EA035332B1 - Полипептиды, нацеленные на слияние вич - Google Patents
Полипептиды, нацеленные на слияние вич Download PDFInfo
- Publication number
- EA035332B1 EA035332B1 EA201792269A EA201792269A EA035332B1 EA 035332 B1 EA035332 B1 EA 035332B1 EA 201792269 A EA201792269 A EA 201792269A EA 201792269 A EA201792269 A EA 201792269A EA 035332 B1 EA035332 B1 EA 035332B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- polypeptide
- amino acid
- adnectin
- acid sequence
- seq
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 274
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 166
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 153
- 230000004927 fusion Effects 0.000 title claims abstract description 96
- 230000008685 targeting Effects 0.000 title description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 122
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 114
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims abstract description 82
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 81
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 69
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 claims abstract description 59
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 claims abstract description 46
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 claims abstract description 46
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 119
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 102
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 47
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 38
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 34
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 30
- 229940125777 fusion inhibitor Drugs 0.000 claims description 26
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 25
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 25
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 16
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 16
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 12
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 claims description 10
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 claims description 10
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 claims description 10
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 8
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 8
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 8
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 claims description 8
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 claims description 7
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 claims description 7
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 claims description 6
- 239000002835 hiv fusion inhibitor Substances 0.000 claims description 6
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims description 5
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 claims description 5
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 claims description 5
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 claims description 5
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 claims description 4
- 102000028557 immunoglobulin binding proteins Human genes 0.000 claims description 3
- 108091009323 immunoglobulin binding proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 abstract description 23
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 abstract description 23
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 10
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 92
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 74
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 67
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 60
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 59
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 56
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 18
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 15
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 15
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 14
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 14
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 14
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 13
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 13
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 12
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 12
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 11
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 11
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 11
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 11
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 11
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 10
- 230000006870 function Effects 0.000 description 10
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 10
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 9
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 9
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 9
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 9
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 9
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 8
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 8
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 8
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 8
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 8
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 8
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 8
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 8
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 8
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 7
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 7
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 7
- -1 while the other Proteins 0.000 description 7
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 6
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 6
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 6
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 6
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 6
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 6
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 6
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 5
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 5
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 108010032976 Enfuvirtide Proteins 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229940124522 antiretrovirals Drugs 0.000 description 5
- 239000003903 antiretrovirus agent Substances 0.000 description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 5
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 5
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 5
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 5
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 5
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 5
- 102100035875 C-C chemokine receptor type 5 Human genes 0.000 description 4
- 101710149870 C-C chemokine receptor type 5 Proteins 0.000 description 4
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 4
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 4
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N Lactic Acid Natural products CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 4
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 229950010245 ibalizumab Drugs 0.000 description 4
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 4
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 4
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Natural products OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 3
- 101001027128 Homo sapiens Fibronectin Proteins 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 3
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- PEASPLKKXBYDKL-FXEVSJAOSA-N enfuvirtide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(C)=O)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)C1=CN=CN1 PEASPLKKXBYDKL-FXEVSJAOSA-N 0.000 description 3
- 239000005038 ethylene vinyl acetate Substances 0.000 description 3
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 3
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 3
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 229920001200 poly(ethylene-vinyl acetate) Polymers 0.000 description 3
- 230000001566 pro-viral effect Effects 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 239000003419 rna directed dna polymerase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 3
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 3
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 3
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 3
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 3
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 241000701822 Bovine papillomavirus Species 0.000 description 2
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 101710167800 Capsid assembly scaffolding protein Proteins 0.000 description 2
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 2
- 101100005713 Homo sapiens CD4 gene Proteins 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 241000701085 Human alphaherpesvirus 3 Species 0.000 description 2
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Polymers 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Natural products OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 101710130420 Probable capsid assembly scaffolding protein Proteins 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 2
- 101710204410 Scaffold protein Proteins 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- DQXBYHZEEUGOBF-UHFFFAOYSA-N but-3-enoic acid;ethene Chemical compound C=C.OC(=O)CC=C DQXBYHZEEUGOBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical compound OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical group C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 2
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 229960002062 enfuvirtide Drugs 0.000 description 2
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 2
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 2
- 229940050526 hydroxyethylstarch Drugs 0.000 description 2
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- JJTUDXZGHPGLLC-UHFFFAOYSA-N lactide Chemical compound CC1OC(=O)C(C)OC1=O JJTUDXZGHPGLLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RGLRXNKKBLIBQS-XNHQSDQCSA-N leuprolide acetate Chemical compound CC(O)=O.CCNC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 RGLRXNKKBLIBQS-XNHQSDQCSA-N 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- 238000003670 luciferase enzyme activity assay Methods 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000034217 membrane fusion Effects 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 2
- AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N pentan-3-ol Chemical compound CCC(O)CC AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000164 protein isolation Methods 0.000 description 2
- 230000012743 protein tagging Effects 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N resorcinol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1 GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FGDZQCVHDSGLHJ-UHFFFAOYSA-M rubidium chloride Chemical compound [Cl-].[Rb+] FGDZQCVHDSGLHJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000013391 scatchard analysis Methods 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NDVRKEKNSBMTAX-BTVCFUMJSA-N (2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O NDVRKEKNSBMTAX-BTVCFUMJSA-N 0.000 description 1
- XMQUEQJCYRFIQS-YFKPBYRVSA-N (2s)-2-amino-5-ethoxy-5-oxopentanoic acid Chemical compound CCOC(=O)CC[C@H](N)C(O)=O XMQUEQJCYRFIQS-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XBBVURRQGJPTHH-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyacetic acid;2-hydroxypropanoic acid Chemical compound OCC(O)=O.CC(O)C(O)=O XBBVURRQGJPTHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 3-phospho-D-glyceric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)COP(O)(O)=O OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 description 1
- 241000713842 Avian sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031650 C-X-C chemokine receptor type 4 Human genes 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- 108010041397 CD4 Antigens Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 201000006082 Chickenpox Diseases 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N D-alanine Chemical compound C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 206010013710 Drug interaction Diseases 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 102100038132 Endogenous retrovirus group K member 6 Pro protein Human genes 0.000 description 1
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 description 1
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 102000030595 Glucokinase Human genes 0.000 description 1
- 108010021582 Glucokinase Proteins 0.000 description 1
- 102000005731 Glucose-6-phosphate isomerase Human genes 0.000 description 1
- 108010070600 Glucose-6-phosphate isomerase Proteins 0.000 description 1
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 description 1
- 102000005548 Hexokinase Human genes 0.000 description 1
- 108700040460 Hexokinases Proteins 0.000 description 1
- 101000922348 Homo sapiens C-X-C chemokine receptor type 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 241000701109 Human adenovirus 2 Species 0.000 description 1
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 238000012695 Interfacial polymerization Methods 0.000 description 1
- 241000235649 Kluyveromyces Species 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 108010000817 Leuprolide Proteins 0.000 description 1
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 1
- 241001082241 Lythrum hyssopifolia Species 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- 239000004907 Macro-emulsion Substances 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007474 Multiprotein Complexes Human genes 0.000 description 1
- 108010085220 Multiprotein Complexes Proteins 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108010087702 Penicillinase Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 241000233805 Phoenix Species 0.000 description 1
- 102000012288 Phosphopyruvate Hydratase Human genes 0.000 description 1
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 108091036407 Polyadenylation Proteins 0.000 description 1
- 241001505332 Polyomavirus sp. Species 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 1
- 101100084022 Pseudomonas aeruginosa (strain ATCC 15692 / DSM 22644 / CIP 104116 / JCM 14847 / LMG 12228 / 1C / PRS 101 / PAO1) lapA gene Proteins 0.000 description 1
- 108010011939 Pyruvate Decarboxylase Proteins 0.000 description 1
- 102000013009 Pyruvate Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020005115 Pyruvate Kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000004879 Racemases and epimerases Human genes 0.000 description 1
- 108090001066 Racemases and epimerases Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010052090 Renilla Luciferases Proteins 0.000 description 1
- 108020005091 Replication Origin Proteins 0.000 description 1
- 241001068263 Replication competent viruses Species 0.000 description 1
- KJTLSVCANCCWHF-UHFFFAOYSA-N Ruthenium Chemical compound [Ru] KJTLSVCANCCWHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102100038803 Somatotropin Human genes 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 102000005924 Triose-Phosphate Isomerase Human genes 0.000 description 1
- 108700015934 Triose-phosphate isomerases Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010046980 Varicella Diseases 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N WHWLQLKPGQPMY Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C1=CNC=N1 IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N aldehydo-D-glucose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 238000011225 antiretroviral therapy Methods 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 229960003872 benzethonium Drugs 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000006635 beta-lactamase Human genes 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H bis[(2-oxo-1,3,2$l^{5},4$l^{2}-dioxaphosphaplumbetan-2-yl)oxy]lead Chemical compound [Pb+2].[Pb+2].[Pb+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N butyl alcohol Substances CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000004970 cd4 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004671 cell-free system Anatomy 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007910 chewable tablet Substances 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005354 coacervation Methods 0.000 description 1
- ZCIGNRJZKPOIKD-CQXVEOKZSA-N cobicistat Chemical compound S1C(C(C)C)=NC(CN(C)C(=O)N[C@@H](CCN2CCOCC2)C(=O)N[C@H](CC[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)OCC=2SC=NC=2)CC=2C=CC=CC=2)=C1 ZCIGNRJZKPOIKD-CQXVEOKZSA-N 0.000 description 1
- 229960002402 cobicistat Drugs 0.000 description 1
- 229940000425 combination drug Drugs 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011461 current therapy Methods 0.000 description 1
- 150000001923 cyclic compounds Chemical class 0.000 description 1
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical compound OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N dodecyl hydrogen sulfate Chemical compound CCCCCCCCCCCCOS(O)(=O)=O MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043264 dodecyl sulfate Drugs 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000000890 drug combination Substances 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 229940099052 fuzeon Drugs 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 102000018146 globin Human genes 0.000 description 1
- 108060003196 globin Proteins 0.000 description 1
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002414 glycolytic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 239000008172 hydrogenated vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001600 hydrophobic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920003063 hydroxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940031574 hydroxymethyl cellulose Drugs 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003701 inert diluent Substances 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 108091006086 inhibitor proteins Proteins 0.000 description 1
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940124524 integrase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000002850 integrase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000012482 interaction analysis Methods 0.000 description 1
- 230000008611 intercellular interaction Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 239000001573 invertase Substances 0.000 description 1
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- ZKLLSNQJRLJIGT-UYFOZJQFSA-N keto-D-fructose 1-phosphate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(=O)COP(O)(O)=O ZKLLSNQJRLJIGT-UYFOZJQFSA-N 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 229960004338 leuprorelin Drugs 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 231100001252 long-term toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- GSNHKUDZZFZSJB-QYOOZWMWSA-N maraviroc Chemical compound CC(C)C1=NN=C(C)N1[C@@H]1C[C@H](N2CC[C@H](NC(=O)C3CCC(F)(F)CC3)C=3C=CC=CC=3)CC[C@H]2C1 GSNHKUDZZFZSJB-QYOOZWMWSA-N 0.000 description 1
- 229960004710 maraviroc Drugs 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Chemical class 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000002887 multiple sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 239000002088 nanocapsule Substances 0.000 description 1
- 150000002790 naphthalenes Chemical class 0.000 description 1
- 108700004028 nef Genes Proteins 0.000 description 1
- 101150023385 nef gene Proteins 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N p-hydroxybenzoic acid methyl ester Natural products COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229950009506 penicillinase Drugs 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 101150009573 phoA gene Proteins 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920002338 polyhydroxyethylmethacrylate Polymers 0.000 description 1
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 108010043277 recombinant soluble CD4 Proteins 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000007151 ring opening polymerisation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940102127 rubidium chloride Drugs 0.000 description 1
- 229910052707 ruthenium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000012106 screening analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002047 solid lipid nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000011301 standard therapy Methods 0.000 description 1
- SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M stearalkonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000007939 sustained release tablet Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000012385 systemic delivery Methods 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000816 toxic dose Toxicity 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000012384 transportation and delivery Methods 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 108010087967 type I signal peptidase Proteins 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- XOOUIPVCVHRTMJ-UHFFFAOYSA-L zinc stearate Chemical compound [Zn+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O XOOUIPVCVHRTMJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/76—Albumins
- C07K14/765—Serum albumin, e.g. HSA
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/79—Transferrins, e.g. lactoferrins, ovotransferrins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Virology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Immunology (AREA)
Abstract
Изобретение направлено на полипептиды, содержащие CD4-связывающий фрагмент, gp41-связывающий фрагмент, фрагмент пептидного ингибитора слияния ВИЧ, и их комбинации. Более конкретно, настоящее изобретение относится к полипептидам, содержащим фибронектиновый каркасный доменный белок, который связывается с CD4, фибронектиновый каркасный доменный белок, который связывается с доменом N17 белка gp41, и пептидный ингибитор слияния ВИЧ, или их комбинациям. Данное изобретение также относится к использованию новых белков в терапевтическом применении в лечении ВИЧ.
Description
Область изобретения
Данное изобретение относится к полипептидам, содержащим ОП4-связывающий фрагмент, gp41связывающий фрагмент, фрагмент пептидного ингибитора слияния ВИЧ, и к их комбинациям. Более конкретно, настоящее изобретение относится к полипептидам, содержащим фибронектиновый каркасный доменный белок, который связывается с CD4, фибронектиновый каркасный доменный белок, который связывается с доменом N17 белка gp41, и пептидный ингибитор слияния ВИЧ, или к их комбинациям. Изобретение также относится к использованию новых белков в терапевтическом применении в лечении ВИЧ-инфекции.
Предшествующий уровень техники
Синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД) является результатом инфицирования ретровирусом, известным как вирус иммунодефицита человека (ВИЧ). Он остается серьезной медицинской проблемой, принимая во внимание, что по данным на конец 2013 г. около 35 млн человек во всем мире были инфицированы. В течение этого года было зарегистрировано 2,1 млн новых случаев инфекций,и 1,5 млн человек умерли от осложнений СПИД.
Современная терапия для ВИЧ-инфицированных субъектов состоит из комбинирования одобренных антиретровирусных средств. В настоящее время одобрено более двух дюжин лекарственных средств для ВИЧ-инфекции, или в виде отдельных агентов, комбинаций с фиксированными дозами, или схем приема одной таблетки, при этом последние два содержат 2-4 одобренных агента. Эти агенты относятся к нескольким разным классам, нацеленным либо на вирусный фермент, либо на функцию вирусного белка в течение жизненного цикла вируса. Таким образом, агенты классифицируют либо как нуклеотидные ингибиторы обратной транскриптазы (NRTI), ненуклеотидные ингибиторы обратной транскриптазы (NNRTI), ингибиторы протеаз (PI), ингибиторы интеграз (INI) или ингибиторы проникновения в клетку (один ингибитор проникновения, маравирок, нацелен на белок хозяина CCR5, в то время как другой, энфувиртид, представляет собой пептид, который нацелен на область gp41 вирусного белка gp160). Кроме того, фармакокинетический усилитель без противовирусной активности (кобицистат) был одобрен для использования в комбинациях с антиретровирусными агентами (ARV), требующих усиления.
Несмотря на имеющийся арсенал агентов и комбинаций лекарственных средств, остается медицинская потребность в новых антиретровирусных агентах, отчасти из-за необходимости в продолжительном приеме дозированных средств для борьбы с инфекцией. Документально описаны значительные проблемы, связанные с долговременной токсичностью, обуславливающие необходимость принять меры и предупредить такие сопутствующие заболевания (например поражение ЦНС, сердечнососудистые/метаболические, почечные заболевания). Кроме того, по-прежнему остается проблемой повышение частоты неблагоприятного исхода современных методов терапии, связанное либо с присутствием или возникновением резистентных штаммов, либо с нарушениями режима лечения, связанными с лекарственными каникулами или вредными побочными эффектами. Например, несмотря на терапию, было подсчитано, что 63% субъектов, получавших комбинированную терапию, оставались зараженными вирусом, так как они имели вирусную нагрузку более 500 копий/мл (Oette, M. et al., Primary ВИЧ Drug Resistance and Efficacy of First-Line Antiretroviral Therapy Guided by Resistance Testing, J. Acq. Imm. Def. Synd., 41(5):573-581 (2006)). Среди этих пациентов 76% имели вирусы, резистентные к одному или более классам антиретровирусных агентов. В результате, необходимы новые лекарственные средства, которые являются более удобными, имеют высокие генетические барьеры для развития резистентности и обладают улучшенной безопасностью по сравнению с имеющимися в настоящее время агентами.
В настоящее время хорошо известно, что клетки могут быть инфицированы ВИЧ при помощи процесса, в котором происходит слияние между клеточной мембраной и вирусной мембраной. Общепринятой моделью этого процесса является модель, где комплекс гликопротеинов вирусной оболочки (gp120/gp41) взаимодействует с рецепторами клеточной поверхности на мембранах клеток-мишеней. После связывания gp120 с клеточными рецепторами (например CD4 в сочетании с хемокиновым корецептором, таким как CCR5 или CXCR4), в комплексе gp120/gp41 индуцируется конформационное изменение, которое позволяет gp41 встраиваться в мембрану клетки-мишени и опосредует мембранное слияние. Поскольку эти процессы проникновения происходят на клеточной мембране, они поддаются ингибированию макромолекулами, которые включают биологические пептиды (Haqqani et al., Antiviral Res., 98:158 (2013)). Например, одобренный противовирусный пептид энфувиртид (FUZEON®) нацелен на область gp41, вовлеченную в мембранное слияние. Более крупные полипептиды, такие как моноклональные антитела, также могут ингибировать различные аспекты проникновения вируса. И моноклональное антитело, нацеленное на первую стадию проникновения вируса, на взаимодействие с клеточным рецептором CD4 (ибализумаб; Bruno et al., J. Antimicrob. Chemother., 65:1839 (2010)), и моноклональное антитело, нацеленное на корецептор CCR5 (PRO-140; Tenorio, Curr. ВИЧ/AIDS Rep., 8:1 (2011)), оба, продемонстрировали положительные результаты в фазе 2а клинических испытаний. Эти антитела также обла- 1 035332 дают свойством противовирусных препаратов длительного действия с возможными схемами введения от еженедельного до ежемесячного (Jacobson et al., J. Infect. Dis., 201:1481 (2010); Jacobson et al., Antimicrob.
Agents Chemother, 53:450 (2009)).
Другое свойство пептидных ингибиторов проникновения заключается в том, что усиленная или синергетическая активность может быть получена в результате присоединения двух пептидных ингибиторов друг к другу или если один ингибитор локализован вблизи места действия посредством связывания с биомолекулами мембраны. Таким образом, присоединение пептидного ингибитора слияния к моноклональныму антителу, нацеленному на CCR5, (Kopetzki et al., Virol. J., 5:56 (2008)) или присоединение холестеринового фрагмента к С-концу пептидного ингибитора слияния для помещения его на поверхности мембраны клетки-мишени (Ingallinela et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 106:5801 (2009); Augusto et al., J. Antimicrob. Chemother., 69:1286 (2014)) в значительной степени увеличивает эффективность комбинированной молекулы по сравнению с отдельными молекулами. Аналогично, биспецифические антитела, состоящие из фрагментов анти-ВИЧ-1 нейтрализующих антител, нацеленных на gp120, слитых с ибализумабом, показали синергетическое увеличение эффективности по сравнению с отдельными ингибиторами (Sun et al., J. Acquir. Immune Defic. Syndr., 66:473 (2014)). Молекулы комбинектина по изобретению используют эти различные свойства.
Краткое изложение сущности изобретения
Данное изобретение направлено на полипептиды, содержащие CD4-связывающий фрагмент, gp41связывающий фрагмент, фрагмент пептидного ингибитора слияния ВИЧ, и их комбинации.
Одно воплощение изобретения направлено на полипептиды, содержащие фибронектиновый каркасный доменный белок, который связывается с CD4, фибронектиновый каркасный доменный белок, который связывается с доменом N17 белка gp41, и пептидный ингибитор слияния ВИЧ.
В одном воплощении изобретения три домена соединены друг с другом линкерами. В другом воплощении изобретения три домена могут быть соединены друг с другом в любом порядке. В другом воплощении изобретения полипептид содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентична нелинкерным участкам SEQ ID NO: 3, 5, 7 или 9.
Изобретение также направлено на полипептиды, содержащие фибронектиновый каркасный доменный белок, который связывается с CD4, и фибронектиновый каркасный доменный белок, который связывается с доменом N17 белка gp41. В одном воплощении изобретения два домена соединены друг с другом линкерами. В другом воплощении изобретения два домена могут быть соединены друг с другом в любом порядке.
Изобретение также направлено на полипептиды, содержащие фибронектиновый каркасный доменный белок, который связывается с CD4, и пептидный ингибитор слияния ВИЧ. В одном воплощении изобретения два домена соединены друг с другом линкерами. В другом воплощении изобретения два домена могут быть соединены друг с другом в любом порядке.
Изобретение также направлено на полипептиды, содержащие фибронектиновый каркасный доменный белок, который связывается с доменом N17 белка gp41, и пептидный ингибитор слияния ВИЧ. В одном воплощении изобретения два домена соединены друг с другом линкерами. В другом воплощении изобретения два домена могут быть соединены друг с другом в любом порядке. В другом воплощении изобретения, полипептид содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентична нелинкерным участкам SEQ ID NO: 410-428.
Еще одно воплощение изобретения также направлено на полипептиды, содержащие три активных домена, фибронектиновый каркасный доменный белок, который связывается с CD4, gp41-связывающий фрагмент и фрагмент пептидного ингибитора слияния ВИЧ. Изобретение также направлено на полипептиды, содержащие фибронектиновый каркасный доменный белок, который связывается с gp41, CD4связывающий фрагмент и фрагмент пептидного ингибитора слияния ВИЧ. Изобретение также направлено на полипептиды, содержащие CD4-связывающий фрагмент, gp41-связывающий фрагмент и пептидный ингибитор слияния ВИЧ. В одном воплощении изобретения два домена соединены друг с другом линкерами. В другом воплощении изобретения два домена могут быть соединены друг с другом в любом порядке.
Изобретение также направлено на полипептиды, содержащие два активных домена, фибронектиновый каркасный доменный белок, который связывается с CD4, и gp41-связывающий фрагмент. Изобретение также направлено на полипептиды, содержащие фибронектиновый каркасный доменный белок, который связывается с gp41, и CD4-связывающий фрагмент. Изобретение также направлено на полипептиды, содержащие CD4-связывающий фрагмент и пептидный ингибитор слияния ВИЧ. Изобретение также направлено на полипептиды, содержащие gp41-связывающий фрагмент и пептидный ингибитор слияния ВИЧ. В одном воплощении изобретения два домена соединены друг с другом линкерами. В другом воплощении изобретения два домена могут быть соединены друг с другом в любом порядке.
Другое воплощение изобретения также направлено на анти-CD4 Аднектин, анти-Ы17 Аднектин или пептидные ингибиторы слияния ВИЧ. В другом воплощении изобретения полипептид содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентична нелинкерным участкам SEQ ID NO: 95-114, или SEQ ID NO: 115-371, или SEQ ID NO: 372-392 соответ- 2 035332 ственно.
В другом воплощении изобретения фармакокинетический (PK) фрагмент присоединен к полипептидам по изобретению. Примеры PK-фрагмента включают, без ограничения ими, полиэтиленгликоль, сиаловую кислоту, Fc, фрагмент Fc, трансферрин, сывороточный альбумин (HSA), белок, связывающий сывороточный альбумин, и белок, связывающий сывороточный иммуноглобулин. В одном воплощении изобретения PK-фрагмент может быть присоединен к линкерным областям или к N- или С-концу полипептида по изобретению. В другом воплощении изобретения, полипептид содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентична нелинкерным участкам SEQ ID NO: 4, 6, 8 или 10.
Изобретение также направлено на полипептид, содержащий аминокислотную последовательность с любой из последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 3-10.
Изобретение также направлено на фармацевтическую композицию, содержащую один или более полипептидов по изобретению и носитель.
Изобретение также относится к способу лечения ВИЧ у субъекта, включающему введение эффективного количества полипептидов по изобретению.
Краткое описание графических материалов
На фиг. 1 представлено изображение альтернативных Комбинектинов. Один из Аднектинов связывается с CD4, второй Аднектин связывается с областью HR1 белка gp41. Пептид также связывается в области HR1 белка gp41. Разные компоненты Комбинектина соединены друг с другом в любом порядке линкерами. Любой из Комбинектинов может иметь присоединенный PK-фрагмент, такой как HSA или Fc.
На фиг. 2 показаны аминокислотные последовательности слияния Fc-Комбинектин 3137 (SEQ ID NO: 4), 3151 (SEQ ID NO: 6) и слияния человеческого сывороточного альбумина (HSA) - Комбинектин 3191 (SEQ ID NO: 8) и 3202 (SEQ ID NO: 10). Последовательности Fc и HSA выделены жирным шрифтом. Последовательности анти-CD4 Аднектина подчеркнуты. Последовательности анти-Ы17 Аднектина подчеркнуты двойной чертой. Пептидные последовательности ингибитора ВИЧ подчеркнуты жирной линией. Линкерные последовательности показаны курсивом.
На фиг. 3 показана активность (EC50 и EC90) Комбинектина 3137, 3151, 3191 и 3202, как описано в примере 2.
На фиг. 4 показаны PK характеристики Комбинектина 3137, 3151, 3191 и 3202, как описано в примере 3.
На фиг. 5 показаны аминокислотные последовательности анти-Ы17 Аднектина в комбинации с пептидным ингибитором слияния ВИЧ, которые соответствуют последовательностям, описанным в табл. 4, без N-концевых и С-концевых удлиняющих областей. Последовательности анти-Ы17 Аднектина подчеркнуты двойной чертой. Последовательности пептидного ингибитора слияния ВИЧ подчеркнуты жирной линией. Линкерные последовательности показаны курсивом.
На фиг. 6 показано изображение WebLogo для CD-петли анти-CD4 Аднектина. WebLogo создает лигатуры последовательностей, графические представления паттернов при множественном выравнивании последовательностей. Каждая лигатура состоит из стеков из букв, один стек для каждого положения в последовательности. Общая высота каждого стека указывает на консервативность последовательности в этом положении (измеряется в битах), тогда как высота символов внутри стека отражает относительную частоту соответствующей аминокислоты или нуклеиновой кислоты в этом положении (Crooks, G.E. et al., WebLogo: A sequence logo generator, Genome Research, 14:1188-1190(2004)).
На фиг. 7 показано изображение WebLogo для FG-петли анти-CD4 Аднектина (Schneider, T.D. et al., Sequence Logos: A New Way to Display Consensus Sequences, Nucleic Acids Res., 18:6097-6100 (1990)).
На фиг. 8 показаны данные по точечным мутантам для пептидного ингибитора слияния ВИЧ. Аспарагиновая кислота (D) около С-конца пептидного ингибитора слияния ВИЧ заменена аминокислотами, указанными вдоль оси x.
Подробное описание изобретения Определения
Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые здесь, имеют такое же значение, какое обычно подразумевается квалифицированным специалистом. Хотя любые способы и композиции, подобные или эквивалентные описанным здесь, могут быть использованы в практическом осуществлении или для тестирования настоящего изобретения, здесь описаны предпочтительные способы и композиции.
При использовании здесь полипептид относится к любой последовательности из двух или более аминокислот, независимо от длины, посттрансляционной модификации или функции. Полипептид, пептид и белок используются здесь взаимозаменяемо. Полипептиды могут быть модифицированы любым из ряда стандартных химических способов (например, аминокислота может быть модифицирована с помощью защитной группы; карбокси-концевая аминокислота может быть превращена в концевую амидную группу; амино-концевой остаток может быть модифицирован группами, которые, например, повышают липофильность; или полипептид может быть химически гликозилирован или иным образом
- 3 035332 модифицирован для увеличения стабильности или периода полувыведения in vivo). Модификации полипептида могут включать присоединение другой структуры, такой как циклическое соединение или другая молекула, к полипептиду и могут также включать полипептиды, которые содержат один или более аминокислот в измененной конфигурации (то есть R или S; или L или D).
Пептиды по изобретению могут включать, например, белки, происходящие из десятого домена фибронектина типа III, которые были модифицированы, чтобы связываться с доменом CD4 или N17 белка gp41 и упоминаются здесь как анти-CD4 Аднектин, анти-Н17 Аднектин, CD4 Аднектин или gp41 Аднектин. Полипептиды по изобретению также могут включать пептиды, смоделированные после области семичленного повтора 2 (HR2) оболочки гликопротеина gp41 ВИЧ, которые ингибируют слияние путем связывания области семичленного повтора 1 (HR1) гликопротеина gp41 и упоминаются здесь как пептидный ингибитор слияния ВИЧ или пептидный ингибитор слияния. Полипептиды по изобретению также включают Комбинектины, содержащие анти-CD4 Аднектин, соединенный с анти-Н17 Аднектином, связанным с пептидным ингибитором слияния ВИЧ (фиг. 1). Альтернативно, Комбинектин содержит анти-CD4 Аднектин, соединенный с анти-Ю7 Аднектином, или анти-Ю7 Аднектин, соединенный с пептидным ингибитором слияния ВИЧ, или анти-CD4 Аднектин, соединенный с пептидным ингибитором слияния ВИЧ.
При использовании здесь полипептидная цепь относится к полипептиду, каждый из доменов которого соединен с другим(и) доменом(ами) пептидной(ыми) связью(ями), в отличие от нековалентных взаимодействий или дисульфидных связей.
Выделенный полипептид представляет собой полипептид, который был идентифицирован и отделен от и/или выделен из компонента его природной среды. Загрязняющие компоненты его природной среды представляют собой вещества, которые будут мешать диагностическим или терапевтическим применениям полипептида и могут включать рекомбинантные белки клетки-хозяина и другие белковые или небелковые растворенные вещества. В одном воплощении полипептиды очищают (1) до более чем 95% по массе полипептида, как определено методом Лоури, и наиболее предпочтительно до более чем 99% по массе, или (2) до гомогенности согласно SDS-PAGE (электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия) в восстанавливающих или невосстанавливающих условиях с использованием кумасси голубого или серебряного красителя. Как правило, выделенный полипептид получают посредством по меньшей мере одной стадии очистки.
Процент (%) идентичности аминокислотной последовательности здесь определен как процент аминокислотных остатков в последовательности-кандидате, которые идентичны аминокислотным остаткам в выбранной последовательности, после выравнивания последовательностей и введения пробелов, если это необходимо, для достижения максимального процента идентичности последовательности и без учета каких-либо консервативных замен как части идентичности последовательности. Выравнивание для определения процента аминокислотной идентичности может быть осуществлено различными способами, известными в данной области, например с использованием общедоступного программного обеспечения, такого как BLAST, BLAST-2, ALIGN, ALIGN-2 или Megalign (DNASTAR®). Специалисты в данной области могут легко определить подходящие параметры для оценки выравнивания, включая любые алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания по всей длине сравниваемых последовательностей. Например, % идентичности аминокислотной последовательности заданной аминокислотной последовательности А с заданной аминокислотной последовательностью В (что альтернативно может быть названо как заданная аминокислотная последовательность А, которая имеет или содержит определенный % идентичности аминокислотной последовательности с заданной аминокислотной последовательностью В) рассчитывают следующим образом: умножают на 100 дробь X/Y, где X представляет собой количество аминокислотных остатков, подсчитанных как идентичные совпадения программой выравнивания последовательности ALIGN-2 при программном выравнивания А и В, и где Y представляет собой общее количество аминокислотных остатков в В. Понятно, что если длина аминокислотной последовательности А не равна длине аминокислотной последовательности В, то % идентичности аминокислотной последовательности А с В не будет равен % идентичности аминокислотной последовательности В с А.
При использовании здесь консервативная замена означает замещение аминокислотного остатка другим, без изменения общей конформации и функции пептида, включая, без ограничения ими, замену аминокислоты другой аминокислотой, имеющей похожие свойства (такие как, например, полярность, потенциал образования водородной связи, кислая, основная форма, гидрофобные, ароматические свойства и тому подобное). Аминокислоты с похожими свойствами хорошо известны в данной области. Например, аргинин, гистидин и лизин являются гидрофильно-основными аминокислотами и могут быть взаимозаменяемыми. Аналогично, изолейцин, гидрофобная аминокислота, может быть заменен лейцином, метионином или валином. Нейтральные гидрофильные аминокислоты, которые могут замещать друг друга, включают аспарагин, глутамин, серин и треонин. Под замещенные или модифицированные в настоящем изобретении подпадают те аминокислоты, которые были изменены или модифицированы по сравнению с природными аминокислотами. Фактически, следует понимать, что в контексте настоящего изобретения консервативной заменой признается замена одной аминокислоты на другую ами- 4 035332 нокислоту, обладающую похожими свойствами.
При использовании здесь сайт связывания относится к сайту или части белка (например CD4, gp41), которые взаимодействуют или связываются с конкретным белком по изобретению (например как эпитоп распознаются антителом). Сайты связывания могут быть образованы смежными аминокислотами или несмежными аминокислотами, расположенными рядом в результате третичного фолдинга белка. Сайты связывания, образованные смежными аминокислотами, обычно сохраняются при воздействии денатурирующих растворителей, в то время как сайты связывания, образованные при третичном фолдинге, обычно теряются при обработке денатурирующими растворителями.
Сайт связывания анти-CD4 фрагмента или анти-Н17 фрагмента по изобретению может быть определен путем применения стандартных методик, обычно используемых для картирования эпитопов антител, включая, без ограничения ими, протеазное картирование и мутационный анализ. Альтернативно, сайт связывания может быть определен посредством конкурентного анализа с использованием эталонного белка (например другого Аднектина или антитела), который связывается с тем же полипептидом, например CD4 или gp41. Если тестируемый белок и эталонная молекула (например другой Аднектин или антитело) конкурируют, тогда они связываются с тем же сайтом связывания или с сайтами связывания, достаточно близкими, так что связывание одной молекулы мешает другой.
Термины специфично связывается, специфичное связывание, селективное связывание и селективно связывается, используемые здесь взаимозаменяемо, относятся к белку, который проявляет аффинность к CD4 или gp41, но в значительной степени не связывается (например имеет менее чем примерно 10% связывание) с другим полипептидом, при измерении с помощью метода, доступного в данной области, такого как, без ограничения им, анализ Скэтчарда и/или анализы конкурентного связывания (например конкурентный анализ ELISA, BIACORE® SPR). Этот термин также применим, когда, например, связывающий домен белка по изобретению является специфичным к CD4 или gp41.
При использовании здесь предпочтительно связывается относится к ситуации, когда пептиды по изобретению связываются с CD4 или gp41 по меньшей мере примерно на 20% больше, чем он связывается с другим полипептидом, при измерении посредством метода, доступного в данной области, такого как, без ограничения ими, анализ Скэтчарда и/или анализы конкурентного связывания (например конкурентный анализ ELISA, BIACORE® SPR).
При использовании здесь перекрестная реактивность относится к белку, который связывается с более чем одним отдельным белком, имеющим идентичные или очень похожие сайты связывания.
При использовании здесь подразумевается, что Kd означает равновесную константу диссоциации взаимодействия конкретного Аднектин-белка, пептидного ингибитора слияния-белка или Комбинектинбелка (например CD4 и/или gp41) или аффинность Аднектина, пептидного ингибитора слияния или Комбинектина к белку (например CD4 и/или gp41), измеренную с использованием анализа поверхностного плазмонного резонанса или анализа межклеточного взаимодействия. При использовании здесь термин желательный Kd относится к Kd белка по изобретению, который является достаточным для предполагаемых целей. Например, желательный Kd может относиться к Kd Комбинектина, необходимому для того, чтобы вызвать функциональный эффект в анализе in vitro, например в клеточном люциферазном анализе.
При использовании здесь подразумевается, что kon означает константу скорости ассоциации для ассоциации, например, Комбинектина в комплекс Комбинектин/белок.
При использовании здесь подразумевается, что koff означает константу скорости диссоциации для диссоциации, например, Комбинектина из комплекса Комбинектин/белок.
При использовании здесь IC50 относится к концентрации, например, Комбинектина, который ингибирует ответ, либо в анализе in vitro, либо в анализе in vivo, до уровня, составляющего 50% от максимального ингибирующего ответа, то есть представляет собой среднее значение между максимальным ингибирующим ответом и ответом в отсутствие обработки.
При использовании здесь термины ингибировать или нейтрализовать в отношении активности белка по изобретению означает способность по существу антагонизировать, препятствовать, предотвращать, сдерживать, замедлять, нарушать, устранять, останавливать, уменьшать или обращать, например, прогрессирование или тяжесть того, что ингибируется, включая, без ограничения ими, биологическую активность или свойство, заболевание или состояние. Ингибирование или нейтрализация предпочтительно составляет по меньшей мере примерно 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95% или более.
Термин PK является акронимом для термина фармакокинетический и охватывает свойства соединения, включающие, например, абсорбцию, распределение, метаболизм и удаление из организма субъекта. При использовании здесь PK-модулирующий белок или PK-фрагмент относится к любому белку, пептиду или фрагменту, который влияет на фармакокинетические свойства биологически активной молекулы, будучи слитым с ней, или при введении вместе с биологически активной молекулой. Примеры PK-модулирующего белка или PK-фрагмента включают ПЭГ (полиэтиленгликоль), связующие на основе человеческого сывороточного альбумина (HSA), (как раскрыто в публикации US 2005/0287153, патенте США 7696320, PCT публикациях WO 2009/083804 и WO 2009/133208), человеческий сыворо- 5 035332 точный альбумин, Fc или фрагменты Fc и его варианты, и сахара (например сиаловую кислоту).
Термин CD4-связывающий фрагмент относится к любому фрагменту, который блокирует связывание поверхностного белка gp120 ВИЧ с рецептором CD4 на CD4+ Т-клетках. CD4-связывающий фрагмент может представлять собой анти-CD4-аднектин, -антитело (такое как ибализумаб), -доменное антитело (dAb), -фрагменты антитела (Fab), -биспецифическое антитело и его слитый белок.
Термин gp41-связывающий фрагмент относится к любому фрагменту, который препятствует взаимодействию гликопротеинового комплекса вирусной оболочки (gp120/gp41) с Т-клетками. gp41Связывающий фрагмент может представлять собой анти-gp41-аднектин, -антитело (Ab), -доменное антитело (dAb), -фрагменты антитела (Fab), -биспецифическое антитело и его слитый белок.
Фрагмент пептидного ингибитора слияния ВИЧ относится к любому фрагменту, который ингибирует слияние путем связывания области семичленного повтора 1 (HR1) из gp41. Примеры фрагмента пептидного ингибитора слияния включают пептиды, происходящие из областей NHR и CHR белка gp41, называемые NHR- и CHR-пептиды соответственно. Энфувиртид является примером CHR-пептида.
Пептиды по изобретению могут включать, например, CD4 моноклональное антитело ибализумаб, анти-Ю7 Аднектин и пептидный ингибитор слияния ВИЧ. Альтернативно, пептиды по изобретению могут включать анти-CD4 Аднектин, анти-Ю7 Аднектин и пептидный ингибитор слияния ВИЧ энфувиртид.
Период полувыведения аминокислотной последовательности или соединения обычно может быть определен как время, необходимое для снижения концентрации полипептида в сыворотке на 50%, например in vivo, из-за разрушения последовательности или соединения, и/или выведения или разрушения последовательности или соединения естественными механизмами. Период полувыведения можно определить любым известным способом, например посредством фармакокинетического анализа. Подходящие методы понятны специалисту в данной области и могут, например, обычно включать стадии подходящего введения субъекту подходящей дозы аминокислотной последовательности или соединения по изобретению; сбор образцов крови или других образцов от субъекта через регулярные промежутки времени; определение уровня концентрации аминокислотной последовательности или соединения по изобретению в указанном образце крови; и вычисление из (графика) таким образом полученных данных о времени, необходимом для снижения уровня концентрации аминокислотной последовательности или соединения по изобретению до 50% по сравнению с исходным уровнем при введении. Ссылка, например, приведена в стандартных руководствах, таких как Kenneth, A. et al., Chemical Stability of Pharmaceuticals: A Handbook for Pharmacists и в Peters et al., Pharmacokinetic Analysis: A Practical Approach (1996). Ссылка также приведена в Gibaldi, M. et al., Pharmacokinetics, Second Rev. Edition, Marcel Dekker (1982).
Период полувыведения может быть выражен с использованием таких параметров, как 1|.2-альфа. t1/2бета, HL_ лямбда _z и область под кривой (AUC). В настоящем описании увеличение периода полувыведения относится к увеличению любого из этих параметров, любых двух из этих параметров, любых трех из этих параметров или всех четырех этих параметров.
Обозначения mpk, мг/кг или мг на кг относятся к миллиграммам на килограмм. Все обозначения используются взаимозаменяемо на протяжении всего описания.
Термины индивидуум, субъект и пациент, используемые здесь взаимозаменяемо, относят к животному, предпочтительно млекопитающему (в том числе не-примату и примату), включая, без ограничения ими, мышей, обезьян, людей, млекопитающих сельскохозяйственных животных (например быков, свиней, овец), млекопитающих спортивных животных (например лошадей) и млекопитающих домашних животных (например собак и кошек); предпочтительно термин относится к людям. В некоторых воплощениях субъект представляет собой млекопитающего, предпочтительно представляет собой человека и инфицирован вирусом ВИЧ.
Термин терапевтически эффективное количество относится по меньшей мере к минимальной дозе, но меньшей чем токсическая доза, агента, которая необходима для обеспечения терапевтической пользы субъекту. Например, терапевтически эффективное количество Комбинектина по изобретению представляет собой количество, которое у млекопитающих, предпочтительно людей, приводит к значительному снижению циркулирующего вируса ВИЧ у инфицированного субъекта.
Общие сведения
В настоящем изобретении предложены новые полипептиды, которые связываются с CD4 и/или gp41. Полипептиды содержат ОО4-связывающий фрагмент, gp41-связывающий фрагмент, фрагмент пептидного ингибитора слияния ВИЧ и их комбинации. Более конкретно, настоящее изобретение относится к полипептидам, содержащим фибронектиновый каркасный доменный белок, который связывается с CD4, фибронектиновый каркасный доменный белок, который связывается с доменом N17 белка gp41, и пептидный ингибитор слияния ВИЧ или их комбинации (называемые здесь Комбинектины).
Чтобы идентифицировать CD4 и gp41 Аднектины, растворимые CD4 (внеклеточный домен) и gp41 (различные искусственные конструкции, разработанные для демонстрации трехспирального сегмента, имитирующего часть gp41) были предоставлены крупным синтетическим библиотекам Аднектинов. Аднектины, которые перенесли несколько раундов селекции, подвергали скринингу в отношении связывания CD4 или gp41, биофизических свойств и ВИЧ-1-ингибирующей активность. Лучшие последователь- 6 035332 ности анти-СВ4 и анти-Nl? Аднектина, которые были выявлены посредством скринингового анализа, были подвергнуты мутациям и дополнительным раундам селекции с повышенным селективным давлением, достигаемым путем снижения целевой концентрации и/или отбором анти-CD4 или gp41 Аднектинов с большой скоростью ассоциации и/или низкой скоростью диссоциации. В этом процессе оптимизации несколько семейств Аднектинов, некоторые из которых были нацелены на CD4, а другие были нацелены на gp41, были идентифицированы как специфические ингибиторы ВИЧ-1 с подходящей биохимической и биофизической активностью.
Был разработан оптимизированный gp41-нацеленный спиральный пептид, начиная с последовательностей, относящихся к gp41 HR2 и содержащих изменения для улучшения эффективности и степени охвата штаммов ВИЧ, а также увеличения барьера к формированию резистентности. Пептиды продуцировали иногда синтетически, а в других случаях как генетические слияния с инертными или активными Аднектинами. Оптимальные N- и С-концевые положения были определены в слияниях с представителем семейства gp41 Аднектинов. Чтобы идентифицировать мутации, которые еще больше увеличивали бы эффективность, использовали пептид с умеренной эффективностью с усеченным N-концом, так чтобы улучшения были более легко обнаруживаемыми. Были созданы небольшие библиотеки инертного Аднектин-пептидного слияния, содержащие одиночные и множественные точечные мутации, затем белки экспрессировали и подвергали скринингу в отношении биофизических свойств и ВИЧ-1-ингибирующей активности. Конечное семейство пептидов состояло из пептидов оптимальной длины с различными комбинациями последовательностей, которые имели наиболее благоприятные профили.
I. Фибронектиновые каркасы - Аднектины
В одном аспекте изобретения предложены анти-CD4 и анти-И17 Аднектины, содержащие домен фибронектина III типа (Fn3), в котором часть или все из одного или более доступных для растворителя петель были рандомизированы или мутированы. В некоторых воплощениях один или более остатков в одной или более непетлевых бета-цепях были рандомизированы или мутированы. В некоторых воплощениях домен Fn3 представляет собой домен Fn3, полученный из десятого модуля человеческого фибронектина типа 3 типа (10Fn3):
IVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPGSKS TATISGLKPGVDYTITVYAVTGRGDSPASSKPISINYRT (SEQ ID NO: 1) (петли BC, CD, DE и FG подчеркнуты).
В других воплощениях нелигандные связывающие последовательности 10Fn3, то есть каркас 10Fn3, могут быть изменены, при условии что 10Fn3 сохраняет функцию связывания лиганда и/или структурную стабильность. Сообщалось о различных мутантных каркасах 10Fn3. В одном аспекте один или более из Asp 7, Glu 9 и Asp 23 заменен другой аминокислотой, такой как, например, не-отрицательно заряженный аминокислотный остаток (например Asn, Lys, и т.д.). Сообщалось, что эти мутации способствуют повышенной стабильности мутанта 10Fn3 при нейтральном pH по сравнению с формой дикого типа (см., например, PCT публикацию WO 02/04523). Было описано множество дополнительных изменений в каркасе 10Fn3, которые являются либо полезными, либо нейтральными. См., например, Baton et al., Protein Eng., 15(12): 1015-1020 (Dec. 2002); Koide et al., Biochemistry, 40(34): 10326-10333 (Aug. 28,2001).
Как вариантный белок, так и белок дикого типа 10Fn3 характеризуются одной и той же структурой, а именно семью бета-цепочечными доменными последовательностями, обозначенными как A-G, и шестью петлевыми участками (петля АВ, петля BC, петля CD, петля DE, петля EF и петля FG), которые связывают семь бета-цепочечных доменных последовательностей. Бета-цепи, расположенные ближе всего к N- и С-концам, могут принимать бета-подобную конформацию в растворе. В SEQ ID NO: 1 петля АВ соответствует остаткам 14-17, петля BC соответствует остаткам 23-31, петля CD соответствует остаткам 37-47, петля DE соответствует остаткам 51-56, петля EF соответствует остаткам 63-67 и петля FG соответствует остаткам 75-87.
Соответственно в некоторых воплощениях анти-CD4 или анти-И17 Аднектин по изобретению представляют собой полипептид 10Fn3, который по меньшей мере на 40, 50, 60, 65, 70, 75, 80, 85 или 90% идентичен человеческому домену 10Fn3, показанному в SEQ ID NO: 1. Большая часть изменений обычно имеет место в одной или более петлях. Каждая из бета- или бета-подобных цепей полипептида 10Fn3 может состоять по существу из аминокислотной последовательности, которая по меньшей мере на 40, 50, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 или 100% идентична последовательности соответствующей бета- или бетаподобной цепи SEQ ID NO: 1, при условии, что такое изменение не нарушает стабильности полипептида в физиологических условиях.
В некоторых воплощениях в изобретении предложены один или более Аднектинов, содержащих десятый домен фибронектина III типа (10Fn3), где домен 10Fn3 содержит петлю AB; петлю BC; петлю CD; петлю DE; петлю EF и петлю FG и имеет по меньшей мере одну петлю, выбранную из петли BC, CD, DE и FG с измененной аминокислотной последовательностью по сравнению с последовательностью соответствующей петли человеческого домена 10Fn3. В некоторых воплощениях Аднектины по настоящему изобретению содержат домен 10Fn3, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 40, 50, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентична непетлевым участкам
- 7 035332
SEQ ID NO: 1, где по меньшей мере одна петля, выбранная из BC, CD, DE и FG, изменена. В некоторых воплощениях петли BC и FG изменены, и в некоторых воплощениях петли BC, DE и FG изменены, то есть домены 10Fn3 содержат не встречающие в природе петли. В некоторых воплощениях петли AB, CD и/или EF изменены. В некоторых воплощениях петли CD и FG изменены. В некоторых воплощениях доступные для растворителя аминокислоты в нитях между петлями изменены, с изменением или без изменения соседних петель. Под изменением подразумевается одно или более изменений аминокислотной последовательности по сравнению с эталонной последовательностью (соответствующей человеческому фибронектиновому домену) и включает добавления, делеции, замены аминокислот или их комбинацию. Изменение аминокислотной последовательности может быть осуществлено посредством умышленного, слепого или спонтанного изменения последовательности, обычно нуклеиновокислотной кодирующей последовательности, и может быть осуществлено при помощи любого метода, например ПЦР, ПЦР с ошибками или химический синтез ДНК.
В некоторых воплощениях одна или более петель, выбранных из BC, CD, DE и FG, могут быть удлинены или укорочены по длине относительно соответствующей петли фибронектина человека. В некоторых воплощениях длина петли может быть увеличена на 1-25 аминокислот. В некоторых воплощениях длина петли может быть уменьшена на 1-11 аминокислот.
Следовательно, для оптимизации связывания антигена может быть изменена длина и последовательность петли 10Fn3 для получения максимально возможной гибкости и аффинности связывания антигена.
В некоторых воплощениях Аднектины содержат домен Fn3, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 40, 50, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентична непетлевым участкам SEQ ID NO: 1, где по меньшей мере одна петля, выбранная из BC, CD, DE и FG, изменена. В некоторых воплощениях измененная петля BC имеет вплоть до 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 аминокислотных замен, вплоть до 1, 2, 3 или 4 аминокислотных делеций, вплоть до 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных вставок или их комбинацию. В некоторых воплощениях измененная петля CD имеет вплоть до 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 11 аминокислотных замен, вплоть до 1, 2, 3, 4, 5 или 6 аминокислотных делеций, вплоть до 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных вставок или их комбинацию. В некоторых воплощениях измененная петля DE имеет вплоть до 1, 2, 3, 4, 5 или 6 аминокислотных замен, вплоть до 1, 2, 3 или 4 аминокислотных делеций, вплоть до 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или 13 аминокислотных вставок или их комбинацию. В некоторых воплощениях петля FG имеет вплоть до 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или 13 аминокислотных замен, вплоть до 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 11 аминокислотных делеций, вплоть до 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16,17,18,19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 аминокислотных вставок или их комбинацию.
Удлиняющие последовательности
В некоторых воплощениях молекулы Аднектина по настоящему изобретению могут быть модифицированы так, чтобы содержать удлиняющую N-концевую последовательность и/или С-концевое удлинение. Например, последовательность MG может быть помещена на N-конец 10Fn3, определенного последовательностью SEQ ID NO: 1. М обычно отщепляется, оставляя G на N-конце. Аднектины, описанные здесь, также могут содержать альтернативные С-концевые хвостовые последовательности, называемые здесь усеченными С-концевыми или С-концевыми удлиняющими последовательностями. Кроме того, усеченный вариант может быть использован как терапевтические молекулы в усеченной форме или альтернативные С-концевые удлинения, такие как И186-тег, могут быть добавлены к усеченному варианту. В некоторых воплощениях С-концевые удлиняющие последовательности (также называемые хвосты), содержат остатки E и D, и их длина может составлять от 8 до 50, от 10 до 30, от 10 до 20, от 5 до 10 и от 2 до 4 аминокислот. В некоторых воплощениях первый остаток С-концевого удлинения представляет собой пролин. В некоторых других воплощениях первый остаток С-концевого удлинения представляет собой глутаминовую кислоту.
В некоторых воплощениях N-конец может быть удлинен на 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или более аминокислот, которые могут быть изменены каким-либо образом до или после раундов селекции, чтобы улучшить связывание мишени, стабильность или то и другое. В других воплощениях Сконец может быть удлинен на 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или более аминокислот, которые могут быть изменены каким-либо образом до или после раундов селекции, чтобы улучшить связывание мишени, стабильность или то и другое. В других воплощениях и N-, и С-конец могут быть удлинены таким образом.
Aiitii-CD4 Аднектин
Аминокислотная последовательность петлевого участка CD и FG анти-CD4 Аднектина по изобретению включает, без ограничения ими, последовательности, указанные в табл. 1 ниже. Петли CD, описанные в табл. 1, заменяют R30-T49 в 10Fn3, определенном последовательностью SEQ ID NO: 1. Петли FG, описанные в табл. 1, заменяют D67-N91 в 10Fn3, определенном последовательностью SEQ ID NO: 1.
В табл. 1 также приведены значения IC50 для каждого анти-CD4 Аднектина, содержащего указанные комбинации петель CD/FG.
- 8 035332
Таблица 1. CD4 Аднектин - комбинации CD и FG петель
| петля CD | петля FG | IC50, mkM | SEQ ID NO |
| HSYHIQYWPLGSYQRY QVFS | EYQIRVYAETGGADSDQSM GWIQIG | 0,0025 | 13, 14 |
| LSYHIQYWPLGLYQAY QVFS | EYQIRVYAETGRGESPASFG WIQIG | 0,0060 | 15, 16 |
| HAYHIQYWPLGFYQGY QVFS | E YQ1RVYAETG LG D AH Q S LG WIQIG | 0,0072 | 17, 18 |
| LAYHIQYWPLGWYQR YQIFS | EYQIRVYAETGRGESPASFG WIQIG | 0,0075 | 19, 20 |
| LAYHIQYWPLGWYQR YQVFS | EYQIRVYAETGRGESPASFG WIQIG | 0,0082 | 21,22 |
| HFYHIQYWPLGLYHLY QVFS | EYQIRVYAETGRGESPASFG WIQIG | 0,0087 | 23, 24 |
| YSYHIQYWPLGWYHR YQVFS | E YQ 1 RVYAETG AD D PVQ ALG WIQIG | 0,0099 | 25, 26 |
| RCYHIQYWPLGLYPLY QVFS | EYQIRVYAETGDESSVQPFG WIQIG | 0,0115 | 27, 28 |
| YS YH1QYWP LG WYQ R YQVFS | EYQIRVYAETDGGRSQQSFG WIQIG | 0,0118 | 29, 30 |
| S S YH 1Q YWP LG AYQ RY QVFS | EYQIRVYAETGRGESPASFG WIQIG | 0,0158 | 31, 32 |
| HAYHIQYWPLGLYQRY QVFS | EYQIRVYAETGRGESPASFG WIQIG | 0,0165 | 33, 34 |
| HAYYIQYWPLGSYQFY QVFA | E YQ 1 RVYAETG RGESPASFG WIQIG | 0,0213 | 35, 36 |
| HSYHIQYWPLGSYLRY QVFS | EYQIRVYAETGRGESPASFG WIQIG | 0,0214 | 37, 38 |
| LSYHIQYWPLGFYQRY QVFS | EYQIRVYAETGRGESPASFG WIQIG | 0,0230 | 39, 40 |
| SAYHIQYWPLGWYHR YQIFS | EYQIRVYAETGRGESPASFG WIQIG | 0,0239 | 41,42 |
| YSYHIQYWPLGAYSRH QLFS | EYQIRVYAETGGDGSEMYFG WIQIG | 0,0260 | 43, 44 |
| LAYHIQYWPLGWYHLY QVFS | EYQIRVYAETGRGESPASFG WIQIG | 0,0272 | 45, 46 |
- 9 035332
| LAYHIQYWPLGWYQLY KVFS | DYQIRVYAETSGESSEQYLG WIQIG | 0,0287 | 47, 48 |
| HSYHIQYWPLGWYQL YQVFS | EYQIRVYAETEVDSGQHSFG WIQIG | 0,0290 | 49, 50 |
| LAYHIQYWPLGWYQR YQIFS | EYQIRVYAETGESGAQQSFG WIQIG | 0,0297 | 51, 52 |
| QSYHIQYWPLGAYQLY QLFS | EYQIRVYAETGRGESPASFG WIQIG | 0,0323 | 53, 54 |
| HAYHIQYWPLGFYQGY QVFS | E YQ1RVYADTG RG YQ LS YS W IQIGY | 0,0353 | 55, 56 |
| F RYH1Q YWP LG G YE RY QVFT | EYQIRVYAETGRGESPASFG WIQIG | 0,0410 | 57, 58 |
| HSYHIQYWPLGSYHLY QLFS | EYQIRVYAETGRGESPASFG WIQIG | 0,0411 | 59, 60 |
| HSYHIQYWPLGWYQL YQVFT | EYQIRVYAETGGFGSPPNFG WIQIG | 0,0436 | 61, 62 |
| QFYHIQYWPLGSYQRY QVFS | EYQIRVYAETGRGESPASFG WIQIG | 0,0509 | 63, 64 |
| NSYHIQYWPLGWYHR YQVFS | EYQIRVYAETGRGESPASFG WIQIG | 0,0517 | 65, 66 |
| HSYHIQYWPLGRYQLY QVFS | EYQIRVYAETGRGESPASFG WIQIG | 0,0562 | 67, 68 |
| LAYHIQYWPLGWYHLY QIFS | E YQ 1RVYAETG GVG WH H S F GWIQIG | 0,0587 | 69, 70 |
| HVYHIQYWPLGWYPR YQVFS | EYQIRVYAETGRGESPASFG WIQIG | 0,0604 | 71, 72 |
| HSYHIPYWELAWYQRY QVFS | EYQIRVYAETGRGESPASFG WIQIG | 0,0637 | 73, 74 |
| ESYHIQYWPLGLYHRY QVFS | EYQIRVYAETGRGESPASFG WIQIG | 0,0688 | 75, 76 |
| LAYHIQYWPLGWYQAY QVFS | EYQIRVYAETGRGESPASFG WIQIG | 0,0703 | 77, 78 |
| YLYHIQYWPLGWYHRY QVFT | EYQIRVYAETGRGESPASFG WIQIG | 0,0715 | 79, 80 |
| RFYHIQYWPLGWYHC YQVFV | EYQIRVYAQTGDGSSQEYFG WIQIG | 0,0839 | 81, 82 |
| HSYHIQYWPLGWYYR YQVFS | EYQIRVYAETGGSGSQQYW GWIQIG | 0,0869 | 83, 84 |
| Η AYH1QYWP LG FYQ GY QVFS | EYQIRVYAETGRGESPASFG WIQIG | 0,0875 | 85, 86 |
| HSYHIQYWPLGLYVLY QVFS | EYQIRVYAETGAGGSEHSFG WIQIG | 0,1059 | 87, 88 |
| LSYHIQYWPLGRYERY QVFS | EYQIRVYAETVGGESLDSFS WIQIG | 0,1277 | 89, 90 |
| LSYHIQYWPLGWYQLY QVFY | EYQ1RVYAETRVGGSVASFG WIQIG | 0,1600 | 91, 92 |
| LAYHIQYWPLGRYQLY QVFS | EYQ 1 RVYAETG RGESPASFG WIQIG | 0,4281 | 93, 94 |
В некоторых воплощениях анти-СП4 Аднектин по изобретению содержит аминокислотную последовательность по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную комбинациям петлевых участков CD/FG с последовательностями SEQ ID NO: 13-94.
В некоторых воплощениях анти-CD4 Аднектин по изобретению содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90%, 95, 98, 99 или 100% идентичную любому из участков петли CD с последовательностью SEQ ID NO: 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91 и 93.
В некоторых воплощениях анти-CD4 Аднектин по изобретению содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную любому из участков петли FG с последовательностью SEQ ID NO: 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48,
- 10 035332
50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92 и 94.
WebLogo (weblogo.berkeley.edu) используют для идентификации консенсусных последовательностей анти-СВ4 Аднектина. Y32, I34, Y36, Q46 и F48 из петли CD анти-0В4 Аднектина представляют собой консервативные аминокислоты (см. фиг. 6). В некоторых воплощениях анти-CD4 Аднектин содержит одну или более консервативных аминокислот Y32, I34, Y36, Q46 и F48.
WebLogo идентифицировал Y68, I70, V72, А74, Т76, I88 и I90 петли FG анти-CD4 Аднектина как консервативные аминокислоты (см. фиг. 7). В некоторых воплощениях анти-CD4 Аднектин содержит одну или более консервативных аминокислот Y68, I70, V72, А74, Т76, I88 и I90.
В некоторых воплощениях анти-CD4 Аднектин содержит одну или более консервативных аминокислот Y32, I34, Y36, Q46, F48, Y68, I70, V72, А74, Т76, I88 и I90.
Полноразмерная аминокислотная последовательность анти-CD4 Аднектина по изобретению включает, без ограничения ими, последовательности, указанные в табл. 2 ниже. В табл. 2 также приведены значения противовирусной EC50 для каждого анти-CD4 Аднектина.
Таблица 2. Анти-CD4 Аднектин
| SEQ ID NO | Противовирусная ес50 (нМ) | Последовательность белка Ahth-CD4 Аднектина |
| 95 | 48 | MASTSGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAVTVHSY HIQYWPLGWYQRYQVFSVPGSKSTATISGLKPEVEYQI RVYAETGGGGSQQSFGWIQIGYRTEGSGSHHHHHH |
| 96 | 7,8 | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAVTVQSYHIQY WPLGSYQRYQVFSVPGSKSTATISGLKPGVEYQIRVY AETGGADSDQSMGWIQIGYRTEGDKPSQHHHHHH |
| 97 | 11 | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAVTVHSYHIQY WPLGWYQRYQVFSVPGSKSTATISGLKPGVEYQIRVY AETRSGLADESFGWIQIGYRTEGDKPSQHHHHHH |
| 98 | 4,9 | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAVTVHSYHIQY WPLGSYQRYQVFSVPGSKSTATISGLKPGVEYQIRVY AETGGADSDQSMGWIQIGYRTEGDKPSQHHHHHH |
| 99 | 8,5 | MGHHHHHHGGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAV TVHSYHIQYWPLGSYQRYQVFSVPGSKSTATISGLKP GVEYQIRVYAETGGADSDQSFGWIQIGYRTPES |
| 100 | 6 | MASTSGSSSYLMPSDLEWAATPTSLYIHWYPIASTIIN FRITYGETGGNSPVQEFTVPGSQVHATISGLKPGVDYT ITVYAVHYEHKYSELWMGHPISINYRTEGSGSHHHHH Н |
| 101 | >400 | М ASTS GS AS YLIP S D L E WAATPTS LSIYWYPVAST11N F RITYVETGGNSPVQEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTIT VYAVHYEQKYSEYWIGHPISINYRTEGSGSHHHHHH |
| 102 | >5500 | MASTSGSSPYLMPYDLEWAATPTSLFIRWYGSASSIV KFRITYGETGGNSPVQEFTVGGTQLHATISGLKPGVDY TITVYAVHFEHKYSELWIGHPISINYRTEGSGSHHHHH H |
| 103 | 255 | MASTSGYTSYPIPYDLEWAATPTSLYIHWYWIAATIISF RITYGETGGNSPVQEFTVPAGQDHATISGLKPGVDYTI TVYAVHYEEEYSEFWTGHPISINYRTEGSGSHHHHHH |
| 104 | 500 | MASTSGTHWFYSIPHDLEWAATPTSLTIAWEPPHHTA MGYRITYGETGGNSPVQEFTVPGGYTTAYISGLKPGV DYTITVYAAYYEREYSEHWISHPISINYRTEGSGSHHH HHH |
- 11 035332
| 105 | 300 | MASTSGEFYHTKYPYDLEWAATPTSLEISWRSPTRD WQWFRITYGETGGNSPVQEFTVAGPYRNAIISGLKPG VDYTITVYADVYMPSEGGLWDTYHPISINYRTEGSGS НННННН |
| 106 | 2400 | MASTSGQAYPEYYFVDLEWAATPTSLLISWSKPYYNA YSYRITYGETGGNSPVQEFTVLGHDTRAVISGLKPGVD YTITVYAMFIEYIDQEIWHAHPISINYRTEGSGSHHHHH Н |
| 107 | 500 | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDEHTDIYRYYRITY GETGGNSPVQEFTVPAMEHTATISGLKPGVDYTITVYA VTHVYPIMIHQYPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 108 | 170 | MASTSGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAVTVLEY QIDYHPAAVWHALQRFTVPGSKSTATISGLKPGVHYKI SVTATTHADNESIMWHPISIYYRTEGSGSHHHHHH |
| 109 | 320 | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDYPTVTPRYYRITY GETGGNSPVQEFTVPEYIGTATISGLKPGVDYTITVYAV TNDTTIYSISRPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 110 | 28,6 | MGHHHHHHGGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAV TVHSYHIQYWPLGSYQRYQVFSVPGSKSTATISGLKP GVEYQIRVYAETGRGESDQSLGWIQIGYRTEES |
| 111 | 20,0 | MGHHHHHHGGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAV TVHSYHIQYWPLGSYQRYQVFSVPGSKSTATISGLKP GVEYQIRVYAETGRGESDQSFGWIQIGYRTEES |
| 112 | 18,4 | MGHHHHHHGGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAV TVHSYHIQYWPLGSYQRYQVFSVPGSKSTATISGLKP GVEYQIRVYAETGRGESDQSLGWIQIGYRTPES |
| 113 | 15,4 | MGHHHHHHGGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAV TVHSYHIQYWPLGSYQRYQVFSVPGSKSTATISGLKP GVEYQIRVYAETGRGESDQSFGWIQIGYRTPES |
| 114 | 12,6 | MGHHHHHHGGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAV TVHAYHIQYWPLGFYQGYQVFSVPGSKSTATISGLKP GVEYQIRVYAETGLGDAHQSLGWIQIGYRTPES |
В некоторых воплощениях анти-СВ4 Аднектин по изобретению содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную любой из SEQ ID NO: 95-114.
В некоторых воплощениях анти-CD4 Аднектин по изобретению содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную любой из SEQ ID NO: 95-114, исключая любой N-концевой удлиненный участок.
В некоторых воплощениях анти-CD4 Аднектин по изобретению содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную любой из SEQ ID NO: 95-114, исключая любой С-концевой удлиненный участок.
В некоторых воплощениях анти-CD4 Аднектин по изобретению содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную любой из SEQ ID NO: 95-114, исключая и N-концевой, и С-концевой удлиненный участок.
В других воплощениях анти-CD4 Аднектин содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную участкам петли CD и петли FG с последовательностями SEQ ID NO: 95-114.
Ahtu-N17 Аднектин
Полноразмерная аминокислотная последовательность белка анти-Ш7 Аднектин по изобретению включает, без ограничения ими, последовательности, указанные в табл. 3 ниже. В табл. 3 также приведены значения противовирусной EC50 для каждого анти-N 17 Аднектина.
- 12 035332
Таблица 3. Ahtu-N17 Аднектин
| SEQ ID NO | Противовирусная ec50 (hM) | Последовательность белка Ahth-N17 Аднектина |
| 115 | 130 | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKVNNYRYYRITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGVHSSPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 116 | 50 | MASTSGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAVTVEQY YIAYYVEGEPSSYQYFRVPGSKSTATISGLKPGVLYHIY VNAVTGSGLRPEFSLPIRIKYRTEGSGSHHHHHH |
| 117 | 42 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 118 | 28 | M GVS DVP RD LE WAATPTS LLISWKYKVH PYRYYRITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGVNSLPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 119 | >1000 | M GVS DVP RD LE WAATPTS LL IS WDAP AVTVGWYHI GY NVEGEPASYQYFRVPGSKSTATISGLKPGVEYMIFVNA VTGSGAREEFSLPISINYRTEGSGSHHHHHH |
| 120 | 39 | MGHHHHHHGGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYNVN PYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSSAQISGLKPG VDYTITVYAVTRGVDSAPISINYRTPGG |
| 121 | 57 | MGHHHHHHGGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYNVN PYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTAEISGLKPG VDYTITVYAVTYGVDSDPISINYRTPGG |
| 122 | 6 | MGHHHHHHGGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWQYKVH PYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTAEISGLKPG VDYTITVYAVTRGVDSAPISIN YRTP GG |
| 123 | 28 | M GVS DVP RD LE WAATPTS L LIS WE YKVH PYRYYR ITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TRGVDSAPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 124 | 6 | M GVS DVP RD LE WAATPTS L LIS WE YKVH PYRYYR ITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTAEISGLKPGVDYTITVYAV TRGVDSAPISINYRTPIDKPSQHHHHHH |
| 125 | 4342 | MGHHHHHHGGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKVH PYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPG VDYTITVYAVTYGVQSDPISINYRTPGG |
| 126 | 8 | M GVS DVP RD LE WAATPTS L LIS WE YKVH PYRYYR ITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGIQSPPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 127 | 9 | MGHHHHHHGGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWQYKVH PYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSSAQISGLKPG VDYTITVYAVTYGIESSPISINYRTPGG |
| 128 | 18 | MGHHHHHHGGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKVH PYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSSAEISGLKPG VDYTITVYAVTYGIDSSPISINYRTPGG |
| 129 | 11 | M GVS DVP RD LE WAATPTS L LIS WE YKVH PYRYYR ITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSSAEISGLKPGVDYTITVYA VTYGIDSPPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 130 | 42 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYNV HYDRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTDGVHSSPISINYRTEID |
| 131 | 5 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDLSAPISINYRTEID |
| 132 | 5 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPA VTVEEYYIGYYVEFEPSSYQWFTVPGSKSTATISGLKP GVEYSIYVNAVTGMGMQPEMSLPISINYRTEGS |
- 13 035332
| 133 | 42 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HYDRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP G VD YTITVYAVTYGVD S DPISINYRTEID |
| 134 | 5 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPA VTVEQYYIAYYDEKEPSSYQYFRVPGSKSTATISGLKP GVEYAIFVNAVTRSGVLPEFSLPISINYRTEGS |
| 135 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWKYNV NAYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGVHSSPISINYRTEID |
| 136 | 5 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPA VTVEQYYIGYYVEAEPSSYQYFFVPGSKSTATISGLKP GVDYAIFVNAVTASGRGPEYSLPISINYRTEGS |
| 137 | 80 | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWHDGIGEERYYRITY GETGGNSPVQEFTVPMDDITATISGLKPGVDYTITVYAV TVGDVISVLHEPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 138 | 3300 | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWHYPFEGYVTYYRIT YGETGGNSHVQEFTVPVGYTTATISGLKPGVDYTITVY AVTSSKGYVYFPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 139 | 130 | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEDPEAAVRYYRITY GETGGNSPVQEFTVPINDLHSYLSGLKPGVDYTITVYA VTEATVMYVLDEPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 140 | 950 | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDLLEDMSRYYRITY GETGGNSPVQEFTVPTDAYTATISGLKPGVDYTITVYA VTQDSHVIELSYPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 141 | 3 | M GVS DVP RD LEWAATPTS LLI SWQ YKVH PYRYYRITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGIQSPPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 142 | 55 | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWRYRVHPYRYYRITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TDGVQSSPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 143 | 20 | M GVS DVP RD LEWAATPTS LLI SWE YNVN PYRYYRITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGIESSPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 144 | 20 | M GVS DVP RD LEWAATPTS LLI SWQ YKVH PYRYYRITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGVESSPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 145 | 11 | M GVS DVP RD LEWAATPTS LLI SWE YKVH PYRYYR ITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGVNSLPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 146 | 11 | M GVS DVP RD LEWAATPTS L LI SWE YKVH PYRYYR ITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGIDSPPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 147 | 28 | M GVS DVP RD LEWAATPTS L LI SWE YKVH PYRYYR ITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGVDSDPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 148 | 14 | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYNVNPYRYYRITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGIDSPPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 149 | 3 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGKDSAPISINYRTEID |
| 150 | 18 | M GVS DVP RD LEWAATPTS LLI SWE YNVN PYRYYR ITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGVESSPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
- 14 035332
| 151 | 11 | M GVS DVP RD LEWAATPTS LLI SWE YKVH PYRYYRITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGIDSSPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 152 | 20 | M GVS DVP RD LEWAATPTS LLI SWE YNVN PYRYYR ITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGVQSDPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 153 | 8 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTAQISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 154 | 8 | M GVS DVP RD LEWAATPTS L LI SWE YNVN PYRYYR ITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGVNSLPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 155 | 9 | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWQYKVHPYRYYRITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV THGVHSAPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 156 | 43 | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKVNPWRYYRITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGIESSPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 157 | 43 | M GVS DVP RD LEWAATPTS LLI SWQ YKVH PYRYYRITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGVNSIPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 158 | 85 | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKVHYDRYYRITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGIQSPPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 159 | 23 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISIPYRTPGG |
| 160 | 58 | M GVS DVP RD LEWAATPTS LLI SWE YKVD PYRYYR ITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGVESSPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 161 | 13 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSSAEISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 162 | 35 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSSAQISGLKP G VD YTITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 163 | 35 | MGHHHHHHGGSVSDVPRYLEWAATPTSLLISWQYKV HPYRWYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGVN SIPISIN YRTEID |
| 164 | 35 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWKYQV HAYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGVYSAP IS INYRTEID |
| 165 | 42 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV NPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGVHSS P IS I NYRTE ID |
| 166 | 50 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWKYNL HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGI IS EP IS I NYRTE ID |
| 167 | 42 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYRV NPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGVQSP P IS I NYRTE ID |
| 168 | 42 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV NAYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGVLSPPISINYRTEID |
- 15 035332
| 169 | 5 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYNV NPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTRGVDS АР ISIN YRTEID |
| 170 | 5 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV SPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTFGIRSS PISIN YRTE ID |
| 171 | 35 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWKYQV HAYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGIISEPISINYRTEID |
| 172 | 5 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV DPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGIDSSPISINYRTEID |
| 173 | 5 | MGHHHHHHGGAVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV NPWRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGVHSS P IS INYRTEID |
| 174 | 5 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYNV NAYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGIISEPISINYRTEID |
| 175 | 5 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HYDRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGVQSTPISI NYRTE ID |
| 176 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HHDRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGI ESS P IS I NYRTE ID |
| 177 | 252 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISIPYRTPGG |
| 178 | 631 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGXDSXP IS I NYRTE ID |
| 179 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSRPISINYRTEID |
| 180 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGKDSAPISINYRTEID |
| 181 | 631 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYG D H S АР ISIN YRTE ID |
| 182 | >1000 | M G Η Η Η Η Η H GGSVS DVP RD LEWAATPTS LLIS WEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDQSAPISINYRTEID |
| 183 | 20 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYG IDSAPISI NYRTE ID |
| 184 | 20 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDVS AP IS I NYRTE ID |
| 185 | 252 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGXDSAPISINYRTEID |
| 186 | 2830 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYG E DS АР ISIN YRTE ID |
- 16 035332
| 187 | 86 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFKVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 188 | 86 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDLSAPISINYRTEID |
| 189 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGKDSAPISINYRTEID |
| 190 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGADS АР ISIN YRTEID |
| 191 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGTDSAPISINYRTEID |
| 192 | 2830 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGTDS АР ISIN YRTE ID |
| 193 | 252 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGKDSAPISINYRTEID |
| 194 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDPSAPISINYRTEID |
| 195 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSQPISINYRTEID |
| 196 | 86 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYG DVS AP IS IN YRTE ID |
| 197 | 81 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSGPISINYRTEID |
| 198 | 2830 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISIQYRTEID |
| 199 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSQPISINYRTEID |
| 200 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYTETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPG VDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 201 | 20 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDQSAPISINYRTEID |
| 202 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSKPISINYRTEID |
| 203 | 86 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSGPISINYRTEID |
| 204 | 0 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYRETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
- 17 035332
| 205 | 86 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYDV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP G VD YTITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 206 | 237 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSKPISINYRTEID |
| 207 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYWETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 208 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSTPISINYRTEID |
| 209 | 20 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSTPISINYRTEID |
| 210 | 143 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSSPISINYRTEID |
| 211 | 631 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTRGDDSAPISINYRTEID |
| 212 | 86 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTHGDDSAPISINYRTEID |
| 213 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSWPISINYRTEID |
| 214 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTHGDDSAPISINYRTEID |
| 215 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWKYDV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 216 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISDLKP GVDYT ITVYAVTYG D D S Η PISINYRTEID |
| 217 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTRGDDSAPISINYRTEID |
| 218 | 62 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATIRGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 219 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWKYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 220 | 86 | MGHHHHHHCGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV AHNRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 221 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV YGYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 222 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV DHQRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
- 18 035332
| 223 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV DYRRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP G VD YTITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 224 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV AYDRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 225 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV TSYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPG VDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 226 | 631 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRIIHETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGV DYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 227 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYG D DS АР ISIN YRKE AE L |
| 228 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV NHQRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 229 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV DHRRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 230 | 17 | M GVS DVP RD LE WAATPTS L LIS WE YKVH P YRYYRITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGVDSDPISINYRTDDKPSQHHHHHH |
| 231 | 10 | M GVS DVP RD LEWAATPTS LLISWEYKVH PYRYYRITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGVNSIPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 232 | 47 | M GVS DVP RD LEWAATPTS L LIS WE YKVNAYRYYR ITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGIESSPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 233 | 55 | M GVS DVP RD LEWAATPTS L LI SWEYKVH P YRYYR ITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TDGVQSSPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 234 | 20 | M GVS DVP RD LEWAATPTS L LIS WE YKVNAYRYYR ITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGIDSSPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 235 | 29 | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKVHYDRYYRITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TNGVLSSPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 236 | 85 | M GVS DVP RD LEWAATPTS LLISWEYKVN PWRYYRITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TRGVDSAPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 237 | 31 | M GVS DVP RD LEWAATPTS LLI SWEYKVH PXRYYR ITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGVBSXPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 238 | 11 | M GVS DVP RD LEWAATPTS LLI SWEYKVN PWRYYRITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGIQSPPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 239 | 4 | M GVS DVP RD LEWAATPTS LLI SWQ YKVH PYRWYRITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGVNSIPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 240 | 5 | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKVSPYRYYRITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGVNSIPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
- 19 035332
| 241 | 8 | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKVNPWRYYRITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGVNSLPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 242 | 0 | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYNVHYDRYYRITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGVDSDPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 243 | 48 | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKVNPWRYYRITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGVDSDPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 244 | 58 | M GVS DVP RD LE WAATPTS LLISWE YKVD PYRYYRITY GETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVDYTITVYAV TYGVDSDPISINYRTEIDKPSQHHHHHH |
| 245 | 50 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWKYQV HAYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATINGLKP GVDYTITVYAVTYGIISEPISINYRTEID |
| 246 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV NYNRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTEGVQSAPISINYRTEID |
| 247 | 2 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTPGG |
| 248 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNTPVQEFRVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYADASAP IS INYRTE ID |
| 249 | 83 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSSATLNGLKP G VD YTITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 250 | 218 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSSAKISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 251 | 186 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFNVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 252 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV AHRRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 253 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV DAYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 254 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV DSYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 255 | 136 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 256 | 170 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDAS AP IS I NYRTE ID |
| 257 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTNGDDSAPISINYRTEID |
| 258 | 195 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSSATIRGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
- 20 035332
| 259 | 135 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTAKISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 260 | 188 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFRVPSVLSTATISGLKP G VD YTITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 261 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV APWRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 262 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV DGWRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 263 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV DTWRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 264 | 209 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTXLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 265 | 63 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGADSAPISINYRTEID |
| 266 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTRGDDSAPISINYRTEID |
| 267 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQDFTVPSVLSTATIRGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 268 | 2 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTANISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 269 | 184 | M G Η Η Η Η Η H GGSVS DVP RD LE WAATPTS LLIS WE YKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQAFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 270 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV APYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 271 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV DGYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 272 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV DTYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 273 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYEV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 274 | 115 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYRV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 275 | 180 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQSFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGADS АР ISIN YRTEID |
| 276 | 16 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATIRGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
- 21 035332
| 277 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQDFTVPSVLSTATISGLKP G VD YTITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 278 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV ARWRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 279 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV DHQRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 280 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV DYGRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 281 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWKYGV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 282 | 56 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYSV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 283 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTDGDDSAPISINYRTEID |
| 284 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTSGDDSAPISINYRTEID |
| 285 | 397 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSSATLRGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 286 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV AAWRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 287 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV ATWRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 288 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATTTSLLISWEYKV DYHRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 289 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYGV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 290 | 138 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWKYXV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 291 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTGGDDSAPISINYRTEID |
| 292 | 52 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATIHGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 293 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATLRGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 294 | 101 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSSATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
- 22 035332
| 295 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV AAYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 296 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV ATYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPG VDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 297 | 30 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV DPWRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP G VD YTITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 298 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV DYQRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 299 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWKYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 300 | 132 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYXV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 301 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTH G D D FAP ISIN YRTEM LI |
| 302 | 4 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSSATINGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 303 | 109 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFKVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 304 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV AHDRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 305 | 83 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV DPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 306 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV DYRRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 307 | 205 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTGLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 308 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV NAWRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 309 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTHGDDSAPISINYRTEID |
| 310 | 62 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATINGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 311 | 42 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTAEISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 312 | 37 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFLVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
- 23 035332
| 313 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV AHGRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP G VD YTITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 314 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV AYKRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 315 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV DRWRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 316 | 331 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYAV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 317 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV NAYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 318 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV NGYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 319 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV SHGRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 320 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV TTWRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 321 | 55 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSSAZLSGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 322 | 96 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGTDSAPISINYRTEID |
| 323 | 126 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDQSAPISINYRTEID |
| 324 | 487 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG D D S N PISI NYRTE ID |
| 325 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV NHDRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 326 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV SHRRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 327 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV TYERYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPG VDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 328 | 63 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSSATXXGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 329 | 102 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDVS AP IS I NYRTE ID |
| 330 | 99 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSPPISINYRTEID |
- 24 035332
| 331 | 100 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP G VD YTITVYAVTYG DDSXPISINYRTEID |
| 332 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV NRWRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 333 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV SPWRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 334 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV TYRRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 335 | 112 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDESAPISINYRTEID |
| 336 | 171 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSDPISINYRTEID |
| 337 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSYPISINYRTEID |
| 338 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV NRYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 339 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV SRWRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 340 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV XXYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 341 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQSFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 342 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYG IDSAPISIN YRTEID |
| 343 | 122 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DHSAPISINYRTEID |
| 344 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSEPISINYRTEID |
| 345 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYG D DS RPISIN YRTE ID |
| 346 | 83 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISIQYRTEID |
| 347 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV NYRRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 348 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV STWRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
- 25 035332
| 349 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV YAYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP G VD YTITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 350 | 191 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQTFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 351 | 215 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQAFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGKDSAPISINYRTEID |
| 352 | 77 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDLSAPISINYRTEID |
| 353 | 19 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSGPISINYRTEID |
| 354 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV SAWRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 355 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV STYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPG VDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 356 | 31 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTAELSGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 357 | 178 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDLSAPISINYRTEID |
| 358 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSTPISINYRTEID |
| 359 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV SAYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 360 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV TGYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 361 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV YHGRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 362 | 121 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTAKLSGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 363 | 130 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGNDSAPISINYRTEID |
| 364 | 89 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDPSAPISINYRTEID |
| 365 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV SGYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEID |
| 366 | >1000 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV YHNRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
- 26 035332
| 367 | 300 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSSAQLSGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSAPISINYRTEID |
| 368 | 62 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGTDSAPISINYRTEID |
| 369 | 155 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYTITVYAVTYGDPSAPISINYRTEID |
| 370 | 335 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG DDSKPISINYRTEID |
| 371 | 114 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKP GVDYT ITVYAVTYG IDSTPISI NYRTE ID |
В некоторых воплощениях анти-Nl? Аднектин по изобретению содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную любой из SEQ ID NO: 115-371.
В некоторых воплощениях анти-№17 Аднектин по изобретению содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную любой из SEQ ID NO: 115-371, исключая любой N-концевой удлиненный участок.
В некоторых воплощениях анти-№17 Аднектин по изобретению содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную любой из SEQ ID NO: 115-371, исключая любой С-концевой удлиненный участок.
В некоторых воплощениях анти-№17 Аднектин по изобретению содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную любой из SEQ ID NO: 115-371, исключая и N-концевой, и С-концевой удлиненный участок.
В других воплощениях анти-№17 Аднектин содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную участкам петли BC, петли DE и петли FG с последовательностями SEQ ID NO: 115-371.
Анализ вышеуказанных последовательностей показывает, что S52, V53, L54 и S55 из петли DE анtu-N17 Аднектина представляют собой консервативные аминокислоты. В некоторых воплощениях антиN17 Аднектин содержит одну или более консервативных аминокислот S52, V53, L54 и S55.
Кроме того, анализ вышеприведенных последовательностей показывает, что Y24 из петли BC антиCD4 Аднектина представляет собой консервативную аминокислоту. В некоторых воплощениях в положении 26 петли BC анти-№17 Аднектина находится валин или лейцин.
Анализ вышеприведенных последовательностей показывает, что G78 и S85 из петли FG анти-№17 Аднектина представляют собой консервативные аминокислоты. В некоторых воплощениях анти-№17 Аднектин содержит одну или более консервативных аминокислот G78 и S85. В некоторых воплощениях в положении 79 петли FG анти-№17 Аднектина находится валин или изолейцин.
В некоторых воплощениях анти-№17 Аднектин содержит одну или более консервативных аминокислот Y24, V26, L26, S52, V53, L54, S55 G78, V79, I79 и S85.
Анализ точечных мутаций анти-№17 Аднектина показал преимущества мутирования нескольких положений непетлевого каркаса 10Fn3. В частности, мутация положений Т56 и Т58 повысили активность. В некоторых воплощениях анти-№17 Аднектин содержит мутацию Т58 в Asn, Glu или Gln.
II. Пептидные ингибиторы слияния ВИЧ
Хорошо известна аминокислотная последовательность gp41 и ее вариации в разных штаммах ВИЧ1. Считается, что сливающий домен (часто называемый пептид слияния или FP) вовлечен во внедрение в мембрану клетки-мишени и ее разрушение. Трансмембранный домен, содержащий трансмембранную якорную последовательность, расположен на С-конце белка. Между сливающим доменом и трансмембранным доменом находятся две различные области, известные как области семичленных повторов (HR), причем каждая область имеет большое количество семичленных повторов. Аминокислотная последовательность, содержащая область HR1, и аминокислотная последовательность, содержащая область HR2, являются относительно консервативными областями в белке оболочки ВИЧ-1. Типичная последовательность внешнего домена gp41 (консенсус клады В) выглядит следующим образом:
512 AVGIGAMFL GFLGAAGSTM GAASVTLTVQ ARQLLSGIVQ QQNNLLRAIE
561 AQQHLLQLTV WGIKQLQARV LAVERYLKDQ QLLGIWGCSG KLICTTAVPW
611 NASWSNKSLD EIWNNMTWME WEREIDNYTG LIYTLIEESQ NQQEKNEQEL
661 LELDKWASLW NWFDITNWLW YIK (SEQ ID N0:2)
Пептид слияния состоит примерно из первых 23 аминокислот Ala512-Ser534. Область HR1 имеет большое количество смежных участков из 7 аминокислотных остатков или семичленных повторов (7 аминокислот в каждом семичленном повторе обозначены как a-g), с преобладанием гидрофобных
- 27 035332 остатков в первом (а) и четвертом (d) положениях, которые взаимодействуют однотипно с образованием ядра с 3-спиральной пучковой структурой. Нейтральные полярные аминокислоты, такие как глутамин, также могут занимать эти положения. Один типичный семичленный повтор начинается с Leu545.
Высококонсервативная часть HR1 состоит из 17 остатков от Leu565 до Leu581 и называется N17.
С-концевая часть gp41 содержит область HR2, которая, как считается, образует альфа-спиральную структуру в процессе слияния и связывается в бороздки тройной спиральной структуры HR1. HR2 также содержит семичленные повторы, хотя они не взаимодействуют однотипно, а скорее взаимодействуют с аминокислотами из HR1. Один типичный семичленный повтор начинается с Trp628.
Пептидный ингибитор слияния ВИЧ
Пептидный ингибитор слияния ВИЧ по изобретению включает, без ограничения ими, следующие по следовательно сти:
| Последовательность пептидного ингибитора слияния ВИЧ | SEQ ID NO |
| SEYEARIEALIRAAQEQQEKNEAALRELYKWAL | 372 |
| SEYEARIEALIRAAQEQQEKNEAALRELWKWAS | 373 |
| TIAEYAARIEALIRAAQEQQEKNEAALRELYKWAS | 374 |
| ARIEEYAARIEALIRAAQEQQEKNEAALRELYKWAS | 375 |
| SEYEARIEALIRAAQEQQEKNEAALRELYKWAS | 376 |
| TEYEARIEALIRAAQEQQE KN EAALRE LKEWASIWN | 377 |
| SEYEARIEALIRAAQEQQEKNEAALRELDKWTGVWGNYEKV | 378 |
| SRIEALIRAAQEQQEKNEAALRELFKWAS | 379 |
| SRIEALIRAAQEQQQKNEAALRELDKWAS | 380 |
| SRIEALIRAAQEQQEKNEAALRELYKWAS | 381 |
| SRIEALIRAAQEQQEKNEAALRELLKWAS | 382 |
| SRIEALIRAAQEQQEKNEAALRELQKWAS | 383 |
| SRIEALIRAAQEQQEKNEAALRELDKWAS | 384 |
| AIAEYAARIEALIRAAQEQQEKNEAALRELDKWAS | 385 |
| TEYEARIEALIRAAQEQQEKNEAALRELDK | 386 |
| SRIEALIRAAQEQQEKNEAALRELYKWTS | 387 |
| SRIEALIRAAQEQQEKNEAALRELYKWASLWI | 388 |
| SRIEALIRAAQEQQEKNEAALRELYKWASRWN | 389 |
| SRIEALIRAAQEQQEKNEAALRELYKWASSWN | 390 |
| SRIEALIRAAQEQQEKNEAALRELYKWGS | 391 |
| SRIEALIRAAQEQQEKNEAALRELDK | 392 |
В некоторых воплощениях пептидный ингибитор слияния ВИЧ содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную любой из SEQ ID NO: 372-392.
Было показано, что точечные мутации в С-концевой области пептидного ингибитора слияния ВИЧ повышают эффективность. В некоторых воплощениях гидрофобная замена аспарагиновой кислоты (D) вблизи С-конца пептидного ингибитора слияния ВИЧ обеспечивает по меньшей мере 10-кратное увеличение эффективности (фиг. 8). В некоторых воплощениях пептидный ингибитор слияния ВИЧ содержит замену DK на YK, LK, FK или WK.
Другие исследования точечной мутации в С-концевой области показали, как могут быть мутированы С-концевые аминокислоты WAS с хорошим влиянием на активность. В некоторых воплощениях пептидный ингибитор слияния ВИЧ содержит замену С-концевых аминокислот WAS на WFS или WAL.
III. Линкеры
Различные компоненты Комбинектина по изобретению могут быть ковалентно или нековалентно связаны. В некоторых воплощениях PK-фрагмент может быть непосредственно или опосредованно связан с Комбинектином посредством полипептидного линкера.
Подходящими линкерами являются такие, которые позволяют отдельным доменам складываться независимо друг от друга, образуя трехмерную структуру, которая обеспечивает высокоаффинное связывание с молекулой-мишенью.
В описании изобретения предложен ряд подходящих линкеров, которые отвечают этим требованиям, включая линкеры на основе глицина-серина, линкеры на основе глицина-пролина. Описанные здесь примеры демонстрируют, что домены Комбинектина, соединенные через полипептидные линкеры, сохраняют свою функцию связывания с мишенью. В некоторых воплощениях линкер представляет собой линкер на основе глицина-серина. Эти линкеры содержат остатки глицина и серина и могут иметь длину от 8 до 50, от 10 до 30 и от 10 до 20 аминокислот. Примеры включают линкеры, имеющие аминокислотную последовательность (GS)7 (SEQ ID NO: 393), G(GS)6 (SEQ ID NO: 394) и G(GS)7G (SEQ ID NO: 395).
- 28 035332
Другие линкеры содержат глутаминовую кислоту и включают, например, (GSE)5 (SEQ ID NO: 396) и GGSEGGSE (SEQ ID NO: 397). Другие типичные глицин-сериновые линкеры включают (GS)4 (SEQ ID NO: 398), (GGGGS)7 (SEQ ID NO: 399), (GGGGS)s (SEQ ID NO: 400), (GGGGS)4 (SEQ ID NO: 401 (GGGGS)3G (SEQ ID NO: 402). В некоторых воплощениях линкер представляет собой линкер на основе глицина-пролина. Эти линкеры содержат остатки глицина и пролина и могут иметь длину от 3 до 30, от 10 до 30 и от 3 до 20 аминокислот. Примеры включают линкеры, имеющие аминокислотную последовательность (GP)3G (SEQ ID NO: 403) и (GP)5G (SEQ ID NO: 404). В других воплощениях линкер может быть линкером на основе пролина-аланина, имеющим длину от 3 до 30, от 10 до 30 и от 3 до 20 аминокислот. Примеры пролин-аланиновых линкеров включают, например, (РА)3 (SEQ ID NO: 405), (РА)6 (SEQ ID NO: 406) и (РА)9 (SEQ ID NO: 407). В некоторых воплощениях линкер представляет собой линкер на основе глутаминовой кислоты-пролина. Эти линкеры содержат остатки глутаминовой кислоты и пролина и могут иметь длину от 3 до 30, от 10 до 30 и от 3 до 20 аминокислот. Примеры включают линкеры, имеющие аминокислотную последовательность ESPEPETPEDE (SEQ ID NO: 408) и (ESPEPETPED)2E (SEQ ID NO: 409). Предполагается, что оптимальная длина линкера и аминокислотный состав могут быть определены при обычном экспериментировании способами, хорошо известными в данной области.
Линкеры или спейсеры могут быть введены в N-конец анти-CD4 фрагмента, в С-конец анти-CD4 фрагмента, в N-конец анти-gp41 фрагмента, в С-конец анти-gp41 фрагмента, в N-конец пептидного ингибитора слияния ВИЧ или их комбинации. В некоторых воплощениях предпочтительные линкеры между анти-CD4 Аднектином и анти-117 Аднектином представляют собой короткие линкеры, обогащенные глутамином-пролином. В некоторых воплощениях предпочтительные линкеры между анти-№17 Аднектином и пептидным ингибитором слияния ВИЧ представляют собой гибкие линкеры, обогащенные глицином-серином.
IV. Анти-N 17 Аднектин, связанный с пептидным ингибитором слияния ВИЧ Комбинектином
Аминокислотные последовательности анти-№17 Аднектина - пептидного ингибитора слияния ВИЧ Комбинектина по изобретению включают, без ограничения ими, представленные в табл. 4 ниже. В табл. 4 также приведены противовирусные значения EC50 для каждого анти-N 17 Аднектина -пептидного ингибитора слияния ВИЧ Комбинектина.
Таблица 4. Анти-N 17 Аднектин - пептидный ингибитор слияния ВИЧ Комбинектин
| SEQ ID NO | Противовирусная ЕС5о (нМ) | Последовательность белка анти-N 17 Аднектина пептидного ингибитора слияния ВИЧ |
| 410 | 2 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV NAYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPG VDYTITVYAVTYGVDSDPISINYRTEIDGGGGSGGGGSG GGGSGGGGARIEEYAARIEALIRAAQEQQEKNEAALRE LYKWAS |
| 411 | 4342 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV NAYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPG VDYTITVYAVTYGVDSDPISINYRTEIDGGGGSGGGGSG GGGSGGGGTIAEYAARIEALIRAAQEQQEKNEAALREL YKWAS |
| 412 | 2980 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV NAYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPG VDYTITVYAVTYGVDSDPISINYRTEIDGGGGSGGGGSG GGGSGGGGSEYEARIEALIRAAQEQQEKNEAALRELYK WAS |
| 413 | 6 | MGHHHHHHGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWKYKVHP YRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVD YTITVYAVTYGVNSLPISINYRTEIDGGGGSGGGGSGGG GSGGGGTEYEARIEALIRAAQEQQEKNEAALRELKEWA SIWN |
| 414 | 4 | М G Η Η Η Η Н HTSGVS DVP RD LEWAATPTS LLISWDAPAV TVGWYHIGYNVEGEPASYQYFRVPGSKSTATISGLKPG VEYMIFVNAVTGSGAREEFSLPISINYRTEIDGGGGSGG GGSGGGGSGGGGSEYEARIEALIRAAQEQQEKNEAAL RE LD KWTGVWG N YE KV |
- 29 035332
| 415 | >1000 | MGHHHHHHGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAVTV RYYRITYGETGGNSPVQEFTVPGSKSTATISGLKPGVD YTITVYAVTGRGESPASSKPISINYRTEIDGGGGSGGGG SGGGGSGGGGSRIEALIRAAQEQQEKNEAALRELFKW AS |
| 416 | >1000 | MGHHHHHHGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAVTV RYYRITYGETGGNSPVQEFTVPGSKSTATISGLKPGVD YTITVYAVTGRGESPASSKPISINYRTEIDGGGGSGGGG SGGGGSGGGGSRIEALIRAAQEQQQKNEAALRELDKW AS |
| 417 | 428 | MGHHHHHHGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAVTV RYYRITYGETGGNSPVQEFTVPGSKSTATISGLKPGVD YTITVYAVTGRGESPASSKPISINYRTEIDGGGGSGGGG SGGGGSGGGGSRIEALIRAAQEQQEKNEAALRELYKW AS |
| 418 | 218 | MGHHHHHHGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAVTV RYYRITYGETGGNSPVQEFTVPGSKSTATISGLKPGVD YTITVYAVTGRGESPASSKPISINYRTEIDGGGGSGGGG SGGGGSGGGGSRIEALIRAAQEQQEKNEAALRELLKW AS |
| 419 | >1000 | MGHHHHHHGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAVTV RYYRITYGETGGNSPVQEFTVPGSKSTATISGLKPGVD YTITVYAVTGRGESPASSKPISINYRTEIDGGGGSGGGG SGGGGSGGGGSRIEALIRAAQEQQEKNEAALRELQKW AS |
| 420 | 8 | MGHHHHHHGGSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKV HPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPG VDYTITVYAVTYGDDSAPISINYRTEIDGGGGSGGGGSG GGGSGGGGSRIEALIRAAQEQQEKNEAALRELDKWAS |
| 421 | 50 | MGHHHHHHGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWVAGAED YQYYRITYGETGGNSPVQEFTVPHDLVTATISGLKPGV DYTITVYAVTDMMHVEYTEHPISINYRTEIDGGGGSGGG GSGGGGSGGAIAEYAARIEALIRAAQEQQEKNEAALRE LDKWAS |
| 422 | 3 | MGHHHHHHGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWKYKVHP YRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVD YTITVYAVTYGVNSLPISINYRTEIDGGGGSGGGGSGGG GSGGGGTEYEARIEALIRAAQEQQEKNEAALRELDK |
| 423 | 122 | MGHHHHHHGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAVTV RYYRITYGETGGNSPVQEFTVPGSKSTATISGLKPGVD YTITVYAVTGRGESPASSKPISINYRTEIDGGGGSGGGG SGGGGSGGGGSRIEALIRAAQEQQEKNEAALRELYKW TS |
| 424 | 39 | MGHHHHHHGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAVTV RYYRITYGETGGNSPVQEFTVPGSKSTATISGLKPGVD YTITVYAVTGRGESPASSKPISINYRTEIDGGGGSGGGG SGGGGSGGGGSRIEALIRAAQEQQEKNEAALRELYKW ASLWI |
| 425 | 523 | MGHHHHHHGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAVTV RYYRITYGETGGNSPVQEFTVPGSKSTATISGLKPGVD YTITVYAVTGRGESPASSKPISINYRTEIDGGGGSGGGG SGGGGSGGGGSRIEALIRAAQEQQEKNEAALRELYKW ASRWN |
| 426 | 139 | MGHHHHHHGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAVTV RYYRITYGETGGNSPVQEFTVPGSKSTATISGLKPGVD YTITVYAVTGRGESPASSKPISINYRTEIDGGGGSGGGG SGGGGSGGGGSRIEALIRAAQEQQEKNEAALRELYKW ASSWN |
- 30 035332
| 427 | 143 | MGHHHHHHGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAVTV RYYRITYGETGGNSPVQEFTVPGSKSTATISGLKPGVD YTITVYAVTGRGESPASSKPISINYRTEIDGGGGSGGGG SGGGGSGGGGSRIEALIRAAQEQQEKNEAALRELYKW GS |
| 428 | 50 | MGHHHHHHGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEYKVNN YRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSTATISGLKPGVD YTITVYAVTYGVHSSPISINYRTEIDGGGGSGGGGSGG GGSGGGGSRIEALIRAAQEQQEKNEAALRELDK |
В некоторых воплощениях анти-№17 Аднектин - пептидный ингибитор слияния ВИЧ Комбинектин или его слитые белки содержат аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную нелинкерным участкам любой из SEQ ID NO: 410-428.
В некоторых воплощениях анти-N 17 Аднектин - пептидный ингибитор слияния ВИЧ Комбинектин или его слитые белки содержат аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную нелинкерным участкам любой из SEQ ID NO: 410-428, исключая любой N-концевой удлиненный участок.
В других воплощениях анти-№17 Аднектин - пептидный ингибитор слияния ВИЧ Комбинектин содержит анти-Ы47 Аднектин, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную петле BC, петле DE и петлевым участкам FG последовательностей SEQ ID NO: 410-428.
В других воплощениях анти-Ы47 Аднектин - пептидный ингибитор слияния ВИЧ Комбинектин содержит пептидный ингибитор слияния ВИЧ, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную пептидному ингибитору слияния ВИЧ с последовательностями SEQ ID NO: 410-428.
V. Ahth-CD4 Аднектин, соединенный с ηητη-Ν17 Аднектином, соединенным с пептидным ингибитором слияния ВИЧ Комбинектином
Анти-CD4 Аднектин, соединенный с апти-/17 Аднектином, соединенным с пептидным ингибитором слияния ВИЧ Комбинектином по изобретению, включает, без ограничения ими, следующие последовательности:
Комбинектин 3137 (SEQ ID NO: 3)
GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAVTVHSYHIQYWPLGSYQRYQVFSVPGSKS
TATISGLKPGVEYQIRVYAETGRGE8DQSLGWIQIGYRTEESPEPE7PEDEGVSDVP
RDLEWAATPT8LLI8WQYKVHPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVP8VLSTAEI8GL KPGVDYTITVYAVTRGVDSAP IS IN YRTP GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEYEARI EALIRAAQEQQEKNEAALRELYKWAL
Комбинектин 3151 (SEQ ID NO: 5)
GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAVTVHSYHIQYWPLGSYQRYQVFSVPGSKS
TATI8GLKPGVEYQIRVYAETGRGE8DQ8LGWIQIGYRTEESPEPE7PEDEGV8DVP
RDLEWAATPTSLLISWEYNVNPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSVLSSAQISGL KPGVDYTITVYAVTRGVD8API8INYRTPGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEYEARI EALIRAAQEQQEKNEAALRELWKWA8
Комбинектин 3191 (SEQ ID NO: 7)
GV8DVPRDLEWAATPT8LLI8WDAPAVB/H8YHIQYWPLG8YQRYQVF8VPG8K8
TATI8GLKPGVEYQIRVYAETGRGE8DQ8LGWIQIGYRTPESPEPETPEDEGV8DVP
RDLEWAATPT8LLI8WEYKVHPYRYYRITYGETGGN8PVQEFTVP8VLS8AEI8GLK PGVDYTITVYAVTYGID8PPI8INYRTEGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEYEARIEA LIRAAQEQQEKNEAALRELYKWAL
Комбинектин 3202 (SEQ ID NO: 9)
GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVHSYHIQYWPLGSYQRYQVFSVP
G8KSTATI8GLKPGVEYQIRVYAETGGADSDQSFGWIQIGYRTPESPEPE7PEDEGV
8DVPRDLEWAATPT8LLI8WEYKVHPYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVP8VLSTAEI 8GLKPGVDYTITVYAVTRGVD8API8INYRTPGGGGSGGGGSGGGGSGGGGTIAEY AARIEALIRAAQEQQEKNEAALRELYKWAS
В вышеприведенных последовательностях подчеркнуты последовательности анти-CD4 Аднектина. Последовательности анти-№17 Аднектина подчеркнуты двойной чертой. Последовательности пептидного ингибитора слияния ВИЧ выделены жирным шрифтом. Последовательности линкера показаны курсивом.
В некоторых воплощениях Комбинектин или его слитые белки содержат аминокислотную последо- 31 035332 вательность, по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную любой из SEQ ID
NO: 3, 5, 7 и 9.
В некоторых воплощениях Комбинектин или его слитые белки содержат аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную нелинкерным участкам любой из SEQ ID NO: 3, 5, 7 и 9.
В других воплощениях Комбинектин содержит анти-CD4 Аднектин, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную участкам петли CD и петли FG последовательностей SEQ ID NO: 3, 5, 7 и 9.
В других воплощениях Комбинектин содержит анти-Х17 Аднектин, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную участкам петли BC, петли DE и петли FG последовательностей SEQ ID NO: 3, 5, 7 и 9.
В других воплощениях Комбинектин содержит пептидный ингибитор слияния ВИЧ, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную пептидному ингибитору слияния ВИЧ с последовательностями SEQ ID NO: 3, 5, 7 и 9.
VI. Фармакокинетические фрагменты
В одном аспекте в заявке предложен анти-CD4 фрагмент, анти-gp41 фрагмент, пептидный ингибитор слияния ВИЧ и их комбинации, дополнительно содержащие фармакокинетический (PK) фрагмент. Улучшенные фармакокинетические параметры могут быть оценены в соответствии с выявленной терапевтической потребностью. Часто желательно увеличивать биодоступность и/или увеличивать время между дозами, возможно путем увеличения времени, в течение которого белок остается доступным в сыворотке после введения. В некоторых случаях желательно улучшить непрерывность во времени концентрации белка в сыворотке (например уменьшить разницу в концентрации белка в сыворотке вскоре после введения и незадолго до следующего введения). Комбинектин по изобретению может быть присоединен к фрагменту, который снижает скорость выведения полипептида у млекопитающих (например мышей, крыс или людей) по меньшей мере в два раза, по меньшей мере в 10 раз, по меньшей мере в 20 раз, по меньшей мере в 30 раз, по меньшей мере в 40 раз, по меньшей мере в 50 раз, по меньшей мере в 60 раз, по меньшей мере в 70 раз, по меньшей мере в 80 раз, по меньшей мере в 90 раз, по меньшей мере в 100 раз по сравнению с немодифицированным Комбинектином. Другие показатели улучшенных фармакокинетических параметров могут включать период полувыведения из сыворотки, который часто делят на альфу-фазу и бета-фазу. Любая или обе фазы могут быть значительно улучшены посредством добавления подходящего фрагмента. Например, PK-фрагмент может увеличить сывороточный период полувыведения полипептида более чем на 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 150, 200, 400, 600, 800, 1000% или более относительно одного Комбинектина.
Фрагменты, которые замедляют выведение белка из крови, называемые здесь PK-фрагменты, включают полиоксиалкиленовые фрагменты (например полиэтиленгликоль), сахара (например сиаловую кислоту) и хорошо переносимые белковые фрагменты (например Fc и его фрагменты и варианты, трансферрин или сывороточный альбумин). Комбинектин по изобретению также может быть слит с альбумином или фрагментом (частью) или вариантом альбумина, как описано в публикации US 2007/0048282 или могут быть слиты с одним или более Аднектинами или другими фрагментами, которые связываются с сывороточным альбумином, Fc или трансферрином.
Другие PK-фрагменты, которые могут быть использованы в изобретении, включают описанные в Kontermann et al. (Current Opinion in Biotechnology, 22: 868-876 (2011)) и включенные в данный документ посредством ссылки. Такие PK-фрагменты включают, без ограничения ими, слияния человеческого сывороточного альбумина, конъюгаты человеческого сывороточного альбумина, вещества, связывающие человеческий сывороточный альбумин (например Аднектин PKE, AlbudAb, ABD), слияния XTEN, слияния PAS (то есть рекомбинантные ПЭГ -миметики на основе трех аминокислот пролина, аланина и серина), углеводные конъюгаты (например гидроксиэтилкрахмал (HES)), гликозилированные конъюгаты, конъюгаты полисиаловой кислоты и конъюгаты жирных кислот.
Соответственно, в некоторых воплощениях в изобретении предложен Комбинектин, слитый с PKфрагментом, представляющим собой полимерный сахар. В некоторых воплощениях PK-фрагмент представляет собой фрагмент полиэтиленгликоля или Fc-область. В некоторых воплощениях PK-фрагмент представляет собой белок, связывающий сывороточный альбумин, такой как описан в публикациях US 2007/0178082 и 2007/0269422. В некоторых воплощениях PK-фрагмент представляет собой человеческий сывороточный альбумин. В некоторых воплощениях PK-фрагмент представляет собой трансферрин.
Fc-слияние-Комбинектин по изобретению включает последовательности, показанные в 3137 (SEQ ID NO: 4) и 3151 (SEQ ID NO: 6) на фиг. 2.
В некоторых воплощениях Fc-слияние-Комбинектин или его слитые белки содержат аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную любой из SEQ ID NO: 4 и 6.
В некоторых воплощениях Fc-слияние-Комбинектин или его слитые белки содержат аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную нелинкерным участкам любой из SEQ ID NO: 4 и 6.
- 32 035332
В других воплощениях Fc-слияние-Комбинектин содержит анти-СП4 Аднектин, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную участкам петли CD и петли FG последовательностей SEQ ID NO: 4 и 6.
В других воплощениях Fc-слияние-Комбинектин содержит анти-Х17 Аднектин, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100 идентичную участкам петли BC, петли DE и петли FG последовательностей SEQ ID NO: 4 и 6.
В других воплощениях Fc-слияние-Комбинектина содержит пептидный ингибитор слияния, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную пептидному ингибитору слияния ВИЧ с последовательностями SEQ ID NO: 4 и 6.
HSA слияние-Комбинектин по изобретению включает последовательности, показанные в 3191 (SEQ ID NO: 8) и 3202 (SEQ ID NO: 10) на фиг. 2.
В некоторых воплощениях HSA слияние-Комбинектин или его слитые белки содержат аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную любой из SEQ ID NO: 8 и 10.
В некоторых воплощениях HSA слияние-Комбинектин или его слитые белки содержат аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную нелинкерным участкам любой из SEQ ID NO: 8 и 10.
В других воплощениях слияние HSA-Комбинектин содержит анти-ОП4 Аднектин, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную участкам петли CD и петли FG последовательностей SEQ ID NO: 8 и 10.
В других воплощениях слияние HSA-Комбинектин содержит анти-Н17 Аднектин, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную участкам петли BC, петли DE и петли FG последовательностей SEQ ID NO: 8 и 10.
В других воплощениях слияние HSA-Комбинектин содержит пептидный ингибитор слияния, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную пептидному ингибитору слияния ВИЧ с последовательностью SEQ ID NO: 8 и 10.
Полиэтиленгликоль
В некоторых воплощениях анти-ОП4 фрагмент, 3πτη^4 1 фрагмент, пептидный ингибитор слияния ВИЧ и их комбинации содержат полиэтиленгликоль (ПЭГ). ПЭГ является хорошо известным водорастворимым полимером, который является коммерчески доступным и может быть получен посредством полимеризации этиленгликоля с раскрытием кольца в соответствии со способами, хорошо известными в данной области (Sandier et al., Polymer Synthesis, vol. 3, pp. 138-161, Academic Press, New York). Термин ПЭГ широко используется, чтобы охватить любую молекулу полиэтиленгликоля, независимо от размера или модификации на конце ПЭГ, и может быть представлен формулой: X-O(CH2CH2O)n-1CH2CH2OH, где n равен 20-2300, и X представляет собой H или концевую модификацию, например C1-4 алкил. ПЭГ может содержать дополнительные химические группы, которые необходимы для реакций связывания, которые являются результатом химического синтеза молекулы; или которые действуют как спейсер для оптимального расстояния между частями молекулы. Кроме того, такой ПЭГ может состоять из одной или более боковых цепей ПЭГ, которые соединены друг с другом. ПЭГ с более чем одной цепью ПЭГ называют многоцепочечными или разветвленными ПЭГ. Разветвленные ПЭГ описаны, например, в европейской опубликованной заявке 473084А и патенте США 5932462.
Одна или более молекул ПЭГ могут быть присоединены к белку в разных положениях, и такое присоединение может быть достигнуто посредством реакции с аминами, тиолами и другими подходящими реакционноспособными группами. Аминная группа может быть, например, первичным амином, находящимся на N-конце полипептида, или аминной группой, присутствующей в аминокислоте, такой как лизин или аргинин. В некоторых воплощениях фрагмент ПЭГ присоединен в положении на полипептиде, выбранном из группы, состоящей из: а) N-конца; б) между N-концом и самой N-концевой бета-нитью или бета-подобной нитью; в) петли или остатка цепи, расположенного на поверхности полипептида, напротив целевого сайта связывания; г) между С-концом и самой С-концевой бета-нитью или бетаподобной нитью; д) в пределах линкерной последовательности, соединяющей два связывающих домена, и е) С-конца.
Пегилирование может быть достигнуто посредством сайт-направленного пегилирования, где подходящую реакционноспособную группу вводят в белок для создания сайта, где предпочтительно происходит пегилирование. В некоторых воплощениях белок модифицирован для введения остатка цистеина в нужное положение, что позволяет осуществлять сайт-направленное пегилирование на цистеине. Мутации могут быть введены в последовательность, кодирующую белок, для образования остатков цистеина. Это может быть достигнуто, например, путем мутации одного или более аминокислотных остатков в цистеин. Предпочтительные аминокислоты для мутации в остаток цистеина включают серин, треонин, аланин и другие гидрофильные остатки. Предпочтительно остаток, мутируемый в цистеин, представляет собой остаток, экспонированный на поверхности. Алгоритмы прогнозирования поверхностной доступности остатков на основе первичной последовательности или белка хорошо известны в данной области техники. Альтернативно, поверхностные остатки могут быть спрогнозированы путем сравнения амино- 33 035332 кислотных последовательностей связывающихся полипептидов, при условии, что кристаллическая структура каркаса, на основе которой разработаны и образованы связывающие полипептиды, расшифрована (см. Himanen et al., Nature, 414: 933-938 (2001)), и, таким образом, идентифицированы остатки, экспонированные на поверхности. Пегилирование остатков цистеина может быть осуществлено с использованием, например, ПЭГ-малеимида, ПЭГ-винилсульфона, ПЭГ-йодацетамида или ПЭГортопиридилдисульфида.
ПЭГ обычно активируют с помощью подходящей активирующей группы, подходящей для связывания с нужным сайтом на полипептиде. Способы пегилирования хорошо известны в данной области и дополнительно описаны в Zalipsky S. et al., Use of Functionalized Poly(Ethylene Glycols) for Modification of Polypeptides in Harris, J.M., Polyethylene Glycol Chemistry: Biotechnical and Biomedical Applications, Plenus Press, New York (1992) и в Zalipsky, Advanced Drug Reviews, 16: 157-182 (1995).
Молекулярная масса ПЭГ может значительно варьироваться, и ПЭГ может быть разветвленным или линейным. Обычно средневесовая молекулярная масса ПЭГ составляет от примерно 100 до примерно 150000 Да. Типичная средневесовая молекулярная масса ПЭГ включает примерно 20000, примерно 40000, примерно 60000 и примерно 80000 Да. В некоторых воплощениях молекулярная масса ПЭГ составляет 40000 Да. Также можно использовать разветвленные варианты ПЭГ, имеющие любую из ранее указанных общую молекулярную массу. В некоторых воплощениях ПЭГ имеет две ветви. В других воплощениях ПЭГ имеет четыре ветви. В другом воплощении ПЭГ представляет собой бис-ПЭГ (NOF Corporation, DE-200MA), с которым конъюгированы два Аднектина.
Обычные способы разделения и очистки, известные в данной области, могут быть использованы для очистки пегилированного Аднектина, такие как эксклюзионная хроматография (например гельфильтрация) и ионообменная хроматография. Продукты также могут быть разделены с использованием SDS-PAGE. Продукты, которые могут быть разделены, включают моно-, ди-, три-, поли- и непегилированные Аднектины, а также свободный ПЭГ. Процент моно-ПЭГ-конъюгатов можно контролировать путем объединения более широких фракций вокруг пика элюирования для увеличения процента моно-ПЭГ в композиции. Примерно 90% моно-ПЭГ-конъюгатов представляют собой хороший баланс выхода и активности.
В некоторых воплощениях пегилированные анти-CD4 фрагмент, анти-gp41 фрагмент, пептидный ингибитор слияния ВИЧ и их комбинации предпочтительно сохраняют по меньшей мере примерно 25, 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95 или 100% биологической активности, ассоциированной с немодифицированным анти-CD4 фрагментом, анти-gp41 фрагментом, Аднектином или Комбинектином. В некоторых воплощениях биологическая активность относится к их способности связываться с CD4 или gp41, оцениваемой посредством Kd, kon или koff. В некоторых воплощениях пегилированные анти-CD4 фрагмент, анти-gp41 фрагмент, Аднектин или его Комбинектин демонстрируют повышенное связывание с CD4 или gp41 относительно непегилированных анти-CD4 фрагмента, анти-gp41 фрагмента, Аднектина или Комбинектина.
Fc-домен иммуноглобулина (и фрагменты)
В некоторых воплощениях пептид по изобретению слит с Fc-доменом иммуноглобулина или его фрагментом или вариантом. При использовании здесь функциональная Fc-область представляет собой Fc-домен или его фрагмент, который сохраняет способность связываться с FcRn. В некоторых воплощениях функциональная Fc-область связывается с FcRn, но не обладает эффекторными функциями. Способность Fc-области или ее фрагмента связываться с FcRn может быть определена с помощью стандартных анализов связывания, известных в данной области. В других воплощениях Fc-область или ее фрагмент связывается с FcRn и обладает по меньшей мере одной эффекторной функцией нативной Fcобласти. Типичные эффекторные функции включают связывание с C1q; комплементзависимую цитотоксичность (CDC); связывание с рецептором Fc; антителозависимую клеточноопосредованную цитотоксичность (ADCC); фагоцитоз; супрессию рецепторов клеточной поверхности (например В-клеточных рецепторов; BCR) и т.д. Такие эффекторные функции обычно требуют объединения Fc-области со связывающим доменом (например анти-CD4 или анти-И-17 Аднектином) и могут быть оценены с использованием различных анализов, известных в данной области для оценки таких эффекторных функций антител.
Нативная последовательность Fc-области содержит аминокислотную последовательность, идентичную аминокислотной последовательности природной Fc-области. Вариант Fc-области содержит аминокислотную последовательность, которая отличается от нативной последовательности Fc-области по меньшей мере одной аминокислотной модификацией. Предпочтительно вариант Fc-области имеет по меньшей мере одну аминокислотную замену по сравнению с нативной последовательностью Fc-области или с Fc-областью родительского полипептида, например от примерно одной до примерно десяти аминокислотных замен, и предпочтительно от примерно одной до примерно пяти аминокислотных замен в нативной последовательности Fc-области или в Fc-области родительского полипептида. Вариант Fcобласти в данном документе предпочтительно обладает по меньшей мере примерно 80% идентичностью последовательности с нативной последовательностью Fc-области и/или с Fc-областью родительского полипептида и наиболее предпочтительно по меньшей мере примерно 90% идентичностью последова- 34 035332 тельности с ними, более предпочтительно по меньшей мере примерно 95% идентичностью последовательности с ними.
В типичном воплощении Fc-домен происходит из подкласса IgG1, однако также могут быть использованы другие подклассы (например IgG2, IgG3 и IgG4). Ниже приведена последовательность Fcдомена человеческого иммуноглобулина IgG1:
DKTHTCPPCPAPELLGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTP EVTCVWDVS Н Е D Р Е
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA LPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN GQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQK SLSLSPGK (SEQ ID NO: 11)
Последовательность ядра шарнирной области подчеркнута, а области CH2 и CH3 указаны обычным текстом. Следует понимать, что С-концевой глицин и лизин являются необязательными в Комбинектине по изобретению.
Слияние может быть образовано путем присоединения Аднектина по изобретению к любому концу Fc-молекулы, то есть комбинации Fc-Аднектин или Аднектин-Fc. В некоторых воплощениях Fc и Аднектин слиты посредством линкера.
В некоторых воплощениях Fc-область, используемая в слиянии Аднектина, содержит шарнирную область Fc-молекулы. При использовании здесь, шарнирная область содержит остатки ядра шарнирной области, охватывающей положения 1-16 в SEQ ID NO: 11 (DKTHTCPPCPAPELLG; SEQ ID NO: 12) Fcобласти из IgG1. В некоторых воплощениях слияние Аднектин-Fc принимает мультимерную структуру (например димер) благодаря, отчасти, остаткам цистеина в положениях 6 и 9 из SEQ ID NO: 11 в пределах шарнирной области.
В некоторых воплощениях слияние Аднектин-Fc может иметь следующие конфигурации: 1) Аднектин-шарнир-Fc или 2) шарнир-Fc-Аднектин. Следовательно, любой Аднектин по настоящему изобретению может быть слит с Fc-областью, содержащей последовательность шарнирной области согласно этим конфигурациям. В некоторых воплощениях линкер может быть использован для присоединения Аднектина к фрагменту шарнир-Fc, например, типичный слитый белок может иметь конфигурацию Аднектинлинкер-шарнир-Fc или шарнир-1х-линкер-Аднектин. Кроме того, в зависимости от системы, в которой производится слияние полипептида, лидерную последовательность можно поместить на N-конец слитого полипептида. Например, если слияние производят в системе млекопитающего, лидерная последовательность может быть добавлена к N-концу молекулы слияния. Если синтез производят в Е. coli, последовательности слияния будет предшествовать метионин.
VII. Технология слияния нуклеиновая кислота-белок
В одном аспекте изобретения предложен Аднектин, содержащий домены фибронектина III типа, который связывается с CD4 или доменом N17 белка gp41. Одним из способов быстрого создания и тестирования доменов Fn3 со специфическими связывающими свойствами является технология слияния нуклеиновой кислоты и белка. В данном изобретении используют технологию экспрессии in vitro и мечения, называемую PROfusion, в которой используют слияния нуклеиновая кислота-белок (слияния РНК- и ДНК-белок) для идентификации мотивов новых полипептидов и аминокислотных мотивов, которые важны для связывания с белками. Технология слияния нуклеиновая кислота-белок представляет собой технологию ковалентного связывания белка с его кодирующей генетической информацией. Подробное описание технологии слияния РНК-белок и методов скрининга библиотеки фибронектиновых каркасных белков см. в Szostak et al., патенты США 6258558, 6261804, 6214553, 6281344, 6207446, 6518018 и 6818418; Roberts et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 94:12297-12302 (1997); и Kurz et al., Molecules, 5: 1259-1264 (2000), все из которых включены в данный документ посредством ссылки.
VIII. Векторы и полинуклеотиды
Нуклеиновые кислоты, кодирующие любой из различных раскрытых здесь белков или полипептидов, могут быть синтезированы химически. Частота использования кодонов может быть выбрана таким образом, чтобы улучшить экспрессию в клетке. Такая частота использования кодона зависит от выбранного типа клетки. Были разработаны специализированные схемы частоты использования кодона для Е. coli и других бактерий, а также для клеток млекопитающих, растительных клеток, дрожжевых клеток и клеток насекомых. См., например, Mayfield et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 100(2):438-442 (Jan. 21, 2003); Sinclair et al., Protein Expr. Purif., 26(1):96-105 (Oct. 2002); Connell, N.D., Curr. Opin. Biotechnol., 12(5): 446-449 (Oct. 2001); Makrides et al., Microbiol. Rev., 60(3):512-538 (Sep. 1996); и Sharp et al., Yeast, 7(7): 657-678 (Oct. 1991).
Общие методы манипуляций с нуклеиновыми кислотами описаны, например, в Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, vol. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989), или Ausubel, F. et al., Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishing and Wiley-Interscience, New York (1987) и периодических изданиях, включенных в настоящее описание посредством ссылки. Как правило, ДНК, кодирующая полипептид, функционально связана с подходящими транскрипционными или трансляционными регуляторными элементами, происходящими из генов млекопитающих, вирусов
- 35 035332 или насекомых. Такие регуляторные элементы включают транскрипционный промотор, возможную последовательность оператора для контроля транскрипции, последовательность, кодирующую подходящий рибосомальный сайт связывания мРНК, и последовательности, контролирующие окончание транскрипции и трансляции. Дополнительно включены способность реплицироваться в хозяине, обычно обеспечиваемая точкой начала репликации, и селективный ген для облегчения распознавания трансформантов.
Описанные здесь белки могут быть получены рекомбинантно не только непосредственно, но также в виде полипептида, слитого с гетерологичным полипептидом, который предпочтительно представляет собой сигнальную последовательность, или с другим полипептидом, имеющим специфический сайт расщепления на N-конце зрелого белка или полипептида. Предпочтительно выбранная гетерологичная сигнальная последовательность представляет собой такую последовательность, которая распознается и процессируется (то есть отщепляется сигнальной пептидазой) клеткой-хозяином.
Для прокариотических клеток-хозяев, которые не распознают и не процессируют нативную сигнальную последовательность, эту сигнальную последовательность заменяют прокариотической сигнальной последовательностью, выбранной, например, из группы лидерных последовательностей щелочной фосфатазы, пенициллиназы, 1 pp или термостабильного энтеротоксина II.
Для секреции дрожжами нативная сигнальная последовательность может быть заменена, например, дрожжевой лидерной последовательностью инвертазы, лидерной последовательностью фактора (включая лидерные последовательности альфа-фактора Saccharomyces и Kluyveromyces) или лидерной последовательностью кислой фосфатазы, лидерной последовательностью глюкоаминазы С. albicans или сигнальной последовательностью, описанной в патенте США 5631144. В случае экспрессии в клетках млекопитающих имеются сигнальные последовательности млекопитающих, а также вирусные секреторные лидерные последовательности, например сигнал gD простого герпеса. ДНК для таких областейпредшественника может быть лигирована в рамке считывания с ДНК, кодирующей белок.
И экспрессионные и клонирующие векторы содержат нуклеиновокислотную последовательность, которая позволяет вектору реплицироваться в одной или более выбранных клетках-хозяевах. Как правило, в клонирующих векторах эта последовательность является последовательностью, которая позволяет вектору реплицироваться независимо от хромосомной ДНК хозяина, и включает точки начала репликации или автономно реплицирующиеся последовательности. Такие последовательности хорошо известны для различных бактерий, дрожжей и вирусов. Точка начала репликации из плазмиды pBR322 подходит для большинства грамотрицательных бактерий, 2-микронная точки начала репликации плазмиды подходит для дрожжей, а различные вирусные точки начала репликации (SV40, полиомавирус, аденовирус, VSV (вирус Варицелла-Зостер) или BPV (вирус папилломы крупного рогатого скота)) используют для клонирующих векторов в клетках млекопитающих. Как правило, компонент точки начала репликации не нужен для экспрессионных векторов млекопитающих (обычно может быть использовано только начало репликации вируса SV40, потому что он содержит ранний промотор).
Экспрессионные и клонирующие векторы могут содержать селективный ген, также называемый селективным маркёром. Типичные селективные гены кодируют белки, которые (а) обеспечивают устойчивость к антибиотикам или другим токсинам, например к ампициллину, неомицину, метотрексату или тетрациклину, (б) дополняют ауксотрофный дефицит или (в) обеспечивают необходимыми питательными веществами, отсутствующими в сложных средах, например геном, кодирующим D-аланинрацемазу для Bacilli.
Экспрессионные и клонирующие векторы обычно содержат промотор, который распознается организмом-хозяином и функционально связан с нуклеиновой кислотой, кодирующей белок по изобретению, например фибронектиновый каркасный белок. Промоторы, подходящие для использования с прокариотическими хозяевами, включают промотор phoA, бета-лактамазную и лактозную промоторные системы, щелочную фосфатазу, триптофановую (trp) промоторную систему и гибридные промоторы, такие как tan промотор. Однако подходят другие известные бактериальные промоторы. Промоторы для использования в бактериальных системах также содержат последовательность Шайна-Дальгарно (S.D.), функционально связанную с ДНК, кодирующей белок по изобретению. Последовательности промотора известны для эукариот. Практически все эукариотические гены имеют АТ-богатую область, расположенную примерно на 25-30 оснований выше сайта, где инициируется транскрипция. Другая последовательность, найденная на 70-80 оснований выше начала транскрипции многих генов, представляет собой область CNCAAT, где N может быть любым нуклеотидом. На 3'-конце большинства эукариотических генов имеется последовательность AATAAA, которая может быть сигналом для добавления поли(А)-хвоста к 3'-концу кодирующей последовательности. Все эти последовательности соответствующим образом встраивают в эукариотические экспрессионные векторы.
Примеры подходящих последовательностей промоторов для использования с хозяевами-дрожжами включают промоторы для 3-фосфоглицераткиназы или других гликолитических ферментов, таких как энолаза, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа, гексокиназа, пируватдекарбоксилаза, фосфофрукто киназа, глюкозо-6-фосфат-изомераза, 3-фосфоглицератмутаза, пируваткиназа, триозофосфат-изомераза, фосфоглюкозоизомераза и глюкокиназа.
Транскрипцию векторов в клетках-хозяевах млекопитающих можно контролировать, например,
- 36 035332 промоторами, полученными из геномов вирусов, таких как полиомавирус, вирус оспы кур, аденовирус (такой как аденовирус 2), вирус папилломы крупного рогатого скота, вирус саркомы птиц, цитомегаловирус, ретровирус, вирус гепатита В и наиболее предпочтительно вирус обезьяны 40 (SV40), из гетерологичных промоторов млекопитающих, например актинового промотора или иммуноглобулинового промотора, промоторов теплового шока, при условии что такие промоторы совместимы с системами клетокхозяев.
Транскрипцию ДНК, кодирующей белок по изобретению, высшими эукариотами часто увеличивают путем встраивания энхансерной последовательности в вектор. Сейчас известны многие энхансерные последовательности из генов млекопитающих (глобин, эластаза, альбумин, α-фетопротеин и инсулин). Однако обычно используют энхансер из вируса эукариотической клетки. Примеры включают энхансер SV40 в поздней области от точки начала репликации (п.о. 100-270), энхансер раннего промотора цитомегаловируса, энхансер полиомы в поздней области от точки начала репликации и аденовирусные энхансеры. См. также Yaniv, Nature, 297:17-18 (1982) об усиливающих элементах активации эукариотических промоторов. Энхансер может быть присоединен к вектору в положении 5' или 3' к пептидкодирующей последовательности, но предпочтительно расположен на участке 5' от промотора.
Экспрессионные векторы, используемые в клетках-хозяевах эукариот (например дрожжей, грибов, насекомых, растений, животных, в человеческих или ядросодержащих клетках других многоклеточных организмов) также будут содержать последовательности, необходимые для прекращения транскрипции и для стабилизации мРНК. Такие последовательности обычно находятся в 5'- и, иногда, в 3'- нетранслируемых областях эукариотических или вирусных ДНК или кДНК. Эти области содержат нуклеотидные сегменты, транскрибируемые как полиаденилированные фрагменты в нетранслируемой части мРНК, кодирующей белок по изобретению. Одним из полезных компонентов окончания транскрипции является область полиаденилирования гормона роста крупного рогатого скота. См. WO 94/11026 и раскрытый в ней экспрессионный вектор.
Рекомбинантная ДНК также может включать любой тип последовательности белкового тега, который можно использовать для очистки белка. Примеры белковых тегов включают, без ограничения ими, гистидиновый тег, FLAG тег, myc тег, НА тег или GST тег. Соответствующие клонирующие и экспрессионные векторы для использования с бактериальными, грибковыми, дрожжевыми и млекопитающими клеточными хозяевами можно найти в Cloning Vectors: A Laboratory Manual, Elsevier, New York (1985), релевантное раскрытие которых включено в настоящее описание посредством ссылки.
Экспрессионную конструкцию вводят в клетку-хозяина, используя способ, соответствующий этой клетке-хозяину, очевидный специалисту в данной области. В данной области известны различные способы введения нуклеиновой кислоты в клетки-хозяева, включающие, без ограничения ими, электропорацию; трансфекцию с использованием хлорида кальция, хлорида рубидия, фосфата кальция, DEAEдекстрана или других веществ; баллистическую трансфекцию; липофекцию; и инфицирование (когда вектор является инфекционным агентом).
Подходящие клетки-хозяева включают прокариотов, дрожжи, клетки млекопитающих или бактериальные клетки. Подходящие бактерии включают грамотрицательные или грамположительные организмы, например Е. coli или Bacillus spp. Также можно использовать для получения полипептидов дрожжи, предпочтительно из Saccharomyces species, такие как S. cerevisiae. Различные культуры клеток млекопитающих или насекомых также можно использовать для экспрессии рекомбинантных белков. Бакуловирусные системы для продуцирования гетерологичных белков в клетках насекомых описаны в Luckow et al. (Bio/Technology, 6:47 (1988)). Примеры подходящих линий клеток-хозяев млекопитающих включают эндотелиальные клетки, клетки почек обезьяны COS-7, клетки CV-1, L-клетки, С127, 3T3, клетки яичника китайского хомячка (СНО), человеческие эмбриональные клетки почек, линии клеток HeLa, 293, 293Т и ВНК. Очищенные полипептиды получают путем культивирования подходящих систем хозяин/вектор для экспрессии рекомбинантных белков. Для многих применений небольшой размер многих полипептидов, описанных здесь, делает экспрессию в Е. coli предпочтительным способом экспрессии. Затем белок очищают из культуральной среды или клеточных экстрактов.
IX. Получение белка
Настоящее изобретение также относится к клеточным линиям, которые экспрессируют Комбинектин или его слитый белок. Создание и выделение клеточных линий, продуцирующих Комбинектин, можно осуществить с использованием стандартных методов, известных в данной области, таких как описаны здесь.
Клетки-хозяева трансформируют описанными здесь экспрессионными или клонирующими векторами для получения белка и культивируют в обычных питательных средах, модифицированных, как это целесообразно для индуцирования промоторов, отбора трансформантов или амплификации генов, кодирующих нужные последовательности. В приведенных здесь примерах клетки-хозяева, используемые для высокоэффективного получения белков (НТРР) и для среднемасштабного производства, представляли собой клетки бактериального штамма HMS174.
Клетки-хозяева, используемые для получения белков по настоящему изобретению, можно культивировать в различных средах. Для культивирования клеток-хозяев пригодны имеющиеся в продаже сре
- 37 035332 ды, такие как Ham's F10 (Sigma), минимальная питательная среда ((MEM), (Sigma), RPMI-1640 (Sigma) и среда Игла в модификации Дульбекко ((DMEM), Sigma)). Кроме того, многие среды, описанные в Ham et al., Meth. Enzymol., 58:44 (1979), Barites et al., Anal. Biochem., 102:255 (1980), патентах США 4767704, 4657866, 4927762, 4560655, 5122469, 6048728, 5672502 или патенте США RE 30985, могут быть использованы в качестве культуральных сред для клеток-хозяев. Любая из этих сред может быть обогащена по мере необходимости гормонами и/или другими факторами роста (такими как инсулин, трансферрин или эпидермальный фактор роста), солями (такими как хлорид натрия, кальций, магний и фосфат), буферами (такими как HEPES), нуклеотидами (такие как аденозин и тимидин), антибиотиками (такими как гентамицин), следовыми элементами (определяемыми как неорганические соединения, обычно присутствующие в конечных концентрациях в микромолярном диапазоне), и глюкозой или эквивалентным источником энергии. Любые другие необходимые добавки также могут быть включены в соответствующих концентрациях, которые известны специалистам в данной области. Условия культивирования, такие как температура, pH и тому подобное, являются такими, которые ранее использовались для клетки-хозяина, отобранной для экспрессии, и очевидны для специалиста обычной квалификации.
Раскрытые здесь белки также могут быть получены с использованием бесклеточных систем трансляции. Для этой цели нуклеиновые кислоты, кодирующие полипептид, должны быть модифицированы так, чтобы обеспечить возможность транскрипции in vitro с получением мРНК и чтобы обеспечить возможность бесклеточной трансляции мРНК в определенной используемой бесклеточной системе (эукариотической, такой как бесклеточная трансляционная система млекопитающих или дрожжей, или прокариотической, такой как бактериальная бесклеточная трансляционная система).
Белки по изобретению также могут быть получены посредством химического синтеза (например посредством методов, описанных в Solid Phase Peptide Synthesis, Second Edition, The Pierce Chemical Co., Rockford, III. (1984)). Модификации белка также могут быть осуществлены посредством химического синтеза.
Белки по настоящему изобретению могут быть очищены при помощи способов выделения/очистки белков, обычно известных в области химии белка. Неограничивающие примеры включают экстракцию, перекристаллизацию, высаливание (например сульфатом аммония или сульфатом натрия), центрифугирование, диализ, ультрафильтрацию, адсорбционную хроматографию, ионообменную хроматографию, гидрофобную хроматографию, хроматографию с нормальными фазами, хроматографию с обращенными фазами, гель-фильтрацию, гель-проникающую хроматографию, аффинную хроматографию, электрофорез, противоточное распределение или любую их комбинацию. После очистки, полипептиды могут быть помещены в разные буферы и/или сконцентрированы любым из множества известных в данной области методов, включая, без ограничения ими, фильтрацию и диализ.
Очищенный полипептид предпочтительно является по меньшей мере на 85% чистым, или предпочтительно по меньшей мере на 95% чистым, и наиболее предпочтительно по меньшей мере на 98% чистым. Независимо от точного числового значения чистоты, полипептид является достаточно чистым для применения в качестве фармацевтического продукта.
X. Биофизические и биохимические характеристики
Связывание белка по изобретению с молекулой-мишенью (например CD4 или gp41) может быть оценено через константы равновесия (например, константу диссоциации, Kd) и через кинетические константы (например, константу скорости ассоциации, kon, и константу скорости диссоциации, koff). Белок по изобретению обычно связывается с молекулой-мишенью с Kd менее 500, 100, 10, 1 нМ, 500, 200 или 100 пМ, хотя допустимы более высокие значения Kd, когда koff является достаточно низкой или kon является достаточно высокой.
Анализы аффинности связывания in vitro
Белки, которые связываются с CD4 или gp41, могут быть идентифицированы с использованием различных анализов in vitro. Предпочтительно анализы представляют собой высокопроизводительные анализы, которые позволяют проводить скрининг множества кандидатов одновременно.
В некоторых воплощениях биомолекулярные взаимодействия можно наблюдать в режиме реального времени с помощью системы BIACORE®, где используется SPR (поверхностный плазмонный резонанс) для обнаружения изменений резонансного угла света на поверхности тонкой золотой пленки на стеклянной подложке из-за изменений показателя преломления поверхности вплоть до 300 нм. При анализе BIACORE® получают константы скорости ассоциации, константы скорости диссоциации, константы равновесной диссоциации и константы аффинности. Аффинность связывания получают путем оценки констант скорости ассоциации и диссоциации с использованием системы поверхностного плазмонного резонанса BIACORE® (Biacore, Inc.). Биологический чип активируют для ковалентного связывания мишени. Затем мишень разбавляют и вводят поверх чипа с получением сигнала иммобилизованного вещества в единицах ответа. Поскольку сигнал в резонансных единицах (RU) пропорционален массе иммобилизованного вещества, он отражает диапазон плотностей иммобилизованной мишени на матрице. Данные по ассоциации и диссоциации аппроксимируют одновременно в общем анализе для определения чистой скорости экспрессии для биомолекулярного взаимодействия 1:1, с получением наилучших ап- 38 035332 проксимированных значения для kon, koff и Rmax (максимальный ответ при насыщении). Равновесные константы диссоциации для связывания, Kd, рассчитывают из измерений SPR, как koff/kon.
В некоторых воплощениях Комбинектин по изобретению демонстрирует Kd 100 нМ или менее.
Предпочтительно Kd составляет 10 нМ или менее. Более предпочтительно Kd составляет 1 нМ или менее.
В некоторых воплощениях Комбинектин по изобретению демонстрирует IC50 5 нМ или менее, 4 нМ или меньше, 3 нМ или менее, 2,5 нМ или менее, 2 нМ или менее, 1,5 нМ или менее, 1 нМ или менее, 0,5 нМ или менее, 0,2 нМ или менее или 0,1 нМ или менее. Предпочтительно IC50 составляет 1,5 нМ или менее. Более предпочтительно IC50 составляет 0,5 нМ или менее.
Следует понимать, что описанные выше анализы являются иллюстративными и что любой способ определения аффинности связывания белков, известный в данной области, (например резонансный перенос энергии флуоресценции (FRET), ферментный иммуносорбентный анализ и анализы конкурентного связывания (например радиоиммуноанализы)) может быть использован для оценки аффинностей связывания Комбинектина по изобретению.
В настоящем изобретении анализы ELISA были использованы для идентификации Аднектинов, которые связываются с CD4 или gp41, с аффинностями, определенными посредством BIACORE® SPR. Анализы FACS были также использованы для определения EC50 связывания CD4-Аднектина (отдельно или как части целого Комбинектина) с CD4, естественно представленным на Т-клеточных поверхностях. Аффинности пептидов измеряли посредством BIACORE® SPR.
Как описано в табл. 5 ниже, диапазон аффинностей связывания (согласно SPR) CD4-Аднектинов с CD4 составлял от 0,3 до 140 нМ; диапазон связывания И17-Аднектинов с искусственными мишенями на основе gp41 составлял от 0,5 до 40 нМ; диапазон связывания пептида составлял от 0,2 до 70 нМ. SPRоснованные аффинности для Комбинектина по изобретению и для его отдельных компонентов показаны в табл. 5 ниже.
Таблица 5. Аффинности связывания Комбинектина и отдельных компонентов
(1/Мс)
K0ff (1/с)
Kd (нМ)
CD4Аднектин
N17Аднектин пептид
HSAКомбинектин
HSAКомбинектин
HSAКомбинектин
ADX 6200 А08
ADX 6940 В01
1,9Е+05 др41 (IZN24)
7,0Е+06
7,6Е-04
3, ЗЕ-ОЗ
203613-24
ВМТ-180280
ВМТ-180280
2,ЗЕ+06
2,5Е-04
ВМТ-180280 др41 (PRD828)
7,6Е+03 др41 (IZN24)
8ДЕ+05
8,ЗЕ-04
1,7Е-03
109
др41 (PRD828)
9,6Е+05
1,8Е-04
In Vitro анализы ингибирующей активности
Существуют различные признанные в данной области системы in vitro, которые позволяют исследовать эффективность Комбинектина (или отдельных ингибиторов, или их комбинации) против инфекции ВИЧ-1. Они включают системы, которые обеспечивают возможность полной репликации лаборатор ного вируса или клинических изолятов различных штаммов в культивируемых клетках или культурах моноцитов периферической крови. Кроме того, для анализа эффективности Комбинектина, отдельных ингибиторов или их комбинаций можно использовать системы, которые воспроизводят ранние стадии проникновения инфекции в клетку без использования жизнеспособного вируса. Эти системы включают, без ограничения ими, псевдотипированные вирусы, содержащие делеции, которые делают их неспособными продуцировать инфекционные вирионы, или клетки, которые экспрессируют только ген gp160 ВИЧ, который можно использовать для мониторинга специфической реакции слияния ВИЧ-1 с клетка ми-мишенями.
In Vivo Модели
Специалисту в данной области известны различные признанные в данной области животные модели, которые обеспечивают возможность репликации и в некоторых случаях воспроизводят симптомы ВИЧ-инфекции. Эти модели могут быть использованы для анализа эффективности Комбинектина, отдельных ингибиторов или их комбинаций по изобретению.
XI. Применения в терапии
В одном аспекте настоящего изобретения предложены Комбинектины для лечения ВИЧ. Соответственно, в некоторых воплощениях в изобретении предложены способы ослабления или ингибирования слияния ВИЧ у субъекта, включающие введение эффективного количества Комбинектина по изобретению субъекту. В некоторых воплощениях субъект представляет собой человека. В некоторых воплоще- 39 035332 ниях Комбинектин по изобретению является фармацевтически приемлемым для млекопитающих, в частности человека. Фармацевтически приемлемый полипептид относится к полипептиду, который вводят животному без существенных неблагоприятных медицинских последствий.
В некоторых воплощениях Комбинектин по изобретению вводят субъекту в комбинации (одновременно или раздельно) с агентом, известным в данной области, как полезный для конкретного расстройства или заболевания, подлежащего лечению.
В некоторых воплощениях целевая популяция пациентов для терапии Комбинектином представляет собой популяцию, которая не поддается стандартной терапии для подлежащего лечению заболевания, изза, например, возраста, ранее существовавших состояний, генетических характеристик и/или сопутствующих заболеваний. Комбинектин по изобретению может служить альтернативой существующим терапевтическим методам, которые связаны со значительными побочными эффектами или проблемами безопасности.
В некоторых воплощениях целевая популяция пациентов для терапии Комбинектином состоит из неинфицированных субъектов с высоким риском инфицирования из-за образа жизни или других отягчающих факторов.
Комбинектин используют для защиты этих субъектов от инфицирования ВИЧ (доконтактная профилактика).
XII. Фармацевтические композиции
В настоящем изобретении предложены фармацевтические композиции, содержащие Комбинектин или его слитые белки, описанные здесь, где композиция по существу не содержит эндотоксин или по меньшей мере содержит не более приемлемых уровней эндотоксинов, определенных органом государственного регулирования и контроля (например FDA).
Композиции по настоящему изобретению могут находиться в форме пилюли, таблетки, капсулы, жидкости или таблетки с замедленным высвобождением для перорального введения; жидкости для внутривенного, подкожного или парентерального введения; или геля, лосьона, мази, крема или полимера или другого носителя с замедленным высвобождением для местного применения, или распыляемой суспензии, подходящей для ингаляционного или интраназального введения.
Способы получения композиций, хорошо известные в данной области, можно найти, например, в Gennaro, A.R., ed., Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, PA (2000). Композиции для парентерального введения могут, например, содержать эксципиенты, стерильную воду, физиологический раствор, полиалкиленгликоли, такие как полиэтиленгликоль, масла растительного происхождения или гидрированные нафталины. Для контролирования высвобождения соединений можно использовать биосовместимый, биоразлагаемый лактидный полимер, лактидный/гликолидный сополимер или сополимеры полиоксиэтилена и полиоксипропилена. Композиции наночастиц (например биоразлагаемые наночастицы, твердые липидные наночастицы, липосомы) можно использовать для контролирования биораспределения соединений. Другие потенциально пригодные парентеральные системы доставки включают частицы сополимера этилена и винилацетата, осмотические насосы, имплантируемые инфузионные системы и липосомы. Концентрация соединения в композиции варьируется в зависимости от ряда факторов, включая дозу вводимого лекарственного средства и путь введения. Приемлемые носители, эксципиенты или стабилизаторы являются нетоксичными для реципиентов в используемых дозах и концентрациях и включают буферы, такие как фосфатный, цитратный и другие органические кислоты; антиоксиданты, включающие аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как октадецилдиметилбензиламмония хлорид, гексаметония хлорид, бензалкония хлорид, бензетония хлорид, фенол, бутиловый или бензиловый спирт, алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен, катехол, резорцин; циклогексанол; 3-пентанол; и м-крезол); низкомолекулярные полипептиды (менее чем примерно 10 остатков); белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстраны; хелатирующие агенты, такие как ЭДТА; сахара, такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; комплексы металлов (например Zn-белковые комплексы); и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как Tween, PLURONIC® или полиэтиленгликоль (ПЭГ).
Активные ингредиенты также могут быть включены в микрокапсулы, полученные, например, методами коацервации или посредством межфазной полимеризации, например в гидроксиметилцеллюлозную или желатиновую микрокапсулу и поли-(метилметакрилатную) микрокапсулу, соответственно , в коллоидные системы доставки лекарств (например липосомы, альбуминовые микросферы, микроэмульсии, наночастицы и нанокапсулы) или в макроэмульсии. Такие методы раскрыты в Osol, A., ed., Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th Edition (1980).
Могут быть изготовлены препараты с замедленным высвобождением. Подходящие примеры препаратов с замедленным высвобождением включают полупроницаемые матрицы из твердых гидрофобных полимеров, содержащие белки по изобретению, где матрицы находятся в виде формованных изделий, например пленок или микрокапсул. Примеры матриц с замедленным высвобождением включают слож- 40 035332 ные полиэфиры, гидрогели (например поли(2-гидроксиэтилметакрилат) или поливиниловый спирт), полилактиды (патент US 3773919), сополимеры L-глутаминовой кислоты и этил-Ь-глутамата, неразлагаемый этиленвинилацетат, разлагаемые сополимеры молочной и гликолевой кислот, такие как LUPRON DEPOT® (инъецируемые микросферы, состоящие из сополимера молочной и гликолевой кислот и ацетата леупролида) и поли-О-(-)-3-гидроксимасляную кислоту. Хотя полимеры, такие как этиленвинилацетат и молочная кислота-гликолевая кислота, позволяют высвобождать молекулы в течение более чем 100 суток, некоторые гидрогели высвобождают белки в течение более коротких периодов времени. Когда инкапсулированные белки по изобретению могут оставаться в организме в течение длительного времени, они могут денатурировать или агрегировать в результате воздействия влаги при 37°С, что приводит к потере биологической активности и к возможным изменениям иммуногенности. Могут быть разработаны рациональные стратегии стабилизации в зависимости от вовлеченного механизма. Например, если обнаружено, что механизм агрегации представляет собой межмолекулярное образование S-Sсвязи посредством тио-дисульфидного взаимообмена, стабилизация может быть достигнута путем модификации сульфгидрильных остатков, лиофилизации из кислых растворов, контроля влажности с использованием соответствующих добавок и разработки конкретных композиций полимерной матрицы.
Композиции по настоящему изобретению для перорального применения включают таблетки, содержащие активный(е) ингредиент(ы) в смеси с нетоксичными фармацевтически приемлемыми эксципиентами. Эти эксципиенты могут представлять собой, например, инертные разбавители или наполнители (например сахарозу и сорбит), смазывающие агенты, скользящие вещества и антиадгезивные вещества (например стеарат магния, стеарат цинка, стеариновую кислоту, кремнеземы, гидрированные растительные масла или тальк). Композиции для перорального применения также могут быть представлены в виде жевательных таблеток или в виде твердых желатиновых капсул, где активный ингредиент смешан с инертным твердым разбавителем, или в виде мягких желатиновых капсул, где активный ингредиент смешан с водой или масляной средой.
Фармацевтическая композиция, предназначенная для использования для введения in vivo, обычно должна быть стерильной. Это может быть достигнуто посредством фильтрации через стерильные фильтрационные мембраны. Когда композиция лиофилизирована, стерилизация с использованием этого метода может быть проведена либо до, либо после лиофилизации и восстановления влагосодержания. Композиция для парентерального введения может храниться в лиофилизированной форме или в растворе. Кроме того, парентеральные композиции обычно помещают в контейнер, имеющий стерильный порт доступа, например пакет для внутривенного раствора или флакон, имеющий пробку, прокалываемую иглой для подкожной инъекции.
После приготовления фармацевтической композиции ее можно хранить в стерильных флаконах в виде раствора, суспензии, геля, эмульсии, твердого вещества или обезвоженного или лиофилизированного порошка. Такие препараты могут храниться либо в готовой к употреблению форме, либо в форме (например лиофилизированной), которая требует восстановления влагосодержания перед введением.
Композиции в настоящем изобретении также могут содержать более одного активного соединения, если это необходимо для конкретного подвергаемого лечению показания, предпочтительно соединения, взаимодополняющие активности которых не оказывают неблагоприятного влияния друг на друга. Такие молекулы подходящим образом присутствуют в комбинации в количестве, эффективном для предполагаемой цели.
XIII. Введение
Фармацевтическую композицию, содержащую Комбинектин или его слитый белок по настоящему изобретению, можно вводить субъекту с ВИЧ, используя стандартные способы введения, включающие пероральное, парентеральное, легочное, трансдермальное, внутримышечное, интраназальное, буккальное, сублингвальное или суппозиторное введение. Предпочтительно введение Комбинектинов по изобретению является парентеральным. Термин парентеральное, при использовании здесь, включает внутривенное, внутримышечное, подкожное, ректальное, вагинальное или внутрибрюшинное введение. Предпочтительной является периферическая системная доставка посредством внутривенной, или внутрибрюшинной, или подкожной инъекции.
Терапевтически эффективная доза относится к дозе, которая обеспечивает терапевтический эффект, для которого ее вводят. Эффективное количество фармацевтической композиции, которое следует использовать терапевтически, зависит, например, от терапевтического контекста и целей. Специалисту в данной области понятно, что подходящие для лечения уровни доз будут, таким образом, варьироваться в зависимости, в частности, от вводимого вещества, показания, для которого используют связывающее вещество, пути введения и размера (массы тела, площади поверхности тела и размера органа) и состояния (возраста и общего состояния здоровья) пациента.
Например, терапевтически эффективная доза может быть определена сначала либо в анализах клеточных культур, либо в животных моделях, таких как мыши, крысы, кролики, собаки, свиньи или обезьяны. Животная модель может также использоваться для определения подходящего диапазона концентраций и пути введения. Такая информация затем может быть использована для определения пригодных доз и путей введения людям.
- 41 035332
Точная доза будет определена с учетом факторов, связанных с субъектом, нуждающимся в лечении, и может быть установлена с использованием стандартных методов. Дозу и введение регулируют так, чтобы обеспечить достаточные уровни активного соединения или поддерживать нужный эффект. Факторы, которые могут быть приняты во внимание, включают тяжесть болезненного состояния, общее состояние здоровья субъекта, возраст, массу и пол субъекта, время и частоту введения, комбинацию(и) лекарственных средств, чувствительность реакции и ответ на терапию. В общем случае, Комбинектин по настоящему изобретению вводят в количестве от примерно 0,01 до примерно 50 мг/кг в сутки, предпочтительно от примерно 0,01 до примерно 30 мг/кг в сутки, наиболее предпочтительно от примерно 0,01 до примерно 20 мг/кг в сутки. В некоторых воплощениях Комбинектин по настоящему изобретению вводят в еженедельных дозах от примерно 0,01 до примерно 10 мг/кг, более предпочтительно от примерно 0,01 до примерно 5 мг/кг, наиболее предпочтительно от примерно 0,01 до примерно 1 мг/кг. Альтернативно, Комбинектин по изобретению вводят в количестве от примерно 15 до примерно 100 мг/неделя, от примерно 20 до примерно 80 мг/неделя, от примерно 20 до примерно 60 мг/неделя или от примерно 20 до примерно 25 мг/неделя.
Частота введения дозы зависит от фармакокинетических параметров связывающего агента в используемой композиции. Обычно композицию вводят до тех пор, пока не будет достигнута доза, при которой достигается нужный эффект. Таким образом, композицию можно вводить в виде разовой дозы или в виде нескольких доз (в одинаковых или в разных концентрациях/дозах) в течение некоторого времени или в виде непрерывной инфузии. Обычно производят дополнительное уточнение подходящей дозы. Подходящие дозы могут быть установлены путем использованием соответствующих данных о зависимости эффекта от дозы. Например, Комбинектин может назначаться ежесуточно (например один, два, три раза или четыре раза в сутки) или реже (например один раз за двое суток, один или два раза в неделю или ежемесячно). Кроме того, как известно в данной области, могут потребоваться корректировки на возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол, питание, время введения, взаимодействие с лекарственными средствами и тяжесть заболевания, и они могут быть установлены с помощью обычных экспериментов специалистами в данной области. Комбинектин вводят подходящим образом пациенту за один раз или посредством целого ряда обработок.
Введение Комбинектина или его слияния, а также одного или более дополнительных терапевтических агентов либо путем совместного введения, либо путем последовательного введения может происходить, как описано выше для терапевтических применений. Подходящие фармацевтически приемлемые носители, разбавители и эксципиенты для совместного введения, как понятно специалисту в данной области, зависят от особенностей конкретного вводимого терапевтического агента.
XIV. Наборы и изделия
Комбинектин по изобретению может быть представлен в наборе, упакованной комбинации реагентов в заранее определенных количествах с инструкциями для применения в терапевтических или диагностических способах по изобретению.
Например, в одном воплощении изобретения предложено изделие, содержащее вещества, пригодные для лечения и предупреждения расстройств или состояний, описанных выше. Это изделие содержит контейнер и ярлык. Подходящие контейнеры включают, например, бутылки, флаконы, шприцы и пробирки. Контейнеры могут быть сделаны из различных материалов, таких как стекло или пластик. Контейнер содержит композицию по изобретению, которая эффективна для лечения ВИЧ, и может иметь стерильный порт доступа (например, контейнер может представлять собой пакет для внутривенного раствора или флакон, имеющий пробку, прокалываемую иглой для подкожной инъекции). Активным агентом в композиции является Комбинектин по изобретению. На ярлыке, прикрепленном или приложенном к контейнеру, указано, что композиция используется для лечения ВИЧ. Изделие может дополнительно содержать второй контейнер, содержащий фармацевтически приемлемый буфер, такой как забуференный фосфатом физиологический раствор, раствор Рингера и раствор декстрозы. Он также может включать другие вещества, желательные с коммерческой и пользовательской точки зрения, включая другие буферы, разбавители, фильтры, иглы, шприцы и вкладыши для упаковки с инструкциями по применению.
Включение посредством ссылки
Все документы и ссылки, включая патентные документы и веб-сайты, описанные здесь, отдельно включены посредством ссылки в данный документ в такой же степени, как если бы они были написаны в этом документе полностью или частично.
Изобретение теперь описано со ссылкой на следующие примеры, которые являются лишь иллюстративными и не предназначены для ограничения настоящего изобретения. Хотя изобретение описано подробно и со ссылкой на конкретные его воплощения, специалисту в данной области техники очевидно, что могут быть сделаны различные изменения и модификации изобретения без отступления от его сущности и объема.
- 42 035332
Примеры
Пример 1. Получение/очистка Комбинектина
Тандем ВИЧ Комбинектин - Бактериальный
Бактериальные клетки BL21 (DE3) трансформировали ДНК.
Клетки выращивали в бактериальной культуре при ~37°С до OD6Oo.
Температуру культивирования снижали до ~30°С и культуру индуцировали с помощью IPTG (изопропилтиогалактозид) и собирали через несколько часов.
Клетки собирали с помощью центрифугирования.
Выделение белка осуществляли с использованием химического лизиса и MICROFLUIDIZER®, с последующим осветлением посредством центрифугирования или тангенциально-поточной фильтрации. Лизат обрабатывали немедленно или замораживали для последующего использования.
Очистка посредством хроматографии с гидрофобным взаимодействием с последующей гидроксиапатитной хроматографией и/или ионообменной хроматографией. Смесь составляли и концентрировали с использованием тангенциально-поточной фильтрации.
Конструкция ВИЧ Комбинектин-Fc; культура клеток млекопитающих
ДНК трансфицируют в подходящие клетки млекопитающих.
Клетки выращивали в клеточной культуре.
Клетки собирали посредством центрифугирования и/или фильтрования.
Для очистки использовали аффинную хроматографию и ионообменную хроматографию.
Смесь составляли и концентрировали с использованием тангенциально-поточной фильтрации.
Конструкция ВИЧ Комбинектин-HuSA; культура клеток млекопитающих
ДНК трансфицировали в подходящие клетки млекопитающих.
Клетки выращивали в клеточной культуре.
Клетки собирали посредством центрифугирования и/или фильтрования.
Для очистки использовали хроматографию гидрофобного взаимодействия с последующей гидроксиапатитной хроматографией и/или ионообменной хроматографией.
Смесь составляли и концентрировали с использованием тангенциально-поточной фильтрации.
Пример 2. Анализ активности Комбинектина
Клетки МТ-2, клетки HEK 293T и провирусный ДНК-клон NL4-3 были получены из программы по СПИД и референтным реагентам (AIDS Research and Reference Reagent) Национального института здравоохранения (NIH). Клетки МТ-2 размножали в среде RPMI 1640 с добавлением 10% инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки (FBS), 10 мМ буфера HEPES, pH 7,55 и 2 мМ L-глутамина. Клетки HEK 293Т размножали в среде DMEM с добавлением 10% инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки FBS, 10 мМ буфера HEPES, pH 7,55 и 2 мМ L-глутамина. Рекомбинантный вирус NL-Rluc, в котором часть гена nef из провирусного клона NL4-3 была заменена геном люциферазы Renilla, был сконструирован в Bristol-Myers Squibb. Репликационно-компетентный вирус собирали через 3 суток после трансфекции клеток HEK 293Т модифицированным провирусным клоном pNL-Rluc. Трансфекцию проводили, используя Lipofectamine Plus (Invitrogen, Carlsbad, CA) в соответствии с инструкцией производителя. Вирус титровали в клетках МТ-2 с использованием активности люциферазного фермента в качестве биомаркера. Вирус NL-Rluc использовали для инфицирования клеток МТ-2 с множественностью 0,01 в течение 1 ч перед добавлением к пептидам в 96-луночных планшетах. Пептиды последовательно разбавляли в три раза и 11 концентраций помещали в планшеты в трех параллелях. Через 4-5 суток инкубации клетки обрабатывали и количественно оценивали в отношении роста вируса по количеству экспрессированной люциферазы. Люциферазу определяли количественно с использованием набора Dual Luciferase от Promega (Madison, WI) с изменениями в протоколе изготовителя. Разбавленный раствор пассивного лизиса предварительно смешивали с ресуспендированным реагентом для люциферазного анализа и затем ресуспендировали в субстрате STOP & GLO® (в соотношении 2:1:1). В каждую аспирированную лунку на аналитических планшетах добавляли в общей сложности 50 мкл смеси, и люциферазную активность измеряли немедленно на Wallac TriLux (Perkin-Elmer, Waltham, MA). 50%-ную эффективную концентрацию (ЕС50) рассчитывали путем сравнения количества люциферазы, продуцируемой в присутствии ингибирующего пептида, по сравнению с лунками, куда пептид не был добавлен.
Пример 3. Определение фармакокинетики Комбинектина
Модель трансгенных мышей с человеческим CD4
Самцов и самок гетерозиготных мышей с человеческим CD4 получали из Jackson Laboratories, Bar Harbor, ME.
Фармакокинетические (PK) исследования на мышах WT (дикого типа)
8-21-суточные исследования с однократной IV (внутривенной) болюсной дозой проводили на самках мышей C57BI/6 WT для оценки PK-свойств различных Комбинектинов. Слияния Fc-Комбинектин вводили в дозе 10 мг/кг и слияния HSA-Комбинектина вводили в дозе 8,8 мг/кг. Образцы плазмы собирали в CPD и хранили при температуре -80°С вплоть до анализа.
- 43 035332
Фармакокинетические (PK) исследования на мышах hCD4
7-10-суточные исследования с однократной IV болюсной дозой проводили на гетерозиготных мышах hCD4 для оценки PK-свойств различных Комбинектинов в присутствии мишени. Дозы Комбинектина и методы сбора проб были такими же, как описано выше для мышей WT.
Исследования на яванских макаках
1-Недельное исследование с однократной дозой было выполнено на самках яванского макака для определения PK Комбинектинов. После дозы 1 мг/кг, в определенные моменты времени, образцы сыворотки собирали, аликвотировали и быстро замораживали для MSD (масс-селективный детектор) или LC/MS (жидкостная хроматография с масс-спектрометрией) анализа.
Фармакокинетические измерения
Уровни лекарственного средства измеряли в плазме мышей и яванского макака с использованием технологической платформы Mesoscale или колориметрических форматов ELISA. Слияния FcКомбинектина захватывали белком PRD828 (BMS), который специфически связывается с пептидным компонентом Комбинектинов, и детектировали с использованием pAb козы против человеческого IgG Fc, конъюгированного с HRP (пероксидаза хрена) (Pierce #31413). Слияния HSA-Комбинектина захватывали белком PRD828 и детектировали с использованием pAb козы против HSA (Bethyl, TX #А80-229А), которые были помечены рутением. Концентрации проб рассчитывали из стандартной кривой, используя 5-параметрическое логарифмическое соответствие. Некомпартментные анализы выполняли с использованием Phoenix WINNONLIN® 6.3 (Pharsight Corporation, Mountain View, CA), используя плазменную модель и линейно-логарифмический метод расчета.
Claims (47)
1. Полипептид, содержащий три активных домена, где один домен представляет собой белок антиCD4 Аднектин, второй домен представляет собой gp41-связывающий фрагмент и третий домен представляет собой фрагмент пептидного ингибитора слияния ВИЧ, где белок анти-CD4 Аднектин содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 95-114 и где пептидный ингибитор слияния ВИЧ содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 372-392.
2. Полипептид, содержащий три активных домена, где один домен представляет собой CD4связывающий фрагмент, второй домен представляет собой белок анти-КП Аднектин и третий домен представляет собой фрагмент пептидного ингибитора слияния ВИЧ, где белок анти-Н17 Аднектин содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 115-371 и где пептидный ингибитор слияния ВИЧ содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 372-392.
3. Полипептид по любому из пп.1, 2, где три домена соединены друг с другом в любом порядке линкерами.
4. Полипептид по любому из пп.1-3, дополнительно содержащий один или более фармакокинетических (PK) фрагментов, выбранных из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, сиаловой кислоты, Fc, фрагмента Fc, трансферрина, сывороточного альбумина, белка, связывающего сывороточный альбумин, и белка, связывающего сывороточный иммуноглобулин.
5. Полипептид по п.4, где PK-фрагмент представляет собой Fc.
6. Полипептид по п.5, где Fc присоединен к N-концу полипептида.
7. Полипептид по п.4, где PK-фрагмент представляет собой человеческий сывороточный альбумин.
8. Полипептид по п.7, где человеческий сывороточный альбумин присоединен к N-концу полипептида.
9. Полипептид, содержащий два активных домена, где один домен представляет собой белок антиCD4 Аднектин, где белок анти-ОО4 Аднектин содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 95-114, и другой домен представляет собой др41-связывающий фрагмент или фрагмент пептидного ингибитора слияния ВИЧ, где пептидный ингибитор слияния ВИЧ содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 372-392.
10. Полипептид, содержащий два активных домена, где один домен представляет собой белок антиN17 Аднектин, где белок анти-Н17 Аднектин содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 115-371, и другой домен представляет собой ОЭ4-связывающий фрагмент или фрагмент пептидного ингибитора слияния ВИЧ, где пептидный ингибитор слияния ВИЧ содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 372-392.
- 44 035332
11. Полипептид по любому из пп.9, 10, где два домена соединены друг с другом в любом порядке линкерами.
12. Полипептид по любому из пп.9, 10, дополнительно содержащий один или более фармакокинетических (PK) фрагментов, выбранных из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, сиаловой кислоты, Fc, фрагмента Fc, трансферрина, сывороточного альбумина, белка, связывающего сывороточный альбумин, и белка, связывающего сывороточный иммуноглобулин.
13. Полипептид по п.12, где PK-фрагмент представляет собой Fc.
14. Полипептид по п.13, где Fc присоединен к N-концу полипептида.
15. Полипептид по п.12, где PK-фрагмент представляет собой человеческий сывороточный альбумин.
16. Полипептид по п.15, где человеческий сывороточный альбумин присоединен к N-концу полипептида.
17. Полипептид, содержащий три активных домена, где один домен представляет собой белок антиCD4 Аднектин, где белок анти-CD4 Аднектин содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 95-114, второй домен представляет собой белок анти-Ы17 Аднектин, где белок анти-Ы17 Аднектин содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 115-371, и третий домен представляет собой пептидный ингибитор слияния ВИЧ, где пептидный ингибитор слияния ВИЧ содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 372-392.
18. Полипептид по п.17, где три домена соединены друг с другом в любом порядке линкерами.
19. Полипептид по п.17 или 18, дополнительно содержащий один или более фармакокинетических (PK) фрагментов, выбранных из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, сиаловой кислоты, Fc, фрагмента Fc, трансферрина, сывороточного альбумина, белка, связывающего сывороточный альбумин, и белка, связывающего сывороточный иммуноглобулин.
20. Полипептид по п.19, где PK-фрагмент представляет собой Fc.
21. Полипептид по п.20, где Fc присоединен к N-концу полипептида.
22. Полипептид по п.19, где PK-фрагмент представляет собой человеческий сывороточный альбумин.
23. Полипептид по п.22, где человеческий сывороточный альбумин присоединен к N-концу полипептида.
24. Полипептид, содержащий анти-CD4 Аднектин, анти-Ы17 Аднектин и пептидный ингибитор слияния ВИЧ, где указанный полипептид содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную нелинкерным участкам SEQ ID NO: 3, 5, 7 или 9.
25. Полипептид по п.24, дополнительно содержащий один или более фармакокинетических (PK) фрагментов, выбранных из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, сиаловой кислоты, Fc, фрагмента Fc, трансферрина, сывороточного альбумина, белка, связывающего сывороточный альбумин, и белка, связывающего сывороточный иммуноглобулин.
26. Полипептид по п.25, где PK-фрагмент представляет собой Fc.
27. Полипептид по п.26, где Fc присоединен к N-концу полипептида.
28. Полипептид по п.25, где PK-фрагмент представляет собой человеческий сывороточный альбумин.
29. Полипептид по п.28, где человеческий сывороточный альбумин присоединен к N-концу полипептида.
30. Полипептид, содержащий анти-CD4 Аднектин, анти-Ы17 Аднектин и пептидный ингибитор слияния ВИЧ, где указанный полипептид содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную нелинкерным участкам SEQ ID NO: 4, 6, 8 или 10.
31. Полипептид, содержащий анти-CD4 Аднектин, анти-Ы17 Аднектин и пептидный ингибитор слияния ВИЧ, где указанный полипептид содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 3.
32. Полипептид, содержащий анти-CD4 Аднектин, анти-Ы17 Аднектин и пептидный ингибитор слияния ВИЧ, где указанный полипептид содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 4.
33. Полипептид, содержащий анти-CD4 Аднектин, анти-Ы17 Аднектин и пептидный ингибитор слияния ВИЧ, где указанный полипептид содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 5.
34. Полипептид, содержащий анти-CD4 Аднектин, анти-Ы17 Аднектин и пептидный ингибитор слияния ВИЧ, где указанный полипептид содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 6.
35. Полипептид, содержащий анти-CD4 Аднектин, анти-Ы17 Аднектин и пептидный ингибитор слияния ВИЧ, где указанный полипептид содержит аминокислотную последовательность, показанную в
- 45 035332
SEQ ID NO: 7.
36. Полипептид, содержащий aHTu-CD4 Аднектин, aHTu-N17 Аднектин и пептидный ингибитор слияния ВИЧ, где указанный полипептид содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 8.
37. Полипептид, содержащий aнти-CD4 Аднектин, анти^17 Аднектин и пептидный ингибитор слияния ВИЧ, где указанный полипептид содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 9.
38. Полипептид, содержащий aнти-CD4 Аднектин, анти^17 Аднектин и пептидный ингибитор слияния ВИЧ, где указанный полипептид содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 10.
39. Полипептид, содержащий два активных домена, где один домен представляет собой белок антиN17 Аднектин, где белок анти^17 Аднектин содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 115-371, и второй домен представляет собой пептидный ингибитор слияния ВИЧ, где пептидный ингибитор слияния ВИЧ содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 372-392.
40. Полипептид по п.39, где два домена соединены друг с другом в любом порядке линкерами.
41. Полипептид по п.39 или 40, дополнительно содержащий один или более фармакокинетических (PK) фрагментов, выбранных из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, сиаловой кислоты, Fc, фрагмента Fc, трансферрина, сывороточного альбумина, белка, связывающего сывороточный альбумин, и белка, связывающего сывороточный иммуноглобулин.
42. Полипептид по п.41, где PK-фрагмент представляет собой Fc.
43. Полипептид по п.42, где Fc присоединен к N-концу полипептида.
44. Полипептид по п.41, где PK-фрагмент представляет собой человеческий сывороточный альбумин.
45. Полипептид по п.44, где человеческий сывороточный альбумин присоединен к N-концу полипептида.
46. Фармацевтическая композиция против ВИЧ-инфекции, содержащая полипептид по любому из пп.1-45 и носитель.
47. Способ лечения ВИЧ у субъекта, включающий введение эффективного количества пептида или его композиции по любому из пп.1-46.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201562152271P | 2015-04-24 | 2015-04-24 | |
| US201562257474P | 2015-11-19 | 2015-11-19 | |
| PCT/US2016/027424 WO2016171980A1 (en) | 2015-04-24 | 2016-04-14 | Polypeptides targeting hiv fusion |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201792269A1 EA201792269A1 (ru) | 2018-04-30 |
| EA035332B1 true EA035332B1 (ru) | 2020-05-28 |
Family
ID=55809237
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201792269A EA035332B1 (ru) | 2015-04-24 | 2016-04-14 | Полипептиды, нацеленные на слияние вич |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US10407490B2 (ru) |
| EP (2) | EP3985020A1 (ru) |
| JP (3) | JP6894846B2 (ru) |
| KR (1) | KR20170138558A (ru) |
| CN (1) | CN107922474A (ru) |
| AU (2) | AU2016252008B2 (ru) |
| BR (1) | BR112017022790A2 (ru) |
| CA (1) | CA2983276A1 (ru) |
| CL (1) | CL2017002687A1 (ru) |
| CO (1) | CO2017011583A2 (ru) |
| CR (1) | CR20170482A (ru) |
| DO (1) | DOP2017000246A (ru) |
| EA (1) | EA035332B1 (ru) |
| ES (1) | ES2884267T3 (ru) |
| HK (1) | HK1243432A1 (ru) |
| IL (1) | IL255122A0 (ru) |
| MA (2) | MA56222A (ru) |
| MX (1) | MX2017013687A (ru) |
| PE (1) | PE20180162A1 (ru) |
| PH (1) | PH12017501914A1 (ru) |
| PT (1) | PT3286212T (ru) |
| SG (1) | SG11201708441RA (ru) |
| TW (1) | TW201643185A (ru) |
| UY (1) | UY36650A (ru) |
| WO (1) | WO2016171980A1 (ru) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106755100A (zh) * | 2017-02-20 | 2017-05-31 | 李因传 | 可控性hiv‑1基因组靶向编辑系统和其靶向载运系统 |
| EP3728310A1 (en) * | 2017-12-18 | 2020-10-28 | VIIV Healthcare UK (No.5) Limited | Antigen binding polypeptides |
| CN114605505B (zh) * | 2018-08-09 | 2023-01-31 | 东莞市朋志生物科技有限公司 | 用于检测hiv-1的合成肽 |
| WO2021081515A2 (en) * | 2019-10-25 | 2021-04-29 | Cidara Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for the treatment of human immunodeficiency virus |
| CN117980465A (zh) * | 2021-08-30 | 2024-05-03 | 康霖生物科技（杭州）有限公司 | 一种用于艾滋病病毒感染基因治疗的基因序列构建体 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20090022720A1 (en) * | 2007-07-20 | 2009-01-22 | Stephan Fischer | Conjugate of an antibody against CD4 and antifusogenic peptides |
| WO2011077093A1 (en) * | 2009-12-22 | 2011-06-30 | Aarhus Universitet | Bivalent molecules for hiv entry inhibition |
| WO2011130354A1 (en) * | 2010-04-13 | 2011-10-20 | Bristol-Myers Squibb Company | Fibronectin based scaffold domain proteins that bind pcsk9 |
| WO2014206336A1 (en) * | 2013-06-28 | 2014-12-31 | Fudan University | A hiv-1 fusion inhibitor with long half-life |
Family Cites Families (35)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3773919A (en) | 1969-10-23 | 1973-11-20 | Du Pont | Polylactide-drug mixtures |
| USRE30985E (en) | 1978-01-01 | 1982-06-29 | Serum-free cell culture media | |
| US4560655A (en) | 1982-12-16 | 1985-12-24 | Immunex Corporation | Serum-free cell culture medium and process for making same |
| US4657866A (en) | 1982-12-21 | 1987-04-14 | Sudhir Kumar | Serum-free, synthetic, completely chemically defined tissue culture media |
| US4767704A (en) | 1983-10-07 | 1988-08-30 | Columbia University In The City Of New York | Protein-free culture medium |
| US5672502A (en) | 1985-06-28 | 1997-09-30 | Celltech Therapeutics Limited | Animal cell culture |
| US4927762A (en) | 1986-04-01 | 1990-05-22 | Cell Enterprises, Inc. | Cell culture medium with antioxidant |
| US6048728A (en) | 1988-09-23 | 2000-04-11 | Chiron Corporation | Cell culture medium for enhanced cell growth, culture longevity, and product expression |
| FR2646437B1 (fr) | 1989-04-28 | 1991-08-30 | Transgene Sa | Nouvelles sequences d'adn, leur application en tant que sequence codant pour un peptide signal pour la secretion de proteines matures par des levures recombinantes, cassettes d'expression, levures transformees et procede de preparation de proteines correspondant |
| JP3051145B2 (ja) | 1990-08-28 | 2000-06-12 | 住友製薬株式会社 | 新規なポリエチレングリコール誘導体修飾ペプチド |
| US5122469A (en) | 1990-10-03 | 1992-06-16 | Genentech, Inc. | Method for culturing Chinese hamster ovary cells to improve production of recombinant proteins |
| EP0752248B1 (en) | 1992-11-13 | 2000-09-27 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma |
| US5932462A (en) | 1995-01-10 | 1999-08-03 | Shearwater Polymers, Inc. | Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces |
| US6261804B1 (en) | 1997-01-21 | 2001-07-17 | The General Hospital Corporation | Selection of proteins using RNA-protein fusions |
| EP0971946B1 (en) | 1997-01-21 | 2006-07-05 | The General Hospital Corporation | Selection of proteins using rna-protein fusions |
| US6818418B1 (en) | 1998-12-10 | 2004-11-16 | Compound Therapeutics, Inc. | Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins |
| AU2265701A (en) * | 1999-12-16 | 2001-06-25 | Tanox, Inc. | Anti-hiv-1 conjugates for treatment of hiv disease |
| US20050287153A1 (en) | 2002-06-28 | 2005-12-29 | Genentech, Inc. | Serum albumin binding peptides for tumor targeting |
| CA2416219C (en) | 2000-07-11 | 2016-10-11 | Research Corporation Technologies, Inc. | Artificial antibody polypeptides |
| US7696320B2 (en) | 2004-08-24 | 2010-04-13 | Domantis Limited | Ligands that have binding specificity for VEGF and/or EGFR and methods of use therefor |
| WO2004028473A2 (en) * | 2002-09-27 | 2004-04-08 | Tanox, Inc. | Synergistic compositions for the prevention and treatment of acquired immunodeficiency syndrome |
| US20070178082A1 (en) | 2002-11-08 | 2007-08-02 | Ablynx N.V. | Stabilized single domain antibodies |
| PL1729795T3 (pl) | 2004-02-09 | 2016-08-31 | Human Genome Sciences Inc | Białka fuzyjne albuminy |
| US20070269422A1 (en) | 2006-05-17 | 2007-11-22 | Ablynx N.V. | Serum albumin binding proteins with long half-lives |
| EA201000979A1 (ru) | 2007-12-27 | 2011-02-28 | Новартис Аг | Улучшенные связывающие молекулы на основе фибронектина и их применение |
| PT2274331E (pt) | 2008-05-02 | 2014-02-27 | Novartis Ag | Moléculas de ligação baseadas em fibronectina melhoradas e suas utilizações |
| RS55218B1 (sr) | 2008-10-31 | 2017-02-28 | Janssen Biotech Inc | Kompozicije fibronektin tip iii skalno baziranih domena, metode i upotrebe |
| GB0920944D0 (en) * | 2009-11-30 | 2010-01-13 | Biotest Ag | Agents for treating disease |
| TW201138808A (en) * | 2010-05-03 | 2011-11-16 | Bristol Myers Squibb Co | Serum albumin binding molecules |
| KR20130036012A (ko) * | 2010-05-07 | 2013-04-09 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 생체외 세포의 검출을 위한 진단 방법 |
| CN103380143B (zh) | 2010-12-22 | 2016-01-06 | 百时美施贵宝公司 | 结合il-23的基于纤连蛋白的支架结构域蛋白质 |
| EP2714971A4 (en) | 2011-05-23 | 2015-01-21 | Phylogica Ltd | METHOD FOR DETERMINING, IDENTIFYING AND INSULATING CELL-PENETRATING PEPTIDES |
| EP4151785A1 (en) | 2011-09-27 | 2023-03-22 | Janssen Biotech, Inc. | Fibronectin type iii repeat based protein scaffolds with alternative binding surfaces |
| US20150361159A1 (en) * | 2013-02-01 | 2015-12-17 | Bristol-Myers Squibb Company | Fibronectin based scaffold proteins |
| WO2014165093A2 (en) * | 2013-03-13 | 2014-10-09 | Bristol-Myers Squibb Company | Fibronectin based scaffold domains linked to serum albumin or a moiety binding thereto |
-
2016
- 2016-04-14 AU AU2016252008A patent/AU2016252008B2/en not_active Ceased
- 2016-04-14 PT PT167188176T patent/PT3286212T/pt unknown
- 2016-04-14 WO PCT/US2016/027424 patent/WO2016171980A1/en active Application Filing
- 2016-04-14 EP EP21176464.2A patent/EP3985020A1/en active Pending
- 2016-04-14 JP JP2017555557A patent/JP6894846B2/ja active Active
- 2016-04-14 MA MA056222A patent/MA56222A/fr unknown
- 2016-04-14 US US15/568,830 patent/US10407490B2/en active Active
- 2016-04-14 EP EP16718817.6A patent/EP3286212B1/en active Active
- 2016-04-14 CA CA2983276A patent/CA2983276A1/en not_active Abandoned
- 2016-04-14 PE PE2017002311A patent/PE20180162A1/es unknown
- 2016-04-14 CR CR20170482A patent/CR20170482A/es unknown
- 2016-04-14 SG SG11201708441RA patent/SG11201708441RA/en unknown
- 2016-04-14 MX MX2017013687A patent/MX2017013687A/es unknown
- 2016-04-14 MA MA041943A patent/MA41943A/fr unknown
- 2016-04-14 BR BR112017022790-8A patent/BR112017022790A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2016-04-14 KR KR1020177033985A patent/KR20170138558A/ko unknown
- 2016-04-14 ES ES16718817T patent/ES2884267T3/es active Active
- 2016-04-14 CN CN201680036930.XA patent/CN107922474A/zh active Pending
- 2016-04-14 EA EA201792269A patent/EA035332B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2016-04-22 TW TW105112708A patent/TW201643185A/zh unknown
- 2016-04-22 UY UY0001036650A patent/UY36650A/es not_active Application Discontinuation
-
2017
- 2017-10-18 IL IL255122A patent/IL255122A0/en unknown
- 2017-10-19 PH PH12017501914A patent/PH12017501914A1/en unknown
- 2017-10-23 DO DO2017000246A patent/DOP2017000246A/es unknown
- 2017-10-23 CL CL2017002687A patent/CL2017002687A1/es unknown
- 2017-11-14 CO CONC2017/0011583A patent/CO2017011583A2/es unknown
-
2018
- 2018-02-28 HK HK18102882.7A patent/HK1243432A1/zh unknown
-
2019
- 2019-08-07 US US16/533,941 patent/US11155602B2/en active Active
- 2019-09-06 AU AU2019226255A patent/AU2019226255A1/en not_active Abandoned
-
2020
- 2020-10-16 JP JP2020174288A patent/JP2021035951A/ja active Pending
-
2023
- 2023-02-03 JP JP2023014947A patent/JP7465378B2/ja active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20090022720A1 (en) * | 2007-07-20 | 2009-01-22 | Stephan Fischer | Conjugate of an antibody against CD4 and antifusogenic peptides |
| WO2011077093A1 (en) * | 2009-12-22 | 2011-06-30 | Aarhus Universitet | Bivalent molecules for hiv entry inhibition |
| WO2011130354A1 (en) * | 2010-04-13 | 2011-10-20 | Bristol-Myers Squibb Company | Fibronectin based scaffold domain proteins that bind pcsk9 |
| WO2014206336A1 (en) * | 2013-06-28 | 2014-12-31 | Fudan University | A hiv-1 fusion inhibitor with long half-life |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| HAQQANI AIMAN A.; TILTON JOHN C.: "Entry inhibitors and their use in the treatment of HIV-1 infection", ANTIVIRAL RESEARCH, ELSEVIER BV, NL, vol. 98, no. 2, 28 March 2013 (2013-03-28), NL, pages 158 - 170, XP028531684, ISSN: 0166-3542, DOI: 10.1016/j.antiviral.2013.03.017 * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7465378B2 (ja) | Ｈｉｖ融合体を標的とするポリペプチド | |
| EP3365366B1 (en) | Trispecific and/or trivalent binding proteins for prevention or treatment of hiv infection | |
| US10421789B2 (en) | Engineered outer domain (EOD) of HIV GP120 and mutants thereof | |
| KR101990341B1 (ko) | 세포 내재화를 유도하기 위한 ｃｄ20-결합 면역독소 및 이의 사용 방법 | |
| EA011876B1 (ru) | АНТИТЕЛА К IFN-γ И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ АНТИТЕЛ | |
| Bhattacharyya et al. | Design of a non-glycosylated outer domain-derived HIV-1 gp120 immunogen that binds to CD4 and induces neutralizing antibodies | |
| KR102389792B1 (ko) | Hiv를 강력하게 저해하는 리포펩티드, 그의 유도체, 그의 약학적 조성물 및 그의 용도 | |
| WO2014150748A2 (en) | Stabilized single human cd4 domains and fusion proteins | |
| US20050113292A1 (en) | Compositions of protein mimetics and methods of using same against HIV-1, SARS-coV and the like | |
| WO2019123262A1 (en) | Antigen binding polypeptides | |
| CN114907490B (zh) | 强效双功能hiv进入抑制剂及其应用 | |
| Egerer et al. | The Prevention of HIV Infection with Viral Entry Inhibitors | |
| CN114010776A (zh) | 用于增强抗逆转录病毒治疗的hiv感染者的治疗性免疫 | |
| OA19487A (en) | Potent HIV inhibiting lipopeptide, derivative thereof, pharmaceutical composition thereof and use thereof. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM |