EA029321B1 - Антитело, фармацевтическая композиция и способ предупреждения или лечения инфекции мутантным вирусом гепатита b - Google Patents

Антитело, фармацевтическая композиция и способ предупреждения или лечения инфекции мутантным вирусом гепатита b Download PDF

Info

Publication number
EA029321B1
EA029321B1 EA201500114A EA201500114A EA029321B1 EA 029321 B1 EA029321 B1 EA 029321B1 EA 201500114 A EA201500114 A EA 201500114A EA 201500114 A EA201500114 A EA 201500114A EA 029321 B1 EA029321 B1 EA 029321B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
antibody
hepatitis
run
virus
tkg
Prior art date
Application number
EA201500114A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201500114A1 (ru
Inventor
Се-Хо Ким
Кван-Вон Хон
Вон-Вон Син
Ки Хван Чан
Original Assignee
Грин Кросс Корпорейшн
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Грин Кросс Корпорейшн filed Critical Грин Кросс Корпорейшн
Publication of EA201500114A1 publication Critical patent/EA201500114A1/ru
Publication of EA029321B1 publication Critical patent/EA029321B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/081—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from DNA viruses
    • C07K16/082—Hepadnaviridae, e.g. hepatitis B virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/42—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum viral
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Изобретение предусматривает антитело для предупреждения или лечения инфекции вирусом гепатита В (HBV), имеющим G145R-мутацию поверхностного антигена HBV (HBsAg) или YMDD-мутацию (тирозин-метионин-аспартат-аспартат) ДНК-полимеразы HBV, содержащее вариабельную область тяжелой цепи (V), имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, и вариабельную область легкой цепи (V), имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7. Мутантный вирус гепатита В (HBV) резистентен к ламивудину, адефовир дипивоксилу или HBIG (иммуноглобулин гепатита В). Изобретение также предусматривает фармацевтическую композицию для предупреждения или лечения инфекции вирусом гепатита В (HBV), имеющим G145R-мутацию поверхностного антигена HBV (HBsAg) или YMDD-мутацию (тирозин-метионин-аспартат-аспартат) ДНК-полимеразы HBV, содержащую предложенное антитело в качестве активного ингредиента и один или несколько агентов, выбранных из группы, состоящей из носителей, вспомогательных веществ и разбавителей. Изобретение также предусматривает способ предупреждения или лечения инфекции вирусом гепатита В (HBV), имеющим G145R-мутацию поверхностного антигена HBV (HBsAg) или YMDD-мутацию (тирозин-метионин-аспартат-аспартат) ДНК-полимеразы HBV, включающий введение млекопитающему предложенной фармацевтической композиции в дозе 0,001-10 мг/кг.

Description

изобретение относится к антителу, фармацевтической композиции и способу предупреждения или лечения заболевания, вызванного мутантным вирусом гепатита В, которая содержит в качестве активного ингредиента нейтрализующее антитело против мутантного вируса гепатита В (НВУ) человека, на который типичный ингибитор вирусной репликации (например, ламивудин или адефовир дипивоксил) или выделенный из плазмы НВЮ (иммуноглобулин против гепатита В) не действует или с которым не связывается.
Сведения о предшествующем уровне техники
Вирус гепатита В (НВУ) представляет собой вирус с ДНК-геномом, который принадлежит семейству Нсрабпаутбас и вызывает острый и хронический гепатит. Вирус гепатита В (НВУ) подразделяется на восемь генотипов, имеющих различие, составляющее примерно 8% или более, в нуклеотидной последовательности гена, или подразделяется на четыре серотипа аб\у. абг. ау\у и ауг на основе двух антигенных детерминант (ά/у и те/г) поверхностного антигена вируса гепатита В (НВкЛд). Около 350 млн человек по всему миру имеют хроническую инфекцию вирусом гепатита В (НВУ) и, в частности, в Корее и Китае количество людей с хронической инфекцией вирусом гепатита В достигает примерно 5-8%, и инфекция вирусом гепатита В (НВУ) является основной причиной заболевания печени и рака печени. Разработанные в настоящее время вакцины могут быть в некоторой степени эффективными в отношении предупреждения инфекции вирусом гепатита В, но все еще существует значительное число пациентов с хронической инфекцией вирусом гепатита В. Хроническая инфекция вирусом гепатита В (НВУ) вызывает гепатит, цирроз и рак печени, и частота рака печени примерно в 300 раз выше у людей с хроническим вирусным гепатитом В, чем у неинфицированных людей. В соответствии с докладом ВОЗ около 80% рака печени вызвано хроническим гепатитом В.
Известные в настоящее время терапевтические агенты против гепатита В включают аналоги нуклеозидов, в том числе ламивудин и адефовир дипивоксил, которые ингибируют репликацию ДНК вируса гепатита В (НВУ) путем ингибирования обратной транскриптазы полимеразы вируса гепатита В (НВУполимеразы). Однако когда эти лекарственные средства вводят в течение 3 лет, примерно у 75% пациентов появляется вирус, резистентный к лекарственному средству, что уменьшает терапевтическое действие лекарственного средства. Из-за этой проблемы невозможно лечить инфекцию вирусом гепатита В путем применения только ингибиторов вирусной репликации. По этой причине предпринимались попытки применения этих ингибиторов в сочетании с содержащими интерферон агентами, но эти ингибиторы в настоящее время не применяются из-за серьезных побочных эффектов.
С аналогичной целью рассматривали возможность применения препарата иммуноглобулина против гепатита В (НВЮ), содержащего антитело к вирусу гепатита В (НВУ), изолированное из крови, имеющей высокий титр антител. Однако, так как антитело препарата НВЮ изолировано и очищено из плазмы, имеются проблемы, включая трудности, связанные с получением плазмы, вероятность вирусной инфекции, низкую активность, высокие затраты и т.п.
В последние годы появлялись сообщения о мутантных вирусах, способных избегать такие антитела, например о мутанте, имеющем замену глицина на аргинин в положении 145 поверхностного белка вируса гепатита В (НВУ). Кроме того, появились разнообразные мутанты, способные избегать антител. По этой причине типичным терапевтическим агентам против вируса гепатита В трудно проявить удовлетворительные терапевтические эффекты.
Таким образом, имеется острая необходимость в разработке антитела для лечения вируса гепатита В (НВУ), которое специфически связывается с эпитопом вируса гепатита В (НВУ), в котором не возникает мутации, для того чтобы терапевтический эффект антитела не уменьшался под ее воздействием.
Сущность изобретения
Первый аспект настоящего изобретения предусматривает антитело для предупреждения или лечения инфекции вирусом гепатита В (НВУ), имеющим О145К-мутацию поверхностного антигена НВУ (НВкЛд) или ΥΜΌΌ-мутацию (тирозин-метионин-аспартат-аспартат) ДНК-полимеразы НВУ, содержащее вариабельную область тяжелой цепи (Ун), имеющую аминокислотную последовательность 8ЕО ГО N0: 2, и вариабельную область легкой цепи (Уь), имеющую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 7. Согласно изобретению мутантный вирус гепатита В (НВУ) резистентен к ламивудину, адефовир дипивоксилу или НВЮ (иммуноглобулин гепатита В).
Второй аспект настоящего изобретения предусматривает фармацевтическую композицию для предупреждения или лечения инфекции вирусом гепатита В (НВУ), имеющим О145К-мутацию поверхностного антигена НВУ (НВкЛд) или ΥΜΌΌ-мутацию (тирозин-метионин-аспартат-аспартат) ДНКполимеразы НВУ, содержащую предложенное антитело в качестве активного ингредиента и один или несколько агентов, выбранных из группы, состоящей из носителей, вспомогательных веществ и разбавителей. Согласно изобретению предложенная композиция содержит антитело в концентрации 0,1-50 мг/мл. Предложенная композиция может быть изготовлена в виде таблетки, пилюли, порошка, саше, эликсира, суспензии, эмульсии, раствора, сиропа, аэрозоля, мягкой или твердой желатиновой капсулы, стерильного инъекционного раствора и стерильного упакованного порошка.
Третий аспект настоящего изобретения предусматривает способ предупреждения или лечения ин- 1 029321
фекции вирусом гепатита В (ИВУ), имеющим С145Р-мутацию поверхностного антигена НВУ (НВкАд) или ΎΜΌΌ-мутацию (тирозин-метионин-аспартат-аспартат) ДНК-полимеразы НВУ, включающий введение млекопитающему предложенной фармацевтической композиции в дозе 0,001-10 мг/кг.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 представлена диаграмма, показывающая НВУ-нейтрализующую активность антитела по настоящему изобретению у шимпанзе.
На фиг. 2 представлены фотографии (см. фиг. 2а и 2с) и график (см. фиг. 2Ь), представляющие результаты анализа методом иммунопреципитации, проводимого для исследования, связывается ли антитело по настоящему изобретению с НВУ крови пациентов с гепатитом В.
На фиг. 2(а) 1: 0,1 мкг антитела по настоящему изобретению, 2: 0,5 мкг антитела по настоящему изобретению, 3: 1 мкг антитела по настоящему изобретению, 4: 5 мкг антитела по настоящему изобретению, и 5: фосфатно-солевой буфер (РВ§).
На фиг. 2(с) 1: РВ§, 2: обработано 1 мкг человеческого антитела к столбнячному анатоксину (ТТЕ9), 3: обработано 1 мкг НераЫд, 4: обработано 1 мкг гуманизированного антитела против поверхностного антигена вируса гепатита В (Ни8 10), и 5: обработано 1 мкг антитела по настоящему изобретению.
На фиг. 3 представлен набор фотографий, показывающих результаты анализа методом иммуногистохимического окрашивания, проводимого для исследования, связываются ли антитела с человеческой тканью печени, инфицированной НВУ. В частности, на фиг. 3(а) представлена фотография, показывающая, что антитело по настоящему изобретению прочно связывается с НВУ-инфицированной тканью печени человека, и на фиг. 3(Ь) представлена фотография, показывающая, что антитело отрицательного изотипипического контроля не связывается с этой же самой тканью.
На фиг. 4 показана генетическая карта вируса гепатита В (НВУ). Плазмиду рНВУ1.3-МВК1 конструировали путем вставки 1,3-сложенной последовательности гена НВУ (подтип абг) (Сеие Вапк Ассекδΐοη Νο. ΌΟ683578) (ген НВУ от вышележащего энхансера I генома НУВ до нижележащего участка полиаденилирования) в сайт фермента рестрикции Рте1 ρεΌΝΑ3.1 (1пуйтодеп, США).
На фиг. 5 показаны результаты эксперимента, проводимого для исследования нейтрализующей активности антитела против С145Р-мутантного вируса с использованием гидродинамической мышиной модели, и показано, что поверхностный антиген и вирусные частицы НВУ дикого типа и С145Р-мутанта НВУ все были удалены из мышиной крови.
Наилучшее техническое выполнение изобретения
В дальнейшем в этом документе настоящее изобретение будет описано более подробно.
Настоящее изобретение относится к композиции антитела для предупреждения или лечения инфекции НВУ, имеющей С145Р-мутацию поверхностного антигена НВУ (НВкАд) или ΎΜΌΌ-мутацию (тирозин-метионин-аспартат-аспартат) ДНК-полимеразы НВУ, при этом указанная композиция содержит антитело, включающее
вариабельную область тяжелой цепи, содержащую любую аминокислотную последовательность, выбранную из последовательностей с 5>ЕС ΙΌ ΝΟ: 1 по 5>ЕС ΙΌ ΝΟ: 5; и
вариабельную область легкой цепи, содержащую любую аминокислотную последовательность, выбранную из последовательностей с 5>ЕС ΙΌ ΝΟ: 6 по 5>ЕС ΙΌ ΝΟ: 10.
Антитело по настоящему изобретению может представлять собой антитело против поверхностного антигена НВУ (НВкАд), имеющего С145Р-мутацию или мутацию в ΎΜΌΌ-мотиве ДНК-полимеразы, полученное из клеточной линии НВАЬ-49 (КСЬКЕ-ВР-00054). С145Р-мутация представляет собой замену глицина на аргинин в положении 145 поверхностного белка НВУ, с которым выделенный из плазмы НВ1С не связывается, и мотив ΎΜΌΌ расположен в С-концевой области гена ДНК-полимеразы вируса гепатита В и содержит замену метионина (М) на валин (У) или изолейцин (I) в положении 552 аминокислотной последовательности.
Композиция антитела применяется для предупреждения или лечения инфекции мутантным вирусом, резистентным к терапевтическому агенту против НВУ, такому как ламивудин или адефовир дипивоксил.
Кроме того, композиция антитела может дополнительно содержать противовирусный агент. Противовирусный агент предпочтительно представляет собой, но без ограничения, один или несколько агентов, выбранных из интерферона, анти-НВУ моноклональных антител, анти-НВУ поликлональных антител, аналогов нуклеозидов, ингибиторов ДНК-полимеразы и препаратов, содержащих δίΡΝΑ.
Композиция антитела предпочтительно содержит антитело при концентрации 0,1-50 мг/мл. В настоящем изобретении также предлагается фармацевтическая композиция, содержащая композицию антитела в качестве активного ингредиента. Фармацевтическую композицию предпочтительно вводят млекопитающему, включая человека, в дозе, составляющей 0,001-10 мг/кг (массы тела).
Фармацевтическая композиция может быть изготовлена в виде фармацевтической композиции в соответствии с любым стандартным способом. При изготовлении фармацевтической композиции антитело предпочтительно смешивают с носителем или разбавляют носителем, или заключают в носитель. В случае, когда носитель выполняет функции разбавителя, он может представлять собой твердый, полутвердый или жидкий материал, действующий в качестве носителя, вспомогательного вещества или среды
- 2 029321
для активного ингредиента. Таким образом, фармацевтические композиции могут быть представлены в форме таблетки, пилюли, порошка, саше, эликсира, суспензии, эмульсии, раствора, сиропа, аэрозоля, мягкой или твердой желатиновой капсулы, стерильного инъецируемого раствора, стерильного упакованного порошка и т.п.
Примеры подходящих носителей, вспомогательных веществ и разбавителей включают лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, крахмалы, аравийскую камедь, альгинаты, желатин, фосфат кальция, силикат кальция, целлюлозу, метилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, воду, метилгидроксибензоаты, пропилгидроксибензоаты, тальк, стеарат магния и минеральное масло. Фармацевтические композиции могут дополнительно включать наполнители, антиагглютинирующие средства, смазывающие агенты, смачивающие агенты, вкусовые агенты, эмульгаторы, консерванты и т.п. Композиции по изобретению могут быть формулированы в соответствии с любым способом, хорошо известным в данной области, таким образом, чтобы обеспечить быстрое, замедленное или отсроченное высвобождение активного ингредиента после их введения млекопитающему.
В эксперименте, выполняемом для демонстрации нейтрализующей НВУ активности антитела по настоящему изобретению с использованием шимпанзе, было показано, что шимпанзе не были инфицированы НВУ в течение одного года после введения смеси НВУ и антитела. Было показано, что у шимпанзе, используемых в контрольной группе, вирусная частица НВУ и поверхностный антиген продуцировались, и антитело против поверхностного антигена НВУ вырабатывалось во время стадии восстановления (см. фиг. 1).
Кроме того, с помощью анализа методом иммунопреципитации было показано, что антитело по настоящему изобретению обладает великолепной способностью связываться с НВУ крови пациента (см. фиг. 2). Кроме того, с помощью анализа методом иммуногистохимического окрашивания было показано, что антитело по настоящему изобретению прочно связывается с НВУ-инфицированной тканью печени человека (см. фиг. 3).
Антитело по настоящему изобретению может обладать способностью к связыванию и нейтрализации НВкАд антитело-резистентного и антитело-"убегающего" НВУ, который не может быть ингибирован типичным ингибитором вирусной репликации (ламивудин или адефовир дипивоксил) или выделенным из плазмы НВЮ. В примере по настоящему изобретению связывающую способность антитела исследовали с помощью ферментного иммуносорбентного анализа (ЕЫ§А) с использованием крови пациента, содержащей ΥΜΌΌ-мутантный вирус, имеющий ΥΜΌΌ-мутацию на обратной транскриптазе полимеразы вируса гепатита В, которая обладает резистентностью к ингибиторам вирусной репликации. В результате было показано, что антитело прочно связывается со всеми ΥΜΌΌ-мутантными вирусами (см. табл. 5 и 6).
Наиболее важной характеристикой антитела по настоящему изобретению является его способность связываться и нейтрализовать мутант, имеющий замену глицина на аргинин в положении 145 поверхностного белка НВУ, который не может быть нейтрализован выделенным из плазмы НВЮ. Для подтверждения этой способности мутантный вирус получали с использованием гидродинамической мышиной модели, и исследовали способность антитела нейтрализовать продуцированный мутантный вирус. В результате было показано, что НВкАд и НВУ в крови мышиной модели все были удалены (см. фиг. 5).
Было показано, что антитело по настоящему изобретению связывалось с вирусами гепатита В (НВУ) пациентов, которые рецидивировали после трансплантации печени, и что вирусы НВУ все были мутантами, имеющими замену глицина на аргинин в положении 145 поверхностного белка НВУ (см. табл. 8).
На основании описанных выше результатов можно предположить, что антитело по настоящему изобретению и композиция, содержащая антитело, могут эффективно применяться для предупреждения или лечения инфекции мутантным вирусом НВУ, обладающим резистентностью к типичным терапевтическим агентам. В частности, можно прийти к выводу о том, что антитело и композицию можно эффективно применять для предупреждения или лечения инфекции С145К-мутантом НВУ или мутантом в ΥΜΌΌ-мотиве НВУ.
Примеры
Далее настоящее изобретение будет описано более подробно с обращением к примерам. Для специалиста в данной области будет очевидно, что эти примеры приведены исключительно в иллюстративных целях и не должны рассматриваться как ограничивающие объем настоящего изобретения.
Пример 1. Эксперимент для оценки НВУ-нейтрализующей способности у шимпанзе.
Для исследования, обладает ли антитело по настоящему изобретению способностью нейтрализовать НВУ ίη νίνο, проводили следующий эксперимент.
НВУ 100 СГО50 (50% инфицирующие дозы для шимпанзе), полученные из Фонда исследования гепатита (Нераййк Кекеатей Роипбайоп, США), помещали в три пробирки. Антитело по настоящему изобретению, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 5>ЕС ГО N0: 2, и вариабельную область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 5>ЕС ГО N0: 7, добавляли в две из трех пробирок в количествах 0,1 и 10 мг соответственно, и в оставшуюся пробирку антитело не добавляли. Смесь в каждой пробирке доводили до объема 3 мл с помо- 3 029321
щью ΡΒδ-буфера (фосфатно-солевого буферного раствора), после чего смесь оставляли для реакции при 37°С на 1 ч, и затем при 4°С на ночь с последующим замораживанием жидким азотом, получая, таким образом, тестируемые материалы.
Для эксперимента на животных тестируемые материалы вводили внутривенно трем шимпанзе, соответственно, которые никогда не были инфицированы НВУ (см. табл. 1).
Таблица 1
Доза антитела, введенная каждому шимпанзе
Пол Возраст (лет) Вес (кг) Доза антитела
Контроля Шимпанзе 1 Мужской 4 12,2 -
Тестируемая группа 1 Шимпанзе 2 Мужской 4 11,6 0,1 мг
Тестируемая группа 2 Шимпанзе 3 Женский 4 10,8 10 мг
С интервалами в 1 неделю в течение периода от 1 недели после введения антитела до 8 недель после введения антитела и с интервалами в 2 недели после введения антитела собирали образцы крови у шимпанзе для измерения связанных с инфекцией НВУ показателей, включая ДНК НВУ, НВзЛд (поверхностный антиген НВУ), анти-НВз (антитело к поверхностному антигену НВУ), анти-НВс (антитело к коровому антигену), ЛЬТ (аланинаминотрансфераза), ΆδΤ (аспартатаминотрансфераза) и т.п. Кроме того, безопасность антитела ίη νίνο анализировали с помощью исследований крови и мочи.
Кроме того, у шимпанзе измеряли изменения ДНК НВУ, НВзЛд и анти-НВз, и результаты измерения показаны в графическом виде на фиг. 1.
Как показано в табл. 2, 3 и 4, НВУ-инфекцию наблюдали у шимпанзе 1, которого использовали в качестве контроля, тогда как у шимпанзе 2 и 3, которым вводили антитело вместе с НВУ, НВУ-инфекции не наблюдалось на протяжении периода проведения эксперимента. Указанные результаты показывают, что антитело по настоящему изобретению обладает великолепной способностью нейтрализовать НВУ. Кроме того, особых отклонений от нормы не наблюдалось при исследовании функции печени, в различных гематологических исследованиях, исследовании мочи и т.п., что дает основание предполагать, что антитело является безопасным ίη νίνο.
Таблица 2
Измерение показателей НВУ-инфекции (шимпанзе 1)
Время после введения АЬТ (в единицах δί) А8Т (в единицах δί) НВУ РСКЬоёю (ДНК моль/мл) ΗΒδΑΟ (ЕГА) АнтиΗΒδ (ΕΙΑ) АнтиНВс (ΕΙΑ)
До 1 недели 6 11 N
День введения 5 10 N
Через 1 неделю 15 13 N
Через 2 недели 6 16 N
Через 3 недели 8 22 N
Через 4 недели 2 6 N
Через 5 недель 6 11 N
Через 6 недель 5 12 N
Через 7 недель 6 20 N
Через 8 недель 7 18 N
Через 10 недель 8 18 2,21 .015(-)
Через 12 недель 10 23 2,43 •023(-)
Через 14 недель 13 25 3,24 .064(-)
Через 16 недель 12 18 3,47 .209(+)
Через 18 недель 8 20 4,10 .600(+) 1,004(-)
Через 20 недель 8 13 4,50 □2,000(+) 1,264(-)
Через 22 недели 10 12 4,82 □ 2,000(+) .056(-) 1,038(-)
Через 24 недели 15 18 N 0.03(-) .085(-) .0129(+)
Через 28 недель 23 22 N N □ 2,000(+) 0,156(+)
Через 32 недели 19 18 N N □ 2,000(+) 0,119(+)
Через 36 недель 21 19 N N □2,000(+) 0,061(+)
Через 40 недель 7 23 N
Через 44 недели 25,24 19 N .
Через 48 недель 19 16 N
Через 51 неделю 28,29 23 N
- 4 029321
Измерение показателей НВУ-инфекции (шимпанзе 2)
Таблица 3
Время после введения АЬТ (в единицах зГ) АЗТ (в единицах з!) НВУ РСКЬо&о (ДНК моль/мл) Анти-НВз (ΕΙΑ) Анти-НВс (ΕΙΑ)
До 1 недели 26 22 N
День введения 9 26, 25 N
Через 1 неделю 10 23 N
Через 2 недели 6 24 N
Через 3 недели 9 25 N
Через 4 недели 4 18 N (-)
Через 5 недель 9 37,37 N (-)
Через 6 недель 5 25 N (-)
Через 7 недель 5 9 N (-)
Через 8 недель 5 13 N (-)
Через 10 недели 8 17 N
Через 12 недель 14 21 N
Через 14 недель 17 23 N
Через 16 недель 15 19 N
Через 18 недель 22 16 N
Через 20 недель 20 16 N
Через 22 недели 13 19 N
Через 24 недели 24 22 N
Через 28 недель 28, 28 25 N
Через 32 недели 24 26 N
Через 36 недель 23 25 N
Через 40 недель 11 20 N
Через 44 недели 27, 27 17 N
Через 48 недель 18 13 N N
Через 51 неделю 30, 29 24 N N
Измерение показателей НВУ-инфекции (шимпанзе 3)
Таблица 4
Время после введения АЬТ (в единицах з1) А8Т (в единицах з£) НВУ РСК Ьо8ю (ДНК моль/мл) НВзАО (ΕΙΑ) АнтиНВз (ΕΙΑ) АнтиНВс (ΕΙΑ)
До 1 недели 5 18 N
День введения 11 22 N
Через 1 неделю 7 18 N
Через 2 недели 5 20 N
Через 3 недели 13 31,31 N
Через 4 недели 9 19 N 0 0
Через 5 недель 8 23 N (-) (-)
Через 6 недель 14 26 N (-) (-)
Через 7 недель 7 15 N 0 0
Через 8 недель 10 19 N 0 0
Через 10 недель 20 16 N
Через 12 недель 13 19 N
Через 14 недель 16 21 N
Через 16 недель 16 24 2.24*, Ν,Ν
Через 18 недель 21 24 N
Через 20 недель 14 22 N
Через 22 недели 16 19 N
Через 24 недели 21 17 N
Через 28 недель 18 21 N
Через 32 недели 23 16 N
Через 36 недель 22 17 N
Через 40 недель 16 23 N
Через 44 недели 24, 25 15 2.24*, Ν,Ν
Через 48 недель 20 19 N N
Через 51 неделю 28,31 22 N N
* граничное значение (+).
Пример 2. Исследование НВУ-связывающей способности антитела с помощью иммунопреципитации.
Исследовали способность антитела по настоящему изобретению, содержащего вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность ВЕС) ΙΌ N0: 2, и вариабельную область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность ВЕС) ΙΌ N0: 7, связываться с НВУ в крови пациента с гепатитом В (полученную от Л|ои ΙΕπνοιχΗν Всйоо1 о£ МеШсте), с помощью иммунопреципитации (см. фиг. 2).
(1) Приготовление крови пациента с гепатитом В.
1,000 мкл крови пациента с гепатитом В в 10-кратном разведении в 0,2% ВВЛ/РВВ-буфере оставляли для реакции с конъюгатом козий античеловеческий ΙμΟ (Рс-специфический) - агароза (Кезеагсй Ι)ίαμ- 5 029321
покйск 1пс., Р1апйетк, N1) для удаления иммуноглобулина из крови.
(2) Реакция связывания между антителом и конъюгатом козий античеловеческий 1дС - агароза.
10 мкл антитела по настоящему изобретению (0,1, 0,5, 1 и 5 мкг), раствор ΡΒδ и 50 мкл конъюгата козий античеловеческий 1дС - агароза (КекеагсЬ О1адпокйск) смешивали и оставляли для реакции при перемешивании при комнатной температуре на 1 ч, и затем добавляли 10 мг человеческого иммуноглобулина (Ι.ν.-глобулин δ, Отееп Сгокк), и оставляли для реакции при перемешивании при комнатной температуре на 1 ч для того, чтобы блокировать участок связывания конъюгата козий античеловеческий 1§О - агароза. Для сравнения, 1 мкг каждого из антител против ΗΒν, а именно, выделенного из крови (НераЬщ). ТТ-Р9 (человеческого антитела против столбнячного токсоида) и Ηυδ 10 (гуманизированного антитела против поверхностного антигена вируса гепатита В) использовали таким же способом, как указано выше.
(3) Реакция связывания между связанным антителом конъюгатом козий античеловеческий 1§О агароза и кровью пациента.
200 мкл крови, приготовленной в примере 2-(1), смешивали со связанным антителом конъюгатом козий античеловеческий 1§О - агароза, приготовленным в примере 2-(2), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч для обеспечения реакции с ΗΒν крови пациента.
(4) Исследование преципитации ΗΒν.
Реакционный раствор, полученный в примере 2-(3), центрифугировали и надосадочную жидкость собирали, и измеряли ΗΒν в надосадочной жидкости с помощью теста Атрйсот ΗΒν Μοηίΐοτ Тек! (ν2.0; КосЬе О1адпокйск, Βаκе1, δλνί^Γΐηπά).
Агарозу, оставшуюся после центрифугирования, промывали 10 раз 0,2% ΒδΑ/ΡΒδ-буфером и затем добавляли в 100 мкл этого же самого буфера, затем добавляли 5 мкл 10% δΌδ, 2 мкл 50 мМ ΕΌΤΑ и 200 мкг протеазы К ^1дта-А1йтюЬ), и оставляли для реакции при 55°С на 30 мин. Затем собирали надосадочную жидкость и ДНК изолировали с помощью набора ОМсцйск РСК рштйсайоп кй (О1адеп, ШМеп, Оеттапу), после чего ΗΒν-специфическую ДНК амплифицировали с помощью полимеразной цепной реакции (РСК) с использованием ΕκμιίΜίχ ΟΜ РСК ртет1х (№игойск, Когеа), праймера М3 (δΕΟ ΙΌ N0: 11) и праймера Р0Ь8 (δΕΟ ΙΌ N0: 12). В настоящем документе полимеразную цепную реакцию (РСК) выполняют при следующих условиях: начальная денатурация при 55°С в течение 5 мин и затем 35 циклов: при 95°С - 1 мин, при 55°С - 1 мин и при 72°С -1 мин, с последующим завершающим этапом элонгации при 72°С в течение 10 мин. Амплифицированную ДНК анализировали на 1,0% агарозном геле. В качестве контролей использовали гуманизированное антитело к ΗΒν и человеческое антитело к столбнячному токсоиду (Отееп Сгокк, Когеа). Результаты анализов показаны на фиг. 2.
Как показано на фиг. 2(а) и 2(Ь), объем преципитации ΗΒν увеличивался по мере увеличения количества антитела, используемого в реакции иммунопреципитации, и количество ΗΒν в надосадочной жидкости после реакции иммунопреципитации увеличивалось по мере уменьшения количества антитела. Также, объем преципитации ΗΒν увеличивался по мере увеличения количества антитела. Кроме того, как показано на фиг. 2(с), при использовании такого же количества антитела, антитело против ΗΒν (ΗераЬ^д), очищенное из крови, не осаждало ΗΒν из-за его низкой способности к связыванию с ΗΒν, тогда как антитело по настоящему изобретению осаждало ΗΒν за счет его высокой способности к связыванию с ΗΒν.
Пример 3. Исследование ΗΒν-связывающей способности антитела с помощью иммуногистохимии.
Способность антитела по настоящему изобретению, содержащего вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 2, и вариабельную область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 7, связываться с ΗΒνинфицированиой тканью исследовали с помощью иммуногистохимии.
Замороженный срез, содержащий ΗΒν-инфицированную ткань печени человека (δр^^ηд Рюкаепсе, Ргетоп!, СА, υδΑ, Са!а1од №. δΤδ-025), фиксировали ацетоном и оставляли для реакции с раствором пероксида водорода в метаноле. Затем срез ткани оставляли для реакции с нормальной кроличьей сывороткой с последующими последовательными реакциями с авидином и биотином. Затем срез ткани оставляли для реакции с каждым антителом по настоящему изобретению и изотипом иммуноглобулина человека (отрицательное контрольное антитело изотипа !дО1; δ^§та-Α1ά^^сЬ), которые биотинилировали с использованием набора для биотинилирования (ЧтишпоргоЬе Ыойпу1айоп кй, δ^дта-Α1άйсЬ), и срез ткани оставляли для реакции с δΐ^ерΐΑΒСοтр1еx/ΗКΡ (Оако, Ηο11аηά). Каждый из продуктов реакции окрашивали с помощью 3,3'-диаминобензидин тетрагидрохлорида (ΌΑΒ) и контрастно окрашивали гематоксилином, и результаты окрашивания показаны на фиг. 3(а) и 3(Ь).
Как можно видеть на фиг. 3(а) и 3(Ь), отрицательное контрольное антитело изотипа !дО1 (см. фиг. 3(Ь)) не связывалось с ΗΒν-инфицированной тканью печени человека, тогда как антитело по настоящему изобретению (см. фиг. 3(а)) прочно связывалось с ΗΒν-инфицированной тканью печени человека.
Пример 4. Исследование способности к связыванию с мутантом, резистентным к ингибитору репликации ΗΒν.
Для исследования связывания антитела по настоящему изобретению, содержащего вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 2, и вариабельную
- 6 029321
область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 7, образцы крови пациента (полученные от δΐ. Магу'з Нозрйа1, СаШоНс Цшуегзйу) оставляли для реакции в 96-луночном планшете, покрытом антителом по настоящему изобретению, и детекцию проводили с использованием конъюгата овечьи аНТН-НВзАд/пероксидаза в наборе ОепеФа НВзАд ЕБ1ЗА 3.0 кй (Огееп Сгозз МЗ, Когеа). В результате, как показано в табл. 5, антитело по настоящему изобретению прочно связывается с НВзАд всех УМОЭ-мутантных вирусов. Таким образом, как можно видеть в табл. 5, антитело по настоящему изобретению может связываться с УМОЭ-мутантным вирусом в крови пациентов с хроническим гепатитом В (СНВ).
Таблица 5
Результаты твердофазного иммуносорбентного анализа (ББ15А) в отношении способности антитела по
настоящему изобретению связываться с УМЭЭ-мутантным вирусом
Пример 5. Исследование способности связывания с различными мутантами НВзАд, полученными из хронического гепатита В, цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы.
Мутанты поверхностного антигена вируса гепатита В (НВзАд), полученные от 100 пациентов с хроническим гепатитом В (СНВ), 100 пациентов с циррозом печени (БС) и 100 пациентов с гепатоцеллюлярной карциномой (НСС), анализировали для исследования, связывается ли антитело по настоящему изобретению, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность ЗЕС) ГО ΝΟ: 2, и вариабельную область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность ЗЕС) ГО ΝΟ: 7, со всеми мутантными вирусами. Образцы крови пациентов (полученные от δΐ. Магу'з Нозрйа1, СаШоНс ЕшуегзЦу) оставляли для реакции в 96-луночном планшете, покрытом антителом по настоящему изобретению, и детекцию проводили с использованием конъюгата овечьи антиНВзАд/пероксидаза в наборе ОепеФа НВзАд ЕБ1ЗА 3.0 кН (Огееп Сгозз М3, Когеа). В результате, как показано в табл. 6 ниже, антитело по настоящему изобретению прочно связывалось со всеми мутантами НВзАд, полученными от пациентов.
Таблица 6
Результаты измерения связывания антитела по настоящему изобретению
с типичными мутантными вирусами поверхностного антигена
Номер пациента ЕЫ8А Титр ΝϋΑ 8 мутация (аминокислота 124-147)
СН15 3,059 3,864*103 Ы10М, Т1138, 8114Т, Ы26Т,О130О,Т13Ю, 3143Т, К.160К
СН 32 2,949 Й7 Р142Т
СНЗЗ 2,833 Ϊ08 Ы268
СН34 1,37 56646*103 Υ1008, Ы268, Τ131Ν, М133Т
СН 62 3,085 10* Т131Ь, К.160К
СН75 2,933 Гб5 П268, Τ131Ν, М133Т
ЬС 32 2,726 <2,5рсг Р127К, <2129К, Т131А, М133Ь, Т1408, К141К, Р1428, С147У, Α159Ψ
ЬС 53 3,497 <2,5рсг Ы26Т
ЬС 59 3,633 <2,5рсг Т131Р
ЬС 98 3,553 9761*103 Ο130Ν
НСС 1 3,611 11943*103 <5101К,Ь126Т
НСС 11 3,358 >100000*103 Ы26Т, Ο130Ν, К160К
НСС 22 3,517 270,8*103 У100С, Ы26Т
НСС 94 3,556 39687*103 Т123А, 8143У/
СН: хронический гепатит, 100 пациентов;
БС: цирроз печени, 100 пациентов;
НСС: гепатоцеллюлярная карцинома, 100 пациентов.
Пример 6. Исследование ίη У1уо эффекта антитела у мышей с индуцированным острым гепатитом В.
В этом примере мышей С57ВБ6, проявляющих симптомы, сходные с острым гепатитом В, получа- 7 029321
ли путем инъекции ДНК ИВУ мышам путем гидродинамической инъекции, и измеряли способность антитела по настоящему изобретению, содержащего вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕР ГО N0: 2, и вариабельную область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕО ГО N0: 7, нейтрализовать поверхностный антиген вируса гепатита В (НВзАд).
Использовали мышей С57ВЙ6, а именно двадцать мышиных самок в возрасте 6 недель (масса: около 20 г; получены от Сйаг1ез Είνοί' ЬаЪогаЮгу, МА, ϋδΆ), которых разделяли на 4 группы по 5 мышей, как показано в табл. 7 ниже. 20 мкг вектора рНВУ-МВК1 (8Ып е! а1., Уииз Кезеагей 119, 146-153, 2006; смотри фиг. 4), полученного путем вставки нуклеотидной последовательности ДНК НВУ в ροΌΝΑ3.1 (ЕшИ'одеп. ϋδΑ), разбавляли до объема, соответствующего 9,5% мышиной массы, и инъецировали в хвостовую вену каждой мыши со скоростью 0,3 мл/мин для индукции у мышей острого гепатита В. Через 24 ч в хвостовую вену каждой мыши инъецировали 0,2 мл тестируемого материала, показанного в табл. 7 ниже. Перед инъекцией тестируемого материала (0 ч) и через 24 и 48 ч после инъекции у мышей собирали образцы крови, отделяли сыворотку и 10-кратно разводили козьей сывороткой, после чего измеряли концентрацию НВзАд в крови с использованием ОепеШа НВзАд ЕЫ8А 3.0 (Огееп Сгозз М8, Когеа).
Таблица 7
Экспериментальный план измерения способности нейтрализовать поверхностный антиген вируса гепатита В (НВзАд) в мышиной крови
Группа Кол-во Тестируемый материал и путь введения Доза
НВ 5Ад (аулу) 5 РВ8, внутривенная инъекция 0,2 мл
НВзАд (аулу) 5 гНВЮ ОД мг(4001и), внутривенная инъекция 0,2 мл
О145К 5 РВЗ, внутривенная инъекция 0,2 мл
О145К 5 гНВЮ ОД мг(400Ю), внутривенная инъекция 0,2 мл
Результаты измерения показаны на фиг. 5. Как можно видеть на фиг. 5(а), в контрольной группе, которой внутривенно инъецировали РВ8 среди групп с вирусом дикого типа, концентрация в крови НВзАд и репликация ДНК НВУ сохранялись на максимальных уровнях вплоть до 48 ч, тогда как в группе, которой вводили 0,1 мг антитела гНВ1О, НВзАд в крови и репликации ДНК НВУ по существу не было обнаружено через 24 ч вплоть до 48 ч благодаря полной нейтрализации. Кроме того, как можно видеть на фиг. 5(Ъ), в контрольной группе, которой вводили внутривенно РВ8 среди групп О145К-мутантного вируса, концентрация в крови НВзАд и репликация ДНК НВУ сохранялись на максимальных уровнях вплоть до 48 ч, тогда как в группе, которой вводили 0,1 мг антитела, НВзАд в крови и репликации ДНК НВУ по существу не было обнаружено через 24 ч вплоть до 48 ч благодаря полной нейтрализации. Таким образом, описанные выше результаты указывают на то, что антитело по настоящему изобретению, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕР ГО N0: 2, и вариабельную область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕО ГО N0: 7, обладает превосходным нейтрализующим эффектом против дикого типа и О145К-мутанта поверхностных антигенов НВУ. Кроме того, число копий ДНК НВУ в каждой из групп подсчитывали с использованием РСК в реальном времени, и в результате, вирусную ДНК детектировали как в диком типе, так и в О145К-мутанте НВУ. Из этого можно сделать вывод о том, что антитело по настоящему изобретению обладает превосходным нейтрализующим эффектом против дикого типа и О145К-мутанта НВУ.
Пример 7. Исследование способности связываться с О145К-мутантами НВзАд, полученными от пациентов, у которых рецидив НВУ вызван О145К-мутантами после трансплантации печени.
Исследовали способность антитела по настоящему изобретению, содержащего вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕО ГО N0: 2, и вариабельную область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕО ГО N0: 7, связываться с О145Кмутантами НВзАд, полученными от пациентов с НВУ, который рецидивировал под действием О145Кмутации в НВзАд Образцы крови пациентов оставляли для реакции в 96-луночном планшете, покрытом антителом по настоящему изобретению, и детекцию проводили с использованием конъюгата овечьи анти-НВзАд/пероксидаза в наборе ОепеШа НВзАд ЕП8А 3.0 кй (Огееп Сгозз М8, Когеа). В результате, как можно видеть в табл. 8, антитело прочно связывалось со всеми О145К-мутантами НВзАд.
- 8 029321
Таблица 8
Результаты измерения связывания антитела по настоящему изобретению со всеми мутантами НВзЛд, полученными от пациентов
Образец Иммобилизованное антитело Мутация
гНВЮ
2,526 О145К
2,471 О145К
3,078 О145К
I/- 2,717 П О145К
2,660 О145К
Отрицательный контроль 0,015 О145К
Положительный контроль 1,048 О145К
Промышленная применимость
Как описано выше, композицию антитела по настоящему изобретению можно эффективно применять для предупреждения или лечения инфекции, вызванной мутантными вирусами, обладающими резистентностью к типичным терапевтическим агентам. В частности, композицию антитела можно эффективно применять для предупреждения или лечения инфекции О145К-мутантом НВУ или мутантом в ΥΜΌΌ-мотиве НВУ.
Хотя настоящее изобретение описано подробно с обращением на определенные отличительные признаки изобретения, специалистам в данной области будет очевидно, что данное описание представлено только для предпочтительного варианта осуществления настоящего изобретения и не ограничивает объем настоящего изобретения. Таким образом, существенный объем настоящего изобретения будет определяться прилагаемой формулой изобретения и ее эквивалентами.
- 9 029321
Список последовательностей
<110> СРЕЕЫ СР055 СОКРОРАТЮИ
<120> АНТИТЕЛО, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И СПОСОБ ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИИ МУТАНТНЫМ ВИРУСОМ ГЕПАТИТА В
<130> РР-В1444
<140> РСТ/К&2О13/ОО6О25
<141> 2013-07-08
<150> 10-2012-0075063
<151> 2012-07-10
<160> 12
<170> РаТепСШ νβΓ3ΐοη 3.2
<210> 1
<211> 129
<212> Белок
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный участок тяжелой цепи человеческого антитела <400> 1
бТ η 1 УаТ ьуз Ьеи |_еи 5 сТи Бег сТу сТу сТу цеи УаТ 10 ьуз Рго СТу 15 СТу
Бег 1_еи Агд 1_еи 20 Бег Су5 Бег АТа Бег 25 СТу РНе Бег |_еи тНг 30 |_уз туг
|_уз мет ТНг 35 Тгр УаТ Агд СТп АТа 40 Рго СТу ьуз СТу |_еи 45 СТи тгр УаТ
Бег Бег Не Бег Бег тНг Бег Агд Азр Пе Азр Туг АТа Азр Бег уаТ
50 55 60
ьуз СТу Агд РНе ТНг Пе Бег Агд Азр АЗП АТа цуз Азп Бег |_еи РНе
65 70 75 80
|_еи СТп мет Бег Бег |_еи Агд УаТ Азр АЗр ТНг АТа УаТ туг Туг суз
85 90 95
ТНг Агд Азр СТу тгр ьеи тгр сТу Тгр Азр УаТ Агд Бег Азп Туг туг
100 105 110
туг А5П АТа Ьеи Азр УаТ Тгр СТу СТп СТ у ТНг ТНг УаТ ТНг УаТ Бег
115 120 125
Бег
<210> 2 <211> 129
<212> Белок
- 10 029321
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный участок тяжелой цепи человеческого антитела <400> 2
с1и Уа1 1 С1п цеи Уа1 С1и 5 Бег с!у С1у с!у 1_еи Уа1 10 ьуз РГО б!у 15 С1у
Бег беи Агд |_еи Бег Суз Бег А1а Бег С1у РНе Бег 1_еи тНг |_уз туг
20 25 30
1_уз МеТ ТНг тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго О1у ьуз С1у 1_еи С1и тгр Уа1
35 40 45
Бег Бег Не Бег Бег тНг Бег Агд Азр Пе АЗр туг А1а А5р Бег Уа1
50 55 60
цуз 65 с!у Агд РНе тНг 11 е 70 Бег Агд Азр АЗП А1а 75 цуз А5П Бег |_еи РНе 80
беи С1п МеТ Бег Бег 85 Ьеи Агд Уа1 Азр А5р 90 ТНг А1а Уа1 Туг туг 95 Су5
тНг Агд АЗр С1у 100 тгр беи тгр С1у тгр 105 Азр Уа1 Агд Бег АЗП 110 туг туг
туг АЗП А1а |_еи А5Р Уа1 тгр С1у е!п С1у тНг ТНг Уа1 ТНг Уа1 Бег
115 120 125
Бег
<210> 3
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариабельный участок тяжелой цепи человеческого антитела
<400> 3
С1п Уа1 С1п ьеи Уа1 С1п Бег С1у С1у С1и Уа1 |_уз Ьуз Рго С1у А1а
1 5 10 15
1_еи мет Цу5 Уа1 Бег Суз 1-УЗ А1а Бег С1у Туг Пе РНе ТНг Бег туг
20 25 30
С1у П е Бег тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у С1п С1у ьеи С1и тгр Пе
35 40 45
С1у тгр Пе А5П тНг туг Бег С1у НТ 5 ТНг АЗП туг А1а Агд 1_уз РНе
50 55 60
- 11 029321
Агд <51 у Агд Уа! ТКг мет тКг тгр Аар тКг вег ТКг Вег тКг Αΐ а Туг
65 70 75 80
мет С1и Теи вег Вег 85 Беи Агд вег А5р А5р 90 ТКг А1а Уа1 Туг туг 95 Су 5
А1а Агд Уа1 рго 100 тКг тгр с1у Пе Азр 105 туг тгр С1у С1п <51у 110 тКг теи
Уа1 тКг Уа! Вег Вег
115
<210> 4
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный участок тяжелой цепи человеческого антитела <400> 4
<51 η 1 Уа1 <51 η теи Уа1 5 с!п Бег <51У <51У С1и 10 уа! туз туз Рго <51 у 15 А1а
теи мет Туз уа1 20 Вег суз туз А1а вег 25 С1у туг Пе рКе тКг 30 Вег Туг
<51у Пе Вег 35 тгр Уа1 Агд <51 η А1а 40 Рго <51 у <51 η <51 у теи 45 <51 и тгр Пе
<51 у тгр 50 Пе АЗ П тКг туг Вег 55 <51 у Н1 5 ТКг АЗП туг 60 А1а Агд туз РКе
Агд 65 <51 у Агд Уа1 тКг мет 70 тКг Тгр Азр ТКг вег 75 ТКг Вег ТКг А1а туг 80
мет <51 и Теи вег вег 85 теи Агд Вег А5р А5р 90 ТКг А1а Уа! туг туг 95 суз
А1а Агд Уа1 РГО 100 ТКг тгр <51 у Пе Азр 105 туг тгр <51 у <51 η <51у 110 ТКг Теи
Уа1 тКг Уа1 115 вег вег
<210> <211> : <212> 1 <213> 1 5 117 Белок лскусственная ι последовательность
<220>
<223> вариабельный участок тяжелой цепи человеческого антитела <400> 5
- 12 029321
б!п 1 Уа! с!п теи Уа1 5 С1п Бег С1у с!у С1и 10 Уа! куз 1_уз Рго С1у 15 А1а
Теи мет Уа! 20 Бег Суз 1-У5 А1а Бег 25 С1у туг Пе РКе тКг 30 Бег туг
С1у Не 5ег 35 тгр Уа! Агд С1п А1а 40 Рго С1у б!п С1у теи 45 с! и тгр Пе
с!у тгр 50 Не АЗП тКг туг Бег 55 С1у Нт 5 тКг А5П туг 60 А1а Агд 1-У5 РКе
Агд 65 с!у Агд Уа! ТКг мет 70 ТКг тгр А5р тКг Бег 75 тКг Бег тКг а! а Туг 80
мет С1и цеи Бег Бег 85 теи Агд Бег А5р Азр 90 ТКг А! а Уа! туг Йг Суз
А1а Агд Уа! Рго ТКг тгр с! у Не Азр Туг тгр с!у с! η с! у тКг теи
100 105 110
Уа! тКг Уа1 5ег Бег 115
<210> 6
<211> 108
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариабельный участок легкой цепи человеческого антитела <400> 6
С1и 1_еи Уа! мет тКг С1п Бег РГО Бег Бег Теи Бег А! а Бег Уа! с!у
1 5 10 15
Азр Агд Уа! ТКг Пе ТКг Суз Агд А! а Бег с!п С1у Пе туг АЗП Бег
20 25 30
Пе А! а тгр туг С1п С1п ьуз рго с! у туз а! а Рго туз теи Теи теи
35 40 45
туг Бег 50 тКг Бег ТКг теи Теи 55 Бег С1у уа! РГО Бег 60 Агд РКе Бег с1у
Бег 65 С1у Бег с! у ТКг Азр 70 туг тКг теи тКг Пе 75 тКг АЗП теи с!п Рго 80
с! и Азр РКе А1а ТКг туг туг Суз с! η с1п туг РКе Уа! тКг РГО с!и
85 90 95
тКг РКе С1у с!п с!у тКг 1_уз Уа! С1и Пе туз Агд
- 13 029321
100 105
<210> 7
<211> 108
<212> Белок
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный участок легкой цепи человеческого антитела
<4оо> : 1
А5р Пе Уа1 Уа1 ТКг 5 С1п Бег Рго Бег Бег 10 Ьеи Бег А1а Бег Уа1 15 С1у
Авр Агд Уа1 ТКг 20 Не ТКг суз Агд А1а 25 Бег с1п с1у Пе Г АЗП Бег
Не А1а тгр 35 Туг С1п С1п ьуз РГО 40 С1у Цуз А1а Рго 4Ϊ5 |_еи ьеи Ьеи
туг Бег 50 ТКг Бег ТКг Ьеи Ьеи 55 Бег С1у Уа1 РГО Бег 60 Агд РКе Бег С1у
Бег С1 у Бег с!у ТКг Авр туг ТКг Ьеи тКг Пе ТКг АЗ η Ьеи с1п Рго
65 70 75 80
С1и Авр РКе А1а ТКг 85 туг туг суз С1п С1п 90 туг РКе Уа1 тКг Рго 95 С1и
тКг РКе с!у С1п С1у тКг 1_ув Беи с1и Пе |_уз Агд
<210> 8
<211> 107
<212> Белок
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный участок легкой цепи человеческого антитела <400> 8
С1п 1 А1а С1у Ьеи ТКг 5 С1п РГО Рго Бег Уа1 10 Бег Уа1 А1а РГО С1у 15 ьуз
ТКг А1а Агд Пе 20 ТКг суз с!у с1у Азр 25 АЗП Пе С1у Агд ьуз 30 Бег Уа1
нт 5 тгр Туг 35 С1п С1п ьуз тКг С1у 40 С1п А1а РГО Уа1 Ьеи 45 Уа1 Уа1 Туг
с!и Азр 50 А5П ьуз Агд Рго Бег 55 С1у Не Рго С1и Агд 60 РКе Бег С1у Бег
АЗП Бег С1у АЗП ТКг А1а ТКг Ьеи тКг Пе Бег С1у ТКг С1п А1а мес
- 14 029321
65 70 75 80
Азр с!и А1а Αδρ туг туг Суб <3ΐη А1а тгр Αδρ Бег 5ег тКг Уа1 Уа1 85 90 95
РКе <з!у <31 у с1у ТКг ьуб Ьеи тКг Уа1 Ьеи С1у 100 105
<210> 9
<211> 108
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный участок легкой цепи человеческого антитела <400> 9
<з!и 11 е 1 Уа1 |_еи тКг <з!п Бег Рго Рго Бег 1_еи Бег А1а Бег Уа1 <31 у
5 10 15
Αδρ Агд Уа1 тКг 20 Не ТКг суз <3ΐη А1а 25 Бег <31 η Αδρ Не Αδη 30 ΑδΠ ΑδΠ
Уа1 Αδη тгр 35 РКе С1п С1п с!и РГО 40 С1у ьу3 А1а РГО Агд 45 Ьеи |_еи Не
Туг Αδρ 50 А1а Бег А5П Беи <31 η 55 ТКг (31 у Уа1 РГО Бег 60 Агд РКе Бег (31 у
Бег <з!у Бег <з1у ТКг <31 и РКе ТКг Беи тКг Не Бег Бег 1_еи <31 η РГО
65 70 75 80
С1и Αδρ РКе А1а ТКг туг туг Су5 <31 η <31 η тКг Бег уа! туг РГО 1_еи
85 90 95
ТКг РКе 01У <31у ТКг 1-У5 Уа1 Αδρ 105 Не ьу5 Агд
<210> 10 <211> 114
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный участок легкой цепи человеческого антитела <400> 10
Αδρ Не Уа1 мет ТКг 5 <31 η тКг РГО Ьеи Бег 10 |_еи РГО Уа1 тКг РГО 15 <31у
<з!и РГО А1а Бег Пе Бег суб Агд Бег Бег с1п Бег ьеи Ьеи НТ δ Бег
20 25 30
Αδη с!у туг Αδη Туг |_еи Абр тгр туг |_еи <з! η ьуб РГО <з!у <31 η Бег
- 15 029321
35 40 45
Рго СТп 50 |_еи Ьеи Не туг ьеи 55 СТу 5ег 1_уз Агд АТ а 60 5ег с!у УаТ рго
Азр Агд РКе 5ег сТу 5ег СТу 5ег сТу тКг Азр РКе ТКг Ьеи СТп Не
65 70 75 80
5ег Агд УаТ СТи А1а 85 сТи Азр УаТ СТу УаТ 90 туг Туг Суз Μβΐ СТ η 95 5ег
ТКг СТп РКе РГО Рго туг тКг РКе сТу СТп СТу ТКг ьуз Ьеи сТи Пе
100 105 110
|_уз дгд
<210> 11
<211> 25
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> праймер м3
<400> 11
сгдддаддад «дддддадд адагг 25
<210> 12
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> праймер РО1_8
<400> 12
аддагадаас сгадсаддс 19

Claims (6)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Антитело для предупреждения или лечения инфекции вирусом гепатита В (ИВУ), имеющим О145К-мутацию поверхностного антигена НВУ (НВьАд) или ΥΜΌΌ-мутацию (тирозин-метионинаспартат-аспартат) ДНК-полимеразы ИВУ, содержащее
    вариабельную область тяжелой цепи (УН), имеющую аминокислотную последовательность ЗЕС) ГО ΝΟ: 2;
    вариабельную область легкой цепи (Уь), имеющую аминокислотную последовательность ЗЕС) ГО ΝΟ: 7.
  2. 2. Антитело по п.1, где мутантный вирус гепатита В (НВУ) резистентен к ламивудину, адефовир дипивоксилу или НВЮ (иммуноглобулин гепатита В).
  3. 3. Фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения инфекции вирусом гепатита В (НВУ), имеющим О145К-мутацию поверхностного антигена НВУ (НВьАд) или ΥΜΌΌ-мутацию (тирозин-метионин-аспартат-аспартат) ДНК-полимеразы НВУ, содержащая антитело по любому из пп.1, 2 в качестве активного ингредиента и один или несколько агентов, выбранных из группы, состоящей из носителей, вспомогательных веществ и разбавителей.
  4. 4. Композиция по п.3, содержащая антитело в концентрации 0,1-50 мг/мл.
  5. 5. Композиция по п.3 или 4, изготовленная в форме таблетки, пилюли, порошка, саше, эликсира, суспензии, эмульсии, раствора, сиропа, аэрозоля, мягкой или твердой желатиновой капсулы, стерильного инъекционного раствора и стерильного упакованного порошка.
  6. 6. Способ предупреждения или лечения инфекции вирусом гепатита В (НВУ), имеющим О145Кмутацию поверхностного антигена НВУ (НВьАд) или ΥΜΌΌ-мутацию (тирозин-метионин-аспартатаспартат) ДНК-полимеразы НВУ, включающий введение млекопитающему фармацевтической композиции по п.3 или 4 в дозе 0,001-10 мг/кг.
    - 16 029321
    Антитело (мкг)
EA201500114A 2012-07-10 2013-07-08 Антитело, фармацевтическая композиция и способ предупреждения или лечения инфекции мутантным вирусом гепатита b EA029321B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20120075063 2012-07-10
PCT/KR2013/006025 WO2014010890A1 (en) 2012-07-10 2013-07-08 An antibody composition for prevention or treatment of mutant hepatitis b virus infection

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201500114A1 EA201500114A1 (ru) 2015-05-29
EA029321B1 true EA029321B1 (ru) 2018-03-30

Family

ID=49916280

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201500114A EA029321B1 (ru) 2012-07-10 2013-07-08 Антитело, фармацевтическая композиция и способ предупреждения или лечения инфекции мутантным вирусом гепатита b

Country Status (14)

Country Link
US (2) US9683029B2 (ru)
EP (1) EP2858674B1 (ru)
JP (2) JP6113279B2 (ru)
KR (2) KR101653261B1 (ru)
CN (2) CN107375924A (ru)
AU (1) AU2013287516B2 (ru)
BR (1) BR112015000474A2 (ru)
CA (1) CA2878155C (ru)
EA (1) EA029321B1 (ru)
ES (1) ES2712686T3 (ru)
HR (1) HRP20190393T1 (ru)
MX (1) MX363256B (ru)
MY (1) MY178496A (ru)
WO (1) WO2014010890A1 (ru)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR112018007121A2 (pt) * 2015-10-09 2018-11-06 Xiamen University anticorpo ou antígeno de ligação ao fragmento do mesmo, anticorpo humanizado ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, molécula de ácido nucléico isolada, vetor, célula hospedeira, método para preparar o anticorpo ou um antígeno de ligação ao fragmento do mesmo, composição farmacêutica, uso do anticorpo ou um antígeno de ligação ao fragmento do mesmo e método para prevenir ou tratar infecção hbv ou uma doença associada com a infecção hbv
CN108624565A (zh) * 2017-03-17 2018-10-09 艾博生物医药(杭州)有限公司 一种抗乙肝表面抗原的单抗隆抗体制备和筛选
CN108624564A (zh) * 2017-03-17 2018-10-09 艾博生物医药(杭州)有限公司 抗乙肝表面抗原的单抗隆抗体的制备和筛选
CN107132357B (zh) * 2017-03-23 2019-11-01 山东大学 一种逆转乙型肝炎病毒慢性感染的抗Tim-3抗体和α-galcer的组合及应用
CN107648602B (zh) * 2017-10-23 2020-09-01 苏州大学 二价乙肝疫苗及其制备方法
SG11202106489RA (en) * 2018-12-20 2021-07-29 Vir Biotechnology Inc Combination hbv therapy
KR20220117627A (ko) * 2021-02-17 2022-08-24 주식회사 녹십자 백신 조성물과의 병용을 위한 hbv 특이적 항체를 포함하는 b형 간염 치료용 조성물

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9007024D0 (en) 1990-03-29 1990-05-30 Imperial College Novel vaccine
FR2815634B1 (fr) * 2000-10-20 2003-10-31 Biomerieux Sa Anticorps monoclonaux diriges contre des virus de l'hepatite b
KR100467706B1 (ko) * 2002-01-15 2005-01-24 주식회사 녹십자홀딩스 Ｂ형 간염 바이러스의 표면 항원에 대한 인간항체
US7405039B2 (en) 2002-02-07 2008-07-29 Austin Health Viral variants with altered susceptibility to nucleoside analogs and uses thereof
CA2475446C (en) 2002-02-07 2014-05-06 Melbourne Health Viral variants with altered susceptibility to nucleoside analogs and uses thereof
EP2455390A1 (en) 2002-04-12 2012-05-23 Melbourne Health Hepatitis B viral variants with reduced susceptibility to nucleoside analogs and uses thereof
CN1600856A (zh) 2003-09-26 2005-03-30 陕西九州科技股份有限公司 分泌抗乙肝人单克隆抗体的异种杂交瘤细胞系的构建方法
WO2006112838A1 (en) * 2005-04-18 2006-10-26 Xtl Biopharmaceuticals Ltd. Stabilized anti-hepatitis b (hbv) antibody formulations
KR20090056537A (ko) 2007-11-30 2009-06-03 주식회사 녹십자 Ｂ형 간염 바이러스 중화능을 갖는 항체를 유효성분으로포함하는 ｂ형 간염 바이러스 감염의 예방 또는 치료용조성물
KR20090056543A (ko) 2007-11-30 2009-06-03 주식회사 녹십자 Ｂ형 간염 바이러스(ｈｂｖ) 중화 인간 항체를 포함하는약학적 제제
KR101072895B1 (ko) * 2009-12-24 2011-10-17 주식회사 녹십자 Ｂ형 간염 바이러스 표면 항원에 특이적으로 결합하는 인간 항체

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Amini-Bavil-Olyaee et al.: "Differential Impact of Immune Escape Mutations G145R and P120T on the Replication of Lamivudine-Resistant Hepatitis B Virus e Antigen-Positive and -Negative Strains", JOURNAL OF VIROLOGY, Jan. 2010, p. 1026-1033, see whole documents *
Fischer et al.: "Lamivudine resistance in hepatitis B: mechanisms and clinical implications", Drug Resistance Updates (2001), 4, 118-128, see whole documents *

Also Published As

Publication number Publication date
JP6113279B2 (ja) 2017-04-12
WO2014010890A1 (en) 2014-01-16
AU2013287516B2 (en) 2016-07-07
US20150166637A1 (en) 2015-06-18
MX363256B (es) 2019-03-19
US9683029B2 (en) 2017-06-20
KR101653261B1 (ko) 2016-09-12
KR20150029699A (ko) 2015-03-18
CN104487090B (zh) 2017-06-16
US20170260257A1 (en) 2017-09-14
EP2858674A4 (en) 2015-12-23
EP2858674B1 (en) 2019-01-30
ES2712686T3 (es) 2019-05-14
EP2858674A1 (en) 2015-04-15
CA2878155C (en) 2019-01-08
CN107375924A (zh) 2017-11-24
JP2015527317A (ja) 2015-09-17
HRP20190393T1 (hr) 2019-04-19
EA201500114A1 (ru) 2015-05-29
AU2013287516A1 (en) 2015-01-29
MX2015000349A (es) 2015-09-29
CA2878155A1 (en) 2014-01-16
MY178496A (en) 2020-10-14
KR20160092042A (ko) 2016-08-03
CN104487090A (zh) 2015-04-01
BR112015000474A2 (pt) 2017-11-14
JP2017095504A (ja) 2017-06-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA029321B1 (ru) Антитело, фармацевтическая композиция и способ предупреждения или лечения инфекции мутантным вирусом гепатита b
Dodson et al. Lamivudine after hepatitis B immune globulin is effective in preventing hepatitis B recurrence after liver transplantation
JP2000506741A (ja) 抗ｈｂｖ抗体
CN110612118A (zh) 用于引起针对hbv的免疫应答的病毒样粒子
Cerny et al. Mechanisms of immunosuppression by oncogenic RNA viruses
CA2125700A1 (en) Hepatitis e virus peptide antigens and antibodies
JP2000513215A (ja) 抗ｈｂｖ抗体
RU2585525C2 (ru) Эпитоп поверхностного антигена вируса гепатита b и его применение
KR20090056537A (ko) Ｂ형 간염 바이러스 중화능을 갖는 항체를 유효성분으로포함하는 ｂ형 간염 바이러스 감염의 예방 또는 치료용조성물
WO2021206638A1 (en) Vaccine and/or antibody for viral infection
Burm et al. A human monoclonal antibody against HBsAg for the prevention and treatment of chronic HBV and HDV infection
JP6830955B2 (ja) 融合タンパク質
US20080085261A1 (en) Vaccine Adjuvant
CN112262153A (zh) 高效的肝炎病毒的抗体诱导方法、抗体以及检测系统
CN107245476B (zh) 单克隆抗体6c9g4及其在制备治疗内毒素血症的药物中的应用
Usherwood et al. Lymphocyte recognition elements on the VP1 protein of Theiler's virus.
JPS59501774A (ja) 非ａ型、非ｂ型肝炎ウイルス、同定方法、精製、特徴付け、診断及び免疫化
CN116178530A (zh) 抗体在治疗SARS-CoV-2感染的用途
AU7550494A (en) Antibody-based treatment of hiv infection
WOCHENSCHR—Stuttgart West Germany
US20140023682A1 (en) Cancer Inhibiting Agent, Antibody Production Enhancing Agent, And Therapeutic Agent For Hepatitis
WO1996002272A2 (en) Treatment of autoimmune diseases
CN103649316A (zh) 合成的丙型肝炎基因组和制备及使用方法

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KG TJ TM