EA034571B1 - Пролекарства аналогов глутамина - Google Patents

Пролекарства аналогов глутамина Download PDF

Info

Publication number
EA034571B1
EA034571B1 EA201890395A EA201890395A EA034571B1 EA 034571 B1 EA034571 B1 EA 034571B1 EA 201890395 A EA201890395 A EA 201890395A EA 201890395 A EA201890395 A EA 201890395A EA 034571 B1 EA034571 B1 EA 034571B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
compound
don
group
mmol
nmr
Prior art date
Application number
EA201890395A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201890395A1 (ru
Inventor
Барбара Слушер
Рана Рэйс
Лукас Тенора
Павел Майер
Андрей Янкарик
Original Assignee
Дзе Джонс Хопкинс Юниверсити
Устав Органике Кемие Э Байокемие Ав Чр, В.В.И.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Дзе Джонс Хопкинс Юниверсити, Устав Органике Кемие Э Байокемие Ав Чр, В.В.И. filed Critical Дзе Джонс Хопкинс Юниверсити
Publication of EA201890395A1 publication Critical patent/EA201890395A1/ru
Publication of EA034571B1 publication Critical patent/EA034571B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C281/00—Derivatives of carbonic acid containing functional groups covered by groups C07C269/00 - C07C279/00 in which at least one nitrogen atom of these functional groups is further bound to another nitrogen atom not being part of a nitro or nitroso group
    • C07C281/20—Derivatives of carbonic acid containing functional groups covered by groups C07C269/00 - C07C279/00 in which at least one nitrogen atom of these functional groups is further bound to another nitrogen atom not being part of a nitro or nitroso group the two nitrogen atoms of the functional groups being doubly-bound to each other, e.g. azoformamide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7076—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines containing purines, e.g. adenosine, adenylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C227/00—Preparation of compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C227/14—Preparation of compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton from compounds containing already amino and carboxyl groups or derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C245/00—Compounds containing chains of at least two nitrogen atoms with at least one nitrogen-to-nitrogen multiple bond
    • C07C245/12—Diazo compounds, i.e. compounds having the free valencies of >N2 groups attached to the same carbon atom
    • C07C245/14—Diazo compounds, i.e. compounds having the free valencies of >N2 groups attached to the same carbon atom having diazo groups bound to acyclic carbon atoms of a carbon skeleton
    • C07C245/18—Diazo compounds, i.e. compounds having the free valencies of >N2 groups attached to the same carbon atom having diazo groups bound to acyclic carbon atoms of a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C271/06—Esters of carbamic acids
    • C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C271/10—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C271/22—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by carboxyl groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/10—Indoles; Hydrogenated indoles with substituted hydrocarbon radicals attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/10—Indoles; Hydrogenated indoles with substituted hydrocarbon radicals attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/18—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/10—Indoles; Hydrogenated indoles with substituted hydrocarbon radicals attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/18—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D209/20—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals substituted additionally by nitrogen atoms, e.g. tryptophane
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/04—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/80—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D211/84—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms, with at the most one bond to halogen directly attached to ring carbon atoms
    • C07D211/90—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D263/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings
    • C07D263/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings not condensed with other rings
    • C07D263/04—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D263/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings
    • C07D263/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings not condensed with other rings
    • C07D263/08—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D263/16—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D263/18—Oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D309/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings
    • C07D309/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D309/08—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D309/10—Oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D317/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D317/08—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3
    • C07D317/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 not condensed with other rings
    • C07D317/32—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 not condensed with other rings with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D317/34—Oxygen atoms
    • C07D317/36—Alkylene carbonates; Substituted alkylene carbonates
    • C07D317/38—Ethylene carbonate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D317/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D317/08—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3
    • C07D317/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 not condensed with other rings
    • C07D317/32—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 not condensed with other rings with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D317/34—Oxygen atoms
    • C07D317/40—Vinylene carbonate; Substituted vinylene carbonates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/26—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with an oxygen, sulphur, or nitrogen atom directly attached in position 2 or 6, but not in both
    • C07D473/32—Nitrogen atom
    • C07D473/34—Nitrogen atom attached in position 6, e.g. adenine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/22—Amides of acids of phosphorus
    • C07F9/24—Esteramides
    • C07F9/2454—Esteramides the amide moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic
    • C07F9/2458—Esteramides the amide moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic of aliphatic amines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings
    • C07F9/65616—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings containing the ring system having three or more than three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members, e.g. purine or analogs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20—Carbocyclic rings
    • C07H15/203—Monocyclic carbocyclic rings other than cyclohexane rings; Bicyclic carbocyclic ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C07H19/207—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids the phosphoric or polyphosphoric acids being esterified by a further hydroxylic compound, e.g. flavine adenine dinucleotide or nicotinamide-adenine dinucleotide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06026—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atom, i.e. Gly or Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06139—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic
    • C07K5/06156—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic and Trp-amino acid; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0808—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Hydrogenated Pyridines (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Раскрыты пролекарства аналогов глутамина, такие как пролекарства азасерина, 6-диазо-5-оксонорлейцина (DON) и 5-диазо-4-оксо-L-норвалина (L-DONV).

Description

Перекрестная ссылка на связанные заявки
По данной заявке испрашивается преимущественный приоритет согласно предварительной заявке
США № 62/199566, поданной 31 июля 2015 г., которая включена в настоящее описание посредством ссылки во всей своей полноте.
Уровень техники
Пролекарственная методология представляет собой установившуюся стратегию для улучшения физико-химических, биофармацевтических и фармакокинетических свойств молекул потенциального лекарственного средства. Примерно 5-7% лекарственных средств, утвержденных по всему миру, представляют собой пролекарства с годовым объемом продаж в 2013 г. 11,2 млрд долларов. Большинство пролекарств являются простыми химическими производными оригинальных молекул. Сложноэфирные пролекарства, наиболее распространенные пролекарства, составляют 49% всех продаваемых пролекарств. Причины популярности сложноэфирных пролекарств включают их обычный прямой передовой синтез, их улучшенную липофильность и проницаемость мембраны и их повсеместную этерифицируемость. Примером подхода к получению сложноэфирного пролекарства является кэппирование кислотного остатка(ков) липофильными алкиловыми или алкилоксиметиловыми эфирами (т.е. пивалоилоксиметил (POM) или пропилоксикарбонилоксиметил (POC); например, эналаприл, адефовир). Другой подход заключается в том, чтобы закрыть кислотную группу(ы) с аминокислотой для получения амидов, которые распознаются по амидазе/пептидазе в плазме крови при гидролизе, или для получения их субстратов для транспортеров, таких как пептидный транспортер 1 (PEPT1) (например, Pomaglumetad метионил, валацикловир).
Антагонисты глутамина, такие как 6-диазо-5-оксо-Ь-норлейцин (DON) и азасерин, как было показано во многих опубликованных доклинических и нескольких клинических исследованиях, проявляют широкую антивирусную (Antiviral Res. 1997; 33(3):165-75; Antiviral Res. 1994; 25(3-4):269-79), противоинфекционную (J. Bacteriol. 1965; 89:1348-53), противораковую (см., например, Yoshioka et al., 1992; Tokushima J. Exp. Med. 39(1-2):69-76), противовоспалительную и иммунодепрессивную активности (Kulcsar et al., 2014; 111:16053-58; Maciolek et al., 2014; Curr Opin Immunol. 27:60-74; Carr et al., 2010; J Immunol. 185:1037-1044; Colombo et al., 2010; Proc Natl Acad Sci USA. 107:18868-73), a также при подавлении судорог (Proc R Soc Lond В Biol Sci. 1984 Apr 24; 221(1223): 145-68), рассеянного склероза (Tohoku, J. Exp. Med. 2009; 217(2):87-92), эпилепсии и вирусного энцефалита (J. Neurovirol. 2015 Apr; 21(2):159-73. doi: 10,1007/s13365-015-0314-6). Однако возникновение тяжелой токсичности (например, при дозах, вызывающих GI токсичность, такую как воспаление слизистой оболочки полости рта, кровотечение желудка, тошнота и рвота, боли в животе, лейкопения, тромбоцитопения и т.п.) при введении таких антагонистов глутамина на уровне терапевтических доз сдерживает их клиническое развитие.
Предыдущие попытки смягчить тяжелую токсичность, связанную с антагонистами глутамина, такими как DON, были неудачными. Например, разделение ежедневного дозирования и введение DON каждые четыре-шесть часов, по-видимому, удваивали потенциал токсичности (MgGill, et al., 1957). В качестве другого примера разработка лечения с участием DON, дозируемого с глутаминазой для уменьшения глутамина в плазме таким образом, чтобы доза DON могла снижаться, была остановлена после опубликования клинических испытаний
Сущность изобретения
Представленное изобретение обеспечивает пролекарства антагонистов глутамина и их фармацевтически приемлемые соли. В некоторых аспектах представляемое изобретение обеспечивает пролекарство антагониста глутамина или его фармацевтически приемлемую соль или его сложный эфир, имеющее структурную формулу (I)
Н NR2R2' где X представляет собой -(СН2)п-, где n равен 1;
R1 выбран из группы, состоящей из Н, C1-6 линейного алкила и C1-6 разветвленного алкила;
R2 выбран из группы, состоящей из аминокислоты, N-ацилированной аминокислоты и -С(=O)-О-(CRзR4)m-O-C(=O)-R1o;
R2' представляет собой Н, каждый R3 и R4 независимо представляет собой Н, С1-С6 алкил или фенил;
m равен 1 и
R10 представляет собой C1-C6 алкил, где аминокислоту выбирают из группы, состоящей из аланина, цистеина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, фенилаланина, глицина, гистидина, изолейцина, лизина, лейцина, метионина, аспарагина, пролина, глутамина, аргинина, серина, треонина, валина, триптофана и тирозина; и
N-ацильная группа представляет собой -С(=О)СН3.
В других аспектах представленное изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию для лечения рака у пациента, содержащую соединение формулы (I) и фармацевтически приемлемый носи- 1 034571 тель, разбавитель или эксципиент.
В некоторых аспектах представленное изобретение обеспечивает способ лечения рака у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, соединения формулы (I) или его фармацевтической композиции в эффективном количестве для лечения рака. В еще других аспектах представленное изобретение обеспечивает применение соединения формулы (I) или его фармацевтической композиции для лечения рака. В некоторых вариантах осуществления рак выбирают из группы, состоящей из рака молочной железы, колоректального рака, лейкоза, рака легких, лимфомы и меланомы.
Некоторые аспекты представленного объекта изобретения, приведенные выше, которые полностью или частично рассматриваются представленным объектом изобретения, другие аспекты станут очевидны при рассмотрении описания, взятого вместе с сопровождающими примерами и чертежами, как подробно описано ниже.
Краткое описание фигур
Таким образом, имея описанное в общих чертах представленное изобретение, теперь будут сделаны ссылки на сопутствующие чертежи, которые, помимо прочего, изображены масштабно, и где:
на фиг. 1 показан пример амино (R) и карбокси (R') модификаций, сделанных на DON при попытке синтезировать различные медленно высвобождаемые DON пролекарства по настоящему изобретению;
на фиг. 2А и 2В продемонстрированы проблемы химической стабильности, возникающие при попытке синтезировать DON пролекарства, включая проблемы стабильности, присутствующие у сложных эфиров DON (фиг. 2А) и DON соединений, обладающих свободным концевым карбоксилатом (фиг. 2В);
на фиг. 3A-3D продемонстрирован ослабленный химизм и плохая фармакокинетика по некоторым результатам неудачных попыток разработки DON пролекарств. На фиг. 3A-3D показано, что большинство DON пролекарств, имеющих свободную карбоксилатную группу, проявляющую незначительное воздействие, по сравнению с DON (за исключением соединения 26, которое показало некоторое высвобождение; фиг. 3A) при пероральном введении мышам, включая соединение 29 (фиг. 3B), соединение 23 (фиг. 3C) и соединение 30 (фиг. 3D), которые показали небольшое высвобождение DON в плазму мыши после введения. Следует отметить, что высвобождение DON пролекарства LTP073 было ниже количественного предела во всех образцах плазмы мыши спустя 30 мин и 5 ч после дозирования (не показано);
на фиг. 4А-4D показан процент высвобождения DON в плазму спустя 0,5 и 5 ч после введения иллюстративного DON-высвобождающего пролекарства по настоящему изобретению по сравнению с DON. На фиг. 4А и 4В показаны результаты фармакокинетического исследования на мышах, показывающие концентрацию DON в плазме после введения DON (1,6 мг/кг п.о.) и DON пролекарства, дозированного при 1,6 мг/кг эквивалентно DON, такого как соединение 22 (фиг. 4А; 2,5 мг/кг п.о.) и соединение 25 фиг. 4В; 2,9 мг/кг п.о.). Интересно, что соединение 22 показало меньшее высвобождение спустя 0,5 ч (65% DON), однако уровни были похожи через 5 ч (почти 100%) с DON. На фиг. 4C и 4D показаны результаты фармакокинетического исследования на мышах, показывающие концентрацию DON в плазме после введения DON (1,6 мг/кг в.б.) и DON пролекарства 17 (фиг. 4С; 3,5 мг/кг п.о.) и соединения 6 (фиг. 4D; 3,7 мг/кг п.о.);
на фиг. 5 показана стабильность DON пролекарства 25 в забуференном фосфатом физиологическом растворе (PBS) и искусственном желудочном соке (SGF) спустя 30 и 60 мин;
на фиг. 6 показаны результаты in vitro DON пролекарства 25 в плазме мышей, обезьян, свиней и человека спустя 30 и 60 мин. Соединение 25, как было обнаружено, не является стабильным в плазме во всех протестированных образцах, поскольку сложный этиловый эфир и сложный лейциновый эфир подверглись гидролизу эстеразой плазмы;
на фиг. 7 показана общая структура некоторых нацеливающих на клетку DON пролекарств, которые содержат карбоксимодификацию сложного изопропилового эфира;
на фиг. 8 показаны результаты скрининга метаболической стабильности in vitro нацеленного на клетку фосфамидного DON пролекарства 4 в плазме мышей, обезьян, свиней и человека спустя 30 и 60 мин. Соединение 4, как было обнаружено, не является стабильным в плазме мышей, но стабильно в плазме всех протестированных образцов;
на фиг. 9 показаны результаты скрининга метаболической стабильности in vitro DON пролекарства 7 в плазме мышей, обезьян, свиней и человека спустя 30 и 60 мин. Соединение 7, как было обнаружено, не является стабильным в плазме мышей, но стабильно в плазме всех протестированных образцов;
на фиг. 10 показаны результаты скрининга метаболической стабильности in vitro DON пролекарства 9 в плазме собак, мышей, обезьян, свиней и человека спустя 30 и 60 мин. Соединение 9, как было обнаружено, не является стабильным в плазме всех протестированных образцов. Метаболическая идентификация свидетельствует о гидролизе лейцина, а стабильный изопропиловый эфир о конкретном высвобождении внутрь лимфоидных клеток;
на фиг. 11A-11F продемонстрированы результаты исследования ex vivo при сравнении накопления DON и DON пролекарства в плазме, клетках крови, красных кровяных клетках (RBC) и мононуклеарных клетках периферической крови (РВМС) после 30 мин инкубации 20 мкМ DON (фиг. 11A) и DON пролекарства 4 (фиг. 11В), соединения 7 (фиг. 11C), соединения 9 (фиг. 11D), соединения 13 (фиг. 11Е) и соединения 14 (фиг. 11F) в цельной крови человека;
- 2 034571 на фиг. 12A-12D продемонстрированы результаты исследования ex vivo при сравнении накопления
DON и DON пролекарства в плазме обезьян Cynomolgous, клетках крови, RBC и РВМС после 30 мин инкубации 20 мкМ DON (фиг. 12А) и DON пролекарства, включая 20 мкМ соединения 4 (фиг. 12В), 7 (фиг. 12С) и 9 (фиг. 12С), в образцах цельной крови обезьян;
на фиг. 13А-13С продемонстрированы результаты исследования ex vivo при сравнении накопления DON и DON пролекарства в плазме свиней, клетках крови, RBC и РВМС после 30 мин инкубации 20 мкМ DON (фиг. 13A) и DON пролекарства, включая 20 мкМ соединения 7 (фиг. 13В) и 9 (фиг. 13C), в образцах цельной крови свиней;
на фиг. 14 показано, что обработка высокой дневной дозой приводит к снижению массы у обработанных DON мышей. Но снижение массы не обнаруживалось у обработанных соединением 25 мышей;
на фиг. 15 показано, что обработка высокой дневной дозой приводит к пан-цитопении у обработанных DON мышей. Мыши, обработанные соединением 25, проявляли некоторую лейкопению;
на фиг. 16 показано, что функции почек и печени у мышей, обработанных высокой дозой DON или соединения 25, не были затронуты;
на фиг. 17А и 17В показано, что соединением 25 и DON обрабатывают для лечения лимфомы; DON обработанные мыши умирали, в то время как обработка соединением 25 хорошо переносилась;
на фиг. 18A-18C показано, что соединение 25 (фиг. 18А) снижает Cmax; (фиг. 18В) увеличивает опухоль до кишечного индекса и (фиг. 18С) вызывает низкую GI токсичность у мышей по сравнению с DON в эквимолярных дозах у мышей. Инфицирование вирусом осповакцины яйцеклетки проводилось после ежедневной обработки носителем (Veh), DON (0,8 мг/кг) и соединением 25 (0,8 мг/кг эквивалент) в течение 5 дней. Через 1 ч после последней дозы животных умерщвляли, тонкий кишечник удаляли, перфузировали DPBS рН 7,4 и закатывали продольно с использованием метода швейцарский рулет и фиксировали для парафиновой заливки. Верхняя панель показывает окрашенные гематоксилином и эозином (H и E) разделы тощей кишки-подвздошной кишки при 4-кратном увеличении; нижняя панель показывает некоторые секции в 10-кратном увеличении. DON вызывал значительное воспаление, состоящее из мультифокального искажения крипты (левый круг на чертеже внизу слева) и дилатации с потерей столбчатой эпителиальной морфологии (правый круг на чертеже внизу слева). DON пролекарство выглядит больше похожим на обработанную наполнителем мышь, со слегка гиперклеточными криптами, но без искажений (левый круг на фото справа внизу) и обычной столбчатой морфологии (правый круг на фото справа внизу);
на фиг. 19А и 19В показано, что супрессия костного мозга не обнаружена (фиг. 19А), после эффективного дозирования соединением 25 по двум 14-дневным схемам дозирования; (фиг. 19В) применение долгосрочных схем перспективного дозирования соединением 25 (48 дней);
на фиг. 20 показаны примеры структур DON и основанных на DON-пролекарств;
на фиг. 21А и 21В показано, что DON (1) ингибирует метаболизм глутамина и рост опухоли множественной глиобластомы (GBM) in vivo. На фиг. 21А показано, что соединение DON (1) (0,8 мг/кг, в.б.) ингибировало метаболизм глутамина, о чем свидетельствует увеличение дозирования эндогенного глутамина в боковой области GBM опухоли через 2 ч после введения относительно обработки носителем контролей; *р<0,05. На фиг. 21В показаны исследования на эффективность при сравнении с базовым днем 0, у обработанных носителем мышей проявился значительный рост боковой GBM опухоли в ходе эксперимента. С другой стороны, системное введение соединения 1 (0,8 мг/кг, в.б., ежедневно, дни 1-6) вызвало резкое сокращение размера опухоли; ***р<0,001, ****р<0,0001;
на фиг. 22А-22С показана фармакокинетика соединения DON (1) in vivo в мозге и плазме после перорального введения DON (1) и соединения 14 мышам. Соединения 1 и 14 дозировали мышам при 0,8 мг/кг эквивалент, перорально через желудочный зонд, и концентрации в плазме и мозге соединения 1 оценивали при помощи ЖХ/МС. Пероральное введение соединений 1 и 14 проявило аналогичные фармакокинетические профили в плазме и мозге из-за полного и быстрого метаболизма соединения 14 в соединение 1 в плазме мыши;
на фиг. 23А-23С показана фармакокинетика in vivo DON после внутривенного (в.в.) введения DON (1) и соединения 14 в плазму обезьян и спинномозговую жидкость (CSF). Соединения 1 и 14 дозировали хвостатым макакам при 1,6 мг/кг эквивалент соединения 1 через в.в. введение, и концентрации DON в плазме (0,25-6 ч) и спинномозговой жидкости (30 мин) оценивали при помощи ЖХ/МС. Относительно соединения 1, соединение 14 доставляло существенно низшую концентрацию DON в плазму. Обратного эффекта в спинномозговой жидкости не обнаруживалось, при доставке соединением 14 значительно высокой концентрации DON в спинномозговую жидкость достигалось 10-кратное повышение соотношения спинномозговой жидкости к плазме через 30 мин после дозирования;
на фиг. 24 показаны конкретные виды стабильности в плазме соединения 14; соединение 14 стабильно в плазме человека, свиньи, собаки и обезьяны, но быстро метаболизируется у мышей;
на фиг. 25 показаны примеры структур DON и основанных на DON пролекарств 25, 9, 38 и 60; различные N-аминокислотные прогруппы (например, лейцин, триптофан) обеспечивают дифференциал в плазме и микросомную стабильность;
на фиг. 26A-26D показана in vitro стабильность DON пролекарств 9, 25, 38 и 60 в плазме. Метабо- 3 034571 лизм происходит через удаление N-защитой группы; этиловые и изопропиловые эфиры стабильны в плазме свиней и людей;
на фиг. 27A-27D показана in vitro микросомальная стабильность печени DON пролекарств 9, 25, 38 и 60; все пролекарства показали умеренно высокую стабильность в микросомах человека и свиньи;
на фиг. 28A-28J показаны ex-vivo исследования цельной крови человека и свиньи соединений 9, 25, 38 и 60; DON пролекарства селективно доставляли DON в РВМС людей и свиней при сравнении с плазмой; при сравнении с DON, соотношение РВМС/плазма усиливалось 10-100+ кратно;
на фиг. 29Ά-29Ε показаны in vivo исследования на свиньях DON пролекарств 9, 25, 38 и 60; DON пролекарства селективно доставляли DON в РВМС при сравнении с плазмой; при сравнении с DON, соотношение РВМС/плазма увеличивалось 6-10-кратно;
на фиг. 30A-30C показана стабильность в плазме соединения метил-POM 14 и его производных;
на фиг. 31 показаны примеры структур, основанных на N-ацилалкилокси DON, пролекарственных аналогов для внутриклеточной ориентации и проникновения в мозг; добавление их стерического объема к мостиковому может привести к медленному гидролизу;
на фиг. 32А-32С показаны в.в. исследования DON пролекарств на свиньях: in vivo у свиней DON пролекарства селективно доставляли DON в РВМС при сравнении с DON;
на фиг. 33 показано сравнение соотношения AUC(0-t) РВМС к плазме DON пролекарств при достижении >6-кратного улучшения соотношения (на основании AUC0-t) в сравнении с DON;
на фиг. 34Ά и 34В показаны ВВ исследования DON пролекарства 14, показавшим низшие концентрации в плазме, но высшие в спинномозговой жидкости, достигнув ~6-7-кратного соотношения >С8Е/плазма по сравнению с DON;
на фиг. 35 показано соотношение спинномозговой жидкости к плазме через 1 ч после в.в. инфузии соединений 1, 9, 14а, 25 и 60;
на фиг. 36 показаны клинические результаты для DON (1) и соединения 38 в течение 5-дневного периода наблюдений за обработанными DON свиньями, проявившими более неблагоприятные клинические признаки по сравнению с соединением 38; дозирование DON (1,6 мг/кг) и соединением 38 (1,5 мг/кг) были выбраны для обеспечения эквивалентного РВМС воздействия; лекарства дозировали в.в. 2 ч/день в течение 5 дней (n=2 свиней); мониторинг клинического заключения проводили для оценки токсичности препарата (например, летаргии, анорексии, диареи, GI-кровотечения и т.д.); спустя 5 дней дозирования, свиней умерщвляли, и ткани собирали для PK и гистопатологии;
на фиг. 37A-37D показано, что макроскопически у обработанных DON свиней проявлялась более тяжелая токсичность желудка по сравнению с соединением 38; расшифровка гистопатологической токсичности для желудочно-интестинальных и других тканей ожидается; и на фиг. 38 показано, что при эквивалентом РВМС воздействии введение соединения 38 доставляет меньше DON в GI ткани по сравнению с введением DON; введение DON, как представляется, вызывают более неблагоприятные клинические эффекты по сравнению с введением соединения 38.
Патент или файл заявки содержит по меньшей мере один чертеж, выполненный в цвете.
Подробное описание
Представленное изобретение теперь будет описано более полно в данном описании со ссылкой на сопровождающее чертежи, в которых представлены некоторые, но не все, варианты осуществления изобретения. Подобные данные относятся к подобным элементам во всем описании. Представленное изобретение может быть воплощено во многих различных формах, и его не следует рассматривать как ограничение вариантами осуществления, представленными в данном описании; скорее эти варианты осуществления предоставляются для раскрытия информации, которая будет удовлетворять применяемым правовым требованиям. Действительно, многие модификации и другие варианты осуществления настоящего изобретения, изложенные в данном описании, на которые обратит внимание специалист в области, к которой относится настоящее изобретение, имея преимущество идей, представленных в данном описании выше, и связанных с ними чертежами. Таким образом, следует понимать, что представленное изобретение не должно быть ограничено раскрытыми конкретными вариантами осуществления, и что модификации и другие варианты осуществления предназначены для включения в объем прилагаемых пунктов формулы изобретения.
I. Пролекарства антагонистов глутамина.
DON представляет собой антибиотик, который выделен из Streptomyces в 1953 г. DON представляет собой диазоаналог L-глутамина, который вмешивается в различные реакции при синтезе нуклеиновых кислот и белков, в которых L-глутамин, среди прочего, является донором азота, блокирует различные распознаваемые глутамин ферменты, такие как глутаминаза, модулирует уровни глутамата в мозге и участвует в энергетическом метаболизме.
Одной из стратегий улучшения терапевтического индекса DON для различных режимов лечения, включая GBM терапию, будет увеличение его воздействия на мозг при ограничении его системного воздействия и, таким образом, на токсичность (Upadhyay, 2014). Пролекарственный подход является установившейся стратегией для изменения фармакокинетики и тканевого распределения молекул лекарственного средства, однако синтетически такой подход является сложной задачей касательно DON. Учи- 4 034571 тывая, что лабильная диазогруппа DON имеет решающее значение для его глутамин антагонистической активности, добавление прогрупп должно быть выполнено в мягких условиях для сохранения диазокетонной группы.
Представленное изобретение обеспечивает новые композиции по изобретению, где прогруппы добавлены к антагонистам глутамина, таким как 6-диазо-5-оксонорлейцин (DON) и азасерин.
Раскрываемые в настоящем изобретении пролекарства антагонистов глутамина получают путем блокировки аминных и/или карбоксилатных функциональных групп для изменения фармакокинетики DON, обеспечивая снижение выделения кинетики и клеточной ориентации для повышения переносимости. Кроме того, раскрываемые в настоящем изобретении пролекарства в некоторых вариантах осуществления селективно нацеливают активность антагонистов глутамина на конкретные клетки или обеспечивают снижение высвобождения DON и, таким образом, снижают токсичность молекулы лекарственного средства.
Представленное изобретение демонстрирует, что защита α-аминогруппы и функциональной карбоксигруппы через образование производного усиливает стабильность пролекарства и пероральную биодоступность. Раскрываемые в настоящем изобретении пролекарства также проявляют стабильность, которая сравнима со стабильностью свободного DON.
Структуры типичных представителей DON пролекарств представлены в табл. 1.
Таблица 1
Структуры типичных представителей DON пролекарств
№ 1ОСВ/ № Соединения Структура мм
Соединение 1 (DON) Н Л. -ОН η2ν о 171,15
Соединение 3 О О I nh2 213,24
Соединение 4 Η о. /<4. 0 · II I % A x-fx χ-k XX X и 445,41
- 5 034571
- 6 034571
Соединение 14а Н СК + Y А 0 I 0 f 385,41
Соединение 14Ь Η °vcx 1 Ν' ^οΑΑΝ'^γθγ
Соединение 15 Η ΟΧ ДА Nt ΧΝ· 0 ? 0 I 371,39
Соединение 17 %α. 0 .Α Ν А ХУ°Λό=° 375,33
Соединение 20 Η СА /СА Nk Ν- Д. /0. / η2ν 0 199,21
Соединение 22 Η °<. /СА . Nt 1 ^ΝΓ ° I Η2Ν. JI /0. / Ν = η II = 0 270,28
- 7 034571
Соединение 23 Н NY 0 ί II ! · Et3N h2n. X .oh N X^ ξ h || = 0 343,42
Соединение 25 H nY J O 1 H2N. JL / X N X = η II 0 312,36
Соединение 26 H °vc^^ ! / ” I · Et3N H2N ί x0H θ 385,50
Соединение 28 H I NY 1 0 ί 1 h || J /4 /0. H2N X II = h || 0 ° 425,52
Соединение 29 H (X X + Y Y- 0 s 0 r -ДДсАХ^н 1 0 329,31
- 8 034571
Соединение 30 У Ч>ЛААйХг он 1 О 343,33
Соединение 31 н 1 ^N- 1 О 357,37
Соединение 32 н °YCX J ^N- 1 О 371,39
Соединение 34 н °vcx 'р 385,42
Соединение 35 °γ% ογλν к0 0 о 327,25
Соединение 36 °γθχ J *Ν- . О Г Г ° 355,30
- 9 034571
Соединение 38 . У4 'Α'Υγ У 399,45
Соединение 40 н cv >4 . N1 ] ΧΝ- О 0 1 Ϋ^ΥΥ 413,47
Соединение 42 Η СК + 1 Ν' О О Ζ ι о 1 371,39
Соединение 44 н 1 Ν’ о \ / 0 Г /γΥΚΑ-γγ 2,44
Соединение 47 Η 0 Т n 0 0 S 1 о I 447,49
Соединение 49 Η /СХ + Y Ч- 0 Q у ύΥ-λΥυ 357,36
- 10 034571
Соединение 51 О η2ν—η HN^ ч V. /° /° °\ /— О )—\ /=\ У-0 \ VnH ΗΝ—ά >-/ HnV /\н2 ( с n; Ν’ 618,69
Соединение 52 0 Η2Ν— ΗΝ—ч \ V. 0 0 ο )— ο )—\ /=\ 0-^ У-0 \ VnH ΗΝ—ά β—f ΗΝ—( ' ΝΗ ( г Ν4+ Ν’ 660,73
Соединение 56 0 η,νΑ' ΗΝ^ \ у 0 0 )— 0 Ν~\ 7^° \ Vnh ην^. /νη2 ( C N Ν’ 469,54
Соединение 57 0 Η2Ν^ ΗΝ^\ \ /° °\ /-- ο Vo \ Vnh hn-A / NH ( η, N7 Ν’ 511,58
Соединение 59 :i£joq„v он н 0 511,48
- 11 034571
- 12 034571
Е Н сЛ^ о 1 οΛη 1 484,51
F .он ί N1 I Ν_ ОН О 1 525,51
G /ОН О f /ч. х-ч *«°н hr II 1 0 509,51
LTP 073 н °YCY 1 χι\Γ о f У ЧЧ н II О 255,23
JAM0351 /ОАс 0 Л Чу°Ас О 0Ас 693,66
JAM0359 о Y°Ac нмАуу, оЧ^ОАс ^44^4° О ОАс 679,63
Специалисту в данной области будет очевидно, что структуры типичных представителей DON пролекарств, приведенных в табл. 1, в сочетании с методологией, раскрываемой в данном описании, позволит специалисту в данной области синтезировать пролекарства других аналогов глутамина, таких как LDONV, азасерин, как проиллюстрировано на общих структурах формулы (I). Другими словами, следует понимать, что пролекарства других антагонистов глутамина, таких как L-DONV, азасерин, могут быть синтезированы с такими же заместителями R1, R2 и R2' в качестве DON пролекарств, приведенных в табл.
1.
Соответственно в одном из аспектов представленное изобретение обеспечивает пролекарство антагониста глутамина или его фармацевтически приемлемую соль, имеющее структурную формулу (I)
Н NR2R2' где X представляет собой -(СН2)п-, где n равен 1;
R1 выбран из группы, состоящей из Н, C1-6 линейного алкила и C1-6 разветвленного алкила;
R2 выбран из группы, состоящей из аминокислоты, N-ацилированной аминокислоты и -C(=O)-Q(CR3R4)m-O-C(=O)-Rw;
R2' представляет собой Н, каждый R3 и R4 независимо представляет собой Н, C1-C6 алкил или фенил;
m равен 1 и
- 13 034571
Rio представляет собой С1-С6 алкил, где аминокислоту выбирают из группы, состоящей из аланина, цистеина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, фенилаланина, глицина, гистидина, изолейцина, лизина, лейцина, метионина, аспарагина, пролина, глутамина, аргинина, серина, треонина, валина, триптофана и тирозина; и
N-ацильная группа представляет собой -С(=О)СН3.
В некоторых вариантах осуществления представленное изобретение обеспечивает пролекарство DON. В некоторых вариантах осуществления пролекарство DON имеет структуру формулы (I). В некоторых вариантах осуществления представленное изобретение обеспечивает пролекарство L-DONV. В некоторых вариантах осуществления пролекарство L-DONV имеет структуру формулы (I). В некоторых вариантах осуществления представленное изобретение обеспечивает пролекарство азасерина. В некоторых вариантах осуществления пролекарство азасерина имеет структуру формулы (I).
В некоторых вариантах осуществления R1 формулы (I) выбран из группы, состоящей из метила, этила и изопропила. В некоторых вариантах осуществления R1 формулы (I) не является Н.
В некоторых вариантах осуществления R2 формулы (I) выбран из группы, состоящей из аминокислоты и N-ацилированной аминокислоты.
Как использовано в данном описании, аминокислоту выбирают из группы, состоящей из аланина, цистеина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, фенилаланина, глицина, гистидина, изолейцина, лизина, лейцина, метионина, аспарагина, пролина, глутамина, аргинина, серина, треонина, валина, триптофана и тирозина.
Концевое положение аминокислотного остатка или пептида может присутствовать в форме свободной кислоты, т.е. завершаться -COOH группой, или может быть в замаскированной (защищенной) форме, такой как форма карбоксилатного сложного эфира или карбоксамида. В некоторых вариантах осуществления аминокислотный или пептидный остаток заканчивается аминогруппой. В одном из вариантов осуществления данный остаток заканчивается группой карбоновой кислоты -COOH или аминогруппой NH2. В другом варианте осуществления данный остаток заканчивается карбоксамидной группой. В еще одном варианте осуществления данный остаток заканчивается карбоксилатным сложным эфиром.
В одном из вариантов осуществления аминокислотная боковая цепь связана с другой аминокислотой. В дополнительном варианте осуществления боковая цепь связана с аминокислотой через аминокислотный N-конец, С-конец или боковую цепь.
Примеры боковых цепей природных аминокислот включают водород (глицин), метил (аланин), изопропил (валин), втор-бутил (изолейцин), -СН2СН(СН3)2 (лейцин), бензил (фенилаланин), пгидроксибензил (тирозин), -СН2ОН (серин), -СН(ОН)СН3 (треонин), -СН2-3-индоил (триптофан), -СН2СООН (аспарагиновая кислота), -СН2СН2СООН (глутаминовая кислота), -CH2C(O)NH2 (аспарагин), -СЩСШС^МЩ (глутамин), -CH2SH, (цистеин), -CH2CH2SCH3 (метионин), -(CH2)4NH2 (лизин), -(Gn2)3NHC(=NH)NH2 (аргинин) и -СН2-3-имидазоил (гистидин).
- 14 034571
В особых вариантах осуществления пролекарственное соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из
В таких вариантах осуществления следует понимать, что конечные карбоксигруппы соединений формулы (I), показанные выше, могут быть использованы для образования солей. В иллюстративном варианте осуществления соль любого из соединений формулы (I), показанных выше, может быть образована при замене Н группой NEt3, как будет очевидно специалисту в данной области.
В некоторых вариантах осуществления R2 формулы (I) представляет собой -С(=О)-О-(CR3R4)m-OC(=O)-R10, где каждый R3 и R4 независимо представляет собой Н, СГС6 алкил или фенил; m равен 1 и R10 представляет собой С1-С6 алкил.
В некоторых вариантах осуществления R2 формулы (I) представляет собой ^(^^-(CR^^OC(=O)-R10; где (i) m равен 1; R3 представляет собой Н и R4 представляет собой метил или фенил; (ii) m равен 1; R3 и R4, каждый, представляют собой Н или (vi) m равен 1; R3 и R4, каждый, представляют собой метил.
- 15 034571
В особых вариантах осуществления пролекарственное соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из
- 16 034571
Следует понимать, что все соединения формулы (I), изображенные в структурных формулах в качестве пролекарства DON, просто являются примерами пролекарств аналогов глутамина, таких как LDONV и азасерин, которые могут быть синтезированы с использованием методик по представленному изобретению.
II. Фармацевтические композиции и их введение.
В другом аспекте настоящее изобретение предоставляет фармацевтическую композицию для лечения рака, содержащую одно пролекарственное соединение формулы (I) в смеси с фармацевтически при- 17 034571 емлемым эксципиентом. Соответственно в некоторых вариантах осуществления представленное изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию, содержащую соединение формулы (I) и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент. Специалисту в данной области будет очевидно, что фармацевтические композиции включают фармацевтически приемлемые соли соединений, описанных выше.
Фармацевтически приемлемые соли, как правило, хорошо известны специалистам в данной области и включают соли активных соединений, которые получают с относительно нетоксичными кислотами или основаниями, в зависимости от конкретных групп-заместителей, находящихся на соединениях, описываемых в данном описании. Когда соединения настоящего изобретения содержат относительно кислотные функциональные группы, аддитивные соли оснований могут быть получены путем приведения в контакт нейтральной формы таких соединений с достаточным количеством желаемого основания, либо в чистом виде, либо в подходящем инертном растворителе, или путем ионного обмена, в котором один основной противоион (базовый) в ионном комплексе заменяется другим. Примеры фармацевтически приемлемых аддитивных солей оснований включают соли натрия, калия, кальция, аммония, органических аминов или магния, или подобные соли.
Когда соединения настоящего изобретения содержат относительно основные функциональные группы, кислотно-аддитивные соли могут быть получены путем приведения в контакт нейтральной формы таких соединений с достаточным количеством желаемой кислоты, либо в чистом виде, либо в подходящем инертном растворителе, или путем ионного обмена, при котором один кислый противоион (кислотный) в ионном комплексе заменяется другим. Примеры фармацевтически приемлемых кислотноаддитивных солей включают производные неорганических кислот подобно хлористо-водородной, бромисто-водородной, азотной, угольной, моногидроугольной, фосфорной, моногидрофосфорной, дигидрофосфорной, серной, моногидросерной, йодисто-водородной или фосфористой кислотам и подобных, а также соли, производные относительно нетоксичных органических кислот, подобно уксусной, пропионовой, изомасляной, малеиновой, малоновой, бензойной, янтарной, субериновой, фумаровой, молочной, миндальной, фталиевой, бензолсульфоновой, п-толуолсульфоновой, лимонной, винной, метансульфоновой и подобным. Также включенными являются соли аминокислот, таких как аргинат и подобные, и соли органических кислот подобно глюкуроновой или галактуроновой кислотам и подобным (см., например, Berge et al., Pharmaceutical Salts, Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19). Некоторые конкретные соединения настоящего изобретения содержат как основные, так и кислотные функциональные группы, которые дают возможность соединениям преобразовываться либо в основные, либо в кислотноаддитивные соли.
Соответственно стабильные фармацевтически приемлемые соли для применения с представленным изобретением включают, например, но без ограничения, ацетат, бензолсульфонат, бензоат, бикарбонат, битартрат, бромид, эдетат кальция, карнсилат, карбонат, цитрат, эдетат, эдисилат, эстолат, эсилат, фумарат, глюцептат, глюконат, глутамат, гликолиларсанилат, гексилресорцинат, гадрабамин, гидробромид, гидрохлорид, гидроксинафтоат, йодид, изетионат, лактат, лактобионат, малат, малеат, манделат, мезилат, мукат, напсилат, нитрат, памоат (эмбонат), пантотенат, фосфат/дифосфат, полигалактуронат, салицилат, стеарат, сабацетат, сукцинат, сульфат, таннат, тартрат или теоклат. Другие фармацевтически приемлемые соли можно найти, например, в Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20th ed.) Lippincott, Williams & Wilkins (2000).
В особых вариантах осуществления соль представляет собой соль три(гидрокарбил)аммония или тетра(гидрокарбил)аммония. В еще более особых вариантах осуществления соль выбрана из группы, состоящей из солей три(С1 -С8алкил)аммония, тетра(П1 -С8алкил)аммония, трифениламмония, три(гидроксиС1-С8алкил)аммония и тетра(гидрокси-С1-С8алкил)аммония. Даже в наиболее особых вариантах осуществления соль выбрана из группы, состоящей из солей триметиламмония, триэтиламмония, три(гидроксиэтил)аммония, трипропиламмония и три(гидроксипропил)аммония.
Для терапевтического и/или диагностического применения соединения по изобретению могут быть сформулированы для различных путей введения, включая оральное (подъязычное, буккальное), пероральное, сублингвальное, системное и местное или локализованное введение. Методики и формулирование, как правило, можно найти в Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20th ed.) Lippincott, Williams & Wilkins (2000).
В зависимости от конкретных состояний, подвергаемых лечению, такие средства могут быть сформулированы в виде жидкости (например, растворов, суспензий или эмульсий) или твердых дозированных форм (капсул или таблеток) и введены системно или местно. Данные средства могут быть доставлены, например, в форме временного, контролируемого или замедленного высвобождения, как известно специалисту в данной области. Методики формулирования и введения можно найти в Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20th ed.) Lippincott, Williams & Wilkins (2000). Подходящие пути могут включать пероральное, буккальное, ингаляцию спреем, сублингвальное, ректальное, трансдермальное, вагинальное, трансмукозальное, назальное или интестинальное введение; парентеральную доставку, включая внутримышечные, подкожные, интрамедуллярные инъекции, а также интратекальные, прямые внутрижелудочковые, внутривенные, внутрисуставные, внутригрудинные, внутрисиновиальные, внутри- 18 034571 печеночные, в поврежденную ткань, внутричерепные, внутриперитонеальные, внутриназальные или внутриглазные инъекции или другие способы доставки. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию вводят перорально. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию вводят внутривенно. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию вводят внутримышечно. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию вводят интратекально. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию вводят подкожно.
Для инъекции, раскрываемые средства могут быть сформулированы и разведены в водных растворах, таких как физиологически совместимые буферы, такие как раствор Хенка, раствор Рингера или забуференный физиологический раствор. Для такого трансмукозального введения, в данных составах используют соответствующие пенетранты, способствующие прохождению через барьер. Такие пенетранты, как правило, известны в данной области.
Использование фармацевтически приемлемых инертных носителей для формулирования описываемых в данном описании соединений для практического применения изобретения при подходящем дозировании для системного введения входит в объем настоящего изобретения. При надлежащем подборе носителя и подходящей практики изготовления, композиции настоящего изобретения, в частности, сформулированные в виде растворов, могут быть введены парентерально путем внутривенных инъекций. Данные соединения могут быть легко сформулированы при использовании фармацевтически приемлемых носителей, хорошо известных в данной области, в дозах, подходящих для перорального введения. Такие носители дают возможность формулировать соединения по изобретению в виде таблеток, пилюль, капсул, жидкостей, гелей, сиропов, эмульсий, суспензий и подобных, для перорального приема внутрь субъектом (например, пациентом), подвергаемым лечению.
Для назальной или ингаляционной доставки раскрываемые средства также могут быть сформулированы способами, известными специалисту в данной области, и включают, например, но не ограничиваясь ими, солюбилизирующие, разбавляющие или диспергирующие вещества, такие как солевой раствор; консерванты, такие как бензиловый спирт; промоторы абсорбции и фторуглероды.
Фармацевтические композиции, подходящие для применения в настоящем изобретении, включают композиции, в которых активные ингредиенты содержатся в эффективном количестве для достижения поставленной цели. Определение эффективного количества находится в компетенции специалиста в данной области, особенно в свете подробного описания, предоставленного в данном описании. Как правило, соединения по настоящему изобретению эффективны в большом диапазоне доз. Например, в лечении взрослых людей могут применяться дозы, например, от 0,01 до 1000 мг, от 0,5 до 100 мг, от 1 до 50 мг в день и от 5 до 40 мг в день. Неограничивающие дозы составляют от 10 до 30 мг в день. Точная дозировка будет зависеть от пути введения, формы, в которой соединение вводят, субъекта, подвергаемого лечению, массы тела субъекта, подвергаемого лечению, биодоступности соединения(й), адсорбции, распределения, метаболизма и экскреции (ADME), токсичности соединения(й) и предпочтений и опыта лечащего врача.
В дополнение к активным ингредиентам такие фармацевтические композиции могут содержать подходящие фармацевтически приемлемые носители, включающие эксципиенты и вспомогательные вещества, которые облегчают обработку активных соединений в препараты, которые могут быть использованы фармацевтически. Препараты, сформулированные для перорального введения, могут быть в форме таблеток, драже, капсул или растворов.
Фармацевтические препараты для перорального применения могут быть получены путем объединения активных соединений с твердыми эксципиентами, необязательного измельчения полученной смеси и переработки смеси гранул, после добавления подходящих вспомогательных веществ, при желании, для получения таблеток или ядер драже. Подходящие эксципиенты представляют собой, в частности, наполнители, такие как сахара, включая лактозу, сахарозу, маннит или сорбит; препараты целлюлозы, например кукурузный крахмал, пшеничный крахмал, рисовый крахмал, картофельный крахмал, желатин, камедь траганта, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, натрийкарбоксиметилцеллюлоза (CMC) и/или поливинилпирролидон (PVP: повидон). При желании, могут быть добавлены дезинтегрирующие агенты, такие как поперечно сшитый поливинилпирролидон, агар или альгиновая кислота или ее соль, такая как альгинат натрия.
Ядра драже обеспечиваются подходящим покрытием. Для этой цели может использоваться концентрированные растворы сахара, которые могут необязательно содержать гуммиарабик, тальк, поливинилпирролидон, карбополовый гель, полиэтиленгликоль (PEG) и/или диоксид титана, лакирующие растворы и подходящие органические растворители или смешанные растворители. Красящие вещества или пигменты могут быть добавлены к таблеткам или покрытиям драже для идентификации или характеризации доз различных комбинаций активных соединений.
Фармацевтические препараты, которые могут применяться перорально, включают твердые желатиновые капсулы, а также мягкие, герметичные желатиновые капсулы и пластификаторы, такие как глицерин или сорбит. Твердые капсулы могут содержать активные ингредиенты в смеси с наполнителем, таким как лактоза, связующими, такими как крахмалы, и/или лубрикантами, такими как тальк или стеарат
- 19 034571 магния, и, необязательно, стабилизаторами. В мягких капсулах активные соединения могут быть растворены или суспендированы в подходящих жидкостях, таких как жирные масла, жидкий парафин или жидкий полиэтиленгликоль (PEG). Кроме того, могут быть добавлены стабилизаторы.
III. Способы лечения заболеваний или расстройств.
Раскрываемые в настоящем изобретении соединения, которые являются перорально биодоступными, представляют собой малотоксичные пролекарства аналогов глутамина, которые являются антагонистами глутамина, дают возможность клинически приемлемому дозированному подходу к заболеваниям или состояниям, при которых наблюдается избыток и/или нарушение активности глутамина. Как использовано в данном описании, термин антагонист глутамина относится к аналогу глутамина, который нарушает метаболический путь глутамина, например ингибирует или блокирует метаболический нисходящий путь глутамина, в котором глутамин действует в качестве предшественника одного или более неглутаминных соединений. Примеры таких метаболических путей хорошо известны (см., например, Hensley et al., Glutamine and Cancer: cell biology, physiology and clinical opportunities, J Clin Invest., 2013; 123(9):3678-3684; DeBerardinis et al., Q's next: the diverse functions of glutamine in metabolism, cell biology and cancer, Oncogene., 2009; 29(3):313-324 и Medina et al., Relevance of glutamine metabolism to tumor cell growth, Mol Cell Biochem., 1992; 113(1):1-15). В некоторых контекстах термин антагонист глутамина также включает аналоги глутамина, которые ингибируют глутамин, усваиваемый клетками, снижая, таким образом, его биологическую активность. Заболевания или состояния, при которых наблюдается избыток и/или нарушение активности глутамина, включают рак.
В целом, раскрываемые в настоящем изобретении способы приводят к снижению тяжести заболевания или состояния у субъекта. Термин снижение означает ингибировать, подавить, смягчить, уменьшить, задержать или стабилизировать симптом заболевания или состояния.
Как использовано в данном описании, термины лечить, лечение, обработка и подобные относятся к сокращению или смягчению заболевания или состояния и/или связанных с ними симптомов. Следует принимать во внимание, хотя и не исключать, что лечение заболевания или состояния не требуется, когда расстройство, состояние или связанные с ними симптомы полностью устранены.
Соответственно в некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предоставляет способ лечения рака, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, соединения формулы (I) или фармацевтической композиции любого из них, в эффективном количестве для лечения рака.
Представленное изобретение предусматривает применение пролекарства формулы (I) или фармацевтической композиции, содержащей пролекарство формулы (I), для лечения рака.
Как использовано в данном описании, рак у пациента относится к присутствию клеток, обладающих характеристиками, вызывающими рак клеток, например бесконтрольной пролиферацией, потерей специализированных функций, бессмертностью, существенным метастатическим потенциалом, значительным увеличением антиапоптозной активности, быстрым ростом и быстротой пролиферации и некоторой характерной морфологией и клеточными маркерами. В некоторых обстоятельствах раковые клетки будут в виде опухоли; такие клетки могут существовать локально в животном или циркулируют в потоке крови, как независимые клетки, например лейкозные клетки. Опухоль, как использовано в данном описании, относится к неопластическому росту всех клеток и пролиферации, будь то злокачественные или доброкачественные, и все предраковые и раковые клетки и ткани. Солидная опухоль, как использовано в данном описании, представляет собой аномальную массу ткани, которая, как правило, не содержит кистозные или жидкие области. Солидная опухоль может находиться в качестве неограничивающих примеров в головном мозге, толстой кишке, груди, простате, печени, почках, легких, пищеводе, голове и шеи, яичниках, матке, желудке, толстой кишке, прямой кишке, мочевом пузыре, матке, поджелудочной железе и яичках. В некоторых вариантах осуществления солидная опухоль регрессирует или ее рост замедляется или приостанавливается после того, как солидная опухоль подвергается лечению раскрываемыми в настоящем изобретении способами. В других вариантах осуществления солидная опухоль является злокачественной. В некоторых вариантах осуществления рак включает в себя 0 стадию рака. В некоторых вариантах осуществления включает в себя I стадию рака. В некоторых вариантах осуществления включает в себя II стадию рака. В некоторых вариантах осуществления включает в себя III стадию рака. В некоторых вариантах осуществления включает в себя IV стадию рака. В некоторых вариантах осуществления рак является рефракторным и/или метастатическим. Например, рефракторный рак может быть подвергнут лечению лучевой терапией, химиотерапией или монотерапией с иммунотерапией. Рак, как использовано в данном описании, включает вновь диагностируемый или рецидивирующий рак, включая, но без ограничений, рак молочной железы, колоректальный рак, мультиформную глиобластому, гепатоцеллюлярную карциному, плоскоклеточную карциному головы и шеи, рак предстательной железы, лейкоз, рак легких, лимфому и меланому.
IV. Общие определения.
Несмотря на то что в данном описании применяются конкретные термины, их используют в общем и описательном смысле, а не для целей ограничения. Если не определено иное, все технические и научные термины, используемые в данном описании, имеют такое же значение, как обычно понимается специалистом в данной области, к которой настоящее изобретение относится.
- 20 034571
Хотя считается, что следующие термины, касающиеся соединений формулы (I), хорошо понятны специалисту в данной области, следующие определения предоставляются в целях упрощения разъяснений касательно настоящего изобретения. Эти определения предназначены для дополнения и иллюстрации, но не исключения определений, которые будут очевидны специалисту в данной области после рассмотрения настоящего изобретения.
Термин замещенный, где предшествует термин необязательно или не и заместитель, как использовано в данном описании, относится к способности, как будет очевидно специалисту в данной области, замены одной функциональной группы другой функциональной группой на молекуле, при условии, что поддерживается валентность всех атомов. Когда более чем одно положение в любой данной структуре может быть замещено более чем одним заместителем, выбранным из указанной группы, данный заместитель может быть либо таким же, или отличаться в каждом положении. Заместители также могут быть дополнительно замещены (например, заместитель арильной группы может иметь другой заместитель, такой как другая арильная группа, которая дополнительно замещена в одном или более положениях).
Когда замещающие группы или связывающие группы конкретно определены их обычными химическими формулами, изображенными слева направо, они одинаково охватывают химически идентичные заместители, которые возникнут в результате изображения структуры справа налево, например изображение -СН2О-эквивалентно -ОСН2-; -С(=О)О- эквивалентно -OC(=O)-; -OC(=O)NR-эквивалентно -NRC(=O)G- и тому подобное.
При использовании термина независимо выбранный заместители относящиеся (например, к R группам, таким как группы Rb R2 и подобные, или переменным, таким как m и n), могут быть одинаковыми или различными. Например, оба Ri и R2 могут представлять собой замещенные алкилы или R1 может представлять собой водород и R2 может представлять собой замещенный алкил и тому подобное.
Единственное число при использовании в отношении группы заместителей в данном описании означает по меньшей мере один. Например, когда соединение замещено алкилом или арилом, данное соединение необязательно замещено по меньшей мере одним алкилом и/или по меньшей мере одним арилом. Кроме того, когда группа замещена R заместителем, данная группа может быть названа Rзамещенной. Когда группа является R-замещенной, данная группа замещена по меньшей мере одним R заместителем, и каждый R заместитель необязательно является различным.
Под названием R или группа, как правило, имеется в виду структура, которая признана в данной области, как соответствующая группе с таким же названием, если в данном описании не указано иное. Для целей иллюстрации определенных представителей R групп, указанных выше, ниже приведены их определения.
Описания соединений настоящего изобретения ограничены принципами химической связи, известными специалистам в данной области. Соответственно, когда группа может быть замещена одним или большим числом заместителей, такие замещения выбираются таким образом, чтобы соблюдать принципы химического связывания и предоставить соединения, которые не являются, по существу, нестабильными и/или будут известны специалисту в данной области как возможно нестабильные в окружающих условиях, таких как водные, нейтральные и несколько известных физиологических условий. Например, гетероциклоалкил или гетероарил, присоединенный к остатку молекулы через кольцевой гетероатом с соблюдением принципов химической связи, известны специалистам в данной области, избегая тем самым нестабильности соединений.
Если специально не определено иное, замещающая группа, как использовано в данном описании, включает функциональную группу, выбранную из одной или более следующих групп, которые определены в данном описании.
Термин углеводород, как использовано в данном описании, относится к любой химической группе, содержащей водород и углерод. Углеводород может быть замещенным или незамещенным. Как известно специалисту в данной области, все валентности должны быть пригодными для выполнения любых замен. Углеводород может быть ненасыщенным, насыщенным, разветвленным, неразветвленным, циклическим, полициклическим или гетероциклическим.
Иллюстративные углеводороды определены в данном описании ниже и включают, например, метил, этил, н-пропил, изопропил, циклопропил, аллил, винил, н-бутил, трет-бутил, этинил, циклогексил и подобные.
Термин алкил, сам по себе или как часть другого заместителя, означает, если не указано иное, прямую (т.е. неразветвленную) или разветвленную цепь, ациклическую или циклическую углеводородную группу, или их комбинацию, которая полностью насыщена и может включать ди- и многовалентные группы, имеющие определенное число атомов углерода (т.е. С1-С10 означает один-десять атомов углерода, включая 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10 атомов углерода). В особых вариантах осуществления термин алкил относится к С1-20 включительно, включая 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 и 20 атомов углерода, линейному (т.е. с прямой цепью), разветвленному или циклическому, насыщенному углеводородному радикалу, производного углеводородных групп, содержащих от одного до двадцати атомов углерода, при удалении одного атома водорода.
Иллюстративные примеры насыщенных углеводородных групп включают, но не ограничиваясь
- 21 034571 ими, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, вторпентил, изопентил, неопентил, н-гексил, втор-гексил, н-гептил, н-октил, н-децил, н-ундецил, додецил, циклогексил, (циклогексил)метил, циклопропилметил и их гомологи и изомеры.
Разветвленный относится к алкильной группе, в которой низшие алкильные группы, такие как метил, этил или пропил, присоединены к линейной алкильной цепи. Низший алкил относится к алкильной группе, имеющей от 1 до примерно 8 атомов углерода (т.е. О^алкил), например 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 атомов углерода. Высший алкил относится к алкильной группе, имеющей примерно от 10 до примерно 20 атомов углерода, например 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 атомов углерода. В некоторых вариантах осуществления алкил относится, в частности, к C1-8 неразветвленным алкилам. В других вариантах осуществления алкил относится, в частности, к С1-8алкилам с разветвленной цепью.
Термин гетероалкил, сам по себе или в комбинации с другим термином, означает, если не указано иное, стабильную прямую или разветвленную цепь, или циклическую углеводородную группу, или их комбинации, состоящие по меньшей мере из одного атома углерода и по меньшей мере одного гетероатома выбранного из группы, состоящей из О, N, P, Si и S, и где атомы азота, фосфора и серы могут быть необязательно окислены, и гетероатом азота может быть необязательно кватернизирован. Г етероатом(ы) О, N, Р и S и Si могут быть размещены в любом внутреннем положении гетероалкильной группы или в положении, в котором алкильная группа присоединена к оставшейся части молекулы. Примеры включают, но не ограничиваясь ими, -СН2-СН2-О-СН3, -CH2-CH2-NH-CH3, -CH2-CH2-N(CH3)-CH3, -CH2-S-CH2CH3, -CH2-CH25-S(O)-CH3, -CH2-CH2-S(O)2-CH3, -CH=CH-O-CH3, -Si(CH3)3, -CH2-CH=N-OCH3, -CH=CHN(CH3)-CH3, O-CH3, -O-CH2-CH3 и -CN. Вплоть до двух или трех гетероатомов могут идти подряд, как, например, в -CH2-NH-OCH3 и -CH2-O-Si(CH3)3.
Как описано выше, гетероалкильные группы, как использовано в данном описании, включают такие группы, которые присоединены к оставшейся части молекулы через гетероатом, такие как -C(O)NR', -NR'R'', -OR', -SR, -S(O)R и/или -S(O2)R'. При ссылке на гетероалкил следующее описание конкретных гетероалкильных групп, таких как -NR'R или подобные, следует понимать, что термины гетероалкил и -NR'R'' не являются избыточными или взаимоисключающими. Окорее. ссылка на конкретные гетероалкильные группы представляется, чтобы добавить ясности. Таким образом, термин гетероалкил в данном описании не следует интерпретировать как исключение конкретных гетероалкильных групп, таких как -NR'R'' или подобные.
Циклический и циклоалкил относятся к неароматической моно- или мультициклической кольцевой системе с примерно от 3 до примерно 10 атомами углерода, например 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 атомами углерода. Данная циклоалкильная группа может быть необязательно частично ненасыщенной. Данная циклоалкильная группа также может быть необязательно замещена заместителем алкильной группы, как определено в данном описании, оксо и/или алкиленом. Вдоль циклической алкильной цепи может быть необязательно вставлен один или более атомов кислорода, серы или замещенного или незамещенного азота, где заместителем азота является водород, незамещенный алкил, замещенный алкил, арил или замещенный арил, обеспечивая, таким образом, гетероциклическую группу. Иллюстративные примеры моноциклического циклоалкильного кольца включают циклопентил, циклогексил и циклогептил. Мультициклическиие циклоалкильные кольца включают адамантил, октагидронафтил, декалин, камфор, камфан и норадамантил, и конденсированные кольцевые системы, такие как дигидро- и тетрагидронафталин, и подобные.
Термин циклоалкилалкил, как использовано в данном описании, относится к циклоалкильной группе, как определено в данном описании выше, которая присоединена к остатку основной молекулы через алкильную группу, как определено выше. Примеры циклоалкилалкильных групп включают циклопропилметил и циклопентилэтил.
Термины циклогетероалкил или гетероциклоалкил относятся к неароматической кольцевой системе, ненасыщенной или частично ненасыщенной кольцевой системе, такой как 3-10-членная замещенная или незамещенная циклоалкильная кольцевая система, включающая один или более гетероатомов, которые могут быть одинаковыми или различными, и выбраны из группы, состоящей из азота (N), кислорода (О), серы (S), фосфора (Р).
Циклогетероалкильное кольцо может быть необязательно конденсировано с или, в противном случае, присоединено к другому циклогетероалкильному кольцу и/или неароматическому углеводородному кольцу. Гетероциклические кольца включают такие, которые имеют от одного до трех гетероатомов, независимо выбранных из кислорода, серы и азота, в которых гетероатомы азота и серы могут быть необязательно окислены, и гетероатом азота может быть необязательно кватернизирован. В некоторых вариантах осуществления термин гетероциклический относится к неароматическому 5-, 6- или 7-членному кольцу или полициклической группе, где по меньшей мере один атом кольца представляет собой гетероатом, выбранный из О, S и N, включая, но не ограничиваясь ими, би- или трициклическую группу, содержащую шестичленное кольцо, имеющее от одного до трех гетероатомов, независимо выбранных из кислорода, серы и азота. Иллюстративные примеры циклогетероалкильных кольцевых систем включают, но не ограничиваясь ими, пирролидинил, пирролинил, имидазолидинил, имидазолинил, пиразолидинил, пиразолинил, пиперидил, пиперазинил, индолинил, хинуклидинил, морфолинил, тиоморфолинил, тиа- 22 034571 диазинанил, тетрагидрофуранил и подобные.
Термины циклоалкил и гетероциклоалкил, сами по себе или в комбинации с другими терминами, представляют, если не указано иное, циклические вариации алкила и гетероалкила соответственно. Кроме того, для гетероциклоалкила, гетероатом может занимать положение, в котором гетероцикл присоединен к оставшейся части молекулы. Примеры циклоалкила включают, но не ограничиваясь ими, циклопентил, циклогексил, 1-циклогексенил, 3-циклогексенил, циклогептил и подобные. Примеры гетероциклоалкила включают, но не ограничиваясь ими, 1-(1,2,5,6-тетрагидропиридил), 1-пиперидинил, 2пиперидинил, 3-пиперидинил, 4-морфолинил, 3-морфолинил, тетрагидрофуран-2-ил, тетрагидрофуран-3ил, тетрагидротиен-2-ил, тетрагидротиен-3-ил, 1-пиперазинил, 2-пиперазинил и подобные. Термины циклоалкилен и гетероциклоалкилен относятся к двухвалентным производным циклоалкила и гетероциклоалкила соответственно.
Термин алкенил, как использовано в данном описании, относится к одновалентной группе, производной C1-20 включительно прямой или разветвленной углеводородной группы, имеющей по меньшей мере одну углерод-углеродную связь, путем удаления одного водорода молекулы. Алкенильные группы включают, например, этенил (т.е. винил), пропенил, бутенил, 1-метил-2-бутен-1-ил, пентенил, гексенил, октенил, алленил и бутадиенил.
Термин циклоалкенил, как использовано в данном описании, относится к циклическому углеводороду, содержащему по меньшей мере одну углерод-углеродную связь. Примеры циклоалкенильных групп включают циклопропенил, циклобутенил, циклопентенил, циклопентадиен, циклогексенил, 1,3циклогексадиен, циклогептенил, циклогептатриенил и циклооктенил.
Термин алкинил, как использовано в данном описании, относится к одновалентной группе, производной прямого или разветвленного C1-20 углеводорода с определенным числом атомов углерода, содержащей по меньшей мере одну углерод-углеродную тройную связь. Примеры алкинила включают группы этинила, 2-пропинила (пропаргила), 1-пропинила, пентинила, гексинила и гептинила, и подобных.
Термин алкилен, сам по себе или как часть другого заместителя, относится к прямой или разветвленной двухвалентной алифатической углеводородной группе, производной алкильной группы, имеющей от 1 до примерно 20 атомов углерода, например 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 атомов углерода. Алкиленовая группа может быть прямой, разветвленной или циклической. Алкиленовая группа также может быть необязательно ненасыщенной и/или замещенной одним или более заместителями алкильной группы. Примеры алкиленовых групп включают метилен (-СН2-); этилен (-СН2-СН2-); пропилен (-(СН2)3-); циклогексилен (-С6Н10-); -СН=СН-СН=СН-; -СН=СН-СН2-; -СН2СН2СН2СН2-, -СН2СН=СНСН2-, -CH2CSCCH2-, -CH2CH2CH(CH2CH2CH3)CH2-, -(^^-Ν^Η^^-, где каждый из q и r независимо равен целому числу от 0 до примерно 20, например 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20, и R представляет собой водород или низший алкил; метилендиоксил (-О-СН2-О-); и этилендиоксил (-О-(СН2)2-О-). Алкиленовая группа может иметь примерно от 2 до примерно 3 атомов углерода и может дополнительно иметь 6-20 атомов углерода. Обычно, алкильная (или алкиленовая) группа будет иметь от 1 до 24 атомов углерода, как и группы с 10 или меньше атомами углерода, являясь несколькими вариантами осуществления настоящего изобретения. Низший алкил или низший алкилен представляют собой укороченную цепь алкильной или алкиленовой группы, обычно имеющих восемь или меньше атомов углерода.
Термин гетероалкилен, сам по себе или как часть другого заместителя, означает двухвалентную группу, производную гетероалкила, как, например, но без ограничения, -042-^2-8-042-042- и -CH2-SCH2-CH2-NH-CH2-. Касательно гетероалкиленовых групп, гетероатомы также могут занимать любую или обе конечные цепи (например, алкиленоксо, алкилендиоксо, алкиленамино, алкилендиамино и подобные). Еще дополнительно, касательно алкилен и гетероалкилен связующих групп, отсутствие ориентации связующей группы косвенно указывается направлением, в котором записана формула связующей группы. Например, формула -C(O)OR'-может быть представлена как -С(О)OR'-, так и -R'OC(O)-.
Термин арил означает, если не указано иное, ароматический углеводородный заместитель, которым может быть единственное кольцо или множественные кольца (такие как от 1 до 3 колец), которые конденсированы вместе или ковалентной связью. Арилы включают фенил (С6), нафтил (C10) и бифенил (C12).
Термин гетероарил относится к арильным группам (или кольцам), которые содержат от одного до четырех гетероатомов (в каждом отдельном кольце, в случае множественных колец), выбранных из N, О и S, где атомы азота и серы необязательно окислены, и атом(ы) азота необязательно кватернизирован(ы). Г етероарильная группа может быть присоединена к оставшейся части молекулы через атом углерода или гетероатом. Неограничивающие примеры арильных и гетероарильных групп включают фенил, 1-нафтил, 2-нафтил, 4-бифенил, 1-пирролил, 2-пирролил, 3-пирролил, 3-пиразолил, 2-имидазолил, 4-имидазолил, пиразинил, 2-оксазолил, 4-оксазолил, 2-фенил-4-оксазолил, 5-оксазолил, 3-изоксазолил, 4-изоксазолил, 5изоксазолил, 2-тиазолил, 4-тиазолил, 5-тиазолил, 2-фурил, 3-фурил, 2-тиенил, 3-тиенил, 2-пиридил, 3пиридил, 4-пиридил, 2-пиримидил, 4-пиримидил, 5-бензотиазолил, пуринил, 2-бензимидазолил, 5индолил, 1-изохинолил, 5-изохинолил, 2-хиноксалинил, 5-хиноксалинил, 3-хинолил и 6-хинолил. Терми- 23 034571 ны арилен и гетероарилен относятся к двухвалентным формам арила и гетероарила соответственно.
В дополнительных вариантах осуществления термин гетероарил относится к С5-С2о ароматическому кольцу, в котором по меньшей мере один атом углерода заменен гетероатомом, выбранным из О, S, N, необязательно замещенному по меньшей мере одним заместителем, выбранным из группы, состоящей из Ci-Сб алкила, гидрокси, СГС4 алкокси, меркапто, СГС4 алкилтио, амино, -М1(С|-С6 алкила), -Л(СгСб алкил)2, -О(Сб-С12 арила), -Л(Сб-С12 арил)2, ^Н(Сб-С12 арила), ^(Сб-С12 арила), галогена, -CF3, -SO3H, -COOH, -СОО(С1-С8 алкила), -SO2NH2, -SO^H^-^ алкила или Сб-С12 арила), -CN, -NO3, -С(О)(С1-С8 алкила), -С(О)(Сб-С12 арила), ^(СгСб алкил или Н)С(О)(С1-Сб алкил или Н), -С(О^(СгСб алкил или Н)2.
Примеры гетероарилов включают, но не ограничиваясь ими, пиридил, пиримидинил, пиразинил, фуранил, тиенил, пиразолил, оксазолил, тиазолил, изотиазолил, изоксазолил, пирролил, имидазолил, индолил, индолинолил и имидазопиридазинил.
В дополнительных вариантах осуществления термин арил также может относиться к C6-C14 арилу, необязательно замещенному по меньшей мере одним заместителем, выбранным из группы, состоящей из С1-Сб алкила, гидрокси, С1-С4 алкокси, меркапто, C1-G4 алкилтио, амино, -ЛЩСрСб алкила), -N(^-06 алкил)2, -O^-Gu арила), -Л(Сб-С12 арил)2, -ЛЩС^С^ арила), ^(Сб-С12 арила), галогена, -CF3, -SO3H, -COOH, -COO^r^ алкила), -SO2NH2, -SO^H^-^ алкила или Сб-С12арила), -CN, -NO3, -С(О)(С1-С8 алкила), -С(О)(Сб-С12 арила), -Л(СгСб алкил или Н)С(О)(С1-Сб алкил или Н), -QO^Q-^ алкил или Н)2.
Для краткости, термин арил, при использовании в комбинации с другими терминами (например, арилокси, арилтиокси, арилалкил), включает как арильные, так и гетероарильные кольца, как определено выше. Таким образом, термины арилалкил и гетероарилалкил означают включение таких групп, в которых арильная или гетероарильная группа присоединена к алкильной группе (например, бензил, фенэтил, пиридилметил, фурилметил и подобные), включая такие алкильные группы, в которых атом углерода (например, метиленовая группа) заменен, например, атомом кислорода (например, феноксиметил, 2-пиридилоксиметил, 3-(1-нафтилокси)пропил и подобные). Однако термин галогенарил, как использовано в данном описании, означает только арилы, замещенные одним или более атомами галогена.
Когда гетероалкил, гетероциклоалкил или гетероарил включают конкретное число членов кольца (например, 3-7-членный), термин член кольца относится к атому углерода или гетероатому.
Далее, структура, представленная общей формулой
как использовано в данном описании, относится к кольцевой структуре, например, но не ограничиваясь ими, 3-углерод, 4-углерод, 5-углерод, б-углерод, 7-углерод и тому подобное алифатическому и/или ароматическому циклическому соединению, включая насыщенную кольцевую структуру, частично насыщенную кольцевую структуру и ненасыщенную кольцевую структуру, содержащую заместитель R группы, где R группа может присутствовать или отсутствовать, и когда присутствует, одна или более R групп, каждая может быть замещена одним или более доступными атомами углерода кольцевой структуры. Присутствие или отсутствие R группы и число R групп определяется значением переменной n, которая равна целому числу, обычно составляющему диапазон от 0 до числа атомов углерода кольца, доступных для замещения. Каждая R группа, если более чем одна, замещается на доступном атоме углерода кольцевой структуры, а не на другой R группе. Например, указанная выше структура, где n равен 0-2, будет включать группу соединений, включая, но не ограничиваясь ими
R, R, R-
R2 и подобные.
Пунктирная линия, представляющая связи в циклической кольцевой структуре, указывает на то, что данная связь может присутствовать или отсутствовать в данном кольце. То есть пунктирная линия, представляющая связи в циклической кольцевой структуре, указывает на то, что кольцевая структура выбрана из группы, состоящей из насыщенной кольцевой структуры, частично насыщенной кольцевой структуры и ненасыщенной кольцевой структуры.
Символ обозначает точку прикрепления группы к оставшейся части молекулы.
Когда названный атом ароматического кольца или гетероциклического ароматического кольца определен как отсутствует, названный атом заменен прямой связью.
Как использовано в данном описании, термин ацил относится к органической кислотной группе, где -ОН карбоксильной группы заменен другим заместителем и имеет общую формулу RC(=O)-, где R представляет собой алкильную, алкенильную, алкинильную, арильную, карбоциклическую, гетероцик- 24 034571 лическую или ароматическую гетероциклическую группу, как определено в данном описании. Как таковой, термин ацил конкретно включает арилацильные группы, такие как 2-(фуран-2-ил)ацетил)- и 2фенилацетильная группа. Конкретные примеры ацильных групп включают ацетил и бензоил. Ацильные группы также предназначены для включения амидов, -RC(=O)NR', сложных эфиров, -RC(=O)OR', кетонов, -RC(=O)R' и альдегидов, -RC(=O)H.
Термины алкоксил или алкокси используются взаимозаменяемо в данном описании и относятся к насыщенной (т.е. алкил-O-) или ненасыщенной (т.е. алкенил-O- и алкинил-O-) группе, присоединенной к остатку основной молекулы через атомом кислорода, где термины алкил, алкенил и алкинил являются такими, как описано выше, и могут включать C1-20> включительно, линейную, разветвленную или циклическую, насыщенную или ненасыщенную оксо-углеводородные цепи, включая, например, метоксил, этоксил, пропоксил, изопропоксил, н-бутоксил, втор-бутоксил, трет-бутоксил и н-пентоксил, неопентоксил, н-гексоксил и подобные.
Термин алкоксиалкил, как использовано в данном описании, относится к простому алкил-Оалкиловому эфиру, например метоксиэтильной или этоксиметильной группе.
Арилоксил относится к арил-O- группе, где арильная группа является такой, как описано выше, включая замещенный арил. Термин арилоксил, как использовано в данном описании, может относиться к фенилоксилу или гексилоксилу и алкилу, замещенному алкилу, галогену или алкоксил замещенному фенилоксилу или гексилоксилу.
Аралкил относится к арилалкильной группе, где арил и алкил являются такими, как описано выше, и включают замещенный арил и замещенный алкил. Примеры аралкильных групп включают бензил, фенилэтил и нафтилметил.
Аралкилоксил относится к аралкил-О- группе, где аралкильная группа является такой, как описано выше. Примерами аралкилоксильной группы является бензилоксил, т.е. C6H5-CH2-O-. Аралкилоксильная группа может быть необязательно замещенной.
Алкоксикарбонил относится к алкил-О-С(=O)- группе. Примеры алкоксикарбонильных групп включают метоксикарбонил, этоксикарбонил, бутилоксикарбонил и трет-бутилоксикарбонил.
Арилоксикарбонил относится к арил-О-С(=O)- группе. Примеры арилоксикарбонильных групп включают фенокси- и нафтоксикарбонил.
Аралкоксикарбонил относится к аралкил-О-С(=O)- группе. Примером аралкоксикарбонильной группы является бензилоксикарбонил.
Карбамоил относится к амидной группе формулы -C(=O)NH2. Алкилкарбамоил относится к R'RN-C(=O)- группе, где один из R и R' представляет собой водород, а другой из R и R' представляет собой алкил и/или замещенный алкил, как описано выше. Диалкилкарбамоил относится к R'RN-C(=O)группе, где каждый из R и R' независимо представляет собой алкил и/или замещенный алкил, как описано выше.
Термин карбонилдиоксил, как использовано в данном описании, относится к карбонатной группе формулы -O-G(=O)-OR.
Ацилоксил относится к ацил-O- группе, где ацил является таким, как описано выше.
Термин амино относится к -NH2 группе, а также относится к азотсодержащей группе, известной в данной области как производная аммиака путем замены одного или более водородного радикала органическим радикалом. Например, термины ациламино и алкиламино относятся к конкретным Nзамещенным органическим радикалам с ацильными и алкильными заместительными группами соответственно.
Аминоалкил, как использовано в данном описании, относится к аминогруппе ковалентно связанной с алкиленовым линкером. Более конкретно, термины алкиламино, диалкиламино и триалкиламино, как использовано в данном описании, относятся к одной, двум или трем соответственно алкильным группам, как определено выше, присоединенным к остатку основной молекулы через атом азота. Термин алкиламино относится к группе, имеющей структуру -NHR', где R' представляет собой алкильную группу, как определено выше; тогда как термин диалкиламино относится к группе, имеющей структуру NR'R'', где R' и R'', каждый независимо, выбран из группы, состоящей из алкильных групп. Термин триалкиламино относится к группе, имеющей структуру -NR'R''R''', где R', R'' и R''', каждый независимо, выбран из группы, состоящей из алкильных групп. Кроме того, R', R'' и/или R''', взятые вместе, могут необязательно представлять собой -(CH2)k-, где k равен целому числу от 2 до 6. Примеры включают, но не ограничиваясь ими, метиламино, диметиламино, этиламино, диэтиламино, диэтиламинокарбонил, метилэтиламино, изопропиламино, пиперидино, триметиламино и пропиламино.
Аминогруппа представляет собой -NR'R'', где R' и R'' обычно выбраны из водорода, замещенного или незамещенного алкила, замещенного или незамещенного гетероалкила, замещенного или незамещенного циклоалкила, замещенного или незамещенного гетероциклоалкила, замещенного или незамещенного арила или замещенного или незамещенного гетероарила.
Термины алкилтиоэфир и тиоалкоксил относятся к насыщенной (т.е. алкил-S-) или ненасыщенной (т.е. алкенил-S- и алкинил-S-) группе, присоединенной к остатку основной молекулы через атом серы. Примеры тиоалкоксильных групп включают, но не ограничиваясь ими, метилтио, этилтио, пропилтио,
- 25 034571 изопропилтио, н-бутилтио и подобные.
Ациламино относится к ацил-NH- группе, где ацил является таким, как описано выше. Ароиламино относится к ароил-NH-группе, где ароил является таким, как описано выше.
Термин карбонил относится к -С(=С)- группе и может включать альдегидную группу, представленную общей формулой И-С(=О)Н.
Термин карбоксил относится к -COOH группе. Такие группы также называются в данном описании группой карбоновой кислоты.
Термины гало, галид или галоген, как использовано в данном описании, относятся к группам фтора, хлора, брома и йода. Кроме того, термины, такие как галогеналкил, предназначены для включения моногалогеналкила и полигалогеналкила. Например, термин галоген(Cl-C4)алкил предназначен для включения, но не ограничиваясь ими, трифторметила, 2,2,2-трифторэтила, 4-хлорбутила, 3-бромпропила и подобных.
Термин гидроксил относится к -ОН группе.
Термин гидроксиалкил относится к алкильной группе, замещенной -ОН группой.
Термин меркапто относится к -SH группе.
Термин оксо, как использовано в данном описании, означает атомом кислорода, который связан двойной связью с атомом углерода или другим элементом.
Термин нитро относится к -NO2 группе.
Термин тио относится к соединению, описанному выше в данном описании, где атом углерода или кислорода заменен атомом серы.
Термин сульфат относится к -SO4 группе.
Термин тиогидроксил или тиол, как использовано в данном описании, относится к группе формулы -SH.
Более конкретно, термин сульфид относится к соединению, имеющему группу формулы -SR.
Термин сульфон относится к соединению, имеющему сульфонильную группу -S(O2)R.
Термин сульфоксид относится к соединению, имеющему сульфинильную группу -S(O)R.
Термин уреидо относится к группе мочевины формулы -NH-CO-NH2.
Во всем описании и пунктах формулы изобретения, приведенные химические формулы или названия должны охватывать все таутомеры, конгенеры и оптические и стереоизомеры, а также рацемические смеси, где такие изомеры и смеси существуют.
Некоторые соединения настоящего изобретения могут обладать асимметрическими атомами углерода (оптические или хиральные центры) или двойными связями; энантиомерные, рацемические, диастереомерные, таутомерные, геометрические изомерные, стереоизомерные формы которых могут определяться терминами абсолютной стереохимии, как (R)- или (S)-, или как D- или L- для аминокислот и индивидуальных изомеров, входят в объем настоящего изобретения. Соединения настоящего изобретения не включают такие, которые известны в данной области как слишком нестабильные при синтезе и/или выделении. Настоящее изобретение предназначено для включения соединений в рацемически, скалемически и оптически чистых формах. Оптически активные (R)-u (S)-, или D- и L-изомеры могут быть получены при использовании хиральных синтезов или хиральных реагентов, или разделения с помощью обычных методов. Когда соединения, описываемые в данном описании, содержат олефиновые связи или другие центры геометрической асимметрии, и, если не указано иное, предполагается, что соединения включают как Е, так и Z геометрические изомеры.
Если не указано иное, изображенные в данном описании структуры также предназначены для включения всех стереохимических форм данной структуры; т.е. R- и S-конфигурации для каждого асимметрического центра. Поэтому, индивидуальные стереохимические изомеры, а также энантиомерные и диастереомерные смеси настоящих соединений входят в объем настоящего изобретения.
Специалисту в данной области будет очевидно, что некоторые соединения настоящего изобретения могут существовать в таутомерных формах, причем все такие таутомерные формы соединений входят в объем настоящего изобретения. Термин таутомер, как использовано в данном описании, относится к одному из двух или более структурных изомеров, которые находятся в равновесии, и которые легко преобразуются из одной изомерной формы в другую.
Если не указано иное, приведенные в данном описании структуры также предназначены для включения соединений, которые отличаются только присутствием одного или нескольких изотопно обогащенных. Например, соединения, имеющие представленные структуры с водородом, замененным дейтерием или тритием, или с углеродом, замененным на 13C- или l4C-обогащенный углерод, входят в объем настоящего изобретения.
Соединения настоящего изобретения также могут содержать неприродное соотношение атомных изотопов к одному или более атомам, которые составляют такие соединения. Например, соединения могут быть радиоактивно мечены радиоактивными изотопами, такими как, например, тритий (3H), йод-125 (125I) или углерод-14 (14C). Все изотопные варианты соединений настоящего изобретения, радиоактивные или нет, входят в объем настоящего изобретения.
Соединения настоящего изобретения могут существовать в виде солей. Настоящее изобретение
- 26 034571 включает такие соли. Примеры применимых солевых форм включают гидрохлориды, гидробромиды, сульфаты, метансульфонаты, нитраты, малеаты, ацетаты, цитраты, фумараты, тартраты, например (+)тартраты, (-)-тартраты или их смеси, включая рацемические смеси, сукцинаты, бензоаты, и соли с аминокислотами, такими как глутаминовая кислота. Указанные соли могут быть получены способами, известными специалисту в данной области. Также включаются аддитивные соли оснований, такие как соли натрия, калия, кальция, аммония, органического амино или соли магния, или аналогичные соли. Когда соединения настоящего изобретения содержат относительно основные функциональные группы, кислотно-аддитивные соли могут быть получены приведением в контакт нейтральной формы таких соединений с достаточным количеством желаемой кислоты, либо как таковой или в подходящем инертном растворителе, или путем ионного обмена. Примеры приемлемых кислотно-аддитивных солей включают производные неорганических кислот, подобно хлористо-водородной, бромисто-водородной, азотной, угольной, моногидроугольной, фосфорной, моногидрофосфорной, дигидрофосфорной, серной, моногидросерной, йодисто-водородной или фосфористой кислотам и подобным, а также соли, производные органических кислот, подобно уксусной, пропионовой, изомасляной, малеиновой, малоновой, бензойной, янтарной, субериновой, фумаровой, молочной, миндальной, фталиевой, бензолсульфоновой, птолилсульфоновой, лимонной, винной, метансульфоновой и подобным. Также включаются соли аминокислот, такие как аргинат и подобные, и соли органических кислот, подобно глюкуроновой или галактуроновой кислотам и подобным. Некоторые конкретные соединения настоящего изобретения содержат как основные, так и кислотные функциональные группы, которые дают возможность соединениям преобразовываться либо в основные, либо в кислотно-аддитивные соли.
Нейтральные формы соединений могут быть регенерированы приведением в контакт данной соли с основанием или кислотой и выделением основного исходного соединения общепринятыми методами. Основная исходная форма соединения отличается от различных солевых форм некоторыми физическими свойствами, такими как растворимость в полярных растворителях.
Некоторые соединения настоящего изобретения могут существовать в несольватированных формах, а также сольватированных формах, включая формы гидратов. Как правило, сольватированные формы эквивалентны несольватированным формам и входят в объем настоящего изобретения. Некоторые соединения настоящего изобретения могут существовать во множественных кристаллических или аморфных формах. Как правило, все физические формы эквивалентны для применения в целях, предусмотренных настоящим изобретением, и предназначены для включения в объем настоящего изобретения.
В дополнение к солевым формам, настоящее изобретение предоставляет соединения, которые представлены в пролекарственной форме. Пролекарствами соединений, описываемых в данном описании, являются такие соединения, которые легко подвергаются химическим изменениям в физиологических условиях, обеспечивая соединения настоящего изобретения. Кроме того, пролекарства могут преобразовываться в соединения настоящего изобретения химическими или биохимическими методами в ex vivo окружающей среде. Например, пролекарства могут медленно преобразовываться в соединения настоящего изобретения при размещении его в трансдермальном пластырьном резервуаре с подходящим ферментом или химическим реагентом.
Следуя конвенции по патентному законодательству, термины, используемые в данном описании и пунктах формулы изобретения в единственном числе, относятся к одному или более. Таким образом, например, ссылка на объект включает множественность объектов, если в контексте четко не указано обратное (например, множественность объектов) и так далее.
Во всем описании и пунктах формулы изобретения термины содержать, состоять из и содержащий не используются в исключительном смысле, за исключением тех случаев, когда контекст требует иное. Аналогичным образом, термин включают и его грамматические варианты не предназначены для ограничения, так чтобы перечень элементов в списке не предназначался для исключения других подобных элементов, которые могут быть заменены или добавлены к перечисленным элементам.
Для целей данного описания и пунктов формулы изобретения, если специально не указано иное, все числа, указывающие на количество, размеры, объемы, пропорции, формы, составы, параметры, проценты, величины, характеристики и другие числовые обозначения, используемые в данном описании и пунктах формулы изобретения, следует понимать как модификации во всех случаях термина примерно, даже несмотря на то, что термин примерно может не отображаться прямо со значением, количеством или диапазоном. Соответственно, если не указано иное, числовые параметры, приведенные в следующем описании и прилагаемых пунктах формулы изобретения, не являются и не должны быть точными, но могут быть приблизительными и/или больше или меньше, при необходимости, или отражающими допуски, коэффициенты пересчета, округления и ошибки измерения, и тому подобное, и другие факторы, известные специалисту в данной области, в зависимости от желаемых искомых свойств, получаемых от представленного изобретения. Например, термин примерно при ссылке на объем может быть предназначен для охвата вариаций в некоторых вариантах осуществления±100%, в некоторых вариантах осуществления±50%, в некоторых вариантах осуществления±20%, в некоторых вариантах осуществления±10%, в некоторых вариантах осуществления±5%, в некоторых вариантах осуществления±1%, в не- 27 034571 которых вариантах осуществления±0,5% и в некоторых вариантах осуществления±0,1% от конкретного количества, в качестве таких вариаций, подходящих для проведения описываемых способов или применений раскрываемых композиций.
Также, термин примерно при использовании в связи с одним или более числами или числовыми диапазонами следует понимать как относящийся ко всем таким числам, включая все числа в данном диапазоне и модификациях данного диапазона при расширении границ выше и ниже приведенных числовых значений. Перечисление численных диапазонов конечными точками включает все числа, например все целые числа, включая их дробные значения, входящие в этот диапазон (например, перечисление от 1 до 5 включает 1, 2, 3, 4 и 5, а также их дробные значения, например 1,5, 2,25, 3,75, 4,1 и подобные) и любой диапазон в этом диапазоне.
Примеры
Следующие примеры включены для обеспечения методологическими основами специалиста в данной области для практической иллюстрации вариантов осуществления настоящего изобретения. В свете настоящего изобретения и общего уровня знаний специалиста в данной области данному специалисту будет очевидно, что следующие примеры предназначены только в качестве примеров, и что число изменений, модификаций и альтернатив могут быть использованы, не отходя от заявляемого объема настоящего изобретения. Описания синтезов и конкретных примеров, которые предназначены только для целей иллюстрации, не должны толковаться как ограничивающие каким-либо образом получение соединений настоящего изобретения другими способами.
Пример 1.
Методы.
Общая методика.
Коммерчески доступный ВЭЖХ чистый метанол, катализаторы и чистые реагенты использовали в том виде, как получены. ТСХ проводили на покрытых силикагелем 60 F254 алюминиевых пластинах (Merck), и пятна проявляли раствором Се(SO4)2.4H2O (1%) и H3P(Mo3O10)4 (2%) в серной кислоте (10%). Флэш-хроматографию проводили на силикагеле 60 (0,040-0,063 мм, Fluka) или на Biotage® KP-C18-HS или KP-Sil® SNAP картриджах с использованием системы Isolera One HPFC (Biotage, Inc.). Все химические реагенты приобретали у фирмы Sigma-Aldrich и использовали без дополнительной очистки. 1H ЯМР спектры измеряли при 400,1, 500,1 или 600,1 МГц, 13С ЯМР спектры при 100,8, 125,7 или 150,9 МГц. Для стандартизации 1H ЯМР спектра использовали внутренний сигнал TMS (δ 0,0, CDCl3) или остаточные сигналы растворителей (δ 7,26 для CDCl3, δ 2,05 для CD3COCD3 и δ 3,31 для CD3OD). В случае 13C спектра использовали остаточные сигналы растворителей (δ 77,00 для CDCl3, δ 29,84 и δ 206,26 для CD3COCD3 и δ 49,00 для CD3OD). Химические сдвиги давали по δ-шкале, константы связывания J представлены в Гц. ESI масс-спектры записывали с использованием ZQ микромасс масс-спектрометра (Waters), оборудованного ESCi мультивариантным источником ионов и под контролем MassLynx программного обеспечения. Альтернативно, ESI масс-спектры низкого разрешение записывали с использованием квадрупольного времяпролетного тандемного масс-спектрометра с ортогональным ускорением ионов (QTof micro, Waters), и ESI масс-спектры высокого разрешения, используя гибридный FT массспектрометр, объединяющий линейные ионные ловушки МС, и масс-анализатора Orbitrap (LTQ Orbitrap XL, Thermo Fisher Scientific). Условия оптимизировали для подходящей ионизации в источнике ESI (скорость потока газа оболочки 35 a.u., скорость потока газа AUX 10 a.u. азота, источник напряжения 4,3 кВ, капиллярное напряжение 40 B, капиллярная температура 275°C, напряжение цилиндрических линз 155 B). Образцы растворяли в метаноле и вносили прямой инъекцией. Оптическое вращение измеряли в CHCl3 или ДМФА с использованием прибора Autopol IV (Rudolph Research Analytical). ИК спектр измеряли в CHCl3 или KBr.
Исследования эффективности на мышах.
Все исследования эффективности на мышах проводили согласно протоколу #МО13М69, одобренному Комитетом при Университете Джонса Хопкинса по уходу за животными и их использованию. Получали самок бестимусных (мыши RH-Foxn1nu) мышей массой от 25 до 30 г (Harlan Sprague Dawley Inc, Indianapolis, Indiana) и выдерживали при 12-часовом цикле свет-темнота с неограниченным доступом к корму и воде. U87 клетки глиомы человека инъецировали подкожно (5х 106 клеток в 100 мл PBS) в четырех разных местах в бок каждой мыши. Когда опухоли выросли до объема вокруг 200 мм3, мышей рандомизировали на группы носителя (HEPES-забуференный солевой раствор, в.б.) или DON (1; 0,8 мг/кг, в.б.). В первой группе мышам вводили единичную дозу соответствующего раствора, спустя два часа после этого, количественно оценивали уровни глутамина в опухоли, как раннее описано (Le et al., 2012). Кратко, опухоли собирали, фиксировали замораживанием и гомогенизировали в жидком N2, затем подвергали метаболитной экстракции с использованием метанола и деионизированной воды. Количественную оценку проводили с использованием масс-спектрометра Agilent 6520 Quadrupole-Time-of-Flight (QTOF) с Agilent 1290 ВЭЖХ и с использованием программного обеспечения Agilent Mass Hunter и программных пакетов для качественного и количественного анализа Agilent. Содержание глутамина в среднем на группу для каждой отдельной опухоли (п=3-4/группа) изображали как относительную интенсив- 28 034571 ность и анализировали односторонним t-тестом. Во второй группе проводили эксперименты на эффективность. Мышей инъецировали один раз ежедневно в течение шести дней; объемы опухолей измеряли с использованием цифрового штангенциркуля и рассчитывали по следующей формуле: [объем=(наибольший размер опухоли) х (наименьший размер опухоли)2 х 0,52] на 2, 4 и 6 дни после начала обработки. Каждую отдельную опухоль (п=8-10/группа) нормализовали до ее объема перед обработкой, усредняли и анализировали повторяющимся двусторонним дисперсионным анализом (ANOVA). При необходимости, впоследствии проводили ретроспективный анализ по методу Бонферрони. Значение определено как р<0,05.
Исследование стабильности In Vitro.
Исходный раствор для большинства пролекарств получали в виде 10 мМ раствора в ДМСО для осуществления in vitro исследований.
Химическую стабильность пролекарства оценивали с использованием искусственного желудочного сока (SGF; рН 1,2) и забуференного фосфатом физиологического раствора (PBS; рН 7,4). Кратко, пролекарства добавляли (10 мкМ) в соответствующие растворы и инкубировали при 37°C в течение 1 ч. В заранее определенные временные точки (0, 30 и 60 мин) аликвоты 100 мкл удаляли и разводили 100 мкл воды. Исчезновение пролекарства мониторили с использованием проявляющей жидкостной хроматографией и тандемной масс-спектрометрией (ЖХ/МС/МС) описанным ниже методом.
Для метаболической стабильности использовали плазму (собаки, человека, обезьяны, мыши и свиньи). Для стабильности пролекарства (10 мкМ) добавляли в каждый матрикс и инкубировали в орбитальном шейкере при 37°C. В заранее определенное время (0, 30 и 60 мин) 100 мкл аликвот смеси в трех повторах удаляли и реакцию гасили добавлением 3-кратным объемом охлажденного льдом ацетонитрила с добавленным внутренним стандартом (лозартан 0,5 мкМ). Образцы перемешивали вихревым способом в течение 30 с и центрифугировали при 12000 g в течение 10 мин. 50 мкл супернатанта, разведенного 50 мкл воды, переносили в 250-мкл полипропиленовую закрываемую пробирку с тефлоновой крышкой. Исчезновение пролекарства мониторили со временем с помощью жидкостной хроматографии и тандемной масс-спектрометрии (ЖХ/МС/МС) описанным ниже методом.
Для ЖХ/МС/МС пролекарства отделяли при помощи системы Thermo Scientific Accela UPLC, связанной с открытым автоматическим пробоотборником Accela, на UPLC колонке Agilent С18 (100х 2,1 мм в.д.). Температуру автоматического пробоотборника контролировали, и она составляла при работе 10°C. Подвижная фаза, используемая для хроматографического разделения, состояла из смеси ацетонитрил/вода, содержащей 0,1% муравьиную кислоту, и скорость потока составляла 0,5 мл/мин в течение 4,5 мин при градиентном элюировании. Колоночный элюент мониторили с использованием тройного квадрупольного масс-спектрометрического детектора TSQ Vantage, оборудованного набором зондов для электрораспыления в режиме положительный ионизации. Образцы вводили в источник ионизации через подогреваемый распыляемый зонд (350°C).
Для количественной оценки оставшегося соединения исчезновение пролекарства измеряли по соотношению площадей пиков аналита в IS. Оставшийся процент рассчитывали следующим образом:
Средний ответ*@60 мин —е----=----------х100
Средний ответ@0 мин где ответ=[(площадь аналита)/(площадь внутреннего стандарта)].
* Средний ответ представляет собой среднее из двух образцов в каждый момент времени. Фармакокинетическое исследование на мышах.
Все фармакокинетические исследования на мышах проводили согласно протоколу (#МО13М113), одобренному Комитетом при Университете Джонса Хопкинса по уходу за животными и их использованию. C57BL/6 мышей массой от 25 до 30 г получали от фирмы Harlan и выдерживали при 12-часовом цикле свет-темнота по выбору с доступом к корму и воде. Для оценки фармакокинетики DON и его пролекарства 5c в мозге и плазме 8-12 недельным мышам C57BL/6 вводили DON (1; 0,8 мг/кг, п.о. в забуференном фосфатом физиологическом растворе) и его пролекарство 5c (при 0,8 мг/кг эквивалент DON (1), п.о. в забуференном фосфатом физиологическом растворе с 5% EtOH и 5% Tween-80). Мышей умерщвляли путем инъекции пентобарбитала через 10, 30 и 90 мин после введения лекарства, кровь собирали через прокол сердца и помещали в микродозатор с охлажденным льдом ЭДТА, окрашенным BD. Образцы крови центрифугировали при 2000 g в течение 15 мин и плазму удаляли и хранили при -80°C. Ткани мозга заготавливали при следующем сборе крови, немедленно замораживали в жидком азоте и хранили при -80°C до ЖХ/МС анализов.
Фармакокинетические исследования на нечеловеческих приматах.
Все исследования обезьян проводили согласно протоколу (#PR15M298), одобренному Комитетом при Университете Джонса Хопкинса по уходу за животными и их использованию. Двух самок хвостатых обезьян (примерно 3,5 кг, ранее не использовавшихся в нелекарственных опытах) профильно содержали в клетках из нержавеющей стали на стойке группового взаимодействия (содержит 4 клетки, каждая 32,5'' ширинах28'' глубинах32'' высота), поддерживая температуру 64-84°F, влажность 30-70% с чередующимся циклом свет/темнота 14-10 ч в соответствии с Законом о благополучии животных (USDA Animal Wel
- 29 034571 fare Act, 9 CFR, Parts 1, 2 и 3). Корм предоставляли ежедневно в количестве, соответствующем размеру и возрасту животных, и RO очищенную воду неограниченно предоставляли через клапан in-Cage lixit. Обогащенный корм предоставляли с понедельника до пятницы. Перед введением лекарства макак успокаивали кетамином в виде внутримышечной инъекции перед проведением введения испытуемого препарата. Седативный эффект поддерживали через кровь и собирали образцы спинномозговой жидкости (CSF) с кетамином при начальной скорости 15 мг/кг с дополнительной дозой 20-30 мг в течение первого часа. В последующих временных точках кетамин вводили при 10-15 мг/кг. DON (50 мМ HEPES забуференный физиологический раствор) и соединение 5c (диастереоизомер 1), (50 мМ HEPES забуференный физиологический раствор, содержащий 5% этанол и 5% твин) вводили (1,6 мг/кг эквивалент) животным при объемном дозировании 1 мл/кг внутривенно. Образец спинномозговой жидкости (расчетное значение 50 мкл) получали чрезкожной пункцией мостомозжечковой цистерны через 30 мин после дозирования. Образцы крови (1 мл) забирали спустя 15, 30, 1, 2, 4 и 6 ч после дозирования чрезкожной пункцией периферических вен. Образцы обрабатывали для плазмы (центрифугировали при температуре 4°C, при 3000xg, в течение 10 мин). Все образцы поддерживали охлажденными на льду в ходе обработки. Образцы собирали в микроцентрифужные пробирки, быстро замораживали и помещали в морозильник, поддерживаемый при -80°C до ЖХ/МС анализов.
Биоанализ DON.
Высокочувствительный метод анализа DON в биологических матрицах (Alt, et al., 2015) был ранее опубликован. Однако из-за химической лабильности DON и его пролекарств был разработан и утвержден метод мягкой дериватизации при использовании дабзилхлорида. Кратко, DON экстрагировали из образцов (50 мг) 250 мкл метанола, содержащего глутамат-б5 (10 мкМ ISTD), путем интенсивного перемешивания в слабо закрепленных пробирках. Образцы центрифугировали при 16000xg в течение 5 мин для преципитации белков. Супернатанты (200 мкл) перемещали в новые пробирки и сушили при 45°C в вакууме в течение 1 ч. В каждую пробирку добавляли 50 мкл 0,2 М буферного бикарбоната натрия (рН 9,0) и 100 мкл 10 мМ дабзилхлорида в ацетоне. После интенсивного перемешивания образцы инкубировали при 60°C в течение 15 мин для дериватизации. Образцы (2 мкл) инъецировали и разделяли на Agilent 1290, оборудованном Agilent Eclipse plus колонке С18 RRHD 2,1 Х100 мМ при 2,5-минутном градиенте 20-95% ацетонитрил+0,1% муравьиная кислота и количественно определяли на масс-спектрометре Agilent 6520 QTOF. Калибровочные кривые в диапазоне 0,005-17,1 мкг/мл в плазме и спинномозговой жидкости для DON строили по отношению площади пика аналита к внутреннему стандарту с помощью линейной регрессии с весовым коэффициентом 1/(номинальная концентрация). Коэффициент корреляции между более чем 0,99 получали во всех аналитических пробах. Среднее прогнозируемое относительное стандартное отклонение для обратного расчета концентрации стандартов и QC для всех аналитов составляло диапазон от 85 до 115%, за исключением низких концентраций, которые составляли пределы от 80 до 120% с общей точностью и сходимостью 6,7 и 6,6% соответственно.
Фармакокинетический анализ.
Данные средняя концентрация-время использовали для фармакокинетического анализа. Для оценки фармакокинетических параметров использовали неразделительный (Non-Compartmental) аналитический модуль в WinNonlin® (version 5,3). Значения пика концентраций в плазме (Cmax) и времени до Cmax (Cmax) получали путем наблюдений. Площадь под кривой (AUC) рассчитывали путем log-линейного правила трапеций в конце отбора образцов (AUClast).
Методика фармакокинетического анализа высвобождения DON из его пролекарства.
DON экстрагировали из образцов (50 мкл) 250 мкл метанола, содержащего глутамат-б5 (10 мкМ ISTD), путем интенсивного перемешивания в слабо закрепленных пробирках. Образцы центрифугировали при 16000xg в течение 5 мин для преципитации белков. Супернатанты (200 мкл) переносили в новые пробирки и сушили при 45°C в вакууме (приблизительно 1 ч). В каждую пробирку 50 мкл добавляли 0,2 М забуференный бикарбонат натрия (рН 9,0) и 100 мкл исходного дабзилхлорида. После интенсивного перемешивания образцы инкубировали при 60°C в течение 15 мин для дериватизации. Образцы (2-10 мкл) инъецировали и разделяли на Agilent 1290, оборудованном колонкой SB-AQ при 4-минутном градиенте 20-95% ацетонитрил+0,1% муравьиная кислота, и количественно оценивали на масс-спектрометре Agilent 6520 QTOF.
Пример 2. Пролекарственная стратегия - блокировка функциональной карбоксилатной группы.
В одном из вариантов осуществления DON пролекарства были разработаны с блокировкой только функциональных карбоксилатных групп с использованием сложных алкиловых эфиров DON с незащищенными функциональными α-аминогруппами. Однако у некоторых сложных алкиловых эфиров DON с незащищенной функциональной α-аминогруппой было обнаружено, что при проведении циклизации происходит формирование 5-членного циклического основания Шиффа. Наблюдаемая циклизация зависит от рН и убыстряется при рН 5-7. При низком рН, при котором циклизация обычно предотвращается или идет в обратном направлении, функциональные диазогруппы становятся нестабильными. Как результат, циклизация становится практически необратимой, придавая некоторым сложным N-αсвободным алкиловым эфирам неприемлемость в качестве DON пролекарств (фиг. 1А).
- 30 034571
Пример 3. Пролекарственная стратегия - блокировка функциональной аминогруппы.
В другом варианте осуществления DON пролекарства были разработаны с блокировкой только функциональных аминогрупп с использованием N-защитных производных DON с незащищенными функциональными карбоксигруппами. N-защитные производные DON с незащищенной функциональной карбоксигруппой (фиг. 1В и 1С) также были нестабильными. Более конкретно, кислотные функциональные карбоксигруппы являются причиной постепенного медленного распада диазогруппы. У некоторых солевых форм карбоксилатный анион дестабилизирует N-a-защитную группу. Даже более того, как показано на фиг. 1D-14, многие тестируемые пролекарства со свободной карбоксилатной группой (за исключением соединения 26) показали незначительное воздействие по сравнению с DON при пероральном введении, свидетельствуя о преимуществах дериватизации как карбоксилатных, так и аминных функ циональных групп при пероральной доступности.
Пример 4. Синтез.
Схемы синтеза иллюстративных примеров пролекарственных соединений показаны ниже (схемы 18).
Схема 1
Синтез изопропил 6-диазо-2-((дифеноксифосфорил)амино)-5-оксогексаноата (4). 1-Метилэтил 5-оксопролинат JAM0256
Данное соединение получали способом, известным в литературе. 1Н ЯМР и 13С ЯМР спектры согласовывались с опубликованными данными.
-(9Н-Флуорен-9-илметил)-2-( 1 -метилэтил)-5-оксопирролидин-1,2-дикарбоксилат (1)
Согласно схеме 1 ранее полученное соединение JAM0256 (US2008/107623 А1) (2,94 г, 17,16 ммоль) растворяли в абсолютном ТГФ (90 мл) в атмосфере аргона и охлаждали до -78°C. По каплям добавляли раствор LiHMDS (1 М в гексанах, 16,3 мл, 16,302 ммоль, 0,95 экв.) и полученный раствор перемешивали при этой же температуре в течение 15 мин. Образовавшуюся в результате желтую смесь переносили через канюлю в раствор Fmoc хлорида (22,2 г, 85,8 ммоль, 5 экв.) в абсолютном ТГФ (90 мл) при -78°C. Полученную реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 2 ч. По истечении этого периода реакцию гасили насыщенным NH4Cl (100 мл). Затем экстрагировали этилацетатом (3x50 мл), объединенные органические слои промывали водой (40 мл), насыщенным раствором соли (40 мл) и сушили над безводным MgSO4. Органический растворитель выпаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле (гексан-этилацетат 2:1) с получением требуемого продукта 1 (6,2 г, 92%) в виде бесцветного твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, CDO3): 1,23 (3H, д, J=6,2), 1,26 (3H, д, J=6,3), 2,06-2,13 (1Н, м), 2,34-2,45 (1Н, м), 2,53-2,61 (1Н, м), 2,67-7,76 (1Н, м), 4,31 (1Н, т, J=7,5), 4,40-4,44 (1Н, м), 4,53-4,57 (1Н, м), 4,65 (1Н, дд, J=9,4, 2,6), 5,07 (1Н, гепт, J=6,3), 7,31-7,35 (2Н, м), 7,39-7,43 (2Н, м), 7,71-7,78 (4Н, м). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 21,69, 21,78, 22,01, 31,31, 46,64, 58,99, 69,20, 69,78, 120,06, 120,08, 125,43, 125,57, 127,32 (2С), 127,98 (2С), 141,31, 141,33, 143,39, 143,43, 151,56, 170,58, 172,92. Оптическое вращение: [a]22D-24,1° (с 0,332, CHCl3). ИК (CHCl3): 3068 w, 3029 m, 2985 m, 2939 w, 2883 vw, 1797 s, 1758 s, sh, 1739 vs, 1724 vs, sh, 1609 vw, 1580 vw, 1479 w, 1463 m, 1452 s, 1421 w, 1386 s, 1377 m, 1305 vs, 1194 m, 1105 s, 1045 m, 1033 m, 621 w, 425 w см-1. ESI MC: 416 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C23H23O5NNa 416,14684; найдено 416,14694.
Изопропил 2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-6-диазо-5-оксогексаноат (2)
- 31 034571
Fmoc
Согласно схеме 1 раствор триметилсилилдиазометана (2 М в диэтиловом эфире, 6 мл, 11,93 ммоль, 1,2 экв.) растворяли в абсолютном ТГФ (55 мл) в атмосфере аргона и охлаждали до -98°C. По каплям добавляли раствор н-бутиллития (2,5 М в гексанах, 4,9 мл, 12,23 ммоль, 1,23 экв.) и полученный раствор перемешивали при -98°C в течение 30 мин. Полученную в результате смесь переносили через канюлю в раствор полученного выше соединения 1 (3,91 г, 9,94 ммоль, 1 экв.) в абсолютном ТГФ (100 мл) при -116°C. Полученную реакционную смесь медленно нагревали до -78°C и затем гасили насыщенным NH4Cl. Затем экстрагировали этилацетатом (3x50 мл), объединенные органические слои промывали водой (40 мл), насыщенным раствором соли (40 мл) и сушили над безводным MgSO4. Органический растворитель выпаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле (хлороформ-ацетон 20:1) с получением требуемого продукта 2 (3,68 г, 85%) в виде желтоватого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,25-1,28 (6Н, м), 1,95-2,04 (1Н, м), 2,17-2,26 (1Н, м), 2,31-2,52 (2Н, м), 4,22 (1Н, т, J=7,1), 4,29-4,43 (3H, м), 5,06 (1Н, гепт, J=6,1), 5,27 (1Н, с), 5,59 (1Н, д, J=8,2), 7,30-7,34 (2Н, м), 7,38-7,42 (2Н, м), 7,59-7,62 (2Н, м), 7,75-7,77 (2Н, м). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 21,81, 21,84, 27,69, 36,56, 47,21, 53,67, 67,10, 69,62, 120,08, 120,09, 125,18, 125,21, 127,16 (2С), 127,81 (2С), 141,35, 141,37, 143,75, 143,96, 156,16, 171,50, 193,67. Оптическое вращение: [a]22D+15,1° (с 0,674, CHCl3). ИК (CHCl3): 3428 m, 3116 w, 3068 w, 2985 m, 2940 w, 2882 w, 2110 vs, 1731 vs, sh, 1719 vs, 1641 s, 1608 w, sh, 1580 vw, 1509 s, 1478 m, 1466 m, 1451 s, 1418 w, sh, 1386 s, sh, 1377 s, 1349 s, 1232 s, 1105 s, 1052 s, 1033 m, 622 w, 539 m, 488 m, 426 w см1. ESI MC: 458 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C24H25O5NaN 458,16864; найдено 458,16873.
Изопропил 2-амино-6-диазо-5-оксогексаноат (3)
nh2
Согласно схеме 1 ранее полученное соединение 2 (900 мг, 2,07 ммоль) растворяли в дихлорметане (10 мл). Добавляли пиперидин (514 мкл 5,17 ммоль, 2,5 экв.) и полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Органический растворитель выпаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле (хлороформ-метанол 30:1) с получением требуемого продукта (290 мг, 66%) в виде желтого масла. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,21 (3H, д, J=1,8), 1,23 (3H, д, J=1,8), 1,52 (2Н, шир.с), 1,74-1,85 (1Н, м), 2,02-2,10 (1Н, м), 2,36-2,53 (2Н, шир.м), 3,37 (1Н, дд, J=8,4, 5,0), 5,00 (1Н, гепт, J=6,3), 5,27 (1Н, с). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 21,87, 21,89, 29,65, 36,99, 53,94, 68,64, 175,21, 194,25. Оптическое вращение: [a]22D+6,5° (с 0,444, CHCl3). ИК (CHCl3): 3390 w, 3323 vw, 3116 w, 2984 s, 2939 m, 2877 w, 2109 vs, 1725 vs, 1640 s, 1467 m, 1454 m, 1439 w, sh, 1388 s, sh, 1376 vs, 1349 s, 1199 s, 1106 vs см-1. ESI MC: 236 ([M+Na]+); HR ESI MC: вычислено для C9H15O3N3Na 236,1006; найдено 236,1007.
Изопропил 6-диазо-2-((дифеноксифосфорил)амино)-5-оксогексаноат (4)
Согласно схеме 1 изопропил DON 3 (80 мг, 0,38 ммоль) растворяли в абсолютном дихлорметане (4 мл) и добавляли триэтиламин (210 мкл, 1,5 ммоль, 4 экв.). Полученный раствор охлаждали до 0°C и по каплям добавляли дифенилхлорфосфат (156 мкл, 0,75 ммоль, 2 экв.). Полученную реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 30 мин и затем охлаждающую баню удаляли. Полученную реакционную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Органический растворитель выпаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле (хлороформ-ацетон 30:1) с получением требуемого продукта (131 мг, 78%) в виде желтого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,19 (3H, д, J=1,0), 1,21 (3H, д, J=1,0), 1,84-1,93 (1Н, м), 2,07-2,16 (1Н, м), 2,19-2,41 (2Н, м), 3,79-3,84 (1Н, м), 4,97 (1Н, гепт, J=6,2), 5,07 (1Н, с). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 21,75, 21,81, 29,34, 35,88, 54,29, 69,80, 80,90, 120,32 (2С, д, Jc,p=5,0), 120,39 (2С, д, Jc,p=4,9), 125,23 (2С, д, Jc,p=1,0), 125,28 (2С, д, Jc,p=1,0), 130,00 (2С), 150,68 (д, JCP=5,8), 150,75 (д, JCP=6,2), 171,93 (д, JCP=5,9), 193,51. 31Р ЯМР (101 МГц, CDCl3): 0,32. Оптическое вращение: [a]22D+15,1° (с 0,337, CHCl3). ИК (CHCl3): 3383 w, 3115 w, 3101 vw, 3063 vw, 2985 m, 2938 w, 2878 vw, 2110 vs, 1731 s, 1642 s, 1600 m, sh, 1591 m, 1490 s, 1467 w, 1456 m, 1448 vw, sh, 1426 m, 1385 s, sh, 1377 s, 1350 m, 1191 vs, 1163 s, 1071 w, 1026 m, 941 vs, 904 m, 821 w, 690 m, 617 w, 487 m см-1. ESI MC: 468 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C21H24O6N3NaP 468,12949; найдено 468,12952.
Синтез этил 2-((((4-ацетоксибензил)окси)карбонил)амино)-6-диазо-5-оксогексаноата (6).
1-[4-(Ацетилокси)бензил]-2-этил-5-оксопирролидин-1,2-дикарбоксилат (5)
- 32 034571
В раствор фосгена (15 мас.% в толуоле, 10 мл, 14 ммоль, 2,5 экв.), охлажденный до 0°C, добавляли раствор 4-ацетоксибензилового спирта (934 мг, 5,6 ммоль) в толуоле (6,7 мл). Полученную реакционную смесь перемешивали при этой же температуре в течение ночи. Летучие вещества удаляли в вакууме, продукт 4-(ацетокси)бензилхлорформиат растворяли в ТГФ (5 мл) и использовали без какой-либо очистки. Этилпироглутамат (800 мг, 5,1 ммоль) растворяли в абсолютном ТГФ (13 мл) в атмосфере аргона и охлаждали до -78°C. По каплям добавляли раствор LiHMDS (1 М в гексанах, 6,12 мл, 6,12 ммоль, 1,2 экв.) и полученный раствор перемешивали при этой же температуре в течение 15 мин. Образовавшуюся в результате желтую смесь переносили через канюлю в раствор 4-(ацетокси)бензилхлорформиата (5,6 ммоль, 1 экв.) при -78°C. Полученную реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 2 ч. По истечении этого периода реакцию гасили насыщенным NH4Cl (100 мл). Затем экстрагировали этилацетатом (3x50 мл), объединенные органические слои промывали водой (40 мл), насыщенным раствором соли (40 мл) и сушили над безводным MgSO4. Органический растворитель выпаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле (гексан-этилацетат 1:1) с получением требуемого продукта 5 (1,16 г, 65%) в виде бесцветного твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,16 (3H, т, J=7,2), 1,99-2,06 (1Н, м), 2,25 (3H, с), 2,28-2,36 (1Н, м), 2,42-2,50 (1Н, м), 2,55-2,64 (1Н, м), 4,11 (1Н, квд, J=7,1, 2,6), 4,62 (1Н, дд, J=9,4, 2,7), 5,16 (1Н, д, J=12,4), 4,25 (1Н, д, J=12,4), 7,02-7,05 (2Н, м), 7,35-7,39 (2Н, м). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 14,02, 21,08, 21,79, 30,99, 58,74, 61,82, 67,58, 121,75, 129,46, 132,62, 150,70, 150,83, 169,28, 170,97, 172,93. Оптическое вращение: [a]22 D-30,7° (с 0,298, CHCl3). ИК (CHCl3): 2968 w, 2942 vw, 2876 vw, 1797 s, 1753 vs, 1717 s, sh, 1609 w, 1597 vw, 1510 m, 1476 vw, 1463 w, 1450 w, 1447 w, 1421 w, 1402 w, sh, 1380 m, 1372 m, 1303 s, 1288 s, 1259 m, 1198 vs, 1166 s, 1107 vw, 1045 m, 1019 m, 1012 m, sh, 913 w, 846 w, 596 w, см-1. ESI MC: 372 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для CnH^OyNNa 372,10537; найдено 372,10541.
Этил 2-((((4-ацетоксибензил)окси)карбонил)амино)-6-диазо-5-оксогексаноат (6)
Раствор триметилсилилдиазометана (2 М в диэтиловом эфире, 1,7 мл, 3,43 ммоль, 1,2 экв.) растворяли в абсолютном ТГФ (17 мл) в атмосфере аргона и охлаждали до -98°C. По каплям добавляли раствор н-буттиллития (2,5 М в гексанах, 1,4 мл, 3,52 ммоль, 1,23 экв.) и полученный раствор перемешивали при -98°C в течение 30 мин. Полученную в результате смесь переносили через канюлю в раствор полученного выше соединения 5 (1,0 г, 2,86 ммоль, 1 экв.) в абсолютном ТГФ (27 мл) при -116°C. Полученную реакционную смесь медленно нагревали до -78°C и затем гасили насыщенным NH4Cl. Затем экстрагирова ли этилацетатом (3x50 мл), объединенные органические слои промывали водой (40 мл), насыщенным раствором соли (40 мл) и сушили над безводным MgSO4. Органический растворитель выпаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле (хлороформ-ацетон 20:1) с получением требуемого продукта 6 (460 мг, 41%) в виде желтоватого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,25 (3H, т, J=7,1), 1,92-2,03 (1Н, м), 2,13-2,23 (1Н, м), 2,28 (3H, с), 2,32-2,43 (1Н, м), 4,18 (1Н, кв, J=7,1), 4,29-4,34 (1Н, м), 5,04 (1Н, д, J=12,4), 5,10 (1Н, д, J=12,1) 5,22 (1Н, с), 7,31 (1Н, д, J=8,2), 7,04-7,07 (2Н, м), 7,34-7,37 (2Н, м). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 14,22, 21,19, 27,53, 36,45, 53,62, 61,78, 66,38, 121,78, 129,52, 134,01, 150,59, 156,01, 169,51, 171,90, 193,60. Оптическое вращение: [q]22d+15,5° (с 0,129, CHCl3). ИК (CHCl3): 3428 w, 3116 w, 2966 w, 2110 s, 1721 vs, 1742 s, sh, 1641 m, 1609 w, sh, 1595 vw, sh, 1509 s, 1418 vw, 1381 s, sh, 1371 s, 1344 m, 1197 vs, 1166 m, 1106 vw, 1053 m, br, 1019 m, 1012 m, sh, 913 w, 848 w, 595 w, 492 w см-1. ESI MC: 414 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C18H21O7N3Na 414,12717; найдено 414,12713.
Синтез 1-метилэтил 2,6-бис-[4-(1Х5-диазинилиден)-3-оксобутил]-9-метил-7-оксо-4-фенокси-8-окса3,5-диаза-4-фосфадекан-1-оат 4-оксида (7).
1-Метилэтил 2,6-бис-[4-(1Х5-диазинилиден)-3-оксобутил]-9-метил-7-оксо-4-фенокси-8-окса-3,5диаза-4-фосфадекан-1-оат 4-оксид (7)
Согласно схеме 1 изопропил DON 3 (100 мг, 0,38 ммоль) растворяли в абсолютном дихлорметане (3 мл) и добавляли диизопропилэтиламин (327 мкл, 1,88 ммоль, 4 экв.). Полученный раствор охлаждали до 0°C и по каплям добавляли фенилдихлорфосфат (31,6 мкл, 0,21 ммоль, 0,45 экв.). Полученную реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 30 мин и затем охлаждающую баню удаляли. Полученную
- 33 034571 реакционную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Органический растворитель выпаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле (этилацетат-метанол 40:1) с получением требуемого продукта (78 мг, 66%) в виде желтого масла. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,211,24 (12Н, м), 1,81-1,93 (2Н, м), 2,09-2,19 (2Н, м), 2,24-2,52 (4Н, м), 3,61-3,70 (2Н, м), 3,90-3,98 (2Н, м), 4,99 (1Н, гепт, J=6,3) 4,99 (1Н, гепт, J=6,2), 5,24 (1Н, с), 5,33 (1Н, с), 7,10-7,14 (1Н, м), 7,17-7,20 (2Н, м), 7,28-7,31 (2Н, м). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 21,81 (4С), 29,26, 29,43, 36,21 (2С), 53,78 (д, JQp=1,7), 53,97, 69,54, 69,66, 120,43 (д, JCP=4,8), 124,76, 129,76 (2С), 151,03 (2С, д, JCP=6,8), 172,47 (д, JCP=5,5), 172,64 (д, JCP=5,2), 194,07 (2С). 31Р ЯМР (101 МГц, CDCl3): 11,08. Оптическое вращение: [a]22D+6,4° (с 0,313, CHCl3). ИК (CHCl3): 3099 w, 3303 w, 2104 vs, 1732 s, 1639 s, 1592 w, 1492 m, 1385 sh, m, 1376 s, 1240 sh, m, 1211 s, 1183 sh, m, 1167 m, 1144 m, 1132 sh, m, 1106 s, 1072 w, 1025 w, 1006 m, 923 m, 832 sh, w, 771 w, m, 692 w см-1.
ESI MC: 587 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C24H33N6O8Pna 587,19897; найдено 587,19899. Синтез изопропил 2-(2-амино-4-метилпентанамидо)-6-диазо-5-оксогексаноата (9).
Изопропил 2-(2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-4-метилпентанамидо)-6-диазо-5оксогексаноат (8)
Согласно схеме 1 Fmoc-NH-(L)-Leu-COOH (874 мг, 2,47 ммоль, 1,1 экв.) и HBTU (1023 мг, 2,70 ммоль, 1,2 экв.) суспендировали в сухом DCM (15 мл). DIEA (872 мг, 1,18 мл, 6,75 ммоль, 3 экв.) и затем раствор NH2-DON-COOiPr (448 мг, 2,25 ммоль, 1 экв.) в сухом DCM (5 мл) добавляли при помощи шприца. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре в инертной атмосфере. Добавляли DCM (20 мл) и органическую фазу промывали насыщенным NaHCO3 (40 мл), 1 М HCl (40 мл), водой (2x40 мл) и насыщенным NaCl (40 мл), сушили над MgSO4. DCM выпаривали. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (DCM/EtOAc 4:1, Rf 0,27) и получали светло-желтое твердое вещество (949 мг) с выходом 79%. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): 0,91-0,96 (6Н, м), 1,23-1,25 (6Н, м), 1,51-1,73 (3H, м), 1,93-2,02 (1Н, м), 2,14-2,24 (1H, м), 2,26-2,44 (2H, м), 4,16-4,24 (2Н, м), 4,33-4,37 (1Н, м), 4,39-4,44 (1Н, м), 4,47-4,52 (1Н, м), 4,96-5,08 (1Н, м), 5,18 (1Н, с), 5,36 (1Н, д, J=8,2), 6,84 (1Н, д, J=7,8), 7,30 (2Н, тт, J=7,4, 1,2), 7,37-7,42 (2Н, м), 7,58 (2Н, д, J=7,4), 7,75 (2Н, д, J=7,5). 13C ЯМР (101 МГц, CDCl3): 21,70, 21,72, 22,04, 22,92, 24,66, 27,04, 36,37, 41,75, 47,14, 52,05, 53,56, 67,08, 69,47, 119,98, 120,01, 125,06, 125,13, 127,10, 127,11, 127,74, 127,75, 141,28 (2С), 143,76, 143,81, 156,14, 170,95, 172,29, 193,80. Оптическое вращение: [a]22D-6,1o (с 0,472, CHCl3). ИК (CHCl3): 3304 m, sh, 3067 w, 3018 w, 2105 s, 1730 s, 1704 s, 1659 vs, 1639 sh, m, 1612 sh, w, 1580 sh, w, 1539 s, 1478 m, 1451 m, 1467 m, 1386 sh, s, 1375 s, 1244 s, 1172 sh, m, 1145 m, 1106 s, 834 sh, w, 759 m, 740 s, 621 m, 427 см-1. ESI MC: 571 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C24H33O4N4Na 571,25271; найдено 571,25271.
Изопропил 2-(2-амино-4-метилпентанамидо)-6-диазо-5-оксогексаноат (9)
Использовали способ получения, аналогично примененному выше для получения соединения 3. Согласно схеме 1 соединение 8 (90 мг, 0,164 ммоль), дихлорметан (1 мл), пиперидин (41 мкл 0,41 ммоль, 2,5 экв.). Хроматография на силикагеле (хлороформ-метанол 20:1). Продукт (31 мг, 66%) в виде желтого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): 0,94 (3H, д, J=6,3), 0,98 (3H, д, J=6,4), 1,25 (3H, д, J=2,8), 1,26 (3H, д, J=2,8), 1,35-1,42 (1Н, м), 1,76-1,79 (2Н, м), 1,95-2,04 (1Н, м), 2,17-2,25 (1Н, м), 2,33-2,49 (2Н, м), 3,48 (1Н, дд, J=9,7, 4,1), 4,52 (1Н, тд, J=8,5, 4,7), 5,04 (1Н, гепт, J=6,3), 5,35 (1Н, с), 7,87 (1Н, д, J=8,3). 13C ЯМР (101 МГц, CDCl3): 27,59, 28,19, 33,40, 66,39, 80,90, 124,87, 128,33, 128,35, 128,66, 136,10, 140,58, 166,01, 172,75. Оптическое вращение: [a]22D+° (с 0,33, CH2Cl2). ИК (CHCl3): 3412 w, 3343 w, 2110 vs, 1731 s, 1663 s, 1643 sh, s, 1603 sh, w, 1510 s, 1413 w, 1386 sh, s, 1376 sh, s, 1370 sh, s, 1349 m, 1145 m, 1105 s см-1. ESI MC: 327 ([M+H]+). HR ESI MC: вычислено для C15H27O4N4Na 327,20268; найдено 327,20280.
Синтез 1-метилэтил L-лейцил-L-лейцил-6-(1λ5-диазинилиден)-5-оксо-L-норлейцината (11).
1-Метилэтил №[(9Н-флуорен-9-илметокси)карбонил]Ш-лейцилШ-лейцил-6-(1Х5-диазинилиден)-5оксоШ-норлейцинат (10)
Fmoc-NH-(L)-Leu-COOH (224 мг, 0,634 ммоль, 1,1 экв.) и тетрафторборат 2-бензотриазол-1-ил
- 34 034571 тетраметилурония (TBTU) (222 мг, 0,69 ммоль, 1,2 экв.) суспендировали в абсолютном дихлорметане (5 мл) и добавляли диизопропилэтиламин (301 мкл, 1,73 ммоль, 3 экв.). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин и затем раствор 9 (188 мг, 0,58 ммоль) в сухом дихлорметане (3 мл) добавляли при помощи шприца. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре в инертной атмосфере. Органический растворитель выпаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле (гексан:этилацетат, 1:1) с получением требуемого продукта 10 (188 мг, 49%) в виде желтоватого аморфного твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): 0,86-0,98 (12Н, м), 1,24 (3H, д, J=5,0), 1,25 (3H, д, J=5,0), 1,47-1,56 (2Н, м), 1,57-1,72 (4Н, м), l, 91-2,04 (1Н, м), 2,14-2,24 (1Н, м), 2,26-2,48 (2Н, м), 4,14-4,22 (1Н, м), 4,21 (1Н, т, J=6,8), 4,36-4,49 (4Н, м), 5,03 (1Н, гепт, J=6,3), 5,14 (1Н, д, J=7,5), 5,32 (1Н, с), 6,41 (1Н, д, J=7,7), 6,83 (1Н, д, J=6,8), 7,32 (2Н, тт, J=7,4, 1,3), 7,41 (2Н, тт, J=7,5, 1,5), 7,58 (2Н, д, J=7,5), 7,77 (2Н, тт, J=7,6, 1,1). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 21,82, 21,84, 21,96, 22,22, 22,91, 23,14, 24,83 (2С), 27,22, 36,46, 41,29, 41,39, 47,26, 51,94, 52,12, 53,74, 55,00, 67,22, 69,54, 120,12, 120,14, 125,11, 125,15, 127,22 (2С), 127,88, 127,89, 141,42 (2С), 143,77, 143,89, 156,42, 171,03, 171,81, 172,39, 193,97. Оптическое вращение: [a]22D-25,2° (с 0,385, CHCls). ИК (CHCl3): 3426 m, 3332 w, sh, 3116 w, 3068 w, 2961 s, 2873 m, 2110 s, 1726 vs, 1672 vs, 1640 sh, m, 1610 sh, w, 1579 sh, w, 1541 m, 1506 vs, 1479 m, 1468 m, 1387 s, 1371 sh, s, 1377 s, 1349 m, 1286 m, 1234 s, 1171 sh, m, 1146 m, 1105 s, 1046 m, 1023 sh, w, 824 w, 585 w, 488 w, sh, 426 w см-1. ESI MC: 684 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C36H47O7N5Na 684,33677; найдено 684,33607.
1-Метилэтил Г-лейцил-Г-лейцил-6-(1Х5-диазинилиден)-5-оксо-Ь-норлейцинат (11)
Соединение 10 (180 мг, 0,272 ммоль) растворяли в дихлорметане (4 мл). Добавляли пиперидин (67 мкл 0,68 ммоль, 2,5 экв.) и полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Органический растворитель выпаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле (хлороформ:метанол, 30:1) с получением требуемого продукта 11 (80 мг, 67%) в виде желтого аморфного твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): 0,88-0,98 (12Н, м), 1,24 (3H, д, J=5,2), 1,26 (3H, д, J=5,3), 1,37-1,47 (1Н, м), 1,50-1,79 (5Н, м), 1,91-2,07 (1Н, м), 2,08-2,28 (3H, м), 2,31-2,50 (2Н, м), 3,52 (1Н, дд, J=9,5, 3,8), 4,39 (1Н, тд, J=8,7, 5,3), 4,46 (1Н, тд, J=8,0, 4,6), 5,03 (1Н, гепт, J=6,2), 5,37 (1Н, с), 7,02 (1Н, д, J=7,4), 7,77 (1Н, д, J=8,1). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 21,46, 21,83, 21,86, 22,05, 23,09, 23,53, 24,95, 25,01, 27,13, 36,52, 40,89, 43,94, 51,55, 52,16, 53,61, 55,01, 69,49, 171,09, 172,36, 175,91, 194,21. Оптическое вращение: [a]22D-31,7° (с 0,439, CHCl3). ИК (CHCl3): 3415 w, 3343 w, br, 3117 w, 2984 m, 2961 s, 2936 m, 2873 m, 2855 w, 2110 vs, 1731 s, 1665 vs, br, 1653 vs, br, 1630 s, sh, 1509 s, 1468 m, 1454 w, 1450 w, 1440 w, 1386 s, 1377 s, 1370 s, 1349 m, 1201 m, 1183 w, 1146 m, 1105 s см-1. ESI MC: 440 ([M+H]+). HR ESI MC: вычислено для C21H38O5N5 440,28675; найдено 440,28674.
Схема 2
Синтез 1-метилэтил 6-(1Х5-диазинилиден)-№{[(5-метил-2-оксо-1,3-диоксол-4-ил)метокси]карбонил}-5-оксо-Ь-норлейцината (13).
2,5-Диоксопирролидин-1-ил-((5-метил-2-оксо-1,3-диоксол-4-ил)метилкарбонат (12)
4-(Гидроксиметил)-5-метил-1,3-диоксол-2-он (1,00 г, 7,89 ммоль, 1 экв.) растворяли в сухом Et2O (30 мл) и полученный раствор охлаждали до 0°C. При этой температуре добавляли пиридин (608 мг, 619 мкл, 7,69 ммоль, 1 экв.) и, наконец, по каплям добавляли раствор S-этилкарбонохлоридотионата (1,04 г,
- 35 034571
874 мкл, 8,38 ммоль, 1,09 экв.) в сухом Et2O (8 мл). Полученную смесь перемешивали в течение 1 ч при 0°C и в течение ночи при кт (18 ч). Et2O удаляли в вакууме и добавляли DCM (70 мл). Полученную реакционную смесь промывали насыщенным NaHCO3 (40 мл) и водой (3x40 мл), сушили над MgSO4 и DCM удаляли на роторном испарителе. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (гексан/EtOAc 5:1, Rf 0,24). Получали светло-желтую жидкость (1,29 г) с выходом 77%. S-Этил О-((5метил-2-оксо-1,3-диоксол-4-ил)метил)карбонотиоат (800 мг, 3,67 ммоль, 1 экв.) и N-гидроксисукцинимид (844 мг, 7,33 ммоль, 2 экв.) суспендировали в сухом DCM (8 мл). Полученный раствор охлаждали до 0°C и по каплям добавляли перуксусную кислоту (836 мг (100%), 2,32 г (36%), 11,00 ммоль, 3 экв., 36% раствор в уксусной кислоте) за 10 мин. Конечную смесь перемешивали в течение 30 мин при 0°C и 2 ч при кт. Добавляли DCM (20 мл) и органическую фазу промывали водой (2x35 мл) и насыщенным NaCl (35 мл). DCM выпаривали и продукт 12 получали в виде бесцветного твердого вещества (750 мг) с выходом 76%. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): 2,20 (3H, с), 2,86 (4Н, с), 5,05 (2Н, с). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 9,67, 25,58, 59,89, 131,61, 142,20, 151,65, 168,39. ИК (CHCl3): 1842 m, 1824 s, 1819 s, 1792 s, 1749 vs, 1431 w, 1386 w, 1309 m, 1195 s, 935 w, 900 w, 811 vw см'1. ESI MC: 294 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для CwH9O8NNa 294,02204; найдено 294,02213.
1-Метилэтил 6-(1Х5-диазинилиден)-П-{[(5-метил-2-оксо-1,3-диоксол-4-ил)метокси]карбонил}-5оксо-Г-норлейцинат (13)
Согласно схеме 2 соединение 12 (70 мг, 0,258 ммоль, 1,1 экв.) растворяли в абсолютном дихлорметане (2 мл). Полученный раствор охлаждали до 0°C и по каплям добавляли раствор соединения 3 (50 мг, 0,235 ммоль) в дихлорметане (1 мл). Реакционную смесь перемешивали 15 мин при 0°C, охлаждающую баню удаляли. Полученную реакционную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Органический растворитель выпаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле (хлороформ:ацетон, 10:1) с получением требуемого продукта 13 (72 мг, 83%) в виде желтого масла. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,24 (3H, д, J=3,4), 1,26 (3H, д, J=5,6), 1,94-2,04 (1Н, м), 2,13-2,24 (1Н, м), 2,16 (3H, с), 2,32-2,49 (2Н, м), 4,23-4,28 (1Н, м), 4,77-4,87 (2Н, м), 5,04 (1Н, гепт, J=6,3), 5,28 (3H, с), 5,66 (1Н, д, J=7,9). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 9,51, 21,82, 21,85, 27,32, 36,33, 53,86, 54,57, 69,79, 133,93, 140,07, 152,31, 155,25, 171,12, 193,50. Оптическое вращение: [a]22D+15,1° (с 0,417, CHCl3). ИК (CHCl3): 3424 w, 3012 w, 2984 w, 2935 w, 2111 s, 1836 sh, s, 1821 vs, 1736 sh, vs, 1725 vs, 1641 m, 1603 sh, w, 1509 s, 1391 sh, m, 1383 s, 1366 sh, m, 1105 s см-1. ESI MC: 392 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C15H19O8N3Na 392,10644; найдено 392,10650.
Синтез 1 -метилэтил 6-( 1 Х5-диазинилиден)-Л-( {1-[(2,2-диметилпропаноил)окси]этокси}карбонил)-5 оксо-Г-норлейцината (14a) и (14b)
-((((2,5-Диоксопирролидин-1-ил)окси)карбонил)окси)этилпивалат (LTP 174)
Данное соединение получали согласно литературной методике (WO 2008033572 А1).
-Метилэтил 6-( 1 Х5-диазинилиден)-Л-( {1-[(2,2-диметилпропаноил)окси]этокси}карбонил)-5 -оксоГ-норлейцинат (14a) и (14b)
Согласно схеме 2 соединение 14a и 14b получали из соединения 3 (200 мг, 0,938 ммоль), как описано для получения соединения 13, при использовании дихлорметана (8 мл) и 1-((((2,5-диоксопирролидин1-ил)окси)карбонил)окси)этилпивалата (297 мг, 1,032 ммоль, 1,1 экв.), с последующей хроматографией на силикагеле (хлороформ:ацетон, 20:1), с выходом двух диастереоизомеров 14a (90 мг, Rf=0,25) и 14b (50 мг, Rf=0,2) в виде желтых масел (39%). 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,18 (9Н, с), 1,25 (3H, д, J=3,0), 1,26 (3H, д, J=3,1), 1,46 (3H, д, J=5,4), 1,94-2,04 (1Н, м), 2,15-2,24 (1Н, м), 2,31-2,49 (2Н, м), 4,24-4,30 (1Н, м), 5,04 (1Н, гепт, J=6,2), 5,28 (1Н, с), 5,50 (1Н, д, J=7,9), 6,77 (1Н, кв, J=5,4). 13C ЯМР (101 МГц, CDCl3): 19,78, 21,83, 21,85, 27,00 (3C), 27,79, 36,56, 38,79, 53,58, 69,76, 89,70, 153,90, 171,16, 176,61, 193,59. ИК (CHCl3): 3427 w, 3116 w, 2984 m, 2960 sh, m, 2937 w, 2875 w, 2857 sh, w, 2110 s, 1745 sh, vs, 1730 sh, vs, 1641 m, 1508 s, 1480 m, 1467 sh, w, 1461 w, 1455 sh, w, 1392 sh, s, 1383 sh, s, 1377 s, 1371 sh, s, 1365 sh, s, 1350 m, 1027 m см-1. Оптическое вращение (14а): [a]22D+22,0° (с 0,191, CHCl3). Оптическое вращение (14b): [a]22D+7,6° (с 0,158, CHQ3). ESI MS (14а): 408 ([M+Na]+). ESI MS (14b): 408 ([M+Na]+). HR ESI MS (14a): вычислено для C17H27O7N3Na 408,17412; найдено 408,17425. HR ESI MS (14b): вычислено для
- 36 034571
C17H27O7N3Na 408,17412; найдено 408,17421. Диастереомер 14а использовали для всех биологических исследований.
Синтез изопропил 6-диазо-2-((( 1 -((3 -метилбутаноил)окси)этокси)карбонил)амино)-5-оксогексаноата (JAM0335).
1-((((2,5-Диоксопирролидин-1-ил)окси)карбонил)окси)этилизобутират (LTP 150)
Данное соединение получали согласно описанной в литературе методике (Magill et al., 1957).
Изопропил 6-диазо-2-(((1-((3-метилбутаноил)окси)этокси)карбонил)амино)-5-оксогексаноат (JAM0335)
Использовали способ получения, аналогично примененному выше для получения соединения 13. Согласно схеме 2 LTP150 (74 мг, 0,258 ммоль, 1,1 экв.), дихлорметан (2 мл). Соединение 3 (50 мг, 0,235 ммоль), дихлорметан (1 мл). Хроматография на силикагеле (хлороформ-ацетон 20:1). Продукт (31 мг, 66%) выделяли в виде желтого масла. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,48 (9Н, с), 2,54-2,64 (4Н, м), 5,11 (2Н, с), 5,48 (1Н, м), 6,07 (1Н, д, J=1,2), 7,30-7,40 (5Н, м). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 27,59, 28,19, 33,40, 66,39, 80,90, 124,87, 128,33, 128,35, 128,66, 136,10, 140,58, 166,01, 172,75. ESIMC: 313 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C17H22O4Na 313,14103; найдено 313,14103.
Синтез 1 -метилэтил 6-( 1 Х5-диазинилиден)^-({1- [(2-метилпропаноил)окси]этокси}карбонил)-5 оксо^-норлейцината (15).
-Метилэтил 6-( 1 Х5-диазинилиден)-№( {1- [(2-метилпропаноил)окси]этокси} карбонил)-5-оксо^норлейцинат (15).
Соединение 15 получали из соединения 3 (300 мг, 1,4 ммоль), как описано для получения соединения 13, с использованием 1-[[[(2,5-диоксопирролидин-1-ил)окси]карбонил]окси]этил 2-метилпропаноата (полученный по WO 2005066122, 423 мг, 1,55 ммоль, 1,1 экв.) и дихлорметана (4 мл), с последующей хроматографией на силикагеле (хлороформ:ацетон, 20:1). Желтое масло (426 мг, 82%). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,13-1,17 (6Н, м), 1,24-1,26 (6Н, м), 1,46 (3H, д, J=5,4), 1,89-2,03 (1Н, м), 2,15-2,26 (1Н, м), 2,31-2,58 (3H, м), 4,25-4,31 (1Н, м), 5,03 (1Н, гепт, J=6,3), 5,29 и 5,34 (1Н, 2х с), 5,48 и 5,52 (1Н, 2х д, J=8,2 и 7,9), 6,75-6,81 (1Н, м). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 18,78 (2С), 19,83, 21,81, 21,84, 27,81, 33,98, 36,40, 53,47, 54,92, 69,75, 89,53, 153,87, 171,12, 175,19, 193,60. ИК (CHCl3): 3427 w, 3116 w, 2983 m, 2940 w, 2879 w, 2110 s, 1746 vs, 1733 vs, 1641 m, 1509 s, 1449 m, 1387 s, 1349 s, 1341 m, 1321 m, 1030 s см'1. ESI MC: 394 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C^OyNaNa 394,15847; найдено 394,15859.
Схема 3
Синтез 4-ацетоксибензил 4-(4-диазо-3-оксобутил)-5-оксооксазолидине-3-карбоксилата (17). 3 -(3 -(((4-Ацетоксибензил)окси)карбонил)-5-оксооксазолидин-4-ил)пропионовая кислота (16)
Согласно схеме 3 раствор фосгена (15% об.) (2,12 г, 2,25 мл, 21,43 ммоль, 2,21 экв.) в PhCH3 (15 мл) охлаждали до 0°C. 4-(Гидроксиметил)фенилацетат (1,61 г, 9,70 ммоль, 1 экв.) в PhCH3 (15 мл) по каплям добавляли около 15 мин. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч при 0°C и затем при комнатной температуре в течение ночи (20 ч). Растворитель выпаривали и неочищенный продукт 4{[(хлоркарбонил)окси]метил}фенилацетат (LTP 086) использовали на следующей стадии без очистки. Lглутаминовую кислоту (951 мг, 6,46 ммоль, 1 экв.) суспендировали в воде (8 мл) и несколькими порциями добавляли NaHCO3 (1,37 г, 16,30 ммоль, 2,52 экв.). Спустя 15 мин перемешивания, неочищенный LTP 086 (2,2 г, 9,70 ммоль, 1 экв.) добавляли при помощи шприца около 2 мин при комнатной температуре.
- 37 034571
Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи (20 ч). 1 М HCl добавляли к полученной смеси до рН 1 и водную фазу затем экстрагировали EtOAc (10x15 мл). Объединенные органические фракции промывали насыщенным NaCl (150 мл), сушили над MgSO4 и растворитель выпаривали. Неочищенный продукт №[[[4-(ацетилокси)фенил]метокси]карбонил]-Е-глутаминовой кислоты (LTP 087) (2,2 г, 6,48 ммоль, 1 экв.) использовали на следующей стадии без очистки. LTP 087 (2,2 г, 6,48 ммоль, 1 экв.) растворяли в PhCH3 (45 мл). Добавляли параформальдегид (389 мг, 12,97 ммоль, 2 экв.) и п-толуолсульфоновую кислоту (PTSA) (123 мг, 0,648 ммоль, 0,1 экв.) и полученную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 1 ч. Толуол выпаривали и неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (CHCl3/МеОН 20:1). Требуемый продукт 16 получали в виде бесцветного густого масла (280 мг) с выходом 12% за три стадии.
4-Ацетоксибензил 4-(4-диазо-3-оксобутил)-5-оксооксазолидин-3-карбоксилат (17) о
Соединение LTP088 (257 мг, 0,732 ммоль) растворяли в абсолютном ТГФ (3 мл), охлаждали до -15°C и по каплям добавляли триэтиламин (153 мкл, 1,097 ммоль, 1,5 экв.). Затем добавляли этилхлорформиат и полученную реакционную смесь перемешивали при -15°C в течение 1,5 ч. Затем добавляли раствор диазометана и полученную реакционную смесь перемешивали еще в течение 30 мин при -15°C, затем охлаждающую баню удаляли. Полученную реакционную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Органический растворитель выпаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле (гексан-этилацетат 1:1) с получением требуемого продукта (220 мг, 66%) в виде желтого аморфного твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): 2,14 (2Н, м), 2,29 (3H, с), 2,32-2,56 (2Н, м), 4,34 (1Н, т, J=6,2), 5,11-5,25 (4Н, м), 5,51 (1Н, с), 7,07-7,10 (2Н, м), 7,37-7,40 (2Н, м). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 21,19, 25,80, 35,36, 54,12, 67,49, 77,89, 122,06 (2С), 129,96 (2С), 130,02, 150,97, 152,98, 169,49, 171,81, 192,64. ИК (CHCl3): 3116 w, 2964 vw, 2922 w, 2111 s, 1802 s, 1768 m, sh, 1756 s, 1716 vs, 1642 m, 1610 w, 1597 vw, sh, 1510 m, 1423 m, 1410 s, 1383 m, 1371 s, 1355 s, 1197 vs, 1167 s, 1128 m, 1106 w, 1019 m, 1013 m, 914 m, 850 w, 596 w, 492 w, см'1. ESI MC: 398 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для
C17H17O7N3Na 398,09587; найдено 398,09596.
Схема 4
Синтез этил 2-(2-аминопропанамидо)-6-диазо-5-оксогексаноата (22).
-(9Н-Флуорен-9-илметил)-2-этил-5-оксопирролидин-1,2-дикарбоксилат (18)
Согласно схеме 4, 5-оксо^-пролинэтиловый эфир (4,00 г, 25,45 ммоль, 1 экв.) растворяли в абсолютном ТГФ (120 мл) в инертной атмосфере и охлаждали до -78°C. По каплям добавляли раствор
- 38 034571
LiHMDS (1 М в ТГФ, 24,2 мл, 24,18 ммоль, 0,95 экв.) и полученный раствор перемешивали при этой же температуре в течение 20 мин. Образовавшуюся в результате желтую смесь переносили через канюлю в раствор Fmoc хлорида (32,9 г, 127,3 ммоль, 5 экв.) в абсолютном ТГФ (90 мл) при -78°C. Полученную реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 2 ч и при кт в течение ночи (18 ч). По истечении этого периода реакцию гасили насыщенным NH4Q (34 мл) и водой (18 мл). Водную фазу экстрагировали EtOAc (60 мл), комбинированные органические части промывали насыщенным раствором соли (2x100 мл) и сушили над безводным MgSO4. Органический растворитель выпаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле (гексан:EtOAc 3:1 до 1:1) и, наконец, ЖХ с обращенной фазой (МеОН:Н2О, 2:1 до 100% МеОН), с получением требуемого продукта 18 (8,40 г, 87%) в виде бесцветного твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,26 (3H, д, J=7,1), 2,12 (1Н, ддт, J=13,4, 9,4, 2,9), 2,40 (1Н, ддт, J=13,4, 10,8, 9,3), 2,57 (1Н, ддд, J=17,5, 9,2, 3,1), 2,72 (1Н, ддд, J=17,5, 10,7, 9,4), 4,20 (2Н, кв, J=7,1), 4,30 (1Н, т, J=7,3), 4,44 (1Н, дд, J=10,5, 7,4), 4,57 (1Н, дд, J=10,6, 7,3), 4,65 (1Н, дд, J=9,4, 2,5), 7,33 (2Н, тт, J=7,4, 1,1), 7,41 (2Н, тдд, J=6,9, 1,3, 0,6), 7,71 (1Н, дд, J=7,5, 1,0), 7,75 (1Н, дд, J=7,5, 1,0), 7,77 (2H, дд, J=7,8, 1,0). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 14,14, 21,96, 31,21, 46,62, 58,76, 61,92, 69,03, 119,99, 120,01, 125,30, 125,44, 127,26 (2С), 127,91 (2С), 141,27, 141,29, 143,35, 143,40, 151,44, 170,80, 172,99. Оптическое вращение: [a]22D-17,2° (с 0,285, CHCl3). ИК (CHCl3): 3068 m, 2985 m, 2941 w, 2898 w, 2875 w, 1797 vs, 1745 vs, br, 1723 vs, 1609 w, 1580 vw, 1478 m, 1463 m, 1452 s, 1400 m, sh, 1385 s, 1197 vs, 1116 vw, sh, 1104 m, 1097 w, sh, 1033 s, 621 m, 426 w, см-1. ESI MC: 402 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C22H21O5NNa 402,1312; найдено 402,1313.
Этил 2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-6-диазо-5-оксогексаноат (19)
о
Раствор триметилсилилдиазометана (2 М в диэтиловом эфире, 7,9 мл, 15,81 ммоль, 1,2 экв.) растворяли в абсолютном ТГФ (70 мл) в атмосфере аргона и охлаждали до -98°C. По каплям добавляли раствор н-буттиллития (2,5 М в гексанах, 6,5 мл, 16,21 ммоль, 1,23 экв.), и полученный раствор перемешивали при -98°C в течение 30 мин. Полученную в результате смесь переносили через канюлю в раствор соединения 18 (5,00 г, 13,18 ммоль, 1 экв.) в абсолютном ТГФ (120 мл) при -116°C. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин при этой температуре и затем медленно нагревали до -78°C и гасили насыщенным NH4Cl (150 мл). Водную фазу экстрагировали этилацетатом (3x50 мл), объединенные органические слои промывали насыщенным раствором соли (200 мл) и сушили над безводным MgSO4. Органический растворитель выпаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле (CHCl3:ацетон) с получением требуемого продукта 19 (4,42 г, 80%) в виде желтоватого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,29 (3H, т, J=7,1), 1,93-2,10 (1Н, м), 2,17-2,29 (1Н, м), 2,33-2,53 (2Н, м), 4,22 (3H, т, J=7,1), 4,32-4,43 (3H, м), 5,27 (1Н, шир.с), 5,56 (1Н, д, J=8,1), 7,32 (2Н, тт, J=7,4, 1,3), 7,41 (2Н, т, J=7,5), 7,60 (2Н, т, J=6,6), 7,77 (2Н, дд, J=7,6, 1,0). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 14,30, 27,63, 36,56, 47,26, 53,63, 54,96, 61,89, 67,17, 120,11, 120,14, 125,22, 125,24, 127,20 (2С), 127,86 (2С), 141,40, 141,43, 143,78, 143,99, 156,18, 172,03, 193,65. Оптическое вращение: [a]22D+10,6° (с 0,265, CHCl3). ИК (CHCl3): 3428 w, 3116 w, 3068 w, 2985 w, 2942 w, 2907 vw, 2110 s, 1740 s, sh, 1721 vs, 1642 m, 1510 s, 1478 w, 1465 w, 1451 m, 1381 s, 1105 w, 1052 m, 1033 m, 622 w, 426 w см-1. ESI MC: 444 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C23H23O5N3Na 444,15299; найдено 444,15292.
Этил 2-амино-6-диазо-5-оксогексаноат (20)
О
Соединение 20 получали из соединения 19 (100 мг, 0,237 ммоль), как описано для получения соединения 3, при использовании дихлорметана (10 мл) и пиперидина (58 мкл 0,59 ммоль, 2,5 экв.), с последующей хроматографией на силикагеле (хлороформ:метанол, 30:1). Желтое масло (31 мг, 66%). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,27 (3H, т, J=7,1), 1,55 (2Н, шир.с), 1,78-1,88 (1Н, м), 2,06-2,17 (1Н, м), 2,40-2,54 (2Н, шир.м), 3,44 (1Н, дд, J=8,3, 5,1), 4,17 (2Н, кв, J=7,1), 5,27 (1Н, с). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 14,24, 29,56, 36,86, 53,77, 54,56, 61,05, 175,58, 194,15. Оптическое вращение: [a]22D+° (с 0,33, CH2Cl2). ИК (CHCl3): 3410 w, vbr, 3327, vw, vbr, 2986 m, 2941 w, 2910 w, 2874 w, 2110 s, 1739 vs, 1641 m, 1605 m, sh, 1586 m, 1552 w, 1513 w, br, 1476 w, 1463 m, 1446 m, 1395 m, sh, 1377 s, 1200 s, 1115 m, 1096 m см-1. ESI MC: 182 ([M-H2O+H]+). HR ESI MC: вычислено для C12H12N3O2 182,0930; найдено 182,0931.
Этил 2-(2-((((9Н-Флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)пропанамидо)-6-диазо-5-оксогексаноат (21)
- 39 034571
Fmoc-NH-(L)-Ala-COOH (4 83 мг, 1,55 ммоль, 1,1 экв.) и HBTU (642 мг, 1,69 ммоль, 1,2 экв.) суспендировали в сухом DCM (10 мл). Добавляли DIEA (547 мг, 737 мкл, 4,32 ммоль, 3 экв.) и затем раствор соединения 20 (281 мг, 1,41 ммоль, 1 экв.) в сухом DCM (3 мл) при помощи шприца. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при кт в инертной атмосфере. Добавляли DCM (15 мл), и органическую фазу промывали насыщенным NaHCO3 (25 мл), 1 М HCl (25 мл), водой (2x25 мл) и насыщенным NaCl (25 мл), сушили над MgSO4. DCM выпаривали. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (DCM:EtOAc, 1:1, Rf 0,40), с получением соединения 21 в виде светло-желтого твердого вещества (452 мг, 65%). 1H ЯМР (400 МГц, CDCh): 1,28 (3H, т, J=7,5), 1,42 (3H, д, J=7,1), 1,982,08 (1Н, м), 2,16-2,28 (1Н, м), 2,30-2,48 (2Н, м), 4,15-4,30 (4Н, м), 4,39 (2Н, д, J=7,3), 4,53 (1Н, тд, J=8,0, 4,5), 5,21 (1Н, с), 5,38 (1Н, д, J=7,4), 6,81 (1Н, д, J=7,8), 7,32 (2Н, т, J=7,5), 7,41 (2Н, т, J=7,5), 7,60 (2Н, д, J=7,5), 7,77 (2Н, д, J=7,5). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 14,25, 18,86, 27,00, 36,48, 38,74, 47,22, 50,65, 55,11, 61,84, 67,24, 120,11, 120,13, 125,20, 125,24, 127,22 (2С), 127,87 (2С), 141,40 (2С), 143,92 (2С), 156,01, 171,58, 172,47, 193,99. Оптическое вращение: [a]22D+0,4° (с 0,225, CHCl3). ИК (CHCl3): 3424 m, 3330 w, br, 3116 vw, 3068 vw, 2986 m, 2941 w, 2908 w, 2875 vw, 2110 s, 1731 vs, 1720 vs, sh, 1682 vs, 1639 m, 1585 vw, 1503 vs, 1478 m, 1451 s, 1377 s, 1233 s, 1116 m, 1105 m, sh, 1095 w, 1032 m, 622 w, 424 w, см-1. ESI MC: 515 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C26H28O6N4Na 515,19011; найдено 515,19044.
Этил 2-(2-аминопропанамидо)-6-диазо-5-оксогексаноат (22)
Соединение 21 (225 мг, 0,457 ммоль, 1 экв.) растворяли в сухом DCM (4 мл). Диэтиламин (167 мг, 236 мкл, 2,28 ммоль, 5 экв.) добавляли при помощи шприца. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 6 ч при кт в инертной атмосфере. DCM выпаривали. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (CHCl3:МеОН, 15:1, Rf 0,07), с получением соединения 22 в виде светложелтого твердого вещества (101 мг, 82%). 1H ЯМР (400 МГц, CDCK): 1,22 (3H, т, J=7,1), 1,28 (3H, д, J=7,0), 1,89-1,94 (2Н, м), 1,94-2,01 (1Н, м), 2,10-2,21 (1Н, м), 2,27-2,43 (2Н, м), 3,47 (1Н, кв, J=7,0), 4,13 (2Н, кв, J=7,1), 4,47 (1Н, тд, J=8,4, 4,9), 5,32 (1Н, с), 7,81 (1Н, д, J=8,4). 13C ЯМР (101 МГц, CDCU): 14,28, 18,56, 27,44, 36,80, 51,63, 55,05, 58,55, 61,74, 171,90, 175,25, 193,93. Оптическое вращение: [α]%-31,1° (с 0,260, CHClj+ДМФА). ИК (CHClj): 3393 w, 3336 vw, br, 3211 vw, br, 3116 vw, 2958 m, 2927 s, 2871 m, 2856 m, 2110 s, 1736 m, 1684 vs, 1639 m, 1517 w, 1379 s, 1115 vw, sh, 1097 w, ем'1. ESI MC: 271 ([M+H]+). HR ESI MC: вычислено для C11H19O4N4 271,14008; найдено 271,14024.
Синтез 2-(2-аминопропанамидо)-6-диазо-5-оксогексановой кислоты (23).
2-(2-Аминопропанамидо)-6-диазо-5-оксогексановая кислота (23)
о
Согласно схеме 4 соединение 22 (225 мг, 0,457 ммоль, 1 экв.) суспендировали в EtOH (3 мл) и ТГФ (3 мл). Добавляли 1 М раствор NaOH (16 мг, 397 мкл, 0,95 экв.) и полученную смесь перемешивали в течение 15 мин. Реакцию гасили 1 М муравьиной кислотой (397 мкл, 0,95 экв.) и после 10-минутного перемешивания полученную смесь упаривали досуха. Неочищенный продукт очищали препаративной ВЭЖХ с буферной смесью Et3N/CH3COOH буфером. Требуемый продукт 23 получали в виде светлооранжевого твердого вещества (50 мг) с выходом 52%. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,45 (3H, д, J=7,0), 2,06-2,22 (2Н, м), 2,45-2,56 (2Н, м), 4,01-4,13 (2Н, м), 5,86 (1Н, шир.с).
Синтез этил 2-(2-амино-4-метилпентанамидо)-6-диазо-5-оксогексаноата (25).
Этил оксогексаноат (24)
2-(2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-4-метилпентанамидо)-6-диазо-5-
Согласно схеме 4 Fmoc-NH-(L)-Leu-COOH (874 мг, 2,47 ммоль, 1,1 экв.) и HBTU (1023 мг, 2,70 ммоль, 1,2 экв.) суспендировали в сухом DCM (15 мл). DIEA (872 мг, 1,18 мл, 6,75 ммоль, 3 экв.) и затем раствор 20 (448 мг, 2,25 ммоль, 1 экв.) в сухом DCM (5 мл) добавляли при помощи шприца. Полученную
- 40 034571 реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при кт в инертной атмосфере. Добавляли DCM (20 мл), и органическую фазу промывали насыщенным NaHCO3 (40 мл), 1 М HCl (40 мл), водой (2x40 мл) и насыщенным NaCl (40 мл), сушили над MgSO4. DCM выпаривали. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (DCM:EtOAc, 4:1, Rf 0,27) с получением соединения 24 в виде светло-желтого твердого вещества (949 мг, 79%). 1H ЯМР (400 МГц, CDCU): 0,95 (6Н, д, J=5,9), 1,26 (3H, т, J=7,5), 1,501,59 (1Н, м), 1,62-1,75 (2Н, м), 1,95-2,05 (1Н, м), 2,17-2,27 (1Н, м), 2,29-2,45 (2Н, м), 4,14-4,25 (4Н, м), 4,34-4,45 (2Н, м), 4,49-4,58 (1Н, м), 5,19 (1Н, с), 5,27 (1Н, д, J=8,4), 6,80 (1Н, д, J=7,6), 7,31 (2Н, т, J=7,4), 7,40 (2Н, т, J=7,8), 7,59 (2Н, д, J=7,5), 7,76 (2Н, д, J=7,6). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 14,12, 22,03, 22,92, 24,66, 26,96, 36,33, 41,65, 47,14, 51,94, 53,56, 55,00, 61,73, 67,09, 120,00, 120,03, 125,05, 125,13, 127,12 (2С), 127,76, 127,77, 141,29, 143,64, 143,75, 143,79, 156,15, 171,46, 172,26, 193,81. Оптическое вращение: [a]22D-9,7° (с 0,109, ДМФА). ИК (CHCl3): 3304 m, sh, 3067 w, 3018 w, 2105 s, 1730 s, 1704 s, 1659 vs, 1639 sh, m, 1612 sh, w, 1580 sh, w, 1539 s, 1478 m, 1451 m, 1467 m, 1386 sh, s, 1375 s, 1244 s, 1172 sh, m, 1145 m, 1106 s, 834 sh, w, 759 m, 740 s, 621 m, 427 см-1. ESI MC: 557 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C29H34O6N4Na 557,23706; найдено 557,23707.
Этил 2-(2-амино-4-метилпентанамидо)-6-диазо-5-оксогексаноат (25)
Согласно схеме 4 соединение 24 (945 мг, 1,77 ммоль, 1 экв.) растворяли в сухом DCM (9 мл). Диэтиламин (646 мг, 914 мкл, 8,84 ммоль, 5 экв.) добавляли при помощи шприца. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч при кт в инертной атмосфере. DCM выпаривали. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (CHCl3:MeOH, 15:1, Rf 0,38) с получением соединения 25 в виде бесцветного твердого вещества (500 мг, 91%). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): 0,94 (6Н, дд, J=14,0, 6,3),
1,27 (3H, т, J=7,1), 1,28-1,37 (1Н, м), 1,45 (2Н, с), 1,57-1,83 (2Н, м), 1,92-2,08 (1Н, м), 2,16-2,26 (1Н, м), 2,26-2,49 (2Н, м), 3,39 (1Н, дд, J=10,0, 3,9), 4,19 (2Н, дкв, J=7,1, 1,4), 4,54 (1Н, дт, J=8,5, 4,8), 5,30 (1Н, с), 7,85 (1Н, д, J=8,3). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 14,25, 21,40, 23,54, 24,97, 27,71, 36,82, 44,29, 51,48, 53,60, 54,86, 61,65, 171,99, 175,99, 193,67. Оптическое вращение: [a]22D-54,8° (с 0,323, CHCl3). ИК (CHCl3): 3412 w, 3343 w, 2110 vs, 1731 s, 1663 s, 1643 sh, s, 1603 sh, w, 1510 s, 1413 w, 1386 sh, s, 1376 sh, s, 1370 sh, s, 1349 m, 1145 m, 1105 s см-1. ESI MC: 335 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C14H25O4N4 313,18703; найдено 313,18712.
Синтез триэтиламмониевой соли 2-(2-амино-4-метилпентанамидо)-6-диазо-5-оксогексановой кислоты (26).
Триэтиламмониевая соль 2-(2-амино-4-метилпентанамидо)-6-диазо-5-оксогексановой кислоты (26)
Соединение 25 (134 мг, 0,429 ммоль, 1 экв.) суспендировали в EtOH (3 мл) и ТГФ (3 мл). Добавляли 1 М раствор NaOH (16 мг, 408 мкл, 0,95 экв.) и полученную смесь перемешивали в течение 15 мин. Реакцию гасили 1 М муравьиной кислотой (408 мкл, 0,95 экв.) и после 10-минутного перемешивания полученную смесь упаривали досуха. Неочищенный продукт очищали препаративной ВЭЖХ с буферной смесью Et3N/CH3COOH. Требуемый продукт 26 получали в виде светло-оранжевого твердого вещества (46 мг) с выходом 40%. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,10 (6Н, д, J=6,4), 1,50-1,61 (1Н, м), 1,63-1,83 (2Н, м), 1,96-2,06 (1Н, м), 2,11-2,23 (1Н, м), 2,33-2,48 (1Н, м), 3,67 (1Н, дд, J=8,6, 5,6), 4,27 (1Н, дд, J=7,0, 5,1), 5,51 (1Н, шир.с).
Синтез этил 2-(2-(2-амино-4-метилпентанамидо)-4-метилпентанамидо)-6-диазо-5-оксогексаноата (28).
Этил 11-(4-диазо-3-оксобутил)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-5,8-диизобутил-3,6,9-триоксо-2-окса-4,7,10триазадодекан-12-оат (27)
Fmoc.
Согласно схеме 4 Fmoc-NH-(L)-Leu-COOH (125 мг, 0,352 ммоль, 1,1 экв.) и HBTU (146 мг, 0,384 ммоль, 1,2 экв.) суспендировали в сухом DCM (3 мл). DIEA (124 мг, 167 мкл, 0,960 ммоль, 3 экв.) и затем раствор соединения 25 (100 мг, 0,320 ммоль, 1 экв.) в сухом DCM (3 мл) добавляли при помощи шприца. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч при кт в инертной атмосфере. Добавляли
- 41 034571
DCM (10 мл) и органическую фазу промывали насыщенным NaHCO3 (20 мл), 1 М HCl (20 мл), водой (2x20 мл) и насыщенным NaCl (20 мл), сушили над MgSO4. DCM выпаривали. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (DCM:EtOAc, 2:1, Rf 0,35) с получением соединения 27 в виде бесцветного твердого вещества (145 мг, 79%). 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): 0,92 (6Н, д, J=6,5), 0,95 (6Н, д, J=6,1), 1,28 (3H, т, J=7,1), 1,49-1,59 (2Н, м), 1,60-1,74 (4Н, м), 1,95-2,06 (1Н, м), 2,18-2,28 (1Н, м), 2,30-2,50 (2Н, м), 4,17-4,27 (4Н, м), 4,32-4,64 (4Н, м), 5,29 (1Н, д, J=8,0), 5,35 (1Н, с), 6,54 (1Н, д, J=8,0), 7,00 (1Н, д, J=7,7), 7,31 (2Н, т, J=7,5, 2,6), 7,40 (2Н, тд, J=7,3, 2,2), 7,57 (2Н, д, J=7,5), 7,76 (2Н, д, J=7,5). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 14,26, 21,96, 22,17, 22,94, 23,15, 24,85, 27,12, 29,84, 36,48, 38,28, 41,17, 41,33, 47,27, 51,94, 52,03, 61,79, 67,22, 120,14, 120,16, 125,10, 125,14, 127,23 (2С), 127,90, 127,91, 141,43, 143,75, 143,89, 156,43, 171,54, 171,81, 172,39, 194,00. Оптическое вращение: [a]22D-34,5° (с 0,109, ДМФА). ИК (CHCl3): 3426 m, 3317 w, br, 3116 w, 3068 w, 2961 s, 2873 m, 2109 s, 1795 w, 1731 vs, 1719 vs, 1667 vs, br, 1635 s, sh, 1508 vs, 1478 m, 1468 m, 1451 s, 1385 s, 1375 s, 1371 s, 1233 s, 1045 m, 1033 m, 622 w, 426 w, см-1. ESI MC: 670 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C35H45O7N5Na 670,32112; найдено 670,32122.
Этил 2-(2-(2-амино-4-метилпентанамидо)-4-метилпентанамидо)-6-диазо-5-оксогексаноат (28)
Соединение 27 (136 мг, 0,210 ммоль, 1 экв.) растворяли в сухом DCM (3 мл). Диэтиламин (77 мг, 109 мкл, 1,05 ммоль, 5 экв.) добавляли при помощи шприца. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 8 ч при кт в инертной атмосфере. DCM выпаривали. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (CHCl3/МеОН 20:1, Rf 0,30) с получением соединения 28 в виде светложелтого масла (77 мг, 87%). 1H ЯМР (400 МГц, CDCE): 0,92 (6Н, т, J=6,0), 0,95 (6Н, т, J=5,9), 1,26 (3H, т, J=7,1), 1,34-1,41 (1Н, м), 1,52-1,61 (1Н, м), 1,60-1,79 (4Н, м), 1,95-2,03 (1Н, м), 2,15-2,25 (1Н, м), 2,30-2,52 (2Н, м), 3,48 (1Н, дд, J=9,5, 4,1), 3,96 (2Н, с), 4,18 (2Н, кв, J=7,1), 4,41 (1Н, тд, J=8,8, 5,4), 4,49 (1Н, тд, J=8,0, 4,6), 5,36 (1Н, с), 7,08-7,17 (1Н, м), 7,74 (1Н, д, J=8,2). 13C ЯМР (101 МГц, CDCl3): 14,25, 21,51, 22,02, 23,06, 23,45, 24,91, 24,97, 27,03, 36,49, 40,77, 43,77, 51,63, 52,04, 53,54, 55,13, 61,76, 171,60, 172,44, 175,74, 194,29. Оптическое вращение: [a]22D-25,8° (с 0,124, ДМФА). ИК (KBr): 3413 s, vbr, 3314 s, vbr, 3072 m, br, 2105 s, 1739 s, 1655 vs, br, 1539 s, br, 1468 s, 1386 s, 1370 s, 1208 s, br, 1029 s, см-1. ESI MC: 426 ([M+H]+).
HR ESI MC: вычислено для C20H36O5N5 426,27110; найдено 426,27124.
Схема 5
О О
nh2
NaOH кт, ТГФ
Синтез триэтиламмониевой соли 6-диазо-2-(((1-(изобутирилокси)этокси)карбонил)амино)-5оксогексановой кислоты (29).
Триэтиламмониевая соль 6-диазо-2-(((1-(изобутирилокси)этокси)карбонил)амино)-5-оксогексановой кислоты (29)
Согласно схеме 5 соединение 20 (121 мг, 0,607 ммоль, 1 экв.) растворяли в ТГФ (5 мл). Добавляли 1 М раствор NaOH (24 мг, 607 мкл, 1 экв.) и полученную смесь перемешивали в течение 1 ч. Добавляли
- 42 034571 воду (2 мл) и 1-[[[(2,5-диоксопирролидин-1-ил)окси]карбонил]окси]этил 2-метилпропаноат (LTP 150) (183 мг, 0,668 ммоль, 1,1 экв.) в ТГФ (3 мл). Полученный раствор перемешивали в течение следующих 2 ч при кт. Реакцию гасили 1 М муравьиной кислотой (607 мкл, 1 экв.) и после 5-минутного перемешивания полученную смесь упаривали досуха. Неочищенный продукт очищали препаративной ВЭЖХ с буферной смесью Et3N/CH3COOH, что давало соединение 29 в виде светло-оранжевого твердого вещества (106 мг, 53%). 1H ЯМР (400 МГц, CDCh): 1,11 (6Н, д, J=6,4), 1,35-1,46 (3H, м), 1,84-2,32 (2Н, м), 2,36-2,75 (2Н, м), 4,15-4,48 (1Н, м), 4,60-4,97 (1Н, м), 5,70-6,12 (1Н, м), 6,67-6,82 (1Н, м), 8,40 (1Н, шир.с).
Синтез триэтиламмониевой соли 6-диазо-2-(((1-(пивалоилокси)этокси)карбонил)амино)-5оксогексановой кислоты (30).
Триэтиламмониевая соль 6-диазо-2-(((1-(пивалоилокси)этокси)карбонил)амино)-5-оксогексановой кислоты (30)
Согласно схеме 5 соединение 20 (89 мг, 0,446 ммоль, 1 экв.) растворяли в ТГФ (3 мл). Добавляли 1 М раствор NaOH (18 мг, 446 мкл, 1 экв.) и полученную смесь перемешивали в течение 1 ч. Добавляли воду (1 мл) и 1-((((2,5-диоксопирролидин-1-ил)окси)карбонил)окси)этилпивалат (LTP174) (141 мг, 0,490 ммоль, 1,1 экв.) в ТГФ (1,5 мл). Полученный раствор перемешивали в течение следующих 2 ч при кт. Реакцию гасили 1 М муравьиной кислотой (446 мкл, 1 экв.) и после 5-минутного перемешивания полученную смесь упаривали досуха. Неочищенный продукт очищали препаративной ВЭЖХ с буферной смесью Et3N/CH3COOH, что давало соединение 30 в виде светло-оранжевого твердого вещества (64 мг) с выходом 42%. 1H ЯМР (400 МГц, CDCb): 1,18 (9Н, с), 1,36-1,59 (3H, м), 1,94-2,36 (2Н, м), 2,40-2,77 (2Н, м), 4,18-4,48 (1Н, м), 4,53-4,97 (1Н, м), 5,45-6,07 (1Н, м), 6,68-6,84 (1Н, м), 8,87 (1Н, шир.с).
Синтез этил 6-диазо-2-(((1-(изобутирилокси)этокси)карбонил)амино)-5-оксогексаноат (31).
Этил 6-диазо-2-(((1-(изобутирилокси)этокси)карбонил)амино)-5-оксогексаноат (31)
1-[[[(2,5-Диоксопирролидин-1-ил)окси]карбонил]окси]этил 2-метилпропаноат (226 мг, 0,828 ммоль, 1,1 экв.) суспендировали в сухом DCM (6 мл). Полученную реакционную смесь охлаждали до 0°C и по каплям добавляли соединение 20 (150 мг, 0,753 ммоль, 1 экв.) в сухом DCM (3 мл). Полученную смесь перемешивали в течение 15 мин при 0°C и затем 1 ч при кт. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (EtOAc/гексан 1:10 до 1:2) и требуемое соединение 31 получали с выходом 56% (150 мг) в виде желтого масла (смесь двух стереоизомеров 1:1). 1Н ЯМР (4 00 МГц, CDCl3, стереоизомер 1): 1,14 (6Н, д, J=6,7), 1,27 (3H, т, J=7,1), 1,46 (3H, д, J=5,4), 1,88-2,09 (1Н, м), 2,16-2,29 (1Н, м), 2,34-2,47 (2Н, м),
2,51 (1Н, сеп, J=7,1), 4,19 (2Н, кв, J=7,1), 4,27-4,36 (1Н, м), 5,29 (1Н, шир.с), 5,49 (1Н, д, J=8,3), 6,78 (1Н, кв, J=7,7). 13C ЯМР (101 МГц, CDCl3, стереоизомер 1): 14,26, 18,78, 18,80, 19,84, 27,73, 33,99, 36,35, 53,39, 54,92, 61,92, 89,54, 153,87, 171,62, 175,18, 193,54. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3, стереоизомер 2): 1,16 (6Н, д, J=6,7), 1,27 (3H, т, J=7,1), 1,46 (3H, д, J=5,4), 1,88-2,09 (1Н, м), 2,16-2,29 (1Н, м), 2,34-2,47 (2Н, м), 2,51 (1Н, сеп, J=7,1), 4,20 (2Н, кв, J=7,1), 4,27-4,36 (1Н, м), 5,29 (1Н, шир.с), 5,53 (1Н, д, J=8,1), 6,80 (1Н, кв, J=7,7). 13C ЯМР (101 МГц, CDCl3, стереоизомер 2): 14,26, 18,80, 18,85, 19,87, 27,84, 33,99, 36,47, 53,50, 54,97, 61,92, 89,72, 153,95, 171,79, 175,30, 193,77. Оптическое вращение: [α]4+19,8° (с 0,177, CHCl3). ИК (CHCl3): 3428 w, 3116 w, 2981 m, 2940 w, 2877 w, 2856 w, 2110 vs, 1741 vs, br, 1641 m, 1510 s, 1469 m, 1388 s, 1377 s, 1232 m, 1199 m, см-1. ESI MC: 380 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C15H24O7N3 358,16088; найдено 358,16118.
Схема 6
Реагенты и соединения: (a) POM-NHS, DCM, 40% (b) Ме-РОМ-NHS, DCM, 68%.
Синтез этил 6-диазо-2-(((1-(пивалоилокси)этокси)карбонил)амино)-5-оксогексаноата (32). Этил 6-диазо-2-(((1-(пивалоилокси)этокси)карбонил)амино)-5-оксогексаноат (32)
- 43 034571
Согласно схеме 6 1-((((2,5-диоксопирролидин-1-ил)окси)карбонил)окси)этилпивалат (238 мг, 0,828 ммоль, 1,1 экв.) суспендировали в сухом DCM (6 мл). Полученную реакционную смесь охлаждали до 0°C, и по каплям добавляли соединение 20 (150 мг, 0,753 ммоль, 1 экв.) в сухом DCM (3 мл). Полученную смесь перемешивали в течение 15 мин при 0°C и затем 1 ч при кт. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (EtOAc/гексан 1:10 до 1:2) и требуемое соединение 32 получали с выходом 68% (190 мг) в виде желтого масла (смесь двух стереоизомеров 1:1). 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3, стереоизомер 1): 1,16 (9Н, с), 1,26 (3H, т, J=7,1), 1,43 (3H, с), 1,88-2,05 (1Н, м), 2,14-2,26 (1Н, м), 2,30-2,50 (2Н, м), 4,18 (2Н, кв, J=7,1), 4,24-4,34 (1Н, м), 5,31 (1Н, шир.с), 5,51 (1Н, д, J=7,7), 6,74 (1Н, кв, J=7,3). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3, стереоизомер 1): 14,23, 19,72, 26,95, 27,57, 36,31, 38,74, 53,33, 54,89, 61,85, 89,66, 153,87, 171,61, 176,56, 193,56. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3, стереоизомер 2): 1,18 (9Н, с), 1,26 (3H, т, J=7,1), 1,45 (3H, с), 1,88-2,05 (1Н, м), 2,14-2,26 (1Н, м), 2,30-2,50 (2Н, м), 4,18 (2Н, кв, J=7,1), 4,24-4,34 (1Н, м), 5,33 (1Н, шир.с), 5,55 (1Н, д, J=7,9), 6,76 (1Н, кв, J=7,3). 13C ЯМР (101 МГц, CDCl3, стереоизомер 2): 14,24, 19,74, 26,97, 27,80, 36,46, 38,75, 53,48, 54,89, 61,87, 89,81, 153,95, 171,77, 176,68, 193,75. Оптическое вращение: [a]22D+16,2° (с 0,259, CHCl3). ИК (CHCl3): 3428 m, 3358 w, 3116 w, 2982 s, 2874 m, 2110 s, 1740 vs, 1640 s, 1510 s, 1480 m, 1393 s (sh), 1377 s, 1349 s, 1284 s, 1232 s, 1025 s, см'1. ESI MC: 394 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C16H25O7N3Na 394,15847; найдено 394,15886.
Схема 7
Ri <R! = Et) 33 (Rt = Et, R2 = 3-СН2-индолил) 34 (R-j = Et, R2 = 3-СН2-индолил) (R1 - iPr) 37 (R1 - iPr, R2 - 3-СН2-индолил) 38 (R^ - iPr, R2 - 3-CH2- индол ил)
Реагенты и соединения: (a) Fmoc-NH-(L)-Trp-COOH, HBTU, DIEA, DCM для соединений 33 (66%) и 37 (46%); (b) пиперидин, DCM, кт, 50% для соединения 34; 53% для соединения 38.
Синтез этил 2-(2-амино-3-(1Н-индол-3-ил)пропанамидо)-6-диазо-5-оксогексаноата (34).
Этил 2-(2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-(1Н-индол-3-ил)пропанамидо)-6-диазо5-оксогексаноат (33)
Согласно схеме 7 Fmoc-NH-(L)-Trp-COOH (353 мг, 0,828 ммоль, 1,1 экв.) и HBTU (343 мг, 0,904 ммоль, 1,2 экв.) суспендировали в сухом DCM (5 мл). DIEA (292 мг, 394 мкл, 2,26 ммоль, 3 экв.) и затем раствор соединения 20 (150 мг, 0,753 ммоль, 1 экв.) в сухом DCM (3 мл) добавляли при помощи шприца. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при кт в инертной атмосфере. Добавляли DCM (20 мл) и органическую фазу промывали насыщенным NaHCO3 (20 мл), 1 М HCl (20 мл), водой (30 мл) и насыщенным NaCl (30 мл), сушили над MgSO4. DCM выпаривали. Неочищенный продукт очищали ЖХ (DCM/EtOAc 2:1, Rf 0,21), с получением соединения 33 в виде светло-желтого твердого вещества (303 мг) с выходом 66%. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,22 (3H, т, J=7,2), 1,82-1,93 (1Н, м), 2,00-2,26 (3H, м), 3,18 (1Н, дд, J=14,5, 7,1), 3,38 (1Н, дд, J=14,0, 5,3), 4,09 (2Н, кв, J=8,2), 4,20 (1Н, т, J=7,1), 4,32-4,48 (3H, м), 4,50- 4,59 (1Н, м), 5,05 (1Н, шир.с), 5,51 (1Н, д, J=7,9), 6,61 (1Н, д, J=7,5), 7,07 (1Н, шир.с), 7,13 (1Н, т, J=7,4), 7,20 (1Н, т, J=7,2), 7,30 (2Н, т, J=7,5), 7,35 (1Н, д, J=8,0), 7,40 (2Н, т, J=7,5), 7,57 (2Н, т, J=6,6), 7,67 (1Н, д, J=7,9), 7,76 (2Н, д, J=7,6), 8,28 (1Н, шир.с). 13С ЯМР (101 МГц, CDQ3): 14,20, 27,09, 28,51, 36,20, 47,25, 52,13, 54,86, 55,76, 61,77, 67,25, 110,29, 111,39, 118,88, 120,00, 120,10, 120,11, 122,41, 123,66, 125,25, 125,29, 126,92, 127,22 (2С), 127,62, 127,86 (2С), 136,38, 141,40, 143,87, 143,96, 156,09, 171,28, 171,48, 193,84. Оптическое вращение: [a]22D-28,6° (с 0,178, ДМФА). ИК (KBr): 3424 s, 3308 m, sh, 2978 w, 2106 m, 1728 s, 1697 m, sh, 1654 m, 1519 m, 1478 w, 1450 m, 1382 m, sh, 1376 m, 1343 m, 1289 m, 1224 m, 1104 m-w, 1081 m-w, 1040 m, 1032 m, 877 w, 855 w, 760 m, 742 m, 621 m, 427 w, см-1. ESI MC: 630 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C34H33O6N5W 630,23230; найдено 630,23236.
Этил 2-(2-амино-3 -(1 Н-индол-3 -ил)пропанамидо)-6-диазо-5-оксогексаноат (3 4)
- 44 034571
Согласно схеме 7 соединение 33 (303 мг, 0,499 ммоль, 1 экв.) растворяли в сухом DCM (5 мл). Пиперидин (212 мг, 244 мкл, 2,49 ммоль, 5 экв.) добавляли при помощи шприца. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 4,5 ч при кт в инертной атмосфере. DCM выпаривали. Неочищенный продукт очищали колоночной ЖХ (CHCl3/МеОН 20:1 до 10:1, Rf 0,29) и соединение 34 в виде бесцветного твердого вещества (96 мг) получали с выходом 50%. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,27 (3H, т, J=7,0), 1,57 (2Н, шир.с), 1,91-2,01 (1Н, м), 2,06-2,27 (3H, м), 3,05 (1Н, дд, J=14,4, 8,1), 3,30 (1Н, дд, J=14,4, 4,0), 3,75 (1Н, дд, J=8,1, 4,2), 4,18 (1Н, квд, J=7,1, 2,0), 4,55 (1Н, тд, J=8,3, 4,1), 5,11 (1Н, шир.с), 7,09 (1Н, д, J=2,4), 7,12 (1Н, ддд, J=8,1, 7,0, 1,1), 7,20 (1Н, ддд, J=8,1, 7,0, 1,2), 7,37 (1Н, дт, J=8,2, 1,0), 7,68 (1Н, дд, J=7,9, l, 1), 7,88 (1Н, д, J=8,3), 8,31 (1Н, шир.с). 13С ЯМР (101 МГц, CDCh): 14,29, 27,60, 30,82, 36,58, 51,56, 54,77, 55,50, 61,71, 111,36, 111,49, 119,23, 119,79, 122,39, 123,45, 127,69, 136,52, 171,92, 175,02, 193,81. Оптическое вращение: [a]22 D-57,6° (с 0,210, ДМФА). ИК (CHCl3): 3479 m, 3355 w, 3215 vw, 3116 w, 2982 m, 2930 m, 2872 w, 2855 w, 2110 vs, 1737 s, 1687 s, 1641 m, 1511 m, 1373 m, 1353 m, 1336 m, sh, 1191 m, 1115 w, 1092 m, 1009 w, см-1. ESI MC: 408 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C19H23O4N5Na 408,16423; найдено 408,16435.
Синтез триэтиламмониевой соли 6-диазо-2-((((5-метил-2-оксо-1,3-диоксол-4-ил)метокси)карбонил)амино)-5-оксогексановой кислоты (35).
Триэтиламмониевая соль 6-диазо-2-((((5-метил-2-оксо-1,3-диоксол-4-ил)метокси)карбонил)амино)5-оксогексановой кислоты (35)
Согласно схеме 5, соединение 20 (238 мг, 1,19 ммоль, 1 экв.) растворяли в ТГФ (10 мл). Добавляли 1 М раствор NaOH (48 мг, 1,18 мл, 1 экв.), и полученную смесь перемешивали в течение 1 ч. Добавляли воду (4 мл) и соединение 12 (389 мг, 1,43 ммоль, 1,2 экв.) в ТГФ (10 мл). Полученный раствор перемешивали в течение следующих 2 ч при кт. Реакцию гасили 1 М муравьиной кислотой (1,15 мл, 0,95 экв.) и, после 5 -минутного перемешивания, полученную смесь упаривали досуха. Неочищенный продукт очищали препаративной ВЭЖХ с буферной смесью Et3N/CH3COOH. Требуемый продукт 35 получали в виде светло-оранжевого твердого вещества (50 мг) с выходом 13%. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,96-2,28 (2Н, м), 2,15 (3H, с), 2,37-2,70 (2Н, м), 4,40-4,76 (1Н, м), 4,98 (2Н, с).
Схема 8
Реагенты и соединения: (а) S-этилкарбонохлоридотионат, пиридин, Et2O; NHS, перуксусная кислота, DCM 58%; (b) DCM, 0°C-kt, 65%.
Синтез этил 6-диазо-2-((((5-метил-2-оксо-1,3-диоксол-4-ил)метокси)карбонил)амино)-5оксогексаноата (36).
Этил 6-диазо-2-((((5-метил-2-оксо-1,3-диоксол-4-ил)метокси)карбонил)амино)-5-оксогексаноат (36)
Согласно схеме 8 соединение 12 (180 мг, 0,663 ммоль, 1,1 экв.) суспендировали в сухом DCM (5 мл). Полученную реакционную смесь охлаждали до 0°C и по каплям добавляли соединение 20 (120 мг, 0,602 ммоль, 1 экв.) в сухом DCM (3 мл). Полученную смесь перемешивали в течение 15 мин при 0°C и затем 1 ч при кт. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (EtOAc:гексан, 1:1) и требуемое соединение 36 получали с выходом 65% (139 мг) в виде желтого масла. 1Н ЯМР (400 МГц,
- 45 034571
CDCl3): 1,27 (3H, т, J=7,1), 1,95-2,06 (1Н, м), 2,10-2,27 (1Н, м), 2,16 (3H, с), 2,31-2,50 (2Н, м), 4,19 (2Н, кв, J=7,1), 4,29 (1Н, тд, J=8,1, 4,8), 4,82 (2Н, дд, J=13,9), 5,29 (1Н, шир.с), 5,72 (1Н, д, J=7,7). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 9,48, 14,24, 27,18, 36,32, 53,76, 54,58, 55,00, 61,92, 133,90, 140,08, 152,30, 155,26, 171,63, 193,52. Оптическое вращение: [α]%+12,2° (с 0,229, CHCb). ИК (CHC^): 3425 m, 3345 w, vbr, 3116 w, 2111 vs, 1838 s, sh, 1820 vs, 1736 vs, 1722 vs, sh, 1640 s, 1511 s, 1229 s, 1200 s, 1114 m, 1097 m, 1045 s, см-1. ESI MC: 378 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для CnH^^Na 378,09079; найдено 378,09102.
Синтез изопропил 2-(2-амино-3-(1Н-индол-3-ил) пропанамидо)-6-диазо-5-оксогексаноата (38).
Изопропил 2-(2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-(1Н-индол-3-ил)пропанамидо)-6диазо-5-оксогексаноат (37)
Согласно схеме 7 Fmoc-NH-(L)-Trp-COOH (880 мг, 2,06 ммоль, 1,1 экв.) и HBTU (854 мг, 2,25 ммоль, 1,2 экв.) суспендировали в сухом ДМФА (14 мл). DIEA (727 мг, 980 мкл, 5,63 ммоль, 3 экв.) и затем раствор соединения 3 (400 мг, 1,88 ммоль, 1 экв.) в сухом ДМФА (5 мл) добавляли при помощи шприца. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч при кт в инертной атмосфере. ДМФА выпаривали, добавляли DCM (100 мл), и органическую фазу промывали насыщенным NaHCO3 (100 мл), водой (100 мл), 1 М HCl (100 мл), водой (100 мл) и насыщенным NaCl (100 мл), сушили над MgSO4. DCM выпаривали. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (DCM:EtOAc, 5:1, Rf 0,15) с получением соединения 37 в виде светло-желтого твердого вещества (540 мг) с выходом 46%. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,19 (3H, д, J=6,3), 1,23 (3H, т, J=6,3), 1,81-1,92 (1Н, м), 2,01-2,28 (3H, м), 3,18 (1Н, дд, J=14,5, 7,1), 3,39 (1Н, дд, J=14,2, 5,2), 4,20 (1Н, т, J=7,1), 4,30-4,48 (3H, м), 4,54 (1Н, кв, J=6,9), 4,88-4,99 (1Н, м), 5,07 (1Н, шир.с), 5,50 (1Н, д, J=7,9), 6,59 (1Н, д, J=7,4), 7,07 (1Н, шир.с), 7,14 (1Н, т, J=7,0), 7,20 (1Н, т, J=7,2), 7,30 (2Н, тдд, J=7,5, 2,5, 1,1), 7,36 (1Н, д, J=8,0), 7,40 (2Н, т, J=7,5), 7,56 (2Н, т, J=6,6), 7,67 (1Н, д, J=7,9), 7,77 (2Н, д, J=7,6), 8,23 (1Н, шир.с). 13С ЯМР (101 МГц, CDCh): 21,78, 21,83, 27,20, 28,47, 36,20, 47,23, 52,19, 54,91, 55,75, 67,23, 69,22, 110,28, 111,40, 118,88, 120,03, 120,10, 120,12 (2С), 122,45, 123,66, 125,25, 125,30, 127,23 (2С), 127,61, 127,86 (2С), 136,35, 141,40 (2С), 143,85, 143,96, 156,09, 170,80, 171,42, 193,92. Оптическое вращение: [α]%-32,0° (с 0,193, ДМФА). ИК (KBr): 3424 s, 3300 m, 3130 vw, 2980 w, 2932 s, 2110 m, 1722 s, 1695 s, 1654 s, 1625 m, 1547 m, sh, 1532 m, 1520 m, sh, 1478 w, 1385 m, 1375 m, 1353 m, 1343 m, 1288 m, 1236 m, 1182 w, 11145 m, 1105 m, 1031 m-w, 1010 w, 852 w, 798 w, 758 m, 741 m, 621 w, 427 w-m, см-1. ESI MC: 644 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C35H35O6N5Na 644,24795; найдено 644,24811.
Изопропил 2-(2-амино-3 -(1 Н-индол-3 -ил)пропанамидо)-6-диазо-5 -оксогексаноат (3 8)
Согласно схеме 7 соединение 37 (500 мг, 0,804 ммоль, 1 экв.) растворяли в сухом DCM (15 мл). Пиперидин (342 мг, 393 мкл, 4,02 ммоль, 5 экв.) добавляли при помощи шприца. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч при кт в инертной атмосфере. DCM выпаривали. Неочищенный продукт очищали колоночной ЖХ (CHCl3/МеОН 30:1, Rf 0,14) с получением соединения 38 в виде желтого аморфного твердого вещества (170 мг) с выходом 53%. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,24 (3H, д, J=6,0), 1,25 (3H, д, J=6,0), 1,50 (2Н, шир.с), 1,88-2,00 (1Н, м), 2,04-2,27 (3H, м), 3,04 (1Н, дд, J=14,4, 8,2), 3,30 (1Н, ддд, J=14,2, 4,2, 0,9), 3,74 (1Н, дд, J=8,1, 4,2), 4,51 (1Н, тд, J=8,3, 4,0), 5,02 (1Н, гепт, J=6,0), 5,11 (1Н, шир.с), 7,08 (1Н, д, J=2,3), 7,11 (1Н, ддд, J=8,0, 7,1, 1,0), 7,19 (1Н, ддд, J=8,1, 7,1, 1,1), 7,36 (1Н, д, J=8,1), 7,67 (1Н, д, J=7,9), 7,88 (1Н, д, J=8,2), 8,45 (1Н, шир.с). 13С ЯМР (101 МГц, CDCh): 21,83, 27,65, 30,81, 36,55, 51,64, 54,80, 55,51, 69,49, 111,37 (2С), 119,17, 119,72, 122,31, 123,48, 127,67, 136,53, 171,42, 175,09, 193,92. Оптическое вращение: [a]22D-1,2° (с 0,012, CHCl3). ИК (CHCl3): 3311 m, vbr, 2980 w, 2924 w, 2874 w, vs, 2853 w, 2104 vs, 1731 s, 1650 s, br, 1618 m, sh, 1512 m, 1388 m, sh, 1375 s, 1253 m, 1232 m, 1183 m, 1145 m, 1105 s, 1010 w, 972 vw, 933 vw, 744 m, см-1. ESI MC: 422 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C20H25O4N5Na 422,17988; найдено 422,17992.
Синтез изопропил 6-диазо-2-(((2-метил-1-(пивалоилокси)пропокси)карбонил)амино)-5-оксогексаноата (40).
-((((2,5-Диоксопирролидин-1 -ил)окси)карбонил)окси)-2-метилпропилпивалат (39)
- 46 034571
1-Хлор-2-метилпропил карбонохлоридат (2,00 г, 1,71 мл, 11,69 ммоль, 1 экв.) растворяли в сухом Et2O (20 мл). Полученную реакционную смесь охлаждали до 0°C и по каплям добавляли смесь Et3N (1,18 г, 1,63 мл, 11,69 ммоль, 1 экв.) и EtSH (727 мг, 866 мкл, 11,69 ммоль, 1 экв.), растворенную в сухом Et2O (10 мл), в течение 10 мин. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение ночи (23 ч) при кт, образовавшийся осадок отфильтровывали через рыхлый слой целита и растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт О-(1-хлор-2-метилпропил)^-этилкарбонотиоата (бесцветная жидкость, 2,20 г, 96%) использовали на следующей стадии без очистки. О-(1-Хлор-2-метилпропил)^этилкарбонотиоат (1,20 г, 6,10 ммоль, 1 экв.) растворяли в пивалиновой кислоте (3,74 г, 4,20 мл, 36,61 ммоль, 6 экв.) и свежеприготовленную соль пивалиновой кислоты (1,87 г, 2,10 мл, 18,31 ммоль, 3 экв.) и DIEA (2,37 г, 3,19 мл, 18,31 ммоль, 3 экв.) добавляли несколькими порциями. Полученную реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 70 ч. Добавляли EtOAc (100 мл) и органическую фазу экстрагировали водой (50 мл), насыщенным NaHCO3 (3x50 мл), насыщенным NaCl (50 мл), сушили над MgSO4 и растворитель выпаривали. Неочищенный продукт 1-(((этилтио)карбонил)окси)-2-метилпропилпивалата (светло-желтая жидкость, 1,32 г, 83%) использовали на следующей стадии без очистки. 1(((Этилтио)карбонил)окси)-2-метилпропилпивалат (1,28 г, 4,88 ммоль, 1 экв.) растворяли в сухом DCM (13 мл), добавляли N-гидроксисукцинимид (1,12 г, 9,76 ммоль, 2 экв.), и полученную суспензию охлаждали до 0°C. Перуксусную кислоту (1,11 г (100%), 3,09 г (36%), 14,64 ммоль, 3 экв., 36% раствор в уксусной кислоте) по каплям добавляли в течение 10 мин. Конечную смесь перемешивали в течение 60 мин при 0°C и 2 ч при кт. Добавляли DCM (40 мл) и органическую фазу промывали водой (20 мл) и насыщенным NaCl (20 мл), сушили над MgSO4. DCM выпаривали и продукт очищали ЖХ (гексан/EtOAc 5:3, Rf 0,26). Продукт 39 получали в виде светло-желтого масла (8 63 мг) с выходом 56% (за 3 стадии). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,00 (6Н, д, J=6,9), 1,21 (9Н, с), 2,08-2,19 (1Н, м), 2,81 (4Н, с), 6,55 (1Н, д, J=5,0). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 16,06, 16,38, 25,55, 26,89, 31,84, 39,05, 98,19, 150,37, 168,48, 176,14. Оптическое вращение: [a]22D-3,0° (с 0,230, CHCl3). ИК (CHCl3): 2978 m, 2938 w, 2878 w, 1821 s, 1795 s, 1748 vs, br, 1481 m, 1463 w, 1432 m, 1396 w, 1373 m, 1366 m, sh, 1279 m, 1199 s, 1046 m, 998 m, sh, 987 m, 932 s см-1. ESI MC: 338 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C14H21O7NNa 338,12102; найдено 338,12115.
Изопропил 6-диазо-2-(((2-метил-1-(пивалоилокси)пропокси)карбонил)амино)-5-оксогексаноат (40)
Соединение 39 (399 мг, 1,27 ммоль, 0,9 экв.) суспендировали в сухом DCM (7 мл). Полученную реакционную смесь охлаждали до 0°C и по каплям добавляли соединение 3 (300 мг, 1,41 ммоль, 1 экв.) в сухом DCM (3 мл). Полученную смесь перемешивали в течение 15 мин при 0°C и затем 2 ч при кт. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (EtOAc/гексан 1:2, Rf 0,29 и 0,31) и требуемое соединение 40 получали с выходом 54% (285 мг) в виде желтого масла (смесь двух стереоизомеров 1:1). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3, стереоизомер 1): 0,94 (6Н, д, J=6,8), 1,16 (9Н, с), 1,23 (6Н, т, J=6,3), 1,83-2,50 (4Н, м), 4,22-4,31 (1Н, м), 5,02 (1Н, гепт, J=6,8), 5,29 (1Н, шир.с), 5,48 (1Н, д, J=8,3), 6,52 (1Н, д, J=4,9). 13C ЯМР (101 МГц, CDCl3, стереоизомер 1): 16,40, 16,54, 27,00, 28,05, 31,87, 36,29, 38,96, 53,38, 54,82, 69,64, 94,21, 154,28, 171,31, 176,56, 193,87. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3, стереоизомер 2): 0,93 (6Н, д, J=6,8), 1,18 (9Н, с), 1,22 (6Н, т, J=6,3), 1,83-2,50 (4Н, м), 4,22-4,31 (1Н, м), 5,00 (1Н, септ, J=6,8), 5,37 (1Н, шир.с), 5,45 (1Н, д, J=8,3), 6,48 (1Н, д, J=4,9). 13C ЯМР (101 МГц, CDCl3, стереоизомер 2): 16,37, 16,54, 26,98, 27,74, 31,91, 36,55, 38,92, 53,54, 54,82, 69,66, 93,87, 154,22, 171,17, 176,81, 193,58. Оптическое вращение: [a]22D+11,5° (с 0,261, CHCl3). ИК (CHCl3): 3428 m, 3116 w, 2982 s, 2936 m, 2878 m, 2110 vs, 1741 vs, br, 1731 vs, sh, 1641 s, 1508 s, 1480 m, 1463 m, 1400 m, sh, 1385 s, sh, 1377 s, 1365 s, sh, 1281 s, 1231 s, 1183 m, 1146 s, 1105 s, 990 s, 941 m см-1. ESI MC: 436 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C19H31O7N3Na 436,20542; найдено 436,20553.
Синтез изопропил 6-диазо-5-оксо-2-((((пивалоилокси)метокси)карбонил)амино)гексаноата (42).
((((2,5-Диоксопирролидин-1 -ил)окси)карбонил)окси)метилпивалат (41)
Хлорметилкарбонохлоридат (2,00 г, 1,38 мл, 15,51 ммоль, 1 экв.) растворяли в сухом Et2O (20 мл). Полученную реакционную смесь охлаждали до 0°C и по каплям добавляли смесь Et3N (1,57 г, 2,16 мл,
15,51 ммоль, 1 экв.) и EtSH (964 мг, 1,15 мл, 15,51 ммоль, 1 экв.), растворенную в сухом Et2O (5 мл), в течение 5 мин. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение ночи (25 ч) при кт, образовавшийся осадок отфильтровывали через рыхлый слой целита и растворитель удаляли при пониженном
- 47 034571 давлении. Неочищенный продукт О-(хлорметил)-8-этилкарбонотиоат (бесцветная жидкость) использовали на следующей стадии без очистки. О-(Хлорметил)-Б-этилкарбонотиоат (2,40 г, 15,51 ммоль, 1 экв.) растворяли в пивалиновой кислоте (9,51 г, 93,14 ммоль, 6 экв.) и свежеприготовленную соль пивалиновой кислоты (4,76 г, 46,57 ммоль, 3 экв.) и DIEA (6,02 г, 8,1 мл, 46,57 ммоль, 3 экв.) добавляли несколькими порциями. Полученную реакционную смесь нагревали до 60°C в течение 22 ч. Добавляли EtOAc (100 мл), органическую фазу экстрагировали водой (100 мл), насыщенным NaHCO3 (3x100 мл), насыщенным NaCl (100 мл), сушили над MgSO4 и растворитель выпаривали. Неочищенный продукт (((этилтио)карбонил)окси)метилпивалата (светло-желтая жидкость, 3,30 г, 97%) использовали на следующей стадии без очистки. (((Этилтио)карбонил)окси)метилпивалат (3,20 г, 14,53 ммоль, 1 экв.) растворяли в сухом DCM (40 мл), добавляли N-гидроксисукцинимид (3,34 г, 29,05 ммоль, 2 экв.) и полученную суспензию охлаждали до 0°C. Перуксусную кислоту (3,31 г (100%), 9,21 г (36%), 43,58 ммоль, 3 экв., 36% раствор в уксусной кислоте) по каплям добавляли за 15 мин. Конечную смесь перемешивали в течение 60 мин при 0°C и 2 ч при кт. Добавляли DCM (50 мл) и органическую фазу промывали водой (30 мл) и насыщенным NaCl (30 мл), сушили над MgSO4. DCM выпаривали и продукт очищали ЖХ (гексан:EtOAc, 2:1, Rf 0,27). Продукт 41 получали в виде бесцветного твердого вещества (2,54 г) с выходом 64% (за 3 стадии). 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,24 (9Н, с), 2,84 (4Н, с), 5,86 (2Н, с). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 25,56 (2С), 26,86 (3C), 38,96, 83,67, 150,90, 168,34 (2С), 176,54. ИК (CHCl3): 2979 m, 2939 w, 2876 w, 1823 s, 1796 vs, 1649 vs, 1481 m, 1463 m, 1456 w, 1431 m, 1398 w, 1371 m, 1367 m, 1280 m, 1199 vs, 1110 vs, 1047 m, 998 s, 986 s, 942 m, sh, 924 s, 853 w, см-1. ESI MC: 296 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C11H15O7NNa 296,07407; найдено 296,07410.
Изопропил 6-диазо-5-оксо-2-((((пивалоилокси)метокси)карбонил)амино)гексаноат (42)
Согласно схеме 6 соединение 41 (320 мг, 1,17 ммоль, 1,0 экв.) суспендировали в сухом DCM (6 мл). Полученную реакционную смесь охлаждали до 0°C и по каплям добавляли NH2-DON-COOEt (250 мг,
1,17 ммоль, 1 экв.) в сухом DCM (3 мл). Полученную смесь перемешивали в течение 15 мин при 0°C и затем 2 ч при кт. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (EtOAc:гексан, 1:2, Rf 0,21) и требуемое соединение 42 получали с выходом 40% (175 мг) в виде желтого масла. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,19 (9Н, с), 1,23 (3H, д, J=6,2), 1,24 (3H, д, J=6,2), 1,90-2,05 (1Н, м), 2,14-2,25 (1Н, м), 2,31-
2,51 (2Н, м), 4,28 (1Н, тд, J=8,2, 4,7), 5,03 (1Н, гепт, J=6,2), 5,27 (1Н, шир.с), 5,65 (1Н, д, J=8,1), 5,69 (1Н, д, J=5,7), 5,73 (1Н, д, J=5,7). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 21,79, 21,81, 26,97, 36,34, 38,86, 53,63, 54,90, 69,75, 80,33, 154,40, 171,01, 177,51, 193,43. Оптическое вращение: [a]22D+13,0° (с 0,184, CHCl3). ИК (CHCl3): 3424 m, 3354 w, br, 3116 w, 2984 s, 2937 m, 2875 s, 2110 vs, 1747 vs, 1730 vs, sh, 1642 s, 1512 s, 1481 m, 1466 m, 1453 m, 1377 s, 1282 s, 1182 m, 1145 s, 1105 s, 994 s, 942 m, см-1. ESI MC: 394 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C16H25O7N3Na 394,15847; найдено 394,15855.
Синтез изопропил 6-диазо-5-оксо-2-((((2-(пивалоилокси)пропан-2-ил)окси)карбонил)амино)гексаноата (44).
2-(((4-Нитрофенилокси)карбонил)окси)пропан-2-илпивалат (43)
2-Хлорпропан-2-ил(4-нитрофенил)карбонат (полученный по способу, представленному в США 2006/229361 А1, 300 мг, 1,16 ммоль, 1 экв.) растворяли в сухом DCM (15 мл). Добавляли пивалат ртути (559 мг, 1,39 ммоль, 1,2 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи (19 ч) при кт в инертной атмосфере. Образовавшийся твердый осадок (HgCl2) удаляли фильтрованием, добавляли DCM (15 мл) и RM экстрагировали насыщенным NaHCO3 (15 мл), насыщенным раствором соли (15 мл), сушили над MgSO4 и растворитель выпаривали. Продукт 43 получали в виде светло-желтого масла (301 мг) с выходом 80%. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,20 (9Н, с), 1,91 (6Н, с), 7,34-7,40 (2Н, м), 8,24-8,30 (2Н, м). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 25,28 (2С), 27,02 (3C), 39,59, 107,71, 121,98 (2С), 125,40 (2С), 145,50, 149,07, 155,41, 175,97. ИК (CHCl3): 3031 w, 2976 w, 2875 w, 1777 m, 1736 m, 1618 w, 1595 w, 1528 m-s, 1493 m, 1481 w, 1439 w, 1396 w, 1376 w, 1349 m, 1322 w, 1264 m, 1191 m, 1112 vs, 1094 s, sh, 1030 w, 980 w, 859 m, 682 vw, 491 vw см-1. ESI MC: 348 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C13H19O7NNa 348,10537; найдено 348,10543.
Изопропил 6-диазо-5-оксо-2-((((2-(пивалоилокси)пропан-2-ил)окси)карбонил)амино)гексаноат (44)
Соединение 43 (48 мг, 0,148 ммоль, 1 экв.) растворяли в сухом ДМФА (2 мл) и реакционную смесь
- 48 034571 охлаждали до 0°C. Соединение 3 (79 мг, 0,369 ммоль, 2,5 экв.), растворенное в сухом ДМФА (1 мл), добавляли при помощи шприца. Реакционную смесь перемешивали при 0°C в инертной атмосфере в течение ночи в течение 3 ч. ДМФА выпаривали и неочищенную смесь очищали ЖХ (гексашБЮЛе, 2:1).
Продукт 44 получали в виде светло-желтого масла (49 мг) с выходом 83%. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3):
l, 19 (9Н, с), 1,23 (3Н, д, J=6,3), 1,24 (3Н, д, J=6,3), 1,80 (3Н, с), 1,83 (3Н, с), 1,90-2,01 (1Н, м), 2,14-2,27 (1Н, м), 2,29-2,51 (2Н, м), 4,24 (1Н, дт, J=8,3, 4,7), 5,05 (1Н, гепт, J=6,3), 5,31 (1Н, шир.с), 5,44 (1Н, д, J=8,2). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 21,80, 21,82, 25,76, 25,91, 27,07 (3C), 27,79, 36,46, 39,48, 53,26, 54,87, 69,59, 105,44, 153,16, 171,31, 176,21, 193,63. Оптическое вращение: [a]22D+12,8° (с 0,133, Μ13). ИК (ОТЗД): 3430 w, 3116 w, 2984 m, 2936 m, 2874 m, 2110 s, 1732 vs, br, 1641 m, 1502 s, 1481 m, 1466 m, 1462 m, 1455 m, 1452 m, 1397 m, sh, 1384 s, 1374 s, 1365 s, sh, 1198 s, 1184 s, 1147 m, sh, 1128 s, 1112 s, 1105 s, 1045 m, 942 w см-1.
Синтез изопропил 6-диазо-5-оксо-2-(((фенил(пивалоилокси)метокси)карбонил)амино)гексаноата (47).
Хлор(фенил)метил(4-нитрофенил)карбонат (45)
Хлор(фенил)метилкарбонохлоридат (полученный по US20110319422, 900 мг, 4,39 ммоль, 1 экв.) растворяли в сухом DCM (20 мл). Добавляли 4-нитрофенол (611 мг, 4,39 ммоль, 1 экв.) и полученную смесь охлаждали до 0°C. Пиридин (347 мг, 355 мкл, 4,39 ммоль, 1 экв.), растворенный в сухом DCM (5 мл), по каплям добавляли в течение 5 мин. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при кт. DCM выпаривали и неочищенный продукт очищали ЖХ (DCM:гексан, 1:1). Продукт 45 получали в виде бесцветного твердого вещества (520 мг) с выходом 39%. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): 7,33 (1Н, с), 7,41-7,50 (5Н, м), 7,58-7,63 (2Н, м), 8,28-8,34 (2Н, м). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 87,37, 121,83 (2С), 125,59 (2С), 126,41 (2С), 129,07 (2С), 130,56, 136,35, 145,91, 150,50, 155,07. Оптическое вращение: [a]22 D-0,9° (с 0,318, отаз). ИК (dCb): 3119 w, 3088 w, 3071 vw, 3032 w, 1788 vs, 1772 s, sh, 1619 m, 1595 m, 1530 vs, 1492 s, 1456 m, 1349 vs, 1317 m, 1296 m, 1232 vs, sh, 1178 m, sh, 1165 m, 1111 m, 1105 w, sh, 1078 m, 1054 s, 1029 m, 1014 m, 1002 w, 978 s, 920 w, 872 s, 854 s, 830 vw, 708 s, 695 m, sh, 680 w, 626 vw, 618 vw, 530 vw, 495 w, 403 w см-1. ESI MC: 329 ([M+Na]+). НЕ ESI MC: вычислено для C^ANClNa 330,01397; найдено 330,01367.
(((4-Нитрофенилокси)карбонил)окси)(фенил)метилпивалат (46)
Соединение 45 (100 мг, 0,325 ммоль, 1 экв.) и пивалат ртути (157 мг, 0,390 ммоль, 1,2 экв.) растворяли в сухом DCM (6 мл). Реакционную смесь перемешивали при кт в инертной атмосфере в течение ночи (16 ч). Добавляли DCM (10 мл) и реакционную смесь промывали насыщенным Nal 1CO3 (10 мл) и насыщенным раствором соли (10 мл), органическую фазу сушили над MgSO4 и DCM выпаривали. Продукт 46 (115 мг) получали с выходом 95% и использовали на следующей стадии без какой-либо очистки. 1Н ЯМР (4 00 МГц, CDCl3): 1,28 (9Н, с), 7,38-7,43 (2Н, м), 7,44-7,50 (3Н, м), 7,57-7,60 (1Н, м), 7,61 (1Н, с), 8,23-8,33 (2Н, м). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 27,02 (3C), 39,11, 93,80, 121,86 (2С), 125,47 (2С), 126,84 (2С), 128,97 (2С), 130,48, 134,39, 145,69, 150,73, 155,32, 176,44. Оптическое вращение: [a]22 D-6,0° (с 0,201, OTC^). ИК (OTCi3): 3118 w, 3087 w, 3072 w, 3031 m, 2980 m, 2875 w, 1775 vs, 1747 s, 1618 m, 1595 m, 1529 vs, 1493 s, 1480 m, 1459 m, 1399 m, 1365 m, 1349 vs, 1279 vs, 1248 vs, 1165 s, 1123 vs, 1112 s, sh, 1030 s, 1014 m, 1003 m, 970 s, br, 943 s, 918 m, 865 s, 860 s, 832 w, 697 s, 682 w, 633 w, 619 vw, 530 vw, 495 w, 403 vw см-1. ESI MC: 396 ([M+Na]+). НЕ ESI MC: вычислено для Q^^NNa 396,10537; найдено 396,10546.
Изопропил 6-диазо-5-оксо-2-(((фенил(пивалоилокси)метокси)карбонил)амино)гексаноат (47)
Соединение 46 (115 мг, 0,308 ммоль, 1 экв.) растворяли в сухом DCM (3 мл). Сложный iPr эфир DON (72 мг, 0,339 ммоль, 1,1 экв.), растворенный в сухом DCM (2 мл), добавляли при помощи шприца. Реакционную смесь перемешивали при кт в инертной атмосфере в течение ночи (24 ч). Дополнительно добавляли сложный iPr эфир DON (72 мг, 0,339 ммоль, 1,1 экв.), растворенный в сухом DCM (2 мл), и перемешивание продолжали в течение следующих 24 ч. DCM выпаривали и полученную неочищенную смесь очищали препаративной ВЭЖХ (AeN'lEO, HCOOH). Продукт 47 получали в виде светлокоричневого масла (66 мг) с выходом 48%. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,17-1,31 (15Н, м), 1,90-2,06 (1Н, м), 2,12-2,31 (1Н, м), 2,31-2,54 (2Н, м), 4,27-4,36 (1Н, м), 5,03 (1Н, гепт, J=6,3), 5,29 (1Н, шир.с), 5,59 (1Н,
- 49 034571 д, J=8,1), 7,36-7,42 (3H, м), 7,46-7,51 (2Н, м), 7,61 (s, 1Н). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 21,82 (2С), 26,99 (3C), 27,70, 36,35, 38,99, 53,55, 54,90, 69,79, 90,93, 126,57 (2С), 128,66 (2С), 129,64, 135,95, 153,82, 171,10, 176,33, 193,51. Оптическое вращение: [u]22d+12,5° (с 0,246, CHCl3). ИК (CHCl3): 3425 w, 3116 w, 3098 vw, 3070 vw, 3029 m, 2984 m, 2937 m, 2875 w, 2110 s, 1735 vs, br, 1641 s, 1590 w, 1507 s, 1480 m, 1457 m, 1398 m, 1377 s, 1367 s, sh, 1366 s, sh, 1280 s, 1182 m, 1146 s, sh, 1133 s, 1105 s, 1085 m, 1057 s, 1027 s, 1003 m, 942 m, 918 w, 697 m, 619 vw см-1. ESI MC: 470 ([M+Na]+).
Синтез изопропил 6-диазо-2-((((изобутирилокси)метокси)карбонил)амино)-5-оксогексаноата (49).
((((2,5-Диоксопирролидин-1 -ил)окси)карбонил)окси)метилизобутират (48)
Хлорметилкарбонохлоридат (1,00 г, 690 мкл, 7,76 ммоль, 1 экв.) растворяли в сухом Et2O (10 мл). Полученную реакционную смесь охлаждали до 0°C и по каплям добавляли смесь EtsN (785 мг, 1081 мкл, 7,76 ммоль, 1 экв.) и EtSH (482 мг, 574 мкл, 7,76 ммоль, 1 экв.), растворенную в сухом Et2O (3 мл), за 5 мин. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение ночи (18 ч) при кт, образовавшийся осадок отфильтровывали через рыхлый слой целита и растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт (хлорметил)^-этилкарбонотиоата (бесцветная жидкость) использовали на следующей стадии без очистки. O-(Хлорметил)-S-этилкарбонотиоат (1,10 г, 7,11 ммоль, 1 экв.) растворяли в изомасляной кислоте (1,88 г, 1. 94 мл, 21,35 ммоль, 3 экв.) и свежеприготовленную соль изомасляной кислоты (1,88 г, 1,94 мл, 21,35 ммоль, 3 экв.) и DIEA (2,76 г, 3,81 мл, 21,35 ммоль, 3 экв.) добавляли несколькими порциями. Полученную реакционную смесь нагревали до 60°C в течение 20 ч. Добавляли EtOAc (50 мл) и органическую фазу экстрагировали водой (50 мл), насыщенным NaHCO3 (3x50 мл), насыщенным NaCl (50 мл), сушили над MgSO4 и растворитель выпаривали. Неочищенный продукт (((этилтио)карбонил)окси)метилизобутират (светло-желтая жидкость, 1,14 г, 72%) использовали на следующей стадии без очистки. (((Этилтио)карбонил)окси)метилизобутират (1,12 г, 5,04 ммоль, 1 экв.) растворяли в сухом DCM (15 мл), добавляли N-гидроксисукцинимид (1,16 г, 10,08 ммоль, 2 экв.) и полученную суспензию охлаждали до 0°C. Перуксусную кислоту (1,15 г (100%), 3,19 г (36%), 15,12 ммоль, 3 экв., 36% раствор в уксусной кислоте) по каплям добавляли за 10 мин. Конечную смесь перемешивали в течение 60 мин при 0°C и 2 ч при кт. Добавляли DCM (20 мл), органическую фазу промывали водой (15 мл) и насыщенным NaCl (15 мл) и сушили над MgSO4. DCM выпаривали и продукт очищали ЖХ (гексан:EtOAc, 2:1, Rf 0,24). Продукт 48 получали в виде бесцветного масла (842 мг) с выходом 64% (за 3 стадии). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,19 (6Н, д, J=7,0), 2,63 (1Н, гепт, J=7,0), 2,83 (4Н, с), 5,85 (2Н, с). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 18,60, 25,54, 33,77, 83,50, 150,92, 168,39, 175,08. ИК (CHCl3): 2981 m, 2945 w, 2880 w, 1823 s, 1795 vs, 1748 vs, br, 1720 m, sh, 1471 m, 1431 m, 1389 w, 1370 m, 1231 vs, 1199 vs, 1113 s, 1045 m, 925 s, см'1. ESI MC: 282 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C10H13O7NNa 282,05842; найдено 282,05848.
Изопропил 6-диазо-2-((((изобутирилокси)метокси)карбонил)амино)-5-оксогексаноат (49)
Соединение 48 (268 мг, 1,03 ммоль, 1,1 экв.) растворяли в абсолютном дихлорметане (8 мл). Полученный раствор охлаждали до 0°C, и по каплям добавляли раствор соединения 3 (200 мг, 0,94 ммоль) в дихлорметане (1 мл). Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 15 мин при 0°C на охлаждающей бане. Полученную реакционную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Органический растворитель выпаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле (хлороформ:ацетон, 10:1), с получением требуемого продукта 49 (180 мг, 54%) в виде желтого аморфного твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,17-1,19 (6Н, м), 1,25-1,27 (6Н, м), 1,94-2,04 (1Н, м), 2,18-2,26 (1Н, м), 2,32-2,49 (2Н, м), 2,59 (1Н, гепт, J=6,9), 4,31 (1Н, тд, J=8,1, 4,7), 5,05 (1Н, гепт, J=6,3),
5,28 (1Н, с), 5,62 (1Н, д, J=8,0), 5,71 (1Н, д, J=5,8), 5,75 (1Н, д, J=5,8). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 18,82 (2С), 21,84, 21,86, 27,67, 33,91, 36,37, 53,66, 54,99, 69,84, 80,14, 154,45, 171,03, 176,19. ИК (CHCl3):3424 w, 2111 s, vs, 1750 sh, vs, 1732 vs, 1641 m, s, 1512 s, 1387 sh, s, 1377 s, 1370 sh, s см-1. Оптическое вращение: [a]22D+5,4° (с 0,202, CH2Cl2). ESI MC: 380 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C15H23O7N3Na 380,14282; найдено 380,14286.
Синтез изопропил 2-((((4-(2-(2-амино-3-метилбутанамидо)-5-уреидопентанамидо)бензил)окси)карбонил)амино)-6-диазо-5-оксогексаноата (51).
Изопропил 2-((((4-(2-(2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-метилбутанамидо)-5уреидопентанамидо)бензил)окси)карбонил)амино)-6-диазо-5-оксогексаноат (50)
- 50 034571 о
h2n^(
ν9-Флуоренилметилоксикарбонил-валил-цитрулил-(4-аминобензил)-(4-нитрофенил)карбонат (191 мг, 0,249 ммоль, 1,2 экв.) растворяли в сухом ДМФА (2,0 мл) и по каплям добавляли раствор соединения 3 (44 мг, 0,208 ммоль) в сухом ДМФА (1,0 мл). К полученной реакционной смеси по каплям добавляли диизопропилэтиламин (130 мкл, 0,747 ммоль, 3 экв.). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Органический растворитель выпаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле (хлороформ:метанол, 15:1) с получением требуемого продукта 50 (110 мг, 53%) в виде белого аморфного твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО): 0,85 (3H, д, J=6,8), 0,88 (3H, д, J=6,9), 1,16 (3H, д, J=6,6), 1,18 (3H, д, J=6,6), 1,31-1,49 (2Н, м), 1,54-1,81 (3H, м), 1,892,03 (2Н, м), 2,35-2,44 (2Н, м), 2,89-3,05 (2Н, м), 3,91-3,98 (2Н, м), 4,20-4,34 (3H, м), 4,39-4,44 (1Н, м), 4,86-5,00 (3H, м), 5,40 (2Н, с), 5,97 (1Н, т, J=5,9), 6,05 (1Н, с), 7,28 (2Н, д, J=8,7), 7,32 (2Н, тд, J=7,5, 1,2), 7,39-7,44 (3H, м), 7,59 (2Н, д, J=8,3), 7,66 (1Н, д, J=7,7), 7,74 (2Н, т, J=7,8), 7,89 (2Н, д, J=7,6), 8,12 (1Н, д, J=7,5), 10,06 (1Н, с). 13С ЯМР (101 МГц, ДМСО): 18,28, 19,23, 21,45, 21,52, 25,78, 26,80, 29,48, 30,46, 36,32, 38,58, 46,69, 53,10, 53,42, 60,08, 65,29, 65,69, 68,04, 118,91 (2С), 120,10 (2С), 125,37 (2С), 127,07 (2С), 127,65 (2С), 128,61 (2С), 131,65, 138,64, 140,71 (2С), 143,77, 143,90, 156,13 (2С), 158,90, 170,60, 171,28, 171,55, 194,03. ИК (KBr): 3400 s, br, sh, 3327 s, br, 3066 w, 2964 m, 2937 m, 2106 s, 1705 vs, br, 1651 vs, 1609 s, 1533 vs, 1517 vs, sh, 1479 m, 1466 m, 1450 s, 1415 m, 1386 s, sh, 1376 s, 1334 s, 1320 s, sh, 1248 s, 1183 m, 1145 m, 1106 s, 1047 m, 1020 m, sh, 826 w, 777 w, sh, 621 w, 427 w см-1. Оптическое вращение: [a]22D-15,6° (c 0,631, ДМСО). ESI MC: 863 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для Cz^NsOwNa 863,36986; найдено 863,36997.
Изопропил 2-((((4-(2-(2-амино-3-метилбутанамидо)-5-уреидопентанамидо)бензил)окси)карбонил)амино)-6-диазо-5-оксогексаноат (51) о
H2N^<
Соединение 50 (110 мг, 0,131 ммоль) растворяли в сухом ДМФА (0,5 мл). Добавляли пиперидин (32 мкл 0,327 ммоль, 2,5 экв.) и полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Органический растворитель выпаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле (хлороформ:метанол, 2:1), с получением требуемого продукта 51 (70 мг, 87%) в виде белого аморфного твердого вещества.
Синтез изопропил 2-((((4-(2-(2-ацетамидо-3-метилбутанамидо)-5-уреидопентанамидо)бензил)окси)карбонил)амино)-6-диазо-5-оксогексаноата (52).
Изопропил 2-((((4-(2-(2-ацетамидо-3-метилбутанамидо)-5-уреидопентанамидо)бензил)окси)карбонил)амино)-6-диазо-5-оксогексаноат (52) о
h2n-<
ν;
Ίψ
Соединение 51 (100 мг, 0,162 ммоль) растворяли в сухом ДМФА (2 мл) и в полученный раствор по каплям добавляли диизопропилэтиламин (144 мкл, 0,842 ммоль, 5,1 экв.) с последующим добавлением ацетангидрида (76,5 мкл, 0,81 ммоль, 5,0 экв.). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Органический растворитель выпаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле (хлороформ:метанол, 7:1) с получением требуемого продукта 52 (97 мг, 91%) в виде желтого аморфного твердого вещества.
Синтез изопропил 2-(2-(2-амино-3-метилбутанамидо)-5-уреидопентанамидо)-6-диазо-5оксогексаноата (56).
Изопропил 2-(2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-5-уреидопентанамидо)-6-диазо-5оксогексаноат (53)
- 51 034571
Fmoc-Cit-COOH (2,05 г, 5,16 ммоль, 1,1 экв.) и TBTU (1,81 г, 5,63 ммоль, 1,2 экв.) растворяли в абсолютном ДМФА (40 мл) и добавляли диизопропилэтиламин (2,51 мл, 14,07 ммоль, 3 экв.). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин и затем при помощи шприца добавляли раствор соединения 3 (1,0 г, 4,69 ммоль) в абсолютном ДМФА (20 мл). Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре в инертной атмосфере. Органический растворитель выпаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле (хлороформ:метанол, 15:1) с получением требуемого продукта 53 (1,84 г, 66%) в виде желтого аморфного твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО): 1,16 (3H, д, J=4,6), 1,17 (3H, д, J=4,4), 1,37-1,57 (3H, м), 1,611,70 (1Н, м), 1,76-1,86 (1Н, м), 1,94-2,03 (1Н, м), 2,33-2,46 (2Н, м), 2,94-3,03 (2Н, м), 4,03-4,08 (1Н, м), 4,15-4,31 (4Н, м), 4,88 (1Н, гепт, J=6,3), 5,42 (2Н, с), 5,96 (1Н, т, J=5,8), 6,01 (1Н, с), 7,31-7,34 (2Н, м), 7,39-7,43 (2Н, м), 7,53 (1Н, д, J=8,1), 7,73-7,74 (2Н, м), 7,88 (2Н, д, J=7,5), 8,28 (1Н, д, J=7,5). 13C ЯМР (101 МГц, ДМСО): 21,45, 21,49, 25,91, 26,72, 29,39, 36,22, 38,77, 46,68, 51,48, 54,06, 65,67, 68,02, 120,10 (2С), 125,36 (2С), 127,09 (2С), 127,65 (2С), 140,72 (2С), 143,80, 143,91, 155,96, 158,87, 171,05, 172,29, 194,04. ИК (KBr): 3435 vs, br, 3348 vs, br, sh, 3068 m, 2979 m, 2936 m, 2871 w, 2105 s, 1723 s, 1678 vs, br, 1610 s, sh, 1540 s, br, 1478 s, 1466 m, sh, 1450 m, 1386 s, sh, 1376 s, 1252 s, 1220 m, sh, 1184 m, sh, 1146 m, 1105 s, 1052 m, 1032 m, 760 m, 741 m, 621 m, 427 s см-1. ESI MC: 615 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C30H36O7N6Na 615,25377; найдено 615,25383.
Изопропил 2-(2-амино-5-уреидопентанамидо)-6-диазо-5-оксогексаноат (54)
Соединение 53 (1,84 г, 3,11 ммоль) растворяли в сухом ДМФА (24 мл). Добавляли пиперидин (767 мкл 7,76 ммоль, 2,5 экв.) и полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Органический растворитель выпаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле (хлороформ:метанол, 2:1) с получением требуемого продукта 54 (874 мг, 76%) в виде белого аморфного твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО): 1,17 (3H, д, J=4,4), 1,18 (3H, д, J=4,3), 1,27-1,47 (3H, м), 1,48-1,58 (1Н, м), 1,76-1,85 (1Н, м), 1,93-2,01 (1Н, м), 2,31-2,43 (2Н, м), 2,93 (2Н, кв, J=6,4), 3,14 (1Н, дд, J=7,3, 5,3), 4,88 (1Н, гепт, J=6,3), 5,36 (2Н, с), 5,90 (1Н, т, J=5,7), 6,07 (1H, с), 8,13 (1H, д, J=7,7). 13C ЯМР (101 МГц, ДМСО): 21,45, 21,50, 26,08, 26,48, 32,69, 36,25, 51,22, 54,21, 68,03, 158,72, 171,18, 175,56, 194,05. ИК (CHCl3): 3509 w, 3414 w, sh, 3446 w, 3357 m, br, sh, 3116 w, 2939 w, 2110 s, 1731 s, 1664 vs, br, 1598 m, 1467 w, 1450 m, 1387 m, sh, 1377 s, 1349 m, 1183 w, 1145 m см-1. Оптическое вращение: [a]22D3,2° (с 0,218, CH2Cl2). ESI MC: 371 ([M+H]+). HR ESI MC: вычислено для C^O^Na 393,18569; найдено 393,18575.
Изопропил 11-(4-диазо-3-оксобутил)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-5-изопропил-3,6,9-триоксо-8-(3уреидопропил)-2-окса-4,7,10-триазадодекан-12-оат (55) о
h2n-\
NFmoc-Val-COOH (484 мг, 1,43 ммоль, 1,1 экв.) и TBTU (499 мг, 1,55 ммоль, 1,2 экв.) растворяли в абсолютном ДМФА (10 мл) и добавляли диизопропилэтиламин (677 мкл, 3,89 ммоль, 3 экв.). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин и затем при помощи шприца добавляли раствор соединения 54 (480 мг, 1,30 ммоль) в абсолютном ДМФА (5 мл). Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре в инертной атмосфере. Органический растворитель выпаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле (хлороформ:метанол, 15:1) с получением требуемого продукта 55 (750 мг, 84%) в виде белого аморфного твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО): 0,84 (3H, д, J=6,7), 0,86 (3H, д, J=6,8), 1,16 (3H, д, J=4,5),
1,17 (3H, д, J=4,5), 1,32-1,54 (3H, м), 1,60-1,68 (1Н, м), 1,73-1,82 (1Н, м), 1,91-2,04 (2Н, м), 2,30-2,46 (2Н, м), 2,90-3,02 (2Н, м), 3,90 (1Н, дд, J=9,1, 7,0), 4,13-4,18 (1Н, м), 4,20-4,34 (4Н, м), 4,87 (1Н, гепт, J=6,2),
- 52 034571
5,41 (2Н, с), 5,94 (1Н, т, J=5,8), 6,04 (1Н, с), 7,30-7,34 (2H, м), 7,39-7,45 (3H, м), 7,72-7,76 (2Н, м), 7,89 (2Н, д, J=7,5), 8,01 (1Н, д, J=7,6), 8,31 (1Н, д, J=7,4). 13С ЯМР (101 МГц, ДМСО): 18,26, 19,26, 21,48, 21,52, 25,99, 26,57, 29,54, 30,51, 36,09, 38,79, 46,71, 51,37, 52,15, 60,05, 65,68, 68,04, 120,15 (2С), 125,41 (2С), 127,12 (2С), 127,68 (2С), 140,72, 140,75, 143,79, 143,93, 156,12, 158,84, 171,03, 171,11, 171,76, 194,15. ИК (KBr): 3415 m, vbr, sh, 3360 m, br, 3283 m, 3068 w, 2964 w, 2937 w, 2873 w, 2106 m, 1727 m, 1686 s, 1655 vs, sh, 1645 vs, 1540 s, br, 1478 w, 1465 m, 1451 m, 1386 m, sh, 1376 m, 1293 m, 1249 m, 1226 m, 1183 w, sh, 1146 m, 1106 m, 1033 w, 1009 vw, 760 w, 741 w, 621 vw, 427 vw см-1. Оптическое вращение: [a]22D-19,3° (c 0,114, ДМСО). ESI MC: 714 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C35H45N7O8Na 714,32218; найдено 714,32218.
Изопропил 2-(2-(2-амино-3-метилбутанамидо)-5-уреидопентанамидо)-6-диазо-5-оксогексаноат (56) о h2n—
Соединение 55 (200 мг, 0,289 ммоль) растворяли в сухом ДМФА (3 мл). Добавляли пиперидин (71 мкл 0,723 ммоль, 2,5 экв.) и полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Органический растворитель выпаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле (хлороформ:метанол, 2:1) с получением требуемого продукта 56 (110 мг, 81%) в виде белого аморфного твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО): 0,77 (3H, д, J=6,8), 0,87 (3H, д, J=6,9), 1,16 (3H, д, J=5,3), 1,18 (3H, д, J=5,2), 1,30-1,52 (3H, м), 1,57-1,68 (1Н, м), 1,73-1,83 (1Н, м), 1,86-2,01 (2Н, м), 2,34-2,44 (2Н, м), 2,89-3,00 (2Н, м), 4,06-4,18 (2Н, м), 4,29-4,37 (1Н, м), 4,88 (1Н, гепт, J=6,3), 5,37 (2Н, с), 5,91 (1Н, т, J=5,8), 6,05 (1Н, с), 8,04 (1H, д, J=7,8), 8,34 (1H, д, J=7,4). 13C ЯМР (101 МГц, ДМСО): 17,49, 18,76, 21,46, 21,50, 25,86, 26,44, 29,61, 30,44, 36,08, 38,64, 51,45, 51,93, 57,96, 68,04, 158,99, 169,93, 170,95, 171,58, 194,03. ИК (KBr): 3500 w, br, sh, 3338 m, vbr, 3116 w, 2984 s 2965 s, 2936 m, 2874 m, 2109 s, 1731 s, 1653 vs, br, 1602 s, br, sh, 1552 s, br, 1517 s, 1466 m, 1452 m, 1387 s, sh, 1376 s, 1234 s, 1183 m, 1145 s, 1106 s см-1. Оптическое вращение: [a]22D-13,0° (с 0,270, ДМСО). ESI MC: 470 ([M+H]+). HR ESI MC: вычислено для C20H36O6N7 470,27216; найдено 470,27208.
Синтез изопропил 2-(2-(2-ацетамидо-3-метилбутанамидо)-5-уреидопентанамидо)-6-диазо-5оксогексаноата (57).
Изопропил 2-(2-(2-ацетамидо-3-метилбутанамидо)-5-уреидопентанамидо)-6-диазо-5-оксогексаноат (57) о
h2n^<
N
Соединение 56 (50 мг, 0,107 ммоль) растворяли в сухом ДМФА (1 мл) и к полученному раствору по каплям добавляли диизопропилэтиламин (95 мкл, 0,543 ммоль, 5,1 экв.) с последующим добавлением ацетангидрида (50 мкл, 0,532 ммоль, 5,0 экв.). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Органический растворитель выпаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле (хлороформ:метанол, 7:1) с получением требуемого продукта 57 (50 мг, 92%) в виде желтого аморфного твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): 0,82 (3H, д, J=6,9), 0,84 (3H, д, J=7,1), 1,16 (3H, д, J=4,8), 1,17 (3H, д, J=4,9), 1,31-1,53 (3H, м), 1,60-1,68 (1Н, м), 1,73-1,82 (1Н, м), 1,86 (3H, с), 1,89-2,00 (2Н, м), 2,31-2,44 (2Н, м), 2,93-2,97 (2Н, м), 4,12-4,17 (2Н, м), 4,21-4,26 (1Н, м), 4,87 (1Н, гепт, J=6,3), 5,39 (2Н, с), 5,92 (1Н, т, J=5,8), 6,02 (1H, с), 7,86 (1H, д, J=8,7), 7,97 (1H, д, J=7,6), 8,20 (1H, д, J=7,5). 13C ЯМР (101 МГц, CDCT3): 18,20, 19,21, 21,45, 21,49, 22,51, 25,95, 26,56, 29,36, 30,40, 36,10, 38,77, 51,33, 52,11, 57,67, 68,01, 158,80, 169,37, 170,97, 171,05, 171,70, 194,05. Оптическое вращение: [a]22D22,6° (с 0,257, ДМСО). ESI MC: 534 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C22H37O7N7Na 534,26467; найдено 513,26456.
Синтез (S)-6-диазо-5-оксо-2-((((4-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-тригидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)окси)карбонил)амино)гексаноата (59).
2-(Ацетоксиметил)-6-(4-((((6-диазо-1-этокси-1,5-диоксогексап-2-ил)карбамоил)окси)метил)фенокси)тетрагидро-2Н-пиран-3,4,5-триилтриацетат (58)
- 53 034571
о
4-[[[(4-Нитрофенокси)карбонил]окси]метил]фенил-в-О-глюкопиранозид 2,3,4,6-тетраацетат (полученный при помощи способа, аналогично описанному в Angew. Chem. Int. Ed. 2006, 45, 5345-5348, 800 мг, 1,3 ммоль) растворяли в сухом ДМФА (6 мл) и по каплям добавляли раствор соединения 20 (330 мг, 1,66 ммоль, 1,3 экв.) в сухом ДМФА (3 мл). К полученной реакционной смеси по каплям добавляли диизопропилэтиламин (0,91 мл, 5,2 ммоль, 4 экв.). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Органический растворитель выпаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле (хлороформ:ацетон, 7:1) с получением требуемого продукта 58 (596 мг, 68%) в виде желтого аморфного твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): 1,25 (3H, м), 1,93-2,04 (1Н, м), 2,02 (3H, с), 2,03 (3H, с), 2,04 (3H, с), 2,06 (3H, с), 2,15-2,23 (1Н, м), 2,28-2,51 (2Н, м), 3,85 (1Н, ддд, J=10,0, 5,3, 2,5), 4,13-4,20 (3H, м), 4,25-4,34 (2Н, м), 5,03-5,07 (3H, м), 5,13-5,17 (1Н, м), 5,21-5,31 (3H, м), 5,49 (1Н, д, J=7,9), 6,94-6,97 (2Н, м), 7,27-7,31 (2Н, м). 13С ЯМР (101 МГц, CDCE): 14,24, 20,71, 20,72, 20,80, 21,82, 27,59, 36,50, 53,61, 54,87, 61,80, 62,01, 66,56, 68,34, 71,23, 72,16, 72,78, 99,13, 117,05 (2С), 129,95 (2С), 131,38, 156,06, 156,86, 169,39, 169,50, 170,32, 170,66, 171,91, 193,55. ИК (CHCl3): 3429 w, 2110 s, 1757 vs, 1744 sh, vs, 1720 sh, s, 1641 m, 1613 m, 1592 w, 1512 s, 1377 m, 1368 s, 1178 m, 1070 sh, s, 651 w см-1. Оптическое вращение: [a]22D-3,3° (с 0,631, CH2O2). ESI MC: 680 ([M+H]+). HR ESI MC: вычислено для C30H38O15N3 680,22974; найдено 680,22998.
Этил (S)-6-диазо-5-оксо-2-((((4-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-тригидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)окси)карбонил)амино)гексаноат (5 9)
Соединение 58 (833 мг, 1,3 ммоль) растворяли в метаноле (20 мл) и по каплям добавляли 50-60% раствор гидразингидрата в воде (417 мкл, 7,36 ммоль, 6,0 экв.). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Органический растворитель выпаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле (хлороформ:метанол 7:1) с получением требуемого продукта 59 (240 мг, 37%) в виде желтого аморфного твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО): 1,18 (3H, т, J=7,1), 1,72-1,81 (1Н, м), 1,91-2,00 (1Н, м), 2,34-2,45 (2Н, м), 3,12-3,19 (1Н, м), 3,20-3,28 (2Н, м), 3,29-3,34 (1Н, м), 3,42-3,48 (1Н, м), 3,66-3,71 (1Н, м), 3,97-4,03 (1Н, м), 4,05-4,12 (2Н, м), 4,54 (1Н, т, J=5,8), 4,86 (1Н, д, J=7,3) 4,96 (2Н, с), 5,01 (1Н, д, J=5,3), 5,08 (1Н, д, J=4,6), 5,30 (1Н, д, J=4,8), 6,05 (1Н, с), 7,01 (2Н, д, J=8,6), 7,28 (2Н, д, J=8,6), 7,67 (1Н, д, J=7,8). 13C ЯМР (101 МГц, ДМСО): 14,07, 25,82, 36,30, 53,27, 60,59, 60,70, 65,30, 69,72, 73,23, 76,63, 77,04, 100,28, 116,11 (2С), 129,49 (2С), 130,09, 156,16, 157,14, 172,06, 201,32. ИК (KBr): 3413 m, 2979 w, 2935 w, 2108 m, 1718 m, 1649 m, 1614 m, 1592 w, 1513 m, 1392 m, sh, 1383 m, 1346 m, 1233 s, 1179 m, sh, 1074 s, 1046 s, sh, 1018 m, 948 w, sh, 832 w, 511 w см-1. Оптическое вращение: [a]22D-18,9° (с 0,254, ДМСО). ESI MC: 534 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C22H29OnN3Na 534,16943; найдено 534,16951.
Синтез изопропил 2-(2-ацетамидо-3-(1Н-индол-3-ил)пропанамидо)-6-диазо-5-оксогексаноата (60).
Изопропил 2-(2-ацетамидо-3-(1Н-индол-3-ил)пропанамидо)-6-диазо-5-оксогексаноат (60)
Соединение 38 (425 мг, 1,06 ммоль, 1 экв.) растворяли в сухом ДМФА (8 мл). При помощи шприца добавляли пиридин (168 мг, 171 мкл, 2,13 ммоль, 2 экв.) с последующим добавлением ацетангидрида (130 мг, 121 мкл, 1,28 ммоль, 1,2 экв.). Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при кт в инертной атмосфере. ДМФА выпаривали. Неочищенный продукт очищали колоночной ЖХ (CHCl3:МеОН, 20:1) с получением 423 мг продукта 60 в виде желтого аморфного твердого вещества (90% выход). 1H ЯМР (400 МГц, CDCE): 1,20 (3H, д, J=6,3), 1,24 (3H, д, J=6,3), 1,81-1,94 (1Н, м), 1,98 (3H, с), 2,04-2,33 (3H, м), 3,17 (1Н, дд, J=14,6, 7,2), 3,33 (1Н, дд, J=14,7, 5,4), 4,37 (1Н, тд, J=7,7, 4,4), 4,75 (1Н, тд, J=7,4, 5,4), 4,95 (1Н, гепт, J=6,3), 5,16 (1Н, шир.с), 6,22 (д, J=7,6), 6,64 (1Н, д, J=7,3), 7,09-7,14 (2Н, м),
- 54 034571
7,18 (1Н, ддд, J=8,2, 7,0, 1,3), 7,32-7,38 (1Н, м), 7,66 (1Н, дд, J=7,9, 1,1), 8,31 (1Н, шир.с). 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 21,77, 21,82, 23,38, 26,97, 28,29, 36,25, 52,28, 54,07, 54,95, 69,54, 110,38, 111,42, 118,78, 119,79, 122,27, 123,57, 127,74, 136,35, 170,25, 170,85, 171,58, 194,04. Оптическое вращение: [a]22D-11, 6° (с 0,284, CHCl3). ИК (CHCl3): 3478 m, 3417 m, 3329 w, vbr, 3117 w, 2986 m, 2934 w, 2874 vw, 2855 w, 2110 s, 1732 s, 1660 vs, br, 1635 s, sh, 1600 w, sh, 1554 m, br, sh, 1505 s, br, 1467 w, 1457 m, 1385 s, sh, 1377 w, vbr, 1350 m, 1183 m, 1146 m, 1105 s, 1093 m, sh, 1012 w. ESI MC: 464 ([M+Na]+). HR ESI MC: вычислено для C22H27O5N5Na 464,19044; найдено 464,19050.
Схема 9 >O--p
Fmoc0 (Rt = Et) (Rd = iPr)
О d nh2 (Rt = Et) (Rt = iPr) yy P R1 a cAn о
6a (R-ι = Et)
6b (R·! = iPr) с О
----- N2<Jl
О О „NH
Fmoc (R·, = Et) _ 2 (R, = iPr)
ДЛаN у
9a (R·, = Et) 9b (R-| = iPr)
Реагенты и соединения: (a) LiHMDS, FMOC-Cl, ТГФ, -78°C, 87% для соединения 7a, 92% для соединения 7b; (b) н-BuLi, TMS диазометан, ТГФ, от -116 до -78°C, 80% для соединения 8а, 85% для соединения 8b; (с) Пиперидин, DCM, кт, 6 6% для соединения 2а и 66% для соединения 2b; (d) CH3CN, 60°C, 50% для соединения 9а; CDCl3, кт, в течение ночи, 41% для соединения 9b.
Этил 5-(диазометил)-3,4-дигидро-2Н-пирроле-2-карбоксилат (9а)
Согласно схеме 9 соединение 20 (117 мг, 0,588 ммоль, 1 экв.) растворяли в CH3CN (1 мл). Полученную реакционную смесь нагревали в течение 2 ч при 60°C в инертной атмосфере. CH3CN выпаривали и неочищенный продукт очищали ВЭЖХ (CH3CN/H2O, HCOOH) с получением светло-оранжевого масла (53 мг) с выходом 50%. 1H ЯМР (CDCl3): 1,27 (3H, т, J=7,1), 2,83-2,93 (1Н, м), 2,93-3,07 (2Н, м), 3,09-3,20 (1Н, м), 4,24 (2Н, дкв, J=7,1, 2,4), 5,17 (1Н, дд, J=9,2, 3,5), 7,43 (1Н, с); 13С ЯМР (101 МГц, CDCb): 14,11, 19,98, 34,19, 59,06, 62,53, 126,82, 142,77, 168,70; ИК (CHCl3): 2942 w, 2910 w, 2875 vw, 2103 vw, 1747 vs, 1475 w, 1676 m, 1605 vw, 1552 w, 1462 w, 1446 w, 1396 w, 1377 m, 1202 vs, 1177 m, 1116 w, 1095 m, см ; ESI MC: 182 ([M+H]+); HR ESI MC: вычислено для C8H12O2N3 182,0930; найдено 182,0931.
Изопропил 5-(диазометил)-3,4-дигидро-2Н-пирроле-2-карбоксилат (9b)
Согласно схеме 9 соединение 3 (100 мг, 0,469 ммоль, 1 экв.) растворяли в CDCl3 (2 мл). Полученную реакционную смесь перемешивали при кт в течение ночи. CDCl3 выпаривали и неочищенный продукт очищали ВЭЖХ (CH3CN/H2O, HCOOH), с получением светло-оранжевого масла (41 мг) с выходом 45%. 1Н ЯМР (CDCl3): 1,25 (3H, д, J=6,1), 1,27 (3H, д, J=6,1), 2,81-2,95 (2Н, м), 2,96-3,06 (1Н, м), 3,08-3,18 (1Н, м), 5,09 (1Н, гепт, J=6,1), 5,13 (1Н, дд, J=9,1, 3,4), 7,43 (1Н, с); 13С ЯМР (101 МГц, CDCl3): 20,00, 21,69 (2С), 21,75, 34,24, 59,20, 70,48, 126,84, 142,71, 168,25; Оптическое вращение: [α]2%-31,8° (с 0,110, CHCl3); ИК (CHCl3): 2104 w, 1741 vs, 1675 w, 1644 w, 1551 w, 1465 m, 1388 m, sh, 1376 m, 1209 s, 1182 m, 1147 m, 1106 s, см-1; ESI MC: 196 ([M+H]+); HR ESI MC: вычислено для C9H14O2N3 196,10805; найдено 196,10808.
Пример 5. Оценка DON пролекарства.
Обзор.
Настоящее изобретение демонстрирует значительную эффективность DON на мышиных моделях GBM, хотя была отмечена выраженная токсичность. При попытке увеличить терапевтический индекс DON направленно синтезировали несколько DON пролекарств. Первоначальная стратегия включает блокировку DON карбоновой кислоты простейшими алкиловыми эфирами, такими как этиловый эфир 20 и изопропиловый эфир 3 (фиг. 20). Однако соединение 3 и 20 проявили химическую нестабильность циклизации с образованием неспецифического диазоимина. Учитывая эту нестабильность, первичный амин и карбоксилат DON далее блокировали пролекарственными группами. Использовали три типа аминных прогрупп, включая (оксодиоксоленил)метилкарбаматные сложные эфиры (13 и 36), дипептиды (9 и 25) и пивалоилоксиметиловые (РОМ) сложные эфиры (14, 32 и 42). Пролекарства, содержащие двойные прогруппы, привели к достаточной химической стабильности, позволяющей проводить дальнейшую оценку метаболической стабильности в анализах in vitro. Хотя все пролекарства проявили быстрый метаболизм в плазме мышей, некоторые обеспечивали отличную стабильность в плазме обезьян и людей. При оценке in vivo самое стабильное DON пролекарство (5 с, сложный метил-POM-DON-изопропиловый эфир) приводило к 10-кратному развитию умственных способностей: соотношение плазмы по сравнению с DON у обезьян таким образом обеспечивает возможный клинический путь к применению DON пациентами с
- 55 034571
GBM.
Химия.
Схема 9 описывает синтез и характеристику сложноэфирного пролекарства на основе соединений 20 и 3 DON и их последующую циклизацию в новые диазоимины 9a-b. Сложные пироглутаматные эфиры 6a-b (D'Andrea, et al., 2008) FMOC-защищали с получением соединений 18 и 1. Формирование диазокетонов 19 и 2 выполняли с использованием TMS диазометана с хорошим выходом. Быстрое удаление защиты с пиперидином приводило к получению сложноэфирного пролекарства на основе соединений 20 и 3. Неожиданно медленная циклизация не обнаруживалась даже в мягких условиях (например, перемешивание в хлороформе при комнатной температуре), приводя к получению новых диазоиминов 9a и 9b. Считается, что это является первым примером функциональной группы, описанной в химической литературе. Попытки избежать циклизации соединений 20 и 3 при солеобразовании в протонатный амин привели к нестабильности диазогруппы. Кроме того, в отличие от большинства иминов 5-членные циклические диазоимины 9a-b были признаны стабильными даже при кислом рН и не преобразовывались обратно в сложные эфиры DON (результаты не показаны).
Таблица 3
Новые диазоимины
9a Θ z 4 ® ΓΛ /0^ N. 7. Ή Λ 0
9b Θ . 4 ® ΓΛ n. \ Ή Λ ' 0
Учитывая их достаточную химическую стабильность, соединения 20 и 3 использовали в качестве синтетических полупродуктов для получения пролекарств с двойной прогруппой (схемы 8 и 2). (Оксодиоксоленил)метилкарбаматные аддукты соединений 36 и 13 синтезировали, как представлено на схемах 8 и 2. 4-(Гидроксиметил)-5-метил-1,3-диоксол-2-он подвергали взаимодействию с S-этилкарбонохлоридотионатом (Keicher, et al., 2009) с последующим взаимодействием с N-гидроксисукцинимидом, с получением соединения 12. Взаимодействие соединений 20 и 3 с соединением 12 приводило к (оксодиоксоленил)метилкарбаматным сложным эфирам 36 и 13 с превосходным выходом.
На схемах 1, 4 и 7 изображен синтез дипептидных сложных эфиров DON. Сложные эфиры DON 20 и 3 подвергали сочетанию с Fmoc-L-лейцином или Fmoc-L-триптофаном с использованием HBTU с высоким выходом с образованием защищенных дипептидов 33 и 37 (схема 7). Удаление защиты с диэтиламина или пиперидина приводило к желаемому лейцин-DON 25 (схема 4) и 9 (схема 1) и триптофан-DON пролекарству 34 и 38 (схема 7).
Как показано на схеме 6, РОМ производное 42 синтезировали из соединения 20 с использованием сложного POM-N-гидроксисукцинамидатного эфира (Gallop, et al., 2008) с выходом 40%. Введение метильной группы в РОМ сложный эфир приводило к образованию метил-РОМ производного 32 (схема 6) и 14 (схема 2) с добавленным хиральным центром. Оба соединения 32 и 14 синтезировали из соединений 20 и 3 с использованием 1-((((2,5-диоксопирролидин-1-ил)окси)карбонил)окси)этилпивалата (Gallop, et al., 2008). Соединение 32 получали в виде смеси двух диастереомеров (1:1 соотношение) с выходом 68%. Соединение 14 также получали в виде диастереомерной смеси в соотношении (1:1), далее очищали в его соответствующие диастереомеры 1 и 2, среди которых диастереомер 1 использовали для последующего биологического тестирования, как описано ниже. Результаты и обсуждение DON показали надежное ингибирование метаболизма глутамина и противоопухолевую эффективность на мышиных моделях GBM. Несмотря на независимые линии доказательств, свидетельствующих о потенциальной терапевтической эффективности нацеливания метаболизма глутамина на GBM эффект, пока отсутствуют сообщения о воздействии DON на рост опухоли GBM in vivo. С использованием модели бокового ксенотрансплантата GBM на мышах U87 (Eshleman, et al., 2002) было первым подтверждением того, что системное введение DON (0,8 мг/кг, в.б.) тормозит метаболизм глутамина, как отражено в накоплении эндогенного глутамина в опухоли (фиг. 21А; р<0,05) аналогично другим системам моделей (Willis, et al., 1977; Windmueller, et al., 1974). Затем оценивали противоопухолевую эффективность, и было отмечено, что DON не только останавливает рост опухоли, но также эффективно индуцирует регрессию опухоли. В частности, у обработанных носителем мышей проявлялся значительный рост опухоли в течение эксперимента, в то время как у мышей, обработанных DON (0,8 мг/кг, в.б., ежедневно), проявлялось >50% уменьшение объема опухоли (фиг. 21В; основное действие во времени [F(3,48)=6,049, р=0,0014]; обработка [F(1,16)=33,42, р<0,0001]; взаимодействие [F(3,48)=21,70, р<0,0001]). Хотя DON проявлял отличную противоопухолевую эффективность, у всех мышей, получавших DON, проявлялись существенные признаки токсичности, включая снижение массы (12+4,1%), скрючивание, птоз и летаргия. Эти результаты согласуются с другими докладами об эффективности DON и токсичности как in vitro, так и in vivo (Fogal, et al., 2015; Cervantes-Madrid, et al., 2015; Potter, et al., 2015).
- 56 034571
Некоторые простые алкилэфирные пролекарства DON обнаруживают нестабильность. Блокировка карбоксилатных и аминных функциональных групп DON усиливает стабильность некоторых пролекарств. Пролекарственная стратегия часто применяется для повышения проницаемости ткани и изменения фармакокинетических параметров эффективных лекарственных средств. Действительно, пролекарственная стратегия является обычным делом при разработке лекарственных средств, так как 5-7% от утвержденных во всем мире препаратов составляют пролекарства (Rautio, et al., 2008). Первоначальная пролекарственная стратегия DON заключается в блокировке карбоновой кислоты легкими алкиловыми эфирами, такими как этиловые соединения 20 и изопропиловые соединения 3. Синтез этих двух производных представляет собой простое объединение соединения 20 и 3 с хорошим выходом. Удивительно, что про эти простые алкиловые эфиры DON ранее не сообщалось в химической литературе, учитывая, что химия и применение DON описывалось в многочисленных группах на протяжении более 60 лет (Magill, et al., 1957; Dion, et al., 1956; Magill, et al., 1956; Coffey, et al., 1956). Одной из возможных причин является обнаружение того, что соединения 20 и 3 были нестабильными, медленно циклизующимися с образованием неспецифических диазоиминов 9a и 9b. Эти два неспецифических производных считались химически стабильными даже при кислом рН, что исключало их применение в качестве DON пролекарства.
Учитывая нестабильность некоторых простых сложноэфирных пролекарств, первичный аминный и карбоксилатный DON блокировали пролекарственными группами. Такая двойная прогрупповая стратегия была рациональна для устранения потенциальной циклизации и потенциально дальнейшего улучшения липофильности. Использовали три аминные прогруппы, включая (оксодиоксоленил)метилкарбаматные сложные эфиры (фиг. 20, соединения 36, 13), дипептиды (25 и 38) и пивалоилоксиметиловые, основанные на (РОМ) сложные эфиры (42, 32, 14). Эти прогруппы были выбраны потому, что они ориентированы на различные метаболические ферменты, включая параоксогеназу, аминопептидазу и карбоксилэстеразу соответственно. Для придания дальнейшей метаболической стабильности РОМ производного (табл. 3, соединение 42) получали соответствующие метил-РОМ аналоги (32, 14). Все содержащие двойную прогруппу пролекарства проявляли достаточную химическую стабильность для дальнейшей оценки.
Все DON пролекарства быстро метаболизируются в плазме мыши, однако соединения 32 и 14 обнаруживали стабильность в плазме людей и обезьян. В табл. 3 показана стабильность DON пролекарств 36, 13, 25, 9, 34, 38, 42, 32 и 14 в плазме. Все пролекарства полностью метаболизируются в плазме мыши в течение времени инкубации 60 мин. Однако в плазме обезьян и человека пролекарства 32 и 14 с метилРОМ на амине и этиловом или изопропиловом эфире карбоксилата соответственно продемонстрировали средний/высокий уровень стабильности у 60-75% пролекарств, оставшихся в плазме обезьян, и 80-90% оставшихся в плазме крови человека за время инкубации 60 мин. Учитывая лучшую стабильность профиля в плазме крови человека соединения 14, оно было выбрано для дальнейшей оценки в фармакокинетических исследованиях и сравнения с DON по его способности проникновения в мозг и выделения DON.
Таблица 4
Соединение # Стабильность в плазме
Мыши Обезьяны Люди
36 0 0 0
13 0 0 0
25 0 1 1
9 0 1 1
34 0 4 12
38 0 10 30
42 0 0 9
32 0 75 88
14 0 61 91
Пролекарство 14 приводит к усилению доставки DON в мозг обезьян, но не мышей.
Как и ожидалось, DON пролекарство, которое полностью метаболизируется в плазме мыши, обнаруживает, что при пероральном введении DON (1) (0,8 мг/кг) и соединения 14 (0,8 мг/кг эквивалент) обнаруживаются аналогичные профили концентрации DON в плазме (фиг. 22А) и мозге (фиг. 22В), при дозировании мышей. AUC0-t DON после введения DON и соединения 14 в плазму составляла 1,25 и 1,22 нмоль-ч/мл соответственно, предлагая быстрое и полное высвобождение DON из соединения 14 in vivo. Аналогичным образом, в мозгу мыши AUC0-t DON после введения DON или соединения 14 составляла 0,57 и 0,69 нмоль-ч/г соответственно, с соотношением мозг/плазма примерно 0,46 от DON против 0,56 пролекарства 14. Результаты фармакокинетических исследований, подтвержденные in vitro исследованиями метаболизма, предлагаемым соединением 14 были полностью преобразованы в DON в плазме мыши.
После исследований на мышах фармакокинетику DON и соединения 14a оценивали на обезьянах, так как у обезьян лучше имитируется профиль стабильности с плазмой человека. У хвостатых макак при в.в. введении DON и соединения 14 (1,6 мг/кг DON эквивалент) продемонстрировано значительное различие профилей DON в плазме (фиг. 23A). Введение DON обеспечивало высокое воздействие на плазму
- 57 034571 с AUCo-t 42,7 нмоль-ч/мл. В противоположность этому, введение соединения 14 доставляло примерно 7кратное снижение воздействия DON на плазму с AUC0-t 5,71 нмоль-ч/мл. Противоположные наблюдения в спинномозговой жидкости показали повышенные уровни DON после введения соединения 14. В спинномозговой жидкости на 30 мин постдозирования введение DON приводило к доставке 0,33 нмоль/г DON, в то время как соединение 14 доставляло 1,43 нмоль/г DON. При сравнении плазмы с соотношением спинномозговой жидкости за 30 мин соединение 14 продемонстрировало 10-кратное повышение доставки DON в спинномозговую жидкость по сравнению с DON (фиг. 23В).
Антагонист глутамина 6-диазо-5-оксо-Ь-норлейцин (DON, 1) показывает надежную противораковую эффективность в доклинических и клинических исследованиях, но его разработка была приостановлена из-за заметной системной токсичности. В данном описании было продемонстрировано, что DON ингибирует метаболизм глутамина и проявляет противораковую эффективность на мышиной модели глиобластомы, не обнаруживая при этом токсичности. Для повышения терапевтического индекса DON использовали пролекарственную стратегию для увеличения его доставки в головной мозг и ограничения системного воздействия. Неожиданно было обнаружено, что простое алкилсложноэфирное пролекарство было неэффективно из-за химической нестабильности циклизации с образованием неспецифического диазоимина. Однако блокировка аминных и карбоксилатных функциональных групп DON придавала достаточную химическую стабильность для биологического тестирования. Хотя эти общие двойные пролекарственные группы проявляли быстрый метаболизм в плазме мыши, некоторые из них обеспечивали отличную стабильность в плазме обезьян и крови человека. Наиболее стабильное соединение (14, метилPOM-DON изопропиловый сложный эфир) является весьма стабильным в плазме обезьяны, человека, свиньи и собаки, но быстро метаболизируется в плазме мышей. При оценке эквимолярного дозирования обезьян соединение 14 поставляет низкие уровни DON в плазму, но повышенные уровни в спинномозговую жидкость, достигая 10-кратного повышения соотношения мозг:плазма по сравнению с DON. Такая стратегия может обеспечивать путь к использованию DON пациентами с GBM.
Ссылки.
Все публикации, патентные заявки, патенты и другие ссылки, представленные в данном описании, являются показателем уровня специалиста в данной области, к которой настоящее изобретение относится. Все публикации, патентные заявки, патенты и другие ссылки, представленные в данном описании, включены посредством ссылки в той же степени, как будто каждая отдельная публикация, патентная заявка, патент и другие ссылки были специально и индивидуально включены посредством ссылки. Следует понимать, хотя приведено определенное число патентных заявок, патентов и других ссылок, что такая ссылка не является признанием того, что любой из этих документов является частью общих знаний в данной области техники. В случае конфликта между данным описанием и включенными ссылками настоящее описание (включая любые его изменения, которые могут быть основаны на включенных ссылках) будет контрольным. В данном описании используются стандартные приемлемые в данной области термины, если не указано иное. В данном описании используются стандартные аббревиатуры для различных терминов.
Ahluwalia, G. S.; Grem, J. L.; Hao, Z.; Cooney, D. A.
Metabolism and action of amino acid analog anti-cancer agents.
- 58 034571
Pharmacol Ther 1990, 46, 243-271.
Alt, J.; Potter, M. C.; Rojas, C.; Slusher, B. S. Bioanalysis of 6-diazo-5-oxo-l-norleucine in plasma and brain by ultra-performance liquid chromatography mass spectrometry. Anal Biochem 2015, 474, 28-34.
Barclay, R. K.; Phillipps, M. A. Effects of 6-diazo-5-oxol-
norleucine and other tumor inhibitors on the biosynthesis of
nicotinamide adenine dinucleotide in mice. Cancer Res 1966, 26,
282-286.
Cervantes-Madrid, , D. ; Romero, Y. ; Duenas-Gonzalez, A.
Reviving Lonidamine and 6-Diazo-5-oxo-L-norleucine to Be Used in Combination for Metabolic Cancer Therapy. Biomed Res Int 2015, 2015, 690492.
Coffey, G. L.; Ehrlich, J.; Fisher, M. W. ; Hillegas, A. B.; Kohberger, D. L.; Machamer, Η. E.; Rightsei, W. A.; Roegner, F.
R. 6-Diazo-5-oxo-L-norleucine, a new tumor-inhibitory substance. I. Biologic studies. Antibiot Chemother (Northfield) 1956, 6,
487-497.
D'Andrea, S.; Zheng, Z.; Scola, P. Inhibitors of Hepatitis C Virus. In Google Patents: 2008.
Dion, H. W.; Fusari, S. A.; Jakubowski, Z. L.; Zora, J. G.;
Bartz, Q. R. 6-Diazo-5-oxo-L-norleucine, A New Tumor-inhibitory
Substance. II.1 Isolation and Characterization. J. Am. Chem.
Soc., 1956, 78, 3075-3077.
Dranoff, G.; Elion, G. B. ; Friedman, H. S.; Bigner, D. D.
Combination chemotherapy in vitro exploiting glutamine
metabolism of human glioma and medulloblastoma. Cancer Res 1985, 45, 4082-4086.
Dranoff, G.; Elion, G. B.; Friedman, H. S.; Campbell, G. L.; Bigner, D. D. Influence of glutamine on the growth of human glioma and medulloblastoma in culture. Cancer Res 1985, 45, 4077-4081.
Eagan, R. T.; Frytak, S.; Nichols, W. C.; Creagan, E. T.; Ingle, J. N. Phase II study on DON in patients with previously treated advanced lung cancer. Cancer Treat Rep 1982, 66, 16651666.
- 59 034571
Earhart, R. H.; Amato, D. J.; Chang, A. Y.; Borden, E. C.; Shiraki, M.; Dowd, Μ. E.; Comis, R. L.; Davis, T. E.; Smith, T. J. Phase II trial of 6-diazo-5-oxo-L-norleucine versus aclacinomycin-A in advanced sarcomas and mesotheliomas. Invest New Drugs 1990, 8, 113-119.
Earhart, R. H.; Koeller, J. M.; Davis, H. L. Phase I trial of 6-diazo-5-oxo-L-norleucine (DON) administered by 5-day courses. Cancer Treat Rep 1982, 66, 1215-1217.
Erickson, J. W. ; Cerione, R. A. Glutaminase: a hot spot for regulation of cancer cell metabolism? Oncotarget 2010, 1, 734740.
Eshleman, J. S.; Carlson, B. L.; Mladek, A. C.; Kastner, B. D.; Shide, K. L.; Sarkaria, J. N. Inhibition of the mammalian target of rapamycin sensitizes U87 xenografts to fractionated radiation therapy. Cancer Res 2002, 62, 7291-7297.
Fogal, V.; Babic, I.; Chao, Y.; Pastorino, S.; Mukthavaram, R.; Jiang, P.; Cho, Y. J.; Pingle, S. C.; Crawford, J. R.; Piccioni, D. E.; Kesari, S. Mitochondrial p32 is upregulated in Мус expressing brain cancers and mediates glutamine addiction. Oncotarget 2015, 6, 1157-1170.
Gallop, M. A.; Xu, F.; Phan, T.; Dilip, U.; Peng, G. Acyloxyalkyl carbamate prodrugs, methods of synthesis and use. In Google Patents: 2008.
Grayzel, A. I.; Seegmiller, J. E.; Love, E. Suppression of uric acid synthesis in the gouty human by the use of 6-diazo-5oxo-L-norleucine. J Clin Invest 1960, 39, 447-454.
Gross, Μ. I.; Demo, S. D.; Dennison, J. B.; Chen, L.; Chernov-Rogan, T.; Goyal, B.; Janes, J. R.; Laidig, G. J.; Lewis, E. R.; Li, J.; MacKinnon, A. L.; Parlati, F.; Rodriguez, M. L. M.; Shwonek, P. J.; Sjogren, E. B.; Stanton, T. F.; Wang, T.; Yang, J.; Zhao, F. Y.; Bennett, Μ. K. Antitumor Activity of the Glutaminase Inhibitor CB-839 in Triple-Negative Breast Cancer. Mol Cancer Ther 2014.
Harding, J. J. T., M.L.; Munster, P.N.; Le, M.H.; Molineaux, C.; Bennett, M.K.; Mittra, E.; Burris,H.A.; Clark, A.S.; Dunphy, M.; Meric-Bernstam, F.; Patel, M.R.; DeMichele,
- 60 034571
A.; Infante, J.R. Safety and tolerability of increasing doses of CB-839, a first-in-class, orally administered small molecule inhibitor of glutaminase, in solid tumors. J Clin Oncol 2015.
Hensley, С. T.; Wasti, A. T.; DeBerardinis, R. J. Glutamine and cancer: cell biology, physiology, and clinical opportunities. J Clin Invest 2013, 123, 3678-3684.
Hofer, A.; Steverding, D.; Chabes, A.; Brun, R.; Thelander, L. Trypanosoma brucei OTP synthetase: a target for the treatment of African sleeping sickness. Proc Natl Acad Sci USA 2001, 98, 6412-6416.
Hu, X.; Stern, Η. M.; Ge, L.; O’Brien, C.; Haydu, L.; Honchell, C. D.; Haverty, P. M.; Peters, B. A.; Wu, T. D.; Amler, L. C.; Chant, J.; Stokoe, D.; Lackner, M. R.; Cavet, G. Genetic alterations and oncogenic pathways associated with breast cancer subtypes. Mol Cancer Res 2009, 7, 511-522.
Keicher, J. D.; Roberts, C. D.; Rajwanshi, V. K. ; Griffith,
R. C.; Zheng, X.; Liehr, S. J. R.; Prhavc, M.; Kim, C. U.; Ray, A. S. Amino tricyclic-nucleoside compounds, compositions, and methods of use. In Google Patents: 2009.
Konopleva, Μ. Y.; Flinn, I. W. ; Wang, E.; DiNardo, C. D.; Bennett, M.; Molineaux, C.; Le, M.; Maris, M.; Frankfurt, 0. In Phase 1 study: Safety and tolerability of increasing doses of cb-839, an orally-administered small molecule inhibitor of glutaminase, in acute leukemia, Haematologica, 2015; Ferrata Storti Foundation Via Giuseppe Belli 4, 27100 Pavia, Italy: 2015; pp 378-379.
Le, A.; Lane, A. N.; Hamaker, M.; Bose, S.; Gouw, A. ; Barbi, J.; Tsukamoto, T.; Rojas, C. J.; Slusher, B. S.; Zhang, H.; Zimmerman, L. J.; Liebier, D. C.; Slebos, R. J.; Lorkiewicz,
P. K.; Higashi, R. M.; Fan, T. W.; Dang, С. V. Glucoseindependent glutamine metabolism via TCA cycling for proliferation and survival in В cells. Cell Metab 2012, 15, 110121 .
Lee, Y. Z.; Yang, C. W.; Chang, Η. Y.; Hsu, Η. Y.; Chen, I.
S. ; Chang, H. S.; Lee, С. H.; Lee, J. C.; Kumar, C. R. ; Qiu, Y.
Q. ; Chao, Y. S.; Lee, S. J. Discovery of selective inhibitors of
- 61 034571
Glutaminase-2, which inhibit mTORCl, activate autophagy and inhibit proliferation in cancer cells. Oncotarget 2014, 5, 60876101.
Lynch, G.; Kemeny, N.; Casper, E. Phase II evaluation of DON (6-diazo-5-oxo-L-norleucine) in patients with advanced colorectal carcinoma. Am J Clin Oncol 1982, 5, 541-543.Magill, G. B.; Myers, W. P. Alterations in calcium metabolism in cancer patients treated with 6-diazo-5-oxo-L-norleucine. Proc Soc Exp Biol Med 1956, 93, 314-318.
Magill, G. B.; Myers, W. P.; Reilly, H. C.; Putnam, R. C.; Magill, J. W.; Sykes, Μ. P.; Escher, G. C.; Karnofsky, D. A.; Burchenal, J. H. Pharmacological and initial therapeutic observations on 6-diazo-5-oxo-l-norleucine (DON) in human neoplastic disease. Cancer 1957, 10, 1138-1150.
McDermott, L. A . ; Iyer, P . ; Vernetti, L. ; Rimer, S. ; Sun,
J.; Boby, M.; Yang, T.; Fioravanti, M.; O'Neill, J.; Wang, L. ;
Drakes, D.; Katt, W. ; Huang, Q. ; Cerione, R. Design and
evaluation of novel glutaminase inhibitors. Bioorg Med Chem
2016, 24, 1819-1839.
Ostrom, Q. T.; Gittleman, H. ; Fulop, J.; Liu, M. .; Blanda,
R. ; Kromer, C.; Wolinsky, Y.; Kruchko, C.; Barnholtz-Sloan, J.
S. CBTRUS Statistical Report: Primary Brain and Central Nervous System Tumors Diagnosed in the United States in 2008-2012. Neuro Oncol 2015, 17 Suppl 4, ivl-iv62.
Potter, M. C.; Baxter, V. K.; Mathey, R. W.; Alt, J.;
Rojas, C.; Griffin, D. E.; Slusher, B. S. Neurological sequelae induced by alphavirus infection of the CNS are attenuated by treatment with the glutamine antagonist 6-diazo-5-oxo-lnorleucine. J Neurovirol 2015, 21, 159-173.
Rahman, A.; Smith, F. P.; Luc, P. T.; Woolley, P. V. Phase I study and clinical pharmacology of 6-diazo-5-oxo-L-norleucine (DON). Invest New Drugs 1985, 3, 369-374.
Rautio, J.; Kumpulainen, H.; Heimbach, T.; Oliyai, R.; Oh, D.; Jarvinen, T.; Savolainen, J. Prodrugs: design and clinical applications. Nat Rev Drug Dlscov 2008, 7, 255-270.
Ru, P.; Williams, T. M.; Chakravarti, A.; Guo, D. Tumor
- 62 034571 metabolism of malignant gliomas. Cancers (Basel) 2013, 5, 1469
1484 .
Schulze, A.; Harris, A. L. How cancer metabolism is tuned for proliferation and vulnerable to disruption. Nature 2012, 491, 364-373.
Shukla, K.; Ferraris, D. V.; Thomas, A. G.; Stathis, M.;
Duvall, В . ; Delahanty, G. ; Alt, J. ; Rais, R. ; Roj as, C. ; Gao,
P.; Xiang, Y.; Dang, C. V.; Slusher, В . S.; Tsukamoto, T.
Design, synthesis, and pharmacological evaluation of bis-2-(5phenylacetamido-1,2,4-thiadiazol-2-yl) ethyl sulfide 3 (BPTES) analogs as glutaminase inhibitors. J Med Chem 2012, 55, 1055110563.
Sklaroff, R. B.; Casper, E. S.; Magill, G. B.; Young, C. W. Phase I study of 6-diazo-5-oxo-L-norleucine (DON). Cancer Treat Rep 1980, 64, 1247-1251.
Stupp, R.; Hegi, Μ. E.; Mason, W. P.; van den Bent, M. J.; Taphoorn, M. J.; Janzer, R. C.;
Ludwin, S. K.; Allgeier, A.; Fisher, B.; Belanger, K.; Hau, P.; Brandes, A. A.; Gijtenbeek, J.; Marosi, C.; Vecht, C. J.; Mokhtari, K.; Wesseling, P.; Villa, S.; Eisenhauer, E.; Gorlia,
T.; Weller, M.; Lacombe, D. ; Cairncross, J. G.; Mirimanoff, R. 0. Effects of radiotherapy with concomitant and adjuvant temozolomide versus radiotherapy alone on survival in glioblastoma in a randomised phase III study: 5-year analysis of the EORTC-NCIC trial. Lancet Oncol 2009, 10, 459-466.
Stupp, R.; Mason, W. P.; van den Bent, M. J.; Weller, M.; Fisher, B.; Taphoorn, M. J.; Belanger, K.; Brandes, A. A.; Marosi, C.; Bogdahn, U.; Curschmann, J.; Janzer, R. C.; Ludwin, S. K.; Gorlia, T.; Allgeier, A.; Lacombe, D.; Cairncross, J. G.; Eisenhauer, E.; Mirimanoff, R. 0. Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma. N Engl J Med 2005, 352, 987-996.
Sullivan, Μ. P.; Beatty, E. C., Jr.; Hyman, С. B.; Murphy, M. L.; Pierce, Μ. I.; Severe, N. C. A comparison of the effectiveness of standard dose 6-mercaptopurine, combination 6mercaptopurine and DON, and high-loading 6-mercaptopurine
- 63 034571 therapies in treatment of the acute leukemias of childhood: results of a coperative study. Cancer Chemother Rep 1962, 18, 83-95.
Sullivan, Μ. P.; Nelson, J. A.; Feldman, S.; Van Nguyen, B. Pharmacokinetic and phase I study of intravenous DON (6-diazo-5oxo-L-norleucine) in children. Cancer Chemother Pharmacol 1988, 21, 78-84.
Tanaka, K.; Sasayama, T.; Irino, Y.; Takata, K.; Nagashima,
H.; Satoh, N.; Kyotani, K. ; Mizowaki, T.; Imahori, T.; Ejima,
Y.; Masui, K.; Gini, B.; Yang, H.; Hosoda, K.; Sasaki, R.;
Mischel, P. S.; Kohmura, E. Compensatory glutamine metabolism promotes glioblastoma resistance to mTOR inhibitor treatment. J Clin Invest 2015, 125, 1591-1602.
Thangavelu, K. ; Chong, Q. Y.; Low, В. C.; Sivaraman, J.
Structural basis for the active site inhibition mechanism of human kidney-type glutaminase (KGA). Sci Rep 2014, 4, 3827.
Upadhyay, R. K. Drug delivery systems, CNS protection, and the blood brain barrier. Biomed Res Int 2014, 2014, 869269.
Weller, M.; van den Bent, M.; Hopkins, K.; Tonn, J. C.; Stupp, R.; Falini, A.; Cohen-Jonathan-Moyal, E.; Frappaz, D.; Henriksson, R.; Balana, C. ; Chinot, 0.; Ram, Z.; Reifenberger, G.; Soffietti, R.; Wick, W. EANO guideline for the diagnosis and treatment of anaplastic gliomas and glioblastoma. lancet Oncol 2014, 15, e395-403.
Willis, R. C. ; Seegmiller, J. E. The inhibition by 6-diazo5-oxo-l-norleucine of glutamine catabolism of the cultured human lymphoblast. J Cell Physiol 1977, 93, 375-382.
Windmueller, H. G.; Spaeth, A. E. Uptake and metabolism of plasma glutamine by the small intestine. J Biol Chem 1974, 249, 5070-5079.
Wise, D. R. ; Thompson, С. B. Glutamine addiction: a new therapeutic target in cancer. Trends Biochem Sci 2010, 35, 427433.
Хотя представленное выше изобретение было описано в некоторых деталях путем иллюстрации и примеров с целью ясности понимания, специалисту в данной области техники будет понятно, что возможны некоторые изменения и модификации в объеме прилагаемой формулы изобретения.

Claims (15)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Соединение, имеющее структурную формулу (I) у OR nr2r2' (I) или его фармацевтически приемлемая соль, где X представляет собой -(СН2)п-, где n равен 1;
    R1 выбран из группы, состоящей из Н, C1-6 линейного алкила и C1-6 разветвленного алкила;
    R2 выбран из группы, состоящей из аминокислоты, N-ацилированной аминокислоты и -С(=O)-О-(CRзR4)m-O-C(=O)-R1o;
    R2' представляет собой Н, каждый R3 и R4 независимо представляет собой Н, C1-C6 алкил или фенил;
    m равен 1 и
    - 64 034571
    R10 представляет собой С1-С6 алкил, где аминокислоту выбирают из группы, состоящей из аланина, цистеина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, фенилаланина, глицина, гистидина, изолейцина, лизина, лейцина, метионина, аспарагина, пролина, глутамина, аргинина, серина, треонина, валина, триптофана и тирозина; и
    N-ацильная группа представляет собой -С(=О)СН3.
  2. 2. Соединение по п.1, где R1 выбран из группы, состоящей из метила, этила и изопропила.
  3. 3. Соединение по п.1, где R2 представляет собой аминокислоту.
  4. 4. Соединение по п.1, где R2 представляет собой N-ацилированную аминокислоту.
  5. 5. Соединение по любому из пп.3 или 4, где аминокислота представляет собой триптофан.
  6. 6. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из
  7. 7. Соединение по п.6, представляющее собой
  8. 8. Соединение по п.1, где R2 представляет собой -ίχ=ϋ)-(>(ΟΑ^4^-(>ίχ=ϋ)-Η|οΐ где (i) R3 представляет собой Н и
    R4 представляет собой метил, изопропил или фенил;
    (ii) R3 и R4, каждый, представляют собой Н или (iii) R3 и R4, каждый, представляют собой метил.
  9. 9. Соединение по п.8, выбранное из группы, состоящей из
    - 65 034571
    - 66 034571
  10. 10. Соединение по п.9, выбранное из группы, состоящей из
  11. 11. Фармацевтическая композиция для лечения рака у пациента, содержащая эффективное количество соединения по любому из пп.1-10 или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент.
  12. 12. Способ лечения рака у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения по любому из пп.1-10 или его фармацевтически приемлемой соли.
  13. 13. Применение соединения по любому из пп.1-10 или его фармацевтически приемлемой соли в эффективном количестве для получения лекарственного средства для лечения рака.
    - 67 034571
  14. 14. Способ по п.12, где рак выбирают из группы, состоящей из рака молочной железы, колоректального рака, мультиформной глиобластомы, гепатоцеллюлярной карциномы, плоскоклеточной карциномы головы и шеи, рака предстательной железы, лейкоза, рака легких, лимфомы и меланомы.
  15. 15. Способ по п.14, где рак выбирают из группы, состоящей из рака молочной железы, колоректального рака, лейкоза, рака легких, лимфомы и меланомы.
EA201890395A 2015-07-31 2016-07-29 Пролекарства аналогов глутамина EA034571B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562199566P 2015-07-31 2015-07-31
PCT/US2016/044767 WO2017023774A1 (en) 2015-07-31 2016-07-29 Prodrugs of glutamine analogs

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201890395A1 EA201890395A1 (ru) 2018-08-31
EA034571B1 true EA034571B1 (ru) 2020-02-21

Family

ID=57943518

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201890395A EA034571B1 (ru) 2015-07-31 2016-07-29 Пролекарства аналогов глутамина

Country Status (22)

Country Link
US (4) US10336778B2 (ru)
EP (1) EP3328827B1 (ru)
JP (1) JP6863981B2 (ru)
KR (1) KR102666477B1 (ru)
CN (2) CN108290827B (ru)
AU (1) AU2016302940B2 (ru)
CA (1) CA2994258A1 (ru)
DK (1) DK3328827T3 (ru)
EA (1) EA034571B1 (ru)
ES (1) ES2957583T3 (ru)
FI (1) FI3328827T3 (ru)
HK (1) HK1256284A1 (ru)
HR (1) HRP20231163T1 (ru)
HU (1) HUE063399T2 (ru)
IL (1) IL257219B (ru)
LT (1) LT3328827T (ru)
MX (1) MX2018001300A (ru)
PL (1) PL3328827T3 (ru)
PT (1) PT3328827T (ru)
RS (1) RS64597B1 (ru)
SI (1) SI3328827T1 (ru)
WO (1) WO2017023774A1 (ru)

Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10842763B2 (en) 2015-07-31 2020-11-24 The Johns Hopkins University Methods for cancer and immunotherapy using prodrugs of glutamine analogs
EP3328374A4 (en) * 2015-07-31 2019-03-13 The Johns Hopkins University GLUTAMINANTAGONISTS FOR THE TREATMENT OF COGNITIVE DEFICITES
CN108348492B (zh) 2015-07-31 2021-09-28 约翰霍普金斯大学 使用谷氨酰胺类似物的用于癌症和免疫疗法的方法
KR102666477B1 (ko) 2015-07-31 2024-05-17 더 존스 홉킨스 유니버시티 글루타민 유사체의 프로드럭
WO2018144718A1 (en) 2017-02-01 2018-08-09 The Johns Hopkins University Prodrugs of glutamine analogs
WO2019071110A1 (en) * 2017-10-06 2019-04-11 The John Hopkins University NOVEL GLUTAMINE ANTAGONISTS AND USES THEREOF
EA202191992A1 (ru) * 2019-01-18 2021-12-17 Дрейсен Фармасьютикалз, Инк. Комбинированная терапия пролекарством don и ингибитором иммунных контрольных точек
JP2022519574A (ja) * 2019-02-11 2022-03-24 ドラセン ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｌ－グルタミン酸からｄｏｎプロドラッグを調製する方法
WO2020167829A1 (en) * 2019-02-11 2020-08-20 Dracen Pharmaceuticals, Inc. Method of preparing a don prodrug from l-pyroglutamic acid
KR20220125213A (ko) * 2019-10-03 2022-09-14 드라센 파마슈티컬스, 인코포레이티드 (s)-이소프로필 2-((s)-2-아세트아미도-3-(1h-인돌-3-일)프로판아미도)-6-디아조-5-옥소헥사노에이트를 포함하는 정맥내 투여용 동결건조 조성물 및 이의 용도
CN110763792A (zh) * 2019-10-24 2020-02-07 湖北省宏源药业科技股份有限公司 一种鸟嘌呤有关物质检测方法
WO2021239049A1 (en) * 2020-05-27 2021-12-02 Jacobio Pharmaceuticals Co., Ltd. Novel glutamine analogs
WO2022022612A1 (en) * 2020-07-29 2022-02-03 Jacobio Pharmaceuticals Co., Ltd. Novel glutamine analogs
US20230372294A1 (en) * 2020-10-02 2023-11-23 Dracen Pharmaceuticals, Inc. Lyophilized composition comprising (s)-isopropyl 2-((s)-2-acetamido-3-(1h-indol-3-yl)propanamido)-6-diazo-5-oxohexanoate for subcutaneous administration and the use thereof
WO2022078416A1 (en) * 2020-10-15 2022-04-21 Jacobio Pharmaceuticals Co., Ltd. Novel glutamine analogs
WO2022078462A1 (en) * 2020-10-15 2022-04-21 Jacobio Pharmaceuticals Co., Ltd. Novel glutamine analogs
CN114621120B (zh) * 2020-12-10 2023-11-03 深圳先进技术研究院 一种don前药分子、前药激活化合物和前药激活体系
US20240246902A1 (en) * 2021-04-29 2024-07-25 The Johns Hopkins University Prodrugs of 6-diazo-5-oxo-l-norleucine
WO2022261117A1 (en) * 2021-06-07 2022-12-15 Dracen Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy with a don prodrug and a tigit inhibitor
CN113461563B (zh) * 2021-07-27 2022-05-10 中国药科大学 Nqo1激活型6-重氮基-5-氧代-l-正亮氨酸前药及其制备方法和应用
CN114306620A (zh) * 2021-12-07 2022-04-12 深圳先进技术研究院 基于代谢检查点的人血清白蛋白纳米药物及其制备方法和应用
WO2023145880A1 (ja) * 2022-01-28 2023-08-03 国立大学法人富山大学 グルタミナーゼ阻害剤
CN114917230B (zh) * 2022-03-09 2023-03-24 山东第一医科大学附属眼科研究所(山东省眼科研究所、山东第一医科大学附属青岛眼科医院) Cb-839在制备抑制角膜新生血管生成的药物中的应用
WO2023202652A1 (en) * 2022-04-21 2023-10-26 Jacobio Pharmaceuticals Co., Ltd. Pharmaceutical combination and use thereof
TW202404938A (zh) * 2022-04-21 2024-02-01 大陸商北京加科思新藥研發有限公司 麩醯胺酸拮抗劑的多晶型及其用途
CN114805138B (zh) * 2022-05-12 2023-10-10 中国科学院长春应用化学研究所 6-重氮-5-氧代-l-正亮氨酸的前药、其制备方法及应用
WO2024094526A1 (en) 2022-11-02 2024-05-10 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) 6-diazo-5-oxo-l-norleucine prodrugs

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060276438A1 (en) * 2004-10-04 2006-12-07 Natarajan Sethuraman Prevention and treatment of influenza with glutamine antagonist agents

Family Cites Families (46)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US121179A (en) * 1871-11-21 Improvement in brick-kilns
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
IE52535B1 (en) 1981-02-16 1987-12-09 Ici Plc Continuous release pharmaceutical compositions
US4485045A (en) 1981-07-06 1984-11-27 Research Corporation Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes
EP0102324A3 (de) 1982-07-29 1984-11-07 Ciba-Geigy Ag Lipide und Tenside in wässriger Phase
US4503044A (en) * 1983-04-25 1985-03-05 American Cyanamid Company Antibiotic LL-D05139 β
US4568646A (en) * 1983-04-25 1986-02-04 American Cyanamid Company Preparation of antibiotic LL-D05139β from cultures of Glycomyces harbinensis, gen. nov., sp. nov.
US4544545A (en) 1983-06-20 1985-10-01 Trustees University Of Massachusetts Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting
HUT35524A (en) 1983-08-02 1985-07-29 Hoechst Ag Process for preparing pharmaceutical compositions containing regulatory /regulative/ peptides providing for the retarded release of the active substance
US5328470A (en) 1989-03-31 1994-07-12 The Regents Of The University Of Michigan Treatment of diseases by site-specific instillation of cells or site-specific transformation of cells and kits therefor
EP1288206B1 (en) * 1996-04-12 2008-09-17 G.D. Searle LLC Substituted benzenesulfonamide derivatives as prodrugs of COX-2 inhibitors
US6362226B2 (en) 1999-12-08 2002-03-26 Vanderbilt University Modulation of in vivo glutamine and glycine levels in the treatment of autism
EP1365798B1 (en) 2000-09-29 2009-12-30 Viron Therapeutics, Inc. Use of serp-1 in combination with an immunosuppressant for treating arthritis
US8048917B2 (en) 2005-04-06 2011-11-01 Xenoport, Inc. Prodrugs of GABA analogs, compositions and uses thereof
CA2487247A1 (en) 2002-05-14 2003-11-27 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Drug therapy for celiac sprue
WO2004028448A2 (en) * 2002-09-13 2004-04-08 Miller Kenneth E Method of alleviating pain via inhibition of neurotransmitter synthesis
GB0314262D0 (en) * 2003-06-19 2003-07-23 Univ Nottingham Trent Novel compounds and methods of using the same
PT1660440E (pt) 2003-08-20 2012-05-15 Xenoport Inc Pró-fármacos de aciloxialquilcarbamato, métodos de síntese e utilização
US7579313B2 (en) 2003-11-18 2009-08-25 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Transglutaminase inhibitors and methods of use thereof
ES2303218T3 (es) 2004-01-19 2008-08-01 Novartis Ag Derivados de indolilmaleimida.
AU2005230399B2 (en) 2004-04-08 2009-07-09 Novartis Ag Protein kinase C inhibitors for the treatment of autoimmune diseases and of transplant rejection
WO2006116423A2 (en) 2005-04-26 2006-11-02 Eisai Co., Ltd Compositions and methods for cancer immunotherapy
RU2008139599A (ru) 2006-03-07 2010-04-20 Эррэй Биофарма Инк. (Us) Гетеробициклические производные пиразола и способы их применения
JP2009536173A (ja) 2006-05-10 2009-10-08 メディカル エンザイムズ アクチエンゲゼルシャフト グルタドン
US7585996B2 (en) 2006-09-15 2009-09-08 Xenoport, Inc. Acyloxyalkyl carbamate prodrugs, methods of synthesis and use
US20080107623A1 (en) 2006-11-01 2008-05-08 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of Hepatitis C Virus
US8343477B2 (en) 2006-11-01 2013-01-01 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of hepatitis C virus
US20080160024A1 (en) 2006-12-07 2008-07-03 Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Inhibition of cancer metastasis
WO2009029729A1 (en) 2007-08-31 2009-03-05 Genelabs Technologies, Inc. Amino tricyclic-nucleoside compounds, compositions, and methods of use
WO2011102407A1 (ja) 2010-02-17 2011-08-25 国立大学法人神戸大学 放射線治療剤
CA2802733C (en) 2010-06-24 2017-11-21 Alkermes Pharma Ireland Limited Prodrugs of nh-acidic compounds: ester, carbonate, carbamate and phosphonate derivatives
CN103561771B (zh) 2011-03-17 2019-01-04 伯明翰大学 重新定向的免疫治疗
KR101900478B1 (ko) 2011-08-04 2018-09-20 한올바이오파마주식회사 암의 재발 또는 전이의 억제용 약제학적 조성물
WO2014138391A1 (en) * 2013-03-06 2014-09-12 The Johns Hopkins University Targeting glutamine metabolism in brain tumors
WO2014160071A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 St. Jude Children's Research Hospital Methods and compositions for the treatment of glutamine-addicted cancers
WO2015035112A1 (en) 2013-09-05 2015-03-12 The Johns Hopkins University Cancer therapy via a combination of epigenetic modulation and immune modulation
BR112016010224A2 (pt) 2013-11-05 2018-05-02 Cognate Bioservices, Inc. combinações de inibidores do ponto de verificação e produtos terapêuticos para tratar o câncer.
JP2017500313A (ja) * 2013-12-09 2017-01-05 ブレット バイオテクノロジー， インコーポレーテッドＢｕｌｌｅｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｉｎｃ． 特異的ウイルス様粒子−ＣｐＧオリゴヌクレオチドワクチンおよびその使用
KR20220013017A (ko) 2014-01-06 2022-02-04 리젠 파마슈티컬스 소시에떼 아노님 신규한 글루타미나제 저해제
EP3116872A4 (en) 2014-03-14 2017-08-30 Calithera Biosciences, Inc. Combination therapy with glutaminase inhibitors
JP6798890B2 (ja) 2014-06-13 2020-12-09 キャリセラ バイオサイエンシーズ， インコーポレイテッド グルタミナーゼ阻害剤との併用療法
WO2016172494A2 (en) 2015-04-23 2016-10-27 The Johns Hopkins University Combination of immunotherapy with local chemotherapy for the treatment of malignancies
CN108348492B (zh) 2015-07-31 2021-09-28 约翰霍普金斯大学 使用谷氨酰胺类似物的用于癌症和免疫疗法的方法
US10842763B2 (en) 2015-07-31 2020-11-24 The Johns Hopkins University Methods for cancer and immunotherapy using prodrugs of glutamine analogs
KR102666477B1 (ko) 2015-07-31 2024-05-17 더 존스 홉킨스 유니버시티 글루타민 유사체의 프로드럭
EP3328374A4 (en) 2015-07-31 2019-03-13 The Johns Hopkins University GLUTAMINANTAGONISTS FOR THE TREATMENT OF COGNITIVE DEFICITES

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060276438A1 (en) * 2004-10-04 2006-12-07 Natarajan Sethuraman Prevention and treatment of influenza with glutamine antagonist agents

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DEWALD, HORACE A. et al., "6-Diazo-5-oxo-L-norleucine, a new tumor-inhibitory substance. Preparation of L-, D-, and DL-forms", Journal of the American Chemical Society, 1958, Vol. 80, p. 3941-3945, See page 3942 *
HAUSCH, FELIX et al., "Design, synthesis and evaluation of gluten peptide analogs as selective inhibitors of human tissue transglutaminase", Chemistry & Biology, 2003, Vol. 10, Pages 225-231, See Figures 1-2 *
LE MAUX, PAUL et al., "Chemical reactivity of 6-diazo-5-oxo-L-norleucine (DON) catalyzed by metalloporphyrins (Fe, Ru)", Tetrahedron, 2010, Vol. 66, page 4462-4468, See Scheme 3 *
LEE, MAY D. et al., "New antitumor antibiotic, LL-D05139β fermentation, isolation, structure determination and biological activities", The Journal of Antibiotics, 1987, Vol. XL, No. 12, Pages 1657-1663, See abstract; and page 1660 *

Also Published As

Publication number Publication date
WO2017023774A9 (en) 2017-11-23
CN112920092B (zh) 2024-04-26
PL3328827T3 (pl) 2023-11-27
LT3328827T (lt) 2023-10-10
JP6863981B2 (ja) 2021-04-21
KR20180071247A (ko) 2018-06-27
FI3328827T3 (fi) 2023-09-26
JP2018528261A (ja) 2018-09-27
CN112920092A (zh) 2021-06-08
US10336778B2 (en) 2019-07-02
IL257219B (en) 2021-05-31
HK1256284A1 (zh) 2019-09-20
US11926640B2 (en) 2024-03-12
ES2957583T3 (es) 2024-01-22
AU2016302940B2 (en) 2021-02-04
CA2994258A1 (en) 2017-02-09
HUE063399T2 (hu) 2024-01-28
EP3328827A1 (en) 2018-06-06
KR102666477B1 (ko) 2024-05-17
IL257219A (en) 2018-03-29
US20190315784A1 (en) 2019-10-17
US20210206787A1 (en) 2021-07-08
SI3328827T1 (sl) 2023-11-30
US20180222930A1 (en) 2018-08-09
BR112018002087A2 (pt) 2018-09-18
CN108290827A (zh) 2018-07-17
EA201890395A1 (ru) 2018-08-31
PT3328827T (pt) 2023-10-13
DK3328827T3 (da) 2023-10-02
EP3328827A4 (en) 2019-03-13
HRP20231163T1 (hr) 2024-03-15
EP3328827B1 (en) 2023-07-05
US10738066B2 (en) 2020-08-11
US10954257B2 (en) 2021-03-23
CN108290827B (zh) 2021-01-01
MX2018001300A (es) 2019-03-14
US20190315783A1 (en) 2019-10-17
WO2017023774A1 (en) 2017-02-09
RS64597B1 (sr) 2023-10-31
AU2016302940A1 (en) 2018-02-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA034571B1 (ru) Пролекарства аналогов глутамина
JP2022174114A (ja) Ａｌｋタンパク質分解剤及びそれらの癌療法における使用
AU2017220738B2 (en) Carboxamide derivatives useful as RSK inhibitors
JP2023508482A (ja) スピロ環含有キナゾリン化合物
ES2558604T3 (es) Derivados de 6-difluorometil-5,6-dihidro-2H-[1,4] oxazin-3-amina
ES2843561T3 (es) Sales farmacéuticamente aceptables del ácido beta-guanidinopropionico con propiedades mejoradas y usos de las mismas
US9872919B2 (en) Prodrugs for selective anticancer therapy
CN113614095B (zh) 作为精氨酸酶抑制剂的烷基硼酸类化合物
ES2463820T3 (es) Derivado de imidazotiazol que tiene estructura de anillo de prolina
JPWO2018143403A1 (ja) 複素環化合物
WO2017218922A2 (en) Compositions and methods for the treatment of bacterial infections
ES2911183T3 (es) Compuesto para inhibir selectivamente quinasas y uso del mismo
JP2022545542A (ja) ピラゾール化合物、その製剤並びに化合物及び／又は製剤を使用する方法
RU2680138C2 (ru) Трициклические ингибиторы гиразы
WO2021062168A1 (en) Synthetic sphingolipid inspired molecules with heteroaromatic appendages, methods of their synthesis and methods of treatment
EP3774843B1 (en) Dipeptide piperidine derivatives
US20210261583A1 (en) Synthetic Cytotoxic Molecules, Drugs, Methods of Their Synthesis and Methods of Treatment
CA2976746C (en) (2r)-3-amino-2-(bicyclic pyridylmethyl)-2-hydroxy-propanoic acid compounds and their use as inhibitors of placental leucine aminopeptidase (p-lap)
DK2699580T3 (en) DIAZONAMI DISEASES
FR3071726A1 (fr) Agents inhibant la proteine tctp pour le traitement de maladies proliferatives et de maladies infectieuses
BR112018002087B1 (pt) Compostos análogos de glutamina, composição farmacêutica compreendendo os mesmos e seu uso no tratamento de câncer
WO2024220874A2 (en) Otub1 small-molecule binders and otub1-recruiting deubiquitinase-targeting chimeras (dubtacs)
BR122023027623A2 (pt) Compostos e sais, seus usos no tratamento de hiv, composição farmacêutica, combinação e kit dos mesmos
OA19640A (en) Prodrugs of glutamine analogs.
BR112018016968B1 (pt) Composto,composição farmacêutica e uso do mesmo para preparo de um medicamento para tratamento de câncer