EA029893B1 - Количественное определение примесей для промышленного тестирования пептидных продуктов - Google Patents

Количественное определение примесей для промышленного тестирования пептидных продуктов Download PDF

Info

Publication number
EA029893B1
EA029893B1 EA201491974A EA201491974A EA029893B1 EA 029893 B1 EA029893 B1 EA 029893B1 EA 201491974 A EA201491974 A EA 201491974A EA 201491974 A EA201491974 A EA 201491974A EA 029893 B1 EA029893 B1 EA 029893B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
composition
impurity
peptide product
peptide
sample
Prior art date
Application number
EA201491974A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201491974A1 (ru
Inventor
Мартин Фогель
Вернер Мюллер
Original Assignee
Санофи-Авентис Дойчланд Гмбх
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Санофи-Авентис Дойчланд Гмбх filed Critical Санофи-Авентис Дойчланд Гмбх
Publication of EA201491974A1 publication Critical patent/EA201491974A1/ru
Publication of EA029893B1 publication Critical patent/EA029893B1/ru

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
    • G01N33/6848—Methods of protein analysis involving mass spectrometry

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Изобретение относится к способу количественного определения примеси, присутствующей в пептидном продукте после синтеза, где примесь не может быть отделена от других примесей или основного продукта. Способ, в частности, включает применение детектирования с использованием масс-спектрометрии высокого разрешения (МС) с или без высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Способ может применяться для исследования качества пептидов и белков, в частности фармацевтических пептидов и белков.

Description

Изобретение относится к способу количественного определения примеси, присутствующей в пептидном продукте после синтеза, где примесь не может быть отделена от других примесей или основного продукта. Способ, в частности, включает применение детектирования с использованием масс-спектрометрии высокого разрешения (МС) с или без высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Способ может применяться для исследования качества пептидов и белков, в частности фармацевтических пептидов и белков.
029893
Изобретение относится к способу количественного определения примеси, присутствующей в пептидном продукте, в котором указанная примесь не может быть отделена от основного продукта и, необязательно, от других примесей. Способ, в частности, включает применение детектирования при помощи масс-спектрометрии высокого разрешения (МС) с использованием или без использования высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Способ может применяться для исследования качества пептидов и белков, в особенности фармацевтических пептидов и белков, и их составов.
С применением хорошо известных технологий рекомбинантных ДНК и химического твердофазного синтеза были синтезированы некоторые белки и пептиды для фармацевтического использования. Производство этих белков и пептидов, однако, часто приводит к множеству нежелательных побочных продуктов синтеза. В особенности это имеет место в случае, когда их производят путем твердофазного синтеза. При увеличении длины пептида/белка, приводящем к увеличению количества стадий синтеза, эти побочные продукты могут составлять 50-70% неочищенного продукта.
Таким образом, важной частью синтеза является очистка основного продукта от побочных продуктов синтеза. Эта очистка осуществляется, главным образом, при помощи хроматографических процедур. Для использования в фармацевтическом продукте в качестве активного ингредиента, конечный очищенный пептидный продукт необходимо проанализировать с точки зрения чистоты, что также делается в основном с помощью хроматографических процедур. Поскольку различия в молекулярной структуре требуемого пептидного продукта и нежелательных побочных продуктов синтеза часто являются очень незначительными при сравнении общей структуры, хроматографические свойства этих продуктов могут быть идентичными или почти идентичными. Это часто приводит к совместному элюированию этих примесей с другими примесями и собственно основным продуктом при процедуре хроматографического разделения.
Ье1Ь е! а1. ("Внес! ОиапОПсаПоп οί Рерййе М1х1иге8 χνίΐίκηιΐ 81апйагЙ8 Цзшд С1и81ег8 Тогшей Ьу Е1есйозргау 1ош7айоп Ма88 8рес1гоше1гу", ΆΝΆΙ.Υ'ΤΚ'ΆΙ. СНЕМ18ТКУ, т. 81, № 10, стр. 3965-3972) относится к способу прямого количественного определения количества пептидных смесей с использованием кластеров, образованных масс-спектрометрией с ионизацией электрораспылением (Е81-М8) без стандартов для определения примесей. Указанный способ описан для пяти различных пептидных смесей с относительными концентрациями в диапазоне от 0,05 до 50%, состоящих из лейцина/энкефалина, метионина/ энкефалина и брадикинина, фрагмента брадикинина 1-8 и фрагмента брадикинина 2-9.
В международной патентной заявке ^02012/012352 А2 раскрыты модифицированные пептиды или их аналоги, которые обеспечивают более высокую аффинность связывания с их мишенью, чем аффинность связывания немодифицированного пептида. Например, речь идет о соединениях с улучшенными свойствами по сравнению с энфурвитидом, пригодных для лечения ВИЧ и СПИД, или соединениях с улучшенными свойствами по сравнению с эксенатидом (экстендин-4) или даже ликсисенатидом, пригодных для лечения сахарного диабета II типа у субъектов, у которых диагностирован диабет, или для лечения индивидуумов с пред-диабетическим состоянием. Для производства таких пептидов раскрыты различные способы получения и очистки, включая масс-спектрометрию. Однако, ^02012/012352 А2 не обеспечивает способа, направленного на количественное определение примесей.
Разработка селективных аналитических способов является одним из ключевых аспектов для промышленного тестирования композиций пептидных продуктов, используемых в качестве фармацевтических соединений. Однако вследствие описанных выше причин даже значительные усилия не могут привести к отделению всех соответствующих примесей при помощи хроматографических методов. Таким образом, существует необходимость в создании новых способов определения количеств примесей в пептидных продуктах, в особенности количества примесей, которые не могут быть количественно отделены от требуемого основного продукта при помощи хроматографических методов.
Настоящее изобретение предоставляет способ количественного определения примесей в композициях пептидных продуктов, которые не могут быть отделены хроматографически от основного продукта или которые элюируются совместно с другими примесями или ингредиентами композиции. Этот способ проиллюстрирован в качестве примера для пептида ликсисенатида (ЛУЕ0010), агониста ОЬР-1, имеющего 44 аминокислот в длину. Последовательность аминокислот ликсисенатида показана в 8Е0 ГО N0:1:
Н-С-Е-С-Т-Г-Т-3-О-Ъ-3-К-0-М-Е-Е-Е-А-У-К-Ъ-Г-1-Е-И-Ъ-К-Ы-С<3-ρ-3-3-<3-α-ρ-ρ-3-κ-κ-κ-κ-κ-κ-νη2
Ликсисенатид продуцируют методом химического твердофазного синтеза. С использованием процедур хроматографической очистки большинство примесей могут быть отделены от требуемого основного продукта.
Но, тем не менее, две примеси, 01-8ег(33)-АУЕ0010 и 01-А1а(35)-АУЕ0010, не могут быть разделены хроматографическими методами. Аминокислотные последовательности этих примесей представляют собой следующее:
- 1 029893
ϋί-Зег (33)-АУЕООЮ (ЗЕО Ю N0:2):
Н-С-Е-С-Т-Е-Т-3-О-Ь-3-К-0-М-Е-Е-Е-А-У-Н-Ь-Е-1-Е-И-Ь-К-Ы-СΟ-Ρ-3-3-3-Ο-Α-Ρ-Ρ-3-Κ-Κ-Κ-Κ-Κ-Κ-ΝΗ2,
О1-А1а (35)-АУЕООЮ (ЗЕО Ю N0:3):
Н-С-Е-С-Т-Е-Т-3-О-Ь-3-К-0-М-Е-Е-Е-А-У-Н-Ь-Е-1-Е-И-Ь-К-Н-СΟ-Ρ-3-3-Ο-Α-Α-Ρ-Ρ-3-Κ-Κ-Κ-Κ-Κ-Κ-ΝΗ2 .
Поскольку ликсисенатид используется в качестве фармацевтического препарата, в частности, при лечении пациентов с сахарным диабетом, присутствие и количество описанных выше примесей должны определяться для того, чтобы обеспечить серийный выпуск. Авторы настоящего изобретения в настоящее время обнаружили, что количественное определение описанных выше примесей может быть достигнуто при использовании процедур масс-спектрометрии высокого разрешения, с или без предварительной хроматографии.
Предметом настоящего изобретения является способ количественного определения примеси, присутствующей в композиции пептидного продукта, включающий стадии:
(a) предоставления композиции пептидного продукта, содержащей пептидный продукт и неизвестное количество, по меньшей мере, одной примеси, где указанная примесь не может быть отделена от пептидного продукта или другого ингредиента композиции с помощью хроматографической процедуры;
(b) предоставления, по меньшей мере, одного образца указанной композиции пептидного продукта без указанной добавленной примеси и необязательно, по меньшей мере, другого образца указанной композиции с известным количеством указанной добавленной примеси;
(c) количественного определения указанной примеси в указанном по меньшей мере одном образце стадии (Ь) при помощи масс-спектрометрии и
(ά) расчета количества указанной примеси в указанной композиции пептидного продукта на основании результатов (с).
Еще одним предметом настоящего изобретения является способ количественного определения примеси, присутствующей в композиции пептидного продукта, включающий стадии:
(a) предоставления композиции пептидного продукта, содержащей пептидный продукт и неизвестное количество, по меньшей мере, одной примеси, где указанная примесь не может быть отделена от пептидного продукта или другого ингредиента указанной композиции при помощи хроматографической процедуры;
(b) предоставления, по меньшей мере, трех образцов указанной композиции пептидного продукта, где первый образец содержит композицию пептидного продукта без указанной добавленной примеси, и где, по меньшей мере, два дополнительных образца содержат композицию пептидного продукта, каждый с различным известным количеством указанной добавленной примеси;
(c) количественного определения указанной примеси в указанных по меньшей мере трех образцах со стадии (Ь) методом масс-спектрометрии и
(ά) расчета количества указанной примеси в композиции пептидного продукта на основании результатов (с).
Еще одним предметом настоящего изобретения является набор реагентов для определения количества примесей в композиции продукта ликсисенатида (АУЕ0010), включающий:
(ί) по меньшей мере один препарат 01-8ег(33)-АУЕ0010 и/или (ίί), по меньшей мере, один исходный препарат 01-А1а(35)-АУЕ0010.
Еще одним предметом настоящего изобретения является способ контроля качества композиции, содержащей пептидный продукт эксендин, включающий аминокислотную последовательность δ-δ-0-Л, предпочтительно композиции, содержащей продукт ликсисенатид (АУЕ0010), включающий количественное определение количества )О1-8ег(33) -пептида, например, )01-8ег(33)-АУЕ0010, и/или )О1-А1а(35)пептида, например, )01-А1а(35)-АУЕ0010, в указанной композиции.
Настоящее изобретение относится к определению примеси, присутствующей в композиции пептидного продукта. Термин "пептидный продукт" включает пептиды и белки, имеющие длину по меньшей мере 5 или по меньшей мере 10 аминокислот и до 50 или до 100 аминокислот или даже больше. Пептидный продукт может состоять из генетически кодируемых аминокислотных структурных блоков или может содержать генетически некодируемые аминокислотные структурные блоки, например, не встречающиеся в природе аминокислоты, Ό-аминокислоты или химически модифицированные аминокислоты, или может состоять из нескольких пептидных цепей, связанных, например, дисульфидными мостиками. Пептидный продукт может дополнительно содержать модификации на Ν- и/или С-конце, и/или в боковых цепях, например, ацилирование, амидирование или добавление групп непептидных боковых цепей, таких как липофильные группы. Пептидный продукт может быть линейным или циклическим. Предпочтительно пептидный продукт имеет длину от 5 до 100 аминокислот.
Синтез пептидного продукта может включать процессы на основе рекомбинантных ДНК и/или процессы химического синтеза. Предпочтительно, пептидный продукт синтезирован химически, в част- 2 029893
ности, путем твердофазного синтеза, который хорошо известен в данной области техники, например, предусматривающего ступенчатое удлинение пептидной цепи, соединенной с носителем, например, синтетической смолой. В предпочтительном варианте осуществления изобретения пептидный продукт представляет собой пептид эксендин, например, эксендин-4, лираглютид или ликсисенатид (ЛУЕ0010). Другими примерами пептидных продуктов являются инсулины и аналоги инсулина или ингибиторы ΌΡΡ-4. Более предпочтительно, пептидный продукт представляет собой пептид эксендин, например, пептид эксендин, включающий аминокислотную последовательность δ-δ-0-Л, наиболее предпочтительно ликсисенатид (ЛУЕ0010).
Способ по настоящему изобретению включает количественное определение примеси, присутствующей в пептидном продукте после синтеза, например, после его синтеза методом твердофазного синтеза или в качестве продукта деградации после хранения. Примесь, как правило, представляет собой пептидную примесь, например, пептид, который отличается от требуемого основного пептидного продукта, по меньшей мере, одним аминокислотным структурным элементом и/или химической модификацией. Например, примесь может представлять собой пептид, который отличается от требуемого пептидного продукта по меньшей мере одним структурным элементом димерных аминокислот, т.е. структурным элементом Όί-серином или Όί-аланином. В случае пептида эксендина, например, пептида эксендина, включающего аминокислотную последовательность δ-δ-0-Л, примесь может представлять собой, например, пептид НЕ§ег(33)-эксендин, пептид Н1-Л1а(35)-эксендин или их комбинации. В случае ликсисенатида, примесь может представлять собой, например, Н1-8ег(33)-ЛУЕ0010, Н1-Л1а(35)-ЛУЕ0010 или их комбинации.
Способ по настоящему изобретению включает количественное определение по меньшей мере одной примеси в композиции пептидного продукта. Композиция пептидного продукта содержит по меньшей мере один пептидный продукт и по меньшей мере одну примесь, которую нужно определить. Далее, композиция может включать другие ингредиенты, например пептидные ингредиенты или ингредиенты, отличные от пептидных, включая другие примеси.
Композиция пептидного продукта может представлять собой, например, фармацевтический состав или композицию, предназначенную для производства фармацевтического состава, например, синтезированную партию пептидного продукта.
В способе по настоящему изобретению пептидный продукт содержит неизвестное количество по меньшей мере одной примеси, которая не может быть количественно отделена от пептидного продукта с помощью хроматографической процедуры или которая элюируется совместно с другими примесями и ингредиентами, присутствующими в образце пептидного продукта. В некоторых случаях композиция пептидного продукта содержит неизвестные количества одной примеси. В других случаях композиция пептидного продукта содержит неизвестные количества по меньшей мере двух, например, 2, 3, 4, 5 или даже больше примесей, которые не могут быть количественно отделены от пептидного продукта с помощью хроматографии или которые элюируются совместно с другими примесями и ингредиентами, присутствующими в образце пептидного продукта. Предпочтительно по меньшей мере одна примесь не может быть количественно отделена от пептидного продукта.
Термин "хроматографическая процедура" включает хроматографическую процедуру, пригодную для очистки пептидных продуктов, включая, например, ионообменную хроматографию, хроматографию гидрофобного взаимодействия, аффинную хроматографию, эксклюзионную хроматографию и особенно высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ), и, в частности, ВЭЖХ с обращенной фазой или комбинацию нескольких процедур.
Примесь, которая определяется способом по настоящему изобретению, не может быть количественно отделена от пептидного продукта или других ингредиентов композиции. Это означает, что примесь элюируется совместно или по существу элюируется совместно с требуемым пептидным продуктом или с другими примесями или ингредиентами после процедуры хроматографического разделения, особенно после процедуры хроматографического разделения, как описано выше, таким образом, что количественное определение оптическими методами, например, УФ-детектирование или детектирование по флуоресценции, не представляется возможным. Это означает, что примесь не может быть отделена от требуемого пептидного продукта или других ингредиентов, включая примеси, при помощи разумных усилий, и его количественная величина в данной партии композиции пептидного продукта должна быть количественно определена способом по настоящему изобретению.
Стадия (а) способа по изобретению включает предоставление композиции пептидного продукта, содержащей неизвестное количество по меньшей мере одной примеси, где примесь не может быть отделена от пептидного продукта или другого ингредиента композиции путем хроматографической процедуры, как описано выше. Пептидный продукт может представлять собой, например, продукт для фармацевтических применений, например, для применения в качестве лекарственного средства в медицине или ветеринарии.
Стадия (Ь) способа по изобретению включает предоставление по меньшей мере одного образца указанной композиции пептидного продукта без добавленной примеси и необязательно, по меньшей мере, еще одного дополнительного образца указанной композиции пептидного продукта с известным количе- 3 029893
ством добавленной примеси. В предпочтительном варианте осуществления стадия (Ь) включает предоставление по меньшей мере трех образцов указанной композиции пептидного продукта, где первый образец содержит композицию пептидного продукта без добавленной примеси и где по меньшей мере два дополнительных образца включают композицию пептидного продукта, и каждый из этих образцов дополнительно содержит различное известное количество добавленной примеси.
По меньшей мере один образец представляет собой образец, который включает композицию пептидного продукта без добавленной примеси, т.е. неконтрольный образец, содержащий неизвестное количество примеси, которую нужно определить. В дополнение к этому образцу может быть предоставлен по меньшей мере один, например по меньшей мере два, три или четыре дополнительных образца, которые представляют собой контрольные образцы, содержащие композицию пептидного продукта с неизвестным количеством примеси, и дополнительно с различными известными количествами добавленной примеси, которые нужно определить. Эти контрольные образцы могут быть подготовлены путем добавления примеси к неконтрольным образцам композиции пептидного продукта из исходного препарата примеси, предпочтительно по меньшей мере из двух исходных препаратов, содержащих различные концентрации указанной примеси. Исходные препараты могут находиться в любой подходящей форме, например, препараты в сухом или жидком виде. Предпочтительно исходные препараты представляют собой исходные растворы.
Тестируемые образцы содержат пептидный продукт с неизвестным количеством примеси, которое нужно определить, и необязательно, добавленную примесь. Эти вещества присутствуют в концентрациях, которые позволяют выполнять анализ методом масс-спектрометрии. Концентрация пептидного продукта может в значительной степени варьировать. Она может находиться, например, в диапазоне от 0,001 до 50 мг/мл, предпочтительно от 0,01 до 10 мг/мл и более, предпочтительно от 0,02 до 5,0 мг/мл, например, примерно 1,0 мг/мл. В контрольных образцах количество добавленной примеси находится предпочтительно в диапазоне от 0,1 до 5%, предпочтительно от 0,1 до 2%, в зависимости от концентрации пептидного продукта в образце.
В предпочтительном варианте осуществления способ по изобретению включает тестирование неконтрольного образца пептидного продукта вместе по меньшей мере с одним, предпочтительно по меньшей мере двумя, тремя, четырьмя или даже больше образцами пептидных продуктов, содержащими, по меньшей мере, одну примесь. В другом варианте осуществления способ по изобретению включает тестирование только неконтрольного образца пептидного продукта. Неизвестное количество примеси, присутствующее в неконтрольном образце, может быть определено путем контрольных определений контрольных образцов и/или путем сравнения измеренного значения примеси в неконтрольном образце при сравнении, например, со стандартной или калибровочной кривой.
Стадия (с) способа по изобретению включает количественное определение указанной примеси в указанном по меньшей мере одном образце со стадии (Ь) с помощью масс-спектрометрии высокого разрешения. В дополнение к масс-спектрометрии, определение может включать предварительную хроматографическую процедуру, например, для отделения других примесей от пептидных продуктов или других ингредиентов композиции. Предпочтительно масс-спектрометрию комбинируют с ВЭЖХ. Каждый образец может быть подвергнут нескольким индивидуальным определениям в целях повышения точности измерения.
Масс-спектрометрия основана на определении соотношения массы к заряду заряженных частиц. В обычной процедуре масс-спектрометрии образец загружают в прибор для масс-спектрометрии и испаряют. Компоненты образца ионизируют, и образовавшиеся ионы разделяют в масс-анализаторе при помощи электромагнитных полей. Полученные ионы детектируют, и сигнал процессируется в масс-спектр. Для ионизации пептидных продуктов можно использовать ионизацию электрораспылением (ΕδΙ) и лазерную десорбцию/ионизацию (ΜΆΣΌΙ). Полученные ионы можно детектировать высокочувствительными методами, такими как системы детекции ОтЬйтар или ионного циклотронного резонанса (1СК) с преобразованием Фурье (РТ).
В соответствии со стадией (с) по меньшей мере один пик, ассоциированный с примесью, которую нужно определить, анализируют методом масс-спектрометрии. Этот пик может быть получен либо из деконволюционного или недеконволюционного масс-спектра. Предпочтительно способ включает определение одного или нескольких моноизотопных пиков, ассоциированных с примесью, которую нужно определить. В случае примеси Όί-δοτ(33)-ΆνΕ0010, можно использовать четырехкратно заряженный пик недеконволюционного масс-спектра, например, в 1237.1529 Да или деконволюционного масс-спектра в 4944.5822 Да. В случае примеси 0ί-Λ1α(35)-ΛνΕ0010. можно анализировать четырехкратно заряженный пик недеконволюционного масс-спектра в 1233.1550 Да или деконволюционного масс-спектра в 4928.5908 Да.
По меньшей мере один пик для анализа может быть выявлен в масс-спектре примеси с использованием настроек высокого разрешения и высокочувствительного детектирования, как описано выше.
Стадия (й) включает подсчет количества примеси в композиции пептидного продукта на основании результатов масс-спектрометрического анализа. В предпочтительном варианте осуществления расчет осуществляют способом, включающим регрессионный анализ, в частности, линейный регрессионный
- 4 029893
анализ. Регрессионный анализ может включать образование кривой, например, прямой линии, от измеренных значений примеси по меньшей мере в двух контрольных образцах, т.е. образцах, содержащих пептидный продукт с неизвестным количеством примеси и содержащих два различных известных добавленных количеств примесей (или от исходных значений таких образцов, которые были генерированы в стандартных и калибровочных определениях). В эту кривую, например прямую линию, вставляют измеренное значение примеси в неконтрольном образце, обеспечивая тем самым количественное определение неизвестного количества примеси, присутствующей в этом образце.
Предпочтительно, расчет осуществляют в соответствии с линейным уравнением прямой линии: у=ах+Ъ,
где у соответствует определенной площади пика примеси в образце (либо в контрольном, либо в неконтрольном образце), х соответствует известному добавленному количеству примеси в контрольном образце, а представляет собой наклон прямой линии, и Ь представляет собой точку пересечения с осью ординат, которая соответствует измеренному сигналу примеси в образце без добавленной примеси (х=0). Количественное количество примеси в неконтрольном образце χ может быть получено с использованием полученных параметров регрессии следующим образом:
хь=Ь · а-1
Изобретение также включает набор реагентов для определения количества примесей в продукте ликсисенатид, который содержит по меньшей мере один исходный препарат 0|-8сг(33)-ЛУЕ0010 и/или 0|-Л1а(35)-ЛУЕ0010 и, необязательно, дополнительные реагенты, такие как растворители, буферы и др. Набор реагентов может быть использован в способе контроля качества продукта ликсисенатида для количественного определения количества О1-8сг(33)-ЛУЕ0010 и/или 0|-Л1а(35)-ЛУЕ0010 в указанном продукте ликсисенатиде. Предпочтительно количественное определение проводят в соответствии с массспектрометрическим методом, например, масс-спектрометрическим методом, как описано выше.
Настоящее изобретение поясняется более подробно следующими фигурами и примерами.
Пояснения к фигурам:
на фиг. 1 показано совместное элюирование пиков ликсисенатида (АУЕ0010), 0|-8сг(33)-ЛУЕ0010 и П1-А1а(35)-АУЕ0010 в ВЭЖХ-хроматограмме;
на фиг. 2 показан масс-спектр четырехкратно заряженных молекулярных ионов АУЕ0010 и примесей П1-8ег(33)-АУЕ0010 и П1-А1а (35)-АУЕ0010;
на фиг. 3 показано сравнение масс-спектров неконтрольного и контрольного (1% каждой примеси) препаратов АУЕ0010;
на фиг. 4 показан развернутый вид массового диапазона П1-8ег(33)-АУЕ0010 при значениях разрешения 60000 и 100000, соответственно, при т/ζ 400, и теоретически рассчитанный профиль наложенных типов;
на фиг. 5 показаны деконволюционные масс-спектры с теоретически рассчитанными структурами наложенных типов;
на фиг. 6 показан развернутый вид примесного пика, используемого для количественного определения П1-8ег(33)-АУЕ0010;
на фиг. 7 показана извлеченная одноионная хроматограмма четырехкратно заряженного изотопа ΌίА1а(35)-АУЕ0010 и Όί-Зег (33)-АУ0010 в тестируемом образце в качестве недеконволюционного массспектра;
на фиг. 8 показана извлеченная одноионная хроматограмма П1-А1а(35)-АУЕ0010 и О|-5ег(33)АУ0010 в тестируемом образце в качестве деконволюционного масс-спектра;
на фиг. 9 показан пример расчета концентрации указанной примеси ^^-Л1а(35)-АУЕ0010 в тестируемом образце.
Примеры
Аналитическая процедура для количественного определения ди-8ег(33)-ликсисенатида и ΌίА1а(35)-ликсисенатида методом ВЭЖХ/масс-спектрометрии.
1. Материалы и способы.
1.1 Контрольные материалы.
Контрольный материал ликсисенатид (АУЕ0010); произведенный путем твердофазного синтеза, с последующей очисткой.
Контрольный материал П1-8ег(33)-АУЕ0010; произведенный способом твердофазного синтеза со стадиями двойного присоединения защищенной аминокислоты серина в положении 33, с последующей очисткой.
Контрольный материал ^^-Л1а(35)-АУЕ0010; произведенный способом твердофазного синтеза со стадиями двойного присоединения защищенной аминокислоты аланина в положении 35, с последующей очисткой.
Препарат неконтрольного образца ликсисенатида (содержащего неизвестные количества примесей П1-8ег(33)-АУЕ0010 и О1-А1а (35)-АУЕ0010) получали в концентрации 1,0 мг ликсисенатида/мл.
Четыре препарата контрольных образцов для каждой из примесей получали путем включения 0,2, 0,4, 0,6 и 0,8% по массе примесей П1-8ег(33)-АУЕ0010 или П1-А1а(35)-АУЕ0010, соответственно, в пре- 5 029893
парат образца с 1,0 мг ликсисенатида/мл.
1.2. Аналитические условия.
Использовали систему градиентной высокоэффективной жидкостной хроматографии, состоящую из двойного ВЭЖХ-насоса, автодозатора, колонной печи и масс-спектрометра высокого разрешения, например, ЬТР-ОгЪйтар (ТйегтоПзйег) с разрешением 100000 (при т/ζ 400) или эквивалентного.
Хроматографию проводили с использованием аналитической ВЭЖХ-колонки С18 с обращенной фазой (ЛырПег С18 3 мкм 300А) длиной 150 мм и внутренним диаметром 2,0 мм.
Подвижная фаза А состояла из 850 объемных частей воды, 150 объемных частей ацетонитрила и 1 объемной части трифторуксусной кислоты. Подвижная фаза В состояла из 250 объемных частей воды, 750 объемных частей ацетонитрила и одной объемной части трифторуксусной кислоты.
Г радиент настраивали следующим образом:_
Время [минуты] Подвижная фаза А [%] Подвижная фаза В [%]
0,00 77,5 22,5
17,50 28,0 72,0
17,51 77,5 22,5
26,00 77,5 22,5
Масс-спектрометр функционировал в режиме положительной ионизации электрораспылением и сканировал таким образом, чтобы измерять ионные сигналы аналитов, которые нужно определить.
Условия тестирования были следующими:
Скорость тока: 0,25 мл/мин.
Впрыскиваемый объем: 10 мкл.
Температура автодозатора: установка температуры автодозатора при +10°С±2°С.
Температура колонки: установка температуры печи при + 25°С±2°С.
Метод ионизации: ΕδΙ положительный.
Определение/
детектирование: ΙΤΜ5: режим: положительный
диапазон
масс: 7000-20000
РТМЗ : режим: положительный
диапазон масс
(5ΙΜ) 12320-12390
разрешение: 100000
Отклоняющий
клапан: потеря: 0-1,5 мин
инъекция: 1,5, 2,2, 5,5
мин
Общая сканограмма ΡϋΑ (УФ), необязательно
Процедура была основана на способах, описанных в Рй. Еиг 7.0 (2011) (2.2.43 Мазз δресΐ^отеΐ^у) и υδΡ 34 (2011) (<736> Мазз δресΐ^отеΐ^у).
1.3. Интеграция.
Определения выполняли либо по деконволюционным масс-спектрам или недеконволюционным масс-спектрам четырехкратно заряженных ионов [М+4Н+]4+.
После выбора точной массы отдельного изотопного пика диаграммы:
a) с использованием четырехкратно заряженного пика недеконволюционных масс-спектров:
^^δе^(33)-ΑVΕ0010: например, 1237.1529 Да;
ΌίΑ1α(35)-ΑνΕ0010: например, 1233.1550 Да; или
b) с использованием деконволюционных масс-спектров:
^^δе^(33)-ΑVΕ0010: например, 4944.5822 Да;
ΌίΑ1α(35)-ΑνΕ0010: например, 4928.5908 Да,
представляли извлеченные ионные хроматограммы. Был извлечен только представляющий интерес изотоп. Пики из извлеченных ионных хроматограмм интегрировали.
2. Результаты.
На фиг. 1 показано совместное элюирование пиков для ликсисенатида и примесей ϋϊ-Α1α(35)ΑνΕ0010 и ^^-δе^(33)-ΑVΕ0010 в ВЭЖХ-хроматограмме. Из-за этих перекрываний в хроматографических пиках Όί-Α1α(35)-ΑνΕ0010 и ^^-δе^(33)-ΑVΕ0010 составляют примеси, которые не могут быть количественно отделены от требуемого пептидного продукта ΑνΕ0010 с помощью хроматографической процедуры.
Для разработки способа были приняты во внимание некоторые специфические особенности массспектрометрии. Масс-спектр ликсисенатида показывает, кроме того, многократно протонированные частицы, как правило, образующие кластеры с катионами, которые распространены по всему раствору, например, натрий или калий. На фиг. 2 показан спектральный раздел четырехкратно заряженных ионов ΑνΕ0010, который перекрывается с масс-спектрами примесей и тем самым скрывает аналит.
- 6 029893
На фиг. 3 образец ЛУЕ0010 с содержанием 1% двух примесей сравнивается с неконтрольным образцом, содержащим еще небольшое количество примесей. В развернутом виде врезки можно видеть, что там может иметь место перекрывание молекулярных профилей с выделенными кластерами. В случае 0|-8ег(33)-АУЕ0010 увеличение массы относительно ликсисенатида составляет 87 Да. С другой стороны, ликсисенатид может ассоциироваться с 4 ионами натрия, что приводит к массовому сдвигу в 88 Да. Эти два профиля перекрываются и должны быть отделены масс-спектрометрически, в противном случае, примесь О1-8ег-АУ0010 не может быть точно количественно определена.
Как видно на фиг. 4, перекрывающиеся пики не были разделены при разрешении 60000, и только при разрешении 100000. В нижней части фиг. 4 показан теоретический спектр перекрывания 0Е8егАУЕ0010 с натриевым кластером ликсисенатида. Такие высокие разрешения предпочтительно достигаются при помощи масс-спектрометрии с преобразованием Фурье, или РТ-1СК или, как используется в настоящем описании, при помощи масс-спектрометра РТ-ОтЪйтар.
После деконволюции и центроидирования спектров, эти две разновидности могут быть разделены масс-спектроскопически, см. фиг. 5.
На фиг. 6 были добавлены все измеренные индивидуальные масс-спектры полного хроматографического пика. Массовый пик, используемый для измерения П1-8ет(33)-АУЕ0010, представлен в развернутом виде. Он находится на достаточном удалении от пика, соответствующего натриевому кластеру АУЕ0010, для обеспечения точного измерения. Все массовые пики аналита попадают в узкое окно масс, показывающего массовую стабильность прибора, хорошо отделенное от какого-либо интерферирующего пика. Поэтому этот способ подходит для точного определения количеств П1-8ет(33)-АУЕ0010 и ΌίА1а(35)-АУЕ0010 в пептидном продукте ликсисенатида.
Извлеченные ионные хроматограммы четырехкратно заряженного изотопа 0|-А1а(35)-АУЕ0010 и 0|-8ег(33)-АУ0010 в тестируемом образце показаны в виде недеконволюционных масс-спектров на фиг. 7 и деконволюционных масс-спектров на фиг. 8.
Количество 0|-8ег(33)-АУЕ0010 и Э|-А1а(35)-АУЕ0010 может быть вычислено путем линейного регрессионного анализа. С помощью отдельного впрыска контрольных и неконтрольных тестируемых растворов кривая регрессии может быть построена в соответствии с уравнением:
а = наклон;
у = площадь пика тестируемых растворов (неконтрольные и контрольные тестируемые растворы); х = добавленное количество О1-8ег(33)-АУЕ0010 или Э|-А1а(35)-АУЕ0010 в тестируемых растворах
(неконтрольные и контрольные тестируемые растворы);
Ъ = отсекаемый отрезок на оси ординат.
Концентрация х4 П1-8ет(33)-АУЕ0010 и Э|-А1а(35)-АУЕ0010 в тестируемом образце может быть рассчитана с помощью параметров регрессии, полученных следующим образом:
На фиг. 9 показан пример расчета концентрации Э|-А1а(35)-АУЕ0010 в тестируемом образце.
Окончательный результат определяется как среднее арифметическое всех индивидуальных определений, выраженное в процентах ликсисенатида. В конкретном случае, среднее значение примеси ΌίА1а(35)-АУЕ0010 в образце было определено как 0,4260%, исходя из количества ликсисенатида.

Claims (16)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Способ количественного определения примеси, присутствующей в композиции пептидного продукта, включающий стадии:
    (a) предоставление композиции пептидного продукта, содержащей пептидный продукт, который представляет собой пептидный продукт эксендин, содержащий аминокислотную последовательность 8-8-О-А и неизвестное количество по меньшей мере одной примеси, которая представляет собой О|-8ег(33)-пептид и/или О|-А1а(35)-пептид. где указанная примесь не может быть отделена от пептидного продукта или другого ингредиента композиции при помощи хроматографической процедуры, и где указанная примесь совместно элюируется или, по существу, совместно элюируется с требуемым пептидным продуктом после процедуры хроматографического разделения;
    (b) предоставление по меньшей мере одного образца указанной композиции пептидного продукта и по меньшей мере одного дополнительного образца, который представляет собой контрольный образец, содержащий образец указанной композиции пептидного продукта с неизвестным количеством примеси и дополнительно с известным количеством добавленной примеси;
    (c) количественное определение указанной примеси в указанном по меньшей мере одном образце со стадии (Ъ) методом масс-спектрометрии и
    (б) расчет количества указанной примеси в композиции пептидного продукта на основании результатов (с).
  2. 2. Способ количественного определения примеси, присутствующей в композиции пептидного продукта, включающий стадии:
    - 7 029893
    (a) предоставление композиции пептидного продукта, содержащей пептидный продукт, который представляет собой пептидный продукт эксендин, содержащий аминокислотную последовательность δ-δ-Ο-А и неизвестное количество по меньшей мере одной примеси, которая представляет собой О1^ег(33)-пептид и/или О1-А1а(35)-пептид, где указанная примесь не может быть отделена от пептидного продукта или другого ингредиента композиции путем хроматографической процедуры,
    (b) предоставление по меньшей мере трех образцов указанной композиции пептидного продукта, где первый образец содержит композицию пептидного продукта и где по меньшей мере два дополнительных образца представляют собой контрольные образцы, содержащие образец указанной композиции пептидного продукта и дополнительно различные известные количества добавленной примеси,
    (c) количественное определение указанной примеси в указанных образцах со стадии (Ь) методом масс-спектрометрии и
    (й) расчет количества указанной примеси в композиции пептидного продукта на основании результатов (с).
  3. 3. Способ по п. 1 или 2, где пептидный продукт имеет длину от 5 до 100 аминокислот.
  4. 4. Способ по любому из пп.1-3, где пептидный продукт был химически синтезирован, в частности, путем процедуры твердофазного синтеза или получен методами рекомбинантных ДНК.
  5. 5. Способ по любому из пп.1-4, где композиция пептидного продукта представляет собой фармацевтический состав или композицию, предназначенную для производства фармацевтического состава.
  6. 6. Способ по любому из пп.1-5, где пептидный продукт эксендин представляет собой ликсисенатид (АУЕ0010).
  7. 7. Способ по любому из пп.1-6, где примесь не может быть количественно отделена от пептидного продукта или другого ингредиента композиции с помощью процедуры ВЭЖХ, в частности с помощью процедуры ВЭЖХ с обращенной фазой.
  8. 8. Способ по любому из пп.1-7, где пептидный продукт содержит неизвестные количества по меньшей мере 2 примесей, которые не могут быть количественно отделены от пептидного продукта или от другого ингредиента композиции с помощью хроматографической процедуры.
  9. 9. Способ по любому из пп.1-8, где примесь добавляют по меньшей мере к одному образцу композиции пептидного продукта из исходного препарата, предпочтительно по меньшей мере из двух исходных препаратов, содержащих различные концентрации указанной примеси.
  10. 10. Способ по любому из пп.1-9, где обеспечивают по меньшей мере 3 или 4 дополнительных образца с различными известными количествами добавленной примеси и подвергают массспектрометрическому определению.
  11. 11. Способ по любому из пп.1-10, где масс-спектрометрия представляет собой масс-спектрометрию высокого разрешения, например, с использованием масс-спектрометрии с преобразованием Фурье.
  12. 12. Способ по любому из пп.1-11, где расчет включает линейный регрессионный анализ.
  13. 13. Способ по п.12, где расчет проводят в соответствии с уравнением:
    у=ах+Ь,
    где а - наклон;
    у - определенная площадь пика примеси в образце; х - добавленное количество примеси в образце;
    Ь - отсекаемый отрезок на оси ординат;
    и неизвестное количество примеси х4 получают следующим образом:
    Х=Ь а-1.
  14. 14. Набор реагентов для определения количества примесей в композиции продукта ликсисенатида (АУЕ0010), включающий:
    (ΐ) по меньшей мере один исходный препарат 01^ег(33)-АУЕ0010 (δΕΡ ΙΌ N0:2):
    Н-е-Е-С-Т-Г-Т-5-В-Ъ-5-К-а-М-Е-Е-Е-А-У-Н-Ъ-Г-1-Е-№-Ь-К-Ы-СС-Р-З-З-З-С-А-Р-Р-З-К-К-К-К-К-К-ЫНг,
    и/или
    (ίί) по меньшей мере один исходный препарат 01-А1а(35)-АУЕ0010 (δΕΟ ΙΌ N0:3):
    Н-С-Е-С-Т-Е-Т-3-О-Ъ-3-К-<2-М-Е-Е-Е-А-У-К-Ъ-Е-1-Е-И-Ъ-К-М-С<3-ρ-3-3-<3-α-α-ρ-ρ-3-κ-κ-κ-κ-κ-κ-νη2 .
  15. 15. Способ контроля качества композиции, содержащей пептидный продукт эксендин, включающий аминокислотную последовательность δ-δ-Ο-А, предпочтительно композиции, содержащей продукт ликсисенатид (АУЕ0010), где способ включает количественное определение количества О1^ег(33)-пептида, например 01^ег(33)-АУЕ0010, и/или О1-А1а(35)-пептида, например 01-А1а(35)-АУЕ0010, в указанной композиции.
  16. 16. Способ по п.15, где количественное определение осуществляют согласно способу по любому из пп.1-13.
    - 8 029893
EA201491974A 2012-04-27 2013-04-25 Количественное определение примесей для промышленного тестирования пептидных продуктов EA029893B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/EP2012/057771 WO2013182217A1 (en) 2012-04-27 2012-04-27 Quantification of impurities for release testing of peptide products
PCT/EP2013/058619 WO2013160397A1 (en) 2012-04-27 2013-04-25 Quantification of impurities for release testing of peptide products

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201491974A1 EA201491974A1 (ru) 2015-02-27
EA029893B1 true EA029893B1 (ru) 2018-05-31

Family

ID=48227257

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201491974A EA029893B1 (ru) 2012-04-27 2013-04-25 Количественное определение примесей для промышленного тестирования пептидных продуктов

Country Status (16)

Country Link
JP (1) JP6121522B2 (ru)
KR (1) KR102071737B1 (ru)
CN (1) CN104246508B (ru)
AR (1) AR090842A1 (ru)
AU (1) AU2013254728B2 (ru)
BR (1) BR112014026613B1 (ru)
CA (1) CA2869041C (ru)
DK (1) DK2841950T3 (ru)
EA (1) EA029893B1 (ru)
ES (1) ES2702712T3 (ru)
HU (1) HUE042296T2 (ru)
IL (1) IL234914A (ru)
MX (1) MX353306B (ru)
SG (1) SG11201406094XA (ru)
TW (1) TWI589874B (ru)
WO (2) WO2013182217A1 (ru)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UA116217C2 (uk) 2012-10-09 2018-02-26 Санофі Пептидна сполука як подвійний агоніст рецепторів glp1-1 та глюкагону
AR094180A1 (es) 2012-12-21 2015-07-15 Sanofi Sa Derivados de exendina-4
EP3080152A1 (en) 2013-12-13 2016-10-19 Sanofi Non-acylated exendin-4 peptide analogues
EP3080149A1 (en) 2013-12-13 2016-10-19 Sanofi Dual glp-1/glucagon receptor agonists
EP3080150B1 (en) 2013-12-13 2018-08-01 Sanofi Exendin-4 peptide analogues as dual glp-1/gip receptor agonists
WO2015086729A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Dual glp-1/gip receptor agonists
TW201625669A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自艾塞那肽－４（Ｅｘｅｎｄｉｎ－４）之肽類雙重ＧＬＰ－１／升糖素受體促效劑
TW201625668A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 作為胜肽性雙重ｇｌｐ－１／昇糖素受體激動劑之艾塞那肽－４衍生物
TW201625670A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自ｅｘｅｎｄｉｎ－４之雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑
US9932381B2 (en) 2014-06-18 2018-04-03 Sanofi Exendin-4 derivatives as selective glucagon receptor agonists
CN104211801A (zh) * 2014-07-25 2014-12-17 杭州诺泰制药技术有限公司 一种制备利西拉来的方法
CN106153748B (zh) * 2015-03-31 2019-02-22 深圳翰宇药业股份有限公司 一种检测多肽中n,n-二异丙基碳二亚胺的方法
AR105319A1 (es) 2015-06-05 2017-09-27 Sanofi Sa Profármacos que comprenden un conjugado agonista dual de glp-1 / glucagón conector ácido hialurónico
AR105284A1 (es) 2015-07-10 2017-09-20 Sanofi Sa Derivados de exendina-4 como agonistas peptídicos duales específicos de los receptores de glp-1 / glucagón
JP6505268B1 (ja) * 2018-01-11 2019-04-24 株式会社日立ハイテクサイエンス 質量分析装置及び質量分析方法
TW202045927A (zh) * 2019-02-27 2020-12-16 法商賽諾菲公司 以具內標之lc-ms於樣品中進行聚山梨醇酯定量之方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012012352A2 (en) * 2010-07-19 2012-01-26 Amidebio, Llc Modified peptides and proteins

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ512663A (en) * 1999-01-14 2004-05-28 Amylin Pharmaceuticals Inc Novel exendin agonist formulations and methods of administration thereof
US6451611B1 (en) * 2000-07-28 2002-09-17 Statens Serum Institute Quantitative analysis of hexose-monophosphates from biological samples
US7427675B2 (en) * 2004-08-23 2008-09-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for the characterization of oligonucleotides
DE102004043153B4 (de) * 2004-09-03 2013-11-21 Philipps-Universität Marburg Erfindung betreffend GLP-1 und Exendin

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012012352A2 (en) * 2010-07-19 2012-01-26 Amidebio, Llc Modified peptides and proteins

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GYGI S P, RIST B, GERBER S A, TURECEK F, GELB M H, AEBERSOLD R: "Quantitative analysis of complex protein mixtures using isotope-coded affinity tags.", NATURE BIOTECHNOLOGY, GALE GROUP INC., vol. 17, no. 10, 1 October 1999 (1999-10-01), pages 994 - 999, XP002173335, ISSN: 1087-0156, DOI: 10.1038/13690 *
HONGWEI XIE, MARTIN GILAR, JOHN C. GEBLER: "Characterization of Protein Impurities and Site-Specific Modifications Using Peptide Mapping with Liquid Chromatography and Data Independent Acquisition Mass Spectrometry", ANALYTICAL CHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, vol. 81, no. 14, 15 July 2009 (2009-07-15), pages 5699 - 5708, XP055048315, ISSN: 00032700, DOI: 10.1021/ac900468j *
RYAN D. LEIB, TAWNYA G. FLICK, EVAN R. WILLIAMS: "Direct Quantitation of Peptide Mixtures without Standards Using Clusters Formed by Electrospray Ionization Mass Spectrometry", ANALYTICAL CHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, vol. 81, no. 10, 15 May 2009 (2009-05-15), pages 3965 - 3972, XP055048311, ISSN: 00032700, DOI: 10.1021/ac900294r *

Also Published As

Publication number Publication date
BR112014026613B1 (pt) 2021-12-21
SG11201406094XA (en) 2014-10-30
TWI589874B (zh) 2017-07-01
MX353306B (es) 2018-01-08
TW201348701A (zh) 2013-12-01
CA2869041C (en) 2021-05-04
KR102071737B1 (ko) 2020-01-30
ES2702712T3 (es) 2019-03-05
WO2013182217A1 (en) 2013-12-12
WO2013160397A1 (en) 2013-10-31
HUE042296T2 (hu) 2019-06-28
DK2841950T3 (en) 2019-01-14
AU2013254728A1 (en) 2014-11-20
JP2015515004A (ja) 2015-05-21
AU2013254728B2 (en) 2018-04-12
AR090842A1 (es) 2014-12-10
CA2869041A1 (en) 2013-10-31
MX2014012826A (es) 2015-11-13
JP6121522B2 (ja) 2017-04-26
CN104246508A (zh) 2014-12-24
BR112014026613A2 (pt) 2017-07-18
KR20150003794A (ko) 2015-01-09
EA201491974A1 (ru) 2015-02-27
IL234914A (en) 2017-12-31
CN104246508B (zh) 2016-06-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA029893B1 (ru) Количественное определение примесей для промышленного тестирования пептидных продуктов
US8901484B2 (en) Quantification of impurities for release testing of peptide products
EP1750126B1 (en) Method and apparatus for analyzing aminofunctional compound
Patel Matrix effect in a view of LC-MS/MS: an overview
PT2098859E (pt) Método para quantificação de péptido e proteína
Hopfgartner et al. Analysis of biopharmaceutical proteins in biological matrices by LC-MS/MS II. LC-MS/MS analysis
Esposito et al. An efficient liquid chromatography-high resolution mass spectrometry approach for the optimization of the metabolic stability of therapeutic peptides
Eyers et al. QCAL—a novel standard for assessing instrument conditions for proteome analysis
Thevis et al. Mass spectrometric identification of peptide hormones in doping-control analysis
CN105092733B (zh) Lc‑ms测试物中不挥发性缓冲盐含量的降低方法和装置
EP1666884A1 (en) Method for determination of arginine, methylated arginines and derivatives thereof
EP2841950B1 (en) Quantification of impurities for release testing of peptide products
Zhu et al. Quantification of recombinant human relaxin-2 (B-29/A-24) in non-pregnant rat plasma using ultra performance liquid chromatography-mass spectrometry
Tanaka et al. Development of a highly sensitive methodology for quantitative determination of fexofenadine in a microdose study by multiple injection method using ultra-high performance liquid chromatography with tandem mass spectrometry
Zeng et al. Impurity characterization and quantification by liquid chromatography–high-resolution mass spectrometry
Tanaka et al. Development of a novel high-throughput analytical methodology, multiple injection method, for quantitative analysis in drug metabolism and pharmacokinetic studies using liquid chromatography with tandem mass spectrometry
Logerot et al. Revealing C-terminal peptide amidation by the use of the survival yield technique
CN104991028B (zh) Lc‑ms测试物中不挥发性缓冲盐含量的降低方法
Michalet et al. Profiling and in vivo quantification of proteins by high resolution mass spectrometry: the example of goserelin, an analogue of luteinizing hormone-releasing hormone
Alarcón-Flores et al. Rapid determination of underivatized amino acids in fertilizers by ultra high performance liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry
Ozdanovac et al. N-Terminal Derivatization of Peptides with 4'-Formylbenzo-18-crown-6-ether for Protein and Species Identification
EP4145134A1 (en) Methods for quantification of amyloid beta peptides in plasma by mass spectrometry
Vij Exploring the Benefits of Trimethylation Enhancement using Diazomthane (TrEnDi) in Mass Spectropmetry-Based Phosphoproteomics
Gowri et al. A Glimpse into Peptidomic Approach
Zhu et al. Quantification of a novel anti-breast cancer cyclic peptide (AFPep) in serum using liquid chromatography coupled with mass spectrometry and its application in a pharmacokinetic study

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KG TJ TM