KR20220117627A - 백신 조성물과의 병용을 위한 hbv 특이적 항체를 포함하는 b형 간염 치료용 조성물 - Google Patents

백신 조성물과의 병용을 위한 hbv 특이적 항체를 포함하는 b형 간염 치료용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 백신 조성물과 병용하기 위한 HBV 특이적 항체를 포함하는 B형 간염 치료용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는, B형 간염 바이러스 특이적 항원을 코딩하는 염기서열을 포함하는 아데노바이러스 기반 치료용 백신 조성물과 병용하여 B형 간염을 치료하기 위한, 특정 아미노산 서열을 포함하는 HBV에 특이적인 항체를 포함하는 B형 간염 치료용 약제학적 조성물 및 상기 약제학적 조성물과 상기 백신 조성물을 병용하여 사용하는 것을 특징으로 하는 B형 간염 치료 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따르면, 작용 기전이 다른 HBV 백신 치료제 “TG1050”와 HBV 표면항원(HBsAg)에 결합할 수 있는 항체 “GC1102”를 병용투여하여, 각각의 단독투여에 비해 HBV 감염에 의한 B형 간염의 예방 또는 치료에 매우 효과적으로 사용될 수 있다.

Description

백신 조성물과의 병용을 위한 HBV 특이적 항체를 포함하는 B형 간염 치료용 조성물{A Composition for Treatment of Hepatitis B Comprising HBV Specific Antibody for Combination with Vaccine Composition}
본 발명은 백신 조성물과 병용하기 위한 HBV 특이적 항체를 포함하는 B형 간염 치료용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는, B형 간염 바이러스 특이적 항원을 코딩하는 염기서열을 포함하는 아데노바이러스 기반 치료용 백신 조성물과 병용하여 B형 간염을 치료하기 위한, 특정 아미노산 서열을 포함하는 HBV에 특이적인 항체를 포함하는 B형 간염 치료용 약제학적 조성물 및 상기 약제학적 조성물과 상기 백신 조성물을 병용하여 사용하는 것을 특징으로 하는 B형 간염 치료 방법에 관한 것이다.
B형 간염 바이러스(hepatitis B virus, HBV)는 헤파드나바이러스(Hepadnaviridae) 패밀리에 속하는 DNA 게놈을 갖는 바이러스로, 급성/만성 B형 간염을 일으키며, 간경화(cirrhosis)와 간암(hepatocellular carcinoma, HCC)의 원인이 된다. 세계 인구의 1/3가량인 20억명에서 HBV에 감염되었던 흔적이 관찰되고, 그 중 약 2억 5천 7백만명은 치료되지 않고 만성 간염상태(chronic hepatitis B, CHB)로 유지되고 있으며, 매년 80만명 이상이 사망한다. 현재는 백신의 개발로 어느 정도 예방이 가능해졌지만, 아직도 HBV에 의한 만성 간염 환자가 상당수 존재하고 있는 현실이다. HBV의 만성 감염은 간염, 간경변 뿐만 아니라 간암을 유발하며 만성 감염자가 비감염자에 비해 간암 발생빈도가 약 300배 높게 나타나는데, WHO의 조사에 따르면 약 80%의 간암은 만성 B형 간염이 원인이라고 한다.
만성 B형 간염을 치료하기 위하여 다양한 약물의 개발이 시도되고 있으며, 현재 Nucleos(t)ide analog(NUC)와 Interferon-alpha(IFN-α) 계열의 약물이 승인되어 사용되었다. 다만, NUC는 내성 바이러스가 발생하여 치료 효과가 저하되고, 바이러스를 완전하게 제거하지 못하여 평생 복용해야 하는 문제점 등이 있으며, 대안으로 시도된 IFN-α 또한 미미한 치료 효과와 부작용이 보고되었다. 때문에 많은 제약회사들이 만성 B형 간염 완치를 목표로 치료제를 개발하고 있다.
본 출원인은 만성 B형 간염 치료제로서 HBV의 표면항원(HBsAg)에 결합할 수 있는 항체(“GC1102”로 명명)를 개발하였다(10-1653261 참조). 항체를 이용하여 HBV의 주요 면역억제 효과를 가진 HBsAg을 혈류에서 제거한 후 치료 백신 투여 시, 증가된 면역반응에 따른 항 바이러스 증대 효과가 보고된 바 있으므로(Clearing Persistent Extracellular Antigen of Hepatitis B Virus An Immunomodulatory Strategy To Reverse Tolerance for an Effective Therapeutic Vaccination. J Immunol 2016;196:3079-3087), GC1102를 B형 간염 치료용 백신과 병용하여 치료 효과를 증대시키고자 하였다.
프랑스 Transgene사가 개발하고 있는 만성 B형 간염 치료제 “TG1050”은 HBV 중합효소와 코어 항원은 물론, HBsAg의 폴리펩타이드 도메인을 코딩하는 Adenovirus type 5의 치료 백신 제형이다(WO2013/007772). AAV-HBV 마우스 모델에서 면역반응의 증진 효과와 그에 따른 항 바이러스 효과가 입증된 바 있으며, 현재 임상 1상이 완료된 상태이다(TG1050, an immunotherapeutic to treat chronic hepatitis B, induces robust T cells and exerts an antiviral effect in HBV-persistent mice. GUT 2015;64:1961-1971).
이에 본 발명자들은, 만성 B형 간염 치료 백신인 TG1050과 HBsAg 특이적 항체인 GC1102을 병용투여하는 경우, 항 바이러스 효과 증가로 인한 B형 간염 치료 효과가 놀랍게도 현저하게 증가하는 것을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.
본 배경기술 부분에 기재된 상기 정보는 오직 본 발명의 배경에 대한 이해를 향상시키기 위한 것이며, 이에 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가지는 자에게 있어 이미 알려진 선행기술을 형성하는 정보를 포함하지 않을 수 있다.
본 발명의 목적은 B형 간염 치료용 백신 조성물과 병용하여 B형 간염을 치료하기 위한, HBV 특이적 항체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 HBV 특이적 항체를 포함하는 약제학적 조성물과 B형 간염 치료용 백신 조성물을 병용하여 사용하는 것을 특징으로 하는 B형 간염 치료 방법을 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 B형 간염 치료용 백신 조성물과 병용하여 B형 간염을 치료하기 위한 HBV 특이적 항체를 포함하는 약제학적 조성물의 용도를 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 B형 간염 치료용 백신 조성물과 병용하는 B형 간염 치료용 약제 제조를 위한, HBV 특이적 항체를 포함하는 약제학적 조성물의 사용을 제공하는 데 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 B형 간염 바이러스 특이적 항원을 코딩하는 염기서열을 포함하는 아데노바이러스(AV) 기반 치료용 백신 조성물과 병용하여 B형 간염을 치료하기 위한, GFSLTKYK의 HCDR1, ISSTSRDI의 HCDR2 및 TRDGWL의 HCDR3를 포함하는 중쇄 가변영역과, QGIYNS의 LCDR1, STS의 LCDR2 및 YFVTPET의 LCDR3를 포함하는 경쇄 가변영역을 함유하는 B형 간염 바이러스(HBV)에 특이적인 항체를 포함하는 B형 간염 치료용 약제학적 조성을 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 HBV 특이적 항체를 포함하는 약제학적 조성물과 상기 B형 간염 치료용 백신 조성물을 병용하여 사용하는 것을 특징으로 하는 B형 간염 치료 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 B형 간염 치료용 백신 조성물과 병용하여 B형 간염을 치료하기 위한 상기 HBV 특이적 항체를 포함하는 약제학적 조성물의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 B형 간염 치료용 백신 조성물과 병용하는 B형 간염 치료용 약제 제조를 위한, 상기 HBV 특이적 항체를 포함하는 약제학적 조성물의 사용을 제공한다.
본 발명에 따르면, 작용 기전이 다른 HBV 백신 치료제 “TG1050”와 HBV 표면항원(HBsAg)에 결합할 수 있는 항체 “GC1102”를 병용투여하여, 각각의 단독투여에 비해 HBV 감염에 의한 B형 간염의 예방 또는 치료에 매우 효과적으로 사용될 수 있다.
도 1은 sGC1102 및 TG1050 병용 실험 모식도이다.
도 2 내지 도 6은 sGC1102 및 TG1050 병용의 HBsAg ELISA 실험 결과를 타나낸 도면이다.
도 2a 내지 도 2e는 mIgG 20mg/kg, 도 3a 내지 도 3d는 sGC1102 20mg/kg, 도 4a 내지 도 4e는 TG1050 108IU (V.P: 2x109), 도 5a 내지 도 5d는 sGC1102 20mg/kg와 Empty Ad. 108IU (V.P: 2x109), 및 도 6a 내지 도 6d는 sGC1102 20mg/kg와 TG1050 108IU (V.P: 2x109) 처리 결과이다. 박스는 HBsAg가 검출되지 않아(마우스 sacrifice 1주 전), HBsAg loss인 것으로 간주되는 마우스를 나타낸다. 검정색('원'으로 표시)과 파란색('네모'로 표시) 선은 각각 HBsAg 및 sGC1102를 나타낸다. X-축 아래의 파란색 화살표는 mIgG 또는 sGC1102와 Empty Ad. 또는 TG1050의 injection time을 나타낸다.
도 7은 마우스 sacrifice 1주 전 혈청 HBsAg 양의 정량화 그래프로, 평균(mean) 및 SEM (standard error of the mean)이 표시되었으며, 통계 분석은 Wilcoxon rank sum test를 이용하여 수행되었다(*: P-value < 0.05, **: < 0.005).
도 8은 quantitative real-time PCR에 의한 간 조직 내 HBV DNA(도 8A) 및 AAV DNA(도 8B) 정량화 그래프로(파란색 점('오각형'으로 표시): 마우스 sacrifice 1주 전 HBsAg loss 마우스; 검정색 점('원'으로 표시): 마우스 sacrifice 1주 전 HBsAg 존재 마우스), 평균(mean) 및 SEM (standard error of the mean)이 표시되었으며, 통계 분석은 Wilcoxon rank sum test를 이용하여 수행되었다(*: P-value < 0.05).
도 9는 간 조직 homogenate에서 HBV nucleocapsid를 NAGE-Western blot로 검출한 결과로, 겔 상단에 표시된 숫자는 실험 동물 번호를 의미한다.
다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로 본 명세서에서 사용된 명명법은 본 기술분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.
본 발명의 일 실시예에서는, B형 간염, 특히 만성 B형 간염의 치료 효율을 높이고자, 기존 치료제에 저항성을 갖는 돌연변이 바이러스의 감염을 예방 하거나 치료하는데 효과적으로 사용될 수 있는 항체 “GC1102”와 HBV 코어 폴리펩타이드(HBV Core polypeptide), HBV 중합효소 폴리펩타이드(HBV Polymerase polypeptide), HBV 외피 폴리펩타이드(HBV Envelope polypeptide) 및 이들의 조합을 포함하는 B형 간염 바이러스 특이적 항원 “TG1050”를 병용투여하였다. 치료율을 확인한 결과, 혈청 내 HBsAg(HBV 표면항원) 양은 단독투여 대비 통계적으로 유의하게 감소하였으며, 간 내 HBV(hepatitis B virus)와 AAV(adeno-associated virus) DNA도 감소됨을 확인할 수 있었다.
따라서, 본 발명은 일 관점에서, B형 간염 바이러스 특이적 항원을 코딩하는 염기서열을 포함하는 아데노바이러스(AV) 기반 치료용 백신 조성물과 병용하여 B형 간염을 치료하기 위한, GFSLTKYK(서열번호 1)의 HCDR1, ISSTSRDI(서열번호 2)의 HCDR2 및 TRDGWL(서열번호 3)의 HCDR3를 포함하는 중쇄 가변영역과, QGIYNS(서열번호 4)의 LCDR1, STS(서열번호 5)의 LCDR2 및 YFVTPET(서열번호 6)의 LCDR3를 포함하는 경쇄 가변영역을 함유하는 B형 간염 바이러스(HBV)에 특이적인 항체를 포함하는 B형 간염 치료용 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 있어서, 상기 B형 간염 바이러스(HBV)에 특이적인 항체는 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역(VH)과, 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역(VL)을 함유하는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 항체는 서열번호 1 내지 서열번호 8의 아미노산 서열과 각각 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 가장 바람직하게는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하는 것일 수 있으며, 본 발명에 따른 HBV 특이적 항체와 동일한 특성을 가지는 항체 또는 이의 항원 결합 단편도 본 발명에 따른 항체의 권리범위에 포함된다.
또한, 본 발명에 따른 HBV 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편에는 본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서, 보존적 치환을 통해 아미노산 서열의 일부가 치환된 항체 또는 이의 항원 결합 단편도 포함된다.
본 명세서에서 “보존적 치환”이란 1개 이상의 아미노산을 해당 폴리펩타이드의 생물학적 또는 생화학적 기능의 손실을 야기하지 않는 유사한 생화학적 특성을 갖는 아미노산으로 치환하는 것을 포함하는 폴리펩타이드의 변형을 의미한다. “보존적 아미노산 치환”은 아미노산 잔기를 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체시키는 치환이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기 부류는 해당 기술분야에 규정되어 있으며, 잘 알려져 있다. 이들 부류는 염기성 측쇄를 갖는 아미노산(예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄를 갖는 아미노산(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 대전되지 않은 극성 측쇄를 갖는 아미노산(예를 들어, 글리신, 아스파라진, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 비-극성 측쇄를 갖는 아미노산(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지된 측쇄를 갖는 아미노산(예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄를 갖는 아미노산(예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)을 포함한다. 본 발명의 항체가 보존적 아미노산 치환을 갖고 여전히 활성을 보유할 수 있음이 예상된다.
본 명세서에서 용어 “HBV 특이적 항체”는 HBV에 결합하여 HBV의 생물학적 활성의 억제를 초래하는 항체를 의미하며, “항-HBV 항체”와 혼용되어 사용된다.
본 발명에 있어서, “항-HBV 항체”는 다클론 항체(polyclonal antibody) 및 단클론 항체(단일클론 항체, monoclonal antibody)를 모두 포함하는 개념으로, 바람직하게는 단클론 항체이며, 온전한 전체 항체(whole antibody) 형태를 가질 수 있다. 전체 항체는 2개의 전체 길이의 경쇄 및 2개의 전체 길이의 중쇄를 가지는 구조로서, 불변영역을 포함하는 구조이며, 각각의 경쇄는 중쇄와 다이설파이드 결합으로 연결되어 있다.
본 명세서에서, 용어 “중쇄”는 항원에 특이성을 부여하기 위한 충분한 가변영역 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변영역 도메인 VH 및 3개의 불변영역 도메인 CH1, CH2 및 CH3를 포함하는 전체길이 중쇄 및 이의 단편을 모두 의미한다. 또한 본 명세서에서 용어 “경쇄”는 항원에 특이성을 부여하기 위한 충분한 가변영역 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변영역 도메인 VL 및 불변영역 도메인 CL을 포함하는 전체길이 경쇄 및 이의 단편을 모두 의미한다.
본 명세서에서, 용어 “상보성 결정 영역(complementarity determining region, CDR)”은 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 고가변 영역(hypervariable region)의 아미노산 서열을 의미한다(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4th Ed., U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987)). 중쇄(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3) 및 경쇄(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)에는 각각 3개의 CDRs이 포함되어 있다. CDR은 항체가 항원 또는 에피토프에 결합하는 데 있어서 주요한 접촉 잔기를 제공한다.
본 발명의 일 실시예에서, 상기 항체를 이용하여 단독 또는 병용투여시 B형 간염 치료율을 확인하였다.
특히 본 발명에 따른 항체(GC1102)와 B형 간염 특이적 항원을 코딩하는 염기서열을 포함하는 아데노바이러스 기반 치료용 백신 조성물(TG1050)의 병용투여시, 혈청 내 HBsAg 양은 단독투여 대비 통계적으로 유의하게 감소하였으며(sGC1102(mouse Surrogate GC1102) 단독투여: 216.6ng/mL, TG1050 단독투여: 470.6ng/mL, sGC1102와 TG1050 병용투여: 12.6ng/mL), 간 내 HBV와 AAV DNA도 감소됨을 확인할 수 있었다(sGC1102 단독투여: Log 4.9, TG1050 단독투여: Log 5.1, sGC1102와 TG1050 병용투여: Log 3.5).
따라서, 본 발명에 있어서, 본 발명에 따른 B형 간염 바이러스에 특이적 항체를 포함하는 약제학적 조성물은 B형 간염 바이러스 특이적 항원을 코딩하는 염기서열을 포함하는 아데노바이러스(AV) 기반 치료용 백신 조성물과 동시 또는 순차 투여되는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 B형 간염 바이러스(HBV)에 특이적인 항체를 포함하는 B형 간염 치료용 약제학적 조성물은 주 1회 또는 2주에 1회 간격으로 10주 내지 20주간 투여되고, 상기 B형 간염 바이러스 특이적 항원을 코딩하는 염기서열을 포함하는 아데노바이러스(AV) 기반 치료용 백신 조성물은 상기 B형 간염 바이러스(HBV)에 특이적인 항체를 포함하는 B형 간염 치료용 약제학적 조성물의 첫번째 투여 이후 3주 내지 5주 경과 시점부터 매주 1회 2주 내지 5주간 투여되는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 상기 B형 간염 바이러스(HBV)에 특이적인 항체의 단위 투여 용량은 5 내지 50 mg/kg이고, B형 간염 바이러스 특이적 항원을 코딩하는 염기서열을 포함하는 아데노바이러스(AV) 기반 치료용 백신의 단위 투여 용량은 105 내지 1010 IU인 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 상기 B형 간염 바이러스 특이적 항원은 HBV 코어 폴리펩타이드(HBV Core polypeptide), HBV 중합효소 폴리펩타이드(HBV Polymerase polypeptide), HBV 외피 폴리펩타이드(HBV Envelope polypeptide) 및 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택된 폴리펩타이드의 전부 또는 일부 서열을 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다(예를 들어, WO2013/007772 참조).
본 명세서에서 사용되는 바, "HBV 중합효소(HBV polymerase)"는 고유의 HBV 중합효소 단백질에 포함된 적어도 500개 아미노산 잔기들을 보유하는 폴리펩타이드를 말한다. 바람직하게, 이러한 적어도 500개 아미노산 잔기들은 3가지 기능적 도메인들에 걸쳐서, 바람직하게는 고유의 HBV 중합효소에 정상적으로 존재하는 4가지 도메인들에 걸쳐서 퍼져 있다. 본 용어는 용어 "HBV"와 연결하여 상기에서 인용된 것들과 같은 자연에서 HBV의 출처로부터 발견되고, 분리될 획득될 수 있는 임의의 HBV 균주, 분리물 또는 유전형의 고유의 (예로, 자연적으로-생기는) 중합효소 폴리펩타이드들뿐만 아니라 변형된 중합효소 (예로, 돌연변이 중합효소 폴리펩타이드) 및 그의 단편들을 포괄한다. 설명하자면, 본 명세서에서 기술된 HBV 중합효소의 아미노산 잔기들은 832개 아미노산들 길이의 중합효소를 기준으로 하여 모티브 Tyr Met Asp Asp (YMDD)에서 538번 잔기가 되는 Tyr 잔기를 가지도록 번호가 매겨진다. 다른 중합효소들 (예로, 843개 또는 845개 아미노산들 길이)로 아미노산 잔기들의 번호 매기기를 적용하는 것은 통상의 기술자의 능력의 범위에 속한다.
본 명세서에서 사용되는 바, 용어 "고유의 (native)" 또는 "자연적으로-생기는 (naturally-occurring)"은 임의의 아미노산 서열 (예로, 펩타이드, 폴리펩타이드, 단백질 등) 또는 뉴클레오타이드 서열 (예로, 유전자, 핵산 분자, 폴리뉴클레오타이드 등)과 연결하여 사용될 때 연구실시에서 사람에 의해 인위적으로 변형되거나 돌연변이된 것과는 구별되는 바 (예로, 돌연변이체) 자연에서 출처로부터 발견되고, 분리되고, 획득될 수 있는 아미노산 서열 또는 뉴클레오타이드 서열을 말한다. 자연에서 이러한 출처들은 감염된 유기체로부터 수집되거나 HBV에 노출되었던 생물학적 시료들 (예로, 혈액, 혈장, 혈청들, 정액, 타액, 조직 절편들, 생검 표본 등), 배양된 세포들 (HepG2.2.15, HuH6-C15 (Sureau et al., 1986, Cell 47: 37; Sells et al., 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. 84(4): 1005); HuH7.TA61 또는 HuH7.TA62 (Sun et al., 2006, J Hepatol. 45(5): 636)와 같음), 조직 배양액들뿐만 아니라 재조합 물질들을 포함한다. 재조합 물질들은 제한되지 않고, HBV 분리물들 (예로, 기탁 기관들에서 입수가능함), HBV 게놈, 게놈 RNA 또는 cDNA 라이브러리들, HBV 게놈을 포함하는 벡터들 또는 그들의 단편(들) 또는 이러한 요소들을 포함하는 것으로 알려진 임의의 선행기술의 벡터를 포함한다.
설명하자면, "고유의 HBV 중합효소"는 당해 기술분야에서 기술된 임의의 자연적으로-생기는 HBV 유전형, 균주 또는 분리물의 ORF P에 의해 인코딩되는 HBV 중합효소 (예로, 유전형에 의존하여 832개 내지 845개 아미노산들의 폴리펩타이드) 또는 그의 단편을 의미한다. 용어 "고유의"는 또한 특정한 유전형을 대표하는 HBV 중합효소 폴리펩타이드/펩타이드들을 포괄하고, 따라서 특정한 유전형의 다양한 HBV 중합효소들의 서열 정렬 이후에 전형적으로 결정되는 공통적 또는 거의 공통적 서열에 해당하는 아미노산 서열을 포함한다.
용어 "돌연변이체 (mutant)"는 본 명세서에서 사용되는 바 고유의 폴리펩타이드에 관하여 하나 이상의 돌연변이(들)을 나타내는 폴리펩타이드를 말한다. 설명하자면, "돌연변이 중합효소 폴리펩타이드"는 본 명세서에서 기술된 바와 같이 연구실에서 사람에 의해 인위적으로 돌연변이되거나 변경된 이후에 고유의 중합효소로부터 기원하는 중합효소 폴리펩타이드를 말한다. 임의의 돌연변이(들)이 하나 이상의 뉴클레오타이드/아미노산 잔기(들)의 치환, 삽입 및/또는 결실, 비-자연적 배열들 (예로, 외래 폴리펩타이드들/펩타이드들과의 융합)뿐만 아니라 이들 가능성들의 임의의 조합을 포함하여 착상될 수 있다. 여러 돌연변이들이 참작될 때, 그들은 연속적 잔기들 및/또는 비-연속적 잔기들을 고려할 수 있다. 돌연변이(들)은 부위-유도된 돌연변이화 (mutagenesis) (예로, 에머샴사의 SculptorTM 시험관내 돌연변이화 시스템, Les Ullis, 프랑스), PCR 돌연변이화, DNA 셔플링과 같은 당업자들에게 알려져 있는 많은 방식들에 의해 그리고 화학적 합성 기법들 (예로, 합성적 핵산 분자들을 가져옴)에 의해 생성될 수 있다. 바람직한 구현예들에 따르면, 본 발명에 의해 참작되는 돌연변이(들)은 중합효소 활성 및/또는 RNaseH 활성과 같은 하기 적어도 하나의 효소적 활성을 파괴할 목적으로, 고유의 HBV 중합효소에 의해 나타나는 적어도 하나의 효소적 활성에서 직접적 또는 간접적으로 관여하는 하나 이상의 아미노산 잔기(들) (연속적이거나 아니거나)의 결실(들) 및/또는 치환(들)을 포괄한다. 본 발명의 맥락에서, 결과로 나온 돌연변이 중합효소 폴리펩타이드는 전체적으로 미-돌연변이된 부분들에서 고유의 HBV 중합효소와 높은 정도의 일치도 (예로, 적어도 80%)를 보유한다.
본 발명에 있어서, 상기 HBV 중합효소 폴리펩타이드는, 이에 제한되는 것은 아니나, 하기로 구성된 폴리펩타이드 군에서 선택되는 것을 특징으로 할 수 있다:
(a) 서열번호 9의 아미노산 서열에서, 203번 위치의 Tyr 잔기, 204번 위치의 Met 잔기, 205번 위치의 Asp 잔기, 206번 위치의 Asp 잔기, 207번 위치의 Val 잔기, 208번 위치의 Val 잔기 및 209번 위치의 Leu 잔기가 결실된 것을 특징으로 하는 돌연변이된 중합효소 도메인을 포함하는 폴리펩타이드;
(b) 고유의 HBV 중합효소에 의해 정상적으로 나타나는 RNaseH 활성을 기능적으로 파괴하는 하나 이상의 아미노산 잔기의 돌연변이를 포함하는 돌연변이된 RNaseH 도메인을 포함하는 폴리펩타이드; 및
(c) 돌연변이된 중합효소 도메인 및 돌연변이된 RNaseH 도메인을 포함하는 폴리펩타이드.
상기 돌연변이된 RNaseH 도메인은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 할 수 있고, 상기 돌연변이된 중합효소 도메인 및 돌연변이된 RNaseH 도메인을 포함하는 폴리펩타이드는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 사용되는 바, 용어 "코어 폴리펩타이드"는 고유의 HBV 코어 (HBc) 단백질에 포함된 적어도 100개의 아미노산 잔기들을 보유하는 폴리펩타이드를 말한다. 본 용어는 상기에 인용된 것들과 같은 자연에서 HBV의 출처로부터 발견되고, 분리되고, 획득될 수 있는 임의의 HBV 균주, 분리물 또는 유전형의 고유의 (예로, 자연적으로-생기는) 코어 폴리펩타이드들 뿐만 아니라 그들의 변형된 코어 및 단편들을 포괄한다.
본 발명에서 사용하는 HBV 코어 폴리펩타이드는 돌연변이 중합효소 폴리펩타이드가 기원하는 바이러스와 동일하거나 서로 다른 유전형을 가지는 HBV 바이러스로부터 기원할 수 있다. 바람직하게, 그들은 둘 다 유전형 D 바이러스로부터, 보다 상세하게 Y07587 분리물로부터 기원할 수 있다. 코어 폴리펩타이드들 및 그들의 인코딩 서열들은 인코딩 서열의 화학적 합성 (예로, 합성 핵산 분자를 가져옴) 또는 재조합 수단 (예로, 해당하는 뉴클레오타이드 서열의 부위-유도된 돌연변이화, PCR 돌연변이화, DNA 셔플링)과 같은 당업자들에게 알려져 있는 많은 방식들에 의해 생성될 수 있다.
임의의 변형(들)은, 결과로 얻은 코어가 본 명세서에서 기술된 돌연변이 중합효소 폴리펩타이드와 조합되거나 융합될 때 바람직하게 고유의 코어 폴리펩타이드와 동일한 범위로 또는 더 높은 범위로 유의한 면역원 활성을 보유하는 경우라면 고려될 수 있다.
적합한 변형들은 고유의 코어 폴리펩타이드의 C-말단에서 또는 그의 C-말단 일부 내에서 정상적으로 존재하는 적어도 10개의 아미노산 잔기들 및 많아야 41개의 아미노산 잔기들의 절단을, 고유의 코어 폴리펩타이드의 143번, 144번, 145번, 146번, 147번, 148번 잔기 또는 149번 잔기부터 C-말단 (183번 잔기)까지 연장하는 절단에 대한 특별한 선호도를 가지고 포함한다.
본 발명에 있어서, 상기 HBV 코어 폴리펩타이드는 서열번호 12의 아미노산 서열에서 148번 또는 149번 잔기 위치에서 C-말단이 절단된 서열을 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "외피(envelope) (또는 HBsAg) 폴리펩타이드"는 HBV 외피의 하나 이상의 단편을 의미한다. 이러한 단편은 약 15개 내지 약 100개의 아미노산 잔기, 바람직하게는 적어도 20개 내지 최대 60개의 연속적 아미노산을 가지며, 고유의 HBsAg 단백질에 정상적으로 존재하는 헬퍼 T (TH) 세포 및/또는 세포독성 T (CTL) 세포에 특이적인 하나 이상의 B 및/또는 T 세포 에피토프를 포함한다. 또한, 이러한 에피토프(들)는 다양한 MHC 클래스 I 및/또는 클래스 II 항원 (예를 들어, A2, A24, DR, DP 등)으로 제한될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명에서 사용되는 하나 이상의 외피 폴리펩타이드(들)는 HBV preS1 및 preS2 폴리펩타이드의 어떤 부분도 포함하지 않는다.
본 발명에서 사용되는 HBV 외피 폴리펩타이드(들)는 돌연변이 중합효소 및/또는 코어 폴리펩타이드가 기원하는 바이러스와 동일하거나 서로 다른 유전형을 가지는 HBV 바이러스로부터 기원할 수 있다. 바람직하게는, 그들은 둘 다 유전형 D 바이러스부터, 보다 상세하게 Y07587 분리물로부터 기원할 수 있다. 외피 폴리펩타이드들 및 그들의 인코딩 서열들은 인코딩 서열의 화학적 합성 (예로, 합성 핵산 분자를 가져옴) 또는 재조합 수단 (예로, 해당하는 뉴클레오타이드 서열의 부위-유도된 돌연변이화, PCR 돌연변이화, DNA 셔플링)과 같은 당업자들에게 알려져 있는 많은 방식들에 의해 생성될 수 있다.
본 발명에서 사용될 수 있는 예시적인 HBV 외피 폴리펩타이드는 당 업계에 기술되어 있다 (예를 들어, WO93/03764; WO94/19011; Desombere et al., 2000, Clin. Exp. Immunol 122: 390; Loirat et al., 2000, J. Immunol. 165: 4748; Schirmbeck et al, 2002, J. Immunol 168: 6253; Depla et al, 2008, J. Virol. 82: 435 및 WO2011/015656). 특히 바람직한 HBV 외피 폴리펩타이드는 WO2011/015656에 기재된 env1 및 env2 도메인을 포함한다. "Env1"은 고유 HBsAg의 대략 위치 14에서 대략 위치 51까지의 부분에 해당하고, “Env2”는 대략 위치 165에서 대략 위치 194까지의 HBsAg 부분에 해당한다.
본 발명에 있어서, 상기 HBV 외피 폴리펩타이드는 서열번호 13의 아미노산 서열을 갖는 HBV 외피 도메인 Env1 및 서열번호 14의 아미노산 서열을 갖는 HBV 외피 도메인 Env2로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 도메인의 서열을 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.
바람직한 구현예에서, 조합은 융합의 형태이다. 이에 따라, 본 발명은 본 명세서에서 기술된 HBV 중합효소 폴리펩타이드 및 이와 융합되는 물질을 포함하는 융합 단백질에 관한 것이다. 바람직하게, HBV 중합효소 폴리펩타이드와 융합되는 물질은 env1 및 env2 도메인에 특정 선호도를 갖는 HBV 외피 폴리펩타이드의 하나 이상의 단편(들) 또는 C-말단 절단되고, 특히 148번 잔기에서 절단된 코어 폴리펩타이드에 대한 특정한 선호도를 가진 HBV 코어 폴리펩타이드이다. 바람직하게, HBV 코어 폴리펩타이드는 본 명세서에서 기술된 HBV 중합효소 폴리펩타이드의 N-말단과 구조틀에 맞추어 융합되고, 개시인자 Met으로 시작하여 임의의 종결 코돈이 없는 코어 폴리펩타이드 (변형된 또는 고유의), HBV 중합효소 폴리펩타이드 (임의의 Met 개시인자가 없음) 및 종결 코돈을 가진 융합 단백질을 가져온다.
바람직하게는, 하나 이상의 HBV 외피 폴리펩타이드의 단편은 융합단백질의 N-말단, C-말단 및/또는 내부에, 예를 들어, HBV 중합효소 폴리펩타이드 내에 (예를 들면, 돌연변이된 중합효소 및/또는 RNaseH 도메인이 부족한 부분을 대신하여) 또는 코어와 HBV 중합효소 폴리펩타이드 사이에 위치할 수 있다. 따라서, 번역-매개 조절 요소 (예를 들어, 융합 단백질의 N- 및 C- 말단에서 Met 개시인자 및 종결코돈)의 필요성 및 위치를 정의하는 것은 당업자의 범위 내에 있다.
보다 바람직하게는 본 발명에 있어서, 상기 B형 간염 바이러스 특이적 항원은 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 할 수 있지만, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 명세서에서 주어진 효소적 활성과 연결하여 사용되는 바 용어 "파괴 (disrupt)"와 같은 임의의 관련 용어는 "없애다" (잔여 활성이 전혀 없음) 또는 "유의하게 감소시키다" (고유의 중합효소에 의해 나타나는 활성의 20% 이하의 잔여 활성)를 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 바, 용어 "분리된 (isolated)"은 그의 자연적 환경으로부터 제거된 (예로, 이것이 자연적으로 연관된 적어도 하나의 다른 구성성분(들)로부터 분리된) 단백질, 폴리펩타이드, 펩타이드, 폴리뉴클레오타이드, 플라스미드 벡터, 바이러스성 벡터, 또는 숙주 세포를 말한다.
본 발명에 있어서, 상기 서열번호 1 내지 서열번호 15의 정보 및 서열을 하기 표 1에 나타내었다.
설명 아미노산 서열 서열
번호
HCDR1 of GC1102 GFSLTKYK 1
HCDR2 of GC1102 ISSTSRDI 2
HCDR3 of GC1102 TRDGWL 3
LCDR1 of GC1102 QGIYNS 4
LCDR2 of GC1102 STS 5
LCDR3 of GC1102 YFVTPET 6
Heavy chain variable region of GC1102 EVQLVESGGG LVKPGGSLRL SCSASGFSLT KYKMTWVRQA PGKGLEWVSS ISSTSRDIDY ADSVKGRFTI SRDNAKNSLF LQMSSLRVDD TAVYYCTRDG WLWGWDVRSN YYYNALDVWG QGTTVTVSS 7
Light chain variable region of GC1102 DIVVTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQGIY NSIAWYQQKP GKAPKLLLYS TSTLLSGVPS RFSGSGSGTD YTLTITNLQP EDFATYYCQQ YFVTPETFGQ GTKLEIKR 8
Polymerase domain with YMDDVVL motif of the HBV polymerase polypeptide EDWGPCAEHG EHHIRIPRTP ARVTGGVFLV DKNPHNTAES RLVVDFSQFS RGNYRVSWPK FAVPNLQSLT NLLSSNLSWL SLDVSAAFYH LPLHPAAMPH LLVGSSGLSR YVARLSSNSR IFNYQHGTMQ NLHDSCSRNL YVSLLLLYQT FGRKLHLYSH PIILGFRKIP MGVGLSPFLL AQFTSAICSV VRRAFPHCLA FSYMDDVVLG AKSVQHLESL FTAVTNFLLS LGIHLNPNKT KRWGYSLHFM GYVIGCYGSL PQDHIIQKIK ECFRKLPVNR PIDWKVCQRI VGLLGFAAPF TQCGYPALMP LYACIQSKQA FTFSPTY 9
Mutated RNaseH domain of the HBV polymerase polypeptide RPGLCQVFAH ATPTGWGLVM GHQRMRGTFL SRKYTSFPWL LGCAANWILR GTSFVYYPSA LNPYHDPSRG RLGLSRPLLR LPFRPTTGRT SLYADSPSVP SHLPDRVHFA SPLHVAWRPP 10
HBV Polymerase polypeptide with mutated Polymerase and RNase domains PL SYQHFRRLLL LDDEAGPLEE ELPRLADEGL NRRVAEDLNL GNLNVSIPWT HKVGNFTGLY SSTVPVFNPH WKTPSFPNIH LHQDIIKKCE QFVGPLTVNE KRRLQLIMPA RFYPNVTKYL PLDKGIKPYY PEHLVNHYFQ TRHYLHTLWK AGILYKRETT HSASFCGSPY SWEQKLQHGA ESFHQQSSGI LSRPPVGSSL QSKHRKSRLG LQSQQGHLAR RQQGRSWSIR AGIHPTARRS FGVEPSGSGH STNLASKSAS CLYQSPVRKA AYPAVSTFEK HSSSGHAVEL HNLPPNSARS QSERPVFPCW WLQFRNSKPC SDYCLSHIVN LLEDWGPCAE HGEHHIRIPR TPARVTGGVF LVDKNPHNTA ESRLVVDFSQ FSRGNYRVSW PKFAVPNLQS LTNLLSSNLS WLSLDVSAAF YHLPLHPAAM PHLLVGSSGL SRYVARLSSN SRIFNYQHGT MQNLHDSCSR NLYVSLLLLY QTFGRKLHLY SHPIILGFRK IPMGVGLSPF LLAQFTSAIC SVVRRAFPHC LAFSGAKSVQHL ESLFTAVTNF LLSLGIHLNP NKTKRWGYSL HFMGYVIGCY GSLPQDHIIQ KIKECFRKLP VNRPIDWKVC QRIVGLLGFA APFTQCGYPA LMPLYACIQS KQAFTFSPTY KAFLCKQYLN LYPVARQRPG LCQVFAHATP TGWGLVMGHQ RMRGTFL SRK YTSFPWLLGC AANWILRGTS FVYYPSALNP YHDPSRGRLG LSRPLLRLPF RPTTGRTSLY ADSPSVPSHL PDRVHFASPL HVAWRPP 11
HBV Core(wild type) MDIDPYKEFG ATVELLSFLP SDFFPSVRDL LDTASALYRE ALESPEHCSP HHTALRQAIL CWGELMTLAT WVGGNLEDPI SRDLVVSYVN TNMGLKFRQL LWFHISCLTF GRETVIEYLV SFGVWIRTPP AYRPPNAPIL STLPETTVVR RRGRSPRRRT PSPRRRRSQS PRRRRSQSRE SQC 12
HBV Envelope domain Env1 VLQAGFFLL TRILTIPQSL DSWWTSLNFL GGTTVCLGQ 13
HBV Envelope domain Env2 WASARFSWLS LLVPFVQWFV GLSPTVWLSV 14
Whole antigen sequence of TG1050(truncated HBV Core domain, modified HBV Polymerase polypeptide with Mutated Polymerase and RNaseH and two HBV Envelope domains) MDIDPYKEFG ATVELLSFLP SDFFPSVRDL LDTASALYRE ALESPEHCSP HHTALRQAIL CWGELMTLAT WVGGNLEDPI SRDLVVSYVN TNMGLKFRQL LWFHISCLTF GRETVIEYLV SFGVWIRTPP AYRPPNAPIL STLPETTVPL SYQHFRRLLL LDDEAGPLEE ELPRLADEGL NRRVAEDLNL GNLNVSIPWT HKVGNFTGLY SSTVPVFNPH WKTPSFPNIH LHQDIIKKCE QFVGPLTVNE KRRLQLIMPA RFYPNVTKYL PLDKGIKPYY PEHLVNHYFQ TRHYLHTLWK AGILYKRETT HSASFCGSPY SWEQKLQHGA ESFHQQSSGI LSRPPVGSSL QSKHRKSRLG LQSQQGHLAR RQQGRSWSIR AGIHPTARRS FGVEPSGSGH STNLASKSAS CLYQSPVRKA AYPAVSTFEK HSSSGHAVEL HNLPPNSARS QSERPVFPCW WLQFRNSKPC SDYCLSHIVN LLEDWGPCAE HGEHHIRIPR TPARVTGGVF LVDKNPHNTA ESRLVVDFSQ FSRGNYRVSW PKFAVPNLQS LTNLLSSNLS WLSLDVSAAF YHLPLHPAAM PHLLVGSSGL SRYVARLSSN SRIFNYQHGT MQNLHDSCSR NLYVSLLLLY QTFGRKLHLY SHPIILGFRK IPMGVGLSPF LLAQFTSAIC SVVRRAFPHC LAFSVLQAGF FLLTRILTIP QSLDSWWTSL NFLGGTTVCL GQGAKSVQHL ESLFTAVTNF LLSLGIHLNP NKTKRWGYSL HFMGYVIGCY GSLPQDHIIQ KIKECFRKLP VNRPIDWKVC QRIVGLLGFA APFTQCGYPA LMPLYACIQS KQAFTFSPTY KAFLCKQYLN LYPVARQRPG LCQVFAHATP TGWGLVMGHQ RMRGTFLWAS ARFSWLSLLV PFVQWFVGLS PTVWLSVSRK YTSFPWLLGC AANWILRGTS FVYYPSALNP YHDPSRGRLG LSRPLLRLPF RPTTGRTSLY ADSPSVPSHL PDRVHFASPL HVAWRPP 15
본 발명에 있어서, 상기 조성물은 HBsAg 미검출(HBsAg loss)이 최소한 3개월 이상, 바람직하게는 4개월 이상, 더욱 바람직하게는 6개월 이상 유지되는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 상기 B형 간염은 만성 B형 간염(chronic hepatitis B)인 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명은 다른 관점에서, GFSLTKYK(서열번호 1)의 HCDR1, ISSTSRDI(서열번호 2)의 HCDR2 및 TRDGWL(서열번호 3)의 HCDR3를 포함하는 중쇄 가변영역과, QGIYNS(서열번호 4)의 LCDR1, STS(서열번호 5)의 LCDR2 및 YFVTPET(서열번호 6)의 LCDR3를 포함하는 경쇄 가변영역을 함유하는 B형 간염 바이러스(HBV)에 특이적인 항체를 포함하는 B형 간염 치료용 약제학적 조성물과, B형 간염 바이러스 특이적 항원을 코딩하는 염기서열을 포함하는 아데노바이러스(AV) 기반 치료용 백신 조성물을 병용하여 사용하는 것을 특징으로 하는 B형 간염의 치료 방법에 관한 것이다.
본 발명에 있어서, 상기 B형 간염 바이러스(HBV)에 특이적인 항체는 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역(VH)과, 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역(VL)을 함유하는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 B형 간염 바이러스(HBV)에 특이적인 항체를 포함하는 B형 간염 치료용 약제학적 조성물과 B형 간염 바이러스 특이적 항원을 코딩하는 염기서열을 포함하는 아데노바이러스(AV) 기반 치료용 백신 조성물은 동시 또는 순차 투여되는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 B형 간염 바이러스(HBV)에 특이적인 항체를 포함하는 B형 간염 치료용 약제학적 조성물은 주 1회 또는 2주에 1회 간격으로 10주 내지 20주간 투여되고, 상기 B형 간염 바이러스 특이적 항원을 코딩하는 염기서열을 포함하는 아데노바이러스(AV) 기반 치료용 백신 조성물은 상기 B형 간염 바이러스(HBV)에 특이적인 항체를 포함하는 B형 간염 치료용 약제학적 조성물의 첫번째 투여 이후 3주 내지 5주 경과 시점부터 매주 1회 2주 내지 5주간 투여되는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 상기 B형 간염 바이러스(HBV)에 특이적인 항체의 단위 투여 용량은 5 내지 50 mg/kg이고, B형 간염 바이러스 특이적 항원을 코딩하는 염기서열을 포함하는 아데노바이러스(AV) 기반 치료용 백신의 단위 투여 용량은 105 내지 1010 IU인 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 상기 B형 간염 바이러스 특이적 항원은 HBV 코어 폴리펩타이드(HBV Core polypeptide), HBV 중합효소 폴리펩타이드(HBV Polymerase polypeptide), HBV 외피 폴리펩타이드(HBV Envelope polypeptide) 및 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택된 polypeptide의 전부 또는 일부 서열을 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 HBV 중합효소 폴리펩타이드는, 이에 제한되는 것은 아니나, 하기로 구성된 폴리펩타이드 군에서 선택되는 것을 특징으로 할 수 있다:
(a) 서열번호 9의 아미노산 서열에서, 203번 위치의 Tyr 잔기, 204번 위치의 Met 잔기, 205번 위치의 Asp 잔기, 206번 위치의 Asp 잔기, 207번 위치의 Val 잔기, 208번 위치의 Val 잔기 및 209번 위치의 Leu 잔기가 결실된 것을 특징으로 하는 돌연변이된 중합효소 도메인을 포함하는 폴리펩타이드;
(b) 고유의 HBV 중합효소에 의해 정상적으로 나타나는 RNaseH 활성을 기능적으로 파괴하는 하나 이상의 아미노산 잔기의 돌연변이를 포함하는 돌연변이된 RNaseH 도메인을 포함하는 폴리펩타이드; 및
(c) 돌연변이된 중합효소 도메인 및 돌연변이된 RNaseH 도메인을 포함하는 폴리펩타이드.
상기 돌연변이된 RNaseH 도메인은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 할 수 있고, 상기 돌연변이된 중합효소 도메인 및 돌연변이된 RNaseH 도메인을 포함하는 폴리펩타이드는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 상기 HBV 코어 폴리펩타이드는 서열번호 12의 아미노산 서열에서 148번 또는 149번 잔기에서 C-말단이 절단된 서열을 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 HBV 외피 폴리펩타이드는 서열번호 13의 아미노산 서열을 갖는 HBV 외피 도메인 Env1 및 서열번호 14의 아미노산 서열을 갖는 HBV 외피 도메인 Env2으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 도메인의 서열을 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.
바람직하게는, 본 발명에 있어서, 상기 B형 간염 바이러스 특이적 항원은 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 할 수 있지만, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, HBsAg 미검출(HBsAg loss)이 최소한 3개월, 바람직하게는 4개월, 더욱 바람직하게는 6개월 이상 유지되는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 B형 간염은 만성 B형 간염(chronic hepatitis B)인 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명은 또 다른 관점에서, 상기 B형 간염 치료용 백신 조성물과 병용하여 B형 간염을 치료하기 위한 상기 HBV 특이적 항체를 포함하는 약제학적 조성물의 용도에 관한 것이다.
본 발명은 또 다른 관점에서, 상기 B형 간염 치료용 백신 조성물과 병용하는 B형 간염 치료용 약제 제조를 위한, 상기 HBV 특이적 항체를 포함하는 약제학적 조성물의 사용에 관한 것이다.
본 발명의 용도 및 사용은 상술한 “상기 B형 간염 치료용 백신 조성물과 병용하여 B형 간염을 치료하기 위한 상기 HBV 특이적 항체를 포함하는 약제학적 조성물”을 이용하기 때문에, 중복된 내용은 그 기재를 생략한다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
실시예 1: 재료
실시예 1-1: 검체(sample)
(1) sGC1102 (Surrogate GC1102)
GC1102는 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역과, 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역을 포함하는 완전 인간 단클론항체(fully human monoclonal antibody)로, 마우스에 주입할 경우 Anti-Drug Antibody (ADA)가 만들어져서 GC1102의 효력을 평가하는데 있어 간섭이 일어날 수 있다. 때문에 마우스 IgG로 치환하는 Surrogate GC1102 (sGC1102)를 제작하여 마우스 실험에 이용한다.
Sigma mouse-Immunoglobin (mIgG)을 음성대조군으로 사용하였으며, powder를 1xPBS에 10mg/ml 녹인 후 20mg/kg되도록 1xPBS로 희석하여 투여한다.
(2) TG1050 및 Empty adenovirus
TG1050은 Transgene사가 개발한 Adenovirus type 5의 치료백신으로, B형 간염 바이러스 특이적 항원인 서열번호 15의 아미노산을 코딩하는 염기서열을 포함하며, 구체적으로는 절단된 core 도메인, 변형된 polymerase 도메인, HBsAg 일부 도메인으로 구성된 융합단백질을 발현할 수 있다. -70℃ deep freezer에 보관 후 투여시기에 thawing하여 투여한다.
음성대조군 Empty adenovirus 또한 같은 process를 통하여 보관/투여한다.
(3) 마우스 조직 및 혈청
sGC1102와 TG1050 투여 후, 매주 혈액에서 혈청을 분리하여 -70℃에 보관한다.
마지막 sGC1102 투여 6달 후 마우스를 sacrifice시켜 간 조직을 분리하여 -70℃에 보관한다.
실시예 1-2: 시약 및 시액 (Reagents)
마우스 실험용 시약
시약 및 시액 제조사 Cat no.
Mouse immunoglobulin Sigma I5381
hHBsAg Biomart HBsAg-8H
ELISA strip Thermo Scientific 468667
Peroxidase GCMS F1101
AccuPrep Genomic DNA Extraction kit BIONEER K-3032
TOPreal qPCR 2X premix low ROX Enzynomics RT500S
Cell lysis buffer Cell signaling Technology 9803
Pierce™ BCA Protein Assay Kit ThermoFisher 23225
PVDF membrane BioRad 1620177
20X Saline Sodium Citrate (SSC) buffer Sigma S6639
Horseradish peroxidase-conjugated anti-rabbit secondary antibody Sigma A6154
HBc standard antigen Abcam ab49013
ECL reagent GE healthcare RPN2106
Mouse IFN-γELISpot kit R&D systems XEL485
FBS Gibco 16000-044
Antibiotic-antimycotic ThermoFisher 15240-062
RPMI Gibco 11875-093
Red Blood Cell Lysing Buffer Sigma R7757
Overlapping peptide Transgene -
Recombinant Murine IL-2/100ug Pepprotech 212-12
실시예 1-3: 기기 및 기구 (Equipment)
기기
용도 기기명 제조사 모델명
HBsAg ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) Microplate reader VERSA max -
qPCR (Real-time polymerase chain reaction) ABI PRISM 7500 Applied Biosystems PN 4345287
NAGE (Native Agarose Gel Electrophoresis)-Western blot Chemi Doc Bio-Rad 1708265
IFN-γELISPOT (Enzyme-Linked ImmunoSpot) ADAM-MC automatic cell counter NanoEnTek Inc #ELR071FL
iSpot reader spectrum AID GmbH ADAM-M
실시예 2: 시험 방법 (Analytical Methods)
실시예 2-1: 실험 스케줄 및 마우스 그룹화
DNA hydrodynamic injection (HD injection) 방법으로 HBV genome을 전달하는 마우스 모델을 이용하여 실험을 진행하였다(Establishment of drug-resistant HBV small-animal models by hydrodynamic injection Acta Pharmaceutica Sinica B 2014;4(4):270-276; Biological characteristics of the A1762T/G1764A mutant strain of hepatitis B virus in vivo Molecular Medicine Reports 2015;12:5141-5148). pAAV_HBV1.2mer DNA (대만 Pj Chen 교수 제공)를 HD injection 방법으로 CBA/CaJ 마우스 내 hepatocyte로 in vivo transfection 시킨 후, 약 3개월 동안 매주 eye-bleeding을 통해 혈액을 채취하여 마우스 혈청을 확보하였다. 이후, 혈청상의 HBsAg 양을 정량하여, 만성 B형 간염 마우스를 확보하였다.
이후, 음성 대조군 mIgG 20mg/kg을 포함한, sGC1102 20mg/kg 단독, TG1050 108IU (V.P: 2x109) 단독, sGC1102 20mg/kg와 Empty adenovirus 108IU (V.P: 2x109) 병용, 및 sGC1102 20mg/kg와 TG1050 108IU (V.P: 2x109) 병용투여 그룹으로 총 5개의 그룹으로 나누어 각 그룹당 16~17마리의 만성 B형 간염 마우스를 사용하였다.
TG1050은 Transgene사와 항체와 치료백신의 치료 효과를 보고한 논문(Clearing Persistent Extracellular Antigen of Hepatitis B Virus An Immunomodulatory Strategy To Reverse Tolerance for an Effective Therapeutic Vaccination. J Immunol 2016;196:3079-3087)을 바탕으로 치료 용량 및 투여 기간을 합의하여 실험을 진행하였다(도 1 및 표 4).
Figure pat00001
실시예 2-2: HBsAg ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)
ELISA strip plate에 PBS로 희석된 sGC1102 (5μg/mL) 100μL를 4℃에서 overnight 코팅한다.
용액을 제거한 후 실온에서 3시간 동안 5% BSA blocking 용액으로 blocking한다. Blocking 용액을 제거한 후, 다양한 농도의 마우스 혈청 100μL와 peroxidase와 conjugate된 polyclonal HBs 항체를 각 well에 첨가하고 실온에서 90분 동안 incubation한다.
결합되지 않은 HBsAg을 PBST (0.05% tween 20을 함유하는 PBS)로 4회 세척하여 제거한다. 효소 기질을 첨가하고 실온에서 30분 동안 incubation한다.
효소 기질 반응은 1.6N 황산을 각 well에 첨가함으로써 종결된다. 흡광도 측정은 450nm에서 Microplate reader에서 측정된다. HBsAg 검출을 위해, 얻어진 값은 알려진 농도의 hHBsAg (subtype: ay)로 표준 곡선을 적용하여 1mL 당 ng으로 전환시킨 후 사용된다. 각 실험은 두 번에 걸쳐 수행된다.
실시예 2-3: qPCR (Quantitative real-time polymerase chain reaction)
Liver 조직 10mg을 AccuPrep Genomic DNA Extraction kit (BIONEER, Cat no. K-3032)로 genomic DNA를 추출한 뒤, SYBR green reagents로 Realtime PCR을 수행하였다.
표 5에 나타낸 바와 같이, PCR 반응에 필요한 component를 첨가한다.
Genomic DNA 2μL
D.W 9.5μL
SYBR mixture 12.5μL
Primer-F 0.5μL
Primer-R 0.5μL
Total 20μL
Primer F- TGCATCGCTGGCGTAATAG(서열번호 16)와 R- ATCGGCCTTGCTGGTAATATC(서열번호 17)을 이용하여 95℃ denaturation 15분 후 [95℃ 10초 - 60℃ 15초 - 72℃ 30초] x 40 cycles로 수행하였다.
Prism software를 이용하여 세포의 genomic DNA 1μg당 DNA copy수를 계산하여 그래프화 한다.
실시예 2-4: NAGE (Native Agarose Gel Electrophoresis)-Western blot
간 조직 20mg을 2X lysis buffer 500μL (from 10X Cell lysis buffer; Cell signaling Technology, Cat no. #9803)에 넣고 ice에서 10분 incubation한 후 13,000rpm으로 4℃에서 15분 동안 원심분리 한다.
상층액을 얻은 후 ThermoFisher, Pierce™ BCA Protein Assay Kit을 이용하여 단백질 정량분석 후, 총 단백질 10μg이 포함된 용해액을 1% Agarose 젤에 1X Tris acetate-EDTA (TAE) 버퍼로 로딩한다.
로딩된 단백질을 PVDF membrane (Bio-Rad, Cat# 1620177)에 20X SSC 버퍼를 이용한 capillary 방법으로 transfer한 후 일반적인 Western blot 방법으로 검출한다.
Transfer가 완료된 PVDF Membrane을 4% skim milk로 상온에서 1시간 반응하여 blocking한다.
4% skim milk로 1:1000 희석한 anti-HBcAg antibody로 상온에서 3시간 반응한 후 1X TBST (0.05% tween 20을 함유하는 TBS)로 membrane washing을 10분 동안 3번 반복한다.
4% skim milk로 1:5000 희석한 horseradish peroxidase-conjugated anti-rabbit secondary antibody로 상온에서 1시간 반응한 후 1X TBST(0.05% tween 20을 함유하는 TBS)로 membrane washing을 10분 동안 3번 반복한다.
ECL reagent (GE healthcare, Cat# RPN2106) 내 ECL 용액으로 10초 감광 후 Chemi Doc 기기를 이용하여 밴드를 시각화한다.
실시예 2-5: IFN -γ ELISPOT (Enzyme-Linked ImmunoSpot )
마우스 비장을 cell strainer(40μm)를 이용하여 파쇄하고, 10 mL complete RPMI medium (10% FBS, 1% antibiotic-antimycotic, 1X 2-mercaptoethanol)으로 15mL conical tube로 옮긴다.
원심분리 (5분, 1,500 rpm) 후, 상층액을 버리고 Red Blood Cell Lysing Buffer (Sigma) 1 mL을 이용하여 suspension을 한다.
Ice에서 5분 incubation을 한 뒤, PBS/FBS 1% 10 ml을 넣어 lysis를 멈춘 후 원심분리 (5분, 1,500 rpm)를 실행하여, 상층액을 버리고 다시 한 번 PBS/FBS 1% 10 mL을 넣어 resuspension한다. 원심분리 (5분, 1,500 rpm) 후, 상층액을 버리고 complete RPMI medium 1mL을 넣어 resuspension 하고, cell strainer (40μm)를 이용하여 filter한다.
비장세포 개수를 측정하고, 세포 농도를 2 X 106 cells/mL로 맞춘다. ELISpot plate의 well에 2 X 105 cells/100μL와 stimulation overlapping peptide (Final conc. 2μg/mL) + IL-2 (Final conc. 10U/mL) 100μL를 넣고 37℃ 세포배양기에서 40시간 incubation한다.
발색 반응은 XEL486 Kit (R&D systems)를 사용하였고, 제조자 프로토콜에 맞춰 진행하여 얻은 plate를 iSpot reader spectrum 기기를 이용하여 plate 내 spot의 개수를 측정한다.
실시예 3: 혈청 내 HBsAg 정량
마우스를 sacrifice하기 1주일 전 혈청 내 HBsAg를 정량분석한 결과, 음성 대조군인 mIgG 투여 그룹은 약물 투여 전 대비 41.2% (7/17)가 HBsAg 미검출 (HBsAg loss) 되었으며, 이는 자연적 치유로 간주할 수 있다.
sGC1102 20 mg/kg 단독투여 그룹은 약물 투여 전 대비 56.3% (9/16)가 HBsAg loss 되었으며, TG1050 108IU (V.P: 2x109) 단독투여 그룹은 64.7% (11/17)가 HBsAg loss 됨을 관찰하였다.
sGC1102와 Empty adenovirus (Empty Ad.) 108IU (V.P: 2x109) 병용투여 그룹은 약물 투여 전 대비 62.5% (10/16)의 HBsAg loss를 보였으며, sGC1102와 TG1050의 병용투여는 93.8% (15/16)의 HBsAg loss 비율을 보였다(표 6 및 도 2 내지 도 6).
Figure pat00002
각 그룹에서 얻은 HBsAg loss 비율 (X)을 음성 대조군인 mIgG에서 얻은 HBsAg loss 비율로 빼주어서 보정하면, sGC1102 단독투여, TG1050 단독투여, sGC1102와 Empty Ad. 병용투여 및 sGC1102와 TG1050 병용투여 시 HBsAg loss 비율은 각각 15.1%, 23.5%, 21.3% 및 52.6% 임을 확인하였다 (표 6).
마우스 sacrifice 1주일 전 혈청 내 HBsAg 농도를 정량분석한 결과, mIgG 대조군의 HBsAg는 465.7 ng/mL에서 관찰되었다. sGC1102 단일투여, TG1050 단일투여, sGC1102 그리고 Empty Ad 병용투여에서 HBsAg는 각각 216.6ng/mL, 470.6ng/mL 그리고 419.6ng/mL였으며, mIgG 대조군과 비교하여 통계적으로 유의한 차이는 관찰되지 않았다. 반면, sGC1102와 TG1050 병용투여시 HBsAg는 12.6ng/mL로 mIgG 대조군과 단일투여군 대비 통계적으로 유의한 감소를 관찰할 수 있었다(도 2 내지 도 7 및 표 6).
실시예 4: 간 내 바이러스 DNA정량
병용투여 시 항 바이러스 증대 효과를 명확하게 확인하기 위하여, 마우스 sacrifice 후 간 내 바이러스 DNA 정량을 Quantitative real time PCR (qPCR) 방법으로 진행하였으며, 동일 주령 Naive 마우스 2마리를 또 다른 음성 대조군으로 포함시켰다.
음성 대조군인 mIgG 투여 그룹의 간 내 HBV DNA의 평균값은 genomic DNA 1μg 당 약 1.5 X 105 copies인 것에 비해, sGC1102 단독투여 그룹은 약 8.2 X 104 copies로 약 1.8배 낮아지는 것을 확인하였지만, 통계적인 유의성은 없음을 확인하였다. TG1050 단독투여 그룹의 간 내 HBV DNA의 평균값은 약 1.1 X 105 copies로 mIgG 음성 대조군 대비 약 1.4배 낮아짐을 관찰하였지만, 마찬가지로 통계적인 유의성은 없음을 확인하였다(도 8A).
또 다른 대조군인 sGC1102와 Empty Ad. 병용투여 그룹의 간 내 HBV DNA의 평균값은 genomic DNA 1μg 당 약 8.4 X 104 copies로, sGC1102 단독투여 그룹의 간 내 HBV DNA 양과 거의 유사하였으며, 이를 통해 Empty Ad.에 의한 HBV DNA 억제 효과는 없음을 추정할 수 있다.
반면, sGC1102과 TG1050 병용투여 그룹의 간 내 HBV DNA의 평균값은 genomic DNA 1μg 당 약 3.3 X 103 copies로, 음성 대조군인 mIgG 투여 그룹, sGC1102 단독투여 및 sGC1102+Empty Ad 투여그룹 대비 통계적으로 유의하게 감소됨을 확인할 수 있었으며(vs mIgG: 약 46배, vs GC1102: 약 25배, sGC1102+Empty Ad: 약 25배), TG1050 단독투여 그룹 대비 약 33배 낮아짐을 확인할 수 있었다.
따라서 sGC1102와 TG1050 병용투여는 간 내 항 바이러스 효과를 통계적으로 유의하게 증가시킴을 확인할 수 있었다.
이러한 항 바이러스 효과가 HD injection된 간 내 주형 DNA (pAAV_HBV1.2mer DNA; AAV DNA)를 감소시킬 수 있는지 확인해 보았다.
음성 대조군인 mIgG 투여 그룹의 간 내 AAV DNA의 평균값은 genomic DNA 1μg 당 약 6.8 X 103 copies인 것에 비해, sGC1102 혹은 TG1050 단독투여 그룹의 간 내 AAV DNA는 각각 5.6 X 103 혹은 8.4 X 103 copies로 유의하게 변화되지 않음을 관찰되었다(도 8B). 또 다른 대조군인 sGC1102와 Empty Ad. 병용투여 그룹의 간 내 AAV DNA도 약 6.5 X 103 copies로, 유의하게 감소되지는 않은 것으로 관찰되었다.
하지만 sGC1102와 TG1050 병용투여 그룹의 내 AAV DNA의 평균값은 genomic DNA 1μg 당 5.0 X 102 copies로, mIgG 음성, sGC1102 단독투여 및 sGC1102+Empty Ad 투여 그룹 대비 통계적으로 유의하게 감소됨을 확인할 수 있었으며(vs mIgG: 약 12배, vs GC1102: 약 10배, sGC1102+Empty Ad: 약 12배), TG1050 단독투여 그룹 대비 약 10~15배 낮아짐을 확인할 수 있었다.
간 내 주형 DNA는 sGC1102 또는 TG1050 단독투여로 유의하게 감소되지 않음을 관찰하였으며, sGC1102와 TG1050 병용투여시 간 내 주형 DNA가 유의하게 감소됨을 확인할 수 있었다. 이는 항 바이러스 효과로 인해 간 세포 내 주형 DNA를 감소하거나, 바이러스가 존재하는 간 세포를 감소시킬 수 있음을 시사한다.
만성 B형 간염으로부터 치료되는 개념 중 하나인 'Functional cure'의 조건(Hepatitis B Cure: From Discovery to Regulatory Approval. Hepatology, 2017 Oct, 66(4); 1296-1313)으로 주형 DNA로부터 단백질 발현의 비활성을 확인하고자, 간 내 HBV nucleocapsid를 NAGE (Native Agarose Gel Electrophoresis)-Western blot 방법으로 검출하였다.
간 내 HBV nucleocapsid는 Western blot 방법으로 band의 시각화 유무에 따라 검출 여부를 결정하였다. 실험은 3회 반복 진행하여 이 중 1회라도 육안으로 band가 확인되면 검출로 간주하였다(도 9의 빨간색 화살표).
sGC1102 투여그룹 (단독 혹은 병용투여)의 혈청 내 HBsAg loss 비율은 nucleocapsid 미검출율과 약간의 차이가 있는 반면(HBsAg loss 비율 vs nucleocapsid 미검출율: sGC1102 단독 투여; 56.3% vs 37.5%, sGC1102와 TG1050 병용투여; 93.8% vs 81.2%), TG1050 단독투여 그룹 내 HBsAg loss 비율과 nucleocapsid 미검출율은 차이가 없음(64.7%로 동일)을 확인할 수 있었다 (표 7).
Figure pat00003
NAGE-Western blot 분석을 통해 각 물질의 단독투여 혹은 sGC1102와 Empty Ad. 병용투여 대비 sGC1102와 TG1050 병용투여가 nucleocapsid 미검출율이 더 큰 것으로 확인되었으며, 이는 병용투여에 의해 항 바이러스 효과가 증대되어 'Functional cure'의 조건인 단백질 발현이 비활성화됨을 시사한다 (표 7).
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
<110> Green Cross Corporation TRANSGENE <120> A Composition for Treatment of Hepatitis B Comprising HBV Specific Antibody for Combination with Vaccine Composition <130> P20-B312 <160> 17 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR1 of GC1102 <400> 1 Gly Phe Ser Leu Thr Lys Tyr Lys 1 5 <210> 2 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR2 of GC1102 <400> 2 Ile Ser Ser Thr Ser Arg Asp Ile 1 5 <210> 3 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR3 of GC1102 <400> 3 Thr Arg Asp Gly Trp Leu 1 5 <210> 4 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR1 of GC1102 <400> 4 Gln Gly Ile Tyr Asn Ser 1 5 <210> 5 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR2 of GC1102 <400> 5 Ser Thr Ser 1 <210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR3 of GC1102 <400> 6 Tyr Phe Val Thr Pro Glu Thr 1 5 <210> 7 <211> 129 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain variable region of GC1102 <400> 7 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ser Leu Thr Lys Tyr 20 25 30 Lys Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Ser Thr Ser Arg Asp Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Val Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Asp Gly Trp Leu Trp Gly Trp Asp Val Arg Ser Asn Tyr Tyr 100 105 110 Tyr Asn Ala Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 125 Ser <210> 8 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain variable region of GC1102 <400> 8 Asp Ile Val Val Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Tyr Asn Ser 20 25 30 Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Leu 35 40 45 Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Leu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Thr Asn Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Phe Val Thr Pro Glu 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 9 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Polymerase domain with YMDDVVL motif of the HBV polymerase polypeptide <400> 9 Glu Asp Trp Gly Pro Cys Ala Glu His Gly Glu His His Ile Arg Ile 1 5 10 15 Pro Arg Thr Pro Ala Arg Val Thr Gly Gly Val Phe Leu Val Asp Lys 20 25 30 Asn Pro His Asn Thr Ala Glu Ser Arg Leu Val Val Asp Phe Ser Gln 35 40 45 Phe Ser Arg Gly Asn Tyr Arg Val Ser Trp Pro Lys Phe Ala Val Pro 50 55 60 Asn Leu Gln Ser Leu Thr Asn Leu Leu Ser Ser Asn Leu Ser Trp Leu 65 70 75 80 Ser Leu Asp Val Ser Ala Ala Phe Tyr His Leu Pro Leu His Pro Ala 85 90 95 Ala Met Pro His Leu Leu Val Gly Ser Ser Gly Leu Ser Arg Tyr Val 100 105 110 Ala Arg Leu Ser Ser Asn Ser Arg Ile Phe Asn Tyr Gln His Gly Thr 115 120 125 Met Gln Asn Leu His Asp Ser Cys Ser Arg Asn Leu Tyr Val Ser Leu 130 135 140 Leu Leu Leu Tyr Gln Thr Phe Gly Arg Lys Leu His Leu Tyr Ser His 145 150 155 160 Pro Ile Ile Leu Gly Phe Arg Lys Ile Pro Met Gly Val Gly Leu Ser 165 170 175 Pro Phe Leu Leu Ala Gln Phe Thr Ser Ala Ile Cys Ser Val Val Arg 180 185 190 Arg Ala Phe Pro His Cys Leu Ala Phe Ser Tyr Met Asp Asp Val Val 195 200 205 Leu Gly Ala Lys Ser Val Gln His Leu Glu Ser Leu Phe Thr Ala Val 210 215 220 Thr Asn Phe Leu Leu Ser Leu Gly Ile His Leu Asn Pro Asn Lys Thr 225 230 235 240 Lys Arg Trp Gly Tyr Ser Leu His Phe Met Gly Tyr Val Ile Gly Cys 245 250 255 Tyr Gly Ser Leu Pro Gln Asp His Ile Ile Gln Lys Ile Lys Glu Cys 260 265 270 Phe Arg Lys Leu Pro Val Asn Arg Pro Ile Asp Trp Lys Val Cys Gln 275 280 285 Arg Ile Val Gly Leu Leu Gly Phe Ala Ala Pro Phe Thr Gln Cys Gly 290 295 300 Tyr Pro Ala Leu Met Pro Leu Tyr Ala Cys Ile Gln Ser Lys Gln Ala 305 310 315 320 Phe Thr Phe Ser Pro Thr Tyr 325 <210> 10 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Mutated RNaseH domain of the HBV polymerase polypeptide <400> 10 Arg Pro Gly Leu Cys Gln Val Phe Ala His Ala Thr Pro Thr Gly Trp 1 5 10 15 Gly Leu Val Met Gly His Gln Arg Met Arg Gly Thr Phe Leu Ser Arg 20 25 30 Lys Tyr Thr Ser Phe Pro Trp Leu Leu Gly Cys Ala Ala Asn Trp Ile 35 40 45 Leu Arg Gly Thr Ser Phe Val Tyr Tyr Pro Ser Ala Leu Asn Pro Tyr 50 55 60 His Asp Pro Ser Arg Gly Arg Leu Gly Leu Ser Arg Pro Leu Leu Arg 65 70 75 80 Leu Pro Phe Arg Pro Thr Thr Gly Arg Thr Ser Leu Tyr Ala Asp Ser 85 90 95 Pro Ser Val Pro Ser His Leu Pro Asp Arg Val His Phe Ala Ser Pro 100 105 110 Leu His Val Ala Trp Arg Pro Pro 115 120 <210> 11 <211> 791 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HBV Polymerase polypeptide with mutated Polymerase and RNase domains <400> 11 Pro Leu Ser Tyr Gln His Phe Arg Arg Leu Leu Leu Leu Asp Asp Glu 1 5 10 15 Ala Gly Pro Leu Glu Glu Glu Leu Pro Arg Leu Ala Asp Glu Gly Leu 20 25 30 Asn Arg Arg Val Ala Glu Asp Leu Asn Leu Gly Asn Leu Asn Val Ser 35 40 45 Ile Pro Trp Thr His Lys Val Gly Asn Phe Thr Gly Leu Tyr Ser Ser 50 55 60 Thr Val Pro Val Phe Asn Pro His Trp Lys Thr Pro Ser Phe Pro Asn 65 70 75 80 Ile His Leu His Gln Asp Ile Ile Lys Lys Cys Glu Gln Phe Val Gly 85 90 95 Pro Leu Thr Val Asn Glu Lys Arg Arg Leu Gln Leu Ile Met Pro Ala 100 105 110 Arg Phe Tyr Pro Asn Val Thr Lys Tyr Leu Pro Leu Asp Lys Gly Ile 115 120 125 Lys Pro Tyr Tyr Pro Glu His Leu Val Asn His Tyr Phe Gln Thr Arg 130 135 140 His Tyr Leu His Thr Leu Trp Lys Ala Gly Ile Leu Tyr Lys Arg Glu 145 150 155 160 Thr Thr His Ser Ala Ser Phe Cys Gly Ser Pro Tyr Ser Trp Glu Gln 165 170 175 Lys Leu Gln His Gly Ala Glu Ser Phe His Gln Gln Ser Ser Gly Ile 180 185 190 Leu Ser Arg Pro Pro Val Gly Ser Ser Leu Gln Ser Lys His Arg Lys 195 200 205 Ser Arg Leu Gly Leu Gln Ser Gln Gln Gly His Leu Ala Arg Arg Gln 210 215 220 Gln Gly Arg Ser Trp Ser Ile Arg Ala Gly Ile His Pro Thr Ala Arg 225 230 235 240 Arg Ser Phe Gly Val Glu Pro Ser Gly Ser Gly His Ser Thr Asn Leu 245 250 255 Ala Ser Lys Ser Ala Ser Cys Leu Tyr Gln Ser Pro Val Arg Lys Ala 260 265 270 Ala Tyr Pro Ala Val Ser Thr Phe Glu Lys His Ser Ser Ser Gly His 275 280 285 Ala Val Glu Leu His Asn Leu Pro Pro Asn Ser Ala Arg Ser Gln Ser 290 295 300 Glu Arg Pro Val Phe Pro Cys Trp Trp Leu Gln Phe Arg Asn Ser Lys 305 310 315 320 Pro Cys Ser Asp Tyr Cys Leu Ser His Ile Val Asn Leu Leu Glu Asp 325 330 335 Trp Gly Pro Cys Ala Glu His Gly Glu His His Ile Arg Ile Pro Arg 340 345 350 Thr Pro Ala Arg Val Thr Gly Gly Val Phe Leu Val Asp Lys Asn Pro 355 360 365 His Asn Thr Ala Glu Ser Arg Leu Val Val Asp Phe Ser Gln Phe Ser 370 375 380 Arg Gly Asn Tyr Arg Val Ser Trp Pro Lys Phe Ala Val Pro Asn Leu 385 390 395 400 Gln Ser Leu Thr Asn Leu Leu Ser Ser Asn Leu Ser Trp Leu Ser Leu 405 410 415 Asp Val Ser Ala Ala Phe Tyr His Leu Pro Leu His Pro Ala Ala Met 420 425 430 Pro His Leu Leu Val Gly Ser Ser Gly Leu Ser Arg Tyr Val Ala Arg 435 440 445 Leu Ser Ser Asn Ser Arg Ile Phe Asn Tyr Gln His Gly Thr Met Gln 450 455 460 Asn Leu His Asp Ser Cys Ser Arg Asn Leu Tyr Val Ser Leu Leu Leu 465 470 475 480 Leu Tyr Gln Thr Phe Gly Arg Lys Leu His Leu Tyr Ser His Pro Ile 485 490 495 Ile Leu Gly Phe Arg Lys Ile Pro Met Gly Val Gly Leu Ser Pro Phe 500 505 510 Leu Leu Ala Gln Phe Thr Ser Ala Ile Cys Ser Val Val Arg Arg Ala 515 520 525 Phe Pro His Cys Leu Ala Phe Ser Gly Ala Lys Ser Val Gln His Leu 530 535 540 Glu Ser Leu Phe Thr Ala Val Thr Asn Phe Leu Leu Ser Leu Gly Ile 545 550 555 560 His Leu Asn Pro Asn Lys Thr Lys Arg Trp Gly Tyr Ser Leu His Phe 565 570 575 Met Gly Tyr Val Ile Gly Cys Tyr Gly Ser Leu Pro Gln Asp His Ile 580 585 590 Ile Gln Lys Ile Lys Glu Cys Phe Arg Lys Leu Pro Val Asn Arg Pro 595 600 605 Ile Asp Trp Lys Val Cys Gln Arg Ile Val Gly Leu Leu Gly Phe Ala 610 615 620 Ala Pro Phe Thr Gln Cys Gly Tyr Pro Ala Leu Met Pro Leu Tyr Ala 625 630 635 640 Cys Ile Gln Ser Lys Gln Ala Phe Thr Phe Ser Pro Thr Tyr Lys Ala 645 650 655 Phe Leu Cys Lys Gln Tyr Leu Asn Leu Tyr Pro Val Ala Arg Gln Arg 660 665 670 Pro Gly Leu Cys Gln Val Phe Ala His Ala Thr Pro Thr Gly Trp Gly 675 680 685 Leu Val Met Gly His Gln Arg Met Arg Gly Thr Phe Leu Ser Arg Lys 690 695 700 Tyr Thr Ser Phe Pro Trp Leu Leu Gly Cys Ala Ala Asn Trp Ile Leu 705 710 715 720 Arg Gly Thr Ser Phe Val Tyr Tyr Pro Ser Ala Leu Asn Pro Tyr His 725 730 735 Asp Pro Ser Arg Gly Arg Leu Gly Leu Ser Arg Pro Leu Leu Arg Leu 740 745 750 Pro Phe Arg Pro Thr Thr Gly Arg Thr Ser Leu Tyr Ala Asp Ser Pro 755 760 765 Ser Val Pro Ser His Leu Pro Asp Arg Val His Phe Ala Ser Pro Leu 770 775 780 His Val Ala Trp Arg Pro Pro 785 790 <210> 12 <211> 183 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HBV Core (wild type) <400> 12 Met Asp Ile Asp Pro Tyr Lys Glu Phe Gly Ala Thr Val Glu Leu Leu 1 5 10 15 Ser Phe Leu Pro Ser Asp Phe Phe Pro Ser Val Arg Asp Leu Leu Asp 20 25 30 Thr Ala Ser Ala Leu Tyr Arg Glu Ala Leu Glu Ser Pro Glu His Cys 35 40 45 Ser Pro His His Thr Ala Leu Arg Gln Ala Ile Leu Cys Trp Gly Glu 50 55 60 Leu Met Thr Leu Ala Thr Trp Val Gly Gly Asn Leu Glu Asp Pro Ile 65 70 75 80 Ser Arg Asp Leu Val Val Ser Tyr Val Asn Thr Asn Met Gly Leu Lys 85 90 95 Phe Arg Gln Leu Leu Trp Phe His Ile Ser Cys Leu Thr Phe Gly Arg 100 105 110 Glu Thr Val Ile Glu Tyr Leu Val Ser Phe Gly Val Trp Ile Arg Thr 115 120 125 Pro Pro Ala Tyr Arg Pro Pro Asn Ala Pro Ile Leu Ser Thr Leu Pro 130 135 140 Glu Thr Thr Val Val Arg Arg Arg Gly Arg Ser Pro Arg Arg Arg Thr 145 150 155 160 Pro Ser Pro Arg Arg Arg Arg Ser Gln Ser Pro Arg Arg Arg Arg Ser 165 170 175 Gln Ser Arg Glu Ser Gln Cys 180 <210> 13 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HBV Envelope domain Env1 <400> 13 Val Leu Gln Ala Gly Phe Phe Leu Leu Thr Arg Ile Leu Thr Ile Pro 1 5 10 15 Gln Ser Leu Asp Ser Trp Trp Thr Ser Leu Asn Phe Leu Gly Gly Thr 20 25 30 Thr Val Cys Leu Gly Gln 35 <210> 14 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HBV Envelope domain Env2 <400> 14 Trp Ala Ser Ala Arg Phe Ser Trp Leu Ser Leu Leu Val Pro Phe Val 1 5 10 15 Gln Trp Phe Val Gly Leu Ser Pro Thr Val Trp Leu Ser Val 20 25 30 <210> 15 <211> 1007 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Whole antigen sequence of TG1050 (truncated HBV Core domain, modified HBV Polymerase polypeptide with Mutated Polymerase and RNaseH and two HBV Envelope domains) <400> 15 Met Asp Ile Asp Pro Tyr Lys Glu Phe Gly Ala Thr Val Glu Leu Leu 1 5 10 15 Ser Phe Leu Pro Ser Asp Phe Phe Pro Ser Val Arg Asp Leu Leu Asp 20 25 30 Thr Ala Ser Ala Leu Tyr Arg Glu Ala Leu Glu Ser Pro Glu His Cys 35 40 45 Ser Pro His His Thr Ala Leu Arg Gln Ala Ile Leu Cys Trp Gly Glu 50 55 60 Leu Met Thr Leu Ala Thr Trp Val Gly Gly Asn Leu Glu Asp Pro Ile 65 70 75 80 Ser Arg Asp Leu Val Val Ser Tyr Val Asn Thr Asn Met Gly Leu Lys 85 90 95 Phe Arg Gln Leu Leu Trp Phe His Ile Ser Cys Leu Thr Phe Gly Arg 100 105 110 Glu Thr Val Ile Glu Tyr Leu Val Ser Phe Gly Val Trp Ile Arg Thr 115 120 125 Pro Pro Ala Tyr Arg Pro Pro Asn Ala Pro Ile Leu Ser Thr Leu Pro 130 135 140 Glu Thr Thr Val Pro Leu Ser Tyr Gln His Phe Arg Arg Leu Leu Leu 145 150 155 160 Leu Asp Asp Glu Ala Gly Pro Leu Glu Glu Glu Leu Pro Arg Leu Ala 165 170 175 Asp Glu Gly Leu Asn Arg Arg Val Ala Glu Asp Leu Asn Leu Gly Asn 180 185 190 Leu Asn Val Ser Ile Pro Trp Thr His Lys Val Gly Asn Phe Thr Gly 195 200 205 Leu Tyr Ser Ser Thr Val Pro Val Phe Asn Pro His Trp Lys Thr Pro 210 215 220 Ser Phe Pro Asn Ile His Leu His Gln Asp Ile Ile Lys Lys Cys Glu 225 230 235 240 Gln Phe Val Gly Pro Leu Thr Val Asn Glu Lys Arg Arg Leu Gln Leu 245 250 255 Ile Met Pro Ala Arg Phe Tyr Pro Asn Val Thr Lys Tyr Leu Pro Leu 260 265 270 Asp Lys Gly Ile Lys Pro Tyr Tyr Pro Glu His Leu Val Asn His Tyr 275 280 285 Phe Gln Thr Arg His Tyr Leu His Thr Leu Trp Lys Ala Gly Ile Leu 290 295 300 Tyr Lys Arg Glu Thr Thr His Ser Ala Ser Phe Cys Gly Ser Pro Tyr 305 310 315 320 Ser Trp Glu Gln Lys Leu Gln His Gly Ala Glu Ser Phe His Gln Gln 325 330 335 Ser Ser Gly Ile Leu Ser Arg Pro Pro Val Gly Ser Ser Leu Gln Ser 340 345 350 Lys His Arg Lys Ser Arg Leu Gly Leu Gln Ser Gln Gln Gly His Leu 355 360 365 Ala Arg Arg Gln Gln Gly Arg Ser Trp Ser Ile Arg Ala Gly Ile His 370 375 380 Pro Thr Ala Arg Arg Ser Phe Gly Val Glu Pro Ser Gly Ser Gly His 385 390 395 400 Ser Thr Asn Leu Ala Ser Lys Ser Ala Ser Cys Leu Tyr Gln Ser Pro 405 410 415 Val Arg Lys Ala Ala Tyr Pro Ala Val Ser Thr Phe Glu Lys His Ser 420 425 430 Ser Ser Gly His Ala Val Glu Leu His Asn Leu Pro Pro Asn Ser Ala 435 440 445 Arg Ser Gln Ser Glu Arg Pro Val Phe Pro Cys Trp Trp Leu Gln Phe 450 455 460 Arg Asn Ser Lys Pro Cys Ser Asp Tyr Cys Leu Ser His Ile Val Asn 465 470 475 480 Leu Leu Glu Asp Trp Gly Pro Cys Ala Glu His Gly Glu His His Ile 485 490 495 Arg Ile Pro Arg Thr Pro Ala Arg Val Thr Gly Gly Val Phe Leu Val 500 505 510 Asp Lys Asn Pro His Asn Thr Ala Glu Ser Arg Leu Val Val Asp Phe 515 520 525 Ser Gln Phe Ser Arg Gly Asn Tyr Arg Val Ser Trp Pro Lys Phe Ala 530 535 540 Val Pro Asn Leu Gln Ser Leu Thr Asn Leu Leu Ser Ser Asn Leu Ser 545 550 555 560 Trp Leu Ser Leu Asp Val Ser Ala Ala Phe Tyr His Leu Pro Leu His 565 570 575 Pro Ala Ala Met Pro His Leu Leu Val Gly Ser Ser Gly Leu Ser Arg 580 585 590 Tyr Val Ala Arg Leu Ser Ser Asn Ser Arg Ile Phe Asn Tyr Gln His 595 600 605 Gly Thr Met Gln Asn Leu His Asp Ser Cys Ser Arg Asn Leu Tyr Val 610 615 620 Ser Leu Leu Leu Leu Tyr Gln Thr Phe Gly Arg Lys Leu His Leu Tyr 625 630 635 640 Ser His Pro Ile Ile Leu Gly Phe Arg Lys Ile Pro Met Gly Val Gly 645 650 655 Leu Ser Pro Phe Leu Leu Ala Gln Phe Thr Ser Ala Ile Cys Ser Val 660 665 670 Val Arg Arg Ala Phe Pro His Cys Leu Ala Phe Ser Val Leu Gln Ala 675 680 685 Gly Phe Phe Leu Leu Thr Arg Ile Leu Thr Ile Pro Gln Ser Leu Asp 690 695 700 Ser Trp Trp Thr Ser Leu Asn Phe Leu Gly Gly Thr Thr Val Cys Leu 705 710 715 720 Gly Gln Gly Ala Lys Ser Val Gln His Leu Glu Ser Leu Phe Thr Ala 725 730 735 Val Thr Asn Phe Leu Leu Ser Leu Gly Ile His Leu Asn Pro Asn Lys 740 745 750 Thr Lys Arg Trp Gly Tyr Ser Leu His Phe Met Gly Tyr Val Ile Gly 755 760 765 Cys Tyr Gly Ser Leu Pro Gln Asp His Ile Ile Gln Lys Ile Lys Glu 770 775 780 Cys Phe Arg Lys Leu Pro Val Asn Arg Pro Ile Asp Trp Lys Val Cys 785 790 795 800 Gln Arg Ile Val Gly Leu Leu Gly Phe Ala Ala Pro Phe Thr Gln Cys 805 810 815 Gly Tyr Pro Ala Leu Met Pro Leu Tyr Ala Cys Ile Gln Ser Lys Gln 820 825 830 Ala Phe Thr Phe Ser Pro Thr Tyr Lys Ala Phe Leu Cys Lys Gln Tyr 835 840 845 Leu Asn Leu Tyr Pro Val Ala Arg Gln Arg Pro Gly Leu Cys Gln Val 850 855 860 Phe Ala His Ala Thr Pro Thr Gly Trp Gly Leu Val Met Gly His Gln 865 870 875 880 Arg Met Arg Gly Thr Phe Leu Trp Ala Ser Ala Arg Phe Ser Trp Leu 885 890 895 Ser Leu Leu Val Pro Phe Val Gln Trp Phe Val Gly Leu Ser Pro Thr 900 905 910 Val Trp Leu Ser Val Ser Arg Lys Tyr Thr Ser Phe Pro Trp Leu Leu 915 920 925 Gly Cys Ala Ala Asn Trp Ile Leu Arg Gly Thr Ser Phe Val Tyr Tyr 930 935 940 Pro Ser Ala Leu Asn Pro Tyr His Asp Pro Ser Arg Gly Arg Leu Gly 945 950 955 960 Leu Ser Arg Pro Leu Leu Arg Leu Pro Phe Arg Pro Thr Thr Gly Arg 965 970 975 Thr Ser Leu Tyr Ala Asp Ser Pro Ser Val Pro Ser His Leu Pro Asp 980 985 990 Arg Val His Phe Ala Ser Pro Leu His Val Ala Trp Arg Pro Pro 995 1000 1005 <210> 16 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer (Forward) <400> 16 tgcatcgctg gcgtaatag 19 <210> 17 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer (Reverse) <400> 17 atcggccttg ctggtaatat c 21

Claims (24)

  1. B형 간염 바이러스 특이적 항원을 코딩하는 염기서열을 포함하는 아데노바이러스(AV) 기반 치료용 백신 조성물과 병용하여 B형 간염을 치료하기 위한,
    GFSLTKYK(서열번호 1)의 HCDR1, ISSTSRDI(서열번호 2)의 HCDR2 및 TRDGWL(서열번호 3)의 HCDR3를 포함하는 중쇄 가변영역과, QGIYNS(서열번호 4)의 LCDR1, STS(서열번호 5)의 LCDR2 및 YFVTPET(서열번호 6)의 LCDR3를 포함하는 경쇄 가변영역을 함유하는 B형 간염 바이러스(HBV)에 특이적인 항체를 포함하는 B형 간염 치료용 약제학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 B형 간염 바이러스(HBV)에 특이적인 항체는 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역(VH)과, 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역(VL)을 함유하는 것을 특징으로 하는 B형 간염 치료용 약제학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서, B형 간염 바이러스 특이적 항원을 코딩하는 염기서열을 포함하는 아데노바이러스(AV) 기반 치료용 백신 조성물과 동시 또는 순차 투여되는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 B형 간염 바이러스(HBV)에 특이적인 항체를 포함하는 B형 간염 치료용 약제학적 조성물은 주 1회 또는 2주에 1회 간격으로 10주 내지 20주간 투여되고,
    상기 B형 간염 바이러스 특이적 항원을 코딩하는 염기서열을 포함하는 아데노바이러스(AV) 기반 치료용 백신 조성물은 상기 B형 간염 바이러스(HBV)에 특이적인 항체를 포함하는 B형 간염 치료용 약제학적 조성물의 첫번째 투여 이후 3주 내지 5주 경과 시점부터 매주 1회 2주 내지 5주간 투여되는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 상기 B형 간염 바이러스(HBV)에 특이적인 항체의 단위 투여 용량은 5 내지 50 mg/kg이고, B형 간염 바이러스 특이적 항원을 코딩하는 염기서열을 포함하는 아데노바이러스(AV) 기반 치료용 백신의 단위 투여 용량은 105 내지 1010 IU인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 B형 간염 바이러스 특이적 항원은 HBV 코어 폴리펩타이드(HBV Core polypeptide), HBV 중합효소 폴리펩타이드(HBV Polymerase polypeptide), HBV 외피 폴리펩타이드(HBV Envelope polypeptide) 및 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택된 폴리펩타이드의 전부 또는 일부 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 상기 HBV 중합효소 폴리펩타이드는 하기로 구성된 폴리펩타이드 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물:
    (a) 서열번호 9의 아미노산 서열에서, 203번 위치의 Tyr 잔기, 204번 위치의 Met 잔기, 205번 위치의 Asp 잔기, 206번 위치의 Asp 잔기, 207번 위치의 Val 잔기, 208번 위치의 Val 잔기 및 209번 위치의 Leu 잔기가 결실된 것을 특징으로 하는 돌연변이된 중합효소 도메인을 포함하는 폴리펩타이드;
    (b) 고유의 HBV 중합효소에 의해 정상적으로 나타나는 RNaseH 활성을 기능적으로 파괴하는 하나 이상의 아미노산 잔기의 돌연변이를 포함하는, 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 돌연변이된 RNaseH 도메인을 포함하는 폴리펩타이드; 및
    (c) 돌연변이된 중합효소 도메인 및 돌연변이된 RNaseH 도메인을 포함하는, 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드.
  8. 제6항에 있어서, 상기 HBV 코어 폴리펩타이드는 서열번호 12의 아미노산 서열에서 148번 또는 149번 잔기 위치에서 C-말단이 절단된 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
  9. 제6항에 있어서, 상기 HBV 외피 폴리펩타이드는 서열번호 13의 아미노산 서열을 갖는 HBV 외피 도메인 Env1 및 서열번호 14의 아미노산 서열을 갖는 HBV 외피 도메인 Env2으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 도메인의 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
  10. 제6항에 있어서, 상기 B형 간염 바이러스 특이적 항원은 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
  11. 제1항에 있어서, HBsAg 미검출(HBsAg loss)이 최소한 6개월 이상 유지되는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
  12. 제1항에 있어서, 상기 B형 간염은 만성 B형 간염(chronic hepatitis B)인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
  13. GFSLTKYK(서열번호 1)의 HCDR1, ISSTSRDI(서열번호 2)의 HCDR2 및 TRDGWL(서열번호 3)의 HCDR3를 포함하는 중쇄 가변영역과, QGIYNS(서열번호 4)의 LCDR1, STS(서열번호 5)의 LCDR2 및 YFVTPET(서열번호 6)의 LCDR3를 포함하는 경쇄 가변영역을 함유하는 B형 간염 바이러스(HBV)에 특이적인 항체를 포함하는 B형 간염 치료용 약제학적 조성물과,
    B형 간염 바이러스 특이적 항원을 코딩하는 염기서열을 포함하는 아데노바이러스(AV) 기반 치료용 백신 조성물을 병용하여 사용하는 것을 특징으로 하는 B형 간염의 치료 방법.
  14. 제13항에 있어서, 상기 B형 간염 바이러스(HBV)에 특이적인 항체는 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역(VH)과, 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역(VL)을 함유하는 것을 특징으로 하는 B형 간염의 치료 방법.
  15. 제13항에 있어서, 상기 B형 간염 바이러스(HBV)에 특이적인 항체를 포함하는 B형 간염 치료용 약제학적 조성물과 B형 간염 바이러스 특이적 항원을 코딩하는 염기서열을 포함하는 아데노바이러스(AV) 기반 치료용 백신 조성물은 동시 또는 순차 투여되는 것을 특징으로 하는 B형 간염의 치료 방법.
  16. 제13항에 있어서, 상기 B형 간염 바이러스(HBV)에 특이적인 항체를 포함하는 B형 간염 치료용 약제학적 조성물은 주 1회 또는 2주에 1회 간격으로 10주 내지 20주간 투여되고,
    상기 B형 간염 바이러스 특이적 항원을 코딩하는 염기서열을 포함하는 아데노바이러스(AV) 기반 치료용 백신 조성물은 상기 B형 간염 바이러스(HBV)에 특이적인 항체를 포함하는 B형 간염 치료용 약제학적 조성물의 첫번째 투여 이후 3주 내지 5주 경과 시점부터 매주 1회 2주 내지 5주간 투여되는 것을 특징으로 하는 B형 간염의 치료 방법.
  17. 제16항에 있어서, 상기 B형 간염 바이러스(HBV)에 특이적인 항체의 단위 투여 용량은 5 내지 50 mg/kg이고, B형 간염 바이러스 특이적 항원을 코딩하는 염기서열을 포함하는 아데노바이러스(AV) 기반 치료용 백신의 단위 투여 용량은 105 내지 1010 IU인 것을 특징으로 하는 B형 간염의 치료 방법.
  18. 제13항에 있어서, 상기 B형 간염 바이러스 특이적 항원은 HBV 코어 폴리펩타이드(HBV Core polypeptide), HBV 중합효소 폴리펩타이드(HBV Polymerase polypeptide), HBV 외피 폴리펩타이드(HBV Envelope polypeptide) 및 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택된 polypeptide의 전부 또는 일부 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 B형 간염의 치료 방법.
  19. 제18항에 있어서, 상기 HBV 중합효소 폴리펩타이드는 하기로 구성된 폴리펩타이드 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 B형 간염의 치료 방법:
    (a) 서열번호 9의 아미노산 서열에서, 203번 위치의 Tyr 잔기, 204번 위치의 Met 잔기, 205번 위치의 Asp 잔기, 206번 위치의 Asp 잔기, 207번 위치의 Val 잔기, 208번 위치의 Val 잔기 및 209번 위치의 Leu 잔기가 결실된 것을 특징으로 하는 돌연변이된 중합효소 도메인을 포함하는 폴리펩타이드;
    (b) 고유의 HBV 중합효소에 의해 정상적으로 나타나는 RNaseH 활성을 기능적으로 파괴하는 하나 이상의 아미노산 잔기의 돌연변이를 포함하는, 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 돌연변이된 RNaseH 도메인을 포함하는 폴리펩타이드; 및
    (c) 돌연변이된 중합효소 도메인 및 돌연변이된 RNaseH 도메인을 포함하는, 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드.
  20. 제18항에 있어서, 상기 HBV 코어 폴리펩타이드는 서열번호 12의 아미노산 서열에서 148번 또는 149번 잔기에서 C-말단이 절단된 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 B형 간염의 치료 방법.
  21. 제18항에 있어서, 상기 HBV 외피 폴리펩타이드는 서열번호 13의 아미노산 서열을 갖는 HBV 외피 도메인 Env1 및 서열번호 14의 아미노산 서열을 갖는 HBV 외피 도메인 Env2으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 도메인의 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 B형 간염의 치료 방법.
  22. 제18항에 있어서, 상기 B형 간염 바이러스 특이적 항원은 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 B형 간염의 치료 방법.
  23. 제13항에 있어서, HBsAg 미검출(HBsAg loss)이 최소한 6개월 이상 유지되는 것을 특징으로 하는 B형 간염의 치료 방법.
  24. 제13항에 있어서, 상기 B형 간염은 만성 B형 간염(chronic hepatitis B)인 것을 특징으로 하는 B형 간염의 치료 방법.
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