EA030681B1 - Модуляторы tgr5 и способы их применения - Google Patents

Модуляторы tgr5 и способы их применения Download PDF

Info

Publication number
EA030681B1
EA030681B1 EA201400258A EA201400258A EA030681B1 EA 030681 B1 EA030681 B1 EA 030681B1 EA 201400258 A EA201400258 A EA 201400258A EA 201400258 A EA201400258 A EA 201400258A EA 030681 B1 EA030681 B1 EA 030681B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
disease
compound
tgr5
compounds
cells
Prior art date
Application number
EA201400258A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201400258A1 (ru
Inventor
Роберто Пелличьяри
Original Assignee
Интерсепт Фармасьютикалз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=41668454&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA030681(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Интерсепт Фармасьютикалз, Инк. filed Critical Интерсепт Фармасьютикалз, Инк.
Publication of EA201400258A1 publication Critical patent/EA201400258A1/ru
Publication of EA030681B1 publication Critical patent/EA030681B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J9/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane
    • C07J9/005—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane containing a carboxylic function directly attached or attached by a chain containing only carbon atoms to the cyclopenta[a]hydrophenanthrene skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J9/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/575—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of three or more carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, ergosterol, sitosterol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A61P5/50—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones for increasing or potentiating the activity of insulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J31/00—Normal steroids containing one or more sulfur atoms not belonging to a hetero ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J31/00—Normal steroids containing one or more sulfur atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J31/006—Normal steroids containing one or more sulfur atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J31/003
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005

Abstract

Изобретение относится к соединению формулы (III) или его фармацевтически приемлемой соли, где Rпредставляет собой гидрокси; Rпредставляет собой незамещенный C-Cалкил, где Rнаходится в S-конфигурации; Rпредставляет собой водород; Rи R, взятые вместе с углеродом, к которому они присоединены, образуют карбонил; Rпредставляет собой гидрокси, NH(CH)SOH или NH(CH)COH; m является целым числом 0, 1, 2, 3, 4 или 5 и n является целым числом 0, 1, 2, 3, 4 или 5. Изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (III), и к применению соединения формулы (III) для лечения различных болезней, включающих метаболическое заболевание, воспалительное заболевание, болезнь печени, аутоиммунное заболевание, болезнь сердца, болезнь почек, рак и болезнь желудочно-кишечного тракта.

Description

Изобретение относится к соединению формулы (III) или его фармацевтически приемлемой соли, где Ri представляет собой гидрокси; R5 представляет собой незамещенный С2-С6 алкил, где R5 находится в S-конфигурации; R7 представляет собой водород; R8 и R9, взятые вместе с углеродом, к которому они присоединены, образуют карбонил; Rw представляет собой гидрокси, NH(CH2)mSO3H или NH(CH2)nCO2H; m является целым числом 0, 1, 2, 3, 4 или 5 и n является целым числом 0, 1, 2, 3, 4 или 5. Изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (III), и к применению соединения формулы (III) для лечения различных болезней, включающих метаболическое заболевание, воспалительное заболевание, болезнь печени, аутоиммунное заболевание, болезнь сердца, болезнь почек, рак и болезнь желудочно-кишечного тракта.
030681
Родственная заявка
Настоящая заявка заявляет приоритет европейской заявки № 08169462.2, зарегистрированной 19 ноября 2008 г., содержание которой включено в настоящее изобретение.
Область изобретения
Изобретение относится к соединениям, которые модулируют TGR5, и к композициям, полезным для способов лечения и/или профилактики различных заболеваний.
Уровень изобретения
Рецептор TGR5 представляет собой связанный с G-белком рецептор, идентифицированный как рецептор клеточной поверхности, который восприимчив к желчным кислотам (ЖК). У человеческого, бычьего, кроличьего, крысиного и мышиного TGR5 выявлена высокая консервативность первичной структуры TGR5 и его чувствительность к желчным кислотам, и в этой связи предполагается, что TGR5 имеет важные физиологические функции. Выявлено, что TGR5 широко распространен не только в лимфатических тканях, но также и в других тканях. Высокий уровень содержания мРНК TGR5 был обнаружен в плаценте, селезенке и моноцитах/макрофагах. Показано, что желчные кислоты индуцируют интернализацию слитого белка TGR5 от клеточной мембраны до цитоплазмы; Kawamata et al., 2003, J. Bio. Chem., 278, 9435. Выявлена идентичность TGR5 и hGPCR19, о чем опубликовано авторами Takeda et al., 2002, FEBS Lett. 520, 97-101.
Существует связь TGR5 с внутриклеточным накоплением цАМФ, что широко проявляется в клетках разных типов. Активация мембранного рецептора TGR5 в макрофагах уменьшает продукцию провоспалительных цитокинов (Kawamata, Y., et al., J. Biol. Chem. 2003, 278, 9435-9440), при этом стимуляция этого рецептора посредством ЖК в адипоцитах и миоцитах увеличивает потребление энергии (Watanabe, M. et al., Nature. 2006, 439, 484-489). Указанный эффект охватывает цАМФ-зависимую индукцию 2 типа йодотирониндейодиназы (D2), которая с помощью локального превращения T4 в T3 вызывает повышение активности гормона щитовидной железы. Роль TGR5 в контроле энергетического обмена согласуется с тем, что у нокаутных по TGR5 самок мышей выявлено значительное накопление жира с увеличением веса при провокации высокожирной диетой, что указывает на уменьшение потребления энергии и возникновение ожирения при недостатке TGR5 (Maruyama, Т., et al., J. Endocrinol. 2006, 191, 197205). Дополнительно, и в связи с вовлечением TGR5 в энергетический гомеостаз известно, что активация мембранного рецептора посредством желчных кислот способствует продукции глюкагон-подобного пептида 1 (GLP-1) в мышиных энтероэндокринных клеточных линиях (Katsuma, S., Biochem. Biophys. Res. Commun. 2005, 329, 386-390). Ha основании всех вышеупомянутых наблюдений утверждается, что TGR5 представляет собой привлекательную цель для лечения заболевания, например ожирения, диабета и метаболического синдрома.
В дополнение к применению агонистов TGR5 для лечения и профилактики метаболических заболеваний, соединения, которые модулируют модуляторы TGR5, также полезны для лечения других заболеваний, например болезней центральной нервной системы, а также воспалительных заболеваний (WO 01/77325 и WO 02/84286). Модуляторы TGR5 также обеспечивают способы регуляции гомеостаза желчных кислот и холестерина, абсорбции жирных кислот и переваривания углеводов и белков.
В литературе описано относительно мало примеров агонистов TGR5. В недавних публикациях отмечено, что 23-алкил-замещенные и 6,23-алкил-дизамещенные производные хенодезоксихолевой кислоты (ХДХК), такие как соединение 6а-этил-23^)-метил-хенодезоксихолевая кислота, показанная ниже, представляют собой мощные и селективные агонисты TGR5 (Pellicciari, R.; et al., J. Med. Chem. 2007, 50, 4265-4268).
В частности, метилирование (S-конфигурация) в CA-положении желчных кислот (ЖК) природного происхождения придает выраженную селективность к TGR5 после активации FXR (фарнезоидных Xрецепторов), тогда как 6а-алкильное замещение увеличивает потенциал обоих рецепторов. Некоторые примеры других агонистов TGR5 включают в себя сложный бензиловый эфир 6-метил-2-оксо-4-тиофен2-ил-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-5-карбоновой кислоты (WO 004067008, Takeda Chemical Industries LTD, Япония, 2004) и олеанолевая кислота (Sato, H. et al., Biochem. and Biophys. Res. Commun. 2007, 362, 793-798; Ito, F. et al., WO 02004067008, 2004). Позднее первый синтез энантиомерической хенодезоксихолевой кислоты (ХДХК) и литохолевой кислоты (ЛХК) позволил подойти к изучению специфичности взаимодействия ЖК природного происхождения с TGR5 (Katona, H.W. et al., J. Med. Chem. 2007, 50, 6048-6058).
Разработанные в последнее время агонисты TGR5 также впервые позволили дифференцировать с
- 1 030681
фармакологической точки зрения геномные эффекты, отличая их от негеномных эффектов ЖК, и также сделали возможными информативные исследования взаимоотношений структуры и действия, например выявлено, что присутствие дополнительного связывающего кармана в TGR5 играет основную роль в определении селективности лиганда (см. Pellicciari, et al., Med. Chem. 2007, 50, 4265-4268). В этой связи наличие более мощных и селективных модуляторов TGR5 необходимо для дальнейшего определения дополнительных признаков, влияющих на активацию рецептора и определения параметров физиологического и фармакологического действия указанного рецептора, с целью лучшего понимания его отношения к профилактике и лечению заболевания.
Наконец, особый интерес представляют биологические и физико-химические свойства соединения
Холевая кислота, представляющая собой первичную желчную кислоту у человека и многих видов животных, также известна как один из основных компонентов, наряду с билирубином Calculus Bovis, который высоко ценится в традиционной китайской медицине (Chen, X., Biochem. Pharmacol. 2002, 63, 533-541). Холевая кислота (ХК) отличается от хенодезоксихолевой кислоты (ХДХК) и ее производных, описанных выше, наличием в С-12 положении дополнительной альфа-гидроксильной группы, ориентированной на полярную сторону молекулы. Это "незначительное" структурное различие обусловливает заметно различающиеся физикохимические и биологические характеристики двух упомянутых желчных кислот. По сравнению с ХДХК, протонированная ХК обладает в 4 раза большей растворимостью и относительно меньшей детергентностью благодаря своему балансу гидрофобности/гидрофильности и полярности. Кроме того, ХК не имеет активности по отношению к рецептору FXR (EC50 >100 мкМ), и при этом проявляет умеренное агонистическое действие к TGR5 (ЕС50=13,6 мкМ). Еще более важное соображение, по предыдущим публикациям, состоит в том, что фармакологическое введение ХК в количестве 0,5 об./об. % мышам с ожирением, индуцированным диетой, является эффективным для профилактики и лечения метаболического синдрома (Katsuma, S., Biochem. Biophys. Res. Commun., 2005, 329, 386). В настоящем исследовании получены интересные результаты, связанные с эндокринными функциями желчных кислот, тем не менее, необходимость высокой дозы (0,5% об./об.) ограничивает доказательство концепции в отношении терапевтической значимости TGR5 в контексте метаболических заболеваний, поскольку при указанной дозе нельзя исключать модуляцию других и неизвестных мишеней. Также дополнительной проблемой был риск, связанный с тестированием высокой дозы ХК в клинических испытаниях по причине продукции токсичного вторичного метаболита ЖК дезоксихолевой кислоты ДХК путем обширного и эффективного 7а-дегидроксилирования с помощью кишечных бактерий (Nagengast, F.M., Eur. J. Cancer, 1995, 31А, 1067).
Таким образом, существует потребность в разработке модуляторов TGR5 для лечения и/или профилактики различных заболеваний. В настоящем изобретении определены соединения, которые модулируют TGR5, а также способы применения указанных соединений для лечения или профилактики заболевания.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к модуляторам TGR5 и их применению для лечения и/или профилактики различных заболеваний. Изобретение рассматривает соединение (формулы III)
или его фармацевтически приемлемую соль.
Настоящее изобретение включает композицию, содержащую соединение по изобретению и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый наполнитель. Изобретение включает соединения для применения для лечения или профилактики болезни у субъекта. В одном аспекте болезнь выбирают из метаболического заболевания, воспалительного заболевания, болезни печени, аутоиммунного заболевания, болезни сердца, болезни почек, рака и болезни желудочно-кишечного тракта.
Вышеупомянутое описание достаточно широко формулирует наиболее важные признаки настояще- 2 030681
го изобретения для понимания его дальнейшего подробного описания, с тем, чтобы лучше оценить вклад настоящего изобретения в данную область. Другие цели и признаки настоящего изобретения станут очевидными из следующего подробного описания, которое рассматривается вместе с примерами.
Описание изобретения
Подробности одного или больше вариантов осуществления изобретения сформулированы ниже в прилагаемом описании. При осуществлении или тестировании настоящего изобретения можно использовать любые способы и материалы, подобные или эквивалентные описанным в изобретении, и в настоящем описании приведены указанные способы и материалы. Другие признаки, задачи и преимущества изобретения станут очевидными из настоящего описания. Формы единственного числа в настоящем описании также включают в себя формы множественного числа, если из контекста явно не следует иначе. Если не указано иначе, все технические и научные термины, приведенные в изобретении, имеют значения, аналогичные общепринятым значениям, которые понятны рядовым специалистам в области техники настоящего изобретения. В случае противоречий настоящее описание их будет урегулировать.
Определения.
Для удобства далее собраны конкретные термины, используемые в описании, примерах и в прилагаемой формуле изобретения.
Термин "лечение", используемый в изобретении, означает облегчение, уменьшение, снижение, устранение, модуляцию или улучшение, то есть то, что вызывает регресс болезни или патологического состояния.
Термин "профилактика", используемый в изобретении, означает полное или почти полное предотвращение состояния болезни или нарушения, его возникновения у пациента или субъекта, в особенности, если пациент или субъект предрасположен к такому состоянию или имеет риск возникновения болезни или патологического состояния. Профилактика также может включать в себя ингибирование, то есть прекращение развития болезни или патологического состояния, и облегчение или улучшение, то есть вызывать регресс болезни или патологического состояния, например, если болезнь или патологическое состояние уже наступили.
Используемое в изобретении сокращение "ЖК" означает желчную кислоту и производные желчной кислоты. Желчные кислоты представляют собой стероидные карбоновые кислоты, происходящие из холестерина. Первичными желчными кислотами являются холевая и хенодезоксихолевая кислоты. В организме указанные кислоты сопрягаются с глицином или таурином перед их выделением в составе желчи.
Термин "алкил" включает насыщенные алифатические группы, включающие в себя алкильные группы с прямой цепью (например, метил, этил, пропил, бутил, пентил, гексил, гептил, октил, нонил, децил), алкильные группы с разветвленной цепью (например, изопропил, tert-бутил, изобутил), циклоалкильные (например, алициклические) группы (например, циклопропил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил), алкилзамещенные циклоалкильные группы и циклоалкилзамещенные алкильные группы. В конкретных вариантах осуществления прямая цепь или разветвленная цепь алкила в своей основной цепи имеет шесть или меньше атомов углерода и упоминается как "низший алкил" (например, C1-C6 для прямой цепи, что означает наличие 1, 2, 3, 4, 5 или 6 атомов углерода, С3-С6 для разветвленной цепи, что означает 3, 4, 5 или 6 атомов углерода). В некоторых примерах прямая цепь или разветвленная цепь алкила имеет в своей основной цепи четыре или меньше атомов углерода. Дополнительно, циклоалкилы в своей кольцевой структуре имеют 3, 4, 5, 6, 7 или 8 атомов углерода.
Если не указано другое число атомов углерода, термин "низший алкил" включает алкильную группу, как определено выше, но имеющую в структуре основной цепи от одного до десяти, например от одного до шести атомов углерода.
Термин "гидрокси" или "гидроксил" включает группы с -OH или -O-.
Понятие "анионная группа", используемое в изобретении, относится к группе, имеющей отрицательный заряд при физиологическом уровне pH. Анионные группы включают в себя карбоксилат, сульфат, сульфонат, сульфинат, сульфамат, тетразолил, фосфат, фосфонат, фосфинат или фосфоротиоат или их функциональные эквиваленты. В понятие "функциональные эквиваленты" анионных групп включены биоизостеры, например биоизостеры карбоксилатной группы. Термин "биоизостеры" охватывает и классические биоизостерические эквиваленты и неклассические биоизостерические эквиваленты. Классические и неклассические биоизостеры известны в данной области техники (см., например, Silverman, RD., The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action, Academic Press, Inc.: San Diego, Calif, 1992, p. 1923). Другой анионной группой является карбоксилат.
Термин "нестабильная функциональная группа" относится к замещаемой структуре, которая содержит неустойчивое присоединение, например функциональную группу или связь, которая восприимчива к гидролизу или расщеплению при физиологических условиях (например, водные растворы при нейтральном диапазоне уровня pH). Примеры нестабильных функциональных групп включают в себя ацетали и кетали.
Термины "кристаллические полиморфы" или "полиморфы" относятся к существованию более чем одной кристаллической формы для соединения, его соли или сольвата. Кристаллические полиморфы соединений аналогов желчной кислоты изготовляет путем кристаллизации при разных условиях.
- 3 030681
Необходимо отметить, что в структуру некоторых из соединений изобретения включены асимметричные атомы углерода. Соответственно подразумевается, что изомеры, являющиеся результатом такой асимметрии (например, все энантиомеры и диастереомеры), включены в объем изобретения, если не указано иначе. Такие изомеры можно получать, по существу, в чистой форме с помощью классических способов разделения, и путем стериохимически контролируемого синтеза. Наименование энантиомеров (Rи S-конфигурации) осуществляют согласно системе, разработанной авторами R.S. Cahn, С. Ingold и V. Prelog.
Структуры и другие соединения, рассмотренные в настоящей заявке, дополнительно включают все свои атроповые изомеры. Атроповые изомеры представляют собой тип стереоизомера, в котором атомы двух изомеров имеют отличающееся пространственное расположение. Существование атроповых изомеров обусловлено ограниченным вращением, вызванным затруднением вращения больших групп вокруг центральной связи. Такие атроповые изомеры обычно существуют в виде смеси, вместе с тем в результате последних разработок хроматографических методик стало возможным в отдельных случаях разделение смеси двух атроповых изомеров.
Понятия "стабильное соединение" и "стабильная структура" предназначается для определения соединения, которое является достаточно устойчивым, чтобы выдерживать выделение из реакционной смеси до полезной степени чистоты и приготовление рецептуры эффективного терапевтического агента.
Используемый в изобретении термин "аналог" относится к химическому соединению, обладающему структурным подобием с другим соединением, который при этом немного отличается по составу (например, заменой одного атома на атом другого элемента, или присутствием конкретной функциональной группы, или заменой одной функциональной группы на другую функциональную группу). Таким образом, аналог представляет собой соединение, которое сходно или сопоставимо по функции и внешнему виду с рассматриваемым соединением.
Согласно определению изобретения термин "производное", например в термине "производные желчной кислоты", относится к соединениям, которые имеют общую основную 4-членную кольцевую структуру, и замещения различными группами, описанными в изобретении.
Термин "биоизостер" относится к соединению, которое получено в результате обмена атома или группы атомов на другой, в общем подобный, атом или группу атомов. Биоизостерическая замена может иметь физикохимическую или топологическую основу. Примеры биоизостеров карбоксильной кислоты включают в себя ацилсульфонимиды, тетразолы, сульфонаты и фосфонаты; см., например, Patani and LaVoie, Chem. Rev. 96, 3147-3176 (1996).
Термины "парентеральное введение" и "вводимый парентерально", используемые в изобретении, относятся к способам введения, отличным от энтерального и местного введения, и обычно относятся к инъекции и включают в себя без ограничения внутривенную, внутримышечную, внутриартериальную, интратекальную, внутрикапсульную, внутриорбитальную, внутрисердечную, внутрикожную, внутрибрюшинную, чрезтрахеальную, подкожную, субкутикулярную, внутрисуставую, подкапсульную, субарахноидальную, внутриспинальную и внутригрудинную инъекцию и вливание.
Термин "легочный", используемый в изобретении, относится к любой части, ткани или органу, основной функцией которого является газовый обмен с внешней средой, например обмен O2/CO2 в организме пациента. Термин "легочный" обычно относится к тканям дыхательных путей. Таким образом, выражение "легочное введение" относится к введению описанных в изобретении рецептур в любую часть, ткань или орган, основной функцией которого является газовый обмен с внешней средой (например, рот, нос, зев, ротоглотка, гортаноглотка, гортань, трахея, киль, бронхи, бронхиолы, альвеолы). Для целей настоящего изобретения термин "легочный" также включает в себя ткань или полость, которая связана с дыхательными путями, в частности пазухи.
Понятие "терапевтически эффективное количество" соединения изобретения, или комбинации соединений представляет собой количество (количественную величину или концентрацию) соединения или соединений. В одном варианте осуществления при введении субъекту, который нуждается в лечении, терапевтически эффективного количества соединения происходит немедленное улучшение вызванных болезнью симптомов или улучшение после введения соединения один или больше раз. Количество соединения, которое будет введено субъекту, зависит от конкретной патологии, способа введения, совместно вводимых соединений, если таковые имеются, и особенностей субъекта, таких как общее состояние здоровья, наличие других заболеваний, возраст, пол, генотип, масса тела и переносимость лекарственных препаратов. Квалифицированный специалист сможет определить подходящие дозировки в зависимости от указанных и других факторов.
Понятие "профилактически эффективное количество" означает количество (количественную величину или концентрацию) соединения настоящего изобретения, или комбинации соединений, предназначенных для введения с целью профилактики или уменьшения заболевания, другими словами, количество, необходимое для обеспечения превентивного или профилактического эффекта. Количество соединения, которое будет введено субъекту, зависит от конкретной патологии, пути введения, совместно вводимых соединений, если таковые имеются, и особенностей субъекта, таких как общее состояние здоровья, наличие других заболеваний, возраст, пол, генотип, масса тела и переносимость лекарственных пре- 4 030681
паратов. Квалифицированный специалист сможет определить подходящие дозировки в зависимости от указанных и других факторов.
Понятие "уменьшение риска", используемое в изобретении, означает снижение возможности или вероятности возникновения у пациента заболевания центральной нервной системы, воспалительного заболевания и/или метаболического заболевания, в особенности если пациент или субъект предрасположены к такому возникновению.
"Фармацевтически приемлемая соль" или "соль" соединения по изобретению представляет собой продукт соединения, который несет ионную связь, и обычно приготовляется путем реакции соединения или с кислотой или с основанием, подходящими для введения субъекту.
Используемый в изобретении термин "фармацевтически приемлемые соли" относятся к производным соединений по изобретению, в которых исходное соединение модифицировано путем получения его кислоты или основных солей. Примеры фармацевтически приемлемых солей включают в себя без ограничения соли минеральных или органических кислот из остатков оснований, например амины; щелочные или органические соли кислотных остатков, например карбоновые кислоты; и тому подобное. Фармацевтически приемлемые соли включают в себя общепринятые нетоксичные соли исходного соединения или соли четвертичного аммония, которые образованы, например, из нетоксичных неорганических или органических кислот. Например, такие общепринятые нетоксичные соли включают в себя без ограничения соли полученные из неорганических и органических кислот, выбираемых из 2-ацетоксибензойной, 2гидроксиэтансульфоновой, уксусной, аскорбиновой, бензолсульфоновой, бензойной, бикарбоновой, карбоновой, лимонной, этилендиаминтетрауксусной, этандисульфоновой, этансульфоновой, фумаровой, глюкогептоновой, глюконовой, глутаминовой, гликолевой, гликольарсаниловой, гексилрезорциновой, гидрабамовой, бромистоводородной, хлористоводородной, йодистоводородной, гидроксималеиновой, гидроксинафтойной, изотионовой, молочной, лактобионовой, лаурилсульфоновой, малеиновой, яблочной, миндальной, метансульфоновой, напсиловой, азотной, щавелевой, памовой, пантотеновой, фенилуксусной, фосфорной, полигалактуроновой, пропионовой, салициловой, стеариновой, субацетиловой, янтарной, сульфамовой, сульфаниловой, серной, дубильной, винной и толуолсульфоновой кислот.
Фармацевтически приемлемые соли настоящего изобретения можно синтезировать общепринятыми химическими способами из исходного соединения, которое содержит основной или кислый функциональный остаток. В общем, такие соли можно получать путем реакции свободных кислотных или основных форм указанных соединений со стехиометрическим количеством подходящего основания или кислоты в воде или в органическом растворителе, или в смеси воды и органического растворителя; в общем, предпочтительными являются неводные среды, такие как эфир, этилацетат, этанол, изопропиловый спирт или ацетонитрил. Перечень подходящих солей опубликован в 18-м изд. Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, USA, p. 1445 (1990).
Понятие "фармацевтически приемлемое" является общепризнанным в данной области техники. В определенных вариантах осуществления термин включает в себя соединения, полимеры и другие материалы и/или лекарственные формы, которые подходят в рамках по результатам тщательной клинической оценки для применения в контакте с тканями людей и животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции или другой проблемы или осложнения, соизмеряемого с разумным соотношением пользы/риска.
Понятие "фармацевтически приемлемый носитель" общепризнано в данной области техники и включает в себя, например, фармацевтически приемлемые материалы, композиции или носители, такие как жидкий или твердый наполнитель, разбавитель, эксципиент, растворитель или инкапсулирующий материал, участвующий в переносе или транспорте какой-либо рассматриваемой композиции от одного органа или части тела, в другой орган или часть тела. Каждый носитель должен быть "приемлемым" в плане совместимости с другими компонентами рассматриваемого соединения и не наносить вред пациенту. В определенных вариантах осуществления фармацевтически приемлемый носитель является неапирогенным. Некоторые примеры материалов, которые могут служить фармацевтически приемлемыми носителями, включают в себя:
(1) сахара, такие как лактоза, глюкоза и сахароза;
(2) крахмалы, такие как кукурузный крахмал и картофельный крахмал;
(3) целлюлозу и ее производные, такие как натрий-карбоксиметилцеллюлоза, этилцеллюлоза и ацетатцеллюлоза;
(4) порошок трагаканта;
(5) солод;
(6) желатин;
(7) тальк;
(8) эксципиенты, такие как масло какао и воски для суппозиториев;
(9) масла, такие как арахисовое масло, хлопковое масло, подсолнечное масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло;
(10) гликоли, такие как пропиленгликоль;
(11) полиолы, такие как глицерин, сорбитол, маннит и полиэтиленгликоль;
- 5 030681
(12) сложные эфиры, такие как этилолеат и этиллаурат;
(13) агар;
(14) буферные агенты, такие как гидроксид магния и гидроксид алюминия;
(15) альгиновую кислоту;
(16) апирогенную воду;
(17) изотонический солевой раствор;
(18) раствор Рингера;
(19) этиловый спирт;
(20) фосфатно-буферные растворы и
(21) другие нетоксичные совместимые субстанции, применяемые в фармацевтических рецептурах.
"Композиция" или "фармацевтически приемлемая композиция" представляет собой рецептуру, содержащую соединение по изобретению или его соль, сольват, гидрат или пролекарство. В одном варианте осуществления фармацевтическая композиция не расфасована или находится в монолитной лекарственной форме. Монолитная лекарственная форма представляет собой какую-либо из множества форм, включающих в себя, например, капсулы, внутривенный (в/в) болюс, таблетки, одиночную помпу на аэрозольном ингаляторе или флакон. Количество активного компонента (например, рецептуры соединения по изобретения или его солей) в монолитной дозе соединения является эффективным количеством и варьирует в соответствии с конкретным применяемым лечением. Специалисту в данной области техники будет очевидно, что иногда необходимо осуществлять обычные изменения дозы в зависимости от возраста и состояния пациента. Доза также будет зависеть от пути введения. Рассматривается ряд путей введения, включающих в себя пероральный, легочный, ректальный, парентеральный, чрескожный, подкожный, внутривенный, внутримышечный, внутрибрюшинный, внутриносовой и тому подобное. Лекарственные формы для местного или чрескожного введения соединения настоящего изобретения включают порошки, спреи, мази, пасты, кремы, лосьоны, гели, растворы, пластыри и ингаляционные формы. В другом варианте осуществления в стерильных условиях действующее соединение смешивают с фармацевтически приемлемым носителем, и с любыми необходимыми консервантами, буферами или пропеллентами.
Термин "флэш-доза" относится к рецептурам соединения, которые представляют собой быстро диспергируемые лекарственные формы.
Термин "немедленное высвобождение" подразумевает высвобождение соединения из лекарственной формы за относительно короткий промежуток времени, обычно до 60 мин. Термин "модифицированное высвобождение" включает в себя отсроченное высвобождение, продолжительное высвобождение и импульсное высвобождение. Термин "импульсное высвобождение" подразумевает высвобождение препарата из лекарственной формы сериями. Термин "длительное высвобождение" или "продолжительное высвобождение" обозначает непрерывное высвобождение соединения из лекарственной формы за длительный период.
Понятие "субъект" включает млекопитающих, например людей, домашних животных (например, собаки, кошки, птицы и т. п.), сельскохозяйственных животных (например, коровы, овцы, свиньи, лошади, домашняя птица и т.п.) и лабораторных животных (например, крысы, мыши, морские свинки, птицы и т.п.). Обычно субъектом является человек.
Термин "соединения по изобретению" относится к соединениям с формулами, описанными в изобретении.
Термин "TGR5 модулятор" означает любое соединение, которое взаимодействует с рецептором TGR5. Взаимодействие не ограничено действием соединения в качестве антагониста, агониста, частичного агониста или обратного агониста рецептора TGR5. В одном аспекте соединения настоящего изобретения действуют как антагонисты рецептора TGR5. В другом аспекте соединения настоящего изобретения действуют как агонисты рецептора TGR5. В другом аспекте соединения настоящего изобретения действуют как частичные агонисты рецептора TGR5. В другом аспекте соединения настоящего изобретения действуют как обратные агонисты рецептора TGR5. Обычно профиль лиганда, эндогенного или синтетического, отличается своей собственной эффективностью "е", описанной впервые автором Furchgott в 1966 г. Это понятие используют для выражения степени выработки варьирующих биологических ответов у разных лигандов, которые задействуют при этом одинаковое количество рецепторов. В общем, термин "агонист" означает соединение, которое повышает активность другой молекулы или рецепторного участка. По классическому определению, агонист, который может быть ортостерическим, аллостерическим, обратным или ко-агонистом, обладает свойством связываться с рецептором, изменять состояние рецептора и в результате производить биологическое действие. Следовательно, агонизм определяют как свойство агониста или лиганда производить биологическое действие. В отличие от этого "антагонист" является, по существу, агонистом с высокой аффинностью к той же рецепторной макромолекуле, но с намного меньшей или незначительной собственной эффективностью, и тем самым стерически предотвращает биологические действия агониста.
В плане свойств, антагонизм может быть функциональным или физиологическим, когда агонист непосредственно конкурирует за рецепторный участок с вышеупомянутыми и противоположными эф- 6 030681
фектами посредством отличающейся системы рецептор-мессенджер в последнем случае. Более конкретно, агонист TGR5 представляет собой рецепторный лиганд или соединение, которое связывается с TGR5 и повышает по меньшей мере на 20% концентрацию циклического аденозинмонофосфата (цАМФ) в клетках, экспрессирующих рецептор. Напротив, антагонист TGR5 представляет собой соединение, которое антагонизирует или блокирует действие агониста, и таким образом вызывает снижение концентрации цАМФ.
Настоящее изобретение относится к соединениям, обладающим действием модуляции рецептора TGR5, и к их применению для лечения и/или профилактики различных болезней, включающих метаболическое заболевание, воспалительное заболевание, болезнь печени, аутоиммунное заболевание, болезнь сердца, болезнь почек, рак и болезнь желудочно-кишечного тракта. Дополнительно, настоящее изобретение относится к соединениям с описанными в них формулами.
Соединения и композиции.
В одном аспекте изобретение относится к соединению формулы (III)
или его фармацевтически приемлемой соли, в котором Ri представляет собой гидрокси;
R5 представляет собой незамещенный С2-С6 алкил, где R5 находится в S-конфигурации;
R7 представляет собой водород;
R8 и R9, взятые вместе с углеродом, к которому они присоединены, образуют карбонил;
R10 представляет собой гидрокси, NH(CH2)mSO3H или NH(CH2)nCO2H; m является целым числом 0, 1, 2, 3, 4 или 5 и n является целым числом 0, 1, 2, 3, 4 или 5.
В другом аспекте изобретение включает соединение или его соль, в котором R8 и R9, взятые вместе с углеродом, к которому они присоединены, образуют карбонил и R10 выбирают из гидрокси, NH(CH2)2SO3H, и NHCH2CO2H. В одном аспекте R10 является гидрокси. В одном аспекте R10 представляет собой NH(СН2)2SO3H. В одном аспекте R10 представляет собой NHCH2CO2H. В одном аспекте изобретение включает соединение или его соль, в котором R5 представляет собой незамещенный алкил. В одном аспекте R5 является метил. В одном аспекте изобретение включает соединение или его соль, в котором R5 находится в S-конфигурации. В одном аспекте изобретение включает соединение или его соль, в котором R5 находится в S-конфигурации, и R5 является метилом.
В одном аспекте изобретение включает соединения Io5, Ip5, Ib3e.
В одном аспекте изобретение включает соединение по изобретению, в котором соединение представляет собой фармацевтически приемлемую соль.
В одном аспекте изобретения включает композицию, содержащую соединение по изобретению или его фармацевтически приемлемую соль, и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый наполнитель.
Применение и способы.
Изобретение включает использование соединения или его фармацевтически приемлемой соли, для лечения или профилактики болезни.
В одном аспекте изобретение выбирают из метаболического заболевания, воспалительного заболевания, болезни печени, аутоиммунного заболевания, болезни сердца, болезни почек, рака и болезни желудочно-кишечного тракта. В одном аспекте изобретение включает метаболическое заболевание, выбираемое из ожирения, диабета, диажирения, метаболического синдрома, гипертонии, дислипидемии и резистентности к инсулину, включающей в себя пре-диабетическую резистентность к инсулину. В одном аспекте метаболическим заболеванием является ожирение. В другом аспекте метаболическим заболеванием является диабет. В одном аспекте диабет выбирают из преддиабетического состояния и диабета II типа. В одном аспекте метаболическим заболеванием является метаболический синдром. В одном аспекте метаболическим заболеванием является резистентность к инсулину. В одном аспекте метаболическое заболевание представляет собой дислипидемию. В одном аспекте метаболическим заболеванием является диажирение. Термин "диажирение" относится к состоянию, при котором субъект страдает диабетом и имеет излишний вес.
В одном аспекте изобретение включает воспалительное заболевание, выбираемое из аллергии, остеоартрита (ОА), хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ), аппендицита, бронхиальной астмы, панкреатита, аллергической сыпи и псориаза.
- 7 030681
В одном аспекте изобретение включает аутоиммунное заболевание, выбираемое из ревматоидного артрита, рассеянного склероза и диабета I типа.
В одном аспекте изобретение включает болезнь желудочно-кишечного тракта, выбираемую из воспалительной болезни кишечника (болезнь Крона, язвенный колит), синдрома короткой кишки (пострадиационный колит), микроскопический колит, синдром раздраженного кишечника (мальабсорбция) и чрезмерный рост бактерий.
В одном аспекте изобретение включает болезнь почек, выбираемую из диабетической нефропатии, хронической почечной недостаточности, гломерулярного нефрита, гипертензивного нефросклероза, хронического гломерулонефрита, хронической трансплантационной гломерулопатии, хронического интерстициального нефрита и поликистозной болезни почек.
В одном аспекте изобретение включает рак, выбираемый из колоректального рака, рака печени, гепатоцеллюлярной карциномы, холангиокарциномы, рака почки, рака желудка, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы и инсулиномы.
В одном аспекте изобретение включает болезнь печени, выбираемую из неалкогольного стеатогепатита, неалкогольной жировой болезни печени, хронического вирусного гепатита, алкогольной болезни печени, лекарственного гепатита, гемохроматоза, первичного билиарного цирроза, первичного склерозирующего холангита, портальной гипертензии, десатурации желчи, болезни Гоше, болезнь Вилсона, дефицита а1-антитрипсина, полного парентерального питания (ППП), холелитиаза, ННПассоциированного холестаза и сепсиса.
В одном аспекте изобретение включает аутоиммунное заболевание эритематоз.
В одном аспекте изобретение включает болезнь сердца, выбираемую из застойной сердечной недостаточности, инфаркта миокарда, атеросклероза, стенокардии, артериосклероза и церебральноваскулярного заболевания (кровоизлияние, инсульт, церебрально-васкулярный инфаркт).
В одном аспекте изобретение включает применение, в котором соединение по изобретению представляет собой агонист TGR5. В одном аспекте коэффициент селективности TGR5 EC50 к FXR EC50 составляет меньше 0,05.
Соединения и композиции настоящего изобретения можно вводить разными путями, например пероральным, подкожным, внутримышечным, внутривенным или внутрибрюшинным путем. Рассматриваемые пути введения фармацевтических композиций представляют собой пероральные, подкожные и внутривенные пути с ежедневными дозами от около 0,01 до около 5000 мг в день, предпочтительно от 5 до 500 мг в день лиганда FXR, которые рассчитаны для взрослого человека весом 70 кг. Подходящую дозу можно вводить как однократную ежедневную дозу или в виде разделенных доз с подходящими интервалами, например две, три, четыре или больше части дозы в день.
Для изготовления фармацевтических композиций, содержащих соединения по изобретению, используют инертные и фармацевтически приемлемые носители. Фармацевтический носитель может быть как твердым, так и жидким. Рецептуры твердых форм включают в себя, например, порошки, таблетки, диспергируемые гранулы, капсулы, саше и суппозитории. Твердый носитель может представлять собой одну или больше субстанций, которые могут также действовать как разбавители, ароматизаторы, солюбилизаторы, лубриканты, суспендирующие агенты, связующие агенты или агенты, дезинтегрирующие таблетки; также могут быть инкапсулирующим материалом.
Носитель в порошках обычно является тонкоизмельченным твердым веществом, которое находится в смеси с тонкоизмельченным активным компонентом, например соединением по изобретению. В таблетках активный компонент смешивают в подходящих пропорциях с носителем, имеющим необходимые связующие свойства, и прессуют с желательной формой и размером.
Для изготовления фармацевтических композиций в форме суппозиториев сначала расплавляют низкоплавкий воск, например смесь глицеридов жирных кислот и масла какао, и диспергируют в нем активный компонент, например, путем взбалтывания. Затем расплавленную гомогенную смесь наливают в формы удобного размера и оставляют для охлаждения и отвердения.
Порошки и таблетки предпочтительно содержат активный компонент соединения по изобретению в диапазоне от около 5 до около 70% веса. Подходящие носители включают в себя, например, карбонат магния, стеарат магния, тальк, лактозу, сахар, пектин, декстрин, крахмал, трагакант, метилцеллюлозу, натрий-карбоксиметилцеллюлозу, низкоплавкий воск, масло какао и тому подобное.
Фармацевтические композиции могут включать рецептуру активного соединения с инкапсулирующим материалом в качестве носителя для получения капсулы, в которую помещают с помощью носителя соединение по изобретению (с носителями или без других носителей), таким образом, что носитель становится ассоциированным с соединением. Подобным образом в изобретение также могут быть включены саше. Таблетки, порошки, саше и капсулы можно применять как твердые лекарственные формы, подходящие для перорального введения.
Жидкие фармацевтические композиции включают, например, растворы, подходящие для перорального или парентерального введения, суспензии и эмульсий, подходящие для перорального введения. Примерами жидких соединений, подходящих для парентерального введения, являются стерильные водные растворы активных компонентов или стерильные растворы активного компонента в растворителях,
- 8 030681
содержащих воду, буферный водный раствор, солевой раствор, фосфатно-буферный раствор (ФБР), этанол или пропиленгликоль. Композиции могут содержать фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, необходимые для приближения к физиологическим условиям, такие как регуляторы уровня pH и буферные агенты, агенты, регулирующие тоничность, увлажняющие агенты, детергенты и тому подобное.
Стерильные растворы можно приготовлять путем растворения активного компонента (например, соединения по изобретению) в желательной растворяющей системе, с последующим пропусканием полученного раствора через мембранный фильтр для его стерилизации, или, альтернативно, путем растворения в стерильных условиях стерильного соединения в заранее простерилизованном растворителе. Полученные водные растворы можно упаковывать для использования как есть, или лиофилизировать, при этом лиофилизированный препарат перед введением соединяют со стерильным водным носителем. Уровень pH указанных препаратов обычно будет в диапазоне от 3 до 11, более предпочтительно от 5 до 9 и наиболее предпочтительно от 7 и 8.
Фармацевтические композиции, содержащие соединения по изобретения, можно вводить в целях профилактического и/или терапевтического лечения. Для терапевтических применений соединения вводят в количестве, достаточном для излечения, обратного развития болезни или, по меньшей мере, частичного замедления или прекращения симптомов болезни и ее осложнений. Количество, адекватное для излечения, обратного развития или, по меньшей мере, частичного замедления или прекращения симптомов болезни и ее осложнений определяют как "терапевтически эффективная доза". Для профилактических применений соединения вводят в количестве, достаточном для предотвращения симптома болезни и ее осложнений. Количество, адекватное для профилактики симптома болезни и ее осложнений, определяют как "профилактически эффективная доза".
Количество, эффективное для терапевтического применения будет зависеть от степени тяжести болезни или нарушения и веса и общего состояния здоровья пациента, но обычно для пациента весом 70 кг будет находиться в диапазоне от около 0,1 до 2000 мг соединения в день, с более общепринятыми дозами для пациента весом 70 кг от около 5 до около 500 мг соединения в день.
Для профилактических применений фармацевтические соединения, содержащие соединения по изобретению, вводят пациенту, предрасположенному к развитию болезни или имеющему риск развития болезни, в количестве, достаточном для задержки развития или предотвращения возникновения симптомов болезни. Такое количество определяют как "профилактически эффективная доза." Точное количество соединения для указанного применения также зависит от состояния здоровья пациента и веса, но обычно для пациента весом 70 кг будет находиться в диапазоне от около 0,1 до 2000 мг соединения в день, с более общепринятыми дозами для пациента весом 70 кг от около 5 до около 500 мг соединения в день.
Выбор дозировок и путей введения соединений при однократных или многократных введениях может осуществлять лечащий врач. В любом случае, фармацевтические рецептуры должны обеспечивать количество соединения по изобретению, достаточное для эффективного лечения или профилактики болезни у пациента.
Ниже представлены некоторые примеры соединений по изобретению.
Следующие соединения, указанные ниже, имеют, по меньшей мере, формулу (III)
Все цитируемые в настоящем изобретении публикации и патентные документы включены в него путем ссылки, как если бы каждая такая публикация или документ были конкретно и отдельно указаны, как включенные в изобретение со ссылкой. Предполагается, что цитирование публикаций и патентных документов не является признанием отношения чего-либо из цитированного к предшествующему уровню техники и не является каким-либо признанием относительно их содержания или даты. Изобретение описано посредством письменного описания, и специалистам в данной области техники будет очевидна возможность осуществления изобретения с помощью ряда вариантов осуществления и что предшествующее описание и нижеуказанные примеры приведены в иллюстративных целях и не ограничивают объем изложенной далее формулы изобретения.
- 9 030681
Пример 1. Синтез модуляторов TGR5.
Соединения изобретения и родственные производные можно синтезировать способами, известными специалистам в данной области техники. Подобные способы синтеза указанных соединений описаны ниже; см. также патенты WO 02/072598, WO 2004/0007521, EP 1568706 и EP 135782.
Пример 1. Синтез соединений Io5 и Ip5
(i) ЭДА (этилдиазоацетат), Rh2(OAc)4, CH2Cl2, комнатная температура; (ii) (a) NaOH, EtOH, кипячение с обратным холодильником, (b) ЖХСД (жидкостная хроматография среднего давления) 3α,7αдигидрокси-22,23-метилен-53-холан-24-оевые кислоты (Io5, Ip5).
Этилдиазоацетат (0,478 г, 1,19 ммоль) в сухом CH2Cl2 (15 мл) медленно добавляли по капле к перемешиваемой суспензии 3а,7а-диацетокси-5-норхолан-22,23-ен (1) (0,6 г, 1,39 ммоль) в присутствии диродий(П) тетраацетата (9 мг, 0,02 ммоль) в сухом CH2Cl2 (15 мл) в атмосфере азота при комнатной температуре. Реакционную смесь фильтровали и промывали Н2О (20 мл), высушивали (Na2SO4) и выпаривали в вакууме, таким образом получали смесь четырех диастереоизомерных сложных эфиров 2. Сложные эфиры 2 последовательно растворяли в EtOH (15 мл) и обрабатывали 10н. раствором NaOH (10 мл) с кипячением с обратным холодильником в течение 4 ч, охлаждали, вливали в холодную Н2О (50 мл), подкисляли 2н. HCl и экстрагировали EtOAc (3x15 мл). Органическую фазу промывали солевым раствором (10 мл), высушивали (Na2SO4) и выпаривали в вакууме. Остаток очищали хроматографией на силикагеле. Элюирование CH2Cl2/MeOH 96/4 с 0,1% АсОН приводило к получению 0,087 г (выход 15%) (22S,23R)3а,7а-дигидрокси-22,23-метилен-53-холан-24-оевой кислоты (Io5). Элюирование CH2Cl2/MeOH 95,5/4,5 с 0,1% АсОН давало 0,18 г (выход 32%) (22S,23R)-3α,7α-дигидрокси-22,23-метилен-5β-холан-24-оевой кислоты (Ip5) в виде белых твердых веществ.
Io5. Т.пл.: 148-150°C [a]20D+5,16 (с1, EtOH) , 1H ЯМР (CD3OD и CDCl3) δ : 0,67 (с, 3Н, 18-СН3), 090 (с, 3Н, 19-СН3), 0,96 (д, J=6,68 Гц, 3Н, 21-CH3), 3,40-3,50 (м, 1Н, 3-СН), 3,85 (м, 1Н, 7-СН), 13С ЯМР (CDCl3) δ : 12,20, 16,80, 17,08, 20,80, 21,00, 23,15, 24,10, 28,30, 30,80, 31,30, 33,30, 34,80, 34,90, 35,40, 35,70, 39,80, 39,90, 41,80, 43,40, 50,55, 58,20, 68,90, 72,30, 177,00.
Ip5. Т.пл.: 221-225°C, [α]2%-40,22 (c1, EtOH), 1H ЯМР (CD3OD и CDCl3) δ : 0,56 (с, 3Н, 18-СН3), 0,86 (с, 3Н, 19-СЩ), 1,16 (д, J=6,60 Гц, 3Н, 21-CH3), 3,10-3,30 (м, 1Н, 3-СН), 3,85 (м, 1Н, 7-СН), 13С ЯМР (CDCl3) δ : 12,10, 18,30, 18,55, 20,00, 20,90, 23,10, 24,00, 28,20, 30,70, 31,70, 33,20, 34,80, 35,40, 35,70, 39,80, 40,10, 41,80, 43,15, 50,40, 57,80, 68,90, 72,20, 178,40.
Пример 8. Активность in vitro TGR5 и FXR.
Потенциал и эффективность действия соединений изобретения на рецептор TGR5 оценивали с помощью тестов in vitro.
В табл. 1 указано, что соединения по изобретению представляют собой мощные и селективные модуляторы TGR5. Введение алкильной группы в положении С-23 желчной кислоты придает селективность рецептору TGR5 по сравнению с FXR. Это очевидно из наблюдаемых биологических результатов для FXR и TGR5, полученных с ХДХК, 6-МеХДХК и 6,23-диМе-ХДХК (смесь изомеров 23-R,S), как указано в табл. 1. 6,23-диМе-ХДХК является в 100 раз более мощной на рецепторе TGR5 по сравнению с рецептором FXR. Описание связывания рецептора TGR5 с использованием тестов in vitro см., например, в публикации Kawamata, J. Biol. Chem 2003, Vol. 278, No. 11, p. 9435-9440). Активность на FXR оценивали с помощью резонансного переноса энергии флуоресценции FRET для рекрутинга пептида SRC-I в человеческий FXR с использованием бесклеточного фермент-связанного иммуносорбентного анализа ELiSA; см. Blanchard et al., WO 00/37077.
- 10 030681
Таблица 1
EC50 (мкмоль) соединений из примеров на рецепторах FXR и TGR5
Соединение Структура Данные FXR Данные TGR5
ХДХК <·, ЕС50: 8,6 ЕС50: 4 мкмоль,
(хенодезоксихолевая \^со2н мкмоль, эффективность
кислота) ^л1 χ> эффективность 100%
Ci Γ 100%
'"θΗ
бсс-МеХДХК \-со2н ЕС50: 0,21 ЕС50: 0,37
Ύ"\ мкмоль, мкмоль,
/ЧА Λ> эффективность эффективность
LI Γ 148% 119%
""он
23(R+S)-Ме-6а- .V ”\-со2н ЕС50: 15,62 ЕС50: 0,11
МеХДХК (13а) S мкмоль, мкмоль,
/xil Γ> эффективность эффективность
Ci J 60% 123%
"он
=
В табл. 2 и 3 показаны дополнительные соединения, оцениваемые на активность TGR5. Активность люциферазы определяли в клетках СНО, устойчиво экспрессирующих hTGR5, или транзиторно котрансфицированных вектором экспрессии hTGR5 и цАМФ чувствительный элемент (CRE) - зависимым геномрепортером люциферазы. Некоторые из соединений дополнительно анализировали в тесте репортера люциферазы для оценки их способности активировать ядерный рецептор желчной кислоты FXR.
Таблица 2
Наименование R, r2 Rj TGRS ЕСм Активность TGR5
22Я235-ССОСА* (1о5> <х-ОН -н /у ^~со2н 133 ПО
22S,23J?-CCDCA* <1р5) а-ОН -Н 2.91 102
* Данные представляют средние значения по меньшей мере трех независимых анализов CREзависимого репортера люциферазы в TGRS-трансфицированных клетках СНО.
Единицы для оценки EC50 указаны в мкмоль, единицы для оценки эффективности указаны в % от значения 10 мкмоль ЛХК.
Таблица 3
Показатели активностиа TGR5 и FXR
Наименование FXR ECso мкМ Активность FXR TGR5 ECso мкМ Активность TGR5 Соотношение ЕС50 (TGR5/ FXR)
НО1 'ОН 1ЬЗе 3,97 64.4 0.51 165 0.128
аДанные показывают средние значения по меньшей мере трех независимых экспериментов. Значение эффективности выражено как % активности от значения 10 мкмоль ЛХК (TGR5) или 10 мкмоль баХДХК (FXR).
Данные в табл. 2 и 3 можно определить с помощью способов, известных в данной области техники, например, согласно описанию ниже.
Плазмиды.
Клоны MGC :40597 из Коллекции генов млекопитающих NIH (также именуемый pCMVSPORT6/hTGR5 или pTGR5) и pcDNA3.1(+) были получены из компании Invitrogen (Carlsbad, CA). pCRE-Luc и pCMVP были получены из компании Clontech (Palo Alto, CA). pCMX-hFXR и рСМХmRXRa были предоставлены в дар д-ром David J. Mangelsdorf (Howard Hughes Medical Institute, University of Texas Southwestern Medical Center). pEcREx7-Luc были предоствлены в дар д-ром Richard A. Heyman (X-ceptor Therapeutics, CA).
- 11 030681
Клеточная культура.
Клетки яичника китайского хомяка (СНО), клетки NCI-H716, клетки НерЗВ и клетки COS1 были получены из Американской коллекции типовых культур (Manassas, VA). Культуральные среды для клеток, сыворотки и добавки поставлялись компаниями Invitrogen или Sigma-Aldrich. Все клетки СНО сохранялись в минимальной эссенциальной среде а (а-МЕМ) с добавлением 10% (об./об.) эмбриональной бычьей сыворотки (ЭБС) и 100 мкмоль неосновных аминокислот (NEAA). Клетки NCI-H716 сохраняли в суспензии в среде RPMI-1640 с добавлением 10% ЭБС (v/v), 10 мМ HEPES и 1 мМ пирувата натрия. Клетки Hep3B сохраняли в среде Игла с добавлением 10% ЭБС (об./об.) и 100 мкмоль NEAA. Клетки COS1 сохраняли в модифицированной по Дульбекко среде Игла (DMEM) с добавлением 10% ЭБС (об./об.). Во все культуральные среды для клеток добавляли 100 ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина сульфата. Клетки выращивали при 37°C в атмосфере 5% СО2, пассировали каждые 2-6 дней и для каждого эксперимента высевали заново.
Транзиторные трансфекции.
Клетки СНО высевали в 96-луночные планшеты с плотностью 3,5х104 клеток/на лунку, культивировали в течение 24 ч и затем трансфицировали 150 нг человеческой (h) плазмидой экспрессии TGR5 (pCMVSPORT6/hTGRS) и 100 нг цАМФ-чувствительного элемента (CRE)-зависимой репортерной плазмиды люциферазы (pCRE-Luc) в каждой лунке с использованием реактива Липофектамин 2000 (Invitrogen) согласно инструкциям изготовителя. Через 6 ч инкубации клетки однократно промывали фосфатнобуферным раствором (ФБР) и заменяли среду на среду DMEM, содержащую 0,1% (вес./об.) бычьего сывороточного альбумина (БСА). Через следующие 18 ч инкубации клетки обрабатывали в течение 5 ч каждым из соединений в разных концентрациях в новой DMEM, содержащей 0,1% (вес./об.) БСА. После обработки клетки лизировали с помощью лизирующего буфера 50 мкл (25 мМ Трис-Cl (pH 7,6), 2 мМ ЭДТА, 1 мМ дитиотретиола (ДТТ), 10% (об./об.) глицерина и 1% (об./об.) тритона Х-100) путем цикла замораживания-оттаивания и подвергали анализу с люциферазой, как описано ниже.
Клетки COS1 высевали в 96-луночные планшеты с плотностью 2,5х104 клеток/на лунку в среде DMEM с добавлением 10% (об./об.) очищенной на активированном угле ЭБС, культивировали в течение 24 ч, и затем трансфицировали 25 нг плазмиды экспрессии hFXR (pCMX-hFXR), 25 нг плазмиды экспрессии мышиного (m) ретиноидного X рецептора а (RXRa) (pCMX-mRXRa), 50 нг репортерной плазмиды (pEcREx7-Luc) и 50 нг pCMVfi в качестве внутреннего контроля в каждой лунке с использованием реактива Липофектамин 2000 (Invitrogen). Через 24 ч клетки дважды промывали ФБР и обрабатывали каждым из соединений в разных концентрациях в свежей DMEM с добавлением 10% (об./об.) очищенной на активированном угле ЭБС в течение 24 ч. После обработки клетки лизировали с помощью лизирующего буфера 50 мкл путем цикла замораживания-оттаивания и подвергали анализам и с люциферазой, и с β-галактозидазой, как описано ниже. Стандартизированные значения люциферазы определяли как отношение активности люциферазы к активности β-галактозидазы.
Анализы с люциферазой и с β-галактозидазой.
Для анализов с люциферазой смешивали 20 мкл клеточного лизата со 100 мкл люциферазного реакционного буфера [235 мкмоль люциферина, 265 мкмоль АТФ и 135 мкмоль коэнзима А (КоА)] и определяли люминесценцию на оборудовании CentroXS3 LB960 (Berthold Technologies, Bad Wildbad, Германия). Для анализа с β-галактозидазой 10 мкл клеточного лизата смешивали со 100 мкл буфера Z [60 мМ Na2HPO4, 10 мМ KCl, 1 мМ MgSO4, 50 мМ β-меркаптоэтанола и 0,75 мг/мл о-нитрофенил-β-Οгалактопиранозида (ONPG)], и инкубировали при 37°C в течение от 0,5 до 3 ч. Реакции прекращали путем добавления 50 мкл останавливающего буфера (1 М Na2CO3) и определяли оптическую плотность при 420 нм.
Создание клеток СНО, устойчиво экспрессирующих человеческий TGR5 (клетки CHO-TGR5).
Клетки СНО были трансфицированы 3,8 мкг плазмиды экспрессии hTGR5 (pCMVSPORT6/hTGR5), 3,8 мкг CRE-зависимой репортерной плазмиды люциферазы (pCRE-Luc) и 0,4 мкг плазмиды экспрессии гена резистентности к неомицину [pcDNA3.1(+)] с использованием липофектамина 2000. Трансфектанты были отобраны с использованием 400 мкг/мл G418 сульфата, и одиночные клоны выращивали по отдельности в 96-луночных планшетах. Проводили скрининг клеточных линий СНО, экспрессирующих TGR5 путем обработки ЛХК с последующими люциферазными анализами.
Анализ продукции цАМФ.
Клетки NCI-H716 высевали в 96-луночные планшеты с нанесенным 0,75 мг/мл гелем Matrigel (BD Biosciences) согласно инструкциям изготовителя непосредственно перед использованием, с плотностью 6х104 клеток/на лунку в среде DMEM с добавлением 10% (об./об.) ЭБС, 100 Ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина сульфата, культивировали в течение 24 ч, что приводило к адгезии клеток на дне планшета. Клетки CHO-TGR5 высевали в 96-луночные планшеты с плотностью 3,5х104 клеток/на лунку в среде а-МЕМ с добавлением 10% (об./об.) ЭБС, 100 мкмоль NEAA, 100 единиц/мл пенициллина и 100 мкг стрептомицина сульфата, культивировали в течение 24 ч. Клетки дважды промывали ФБР, затем меняли среду на среду для цАМФ-анализа [DMEM, содержащую 0,1% (вес./об.) БСА и 0,5 мМ 3-изобутил1-метилксантина (IBMX)]. После инкубации в течение 30 мин при 37°C клетки обрабатывали каждым
- 12 030681
соединением в течение 30 мин в новой среде для цАМФ-анализа. После обработки среду удаляли и определяли количество цАМФ с помощью комплекта для скрининга cAMP-Screen (Applied Biosystems, Foster City, CA) согласно инструкциям изготовителя.
Анализ FRET (определение внутриклеточного содержания цАМФ).
Проводили анализ связывания рецептора путем измерения уровня циклического АМФ (цАМФ) с помощью анализа FRET. Человеческие клеточные линии кишечных клеток (NCI-H716) высевали в 96луночные планшеты, покрытые непосредственно перед использованием 0,75 мг/мл гелем Matrigel (BD Biosciences) согласно инструкциям изготовителя, с плотностью 12х103 клеток/на лунку в среде DMEM с добавлением 10% (об./об.) ЭБС, 100 единиц/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина сульфата, культивировали в течение 24 ч, что приводило к адгезии клеток на дне планшета. Клетки дважды промывали ФБР, затем среду заменяли на среду для анализа цАМФ [OPTIMEM, содержащую 0,1% (вес./об.) БСА и 1 мМ 3-изобутил-1-метилксантин (IBMX)]. После инкубации в течение 60 мин при 37°C клетки в течение 1 ч при комнатной температуре обрабатывали возрастающими концентрациями соединения Ih3 с в стимулирующем буфере (5 мМ HEPES, 0,1% БСА в HBSS (сбалансированном солевом растворе Хенкса) с уровнем pH 7,4) который содержал конъюгированное с хелатом европия - стрептадивином и ALEXA Фтор-647 антитело анти-цАМФ (PerkinElmer). Уровень внутриклеточного цАМФ определяли с помощью комплекта Lance (PerkinElmer). В качестве контрольного лиганда использовали литохолевую кислоту. Z' фактор использовали для подтверждения анализа. Для получения значения ЕС50 были построены нелинейные кривые регрессии без ограничений с использованием уравнения с четырьмя параметрами и программного обеспечения GraphPad Prism (GraphPad Inc).
Альфа-скрининговый анализ.
Активность FXR оценивали по методике альфа-скрининга в анализе рекрутинга коактиватора. Альфа-скрининг представляет собой химическое исследование, основанное на изучении гранул, которое используют для изучения биомолекулярных взаимодействий. Связывание молекул, зафиксированных на гранулах, приводит к передаче энергии от одной гранулы к другой, что в итоге производит люминесцентный сигнал. При взаимодействии партнеров химическая энергия передается от донорных на акцепторные гранулы и возникает сигнал. При стимуляции желчных кислот GST-FXR-LBD взаимодействует с пептидом Src-1. Для фиксации GST-слитого FXR-LBD использовали анти-GST-покрытые акцепторные гранулы, тогда как биотинилированный SRC-1 пептид фиксировали донорными стрептадивиновыми гранулами. После облучения 680 нм происходил перенос химической энергии от донорных гранул к акцепторным гранулам через комплекс стрептадивин-донор/Src-1-биотин/GSTFXR-L·BD/анти-GSTакцептор и возникал сигнал. Анализ проводили в белых малообъемных 384-луночных планшетах Optiplates (PerkinElmer) в конечном объеме 25 мкл, содержащем конечные концентрации 10 нМ очищенного GST-меченого белка FXR-LBD, 30 нМ биотинилированного пептида Src-1, 20 мкг/мл анти-GST акцепторных гранул и 10 мкг/мл стрептавидиновых донорных гранул (PerkinElmer). Тестовый буфер содержал 50 мМ Трис (уровень pH 7,4), 50 мМ KCl, 0,1% БСА и 1 мМ ДТТ. Устанавливали время возбуждения с помощью 1 мкл лигандов (солюбилизированных в 100%-ном ДМСО) в течение 30 мин при комнатной температуре. Поддерживали концентрацию ДМСО в каждой лунке с конечной концентрацией 4%. После добавления смеси обнаружения (донорные и акцепторные гранулы) планшеты икубировали в темноте в течение 4 ч при комнатной температуре, затем данные считывали в анализаторе Envision microplate analyzer (PerkinElmer). Кривые доза-ответ получали трижды и для подтверждения анализа использовали фактор Z'. Для получения значения ЕС50 были построены нелинейные кривые регрессии без ограничений с использованием уравнения с четырьмя параметрами и программного обеспечения GraphPad Prism (GraphPad Inc).
Пример 13. Токсичность in vitro в клетках HepG2.
Соединения изобретения оценивали на токсичность in vitro с помощью изучения клеток HepG2. Цитотоксичность клеток HepG2 определяли контролем уменьшения АТФ, и апоптоз клеток HepG2 определяли контролем активации каспазы-3. Результаты показаны в табл. 7.
Цитотоксичность.
Жизнеспособность клеток измеряли с помощью Perkinelmer ATP-Lite 1 STEP. АТФ представляет собой маркер жизнеспособности клеток, поскольку присутствует во всех метаболически активных клетках, и при некрозе или апоптозе клеток наблюдается очень быстрое снижение его концентрации. Клетки HepG2 (1х104) высевали в 96-луночные планшеты и стимулировали 10-кратными разведениями от 1 нМ до 300 мкмоль соединения по изобретению в течение 4 ч при 37°C. Планшеты уравновешивали при КТ в течение 10 мин, затем к 100 мкл культуральной среды, содержащей клетки добавляли 100 мкл реактива ATP-Lite 1 STEP. Люминесценцию определяли устройством Victor Light (PerkinElemr). Тестовый сигнал вычленяли из фона. В качестве положительного контроля клеточной цитотоксичности применяли тамоксифен, а отрицательным контролем были необработанные клетки.
Апоптоз.
Каспазы участвуют в молекулярном контроле апоптоза, и каспазную активность можно изучать с помощью субстрата каспазы-3 TruPoint, который позволяет проводить чувствительный, надежный и рав- 13 030681
номерный тест флюоресценции с временным разрешением. Человеческие клетки гепатоциты (HepG2) высевали (1х104) в 96-луночные планшеты со средой HepG2 без пирувата натрия. Клетки стимулировали в течение 4 ч при 37°C последовательными разведениями тестового соединения по изобретению от 1 нМ до 300 мкмоль в трех исследованиях. В качестве положительного контроля апоптозных клеток применяли стауроспорин. Отрицательным контролем служили: 1. Нестимулированные клетки: 2. Среда единственная без клеток: 3. Клетки, инкубированные без каспазного субстрата. В клетки добавляли лизирующий буфер и каспазу-3 субстрат, затем через 1 ч и через 24 ч после добавления считывали данные флюоресценции с помощью ридера Envision.
Некроз.
Клеточный некроз анализировали путем измерения высвобождения лактатдегидрогеназы (ЛДГ) из некротических клеток в анализе изучения целостности гомогенных мембран, используя реактив CytoTox Promega ONE. Клетки HepG2 (1х104) высевали в 96-луночные планшеты. Через 18 ч инкубации производили замену среды на свежую среду без пирувата натрия и сыворотки и добавляли соединение по изобретению при ответе на дозу от 0,1 до 500 мкмоль. Тритон 1% использовали как контроль максимального высвобождения ЛДГ. Тамоксифен использовали как индуктор некроза. После высевания клетки вновь находились в инкубаторе в течение дополнительных 4 ч. Супернатант переносили в новую планшету и в том же объеме в планшету добавляли реактив CytoTox Promega ONE. Через 1 ч инкубации получали данные флюоресценции с помощью многофункционального планшетного ридера Envision с длиной волны возбуждения 560 нм и эмиссией 590 нм.
Таблица 7
Токсичность in vitro в клетках HepG2
Соединение Цитотоксичность Уменьшение АТФ ЕС50 (мкмоль) Апоптоз Активность каспазы-3 ЕС50 (мкмоль) Некроз Высвобождение ЛДГ ЕС50 (мкмоль)
Стауроспорин (апоптоз) 15 3 n.d.
Тамоксифен (некроз) 47 4 35
ЛХК 84 65 105
ХДХК 650 890 >1000
УДХК >1000 n.d. n.d.
ХК >1000 n.d. n.d.
Соединение по изобретению >1000 n.d. n.d.
Пример 14. Анализ селективности ядерных рецепторов (NR).
Селективность соединений по изобретению оценивали способами исследования, известными в данной области техники. Более конкретно, применяли следующие способы исследований:
FXR и LXR: рекрутинг коактиватора (альфа-скрининг);
TGR5: уровень цАМФ в человеческой клеточной линии клеток кишечника (NCI-H716);
PXR: анализ конкурентного связывания лигандов (анализ связывания);
CAR: рекрутинг коактиватора (Lantha-скрининг);
В табл. 8 представлены результаты указанных исследований.
TR-FRET анализ коактиватора.
Lantha-скрининг (Invitrogen) применяли для изучения селективности ядерных рецепторов. В комплекте использовали меченое тербием анти-GST антитело, флюоресцеин-меченый коактиваторный пептид и NR-лиганд-связывающий домен, несущий метку глутатиона-трансферазы (GST) в формате гомогенного анализа смешивай-и-считывай. Исследование проводили в 384-луночной планшете с микролунками (PerkinElmer). В общей сложности 20 мкл исследуемой реакционной смеси включали в себя 5 нМ GST-меченых NR, 125 нМ корегуляторного пептида, 5 нМ ТВ-анти-GST-меченого антитела (тербийанти-глутатион-S меченая трансфераза), 5 мМ ДТТ и соединения по изобретению в разных концентрациях в тестовом буфере, поставляемом компанией Invitrogen. Отрицательный контроль не содержал соединения по изобретению, но содержал все остальные содержавшиеся в лунках агонисты. Через 1 ч инкубации в темноте проводили измерения TR-FRET в ридере Envision. Соотношения эмиссии 520/495 выстраивали в зависимости от разных концентраций лиганда. Данные анализировали с помощью GraphPad Prism, для получения значений EC50 использовали уравнение сигмоидальной кривой с переменным наклоном.
- 14 030681
Таблица 8
Анализ . селективности ядерных рецепторов
Соединение (эталонный стандарт) Активация FXR (ХДХК=10-20 мкМ) ЕС50 (мкМ) Активация TGR5 (ЛХК=4-8 мкМ) ЕС50 (мкМ) Активация LXRa (Т0901317=0,08 мкМ) 1С50 (мкМ) Активация PXR (SR12183=0,013 мкМ) 1С50 (мкМ) Активация CAR (С1ТСО=0,005 мкМ) ЕС50 (мкМ) Активация PPAR5 (GW0742=0,004 мкМ) ЕС50 (мкМ) Активация VDR (Ди-гидроксиВит. D3=0,005 мкМ) ЕС50 (мкМ)
ХДХК 20 30 Отсутствие активности >250 >250 Отсутствие активности Отсутствие активности
ЛХК Отсутствие активности 4-8 Отсутствие активности 23 Отсутствие активности Отсутствие активности Отсутствие активности
ХК Отсутствие активности 30 Отсутствие активности Отсутствие активности Отсутствие активности Отсутствие активности Отсутствие активности
УДХК >150 Отсутствие активности Отсутствие активности >250 >250 Отсутствие активности Отсутствие активности
Соединение по изобретению 175 0,9 Отсутствие активности 110 >250 Отсутствие активности Отсутствие активности
FXR, LXRa, CAR, PPAR5, VDR: анализ рекрутинга коактиватора; TGR5: уровень цАМФ в клеточной линии человеческих клеток кишечника, NCI-H716; PXR: анализ конкурентных лигандов.
Пример 15. Стабильность соединений.
Стабильность соединения по изобретению определяли известными в данной области способами. Концентрация клеточной фракции составляла 1 мг/мл на протяжении времени 0-15-30-60-120-240-3601440 мин. В качестве положительного контроля применяли тестостерон (1000 нг/мл); 7-гидроксикумарин (1296 нг/мл); бензойную кислоту (2440 нг/мл) на протяжении времени 0-10-20-40-60-120 мин. Применяли анализ жидкостной хроматографии/масс-спектрометрии LC/MS на колонке C18 посредством градиента полярности; сбор данных осуществляли с помощью селективного ионного мониторинга. Результаты показаны ниже в табл. 9.
Таблица 9
Положительный контроль
Соединение по изобретению Тестостерон 7-гидроксикумарин Бензойная кислота
ТУ (время, выраженное в минутах)
Фракция S9 человеческой печени 725 39 8,5 236
Микросомы человеческой печени 1942 8-20 -
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> intercept Pharmaceuticals, inc.
Pellicciari, Roberto
<120> Модуляторы TGR5 и способы их применения
<130> 35147-501002WO
<140> PCT/US09/65188
<141> 2009-11-19
<150> EP 08169462.2
<151> 2008-11-19
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 20
- 15 030681
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Химически синтезированный праймер
<400> 1
agatgctaaa cttgggcttg
<210> 2
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Химически синтезированный праймер <400> 2
taaagtgccc acaccactc
1. Соединение формулы (III)

Claims (4)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    или его фармацевтически приемлемая соль, в котором R1 представляет собой гидрокси;
    R5 представляет собой незамещенный С2-С6 алкил, где R5 находится в S-конфигурации;
    R7 представляет собой водород;
    R8 и R9, взятые вместе с углеродом, к которому они присоединены, образуют карбонил;
    Rio представляет собой гидрокси, NH(CH2)mSO3H или NH(CH2)nCO2H; m является целым числом 0, 1, 2, 3, 4 или 5 и n является целым числом 0, 1, 2, 3, 4 или 5.
  2. 2. Фармацевтически приемлемая композиция, содержащая соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый наполнитель.
  3. 3. Применение соединения формулы (III) или его фармацевтически приемлемой соли для лечения или профилактики метаболического заболевания, воспалительного заболевания, болезни печени, аутоиммунного заболевания, болезни сердца, болезни почек, рака и болезни желудочно-кишечного тракта.
  4. 4. Соединение, выбранное из
    - 16 030681
EA201400258A 2008-11-19 2009-11-19 Модуляторы tgr5 и способы их применения EA030681B1 (ru)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP08169462 2008-11-19

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201400258A1 EA201400258A1 (ru) 2015-02-27
EA030681B1 true EA030681B1 (ru) 2018-09-28

Family

ID=41668454

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201170714A EA020140B1 (ru) 2008-11-19 2009-11-19 Модуляторы tgr5 и способы их применения
EA201400258A EA030681B1 (ru) 2008-11-19 2009-11-19 Модуляторы tgr5 и способы их применения

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201170714A EA020140B1 (ru) 2008-11-19 2009-11-19 Модуляторы tgr5 и способы их применения

Country Status (23)

Country Link
US (5) US8114862B2 (ru)
EP (2) EP2698375B1 (ru)
JP (5) JP5535233B2 (ru)
KR (2) KR101789960B1 (ru)
CN (2) CN104370990A (ru)
AU (1) AU2009316566B9 (ru)
BR (1) BRPI0921983B8 (ru)
CA (1) CA2744189C (ru)
DK (2) DK2698375T3 (ru)
EA (2) EA020140B1 (ru)
ES (2) ES2663948T3 (ru)
HK (2) HK1166327A1 (ru)
HU (1) HUE039171T2 (ru)
IL (3) IL212969A (ru)
LT (1) LT2698375T (ru)
MX (1) MX2011005295A (ru)
NO (1) NO2698375T3 (ru)
PL (2) PL2698375T3 (ru)
PT (2) PT2376519E (ru)
SG (1) SG10201400162QA (ru)
SI (1) SI2698375T1 (ru)
WO (1) WO2010059853A1 (ru)
ZA (1) ZA201104077B (ru)

Families Citing this family (47)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE60205891T2 (de) 2001-03-12 2006-06-22 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Steroide als agonisten für fxr
US10987362B2 (en) 2004-03-12 2021-04-27 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Treatment of fibrosis using FXR ligands
DK1734970T3 (en) 2004-03-12 2015-02-16 Intercept Pharmaceuticals Inc Treatment of fibrosis using FXR ligands
ITMI20050912A1 (it) 2005-05-19 2006-11-20 Erregierre Spa Processo di preparazione di acidi 3-a-ya(b)-diidrossi-6-a(b)-alchil-5b-colanici
AU2008209566C1 (en) 2007-01-19 2013-02-14 Intercept Pharmaceuticals, Inc. 23-substituted bile acids as TGR5 modulators and methods of use thereof
CA2732323C (en) 2008-07-30 2017-06-27 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Tgr5 modulators and methods of use thereof
MX2011005295A (es) * 2008-11-19 2011-06-24 Intercept Pharmaceuticals Inc Moduladores de tgr5 y metodo de uso de los mismos.
EP2364161B1 (en) * 2008-11-26 2020-03-11 Satiogen Pharmaceuticals, Inc. Compositions containing satiogens and methods of use
CN102316872B (zh) 2008-11-26 2016-12-21 萨蒂奥根制药公司 治疗肥胖症和糖尿病的胆汁酸再循环抑制剂
EP2575821B1 (en) 2010-05-26 2015-08-12 Satiogen Pharmaceuticals, Inc. Bile acid recycling inhibitors and satiogens for treatment of diabetes, obesity, and inflammatory gastrointestinal conditions
WO2013063512A1 (en) 2011-10-28 2013-05-02 Lumena Pharmaceuticals, Inc Bile acid recycling inhibitors for treatment of pediatric cholestatic liver diseases
US9982008B2 (en) 2012-06-19 2018-05-29 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Preparation and uses of obeticholic acid
KR20150022974A (ko) 2012-06-19 2015-03-04 인터셉트 파마슈티컬즈, 인크. 오베티콜산의 제조법, 용도 및 고체 형태
CN104703585A (zh) 2012-10-09 2015-06-10 宝洁公司 鉴定协同化妆品组合的方法
US10302630B2 (en) 2012-10-09 2019-05-28 The Procter & Gamble Company Method of identifying or evaluating beneficial actives and compositions containing the same
EP3004132A4 (en) 2013-06-06 2017-01-18 Yissum, Research Development Company of the Hebrew Bile acid-basic amino acid conjugates and uses thereof
CA2914924A1 (en) * 2013-06-13 2014-12-18 Fast Forward Pharmaceuticals B.V. Cd40 signalling inhibitor and a further compound, wherein the further compound is a bile acid, a bile acid derivative, an tgr5-receptor agonist, an fxr agonist or a combination thereof, for the treatment of chronic inflammation, and the prevention of gastrointestinal cancer or fibrosis.
DK3071696T3 (da) 2013-11-22 2019-10-07 Mina Therapeutics Ltd C/ebp alfa kort aktiverings-rna-sammensætninger og fremgangsmåder til anvendelse
MX2020004024A (es) 2014-05-29 2021-12-10 Bar Pharmaceuticals S R L Derivados del colano para uso en el tratamiento y/o prevencion de enfermedades en las que intervienen el fxr y el tgr5/gpbar1.
WO2016054208A1 (en) * 2014-10-03 2016-04-07 Mayo Foundation For Medical Education And Research Targeting tgr5 to treat disease
JP2017533923A (ja) * 2014-11-06 2017-11-16 エナンタ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｆｘｒ／ｔｇｒ５アゴニストとしての胆汁酸類似体およびその使用方法
US10131688B2 (en) 2014-11-19 2018-11-20 NZP UK Limited 5.beta.-6-alkyl-7-hydroxy-3-one steroids as intermediates for the production of steroidal FXR modulators
CA2968310A1 (en) 2014-11-19 2016-05-26 NZP UK Limited 6.alpha.-alkyl-6,7-dione steroids as intermediates for the production of steroidal fxr modulators
MX2017006563A (es) 2014-11-19 2018-01-26 Nzp Uk Ltd Esteroides de 6-alquil-7-hidroxi-4-en-3-ona como intermedios para la produccion de moduladores esteroides del receptor x farnesoide (fxr).
MX2017006565A (es) 2014-11-19 2018-01-26 Nzp Uk Ltd Esteroides 6.alfa.-alquil-3,7-diona como intermedios para la produccion de moduladores esteroides del receptor x farnesoide (fxr).
CN105985396A (zh) * 2015-02-16 2016-10-05 苏州泽璟生物制药有限公司 氘代鹅去氧胆酸衍生物以及包含该化合物的药物组合物
JP2018519246A (ja) * 2015-04-28 2018-07-19 ジエンス ハンセン ファーマセウティカル グループ カンパニー リミテッド コール酸誘導体、及びその製造方法及び医薬用途
CA2989167A1 (en) * 2015-06-19 2016-12-22 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Tgr5 modulators and methods of use thereof
US10800807B2 (en) 2015-06-19 2020-10-13 Intercept Pharmaceuticals, Inc. TGR5 modulators and methods of use thereof
WO2017053826A1 (en) * 2015-09-24 2017-03-30 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Methods and intermediates for the preparation bile acid derivatives
TW201718621A (zh) * 2015-10-07 2017-06-01 英特賽普醫藥品公司 法尼醇x受體調節劑
CN109467585A (zh) * 2016-03-11 2019-03-15 深圳市塔吉瑞生物医药有限公司 用于预防或治疗fxr-介导疾病的胆烷酸化合物
CA3020698A1 (en) 2016-04-13 2017-10-19 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating or preventing hepatocellular carcinoma
GB201608777D0 (en) 2016-05-18 2016-06-29 Dextra Lab Ltd Compounds
US10654834B2 (en) * 2016-07-01 2020-05-19 Venenum Biodesign, LLC Non-systemic TGR5 agonists
WO2018222701A1 (en) * 2017-05-30 2018-12-06 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Treatment of renal diseases with a bile acid derivative
CN109021056B (zh) * 2017-06-09 2021-03-09 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 法尼酯x受体激动剂
BR112020001362A2 (pt) 2017-07-24 2020-08-11 Intercept Pharmaceuticals, Inc. derivados de ácido biliar isotopicamente marcados
EP3679139B1 (en) 2017-09-08 2022-11-02 MiNA Therapeutics Limited Stabilized hnf4a sarna compositions and methods of use
GB201812382D0 (en) 2018-07-30 2018-09-12 Nzp Uk Ltd Compounds
WO2020163201A1 (en) * 2019-02-04 2020-08-13 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Treatment and prevention of intestinal inflammatory diseases with a bile acid derivative
CN116925168A (zh) * 2019-08-23 2023-10-24 深圳云合医药科技合伙企业(有限合伙) 胆汁酸衍生物及其组合物和应用
JP2022552655A (ja) 2019-10-07 2022-12-19 キャリーオペ，インク． Ｇｐｒ１１９アゴニスト
CN116323608A (zh) 2020-05-19 2023-06-23 卡尔优普公司 Ampk活化剂
JP2023531726A (ja) 2020-06-26 2023-07-25 キャリーオペ，インク． Ａｍｐｋアクチベーター
KR20220004451A (ko) * 2020-07-03 2022-01-11 연세대학교 산학협력단 지방간 질환의 예방 또는 치료를 위한 약학적 조성물
CN113774142A (zh) * 2021-10-11 2021-12-10 北京化工大学 Tgr5在制备治疗肠癌药物及诊断性试剂盒中的应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0186023A2 (en) * 1984-12-21 1986-07-02 Lehner A.G. Biliary acid derivatives, process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
US4892868A (en) * 1984-08-17 1990-01-09 Gipharmex, S.P.A. Derivatives of biliary acids, process for the production thereof and corresponding pharmaceutical compositions
WO2008091540A2 (en) * 2007-01-19 2008-07-31 Intercept Pharmaceuticals, Inc. 23-substituted bile acids as tgr5 modulators and methods of use thereof

Family Cites Families (48)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3366932D1 (en) 1982-07-29 1986-11-20 Lehner Ag New derivatives of biliary acids, process for the production thereof and pharmaceutical compositions containing the same
IT1206112B (it) 1983-04-29 1989-04-14 Lehner Ag Nuovi derivati di acidi biliari, procedimento per la loro preparazione e relative composizioni farmaceutiche.
IT1212835B (it) 1983-08-18 1989-11-30 Lehner Ag Derivati di acidi biliari, procedimento per la loro preparazione e relative composizioni farmaceutiche.
IT1223313B (it) 1987-10-20 1990-09-19 Gipharmex Spa Derivati di acidi biliari loro preparazione e composizioni farmaceutiche che li contengono
IT1229570B (it) 1989-04-17 1991-09-04 Giuliani Spa Derivati fluorurati di acidi biliari, loro preparazione e composizioni farmaceutiche che li contengono.
US5175320A (en) 1989-04-17 1992-12-29 Giuliani S.P.A. Fluorinated bile acid derivatives, processes for the preparation thereof and pharmaceutical compositions containing them
DE69018592T2 (de) 1989-12-13 1995-10-05 Mitsubishi Chem Corp Pyrazolylacrylsäure-Derivate, verwendbar als systemische Fungiziden in Pflanzen- und Materialschutz.
AU1856997A (en) 1996-02-02 1997-08-22 Merck & Co., Inc. Method for raising hdl cholesterol levels
GB9604242D0 (en) 1996-02-28 1996-05-01 Glaxo Wellcome Inc Chemical compounds
GB9606805D0 (en) 1996-03-30 1996-06-05 Glaxo Wellcome Inc Medicaments
US5689791A (en) 1996-07-01 1997-11-18 Xerox Corporation Electrically conductive fibers
TR199900056T2 (xx) 1996-07-12 1999-04-21 Smithkline Beecham P.L.C. Leptin direncinin yeni tedavisi.
US6008237A (en) 1997-12-19 1999-12-28 Merck & Co., Inc. Arylthiazolidinedione derivatives
DE69939864D1 (de) 1998-01-29 2008-12-18 Amgen Inc Ppar-gamma modulatoren
WO2000025134A1 (en) 1998-10-23 2000-05-04 Glaxo Group Limited Assays for ligands for nuclear receptors
DE69940958D1 (de) 1998-12-23 2009-07-16 Glaxo Group Ltd Bestimmungsmethode fur liganden der nuklearen rezeptoren
US6465258B1 (en) 1999-01-07 2002-10-15 Tularik, Inc. FXR receptor-mediated modulation cholesterol metabolism
US20020132223A1 (en) 1999-03-26 2002-09-19 City Of Hope Methods for modulating activity of the FXR nuclear receptor
EP1473042B1 (en) 1999-03-26 2006-06-21 City of Hope Screening for FXR receptor modulators
DE60013417T2 (de) 1999-03-26 2005-09-15 City Of Hope, Duarte Verfahren zum screenen von fxr-rezeptormodulatoren
US6906057B1 (en) 1999-06-11 2005-06-14 Allergan, Inc. Methods for modulating FXR receptor activity
BR0011743A (pt) 1999-06-11 2002-03-05 Allergan Sales Inc Método para modular a atividade de receptor de fxr
US6559188B1 (en) 1999-09-17 2003-05-06 Novartis Ag Method of treating metabolic disorders especially diabetes, or a disease or condition associated with diabetes
EP1284728A4 (en) 1999-10-22 2004-05-19 Merck & Co Inc MEDICINES FOR TREATING ADDICTIC ADDICTION
CA2401290A1 (en) 2000-04-12 2001-10-18 Takeda Chemical Industries, Ltd. Novel g protein-coupled receptor protein and dna thereof
US6627636B2 (en) 2000-06-15 2003-09-30 Bristol-Myers Squibb Company HMG-CoA reductase inhibitors and method
WO2002020463A2 (en) 2000-09-05 2002-03-14 Tularik Inc. Fxr modulators
US20020119958A1 (en) 2001-02-13 2002-08-29 Shinichiro Tojo Therapeutic agent for hyperlipidemia
DE60205891T2 (de) 2001-03-12 2006-06-22 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Steroide als agonisten für fxr
EP1378749A4 (en) 2001-04-12 2005-05-11 Takeda Pharmaceutical SCREENING METHOD
US20070010562A1 (en) 2001-08-13 2007-01-11 Ulrike Bauer Nr1h4 nuclear receptor binding compounds
DE60131967D1 (de) 2001-08-13 2008-01-31 Phenex Pharmaceuticals Ag Nr1h4-kern-rezeptor-bindende verbindungen
EP1423113A4 (en) 2001-08-13 2007-04-18 Phenex Pharmaceuticals Ag NR1H4 NUCLEAR RECEPTOR BINDING COMPOUNDS
US20030144360A1 (en) 2001-11-19 2003-07-31 Allergan Sales, Inc. Composition and method for modulating BAR/FXR receptor activity
WO2003080803A2 (en) 2002-03-21 2003-10-02 Smithkline Beecham Corporation Methods of using farnesoid x receptor (fxr) agonists
EP1494533A2 (en) 2002-04-12 2005-01-12 The University of Chicago Farnesoid x-activated receptor agonists
US6987121B2 (en) 2002-04-25 2006-01-17 Smithkline Beecham Corporation Compositions and methods for hepatoprotection and treatment of cholestasis
JPWO2004000752A1 (ja) 2002-06-19 2005-10-20 株式会社アベイラス 人造石壁材
ITMI20021532A1 (it) 2002-07-12 2004-01-12 Roberto Pellicciari Composti chimici
US7319109B2 (en) 2002-11-22 2008-01-15 Smith Kline Beecham Corporation Farnesoid X receptor agonists
WO2004067008A1 (ja) 2003-01-28 2004-08-12 Takeda Pharmaceutical Company Limited 受容体作動薬
EP1696910A4 (en) 2003-09-26 2009-12-09 Smithkline Beecham Corp COMPOSITIONS AND METHOD FOR THE TREATMENT OF FIBROSIS
EP1568706A1 (en) 2004-02-26 2005-08-31 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Novel steroid agonist for FXR
DK1734970T3 (en) 2004-03-12 2015-02-16 Intercept Pharmaceuticals Inc Treatment of fibrosis using FXR ligands
ITMI20050912A1 (it) 2005-05-19 2006-11-20 Erregierre Spa Processo di preparazione di acidi 3-a-ya(b)-diidrossi-6-a(b)-alchil-5b-colanici
JP5222846B2 (ja) 2006-06-27 2013-06-26 インターセプト ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド Ｆｘｒ媒介疾患または状態の予防または治療のためのｆｘｒリガンドとしての胆汁酸誘導体
EP1947108A1 (en) 2007-01-19 2008-07-23 Intercept Pharmaceuticals, Inc. TGR5 modulators and methods of use thereof
MX2011005295A (es) * 2008-11-19 2011-06-24 Intercept Pharmaceuticals Inc Moduladores de tgr5 y metodo de uso de los mismos.

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4892868A (en) * 1984-08-17 1990-01-09 Gipharmex, S.P.A. Derivatives of biliary acids, process for the production thereof and corresponding pharmaceutical compositions
EP0186023A2 (en) * 1984-12-21 1986-07-02 Lehner A.G. Biliary acid derivatives, process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
WO2008091540A2 (en) * 2007-01-19 2008-07-31 Intercept Pharmaceuticals, Inc. 23-substituted bile acids as tgr5 modulators and methods of use thereof

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SATO Hiroyuki el al., Novel Potent and Selective Bile Acid Derivatives as TGR5 Agonists:Biological Screening, Structure-Activity Relationships, and Molecular Modeling Studies. Journal of Medicinal Chemistry, 2008, 51 (6), p. 1831-1841, (реферат) [он-лайн] CAS(STN), 148:441185, RN 951694-85-2 *

Also Published As

Publication number Publication date
PT2376519E (pt) 2014-02-20
SI2698375T1 (sl) 2018-10-30
IL244812A0 (en) 2016-05-31
KR20110086177A (ko) 2011-07-27
IL212969A0 (en) 2011-07-31
US20210269473A1 (en) 2021-09-02
KR101789960B1 (ko) 2017-10-25
KR101667436B1 (ko) 2016-10-18
JP2017132803A (ja) 2017-08-03
AU2009316566A1 (en) 2010-05-27
JP2014159456A (ja) 2014-09-04
LT2698375T (lt) 2018-07-10
KR20160122272A (ko) 2016-10-21
CN104370990A (zh) 2015-02-25
US9650409B2 (en) 2017-05-16
CN102325784B (zh) 2014-11-19
AU2009316566A2 (en) 2011-07-14
EP2698375B1 (en) 2018-02-21
SG10201400162QA (en) 2014-05-29
ZA201104077B (en) 2012-02-29
DK2376519T3 (da) 2014-02-03
AU2009316566B2 (en) 2014-04-17
MX2011005295A (es) 2011-06-24
EA201400258A1 (ru) 2015-02-27
ES2458168T3 (es) 2014-04-30
US20140100209A1 (en) 2014-04-10
PL2698375T3 (pl) 2018-08-31
EA201170714A1 (ru) 2012-01-30
JP2015232020A (ja) 2015-12-24
HK1166327A1 (en) 2012-10-26
DK2698375T3 (en) 2018-05-28
NO2698375T3 (ru) 2018-07-21
EP2698375A3 (en) 2014-03-12
IL244812B (en) 2019-03-31
BRPI0921983B8 (pt) 2021-05-25
EP2698375A2 (en) 2014-02-19
BRPI0921983A2 (pt) 2018-07-10
EP2376519B1 (en) 2013-11-13
US8114862B2 (en) 2012-02-14
CA2744189A1 (en) 2010-05-27
AU2009316566B9 (en) 2014-05-15
CA2744189C (en) 2016-10-11
BRPI0921983B1 (pt) 2021-04-20
IL212969A (en) 2016-04-21
ES2663948T3 (es) 2018-04-17
US20100152151A1 (en) 2010-06-17
US20120115832A1 (en) 2012-05-10
EA020140B1 (ru) 2014-08-29
EP2376519A1 (en) 2011-10-19
US8445472B2 (en) 2013-05-21
JP2018100304A (ja) 2018-06-28
PL2376519T3 (pl) 2014-04-30
CN102325784A (zh) 2012-01-18
US20180016295A1 (en) 2018-01-18
PT2698375T (pt) 2018-05-25
JP2012509348A (ja) 2012-04-19
IL264796B (en) 2020-11-30
HK1205132A1 (en) 2015-12-11
WO2010059853A1 (en) 2010-05-27
HUE039171T2 (hu) 2018-12-28
JP5535233B2 (ja) 2014-07-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA030681B1 (ru) Модуляторы tgr5 и способы их применения
US9540414B2 (en) TGR5 modulators and methods of use thereof
JP5639073B2 (ja) Ｔｇｒ５モジュレーターおよびその使用方法
AU2014204505B2 (en) TGR5 Modulators and Method of Use Thereof
BRPI0921992B1 (pt) Compostos moduladores de tgr5, composição e seus usos

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): MD