EA032706B1 - ДОСТАВКА НАЦЕЛЕННЫХ НА ЭКЗОН 2 ПОЛИНУКЛЕОТИДНЫХ КОНСТРУКЦИЙ U7snRNA ПРИ ПОМОЩИ РЕКОМБИНАНТНОГО АДЕНОАССОЦИИРОВАННОГО ВИРУСА - Google Patents
ДОСТАВКА НАЦЕЛЕННЫХ НА ЭКЗОН 2 ПОЛИНУКЛЕОТИДНЫХ КОНСТРУКЦИЙ U7snRNA ПРИ ПОМОЩИ РЕКОМБИНАНТНОГО АДЕНОАССОЦИИРОВАННОГО ВИРУСА Download PDFInfo
- Publication number
- EA032706B1 EA032706B1 EA201592014A EA201592014A EA032706B1 EA 032706 B1 EA032706 B1 EA 032706B1 EA 201592014 A EA201592014 A EA 201592014A EA 201592014 A EA201592014 A EA 201592014A EA 032706 B1 EA032706 B1 EA 032706B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- raav
- exon
- aav
- genome
- patient
- Prior art date
Links
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 title claims abstract description 18
- 108091026823 U7 small nuclear RNA Proteins 0.000 title claims description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 52
- 206010013801 Duchenne Muscular Dystrophy Diseases 0.000 claims abstract description 36
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 16
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 32
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 claims description 21
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 19
- 230000006872 improvement Effects 0.000 claims description 7
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 7
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 claims description 6
- 230000004220 muscle function Effects 0.000 claims description 6
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 4
- 230000007170 pathology Effects 0.000 claims description 3
- 101100301559 Bacillus anthracis repS gene Proteins 0.000 claims description 2
- 101100247969 Clostridium saccharobutylicum regA gene Proteins 0.000 claims description 2
- 101100412434 Escherichia coli (strain K12) repB gene Proteins 0.000 claims description 2
- 101100114425 Streptococcus agalactiae copG gene Proteins 0.000 claims description 2
- 101150044854 repA gene Proteins 0.000 claims description 2
- 241000972680 Adeno-associated virus - 6 Species 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 54
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 24
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 19
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 16
- 108010069091 Dystrophin Proteins 0.000 description 14
- 102000001039 Dystrophin Human genes 0.000 description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 11
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 10
- 201000006938 muscular dystrophy Diseases 0.000 description 10
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 10
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 9
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 9
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 9
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 101001023030 Toxoplasma gondii Myosin-D Proteins 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 101150015424 dmd gene Proteins 0.000 description 6
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 6
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 6
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 6
- 241001655883 Adeno-associated virus - 1 Species 0.000 description 5
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 5
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 101100524324 Adeno-associated virus 2 (isolate Srivastava/1982) Rep78 gene Proteins 0.000 description 4
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 4
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 4
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 4
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 4
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 239000013607 AAV vector Substances 0.000 description 3
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 3
- 241000580270 Adeno-associated virus - 4 Species 0.000 description 3
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 3
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 3
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 3
- 108700026226 TATA Box Proteins 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000013608 rAAV vector Substances 0.000 description 3
- 210000000518 sarcolemma Anatomy 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 101150044789 Cap gene Proteins 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000362 Lymphotoxin-beta Proteins 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 2
- 108010017842 Telomerase Proteins 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 210000001109 blastomere Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 2
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 2
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 229960003722 doxycycline Drugs 0.000 description 2
- XQTWDDCIUJNLTR-CVHRZJFOSA-N doxycycline monohydrate Chemical compound O.O=C1C2=C(O)C=CC=C2[C@H](C)[C@@H]2C1=C(O)[C@]1(O)C(=O)C(C(N)=O)=C(O)[C@@H](N(C)C)[C@@H]1[C@H]2O XQTWDDCIUJNLTR-CVHRZJFOSA-N 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 101150042523 myod gene Proteins 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000013645 rAAV1 vector Substances 0.000 description 2
- 101150066583 rep gene Proteins 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 230000002463 transducing effect Effects 0.000 description 2
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 2
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 2
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 101150012307 78 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 241000702423 Adeno-associated virus - 2 Species 0.000 description 1
- 241001164825 Adeno-associated virus - 8 Species 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102400000309 Beta-dystroglycan Human genes 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102000004420 Creatine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108010042126 Creatine kinase Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102100036912 Desmin Human genes 0.000 description 1
- 108010044052 Desmin Proteins 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 108010071885 Dystroglycans Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 108010059343 MM Form Creatine Kinase Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 208000010428 Muscle Weakness Diseases 0.000 description 1
- 206010028372 Muscular weakness Diseases 0.000 description 1
- 102100031790 Myelin expression factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710107751 Myelin expression factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 108060008487 Myosin Proteins 0.000 description 1
- 102400000743 NPP Human genes 0.000 description 1
- 101800002690 NPP Proteins 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 108010066816 Polypeptide N-acetylgalactosaminyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 1
- 108020005067 RNA Splice Sites Proteins 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 101100409194 Rattus norvegicus Ppargc1b gene Proteins 0.000 description 1
- 101150100379 Rep52 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical class [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010042566 Superinfection Diseases 0.000 description 1
- 108090001027 Troponin Proteins 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N cocaine Chemical compound O([C@H]1C[C@@H]2CC[C@@H](N2C)[C@H]1C(=O)OC)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 229920001940 conductive polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229960001145 deflazacort Drugs 0.000 description 1
- FBHSPRKOSMHSIF-GRMWVWQJSA-N deflazacort Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1C[C@H]3OC(C)=N[C@@]3(C(=O)COC(=O)C)[C@@]1(C)C[C@@H]2O FBHSPRKOSMHSIF-GRMWVWQJSA-N 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 210000005045 desmin Anatomy 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002996 emotional effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229950005470 eteplirsen Drugs 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 208000035474 group of disease Diseases 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000004217 heart function Effects 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 1
- 238000010185 immunofluorescence analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 229940124589 immunosuppressive drug Drugs 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 1
- 238000009616 inductively coupled plasma Methods 0.000 description 1
- 208000021005 inheritance pattern Diseases 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- NBQNWMBBSKPBAY-UHFFFAOYSA-N iodixanol Chemical compound IC=1C(C(=O)NCC(O)CO)=C(I)C(C(=O)NCC(O)CO)=C(I)C=1N(C(=O)C)CC(O)CN(C(C)=O)C1=C(I)C(C(=O)NCC(O)CO)=C(I)C(C(=O)NCC(O)CO)=C1I NBQNWMBBSKPBAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004359 iodixanol Drugs 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000011901 isothermal amplification Methods 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000007838 multiplex ligation-dependent probe amplification Methods 0.000 description 1
- 210000003098 myoblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000000107 myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001114 myogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001087 myotubule Anatomy 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 208000018360 neuromuscular disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 210000003540 papillary muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 238000010248 power generation Methods 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000001566 pro-viral effect Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 208000022587 qualitative or quantitative defects of dystrophin Diseases 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 1
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 102000034285 signal transducing proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006024 signal transducing proteins Proteins 0.000 description 1
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000003153 stable transfection Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000017105 transposition Effects 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
- A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
- A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4707—Muscular dystrophy
- C07K14/4708—Duchenne dystrophy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
- C12N15/864—Parvoviral vectors, e.g. parvovirus, densovirus
- C12N15/8645—Adeno-associated virus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
- A01K2217/072—Animals genetically altered by homologous recombination maintaining or altering function, i.e. knock in
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/105—Murine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
- A01K2267/0306—Animal model for genetic diseases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/11—Antisense
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/30—Special therapeutic applications
- C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/30—Special therapeutic applications
- C12N2320/33—Alteration of splicing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2330/00—Production
- C12N2330/50—Biochemical production, i.e. in a transformed host cell
- C12N2330/51—Specially adapted vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14121—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14132—Use of virus as therapeutic agent, other than vaccine, e.g. as cytolytic agent
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14171—Demonstrated in vivo effect
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14311—Parvovirus, e.g. minute virus of mice
- C12N2750/14321—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14311—Parvovirus, e.g. minute virus of mice
- C12N2750/14333—Use of viral protein as therapeutic agent other than vaccine, e.g. apoptosis inducing or anti-inflammatory
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Virology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Neurology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к доставке полинуклеотидов при помощи рекомбинантного аденоассоциированного вируса (rAAV) для лечения мышечной дистрофии Дюшенна, являющейся следствием дупликации экзона 2 DMD. В изобретении предложены продукты rAAV и способы применения rAAV в лечении мышечной дистрофии Дюшенна.
Description
Изобретение относится к доставке полинуклеотидов при помощи рекомбинантного аденоассоциированного вируса (rAAV) для лечения мышечной дистрофии Дюшенна, являющейся следствием дупликации экзона 2 DMD. В изобретении предложены продукты rAAV и способы применения rAAV в лечении мышечной дистрофии Дюшенна.
Включение перечня последовательностей посредством ссылки
Данная заявка содержит в виде отдельной части описания Перечень последовательностей в компьютерно-читаемой форме (название файла: 47699PCT_SeqListing.txt; 10162 байтов - текстовый файл ASCII, созданный 18 апреля 2014 г.), который в полном объеме включен в данный документ посредством ссылки.
Уровень техники
Мышечные дистрофии (МД) представляют собой группу генетических заболеваний. Указанная группа характеризуется прогрессирующим ослаблением и дегенерацией скелетных мышц, которые управляют движением. Некоторые формы МД развиваются в младенческом или детском возрасте, в то время как другие могут не проявляться до достижения среднего и более старшего возраста. Нарушения различаются по времени распространения и степени ослабления мышц (некоторые формы МД поражают также сердечные мышцы), возрасту, на который приходится начало заболевания, скорости прогрессирования и схемы наследования.
Одной из форм МД является мышечная дистрофия Дюшенна (МДД). Она является наиболее распространенной тяжелой детской формой мышечной дистрофии, поражающей 1 из 5000 новорожденных детей мужского пола. Причиной МДД являются мутации в гене DMD, которые приводят к отсутствию белка дистрофина (427 КДа) в скелетных и сердечных мышцах, а также ЖК-тракте и сетчатке. Дистрофии не только защищает сарколемму от эксцентрических сокращений, но также фиксирует большое количество сигнальных белков в непосредственной близости от сарколеммы. Многие клинические случаи МДД связаны с делеционными мутациями в гене DMD. Несмотря на проведение большого количества исследований после идентификации гена DMD, возможности лечения ограничены. Кортикостероиды, несомненно, являются полезными, но даже несмотря на продление на годы способности передвигаться, их польза нивелируется долгосрочными побочными явлениями. Опубликованные более 20 лет назад результаты оригинального контролируемого, рандомизированного двойного слепого исследования показали наличие пользы от применения преднизона [Mendell et al., N. Engl. J. Med., 320: 1592-1597 (1989)]. В последующих работах было показано, что такой же эффективностью обладает дефлазакорт - натрийсберегающий стероид. [Biggar et al., J. Pediatr., 138: 45-50 (2001)]. В недавних исследованиях также была продемонстрирована эффективность методики пропуска экзона, продлевающей дистанцию безболевой ходьбы в 6MWT (тесте шестиминутной ходьбы). До настоящего времени в опубликованных результатах клинических исследований сообщалось о пользе только в случае тех мутаций, для которых при пропуске экзона 51 происходит восстановление рамки считывания [Cirak et al., Lancet, 378: 595-605 (2011) и Goemans et al., New Engl. J. Med. 364: 1513-1522 (2011)]. В единственной работе, описывающей двойное слепое, рандомизированное пробное лечение, перспективные результаты демонстрировал этеплирсен фосфородиамидат морфолино олигомер (ФМО). Во всех этих испытаниях с пропуском экзона конечным результатом было достижение фазы плато в способности к ходьбе после начального небольшого улучшения.
См. также публикации заявок на патент США № 2012/0077860, опубликованную 29 марта 2012 г.; 2013/0072541, опубликованную 21 марта 2013 г.; и 2013/0045538, опубликованную 21 февраля 2013 г.
В отличие от делеционных мутаций дупликации экзона DMD отвечают приблизительно за 5% приводящих к заболеванию мутаций в случае объективной выборки по пациентам с патологией дистрофина [Dent et al., Am. J. Med. Genet., 134(3): 295-298 (2005)], хотя в некоторых перечнях мутаций количество дупликаций выше [включая перечень, опубликованный United Dystrophinopathy Project в Flanigan et al., Hum. Mutat, 30(12): 1657-1666 (2009), в котором оно составляет 11%].
Аденоассоциированный вирус (AAV) представляет собой дефектный по репликации парвовирус, одноцепочечный ДНК-геном которого имеет длину около 4,7 тыс. п.о., включая 145-нуклеотидный инвертированный концевой повтор (ИКП). Существует множество серотипов AAV. Известны нуклеотидные последовательности геномов серотипов AAV. Например, полный геном AAV-1 представлен в GenBank под номером доступа NC_002077; полный геном AAV-2 представлен в GenBank под номером доступа NC_001401 и в Srivastava et al., J. Virol., 45: 555-564 (1983); полный геном AAV-3 представлен в GenBank под номером доступа NC_1829; полный геном AAV-4 представлен в GenBank под номером доступа NC_001829; полный геном AAV-5 представлен в GenBank под номером доступа AF085716; полный геном AAV-6 представлен в GenBank под номером доступа NC_00 1862; по меньшей мере части геномов AAV-7 и AAV-8 представлены в GenBank под номерами доступа АХ753246 и АХ753249 соответственно (см. также патенты № 7282199 и 7790449 в отношении AAV-8); геном AAV-9 представлен в Gao et al., J.
- 1 032706
Virol, 78: 6381-6388 (2004); геном AAV-10 представлен в Mol. Ther., 13(1): 67-76 (2006); а геном AAV-11 представлен в Virology, 330(2): 375-383 (2004). Действующие в цис-положении последовательности, управляющие репликацией вирусной ДНК (rep), капсидированием/упаковкой и интеграцией в хромосомы клетки-хозяина, находятся в ИКП AAV. Три промотора AAV (имеющие названия р5, р19 и р40, связанные с их относительным месторасположением на карте) управляют экспрессией двух внутренних открытых рамок считывания AAV, кодирующих гены rep и cap. Два rep-промотора (р5 и р19), связанные с дифференциальным сплайсингом единичного интрона AAV (в нуклеотидах 2107 и 2227), приводят к выработке четырех rep-белков (rep 78, rep 68, rep 52 и rep 40) из гена rep. Rep-белки обладают многими ферментативными свойствами, которые в значительной степени отвечают за репликацию вирусного генома. Ген cap экспрессируется из промотора р40 и кодирует три капсидных белка VP1, VP2 и VP3. Альтернативные сайты сплайсинга и неконсенсусные сайты инициации трансляции отвечают за выработку трех родственных капсидных белков. Единственный консенсусный сайт полиаденилирования расположен в позиции 95 на карте генома AAV. Жизненный цикл и генетические особенности AAV описаны в Muzyczka, Current Topics in Microbiology and Immunology, 158: 97-129 (1992).
AAV обладает уникальными свойствами, которые обеспечивают его привлекательность в качестве вектора для доставки чужеродной ДНК в клетки, например, в рамках генной терапии. Инфицирование клеток в культуре при помощи AAV является нецитопатическим, а естественное инфицирование людей и других животных является бессимптомным. Кроме того, AAV инфицирует большое количество клеток млекопитающих, что делает возможным нацеливание на большое количество разных тканей in vivo. Кроме того, AAV трансдуцирует медленно делящиеся и неделящиеся клетки и может в значительной степени сохраняться на протяжении всего времени жизни этих клеток в качестве транскрипционно активной ядерной эписомы (внехромосомного элемента). Провирусный геном AAV является инфекционным в виде клонированной ДНК в плазмидах, что делает возможным конструирование рекомбинантных геномов. Более того, так как сигналы, управляющие репликацией AAV, капсидированием и интеграцией генома, находятся в ИКП генома AAV, некоторая часть или вся внутренняя часть генома, составляющая приблизительно 4,3 тыс. п.о. (кодирующая репликационные и структурные капсидные белки, rep-cap) может быть замещена чужеродной ДНК. Белки rep и cap могут находиться в транс-положении. Другой существенной характеристикой AAV является то, что это исключительно стабильный и крепкий вирус. Он легко переносит условия, применяемые для инактивации аденовируса (от 56 до 65°С на протяжении нескольких часов), что делает менее критическим сохранение AAV в холоде. AAV можно даже лиофилизировать. И наконец, AAV-инфицированные клетки не устойчивы к суперинфекции.
AAV8-подобный AAV под названием rh.74 для доставки ДНК, кодирующих различные белки. Xu et al., Neuromuscular Disorders, 17: 209-220 (2007) и Martin et al., Am. J. Physiol. Cell. Physiol., 296: 476-488 (2009) относятся к экспрессии rh.74 GalNAc-трансферазы цитотоксических Т-клеток в случае мышечной дистрофии Дюшенна. В Rodino-Klapac et al., Mol. Ther., 75(1): 109-117 (2010) описана экспрессия AAV rh.74 продукта слияния микродистрофина с белковой меткой FLAG после доставки AAV rh.74 путем перфузии в сосуды конечностей.
Мышечные дистрофии представляют собой группу заболеваний, для которых не существует определенного вида лечения и которые негативно сказываются на отдельных людях, семьях и обществе. Затраты не поддаются учету. Люди страдают от эмоционального напряжения и сниженного качества жизни, связанных с потерей самооценки. Чрезвычайные физические трудности вследствие утраты функциональности конечностей создают сложности в повседневной жизни. Семейная динамика страдает из-за материальных убытков и трудностей в межличностных взаимоотношениях. Братья и сестры пораженных детей чувствуют отчуждение, а конфликты между супругами часто приводят к разводам, в особенности, если ответственность за мышечную дистрофию можно возложить на одного из родителей. Необходимость поисков лечения часто становится основной задачей всей жизни, что оказывает негативное влияние и затрудняет каждый аспект жизни. За пределами семьи общество несет финансовое бремя вследствие необходимости в добавочных средствах для того, чтобы ликвидировать ограничение населения с мышечной дистрофией в специальном образовании, специальной транспортировке и средствах для регулярной госпитализации для лечения регулярных инфекций дыхательных путей и сердечных осложнений. Финансовые обязательства распределяются между региональными и федеральными государственными органами, которые распространяют эти обязательства на налогоплательщиков.
Следовательно, в данной области остается необходимость в средствах лечения мышечных дистрофий, включая МДД.
Описание
В изобретении предложены способы и продукты для предотвращения, замедления прогрессирования и/или лечения МДД, которая вызвана дупликацией экзона 2 гена DMD. Способы включают применение AAV в качестве вектора для доставки полинуклеотидной конструкции, кодирующей малую ядерную РНК U7 и антисмысловую последовательность, нацеленную на экзон 2 - нацеленную на экзон 2 полинуклеотидную конструкцию U7snRNA. Например, полинуклеотидную конструкцию вставляют в геном rAAV rh.74, геном rAAV6 или геном rAAV9. Полинуклеотидная последовательность генома AAV rh.74 приведена на фиг. 7 и в виде SEQ ID №: 1.
- 2 032706
Типовые нацеленные на экзон 2 антисмысловые последовательности включают, но не ограничиваются этим
U7B TCAAAAGAAAACATTCACAAAATGGGTA (SEQ ID №: 3);
U7Along GTTTTCTTTTGAAGATCTTCTCTTTCATcta (SEQ ID №: 4);
U7Ashort AGATCTTCTCTTTCATcta (SEQ ID №: 5); и
U7C GCACAATTTTCTAAGGTAAGAAT (SEQ ID №: 6).
В одном аспекте предложен способ облегчения МДД у пациента. В некоторых вариантах реализации изобретения указанный способ включает этап введения пациенту rAAV, при этом геном rAAV содержит нацеленную на экзон 2 полинуклеотидную конструкцию U7snRNA.
В другом аспекте в изобретении предложен способ подавления прогрессирования дистрофической патологии, связанной с МДД. В некоторых вариантах реализации изобретения указанный способ включает этап введения пациенту rAAV, при этом геном rAAV содержит нацеленную на экзон 2 полинуклеотидную конструкцию U7snRNA.
В другом аспекте предложен способ улучшения мышечной функции у пациента, страдающего МДД. В некоторых вариантах реализации изобретения указанный способ включает этап введения пациенту rAAV, при этом геном rAAV содержит нацеленную на экзон 2 полинуклеотидную конструкцию U7snRNA. В некоторых случаях улучшение мышечной функции состоит в улучшении мышечной силы. Улучшение мышечной силы определяют известными в данной области техники способами, такими как тест на максимальное произвольное изометрическое напряжение (MVICT). В некоторых случаях улучшение мышечной функции состоит в улучшении стабильности в отношении возможности стоять и ходить. Улучшение в стабильности определяют известными в данной области техники способами, такими как тест 6-минутной ходьбы (6MWT) или лестничная проба.
В другом аспекте в изобретении предложен способ доставки нацеленной на экзон 2 полинуклеотидной конструкции U7snRNA животному (включая, но не ограничиваясь этим, человека). В некоторых вариантах реализации изобретения указанный способ включает этап введения пациенту rAAV, при этом геном rAAV содержит нацеленную на экзон 2 полинуклеотидную конструкцию U7snRNA.
Эффективность трансдукции клеток в вышеописанных способах согласно изобретению может составлять по меньшей мере около 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 или 95%.
В некоторых вариантах реализации вышеуказанных способов вирусный геном является самокомплементарным. В некоторых вариантах реализации указанных способов в геноме rAAV отсутствует ДНК rep и cap AAV. В некоторых вариантах реализации указанных способов rAAV представляет собой SC rAAV U7_ACCA, содержащую типовой геном, приведенный на фиг. 9. В некоторых вариантах реализации изобретения rAAV представляет собой rAAV rh.74. В некоторых вариантах реализации изобретения rAAV представляет собой rAAV6. В некоторых вариантах реализации изобретения rAAV представляет собой rAAV9.
В другом аспекте в изобретении предложен rAAV, содержащий капсид AAV rh.74 и геном, содержащий типовую нацеленную на экзон 2 полинуклеотидную конструкцию U7snRNA - U7_ACCA. В некоторых вариантах реализации изобретения в геноме rAAV отсутствует ДНК rep и cap AAV. В некоторых вариантах реализации изобретения rAAV содержит самокомплементарный геном. В некоторых вариантах реализации указанных способов rAAV представляет собой SC rAAV U7_ACCA, содержащую типовой геном, приведенный на фиг. 9. В некоторых вариантах реализации изобретения rAAV представляет собой rAAV rh.74. В некоторых вариантах реализации изобретения rAAV представляет собой rAAV6. В некоторых вариантах реализации изобретения rAAV представляет собой rAAV9.
Геномы рекомбинантных AAV согласно изобретению содержат один или более ИКП AAV, фланкирующих по меньшей мере одну нацеленную на экзон 2 полинуклеотидную конструкцию U7snRNA. Отдельно рассмотрены геномы с нацеленными на экзон 2 полинуклеотидными конструкциями U7snRNA, каждая из которых содержит нацеленные на экзон 2 антисмысловые последовательности, приведенные в параграфе [0012], а также геномы с нацеленными на экзон 2 полинуклеотидными конструкциями U7snRNA, содержащими любые возможные комбинации двух или более нацеленных на экзон 2 антисмысловых последовательностей, приведенных в параграфе [0012]. В некоторых вариантах реализации изобретения, включая проиллюстрированные варианты реализации изобретения, полинуклеотид U7snRNA содержит собственный промотор. ДНК AAV в геноме rAAV может быть получена из AAV любого серотипа, для которого можно получить рекомбинантный вирус, включая, но не ограничиваясь этим, серотипы AAV AAV-1, AAV-2, AAV-3, AAV-4, AAV-5, AAV-6, AAV-7, AAV-8, AAV-9, AAV-10 и AAV-11. Как отмечалось в приведенном выше разделе, описывающем уровень техники, нуклеотидные последовательности геномов разных серотипов AAV известны в данной области техники. В некоторых вариантах реализации изобретения промоторные ДНК представляют собой мышечно-специфические регуляторные элементы, включая, но не ограничиваясь этим, полученные из семейств актиновых и миозиновых генов, такие как полученные из семейства генов myoD [См. Weintraub et al., Science, 251: 761
- 3 032706
766 (1991)], миоцит-специфический связывающий (энхансерный) фактор MEF-2 [Cserjesi and Olson, Mol. Cell. Biol., 11: 4854-4862 (1991)], регуляторные элементы, полученные из человеческого гена актина скелетных мышц [Muscat et al., Mol. Cell. Biol., 7: 4089-4099 (1987)], гена актина сердечных мышц, элементы последовательности мышечной креатинкиназы [Johnson et al., Mol. Cell. Biol., 9:3393-3399 (1989)] и энхансерный элемент мышиной креатинкиназы (МСК), десминовый промотор, регуляторные элементы, полученные из гена быстросокращающегося тропонина С скелетных мышц, гена медленносокращающегося тропонина С сердечных мышц и гена медленносокращающегося тропонина I: гипоксияиндуцибельные ядерные факторы [Semenza et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 5680-5684 (1991)], стероид-индуцибельные элементы и промоторы, включая глюкокортикоид-ответные элементы (GRE) [См. Mader and White, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 5603-5607 (1993)], и другие регуляторные элементы.
ДНК-плазмиды согласно изобретению содержат геномы rAAV согласно изобретению. ДНКплазмиды переносятся в клетки, которые можно инфицировать, посредством вируса-помощника AAV (например, аденовируса, аденовируса с удаленным Е1 или вируса герпеса) для сборки генома rAAV в инфекционные вирусные частицы. Способы получения частиц rAAV, в которых геном AAV, который необходимо упаковать, гены rep и cap и функции вируса-помощника вводят в клетку, являются стандартными в данной области техники. Для получения rAAV необходимо присутствие в одной клетке (называемой в данном документе пакующей клеткой) следующих компонентов: генома rAAV, генов rep и cap AAV отдельно от (т.е. не в составе) генома rAAV и функций вируса-помощника. Rep-гены AAV могут быть получены из AAV любого серотипа, для которого можно получить рекомбинантный вирус, и могут быть получены из серотипа AAV, отличного от ИКП генома rAAV, включая, но не ограничиваясь этим, серотипы AAV AAV-1, AAV-2, AAV-3, AAV-4, AAV-5, AAV-6, AAV-7, AAV-8, AAV-9, AAV-10 и AAV-11. Отдельно рассмотрено применение когнатных компонентов. Получение псевдотипированного rAAV описано, например, в WO 01/83692, которая в полном объеме включена в данный документ посредством ссылки.
Способ получения пакующей клетки состоит в создании клеточной линии, которая стабильно экспрессирует все необходимые компоненты для получения AAV-частицы. Например, в геном клетки интегрируется плазмида или (множественные плазмиды), содержащая геном rAAV, в котором отсутствуют rep и cap гены AAV, rep и cap гены AAV отдельно от генома rAAV и селектируемый маркер, такой как ген устойчивости к неомицину. Геномы AAV вносили в бактериальные плазмиды при помощи таких процедур, как GC-присоединение (Samulski et al., 1982, Proc. Natl. Acad. S6. USA, 79:2077-2081), добавление синтетических линкеров, содержащих сайты расщепления рестрикционной эндонуклеазой (Laughlin et al., 1983, Gene, 23:65-73) или прямое лигирование тупых концов (Senapathy & Carter, 1984, J. Biol. Chem., 259:4661-4666). Затем пакующую клеточную линию инфицируют вирусом-помощником, таким как аденовирус. Преимущества этого способа состоят в том, что клетки являются селектируемыми и подходят для крупномасштабного получения rAAV. В других примерах подходящих способов для внесения геномов rAAV и/или rep и cap генов в пакующие клетки вместо плазмид применяется аденовирус или бакуловирус.
Обзор основных принципов получения rAAV приведен, например, в Carter, 1992, Current Opinions in Biotechnology, 1533-539; и Muzyczka, 1992, Curr. Topics in Microbial. and Immunol., 158:97-129). Различные подходы описаны в Ratschin et al., Mol. Cell. Biol. 4:2072 (1984); Hermonat et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6466 (1984); Tratschin et al., Mol. Cell. Biol. 5:3251 (1985); McLaughlin et al., J. Virol., 62:1963 (1988); и Lebkowski et al., 1988 Mol. Cell. Biol., 7:349 (1988). Samulski et al. (1989, J. Virol., 63:3822-3828); патент США № 5173414; WO 95/13365 и соответствующий патент США № 5658776; WO 95/13392; WO 96/17947; PCT/US 98/18600; WO 97/09441 (PCT/US 96/14423); WO 97/08298 (PCT/US 96/13872); WO 97/21825 (PCT/US 96/20777); WO 97/06243 (PCT/FR 96/01064); WO 99/11764; Perrin et al. (1995) Vaccine 13:1244-1250; Paul et al. (1993) Human Gene Therapy 4:609-615; Clark et al. (1996) Gene Therapy 3:11241132; патент США № 5786211; патент США № 5871982 и патент США № 6258595. Вышеуказанные документы в полном объеме включены в данный документ посредством ссылки с особенным акцентом на тех разделах документов, которые относятся к получению rAAV.
Таким образом, в настоящем изобретении предложены пакующие клетки, которые вырабатывают инфекционный rAAV. В одном варианте реализации изобретения пакующие клетки могут представлять собой стабильно трансформированные раковые клетки, такие как клетки HeLa, клетки 293 и клетки PerC.6 (когнатная линия 293). В другом варианте реализации изобретения пакующие клетки представляют собой клетки, которые не являются трансформированными раковыми клетками, такие как немногократно пассированные клетки 293 (человеческие фетальные клетки почек, трансформированные Е1 аденовирусом), клетки MRC-5 (человеческие фетальные фибробласты), клетки WI-38 (человеческие фетальные фибробласты), клетки Vero (клетки почек обезьяны) и клетки FRhL-2 (фетальные клетки легких макака-резуса).
rAAV можно очищать стандартными в данной области техники способами, такими как колоночная хроматография или центрифугирование в градиенте плотности хлорида цезия. Способы очистки rAAVвекторов от вируса-помощника известны в данной области техники и включают способы, раскрытые, например, в Clark et al., Hum. Gene Then, 10(6): 1031-1039 (1999); Schenpp and Clark, Methods Mol. Med.,
- 4 032706
427-443 (2002); патенте США № 6566118 и WO 98/09657.
В другом варианте реализации в изобретении рассмотрены композиции, содержащие rAAV согласно настоящему изобретению. Композиции согласно изобретению содержат rAAV в фармацевтически приемлемом носителе. Композиции также могут содержать другие ингредиенты, такие как разбавители. Подходящие носители и разбавители нетоксичны для реципиентов и предпочтительно являются инертными в применяемых дозировках и концентрациях и включают буферы, такие как фосфатный, цитратный или другие органические кислоты; антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота; низкомолекулярные полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как ЭДТК; сахарные спирты, такие как манит или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как ионы натрия; и/или неионные сурфактанты, такие как твин, плюроники или полиэтиленгликоль (ПЭГ).
Стерильные растворы для инъекций готовят путем внесения необходимого количества rAAV в соответствующий растворитель, при необходимости, с различными другими ингредиентами, перечисленными выше, с последующей фильтрующей стерилизацией. В общем случае дисперсии готовят путем внесения стерилизованного активного ингредиента в стерильный носитель, который содержит основную дисперсионную среду и другие необходимые ингредиенты из вышеперечисленных. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных инъецируемых растворов предпочтительными способами приготовления являются методы вакуумной сушки и лиофилизации, которые позволяют получить порошок активного ингредиента плюс любой дополнительный необходимый ингредиент из их предварительно стерильно-отфильтрованного раствора.
Титры rAAV, предназначенного для введения в способах согласно настоящему изобретению, будут варьироваться в зависимости, например, от конкретного rAAV, режима введения, цели лечения, индивида и типа(ов) клеток-мишеней, и могут быть определены стандартными в данной области техники способами. Диапазон титров rAAV может составлять от около 1х106, около 1х107, около 1х108, около 1х109, около 1х1010, около 1Х1011, около 1х1012, около 1х1013 до около 1х1014 или более устойчивых к ДНКазе частиц (УДЧ) на мл. Дозировки также можно выражать в единицах вирусных геномов (вг) (т.е. 1х107 вг, 1х108 вг, 1х109 вг, 1х1010 вг, 1х10п вг, 1х1012 вг, 1х1013 вг, 1х1014 вг соответственно).
В изобретении рассмотрены способы трансдукции клетки-мишени (например, скелетных мышц) rAAV in vivo или in vitro. Указанные способы включают этап введения эффективной дозы или эффективных многократных доз композиции, содержащей rAAV согласно изобретению, нуждающемуся в этом животному (включая человека). Если дозу вводят до развития МДД, введение является профилактическим. Если дозу вводят после развития МДД, введение является терапевтическим. В вариантах реализации изобретения эффективная доза представляет собой дозу, которая приводит к облегчению (устранению или снижению) по меньшей мере одного симптома, связанного с МДД, лечение которой проводится, которая замедляет или предотвращает прогрессирование до МДД, которая замедляет или предотвращает прогрессирование нарушения/болезненного состояния, которая снижает степень заболевания, которая приводит к ремиссии (частичной или полной) заболевания и/или которая продлевает срок жизни.
Введение эффективной дозы композиций можно осуществлять стандартными в данной области техники путями, включая, но не ограничиваясь этим, внутримышечный, парентеральный, внутривенный, пероральный, буккальный, назальный, ингаляционный, внутричерепной, внутрикостный, внутриглазной, ректальный или вагинальный. Путь(и) введения и серотип(ы) AAV-компонентов rAAV (в частности, ИКП AAV и капсидный белок) согласно изобретению могут быть выбраны и/или подобраны специалистами в данной области техники, принимая во внимание инфекцию и/или болезненное состояние, лечение которых проводится, и клетки/ткань(и)-мишени. В некоторых вариантах реализации изобретения путем введения является внутримышечный путь. В некоторых вариантах реализации изобретения путем введения является внутривенный путь.
Также в изобретении рассмотрена комбинированная терапия. В контексте данного документа комбинирование включает одновременное лечение или последовательное лечение. В частности, рассмотрено комбинирование способов согласно изобретению со стандартными видами медицинского лечения (например, кортикостероидами и/или иммуносупрессивными лекарственными препаратами), а также комбинирование с другими видами терапии, такими как те, которые представлены выше в разделе, описывающем уровень техники.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1 иллюстрирует гистологический и иммунофлуоресцентный анализ мышц мыши Dup2; фиг. 2 - иммуноблоты, полученные при проведении вестерн-блот анализа мышц мыши Dup2;
фиг. 3 иллюстрирует, что пропуск продублированного экзона 2 в MyoD-трансдифференцированном миобласте, индуцированный АОН, направленными на энхансер сплайсинга экзона, приводит к получению 39% транскрипта дикого типа. Дозировка для каждого ряда приведена в нмолях (25, 50, 100, 200, 300, 400, 500). Количество варьирующихся транскриптов приведено под каждым рядом, а максимальное
- 5 032706 залито цветом. ТБ - трансфекционный буфер. НСМ - нормальные скелетные мышцы. Процент дупликаций экзона 2, дт и делеций экзона 2 приведен под каждым рядом;
фиг. 4 - подход с применением вектора U7snRNA для пропуска экзона. U7snRNA применяют в качестве носителя для нацеливания на пре-матричную РНК. Она состоит из петли, используемой для ядерно-цитоплазматического экспорта, последовательности распознавания для связывания с белками Sm, используемыми для эффективной сборки между U7snRNA и пре-мРНК-мишенью, и антисмысловой последовательности для нацеливания на пре-мРНК. Она содержит свой собственный промотор и 3' нижележащие последовательности. Затем кассету U7 клонируют в AAV-плазмиду для получения вектора;
фиг. 5 - результаты ОТ-ПЦР для экспериментов по пропуску экзона с применением векторов SC rAAV для трансдуцирования иммортализованных человеческих фибромиобластов Dup2 типовыми нацеленными на экзон 2 конструкциями U7snRNA;
на фиг. 6 (A-D) представлены результаты экспериментов по пропуску экзона in vivo, в которых U7_ACCA SC rAAV доставляли путем внутримышечной инъекции Dup2 мышам;
на фиг. 7 представлена геномная последовательность rh74 (SEQ ID №: 1), в которой нуклеотиды 210-2147 представляют собой открытую рамку считывания гена Rep 78, 882-208 представляют собой открытую рамку считывания гена Rep52, 2079-2081 представляют собой стоп-кодон Rep78, 2145-2147 представляют собой стоп-кодон Rep78, 1797-1800 представляют собой донорный сайт сплайсинга, 20942097 представляют собой акцепторный сайт сплайсинга, 2121-2124 представляют собой акцепторный сайт сплайсинга, 174-181 представляют собой промотор р5 +1 прогнозированный, 145-151 представляют собой ТАТА-бокс р5, 758-761 представляют собой промотор р19 +1 прогнозированный, 732-738 представляют собой ТАТА-бокс р19, 1711-1716 представляют собой ТАТА-бокс р40, 2098-4314 представляют собой открытую рамку считывания гена VP1 Сар, 2509-2511 представляют собой стартовый кодон VP2, 2707-2709 представляют собой стартовый кодон VP3 и 4328-4333 представляют собой сигнал полиА;
фиг. 8 иллюстрирует карту плазмиды с вставкой генома AAV типовой нацеленной на экзон 2 U7snRNA;
фиг. 9 - последовательность ДНК вставки генома AAV (SEQ ID №: 2) для плазмиды, представленной на фиг. 8;
на фиг. 10 вертикальные столбики указывают на приблизительное расположение зонда MLPA;
на фиг. 11 приведено схематическое изображение вектора, применяемого при получении мыши mdxdup2 (Dup2);
фиг. 12 (а-е) иллюстрирует результаты внутримышечной доставки AAV1 Ш-АССА мышам Dup2; фиг. 13 (a-f) - результаты внутривенной инъекции AAV9 U7_ACCA в мышиной модели Dup2.
Примеры
Аспекты и варианты реализации изобретения проиллюстрированы следующими примерами.
Пример 1. Выделение AAV rh.74.
Уникальный серотип AAV выделяли из лимфатического узла макака-резуса при помощи новой методики под названием Линейная Амплификация по типу Катящегося Кольца. Применяя способ ЛАКК, проводили амплификацию двухцепочечных циклических AAV-геномов, полученных от нескольких макак-резус. Данный способ базируется на способности амплифицировать циклические AAV-геномы путем изотермической амплификации по типу катящегося кольца с применением ДНК-полимеразы фага phi29 и AAV-специфических праймеров. Продукты ЛАКК представляют собой непрерывные матрицы головак-хвосту циклических AAV-геномов, из которых выделяли полноразмерные молекулярные клоны RepCap AAV. Проводили секвенирование четырех изолятов, а для прогрозированных аминокислотных последовательностей для ОРС Rep и Cap проводили выравнивание и сравнении с ранее опубликованными серотипами (таблица). Проводили анализ белковых последовательностей VP1, который выявил наличие гомологии с изолятами клад D, Е AAV нечеловеческих приматов (НЧП) и AAV 4-подобного вируса. Анализ ОРС Rep78 (верхняя часть таблицы) выявил высокую степень гомологии с AAV 1 (98-99%).
| AAV 1 | AAV 4 | AAV 7 | AAV 8 | rh.73 | rh.74 | rh.75 | rh.76 | |
| AAV 1 | 90 | 98 | 95 | 98 | 98 | 99 | ||
| AAV4 | 63 | 90 | 87 | 90 | 90 | 90 | ||
| AAV7 | 85 | 63 | 96 | 97 | 98 | 98 | ||
| AAV 8 | 84 | 63 | 88 | 97 | 97 | 95 | ||
| rh.73 | 79 | 61 | 83 | 80 | 99 | 99 | ||
| rh.74 | 84 | 63 | 88 | 93 | 80 | 99 | ||
| rh.75 | 65 | 82 | 82 | 64 | 62 | 64 | ||
| rh.76 | 85 | 63 | 91 | 86 | 84 | 86 | 84 |
Сходство опубликованных последовательностей AAV и новых последовательностей AAV, определенное при помощи однопарного выравнивания по методу Липмана-Пирсона, осуществленного при помощи программного обеспечения MegAlgn в DNASTAR (DNASTAR Inc.). Числа, набранные обычным шрифтом (вверху, справа), представляют сходство последовательностей Rep78, а числа, набранные жирным шрифтом (внизу, слева), представляют сходство капсидных последовательностей VP1.
Из образца ткани одного макака-резуса (rh426-M) получили дивергентный AAV'8-нодобный изолят
- 6 032706 под названием rh.74, который обладает 93% идентичности последовательности с AAV8. Нуклеотидная последовательность генома rh.74 приведена на фиг. 7 и в виде SEQ ID №: 1.
Последовательность капсидного гена rh.74 клонировали в AAV плазмиду-помощника, содержащую ген Rep из AAV2, чтобы обеспечить функции репликации вектора для получения рекомбинантного AAV-вектора.
Пример 2. Модели МДД.
Примеры моделей дупликации экзона 2 МДД включают следующие in vivo и in vitro модели.
Мышиная модель mdxdup2.
Разрабатывали линию мышей, несущих дупликацию экзона 2 в пределах локуса Dmd. Мутация, связанная с дупликацией экзона 2, является наиболее распространенной человеческой дупликационной мутацией и приводит к развитию относительно тяжелой формы МДД.
Сначала по данным White et al., Hum. Mutat., 27(9): 938-945 (2006), исследовали максимальное содержание 11 разных дупликаций экзона 2 у человека при помощи МАЛЗ (мультиплексной амплификации лигированных зондов) и ПЦР длинных фрагментов. Результаты приведены на фиг. 10. На фиг. 10 каждый вертикальный столбик указывает на приблизительное расположение МАЛЗ-зонда. Заштрихованные колонки представляют два выявленных вариабельных участка; их использовали для определения расположения вставки по гомологии кассеты экзона 2 у мышей.
Карта инсерционного вектора приведена на фиг. 11. На карте обозначены числами относительные позиции сайтов клонирования и экзонов и сайтов рестрикции. Нео-кассета имеет то же направление гена, а точка вставки находится точно в 32207/32208 п.о. в интроне 2. С каждой стороны вставленного экзона 2 находятся по меньшей мере 150 п.о. добавочныхе интронных последовательностей, длина участка Е2 составляет 1775-2195 п.о. Размеры экзона 2 и интрона 2 составляют 62 п.о. и 209572 п.о. соответственно.
Клетки самцов C57BL/6 ES трансфицировали вектором, несущим конструкцию экзона 2, а вставку затем проверяли при помощи ПНР. Был обнаружен один хороший клон, который амплифицировали и инъецировали в большое количество бластоцитов мышей-альбиносов BL/6. Инъецированные бластоциты имплантировали в реципиентных мышей. Ген дистрофина, полученный от химерных самцов, проверяли при помощи ПЦР, а затем - ОТ-ПЦР. Колония была расширена и содержит некоторое количество самок мышей размноженных до достижения гомозиготности.
Фиг. 1 и 2 демонстрируют, что экспрессия дистрофина в мышцах 4-недельных гемизиготных мышей mdxdup2 практически отсутствует. (Как видно на фиг. 2, следы экспрессии можно выявить, используя С-терминальное антитело, но не специфическое к экзону 1 антитело Manex1 А, что согласуется с очень слабой трансляцией из альтернативного сайта инициации трансляции экзона 6, как было описано ранее).
Иммортализованные и условно-индуцибельные клеточные линии fibroMyoD.
Экспрессия гена MyoD в фибробластах млекопитающих приводит к трансдифференцировке клеток в миогенную линию. Такие клетки могут впоследствии дифференцировать в мышечные трубочки и экспрессируют мышечные гены, включая ген DMD.
Получали иммортализованные клеточные линии, которые в определенных условиях экспрессируют MyoD под управлением тетрациклин-индуцибельного промотора. Этого достигали путем стабильной трансфекции линий первичных фибробластов лентивирусом, содержащим тет-индуцибельный MyoD и содержащим ген человеческой теломеразы (TER). Полученные в результате стабильные линии позволяют инициировать экспрессию MyoD путем обработки доксициклином. Такие клеточные линии получали от пациентов с МДД, несущих дупликацию экзона 2.
При помощи указанной линии был продемонстрирован пропуск дупликации с применением 2'-Ометил антисмысловых олигомеров (АОН), предоставленных доктором Стивом Уилтоном (Steve Wilton) (Перт, Австралия). Были исследованы множественные клеточные линии. Результаты, полученные для типовых клеточных линий, приведены на фиг. 3.
Временно MyoD-трансфицированные первичные клеточные линии.
Проводили контрольно-проверочные эксперименты с применением линий первичных фибробластов, временно трансфицированных аденовирусом-MyoD. Аденовирусные конструкции не интегрировались в геном клеток, но при этом происходила временная экспрессия MyoD. Достигнутая в результате экспрессия DMD была достаточной для проведения экспериментов по пропуску экзонов (хотя для воспроизводимости больше подходят стабильно трансфицированные линии).
Пример 3. Эффективность U7snRNA-опосредованного пропуска мутаций, связанных с дупликацией экзона 2.
Были разработаны продукты и способы для вирусно-опосредованного пропуска дуплицированных экзонов. Продукты и способы были модифицированы по сравнению с U7snRNA-системами, описанными в Goyenvalle et al., Science, 306(5702): 1796-1799 (2004) или Goyenvalle et al., Mol. Ther., 20(6): 179601799 (2004).
U7snRNA модифицировали, чтобы включить нацеленную антисмысловую последовательность для того, чтобы она препятствовала сплайсингу в заданном экзоне-мишени (фиг. 4). В частности, были сконструированы четыре новых нацеленных на экзон 2 последовательности на основании результатов иссле
- 7 032706 дований АОН, описанных в примере 2
U7B TCAAAAGAAAACATTCACAAAATGGGTA (SEQ ID №: 3)
U7Along GTTTTCTTTTGAAGATCTTCTCTTTCATcta (SEQ ID №: 4)
U7Ashort AGATCTTCTCTTTCATcta (SEQ ID №: 5)
U7C GCACAATTTTCTAAGGTAAGAAT (SEQ ID №: 6)
Получали конструкции U7snRNA, включая нацеленные на экзон 2 последовательности. Каждая конструкция U7snRNA содержала одну из нацеленных последовательностей. Также получали конструкции U7snRNA, нацеленные на некоторые другие избранные экзоны (на основании вышеописанных исследований MyoD-трансдифференцированных клеточных линий). Затем получали самокомплементарные (SC) AAV векторы с геномами, содержащими одну или более из конструкций U7snRNA.
Для экспериментов в клеточной культуре и для внутримышечной инъекции мышам Dup2 применяли rAAVl векторы. Рекомбинантные SC AAV векторы необходимого серотипа AAV получали, используя модифицированный подход перекрестной упаковки при помощи плазмиды, содержащей необходимый векторный геном, методом тройной трансфекции плазмидной ДНК (с преципитацией CaPO4) в клетках HEK293 без применения аденовируса [Rabinowitz et al., J. Virol., 7(5:791-801 (2002)]. Вектор получали путем котрансфекции AAV плазмидой-помощником и аденовирусной плазмидой-помощником тем же способом, что был описан ранее [Wang et al., Gene. Ther., 70:1528-1534 (2003)]. Аденовирусная плазмидапомощник (pAdhelper) экспрессирует аденовирусные гены типа 5 Е2А, E4ORF6 и VA I/II RNA, которые необходимы для получения высоких титров rAAV.
Векторы очищали из осветленных лизатов клеток 293 методом очистки в непрерывном градиенте плотности йодиксанола и анионообменной колоночной хроматографии, используя линейный градиент соли NaCl, как было описано ранее [Clark et al., Hum. Gene Ther., 70:1031-1039 (1999)]. Титры векторных геномов (вг) определяли методом КПЦР на основании выявления при помощи группы специфических праймеров/зондов, используя детекторную систему Prism 7500 Taqman (PE Applied Biosystems), как было описано ранее (Clark et al., выше). Исходные векторные титры соответствовали диапазону 1-10Х1012 вг/мл.
Начальный анализ пропуска экзонов проводили методом ОТ-ПЦР, используя SC rAAV векторы, чтобы трансдуцировать иммортализованные человеческие фибромиобласты Dup2. Иммортализованные человеческие фибромиобласты Dup 2, которые были способны трансдифференцироваться в клетки мышечной линии дифференцировки под управлением доксициклина, получали путем трансдукции экспрессирующих теломеразу и тет-индуцибельных экспрессирующих MyoD векторов. Конвертированные человеческие фибромиобласты (ФМ) затем трансдуцировали SC rAAV, несущим разные конструкции U7, содержащие антисмысловые последовательности экзона 2.
На фиг. 5 показаны результаты ОТ-ПЦР для конструкций SC rAAV-U7 с тремя разными антисмысловыми последовательностями. На фиг. 5, (4С) означает, что четыре копии конструкции U7 были включены в векторный геном, + означает более высокую дозу и U7_ACCA A=Along означает векторный геном (показанный на карте плазмиды на фиг. 8, и последовательность которого, SEQ ID №: 2, приведена на фиг. 9), который содержит последовательно расположенные четыре нацеленные на экзон 2 полинуклеотидные конструкции U7snRNA: первую конструкцию U7Along, первую конструкцию U7C, вторую конструкцию U7C и вторую конструкцию U7Along. Как показано, для SC rAAV U7_ACCA A-Along (в другом месте данного документа обозначенной как U7_ACCA SC rAAV1) был достигнут более высокий процент пропуска экзона 2 по сравнению с любыми другими векторными конструкциями.
В последующих экспериментах эффективность пропуска экзонов анализировали in vivo. Наиболее эффективный AAV-U7 вектор, U7_ACCA SC rAAV1, был выбран для проведения внутримышечной инъекции Dup2 мышам Dup2. Результаты приведены ниже на фиг. 6 (A-D), где (А) иллюстрирует окрашивание дистрофина в случае восстановления экспрессии белка, локализированной в мембранах многих мышечных волокон; (В) восстановление белка подтверждали методом вестерн-блоттинга. Результаты ОТПЦР показывают (С) дозозависимый единичный или двойной пропуск у мышей Dup2, а также (D) эффективный пропуск у мышей дикого типа.
Таким образом, была сконструирована высокоэффективная AAV-опосредованная U7snRNA для пропуска экзона 2, которая позволяет восстанавливать дистрофин субсарколеммы. Будет проведено сравнение сердечной функции; оценки силы ДРП (длинного разгибателя пальцев) и диафрагмы; тестирования на бегущей дорожке и приподнятой перекладине для необработанных и обработанных мышей.
На основании степени экспрессии дистрофина, регистрируемой в инъецированных мышцах, U7_ACCA SC rAAV была выбрана для проведения дополнительных экспериментов для внутривенной доставки первой группе при 1Е11 вг/кг, с последующим дозированием второй группы на один log выше. Инъекцию будут осуществлять в возрасте четырех недель и проводить физиологическую и гистопатологическую оценку животных на 10 и 24 недели (n = 8 животных на группу), как описано выше.
Пример 4.
- 8 032706
Внутримышечная доставка U7-ACCA при помощи AAV1 приводит к существенной экспрессии Nусеченного дистрофина у мышей Dup2.
rAAVl, содержащий геномную вставку, приведенную на фиг. 9, получали способами, описанными в примере 3. Затем AAV.1U7-ACCA вводили мышам Dup2 путем внутримышечной инъекции.
Для мРНК DMD проводили ОТ-ПЦР через 4 недели после внутримышечной инъекции в переднюю болыпеберцовую мышцу (ПБМ) 5e11vg AAV.1U7-ACCA, которая показывала практически полный пропуск обеих копий экзона 2 животных Dup2 [фиг. 12(а)].
Результаты иммуноблоттинга с применением С-терминального антитела (РА1-21011, ThermoScientific), проведенного через месяц после инфицирования, показали наличие значительной экспрессии Nусеченной изоформы (звездочки) как у Dup2, так и у контрольных В16 мышей [фиг. 12(b)]. Белок, выработка которого была индуцирована у самцов В16, инъецированных U7-ACCA, имел такой же размер, что и экспрессируемый у обработанных животных Dup2, что подтверждает разницу в размере между этим белком и полноразмерной изоформой.
Иммунофлуоресцентное окрашивание дистрофина, β-дистрогликана и нейрональной синтазы оксида азота продемонстрировало восстановление представителей дистрофин-ассоциированного комплекса [фиг. 12(с)].
Нормированная удельная сила после тетанического сокращения у необработанных животных Dup2 была значительно меньшей, чем у мышей В16.
Внутримышечная инъекция AAV1.U7-ACCA, как одного, так и с преднизоном, значительно повышала силу до уровней, которые существенно не отличались от наблюдаемых для В16 мышей. Существенной разницы между необработанными мышами Dup2 и обработанными одним преднизоном (Dup2+ПДН) не наблюдали [фиг. 12(d)]. В этом анализе нормированную удельную силу оценивали, используя опубликованный протокол [Hakim et al., Journal of Applied Physiology, 110: 1656-1663 (2011)].
Обработка в значительной степени защищала Dup2 мышцы от потери силы после повторяющихся эксцентрических сокращений согласно оценке в соответствии с опубликованными протоколами (Hakim et al., выше). Обработка мышей Dup2 одним AAV1.U7-ACCA приводила к статистически значимому улучшению по сравнению с необработанными мышами Dup2. Комбинирование AAV1.U7-ACCA и преднизона приводило к незначительной разнице по сравнению с контрольными мышами В16 в сохранении силы после сокращений от № 3 до 10 [фиг. 12(е)].
Пример 5.
Внутривенная инъекция AAV9-U7_ACCA в мышиной модели Dup2 приводит к значительной экспрессии N-усеченной изоформы и коррекции недостатка силы.
На основании степени экспрессии дистрофина, регистрируемой в инъецированных мышцах, U7_ACCA SC rAAV была выбрана для внутривенной доставки для проведения дополнительных экспериментов, а серотип rAAV9 был выбран на основании известных свойств распределения в тканях.
rAAV9, содержащий геномную вставку, приведенную на фиг. 9, получали способами, описанными в примере 3. Затем AAV.9U7-ACCA вводили Dup2 мышам Dup2. Первой группе проводили инъекцию в хвостовую вену 3.3Е112 вг/кг. Инъекцию проводили в возрасте четырех недель.
ОТ-ПЦР проводили для пяти разных мышечных групп мышей Dup2 через месяц после инъекции в хвостовую вену AAV9.U7-ACCA (3.3Е12 вг/кг) [фиг. 13(а)]. Как продемонстрировано наличием множественных транскриптов (обозначенных Dup2, дт и Del2), обработка U7-ACCA приводила к пропуску одной или обеих копий экзона 2 во всех исследуемых типах мышц. (ПБМ: передняя болыпеберцовая мышца; Икр: икроножная мышца; V'· сердце; Три: трицепс; диа: диафрагма).
Результаты вестерн-блоттинга с применением С-терминального антитела (РА1-21011, Thermo Scientific), проведенного для пяти разных мышечных групп через месяц после инъекции, показали наличие дистрофина во всех исследуемых типах мышц [фиг. 13(b)].
Результаты иммуноокрашивания дистрофина с применением С-терминального антитела (РА121011, ThermoScientific), проведенного для тех же образцов, подтвердили наличие экспрессии дистрофина и его надлежащей локализации в сарколемме [фиг. 13(с)].
Оценка силы захвата передней и задней лапы продемонстрировала полную коррекцию силы захвата у животных Dup2, обработанных AAV9.U7-ACCA [фиг. 13(d)]. Данный анализ проводили, используя опубликованный протокол [Spurney et al., Muscle & Nerve, 39, 591-602 (2009)].
Измерение нормированной удельной и общей силы после тетанического сокращения показали улучшение в мышечной силе по сравнению с необработанными животными Dup2 [фиг. 13(е)], для оценки которого использовали опубликованный протокол [Hakim et al., выше).
Сердечные папиллярные мышцы демонстрировали улучшение в зависимой от длины силовой генерации у обработанных животных [фиг. 13(f)], для оценки которого использовали опубликованный протокол [Janssen et al., Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol., 259(6):H2373-2378 (2005)].
Несмотря на то что изобретение было описано в терминах конкретных вариантов реализации, специалистам в данной области техники будет очевидно существование его вариаций и модификаций. Соответственно, только те ограничения, которые прописаны в формуле изобретения, могут быть наложены на
- 9 032706 изобретение.
Все документы, на которые ссылается данная заявка, в полном объеме включены в данный документ посредством ссылки с особым акцентом на их содержание.
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ <110> РИСЁРЧ ИНСТИТЪЮТ ЭТ НЭЙШНВАЙД ЧИЛДРЕН'С ХОСПИТАЛ <12 0> ДОСТАВКА НАЦЕЛЕННЫХ НА ЭКЗОН 2 ПОЛИНУКЛЕОТИДНЫХ КОНСТРУКЦИЙ U7snRNA
ПРИ ПОМОЩИ РЕКОМБИНАНТНОГО АДЕНОАССОЦИИРОВАННОГО ВИРУСА <130> 28335/47699PCT <150> US-61/814256 <151> 2013-04-20 <160> 6 <170> PatentIn версия 3.5 <210> 1 <211> 4472 <212> ДНК <213> Аденоассоциированный вирус <400> 1
| ctccatcact | aggggtaacc | gcgaagcgcc | tcccacgctg | ccgcgtcagc | gctgacgtaa | 60 |
| attacgtcat | aggggagtgg | tcctgtatta | gctgtcacgt | gagtgctttt | gcgacatttt | 120 |
| gcgacaccac | gtggccattc | atggtatata | tggccgagtg | agcgagcagg | atctccattt | 180 |
| tgaccgcgaa | atttgaacga | gcagcagcca | tgccgggctt | ctacgagatc | gtgcttaagg | 240 |
| tgccgagcga | cctggacgag | cacctgccgg | gcatttctga | ctcgtttgtg | aactgggtgg | 300 |
| cagagaagga | atgggagctg | cccccggatt | ctgacatgga | tcggaatctg | attgagcagg | 360 |
| cacccctgac | cgtggccgag | aagctacagc | gcgacttcct | ggtccaatgg | cgccgcgtga | 420 |
| gtaaggcccc | ggaggccctc | ttctttgttc | agttcgagaa | gggcgagtcc | tacttccacc | 480 |
| tccatattct | ggtagagacc | acgggggtca | aatccatggt | gctgggccgc | ttcctgagtc | 540 |
| agattcggga | caagctggtg | cagaccatct | accgcgggat | cgagccgacc | ctgcccaact | 600 |
| ggttcgcggt | gacaaagacg | cgtaatggcg | ccggaggggg | gaacaaggtg | gtggacgagt | 660 |
| gctacatccc | caactacctg | ctgcccaaga | ctcagcccga | gctgcagtgg | gcgtggacta | 720 |
| acatggagga | gtatataagc | gcgtgcttga | acctggccga | gcgcaaacgg | ctcgtggcgc | 780 |
| agcacctgac | ccacgtcagc | cagacccagg | agcagaacaa | ggagaatctg | aacccgaatt | 840 |
| ctgacgcgcc | tgtcatccgg | tcaaaaacct | ccgcgcgcta | catggagctg | gtcgggtggc | 900 |
| tggtggaccg | gggcatcacc | tccgagaagc | agtggatcca | ggaggaccag | gcctcgtaca | 960 |
| tctccttcaa | cgccgcctcc | aactcgcggt | ctcagatcaa | ggccgcgctg | gacaatgccg | 1020 |
| gcaagatcat | ggcgctgacc | aaatccgcgc | ccgactacct | ggtaggcccc | gctctgcccg | 1080 |
- 10 032706
| cggacattaa | atccaaccgc | atctaccgca | tcctggagct | gaatggctac | gaccctgcct | 1140 |
| acgccggttc | cgtctttctc | ggctgggccc | agaaaaagtt | tggcaaaagg | aacaccatct | 1200 |
| ggctgtttgg | gccggccacc | acgggcaaga | ccaacatcgc | ggaagccatc | gcccacgccg | 1260 |
| tgcccttcta | cggctgcgtc | aactggacca | atgagaactt | tcccttcaac | gattgcgtcg | 1320 |
| acaagatggt | gatctggtgg | gaggagggca | agatgacggc | caaggtcgtg | gagtccgcca | 1380 |
| aggccattct | cggcggcagc | aaggtgcgcg | tggaccaaaa | gtgcaagtcg | tccgcccaga | 1440 |
| tcgatcccac | ccccgtgatc | gtcacctcca | acaccaacat | gtgcgccgtg | attgacggga | 1500 |
| acagcaccac | cttcgagcac | cagcagccgt | tgcaggaccg | gatgttcaaa | tttgaactta | 1560 |
| cccgccgtct | ggagcacgac | tttggcaagg | tgacaaagca | ggaagtcaaa | gagttcttcc | 1620 |
| gctgggcgca | ggatcacgtg | accgaggtgg | cgcatgagtt | ctacgtcaga | aagggtggag | 1680 |
| ctaacaaaag | acccgccccc | gatgacgcgg | atataagcga | gcccaagcgg | gcctgcccct | 1740 |
| cagtcgcgga | tccatcgacg | tcagacgcgg | aaggagctcc | ggtggacttt | gccgacaggt | 1800 |
| accaaaacaa | atgttctcgt | cacgcgggca | tgcttcagat | gctgtttccc | tgcaaaacat | 1860 |
| gcgagagaat | gaatcagaat | ttcaacattt | gcttcacgca | cgggaccaga | gactgttcag | 1920 |
| aatgtttccc | tggcgtgtca | gaatctcaac | cggtcgtcag | aaaaaagacg | tatcggaaac | 1980 |
| tctgtgcgat | tcatcatctg | ctggggcggg | cacccgagat | tgcttgctcg | gcctgcgacc | 2040 |
| tggtcaacgt | ggacctggat | gactgtgttt | ctgagcaata | aatgacttaa | accaggtatg | 2100 |
| gctgccgatg | gttatcttcc | agattggctc | gaggacaacc | tctctgaggg | cattcgcgag | 2160 |
| tggtgggacc | tgaaacctgg | agccccgaaa | cccaaagcca | accagcaaaa | gcaggacaac | 2220 |
| ggccggggtc | tggtgcttcc | tggctacaag | tacctcggac | ccttcaacgg | actcgacaag | 2280 |
| ggggagcccg | tcaacgcggc | ggacgcagcg | gccctcgagc | acgacaaggc | ctacgaccag | 2340 |
| cagctccaag | cgggtgacaa | tccgtacctg | cggtataatc | acgccgacgc | cgagtttcag | 2400 |
| gagcgtctgc | aagaagatac | gtcttttggg | ggcaacctcg | ggcgcgcagt | cttccaggcc | 2460 |
| aaaaagcggg | ttctcgaacc | tctgggcctg | gttgaatcgc | cggttaagac | ggctcctgga | 2520 |
| aagaagagac | cggtagagcc | atcaccccag | cgctctccag | actcctctac | gggcatcggc | 2580 |
| aagaaaggcc | agcagcccgc | aaaaaagaga | ctcaattttg | ggcagactgg | cgactcagag | 2640 |
| tcagtccccg | accctcaacc | aatcggagaa | ccaccagcag | gcccctctgg | tctgggatct | 2700 |
| ggtacaatgg | ctgcaggcgg | tggcgctcca | atggcagaca | ataacgaagg | cgccgacgga | 2760 |
| gtgggtagtt | cctcaggaaa | ttggcattgc | gattccacat | ggctgggcga | cagagtcatc | 2820 |
| accaccagca | cccgcacctg | ggccctgccc | acctacaaca | accacctcta | caagcaaatc | 2880 |
| tccaacggga | cctcgggagg | aagcaccaac | gacaacacct | acttcggcta | cagcaccccc | 2940 |
| tgggggtatt | ttgacttcaa | cagattccac | tgccactttt | caccacgtga | ctggcagcga | 3000 |
- 11 032706
| ctcatcaaca | acaactgggg | attccggccc | aagaggctca | acttcaagct | cttcaacatc | 3060 |
| caagtcaagg | aggtcacgca | gaatgaaggc | accaagacca | tcgccaataa | ccttaccagc | 3120 |
| acgattcagg | tctttacgga | ctcggaatac | cagctcccgt | acgtgctcgg | ctcggcgcac | 3180 |
| cagggctgcc | tgcctccgtt | cccggcggac | gtcttcatga | ttcctcagta | cgggtacctg | 3240 |
| actctgaaca | atggcagtca | ggctgtgggc | cggtcgtcct | tctactgcct | ggagtacttt | 3300 |
| ccttctcaaa | tgctgagaac | gggcaacaac | tttgaattca | gctacaactt | cgaggacgtg | 3360 |
| cccttccaca | gcagctacgc | gcacagccag | agcctggacc | ggctgatgaa | ccctctcatc | 3420 |
| gaccagtact | tgtactacct | gtcccggact | caaagcacgg | gcggtactgc | aggaactcag | 3480 |
| cagttgctat | tttctcaggc | cgggcctaac | aacatgtcgg | ctcaggccaa | gaactggcta | 3540 |
| cccggtccct | gctaccggca | gcaacgcgtc | tccacgacac | tgtcgcagaa | caacaacagc | 3600 |
| aactttgcct | ggacgggtgc | caccaagtat | catctgaatg | gcagagactc | tctggtgaat | 3660 |
| cctggcgttg | ccatggctac | ccacaaggac | gacgaagagc | gattttttcc | atccagcgga | 3720 |
| gtcttaatgt | ttgggaaaca | gggagctgga | aaagacaacg | tggactatag | cagcgtgatg | 3780 |
| ctaaccagcg | aggaagaaat | aaagaccacc | aacccagtgg | ccacagaaca | gtacggcgtg | 3840 |
| gtggccgata | acctgcaaca | gcaaaacgcc | gctcctattg | taggggccgt | caatagtcaa | 3900 |
| ggagccttac | ctggcatggt | gtggcagaac | cgggacgtgt | acctgcaggg | tcccatctgg | 3960 |
| gccaagattc | ctcatacgga | cggcaacttt | catccctcgc | cgctgatggg | aggctttgga | 4020 |
| ctgaagcatc | cgcctcctca | gatcctgatt | aaaaacacac | ctgttcccgc | ggatcctccg | 4080 |
| accaccttca | ctaaggccaa | gctggcttct | ttcatcacgc | agtacagtac | cggccaggtc | 4140 |
| agcgtggaga | tcgagtggga | gctgcagaag | gagaacagca | aacgctggaa | cccagagatt | 4200 |
| cagtacactt | ccaactacta | caaatctaca | aatgtggact | ttgctgtcaa | tactgagggt | 4260 |
| acttattccg | agcctcgccc | cattggcacc | cgttacctca | cccgtaatct | gtaattacat | 4320 |
| gttaatcaat | aaaccggtta | attcgtttca | gttgaacttt | ggtctcctgt | ccttcttatc | 4380 |
| ttatcggtta | ccatagaaac | tggttactta | ttaactgctt | ggtgcgcttc | gcgataaaag | 4440 |
| acttacgtca | tcgggttacc | cctagtgatg | ga | 4472 |
<210> 2 <211> 2052 <212> ДНК <213> Аденоассоциированный вирус <220>
<221> misc_feature <222> (1)..(88) <223> Инвертированная концеваяпоследовательность (ИКП)
- 12 032706 <220>
<221> misc_feature <222> (89)..(365) <223> U7-Along <220>
<221> misc_feature <222> (525)..(806) <223> U7-C <220>
<221> misc_feature <222> (961)..(1242) <223> U7-C <220>
<221> misc_feature <222> (1397)..(1678) <223> U7-Along <220>
<221> misc_feature <222> (1830)..(2052) <223> Инвертированная концевая последовательность 3' (ИКП) <400> 2
| ctgcgcgctc | gctcgctcac | tgaggccgcc | cgggcaaagc | ccgggcgtcg | ggcgaccttt | 60 |
| ggtcgcccgg | cctcagtgag | cgagcgagcg | cgcagagagg | gagtggggtt | gtacacatac | 120 |
| gcgtttccta | ggaaaccaga | gaaggatcaa | agcccctctc | acacaccggg | gagcggggaa | 180 |
| gagaactgtt | ttgctttcat | tgtagaccag | tgaaattggg | aggggttttc | cgaccgaagt | 240 |
| cagaaaacct | gctccaaaaa | tttagatgaa | agagaagatc | ttcaaaagaa | aacttgcgga | 300 |
| agtgcgtctg | tagcgagcca | gggaaggaca | tcaactccac | tttcgatgag | ggtgagatca | 360 |
| aggtgccatt | tccacacccc | tccactgata | tgtgaatcac | aaagcacagt | tccttattcg | 420 |
| gttcgataaa | caatattcta | aaagactatt | aaaaccgctc | gtttcttgag | tttgtgaccg | 480 |
| cttgtaaagg | ctatgcaaat | gagtcagtgc | tgattggctg | aaaacagcca | atcacagctc | 540 |
| ctatgttgtt | atctagccac | atacgcgttt | cctaggaaac | cagagaagga | tcaaagcccc | 600 |
| tctcacacac | cggggagcgg | ggaagagaac | tgttttgctt | tcattgtaga | ccagtgaaat | 660 |
| tgggaggggt | tttccgaccg | aagtcagaaa | acctgctcca | aaaattgcac | aattttctaa | 720 |
| ggtaagaatt | tgcggaagtg | cgtctgtagc | gagccaggga | aggacatcaa | ctccactttc | 780 |
| gatgagggtg | agatcaaggt | gccatttcca | cacccctcca | ctgatatgtg | aatcacaaag | 840 |
| cacagttcct | tattcggttc | gataaacaat | attctaaaag | actattaaaa | ccgctcgttt | 900 |
| cttgagtttg | tgaccgcttg | taaaggctat | gcaaatgagt | cagtgctgat | tggctgaaaa | 960 |
| cagccaatca | cagctcctat | gttgttatct | agccacatac | gcgtttccta | ggaaaccaga | 1020 |
| gaaggatcaa | agcccctctc | acacaccggg | gagcggggaa | gagaactgtt | ttgctttcat | 1080 |
| tgtagaccag | tgaaattggg | aggggttttc | cgaccgaagt | cagaaaacct | gctccaaaaa | 1140 |
- 13 032706
| ttgcacaatt | ttctaaggta | agaatttgcg | gaagtgcgtc | tgtagcgagc | cagggaagga | 1200 |
| catcaactcc | actttcgatg | agggtgagat | caaggtgcca | tttccacacc | cctccactga | 1260 |
| tatgtgaatc | acaaagcaca | gttccttatt | cggttcgata | aacaatattc | taaaagacta | 1320 |
| ttaaaaccgc | tcgtttcttg | agtttgtgac | cgcttgtaaa | ggctatgcaa | atgagtcagt | 1380 |
| gctgattggc | tgaaaacagc | caatcacagc | tcctatgttg | ttatctagcc | acatacgcgt | 1440 |
| ttcctaggaa | accagagaag | gatcaaagcc | cctctcacac | accggggagc | ggggaagaga | 1500 |
| actgttttgc | tttcattgta | gaccagtgaa | attgggaggg | gttttccgac | cgaagtcaga | 1560 |
| aaacctgctc | caaaaattta | gatgaaagag | aagatcttca | aaagaaaact | tgcggaagtg | 1620 |
| cgtctgtagc | gagccaggga | aggacatcaa | ctccactttc | gatgagggtg | agatcaaggt | 1680 |
| gccatttcca | cacccctcca | ctgatatgtg | aatcacaaag | cacagttcct | tattcggttc | 1740 |
| gataaacaat | attctaaaag | actattaaaa | ccgctcgttt | cttgagtttg | tgaccgcttg | 1800 |
| taaaggctat | gcaaatgagt | cagtgctgat | tggctgaaaa | cagccaatca | cagctcctat | 1860 |
| gttgttatct | agagcatggc | tacgtagata | agtagcatgg | cgggttaatc | attaactaca | 1920 |
| aggaacccct | agtgatggag | ttggccactc | cctctctgcg | cgctcgctcg | ctcactgagg | 1980 |
| ccgggcgacc | aaaggtcgcc | cgacgcccgg | gctttgcccg | ggcggcctca | gtgagcgagc | 2040 |
| gagcgcgcca | gc | 2052 |
<210>3 <211> 28 <212> ДНК <213> Аденоассоциированный вирус <400>3 tcaaaagaaa acattcacaa aatgggta
| <210> | 4 | |
| <211> | 31 | |
| <212> | ДНК | |
| <213> | Аденоассоциированный вирус | |
| <400> | 4 | |
| gttttctttt gaagatcttc tctttcatct a | 31 |
<210>5 <211>19 <212> ДНК <213> Аденоассоциированный вирус <400>5 agatcttctc tttcatcta <210> 6 <211>23
- 14 032706 <212>
<213>
ДНК
Аденоассоциированный вирус <400> 6 gcacaatttt ctaaggtaag aat
Claims (14)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Способ облегчения мышечной дистрофии Дюшенна у нуждающегося в этом пациента с дупликациями экзона 2 DMD, включающий этап введения рекомбинантного аденоассоциированного вируса (rAAV) пациенту, при этом геном rAAV содержит полинуклеотид SEQ ID №: 2.
- 2. Способ подавления прогрессирования дистрофической патологии, связанной с мышечной дистрофией Дюшенна, у нуждающегося в этом пациента с дупликациями экзона 2 DMD, включающий этап введения rAAV пациенту, при этом геном rAAV содержит полинуклеотид SEQ ID №: 2.
- 3. Способ улучшения мышечной функции у пациента, пораженного мышечной дистрофией Дюшенна, связанной с дупликациями экзона 2 DMD, включающий этап введения rAAV пациенту, при этом геном rAAV содержит полинуклеотид SEQ ID №: 2.
- 4. Способ по п.3, отличающийся тем, что улучшение мышечной функции состоит в улучшении мышечной силы.
- 5. Способ по п.3, отличающийся тем, что улучшение мышечной функции состоит в улучшении стабильности в отношении возможности стоять и ходить.
- 6. Способ по любому из пп.1-5, отличающийся тем, что вирусный геном представляет собой самокомплементарный геном.
- 7. Способ доставки нацеленной на экзон 2 полинуклеотидной конструкции U7snRNA пациенту с дупликациями экзона 2 DMD, включающий этап введения rAAV пациенту, при этом геном rAAV содержит полинуклеотид SEQ ID №: 2.
- 8. Способ по любому из пп.1-7, отличающийся тем, что в геноме rAAV отсутствуют последовательности rep и cap AAV.
- 9. Способ по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что вирусный геном представляет собой самокомплементарный геном.
- 10. Способ по любому из пп.1-9, отличающийся тем, что rAAV представляет собой rAAV rh74, rAAV6 или rAAV9.
- 11. Рекомбинантный аденоассоциированный вирус (rAAV) для доставки нацеленной на экзон 2 полинуклеотидной конструкции U7snRNA пациенту с дупликациями экзона 2 DMD, причем геном rAAV содержит полинуклеотид SEQ ID №: 2.
- 12. Рекомбинантный аденоассоциированный вирус (rAAV) для доставки нацеленной на экзон 2 полинуклеотидной конструкции U7snRNA пациенту с дупликациями экзона 2 DMD, причем rAAV содержит капсид AAV rh.74, капсид AAV6 или капсид AAV9 и геном rAAV содержит полинуклеотид SEQ ID №: 2.
- 13. Рекомбинантный аденоассоциированный вирус по п.11 или 12, отличающийся тем, что в геноме rAAV отсутствует ДНК rep и cap AAV.
- 14. Рекомбинантный аденоассоциированный вирус по п.11 или 12, отличающийся тем, что вирусный геном представляет собой самокомплементарный геном.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201361814256P | 2013-04-20 | 2013-04-20 | |
| PCT/US2014/034702 WO2014172669A1 (en) | 2013-04-20 | 2014-04-18 | Recombinant adeno-associated virus delivery of exon 2-targeted u7snrna polynucleotide constructs |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201592014A1 EA201592014A1 (ru) | 2016-06-30 |
| EA032706B1 true EA032706B1 (ru) | 2019-07-31 |
Family
ID=50933493
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201592014A EA032706B1 (ru) | 2013-04-20 | 2014-04-18 | ДОСТАВКА НАЦЕЛЕННЫХ НА ЭКЗОН 2 ПОЛИНУКЛЕОТИДНЫХ КОНСТРУКЦИЙ U7snRNA ПРИ ПОМОЩИ РЕКОМБИНАНТНОГО АДЕНОАССОЦИИРОВАННОГО ВИРУСА |
| EA201990558A EA201990558A3 (ru) | 2013-04-20 | 2014-04-18 | Доставка нацеленных на экзон 2 полинуклеотидных конструкций u7snrna при помощи рекомбинантного аденоассоциированного вируса |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201990558A EA201990558A3 (ru) | 2013-04-20 | 2014-04-18 | Доставка нацеленных на экзон 2 полинуклеотидных конструкций u7snrna при помощи рекомбинантного аденоассоциированного вируса |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US9862945B2 (ru) |
| EP (2) | EP3461838A1 (ru) |
| JP (4) | JP6461917B2 (ru) |
| KR (3) | KR102268473B1 (ru) |
| CN (2) | CN105324392A (ru) |
| AU (4) | AU2014253730B2 (ru) |
| CA (2) | CA2909807C (ru) |
| EA (2) | EA032706B1 (ru) |
| HK (1) | HK1221962A1 (ru) |
| MX (2) | MX2015014712A (ru) |
| WO (1) | WO2014172669A1 (ru) |
Families Citing this family (80)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3808845A1 (en) | 2004-06-28 | 2021-04-21 | The University Of Western Australia | Antisense oligonucleotides for inducing exon skipping and methods of use thereof |
| KR102581868B1 (ko) | 2009-11-12 | 2023-10-04 | 더 유니버시티 오브 웨스턴 오스트레일리아 | 안티센스 분자 및 이를 이용한 질환 치료방법 |
| CA2906209A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Sarepta Therapeutics, Inc. | Exon skipping compositions for treating muscular dystrophy targeting the annealing site h44a (-07+15) |
| JP2016516066A (ja) | 2013-03-15 | 2016-06-02 | サレプタ セラピューティクス， インコーポレイテッド | 筋ジストロフィを処置するための改善された組成物 |
| JP6461917B2 (ja) | 2013-04-20 | 2019-01-30 | リサーチ インスティチュート アット ネイションワイド チルドレンズ ホスピタル | エクソン２標的Ｕ７ｓｎＲＮＡポリヌクレオチド構築物の組換えアデノ随伴ウイルスによる送達 |
| BR112015028605A8 (pt) * | 2013-05-15 | 2019-12-24 | Univ Minnesota | uso de uma composição e uso de um imunossupressor e uma composição |
| WO2015191508A1 (en) | 2014-06-09 | 2015-12-17 | Voyager Therapeutics, Inc. | Chimeric capsids |
| EP3572516A1 (en) | 2014-08-09 | 2019-11-27 | The Research Institute at Nationwide Children's Hospital | Methods and materials for activating an internal ribosome entry site in exon 5 of the dmd gene |
| BR112017009497A2 (pt) | 2014-11-05 | 2018-02-06 | Voyager Therapeutics, Inc. | polinucleotídeos de aadc para o tratamento da doença de parkinson |
| US10597660B2 (en) | 2014-11-14 | 2020-03-24 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods of treating amyotrophic lateral sclerosis (ALS) |
| ES2878451T3 (es) | 2014-11-14 | 2021-11-18 | Voyager Therapeutics Inc | Polinucleótidos moduladores |
| EP3230441A4 (en) | 2014-12-12 | 2018-10-03 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for the production of scaav |
| CN108738310A (zh) * | 2015-09-30 | 2018-11-02 | 萨勒普塔医疗公司 | 用于治疗肌营养不良的方法 |
| WO2017136435A1 (en) | 2016-02-01 | 2017-08-10 | The Usa, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Office Of Technology Transfer National Institute Of Health | Compounds for modulating fc-epsilon-ri-beta expression and uses thereof |
| AU2017250298B2 (en) | 2016-04-15 | 2024-10-03 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Gene therapy for treating mucopolysaccharidosis type II |
| WO2017189964A2 (en) | 2016-04-29 | 2017-11-02 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions for the treatment of disease |
| US11951121B2 (en) | 2016-05-18 | 2024-04-09 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for treating Huntington's disease |
| KR20240056729A (ko) | 2016-05-18 | 2024-04-30 | 보이저 테라퓨틱스, 인크. | 조절성 폴리뉴클레오티드 |
| CN106086012A (zh) * | 2016-06-23 | 2016-11-09 | 百奥迈科生物技术有限公司 | 一种线性双链腺相关病毒基因组的体外制备方法 |
| CA3035522A1 (en) | 2016-08-30 | 2018-03-08 | The Regents Of The University Of California | Methods for biomedical targeting and delivery and devices and systems for practicing the same |
| CN110997923B (zh) * | 2017-03-17 | 2024-01-02 | 全国儿童医院研究所 | 腺相关病毒载体递送肌肉特异性微肌营养不良蛋白以治疗肌营养不良症 |
| CA3061652A1 (en) | 2017-05-05 | 2018-11-08 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods of treating amyotrophic lateral sclerosis (als) |
| CN111108198A (zh) | 2017-05-05 | 2020-05-05 | 沃雅戈治疗公司 | 治疗亨廷顿病的组合物和方法 |
| JOP20190269A1 (ar) | 2017-06-15 | 2019-11-20 | Voyager Therapeutics Inc | بولي نوكليوتيدات aadc لعلاج مرض باركنسون |
| AU2018302016A1 (en) | 2017-07-17 | 2020-02-06 | The Regents Of The University Of California | Trajectory array guide system |
| JP7221275B2 (ja) | 2017-08-03 | 2023-02-13 | ボイジャー セラピューティクス インコーポレイテッド | Ａａｖを送達するための組成物および方法 |
| AU2018335752A1 (en) | 2017-09-22 | 2020-03-12 | Christian HINDERER | Gene therapy for treating Mucopolysaccharidosis type ii |
| US20200237799A1 (en) | 2017-10-16 | 2020-07-30 | Voyager Therapeutics, Inc. | Treatment of amyotrophic lateral sclerosis (als) |
| TWI804518B (zh) | 2017-10-16 | 2023-06-11 | 美商航海家醫療公司 | 肌萎縮性脊髓側索硬化症(als)之治療 |
| CA3093347A1 (en) * | 2018-04-05 | 2019-10-10 | Genethon | Hybrid recombinant adeno-associated virus serotype between aav9 and aavrh74 with reduced liver tropism |
| EP3787771A1 (en) | 2018-04-29 | 2021-03-10 | REGENXBIO Inc. | Scalable clarification process for recombinant aav production |
| WO2019212922A1 (en) | 2018-04-29 | 2019-11-07 | Regenxbio Inc. | Systems and methods of spectrophotometry for the determination of genome content, capsid content and full/empty ratios of adeno-associated virus particles |
| EP3807405A2 (en) | 2018-06-14 | 2021-04-21 | REGENXBIO Inc. | Anion exchange chromatography for recombinant aav production |
| KR20210043580A (ko) | 2018-08-10 | 2021-04-21 | 리젠엑스바이오 인크. | 재조합 aav 생산을 위한 규모 조정 가능한 방법 |
| CN112912518A (zh) | 2018-10-15 | 2021-06-04 | 再生生物股份有限公司 | 用于测量复制缺陷型病毒载体和病毒的感染性的方法 |
| TW202102526A (zh) | 2019-04-04 | 2021-01-16 | 美商銳進科斯生物股份有限公司 | 重組腺相關病毒及其用途 |
| ES2965341T3 (es) | 2019-04-11 | 2024-04-12 | Regenxbio Inc | Métodos de cromatografía de exclusión por tamaño para la caracterización de composiciones de virus adenoasociados recombinantes |
| AR118734A1 (es) | 2019-04-19 | 2021-10-27 | Regenxbio Inc | Formulaciones y métodos de vectores de virus adenoasociados |
| WO2020219868A1 (en) | 2019-04-24 | 2020-10-29 | Regenxbio Inc. | Fully-human post-translationally modified antibody therapeutics |
| EP3997225A1 (en) | 2019-07-10 | 2022-05-18 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods for the treatment of epilepsy |
| EP4004214A1 (en) | 2019-07-26 | 2022-06-01 | RegenxBio Inc. | Engineered nucleic acid regulatory element and methods of uses thereof |
| US20230016983A1 (en) | 2019-11-19 | 2023-01-19 | lNSERM (INSTITUT NATIONAL DE LA SANTÉ ET DE LA RECHERCHE MÉDICALE) | Antisense oligonucleotides and thier use for the treatment of cancer |
| BR112022009895A2 (pt) | 2019-11-28 | 2022-08-09 | Regenxbio Inc | Construtos de terapia de gene de microdistrofina e usos dos mesmos |
| WO2021222332A1 (en) | 2020-04-29 | 2021-11-04 | Bristol-Myers Squibb Company | Miniaturized dystrophins having spectrin fusion domains and uses thereof |
| CN116113697A (zh) | 2020-07-10 | 2023-05-12 | 国家健康与医学研究院 | 用于治疗癫痫的方法和组合物 |
| WO2022060915A1 (en) | 2020-09-15 | 2022-03-24 | Regenxbio Inc. | Vectorized lanadelumab and administration thereof |
| WO2022060916A1 (en) | 2020-09-15 | 2022-03-24 | Regenxbio Inc. | Vectorized antibodies for anti-viral therapy |
| EP4217375A1 (en) * | 2020-09-28 | 2023-08-02 | Research Institute at Nationwide Children's Hospital | Products and methods for treating muscular dystrophy |
| WO2022076750A2 (en) | 2020-10-07 | 2022-04-14 | Regenxbio Inc. | Recombinant adeno-associated viruses for cns or muscle delivery |
| JP2023545722A (ja) | 2020-10-07 | 2023-10-31 | リジェネックスバイオ インコーポレイテッド | 遺伝子治療剤の眼送達のためのアデノ随伴ウイルス |
| MX2023004806A (es) | 2020-10-28 | 2023-05-10 | Regenxbio Inc | Anticuerpos anti-tnf-a vectorizados para indicaciones oculares. |
| WO2022094157A1 (en) | 2020-10-28 | 2022-05-05 | Regenxbio Inc. | Vectorized anti-cgrp and anti-cgrpr antibodies and administration thereof |
| US20230390418A1 (en) | 2020-10-29 | 2023-12-07 | Regenxbio Inc. | Vectorized factor xii antibodies and administration thereof |
| MX2023004843A (es) | 2020-10-29 | 2023-05-10 | Regenxbio Inc | Antagonistas de tnf-alfa con vectorizacion para indicaciones oculares. |
| AU2021403076A1 (en) | 2020-12-16 | 2023-06-29 | Regenxbio Inc. | Method of producing a recombinant adeno-associated virus particle |
| TW202241943A (zh) | 2020-12-29 | 2022-11-01 | 美商銳進科斯生物股份有限公司 | Tau特異性抗體基因療法組合物、方法及其用途 |
| EP4281568A1 (en) | 2021-01-21 | 2023-11-29 | RegenxBio Inc. | Improved production of recombinant polypeptides and viruses |
| JP2024517143A (ja) | 2021-04-26 | 2024-04-19 | リジェネックスバイオ インコーポレイテッド | ジストロフィン異常症の治療のためのマイクロジストロフィン遺伝子療法投与 |
| WO2022235614A2 (en) | 2021-05-04 | 2022-11-10 | Regenxbio Inc. | Novel aav vectors and methods and uses thereof |
| WO2022241030A1 (en) | 2021-05-11 | 2022-11-17 | Regenxbio Inc. | Treatment of duchenne muscular dystrophy and combinations thereof |
| WO2023060113A1 (en) | 2021-10-05 | 2023-04-13 | Regenxbio Inc. | Compositions and methods for recombinant aav production |
| CN118202060A (zh) | 2021-10-05 | 2024-06-14 | 再生生物股份有限公司 | 用于重组aav生产的组合物和方法 |
| EP4413019A2 (en) | 2021-10-07 | 2024-08-14 | RegenxBio Inc. | Recombinant adeno-associated viruses for cns tropic delivery |
| WO2023060269A1 (en) | 2021-10-07 | 2023-04-13 | Regenxbio Inc. | Recombinant adeno-associated viruses for targeted delivery |
| WO2023077092A1 (en) | 2021-10-28 | 2023-05-04 | Regenxbio Inc. | Engineered nucleic acid regulatory elements and methods and uses thereof |
| EP4230196A1 (en) | 2022-02-21 | 2023-08-23 | Som Innovation Biotech, S.A. | Compounds for use in the treatment of dystrophinopathies |
| US20230279397A1 (en) | 2022-03-04 | 2023-09-07 | Locanabio, Inc. | Compositions and methods comprising engineered short nuclear rna (snrna) |
| TW202346590A (zh) | 2022-03-13 | 2023-12-01 | 美商銳進科斯生物股份有限公司 | 經修飾之肌肉特異性啟動子 |
| WO2023183623A1 (en) | 2022-03-25 | 2023-09-28 | Regenxbio Inc. | Dominant-negative tumor necrosis factor alpha adeno-associated virus gene therapy |
| WO2023201277A1 (en) | 2022-04-14 | 2023-10-19 | Regenxbio Inc. | Recombinant adeno-associated viruses for cns tropic delivery |
| WO2023215807A1 (en) | 2022-05-03 | 2023-11-09 | Regenxbio Inc. | VECTORIZED ANTI-TNF-α INHIBITORS FOR OCULAR INDICATIONS |
| TW202400803A (zh) | 2022-05-03 | 2024-01-01 | 美商銳進科斯生物股份有限公司 | 載體化抗補體抗體與補體劑及其投與 |
| GB202208384D0 (en) * | 2022-06-08 | 2022-07-20 | Ucl Business Ltd | Modified U7 snRNA construct |
| WO2023239627A2 (en) | 2022-06-08 | 2023-12-14 | Regenxbio Inc. | Methods for recombinant aav production |
| WO2024017990A1 (en) | 2022-07-21 | 2024-01-25 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | Methods and compositions for treating chronic pain disorders |
| WO2024044725A2 (en) | 2022-08-24 | 2024-02-29 | Regenxbio Inc. | Recombinant adeno-associated viruses and uses thereof |
| WO2024081746A2 (en) | 2022-10-11 | 2024-04-18 | Regenxbio Inc. | Engineered nucleic acid regulatory elements and methods and uses thereof |
| WO2024146935A1 (en) | 2023-01-06 | 2024-07-11 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | Intravenous administration of antisense oligonucleotides for the treatment of pain |
| WO2024192281A2 (en) | 2023-03-15 | 2024-09-19 | Regenxbio Inc. | Exon skipping gene therapy constructs, vectors and uses thereof |
| WO2024211780A1 (en) | 2023-04-07 | 2024-10-10 | Regenxbio Inc. | Compositions and methods for recombinant aav production |
Family Cites Families (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5173414A (en) | 1990-10-30 | 1992-12-22 | Applied Immune Sciences, Inc. | Production of recombinant adeno-associated virus vectors |
| JP3952312B2 (ja) | 1993-11-09 | 2007-08-01 | メディカル カレッジ オブ オハイオ | アデノ関連ウイルス複製遺伝子を発現可能な安定な細胞株 |
| WO1995013365A1 (en) | 1993-11-09 | 1995-05-18 | Targeted Genetics Corporation | Generation of high titers of recombinant aav vectors |
| US5658785A (en) | 1994-06-06 | 1997-08-19 | Children's Hospital, Inc. | Adeno-associated virus materials and methods |
| US5856152A (en) | 1994-10-28 | 1999-01-05 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Hybrid adenovirus-AAV vector and methods of use therefor |
| WO1996017947A1 (en) | 1994-12-06 | 1996-06-13 | Targeted Genetics Corporation | Packaging cell lines for generation of high titers of recombinant aav vectors |
| FR2737730B1 (fr) | 1995-08-10 | 1997-09-05 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Procede de purification de virus par chromatographie |
| CA2625279A1 (en) | 1995-08-30 | 1997-03-06 | Genzyme Corporation | Chromatographic purification of adenovirus and aav |
| AU715543B2 (en) | 1995-09-08 | 2000-02-03 | Genzyme Corporation | Improved AAV vectors for gene therapy |
| US5910434A (en) | 1995-12-15 | 1999-06-08 | Systemix, Inc. | Method for obtaining retroviral packaging cell lines producing high transducing efficiency retroviral supernatant |
| EP0932418B1 (en) | 1996-09-06 | 2007-12-05 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Method for recombinant adeno-associated virus-directed gene therapy |
| US6566118B1 (en) | 1997-09-05 | 2003-05-20 | Targeted Genetics Corporation | Methods for generating high titer helper-free preparations of released recombinant AAV vectors |
| CA2830694C (en) | 1997-09-05 | 2018-02-27 | Genzyme Corporation | Methods for generating high titer helper-free preparations of recombinant aav vectors |
| US6258595B1 (en) | 1999-03-18 | 2001-07-10 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for helper-free production of recombinant adeno-associated viruses |
| CA2406743A1 (en) | 2000-04-28 | 2001-11-08 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Recombinant aav vectors with aav5 capsids and aav5 vectors pseudotyped in heterologous capsids |
| PT1453547T (pt) | 2001-12-17 | 2016-12-28 | Univ Pennsylvania | Sequências do vírus adeno-associado (aav) do serotipo 8, vetores contendo as mesmas, e utilizações destas |
| EP1432724A4 (en) | 2002-02-20 | 2006-02-01 | Sirna Therapeutics Inc | RNA inhibition mediated inhibition of MAP KINASE GENES |
| WO2004083432A1 (en) | 2003-03-21 | 2004-09-30 | Academisch Ziekenhuis Leiden | Modulation of exon recognition in pre-mrna by interfering with the secondary rna structure |
| FR2874384B1 (fr) | 2004-08-17 | 2010-07-30 | Genethon | Vecteur viral adeno-associe pour realiser du saut d'exons dans un gene codant une proteine a domaines dispensables |
| CA2713458A1 (en) * | 2008-01-29 | 2009-08-06 | Proyecto De Biomedicina Cima, S.L. | Methods and compositions capable of causing post-transcriptional silencing of gene expression in a synergic manner |
| WO2009101399A1 (en) | 2008-02-12 | 2009-08-20 | Isis Innovation Limited | Treatment of muscular dystrophy using peptide nucleic acid ( pna) |
| WO2010108126A2 (en) | 2009-03-19 | 2010-09-23 | Fate Therapeutics, Inc. | Reprogramming compositions and methods of using the same |
| KR102581868B1 (ko) | 2009-11-12 | 2023-10-04 | 더 유니버시티 오브 웨스턴 오스트레일리아 | 안티센스 분자 및 이를 이용한 질환 치료방법 |
| WO2011078797A2 (en) * | 2009-12-22 | 2011-06-30 | Singapore Health Services Pte. Ltd | Antisense oligonucleotides and uses threreof |
| EP2547768B1 (en) * | 2010-03-17 | 2015-12-30 | Association Institut de Myologie | Modified u7 snrnas for treatment of neuromuscular diseases |
| IT1400425B1 (it) * | 2010-06-08 | 2013-05-31 | Amsterdam Molecular Therapeutics Bv | Modified snrnas for use in therapy. |
| WO2013033407A2 (en) | 2011-08-30 | 2013-03-07 | The Regents Of The University Of California | Identification of small molecules that enhance therapeutic exon skipping |
| JP6461917B2 (ja) | 2013-04-20 | 2019-01-30 | リサーチ インスティチュート アット ネイションワイド チルドレンズ ホスピタル | エクソン２標的Ｕ７ｓｎＲＮＡポリヌクレオチド構築物の組換えアデノ随伴ウイルスによる送達 |
-
2014
- 2014-04-18 JP JP2016509136A patent/JP6461917B2/ja active Active
- 2014-04-18 AU AU2014253730A patent/AU2014253730B2/en active Active
- 2014-04-18 CA CA2909807A patent/CA2909807C/en active Active
- 2014-04-18 EP EP18192536.3A patent/EP3461838A1/en active Pending
- 2014-04-18 KR KR1020157033190A patent/KR102268473B1/ko active IP Right Review Request
- 2014-04-18 MX MX2015014712A patent/MX2015014712A/es unknown
- 2014-04-18 CN CN201480034373.9A patent/CN105324392A/zh active Pending
- 2014-04-18 KR KR1020217018724A patent/KR102413498B1/ko active IP Right Grant
- 2014-04-18 CN CN201811631920.8A patent/CN109652385A/zh active Pending
- 2014-04-18 EA EA201592014A patent/EA032706B1/ru unknown
- 2014-04-18 EA EA201990558A patent/EA201990558A3/ru unknown
- 2014-04-18 KR KR1020227021096A patent/KR20220090593A/ko not_active Application Discontinuation
- 2014-04-18 WO PCT/US2014/034702 patent/WO2014172669A1/en active Application Filing
- 2014-04-18 CA CA3201710A patent/CA3201710A1/en active Pending
- 2014-04-18 EP EP14729770.9A patent/EP2986632B1/en active Active
- 2014-04-18 US US14/785,769 patent/US9862945B2/en active Active
-
2015
- 2015-10-20 MX MX2021002845A patent/MX2021002845A/es unknown
-
2016
- 2016-08-24 HK HK16110120.4A patent/HK1221962A1/zh not_active IP Right Cessation
-
2018
- 2018-07-11 US US16/032,744 patent/US11230707B2/en active Active
- 2018-12-13 AU AU2018278955A patent/AU2018278955B2/en active Active
- 2018-12-26 JP JP2018241945A patent/JP6938459B2/ja active Active
-
2020
- 2020-08-14 AU AU2020217441A patent/AU2020217441B2/en active Active
-
2021
- 2021-07-09 JP JP2021114275A patent/JP2021169489A/ja active Pending
- 2021-12-09 US US17/546,428 patent/US20230025574A1/en active Pending
-
2023
- 2023-01-13 AU AU2023200175A patent/AU2023200175B2/en active Active
- 2023-08-02 JP JP2023125933A patent/JP2023139282A/ja active Pending
Non-Patent Citations (10)
| Title |
|---|
| "8 th AUSTRALASIAN GENE THERAPY SOCIETY MEETING", THE JOURNAL OF GENE MEDICINE, JOHN WILEY & SONS, 1 September 2013 (2013-09-01), pages n/a - n/a, XP055094087, ISSN: 1099498X, DOI: 10.1002/jgm.2740 * |
| "Exon Skipping Strategies for the Treatment of Duplication Mutations in Duchenne Muscular Dystrophy", Cure Duchenne, 1 September 2012 (2012-09-01), XP002728582, Retrieved from the Internet: URL:http://support.cureduchenne.org/site/PageServer?pagename=september2012page01 [retrieved on 2014-08-14], the whole document * |
| A. GOYENVALLE, SETO J. T., DAVIES K. E., CHAMBERLAIN J.: "Therapeutic approaches to muscular dystrophy", HUMAN MOLECULAR GENETICS, vol. 20, no. R1, 15 April 2011 (2011-04-15), pages R69 - R78, XP055128778, ISSN: 09646906, DOI: 10.1093/hmg/ddr105 * |
| AARTSMA-RUS ANNEMIEKE; JANSON ANNEKE AM; VAN OMMEN GERT-JAN B; VAN DEUTEKOM JUDITH CT: "Antisense-induced exon skipping for duplications in Duchenne muscular dystrophy", BMC MEDICAL GENETICS, BIOMED CENTRAL, LONDON, GB, vol. 8, no. 1, 5 July 2007 (2007-07-05), GB, pages 43, XP021028970, ISSN: 1471-2350, DOI: 10.1186/1471-2350-8-43 * |
| ADELINE VULIN, NICOLAS WEIN, YUUKI J. KAMINOH, ANDREW R. FINDLAY, KEVIN M. FLANIGAN: "A New Mouse Model of DMD: A Tool for Therapeutic Development Directed at Exon Duplications", MOLECULAR THERAPY, vol. 21, no. Suppl. 1, 180, 1 June 2013 (2013-06-01), pages S71, XP002728583, ISSN: 1525-0016 * |
| AURÉLIE GOYENVALLE, ARRAN BABBS, JORDAN WRIGHT, VIVIENNE WILKINS, DAVE POWELL, LUIS GARCIA, KAY E. DAVIES: "Rescue of severely affected dystrophin/utrophin-deficient mice through scAAV-U7snRNA-mediated exon skipping", HUMAN MOLECULAR GENETICS, OXFORD UNIVERSITY PRESS, GB, vol. 21, no. 11, 1 June 2012 (2012-06-01), gb, pages 2559 - 2571, XP002728586, ISSN: 0964-6906, DOI: 10.1093/HMG/DDS082 * |
| GOYENVALLE A, ET AL: "Rescue of dystrophic muscle through U7 snRNA-mediated exon skipping.", SCIENCE, AAAS, AMERICAN ASSOC. FOR THE ADVANCEMENT OF SCIENCE, US, vol. 306, no. 5702, 3 December 2004 (2004-12-03), US, pages 1796 - 1799, XP002314369, ISSN: 0036-8075, DOI: 10.1126/science.1104297 * |
| GOYENVALLE AURELIE; WRIGHT JORDAN; BABBS ARRAN; WILKINS VIVIENNE; GARCIA LUIS; DAVIES KAY E: "Engineering Multiple U7snRNA Constructs to Induce Single and Multiexon-skipping for Duchenne Muscular Dystrophy", MOLECULAR THERAPY, vol. 20, no. 6, 1 June 2012 (2012-06-01), pages 1212 - 1221, XP008158627, ISSN: 1525-0016, DOI: 0.1038/mt.2012.26 * |
| KANE L GREER, HANNS LOCHMÜLLER, KEVIN FLANIGAN, SUSAN FLETCHER, STEVE D WILTON: "Targeted Exon Skipping to Correct Exon Duplications in the Dystrophin Gene", MOLECULAR THERAPY-NUCLEIC ACIDS, vol. 3, no. 2014, 1 March 2014 (2014-03-01), pages e155.1 - e155.7, XP002728584, ISSN: 2162-2531, DOI: 10.1038/mtna.2014.8 * |
| S.J. WHITE, A. AARTSMA-RUS, K.M. FLANIGAN, R.B. WEISS, A.L.J. KNEPPERS, T. LALIC, A.A.M. JANSON, H.B. GINJAAR, M.H. BREUNING, J.T.: "Duplications in the DMD gene", HUMAN MUTATION, JOHN WILEY & SONS, INC., US, vol. 27, no. 9, 1 September 2006 (2006-09-01), US, pages 938 - 945, XP002728585, ISSN: 1059-7794, DOI: 10.1002/humu.20367 * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2020217441B2 (en) | Recombinant Adeno-Associated Virus Delivery Of Exon 2-Targeted U7snRNA Polynucleotide Constructs | |
| JP6966463B2 (ja) | 組換えウイルス産物及びｄｕｘ４エクソンスキッピングを誘導するための方法 | |
| US20220282247A1 (en) | Exon 44-targeted nucleic acids and recombinant adeno-associated virus comprising said nucleic acids for treatment of dystrophin-based myopathies | |
| US20240200066A1 (en) | Products and methods for treating muscular dystrophy | |
| KR102723346B1 (ko) | 엑손 2-표적 U7snRNA 폴리뉴클레오티드 작제물의 재조합형 아데노 부속 바이러스 전달 |