EA037813B1 - Антитела к il-17c - Google Patents
Антитела к il-17c Download PDFInfo
- Publication number
- EA037813B1 EA037813B1 EA201891594A EA201891594A EA037813B1 EA 037813 B1 EA037813 B1 EA 037813B1 EA 201891594 A EA201891594 A EA 201891594A EA 201891594 A EA201891594 A EA 201891594A EA 037813 B1 EA037813 B1 EA 037813B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- antibody
- seq
- region
- antibody fragment
- amino acid
- Prior art date
Links
- 102000013691 Interleukin-17 Human genes 0.000 title claims abstract description 182
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 title claims abstract description 182
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims abstract description 249
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims abstract description 249
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims abstract description 106
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 31
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 114
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 33
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 32
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 25
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 25
- 101000998177 Mus musculus Interleukin-17C Proteins 0.000 claims description 24
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 11
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 10
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 abstract description 61
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 abstract description 40
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 abstract description 40
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 abstract description 10
- 241000282412 Homo Species 0.000 abstract description 6
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract 1
- LWQQLNNNIPYSNX-UROSTWAQSA-N calcipotriol Chemical compound C1([C@H](O)/C=C/[C@@H](C)[C@@H]2[C@]3(CCCC(/[C@@H]3CC2)=C\C=C\2C([C@@H](O)C[C@H](O)C/2)=C)C)CC1 LWQQLNNNIPYSNX-UROSTWAQSA-N 0.000 description 45
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 44
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 41
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 40
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 38
- 238000000034 method Methods 0.000 description 31
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 30
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 29
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 29
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 27
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 27
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 27
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 27
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 25
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 25
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 25
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 22
- 102100035016 Interleukin-17 receptor E Human genes 0.000 description 20
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 20
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 20
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 17
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 17
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 16
- 101001019590 Homo sapiens Interleukin-17 receptor E Proteins 0.000 description 15
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 15
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 15
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 14
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 14
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 14
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 14
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 13
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 13
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 13
- 241000894007 species Species 0.000 description 13
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 12
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 12
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 12
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 11
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 11
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 11
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 10
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 10
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 10
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 9
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 9
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 9
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 9
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 9
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 8
- 101000595467 Homo sapiens T-complex protein 1 subunit gamma Proteins 0.000 description 8
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 8
- 208000005141 Otitis Diseases 0.000 description 8
- 102100036049 T-complex protein 1 subunit gamma Human genes 0.000 description 8
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 8
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 8
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 8
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 8
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 8
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 7
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 7
- 102000017761 Interleukin-33 Human genes 0.000 description 7
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 7
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 7
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 7
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 7
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 7
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 7
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 6
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101000845170 Homo sapiens Thymic stromal lymphopoietin Proteins 0.000 description 6
- 101710186076 Interleukin-17 receptor E Proteins 0.000 description 6
- 102100031294 Thymic stromal lymphopoietin Human genes 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 6
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 6
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 6
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 6
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 6
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000011503 in vivo imaging Methods 0.000 description 6
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 6
- 101100454807 Caenorhabditis elegans lgg-1 gene Proteins 0.000 description 5
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102100035018 Interleukin-17 receptor A Human genes 0.000 description 5
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 5
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 5
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 5
- 210000000744 eyelid Anatomy 0.000 description 5
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 5
- 102100023698 C-C motif chemokine 17 Human genes 0.000 description 4
- 108010052495 Calgranulin B Proteins 0.000 description 4
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 description 4
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 4
- 101000978362 Homo sapiens C-C motif chemokine 17 Proteins 0.000 description 4
- 101001019598 Homo sapiens Interleukin-17 receptor A Proteins 0.000 description 4
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 4
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 4
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 4
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 4
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 4
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 4
- 101001019589 Mus musculus Interleukin-17 receptor E Proteins 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 4
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 4
- 102100032420 Protein S100-A9 Human genes 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 208000010217 blepharitis Diseases 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 4
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 4
- 208000037851 severe atopic dermatitis Diseases 0.000 description 4
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 description 4
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 description 4
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 4
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 4
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 3
- 102100039619 Granulocyte colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 3
- 101000746367 Homo sapiens Granulocyte colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 3
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 3
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 3
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 3
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 description 3
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 description 3
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000036566 epidermal hyperplasia Effects 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 3
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 3
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 3
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- OZFAFGSSMRRTDW-UHFFFAOYSA-N (2,4-dichlorophenyl) benzenesulfonate Chemical compound ClC1=CC(Cl)=CC=C1OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 OZFAFGSSMRRTDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(2-ethylhexyl) sulfosuccinate Chemical compound CCCCC(CC)COC(=O)CC(S(O)(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005084 2D-nuclear magnetic resonance Methods 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 208000019028 Epidermal thickening Diseases 0.000 description 2
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 101000998146 Homo sapiens Interleukin-17A Proteins 0.000 description 2
- 101000998178 Homo sapiens Interleukin-17C Proteins 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 2
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 2
- 102100033105 Interleukin-17C Human genes 0.000 description 2
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 2
- 101100046493 Mus musculus Tmem79 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 2
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 2
- 102100032442 Protein S100-A8 Human genes 0.000 description 2
- 108700012920 TNF Proteins 0.000 description 2
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 229960002882 calcipotriol Drugs 0.000 description 2
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 229910052805 deuterium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- 238000002424 x-ray crystallography Methods 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010173 Alzheimer-disease mouse model Methods 0.000 description 1
- 206010003645 Atopy Diseases 0.000 description 1
- 101710125298 Beta-defensin 2 Proteins 0.000 description 1
- 101710176951 Beta-defensin 4A Proteins 0.000 description 1
- 102100038326 Beta-defensin 4A Human genes 0.000 description 1
- 101000693922 Bos taurus Albumin Proteins 0.000 description 1
- YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N C16 ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO)[C@H](O)C=CCCCCCCCCCCCCC YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N 0.000 description 1
- 101150087628 CSF3 gene Proteins 0.000 description 1
- 229940122739 Calcineurin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101710192106 Calcineurin-binding protein cabin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100024123 Calcineurin-binding protein cabin-1 Human genes 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 108010072220 Cyclophilin A Proteins 0.000 description 1
- 108010068682 Cyclophilins Proteins 0.000 description 1
- 102000001493 Cyclophilins Human genes 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N Deuterium Chemical group [2H] YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- 206010014025 Ear swelling Diseases 0.000 description 1
- 108010092408 Eosinophil Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000044708 Eosinophil peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 208000035874 Excoriation Diseases 0.000 description 1
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 description 1
- 102000002090 Fibronectin type III Human genes 0.000 description 1
- 108050009401 Fibronectin type III Proteins 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 102100037009 Filaggrin-2 Human genes 0.000 description 1
- 101000884714 Homo sapiens Beta-defensin 4A Proteins 0.000 description 1
- 101000878281 Homo sapiens Filaggrin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101001023833 Homo sapiens Neutrophil gelatinase-associated lipocalin Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 IL-1e Proteins 0.000 description 1
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 1
- 108010017525 Interleukin-17 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 101710186083 Interleukin-17 receptor A Proteins 0.000 description 1
- 102100033461 Interleukin-17A Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 101000998145 Mus musculus Interleukin-17A Proteins 0.000 description 1
- CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N N-acetylsphinganine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)[C@H](CO)NC(C)=O CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N 0.000 description 1
- 102100035405 Neutrophil gelatinase-associated lipocalin Human genes 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102100034539 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase A Human genes 0.000 description 1
- 229940122907 Phosphatase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 240000001987 Pyrus communis Species 0.000 description 1
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 102000001400 Tryptase Human genes 0.000 description 1
- 108060005989 Tryptase Proteins 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 208000010216 atopic IgE responsiveness Diseases 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 108091006004 biotinylated proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000000125 calcaemic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 description 1
- ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)NC(CO)C(O)C=CCCC=C(C)CCCCCCCCC ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 101150070926 ct gene Proteins 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 229940097957 dexamethasone 2 mg Drugs 0.000 description 1
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 1
- 230000010093 eczematous lesion Effects 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 230000002444 effect on eosinophils Effects 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 210000005175 epidermal keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- OCLXJTCGWSSVOE-UHFFFAOYSA-N ethanol etoh Chemical compound CCO.CCO OCLXJTCGWSSVOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000763 evoking effect Effects 0.000 description 1
- 238000002270 exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 1
- 230000009454 functional inhibition Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N newbouldiamide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)C(O)C(CO)NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 238000000164 protein isolation Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 238000003571 reporter gene assay Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 230000008591 skin barrier function Effects 0.000 description 1
- RWVGQQGBQSJDQV-UHFFFAOYSA-M sodium;3-[[4-[(e)-[4-(4-ethoxyanilino)phenyl]-[4-[ethyl-[(3-sulfonatophenyl)methyl]azaniumylidene]-2-methylcyclohexa-2,5-dien-1-ylidene]methyl]-n-ethyl-3-methylanilino]methyl]benzenesulfonate Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C(=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C)C=2C(=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C)C=C1 RWVGQQGBQSJDQV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 1
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 230000036269 ulceration Effects 0.000 description 1
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- QYSXJUFSXHHAJI-YRZJJWOYSA-N vitamin D3 Chemical class C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-YRZJJWOYSA-N 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/244—Interleukins [IL]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение предусматривает антитела или фрагменты антител, которые связываются с IL-17C человека. В частности, оно относится к антителам или фрагментам антител, которые характеризуются комбинированными полезными свойствами и, таким образом, являются применимыми для лечения людей, например, с атопическим дерматитом или псориазом.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Заявка на данное изобретение относится к антителам или фрагментам антител, которые взаимодействуют с IL-17C человека. Настоящее изобретение также относится к нуклеиновым кислотам, векторам и клеткам-хозяевам, способным экспрессировать указанные антитела или их фрагменты, к фармацевтическим композициям, содержащим указанные антитела или их фрагменты, и к вариантам применения указанных антител или их фрагментов для лечения определенных заболеваний.
Предпосылки изобретения
IL-17C представляет собой секретируемый гомодимер из семейства белков IL17. In vitro было показано, что IL-17C стимулирует высвобождение TNF-α и IL-1 β из моноцитов линии ТНР-1 (Li et al. (2000), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97, 773-8). IL-17C может индуцировать экспрессию мРНК, кодирующей воспалительные цитокины, такие как IL-1e, IL-6 и IL-23, в клетках перитонеального экссудата (РЕС) и в линии клеток 3T3 (Yamaguchi et al. (2007), J. Immunol 179, 7128-36).
Роль IL-17C в качестве провоспалительного цитокина, играющего важную роль в иммунологической защите, была изложена в нескольких исследованиях (Chang et al. (2011, Immunity, 35, 611-621, Song et al. (2011), Nature Immunology, 12, 12, Ramirez-Carrozzi et al. (2011), Nature Immunology, 12, 12). Также недавно была показана потенциальная роль в прогрессировании конкретных опухолей и раковых тканей (Xinyang Song (2014), Immunity, 40, 140-152).
Недавно в патентном документе WO 2013/057241 с помощью эксперимента установили, что ингибирование IL-17C является перспективным подходом в лечении воспалительных нарушений. Тем не менее соответствующие антитела, используемые в патентном документе WO 2013/057241, являются суррогатными антителами, специфичными в отношении IL-17C мыши, но было показано, что они вообще не являются реактивными в отношении IL-17C человека. Помимо этого, уже были предложены дополнительные антитела, являющиеся антагонистами по отношению IL-17C, (например, в патентном документе WO 1999/060127), но они являются или поликлональными сыворотками, или суррогатными антителами, которые специфически связывают только IL-17C мыши.
Соответственно, существует необходимость в изучении и выявлении антител, которые связывают IL-17C человека для уменьшения тяжести обусловленных IL-17C заболеваний или нарушений у человека.
Краткое описание изобретения
В настоящем изобретении представлены новые антитела и фрагменты антител. Антитела и фрагменты антител, раскрытые в данном документе, связывают IL-17C человека и также перекрестно реагируют с IL-17C от макака-крабоеда и мышей. Кроме того, раскрытые антитела ингибируют связывание IL-17C с его рецептором среди соответствующих видов - человека, мыши и макака-крабоеда, - при концентрации IC50, составляющей 80 пМ или меньше. Как раскрыто и подтверждено в примерах в данном документе, доказано, что указанные антитела являются эффективными в разных мышиных моделях in vivo атопического дерматита и псориаза.
Таким образом, раскрытые антитела или фрагменты антител являются наилучшими в плане эффективности и обеспечивают подходящие и перспективные соединения для лечения людей, например, с атопическим дерматитом или псориазом.
Настоящее изобретение предусматривает антитела или фрагменты антител, которые связывают IL-17C человека, имеющие участки CDR, согласно табл. 1 настоящего описания. Настоящее изобретение также предусматривает специфические антитела или фрагменты антител, имеющие вариабельный участок тяжелой цепи, вариабельные участки CDR легкой цепи, содержащие аминокислотные последовательности согласно табл. 1 настоящего описания.
Настоящее изобретение также предусматривает специфические антитела или фрагменты антител, которые конкурируют со специфическими антителами или фрагментами антител, раскрытыми в данном документе. Настоящее изобретение также предусматривает специфические антитела или фрагменты антител, которые связываются с тем же самым эпитопом, что и специфические антитела или фрагменты антител, раскрытые в данном документе.
Настоящее изобретение также предусматривает выделенные антитела или фрагменты антител по настоящему изобретению для применения в медицине.
Настоящее изобретение также предусматривает способы лечения субъекта, страдающего от нарушения, такого как воспалительное нарушение, путем введения указанному субъекту эффективного количества антител или фрагментов антител по настоящему изобретению. Предпочтительно указанный субъект является человеком.
Настоящее изобретение также предусматривает фармацевтические композиции, содержащие выделенные антитела или фрагменты антител по настоящему изобретению и фармацевтически приемлемый носитель.
Настоящее изобретение также обеспечивает нуклеиновые кислоты, кодирующие антитела или фрагменты антител по настоящему изобретению.
Настоящее изобретение также предусматривает векторы, содержащие нуклеиновые кислоты, коди- 1 037813 рующие антитела или фрагменты антител по настоящему изобретению.
Настоящее изобретение также предусматривает клетку-хозяина, содержащую вектор или нуклеиновые кислоты, кодирующие антитела или фрагменты антител по настоящему изобретению.
Заявленные антитела или фрагменты антител являются полезными. Более того, заявленный способ является полезным для определения таких антител или фрагментов.
Заявленные антитела или фрагменты антител используются для изменения биологической активности IL-17C человека. В частности, заявленные антитела или фрагменты антител предназначены для терапевтического применения, как, например, для лечения воспалительных нарушений, таких как, например, ревматоидный артрит, псориаз, воспаление легких, COPD, и/или для лечения атопического дерматита (AD), в том числе AD со степенью тяжести от умеренной до тяжелой.
Краткое описание графических материалов
Фиг. 1: Дозозависимое предупреждение утолщения уха, вызванного местным нанесением МС903 на кожу уха, с помощью МАВ#1.
Данные выражены в виде средних значений ± стандартная ошибка среднего (SEM) (n=8 на группу). Статистическую значимость относительно MC903+MOR03207 рассчитывали с использованием дисперсионного анализа и апостериорного множественного сравнения Даннета: *р<0,05; **р<0,01; ***р<0,001. (DEX: дексаметазон; EtOH: этанол).
Фиг. 2: Дозозависимое уменьшение воспаления уха, вызванного местным нанесением МС903 на кожу уха, с помощью МАВ#1.
Воспаление уха оценивали в день 5, используя визуализацию in vivo. Левая панель: количественная оценка интенсивности сигнала в ушах. Отдельные точки данных (n=8 на группу) представляют усредненную интенсивность для обоих ушей; данные также показаны в виде средних значений (горизонтальные линии) ± SEM. Статистическую значимость относительно MC903+MOR03207 рассчитывали с использованием дисперсионного анализа и апостериорного множественного сравнения Даннета: *p<0,05; **p<0,01; ***p<0,001. Правая панель: репрезентативные изображения мышиных ушей от животных из разных групп лечения получали с помощью устройства Bruker in vivo Xtreme Imager через 24 ч после инъекции зонда Prosense 680. (DEX: дексаметазон; EtOH: этанол).
Фиг. 3: Дозозависимое уменьшение утолщения эпидермального и дермального слоев кожи, вызванного местным нанесением МС903 на кожу уха, с помощью МАВ#1.
Данные представлены в виде отдельных точек данных (n=8 на группу) и средних значений (горизонтальные линии) ± SEM. Статистическую значимость относительно MC903+MOR03207 рассчитывали с использованием дисперсионного анализа и апостериорного множественного сравнения Даннета: *p<0,05; **p<0,01; ***p<0,001. Левая панель: данные по толщине эпидермиса; правая панель: данные по толщине дермы.
Фиг. 4: Дозозависимое ингибирование MC903-опосредованного повышения экспрессии TSLP и IL-33 в ухе и уровней TARC в плазме крови с помощью МАВ#1.
Данные представлены в виде отдельных точек данных (n=8 на группу) и средних значений (горизонтальные линии) ± SEM. Статистическую значимость относительно группы MC903+MOR03207 рассчитывали с использованием дисперсионного анализа и апостериорного множественного сравнения Даннета: *p<0,05; **p<0,01; ***p<0,001. Верхняя левая панель: данные по экспрессии белка TSLP в ухе; нижняя левая панель: данные по экспрессии белка IL-33 в ухе; верхняя правая панель: данные по уровням белка TARC в плазме крови.
Фиг. 5: Дозозависимое уменьшение утолщения уха, вызванное местным нанесением МС903 на кожу уха, с помощью терапевтического введения МАВ#1.
Данные выражены в виде средних значений ± SEM (n=10 на группу). Статистическую значимость относительно MC903+MOR03207 рассчитывали с использованием дисперсионного анализа и апостериорного множественного сравнения Даннета: *p<0,05; **p<0,01; ***p<0,001. (DEX: дексаметазон; EtOH: этанол).
Фиг. 6: Дозозависимое уменьшение воспаления уха, вызванного местным нанесением МС903 на кожу уха, с помощью терапевтического введения МАВ#1.
Воспаление уха оценивали в день 12 с использованием визуализации in vivo, и при этом интенсивность сигнала в ушах представлена графически. Отдельные точки данных (n=10 на группу) представляют среднюю интенсивность для обоих ушей; данные также показаны в виде средних значений (горизонтальные линии) ± SEM. Статистическую значимость относительно MC903+MOR03207 рассчитывали с использованием дисперсионного анализа и апостериорного множественного сравнения Даннета: *p<0,05; **p<0,01; ***p<0,001. (DEX: дексаметазон; EtOH: этанол).
Фиг. 7: Дозозависимое уменьшение утолщения эпидермального и дермального слоев кожи, вызванного местным нанесением МС903 на кожу уха, с помощью терапевтического введения МАВ#1.
Данные представлены в виде отдельных точек данных (n=10 на группу) и средних значений (горизонтальные линии) ± SEM. Статистическую значимость относительно MC903+MOR03207 рассчитывали с использованием дисперсионного анализа и апостериорного множественного сравнения Даннета:
- 2 037813 *p<0,05; **p<0,01; ***p<0,001. Левая панель: данные по толщине эпидермиса; правая панель: данные по толщине дермы. (DEX: дексаметазон; EtOH: этанол).
Фиг. 8: Дозозависимое снижение инфильтрации дермы эозинофилами, Т-клетками и тучными клетками с помощью терапевтического введения МАВ#1.
Данные представлены в виде отдельных точек данных (n=10 на группу) и средних значений (горизонтальные линии) ± SEM. Статистическую значимость относительно MC903+MOR03207 рассчитывали с использованием дисперсионного анализа и апостериорного множественного сравнения Даннета: *p<0,05; **p<0,01; ***p<0,001. Верхняя левая панель: данные по эозинофилам; верхняя правая панель: данные по тучным клеткам; нижняя левая панель: данные по Т-клеткам. (DEX: дексаметазон; EtOH: этанол).
Фиг. 9: Снижение экспрессии IL-33, IL-4 и S100A9, которая была по-прежнему повышена в день 16 (11 дней после прекращения нанесения МС903), с помощью терапевтического введения МАВ#1.
Данные представлены в виде отдельных точек данных (n=10 на группу) и средних значений (горизонтальные линии) ± SEM. Статистическую значимость относительно группы MC903+MOR03207 рассчитывали с использованием дисперсионного анализа и апостериорного множественного сравнения Даннета: *p<0,05; **p<0,01; ***p<0,001. Верхняя левая панель: данные по экспрессии мРНК S100A9 в ухе; нижняя левая панель: данные по экспрессии мРНК IL-4 в ухе; верхняя правая панель: данные по уровням белка IL-33 в ухе.
Фиг. 10: Снижение макроскопических клинических признаков AD-подобного воспаления в спонтанной и хронической модели чешуйчатого хвоста с помощью МАВ#1.
Клиническую оценку в баллах воспаления кожи для каждой мыши проводили в начале (неделя 0) и в конце (неделя 6) обработки. Данные представляют собой среднее значение ± SD для каждой группы обработки (n=8 на группу). Статистическую значимость относительно группы, обработанной изотипическим антителом, рассчитывали с использованием дисперсионного анализа и апостериорного множественного сравнения Даннета: (*p<0,05; **p< 0,01; ***p< 0,001).
Фиг. 11: Снижение подобного экзематозному воспаления глазных век в спонтанной и хронической модели чешуйчатого хвоста с помощью МАВ#1.
Воспаление кожи век оценивали в баллах в конце обработки (неделя 6). Данные представляют собой среднее значение ± SD для каждой группы обработки (n=8 на группу). Статистическую значимость относительно группы, обработанной изотипическим антителом, рассчитывали с использованием дисперсионного анализа и апостериорного множественного сравнения Даннета: (*p<0,05; **p<0,01; ***p<0,001).
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к ряду антител или фрагментов антител, которые распознают IL-17C человека.
Определения.
Термин IL-17C относится к белку, известному как интерлейкин 17С.
IL-17C человека имеет следующую аминокислотную последовательность (UniProt Q9P0M4):
MTLLPGLLFLTWLHTCLAHHDPSLRGHPHSHGTPHCYSAEELPLGQAPPHLLA
RGAKWGQALPVALVSSLEAASHRGRHERPSATTQCPVLRPEEVLEADTHQR
SISPWRYRVDTDEDRYPQKLAFAECLCRGCIDARTGRETAALNSVRLLQSLLV
LRRRPCSRDGSGLPTPGAFAFHTEFIHVPVGCTCVLPRSV (SEQ ID No.: 1)
IL-17C мыши имеет следующую аминокислотную последовательность (UniProt Q8K4C5): MSLLLLGWLPTGMTHQDPPSWGKPRSHRTLRCYSAEELSHGQAPPHLLTRS
ARWEQALPVALVASLEATGHRRQHEGPLAGTQCPVLRPEEVLEADTHERSIS PWRYRIDTDENRYPQKLAVAECLCRGCINAKTGRETAALNSVQLLQSLLVLRR QPCSRDGTADPTPGSFAFHTEFIRVPVGCTCVLPRSTQ (SEQ ID No.: 2)
IL-17C макака-крабоеда имеет следующую аминокислотную последовательность (ХР_005592825.1): MTLLPGLLFLTWLHACLAHQDPFLRGHPHTHGTPRCYSAEELPLGQAPPHLLA RGAKWGQALPVALVSSLEAAGHRRRHDRPSAATQCPVLRPEEVLEADTHQR SISPWRYRVDTDEDRYPQKLAFAECLCRGCIDPRTGRETAALNSVRLLQSLLV LRRRPCSRDGSGLPTPGAFAFHTEFIRVPVGCTCVLPRSV (SEQ ID No.: 3)
Термин IL17RA относится к белку, известному как рецептор А интерлейкина 17. IL17RA человека характеризуется следующей аминокислотной последовательностью (UniProt Q96F46):
- 3 037813
MGAARSPPSAVPGPLLGLLLLLLGVLAPGGASLRLLDHRALVCSQPGLNCTVKNSTC LDDSWIHPRNLTPSSPKDLQIQLHFAHTQQGDLFPVAHIEWTLQTDASILYLEGAELS VLQLNTNERLCVRFEFLSKLRHHHRRWRFTFSHFVVDPDQEYEVTVHHLPKPIPDG DPNHQSKNFLVPDCEHARMKVTTPCMSSGSLWDPNITVETLEAHQLRVSFTLWNES THYQILLTSFPHMENHSCFEHMHHIPAPRPEEFHQRSNVTLTLRNLKGCCRHQVQIQ PFFSSCLNDCLRHSATVSCPEMPDTPEPIPDYMPLWVYWFITGISILLVGSVILLIVCM TWRLAGPGSEKYSDDTKYTDGLPAADLIPPPLKPRKVWIIYSADHPLYVDVVLKFAQ FLLTACGTEVALDLLEEQAISEAGVMTWVGRQKQEMVESNSKIIVLCSRGTRAKWQ ALLGRGAPVRLRCDHGKPVGDLFTAAMNMILPDFKRPACFGTYVVCYFSEVSCDGD VPDLFGAAPRYPLMDRFEEVYFRIQDLEMFQPGRMHRVGELSGDNYLRSPGGRQL RAALDRFRDWQVRCPDWFECENLYSADDQDAPSLDEEVFEEPLLPPGTGIVKRAPL VREPGSQACLAIDPLVGEEGGAAVAKLEPHLQPRGQPAPQPLHTLVLAAEEGALVA AVEPGPLADGAAVRLALAGEGEACPLLGSPGAGRNSVLFLPVDPEDSPLGSSTnMA SPDLLPEDVREHLEGLMLSLFEQSLSCQAQGGCSRPAMVLTDPHTPYEEEQRQSV QSDQGYISRSSPQPPEGLTEMEEEEEEEQDPGKPALPLSPEDLESLRSLQRQLLFR QLQKNSGWDTMGSESEGPSA (SEQ ID No.: 4)
Термин IL17RE относится к белку, известному как рецептор Е интерлейкина 17. IL17RE человека характеризуется следующей аминокислотной последовательностью (UniProt Q8NFR9):
MGSSRLAALLLPLLLIVIDLSDSAGIGFRHLPHWNTRCPLASHTDDSFTGSSAYIPCRT WWALFSTKPWCVRVWHCSRCLCQHLLSGGSGLQRGLFHLLVQKSKKSSTFKFYRR HKMPAPAQRKLLPRRHLSEKSHHISIPSPDISHKGLRSKRTQPSDPETWESLPRLDS QRHGGPEFSFDLLPEARAIRVTISSGPEVSVRLCHQWALECEELSSPYDVQKIVSGG HTVELPYEFLLPCLCIEASYLQEDTVRRKKCPFQSWPEAYGSDFWKSVHFTDYSQH TQMVMALTLRCPLKLEAALCQRHDWHTLCKDLPNATARESDGWYVLEKVDLHPQL CFKFSFGNSSHVECPHQTGSLTSWNVSMDTQAQQLILHFSSRMHATFSAAWSLPG LGQDTLVPPVYTVSQARGSSPVSLDLIIPFLRPGCCVLVWRSDVQFAWKHLLCPDVS YRHLGLLILALLALLTLLGWLALTCRRPQSGPGPARPVLLLHAADSEAQRRLVGALA ELLRAALGGGRDVIVDLWEGRHVARVGPLPWLWAARTRVAREQGTVLLLWSGADL RPVSGPDPRAAPLLALLHAAPRPLLLLAYFSRLCAKGDIPPPLRALPRYRLLRDLPRL LRALDARPFAEATSWGRLGARQRRQSRLELCSRLEREAARLADLG (SEQ ID No.: 5) IL17RE мыши имеет аминокислотную последовательность (UniProt Q8BH06):
MGSPRLAALLLSLPLLLIGLAVSARVACPCLRSWTSHCLLAYRVDKRFAGLQWGWF PLLVRKSKSPPKFEDYWRHRTPASFQRKLLGSPSLSEESHRISIPSSAISHRGQRTK RAQPSAAEGREHLPEAGSQKCGGPEFSFDLLPEVQAVRVTIPAGPKASVRLCYQW ALECEDLSSPFDTQKIVSGGHTVDLPYEFLLPCMCIEASYLQEDTVRRKKCPFQSWP EAYGSDFWQSIRFTDYSQHNQMVMALTLRCPLKLEASLCWRQDPLTPCETLPNATA QESEGWYILENVDLHPQLCFKFSFENSSHVECPHQSGSLPSWTVSMDTQAQQLTL HFSSRTYATFSAAWSDPGLGPDTnMPPVYSISQTQGSVPVTLDLIIPFLRQENCILVW RSDVHFAWKHVLCPDVSHRHLGLLILALLALTALVGWLVLLGRRLLPGSGRTRPVLL LHAADSEAQRRLVGALAELLRTALGGGRDVIVDLWEGTHVARIGPLPWLWAARERV AREQGTVLLLWNCAGPSTACSGDPQAASLRTLLCAAPRPLLLAYFSRLCAKGDIPRP LRALPRYRLLRDLPRLLRALDAQPATLASSWSHLGAKRCLKNRLEQCHLLELEAAKD DYQGSTNSPCGFSCL (SEQ ID No.: 6)
Термины антагонист IL-17C и IL-17C-антагонист используются взаимозаменяемо в данном документе, и они относятся к любой молекуле, которая ингибирует активность или функцию IL-17C. Термин антагонист IL-17C включает без ограничения антитела или фрагменты антител, специфически связывающиеся с IL-17C Предпочтительно антагонист IL-17C в настоящем изобретении представляет собой антитело, специфичное в отношении IL-17C человека. Такое антитело может быть любого типа, такое как антитело мыши, крысы, химерное, гуманизированное антитело или антитело человека.
Используемый в данном документе термин антитело относится к белку, содержащему по меньшей мере две тяжелые (H) цепи и две легкие (L) цепи, связанные между собой дисульфидными связями, которые взаимодействуют с антигеном. Каждая тяжелая цепь состоит из вариабельного участка тяжелой цепи (в настоящем документе сокращенно VH) и константного участка тяжелой цепи. Константный участок тяжелой цепи состоит из трех доменов, СН1, СН2 и CH3. Каждая легкая цепь состоит из вариабельного участка легкой цепи (в настоящем документе сокращенно VL) и константного участка легкой цепи. Константный участок легкой цепи состоит из одного домена - CL. Участки VH и VL можно дополнительно подразделить на участки гипервариабельности, называемые определяющими комплементарность
- 4 037813 участками (CDR), которые чередуются с более консервативными участками, называемыми каркасными участками (FR). Каждая из VH и VL состоит из трех CDR и четырех FR, расположенных от аминоконца к карбоксиконцу в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4. Вариабельные участки тяжелой и легкой цепей содержат связывающий домен, который взаимодействует с антигеном. Константные участки антител могут опосредовать связывание иммуноглобулина с тканями или факторами хозяина, включая различные клетки иммунной системы (например, эффекторные клетки) и первый компонент (C1q) классической системы комплемента. Термин антитело включает, например, моноклональные антитела, антитела человека, гуманизированные антитела, верблюжьи антитела и химерные антитела. Антитела могут относиться к любому изотипу (например, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA и IgY), классу (например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, lgA1 и lgA2) или подклассу. Как легкая, так и тяжелая цепи подразделяются на участки структурной и функциональной гомологии.
Используемая в данном документе фраза фрагмент антитела относится к одной или нескольким частям антитела, которые сохраняют способность специфически взаимодействовать (например, путем связывания, стерического несоответствия, стабилизирующего пространственного распределения) с антигеном. Примеры связывающих фрагментов включают без ограничения Fab-фрагмент, моновалентный фрагмент, состоящий из доменов VL, VH, CL и СН1; F(ab)2-фрагмент, бивалентный фрагмент, содержащий два Fab-фрагмента, связанных дисульфидным мостиком в шарнирном участке; Fd-фрагмент, состоящий из доменов VH и СН1; Fv-фрагмент, состоящий из доменов VL и VH одного плеча антитела, dAb-фрагмент (Ward et al. (1989), Nature, 341:544-546), который состоит из домена VH; и выделенный участок, определяющий комплементарность (CDR). Более того, несмотря на то, что два домена Fv-фрагмента, VL и VH, кодируются отдельными генами, их можно соединить с применением рекомбинантных способов с помощью синтетического линкера, который позволяет образовать им единую белковую цепь, в которой участки VL и VH соединяются попарно с образованием моновалентных молекул (известных как одноцепочечные Fv (scFv), см., например, Bird et al. (1988), Science, 242:423-426; and Huston et al. (1988), Proc. Natl. Acad. Sci. 85:5879-5883). Подразумевается, что такие одноцепочечные антитела также охвачены выражением фрагмент антитела. Эти фрагменты антитела получают, используя традиционные методики, известные специалистам в данной области техники, и фрагменты проверяют на пригодность таким же образом, как и интактные антитела. Фрагменты антител также могут быть включены в однодоменные антитела, макситела, мини-тела, внутриклеточные антитела, диатела, триатела, тетратела, v-NAR и bis-scFv (см., например, Hollinger and Hudson, (2005), Nature Biotechnology, 23:11261136). Фрагменты антител можно прививать к остовам на основе полипептидов, таких как фибронектин типа III (Fn3) (см. патент США № 6703199, в котором описываются монотела на основе полипептида, представляющего собой фибронектин). Фрагменты антител могут быть включены в одноцепочечные молекулы, содержащие пару тандемных Fv-сегментов (VH-CH1-VH-CH1), которые вместе с комплементарными полипептидами легкой цепи образуют пару антигенсвязывающих участков (Zapata et al. (1995), Protein Eng. 8:1057-1062; и патент США № 5641870).
Используемое в данном документе выражение антитело человека или фрагмент антитела человека включает антитела и фрагменты антител, содержащие вариабельные участки, в которых и каркасные, и CDR-участки получены из последовательностей человеческого происхождения. Кроме того, если антитело содержит константный участок, тогда константный участок также получен из таких последовательностей. Источники человеческого происхождения включают, например, последовательности зародышевой линии человека или мутантные версии последовательностей зародышевой линии человека или антитела, содержащего консенсусные каркасные последовательности, полученные в результате анализа каркасных последовательностей человека, например, как описано в Knappik et al. (2000), J. Mol. Biol. 296:5786).
Структуры и местоположения вариабельных доменов иммуноглобулинов, например CDR, можно определять с применением хорошо известных схем нумерации, например схемы нумерации по Kabat, схемы нумерации по Chothia или комбинации схем по Kabat и Chothia (см., например, Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services (1991), eds. Kabat et al., Lazikani et al. (1997), J. Mol. Bio. 273:927-948); Kabat et al. (1991), Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th edit., NIH Publication no. 91-3242 U.S. Department of Health and Human Services; Chothia et al. (1987), J. Mol. Biol. 196:901-917; Chothia et al. (1989), Nature, 342:877-883; и Al-Lazikani et al. (1997), J. Mol. Biol. 273:927-948.
В данном документе выражения гуманизированное антитело или фрагмент гуманизированного антитела определены как молекула антитела, которая имеет константные участки антитела, полученные из последовательностей человеческого происхождения, и при этом вариабельные участки антитела и их части или только CDR получены от другого вида. Например, гуманизированное антитело может быть с привитыми CDR, где CDR вариабельного домена имеют происхождение, отличное от человеческого, тогда как один или несколько каркасов вариабельного домена имеют человеческое происхождение, и константный домен (если таковой имеется) имеет человеческое происхождение.
Термин химерное антитело или фрагмент химерного антитела определен в данном документе как молекула антитела, которая содержит константные участки антитела, полученные из последователь- 5 037813 ностей, встречающихся у одного вида, и вариабельные участки антитела, происходящие из другого вида, или соответствующие им. Предпочтительно константные участки антитела получены из последовательностей, встречающихся у людей, или соответствуют им, а вариабельные участки антитела (например,
VH-, VL-, CDR- или FR-участки) получены из последовательностей, встречающихся у животного, отличного от человека, например мыши, крысы, кролика или хомячка.
Термин выделенный относится к соединению, которое может представлять собой, например, антитело или фрагмент антитела, которое(который) практически не содержит других антител или фрагментов антител, характеризующихся отличной антигенной специфичностью. Более того, выделенное антитело или фрагмент антитела могут практически не содержать другой клеточный материал и/или химические вещества. Таким образом, согласно некоторым аспектам предусмотренные антитела представляют собой выделенные антитела, которые были отделены от антител с отличной специфичностью. Выделенное антитело может представлять собой моноклональное антитело. Выделенное антитело может представлять собой рекомбинантное моноклональное антитело. Выделенное антитело, которое специфически связывается с эпитопом, изоформой или вариантом мишени, может, однако, характеризоваться перекрестной реактивностью с другими родственными антигенами, например, из других видов (например, видов-гомологов).
Термин рекомбинантное антитело, используемое в данном документе, включает все антитела, которые получены, экспрессированы, созданы или выделены с помощью не существующих в природе способов. Например, антитела, выделенные из клетки-хозяина, трансформированы так, чтобы экспрессировать антитело, антитела, выбранные и выделенные из рекомбинантной комбинаторной библиотеки антител человека, и антитела, полученные, экспрессированные, созданные или выделенные с помощью любых других способов, которые включают сплайсинг всего или части гена иммуноглобулина человека, последовательностей для других последовательностей ДНК или антител, выделенных из животного (например, мыши), которые являются трансгенными или трансхромосомальными по отношению к генам иммуноглобулина человека или полученной из них гибридомы. Предпочтительно такие рекомбинантные антитела содержат вариабельные участки, в которых каркасные и CDR-участки получены из последовательностей иммуноглобулинов зародышевой линии человека. В определенных вариантах осуществления, однако, такие рекомбинантные антитела человека можно подвергать мутагенезу in vitro (или, если применяют животное, трансгенное по последовательностям Ig человека, соматическому мутагенезу in vivo), и, таким образом, аминокислотные последовательности VH- и VL-участков рекомбинантных антител представляют собой последовательности, которые, поскольку получены из последовательностей VH и VL зародышевой линии человека и родственны им, в естественных условиях могут не встречаться в пределах репертуара антител зародышевой линии человека in vivo. Рекомбинантное антитело может представлять собой моноклональное антитело. В одном из вариантов осуществления антитела и фрагменты антител, раскрытые в данном документе, выделены из библиотеки антител Ylanthia®, раскрытой в US 13/321564 или US 13/299367, оба из которых включены в данный документ посредством ссылки.
В контексте данного документа термин моноклональное антитело относится к препарату молекул антител одной молекулярной композиции. Композиция моноклонального антитела характеризуется уникальным участком связывания с уникальной специфичностью связывания и аффинностью к конкретным эпитопам.
Используемый в данном документе термин связывается специфично с, специфично связывается с, является специфичным к/в отношении или специфично распознает или тому подобный относится к измеряемым и воспроизводимым взаимодействиям, таким как связывание между мишенью и антителом или фрагментом антитела, что является определяющим для наличия мишени в присутствии гетерогенной популяции молекул, в том числе биологических молекул. Например, антитело или фрагмент антитела, которые специфично связываются с мишенью (которая может являться антигеном или эпитопом антигена), представляют собой антитело или фрагмент антитела, которые связывают данную мишень с более высокой аффинностью, авидностью, более легко и/или с большей продолжительностью, чем связываются с другими мишенями. В определенных вариантах осуществления антитело или фрагмент антитела специфически связываются с эпитопом на белке, который является консервативным среди белков из различных видов. В другом варианте осуществления специфическое связывание может включать исключительное связывание, но не требует его. Антитела или фрагменты антител, раскрытые в данном документе, специфически связываются с IL-17C человека. Предпочтительно раскрытые антитела или фрагменты антител, специфичные в отношении IL-17C человека, специфически связываются с IL-17C от другого вида, таким как IL-17C от мыши, крысы, макака-резуса и/или макака-крабоеда. Еще более предпочтительно антитела или фрагменты антител, раскрытые в данном документе, являются специфичными в отношении IL-17C человека, IL-17C макака-крабоеда и IL-17C мыши. Способы определения того, специфически ли связываются две молекулы, хорошо известны в данной области и включают, например, стандартный анализ ELISA. Оценку в баллах можно проводить с помощью стандартного проявления окрашивания (например, с применением вторичного антитела с пероксидазой хрена и тетраметилбензидина с перекисью водорода). Реакцию в определенных лунках оценивают по оптической плотности, например, при 450 нм. Типичный фон (=отрицательная реакция) может соответствовать 0,1 OD; типичная положи- 6 037813 тельная реакция может соответствовать 1 OD. Это означает, что различие положительной/отрицательной реакции может быть более чем 5-кратным. Как правило, определение специфичности связывания осуществляют с применением не одного эталонного антигена, а набора приблизительно из трех-пяти неродственных антигенов, таких как белки сухого молока, BSA, трансферрин и т.п.
Термин авидность применяется для описания общей силы взаимодействий между белками за счет множества связей. Авидность отличается от аффинности, которая описывает силу отдельной связи. Как таковая, авидность представляет собой общую синергическую силу аффинностей связывания (функциональную аффинность), а не сумму связей. С помощью антител по настоящему изобретению оба антигенсвязывающих участка из пар VH/VL одновременно взаимодействуют с IL-17C. Хотя каждое взаимодействие за счет единичного связывания легко может быть нарушено (в зависимости от относительной аффинности), поскольку в одно и то же время имеют место взаимодействия за счет множественных связей, временное отсутствие связывания одного участка не позволяет молекуле диффундировать, и связывание такого участка, вероятно, восстанавливается. Общий эффект заключается в синергическом, сильном связывании антигена с антителом.
В контексте данного документа термин аффинность относится к силе взаимодействия между полипептидом и его мишенью в одном участке. В пределах каждого участка связывающая область полипептида взаимодействует с его мишенью во множестве участков посредством слабых нековалентных сил; чем больше взаимодействий, тем сильнее аффинность.
Используемый в данном документе термин KD относится к константе диссоциации, которая получена из соотношения Kd и Ka (т.е. Kd/Ka) и которая выражается в виде молярной концентрации (М). Значения KD для антигенсвязывающих частиц, таких как, например, моноклональные антитела, можно определить с применением способов, хорошо известных из уровня техники. Способами определения KD для антигенсвязывающей частицы, такой как, например, моноклональное антитело, являются SET (равновесное титрование раствора) или метод поверхностного плазмонного резонанса с применением биосенсорной системы, такой как система Biacore®. В настоящем изобретении антитело, специфичное к IL-17C, как правило, характеризуется константой скорости диссоциации (KD) (koff/kon), составляющей менее 5х10-2 М, менее 10-2 М, менее 5х10-3 М, менее 10-3 М, менее 5х10-4 М, менее 10-4 М, менее 5х10-5 М, менее 10-5 М, менее 5х10-6 М, менее 10-6 М, менее 5х10-7 М, менее 10-7 М, менее 5х10-8 М, менее 10-8 М, менее 5х10-9 М, менее 10-9 М, менее 5х10-10 М, менее 5х10-10 М, менее 5х10-11 М, менее 10-11 М, менее 5х10-12 М, менее 10-12 М, менее 5х10-13 М, менее 10-13 М, менее 5х 10-14 М, менее 10-14 М, менее 5х 10-15 М или менее 10-15 М, или меньше.
Выражение перекрестно конкурирует означает способность антитела, фрагмента антитела или других антигенсвязывающих частиц препятствовать связыванию других антител, фрагментов антител или антигенсвязывающих частиц со специфическим антигеном в стандартном анализе конкурентного связывания. Способность или степень, с которой антитело, фрагмент антитела или другие антигенсвязывающие частицы способны препятствовать связыванию другого антитела, фрагмента антитела или антигенсвязывающих частиц с определенным антигеном, и, таким образом, их способность перекрестно конкурировать в соответствии с настоящим изобретением можно определить с применением стандартных анализов конкурентного связывания. В одном подходящем анализе используется технология Biacore (например, с применением прибора BIAcore 3000 (Biacore, Уппсала, Швеция)), с помощью которого можно измерить степень взаимодействия, используя технологию на основе поверхностного плазмонного резонанса. В другом анализе для измерения перекрестной конкуренции применяется подход на основе ELISA. Высокопроизводительный способ эпитоп-специфической сортировки антител, основанный на их перекрестной конкуренции, описан в международной заявке на патент WO 2003/48731. Перекрестная конкуренция имеет место, если исследуемые антитело или фрагмент антитела обеспечивают снижение связывания одного из описанных в табл. 1 антител с IL-17C на 60% или больше, в частности, на 70% или больше и, более конкретно, на 80% или больше и если одно из описанных в табл. 1 антител обеспечивает снижение связывания указанного антитела или фрагмента антитела с IL-17C на 60% или больше, в частности, на 70% или больше и, более конкретно, на 80% или больше.
Термин эпитоп включает любой белковый участок, который специфически распознается антителом или его фрагментом или Т-клеточным рецептором или иным образом взаимодействует с молекулой. Обычно эпитопы представляют собой химически активные поверхностные группы молекул, таких как аминокислоты или боковые цепи углеводов или сахаров, и обычно могут обладать специфическими характеристиками трехмерной структуры, а также специфическими характеристиками заряда. Как будет понятно специалисту в данной области техники, практически все, с чем антитело может специфически связываться, может представлять собой эпитоп.
Выражение связывает тот же эпитоп, что и означает способность антитела, фрагмента антитела или другой антигенсвязывающей частицы связываться со специфическим антигеном и связываться с тем же самым эпитопом, что и иллюстративное антитело при использовании той же самой методики картирования эпитопов для сравнения антител. Эпитопы иллюстративного антитела и других антител можно определять с помощью методик картирования эпитопов. Методики картирования эпитопов хорошо из- 7 037813 вестны в данной области техники. Например, конформационные эпитопы легко идентифицируются путем определения пространственной конформации аминокислот, например, с помощью метода на основе водород-дейтериевого обмена, рентгеноструктурной кристаллографии и двухмерной ядерной магнитнорезонансной спектроскопии.
Композиции по настоящему изобретению можно использовать для терапевтических или профилактических способов применения. Настоящее изобретение, таким образом, предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую антитело (или функциональный фрагмент антитела), раскрытые в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное вещество для них. В связанном аспекте в настоящем изобретении предусматривается способ лечения воспалительного нарушения. Такой способ включает стадии введения субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества фармацевтической композиции, которая содержит антитело (или функциональный фрагмент антитела), описанные или рассмотренные в данном документе.
В настоящем изобретении предусмотрены терапевтические способы, включающие введение терапевтически эффективного количества раскрытого антитела к IL-17C субъекту, нуждающемуся в таком лечении. Используемое в данном документе выражение терапевтически эффективное количество или эффективное количество относится к количеству антитела к IL-17C, необходимому для получения необходимого биологического ответа. В соответствии с заявленным изобретением терапевтически эффективным количеством является количество антитела к IL-17C, требуемое для лечения и/или предупреждения заболевания.
Используемый в данном контексте термин субъект или вид относится к любому млекопитающему, включая грызунов, таких как мышь или крыса, и приматов, таких как макак-крабоед (Macaca fascicularis), макак-резус(Macaca mulatta) или люди (Homo sapiens). Предпочтительно субъектом является примат, наиболее предпочтительно человек.
Варианты осуществления.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, специфичным в отношении IL-17C, где указанные антитело или фрагмент антитела содержат:
(а) участок HCDR1, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 7, участок HCDR2, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.:8, участок HCDR3, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.:9, участок LCDR1, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 13, участок LCDR2, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 14, и участок LCDR3, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 15; или (b) участок HCDR1, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 20, участок HCDR2, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.:21, участок HCDR3, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.:22, участок LCDR1, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.:26, участок LCDR2, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 27, и участок LCDR3, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 28.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, специфичным в отношении IL-17C, где указанные антитело или фрагмент антитела содержат участок HCDR1 под SEQ ID No.: 7, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 8, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 9, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 13, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 14 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 15 или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 20, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 21, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 22, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 26, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 27 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 28.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, специфичным в отношении IL-17C, где указанные антитело или фрагмент антитела содержат:
(а) участок HCDR1, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 10, участок HCDR2, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.:11, участок HCDR3, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.:12, участок LCDR1, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.:13, участок LCDR2, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 14, и участок LCDR3, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 15; или (b) участок HCDR1, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 23, участок HCDR2, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.:24, участок HCDR3, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.:25, участок LCDR1, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.:26, участок LCDR2, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 27, и участок LCDR3, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 28.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, специфичным в отношении IL-17C, где указанные антитело или фрагмент антитела содержат
- 8 037813 участок HCDR1 под SEQ ID No.: 10, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 11, участок HCDR3 под
SEQ ID No.: 12, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 13, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 14 и участок
LCDR3 под SEQ ID No.: 15 или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 23, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 24, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 25, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 26, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 27 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 28.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, специфичным в отношении IL-17C, где указанные антитело или фрагмент антитела содержат:
(a) участок HCDR1, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 7, участок HCDR2, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 8, участок HCDR3, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 9, участок LCDR1, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 13, участок LCDR2, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 14, и участок LCDR3, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 15; или (b) участок HCDR1, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 10, участок HCDR2, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.:11, участок HCDR3, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.:12, участок LCDR1, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.:13, участок LCDR2, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 14, и участок LCDR3, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 15; или (c) участок HCDR1, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 20, участок HCDR2, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.:21, участок HCDR3, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.:22, участок LCDR1, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.:26, участок LCDR2, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 27, и участок LCDR3, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 28; или (d) участок HCDR1, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 23, участок HCDR2, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.:24, участок HCDR3, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.:25, участок LCDR1, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.:26, участок LCDR2, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 27, и участок LCDR3, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 28.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, специфичным в отношении IL-17C, где указанные антитело или фрагмент антитела содержат участок HCDR1 под SEQ ID No.: 7, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 8, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 9, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 13, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 14 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 15; или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 10, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 11, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 12, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 13, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 14 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 15; или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 20, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 21, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 22, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 26, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 27 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 28; или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 23, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 24, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 25, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 26, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 27 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 28.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения антитело или фрагмент антитела специфически связывается с IL-17C человека.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения антитело или фрагмент антитела представляет собой моноклональное антитело или фрагмент антитела.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения антитело или фрагмент антитела представляют собой человеческие, гуманизированные или химерные антитело или фрагмент антитела. В другом варианте осуществления настоящего изобретения антитело или фрагмент антитела относятся к изотипу IgG. В другом варианте осуществления антитело или фрагмент антитела представляют собой IgG1
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, специфичным в отношении IL-17C, где указанные антитело или фрагмент антитела содержат участок HCDR1 под SEQ ID No.: 7, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 8, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 9, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 13, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 14 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 15 и дополнительно содержат тяжелую цепь под SEQ ID No.: 17 или легкую цепь под SEQ ID No.: 16; или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 10, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 11, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 12, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 13, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 14 и участок
- 9 037813
LCDR3 под SEQ ID No.: 15 и дополнительно содержат тяжелую цепь под SEQ ID No.: 17 или легкую цепь под SEQ ID No.: 16;, или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 20, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 21, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 22, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 26, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 27 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 28, и дополнительно содержат тяжелую цепь под SEQ ID No.: 30 или легкую цепь под SEQ ID No.: 29; или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 23, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 24, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 25, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 26, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 27 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 28, и дополнительно содержат тяжелую цепь под SEQ ID No.: 30 или легкую цепь под SEQ ID No.: 29.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, специфичным в отношении IL-17C, где указанные антитело или фрагмент антитела содержат тяжелую цепь под SEQ ID No.: 17 и легкую цепь под SEQ ID No.: 16.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, специфичным в отношении IL-17C, где указанные антитело или фрагмент антитела содержат тяжелую цепь под SEQ ID No.: 30 и легкую цепь под SEQ ID No.: 29.
В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, специфичным в отношении IL-17C, где указанные антитело или фрагмент антитела содержат тяжелую цепь под SEQ ID No.: 43 и легкую цепь под SEQ ID No.: 42.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, специфичным в отношении IL-17C, где указанные антитело или фрагмент антитела содержат тяжелую цепь под SEQ ID No.: 56 и легкую цепь под SEQ ID No.: 55.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения антитело или фрагмент антитела представляют собой выделенное антитело или фрагмент антитела.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения антитело или фрагмент антитела представляют собой рекомбинантное антитело или фрагмент антитела.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, специфичным в отношении IL-17C для применения в лечении нарушения или состояния, ассоциированных с нежелательным присутствием IL-17C.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к композиции на основе нуклеиновой кислоты, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты или множество последовательностей нуклеиновой кислоты, кодирующих антитело или фрагмент антитела, специфичных в отношении IL-17C, где указанные антитело или фрагмент антитела содержат участок HCDR1 под SEQ ID No.: 7, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 8, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 9, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 13, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 14 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 15; или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 10, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 11, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 12, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 13, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 14 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 15; или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 20, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 21, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 22, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 26, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 27 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 28; или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 23, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 24, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 25, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 26, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 27 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 28.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к композиции на основе вектора, содержащей вектор или множество векторов, содержащих последовательность нуклеиновой кислоты или множество последовательностей нуклеиновой кислоты, кодирующих антитело или фрагмент антитела, раскрытые в табл. 1.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к клетке, содержащей композицию на основе вектора, содержащую вектор или множество векторов, содержащих последовательность нуклеиновой кислоты или множество последовательностей нуклеиновой кислоты, кодирующих антитело или фрагмент антитела, раскрытые в табл. 1.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей антитело или фрагмент антитела, раскрытые в табл. 1, и фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное вещество.
В одном варианте осуществления указанные антитело или фрагмент антитела, специфичные к IL-17C, блокируют связывание IL-17C с рецептором IL-17C. В дополнительном варианте осуществления указанные антитело или фрагмент антитела, специфичные к IL-17C, блокируют связывание IL-17C с рецептором IL-17C, где указанный рецептор представляет собой IL17RE. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, специфичным в отношении IL-17C, где указанные антитело или фрагмент антитела блокируют связывание IL-17C с IL17RE. В дру- 10 037813 гом варианте осуществления указанные антитело или фрагмент антитела содержат участок HCDR1 под SEQ ID No.: 7, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 8, участок HCDR3 под
SEQ ID No.: 9, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 13, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 14 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 15; или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 10, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 11, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 12, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 13, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 14 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 15; или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 20, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 21, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 22, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 26, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 27 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 28; или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 23, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 24, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 25, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 26, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 27 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 28.
В другом варианте осуществления указанные антитело или фрагмент антитела содержат тяжелую цепь под SEQ ID No.: 17 и легкую цепь под SEQ ID No.: 16, или тяжелую цепь под SEQ ID No.: 30 и легкую цепь под SEQ ID No.: 29, или тяжелую цепь и легкую цепь, которые характеризуются по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентичностью с тяжелой цепью под SEQ ID No.: 17 или 30 и легкой цепью под SEQ ID No.: 16 или 29.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, специфичным к IL-17C, где указанные антитело или фрагмент антитела бивалентно связываются с гомодимером IL-17C и образуют комплекс, состоящий из указанных антитела или фрагмента антитела и одного гомодимера IL-17C, и где указанные антитело или фрагмент антитела блокируют связывание IL-17C с IL17RE.
В определенных вариантах осуществления указанные антитело или фрагмент антитела, специфичные в отношении IL-17C, блокируют связывание IL-17C с одним или несколькими рецепторами IL-17C. В другом варианте осуществления указанные антитело или фрагмент антитела содержат участок HCDR1 под SEQ ID No.: 7, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 8, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 9, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 13, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 14 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 15; или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 10, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 11, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 12, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 13, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 14 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 15; или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 20, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 21, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 22, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 26, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 27 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 28; или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 23, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 24, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 25, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 26, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 27 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 28.
В другом варианте осуществления указанные антитело или фрагмент антитела содержат тяжелую цепь под SEQ ID No.: 17 и легкую цепь под SEQ ID No.: 16, или тяжелую цепь под SEQ ID No.: 30 и легкую цепь под SEQ ID No.: 29, или тяжелую цепь и легкую цепь, которые характеризуются по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентичностью с тяжелой цепью под SEQ ID No.: 17 или 30 и легкой цепью под SEQ ID No.: 16 или 29.
В альтернативных вариантах осуществления указанные антитело или фрагмент антитела, специфичные в отношении рецептора IL-17C, блокируют связывание IL-17C с рецепторами IL-17C, где рецепторы IL-17C включают IL17RE и IL17RA. В альтернативных вариантах осуществления указанные антитело или фрагмент антитела, специфичные в отношении рецептора IL-17C, блокируют связывание IL17C с IL17RE и IL17RA. В определенных аспектах указанные антитело или фрагмент антитела, специфичные в отношении IL-17C, блокируют связывание IL-17C с IL17RE при концентрации IC50 менее 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40 30, 20, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 и 1 нМ, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 пМ. В определенных аспектах концентрацию IC50 можно определить с помощью ELISA; SET, FACS или MSD (Meso Scale Discovery). В другом аспекте концентрация IC50 может быть определена с помощью способа, описанного в данном документе в примере 3. В другом варианте осуществления указанные антитело или фрагмент антитела содержат тяжелую цепь под SEQ ID No.: 17 и легкую цепь под SEQ ID No.: 16, или тяжелую цепь под SEQ ID No.: 30 и легкую цепь под SEQ ID No.: 29, или тяжелую цепь и легкую цепь, которые характеризуются по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентичностью с тяжелой цепью под SEQ ID No.: 17 или 30 и легкой цепью под SEQ ID No.: 16 или 29.
В одном варианте осуществления раскрытые антитело или фрагмент антитела являются специфичными в отношении IL-17C человека. В дополнительном варианте осуществления раскрытые антитело
- 11 037813 или фрагмент антитела, специфичные в отношении IL-17C, перекрестно реагируют с IL-17C других видов, таким как IL-17C мыши, крысы, макака-резуса и/или макака-крабоеда. В другом варианте осуществления антитело или фрагмент антитела являются специфичными в отношении IL-17C человека, IL-17C макака-крабоеда и IL-17C мыши. В дополнительном варианте осуществления антитело или фрагмент антитела являются специфичными в отношении IL-17C человека, IL-17C макака-крабоеда и IL-17C мыши. В другом варианте осуществления антитело или фрагмент антитела являются специфичными в отношении IL-17C человека, IL-17C макака-крабоеда и IL-17C мыши, где указанные антитело или фрагмент антитела содержат участок HCDR1 под SEQ ID No.: 7, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 8, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 9, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 13, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 14 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 15; или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 10, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 11, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 12, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 13, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 14 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 15; или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 20, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 21, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 22, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 26, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 27 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 28; или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 23, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 24, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 25, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 26, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 27 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 28.
В другом варианте осуществления указанные антитело или фрагмент антитела содержат тяжелую цепь под SEQ ID No.: 17 и легкую цепь под SEQ ID No.: 16, или тяжелую цепь под SEQ ID No.: 30 и легкую цепь под SEQ ID No.: 29, или тяжелую цепь и легкую цепь, которые характеризуются по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентичностью с тяжелой цепью под SEQ ID No.: 17 или 30 и легкой цепью под SEQ ID No.: 16 или 29.
В еще одном варианте осуществления раскрытые антитело или фрагмент антитела специфически связываются с IL-17C человека, IL-17C макака-крабоеда и IL-17C мыши и блокируют связывание IL-17C человека, IL-17C макака-крабоеда и IL-17C мыши с их специфическим рецептором IL17RE при концентрации IC50 менее 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 нМ, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 пМ. В другом аспекте указанное антитело представлено в формате IgG1 В другом варианте осуществления указанную концентрацию IC50 определяют в анализе ингибирования связывания рецепторов, описанном в примере 3.
В еще одном варианте осуществления раскрытые антитело или фрагмент антитела специфически связываются с IL-17C человека и блокируют связывание IL-17C человека с IL17RE человека при концентрации IC50 менее 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 нМ, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 пМ. В другом аспекте указанное антитело представлено в формате IgG1. В других вариантах осуществления указанную концентрацию IC50 определяют в анализе ингибирования связывания рецепторов, описанном в примере 3.
В еще одном варианте осуществления раскрытые антитело или фрагмент антитела специфически связываются с IL-17C макака-крабоеда и блокируют связывание IL-17C макака-крабоеда с IL17RE макака-крабоеда при концентрации IC50 менее 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 нМ, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 пМ. В другом аспекте указанное антитело представлено в формате IgG1. В других вариантах осуществления указанную концентрацию IC50 определяют в анализе ингибирования связывания рецепторов, описанном в примере 3.
В еще одном варианте осуществления раскрытые антитело или фрагмент антитела специфически связываются с IL-17C человека, IL-17C макака-крабоеда и IL-17C мыши и блокируют связывание IL-17C человека, IL-17C макака-крабоеда и IL-17C мыши с IL17RE человека, IL17RE макака-крабоеда и IL17RE мыши соответственно при концентрации IC50 для каждого, составляющей менее 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 нМ, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 пМ. В предпочтительном варианте осуществления указанные антитело или фрагмент антитела содержат участок HCDR1 под SEQ ID No.: 7, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 8, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 9, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 13, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 14 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 15; или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 10, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 11, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 12, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 13, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 14 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 15; или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 20, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 21, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 22, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 26, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 27 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 28; или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 23, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 24, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 25, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 26, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 27 и участок
- 12 037813
LCDR3 под SEQ ID No.: 28.
В другом варианте осуществления указанные антитело или фрагмент антитела содержат тяжелую цепь под SEQ ID No.: 17 и легкую цепь под SEQ ID No.: 16, или тяжелую цепь под SEQ ID No.: 30 и легкую цепь под SEQ ID No.: 29, или тяжелую цепь и легкую цепь, которые характеризуются по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентичностью с тяжелой цепью под SEQ ID No.: 17 или 30 и легкой цепью под SEQ ID No.: 16 или 29. В другом аспекте указанное антитело представлено в формате IgG1. В других вариантах осуществления указанную концентрацию IC50 определяют в анализе ингибирования связывания рецепторов, описанном в примере 3.
В еще одном варианте осуществления раскрытые антитело или фрагмент антитела ингибируют контролируемую с помощью IL-17C человека, IL-17C макака-крабоеда и IL-17C мыши активацию репортерного гена NF-кВ в клетках NIH3T3 при концентрации IC50, составляющей менее 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 пМ. В предпочтительном варианте осуществления указанные антитело или фрагмент антитела содержат участок HCDR1 под SEQ ID No.: 7, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 8, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 9, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 13, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 14 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 15; или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 10, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 11, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 12, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 13, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 14 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 15; или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 20, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 21, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 22, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 26, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 27 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 28; или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 23, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 24, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 25, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 26, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 27 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 28.
В другом варианте осуществления указанные антитело или фрагмент антитела содержат тяжелую цепь под SEQ ID No.: 17 и легкую цепь под SEQ ID No.: 16, или тяжелую цепь под SEQ ID No.: 30 и легкую цепь под SEQ ID No.: 29, или тяжелую цепь и легкую цепь, которые характеризуются по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентичностью с тяжелой цепью под SEQ ID No.: 17 или 30 и легкой цепью под SEQ ID No.: 16 или 29. В другом аспекте указанное антитело представлено в формате IgG1. В других вариантах осуществления указанную концентрацию IC50 определяют в анализе с репортерным геном NF-кВ, контролируемым с помощью IL-17C, как описано в данном документе в примере 4.
В одном варианте осуществления раскрытые антитело или фрагмент антитела являются специфичными в отношении IL-17C человека, кодируемого аминокислотной последовательностью под SEQ ID No.: 1. В одном варианте осуществления раскрытые антитело или фрагмент антитела являются специфичными в отношении полипептида, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 1. В дополнительном варианте осуществления указанное моноклональное антитело или фрагмент антитела представляют собой моноклональное антитело, специфичное к полипептиду, состоящему из аминокислотной последовательности под SEQ ID No.: 1. В другом варианте осуществления раскрытые антитело или фрагмент антитела являются специфичными в отношении IL-17C человека, кодируемого аминокислотной последовательностью под SEQ ID No.: 1, и представляют собой моноклональное антитело или фрагмент моноклонального антитела.
В одном варианте осуществления раскрытые антитело или фрагмент антитела, специфичные к IL-17C, представляют собой моноклональное антитело или фрагмент моноклонального антитела.
В одном варианте осуществления раскрытые антитело или фрагмент антитела, специфичные к IL-17C, представляют собой человеческое, гуманизированное или химерное антитело. В определенных вариантах осуществления указанные антитело или фрагмент антитела, специфичные к IL-17C, представляют собой выделенные антитело или фрагмент антитела. В другом варианте осуществления указанные антитело или фрагмент антитела представляют собой рекомбинантное антитело или фрагмент рекомбинантного антитела. В дополнительном варианте осуществления указанные антитело или фрагмент антитела представляют собой рекомбинантное антитело человека или фрагмент рекомбинантного антитела человека. В дополнительном варианте осуществления указанные рекомбинантное антитело человека или фрагмент рекомбинантного антитела представляют собой выделенное рекомбинантное антитело человека или фрагмент выделенного рекомбинантного антитела человека. В дополнительном варианте осуществления указанные рекомбинантное антитело человека или фрагмент рекомбинантного антитела человека или выделенное рекомбинантное антитело человека или фрагмент выделенного рекомбинантного антитела человека являются моноклинальными.
В другом варианте осуществления раскрытые антитело или фрагмент антитела содержат тяжелую цепь под SEQ ID No.: 17 и легкую цепь под SEQ ID No.: 16, или тяжелую цепь под SEQ ID No.: 30 и лег- 13 037813 кую цепь под SEQ ID No.: 29, или тяжелую цепь и легкую цепь, которые характеризуются по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере
95% идентичностью с тяжелой цепью под SEQ ID No.: 17 или 30 и легкой цепью под SEQ ID No.: 16 или
29.
В одном варианте осуществления раскрытые антитело или фрагмент антитела содержат константный участок тяжелой цепи человека и константный участок легкой цепи человека. В дополнительном варианте осуществления указанный константный участок тяжелой цепи человека содержит аминокислотные последовательности под SEQ ID No.: 17, а константный участок легкой цепи человека содержит аминокислотные последовательности под SEQ ID No.: 16 или указанный константный участок тяжелой цепи человека содержит аминокислотные последовательности под SEQ ID No.: 30, а константный участок легкой цепи человека содержит аминокислотные последовательности под SEQ ID No.: 29.
В одном варианте осуществления раскрытые антитело или фрагмент антитела относятся к изотипу IgG. В другом варианте осуществления указанное антитело представляет собой IgG1.
В одном варианте осуществления указанный фрагмент антитела представляет собой фрагмент бивалентного антитела.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, которые перекрестно конкурируют с антителом, описанным в табл. 1. В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, где указанные антитело или фрагмент антитела перекрестно конкурируют с антителом или фрагментом антитела, содержащими 6 CDR, определенных по Kabat, одного из антител, приведенных в табл. 1. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, специфичным к IL-17C человека, где указанные антитело или фрагмент антитела бивалентно связываются с гомодимером IL-17C и образуют комплекс, состоящий из указанных антитела или фрагмента антитела и одного гомодимера IL-17C, и где указанные антитело или фрагмент антитела перекрестно конкурируют с антителом или фрагментом антитела, содержащими 6 CDR, определенных по Kabat, одного из антител, приведенных в табл. 1.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, где указанные антитело или фрагмент антитела перекрестно конкурируют с антителом или фрагментом антитела, содержащими 6 CDR, где HCDR1 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 7, HCDR2 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 8, HCDR3 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 9, LCDR1 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 13, LCDR2 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 14, и LCDR3 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 15. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, где указанные антитело или фрагмент антитела перекрестно конкурируют с антителом или фрагментом антитела, содержащими VH в соответствии с SEQ ID No.: 17 и VL в соответствии с SEQ ID No.: 16.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, где указанные антитело или фрагмент антитела перекрестно конкурируют с антителом или фрагментом антитела, содержащими 6 CDR, где HCDR1 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 20, HCDR2 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 21, HCDR3 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 22, LCDR1 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 26, LCDR2 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 27, и LCDR3 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 28. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, где указанные антитело или фрагмент антитела перекрестно конкурируют с антителом или фрагментом антитела, содержащими VH в соответствии с SEQ ID No.: 30 и VL в соответствии с SEQ ID No.: 29.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, которые перекрестно конкурируют с антителом, описанным в табл. 1. В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, где указанные антитело или фрагмент антитела перекрестно конкурируют с антителом или фрагментом антитела, содержащими 6 CDR, определенных по Chothia, одного из антител, приведенных в табл. 1. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, специфичным к IL-17C человека, где указанные антитело или фрагмент антитела бивалентно связываются с гомодимером IL-17C и образуют комплекс, состоящий из указанного антитела или фрагмента антитела и одного гомодимера IL17C, и где указанные антитело или фрагмент антитела перекрестно конкурируют с антителом или фрагментом антитела, содержащими 6 CDR, определенных по Chothia, одного из антител, приведенных в табл. 1.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, где указанные антитело или фрагмент антитела перекрестно конкурируют с антителом или фрагментом антитела, содержащими 6 CDR, где HCDR1 представляет собой аминокислотную последователь- 14 037813 ность под SEQ ID No.: 10, HCDR2 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 11, HCDR3 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 12, LCDR1 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 13, LCDR2 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 14, и LCDR3 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 15. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, где указанные антитело или фрагмент антитела перекрестно конкурируют с антителом или фрагментом антитела, содержащими VH в соответствии с SEQ ID No.: 17 и VL в соответствии с SEQ ID No.: 18.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, где указанные антитело или фрагмент антитела перекрестно конкурируют с антителом или фрагментом антитела, содержащими 6 CDR, где HCDR1 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 23, HCDR2 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 24, HCDR3 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 25, LCDR1 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 26, LCDR2 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 27, и LCDR3 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 28. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, где указанные антитело или фрагмент антитела перекрестно конкурируют с антителом или фрагментом антитела, содержащими VH в соответствии с SEQ ID No.: 30 и VL в соответствии с SEQ ID No.: 29.
В определенном варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, которые перекрестно конкурируют с антителом, описанным в табл. 1, и снижают специфическое связывание одного из антител, описанных в табл. 1, по меньшей мере на 70, 80 или 90% в анализе перекрестного конкурирования на основе ELISA. В определенном варианте осуществления настоящее изобретение относится к моноклональному антителу или фрагменту моноклонального антитела, которые перекрестно конкурируют с антителом, описанным в табл. 1, и снижают специфическое связывание одного из антител, описанных в табл. 1, с IL-17C по меньшей мере на 70, 80 или 90% в анализе перекрестного конкурирования на основе ELISA. Типичная постановка анализа проиллюстрирована в примере 6 настоящего изобретения.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, которые связываются (например, путем связывания, стабилизации, пространственного распределения) с тем же эпитопом, что и одно из антител, приведенных в табл. 1. В дополнительном варианте осуществления указанные антитело или фрагмент антитела связываются (например, путем связывания, стабилизации, пространственного распределения) с тем же эпитопом, что и антитело или фрагмент антитела, содержащие 6 CDR, определенные по Kabat, одного из антител, приведенных в табл. 1. В еще одном варианте осуществления указанные антитело или фрагмент антитела связываются (например, путем связывания, стабилизации, пространственного распределения) с тем же эпитопом IL-17C, что и антитело или фрагмент антитела, содержащие 6 CDR, определенные по Kabat, одного из антител, приведенных в табл. 1. В еще одном другом варианте осуществления указанные антитело или фрагмент антитела связываются (например, путем связывания, стабилизации, пространственного распределения) с тем же эпитопом полипептида, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 1, что и антитело или фрагмент антитела, содержащие 6 CDR, определенные по Kabat, одного из антител, приведенных в табл. 1.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, где указанные антитело или фрагмент антитела связываются с тем же эпитопом, что и антитело или фрагмент антитела, содержащие 6 CDR, где HCDR1 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 10, HCDR2 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 11, HCDR3 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 12, LCDR1 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 13, LCDR2 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 14, и LCDR3 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 15. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, где указанные антитело или фрагмент антитела связываются с тем же эпитопом, что и антитело или фрагмент антитела, содержащие VH в соответствии с SEQ ID No.: 17 и VL в соответствии с SEQ ID No.: 18.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, где указанные антитело или фрагмент антитела связываются с тем же эпитопом, что и антитело или фрагмент антитела, содержащие 6 CDR, где HCDR1 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 23, HCDR2 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 24, HCDR3 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 25, LCDR1 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 26, LCDR2 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 27, и LCDR3 представляет собой аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 28. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, где указанные антитело или фрагмент антитела
- 15 037813 связываются с тем же эпитопом, что и антитело или фрагмент антитела, содержащие VH в соответствии с SEQ ID No.: 30 и VL в соответствии с SEQ ID No.: 29.
Участки указанного полипептида, которые включают в себя эпитоп, можно идентифицировать с помощью широкого ряда методик картирования эпитопов, хорошо известных из уровня техники. См., например, протоколы картирования эпитопов в Methods in Molecular Biology, Vol. 66 (Glenn E. Morris, Ed., 1996) Humana Press, Totowa, New Jersey. Например, эпитопы можно определять, например, путем одновременного синтеза больших количеств пептидов на твердых подложках, пептидов, соответствующих частям молекулы белка, и вступления в реакцию пептидов с антителами, при этом пептиды все еще связаны с подложками. Такие методики известны из уровня техники и описаны, например, в патенте США № 4708871; публикациях Geysen et al. (1984), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 8:3998-4002; Geysen et al. (1985), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:78-182; Geysen et al. (1986), Mol. Immunol. 23:709-715. Аналогичным образом эпитопы легко идентифицируются путем определения пространственной конформации аминокислот, например, с помощью обмена водорода/дейтерия, рентгеновской кристаллографии и двухмерного ядерного магнитного резонанса. См., например, Epitope Mapping Protocols, выше. Антигенные участки белков также можно идентифицировать с применением стандартных графиков антигенности и гидрофобности, таких как рассчитанные с использованием, например, программного обеспечения Omiga версии 1.0, доступного от Oxford Molecular Group. В этой компьютерной программе используется способ Hopp/Woods, Hopp et al. (1981), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78:3824-3828 для определения профилей антигенности и методика Кайта-Дулиттла, Kyte et al. (1982), J. Mol. Biol. 157:105-132; для построения графиков гидрофобности.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, содержащим 6 CDR, определенных по Kabat, из любого из антител, приведенных в табл. 1. В другом аспекте настоящее изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его фрагменту, содержащим 6 CDR, определенных по Kabat, из каждого из антител, приведенных в табл. 1.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу или фрагменту антитела, содержащим 6 CDR, определенных по Chotia, из любого из антител, приведенных в табл. 1. В другом аспекте настоящее изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его фрагменту, содержащим 6 CDR, определенных по Chotia, из каждого из антител, приведенных в табл. 1.
В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к антителам или фрагментам антител, раскрытым в табл. 1, где указанные антитела или фрагменты антител могут связываться с IL-17C с аффинностью, составляющей приблизительно менее 100 нМ, более предпочтительно приблизительно менее 60 нМ и еще более предпочтительно приблизительно менее 30 нМ. Дополнительно, предпочтительными являются антитела или фрагменты антител, которые связываются с IL-17C с аффинностью, составляющей приблизительно менее 10 нМ и более предпочтительно приблизительно менее 3 нМ.
В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к антителам или фрагментам антител, раскрытым в табл. 1, где указанные антитела или фрагменты антител могут связываться с IL-17C с моновалентной аффинностью, составляющей приблизительно менее 100 нМ, более предпочтительно приблизительно менее 60 нМ и еще более предпочтительно приблизительно менее 30 нМ. Дополнительно, предпочтительными являются антитела или фрагменты антител, которые связываются с IL-17C с моновалентной аффинностью, составляющей приблизительно менее 10 нМ и более предпочтительно приблизительно менее 3 нМ.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителам или фрагментам антител, специфичным в отношении IL-17C, где указанные антитела или фрагменты антител характеризуются моновалентной аффинностью в отношении IL-17C с константой скорости диссоциации (KD), составляющей менее 5х10-2 М, менее 10-2 М, менее 5х10-3 М, менее 10-3 М, менее 5х10-4 М, менее 10-4 М, менее 5х10-5 М, менее 10-5 М, менее 5х10-6 М, менее 10-6 М, менее 5х10-7 М, менее 10-7 М, менее 5х10-8 М, менее 10-8 М, менее 5х10-9 М, менее 10-9 М, менее 5х10-10 М, менее 10-10 М, менее 5х10-11 М, менее 10- 11 М, менее 5х10-12 М, менее 10-12 М, менее 5х10-13 М, менее 10-13 М, менее 5х10-14 М, менее 10-14 М, менее 5х 10-15 М или менее 10-15 М, и где указанные антитела или фрагменты антител в бивалентном формате характеризуются аффинностью в отношении IL-17C с константой скорости диссоциации (KD), которая по меньшей мере в 2, 5, 10, 100, 1000, 10000 и 100000 раз меньше, чем константа скорости диссоциации (KD) в моновалентном формате. В дополнительном варианте осуществления бивалентную аффинность указанных антител или фрагментов антител определяют в формате IgG, при этом моновалентную аффинность указанных антител или фрагментов антител определяют в формате Fab.
Композиции по настоящему изобретению предпочтительно представляют собой фармацевтические композиции, содержащие антитело или фрагмент антитела, специфичные к IL-17C, раскрытые в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или вспомогательное вещество для лечения воспалительного нарушения или рака. Такие носители, разбавители и вспомогательные вещества известны из уровня техники, и специалист в данной области техники найдет состав и путь введения, наиболее подходящий для лечения субъекта с помощью антител к IL-17C или фрагментов антител по на- 16 037813 стоящему изобретению.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, которые содержат антитело или фрагмент антитела, специфичные в отношении IL-17C, раскрытые в данном документе, для применения в лечении нарушения или состояния, ассоциированных с нежелательным присутствием IL-17C. В другом варианте осуществления указанное состояние, ассоциированное с нежелательным присутствием IL-17C, представляет собой воспалительное нарушение или рак. В другом варианте осуществления указанное воспалительное нарушение представляет собой ревматоидный артрит, псориаз, воспаление легких, COPD и/или атопический дерматит (AD), в том числе AD со степенью тяжести от умеренной до тяжелой. В предпочтительном варианте осуществления указанное воспалительное нарушение представляет собой атопический дерматит (AD) и/или AD со степенью тяжести от умеренной до тяжелой.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, которые содержат антитело или фрагмент антитела, специфичные в отношении IL-17C, раскрытые в данном документе, для применения в лечении нарушения или состояния, ассоциированных с нежелательным присутствием IL-17C. В другом варианте осуществления указанное состояние, ассоциированное с нежелательным присутствием IL-17C, представляет собой воспалительное нарушение или рак. В другом варианте осуществления указанное воспалительное нарушение представляет собой ревматоидный артрит, псориаз, воспаление легких, COPD и/или атопический дерматит (AD), в том числе AD со степенью тяжести от умеренной до тяжелой. В предпочтительном варианте осуществления указанное воспалительное нарушение представляет собой атопический дерматит (AD) и/или AD со степенью тяжести от умеренной до тяжелой.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению указанной фармацевтической композиции для лечение нарушения или состояния, ассоциированных с нежелательным присутствием IL-17C. В другом варианте осуществления указанное состояние, ассоциированное с нежелательным присутствием IL-17C, представляет собой воспалительное нарушение или рак. В другом варианте осуществления указанное воспалительное нарушение представляет собой ревматоидный артрит, псориаз, воспаление легких, COPD и/или атопический дерматит (AD), в том числе AD со степенью тяжести от умеренной до тяжелой. В предпочтительном варианте осуществления указанное воспалительное нарушение представляет собой атопический дерматит (AD) и/или AD со степенью тяжести от умеренной до тяжелой.
В другом аспекте в данном документе представлен способ лечения атопического дерматита (AD) и/или атопического дерматита (AD) со степенью тяжести от умеренной до тяжелой у субъекта, при этом способ предусматривает введение фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество антител или фрагментов антител к IL-17C по настоящему изобретению. В одном варианте осуществления указанный субъект является устойчивым к лечению, не дает ответа или характеризуется неадекватным ответом на лечение с помощью либо кортикостероидов (TCS), либо ингибитора кальциневрина для местного применения. В другом варианте осуществления субъект представляет собой субъекта, нуждающегося в лечении. В предпочтительном варианте осуществления субъект является человеком. В альтернативных аспектах указанный субъект представляет собой грызуна, такого как крыса или мышь.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу профилактики воспалительного нарушения у субъекта, при этом указанный способ предусматривает введение антагониста IL-17C указанному субъекту. Используемый в данном контексте термин профилактика относится к способам, которые направлены на предупреждение проявления заболевания или которые обеспечивают задержку проявления заболевания. В некоторых вариантах осуществления субъект является человеком. В альтернативных аспектах указанный субъект представляет собой грызуна, такого как крыса или мышь.
В некоторых вариантах осуществления антитела или фрагменты антител, специфичные в отношении IL-17C, по настоящему изобретению вводят подкожно. В других аспектах антитела или фрагменты антител, специфичные в отношении IL-17C, по настоящему изобретению вводят внутривенно, внутрисуставно или интраспинально.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его фрагменту, которые содержат VH и VL из любого из антител, приведенных в табл. 1.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его фрагменту, которые содержат тяжелую цепь (IgG1) и легкую цепь из любого из антител, приведенных в табл. 1.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенной нуклеиновой кислоте, кодирующей последовательность тяжелой цепи и/или последовательность легкой цепи антитела, которое связывается с IL-17C, при этом нуклеиновая кислота содержит участок HCDR1 под SEQ ID No.: 58, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 59, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 60, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 64, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 65 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 66; или
- 17 037813 участок HCDR1 под SEQ ID No.: 61, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 62, участок HCDR3 под
SEQ ID No.: 63, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 64, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 65 и участок
LCDR3 под SEQ ID No.: 66; или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 33, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 34, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 35, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 39, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 40 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 41; или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 36, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 37, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 38, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 39, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 40 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 41; или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 46, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 47, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 48, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 52, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 53 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 54; или участок HCDR1 под SEQ ID No.: 49, участок HCDR2 под SEQ ID No.: 50, участок HCDR3 под SEQ ID No.: 51, участок LCDR1 под SEQ ID No.: 52, участок LCDR2 под SEQ ID No.: 53 и участок LCDR3 под SEQ ID No.: 54.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей выделенное моноклональное антитело или его фрагмент, где нуклеиновая кислота содержит участок VH под SEQ ID No.: 19 и участок VL под SEQ ID No.: 18 или участок VH и участок VL, которые характеризуются по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентичностью с участком VH под SEQ ID No.: 19 и/или участком VL под SEQ ID No.: 18.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей выделенное моноклональное антитело или его фрагмент, где нуклеиновая кислота содержит участок VH под SEQ ID No.: 68 и участок VL под SEQ ID No.: 67 или участок VH и участок VL, которые характеризуются по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентичностью с участком VH под SEQ ID No.: 68 и/или участком VL под SEQ ID No.: 67.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей выделенное моноклональное антитело или его фрагмент, где нуклеиновая кислота содержит участок VH под SEQ ID No.: 32 и участок VL под SEQ ID No.: 31 или участок VH и участок VL, которые характеризуются по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентичностью с участком VH под SEQ ID No.: 32 и/или участком VL под SEQ ID No.: 31.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей выделенное моноклональное антитело или его фрагмент, где нуклеиновая кислота содержит тяжелую цепь (IgG1) под SEQ ID No.: 45 и легкую цепь под SEQ ID No.: 44.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей выделенное моноклональное антитело или его фрагмент, где нуклеиновая кислота содержит тяжелую цепь (IgG1) под SEQ ID No.: 70 и легкую цепь под SEQ ID No.: 69.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей выделенное моноклональное антитело или его фрагмент, где нуклеиновая кислота содержит тяжелую цепь (IgG1) под SEQ ID No.: 71 и легкую цепь под SEQ ID No.: 57.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей выделенное моноклональное антитело или его фрагмент, где нуклеиновая кислота содержит VH и VL из любого из антител, приведенных в табл. 1.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей выделенное моноклональное антитело или его фрагмент, где нуклеиновая кислота содержит тяжелую цепь (IgG1) и легкую цепь из любого из антител, приведенных в табл. 1.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу получения выделенного моноклинального антитела или его фрагмента из любого из антител, приведенных в табл. 1.
- 18 037813
Последовательности антител
Таблица 1
| Антител о № | SEQ ID No.: | [ак]/ДНК | |
| МАВ#1 | HCDRI(Kabat) | SEQ ID No.:7 | DYAMH |
| HCDR2(Kabat) | SEQ ID No.:8 | YIGGVGEGTQYAESVKG | |
| HCDR3(Kabat) | SEQ ID No.:9 | GFAIRYYGFDY | |
| HCDR1 (Chothia) | SEQ ID No.:10 | GFTVSDY | |
| HCDR2 (Chothia) | SEQ ID No.:11 | GGVGEG | |
| HCDR3 (Chothia) | SEQ ID No.:12 | GFAIRYYGFDY | |
| LCDR1(Kabatn Chothia) | SEQ ID No.:13 | SGDKLGDKYAY | |
| LCDR2(Kabat и Chothia) | SEQ ID No.:14 | QDSKRPS | |
| LCDR3(Kabat и Chothia) | SEQ ID No.:15 | QVFTFPLVTT | |
| VL | SEQ ID No.:16 | SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYAYW YQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGN TATLTISGTQAEDEADYYCQVFTFPLVTTVFGGGT KLTVLGQ | |
| VH | SEQ ID No.:17 | EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSDYAM HWVRQAPGKGLEWVSYIGGVGEGTQYAESVKGR FTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGFAI RYYGFDYWGQGTLVTVSS | |
| VL (ДНК) | SEQ ID No.:18 | ag ctatg aactg a cccag ccg ccg ag cgttag cgttag cccagg cca gaccgccagcattacctgtagcggcgacaaactgggcgacaaatac gcctactggtatcagcagaaaccgggccagagcccggtgctggttatc tatcaggatagcaaacgcccgagcggcattccagaacgctttagcgg cagcaacagcggcaacaccgccaccctgaccattagcggcaccca ggccgaagacgaagccgattattactgccaggttttcactttcccgctgg ttactactgtgtttggcggcggtaccaagctgaccgtgctgggccag | |
| VH (ДНК) | SEQ ID No.:19 | gaagtgcagctgctggaaagcggtggcggtctggtgcagccaggtgg tag cctg eg cctg ag ctgtg ccg caag egg cttcacagtgtccg acta cgcaatgcattgggtgcgccaagcaccaggcaaaggcctggaatgg gtgagttacataggtggcgtgggtgaggggacacaatatgcagagag cgtgaaaggtcgctttaccattagtcgcgataacagcaaaaacaccct gtatctgcaaatgaacagcctgcgggcagaagataccgcagtttattat tgcgcgcgtggtttcgcaatccgttattatggatttgattattggggccagg gcaccctggttactgtct egage | |
| HCDR1 (Kabat) | SEQ ID No.:33 | gactacgcaatgcat |
- 19 037813
| HCDR2 (Kabat) | SEQ ID No.:34 | tacataggtggcgtgggtgaggggacacaatatgcagagagcgtga aaggt | |
| HCDR3 (Kabat) | SEQ ID No.:35 | ggtttcgcaatccgttattatggatttgattat | |
| HCDR1 (Chothia) | SEQ ID No.:36 | ggcttcacagtgtccgactac | |
| HCDR2 (Chothia) | SEQ ID No.:37 | ggtggcgtgggtgagggg | |
| HCDR3 (Chothia) | SEQ ID No.:38 | ggtttcgcaatccgttattatggatttgattat | |
| LCDR1 (Kabat и Chothia) | SEQ ID No.:39 | agcggcgacaaactgggcgacaaatacgcctac | |
| LCDR2 (Kabat и Chothia) | SEQ ID No.:40 | caggatagcaaacgcccgagc | |
| LCDR3 (Kabat и Chothia) | SEQ ID No.:41 | caggttttcactttcccg ctggttactact | |
| Легкая цепь | SEQ ID No.:42 | SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYAYW YQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGN TATLTISGTQAEDEADYYCQVFTFPLVTTVFGGGT KLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLIS DFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNK YAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKT VAPTECS | |
| Тяжелая цепь (lgG1) | SEQ ID No.:43 | EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSDYAM HWVRQAPGKGLEWVSYIGGVGEGTQYAESVKGR FTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGFAI RYYGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSK STSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNV NHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDP EVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSL SLSPGK | |
| Легкая цепь (ДНК) | SEQ ID No.:44 | ag ctatg aactg a cccag ccg ccg ag cgttag cgttag cccagg cca gaccgccagcattacctgtagcggcgacaaactgggcgacaaatac gcctactggtatcagcagaaaccgggccagagcccggtgctggttatc tatcaggatagcaaacgcccgagcggcattccagaacgctttagcgg cagcaacagcggcaacaccgccaccctgaccattagcggcaccca ggccgaagacgaagccgattattactgccaggttttcactttcccgctgg ttactactgtgtttggcggcggtaccaagctgaccgtgctgggccagcc caaagccgcccctagcgtgaccctgttccccccaagcagcgaggaa ctccaggccaacaaggccaccctcgtgtgcctgatcagcgacttctac cctggcgccgtgaccgtggcctggaaggccgatagcagccctgtgaa ggccggcgtggaaaccaccacccccagcaagcagagcaacaaca aatacgccgccagcagctacctgagcctgacccccgagcagtggaa gtcccacagatcctacagctgccaggtcacacacgagggcagcacc gtggaaaagaccgtggcccccaccgagtgcagc |
- 20 037813
| Тяжелая цепь (lgG1, ДНК) | SEQ ID No.:45 | gaagtgcagctgctggaaagcggtggcggtctggtgcagccaggtgg tag cctg eg cctg ag ctgtg ccg caag egg cttcacagtgtccg acta cgcaatgcattgggtgcgccaagcaccaggcaaaggcctggaatgg gtgagttacataggtggcgtgggtgaggggacacaatatgcagagag cgtgaaaggtcgctttaccattagtcgcgataacagcaaaaacaccct gtatctgcaaatgaacagcctgcgggcagaagataccgcagtttattat tgcgcgcgtggtttcgcaatccgttattatggatttgattattggggccagg gcaccctggttactgtctcgagcgcgtcgaccaaaggccccagcgtgt tccctctggcccccagcagcaagagcacctctggcggaacagccgc cctgggctgcctggtcaaggactacttccccgagcccgtgaccgtgtcc tggaactctggcgccctgaccagcggcgtgcacacctttccagccgtg ctccagagcagcggcctgtacagcctgagcagcgtcgtgaccgtgcc cagcagcagcctgggcacccagacctacatctgcaacgtgaaccac aagcccagcaacacaaaggtggacaagcgggtggaacccaagag ctgcgacaagacccacacctgtcccccctgccctgcccctgaactgct gggaggcccctccgtgttcctgttccccccaaagcctaaggacaccct gatgatcagccggacccccgaagtgacctgcgtggtggtggacgtgt cccacgaggaccctgaagtgaagtttaattggtacgtggacggcgtgg aagtgcacaacgccaagaccaagcccagagaggaacagtacaac agcacctaccgggtggtgtccgtgctgaccgtgctgcaccaggactgg ctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaaggccctgc ctgcccccatcgagaaaaccatcagcaaggccaaaggccagcccc gcgagccccaggtgtacacactgccccctagccgggaagagatgac caagaaccaggtgtccctgacctgcctcgtgaagggcttctaccccag cgacattgccgtggaatgggagagcaacggccagcccgagaacaa ctacaagaccaccccccctgtgctggacagcgacggctcattcttcctg tacagcaagctgaccgtggacaagagccggtggcagcagggcaac gtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacc cagaagtccctgagcctgagccccggcaag | |
| ДНК (оптимизированная) | |||
| HCDR1 (Kabat) | SEQ ID No.:58 | gactacgctatgcac | |
| HCDR2 (Kabat) | SEQ ID No.:59 | tatatcggcggcgtgggcgagggcacccagtacgctgagtctgtgaa gggc | |
| HCDR3 (Kabat) | SEQ ID No.:60 | ggcttcgccatccggtactacggcttcgactac | |
| HCDR1 (Chothia) | SEQ ID No.:61 | ggcttcaccgtgtccgactac | |
| HCDR2 (Chothia) | SEQ ID No.:62 | ggcggcgtgggcgagggc | |
| HCDR3 (Chothia) | SEQ ID No.:63 | ggcttcgccatccggtactacggcttcgactac | |
| LCDR1 (Kabat и Chothia) | SEQ ID No.:64 | tccggcgacaagctgggcgataagtacgcctac | |
| LCDR2 (Kabat и Chothia) | SEQ ID No.:65 | caggactccaagcggccctcc | |
| LCDR3 (Kabat и Chothia) | SEQ ID No.:66 | caggtgttcaccttccccctggtcaccacc | |
| VL (ДНК) | SEQ ID No.:67 | tecta eg ag etg acccag cccccctccgtgtccgtgtctcctgg ccag a ccgcctccatcacctgttccggcgacaagctgggcgataagtacgcct actggtatcagcagaagcccggccagtcccccgtgctggtcatctacc aggactccaagcggccctccggcatccctgagcggttctccggctcca actccggcaacaccgccaccctgaccatctccggcacccaggccga ggacgaggccgactactactgccaggtgttcaccttccccctggtcacc accgtgttcggcggaggcaccaagctgaccgtgctgggccag |
- 21 037813
| VH (ДНК) | SEQ ID No.:68 | gaggtgcagctgctggaatccggcggaggactggtgcagcctggcg gctccctgagactgtcttgcgccgcctccggcttcaccgtgtccgactac gctatgcactgggtccgacaggcccctggcaagggcctggaatgggt gtcctatatcggcggcgtgggcgagggcacccagtacgctgagtctgt gaagggccggttcaccatctcccgggacaactccaagaacaccctgt acctgcagatgaactccctgcgggccgaggacaccgccgtgtactac tgtgccagaggcttcgccatccggtactacggcttcgactactggggcc agggcaccctggtcaccgtgtctagc | |
| Легкая цепь (ДНК) | SEQ ID No.:69 | tecta eg ag etg acccag cccccctccgtgtccgtgtctcctgg ccag a ccgcctccatcacctgttccggcgacaagctgggcgataagtacgcct actggtatcagcagaagcccggccagtcccccgtgctggtcatctacc aggactccaagcggccctccggcatccctgagcggttctccggctcca actccggcaacaccgccaccctgaccatctccggcacccaggccga ggacgaggccgactactactgccaggtgttcaccttccccctggtcacc accgtgttcggcggaggcaccaagctgaccgtgctgggccagcctaa ggccgctccctccgtgaccctgttccccccatcctccgaggaactgca ggccaacaaggccaccctggtctgcctgatctccgacttctaccctggc gccgtgaccgtggcctggaaggccgacagctctcctgtgaaggccgg cgtggaaaccaccaccccctccaagcagtccaacaacaaatacgcc gcctcctcctacctgtccctgacccccgagcagtggaagtcccaccgg tcctacagctgccaggtcacacacgagggctccaccgtggaaaaga ccgtgg cccctaccg agtg ctcc | |
| Тяжелая цепь (lgG1, ДНК) | SEQ ID No.:70 | gaggtgcagctgctggaatccggcggaggactggtgcagcctggcg gctccctgagactgtcttgcgccgcctccggcttcaccgtgtccgactac gctatgcactgggtccgacaggcccctggcaagggcctggaatgggt gtcctatatcggcggcgtgggcgagggcacccagtacgctgagtctgt gaagggccggttcaccatctcccgggacaactccaagaacaccctgt acctgcagatgaactccctgcgggccgaggacaccgccgtgtactac tgtgccagaggcttcgccatccggtactacggcttcgactactggggcc agggcaccctggtcaccgtgtctagcgcctccaccaagggcccctcc gtgttccctctggccccctccagcaagtccacctctggcggcaccgctg ccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgagcccgtgaccgtgtc ctggaactctggcgccctgacctccggcgtgcacaccttccctgccgtg etg cagtcctccg gcctgtactccctgtcctccgtcgtg accgtg ccctcc agctctctgggcacccagacctacatctgcaacgtgaaccacaagcc ctccaacaccaaggtggacaagcgggtggaacccaagtcctgcgac aagacccacacctgtcccccctgccctgcccctgaactgctgggcgg accttccgtgttcctgttccccccaaagcccaaggacaccctgatgatct cccggacccccgaagtgacctgcgtggtggtggacgtgtcccacgag gaccctgaagtgaagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtgcac aacgccaagaccaagcccagagaggaacagtacaactccacctac cgggtggtgtccgtgctgaccgtgctgcaccaggactggctgaacggc aaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaaggccctgcctgcccccat cgaaaagaccatctccaaggccaagggccagccccgcgagcccca ggtgtacacactgccccctagccgggaagagatgaccaagaaccag gtgtccctgacctgtctggtcaagggcttctacccctccgacattgccgt ggaatgggagtccaacggccagcccgagaacaactacaagaccac cccccctgtgctggactccgacggctcattcttcctgtactccaagctga ccgtggacaagtcccggtggcagcagggcaacgtgttctcctgctccg tgatgcacgaggccctgcacaaccactacacccagaagtccctgtcc ctgagccccggcaag |
- 22 037813
| МАВ#2 | HCDR1 (Kabat) | SEQ ID No.:20 | SDHYIS |
| HCDR2 (Kabat) | SEQ ID No.:21 | YISSSGSTTYYAESVKG | |
| HCDR3 (Kabat) | SEQ ID No.:22 | QSYYFLPYFDV | |
| HCDR1 (Chothia) | SEQ ID No.:23 | GFTFSDH | |
| HCDR2 (Chothia) | SEQ ID No.:24 | SSSGST | |
| HCDR3 (Chothia) | SEQ ID No.:25 | QSYYFLPYFDV | |
| LCDR1 (Kabat и Chothia) | SEQ ID No.:26 | TGTSSDVGSYNLVS | |
| LCDR2 (Kabat и Chothia) | SEQ ID No.:27 | EGSKRPS | |
| LCDR3 (Kabat и Chothia) | SEQ ID No.:28 | ASRGSRRVLYV | |
| VL | SEQ ID No.:29 | QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGSYNLV SWYQQHPGKAPKLMIYEGSKRPSGVSNRFSGSK SGNTASLTISGLQAEDEADYYCASRGSRRVLYVFG GGTKLTVLGQ | |
| VH | SEQ ID No.:30 | QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDHYI SWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTTYYAESVKGRF TISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQSYYF LPYFDVWGQGTLVTVSS | |
| VL (ДНК) | SEQ ID No.:31 | cag ag eg ccctg acccag ccag ccag cgttag eggtag cccagg cc agagcattaccattagctgcaccggcaccagcagcgacgtgggcag ctataacctggttagctggtatcagcagcatccgggcaaagccccgaa actgatgatctatgaaggcagcaaacgcccgagcggcgttagcaac cgctttagtggcagcaaaagcggcaacaccgccagcctgaccattag cggcctgcaagccgaagacgaagccgattattactgcgcaagtcgg ggaagccgtcgtgtgctgtatgtttttggcggcggtaccaagctgaccgt gctgggccag | |
| VH (ДНК) | SEQ ID No.:32 | caggtgcagctggtggaaagcggcggtggcctggtgaaaccaggcg gtag cctg eg cctg ag etg eg cog ccag egg ctttacctttag eg atca ttacattagctggattcgccaggccccaggcaaaggcctggaatgggt tagctatattagcagcagtggcagcaccacctattacgccgagagcgt gaaaggccgctttaccattagccgcgataacgccaaaaacagcctgt atctgcaaatgaacagcctgcgggccgaagataccgccgtgtattatt gcgcgcgacaatcctactatttcctgccttatttcgacgtttggggccagg gcaccctggttactgtct egage | |
| HCDR1 (Kabat) | SEQ ID No.:46 | agcgatcattacattagc | |
| HCDR2 (Kabat) | SEQ ID No.:47 | tatattagcagcagtggcagcaccacctattacgccgagagcgtgaa aggc | |
| HCDR3 (Kabat) | SEQ ID No.:48 | caatcctactatttcctgccttatttcgacgtt | |
| HCDR1 (Chothia) | SEQ ID No.:49 | ggctttacctttagcgatcat | |
| HCDR2 (Chothia) | SEQ ID No.:50 | agcagcagtggcagcacc | |
| HCDR3 (Chothia) | SEQ ID No.:51 | caatcctactatttcctgccttatttcgacgtt | |
| LCDR1 (Kabat и Chothia) | SEQ ID No.:52 | accggcaccagcagcgacgtgggcagctataacctggttagc |
- 23 037813
| LCDR2 (Kabat и Chothia) | SEQ ID No.:53 | gaaggcagcaaacgcccgagc | |
| LCDR3 (Kabat и Chothia) | SEQ ID No.:54 | gcaagtcggggaagccgtcgtgtgctgtatgtt | |
| Легкая цепь | SEQ ID No.:55 | QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGSYNLV SWYQQHPGKAPKLMIYEGSKRPSGVSNRFSGSK SGNTASLTISGLQAEDEADYYCASRGSRRVLYVFG GGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLV CLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQS NNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTV EKTVAPTECS | |
| Тяжелая цепь (lgG1) | SEQ ID No.:56 | QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDHYI SWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTTYYAESVKGRF TISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQSYYF LPYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVH TFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKG QPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPS DIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKL TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSL SPGK | |
| Легкая цепь (ДНК) | SEQ ID No.:57 | cag ag eg ccctg acccag ccag ccag cgttag eggtag cccagg co agagcattaccattagctgcaccggcaccagcagcgacgtgggcag ctataacctggttagctggtatcagcagcatccgggcaaagccccgaa actgatgatctatgaaggcagcaaacgcccgagcggcgttagcaac cgctttagtggcagcaaaagcggcaacaccgccagcctgaccattag cggcctgcaagccgaagacgaagccgattattactgcgcaagtcgg ggaagccgtcgtgtgctgtatgtttttggcggcggtaccaagctgaccgt gctgggccagcccaaagccgcccctagcgtgaccctgttccccccaa gcagcgaggaactccaggccaacaaggccaccctcgtgtgcctgat cagcgacttctaccctggcgccgtgaccgtggcctggaaggccgata gcagccctgtgaaggccggcgtggaaaccaccacccccagcaagc agagcaacaacaaatacgccgccagcagctacctgagcctgaccc ccgagcagtggaagtcccacagatcctacagctgccaggtcacaca cgagggcagcaccgtggaaaagaccgtggcccccaccgagtgcag c | |
| Тяжелая цепь (ДНК, lgG1) | SEQ ID No.:71 | caggtgcagctggtggaaagcggcggtggcctggtgaaaccaggcg gtag cctg eg cctg ag etg eg cog ccag egg ctttacctttag eg atca ttacattagctggattcgccaggccccaggcaaaggcctggaatgggt tagctatattagcagcagtggcagcaccacctattacgccgagagcgt gaaaggccgctttaccattagccgcgataacgccaaaaacagcctgt atctgcaaatgaacagcctgcgggccgaagataccgccgtgtattatt gcgcgcgacaatcctactatttcctgccttatttcgacgtttggggccagg gcaccctggttactgtctcgagcgcgtcgaccaaaggccccagcgtgt tccctctggcccccagcagcaagagcacctctggcggaacagccgc cctgggctgcctggtcaaggactacttccccgagcccgtgaccgtgtcc tggaactctggcgccctgaccagcggcgtgcacacctttccagccgtg ctccagagcagcggcctgtacagcctgagcagcgtcgtgaccgtgcc cagcagcagcctgggcacccagacctacatctgcaacgtgaaccac aagcccagcaacacaaaggtggacaagcgggtggaacccaagag ctgcgacaagacccacacctgtcccccctgccctgcccctgaactgct gggaggcccctccgtgttcctgttccccccaaagcctaaggacaccct gatgatcagccggacccccgaagtgacctgcgtggtggtggacgtgt cccacgaggaccctgaagtgaagtttaattggtacgtggacggcgtgg aagtgcacaacgccaagaccaagcccagagaggaacagtacaac agcacctaccgggtggtgtccgtgctgaccgtgctgcaccaggactgg ctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaaggccctgc ctgcccccatcgagaaaaccatcagcaaggccaaaggccagcccc gcgagccccaggtgtacacactgccccctagccgggaagagatgac caagaaccaggtgtccctgacctgcctcgtgaagggcttctaccccag cgacattgccgtggaatgggagagcaacggccagcccgagaacaa ctacaagaccaccccccctgtgctggacagcgacggctcattcttcctg tacagcaagctgaccgtggacaagagccggtggcagcagggcaac gtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacc cagaagtccctgagcctgagccccggcaag |
Демонстрационные примеры
Список сокращений:
ANOVA дисперсионный анализ
BSA бычий сывороточный альбумин
BW вес тела
CDR участок, определяющий комплементарность
DLS динамическое рассеяние света
DMEM среда Игла, модифицированная Дульбекко
ЕС5о 50% эффективная концентрация
- 24 037813
| ECD | внеклеточный домен |
| ECL | электрохемилюминесценция |
| ELISA | твердофазный иммуноферментный анализ |
| EtOH | этанол |
| Fab | антигенсвязывающий фрагмент |
| FBS | сыворотка эмбриона теленка |
| Fc | константный фрагмент |
| HPLC | высокоэффективная жидкостная хроматография |
| i.p. | внутрибрюшинный(внутрибрюшинно) |
| i.v. | внутривенный(внутривенно) |
| IC50 | 50% ингибирующая концентрация |
| IFN-γ | интерферон-гамма |
| ig | иммуноглобулин |
| IHC | иммуногистохимия |
| IL-17R | рецептор интерлейкина 17 |
| IL-xx | интерлейкин хх |
| KD | константа диссоциации |
| MC903 | кальципотриол |
| MPEK | первичные кератиноциты мыши |
| mPHK | матричная рибонуклеиновая кислота |
| NF-kB | ядерный фактор каппа В |
| p.o. | peros, пероральный(перорально) |
| PBS | фосфатно-буферный солевой раствор |
| qPCR | количественная полимеразная цепная реакция |
| qRT-PCR | количественная полимеразная цепная реакция в режиме реального времени |
| SEM | стандартная ошибка среднего |
| Th2 | хелперные Т-клетки типа 2 |
Пример 1. Получение антигена, Fab-фрагментов и антител.
1.1. Получение антигена и контроль качества.
Выравнивали аминокислотные последовательности IL-17C человека, макака-крабоеда и мыши.
Без учета лидерной последовательности все три вида характеризовались 79% гомологией.
| Человек | |
| Человек | 100% |
| Макаккрабоед | |
| Мышь |
| Макаккрабоед | Мышь |
| 95% | 79% |
| 100% | 79% |
| 100% |
IL-17C от разных видов приобретали у разных поставщиков или получали в собственной лаборатории и при необходимости солюбилизировали. На 100 мкг белка добавляли 4 мкл биотинилирующего реа гента для биотинилирования модуля ECL™ и инкубировали в течение 60 мин при комнатной температуре в темноте с осторожным перемешиванием. Далее биотинилированный белок очищали с использованием центрифужных колонок для обессоливания Zeba™ и определяли OD при 280 нм.
Антигены подвергали биотинилированию с использованием модуля для биотинилирования ECL™ (GE Healthcare; #1061918). После биотинилирования продукт очищали с применением центрифужных колонок для обессоливания Zeba™ (Pierce; #89889).
Биотинилированный и небиотинилированный IL-17C мыши, яванского макака и человека подвергали контролю качества, который включал анализы в денатурирующих восстанавливающих и денатурирующих невосстанавливающих условиях с помощью SDS-PAGE и в нативном состоянии с применением эксклюзионной хроматографии высокого давления (HP-SEC) и метода динамического рассеяния света (DLS).
HP-SEC осуществляли на HPLC-системе UltiMate 3000 Titanium от Dionex (Dionex Corporation, Гермеринг, Германия) в сочетании с miniDAWN Treos от Wyatt и Optilab rEX от Wyatt (Wyatt Technology Europe, Дернбах, Германия). Для разделения использовали колонку TSK-Gel G3000SWxl от Tosoh (Tosoh Bioscience, Штутгарт, Германия). В случае каждого образца в колонку загружали 15 мкг белка, разделе- 25 037813 ние осуществляли при скорости потока 0,5 мл/мин и результаты разделения регистрировали по
УФ-поглощению при 280 нм. Буфер для разделения состоял из 49 мМ NaH2PO4, 51 мМ Na2HPO4, 100 мМ
K2SO4, 0,0005% Tween-80 при рН 6,8.
Все эксперименты с DLS осуществляли с применением системы DynaPro Titan на основе кювет (Wyatt Technology Europe, Дернбах, Германия) с концентрациями белка от 0,2 до 1,0 мг/мл. В случае осаждения или образования частиц перед экспериментом образец центрифугировали при 10000xg в течение 5 мин.
Внеклеточный домен (ECD) рецептора Е IL-17 мыши (UniProt Q8BH06, изоформа 1) и рецептор Е IL-17 человека (UniProt Q8NFR9) клонировали в вектор экспрессии pMAX_vk_Fc2_His с применением KpnI и EcoRV с получением в результате слитых конструкций с С-концевым Fc2_H. Помимо содержащей природную лидерную последовательность (AG00158) получали вторую конструкцию с Vk-лидерной последовательностью (AG00159).
Обе конструкции были транзиентно экспрессированы в клетках НКВ11. Через три дня после трансфекции суспензию клеток увеличивали в масштабе и супернатант культуры клеток собирали через 6 дней после трансфекции. После стерилизации с помощью фильтрации раствор подвергали аффинной хроматографии с использованием белка А. Осуществляли замену буфера на PBS и образцы подвергали стерилизации с помощью фильтрации (размер пор 0,2 мкм). Концентрации белка определяли с помощью УФ-спектрофотометрии. Чистоту продуктов анализировали в денатурирующих восстанавливающих и денатурирующих невосстанавливающих условиях с помощью SDS-PAGE и в нативном состоянии с применением HP-SEC и метода DLS.
1,2. Пэннинг и получение Fab/антитела.
Для получения антител использовали библиотеку MorphoSys Ylanthia® для отбора Fab-фрагментов к IL-17C человека. Библиотека MorphoSys Ylanthia® (Tiller et al., mAbs 5:3, 1-26; May/June (2013) и патент США № 8728981) представляет собой коммерчески доступную фагмидную библиотеку, и для нее используется технология CysDisplay® для представления Fab на поверхности фагов (Lohning et al., WO 2001/05950).
Для выявления специфичных к IL-17C антител применяли различные стратегии пэннинга. Каждая стратегия пэннинга включала по меньшей мере три отдельных цикла пэннинга в отношении соответствующих антигенов, в том числе IL-17C человека (SEQ ID No.: 1) и мыши IL-17C.
Идентифицированным выделенным клонам позволяли созреть, подвергали перестройке и/или создавали зародышевую линию с целью повышения аффинности и/или функциональности. Затем несколько сотен клонов подвергали скринингу и тщательно тестировали в анализах in vitro на предмет функциональности, предусматривающих, например, оценку связывания с IL-17C человека, макака-крабоеда и мыши с помощью SET, ингибирование связывания IL-17C человека, макака-крабоеда и мыши с его соответствующим IL-17RE и функциональное ингибирование IL-17C (анализ IL-17RE-контролируемой активации репортерного гена NF-кВ в мышиных клетках NIH3T3 и опосредованная IL-17C экспрессия CSF3 в первичных кератиноцитах мыши (MPEK)).
И наконец, отбирали две предпочтительные лидерные молекулы (МАВ#1 и МАВ#2) и их дополнительно описывали в демонстрационных примерах, как изложено ниже.
Пример 2. Определение аффинности в формате моновалентного Fab и бивалентного IgG.
С помощью SET определяли аффинность моновалентного Fab и бивалентного IgG. Следовательно, очищенные Fab титровали в отношении IL-17C человека, макака-крабоеда или мыши для определения KD. Соответственно очищенные IgG титровали в отношении IL-17C человека, макака-крабоеда или мыши для определения EC50.
Равновесное титрование раствора (SET) в основном осуществляли, как описано в литературе (Friquet et al. (1985), J. Immunol. Meth. 77:305-19). Для повышения чувствительности и точности способа SET его переводили из формата классической ELISA в технологию на основе ECL (Haenel et al. (2005), Anal. Biochem. 339.1:182-84).
Соответствующие результаты для МАВ#1 и МАВ#2 показаны в табл. 2 и 3 соответственно.
Пример 3. Определение характеристик Fab или IgG, специфичных к IL-17C, в отношении активности ингибирования рецептора.
Очищенные Fab или IgG, специфичные к IL-17C, соответственно тестировали в отношении их способности ингибировать связывание IL-17C с его специфическим рецептором IL-17RE. Для этого 384-луночные планшеты МА6000 (Meso Scale Discovery, MSD) покрывали 30 мкл химерного белка IL17RE/FC мыши при 75 нг/мл в PBS при 4°С в течение ночи. На следующий день антитело в серийном разведении (концентрации от 0,001 до 100 нМ) предварительно инкубировали в течение 30 мин при к.т. с равным объемом биотинилированного IL-17C человека/макака-крабоеда или мыши для определения концентрации IC50 для ингибирования связывания рецептора. После блокирования планшетов в течение 1 ч с помощью 2,5% BSA в PBST ранее образованные комплексы антитело-лиганд добавляли на 1 ч в лунки, покрытые IL17RE/FC, и выявляли связывание с рецептором с помощью системы стрептавидинECL с применением MSD Sector Imager.
- 26 037813
Оба антитела (МАВ#1 и МАВ#2) в равной степени ингибировали взаимодействие IL-17C человека/макака-крабоеда или мыши с IL-17RE в формате Fab и в формате IgG. Концентрации IC50 в двухзначном пМ-диапазоне получали для обоих антител в формате IgG среди всех трех клинических значимых видов. Результаты показаны в строках 3 и 4 в табл. 2 и 3 соответственно.
Пример 4. Функциональное тестирование в анализе с контролируемым IL-17C репортерным геном NF-кВ.
Очищенные IgG, специфичные к IL-17C, дополнительно тестировали в отношении их способности ингибировать биологическую активность IL-17C человека, мыши и макака-крабоеда в функциональном клеточном анализе, в котором отслеживают контролируемую IL-17C активацию репортерного гена NF-кВ в клетках NIH3T3, сверхэкспрессирующих IL-17RE мыши.
Клетки NIH3T3 культивировали в DMEM, дополненной 10% FBS и 1% Pen/Strep при 37°С, 5% СО2. Для анализа клетки NIH3T3 трансфицировали в суспензии с помощью ДНК в общем количестве 100 нг (20 нг конструкции для экспрессии IL-17RE мыши, 50 нг репортерной конструкции NF-кВ-люцифераза и 30 нг pBluescript) с использованием средства для трансфекции Polyplus jet-PEI. Вкратце, ДНК разбавляли в 5 мкл 150 мМ NaCl (на лунку) и готовили 0,2 мкл jet-PEI в 8 мкл 150 мМ NaCl (на лунку). Через 5 мин инкубирования при комнатной температуре к раствору ДНК добавляли раствор JetPEI® и дополнительно инкубировали в течение 20-30 мин при комнатной температуре. Клетки NIH3T3 разбавляли с получением ~40000 клеток в 87 мкл среды. Клетки добавляли к смеси ДНК-JetPEI I® (87 мкл клеток и 13 мкл смеси ДНК-JetPEI I®/лунка) и конечный объем переносили в 96-луночные планшеты.
После инкубирования в течение ночи при 37°С в инкубаторе с увлажнением и 5% СО2 среду удаляли и заменяли jetPEI® 90 мкл среды, содержащей 5% FBS и 1% Pen/Strep. К клеткам добавляли 10 мкл антител в серийном разведении, выполненном в DPBS, которые предварительно инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре с равным объемом очищенного рекомбинантного IL-17C (или IL-17C человека (Novus #NBP1-42910), или mIL-17C мыши (R&D Systems #2306-ml-025), или IL-17C макакакрабоеда (полученного в собственной лаборатории)). Конечная концентрация IL-17C составляла 0,5 нг/мл.
После инкубирования планшетов при 37°С в CO2-инкубаторе добавляли 100 мкл SteadyLite Plus (Perkin Elmer), после чего считывали люминесценцию на Envision (Perkin Elmer).
Оба антитела эффективно снижали активацию репортерного гена NF-кВ, опосредованную IL-17RE, в присутствии IL-17C человека, мыши и макака-крабоеда. Соответствующие результаты можно найти в строке 5 табл. 2 и 3 соответственно.
Пример 5. Контролируемая IL-17C экспрессия генов в первичных кератиноцитах человека.
В кератиноцитах эндогенно экспрессируются рецепторы IL-17RE и IL-17RA, каждый из которых необходим для функциональной передачи сигнала IL-17C. Первичные кератиноциты человека, полученные от здоровых индивидуумов, и первичные кератиноциты мышей, полученные от мышей C57BL/6, таким образом, использовали для определения способности IgG1 MAB#1 и IgG1 MAB#2 подавлять биологическую активность соответственно IL-17C человека и мыши в более физиологическом контексте.
NHEK (нормальные эпидермальные кератиноциты человека) получали от Lonza и культивировали в среде для выращивания кератиноцитов с добавками (набор KGM-Gold™ Bullet, Lonza) согласно протоколу производителя. NHEK, которые субкультивировали до 3 пассажа и замораживали, размораживали и сразу же высевали на среду для культивирования клеток KGM при 30000 клеток/лунку в 96-луночный планшет для культивирования клеток. Через 2 дня среду удаляли и заменяли на KGM-Gold без гидрокортизона перед добавлением ML-17C (Novus #NBP1-42910) и hTNFa (Peprotech #300-01A) до конечных концентраций 10 нг/мл каждого.
Для тестирования антител IL-17C человека сперва предварительно инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре с равным объемом серийного разведения антитела, выполненного в DPBS. Проводили стимуляцию клеток с использованием рекомбинантного IL-17C (предварительно инкубированного с разведением или без разведения антитела) в присутствии TNFa. Известно, что одновременная стимуляция с использованием IL-17C и TNFa приводит в результате к синергической индукции разных генов, и было показано, что она является необходимой, поскольку в отдельности IL-17C оказывает ограниченный эффект на экспрессию исследуемых генов.
Клетки культивировали в течение 48 ч, а затем общую РНК экстрагировали с использованием набора RNeasy 96 Kit (Qiagen), подвергали обратной транскрипции с использованием реагентов для обратной транскрипции Taqman® (Applied Biosystems) и определяли экспрессию генов бета-дефензина 2 DEFB4A (человека) или CSF3 (мыши) с помощью количественной полимеразной цепной реакции (qPCR). Вкратце, готовили 10 мкл реакционных смесей с применением универсального мастер-микса/No AmpErase® UNG Taqman® для ПЦР и предварительно сконструированных наборов праймеров/зондов по заказу для анализа экспрессии генов DEF4B или CSF3 (#Hs00823638_m1, все от Applied Biosystems). Осуществляли qPCR на приборе для ПЦР в режиме реального времени VNA7™ (Applied Biosystems). Экспрессию гена нормализовали относительно гена домашнего хозяйства либо β-актина (набор праймеров Taqman #4310881Е), либо GAPDH (набор праймеров Taqman #4310893Е).
- 27 037813
Было показано, что оба антитела (МАВ#1 и МАВ#2) эффективно снижают экспрессию гена
DEFB4A (человека) или CSF3 (мыши) соответственно и подтверждают свою способность к нейтрализации биологической активности IL-17C человека, а также IL-17C мыши (табл. 2 и 3).
Обзор определения in vitro функциональных характеристик.
Соответствующие результаты, полученные при тестировании in vitro, сведены в табл. 2 для МАВ#1 и в табл. 3 для МАВ#2. Аминокислотные последовательности и последовательности нуклеиновых кислот вариабельных участков и CDR этих двух родительских антител показаны в табл. 1. Оба антитела удовлетворяли соответствующим критериям и считались перспективными молекулами в плане клинической разработки.
Таблица 2
Сводные данные определения характеристик МАВ#1 in vitro
| МАВ#1 | IL-17C человека | IL-17C мыши | IL-17C макакакрабоеда | ||
| Моновалентная аффинность (Fab), определенная с помощью SET | KD = 3950 ± 50 пМ (п=2) | KD =28000 ± 4000 пМ (п=2) | KD = 22000 ± 100 пМ (п=2) | ||
| Кажущаяся аффинность (IgG), определенная с помощью SET | ЕС50 = 19 ± 6,9 пМ (п=3) | ЕС50 = 387 ± 63 пМ (п=3) | ЕС50 = 257 ± 59 пМ | ||
| Анализ ингибирования рецепторов - формат Fab Анализ ингибирования рецепторов - формат IgG Анализ с использованием репортерного гена NF-kB Анализ с использованием кератиноцитов Сводные данны | IC50 = 2900 пМ Ю50 = 59 пМ 1С50 = 31,3 ±12,1 пМ (п=3) 1С50 = 319,2 ± 86,3 пМ (п=3) [е определения ха | 1С50 = 6000 пМ 1С50 = 55 пМ 1С50 =47,6 ± 9,4 пМ (п=3) 1С50= 112,1 ±26,7 пМ (п=3) рактеристик МАВ | 1С50 = 2700 пМ 1С50 = 44 пМ 1С50 = 12,8 ± 1,9 пМ (п=3) Не определено Таблица 3 ;#2 in vitro | ||
| МАВ#2 | IL-17C человека | IL-17C мыши | IL-17C макакакрабоеда | ||
| Моновалентная аффинность (Fab), определенная с помощью SET | KD = 37±17nM (п=2) | KD = 460 ± 90 пМ (п=2) | KD = 63 ± 20 пМ (п=2) | ||
| Кажущаяся аффинность (IgG), определенная с помощью SET | ЕС50 = 16±4пМ (п=3) | ЕС50 = 323 ± 12 пМ (п=3) | Не тестировали | ||
| Анализ ингибирования рецепторов - формат Fab | IC50 = 76 пМ | 1С50 = 150 пМ | Ю50 = 50 пМ | ||
| Анализ ингибирования рецепторов - формат IgG | IC50 = 58 пМ | IC50 = 48 пМ | Ю50 = 57 пМ | ||
| Анализ с использованием репортерного гена NF-kB | Ю50 = 18,5 ±2,2 пМ (п=3) | 1С60 =64,8 ± 8,6 пМ (п=3) | 1С50= 12,9 ±4,5 пМ (п=3) | ||
| Анализ с использованием кератиноцитов | 1С50 = 279,9 ± 161,7 пМ (п=3) | 1С50 = 51,0 ± 9,0 пМ (п=3) | Не определено |
Пример 6. Анализ перекрестной конкуренции на основе ELISA.
Перекрестную конкуренцию антитела к IL-17C или другого средства, связывающего IL-17C, можно выявить с применением анализа ELISA в соответствии со следующей стандартной процедурой.
Общий принцип анализа ELISA включает покрытие антителом к IL-17C (таким как МАВ#1 или МАВ#2) лунок планшета для ELISA. Затем в раствор добавляли избыточное количество второго, потенциально перекрестно конкурирующего антитела к IL-17C (т.е. не связанного с планшетом для ELISA). Далее в лунки затем добавляли ограниченное количество IL-17C-FC.
Антитело, которым покрыты лунки, и антитело в растворе будут конкурировать за связывание с ограниченным количеством молекул IL-17C. Затем планшет промывали для удаления молекул IL-17C, которые не связались с покрывающим антителом, а также с целью удаления второго антитела в фазе раствора, а также любых комплексов, образовавшихся между вторым антителом в фазе раствора и IL-17C. Количество связанного IL-17C затем измеряли с использованием соответствующего реагента для выявления IL-17C. Для этого IL-17C может быть слит с меткой, например Fc, Flag и им подобными, которую
- 28 037813 можно выявить с помощью соответствующего средства, специфичного для метки.
Антитело в растворе, которое перекрестно конкурирует с покрывающим антителом, будет способно вызвать снижение количества молекул IL-17C, которые может связать покрывающее антитело, по сравнению с количеством молекул IL-17C, которое покрывающее антитело может связать при отсутствии второго антитела в фазе раствора.
Этот анализ более подробно описан ниже для двух антител, обозначенных Ab-Х и Ab-Y. В том случае, если Ab-Х выбрано в качестве иммобилизованного антитела, им покрывали лунки планшета для ELISA, после чего планшеты блокировали подходящим блокирующим раствором для сведения к минимуму неспецифического связывания добавляемых в дальнейшем реагентов. Затем в планшет для ELISA добавляли избыточное количество Ab-Y так, что концентрация в молях Ab-YI с участками связывания L-17C на лунку по меньшей мере в 10 раз превышала концентрацию в молях Ab-Х с участками связывания IL-17C на лунку при покрытии планшета для ELISA. IL-17C добавляли таким образом, что концентрация добавляемого в молях IL-17C на лунку была по меньшей мере в 25 раз меньше, чем концентрация в молях Ab-Х с участками связывания IL-17C, применяемого для покрытия каждой лунки. По истечении подходящего периода инкубирования планшет для ELISA промывали и добавляли реагент для выявления, специфичный к антигену IL-17C, с целью измерения количества молекул IL-17C, специфически связанных покрывающим антителом к IL-17C (в данном случае Ab-Х). Фоновый сигнал для анализа определяли как сигнал, полученный в лунках с покрывающим антителом (в данном случае Ab-Х), со вторым антителом в фазе раствора (в данном случае Ab-Y), только буфером (т.е. без IL-17C) и реагентами для выявления. Сигнал положительного контроля для анализа определяли как сигнал, полученный в лунках с покрывающим антителом (в данном случае Ab-Х), со вторым антителом в фазе раствора, только буфером (т.е. без второго антитела в фазе раствора), реагентами для выявления IL-17C. ELISA-анализ должен выполняться таким образом, чтобы сигнал положительного контроля по меньшей мере в 6 раз превышал фоновый сигнал.
Во избежание каких-либо артефактов (например, существенно отличающихся между Ab-X и Ab-Y аффинностей в отношении IL-17C), в результате выбора того, какое антитело будет использоваться в качестве покрывающего антитела, а которое будет использоваться в качестве второго (конкурентного) антитела, анализ перекрестного блокирования должен выполняться в двух форматах: 1) формат 1 представляет собой вариант, в котором Ab-Х является антителом, которым покрывают планшет для ELISA, a Ab-Y является конкурентным антителом, которое находится в растворе, и 2) формат 2 представляет собой вариант, когда Ab-Y является антителом, которым покрывают планшет для ELISA, a Ab-Х является конкурентным антителом, которое находится в растворе.
Пример 7. Индуцированная с помощью IL-23 модель псориаза у мышей.
Для оценки эффективности in vivo и терапевтического потенциала оба кандидатных антитела дополнительно оценивали на моделях псориза у мышей, индуцированного IL-23.
Модель псориаза, индуцированного с помощью IL-23, у мышей, по сути реализована, как описано в Rizzo H. et al., J. Immunol. (2011), Vol. 186(3), p. 1495-1502.
Вкратце, поражения кожи индуцировали у мышей Balb/C путем внутрикожной инъекции IL-23 в уши (1 мкг) в течение 4 последовательных дней (от дня 1 до дня 4). Измерения общей толщины уха проводили ежедневно до дня 5 включительно, в который мышей умерщвляли. После умерщвления отбирали образцы ушных раковин и их разрезали продольно на две половины. Одну половину фиксировали в формалине для тщательного гистологического анализа толщины эпидермиса/дермы кожи уха. Вторую половину погружали в RNAIater для анализа с помощью количественной полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (qRT-PCR) уровней экспрессии мРНК связанных с заболеванием провоспалительных цитокинов IL-17A, IL-22 и IL-113 и белков с противомикробной активностью LCN2, S100A8 и S100A9. Группы мышей (n=10), которым вводили IL-23, обрабатывали антителами МАВ#1 или МАВ#2, которые вводили дважды i.p. в дозе 10 мг/кг (один раз за 3 дня до и один раз непосредственно перед первой внутрикожной инъекцией IL-23).
Каждое антитело тестировали в двух независимых экспериментах, разделенных на три разных исследования. В каждое исследование включали следующие контрольные группы (в каждой n=10).
Контрольная группа мышей не получала ежедневных инъекций IL-23, а вместо этого ежедневно получала внутрикожные инъекции раствора BSA/PBS в том же самом объеме. Данную группу обрабатывали с помощью изотипического антитела MOR03207 (2х, 10 мг/кг, i.p.), представляющего собой отрицательный контроль.
Для каждого исследования общую толщину уха и толщину эпидермиса определяли в течение периода времени и использовали отдельные точки данных на животное для определения % предупреждения утолщения, опосредованного IL-23. Данные по экспрессии, полученные с помощью qPCR, выражали с помощью уравнения Rq (относительного количества) (Rq=2-ΔCt, где ΔCt=Ct (представляющий интерес ген) - Ct (ген домашнего хозяйства)) после нормализации по уровням экспрессии циклофилина А, используемого в качестве гена домашнего хозяйства. Что касается всех измерений, то данные среднее значение ± SEM для групп сравнивали с использованием дисперсионного анализа (ANOVA) и апостери- 29 037813 орного множественного сравнения Даннета с помощью программного обеспечения PRISM. Значение р <0,05 считали статистически значимым (*р<0,05; ** р<0,01; ***р<0,001; ns: статистически не значимое).
Таким образом, введение обоих кандидатных IgG MAB#1 и МАВ#2 (2x10 мг/кг) уменьшало тяжесть воспаления кожи, вызванного IL-23, демонстрируя эффективность in vivo и терапевтический потенциал обоих антител. Оба антитела проявляли аналогичные эффекты при уровне индуцированного IL-23 утолщения эпидермиса и аналогичное воздействие при уровне индуцированной IL-23 экспрессии генов (см. табл. 4).
Таблица 4
Сводные данные эффективности in vivo в модели IL-23
| МАВ#1 | МАВ#2 | |
| % предупреждения увеличения общей толщины уха (среднее значение и значимость в 2-3 исследованиях) | -34 Значимость в 2 исследованиях из 2 | -6 Не значимо в 2 исследованиях из 2 |
| % предупреждения утолщения эпидермиса (среднее значение и значимость в 2-3 исследованиях) | -62 Значимость в 2 исследованиях из 2 | -50 Значимость в 2 исследованиях из 2 |
| Количество связанных с заболеванием генов со значимо сниженной экспрессией (в каждом из 3 проведенных исследований) | не тестировали/3/6 | 1 /6/не тестировали |
Пример 8. Мышиная модель атопического дерматита с использованием МС903.
Эффективность антитела МАВ#1 при атопическом дерматите оценивали на мышиной модели атопического дерматита с кожным воспалением неинфекционной природы, где местное применение аналога витамина D3 с низким кальцемическим эффектом, МС903 (кальципотриола), вызывает поражение кожи, такое как атопический дерматит, который характеризуется красной и чешуйчатой кожей, сопровождается эпидермальной гиперплазией и инфильтрацией дермы различными типами клеток, а также повышением уровня цитокина Th2 в коже и повышенным уровнем IgE в сыворотке крови (Li M. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (2006), Vol. 103(31), p. 11736-11741; Li M. et al., J. Invest. Dermatol. (2009), Vol. 129(2), p. 498502).
8.1. Животные.
Мышей Balb/c (самок в возрасте 8 недель) получали из Janvier Labs (Франция). Мышей содержали при 12-часовом цикле чередования света и темноты (0700-1900). Температуру поддерживали при 22°С и пищу с водой предоставляли ad libitum.
8.2. Экспериментальные процедуры.
С целью индуцирования AD-подобного ответа 2 нмоль МС903 (Tocris, растворенный в этаноле) местно наносили в объеме 20 мкл на оба уха мышей в течение 5 последовательных дней. Контрольная группа без заболевания получала то же количество этанола (EtOH).
Тяжесть воспаления кожи (эритема и утолщение) оценивали ежедневно. Утолщение ушей измеряли с помощью электронного штангенциркуля (Mitutoyo). Воспаление дополнительно оценивали с применением методики визуализации in vivo. С этой целью зонд Prosense 680 (1,6 нмоль, Perkin Elmer) вводили интраперитонеально за 24 ч до визуализации. Визуализацию проводили с помощью системы визуализации Bruker In-vivo Xtreme. Изображения получали с помощью сильно охлаждаемой камеры 4МР CCD (при значении диафрагмы 1,1, биннинг 2x2, время экспозиции 5 с, Ex 630 нМ, Em 700 нМ). Для анатомической совместной регистрации получали изображение отражения (значение диафрагмы 2,8, время экспозиции 0,175 с). Все изображения получали при поле зрения 190x190 и изображения анализировали с применением программного обеспечения для молекулярной визуализации Molecular Imaging версии 7.1 (Bruker Biospin, Биллерика, Массачусетс, США). Для каждой группы средние значения и стандартную ошибку среднего (sem) рассчитывали с применением для каждой мыши среднего значения левого и правого уха.
После умерщвления проводили отбор образцов кожи уха и фиксировали в 4% формальдегиде перед погружением в парафин. Срезы толщиной 4 мкм окрашивали гематоксилином и эозином (окрашивание Н&Е) для гистоморфометрической оценки толщины эпидермиса путем анализа изображений с помощью программного обеспечения Sisn'Com (Франция). Измеряли пять полей на ухо (поле зрения под большим увеличением x20), покрывающих все ухо сверху вниз, и пять значений на ухо и на мышь усредняли (левое/правое ухо). Дополнительный набор срезов ткани получали для IHC окрашивания IL-17C с применением биотинилированного антитела МАВ к IL-17C (и отрицательного контроля, представляющего собой биотинилированное изотипическое антитело MOR03207). Обработку и окрашивание по сути проводили, как описано выше.
Также проводили отбор образцов кожи уха для анализа экспрессии цитокина с использованием qPCR или ELISA. Кусочки ткани уха для анализа генов с помощью qPCR погружали в стабилизирующий раствор RNALater® (Ambion) и хранили при -20°С. Образцы кожи уха для количественного определения на уровне белка сразу же быстро замораживали в жидком N2 и хранили при -80°С. Для анализа экспрес- 30 037813 сии генов ткань измельчали и лизировали в лизирующем растворе для РНК с использованием гомогенизатора Precellys (микропробирки, заполненные церамидными гранулами диаметром 1,4 мм, 3 раза, 3 цикла по 15 с при 6000 об/мин). Общую РНК дополнительно выделяли с применением набора для выделения РНК от NucleoSpin® в соответствии с инструкциями производителя (Macherey-Nagel) и 300 нг подвергали обратной транскрипции с применением набора для высокопроизводительной обратной транскрипции кДНК от Applied Biosystems™. 5 мкл 10-кратно разбавленной кДНК применяли в реакциях количественной ПЦР в реальном времени с применением технологии SYBR Green с ген-специфическими праймерами от Qiagen. qPCR выполняли на системе для ПЦР в реальном времени VNA™ 7 (Applied Biosystems). Экспрессию генов нормализовали относительно экспрессии 3 различных генов домашнего хозяйства (циклофилин, β-актин и GAPDH) и выражали как относительный уровень мРНК специфической экспрессии генов, полученный с помощью метода 2-ACt, с формулой ACt=Ct гена - геометрическое среднее Ct-значение (гены домашнего хозяйства). Для количественного определения экспрессии на уровне белка ткани сначала измельчали и лизировали в 250 мкл лизирующего буфера (реагент для выделения белка ткани T-PER™ (Pierce), дополненного коктейлем ингибиторов протеазы (Roche) и коктейлем ингибиторов фосфатазы Halt™ (Pierce)) с применением гомогенизатора Precellys (микропробирки, заполненные металлическими гранулами диаметром 2,8 мм, 10 мин, 14000 об/мин при 4°С). Количество TSLP в ушах определяли с помощью наборов для определения TSLP мыши DuoSet ELISA от R&D System. Количество нормализовали относительно общего содержания белка в лизате, которое определяли с помощью реагента Кумасси для анализа белка (Thermo Fisher) относительно стандартного белка BSA. Данные выражали в виде количества цитокина в ухе, которое рассчитывали с использованием формулы: концентрация цитокина в образце/концентрация белка в образце х общее содержание белка в ухе.
Значимость эффекта обработки на каждое из считываний оценивали с помощью программного обеспечения Prism® с использованием однофакторного дисперсионного анализа с последующим апостериорным множественным сравнением Даннета относительно контрольной группы MC903+MOR03207 с *р<0,05; **р<0,01; ***р<0,001.
8.3. Эффективность МАВ#1 в мышиной модели атопического дерматита (профилактической).
Эффективность разных доз МАВ#1 в модели атопического дерматита МС903 оценивали в плане профилактики. Вкратце, поражения кожи у мышей BALB/c вызывали путем местного применения 2 нмоль МС903 (растворенного в этаноле) на обоих ушах в течение 5 последовательных дней; мышей умерщвляли в день 8. МАВ#1 вводили i.p. 3 раза, т. е. за 3 до первого нанесения МС903, в начале и через 4 дня после него. Оценивали эффекты в отношении отечности уха, воспаления уха, гиперплазии эпидермиса, утолщения дермы и экспрессии генов. Группа мышей, которая получала отрицательный контроль, представляющий собой изотипическое антитело (MOR03207), служила в качестве группы сравнения. Дексаметазон (5 мг/кг в 0,5% метилцеллюлозе, вводимый ежедневно пероральным путем (р.о.), как и в первый день нанесения МС903) использовали в качестве активного препарата сравнения. Мышей делили в произвольном порядке на равные группы (n=10).
Тяжесть воспаления кожи (эритема и утолщение) наблюдали на протяжении эксперимента. Общую толщину уха измеряли с использованием измерителя толщины Митутойо на протяжении эксперимента. Воспаление дополнительно оценивали в день 5, используя методику визуализации in vivo, как описано в 8.2).
Эффект от воздействия этанола (в качестве контроля, представляющего собой среду-носитель) на ухо отсутствовал. И наоборот, обработанные МС903 уши становились покрасневшими и отечными. Обработка с использованием МАВ#1 в дозах 2 мг/кг или выше существенно предотвращала утолщение уха. Эффект, обусловленный МАВ#1, был максимальным при дозе 10 мг/кг и сравнимым с эффектом дексаметазона (фиг. 1). Наряду с данными наблюдениями воспаление уха (которое оценивали с помощью визуализации in vivo в день 5) было ярко выраженным у животных, которых обрабатывали МС903, и оно снижалось под воздействием МАВ#1, причем значительный и почти максимальный эффект наблюдали при дозе 10 мг/кг (фиг. 2).
Для подтверждения уменьшения толщины уха под воздействием МАВ#1 гистологические срезы ушей, отобранные в день 8, окрашивали гематоксилином и эозином для гистоморфометрической оценки толщины эпидермиса и дермы. Получали значения данных для пяти полей на ухо, охватывающих все ухо от верха до низа, и получали среднее на мышь. МАВ#1 в дозах 10 мг/кг и выше значительно предотвращало увеличение толщины слоя как эпидермиса, так и дермы (фиг. 3).
8.3.1. Эффект МАВ#1 в отношении экспрессии генов.
Для дополнительной характеристики эффекта МАВ#1 в модели воспаления кожи, подобного атопическому дерматиту, вызванного МС903, экспрессию разных генов, связанных с атопическим дерматитом, анализировали на уровне мРНК с помощью qPCR или на уровне белка с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA). Экспрессия белков TSLP и IL-33 в ушах и уровень TARC в плазме крови повышались с помощью нанесения МС903 и значительно подавлялись при обработке МАВ#1 при дозах 10 мг/кг или выше (фиг. 4). Аналогичный подавляющий эффект наблюдали у МАВ#1 в отношении нескольких других генов, которые положительно регулировались в обработанных МС903 ушах, подобно
- 31 037813
IL-31 (цитокин, связанный с появлением зуда при атопическом дерматите), Th2-цитокину IL-4 и другим генам, которые, как было показано, положительно регулируются при атопическом дерматите человека, подобно S100A8/9 и IFN-γ. И наоборот, было показано, что МАВ#1 предупреждает понижающую регуляцию FLG2 в обработанных МС903 ушах, что может свидетельствовать о потенциальной роли МАВ#1 в восстановлении барьерной функции.
8.4. Эффективность МАВ#1 в мышиной модели атопического дерматита (терапевтической).
Эффективность разных доз МАВ#1 в модели атопического дерматита с использованием МС903 оценивали в плане терапии, связанном с заболеванием. Вкратце, вызывали у мышей Balb/c поражения кожи перед началом какой-либо обработки путем местного нанесения 2 нмоль МС903 (растворенного в этаноле) на обоих ушах в течение 5 последовательных дней. МАВ#1 вводили i.p. 4 раза, при этом первое введение проводили в последний день нанесения МС903 на кожу (день 5) с последующими введениями в дни 8, 12 и 15. Мышей умерщвляли в день 16. Оценивали эффекты в отношении отечности уха, воспаления уха, гиперплазии эпидермиса, утолщения дермы и экспрессии генов. Кроме того, также оценивали эффект в отношении мигрирующих иммунных клеток (эозинофилов, Т-клеток и тучных клеток). Группа мышей, которая получала отрицательный контроль, представляющий собой изотипическое антитело (MOR03207), служила в качестве группы сравнения. Дексаметазон (1 мг/кг в 0,5% метилцеллюлозы, который вводили р.о. с последнего дня нанесения МС903 в день 5, а в последующем в дни 8-12 и дни 1516) использовали в качестве активного препарата сравнения.
8.4.1. Эффект МАВ#1 в отношении общей толщины и воспаления уха.
Общую толщину уха измеряли с использованием измерителя толщины Митутойо на протяжении эксперимента. Местное нанесение МС903 на уши вызывало выраженное увеличение толщины уха со дня 3 при сравнении с ушами, обработанными этанолом (в качестве контроля, представляющего собой средуноситель, для МС903). Активная фаза заболевания хорошо вызывалась в день 5 (т. е. в день первой обработки) и продолжала развиваться впоследствии (несмотря на то, что нанесение МС903 прекращали), как очевидно из продолжающегося увеличения отечности уха в группе, обработанной антителом MOR03207, представляющим собой отрицательный контроль (фиг. 5). Обработка с помощью МАВ#1 при дозах 0,4 мг/кг или выше значимо уменьшала толщину уха, как в день 12, при этом более высокие дозы МАВ#1 имели более выраженный эффект и значительно уменьшали толщину уха даже в более ранние временные точки (как в день 8 для МАВ#1 при 50 мг/кг и в день 10 для доз 10 и 2 мг/кг). Наряду с данными наблюдениями воспаление уха, которое оценивали с помощью визуализации in vivo (как описано в 8.2) в день 12, было по-прежнему повышенным у животных, которых обрабатывали антителом, представляющим собой отрицательный контроль, и существенно снижалось под воздействием МАВ#1 при всех дозах, причем максимальный эффект наблюдали при дозе 2 мг/кг (фиг. 6).
8.4.2. Эффект МАВ#1 в отношении толщины эпидермиса/дермы уха.
Для подтверждения уменьшения толщины уха с помощью МАВ#1 гистологические срезы ушей, отобранных в день 16, окрашивали гематоксилином и эозином для гистоморфометрической оценки толщины эпидермиса и дермы. МАВ#1 при дозах 2 мг/кг и выше существенно снижал увеличение толщины слоя как эпидермиса, так и дермы наряду с измерениями общей толщины уха (фиг. 7).
8.4.3. Эффект МАВ#1 в отношении клеточной инфильтрации дермы.
Для дополнительного определения характеристик эффекта МАВ#1 в отношении процессов заболевания в модели атопического дерматита с использованием МС903 авторы оценивали эффект в отношении клеточной инфильтрации. Более конкретно, авторы оценивали эффект на эозинофилы, Т-лимфоциты и тучные клетки с помощью иммуногистохимического анализа (IHC) и дальнейшего количественного определения площади, которая окрашивается соответствующими антителами, выявляющими пероксидазу эозинофилов, Т-клеточный маркер CD3 и триптазы тучных клеток (подробно см. Marsais, 2016). Наряду с повышенными воспалением и толщиной уха инфильтрация эозинофилами, Т-клетками и в меньшей степени тучными клетками была все еще выраженной в день 16 в ушах мышей, у которых активная фаза заболевания была индуцирована МС903. Обработка МАВ#1 уменьшала инфильтрацию дермы во всех трех типах исследуемых клеток (фиг. 8). Значительное снижение количества инфильтрировавших эозинофилов и Т-клеток наблюдали при всех тестируемых дозах МАВ # 1 при самой высокой дозе 50 мг/кг, которая обладала более сильным эффектом, уменьшающим миграцию этих типов клеток до уровней, сравнимых с эффектом дексаметазона. Эффект в отношении инфильтрации тучными клетками в целом был слабее, но все еще значимый: миграция существенно снижалась с помощью МАВ#1 при более высоких дозах, составляющих 50 и 10 мг/кг.
8.4.4. Эффект МАВ#1 в отношении экспрессии генов.
Экспрессию анализировали в образцах кожи уха или плазмы крови, собранных в день 16, или с помощью qPCR для восьми генов, связанных с заболеванием, или с помощью ELISA для TSLP и IL-33, продуцирующихся в ухе, и TARC в плазме крови, как описано в 8.2.
В отношении большинства анализированных генов не наблюдали значимой дифференциальной экспрессии между обработанными EtOH контрольными здоровыми мышами и мышами, у которых заболевание было вызвано нанесением МС903 в течение первых 5 дней. Только уровни белка IL-33 и уровни
- 32 037813 экспрессии мРНК IL-4, S100A9 и IFN-γ были по-прежнему повышены. Повышенные уровни экспрессии для этих генов (за исключением IFN-γ) снижались с помощью МАВ#1, что показано на фиг. 9, при всех уровнях доз.
8.5. Результаты.
МАВ#1 предупреждал развитие воспаления кожи, подобного атопическому дерматиту, в модели с использованием МС903, при этом он оказывал существенное воздействие на толщину эпидермиса и дермы, воспаление и экспрессию генов, подобную экспрессии в Т-хелперных клетках (Th2) типа 2, при введении дозы с профилактической целью при 3x10 мг/кг интраперитонеально (i.p.). Значительные эффекты на общую толщину уха уже наблюдали в данной модели при дозах 3x2 мг/кг (i.p.). Также в терапевтической модели с использованием МС903 применение МАВ#1 облегчало воспаление кожи. Значимые терапевтические эффекты в отношении общей толщины уха, толщины эпидермиса, воспаления и миграции эозинофилов и Т-клеток наблюдали при дозах 4x0,4 мг/кг (i.p.), вплоть до доз 4x2-10 мг/кг (i.p.).
Пример 9. Мышиная модель атопического дерматита с чешуйчатым хвостом.
Эффективность антитела МАВ#1 оценивали в модели с чешуйчатым хвостом. Мыши с чешуйчатым хвостом характеризуются мутацией в генах Fl и Matt (Mattma/maFlgft/ft), которая в результате приводит к нарушению барьерной функции кожи. У данных мышей спонтанно развивается атопический и прогрессирующий дерматит, характеризующийся смешанным воспалительным фенотипом Th2/Th17, и они воспроизводят ключевые признаки AD у человека.
9.1. Животные и экспериментальные процедуры.
Мышей (MattmTmaFlgftf1) с чешуйчатым хвостом на основе конгенного генотипа C57BL/6J использовали, как описано в Fallon et al. (2009), Nat. Genet. 41(5):602-608 and Saunders et al. (2013), J. Allergy Clin. Immunol. 132(5):1121-1129. Самок мышей с чешуйчатым хвостом 9-10-недельного возраста рандомизировали в четыре группы (8 мышей на группу) и обрабатывали в течение 6 недель следующим образом.
Группа I: отрицательный контроль, представляющий собой изотипическое антитело (MOR03207) (30 мг/кг, i.p. два раза в неделю x 6 недель).
Группа II: МАВ#1 (3 мг/кг, i.p. дважды в неделю x 6 недель).
Группа III: МАВ#1(30 мг/кг, i.p. дважды в неделю x 6 недель).
Группа IV: дексаметазон 2 мг/кг (i.p. дважды в неделю x 6 недель) в качестве активного препарата сравнения.
Тяжесть AD-подобного воспаления кожи оценивали в баллах, используя макроскопические диагностические критерии, адаптированные на основе оценки воспаления кожи в мышиной модели NC/Nga, как описано в Saunders et al. (2013), J. Allergy Clin. Immunol. 132(5):1121-1129. Вкратце, систему оценки в баллах (0: отсутствует; 1: слабое; 2: умеренное; 3: явно выраженное) применяли в отношении признаков эритемы, экскориации и отслаивания. Общую оценку в баллах для каждой мыши (с максимумом 9) рассчитывали по сумме отдельных баллов для каждого из трех параметров.
Возникновение экзематозных поражений кожи век глаз контролировали в конце исследования и отдельно оценивали блефарит в баллах по его тяжести (0: нормальное состояние, 1: эритема век глаз и/или отек, 2: эритема век глаз, отек и образование чешуек, 3: эритема век глаз, отек, образование чешуек, изъязвление). Максимальный балл блефарита (среднее значение для обоих глаз) для каждой мыши составляет 3.
9.2. Эффективность МАВ#1 в модели спонтанного и хронического AD мыши, характеризующейся чешуйчатым хвостом.
Клиническая оценка в баллах воспаления кожи показывает, что мыши, характеризующиеся чешуйчатым хвостом, уже имели признаки спонтанно возникшего экзематозноподобного дерматита при начале обработки, который в дальнейшем прогрессировал в ходе последующего 6-недельного периода в клинически выраженный дерматит у необработанных животных. Обработка с помощью МАВ#1 снижает прогрессирование со значительным эффектом, сравнимым с эффектом дексаметазона, который наблюдался при самой высокой тестируемой дозе 30 мг/кг (фиг. 10). Аналогичный эффект антитела МАВ#1 наблюдают в степени блефарита в конце лечения (фиг. 11).
Claims (13)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Антитело или фрагмент антитела, специфичные в отношении IL-17C, где указанные антитело или фрагмент содержат участок HCDR1, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 7, участок HCDR2, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 8, участок HCDR3, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 9, участок LCDR1, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 13, участок LCDR2, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 14, и участок LCDR3, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 15.
- 2. Антитело или фрагмент антитела, специфичные в отношении IL-17C, где указанные антитело или фрагмент антитела содержат участок HCDR1, который содержит аминокислотную последовательность- 33 037813 под SEQ ID No.: 20, участок HCDR2, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 21, участок HCDR3, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 22, участок LCDR1, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 26, участок LCDR2, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 27, и участок LCDR3, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No.: 28.
- 3. Антитело или фрагмент антитела по любому из пп. 1 или 2, где указанные антитело или фрагмент антитела являются специфичными в отношении IL-17C человека.
- 4. Антитело или фрагмент антитела по п.3, где указанные антитело или фрагмент антитела являются специфичными в отношении IL-17C человека, IL-17C макака-крабоеда и IL-17C мыши.
- 5. Антитело или фрагмент антитела по любому из пп.1-4, где указанные антитело или фрагмент антитела представляют собой антитело человека, гуманизированное или химерное антитело или фрагмент антитела человека, гуманизированного или химерного антитела.
- 6. Антитело или фрагмент антитела по любому из пп.1 и 3-5, где указанные антитело или фрагмент антитела содержат вариабельный участок тяжелой цепи под SEQ ID No.: 17 и вариабельный участок легкой цепи под SEQ ID No.: 16.
- 7. Антитело или фрагмент антитела по любому из пп.2-5, где указанные антитело или фрагмент антитела содержат вариабельный участок тяжелой цепи под SEQ ID No.: 30 и вариабельный участок легкой цепи под SEQ ID No.: 29.
- 8. Антитело или фрагмент антитела по любому из пп.1-7, где указанные антитело или фрагмент антитела являются рекомбинантным антителом или фрагментом рекомбинантного антитела.
- 9. Применение антитела или фрагмента антитела по любому из пп.1-8 в лечении субъекта, нуждающегося в этом.
- 10. Нуклеиновая кислота, кодирующая антитело или фрагмент антитела по любому из пп.1-8.
- 11. Вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту по п.10.
- 12. Клетка, способная экспрессировать антитело или фрагмент антитела по любому из пп.1-8, содержащая вектор по п.11.
- 13. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело или фрагмент антитела по любому из пп.1-8 и фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное вещество.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP16156582 | 2016-02-19 | ||
| EP16156651 | 2016-02-22 | ||
| PCT/EP2017/053592 WO2017140831A1 (en) | 2016-02-19 | 2017-02-17 | Antibodies for il-17c |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201891594A1 EA201891594A1 (ru) | 2019-01-31 |
| EA037813B1 true EA037813B1 (ru) | 2021-05-24 |
Family
ID=58057136
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201891594A EA037813B1 (ru) | 2016-02-19 | 2017-02-17 | Антитела к il-17c |
Country Status (32)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US20190048071A1 (ru) |
| EP (1) | EP3416983B1 (ru) |
| JP (2) | JP6535139B2 (ru) |
| KR (1) | KR20180109977A (ru) |
| CN (1) | CN108699143B (ru) |
| AU (1) | AU2017219837B2 (ru) |
| BR (1) | BR112018016798A2 (ru) |
| CA (1) | CA3014842A1 (ru) |
| CL (1) | CL2018002340A1 (ru) |
| CO (1) | CO2018008724A2 (ru) |
| CU (1) | CU20180087A7 (ru) |
| CY (1) | CY1124296T1 (ru) |
| DK (1) | DK3416983T3 (ru) |
| EA (1) | EA037813B1 (ru) |
| EC (1) | ECSP18070641A (ru) |
| ES (1) | ES2877376T3 (ru) |
| HR (1) | HRP20211059T1 (ru) |
| HU (1) | HUE054755T2 (ru) |
| IL (1) | IL260733B2 (ru) |
| LT (1) | LT3416983T (ru) |
| MA (2) | MA43088B1 (ru) |
| MD (1) | MD3416983T2 (ru) |
| MX (1) | MX2018009860A (ru) |
| PH (1) | PH12018501739A1 (ru) |
| PL (1) | PL3416983T3 (ru) |
| RS (1) | RS62012B1 (ru) |
| SG (1) | SG11201806161TA (ru) |
| SI (1) | SI3416983T1 (ru) |
| TN (1) | TN2018000289A1 (ru) |
| TW (1) | TW201734041A (ru) |
| WO (1) | WO2017140831A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA201806249B (ru) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MA43088B1 (fr) * | 2016-02-19 | 2020-10-28 | Morphosys Ag | Anticorps anti-il-17c |
| TW201919698A (zh) * | 2017-09-25 | 2019-06-01 | 德商莫菲西斯公司 | 異位性皮炎之治療 |
| GB201803563D0 (en) | 2018-03-06 | 2018-04-18 | Galapagos Nv | Antibodies and pharmaceutical compositions thereof for the treatment of autoimmune skin diseases |
| TW202011995A (zh) * | 2018-07-03 | 2020-04-01 | 比利時商葛萊伯格有限公司 | 高濃度液體抗體配製物 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999060127A2 (en) * | 1998-05-15 | 1999-11-25 | Genentech, Inc. | Il-17 homologous polypeptides and therapeutic uses thereof |
| WO2007047738A1 (en) * | 2005-10-18 | 2007-04-26 | Zymogenetics, Inc. | Il-17c antagonists and methods of using the same |
| WO2013057241A1 (en) * | 2011-10-19 | 2013-04-25 | Morphosys Ag | Antagonists of il17c for the treatment of inflammatory disorders |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0138854B1 (en) | 1983-03-08 | 1992-11-04 | Chiron Mimotopes Pty. Ltd. | Antigenically active amino acid sequences |
| US5641870A (en) | 1995-04-20 | 1997-06-24 | Genentech, Inc. | Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification |
| CA2293632C (en) | 1997-06-12 | 2011-11-29 | Research Corporation Technologies, Inc. | Artificial antibody polypeptides |
| ATE417925T1 (de) | 1999-07-20 | 2009-01-15 | Morphosys Ag | Verfahren zur präsentation von (poly)peptiden/proteinen auf bakteriophagenpartikeln via disulfidbindungen |
| AU2002357060A1 (en) | 2001-12-03 | 2003-06-17 | Abgenix, Inc. | Antibody categorization based on binding characteristics |
| CA2584078A1 (en) | 2004-10-18 | 2006-04-27 | Zymogenetics, Inc. | Soluble zcytor21, anti-zcytor21 antibodies and binding partners and methods of using in inflammation |
| EP2064237A2 (en) | 2006-10-18 | 2009-06-03 | ZymoGenetics, Inc. | Il-17c antagonists and methods of using the same |
| AR083546A1 (es) * | 2010-10-25 | 2013-03-06 | Genentech Inc | Tratamiento de inflamacion gastrointestinal, soriasis y asma |
| WO2012066129A1 (en) | 2010-11-19 | 2012-05-24 | Morphosys Ag | A collection and methods for its use |
| US20140234330A1 (en) | 2011-07-22 | 2014-08-21 | Amgen Inc. | Il-17 receptor a is required for il-17c biology |
| ES2685553T3 (es) | 2012-06-12 | 2018-10-09 | Orega Biotech | Antagonistas de isoformas de IL-17 y sus usos |
| MX2017007747A (es) * | 2014-12-15 | 2018-02-13 | Morphosys Ag | Anticuerpos para il-17c. |
| MA43088B1 (fr) * | 2016-02-19 | 2020-10-28 | Morphosys Ag | Anticorps anti-il-17c |
-
2017
- 2017-02-17 MA MA43088A patent/MA43088B1/fr unknown
- 2017-02-17 JP JP2018543220A patent/JP6535139B2/ja active Active
- 2017-02-17 LT LTEP17705873.2T patent/LT3416983T/lt unknown
- 2017-02-17 TW TW106105384A patent/TW201734041A/zh unknown
- 2017-02-17 BR BR112018016798A patent/BR112018016798A2/pt unknown
- 2017-02-17 SG SG11201806161TA patent/SG11201806161TA/en unknown
- 2017-02-17 AU AU2017219837A patent/AU2017219837B2/en active Active
- 2017-02-17 US US16/076,401 patent/US20190048071A1/en not_active Abandoned
- 2017-02-17 EP EP17705873.2A patent/EP3416983B1/en active Active
- 2017-02-17 WO PCT/EP2017/053592 patent/WO2017140831A1/en active Application Filing
- 2017-02-17 PL PL17705873T patent/PL3416983T3/pl unknown
- 2017-02-17 CU CU2018000087A patent/CU20180087A7/es unknown
- 2017-02-17 DK DK17705873.2T patent/DK3416983T3/da active
- 2017-02-17 ES ES17705873T patent/ES2877376T3/es active Active
- 2017-02-17 KR KR1020187024953A patent/KR20180109977A/ko not_active Application Discontinuation
- 2017-02-17 MD MDE20190007T patent/MD3416983T2/ro unknown
- 2017-02-17 IL IL260733A patent/IL260733B2/en unknown
- 2017-02-17 MX MX2018009860A patent/MX2018009860A/es unknown
- 2017-02-17 CA CA3014842A patent/CA3014842A1/en active Pending
- 2017-02-17 MA MA44227A patent/MA44227B1/fr unknown
- 2017-02-17 SI SI201730777T patent/SI3416983T1/sl unknown
- 2017-02-17 RS RS20210775A patent/RS62012B1/sr unknown
- 2017-02-17 HU HUE17705873A patent/HUE054755T2/hu unknown
- 2017-02-17 TN TNP/2018/000289A patent/TN2018000289A1/en unknown
- 2017-02-17 EA EA201891594A patent/EA037813B1/ru unknown
- 2017-02-17 CN CN201780011965.2A patent/CN108699143B/zh active Active
-
2018
- 2018-08-08 US US16/058,143 patent/US10259869B2/en active Active
- 2018-08-16 CL CL2018002340A patent/CL2018002340A1/es unknown
- 2018-08-16 PH PH12018501739A patent/PH12018501739A1/en unknown
- 2018-08-21 CO CONC2018/0008724A patent/CO2018008724A2/es unknown
- 2018-09-17 ZA ZA2018/06249A patent/ZA201806249B/en unknown
- 2018-09-19 EC ECSENADI201870641A patent/ECSP18070641A/es unknown
-
2019
- 2019-02-26 US US16/286,231 patent/US10633439B2/en active Active
- 2019-04-26 JP JP2019086144A patent/JP6916834B2/ja active Active
-
2020
- 2020-03-18 US US16/822,844 patent/US11987621B2/en active Active
-
2021
- 2021-07-02 HR HRP20211059TT patent/HRP20211059T1/hr unknown
- 2021-07-06 CY CY20211100604T patent/CY1124296T1/el unknown
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999060127A2 (en) * | 1998-05-15 | 1999-11-25 | Genentech, Inc. | Il-17 homologous polypeptides and therapeutic uses thereof |
| WO2007047738A1 (en) * | 2005-10-18 | 2007-04-26 | Zymogenetics, Inc. | Il-17c antagonists and methods of using the same |
| WO2013057241A1 (en) * | 2011-10-19 | 2013-04-25 | Morphosys Ag | Antagonists of il17c for the treatment of inflammatory disorders |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| RAJITA PAPPU ; VLADIMIR RAMIREZ-CARROZZI ; NARUHISA OTA ; WENJUN OUYANG ; YAN HU: "The IL-17 Family Cytokines in Immunity and Disease", JOURNAL OF CLINICAL IMMUNOLOGY, KLUWER ACADEMIC PUBLISHERS-PLENUM PUBLISHERS, NE, vol. 30, no. 2, 23 February 2010 (2010-02-23), Ne, pages 185 - 195, XP019791216, ISSN: 1573-2592 * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20210130488A1 (en) | Methods of treating immunotherapy-related toxicity using a gm-csf antagonist | |
| US10815297B2 (en) | Antagonists of IL17C for the treatment of inflammatory disorders | |
| US9809647B2 (en) | Neutralizing anti-CCL20 antibodies | |
| US11987621B2 (en) | Antibodies for IL-17C | |
| JP7094698B2 (ja) | 抗体、使用、及び方法 | |
| JP2024500920A (ja) | 抗ｉｌ１ｒａｐ抗体 | |
| JP2015515487A (ja) | 抗ｐｄｇｆ−ｃ抗体 | |
| US20230406922A1 (en) | Humanized cd19 antibody and use thereof | |
| CA3124356A1 (en) | Fn14 antibodies and uses thereof | |
| JP7525397B2 (ja) | ネコＭｃＤｏｎｏｕｇｈ肉腫（ＦＭＳ）様チロシンキナーゼ３受容体リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）に対する抗体並びに自己免疫疾患及び炎症性疾患を治療するためのそれらの使用 |