CN104487090A - 一种用于预防或治疗突变型乙型肝炎病毒感染的抗体组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种与乙型肝炎病毒(HBV)的表面抗原(HBsAg)结合以中和乙型肝炎病毒的抗体。发现所述抗体的表面抗原结合位点在病毒复制中发挥非常重要的作用,并且当位点中发生突变时,病毒复制被显著抑制,这样至少HBV病毒不能引起位点中的突变。在本发明中,通过利用源自患者的病毒证实了本发明抗体与由传统的病毒复制抑制剂产生的YMDD突变乙型肝炎病毒结合,或与血浆源性HBIG(乙型肝炎免疫球蛋白)不结合的G145R HBsAg突变体结合。此外,利用对乙型肝炎病毒的独特动物模型黑猩猩来检测本发明抗体的体内效果。结果发现,所述抗体甚至对体内模型中的野生型乙型肝炎病毒具有中和效果。因此,可以看出本发明的抗体不仅对野生型乙型肝炎病毒具有结合能力,而且对具有聚合酶YMDD突变体和表面抗原突变G145R的突变型乙型肝炎病毒具有结合能力,并且对源自患者的各种突变病毒具有结合能力。因此,本发明的抗体不仅能够被有效地用于野生型乙型肝炎病毒的预防或治疗,而且能够被有效地用于突变型乙型肝炎病毒的预防或治疗。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于预防或治疗由突变型乙型肝炎病毒引起的疾病的组合物,该组合物包含抗突变型人乙型肝炎病毒(HBV)的中和抗体作为活性成分,传统的病毒复制抑制剂(例如,拉米夫定或阿德福韦酯)或血浆源性HBIG(乙型肝炎免疫球蛋白)对该突变型人乙型肝炎病毒(HBV)不起作用或不结合它。
背景技术
乙型肝炎病毒(HBV)是具有DNA基因组的病毒,属于嗜肝DNA病毒科并引起急性和慢性肝炎。乙型肝炎病毒(HBV)被划分为在基因核苷酸序列中具有约8%或更多差异的八种基因型,或基于乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的两个抗原决定簇(d/y和w/r)被划分为四种血清型(adw、adr、ayw和ayr)。全球大约有3.5亿人具有慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染,特别地,在韩国和中国,慢性乙型肝炎病毒感染的人达到约5-8%,并且乙型肝炎病毒(HBV)感染是肝病和肝癌的主要原因。目前开发的疫苗可一定程度上在乙型肝炎病毒感染的预防方面起效果,但是仍存在相当数量的慢性乙型肝炎病毒感染患者。慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染引起肝炎、肝硬化和肝癌,并且在慢性乙型肝炎病毒患者中肝癌的发病率比未受感染的人高大约300倍。根据WHO报告,大约80%的肝癌是由慢性乙型肝炎引起的。
目前已知的乙型肝炎治疗剂包括核苷类似物,所述核苷类似物包括拉米夫定和阿德福韦酯,其通过抑制乙型肝炎病毒聚合酶(HBV聚合酶)的逆转录酶来抑制乙型肝炎病毒(HBV)的DNA复制。然而,当施用这些药物3年时,在大约75%的患者中产生抗药性病毒,降低了药物的疗效。由于这个问题,无法单独使用病毒复制抑制剂来治疗乙型肝炎感染。为此,试图与干扰素剂结合使用这些抑制剂,但由于严重的副作用,目前没有使用这些抑制剂。
为了类似的目的,考虑使用乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG)制剂,该制剂包括从具有高抗体效价的血液中分离的乙型肝炎病毒(HBV)抗体。然而,因为HBIG制剂的抗体是从血浆中分离并纯化的,存在以下这些问题:包括获得血浆的难度、病毒感染的可能性、低活性、高成本等。
近年来,有报道称存在能够使这些抗体无效的突变病毒,例如,在乙型肝炎病毒(HBV)的表面蛋白的145位具有甘氨酸替换为精氨酸的突变体。此外,已经出现能够使抗体无效的各种突变体。因为这个原因,传统的乙型肝炎病毒治疗剂很难表现出满意的治疗效果。
因此,迫切需要开发与乙型肝炎病毒(HBV)抗原表位特异性结合的抗体,用于治疗乙型肝炎病毒(HBV),在抗原表位中不会产生突变,从而该抗体的疗效不会因突变体而降低。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于预防或治疗由感染突变病毒引起的疾病的组合物,所述突变病毒对已被用于预防或治疗乙型肝炎病毒(在下文中简称为“HBV”)的传统治疗剂具有抗性。
为了实现上述目的,本发明提供一种用于预防或治疗具有HBV表面抗原(HBsAg)的G145R突变或HBV DNA聚合酶的YMDD(酪氨酸-甲硫氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸)突变的HBV感染的抗体组合物,所述组合物中含有的抗体包括:
具有选自SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:5的任何一个氨基酸序列的重链可变区;和具有选自SEQ ID NO:6至SEQ ID NO:10的任何一个氨基酸序列的轻链可变区。
根据下面的详细描述和所附的权利要求,本发明的其他特征和实施方式将变得显而易见。
附图说明
图1是示出了本发明抗体在黑猩猩中的HBV中和活性的图表。
图2绘示了照片(参见图2a和2c)和图表(参见图2b),这些照片和图表示出了用来检测本发明的抗体是否与乙型肝炎患者血液的HBV结合所进行的免疫沉淀测试的结果。
在图2(a)中,1:0.1μg的本发明抗体,2:0.5μg的本发明抗体,3:1μg的本发明抗体,4:5μg的本发明抗体,和5:PBS缓冲液。
在图2(c)中,1:PBS,2:用1μg的抗破伤风类毒素人抗体(TT-F9)处理,3:用1μg的Hepabig处理,4:用1μg的抗乙型肝炎病毒表面抗原人源化抗体(HuS 10)处理,和5:用1μg的本发明抗体处理。
图3是一组照片,示出了用来检测抗体是否与感染HBV的人肝组织结合所进行的免疫组织化学染色测试的结果。具体地,图3(a)是示出本发明抗体与感染HBV的人肝组织强结合的照片,图3(b)是示出同型阴性对照抗体不与同一组织结合的照片。
图4是乙型肝炎病毒(HBV)的基因图谱。通过以下方式来构建质粒pHBV1.3-MBRI:在pcDNA3.1(Invitrogen,USA)的Pmel限制酶位点中插入1.3倍序列的HBV(adr亚型)基因(Genbank登录号DQ683578)(从HBV基因组增强子I上游至聚腺苷酸化区域下游的HBV基因)。
图5示出使用水动力小鼠模型来检测抗体对G145R突变病毒的中和活性的实验结果,表明野生型HBV和G145R突变型HBV的表面抗原和病毒颗粒均被从小鼠血液中除去。
实施本发明的最佳实施方式
下文中,将进一步详细描述本发明。
本发明涉及一种用于预防或治疗具有HBV表面抗原(HBsAg)的G145R突变体或HBV DNA聚合酶的YMDD(酪氨酸-甲硫氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸)突变体的HBV感染的抗体组合物,所述组合物含有的抗体包括:
具有选自SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:5的任何一个氨基酸序列的重链可变区;和具有选自SEQ ID NO:6至SEQ ID NO:10的任何一个氨基酸序列的轻链可变区。
根据本发明的抗体可以是针对从细胞系HBAb-49(KCLRF-BP-00054)产生的具有G145R突变的HBV表面抗原(HBsAg)或DNA聚合酶YMDD基序突变的抗体。G145R突变是HBV表面抗原的145位处甘氨酸替换为精氨酸,血浆源性HBIG不与该G145R突变结合,而YMDD基序位于乙型肝炎病毒的DNA聚合酶基因的C端区域并在氨基酸序列的552位处甲硫氨酸(M)替换为缬氨酸(V)或异亮氨酸(I)。
所述抗体组合物用于对HBV治疗剂拉米夫定或阿德福韦酯具有抗性的突变病毒感染的预防或治疗。
此外,所述抗体组合物可进一步包括抗病毒剂。所述抗病毒剂优选为选自干扰素、抗-HBV单克隆抗体、抗-HBV多克隆抗体、核苷类似物、DNA聚合酶抑制剂和siRNA制剂中的一种或更多种,但并不限于此。
所述抗体组合物优选地含有浓度为0.1-50mg/ml的抗体。本发明还提供一种包含所述抗体组合物作为活性成分的药物制剂。所述药物制剂优选地以0.001-10mg/kg(体重)的剂量施用于哺乳动物,包括人。
可按照任何常规方法将所述抗体组合物制成药物制剂。在制剂的制备中,所述抗体优选与介载体混合或用介载体稀释,或包封在介载体内。当将介载体用作稀释剂时,其可为固体、半固体或液体物质,对活性成分起运载体、赋形剂或介质作用。因此,制剂可为片剂、丸剂、散剂、药囊、酏剂、混悬剂、乳剂、溶液、糖浆剂、气溶胶、软和硬明胶胶囊、无菌注射溶液、无菌包装粉剂等剂型。
适合的介载体、赋形剂和稀释剂的实例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟苯甲酯、羟苯丙酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油。制剂可额外地包括充填剂、抗凝结剂、润滑剂、润湿剂、调味剂、乳化剂、防腐剂等。可按照本领域已知的任何方法来配制本发明的组合物,以便在将其施用于哺乳动物后提供活性成分的速释、缓释或迟释。
在利用黑猩猩来验证本发明抗体的HBV中和活性的实验中,显示在施用HBV和抗体的混合物之后一年,黑猩猩没有感染HBV。在对照组的黑猩猩中,显示产生了HBV病毒颗粒和表面抗原并且在恢复期产生了抗HBV表面抗原的抗体(参见图1)。
此外,免疫沉淀测试显示本发明的抗体对患者血液的HBV具有优异的结合能力(参见图2)。此外,免疫组织化学染色测试显示本发明的抗体强结合于感染HBV的人肝组织(参见图3)。
根据本发明的抗体可具有结合于并中和对抗体有抗性和可避免抗体的HBV的HBsAg的能力,所述HBsAg不能被传统的病毒复制抑制剂(拉米夫定或阿德福韦酯)或血浆源性HBIG所抑制。在本发明的一个实施例中,利用含YMDD突变病毒的患者血液通过酶联免疫吸附测试(ELISA)来检测抗体的结合能力,所述YMDD突变病毒在乙型肝炎病毒聚合酶的逆转录酶上具有YMDD突变并对病毒复制抑制剂具有抗性。结果表明,抗体强结合于所有YMDD突变病毒(参见表5和表6)。
本发明抗体的最大特点在于,其对不能被血浆源性HBIG中和的、在HBV表面蛋白的145位具有甘氨酸替换为精氨酸的突变体的结合和中和能力。为了验证这一能力,利用水动力小鼠模型产生突变病毒,并检测抗体是否具有中和所产生的突变病毒的能力。结果表明,小鼠模型血液中的HBsAg和HBV均被除去(参见图5)。
研究表明,本发明的抗体与患者肝移植后复发的乙型肝炎病毒(HBV)结合,并且HBV病毒均为在HBV表面蛋白的145位具有甘氨酸替换为精氨酸的突变体(参见表8)。
上述结果表明,本发明的抗体和包括该抗体的组合物能够被有效地用于对传统治疗剂具有抗性的突变HBV病毒感染的预防或治疗。特别地,可以看出所述抗体和所述组合物能够被非常有效地用于G145R突变HBV或YMDD基序突变HBV感染的预防或治疗。
实施例
以下,将参照实施例更详细地描述本发明。对于本领域的普通技术人员将显而易见的是,这些实施例仅是解释性的目的,而不被理解为限制本发明的范围。
实施例1:在黑猩猩中进行HBV中和能力实验
为了检测本发明的抗体在体内是否具有中和HBV的能力,进行了以下实验。
将从肝炎研究基金会(USA)获得的HBV 100CID50(50%黑猩猩感染剂量)放置在三个试管中。向三个试管中的两个分别以0.1mg和10mg的量加入本发明的抗体,所述抗体包括具有氨基酸序列SEQ ID NO:2的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID NO:7的轻链可变区,而剩余的一个试管中不加入抗体。用PBS(磷酸盐缓冲液)缓冲液将每个试管中混合物的容积调整为3ml,之后使混合物在37℃反应1小时,然后在4℃过夜,随后用液氮冷冻,由此制备测试物质。
对于动物实验,将测试物质分别静脉施用于从未感染HBV的三只黑猩猩(参见表1)。
表1
[表1]施用于每只黑猩猩的抗体剂量
性别 | 年龄(岁) | 体重(kg) | 抗体剂量 | ||
对照 | 黑猩猩1 | 雄性 | 4 | 12.2 | - |
测试组1 | 黑猩猩2 | 雄性 | 4 | 11.6 | 0.1mg |
测试组2 | 黑猩猩3 | 雌性 | 4 | 10.8 | 10mg |
在从施用抗体之后1周至施用抗体之后8周期间每隔1周,和在施用抗体之后每隔2周,收集黑猩猩血液以测量HBV感染相关的指数,这些指数包括HBV DNA、HBsAg(HBV表面抗原)、抗-HBs(HBV表面抗原抗体)、抗-HBc(HBV核心抗体)、ALT、AST等。此外,通过血液和尿液检查来分析抗体的体内安全性。
此外,测量了黑猩猩的HBV DNA、HBsAg和抗-HB的变化,并将测量结果图形化地示出于图1中。
如表2、表3和表4所示,在作为对照的黑猩猩1中观察到HBV感染,然而在将抗体与HBV一起施用的黑猩猩2和3中,在整个实验期间没有观察到HBV感染。这些结果表明,本发明的抗体具有优异的中和HBV的能力。此外,在肝功能检查、各种血液学检查、尿液检查等中没有观察到特殊的异常发现,表明所述抗体在体内是安全的。
表2
[表2]HBV感染指数的测量(黑猩猩1)
表3
[表3]HBV感染指数的测量(黑猩猩2)
表4
[表4]HBV感染指数的测量(黑猩猩3)
(*边界线(+))
实施例2:通过免疫沉淀反应检测抗体的HBV结合能力
通过免疫沉淀反应来检测本发明的抗体是否与乙型肝炎患者血液(由亚洲大学医学院提供)中的HBV结合(参见图2),所述抗体包括具有氨基酸序列SEQ ID NO:2的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID NO:7的轻链可变区。
(1)乙型肝炎患者血液的制备
将1,000μl在0.2%BSA/PBS缓冲液中稀释10倍的乙型肝炎患者血液与山羊抗人IgG(Fc特异性)-琼脂糖缀合物(Research Diagnostics Inc.,Flanders,NJ)反应,从血液中除去免疫球蛋白。
(2)抗体与山羊抗人IgG-琼脂糖缀合物之间的结合反应
将10μl的本发明抗体(0.1、0.5、1和5μg)、PBS溶液和50μl的山羊抗人IgG-琼脂糖缀合物(Research Diagnostics)彼此混合,使它们在室温下搅拌反应1小时,然后向其中加入10mg的人免疫球蛋白(I.V.-Globulin-S、GreenCross),并使它们在室温下搅拌反应1小时,以封闭山羊抗人IgG-琼脂糖缀合物的结合部分。作为比较,以上述相同的方式使用各1μg的血液HBV抗体(Hepabig)、TT-F9(抗破伤风类毒素人抗体)和HuS 10(抗乙型肝炎病毒表面抗原人源化抗体)。
(3)抗体结合的羊抗人IgG-琼脂糖缀合物与患者血液之间的结合反应
将200μl的实施例2-(1)中制备的血液与实施例2-(2)中制备的抗体结合的山羊抗人IgG-琼脂糖缀合物混合,将混合物在室温下搅拌1小时,使抗体与患者血液的HBV反应。
(4)HBV沉淀的检测
将实施例2-(3)的反应溶液离心,并收集上清液,并利用Cobas Amplicor HBVMonitor Test(v2.0;罗氏诊断公司,巴塞尔,瑞士)测量上清液中的HBV。
将离心之后剩余的琼脂糖用0.2%BSA/PBS缓冲液洗涤10次,然后加入到100μl的同一缓冲液中,并向其中加入5μl的10%SDS、2μl的50mM EDTA和200μg的蛋白酶K(Sigma-Aldrich),并在55℃反应30分钟。然后,收集上清液,利用QIAquick PCR纯化试剂盒(Qiagen,希尔登,德国)从其中分离DNA,之后利用LiquiMix GM PCR预混合物(Neurotics,韩国)、引物M3(SEQID NO:11)和引物POL8(SEQ ID NO:12)通过PCR对HBV-特异性DNA进行扩增。其中,在以下条件下进行PCR:在55℃初始变性5分钟,然后进行在95℃维持1分钟、在55℃维持1分钟和在72℃维持1分钟的35个循环,接着在72℃最后延伸10分钟。在1.0%琼脂糖凝胶上对扩增的DNA进行分析。作为对照,使用HBV人源化抗体和抗破伤风类毒素人抗体(Green Cross,韩国)。分析结果在图2中示出。
如图2(a)和2(b)所示,随着免疫沉淀反应中使用的抗体的量增加,HBV沉淀的量增加,并且随着抗体的量减少,免疫沉淀反应之后上清液中的HBV的量增加。并且,HBV沉淀的量随着抗体的量增加而增加。此外,如图2(c)所示,当使用相同量的抗体时,从血液中纯化得到的HBV抗体(Hepabig)由于其对HBV的低结合能力而不使HBV沉淀,然而本发明的抗体由于其对HBV的高结合能力而使HBV沉淀。
实施例3:通过免疫组织化学对抗体的HBV结合能力的检测
通过免疫组织化学来检测本发明的抗体是否结合HBV感染组织,所述抗体包括具有氨基酸序列SEQ ID NO:2的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID NO:7的轻链可变区。
用丙酮将具有感染HBV的人肝组织(Spring Bioscience,Fremont,CA,USA,目录号STS-025)的冷冻切片固定,并使其与在甲醇中稀释的过氧化氢反应。然后,使组织切片与正常兔血清反应,接着按顺序与抗生物素蛋白和生物素反应。然后,使组织切片与利用免疫探针生物素标记试剂盒(Sigma-Aldrich)生物素化的本发明抗体和同型人免疫球蛋白(IgG1同型对照抗体;Sigma-Aldrich)中每个进行反应,并使组织切片与StreptABComplex/HRP(Dako,荷兰)反应。用3,3'-二氨基联苯胺四盐酸盐(DAB)对每一个反应产物进行染色,并用苏木精复染,染色结果在图3(a)和图3(b)中示出。
从图3(a)和图3(b)中可以看出,同型阴性对照抗体(参见图3(b))不与感染HBV的人肝组织结合,然而本发明的抗体(参见图3(a))与感染HBV的人肝组织强结合。
实施例4:对复制抑制剂具有抗性的突变体的结合能力的检测
为了检测本发明的包括具有氨基酸序列SEQ ID NO:2的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID NO:7的轻链可变区的抗体是否结合,使患者血液样品(由天主教大学St.Mary's Hospital提供)在包被有本发明抗体的96孔板上反应,并利用Genedia HBsAg ELISA 3.0试剂盒(Green Cross MS,韩国)中的山羊抗-HBsAg/过氧化物酶缀合物进行检测。结果,如下面的表5中所示,本发明的抗体与所有YMDD突变病毒的HBsAg强结合。因此,从表5可以看出,本发明抗体能够与慢性乙型肝炎(CHB)患者血液中的YMDD突变病毒结合。
表5
[表5]本发明抗体与YMDD突变病毒结合能力的酶联免疫吸附测试(ELISA)结果
实施例5:对源自慢性乙型肝炎、肝硬化和肝细胞癌的各种HBsAg突变体的结合能力的检测
对源自100位慢性乙型肝炎(CHB)患者、100位肝硬化(LC)患者和100位肝细胞癌(HCC)患者的病毒表面抗原(HBsAg)突变体进行分析,检测本发明的抗体是否与所有突变病毒结合,所述抗体包括具有氨基酸序列SEQ IDNO:2的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID NO:7的轻链可变区。使患者血液样品(由天主教大学St.Mary's Hospital提供)在包被有本发明抗体的96孔板上反应,并利用Genedia HBsAg ELISA 3.0试剂盒(Green Cross MS,韩国)中的山羊抗-HBsAg/过氧化物酶缀合物进行检测。结果,如下面的表6中所示,本发明的抗体与源自患者的所有HBsAg突变体强结合。
表6
[表6]本发明的抗体与典型的表面抗原突变病毒的结合的测量结果
[CH(慢性肝炎,100位患者);LC(肝硬化,100位患者);HCC(肝细胞癌,100位患者)]
实施例6:抗体在诱导急性乙型肝炎小鼠中的体内效果检测
在该实施例中,通过水流动力学注射将HBV DNA注入小鼠,得到表现出与急性乙型肝炎类似症状的C57BL6小鼠,并测量本发明的抗体中和乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的能力,所述抗体包括具有氨基酸序列SEQ ID NO:2的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID NO:7的轻链可变区。
所用的C57BL6小鼠为20只6周龄的雌鼠(体重:约20g;购自Charles肝脏实验室,MA,USA),并将其分为4组,每组包括5只小鼠,如下面的表7中所示。通过在pcDNA3.1(Invitrogen,USA)中插入HBV DNA核苷酸序列得到pHBV-MBRI载体,将20μg的pHBV-MBRI载体稀释为对应于小鼠体重的9.5%的体积,并以0.3ml/分钟的速率注入各小鼠的尾静脉,在小鼠中诱导急性乙型肝炎。24小时之后,将0.2ml的下面表7中所示的测试物质注入各小鼠的尾静脉。在注射测试物质之前(0小时)和注射之后24小时及48小时,收集小鼠血液,从其中分离血清并用山羊血清稀释10倍,之后利用Genedia HBsAgELISA 3.0(Green Cross MS,韩国)测量血液中HBsAg的浓度。
表7
[表7]测量对小鼠血液中的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的中和能力的测试设计
组 | 数量 | 测试物质和路径剂量 | 剂量 |
HBsAg(ayw) | 5 | PBS、静脉注射 | 0.2mL |
HBsAg(ayw) | 5 | rHBIG 0.1mg(400IU)、静脉注射 | 0.2mL |
G145R | 5 | PBS、静脉注射 | 0.2mL |
G145R | 5 | rHBIG 0.1mg(400IU)、静脉注射 | 0.2mL |
测量结果在图5中示出。从图5(a)可以看出,在野生型病毒组中的静脉注射PBS的对照组中,血液HBsAg浓度和HBV DNA复制维持在峰值水平直到48小时,而在施用了0.1mg的抗体rHBIG的组中,由于完全中和,在24小时直到48小时之后基本上没有检测到血液HBsAg浓度和HBV DNA复制。此外,从图5(b)可以看出,在G145R突变病毒组中的静脉注射PBS的对照组中,血液HBsAg浓度和HBV DNA复制维持在峰值水平直到48小时,而在施用了0.1mg的抗体的组中,由于完全中和,在24小时直到48小时之后基本上没有检测到血液HBsAg和HBV DNA复制。因此,上述结果表明,包括具有氨基酸序列SEQ ID NO:2的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID NO:7的轻链可变区的本发明抗体对野生型和G145R突变型HBV表面抗原具有非常优异的中和效果。此外,利用实时PCR对各组中HBV DNA复制的数目进行量化,结果,在野生型和G145R突变型HBV中均检测到病毒DNA。这表明本发明的抗体对野生型和G145R突变型HBV均具有非常优异的中和效果。
实施例7:对源自肝移植后由G145R突变体导致HBV复发的患者的G145RHBsAg突变体的结合能力的检测
检测包括具有氨基酸序列SEQ ID NO:2的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID NO:7的轻链可变区的本发明抗体对源自因HBsAg中的G145R突变体导致HBV复发的患者的G145R HBsAg突变体的结合能力。使患者血液样品在包被有本发明抗体的96孔板上反应,并利用Genedia HBsAg ELISA 3.0试剂盒(Green Cross MS,韩国)中的山羊抗-HBsAg/过氧化物酶缀合物进行检测。结果,从下面的表8中可以看出,所述抗体与所有G145R HBsAg突变体强结合。
表8
[表8]本发明抗体与源自患者的所有HBsAg突变体的结合的测量结果
工业实用性
如上所述,本发明的抗体组合物能够被有效地用于对传统的治疗剂具有抗性的突变病毒感染的预防或治疗。特别地,本发明的抗体组合物能够被非常有效地用于G145R突变型HBV或YMDD基序突变型HBV感染的预防或治疗。
尽管参照具体的特征已经详细地描述了本发明,对于本领域的技术人员将显而易见的是,这种描述仅是为了优选的实施方式而不是限制本发明的范围。因此,本发明的实质的范围将由所附权利要求和其等效物限定。
Claims (10)
1.一种用于预防或治疗具有HBV表面抗原(HBsAg)的G145R突变或HBVDNA聚合酶的YMDD(酪氨酸-甲硫氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸)突变的HBV感染的抗体组合物,所述组合物包括抗体作为活性成分,所述抗体包括:
具有选自SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:5的任何一个氨基酸序列的重链可变区(VH);和
具有选自SEQ ID NO:6至SEQ ID NO:10的任何一个氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
2.如权利要求1所述的抗体组合物,进一步包括抗病毒剂。
3.如权利要求2所述的抗体组合物,其中所述抗病毒剂包括选自干扰素、抗-HBV单克隆抗体、抗-HBV多克隆抗体、核苷类似物、DNA聚合酶抑制剂和siRNA制剂中的一种或多种。
4.如权利要求1所述的抗体组合物,其中所述YMDD突变为M552V突变或M552I突变。
5.如权利要求1所述的抗体组合物,其中所述病毒是对拉米夫定、阿德福韦酯或HBIG(乙型肝炎免疫球蛋白)具有抗性的突变乙型肝炎病毒(HBV)。
6.如权利要求1所述的抗体组合物,其中所包含的所述抗体的浓度为0.1-50mg/ml。
7.一种药物制剂,包含权利要求1至6中任一项所述的抗体组合物作为活性成分。
8.如权利要求7所述的药物制剂,进一步包括选自介载体、赋形剂和稀释剂中的一种或多种。
9.如权利要求7所述的药物制剂,其中所述制剂为选自片剂、丸剂、散剂、药囊、酏剂、混悬剂、乳剂、溶液、糖浆剂、气溶胶、软和硬明胶胶囊、无菌注射溶液和无菌包装粉剂的剂型。
10.如权利要求7所述的药物制剂,其中所述药物制剂优选以0.001-10mg/kg的剂量施用于哺乳动物。
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