EA030296B1

EA030296B1 - Пептиды, выполняющие роль агонистов окситоцина

Info

Publication number: EA030296B1
Application number: EA201692488A
Authority: EA
Inventors: Катерина Биссанц; Конрад Блайгер; Канчан Чакраборти; Кристоф Грундшобер; Гоутам Саха
Original assignee: Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг
Priority date: 2014-06-06
Filing date: 2015-06-03
Publication date: 2018-07-31
Also published as: PH12016502251A1; AU2015270564A1; JP2017518313A; PE20170427A1; EP3152225A1; EP3152225B1; CR20160562A; KR20170004014A; CN106459156A; MX2016015877A; EA201692488A1; CL2016003076A1; JP6535688B2; CA2950493A1; SG11201610221WA; US20170081368A1; WO2015185584A1; IL248625A0

Abstract

Настоящее изобретение относится к соединениям формулыгде Rявляется атомом водорода, низшим алкилом, -CH-циклоалкильной группой или циклоалкильной группой; Rявляется атомом водорода, низшим алкилом, низшим алкилом, замещенным гидроксильной группой; или Rи Rвместе с атомами N и C, к которым они присоединены, могут образовывать пирролидиновое кольцо, необязательно замещенное одним или двумя атомами F или гидроксильной группой, или могут образовывать азетидиновое или пиперидиновое кольцо; Rявляется атомом водорода, низшим алкилом, низшим алкилом, замещенным гидроксильной группой, -(CH)-NH, бензильной группой, необязательно замещенной гидроксильной группой, фенильной группой, -CH-циклоалкильной группой или циклоалкильной группой; Rявляется атомом водорода или низшей алкильной группой; n равно 1; m равно 0 или 1; o имеет значение от 1 до 4; или к фармацевтически приемлемой соли присоединения кислоты, к рацемической смеси или к соответствующему энантиомеру и/или оптическим изомерам. Обнаружено, что представленные соединения являются агонистами окситоциновых рецепторов для лечения аутизма, стресса, включая посттравматическое стрессовое расстройство, тревоги, включая тревожные расстройства и депрессию, шизофрении, психиатрических расстройств и потери памяти, алкогольной абстиненции, лекарственной зависимости и для лечения синдрома Прадера-Вилли.

Description

изобретение относится к соединениям формулы

030296 Β1

где Κ¹ является атомом водорода, низшим алкилом, -СН2-циклоалкильной группой или циклоалкильной группой; Κ² является атомом водорода, низшим алкилом, низшим алкилом, замещенным гидроксильной группой; или Κ¹ и Κ² вместе с атомами N и С, к которым они присоединены, могут образовывать пирролидиновое кольцо, необязательно замещенное одним или двумя атомами Ε или гидроксильной группой, или могут образовывать азетидиновое или пиперидиновое кольцо; Κ³ является атомом водорода, низшим алкилом, низшим алкилом, замещенным гидроксильной группой, -(СН2)_о^Н₂, бензильной группой, необязательно замещенной гидроксильной группой, фенильной группой, -СН2-циклоалкильной группой или циклоалкильной группой; Κ³ является атомом водорода или низшей алкильной группой; п равно 1; т равно 0 или 1; о имеет значение от 1 до 4; или к фармацевтически приемлемой соли присоединения кислоты, к рацемической смеси или к соответствующему энантиомеру и/или оптическим изомерам. Обнаружено, что представленные соединения являются агонистами окситоциновых рецепторов для лечения аутизма, стресса, включая посттравматическое стрессовое расстройство, тревоги, включая тревожные расстройства и депрессию, шизофрении, психиатрических расстройств и потери памяти, алкогольной абстиненции, лекарственной зависимости и для лечения синдрома Прадера-Вилли.

030296

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы

где К¹ является атомом водорода, низшей алкильной группой, -СН₂-циклоалкильной группой или циклоалкильной группой;

К² является атомом водорода, низшей алкильной группой, низшей алкильной группой, замещенной гидроксильной группой, или

К¹ и К² вместе с атомами N и С, к которым они присоединены, могут образовывать пирролидиновое кольцо, необязательно замещенное одним или двумя атомами Р или гидроксильной группой, или могут образовывать азетидиновое или пиперидиновое кольцо;

К³ является атомом водорода, низшей алкильной группой, низшей алкильной группой, замещенной гидроксильной группой, -(СН₂)_О^Н₂, бензильной группой, необязательно замещенной гидроксильной группой, фенильной группой, -СН2-циклоалкильной группой или циклоалкильной группой;

К³ является атомом водорода или низшей алкильной группой; η равно 1; т равно 0 или 1; о имеет значение от 1 до 4;

или к фармацевтически приемлемой соли присоединения кислоты, к рацемической смеси или к соответствующему энантиомеру и/или оптическим изомерам.

Обнаружено, что представленные соединения являются агонистами рецепторов окситоцина, то есть эти соединения являются аналогами окситоцина, сохраняющими биологическую активность окситоцина. Такие молекулы-аналоги способны действовать сходно с эндогенным окситоцином, включая связывание с рецептором окситоцина. Аналоги окситоцина обладают абсолютно новыми молекулярными структурами.

Окситоцин - это состоящий из девяти аминокислот циклический пептидный гормон с двумя остатками цистеина, которые образуют дисульфидный мостик между положениями 1 и 6. Окситоцин человека содержит последовательность Су8-Туг-11е-О1п-А§п-Су8-Рго-Реи-О1у.

Пептиды оказались коммерчески значимым классом лекарственных препаратов, который обеспечивает преимущество большей специфичности и эффективности и более низких профилей токсичности перед традиционными низкомолекулярными фармацевтическими препаратами. Они обеспечивают перспективные варианты лечения многих болезней, таких как диабет, ВИЧ, гепатит, рак и другие, причем врачи и пациенты начинают все более благосклонно относиться к лекарственным средствам на основе пептидов. Настоящее изобретение относится к пептидным агонистам рецепторов окситоцина, которые также включают природный гормон окситоцин и карбетоцин.

Окситоцин - это сильнодействующий утеротонический агент для лечения атонии матки и сильных маточных кровотечений, его используют в клинике для индукции родов, также показано, что он способствует началу и поддержанию лактации (О1тр1 е! а1., Рйузю1. Кеу., 81, (2001), 629-683, Кш§ е! а1., ΒΜΣ, 283, (1981), 340-342). Карбетоцин (1-деамино-1-карба-2-тирозин(О-метил)окситоцин) также является сильнодействующим утеротоническим агентом, используемым в клинике для лечения атонии матки и сильных маточных кровотечений.

Пептидные агонисты окситоцина можно использовать для лечения синдрома Прадера-Вилли, который является редким генетическим заболеванием, поражающим одного ребенка из 25.000.

Недавно проведенное исследование показывает, что агонисты окситоцина можно использовать для лечения воспаления и боли, включая боли в брюшной полости и спине (Уапд, Зрте, 19, 1994, 867-71), сексуальной дисфункции у мужчин (ЫбЬегд е! а1., РйагтакорзусЫа!., 10, 1977, 21-25) и женщин (Апбегзоп-Нип! е! а1., ΒΜΣ, 309, 1994, 929), синдрома раздраженного кишечника (ΙΒ8, от англ. 1т!аЬ1е Ьо\ее1 зупбготе) (Ьоцуе1 е! а1., Ои!, 39, 1996, 741-47), запора и желудочно-кишечной непроходимости (ОйНзоп е! а1., №игода§!гоеп!его1. Μο!ΐ1., 17, 2005, 697-704), аутизма (Но11апбег е! а1., №игор8усйорйагт., 28, 2008, 193-98), стресса, включая посттравматическое стрессовое расстройство (ΡΤ8Ό, от англ. розИгаитаИс §!ге§8 018огбег) (Рйтап е! а1., РзусЫайу Кезеагсй, 48, 107-117), тревоги, включая тревожные расстройства и депрессию (Кйьсй е! а1., Г №иго8ст, 25, 49, 11489-93, ШаИНегг е! а1., ΡNА8, 104, 2007, 16681-84), хи- 1 030296

рургической кровопотери или послеродовых кровотечений (РцртоЮ с1 а1., Ас1а ОЬк1е1. Суиеео1., 85, 2006, 1310 -14), для стимуляции и поддержания родовой деятельности (Р1атт е1 а1., ОЬк1е1. Супесо1., 70, 1987, 70 - 12), для заживления ран и лечения инфекций, для лечения мастита, рождения плаценты и лечения остеопороза. Кроме того, агонисты окситоцина могут быть использованы для диагностики рака и плацентарной недостаточности.

Кроме того, в публикациях "1п1гапа8а1 ОхуЮст Ь1оскк а1соко1 \уййбга\уа1 ίη китап 5иЬ)ес15" (А1соко1 Сйп Ехр Кек, Уо1, Ыо. 2012) и "Вгеакшд Не 1оор: ОхуЮст ак а ро1епка1 1геа1теп1 £ог бгид аббюОоп" (Ногтопек апб Векауюг, 61, 2012, 331-339) предложено лечить агонистом окситоцина алкогольную абстиненцию и лекарственную (наркотическую) зависимость.

Окситоцин и его рецепторы присутствуют в зонах головного мозга, связанных с симптомами шизофрении, таких как прилежащее ядро (пис1еик асситЬепк) и гиппокамп. Агонисты окситоциновых рецепторов могут быть использованы для лечения аутизма, стресса, включая посттравматическое стрессовое расстройство, тревоги, включая тревожные расстройства и депрессию, шизофрении, болезни Альцгеймера, психиатрических заболеваний, потери памяти и метаболических болезней (\УО 2012/016229).

Задачами настоящего изобретения являются новые соединения формулы I и применение соединений формулы I и их фармацевтически приемлемых солей для лечения заболеваний ЦНС, связанных с рецепторами окситоцина; такими заболеваниями являются аутизм, стресс, включая посттравматическое стрессовое расстройство, тревога, включая тревожные расстройства и депрессию, шизофрения, психиатрические заболевания и потеря памяти, алкогольная абстиненция, лекарственная зависимость, а также синдром Прадера-Вилли.

Другими задачами являются получение новых соединений формулы I и лекарственных средств, содержащих эти соединения.

Настоящее изобретение может обеспечить селективные и эффективные соединения, представляющие собой альтернативы и/или усовершенствования для лечения некоторых болезней ЦНС, включающих аутизм, стресс, включая посттравматическое стрессовое расстройство, тревогу, включая тревожные расстройства и депрессию, шизофрению, психиатрические заболевания и потеря памяти, алкогольную абстиненцию, лекарственную зависимость, а также для лечения синдрома Прадера-Вилли.

Показано, что пептиды по настоящему изобретению обладают очень хорошей селективностью в отношении рецепторов вазопрессина У1а и У2, как показано в таблице. Это может обеспечить большое преимущество при использовании их в качестве лекарственного средства для предотвращения побочных эффектов. Эти физиологические эффекты могут считаться нежелательными побочными эффектами в случае лекарственных средств, предназначенных для лечения болезней центральной нервной системы. Поэтому желательно получить лекарственные средства, обладающие большей селективностью в отношении окситоциновых рецепторов, чем в отношении вазопрессиновых рецепторов.

При использовании в контексте настоящего изобретения термин "низшая алкильная группа" обозначает насыщенную углеводородную группу с неразветвленной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 7 атомов углерода, например метильную, этильную, пропильную, изопропильную, н-бутильную, и-бутильную, 2-бутильную, т-бутильную группу и т.п.

Термин "низшая алкильная группа, замещенная гидроксильной группой" обозначает низшую алкильную группу, определенную выше, в которой по меньшей мере один атом водорода заменен на гидроксильную группу.

Термин "циклоалкильная группа" обозначает циклическую алкильную цепь, содержащую от 3 до 6 атомов углерода.

Термин "фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты" включает соли, образованные посредством взаимодействия с неорганическими и органическими кислотами, такими как хлористоводородная кислота, азотная кислота, серная кислота, фосфорная кислота, лимонная кислота, муравьиная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, уксусная кислота, янтарная кислота, винная кислота, метансульфоновая кислота, п-толуолсульфоновая кислота и т. п.

Предпочтительными являются соединения формулы I, в которой т равно 1.

Одной из задач настоящего изобретения являются соединения, в которых К¹ является атомом водорода, низшей алкильной группой, -СН₂-циклоалкильной или циклоалкильной группой, К² является атомом водорода, низшей алкильной группой, низшей алкильной группой, замещенной гидроксильной группой, а другие обозначения являются такими, как указано выше.

Следующей задачей настоящего изобретения являются соединения, в которых К¹ и К² вместе с атомами N и С, к которым они присоединены, могут образовывать пирролидиновое кольцо, необязательно замещенное одним или двумя атомами Р или гидроксильной группой, или могут образовывать азетидиновое или пиперидиновое кольцо, а другие обозначения являются такими, как указано выше.

Следующие специфические соединения были получены и испытаны на агонистическую активность в отношении рецептора окситоцина:

- 2 030296

- 3 030296

- 4 030296

- 5 030296

Получение соединений формулы I по настоящему изобретению можно осуществить посредством последовательных или конвергентных путей синтеза. Знания, необходимые для проведения реакции и очистки полученных продуктов, имеются у специалистов в данной области техники.

Соединения по настоящему изобретению синтезировали стандартными способами твердофазного синтеза пептидов с использованием методологий защиты аминогрупп Ршос (9флуоренилметоксикарбонилом; от англ. 9-йиогепу1ше1йохусагЬопу1) и Вое (Ν-трет-бутоксикарбонилом; от англ. ^1еП-Ь111охусагЬопу1). Реакции, выполненные вручную, проводили при комнатной температуре, тогда как синтез пептидов с микроволновым облучением проводили при повышенной температуре.

Общее описание синтеза

Линейные пептиды синтезировали либо вручную, либо с использованием микроволновой технологии согласно протоколам твердофазного синтеза, соответствующим уровню техники (Ршос-химия), которые описаны, например, в публикации Ка1ез апб А1Ьепсю, Εάδ., "Зойй РИа%е 8уηίйеδ^δ: А ргасйса1 дшйе", Магсе1 Бескег, №а Уогк, Ваδе1, 2000. В качестве твердого носителя использовали смолу Теп1аСе1-8-КАМ (0,24 мэкв./г). Все Ршос-защищенные аминокислоты добавляли в 4-кратном избытке после активации СОМИ (1-[(1-(циано-2-этокси-2-оксоэтилиденаминоокси)диметиламиноморфолино)] урония гексафторфосфатом; от англ. 1-[(1-(суапо-2-е1йоху-2-охое1йуНйепеатшооху)Й1ше1йу1атшо- 6 030296

ιηοΓρ1ιο1ίηο)|ιιΐΌηίιιιη ПехаЛиогорПокрПаЮ) (0,5 моль/л в ДМФА (диметилформамиде; от англ. йипеЛкПогтатШе - ЭМР) и 4 экв. ΌΙΡΕΑ (Ν,Ν-диизопропилэтиламина; от англ. Ν.Ν-ύίίκορίΌρνΚίΙινΕιιηίικ) (2 моль/л в ΝΜΡ (Ν-метилпирролидоне; от англ. N-теΐЬу1ру^^ο1^йοηе). Удаление Ρтοс-групп осуществляли 20%-м пиперидином в ДМФА). Пептиды циклизовали в растворе после депротекции и отщепления от смолы и стандартной обработки. Неочищенные пептиды обрабатывали стандартными реагентами для активации пептидов в ДМФА.

Циклизацию контролировали с использованием НРЬС (высокоэффективной жидкостной хроматографии; от англ. Ιιίβΐι регГогтапсе Псцпй сЬтотаФдгарПу).

Отщепление пептидов от смолы и обработка.

Отщепляющую смесь трифторуксусной кислоты. триизопропилсилана и воды (95/2,5/2,5) добавляли к смоле и встряхивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Отщепленные от смолы пептиды осаждали в холодном диэтиловом эфире (-18°С). Пептиды отделяли посредством центрифугирования и осадок дважды промывали холодным диэтиловым эфиром. Затем осадки снова растворяли в воде/ацетонитриле и лиофилизировали.

Очистка.

Пептиды очищали с использованием обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (КР-НРЬС; от англ. теуеткей рПаке ЫдП регГогтапсе Псцпй сПготаЮдгарПу) с использованием колонки КергокрПег 100 С18-Т (100x4,6 мм, размер частиц 5 мкм) в качестве стационарной фазы и смеси воды с ацетонитрилом в качестве элюента (градиент ацетонитрила 1-50% в течение 30 мин). Фракции собирали и анализировали посредством жидкостной хромато-масс-спектрометрии (ЬС/Μδ; от англ. Псций сПготаЮдгарПу-такк кресйотейу). Образцы чистых продуктов объединяли и лиофилизировали. Все пептиды были получены в форме белых порошков со степенью чистоты более 85%. Идентификация продуктов была выполнена посредством масс-спектрометрии.

Все стандартные аминокислоты были закуплены в компании СЕМ. (2§)-Ртос-дифторпирролидин2-карбоновую кислоту, Ртос-транс-4-фторпролин-ОН, Ртос-Нур(1Ви)-ОН, (2§,4§)-Ртос-4фторпирролидин-2-карбоновую кислоту закупили в компании Ро1урерййе. Ртос-(8)-2-амино-4-(2-третбутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту получили способом, описанным ниже.

Синтез Ртос-(3)-2-амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановой кислоты.

К перемешиваемому раствору (2§)-2-амино-4-{[(3§)-3-амино-3-карбоксипропил]дисульфанил}бутановой кислоты (10 г, 37,263 ммоль) в МеОН (250 мл) добавили §ОС1₂ (10,8 мл, 149,05 ммоль) по каплям в течение 20 мин и реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 18 ч. Затем реакционную смесь сконцентрировали при пониженном давлении с получением хлоридной соли метил-(2§)-2-амино-4{[3§)-3-амино-4-метокси-4-оксобутил]дисульфанилбутаноата (12 г, 87%) в виде грязно-белого твердого вещества. К перемешиваемой суспензии хлоридной соли метил-(2§)-2-амино-4-{[3§)-3-амино-4-метокси4-оксобутил]дисульфанилбутаноата (24 г, 64,97 ммоль) в Н₂О (560 мл) добавили К₂СО₃ (53,7 г, 389,8 ммоль), Ртос-С1 (33,6 г, 129,9 ммоль) в диоксане (1800 мл) и перемешивали реакционную смесь при 25°С в течение 18 ч. Твердое вещество отфильтровали, промыли МеОН (800 мл) и высушили при пониженном давлении с получением метил-(2§)-2-{[(9Н-флуорен-9-ил-метокси)карбонил]амино}-4-{[(3§)-3{[(9Н-флуорен-9-ил-метокси)карбонил]амино}-4-метокси-4-оксобутил]дисульфанил}бутаноата (32 г, 66%) в форме грязно-белого вещества. ЖХ-МС: 741 (М+Н). К перемешиваемому раствору метил-(2§)-2{[(9Н-флуорен-9-ил-метокси)карбонил]амино}-4-{[(3§)-3-{[(9Н-флуорен-9-ил-метокси)карбонил]амино}-4-метокси-4-оксобутил]дисульфанил}бутаноата (16 г, 21,6 ммоль) в МеОН (864 мл) и ДХМ (англ. ЭСМ, йюЫототеШапе - дихлорметан) (240 мл) добавили цинковую пыль (4,2 г, 64,8 ммоль), ТРА (от англ. Тпйиогоасейс Ашй - трифторуксусная кислота) (64,3 мл, 863,8 ммоль) и перемешивали реакционную смесь при 25°С в течение 18 ч. Реакционную смесь профильтровали для удаления цинка и сконцентрировали фильтрат при пониженном давлении. Неочищенный продукт перенесли в этилацетат и промыли 1Ν раствором НС1, 1Ν раствором ШОН, водой и солевым раствором. Отделенную органическую фазу высушили над сульфатом натрия и испарили при пониженном давлении с получением метил-(2§)-2{[(9Н-флуорен-9-ил-метокси)карбонил]амино}-4-сульфанилбутаноата, который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХ-МС: 372 (М+Н). К перемешиваемому раствору метил(2§)-2-{[(9Н-флуорен-9-ил-метокси)карбонил]амино}-4-сульфанилбутаноата (8 г, 21,5 ммоль) в смеси МеОН/ТНР (2:1, 336 мл) добавили триэтиламин (3 мл, 21,5 ммоль), трет-бутилпроп-2-еноат (4,70 мл, 32,3 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 3 ч. Реакционную смесь испарили при пониженном давлении. Неочищенный продукт перенесли в ДХМ, промыли 1Ν НС1, насыщенным раствором NаНСО₃, водой и солевым раствором. Отделенную органическую фазу высушили над сульфатом натрия и испарили при пониженном давлении. Полученный таким образом неочищенный продукт очистили на колонке с нормальным диоксидом кремния с использованием ДХМ (100%) с получением метил(2§)-4-{[3-трет-бутокси)-3-оксопропил]сульфанил}-2-{[(9Н-флуорен-9-илметокси)карбонил]амино}бутаноата (4,6 г, 44%) в форме бесцветной вязкой жидкости. ЖХ-МС: 500 (М+Н). К перемешиваемому раствору метил-(2§)-4-{ [3-трет-бутокси)-3-оксопропил]сульфанил}-2-{[(9Н-флуорен-9-илметокси)карбонил]амино}бутаноата (4,6 г, 9,2 ммоль) в изопропаноле (122 мл) и Н₂О (46 мл) добавили СаС1₂ (16,5 г, 149,2 ммоль), МОН (1,5 г, 36,8 ммоль) и перемешивали реакционную смесь при 25°С в течение 40 мин.

- 7 030296

Органические растворители удалили при пониженном давлении. Полученный остаток разбавили 10%-м раствором К₂СО₃ и промыли диэтиловым эфиром. Отделенную водную фазу подкислили до рН, примерно равного 2, концентрированной НС1 и экстрагировали ДХМ. Отделенную органическую фазу промыли водой, солевым раствором, высушили над безводным сульфатом натрия и испарили при пониженном давлении с получением (28)-4-{[3-(трет-бутокси)-3-оксопропил]сульфанил(-2-{[(9Н-флуорен-9илметокси)карбонил]амино (бутановой кислоты (4 г, 89%) в виде грязно-белого липкого твердого вещества. ЖХ-МС: 484(М-Н). К перемешиваемому раствору (28)-4-{[3-(трет-бутокси)-3оксопропил]сульфанил(-2-{[(9Н-флуорен-9-илметокси)карбонил]амино}бутановой кислоты (3,5 г, 7,2 ммоль) в этилацетате (18 мл) добавили оксон (22,15 г, 36,0 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 48 ч. Затем реакционную массу профильтровали, твердое вещество промыли этилацетатом и испарили фильтрат при пониженном давлении. Полученный таким образом неочищенный продукт очистили на колонке с нормальным диоксидом кремния с использованием 0-5% МеОН в ДХМ с получением (28)-4-{[3-(трет-бутокси)-3-оксопропан]сульфонил(-2-{[(9Н-флуорен-9-илметокси)карбонил]амино (бутановой кислоты (3,1 г, 84%) в форме белого твердого вещества. ЬС-М8: 516 (М-Н).

Синтез пептида.

Пептид синтезировали с использованием микроволновой технологии компании СЕМ с временем присоединения, равным 5 мин для каждой аминокислоты, при повышенной температуре (78°С) и загрузке, равной 0,25 ммоль. Синтез провели с использованием в качестве твердого носителя смолы Теи1а10е18 КЛМ (0,24 мэкв./г). Все использованные аминокислоты растворяли в ИМР в концентрации, равной 0,2 моль. Раствор 4 экв. СОМИ в ДМФА (0,5 моль/л) и ΌΙΡΕΑ использовали для активации аминокислот. Удаление Ртое-группы производили пиперидином (20%) в ДМФА в течение 3 мин. Удаление Ртос повторили.

Отщепление от смолы.

10 мл смеси для отщепления, состоявшей из трифторуксусной кислоты, триизопропилсилана и воды в соотношении 95/2,5/2,5, добавили к смоле и встряхивали в течение 3 ч при комнатной температуре. Отщепленный пептид осадили в холодном ЕьО (-18°С). Пептид отделили посредством центрифугирования в 2x50 мл пробирках из полипропилена. Осадки два раза промыли холодным диэтиловым эфиром. После этого осадок растворили в смеси Н₂О и ацетонитрила и лиофилизировали с получением 88 мг белого порошка.

Циклизация.

Неочищенный пептид растворили в ДМФА (15 мл). Добавили 1 экв. конденсирующих реагентов РуоАР (0,5 моль/л) в ДМФА и ΌΙΡΕΑ в ИМР (2 моль/л). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. После завершения реакции (контроль посредством ЬС-М8) содержание ДМФА уменьшили посредством концентрирования до объема, примерно равного 2 мл. Осаждение провели в холодном (-18°С) диэтиловом эфире (40 мл). Пептид отделили посредством центрифугирования и осадок промыли холодным диэтиловым эфиром.

Очистка.

Неочищенный пептид очистили посредством препаративной НРЬС на колонке КертокрЬет 100 С18Т (100x4,6 мм, размер частиц 5 мкм). В качестве элюирующей системы использовали смесь 0,1% ТРА/воды/ацетонитрила с градиентом ацетонитрила 0-100% в течение 0-75 мин. Фракции собрали и проверили с использованием аналитической НРЬС. Фракции, содержавшие чистый продукт, объединили и лиофилизировали. Получили 27 мг белого порошка.

Все остальные пептиды, указанные ниже, были синтезированы сходным образом.

Аббревиатуры.

Ртос - 9-флуоренилметоксикарбонил,

(Ви - трет-бутил,

О1у - глицин,

РЬе - фенилаланин,

СЬа - циклогексилаланин,

СЬд - циклогексилглицин,

8аг - саркозин,

Нур - гидроксипролин,

11е - изолейцин,

Ьеи - лейцин,

И1е - норлейцин,

Ννα - норвалин,

Пар - диаминопропионовая кислота,

АЛ - аминоизобутановая кислота,

Рго - пролин,

А1а - аланин,

Уа1 - валин,

- 8 030296

ЬотоУа1 - гомовалин,

Ηΐδ(ΤΓί) - гистидин с защищенной боковой цепью (тритил),

Άδη(ΤΓί) - аспарагин с защищенной боковой цепью (тритил),

Θ1η(ΤΓί) - глутамин с защищенной боковой цепью (тритил),

ТугДВи) - тирозин с защищенной боковой цепью (©и),

ΤΙιΐ'(ΐΒιι) - треонин с защищенной боковой цепью (1Ви),

НОВТ - Ν-гидроксибензотриазол,

СОМи - 1-[(1-(циано-2-этокси-2-оксоэтилиденаминоокси)диметиламиноморфолино)]урония гексафторфосфат,

РуаОР - (7-азабензотриазол-1-илокси)трипирролидинофосфония гексафторфосфат,

ΗΒΤϋ - О-бензотриазол-НН№,^-тетраметилурония гексафторфосфат,

ДМФА - Ν,Ν-диметилформамид,

ΝΜΡ - Ν-метилпирролидон,

ΏΙΡΕΑ - Ν,Ν-диизопропилэтиламин,

ДХМ - дихлорметан,

ΜеСN - ацетонитрил.

Пример 1.

Использовали следующие аминокислоты: Ртое-О1у-ОН, Ртос-Ьеи-ОН, Ртос-Рго-ОН, Ртос-(5)-2амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ртос-Αδη(Τ^ί)-ОΗ, Ртос-Θ1η(Τ^ί)ОН, Ртос-11е-ОН и Ртос-Τу^(ίΒи)-ОΗ.

МС (М+Н+): ожидаемое значение 1006,1; наблюдаемое значение 1006,4.

Пример 2.

Использовали следующие аминокислоты: Ртос-О1у-ОН, Ртос-Ьеи-ОН, Ртос-5аг-ОН, Ртос-(8)-2амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ртос-Αδη(Τ^ί)-ОΗ, Ртос-Θ1η(Τ^ί)ОН, Ртос-11е-ОН и Ртос-Τу^(ίΒи)-ОΗ.

Использовали следующие аминокислоты: Ртос-О1у-ОН, Ртос-Ьеи-ОН, (25)-Ртос-4,4-дифторпирролидин-2-карбоновую кислоту, Ртос-(5)-2-амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ртос-Αδη(Τ^ί)-ОΗ, Ртос-Θ1η(τ^ί)-ОΗ, Ртос-11е-ОН и Ртос-Τу^(ίΒи)-ОΗ.

МС (М+Н+): ожидаемое значение 1042,1; наблюдаемое значение 1043,1.

- 9 030296

Пример 4.

Использовали следующие аминокислоты: Ршос-С1у-ОН, Ршос-Ьеи-ОН, (8)-К-Ршос-азетидин-2карбоновую кислоту, Ршос-(8)-2-амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ршос-Л§п(Тг1)-ОН, Ршос-С1п(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН и Ршос-Туг(1Ви)-ОН.

МС (М+Н+): ожидаемое значение 992,2; наблюдаемое значение 993,4.

Пример 5.

Использовали следующие аминокислоты: Ршос-С1у-ОН, Ршос-Ьеи-ОН, Ртос-пипеколиновую кислоту, Ршос-(8)-2-амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ршос-Л§п(Тг1)ОН, Ршос-С1п(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН и Ршос-Туг(1Ви)-ОН.

МС (М+Н+): ожидаемое значение 1020,2; наблюдаемое значение 1020,5.

Пример 6.

Использовали следующие аминокислоты: Ршос-С1у-ОН, Ршос-Ьеи-ОН, (28,48)-Ршос-4фторпирролидин-2-карбоновую кислоту, Ршос-(8)-2-амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил) бутановую кислоту, Ршос-Л§п(Тг1)-ОН, Ршос-С1п(Тг1)-ОН, Ршос-Ие-ОН и Ршос-Туг(1Ви)-ОН.

МС (М+Н+): ожидаемое значение 1024,1; наблюдаемое значение 1024,5.

Пример 7.

Использовали следующие аминокислоты: Ршос-С1у-ОН, Ршос-Ьеи-ОН, Ртос-транс-4-фторпролин, Ршос-(8)-2-амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ршос-Л§п(Тг1)-ОН, Ршос-С1п(Тг1)-ОН, Ршос-Ие-ОН и Ршос-Туг(1Ви)-ОН.

Пример 8.

- 10 030296

Использовали следующие аминокислоты: Ршос-С1у-ОН, Ршос-Ьеи-ОН, Ршос-Нур(1Ви)-ОН Ршос(8)-2-амино-4-(2-трет-бутоксикарбонил-этансульфони)бутановую кислоту, Ршос-Л8и(Тг1)-ОН, РшосС1и(ТИ)-ОН, Ршос-Не-ОИ и Ршос-Туг(1Ви)-ОН.

МС (М+Н+): ожидаемое значение 1022,1; наблюдаемое значение 1022,5.

Пример 9.

Использовали следующие аминокислоты: Ршос-С1у-ОН, Ршос-Ме-ОН, Ршос-Заг-ОН Ршос-(8)-2амино-4-(2-трет-бутоксикарбонил-этансульфонил)бутановую кислоту Ршос-Л8и(Тг1)-ОН, Ршос-С1и(Тг1)ОН, Ртос-11е-ОН и Ршос-Туг(1Ви)-ОН.

МС (М+Н+): ожидаемое значение 980,1; наблюдаемое значение 980,4.

Пример 10.

Использовали следующие аминокислоты: Ршос-С1у-ОН, Ршос-ЛШ-ОН, Ршос-Заг-ОН, Ршос-(8)-2амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ршос-Л8и(Тг1)-ОН, Ршос-С1и(Тг1)ОН, Ршос-11е-ОН и Ршос-Туг(1Ви)-ОН.

МС (М+Н⁺): ожидаемое значение 952,0; наблюдаемое значение 952,4.

Пример 11.

Использовали следующие аминокислоты: Ршос-С1у-ОН, Ршос-СЬа-ОН, Ршос-Заг-ОН, Ршос-(8)-2амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ршос-Л8и(Тг1)-ОН, Ршос-С1и(Тг1)ОН, Ршос-11е-ОН и Ршос-Туг(1Ви)-ОН.

МС (М+Н+): ожидаемое значение 1020,2; наблюдаемое значение 1020,6.

Пример 12.

Использовали следующие аминокислоты: Ршос-С1у-ОН, Ршос-Уа1-ОН, Ршос-Заг-ОН, Ршос-(8)-2амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ршос-Л8и(Тг1)-ОН, Ршос-С1и(Тг1)ОН, Ршос-11е-ОН и Ршос-Туг(1Ви)-ОН.

- 11 030296

МС (М+Н+): ожидаемое значение 966,1; наблюдаемое значение 966,5. Пример 13.

Использовали следующие аминокислоты: Ршос-С1у-ОН, Ршос-11е-ОН, Ршос-Заг-ОН, Ршос-(3)-2амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ршос-Л8п(Тг1)-ОН, Ршос-С1п(Тг1)ОН, Ршос-11е-ОН и Ршос-Туг(1Ви)-ОН.

Пример 14.

Использовали следующие аминокислоты: Ршос-С1у-ОН, Ршос-Ыуа-ОН, Ршос-Заг-ОН, Ршос-(3)-2амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ршос-Л5п(Тг1)-ОН, Ршос-С1п(Тг1)ОН, Ршос-11е-ОН и Ршос-Туг(1Ви)-ОН.

МС (М+Н+): ожидаемое значение 966,1; наблюдаемое значение 966,5.

Пример 15.

Использовали следующие аминокислоты: Ршос-С1у-ОН, Ршос-ЬошоУа1-ОН, Ршос-Заг-ОН, Ршос(3)-2-амино-4-(2-трет-бутоксикарбонил-этансульфонил)бутановую кислоту, Ршос-Л5п(Тг1)-ОН, РшосС1п(Тг1)-ОН, Ршос-11е-ОН и Ршос-Туг(1Ви)-ОН.

МС (М+Н+): ожидаемое значение 994,1; наблюдаемое значение 994,5.

Пример 16.

Использовали следующие аминокислоты: Ршос-С1у-ОН, Ршос-РЬе-ОН, Ршос-Заг-ОН Ршос-(3)-2амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ршос-Л5п(Тг1)-ОН, Ршос-С1п(Тг1)ОН, Ршос-11е-ОН и Ршос-Туг(1Ви)-ОН.

МС (М+Н⁺): ожидаемое значение 1014,1; наблюдаемое значение 1014,4.

Пример 17.

- 12 030296

Использовали следующие аминокислоты: Ршос-О1у-ОН, Ршос-Туг(1Ви)-ОН, Ршое 8аг-ОН Ршос-(8)2-амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ршос-Азп(Тг1)-ОН, РшосС1п(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН и Ршос-Туг(1Ви)-ОН.

МС (М+Н+): ожидаемое значение 1030,1; наблюдаемое значение 1030,4.

Использовали следующие аминокислоты: Ршос-О1у-ОН, Ршос-8ег(1Ви)-ОН, Ршос-Заг-ОН, Ршос(8)-2-амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ршос-Азп(Тг1)-ОН, РшосО1п(Тг1)-ОН, Ршос-11е-ОН и Ршос-Туг(1Ви)-ОН.

МС (М+Н+): ожидаемое значение 954,0; наблюдаемое значение 954,4.

Пример 19.

Использовали следующие аминокислоты: Ршос-О1у-ОН, Ршос-А1а-ОН, Ршос-Заг-ОН, Ршос-(8)-2амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ршос-Азп(Тг1)-ОН, Ршос-С1п(Тг1)ОН, Ршос-11е-ОН и Ршос-Туг(1Ви)-ОН.

МС (М+Н+): ожидаемое значение 938,0; наблюдаемое значение 938,4.

Пример 20.

Использовали следующие аминокислоты: Ршос-О1у-ОН, Ршос-Иар(ВОС)-ОН, Ршос-Заг-ОН, Ршос(8)-2-амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ршос-Азп(Тг1)-ОН, РшосС1п(Тг1)-ОН, Ршос-11е-ОН и Ршос-Туг(1Ви)-ОН.

МС (М+Н+): ожидаемое значение 953,0; наблюдаемое значение 953,4.

Использовали следующие аминокислоты: Ршос-О1у-ОН, Ршос-СНд-ОН, Ршос-Заг-ОН, Ршос-(8)-2амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ршос-Азп(Тг1)-ОН, Ршос-С1п(Тг1)ОН, Ршос-11е-ОН и Ршос-Туг(1Ви)-ОН.

- 13 030296

Пример 22.

Использовали следующие аминокислоты: Ртос-О1у-ОН, Ртос-а-МеЬеи-ОН, Ртос-5аг-ОН, Ртос(5)-2-амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ртос-Л8п(Тг1)-ОН, РтосО1п(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН и Ртос-Туг(1Ви)-ОН.

Пример 23.

Использовали следующие аминокислоты: Ртос-О1у-ОН, Ртос-Ьеи-ОН, Ртос-Ыуа-ОН, Ртос-(5)-2амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ртос-Л8п(Тг1)-ОН, Ртос-О1п(Тг1)ОН, Ртос-11е-ОН и Ртос-Туг(1Ви)-ОН.

МС (М+Н+): ожидаемое значение 1008,1; наблюдаемое значение 1008,4.

Пример 24.

Использовали следующие аминокислоты: Ртос-О1у-ОН, Ртос-Ьеи-ОН, Ртос-Ы1е-ОН Ртос-(5)-2амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ртос-Л8п(Тг1)-ОН, Ртос-О1п(Тг1)ОН, Ртос-11е-ОН и Ртос-Туг(1Ви)-ОН.

МС (М+Н⁺): ожидаемое значение 1022,2; наблюдаемое значение 1022,4.

Пример 25.

Использовали следующие аминокислоты: Ртос-О1у-ОН, Ртос-Ьеи-ОН, Ртос-5ег(1Ви)-ОН Ртос(5)-2-амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ртос-Л8п(Тг1)-ОН, РтосО1п(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН и Ртос-Туг(1Ви)-ОН.

МС (М+Н⁺): ожидаемое значение 996,1; наблюдаемое значение 996,3.

Использовали следующие аминокислоты: Ртос-О1у-ОН, Ртос-Ьеи-ОН, Ртос-Рото5ег(1Ви)-ОН, Ртос-(5)-2-амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ртос-Л8п(Тг1)-ОН,

- 14 030296

Ртос-С1п(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН и Ртос-Туг(1Ви)-ОН.

МС (М+Н+): ожидаемое значение 1010,1; наблюдаемое значение 1010,4. Пример 27.

Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-Ьеи-ОН, Ртос-Сус1оргорС1у-ОН, Ртос-(5)-2-амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ртос-Азп(Тг1)-ОН, Ртос-С1п(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН и Ртос-Туг(1Ви)-ОН.

Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-а-МеЬеи-ОН, Ртос-Сус1оргорС1уОН, Ртос-(5)-2-амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ртос-Азп(Тг1)-ОН, Ртос-С1п(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН и Ртос-Туг(1Ви)-ОН.

МС (М+Н+): ожидаемое значение 1020,1; наблюдаемое значение 1020,5.

Пример 29.

Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-Уа1-ОН, Ртос-Сус1оргорС1у-ОН, Ртос-(5)-2-амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ртос-Азп(Тг1)-ОН, Ртос-С1п(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН и Ртос-Туг(1Ви)-ОН.

Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-А1Ь-ОН, Ртос-Сус1оргорС1у-ОН, Ртос-(5)-2-амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ртос-Азп(Тг1)-ОН, Ртос-С1п(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН и Ртос-Туг(1Ви)-ОН.

МС (М+Н+): ожидаемое значение 978,1; наблюдаемое значение 978,5.

- 15 030296

Пример 31.

Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Сус1оргорС1у-ОН, Ртос-(3)-2-амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ртос-Азп(Тг1)-ОН, Ртос-С1п(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН и Ртос-Туг(1Ви)-ОН.

Пример 32.

Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-Сйд-ОН, Ртос-Сус1оргорС1у-ОН, Ртос-(3)-2-амино-4-(2-трет-бутоксикарбонилэтансульфонил)бутановую кислоту, Ртос-Азп(Тг1)-ОН, Ртос-С1п(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН и Ртос-Туг(1Ви)-ОН.

МС (М+Н+): ожидаемое значение 1032,2; наблюдаемое значение 1032,4.

Материалы и методы.

Получение культуры клеток и стабильного клона.

Клетки яичников китайского хомячка (СНО-клетки; от англ. СЫпезе Натз1ег Оуагу) трансфицировали экспрессирующими плазмидами, кодирующими рецепторы У1а человека, рецепторы окситоцина (ОТК; от англ. оху!осте гесер!ог) или рецепторы У2 человека, последние в комбинации с химерным Сбелком Θς§5 для перенаправления сигнала на поток кальция. Стабильные клетки клонировали посредством ограниченного разведения с получением моноклональных клеточных линий, экспрессирующих У1а рецептор человека, У2+Сц85 человека или ОТК человека и производили селекцию на основании функциональных реакций, обнаруживаемых с помощью спектрофотометра для чтения планшетов посредством визуализации флуоресценции (РЫРК; от англ. Йиоготе1пс 1тадтд р1а!е геайег), который выявляет поток кальция в клетку после активации рецепторов. Стабильные клеточные линии выращивали в питательной смеси Р-12 К (в модификации по КащЬп), содержавшей 10% эмбриональной телячьей сыворотки (РВЗ; 1е1а1 Ъоуте зегит), 1% пенициллина-стрептомицина, 1% Б-глутамата, 200 мкг/мл Генетицина, при 37°С в инкубаторе, содержавшем 10% СО₂, при 95% влажности.

Анализ потока кальция с использованием флуоресцентной визуализации (Р1иоготе1пс 1тадтд Р1а1е Кеайег, РЫРК).

Во второй половине дня, предшествовавшего анализу, клетки засеяли с плотностью 50000 клеток/лунку в черные 96-луночные планшеты с прозрачным дном лунок, позволявшим инспекцию клеток и измерения флуоресценции через дно каждой ячейки. Плотность клеток была достаточной для получения на следующий день сплошного монослоя. Для каждого эксперимента готовили свежий сбалансированный солевой раствор Хэнкса без фенолового красного, содержавший 20 мМ НЕРЕЗ (рН 7,3) и 2,5 мМ пробенецида (буфер для анализа). Разведения исследованных соединений в буфере для анализа, содержавшем 1% ИМЗО (диметилсульфоксида; от англ. й1те1йуБи1рйох1йе), приготовили с использованием лабораторной автоматической установки Весктап Вютек 2000. Буфер с красителем содержал конечную концентрацию Р1ио-4-АМ, равную 2 мкМ (растворенного в ИМЗО и плюрониловой кислоты), в буфере для анализа. Культуральную среду, имевшуюся в лунках, удалили из лунок и в каждую лунку добавили буфер, содержащий краситель, и инкубировали в течение 60 мин при 37°С в инкубаторе, содержавшем 5% СО2, при 95%-ной влажности. После нагрузки красителем клетки тщательно промыли буфером для анализа в промывателе клеток ЕтЪ1а для удаления не вошедшего в клетки красителя. В каждой лунке оставили ровно 100 мкл буфера для анализа.

Каждый 96-луночный планшет, содержавший нагруженные красителем клетки, поместили в аппарат РЫРК и установили уровень интенсивности лазерного излучения, подходящий для выявления базового уровня флуоресценции. Для испытания соединений в качестве агонистов, 25 мкл разбавленного соединения добавили в планшет через 10 с после начала измерений флуоресценции и измерили реакцию флуоресценции в течение 5 мин. Данные по флуоресценции нормировали по кривой "доза-эффект" для эндогенного полного агониста, где 100% соответствовало максимальной реакции, а 0% - минимальной

- 16 030296

реакции. Кривые "доза-эффект" для каждого агониста построили с использованием четырехфакторного логистического уравнения в программе ΜίοτοδοΓΐ Ехсе1 ХЬЕД следующим образом: У=минимум+((максимум-минимум)/(1+10^{(1одЕС50-Х)пН})), где у - % нормализованной флуоресценции, минимум - минимальное значение у, 1одЕС₅₀ - логарифм по основанию 10 концентрации, которая вызывает 50% от максимальной индуцированной флуоресценции, X - логарифм по основанию 10 концентрации соединения-агониста и Н - наклон кривой (коэффициент Хилла). Максимальное значение показывает эффективность исследуемого соединения-агониста в процентах. Концентрация агониста, которая вызывает реакцию, равную половине максимальной, обозначают как значение ЕС50, логарифм которого дает значение рЕС₅₀.

Для конкретных пептидов можно привести следующие значения ЕС₅₀ (нМ) и эффективности (%), совместно со сравнительными данными для НУ1а и НУ₂:

Пример	МОТ ЕС₅₀(нМ)/ эффективность (%)	ГЛ/1а ЕС₅₀ (нМ)	ИУ2 ЕС₅₀ (нМ)/ эффективность (%)	Пример	йот ес₅₀ (нМ)/ эффективность (%)	ГЛ/1а ЕС₅₀ (нМ) / эффективность (%)	ИУ2 ЕС₅₀ (нМ) эффективность (%)
1	0,8/120	1633	2982/101	18	3,3/102
2	0,8/107	>27000	3984/86	19	1,4/110
3	1,7/144			20	12,9/113
4	3,0/128			21	0,4/117
5	3,8/130			22	2,5/109
6	1,6/145			23	23/123
7	2,6/141			24	40/114
8	0,8/129			25	16/137
9	1,0/104			26	7/140
10	4,7/100			27	0,5/125	>27000	3730/110
11	1,4/115			28	0,7/105	>27000	9423/129
12	1.4/112			29	0,5/105		3344/143
13	1,1/117			30	1/97		6339/131
14	0,7/117			31	0,4/115		2942/150
15	1,0/107			32	0,26/120	2233/38	2365/155
16	5,6/104
17	2,2/105

Соединения формулы I и фармацевтически приемлемые соли соединений формулы I могут быть использованы в качестве лекарственных средств, например в форме фармацевтических препаратов. Фармацевтические препараты предпочтительно можно вводить трансдермально, интраназально, подкожно или внутривенно (в/в).

Трансдермальный путь введения - это путь введения, при котором активные ингредиенты доставляются через кожу для системного распределения. Примерами являются трансдермальные пластыри, используемые для доставки лекарственных средств, и трансдермальные имплантаты, используемые для лечебных или эстетических целей.

Назальное введение можно использовать для доставки лекарственных средств с целью получения местных или системных эффектов, широко распространены назальные спреи для достижения локальных эффектов. Пептидные лекарственные средства можно вводить в форме назальных спреев для предотвращения деградации лекарственных средств при оральном введении.

Подкожные инъекции также часто используют для введения пептидных лекарственных средств. Внутримышечная инъекция - это инъекция вещества прямо в мышцу. Это один из нескольких альтернативных способов введения лекарственных средств. Его часто используют для конкретных форм лекарственных средств, которые вводят в малых количествах. Инъекцию следует выполнять под кожу.

Внутривенным путем является инфузия жидких веществ прямо в вену. По сравнению с другими путями введения внутривенный путь является самым быстрым способом доставки текучих сред и лекарственных средств ко всему организму.

Кроме того, фармацевтические препараты могут содержать консерванты, солюбилизаторы, стабилизаторы, смачивающие агенты, эмульгаторы, подсластители, красители, вкусовые добавки, соли для регулирования осмотического давления, буферы, маскирующие средства или антиоксиданты. Они также могут содержать другие терапевтически значимые вещества.

Лекарственные средства, содержащие соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль и терапевтически инертный носитель, также являются задачей настоящего изобретения, как и способ их получения, который включает перевод одного или более соединений формулы I и/или его фармацевтически приемлемой соли присоединения кислоты и, необязательно, одного или более других

- 17 030296

терапевтически значимых веществ в галеновую форму введения совместно с одним или более терапевтически инертными носителями.

Наиболее предпочтительными показаниями по настоящему изобретению являются показания, которые включают заболевания центральной нервной системы, например лечение или профилактика аутизма, стресса, включая посттравматическое стрессовое расстройство, тревоги, включая тревожные расстройства и депрессию, шизофрении, психиатрических заболеваний и потери памяти, алкогольной абстиненции, лекарственной зависимости и лечение синдрома Прадера-Вилли.

Дозировка может варьироваться в широких пределах, и, конечно же, ее следует отрегулировать в соответствии с индивидуальными потребностями в каждом конкретном случае. Доза для взрослых может варьироваться от примерно 0,01 до примерно 1000 мг в день соединения с общей формулой I или соответствующего количества его фармацевтически приемлемой соли. Дневную дозу можно вводить в виде одной дозы или дробных доз, и, кроме того, верхняя граница также может быть превышена, если будет установлено, что это показано.

1. Соединение формулы

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

где К¹ является атомом водорода, С_1-7алкилом, -СН₂-С_3-6циклоалкильной группой или С_3-6циклоалкильной группой;

К² является атомом водорода, С_1-7алкилом, С_1-7алкилом, замещенным гидроксильной группой, или

К¹ и К² вместе с атомами N и С, к которым они присоединены, могут образовывать пирролидиновое кольцо, необязательно замещенное одним или двумя атомами Е или гидроксильной группой, или могут образовывать азетидиновое или пиперидиновое кольцо;

К³ является атомом водорода, С_1-7алкилом, С_1-7алкилом, замещенным гидроксильной группой, -(ΌΗ₂)_Ο-ΝΗ₂, бензильной группой, необязательно замещенной гидроксильной группой, фенильной группой, -СН2-С3-6циклоалкильной группой или С3-6циклоалкильной группой;

К³ является атомом водорода или С_1-7алкильной группой; η равно 1; т равно 0 или 1; о имеет значение от 1 до 4;

или его фармацевтически приемлемая соль присоединения кислоты, рацемическая смесь или соответствующий энантиомер и/или оптические изомеры.
2. Соединение формулы I по п.1, отличающееся тем, что т равно 1.
3. Соединение формулы I по п.1 или 2, отличающееся тем, что

К¹ является атомом водорода, С1-7лкилом, -СН2-С3-6циклоалкильной или С3-6циклоалкильной группой,

К² является атомом водорода, С_1-7алкилом, С_1-7алкилом, замещенным гидроксильной группой, а остальные обозначения являются такими, как указано в п.1.
4. Соединение формулы I по п.1 или 2, отличающееся тем, что К¹ и К² вместе с атомами N и С, к которым они присоединены, могут образовывать пирролидиновое кольцо, необязательно замещенное одним или двумя атомами Е или гидроксильной группой, или могут образовывать азетидиновое или пиперидиновое кольцо, а остальные обозначения являются такими, как указано в п.1.
5. Соединение формулы I, выбранное из

- 18 030296

- 19 030296

- 20 030296

- 21 030296
6. Фармацевтическая композиция, обладающая агонистической активностью в отношении рецептора окситоцина, содержащая соединение по любому из пп.1-5, а также фармацевтически приемлемый носитель и/или адъювант.
7. Применение фармацевтической композиции по п.6 для лечения аутизма, стресса, тревоги, депрессии, шизофрении, психиатрических заболеваний, потери памяти, алкогольной абстиненции, лекарственной зависимости и синдрома Прадера-Вилли.

- 22 030296
8. Применение соединения по любому из пп.1-5 в качестве агониста рецептора окситоцина.
9. Применение соединения по любому из пп.1-5 в качестве терапевтически активного вещества для лечения аутизма, стресса, тревоги, депрессии, шизофрении, психиатрических заболеваний, потери памяти, алкогольной абстиненции, лекарственной зависимости и синдрома Прадера-Вилли.
10. Применение соединения по любому из пп.1-5 для получения лекарственного средства для терапевтического и/или профилактического лечения аутизма, стресса, тревоги, депрессии, шизофрении, психиатрических заболеваний, потери памяти, алкогольной абстиненции, лекарственной зависимости и синдрома Прадера-Вилли.

4^)