CN116178530A - 抗体在治疗SARS-CoV-2感染的用途 - Google Patents

抗体在治疗SARS-CoV-2感染的用途 Download PDF

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Abstract

本申请实施例提供了特异性结合SARS‑CoV‑2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗或预防受试者的SARS‑CoV‑2感染的药物中的用途、疗法、药物组合物及试剂盒。

Description

抗体在治疗SARS-CoV-2感染的用途
本申请要求于2021年9月26日提交申请号为202111127152.4、发明名称为“抗体在治疗SARS-CoV-2感染的用途”的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。
技术领域
本申请属于医药技术领域，具体涉及一种新型冠状病毒(SARS-CoV-2，又称为2019-nCoV)的抗体及其用途。
背景技术
自COVID-19出现以来，SARS-CoV-2已经衍生出许多变体，其中一些变体含有刺突蛋白的关键位点的氨基酸取代，表现出更强的传播能力，免疫逃逸能力以及更低的单抗敏感性，这些变体的初次出现往往伴随着所在国家的感染率高峰，如Alpha突变株(B.1.1.7)、Beta突变株(B.1.351)(Beta)、Gamma突变株(P.1)和Delta突变株(B.1.617.2)等。
治疗性抗体药物不但在肿瘤和自身免疫疾病方面占有重要地位，在传染性疾病的治疗中也同样有效。已经上市的治疗和预防病毒感染的药物有预防小儿呼吸道合胞病毒(RSV)感染的帕利珠单抗(Synagis)，治疗HIV感染的艾巴利珠单抗(Trogarzo)，以及用于狂犬病毒暴露后预防的Rabishield。
目前对于SARS-CoV-2主要通过接种疫苗来预防，而在感染的治疗方面，已有Casirvimab、Sotrovimab、Bamlanivimab、CB6等疫苗中和抗体药物上市，但单独使用上述任一抗体都无法覆盖所有已经出现的主要突变株。
发明内容
发明人在研究中发现，病毒要感染细胞，首先需要通过囊膜蛋白结合宿主的受体。抗体，尤其是中和活性抗体，通过结合到囊膜蛋白上，阻断病毒与细胞受体的结合，从而阻断病毒感染。因此，靶向囊膜蛋白的中和抗体可有效中和病毒毒力。
基于对其它冠状病毒，尤其是SARS-CoV和MERS-CoV的研究，与受体结合的重要囊膜蛋白是刺突蛋白(S)。S可进一步分为S1和S2两部分。S2的作用是介导膜融合。S1的N端结构域(NTD)和C端结构域(CTD)都可能是受体结合区(receptor binding domain，RBD)。发明人进一步通过对SARS-CoV-2的研究，发现CTD是SARS-CoV-2冠状病毒的RBD，结合受体ACE2。因此靶向RBD的抗体，特别是阻断S蛋白与ACE2结合的抗体，可能成为抑制病毒感染的中和抗体。
基于上述研究，本申请的目的是获得特异的、针对SARS-CoV-2及其多种突变株的具有保护效果的人源中和抗体。
具体地，本申请通过以下方面实现。
在一个方面，本申请提供特异性结合SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段，或包含其的药物组合物在制备用于治疗或预防受试者的SARS-CoV-2感染的药物中的用途，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQID NO:3所示的三个重链互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的三个轻链互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3；所述SARS-CoV-2为野生型或突变株。
在一些实施方式中，SARS-CoV-2突变株包含一个或多个受体结合区的氨基酸残基突变，突变位点包括N501，E484，L452，K417，T478，R346的至少一个。优选地，所述受体结合区的氨基酸残基突变选自N501Y，E484K，L452R，K417N，K417T，T478K，E484Q，R346K中的至少一个。优选地，所述SARS-CoV-2的突变株选自Alpha突变株(B.1.1.7，N501Y)，Beta突变株(B.1.351，K417N，E484K，N501Y)，Gamma突变株(P.1，K417T，E484K，N501Y)，Delta突变株(B.1.617.2，L452R，T478K)，Epsilon突变株(B.1.427/B.1.429，L452R)，Zeta突变株(P.2，E484K)，Eta突变株(B.1.525，E484K)，Theta突变株(P.3，E484K，N501Y)，Iota突变株(B.1.526，E484K)，Kappa突变株(B.1.617.1，L452R，E484Q)和Mu突变株(B.1.621，R346K，E484K，N501Y)的至少一种；更优选地，所述SARS-CoV-2的突变株选自Alpha突变株，Beta突变株，Gamma突变株，Delta突变株和Kappa突变株的至少一种。再优选地，所述SARS-CoV-2的突变株选自Alpha突变株，Beta突变株，Gamma突变株，Delta突变株和Kappa突变株。
在一些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示的重链可变区，和氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示的轻链可变区。
在一些实施方式中，所述抗体是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4类抗体；优选为IgG1或IgG4类抗体。
在一些实施方式中，所述IgG1类抗体在Fc结构域包含1、2、3、4、5或6个氨基酸残基的突变。在一些实施方式中，所述IgG4类抗体在Fc结构域包含1、2、3、4、5或6个氨基酸残基的突变。
在一些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示的重链和氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示的轻链。
在一些实施方式中，所述药物组合物还包含其他结合SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段中的至少一种。
在一些实施方式中，如前项所述的用途，其中所述其他抗体或其抗原结合片段具有以下特征中的至少一种：
(1)特异性结合SARS-CoV-2刺突蛋白上的不同表位；
(2)特异性结合SARS-CoV-2的两种或多种不同抗原；
(3)特异性结合SARS-CoV-2的野生型或不同突变株；
(4)以非竞争方式与SARS-CoV-2结合。
在一些实施方式中，所述其他结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段包含：
(1)氨基酸序列如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(2)氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示的轻链可变区；或
(3)氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示的重链和氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示的轻链。
在一些实施方式中，所述其他结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段包含：
(1)氨基酸序列如SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:25所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(2)氨基酸序列如SEQ ID NO:29所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示的轻链可变区；
(3)氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示的重链和氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示的轻链。
在一些实施方式中，如前文任一项所述的用途，其中其他结合SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段选自Casirvimab、Sotrovimab、Bamlanivimab和CB6中的至少一种，优选为CB6。
在一些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段或药物组合物通过口服、鼻腔、静脉内、皮下、舌下或肌肉内给药。
在另一个方面，本申请提供一种特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段，其包含氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示的重链和氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示的轻链。
在另一个方面，本申请提供一种药物组合物，其包含特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白抗体或其抗原结合片段，所述特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段包含：氨基酸序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示的重链可变区，和氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示的轻链可变区；更优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示的轻链；
和
任选地，其他结合SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段，
所述其他结合SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段包含：氨基酸序列如SEQ IDNO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示的轻链可变区；更优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示的重链和氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示的轻链；
或
氨基酸序列如SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:25所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:29所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示的轻链可变区；更优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示的重链和氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示的轻链。
在另一个方面，本申请提供一种治疗和/或预防SARS-CoV-2感染的方法，其包括向有需要的受试者施用如前文任一项所述的特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段，或者施用如前文任一项所述的药物组合物。
在另一个方面，本申请提供一种诊断受试者SARS-CoV-2感染的方法，包括：a)使从受试者获得的样品与前文任一项的特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段或前文任一项所述的药物组合接触；b)确定样本中SARS-CoV-2的存在或数量；c)将SARS-CoV-2的存在或数量与受试者中SARS-CoV-2感染的存在或状态相关联。
在另一个方面，本申请提供一种降低感染SARS-CoV-2的受试者的全身或局部病毒载量的方法，包括向受试者施用有效量的前文任一项所述的特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段，或前文任一项所述的药物组合物。
在本申请的一些实施方式中，所述SARS-CoV-2为野生型或突变株，优选地，所述SARS-CoV-2为突变株。
在一些实施方式中，SARS-CoV-2突变株包含一个或多个受体结合区的氨基酸残基突变，突变位点包括N501，E484，L452，K417，T478，R346的至少一个。优选地，所述受体结合区的氨基酸残基突变选自N501Y，E484K，L452R，K417N，K417T，T478K，E484Q，R346K中的至少一个。优选地，所述SARS-CoV-2的突变株选自Alpha突变株(B.1.1.7，N501Y)，Beta突变株(B.1.351，K417N，E484K，N501Y)，Gamma突变株(P.1，K417T，E484K，N501Y)，Delta突变株(B.1.617.2，L452R，T478K)，Epsilon突变株(B.1.427/B.1.429，L452R)，Zeta突变株(P.2，E484K)，Eta突变株(B.1.525，E484K)，Theta突变株(P.3，E484K，N501Y)，Iota突变株(B.1.526，E484K)，Kappa突变株(B.1.617.1，L452R，E484Q)和Mu突变株(B.1.621，R346K，E484K，N501Y)的至少一种；更优选地，所述SARS-CoV-2的突变株选自Alpha突变株，Beta突变株，Gamma突变株，Delta突变株和Kappa突变株的至少一种。再优选地，所述SARS-CoV-2的突变株选自Alpha突变株，Beta突变株，Gamma突变株，Delta突变株和Kappa突变株。
在本申请的一些实施方式中，所述特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段包含：氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示的重链可变区，和氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示的轻链可变区；更优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示的轻链。
在本申请的另一些实施方式中，所述特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段可以与其他结合SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段联合使用。
所述其他结合SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段包含：氨基酸序列如SEQ IDNO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示的轻链可变区；更优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示的重链和氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示的轻链；
或
氨基酸序列如SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:25所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:29所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示的轻链可变区；更优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示的重链和氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示的轻链。
本申请中，所述药物组合物包含所述特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段，任选地，所述药物组合物还包含如上文所述的其他结合SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段。
在另一个方面，本申请提供一种试剂盒，其包含：
(1)一个或多个单次药物剂量单元的前文任一项所述的特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段；或
(2)一个或多个单次药物剂量单元的如前文任一项所述的药物组合物；
其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示的重链可变区，和氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示的轻链可变区；更优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示的轻链。
本申请提供的特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段对SARS-CoV-2的野生型及多种突变株均具有中和活性，因此能够用于制备用于治疗或预防受试者的SARS-CoV-2感染的药物。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一种实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，还可以根据这些附图获得其他的实施方式。
图1A显示了JS5-10体外中和SARS-CoV-2的Alpha突变株(B.1.1.7)假病毒的活性；
图1B显示了JS5-10体外中和SARS-CoV-2的Beta突变株(B.1.351)假病毒的活性；
图1C显示了JS5-10体外中和SARS-CoV-2的Gamma突变株(P.1)假病毒的活性；
图1D显示了JS5-10体外中和SARS-CoV-2的Kappa突变株(B.1.617.1)假病毒的活性；
图1E显示了JS5-10体外中和SARS-CoV-2的Delta突变株(B.1.617.2)假病毒的活性；
图2显示了JS5-10以及JS5-10和CB6联合用药的小鼠肺部的病毒载量。
图3显示了JS5-10、CB6以及两者联合用药体外中和SARS-CoV-2的活性。
具体实施方式
定义和说明
除非另有说明，本申请的实施将采用分子生物学(包括重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学的常规技术，这些都在本领域的技术范围内。
为了可以更容易地理解本申请，某些科技术语具体定义如下。除非本文其它部分另有明确定义，否则本文所用的科技术语都具有本申请所属领域普通技术人员通常理解的含义。关于本领域的定义及术语，专业人员具体可参考Current Protocols in MolecularBiology(Ausubel)。氨基酸残基的缩写是本领域中所用的指代20个常用L-氨基酸之一的标准3字母和/或1字母代码。本文(包括权利要求书)所用单数形式包括其相应的复数形式，除非文中另有明确规定。
术语“约”在与数字数值联合使用时意为涵盖具有比指定数字数值小5％的下限和比指定数字数值大5％的上限的范围内的数字数值，包括但不限于±5％、±2％、±1％和±0.1％，因为这些变化适于进行所公开的方法。
术语“和/或”应理解为意指可选项中的任一项或可选项中的任意两项或更多项的组合。
如本文所用，术语“或”应被理解为与如上定义的“和/或”具有相同的含义。例如，当分离列表中的项目时，“或”或“和/或”应被解释为包容性的，即，包括数量或元素列表中的至少一个，但也包括多于一个，以及任选地，额外的未列出的项目。只有明确指出相反的术语下，例如“只有一个”或“的确一个”或者在权利要求中使用“由...组成”时，将指的是仅列出的一个数字或列表的一个元素。
术语“受试者”、“个体”、“对象”包括任何生物体，优选动物，更优选哺乳动物(例如大鼠、小鼠、狗、猫、兔等)，且最优选的是人。
术语“施用”、“给与”及“处理”是指采用本领域技术人员已知的各种方法或递送系统中的任意一种将包含治疗剂的组合物引入受试者。与SARS-CoV-2特异性结合的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段的给药途径包括静脉内、肌内、皮下、腹膜、脊髓或其他胃肠外给药途径，比如注射或输注。“胃肠外给药”是指除了肠内或局部给药以外的通常通过注射的给药方式，包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、淋巴内、损伤内、囊内、框内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜内和胸骨内注射和输注以及经体内电穿孔。术语“核酸”或“多核苷酸”是指脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)及其呈单链或双链形式的聚合物。除非明确地限制，否则术语包括具有与参照核酸相似的结合性质并且以与天然存在的核苷酸相似的方式被代谢的含有已知的天然核苷酸的类似物的核酸(参见，属于Kariko等人的美国专利No.8,278,036，其公开了尿苷被假尿苷替代的mRNA分子，合成所述mRNA分子的方法以及用于在体内递送治疗性蛋白的方法)。除非另有所指，否则特定核酸序列还隐含地包括其保守修饰的变体(例如，简并密码子取代)、等位基因、直系同源物、SNP和互补序列以及明确指出的序列。具体地，简并密码子取代可通过生成其中一个或多个选择的(或全部)密码子的第三位被混合碱基和/或脱氧肌苷残基取代的序列来实现(Batzer等人，Nucleic Acid Res.19:5081(1991)；Ohtsuka等人，J.Biol.Chem.260:2605-2608(1985)；和Rossolini等人，Mol.Cell.Probes8:91-98(1994))。
“载体”是指任何重组多核苷酸构建体，该构建体可用于转化的目的(即将异源DNA引入到宿主细胞中)。一种类型的载体为“质粒”，是指环状双链DNA环，可将额外DNA区段连接至该环中。另一类型的载体为病毒载体，其中可将额外DNA区段连接至病毒基因组中。某些载体能够在被引入到的宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌复制起点的细菌载体及游离型哺乳动物载体)。在引入到宿主细胞中后，其他载体(例如，非游离型哺乳动物载体)整合至宿主细胞的基因组中，且因此与宿主基因组一起复制。此外，某些载体能够导引被操作性连接的基因的表达。本文将此类载体称为“表达载体”。
本文所用术语“表达载体”是指能够在转化、转染或转导至宿主细胞中时复制及表达目的基因的核酸分子。表达载体包含一个或多个表型选择标记及复制起点，以确保维护载体及以在需要的情况下于宿主内提供扩增。
药物或治疗剂的“治疗有效量”或“有效量”是当单独使用或与另一种治疗剂组合使用时保护受试者免于疾病发作或促进疾病消退的任何量的药物，所述疾病消退通过疾病症状的严重性的降低，疾病无症状期的频率和持续时间的增加，或由疾病痛苦引起的损伤或失能的预防来证明。治疗剂促进疾病消退的能力可以使用本领域技术人员已知的多种方法来评价，比如在临床试验期间的人受试者中，在预测人类功效的动物模型系统中，或通过在体外测定法中测定所述药剂的活性。
抗体(antibody，Ab)
本文所述的“抗体”是指能达到期望的生物活性或结合活性的任何形式的抗体。因此，它以最广泛含义使用，但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体、人源化全长人抗体、嵌合抗体及骆驼来源的单域抗体。“抗体”特异性结合抗原并包含通过二硫键互连的至少两条重(H)链和两条轻(L)链。每条重链包含重链可变区(VH)和重链恒定区，重链恒定区包含三个恒定结构域CH1、CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区(VL)和轻链恒定区，轻链恒定区包含一个恒定结构域CL。VH和VL区可进一步包含称为互补决定区(CDR)的高变区，其散布于更为保守的称为框架区(FR)的区域。一般而言，自N末端至C末端，轻链及重链可变结构域二者皆包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4。通常是根据如下的定义将氨基酸分配至每一个结构域的：Sequences of Proteins of Immunological Interest,Kabat等人；National Institutes of Health,Bethesda,Md.；第5版；NIH出版号91-3242(1991)：Kabat(1978)Adv.Prot.Chem.32:1-75；Kabat等人，(1977)J.Biol.Chem.252:6609-6616；Chothia等人，(1987)J Mol.Biol.196:901-917或Chothia等人，(1989)Nature 341:878-883。重链的羧基末端部分可定义主要负责效应子功能的恒定区。通常，人轻链分为κ链及λ链。人重链通常分为μ、δ、γ、α或ε，且将抗体的同种型分别定义为IgM、IgD、IgG、IgA及IgE。IgG亚类是本领域技术人员熟知的，包括但不限于IgG1、IgG2、IgG和IgG4。
除非另有明确表示，否则本文所述的“抗体片段”或“抗原结合片段”是指抗体的抗原结合片段，即保留了全长抗体的特异性结合至抗原能力的抗体片段，例如保留一个或多个CDR区的片段。抗原结合片段的实例包括但不限于Fab、Fab’、F(ab’)2及Fv片段；双链抗体；线形抗体；单链抗体分子；纳米抗体及由抗体片段形成的多特异性抗体。
本申请的所述抗体的互补决定区CDR的精确氨基酸序列边界可使用许多公知的方案的任何方案来确定，包括基于抗体的三维结构和CDR环的拓扑学的Chothia(Chothia等人.(1989)Nature 342:877-883；Al-Lazikani等人,“Standard conformations for thecanonical structures of immunoglobulins”,Journal of Molecular Biology,273,927-948(1997))、基于抗体序列可变性的Kabat(Kabat等人,Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第4版，U.S.Department of Health and Human Services,National Institutes of Health(1987))，AbM(University of Bath)，Contact(University College London)，国际ImMunoGeneTics database(IMGT)(1999NucleicAcids Research,27,209-212)，以及基于利用大量晶体结构的近邻传播聚类(affinitypropagation clustering)的North CDR定义。除非另有说明，否则本申请抗体的CDR可以由本领域的技术人员根据本领域的任何方案(例如不同的指派系统或组合)确定边界。
“人抗体”是指仅包含人免疫球蛋白序列的抗体。若人抗体是在小鼠、小鼠细胞或源自小鼠细胞的杂交瘤中产生，则其可含有鼠类碳水化合物链。类似的，“小鼠抗体”或“大鼠抗体”是指仅分别包含小鼠或大鼠免疫球蛋白序列的抗体。
“人源化抗体”是指含有来自非人(如鼠类)抗体以及人抗体的序列的抗体形式。此类抗体含有源自非人免疫球蛋白的最小序列。通常，人源化抗体将包含实质上全部的至少一个且通常两个可变结构域，其中全部或实质上全部超变环对应于非人免疫球蛋白的超变环，且全部或实质上全部FR区为人免疫球蛋白的FR区。人源化抗体任选还包括免疫球蛋白恒定区(通常为人免疫球蛋白恒定区)的至少一部分。
“Fab片段”由一条轻链和一条重链的CH1及可变区组成。
“Fc区”或“Fc结构域”含有包含抗体的CH2和CH3结构域的两个重链片段。两个重链片段由两个或多个二硫键并通过CH3结构域的疏水作用保持在一起。
“Fab′片段”含有一条轻链和一条包含VH结构域、CH1结构域以及CH1和CH2结构域之间的恒定区的部分的重链的部分，两个Fab′片段的两条重链之间形成链间二硫键以形成F(ab′)2分子。
“F(ab′)2片段”含有两条轻链和两条包含VH结构域、CH1结构域以及CH1和CH2结构域之间的恒定区的部分的重链的部分，由此在两条重链间形成链间二硫键。因此，F(ab′)2片段由通过两条重链间的二硫键保持在一起的两个Fab′片段组成。
“Fv区”包含来自重链和轻链二者的可变区，但缺少恒定区。
“单链Fv抗体(scFv抗体)”是指包含抗体的VH和VL结构域的抗原结合片段，这些结构域包含于单个多肽链中。一般而言，scFv多肽在VH和VL结构域之间包含多肽接头，该接头使得scFv能形成用于抗原结合的所需结构。
“双抗体”为具有两个抗原结合位点的小抗原结合片段。所述片段包含在相同的多肽链中与轻链可变结构域(VL)连接的重链可变结构域(VH)(VH-VL或VL-VH)。通过使用短至不能在同一链的两个结构域之间配对的接头，使得所述结构域和另一条链的互补结构域配对并形成两个抗原结合位点。
本申请还提供含有本申请特异性结合SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段的药物组合物。为了制备药物组合物，可以通过使抗体或其抗原结合片段与药用载体或赋形剂混合，制备成各种所需的剂型。作为本申请的医药组合物的剂型的种类，例如可以列举作为口服剂的片剂、粉末剂、丸剂、散剂、颗粒剂、细粒剂、软/硬胶囊剂、薄膜包衣剂、小丸剂、舌下片、膏剂等，作为非口服剂，可以列举注射剂、栓剂、经皮剂、软膏剂、硬膏剂、外用液剂等，本领域的技术人员能够根据给药途径和给药对象等选择适当的剂型。
本申请的药物组合物的有效成分的给药量，根据给药对象、对象脏器、症状、给药方法等不同而存在差异，可以考虑剂型的种类、给药方法、患者的年龄和体重、患者的症状等，根据医生的判断来确定。
当提及配体/受体、抗体/抗原或其它结合对时，“特异性”结合是指在蛋白和/或其它生物试剂的异质群体中确定是否存在所述蛋白。例如本申请的单克隆抗体与SARS-CoV-2RBD蛋白的结合反应。因此，在所指定的条件下，特定的配体/抗原与特定的受体/抗体结合，并且并不以显著量与样品中存在的其它蛋白结合。
本文中，“特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段”可简称为“SARS-CoV-2抗体”，是指结合SARS-CoV-2的S蛋白(刺突蛋白)，阻断S蛋白与表达ACE2的细胞上的ACE2(血管紧张素转化酶2)结合的任何化学化合物或生物分子。在治疗人个体的任何本申请治疗方法、药物及用途中，SARS-CoV-2抗体阻断SARS-CoV-2的S蛋白与人ACE2的结合。野生型SARS-CoV-2的S蛋白氨基酸序列可见于Uniprot条目P0DTC2。人ACE2氨基酸序列可见于NCBI条目NP_068576.1。
本文中，当提及“SARS-CoV-2抗体”时，除非另有说明或描述，否则该术语包括其抗原结合片段。
适用于本申请所述的任意用途、疗法、药物及试剂盒的SARS-CoV-2抗体或其抗原结合片段以高特异性和高亲和力结合SARS-CoV-2的S蛋白，阻断ACE2与SARS-CoV-2的S蛋白的结合，抑制SARS-CoV-2进入细胞的活性，从而达到抗SARS-CoV-2感染的效果。本文所公开的任意用途、疗法、药物及试剂盒中，SARS-CoV-2抗体包括全长抗体本身，以及结合SARS-CoV-2并在抑制配体结合方面表现出类似完整Ab的功能特性的抗原结合部分或片段。在一些实施方式中，SARS-CoV-2抗体为与特瑞普利单抗交叉竞争结合人SARS-CoV-2的SARS-CoV-2抗体。在其他的实施方式中，SARS-CoV-2抗体是鼠源、嵌合、人源化或人Ab或其抗原结合片段。在用于治疗人个体的某些实施方式中，所述的Ab为人源化Ab。
在一些实施方式中，恒定区是选自人IgG的恒定区，例如IgG1、IgG2、IgG3及IgG4恒定区以及上述恒定区的突变体，例如IgG1-LALA，即IgG1恒定区234和235位亮氨酸(L)突变成丙氨酸(A)；优选地，适用于本申请所述的任何用途、疗法、药物及试剂盒的SARS-CoV-2抗体包含人IgG1或IgG4同种型的重链恒定区，或IgG1-LALA突变体。
在一些实施方式中，通过对抗体的Fc的改造，去除抗体的Fc功能，可有效降低抗体依赖性增强(antibody-dependent enhancement，ADE)效应的风险。本申请中所提供的特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段包含JS5-10的三个重链互补决定区(IMGT)：
HCDR1：GFTFSSYA(SEQ ID NO:1)
HCDR2：IVGSGGST(SEQ ID NO:2)
HCDR3：AKSLIYGHYDILTGAYYFDY(SEQ ID NO:3)；
以及
包含JS5-10的三个轻链互补决定区：
LCDR1：QGIGNW(SEQ ID NO:4)
LCDR2：AAS(SEQ ID NO:5)
LCDR3：QQANSFPP(SEQ ID NO:6)
或者，具体地，包括JS5-10重链可变区：
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIVGSGGSTYYADSVKGRFIISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSLIYGHYDILTGAYYFDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:7)；
以及JS5-10轻链可变区：
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTIPCRASQGIGNWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPPFGQGTRLEIK(SEQ ID NO:8)；
或更具体地包含JS5-10的重链：
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIVGSGGSTYYADSVKGRFIISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSLIYGHYDILTGAYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:9)；
以及JS5-10的轻链：
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTIPCRASQGIGNWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPPFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ IDNO:10)。
本申请中，将具有上述SEQ ID NO:9所示的重链和SEQ ID NO:10所示的轻链的SARS-CoV-2抗体命名为JS5-10，其具有两条重链和两条轻链。
优选地，本申请中所述的任一用途、疗法、药物及试剂盒中的SARS-CoV-2抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含重链CDR为SEQ ID NO:1、2和3所示的氨基酸序列，及(b)包含轻链CDR为SEQ ID NO:4、5和6所示的氨基酸序列。
更优选地，本申请中所述的任一用途、疗法、药物及试剂盒中的SARS-CoV-2抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含SEQ ID NO:7的重链可变区，及(b)包含SEQ ID NO:8的轻链可变区。
更优选地，本申请中所述的任一用途、疗法、药物及试剂盒中的SARS-CoV-2抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含SEQ ID NO:9的重链，及(b)包含SEQ ID NO:10的轻链，优选为JS5-10。
在本文实施例中用作对照或联用药物的非限制性、示例性的其他结合SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段(或称其他SARS-CoV-2抗体)包括申请号为PCT/CN2021/077392中描述的任意一个抗SARS-CoV-2或其抗原结合片段，本文将其所公开的全部内容以引入的方式纳入本文。在一些实施方式中，在本申请的方法和组合物中使用的抗体的CDR序列包括来自于PCT/CN2021/077392中描述的抗体CB6的CDR序列和抗体GH12的CDR序列。在一些方案中，在本申请的方法和组合物中使用的抗体的CDR序列包括来自于PCT/CN2021/077392中描述的抗体CB6的可变区序列和抗体GH12的可变区序列。在一些方案中，在本申请的方法和组合物中使用的抗体来自于PCT/CN2021/077392中描述的抗体CB6的可变区序列或抗体GH12的可变区序列，其经过常规技术构建表达载体并在细胞中表达，制备获得的人源化单克隆抗体。其中CB6和GH12相关氨基酸序列如下，其中CB6的CDR的定义方式为KABAT，GH12的CDR的定义方式为IMGT：
本申请的一些实施方式中，所述其他结合SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段包含CB6抗体的三个重链互补决定区：
HCDR1：SNYMS(SEQ ID NO:13)
HCDR2：VIYSGGSTFYADSVKG(SEQ ID NO:14)
HCDR3：VLPMYGDYLDY(SEQ ID NO:15)；
以及包含CB6抗体的三个轻链互补决定区：
LCDR1：RASQSISRYLN(SEQ ID NO:16)
LCDR2：AASSLQS(SEQ ID NO:17)
LCDR3：QQSYSTPPEYT(SEQ ID NO:18)或者，具体地，包括CB6抗体的重链可变区：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSNYMSWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGSTFYADSVKGRFTISRDNSMNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCARVLPMYGDYLDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:19)
和CB6抗体的轻链可变区：
DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPEYTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:20)；
或更具体地包含CB6抗体的重链：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSNYMSWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGSTFYADSVKGRFTISRDNSMNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCARVLPMYGDYLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:21)；
和CB6抗体的轻链：
DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPEYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQID NO:22)
或者更优选为CB6抗体。
本申请的另一些实施方式中，所述其他结合SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段包含GH12抗体的三个重链互补决定区：
HCDR1：GFTFSSYW(SEQ ID NO:23)
HCDR2：IKQDGSEK(SEQ ID NO:24)
HCDR3：TRAGWVRGAFDI(SEQ ID NO:25)
以及
包含GH12抗体的三个轻链互补决定区：
HCDR1：SGSIASNY(SEQ ID NO:26)
HCDR2：EDN(SEQ ID NO:27)
HCDR3：QSYDSSNLWV(SEQ ID NO:28)
或者，具体地，包括GH12抗体的重链可变区：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRAGWVRGAFDIWGQGTMVTVSS(SEQ ID NO:29)；
和GH12抗体的轻链可变区：
NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTGSSGSIASNYVQWYQQRPGSAPTTVIYEDNQRPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQSYDSSNLWVFGGGTKLTVLGQPK(SEQ ID NO:30)；
或更具体地包含GH12抗体的重链：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRAGWVRGAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:11)；
和GH12抗体的轻链：
NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTGSSGSIASNYVQWYQQRPGSAPTTVIYEDNQRPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQSYDSSNLWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQID NO:12)
或者更优选为GH12抗体。
在一些实施方式中，可与本申请中所述的任一用途、疗法、药物及试剂盒的SARS-CoV-2抗体组合使用的其他SARS-CoV-2抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含重链CDR为SEQID NO:13、14和15所示的氨基酸序列，及(b)包含轻链CDR为SEQ ID NO:16、17和18所示的氨基酸序列。
更优选地，可与本申请中所述的任一用途、疗法、药物及试剂盒的SARS-CoV-2抗体组合使用的其他SARS-CoV-2抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含SEQ ID NO:19的重链可变区，及(b)包含SEQ ID NO:20的轻链可变区。
更优选地，可与本申请中所述的任一用途、疗法、药物及试剂盒的SARS-CoV-2抗体组合使用的其他SARS-CoV-2抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含SEQ ID NO:21的重链，及(b)包含SEQ ID NO:22的轻链，优选为CB6。
在另一些实施方式中，可与本申请中所述的任一用途、疗法、药物及试剂盒的SARS-CoV-2抗体组合使用的其他SARS-CoV-2抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含重链CDR为SEQ ID NO:23、24和25所示的氨基酸序列，及(b)包含轻链CDR为SEQ ID NO:26、27和28所示的氨基酸序列。
更优选地，可与本申请中所述的任一用途、疗法、药物及试剂盒的SARS-CoV-2抗体组合使用的其他SARS-CoV-2抗体或其抗原结合片段：(a)包含SEQ ID NO:29的重链可变区，及(b)包含SEQ ID NO:30的轻链可变区。
更优选地，可与本申请中所述的任一用途、疗法、药物及试剂盒的SARS-CoV-2抗体组合使用的其他SARS-CoV-2抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含SEQ ID NO:11的重链，及(b)包含SEQ ID NO:12的轻链，优选为GH12。
可与本申请中所述的任一用途、疗法、药物及试剂盒的抗体组合使用的SARS-CoV-2抗体还包括Casirvimab、Sotrovimab或Bamlanivimab的至少一种。
药物组合物
本申请还提供了一种药物组合物，其含有本文所述的SARS-CoV-2抗体和任选的其他SARS-CoV-2抗体，二者可以混合物的形式提供(即为药物组合物的形式)，或者各自均以独立的制剂的形式提供。当以独立的制剂的形式存在时，每一制剂除所述活性成分外，还含有药学上可接受的载体。
对于具有重症或重症倾向的患者，本申请的药物组合中亦可包含一种或多种额外治疗剂。额外治疗剂可为(例如)化学治疗剂(例如，α-干扰素、利巴韦林、磷酸氯喹、阿比多尔)、生物治疗剂(例如，托珠单抗)。
优选的用于本申请所述的SARS-CoV-2抗体可如本文任一实施方案所述，优选为包含：氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；更优选为包含氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示的重链可变区，和氨基酸序列如SEQID NO:8所示的轻链可变区；最优选为JS5-10。
优选的用于本申请所述的与SARS-CoV-2抗体组合使用的抗体可如本文任一实施方案所述，优选为包含：
(1)氨基酸序列如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；更优选为包含氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示的轻链可变区；更优选为氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示的重链和氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示的轻链；最优选为CB6；或
(2)氨基酸序列如SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:25所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；更优选为氨基酸序列如SEQ ID NO:29所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示的轻链可变区；更优选为氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示的重链和氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示的轻链；最优选为GH12。
试剂盒
本申请提供了一种试剂盒，其包含：
(1)一个或多个单次药物剂量单元的特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段，任选地还包括一个或多个单次药物剂量单元的其他结合SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段；
或
(2)一个或多个单次药物剂量单元的如本文所述的药物组合物。
治疗方法和用途
本申请提供了前文任一项所述的特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段，或者前文任一项所述的药物组合物在制备用于预防或治疗新型冠状病毒SARS-CoV-2感染的药物中的用途。
在另一个方面，本申请提供一种治疗和/或预防SARS-CoV-2感染的方法，其包括向有需要的受试者施用如前文任一项所述的特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段，或者施用如前文任一项所述的药物组合物。
在另一个方面，本申请提供了前文任一项所述的特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段，或者前文任一项所述的药物组合物，其用于预防或治疗新型冠状病毒SARS-CoV-2感染。
在另一个方面，本申请提供一种诊断受试者SARS-CoV-2感染的方法，包括：a)使从受试者获得的样品与前文任一项的特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段或前文任一项所述的药物组合接触；b)确定样本中SARS-CoV-2的存在或数量；c)将SARS-CoV-2的存在或数量与受试者中SARS-CoV-2感染的存在或状态相关联。
在另一个方面，本申请提供一种降低感染SARS-CoV-2的受试者的全身或局部病毒载量的方法，包括向受试者施用有效量的前文任一项所述的特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段，或前文任一项所述的药物组合物。
在一些实施方式中，所述药物组合物包含所述特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方式中，具有所述新型冠状病毒SARS-CoV-2感染的患者或疑似患者具有以下特征的至少一种：(a)实时荧光RT-PCR检测新型冠状病毒SARS-CoV-2核酸阳性；(b)SARS-CoV-2基因测序，与已知的毒株高度同源；(c)SARS-CoV-2特异性IgM抗体和IgG抗体阳性；(d)SARS-CoV-2特异性IgG抗体由阴性转为阳性或恢复期IgG抗体滴度较急性期呈4倍以上升高。本申请中，SARS-CoV-2感染指SARS-CoV-2感染导致发生和发展的疾病。在一些实施方式中，所述SARS-CoV-2为野生型或如前文任一项所述的突变株。
优选的用于本申请所述特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段可如本文任一实施方案所述，优选为包含：氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示的重链可变区，和氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示的轻链可变区；更优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示的轻链；更有选为JS5-10。
在一些优选方案中，用于本申请所述药物组合物包含：
(1)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示的重链可变区，和氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示的轻链可变区；更优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示的轻链；更有选为JS5-10；和
(2)氨基酸序列如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示的轻链可变区；更优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示的重链和氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示的轻链；更有选为CB6。
在特别优选的实验方案中，本申请提供了前文任一项所述的特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段，或包含其的药物组合物在制备用于预防或治疗新型冠状病毒SARS-CoV-2感染的药物中的用途；优选地，所述SARS-CoV-2选自野生型、Alpha突变株、Beta突变株、Gamma突变株、Delta突变株和Kappa突变株；优选地，所述特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体包含氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示的轻链；所述药物组合物包含氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示的轻链，以及氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示的重链和氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示的轻链。
缩略语
贯穿于本申请的说明书及实施例中，使用以下缩略语：
SARS-CoV-2重症急性呼吸综合征-新型冠状病毒2
ACE2血管紧张素转化酶2
RBD受体结合结构域
NTD N端结构域
CTD C端结构域
下文将以具体实施例的方式阐述本申请。应理解，这些实施例仅为阐述性的，并非旨在限制本申请的范围，凡在本申请的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。实施例中所用到的方法和材料，除非另有说明，否则为本领域的常规方法和材料。
实施例
实施例1：人源化抗体JS5-10
本申请中首先以昆虫细胞表达的突变株的SARS-CoV-2RBD作为抗原，通过流式分选，从SARS-CoV-2感染后痊愈出院人员的外周血单核细胞(PBMCs)中筛选到可以特异结合SARS-CoV-2RBD蛋白的记忆B细胞，然后对筛选的单一B细胞进行RT-PCR，获得抗体的可变区序列与片段，并进一步与恒定区连接至表达载体中。经哺乳动物细胞表达、纯化后，进行一系列的功能检测，包括与SARS-CoV-2RBD蛋白的结合能力，阻断SARS-CoV-2RBD与ACE2结合的阻断效果，抑制SARS-CoV-2感染的中和效果等，获得了中和SARS-CoV-2感染的抗体JS5-10。
实施例2：荧光素酶报告基因系统检测JS5-10对SARS-CoV-2假病毒的体外中和活性
本实施例利用荧光素酶报告基因系统，检测JS5-10和CB6(君实生物)对SARS-CoV-2突变株假病毒感染293-ACE2细胞(南京诺唯赞生物科技股份有限公司，培养条件：DMEM+10％FBS)的阻断作用，以anti-KLH hIgG1 LALA(君实生物)为对照抗体。
SARS-CoV-2的Alpha突变株(B.1.1.7)假病毒、Beta突变株(B.1.315)假病毒、Gamma突变株(P.1)假病毒、Kappa突变株(B.1.617.1)和Delta突变株(B.1.617.2)假病毒来源：北京三药科技开发公司。
测试方法：
首先将Alpha突变株(5μl病毒/孔)、Beta突变株(2μl病毒/孔)、Gamma突变株(10μl病毒/孔)、Kappa突变株(5μl病毒/孔)以及Delta突变株(2μl病毒/孔)假病毒分别与不同浓度的抗体JS5-10、抗体CB6或者对照抗体)在37℃预孵育1h，其中，抗体浓度从100μg/ml，10倍稀释至0.1pg/ml。然后用PBS缓冲液重悬293-ACE2细胞，并按每孔20000个细胞加入到假病毒与抗体混合液中，放于37℃培养箱孵育24h。孵育结束后，向每孔加入50μl Brightlight Luciferase substrate(Vazyme，DD1204)，并用酶标仪检测荧光信号，并用GraphPadPrism软件进行四参数拟合曲线得出半抑制浓度IC50值。以抗体浓度对数值和相对光单位(RLU)作图，结果如图1A至1E所示，其中图1A为对Alpha突变株假病毒的抑制结果；图1B为对Beta突变株假病毒的抑制结果；图1C为对Gamma突变株假病毒的抑制结果；图1D为对Kappa突变株假病毒的抑制结果；图1E为对Delta突变株假病毒的抑制结果。
从图1A至1E中可以看出，JS5-10能对293-ACE2细胞中感染的SARS-CoV-2的Alpha突变株(B.1.1.7)假病毒、Beta突变株(B.1.315)假病毒、Gamma突变株(P.1)假病毒、Kappa突变株(B.1.617.1)和Delta突变株(B.1.617.2)假病毒有较强的中和作用，IC50值分别为1.184ng/ml、8.470ng/ml、0.4494ng/ml、5.399ng/ml和5.563ng/ml。CB6对SARS-CoV-2的Alpha突变株、Kappa突变株以及Delta突变株有较为显著的中和活性，IC50值分别为55.73ng/ml、14.73ng/ml和3.430ng/ml，中和活性显著低于JS5-10；CB6对Beta突变株、Gamma突变株无中和活性。
结果说明，本申请的抗体JS5-10能够有效中和SARS-CoV-2的假病毒，对SARS-CoV-2的Alpha突变株(B.1.1.7)、Beta突变株(B.1.351)、Gamma突变株(P.1)、Kappa突变株(B.1.617.1)以及Delta突变株(B.1.617.2)感染293-ACE2细胞均表现出相当的、显著的病毒抑制活性。由此可见，抗体JS5-10对SARS-CoV-2的Alpha突变株、南非Beta突变株、巴西Gamma突变株、Kappa突变株以及Delta突变株等几种大流行的突变株都有较为显著的中和作用，能够阻止病毒感染人体。
实施例3：定量聚合酶链式反应检测肺部病毒载量以评估本申请抗体在小鼠体内对SARS-CoV-2活病毒的中和活性
实验材料
Figure SMS_1
将hACE2转基因小鼠(雌性，30周)分为4组，每组8只动物，各组动物给药情况如表1所示：预防组，在滴鼻攻毒前1天给小鼠腹腔注射20mg/kg的JS5-10抗体；治疗组，滴鼻攻毒后1天腹腔注射20mg/kg的JS5-10抗体；联合治疗组，攻毒后1天腹腔注射10mg/kg的CB6抗体和10mg/kg的VA5-10抗体：安慰剂组，攻毒后1天腹腔注射100μL无菌PBS。在攻毒后的第5天对所有小鼠实施安乐死并收集肺组织，进行肺部病毒载量检测。
表1：小鼠体内中和活性实验分组设计
组别 数量 给药情况
预防组 8 JS5-10:20mg/kg
治疗组 8 JS5-10:20mg/kg
联合治疗组 8 JS5-10:10mg/kg；CB6:10mg/kg
安慰剂组 8 PBS
将用于肺部病毒载量检测的肺组织加入1.5mL DMEM培养基研磨后，5000g/min，离心10min，取上清用于RNA提取。每个样品取140μL上清，按照QIAamp viral RNA mini kit进行RNA提取。使用针对ORF1ab基因的引物：OFR1ab-F:5’-CCCTGTGGGTTTTACACTTAA-3’；OFR1ab-R:5’-ACGATTGTGCATCAGCTGA-3’,Probe-ORF1ab:5’-FAM-CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGG-BHQ1-3’。
根据说明，使用One Step PrimeScriptTMRT-PCR Kit(Perfect Real Time)(Takara Co.,Ltd)试剂盒，测定样品中RNA的拷贝数，同时使用梯度稀释的ORF1ab基因的标准质粒溶液绘制标准曲线。在ABI QuantStudio 5荧光定量PCR仪上进行42℃反转录5min，95℃预变性10s，包括95℃变性3s在内的40个循环，60℃退火延伸30s终止，机器根据标准曲线，自动将每个样品CT值换算为病毒拷贝数。最后，根据样品直接检测到的拷贝数和每只小鼠的肺重计算小鼠肺部病毒载量(copies/g)。
各组小鼠肺部病毒载量结果如图2所示，由图2可以看出，与安慰剂组相比，单克隆抗体JS5-10与CB6联合使用时显著降低了小鼠的肺部病毒载量，起到了很好的治疗效果。在该检测系统中，单克隆抗体JS5-10无论是在小鼠攻毒前预防用药，亦或是攻毒后单独或与CB6联合治疗用药，均可显著降低小鼠的肺部病毒载量，说明JS5-10对于发生在实验动物体内的SARS-CoV-2的感染具有良好的治疗和预防效果，此外，JS5-10与CB6联合用药，表现出更好的治疗效果。
实施例4：联合用药对SARS-CoV-2病毒的体外中和活性影响
表2体外中和活病毒实验材料
Figure SMS_2
用DMEM完全培养基将Vero E6细胞按照1×104cells/孔进行96孔铺板，37℃，二氧化碳培养箱中孵育24h。CB6抗体起始浓度2μg/mL，JS5-10抗体起始浓度5μg/mL，CB6和JS5-10等比例混合抗体起始浓度2μg/mL，用DMEM培养基进行2倍梯度稀释，共11个梯度。PBS溶液为空白对照。然后将相应浓度梯度的抗体与SARS-CoV-2病毒充分混匀，使每孔感染病毒量为100个半数组织培养感染剂量(median tissue culture infective dose,TCID50)；每个抗体浓度设置8个复孔；设置不加抗体孔(以等体积PBS代替抗体溶液)作为阴性对照。将上述96孔板置于细胞培养箱中(37℃，5％CO2)孵育72小时。
72小时后，取出96孔板，置于显微镜下观察并记录每个抗体浓度下的8个孔中的发生致细胞病变效应(CPE)的孔数，根据病变孔数统计每个抗体浓度下的CPE抑制率，结果如图3所示。
CPE抑制率＝100-CPE孔数/8
根据不同浓度下的CPE抑制率(中和率)结果，利用生物统计学软件Graphpad拟合计算抗体半数中和浓度ND50，结果如图3所示。
由图3可以看出，与阴性对照PBS相比，JS5-10能够抑制SARS-CoV-2活病毒对VeroE6细胞的感染，具有浓度梯度依赖效应，其ND50为0.0857μg/mL，相比于抗体CB6(ND50为0.2563μg/mL)明显降低，说明本申请的JS5-10具有更好的病毒中和作用。此外，当两者联合使用时中和活性提升至0.0155μg/mL，说明两者联用时具有一定的协同效应。
由此说明，本申请的JS5-10对于SARS-CoV-2活病毒具有较高的中和生物学活性，且呈现剂量依赖效应，同时JS5-10对SARS-CoV-2活病毒的中和活性优于CB6。两种抗体联合使用时，具有一定的协同效应，提高了对SARS-CoV-2活病毒的中和生物学活性。
实施例5：JS5-10与SARS-CoV-2的RBD蛋白的结合活性
使用Octet RED384系统(Sartorius公司，美国)，通过生物层干涉仪(Bio-LayerInterferometry，BLI)对JS5-10与SARS-CoV-2的野生型RBD蛋白(货号SPD-C82E8，ACROBiosystems，北京)以及SARS-CoV-2的突变株RBD蛋白的结合动力学进行测定。
SARS-CoV-2的突变型RBD蛋白包括：Alpha突变株RBD蛋白(货号SPD-C82E6，ACROBiosystems，北京)、Beta突变株RBD蛋白(货号SPD-C82E5，ACRO Biosystems，北京)、Gamma突变株RBD蛋白(货号SPD-C82E7，ACRO Biosystems，北京)、Kappa突变株RBD蛋白(货号SPD-C82Ec，ACRO Biosystems，北京)、Epsilon突变株RBD蛋白(货号SPD-C82E3，ACROBiosystems，北京)、Delta突变株RBD蛋白(货号SPD-C82Ed，ACRO Biosystems，北京)。
测试方法：将生物层干涉仪的蛋白A生物传感器浸入抗体JS5-10(浓度为1μg/mL，溶剂为含有0.02v/v％吐温20的PBS溶液)中，之后分别浸入不同浓度的SARS-CoV-2的野生型RBD蛋白溶液或突变株RBD蛋白溶液中；其中，SARS-CoV-2的野生型RBD蛋白溶液或突变株RBD蛋白溶液的浓度分别为100nM、50nM、25nM、12.5nM和6.25nM，稀释剂均为含有0.02v/v％吐温20的PBS溶液。之后将蛋白A生物传感器浸至分析缓冲液(1×HBS-EP+缓冲液)孔中进行解离，测得缔合速率常数(Ka)和解离速率常数(Kd)。使用1：1结合动力学模型测得亲和力(KD)，并使用Octet RED384 Data Analysis 12.0软件进行全局拟合分析。
测试结果：结果如下表3所示。
表3 JS5-10与SARS-CoV-2的RBD蛋白的结合活性
SARS-CoV-2 RBD类型 Ka(1/Ms) Kd(1/s) KD(M)
野生型 1.06E+5 2.15E-4 2.04E-9
Alpha突变株 2.43E+5 3.16E-4 1.30E-9
Beta突变株 2.01E+5 1.76E-4 0.88E-9
Gamma突变株 2.16E+5 2.41E-4 1.12E-9
Kappa突变株 1.96E+5 1.72E-4 8.75E-10
Epsilon突变株 1.93E+5 2.26E-4 1.17E-9
Delta突变株 2.20E+5 1.61E-4 0.73E-9
上述结果表明，本申请的JS5-10与SARS-CoV-2的野生型RBD蛋白、Alpha突变株RBD蛋白、Beta突变株RBD蛋白、Gamma突变株RBD蛋白、Kappa突变株RBD蛋白、Epsilon突变株RBD蛋白和Delta突变株RBD均具有较强的结合活性。
以上所述仅为本申请的较佳实施例而已，并非用于限定本申请的保护范围。凡在本申请的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均包含在本申请的保护范围内。

Claims (23)

1.特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段，或包含其的药物组合物在制备用于治疗或预防受试者SARS-CoV-2感染的药物中的用途，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；所述SARS-CoV-2为野生型或突变株。
2.如权利要求1所述的用途，其中，所述SARS-CoV-2的突变株包含一个或多个受体结合区的氨基酸残基突变，突变位点包括N501，E484，L452，K417，T478和R346的至少一个。
3.如权利要求2所述的用途，其中，所述受体结合区的氨基酸残基突变选自N501Y，E484K，L452R，K417N，K417T，T478K，E484Q和R346K中的至少一个。
4.如权利要求1所述的用途，其中，所述SARS-CoV-2的突变株选自Alpha突变株，Beta突变株，Gamma突变株，Delta突变株，Epsilon突变株，Zeta突变株，Eta突变株，Theta突变株，Iota突变株，Kappa突变株和Mu突变株的至少一种；优选地，所述SARS-CoV-2的突变株选自Alpha突变株，Beta突变株，Gamma突变株，Delta突变株和Kappa突变株的至少一种。
5.如权利要求1所述的用途，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含氨基酸序列如SEQID NO:7所示的重链可变区，和氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示的轻链可变区。
6.如权利要求5所述的用途，其中，所述抗体是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4类抗体；优选为IgG1或IgG4类抗体。
7.如权利要求6所述的用途，其中，所述IgG1类抗体在Fc结构域包含1、2、3、4、5或6个氨基酸残基的突变。
8.如权利要求1-7中任一项所述的用途，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示的重链和氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示的轻链。
9.如权利要求1-8中任一项所述的用途，其中，所述药物组合物还包含其他结合SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段中的至少一种。
10.如权利要求9所述的用途，其中，所述其他结合SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段具有以下特征中的至少一种：
(1)特异性结合SARS-CoV-2刺突蛋白上的不同表位；
(2)特异性结合SARS-CoV-2的相同或不同结构域；
(3)特异性结合SARS-CoV-2的野生型或不同突变株；
(4)以非竞争方式与SARS-CoV-2结合。
11.如权利要求9所述的用途，其中，所述其他结合SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段包含：
(1)氨基酸序列如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(2)氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示的轻链可变区；或
(3)氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示的重链和氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示的轻链。
12.如权利要求9所述的用途，其中，所述其他结合SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段包含：
(1)氨基酸序列如SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:25所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(2)氨基酸序列如SEQ ID NO:29所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示的轻链可变区；或
(3)氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示的重链和氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示的轻链。
13.如权利要求9所述的用途，其中，所述其他结合SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段选自Casirvimab、Sotrovimab、Bamlanivimab和CB6中的至少一种，优选为CB6。
14.如权利要求1-13中任一项所述的用途，其中，所述抗体或其抗原结合片段或药物组合物通过口服、鼻腔、静脉内、皮下、舌下或肌肉内给药。
15.一种特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段，其包含氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示的重链和氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示的轻链。
16.一种药物组合物，其包含特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段，所述特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段包含：
氨基酸序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示的重链可变区，和氨基酸序列如SEQ IDNO:8所示的轻链可变区；更优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示的轻链；
和
任选地，其他结合SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段；
所述其他结合SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段包含：氨基酸序列如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和氨基酸序列分别如SEQID NO:16、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示的轻链可变区；更优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示的重链和氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示的轻链；
或
氨基酸序列如SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:25所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:29所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示的轻链可变区；更优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示的重链和氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示的轻链。
17.一种治疗和/或预防SARS-CoV-2感染的方法，其包括向有需要的受试者施用特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段，或包含其的药物组合物。
18.一种诊断受试者SARS-CoV-2感染的方法，其包括：a)使从受试者获得的样品与特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段或包含其的药物组合物接触；b)确定样本中SARS-CoV-2的存在或数量；c)将SARS-CoV-2的存在或数量与受试者中SARS-CoV-2感染的存在或状态相关联。
19.一种降低感染SARS-CoV-2的受试者的全身或局部病毒载量的方法，其包括向受试者施用有效量的特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段或包含其的药物组合物。
20.如权利要求17-19中任一项所述的方法，其中，所述SARS-CoV-2为野生型或突变株；优选地，所述SARS-CoV-2的突变株选自Alpha突变株，Beta突变株，Gamma突变株，Delta突变株和Kappa突变株的至少一种。
21.如权利要求17-19中任一项所述的方法，其中，所述特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段包含：氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示的重链可变区，和氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示的轻链可变区；更优选包含氨基酸序列如SEQ IDNO:9所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示的轻链。
22.如权利要求17-19中任一项所述的方法，其中，所述药物组合物包含特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段，所述特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段包含：
氨基酸序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示的重链可变区，和氨基酸序列如SEQ IDNO:8所示的轻链可变区；更优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示的轻链；
和
任选地，其他结合SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段；
所述其他结合SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段包含：氨基酸序列如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和氨基酸序列分别如SEQID NO:16、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示的轻链可变区；更优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示的重链和氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示的轻链；
或
氨基酸序列如SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:25所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:29所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示的轻链可变区；更优选包含氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示的重链和氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示的轻链。
23.一种试剂盒，其包含：
(1)一个或多个单次药物剂量单元的特异性结合SARS-CoV-2的刺突蛋白的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；
或
(2)一个或多个单次药物剂量单元的如权利要求16所述的药物组合物。
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