which are the cell response in wound healing and other pathological processes (Marshall and Hart, 1996, Semin. Cancer
  • the relative affinity and specificity for ligand binding is determined by combining the different ⁇ and ⁇ subunits.
  • ⁇ vß6 is a relatively rare integrin (Busk et al., J. Biol. Chem. 1992, 267 (9), 5790), which is increasingly formed in repair processes in epithelial tissue and which preferentially binds the natural matrix molecules fibronectin and tenascin (Wang et al. , Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1996, 75 (5), 664).
  • the physiological and pathological functions of ⁇ vß6 are not yet exactly known, but it is suspected that this integrin is associated with physiological processes and diseases (e.g. inflammation,
  • ⁇ vß6 is expressed on keratinocytes in wounds (Haapasalmi et al., J. Invest. Dermatol. 1996, 106 (1), 42).
  • Fibrous, endometriosis, cirrhosis of the liver or periodontitis can be influenced by agonists or antagonists of said integrin.
  • ⁇ vß ⁇ plays a role in the respiratory epithelium (Weinacker et al., Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1995, 12 (5), 547), so that corresponding agonists / antagonists of this integrin in respiratory diseases such as bronchitis, asthma, Lung fibrosis and respiratory tumors could be used successfully.
  • ⁇ v ⁇ also plays a role in the intestinal epithelium, so that corresponding integrin agonists / antagonists could be used in the treatment of inflammation, tumors and wounds of the gastrointestinal tract.
  • the compounds of the formula I according to the invention and their salts act as soluble molecules on cells which carry the receptor mentioned, or, if they are bound to surfaces, are artificial ligands for ⁇ v ⁇ -mediated cell attachment. Above all, they act as ⁇ v ⁇ integrin inhibitors, in particular inhibiting the interactions of the receptor with other ligands, e.g. the binding of fibronectin.
  • the compounds of the invention are particularly potent
  • Inhibitors of the vitronectin receptor ⁇ vß3 and / or potent inhibitors of the ⁇ vß ⁇ receptor are included in the vitronectin receptor ⁇ vß3 and / or potent inhibitors of the ⁇ vß ⁇ receptor.
  • the ⁇ vß3 integrin is grown on a number of cells, e.g. Endothelial cells, cells of the smooth vascular muscles, for example of the aorta, cells for
  • Antibodies against ⁇ vß3 are described which cause tumor shrinkage by inducing apoptosis.
  • the compounds can inhibit the binding of metal proteinases to integrins and thus prevent the cells from the enzymatic activity of the
  • An example can be found in the inhibition of the binding of MMP-2- (matrix metallo-proteinase-2) to the vitronectin receptor ⁇ vß3 by a cyclo-RGD peptide, as in PC Brooks et al., Cell 1996, 85, 683-693.
  • the compounds of the formula I according to the invention can therefore be used as active pharmaceutical ingredients, in particular for the treatment of tumor diseases, osteoporoses, osteolytic diseases and for suppressing angiogenesis.
  • micro-aggregates microthrombi
  • the spread of tumor cells from a local tumor into the vascular system occurs through the formation of micro-aggregates (microthrombi) through the interaction of the tumor cells with platelets.
  • the tumor cells are shielded by the protection in the micro-aggregate and are not recognized by the cells of the immune system.
  • the micro-aggregates can attach themselves to the vessel walls, which facilitates further penetration of tumor cells into the tissue. Since the formation of the microthrombi is mediated by fibrinogen binding to the fibrinogen receptors on activated platelets, the GPIIb / llla antagonists can be regarded as effective metastasis inhibitors.
  • compounds of the formula I In addition to the binding of fibrinogen, fibronectin and von Willebrand factor to the fibrinogen receptor of the platelets, compounds of the formula I also inhibit the binding of other adhesive proteins, such as
  • Vitronectin, collagen and laminin to the appropriate receptors on the surface of different cell types. In particular, they prevent the formation of platelet thrombi and can therefore be used to treat thrombosis, apoplexy, heart attack, inflammation and arteriosclerosis.
  • the antiplatelet effect can be demonstrated in vitro by the method of Born (Nature 1962, 4832, 927-929).
  • Organism is its bioavailability. If the active pharmaceutical ingredient is added intravenously to the organism in the form of a solution for injection, its absolute bioavailability, ie the proportion of the drug that remains unchanged in the systemic blood, ie in the large circulation, is 100%.
  • the agent When a therapeutic agent is administered orally, the agent is usually present as a solid in the formulation and must therefore first dissolve so that it can overcome the entry barriers, for example the gastrointestinal tract, the oral mucosa, nasal membranes or the skin, in particular the stratum corneum or can be absorbed by the body.
  • Pharmacokinetic data ie
  • Bioavailability can be obtained analogously to the method of J. Shaffer et al, J. Pharm. Sciences, 1999, 88, 313-318.
  • the invention relates to compounds of the formula I as claimed in claim 1 and their physiologically acceptable salts and / or solvates as active therapeutic substances.
  • the invention accordingly relates to compounds of the formula I as claimed in claim 1 and their physiologically acceptable salts and / or solvates as integrin inhibitors.
  • the invention relates to compounds of the formula I according to claim 1 and their physiologically acceptable salts and / or solvates for use in combating diseases.
  • the compounds of formula I can be used as active pharmaceutical ingredients in human and veterinary medicine, in particular for the prophylaxis and / or therapy of diseases of the circulatory system, thrombosis, heart attack, arteriosclerosis, apoplexy, angina pectoris, tumor diseases such as tumor growth or tumor metastasis, osteolytic diseases such as Osteoporosis, pathologically angiogenic diseases such as inflammation, ophthalmological diseases, diabetic retinopathy, macular degeneration, myopia, ocular histoplasmosis, rheumatoid arthritis, osteoarthritis, rubeotic glaucoma, ulcerative colitis, Crohn's disease, atherosclerosis, erythematosus, psoriasis sores, psoriasem sebioma, psoriasis sebiitis, psoriasem sebioma, psoriasis inflammation, psoriasem sebi
  • the compounds of formula I can be used as antimicrobial substances in operations where biomaterials, implants, catheters or pacemakers are used. They have an antiseptic effect.
  • the effectiveness of the antimicrobial activity can be determined by the P. Valentin-Weigund et al. in Infection and
  • the compounds of the formula I are inhibitors of fibrinogen binding and thus ligands of the fibrinogen receptors on platelets, they can be used as diagnostics for the detection and localization of thrombi in the vascular system in vivo, provided that they are substituted, for example, by a radioactive or UV-detectable residue.
  • the compounds of formula I can act as inhibitors of
  • Fibrinogen binding can also be used as an effective tool for studying the metabolism of platelets in different stages of activation or intracellular signaling mechanisms of the fibrinogen receptor.
  • the detectable unit of a "label" to be incorporated for example isotope labeling by 3 H, allows the mechanisms mentioned to be investigated after binding to the receptor.
  • Trt trityl (triphenylmethyl).
  • the compounds of formula I have at least one chiral center and can therefore occur in several stereoisomeric forms. All of these forms (e.g. D and L forms) and their mixtures (e.g. the DL forms) are included in Formula I.
  • prodrug derivatives are also included in the compounds according to the invention, i.e. with e.g. Alkyl or acyl groups, sugars or oligopeptides modified compounds of formula I, which are quickly cleaved in the organism to the active compounds of the invention.
  • Carboxyl group is converted into a pharmaceutically acceptable metabolically labile ester or an amide thereof. Furthermore, free amino groups or free hydroxyl groups as substituents of compounds of the formula I can be provided with corresponding protective groups.
  • Solvates of the compounds of the formula I are understood to mean additions of inert solvent molecules to the compounds of the formula I which are formed on account of their mutual attraction. Solvates are e.g. Mono- or dihydrates or
  • Addition compounds with alcohols e.g. with methanol or ethanol.
  • the invention further relates to a process for the preparation of compounds of the formula I according to claim 1 and their salts, characterized in that a) a compound of the formula II, in which Z, R 1 and n have the meaning given above and W denotes a customary protective group or a solid phase used in peptide chemistry,
  • guanyl compound e.g. N, N'- bis-BOC-1-guanylpyrazole reacted and, if appropriate, the remaining protective groups and / or the solid phase are split off or
  • A means alkyl, is linear or branched, and has 1 to 6, preferably 1, 2, 3, 4, 5 or 6 carbon atoms.
  • A is preferably methyl, furthermore ethyl, isopropyl, n-propyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl or tert-butyl, further also n-pentyl, 1-, 2- or 3-methylbutyl, 1, 1- , 1,2- or 2,2-dimethylpropyl, 1-ethylpropyl, hexyl, 1-, 2-, 3- or 4-methylpentyl, 1, 1-, 1, 2-, 1,3-, 2,2- , 2,3- or 3,3-dimethylbutyl, 1- or 2-
  • Ethyl butyl 1-ethyl-1-methylpropyl, 1-ethyl-2-methylpropyl, 1, 1, 2- or 1, 2,2-trimethylpropyl. Methyl is particularly preferred for A.
  • protecting group preferably means acetyl, propionyl,
  • Arylalkyl preferably means benzyl, phenylethyl, phenylpropyl or naphthylmethyl, particularly preferably benzyl.
  • Shark is preferably F, Cl or Br.
  • Het means a mono- or bicyclic aromatic or saturated radical with up to three heteroatoms, preferably a saturated, partially or completely unsaturated mono- or bicyclic heterocyclic radical with 5 to 10 ring members, where 1 or 2 N- and / or 1 or 2 S - Or O atoms can be present and the heterocyclic radical can be substituted once or twice by CN, shark, OH, OA, CF 3 , A, N0 2 or OCF 3 .
  • Het is preferably substituted or unsubstituted 2- or 3-furyl, 2- or 3-thienyl, 1-, 2- or 3-pyrrolyl, 1-, 2-, 4- or 5-imidazolyl, 3-, 4- or 5-pyrazolyl, 2-, 4- or 5-oxazolyl, 3-, 4- or 5-isoxazolyl, 2-, 4- or 5-thiazolyl, 3-, 4- or 5-isothiazolyl, 2-, 3- or 4-pyridyl, 2-, 4-, 5- or 6-pyrimidinyl, further preferably 1, 2,3-triazol-1-, -4- or -5-yl, 1, 2,4-triazol-1- , -4- or -5-yl, 1- or 5-tetrazolyl, 1, 2,3-oxadiazol-4- or -5-yl 1, 2,4-oxadiazol-3- or -5-yl, 1, 3,4-thiadiazol-2- or -5-yl, 1, 2,4-
  • heterocyclic radicals can also be partially or completely hydrogenated.
  • Het can also mean 2,3-dihydro-2-, -3-, -4- or -5-furyl, 2,5-dihydro-2-, -3-, -4- or -5-furyl, tetrahydro -2- or -3-furyl, 1, 3-dioxolan-4-yl, tetrahydro-2- or -3-thienyl, 2,3-dihydro-1-, -2-, -3-, -4- or -5-pyrrolyl, 2,5-dihydro-1-, -2-, -3-, -4- or -5-pyrrolyl,
  • Het methylpyridyl in particular 4-methylpyridin-2-yl, pyridin-2-yl, pyrimidin-2-yl, imidazol-2-yl, benzimidazol-2-yl and their hydrogenated derivatives, is particularly preferred.
  • OA preferably means methoxy, ethoxy, propoxy or butoxy, further also pentyloxy or hexyloxy.
  • R 1 and R 5 independently of one another are preferably H, A, CN, NO 2 , shark or -COA-, where A has one of the meanings given above; in particular R 1 and R 5 mean H.
  • R 2 is preferably H or A, where A has one of the meanings given above; especially H.
  • R 3 and R 4 independently of one another preferably mean H or -COA-, in particular H.
  • Y means - (CH 2 ) m- or in particular - (CH 2 ) - or
  • n and p independently of one another are preferably 1 or 2, in particular 1.
  • n preferably denotes 0, 2 or 4, in particular 0 or 4.
  • Radicals has one of the preferred meanings given above. Some preferred groups of compounds can be expressed by the following sub-formulas 11 to I36:
  • the starting materials can also be formed in situ, so that they are not isolated from the reaction mixture, but instead are immediately reacted further to give the compounds of the formula I.
  • Compounds of formula I can preferably be obtained under the conditions of peptide synthesis. The procedure is advantageously carried out according to customary methods of peptide synthesis, as described, for example, in Houben-Weyl, 1.c, volume 15/11, pages 1 to 806 (1974).
  • the direct precursors of the compounds of formula I can also e.g. according to Merrifield (Angew. Chem. 97, 801-812, 1985) on a solid phase, e.g. a swellable polystyrene resin.
  • a solid phase e.g. a swellable polystyrene resin.
  • all carriers e.g. from the
  • Solid phase peptide chemistry or nucleic acid synthesis are known to be used.
  • Suitable polymeric carrier materials are polymeric solid phases with preferably hydrophilic properties, for example cross-linked poly sugars such as cellulose, Sepharose or Sephadex R , acrylamides,
  • Polyethylene glycol-based polymer or tentacle polymers R Polyethylene glycol-based polymer or tentacle polymers R.
  • the solid phase is trityl chloride polystyrene resin, 4-
  • Methoxytritylchloride resin Merrifield resin. And Wang resin used.
  • the compounds of formula I can also be obtained by reacting a compound of formula IV with a compound of formula V and then removing the protecting groups.
  • the coupling reaction is preferably accomplished in the presence of a dehydrating agent, e.g. a carbodiimide such as DCCI or EDCI, further e.g. Propanephosphonic anhydride (cf. Angew. Chem. 1980, 92,
  • diphenylphosphoryl azide or 2-ethoxy-N-ethoxycarbonyl-1,2-dihydroquinoline in an inert solvent, e.g. a halogenated hydrocarbon such as dichloromethane, an ether such as tetrahydrofuran or dioxane, an amide such as DMF or dimethylacetamide, a nitrile such as acetonitrile, in dimethyl sulfoxide or in the presence of these solvents
  • an inert solvent e.g. a halogenated hydrocarbon such as dichloromethane, an ether such as tetrahydrofuran or dioxane, an amide such as DMF or dimethylacetamide, a nitrile such as acetonitrile, in dimethyl sulfoxide or in the presence of these solvents
  • the reaction time is between a few minutes and 14 days depending on the conditions used.
  • derivatives of compounds of the formula II and / or IV preferably a preactivated carboxylic acid, or a carboxylic acid halide, a symmetrical or mixed anhydride or an active ester can also be used.
  • residues for activating the carboxy group in typical acylation reactions are described in the literature (e.g. in the standard works such as Houben-Weyl, Methods of Organic Chemistry, Georg-Thieme-Verlag, Stuttgart).
  • Activated esters are conveniently formed in situ, e.g. B. by adding
  • reaction is usually carried out in an inert solvent, when using a carboxylic acid halide in the presence of an acid-binding agent, preferably an organic base such as
  • Triethylamine dimethylaniline, pyridine or quinoline.
  • an alkali metal or alkaline earth metal hydroxide, carbonate or bicarbonate or another salt of a weak acid of the alkali metal or alkaline earth metal preferably of potassium, sodium, calcium or cesium, can also be favorable.
  • the compounds of formula I can also be obtained by liberating them from their functional derivatives by solvolysis, in particular hydrolysis, or by hydrogenolysis.
  • Preferred starting materials for solvolysis or hydrogenolysis are those which otherwise correspond to the formula I, but instead of one or more free amino and / or hydroxyl groups contain corresponding protected amino and / or hydroxyl groups, in particular those which have a instead of an HN group Carry SG 1 -N group, wherein
  • SG 1 means an amino protecting group and / or those which replace the H atoms of a hydroxyl group carry a hydroxyl protective group, for example those which correspond to the formula I, but instead of a group -COOH carry a group -COOSG 2 , in which SG 2 denotes a hydroxyl protective group.
  • amino protecting group is generally known and refers to groups which are suitable for protecting (blocking) an amino group against chemical reactions. Unsubstituted or substituted acyl, aryl, aralkoxymethyl or aralkyl groups are particularly typical of such groups. Since the amino protective groups are removed after the desired reaction (or reaction sequence), their type and size is otherwise not critical; however, those with 1-20 C atoms are preferred.
  • acyl group is to be understood in the broadest sense in connection with the present process.
  • acyl groups derived from aliphatic, araliphatic, alicyclic, aromatic or heterocyclic carboxylic acids or sulfonic acids, and in particular alkoxy-carbonyl, alkenyloxycarbonyl, aryloxycarbonyl and especially aralkoxy-carbonyl groups.
  • alkanoyl such as acetyl, propionyl, butyryl
  • Aralkanoyl such as phenylacetyl
  • Aroyl such as benzoyl or toluyl
  • benzoyl or toluyl
  • Aryloxyalkanoyl such as phenoxyacetyl
  • Alkoxycarbonyl such as methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, 2,2,2-trichloroethoxycarbonyl, Boc, 2-iodoethoxycarbonyl
  • Alkenyloxycarbonyl such as allyloxycarbonyl (aloe), aralkyloxycarbonyl such as CBZ (synonymous with Z), 4-methoxybenzyloxycarbonyl (MOZ), 4-nitrobenzyloxycarbonyl or 9-fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc); 2
  • Phenylsulfonyl ethoxycarbonyl; Trimethylsilylethoxycarbonyl (Teoc) or Arylsulfonyl such as 4-methoxy-2,3,6-trimethylphenylsulfonyl (Mtr).
  • Preferred amino protecting groups are Boc, Fmoc and aloe, furthermore Z, benzyl and acetyl.
  • hydroxyl protecting group is also generally known and refers to groups which are suitable for protecting a hydroxyl group against chemical reactions. Typical of such groups are the above-mentioned unsubstituted or substituted aryl, aralkyl, aroyl or acyl groups, furthermore also alkyl groups, alkyl, aryl or aralkylsilyl groups or 0.0- or 0, S-acetals. The nature and size of the
  • Hydroxy protective groups are not critical since they are removed again after the desired chemical reaction or reaction sequence; groups with 1-20, in particular 1-10, carbon atoms are preferred.
  • hydroxy protecting groups include Aralkyl groups such as benzyl, 4-methoxybenzyl or 2,4-dimethoxybenzyl, aroyl groups such as benzoyl or p-nitrobenzoyl, acyl groups such as acetyl or pivaloyl, p-toluenesulfonyl, alkyl groups such as methyl or tert-butyl, but also allyl, alkylsilyl groups such as trimethylsilyl (TMS ), Triisopropylsilyl (TIPS), tert-butyldimethylsilyl (TBS) or triethylsilyl, trimethylsilylethyl, aralkylsilyl groups such as tert.-butyldiphenylsilyl (TBDPS), cycl
  • Particularly preferred hydroxyl protecting groups are benzyl, acetyl, tert-butyl or
  • a base of the formula I can be converted into the associated acid addition salt using an acid, for example by reacting equivalent amounts of the base and the acid in an inert solvent such as ethanol and subsequent evaporation.
  • acids that provide physiologically acceptable salts are suitable for this implementation.
  • inorganic acids can be used, for example sulfuric acid, sulfurous acid, dithionic acid, nitric acid, hydrohalic acids such as hydrochloric acid or hydrobromic acid, phosphoric acids such as orthophosphoric acid, sulfamic acid, furthermore organic acids, in particular aliphatic, alicyclic, araliphatic, aromatic or heterocyclic mono- or poly-based carbon.
  • Sulfonic or sulfuric acids for example formic acid, acetic acid, propionic acid, hexanoic acid, octanoic acid, decanoic acid, hexadecanoic acid, octadecanoic acid, pivalic acid, diethyl acetic acid, malonic acid, succinic acid, pimelic acid, fumaric acid, maleic acid,
  • Lactic acid tartaric acid, malic acid, citric acid, gluconic acid, ascorbic acid, nicotinic acid, isonicotinic acid, methane or ethanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, trimethoxybenzoic acid, adamantane carboxylic acid, p-toluenesulfonic acid, glycolic acid, embonic acid, chlorophenoxyacetic acid, aspartic acid, proline acid, glutamic acid
  • Glyoxylic acid palmitic acid, parachlorophenoxyisobutyric acid, cyclohexane carboxylic acid, glucose-1-phosphate, naphthalene mono- and disulfonic acids or lauryl sulfuric acid. Salts with physiologically unacceptable acids, e.g. Picrates can be used for the isolation and / or purification of the compounds of the formula I.
  • compounds of the formula I with bases can be converted into the corresponding metal, in particular alkali metal or alkaline earth metal or into the corresponding ammonium salts.
  • bases for example sodium or potassium hydroxide or carbonate
  • Substituted ammonium salts for example the dimethyl, diethyl or diisopropylammonium salts, monoethanol, diethanol or diisopropylammonium salts, cyclohexyl, dicyclohexylammonium salts, dibenzylethylenediammonium salts, furthermore, for example, salts with arginine or lysine.
  • the invention further relates to the use of the compounds of the formula I and / or their physiologically acceptable salts for the production of a pharmaceutical preparation.
  • the invention further relates to pharmaceutical preparations containing at least one compound of the formula I and / or one of its physiologically acceptable salts or solvates, which are prepared in particular by a non-chemical route.
  • the compounds of the formula I can be brought into a suitable dosage form together with at least one solid, liquid and / or semi-liquid carrier or auxiliary and, if appropriate, in combination with one or more further active compounds.
  • Suitable carriers are organic or inorganic substances which are suitable for enteral (e.g. oral), parenteral or topical application and do not react with the new compounds, for example water, vegetable oils, benzyl alcohols, alkylene glycols, polyethylene glycols, glycerol triacetate, gelatin, carbohydrates such as lactose or starch, magnesium stearate, talc,
  • Vaseline Tablets, pills, dragees, capsules, powders, granules, syrups, juices or drops are used for oral use, suppositories for rectal use, solutions, preferably oily or aqueous solutions, furthermore suspensions, emulsions or implants for topical use for parenteral use
  • the new compounds can also be lyophilized and the resulting lyophilisates e.g. can be used for the production of injectables.
  • the specified preparations can be sterilized and / or contain auxiliary substances such as lubricants, preservatives, stabilizers and / or wetting agents, emulsifiers, salts for influencing the osmotic pressure, buffer substances, coloring, taste and / or several other active substances, e.g. one or more vitamins.
  • sprays can be used which either dissolved or suspended in a propellant or the active ingredient
  • Propellant mixture e.g. C0 2 or chlorofluorocarbons
  • the active ingredient is expediently used in micronized form, it being possible for one or more additional physiologically compatible solvents to be present, for example ethanol.
  • Inhalation solutions can be administered using standard inhalers.
  • the compounds of the formula I and their physiologically acceptable salts can be used as integrin inhibitors in combating diseases, in particular thromboses, heart attacks, coronary heart diseases, arteriosclerosis, tumors, osteoporosis, inflammations and infections.
  • the compounds of formula I according to claim 1 and / or their physiologically acceptable salts are also used in pathological processes which are maintained or propagated by angiogenesis, in particular in tumors or rheumatoid arthritis.
  • the substances according to the invention are generally administered in analogy to other known, commercially available peptides, but in particular in analogy to the compounds described in US Pat. No. 4-472,305, preferably in doses between about 0.05 and 500 mg , in particular between 0.5 and 100 mg per dosage unit.
  • the daily dosage is preferably between about 0.01 and 2 mg / kg body weight.
  • the specific dose for each patient depends on a wide variety of factors, for example on the effectiveness of the specific ones used
  • the compounds of the formula I can be used as integrin ligands for the preparation of columns for affinity chromatography for the purification of integrins.
  • the ligand ie a compound of the formula I, is covalently coupled to a polymeric support via an anchor function, for example the carboxy group of Asp.
  • Integrin purification takes place under conditions which are customary and known per se for the condensation of amino acids.
  • the compounds of the formula I contain one or more chiral centers and can therefore be present in racemic or in optically active form.
  • Racemates obtained can be separated mechanically or chemically into the enantiomers by methods known per se.
  • Diastereomers are preferably formed from the racemic mixture by reaction with an optically active release agent.
  • Suitable release agents are e.g. optically active acids, such as the D and L forms of tartaric acid,
  • Enantiomer separation using a column filled with an optically active separating agent e.g. dinitrobenzoylphenylglycine
  • a suitable solvent is e.g. a mixture
  • Hexane / isopropanol / acetonitrile e.g. in the volume ratio 82: 15: 3.
  • optically active compounds of the formula I by the methods described above by using starting materials which are already optically active.
  • customary work-up means: if necessary, water is added and, if necessary, the pH is adjusted to between 2 and 10, depending on the constitution of the end product, extracted with
  • the diastereomers are preferably separated under the stated conditions.
  • Fmoc-protected amino acids were purchased from Novabiochem, Advanced ChemTech, MultiSynTech or PepTech Corporation (Cambridge, USA).
  • PE syringes from Becton-Dickinson (Fraga, Spain) or Braun (Melsungen) with PE frits from Roland Vetter Labor bin (Ammerbuch) were used for manual solid-phase synthesis.
  • the syringes were rotated at about 30 rpm to mix the resin suspension.
  • the resin was loaded in glass shaking vessels.
  • Hygroscopic and / or absolute solvents were transferred in syringes under argon.
  • Mass spectra were recorded using electron impact (El) and chemical ionization (Cl) technology on a Finnigan MAT 8200 instrument.
  • Electrospray ionization (ESI) mass spectra were recorded on a Finnigan LCQ mass spectrometer in combination with a
  • the compounds were eluted with a linear gradient (15 min) of acetonitrile (solvent B) in water (solvent A) and 0.1% (v / v) formic acid.
  • Mass spectra are in the form "X
  • Lyophilization was carried out using the Alpha 2-4 device from Christ
  • AAV 2 The Fmoc protecting group is split off
  • the resin (100 mg) is pre-swollen in NMP (5 mL, 10 min.).
  • the Fmoc protective group is removed by treatment with a freshly prepared 20% piperidine solution (v / v) in NMP (5 mL) for 15 min. cleaved. Then the resin is washed with NMP (5 x 5 mL, 3 min. Each) and again with a 20 % Piperidine solution (v / v) in NMP (5 mL, 15 min.) Added. Finally the resin is washed with NMP (5 5 mL, 3 min each).
  • AAV 3 Coupling of 5- (9H-fluoren-9-ylmethoxy) -3H- [1, 3,4] oxadiazol-2-one (142) to resin-bound, free amines according to Gibson
  • AAV 4 coupling with HATU / HOAt
  • connection from the TCP resin is split off according to the following flow diagram:
  • N - [(9H-Fluoren-9-ylmethoxy) carbonyl] hydrazine (141) Boc hydrazine (10.0 g, 75.6 mmol) and DIPEA (12.95 mL, 75.6 mmol) were dissolved in dry CH 2 CI 2 (200 mL) and cooled to 0 ° C. Then FmocCI (19.6 g, 75.8 mmol), dissolved in dry CH 2 CI 2 (100 mL), was dissolved within 30 min. added and the mixture was stirred at room temperature overnight. The organic phase was extracted with water (200 mL) and concentrated to a volume of about 100 mL.
  • Amine is mixed with an approx. 0.1 M solution from 2.5 equiv. (based on resin coverage, 0.09 mmol) Fmoc-3-aminobenzoic acid, 2.4 equiv. (0.086) HATU and 30 equiv. (1.08) sym-collidine added in dry DMF and shaken for 90 min at room temperature. It is washed with DMF (6 x 1 ml) and deprotected as described.
  • the resin is then washed with anhydrous chloroform (3 ⁇ 1 ml) and mixed with a solution of 0.36 mmol of N, N'-bis-BOC-1-guanylpyrazole in 0.4 ml of anhydrous chloroform and reacted at 50 ° C. in a heated shaker. After 20 hours the resin is washed with DCM (6 x 1 ml).
  • Example A Injection glasses
  • a solution of 100 g of an active ingredient of the formula I and 5 g of disodium hydrogenphosphate is adjusted to pH 6.5 in 3 l of double-distilled water with 2N hydrochloric acid, sterile filtered, filled into injection glasses, lyophilized under sterile conditions and sealed sterile. Each injection glass contains 5 mg of active ingredient.
  • a mixture of 20 g of an active ingredient of the formula I is melted with 100 g of soy lecithin and 1400 g of cocoa butter, poured into molds and allowed to cool. Each suppository contains 20 mg of active ingredient.
  • a solution is prepared from 1 g of an active ingredient of the formula I, 9.38 g
  • Example D ointment 500 mg of an active ingredient of the formula I are mixed with 99.5 g of petroleum jelly under aseptic conditions.
  • a mixture of 1 kg of active ingredient of the formula I, 4 kg of lactose, 1, 2 kg of potato starch, 0.2 kg of talc and 0.1 kg of magnesium stearate is compressed into tablets in a conventional manner such that each tablet contains 10 mg of active ingredient.
  • Example F coated tablets
  • Example E tablets are pressed, which are then coated in a conventional manner with a coating of sucrose, potato starch, talc, tragacanth and colorant.
  • Example G capsules
  • each capsule contains 20 mg of the active ingredient.

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Abstract

Isochinolinderivate der allgemeinen Formel (I), worin X, Y, Z, R1, R2 und n, die in Patentanspruch (1) angegebenen Bedeutungen haben, sowie deren physiologisch unbedenklichen Salze oder Solvate sind Integrininhibitoren und können zur Bekämpfung von Thrombosen, Herzinfarkt, koronaren Herzerkrankungen, Arteriosklerose, Entzündungen, Tumoren, Osteoporose, Infektionen und Restenose nach Angioplastie oder bei pathologischen Vorgängen, die durch Angiogenese unterhalten oder propagiert werden, eingesetzt werden.

Description

Isochinolinderivate
Die Erfindung betrifft Verbindungen der allgemeinen Formel
worin
X H, -C(=NR3)-NHR4 oder Het,
Y -(CH2)m-,
NH oder CH2,
R , R jeweils unabhängig voneinander H, A, OH, OA, Arylalkyl, Hai, -CO-A, CN, N02, NHR3, COOA, COOH, S02A, CF3 oder OCF3,
R jeweils unabhängig voneinander H oder A,
R , R jeweils unabhängig voneinander H, A, -CO-A, N02 oder CN,
A Alkyl mit 1-6 C-Atomen,
m 0, 1 , 2, 3, 4, 5 oder 6,
n, p unabhängig voneinander 1 , 2 oder 3 bedeuten,
sowie ihre physiologisch unbedenklichen Derivate, insbesondere deren Salze und Solvate. Der Erfindung lag die Aufgabe zugrunde, neue Verbindungen mit wertvollen Eigenschaften aufzufinden, insbesondere solche, die zur Herstellung von Arzneimitteln verwendet werden.
Es wurde gefunden, daß die Verbindungen der Formel I und ihre Salze bei guter Verträglichkeit sehr wertvolle pharmakologische Eigenschaften besitzen. Vor allem wirken sie als Integrin-Inhibitoren, wobei sie insbesondere die Wechselwirkungen der αv-, ß3-, ß5- oder ß6-lntegrin- Rezeptoren mit Liganden hemmen, wie z.B. die Bindung von Fibrinogen an den Integrinrezeptor.
Integrine gehören zu der Familie von heterodimeren Klasse I - Transmembran-Rezeptoren, die in zahlreichen Zeil-Matrix- bzw. Zell-Zell- Adhäsionsvorgängen eine wichtige Rolle spielen (Tuckwell et al., 1996, Symp. Soc. Exp. Biol. 47). Sie können grob in drei Klassen eingeteilt werden: die ß1 -Integrine, die Rezeptoren für die extrazelluläre Matrix darstellen, die ß2-lntegrine, welche auf Leukozyten aktivierbar sind und während inflammatorischen Prozessen "getriggert" werden, sowie die αv - Integrine, die die Zellantwort bei Wundheilungs- und anderen patholo- gischen Prozessen beeinflussen (Marshall and Hart, 1996, Semin. Cancer
Biol. 7, 191). Die relative Affinität und Spezifität für eine Ligandenbindung wird durch Kombination der verschiedenen α- und ß-Untereinheiten bestimmt.
Besondere Wirksamkeit zeigen die erfindungsgemäßen Verbindungen im
Fall der Integrine αvßl , αvß3, αvß5, αllbß3 sowie αvßδ und αvßδ, bevorzugt von αvß3, αvß5 und αvßδ, sowie αllbß3.
αvß6 ist ein relativ seltenes Integrin (Busk et al., J. Biol. Chem. 1992, 267(9), 5790), das bei Reparaturvorgängen in Epithelgewebe vermehrt gebildet wird und die natürlichen Matrixmoleküle Fibronectin und Tenascin bevorzugt bindet (Wang et al., Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1996, 75(5), 664). Die physiologischen und pathologischen Funktionen von αvß6 sind noch nicht genau bekannt, es wird jedoch vermutet, daß dieses Integrin bei physiologischen Vorgängen und Erkrankungen (z.B. Entzündungen,
Wundheilung, Tumoren), bei denen epitheliale Zellen beteiligt sind, eine wichtige Rolle spielt. So wird αvß6 auf Keratinozyten in Wunden exprimiert (Haapasalmi et al., J. Invest. Dermatol. 1996, 106(1), 42), woraus anzunehmen ist, daß neben Wundheilungsprozessen und Entzündungen auch andere pathologische Ereignisse der Haut, wie z. B. Psoriasis, bullöser Pemphigus, Dermatitis und Erytheme sowie auch zystische
Fibröse, Endometriose, Leberzirrhose oder Periodontitis durch Agonisten oder Antagonisten des besagten Integrins beeinflußbar sind. Ferner spielt αvßδ im Atemwegsepithel eine Rolle (Weinacker et al., Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1995, 12(5), 547), so daß entsprechende Agonisten / Antagonisten dieses Integrins bei Atemwegserkrankungen, wie Bronchitis, Asthma, Lungenfibrosen und Atemwegstumoren erfolgreich eingesetzt werden könnten. Letztlich ist bekannt, daß αvßδ auch im Darmepithel eine Rolle spielt, so daß entsprechende lntegrin-Agonisten/-Antagonisten bei der Behandlung von Entzündungen, Tumoren und Wunden des Magen/Darmtraktes Verwendung finden könnten.
Es wurde gefunden, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel I und ihre Salze als lösliche Moleküle Wirkung auf Zellen ausüben, die den genannten Rezeptor tragen, oder wenn sie an Oberflächen gebunden sind, künstliche Liganden für die αvßδ - vermittelte Zellanhaftung darstellen. Vor allem wirken sie als αvßδ Integrin-Inhibitoren, wobei sie insbesondere die Wechselwirkungen des Rezeptors mit anderen Liganden hemmen, wie z.B. die Bindung von Fibronectin.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind insbesondere potente
Inhibitoren des Vitronectinrezeptors αvß3 und/oder potente Inhibitoren des αvßδ-Rezeptors.
Das αvß3 Integrin wird auf einer Reihe von Zellen, z.B. Endothelzellen, Zellen der glatten Gefäßmuskulatur beispielsweise der Aorta, Zellen zum
Abbau von Knochenmatrix (Osteoclasten) oder Tumorzellen, exprimiert.
Die Wirkung der erfindungsgemäßen Verbindungen kann z.B. nach der Methode nachgewiesen werden, die von J.W. Smith et al. in J. Biol. Chem. 1990, 265, 12267-12271 beschrieben wird. B. Felding-Habermann und D.A. Cheresh beschreiben in Curr. Opin. Cell. Biol. 1993,- 5, 864 die Bedeutungen der Integrine als Adhäsionsrezeptoren für die unterschiedlichsten Phänomene und Krankheitsbilder, speziell in Bezug auf den Vitronectinrezeptor αvß3.
Die Abhängigkeit der Entstehung von Angiogenese von der Wechselwirkung zwischen vaskulären Integrinen und extrazellulären Matrixproteinen ist von P.C. Brooks, R.A. Clark und D.A. Cheresh in Science 1994, 264, 569-571 beschrieben.
Die Möglichkeit der Inhibierung dieser Wechselwirkung und damit zum Einleiten von Apoptose (programmierter Zelltod) angiogener vaskulärer Zellen durch ein cyclisches Peptid ist von P.C. Brooks, A.M. Montgomery, M. Rosenfeld, R.A. Reisfeld, T. Hu, G. Klier und D.A. Cheresh in Cell 1994, 79, 1157-1164 beschrieben. Es wurden darin z.B. αvß3-Antagonisten oder
Antikörper gegen αvß3 beschrieben, die eine Schrumpfung von Tumoren durch Einleiten von Apoptose bewirken.
Der experimentelle Nachweis, daß auch die erfindungsgemäßen Verbindungen die Anheftung von lebenden Zellen auf den entsprechenden Matrixproteinen verhindern und dementsprechend auch die Anheftung von Tumorzellen an Matrixproteine verhindern, kann in einem Zeiladhäsionstest erbracht werden, analog der Methode von F. Mitjans et al., J. Cell Science 1995, 108, 2825-2838.
P.C. Brooks et al. beschreiben in J. Clin. Invest. 1995, 96, 1815-1822 αvß3- Antagonisten zur Krebsbekämpfung und zur Behandlung tumor-induzierter angiogener Krankheiten.
Die Verbindungen können die Bindung von Metallproteinasen an Integrine hemmen und so verhindern, daß die Zellen die enzymatische Aktivität der
Proteinase nutzen können. Ein Beispiel ist in der Hemmbarkeit der Bindung von MMP-2- (Matrix-Metallo-Proteinase-2-) an den Vitronectin- Rezeptor αvß3 durch ein Cyclo-RGD-Peptid zu finden, wie in P.C. Brooks et al., Cell 1996, 85, 683-693 beschrieben. Die erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel I können daher als Arzneimittelwirkstoffe insbesondere zur Behandlung von Tumorerkrankungen, Osteoporosen, osteolytischen Erkrankungen sowie zur Unterdrückung der Angiogenese eingesetzt werden.
Verbindungen der Formel I, die die Wechselwirkung von Integrinrezeptoren und Liganden, wie z.B. von Fibrinogen an den Fibrinogenrezeptor (Glycoprotein llb/llla) blockieren, verhindern als GPIIb/llla-Antagonisten die Ausbreitung von Tumorzellen durch Metastase. Dies wird durch folgende Beobachtungen belegt:
Die Verbreitung von Tumorzellen von einem lokalen Tumor in das vaskuläre System erfolgt durch die Bildung von Mikroaggregaten (Mikrothromben) durch die Wechselwirkung der Tumorzellen mit Blutplättchen. Die Tumorzellen sind durch den Schutz im Mikroaggregat abgeschirmt und werden von den Zellen des Immunsystems nicht erkannt.
Die Mikroaggregate können sich an Gefäßwandungen festsetzen, wodurch ein weiteres Eindringen von Tumorzellen in das Gewebe erleichtert wird. Da die Bildung der Mikrothromben durch Fibrinogenbindung an die Fibrinogenrezeptoren auf aktivierten Blutplättchen vermittelt wird, können die GPIIb/llla-Antagonisten als wirksame Metastase-Hemmer angesehen werden.
Verbindungen der Formel I hemmen neben der Bindung von Fibrinogen, Fibronectin und des von-Willebrand-Faktors an den Fibrinogenrezeptor der Blutplättchen auch die Bindung weiterer adhäsiver Proteine, wie
Vitronectin, Kollagen und Laminin, an die entsprechenden Rezeptoren auf der Oberfläche verschiedener Zelltypen. Sie verhindern insbesondere die Entstehung von Blutplättchenthromben und können daher zur Behandlung von Thrombosen, Apoplexie, Herzinfarkt, Entzündungen und Arteriosklerose eingesetzt werden.
Die thrombozytenaggregationshemmende Wirkung läßt sich in vitro nach der Methode von Born (Nature 1962, 4832, 927-929) nachweisen.
Ein Maß für die Aufnahme eines Arzneimittelwirkstoffs in einen
Organismus ist seine Bioverfügbarkeit. Wird der Arzneimittelwirkstoff in Form einer Injektionslösung dem Organismus intravenös zugefügt, so liegt seine absolute Bioverfügbarkeit, d.h. der Anteil des Pharmakons, der unverändert im systemischen Blut, d.h. in den großen Kreislauf gelangt, bei 100%. Bei oraler Vergabe eines therapeutischen Wirkstoffs liegt der Wirkstoff in der Regel als Feststoff in der Formulierung vor und muß sich daher zuerst auflösen, damit er die Eintrittsbarrieren, beispielsweise den Gastrointestinaltrakt, die Mundschleimhaut, nasale Membranen oder die Haut, insbesondere das Stratum corneum, überwinden kann bzw. vom Körper resorbiert werden kann. Daten zur Pharmakokinetik, d.h. zur
Bioverfügbarkeit können analog zu der Methode von J. Shaffer et al, J. Pharm. Sciences, 1999, 88, 313-318 erhalten werden.
Gegenstand der Erfindung sind Verbindungen der Formel I nach Anspruch 1 und ihre physiologisch unbedenklichen Salze und/oder Solvate als therapeutische Wirkstoffe.
Gegenstand der Erfindung sind demgemäß Verbindungen der Formel I nach Anspruch 1 und ihre physiologisch unbedenklichen Salze und/oder Solvate als Integrininhibitoren.
Gegenstand der Erfindung sind Verbindungen der Formel I nach Anspruch 1 und ihre physiologisch unbedenklichen Salze und/oder Solvate zur Anwendung bei der Bekämpfung von Krankheiten.
Die Verbindungen der Formel I können als Arzneimittelwirkstoffe in der Human- und Veterinärmedizin eingesetzt werden, insbesondere zur Prophylaxe und/oder Therapie von Erkrankungen des Kreislaufs, Thrombose, Herzinfarkt, Arteriosklerose, Apoplexie, Angina pectoris, Tumorerkrankungen, wie Tumorwachstum oder Tumormetastasierung, osteolytischen Krankheiten wie Osteoporose, pathologisch angiogenen Krankheiten wie z.B. Entzündungen, ophthalmologischen Krankheiten, diabetischer Retinopathie, makularer Degeneration, Myopia, okularer Histoplasmose, rheumatischer Arthritis, Osteoarthritis, rubeotischem Glaukom, ulcerativer Colitis, Morbus Crohn, Atherosklerose, Psoriasis, bullöser Pemphigus, Dermatitis, Erytheme, Lungenfibrose, zystische Fibrose, Endometriose, Leberzirrhose, Periodontitis, Restenose nach Angioplastie, Multiplesklerose, viraler Infektion, bakterieller Infektion, Pilzinfektion, bei akutem Nierenversagen und bei der Wundheilung zur Unterstützung des Heilungsprozesses.
Die Verbindungen der Formel I können als antimikrobiell wirkende Substanzen bei Operationen eingesetzt werden, wo Biomaterialien, Implantate, Katheter oder Herzschrittmacher verwendet werden. Dabei wirken sie antiseptisch. Die Wirksamkeit der antimikrobiellen Aktivität kann durch das von P. Valentin-Weigund et al. in Infection and
Immunity, 1988, 2851-2855 beschriebene Verfahren nachgewiesen werden.
Da die Verbindungen der Formel I Inhibitoren der Fibrinogenbindung und damit Liganden der Fibrinogenrezeptoren auf Blutplättchen darstellen, können sie als Diagnostika zur Detektion und Lokalisierung von Thromben im vaskulären System in vivo verwendet werden, sofern sie beispielsweise durch einen radioaktiven oder UV-detektierbaren Rest substituiert werden.
Die Verbindungen der Formel I können als Inhibitoren der
Fibrinogenbindung auch als wirksame Hilfsmittel zum Studium des Metabolismus von Blutplättchen in unterschiedlichen Aktivierungsstadien oder von intrazellulären Signalmechanismen des Fibrinogenrezeptors verwendet werden. Die detektierbare Einheit eines einzubauenden "Labels", z.B. eine Isotopenmarkierung durch 3H, erlaubt es, nach Bindung an den Rezeptor, die genannten Mechanismen zu untersuchen.
Es bedeuten nachstehend:
Ac Acetyl
Aza-Gly H2N-NH-COOH
BOC tert.-Butoxycarbonyl
CBZ oder ZBenzyloxycarbonyl
DCCI Dicyclohexylcarbodiimid DCM Dichlormethan
DIPEA Diisopropylethylamin DMF Dimethylformamid
DMSO Dimethylsulfoxid
EDCI N-Ethyl-N,N'-(dimethylaminopropyl)-carbodiimid
Et Ethyl
Fmoc 9-Fluorenylmethoxycarbonyl
Gly Glycin
Gua Guanidin
HATU 0-(7-Azabenzotriazol-1-yl)-N,N,N,,N'-tetramethyluronium hexafluorophosphat
HOBt 1 -Hydroxybenzotriazol
Me Methyl
MBHA 4-Methyl-benzhyd rylam in
Mtr 4-Methoxy-2,3,6-trimethylphenyl-sulfonyl
NMP N-Methylpyrrolidon
NMR kernmagnetische Resonanz
HONSu N-Hydroxysuccinimid
OBzl Benzylester
OtBu tert.-Butylester
Oct Octanoyl
OMe Methylester
OEt Ethylester
Pbf 2,2,4,6,7-Pentamethyldihydrobenzofuran-5-sulfonyl ß-Phe ß-Phenylalanin
POA Phenoxyacetyl
Pyr Pyridin
Rf-Wert Retentionsfaktor
RP Reversed Phase
RT Retentionszeit
Sal Salicyloyl
TBTU O^I H-Benzotriazol-l-y -N.N.N'.N'- tetramethyluroniumtetrafluorborat
TFA Trifluoressigsäure
Thiqu 1 ,2,3,4-Tetrahydroisoquinolin
Trt Trityl (Triphenylmethyl). Die Verbindungen der Formel I besitzen mindestens ein chirales Zentrum und können daher in mehreren stereoisomeren Formen auftreten. Alle diese Formen (z. B. D- und L-Formen) und deren Gemische (z. B. die DL- Formen) sind in der Formel I eingeschlossen.
In die erfindungsgemäßen Verbindungen nach Anspruch 1 sind auch sogenannte Prodrug-Derivate eingeschlossen, d.h. mit z.B. Alkyl- oder Acylgruppen, Zuckern oder Oligopeptiden abgewandelte Verbindungen der Formel I, die im Organismus rasch zu den wirksamen erfindungsgemäßen Verbindungen gespalten werden.
Hierzu gehören auch bioabbaubare Polymerderivate der erfindungsgemäßen Verbindungen, wie dies z. B. in Int. J. Pharm. 1995, 115, 61 -67 beschrieben ist. In die erfindungsgemäßen Verbindungen nach Anspruch 1 sind auch Derivate der Verbindungen der Formel I eingeschlossen, deren
Carboxylgruppe in einen pharmazeutisch akzeptablen metabolisch labilen Ester oder ein Amid davon umgewandelt ist. Ferner können freie Aminogruppen oder freie Hydroxygruppen als Substituenten von Verbindungen der Formel I mit entsprechenden Schutzgruppen versehen sein.
Unter Solvaten der Verbindungen der Formel I werden Anlagerungen von inerten Lösungsmittelmolekülen an die Verbindungen der Formel I verstanden, die sich aufgrund ihrer gegenseitigen Anziehungskraft ausbilden. Solvate sind z.B. Mono- oder Dihydrate oder
Additionsverbindungen mit Alkoholen, wie z.B. mit Methanol oder Ethanol.
Gegenstand der Erfindung ist ferner ein Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel I nach Anspruch 1 sowie ihrer Salze, dadurch gekennzeichnet, daß man a) eine Verbindung der Formel II, worin Z, R1 und n die oben angebebene Bedeutung aufweisen und W eine übliche Schutzgruppe oder eine in der Peptidchemie verwendete feste Phase bedeutet,
mit einer Verbindung der Formel III worin Y die oben angegebene Bedeutungen aufweist und Q eine geeignete Schutzgruppe oder Het bedeutet, in Gegenwart eines Kondensationsmittels wie z.B. HATU umsetzt,
und anschließend die Schutzgruppen und/oder die feste Phase entfernt,
und das erhaltene Produkt gegebenenfalls, sofern Q als Schutzgruppe abgespalten wird, mit einer geeigneten Guanylverbindung, wie z.B. N, N'- bis-BOC-1-Guanylpyrazol umgesetzt und gegebenenfalls die verbliebenen Schutzgruppen und/oder die festen Phase abgespaltet oder
b) eine Verbindung der Formel I aus einem ihrer funktioneilen Derivate durch Behandeln mit einem solvolysierenden oder hydrogenolysierenden Mittel in Freiheit setzt,
und/oder daß man eine basische oder saure Verbindung der Formel I durch Behandeln mit einer Säure oder Base in eines ihrer Salze überführt. Für die gesamte Erfindung gilt, daß sämtliche Reste, die mehrfach auftreten, wie z.B. R1 gleich oder verschieden sein können, d.h unabhängig voneinander sind.
In den vorstehenden Formeln bedeutet A Alkyl, ist linear oder verzweigt, und hat 1 bis 6, vorzugsweise 1 , 2, 3, 4, 5 oder 6 C-Atome. A bedeutet vorzugsweise Methyl, weiterhin Ethyl, Isopropyl, n-Propyl, n-Butyl, Isobutyl, sek.-Butyl oder tert.-Butyl, ferner auch n-Pentyl, 1-, 2- oder 3-Methylbutyl, 1 ,1-, 1,2- oder 2,2-Dimethylpropyl, 1-Ethylpropyl, Hexyl, 1-, 2-, 3- oder 4- Methylpentyl, 1 ,1-, 1 ,2-, 1,3-, 2,2-, 2,3- oder 3,3-Dimethylbutyl, 1- oder 2-
Ethylbutyl, 1-Ethyl-1-methylpropyl, 1-Ethyl-2-methylpropyl, 1 ,1 ,2- oder 1 ,2,2-Trimethylpropyl. Besonders bevorzugt für A ist Methyl.
Der Ausdruck „Schutzgruppe" bedeutet vorzugsweise Acetyl, Propionyl,
Butyryl, Phenylacetyl, Benzoyl, Toluyl, POA, Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, 2,2,2-Trichlorethoxycarbonyl, BOC, 2-lodethoxycarbonyl, CBZ ("Carbobenzoxy"), 4-Methoxybenzyloxycarbonyl, Fmoc, Mtr oder Benzyl. Besonders bevorzugt Fmoc.
Arylalkyl bedeutet bevorzugt Benzyl, Phenylethyl, Phenylpropyl oder Naphthylmethyl, besonders bevorzugt Benzyl.
Hai bedeutet vorzugsweise F, Cl oder Br.
Het bedeutet einen mono- oder bicyclischen aromatischen oder gesättigten Rest mit bis zu drei Heteroatomen, vorzugsweise einen gesättigten, teilweise oder vollständig ungesättigten mono- oder bicyclischen heterocyclischen Rest mit 5 bis 10 Ringgliedern, wobei 1 oder 2 N- und/oder 1 oder 2 S- oder O-Atome vorliegen können und der heterocyclische Rest ein- oder zweifach durch CN, Hai, OH, OA, CF3, A, N02 oder OCF3 substituiert sein kann.
Het ist vorzugsweise substituiertes oder unsubstituiertes 2- oder 3-Furyl, 2- oder 3-Thienyl, 1-, 2- oder 3-Pyrrolyl, 1-, 2-, 4- oder 5-lmidazolyl, 3-, 4- oder 5-Pyrazolyl, 2-, 4- oder 5-Oxazolyl, 3-, 4- oder 5-lsoxazolyl, 2-, 4- oder 5-Thiazolyl, 3-, 4- oder 5-lsothiazolyl, 2-, 3- oder 4-Pyridyl, 2-, 4-, 5- oder 6- Pyrimidinyl, weiterhin bevorzugt 1 ,2,3-Triazol-1-, -4- oder -5-yl, 1 ,2,4- Triazol-1-, -4- oder -5-yl, 1- oder 5-Tetrazolyl, 1 ,2,3-Oxadiazol-4- oder -5-yl 1 ,2,4-Oxadiazol-3- oder -5-yl, 1 ,3,4-Thiadiazol-2- oder -5-yl, 1 ,2,4-
Thiadiazol-3- oder -5-yl, 1 ,2,3-Thiadiazol-4- oder -5-yl, 2-, 3-, 4-, 5- oder 6- 2H-Thiopyranyl, 2-, 3- oder 4-4H-Thiopyranyl, 3- oder 4-Pyridazinyl, Pyrazinyl, 2-, 3-, 4-, 5-, 6- oder 7-Benzofuryl, 2-, 3-, 4-, 5-, 6- oder 7- Benzothienyl, 1-, 2-, 3-, 4-, 5-, 6- oder 7-1 H-lndolyl, 1 -, 2-, 4- oder 5- Benzimidazolyl, 1-, 3-, 4-, 5-, 6- oder 7-Benzopyrazolyl, 2-, 4-, 5-, 6- oder
7-Benzoxazolyl, 3-, 4-, 5-, 6- oder 7-Benzisoxazolyl, 2-, 4-, 5-, 6- oder 7- Benzthiazolyl, 2-, 4-, 5-, 6- oder 7-Benzisothiazolyl, 4-, 5-, 6- oder 7-Benz- 2,1 ,3-oxadiazolyl, 1-, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- oder 8-Chinolinyl, 1-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- oder 8-lsochinolinyl, 1-, 2-, 3-, 4- oder 9-Carbazolyl, 1-, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8- oder 9-Acridinyl, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- oder 8-Cinnolinyl, 2-, 4-, 5-, 6-, 7- oder 8-Chinazolinyl. Die heterocyclischen Reste können auch teilweise oder vollständig hydriert sein. Het kann also auch bedeuten 2,3-Dihydro-2-, -3-, -4- oder -5-furyl, 2,5-Dihydro-2-, -3-, -4- oder -5-furyl, Tetrahydro-2- oder -3-furyl, 1 ,3-Dioxolan-4-yl, Tetrahydro-2- oder -3-thienyl, 2,3-Dihydro- 1-, -2-, -3-, -4- oder -5-pyrrolyl, 2,5-Dihydro-1-, -2-, -3-, -4- oder -5-pyrrolyl,
1-, 2- oder 3-Pyrrolidinyl, Tetrahydro-1-, -2- oder -3-pyrollyl, Tetrahydro-1-, -2- oder 4-imidazolyl, 2,3-Dihydro-1-, -2-, -3-, -4-, -5-, -6-, -7-1 H-indolyl, 2,3-Dihydro-1-, -2-, -3-, -4- oder -5-pyrazolyl, Tetrahydro-1-, -3- oder -4- pyrazolyl, 1 ,4-Dihydro-1-, -2-, -3- oder -4-pyridyl, 1 ,2,3,4-Tetrahydro-1-, -2-, -3-, -4-, -5- oder -6-pyridyl, 1 ,2,3,6-Tetrahydro-1-, -2-, -3, -4-, -5- oder -6- pyridyl, 1-, 2-, 3- oder 4-Piperidinyl, 1-, 2-, 3- oder 4-Azepanyl, 2-, 3- oder 4-Morpholinyl, Tetrah yd ro-2-, -3- oder -4-pyranyl, 1 ,4-Dioxanyl, 1 ,3-Dioxan- 2-, -4- oder -5-yl, Hexahydro-1 -, -3- oder -4-pyridazinyl, Hexahydro-1-, -2-, -4- oder -5-pyrimidinyl, 1-, 2- oder 3- Piperazinyl, 1 ,2,3,4-Tetrahydro-1-, -2-, -3-, -4-, -5-, -6-, -7- oder -8-chinolinyl, 1 ,2,3,4-Tetrahydro-1-, -2-, -3-, -4-, -
5-, -6-, -7- oder -8-isochinolinyl.
Besonders bevorzugt ist Het Methylpyridyl, insbesondere 4-Methylpyridin- 2-yl, Pyridin-2-yl, Pyrimidin-2-yl, lmidazol-2-yl, Benzimidazol-2-yl und deren hydrierte Derivate. OA bedeutet vorzugsweise Methoxy, Ethoxy, Propoxy oder Butoxy, ferner auch Pentyloxy oder Hexyloxy.
R1 und R5 bedeuten unabhängig voneinander vorzugsweise H, A, CN, N02, Hai oder -COA-, wobei A eine der zuvor angegebenen Bedeutungen hat; insbesondere bedeutet R1 und R5 H.
R2 bedeutet vorzugsweise H oder A, wobei A eine der zuvor angegebenen Bedeutungen hat; insbesondere H.
R3 und R4 bedeuten unabhängig voneinander bedeutet vorzugsweise H oder -COA-, insbesondere H.
X bedeutet bevorzugt H, -C(=NH)-NH2, -C(=NMethyl)-NH2, 4-Methylpyridin- 2-yl, Pyridin-2-yl, Pyriminin-2-yl, lmidazol-2-yl, Benzimidazol-2-yl und deren hydrierte Derivate.
Y bedeutet -(CH2)m- oder insbesondere -(CH2) - oder
n und p bedeuten unabhängig voneinander vorzugsweise 1 oder 2, insbesondere 1.
m bedeutet bevorzugt 0, 2 oder 4, insbesondere 0 oder 4.
Bevorzugt sind die Verbindungen der Formeln IA und IB:
worin X, Y, Z und R2 die oben angegebene Bedeutung aufweisen. R2 bedeutet in den Formeln IA und IB insbesondere H. Dementsprechend sind Gegenstand der Erfindung insbesondere diejeni- gen Verbindungen der Formel I, in denen mindestens einer der genannten
Reste eine der vorstehend angegebenen bevorzugten Bedeutungen hat. Einige bevorzugte Gruppen von Verbindungen können durch die folgenden Teilformeln 11 bis I36 ausgedrückt werden:
11
12
13
Iδ 19
110
111
112
113 114
115
116
117
118
119 I20
121
I22
I23
I24
I30 131
I32
I33
I34 I35
I36
Die Verbindungen der Formel I und auch die Ausgangsstoffe zu ihrer Herstellung werden im übrigen nach an sich bekannten Methoden hergestellt, wie sie in der Literatur (z.B. in den Standardwerken wie Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, Georg-Thieme-Verlag, Stuttgart) beschrieben sind, und zwar unter Reaktionsbedingungen, die für die ge- nannten Umsetzungen bekannt und geeignet sind. Dabei kann man auch von an sich bekannten, hier nicht näher erwähnten Varianten Gebrauch machen.
Die Ausgangsstoffe können, falls erwünscht, auch in situ gebildet werden, so daß man sie aus dem Reaktionsgemisch nicht isoliert, sondern sofort weiter zu den Verbindungen der Formel I umsetzt. Verbindungen der Formel I können vorzugsweise unter den Bedingungen einer Peptidsynthese erhalten werden. Dabei arbeitet man zweckmäßig nach üblichen Methoden der Peptidsynthese, wie sie z.B. in Houben-Weyl, 1.c, Band 15/11, Seite 1 bis 806 (1974) beschrieben sind.
Die direkten Vorstufen der Verbindungen der Formel I können auch z.B. nach Merrifield (Angew. Chem. 97, 801-812, 1985) an einer festen Phase, z.B. einem quellfähigen Polystyrolharz, aufgebaut werden. Als feste Phase können prinzipiell alle Träger, wie sie z.B. aus der
Festphasen-Peptidchemie oder Nucleinsäuresynthese bekannt sind, verwendet werden.
Als polymere Trägermaterialien eignen sich polymere feste Phasen mit vorzugsweise hydrophilen Eigenschaften, beispielsweise quervernetzte Polyzucker wie Cellulose, Sepharose oder SephadexR, Acrylamide,
Polymer auf Polyethylenglykolbasis oder TentakelpolymereR.
Vorzugsweise wird als feste Phase Tritylchloridpolystyrol-Harz, 4-
Methoxytritylchlorid-Harz, Merrifield-Harz.und Wang-Harz eingesetzt.
So können Verbindungen der Formel I erhalten werden, indem man eine
Verbindung der Formel II mit einer Verbindung der Formel III umsetzt, und anschließend die Schutzgruppen oder die feste Phase entfernt.
Die Verbindungen der Formel I können ebenfalls erhalten werden, indem man eine Verbindung der Formel IV mit einer Verbindung der Formel V umsetzt, und anschließend die Schutzgruppen entfernt.
Die Kupplungsreaktion gelingt vorzugsweise in Gegenwart eines Dehydratisierungsmittels, z.B. eines Carbodiimids wie DCCI oder EDCI, ferner z.B. Propanphosphonsäureanhydrid (vgl. Angew. Chem. 1980, 92,
129), Diphenylphosphorylazid oder 2-Ethoxy-N-ethoxycarbonyl-1 ,2- dihydrochinolin, in einem inerten Lösungsmittel, z.B. einem halogenierten Kohlenwasserstoff wie Dichlormethan, einem Ether wie Tetrahydrofuran oder Dioxan, einem Amid wie DMF oder Dimethylacetamid, einem Nitril wie Acetonitril, in Dimethylsulfoxid oder in Gegenwart dieser Lösungsmittel, bei
Temperaturen zwischen etwa -10 und 40, vorzugsweise zwischen 0 und 30°. Um die intramolekulare Cyclisierung vor der intermolekularen Peptidbindung zu fördern, ist es zweckmäßig, in verdünnten Lösungen zu arbeiten.
Die Reaktionszeit liegt je nach den angewendeten Bedingungen zwischen einigen Minuten und 14 Tagen.
Anstelle von Verbindungen der Formel II und/oder IV können auch Derivate von Verbindungen der Formel II und/oder IV, vorzugsweise eine voraktivierte Carbonsäure, oder ein Carbonsäurehalogenid, ein sym- metrisches oder gemischtes Anhydrid oder ein Aktivester eingesetzt werden. Derartige Reste zur Aktivierung der Carboxygruppe in typischen Acylierungsreaktionen sind in der Literatur (z.B. in den Standardwerken wie Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, Georg-Thieme- Verlag, Stuttgart) beschrieben. Aktivierte Ester werden zweckmäßig in situ gebildet, z. B. durch Zusatz von
HOBt oder N-Hydroxysuccinimid.
Die Umsetzung erfolgt in der Regel in einem inerten Lösungsmittel, bei Verwendung eines Carbonsäurehalogenids in Gegenwart eines säurebindenden Mittels vorzugsweise einer organischen Base wie
Triethylamin, Dimethylanilin, Pyridin oder Chinolin. Auch der Zusatz eines Alkali- oder Erdalkalimetall-hydroxids, -carbonats oder -bicarbonats oder eines anderen Salzes einer schwachen Säure der Alkali- oder Erdalkalimetalle, vorzugsweise des Kaliums, Natriums, Calciums oder Cäsiums kann günstig sein.
Die Verbindungen der Formel I können femer erhalten werden, indem man sie aus ihren funktioneilen Derivaten durch Solvolyse, insbesondere Hydrolyse, oder durch Hydrogenolyse in Freiheit setzt.
Bevorzugte Ausgangsstoffe für die Solvolyse bzw. Hydrogenolyse sind solche, die sonst der Formel I entsprechen, aber anstelle einer oder mehrerer freier Amino- und/oder Hydroxygruppen entsprechende geschützte Amino- und/oder Hydroxygruppen enthalten, insbesondere solche, die anstelle einer H-N-Gruppe eine SG1-N-Gruppe tragen, worin
SG1 eine Aminoschutzgruppe bedeutet und/oder solche, die anstelle des H-Atoms einer Hydroxygruppe eine Hydroxyschutzgruppe tragen, z.B. solche, die der Formel I entsprechen, jedoch anstelle einer Gruppe -COOH eine Gruppe -COOSG2 tragen, worin SG2 eine Hydroxyschutzgruppe bedeutet.
Es können auch mehrere - gleiche oder verschiedene - geschützte Amino- und/oder Hydroxygruppen im Molekül des Ausgangsstoffes vorhanden sein. Falls die vorhandenen Schutzgruppen voneinander verschieden sind, können sie in vielen Fällen selektiv abgespalten werden (vgl. dazu: T.W. Greene, P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Chemistry, 2. Aufl.,
Wiley, New York 1991 oder P.J. Kocienski, Protecting Groups, 1. Aufl., Georg Thieme Verlag, Stuttgart - New-York, 1994, H. Kunz, H. Waldmann in Comprehensive Organic Synthesis, Vol. 6 (Hrsg. B.M. Trost, I. Fleming, E. Winterfeldt), Pergamon, Oxford, 1991 , S. 631-701).
Der Ausdruck "Aminoschutzgruppe" ist allgemein bekannt und bezieht sich auf Gruppen, die geeignet sind, eine Aminogruppe vor chemischen Umsetzungen zu schützen (zu blockieren). Typisch für solche Gruppen sind insbesondere unsubstituierte oder substituierte Acyl-, Aryl-, Aralkoxymethyl- oder Aralkylgruppen. Da die Aminoschutzgruppen nach der gewünschten Reaktion (oder Reaktionsfolge) entfernt werden, ist ihre Art und Größe im übrigen nicht kritisch; bevorzugt werden jedoch solche mit 1-20 C-Atomen. Der Ausdruck "Acylgruppe" ist im Zusammenhang mit dem vorliegenden Verfahren im weitesten Sinne aufzufassen. Er umschließt von aliphatischen, araliphatischen, alicyclischen, aromatischen oder heterocyclischen Carbonsäuren oder Sulfonsäuren abgeleitete Acylgruppen sowie insbesondere Alkoxy-carbonyl-, Alkenyloxycarbonyl-, Aryloxycarbonyl- und vor allem Aralkoxy-carbonylgruppen. Beispiele für derartige Acylgruppen sind Alkanoyl wie Acetyl, Propionyl, Butyryl; Aralkanoyl wie Phenylacetyl; Aroyl wie Benzoyl oder Toluyl;
Aryloxyalkanoyl wie Phenoxyacetyl; Alkoxycarbonyl wie Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, 2,2,2-Trichlorethoxy-carbonyl, Boc, 2-lodethoxycarbonyl; Alkenyloxycarbonyl wie Allyloxycarbonyl (Aloe), Aralkyloxycarbonyl wie CBZ (synonym mit Z), 4-Methoxy-benzyloxycarbonyl (MOZ), 4-Nitro- benzyloxycarbonyl oder 9-Fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc); 2-
(Phenylsulfonyl)ethoxycarbonyl; Trimethylsilylethoxycarbonyl (Teoc) oder Arylsulfonyl wie 4-Methoxy-2,3,6-trimethylphenyl-sulfonyl (Mtr). Bevorzugte Aminoschutzgruppen sind Boc, Fmoc und Aloe, ferner Z, Benzyl und Acetyl.
Der Ausdruck "Hydroxyschutzgruppe" ist ebenfalls allgemein bekannt und bezieht sich auf Gruppen, die geeignet sind, eine Hydroxygruppe vor chemischen Umsetzungen zu schützen. Typisch für solche Gruppen sind die oben genannten unsubstituierten oder substituierten Aryl-, Aralkyl-, Aroyl- oder Acylgruppen, ferner auch Alkylgruppen, Alkyl-, Aryl- oder Aralkyl-silylgruppen oder 0,0- oder 0,S-Acetale. Die Natur und Größe der
Hydroxyschutzgruppen ist nicht kritisch, da sie nach der gewünschten chemischen Reaktion oder Reaktionsfolge wieder entfernt werden; bevorzugt sind Gruppen mit 1-20, insbesondere 1-10 C-Atomen. Beispiele für Hydroxyschutzgruppen sind u.a. Aralkylgruppen wie Benzyl, 4- Methoxybenzyl oder 2,4-Dimethoxybenzyl, Aroylgruppen wie Benzoyl oder p-Nitrobenzoyl, Acylgruppen wie Acetyl oder Pivaloyl, p-Toluolsulfonyl, Alkylgruppen wie Methyl oder tert.-Butyl, aber auch Allyl, Alkylsilylgruppen wie Trimethylsilyl (TMS), Triisopropylsilyl (TIPS), tert.-Butyldimethylsilyl (TBS) oder Triethylsilyl, Trimethylsilylethyl, Aralkylsilylgruppen wie tert.- Butyldiphenylsilyl (TBDPS), cyclische Acetale wie Isopropyliden-,
Cyclopentyliden-, Cyclohexyliden-, Benzyliden-, p-Methoxybenzyliden- oder o,p-Dimethoxybenzylidenacetal, aeyclische Acetale wie Tetrahydropyranyl (Thp), Methoxymethyl (MOM), Methoxyethoxymethyl (MEM), Benzyloxymethyl (BOM) oder Methylthiomethyl (MTM). Besonders bevorzugte Hydroxyschutzgruppen sind Benzyl, Acetyl, tert.-Butyl oder
TBS.
Das In-Freiheit-Setzen der Verbindungen der Formel I aus ihren funktionellen Derivaten ist für die jeweils benutzte Schutzgruppe aus der Literatur bekannt (z.B. T.W. Greene, P.G.M. Wuts, Protective Groups in
Organic Chemistry, 2. Aufl., Wiley, New York 1991 oder P.J. Kocienski, Protecting Groups, 1. Aufl., Georg Thieme Verlag, Stuttgart - New- York, 1994). Dabei kann man auch von an sich bekannten, hier nicht näher erwähnten Varianten Gebrauch machen. Eine Base der Formel I kann mit einer Säure in das zugehörige Säureadditionssalz überführt werden, beispielsweise durch Umsetzung äquivalenter Mengen der Base und der Säure in einem inerten Lösungsmittel wie Ethanol und anschließendes Eindampfen. Für diese Umsetzung kommen insbesondere Säuren in Frage, die physiologisch unbedenkliche Salze liefern. So können anorganische Säuren verwendet werden, z.B. Schwefelsäure, schweflige Säure, Dithionsäure, Salpetersäure, Halogenwasserstoffsäuren wie Chlorwasserstoffsäure oder Bromwasserstoffsäure, Phosphorsäuren wie z.B. Orthophosphorsäure, Sulfaminsäure, ferner organische Säuren, insbesondere aliphatische, alicyclische, araliphatische, aromatische oder heterocyclische ein- oder mehrbasige Carbon-, Sulfon- oder Schwefelsäuren, z.B. Ameisensäure, Essigsäure, Propionsäure, Hexansäure, Octansäure, Decansäure, Hexadecansäure, Octadecansäure, Pivalinsäure, Diethylessigsäure, Malonsäure, Bernsteinsäure, Pimelinsäure, Fumarsäure, Maleinsäure,
Milchsäure, Weinsäure, Äpfelsäure, Citronensäure, Gluconsäure, Ascorbinsäure, Nicotinsäure, Isonicotinsäure, Methan- oder Ethansulfonsäure, Benzolsulfonsäure, Trimethoxybenzoesäure, Adamantancarbonsäure, p-Toluolsulfonsäure, Glycolsäure, Embonsäure, Chlorphenoxyessigsäure, Asparaginsäure, Glutaminsäure, Prolin,
Glyoxylsäure, Palmitinsäure, Parachlorphenoxyisobuttersäure, Cyclohexancarbonsäure, Glucose-1-phosphat, Naphthalin-mono- und disulfonsäuren oder Laurylschwefelsäure. Salze mit physiologisch nicht unbedenklichen Säuren, z.B. Pikrate, können zur Isolierung und/oder Aufreinigung der Verbindungen der Formel I verwendet werden.
Andererseits können Verbindungen der Formel I mit Basen (z.B. Natriumoder Kaliumhydroxid oder -carbonat) in die entsprechenden Metall-, insbesondere Alkalimetall- oder Erdalkalimetall- oder in die entsprechenden Ammoniumsalze umgewandelt werden. Als Salze kommen ferner substituierte Ammoniumsalze, z.B. die Dimethyl-, Diethyl- oder Diisopropyl-ammoniumsalze, Monoethanol-, Diethanol- oder Diisopropylammoniumsalze, Cyclohexyl-, Dicyclohexylammoniumsalze, Dibenzylethylendiammoniumsalze, weiterhin z.B. Salze mit Arginin oder Lysin. Gegenstand der Erfindung ist ferner die Verwendung der Verbindungen der Formel I und/oder ihrer physiologisch unbedenklichen Salze zur Herstellung einer pharmazeutischen Zubereitung.
Gegenstand der Erfindung sind ferner pharmazeutische Zubereitungen, enthaltend mindestens eine Verbindung der Formel I und/oder eines ihrer physiologisch unbedenklichen Salze oder Solvate, die insbesondere auf nicht-chemischem Wege hergestellt werden. Hierbei können die Verbindungen der Formel I zusammen mit mindestens einem festen, flüssigen und/oder halbflüssigen Träger- oder Hilfsstoff und gegebenenfalls in Kombination mit einem oder mehreren weiteren Wirkstoffen in eine geeignete Dosierungsform gebracht werden.
Diese Zubereitungen können als Arzneimittel in der Human- oder Veterinärmedizin verwendet werden. Als Trägerstoffe kommen organische oder anorganische Substanzen in Frage, die sich für die enterale (z.B. orale), parenterale oder topische Applikation eignen und mit den neuen Verbindungen nicht reagieren, beispielsweise Wasser, pflanzliche Öle, Benzylalkohole, Alkylenglykole, Polyethylenglykole, Glycerintriacetat, Gelatine, Kohlenhydrate wie Lactose oder Stärke, Magnesiumstearat, Talk,
Vaseline. Zur oralen Anwendung dienen insbesondere Tabletten, Pillen, Dragees, Kapseln, Pulver, Granulate, Sirupe, Säfte oder Tropfen, zur rektalen Anwendung Suppositorien, zur parenteralen Anwendung Lösungen, vorzugsweise ölige oder wässrige Lösungen, ferner Suspensionen, Emulsionen oder Implantate, für die topische Anwendung
Salben, Cremes oder Puder. Die neuen Verbindungen können auch lyophilisiert und die erhaltenen Lyophilisate z.B. zur Herstellung von Injektionspräparaten verwendet werden. Die angegebenen Zubereitungen können sterilisiert sein und/oder Hilfsstoffe wie Gleit-, Konservierungs-, Stabilisierungs- und/oder Netzmittel, Emulgatoren, Salze zur Beeinflussung des osmotischen Druckes, Puffersubstanzen, Färb-, Geschmacksund/oder mehrere weitere Wirkstoffe enthalten, z.B. ein oder mehrere Vitamine. Für die Applikation als Inhalationsspray können Sprays verwendet werden, die den Wirkstoff entweder gelöst oder suspendiert in einem Treibgas oder
Treibgasgemisch (z.B. C02 oder Fluorchlorkohlenwasserstoffen) enthalten. Zweckmäßig verwendet man den Wirkstoff dabei in mikronisierter Form, wobei ein oder mehrere zusätzliche physiologisch verträgliche Lösungsmittel zugegen sein können, z.B. Ethanol. Inhalationslösungen können mit Hilfe üblicher Inhalatoren verabreicht werden.
Die Verbindungen der Formel I und ihre physiologisch unbedenklichen Salze können als Integrininhibitoren bei der Bekämpfung von Krankheiten, insbesondere von Thrombosen, Herzinfarkt, koronaren Herzerkrankungen, Arteriosklerose, Tumoren, Osteoporose, Entzündungen und Infektionen verwendet werden.
Die Verbindungen der Formel I nach Anspruch 1 und/oder ihre physiologisch unbedenklichen Salze finden auch Verwendung bei pathologischen Vorgängen, die durch Angiogenese unterhalten oder propagiert werden, insbesondere bei Tumoren oder rheumatoider Arthritis.
Dabei werden die erfindungsgemäßen Substanzen in der Regel in Analogie zu anderen bekannten, im Handel befindlichen Peptiden, insbesondere aber in Analogie zu den in der US-A-4-472 305 beschriebenen Verbindungen verabreicht, vorzugsweise in Dosierungen zwischen etwa 0,05 und 500 mg, insbesondere zwischen 0,5 und 100 mg pro Dosierungseinheit. Die tägliche Dosierung liegt vorzugsweise zwischen etwa 0,01 und 2 mg/kg Körpergewicht. Die spezielle Dosis für jeden Patienten hängt jedoch von den verschiedensten Faktoren ab, beispielsweise von der Wirksamkeit der eingesetzten speziellen
Verbindung, vom Alter, Körpergewicht, allgemeinen Gesundheitszustand, Geschlecht, von der Kost, vom Verabreichungszeitpunkt und -weg, von der Ausscheidungsgeschwindigkeit, Arzneistoffkombination und Schwere der jeweiligen Erkrankung, welcher die Therapie gilt. Die parenterale Applikation ist bevorzugt.
Ferner können die Verbindungen der Formel I als Integrinliganden zur Herstellung von Säulen für die Affinitätschromatographie zur Reindarstellung von Integrinen verwendet werden. Der Ligand, d.h. eine Verbindung der Formel I, wird dabei über eine Ankerfunktion, z.B. die Carboxygruppe von Asp, an einen polymeren Träger kovalent gekuppelt.
Die Herstellung der Materialien für die Affinitätschromatographie zur
Integrinreinigung erfolgt unter Bedingungen wie sie für die Kondensation von Aminosäuren üblich und an sich bekannt sind.
Die Verbindungen der Formel I enthalten ein oder mehrere chirale Zentren und können daher in racemischer oder in optisch-aktiver Form vorliegen.
Erhaltene Racemate können nach an sich bekannten Methoden mechanisch oder chemisch in die Enantiomeren getrennt werden. Vorzugsweise werden aus dem racemischen Gemisch durch Umsetzung mit einem optisch aktiven Trennmittel Diastereomere gebildet. Als Trennmittel eignen sich z.B. optisch aktive Säuren, wie die D- und L-Formen von Weinsäure,
Diacetylweinsäure, Dibenzoylweinsäure, Mandelsäure, Äpfelsäure, Milchsäure oder die verschiedenen optisch aktiven Camphersulfonsäuren wie ß- Camphersulfonsäure. Vorteilhaft ist auch eine Enantiomerentrennung mit Hilfe einer mit einem optisch aktiven Trennmittel (z.B. Dinitrobenzoyl- phenylglycin) gefüllten Säule; als Laufmittel eignet sich z.B. ein Gemisch
Hexan/Isopropanol/Acetonitril, z.B. im Volumenverhältnis 82:15:3.
Natürlich ist es auch möglich, optisch aktive Verbindungen der Formel I nach den oben beschriebenen Methoden zu erhalten, indem man Aus- gangsstoffe verwendet, die bereits optisch aktiv sind.
Vor- und nachstehend sind alle Temperaturen in °C angegeben. In den nachfolgenden Beispielen bedeutet "übliche Aufarbeitung": Man gibt, falls erforderlich, Wasser hinzu, stellt, falls erforderlich, je nach Konstitution des Endprodukts auf pH-Werte zwischen 2 und 10 ein, extrahiert mit
Ethylacetat oder Dichlormethan, trennt ab, trocknet die organische Phase über Natriumsulfat, dampft ein und reinigt durch Chromatographie an Kieselgel und /oder durch Kristallisation.
RT = Retentionszeit (Minuten) bei HPLC in den folgenden Systemen:
Säulen der Firma Omnicrom YMC: 1. 4,6x250 mm, 5 μm, C18 (Analytik);
2. 30x250 mm, 7μm, C18 (Präparation).
Als Eluenten kommen Gradienten aus Acetonitril (B) mit 0,1 % TFA und Wasser (A) mit 0.1 % TFA zum Einsatz (Angaben jeweils in Volumenprozent Acetonitril). Retentionszeit RT wurde bei einem Fluß von
1 ml/min. ermittelt. Detektion bei 220 nm.
Die Trennung der Diastereomeren erfolgt vorzugsweise unter den angegebenen Bedingungen.
Massenspektrometrie (MS): ESI (Elektrospray-Ionisation) (M+H)+
FAB (Fast-Atom-Bombardment) (M+H)+.
1. Material und Allgemeine Arbeitsvorschriften
Lösungsmittel für die Synthese wurden entweder "technisch" erhalten und vor Benutzung destilliert oder von Fluka (Seelze) oder Merck (Darmstadt) in den Reinheitsgraden "absolut" oder "zur Synthese" gekauft. NMP
(destilliert) wurde von BASF (Ludwigshafen) kostenlos erhalten. Lösungsmittel für die Säulenchromatographie wurden "technisch" erhalten und entweder vor Benutzung destilliert oder undestilliert eingesetzt (Hexan). Die HPLC-Lösungsmittel Acetonitril (Lösungsmittel B) und TFA wurden im Reinheitsgrad "gradient grade" von Merck (Darmstadt) gekauft,
Wasser (Lösungsmittel A) wurde deionisiert und mit einem Milli-Q System von Millipore (Molsheim, Frankreich) aufbereitet.
Fmoc-geschützte Aminosäuren wurden von Novabiochem, Advanced ChemTech, MultiSynTech oder PepTech Corporation (Cambridge, USA) gekauft.
Zur manuellen Festphasensynthese wurden PE-Spritzen von Becton- Dickinson (Fraga, Spain) oder Braun (Melsungen) mit PE-Fritten von Roland Vetter Laborbedarf (Ammerbuch) verwendet. Die Spritzen wurden zur Durchmischung der Harzsuspension mit etwa 30 rpm rotiert. Die Beladung des Harzes erfolgte in Schüttelgefäßen aus Glas.
Luft- oder Feuchtigkeitsempfindliche Reaktionen wurden in trockenen Glasgefäßen und unter Argonatmosphäre durchgeführt (99.996 %).
Hygroskopische und/oder absolutierte Lösungsmittel wurden in Spritzen unter Argon transferiert.
Zur HPLC-Reinigung wurden die Verbindungen in DMSO, Acetonitril oder Methanol ("gradient grade") gelöst und mit durch einen Spritzenfilter RC 15 or RC 25 (RC-Membran, 0.45 μm) von Sartorius (Göttingen) filtriert. Analytische, semi-präparative und präparative Trennungen wurden auf zwei HPLC-Systemen der Firma Amersham Pharmacia Biotech (analytisch: Äkta Basic 10F mit Autosampier A-900; präparativ: Äkta Basic 100F mit Pumpensystem P-900 und Detektor UV-900) und zwei Systemen der Firma Beckman (System Gold mit Lösungsmittelmodul 125 und Detektormodul 166; Pumpensystem 110B, Kontrolleinheit 420 und Detektor Knauer Uvicord) durchgeführt. Folgende Säulen wurden für analytische Trennungen verwendet: ODS-A C-ι8 (250 mm x 4.6 mm, 5 μm, Flussrate: 1 mL/min) von Omnicrom YMC; für semi-präparative
Trennungen: ODS-A C-ι8 (250 mm x 20 mm, 5 μm oder 10 μm, Flussrate: 8 mL/min) von Omnicrom YMC; für präparative Trennungen: ODS-A Cι8 (250 mm x 30 mm, 10 μm, Flussrate: 25 mUmin) von Omnicrom YMC und Nucleosil Cι8 (250 mm x 20 mm, 7 μm, Flussrate: 25 mUmin) von Macherey-Nagel. Die Verbindungen wurden mit linearen Gradienten (30 min) von Acetonitril (Lösungsmittel B) in Wasser (Lösungsmittel A) und 0.1 % (v/v) TFA eluiert. Zur analytischen Reinheitsbestimmung der Verbindungen nach semi-präparativer oder präparativer HPLC-Reinigung wurde das Peakintegral des analytischen HPLC-Chromatogramms bei 220 nm Detektorwellenlänge ausgewertet.
Zur Säulenchromatographie wurde Silica Gel 60 (230-400 mesh ASTM, Korngröße 0,040-0,063 mm) von Merck (Darmstadt) verwendet, Flashchromatographie wurde bei 1-1.2 bar Überdruck durchgeführt. Dünnschichtchromatographie (DC) und die Bestimmung der Rf-Werte wurden unter Verwendung von DC Aluminiumplatten beschichtet mit Silica Gel 60 F254 von Merck (Darmstadt) durchgeführt. Zur Detektion wurden die DC-Platten unter UV-Licht (λ = 254 nm) betrachtet.
Schmelzpunkte wurden auf einem Büchi 510 Schmelzpunktapparat nach to Dr. Tottoli bestimmt und sind unkorrigiert.
Alle 1H-NMR und 13C-NMR Spektren wurden auf einem Bruker AC250 oder DMX500 Spektrometer bei 300 K aufgenommen, die Spektrendaten wurden auf Bruker Aspekt 1000 (AC 250) oder auf Silicon Graphics Indy-, 02- and Octane-workstations mit XWINNMR Software prozessiert. Chemische Verschiebungen (δ) werden in parts per million (ppm) relativ zu Tetramethylsilan angegeben, Kopplungskonstanten werden in Hertz (Hz) angegeben. Als interner Standard wurde Tetramethylsilan oder der
Lösungsmittelpeak verwendet: DMSO-d6: 2.49 ppm (1 H-NMR) und 39.5 ppm (13C-NMR); CDCI3: 7.24 ppm (1H-NMR) und 77.0 ppm (13C-NMR). 13C-NMR Spektren wurden mit 1H-Breitbandentkopplung aufgenommen. Die Signalzuordnung erfolgte in den meisten Fällen mit Hilfe von HMQC- und COSY-Experimenten.
Massenspektren wurden durch electron impact (El)- und chemical ionisation (Cl)-Technik auf einem Finnigan MAT 8200 Instrument aufgenommen. Electrospray ionisation (ESI)-Massenspektren wurden auf einem Finnigan LCQ Massenspektrometer in Kombination mit einem
Hewlett Packard 1100 HPLC-System mit einer ODS-A Cι8 (125 mm x 2 mm, 3 μm, flow rate: 0.2 mL/min) Säule von Omnicrom YMC aufgenommen. Die Verbindungen wurden mit einem linearen Gradienten (15 min) von Acetonitril (Lösungsmittel B) in Wasser (Lösungsmittel A) und 0.1 % (v/v) Ameisensäure eluiert. Massenspektren werden in der Form "X
(Y) [M+Zf angegeben, wobei "X" die detektierte Masse ist, "Y" die beobachtete Intensität des Massenpeaks, "M" das untersuchte Molekül und "Z" das angelagerte Kation. Hochaufgelöste Massenspektren (HRMS) wurden von Koka Jajasimhulu, Ph.D. (University of Cincinnati, USA) unter Verwendung der electrospray ionisation-time of flight (ESI-TOF) Technik aufgenommen.
Lyophilisierung wurde mit dem Gerät Alpha 2-4 der Firma Christ
(Osterode) durchgeführt. AAV 1 : Beladung von TCP-Harz
Zu vorgequollenem TCP-Harz (1.16 g, maximale Beladung: 0.9 mmol/g) in trockenem CH2CI2 (6 mL, 10 min.) werden die entsprechende Fmoc- geschützte Aminosäure (1.56 mmol, 1.5eq) und DIPEA (177 μL, 1.03 mmol) zugegeben. Nach 5 min. wird weiteres DIPEA (91 μL, 0.52 mmol) zugegeben und das Harz wird geschüttelt. Nach 2 Std. wird Methanol (1.16 mL) zum Cappen der nicht umgesetzten Tritylgruppen zugegeben und das Harz wird für weitere 15 min. geschüttelt. Dann wird das Harz mit trockenem CH2CI2 (5 x 20 mL, je 3 min.), NMP (5 x 20 mL, je 3 min.) und wieder mit trockenem CH2CI2 (5 x 20 mL, je 3 min.) gewaschen schließlich mit einer Mischung aus Methanol/CH2CI2 (1 :1 , 20 ml) und Methanol (20 ml). Das Harz wird im Hochvakuum getrocknet, die Beladung läßt sich mit folgender Gleichung bestimmen:
(m2 - mι) χ l000 ~ (MW - 36.45) χ m2
I Beladung des Harzes mit Baustein [mmol/g] rτiι Gewicht des Harzes vor der Kupplung [g] m2 Gewicht des getrockneten Harzes nach der Kupplung [g]
MW Molekulargewicht der Fmoc-geschützten
Aminosäure/Carbonsäurebaustein [g/mol]
Der Fehler, der durch die unterschiedlichen Massen von Cl- und MeO- entsteht, ist dabei zu vernachlässigen.
AAV 2: Abspaltung der Fmoc-Schutzgruppe
Das Harz (100 mg) wird in NMP (5 mL, 10 min.) vorgequollen. Die Fmoc- Schutzgruppe wird durch Behandlung mit einer frisch hergestellten 20 % Piperidin-Lösung (v/v) in NMP (5 mL) für 15 min. abgespalten. Dann wird das Harz mit NMP (5 x 5 mL, je 3 min.) gewaschen und erneut mit einer 20 % Piperidin-Lösung (v/v) in NMP (5 mL, 15 min.) versetzt. Schließlich wird das Harz mit NMP (5 5 mL, je 3 min.) gewaschen.
AAV 3: Kupplung von 5-(9H-Fluoren-9-ylmethoxy)-3H-[1 ,3,4]oxadiazol- 2-on (142) an harzgebundene, freie Amine nach Gibson
Zur Entschützung des harzgebundenen Amins wird das TCP-Harz (100 mg, 0.354 mmol/g, 0.035 mmol) mit 20 % Piperidin (v/v) in NMP (2 x 5 mL, je 15 min.) versetzt. Dann wird das Harz mit NMP (5 x 5 mL, je 3 min.) trockenem CH2CI2 (5 5 mL, je 3 min.) gewaschen und dann in trockenem CH2CI2 (5 mL) eine halbe Stunde lang umgequollen. Dann wird das Harz mit einer Lösung von 5-(9H-Fluoren-9-ylmethoxy)-3H-[1 ,3,4]oxadiazol-2-on (142) (30.5 mg, 0.108 mmol, 3.1 eq) in trockenem CH2CI2 (1 mL) versetzt und für 90 min. geschüttelt. Die Reaktion wird durch Waschen mit CH2CI (5 x 5 mL, je 3 min.) und NMP (5 x 5 mL, je 3 min.) abgebrochen.
AAV 4: Kupplung mit HATU/HOAt
Das harzgebundene, freie Amin oder Hydrazin (0.389 mmol) wird mit NMP (5 x 5 mL, je 3 min) gewaschen. Dann wird das Harz mit einer Lösung der geeigneten Fmoc-geschützten Aminosäure oder eines Carbonsäurebausteins (0.779 mmol, 2eq), HATU (296 mg, 0.779 mmol,
2eq) und HOAt (106 mg, 0.779 mmol, 2eq) in NMP (5 mL) versetzt. Zuletzt wird sym.-Collidin (1027 μL, 7.79 mmol, 20eq) zugegeben und das Harz wird über Nacht geschüttelt. Dann wird mit NMP (5 5 mL, je 3 min) gewaschen, und der Kupplungsschritt wird mit den gleichen Reagenzien, Mengen und Reaktionszeit wiederholt. Anschließend wird das Harz mit
NMP (5 x 5 mL, je 3 min.) gewaschen.
AAV 5: Abspaltung vom TCP- Harz
Die Abspaltung der Verbindung vom TCP-Harz erfolgt nach folgendem Fließschema:
Schritt Reagenzien Operation Anzahl Zeit [min]
1 CH2CI2 Waschen 3 10
2 TFA/TIPS/H2O Abspalten/Entschütz 3 30 (18:1 :1) en
3 CH2CI2 Waschen 3 3 Für 100 mg Harz wurde üblicherweise 2 mL Abspaltlösung verwendet. Die vereinigten Filtrate der Schritte 2 und 3 wurden eingeengt.
2. Beispiele
Beispiel 1a)
N-[(9H-Fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl]-hydrazin (141 ) Boc-Hydrazin (10.0 g, 75.6 mmol) und DIPEA (12.95 mL, 75.6 mmol) wurden in trockenem CH2CI2 (200 mL) gelöst und auf 0 °C abgekühlt. Dann wurde FmocCI (19.6 g, 75.8 mmol), gelöst in trockenem CH2CI2 (100 mL), innerhalb von 30 min. zugegeben und die Mischung wurde bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Die organische Phase wurde mit Wasser (200 mL) extrahiert und bis auf ein Volumen von etwa 100 mL eingeengt. Dann wurde vorsichtig bei 0 °C Trifluoressigsäure (100 mL) zugegeben und die Mischung wurde 1.5 Std. gerührt. Das Produkt wurde durch vorsichtige Zugabe von gesättigter Na2C03-Lösung (300 mL) ausgefällt, nach dem Trocknen erhielt man einen farblosen Feststoff (18.02 g, 70.8 mmol, 94 %).
Smp. 150-153 °C; 1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6, 300 K) δ = 10.10 (bs, 1 H, NH), 9.60 (bs, 1 H, NH), 7.89 (d, J = 7.6 Hz, 2H, arom), 7.70 (d, J = 7.3 Hz, 2H, arom), 7.30-7.45 (m, 4H, arom), 4.48 (d, J = 6.6 Hz, 2H, CO-CH2), 4.27 (t, J = 6.7 Hz, 1 H, CO-CH2-CH); 13C-NMR (62.9 MHz, DMSO-d6, 300 K) δ = 156.26, 143.59, 140.98, 127.96, 127.34, 125.33, 120.39, 67.00, 46.60; HRMS (ESI-TOF) für C15H15N2θ2 [M+H]+: 255.1134 (ber. 255.1 119); Analytische HPLC (5-90 % in 30 min) tR = 16.47 min.
Beispiel 1b)
5-(9H-Fluoren-9-ylmethoxy)-3H-[1 ,3,4]oxadiazol-2-on (142) Eine Suspension von N-[(9H-fluoren-9-ylmethoxy) carbonyl]-hydrazin (141 ) (1.49 g, 5.78 mmol), CH2CI2 (60 mL) und gesättigter NaHC03-Lösung (60 mL) wurde 5 min. lang bei 0 °C heftig gerührt, dann beließ man die Lösung
5 min. lang ohne Rühren. Dann wurde Phosgen (1.89 M in Toluol, 7.95 mL, 15.0 mmol) mit einer Spritze vorsichtig zu der unteren, organischen Phase zugegeben und begann unmittelbar nach der Zugabe die Reaktionsmischung wieder zu Rühren. Nach 10 min. wurde das Reaktionsgemisch mit Wasser (20 mL) und CH2CI2 (20 mL) versetzt. Anschließend wurden die Phasen schnell getrennt, die wässrige Phase mit
CH2CI2 (50 mL) extrahiert und die vereinigten organischen Phasen über Na2S04 getrocknet. Entfernen des Lösungsmittels imVakuum und Trocknen ergaben einen farblosen Feststoff (1.35 g, 4.82 mmol, 83 %).
Smp. 125 °C; 1H NMR (250 MHz, CDCI3, 300 K) δ = 8.72 (bs, 1H, NH),
7.77 (d, J = 7.5 Hz, 2H, arom), 7.59 (d, J = 7.4 Hz, 2H, arom), 7.28-7.45 (m, 4H, arom), 4.49 (d, J = 7.8 Hz, 2H, CH2-CH), 4.32-4.41 (m, 1H, CH2- CH).
Beispiel 2a)
N-Phenylethylformamid (146)
Eine Mischung von Phenylethylamine (20.0 g, 0.165 mol) und Ameisensäure (49.4 ml, 1.309 mol) wurde langsam auf 200 °C erhitzt. Dabei destillierte man überschüssiges Wasser und Ameisensäure ab. Dann wurde die Mischung für 1 Std. bei 200 °C gehalten, nach Vakuumdestillation des Produkts erhielt man ein farbloses Öl (22.0 g, 0.147 mol, 89 %).
1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6, 300 K) δ = 8.06 (bs, 1 H, CHO), 7.16-7.32 (m, 5H, arom), 3.32-3.42 (m, 2H, NH-CH2), 2.77 (t, J = 7.2 Hz, 2H, NH- CH2-CH2); Analytische HPLC (5-90 % in 30 min) tR = 15.04 min.
Beispiel 2b)
3,4-Dihydro-isoquinolin (147)
Polyphosphorsäure (25 g) und Phosphorpentaoxid (5.4 g, 38.0 mmol) wurden unter Argonatmosphäre in einem Ölbad innerhalb von einer Std. auf 180 °C erhitzt. Dann wurde N-Phenylethylformamid (146) (4.3 g, 28.8 mmol) bei 160 °C zugegeben und bei konstant gehaltener Temperatur 1.5 Std. gerührt. Dann ließ man die Mischung auf Raumtemperatur abkühlen und versetzte mit Wasser (40 mL). Anschließend wurde die Mischung durch vorsichtige Zugabe von gesättigter wässriger NaOH-Lösung auf pH 10 gebracht. Dann wurde mit Ether (500 mL) extrahiert, die organische
Phase wurde abgetrennt und mit NaOH getrocknet. Nach dem Einengen erhielt man ein braunes Öl (2.81 g, 21.4 mmol, 74 %).
1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6, 300 K) δ = 8.32 (t, J = 2.3 Hz, 1 H, N-CH), 7.16-7.40 (m, 4H, arom), 3.59-3.66 (m, 2H, N-CH2), 2.66 (t, J = 7.3 Hz, 2H,
N-CH2-CH2); Analytische HPLC (5-90 % in 30 min) tR = 8.29 min.
Beispiel 2c)
2-(1 ,2,3,4-Tetrahydro-1-isoquinolinyl)essigsäure (148) 3,4-Dihydro-isoquinolin (147) (2.2 g, 16.77 mmol) und Malonsäure (1.94 g, 16.77 mmol) wurden bei Raumtemperatur vermischt und in einem Ölbad auf 120 °C für 1 Std. erhitzt. Dann ließ man die Mischung auf
Raumtemperatur abkühlen und kristallisierte aus Methanol (150 mL) um. Nach dem Trocknen erhielt man einen farblosen Feststoff (1.52 g, 7.99 mmol, 48 %).
Smp. 230 °C decomp; 1H-NMR (250 MHz, D20, 300 K) δ = 7.13-7.23 (m,
4H, arom), 4.65 (t, J = 6.9 Hz, 1 H, CH-NH), 3.44-3.54 (m, 1 H, NH-CH2), 3.24-3.34 (m, 1 H, NH-CH2), 2.95-3.03 (m, 2H, NH-CH2-CH2), 2.79 (d, J = 6.1 Hz, 2H, CH2-COOH); HRMS (ESI-TOF) für CnH14N02 [M+H]+: 192.1047 (ber. 192.1025); Analytische HPLC (5-90 % in 30 min) tR = 10.15 min. 1-Carboxymethyl-3,4-dihydro-1 H-isoquinoline-2-carboxylsäure-9H-fluoren- 9-yl methylester (149)
Eine Suspension von 2-(1 ,2,3,4-Tetrahydro-1-isoquinolinyl)essigsäure (148) (0.9 g, 4.73 mmol), gesättigter NaHC03-Lösung (15 mL) und Dioxan (5 mL) wurde auf 0 °C abgekühlt. Dann wurde FmocCI (1.35 g, 5.2 mmol), gelöst in Dioxan (5 mL), tropfenweise innerhalb von 30 min. zugegeben und die Mischung über Nacht gerührt. Dann wurde mit Ether (30 mL) ausgeschüttelt und die wässrige Phase mit pH 1 with conc. HCI. Das Produkt wurde dann mit Essigsäureethylester (50 mL) extrahiert, die organische Phase wurde über MgS0 getrocket und eingeengt. Das
Rohprodukt wurde anschließend säulenchromatographisch gereinigt (Essigsäureethylester/Hexan/ Essigsäure, 1 :1 :1 %), nach dem Trocknen erhielt man einen farblosen Schaum (1.54 g, 3.73 mmol, 79 %).
Smp. 61-63 °C; DC Rf (Essigsäureethylester/Hexan/Essigsäure, 1 :1 :1 %) =
0.54; 1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6, 300 K) δ = 7.79-7.91 (m, 2H, arom), 7.63-7.66 (m, 2H, arom), 7.05-7.39 (m, 8H, arom), 5.40-5.52 (m, 1 H, NH- CH), 4.37-4.42 (m, 1 H, COO-CH2-CH), 4.25-4.32 (m, 2H, COO-CH2), 3.62- 4.02 (m, 1 H, N-CH2), 3.27-3.38 (m, 1 H, N-CH2), 2.52-2.76 (m, 4H, N-CH- CH2 and N-CH2-CH2); MS (ESI) m/z 179.1 (30), 414.0 (20) [M+Hf, 436.2
(25) [M+Na]+, 492.8 (15), 826.7 (5) [2M+H]+, 849.1 (45) [2M+Na]+, 865.1 (100) [2M+K]+; HRMS (ESI-TOF) für C26H24N04 [M+H]+: 414.1721 (ber. 414.1705); Analytische HPLC (5-90 % in 30 min) tR = 27.53 min.
Beispiel 3a)
5-[N-(4-Methylpyridin-2-yl)-amino]- pentansäureethylester 5-Brompentansäureethylester (33.03 g, 25 mL, 158 mmol) and 2-Amino-4- methylpyridin (32.9 g, 304 mmol) wurden über Nacht bei 130 °C (Ölbadtemperatur) unter Rückfluss erhitzt. Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur wurde gesättigte NaHC03-Lösung (100 mL) zur
Reaktionsmischung gegeben, und mit Ether extrahiert (5 x 100 mL). Die vereinigten organischen Phasen wurden über MgS0 getrocknet und das Lösungsmittel entfernt. Das Rohprodukt wurde mittels Flashchromatographie gereinigt (Essigsäureethylester/Hexan, 1 :1 , 2 L; 3:2, 1 L; 7:3, 1 L; 4:1 , 1 L), nach dem Trocknen erhielt man einen farblosen Feststoff (16.7 g, 70.7 mmol, 45 %).
Smp. 41-43 °C; DC Rf (Essigsäureethylester/Hexan, 1 :1 ) = 0.26; 1 H-NMR (250 MHz, DMSO-de, 300 K) δ = 7.90 (d, J = 5.3 Hz, 1 H, N-CH-CH), 6.38 (d, J = 5.2 Hz, 1 H, N-C-CH), 6.17 (s, 1 H, N-CH-CH), 4.51 (bs, 1 H, NH), 4.1 1 (q, J = 7.2 Hz, 2H, 0-CH2-CH3), 3.25 (q, J = 6.3 Hz, 2H, NH-CH2),
2.33 (t, J = 7.0 Hz, 2H, CH2-CO), 2.21 (s, 3H, C-CH3), 1.60-1 .80 (m, 4H, NH-CH2-CH2-CH2), 1.23 (t, J = 7.0 Hz, 2H, 0-CH2-CH3); Analytische HPLC (5-90 % in 30 min) tR = 13.58 min.
Beispiel 3b)
5-[N-(4-Methylpyridin-2-yl)-amino]-pentansäure 5-[N-(4-Methylpyridin-2-yl)-amino]-pentansäureethylester (16.7 g, 70.7 mmol, erhältlich nach Beispiel 3a)) wurde in Methanol gelöst (20 mL), mit 2N wässriger NaOH (71 mL, 141 mmol) versetzt und bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Dann wurde das Lösungsmittel entfernt und der erhaltene Feststoff mit CHCI3 (500 ml) und einem Überschuss an DIPEA gründlich extrahiert. Das Filtrat wurde eingeengt, nach dem Trocknen erhielt man einen farblosen Feststoff (3.92 g, 18.8 mmol, 27 %).
Smp. 138-140 °C; 1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6, 300 K) δ = 7.79 (d, J=5.2 Hz, 1 H, NH), 6.26-6.30 (m, 2H, arom. C5-H and C6-H), 6.22 (s, 1 H, arom. C3-H), 3.17 (dt, J=5.8 Hz, 2H, NH-CH2), 2.21 (t, J=7.0 Hz, 2H, CH2-CH2-
CO), 2.1 1 (s, 3H, Cquart-CH3), 1.41-1.58 (m, 4H, CH2-CH2-CH2-CH2); 13C- NMR (67.5 MHz, DMSO-d6, 300 K) δ = 174.6 (COOH), 159.3, 147.3, 146.8, 113.1 , 107.9, 40.5, 33.7, 28.8, 22.4, 20.8; HRMS (ESI-TOF) für CιιH17N2θ2 [M+Hf: 209.1293 (ber. 209.1290); Analytische HPLC (5-90 % in 30 min) tR = 9.83 min. eispiel 4
TCP-Harz wurde mit 1-Carboxymethyl-3,4-dihydro-1 H-isoquinoline-2- carboxylsäure-9H-fluoren-9-ylmethylester (149 aus Beispiel 2d)) (0.48 g, 1.16 mmol) gemäß AAV 1 beladen (ITH = 0.84 g, m2 = 1.0 g, I = 0.426 mmol/g). Fmoc-Entschützung und Kupplung des frisch hergestellten 5-(9H- Fluoren-9-ylmethoxy)-3H-[1 ,3,4]oxadiazol-2-on (142 aus Beispiel 1b)) (385 mg, 1.32 mmol) wurden gemäß AAV 2 und 3, Kupplung von 5-[N-(4- Methylpyridin-2-yl)-amino]-pentansäure (177 mg, 0.852 mmol) gemäß AAV 4, Abspaltung vom Harz wurde gemäß AAV 5 durchgeführt. Nach HPLC- Reinigung (10-80 % in 30 min) und Lyophilisieren wurde ein farbloses Pulver erhalten (3.0 mg, 0.00542 mmol, 1.3 %).
Smp. 103-109 °C; 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, 300 K) δ = 8,81 (bs, 1 H, NH-NH), 8.44 (bs, 1H, NH-NH), 8.25 (d, J = 6.5 Hz, 1 H, N-CH-CH), 7.74- 7.77 (m, 4H, arom), 7.34 (s, 1 H, N-C-CH), 7.21 (d, J = 6.4 Hz, 1 H, N-CH- CH), 6.06-6.07 (m, 1 H, N-CH), 4.46-4.52 (m, 1 H, CH-CH2), 3.82-3.93 (m, 3H, NH-CH2 and CH-CH2), 3.47-3.57 (m, 2H, NCH2CH2), 3.30-3.40 (m, 2H, NCH2CH2), 2.94 (s, 3H, C-CH3), 2.79-2.84 (m, 2H, CH2-CO), 2.23-2.35 (m, 4H, NH-CH2-CH2-CH2); MS (ESI) m/z 191.2 (8), 249.1 (100), 440.1 (30) [M+Hf, 462.1 (8) [M+Na]+, 478.1 (10) [M+K]\ 901.0 (2) [2M+Na]+, 917.1 (3) [2M+K]+, 939.1 (4) [2M-H+Na+K]+, 945.1 (4); HRMS für C23H3oN504 [M+H]+ 440.2273 (ber. 440.2298); Analytische HPLC (5-90 % in 30 min) tR = 14.69 min (92.7 % Reinheit bei 220 nm)
Beispiel 5a) A Harzgebundene Fmoc-1 ,2,3,4-tetrahydroisoquinolin-3(S)-yl-essigsäure
200 mg Tritylchloridpolystyrol-Harz (0.18 mmol theoretische Beladung) wird in 1.5 ml abs DCM gewaschen. Anschließend wird das Harz mit einer Lösung aus 0.24 mmol Fmoc-1 ,2,3,4-tetrahydroisoquinolin-3(S)-yl- essigsäure und 0.6 mmol DIPEA in 1.5 ml abs DCM verstezt, 1.5 Stunden bei Raumtemperatur geschüttelt und danach 0.2 ml Methanol zugegeben. Man wäscht mit DCM (5 x 1.5 ml) und Methanol (3 x 1.5 ml) und trocknet.
Beispiel 5b)
B Harzgebundene Fmoc-Gly-1 ,2,3,4-tetrahydroisochinolin-3-yl-essigsäure 0.072 mmol A werden mit DMF (1 x 2 ml) gewaschen. Anschliessend zweimal mit 20% Piperidin in DMF (2 x 2 ml) zuerst 5 min dannach 15 min entschützt und mit DMF (6 x 2 ml) gewaschen. Das harzgebundene freie Amin wird mit einer ca. 0.1 M Lösung aus 2.5 Äquiv. (bezogen auf die Harzbelegung, 0.18 mmol) Fmoc-Glycin, 2.4 Äquiv. (0.17 mmol) HATU und 30 Äquiv. (2.16 mmol) sym-Collidin in trockenem DMF versetzt und 90 min bei Raumtemperatur geschüttelt. Die Reaktion wird durch Waschen in DMF (6 x 2 ml) beendet.
Beispiel 5c) 3-Guanidinobenzoyl-glycyl-1 ,2,3,4-tetrahydroisochinolin-3-yl-essigsäure 0.036 mmol B werden mit DMF (1 x 1 ml) gewaschen. Anschliessend zweimal mit 20% Piperidin in DMF (2 x 1 ml) zuerst 5 min dannach 15 min entschützt und mit DMF (6 x 1 ml) gewaschen. Das harzgebundene freie
Amin wird mit einer ca. 0.1 M Lösung aus 2.5 Äquiv. (bezogen auf die Harzbelegung, 0.09 mmol) Fmoc-3-aminobenzoesäure, 2.4 Äquiv. (0.086) HATU und 30 Äquiv. (1.08) sym-Collidin in trockenem DMF versetzt und 90 min bei Raumtemperatur geschüttelt. Man wäscht mit DMF (6 x 1 ml) und entschützt wie beschrieben.
Das Harz wird anschliessend mit wasserfreiem Chloroform (3 x 1 ml) gewaschen und mit einer Lösung aus 0.36 mmol N,N'-bis-BOC-1- guanylpyrazol in 0.4 ml wasserfreiem Chloroform versetzt und bei 50°C in einem beheizbaren Schüttler umgesetzt. Nach 20 Stunden wird das Harz mit DCM (6 x 1 ml) gewaschen.
Zur Abspaltung vom Harz mit gleichzeitiger BOC-Abspaltung wird das Harz mit einem 4.75:4.75:0.5-Gemisch aus DCM, TFA und TIPS (3 x 1 ml) einmal 1.5 Stunden, einmal 30 min und einmal 3 min geschüttelt und abfiltriert. Die vereinigten Filtrate werden eingeengt, und der Rückstand aus tertButanol/Wasser lyophilisiert. Die Reinigung mit präparativer HPLC ergibt 3-Guanidinobenzoyl-glycyl-1 ,2,3,4-tetrahydroisochinolin-3-yl- essigsäure, Trifluoracetat. RT = 12,3 (10→90%ACN, 30 min) MS (ESI): m/z = 410.2 ([M+H]+). 1H-NMR (1.3:1 Verhältnis der Rotationsisomere, * kleinere
Rotationsisomer-Signale, 500 MHz, DMSO-d6) δ = 12.39 (br. s, 1 H, COOH), 9.95 (s, 1 H, NH-ArC), 8.67 (t, J = 5.4 Hz, 1 H, NH-GlyCH2), 8.63* (t, J = 5.4 Hz, 1 H, NH-GlyCH2), 7.78 (d, J = 7.8 Hz, 1 H, ArC6-H), 7.72 (s, 1 H, ArC2-H), 7.58 (s, 4H, GuaN2H4), 7.53 (t, J = 7.8 Hz, 1 H, ArC5-H), 7.39 (d, J = 7.8 Hz, 1 H, ArC4-H), 7.17-7.25 (m, 4H, ™quC 5,6,7,8_H)) 5 (d_ j = π g Hz
-I H, ThiquC1-H2), 5.01-5.02* (m, 1 H, Thic<uC3-H), 4.82* (d, J = 16.2 Hz, 1 H, τhiquC1-H2), 4.73-4.75 (m, 1H, Thi uC3-H), 4.55* (d, J = 16.2 Hz, 1H, ThiquC1- H2), 4.44 (dd, J = 16.4 Hz, J = 5.4 Hz, 1 H, GlyCH2), 4.19-4.29 (m, 3H, G,yCH2), 4.10 (d, J = 17.9 Hz, 1 H, ThiquC1-H2), 3.15 (dd, J = 16.4 Hz, J = 5.0 Hz, 1 H CH2C02H), 2.98* (dd, J = 15.8 Hz, J = 5.2 Hz, 1 H, CH2C02H), 2.74-2.79 (m, 2H, CH2C02H), 2.41-2.51 , 2.33-2.37, 2.16-2.21 (m, 4H,
Th,qu,c4_H2)
Beispiel 6
5-(4-Methylpyridin-2-ylamino)-pentanoyl-glycyl-1 , 2,3,4- tetrahydroisochinolin-3-yl-essigsäure
0.036 mmol B (erhältlich nach Beispiel 5b)) werden mit DMF (1 x 1 ml) gewaschen. Anschliessend zweimal mit 20% Piperidin in DMF (2 x 1 ml) zuerst 5 min dannach 15 min entschützt und mit DMF (6 x 1 ml) gewaschen. Das harzgebundene freie Amin wird mit einer ca. 0.1 M Lösung aus 2.5 Äquiv. (0.09 mmol) 5-(N-(4-Methylpyridin-2-yl)-amino-pentansäure, 2.4 Äquiv. (0.086 mmol) HATU und 30 Äquiv. (1.08 mmol) Collidin in absolutem DMF über Nacht bei Raumtemperatur geschüttelt. Man wäscht mit DMF und DCM. Zur Abspaltung von der festen Phase schüttelt man das gewaschene Harz mit 1 ml eines Gemisches aus DCM/Trifluorethanol/Essigsäure (31/1) zunächst 90 min, danach 30 min und abschliessend 1 min. Entfernen des Lösungsmittels und Reinigung mit präparativer HPLC ergibt 5-(4-Methylpyridin-2-ylamino)-pentanoyl-glycyl- 1 ,2,3,4-tetrahydroisochinolin-3-yl-essigsäure, Trifluoracetat. RT = 13,3 (10→90%ACN, 30 min) MS (ESI): m/z = 439.3 ([M+H]+).
1H-NMR (1.3:1 Verhältnis der Rotationsisomere, * kleinere Rotationsisomer-Signale, 500 MHz, DMSO-d6) δ = 12.35 (br. s, 1H, COOH), 8.46 (br. s, 1 H, NH-CH2), 7.93-7.97 (m, 1 H, NH-GlyCH2), 7.78 (d, J = 6.5 Hz, 1H, PyrC6-H), 7.14-7.22 (m, 4H, Thic>uc5l6'7'8-H), 6.81 (s, 1 H, PyrC3- H), 6.69 (d, J = 6.5 Hz, 1 H, PyrC5-H), 5.08 (d, J = 17.9 Hz, 1H, ThιquC1-H2), 4.97-5.01* (m, 1 H, ThiquC3-H), 4.71* (d, J = 16.2 Hz, 1 H, ThiquC1-H2), 4.59- 4.63 (m, 1 H, ThιquC3-H), 4.47* (d, J = 16.2 Hz, 1H, ThιquC1-H2), 4.21 (dd, J = 16.7 Hz, J = 5.5 Hz, 1 H, GlyCH2), 4.04-4.08 (m, 3H, GlyCH2, ThiquC1-H2), 3.97* (dd, J = 16.9 Hz, J =5.4 Hz, 1 H, GlyCH2), 3.27 (m, 2H, NH-CH2), 3.11 (dd, J = 16.2 Hz, J = 5.3 Hz, 1 H, CH2C02H), 2.95* (dd, J = 15.7 Hz, J = 5.4 Hz, 1 H, CH2C02H), 2.62-2.77 (m, 2H, CH2C02H), 2.34-2.44 (m, 3H, ™quiC4-H2) 2.31 (s, 3H, CH3), 2.12-2.21 (m, 3H, ThiquiC4-H4, CH2-CH2-CO),
1.58 (s, 4H, (CH2)2-CH2-CO).
Analog lassen sich unter Verwendung der entsprechenden Vorstufen die weiteren Verbindungen der Formel I, insbesondere die Verbindungen der Formeln 11 bis I36 erhalten.
Die nachfolgenden Beispiele betreffen pharmazeutische Zubereitungen:
Beispiel A: Injektionsgläser
Eine Lösung von 100 g eines Wirkstoffes der Formel I und 5 g Dinatrium- hydrogenphosphat wird in 3 I zweifach destilliertem Wasser mit 2 n Salzsäure auf pH 6,5 eingestellt, steril filtriert, in Injektionsgläser abgefüllt, unter sterilen Bedingungen lyophilisiert und steril verschlossen. Jedes In- jektionsglas enthält 5 mg Wirkstoff.
Beispiel B: Suppositorien
Man schmilzt ein Gemisch von 20 g eines Wirkstoffes der Formel I mit 100 g Sojalecithin und 1400 g Kakaobutter, gießt in Formen und läßt erkalten. Jedes Suppositorium enthält 20 mg Wirkstoff.
Beispiel C: Lösung
Man bereitet eine Lösung aus 1 g eines Wirkstoffes der Formel I, 9,38 g
NaH2P04 • 2 H2O, 28,48 g Na2HP04 • 12 H2O und 0,1 g Benzalkonium- chlorid in 940 ml zweifach destilliertem Wasser. Man stellt auf pH 6,8 ein, füllt auf 1 I auf und sterilisiert durch Bestrahlung. Diese Lösung kann in Form von Augentropfen verwendet werden.
Beispiel D: Salbe Man mischt 500 mg eines Wirkstoffes der Formel I mit 99,5 g Vaseline unter aseptischen Bedingungen.
Beispiel E: Tabletten
Ein Gemisch von 1 kg Wirkstoff der Formel I, 4 kg Lactose, 1 ,2 kg Kartoffelstärke, 0,2 kg Talk und 0,1 kg Magnesiumstearat wird in üblicher Weise zu Tabletten verpreßt, derart, daß jede Tablette 10 mg Wirkstoff enthält.
Beispiel F: Dragees
Analog Beispiel E werden Tabletten gepreßt, die anschließend in üblicher Weise mit einem Überzug aus Saccharose, Kartoffelstärke, Talk, Tragant und Farbstoff überzogen werden.
Beispiel G: Kapseln
2 kg Wirkstoff der Formel I werden in üblicher Weise in Hartgelatinekapseln gefüllt, so daß jede Kapsel 20 mg des Wirkstoffs enthält.
Beispiel H: Ampullen
Eine Lösung von 1 kg Wirkstoff der Formel I in 60 I zweifach destilliertem
Wasser wird steril filtriert, in Ampullen abgefüllt, unter sterilen Bedingungen lyophilisiert und steril verschlossen. Jede Ampulle enthält 10 mg Wirkstoff.
Beispiel I: Inhalations-Spray
Man löst 14 g Wirkstoff der Formel I in 10 I isotonischer NaCI-Lösung und füllt die Lösung in handelsübliche Sprühgefäße mit Pump-Mechanismus. Die Lösung kann in Mund oder Nase gesprüht werden. Ein Sprühstoß (etwa 0,1 ml) entspricht einer Dosis von etwa 0,14 mg.

Claims

Patentansprüche
Verbindungen der Formel I
NH oder CH2,
R ) 1 , R jeweils unabhängig voneinander H, A, OH, OA, Arylalkyl, Hai, -CO-A, CN, N02, NHR3, COOA, COOH, S02A, CF3 oder OCF3,
R >2 jeweils unabhängig voneinander H oder A,
RJ, R jeweils unabhängig voneinander H, A, -CO-A, N02 oder CN,
Alkyl mit 1-6 C-Atomen,
m 0, 1 , 2, 3, 4, 5 oder 6,
n, p unabhängig voneinander 1 , 2 oder 3 bedeuten,
sowie ihre physiologisch unbedenklichen Derivate, insbesondere deren Salze und Solvate. Verbindungen der Formel I nach Anspruch 1 , worin A Methyl, weiterhin Ethyl, Isopropyl, n-Propyl, n-Butyl, Isobutyl, sek.-Butyl oder tert.-Butyl bedeutet.
Verbindungen der Formel I nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 oder 2, worin Het 4-Methylpyridin-2-yl, Pyridin-2-yl, Pyriminin-2-yl, lmidazol-2-yl, Benzimidazol-2-yl und deren hydrierte Derivate bedeutet.
Verbindungen der Formel I nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß R1 und R5 unabhängig voneinander vorzugsweise H, A, CN, N02, Hai oder - COA- bedeuten.
Verbindungen der Formel I nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß R2 vorzugsweise H oder A bedeutet.
Verbindungen der Formel I nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß R3 und R4 unabhängig voneinander bedeutet vorzugsweise H oder -COA- bedeuten.
Verbindungen der Formel I nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß X H, -C(=NH)-NH2, -C(=NMethyl)-NH2, 4-Methylpyridin-2-yl, Pyridin-2-yl, Pyrimidin-2-yl, lmidazol-2-yl, Benzimidazol-2-yl und deren hydrierte Derivate bedeutet.
Verbindungen der Formel I nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß Y -(CH2)m- oder bedeutet. Verbindungen der Formel I nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß n und p unabhängig voneinander 1 oder 2 bedeuten.
Verbindungen der Formel I nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß m 0, 2 oder 4 bedeutet.
Verbindungen der Formel 11 bis I36:
11
12
13
14
15
16
17
18
19
110 111
112
113
114
115 116
117
118
119
I20
131 I32
I33
I34
I35 I36
Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel I nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 11 sowie ihrer Salze, dadurch gekennzeichnet, daß man a) eine Verbindung der Formel II, worin Z, R1 und n die oben angebebene Bedeutung aufweisen und W eine übliche Schutzgruppe oder eine in der Peptidchemie verwendete feste Phase bedeutet,
mit einer Verbindung der Formel III worin Y die oben angegebene Bedeutungen aufweist und Q eine geeignete Schutzgruppe oder Het bedeutet, in Gegenwart eines Kondensationsmittels wie z.B. HATU umsetzt,
und anschließend die Schutzgruppen und/oder die feste Phase entfernt,
und das erhaltene Produkt gegebenenfalls, sofern Q als Schutzgruppe abgespalten wird, mit einer geeigneten
Guanylverbindung, wie z.B. N, N'-bis-BOC-1-Guanylpyrazol umgesetzt und gegebenenfalls die verbliebenen Schutzgruppen und/oder die festen Phase abgespaltet
oder
b) eine Verbindung der Formel I aus einem ihrer funktionellen Derivate durch Behandeln mit einem solvolysierenden oder hydrogenolysierenden Mittel in Freiheit setzt,
und/oder daß man eine basische oder saure Verbindung der Formel I durch Behandeln mit einer Säure oder Base in eines ihrer Salze überführt.
13. Verbindungen der Formel I nach einem oder mehreren der
Ansprüche 1 bis 11 und ihre physiologisch unbedenklichen Salze oder Solvate als therapeutische Wirkstoffe.
14. Verbindungen der Formel I nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 11 und ihre physiologisch unbedenklichen Salze oder Solvate als Integrininhibitoren.
15. Verbindungen der Formel I nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 11 und ihre physiologisch unbedenklichen Salze oder Solvate zur Anwendung bei der Bekämpfung von Krankheiten. Pharmazeutische Zubereitung gekennzeichnet durch einen Gehalt an mindestens einer Verbindung der Formel I nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 11 und/oder einem ihrer physiologisch unbedenklichen Salze oder Solvate.
Verwendung von Verbindungen der Formel I nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 11 und/oder ihre physiologisch unbedenklichen Salze oder Solvate zur Herstellung einer pharmazeutischen Zubereitung.
Verwendung von Verbindungen der Formel I nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 11 und/oder ihrer physiologisch unbedenklichen Salze oder Solvate zur Herstellung einer pharmazeutischen Zubereitung zur Bekämpfung von Thrombosen, Herzinfarkt, koronaren Herzerkrankungen, Arteriosklerose,
Entzündungen, Tumoren, Osteoporose, Infektionen und Restenose nach Angioplastie.
Verwendung von Verbindungen der Formel I nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 11 und/oder ihre physiologisch unbedenklichen Salze oder Solvate bei pathologischen Vorgängen, die durch Angiogenese unterhalten oder propagiert werden.
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