KR20220004451A - 지방간 질환의 예방 또는 치료를 위한 약학적 조성물 - Google Patents

지방간 질환의 예방 또는 치료를 위한 약학적 조성물 Download PDF

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KR20220004451A
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배초롱
장해영
김명화
안구현
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Abstract

본 발명은 지방간 질환의 예방 또는 치료 용도의 신규한 약학적 조성물을 제공하며, 상기 약학적 조성물은 간의 지방 축적 감소 효과, 간 섬유증 억제효과, 간염 완화 효과, 간 동모양 혈관내피세포(liver sinusoidal endothelial cells, LSECs) 모세관화 약화 효과 등을 나타내므로 지방간 질환 또는 대사 증후군의 중요한 치료제 후보가 될 수 있다.

Description

지방간 질환의 예방 또는 치료를 위한 약학적 조성물{Pharmaceutical composition for prevention or treatment of fatty liver disease}
지방간 질환의 예방 또는 치료를 위한 신규한 약학적 조성물에 관한 것이다.
간은 신진대사를 조절하는데 중요한 역할을 하며, 지방조직, 골격근에 영향을 미치고 지질 대사의 필수적인 역할을 수행한다. 지방간은 지질 축적 및 지질 처리의 불균형한 조절의 결과로 발생하며 일반적으로 NAFLD/NASH 진행 초기에 발생한다. 비알콜성 지방간 질환(Non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)은 만성 간 질환을 포괄하는 광범위한 용어이며, 제2형 당뇨병, 인슐린 저항성을 포함하는 대사 증후군과 관련된 증상의 주요 원인이 된다 (Maurice J et al., Clin Med(Lond)., 2018). 비알콜성 지방간염(Non-alcoholic steatohepatitis, NASH)은 비알콜성 지방간 질환이 진행된 형태로서, 전형적으로 간의 지방증, 염증, 섬유증과 함께 발병한다. 한편, 몇몇 연구를 통해 비알콜성 지방간염의 치료를 위한 다양한 시험이 진행되었으나 현재까지 비알콜성 지방간염의 효과적인 치료법으로 승인된 사례가 없다.
혈관내피(vascular endothelium)는 체순환과 조직 사이의 핵심적인 장벽이다. 간의 내피는 주로 간 동모양 혈관내피세포(liver sinusoidal endothelial cells, LSECs)로 이루어져 있는데, 상기 간 동모양 혈관내피세포는 간이 항상성을 유지할 수 있도록 돕고 효과적인 영양소와 가스 교환이 이루어질 수 있도록 기여하는 역할을 한다. 간 손상은 종종 간 동모양 혈관내피세포에 손상이 생겨 시작되는데, 이에 관해 비알콜성 지방간 질환 및 비알콜성 지방간염의 발병기전에 있어서의 상기 간 동모양 혈관내피세포 기능 장애의 중요성은 이전의 연구들을 통해 자세히 보고되어 왔다 (Villanova N et al., Hepatology, 2005; Senturk O et al., Intern Med J., 2008). 간 손상 후에는 간 동모양 혈관내피세포의 모세관화가 증가하고, 염증 및 섬유증 특징이 나타나게 된다. 그러므로, 간 동모양 혈관내피세포의 모세관화를 예방하는 것은 비알콜성 지방간염의 치료에 중요한 요소가 될 것이다.
본 발명의 일 목적은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는, 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다:
[화학식 1]
Figure pat00001
.
본 발명의 다른 일 목적은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 지방간 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여,
본 발명의 일 측면은,
하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는,
지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다:
[화학식 1]
Figure pat00002
이때 상기 화학식 1에서,
X는 산소 또는 황이고;
Figure pat00003
는 단일결합 또는 이중결합을 나타내고;
R1은 수소, 할로, C1-30 알킬, C3-10 사이클로알킬, C2-30 알케닐, C3-10 사이클로알케닐, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C2-15 헤테로사이클로알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C3-15 헤테로사이클로알킬알킬, C2-30 알콕시알킬, C3-30 알콕시알콕시알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C3-10 헤테로사이클로알케닐, C1-20 알코올, C1-20 알케놀, C2-30 아실, C1-10 아미드, C1-10 아민, C2-15 에스테르, 설페이트, 카르복실기, C3-20 카르복시알킬, C3-20 카르복시알케닐, C3-20 알킬카르복실, C3-20 알케닐카르복실, C3-20 알킬카르복시알킬, C3-20 알킬카르복시알케닐, C3-20 알케닐카르복시알킬, C4-20 알케닐카르복시알케닐, C6-30 아릴, C6-30 아랄킬, C6-30 알카릴, 헤테로원자로서 질소를 포함하는 C3-30 헤테로아릴 또는 C6-30 아릴카르보닐이고;
R21은 C2-30 알킬, C3-10 사이클로알킬, C2-30 알케닐, C3-10 사이클로알케닐, C2-30 카르복시알킬, C2-30 알킬카르복실, C3-30 카르복시알케닐, C3-30 알케닐카르복실, C3-30 알킬카르복시알킬, C3-30 알킬카르복시알케닐, C3-30 알케닐카르복시알킬, C4-30 알케닐카르복시알케닐, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C2-10 헤테로사이클로알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C3-10 헤테로사이클로알킬알킬, C2-30 알콕시알킬, C3-30 알콕시알콕시알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C3-10 헤테로사이클로알케닐, C1-20 알코올, C1-20 알케놀, C2-30 아실, C1-10 아미드, C1-10 아민 또는 C2-15 에스테르이고;
R22는 수소, 히드록시, 할로 또는 C1-10 알킬이고;
R23은 수소, 히드록시 또는 C1-10 알킬이고;
R21은 R22 및 R23과 함께 결합하는 탄소에 대하여 이중결합을 형성할 수 있고;
R23은 R21 및 R22과 함께 결합하는 탄소에 대하여 이중결합을 형성할 수 있고;
R21 또는 R23이 상기 탄소에 이중결합을 형성하는 경우 R22는 원자를 포함하지 않고; 및
R3 및 R4는 서로 독립적으로 수소 또는 C1-10 알킬이다.
또한, 본 발명의 일 측면은,
하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 지방간 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다:
[화학식 1]
Figure pat00004
상기 화학식 1에서,
X,
Figure pat00005
, R1, R21, R22, R23, R3, R4는 상기에서 정의한 바와 같다.
본 발명의 다른 일 측면은 상기 화합물, 이의 입체 이성질체, 이의 수화물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을, 이를 필요로 하는 개체나 대상에 투여하는 단계를 포함하는, 지방간 질환의 치료방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 측면은 지방간 질환의 치료에 사용하기 위한 상기 화합물, 이의 입체 이성질체, 이의 수화물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
본 발명의 다른 일 측면은 지방간 질환 치료용 약제의 제조에 사용하기 위한 상기 화합물, 이의 입체 이성질체, 이의 수화물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 용도(use)를 제공한다.
본 발명은 지방간 질환의 예방 또는 치료 용도의 신규한 약학적 조성물을 제공하며, 상기 약학적 조성물은 간의 지방 축적 감소 효과, 간 섬유증 억제 효과, 간염 완화 효과, 간 동모양 혈관내피세포(liver sinusoidal endothelial cells, LSECs) 모세관화 약화 효과 등을 나타낸다.
도 1a는 콜린-결핍 L-아미노산 (CDAA) 유도 비알콜성 지방간염(Non-alcoholic steatohepatitis, NASH) 마우스에서 대사지표에 대한 실시예 1의 효과를 확인하기 위한 실험예 1의 연구 1 (3주), 연구 2 (6주)를 설계한 도식표를 나타낸 것이다.
도 1b는 CDAA 유도 NASH 마우스에서 대사지표에 대한 실시예 1의 효과를 확인하기 위해 연구 2의 각 실험 그룹의 체중(The body weight)을 확인한 결과를 나타낸 것이다 (평균±SEM., #p<0.05 vs. Con 그룹; *p<0.05 vs. CD 그룹; n=10 mice/group).
도 1c는 CDAA 유도 NASH 마우스에서 대사지표에 대한 실시예 1의 효과를 확인하기 위해 연구 2의 각 실험 그룹에 대해 포도당 내성 시험(Glucose tolerance test, GTT)을 한 결과를 나타낸 것이다 (평균±SEM., #p<0.05 vs. Con 그룹; *p<0.05 vs. CD 그룹; n=10 mice/group).
도 1d 및 도 1e는 CDAA 유도 NASH 마우스에서 대사지표에 대한 실시예 1의 효과를 확인하기 위해 각 실험 그룹의 혈청 트리글리세라이드(serum triglycerides, serum TG, 도 1d) 및 혈청 전체 콜레스테롤(serum total cholesterol, serum TC, 도 1e) 레벨을 확인할 결과를 나타낸 것이다 (평균±SEM., #p<0.05 vs. Con 그룹; *p<0.05 vs. CD 그룹; n=10 mice/group).
도 1f 및 도 1g는 CDAA 유도 NASH 마우스에서 대사지표에 대한 실시예 1의 효과를 확인하기 위해 각 실험 그룹의 아스파르테이트 아미노전달효소(aspartate aminotransferase, AST, 도 1f) 및 알라닌 아미노전달효소(alanine aminotransferase, ALT, 도 1g) 레벨을 확인한 결과를 나타낸 것이다 (평균±SEM., #p<0.05 vs. Con 그룹; *p<0.05 vs. CD 그룹; n=10 mice/group).
도 1h는 CDAA 유도 NASH 마우스에서 대사지표에 대한 실시예 1의 효과를 확인하기 위해 연구 1의 각 실험 그룹의 체중(The body weight)을 확인한 결과를 나타낸 것이다 (평균±SEM., #p<0.05 vs. Con 그룹; *p<0.05 vs. CD 그룹; n=10 mice/group).
도 1i는 CDAA 유도 NASH 마우스에서 대사지표에 대한 실시예 1의 효과를 확인하기 위해 연구 1의 각 실험 그룹에 대해 포도당 내성 시험(Glucose tolerance test, GTT)을 한 결과를 나타낸 것이다 (평균±SEM., #p<0.05 vs. Con 그룹; *p<0.05 vs. CD 그룹; n=10 mice/group).
도 2a는 CDAA 유도 NASH 마우스에서 실시예 1의 간의 지질 축적 감소 효과를 확인하기 위해 각 실험 그룹의 간 사진을 찍은 것이다 (n=10 mice/group).
도 2b는 H&E로 염색된 각 실험 그룹 간의 구역을 나타낸 것이다 (n=5 mice/group).
도 2c는 CDAA 유도 NASH 마우스에서 실시예 1의 간의 지질 축적 감소 효과를 확인하기 위해 각 실험 그룹의 간 대비 체중의 비율을 확인한 결과를 나타낸 것이다 (평균±SEM., #p<0.05 vs. Con 그룹; *p<0.05 vs. CD 그룹; n=10 mice/group).
도 2d 및 도 2e는 CDAA 유도 NASH 마우스에서 실시예 1의 간의 지질 축적 감소 효과를 확인하기 위해 각 실험 그룹의 간 TG (도 2d) 및 TC (도 2e) 레벨을 확인할 결과를 나타낸 것이다 (평균±SEM., #p<0.05 vs. Con 그룹; *p<0.05 vs. CD 그룹; n=10 mice/group).
도 2f 내지 도 2i는 CDAA 유도 NASH 마우스에서 실시예 1의 간의 지질 축적 감소 효과를 확인하기 위해 지질합성에 관여하는 유전자인 SREBP1c mRNA (도 2f), ACC mRNA (도 2g), FAS mRNA (도 2h) 및 PPARγ mRNA (도 2i) 발현 레벨을 정량적 실시간 중합 효소 연쇄 반응(qPCR) 분석한 결과를 나타낸 것이다 (평균±SEM., #p<0.05 vs. Con 그룹; *p<0.05 vs. CD 그룹; n=9 mice/group).
도 3a 내지 도 3d는 CDAA 유도 NASH 마우스에서 실시예 1의 항염 효과를 확인하기 위하여 염증성 사이토카인에 관여하는 유전자인 F4/80 mRNA (도 3a), MCP-1 mRNA (도 3b), IL-1β mRNA (도 3c) 및 TNF-α mRNA (도 3d) 발현 레벨을 정량적 실시간 중합 효소 연쇄 반응(qPCR) 분석한 결과를 나타낸 것이다 (평균±SEM., #p<0.05 vs. Con 그룹; *p<0.05 vs. CD 그룹; n=9 mice/group).
도 3e는 간에서 F4/80의 면역조직화학분석 결과 및 염색된 양성 영역을 정량적으로 분석한 결과를 나타낸 것이다 (평균±SEM., #p<0.05 vs. Con 그룹; *p<0.05 vs. CD 그룹; n=8 mice/group).
도 3f 및 도 3g는 CDAA 유도 NASH 마우스에서 실시예 1의 항염 효과를 확인하기 위하여 혈청 염증성 사이토카인 IL-6 (도 3f) 및 TNF-α (도 3g) 레벨을 분석한 결과를 나타낸 것이다 (평균±SEM., #p<0.05 vs. Con 그룹; *p<0.05 vs. CD 그룹; n=10 mice/group).
도 4a는 CDAA 유도 NASH 마우스에서 실시예 1의 간 섬유증 완화 효과를 확인하기 위하여 picro-sirius red로 염색한 간 구역의 이미지 및 그 결과를 정량적으로 분석한 결과를 나타낸 것이다 (평균±SEM., #p<0.05 vs. Con 그룹; *p<0.05 vs. CD 그룹; n=4 mice/group).
도 4b는 CDAA 유도 NASH 마우스에서 실시예 1의 간 섬유증 완화 효과를 확인하기 위하여 간 α-SMA 함량을 면역조직화학적 분석한 결과 및 그 결과를 정량적으로 분석한 결과를 나타낸 것이다 (평균±SEM., #p<0.05 vs. Con 그룹; *p<0.05 vs. CD 그룹; n=4 mice/group).
도 4c 내지 도 4f는 CDAA 유도 NASH 마우스에서 실시예 1의 간 섬유증 완화 효과를 확인하기 위하여 섬유증 관련 유전자에 관여하는 α-SMA mRNA (도 4c), Col1α mRNA (도 4d), Col4α mRNA (도 4e) 및 TGF-β mRNA (도 4f) 발현 레벨을 정량적 실시간 중합 효소 연쇄 반응(qPCR) 분석한 결과를 나타낸 것이다 (평균±SEM., #p<0.05 vs. Con 그룹; *p<0.05 vs. CD 그룹; n=9 mice/group).
도 4g는 CDAA 유도 NASH 마우스에서 실시예 1의 간 섬유증 완화 효과를 확인하기 위하여 간의 하이드록시프롤린을 측정하여 간조직 내 콜라겐 함량을 분석한 결과를 나타낸 것이다 (평균±SEM., #p<0.05 vs. Con 그룹; *p<0.05 vs. CD 그룹; n=5 mice/group).
도 5a는 CDAA 유도 NASH 마우스에서 실시예 1의 LSEC 모세관화 감소 효과를 확인하기 위하여 간의 ICAM-1를 면역조직화학적으로 분석한 결과 및 그 결과를 정량적으로 분석한 결과를 나타낸 것이다 (평균±SEM., #p<0.05 vs. Con 그룹; *p<0.05 vs. CD 그룹; n=5 mice/group).
도 5b는 CDAA 유도 NASH 마우스에서 실시예 1의 LSEC 모세관화 감소 효과를 확인하기 위하여 간의 CD31를 면역조직화학적으로 분석한 결과 및 그 결과를 정량적으로 분석한 결과를 나타낸 것이다 (평균±SEM., #p<0.05 vs. Con 그룹; *p<0.05 vs. CD 그룹; n=5 mice/group).
도 5c 내지 도 5f는 CDAA 유도 NASH 마우스에서 실시예 1의 LSEC 모세관화 감소 효과를 확인하기 위하여 내피세포 부착 분자 관련 유전자인 E-셀렉틴(E-selectin) mRNA (도 5c), ICAM-1 mRNA (도 5d), VCAM-1 mRNA (도 5e) 및 CD31 mRNA (도 5f) 발현 레벨을 정량적 실시간 중합 효소 연쇄 반응(qPCR) 분석한 결과를 나타낸 것이다 (평균±SEM., #p<0.05 vs. Con 그룹; *p<0.05 vs. CD 그룹; n=9 mice/group)
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명의 일 측면은,
하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는,
지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다:
[화학식 1]
Figure pat00006
상기 화학식 1에서,
X는 산소 또는 황이고;
Figure pat00007
는 단일결합 또는 이중결합을 나타내고;
R1은 수소, 할로, C1-30 알킬, C3-10 사이클로알킬, C2-30 알케닐, C3-10 사이클로알케닐, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C2-15 헤테로사이클로알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C3-15 헤테로사이클로알킬알킬, C2-30 알콕시알킬, C3-30 알콕시알콕시알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C3-10 헤테로사이클로알케닐, C1-20 알코올, C1-20 알케놀, C2-30 아실, C1-10 아미드, C1-10 아민, C2-15 에스테르, 설페이트, 카르복실기, C3-20 카르복시알킬, C3-20 카르복시알케닐, C3-20 알킬카르복실, C3-20 알케닐카르복실, C3-20 알킬카르복시알킬, C3-20 알킬카르복시알케닐, C3-20 알케닐카르복시알킬, C4-20 알케닐카르복시알케닐, C6-30 아릴, C6-30 아랄킬, C6-30 알카릴, 헤테로원자로서 질소를 포함하는 C3-30 헤테로아릴 또는 C6-30 아릴카르보닐이고;
R21은 C2-30 알킬, C3-10 사이클로알킬, C2-30 알케닐, C3-10 사이클로알케닐, C2-30 카르복시알킬, C2-30 알킬카르복실, C3-30 카르복시알케닐, C3-30 알케닐카르복실, C3-30 알킬카르복시알킬, C3-30 알킬카르복시알케닐, C3-30 알케닐카르복시알킬, C4-30 알케닐카르복시알케닐, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C2-10 헤테로사이클로알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C3-10 헤테로사이클로알킬알킬, C2-30 알콕시알킬, C3-30 알콕시알콕시알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C3-10 헤테로사이클로알케닐, C1-20 알코올, C1-20 알케놀, C2-30 아실, C1-10 아미드, C1-10 아민 또는 C2-15 에스테르이고;
R22는 수소, 히드록시, 할로 또는 C1-10 알킬이고;
R23은 수소, 히드록시 또는 C1-10 알킬이고;
R21은 R22 및 R23과 함께 결합하는 탄소에 대하여 이중결합을 형성할 수 있고;
R23은 R21 및 R22과 함께 결합하는 탄소에 대하여 이중결합을 형성할 수 있고;
R21 또는 R23이 상기 탄소에 이중결합을 형성하는 경우 R22는 원자를 포함하지 않고; 및
R3 및 R4는 서로 독립적으로 수소 또는 C1-10 알킬이다.
이때 상기 화학식 1의 X는 산소일 수 있다.
또한, 상기 화학식 1의 R1은 수소, 할로, C1-10 알킬, C3-8 사이클로알킬, C2-10 알케닐, C3-8 사이클로알케닐, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C2-8 헤테로사이클로알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C3-10 헤테로사이클로알킬알킬, C2-20 알콕시알킬, C3-20 알콕시알콕시알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C3-8 헤테로사이클로알케닐, C1-10 알코올, C1-10 알케놀, C2-20 아실, C1-10 아미드, C1-5 아민, C2-15 에스테르, 설페이트, 카르복실기, C3-20 카르복시알킬, C3-20 카르복시알케닐, C3-20 알킬카르복실, C3-20 알케닐카르복실, C3-20 알킬카르복시알킬, C3-20 알킬카르복시알케닐, C3-20 알케닐카르복시알킬, C4-20 알케닐카르복시알케닐, C6-20 아릴, C6-20 아랄킬, C6-20 알카릴, 헤테로원자로서 질소를 포함하는 C3-20 헤테로아릴 또는 C6-20 아릴카르보닐일 수 있다.
상기 화학식 1의 R1은 수소, C1-10 알킬, C3-8 사이클로알킬, C2-10 알케닐, C3-8 사이클로알케닐, 헤테로원자로서 산소를 포함하는 C2-8 헤테로사이클로알킬, 헤테로원자로서 산소를 포함하는 C3-10 헤테로사이클로알킬알킬, C2-20 알콕시알킬, C3-10 알콕시알콕시알킬, 헤테로원자로서 산소를 포함하는 C3-8 헤테로사이클로알케닐, C1-10 알코올, C1-10 알케놀, C1-10 아미드, C1-5 아민, C2-15 에스테르, 설페이트, 카르복실기, C3-20 카르복시알킬, C3-20 카르복시알케닐, C3-20 알킬카르복실, C3-20 알케닐카르복실, C3-20 알킬카르복시알킬, C3-20 알킬카르복시알케닐, C3-20 알케닐카르복시알킬, C4-20 알케닐카르복시알케닐, C6-20 아릴, C6-20 아랄킬, C6-20 알카릴, 헤테로원자로서 질소를 포함하는 C3-20 헤테로아릴 또는 C6-20 아릴카르보닐일 수 있다.
상기 화학식 1의 R1에서 상기 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬은 히드록시, 할로, C1-5 알킬, C1-5 알코올, C1-5 알콕시, C2-8 알콕시알킬, C6-20 아릴, C7-20 아릴카르복실 또는 이들의 조합에 의해 치환될 수 있고; 상기 C3-10 사이클로알케닐 또는 헤테로사이클로알케닐은 히드록시, 할로, C1-5 알킬, C2-8 알킬카르복실, C3-8 알킬카르복실알킬, C1-5 알코올, C1-5 알콕시, C2-8 알콕시알킬, C6-20 아릴, C7-20 아릴카르복실 또는 이들의 조합에 의해 치환될 수 있으며; 상기 아릴은 히드록시, 할로, C1-5 알킬, C1-5 알코올, C1-5 알콕시, C2-8 알콕시알킬, 니트로, C2-8 알킬카르복실아미노 또는 이들의 조합에 의해 치환될 수 있고; 상기 아랄킬은 히드록시, 할로, C1-5 알킬, C1-5 알코올, C1-5 알콕시, C2-8 알콕시알킬, 니트로, C2-8 알킬카르복실아미노 또는 이들의 조합에 의해 치환될 수 있고; 상기 알카릴은 히드록시, 할로, C1-5 알킬, C1-5 알코올, C1-5 알콕시, C2-8 알콕시알킬, 니트로, C2-8 알킬카르복실아미노 또는 이들의 조합에 의해 치환될 수 있으며; 상기 아릴카르보닐은 히드록시, 할로, C1-5 알킬, C1-5 알코올, C1-5 알콕시, C2-8 알콕시알킬, 니트로, 또는 C2-8 알킬카르복실아미노 또는 이들의 조합에 의해 치환될 수 있으며; 상기 헤테로아릴은 히드록시, 할로, C1-5 알킬, C1-5 알코올, C1-5 알콕시, C2-8 알콕시알킬, 니트로, C2-8 알킬카르복실아미노 또는 이들의 조합에 의해 치환될 수 있는 것일 수 있다.
상기 화학식 1의 R21은 직쇄 또는 분쇄의 C2-15 알킬, C3-10 사이클로알킬, C2-15 알케닐, C3-10 사이클로알케닐, C2-15 카르복시알킬, C2-15 알킬카르복실, C3-15 카르복시알케닐, C2-15 알케닐카르복실, C3-15 알킬카르복시알킬, C3-15 알킬카르복시알케닐, C3-15 알케닐카르복시알킬, C2-30 알케닐카르복시알케닐, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C2-10 헤테로사이클로알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C3-10 헤테로사이클로알킬알킬, C2-20 알콕시알킬, C3-30 알콕시알콕시알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C3-10 헤테로사이클로알케닐, C1-20 알코올, C1-20 알케놀, C2-30 아실, C1-10 아미드, C1-10 아민 또는 C2-15 에스테르일 수 있다.
상기 화학식 1의 R23은 C1-5 알킬이거나 또는 R21 및 R22과 함께 결합하는 탄소에 대하여 이중결합을 형성할 수 있다.
상기 화학식 1의
Figure pat00008
는 이중결합일 수 있다.
R3 및 R4는 서로 독립적으로 C1-3 알킬일 수 있다.
R23은 C1-3 알킬이고;
R21 및 R22는 함께 C1-5 알킬바이닐을 형성하고, 이때 상기 알킬바이닐은 C1-3 알콕시카보닐로 치환되는 것일 수 있다.
R1은 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C3-8 헤테로사이클로알케닐일 수 있다.
R1은 산소를 포함하는 C5 헤테로사이클로알케닐일 수 있다.
가장 바람직하게는, 상기 화학식 1은 하기 화학식 2로 표시되는 화합물인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물이다:
[화학식 2]
Figure pat00009
.
상기 지방간 질환은 단순 지방간(fatty liver), 알코올성 지방간(alcoholic fatty liver), 영양성 지방간, 기아성 지방간, 비만성 지방간, 당뇨병성 지방간, 지방간염(steatohepatitis), 비알콜성 지방간 질환(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD), 비알콜성 지방간염(non-alcoholic steatohepatitis, NASH) 및 섬유증으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상일 수 있다.
상기 섬유증은 신장 섬유증, 심장 섬유증, 췌장 섬유증, 폐 섬유증, 혈관 섬유증, 피부 섬유증, 골수 섬유증, 간 섬유증, 장 섬유증, 경피증 및 낭포성 섬유증으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 간 섬유증은 간경변증(liver cirrhosis), 간신증후군(hepatorenal syndrome), 간자반병(peliosis hepatis), 대사성 간질환, 만성 간질환, B형 간염 바이러스 감염, C형 간염 바이러스 감염. D형 간염 바이러스 감염, 주혈흡충증(Schistosomiasis), 알콜성 간질환, 비알콜성 지방간염, 당뇨, 단백질 결핍증, 관상동맥질환, 자가면역 간염, 알파-1 항트립신 결핍증(α-1-Antitrypsin deficiency) 및 일차성 담즙성 간경화증으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 폐 섬유증은 기관지염, 급성 기관지염, 미만성범세기관지염(diffuse panbronchiolitis, DPB), 모세기관지염(bronchiolitis), 특발성 폐섬유증(Idiopathic pulmonary fibrosis, IPF), 급성 간질성 폐렴(acute interstitial pneumonia), 과민성 간질성 폐렴, 폐이식, 낭포성 섬유증, 방사선 유발 폐섬유증, 만성폐쇄성 폐질환(chronic obstructive pulmonary disease, COPD), 천식(asthma), 기관지확장증(bronchiectasis), 폐결핵, 폐렴, 진폐증, 과민성폐렴, 폐부종 및 사르코이드증(sarcoidosis)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 신장 섬유증은 신부전(kidney failure), 도관 설치, 당뇨병성 신증(diabetic nephropathy), 요로 폐쇄(ureteral obstruction), 사구체 경화증(glomerular sclerosis), 신세뇨관간질성, 사구체 신염(glomerulonephritis), 만성 신부전증, 당뇨병성 근위세뇨관 섬유화, 급성 신손상, 만성 신장 질환, 말기 신장 질환, 허혈 재관류 손상 (ischemia-reperfusion injury), 신독성 약제(nephrotoxic agents)에 의한 손상, 조영제(radiocontrast media)에 의한 손상 및 알부민뇨 발생으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 간섬유증 또는 간경변은 비알콜성 지방간염에 의해 유발된 것일 수 있다.
상기 비알콜성 지방간염은 콜린-결핍 L-아미노산 식단(choline-deficient L-amino acid diet)에 의해 유발된 것일 수 있다.
상기 약학적 조성물은 간 내 염증(hepatic inflammation) 또는 전신 염증(systemic inflammation)을 개선시킬 수 있으며, 간 내 지질 축적을 억제시킬 수도 있고, 간 동모양 혈관내피세포(liver sinusoidal endothelial cells, LSECs)의 모세관화(capillarization)를 감소시킬 수도 있다.
또한, 상기 약학적 조성물은 알라닌 아미노전달효소(alanine aminotransferase, ALT) 또는 아스파르테이트 아미노전달효소(aspartate transaminase, AST)의 발현을 감소시킬 수 있으며, 트리글리세라이드(triglycerides, TG) 또는 전체 콜레스테롤(total cholesterol, TC) 함량을 감소시킬 수도 있다.
상기 약학적 조성물은 지질합성(lipogenesis) 관련 인자의 발현을 감소시킬 수 있는데, 상기 지질합성 관련 인자는 종래 지질의 합성에 관여하는 것으로 알려진 인자를 말하며, 예를 들면 SREBP1c(sterol regulatory element-binding transcription factor-1c), ACC(acetyl-CoA carboxylase), PPARγ(peroxisome proliferator-activated receptors γ) 또는 FAS(fatty acid synthase)이다.
상기 약학적 조성물은 염증성(pro-inflammatory) 인자의 발현을 감소시킬 수 있는데, 상기 염증성 인자는 종래 염증성 인자로 알려진 것을 말하며, 예를 들면, F4/80, MCP-1(monocyte chemoattractant protein-1), IL-1β(interleukin 1β), IL-1α(interleukin 1α), TNF-α(tumor necrosis factor-α), IL-6 또는 IL-8이다.
상기 약학적 조성물은 섬유증(pro-fibrotic) 관련(fibrosis-related) 인자의 발현을 감소시킬 수 있는데, 상기 섬유증 관련 인자는 종래 섬유증에 관여하는 인자로 알려진 인자를 말하며. 예를 들면, α-SMA(α-smooth muscle actin), Col1α(collagen 1α), Col4α(Collagen 4α) 또는 TGF-β(transforming growth factor-β)이다.
상기 약학적 조성물은 하이드록시프롤린(hydroxyproline)의 함량을 감소시킬 수 있다.
상기 약학적 조성물은 내피 부착 분자(endothelial adhesion molecule)의 발현을 감소시킬 수 있는데, 상기 내피 부착 분자의 예를 들면, E-셀렉틴(E-selectin), ICAM-1(intercellular adhesion molecule-1), VCAM-1(vascular cell adhesion molecule-1) 또는 CD31(cluster of differentiation 31)이다.
본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산, 아인산 등과 같은 무기산류, 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류 등과 같은 무독성 유기산, 트리플루오로아세트산, 아세테이트, 안식향산, 구연산, 젖산, 말레인산, 글루콘산, 메탄설폰산, 4-톨루엔설폰산, 주석산, 푸마르산 등과 같은 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염의 종류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 만델레이트 등을 포함한다.
본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법으로 제조할 수 있으며, 예를 들면 화학식 1의 유도체를 메탄올, 에탄올, 아세톤, 메틸렌클로라이드, 아세토니트릴 등과 같은 유기용매에 녹이고 유기산 또는 무기산을 가하여 생성된 침전물을 여과, 건조시켜 제조하거나, 용매와 과량의 산을 감압 증류한 후 건조시켜 유기용매 하에서 결정화시켜서 제조할 수 있다.
또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효 성분으로 하는 약학적 조성물은 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여는 피하주사, 정맥주사, 근육 내 주사 또는 흉부 내 주사를 주입하는 방법에 의한다.
이때, 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위하여 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 안정제 또는 완충제와 함께 물에 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고, 이를 앰플 또는 바이알 단위 투여형으로 제조할 수 있다. 상기 조성물은 멸균되고/되거나 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 보조제, 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 함유할 수 있으며, 통상적인 방법인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 따라 제제화할 수 있다.
본 발명의 다른 일 측면은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 지방간 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다:
[화학식 1]
Figure pat00010
상기 화학식 1에서,
X,
Figure pat00011
, R1, R21, R22, R23, R3, R4는 상기에서 정의한 바와 같으므로 생략한다.
본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합량은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강식품 중의 상기 화합물의 양은 전체 식품 중량의 0.1 내지 90 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
나아가, 상기 외에 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 화학식 1로 표시되는 화합물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
한편, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 목적에 따라 여러 형태로 제제화가 가능하다. 하기는 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 활성성분으로 함유시킨 몇몇 제제화 방법을 예시한 것으로 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.
<제제예 1> 약학적 제제의 제조
1-1. 산제의 제조
화학식 1의 화합물 500 ㎎
유당 100 ㎎
탈크 10 ㎎
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
1-2. 정제의 제조
화학식 1의 화합물 500 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
1-3. 캅셀제의 제조
화학식 1의 화합물 500 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
1-4. 주사제의 제조
화학식 1의 화합물 500 ㎎
주사용 멸균 증류수 적량
pH 조절제 적량
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.
1-5. 액제의 제조
화학식 1의 화합물 100 ㎎
이성화당 10 g
만니톨 5 g
정제수 적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬 향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ㎖로 조절한 후 갈색 병에 충진하여 멸균시켜 액체를 제조한다.
이하, 본 발명의 실시예 및 실험예를 하기에 구체적으로 예시하여 설명한다. 다만, 후술하는 실시예 및 실험예는 본 발명의 일부를 예시하는 것일 뿐, 본 발명에 이에 한정되는 것은 아니다.
<실험 프로토콜>
1. 포도당 내성 시험
복강 내 포도당 내성 시험(Glucose tolerance test, GTT) (GTT, 1 g/kg 체중의 포도당)은 16시간 단식 후 마우스에서 수행되었다. 혈액 샘플은 포도당 주입 후 0, 15, 30, 60 및 120분 후 수집하였으며, 글루코미터 (Roche, Germany, Acuue chek)로 측정하였다.
2. 혈청 및 간의 생화학적 분석
트리글리세라이드 및 전체 콜레스테롤은 클로로포름-메탄올 (2:1, vol:vol)로 간 조직으로부터 추출하였다. 구체적으로, 클로로포름-메탄올을 균질화된 간 조직에 첨가하고, 볼텍싱한 후 원심분리하였으며, 이때 가라앉은 상을 수집하고 퓸 후드안에서 상온에서 증발시켰다. 그 결과 얻어진 반 건조된 펠릿을 1% 트리톤 X-100 (VWR, USA)에 용해시켰다. 간 및 혈청 트리글리세라이드(TG) 및 전체 콜레스테롤(TC) 함량을 시판 키트 (Asan Pharmaceutical Co., Seoul, Korea)를 이용하여 정량화하였다. 알라닌 아미노전달효소(alanine aminotransferase, ALT) 및 아스파르테이트 아미노전달효소(aspartate transaminase, AST) 활성과 같은 간 기능 파라미터도 시판 키트 (Asan Pharmaceutical Co., Seoul, Korea)를 이용하여 측정하였다. TNF-α 및 IL-6의 혈청 농도는 Quantikine ELISA kits (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA)를 이용하여 결정하였다.
3. 조직학 및 면역조직화학 분석
간을 4% 파라포름알데하이드 in PBS (Sigma, Steinheim, Germany)에 상온에서 48시간 동안 고정시키고, 파라핀에 매립한 후, 6 μm로 구획한 뒤 헤마톡실린 및 에오신(H&E)으로 염색하였다. 간 섬유증은 Picro Sirius Red kit (Abcam, Cambridge, MA, USA)로 염색하여 평가하였다. 면역조직화학 분석을 위해, 파라핀-매립 구역을 F4/80 (1:60; AbD Serotec, Oxford, UK), α-평활근 액틴 (α-SMA, 1:300, Abcam), ICAM-1 (1:200; Santa Cruz, CA, USA), 및 CD31 (1:200; Santa Cruz, CA, USA) 및 CD31 (1:200, R&D System, MN, USA)의 항체로 염색하였다. 이미지는 eclipse microscope (Nikon, 도쿄, 일본)을 사용하였고, F4/80, Sirius Red, α-SMA, ICAM-1 및 CD31 양성 영역은 Image J를 이용하여 정량화하였다.
4. RNA 분리 및 정량적 RT- PCR 분석
easy-BLUE (iNtRON, 성남, 한국)을 이용하여 간으로부터 전체 RNA를 분리하였으며, cDNA는 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스 역전사효소(Moloney murine leukemia virus reverse transcriptase)를 이용하여 합성하였다. 정량적 실시간 중합 효소 연쇄 반응(qRT-PCR)은 하기 표 1의 유전자 특이적 프라이머 및 Bio-Rad RT-PCR 검출 시스템의 SYBR Green (Invitrogen)를 이용하여 수행하였다. 리보솜 단백질 36B4 mRNA의 레벨은 표준화에 사용하였다.
유전자 Forward Reverse
α-SMA TGCTGCATCCATGAAACCACCTA GTTTGCTGATCCACATCTGCTGGA
ACC CCCATCCAAACAGAGGGAAC CTGACAAGGTGGCGTGAAG
CD31 CCAAAGCCAGTAGCATCATGGTC GGATGGTGAAGTTGGCTACAGG
Col1α AGTAACGTCGTCGTGCCTAGCAACAT GAATACTGAGCAGCAAAGTTCCCAG
Col4α CCAGGATGCAACGGTACAAA ACGTGGCCGAGAATTTCAC
E-selectin AGATACTTTCGGAAGAAAGCAAAGAA GTAAGAAGGCACATGGTAGTTTTCAA
FAS GCTGCTGTTGGAAGTCAGC AGTGTTCGTTCCTCGGAGTG
F4/80 GACACTTCGGGCCATGTT GAGGAGGACCAGGCCAAT
ICAM-1 CGTGTGCCATGCCTTTAGCT TCCAGTTATTTTGAGAGTGGTACAGTACTG
IL-1β AGCACCTTCTTTCCCTTCATCTTT GAGGTGGAGAGCTTTCAGTTCATA
MCP-1 GGCTCAGCCAGATGCAGTTAA AGCCTACTCATTGGGATCATCTT
PPARγ AGGCCGAGAAGGAGAAGCTGTTG TGGCCACCTCTTTGCTCTGCTC
SREBP-1c TTCCTCAGACTGTAGGCAAATCT AGCCTCAGTTTACCCACTCCT
TGF-β CAACTACTGCTTCAGCTCCACAGAG CAAGGACCTTGCTGTACTGTGTGTC
TNF-α TGGCCCAGACCCTCACACTCAGATC GCCTTGTCCCTTGAAGAGAACCTGG
VCAM-1 CCCTGAATACAAAACGATCGC CAGCCCGTAGTGCTGCAAG
36B4 TCATTGTGGGAGCAGACAATGTGG AGGTCCTCCTTGGTGAACACAAAG
α-SMA, α-smooth muscle actin;
ACC, acetyl CoA carboxylase;
CD31, cluster of differentiation;
Col1α, collagen 1α;
Col4α, collagen 4α;
FAS, fatty acid synthase;
ICAM-1, intercellular adhesion molecule 1;
IL-1β, interleukin-1β;
MCP1, monocyte chemoattractant protein-1;
PPARγ, peroxisome proliferator-activated receptor γ;
SREBP-1c, sterol regulatory element binding protein-1c;
TGF-β, transforming growth factor-β
TNF-α, tumor necrosis factor-α;
VCAM-1, vascular cell adhesion protein-1.
5. 하이드록시프롤린 분석
간의 콜라겐 함량을 평가하기 위하여, 비색 분석 키트 (Bio Vision, Milpitas, CA)를 이용하여 하이드록시프롤린(hydroxyproline) 레벨을 측정하였다. 흡광도는 마이크로플레이트 리더 (BMG Labtech, Ortenberg, Germany)를 이용하여 560 nm에서 측정하였다.
6. 통계 분석
모든 값은 평균±SEM으로 표현하였다. SPSS 소프트웨어 (Window 12.0 버전; IBM, Armonk, NY, USA)를 이용하여 데이터를 분석하였다. 통계적 유의성은 post hoc Tukey-Kramer test와 함께 Student's t-test 및 one-way ANOVA를 이용하여 평가하였다. 이때, P 값이 < 0.05일 때, 차이가 유의한 것으로 간주하였다.
< 실시예1 > 비알콜성 지방간염의 예방 또는 치료를 위한 약학적 조성물의 준비
하기 화학식 2로 표시되는 화합물 1은 화합물 명이 (E)-메틸 6-((3S,8S,9S,10R,13S,14S,17R)-3-(((5S,6R)-5-아세톡시-6-(아세톡시메틸)-5,6-디하이드로-2H-피란-2-일)옥시)-10,13-디메틸-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-테트라데카하이드로-1H-사이클로펜타[a]페난트렌-17-일)헵트-5-에노에이트이며, 코드명 SAC-1004로 대한민국 공개특허 10-2011-0047170에 개시된 화합물이다.
화합물 1은 Maharjan S et al., Sac-1004, a novel vascular leakage blocker, enhances endothelial barrier through the cAMP/Rac/cortacin pathway. Biochem Biophys Res Commun. 2013; 435: 420-427.에 기재된 방법에 따라 합성하였다. 실시예 1에 따른 약학적 조성물은 화합물 1 (50 mg/mL)을 다이메틸 설폭사이드(DMSO)를 용매로하여 제조하였으며, 포스페이트 완충 식염수(PBS)로 희석용액을 제조하였다.
[화학식 2]
Figure pat00012
< 실험예 1> CDAA -유도 NASH 마우스에서 대사지표에 대한 효과 평가
7주령의 수컷 마우스를 DBL (서울, 한국)에서 구입하여 실험에 이용하였다. 실험용 동물은 1주일 동안 식이 조절 (Purina Laboratory rodent diet 38057; Purina Korea Inc., 서울, 한국)을 유지한 후 하기와 같은 그룹으로 분리하였다:
Con 그룹: 대조군(control diet);
CD 그룹: 콜린-결핍 L-아미노산(choline-deficient L-amino acid, CDAA) 식단 그룹 (CDAA; A06071302; Research Diets Inc., New Brunswick, NJ);
실시예 1 그룹: 화합물 1 10 mg/kg/day로 3주 또는 6주 동안 처리된 CDAA 식단 그룹
상기 실시예 1 그룹에서 3주 및 6주 그룹의 마우스는 각각 CDAA 식단을 1주 및 3주 동안 받은 후 2주 및 3주 동안 CDAA 식단과 함께 화합물 1로 처리되었다. 마우스는 동일한 부피의 경구용 컨트롤 용액, 비히클 또는 화합물 1 (10 mg/kg 체중)로 하루 한번 처리되었다.
모든 실험용 마우스는 12:12-시간 명:암 주기에서 일정 온도 (23 ℃) 및 습도 (60%)의 표준 케이지에 수용되었으며, 먹이와 물의 접근에 제한이 없도록 하였다. 마우스는 일주일에 한번 그 무게를 재었으며, 조직 수집을 위해 안락시키기 전에 16시간 동안 금식시켰다. 동물이 관여되는 모든 실험은 사전에 Animal Care 및 Use Committee of the Yonsei University (서울, 한국)에 승인받았으며, 승인된 가이드라인 (IACUC-A-201901-854-02)에 따라 수행하였다.
실험예 1은 CDAA-유도 NASH 마우스에서 실시예 1의 대사지표(metabolic parameters)에 대한 효과를 확인하기 위하여 Con 그룹, CD 그룹, 실시예 1 그룹에 대하여 3주 (연구 1) 또는 6주 (연구 2) 동안 시험하였으며, 시험 마우스는 실험 종료 전 각각 2주 또는 3주 전에 실시예 1을 2주 (연구 1) 또는 3주 (연구 2) 동안 경구로 처리되었다 (도 1a). 이때 상기 연구 1에 의한 마우스는 경증 NASH (mild NASH) 마우스 모델이고, 연구 2에 의한 마우스는 중증 NASH (moderate NASH) 마우스 모델이다.
실험은 상기 <실험 프로토콜> 1, 2 및 6에 따라 수행하였다. 그 결과를 도 1b 내지 도 1i에 나타내었다.
각 실험 그룹의 체중을 기록한 결과, 연구 1과 연구 2의 마우스의 체중이 CDAA 식단을 3주 또는 6주 공급받은 동안 CD 그룹과 실시예 1 그룹에 비해 대조군 동물의 체중이 증가하는 것으로 확인되었으며, 한편 CD 그룹과 실시예 1 그룹 사이에서 유의한 체중 차이는 나타나지 않았다 (도 1b, 도 1h).
또한, 포도당 내성 시험(GTT), 혈청 트리글리세라이드(TG) 및 아스파르테이트 아미노전달효소(AST) 분석 결과, CD 그룹과 실시예 1 그룹 사이에 큰 차이를 확인할 수 없었다 (도 1c, 도 1d, 도 1f 및 도 1i). 한편, 전체 콜레스테롤(TC) 및 알라닌 아미노전달효소(ALT) 분석에서는 연구 2에서 실시예 1 그룹이 CD 그룹과 비교할 때 유의한 정도의 낮은 수치를 확인할 수 있었다.
이를 통해, 실시예 1을 이용하여 CDAA-유도 NASH 마우스의 간 손상을 완화시킬 수 있음을 확인할 수 있다.
< 실험예 2> CDAA -유도 NASH 마우스에서 지방간 예방 효과 평가
지질은 NASH 발달 초기 단계에 간에 축적되기 시작한다. 이때 실시예 1이 CDAA-유도 NASH 마우스에서 간의 지질 축적에 영향을 주는지 확인하고 지방간(hepatic steatosis)에 대한 예방 효과를 확인하기 위하여 상기 <실험 프로토콜> 2, 3, 4 및 6에 따라 수행하였다. 그 결과를 도 2a 내지 도 2i에 나타내었다.
먼저, 도 2b의 CD 그룹에서 나타낸 것처럼 H&E로 염색한 구역의 간의 형태학적 분석을 통해 CDAA 식단을 통해 유발된 지방간을 확인할 수 있었다. 한편, 실시예 1 그룹 마우스는 3주 (연구 1) 및 6주 (연구 2)에서 모두 CD 그룹에 비해 지질방울(lipid droplets)이 감소된 것으로 나타났다 (도 2a 및 도 2b).
CDAA-유도 NASH 마우스의 3주 또는 6주 후의 간 대비 체중 비율을 확인한 결과, 대조군에 비해 CDAA 식단을 공급받은 그룹에서 간 대비 체중 비율이 증가한 반면, CD 그룹과 실시예 1 그룹의 간 대지 체중의 비율에는 유의한 차이가 없었다 (도 2c).
간의 생화학적 분석 결과, 실시예 1의 처리는 간의 TG 레벨 (도 2d) 및 간의 TC 레벨 (도 2e)을 유의하게 감소시키는 것으로 나타났다. 특히, 간의 TG 레벨은 경증 NASH 마우스에서는 유의한 감소를 나타내지 못한 반면, 중증 NASH 마우스에서는 효과적으로 간의 TG 레벨을 감소시켰고, 간의 TC 레벨은 경증 및 중증 NASH 마우스에서 모두 효과적으로 감소하였다.
다음으로, 지질합성(lipogenesis)과 관련된 유전자 발현을 조사하였다. 그 결과 스테롤(sterol) 조절 인자-결합 전사 인자-1c(SREBP-1c) 및 아세틸-CoA carboxylase(ACC) mRNA의 발현은 실시예 1의 처리에 의해 영향을 받지 않는 것으로 나타났으며 (도 2f 및 도 2g), 반면 FAS mRNA 뿐만 아니라, NAFLD의 발병 기전에서 지질 대사 및 염증 반응을 조절하는 전사 인자인 PPARγ mRNA 발현은 실시예 1의 처리에 의해 유의한 정도로 감소된 것을 확인할 수 있었다 (도 2h 및 도 2i).
이를 통해, 실시예 1의 처리가 CDAA-유도 NASH 마우스 간에서 간 손상 정도 및 지질 축적을 효과적으로 감소시키며, 이러한 효과는 FAS 및 PPARγ과 같은 지질합성 관련 유전자의 하향 조절과 상관관계가 있음을 확인하였다.
< 실험예 3> CDAA -유도 NASH 마우스에서 간염 및 전신 염증 완화 효과 평가
간염은 NASH 진행에 중요한 요소이며, 간 손상은 쿠퍼 세포(Kupffer cells)의 활성화를 유발하여 염증성 사이토카인 및 케모카인의 발현을 증가시킨다.
간 동모양 혈관내피세포(liver sinusoidal endothelial cells, LSECs)는 대식세포와 함께 중요한 항염증 역할을 수행하는데, LSEC는 NASH에서 염증성 매개체를 생성하고, LSEC로부터 염증성 사이토카인의 방출은 대식세포를 활성화시킴으로써 염증 반응에 추가로 기여한다. 이때, LSECs는 NAFLD의 초기 단계에서 지방간의 형태학적 및 기능적 변화를 겪게 된다. 따라서 CDAA-유도 NASH 마우스에서 실시예 1의 간염 및 전신 염증(systemic inflammation)에 대한 완화 효과를 확인하기 위하여 상기 <실험 프로토콜> 2, 3, 4 및 6에 따라 수행하였다. 그 결과를 도 3a 내지 3g에 나타내었다.
그 결과, 연구 1에 따른 경증 NASH 마우스는 실시예 1의 처리에 의해 F4/80 및 MCP-1(monocyte chemoattractant protein-1)의 mRNA 발현이 유의적으로 감소한 것으로 나타났다 (도 3a 및 도 3b). 연구 2의 중증 NASH 마우스는 실시예 1의 처리에 의해 MCP-1과 같은 M1 대식세포 마커, 인터루킨 1(interleukin 1, IL-1β) 및 종양괴사인자-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)의 mRNA 발현이 유의적으로 감소한 것으로 나타났다 (도 3b 내지 도 3d).
F4/80에 대한 면역조직화학적 염색을 통해 실시예 1에 의해 F4/80 양성 영역비율을 확인한 결과, 실시예 1 그룹의 경증 또는 중증의 CDAA-유도 NASH를 갖는 마우스에서 대식세포 마커 F4/80의 침윤을 상당히 감소시키는 것을 확인하였다 (도 3e 및 도 3f). 또한, 실시예 1 그룹에서 IL-6와 같은 염증성 사이토카인 레벨이 유의하게 감소하였으며 (특히, 경증 NASH 마우스), 마우스 혈청 TNF-α 레벨도 유의하게 감소하였다 (특히, 중증 NASH 마우스).
이를 통해, 실시예 1이 NASH를 갖는 마우스에서 대식세포의 침윤을 감소시켜 전신 염증을 약화시키는 효과가 있으며, 지방간염 발병에 관여하는 주요 염증 인자의 발현을 감소시키는 효과가 있음을 알 수 있다.
< 실험예 4> CDAA -유도 NASH 마우스에서 간 섬유증 억제 효과 평가
건강한 간에서 LSEC는 HSC의 활성화를 막아 섬유화를 방지하는 역할을 하는 반면, 모세관화된 LSECs는 염증 매개체를 방출하고, 대식세포 및 HSC의 동원(recruitment)에 기여하여 염증 및 섬유증을 촉진시키게 된다. 이에, CDAA-유도 NASH 마우스 모델에서 실시예 1의 간 성상 세포(hepatic stellate cells, HSCs) 활성화에 영향을 미치는지 여부를 확인하기 위하여 상기 <실험 프로토콜> 3, 4, 5 및 6에 따라 수행하였다. 그 결과를 도 4a 내지 4g에 나타내었다.
HSC의 활성화는 Sirius red 및 α-SMA 염색 증가에 의해 나타난 것처럼 형태 및 세포외 매트릭스의 변화를 유도한다. 한편, 도 4a 및 도 4b를 통해 CD 식단 공급 3주 후 (경증 NASH) 실시예 1 그룹에서 Sirius red 염색 및 α-SMA 양성 영역이 감소하는 것을 확인할 수 있으며, 이를 통해 실시예 1은 경증 CDAA-유도 NASH 마우스에서 섬유증을 억제하는 효과가 있다는 것을 알 수 있다.
또한, CD 그룹에 비해 실시예 1 그룹에서 α-SMA(α-smooth muscle actin), Col1α(collagen 1α), Col4α(collagen 4α) 및 TGF-β(transforming growth factor-β)와 같은 섬유증 관련 유전자의 mRNA 발현이 유의하게 감소하는 것을 확인할 수 있다.
특히, 하이드록시프롤린(hydroxyproline) 레벨은 실시예 1에서 매우 우수하게 감소하는 것으로 나타났다.
이를 통해, 실시예 1이 간에서 HSC를 억제함으로써 콜라겐의 축적을 감소시킴으로써 간에서 가벼운 원섬유성(fibrillar) 콜라겐의 침착을 감소시키는 효과가 있음을 알 수 있다.
< 실험예 5> CDAA -유도 NASH 마우스에서 LSEC 모세관화 개선 효과 평가
간 동모양 혈관내피세포(liver sinusoidal endothelial cells, LSECs)의 모세관화 및 기능장애는 대사성 간 질환의 진행 초기에 발생하며, 이러한 LSEC 모세관화는 지방간에서 발생하여 간 혈관의 저항 증가에 기여하게 된다. 비알콜성 지방간 질환(NAFLD)에 있어서, LSEC는 E-셀렉틴(E-selectin), ICAM-1(intercellular adhesion molecule-1), VCAM-1(vascular cell adhesion molecule-1) 및 CD31(cluster of differentiation 31)와 같은 내피세포 부착 분자의 발현을 증가시키는 것을 특징으로 하는데, 이 분자들은 세포-세포 상호작용에 영향을 미치며 염증성 사이토카인에 의해 조질되는 분자들이다. 이에, 면역조직화학 염색을 통해 ICAM-1 및 CD31 발현 변화를 분석하기 위해 상기 <실험 프로토콜> 3, 4 및 6에 따라 수행하였다. 그 결과를 도 5a 내지 5f에 나타내었다.
ICAM-1 양성 영역은 경증 NASH 마우스 및 중증 NASH 마우스의 실시예 1 그룹에서 모두 유의하게 감소하는 것으로 나타났으며 (도 5a), CD31의 발현은 경증 NASH 마우스에서 효과적으로 감소하였다 (도 5b). CD31은 NASH에서 증가된 LSEC 모세관화를 평가할 수 있는 마커이므로, 경증 CDAA-유도 NASH 마우스에서 실시예 1의 처리는 CD31의 발현을 감소시킨 상기 결과를 통해 모세관화가 감소되었음을 확인할 수 있다.
내피세포 부착 분자 관련 유전자에 관여하는 E-셀렉틴 및 ICAM-1의 mRNA 발현은 실시예 1 그룹에서 모두 유의하게 나타났으며, 경증 NASH 및 중증 NASH에서 모두 효과적으로 감소하였다(도 5c 및 도 5d). VCAM-1 및 CD31 mRNA의 발현 역시 실시예 1 그룹에서 유의하게 감소하는 것을 확인할 수 있다 (도 5e 및 5f).
이를 통해, 실시예 1이 LSEC에 의한 세포 부착 분자인 E-셀렉틴, ICAM-1 및 VCAM-1의 발현을 하향 조절하는 역할을 수행할 수 있으며, NASH를 갖는 마우스에서 LSEC 모세관화를 우수하게 개선시키는 효과가 있음을 알 수 있다.
이상, 본 발명을 바람직한 제조예, 실시예 및 실험예를 통해 상세히 설명하였으나, 본 발명의 범위는 특성 실시예에 한정되는 것은 아니며, 첨부된 특허청구범위에 의하여 해석되어야 할 것이다. 또한, 이 기술분야에서 통상의 지식을 습득한 자라면, 본 발명의 범위에서 벗어나지 않으면서도 많은 수정과 변형이 가능함을 이해하여야 할 것이다.

Claims (19)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는,
    지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
    [화학식 1]
    Figure pat00013

    상기 화학식 1에서,
    X는 산소 또는 황이고;
    Figure pat00014
    는 단일결합 또는 이중결합을 나타내고;
    R1은 수소, 할로, C1-30 알킬, C3-10 사이클로알킬, C2-30 알케닐, C3-10 사이클로알케닐, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C2-15 헤테로사이클로알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C3-15 헤테로사이클로알킬알킬, C2-30 알콕시알킬, C3-30 알콕시알콕시알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C3-10 헤테로사이클로알케닐, C1-20 알코올, C1-20 알케놀, C2-30 아실, C1-10 아미드, C1-10 아민, C2-15 에스테르, 설페이트, 카르복실기, C3-20 카르복시알킬, C3-20 카르복시알케닐, C3-20 알킬카르복실, C3-20 알케닐카르복실, C3-20 알킬카르복시알킬, C3-20 알킬카르복시알케닐, C3-20 알케닐카르복시알킬, C4-20 알케닐카르복시알케닐, C6-30 아릴, C6-30 아랄킬, C6-30 알카릴, 헤테로원자로서 질소를 포함하는 C3-30 헤테로아릴 또는 C6-30 아릴카르보닐이고;
    R21은 C2-30 알킬, C3-10 사이클로알킬, C2-30 알케닐, C3-10 사이클로알케닐, C2-30 카르복시알킬, C2-30 알킬카르복실, C3-30 카르복시알케닐, C3-30 알케닐카르복실, C3-30 알킬카르복시알킬, C3-30 알킬카르복시알케닐, C3-30 알케닐카르복시알킬, C4-30 알케닐카르복시알케닐, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C2-10 헤테로사이클로알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C3-10 헤테로사이클로알킬알킬, C2-30 알콕시알킬, C3-30 알콕시알콕시알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C3-10 헤테로사이클로알케닐, C1-20 알코올, C1-20 알케놀, C2-30 아실, C1-10 아미드, C1-10 아민 또는 C2-15 에스테르이고;
    R22는 수소, 히드록시, 할로 또는 C1-10 알킬이고;
    R23은 수소, 히드록시 또는 C1-10 알킬이고;
    R21은 R22 및 R23과 함께 결합하는 탄소에 대하여 이중결합을 형성할 수 있고;
    R23은 R21 및 R22과 함께 결합하는 탄소에 대하여 이중결합을 형성할 수 있고;
    R21 또는 R23이 상기 탄소에 이중결합을 형성하는 경우 R22는 원자를 포함하지 않고; 및
    R3 및 R4는 서로 독립적으로 수소 또는 C1-10 알킬이다.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 화학식 1의 X는 산소인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    R3 및 R4는 서로 독립적으로 C1-3 알킬인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    R23은 C1-3 알킬이고;
    R21 및 R22는 함께 C1-5 알킬바이닐을 형성하고, 이때 상기 알킬바이닐은 C1-3 알콕시카보닐로 치환되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    R1은 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C3-8 헤테로사이클로알케닐인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    R1은 산소를 포함하는 C5 헤테로사이클로알케닐인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 화학식 1의
    Figure pat00015
    는 이중결합인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 화학식 1은 하기 화학식 2로 표시되는 화합물인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물:
    [화학식 2]
    Figure pat00016
    .
  9. 제1항에 있어서,
    상기 지방간 질환은 단순 지방간(fatty liver), 알코올성 지방간(alcoholic fatty liver), 영양성 지방간, 기아성 지방간, 비만성 지방간, 당뇨병성 지방간, 지방간염(steatohepatitis), 비알콜성 지방간 질환(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD), 비알콜성 지방간염(non-alcoholic steatohepatitis, NASH) 및 섬유증으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 섬유증은 신장 섬유증, 심장 섬유증, 췌장 섬유증, 폐 섬유증, 혈관 섬유증, 피부 섬유증, 골수 섬유증, 간 섬유증, 장 섬유증, 경피증 및 낭포성 섬유증으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 간 섬유증은 간경변증, 간신증후군, 간자반병, 대사성 간질환, 만성 간질환, B형 간염 바이러스 감염, C형 간염 바이러스 감염. D형 간염 바이러스 감염, 주혈흡충증, 알콜성 간질환, 비알콜성 지방간염, 당뇨, 단백질 결핍증, 관상동맥질환, 자가면역 간염, 알파-1 항트립신 결핍증 및 일차성 담즙성 간경화증으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  12. 제10항에 있어서,
    상기 폐 섬유증은 기관지염, 급성 기관지염, 미만성범세기관지염, 모세기관지염, 특발성 폐섬유증, 급성 간질성 폐렴, 과민성 간질성 폐렴, 폐이식, 낭포성 섬유증, 방사선 유발 폐섬유증, 만성폐쇄성 폐질환, 천식, 기관지확장증, 폐결핵, 폐렴, 진폐증, 과민성폐렴, 폐부종 및 사르코이드증(sarcoidosis)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  13. 제10항에 있어서,
    상기 신장 섬유증은 신부전, 도관 설치, 당뇨병성 신증, 요로 폐쇄, 사구체 경화증, 신세뇨관간질성, 사구체 신염, 만성 신부전증, 당뇨병성 근위세뇨관 섬유화, 급성 신손상, 만성 신장 질환, 말기 신장 질환, 허혈 재관류 손상, 신독성 약제에 의한 손상, 조영제에 의한 손상 및 알부민뇨 발생으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  14. 제10항에 있어서,
    상기 간 섬유증은 비알콜성 지방간염에 의해 유발된 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  15. 제1항에 있어서,
    상기 약학적 조성물은 간 내 염증(hepatic inflammation) 또는 전신 염증(systemic inflammation)을 개선시키는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  16. 제1항에 있어서,
    상기 약학적 조성물은 간 내 지질 축적을 억제하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  17. 제1항에 있어서,
    상기 약학적 조성물은 간 섬유화를 억제하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  18. 제1항에 있어서,
    상기 약학적 조성물은 간 동모양 혈관내피세포(liver sinusoidal endothelial cells, LSECs)의 모세관화(capillarization)를 감소시키는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  19. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 지방간 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품:
    [화학식 1]
    Figure pat00017

    상기 화학식 1에서,
    X,
    Figure pat00018
    , R1, R21, R22, R23, R3, R4는 청구항 1에서 정의한 바와 같다.
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