EA031317B1 - КОНДЕНСИРОВАННЫЕ ПИРИМИДИНЫ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ КОМПЛЕКСА p97 - Google Patents

КОНДЕНСИРОВАННЫЕ ПИРИМИДИНЫ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ КОМПЛЕКСА p97 Download PDF

Info

Publication number
EA031317B1
EA031317B1 EA201691472A EA201691472A EA031317B1 EA 031317 B1 EA031317 B1 EA 031317B1 EA 201691472 A EA201691472 A EA 201691472A EA 201691472 A EA201691472 A EA 201691472A EA 031317 B1 EA031317 B1 EA 031317B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
carboxamide
pyrimidin
methyl
dihydro
pyrano
Prior art date
Application number
EA201691472A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201691472A1 (ru
Inventor
Хань-Цзе Чжоу
Дэвид Вустроу
Original Assignee
Клив Байосайенсиз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=52478057&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA031317(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Клив Байосайенсиз, Инк. filed Critical Клив Байосайенсиз, Инк.
Publication of EA201691472A1 publication Critical patent/EA201691472A1/ru
Publication of EA031317B1 publication Critical patent/EA031317B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/517—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. quinazoline, perimidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/12—Antidiarrhoeals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/04—Amoebicides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/04—Ortho-condensed systems
    • C07D491/044—Ortho-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring
    • C07D491/048—Ortho-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring the oxygen-containing ring being five-membered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/04—Ortho-condensed systems
    • C07D491/044—Ortho-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring
    • C07D491/052—Ortho-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring the oxygen-containing ring being six-membered

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Psychiatry (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к конденсированным пиримидинам формулы IA или IB, где значения заместителей определены в формуле изобретения, которые можно применять для снижения активности валозин-содержащего белка (p97) и лечения неопластических патологий у пациента-человека.

Description

Настоящее изобретение относится к конденсированным пиримидинам формулы IA или IB, где значения заместителей определены в формуле изобретения, которые можно применять для снижения активности валозин-содержащего белка (р97) и лечения неопластических патологий у пациента-человека.
HN^
Аг
Формула IA
Формула IB
031317 Bl
Уровень техники
АТФаза, ассоциированная с несколькими видами активности (AAA), p97, имеющая описательное название валозинсодержащий белок, консервативна у всех эукариот и необходима для жизни почкующихся дрожжей (Giaever, G. с соавт., Nature (2002) 418, 387-391) и мышей (Muller, JM. с соавт. Biochem. Biophys. Res. Commun. (2007) 354, 459-465). Люди с аллелями, определяющими снижение функции p97, поражаются синдромом, который включает миопатию с тельцами включения и лобно-височную дегенерацию (Weihl, C. с соавт. Hum. Mol. Genet. (2006) 15, 189-199). Исследования потери функции на модельных организмах указывают на то, что p97 играет решающую роль в большом количестве процессов в клетке, включая повторную сборку мембран комплекса Гольджи (Rabouille, C. с соавт. Cell (1995) 82, 905-914), мембранный транспорт (Ye, Y. с соавт., Nature (2001) 414, 652-656; Ye, Y. с соавт. Nature (2004) 429, 841-847), разрушение неправильно собранной мембраны и секреторных белков убиквитинпротеасомной системой (UPS) (Golbik, R. с соавт. Biol. Chem. (1999) 380, 1049-1062; Richly, H. с соавт. Cell (2005) 120, 73-84), регуляцию сборки миофибрилл (Janiesch, P.C. с соавт. Nat. Cell Biol. (2007) 9, 379390) и деление клетки (Cao, K. с соавт. Cell (2003) 115, 355-367). Считается, что такой широкий диапазон функций этого белка в клетке обусловлен его способностью раскручивать белки или разъединять комплексы белков. Связь механохимической активности p97 с белками-субстратами осуществляется набором по меньшей мере из 14 убиквитиовых адаптерных доменов, которые связывают p97, а также неубиквитиовых адаптерных доменов Ufdl и Np14 (Meyer, H.H. с соавт. EMBO J. (2000) 19, 2181-2192).
В последовательности p97 выделяют три домена (N-домен, АТФазный домен D1 и АТФазный домен D2), связанные линкерными участками. Рентгеноструктурный анализ p97 выявил, что он образует гексамер из субъединиц массой 97 кД, которые совместно образуют два расположенных друг над другом кольца. Эти два кольца образованы АТФазными доменами (Huyton, T. с соавт., Struct. Biol. (2003) 144, 337-348; DeLaBarre, B. с соавт. Nat. Struct. Biol. (2003) 10, 856-863). Верхнее кольцо образовано гексамером из доменов D1, а нижнее кольцо образовано гексамером из доменов D2. N-домен выступает наружу из кольца, образованного доменами D1. Хотя ясно, что домен D2 гидролизует АТФ in vitro, уровень D1-специфической АТФ-азной активности различные исследователи определяют по-разному. Тем не менее, генетические исследования на дрожжах позволяют предположить, что гидролиз АТФ обоими доменами D1 и D2 необходим для функционирования p97 (Song, C. с соавт., J. Bid. Chem. (2003) 278, 36483655; Ye, Y. с соавт. J. Cell Biol. (2004) 162, 71-84). Связывание АТФ с доменом D1 также необходимо для сборки p97 (Wang, Q. с соавт. Biochem. Biophys. Res. Commun. (2003) 300, 253-260). Хотя гидролиз АТФ доменом D2 не является необходимым для сборки гексамера p97, считают, что гидролиз АТФ доменом D2 представляет собой превращение субстрата, приводящее к его раскручиванию или отсоединению от партнеров по связыванию.
Значимой ролью p97 в клетке, которая была тщательно исследована, является ее роль в обновлении неправильно скрученных секреторных белков посредством UPS (убиквитин-протеасомной системы). В этом процессе, который известен как ERAD (связанное с эндоплазматическим ретикулумом расщепление белка), белки, которые не скручиваются в эндоплазматическом ретикулуме, при участии p97 перетранслоцируются в цитоплазму, где они разрушаются убиквитин-протеасомной системой UPS (Ye, Y. с соавт. Nature (2004) 429, 841-847). Считается, что в этом процессе p97 опосредует извлечение субстратов из мембраны эндоплазматического ретикулума. Комплекс p97 также необходим для обновления цитозольных субстратов убиквитин-протеасомной системы (Janiesch, P.C. с соавт. Nat. Cell Biol. (2007) 9, 379-390; Cao, K. с соавт. Cell (2003) 115, 355-367; Fu, X. с соавт. J. Cell Biol. (2003) 163, 21-26), хотя его роль в обороте цитозольных белков известна не так хорошо.
Валозинсодержащий белок, p97, представляет подходящую мишень для противораковых терапевтических средств. Комплекс p97 и его функция необходимы для поддержания жизнеспособности клеток, и, таким образом, лекарственные средства, которые его ингибируют, должны обладать антипролиферативным действием. Другими словами, ингибирование p97 вызовет нежелательное концентрирование белка в клетке-мишени. Часто реакцией клеток на это является апоптоз или, по меньшей мере, снижение клеточного роста и митоза. Также известно, что продукция p97 повышена при многих видах рака (Yamamoto, S. с соавт., Ann. Surg. Oncol. (2005) 12, 925-934; Yamamoto, S. с соавт. Clin. Cancer Res. (2004) 10, 5558-5565; Yamamoto, S. с соавт. Ann. Surg. Oncol. (2004) 11, 697-704; Yamamoto, S. с соавт. Ann. Surg. Oncol. (2004) 11, 165-172), что указывает на то, что его активность может быть ограничивающим фактором для развития, по меньшей мере, некоторых видов рака. Известно, что p97 необходима для связанного с эндоплазматическим ретикулумом расщепления белка (ERAD) (Carvalho, P. с соавт. Cell (2006) 126, 361-373), а недавние исследования предполагают, что рак может особенно сильно зависеть от ERAD (Boelens, J. с соавт. In Vivo (2007) 21, 215-226). Кроме того, p97 связывают с обновлением IlcB и последующей активацией NF-kB (Dai, И.М. с соавт. J. Bid. Chem. (1998) 273, 3562-3573). Активность NF-kB важна для выживания некоторых раковых клеток, в частности при множественной миеломе (Keats, J.J. с соавт., Cancer Cell (2007) 12, 131-144; Annunziata, C.M. с соавт., Cancer Cell (2007) 12, 115-130). Было сделано предположение, что активность ботрезомиба при множественной миеломе связана с его способностью блокировать обновление белков по пути связанного с эндоплазматическим ретикулумом расщепления белка (ERAD) и его способностью блокировать обновление его lkB, что нарушает активность NF
- 1 031317 кВ. С учетом того, что p97 участвует как в связанном с эндоплазматическим ретикулумом расщеплением белка, так и в обновлении IlcB, но в остальном играет более ограниченную роль в убиквитинпротеасомной системе (UPS), чем сама протеасома, лекарственные средства, мишенью которых является p97, могут сохранять большую часть активности ботрезомиба и при этом обладать меньшей токсичностью. Кроме того, соединения, воздействующие на комплекс p97, раскрыты в заявке PCT/US 2011/035654, поданной 6 мая 2011 г. и опубликованной под номером WO 2011/140527 10 ноября 2011 г.
Задачи изобретения
Таким образом, существует потребность в разработке соединений, подходящих для ингибирования активности p97 и для способов ингибирования активности p97 с применением таких соединений. Существует потребность в разработке таких соединения для применения в лечении неопластических патологий.
Сущность изобретения
Аспекты настоящего изобретения удовлетворяют эти и другие потребности; один из них относится к группе конденсированных пиримидинов, содержащих кольцо циклогексила в качестве партнера по конденсации конденсированных пиримидинов. Партнер по связыванию необязательно содержит в кольце гетероатом азота, кислорода или серы. Конденсированные пиримидины содержат определенные необязательно замещенные 5:6 гетероциклические кольца, содержащие заместитель в положении 2 кольца пиримидина, и необязательно замещенную группу бензиламина в положении 4 кольца пиримидина.
В другом аспекте изобретения конденсированный пиримидин согласно настоящему изобретению и содержащие его фармацевтические композиции обладают способностью ингибировать валозинсодержащий белок p97 и облегчать, снижать, сокращать, смягчать и/или устранять проявление клетками тенденций к неопластическому росту и/или абнормальное функционирование. В другом аспекте изобретения такие соединения и композиции ингибируют АТФазную активность p97.
Другой аспект настоящего изобретения относится к лечению патологий и/или заболеваний, таких как рак, посредством применения таких соединений и композиций.
Первый аспект настоящего изобретения относится к конденсированному пиримидину формулы IA или IB
или его фармацевтически приемлемая соли, где A представляет собой NR5 или O;
HET представляет собой радикал, выбранный из группы H4, H5 и H10
где R1 представляет собой карбоксил (-COOH) или карбоксамидо (-CONH2);
R5 представляет собой водород или метил;
R6 представляет собой водород, метил, этил, метокси или этокси;
Ar представляет собой фенил или фторфенил.
Дополнительный аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и описанные выше соединения.
Другой аспект настоящего изобретения относится к способу снижения активности валозинсодержащего белка (p97) путем введения нуждающемуся в этом пациенту эффективного терапевтического количества одного из вышеуказанных соединений или описанной ниже фармацевтической композиции.
Еще один аспект настоящего изобретения относится к лечению неопластических патологий, связанных с p97, путем введения нуждающемуся в этому пациенту одного из вышеуказанных соединений или описанной ниже фармацевтической композиции.
Конденсированные пиримидины и фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению ингибируют или снижают биологическую активность фермента p97, демонстрируют физиологический профиль и в предпочтительном варианте демонстрируют желаемую степень подавления или сниже
- 2 031317 ния, в частности в контексте лечения рака и родственных патологий.
Подробное описание изобретения Определения
Если не дано другого определения, все технические и научные термины, используемые в настоящем тексте, имеют значения, обычные для среднего специалиста в данной области.
В настоящем описании и прилагающийся к нему формуле изобретения все формы единственного числа включают множественное, если контекст явно не указывает на обратное.
Термин примерно в настоящем документе применительно к числовому значению или диапазону допускает степень отклонения, например, в пределах 10% или в пределах 5% указанного значения или указанных крайних значений диапазона.
Процентные составы приведены в массовых процентах, если не указано иное.
Все средние молекулярные массы представляют собой средневесовые значения молекулярной массы, если не указано иное.
В настоящем тексте индивидуум (как субъект лечения) или пациент относится как к млекопитающим, так и к немлекопитающим. Млекопитающие включают, например, людей, приматов, отличных от человека, например человекообразных и других обезьян; и животных, не являющихся приматами, например собак, кошек, скот, лошадей, овец и коз. Немлекопитающие включают, например, рыб и птиц.
Термин может в контексте настоящей заявки означает допустимо или потенциально и является синонимом термина возможно. Термин возможно в настоящем документе не обозначает вероятность или случайность.
Термины заболевание, нарушение и патология являются взаимозаменяемыми и используются для обозначения заболеваний или состояний, при которых X играет некоторую роль в биохимических механизмах, связанных с патологией или ее симптомом(симптомами), что позволяет достичь благоприятного терапевтического эффекта путем воздействия на X. Воздействие на X или модулирование X может включать связывание с X, и/или ингибирование биологической активности X, и/или аллостерическое регулирование биологической активности X in vivo.
Выражение эффективное количество применительно к лечению индивидуума, страдающего каким-либо нарушением, относится к такому количеству лекарственного средства, фармацевтического агента или соединения, которое вызовет такой биологический или медицинский ответ клетки, ткани, системы, животного или человека, которого добивается, например, исследователь или врач. Такие ответы включают следующие, но не ограничиваются ими: облегчение, подавление или другое воздействие на нарушение, патологию, заболевание, инфекцию или другую проблему с тканями или в тканях индивидуума, пораженного этим нарушением, патологией, заболеванием и т.п., причем степень такого подавления или другого воздействия достаточна для обеспечения полезного терапевтического эффекта. Кроме того, термин терапевтически эффективное количество обозначает любое количество, которое при сравнении с соответствующим субъектом, который не получал такое количество, обеспечивает улучшенное лечение, излечивание, предотвращение или облегчение заболевания, нарушения или побочного эффекта, или снижение скорости прогрессирования заболевания или нарушения. Объем этого термина также включает количества, эффективные для улучшения нормальной физиологической функции.
Термин по существу в настоящем документе обозначает полностью или почти полностью; например, композиция, которая по существу не содержит какого-либо компонента либо совсем не содержит этот компонент, либо содержит такое его следовое количество, что это следовое количестве не влияет ни на одно из значимых функциональных свойств композиции, или если соединение является по существу чистым, в нем присутствуют лишь пренебрежимые следы примесей.
Лечение или осуществление лечения в настоящем документе относится к облегчению симптомов, связанных с нарушением или заболеванием, или подавлению дальнейшего прогрессирования или ухудшения этих симптомов, или к предотвращению или профилактике заболевания или нарушения, или к излечению заболевания или нарушения. Аналогично, в настоящем тексте эффективное количество или терапевтически эффективное количество соединения согласно настоящему изобретению относится к количеству соединения, которое облегчает, полностью или частично, симптомы, связанные с нарушением или состоянием, или останавливает или замедляет дальнейшее прогрессирование или ухудшение этих симптомов, или обеспечивает профилактику нарушения или состояния. В частности, терапевтически эффективное количество относится к количеству, которое в необходимых дозировках и в течение необходимых периодов времени обеспечивает достижение терапевтического результата. Терапевтически эффективное количество также представляет собой количество, в котором терапевтически благоприятные эффекты соединений согласно настоящему изобретению перевешивают токсические или нежелательные эффекты.
В настоящем документе такие фразы как в условиях, допускающих обеспечение (получение) или в условиях, достаточных для получения и т. п. в контексте способов синтеза относится к условиям реакций, таким как время, температура, растворитель, концентрации реагирующих веществ и т.п., варьирование которых входит в компетенцию среднего специалиста, осуществляющего эксперименты, которые обеспечивают достаточный выход продукта реакции. Целевой продукт реакции не обязательно должен
- 3 031317 быть единственным продуктом, также не обязательно, чтобы исходные материалы полностью поглощались, при условии, что возможно выделение или иное использование целевого продукта реакции.
Под химически возможными подразумевают организацию связей или соединение, в которых не нарушаются правила образования органических структур в общем понимании; например, структура в характеристике заявленного изобретения, которая в некоторых ситуациях содержала бы пятивалентный атом углерода, и которая не существовала бы в природе, не включается в объем заявленного изобретения. Предполагается, что раскрытые в настоящем документе структуры, во всех вариантах их реализации включают только химически возможные структуры, а любые указанные структуры, которые не являются химически возможными, например, в структурах, описанных с различными возможными атомами или группами, не входят в описание или формулу изобретения, содержащиеся в настоящем документе.
Термин аналог химической структуры в настоящем документе относится к химической структуре, которая, по существу, близка к исходной структуре, хотя ее не обязательно легко получить путем синтеза из исходной структуры. Сходная химическая структура, которую легко получить путем синтеза из исходной химической структуры, называется также производным.
В случае, когда указано, что заместитель представляет собой конкретный атом или атомы или связь, конфигурация, подразумеваемая в том случае, когда заместитель представляет собой связь, заключается в том, что группы, которые располагаются непосредственно рядом с указанным заместителем, напрямую связаны друг с другом в химически возможной конфигурации связывания.
Предусмотрены хиральные, диастереомерные, рацемические формы структуры, если в явном виде не указана конкретная стереохимия. В некоторых случаях, несмотря на то, что в числе отдельно охарактеризованных соединений приведены конкретные стереоизомеры, стереохимические обозначения не подразумевают, что другие изомерные формы являются менее предпочтительными или не входят в заявленный объем. Соединения, применяемые в настоящем изобретении, могут содержать обогащенные или разделенные оптические изомеры по любому или всем асимметричным атомам, присутствие которых понятно из графического представления, при этом возможна любая степень обогащения. Можно синтезировать или выделять как рацемические, так и диастереомерные смеси, а также индивидуальные оптические изомеры, таким образом, чтобы они, по существу, не содержали соответствующих энантиомерных или диастереомерных примесей, и все они включены в объем настоящего изобретения.
В настоящем тексте термины стабильное соединение и стабильная структура используются для обозначения соединения, которое является достаточно устойчивым, чтобы его можно было с достаточной степенью чистоты выделить из реакционной смеси и использовать для изготовления эффективного терапевтического агента. В настоящем документе предусмотрены только стабильные соединения.
Выбранные заместители, входящие в состав соединений, описанных в настоящем документе, представлены в рекурсивной форме. В данном контексте рекурсивный заместитель обозначает, что описание заместителя может включать еще одно упоминание того же заместителя. Вследствие рекурсивной природы таких заместителей, теоретически, в любой характеристике изобретения может быть представлено большое количество соединений. Для специалиста в области медицинской химии понятно, что общее число таких заместителей разумно ограничивается необходимыми свойствами целевого соединения. Такие свойства в качестве неограничивающего примера включают физические свойства, такие как молекулярная масса, растворимость или logP, потребительские свойства, такие как активность в отношении заданной мишени, и практические свойства, такие как простота синтеза. Рекурсивные заместители представляют собой предусмотренный аспект раскрытого изобретения. Средний специалист в области медицинской и органической химии понимает, насколько разнообразны и многочисленны такие заместители. В тех случаях, когда рекурсивные заместители присутствуют в характеристике раскрытого изобретения, общее их число должно определяться, как показано выше.
В случае, когда упоминается какая-либо группа, которая может находиться в структуре в более чем одной ориентации, что обуславливает существование более чем одной молекулярной структуры, например карбоксамидная группа C(=O)NR, подразумевается, что эта группа может присутствовать в любой возможной ориентации, например X-C(=O)N(R)-Y или X-N(R)C(=O)-Y, если контекст явно не ограничивает ориентацию группы в молекулярной структуре.
В случае, когда группа, например группа алкил упоминается без какого-либо ограничения по числу атомов в группе, это подразумевает, что такая характеристика является определенной и ограниченной в отношении размера алкильной группы, как по определению, т.е. размер (число атомов углерода) такой группы, как алкильная группа, является ограниченной величиной, меньше общего числа атомов углерода во вселенной, а также ограничен пониманием среднего специалиста, знающего, что размер группы должен быть разумным для молекулы, так и функциональностью, т. е. размер такой группы, как алкил, ограничен функциональными свойствами, которые эта группа сообщает молекуле, ее содержащей, такими как растворимость в водных или органических жидких средах. Соответственно, характеристика изобретения, в которой упоминается алкил или другая химическая группа или фрагмент, является определенной и ограниченной, посколько число атомов в группе не может быть бесконечным.
В целом замещенный (содержащий заместители) относится к органической группе, соответствующей определению, данному в настоящем тексте, в которой одна или более связей с содержащейся в
- 4 031317 ней водородом заменены связями с атомом, не являющимся водородом. Более конкретно, термин химический заместитель относится к любым алифатическим, ароматическим и функциональным группам, перечисленным в этом разделе, которые могут быть присоединены к органической молекуле. Функциональная группа представляет собой неорганический фрагмент, такой как галоген, сульфат, нитро, амино и т.п., а также функциональные группы, содержащие один атом углерода, такие как карбоксил, карбонил, карбоксамид, которые являются обычными и необязательными заместителями органических молекул. В контексте настоящего изобретения упоминание этого термина без указания конкретных групп составляет приведенное выше определение. Упоминание этого термина в комбинации с описанием конкретной группы в виде формулы Маркуша представляет собой подкласс значения, соответствующего приведенному выше определению. Термин заместитель обычно обозначает любую соответствующую группу, обозначенную ниже, имеющую окончание ил, и или о, обозначающее, что она сцеплена с, присоединена или ковалентно связана с другим фрагментом, таким как ароматический остов, но не ограничиваясь указанным. Примеры включают следующие, но не ограничиваются ими: галоген (т.е. F, Cl, Br и I), атом кислорода в таких группах, как гидроксильные группы, алкоксигруппы, арилоксигруппы, аралкилоксигруппы, оксо(карбонильные) группы, карбоксильные группы, включая карбоновые кислоты, карбоксилаты, сложные эфиры карбоксилатов, сложные эфиры в таких группах, как тиольные группы, алкильные и арилсульфидные группы, сульфоксидные группы, сульфоновые группы, сульфонильные группы и сульфонамидные группы, атом азота в таких группах, как амины, гидроксиламины, нитрилы, нитрогруппы, N-оксиды, гидразиды, азиды и енамины и другие гетероатомы в различных других группах.
Соль, как хорошо известно в данной области, включает органические соединения, такие как карбоновая кислота, сульфоновая кислота или амин, в ионной форме в комбинации с противоионом. Например, кислоты в анионной форме могут образовывать соли с катионами, такими как катионы металлов, например натрия, калия и т.п.; с солями аммония, такими как NH4 +, или катионами различных аминов, включая тетраалкиламмонийные соли, такие как тетраметиламмоний, или другими катионами, такими как триметилсульфоний и т.п. Фармацевтически приемлемая или фармакологически приемлемая соль представляет собой соль, образованную йодом, одобренным для употребления человеком и являющимся в целом нетоксичным, такие как хлорид или соли натрия. Цвиттерион представляет собой внутреннюю соль, такую как соли, которые могут образовываться в молекуле, содержащей по меньшей мере две способные к ионизации группы, одна из которых образует анион, а другая - катион, которые уравновешивают друг друга. Например, аминокислоты, такие как глицин, могут существовать в цвиттерионной форме. Цвиттерион представляет собой в том смысле, в котором этот термин используется в настоящем тексте. Соединения согласно настоящему изобретению могут принимать форму солей. Термин соли охватывает соли присоединения свободных кислот или свободных оснований, которые являются соединениями согласно настоящему изобретению. Соли могут представлять собой фармацевтически приемлемые соли. Термин фармацевтически приемлемые соли относится к солям, которые обладают профилями токсичности, допускающими возможность их применения для фармацевтических целей. Фармацевтически неприемлемые соли могут, тем не менее, обладать такими свойствами как высокая кристалличность, которые могут находить применение в осуществлении настоящего изобретения, например применение в способах синтеза, очистки или изготовления лекарственных препаратов соединений согласно настоящему изобретению.
Подходящие фармацевтически приемлемые соли присоединения могут быть образованы неорганической кислотой или органической кислотой. Примеры неорганических кислот включают хлороводородную, бромоводородную, йодоводородную, азотную, карбоновую, серную и фосфорную кислоты. Подходящие органические кислоты могут быть выбраны из органических кислот, принадлежащих к классам алифатических, циклоалифатических, ароматических, аралифатических, гетероциклических, карбоновых и сульфоновых кислот, примеры которых включают муравьиную, уксусную, пропионовую, янтарную, гликолевую, глюконовую, молочную, яблочную, винную, лимонную, аскорбиновую, глюкуроновую, малеиновую, фумаровую, пировиноградную, аспарагиновую, глютаминовую, бензойную, аминобензойную, 4-гидроксибензойную, фенилуксусную, миндальную, эмбоновую (памоевую), метансульфоновую, этансульфоновую, бензолсульфоновую, пантотеновую, трифторметансульфоновую, 2-гидроксиэтансульфоновую, п-толуолсульфоновую, сульфаниловую, циклогексиламиносульфоновую, стеаровую, альгиновую, β-гидроксимасляную, салициловую, галактаровую и галактуроновую кислоту. Примеры солей соединения с фармацевтически неприемлемыми кислотами включают, например, перхлораты и тетрафторбораты. Представительные примеры солей включают следующие соли: гидробромид, гидрохлорид, сульфат, бисульфат, фосфат, нитрат, ацетат, валерат, олеат, пальмитат, стеарат, лаурат, бензоат, лактат, фосфат, тозилат, цитрат, малеат, фумарат, сукцинат, тартрат, нафтилат, мезилат, глюкогептонат, лактобионат, лаурилсульфонат и соли аминокислот и т.п. (см., например, Berge с соавт. (1977) Pharmaceutical Salts, J. Pharm. Sci. 66: 1-19).
Подходящие фармацевтически приемлемые соли присоединения оснований соединений согласно настоящему изобретению включают, например, соли металлов, включая щелочные металлы, щелочноземельные металлы, и соли переходных металлов, такие как, например, соли кальция, магния, калия, на
- 5 031317 трия и цинка. Фармацевтически приемлемые соли присоединения основания также включают органические соли, образованные основными аминами, такими как, например, Ν,Ν'-дибензилэтилендиамин, хлорпрокаин, холин, диэтаноламин, этилендиамин, меглюмин (N-метилглюкамин) и прокаин. Примеры фармацевтически неприемлемых солей присоединения основания включают соли лития и цианаты. Хотя фармацевтически неприемлемые соли обычно не используются в качестве лекарственных средств, такие соли могут быть полезны, например, в качестве промежуточных соединений синтеза соединений формулы (I), например, при их очистке и перекристаллизации. Все эти соли могут быть получены обычными средствами из соответствующих соединений формулы (I) посредством реакции, например, соответствующей кислоты или основания с соединением формулы (I). Термин фармацевтически приемлемые соли относится к нетоксичным солям присоединения неорганической или органической кислоты и/или основания, см., например, статью Lit с соавт., Salt Selection for Basic Drugs (1986), Int J. Pharm., 33, 201217, которая включена в настоящий документ посредством ссылки.
Гидрат представляет собой соединение, которое существует в комплексе с молекулами воды. Этот комплекс может содержать воду в стехиометрических количествах, как в случае моногидрата и дигидрата, или может содержать воду в случайных количествах. Термин гидрат в настоящем документе относится к твердой форме, т.е. соединение, растворенное в воде, хотя и может быть гидратировано, не является гидратом в том смысле, в котором этот термин используется в настоящем документе.
Дополнительно в тех случаях, когда признаки или аспекты настоящего изобретения описаны с использованием групп Маркуша, специалисты в данной области поймут, что изобретение таким образом описано также в терминах любого отдельного элемента или подгруппы элементов группы Маркуша. Например, если X описан как выбранный из группы, состоящей из брома, хлора и йода, варианты изобретения, в которых X представляющий собой бром и хлор, считаются описанными в полной мере. Далее в тех случаях, когда признаки или аспекты настоящего изобретения описаны с использованием групп Маркуша, специалисты в данной области поймут, что изобретение таким образом описано также в терминах любой комбинации отдельных элементов и подгрупп элементов групп Маркуша. Таким образом, например, если X описан как выбранный из группы, состоящей из брома, хлора и йода, a Y описан как выбранный из группы, состоящей из метила, этила и пропила, варианты изобретения, в которых X представляет собой бром и Y представляет собой метил, считаются описанными в полной мере.
Если значение переменной, которая обязательно является целым числом, например, число атомов углерода в алкильной группе или число заместителей в кольце, описано в форме диапазона, например, 04, это означает, что это значение может представлять собой любое целое число от 0 до 4 включительно, т.е. 0, 1, 2, 3 или 4.
В различных вариантах реализации соединение или группа соединений согласно настоящему изобретению, такие как соединения, применяемые в способах согласно настоящему изобретению, могут представлять собой любое одно из любой комбинации и/или подкомбинации перечисленных выше вариантов реализации.
В некоторых вариантах реализации предусмотрено соединение, показанное в любом из примеров или среди примеров соединения. К любой из раскрытых категорий или вариантов реализации могут применяться оговорки, исключающие один или больше любых раскрытых выше вариантов реализации или видов из этих категорий или вариантов реализации.
Термин аминозащитная группа или N-защищенная в настоящем документе относится к группам, предназначенным для защиты аминогруппы от нежелательных реакций в ходе осуществления процедур синтеза, и которые позднее могут быть удалены с освобождением амина. Широкоприменяемые аминозащитные группы описаны в книге Protective Groups in Organic Synthesis, Greene, T.W.; Wuts, P.G. M., John Wiley & Sons, New York, NY, (3-е изд., 1999). Аминозащитные группы включают ацильные группы, такие как формил, ацетил, пропионил, пивалоил, трет-бутилацетил, 2-хлорацетил, 2-бромацетил, трифторацетил, трихлорацетил, о-нитрофеноксиацетил, α-хлорбутирил, бензоил, 4-хлорбензоил, 4бромбензоил, 4-нитробензоил и т.п.; сульфонильные группы, такие как бензолсульфонил, птолуолсульфонил и т.п.; алкокси- или арилоксикарбонильные группы (которые образуют уретаны с защищенным амином), такие как бензилоксикарбонил (Cbz), п-хлорбензилоксикарбонил, пметоксибензилоксикарбонил, п-нитробензилоксикарбонил, 2-нитробензилоксикарбонил, п-бромбензилоксикарбонил, 3,4-диметоксибензилоксикарбонил, 3,5-диметоксибензилоксикарбонил, 2,4-диметоксибензилоксикарбонил, 4-метоксибензилоксикарбонил, 2-нитро-4,5-диметоксибензилоксикарбонил, 3,4,5триметоксибензилоксикарбонил, 1-(п-бифенилил)-1-метилэтоксикарбонил, ц,ц-диметил-3,5-диметоксибензилоксикарбонил, бензгидрилоксикарбонил, трет-бутилоксикарбонил (Boc), диизопропилметоксикарбонил, изопропилоксикарбонил, этоксикарбонил, метоксикарбонил, аллилоксикарбонил (Alloc), 2,2,2трихлорэтоксикарбонил, 2-триметилсилилэтилоксикарбонил (Teoc), феноксикарбонил, 4нитрофеноксикарбонил, флуоренил-9-метоксикарбонил (Fmoc), циклопентилоксикарбонил, адамантилоксикарбонил, циклогексилоксикарбонил, фенилтиокарбонил и т.п.; аралкильные группы, такие как бензил, трифенилметил, бензилоксиметил и т.п.; и силилгруппы, такие как триметилсилил и т.п. Аминозащитные группы также включают циклические аминозащитные группы, такие как фталоил и дитиосукцинимидил, которые встраивают атом азота аминогруппы в гетероцикл. Обычно аминозащитные группы
- 6 031317 включают формил, ацетил, бензоил, пивалоил, трет-бутилацетил, фенилсульфонил, Alloc, Teoc, бензил, Fmoc, Boc и Cbz. Выбор и применение подходящей аминозащитной группы для конкретной задачи синтеза вполне входят в компетенцию среднего специалиста в данной области.
Термин гидроксилзащитная группа или О-защищенная в настоящем документе относится к группам, предназначенным для защиты группы ОН от нежелательных реакций в ходе осуществления процедур синтеза, и которые позднее могут быть удалены с освобождением амина. Широко применяемые гидроксилзащитные группы описаны в книге Organic Synthesis, Greene, T.W.; Wuts, P.G.M., John Wiley & Sons, New York, NY, (3-е изд., 1999). Гидроксилзащитные группы включают ацильные группы, такие как формил, ацетил, пропионил, пивалоил, трет-бутилацетил, 2-хлорацетил, 2-бромацетил, трифторацетил, трихлорацетил, о-нитрофеноксиацетил, α-хлорбутирил, бензоил, 4-хлорбензоил, 4бромбензоил, 4-нитробензоил и т.п.; сульфонильные группы, такие как бензолсульфонил, птолуолсульфонил и т.п.; ацилоксигруппы (которые образуют уретаны с защищенным амином), такие как бензилоксикарбонил (Cbz), п-хлорбензилоксикарбонил, п-метоксибензилоксикарбонил, пнитробензилоксикарбонил, 2-нитробензилоксикарбонил, п-бромбензилоксикарбонил, 3,4диметоксибензилоксикарбонил, 3,5-диметоксибензилоксикарбонил, 2,4-диметоксибензилоксикарбонил, 4-метоксибензилоксикарбонил, 2-нитро-4,5-диметоксибензилоксикарбонил, 3,4,5триметоксибензилоксикарбонил, 1-(п-бифенилил)-1-метилэтоксикарбонил, ц,ц-диметил-3,5диметоксибензилоксикарбонил, бензгидрилоксикарбонил, трет-бутилоксикарбонил (Boc), диизопропилметоксикарбонил, изопропилоксикарбонил, этоксикарбонил, метоксикарбонил, аллилоксикарбонил (Alloc), 2,2,2-трихлорэтоксикарбонил, 2-триметилсилилэтилоксикарбонил (Teoc), феноксикарбонил, 4нитрофеноксикарбонил, флуоренил-9-метоксикарбонил (Fmoc), циклопентилоксикарбонил, адамантилоксикарбонил, циклогексилоксикарбонил, фенилтиокарбонил и т.п.; аралкильные группы, такие как бензил, трифенилметил, бензилоксиметил и т.п.; и силильные группы, такие как триметилсилил и т.п. Выбор и применение подходящей гидроксилзащитной группы для конкретной задачи синтеза вполне входят в компетенцию среднего специалиста в данной области.
В различных местах настоящего описания заместители соединений согласно настоящему изобретению описаны в терминах групп и диапазонов. Отдельно предусмотрено, что изобретение включает каждую и все отдельные подкомбинации элементов таких групп и диапазонов. Например, термин C1-C6алкил описывает отдельно метил, этил, пропил, изопропил, н-бутил, сек-бутил, изобутил и т.д. Для числа, определяемого термином примерно, объем определяемого числа включает отклонения, соответствующие 2, 5, 10 или даже 20%.
Используются стандартные сокращения для химических групп, хорошо известные в данной области, например Me = метил, Et = этил, i-Pr = изопропил, Bu = бутил, t-Bu = трет-бутил, Ph = фенил, Bn = бензил, Ac = ацетил, Bz = бензоил и т.п.
Соединения
Настоящее изобретение относится к конденсированным пиримидинам, которые ингибируют АТФа зу, ассоциированную с различными активностями (AAA), АТФазу, имеющую описательное название валозинсодержащий белок, также известную как p97, а также к способам лечения или предотвращения заболевания или состояния у субъекта, которому принесло бы пользу ингибирование p97. Соединения, воплощающие первый аспект настоящего изобретения, представляют собой конденсированный пиримидин формулы IA или IB
НЕТ
Формула IA Формула Ш или его фармацевтически приемлемую соль, где
A представляет собой NR5 или O;
HET представляет собой радикал, выбранный из группы H4, H5 и H10
где R1 представляет собой карбоксил (-COOH) или карбоксамидо (-CONH2); R5 представляет собой водород или метил;
- 7 031317
R6 представляет собой водород, метил, этил, метокси или этокси;
Ar представляет собой фенил или фторфенил.
Группа Ar предпочтительно представляет собой фенил.
Одним из предпочтительных вариантов реализации изобретения является случай, когда R1 представляет собой карбоксамидо, R5 представляет собой водород, R6 представляет собой водород, метил или метокси.
Еще одним из предпочтительных вариантов реализации изобретения является случай, когда R6 представляет собой метил или метокси.
Еще одним из вариантов реализации изобретения является случай, когда конденсированный пиримидин выбран из следующих соединений:
1-(4-((3-фторбензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3-с1]пиримидин-2-ил)-1Ниндазол-4-карбоксамид,
1-(4-((3-фторбензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3-с1]пиримидин-2-ил)-2метокси-1Н-бензо[с1]имидазол-4-карбоксамид,
1-(4-((3-фторбензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3-с1]пиримидин-2-ил)-2метил-1 Н-инд ол-4-карбоксамид,
1-(4-((3-фторбензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2-с1]пиримидин-2-ил)-1Ниндазол-4-карбоксамид,
1-(4-((3-фторбензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2-с1]пиримидин-2-ил)-2метокси-1Н-бензо[с1]имидазол-4-карбоксамид,
1-(4-((3-фторбензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2-с1]пиримидин-2-ил)-2КуТА'ртдтт- 1 ТТ-ттштглтт-Д-ггаглАг'мталттттт
IVXV'XrXJX A A A I 1Λ.4Α V1W V4.1VAA A/J,,
1-(4-((3-фторбензил)амино)-6,7-дигидро-5Н-пирано[2,3-с1]пиримидин-2-ил)-1Ниндазол-4-карбоксамид,
1-(4-((3-фторбензил)амино)-6,7-дигидро-5Н-пирано[2,3-с1]пиримидин-2-ил)-2метокси-1Н-бензо[с1]имидазол-4-карбоксамид,
1-(4-((3-фторбензил)амино)-6,7-дигидро-5Н-пирано[2,3-с1]пиримидин-2-ил)-2метил-1 Н-инд ол-4-карбоксамид,
1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3-с1]пиримидин-2-ил)-1Ниндазол-4-карбоксамид,
1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3-с1]пиримидин-2-ил)-2-метокси1 Н-бензо[с1] имид азол-4-карбоксамид,
1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3-с1]пиримидин-2-ил)-2-метил- 8 031317
1Н-инд ол-4-карбоксамид,
1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2-б]пиримидин-2-ил)-1Ниндазол-4-карбоксамид,
1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2-б]пиримидин-2-ил)-2-метокси1 Н-бензо[с1] имид азол-4-карбоксамид,
1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2-б]пиримидин-2-ил)-2-метил1 Н-инд ол-4-карбоксамид,
1-(4-(бензиламино)-6,7-дигидро-5Н-пирано[2,3-б]пиримидин-2-ил)-1Н-индазол4-карбоксамид,
1-(4-(бензиламино)-6,7-дигидро-5Н-пирано[2,3-б]пиримидин-2-ил)-2-метокси1Н-бензоГб1имилазол-4-капбоксамип
---------|_—J------------- £-------------F—'7
1-(4-(бензиламино)-6,7-дигидро-5Н-пирано[2,3-б]пиримидин-2-ил)-2-метил-1Ниндол-4-карбоксамид,
-(4-((3 -фторбензил)амино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[3,2-d] пиримид ин-2-ил)-1Ниндазол-4-карбоксамид,
1-(4-((3-фторбензил)амино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[3,2-б]пиримидин-2-ил)-2метокси-1Н-бензо[б]имидазол-4-карбоксамид,
1-(4-((3-фторбензил)амино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[3,2^]пиримидин-2-ил)-2метил-1 Н-инд ол-4-карбоксамид,
-(4-(бензиламино)-7,8 -д игидро-6Н-пирано[3,2-d] пиримидин-2-ил)-1 Н-инд азол4-карбоксамид,
1-(4-(бензиламино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[3,2-б]пиримидин-2-ил)-2-метокси1 H-6eH3o[d] имид азол-4-карбоксамид,
1-(4-(бензиламино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[3,2^]пиримидин-2-ил)-2-метил-1Ниндол-4-карбоксамид,
-(4-((3 -фторбензил)амино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[3,2-d] пиримид ин-2-ил)-2метил-1 Н-инд ол-7-карбоксамид.
Предпочтительным вариантом реализации изобретения является случай, когда конденсированный пиримидин выбран из следующих соединений:
1-(4-((3-фторбензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3^]пиримидин-2ил)-2-метил-1Н-индол-4-карбоксамид,
1-(4-((бензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропир идо[2,3^]пиримидин-2-ил)-2метил-1Н-индол-4-карбоксамид,
1-(4-((3-фторбензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3^]пиримидин-2ил)-2-метокси-1Н-индол-4-карбоксамид,
- 9 031317
1-(4-((бензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропир идо[2,3-с1]пиримидин-2-ил)-2метокси-1 Н-индол-4-карбоксамид,
-(4-((3-фторбенз ил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропир идо[3,2-с1]пиримидин-2ил)-2-метил-1 Н-индол-4-карбоксамид,
1-(4-((бензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропир идо[3,2-с1]пиримидин-2-ил)-2-метил1 Н-инд ол-4-карбоксамид,
-(4-((3-фторбенз ил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропир идо[3,2-с1]пиримидин-2-ил)-2метокси-1 Н-инд ол-4-карбоксамид,
1-(4-((бензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропир идо[3,2-с1]пиримидин-2-ил)-2метокси-1 Н-инд ол-4-карбоксамид,
1-(4-(бензиламино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[3,2-(1]пиримидин-2-ил)-2-метил-1Ниндол-4-карбоксамид,
1-(4-(бензиламино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[3,2-(1]пиримидин-2-ил)-2-метокси1 Н-инд ол-4-карбоксамид,
1-(4-(3-фторбензиламино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[3,2-(1]пиримидин-2-ил)-2метил-1 Н-инд ол-4-карбоксамид,
1-(4-(3-фторбензиламино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[3,2-(1]пиримидин-2-ил)-2метокси-1 Н-инд ол-4-карбоксамид,
-(4-(бензиламино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[2,3 -d] пиримидин-2-ил)-2-метил-1Ниндол-4-карбоксамид,
1-(4-(бензиламино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[2,3-0]пиримидин-2-ил)-2-метокси1 Н-инд ол-4-карбоксамид,
1-(4-(3 -фторбензиламино)-7,8 -дигидро-6Н-пирано[2,3 -d] пиримид ин-2-ил)-2метил-1Н-индол-4-карбоксамид или
1-(4-(3-фторбензиламино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[2,3-4]пиримидин-2-ил)-2метокси-1 Н-инд ол-4-карбоксамид.
Механизм действия и медицинское лечение
В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение относится к способам ингибирования p97. Конденсированные пиримидины согласно настоящему изобретению для применения в раскрытых в настоящем документе способах связывают активный сайт p97, например, нековалентным или ковалентным образом. В некоторых таких вариантах реализации ковалентное связывание может быть обратимым или необратимым.
Соединения согласно настоящему изобретению и содержащие их фармацевтические композиции способны действовать как ингибиторы p97, что означает, что они способны блокировать или снижать активность фермента, например ингибировать различные виды активности p97. Ингибитор может действовать по механизму конкурентного, неконкурентного или бесконкурентного ингибирования. Ингибитор может связываться обратимо или необратимо и, соответственно, этот термин включает соединения, которые действуют как суицидные ингибиторы (т.е. связываются с активным сайтом фермента) или вызывают конформационные изменения в какой-либо другой части фермента.
Соединения согласно настоящему изобретению и содержащие их фармацевтические композиции действуют как терапевтические агенты в том смысле, что они способны предотвращать, облегчать, модифицировать и/или ослаблять нарушение или состояние, т.е. такое соединение в статистической выборке снижает встречаемость нарушения или состояния в выборке, получающей лечение, по сравнению с не получающей лечения контрольной выборкой, или замедляет возникновение или снижает тяжесть одного или более симптомов нарушения или состояния по сравнению с не получающей лечение контрольной выборкой.
Способность предотвращать, облегчать, модифицировать и/или ослаблять применительно к состоя
- 10 031317 нию, такому как местный рецидив (например, боли), заболеванию, такому как рак, комплексному синдрому, такому как сердечная недостаточность, или любому другому медицинскому состоянию хорошо известна в данной области и включает введение композиции, которая снижает у субъекта частоту или замедляет наступление симптомов какого-либо медицинского состояния по сравнению с субъектом, который не получает эту композицию. Соответственно, предотвращение рака включает, например, снижение определяемого ракового роста в популяции и/или замедление возникновения детектируемого ракового роста в популяции, получающей лечение по сравнению с не получающей лечение контрольной популяцией, например, на статистически и/или клинически значимую величину.
Предотвращение инфекции включает, например, снижение числа диагнозов данной инфекции в популяции, получающей лечение, по сравнению с контрольной популяцией, не получающей лечение, и/или замедление возникновения симптомов в популяции, получающей лечение, по сравнению с контрольной популяцией, не получающей лечение. Предотвращение боли включает, например, снижение силы или в альтернативном варианте приостановку болезненных ощущений, испытываемых субъектами в популяции, получающей лечение, по сравнению с контрольной популяцией, не получающей лечение.
Соединения согласно настоящему изобретению и содержащие их фармацевтические композиции могут действовать профилактически и/или терапевтически, включая введение хозяину одной или больше композиций согласно настоящему изобретению. Если его вводят до клинического проявления нежелательного состояния (например, заболевания или другого нежелательного состояния у животногохозяина), лечение является профилактическим, (т.е. оно защищает хозяина от развития нежелательного состояния), а если его вводят после проявления нежелательного состояния, лечение является терапевтическим (т.е. оно направлено на снижение, облегчение или стабилизацию существующего нежелательного состояния или его побочных эффектов).
Соединения согласно настоящему изобретению и содержащие их фармацевтические композиции подходят для профилактического и/или терапевтического лечения. Если соединение или композицию вводят до клинического проявления нежелательного состояния (например, заболевания или другого нежелательного состояния у животного-хозяина), лечение является профилактическим (т.е. оно защищает хозяина от развития нежелательного состояния), а если их вводят после проявления нежелательного состояния, лечение является терапевтическим (т.е. оно направлено на снижение, облегчение или стабилизацию существующего нежелательного состояния или его побочных эффектов). В настоящем тексте термин лечение или лечить включает обращение, снижение или блокирование симптомов, клинических признаков и первопричинной патологии состояния для улучшения или стабилизации состояния пациента.
Соединения согласно настоящему изобретению и содержащие их фармацевтические композиции можно вводить в терапевтически эффективных количествах применительно к используемому способу лечения. Терапевтически эффективное количество представляет собой количество соединения (соединений) в фармацевтической композиции, которое при введении в рамках необходимой схемы введения (млекопитающему, предпочтительно человеку) облегчает симптом, облегчает состояние или замедляет начало болезненных состояний в соответствии с применяемыми в клинической практике стандартами для нарушения или состояния, которое лечат, или обеспечивает косметический результат, например, при разумном соотношении польза/риск, применимо для любого медицинского лечения.
Введение(применение).
Соединения согласно настоящему изобретению и содержащие их фармацевтические композиции, полученные, как описано в настоящем документе, можно вводить в различных формах в зависимости от нарушения, которое лечат и возраста, состояния и массы тела пациента, в соответствии с общими знаниями в данной области. В соответствии с необходимостью, рекомендациями и требованиями государственного органа по контролю в сфере фармацевтики, введение в конечном итоге осуществляется под руководством и по предписанию лечащего врача, который контролирует лечение пациента на основании своего здравого смысла, опыта и знаний.
Например, если соединения предстоит применять перорально, они могут быть изготовлены в форме таблеток, капсул, гранул, порошков или сиропов; а в случае парентерального введения, они могут быть изготовлены в форме инъекционных средств (для внутривенных, внутримышечных или подкожных инъекций), препаратов для капельниц или суппозиториев. Для введения через слизистую оболочку глаза соединения могут быть изготовлены в форме капель или мази.
Эти составы для перорального введения или введения через слизистые оболочки могут быть получены с использованием обычных средств и, при желании, активный ингредиент может быть смешан с любой обычной добавкой или вспомогательным веществом, такими как связующее вещество, разрыхлитель, смазывающее вещество, корригент, солюбилизатор, суспендирующая добавка, эмульгатор, покрытие, циклодекстрин и/или буфер. Хотя дозировка будет варьировать в зависимости от симптомов, возраста и массы тела пациента, пола пациента, природы и тяжести заболевания, которое лечат или предотвращают, пути введения и лекарственной формы, обычно для взрослого пациента-человека рекомендуется ежедневная дозировка, составляющая от 0,0001 до 2000 мг, предпочтительно от 0,001 до 1000 мг, более предпочтительно от 0,001 до 500 мг, особенно предпочтительно от 0,001 до 250 мг, наиболее предпочти
- 11 031317 тельно от 0,001 до 150 мг соединения, причем эта дозировка может вводиться одной дозой или дробными дозами. В альтернативном варианте возможно назначение ежедневной дозы в зависимости от массы тела, например, 1 нг/кг до 200 мг/кг, предпочтительно от 10 нг/кг до 100 мг/кг/день, более предпочтительно от 10 нг/кг до 10 мг/кг/день, наиболее предпочтительно от 10 нг/кг до 1 мг/кг/день. Количество активного компонента, которое может быть объединено с носителем для получения единой лекарственной формы, обычно будет представлять собой такое количество соединения, которое обеспечивает терапевтический эффект.
Точное время введения и/или количество композиции, которые обеспечат наиболее эффективные результаты с точки зрения эффективности лечения у конкретного пациента, будут зависеть от активности, фармакокинетики и биодоступности конкретного соединения, физиологического состояния пациента (включая возраст, пол, тип и стадию заболевания, общее физическое состояние, ответ на конкретную дозировку и тип лекарства), путь введения и т.д. Однако приведенные выше инструкции можно использовать в качестве основы для тонкой регулировки лечения, например определение оптимального времени и/или количества введения, которое потребует проведения исключительно рутинных экспериментов, заключающихся в мониторинге состояния субъекта и корректировке дозы и/или выбора времени введения.
Фраза фармацевтически приемлемый применяется в настоящем документе для обозначения тех лигандов, материалов, композиций и/или лекарственных форм, которые согласно обоснованному медицинскому суждению подходят для применения в контакте с тканями человека и животных и не вызывают при этом избыточной токсичности, раздражения, аллергической реакции или других проблем или осложнений, причем такое применение характеризуется разумным соотношением польза/риск.
Фармацевтические композиции, включающие формулу I.
Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению включает варианты реализации конденсированного пиримидина формулы I согласно настоящему изобретению и фармацевтически приемлемый носитель. Природа фармацевтического носителя и доза конденсированного пиримидина формулы I зависят от выбранного пути введения, эффективной дозы для такого пути и знаний и опыта лечащего врача.
Фармацевтически приемлемый носитель представляет собой фармацевтически приемлемый материал, композицию или основу, такую как жидкий или твердый наполнитель, разбавитель, вспомогательное вещество, растворитель или инкапсулирующий материал. Каждый носитель должен быть приемлемым, т.е. совместимым с другими компонентами состава и не приносящим вреда пациенту. Некоторые примеры материалов, которые могут служить фармацевтически приемлемыми носителями, включают:
(1) сахара, такие как лактоза, глюкоза и сахароза; (2) крахмалы, такие как кукурузный крахмал, картофельный крахмал и замещенный или незамещенный β-циклодекстрин; (3) целлюлоза и ее производные, такие как карбоксиметилцеллюлоза натрия, этилцеллюлоза и ацетат целлюлозы; (4) порошковый трагакант; (5) солод; (6) желатин; (7) тальк; (8) вспомогательные вещества, такие как масло какао и воски для суппозиториев; (9) масла, такие как арахисовое масло, хлопковое масло, сафлоровое масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло; (10) гликоли, такие как пропиленгликоль; (11) многоатомные спирты, такие как глицерин, сорбит, маннитол и полиэтиленгликоль; (12) сложные эфиры, такие как этилолеат и этиллаурат; (13) агар; (14) буферные вещества, такие как гидроксид магния и гидроксид алюминия; (15) альгиновая кислота; (16) апирогенная вода; (17) изотонический солевой раствор; (18) раствор Рингера; (19) этиловый спирт; (20) фосфатные буферные растворы; и (21) другие нетоксичные приемлемые вещества, применяемые в фармацевтических препаратах.
В композиции также могут присутствовать смачивающие вещества, эмульгаторы и смазывающие вещества, такие как лаурилсульфат натрия и стеарат магния, а также красители, регуляторы высвобождения, покровные вещества, подсластители, вкусоароматические и ароматические вещества, консерванты и антиоксиданты. Примеры фармацевтически приемлемых антиоксидантов включают: (1) водорастворимые антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота, цистеина гидрохлорид, бисульфат натрия, метабисульфит натрия, сульфит натрия и т. п.; (2) жирорастворимые антиоксиданты, такие как аскорбилпальмитат, бутилгидроксианизол (ВНА), бутилгидрокситолуол (ВНТ), лецитин, пропилгаллат, α-токоферол и т.п.; и (3) хелаторы металлов, такие как лимонная кислота, этилендиамин тетрауксусная кислота (ЭДТА), сорбит, винная кислота, фосфорная кислота и т.п.
Препараты, подходящие для перорального введения, могут иметь форму капсул, саше, пилюль, таблеток, леденцов (с использованием вкусоароматической основы, обычно сахарозы и гуммиарабика или трагаканта), порошков, гранул или иметь форму раствора или суспензии в водной или неводной жидкости, такой как жидкая эмульсия типа масло-в-воде или вода-в-масле, или форму эликсира или сиропа или пастилок (с использованием инертной основы, такой как желатин и глицерин, или сахароза и гуммиарабик) и/или форму полосканий для рта и т.п., причем каждая из указанных форм содержит заранее определенное количество соединения согласно настоящему изобретению в качестве активного компонента. Также возможно введение композиции в форме болюса, кашки или пасты.
В твердой лекарственной форме для перорального введения (капсулы, таблетки, пилюли, драже,
- 12 031317 порошки, гранулы и т.п.) соединение согласно настоящему изобретению смешано с одним или больше фармацевтически приемлемых носителей, таких как цитрат натрия или дикальций фосфат, и/или любое вещество из следующих:
(1) наполнители или вещества, увеличивающие объем, такие как крахмалы, циклодекстрины, лактоза, сахароза, глюкоза, маннитол и/или кремниевая кислота;
(2) связующие, такие как, например, карбоксиметилцеллюлоза, альгинаты, желатин, поливинилпирролидон, сахароза, и/или гуммиарабик;
(3) увлажняющие вещества, такие как глицерин;
(4) разрыхлители, такие как агар-агар, карбонат кальция, картофельный или тапиоковый крахмал, альгиновая кислота, определенные силикаты и карбонат натрия;
(5) вещества, замедляющие растворение, такие как парафин;
(6) вещества, ускоряющие всасывание, такие как четвертичные аммониевые соединения;
(7) смачивающие вещества, такие как, например, ацетиловый спирт глицерин моностеарат;
(8) адсорбенты, такие как каолин и бентонитовая глина;
(9) смазывающие вещества, такие как тальк, стеарат кальция, стеарат магния, твердые полиэтиленгликоли, лаурилсульфат натрия и их смеси; и (10) красители.
В случае капсул, таблеток и пилюлей фармацевтические композиции могут содержать буферные вещества. Твердые композиции аналогичного типа также можно применять в качестве наполнителей в мягких и твердых желатиновых капсулах с наполнителем с использованием таких вспомогательных веществ лактоза или молочные сахара, а также высокомолекулярных полиэтиленгликолей и т. п.
Таблетка может быть изготовлена путем прессования или формовки, необязательно с одним или большим числом дополнительных компонентов. В получении прессованных таблеток могут применяться связующее (например, желатин или гидроксипропилметилцеллюлоза), смазывающее вещество, инертный разбавитель, ронсерват, разрыхлитель (например, натрия гликолят крахмала или поперечносшитая карбоксиметилцеллюлоза), поверхностно-активное вещество или диспергирующее вещество. Формованные таблетки могут быть изготовлены путем формования в соответствующем устройстве смеси ингибитора (ингибиторов) в форме порошка, увлажненных жидким инертным разбавителем.
Таблетки и другие твердые лекарственные формы, такие как драже, капсулы, пилюли и гранулы, могут необязательно храниться или готовиться с покрытиями или оболочками, такими как покрытия, растворяющиеся в кишечнике и другие покрытия, хорошо известные в области изготовления фармацевтических средств. Они также могут быть изготовлены таким образом, чтобы обеспечивать медленное или контролируемое высвобождение содержащегося в них активного компонента, например, могут включать гидроксипропилметилцеллюлозы в различных соотношениях для обеспечения желаемого профиля высвобождения, другие полимерные матрицы, липосомы и/или микросферы. Они могут быть стерилизованы путем, например, фильтрации через фильтр, удерживающий бактерии, или путем включения стерилизующих агентов в форме стерильной твердой композиции, которая может быть растворена в стерильной воде или какой-либо другой стерильной среде, подходящей для инъекций, непосредственно перед применением. Эти композиции могут дополнительно содержать замутнители и могут иметь состав, обеспечивающий высвобождение только активного компонента (компонентов) или предпочтительно высвобождение только в определенной области желудочно-кишечного тракта, причем высвобождение может быть отложенным.
Примеры запечатывающих композиций, которые могут применяться, включают полимерные вещества воски. Соединение согласно настоящему изобретению также может быть представлено в микроинкапсулированной форме, в соответствующих случаях, с одним или больше из описанных выше вспомогательных веществ.
Жидкие лекарственные формы для перорального введения включают фармацевтически приемлемые эмульсии, микроэмульсии, растворы, суспензии, сиропы, и эликсиры. В дополнение к активному ингредиенту жидкие лекарственные формы могут содержать инертные разбавители, обычно применяемые в данной области, такие как, например, вода или другие растворители, солюбилизаторы и эмульгаторы, такие как этиловый спирт, изопропиловый спирт, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензил бензоат, пропиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль, масла (в частности, хлопковое масло, арахисовое масло, кукурузное масло, масло ростков пшеницы, оливковое масло, касторовое масло и кунжутное масло), глицерин, тетрагидрофуриловый спирт, полиэтиленгликоли и сложные эфиры жирных кислот с сорбитаном, а также их смеси.
Помимо инертных разбавителей пероральные композиции могут также включать адъюванты, такие как смачивающие вещества, эмульгирующие и суспендирующие вещества, подсластители, вкусоароматические вещества, красители, отдушки и консерванты.
Суспензии в дополнение к активному ингибитору (ингибиторам) могут содержать суспендирующие вещества, такие как, например, этоксилированные изостеариловые спирты, сложные эфиры полиоксиэтилена с сорбитом и сорбитаном, микрокристаллическая целлюлоза, метагидроксид алюминия, бентонит, агар-агар и трагакант и их смеси.
- 13 031317
Составы для ректального или вагинального введения могут быть представлены в форме суппозитория, который может быть получен путем смешивания одного или больше ингибиторов с одним или больше подходящих нераздражающих вспомогательных веществ или носителей, включая, например, масло какао, полиэтиленгликоль, воск для суппозиториев или салицилат, которые являются твердыми при комнатной температуре, но жидкими при температуре тела и, соответственно, плавятся в прямой кишке или влагалище и высвобождают активное вещество.
Составы, подходящие для вагинального введения, включают также включают составы в форме пессариев, тампонов, кремов, гелей, паст, пенок или спрея, содержащие носители, известные в данной области как приемлемые.
Лекарственные формы для топического или трансдермального введения ингибитора (ингибиторов) включают порошки, спреи, мази, пасты, кремы, лосьоны, гели, растворы, пластыри и формы для ингаляции. Активный компонент может быть смешан в стерильных условиях с фармацевтически приемлемым носителем и с любыми консервантами, буферами или пропеллентами, которые могут быть необходимы.
Мази, пасты, кремы и гели могут содержать в дополнение к соединению согласно настоящему изобретению вспомогательные вещества, такие как животные и растительные жиры, масла, воски, парафины, крахмал, трагакант, производные целлюлозы, полиэтиленгликоли, силиконы, бентониты, кремниевая кислота, тальки оксид цинка или их смеси.
Порошки и спреи могут содержать в дополнение к соединению согласно настоящему изобретению вспомогательные вещества, такие как лактоза, тальк, кремниевая кислота, гидроксид алюминия, силикаты кальция и порошковый полиамид или смеси этих веществ. Спреи могут дополнительно содержать обычные пропелленты, такие как хлорофторуглеводороды и летучие незамещенные углеводороды, такие как бутан и пропан.
В альтернативном варианте возможно введение соединения согласно настоящему изобретению в форме аэрозоля. Это осуществляется путем приготовления водного аэрозоля, препарата липосом или твердых частиц, содержащих аэрозоль. Могут быть использованы неводные суспензии (например, с фтороуглеродным пропеллентом). Предпочтительны ультразвуковые небулайзеры, поскольку они минимизируют воздействие трения, которое может привести к разрушению соединения, на соединение.
Обычно водный аэрозоль изготавливают путем приготовления водного раствора или суспензии соединения согласно настоящему изобретению с обычными фармацевтически приемлемыми носителями и стабилизаторами. Носители и стабилизаторы зависят от требований для конкретной композиции, но обычно включают неионные поверхностно-активные вещества (такие как различные Tween, Pluronic, сложные эфиры, лецитин сорбитана, Cremophos), фармацевтически приемлемые сорастворители, такие как полиэтиленгликоль, безвредные белки, такие как сывороточный альбумин, олеиновая кислота, аминокислоты, такие как глицин, буферы, соли, сахара или сахарные спирты. Аэрозоли обычно получают из изотонических растворов.
Трансдермальные пластыри обладают дополнительным преимуществом, заключающимся в обеспечении контролируемой доставки соединения согласно настоящему изобретению в организм. Такие лекарственные формы могут быть получены путем растворения или диспергирования соединения в подходящей среде. Также можно применять вещества, улучшающие всасывание, для увеличения интенсивности потока ингибитора(ингибиторов) через кожу. Скорость такого потока можно контролировать либо при помощи мембраны, контролирующей скорость, либо путем диспергирования ингибитора (ингибиторов) в полимерной матрице или геле.
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению, подходящие для парентерального введения, содержат одно или больше соединений согласно настоящему изобретению в комбинации с одним или большим числом фармацевтически приемлемых стерильных водных или неводных растворов, дисперсий, суспензий или эмульсий, или стерильные порошки, которые могут быть восстановлены с получением стерильных раствором или дисперсий для инъекций, изотонических по отношению к крови предполагаемого реципиента, непосредственно перед применением, или суспендирующими агентами или загустителями. Примеры подходящих водных и неводных носителей, которые могут применяться в композициях согласно настоящему изобретению, включают воду, этанол, многоатомные спирты (такие как глицерин, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль и т. п.) и их подходящие смеси, растительные масла, такие как оливковое масло и инъекционные сложные органические эфиры, такие как этилолеат. Необходимую текучесть можно поддерживать, например, путем применения покрытий, таких как лецитин, за счет поддержания необходимого размера частиц в случай дисперсий, и путем применения поверхностноактивных веществ.
Эти композиции могут также содержать адъюванты, такие как консерванты, смачивающие вещества, эмульгаторы и диспергирующие агенты. Влияние микроорганизмов можно предотвратить путем включения различных антибактериальных и противогрибковых средств, например, парабена, хлорбутанола, фенолсорбиновой кислоты и т.п. Также может быть желательно включать в композиции регуляторы тоничности, такие как сахара, хлорид натрия и т.п. Дополнительно можно обеспечить замедленное всасывание инъецируемой фармацевтической формы путем включения в композицию средств, замедляющих всасывание, таких как моностеарат алюминия и желатин.
- 14 031317
В некоторых случаях для того чтобы продлить действие соединения согласно настоящему изобретению желательно замедлить всасывание соединения, вводимого путем подкожной или внутримышечной инъекции. Например, замедленного всасывания вводимых парентерально лекарственных форм добиваются путем растворения или суспендирования лекарственного средства в масляной основе.
Инъецируемые депо-формы изготавливают путем формирования микроинкапсулирующих матриц ингибитора (ингибиторов) в биодеградируемых полимерах, таких как полилактид-полигликолид. Соотношение лекарственного средства и полимера и свойства конкретного применяемого полимера позволяют контролировать скорость высвобождения. Примеры биодеградируемых полимеров включают поли(ортосложные эфиры) и поли(ангидриды). Инъецируемые депо-составы также получают путем заключения лекарственного средства в липосомы или микроэмульсии, которые можно вводить в ткани тела.
Фармацевтические композиции можно применять перорально, парентерально, топически или ректально. Безусловно, их вводят в форме, подходящей для каждого пути введения. Например, их вводят в форме таблеток или капсул, путем инъекции, ингаляции, в форме глазного лосьона, мази, суппозитория, инфузии; топически в форме лосьона или мази; и ректально в форме суппозитория. Предпочтительным является пероральное введение.
Фразы парентаральное введение и вводимый парентерально в настоящем документе обозначают пути введения, отличные от энтерального и топического введения, обычно путем инъекции, и включающие, без ограничения перечисленными, внутривенное, внутримышечное, внутриартериальное, интратекальное, интракапсулярное, интраорбитальное, внутрисердечное, внутрикожное, внутрибрюшинное, транстрахеальное, подкожное, внутрикожное, внутрисуставное, субкапсулярное, субарахноидальное, интраспинальное и интрастернальное инъекционное и инфузионное введение.
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут быть системно вводимыми, вводимыми системно, вводимыми периферически периферически вводимыми, что означает введение лиганда, лекарственного средства или другого материала путем, отличным от введения непосредственно в нервную систему, в результате чего он подвергается метаболизму и другим подобным процессам. Примером такого введения является подкожное введение.
Соединения (соединения) согласно настоящему изобретению можно вводить людям и другим животным в терапевтических целях с использованием любого подходящего пути введения, включая пероральное, назальное введение, например, в виде спрея, ректальное введение, интравагинальное введение, парентеральное введение, интрацистернальное введение и топическое введение, например, в форме порошков, мазей или капель, включая буккальное и подъязычное введение.
Вне зависимости от выбранного пути введения соединения (соединения) согласно настоящему изобретению, которые могут применяться в соответствующей гидратированной форме, и/или фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению изготавливают в виде фармацевтически приемлемых лекарственных форм с использованием обычных методов, известных специалистам в данной области.
Фактические уровни дозировки (соединений) согласно настоящему изобретению в фармацевтических композициях согласно настоящему изобретению можно варьировать таким образом, чтобы в результате обеспечивалось такое количество активного ингредиента, которое эффективно для обеспечения желаемого терапевтического ответа для конкретного пациента, композиции и способа введения и при этом не токсично для пациента.
Концентрация соединения согласно настоящему изобретению в фармацевтически приемлемой смеси будет варьировать в зависимости от нескольких факторов, включая применяемую дозировку соединения, фармакокинетические характеристики применяемого соединения (соединений) и путь введения.
Обычно композиции согласно настоящему изобретению могут быть представлены в водном растворе, содержащем приблизительно 0,1-10% мас./об. соединения, раскрытого в настоящем документе, а также другие вещества для парентерального введения. Типичная доза лежит в диапазоне от приблизительно 0,001 до приблизительно 50 мг/кг/день массы тела в день, и еще вводят в виде 1-4 дробных доз. Каждая дробная доза может содержать одинаковые или разные соединения согласно настоящему изобретению. Дозировка будет представлять собой эффективное количество, зависящее от нескольких факторов, включая общее состояние здоровья пациента, форму и путь введения выбранного соединения (соединений).
Лечение рака
Примеры форм рака, которые можно лечить способами согласно настоящему изобретению с применением конденсированных пиримидинов согласно настоящему изобретению и содержащих их фармацевтических композиций, включают следующие, но не ограничиваются ими: рак предстательной железы, рак мочевого пузыря, рак легких (включая мелкоклеточный и немелкоклеточный рак), рак толстой кишки, рак почек, рак печени, рак молочной железы, рак шейки матки, рак эндометрия и другие виды рака матки, рак яичников, рак яичек, рак пениса, рак влагалища, рак уретры, рак мочевого пузыря, рак пищевода или рак поджелудочной железы.
Дополнительные примеры форм рака, которые можно лечить способами согласно настоящему изобретению, включают следующие, но не ограничиваются ими: рак скелетных или гладких мышц, рак же- 15 031317 лудка, рак тонкого кишечника, рак слюнной железы, рак ануса, рак прямой кишки, рак щитовидной железы, рак паращитовидной железы, рак гипофиза и рак носоглотки.
Соединения согласно настоящему изобретению и их соли могут применяться самостоятельно или в комбинации с другими терапевтическими средствами для лечения заболеваний или состояний, связанных с неадекватной активностью p97.
Другие заболевания, которые можно лечить в соответствии со способами согласно настоящему изобретению, включают в дополнение к раку аутоиммунные заболевания, болезни обмена веществ, инфекционные заболевания, неврологические заболевания, реакции трансплантат против хозяина и другие наследственные заболевания, приведенные в настоящем тексте: абеталипопротеинемия, ацерулоплазминемия, дефицит α-1-антихимотрипсина (АХТ), аспартилглюкозаминурия, аутосомно-доминантный пигментный ретинит, синдром Бругада, синдром Шарко-Мари-Тута, врожденная гиперплазия надпочечников, врожденная хлоридная диарея, врожденный гипотириодизм, врожденный синдром удлиненного интервала QT, врожденный нефротический синдром, врожденная сахарозо-изомальтазная недостаточность, синдром Криглера-Найяра II типа, муковисцедоз, сахарный диабет, дистрофическая дисплазия, синдром Дабина-Джонсона, болезнь Фабри, семейная хиломикронемия, семейная недостаточность глюкокортикоидов, семейная гиперхолестеринемия, болезнь Гоше, болезнь тяжелых цепей, наследственная эмфизема, наследственная эмфизема с поражением печени, наследственный гемохроматоз, наследственная гипофибриногенемия, наследственный дефицит миелопероксидазы, наследственный сфероцитоз, болезнь Гиршпрунга, гипогонадотропный гипогонадизм, системный гиалиноз новорожденных, нейрональный цероидный липофусциноз новорожденных, синдром Ларона, печеночная недостаточность, синдром Марфана, кистозная болезнь мозгового вещества почек, семейная ювенильная гиперурикемическая нефропатия, болезнь Менкеса, нефрогенный диабет, нейрогипофизарный несахарный диабет, окулокутанный, несовершенный остеогенез, болезнь Пелицеуса-Мерцбахера, синдром Пендреда, персистирующая гиперинсулинемическая гипогликемия новорожденных, первичный гипотиреоз, недостаточность белка C, псевдоахондраплазия с множественной эпифизарной дисплазией, тяжелая врожденная нейтропения, макулярная дистрофия по Штаргардту, стероидрезистентный нефротический синдром, болезнь ТеяСакса, врожденная ангиоэдема I типа, дефицит тироксинсвязывающего глобулина, болезнь фон Виллебранда IIA типа, X-сцепленная болезнь Шарко-Мари-Тута, X-сцепленная гипофосфатемия, болезнь Альцгеймера, аутосомно-рецессивный ювенильный паркинсонизм, комбинированный дефицит факторов V и VIII, кранио-лентикуло-сутуральная дисплазия, гипотония и дисморфизм, комплекс миопатия с тельцами включения+болезнь костей Паже+лобно-височная деменция (IBMPFD), нарушения всасывания липидов, синдром Маринеску-Шегрена, болезнь Паркинсона, поликистоз печени, поздняя спондилоэпифизарная дисплазия, синдром Уолкотта-Раллисона и болезнь Лу-Герига (БАС).
В различных вариантах реализации соединения согласно настоящему изобретению можно применять для лечения неопластического роста, ангиогенеза, инфекции, воспаления, связанных с иммунной системой заболеваний, ишемии и реперфузионного поражения, рассеянного склероза, ревматоидного артрита, нейродегенеративных заболевний или псориаза.
Неопластический рост может включать рак. В подходящем варианте настоящее изобретение относится к способу лечения или снижения тяжести рака, выбранного из следующих: рак мозга (глиомы), глиобластомы, рак молочной железы, опухоль Вильма, саркома Эвинга, рабдомиосаркома, эпендимиома, медуллобластома, рак толстого кишечника, головы и шеи, почки, легкого, печени, меланома, рак яичников, рак поджелудочной железы, рак предстательной железы, саркома, остеосаркома, гигантоклеточная опухоль кости, щитовидной железы, лимфобластный T-клеточный лейкоз, хронический миелолейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, солосатоклеточный лейкоз, острый лимфобластный лейкоз, острый миелогенный лейкоз, хронический нейтрофильный лейкоз, острый лимфобластный T-клеточный лейкоз, плазмацитома, иммунобластный крупноклеточный лейкоз, мантийноклеточный лейкоз, множественная миелома, мегакариобластный лейкоз, множественная миелома, острый мегакариоцитарный лейкоз, промиелоцитарный лейкоз, эритролейкоз, злокачественная лимфома, ходжкинская лимфома, неходжкинская лимфома, лимфобластная T-клеточная лимфома, лимфома Беркитта, фолликулярная лимфома, нейробластома, рак мочевого пузыря, рак уротелия, рак легких, рак влагалища, рак шейки матки, рак эндометрия, рак почки, мезотелиома, рак пищевода, рак слюнных желез, гепатоцеллюлярный рак, рак желудка, рак носоглотки, рак щеки, рак ротовой полости, ГИСТ (стромальная опухоль ЖКТ) и рак яичек.
В различных вариантах реализации рак выбран из рака мозга (глиомы), глиобластом, рака молочной железы, рака толстой кишки, рака головы и шеи, рака почек, рака легких, рака печени, меланомы, рака яичников, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, саркомы и рака щитовидной железы.
В различных вариантах реализации рак, который лечат, связан с протеасомами. См. статью Voorhees с соавт., The Proteasome as a Target for Cancer Therapy, Clinical Cancer Research, vol. 9, 6316-6325, 12.2003, которая полностью включена в настоящий текст посредством ссылки. В различных вариантах реализации рак связан с конкретной мишенью, такой как NF-kB, p44/42 MAPK, P-gp, TopI, TopIIu.
В различных вариантах реализации рак представляет собой солидную опухоль. В различных вариантах реализации рак выбран из множественной миеломы, метастатического рака молочной железы, не
- 16 031317 мелкоклеточного рака легких, рака предстательной железы, поздней стадии рака толстой и прямой кишки, карциномы яичников или первичной перитонеальной карциномы, гормонорезистентного рака предстательной железы, плоскоклеточной карциномы головы и шеи, метастатической аденокарциномы поджелудочной железы, желудочно-пищеводного соединения или желудка, неходжкиской лимформы.
Способ применения соединений, описанных в настоящем тексте, для лечения нарушения, характеризующегося неадекватным уровнем активности протеасом, или нарушения, при котором снижение нормального уровня протеасомной активности обеспечивает благоприятные клинические результаты. Это нарушение может включать рак или иммунные нарушения, характеризующиеся избыточной пролифераций клеток или избыточным клеточным сигналлингом. Такие типы рака включают рак у человека, при котором сверхэкспрессируется c-Myc или экспрессируется онкогенная форма белка K-Ras.
Нейродегенеративные заболевания и состояния могут включать следующие, но не ограничиваются ими: инсульт, ишемическое поражение нервной системы, травма нервной системы (например, ушиб головного мозга, повреждение спинного мозга и травматическое поражение нервной системы), рассеянный склероз и другие опосредуемые иммунными механизмами невропатии (например, синдром Гийена-Барре и его варианты, острая моторная аксональная невропатия, острая воспалительная демиелиненизирующая полиневропатия и синдром Фишера), комплекс ВИЧ/СПИД-деменция, аксономия, диабетическая невропатия, болезнь Паркинсона, болезнь Хантингтона, боковой амиотрофический склероз, рассеянный склероз, бактериальный, паразитический, грибковый и вирусный менингит, энцефалит, сосудистая деменция, мультиинфарктная деменция, деменция с тельцами Леви, деменция лобной доли, такая как болезнь Пика, подкорковые деменции (такие как болезнь Хантингтона или прогрессирующий надъядерный паралич), синдромы, связанные а очаговой атрофией коры (такие как первичная афазия), метаболические деменции (такие как хронический гипотириодизм или дефицит B12) и деменции, вызываемые инфекциями (такие как сифилис или хронический менингит). Соединения согласно настоящему изобретению можно применять для лечения болезни Альцгеймера, включающего введение субъекту эффективного количества соединения или композиции (например, фармацевтической композиции), раскрытых в настоящем документе.
Соединения согласно настоящему изобретению можно применять для лечения кахексии и мышечных атрофий. Соединения согласно настоящему изобретению можно применять для лечения следующих состояний, связанных с раком, хроническими инфекционными заболеваниями: лихорадки, атрофии мышц (вследствие бездействия) и денервации мышц, повреждения нервов, истощения, почечной недостаточности, связанной с ацидозом, диабета и печеночной недостаточности.
Соединения согласно настоящему изобретению можно применять для лечения гипурпролиферативных состояний, таких как диабетическая ретинопатия, дегенерация желтого пятна, диабетическая нефропатия, гломерулосклероз, нефропатия типа IgA, цирроз, артезия желчных протоков, застойная сердечная недостаточность, склеродермия, радиационный фиброз и фиброз легких (идиопатический фиброз легких, коллагеноз сосудов, сакроидоз, интерстициальная болезнь легких и экзогенные заболевания легких). Лечение жертв ожогов часто затрудняется фиброзом. Соответственно, дополнительным вариантом осуществления настоящего изобретения является топическое или системное введение ингибиторов для лечения ожогов. Зашивание раны после хирургического вмешательства часто связано с обезображивающими рубцами, которые можно предотвратить путем подавления фиброза. Соответственно, в некоторых вариантах реализации настоящая заявка относится к предотвращению или снижению образования рубцов.
Соединения согласно настоящему изобретению можно применять для лечения ишемических состояний или реперфузионного повреждения, например острого коронарного синдрома (нестабильные бляшки), окклюзионное заболевание артерий (окклюзионные поражения сердца, головного мозга, периферических артерий и сосудов), атеросклероза (атеросклероза коронарных сосудов, ишемической болезни сердца), инфарктов, сердечной недостаточности, панкреатита, гипертрофии миокарда, стеноза и рестеноза.
Соединения согласно настоящему изобретению можно применять для ингибирования ФНО-α для предотвращения и/или лечения септического шока.
Соединения согласно настоящему изобретению можно применять для ингибирования презентации антигена в клетке, включающего приведение клетки в контакт с описанным в настоящем документе веществом. Соединение согласно настоящему изобретению можно применять для лечения связанных с иммунной системой состояний, таки как аллергия, астма, отторжение органа/ткани (болезнь трансплантат-против-хозяина) и аутоиммунные заболевания, включая следующие, но не ограничиваясь ими: волчанка, ревматоидный артрит, псориаз, рассеянный склероз и воспалительные заболевания кишечника (такие как язвенный колит и болезнь Крона). Соответственно, дальнейший вариант реализации представляет собой способ иммуномодуляции у субъекта (например, подавление отторжение трансплантата, аллергий, аутоиммунных заболеваний и астмы), включающий введение субъекту эффективного количества соединения согласно настоящему изобретению.
Соединения согласно настоящему изобретению можно применять в способах изменения репертуара ангиогенных пептидов, образуемых протеасомой или другим белковым комплексом, обладающим несколькими видами каталитической активности.
- 17 031317
Соединения согласно настоящему изобретению можно применять в способах ингибирования разрушения ΙκΒ-α, включающих осуществление контакта клетки с охарактеризованным в настоящем документе веществом. Другой вариант реализации представляет собой способ снижения содержания клеточного NF-κΒ в клетке, мышце или организме субъекта, включающий осуществление контакта клетки, органа или организма субъекта с соединением согласно настоящему изобретению.
Соединения согласно настоящему изобретению можно применять в способах влияния на циклинзависимые клеточные циклы эукариотических клеток. Соединения согласно настоящему изобретению можно применять в способах лечения пролиферативного заболевания у субъекта (например, рака, псориаза или рестеноза).
Соединения согласно настоящему изобретению можно применять для лечения связанного с циклином воспаления у субъекта.
Один вариант реализации представляет собой способ лечения связанного с p53-апоптоза, включающий введение субъекту эффективного количества соединения согласно настоящему изобретению.
В другом варианте реализации соединения, описанные в настоящей заявке, можно применять для лечения паразитарной инфекции, такой как инфекции, вызываемые паразитическими простейшими. В некоторых таких вариантах реализации вещества пригодны для лечения паразитарных инфекций у человека, вызванных паразитическими простейшими, выбранными из Plasmodium sps., Trypanosoma sps., Leishmania sps., Pneumocystis carinn, Tokcoplasma gondii, Entamoeba histolytica, Entamoeba invadens и Giardia lamblia. В некоторых вариантах реализации соединения пригодны для лечения паразитических инфекций у животных и скота, вызванных паразитическими простейшими, выбранными из Plasmodium hermani, Cryptosporidium sps., Echinococcus granulosus, Eimeria tenella, Sarcocystis neurona и Neurospora crassa. Другие соединения, которые можно применять в качестве ингибиторов протеасом в лечении паразитических заболеваний, описаны в публикации WO 98/10779, которая полностью включена в настоящий документ.
В частности, способы лечения включают подавление, блокирование, облегчение, минимизацию и/или устранение патологических состояний, связанных с неспособностью клетки метаболизировать, разрушать или избавляться другим образом от меченных убиквитином белков вследствие расщепления, разрушения, удаления этой метки или потери ее функции в результате активности металлопротеазного домена p97. К этому относятся способы, в которых нарушение у человека характеризуется анормальным разрушением регуляторного пептида, приводящему к избыточной пролиферации клеток или избыточному клеточному сигналлингу. Эти способы относятся к введению эффективного количества соединения или фармацевтического состава, охарактеризованных в настоящем документе, что обеспечивает уменьшение, снижение или подавление анормального разрушения регуляторного пептида. В частности, нарушения у человека включают рак или иммунное нарушение, рак, вызванный сверхэкспрессией c-Myc или экспрессией онкогенной формы белка K-Ras. Способы также включают ингибирование или снижение активности металлопротеазного домена p97 у пациента-человека, страдающего от анормальной активности металлопротеазного домена p97 в отношении белков, модифицированных убиквитином. Как описано выше, эти способы включают введение пациенту эффективного количества соединения или фармацевтического состава, раскрытых выше, что обеспечивает снижение, уменьшение или подавление анормальной активности металлопротеазного домена p97.
Диагностика
Многие клеточные белки подвергаются протеолитическому процессингу в ходе созревания или активации. Композиции, охарактеризованные в настоящем тексте, могут также быть полезны в качестве диагностических агентов (например, в диагностических наборах или для применения в клинических лабораториях) для скрининга белков (например, ферментов, факторов транскрипции), подвергающихся процессингу под действием гидролаз, включая протеасомные. Эти агенты также можно применять в качестве аналитических реагентов для специфичного связывания субъединицы X/MB1 или α-цепи и ингибирования связанной с ней протеолитической активности. Например, можно определять активность (и специфические ингибиторы) других субъединиц протеасомы.
Соединения согласно настоящему изобретению, охарактеризованные в настоящем документе, можно применять для того, чтобы определить, регулируются ли клеточные, связанные с развитием или физиологические процессы или параметры протеолитической активностью. Один такой способ включает получение организма, препарата интактных клеток или клеточного экстракта; воздействие на этот организм, препарат клеток или клеточный экстракт охарактеризованным в настоящем документе соединением; воздействие на подвергнутый воздействию соединения организм, препарат клеток или клеточный экстракт сигналом и мониторинг процесса или параметра. См., например, патент США № 7741432.
Соединения согласно настоящему исследованию могут использоваться в качестве компонента диагностического анализа. Например, можно получить клетки из организма пациента и осуществить анализ, чтобы определить, есть ли вероятность, что соединения согласно настоящему изобретению являются эффективными терапевтическими соединениями для лечения этого пациента. Клетки, полученные из организма пациента, могут, например, быть раковыми клетками из опухоли. Можно культивировать клетки и добавлять соединения согласно настоящему изобретению чтобы определить, какая концентра
- 18 031317 ция вызывает ответ у раковых клеток.
Относящийся к диагностике аспект настоящего изобретения также включает анализ для определения ингибирования активности p97. Анализ включает объединение ферментативного материала p97 с белковым субстратом и определение, будет ли потенциальный ингибитор-кандидат снижать ферментативную активность в этом анализе. Ферментативный материал p97 может представлять собой стандартный препарат или может быть получен из клеток пациента. Аналогичным образом, белковый субстрат может представлять собой стандартный препарат или может быть получен из клеток пациента. В частности, белковый субстрат выбирают из группы, состоящей из белка, модифицированного убиквитином или аналогичным убиквитину модификатором, причем белок, модифицируемый цепью убиквитина. может быть выделен из клеток пациента. В результате объединения ферментативного материала p97 и белкового субстрата получают ферментативную среду. Для этой среды белковый субстрат модифицируют меткой, которая может быть детектирована путем измерения молекулярной массы, спектроскопических взаимодействий или определения Rf в хроматографии.
После выделения и мечения ферментативную среду подвергают манипуляциям, необходимым для осуществления первого измерения ферментативной среды относительно белка-субстрата отдельно, причем первое измерение осуществляют путем детектирования метки.
После процедуры первого измерения потенциальный кандидат-ингибитор объединяют с меченым белком-субстратом и добавляют ферментативный материал, содержащий p97, для получения среды с кандидатом.
Среду с кандидатом подвергают манипуляциям для осуществления второго измерения в среде с кандидатом относительно белка-субстрата отдельно, причем второе измерение осуществляют путем детектирования метки.
Наконец, оценивают эффективность ингибитора-кандидата в лечении нуждающегося в этом пациента путем сравнения результатов первого и второго измерений для выявления кандидата, который демонстрирует по меньшей мере приблизительно 50% ингибирование в концентрации не более 500 мкмоль в среде с кандидатом, если разница между результатами первого и второго измерения составляет по меньшей мере приблизительно 50%, причем результат второго измерения выше результата первого измерения.
Конкретные варианты реализации конденсированных пиримидинов формулы I.
Варианты реализации конденсированных пиримидинов формулы I включают конкретные соединения, перечисленные ниже, в соответствии с номенклатурой ИЮПАК (IUPAC - Международного союза теоретической и прикладной химии). Все соединения в этих таблицах могут быть синтезированы в соответствии со схемами синтеза, приведенными ниже, и будут демонстрировать соответствующую биологическую активность в одном или большем числе биологических анализов, описанных в настоящем тексте. Варианты реализации разделены на три группы: предпочтительные, более предпочтительные и наиболее предпочтительные.
Предпочтительные соединения
- 19 031317
1-(4-((3-фторбензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3-(1]пиримидин-2-ил)-1Н· индазол-4-карбоксамид,
1-(4-((3-фторбензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3-(1]пиримидин-2-ил)-2метокси-1Н-бензо[с1]имидазол-4-карбоксамид,
1-(4-((3-фторбензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3-(1]пиримидин-2-ил)-2метил-1 Н-инд ол-4-карбоксамид,
1-(4-((3-фторбензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2-с1]пиримидин-2-ил)-1Н· индазол-4-карбоксамид,
1-(4-((3-фторбензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2-с1]пиримидин-2-ил)-2метокси-1Н-бензо[с1]имидазол-4-карбоксамид,
1-(4-((3-фторбензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2-с1]пиримидин-2-ил)-2метил-1 Н-инд ол-4-карбоксамид,
1-(4-((3-фторбензил)амино)-6,7-дигидро-5Н-пирано[2,3-(1]пиримидин-2-ил)-1Ниндазол-4-карбоксамид,
1-(4-((3-фторбензил)амино)-6,7-дигидро-5Н-пирано[2,3-(1]пиримидин-2-ил)-2метокси-1Н-бензо[с1]имидазол-4-карбоксамид,
1-(4-((3-фторбензил)амино)-6,7-дигидро-5Н-пирано[2,3-(1]пиримидин-2-ил)-2метил-1 Н-инд ол-4-карбоксамид,
1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3-(1]пиримидин-2-ил)-1Ниндазол-4-карбоксамид,
1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3-(1]пиримидин-2-ил)-2-метокси1 Н-бензо[(1] имид азол-4-карбоксамид,
1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3-(1]пиримидин-2-ил)-2-метил1 Н-инд ол-4-карбоксамид,
1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2-(1]пиримидин-2-ил)-1Ниндазол-4-карбоксамид,
1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2-(1]пиримидин-2-ил)-2-метокси1 Н-бензо[(1] имид азол-4-карбоксамид,
- 20 031317
1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2-б]пиримидин-2-ил)-2-метил1Н-инд ол-4-карбоксамид,
1-(4-(бензиламино)-6,7-дигидро-5Н-пирано[2,3-б]пиримидин-2-ил)-1Н-индазол4-карбоксамид,
1-(4-(бензиламино)-6,7-дигидро-5Н-пирано[2,3-б]пиримидин-2-ил)-2-метокси1 Н-бензо[б] имид азол-4-карбоксамид,
1-(4-(бензиламино)-6,7-дигидро-5Н-пирано[2,3-б]пиримидин-2-ил)-2-метил-1Ниндол-4-карбоксамид,
-(4-((3 -фторбенз ил)амино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[3,2-d] пиримид ин-2-ил)-1Ниндазол-4-карбоксамид,
1-(4-((3-фторбензил)амино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[3,2-б]пиримидин-2-ил)-2метокси-1Н-бензо[б]имидазол-4-карбоксамид,
1-(4-((3-фторбензил)амино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[3,2-б]пиримидин-2-ил)-2метил-1 Н-инд ол-4-карбоксамид,
1-(4-(бензиламино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[3,2-б]пиримидин-2-ил)-1Н-индазол4-карбоксамид,
1-(4-(бензиламино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[3,2-б]пиримидин-2-ил)-2-метокси1 Н-бензо[б] имид азол-4-карбоксамид,
-(4-(бензиламино)-7,8-д игидро-6Н-пирано[3,2-d] пиримидин-2-ил)-2-метил-1Ниндол-4-карбоксамид,
-(4-((3 -фторбензил)амино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[3,2-d] пиримид ин-2-ил)-2метил-1 Н-инд ол-7-карбоксамид.
Более предпочтительные соединения
1-(4-((3-фторбенз ил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропир идо[2,Зч1]пиримидин-2· ил)-2-метил-1 Н-инд ол-4-карбоксамид,
1-(4-((бензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропир идо[2,3-б]пиримидин-2-ил)-2метил-1 Н-инд ол-4-карбоксамид,
1-(4-((3-фторбенз ил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропир идо[2,3-б]пиримидин-2· ил)-2 - метокс и- 1Н - индол-4-карбоксамид,
1-(4-((бензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропир идо[2,3-б]пиримидин-2-ил)-2метокси-1 Н-инд ол-4-карбоксамид,
-(4-((3-фторбенз ил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропир идо[3,2-б]пиримидин-2 ил)-2-метил-1 Н-инд ол-4-карбоксамид,
1-(4-((бензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропир идо[3,2-б]пиримидин-2-ил)-2-метил- 21 031317
1Н-инд ол-4-карбоксамид,
1-(4-((3-фторбенз ил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропир идо[3,2-0]пиримидин-2-ил)-2метокси-1Н-индол-4-карбоксамид,
1-(4-((бензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропир идо[3,2-б]пиримидин-2-ил)-2метокси-1Н-индол-4-карбоксамид,
1-(4-(бензиламино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[3,2-с1]пиримидин-2-ил)-2-метил-1Ниндол-4-карбоксамид,
1-(4-(бензиламино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[3,2-с1]пиримидин-2-ил)-2-метокси1 Н-инд ол-4-карбоксамид,
1-(4-(3-фторбензиламино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[3,2-с1]пиримидин-2-ил)-2ivic ι ил- 111-ипд ил-ч-кауиим/амид,
1-(4-(3-фторбензиламино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[3,2-б]пиримидин-2-ил)-2метокси- 1Н-индол-4-карбоксамид,
1-(4-(бензиламино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[2,3-с1]пиримидин-2-ил)-2-метил-1Ниндол-4-карбоксамид,
1-(4-(бензиламино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[2,3-с1]пиримидин-2-ил)-2-метокси1 Н-инд ол-4-карбоксамид,
1-(4-(3-фторбензиламино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[2,3-б]пиримидин-2-ил)-2метил-1Н-индол-4-карбоксамид или
1-(4-(3-фторбензиламино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[2,3-с1]пиримидин-2-ил)-2метокси-1Н-индол-4-карбоксамид.
Наиболее предпочтительные соединения
1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3-0]пиримидин-2-ил)-2-метил1Н-индол-4-карбоксамид или 1-(4-(бензиламино)-7,8-дигидро-6Н-пирано[2,3 d] пиримидин-2-ил)2-метил-1 Н-индол-4-карбоксамид и
1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3-0]пиримидин-2-ил)-2-метил1Н-индол-4-карбоксамид.
Способы синтеза
В следующем разделе получение примеров соединений согласно настоящему изобретению описано более подробно. Представленные ниже примеры приведены в иллюстративных целях и никоим образом не предполагают ограничения изобретения. Для специалиста в данной области будет очевидно множество некритичных параметров, которые можно изменить и получить при этом, по существу, те же результаты.
Для специалистов в данной области будут очевидны многочисленные эквиваленты способов синтеза и применения соединений, описанных в настоящем документе, или они смогут выявить такие эквиваленты, не выходя за рамки рутинных экспериментов. Несмотря на то, что в данном тексте приведены и описаны несколько примеров реализации, следует понимать, что соединения согласно настоящему изобретению могут быть получены с использованием способов, широко доступных для средних специалистов в данной области. Все цитируемые выше источники и публикации включены в настоящий документ посредством ссылки.
Получение путем синтеза.
Новые соединения согласно настоящему изобретению могут быть получены различными способами, известными специалисту в области органического синтеза. Соединения согласно настоящему изобретению могут быть синтезированы с использованием способов, описанных ниже, в комбинации со способами синтеза, известными в области синтетической органической химии, или их вариантов, которые будут понятны специалисту в данной области.
Получение соединений согласно настоящему изобретению может включать защиту и удаление за
- 22 031317 щиты с различных химических групп. Специалист в данной области легко определит необходимость в защите и ее удалении, а также сможет выбрать подходящие защитные группы. Химия защитных групп описана, например, в книге Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 44-e изд., Wiley & Sons, 2006, а также в книге Jerry March, Advanced Organic Chemistry, 4-е изд., изд. John Wiley & Sons, Нью-Йорк, 1992 г., которые полностью включены в настоящий документ посредством ссылки.
Остовы конденсированных пиримидинов могут быть получены известными из литературы способами, цитируемыми в настоящем документе. Приведенные ниже схемы отражают стандартные, известные способы синтеза этих остовов.
Группа Het и заместители-амины остовов конденсированных пиримидинов могут быть синтезированы и присоединены к этим остовам известными из литературы способами, цитируемыми в настоящем документе. Приведенные ниже схемы отражают известные методики осуществления такого присоедине ния.
Общие схемы синтеза конденсированных пиримидинов.
Соединения согласно настоящему изобретению можно синтезировать с использованием следующих способов. Приведены общие условия реакций, продукты реакций могут быть очищены известными способами, включая кристаллизацию, хроматографию на силикагеле с использованием различных органических растворителей, таких как гексан, циклогексан, этилацетат, метанол и т.п., препаративная жидкостная хроматография высокого давления или препаративная жидкостная хроматография высокого давления с обращенными фазами.
Схема 01
Общие пути синтеза для получения 2-хлорзамещенных конденсированных циклоалкилпиримидинов (Y представляет собой sp3-атом углерода)
.--{У мочевина, HCl, EtOH XXo?r н7евание m собр. холод. ОН 0H POCI3 CI АГС+NH^ QJT
нагревание с обр. холод. * m Т MeCN HN^ Ar
ГП=1,2,3 выход -60% . _ выход -60% АЗ выход -80%
A1 A2 A
Можно осуществить реакцию циклического сложного кетоэфира общей структуры A1 с мочевиной в присутствии такой кислоты, как HCl. в присутствии такого растворителя, как этанол, при температуре рефлюкса в течение 2-24 ч, что даст пиримидиндион A2. Пиримидиндион A2 можно использовать в реакции с избытком POCl3 при нагревании с обратным холодильником в течение 3-12 ч в присутствии (необязательно) третичного амина, такого как триэтиламин, в результате чего получают конденсированный дихлорпиримидин общей структуры A3. Вместо POCl3 можно использовать другие хлорирующие агенты, такие как тионилхлорид или PCl5. A3 можно использовать в реакции с избыточными количествами различных замещенных аминов при температурах в диапазоне от комнатной температуры до температуры дефлегмации в таком растворителе, как ацетонитрил или диметилформамид, для получения 4-амино-
2-хлорконденсированных пиримидинов общей структуры A.
Схема 02
Общие пути синтеза для получения 2-хлорзамещенных конденсированных дигидрофуропиримидинов или тетрагидропиранопиримидинов (Y представляет собой кислород)
ВА1
н) этилацетат ДМСО, К.Т.
О
ВАЗ
ВА4
ArCH2NH2,
----►
MeCN выход -70%
Аналогичным образом могут быть получены 2-C1-5,7-дигидрофуро[3,4-d]пиримидин-4-амины BA для соответствующих сложных кетоэфиров BA2, причем последние могут быть получены в результате обработки 2-гидроксиацетата этилакрилатом в присутствии сильного основания, такого как гидрид натрия.
- 23 031317
2-(2,4,6-Трихлорпиримидин-5-ил)этанол BB1 может быть преобразован в дихлорид BB2 путем внутримолекулярной циклизации в присутствии сильного основания, такого как гидрид натрия, при комнатной температуре. Аналогичным образом последний можно использовать в реакции с аминами для получения 2-хлор-5,6-дигидрофуро[2,3-б]пиримидин-4-аминов BB.
Тетрагидропиран-4-он BC1 может вступать в реакцию с диметилкарбонатом в присутствии гидрида натрия, в результате чего образуется 4-оксотетрагидро-2И-пиран-3-карбоксилат BC2; последний можно преобразовать в соответствующий диол BC4, используя двухэтапную процедуру, через промежуточное соединение 4-уреидо-5,6-дигидро-2И-пиран-3-карбоксилат BC3. Аналогичным образом диол может быть преобразован в 2-хлор-7,8-дигидро-5И-пирано[4,3-б]пиримидин-4-амины BC.
- 24 031317
Дигидрофуран-2(3И)-он BD1 может быть преобразован в 4-гидроксибутаноат BD3 путем гидролиза с использованием сильного основания, такого как гидроксид калия с последующей обработкой алкилбромидом. Его можно использовать в реакции с 2-пропионилдиазенкарбальдегидом в присутствии Rh2(OAc)4 для получения 4-(2-этокси-2-оксоэтокси)бутаноата BD4, а последний можно преобразовать в
3-оксотетрагидро-2H-пиран-4-карбоксилат BD5 путем обработки трет-бутоксидом калия. Затем подход, аналогичный использованному в получении BC, можно использовать для превращения сложного кетоэфира в 2-хлор-6,8-дигидро-5H-пирано[3,4-d]пиримидин-4-амины BD.
-78°C ~ 0°C., в темен, ночи
BE1
MeSCN, Tf2O, ДХМ выход 15-20%
ВЕ2
ВЕЗ
10% NaOH
100°С, 2 ч выход ~80%
ВЕ4
MeCN
ArCH2NH2, выход
ВЕ5
Тетрагидро-21 l-пиран-2-он BE1 можно преобразовать в 2,4-бис(метилтио)пиримидин BE2 путем осуществления одноэтапной реакции с тиоцианатометаном в присутствии ТФУК, хотя выход этой реакции сравнительно низок. Последнее соединение затем окисляют под действием метахлорпербензойной кислоты (m-CPBA) до дисульфона BE3. Сульфон можно гидролизовать до диола BE4 с использованием водного раствора гидроксида натрия. Аналогичным образом его можно затем преобразовать в 2-хлор-6,7дигидро-5H-пирано[2,3-d]пиримидин-4-амины BE.
Схема 03
Общие пути синтеза для получения 2-хлорзамещенных конденсированных дигидропирролопиримидинов или тетрагидропиридопиримидинов (Y представляет собой азот)
TEA, MeCN выход ~80%
СА1
Доступный для приобретения Boc-защищенный 2,4-дихлор-5И-пирроло[3,4^]пиримидин CA1 может быть преобразован в соответствующие CA с использованием аналогичного подхода.
2-хлор-6,7-дигидро-5H-пирроло[3,4-d]пиримидин-4-амины
2-(2,4,6-Трихлорпиримидин-5-ил)ацетальдегид CB1 может вступать в реакцию с аминами, такими как метиламин, по механизму восстановительного аминирования в присутствии NaBH3CN, в результате чего образуется 2,4-дихлорид CB2, согласно международной заявке PCT № 2011152485 последнее со
- 25 031317 единение можно легко преобразовать в 2-хлор-6,7-дигидро-5Н-пирроло[2,3-0]пиримидин-4-амины CB с использованием описанного выше подхода.
Мочевина, MeONa
COOEt
СС1 выход ~40%
МеОН, нагр. с обр. холодильником
СС2 °н РОС1з нагревание с обрати, холодильником выход ~30%
ССЗ выход ~55%
2-дихлорэтан, нагревание с обрати, холодильником выход
I
ArCH2NH2,MeCN
I преобразовать в соответстСС5
Замещенный бензилом 4-оксопиперидин-3-карбоксилат CC1 можно вующий диол CC2 путем обработки мочевиной в основной среде, такой как метоксид натрия. Затем его переносят на дихлорид CC3, а потом преобразуют защитную группу из бензильной в Boc, поскольку есть основания ожидать трудностей с селективным удалением бензильной группы из пиримидина, содержащего ароматическую метиламиногруппу в положении 4. Аналогично, Boc-замещенный дихлорид CC5 может вступать в реакцию с аминами, в результате чего образуются Boc-замещенные 2-хлор-5,6,7,8тетрагидропиридо[4,3-й]пиримидин-4-амины CC.
CD1
Мочевина, NaOMe
МеОН, нагр. с обр. холодильником,48 ч
выход ~50%
CD2 выход ~60%
ДХМ, К.Т., 3 ч
CI
CD3
CD4
1) ДХЭ, 0°С до дефлегмации, 36 ч
2) МеОН, 70°С, 1 ч выход ~35% после двух этапов
ArCH2NH2
TEA, MeCN выход ~70%
I
CD5
Аналогично, Boc-защищенные 2-хлор-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-й]пиримидин-4-амины CD могут быть получены из 1-бензил-3-оксопиперидин-4-карбоксилата CD1.
- 26 031317
ACN = 3,5-дибром-4-гидроксибензонитрил.
Региоизомеры CE, 2-хлор-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3Щпиримидин-4-амины, могут быть получены с использованием пары различных подходов. Можно осуществить реакцию 2-аминоникотиновой кислоты CE1 с мочевиной с последующим гидролизом, что даст пиридо[2,3Щпиримидин-2,4-диол CE2, который легко можно превратить в дихлорид CE3. CE3 можно селективно восстановить до 2,4-дихлор-
5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3Щпиримидина CE4 в атмосфере водорода с давлением в одну атмосферу в присутствии PtO2, хотя выход этой процедуры обычно довольно низок. Последующее введение защитной группы Boc на аминогруппе и замена 4-хлорида аминами дают CE. В альтернативном варианте обработка CE3 аминами с последующем восстановлением водородом при высоком давлении могу обеспечить более высокий выход.
холод., 1 ч выход ~70%
CF1
ЕЮН, к.т. ,12 ч выход ~50%
CF4
Аг
CF5 (HCHO)m, NaBH3CN, ТГФ ----------------------------------------------------------------------------ί
АсОН (кат.), к.т. ~50°С, 2 дня выход 30~40
CF
Аналогичный подход можно использовать для получения другого ряда региоизомеров, 2-хлор-
5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2Щпиримидин-4-аминов CF. Исходным материалом является 3-аминопиколиновая кислота CF1. Поскольку в положении 4 находится заместитель-пиримидин, введение защитных групп, таких как Boc для защиты аминогруппы, с разумным выходом может быть затруднительно, но зато легко могут быть введены небольшие алкильные группы, такие как метил.
- 27 031317
1). мочевина, NaOMe, МеОН, нагр. с обр. хол., 48 ч
CG1 дефлегм.
в течение ночи выход -45%
NaH, толуол
CG3
-60%, в 2 этапа
90°С, в течение ночи
2). POCIS 120°С, 4 ч
ТГФ
CI
CG5
О CI
1) . С|АО^
ДХЭ, 0°С - дефлегм.
2) . МеОН, к.т., 12 ч
3) . DMAP, ACN, K.T., 5 Ч
4) . ArCH2NH2,TEA, ТГФ, к.т., 0,5 ч
Вос/
CG
5,6,7,8-Тетрагидропиридопиримидин-4-амины с алкильной группой на атоме углерода насыщенного кольца также может быть получены с применением описанных выше подходов, при условии, что может быть получен соответствующий кетоэфир. Например, 1-бензил-5-метил-4-оксопиперидин-3- карбоксилат может быть получен с использованием трехэтапной процедуры из метилметакрилата CG1.
3-(Бензиламино)-2-метилпропаноат может быть получен путем присоединения по Михаэлю между метакрилатом CG1 и бензиламином, аналогичным образом, еще одно присоединение по Михаэлю с актилатом может дать 3-(бензил-(3-метокси-3-оксопропил)амино)-2-метилпропаноат CG3. Внутримолекулярная циклизация CG3 в присутствии гидрида натрия при нагревании с обратным холодильником может давать 1-бензил-5-метил-4-оксопиперидин-3-карбоксилат CG4. Затем, используя путь, аналогичный описанному выше, можно получить 2-хлор-8-метил-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-й]пиримидин-4-амины CG. Аналогичную стратегию можно использовать для получения тетрагидропиридопиримидин-4-аминов, содержащих алкильную группу в качестве заместителя в других положениях, или хиральных производных в случае использования хиральных акрилатов в качестве исходного материала.
2,4-Дибром-6,7,8,9-тетрагидро-5H-пиримидо[4,5-d]азепин CH1 можно использовать в реакции с амином для селективного получения промежуточного соединения CH2, в которое можно ввести защитную группу Boc путем осуществления реакции с гидридом Boc, в результате чего будет получено соединение CH.
- 28 031317
Схема 04
Pd катализатор Лиганд основание
Общие пути синтеза для получения 2-(1Н-бензо[0]имдазол-1-ил)замещенных насыщенных конденсированных пиримидинов (DA)
С(ОМе)4, НОАс
DA3 или NRR’
Y=CH2, О, NR или защищенный N
DA0
Общим синтетическим подходом для присоединения бензо[0]имидазола DA1 через его положение 1 в положении 2 конденсированного пиримидина, в результате чего получаются целевые молекулы DA, является реакция сочетания на основе Pd. Обычные условия включают Pd(dba)2 в качестве катализатора на основе переходного металла, X-phos в качестве лиганда, карбонат цезия в качестве основания и диоксан в качестве органического растворителя. Температура реакции варьирует от комнатной до температуры дефлегмации. Например, если Y представляет собой Boc-защищенный азот, может быть осуществлен дополнительный этап удаления группы deBoc. Например, если R1 представляет собой нитрил (CN), его можно преобразовать в амид в присутствии пероксигидрата мочевины (UHP). В альтернативном варианте в некоторых случаях, когда R4 представляет собой алкокси- или аминогруппы, может быть проведена реакция сочетания между 2-хлорпиримидином DA0 и бензол-1,2-диаминами DA2 с использованием Pd(OAc)2 в качестве катализатора и CsCO3 В качестве основания, после чего может быть осуществлена циклизация с бромцианидо или тетраметоксиметаном.
Схема 05
Общие пути синтеза для получения 2-(Ш-индол-1-ил или Ш-индазол-1-ил)замещенных насыщенных конденсированных пиримидинов (DB)
R1
В=СЦ4или N
к.т.~100°С
Pd катализатор
Лиганд основание
DB
У=СН2, О, NR или защищенный N
DB1
ОАО
Сочетание раствора замещенного пиримидина DA0 с индолом или индазолом DB1 может быть эффективно для получения целевых молекул DB с использованием методов, аналогичных тем, которые описаны Zhou, H.-J. с соавт. В публикации WO 2014015291 раствору замещенного пиримидина, такого как соединение DA0, добавляют индолзамещенное соединение, такое как DB1, и основание, такое как карбонат натрия или карбонат цезия, в присутствии палладиевого катализатора, такого как Pd(OAc)2, и лиганда, такого как трифенилфосфин, в растворителе, таком как диоксан, и необязательно нагревают реакционную смесь до температуры дефлегмации в течение времени, продолжительностью до 48 ч.
- 29 031317
Схема 06
Общие пути синтеза для получения 2-(1H-бензо[d][1,2,3]триазол-1-ил)замещенных насыщенных конденсированных пиримидинов (DC)
Pd катализатор Лиганд основание
защищенный N
DAO
Соединения, имеющие структуру ил-1,2,3-бензотриазолов DC, могут быть получены с использованием способов, аналогичных способам, описанным у Zhou, H.-J. с соавт., WO 2014015291 и Ohlmeyer, Michael J. с соавт, WO 2008060301, а также описанным выше, с использованием замещенного 1,2,3бензотриазола DC1.
Схема 07
Общие пути синтеза для получения 2-(Ш-индол-3-ил-, бензофуран-3-ил- или бензо [Ь]тиофен-3-ил) замещенных насыщенных конденсированных пиримидинов (DD)
DD1
DD2
DD3
Pd катализатор Лиганд основание
DAO
В различных средах, таких как NBS в ДМФА, бромирование 3-незамещенных промежуточных соединений DD1 (X=O, S, замещенный или защищенный соответствующим образом азот) будет протекать региоселективным образом по положению 3, что даст 3-Бг-замещенные промежуточные соединения DD2. Затем их можно преобразовать в сложные бороновые эфиры DD4 путем обработки бороновым эфиром DD3 в различных условиях. Затем основанная на Pd реакция сочетания, аналогичная описанным Zhou, H.-J. соавт. в публикации WO 2014015291, между промежуточными соединениями DD4 и DA0 давала целевые молекулы. Например, если Y или A представляет собой защищенный азот, может быть осуществлен дополнительный этап удаления защитной группы с использованием описанных условий.
- 30 031317
Схема 08 Общие пути синтеза для получения 2-(бензо[0]изоксазол-3-ил-бензо [d] изотиазол-3-ил, 1Н-индазол-3-ил)замещенных насыщенных конденсированных пиримидинов (DE)
Ключевое промежуточное соединение DE1, трибутил-2-пириммидинилолово, может быть получено из промежуточных соединений DA0 в соответствии с процедурой, аналогичной процедуре, описанной в источнике Castanedo, Georgette с соавт., международная публикация PCT 2010138589. Может осуществляться селективное бромирование по положению 3 этих 5,6-бициклоароматических колец. Затем основанная на Pd реакция сочетания, аналогичная описанным Zhou, H.-J. с соавт. в WO 2014015291, между промежуточными соединениями DE1 и DE2 дает целевые молекулы DE. Например, если Y или A представляет собой защищенный азот, может быть осуществлен дополнительный этап удаления защитной группы с использованием описанных условий.
Схема 09
Общие пути синтеза для получения 2-(имидазо[1,5-а]пиридин-1-ил)замещенных
Может осуществляться селективное бромирование по положению 3 имидазоЦ^^]пиридина DF1. Затем основанная на Pd реакция сочетания, аналогичная описанным выше, между промежуточными соединениями DE1 и DF2 давала целевые молекулы DF. Например, если Y представляет собой защищен- 31 031317 ный азот, может быть осуществлен дополнительный этап удаления защитной группы с использованием описанных условий.
В альтернативном варианте бромиды DF2 можно преобразовать в сложные бороновые эфиры DF3 путем обработки бороновым эфиром DD3 в различных условиях. Затем основанная на Pd реакция сочетания, аналогичная описанным выше, между промежуточными соединениями DF3 и DA0 давала целевые молекулы. Например, если Y или A представляет собой защищенный азот, может быть осуществлен дополнительный этап удаления защитной группы с использованием описанных условий.
Схема10
Общие пути синтеза для получения 2-(имидазо[1,5-a]пиридин-1-ил)замещенных насыщенных конденсированных пиримидинов (DG)
Способ А:
DG1
NBS
ДМФА
ArCH2NH2 TEA, MeCN
Выход 40-70%
DG3
DG4
2, О, NR и.
защищенный N
DG5
DG6
DG7
Имидазо[1,5-a]пиридин-3(2H)-он, DG1, можно преобразовать в его трифлат DG2. Затем основанная на Pd реакция сочетания, аналогичная описанным выше, между промежуточными соединениями DE1 и DG2 давала целевые молекулы DG. Например, если Y представляет собой защищенный азот, может быть осуществлен дополнительный этап удаления защитной группы с использованием описанных условий.
В альтернативном варианте сложные эфиры замещенного имидазо[1,5-a]пиридин-3-карбоксилата DG3 могут быть получены различными способами, включая способы, схемы которых приведены в Chen, Shaoqing с соавт, WO 2013030138, Bilodeau, Mark T. с соавт., WO 2008085302. Сложный эфир имидазо[1,5-a]пиридин-3-карбоксилата DG3 может быть преобразован в соответствующий амидин DG4 с использованием аминохлорметилалюминия в органическом растворителе, таком как толуол, при температуре от комнатной до 100°C, как описано у Brockunier L. С соавт. в WO 2010065275 и Gargiapati R.S., Tetrahedron Letters 1990, 31, 1969. Полученный имидазо[1,5щ]пиридин-3-карбоксамидин DG4 можно использовать в реакции с указанными выше сложными кетоэфирами DG5 в присутствии каталитического количества описания, такого как этоксид натрия в этаноле, при нагревании с обратным холодильником, в результате чего будет получен пиримидин-4-ол DG6. Последнее соединение может быть преобразовано в целевые молекулы DG с использованием описанных выше способов.
- 32 031317
Схема 11
Общие пути синтеза для получения 2-(имидазо[1,2-a]пиридин-3-ил)- или 2-([1,2,4]триазоло[4,3-&] пиридин-3-ил)замещенных насыщенных конденсированных пиримидинов (DH)
Имндазо[1,2-&] пиридин DH3 может быть получен путем обработки 2-аминопиридина DH1 альдегидами или кетонами DH2 способом, аналогичным способам, описанным в таких источниках, как Ebetino, Frank Hallock с соавт., в международной заявке на патент 2010033978. Йодирование Nйодосукцинимидом может обеспечить получение 3-I-нмндазо[1,2-a]пнрнднн DH4 способом, аналогичным способам, описанным в таких ссылках, как Bifulco, Neil, Jr. с соавт., международная заявка на патент 2014011900. [1,2,4]Трназоло[4,3-a]пнрнднн-8-карбоннтрнл DH7 может быть получен с использованием замещенного пиридина DH5 в процедуре, состоящей из двух этапов, реакции с гидразином с последующей обработкой триэтоксиметаном способом, аналогичным способам, описанным в таких источниках, как Allen, Shelley с соавт., международная заявка на патент № 2010022076; Potts, K.T. and Burton, H.R., Journal of Organic Chemistry, 31(1), 251-60; 1966. Последующее бромирование с использованием NBS может обеспечить получение промежуточного соединения DH8. DH4 или DH8 можно преобразовать в сложные бороновые эфиры DH9 после обработки бороновым эфиром DD3 в различных условиях. Затем основанная на Pd реакция сочетания, аналогичная описанным выше, между промежуточными соединениями DH9 и DA0 давала целевые молекулы DH. В альтернативном варианте основанная на Pd реакция сочетания, аналогичная реакциям, описанным выше, между промежуточными соединениями DE1 или DH4 или DH8 давала целевые молекулы DH. Например, если Y представляет собой защищенный азот, может быть осуществлен дополнительный этап удаления защитной группы с использованием
- 33 031317 описанных условий.
Схема 12
Способ
Способ
Общие пути синтеза для получения 2-(пиразоло[1,5-а]пиридин-3-ил)- или 2-([1,2,3]триазоло[1,5-а] пиридин-3-ил)замещенных насыщенных конденсированных пиримидинов (DI)
DI
Для получения замещенных 3-пиримидин-2-илпиразоло[1,5-a]пиридинов DI1 (Z=CR4) можно использовать различные способы, описанные Tsuchiya с соавт., в Chemical & Pharmaceutical Bulletin 1983, 31, 4568; Hajos, G. and Riedl, Z. Science of Synthesis, 2002, 12, 613 и Aboul-Fadl, T. с соавт., Synthesis, 2000, 12, 1727-1732. Для получения замещенного [1,2,3]триазоло[1,5щ]пиридина DI1 (Z=N) можно использовать различные способы, описанные в Latham, Elliot J. and Stanforth, Stephen P. Journal of Heterocyclic Chemistry, 32(3), 787-9; 199; Sheng с соавт., Organic Letters, 14(14), 3744-3747; 2012 и Prakash, Om с соавт., Synthetic Communications, 30(3), 417-425; 2000. Иодирование под действием NIS (Nйодосукцинимида) обеспечивает получение 3-йодопиразоло[1,5щ]пиридина DI2 в способе, аналогичном описанному в таких источниках, как Bifulco, Neil, Jr. с соавт., международная заявка на патент № 2014011900; Wan, Huixin с соавт., международная заявка на патент № 2013170774, 21 ноября 2013 г. Затем DI2 можно преобразовать в сложные бороновые эфиры DI3 путем обработки сложным бороновым эфиром DD3 в различных условиях. Затем реакция сочетания на основе Pd, аналогичная описанным выше реакциям между промежуточными соединениями DI3 и DA0, давала целевые молекулы DI. В альтернативном варианте реакция сочетания на основе Pd, аналогичная описанным выше реакциям между промежуточными соединениями DE1 и DI2, давала также целевые молекулы DI. Например, если Y представляет собой защищенный азот, может быть осуществлен дополнительный этап удаления защиты в описанных условиях.
- 34 031317
Схема 13
Общие пути синтеза для получения 2-(2-метилиндолизин-1-ил)замещенных насыщенных конденсированных пиримидинов (DJ)
1-Броминдолизин DJ2 можно получить из замещенного пиридина с использованием способов, описанных в заявке № 2012043638 (Iizuka, Masato и Shimizu, Kazuo). DJ2 можно далее преобразовать в сложные бороновые эфиры DI3 путем обработки сложным бороновым эфиров DD3 в различных условиях. Затем реакция сочетания на основе Pd, аналогичная описанным выше реакциям между промежуточными соединениями DJ3 и DA0, давала целевые молекулы DJ. В альтернативном варианте реакция сочетания на основе Pd, аналогичная описанным выше реакциям между промежуточными соединениями DE1 и DJ2, давала также целевые молекулы DI. Например, если Y представляет собой защищенный азот, дополнительный этап удаления защиты может быть осуществлен в описанных условиях.
Схема 14
Общие пути синтеза для получения 2-(индолизин-3-ил)замещенных насыщенных конденсированных пиримидинов (DK)
R4
Y=CH2, О, NR или Z=CR4, N защищенный N
DAO
Осуществление реакции сочетания на основа Pd между DJ1 и DA0 с использованием подходов, аналогичных подходам, описанным выше, давала целевые молекулы DK. Например, если Y представляет собой защищенный азот, может быть осуществлен дополнительный этап удаления защитной группы с использованием описанных условий.
- 35 031317 дмсо,
Схема 15
Общие пути синтеза для получения 2-(2H-изоиндол-1-ил)замещенных насыщенных конденсированных пиримидинов (DL)
DAO
Pd катализатор Лиганд основание
Сложный бороновый эфир 2H-изоиндол DL3 может быть получен из 1,2-диметилбензола DL1 в соответствии с процедурой, описанной в источнике (Ohmura, Toshimichi с соавт., Journal of the American Chemical Society, 131(17), 6070-6071; 2009). Затем основанная на Pd реакция сочетания, аналогичная описанным выше, между промежуточными соединениями DL3 и DA0 давала целевые молекулы DL. Например, если Y представляет собой защищенный азот, может быть осуществлен дополнительный этап удаления защитной группы с использованием описанных условий.
Схема 16
Общие пути синтеза для получения 2-(бензо[c]тиофен-1-ил)замещенных насыщенных конденсированных пиримидинов (DM)
Ключевые промежуточные соединения DM3, бензо^тиофен-1-илтриметилстаннаны могут быть получены из промежуточных соединений DL2 в соответствии с процедурой, описанной в источнике Kawabata, Kohsuke and Goto, Hiromasa, Journal of Materials Chemistry, 22(44), 23514-23524; 2012). Затем основанная на Pd реакция сочетания, аналогичная описанным выше, между промежуточными соединениями DM3 и DA0 давала целевые молекулы DM. Например, если Y представляет собой защищенный азот, может быть осуществлен дополнительный этап удаления защитной группы с использованием описанных условий.
- 36 031317
Схема 17
Общие пути синтеза для получения 2-(изобензофуран-1-ил)замещенных насыщенных конденсированных пиримидинов (DN)
Ключевые промежуточные соединения DN3, трибутил(изобензофуран-1-ил)станнаны, могут быть получены из промежуточных соединений DN2, которые могут быть получены из лактона DN1. Затем основанная на Pd реакция сочетания, аналогичная описанным выше, между промежуточными соединениями DN3 и DA0 давала целевые молекулы DN. Например, если Y представляет собой защищенный азот, может быть осуществлен дополнительный этап удаления защитной группы с использованием описанных условий.
Схема 18
Общие пути синтеза для получения 2-(бензо[c]изоксазол-3-ил) или 2-(бензо[c]изотиазол-3-ил) замещенных насыщенных конденсированных пиримидинов DO
DO1 002 DO3
D04
D05 __А
К'
BrCI2CCCI2Br
-------------------Э n-BuLi, ТГФ
DO6 г^1
DO7
Замещенные 3-метоксибензо^изоксазолы DO2 могут быть получены из 2-аминобензоатов DO1 в соответствии с процедурами, аналогичными описанным в таких источниках, как Chauhan, Mohinder S. and McKinnon, David M., Canadian Journal of Chemistry, 53(9), 1336-42; Smalley, R.K., Science of Synthesis, 11, 337-382; 2002. Последующее деметилирование и превращение гидроксила в трифлатную группу может обеспечить получение промежуточного соединения DO3. Замещенный бензо^изотиазол DO6 может быть получен из замещенного о-толуидина DO4 в соответствии с процедурами, аналогичными описанным в таких источниках, как Puetz, Claudia с соавт., заявка на европейский патент 1352910. Последующее бромирование бромо-З-нитростиролом BNS может обеспечить селективное введение Br в положении DO7. Затем основанная на Pd реакция сочетания, аналогичная описанным выше, между промежуточны
- 37 031317 ми соединениями DO3 или DO7 и DA0 давала целевые молекулы DO. Например, если Y представляет собой защищенный азот, может быть осуществлен дополнительный этап удаления защитной группы с использованием описанных условий.
Схема 19
Превращение нитрилов в амиды DP2
DP1
DP2
В некоторых случаях соединения DP1, получаемые в схемах 5-18 выше, могут содержать заместитель-нитрил в положении, показанном на схеме 19. Этот заместитель может быть преобразован в соответствующий карбоксамид. Нитрилы DP1 растворяют в смеси 1/10 вода/ДМСО и обрабатывают гидроксипероксидом мочевины (UHP) и основанием, таким как карбонат калия. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение периода времени до 18 ч. А затем вливают в смесь льда и воды и перемешивают в течение 2 ч. Полученное твердое вещество фильтруют, сушат и при необходимости очищают колоночной хроматографией, в результате чего получают целевые амиды DP2.
Схема 20
Превращение нитрилов в аминометиламины DP3
DP1 DP3
В некоторых случаях соединения DP1, получаемые в схемах 1-18 выше, могут содержать заместитель-нитрил в положении, показанном в схеме 20. Этот заместитель может быть преобразован в соответствующие метиламины DP3. Раствор нитрила DP1 в таком апротонном растворителе, как ТГФ, обрабатывают алюмогидратом лития LAH и перемешивают полученную смесь в течение периода времени продолжительностью до 18 ч. Реакционную смесь обрабатывают 15% водным раствором NaOH, перемешивают реакционную смесь в течение 1 ч, а затем фильтруют. ТГФ удаляют при пониженном давлении, в результате чего получают продукт DP3, который можно затем очистить колоночной хроматографией.
Схема 21
Превращение сложных эфиров в кислоты DP4 или амиды DP5
В некоторых случаях соединения DP1, получаемые в схемах 5-18 выше, могут содержать карбоксилатный эфир в положении, показанном в схеме 21. Эта функциональная группа может быть легко преобразована в соответствующие кислоты DP4 или замещенные амиды DP5 с использованием стандартной методики.
- 38 031317
Схема 22
Превращение альдегидов DP6 в амины DP7 или метиловые спирты или эфиры DP8
В некоторых случаях соединения DP1, получаемые в схемах 5-18 выше, могут содержать нитрил в положении, показанном на схеме 22. Эта функциональная группа может быть легко преобразована в соответствующие амины DP7 или спирты или эфиры DP8 с использованием стандартной методики через промежуточные альдегиды DP6.
Схема 23
Превращение альдегидов DP9 в метиловые спирты или эфиры DP10 или амины DP11
В некоторых случаях соединения DP9, получаемые в схемах 5-18 выше, могут содержать альдегид в положении, показанном на схеме 23. Эта функциональная группа может быть легко преобразована в соответствующие спирты или эфиры DP10 или амины DP11 с использованием стандартной методики.
Биологические тесты
Различные формы биологической активности конденсированных пиримидинов согласно настоящему изобретению могут быть определены путем их исследования in vitro и клеточных анализах с использованием хорошо известных протоколов идентификации и отбора соединений, которые будут демонстрировать противораковую активность. Настоящее изобретение относится к конденсированным пиримидинам для уменьшения активности протеасомного комплекса p97. Как описано в источниках уровня техники, функция комплекса p97 необходима для поддержания жизнеспособности клеток. Ингибирование активности этого комплекса вызовет накопление белка в клетке и последующий апоптоз. Биологические анализы позволяют оценить биологическую активность конденсированных пиримидинов согласно настоящему изобретению.
Первичными биологическими тестами являются in vitro тесты и клеточные тесты, предназначенные для определения ингибиторной активности конденсированных соединений согласно настоящему изобретению против валозинсодержащего белка, т.е. p97. Эти тесты также являются средством первичной
- 39 031317 оценки конденсированных пиримидинов согласно настоящему изобретению.
Способность ингибировать комплекс p97 изучают с использованием in vitro теста на активность p97 с использованием меченого субстрата p97 в соответствии с методом Кристиансона (Christianson), описанного в Nat. Cell. Biol. (2011) 14:93 для клеточного анализа на активность p97. Клеточные анализы используют для исследования противоопухолевых эффектов на раковых клетках в культуре. Этот противоопухолевый анализ основан на культивируемых раковых клетках и в нем используется коммерческий набор для определения титра клеток glo, поставляемый Promega. Дополнительные тесты обеспечивают возможность оценить биодоступность с использованием признанных в данной области моделей, предназначенных для демонстрации способности соединения согласно настоящему изобретению достигать клеток-мишеней in vivo. Хотя все исследованные соединения продемонстрировали некоторую степень противопухолевой активности, эти тесты также позволили идентифицировать конденсированные пиримидины в качестве кандидатов для дальнейшего исследования путем изучения противоопухолевой активности in vivo в моделях на мышах, морских свинках и собаках. Отобранные кандидаты продемонстрировали очень хорошие фармакокинетические свойства в этих анализах in vitro.
Биохимический анализ p97 с АТФазой.
Анализ с АТФазой осуществляют в соответствии с приведенным ниже протоколом: Очищенный фермент (20 нМ p97), субстрат (20 мкМ АТФ) и титры дозы соединений согласно настоящему изобретению смешивают в буфере (50 мМ TRIS, pH 7,5, 20 мМ MgCl2, 0,02% TX-100, 1 мМ DTT, 0,2% (об./об.) глицерина), инкубируют при 37°C в течение 15 мин. Реакцию прекращают и измеряют уровень продукта с использованием анализа для определения АДФ ADP Glo Assay Kit (Promega, Madison WI). Строя график образованного соединения от концентрации и используя четырехпараметрическую модель получают значение IC50 для каждого соединения.
Клеточный анализ p97.
Влияние соединений согласно настоящему изобретению на клетки-мишени отслеживают с использованием клеточной линии HEK-293 TCRo-GFP. как описано у Christianson с соавт., Nat. Cell Biol. (2011) 14:93. Ингибирование обновления репортера TCRa-GFP представляет собой индикатор ингибирования p97. Для мониторинга обновления репортера TCRa-GFP используют следующий протокол: репортерные клетки высевают и инкубируют с ингибитором протеасом MG132, чтобы накопить TCRa-GFP. Затем среду, содержащую MG132, удаляют и с клетками инкубируют титры соединения плюс циклогексимид. По окончании ингибирования удаляют соединение и среду клетки фиксируют и измеряют флуоресценцию белка GFP с использованием стандартных методик эпифлюоресцентной микроскопии. Строя график флуоресценции от концентрации и используя четырехпараметрическую модель получают значение IC50 для каждого соединения.
Анализ изображений используют, чтобы получить на основании этих тестов количественных данных, которые можно аппроксимировать четырехпараметрической сигмоидной кривой для получения значений IC50. Контролируют субстраты убиквитин-протеасомной системы, такие как p53, после инкубации линий клеток с соединениями в течение нескольких часов. Накопление этих белков указывают на подавление протеасомного разрушения. Накопление связей полиубиквитина с остатками лизина-48, которое является индикатором ингибирования убиквитин-протеасомной системы, также контролируют. Как LC3, так и SQSTM1 опосредуют аутофагию. Локализацию и количество этих белков отслеживают по иммунофлуоресценции, и они свидетельствуют об активности и ингибированию аутофагии в ответ на ингибирование p97.
Анализ с культивируемыми раковыми клетками.
В течение нескольких дней после обработки соединением исследуют противоопухолевые эффекты в культивируемых раковых клетках. Титр клеток в анализе glo (Promega) является мерой присутствующей АТФ, что является показателем жизнеспособности клеток. Подсчет клеток осуществляют с использованием микроскопии высокого разрешения с последующим анализом изображений. Используют систему 3D-культивирования в висячей капле (3D Biomatrix), после чего используют титр glo для измерения роста в опухолеподобном окружении.
Анализ всасывания.
Способность соединений согласно настоящему изобретению всасываться из просвета желудочнокишечного тракта после перорального введения оценивали путем измерения их способности проникать через монослои клеток Caco-2. SunD с соавт., Curr. Opin. Drug Discov. Develop [(2004) 75. Проницаемость соединения in vitro (2 мкМ в буфере или буфере HBSS с n=2) определяли с использованием 21-дневного монослоя Caco-2. Коэффициент проницаемости определяли как для прохождения в направлении от апикальной к базолатеральной мембране (A-B) и в направлении от базолатеральной к апркальной мембране (B-A) через 120 мин при 37°C. Эффлюксное соотношение рассчитывали на основании соотношения коэффициента проницаемости в направлении B-A по отношению A-B для определения возможности применения соединения в качестве субстрата для эффлюксной помпы (например, Pgp). Протокол для этого анализа с клетками Caco-2 и соответствующее подробное описание приведены ниже в экспериментальном разделе.
Анализ метаболической стабильности.
- 40 031317
Метаболическую стабильность соединений согласно настоящему изобретению можно оценить путем измерения времени их полужизни в микросомальных препаратах печени. Roserts, Sa, с соавт., Xenobiotica (2001) 37:557. Соединения наносят на препарат микросом печени мыши в присутствии NADPH и определяют их периоды полужизни путем измерения скорости исчезновения соединений из препарата путем определения концентрации через 0, 15, 30 и 60 мин с использованием ЖХМС/МС. Протокол определения метаболической стабильности в анализе с печенью мыши и соответствующее подробное описание приведены ниже в экспериментальном разделе.
Анализ неспецифического связывания.
Известно, что многие соединения связываются неспецифическим образом с белками, которые в больших количествах содержатся в плазме. Фракция несвязанного лекарственного средства (свободная фракция) доступна для взаимодействия с мишенями, находящимися в тканях. Banker, M.J. с соавт., Curr. Drug Metab. (2008) 9:854. Способность соединений согласно настоящему изобретению переходить из камеры, содержащей плазму крови, в камеру, содержащую только буфер, можно оценить путем измерения концентрации, возникающей в камере с буфером и концентрации, которая остается в камере с плазмой. Результаты этих измерений можно использовать для определения фракции соединения, связанного с белками плазмы, и его свободной плазмы (100% связывания с белками плазмы). Протокол для определения неспецифического связывания белков в анализе связывания с белками плазмы и соответствующее подробное описание приведены в экспериментальном разделе ниже.
Результаты первичного анализа отобранных конденсированных пиримидинов согласно настоящему изобретению показывают, что конденсированные пиримидины согласно настоящему изобретению демонстрируют значительную ингибирующую активность (IC50) против ферментативного действия p97 в отношении его природного субстрата. Некоторые из этих соединений также обладали повышенной активностью в клеточных анализах и обладают фармакокинетическими свойствами in vitro, соответствующими хорошей биодоступностью при пероральном введении. Эти результаты приведены ниже в табл. 1.
Таблица 1
Биологические данные для представленных соединений формулы I
Номер Название по ИЮПАК р97IC50 **** < 30 нМ *** < 100 нМ ** <300 нМ * < 1000 нМ А549 CTGIC50 *** < 1 мкМ ** <3 мкМ * < 10 мкМ А549 К48 IC50 *** < 1 мкМ ** <3 мкМ * < 10 мкМ
FF03 1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8тетрагидрохиназо лин-2-ил)1Н-индазол-4-карбоксамид **** *** ***
FF04 1 -(4-(бензиламино) -7,8дигидро-5Н-пирано[3,4-с1] пиримидин-2-ил)-1Нимидазол-4-карбоксамид ** Н.д. Н.д.
FF05 3-(4-(бензиламино)-5,6,7,8тетрагидрохиназо лин-2-ил)-2метил-1 Н-индо л-7 карбоксамид **** ** **
FF06 1 -(4-(бензиламино)-6,7дигидро-5Н-пирано [2,3 -d] пиримидин-2-ил)-2-метил- 1Ниндол-4-карбоксамид **** *** ***
FF07 1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8тетрагидропиридо [2,3 -d] пиримидин-2-ил)-2-метил- 1Ниндол-4-карбоксамид **** *** ***
FF08 1 -(4-(бензиламино)-5,6дигидрофуро|2.3<1| пиримидин-2-ил)-2-метил- 1Ниндол-4-карбоксамид **** ** **
FF09 1-(4-((3-фторбензил) амино)6,7-дигидро-5Н-пирано [2,3 0]пиримидин-2-ил)-2-метил1Н-индол-4-карбоксамид **** *** ***
FF10 3 -(4-(бензиламино) -7,8дигидро-5Н-пирано|4.3<1| **** ** **
- 41 031317
пиримидин-2-ил)-2-метил- 1Hиндо л-7-карбоксамид
FFll 1-(4-((3-фторбензил)амино) 5-метил-5,6,7,8тетрагидропиридо [3,2-d] пиримидин-2-ил)- 1Н-индазол4-карбоксамид *** Н.д. Н.д.
FF12 1 -(4-((3-фторбензил)амино) 5-метил-5,6,7,8тетрагидропиридо [3,2-d] пиримидин-2-ил)-2-метил- 1Ниндол-4-карбоксамид **** *** **
FF13 1 -(4-(бензиламино) -6,8диметил-5,6,7,8тетрагидропиридо [4,3 -d] пиримидин-2-ил)-2-метил- 1Ниндол-4-карбоксамид *** Н.д. Н.д.
FF14 1 -(4-((3-фторбензил)амино) 5,6,7,8-те1рагидрохиназолин2-ил)-1Н-индазол-4карбоксамид *** ** Н.д.
FF15 1 -(4-((3-фторбензил)амино) 6,7-дигидро-5Н-пирано [2,3 0]пиримидин-2-ил)-2метокси-1 Н-бензо [d] имидазол-4-карбоксамид **** ** Н.д.
FF16 1 -(4-((3-фторбензил)амино) 6,7-дигидро-5Н-пирано [2,3 d | пиримидин-2-ил)- 1Ниндазол-4-карбоксамид **** * Н.д.
FF17 1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8тетрагидропиридо [2,3 -d] пиримидин-2-ил)-2(гидроксиметил)- 1Н-индол-4карбоксамид **** *** Н.д.
FF18 1-(4-(бензиламино)-6,7,8,9тетрагидро-5Нциклогепта[0]пиримидин-2ил)-2-метил-1Н-индол-4карбоксамид **** *** **
FF19 1-(4-(бензиламино)-8-метил5,6,7,8-те1рагидропиридо[4,3d] пиримидин-2-ил)-2-метил1Н-индол-4-карбоксамид *** ** ***
FF20 1-(4-(бензиламино)-6,7,8,9тетрагидро-5Н-пиримидо[4,5d |азспин-2-ил)-2-мстил- 1Ниндол-4-карбоксамид ** ** Н.д.
FF21 1 -(4-(бензиламино) -5 -метил5,6,7,8-те1рагидропиридо[3,2d] пиримидин-2-ил)-2-метил1Н-индол-4-карбоксамид **** *** ***
FF22 3-(4-((3-фторбензил)амино) 7,8-дигидро-5Н-пирано[4,3п]пиримидин-2-ил)-2метилбензофуран-7карбоксамид * Н.д. Н.д.
- 42 031317
FF23 1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8тетрагидропиридо [2,3 -d] пиримидин-2-ил)-2-метокси1Н-бензо[0] имидазол-4карбоксамид **** ** **
FF24 1-(4-(бензиламино)-6,7дигидро-5Н-пирано [2,3 -d] пиримидин-2-ил)-2-метокси1Н-бензо [d] имидазол-4карбоксамид **** * * **
FF25 1-(4-((3-фторбензил)амино) 5,6,7,8-те1рагидропиридо[3,2d] пиримидин-2-ил)-2-метил1Н-индол-4-карбоксамид **** * * **
FF26 1-(4-((3-фторбензил)амино) 5,6,7,8-телрагидропиридо[2,3d] пиримидин-2-ил)-2-метил1Н-индол-4-карбоксамид **** ** **
FF27 3-(4-(бензиламино)-6,7дигидро-5Н-пирано [2,3 -d] пиримидин-2-ил)-2-метил- 1Ниндол-7-карбоксамид **** * * **
FF28 1-(4-(бензиламино)-6,7дигидро-5Н-пирано [2,3 -d] пиримидин-2-ил)- 1Н-индазол4-карбоксамид **** * * **
FF29 1 -(4 -(бензиламино) -8 -метил5,6,7,8-те1рагидропиридо[2,3d] пиримидин-2-ил)-2-метил1Н-индол-4-карбоксамид **** ** **
FF30 1-(4-((3,5дифторбензил)амино)-6,7дигидро-5Н-пирано [2,3 -d] пиримидин-2-ил)-2-метил- 1Ниндол-4-карбоксамид **** * * **
FF31 2-(4-(аминометил)-2-метилШ-индол-1 -hji)-N-бензил-6,7дигидро-5Н-пирано [2,3б]пиримидин-4-амин ** Н.д. Н.д.
FF32 2-(аминометил)-1 -(4(бензиламино)-6,7-дигидро5Н-пирано[2,3-б] пиримндин2-ил)-1Н-индол-4карбоксамид *** * *
FF33 1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8телрагидропиридо [4,3 -d] пиримидин-2-ил)- 1Н-индазол4-карбоксамид * Н.д. Н.д.
FF34 1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8тетрагидропиридо [3,2-d] пиримидин-2-ил)-2-метил- 1Ниндол-4-карбоксамид ***
FF35 3-(4-(бензиламино)-5,6,7,8те1рагидрохиназолин-2-ил)-2метилбензофуран-7карбоксамид **** * * **
FF36 К[-бензил-2-(2-метил- 1Н- ** * *
индол-3-ил)-5,6,7,8телрагидрохиназолин-4-амин
Примеры
Ниже более подробно описано получение представленных примеров соединений согласно настоящему изобретению. Примеры ниже приведены исключительно в иллюстративных целях и не предназначены для какого-либо ограничения изобретения. Специалист поймет, что многие параметры не являются критичными, и их можно менять или модифицировать, получая, по существу, такие же результаты.
Специалисты узнают или смогут установить, не выходя за рамки рутинных экспериментов, многочисленные эквиваленты процедур синтеза и способов их применения, описанных в настоящем документе. Хотя в настоящем тексте показаны и описаны некоторые примеры реализации, следует понимать, что соединение согласно настоящему изобретению может быть получено способами, широко доступными средним специалистам в данной области. Все цитируемые выше литературные источники и публикации включены в настоящий документ посредством ссылки.
Если не указано иначе, все растворители, химические вещества и реагенты приобретали в коммерческих источниках и использовали без очистки. Спектры 2Н ЯМР получали в CDCl3, б6-ДМСО, CD3OD или б6-ацетоне при 25°C при 300 МГц на спектрометре OXFORD (Varian) с химическим сдвигом (δ, ppm), который регистрировали относительно TMS, который использовали в качестве внутреннего стандарта. Хроматограммы и масс-спектры ЖХВД-МС получали с использованием системы Shimadzu LC- 43 031317
MS-2020. Для очистки некоторых соединений использовали устройства для преп-ЖХВД: Gilson GX-281 (Gilson) или P230 Preparative Gradient System (Elite). Процедуры разделения методом хиральной препаративной ЖХВД осуществляли с использованием систем Elite P230 Preparative Gradient System, Thar Prep80 или Thar SFC X-5. Реакции с использованием микроволнового излучения проводили на аппарате СЕМ Discover SP.
Синтез 1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидрохиназолин-2-ил)-Ш-индазол-4-карбоксамида FF03
К раствору метил-Ш-индазол-4-карбоксилата 2 (2,6 г, 14,7 ммоль) и №бензил-2-хлор-5,6,7,8тетрагидрохиназолин-4-амина 1 (4 г, 14,7 ммоль) в диоксане (150 мл) добавляли Pd2(dba)3 (2,7 г, 2,94 ммоль), X-Phos (2,8 г, 5,88 ммоль) и Cs2CO3 (9,6 г, 29,4 ммоль). Смесь трижды дегазировали, а затем перемешивали при 100°C в течение 12 ч. Полученную смесь концентрировали под вакуумом, остаток очищали колоночной хроматографией (силикагель, петролейный эфир/этилацетат=3:1), в результате чего получали метил-Н^^бензиламино^^Д^-тетрагидрохиназолин^-илуШ-индазолЧ-карбоксилат 3 (2,74 г, 45%). Масс-спектрометрия низкого разрешения (M+H+) m/z: рассч. 414,47; эксп. 414.
К раствору метил-1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидрохиназолин-2-ил)-Ш-индазол-4карбоксилата 3 (2,74 г, 6,63 ммоль) в ТГФ (12 мл), MeOH (4 мл) и H2O (4 мл) добавляли LiOH (836 мг, 19,9 ммоль). Затем смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Растворитель удаляли, а твердое вещество разбавляли водой, нейтрализовали соляной кислотой (1М) до pH 2-3, твердые вещества фильтровали и сушили, в результате чего получали 1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8тетрагидрохиназолин-2-ил)-Ш-индазол-4-карбоновую кислоту 4 (2,3 г, 87%), которую использовали на следующем этапе без дальнейшей очистки. Масс-спектрометрия низкого разрешения (M+H+) m/z: рассч. 400,45; эксп. 400.
К раствору 1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидрохиназолин-2-ил)-Ш-индазол-4-карбоновой кислоты 4 (2,3 г, 5,76 ммоль) в ДМФА (60 мл) добавляли NH4Cl (930 мг, 17,3 ммоль), HATU (3,3 г, 8,64 и Et3N (2,4 мл, 17,3 ммоль). Затем реакционный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. К полученному раствору добавляли вод, твердые вещества фильтровали, сушили и очищали с использованием системы Combiflash (дихлорметан/метанол=20:1), в результате чего получали 1-(4(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидрохиназолин-2-ил)-1Н-индазол-4-карбоксамид FF03 (1,6 г, 70%). Массспектрометрия низкого разрешения (M+H+) m/z: рассч. 399,46; эксп. 399. Степень числоты, определенная методом ЖХВД (214 нм): 100%.
Ή-ЯМР (300 МГц, ДМСО): δ 8,61 (s, 1H), 8,38 (d, J=8,4 Гц, 1H), 8,09 (s, 1H), 7,70-7,68 (m, 2H), 7,54 (s, 1H), 7,42-7,32 (m, 5H), 7,24-7,23 (m, 1H), 4,74 (d, J=5,6 Гц, 2H), 2,70-2,68 (m, 2H), 2,50-2,48 (m, 2H), 1,83-1,82 (m, 2H).
Синтез 1-(4-(бензиламино)-7,8-дигидро-5H-пирано[4,3-d]пиримидин-2-ил)-1H-индазол-4карбоксамида FF04
- 44 031317
Аналогичную процедуру применяли для получения целевой молекулы FF04, 1-(4-(бензиламино)7,8-дигидро-5H-пирано[4,3-d]пиримидин-2-ил)-1H-индазол-4-карбоксамида в виде белого твердого вещества (60 мг, 52%). Масс-спектрометрия низкого разрешения (M-H') m/z: рассч. 400,16; эксп. 401. Степень чистоты, определенная методом ЖХВД (214 нм): 98%.
1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО): δ 8,63 (s, 1H), 8,39 (d, J=5,4 Гц, 1H), 8,11 (br, 1H), 7,69 (d, J=4,5 Гц, 2H), 7,56 (br, 1H), 7,41-7,20 (m, 5H), 4,73 (d, J=5,4 Гц, 2H), 4,58 (s, 2h), 4,00-3,96 (m, 2H), 2,77 (t, J=0,3 Гц, 2H). Синтез 3-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидрохиназолин-2-ил)-2-метил-1Н-индол-7-карбоксамида FF05
К раствору 1Н-индол-7-карбонитрила 1 (1,0 г, 7,04 ммоль) в ТГФ (30 мл) добавляли NaH (0,36 г, 9,15 ммоль, 60%) при 0°C и перемешивали реакционную смесь при 20°C в течение 30 мин. Затем добавляли бензолсульфонил хлорид (1,49 г, 8,44 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 2 ч. Раствор нейтрализовали путем добавления водного раствора NH4Cl и экстрагировали этилацетатом (300 мл х 2), сушили на Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали флэш-хроматографией (петролейный эфир:этилацетат = 3:1), в результате чего получали 1-(фенилсульфонил)-1Н-индол-7карбонитрил 2 (1,83 г, 92%). Масс-спектрометрия низкого разрешения (M+H+) m/z: рассч. 282,32; эксп. 282.
К раствору 1-(фенилсульфонил)-1Н-индол-7-карбонитрила 2 (1,83 г, 6,49 ммоль) в ТГФ (30 мл) при -80°C добавляли n-BuLi (3 мл, 7,14 ммоль, 2,4н.), Реакционную смесь перемешивали при -60°C в течение 1 ч. Затем добавляли йодометан (1,38 г, 9,73 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 1 ч. Реакцию гасили вод. раствором NH4Cl и экстрагировали этилацетатом (200 мл х 2), сушили на Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали флэшхроматографией (петролейный эфир:этилацетат=3:1), в результате чего получали 2-метил-1(фенилсульфонил)-1Н-индол-7-карбонитрил 3 (1,83 г, 95%). Масс-спектрометрия низкого разрешения (M+H+) m/z: рассч. 296,34; эксп. 296.
К раствору 2-метил-1-(фенилсульфонил)-1Н-индол-7-карбонитрила 3 (1,6 г, 5,67 ммоль) в ДХМ (15 мл) добавляли Br2 (1,81 г, 11,34 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре окружаю
- 45 031317 щей среды в течение 2 ч. Реакцию гасили путем добавления вод. NaHCO3 и экстрагировали этилацетатом (60 мл χ 2), сушили на Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали флэшхроматографией (петролейный эфир:этилацетат = 3:1), в результате чего получали 3-бром-2-метил-1(фенилсульфонил)-1Н-индол-7-карбонитрил 4 (1,8 г, 85%). Масс-спектрометрия низкого разрешения (M+H+) m/z: рассч. 375,24; эксп. 375.
!Н-ЯМР (300 МГц, CD3OD): δ 7,66-7,84 (m, 5H), 7,46-7,58 (m, 3H), 2,66 (s, 3H).
К раствору 3-бром-2-метил-1-(фенилсулъфонил)-Ш-индол-7-карбонитрила 4 (900 мг, 2,4 ммоль) и 2-изопропокси-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолана 5 (450 мг, 2,4 ммоль) в ТГФ (15 мл), -78°C добавляли n-BuLi (1 мл, 2,4 ммоль, 2,4N) и перемешивали реакционную смесь при -78°C в течение 1 ч. Затем раствору давали нагреться до к.т. и перемешивали в течение 1 ч. Реакцию гасили водным NH4Cl и экстрагировали этилацетатом (50 мл χ 2), сушили на Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали флэш-хроматографией (петролейный эфир:этилацетат=2:1), в результате чего получали 2метил-1-(фенилсульфонил)-3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-индол-7-карбонитрил 6 (760 мг, 75%). Масс-спектрометрия низкого разрешения (M+H+) m/z: рассч. 422,31; эксп. 422.
!Н-ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ 8,28 (d, J=3,6 Гц, 1H), 7,97 (t, J=4,8 Гц, 2H), 7,60-7,63 (m, 2H), 7,54 (t, J=5,4 Гц, 2H), 7,30 (t, J=7,8 Гц, 1H), 2,89 (s, 3H), 1,37 (s, 12H).
Смесь 2-метил-1-(фенилсульфонил)-3-(4,4,5,5-тетраметил- 1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-Ш-индол-7 карбонитрила 6 (360 мг, 0,85 ммоль), №бензил-2-хлор-5,6,7,8-тетрагидрохиназолин-4-амина 7 (232 мг, 0,85 ммоль), Pd(PPh3)4 (196 мг, 0,17 ммоль) и Na2CO3 (176 мг, 1,7 ммоль) в диоксане (10 мл) и H2O (3 мл) нагревали при 100°C в течение 16 ч в атмосфере азота. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом, Остаток очищали флэш-хроматографией (петролейный эфир: этилацетат = 1:1), в результате чего получали 3-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидрохиназолин-2ил^-метил-ЩфенилсульфонилЬШ-индол^-карбонитрил 8 (217 мг, 48%).
Масс-спектрометрия низкого разрешения (M+H+) m/z: рассч. 533,64; эксп. 533.
К раствору 3-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидрохиназолин-2-ил)-2-метил-1-(фенилсульфонил)-1Hиндол-7-карбонитрила 8 (120 мг, 0,22 ммоль) в ДМСО (5 мл) добавляли пероксид мочевины (165 мг, 1,76 ммоль), K2CO3 (15 мг, 0,11 ммоль) и воду (0,3 мл) при 0°C и перемешивали реакционную смесь при 60°C в течение ночи. К смеси добавляли воду (100 мл), твердое вещество крошили и фильтровали, в результате чего получали неочищенный продукт, который очищали флэш-хроматографией ДХМ:MeOH = 20:1), в результате чего получали 3-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидрохиназолин-2-ил)-2-метил-1H-индол-7карбоксамид 65 мг (72%) FF05. Масс-спектрометрия низкого разрешения (M+H+) m/z: рассч. 411,5; эксп. 411. Степень чистоты, определенная методом ЖХВД (214 нм): 97,6%.
!Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО): δ 10,97 (s, 1H), 8,52 (d, J=4,0 Гц, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,57 (d, J=4,0 Гц, 1H), 7,27-7,35 (m, 5H), 7,18 (t, J= 7,2 Гц, 1H), 7,12 (t, J= 6,0 Гц, 1H), 6,97 (t, J=8,0 Гц, 1H), 4,73 (d, J=2,8 Гц, 2H), 2,70 (s, 3H), 2,66 (bs, 2H), 2,44 (bs, 2H), 1,81 (bs, 4H).
Синтез 1 -(4-(бензиламино)-6,7-дигидро-5H-пирано [2,3^]пиримидин-2-ил)-2-метил-Ш-индол-4карбоксамида FF06
- 46 031317
К смеси тетрагидропиран-2-она 1 (1,0 г, 10 ммоль) и тиоцианатометана (2,93 г, 40 ммоль) в ДХМ (25 мл) по каплям добавляли Tf2O (4,23 г, 15 ммоль) в ДХМ (25 мл) при -78°C в атмосфере азота. Полученную после добавления смесь перемешивали при 0°C в течение 3 ч, а затем перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Летучую фазу удаляли при пониженном давлении. Остаток растворяли в ДХМ (40 мл), промывали бикарбонатом натрия, солевым раствором, сушили над сульфатом натрия. Органические слои концентрировали при пониженном давлении. Остаток наносили на колонку с силикагелем, используя для элюирования ДХМ. В результате получали 2,4-бис(метилтио)-6,7-дигидро5H-пирано[2,3-d]пиримидин 2 в виде белого твердого вещества (0,4 г, 17,5%). Масс-спектрометрия низкого разрешения (M+H+) m/z: рассч. 229,0; эксп. 229.
К смеси 2,4-бис(метилтио)-6,7-дигидро-5Н-пирано[2,3-дипиримидина 2 (0,4 г, 1,75 ммоль) в ДХМ (20 мл) порциями добавляли m-CPBA (2,47 г, 12 ммоль).
Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. Ее гасили с использованием Na2S2O3 (5%, 20 мл), затем осторожно добавляли насыщенный NaHCO3 (20 мл). Смесь перемешивали в течение 30 мин. Органические слои отделяли. Водный слой экстрагировали дихлорметаном (20 мл х 2). Органические слои объединяли, промывали солевым раствором, сушили на Na2SO4, фильтровали и концентрировали. В результате получали 0,42 г (82%) 2,4-бис(метилсульфонил)-6,7-дигидро-5Нпирано[2,3-й]пиримидина 3 в виде белого твердого вещества. Масс-спектрометрия низкого разрешения (M+H+) m/z: рассч. 293,0; эксп. 293.
Смесь 2,4-бис(метилсульфонил)-6,7-дигидро-5Н-пирано[2,3-й]пиримидина 3 (1,5 г, 5,1 ммоль) в 10% NaOH (30 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 2 ч, затем реакционную смесь подкисляли соляной кислотой HCl (10%) до pH 2, полученное твердое вещество собирали фильтрацией, промывали водой. В результате перекристаллизации из воды получали 0,82 г (95,7%) 6,7-дигидро-5Hпирано[2,3-й] пиримидин-2,4-диола 4 в виде белого твердого вещества. Масс-спектрометрия низкого разрешения (M+H+) m/z: рассч. 169,0; эксп. 169.
Смесь 6,7-дигидро-5H-пирано[2,3-d]пиримидин-2,4-диола 4 (0,4 г, 2,4 ммоль) в POCl3 (10 мл) перемешивали при 100°C в течение 4 ч. Летучую фазу удаляли при пониженном давлении. Остаток растворяли в ДХМ (50 мл), а затем добавляли смесь лед/вода, которую промывали с использованием NaHCO3, солевого раствора, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Остаток наносили на колонку с силикагелем, используя для элюирования петролейный эфир/этилацетат = 4/1. В результате получали 0,25 г (50%) 2,4-дихлор-6,7-дигидро-5H-пирано[2,3-d]пиримидина 5 в виде белого твердого
- 47 031317 вещества. Масс-спектрометрия низкого разрешения (M+H+) m/z: рассч. 205,0; эксп. 205.
Смесь 2,4-дихлор-6,7-дигидро-5H-пирано[2,3-d]пиримидина 5 (0,16 г, 0,8 ммоль) и Et3N (0,24 г, 2,4 ммоль) в ДМФА (15 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь разбавляли этилацетатом (50 мл), промывали водой, солевым раствором, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Остаток наносили на колонку с силикагелем, используя для элюирования петролейный эфир/этилацетат = 2/1. В результате получали 0,16 г (74,5%) N-бензил-2-хлор-6,7-дигидро-5Hпирано[2,3Д]пиримидин-4-амина 6 в виде белого твердого вещества. Масс-спектрометрия низкого разрешения (M+H+) m/z: рассч. 276,1; эксп. 276.
Смесь N-бензил-2-хлор-6,7-дигидро-5H-пирано[2,3-d]пиримидин-4-амина 6 (82 мг, 0,3 ммоль), 2метил-Ш-индол-4-карбонитрила 7 (48 мг, 0,3 ммоль), Pd2(dba)3 (55 мг, 0,06 ммоль), X-Phos (57 мг, 0,12 ммоль) и Cs2CO3 (196 мг, 0,6 ммоль) в диоксане (8 мл) перемешивали при 100°C в течение ночи. Летучую фазу удаляли при пониженном давлении. Остаток наносили на колонку с силикагелем, используя для элюирования петролейный эфир/этилацетат = 2/1. В результате получали 80 мг (68%) 1-(4(бензиламино)-6,7-дигидро-5H-пирано [2,3Д]пиримидин-2-ил)-2-метил-1Н-индол-4-карбонитрила 8 в виде желтого твердого вещества. Масс-спектрометрия низкого разрешения (M+H+) m/z: рассч. 396,2; эксп. 396.
Смесь 1-(4-(бензиламино)-6,7-дигидро-5H-пирано[2,3-d]пиримидин-2-ил)-2-метил-1H-индол-4карбонитрила 8 (72 мг, 0,182 ммоль), 1-гидропероксимочевины (112 мг, 1,45 ммоль) и K2CO3 (13 мг, 0,09 ммоль) в ДМСО/НЮ (10 мл/1 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Смесь разбавляли 50 мл воды, а затем экстрагировали этилацетатом (20 мл χ 3).
Органические слои объединяли, промывали солевым раствором, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Остаток наносили на колонку с силикагелем, используя для элюирования петролейный эфир/этилацетат = 2/1. В результате получали 50 мг (66%) 1-(4-(бензиламино)-6,7дигидро-5Н-пирано[2,3Д]пиримидин-2-ил)-2-метил-1Н-индол-4-карбоксамида FF06 в виде желтого твердого вещества. Масс-спектрометрия низкого разрешения (M+H+) m/z: рассч. 414,2; эксп. 414. Степень числоты, определенная методом ЖХВД (214 нм): 97%.
Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО): δ 7,88 (d, J=8,0 Гц, 1Н), 7,75-7,71 (m, 1Н), 7,69-7,65 (m, 1Н), 7,45 (d, J=8,0 Гц, 1Н),7,40-7,30 (m, 4Н), 7,28-7,20 (m, 2Н), 6,94 (t, J=8,0 Гц, 1Н), 4,69 (d, J=8,0 Гц, 2Н), 4,31 (t, J=4,0 Гц, 2Н), 2,52-2,50 (m, 2Н), 2,48 (s, 3Н), 2,06-2,02 (m, 3Н).
Синтез 1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3-d]пиримидин-2-ил)-2-метил-1P-индол-4карбоксамида FF07
- 48 031317
К раствору пиридо[2,3-0]пиримидин-2,4-диола 1 (0,80 г, 4,9 ммоль) в смеси AcOH/H2O (12мл/8 мл) добавляли Pd(OH)2 (0,08 г, 0,57 ммоль). Смесь нагревали при 70°C в течение ночи в атмосфере водорода. Смесь фильтровали, в результате чего получали 5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3^]пиримидин-2,4-диол 2 (0,5 г, 61%). Масс-спектрометрия низкого разрешения (M+HQ m/z: рассч. 168,07; эксп. 168.
Смесь 5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3Д]пиримидин-2,4-диола 2 (500 мг, 2,99 ммоль), PCl5 (300 мг, 1,5 ммоль) в POCl3 (10 мл) нагревали при 130°C в течение ночи.
Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом, остаток растворяли в ДХМ (20 мл) и вливали в смесь воды и льда (20 мл), слой в масле концентрировали под вакуумом, остаток очищали флэш-хроматографией (петролейный эфир:этилацетат = 5:1), в результате чего получали 2,4-дихлор-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3^]пиримидин 3 (150 мг, 25%). ЖХМС (M+tf) m/z: рассч. 204,00; эксп. 203,9.
Смесь 2,4-дихлор-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3Д]пиримидина 3 (150 мг, 0,74 ммоль), DMAP (91 мг, 0,74 ммоль) и Boc2O (241 мг, 1,1 ммоль) в CH3CN (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 ч. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом, остаток очищали флэшхроматографией (петролейный эфир:этилацетат = 10:1), в результате чего получали трет-бутил 2,4дихлор-6,7-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-8(5H)-карбоксилат 4 (100 мг, 45%). Масс-спектрометрия низкого разрешения (M+H) m/z: рассч. 248,05; эксп. 247,9.
К раствору трет-бутил-2,4-дихлор-6,7-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-8(5H)-карбоксилата 4 (100 мг, 0,33 ммоль) и триэтаноламина (100 мг, 0,99 ммоль) в CH3CN (10 мл) добавляли фенилметананамин (43 мг, 0,39 ммоль), перемешивали при 70°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом, остаток очищали флэш-хроматографией (петролей
- 49 031317 ный эфир/этилацетат), в результате чего получали трет-бутил 4-(бензнламнно)-2-хлор-6,7днгндропнрндо[2,3-d]пирнмнднн-8(5H)-карбокснлат 5 (100 мг, 81%). Масс-спектрометрия низкого разрешения (M+H+) m/z: рассч. 375,15; эксп. 375,1.
Смесь трет-бутнл-4-(бензнламнно)-2-хлор-6,7-днгндропнрндо[2,3-d]пнрнмнднн-8(5H)-карбокснлата 5 (100 мг, 0,27 ммоль), 2-метнл-1H-нндол-4-карбоннтрнла 6 (41 мг, 0,32 ммоль), трис(днбензнлнденацетон)днпалладня (98 мг, 0,11 ммоль), X-phos (26 мг, 0,05 ммоль) и Cs2CO3 (174 мг, 0,54 ммоль) в диоксане (10 мл) нагревали при 100°C в течение 3 ч в атмосфере азота.
Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом, остаток очищали флэш-хроматографией (петролейный эфир/этилацетат), в результате чего получали третбутнл-4-(бензнламнно)-2-(4-цнано-2-метнл-1H-нндол-1-нл)-6,7-днгндропнрндо[2,3-d]пнрнмнднн-8(5H)карбоксилат 7 (80 мг, 61%). ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 495,24; эксп. 495,2.
К раствору трет-бутнл-4-(бензнламнно)-2-(4-цнано-2-метнл-1H-нндол-1-нл)-6,7-днгндропнрндо[2,3d]пнрнмнднн-8(5H)-карбокснлата 7 (80 мг, 0,16 ммоль) в ДМСО (8 мл) добавляли пероксид мочевины (123 мг, 1,29 ммоль) и K2CO3 (12 мг, 0,081 ммоль), добавляли воду (0,5 мл) и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 2 ч. К смеси добавляли воду (100 мл) и фильтровали образующееся твердое вещество, в результате чего получали трет-бутил-4-(бензиламино)-2-(4карбамонл-2-метнл-1H-нндол-1-нл)-6,7-днгндропнрндо[2,3-d]пнрнмнднн-8(5H)-карбокснлат 8 (60 мг, 70%). ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 513,25; эксп. 513.
К раствору трет-бутнл-4-(бензнламнно)-2-(4-карбамонл-2-метнл-1H-нндол-1-нл)-6,7-днгндропнрндо[2,3-d]пнрнмнднн-8(5H)-карбокснлата 8 (60 мг, 0,12 ммоль) в EtOAc (2 мл) добавляли HCl/этилацетат (5 мл, 2N), затем перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Образующееся твердое вещество фильтровали, в результате чего получали 1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8тетрагндропирндо[2,3-d]пирнмнднн-2-нл)-2-метнл-1H-нндол-4-карбоксамнд FF07 в форме белого твердого вещества (20 мг, 40%). ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 413,2; эксп. 413,1. Чистота, определенная методом ЖХВД (214 нм): 100%.
'Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО): δ 7,79-7,65 (m, 2H), 7,50-7,41 (m, 2H), 7,38-7,19 (m, 7H), 6,97-6,89 (m, 1H), 6,88-6,79 (m, 1H), 4,62-4,59 (m, 2H), 3,33-3,26 (m, 2H), 2,54-2,52 (m, 2H), 2,45 (s, 3H), 1,94-1,86 (m, 2H).
Синтез 1-[4-(Бензнламнно)-5,6-днгндрофуро[2,3-d]пнрнмнднн-2-нл]-2-метнлнндол-4-карбоксамнда FF08
К раствору EtOH (400 мл) порциями добавляли Na (2,66 г, 0,12 моль). После того как натрий полностью растворялся, в реакционную смесь последовательно добавляли триэтилэтан-1,1,2-трикарбоксилат (19 г, 77,16 ммоль) и мочевину (5,1 г, 84,87 ммоль). Белую суспензию нагревали с обратным холодильником в течение 16 ч. Образовывалось большое количество белого твердого вещества. ТСХ показала
- 50 031317 завершение реакции. Реакционную смесь фильтровали, остаток на фильтре промывали этанолом (EtOH, 200 мл). Фильтрат концентрировали под вакуумом, в результате чего получали целевой этил 2-(2,4,6триоксогексагидропиримидин-5-ил)ацетат (15 г, 81,7%) в форме белого твердого вещества, который подтверждали не следующем этапе. ЖХМС (M-H+) m/z: рассч. 213,05; эксп. 213,3.
Белую суспензию этил-2-(2,4,6-триоксогексагидропиримидин-5-ил)ацетата (19 г, 88,71 ммоль) в POCl3 (100 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 16 ч. Цвет реакционной смеси менялся на коричневый. ТСХ показала завершение реакции. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом. Коричневый остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (петролейный эфир: этилацетат = от 20:1 до 5:1), в результате чего получали целевой этил 2-(2,4,6-трихлорпиримидин-5-ил)ацетат (1,8 г, 6,8%) в виде коричневого масла. ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 268,97; эксп. 269,0.
К раствору этил-2-(2,4,6-трихлорпиримидин-5-ил)ацетата (500 мг, 1,86 ммоль) в ТГФ (20 мл) по каплям добавляли DIBAL-H (1М в толуоле, 7,42 мл) при 0°C. Светло-желтый раствор перемешивали при 15°C в течение 12 ч. ТСХ показала завершение реакции. Реакцию гасили 1н. раствором HCl (20 мл). Полученную смесь экстрагировали этилацетатом (20 мл х 3). Объединенные органические слои сушили над Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (петролейный эфир:этилацетат = от 10:1 до 1:1), в результате чего получали целевой 2-(2,4,6трихлорпиримидин-5-ил)этанол (0,2 г, 42,7%) в виде коричневого твердого вещества. ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 226,95; эксп. 227,0.
К бесцветному раствору 2-(2,4,6-трихлорпиримидин-5-ил)этанола (500 мг, 2,2 ммоль) в безводном ТГФ (50 мл) добавляли NaH (131,87 мг, 3,3 ммоль, 60% минеральное масло) при к.т. Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение ночи. ТСХ показала завершение реакции. Реакцию гасили путем добавления насыщ. NH4Cl (20 мл), а затем экстрагировали этилацетатом (20 мл х 3). Объединенные органические слои сушили над Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали препаративной ТСХ, в результате чего получали целевой 2,4-дихлор-5,6-дигидрофуро[2,3^]пиримидин (0,1 г, 21,4%) в форме белого твердого вещества. ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 190,97; эксп. 191,1.
Бесцветный раствор 2,4-дихлор-5,6-дигидрофуро[2,3^]пиримидина (90 мг, 0,47 ммоль), фенилметананамина (55,54 мг, 0,52 ммоль) и триэтаноламина (57,21 мг, 0,57 ммоль) в MeCN (25 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 16 ч. ЖХМС показала завершение реакции. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом и очищали препаративной ТСХ (петролейный эфир: этилацетат = 1:1), в результате чего получали целевой №бензил-2-хлор-5,6-дигидрофуро[2,3^]пиримидин-4-амин (50 мг, 36,5%) в форме белого твердого вещества.
!Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 7,30 (m, 5H,Ph), 5,50 (s, 1H, NH), 4,63 (m, 4H, NHCH2, OCH2), 3,18 (m, 2H,PhCH2). Масс-спектрометрия низкого разрешения (M+H+) m/z: рассч. 262,07; эксп. 262,1. Красную суспензию №бензил-2-хлор-5,6-дигидрофуро[2,3^]пиримидин-4-амина (45 мг, 0,17 ммоль), 2-метил-Шиндол-4-карбонитрила (32,23 мг, 0,21 ммоль), Pd2(dba)3 (31,49 мг, 0,03 ммоль), K2CO3 (47,53 мг, 0,34 ммоль) и X-Phos (16,39 мг, 0,03 ммоль) в диоксане (5 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 2 ч в атмосфере N2. ЖХМС показала завершение реакции. Реакционную смесь фильтровали и концентрировали фильтрат под вакуумом. Неочищенный продукт очищали препаративной ТСХ (петролейный эфир:этилацетат = 5:1), в результате чего получали целевой 1-[4-(бензиламино)-5,6дигидрофуро[2,3^]пиримидин-2-ил]-2-метилиндол-4-карбонитрил (50 мг, 68,6%) в виде светло-желтого твердого вещества. Масс-спектрометрия низкого разрешения (M+H+) m/z: рассч. 382,16; эксп. 382,2.
Светло-желтый раствор 1-[4-(бензиламино)-5,6-дигидрофуро[2,3^]пиримидин-2-ил]-2-метилиндол-4-карбонитрила (45 мг, 0,12 ммоль), пероксида мочевины (55,49 мг, 0,59 ммоль) и K2CO3 (16,31 мг, 0,12 ммоль) в ДМСО (20 мл) и H2O (1 мл) перемешивали при 15°C в течение 2 ч. ТСХ показала завершение реакции. В реакционную смесь добавляли этилацетат (20 мл) и солевой раствор (20 мл). Органические слои отделяли и промывали солевым раствором (20 мл х 3), сушили на Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Желтый остаток очищали препаративной ТСХ, в результате чего получали целевой 1-[4-(бензиламино)-5,6-дигидрофуро[2,3^]пиримидин-2-ил]-2-метилиндол-4-карбоксамид FF08 (30 мг, 63,7%) в форме белого твердого вещества.
!Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 8,28 (d, 1H, Ph), 7,49 (d, 1H, Ph), 7,43-7,30 (m, 5H, CH2Ph), 7,10 (m, 1H, Ph), 6,83 (s, 1H, 3-H индол), 6,15 (s, 2H, NH2). 4,98 (s, 1H, NH), 4,81-4,61 (m, 4H, QCH2+NHCH2), 3,08 (m, 2H, CH2), 2,74-2,57 (s, 3H, CH3). Масс-спектрометрия низкого разрешения (M+H+) m/z: рассч.: 400,18; эксп. 400,2.
Синтез 1 -(4-((3 -фторбензил)амино)-6,7-дигидро-5H-пирано [2,3-d] пиримидин-2-ил)-2-метил-Шиндол-4-карбоксамида FF09
- 51 031317
К смеси 2,4-дихлор-6,7-дигидро-5H-пирано[2,3-d]пиримидина (250 мг, 1 ммоль) в триэтаноламине (ACN) (20 мл) добавляли DIPEA (464 мг, 4 ммоль) и соединение 2 (604 мг, 5 ммоль). Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 16 ч. ТСХ (петролейный эфир:этилацетат = 2:1) показала завершение реакции. Затем смесь концентрировали и очищали силикагелем (петролейный эфир:этилацетат = от 6:1 до 3:1), в результате чего получали целевой 2-хлор^-(3-фторбензил)-6,7дигидро-5H-пирано[2,3-d]пиримидин-4-амин (240 мг, 67,67%) в форме белого твердого вещества. ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 294,07; эксп. 294,1.
К раствору 2-хлор-N-(3-фторбензил)-6,7-дигидро-5H-пирано[2,3-d]пиримидин-4-амина (820 мг, 3 ммоль) в диоксане (150 мл) добавляли 2-метил-1H-индол-4-карбонитрил (654 мг, 4 ммоль), Cs2CO3 (1,819 г, 6 ммоль), X-Phos (532 мг, 1 ммоль) и Pd2(dba)3 (767 мг, 0,838 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 100°C в течение 12 ч в атмосфере N2. ТСХ (петролейный эфир:этилацетат = 1:1) показала завершение реакции. Затем смесь фильтровали, фильтрат концентрировали и очищали силикагелем (петролейный эфир:этилацетат = 10:1), в результате чего получали целевой 1-(4-((3-фторбензил)амино)-6,7дигидро-5H-пирано[2,3-d]пиримидин-2-ил)-2-метил-1H-индол-4-карбонитрил (600 мг, 52%). ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 414,17; эксп. 414,2.
К смеси 1-(4-((3-фторбензил)амино)-6,7-дигидро-5H-пирано[2,3-d]пиримидин-2-ил)-2-метил-1Hиндол-4-карбонитрила (0,6 г, 1 ммоль) в ДМСО (50 мл) добавляли пероксид мочевины (0,697 г, 7 ммоль) и K2CO3 (0,1 г, 0,726 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 10 мин. Затем добавляли H2O (5 мл) и перемешивали в течение 12 ч при 25°C. ТСХ (петролейный эфир:этилацетат = 1:2) показала завершение реакции. Затем добавляли H2O (500 мл), а затем экстрагировали этилацетатом (200 мл х 3). Объединенную органическую фазу концентрировали и очищали силикагелем (петролейный эфир:этилацетат = от 5:1 до 1:1), в результате чего получали неочищенный продукт, который промывали триэтаноламином (ACN) (10 мл), фильтровали и концентрировали, в результате чего получали целевой 1-(4-((3-фторбензил)амино)-6,7-дигидро-5H-пирано[2,3-d]пиримидин-2-ил)-2-метил-1H-индол-4карбоксамид FF09 (0,2 г, 31,3%). ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 432,18; эксп. 432,2.
1Н-ЯМР (400 МГц, CD3OD): δ 7,73 (d, J=8,4 Гц, 1H, Ph), 7,47 (d, >7,2Гц, 1H, Ph), 7,34 (m, 1H, Ph), 7,16-7,14 (d, J=1,2 Гц, 1H, Ph), 7,04 (m, 1H, Ph), 7,00-6,97 (m, 2H, Ph), 6,77(s, 1H, 3-H индола), 4,73 (s, 2H, PhCH2NH2), 4,40-4,38 (m, 2H, OCH2CH2CH2), 2,61-2,58 (m, 2H, OCH2CH2CH2), 2,46 (s, 3H, NCCH3), 2,172,14 (m, 2H, OCH2CH2CH2).
Синтез 3-[4-(бензиламино)-7,8-дигидро-5H-пирано[4,3-d]пиримидин-2-ил-2-метил-1H-индол-7карбоксамида FF10
- 52 031317
К раствору 2,4-дихлор-7,8-дигидро-5Н-пирано[4,3^]пиримидина (1 г, 4,877 ммоль) в триэтаноламине (ACN) (50 мл) добавляли BnNH2 (0,78 г, 7,316 ммоль). Смесь перемешивали при 25°C в течение 12 ч в атмосфере N2. ТСХ показала завершение реакции. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом и очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир/этилацетат = от 10/1 до 5/1), в результате чего получали целевой Х-бензил-2-хлор-7,8-дигидро-5Н-пирано[4,3Д]пиримидин-4-амин (0,85 г, 60,5% выход) в форме белого твердого вещества.
К раствору №бензил-2-хлор-7,8-дигидро-5Н-пирано[4,3^]пиримидин-4-амина (300 мг, 1,09 ммоль) и 1-(бензолсульфонил)-2-метил-3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)индол-7-карбонитрила (551 мг, 1,31 ммоль) в диоксане (10 мл) и воде (2 мл) добавляли K2CO3 (300 мг, 2,17 ммоль) и Pd(PPh3)4 (126 мг, 0,11 ммоль). Смесь перемешивали при 100°C в атмосфере N2 в течение 3 ч. ТСХ показала завершение реакции. Смесь разбавляли этилацетатом (20 мл) и H2O (5 мл). Органическую фазу отделяли, сушили на Na2SO4, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир:этилацетат = от 10:1 до чистого этилацетата), в результате чего получали целевой 1(бензолсульфонил)-3-[4-(бензиламино)-7,8-дигидро-5Н-пирано[4,3Д]пиримидин-2-ил]-2-метилиндол-7карбонитрил (300 мг, 50,5%) в форме белого твердого вещества. ЖХМС (M+H+) m/z: рассч.: 536,17; эксп. 536,2.
К раствору 1-(бензолсульфонил)-3-[4-(бензиламино)-7,8-дигидро-5Н-пирано[4,3Д]пиримидин-2ил]-2-метилиндол-7-карбонитрила (150 мг, 280 ммоль) в ДМСО (10 мл) и H2O (0,2 мл) добавляли пероксид мочевины (130 мг, 1,4 ммоль) и K2CO3 (19 мг, 140 ммоль). Смесь перемешивали при 60°C в течение 12 ч. ТСХ показала, что осталось 10% 1-(бензолсульфонил)-3-[4-(бензиламино)-7,8-дигидро-5Нпирано[4,3^]пиримидин-2-ил]-2-метилиндол-7-карбонитрила. Смесь вливали в H2O (100 мл), а затем экстрагировали этилацетатом (50 мл х 2).
Объединенные органические слои промывали солевым раствором (20 мл), сушили на Na2SO4, концентрировали под вакуумом досуха и очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир:этилацетат = от 5:1 до 100% этилацетата), в результате чего получали целевой 3-[4-(бензиламино)-
7,8-дигидро-5Н-пирано[4,3^]пиримидин-2-ил-2-метил-1Н-индол-7-карбоксамид FF10 (60 мг, 50,3%). ЖХМС (M+H+) m/z: рассч.: 414,19; эксп. 414,3.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 11,05 (s, 1Н, CONH2), 8,53 (d, J=8,0 Гц, 1H, C6H3), 8,02 (s, 1H, CONH2), 7,57-7,59 (m, 1H, C6H3), 7,31-7,35 (m, 5H, C6H5), 7,20-7,21 (m, 1H, C6H3), 7,14-7,15 (m, 1H, NH), 6,99-7,02 (m, 1H, NH), 4,72-4,73 (d, J=7,2 Гц, 2H, CH2), 4,55 (s, 2H, CH2), 3,96 (t, J=5,6 Гц, CH3), 2,72-2,73 (m, 5H, CH2, CH3).
Синтез 1-(4-((3-фторбензил)амино)-5-метил-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2^]пиримидин-2-ил)-1Ниндазол-4-карбоксамида FF11
- 53 031317
Смесь 3-аминопиколиновой кислоты (5,00 г, 36,2 ммоль) и мочевины (10,9 г, 181 ммоль) в колбе объемом 100 мл перемешивали при 170°C в течение 6 ч. Реакционная смесь превращалась из прозрачного раствора в суспензию. Затем реакционную смесь охлаждали до 25°C и фильтровали. Остаток на фильтре промывали водой (50 мл) и сушили, в результате чего получали целевой пиридо[3,2^]пиримидин2,4-диол (3,2 г, 74,5%) в форме белого твердого вещества.
1 Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 11,66 (s, 1H, OH), 11,16 (s, 1H, OH), 8,59 (d, J=2,4 Гц, 1H, C6H3), 8,25 (d, J=8,4 Гц, 1H, C6H3), 7,24 (t, J=2,4 Гц, 1H, C6H3).
Смесь пиридо[3,2^]пиримидин-2,4-диола (5,0 г, 0,031 моль), POCl3 (150 мл) и PCl5 (25,5 г, 0,128моль) перемешивали при 130°C в течение 3 ч. ТСХ показала завершение реакции. Смесь концентрировали под вакуумом, Остаток растворяли дихлорметаном (1000 мл), а затем вливали в H2O (400 мл). Органические слои отделяли, промывали насыщенным раствором Na2CO3 (400 мл), сушили при помощи Na2SO4, фильтровали, концентрировали под вакуумом и очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир:этилацетат = от 10:1 до петролейный эфир:этилацетат = 3:1), в результате чего получали чистый целевой 2,4-дихлорпиридо[3,2^]пиримидин (3,5 г, 57,4%) в виде желтого твердого вещества.
1 Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3): 9,33 (t, J=2,4 Гц, 1H, C6H3), 8,64 (d, J=7,6 Гц, 1H, C6H3), 7,71-7,75 (m, 1H, C6H3).
К желтому раствору 2,4-дихлорпиридо[3,2^]пиримидина (500 мг, 2,5 ммоль) в безводном ТГФ (30 мл) добавляли (3-фторфенил)метананамин (344 мг, 2,75 ммоль) и триэтаноламин (379 мг, 3,75 ммоль). Затем смесь перемешивали при 60°C в течение 1 ч в атмосфере N2. TCX показала завершение реакции. Реакционную смесь концентрировали досуха под вакуумом, в результате чего получали неочищенный 2хлор-№-[(3-фторфенил)метил]пиридо[3,2^]пиримидин-4-амин (0,72 г, 84,8%) в виде желтого твердого вещества.
К желтой суспензии 2-хлор-№[(3-фторфенил)метил]пиридо[3,2^]пиримидин-4-амина (0,72 г, 2,5 ммоль) в EtOH (50 мл) добавляли PtO2 (110 мг). Затем смесь перемешивали при 60°C в атмосфере H2 (15 фунтов/кв.дюйм в течение 6 ч). ТСХ показала, что соотношение продукт:2-хлор-№[(3фторфенил)метил]пиридо[3,2^]пиримидин-4-амин = 1:1. Катализатор удаляли фильтрацией. Фильтрат концентрировали досуха под вакуумом и очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир:этилацетат = от 5:1 до 1:1), в результате чего получали целевой 2-хлор-№-[(3-фторфенил)метил]-
5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2^]пиримидин-4-амин (300 мг, 37%) в форме белого твердого вещества.
К белой суспензии 2-хлор-№-[(3-фторфенил)метил]-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2^]пиримидин-4
- 54 031317 амина (250 мг, 0,854 ммоль) в безводном ТГФ (10 мл) добавляли параформальдегид (153,85 мг, 1,708 ммоль) и одну каплю AcOH. Затем белую суспензию перемешивали при 20°C в течение 3 ч. К этой смеси добавляли NaBH(OAc)3 (362 мг, 1,708 ммоль). Затем смесь перемешивали при 80°C в течение 9 ч. ЖХМС и ТСХ показали соотношение 2-хлор+-[(3-фторфенил)метил]-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2d]пиримидин-4-амин:продукт =1:2. Белую суспензию фильтровали через целит, концентрировали фильтрат досуха под вакуумом и очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир:этилацетат = от 10:1 до 1:1), в результате чего получали целевой 2-хлор+-[(3-фторфенил)метил]-5-метил-7,8-дигидро6И-пиридо[3,2Щ]пиримидин-4-амин (200 мг, 57%) в виде бесцветного масла. ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 307,11; эксп. 307,10.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 7,32 (t, J=6,0 Гц, 1H, C6H4, 7,13 (d, J=7,6 Гц, 1H, C6H4, 7,06-7,00 (m, 2H, C6H4, 5,67 (s, 1H, NH), 4,69 (d, J=7,2 Гц, 2H, CH2Ph), 2,96-3,02 (m, 2H, CH2), 2,71-2,74 (m, 2H, CH2), 2,58 (s, 3H, CH3), 1,95-1,99 (m, 2H, CH2).
К раствору 2-хлор-N-[(3-фторфенил)метил]-5-метил-7,8-дигидро-6H-пиридо[3,2-d]пиримидин-4амина (50 мг, 0,16 ммоль) и Ш-индазол-4-карбонитрила (25,66 мг, 0,18 ммоль) в безводном диоксане (10
ммоль). Затем смесь перемешивали при 100°C в течение 12 ч в атмосфере N2. TCX показала соотношение продукт:2-хлор-N-[(3-фторфенил)метил]-5-метил-7,8-дигидро-6H-пиридо[3,2-d]пиримидин-4-амин =1:1. Смесь фильтровали через целит, концентрировали досуха под вакуумом и очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир:этилацетат = от 10:1 до 1:1), в результате чего получали целевой 1-[4-[(3фторфенил)метиламино]-5-метил-7,8-дигидро-6H-пиридо[3,2-d]пиримидин-2-ил]индазол-4-карбонитрил (20 мг, 23,7%) в виде желтого масла. ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 414,18; эксп. 414,2.
К желтому раствору 1-[4-[(3-фторфенил)метиламино]-5-метил-7,8-дигидро-6H-пиридо[3,2d]пиримидин-2-ил]индазол-4-карбонитрила (20 мг, 0,05 ммоль) в ДМСО (3 мл) и H2O (0,3 мл) добавляли пероксид мочевины (22,74 мг, 0,242 ммоль) и K2CO3 (3,338 мг, 0,024 ммоль). Затем смесь перемешивали при 20°C в течение 2 ч. ТСХ показала завершение реакции. К этой смеси добавляли H2O (30 мл) и этилацетат (20 мл). Органическую фазу отделяли, а водный слой экстрагировали этилацетатом (10 мл х 2). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (15 мл х 5), сушили на Na2SO4, концентрировали досуха под вакуумом и очищали препаративной ТСХ (ЭА:MeOH = 3:1), в результате чего получали целевой 1- [4-[(3-фторфенил)метиламино]-5-метил-7,8-дигидро-6H-пиридо [3,2^]пиримидин-2ил]индазол-4-карбоксамид FF11(6 мг, 26,4%) в форме белого твердого вещества. ЖХМС (M+H+) m/z:
рассч. 432,19; эксп. 432,3.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 8,73 (s, 1H, CH), 8,55 (d, J=8,0 Гц, 1H, C6H4), 7,34-7,54 (m, 3H, C6H4, 7,01-7,22 (m, 3H, C6H3), 6,12 (s, 2H, CONH2), 5,86 (s, 1H, NH), 3,10 (m, CH2), 2,93 (m, CH2), 2,69 (s, CH3), 1,62 (s, CH2).
Синтез 1-(4-((3-фторбензил)амино)-5-метил-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2^]пиримидин-2-ил)-2метил-1 ^индол^-карбоксамида FF12
Pd2(dba)3 X-Phos, Cs2CO3 диоксан, 100°C, 12 ч
CN
HN
ДМСО, 20°C, 4 ч
FF12
К раствору 2-хлор+-[(3-фторфенил)метил]-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2^]пиримидин-4-амина
пель). Затем смесь перемешивали при 25°C в пробирке для сушки в течение 8 ч. Затем добавляли NaBH3CN (644 мг, 10,27 ммоль). Смесь перемешивали при 80°C в течение еще 48 ч. Смесь нейтрализовали водой (20 мл), а затем экстрагировали этилацетатом (50 мл х 3). Объединенные органические слои
- 55 031317 очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир: этилацетат = от 10:1 до 5:1), в результате чего получали целевой 2-хлор-N-[(3-фторфенил)метил]-5-метил-7,8-дигидро-6H-пиридо[3,2-d]пиримидин-4амин (340 мг, 60,3%) в виде красного масла. ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 307,11; эксп. 307,10.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 7,32 (t, J=6,0 Гц, 1H, C6H4), 7,13 (d, J=7,6 Гц, 1H, C6H4), 7,06-7,00 (m, 2H, C6H4), 5,62 (s, 1H, NH), 4,69 (d, J=7,2 Гц, 2H, CH2Ph), 2,96-3,02 (m, 2H, CH2), 2,71-2,74 (m, 2H, CH2), 2,58 (s, 3H, CH3), 1,93-1,99 (m, 2H, CH2).
К суспензии 2-хлор-N-[(3-фторфенил)метил]-5-метил-7,8-дигидро-6H-пиридо[3,2-d]пиримидин-4амина (100 мг, 0,326 ммоль) и 2-метил-Ш-индол-4-карбонитрила (61 мг, 0,392 ммоль) в диоксане (10 мл) добавляли Pd2(dba)3 (60 мг, 0,065 ммоль), X-Phos (31 мг, 0,065 ммоль) и Cs2CO3 (214 мг, 0,978 ммоль). Затем смесь перемешивали при 100°C в течение 12 ч в атмосфере N2. ЖХМС показала соотношение продукт:побочный продукт (298) = 4:1. Смесь разбавляли водой (10 мл), а затем экстрагировали этилацетатом (10 мл х 3). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (10 мл), сушили на Na2SO4, концентрировали досуха под вакуумом и очищали препаративной ЖХВД (ТФУК), в результате чего получали целевой 1-[4-[(3-фторфенил)метиламино]-5-метил-7,8-дигидро-6H-пиридо[3,2d]пиримидин-2-ил]-2-метилиндол-4-карбонитрил (100 мг, 68,3%) в форме белого твердого вещества. ЖХМС (M+H) m/z: рассч. 427,20; эксп. 427,1.
К раствору 1-[4-[(3-фторфенил)метиламино]-5-метил-7,8-дигидро-6H-пиридо[3,2-d]пиримидин-2ил]-2-метилиндол-4-карбонитрила (90 мг, 0,211 ммоль) в ДМСО (10 мл) и H2O (1 мл) добавляли пероксид мочевины (99 мг, 1,055 ммоль) и K2CO3 (15 мг, 0,105 ммоль). Смесь перемешивали при 20°C в течение 4 ч. ТСХ показала завершение реакции. Смесь нейтрализовали водой (20 мл), а затем экстрагировали этилацетатом (10 мл х 3). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (10 мл х 5), сушили на Na2SO4, концентрировали досуха под вакуумом и очищали препаративной ТСХ (петролейный эфир:этилацетат = 1:3), в результате чего получали целевой 1-[4-[(3-фторфенил)метиламино]-5-метил-
7,8-дигидро-6H-пиридо[3,2-d]пиримидин-2-ил]-2-метилиндол-4-карбоксамид FF12 (30 мг, 33,8%) в форме белого твердого вещества. ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 445,22; эксп. 445,3.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 8,06 (d, J=8,0 Гц, 1H, C6H3), 7,51 (d, J=12 Гц, 1H, C6H3), 7,28-7,33 (m, 1H, C6H3), 7,00-7,14 (m, 4H, QH4, 6,80 (s, 1H, CH), 6,08 (s, 2H, CONH2), 5,77 (s, 1H, NH), 4,74 (d, J=6,0 Гц, 2H, PhCH2), 3,08-3,12 (m, 2H, CH2), 2,81-2,86 (m, CH2), 2,71 (s, 3H, CH3), 2,59 (s, 3H, CH3), 2,04-2,06 (m, 2H, CH2).
Синтез 1-(4-(бензиламино)-6,8-диметил-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3^]пиримидин-2-ил)-2-метилШ-индол-4-карбоксамида FF13
- 56 031317
Раствор BnNH2 (50,0 г, 0,47 моль) и метилметакрилата (56,04 г, 0,560 моль) в MeOH (1000 мл) перемешивали в течение 5 ч при 25°C в атмосфере N2. TCX показала, что осталось 70% исходного материала. Затем раствор нагревали до температуры дефлегмации и перемешивали в течение ночи. ТСХ показала завершение реакции. Затем раствор концентрировали в вакууме, в результате чего получали метил-3-(бензиламино)-2-метилпропаноат 2 (60 г, 62%) в виде розового масла.
Раствор соединения 2 (60,0 г, 0,29 моль) и метилакрилата (30,0 г, 0,35 моль) в MeOH (800 мл) нагревали до температуры дефлегмации и перемешивали в течение ночи. ТСХ показала завершение реакции. Затем раствор концентрировали в вакууме, в результате чего получали неочищенный продукт - метил 3-(бензил-(3-метокси-3-оксопропил)амино)-2-метилпропаноат 3 (70 г, чистота приблизительно 80%) в виде розового масла.
К раствору соединения 3 (20 г, 68,18моль) в толуоле (300 мл) медленно добавляли NaH (3,272 г, 81,81 ммоль). Смесь перемешивали при 90°C в течение 12 ч в атмосфере N2. TCX показала завершение реакции. После охлаждения реакционный раствор нейтрализовали добавлением 100 мл воды, затем экстрагировали этилацетатом (200 мл х 2). Объединенную органическую фазу концентрировали в вакууме и очищали хроматографией на колонке с силикагелем (петролейный эфир:этилацетат = от 50: 1 до 25:1), в результате чего получали метил 1-бензил-5-метил-4-оксопиперидин-3-карбоксилат 4 (13,6 г, 76,4%) в виде бесцветного масла. ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 262,14; эксп. 262,2.
К раствору соединения 4 (15 г, 0,06 моль) в MeOH (200 мл) медленно добавляли мочевину (6,89 г, 0,11 моль) и NaOMe (15,51 г, 0,29 моль). Смесь перемешивали при 70°C в течение 16 ч в атмосфере N2. TCX показала завершение реакции. Затем смесь охлаждали до к.т., а затем фильтровали. Остаток на фильтре промывали этанолом (EtOH) (100 мл х 2) и сушили в вакууме, в результате чего получали продукт - 6-бензил-8-метил-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-2,4(1H,3H)-дион 5 (6,3 г, 40%) в форме белого твердого вещества. ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 272,14; эксп. 272,10.
Раствор соединения 5 (3,0 г, 0,011 моль) в POCl3 (100 мл) перемешивали при 120°C в течение 4 ч. ЖХМС показала завершение реакции; смесь концентрировали в вакууме, в результате чего получали остаток. Его разбавляли этилацетатом (200 мл) и вливали в воду (50 мл). Органические слои отделяли, сушили на Na2SO4, фильтровали и концентрировали, в результате чего получали неочищенное соединение 6, которое суспендировали в MTBE (50 мл) и фильтровали, в результате чего получали чистый 6бензил-2,4-дихлор-8-метил-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3^]пиримидин 6 (2,0 г, 54,58%) в виде желтого твердого вещества. ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 308,06; эксп. 308,1.
К раствору соединения 6 (4,1 г, 0,013 моль) в ДХЭ (150 мл) при 25°C в атмосфере N2 добавляли 1хлорэтилкарбонохлоридат (38,04 г, 0,266 моль). Смесь нагревали с обратным холодильником в течение 48 ч. ЖХМС показала завершение реакции; смесь концентрировали досуха и растворяли в безводном MeOH (150 мл) и перемешивали при 25°C в течение 12 ч. ЖХМС показала завершение реакции, смесь концентрировали досуха в вакууме, в результате чего получали неочищенный продукт. Его суспендировали в этилацетате (5 мл) и фильтровали, в результате чего получали чистый 2,4-дихлор-8-метил-5,6,7,8тетрагидропиридо[4,3^]пиримидин 7 (2,0 г, 68%) в виде желтого твердого вещества. ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 218,02; эксп. 218,1.
Смесь соединения 7 (2,0 г, 9,171 ммоль), Boc2O (2,999 г, 13,76 ммоль) и Et3N (1,853 г, 18,34 ммоль) в ДХМ (120 мл) перемешивали при 25°C в течение 3 ч. ТСХ и ЖХМС показали завершение реакции. Реакционную смесь концентрировали, в результате чего получали остаток, который суспендировали в MTBE (20 мл) и фильтровали, в результате чего получали чистый трет-бутил-2,4-дихлор-8-метил-7,8дигидропиридо[4,3-d]пиримидин-6(5H)-карбоксилат 8 (2,1 г, 72%) в виде желтого твердого вещества. ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 318,02; эксп. 318,1.
К раствору соединения 8 (1,9 г, 5,971 ммоль) и триэтаноламина (1,206 г, 11,94 ммоль) в ацетонитриле (ACN, 50 мл) добавляли BnNH2 (0,768 г, 7,165 ммоль). Смесь перемешивали при 85°C в течение 3,5 ч. ТСХ и ЖХМС показали завершение реакции, смесь концентрировали в вакууме, в результате чего получали остаток, который очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир/этилацетат = от 10/1 до 5/1), в результате чего получали трет-бутил 4-(бензиламино)-2-хлор-8-метил-7,8-дигидропиридо[4,3d]пиримидин-6(5H)-карбоксилат 9 (1,9 г, 82%) в виде желтого твердого вещества. ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 389,17; эксп. 389,2.
Смесь соединения 9 (389 мг, 1 ммоль), 2-метил-4-нитрилиндола (0,203 г, 1,3 ммоль), Pd2(dba)3 (0,275 г, 0,3 ммоль), X-Phos (0,187 г, 0,4 ммоль) и Cs2CO3 (0,652 г, 2 ммоль) в диоксане (50 мл) перемешивали при 100°C в течение 2 ч в атмосфере N2. ТСХ показала завершение реакции. Реакционную смесь концентрировали с получением остатка, который очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир/этилацетат = 5/1), в результате чего получали трет-бутил 4-(бензиламино)-2-(4-циано-2-метил-Шиндол-1-ил)-8-метил-7,8-дигидропиридо[4,3-d]пиримидин-6(5H)-карбоксилат 10 (0,34 г, 67%) в виде желтого твердого вещества. ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 509,27; эксп. 509,3.
Раствор соединения 10 (0,28 г, 0,551 ммоль) в ТФУК (20 мл, 20% в ДХМ) перемешивали при 25°C в течение 12 ч. ЖХМС показала завершение реакции, смесь вливали в насыщ. NaHCO3 (250 мл) и экстрагировали этилацетатом (100 мл х 2). Объединенную органическую фазу сушили на Na2SO4, фильтровали и концентрировали, в результате чего получали 1-(4-(бензиламино)-8-метил-5,6,7,8
- 57 031317 тетрагидропиридо[4,3-0]пиримидин-2-ил)-2-метил-1Н-индол-4-карбонитрил 12 (0,13 г, 60%) в виде желтого твердого вещества. ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 409,21; эксп. 409,3.
Смесь соединения 12 (110 мг, 0,269 ммоль), (CH2O)n (72,71 мг, 0,808 ммоль) и трех капель AcOH в ТГФ (40 мл) перемешивали при 25°C в течение 3 ч, после чего к смеси добавляли NaBH3(AcO)3 (171,26 мг, 0,808 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 90°C в течение 12 ч. ЖХМС показала завершение реакции, реакционную смесь концентрировали в вакууме с получением остатка, который очищали препаративной ТСХ, в результате чего получали 1-(4-(бензиламино)-6,8-диметила-5,6,7,8тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-2-ил)-2-метил-1H-индол-4-карбонитрил 13 (0,095 г, 83,5%) в виде желтого твердого вещества. ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 423,23; эксп. 423,3.
Смесь соединения 13 (95 мг, 0,098 ммоль), пероксида мочевины (0,106 г, 0,001 моль) и K2CO3 (0,031 г, 0,225 ммоль) в ДМСО/H2O (6,0 мл, об./об., 10/1) перемешивали при 25°C в течение 12 ч. ЖХМС показала завершение реакции. Реакционную смесь вливали в H2O (15 мл) и экстрагировали этилацетатом (25 мл х 2). Объединенную органическую фазу сушили на Na2SO4, фильтровали и концентрировали с получением остатка. Его очищали препаративной ТСХ, в результате чего получали 1-(4-(бензиламино)-6,8диметилаАА^^-тетрагидропиридо^Д-^пиримидин^-ил^-метил-Ш-индолА-карбоксамид FF13 (35 мг, 35,3%) в виде желтого твердого вещества. ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 441,2; эксп. 441,3.
1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-й6): δ 7,81 (t, J=8,4 Гц, 1H, Ph), 7,68-7,60 (m, 2H, CONH2), 7,44-7,73 (m, 1H, Ph), 7,34-7,24 (m, 5H, Ph), 6,91-6,84 (m, 2H, Ph), 4,64 (d, J=6,4 Гц, 2H, CH2Ph), 3,45-3,31 (m, 4H, CH2NCH2), 2,87-2,83 (m, 2H, CHCH3+NH), 2,54 (s, 3H, NCH3), 2,37 (s, 3H, CH3), 1,30 (d, J=2,8 Гц, 3H, CH3CH).
Синтез 1-(4-((3-фторбензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидрохиназолин-2-ил)-Ш-индазол-4-карбоксамида FF14
К раствору этил 2-оксоциклогексанкарбоксилата (20,00 г, 117,50 ммоль) в EtOH (250,00 мл) добавляли мочевину (9,17 г, 152,76 ммоль) при к.т. в атмосфере N2. Раствор перемешивали при к.т. в течение 5 мин. Затем добавляли одной порцией MeONa (12,70 г, 235,01 ммоль) в MeOH (200 мл). Белую суспензию нагревали до 80°C и перемешивали в течение 16 ч. В процессе перемешивания выпадал белый осадок. ТСХ показала завершение реакции. Затем суспензию фильтровали. Остаток на фильтре промывали метил-трет-бутиловым эфиром (MTBE) (50 мл х 2), а затем сушили под вакуумом, в результате чего получали целевой 5,6,7,8-тетрагидрохиназолин-2,4(1H,3H)-дион (14,00 г, выход 65%, чистота 90% 'И-ЯМР) в виде белого порошка.
'Н-ЯМР (400 МГц, CD3OD): δ 8,54 (br s, 2Н, CONH), 2,38 (m, 2H, CH2CH2CCONH), 2,30 (m, 2H, CH2CH2CNHCO), 1,71 (m, 4H, CH2CH2CH2CH2).
Суспензию 5,6,7,8-тетрагидрохиназолин-2,4(1H,3H)-диона (25,0 г, 0,151 моль) в POCl3 (100 мл) нагревали до 120°C и перемешивали в течение 2 ч. ТСХ показала завершение реакции. Затем смесь концентрировали под вакуумом. Остаток растворяли в EtOAc (200 мл) и медленно вливали в насыщ. NaHCO3 (500 мл) при 0°C. Затем органическую фазу отделяли, а водную фазу экстрагировали этилацетатом (200
- 58 031317 мл х 2). Объединенную органическую фазу сушили на Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с использованием колонки с силикагелем (петролейный эфир/EtOAc = от 20/1 до 10/1), в результате чего получали 2,4-днхлор-5,6,7,8-тетрагидрохнназолнн (10,3 г, чистота согласно ЖХМС 99,9%) в виде белого порошка. 1Н-ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ 2,89 (m, 2H, CH2CH2CCONH), 2,73 (m, 2H, CH2CH2CNHCO), 1,88 (m, 4H, CH2CH2CH2CH2).
Смесь 2,4-днхлор-5,6,7,8-тетрагидрохнназолнна (1,0 г, 4,9 ммоль), (3-фторфенил)метанамина (796 мг, 6,37 ммоль) и триэтаноламина (1,48 г, 14,7 ммоль) в MeCN (50 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 4 ч в атмосфере N2. TCX показала почти полное завершение реакции. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир/этилацетат = от 10/1 до 5/1), в результате чего получали целевой 2-хлор-№(3-фторбензил)-5,6,7,8тетрагидрохиназолинЧ-амин (800 мг, 56% выход) в форме белого твердого вещества. ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 292,10; эксп. 292,1.
Смесь 2-хлор-N-[(3-фторфенил)метил]-5,6,7,8-тетрагидрохнназолнн-4-амнна (20 мг, 68,5 мкмоль), Ш-индазол-4-карбонитрила (12 мг, 82,3 мкмоль), Pd2(dba)3 (13 мг, 13,7 мкмоль), Cs2CO3 (67 мг, 206 мкмоль) и X-Phos (7 мг, 13,7 мкмоль) в диоксане (5 мл) перемешивали при 100°C в течение 4 ч в атмосфере N2. TCX показала соотношение исходный материал: целевой материал = 2:1. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир/этилацетат = от 10/1 до 5/1), в результате чего получали 1-(4-((3-фторбензил)амнно)-5,6,7,8-тетрагидрохнназолнн-2-ил)Ш-индазол-4-карбонитрил (20 мг, 73%) в виде светло-желтого твердого вещества. ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 399,17; эксп. 399,2.
Смесь 1-[4-[(3-фторфенил)метиламино]-5,6,7,8-тетрагидрохиназолин-2-ил]индазол-4-карбонитрила (90 мг, 0,23 ммоль), пероксида мочевины (21,25 мг, 0,23 ммоль) и K2CO3 (31,22 мг, 0,23 ммоль) в ДМСО (10 мл) и воде (1 мл) перемешивали при 20°C в течение 16 ч в атмосфере N2. TCX показала почти полное завершение реакции. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и очищали препаративной ЖХВД (H2O, MeCN, HCl), в результате чего получали целевой 1-(4-((3-фторбензил)амино)-5,6,7,8тетрагидрохиназолин^-илЕШ-индазолЧ-карбоксамид FF14 (20 мг, 21,3%) в форме белого твердого вещества. ЖХМС (M+H+) m/z: рассч.: 417,18; эксп.:417,2.
1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-de): δ 9,11 (s, 1H, CONH2), 8,91 (s, 1H, 3-H пиразола), 8,30-8,26 (m, 2H, Ph), 7,87-7,85 (m, 1H, Ph ), 7,71 (s, 1H, CONH2), 7,56-7,54 (m, 1H, Ph), 7,43-7,42 (m, 2H, Ph), 7,09 (m, 1H, CH2NH), 4,88-4,87 (m, 2Н, CH2NH), 2,82 (s, 2H, NCCH2), 1,84 (s, 4H, CH2CH2CH2CH2).
Синтез 1-(4-((3-фторбензил)амнно)-6,7-днгидро-5H-пнрано[2,3-d]пирнмиднн-2-ил)-2-метоксн-1Hбензо^]имидазол-4-карбоксамида FF15
К смеси соединения 1 (13 г, 0,057 моль) в ДХМ (650 мл) порциями добавляли метахлорпербензойную кислоту (m-CPBA) (73,69 г, 0,342 моль). Полученную смесь перемешивали при к.т. в течение ночи. ЖХМС показала завершение реакции. Смесь фильтровали и нейтрализовали фильтрат 5% Na2S2O3 (500 мл), затем осторожно добавляли NaHCO3 (500 мл). Органическую фазу отделяли, промывали солевым раствором (300 мл), сушили на Na2SO4, фильтровали и концентрировали, в результате чего
- 59 031317 получали неочищенное соединение 2. Его разбавляли этилацетатом (100 мл) и фильтровали, в результате чего получали чистый 2,4-бис(метилсульфонил)-6,7-дигидро-5Н-пирано[2,3-й]пиримидин 2 (15 г, 72%) в форме белого твердого вещества. ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 293,03; эксп.:293,0.
Смесь соединения 2 (10,0 г, 0,034 моль) в 10% NaOH (200 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 3 ч. ТСХ показала завершение реакции, смесь подкисляли соляной кислотой (HCl, 10%) до pH 2 и собирали твердые вещества фильтрацией, в результате чего получали 6,7-дигидро-1H-пирано[2,3d]пиримидин-2,4(3H,5H)-дион 3 (3,5 г, 60,8%) в форме белого твердого вещества. ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 169,06; эксп. 169,10.
Смесь соединения 3 (3,5 г, 0,021 моль) в POCl3 (80 мл) перемешивали при 100°C в течение 12 ч. ТСХ показала завершение реакции, смесь концентрировали в вакууме с получением остатка, который разбавляли дихлорметаном (500 мл) и вливали в смесь лед/вода (200 мл). Органические слои отделяли и промывали насыщенным раствором NaHCO3 (150 мл), солевым раствором (150 мл), сушили на Na2SO4, фильтровали и концентрировали с получением остатка. Его очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир/этилацетат = 10/1), в результате чего получали 2,4-дихлор-6,7-дигидро-5H-пирано[2,3й]пиримидин 4 (2,2 г, 51,5%) в форме белого твердого вещества. ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 204,99; эксп. 205,1.
Смесь промежуточного соединения 4 (1,0 г, 0,005 моль), амина 5 (0,671 г, 0,005 моль) и триэтаноламина (0,985 г, 0,010 моль) в триэтаноламине (ACN) (50 мл) перемешивали при 90°C в течение 12 ч. ЖХМС показал образование 60% продукта, смесь концентрировали, в результате чего получали остаток, который перемешивали в этилацетате (10 мл) и фильтровали, в результате чего получали чистый 2-хлорN-(3-фторбензил)-6,7-дигидро-5H-пирано[2,3-d]пиримидин-4-амин 6 (0,4 г, 28%) в форме белого твердого вещества. ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 294,08; эксп. 294,1. Смесь промежуточного соединения 6 (100 мг, 0,340 ммоль), соединения 7 (70,75 мг, 0,409 ммоль), Pd2(dba)3 (93,53 мг, 0,102 ммоль), X-Phos (63,70 мг, 0,136 ммоль) и K2CO3 (0,094 г, 0,68 ммоль) в диоксане (30 мл) перемешивали при 100°C в течение 2 ч в атмосфере N2. ТСХ показала завершение реакции. Смесь концентрировали с получением остатка, который очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир/этилацетат = 5/1), в результате чего получали 1-(4-((3-фторбензил)амино)-6,7-дигидро-5H-пирано[2,3-d]пиримидин-2-ил)-2-метокси-1H-бензо[d] имидазол-4-карбонитрил 8 (0,11 г, 75,1%) в виде желтого твердого вещества. ЖХМС (M+H+) m/z: рассч. 431,16; эксп. 431,2.
Смесь соединения 7 (90 мг, 0,209 ммоль), оксима ацетальдегида (24,67 мг, 0,418 ммоль), PPh3смолы (17 мг, 0,042 ммоль) и Pd(OAc)2 (9 мг) в EtOH H2O (5 мл, об./об. = 10/1) перемешивали при 80°C в течение 4 ч. ЖХМС показала завершение реакции. Реакционную смесь концентрировали в вакууме, в результате чего получали остаток, который очищали препаративной ТСХ, в результате чего получали 1(4-((3-фторбензил)амино)-6,7-дигидро-5H-пирано[2,3-d]пиримидин-2-ил)-2-метокси-1H-бензо[d]имидазол-4-карбоксамид FF15 (0,044 г, 47%) в форме белого твердого вещества. Масс-спектрометрия низкого разрешения (M+H+) m/z: рассч. 449,17; эксп. 449,30.
1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО^): δ 8,76 (s, m, CONH2), 7,82-7,76 (m, 3H, Ph), 7,42-7,40 (m, 2H, Ph, CONH2), 7,18-7,13 (m, 3H, Ph, NH), 7,04-7,02 (m, 1H, Ph), 4,61 (d, J=6A Гц, 2H, CH2Ph), 4,32-4,30 m, 2H, OCH2CH2), 4,15 (s, 3H, OCH3), 2,02-l,98( m, 2H, OCH2CH2CH2).
Синтез 1-(4-((3-фторбензил)амино)-6,7-дигидро-5H-пирано[2,3-d]пиримидин-2-ил)-1H-индазол-4карбоксамида FF16
Смесь соединения 1 (50 мг, 0,170 ммоль), соединения 2 (29,24 мг, 0,204 ммоль), Pd2(dba)3 (46,67 мг,
0,051 ммоль), X-Phos (31,85 г, 0,068 ммоль) и Cs2CO3 (0,111 г, 0,34 ммоль) в диоксане (10 мл) перемеши
- 60 031317 вали при 110°C в течение 24 ч, параллельно проводили четыре одинаковых реакции. ЖХМС показала завершение реакции; объединяли четыре реакционные смеси, концентрировали, в результате чего получали остаток, который очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир/этилацетат=1/1), в результате чего получали 1-(4-((3-фторбензил)амино)-6,7-дигидро-5Н-пирано[2,3Д]пиримидин-2-ил)-1Ниндазол-4-карбонитрил 3 (163 мг, 43%) в форме белого твердого вещества. ЖХМС (М+Н+) m/z: рассч. 401,15; эксп. 401,20.
Раствор соединения 3 (123 мг, 0,307 ммоль), пероксида мочевины (0,144 г, 0,002 моль) и K2CO3 (0,042 г, 0,307 ммоль) в ДМСО/НЮ (10/1, 7 мл) перемешивали при 25°C в течение 2 ч. ТСХ и ЖХМС показали завершение реакции. Смесь вливали в НЮ (30 мл) и экстрагировали этилацетатом (80 мл χ 2). Объединенный органический слой сушили на Na2SO4, фильтровали и концентрировали с получением остатка, который очищали препаративной ТСХ, в результате чего получали целевой 1-(4-((3фторбензил)амино)-6,7-дигидро-5Н-пирано[2,3Д]пиримидин-2-ил)-1Н-индазол-4-карбоксамид FF16 (53 мг, 41%) в виде желтого твердого вещества. ЖХМС (М+Н+) m/z: рассч. 419,2; эксп. 419,16.
Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-dJ: δ 8,61 (s, 1Н, Ph), 8,40 (d, J=8,4 Гц, 1Н, Ph), 8,15-8,10 (m, 1Н, CON 12). 7,71-7,67 (m, 2Н, Ph), 7,53-7,52 (m, 1Н, CON N. 7,40-7,36 (m, 2Н, Ph), 7,36-7,25 (m, 2Н, PhN 1). 7,15-7,05 (m, 1Н, Ph), 4,73 (d, J=6,0 Гц, 2Н, PhC^), 4,31 (t, J=4,4 Гц, 2Н, OCH2CH2CH2), 2,02-1,98 (m, 2Н,
Биологические протоколы
Ниже приведено краткое описание биологических тестов in vitro и in vivo по определению противораковых свойств конденсированных пиримидинов согласно настоящему изобретению. Детали этих протоколов демонстрируют как проводятся указанные анализы.
Протокол биохимического анализа p97.
Анализ p97 представляет собой первоначальный скрининг-тест, использующийся для определения ингибирующей активности конденсированных пиримидинов согласно настоящему изобретению в отношении комплекса p97. Как обсуждалось выше, ингибирование активности протеасомного комплекса p97 может вызывать апоптоз и привести к уничтожению опухолевых клеток (раковых клеток). Метод взят из Christianson в Nat. Cell Biol., (2011) 14:93.
Реагенты, использующиеся в анализе p97 включают буфер для анализа, представляющий собой смесь 50 мМ Трис рН 7,5, 20 мМ MgCl2, 0,02% TX-100, 1 мМ DTT и 0,2% (об./об.) глицерин. Луночный планшет представляет собой 384-луночный планшет Corning 3674. Набор для идентификации представляет собой набор ADP-Glo (Promega): буфер для остановки реакции, реагент для детектирования.
Анализ в соответствии с протоколом осуществляли следующим образом.
Делают серийное разведение соединения в ДМСО в соотношении 1:3,33 в количестве 10 серийных разведений.
В каждую лунку 384-луночного планшета добавляют следующие реагенты:
0,5 мкл соединения, серийно разведенного в ДМСО (конечная концентрация 10%), мкл АТФ (конечная концентрация = 20 мкМ, разбавленный в буфере для анализа),
2,5 мкл p97 (конечная концентрация = 20 нМ, разбавленный в буфере для анализа).
Инкубируют при 37°C в течение 15 мин.
Добавляют 5 мкл буфера для остановки реакции, инкубируют при комнатной температуре в течение 40 мин.
Добавляют 10 мкл реагента для детектирования, инкубируют при комнатной температуре в течение 30 мин.
Считывают данные люминесценции с помощью спектрофотометра Envision для прочтения планшетов.
Данные, полученные в результате считывания люминесценции, могут быть исследованы следующим образом.
Нормируют данные люминесценции с использованием контролей без фермента (полное ингибирование) и без соединения (отсутствие ингибирования). Строят график нормированных значений люминесценции в зависимости от значений концентрации в логарифмической шкале и сглаживают сигмоидную функцию для определения значений IC50 (осуществляют с помощью программного обеспечения Collaborative Drug Discovery).
Анализ проницаемости с клетками Caco-2.
Указанный анализ разрабатывался в качестве модели для определения способности конденсированного пиримидина согласно настоящему изобретению к прониканию через барьер желудок-кровь. Результаты покажут, могут ли конденсированные пиримидины эффективно всасываться в кровяное русло пациента или нет. Действенная, эффективная абсорбция перорально введенного лекарственного средства частично определяет его биодоступность. Для конденсированных пиримидинов согласно настоящему изобретению этот анализ представляет собой модель оценки биодоступности соединений, определяемой их способностью к прохождению через биологические барьеры для попадания в физиологические системы пациента.
Экспериментальной целью анализа Caco-2 является измерение направленного прохождения иссле
- 61 031317 дуемых соединений через Caco-2 в культивируемых монослоях Caco-2.
Исследуемыми соединениями являются конденсированные пиримидины согласно настоящему изобретению.
Организация
Инструменты.
Инкубатор тканевых культур в атмосфере CO2 с контролем влажности.
Устройство подачи жидкостей.
Круговая качалка.
Эпителиальный вольт-омметр EVOM, оснащенный плоскими электродами (World Precision Instruments, Sarasota, Флорида), необходимыми для измерения трансэпителиального электрического сопротивления (TEER).
Настольная центрифуга с адаптером для 96-луночного планшета.
Клетки Caco-2 (колоректальная карцинома человека, ATCC #37-HTB, пассажи 30-45).
Клетки высевали на мембраны из PET (размер пор 1 мкм, площадь поверхности 0,31 см2) внутрь многолуночной системы введения Falcon HTS с использованием 24-луночных планшетов (планшеты Becton Dickinson, изделие № 351181, Fisher Scientific, Inc.) при плотности 23000 клеток/на лунку. Клетки выращивали 20-23 дней со сменой питательной среды каждые 2-3 дня.
Реагенты.
Раствор буфера Рингера (pH 7,4 при 25°C).
Буфер Рингера с 1% метанолом.
Раствор Blk: буфер Рингера: метанол=2:1 (об./об.); 100% метанол с внутренним стандартом (IS); 10 мМ раствор для введения для хранения в ДМСО; 100 мкМ раствор для введения в буфере.
Краткое описание протокола
Проницаемость Caco-2:20-23 дня/пассажи 30-45.
Вкладыши трансвел в 24-луночном формате: площадь поверхности 0,31 см2.
Концентрация вводимого вещества: 100 мкМ, включая 1% ДМСО.
A: 300 мкл pH 7,4, B: 1200 мкл, pH 7,4, буфер Рингера.
Направленность: A B и B A (N=4).
Отбор образцов со стороны введения: 20 мкл в начале и в конце (90 мин).
Отбор образцов со стороны отбора: 100 мкл через 30, 50, 70 и 90 мин.
Инкубация при 50 встряхиваниях в минуту, 37°C, 5% CO2; 95% влажность.
Метод анализа: ЖХ-УФ, ЖХ-МС или ЖТХ.
Данные на выходе: Peff (см/с) = (dX/dt)/(A*Cox60), dX/dt: профиль транспортированного в получающую камеру количества (нмоль) в зависимости от времени (минуты); A: площадь поверхности (см2); Co: начальная концентрация вводимого вещества (мкМ).
Положительный контроль: атенолол и пропранолол.
Целостность мембраны: TEER >200 Осм2.
Требующееся количество: приблизительно 1 мг или 100 мкл 10 мМ раствора исследуемого соединения в ДМСО.
Инструменты: инкубатор с CO2 с контролем влажности, устройство подачи жидкости, эпителиальный вольт-омметр для измерения TEER, клетки Caco-2 (ATCC #37-HTB), и 24-луночные планшеты со вставками (мембраны из PET, размер пор 1 мкм, площадь поверхности 0,31 см2, изделие № 351181), Becton Dickinson.
Пропускная способность: 6 соединений/2 планшета Caco-2/1 FTE/день.
Получение.
- 62 031317
Таблица 2
Получение буфера Рингера с глюкозой (изотоничность = 290 мОсм-кг), pH 7,4
Химическое содинение Молекулярная масса Концентрация Вес (г) на 1 л Вес (г) на 2 л Вес (г) на 4 л
CaSO4 2Н2О 172,2 1,25 мМ 0,2152 0,4305 0,861
MgSO4 7Н2О 246,5 1,1 мМ 0,2712 0,5423 1,0846
КС1 74,55 5 мМ 0,3728 0,7455 1,491
Na2HPO4 142,0 1,15 мМ 0,1633 0,3266 0,6532
NaH2PO4 н2о 138,0 0,3 мМ 0,0414 0,08 0,1656
NaHCO3 84,01 25 мМ 2,100 4,200 8,401
Глюкоза (С6Н12О6) 180,2 25 мМ 4,505 9,01 18,02
NaCl 58,44 110мМ 6,428 12,86 25,71
Приготовление 4 л раствора.
1. К 3,5 л дистиллированной воды добавляют сульфат кальция и сульфат магния. Замечание: сначала добавляют сульфат кальция и сульфат магния ввиду плохой растворимости и добавляют оставшиеся ингредиенты.
2. Доводят окончательный объем раствора до 4 л дистиллированной водой при постоянном перемешивании.
3. Доводят pH конечного раствора до 7,4 с использованием 1N HCl или 1N NaOH.
4. Делают указанный буфер изоосмотическим с использованием NaCl. Измеряют тоничность раствора с использованием тонометра. При условии, что изотонический раствор является эквивалентом 0,9% NaCl (290 мОсм/л), y={(290-x)/290}*9 мг*4000 мл, где y - NaCl, требующегося (в мг) для получения изотонического раствора и x - наблюдаемая тоничность раствора (измеренная в мОсм/л).
Приготовление раствора для введения в 15 мл пробирке из полипропилена.
1. 100 мкМ раствор для введения в RG: 140 мкл 10 мМ исходного раствора + (14 мл - 140 мкл) RG. Приготовление калибровки в 96 неглубоких лунках.
1. Готовят 10 мкМ стандарта: 100 мкл 100 мкМ раствора для введения + 0,9 мл буфера Рингера с 1% метанола.
2. Готовят растворы аналитических стандартов 10, 5, 2, 1, 0,5, 0,2, 0,1, 0,05, 0,02, 0,01 и 0 мкМ (см. табл. 4).
- 63 031317
Таблица 3
Приготовление аналитической градуировки в 96 неглубоких лунках
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
0 20 мкл ОД мкМ 20 мкл 0,2 мкМ 20 мкл 0,5 мкМ 20 мкл 1 мкМ 20 мкл 2 мкМ 20 мкл 5 мкМ 20 мкл 10 мкМ 40 мкл 10 мкМ 100 мкл 10 мкМ 200 мкл 10 мкМ Исходный раствор
180 мкл 180 мкл 180 мкл 180 мкл 180 мкл 180 мкл 180 мкл 180 мкл 160 мкл 100 мкл 0 1%МеОН в буфере
Со ед. 1 0,01 мкМ 0,02 мкМ 0,05 мкМ 0,1 мкМ 0,2 мкМ 0,5 мкМ 1 мкМ 2 мкМ 5 мкМ 10 мкМ
Со ед. 2
Со ед. 3
Изучение транспорта.
Введение и отбор проб.
1. Уравновешивают обе стороны микрослоев в течение 10 мин в предварительно нагретом (37°C) буфере Рингера без исследуемых соединений (300 мкл в верхней части, 1200 мкл в базолатеральной части) с добавкой глюкозы (25 мМ).
2. Измеряют TEER в условиях водяной бани при 37°C.
Замечание: указанное значение TEER служит для проверки качественного контроля целостности монослоя. Через 21 день после высевания каждый монослой с клетками Caco-2 должен иметь значение TEER большее чем 2000*см2 или равное ему, а те монослои, которые не соответствуют этому критерию, считаются непригодными для оценки проникающей способности.
3. Затем изучают транспорт из A в B: наполняют базолатеральную часть 1200 мкл буфера Рингера. Начинают эксперименты по транспорту посредством добавления раствора для введения с исследуемым веществом (320 мкл) в верхнюю часть.
4. Затем изучают транспорт из B в A: наполняют верхнюю часть 300 мкл буфера Рингера посредством добавления раствора для введения с исследуемым веществом (1220 мкл) в базолатеральную часть. Исследования транспорта в каждом направлении (из A в B, из B в A) осуществляют в четырех повторах для каждого исследуемого соединения.
5. Включают таймер после введения дозы в последнюю лунку.
6. Отбирают 20 мкл аликвоты из указанной лунки для введения в момент времени 0 мин (D0) и переносят эти аликвоты в лунки для введения в 96-луночном планшете, содержащие 180 мкл буфера с 1% метанолом. На этой стадии происходит разбавление D0 в десять раз.
7. Начинают исследования транспорта путем размещения планшета в круговую качалку, установленную внутри инкубатора, в которм поддерживают температуру (37°C) и влажность (5% CO2). Исследования осуществляют в условиях перемешивания при 50 встряхиваниях в минуту.
8. Отбирают 100 мкл аликвоты со стороны монослоя для отбора проб при 30, 50, 70, и 90 мин после введения и переносят эти аликвоты в соответствующую лунку 96-луночного планшета для образцов (см. табл. 4). Добавляют эквивалентный объем предварительно нагретого буфера.
9. Отбирают 20 аликвоты из указанной лунки для введения в момент времени 90 мин после введения (Df) и переносят эти аликвоты в лунки для введения в 96-луночном планшете, содержащие 180 мкл буфера с 1% метанола. На этой стадии происходит разбавление Df в десять раз.
10. Наполняют обе стороны монослоя свежим, не содержащим соединения предварительно нагретым буфером Рингера (300 мкл в верхней части, 1200 мкл в базолатеральной части) и уравновешивают в течение 10 мин.
11. Измеряют TEER в условиях водяной бани при 37°C.
Обработка образцов.
Последующие стадии относятся к 96-луночному аналитическому планшету для анализа Caco-2, табл. 4.
1. Переносят 20 мкл разбавленных D0 и Df в соответствующий 96-луночный планшет для образцов, каждая лунка которого содержит 80 мкл буфера с 1% метанола. На этой стадии образцы эффективно раз- 64 031317 бавляются еще в пять раз. Следовательно, вводимые образцы разбавляются в 50 раз по сравнению с их начальной концентрацией.
2. Переносят 100 мкл аналитической градуировки (от 0 до 10 мкМ) в ряд 1 планшета для образцов.
3. Добавляют 50 мкл метанола, включая внутренний стандарт (IS), во все лунки для образцов и перемешивают (стандарты, образцы, D0 и Df).
4. Переносят 150 мкл раствора Blk в ряд 2 аналитического планшета.
5. Запечатывают аналитический планшет клейкой пленкой и хранят образцы с маркировкой при -80°C для анализа ЖХ-УФ или ЖХ-МС.
6. Анализируют 20 мкл аликвоты образцов с индивидуальной проницаемостью и стандартами с использованием подходящего аналитического инструмента.
7. Peff = ^ХМ1)/(А*С0х60), где Peff является эффективной проницаемостью в см/с, X - транспортированная масса, А - площадь поверхности (см)2, доступной для трансопрта, C0 - начальная концентрация вводимого вещества (мкМ) и dX/dt - угол наклона линии наилучшего соответствия между транспортированным количеством (нмоль) и временем (мин) в получающей камере.
Таблица 4
Аналитический планшет для Caco-2 (96-луночный планшет)
0 0,01 мкМ 0,02 мкМ 0,05 мкМ 0,1 mkM 0,2 mkM
Blk Blk Blk Blk из A bB
1-30 2-30 3-30 4-30
1 1-^'М О j-ju A 4·“^ V
1-70 2-70 3-70 4-70
1-90 2-90 3-90 4-90
1-Do 2Do 3-Do 4- Do
1-Df 2- Df 3-Df 4- Df
0,5 mkM 1 mkM 2 мкМ 5 mkM 10 mkM
из В в A Blk Blk Blk Blk
5-30 6-30 7-30 8-30
j-ju z: U_JU /-a V Q O_JU
5-70 6-70 7-70 8-70
5-90 6-90 7-90 8-90
5-Do 6-Do 7-Do 8-Do
5-Df 6- Df 7- Df 8-Df
Данные положительного контроля.
Данные Среднее в табл. 5 представляют среднее значение 12 отдельных экспериментов в преде лах суток.
Таблица 5 Peff (хЕ-6 см/с) в Caco-2 при pH 7,4
A В В A
Атенолол
Среднее 1,08 2,29
Диапазон 0,69-1,80 1,69-2,68
Пропранолол
Среднее 28,53 20,91
Диапазон 18,50-36,80 16,30-31,40
Анализ микросом печени мыши.
Анализ микросом печени представляет собой модель для изучения метаболической стабильности конденсированных пиримидинов согласно настоящему изобретению. Метаболическая стабильность является другим аспектом определения биодоступности. Способность соединения быть биоабсорбированным в кровяное русло, демонстрируемая в модели Caco-2, указывает на степень, в которой оральная доза соединения может достичь кровяного русла. Организм эффективно метаболизирует субстраты для вывода их из организма и/или для использования их в качестве питательных веществ. Этот аспект биодоступности может быть установлен посредством таких исследований, как метаболизм в микросомах печени. Будь-то окисление, конъюгирование или любой другой биологический путь, метаболизм лекарственных веществ определяет, по меньшей мере частично, время жизни лекарственного средства в организме.
Анализ с микросами печени мыши представляет собой модель, предназначенную для определения времени полужизни лекарственного средства in vivo. Ферменты печени ответственны за превращение веществ в материалы, которые могут быть легко выведены организмом. Другие маршруты для такого обмена веществ включают метаболизм почек, клеточный метаболизм и т.п.
В этом протоколе соединение инкубируют с препаратом микросом печени (белок) и НАДФ-Н.
- 65 031317
Смесь инкубируют и измеряют скорость исчезновения соединения из исследуемого раствора. Измерение осуществляют путем скрининга концентрации соединения в определенное время с использованием жидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией.
Концентрации реагентов для приготовления композиции в качестве исследуемого раствора
Белок: 1,0 мг/мл
Соединение: 1 мкМ
Органический растворитель: 0,4% ДМСО
Среда: 0,1 М фосфат калия (КВ) мМ НАДФ-Н (сигма N1630, FW 833,3, готовить свежий)
Готовят исследуемый материал (TA, т.е. соединение согласно настоящему изобретению) путем растворения твердого TA в ДМСО для получения 0,25 мМ раствора.
Количества растворов реагентов для объединения для получения исследуемого раствора
423 мкл КВ (фосфат калия) +25 мкл MLM (20 мг/мл) (образец микросом печени мыши)
448 мкл +2 мкл исследуемого соединения (конденсированный пиримидин в 0,25 мМ ДМСО) +50 мкл исходного раствора НАДФ-Н (10 мМ, 10 х)
500 мкл
Протокол исследования для проведения анализа.
1. Добавляют 423 мкл KB в 8 соединенных глубоких узких пробирок стрип.
2. Добавляют 25 мкл MLM для условий 1.
3. Помещают в лед, добавляют 2 мкл соединения (250 х исходный раствор в ДМСО, исходная концентрация 0,25 мМ).
4. Предварительно инкубируют реакционную смесь при 37°C в течение от 3 до 5 мин (встряхивание при 150 об/мин).
5. Начинают реакцию путем добавления 50 мкл НАДФ-Н для условий 1.
6. Добавляют 50 мкл KB для условий 2.
7. Отбирают аликвоты 100 мкл образцов в моменты времени 0, 15, 30, и 60 мин и добавляют 200 мкл смеси ацетонитрила, содержащей IS, для остановки реакции.
8. Центрифугируют в течение 10 мин при 4000 об/мин.
9. Супернатант вводят путем инъекции для анализа методом жидкой хроматографии, совмещенной с масс-спектрометрией (ЖХ-МС/МС).
Методика связывания белка C с использованием 96-луночного равновесного диализатора.
Неспецифическое связывание белка является еще одним аспектом, влияющим на биодоступность и эффективность лекарственного средства. Для того чтобы провести анализ соединения на неспецифическое связывание, указанное соединение смешивают с плазмой крови человека и раствор диализуют через мембрану, изготовленную таким образом, чтобы предотвратить прохождение крупных молекул, таких как белки плазмы крови человека, но обеспечить прохождение малых молекул, таких как соединения согласно настоящему изобретению. Как правило, такие мембраны обеспечивают прохождение таких соединений независимо от их состояния, в виде соли или в нейтральной форме. Диализат (раствор, прошедший через мембрану) изучают методами жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией для определения их идентичности и концентрации присутствующего соединения. Концентрация соединения в диализате по сравнению с концентрацией в смеси с соединениями плазмы крови указывает, произошло ли неспецифическое связывания с белками или нет.
Оборудование и реагенты:
96-луночный равновесный диализатор (производство Harvard Apparatus), планшетный ротатор с планшетами DIALYZER, закрепляющимися зажимным устройством, буфер: БФБР (Gibco, 1X), концентрация соединения: 1 мкМ (~0,5 мкг/мл) в плазме человека.
Методика.
1. Запечатывают пустую сторону для образца с окрашенной стороны крышками от стрипов.
2. Переворачивают планшет и осторожно вносят пипеткой буфер объемом 200 мкл, равный объему образца, в лунки на стороне для буфера (прозрачная рамка), не касаясь мембраны, позволяя жидкости протекать вдоль внутренней боковой стенки каждой лунки.
3. Аккуратно запечатывают заполненные буфером лунки крышками от стирпов.
4. Переворачивают пластины и осторожно снимают крышки от стирпов со стороны лунок для образцов. Вносят пипеткой необходимые образцы, не касаясь мембраны.
- 66 031317
5. Запечатывают лунки с образцами крышками от стрипов.
6. Задвигают собранный планшет DIALYZER в планшетный ротатор и вручную затягивают зажимы. Включают вращение и продолжают вращение до достижения равновесие (24 ч при 37°C), достают планшет DIALYZER из ротатора.
7. После того как равновесие достигнуто, достают планшет DIALYZER из ротатора.
8. Осторожно удаляют крышки от стрипов со стороны планшета для буфера (прозрачная рамка) и медленно отдирают пипеткой образцы для анализа из лунок, стараясь не касаться мембран и не повреждать их.
Образцы должны включать образцы контроля при 4°C и стабильности при 37°C в ФБР и плазме.
Анализ MC: готовят стандартный диапазон 5, 10, 50, 100, 500 и 1000 нг/мл в плазме.
Вносят пипеткой 10 мкл каждого из стандартов и образец в 40 мкл чистого буфера/чистой плазмы (соотношение: 1 плазма/4 БФБР), смешивают их. Добавляют 200 мкл IS (внутренний стандарт) в ACN, хорошо перемешивают. Центрифугируют образцы и супернатант отбирают для анализа ЖХ/МС.
Методика анализа клеток.
Анализ клеток позволяет получить информацию о противоопухолевой активности соединения согласно настоящему изобретению. Соединения испытывают в отношении культивируемых раковых клеток для определения, способны ли соединения согласно настоящему изобретению взаимодействовать с раковыми клетками, чтобы свести к минимуму или уничтодить такие клетки, или нет. Анализ включает в себя создание колоний таких клеток, а затем обработку их тестируемым соединением в определенных условиях и анализ режимов для определения результатов.
День 1. Посев клеток для образования колоний клеток рака.
Высевают клетки.
Клетки высевают за ~16 ч перед обработкой соединениями.
Высевают 25 мкл клеток A549 в каждую лунку 384-луночного планшета с использованием многоканального дозатора.
Два черных планшета для IF с содежанием 2500 клеток/на лунку. Оставляют планшет при комнатной температуре в течение 10-15 мин перед помещением в инкубатор, чтобы дать возможность клеткам прикрепиться в середине планшета.
Один белый планшет для оценки выживаемости с содержанием 500 клеток/лунка.
День 2. Обработка выращенных клеток исследуемыми соединениями.
Обрабатывают клетки.
Готовят серийные разведения соединений в 10 концентрациях 2-кратным серийным разведением в ДМСО, чтобы получить 250Х исходный раствор соединений.
Разводят соединения в соотношении 1:125 в среде для культивирования клеток, чтобы получить 2X раствор.
Добавляют 25 мкл разбавленных соединений в планшет с клетками в лунки в двух повторах.
Помещают клетки обратно в инкубатор (6 ч инкубации для черных планшетов, 72 ч инкубации для белых планшетов).
Фиксация/окраска черных планшетов.
Инкубируют клетки в черных планшетах соединениями при 37°C в течение 6 ч, добавляют 15 мкл 16% параформальдегида (PFA) непосредственно в среду в каждую лунку, инкубируют при комнатной температуре в течение 5 мин, вытряхивают жидкость из планшетов и промывают 50 мкл ФБР.
Блокируют 50 мкл буфера для блокирования в течение 30 мин (может продолжаться в течение нескольких часов).
Буфер для блокирования: 1Х ФБР, 1% БСА, 0,3% Тритон-Х100, Hoechst (1:10000) инкубируют в 25 мкл первичного антитела в блокирующем буфере при 4°C в течение ночи.
Первичные антитела.
Планшет A: K48-Ub 1:20,000 (millipore 05-1307 Lot 2049282) кролика.
CHOP/Gaddl53 1:2,000 (SC-7351) мыши.
Планшет B: P53 1:2,000 (SC-6243) кролика.
p62/SQSTMl 1:2,000 (SC-28359) мыши.
выдерживают в течение ночи при 4°C.
Вторичные антитела.
AlexaFluor488 козы против антител кролика t 1:2,000 (Life Tech A11008).
AlexaFluor555 козы против антител мыши 1:2,000 (Life Tech A21422).
День ¾.
Окрашивание черного планшета (продолжение):
промывают черные планшеты 3 раза 50 мкл ФБР (~5 мин каждый), инкубируют в 25 мкл вторичного антитела (1:2,000) буфере для блокирования в течение 1-2 ч при комнатной температуре (alexafluor488 против антител кролика/alexafluor555 против антител мыши), промывают 4 раза 50 мкл ФБР (~5 мин каждый), оставляют планшеты с ФБР для считывания,
- 67 031317 очищают дно планшетов 70% EtOH.
Считывание.
Прочитывают планшеты под микроскопом с фильтрами 405 нм, 488 нм и 555 нм.
Данные анализа.
Подсчитывают количество ядер и изучают интенсивность окраски клеток каждым из маркеров с использованием реагента Hoechst в качестве ядерного маркера с помощью протокола автоматического анализа изображений с использованием программного обеспечения Matlab (Math Works).
День 5.
Анализ выживаемости.
Размораживают аликвоты замороженных клеток Titer Glo (Promega G7572) при комнатной температуре.
Добавляют 45 мл раствора NaCl/ФБР к 5 мл клеток Titer Glo (10X).
Достают белые планшеты из инкубатора, оставляют при комнатной температуре в течение 30 мин.
Добавляют 25 мкл разбавленных клеток Titer Glo в каждую лунку.
Встряхивают планшет дольше 1 мин.
Инкубируют планшет дольше 5 мин для стабилизации люминесценции.
Люминесценция является стабильной вплоть до 3 ч.
Считывают люминесценцию на спектрофотометре для прочтения планшетов.
Заключительные заявления.
Изобретения, примеры, биологические анализы и результаты, описанные и заявленные в настоящем тексте, имеют разнообразные свойства и варианты реализации, включающие указанные, описанные или упоминающиеся в настоящей заявке, но не ограниченные ими.
Все патенты, публикации, научные статьи, веб-сайты и другие документы и материальны источники, цитируемые или упоминаемые в данном тексте, демонстрируют уровень техники в области, к которой принадлежит настоящее изобретение, и каждый из таких ссылочных документов и материалов включен в настоящий документ посредством ссылки в той же степени, как если бы он был буквально полностью приведен в настоящем тексте. Заявитель сохраняет за собой право физически включать в это описание любые и все материалы или информацию из этих патентов, публикаций, научных статей, веб-сайтов, информации, доступной в электронном виде, учебников или других цитируемых материалов или документов.
Письменное описание в данной патентной заявке включает все пункты формулы изобретения. Все пункты формулы изобретения, включая первоначальные, полностью включены текст путем ссылки часть заявки, представляющую собой письменное описание, и заявитель оставляет за собой право физически включать в письменное описание или любую другую часть заявки любые и все пункты формулы. Соответственно, например, ни при каких обстоятельствах нельзя считать, что настоящий патент не содержит письменного описания изобретения, заявленного в формуле, на основании того, что конкретная формулировка этого пункта формулы не приведена дословно в части патента, составляющей письменное описание.
Хотя настоящее изобретение было описано при помощи его подробного описания, описание выше предназначено для иллюстрации, а не для ограничения объема изобретения, который определяется объемом сопутствующей формулы изобретения. Соответственно, на основе вышесказанного предполагается, что хотя в настоящем документе с целью иллюстрации описаны конкретные неограничивающие варианты реализации изобретения, в него могут быть внесены различные модификации, которые не будут выходить за рамки замысла и объема настоящего изобретения. Другие аспекты и преимущества находятся в рамках объема нижеследующей формулы изобретения, настоящее изобретение не ограничивается ничем, кроме сопутствующей формулы изобретения.
Конкретные способы и композиции, описанные в настоящем документе, представляют примеры предпочтительных неограничивающих вариантов реализации, являются примерными и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения. Другие задачи, аспекты и варианты реализации станут понятны для специалиста после ознакомления с настоящим описанием; и все они включены в замысел настоящего изобретения, определенного формулой изобретения. Для специалиста будет очевидно, что в раскрытое здесь изобретение могут быть внесены различные замены и модификации, которые не будут выходить за рамки замысла и объема настоящего изобретения. Изобретение, проиллюстрированное в настоящем документе, может быть осуществлено в отсутствие любого элемента или элементов, либо ограничения или ограничений, которые не описаны здесь отдельно как существенные. Таким образом, например, в каждом употреблении в данном тексте, в наограничивающих вариантах реализации или примерах настоящего изобретения, термины содержащий, включающиий, включающий в себя и т.д. следует понимать в широком смысле и без ограничений. Способы и процессы, описанные в настоящем документе в качестве иллюстрации, можно, по необходимости, реализовывать, меняя порядок этапов, они не обязательно ограничиваются порядком этапов, приведенным в настоящем описании или формуле изобретения.
Используемые термины и выражения предназначены для описания, а не для ограничения, исполь
- 68 031317 зование таких терминов и выражений не предполагает исключения каких-либо эквивалентов показанных признаков или их частей, подразумевается, что возможны различные модификации в рамках объема заявленного изобретения. Соответственно, следует понимать, что хотя настоящее изобретение раскрыто с использованием различных неограничивающих вариантов реализации и/или предпочтительных неограничивающих вариантов реализации или необязательных признаков, считается, что любые и все модификации и варианты раскрытого в настоящем документе замысла, которые могут быть осуществлены специалистом в данной области, включены в объем настоящего изобретений, определенный прилагающейся формулой изобретения.
В настоящем документе изобретение описано широко и обще. Каждый более узкий вид или подвид, входящие в объем родового (общего) описания также являются частью изобретения. Это включает общее описание изобретения с оговоркой или исключением путем отрицательного ограничения любого объекта из этого рода, вне зависимости от того, упоминается ли конкретно исключаемый объект в настоящем тексте.
Также подразумевается, что в настоящем документе все термины единственного числа как в значении некоторый, один из, так и в значении этот, указанный включают множественное число, если из контекста явно не следует обратное. Например, термин X и/или Y обозначает X или Y или как X, так и Y, а множественное число существительного охватывает как единственную, так и множественную форму этого существительного. Дополнительно если признаки или аспекты настоящего изобретения описаны с использованием формул Маркуша, предполагается, и специалисты это поймут, что изобретение охватывает все индивидуальные элементы и подгруппы элементов группы Маркуша и описано с указанием каждого из них, при этом сохраняется пряво редактировать заявку или формулу изобретения путем конкретного указания любого элемента или подгруппы элементов группы Маркуша.

Claims (15)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Конденсированный пиримидин формулы IA или IB или его фармацевтически приемлемая соль, где A представляет собой NR5 или O;
    HET представляет собой радикал, выбранный из группы H4, H5 и H10 где R1 представляет собой карбоксил (-COOH) или карбоксамидо (-CONH2);
    R5 представляет собой водород или метил;
    R6 представляет собой водород, метил, этил, метокси или этокси;
    Ar представляет собой фенил или фторфенил.
  2. 2. Конденсированный пиримидин по п.1, в котором Ar представляет собой фенил.
  3. 3. Конденсированный пиримидин по любому из пп.1, 2, где R1 представляет собой карбоксамидо, R5 представляет собой водород, R6 представляет собой водород, метил или метокси.
  4. 4. Конденсированный пиримидин по п.3, где R6 представляет собой метил или метокси.
  5. 5. Конденсированный пиримидин по любому из пп.1-4, где HET представляет собой H4.
  6. 6. Конденсированный пиримидин по любому из пп.1-4, где HET представляет собой H5.
  7. 7. Конденсированный пиримидин по любому из пп.1-4, где HET представляет собой H10.
  8. 8. Конденсированный пиримидин по п.1, имеющий любое из приведенных ниже названий:
    1-(4-((3-фторбензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3-d]пиримидин-2-ил)-1H-индазол-4карбоксамид,
    1-(4-((3-фторбензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3-d]пиримидин-2-ил)-2-метокси-1Hбензо|Д]имидазол-4-карбоксамид,
    - 69 031317
    1-(4-((3-фторбензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3-d]пиримидин-2-ил)-2-метил-1H-индол-4карбоксамид,
    1-(4-((3-фторбензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2-d]пиримидин-2-ил)-1H-индазол-4карбоксамид,
    1-(4-((3-фторбензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2-d]пиримидин-2-ил)-2-метокси-1Hбензо Щимидазол-4-карбоксамид,
    1-(4-((3-фторбензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2-d]пиримидин-2-ил)-2-метил-1H-индол-4карбоксамид,
    1-(4-((3 -фторбензил)амино)-6,7-дигидро-5H-пирано |2.3-d| пиримидин^-илЕШ-индазол^карбоксамид,
    1-(4-((3 -фторбензил)амино)-6,7-дигидро-5H-пирано [2,3-d]пиримидин-2-ил)-2-метокси-1Hбензо [d] имидазол-4-карбоксамид,
    1-(4-((3-фторбензил)амино)-6,7-дигидро-5H-пирано[2,3-d]пиримидин-2-ил)-2-метил-1H-индол-4карбоксамид,
    1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3-d]пиримидин-2-ил)-1H-индазол-4-карбоксамид, 1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3-d]пиримидин-2-ил)-2-метокси-1Hбензо Щимидазол-4-карбоксамид, 1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3-d]пиримидин-2-ил)-2-метил-1H-индол-4карбоксамид,
    1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2-d]пиримидин-2-ил)-1H-индазол-4-карбоксамид, 1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2-d]пиримидин-2-ил)-2-метокси-1Hбензо [d] имидазол-4-карбоксамид, 1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2-d]пиримидин-2-ил)-2-метил-1H-индол-4карбоксамид, 1-(4-(бензиламино)-6,7-дигидро-5H-пирано[2,3-d]пиримидин-2-ил)-1H-индазол-4-карбоксамид, 1-(4-(бензиламино)-6,7-дигидро-5H-пирано [2,3-d]пиримидин-2-ил)-2-метокси-1Hбензо Щимидазол-4-карбоксамид,
    1-(4-(бензиламино)-6,7-дигидро-5H-пирано [2,3-d]пиримидин-2-ил)-2-метил-1H-индол-4карбоксамид,
    1-(4-((3-фторбензил)амино)-7,8-дигидро-6H-пирано[3,2-d]пиримидин-2-ил)-1H-индазол-4карбоксамид,
    1-(4-((3 -фторбензил)амино)-7,8-дигидро-6H-пирано [3,2-d]пиримидин-2-ил)-2-метокси-1Hбензо Щимидазол-4-карбоксамид, 1-(4-((3-фторбензил)амино)-7,8-дигидро-6H-пирано[3,2-d]пиримидин-2-ил)-2-метил-1H-индол-4карбоксамид,
    1-(4-(бензиламино)-7,8-дигидро-6H-пирано[3,2-d]пиримидин-2-ил)-1H-индазол-4-карбоксамид, 1-(4-(бензиламино)-7,8-дигидро-6H-пирано[3,2-d]пиримидин-2-ил)-2-метокси-1Hбензо Щимидазол-4-карбоксамид,
    1-(4-(бензиламино)-7,8-дигидро-6H-пирано[3,2-d]пиримидин-2-ил)-2-метил-1H-индол-4карбоксамид,
    3-(4-((3 -фторбензил)амино)-7,8-дигидро-6H-пирано [3,2-d]пиримидин-2-ил)-2-метил-1H-индол-7 карбоксамид.
  9. 9. Конденсированный пиримидин по п.8, имеющий одно из следующих названий: 1-(4-((3-фторбензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3-d]пиримидин-2-ил)-2-метил-1H-индол-4карбоксамид,
    1-(4-((бензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3-d]пиримидин-2-ил)-2-метил-1H-индол-4карбоксамид,
    1-(4-((3-фторбензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3-d]пиримидин-2-ил)-2-метокси-1H-индол4-карбоксамид, 1-(4-((бензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[2,3-d]пиримидин-2-ил)-2-метокси-1H-индол-4карбоксамид,
    1-(4-((3-фторбензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2-d]пиримидин-2-ил)-2-метил-1H-индол-4карбоксамид, 1-(4-((бензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2-d]пиримидин-2-ил)-2-метил-1H-индол-4карбоксамид,
    1-(4-((3-фторбензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2-d]пиримидин-2-ил)-2-метокси-1H-индол4-карбоксамид, 1-(4-((бензил)амино)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,2-d]пиримидин-2-ил)-2-метокси-1H-индол-4карбоксамид,
    1-(4-(бензиламино)-7,8-дигидро-6H-пирано [3,2-d]пиримидин-2-ил)-2-метил-1H-индол-4карбоксамид,
    1-(4-(бензиламино)-7,8-дигидро-6H-пирано [3,2-d]пиримидин-2-ил)-2-метокси-1H-индол-4- 70 031317 карбоксамид,
    1-(4-(3-фторбензиламино)-7,8-дигидро-6H-пирано[3,2-d]пиримидин-2-ил)-2-метил-1H-индол-4карбоксамид,
    1-(4-(3 -фторбензиламино)-7,8-дигидро-6H-пирано [3 ,2^]пиримидин-2-ил)-2-метокси-Ш-индол-4карбоксамид,
    1-(4-(бензиламино)-7,8-дигидро-6H-пирано[2,3-d]пиримидин-2-ил)-2-метил-1H-индол-4карбоксамид,
    1-(4-(бензиламино)-7,8-дигидро-6H-пирано[2,3-d]пиримидин-2-ил)-2-метокси-1H-индол-4карбоксамид,
    1-(4-(3 -фторбензиламино)-7,8-дигидро-6H-пирано рр^пиримидин^-ил^-метил-Ш-индолМкарбоксамид или
    1-(4-(3 -фторбензиламино)-7,8-дигидро-6H-пирано рр^пиримидин^-ил^-метокси-Ш-индолЛкарбоксамид.
  10. 10. Конденсированный пиримидин по п.9, имеющий название 1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8тетрагидропиридоРр^пиримидин^-ил^-метил-Ш-индолМ-карбоксамид или 1-(4-(бензиламино)-7,8дигидро-6H-пирано рр^пиримидин^-ил^-метил-Ш-индолМ-карбоксамид.
  11. 11. Конденсированный пиримидин по п.10, имеющий название 1-(4-(бензиламино)-5,6,7,8тетрагидропиридоРр^пиримидин^-ил^-метил-Ш-индолЛ-карбоксамид.
  12. 12. Фармацевтическая композиция, включающая конденсированный пиримидин по любому из пп.111 и фармацевтически приемлемый носитель.
  13. 13. Способ снижения активности валозинсодержащего белка (p97) у пациента-человека, нуждающегося в этом, путем введения пациенту терапевтически эффективного количества конденсированного пиримидина по любому одному из пп.1-11 или фармацевтической композиции по п.12.
  14. 14. Способ лечения неопластических патологий у пациента-человека, включающий введение терапевтически эффективного количества конденсированного пиримидина по любому одному из пп.1-11 или фармацевтической композиции по п.12.
  15. 15. Способ по п.14, где неопластическая патология представляет собой рак.
EA201691472A 2014-01-20 2015-01-19 КОНДЕНСИРОВАННЫЕ ПИРИМИДИНЫ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ КОМПЛЕКСА p97 EA031317B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201461929382P 2014-01-20 2014-01-20
PCT/US2015/011921 WO2015109285A1 (en) 2014-01-20 2015-01-19 FUSED PYRIMIDINES AS INHIBITORS OF p97 COMPLEX

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201691472A1 EA201691472A1 (ru) 2017-05-31
EA031317B1 true EA031317B1 (ru) 2018-12-28

Family

ID=52478057

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201691472A EA031317B1 (ru) 2014-01-20 2015-01-19 КОНДЕНСИРОВАННЫЕ ПИРИМИДИНЫ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ КОМПЛЕКСА p97

Country Status (19)

Country Link
US (2) US9828363B2 (ru)
EP (1) EP3097092B1 (ru)
JP (1) JP6387111B2 (ru)
KR (1) KR101922317B1 (ru)
CN (1) CN106458996B (ru)
AR (1) AR099138A1 (ru)
AU (1) AU2015206292B2 (ru)
BR (1) BR112016016421B1 (ru)
CA (1) CA2936559C (ru)
CL (1) CL2016001840A1 (ru)
EA (1) EA031317B1 (ru)
ES (1) ES2819867T3 (ru)
IL (1) IL246692B (ru)
MX (1) MX2016009465A (ru)
NZ (1) NZ722624A (ru)
SG (1) SG11201605699QA (ru)
TW (1) TWI640516B (ru)
WO (1) WO2015109285A1 (ru)
ZA (1) ZA201605107B (ru)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015089218A1 (en) 2013-12-10 2015-06-18 David Wustrow Monocyclic pyrimidine/pyridine compounds as inhibitors of p97 complex
MX2016009465A (es) 2014-01-20 2016-12-02 Cleave Biosciences Inc Pirimidinas fusionadas como inhibidores del complejo p97.
RS62456B1 (sr) * 2016-12-22 2021-11-30 Amgen Inc Derivati benzizotiazola, izotiazolo[3,4-b]piridina, hinazolina, ftalazina, pirido[2,3-d]piridazina i pirido[2,3-d]pirimidina kao kras g12c inhibitori za tretman raka pluća, pankreasa ili debelog creva
JOP20190272A1 (ar) 2017-05-22 2019-11-21 Amgen Inc مثبطات kras g12c وطرق لاستخدامها
CA3075046A1 (en) 2017-09-08 2019-03-14 Amgen Inc. Inhibitors of kras g12c and methods of using the same
WO2020050890A2 (en) 2018-06-12 2020-03-12 Amgen Inc. Kras g12c inhibitors and methods of using the same
WO2020047192A1 (en) * 2018-08-31 2020-03-05 Mirati Therapeutics, Inc. Kras g12c inhibitors
JP7377679B2 (ja) 2018-11-19 2023-11-10 アムジエン・インコーポレーテツド がん治療のためのｋｒａｓｇ１２ｃ阻害剤及び１種以上の薬学的に活性な追加の薬剤を含む併用療法
MX2021014126A (es) 2019-05-21 2022-01-04 Amgen Inc Formas en estado solido.
CN110078749B (zh) * 2019-06-04 2021-01-01 贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室(贵州医科大学天然产物化学重点实验室) 3a，3a′-双呋喃[2,3-b]吲哚啉类化合物、制备方法、药物组合物及应用
CN110872291B (zh) * 2019-11-26 2021-06-25 五邑大学 一种四氢吡啶并嘧啶类化合物及其制备方法和应用
WO2021231322A1 (en) * 2020-05-11 2021-11-18 Cleave Therapeutics, Inc. Crystalline forms and formulations of a vcp/p97 inhibitor
EP4149943A4 (en) * 2020-05-11 2024-06-05 Cleave Therapeutics, Inc. VCP/p97 INHIBITOR FOR CANCER TREATMENT
GB202111193D0 (en) * 2021-08-03 2021-09-15 Phoremost Ltd Pharmaceutical compounds
KR20240097859A (ko) * 2021-11-10 2024-06-27 카시 파마슈티컬스, 인코포레이티드 암의 치료용 VCP/p97 억제제
CN116178374A (zh) * 2023-01-13 2023-05-30 河北医科大学 小电导钙激活钾离子通道激动剂及其合成和应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011140527A2 (en) * 2010-05-07 2011-11-10 California Institute Of Technology And The University Of Kansas Methods and compositions for inhibition of the transitional endoplasmic reticulum atpase
WO2014015291A1 (en) * 2012-07-20 2014-01-23 Han-Jie Zhou FUSED PYRIMIDINES AS INHIBITORS OF p97 COMPLEX

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK0640599T3 (da) 1993-08-26 1998-09-28 Ono Pharmaceutical Co 4-Aminopyrimidin-derivater
WO1998010779A1 (en) 1996-09-13 1998-03-19 New York University Method for treating parasitic diseases with proteasome inhibitors
KR20010091827A (ko) 2000-03-18 2001-10-23 정상훈 통신 단말 번호를 이용한 송금 시스템 및 송금 방법
KR20020020316A (ko) 2000-09-08 2002-03-15 라응찬 인터넷 송금 서비스 방법
KR20030009830A (ko) 2001-07-24 2003-02-05 중소기업은행 이동단말을 이용한 현금출금 서비스 장치 및 방법
EP1352910A1 (en) 2002-04-10 2003-10-15 Grünenthal GmbH New analogs of nitrobenzylthioinosine
JP3862666B2 (ja) 2003-03-31 2006-12-27 株式会社みずほ銀行 バンキング処理方法及びバンキング処理プログラム
EP1663994B1 (en) * 2003-08-05 2012-03-07 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Tetrahydroquinazoline compounds as inhibitors of voltage-gated ion channels
TW200605886A (en) 2004-08-03 2006-02-16 Wyeth Corp Indazoles useful in treating cardiovascular diseases
CA2609271C (en) 2005-05-27 2014-02-25 Proteolix, Inc. Novel substrate for rpn 11 enzymatic activity
WO2008040753A1 (en) 2006-10-03 2008-04-10 Neurosearch A/S Indazolyl derivatives useful as potassium channel modulating agents
TW200837064A (en) * 2006-10-04 2008-09-16 Pharmacopeia Inc 8-substituted 2-(benzimidazolyl)purine derivatives for immunosuppression
JP2010510211A (ja) 2006-11-16 2010-04-02 ファーマコペイア・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー 免疫抑制用７−置換プリン誘導体
EP2120938A4 (en) 2006-12-20 2010-12-08 Merck Sharp & Dohme IMIDAZOPYRIDINE ANALOGUE AS CB2 RECEPTOR MODULATORS FOR THE TREATMENT OF PAIN, RESPIRATORY AND NON-RESPIRATORY DISEASES
TWI496779B (zh) 2008-08-19 2015-08-21 Array Biopharma Inc 作為ｐｉｍ激酶抑制劑之三唑吡啶化合物
JP5823862B2 (ja) 2008-09-22 2015-11-25 アイシス イノベイション リミテッド イミダゾ［１，２‐α］ピリジニルビスホスホネート
EP2373317B1 (en) 2008-11-25 2016-12-14 Merck Sharp & Dohme Corp. 4-amino-5,7-dihydro-6H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-6-one or 4-amino-5,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-7(6H)-one derivatives as activators of the soluble guanylat cyclase for the treatment of cardiovascular diseases
BRPI0920966B1 (pt) 2008-11-28 2022-03-03 Kowa Company Ltd Derivado de piridina-3-carboxiamida, seu uso, inibidor de jak3 e composição farmacêutica
AR074870A1 (es) * 2008-12-24 2011-02-16 Palau Pharma Sa Derivados de pirazolo (1,5-a ) piridina
CA2761445A1 (en) 2009-05-27 2010-12-02 Genentech, Inc. Bicyclic pyrimidine pi3k inhibitor compounds selective for p110 delta, and methods of use
EP2338888A1 (en) 2009-12-24 2011-06-29 Almirall, S.A. Imidazopyridine derivatives as JAK inhibitors
UY33213A (es) 2010-02-18 2011-09-30 Almirall Sa Derivados de pirazol como inhibidores de jak
WO2011115804A1 (en) 2010-03-17 2011-09-22 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Sgc stimulators
JP2013166700A (ja) 2010-06-02 2013-08-29 Dainippon Sumitomo Pharma Co Ltd 新規４，５−縮環ピリミジン誘導体
BR112014004569A2 (pt) 2011-09-01 2017-06-13 F. Hoffmann-La Roche Ag composto da fórmula i, métodos para tratar condição inflamatória, artrite reumatoide, asma e distúrbio imune, composição farmacêutica e uso do composto
WO2013170770A1 (zh) 2012-05-16 2013-11-21 上海医药集团股份有限公司 具有抗肿瘤活性的乙炔衍生物
WO2014011900A2 (en) 2012-07-11 2014-01-16 Blueprint Medicines Inhibitors of the fibroblast growth factor receptor
WO2015089218A1 (en) 2013-12-10 2015-06-18 David Wustrow Monocyclic pyrimidine/pyridine compounds as inhibitors of p97 complex
MX2016009465A (es) 2014-01-20 2016-12-02 Cleave Biosciences Inc Pirimidinas fusionadas como inhibidores del complejo p97.
US10253082B2 (en) 2014-01-20 2019-04-09 Hanmi Pharm. Co., Ltd Long-acting insulin and use thereof

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011140527A2 (en) * 2010-05-07 2011-11-10 California Institute Of Technology And The University Of Kansas Methods and compositions for inhibition of the transitional endoplasmic reticulum atpase
WO2014015291A1 (en) * 2012-07-20 2014-01-23 Han-Jie Zhou FUSED PYRIMIDINES AS INHIBITORS OF p97 COMPLEX

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DATABASE REGISTRY [online] CHEMICAL ABSTRACTS SERVICE, COLUMBUS, OHIO, US; 7 March 2012 (2012-03-07), XP002737402 *
TSUI-FEN CHOU, KELIN LI, KEVIN J. FRANKOWSKI, FRANK J. SCHOENEN, RAYMOND J. DESHAIES: "Structure-Activity Relationship Study Reveals ML240 and ML241 as Potent and Selective Inhibitors of p97 ATPase", CHEMMEDCHEM, WILEY-VCH, DE, vol. 8, no. 2, 1 February 2013 (2013-02-01), DE, pages 297 - 312, XP055152147, ISSN: 1860-7179, DOI: 10.1002/cmdc.201200520 *

Also Published As

Publication number Publication date
TWI640516B (zh) 2018-11-11
JP6387111B2 (ja) 2018-09-05
KR101922317B1 (ko) 2018-11-26
TW201605833A (zh) 2016-02-16
MX2016009465A (es) 2016-12-02
AU2015206292A1 (en) 2016-08-18
CL2016001840A1 (es) 2017-04-17
CN106458996B (zh) 2020-11-03
NZ722624A (en) 2017-09-29
JP2017505812A (ja) 2017-02-23
EA201691472A1 (ru) 2017-05-31
CA2936559A1 (en) 2015-07-23
US20180044325A1 (en) 2018-02-15
ES2819867T3 (es) 2021-04-19
ZA201605107B (en) 2017-09-27
IL246692A0 (en) 2016-08-31
US20160332990A1 (en) 2016-11-17
SG11201605699QA (en) 2016-08-30
BR112016016421A2 (ru) 2017-08-08
CN106458996A (zh) 2017-02-22
IL246692B (en) 2019-05-30
AU2015206292B2 (en) 2018-02-15
EP3097092B1 (en) 2020-08-26
CA2936559C (en) 2019-03-12
AR099138A1 (es) 2016-06-29
WO2015109285A1 (en) 2015-07-23
KR20160110506A (ko) 2016-09-21
US9828363B2 (en) 2017-11-28
EP3097092A1 (en) 2016-11-30
US10174005B2 (en) 2019-01-08
BR112016016421B1 (pt) 2022-10-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA031317B1 (ru) КОНДЕНСИРОВАННЫЕ ПИРИМИДИНЫ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ КОМПЛЕКСА p97
US10010554B2 (en) Fused pyrimidines as inhibitors of P97 complex
CN102124005B (zh) cMET抑制剂
ES2274526T3 (es) Pirido(2,3-d)pirimidinas para inhibir la proliferacion celular mediada por tirosinaquinasa.
CN102858770A (zh) 双环化合物及其作为c-SRC/JAK激酶双重抑制剂的用途
CZ164196A3 (en) Pyrimidine derivatives with condensed heterocyclic ring and pharmaceutical compositions based thereon
CN109641887A (zh) 可用作用于治疗癌症的突变idh1抑制剂的噻唑衍生物
KR20170045748A (ko) 증식성 질병의 치료를 위한 조성물 및 방법
WO2016200840A1 (en) Mono and bicyclic ring boronic acid, ester and salt compounds as inhibitors of p97 complex
US20170267679A1 (en) TRICYCLIC FUSED PYRIMIDINE COMPOUNDS AS INHIBITORS OF p97 COMPLEX

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM