JP6685225B2 - 形質細胞様樹状細胞の枯渇 - Google Patents

Description

［関連出願］
本出願は、２０１３年１２月１６日出願の米国仮特許出願第６１／９１６，３２２号の利益を主張する。この出願の内容全体が参照により本明細書の一部をなすものとする。

［連邦支援の陳述］
本発明は、国立衛生研究所によって授与された助成金第ＡＩ０７７４５４号の下で、政府の支援により行われたものである。政府は、本発明において一定の権利を有する。

［発明の分野］
本発明は、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）を枯渇させる、ＢＤＣＡ２を標的とする抗体、およびｐＤＣに関連する障害を治療するために該抗体を使用する方法に関する。

形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）は強力なＩ型インターフェロン（ＩＦＮ−Ｉ）産生細胞であり（Ｓｉｅｇａｌら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８４：１８３５（１９９９））、様々なウイルス感染の制御に関与している（Ｃｅｒｖａｎｔｅｓ−Ｂａｒｒａｇａｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０９：３０１２（２０１２）；Ｔａｋａｇｉら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３５：９５８（２０１１）；Ｌｉｕ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：２７５（２００５）；Ｓｗｉｅｃｋｉら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３３：９５５（２０１０））。しかしながら、ヒト免疫不全ウイルス１（ＨＩＶ−１）の感染および発症機序におけるｐＤＣの寄与には議論が残る。一方、ｐＤＣはＩＦＮ−Ｉ産生によりＨＩＶ−１複製を阻害することが示されている（Ｙｏｎｅｚａｗａら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７７：３７７７（２００３）；Ｆｏｎｇら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７６：１１０３３（２００２）；Ｇｕｒｎｅｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３：７２６９（２００４））。さらに、ＨＩＶ−１感染患者でのｐＤＣの数および機能低下は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞数と無関係な日和見感染と相関がある（Ｓｉｅｇａｌら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．７８：１１５（１９８６）；Ｆｅｌｄｍａｎら、Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０１：２０１（２００１）；Ｌｉｃｈｔｎｅｒら、Ｃｕｒｒ．ＨＩＶ Ｒｅｓ．６：１９（２００８））。一方で、ｐＤＣはＨＩＶ免疫病原性の一因であり得る。ＨＩＶ−１感染患者での持続的なｐＤＣ活性化およびＩＦＮ−Ｉ産生は、ウイルス制御と相関はなく、疾患の進行の前兆である（Ｂｕｉｍｏｖｉｃｉ−Ｋｌｅｉｎら、Ｌａｎｃｅｔ ２：３４４（１９８３）；Ｂｕｉｍｏｖｉｃｉ−Ｋｌｅｉｎら、ＡＩＤＳ Ｒｅｓ．２：９９−１０８（１９８６）；Ｍｅｉｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １５：９５５（２００９））。さらに、ｐＤＣは、病原性アジアザル（アカゲザルおよびカニクイザル）および非病原性アフリカザル（スーティーマンガベイおよびアフリカミドリザル）の両方で、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）感染の急性期中に活性化される。しかしながら、ｐＤＣ活性化は非病原性ＳＩＶ感染では速やかに制御される一方で、アジアザルでの病原性感染中、該活性化およびＩＦＮ−Ｉ産生は持続する（Ｌｅｄｅｒｅｒら、ＰＬｏＳ Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ５：ｅ１０００２９６（２００９）；Ｂｏｓｉｎｇｅｒら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１９：３５５６（２００９）；Ｊａｃｑｕｅｌｉｎら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１９：３５４４（２００９）；Ｈａｒｒｉｓら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８４：７８８６（２０１０）；Ｃａｍｐｉｌｌｏ−Ｇｉｍｅｎｅｚら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８４：１８３８（２０１０））。このように、ＨＩＶとｐＤＣとの間の相互作用はわかっていない。

本発明は、当技術分野のこれまでの短所を、対象においてｐＤＣを枯渇させ、ｐＤＣに関連する障害を治療する抗体を提供することによって対処する。

本発明は、対象に投与されるとＢＤＣＡ２（血液樹状細胞抗原−２）に特異的に結合してｐＤＣを枯渇させる（例えば、ｐＤＣの数を減らす）抗体の同定に一部基づいている。さらに本発明は、対象においてｐＤＣを枯渇させ、対象においてｐＤＣに関連する障害を治療するこれらの抗体の使用に基づいている。

したがって、一態様では、本発明は、対象においてｐＤＣを枯渇させる方法であって、ＢＤＣＡ２に特異的に結合してｐＤＣを枯渇させる抗体またはその断片を該対象に送達し、それによりｐＤＣを枯渇させる工程を含む方法に関する。

別の態様では、本発明は、対象においてｐＤＣに関連する障害を治療する方法であって、ＢＤＣＡ２に特異的に結合してｐＤＣを枯渇させる抗体またはその断片を該対象に送達し、それにより該障害を治療する工程を含む方法に関する。

追加の態様では、本発明は、ｐＤＣに関連する障害を治療するための医薬の調製における、ＢＤＣＡ２に特異的に結合してｐＤＣを枯渇させる抗体またはその断片の使用に関する。

別の実施形態では、本発明は、ｐＤＣに関連する障害を治療するための、ＢＤＣＡ２に特異的に結合してｐＤＣを枯渇させる抗体またはその断片の使用に関する。

さらなる態様では、本発明は、対象に投与されるとＢＤＣＡ２に特異的に結合してｐＤＣを枯渇させる抗体またはその断片に関する。

本発明のこれらの態様および他の態様を、以下の本発明の説明においてより詳細に述べる。

単離した病原性ＨＩＶ−Ｒ３Ａに感染したヒト化マウスのＨＩＶ−１感染および免疫病因を示すグラフである。（ａ）１ｎｇのＲ３Ａ−ｐ２４／マウスを接種したマウス（ｎ＝１０）の血漿中のウイルスＲＮＡのゲノムコピー数を示すグラフである。（ｂ）ＦＡＣＳで測定した、末梢血および脾臓のＨＬＡ−ＤＲ＋ＣＤ３８＋ＣＤ８Ｔ細胞（ＣＤ３＋ＣＤ４−ＣＤ８＋）の割合の要約データを示すグラフである。（ｃ）全ＣＤ３＋Ｔ細胞中の相対的なＣＤ４＋Ｔ細胞（ＣＤ３＋ＣＤ８−ＣＤ４＋）の要約データを示すグラフである。（ｄ）非感染コントロールマウス（ｎ＝３）およびＲ３Ａ感染マウス（ｎ＝１０）の脾臓のＣＤ４Ｔ細胞、ＣＤ８Ｔ細胞およびｈｕＣＤ４５＋細胞の絶対細胞数の比較を示すグラフである。（ｅ）ルミネックス（ｌｕｍｉｎｅｘ）で測定した、非感染（ｎ＝３）および感染（ｎ＝３）ＤＫＯ−ｈｕマウスの血漿のＩＦＮ−ａ２の産生を示すグラフである。（ｆ）脾臓（ｎ＝３）のｈｕＣＤ４５＋細胞のＭｘ１およびＴＲＩＭ２２遺伝子発現の相対量を示すグラフである。点グラフの全てのバーは中央値を示す。エラーバーは標準偏差（ＳＤ）を示す。^＊および^＊＊は、ｐ＜０．０５およびｐ＜０．０１をそれぞれ示す。 定量的リアルタイムＰＣＲで測定した、個々のＣＣＲ５トロピックＪＲ−ＣＳＦ感染ＤＫＯ−ｈｕマウスのウイルス血（ｖｉｒｅｍｉａ）の動態を示すグラフである（ｎ＝１０）。 ＤＫＯ−ｈｕマウスでの、急性Ｒ３Ａ感染および慢性ＪＲ−ＣＳＦ感染におけるＣＤ８Ｔ細胞活性化を示すグラフである。（ａ）感染後３週目での、Ｒ３Ａ感染マウスの末梢血および脾臓のＨＬＡ−ＤＲ＋ＣＤ３８＋ＣＤ８Ｔ細胞割合の代表的なＦＡＣＳプロットを示すグラフである。（ｂ）感染後１８週目での、ＪＲ−ＣＳＦ感染マウスの末梢血および脾臓のＨＬＡ−ＤＲ＋ＣＤ３８＋ＣＤ８Ｔ細胞割合の代表的なＦＡＣＳプロットを示すグラフである。（ｃ）補足図２ｂの要約データを示すグラフである。モック（ｍｏｃｋ）はｎ＝４；ＪＲ−ＣＳＦはｎ＝１０。点グラフの全てのバーは中央値を示す。^＊＊はｐ＜０．０１を示す。 ＤＫＯ−ｈｕマウスでの、急性Ｒ３Ａ感染および慢性ＪＲ−ＣＳＦ感染におけるＣＤ４Ｔ細胞枯渇を示すグラフである。（ａ）感染後３週目での、Ｒ３Ａ感染マウスの末梢血および脾臓のＣＤ４Ｔ細胞（ＣＤ８−ＣＤ４＋）の割合の代表的なＦＡＣＳプロットを示すグラフである。（ｂ）感染後１８週目での、Ｒ３Ａ感染マウスの末梢血および脾臓のＣＤ４Ｔ細胞（ＣＤ８−ＣＤ４＋）割合の代表的なＦＡＣＳプロットを示すグラフである。（ｃ）補足図３ｂの要約データを示すグラフである。モックはｎ＝４；ＪＲ−ＣＳＦはｎ＝１０。点グラフの全てのバーは中央値を示す。^＊＊はｐ＜０．０１を示す。 感染後３週目で屠殺したＲ５トロピックＪＲ−ＣＳＦ感染ヒト化マウスのＩ型ＩＦＮ応答およびＨＩＶ発症機序を示すグラフである。（ａ）非感染コントロールマウス（ｎ＝４）およびＪＲ−ＣＳＦ感染マウス（ｎ＝１０）の脾臓のＣＤ４Ｔ細胞、ＣＤ８Ｔ細胞およびヒトＣＤ４５＋細胞の絶対細胞数の比較を示すグラフである。（ｂ）ルミネックスで測定した、非感染（ｎ＝３）および感染（ｎ＝３）ヒト化マウスの血漿のＩＦＮ−α２の産生を示すグラフである。（ｃ）脾臓から単離されたヒトＣＤ４５＋細胞のＭｘ１およびＴＲＩＭ２２遺伝子発現の相対量を示すグラフである。点グラフの全てのバーは中央値を示す。エラーバーは標準偏差（ＳＤ）を示す。^＊および^＊＊は、ｐ＜０．０５およびｐ＜０．０１をそれぞれ示す。 ＤＫＯ−ｈｕマウスでの１５Ｂにより媒介されたｐＤＣの枯渇を示すグラフである。（ａ〜ｂ）ヒト化マウスは１５Ｂまたはアイソタイプコントロール（ｉｓｏ）抗体のどちらか一方で処理し、全ヒト白血球（ＣＤ４５＋）中のｐＤＣ（ＣＤ４＋ＣＤ１２３＋）の割合はＦＡＣＳで分析した。（ａ）末梢血の抗体処理前後の相対ｐＤＣ頻度を示す代表的なＦＡＣＳプロットおよび要約データである（ｎ＝７）。（ｂ）腸間膜リンパ節（ｍＬＮ、アイソタイプはｎ＝４；１５Ｂはｎ＝５）および脾臓（ＳＰ、アイソタイプはｎ＝４；１５Ｂはｎ＝５）での１５ＢによるｐＤＣ枯渇を示す代表的なＦＡＣＳプロットおよび要約データである。点グラフの全てのバーは中央値を示す。エラーバーは標準偏差（ＳＤ）を示す。^＊および^＊＊は、ｐ＜０．０５およびｐ＜０．０１をそれぞれ示す。 ＤＫＯ−ｈｕマウスの異なるリンパ器官での１５Ｂにより誘導されるｐＤＣの特異的な枯渇を示すグラフである。（ａ）ｈｕＣＤ４５＋細胞中の、ＣＤ３＋ＣＤ１９−細胞およびＣＤ３−ＣＤ１９＋細胞の割合を示す代表的なＦＡＣＳプロットである。（ｂ〜ｃ）図７ａの要約データを示すグラフである。点グラフの全てのバーは中央値を示す。 ＤＫＯ−ｈｕマウスの異なるリンパ器官での１５Ｂにより誘導されるｐＤＣの特異的な枯渇を示すグラフである。（ａ）ｈｕＣＤ４５＋細胞中の、ＣＤ３−ＣＤ１４＋細胞の割合を示す代表的なＦＡＣＳプロットである。（ｂ）図８ａの要約データを示すグラフである。 ＤＫＯ−ｈｕマウスの異なるリンパ器官での１５Ｂにより誘導されるｐＤＣの特異的な枯渇を示すグラフである。（ａ）ｈｕＣＤ４５＋細胞中の、ＣＤ３−ＣＤ１１ｃ＋細胞の割合を示す代表的なＦＡＣＳプロットである。（ｂ）図９ａの要約データを示すグラフである。点グラフの全てのバーは中央値を示す。 ｐＤＣの枯渇はＤＫＯ−ｈｕマウスでの急性ＨＩＶ−１感染中のＩＦＮ−Ｉ誘導を消失させることを示すグラフである。ヒト化マウスは１５Ｂまたはアイソタイプコントロール（ｉｓｏ）抗体のどちらか一方で処理した。ｐＤＣ枯渇後、ＨＩＶ−Ｒ３Ａをヒト化マウスに感染させ、感染してから８日後（８ｄｐｉ）のマウスを分析のために屠殺した。（ａ）ＦＡＣＳで分析した、全ヒト白血球（ＣＤ４５＋）中のｐＤＣ（ＣＤ４＋ＣＤ１２３＋）の割合の要約データを示すグラフである。モック、ｎ＝６；アイソタイプ＋Ｒ３Ａ、ｎ＝９；１５Ｂ＋Ｒ３Ａ、ｎ＝１２。（ｂ）モック、ＨＩＶ−１感染および１５Ｂ処理マウスの血漿ＩＦＮα２をルミネックスアッセイで定量した結果を示すグラフである。モック、ｎ＝３；アイソタイプ＋Ｒ３Ａ、ｎ＝５；１５Ｂ＋Ｒ３Ａ、ｎ＝５。（ｃ〜ｄ）リアルタイムＰＣＲで測定した、マウス脾臓から精製したヒト細胞（ＣＤ４５＋）中のＩＦＮ−Ｉおよびインターフェロン刺激遺伝子のｍＲＮＡ量を示すグラフである。モック、ｎ＝３；アイソタイプ＋Ｒ３Ａ、ｎ＝５；１５Ｂ＋Ｒ３Ａ、ｎ＝５。点グラフの全てのバーは中央値を示す。エラーバーは標準偏差（ＳＤ）を示す。^＊および^＊＊は、ｐ＜０．０５およびｐ＜０．０１をそれぞれ示す。 ｐＤＣの枯渇前はＨＩＶ−１複製を増進することを示すグラフである。ヒト化マウスをｐＤＣ枯渇してから３日後にＨＩＶ−１に感染させ、感染してから８日後（８ｄｐｉ）（Ｒ３Ａ、ａ〜ｂ）または３週間後（ＪＲ−ＣＳＦ、ｃ〜ｅ）に屠殺した。（ａ）リアルタイムＰＣＲで測定した、血漿ＨＩＶ−１ＲＮＡ量（ゲノムコピー数×ｌｏｇ１０／ｍｌ）を示すグラフである。アイソタイプ＋Ｒ３Ａ、ｎ＝９；１５Ｂ＋Ｒ３Ａ、ｎ＝１２。（ｂ）脾臓ｐ２４陽性細胞の免疫組織化学染色を示す写真である。（ｃ）感染してから３週間後の血漿ＪＲ−ＣＳＦ ＨＩＶ−１ＲＮＡ量（ゲノムコピー数×ｌｏｇ１０／ｍｌ）をリアルタイムＰＣＲで測定した結果を示すグラフである。アイソタイプ＋ＪＲ−ＣＳＦ、ｎ＝１２；１５Ｂ＋ＪＲ−ＣＳＦ、ｎ＝１２。（ｄ）感染してから３週間後の脾臓ｐ２４陽性ＣＤ４Ｔ細胞の代表的なＦＡＣＳプロットを示すグラフである。（ｅ）相対的なｐ２４＋Ｔ細胞の要約データを示すグラフである。アイソタイプ＋ＪＲ−ＣＳＦ、ｎ＝７；１５Ｂ＋ＪＲ−ＣＳＦ、ｎ＝７。点グラフのバーは中央値を示す。^＊は、ｐ＜０．０５を示す。 亢進されたＨＩＶ−１感染によるｐＤＣ枯渇マウスでのＣＤ３８＋ＤＲ＋ＣＤ８Ｔ細胞数の上昇を示すグラフである。（ａ）８ｄｐｉでの末梢血および脾臓の、Ｒ３Ａ感染により誘導される、ＣＤ８Ｔ細胞でのＣＤ３８およびＨＬＡ−ＤＲ発現を示す代表的なＦＡＣＳプロットである。（ｂ）図４ａの要約データを示すグラフである。（ｃ）感染してから３週間後のＪＲ−ＣＳＦ感染により誘導される、ＣＤ８Ｔ細胞活性化を示す代表的なＦＡＣＳプロットである。（ｄ）図４ｃの要約データを示すグラフである。モック、ｎ＝６；アイソタイプ＋Ｒ３Ａ、ｎ＝９；１５Ｂ＋Ｒ３Ａ、ｎ＝１２。点グラフの全てのバーは中央値を示す。^＊および^＊＊は、ｐ＜０．０５およびｐ＜０．０１をそれぞれ示す。 脾臓でのＣＤ８Ｔ細胞活性化とウイルス量との間の相関を示すグラフである。相関はスピアマンのノンパラメトリック検定を用いて分析した。アイソタイプ＋Ｒ３Ａ、ｎ＝９；１５Ｂ＋Ｒ３Ａ、ｎ＝１２。二乗相関係数（ｒ）およびＰ値を示す。 ｐＤＣの枯渇前はＨＩＶ−１免疫病原性を減少させることを示すグラフである。ヒト化マウスをｐＤＣ枯渇から３日後にＨＩＶ−Ｒ３Ａに感染させ、８ｄｐｉで屠殺した。（ａ〜ｃ）末梢血および脾臓でのヒトＴ細胞の細胞数または全白血球数を示すグラフである。（ａ）ＣＤ４Ｔ細胞（ＣＤ３＋ＣＤ８−）数を示すグラフである。（ｂ）ＣＤ８Ｔ細胞（ＣＤ３＋ＣＤ４−ＣＤ８＋）数を示すグラフである。（ｃ）全ヒトＣＤ４５＋白血球数を示すグラフである。（ｄ〜ｅ）脾臓での死ＣＤ４Ｔ細胞、ＣＤ８Ｔ細胞およびヒトＣＤ４５^＋細胞の割合を示す代表的なヒストグラムおよび要約データである。モック、ｎ＝６；アイソタイプ＋Ｒ３Ａ、ｎ＝９；１５Ｂ＋Ｒ３Ａ、ｎ＝１２。点グラフの全てのバーは中央値を示す。^＊および^＊＊は、ｐ＜０．０５およびｐ＜０．０１をそれぞれ示す。 ｐＤＣの枯渇前はＨＩＶ−１発症を減少させることを示すグラフである。ヒト化マウスをｐＤＣ枯渇から３日後にＨＩＶ−１に感染させ、感染してから３週間後に屠殺した。（ａ〜ｃ）末梢血および脾臓でのヒトＴ細胞の細胞数または全白血球数を示すグラフである。（ａ）ＣＤ４Ｔ細胞（ＣＤ３＋ＣＤ８−）数を示すグラフである。（ｂ）ＣＤ８Ｔ細胞（ＣＤ３＋ＣＤ４−ＣＤ８＋）数を示すグラフである。（ｃ）ｈｕＣＤ４５＋白血球数を示すグラフである。モック、ｎ＝４；アイソタイプ＋ＪＲ−ＣＳＦ、ｎ＝８；１５Ｂ＋ＪＲ−ＣＳＦ、ｎ＝７。点グラフの全てのバーは中央値を示す。^＊は、ｐ＜０．０５を示す。 ｐＤＣの枯渇は、慢性ＨＩＶ−１感染中、ＨＩＶ−１複製を亢進するが、ＨＩＶ−１免疫病原性を減少させることを示すグラフである。感染してから１１週間後に、１５ＢでＨＩＶ−１感染ヒト化マウスを処理し、感染してから２１週間後（２１ｗｐｉ）に屠殺した（モック、ｎ＝６；ＪＲ−ＣＳＦ＋ＰＢＳ、ｎ＝１０；ＪＲ−ＣＳＦ＋１５Ｂ、ｎ＝９）。（ａ）各時点における血漿ＨＩＶ−１ＲＮＡ量（ゲノムコピー数×ｌｏｇ１０／ｍｌ）をリアルタイムＰＣＲで分析した結果を示すグラフである。（ｂ）脾臓のＨＩＶｐ２４陽性ＣＤ４Ｔ細胞（ＣＤ３＋ＣＤ８−）の割合を示す要約データである。（ｃ〜ｅ）末梢血および脾臓でのヒトＴ細胞の細胞数または全ＣＤ４５白血球数を示すグラフである。（ｃ）ＣＤ４Ｔ細胞（ＣＤ３＋ＣＤ８−）数を示すグラフである。（ｂ）ＣＤ８Ｔ細胞（ＣＤ３＋ＣＤ４−ＣＤ８＋）数を示すグラフである。（ｅ）ヒトＣＤ４５＋白血球数を示すグラフである。（ｆ）脾臓のヒトＣＤ４５＋細胞の免疫組織化学染色を示す写真である。（ｇ）脾臓での死ＣＤ４Ｔ細胞、ＣＤ８Ｔ細胞およびヒトＣＤ４５^＋細胞の割合を示す要約データである（屠殺時のＪＲ−ＣＳＦ感染、２１ｗｐｉ）。点グラフのバーは中央値を示す。^＊および^＊＊は、ｐ＜０．０５およびｐ＜０．０１をそれぞれ示す。 ｐＤＣの枯渇は、慢性感染での、ＨＩＶ−１複製を促進するが、Ｉ型ＩＦＮ応答を減少させることを示すグラフである。感染してから１１週間後に、１５ＢでＨＩＶ−１感染ヒト化マウスを処理し、感染してから２１週間後に屠殺した。（ａ）図６ｂの代表的なＦＡＣＳヒストグラムである。（ｂ）ルミネックスで測定した、感染してから１１週間後（ｐｒｅ）または２１週間後（ｐｏｓｔ）のモック（ｎ＝４）、ＪＲ−ＣＳＦ＋ＰＢＳ（ｎ＝５）およびＪＲ−ＣＳＦ＋１５Ｂ（ｎ＝５）からの血漿中のＩＦＮ−ａ２の産生を示すグラフである。（ｃ〜ｄ）リアルタイムＰＣＲで測定した、マウス脾臓から精製したヒト細胞（ＣＤ４５＋）中のＩＦＮ−Ｉおよびインターフェロン刺激遺伝子のｍＲＮＡ量を示すグラフである（ｎ＝５）。（ｅ〜ｆ）屠殺時の、脾臓から精製したヒトＣＤ４５＋細胞（ｅ）およびＣＤ８Ｔ細胞（ＣＤ３＋ＣＤ４−ＣＤ８＋）（ｆ）での相対的なＩＳＧ遺伝子発現を示す図である。点グラフの全てのバーは中央値を示す。エラーバーは標準偏差（ＳＤ）を示す。^＊および^＊＊は、ｐ＜０．０５およびｐ＜０．０１をそれぞれ示す。 １５Ｂの重鎖のヌクレオチド配列（配列番号１）およびアミノ酸配列（配列番号２）を示す図である。 １５Ｂの軽鎖のヌクレオチド配列（配列番号３）およびアミノ酸配列（配列番号４）を示す図である。 ＤＫＯ−ｈｕマウスでの１２Ｂ（１２５とも呼ばれる）によって媒介されたｐＤＣの枯渇を示すグラフである。 １２Ｂの重鎖のヌクレオチド配列（配列番号５）およびアミノ酸配列（配列番号６）を示す図である。 １２Ｂの軽鎖のヌクレオチド配列（配列番号７）およびアミノ酸配列（配列番号８）を示す図である。

本発明は、本発明の好ましい実施形態が示された添付の図面を参照してここにより詳細に記載される。しかし本発明は、異なる形態で実施してもよく、本明細書に示される実施形態に限定されると解釈すべきではない。むしろ、これらの実施形態は、この開示が徹底的かつ完全となり、本発明の範囲を当業者に完全に伝達するように提供されるものである。

文脈上、他に指示がない限り、本明細書に記載された本発明の様々な特徴は、任意の組み合わせで用いられ得ることは、明確に意図される。さらに、本発明はまた、本発明のいくつかの実施形態では、本明細書に示された任意の特徴、または特徴の組み合わせが排除または除外され得ることを企図する。例示すると、ある複合体が構成要素Ａ、ＢおよびＣを含むことが本明細書で述べられている場合、Ａ、ＢもしくはＣのうちのいずれかまたはそれらの組み合わせを単独でまたは任意の組み合わせで省略して特許請求の範囲から除外することができることが明確に意図される。

特に規定しない限り、本明細書で用いられる全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で発明の説明において使用される術語は、特定の実施形態だけを記載することを目的としており、本発明を限定することを意図しない。

別段の具体的な指示がない限り、本明細書では、ヌクレオチド配列を左から右へ５’から３’方向に一本鎖のみで示す。本明細書では、ヌクレオチドおよびアミノ酸の両方を、米国特許法施行規則１．８２２条（３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．８２２）および確立された用法に従って、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨された様式でまたは（アミノ酸に関しては）１文字表記もしくは３文字表記のいずれかにより表す。

別段に指示されている場合を除き、当業者に既知である標準的な方法を、遺伝子のクローニング、核酸の増幅および検出などに使用することができる。そのような技法は当業者に既知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ２ｎｄ Ｅｄ．（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ、１９８９）；Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）を参照。

本明細書において引用される全ての刊行物、特許出願、特許、特許公報および他の参考資料は、参照される文および／または段落と関連性がある教示のために、本参照によってその内容全体が本明細書の一部をなすものとする。

１．定義
本発明の説明および添付した特許請求の範囲で用いられる場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに他を示さない限り、複数形も同様に含むことが意図される。

また、本明細書で用いられる場合、「および／または」は、関連する列挙された項目のうち１つまたは複数の、任意のおよび全ての可能な組み合わせ、ならびに代替として解釈される場合（「または」）には組み合わせの欠如を指し、かつこれらを包含する。

用語「約」は、本明細書で用いられる場合、ポリペプチド、用量、時間、温度、酵素活性または他の生物活性などの量などの測定可能な値をいう場合、特定された量の±２０％、±１０％、±５％、±１％、±０．５％またはさらには±０．１％の変動を包含することを意味する。

移行句「から本質的になる」とは、特許請求の範囲の範囲が、その特許請求の範囲に列挙された、特定される材料またはステップ、「およびその特許請求された発明の基本的かつ新規の特徴に著しく影響するものではないもの」を包含すると解釈されるべきであることを意味する。Ｉｎ ｒｅ Ｈｅｒｚ、５３７ Ｆ．２ｄ ５４９、５５１〜５２、１９０ ＵＳＰＱ ４６１、４６３（ＣＣＰＡ １９７６）（原本における強調）を参照；ＭＰＥＰ§２１１１．０３も参照。

用語「〜から本質的になる」（および文法上の変型）は、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドの配列に適用する場合、言及する配列（例えば、配列番号）と、言及する配列の５’末端および／もしくは３’末端またはＮ末端および／もしくはＣ末端上の総数１０個以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個）の追加のヌクレオチドまたはアミノ酸との両方からなるポリヌクレオチドまたはポリペプチドであって、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの機能が実質的に変化していないようなポリヌクレオチドまたはポリペプチドを意味する。１０個以下の追加のヌクレオチドまたはアミノ酸の総数は、両方の末端上の追加のヌクレオチドまたはアミノ酸を一緒にして足した総数を含む。用語「実質的に変化する」は、本発明のポリヌクレオチドに適用する場合、言及する配列からなるポリヌクレオチドの発現レベルと比較した場合の、少なくとも約５０％以上の、コードされるポリペプチドを発現する能力の増加または減少を指す。用語「実質的に変化する」は、本発明のポリペプチドに適用する場合、言及する配列からなるポリペプチドの活性と比較した場合の、少なくとも約５０％以上のエピトープ結合活性の増加または減少を指す。

「有効」量は、本明細書で用いられる場合、望ましい効果を提供する量である。

「治療有効」量は、本明細書で用いられる場合、いくらかの改善または利益を対象に提供するのに充分な量である。代替的に述べると、「治療有効」量は、対象における少なくとも１つの臨床症状におけるいくらかの緩和、軽減、減少または安定化を提供する量である（例えば、ＨＩＶ感染の場合、ウイルス量の減少または免疫細胞の増加）。いくらかの利益が対象に提供される限り、治療効果は完全である必要も治癒的である必要もないことを、当業者は理解するであろう。

用語「治療する（ｔｒｅａｔ／ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「〜の治療」は、対象の状態の重症度が低下され、少なくとも部分的に改善または改良されること、および少なくとも１つの臨床症状における幾分かの緩和、軽減または減少が達成されることを意図する。

用語「枯渇する（ｄｅｐｌｅｔｅ）」は、ｐＤＣに関して本明細書で用いられる場合、対象または試料のｐＤＣ数を測定可能な程度に減少させることを指す。該減少は、少なくとも約１０％、例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上であり得る。いくつかの実施形態では、該用語は対象または試料のｐＤＣ数を検出可能限界以下の量に減少させることを指す。

句「ｐＤＣに関連する障害」は、本明細書で用いられる場合、ｐＤＣが疾患、障害または状態の、原因、副作用、症状または他の態様に影響を与える、任意の疾患、障害または状態を指す。そのような障害の例は感染症、自己免疫疾患、およびがんであるが、これらに限定されない。

用語「感染症」は、本明細書で用いられる場合、感染因子による感染に関連する任意の病気を指す。感染因子の例にはウイルスおよび微生物を含むが、これらに限定されない。ウイルスには、肝炎Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇなどを含むヘパドナウイルス科（Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ）；ヒト肝炎Ｃウイルス（ＨＣＶ）を含むフラビウイルス科（Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ）；黄熱ウイルスおよびデング熱ウイルス；ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）およびヒトＴリンパ球トロピックウイルス（ＨＴＬＶ１およびＨＴＬＶ２）を含むレトロウイルス科（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）；単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ−６）、ヒトヘルペスウイルス８（ＨＨＶ−８）、およびヘルペスＢウイルスを含むヘルペスウイルス科（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）；ヒトパピローマウイルスを含むパポバウイルス科（Ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ）；狂犬病ウイルスを含むラブドウイルス科（Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ）；呼吸器合胞体ウイルスを含むパラミクソウイルス科（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）；ロタウイルスを含むレオウイルス科（Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ）；ハンタウイルスを含むブニヤウイルス科（Ｂｕｎｙａｖｉｒｉｄａｅ）；エボラウイルスを含むフィロウイルス科（Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ）；アデノウイルス科（Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）；パルボウイルスＢ−１９を含むパルボウイルス科（Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ）；ラッサ熱ウイルスを含むアレナウイルス科（Ａｒｅｎａｖｉｒｉｄａｅ）；インフルエンザウイルスを含むオルトミクソウイルス科（Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）；オルフウイルス、伝染性軟属腫ウイルス、天然痘ウイルスおよびサル痘ウイルスを含むポックスウイルス科（Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ）；ベネズエラウマ脳炎ウイルスを含むトガウイルス科（Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ）；重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルスなどのコロナウイルスを含むコロナウイルス科（Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ）；ポリオウイルスを含むピコルナウイルス科（Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）；ライノウイルス；オルビウイルス；ピコルナウイルス；脳心筋炎ウイルス（ＥＭＶ）；パラインフルエンザウイルス、アデノウイルス、コクサッキーウイルス、エコーウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、ヒトパピローマウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌ伝染性肝炎ウイルス、ネコカリシウイルス、ネコ鼻気管炎ウイルス、ＴＧＥウイルス（ブタ）、口蹄疫ウイルス、シミアンウイルス５、ヒトパラインフルエンザウイルス２型、ヒトメタ肺炎ウイルス、エンテロウイルス、ならびに現在知られているまたは後に同定される任意の他の病原性ウイルスが含まれるが、これらに限定されない（例えば、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、Ｆｉｅｌｄｓら、Ｅｄｓ．、３^ｒｄｅｄ．、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９６を参照。病原性ウイルスの教示のために、その内容全体が参照により本明細書の一部をなすものとする）。

病原性微生物には、リケッチア属（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ）、クラミジア属（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）、マイコバクテリア属（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａ）、コリネバクテリア属（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉａ）、マイコプラズマ属（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ）、ウレアプラズマ属（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ）、レジオネラ属（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）、シゲラ属（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、病原性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）種、ボルデテラ属（Ｂｏｒｄａｔｅｌｌａ）、ナイセリア属（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）、トレポネーマ属（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、ヘモフィルス属（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）、モラクセラ属（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ）、ビブリオ属（Ｖｉｂｒｉｏ）、ブドウ球菌種（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．）、連鎖球菌種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．）、カンピロバクター菌種（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｐ．）、ボレリア菌種（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｓｐｐ．）、レプトスピラ種（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｓｐｐ．）、エールリヒア種（Ｅｒｌｉｃｈｉａ ｓｐｐ．）、クレブシエラ菌種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｓｐｐ．）、シュードモナス菌種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐｐ．）、ヘリコバクター種（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｐ．）、ならびに現在知られているまたは後に同定される任意の他の病原性微生物が含まれるが、これらに限定されない（例えば、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、Ｄａｖｉｓら、Ｅｄｓ．、４^ｔｈｅｄ．、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９０を参照。病原性微生物の教示のために、その内容全体が参照により本明細書に援用される）。微生物の具体例として、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）、クラミジア・ニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、クラミジア・トラコマティス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、ウレアプラズマ・ウレアリチカム（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）、マイコプラズマ・ニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、緑色連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｉｄａｎｓ）、大便連鎖球菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ）、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、チフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ）、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａ）、ペスト菌（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｐｅｓｔｉｓ （Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ））、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）、クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、ボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、ヒト型結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、ライム病ボレリア（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、デュクレー菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｄｕｃｒｅｙｉ）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ）、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、パラ百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐａｒａｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、気管支敗血症菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）、ならびに腸管毒素原性大腸菌（ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｃ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）が含まれるが、これらに限定されない。

用語「自己免疫疾患」は、本明細書で用いられる場合、自己免疫反応に関連する任意の障害を指す。例として、多発性硬化症、クローン病、潰瘍性結腸炎、紅斑性狼瘡、炎症性腸症候群、および過敏性腸症候群が含まれるが、これらに限定されない。

用語「がん」は、本明細書で用いられる場合、任意の良性または悪性の異常な細胞増殖を指す。例として、乳がん、前立腺がん、リンパ腫、皮膚がん、膵臓がん、結腸がん、黒色腫、悪性黒色腫、卵巣がん、脳がん、原発性脳癌、頭頸部がん、神経膠腫、グリア芽腫、肝臓がん、膀胱がん、非小細胞肺がん、頭頸部癌、乳癌、卵巣癌、肺癌、小細胞肺癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、睾丸癌、膀胱癌、膵臓癌、胃癌、結腸癌、前立腺癌、泌尿生殖器癌、甲状腺癌、食道癌、骨髄腫、多発性骨髄腫、副腎癌、腎細胞癌、子宮内膜癌、副腎皮質癌、悪性膵臓インスリノーマ、悪性カルチノイド癌、絨毛癌、菌状息肉腫、悪性高カルシウム血症、頸部過形成、白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性顆粒球性白血病、急性顆粒球性白血病、有毛細胞白血病、神経芽細胞腫、横紋筋肉腫、カポジ肉腫、真性赤血球増加症、本態性血小板増加症、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、軟部組織肉腫、骨肉腫、原発性マクログロブリン血症、および網膜芽細胞腫が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、該がんは腫瘍形成がんからなる群より選択される。

本明細書で用いられる場合、「核酸」、「ヌクレオチド配列」および「ポリヌクレオチド」は区別しないで用いられ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ，ｍＲＮＡ、合成（例えば、化学合成）ＤＮＡまたはＲＮＡ、およびＲＮＡとＤＮＡのキメラを含む、ＲＮＡおよびＤＮＡの両方を包含する。用語ポリヌクレオチド、ヌクレオチド配列または核酸は、ヌクレオチド鎖を、該鎖の長さに関係なく、指す。

用語「単離された」は、細胞材料、ウイルス材料、および／もしく培養基（組換えＤＮＡ技術によって生産されるとき）、または化学的前駆体もしくは他の化学物質（化学合成されるとき）が実質的にない、核酸、ヌクレオチド配列またはポリペプチドを指すことができる。さらに、「単離された断片」は、断片として自然に発生せず、天然状態では見つけられない、核酸、ヌクレオチド配列またはポリペプチドの断片である。「単離された」は、その調製物が厳密に純粋（均一）であるという意味でないが、ポリペプチドまたは核酸を所期の目的のために使用できる形態で提供するために十分純粋である。

ポリヌクレオチドに適用される場合の用語「断片」は、参照核酸またはヌクレオチド配列に比べて低減された長さのヌクレオチド配列であって、参照核酸またはヌクレオチド配列と同一またはほぼ同一（例えば、９０％、９２％、９５％、９８％、９９％同一）の連続したヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むこと、該配列から本質的になる、および／または、該配列からなるヌクレオチド配列を意味することは理解されるはずである。本発明によるそのような核酸断片は、適切な場合には、それが構成要素である、より大きなポリヌクレオチドに含まれている場合がある。いくつかの実施形態では、そのような断片は、本発明による核酸またはヌクレオチド配列の少なくとも約８、１０、１２、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、７５、１００、１５０、２００、またはそれ以上の連続ヌクレオチド長を有するオリゴヌクレオチドを含むこと、これらから本質的になる、および／または、これらからなる場合がある。

ポリペプチドに適用される場合の用語「断片」は、参照ポリペプチドまたはアミノ酸配列に比べて低減された長さのアミノ酸配列であって、参照ポリペプチドまたはアミノ酸配列と同一またはほぼ同一（例えば、９０％、９２％、９５％、９８％、９９％同一）の連続するアミノ酸のアミノ酸配列を含む、これらから本質的になる、および／またはこれらからなるアミノ酸配列を意味することは理解されるはずである。本発明によるそのようなポリペプチド断片は、適切な場合には、それが構成要素である、より大きなポリペプチドに含まれている場合がある。いくつかの実施形態では、そのような断片は、本発明によるポリペプチドまたはアミノ酸配列の少なくとも約４、６、８、１０、１２、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、７５、１００、１５０、２００、またはそれ以上の連続アミノ酸長を有するペプチドを含むこと、これらから本質的になる、および／または、これらからなる場合がある。

本明細書で用いられる場合、用語「タンパク質」および「ポリペプチド」は区別しないで用いられ、別段の記載がない限り、ペプチドおよびタンパク質の両方を包含する。

「融合タンパク質」は、自然界では互いに融合している状態を見いだせない２つ（またはそれ以上）の異なるポリペプチドをコードする２つの異種ヌクレオチド配列またはそれらの断片が、正しい翻訳リーディングフレーム内で互いに融合したとき生成されるポリペプチドである。実例となる融合ポリペプチドとしては、本発明のポリペプチド（またはその断片）と、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、マルトース結合タンパク質またはレポータータンパク質（例えば、緑色蛍光タンパク質、β−グルクロニダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼなど）の全てまたは一部、ヘマグルチニン、ｃ−ｍｙｃ、ＦＬＡＧエピトープなどとの融合体が挙げられる。

本明細書で用いられる場合、「機能性」ポリペプチドまたは「機能性断片」は、そのポリペプチドに通常付随する少なくとも１つの生物活性（例えば、標的タンパク質結合）を実質的に保持するものである。特定の実施形態では、「機能性」ポリペプチドまたは「機能性断片」は、未修飾ペプチドが有する活性の全てを実質的に保持する。生物活性を「実質的に保持する」とは、そのポリペプチドが、天然ポリペプチドの生物活性の少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７５％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上を保持する（および天然ポリペプチドより高レベルの活性を有する場合さえある）ことを意味する。「非機能性」ポリペプチドは、そのポリペプチドに通常付随する検出可能な生物活性を殆ど、または、本質的にまったく（例えば、多くとも、有意でない量、例えば約１０％またはさらに５％未満）示さないものである。タンパク質結合などの生物活性は、当該技術分野において周知であるおよび本明細書において説明するようなアッセイを用いて測定することができる。

２．抗体および組成物
本発明者らは、ＢＤＣＡ２に特異的に結合してｐＤＣを枯渇させる抗体を同定および特徴づけた。そのような抗体は、例えば、研究または治療目的のために、対象のｐＤＣを枯渇させるために有利に使用され得る。そのような抗体は、ｐＤＣに関連する障害を治療するために使用され得る。したがって、本発明の一態様は、対象に投与されたとき、ＢＤＣＡ２に特異的に結合してｐＤＣを枯渇させる抗体またはその断片に関する。

本明細書で用いられる場合、用語「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」または「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥを含む全ての型の免疫グロブリンを指す。該抗体はモノクローナルまたはポリクローナルであってもよく、（例えば）マウス、ラット、ウサギ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ラクダ、もしくはヒトを含む任意の種の起源であってもよく、またはキメラ抗体でもよい。例えば、Ｗａｌｋｅｒら、Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：４０３（１９８９）を参照。該抗体は、例えば、米国特許第４，４７４，８９３号、または米国特許第４，８１６，５６７号において開示される方法に従い作製される組換えモノクローナル抗体でありうる。該抗体はまた、米国特許第４，６７６，９８０号において開示される方法に従い化学的に構築することもできる。

本発明の範囲内に包含される抗体断片には、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、およびＦｖ断片；ドメイン抗体、ダイアボディー；ワクシボディー、直鎖状抗体；単鎖抗体分子；および抗体断片から形成される多重特異性抗体が含まれる。このような断片は、既知の技法により作製することができる。例えば、Ｆ（ａｂ’）_２断片は、抗体分子のペプシン消化により作製することができる。Ｆａｂ断片は、Ｆ（ａｂ’）_２断片のジスルフィド架橋を還元することにより作製することができる。代替的に、Ｆａｂの発現ライブラリーを構築して、所望の特異性を伴うモノクローナルのＦａｂ断片の迅速かつ容易な同定を可能とすることができる（Ｈｕｓｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４：１２７５（１９８９））。

本発明の抗体は、抗体が作製される種以外の種との適合性のために、改変するかまたは突然変異させることができる。例えば、抗体は、ヒト化することもでき、ラクダ化することもできる。非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはその断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２または他の抗原に結合する抗体の部分配列など）である。ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来する残基が、所望の特異性、アフィニティー、および効力を有するマウス、ラット、またはウサギなど、非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲに由来する残基で置きかえられたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）を含む。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基を、対応する非ヒト残基で置きかえる。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体にも、移入されたＣＤＲ配列またはフレームワーク配列にも見出されない残基も含みうる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つであり、典型的には２つの可変ドメインであって、その中のＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、フレームワーク（ＦＲ）領域（すなわち、ＣＤＲ領域の間の配列）の全てまたは実質的に全てが、ヒト免疫グロブリンのコンセンサス配列のＦＲ領域である可変ドメインの実質的に全てを含む。ヒト化抗体はまた、最適には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的に、ヒト免疫グロブリンＦｃの少なくとも一部も含む（Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３（１９８８）；およびＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３（１９９２））。

当技術分野では、非ヒト抗体をヒト化するための方法がよく知られている。一般に、ヒト化抗体では、１つまたは複数のアミノ酸残基が、非ヒトである供給源から導入される。これらの非ヒトアミノ酸残基は、「移入」残基と称することが多く、「移入」可変ドメインから採取されることが典型的である。ヒト化は、本質的に、Ｗｉｎｔｅｒら（Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４（１９８８））の方法に従い、齧歯動物のＣＤＲまたはＣＤＲ配列を、対応するヒト抗体の配列で置換することにより実施することができる。したがって、このような「ヒト化」抗体は、対応する非ヒト種に由来する配列で置換されたインタクトなヒト可変ドメインが実質的に１つ未満のキメラ抗体である（米国特許第４，８１６，５６７号）。実際に、ヒト化抗体は、一部のＣＤＲ残基（例えば、ＣＤＲの全部またはその一部）が、齧歯動物抗体内の相似部位に由来する残基で置換され、おそらくは一部のＦＲ残基が、齧歯動物抗体内の相似部位に由来する残基で置換されたヒト抗体であることが典型的である。

ヒト抗体もまた、ファージディスプレイライブラリーを含め、当技術分野で知られた多様な技法を用いて作製することができる（ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１（１９９１））。ＣｏｌｅらおよびＢｏｅｒｎｅｒらの技法もまた、ヒトモノクローナル抗体を調製するために利用可能である（Ｃｏｌｅら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ、７７ページ（１９８５）およびＢｏｅｒｎｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８６（１９９１））。同様に、ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を、内因性免疫グロブリン遺伝子が部分的または完全に不活化されたトランスジェニック動物、例えば、マウスへと導入することによっても作製することができる。感作すると、遺伝子再配列、遺伝子アセンブリー、および抗体レパートリーを含めた全ての点で、ヒトにおいて見られる抗体に酷似するヒト抗体の産生が観察される。この手法は、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号；５，５４５，８０６号；５，５６９，８２５号；５，６２５，１２６号；５，６３３，４２５号；５，６６１，０１６号、ならびに以下の学術刊行物：Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇら、Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８１２（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８４５（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８２６（１９９６）；ＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ、Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５（１９９５）において記載されている。

本発明を実行するのに用いられるポリクローナル抗体は、適切な動物（例えば、ウサギ、ヤギなど）を、標的に対するモノクローナル抗体が結合する抗原で免疫化し、免疫血清を動物から回収し、知られた手順に従い、ポリクローナル抗体を免疫血清から分離することにより作製することができる。ＢＤＣＡ２のポリヌクレオチド配列およびポリペプチド配列は、当該技術分野において公知であり、ＧｅｎＢａｎｋなどの配列データベースで入手することができる。配列の例として、ヒトＢＤＣＡ２ポリペプチド配列（受託番号Ｑ８ＷＴＴ０）およびポリヌクレオチド配列（受託番号ＡＦ２９３６１５）、その全体は参照により本明細書の一部をなすものとする。

本発明を実行するのに用いられるモノクローナル抗体は、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ，２６５：４９５（１９７５）の技法に従い、ハイブリドーマ細胞株内で作製することができる。例えば、適切な抗原を含有する溶液を、マウスへと注射し、十分な時間の後、マウスを屠殺し、脾臓細胞を得た。次いで、脾臓細胞を、典型的にはポリエチレングリコールの存在下で、骨髄腫細胞またはリンパ腫細胞と融合させることにより、それらを不死化して、ハイブリドーマ細胞を作製する。次いで、ハイブリドーマ細胞を適切な培地中で成長させ、上清を、所望の特異性を有するモノクローナル抗体についてスクリーニングする。モノクローナルのＦａｂ断片は、当業者に知られた組換え法により、Ｅ．ｃｏｌｉ内で作製することができる。例えば、Ｈｕｓｅ、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４６：１２７５（１９８９）を参照。

標的のポリペプチドに特異的な抗体はまた、当技術分野で知られたファージディスプレイ法によっても得ることができる。

様々なイムノアッセイを、ＢＤＣＡ２に対して所望の特異性を有する抗体をスクリーニングして同定するために用いることができる。当技術分野では、特異性が確立されたポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を用いる競合的結合アッセイまたは免疫放射定量測定法のための多数のプロトコールがよく知られている。このようなイムノアッセイは、抗原とその特異的抗体との間の複合体の形成（例えば、抗原／抗体複合体の形成）の測定を伴うことが典型的である。本発明のポリペプチドまたはペプチド上の２つの非干渉的エピトープに対するモノクローナル抗体の反応性を使用する、ｔｗｏ−ｓｉｔｅモノクローナルベースのイムノアッセイのほか、競合的結合アッセイも用いることができる。

抗体は、既知の技法に従い、固体支持体（例えば、ラテックスまたはポリスチレンなどの材料から形成されるビーズ、プレート、スライド、またはウェル）へとコンジュゲートすることができる。抗体はまた、既知の技法に従い、放射性標識（例えば、^３５Ｓ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ）、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ）、および蛍光標識（例えば、フルオレセイン）などの検出可能な基へもコンジュゲートすることができる。本発明の方法における抗体／抗原複合体の形成の決定は、例えば、当技術分野でよく知られた沈殿、凝集、フロック凝集、放射能、発色または色彩の変化、蛍光、発光などの検出によって行うことができる。

一実施形態では、上記抗体は、ＢＤＣＡ２に特異的に結合する抗体またはその断片（例えば、モノクローナル抗体）である。該抗体はＢＤＣＡ２の特異的なエピトープに結合し得る。

一実施形態では、上記抗体は、ハイブリドーマ細胞株１５Ｂ（ＡＴＣＣ受託番号：＿＿＿）により産生されるモノクローナル抗体である。さらなる実施形態では、該抗体は、ハイブリドーマ細胞株１５Ｂにより産生されるモノクローナル抗体が特異的に結合する同じエピトープへの結合について競合するモノクローナル抗体またはその断片である。別の実施形態では、該抗体は、ハイブリドーマ細胞株１５Ｂにより産生されるモノクローナル抗体が特異的に結合する同じエピトープに特異的に結合するモノクローナル抗体またはその断片である。ハイブリドーマ細胞株１５Ｂによって産生された抗体が結合したエピトープは、アミノ酸配列ＩＱＮＬＫＲＮＳＳＹＦＬＧＬＳＤＰＧＧＲ（配列番号９）または少なくとも５の連続するアミノ酸、例えば、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５以上の連続するアミノ酸であるその断片を含む、これらから本質的になる、またはこれらからなる。

いくつかの実施形態では、上記モノクローナル抗体またはその断片は、キメラ抗体またはヒト化抗体である。追加の実施形態では、該キメラまたはヒト化抗体は、ハイブリドーマ細胞株１５Ｂにより産生されるモノクローナル抗体のＣＤＲの少なくとも一部を含む。本明細書で用いられる、ＣＤＲの「一部」とは、ＣＤＲを構成する軽鎖および重鎖の各々に由来する（例えば、ＣＤＲの１〜６に由来する）３つのループのうちの１つもしくは複数、またはループの１つもしくは複数の部分であって、少なくとも３つの連続するアミノ酸を含むか、これらから本質的になるか、もしくはこれらからなる部分と定義される。例えば、キメラ抗体またはヒト化抗体は、任意の組み合わせで、１、２、３、４、５、もしくは６つのＣＤＲループ、１、２、３、４、５、もしくは６つのＣＤＲループの部分、またはこれらの混合物を含み得る。

一実施形態では、上記抗体またはその断片は、配列番号２のアミノ酸配列、またはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、または９９％同一である配列を含む重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、該抗体またはその断片は、配列番号１のヌクレオチド配列、またはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、または９９％同一である配列によってコードされるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、該抗体またはその断片は、配列番号２のアミノ酸配列、またはその配列と少なくとも９０％同一である配列の少なくとも５０の連続するアミノ酸、例えば、少なくとも１００、１５０、または２００以上の連続するアミノ酸を含む重鎖可変領域を含む。

一実施形態では、上記抗体またはその断片は、配列番号４のアミノ酸配列、またはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、または９９％同一である配列を含む軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、該抗体またはその断片は、配列番号３のヌクレオチド配列、またはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、または９９％同一である配列によってコードされるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、該抗体またはその断片は、配列番号４のアミノ酸配列の少なくとも５０の連続するアミノ酸、またはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、少なくとも１００、１５０、または２００以上の連続するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む。

一実施形態では、上記抗体またはその断片は、配列番号２のアミノ酸配列もしくはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％同一である配列、または配列番号１のヌクレオチド配列もしくはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％同一である配列によってコードされるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４のアミノ酸配列もしくはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％同一である配列、または配列番号３のヌクレオチド配列もしくはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％同一である配列によってコードされるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、該抗体またはその断片は、配列番号２のアミノ酸配列の少なくとも５０の連続するアミノ酸、またはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、少なくとも１００、１５０、もしくは２００以上の連続するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号４のアミノ酸配列の少なくとも５０の連続するアミノ酸、またはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、少なくとも１００、１５０、もしくは２００以上の連続するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む。

一実施形態では、上記抗体またはその断片は、配列番号２のアミノ酸配列、またはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％同一である配列からの少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、１、２、または３）またはその部分を含む重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、該抗体またはその断片は、配列番号１のヌクレオチド配列、またはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％同一である配列によってコードされるアミノ酸配列からの少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、１、２、または３）またはその部分を含む重鎖可変領域を含む。当業者であれば、ＣＤＲは結合特異性において重要な役割を果たすこと、配列置換（例えば、マウス抗体のヒト化）はＣＤＲ外で行われることが好ましく、ＣＤＲ内では最小限の変化が起こることが理解される。したがって、いくつかの実施形態では、開示された配列と少なくとも９０％同一である配列は、ＣＤＲの変化を含まないまたは最小数の変化のみ含む。

一実施形態では、上記抗体またはその断片は、配列番号４のアミノ酸配列、またはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％同一である配列からの少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、１、２、または３）またはその部分を含む軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、該抗体またはその断片は、配列番号３のヌクレオチド配列、またはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、または９９％同一である配列によってコードされるアミノ酸配列からの少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、１、２、または３）またはその部分を含む軽鎖可変領域を含む。

一実施形態では、上記抗体またはその断片は、配列番号２のアミノ酸配列、もしくはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％同一である配列、または配列番号１のヌクレオチド配列もしくはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％同一である配列によってコードされるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４のアミノ酸配列、もしくはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％同一である配列、または配列番号３のヌクレオチド配列もしくはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％同一である配列によってコードされるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

一実施形態では、上記抗体はハイブリドーマ細胞株１２Ｂ（以前は１２５と呼ばれていた）（ＡＴＣＣ受託番号：＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿）より産生されたモノクローナル抗体である。さらなる実施形態では、該抗体は、ハイブリドーマ細胞株１２Ｂにより産生されたモノクローナル抗体が特異的に結合するエピトープと同じエピトープへの結合について競合するモノクローナル抗体またはその断片である。別の実施形態では、該抗体は、ハイブリドーマ細胞株１２Ｂにより産生されたモノクローナル抗体が特異的に結合するエピトープと同じエピトープに特異的に結合するモノクローナル抗体またはその断片である。いくつかの実施形態では、該モノクローナル抗体またはその断片は、キメラ抗体またはヒト化抗体である。追加の実施形態では、該キメラ抗体またはヒト化抗体は、ハイブリドーマ細胞株１２Ｂにより産生されたモノクローナル抗体のＣＤＲ部分を少なくとも含む。

一実施形態では、上記抗体またはその断片は、配列番号６のアミノ酸配列、またはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、または９９％同一である配列を含む重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、該抗体またはその断片は、配列番号５のヌクレオチド配列、またはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、または９９％同一である配列によってコードされるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、該抗体またはその断片は、配列番号６のアミノ酸配列、またはその配列と少なくとも９０％同一である配列の少なくとも５０の連続するアミノ酸、例えば、少なくとも１００、１５０、または２００以上の連続するアミノ酸を含む重鎖可変領域を含む。

一実施形態では、上記抗体またはその断片は、配列番号８のアミノ酸配列、またはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、または９９％同一である配列を含む軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、該抗体またはその断片は、配列番号７のヌクレオチド配列、またはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、または９９％同一である配列によってコードされるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、該抗体またはその断片は、配列番号８のアミノ酸配列、またはその配列と少なくとも９０％同一である配列の少なくとも５０の連続するアミノ酸、例えば、少なくとも１００、１５０、または２００以上の連続するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む。

一実施形態では、上記抗体またはその断片は、配列番号６のアミノ酸配列もしくはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％同一である配列、または配列番号５のヌクレオチド配列もしくはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％同一である配列によってコードされるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８のアミノ酸配列もしくはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、または９９％同一である配列、または配列番号７のヌクレオチド配列もしくはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、または９９％同一である配列によってコードされるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、該抗体またはその断片は、配列番号６のアミノ酸配列、またはその配列と少なくとも９０％同一である配列の少なくとも５０の連続するアミノ酸、例えば、少なくとも１００、１５０、または２００以上の連続するアミノ酸を含む重鎖可変領域、および配列番号８のアミノ酸配列、またはその配列と少なくとも９０％同一である配列の少なくとも５０の連続するアミノ酸、例えば、少なくとも１００、１５０、または２００以上の連続するアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む。

一実施形態では、上記抗体またはその断片は、配列番号６のアミノ酸配列、またはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、または９９％同一である配列からの少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、１、２、または３）またはその部分を含む重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、該抗体またはその断片は、配列番号５のヌクレオチド配列、またはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、または９９％同一である配列によってコードされるアミノ酸配列からの少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、１、２、または３）またはその部分を含む重鎖可変領域を含む。当業者であれば、ＣＤＲは結合特異性において重要な役割を果たすこと、配列置換（例えば、マウス抗体のヒト化）はＣＤＲ外で行われることが好ましく、ＣＤＲ内では最小限の変化が起こることは理解される。したがって、いくつかの実施形態では、開示された配列と少なくとも９０％同一である配列では、ＣＤＲの変化が起こっていないまたは最小数の変化のみ起こっている。

一実施形態では、上記抗体またはその断片は、配列番号８のアミノ酸配列、またはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、または９９％同一である配列からの少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、１、２、または３）またはその部分を含む軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、該抗体またはその断片は、配列番号７のヌクレオチド配列、またはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、または９９％同一である配列によってコードされるアミノ酸配列からの少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、１、２、または３）またはその部分を含む軽鎖可変領域を含む。

一実施形態では、上記抗体またはその断片は、配列番号６のアミノ酸配列、もしくはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％同一である配列からの少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、１、２、または３）またはその部分、または配列番号５のヌクレオチド配列もしくはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％同一である配列によってコードされるアミノ酸配列からの少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、１、２、または３）またはその部分を含む重鎖可変領域、および配列番号８のアミノ酸配列、もしくはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％同一である配列、または配列番号７のヌクレオチド配列もしくはその配列と少なくとも９０％同一である配列、例えば、その配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％同一である配列によってコードされるアミノ酸配列からの少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、１、２、または３）またはその部分を含む軽鎖可変領域を含む。

さらなる態様として、本発明は、本発明の抗体またはその断片を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態では、該組成物は薬学的に許容される担体中に本発明の抗体を含む医薬製剤である。

「薬学的に許容される」とは、生物学的または別様に望ましくないものではない材料、すなわち、その材料が、毒性などの任意の望ましくない生物学的作用を生じさせることなく対象に投与され得ることを意味する。

本発明の製剤は、薬剤、医薬品、担体、アジュバント、分散剤、希釈剤などを任意選択的に含むことができる。

本発明の化合物は、既知の技法に従い、医薬担体による投与用に調合することができる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（９版、１９９５）を参照。本発明による医薬製剤の製造では、化合物（生理学的に許容されるその塩を含む）を、とりわけ、許容される担体と混合することが典型的である。担体は、固体もしくは液体、または両方であることが可能であり、０．０１または０．５重量％〜９５重量％または９９重量％の化合物を含有しうる単位用量製剤、例えば、錠剤としての化合物により調合することが好ましい。任意の周知の調剤技術によって調製することができる本発明の製剤に１つまたは複数の化合物を組み込むことができる。

本発明の製剤は、経口、直腸、局所、口腔（例えば、舌下）、膣内、非経口（例えば、皮下、骨格筋、心筋、横隔膜筋および平滑筋を含む筋肉内、皮内、静脈内、腹腔内）、局所（すなわち、気道表面を含めて、皮膚表面と粘膜表面の両方）、鼻腔内、経皮、関節内、くも膜下および吸入投与、門脈内送達による肝臓への投与、ならびに直接器官注射（例えば、肝臓へのもの、中枢神経系への送達のための脳へのもの、膵臓へのもの、または腫瘍へのもしくは腫瘍を包囲する組織へのもの）に適するものを含む。任意の所定の症例に関しても、最も適する経路は、治療することとなる状態の性質および重症度に、ならびに使用することとなる特定の化合物の性質に依存する。

注射のための担体は、概して、液体、例えば発熱物質を含まない滅菌水、発熱物質を含まないリン酸緩衝食塩溶液、静菌水、またはＣｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（登録商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）である。他の投与方法のための担体は、固体であることもでき、または液体であることもできる。

経口投与については、化合物は、カプセル、錠剤および粉末などの固形剤形またはエリキシル、シロップおよび懸濁液などの液体剤形で投与することができる。化合物は、グルコース、ラクトース、スクロース、マンニトール、デンプン、セルロースまたはセルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、サッカリンナトリウム、タルク、炭酸マグネシウムなどの不活性成分および粉末状担体とともにゼラチンカプセルに封入することができる。望ましい色、味、安定性、緩衝能、分散性または他の既知の望ましい特徴を提供するために添加することができる追加の不活性成分の例は、赤色酸化鉄、シリカゲル、ラウリル硫酸ナトリウム、二酸化チタン、食用白色インクなどである。圧縮錠を製造するために同様の希釈剤を使用することができる。錠剤およびカプセルはともに、数時間にわたって医薬品を持続的に放出するための徐放性製品として製造することができる。圧縮錠は、任意の望ましくない味をマスクし、錠剤を大気から保護するために糖コーティングもしくは薄膜コーティングしても、または消化管において選択的に崩壊させるために腸溶コーティングしてもよい。経口投与のための液体剤形は、患者の受け入れやすさを増加するための着色剤および矯味矯臭剤を含有してもよい。

口腔内（舌下）投与に適した製剤として、通常はスクロースおよびアラビアゴムまたはトラガントである風味付け基剤中に化合物を含むロゼンジ剤；ならびにゼラチンおよびグリセリンまたはスクロースおよびアラビアゴムなどの不活性基剤中に化合物を含むパステル剤が挙げられる。

非経口投与に適した製剤は、化合物の滅菌水性注射溶液および非水性注射溶液を含み、これらの調製液は、好ましくは所期のレシピエントの血液と等張である。これらの調製液は、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および製剤と所期のレシピエントの血液とを等張にする溶質を含有することができる。水性のおよび非水性の滅菌の懸濁液は、懸濁剤および増粘剤を含むことができる。製剤は、単位／用量のまたは複数回用量の容器、例えば密封アンプルおよびバイアル内に存在させることができ、使用直前に滅菌液体担体、例えば食塩水または注射用水の添加のみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）の状態で貯蔵され得る。

即時調合注射溶液および懸濁液を、上記した種類の滅菌粉末、顆粒および錠剤から調製することができる。例えば、本発明の一態様として、密封容器中の単位剤形で、本発明の化合物を含む注射可能な安定滅菌組成物を提供される。化合物または塩は凍結乾燥した形態で提供され、該組成物を適切な薬学的に許容される担体と再構成して対象への注射に適した液体組成物を形成することができる。該単位剤形は、約１０ｍｇ〜約１０グラムの該化合物またはその塩を典型的には含む。該化合物またはその塩が実質的に水不溶性である場合、十分な量の薬学的に許容される乳化剤が、水性担体中で該化合物またはその塩を乳化させるのに十分な量で採用され得る。そのような有用な乳化剤の１つはホスファチジルコリンである。

直腸投与に適した製剤は好ましくは、単位用量の座薬として存在する。化合物および例えばカカオ脂などの１つまたは複数の従来の固体担体を混合し、次いで得られた混合物を成形することにより、この座薬を調製することができる。

皮膚への局所適用に適した製剤は好ましくは、軟膏、クリーム、ローション、ペースト、ゲル、スプレー、エアロゾルまたはオイルの形態をとる。使用することができる担体には、ワセリン、ラノリン、ポリエチレングリコール、アルコール、経皮吸収促進剤およびこれらの２つ以上の組み合わせが含まれる。

経皮投与に適した製剤は、長時間にわたりレシピエントの表皮に密接させた状態で保つのに適した個別パッチの形態であり得る。経皮投与に適した製剤をイオン導入により送達することもでき（例えば、Ｔｙｌｅ、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．３：３１８（１９８６）を参照）、任意選択的に化合物の緩衝水溶液の形態を典型的にはとる。適切な製剤は、クエン酸塩もしくはビス／トリス緩衝液（ｐＨ６）またはエタノール／水を含み、および０．１〜０．２Ｍの該化合物を含有する。

また、化合物を鼻投与用に調合することができ、または任意の適した手段によって対象の肺に別様に投与することができ、例えば、対象が吸入する、該化合物を含む呼吸用粒子のエアロゾル懸濁物によって投与することができる。該呼吸用粒子は、液体である場合もあり、または固体である場合もある。用語「エアロゾル」は、細気管支または鼻腔に吸入され得る任意のガス輸送懸濁相を含む。具体的には、エアロゾルは、定量吸入器もしくはネブライザーにおいてまたはミスト噴霧器において生成され得るような、液滴のガス輸送懸濁物を含む。エアロゾルは、例えば吸入装置からの吸入によって送達され得る、空気または他の担体ガスに懸濁された乾燥粉末組成物も含む。Ｇａｎｄｅｒｔｏｎ ＆ Ｊｏｎｅｓ、Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｔｏ ｔｈｅ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｔｒａｃｔ、Ｅｌｌｉｓ Ｈｏｒｗｏｏｄ（１９８７）、Ｇｏｎｄａ（１９９０）Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ ６：２７３−３１３、およびＲａｅｂｕｒｎら、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｍｅｔｈ．２７：１４３（１９９２）を参照。該化合物を含む液体粒子のエアロゾルは、当業者に公知であるような任意の適した手段によって、例えば、圧力駆動式エアロゾルネブライザーまたは超音波ネブライザーを用いて、生成することができる。例えば、米国特許第４，５０１，７２９号参照。同様に、該化合物を含む固体粒子のエアロゾルを、製薬技術分野において公知の技術により、任意の固体粒状薬物エアロゾル生成装置を用いて生成することができる。

また、例えば、デポー剤または徐放性製剤で、全身的な様式ではなく局所に化合物を投与することができる。

本発明のさらなる態様は本発明の方法の使用のためのキットに関する。該キットは、対象への投与に適した形態または製剤に調合するために適した形態である、本発明の抗体を含み得る。該キットはさらに、治療剤、担体、緩衝液、容器、投与のための装置などの他の構成要素を含み得る。該キットは、治療用途、診断用途、および／または研究用途用に設計することができ、他の構成要素は使用用途に適したものにすることができる。該キットはさらに、ラベルおよび／または例えば障害の治療用の使用説明書を含み得る。そのようなラベルおよび／または使用説明書には、例えば、量、回数および抗体の投与方法に関する情報が含み得る。

３．方法
一態様として、本発明は、対象においてｐＤＣを枯渇させる方法であって、ＢＤＣＡ２に特異的に結合してｐＤＣを枯渇させる有効量の抗体またはその断片を該対象に送達し、ｐＤＣを枯渇させる工程を含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、ｐＤＣは、該抗体またはその断片を投与されていない対象と比較して、少なくとも約５０％、例えば、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％以上枯渇している。他の実施形態では、本発明は、エクスビボまたはインビトロで試料中、例えば細胞の混合集団のｐＤＣの数を減らすおよび／またはｐＤＣを枯渇させる方法であって、ＢＤＣＡ２に特異的に結合してｐＤＣの数を減らすおよび／またはｐＤＣを枯渇させる抗体またはその断片の有効量を該試料に送達し、それによりｐＤＣの数を減らすおよび／またはｐＤＣを枯渇させる工程を含む方法を提供する。

さらなる態様において、本発明は、対象においてｐＤＣに関連する障害を治療する方法であって、ＢＤＣＡ２に特異的に結合してｐＤＣの数を減らすおよび／またはｐＤＣを枯渇させる、治療効果のある抗体またはその断片を該対象に送達し、それにより該障害を治療する工程を含む方法を提供する。

いくつかの実施形態では、対象は研究対象、例えば、実験動物である。他の実施形態では、対象はｐＤＣに関連する障害と診断された対象である。別の実施形態では、対象は、ｐＤＣに関連する障害を発症するリスクがある対象であり得る（例えば、遺伝要因によるかかりやすい、病原体、異常な免疫細胞数にさらされる、など）。ＰＤＣに関連する障害には、感染症または持続性ウイルス感染（例えば、ＨＩＶ感染）、自己免疫疾患（例えば、全身性エリテマトーデス）、およびがん（例えば、ｐＤＣ性白血病）、およびｐＤＣの組織内蓄積に関連する障害が含まれるが、これらに限定されない。

本発明の抗体は任意選択で、他の治療剤とともに送達され得る。該他の治療剤は本発明の抗体と同時に送達され得る。本明細書で用いる場合、用語「同時に」とは、組み合わされた効果を生じるのに時間的に十分接近していることを意味する（すなわち、同時に（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔｌｙ）は同時に（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ）であってもよく、またはそれは相互の前後の短い時間内に起こる２以上の事象とすることができる）。

一実施形態では、本発明の抗体は、抗がん剤、例えば、１）ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン）；２）エピポドフィロトキシン（例えば、エトポシドおよびテニポシド）；３）抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ダウノルビシン（ダウノマイシン；ルビドマイシン）、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）、およびマイトマイシン（マイトマイシンＣ））；４）酵素（例えば、Ｌ−アスパラギナーゼ）；５）生体応答修飾剤（例えば、インターフェロン−アルファ）；６）白金配位錯体（例えば、シスプラチンおよびカルボプラチン）；７）アントラセンジオン（例えば、ミトキサントロン）；８）置換尿素（例えば、ヒドロキシ尿素）；９）メチルヒドラジン誘導体（例えば、プロカルバジン（Ｎ−メチルヒドラジン；ＭＩＨ））；１０）副腎皮質抑制剤（例えば、ミトタン（ｏ，ｐ’−ＤＤＤ）およびアミノグルテチミド）；１１）副腎皮質ステロイド（例えば、プレドニゾン）；１２）プロゲスチン（例えば、ヒドロキシプロゲステロンカプロン酸エステル、メドロキシプロゲステロン酢酸エステル、およびメゲストロール酢酸エステル）；１３）エストロゲン（例えば、ジエチルスチルベストロールおよびエチニルエストラジオール）；１４）抗エストロゲン薬（例えば、タモキシフェン）；１５）アンドロゲン（例えば、テストステロンプロピオン酸エステルおよびフルオキシメステロン）；１６）抗アンドロゲン薬（例えば、フルタミド）；ならびに１７）ゴナドトロピン放出ホルモンアナログ（例えば、ロイプロリド）とともに投与される。別の実施形態では、本発明の化合物は、抗血管新生薬、例えば、ＶＥＧＦに対する抗体（例えば、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ）、ラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ））、および血管新生の他のプロモーター（例えば、ｂＦＧＦ、アンジオポエチン−１）、アルファ−ｖ／ベータ−３血管インテグリンに対する抗体（例えば、ＶＩＴＡＸＩＮ）、アンギオスタチン、エンドスタチン、ダルテパリン、ＡＢＴ−５１０、ＣＮＧＲＣペプチドＴＮＦアルファコンジュゲート、シクロホスファミド、コンブレタスタチンＡ４ホスフェート、ジメチルキサンテノン酢酸、ドセタキセル、レナリドマイド、エンザスタウリン、パクリタキセル、パクリタキセル・アルブミン安定化ナノ粒子製剤（Ａｂｒａｘａｎｅ）、大豆イソフラボン（Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）、タモキシフェンクエン酸塩、サリドマイド、ＡＤＨ−１（ＥＸＨＥＲＩＮ）、ＡＧ−０１３７３６、ＡＭＧ−７０６、ＡＺＤ２１７１、ソラフェニブトシル酸塩、ＢＭＳ−５８２６６４、ＣＨＩＲ−２６５、パゾパニブ、ＰＩ−８８、バタラニブ、エベロリムス、スラミン、スニチニブリンゴ酸塩、ＸＬ１８４、ＺＤ６４７４、ＡＴＮ−１６１、シレニグチド、ならびにセレコキシブとともに投与される。

一実施形態では、本発明の抗体は、抗ウイルス剤、例えば、本明細書に記載の非イオン界面活性剤、陰イオン界面活性剤、および陽イオン界面活性剤、ならびにＣ３１Ｇ（アミンオキシドおよびアルキルベタイン）、ポリビグアニド、ドコサノール、アシルカルニチン類似体、オクチルグリセロール、ならびに抗菌性ペプチド、例えば、マガイニン、グラミシジン、プロテグリン、およびレトロサイクリン、などのウイルス不活化剤とともに投与される。本明細書に記載の組成物に含まれる抗ウイルス剤として、穏やかな界面活性剤、例えばソルビタンラウリン酸エステル、を有利に使用することができる。本明細書に記載の組成物に有利に使用することができる他の抗ウイルス剤として、テノフォビル、アシクロビル、アマンタジン、ジダノシン、フォスカーネット、ガンシクロビル、リバビリン、ビダラビン、ザルシタビン、およびジドブジンなどのヌクレオチドまたはヌクレオシド類似体が挙げられる。使用することができるさらなる抗ウイルス剤として、ＵＣ−７８１（チオカルボキサニリド）、ピリジノン、ＴＩＢＯ、ネバリピン、デラビルジン、カラノリドＡ、カプラビリン、およびエファビレンツなどの非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤が挙げられる。ＨＩＶの性的伝播を阻害するために、これらの逆転写酵素阻害剤に由来する十分な経口バイオアベイラビリティを示さない薬剤およびその類似体が本発明の抗体および組成物と組み合わせた粘膜組織への投与に特に適している。使用することができる他の抗ウイルス剤は、シアノビリン−ＮなどのＨＩＶ侵入ブロッカー、シクロデキストリン、カラギーナン、硫酸化またはスルホン化ポリマー、マンデル酸縮合ポリマー、モノクローナル抗体、ＴＡＫ−７７９、ＳＣＨ−Ｃ／Ｄ、およびＡＭＤ−３１００などのケモカイン受容体アンタゴニスト、ならびにＴ−２０および１２４９などの融合阻害剤の部類に入るものである。

一実施形態では、本発明の抗体は、例えば、シクロスポリンＡ、ラパマイシン、グルココルチコイド、アザチオプリン、ミゾリビン、アスピリン誘導体、ヒドロキシクロロキン、メトトレキサート、シクロホスファミドおよびＦＫ５０６（タクロリムス）を含む免疫抑制剤とともに投与される。

特定の実施形態では、上記抗体を治療有効量（この用語は、上で定義したとおりである）で対象に投与する。医薬活性化合物の用量は、当該技術分野において既知の方法によって決定することができる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ）を参照。抗体の治療有効投薬量は、患者間で多少変化し、患者の状態および送達の経路に左右される。一般的な提案として、約０．１〜約５０ｍｇ／ｋｇの用量が治療上有効となる。より高いレベルでは毒性が懸念されるため、静脈内投薬量は、約１０ｍｇ／ｋｇまでなどのより低いレベルに制限してもよい。約１０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの用量を経口投与に用いることができる。典型的には、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇの用量を筋肉内注射に用いることができる。

本発明の特定の実施形態では、１回以上の投与（例えば、２、３、４回、またはそれ以上の投与）を様々な時間間隔（例えば、１時間に１回、１日１回、週１回、月１回など）で用いて、治療効果を達成することができる。

本発明は、獣医学的用途および医療用途、ならびに研究用途で使用することができる。本明細書で用いられる場合、用語「対象」はヒトおよび他の動物を指す。適した対象として、ヒトなどの哺乳動物、ならびにアムールトラなどの絶滅寸前であるために重要性を有する哺乳動物；農場で飼育される動物などの経済的重要性を有する哺乳動物；ペットとしてまたは動物園で飼われる動物などのヒトにとって社会的重要性を有する動物；ならびにマウス、ウサギ、モルモット、フェレット、イヌ、ネコ、サルおよび類人猿などの研究動物が含まれる。そのような動物の例として、ネコおよびイヌなどの肉食動物；豚（ｐｉｇ）、去勢豚（ｈｏｇ）を含むブタ（ｓｗｉｎｅ）、ならびにイノシシ；ウシ、去勢ウシ、ヒツジ、キリン、シカ、ヤギ、バイソンおよびラクダなどの反芻動物および／または有蹄動物；ウマ；ならびに家畜が含まれるが、これらに限定されない。

その数多くの修正および変化が当業者に明白であるので、例示だけを意図する以下の実施例において本発明をより詳細に説明する。

＜実験手法＞
ヒト化マウスの構築：動物実験の承認はノースカロライナ大学機関動物愛護および使用委員会（ＩＡＣＵＣ）から得られた。Ｂａｌｂ／Ｃｒａｇ２−ｇａｍｍａＣ（ＤＫＯ）変異ＤＫＯ−ｈｕＨＳＣまたはＮｏｄ−ｒａｇ１−ｇａｍｍａＣ（ＮＲＧ）ＮＲＧ−ｈｕＨＳＣマウスを、既に報告されている方法と同様に構築した^５０。簡単に説明すると、ヒトＣＤ３４＋細胞を１６〜２０週齢の胎児肝臓組織から単離した。組織を肝臓消化液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ、ＭＤ）で消化した。該懸濁液を７０μｍの細胞濾過器（ＢＤ Ｆａｌｃｏｎ、Ｌｉｎｃｏｌｎ Ｐａｒｋ、ＮＪ）で濾過し、１５０ｇで５分間遠心分離してフィコール（Ｆｉｃｏｌｌ）によって単核細胞を単離した。磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）キットでＣＤ３４＋を選別後、ＣＤ３４＋ＨＳＣ（０．５×１０^６）を、あらかじめ３００ｒａｄに曝露した各２〜６日齢のＤＫＯまたはＮＲＧマウスの肝臓に注射した。９５％以上のヒト化マウスで、血液中にヒト白血球を安定して再構築した（１２〜１４週で１０％〜９０％）。各コホート（同じヒトドナー胎児肝臓組織から再構築されたヒト化マウス）は同様の生着レベルだった。全てのマウスはノースカロライナ大学チャペルヒル校に収容した。

ＨＩＶ−１ウイルスのストックおよびヒト化マウスの感染：高病原性デュアルトロピックエンベロープをＮＬ４−３骨格にクローニングすることにより生じる^{２４，２５，５１}、ＨＩＶ−Ｒ３Ａは急性感染実験に使用した。ＨＩＶ−１のＲ５トロピック株である、ＪＲ−ＣＳＦは急性および慢性感染の両方に使用した。全てのウイルスは２９３Ｔ細胞のトランスフェクションによって産生した。安定したヒト白血球再構築を有するヒト化マウスに、静脈内注射（ｉ．ｖ．）によって、マウス１匹あたり１０ｎｇのｐ２４の用量で、ＨＩＶ−Ｒ３ＡまたはＪＲ−ＣＳＦを感染させた。２９３Ｔモック上清を感染させたヒト化マウスを対照群として使用した。

ヒト化マウスのヒト形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）の枯渇：血液樹状細胞抗原−２（ＢＤＣＡ２）に特異的なモノクローナル抗体である１５Ｂは、腹腔内注射（ｉ．ｐ．、４ｍｇ／ｋｇ）によって、ヒト化マウスを治療するために使用された。急性ＨＩＶ−１感染については、ヒト化マウスに、感染５日前、３日前および１日前に、１５Ｂを３回注射した。慢性ＨＩＶ−１感染については、１０週間毎週２回注射した感染後１１週目（ｗｐｉ）のマウスに１５Ｂを適用した。

ＨＩＶ−１ウイルス量の検出：血漿中のウイルスゲノムＲＮＡは、製造業者の指示書に従って、ＱＩＡａｍｐ（登録商標）ウイルスＲＮＡミニキット（ＱＩＡＧＥＮ、ｃａｔ＃５２９０４）を用いて抽出した。ＨＩＶ−１複製（血漿中のゲノムコピー／ｍＬ）はリアルタイムＰＣＲ（ＡＢＩ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ）で測定した。

動物の屠殺および組織の処理：急性ＨＩＶ−１感染について、マウスは１ｗｐｉ（ＮＬ４−Ｒ３Ａ）または３ｗｐｉ（ＪＲ−ＣＳＦ）で屠殺した。慢性ＪＲ−ＣＳＦ感染については、マウスは２１ｗｐｉで終止させた。屠殺後、全白血球を既に報告されている方法のように^{５０，５２}、マウスリンパ器官から単離した。末梢血（ＰＢＬ）、腸間膜リンパ節（ｍＬＮ）、脾臓（ＳＰ）および骨髄（ＢＭ）を含む、リンパ系組織は分析のために採取した。赤血球はＡＣＫ緩衝液に溶解し、残った細胞はＦＡＣＳ分析の前に染色し、１％（ｗｔ／ｖｏｌ）ホルムアルデヒドで固定した。全細胞数はＧｕａｖａ Ｅｘｐｒｅｓｓ ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｇｕａｖａ）を用いたＧｕａｖａ Ｅａｓｙｃｙｔｅｓで定量した。

フローサイトメトリー：ＨＩＶ−１ ｇａｇ ｐ２４染色について、細胞は最初に表面抗体で染色し、次いでｃｙｔｏｆｉｘ／ｃｙｔｏｐｅｒｍ緩衝液（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、ｃａｔ＃５５４７１４）で透過処理後、細胞内染色をした。ヒト白血球（ｍＣＤ４５−ｈｕＣＤ４５＋）について、ＣｙＡｎ ＦＡＣＳ ｍａｃｈｉｎｅ（Ｄａｋｏ）により、ヒトＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１２３、ＨＬＡ−ＤＲおよびＣＤ３８の分析を行った。ＦＩＴＣをコンジュゲートした抗ヒトＨＬＡ−ＤＲ（クローン：Ｌ２４３、ｃａｔ＃３０７６０４）、ＰＥをコンジュゲートした抗ヒトＣＤ３８（クローン：ＨＩＴ２、ｃａｔ＃３０３５０６）、ＰＥ／Ｃｙ５をコンジュゲートした抗ヒトＣＤ４（クローン：ＲＰ４−Ｔ４、ｃａｔ＃３００５１０）、ＰＥ／Ｃｙ７をコンジュゲートした抗ヒトＣＤ３（クローン：ＨＩＴ３ａ、ｃａｔ＃３００３１６）、パシフィックブルーをコンジュゲートした抗ヒトＣＤ３（クローン：ＵＣＨＴ１、ｃａｔ＃３００４３１）、ＰＥ／Ｃｙ７をコンジュゲートした抗ヒトＣＤ８（クローン：ＨＩＴ８ａ、ｃａｔ＃３００９１４）、ＡＰＣをコンジュゲートしたヒトＣＤ１２３（クローン：６Ｈ６、ｃａｔ＃３０６０１２）およびＡＰＣ／Ｃｙ７をコンジュゲートした抗ヒトＣＤ４５（クローン：Ｈ１３０、ｃａｔ＃３０４０１４）は、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄから購入した。ＰＥをコンジュゲートした抗ヒトカスパーゼ３（クローン：Ｃ９２−６０５、ｃａｔ＃５１−６８６５５Ｘ）はＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅから購入した。パシフィックオレンジをコンジュゲートした抗マウスＣＤ４５（クローン：ＨＩ３０、ｃａｔ＃ＭＨＣＤ４５３０）、ＰＥ／テキサスレッドをコンジュゲートした抗ヒトＣＤ４（クローン：Ｓ３．５、ｃａｔ＃ＭＨＣＤ０４１７）またはＣＤ８（クローン：３Ｂ５、ｃａｔ＃ＭＨＣＤ０８１７）、およびＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）Ｆｉｘａｂｌｅ Ａｑｕａ死細胞染色キット（ｃａｔ＃Ｌ３４９５７）はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入した。ＦＩＴＣをコンジュゲートした抗ＨＩＶｐ２４（クローン：ＦＨ１９０−１−１、ｃａｔ＃６６０４６６５）はＢｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒから購入した。細胞はＣｙＡｎ ＡＤＰ（Ｄａｋｏ）で分析した。

ヒトサイトカインルミネックスアッセイ：マウス血漿中のサイトカインはＭｉｌｌｉｐｌｅｘ（登録商標）ＭＡＰ ｕｍａｎサイトカイン／ケモカイン磁気ビーズパネルイムノアッセイ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で定量した。血漿試料は回収し、分析前は−８０℃で保管した。該アッセイはノースカロライナ大学チャペルヒル校の臨床プロテオミクス研究室で行った。

免疫組織化学：パラフィンに包埋されたヒト化マウスの脾臓切片は、マウス抗ヒトｈｕＣＤ４５抗体（Ｄａｋｏ、ｃａｔ＃Ｎ１５１４）で染色し、ＰＢＳで洗浄後、Ｍｏｕｓｅ−＆−Ｒａｂｂｉｔ−ｏｎ−Ｒｏｄｅｎｔ二重染色ポリマー（ＢＩＯＣＡＲＥ ＭＥＤＩＣＡＬ、ｃａｔ＃ＲＤＳ５１３Ｈ）およびＤＡＢ基質（ＢＩＯＣＡＲＥ ＭＥＤＩＣＡＬ、ｃａｔ＃ＢＤＢ２００４ Ｈ、Ｌ、ＭＭ）でインキュベートした。画像はＱＩｍａｇｉｎｇ Ｍｉｃｒｏｐｕｂｌｉｓｈｅｒ ３．３ ＣＣＤデジタルカメラおよびＱＣａｐｔｕｒｅソフトウェアバージョン３．０（ＱＩｍａｇｉｎｇ、Ｓｕｒｒｅｙ、ＢＣ）を用いて記録した。

ＦＡＣＳ選別による細胞精製：マウスのモックまたは処理群の脾臓細胞をプール（ｐｏｏｌ）した。ヒトＣＤ４５＋細胞選別について、全脾臓はヒトＣＤ４５、マウスＣＤ４５および７−アミノアクチノマイシンＤ（７−ＡＡＤ）で染色した。ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞選別について、ＣＤ３およびＣＤ８抗体を抗体ミックスに加えた。細胞選別はＵＮＣフローサイトメトリーコアを用いて行った。

アジレント（Ａｇｉｌｅｎｔ）マイクロアレイアッセイ：ＲＮＡ精製は、製造業者の指示書に従って、ＲＮｅａｓｙ（登録商標）プラスミニキット（ＱＩＡＧＥＮ、ｃａｔ＃７４１３４）を用いて行った。ＤＮａｓｅ−ＲＮａｓｅフリー（ＱＩＡＧＥＮ）処理をカラムに行い、ＲＮＡ調製中のいかなる潜在ＤＮＡの夾雑をも排除した。全ＲＮＡについて、キャピラリー電気泳動で、量、純度および完全性を確認した。ＲＮＡはＣｙ３およびＣｙ５が標識されたＣＴＰと別々の反応系で増幅し、別個に標識された試料および参照ｃＤＮＡを産生した。２００〜４００ｎｇの全ＲＮＡはｃＤＮＡを調製するための出発材料として用いた。両方ともＳｕｒｅＰｒｉｎｔ Ｇ３ヒト遺伝子発現８×６０Ｋマイクロアレイキット（Ａｇｉｌｅｎｔ）を用いて同じマイクロアレイ（ＵＮＣ Ｇｅｎｏｍｉｃ ａｎｄ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｃｏｒｅ）でハイブリダイズした。Ａｇｉｌｅｎｔ Ｆｅａｔｕｒｅ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｖ１８ソフトウェアは全ての画像を解析するために使用した。遺伝子発現量は、赤チャンネル強度（平均）ｖｓ．緑チャンネル強度（平均）のｌｏｇ２割合で定量し、ＬＯＷＥＳＳ標準化によって強度依存による染色の偏りを除去した^５３。

細胞ｍＲＮＡ量の検出：インターフェロンアルファ１／１３（ＩＦＮα１／１３）、インターフェロンアルファ２（ＩＦＮα２）、インターフェロンベータ（ＩＦＮβ）^５４、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）^５５、および腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）^５６が検出された。Ｉ型インターフェロン刺激遺伝子、ＭｘＡ^５７およびＴＲＩＭ２２^５８が検出され、Ｉ型ＩＦＮ産生でのｐＤＣ枯渇効果が確認された。リアルタイムＰＣＲアッセイが行われた（ＡＢＩ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ）。全ての試料は３連で試験し、ヒトＧＡＰＤＨ遺伝子^５９はデータ標準化のために使用した。

統計解析：データはＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアバージョン５．０（ＧｒａｐｈＰａｄ ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）を用いて解析した。マイクロアレイデータ解析のために使用した方法は上述のとおりである。マウスの異なるコホートからのデータは、両側マンホイットニーＵ検定を用いて比較した。遺伝子発現について、平均ΔＣＴは各群の試料内の全てのΔＣＴ値の平均（±ＳＤ）として計算し、両方向ＡＮＯＶＡ法を使用した。相関はスピアマン検定を用いて評価した。ｐ＜０．０５のときの結果は全て有意であるとみなした。

＜ヒト化マウスのＨＩＶ−１感染＞
本発明者らや他のグループは、機能的なヒトｐＤＣはヒト化マウスモデルのリンパ系組織で発現していることを報告している（Ｔｒａｇｇｉａｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ３０４：１０４（２００４）；Ｚｈａｎｇら、Ｂｌｏｏｄ １１７：６１８４（２０１１）；Ｔａｎａｋａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１２））。ヒトｐＤＣはＨＩＶ−１感染によって急速に活性化され、ｐＤＣ活性化量はＣＤ４^＋Ｔ細胞数と逆相関性であり（Ｚｈａｎｇら、Ｂｌｏｏｄ １１７：６１８４（２０１１））、この結果はＨＩＶ−１感染患者での観察結果（Ｂｕｉｍｏｖｉｃｉ−Ｋｌｅｉｎら、Ｌａｎｃｅｔ ２：３４４（１９８３）；Ｂｕｉｍｏｖｉｃｉ−Ｋｌｅｉｎら、ＡＩＤＳ Ｒｅｓ．２：９９−１０８（１９８６）；Ｍｅｉｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １５：９５５（２００９））およびＳＩＶ感染サルでの観察結果（Ｈａｒｒｉｓら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８４：７８８６（２０１０）；Ｃａｍｐｉｌｌｏ−Ｇｉｍｅｎｅｚら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８４：１８３８（２０１０））と一致している。本研究では、持続性ＨＩＶ感染がデュアルトロピックＲ３Ａ株（図１ａ）またはＣＣＲ５トロピックＪＲ−ＣＳＦ株（図２）に感染したヒト化マウスで効率よく確立されたことを示した。急性および慢性ＨＩＶ−１感染の両方において、ＨＬＡ−ＤＲ^＋ＣＤ３８^＋ＣＤ８Ｔ細胞の増加が観察され（図１ｂ、図３ａ〜図３ｃ）、ＣＤ３^＋Ｔ細胞中のＣＤ４Ｔ細胞割合の減少も観察された（図１ｃ、図４ａ〜図４ｃ）。ＨＩＶ−１患者について、白血球減少、またはＣＤ８Ｔ細胞を含む全ヒトＣＤ４５^＋白血球の枯渇が血液および脾臓で起こった（図１ｄ、図５ａ）。ＨＩＶ患者と同様に、Ｒ３ＡまたはＪＲ−ＣＳＦ感染マウスのいずれか一方で血漿中のＩ型インターフェロン産生が有意に誘導し（図１ｅ、図５ｂ）、脾臓の白血球においてＩ型インターフェロン特異的ＩＳＧ遺伝子発現も増加した（図１ｆ、図５ｃ）。このように、ヒト化マウスは、ＨＩＶ−１の役割を研究するための適切なインビボモデルおよびＨＩＶ−１免疫病原性における宿主の免疫エフェクターを提供する（Ｚｈａｎｇら、Ｂｌｏｏｄ １１７：６１８４（２０１１）；Ｚｈａｎｇら、Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：２３７（２０１２））。

＜ヒト化マウスにおける形質細胞様樹状細胞の枯渇＞
インビボでのＨＩＶ−１感染および発症機序でのヒトｐＤＣの役割を詳しく調べるため、抗ＢＤＣＡ２（ＣＤ３０３）モノクローナル抗体（１５Ｂ）を作製した。この抗体はヒト化マウスのリンパ器官においてヒトｐＤＣを特異的に枯渇させることができる。１５Ｂの注射後、ＣＤ４５^＋白血球中のヒトｐＤＣは、末梢血（図６ａ）およびリンパ器官（図６ｂ）の両方で大きく減少した。コントロールである、ヒトＴ、Ｂ、モノサイト／マクロファージおよび骨髄樹状細胞は、１５Ｂ注射によって不安定にならなかった（図７〜図９）。

＜急性ＨＩＶ−１感染での形質細胞様樹状細胞の役割＞
ＨＩＶ−１の一次感染初期におけるｐＤＣの役割を検証するため、１５Ｂおよびアイソタイプコントロール抗体を、感染５日前、３日前および１日前のヒト化マウスに注射し、該マウスに高病原性であるＲ３Ａ、ＣＣＲ５およびＣＸＣＲ４デュアルトロピックＨＩＶ−１株を感染させた（Ｍｅｉｓｓｎｅｒら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ３２８：７４（２００４）；Ｓｉｖａｒａｍａｎら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８３：１１７１５（２００９））。該感染マウスに感染後３日目および６日目に１５Ｂまたはコントロール抗体を注射した。感染後８日目で屠殺したとき、該感染マウスの血液およびリンパ器官でｐＤＣは枯渇したままであることがわかった（図１０ａ）。興味深いことに、ＨＩＶ−１感染マウスの血漿ＩＦＮ−Ｉレベルは、ｐＤＣ枯渇によって有意に消失した（図１０ｂ）。異なるサブタイプのヒトＩＦＮ−Ｉの誘導についても、リアルタイムＰＣＲによるＲＮＡレベルは消失していた（図１０ｃ）。さらに、Ｍｘ１、ＴＲＩＭ２２などのＩＳＧのアップレギュレーションも阻害された（図１０ｄ）。これらのデータは、ｐＤＣが、これのみではないにしても、ヒト化マウスにおいて、ＨＩＶ−１感染初期のインビボでの主要なＩＦＮ−Ｉ産生細胞であることを証明している。

ＩＦＮ−Ｉの抗ウイルス活性と一致して、ｐＤＣ枯渇はインビボでのＨＩＶ−１複製の亢進を誘導した。コントロール抗体処理マウスと比較して、平均血漿ウイルス血は約１０倍増加した（ｐ＜０．０１）（図１１ａ）。該実験は、低い病原性であるＣＣＲ５トロピックＨＩＶ−１ ＪＲ−ＣＳＦで再度行った。Ｒ３Ａ感染と同様に、ｐＤＣ枯渇マウスにおいてＪＲ−ＣＳＦ複製が約５倍増加した（図１１ｃ）。ウイルス複製の増加はさらに、脾臓のヒト細胞中のＨＩＶｐ２４タンパク質陽性細胞についての免疫組織化学（図１１ｂ）またはフローサイトメトリー（図１１ｄ、ｅ）でも確認された。

ＨＩＶ−１感染は全身免疫活性化を誘導し（Ｌａｎｅら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３０９：４５３（１９８３）；Ａｓｃｈｅｒら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７３：１６５（１９８８））、このことはＨＩＶ−１疾患の進行の一因となることを示唆している（Ｌａｎｅら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３０９：４５３（１９８３）；Ａｓｃｈｅｒら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７３：１６５（１９８８）；Ｇｒｏｓｓｍａｎら、Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．６９：１２３（１９９３）；Ｇｉｏｒｇｉら、Ｊ．Ａｃｑｕｉｒ．Ｉｍｍｕｎｅ Ｄｅｆｉｃ．Ｓｙｎｄｒ．６：９０４（１９９３）；Ｂｏｓｉｎｇｅｒら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．ＨＩＶ ＡＩＤＳ ６：４１１（２０１１）；Ｍｏｉｒら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐａｔｈｏｌ．６：２２３（２０１１））。ＩＦＮ−Ｉの誘導およびｐＤＣ活性化は、ＨＩＶ感染患者およびＳＩＶ感染アカゲザルの両方で免疫活性化の一因となると仮定されている（Ｂｕｉｍｏｖｉｃｉ−Ｋｌｅｉｎら、Ｌａｎｃｅｔ ２：３４４（１９８３）；Ｂｕｉｍｏｖｉｃｉ−Ｋｌｅｉｎら、ＡＩＤＳ Ｒｅｓ．２：９９−１０８（１９８６）；Ｍｅｉｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １５：９５５（２００９）；Ｈａｒｒｉｓら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８４：７８８６（２０１０）；Ｃａｍｐｉｌｌｏ−Ｇｉｍｅｎｅｚら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８４：１８３８（２０１０）；Ｂｏｓｉｎｇｅｒら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．ＨＩＶ ＡＩＤＳ ６：４１１（２０１１）；Ｋｗａら、Ｂｌｏｏｄ １１８：２７６３（２０１１）；Ｍａｎｃｈｅｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０９：１４１２２（２０１２）；Ｍａｎｃｈｅｓら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１８：３４３１（２００８））。しかしながら、Ｔ細胞活性化の減少の代わりに、Ｔ細胞活性化（ＣＤ３８＋ＤＲ＋）のさらなる増加が、Ｒ３Ａ（図１２ａ、ｂ）またはＪＲ−ＣＳＦ（図１２ｃ、ｄ）のいずれか一方を感染させたｐＤＣ枯渇マウスの血液およびリンパ器官の両方について観察された。興味深いことに、ｐＤＣ枯渇マウスにおいて、ＣＤ８Ｔ細胞活性化量はウイルス量と相関があることがわかった（図１３）。したがって、ＨＩＶ−１はＩＮＦ−Ｉの非存在下でＴ細胞活性化も直接導き得る。

しかしながら、ＨＩＶ−Ｒ３Ａウイルス複製が増加したにもかかわらず、血液および脾臓でのヒトＣＤ４^＋Ｔ細胞の絶対数はコントロール抗体処理マウスと同等であった（図１４ａ）。さらに驚くべきことに、ｐＤＣ枯渇マウスのＣＤ８^＋細胞は、コントロール抗体処理マウスと比較して有意に増加した（図１４ｂ）。全ヒトＣＤ４５^＋白血球も血液および脾臓で維持され（図１４ｃ）、この結果は全ＣＤ４５＋またはＣＤ８Ｔ細胞の死細胞の減少と相関がある（図１４ｄ、ｅ）。同様の結果がＪＲ−ＣＳＦ感染マウスでも観察されたが、少量のヒトＣＤ４^＋、ＣＤ８^＋Ｔ細胞および全ヒト白血球、および枯渇は感染後３週間で起こった（図１５）。

＜慢性ＨＩＶ−１感染での形質細胞様樹状細胞の役割＞
ヒト化マウスでのｐＤＣ枯渇は、確立されている持続性ＨＩＶ−１感染によって行った。ヒト化マウスにＪＲ−ＣＳＦを１１週間感染させ、その後１５Ｂを投与してｐＤＣを枯渇させた。感染前ｐＤＣ枯渇のデータと一致して、屠殺までの１０週間持続して、増加したウイルス血が観察された（図１６ａ）。ＨＩＶ感染細胞（ＨＩＶ−１ ｐ２４陽性）の割合も増加した（図１６ｂ、図１７ａ）。血漿ＩＦＮ−α２の誘導は、ｐＤＣ枯渇マウスで大きく減少した（図１７ｂ）。リアルタイムＰＣＲアッセイおよびｃＤＮＡアッセイ（図１７ｅ、ｆ）によって、脾臓のヒト白血球での、異なるＩＦＮ−１サブタイプ（図１７ｃ）およびＩＳＧ（図１７ｄ）の誘導がＲＮＡ量で減少したことも証明された。これらのデータは、ｐＤＣがＨＩＶ−１慢性感染においてインビボでなお主要なＩＮＦ−Ｉ産生細胞であることを示唆している。

ｐＤＣ枯渇の１０週間にわたる持続的な高いウイルス血にもかかわらず、対照群と比較して、脾臓でのヒトＣＤ４^＋Ｔ細胞の数が有意に増加した（図１６ｃ、ｐ＜０．０５）。さらに、ヒトＣＤ８Ｔ細胞およびＣＤ４５^＋白血球数も増加した（図１６ｄ、ｅ、ｐ＜０．０１）。興味深いことに、血液中のヒトＣＤ４、ＣＤ８Ｔ細胞および全ＣＤ４５＋白血球は有意にレスキューされなかった（図１６ｃ〜ｅ）。ヒトＣＤ４５＋細胞の増加は脾臓切片のＣＤ４５免疫組織化学染色によっても証明された（図１６ｆ）。よって、ｐＤＣ枯渇は、脾臓でのＴ細胞および全ヒトＣＤ４５^＋細胞の死細胞（ｄｅａｄ／ｄｙｉｎｇ ｃｅｌｌｓ）の割合を有意に減少させた（図１６ｇ）。すなわち、慢性ＨＩＶ−１感染において、ｐＤＣは、ウイルス複製の抑制およびＨＩＶ誘導免疫病原性の増進の両方の役割をなお果たす。

ヒト患者またはＳＩＶ感染サルに実施される相関研究では、ＨＩＶ−１のような慢性ウイルス感染におけるｐＤＣの役割については議論が残っていた（Ｃｅｒｖａｎｔｅｓ−Ｂａｒｒａｇａｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０９：３０１２（２０１２）；Ｒｉｖｉｅｒｅら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５２：６３３（１９８０）；Ｗａｎｇら、Ｃｅｌｌ Ｈｏｓｔ Ｍｉｃｒｏｂｅ １１：６３１（２０１２））。ＨＩＶ−１感染前または感染中に新規抗体で特異的にｐＤＣを枯渇させることによって、ｐＤＣはインビボでのＨＩＶ感染中の主要なＩＦＮ−Ｉ産生細胞であることが報告されている。ｐＤＣはＨＩＶ−１感染中および発症中において、ＩＦＮ−Ｉを産生してＨＩＶ−１複製を阻害し、ヒトＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞を含むヒト白血球の死を促進させることによってＨＩＶ−１発症を増進させるという二重の役割を果たすことが報告されている。持続性ＨＩＶ−１感染中における１５ＢｍＡｂ処理後の残りのＩＦＮ−Ｉ発現は、骨髄における残りのｐＤＣにより得るが、他の細胞型の寄与を排除することはできない（Ｌｅｐｅｌｌｅｙら、ＰＬｏＳ Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ７：ｅ１００１２８４（２０１１））。

ｐＤＣはＨＩＶ誘導免疫活性化およびそれに続く免疫病原性の一因となり得ることが報告されている。抗マラリア薬であるクロロキンはインビトロでｐＤＣによってＩＦＮ−Ｉ産生を阻害し（Ｂｅｉｇｎｏｎら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１５：３２６５（２００５））、減少した免疫活性化と相関して、ＨＩＶ−１感染患者におけるヒトＴ細胞をレスキューするものと思われる（Ｍｕｒｒａｙら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８４：１２０８２（２０１０）；Ｐｉｃｏｎｉら、Ｂｌｏｏｄ １１８：３２６３（２０１１））。興味深いことに、ＨＩＶ活性化ｐＤＣは、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）依存機構を介して、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇｓ）を誘導もしている（Ｍａｎｃｈｅｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０９：１４１２２（２０１２）；Ｍａｎｃｈｅｓら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１８：３４３１（２００８））。ｐＤＣ枯渇によるＴ細胞活性化の増強が観察され、ｐＤＣ／ＩＦＮ−Ｉ非依存機構を介したウイルス複製の増進による可能性があることが報告されている。最近の報告では、アカゲザルから単離された、ｐＤＣ活性を阻害し得るＴＬＲ７およびＴＬＲ９アンタゴニストが、ＳＩＶ感染サルにおける血漿ＩＦＮ−１量およびＩＳＧ発現を有意に変化させず、インビボでのｐＤＣの不完全な阻害またはｍＤＣおよびマクロファージの高レベルの活性化による可能性があることが報告されている（Ｋａｄｅｒら、ＰＬｏＳ Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ９：ｅ１００３５３０（２０１３））。したがって、ｐＤＣおよびＨＩＶ−１複製の免疫活性化における相対的な役割は、他の免疫細胞と同様に、さらに調べる必要がある。

マウスにＴＬＲ７リガンドを繰り返し投与することによって、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞およびＢ細胞が減少する、ＡＩＤＳ様リンパ球減少が誘導される（Ｂａｅｎｚｉｇｅｒら、Ｂｌｏｏｄ １１３：３７７（２００９））。ＩＦＮ−１はＴ細胞でのプロアポトーシスおよび増殖抑制効果を引き起こすことが報告され（Ｔａｎａｂｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７４：６０９（２００５））、ＴＣＲシグナリングによるＳｔａｔ４の活性化はＴ細胞増殖のＳＴＡＴ１依存による阻害を克服し得ることも報告されている（Ｇｉｌら、Ｂｌｏｏｄ １２０：３７１８（２０１２））。同様に、ＴＬＲ７およびＴＬＲ９アンタゴニストであるＤＶ０５６処理マカクにおいて、血液中の記憶ＣＤ４^＋およびＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖が有意に増加する（Ｋａｄｅｒら、ＰＬｏＳ Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ９：ｅ１００３５３０（２０１３））。一貫して、ｐＤＣ枯渇はＣＤ４^＋Ｔ細胞だけでなく全ＣＤ４５^＋白血球およびＣＤ８Ｔ細胞もレスキューすることがわかった。ｐＤＣは異常な免疫活性化の誘導およびヒト免疫細胞の枯渇を促進することによってＨＩＶ免疫病原性の一因となることが示唆される。

最近の報告では、ＬＣＭＶ持続性感染中のＩＦＮ−Ｉシグナリングの阻害が、抗ウイルスＴ細胞応答を促進し、ＩＬ−１０依存機構を介した慢性ＬＣＭＶ感染のクリアランスを亢進することができることを示している（Ｗｉｌｓｏｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４０：２０２（２０１３）；Ｔｅｉｊａｒｏら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４０：２０７（２０１３））。同様の結果が我々のＨＩＶ−１感染モデルでも見られ、ＣＤ８Ｔ細胞およびＩＦＮγ量の増加は、ｐＤＣ枯渇およびＩＦＮ−Ｉ誘導の阻害と相関があった。しかしながら、ｐＤＣ枯渇はヒト化マウスでのＩＬ−１０発現に影響を与えていないようであり、ＨＩＶ−１複製量の増加による可能性が高い。ＨＡＡＲＴ処理ＨＩＶ患者において、有効なウイルス学的反応であるにもかかわらず、かなりの割合で免疫活性化の減少および有効な免疫再構築が見られない（Ａｉｕｔｉら、ＡＩＤＳ Ｒｅｘ．８：８８（２００６）；Ｇａａｒｄｂｏら、Ｃｌｉｎ．Ｄｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２：６７０９５７（２０１２）；Ｚｈａｎｇら、Ａｉｄｓ ２７：１２８３（２０１３））。持続性ｐＤＣ活性化およびＩＦＮ−Ｉ誘導は、そのような免疫非応答患者に影響を与え得る。ＨＩＶ−１慢性感染でのＨＡＡＲＴ中のｐＤＣ阻害または枯渇は、ＨＩＶ−１感染患者のヒト免疫細胞を維持するための有効な治療を提供し得ることが示唆される。

＜ヒト化マウスでの形質細胞様樹状細胞の枯渇＞
さらなる抗ＢＤＣＡ２（ＣＤ３０３）モノクローナル抗体のスクリーニングで、ヒト化マウスのリンパ器官でのヒトｐＤＣを特異的に枯渇させる別の抗体（１２Ｂ）を同定した。１２Ｂ注射後、ＣＤ４５^＋白血球のヒトｐＤＣは脾臓で大きく減少した（図２０）。対照として、ヒトＴ細胞および骨髄樹状細胞は１２Ｂ注射によって不安定にはならなかった（図２０）。

上記は、本発明の例証となるものであるが、それを限定するものと解釈されるべきでない。本発明は、以下の特許請求の範囲により定義され、その請求項の均等物はその中に包含される。

Claims (35)

1. 対象において形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）を枯渇させるために使用するための、血液樹状細胞抗原−２（ＢＤＣＡ２）に特異的に結合してｐＤＣを枯渇させる抗体またはその断片であって、前記抗体またはその断片が、
   配列番号２のアミノ酸配列からの３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４のアミノ酸配列からの３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域とを含む、または、
   配列番号６のアミノ酸配列からの３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８のアミノ酸配列からの３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域とを含む、
   抗体またはその断片。
2. 治療を必要とする対象においてｐＤＣに関連する障害を治療するために使用するための、ＢＤＣＡ２に特異的に結合してｐＤＣを枯渇させる抗体またはその断片であって、前記抗体またはその断片が、
   配列番号２のアミノ酸配列からの３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４のアミノ酸配列からの３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域とを含む、または、
   配列番号６のアミノ酸配列からの３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８のアミノ酸配列からの３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域とを含む、
   抗体またはその断片。
3. 前記障害が持続性ウイルス感染である、請求項２に記載の抗体またはその断片。
4. 前記障害がヒト免疫不全ウイルス感染である、請求項２に記載の抗体またはその断片。
5. 前記障害が感染症である、請求項２に記載の抗体またはその断片。
6. 前記障害が自己免疫疾患である、請求項２に記載の抗体またはその断片。
7. 前記障害ががんである、請求項２に記載の抗体またはその断片。
8. 前記障害がｐＤＣ性白血病である、請求項２に記載の抗体またはその断片。
9. 前記障害がｐＤＣの組織内蓄積に関連する障害である、請求項２に記載の抗体またはその断片。
10. 前記ＢＤＣＡ２がヒトＢＤＣＡ２である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体またはその断片。
11. 前記抗体またはその断片が、モノクローナル抗体またはその断片である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の抗体またはその断片。
12. 前記モノクローナル抗体またはその断片が、エピトープＩＱＮＬＫＲＮＳＳＹＦＬＧＬＳＤＰＧＧＲ（配列番号９）または少なくとも５つの連続するアミノ酸である前記エピトープの断片に特異的に結合する、請求項１１に記載の抗体またはその断片。
13. 前記モノクローナル抗体またはその断片が、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１１に記載の抗体またはその断片。
14. 前記モノクローナル抗体またはその断片が、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１１に記載の抗体またはその断片。
15. 前記モノクローナル抗体またはその断片が、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１１に記載の抗体またはその断片。
16. 前記モノクローナル抗体またはその断片が、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１１に記載の抗体またはその断片。
17. 前記モノクローナル抗体またはその断片が、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１１に記載の抗体またはその断片。
18. 前記モノクローナル抗体またはその断片が、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１１に記載の抗体またはその断片。
19. 前記モノクローナル抗体またはその断片がキメラ抗体またはその断片である、請求項１１〜１８のいずれか１項に記載の抗体またはその断片。
20. 前記モノクローナル抗体またはその断片がヒト化抗体またはその断片である、請求項１１〜１８のいずれか１項に記載の抗体またはその断片。
21. ＢＤＣＡ２に特異的に結合してｐＤＣを枯渇させる抗体またはその断片の有効量をインビトロの細胞の混合集団に送達するステップを含み、それにより前記インビトロの細胞の混合集団におけるｐＤＣを枯渇させる、細胞の混合集団においてｐＤＣを枯渇させる方法であって、
    前記抗体またはその断片が、配列番号２のアミノ酸配列からの３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４のアミノ酸配列からの３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域とを含む、または、
    前記抗体またはその断片が、配列番号６のアミノ酸配列からの３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８のアミノ酸配列からの３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域とを含む、
    方法。
22. ＢＤＣＡ２に特異的に結合し、対象に投与されるとｐＤＣを枯渇させる抗体またはその断片であって、前記抗体またはその断片が、
    配列番号２のアミノ酸配列からの３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４のアミノ酸配列からの３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域とを含む、または、
    配列番号６のアミノ酸配列からの３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８のアミノ酸配列からの３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域とを含む、
    抗体またはその断片。
23. モノクローナル抗体またはその断片である、請求項２２に記載の抗体またはその断片。
24. エピトープＩＱＮＬＫＲＮＳＳＹＦＬＧＬＳＤＰＧＧＲ（配列番号９）または少なくとも５つの連続するアミノ酸である前記エピトープの断片に特異的に結合する、請求項２３に記載の抗体またはその断片。
25. ＢＤＣＡ２に特異的に結合するモノクローナル抗体またはその断片であって、前記抗体またはその断片が、
    配列番号２のアミノ酸配列からの３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４のアミノ酸配列からの３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域とを含む、または、
    配列番号６のアミノ酸配列からの３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８のアミノ酸配列からの３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域とを含む、
    抗体またはその断片。
26. 前記抗体またはその断片が、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項２５に記載のモノクローナル抗体またはその断片。
27. 前記抗体またはその断片が、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項２５に記載のモノクローナル抗体またはその断片。
28. 前記抗体またはその断片が、配列番号２のアミノ酸配列からの３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４のアミノ酸配列からの３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項２５に記載のモノクローナル抗体またはその断片。
29. 前記抗体またはその断片が、配列番号６のアミノ酸配列またはその配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項２５に記載のモノクローナル抗体またはその断片。
30. 前記抗体またはその断片が、配列番号８のアミノ酸配列またはその配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項２５に記載のモノクローナル抗体またはその断片。
31. 前記抗体またはその断片が、配列番号６のアミノ酸配列からの３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８のアミノ酸配列からの３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項２５に記載のモノクローナル抗体またはその断片。
32. キメラ抗体またはその断片である、請求項２５〜３１のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体またはその断片。
33. ヒト化抗体またはその断片である、請求項２５〜３１のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体またはその断片。
34. 請求項２５〜３３のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体またはその断片および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
35. 請求項２５〜３３のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体またはその断片および使用説明書を含むキット。