EA038794B1

EA038794B1 - Малеатная соль агониста tlr7, ее кристаллические формы c, d и e, способы получения и применение малеатной соли и кристаллических форм

Info

Publication number: EA038794B1
Application number: EA201891770A
Authority: EA
Inventors: Чжаочжун Дин; Фей Сунь; Инху Ху; Илун Чжоу; Чжэн Ван; Лин Ян
Original assignee: Чиа Тай Тяньцин Фармасьютикал Груп Ко., Лтд.
Priority date: 2016-02-05
Filing date: 2017-02-04
Publication date: 2021-10-20
Also published as: EP3412671B1; JP6898336B2; EA201891770A1; CA3013682A1; EP3412671A1; DK3412671T3; MY196762A; AR107547A1; HK1259175A1; MX2018009500A; EP3412671A4; US10780091B2; CL2018002089A1; HUE052211T2; ES2834303T3; KR102393279B1; US20200368241A1; TWI778951B; TW201728588A; NZ745231A

Abstract

Настоящее изобретение относится к малеатной соли соединения, представленного формулой I, способу получения соли, фармацевтической композиции, содержащей соль, и использованию соли. Настоящее изобретение также относится к кристаллическим формам C, D и E малеатной соли соединения, представленного формулой I, способам получения кристаллических форм, кристаллическим композициям и фармацевтическим композициям, содержащим кристаллические формы, а также к их использованию.

Description

Область техники

Настоящее изобретение относится к области медицинской химии, и в частности относится к малеату агониста TLR7, способу его получения, содержащей его фармацевтической композиции и его применению. Настоящее изобретение также относится к кристаллической форме С, кристаллической форме D и кристаллической форме Е соли, способам получения, кристаллическим композициям, содержащим кристаллические формы, фармацевтическим композициям, содержащим кристаллические формы или кристаллические композиции, и их применению.

Предпосылки

Различные клетки иммунной системы экспрессируют Toll-подобный рецептор, который распознает высоко консервативные структурные мотивы: патоген-ассоциированный молекулярный паттерн (РАМР), экспрессируемый патогенными микроорганизмами, или ассоциированные с повреждением молекулярные паттерны (DAMP), высвобождаемые погибшими клетками. РАМР или DAMP стимулирует Tollподобный рецептор к запуску сигнального каскада, который индуцирует активацию транскрипционных факторов, таких как АР-1, NF-кВ, и регуляторов интерферонов (функция импульсного ответа). Это ведет к различным клеточным ответам, в том числе образованию интерферонов, провоспалительных цитокинов и эффекторных цитокинов, в соответствии с чем возникает иммунный ответ. Определенно, у млекопитающих обнаружены Toll-подобные рецепторы 13 типов. Toll-подобные рецепторы 1, 2, 4, 5 и 6 преимущественно экспрессированы на клеточной поверхности, тогда как Toll-подобные рецепторы 3, 7, 8 и 9 экспрессированы в эндосомах. Различные Toll-подобные рецепторы распознают лиганды, получаемые из различных патогенов. Toll-подобный рецептор 7 (TLR7) преимущественно экспрессируют плазмацитоидные дендритные клетки (pDC), и распознавание его лиганда ведет к индукции секреции интерферона α (IFN-α). Toll-подобный рецептор 7 (TLR7) и Toll-подобный рецептор 8 (TLR8) обладают высокой гомологией и, следовательно, лиганд TLR7 в большинстве случаев также подходит для TLR8. Стимуляция TLR8 преимущественно индуцирует продуцирование цитокинов, таких как фактор некроза опухоли α (TNF-α) и хемоаттрактант. Интерферон α представляет собой одно из лекарственных средств для лечения хронического гепатита В или гепатита С, тогда как TNF-α представляет собой провоспалительный цитокин, чрезмерная секреция которого ведет к тяжелым побочным эффектам.

Сообщается о нескольких агонистах TLR7, таких как имиквимод (British Journal of Dermatology 2003; 149 (Suppl. 66): 5-8), резиквимод (Antiviral Research 64 (2004) 79-83), GS-9620 (Gastroenterology (2013), 144(7), 1508-1517). Тем не менее, желательно иметь новые агонисты TLR7 с более хорошей избирательностью, активностью и безопасностью.

В китайской патентной заявке № 201410405136.0, которая включена в полном объеме по ссылке в настоящее описание, раскрыто одно низкомолекулярное соединение, т.е. 2-бутокси-7-(4-(пирролидин-1илметил)бензил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин, а также процесс его получения, которое имеет следующую структуру:

Краткое изложение

В одном из аспектов предоставлен малеат соединения формулы I:

В другом аспекте предоставлены кристаллические формы малеата соединения формулы I, соответствующий способ получения и кристаллическая композиция. В одном из вариантов осуществления кристаллическая форма представляет собой кристаллическую форму С, кристаллическую форму D или кристаллическую форму Е.

В одном из вариантов осуществления кристаллическая форма С отличается рентгеновской порошковой дифрактограммой (XRPD), которая имеет дифракционные пики при 2θ=7, 6°±0,2°, 9,9°±0,2°, 17,8°±0,2°, 22,8°±0,2°, 24,2°±0,2°, 26,3°±0,2°.

В одном из вариантов осуществления кристаллическая форма D отличается рентгеновской порошковой дифрактограммой (XRPD), которая имеет дифракционные пики при 2θ=5,1°±0,2°, 9,5°±0,2°, 11,2°±0,2°, 17,6°±0,2°, 20,2°±0,2°, 23,0°±0,2°.

- 1 038794

В одном из вариантов осуществления кристаллическая форма Е отличается рентгеновской порошковой дифрактограммой (XRPD), которая имеет дифракционные пики при 2θ=4,9°±0,2°, 5,3°±0,2°,

9,0°±0,2°, 16,5°±0,2°, 19,3°±0,2°.

В другом аспекте предоставлена фармацевтическая композиция, которая содержит одну или несколько кристаллических форм или их кристаллическую композицию в соответствии с изобретением. Фармацевтическая композиция дополнительно необязательно может содержать фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент и/или среду.

В другом аспекте предоставлен способ лечения или предотвращения ассоциированного с Tollподобным рецептором 7 (TLR7) заболевания, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, кристаллической формы или кристаллической композиции или фармацевтической композиции в соответствии с изобретением в эффективном количестве. Предпочтительно, заболевание представляет собой вирусную инфекцию.

В дополнительном аспекте предложено применение кристаллической формы или кристаллической композиции или фармацевтической композиции в соответствии с изобретением для изготовления лекарственного средства для лечения или предотвращения ассоциированного с Toll-подобным рецептором 7 (TLR7) заболевания. Предпочтительно заболевание представляет собой вирусную инфекцию.

В еще одном дополнительном аспекте предусмотрена кристаллическая форма или кристаллическая композиция или фармацевтическая композиция в соответствии с изобретением для применения в лечении или предотвращении ассоциированного с Toll-подобным рецептором 7 (TLR7) заболевания. Предпочтительно заболевание представляет собой вирусную инфекцию.

В одном из вариантов осуществления изобретения вирусная инфекция представляет собой инфекцию вируса гепатита, в частности инфекцию вируса гепатита В или гепатита С.

Краткое описание фигур

Фиг. 1: XRPD дифрактограмма кристаллической формы С малеата соединения формулы I.

Фиг. 2: XRPD дифрактограмма кристаллической формы D малеата соединения формулы I.

Фиг. 3: XRPD дифрактограмма кристаллической формы Е малеата соединения формулы I.

Подробное описание

Общие определения и терминология

Если не установлено иное, термины и фразы, используемые в настоящем описании, имеют следующие значения. Конкретный термин или фразу не следует рассматривать в качестве неясных или неопределенных, когда они не определены конкретно. Их следует понимать в соответствии с основным значением. Торговое название, используемое в настоящем описании, относится к соответствующему продукту или активному ингредиенту.

Пока иное не определено конкретно, в настоящем описании долю (в том числе процентную долю) или часть вычисляют на основании массы.

Когда используют с числовыми переменными, термин около или приблизительно обычно относится к значению переменной и всем значениям переменной в пределах ошибки эксперимента (например, в пределах усредненной доверительной области 95%) или в пределах±10% от точно определенного значения или более широкого диапазона.

Выражение содержать или его синонимы включать, иметь или тому подобное является открытым, что не исключает другие не перечисленные элементы, стадии или ингредиенты. Выражение состоять из исключает любые не перечисленные элементы, стадии или ингредиенты. Выражение по существу состоять из относится к конкретным элементам, стадиям или ингредиентам в заданном диапазоне, вместе с необязательными элементами, стадиями или компонентами, которые по существу не оказывают влияния на базовый и новый признак заявленного объекта изобретения. Следует понимать, что выражение содержать охватывает выражения по существу состоять из и состоять из.

Термин необязательный или необязательно обозначает, что событие, следующее за ним, может наступать или не наступать. Этот термин охватывает случаи, когда событие может наступать или не наступать.

Термин фармацевтическая композиция относится к активному ингредиенту, который необязательно объединяют с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми компонентами (например, но не ограничиваясь этим, носителем и/или эксципиентом). Активный ингредиент приведен в качестве примера соединения формулы I или его малеата, одной или нескольких кристаллических форм в соответствии с изобретением или одной или нескольких кристаллических композиций в соответствии с изобретением.

Термин фармацевтически приемлемый носитель относится к тем носителям, которые не вызывают значимого раздражения и не ослабляют биологическую активность и свойство активного соединения. Фармацевтически приемлемый носитель относится к инертному веществу, которое вводят с активным ингредиентом, которое полезно для его введения и которое включает, но не ограничиваясь этим, любые из следующих веществ, одобренных в State Food and Drug Administration для использования у человека или животных (например, сельскохозяйственных животных): скользящее средство, подсластитель, раз- 2 038794 бавитель, консервант, краситель/красящее вещество, ароматизатор, поверхностно-активное средство, смачивающее средство, дисперсант, разрыхлитель, суспендирующее средство, стабилизирующее средство, изотоническое средство, растворитель или эмульгирующее средство.

Неограничивающие примеры носителей включают карбонат кальция, фосфат кальция, различные сахара и крахмалы, производные целлюлозы, желатин, растительное масло и полиэтиленгликоль или тому подобное. Другую информацию о носителях можно найти в Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21-е изд., Lippincott, Williams & Wilkins (2005), содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки. Термин эксципиент в целом относится к носителю, разбавителю и/или среду, используемому для того, чтобы формулировать эффективную фармацевтическую композицию.

Термин введение или вводить или тому подобное относится к способу, который позволяет доставлять соединение или композицию в желаемое место биологического действия. Такие способы включают, но не ограничиваясь этим, оральное, парентеральное (в том числе внутривенные, подкожные, интраперитонеальные, внутримышечные, внутрисосудистые инъекции или инфузии), местное, ректальное введение или тому подобное.

Что касается фармацевтического или фармакологического активного средства, термин эффективное количество относится к количеству лекарства или средства, которое является не токсичным, но достаточным для достижения желаемого эффекта. В отношении орального состава в настоящем описании эффективное количество активного вещества в композиции относится к количеству, необходимому для достижения желаемого эффекта в комбинации с другим активным веществом в композиции. Эффективное количество можно определять индивидуально, и оно зависит от возраста и общего состояния реципиента, а также конкретного активного вещества. Эффективное количество в конкретном случае может определять специалист в данной области с помощью стандартного теста.

Термин активный ингредиент, терапевтическое средство, активное вещество или активное средство относится к химической частице, которую можно эффективно использовать для лечения или предотвращения целевого нарушения, заболевания или состояния. Термин в настоящем описании может относиться, например, к соединению формулы I или его малеату, одной или нескольким кристаллическим формам в соответствии с изобретением или одной или нескольким кристаллическим композициям в соответствии с изобретением.

В спектрах рентгеновской порошковой дифракции (XRPD или XRD) дифрактограмма, получаемая для кристаллического соединения, в целом характерна для конкретной кристаллической формы, где относительные интенсивности полос (в частности, при малых углах) могут варьировать вместе с эффектом преобладающей ориентации из-за различий в условиях кристаллизации, диаметрах частиц и других условиях измерения. Следовательно, относительные интенсивности дифракционных пиков не являются отличительными для заданной кристаллической формы. Более важно отметить относительные положения пиков, а не их относительные интенсивности, при определении, является ли кристаллическая форма такой же, как та, что известна в данной области. Кроме того, могут иметь место небольшие ошибки в положениях пиков для любой заданной кристаллической формы, которые также хорошо известны в области кристаллографии. Например, положение пика может смещаться из-за изменения температуры, движения образца или калибровки прибора во время анализа образца; и ошибка измерения значения 2θ иногда может составлять приблизительно ±0,2°, обычно приблизительно ±0,1°. Следовательно, эту ошибку следует учитывать при определении кристаллической структуры. Если кристаллические формы в соответствии с изобретением описаны по существу, как показано на фигурах, термин по существу также предназначен для того, чтобы охватывать такие различия в дифракционном пике.

В XRPD дифрактограмме положение пика обычно представляют с помощью угла 2θ или расстояния d до поверхности кристалла, и простое преобразование между d и θ представляет собой d=λ/2sinθ, где d представляет расстояние до поверхности кристалла, λ представляет длину волны падающего рентгеновского луча и θ представляет собой угол дифракции. Что касается одной и той же кристаллической формы одного и того же соединения, положения пиков XRPD дифрактограммы в целом схожи, а ошибка относительной интенсивности может быть большой. Также следует отметить, что при идентификации смеси некоторые дифракционные линии могут быть потеряны из-за таких факторов, как снижение содержания и т.д., и, таким образом, нет необходимости полагаться на все полосы, наблюдаемые в образце высокой чистоты, и даже одна полоса может быть характеристикой для заданного кристалла.

Дифференциальную сканирующую калориметрию (DSC) используют для того, чтобы измерять температуру перехода, когда кристалл поглощает или высвобождает тепло из-за изменений в его кристаллической структуре или плавления кристалла. Ошибка температуры теплового перехода и температуры плавления обычно находится в пределах приблизительно 5°С, обычно приблизительно 3°С для одной и той же кристаллической формы одного и того же соединения при непрерывном анализе. Когда соединение описано как обладающее заданными DSC пиком или температурой плавления, это обозначает DSC пик или температуру плавления ±5°С. Предоставлен вспомогательный способ с использованием DSC для того, чтобы идентифицировать различные кристаллические формы. Различные кристаллические формы можно идентифицировать в соответствии с их различными характеристиками температуры пере- 3 038794 хода. Следует отметить, что DSC пик или температура плавления смеси может варьировать в широком диапазоне. Кроме того, температура плавления связана со скоростью роста температуры из-за разложения во время плавления вещества.

Дифференциальную сканирующую калориметрию (DSC) в настоящем описании выполняют с помощью следующего способа: аппарат: дифференциальный сканирующий калориметр ТА Q2000; способ: образец (~1 мг) помещают в алюминиевый лоток для DSC, способ: 25°С-300°С, скорость нагрева 10°С/мин.

Термин кристаллическая композиция относится к твердой форме, которая содержит одну или несколько кристаллических форм в соответствии с изобретением (таких как кристаллическая форма С, D и/или Е). Количества кристаллических форм, содержащиеся в кристаллической композиции, могут составлять 50% или больше, 80% или больше, 90% или больше или 95% или больше независимо. В дополнение к кристаллической форме в соответствии с изобретением кристаллическая композиция также может необязательно содержать другую кристаллическую или аморфную форму соединения формулы I или его соли (такой как малеат) или примеси, отличные от этих веществ. Специалистам в данной области следует понимать, что сумма содержащихся компонентов в кристаллической композиции должна составлять 100%.

Малеат соединения формулы I

Предоставлен малеат соединения формулы I:

В предпочтительном варианте осуществления в малеате соединения формулы I молярное соотношение соединения формулы I и малеиновой кислоты составляет 1:1-3, предпочтительно 1:2. Малеат соединения формулы I можно получать с помощью стандартного процесса получения малеата.

Кристаллическая форма С

Предусмотрена кристаллическая форма С малеата соединения формулы I, которая имеет дифракционные пики при 2θ=7,6°±0,2°, 9,9°±0,2°, 17,8°±0,2°, 22,8°±0,2°, 24,2°±0,2°, 26,3°±0,2° в рентгеновском дифракционном (XRPD) паттерне.

В конкретном варианте осуществления кристаллическая форма С имеет дифракционные пики при 2θ=5,6°±0,2°, 7,6°±0,2°, 9,9°±0,2°, 17,8°±0,2°, 19,8°±0,2°, 22,8°±0,2°, 24,2°±0,2°, 25,0°±0,2°, 26,3°±0,2° в рентгеновском дифракционном (XRPD) паттерне.

В более конкретном варианте осуществления кристаллическая форма С имеет дифракционные пики при 2θ=5,6°±0,2°, 6,0°±0,2°, 7,6°±0,2°, 9,9°±0,2°, 12,0°±0,2°, 15,3°±0,2°, 17,8°±0,2°, 18,5°±0,2°, 19,8°±0,2°, 20,4°±0,2°, 22,8°±0,2°, 23,1°±0,2°, 24,2°±0,2°, 24,7°±0,2°, 25,0°±0,2°, 26,3°±0,2° в рентгеновском дифракционном (XRPD) паттерне.

- 4 038794

В конкретном варианте осуществления дифракционные пики кристаллической формы С малеата соединения формулы I отличаются следующим образом:

Номер	2Θ+ 0, 2 (°)	Относительна я интенсивност ь (%)	Номер	2Θ+ 0,2 (°)	Относительна я интенсивност ь (%)
1	5, 6	22,0	19	20,7	14,1
2	6, 0	18,7	20	21,3	5, 8
3	7, 6	100, 0	21	21,7	5, 6
4	9, 4	8,0	22	22,4	5, 1
5	9, 9	87,7	23	22,8	41,9
6	10,2	9, 8	24	23, 1	17,7
7	11,1	13, 8	25	24,2	42,1
8	12,0	16, 5	26	24,7	19, 7
9	12,9	2,5	27	25, 0	26, 6
10	15, 3	18,7	28	25, 4	3,7
11	16, 6	5, 5	29	25, 9	8,7
12	16, 9	7,0	30	26, 3	35, 2
13	17,8	30, 0	31	28,0	8,3
14	18,1	9, 4	32	28, 6	10, 9
15	18,5	15, 5	33	29, 3	4,4
16	19, 1	9, 9	34	30,4	7,2
17	19, 8	25, 4	35	33,2	3,5
18	20,4	18,1

В одном из вариантов осуществления рентгеновский порошковый дифракционный паттерн кристаллической формы С малеата соединения формулы I по существу представлен на фиг. 1.

Кристаллическая форма С также может отличаться по DSC при начальной температуре 97,0°С±5°С и температурой пика 106,0°С±5°С.

В одном из вариантов осуществления в кристаллической форме С молярное соотношение соединения формулы I и малеиновой кислоты составляет 1:1-3, предпочтительно 1:2.

Также предоставлен способ получения кристаллической формы С по изобретению, который включает преципитацию малеата соединения формулы I из растворителя.

В одном из вариантов осуществления способ включает следующие стадии:

1) растворение соединения формулы I в растворителе, который предпочтительно нагревают для содействия растворению;

2) добавление малеиновой кислоты;

3) охлаждение для кристаллизации, фильтрования, промывания и сушки для получения кристаллической формы С.

На стадии 1) растворитель выбирают из группы, состоящей из метанола, этанола, пропанола, изопропанола, н-бутанола, изобутанола, третичного бутанола, ацетона, этилацетата и их смешанного растворителя; предпочтителен этанол.

На стадии 1) количество растворителя, добавляемого на 1 моль соединения формулы I, составляет от 0,2 до 8 л, предпочтительно от 0,3 до 4 л, более предпочтительно от 0,5 до 2 л, наиболее предпочтительно 1 л.

На стадии 1) температура нагрева может составлять от 40 до 90°С, предпочтительно от 50 до 80°С, более предпочтительно от 70 до 80°С.

На стадии 2) количество малеиновой кислоты, добавляемой на 1 моль соединения формулы I, составляет от 1,0 до 4,0 моль, предпочтительно от 1,6 до 3,0 моль, более предпочтительно от 2,0 до 2,4 моль, наиболее предпочтительно 2,2 моль.

Также предоставлена кристаллическая композиция, содержащая кристаллическую форму С. В одном из вариантов осуществления, на основании массы кристаллической композиции, содержание кристаллической формы С составляет 50% или больше, предпочтительно 80% или больше, более предпочтительно 90% или больше и наиболее предпочтительно 95% или больше.

Кристаллическая композиция, в дополнение к кристаллической форме С, также может содержать

- 5 038794 соединение формулы I или его соль в других кристаллических или аморфных формах или примеси, отличные от этих веществ.

Кристаллическая форма D

Предусмотрена кристаллическая форма D малеата соединения формулы I, которая имеет дифракционные пики при 2θ=5,1°±0,2°, 9,5°±0,2°, 11,2°±0,2°, 17,6°±0,2°, 20,2°±0,2°, 23,0°±0,2° в рентгеновском дифракционном (XRPD) паттерне.

В конкретном варианте осуществления кристаллическая форма D имеет дифракционные пики при 2θ=5,1°±0,2°, 9,5°±0,2°, 11,2°±0,2°, 17,6°±0,2°, 20,2°±0,2°, 20,7°±0,2°, 23,0°±0,2°, 23,7°±0,2° в рентгеновском дифракционном (XRPD) паттерне.

В более конкретном варианте осуществления кристаллическая форма D имеет дифракционный пик при 2θ=5,1°±0,2°, 5,6°±0,2°, 9,5°±0,2°, 11,2°±0,2°, 16,9°±0,2°, 17,6°±0,2°, 20,2°±0,2°, 20,7°±0,2°, 22,6°±0,2°, 23,0°±0,2°, 23,7°±0,2°, 24,5°±0,2° в рентгеновском дифракционном (XRPD) паттерне.

В конкретном варианте осуществления дифракционные пики кристаллической формы D малеата соединения формулы I отличаются следующим образом:

Номер	2θ ± 0, 2 (°)	Относительна я интенсивност ь (%)	Номер	2θ ± 0,2 (°)	Относительна я интенсивност ь (%)
1	5, 1	100, 0	16	19,6	4,4
2	5, 6	11,5	17	20,2	35, 6
3	7, 0	2,7	18	20,7	19, 0
4	8,7	2, 6	19	21,4	3,5
5	9, 5	36, 2	20	22, 6	12,3
6	10,3	3, 1	21	23, 0	20, 1
7	11,2	23,5	22	23,7	17,7
8	12,0	3, 1	23	24,5	14, 8
9	14,2	2,5	24	26,4	6, 1

10	16, 2	4,2	25	27,1	3, 1
11	16, 9	11,2	26	27,7	3,3
12	17, 6	33, 6	27	28,4	5, 2
13	18,3	4,7	28	28,8	8,7
14	18, 8	2,0	29	30,7	3, 8
15	19, 2	5, 3

В одном из вариантов осуществления рентгеновский порошковый дифракционный паттерн кристаллической формы D малеата соединения формулы I по существу представлен на фиг. 2.

Кристаллическая форма D также может отличаться по DSC, при начальной температуре 98,3°С±5°С и температуре пика 110,1°С±5°С.

В одном из вариантов осуществления в кристаллической форме D молярное соотношение соединения формулы I и малеиновой кислоты составляет 1:1-3, предпочтительно 1:2.

Также предоставлен способ получения кристаллической формы D, который включает следующие стадии:

1) размещение кристаллической формы С малеата соединения формулы I в растворителе ацетоне для того, чтобы формировать суспензию;

2) встряхивание при постоянной температуре;

3) центрифугирование, промывание и сушка для получения кристаллической формы D.

На стадии 1) количество ацетона, добавляемое на 1 г кристаллической формы С малеата соединения формулы I, составляет от 2 до 30 мл, предпочтительно от 8 до 24 мл, более предпочтительно от 12 до 20 мл, наиболее предпочтительно от 14 до 16 мл.

На стадии 2) постоянная температура составляет от 20 до 60°С, предпочтительно от 30 до 50°С, более предпочтительно от 35 до 45°С, наиболее предпочтительно 40°С.

Также предоставлена кристаллическая композиция, содержащая кристаллическую форму D. В одном из вариантов осуществления на основании массы кристаллической композиции кристаллическая форма D составляет 50% или больше, предпочтительно 80% или больше, более предпочтительно 90% или больше и наиболее предпочтительно 95% или больше. Кроме того, кристаллическая композиция, в

- 6 038794 дополнение к кристаллической форме D, также может содержать соединение формулы I или его соль в других кристаллических или аморфных формах или примеси, отличные от этих веществ.

Кристаллическая форма Е

Предусмотрена кристаллическая форма Е малеата соединения формулы I, которая имеет дифракционные пики при 2θ=4,9°±0,2°, 5,3°±0,2°, 9,0°±0,2°, 16,5°±0,2°, 19,3°±0,2° в рентгеновском дифракционном (XRPD) паттерне.

В конкретном варианте осуществления кристаллическая форма Е имеет дифракционные пики при 2θ=4,9°±0,2°, 5,3°±0,2°, 6,7°±0,2°, 9,0°±0,2°, 10,8°±0,2°, 16,5°±0,2°, 19,3°±0,2° в рентгеновском дифракционном (XRPD) паттерне.

В более конкретном варианте осуществления кристаллическая форма Е имеет дифракционные пики при 2θ=4,9°±0,2°, 5,3°±0,2°, 6,7°±0,2°, 9,0°±0,2°, 10,8°±0,2°, 16,2°±0,2°, 16,5°±0,2°, 19,3°±0,2°, 22,0°±0,2°, 22,6°±0,2°, 25,9°±0,2° в рентгеновском дифракционном (XRPD) паттерне.

В конкретном варианте осуществления дифракционные пики кристаллической формы Е малеата соединения формулы I отличаются следующим образом:

Номер	2Θ+ 0, 2 (°)	Относительна я интенсивност ь (%)	Номер	2Θ+ 0,2 (°)	Относительна я интенсивност ь (%)
1	4, 9	100, 0	9	16, 5	15, 4
2	5, 3	10,4	10	17,7	2,0
3	6, 7	6, 9	11	19, 3	7,2
4	8,2	2,8	12	22,0	4, 6
5	8, 6	2,7	13	22, 6	4,0
6	9, 0	7,9	14	24,3	2,3
7	10, 8	5, 1	15	25, 9	3,4
8	16, 2	3, 9	16	27,1	2,8

В одном из вариантов осуществления рентгеновский порошковый дифракционный паттерн кристаллической формы Е малеата соединения формулы I по существу представлен на фиг. 3.

Кристаллическая форма Е также может отличаться по DSC при начальной температуре 85,7°С±5°С и температуре пика 97,5°С±5°С.

В одном из вариантов осуществления в кристаллической форме Е молярное соотношение соединения формулы I и малеиновой кислоты составляет 1:1-3, предпочтительно 1:2.

Также предоставлен способ получения кристаллической формы Е, который включает следующие стадии:

1) размещение кристаллической формы С малеата соединения формулы I в растворителе изопропаноле для того, чтобы формировать суспензию;

2) встряхивание при постоянной температуре;

3) центрифугирование, промывание и сушка для получения кристаллической формы Е.

На стадии 1) количество изопропанола, добавляемое на 1 г кристаллической формы С малеата соединения формулы I, составляет от 2 до 30 мл, предпочтительно от 8 до 24 мл, более предпочтительно от 12 до 20 мл, еще более предпочтительно от 14 до 16 мл.

На стадии 2) постоянная температура составляет от 20 до 60°С, предпочтительно от 30 до 50°С, более предпочтительно от 35 до 45°С, еще более предпочтительно 40°С.

Также предоставлена кристаллическая композиция, содержащая кристаллическую форму Е. В одном из вариантов осуществления, на основании массы кристаллической композиции, кристаллическая форма Е составляет 50% или больше, предпочтительно 80% или больше, более предпочтительно 90% или больше и наиболее предпочтительно 95% или больше. Кристаллическая композиция, в дополнение к кристаллической форме Е, также может содержать соединение формулы I или его соль в других кристаллических или аморфных формах или примеси, отличные от этих веществ.

Фармацевтическая композиция и введение

Предоставлена фармацевтическая композиция, которая содержит малеат соединения формулы I; кристаллическую форму С или кристаллическую композицию, содержащую кристаллическую форму С; кристаллическую форму D или кристаллическую композицию, содержащую кристаллическую форму D; или кристаллическую форму Е или кристаллическую композицию, содержащую кристаллическую форму Е, или любое их сочетание в эффективном количестве. Кроме того, фармацевтическая композиция также может содержать или не содержать фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент и/или среду.

Соединение в соответствии с изобретением вводят в чистой форме или в форме подходящей фар- 7 038794 мацевтической композиции, что можно осуществлять через любой приемлемый способ введения средства по схожим использованием. Фармацевтическую композицию в соответствии с изобретением можно получать посредством объединения соединения в соответствии с изобретением или его соли с подходящим фармацевтически приемлемым носителем, например ее можно формулировать в твердом, полутвердом, жидком или газообразном составе, таком как таблетка, пилюля, капсула, порошок, гранула, мазь, эмульсия, суспензия, раствор, суппозиторий, инъекция, ингаляционное средство, гель, микросфера, аэрозоль или тому подобное.

Фармацевтическую композицию в соответствии с изобретением можно получать с помощью способов, которые хорошо известны в данной области, таких как стандартное смешивание, растворение, гранулирование, покрывание драже, отмучивание, эмульгирование, лиофилизация или тому подобное.

Типичные пути введения соединения в соответствии с изобретением или его фармацевтической композиции включают, но не ограничиваясь этим, оральное, ректальное, чресслизистое, энтеральное введение или местное, чрескожное, ингаляционное, парентеральное, сублингвальное, интравагинальное, интраназальное, внутриглазное, интраперитонеальное, внутримышечное, подкожное, внутривенное введение.

В предпочтительном варианте осуществления фармацевтическая композиция представлена в форме для перорального введения. Что касается перорального введения, активные соединения можно смешивать с фармацевтически приемлемыми носителями, эксципиентами и/или средами, хорошо известными в данной области, чтобы получать фармацевтическую композицию. Носители, эксципиенты и среды можно использовать для того, чтобы получать соединения в соответствии с изобретением в таблетке, пилюле, лепешке, драже, капсуле, жидкости, геле, взвеси, суспензии или тому подобном, которые можно использовать для орального введения пациенту.

Твердую пероральную композицию можно получать с помощью стандартных процессов смешивания, заполнения или прессования, например с помощью следующих процессов: смешивание активного соединения с твердыми эксципиентами, необязательно перемалывание получаемой смеси, добавление других надлежащих адъювантов в случае необходимости и затем переработка смеси в гранулы с тем, чтобы получать сердцевину таблетки или драже. Надлежащие эксципиенты включают, но не ограничиваясь этим, наполнитель, такой как сахар, в том числе лактоза, сахароза, маннит или сорбит; препарат целлюлозы, такой как микрокристаллическая целлюлоза, кукурузный крахмал, пшеничный крахмал, рисовый крахмал и картофельный крахмал; и другие вещества, такие как силикагель, желатин, трагакант, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза натрия и/или поливинилпирролидон; разрыхлитель, такой как карбоксиметилкрахмал натрия, кроскармелоза натрия, сшитый поливинилпирролидон, агар или альгиновая кислота. Также можно использовать соль, такую как альгинат натрия. Сердцевину драже можно необязательно покрывать с помощью процессов, известных в общей фармацевтической практике, в частности энтеросолюбильным покрытием.

Положительные эффекты

Кристаллическая форма С, кристаллическая форма D и кристаллическая форма Е малеата соединения формулы I в соответствии с изобретением имеют преимущества высокой чистоты, высокой кристалличности и хорошей стабильности, которые подходят для изготовления лекарственного средства для предотвращения или лечения ассоциированного с Toll-подобным рецептором 7 (TLR7) заболевания.

Технические решения по изобретению проиллюстрированы в соответствии со следующими параграфами с [1] до [44].

[1] Малеат соединения формулы I:

[2] Малеат соединения формулы I в соответствии с параграфом [1], который отличается тем, что молярное соотношение соединения формулы I и малеиновой кислоты составляет 1:1-3, предпочтительно 1:2.

[3] Фармацевтическая композиция, которая содержит малеат соединения формулы I в соответствии с параграфом [1] или [2] в эффективном количестве.

[4] Применение малеата соединения формулы I в соответствии с параграфом [1] или [2] или фармацевтической композиции в соответствии с параграфом [3] для изготовления лекарственного средства для лечения ассоциированного с Toll-подобным рецептором 7 заболевания.

[5] Применение в соответствии с параграфом [4], которое отличается тем, что заболевание представляет собой вирусную инфекцию, в частности инфекцию вируса гепатита, например инфекцию вируса гепатита В или гепатита С.

[6] Кристаллическая форма С малеата соединения формулы I, которая отличается тем, что она имеет дифракционные пики при 2θ=7,6°±0,2°, 9,9°±0,2°, 17,8°±0,2°, 22,8°±0,2°, 24,2°±0,2°, 26,3°±0,2° в рентгеновском порошковом дифракционном паттерне.

- 8 038794

[7] Кристаллическая форма С в соответствии с параграфом [6], которая отличается тем, что она имеет дифракционные пики при 2θ=5,6°±0,2°, 7,6°±0,2°, 9,9°±0,2°, 17,8°±0,2°, 19,8°±0,2°, 22,8°±0,2°,

24,2°±0,2°, 25,0°±0,2°, 26,3°±0,2° в рентгеновском порошковом дифракционном паттерне.

[8] Кристаллическая форма С в соответствии с параграфом [7], которая отличается тем, что она имеет дифракционные пики при 2θ=5,6°±0,2°, 6,0°±0,2°, 7,6°±0,2°, 9,9°±0,2°, 12,0°±0,2°, 15,3°±0,2°, 17,8°±0,2°, 18,5°±0,2°, 19,8°±0,2°, 20,4°±0,2°, 22,8°±0,2°, 23,1°±0,2°, 24,2°±0,2°, 24,7°±0,2°, 25,0°±0,2°, 26,3°±0,2° в рентгеновском порошковом дифракционном паттерне.

[9] Кристаллическая форма С в соответствии с любым одним из параграфов [6]-[8], которая отличается тем, что она имеет рентгеновский порошковый дифракционный паттерн, по существу представленный на фиг. 1.

[10] Кристаллическая форма С в соответствии с любым одним из параграфов [6]-[9], которая отличается тем, что, когда характеризуют по DSC, начальная температура составляет 97,0°С±5°С и температура пика составляет 106,0°С±5°С.

[11] Способ получения кристаллической формы С в соответствии с любым одним из параграфов [6]-[10], который включает следующие стадии:

2) добавление малеиновой кислоты;

[12] Способ получения в соответствии с параграфом [11], который отличается тем, что растворитель на стадии 1) выбирают из группы, состоящей из метанола, этанола, пропанола, изопропанола, нбутанола, изобутанола, третичного бутанола, ацетона, этилацетата и их смешанного растворителя.

[13] Способ получения в соответствии с параграфом [12], который отличается тем, что растворителем является этанол.

[14] Способ получения в соответствии с любым одним из параграфов [11]-[13], который отличается тем, что на стадии 1) количество растворителя, добавляемое на 1 моль соединения формулы I, составляет от 0,2 до 8 л, предпочтительно от 0,3 до 4 л, более предпочтительно от 0,5 до 2 л, наиболее предпочтительно 1 л.

[15] Способ получения в соответствии с любым одним из параграфов [11]-[14], который отличается тем, что на стадии 2) количество малеиновой кислоты, добавляемой на 1 моль соединения формулы I, составляет от 1,0 до 4,0 моль, предпочтительно от 1,6 до 3,0 моль, более предпочтительно от 2,0 до 2,4 моль, наиболее предпочтительно 2,2 моль.

[16] Способ получения в соответствии с любым одним из параграфов [11]-[14], который отличается тем, что на стадии 1), температура нагрева может составлять от 40 до 90°С, предпочтительно от 50 до 80°С, более предпочтительно от 70 до 80°С.

[17] Кристаллическая композиция, которая отличается тем, что, на основании массы кристаллической композиции, кристаллическая форма С в соответствии с любым одним из параграфов [6]-[10] составляет 50% или больше, предпочтительно 80% или больше, более предпочтительно 90% или больше и наиболее предпочтительно 95% или больше.

[18] Фармацевтическая композиция, которая содержит кристаллическую форму С в соответствии с любым одним из параграфов [6]-[10] или кристаллическую композицию в соответствии с параграфом [17] в эффективном количестве.

[19] Использование кристаллической формы С в соответствии с любым одним из параграфов [6][10] или кристаллической композиции в соответствии с параграфом [17] или фармацевтической композиции в соответствии с параграфом [18] для изготовления лекарственного средства для лечения ассоциированного с Toll-подобным рецептором 7 (TLR7) заболевания.

[20] Использование в соответствии с параграфом [19], которое отличается тем, что заболевание представляет собой вирусную инфекцию, в частности инфекцию вируса гепатита, такую как инфекция вируса гепатита В или гепатита С.

[21] Кристаллическая форма D малеата соединения формулы I, которая отличается тем, что она имеет дифракционные пики при 2θ=5,1°±0,2°, 9,5°±0,2°, 11,2°±0,2°, 17,6°±0,2°, 20,2°±0,2°, 23,0°±0,2° в рентгеновском порошковом дифракционном паттерне.

[22] Кристаллическая форма D в соответствии с параграфом [21], которая отличается тем, что она имеет дифракционные пики при 2θ=5,1°±0,2°, 9,5°±0,2°, 11,2°±0,2°, 17,6°±0,2°, 20,2°±0,2°, 20,7°±0,2°, 23,0°±0,2°, 23,7°±0,2° на рентгеновской порошковой дифрактограмме.

[23] Кристаллическая форма D в соответствии с параграфом [22], которая отличается тем, что она имеет дифракционные пики при 2θ=5,1°±0,2°, 5,6°±0,2°, 9,5°±0,2°, 11,2°±0,2°, 16,9°±0,2°, 17,6°±0,2°, 20,2°±0,2°, 20,7°±0,2°, 22,6°±0,2°, 23,0°±0,2°, 23,7°±0,2°, 24,5°±0,2° на рентгеновской порошковой дифрактограмме.

[24] Кристаллическая форма D в соответствии с любым одним из параграфов [21]-[23], которая от-

- 9 038794 личается тем, что кристаллическая форма D имеет рентгеновскую порошковую дифрактограмму, по существу представленную на фиг. 2.

[25] Кристаллическая форма D в соответствии с любым одним из параграфов [21]-[24], которая отличается тем, что, когда характеризуют по DSC, начальная температура составляет 98,3°С±5°С и температура пика составляет 110,1 °С±5°С.

[26] Способ получения кристаллической формы D в соответствии с параграфом [25], который включает следующие стадии:

2) встряхивание при постоянной температуре;

[27] Способ получения в соответствии с любым одним из параграфов [21]-[26], который отличается тем, что на стадии 1) количество ацетона, добавляемое на 1 г кристаллической формы С малеата соединения формулы I, составляет от 2 до 30 мл, предпочтительно от 8 до 24 мл, более предпочтительно от 12 до 20 мл, наиболее предпочтительно от 14 до 16 мл.

[28] Способ получения в соответствии с любым одним из параграфов [21]-[27], который отличается тем, что на стадии 2) постоянная температура составляет от 20 до 60°С, предпочтительно от 30 до 50°С, более предпочтительно от 35 до 45°С, наиболее предпочтительно 40°С.

[29] Кристаллическая композиция, которая отличается тем, что, на основании массы кристаллической композиции, кристаллическая форма D в соответствии с любым одним из параграфов [21]-[25] составляет 50% или больше, предпочтительно 80% или больше, более предпочтительно 90% или больше и наиболее предпочтительно 95% или больше.

[30] Фармацевтическая композиция, которая содержит кристаллическую форму D в соответствии с любым одним из параграфов [21]-[25] или кристаллическую композицию в соответствии с параграфом [29] в эффективном количестве.

[31] Применение кристаллической формы D в соответствии с любым одним из параграфов [21]-[25] или кристаллической композиции в соответствии с параграфом [29] или фармацевтической композиции в соответствии с параграфом [30] для изготовления лекарственного средства для лечения ассоциированного с Toll-подобным рецептором 7 (TLR7) заболевания.

[32] Применение в соответствии с параграфом [31], которое отличается тем, что заболевание представляет собой вирусную инфекцию, в частности инфекцию вируса гепатита, такую как инфекция вируса гепатита В или гепатита С.

[33] Кристаллическая форма Е малеата соединения формулы I, которая отличается тем, что она имеет дифракционные пики при 2θ=4,9°±0,2°, 5,3°±0,2°, 9,0°±0,2°, 16,5°±0,2°, 19,3°±0,2°.

[34] Кристаллическая форма Е в соответствии с параграфом [33], которая отличается тем, что она имеет дифракционные пики при 2θ=4,9°±0,2°, 5,3°±0,2°, 6,7°±0,2°, 9,0°±0,2°, 10,8°±0,2°, 16,5°±0,2°, 19,3°±0,2° на рентгеновской порошковой дифрактограмме.

[35] Кристаллическая форма Е в соответствии с параграфом [34], которая отличается тем, что она имеет дифракционные пики при 2θ=4, 9°±0,2°, 5,3°±0,2°, 6,7°±0,2°, 9,0°±0,2°, 10,8°±0,2°, 16,2°±0,2°, 16,5°±0,2°, 19,3°±0,2°, 22,0°±0,2°, 22,6°±0,2°, 25,9°±0,2° на рентгеновской порошковой дифрактограмме.

[36] Кристаллическая форма Е в соответствии с любым одним из параграфов [33]-[35], которая отличается тем, что кристаллическая форма Е имеет рентгеновский порошковый дифракционный паттерн, по существу представленный на фиг. 3.

[37] Кристаллическая форма Е в соответствии с любым одним из параграфов [33]-[36], которая отличается тем, что, когда характеризуют по DSC, начальная температура составляет 85,7°С±5°С и температура пика составляет 97,5°С±5°С.

[38] Способ получения кристаллической формы Е в соответствии с любым одним из параграфов [33]-[37], который включает следующие стадии:

2) встряхивание при постоянной температуре;

[39] Способ получения в соответствии с параграфом [38], который отличается тем, что, на стадии 1) количество изопропанола, добавляемое на 1 г кристаллической формы С малеата соединения формулы I, составляет от 2 до 30 мл, предпочтительно от 8 до 24 мл, более предпочтительно от 12 до 20 мл, еще более предпочтительно от 14 до 16 мл.

[40] Способ получения в соответствии с параграфами [38] или [39], который отличается тем, что на стадии 2) постоянная температура составляет от 20 до 60°С, предпочтительно от 30 до 50°С, более предпочтительно от 35 до 45°С, еще более предпочтительно 40°С.

[41] Кристаллическая композиция, которая отличается тем, что, на основании массы кристаллической композиции, кристаллическая форма Е в соответствии с любым одним из параграфов [33]-[37] со-

- 10 038794 ставляет 50% или больше, предпочтительно 80% или больше, более предпочтительно 90% или больше и наиболее предпочтительно 95% или больше.

[42] Фармацевтическая композиция, которая содержит кристаллическую форму Е в соответствии с любым одним из параграфов [33]-[37] или кристаллическую композицию в соответствии с параграфом

[41] в эффективном количестве.

[43] Применение кристаллической формы Е в соответствии с любым одним из параграфов [33]-[37], или кристаллической композиции в соответствии с параграфом [41], или фармацевтической композиции в соответствии с параграфом [42] для изготовления лекарственного средства для лечения ассоциированного с Toll-подобным рецептором 7 (TLR7) заболевания.

[44] Применение в соответствии с параграфом [43], которое отличается тем, что заболевание представляет собой вирусную инфекцию, в частности инфекцию вируса гепатита, такую как инфекция вируса гепатита В или гепатита С.

Примеры

В настоящем описании используют следующие сокращения: SEM-Cl: 2(триметилсилил)этоксиметилхлорид; SEM: 2-(триметилсилил)этоксиметил; DIPEA: диизопропилэтиламин; TFA: трифторуксусная кислота; DMF: N,N-диметилформамид; n-BuOH: н-бутанол; NH₃-H₂O: водный аммиак; Na: натрий; XRPD: рентгеновская порошковая дифракция; DSC: дифференциальный тепловой анализ.

В настоящем изобретении рентгеновский дифракционный паттерн определяли следующим образом: аппарат: рентгеновский дифрактометр Bruker D8 ADVANCE; способ: мишень: Cu: K-Alpha; длина волны λ=1,54179 ангстрема; напряжение: 40 кВ; ток: 40 мА; диапазон сканирования: 4-40°; скорость вращения образца: 15 об/мин; скорость сканирования: 10°/мин.

Растворители, используемые в настоящем описании, коммерчески доступны, и их можно использовать без дополнительной очистки. Реакции синтеза в примерах получения в целом осуществляют в инертной атмосфере азота в безводном растворителе. Данные протонного магнитного резонанса регистрируют на спектрометре Bruker Avance III 400 (400 МГц), с химическим сдвигом, представленным в виде (м.д.) при слабом поле тетраметилсилана. Масс-спектрометрию осуществляют на Agilent 1200 plus 6110 (&1956А). LC/MS или Shimadzu MS включает DAD: SPD-M20A(LC) и детектор Shimadzu Micromass 2020. Масс-спектрометр оборудован ионизацией электрораспылением (ESI), работающей в положительном или отрицательном режиме.

Пример получения 1.

Получение малеата 2-бутокси-7-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-5Н-nирроло[3,2-d]пиримидин4-амина.

Формула III: 2,4-дихлор-5-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-5Н-nирроло[3,2-d]пиримидин.

Соединение формулы II (2,4-дихлор-5Н-пирроло[3,2-б]пиримидин) (4,00 кг, 21,28 моль) растворяли в DMF (20,00 л) и по частям добавляли DIPEA (2,58 кг, 20,00 моль) при комнатной температуре (25°С) , после чего следовало перемешивание в течение 30 мин. Реакционную жидкость охлаждали до 0°С с использованием ледяной бани и затем по каплям медленно добавляли SEM-C1 (4,00 кг, 24,00 моль) в течение 5 ч, при скорости капания от 1 до 2 капель в секунду. После добавления реакционную жидкость перемешивали при 0°С в течение 4 ч. Мониторинг реакции осуществляли с помощью HPLC. После завершения реакционную жидкость гасили и разводили в 70 л воды и затем экстрагировали этилацетатом (15 л х3). Объединенную органическую фазу промывали последовательно в 1 М водной соляной кислоте (5 л х2) и насыщенном солевом растворе (7 л х2) и растворитель удаляли посредством дистилляции при пониженном давлении для получения соединения формулы III (6,40 кг, 20,11 моль, выход 94,50%).

1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 8,24-8,35 (м, 1Н), 6,70-6,85 (м, 1Н), 5,77 (с, 2Н), 3,45-3,57 (м, 2Н), 0,74-0,86 (м, 2Н), 0,00 (с, 9Н).

Формула IV: 2-хлор-5-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-5Н-nирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин.

Cl SEM ^^Н2 SEM

A A? A A?

СГ N Cl N

III IV

Соединение формулы III (1,60 кг, 5,03 моль) растворяли в изопропаноле (1,60 л) в 10 л сосуде. Водный аммиак (4 л) добавляли при комнатной температуре (25°С) одной частью и реакционную смесь перемешивали при 95°С в течение 7 ч. Мониторинг реакции осуществляли с помощью HPLC. После завершения реакционную жидкость оставляли остывать до комнатной температуры и фильтровали через

- 11 038794 воронку Бюхнера для получения твердого вещества темно-коричневого цвета. Твердое вещество последовательно разжижали в этилацетате/н-гептане (1/1, 5 л х2) и этилацетате (4 л) для получения соединения формулы IV в виде твердого вещества коричневого цвета (1,25 кг, 4,18 моль, выход 83,1%).

1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 7,61-7,77 (м, 1Н), 6,97-7,19 (м, 2Н), 6,28-6,38 (м, 1Н), 5,54-5,67 (м,

2Н), 3,43-3,53 (м, 2Н), 0,76-0,91 (м, 2Н), 0,07 (с, 9Н).

Формула V: 2-бутокси-5-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин.

В n-BuOH (17,0 л) медленно добавляли металлический натрий (525,05 г, 22,84 моль) по частям под азотом. После добавления температуру системы поднимали до 60°С и перемешивание осуществляли непрерывно при этой температуре до полного растворения металлического натрия. Затем систему охлаждали до 25°С и по частям добавляли соединение формулы IV (1,95 кг, 6,53 моль). После гомогенного смешивания при перемешивании реакционную смесь непрерывно перемешивали в течение 8 ч при 90°С.

Мониторинг реакции осуществляли с помощью HPLC. После завершения реакционную смесь оставляли остывать самопроизвольно до 25 °С и медленно выливали в 30 л насыщенного водного хлорида аммония. Затем реакционную смесь экстрагировали этилацетатом (15 л х3) и объединенную органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (20 л х2), сушили с использованием безводного Na₂SO₄ и фильтровали. После растворитель отгоняли при пониженном давлении, остаток разжижали в нгептане (4л) и твердое вещество отделяли посредством фильтрования и разжижали в этилацетате (5 л) для получения соединения формулы V в виде твердого вещества желто-белого цвета (1,53 кг, 4,55 моль, 69,7%).

1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 7,49-7,54 (м, 1Н), 6,54-6,62 (м, 2Н), 6,15-6,20 (м, 1Н), 5,54 (с, 2Н), 4,10-4,22 (м, 2Н), 3,42-3,55 (м, 2Н), 1,58-1,73 (м, 2Н), 1,35-1,47 (м, 2Н), 0,90-0,96 (м, 3Н), 0,83-0,89 (м, 2Н), 0,05 (с, 9Н).

Формула VI: 2-бутокси-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин.

V VI

Соединение формулы V (1,10 кг, 3,27 моль) растворяли в TFA (5,50 л) и реакционную жидкость пе ремешивали при 25°С в течение 16 ч. Мониторинг реакции осуществляли с помощью HPLC. После завершения TFA удаляли посредством дистилляции при пониженном давлении и остаток растворяли в метаноле (1,2 л) и воде со льдом (1,2 л). рН системы корректировали до 12 концентрированным водным аммиаком при равномерном перемешивании. Смесь перемешивали в течение 2 ч и осадок непрерывно осаждали из раствора. После фильтрования, фильтровальный осадок в виде твердого вещества белого цвета разжижали 15% водным аммиаком (1,2 л х3) и этилацетатом (4 л) последовательно для получения соединения формулы VI в виде твердого вещества белого цвета (550,00 г, 2,67 моль, 81,7%).

1H ЯМР (400 МГц, метанол-б₄) δ 7,37 (д, J=2,89 Гц, 1Н), 6,29 (д, J=3,01 Гц, 1Н), 4,27 (т, J=6,53 Гц, 2Н), 1,75 (д, J=7,91 Гц, 2Н), 1,44-1,61 (м, 2Н), 1,00 (т, J=7,40 Гц, 3Н).

Формула VII: 4-((4-амино-2-бутокси-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)гидроксиметил)бензальдегид.

В трехгорлую колбу добавляли терефталевый альдегид (790,64 мг, 5,82 ммоль) и изопропанол (10 мл), 2-бутокси-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин (1,00 г, 4,85 ммоль) добавляли при перемешивании и систему охлаждали до 0°С и перемешивали в течение еще 10 мин. Добавляли очищенную воду (10 мл), карбонат калия (804,17 мг, 5,82 ммоль) и проводили реакцию при 25°С в течение 16 ч до исчерпания реагентов при мониторинге с помощью LCMS. Твердое вещество осаждали после завершения реакции. После фильтрования получаемое твердое вещество последовательно разжижали в 20 мл очищенной воды и 30 мл (этилацетата/н-гептана=1/20), фильтровали и сушили для получения соединения формулы VII в виде твердого вещества желтого цвета (1,50 г, 4,41 ммоль, выход: 90,9%).

1H ЯМР (400 МГц, метанол-d₄) δ 9,94 (с, 1Н), 7,86 (д, J=8,16 Гц, 2Н), 7,72 (д, J=8,16 Гц, 2Н), 7,127,17 (м, 1Н), 6,19 (с, 1Н), 4,28 (т, J=6,53 Гц, 2Н), 1,68-1,77 (м, 2Н), 1,44-1,54 (м, 2Н), 0,97 (т, J=7,34 Гц, 3Н).

- 12 038794

Формула VIII: тил)фенил)метанол.

(4-амино-2-бутокси-5Н-nирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)(4-(пирролидин-1-илме-

В 30 л реактор добавляли соединение формулы VII (450,0 г, 1,32 моль) и изопропанол (4,5 л) и перемешивали смесь в течение 5 мин. Затем добавляли ледяную уксусную кислоту (119,0 г, 1,98 моль) и температуру снижали до 0-10°С при перемешивании. Пирролидин (112,4 г, 1,58 моль) добавляли по каплям при температуре ниже 10°С. После добавления по частям добавляли триацетоксиборогидрид натрия (420,0 г, 1,98 моль) и проводили реакцию при 10-20°С в течение 3 ч до исчерпания сырья при мониторинге посредством жидкостной хроматографии. После завершения реакции добавляли 5 л очищенной воды, температуру раствора снижали приблизительно до -10°С и в раствор добавляли 12 л 15% водного аммиака при температуре раствора ниже 0°С во время добавления. Твердое вещество осаждали при перемешивании. Осуществляли фильтрование и получаемый фильтровальный осадок разжижали в 2 л воды и 2 л х2 этилацетата. Осуществляли фильтрование и сушку проводили при пониженном давлении при 40°С в течение 12 ч для получения соединения формулы VIII в виде твердого вещества желтого цвета (465,0 г, 1,18 моль, выход 89,4%, влага 0,9%).

1H ЯМР (400 МГц, метанол^) δ 7,46 (д, J=7,91 Гц, 1Н), 7,29 (д, J=8,03 Гц, 1Н), 7,09 (с, 1Н) , 6,12 (с, 1Н), 4,29 (т, J=6,53 Гц, 2Н), 3,60 (с, 2Н), 2,52 (ушир. с, 4Н), 1,66-1,83 (м, 6Н), 1,49 (д, J=7,53 Гц, 2Н), 0,98 (т, J=7,40 Гц, 3Н).

Формула I: 2-бутокси-7-(4-(пирролидин-1-илметил)бензил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин.

В 20 л сосуд добавляли соединение формулы VIII (440,0 г, 1,11 моль) и дихлорметан (7,0 л) и снижали температуру системы ниже -15°С при перемешивании. После в систему по каплям добавляли триэтилсилан (880 мл, 5,55 моль), непрерывно по каплям добавляли трифторуксусную кислоту (880 мл), поддерживая температуру ниже -10°С во время добавления. После добавления реакцию осуществляли при 0°С в течение 2 ч и осуществляли мониторинг посредством жидкостной хроматографии до исчезновения точки сырья. После завершения реакции реакционную жидкость концентрировали досуха и в раствор добавляли 2,2 л этилацетата. Перемешивание осуществляли для снижения температуры ниже 0°С. Затем насыщенный карбонат натрия раствор добавляли для того, чтобы корректировать рН раствора до 9-10, во время чего температуру системы поддерживали ниже 10°С. Осуществляли фильтрование и получаемый фильтровальный осадок разжижали с использованием 2,2 л воды. Осуществляли фильтрование и проводили сушку при пониженном давлении для получения 550 г трифторацетата соединения формулы I в виде твердого вещества белого цвета.

К 1,6 л этанола добавляли 525 г трифторацетата соединения формулы I в виде твердого вещества белого цвета и температуру системы снижали приблизительно до 0°С при перемешивании. Затем добавляли 2,2 л раствора гидроксида натрия 1 моль/л. Осуществляли фильтрование и получаемый фильтровальный осадок разжижали с использованием 2,5 л очищенной воды. Осуществляли фильтрование и проводили сушку при пониженном давлении для получения 380,0 г соединения формулы I в виде твердого вещества.

1H ЯМР (400 МГц, метанол-^) δ 7,27 (д, J=8,0 Гц, 2Н), 7,22 (д, J=8,0 Гц, 2Н), 7,04 (с, 1Н), 4,32 (т, J=6,6 Гц, 2Н), 3,99 (с, 2Н), 3,60 (с, 2Н), 2,55-2,52 (м, 4Н), 1,85-1,71 (м, 6Н), 1,55-1,48 (м, 2Н), 1,00 (т, J=7,4 Гц, 3Н).

Пример 1: получение кристаллической формы С малеата 2-бутокси-7-(4-(пирролидин-1илметил)бензил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина.

К 10 мл этанола добавляли соединение формулы I (3,80 г, 10 ммоль), которое нагревали для растворения. Затем в раствор добавляли малеиновую кислоту (2,55 г, 22 ммоль) и осуществляли перемешивание при нагреве непрерывно, пока раствор был прозрачным. Затем раствор оставляли остывать до комнатной температуры и стоять в течение 1-2 ч. Осадок фильтровали и твердое вещество сушили при пониженном давлении с использованием масляного насоса, чтобы получать кристаллическую форму С малеата соединения формулы I в виде твердого вещества. В получаемом малеате молярное соотношение соединения формулы I и малеиновой кислоты составляло 1:2.

XRPD измеряли следующим образом: аппарат: рентгеновский дифрактометр Bruker D8 ADVANCE; способ: мишень: Cu: K-Alpha; длина волны λ=1,54179 ангстрема; напряжение: 40 кВ; ток: 40 мА; диапа- 13 038794 зон сканирования: 4-40°; скорость вращения образца: 15 об/мин; скорость сканирования: 10°/мин.

Получаемый кристалл соединения имел дифракционные пики по существу как показано на фиг. 1.

Пример 2: получение кристаллической формы D малеата 2-бутокси-7-(4-(пирролидин-1илметил)бензил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина.

К 0,8 мл ацетона добавляли кристаллическую форму С малеата соединения формулы I (50 мг) для того, чтобы формировать суспензию. Образец суспензии встряхивали на термостате (40°С) в течение 2 суток (в темноте). Остаточное твердое вещество центрифугировали и сушили в вакуумной печи при 40°С в течение ночи для получения кристаллической формы D малеата соединения формулы I в виде твердого вещества. В получаемом малеате молярное соотношение соединения формулы I и малеиновой кислоты составляло 1:2.

XRPD измеряли следующим образом: аппарат: рентгеновский дифрактометр Bruker D8 ADVANCE; способ: мишень: Cu: K-Alpha; длина волны λ=1,54179 ангстрема; напряжение: 40 кВ; ток: 40 мА; диапазон сканирования: 4-40°; скорость вращения образца: 15 об/мин; скорость сканирования: 10°/мин.

Получаемый кристалл соединения имел дифракционные пики, по существу, как показано на фиг. 2.

Пример 3: получение кристаллической формы Е малеата 2-бутокси-7-(4-(пирролидин-1илметил)бензил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина.

К 0,8 мл изопропанола добавляли кристаллическую форму С малеата соединения формулы I (50 мг) для того, чтобы формировать суспензию. Образец суспензии встряхивали на термостате (40°С) в течение 2 суток (в темноте). Остаточное твердое вещество центрифугировали и сушили в вакуумной печи при 40°С в течение ночи для получения кристаллической формы Е малеата соединения формулы I в виде твердого вещества. В получаемом малеате молярное соотношение соединения формулы I и малеиновой кислоты составляло 1:2.

Получаемый кристалл соединения имел дифракционные пики, по существу, как показано на фиг. 3.

Пример 4: тест на высокотемпературную стабильность.

Кристаллические формы, полученные в примерах 1-3, тестировали в ускоренном тесте в условиях высоких температур на стабильность в соответствии с Guidelines for the Stability Test of Pharmaceutical Ingredients and Pharmaceutical Preparations (Китайская фармакопея 2010, приложение XIXC).

Кристаллические формы С, D и Е, полученные в примерах 1-3, помещали в открытый чистый контейнер при 60°С соответственно. Образцы брали для теста в сутки 10, сутки 20 и сутки 30 соответственно. Результаты сравнивали с результатом начального теста в сутки 0.

Пример 5: тест на стабильность при высокой влажности.

Кристаллические формы, полученные в примерах 1-3, тестировали в ускоренном тесте в условиях высокой влажности на стабильность в соответствии с Guidelines for the Stability Test of Pharmaceutical Ingredients and Pharmaceutical Preparations (Китайская фармакопея 2010, приложение XIXC).

Кристаллические формы С, D и Е, полученные в примерах 1-3, подвергали ускоренному тесту в сосуде с постоянной температурой и влажностью в условиях 40°С/75% влажность (открыт). Образцы брали для теста в сутки 30, сутки 60 и сутки 90 соответственно.

Результаты сравнивали с результатом начального теста в сутки 0.

Пример 6: световая стабильность.

Кристаллические формы, полученные в примерах 1-3, в условиях освещения тестировали на стабильность в соответствии с Guidelines for the Stability Test of Pharmaceutical Ingredients and Pharmaceutical Preparations (Китайская фармакопея 2010, приложение XIXC).

Кристаллические формы С, D и Е, полученные в примерах 1-3 соответственно, помещали в освещенную среду 5000 лк±500 лк. Образцы брали в сутки 5, сутки 10 и сутки 30. Результаты тестов сравнивали с результатом начального теста в сутки 0.

Примеры фармакологической активности

Пример эффекта 1: скрининг активности связывания рецепторов in vitro для Toll-подобного рецептора 7 и Toll-подобного рецептора 8.

Реактивы.

Клетки HEK-blue hTLR7 и клетки HEK-blue hTLR8 (доступны в InvivoGen).

Среда DMEM.

Инактивированная теплом эмбриональная телячья сыворотка.

Реактив Normocin™ против Mycoplasma.

Блеомицин.

Бластцидин.

Структуру GS-9620 и R848 использовали следующим образом, где получение GS-9620 можно найти в процессе, раскрытом в US 20100143301; R848 коммерчески доступен в ABGENT (IMG-2208, описание: 0,5 мг).

- 14 038794

Схема.

1. Получение 96-луночного планшета с соединениями.

Получали градиент разведений соединений в DMSO 3-кратно с использованием станции для работы с жидкостями POD, начиная с концентрации 10 ммоль/л и разводили 10 точек (со 2-й колонки до 11-й колонки, и каждую точку дублировали). В 12-ю колонку добавляли 1 мкл 5 мг/мл положительного соединения R848 в качестве положительного контроля; и в 1-ю колонку добавляли 1 мкл DMSO в качестве отрицательного контроля. Каждая лунка содержала 1 мкл DMSO.

2. Клетки в культуральной колбе собирали и плотность клеток разводили до 250000 клеток/мл.

3. 200 мкл (50000 клеток/лунка) клеточной суспензии добавляли в полученный планшет с соединениями, и конечная концентрация DMSO в каждой лунке составляла 0,5%.

4. Культуральные планшеты, содержащие клетки и соединения, инкубировали в СО₂ инкубаторе в течение 24 ч при 37°С, 5% СО₂.

5. После 24 ч инкубации 20 мкл супернатанта удаляли из каждой лунки в 96-луночных прозрачный аналитический планшет. В каждую лунку аналитического планшета добавляли 180 мкл реактива QuantiBlue и планшет инкубировали в инкубаторе при 37°С, 5% СО₂ в течение 1 ч.

6. После 1 ч содержание щелочной фосфатазы в 20 мкл супернатанта определяли с использованием Microplate Reader OD650.

7. ЕС5о каждого соединения получали с использованием программного обеспечения Prism.

Результаты представлены в табл. 1.

Таблица 1

Название соединения	TLR7 ЕС₅₀ (нМ)	TLR8 ЕСзо (нМ)
GS-9620	517	7867
Соединение формулы I	160	11632

Как показано в табл. 1, соединение формулы I в соответствии с изобретением демонстрировало более высокую активность связывания рецептора in vitro для Toll-подобного рецептора 7, чем контроль (агонист GS-9620 Toll-подобного рецептора 7), и более низкую активность связывания рецептора in vitro для Toll-подобного рецептора 8, чем контроль (агонист GS-9620 Toll-подобного рецептора 7).

Соединение по настоящему изобретению обладает выраженными различиями в избирательности в отношении различных рецепторов, и эффект превосходит известный уровень техники.

Пример эффекта 2: схема теста с мононуклеарными клетками периферической крови.

Цель этого примера состоит в том, чтобы определять уровень экспрессии цитокинов через 24 ч после стимуляции мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС) человека соединением формулы I.

Клеточный супернатант анализировали без разведения, и уровни IFN-α определяли непосредственно. Соединение формулы I сначала формулировали в 20 мМ стоковом растворе в DMSO и получали градиент разведений клеточной средой 10-кратно при общем числе в 11 точек разведения. Соединения в 9 точках разведения (наивысшая концентрация составляла 200 мкмоль/л) добавляли в 96-луночный планшет по 50 мкл в каждую лунку. Свежие мононуклеарные клетки периферической крови человека инокулировали в каждую лунку по 150 мкл, которые содержали 450000 клеток. Планшет с клеточными культурами инкубировали в инкубаторе при 37°С, 5% СО₂ в течение 24 ч. После инкубации культуральный планшет центрифугировали на 1200 об/мин в течение 5 мин и супернатант собирали и хранили при -20°С для определения. Определение цитокина осуществляли с использованием Cytometric Bead Array (CBA) из BD-Pharmingen на проточном цитометре. Используя вышеуказанный способ определения, наименьшую концентрацию лекарственного средства, которая стимулирует образование 30 пг/мл IFN-α, обозначали как значение МЕС в тесте стимуляции цитокинов. Результаты представлены в табл. 2.

Таблица 2

Название соединения	ΙΕΝ-α МЕС (нМ)	TNF-α МЕС (нМ)
GS-9620	50	500
Соединение формулы I	5	500

Заключение: по сравнению с контролем (GS-9620), соединение формулы I по изобретению демонстрировало более хорошую активность индуцирования IFN-α in vitro в РВМС и сравнимую активность индуцирования TNF-α.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1) размещение кристаллической формы С малеата соединения формулы I по любому из пп.1-4 в растворителе изопропаноле для того, чтобы формировать суспензию;

1 4.9 9 16.5

1) размещение кристаллической формы С малеата соединения формулы I по любому из пп.1-4 в растворителе ацетоне для того, чтобы формировать суспензию;

1 5.1 16 19.6

1) растворение соединения формулы I в растворителе;

1. Кристаллическая форма С малеата соединения формулы I, которая отличается тем, что кристаллическая форма С имеет дифракционные пики при 2θ=7,6°±0,2°, 9,9°±0,2°, 17,8°±0,2°, 22,8°±0,2°, 24,2°±0,2°, 26,3°±0,2° на рентгеновской порошковой дифрактограмме

2) встряхивание при постоянной температуре;

2 5.3 10 17.7

2) встряхивание при постоянной температуре;

2 5.6 17 20.2

2) добавление малеиновой кислоты;

2. Кристаллическая форма С по п.1, которая отличается тем, что кристаллическая форма С имеет дифракционные пики при 2θ=5,6°±0,2°, 7,6°±0,2°, 9,9°±0,2°, 17,8°±0,2°, 19,8°±0,2°, 22,8°±0,2°, 24,2°±0,2°, 25,0°±0,2°, 26,3°±0,2° на рентгеновской порошковой дифрактограмме.

3 6.7 11 19.3

3 7.0 18 20.7

3) охлаждение для кристаллизации, фильтрования, промывания и сушки для получения кристаллической формы С, где растворитель представляет собой этанол.

3. Кристаллическая форма С по п.1, которая отличается тем, что кристаллическая форма С имеет дифракционные пики при 2θ=5,6°±0,2°, 6,0°±0,2°, 7,6°±0,2°, 9,9°±0,2°, 12,0°±0,2°, 15,3°±0,2°, 17,8°±0,2°, 18,5°±0,2°, 19,8°±0,2°, 20,4°±0,2°, 22,8°±0,2°, 23,1°±0,2°, 24,2°±0,2°, 24,7°±0,2°, 25,0°±0,2°, 26,3°±0,2° на рентгеновской порошковой дифрактограмме.

4 8.2 12 22.0

4 8.7 19 21.4

4. Кристаллическая форма С по любому из пп.1-3, которая отличается тем, что кристаллическая форма С имеет дифракционные пики в следующих положениях на рентгеновской порошковой дифрактограмме:

5 8.6 13 22.6

5 9.5 20 22.6

5. Способ получения кристаллической формы С по любому из пп.1-4, который включает следующие стадии:

6 9.0 14 24.3

6 10.3 21 23.0

6. Кристаллическая форма D малеата соединения формулы I, которая отличается тем, что кристаллическая форма D имеет дифракционные пики при 2θ=5,1°±0,2°, 9,5°±0,2°, 11,2°±0,2°, 17,6°±0,2°, 20,2°±0,2°, 23,0°±0,2° на рентгеновской порошковой дифрактограмме

7 10.8 15 25.9

7 11.2 22 23.7

7. Кристаллическая форма D по п.6, которая отличается тем, что кристаллическая форма D имеет дифракционные пики при 2θ=5,1°±0,2°, 9,5°±0,2°, 11,2°±0,2°, 17,6°±0,2°, 20,2°±0,2°, 20,7°±0,2°, 23,0°±0,2°, 23,7°±0,2° на рентгеновской порошковой дифрактограмме.

8 16.2 16 27.1

8 12.0 23 24.5

8. Кристаллическая форма D по п.6, которая отличается тем, что кристаллическая форма D имеет дифракционные пики при 2θ=5,1°±0,2°, 5,6°±0,2°, 9,5°±0,2°, 11,2°±0,2°, 16,9°±0,2°, 17,6°±0,2°, 20,2°±0,2°, 20,7°±0,2°, 22,6°±0,2°, 23,0°±0,2°, 23,7°±0,2°, 24,5°±0,2° на рентгеновской порошковой дифрактограмме.

9 14.2 24 26.4

9. Кристаллическая форма D по любому из пп.6-8, которая отличается тем, что кристаллическая форма D имеет дифракционные пики в следующих положениях на рентгеновской порошковой дифракто грамме:

Номер 20±О.2(°) Номер 20±О.2(°)

10. Способ получения кристаллической формы D по любому из пп.6-9, который включает следующие стадии:

10 16.2 25 27.1

11. Кристаллическая форма Е малеата соединения формулы I, которая отличается тем, что кристаллическая форма Е имеет дифракционные пики при 2θ=4,9°±0,2°, 5,3°±0,2°, 9,0°±0,2°, 16,5°±0,2°, 19,3°±0,2° на рентгеновской порошковой дифрактограмме

11 16.9 26 27.7

12. Кристаллическая форма Е по п.11, которая отличается тем, что кристаллическая форма Е имеет дифракционные пики при 2θ=4,9°±0,2°, 5,3°±0,2°, 6,7°±0,2°, 9,0°±0,2°, 10,8°±0,2°, 16,5°±0,2°, 19,3°±0,2° на рентгеновской порошковой дифрактограмме.

12 17.6 27 28.4

13. Кристаллическая форма Е по п.11, которая отличается тем, что кристаллическая форма Е имеет дифракционные пики при 2θ=4,9°±0,2°, 5,3°±0,2°, 6,7°±0,2°, 9,0°±0,2°, 10,8°±0,2°, 16,2°±0,2°, 16,5°±0,2°,

19,3°±0,2°, 22,0°±0,2°, 22,6°±0,2°, 25,9°±0,2° на рентгеновской порошковой дифрактограмме.

13 18.3 28 28.8

14. Кристаллическая форма Е по любому из пп.11-13, которая отличается тем, что кристаллическая форма Е имеет дифракционные пики в следующих положениях на рентгеновской порошковой дифрактограмме:

Номер 20± 0.2(°) Номер 20± 0.2(°)

14 18.8 29 30.7

15. Способ получения кристаллической формы Е по любому из пп.11-14, который включает следующие стадии:

15 19.2

16. Фармацевтическая композиция, которая отличается тем, что она содержит кристаллическую форму С по любому из пп.1-4, кристаллическую форму D по любому из пп.6-9, кристаллическую форму Е по любому из пп.11-14 или любое их сочетание в эффективном количестве.

- 16 038794

17. Применение кристаллической формы С по любому из пп.1-4, кристаллической формы D по любому из пп.6-9, кристаллической формы Е по любому из пп.11-14 или фармацевтической композиции по п.16 для изготовления лекарственного средства для лечения заболевания, ассоциированного с Tollподобным рецептором 7.

- 17 038794

18. Применение по п.17, отличающееся тем, что заболевание, ассоциированное с Toll-подобным рецептором 7, представляет собой инфекцию вируса гепатита В или гепатита С.