TW202144405A - 抗新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)之新穎單株抗體及其應用 - Google Patents

抗新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)之新穎單株抗體及其應用 Download PDF

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Abstract

本發明提供了抗新型冠狀病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)的新穎單株抗體或其抗原結合片段。還提供包含該新穎單株抗體或其抗原結合片段的醫藥組合物以及用於檢測樣品中SARS-CoV-2存在的套組。本文還公開了用於檢測或預防及/或治療SARS-CoV-2或由ACE2媒介的疾病之方法。

Description

抗新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)之新穎單株抗體及其應用
本發明涉及抗新型冠狀病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)的新穎單株抗體(monoclonal antibodies, MAbs)及/或其抗原結合片段，特別是與SARS-COV-2的棘(spike, S)蛋白或核鞘(nucleocapsid, N)蛋白結合的新穎單株抗體(MAbs)。本發明還提供一種包含該新穎單株抗體或其抗原結合片段的醫藥組合物。此外，本發明提供一種檢測SARS-CoV-2的套組及方法，以及一種預防或治療SARS-CoV-2或一種由ACE2媒介的疾病之方法，該些方法使用如本文所述之新穎單株抗體或其抗原結合片段。
2019年底出現了一種新的冠狀病毒，該病毒被確認為是造成中國武漢發生一系列呼吸道感染病例的原因。該病毒迅速傳遍了中國及全球。世界衛生組織於2020年3月宣布該病毒造成全球大流行，即嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2，又稱新型冠狀病毒)是導致2019年冠狀病毒病(coronavirus disease of 2019, COVID-19)的病毒。截至2021年5月6日，在這波還在進行的大流行中總計有154,815,600例SARS-CoV-2感染確診病例，其中3,236,104例死亡(世界衛生組織)。
儘管目前已有數種SARS-CoV-2疫苗可供施打，但全球平均疫苗接種率仍然很低。除此之外，目前可得的一些SARS-CoV-2疫苗需要極低的溫度來儲存，而其他可得的疫苗則有安全性及/或保護效果低的隱憂。因此，新型冠狀病毒的出現對人類而言仍是一個持續的威脅。此外，目前還沒有抗SARS-CoV-2的抗病毒藥物(Rome，2020年)。保守療法仍被認為是治療人類SARS-CoV-2感染的主要方法。先前的報告顯示，使用恢復期血漿、血清或含有病毒特異性多株抗體的高免疫免疫球蛋白進行被動免疫治療可能是降低嚴重呼吸道病毒感染死亡率的替代治療方法(Mair-Jenkins，2015年)。由於多株免疫球蛋白的效力與涵蓋的疾病範圍可能有限，因此還需要使用單株抗體(MAb)製劑來治療或預防病毒感染性疾病(Casadevall，2004年)。
本發明提供一組群對SARS-CoV-2棘蛋白與核鞘蛋白具有反應性的人類單株抗體，該抗體係由實驗室確診SARS-CoV-2感染的成年患者的周邊血B 細胞所衍生產生的。單株抗體的抗原特異性以及其重鏈與輕鏈可變結構域中的基因使用被詳細描述。這些SARS-CoV-2抗原特異性人類單株抗體為開發診斷試劑以及抗SARS-CoV-2的候選預防及治療藥物提供模板。
因此，於一方面，本發明提供一種抗新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)的單株抗體或其抗原結合片段，包括 (i) 一重鏈可變區 (heavy chain variable region, VH )，其包含 (a) 一第一重鏈互補決定區(first heavy chain complementarity determining region, HCDR1)，具有與 SEQ ID NO: 69、SEQ ID NO: 75、SEQ ID NO: 81、SEQ ID NO: 87、SEQ ID NO: 93、SEQ ID NO: 99、SEQ ID NO: 105、SEQ ID NO: 111、SEQ ID NO: 117、SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 135、SEQ ID NO: 141、SEQ ID NO: 147、SEQ ID NO: 153、SEQ ID NO: 159、SEQ ID NO: 165、SEQ ID NO: 171、SEQ ID NO: 177、SEQ ID NO: 183、SEQ ID NO: 189、SEQ ID NO: 195、SEQ ID NO: 201、SEQ ID NO: 207、SEQ ID NO: 213、SEQ ID NO: 219、SEQ ID NO: 225、SEQ ID NO: 231、SEQ ID NO: 237、SEQ ID NO: 243、SEQ ID NO: 249、SEQ ID NO: 255、SEQ ID NO: 261、SEQ ID NO: 267、SEQ ID NO: 333、SEQ ID NO: 339、SEQ ID NO: 345、SEQ ID NO: 351、SEQ ID NO: 357、SEQ ID NO: 363、SEQ ID NO: 369、SEQ ID NO: 375、SEQ ID NO: 381、SEQ ID NO: 387、SEQ ID NO: 393、SEQ ID NO: 399、SEQ ID NO: 405、SEQ ID NO: 411、SEQ ID NO: 417、SEQ ID NO: 423、SEQ ID NO: 429、SEQ ID NO: 435、SEQ ID NO: 441、SEQ ID NO: 447、SEQ ID NO: 453、SEQ ID NO: 459、SEQ ID NO: 465、SEQ ID NO: 471、SEQ ID NO: 477、SEQ ID NO: 483、SEQ ID NO: 489、SEQ ID NO: 495、SEQ ID NO: 501，或 SEQ ID NO: 507所示之胺基酸序列約 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100%相同的一胺基酸序列； (b) 一第二重鏈互補決定區(HCDR2)，具有與SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 88、SEQ ID NO: 94、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 112、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 136、SEQ ID NO: 142、SEQ ID NO: 148、SEQ ID NO: 154、SEQ ID NO: 160、SEQ ID NO: 166、SEQ ID NO: 172、SEQ ID NO: 178、SEQ ID NO: 184、SEQ ID NO: 190、SEQ ID NO: 196、SEQ ID NO: 202、SEQ ID NO: 208、SEQ ID NO: 214、SEQ ID NO: 220、SEQ ID NO: 226、SEQ ID NO: 232、SEQ ID NO: 238、SEQ ID NO: 244、SEQ ID NO: 250、SEQ ID NO: 256、SEQ ID NO: 262、SEQ ID NO: 268、SEQ ID NO: 334、SEQ ID NO: 340、SEQ ID NO:346、SEQ ID NO: 352、SEQ ID NO: 358、SEQ ID NO: 364、SEQ ID NO: 370、SEQ ID NO: 376、SEQ ID NO: 382、SEQ ID NO: 388、SEQ ID NO: 394、SEQ ID NO: 400、SEQ ID NO: 406、SEQ ID NO: 412、SEQ ID NO: 418、SEQ ID NO: 424、SEQ ID NO: 430、SEQ ID NO: 436、SEQ ID NO: 442、SEQ ID NO: 448、SEQ ID NO: 454、SEQ ID NO: 460、SEQ ID NO: 466、SEQ ID NO: 472、SEQ ID NO: 478、SEQ ID NO: 484、SEQ ID NO: 490、SEQ ID NO: 496、SEQ ID NO: 502，或SEQ ID NO: 508所示之胺基酸序列約 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100%相同的一胺基酸序列；以及 (c) 一第三重鏈互補決定區(HCDR3)，具有與SEQ ID NO: 71、SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 83、SEQ ID NO: 89、SEQ ID NO: 95、SEQ ID NO: 101、SEQ ID NO: 107、SEQ ID NO: 113、SEQ ID NO: 119、SEQ ID NO: 125、SEQ ID NO: 131、SEQ ID NO: 137、SEQ ID NO: 143、SEQ ID NO: 149、SEQ ID NO: 155、SEQ ID NO: 161、SEQ ID NO: 167、SEQ ID NO: 173、SEQ ID NO: 179、SEQ ID NO: 185、SEQ ID NO: 191、SEQ ID NO: 197、SEQ ID NO: 203、SEQ ID NO: 209、SEQ ID NO: 215、SEQ ID NO: 221、SEQ ID NO: 227、SEQ ID NO: 233、SEQ ID NO: 239、SEQ ID NO: 245、SEQ ID NO: 251、SEQ ID NO: 257、SEQ ID NO: 263、SEQ ID NO: 269、SEQ ID NO: 335、SEQ ID NO: 341、SEQ ID NO:347、SEQ ID NO: 353、SEQ ID NO: 359、SEQ ID NO: 365、SEQ ID NO: 371、SEQ ID NO: 377、SEQ ID NO: 383、SEQ ID NO: 389、SEQ ID NO: 395、SEQ ID NO: 401、SEQ ID NO: 407、SEQ ID NO: 413、SEQ ID NO: 419、SEQ ID NO: 425、SEQ ID NO: 431、SEQ ID NO: 437、SEQ ID NO: 443、SEQ ID NO: 449、SEQ ID NO: 455、SEQ ID NO: 461、SEQ ID NO: 467、SEQ ID NO: 473、SEQ ID NO:479、SEQ ID NO: 485、SEQ ID NO: 491、SEQ ID NO: 497、SEQ ID NO: 503，或SEQ ID NO: 509所示之胺基酸序列約 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100%相同的一胺基酸序列；以及 (ii) 一輕鏈可變區 (light chain variable region、VL )，其包含 (a)  一第一輕鏈互補決定區(first light chain complementarity determining region、LCDR1)，具有與SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 84、SEQ ID NO: 90、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 108、SEQ ID NO: 114、SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 138、SEQ ID NO: 144、SEQ ID NO: 150、SEQ ID NO: 156、SEQ ID NO: 162、SEQ ID NO: 168、SEQ ID NO: 174、SEQ ID NO: 180、SEQ ID NO: 186、SEQ ID NO: 192、SEQ ID NO: 198、SEQ ID NO: 204、SEQ ID NO: 210、SEQ ID NO: 216、SEQ ID NO: 222、SEQ ID NO: 228、SEQ ID NO: 234、SEQ ID NO: 240、SEQ ID NO: 246、SEQ ID NO: 252、SEQ ID NO: 258、SEQ ID NO: 264、SEQ ID NO: 270、SEQ ID NO: 336、SEQ ID NO: 342、SEQ ID NO: 348、SEQ ID NO: 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NO: 337、SEQ ID NO: 343、SEQ ID NO: 349、SEQ ID NO: 355、SEQ ID NO: 361、SEQ ID NO: 367、SEQ ID NO: 373、SEQ ID NO: 379、SEQ ID NO: 385、SEQ ID NO: 391、SEQ ID NO: 397、SEQ ID NO: 403、SEQ ID NO: 409、SEQ ID NO: 415、SEQ ID NO: 421、SEQ ID NO: 427、SEQ ID NO: 433、SEQ ID NO: 439、SEQ ID NO: 445、SEQ ID NO: 451、SEQ ID NO: 457、SEQ ID NO: 463、SEQ ID NO: 469、SEQ ID NO: 475、SEQ ID NO: 481、SEQ ID NO: 487、SEQ ID NO: 493、SEQ ID NO: 499、SEQ ID NO: 505，或SEQ ID NO: 511所示之胺基酸序列約 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100%相同的一胺基酸序列；以及 (c)    一第三輕鏈互補決定區(LCDR3)，具有與SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO: 86、SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO: 110、SEQ ID NO: 116、SEQ ID NO: 122、SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 134、SEQ ID NO: 140、SEQ ID NO: 146、SEQ ID NO: 152、SEQ ID NO: 158、SEQ ID NO: 164、SEQ ID NO: 170、SEQ ID NO: 176、SEQ ID NO: 182、SEQ ID NO: 188、SEQ ID NO: 194、SEQ ID NO: 200、SEQ ID NO: 206、SEQ ID NO: 212、SEQ ID NO: 218、SEQ ID NO: 224、SEQ ID NO: 230、SEQ ID NO: 236、SEQ ID NO: 242、SEQ ID NO: 248、SEQ ID NO: 254、SEQ ID NO: 260、SEQ ID NO: 266、SEQ ID NO: 272、SEQ ID NO: 338、SEQ ID NO: 344、SEQ ID NO: 350、SEQ ID NO: 356、SEQ ID NO: 362、SEQ ID NO: 368、SEQ ID NO: 374、SEQ ID NO: 380、SEQ ID NO: 386、SEQ ID NO: 392、SEQ ID NO: 498、SEQ ID NO: 404、SEQ ID NO: 410、SEQ ID NO: 416、SEQ ID NO: 422、SEQ ID NO: 428、SEQ ID NO: 434、SEQ ID NO: 440、SEQ ID NO: 446、SEQ ID NO: 452、SEQ ID NO: 458、SEQ ID NO: 464、SEQ ID NO: 470、SEQ ID NO: 476、SEQ ID NO: 482、SEQ ID NO: 488、SEQ ID NO: 494、SEQ ID NO: 500、SEQ ID NO: 506，或SEQ ID NO: 512所示之胺基酸序列約 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100%相同的一胺基酸序列。
於某些具體實施例中，該重鏈可變區(VH )包含與SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 49、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 57、SEQ ID NO: 59、SEQ ID NO: 61、SEQ ID NO: 63、SEQ ID NO: 65、SEQ ID NO: 67、SEQ ID NO: 273、SEQ ID NO: 275、SEQ ID NO: 277、SEQ ID NO: 279、SEQ ID NO: 281、SEQ ID NO: 283、SEQ ID NO: 285、SEQ ID NO: 287、SEQ ID NO: 289、SEQ ID NO: 291、SEQ ID NO: 293、SEQ ID NO: 295、SEQ ID NO: 297、SEQ ID NO: 299、SEQ ID NO: 301、SEQ ID NO: 303、SEQ ID NO: 305、SEQ ID NO: 307、SEQ ID NO: 309、SEQ ID NO: 311、SEQ ID NO: 313、SEQ ID NO: 315、SEQ ID NO: 317、SEQ ID NO: 319、SEQ ID NO: 321、SEQ ID NO: 323、SEQ ID NO: 325、SEQ ID NO: 327、SEQ ID NO: 329，或SEQ ID NO: 331所示之胺基酸序列約 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100%相同的一胺基酸序列。
於某些具體實施例中，該輕鏈可變區(VL )包含與SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 274、SEQ ID NO: 276、SEQ ID NO: 278、SEQ ID NO: 280、SEQ ID NO: 282、SEQ ID NO: 284、SEQ ID NO: 286、SEQ ID NO: 288、SEQ ID NO: 290、SEQ ID NO: 292、SEQ ID NO: 294、SEQ ID NO: 296、SEQ ID NO: 298、SEQ ID NO: 300、SEQ ID NO: 302、SEQ ID NO: 304、SEQ ID NO: 306、SEQ ID NO: 308、SEQ ID NO: 310、SEQ ID NO: 312、SEQ ID NO: 314、SEQ ID NO: 316、SEQ ID NO: 318、SEQ ID NO: 320、SEQ ID NO: 322、SEQ ID NO: 324、SEQ ID NO: 326、SEQ ID NO: 328、SEQ ID NO: 330，或SEQ ID NO: 332所示之胺基酸序列約 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100%相同的一胺基酸序列。
於另一方面，本發明提供一種醫藥組合物，包含本發明之至少一種單株抗體或其抗原結合片段。
於某些具體實施例中，該醫藥組合物進一步包含至少一種藥學上可接受的載體。
於另一方面，本發明提供一種用於檢測一樣品中SARS-CoV-2存在的套組，包含本發明之至少一種單株抗體或其抗原結合片段。
於某些具體實施例中，本發明之至少一種單株抗體或其抗原結合片段包含一可檢測的標記物。
於某些具體實施例中，該可檢測的標記物係選自一酶標記物、一螢光標記物、一金屬標記物，以及一放射性標記物。
於某些具體實施例中，可檢測標記選自金奈米顆粒、有色乳膠微珠、磁性顆粒、碳奈米顆粒，以及硒奈米顆粒。
於某些具體實施例中，該套組為一免疫測定套組。
於某些具體實施例中，該免疫測定套組係選自酵素結合免疫吸附分析法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)、放射性免疫測定法(radioimmunoassay, RIA)、螢光免疫測定法(fluorescence immunoassay, FIA)、發光免疫測定法(luminescence immunoassay, LIA)以及免疫發光測定法(immunoluminometric assay, ILMA)。
於某些具體實施例中，該免疫測定為一三明治式測定法。
於某些具體實施例中，該免疫測定為一側向流動測定形式。
於又一方面，本發明提供一種在一懷疑含有一SARS-CoV-2的樣品中檢測該SARS-CoV-2之方法，包括將該樣品與本發明之至少一種單株抗體或其抗原結合片段接觸，並測定該抗體與該樣品的結合。
於某些具體實施例中，該樣品為尿液、糞便或取自呼吸道。
於某些具體實施例中，該取自呼吸道的樣品為鼻咽(nasopharyngeal, NP)或鼻(nasal, NS)拭子。
於某些具體實施例中，透過一三明治式免疫測定或側向流動測定檢測該SARS-COV-2。
於另一方面，本發明提供一種用於預防或治療一受試者中由血管收縮素轉化酶2 (ACE2)媒介的疾病之方法，包括一施用一有效量的本發明之至少一種單株抗體或其抗原結合片段的步驟。
本發明還提供本發明之單株抗體或其抗原結合片段在製備用於預防或治療由血管收縮素轉化酶2 (ACE2)媒介的疾病的藥物中之用途。
於某些具體實施例中，該由ACE2媒介的疾病為SARS-CoV-2感染。
於另一方面，本發明提供一種核酸，其包含編碼一重鏈可變區(VH )、一輕鏈可變區(VL )或兩者的核苷酸序列，其中該VH 以及VL 如本文所述。
於另一方面，本發明提供一種包含本文所述之任何核酸的載體(例如一表現載體)以及一種包含該載體的宿主細胞。
本發明之一個或多個實施例的細節在以下描述中闡述。本發明之其他特徵或優點將從以下幾個實施例的詳細描述以及從所附申請專利範圍中顯而易見。
本發明涉及與SARS-CoV-2的棘(S)蛋白或核鞘(N)蛋白結合的新穎單株抗體。本發明提供此類抗體及其抗原結合片段，其可用於檢測或預防及/或治療SARS-CoV-2或由血管收縮素轉化酶2 (ACE2)媒介的疾病。本發明還提供一種包含該新穎單株抗體或其抗原結合片段的醫藥組合物。此外，本發明提供檢測SARS-CoV-2的套組及方法以及預防或治療SARS-CoV-2或由ACE2媒介的疾病之方法，使用本文所述之新穎單株抗體或其抗原結合片段。
以下描述之目的僅在於說明本發明之各種具體實施例。因此，本文討論之特定具體實施例或修改不應被解釋為對本發明範圍之限制。對本領域技術人員顯而易見的是，在不脫離本發明之範圍的情況下可以產生各種改變或等效物。
為了使本發明能被清楚並容易理解，首先定義某些術語。在整個詳細描述中闡述額外的定義。除非另有定義，本文使用之所有技術及科學術語具有與本發明所屬領域的技術人員通常理解的相同含義。
如本文所用，單數形式“一”、“一個”以及“該”包括複數所指對象，除非上下文另有明確規定。因此，例如，對“一個組成分”的引用包括本領域技術人員已知的多個這樣的組成分及其等效物。
術語“包含(comprise)”或“包含(comprising)”通常以包括(include)/包括(including)的意義使用，其表示允許存在一種或多種特徵、成分或組成分。術語“包含(comprise)”或“包含(comprising)”涵蓋術語“由…所組成(consists)”或“由…所組成(consisting of)”。
如本文所用，術語“約(about)”、“大約(around)”或“約莫(approximately)”係指本領域普通技術人員將理解的可接受偏差的程度，取決於使用該術語的上下文，該可接受偏差的程度可能會有所不同。一般而言，“約(about)”、“大約(around)”或“約莫(approximately)”可表示在引用值附近具有±10%範圍的數值。本文中的所有數字可理解為由“約(about)”、“大約(around)”或“約莫(approximately)”修飾。
如本文所用，術語“抗體”係指免疫球蛋白分子以及免疫球蛋白分子的免疫活性部分，亦即，包含免疫特異性結合一糖蛋白的抗原結合部分的分子。因此，術語抗體不僅包括完整的抗體分子，還包括抗體片段以及抗體及抗體片段的變體(包括衍生物)。在天然抗體中，兩條重鏈透過雙硫鍵相互連接，且每條重鏈透過雙硫鍵與一輕鏈連接。輕鏈有兩種類型，lambda (l)及kappa (k)。有五種主要的重鏈類別(或同種型)決定抗體分子的功能活性：IgM、IgD、IgG、IgA以及IgE。每條鏈包含不同的序列結構域。輕鏈包括兩個結構域，一可變結構域(VL )以及一恆定結構域(CL )。重鏈包括四個結構域，一個可變結構域(VH )以及三個恆定結構域(CH 1、CH 2以及CH 3，統稱為CH )。輕鏈(VL )以及重鏈(VH )的可變區決定了對糖蛋白等抗原的結合識別及特異性。抗體的輕鏈及重鏈各有三個互補決定區 (complementarity determining regions, CDRs)，分別命名為 LCDR1、LCDR2、LCDR3以及HCDR1、HCDR2、HCDR3。因此，抗原結合位點包括六個CDRs，包括來自重鏈與輕鏈可變區中的每一個的CDR組。框架區(Framework Regions, FRs)係指插入在CDRs之間的胺基酸序列。
相對於本發明之特定胺基酸序列的同一性或同源性於本文中定義為，在比對序列並在必要時引入缺口之後，候選序列中與特定殘基相同的胺基酸殘基之百分比，以實現最大百分比同源性或同一性，且不考慮任何保守取代作為序列同源性或同一性的一部分。N 端、C 端或內部延伸、缺失，或插入指定序列均不應被解釋為影響同源性或同一性。用於比較的序列比對方法為本領域習知。雖然可使用傳統方法手動完成此類比對，但在以下文獻中描述了各種程式及比對演算法：Smith及Waterman，Adv. Appl. Math. 2:482，1981年；Needleman及Wunsch，J. Mol. Biol. 48:443，1970年；Pearson及Lipman，Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85:2444，1988年；Higgins及Sharp，Gene 73:237，1988年；Higgins及Sharp，CABIOS 5:151，1989年；Corpet等人，Nucleic Acids Research 16:10881，1988年；以及Pearson及Lipman，Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85:2444，1988年；Altschul等人，Nature Genet. 6:119，1994年，呈現詳細考慮序列比對方法及同源性/同一性計算。NCBI基本局部比對搜索工具(BLAST (Altschul等人，J. Mol. Biol. 215:403，1990年)可從多個來源獲得，包括生物科技資訊國家中心(National Center for Biotechnology Information, NCBI，貝塞斯達，馬里蘭州，美國)以及網際網路，用於與序列分析程式blastp、blastn、blastx、tblastn以及tblastx結合使用。NCBI 網站上提供了有關如何使用該程式確定序列同一性或同源性的說明。
本發明之抗體還包括由本發明之抗體產生的嵌合或人源化單株抗體。於一具體實施例中，人源化抗體係來自非人類物種的抗體分子，其具有來自非人類物種的一個、兩個或所有CDRs以及來自人類免疫球蛋白分子的一個、兩個或所有三個框架區。嵌合抗體是其中不同部分源自不同動物物種的分子。例如，一級抗體體可含有源自一鼠類單株抗體的可變區以及一人類免疫球蛋白恆定區。嵌合抗體可透過重組DNA技術產生。Morrison等人，Proc Natl Acad Sci , 81:6851-6855 (1984年)。例如，編碼一鼠(或其他物種)抗體分子的基因以限制性內切酶消化以去除編碼該鼠Fc的區域，然後將編碼人類Fc恆定區的基因的等效部分替換到該重組DNA分子中。嵌合抗體亦可透過重組DNA技術產生，其中編碼鼠可變(V)區的DNA可與編碼人類恆定(C)區的DNA連接。Better等人，Science ，1988年，240:1041-1043。Liu等人，PNAS ，1987年84:3439-3443。Liu等人，J. Immunol. ，1987年，139:3521-3526。Sun等人，PNAS ，1987年，84:214-218。Nishimura等人，Canc. Res. ，1987年，47:999-1005。Wood等人，Nature ，1985年，314:446-449。Shaw等人，J. Natl. Cancer Inst. ，1988年，80:1553-1559。PCT國際專利公開第WO1987002671號以及第WO 86/01533號。歐洲專利申請第184,187號；第171,496號；第125,023號；以及第173,494號。美國專利第4,816,567號。
因此，本發明之SARS-CoV-2抗體包括與非鼠源的重鏈或輕鏈可變區、重鏈或輕鏈恆定區、框架區或其任何部分之組合，較佳為人類來源的，其可併入本發明之抗體中。
本發明之抗體能夠調節、減少、拮抗、緩解、緩和、阻斷、抑制、消除，及/或干擾SARS-CoV-2病毒。
如本文所用，術語“抗原結合結構域”或“抗原結合片段”係指負責抗原結合的完整抗體分子的部分或區域。抗原結合片段能夠結合親本抗體所結合的相同抗原。抗原結合片段的例子包括，但不限於：(i) Fab片段，可為由VH -CH 1鏈以及VL -CL 鏈組成的單價片段；(ii) F(ab’)2 片段，可為由兩個Fab片段組成的二價片段，透過鉸鏈區的雙硫鍵連接；(iii) Fv片段，由透過非共價相互作用結合在一起的抗體分子的VH 與VL 結構域所組成；(iv) 單鏈Fv (single chain Fv, scFv)，可為由一VH 結構域以及一VL 結構域透過一胜肽連接子組成的單條多胜肽鏈；(v) (scFv)2 ，可包含由一胜肽連接子連接的兩個VH 結構域以及兩個VL 結構域，該兩個VL 結構域透過雙硫鍵與該兩個VH 結構域連接。
抗體可以單劑量治療或多劑量治療，按時間表及在適合受試者年齡、體重及狀況的一段時間內施用，所用之特定組合物，以及施用途徑等，用於預防或治療目的。例如，於一具體實施例中，根據本發明之抗體每月施用一次、每月兩次、每月三次、每隔一周(qow)、每週一次(qw)、每週兩次(biw)、每週三次(tiw)、每週四次、每週五次、每週六次、每隔一天(qod)、每天 (qd)、每天兩次(qid)、每天三次(tid)、每天四次(qid)，或一天6次。
為了便於施用及劑量均勻，可使用腸胃外劑量單位形式。如本文所用之劑量單位形式係指適合作為待治療受試者的單位劑量的物理離散單位；每個單位含有預定量的抗體，經計算可產生所需的治療效果。
如本文所用，一“有效量”係指足以減輕SARS-CoV-2之症狀及體徵的抗體劑量，該症狀及體徵如咳嗽、發燒、呼吸急促、病毒持續排出，或可檢測到的肺炎，透過各種成像方法進行臨床或放射學檢查。術語“有效量”以及“治療有效量”可互換使用。
抗體或共軛物的有效量取決於受試者及待治療的病症。任何特定受試者的特定劑量程度取決於多種因素，包括特定胜肽的活性、年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、施用時間、施用途徑，以及排泄率、藥物組合以及正在接受治療的特定疾病的嚴重程度，且可由本領域普通技術人員不需過度實驗即可確定。
術語“受試者”可能指懷疑患有SARS-CoV-2或已確認感染SARS-CoV-2的脊椎動物。受試者包括溫血動物，例如哺乳動物，例如靈長類動物，且更佳為人類。 非人類靈長類動物也是受試者。術語受試者包括馴養動物，如貓、狗等，家畜(如，牛、馬、豬、綿羊、山羊等)，以及實驗動物(如，小鼠、兔、大鼠、沙鼠、天竺鼠等)。
如本文所用，術語“治療”係指將包含一種或多種活性劑的組合物施用於患有病症、該病症之症狀或狀況，或該病症之進展的受試者，目的為治癒、治療、緩解、緩和、改變、補救、改善、改良或影響該病症、該病症之症狀或狀況、該病症引起之殘疾、或該病症或其症狀或狀況的進展。
如本文所用，“藥學上可接受的”係指載體與組合物中的活性成分相容，且較佳地可穩定該活性成分並且對接受治療的個體是安全的。該載體可為活性成分的稀釋劑、載劑、賦形劑或基質。合適的賦形劑的一些實例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖、甘露糖、澱粉、阿拉伯膠、磷酸鈣、藻酸鹽、黃蓍膠、明膠、矽酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、無菌水、糖漿以及甲基纖維素。該組合物還可包含潤滑劑，例如滑石、硬脂酸鎂，以及礦物油；潤濕劑；乳化劑及懸浮劑；防腐劑，例如羥基苯甲酸甲酯及丙酯；甜味劑；以及調味劑。本發明之組合物可在施用於患者後提供活性成分的快速、持續或延遲釋放之效果。
根據本發明，所述醫藥組合物的形式可為片劑、丸劑、散劑、錠劑、小包、口含錠、酏劑、混懸劑、洗劑、溶液、糖漿、軟硬膠囊、栓劑、無菌注射液，以及包裝好的粉末。
如本文所用，術語“多胜肽”係指由透過胜肽鍵連接的胺基酸殘基所組成之聚合物。術語“蛋白質”通常係指相對較大的多胜肽。術語“胜肽”通常係指相對較短的多胜肽(例如，包含多達100、90、70、50、30 或 20個胺基酸殘基)。
如本文所用，“分離的”物質係指其已從自然狀態經過人為改變。於某些具體實施例中，如果本發明之多胜肽(例如，抗體)或核酸基本上不含可能參與胜肽/核酸的製備過程的細胞材料或化學前體或其他化學物質/組成分，則可說其為“分離的”或“純化的”。應當理解的是，術語“分離的”或“純化的”不一定反映胜肽已“絕對”分離或純化的程度，例如，透過去除所有其他物質(例如，雜質或細胞成分)。於某些情況下，例如，分離或純化的多胜肽包括含有該多胜肽之製劑，該多胜肽具有少於50%、40%、30%、20%，或10% (按重量計)的其他蛋白質(例如，細胞蛋白質)，具有少於50%、40%、30%、20%，或 10% (按體積計)的培養基，或具有少於50%、40%、30%、20%，或10% (按重量計)的化學前體或其他合成程序中涉及的化學品/組成分。
如本文所用，術語“特異性結合(specific binds)”或“特異性結合(specifically binding)”係指兩個分子之間的非隨機結合反應，例如抗體與其目標抗原的抗原決定位的結合。與一目標抗原或一級抗體原決定位“特異性結合”的抗體為本領域熟知的術語，而且確定這種特異性結合的方法亦為本領域熟知的。如果一分子與一特定目標抗原或一級抗體原決定位的反應或結合比與其他目標/抗原決定位更頻繁、更迅速、持續時間更長及/或親和力更大，則稱該分子表現出“特異性結合”。如果一級抗體體與一目標抗原比該抗體與其他物質結合具有更大的親和力、強結合性、更容易，及/或更長期間的結合，則該抗體與該目標抗原“特異性結合”。換言之，透過閱讀該定義還可理解，例如，與一第一目標抗原特異性結合的抗體可以或可以不特異性或優先與一第二目標抗原結合。因此，“特異性結合”或“優先結合”不一定需要(儘管其可包括)排他性結合。通常，但不一定，提及結合代表特異性/優先結合。結合的親和力根據解離常數(dissociation constant, Kd) 定義。通常，當針對一級抗體體使用時，特異性結合可指一級抗體體以小於約10~7 M，例如約10~8 M或以下，例如10~9 M 或更小、約 10~10 M或更小、約10~11 M 或更小、約 10~12 M 或更小，或甚至更少的Kd值特異性結合(識別)其目標，並以對應於Kd的親和力與該特定目標結合，該Kd值比其與一非特異性抗原(例如BSA或酪蛋白)結合的親和力低至少十倍，例如低至少100倍，例如低至少1,000倍，例如低至少10,000倍。
如本文所用，術語“冠狀病毒”係指屬于冠狀病毒科的病毒。冠狀病毒為一種具有外膜的RNA病毒，在電子顯微鏡下呈球形，表面呈冠狀般的尖刺，因此得名。這種類型的病毒可進一步分為四個亞群：alpha (α)、beta (β)、gamma (γ)，以及delta (δ)。有七種人類冠狀病毒株，包括兩種α冠狀病毒(HCov-229E以及HCoV-NL63)、兩種β冠狀病毒(HCov-HKU1以及HCov-OC43)、中東呼吸道症候群冠狀病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus, MERS-CoV)、SARS-CoV，以及新發現的SARS-CoV-2。
如本文所用，術語“嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2，又稱為新型冠狀病毒)”係指導致2019年冠狀病毒病(COVID-19)的冠狀病毒株。SARS-CoV-2為一種正鏈單鏈RNA病毒，屬于冠狀病毒科β冠狀病毒屬的成員。SARS-CoV-2的RNA序列長度約為30,000個鹼基。每個SARS-CoV-2病毒粒子的直徑為50-200 奈米。與其他冠狀病毒一樣，SARS-CoV-2具有四種結構蛋白，稱為S (spike，棘)、E (envelope，外膜)、M (membrane，膜)，以及N (nucleocapsid，核鞘)蛋白；N蛋白包含RNA基因組，而S、E及M蛋白共同形成病毒外膜。
如本文所用，術語“棘蛋白”、“S多胜肽”、“S蛋白”、“SARS-CoV-2棘”，或“SARS-CoV-2 S蛋白”可互換使用，其係指SARS CoV-2上的表面結構糖蛋白，負責使病毒附著在宿主細胞的膜上並與之融合。三聚體S蛋白的每個單體約為180 kDa，包含兩個次單元S1及S2，分別調節附著及膜融合。棘蛋白主要透過與受體血管收縮素轉化酶2 (angiotensin converting enzyme 2, ACE2)結合進入人體細胞。
如本文所用，術語“核鞘蛋白”、“N多胜肽”、“N蛋白”、“SARS-CoV-2核鞘”或“SARS-CoV-2 N蛋白”可以互換使用，其係指SARS CoV-2的多結構域RNA結合蛋白，對病毒基因組包裝相當重要。N蛋白包含三個動態無序區域，其中包含假定的瞬時螺旋結合基序；且其兩個折疊結構域的相互作用最小化到全長N蛋白為一種有彈性的多價RNA結合蛋白。(Cubuk，2021年)。
術語“核酸”或“多核苷酸”可指由核苷酸單元組成之聚合物。多核苷酸包括天然存在的核酸，例如去氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid, “DNA”)以及核糖核酸(ribonucleic acid, “RNA”)以及核酸類似物，包括那些具有非天然存在的核苷酸的核酸類似物。例如，可以使用自動化DNA合成儀合成多核苷酸。應當理解的是，當核苷酸序列由DNA序列(亦即，A、T、G、C)表示時，這也包括其中以“U”取代“T”的RNA序列(亦即，A、U、G、C)。術語“cDNA”係指以單鏈或雙鏈形式與一mRNA互補或相同的DNA。
術語“編碼”係指多核苷酸(例如，一基因、一cDNA ，或一mRNA)中特定核苷酸序列的固有特性，作為生物過程中合成其他聚合物及大分子的模板，具有核苷酸的給定序列(亦即，rRNA、tRNA，以及mRNA)或胺基酸的給定序列以及由此產生的生物學特性。因此，如果該基因產生的mRNA的轉錄及轉譯在細胞或其他生物系統中產生蛋白質，則該基因編碼該蛋白質。技術人員理解，由於遺傳密碼的簡併性，許多不同的多核苷酸及核酸可編碼相同的多胜肽。還應理解的是，技術人員可使用常規技術製造不影響由所述多核苷酸編碼的多胜肽序列的核苷酸取代，以反映表現該多胜肽的任何特定寄主生物體偏好使用的密碼子。因此，除非另有說明，“編碼一胺基酸序列的核苷酸序列”涵蓋彼此簡併形式並編碼相同胺基酸序列的所有核苷酸序列。
本領域中的許多常規方法可用於獲得單株抗體或其抗原結合片段。於某些具體實施例中，本文提供之單株抗體可透過常規融合瘤技術製備。於某些具體實施例中，本文提供之單株抗體可透過重組技術製備。於某些具體實施例中，本文提供的單株抗體可透過基於抗原特異性B細胞的流式細胞儀以及PCR選殖的單細胞表現系統製備(黃2015年，黃2017年，黃2019年)。
當需要全長抗體時，本文所述之任何VH 以及VL 鏈的編碼序列可連接至免疫球蛋白Fc區的編碼序列，並且所得的編碼全長抗體重鏈與輕鏈的基因可在合適的宿主細胞中表現及組裝，例如，植物細胞、哺乳動物細胞、酵母細胞，或昆蟲細胞。
抗原結合片段可透過常規方法製備。例如，F(ab’)2 片段可透過全長抗體分子的胃蛋白酶消化產生，而Fab片段可透過還原F(ab’)2 片段的雙硫鍵來製備。或者，還可以重組技術透過在合適的宿主細胞中表現重鏈與輕鏈片段並將它們組裝，以在體內或體外形成所需的抗原結合片段來製備此類片段。單鏈抗體可以重組技術透過連接編碼一重鏈可變區的核苷酸序列以及編碼一輕鏈可變區的核苷酸序列來製備。較佳地，在兩個可變區之間併入一彈性連接子。
一般而言，本發明用於在一疑似含有所述SARS-CoV-2的樣品中檢測SARS-CoV-2之方法包括將該樣品與任何本文揭露之單株抗體或其任何組合接觸，並測定該抗體與該樣品之結合。
存在本領域普通技術人員已知的各種測定形式來針對使用抗體檢測樣品中的抗原或病原體。這些使用特異性針對目標抗原/病原體的抗體的測定通常稱為免疫測定。 免疫測定的實例包括，但不限於，酵素結合免疫吸附分析法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)、放射性免疫測定法(radioimmunoassay, RIA)、螢光免疫測定法(fluorescence immunoassay, FIA)、發光免疫測定法(luminescence immunoassay, LIA)以及免疫螢光測定法(immunoluminometric assay, ILMA)。此類檢測可用於檢測生物樣本中是否存在 SARS-CoV-2，包括血液、血清、血漿、唾液、腦脊液、尿液、糞便、呼吸道樣本以及其他組織樣本。
於某些具體實施例中，取自呼吸道的樣品為鼻咽(nasopharyngeal, NP)或鼻(nasal, NS)拭子。
於某些具體實施例中，該免疫測定為三明治式測定或橫向流動測定形式。
提供用於實施本發明之具體方面的以下實施例僅用於說明之目的，且並非要以任何方式限制本發明之範圍。
實施例
實施例1  針對SARS-CoV-2的單株抗體之製備及特徵描述
1. 研究設計
於本實施例中，從自然感染SARS-CoV-2的人類周邊漿母細胞(plasmablast)中分離出SARS-CoV-2抗原特異性人類單株抗體，然後描述該人類單株抗體的抗原特異性以及表型活性的特徵。急性SARS-CoV-2感染的診斷係基於呼吸道樣本的即時反轉錄聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction, PCR)的陽性結果。研究方案與知情同意書經長庚醫學基金會(桃園，台灣)以及衛生福利部桃園總醫院(桃園，台灣)倫理委員會核准。每位患者都簽署了知情同意書。該研究以及所有相關方法均按照核准的方案、赫爾辛基宣言，以及優良臨床實踐指南進行。
2. 漿母細胞的染色及分選
透過密度梯度離心從全血中分離新鮮周邊血單核細胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)，和解凍冷凍保存的PBMCs。以針對細胞表面標記物的螢光標記抗體的混合物對PBMCs染色，包括抗CD3 (BD Biosciences公司，美國)、抗CD19 (BD Biosciences公司，美國)、抗CD27 (BD Biosciences公司，美國)、抗CD20 (BD Biosciences公司，美國)、抗CD38 (BD Biosciences公司，美國)、抗IgG (BD Biosciences公司，美國)，以及抗IgM (BD Biosciences公司，美國)。透過對CD3- CD20- CD19+ CD27高 CD38高 IgG+ IgM- 事件進行門控來選擇漿母細胞，並如前所述(黃2015年，黃2017年，黃2019年)在小室中分離為單細胞。
3. 人類IgG 1單株抗體之生產
如前所述(黃2015年，黃2017年，黃2019年)，分選的單細胞用於產生人類IgG單株抗體。簡言之，將單個細胞直接分選至捕獲緩衝液中，並使用對前導區具有特異性的正股引子以及對重鏈的C
Figure 02_image001
恆定區與輕鏈的C
Figure 02_image003
或C
Figure 02_image005
恆定區的反股引子的混合物，在反轉錄酶PCR (QIAGEN公司，德國)中擴增來自每個細胞的可變區基因。如前所述(黃2015年，黃2017年，黃2019年)，使用嵌套引子在可變基因的末端加入限制酶切位，分別以PCR反應針對個別的重鏈及輕鏈基因家族進行反轉錄酶PCR產物的擴增。然後針對重鏈及輕鏈，分別將這些可變區的基因選殖到表現載體中。質體被轉染至293T細胞株中，用於在無血清轉染培養基中表現重組全長人類IgG1單株抗體(圖1)。一組群單株抗體將被進一步擴大並純化。
為了確定以VDJ及VJ重組所採用的個別基因片段以及核苷酸突變與胺基酸替換的數量，使用國際ImMunoGeneTics (IMGT)比對工具將可變結構域序列與種系基因片段進行比對(http://www.imgt.org/IMGT_vquest/input)。
4. 酵素結合免疫吸附分析法(ELISA)
ELISA微孔盤(Corning® 96孔透明聚苯乙烯高結合StripwellTM 微孔盤，美國)以SARS-CoV-2抗原(棘蛋白胞外結構域或棘蛋白S1次單元或棘蛋白受體結合結構域(receptor binding domain, RBD)或棘蛋白S2次單元或核鞘蛋白，Sino Biological公司，中國)或SARS抗原(棘蛋白S1次單元，Sino Biological公司，中國)或中東呼吸道症候群冠狀病毒(MERS)抗原(棘蛋白胞外結構域，Sino Biological公司，中國) 或人類冠狀病毒OC43抗原(棘蛋白胞外結構域，Sino Biological公司，中國)包覆，該些抗原在最佳濃度下於碳酸鹽緩衝液中、4°C下過夜，固著於盤上。第二天透過移液去除未結合固著的抗原。接著以含3%牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)的磷酸鹽緩衝鹽水(phosphate-buffered saline, PBS)溶液於室溫下在振盪器上作用1小時以阻隔非特異性結合。去除阻隔緩衝液後，加入含單株抗體的細胞培養上清液或純化的單株抗體製劑，於37°C作用1小時。未轉染的細胞培養上清液與抗流感人類單株抗體 BS 1A (本案發明人自行製備)作為每個實驗的陰性抗體對照。SARS-CoV-2以及SARS-CoV交叉反應之棘蛋白單株抗體CR3022以及恢復期血清則作為每個實驗的陽性抗體對照。作用後，清洗該微孔盤並與辣根過氧化物酶共軛的兔抗人類IgG (Rockland Immunochemicals公司，美國)作為二級抗體進行作用。作用後，清洗該微孔盤並以3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(3,3’,5,5’-Tetramethylbenzidine, TMB)基質試劑(BD Biosciences公司，美國)顯色。以0.5M鹽酸終止反應，並在微孔盤讀取儀上測量波長450 nm下的吸光度(OD450 )。微孔中的樣品的OD值若為陰性對照(BS 1A)平均吸光度的四倍者認定為陽性。
5. 免疫螢光測定
在生物安全層級第3級(BSL-3)條件下，細胞感染100 TCID50 (半數組織培養感染劑量)的SARS-CoV-2病毒(hCoV-19/Taiwan/CGMH-CGU-01/2020，EPI_ISL_411915)。將感染的細胞置於蓋玻片上，並在室溫下以丙酮固定10分鐘。在室溫下以1% BSA阻隔1小時並洗滌後，將固定的細胞與含有單株抗體的細胞培養上清液一起作用。抗流感人類單株抗體BS 1A作為每個實驗的陰性抗體對照。SARS-CoV-2以及SARS-CoV交叉反應之棘蛋白單株抗體CR3022以及恢復期血清作為每個實驗的陽性抗體對照。在進行作用並清洗微孔盤後，以與FITC共軛的抗人類IgG作為二級抗體並以伊凡氏藍(Evans blue)染劑作為複染劑對細胞進行染色。在由伊凡氏藍複染劑染色的紅色螢光材料的背景下，與抗體結合的感染的細胞顯現出蘋果綠色的螢光。影像於原始放大倍數40倍、比例尺20 µm下擷取的。
6. 流式細胞儀檢測
製備表現SARS-CoV-2受體結合結構域(RBD)的Madin-Darby犬腎(Madin-Darby Canine Kidney, MDCK)細胞(RBD細胞)，該RBD細胞用以檢測序列稀釋於3% BSA中的純化單株抗體。結合的一級抗體以與FITC共軛的抗IgG 二級抗體檢測，並透過BD FACSCantoTM II流式細胞儀(BD Biosciences公司，美國)分析結合活性。進行非線性回歸分析以獲得單株抗體結合SARS-CoV-2 RBD 的Kd值。
7. 結果
從確診感染SARS-CoV-2的恢復期患者獲取周邊血樣本，並透過流式細胞儀鑑定循環漿母細胞(黃2015年，黃2017年，黃2019年)。所分選的單細胞用於生成SARS-CoV-2人類單株抗體(圖1)。共生產64株抗SARS-CoV-2人類IgG1單株抗體，透過在酵素結合免疫吸附分析(ELISA)中與重組蛋白的結合進行測試，結果顯示其中34株與SARS-CoV-2棘蛋白反應(表1、圖2)，另外30株與SARS-CoV-2核鞘蛋白反應(表5)。
表1. 34 株SARS-CoV-2棘蛋白反應性人類單株抗體的抗原特異性。
單株抗體 抗原特異性   與其他β冠狀病毒的交叉反應
SARS-CoV-2 棘蛋白 SARS-CoV-2 S1次單元 SARS-CoV-2 RBD SARS-CoV-2 S2次單元   SARS 棘蛋白 S1次單元 MERS 棘蛋白 人類冠狀病毒OC43 棘蛋白
FM 7B + + + -   + - -
FD 8B + - - -   - - -
EW 9B + - - -   - - -
FN 12A + + + -   ± ± ±
FG 12C + - - -   - - -
FI 1C + + + -   - - -
FI 4A + + + -   - - -
FD 1E + - - -   - - -
FD 11E + - - -   - - -
FN 2C + - - +   - - +
EY 6A + + + -   + - -
EY 6A-1* + + + -   + - -
FD 11D + ± - -   ± ± ±
EW 9C + - - +   - ± +
EW 9C-1* + - - +   - ± +
FD 1D + - - +   ± ± ±
FG 7A + - - +   - - -
FM 1A + - - +   - - -
FD 11A + + + -   - - -
FN 8C + - - -   - - -
FD 5E + - - -   - - -
FD 5D + + + -   - - -
FI 3A + + + -   - - -
FD 10A + - - +   ± ± ±
FJ 4E + - - +   ± + +
FJ 1C + + - -   ± - -
EW 8B + - - -   - - -
FD 11C + + - -   - - -
FD 7C + + - -   - - -
FD 7D + - - -   - - -
FJ 10B + + + -   + - -
FB 9D + - - +   - + +
FB 1E + - - +   - + +
EZ 7A + + + -   + + +
* EY 6A及EW 9C都有一對額外的表現載體。 縮寫：Mab，單株抗體；SARS-CoV-2，嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒2 (又稱新型冠狀病毒)；RBD，受體結合結構域；SARS，嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒；MERS，中東呼吸道症候群冠狀病毒。
在棘蛋白反應性單株抗體中，有15株識別S1次單元，10株識別SARS-CoV-2棘蛋白的受體結合結構域(RBD)(表1，圖3A至3K)。這些SARS-CoV-2棘蛋白反應性抗體中有13株與其他β冠狀病毒的棘蛋白發生交叉反應，包括 SARS、MERS或人類冠狀病毒OC43 (表1)，顯示β冠狀病毒的棘蛋白上存在著某些保守抗原決定位。透過免疫螢光測定，其中24株棘蛋白反應性單株抗體可與感染細胞上表現的病毒抗原結合，顯示大多數棘蛋白反應性人類單株抗體可識別病毒棘蛋白上的構象抗原決定位。
該34株SARS-CoV-2棘蛋白反應性單株抗體中，每株抗體均有獨特的可變結構域序列，並帶有體細胞突變(表2、表3、表4)。表2顯示SARS-CoV-2棘蛋白反應性單株抗體可能至少係從25個株群(clonal group)發展而來的，這些株群可以其重鏈VDJ重組內容(VDJ rearrangement)以及輕鏈VJ重組內容(VJ rearrangement)所定義。它們的平均核苷酸體細胞突變(somatic mutation)在重鏈可變區為6±9個突變，在輕鏈可變區為4±6個突變。可發現其中14株SARS-CoV-2棘蛋白反應性單株抗體在重鏈可變區僅攜帶少量(少於 2 個)體細胞突變，顯示人類對初次感染SARS-CoV-2病毒所產生的新生的(de-novo )B細胞反應。表3所示為該34株SARS-CoV-2棘蛋白反應性單株抗體的重鏈可變區以及輕鏈可變區的核苷酸及胺基酸序列，表4所示為該34株SARS-CoV-2棘蛋白反應性人類單株抗體的重鏈可變區以及輕鏈可變區的互補決定區(CDRs)的胺基酸序列。
表2 SARS-CoV-2棘蛋白反應性人類單株抗體的重鏈與輕鏈可變結構域的基因使用情況。
單株抗體 H-L VH JH DH rf VH 連接序列 Mut# aa Sub VL JL VL 連接序列 Mut # aa Sub
FM 7B H-
Figure 02_image007
 1-3*04 F 5*02 F 2-2*01 F 2 CARDPTYCSSTSCYPFSWFDPW 3 1 3-21*02 F 3*02 F CQVWDSTGDHSWVF 2 2
FD 8B H-
Figure 02_image009
 1-24*01 F 6*02 F 2-2*01 F 2 CATAAAINCSSTSCYYYYYYYGMDVW 0 0 2-24*01 F 2*01 F CTQATQFPYTF 2 2
EW 9B H-
Figure 02_image009
 1-46*01或03 F 6*02 F 2-2*01 F 3 CAREDGVVPAANLMISLEDYYYYGMDVW 2 2 3-11*01 F 4*01 F CQQRSNWPLTF 0 0
FN 12A H-
Figure 02_image007
 1-69*04或09 F 6*02 F 2-2*01 F 2 CARSGCSSTSCPSNLYYYYYGMDVW 1 0 1-51*01 F 3*02 F CGTWDSSLSALVF 1 0
FG 12C H-
Figure 02_image007
 3-9*01 F 4*02 F 4-17*01 F 2 CAKDMRVHDYGDYYFDYW 0 0 3-21*01 F 2*01或3*01 F CQVWDSSSDHPVF 1 1
FI 1C H-
Figure 02_image007
 3-11*04 F 3*02 F 6-13*01 F 1 CARRSNRFLIAFDIW 3 2 2-14*01 F 2*01或3*01 F CSSYTSSSTLVVF 1 1
FI 4A H-
Figure 02_image007
 3-21*01 F 4*02 F 2-21*02 F 2 CATYLFGDSHTYW 9 7 6-57*02 F 3*02 F CQSYDSSNLHWVF 0 0
FD 1E H-
Figure 02_image007
 3-21*01 F 6*02 F 6-13*01 F 2 CASLAAAGPETYYYYGMDVW 1 0 3-1*01 F 2*01或3*01 F CQAWDSSVVF 0 0
FD 11E H-
Figure 02_image007
 3-21*01 F 6*02 F 6-13*01 F 2 CASLAAAGPETYYYYGMDVW 0 0 3-1*01 F 2*01或3*01 F CQAWDSSVVF 0 0
FN 2C H-
Figure 02_image007
 3-30*03或18或3-30-5*01 F 3*01或02 F 3-10*01 F 1 CAKRREIFWLGEPPLSDAFDFW 22 14 1-40*01 F 3*02 F CQSYDSSLSGSVF 8 4
EY 6A H-
Figure 02_image009
 3-30*03或18或3-30-5*01 F 4*02 F 2-21*01 F 1 CAKDGGKLWVYYFDYW 6 5 1-39*01 F或1D-39*01 F 4*01 F CQQSYSTLALTF 0 0
EY 6A-1* H-
Figure 02_image009
 3-30*03或18或3-30-5*01 F 4*02 F 2-21*01 F 1 CAKDGGKLWVYYFDYW 6 5 1-39*01 F或1D-39*01 F 4*01 F CQQSYSTLALTF 0 0
FD 11D H-
Figure 02_image009
 3-30*03或18或3-30-5*01 F 4*02 F 6-19*01 F 1 CAKEGAGSGWYRHHKPGYYFDYW 1 1 3-20*01 F 1*01 F CQQYGSSPLTF 0 0
EW 9C H-
Figure 02_image009
 3-30*03或18或3-30-5*01 F 5*01或02 F 3-10*01 F 1 CARATSIFWFGEGRNWFDPW 33 15 3-11*01 F 4*01 F CQQRSNWPLTF 25 13
EW 9C-1* H-
Figure 02_image009
 3-30*03或18或3-30-5*01 F 5*01或02 F 3-10*01 F 1 CARATSIFWFGEGRNWFDPW 33 15 3-11*01 F 4*01 F CQQRSNWPLTF 25 13
FD 1D H-
Figure 02_image009
 3-30*04或3-30-3*03 F 5*02 F 3-10*01 F 2 CARAGSGSYLNWFDPW 1 0 3-11*01 F 5*01 F CQQRSNWPITF 0 0
FG 7A H-
Figure 02_image009
 3-30-3*01 F 4*02 F 1-26*01 F 3 CARSHSGSYRASLDYW 2 2 3-20*01 F 2*01 F CQQYGSSPLYTF 0 0
FM 1A H-
Figure 02_image007
 3-33*01或06 F 4*02 F 1-26*01 F 1 CAREGAVGATRGFDYW 1 0 3-21*02 F 2*01或3*01 F CQVWDSSSDQGVF 2 1
FD 11A H-
Figure 02_image007
 3-33*01或06 F 6*02 F 3-9*01 F 2 CAKGPDILTGYYNYYYYGMDVW 2 2 1-40*01 F 2*01或3*01 F CQSYDSSLSGFYVVF 0 0
FN 8C H-
Figure 02_image007
 3-33*05 F 6*02 F 3-9*01 F 2 CARERTYYDILTGYRHYYGMDVW 1 1 3-21*02 F 3*02 F CQVWDSSSDHWVF 1 1
FD 5E H-
Figure 02_image009
 3-43D*03 F 6*02 F 3-3*01 F 1 CAKDSVRFRYYYGMDVW 0 0 3-11*01 F 3*01 F CQQRSNWPLTF 0 0
FD 5D H-
Figure 02_image009
 3-48*04 F 6*02 F 6-13*01 F 2 CASPGGITAAGTSVLFGYYGMDVW 4 2 2-28*01或2D-28*01 F 1*01 F CMQALQTPITWTF 0 0
FI 3A H-
Figure 02_image009
 3-53*01 F 3*02 F 6-6*01 F 3 CARDHVRPGMNIW 2 2 1-33*01或1D-33*01 F 4*01 F CQQYDNLPVTF 1 0
FD 10A H-
Figure 02_image009
 3-74*01 F 3*02 F - - CANMAFDIW 0 0 4-1*01 F 5*01 F CQQYYSTPITF 0 0
FJ 4E H-
Figure 02_image009
 4-31*06 F 5*02 F 3-10*01 F 2 CARDEYDSSDSGIQGHWFDPW 20 15 1-39*01 F或1D-39*01 F 1*01 F CQQSYSTPWTF 15 10
FJ 1C H-
Figure 02_image007
 4-38-2*02 F 4*02 F 3-10*01 F 1 CARDKALLWFGELFTNLFDYW 0 0 2-14*01 F 2*01或3*01 F CSSYTSSSTLVF 1 1
EW 8B H-
Figure 02_image009
 4-39*01 F 3*02 F 3-16*01 F 2 CARQEVWGGFDIW 20 12 3-20*01 F 1*01 F CQQYGSSPTF 4 4
FD 11C H-
Figure 02_image007
 4-39*07 F 6*02 F 3-10*01 F 2 CAREYYYGSETKKYYYYYGMDVW 2 1 3-1*01 F 2*01或3*01 F CQAWDSSTVF 0 0
FD 7C H-
Figure 02_image009
 4-59*01 F 5*02 F 3-10*02 F 3 CARDYRFGELFGRFAWFDPW 1 1 3-15*01 F 1*01 F CQQYNNWPRAF 2 1
FD 7D H-
Figure 02_image007
 5-10-1*03 F 3*02 F 2-2*01 F 2 CARHSDCSSTSCYFVDAFDIW 1 1 3-25*03 F 2*01或3*01 F CQSADSSGTYVVF 1 0
FJ 10B H-
Figure 02_image009
 5-10-1*03 F 6*02 F 3-16*01 F 1 CARLDPRYGPDYYGMDVW 2 1 1-39*01 F或1D-39*01 F 4*01 F CQQSYSTPLTF 3 2
FB 9D H-
Figure 02_image007
 5-51*01 F 6*02 F 3-10*01 F 3 CARHWASMVRGVIRASHYYGMDVW 27 11 2-8*01 F 3*02 F CSSYAFGGSDTRVF 20 10
FB 1E H-
Figure 02_image007
 5-51*01 F 6*02 F 3-10*01 F 3 CARHWASMVRGVIRASHYYGMDVW 22 11 2-8*01 F 3*02 F CSSYAFGGSDIRVF 16 8
EZ 7A H-
Figure 02_image007
 5-51*01 F 6*02 F 5-12*01 F 3 CARGWVYRGFPYYGMDVW 2 1 2-11*01 F 3*02 F CCSYAGSYTLVF 0 0
* EY 6A及EW 9C都有一對額外的表現載體。 縮寫：H，重鏈；K，kappa；λ，lambda；VH ，重鏈可變結構域的可變基因片段；DH ，重鏈可變結構域的多樣性基因片段；JH ，連接重鏈可變結構域的基因片段；Mut，核苷酸突變的數量；Sub，胺基酸取代的數量；VL ，輕鏈可變結構域的可變基因片段；JL ，連接輕鏈可變結構域的基因片段。
表3 該34株SARS-CoV-2棘蛋白反應性人類單株抗體的重鏈可變區(VH )以及輕鏈可變區(VL )的核苷酸及胺基酸序列。
VH 以及 VL 的核苷酸序列
FM 7B VH GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACTAGCTATGCTATGCATTGGGTGCGCCAGGCCCCCGGACAAAGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACACTGGCAATGGTAACACAAAATATTCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACCATTACCAGGGACACATCCGCGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAAGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGATCCCACCTATTGTAGTAGTACCAGCTGCTACCCTTTTAGCTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 513)
VL AATTTTATGCTGACTCAGCCACCCTCGGTGTCAGTGGCCCCAGGACAGACGGCCAGGATTACCTGTGGGGGAAACAACATTGGAAGTAAAAGTGTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTCGTCTATGATGATAGCGACCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCAGGGTCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTACTGTCAGGTGTGGGATAGTACTGGTGATCATTCTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID NO: 514)
FD 8B VH GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGTTTCCGGATACACCCTCACTGAATTATCCATGCACTGGGTGCGACAGGCTCCTGGAAAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGTTTTGATCCTGAAGATGGTGAAACAATCTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCGAGGACACATCTACAGACACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCAACAGCTGCAGCAATTAATTGTAGTAGTACCAGCTGCTACTATTACTACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 515)
VL GATATTGTGATGACCCAGACTCCACTCTCCTCACCTGTCACCCTTGGACAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTCAAAGCCTCGTACACAGTGATGGAAACACCTACTTGAGTTGGCTTCAGCAGAGGCCAGGCCAGCCTCCAAGACTCCTAATTTATAAGATTTCTAGCCGGTTCTCTGGGGTCCCAGACAGATTCAGTGGCAGTGGGGCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAGCAGGGTGGAAGCTGAGGATGTCGGGGTTTATTACTGCACGCAAGCTACACAATTTCCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAAGTGGATATCAAA (SEQ ID NO: 516)
EW 9B VH GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCACCAGCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAATAATCAACCCTAGTGGTGGTAGCACAAGCTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCAGGGACACGTCCACGAGCACAGTCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAGGATGGAGTAGTACCAGCTGCTAATTTGATGATATCGTTGGAAGACTACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA  (SEQ ID NO: 517)
VL GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTAGAGCCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGCCCCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAAGTGGATATCAAA (SEQ ID NO: 518)
FN 12A VH CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAAGGATCATCCCTATCCTTGGTATAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATCGGGCTGTAGTAGTACCAGCTGCCCCTCAAACCTTTACTACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 519)
VL CAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGCGGCCCCAGGACAGAAGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATTTATGACAATAATAAGCGACCCTCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTCAGCCACCCTGGGCATCACCGGACTCCAGACTGGGGACGAGGCCGATTATTACTGCGGAACATGGGATAGCAGCCTGAGTGCTTTGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID NO: 520)
FG 12C VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAGTTGGAATAGTGGTAGCATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGATATGAGGGTGCATGACTACGGTGACTACTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 521)
VL TCCTATGAGCTGACTCAGCCACCCTCAGTGTCAGTGGCCCCAGGAAAGACGGCCAGGATTACCTGTGGGGGAAACAACATTGGAAGTAAAAGTGTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTCATCTATTATGATAGCGACCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCAGGGTCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTACTGTCAGGTGTGGGATAGTAGTAGTGATCATCCGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID NO: 522)
FI 1C VH GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTTTCATACATTAGTAGTAGTGGTAGTACCATATACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGGCGCAGTAACAGGTTTTTGATTGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA (SEQ ID NO: 523)
VL CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGACGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGAGGTCAGTAATCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATACAAGCAGCAGCACTCTCGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCCA (SEQ ID NO: 524)
FI 4A VH GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTCGCTTTAGCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCCTCCATTAGTAGTAGTGGTAGTTACATATACTTCGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTATATATTACTGTGCGACTTATTTATTTGGTGACTCCCATACCTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 525)
VL CAGTCTGTGCTGACGCAGCCCCACTCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACCGGCAGCAGTGGCAGCATTGCCAGCAACTATGTGCAGTGGTACCAGCAGCGCCCGGGCAGTGCCCCCACCACTGTGATCTATGAGGATAACCAAAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTCTCTGGCTCCATCGACAGCTCCTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATCTCTGGACTGAAGACTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGTCTTATGATAGCAGCAATCTCCATTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID NO: 526)
FD 1E VH GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATAGCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGCTTAGCAGCAGCTGGCCCCGAAACCTACTATTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA (SEQ ID NO: 527)
VL TCCTATGAGCTGACACAGCCACCCTCAGTGTCCGTGTCCCCAGGACAGACAGCCAGCATCACCTGCTCTGGAGATAAATTGGGGGATAAATATGCTTGCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCCAGTCCCCTGTGCTGGTCATCTATCAAGATAGCAAGCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACAGCCACTCTGACCATCAGCGGGACCCAGGCTATGGATGAGGCTGACTATTACTGTCAGGCGTGGGACAGCAGCGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID NO: 528)
FD 11E VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATAGCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGCTTAGCAGCAGCTGGCCCCGAAACCTACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA (SEQ ID NO: 529)
VL TCCTATGAGCTGACTCAGCCACCCTCAGTGTCCGTGTCCCCAGGACAGACAGCCAGCATCACCTGCTCTGGAGATAAATTGGGGGATAAATATGCTTGCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCCAGTCCCCTGTGCTGGTCATCTATCAAGATAGCAAGCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACAGCCACTCTGACCATCAGCGGGACCCAGGCTATGGATGAGGCTGACTATTACTGTCAGGCGTGGGACAGCAGCGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID NO: 530)
FN 2C VH GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCCGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCAACTTCAATAACTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCTACTATTTCATATGAAGGAAGTAAAAAATTTTATGTAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAAAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGTTGACGACACGGCTTTTTATTACTGTGCGAAACGGAGGGAAATATTTTGGTTGGGGGAGCCACCTCTCTCGGATGCTTTTGATTTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA (SEQ ID NO: 531)
VL CAGTCTGTGCTGACTCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCACTGGGAGCGGCTCCAACATCGGGGCAGGTTATGATGTACACTGGTACCAGTTCCTTCCAGGAACAGCCCCCCAACTCCTCATCTATGGTAACAACAATCGTCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCACTGGGCTCCAGGCTGAAGATGAGGCTGATTATTACTGCCAGTCCTATGACAGCAGCCTGAGTGGTTCGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID NO: 532)
EY 6A VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGCATTCACCTTCAGTAGCTATGACATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAAAGATGGGGGAAAGCTATGGGTGTACTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCACGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 533)
VL GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCTCGCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAAGTGGATATCAAA (SEQ ID NO: 534)
EY 6A-1* VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGCATTCACCTTCAGTAGCTATGACATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAAAGATGGGGGAAAGCTATGGGTGTACTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 535)
VL GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCTCGCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA (SEQ ID NO: 536)
FD 11D VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAAAGAAGGAGCCGGCAGTGGCTGGTACCGCCACCACAAGCCGGGCTACTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 537)
VL GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCTCTAACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA (SEQ ID NO: 538)
EW 9C VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCGGGGGGGGGCGTGGTCCAGCCTGGGGCGTCCCTGAGACTCTCCTGCGTAGCCTCCGGATTCACCTTTAATAATTTTGGATTCCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGCTGGCAGTGATATCATATGAGGGAAGTAAGACTTACTATGCAGAGTCGCTGAAGGGCCGCTTCACCATCTCCAGAGACACTTCCAAGAACACGGTGTATCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCTGAGGACACGGCTGTCTATTACTGTGCGCGGGCGACTTCAATTTTTTGGTTTGGAGAGGGCCGTAACTGGTTCGACCCCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA (SEQ ID NO: 539)
VL GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCGTGTCTTTGTCTGCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAATGTTGGCACCGACTTAGCCTGGTATGTTCAGAGACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATACATCCAATAAGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTTAGTGGTCGAGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCGACAGCCTAGAGCCTGAAGACTTTGCAGTTTATTACTGTCAACAGCGTAGCAACTGGCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAAATCAGA (SEQ ID NO: 540)
EW 9C-1* VH GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCGGGGGGGGGCGTGGTCCAGCCTGGGGCGTCCCTGAGACTCTCCTGCGTAGCCTCCGGATTCACCTTTAATAATTTTGGATTCCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGCTGGCAGTGATATCATATGAGGGAAGTAAGACTTACTATGCAGAGTCGCTGAAGGGCCGCTTCACCATCTCCAGAGACACTTCCAAGAACACGGTGTATCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCTGAGGACACGGCTGTCTATTACTGTGCGCGGGCGACTTCAATTTTTTGGTTTGGAGAGGGCCGTAACTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAGCCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 541)
VL GAAATAGTGATGACGCAGTCTCCAGGCACCGTGTCTTTGTCTGCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAATGTTGGCACCGACTTAGCCTGGTATGTTCAGAGACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATACATCCAATAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTTAGTGGTCGAGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCGACAGCCTAGAGCCTGAAGACTTTGCAGTTTATTACTGTCAACAGCGTAGCAACTGGCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA (SEQ ID NO: 542)
FD 1D VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGCTATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAAGTAATAAATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGCGGGTTCGGGGAGCTACCTCAACTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 543)
VL GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTAGAGCCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAA (SEQ ID NO: 544)
FG 7A VH GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGCTATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAAGCAATAAATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGATCCCATAGTGGGAGCTACCGAGCCTCCCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCACGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 545)
VL GACATCCAGTTGACCCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCTTTGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGGTGGAAATCAAA (SEQ ID NO: 546)
FM 1A VH GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAATGGGTGGCAGTTATATGGTATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGAGGGGGCAGTGGGAGCTACTAGGGGGTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 547)
VL TCCTATGAGCTGACACAGCCACCCTCGGTGTCAGTGGCCCCAGGACAGACGGCCAGGATTACCTGTGGGGGAAACAACATTGGAAGTAAAAGTGTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTCGTCTATGATGATAGCGACCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCAGGGTCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTACTGTCAGGTGTGGGATAGTAGTAGTGATCAGGGGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID NO: 548)
FD 11A VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATGGTATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAAAGGCCCCGATATTTTGACTGGTTATTATAACTACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA (SEQ ID NO: 549)
VL CAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCACTGGGAGCAGCTCCAACATCGGGGCAGGTTATGATGTACACTGGTACCAGCAGCTTCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCACTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCCAGTCCTATGACAGCAGCCTGAGTGGTTTCTATGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID NO: 550)
FN 8C VH CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACACCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGAACGGACGTATTACGATATTTTGACTGGTTATAGACACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 551)
VL TCCTATGAGCTGACACAGCCACCCTCGGTGTCAGTGGCCCCAGGACAGACGGCCAGGATTACCTGTGGGGGAAACAACATTGGAAGTAAAAGTGTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTCGTCTATGATGATAGCGACCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCAGGGTCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTACTGTCAGGTGTGGGATAGTAGTAGTGATCATTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID NO: 552)
FD 5E VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGTCGTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGTCAAGCTCCGGGGAAGGGTCTGGAGTGGGTCTCTCTTATTAGTTGGGATGGTGGTAGCACCTACTATGCAGACTCTGTGAAGGGTCGATTCACCATCTCCAGAGACAACAGCAAAAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCTGAGGACACCGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGATTCGGTACGATTTCGGTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 553)
VL GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTAGAGCCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGCCTCTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA (SEQ ID NO: 554)
FD 5D VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATAGCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTTTCATACATTAGTAGTAGTAGTAGTACCATATACTACGCAGACCCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGTCCCGGAGGGATCACAGCAGCTGGTACATCAGTTCTTTTTGGGTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA (SEQ ID NO: 555)
VL GATATTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCCTGGAGAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTCAGAGCCTCCTGCATAGTAATGGATACAACTATTTGGATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGGCAGTCTCCACAGCTCCTGATCTATTTGGGTTCTAATCGGGCCTCCGGGGTCCCTGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACAGATTTTACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCATGCAAGCTCTACAAACTCCCATCACGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAAGTGGATATCAAA (SEQ ID NO: 556)
FI 3A VH GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGAGGAGGCTTGATCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGGTTCACCGTCAGTAGCAACTACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGTTATTTATAGCGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATCACGTGCGGCCCGGGATGAATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA (SEQ ID NO: 557)
VL GCCATCCGGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTAGCAACTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTACGATGCATCCAATTTGGAAACAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAACAGTATGATAATCTTCCGGTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAAGTGGATATCAAA (SEQ ID NO: 558)
FD 10A VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGGGGAGGCTTAGTTCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTACTGGATGCACTGGGTCCGCCAAGCTCCAGGGAAGGGGCTGGTGTGGGTCTCACGTATTAATAGTGATGGGAGTAGCACAAGCTACGCGGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAACATGGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA (SEQ ID NO: 559)
VL GACATCGTGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAGTCCAGCCAGAGTGTTTTATACAGCTCCAACAATAAGAACTACTTAGCTTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGCCTCCTAAGCTGCTCATTTACTGGGCATCTACCCGGGAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAATATTATAGTACTCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAA (SEQ ID NO: 560)
FJ 4E VH CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCAGAGACCCTGTCCCTCACCTGCAGCGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTGGTACTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCAGCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGATTGGGTACATCTATAACACTGGGAGACCCTACTACAACCCGTTTCTCAAGAGTCGAATTACCATATCAGTGGACTCGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGACCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTATTGTGCGAGAGATGAATATGATTCCTCTGATTCGGGGATTCAAGGCCACTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 561)
VL GCCATCCGGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTGGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGACAAGTCAGAACATTAACAGTTTTTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGGCCCTAACCTCCTGATCTATGGTGCATTCACTTTACAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACACTCACCATCAGCAGTCTACAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTTCTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA (SEQ ID NO: 562)
FJ 1C VH CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTTACTCCATCAGCAGTGGTTACTACTGGGGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATCATAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATAAGGCCTTACTATGGTTCGGGGAGTTATTTACCAACCTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 563)
VL CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGAGGTCAGTAATCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTAATTATTACTGCAGCTCATATACAAGCAGCAGCACTCTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID NO: 564)
EW 8B VH GTCCAGCTGGTACAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTAGTGGTTACTACTGGGGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGCGAATTTTTATTTTACTGGGAGTGTCTACTCCAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTTGACACGTCCAAGAACCAGCTCTCCCTGAAATTGAGCTATCTGACCGCCGCAGACACGGCTGTATATTACTGTGCGAGACAAGAGGTTTGGGGTGGTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA (SEQ ID NO: 565)
VL GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGTCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTCTTGGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTTCTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA (SEQ ID NO: 566)
FD 11C VH GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTAGTAGTTACTACTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTATAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGGGAGTATTACTATGGTTCGGAGACAAAAAAATACTACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 567)
VL TCCTATGAGCTGACTCAGCCACCCTCAGTGTCCGTGTCCCCAGGACAGACAGCCAGCATCACCTGCTCTGGAGATAAATTGGGGGATAAATATGCTTGCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCCAGTCCCCTGTGCTGGTCATCTATCAAGATAGCAAGCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACAGCCACTCTGACCATCAGCGGGACCCAGGCTATGGATGAGGCTGACTATTACTGTCAGGCGTGGGACAGCAGCACCGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID NO: 568)
FD 7C VH CAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGTATATCTATTACAGTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATTATAGGTTCGGGGAGTTATTTGGAAGGTTTGCCTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 569)
VL GACATCCAGTTGACCCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTGTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCACCAGGGCCACTGGTATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGTCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGTATAATAACTGGCCTAGGGCTTTCGGCCCTGGGACCAAGGTGGAAATCAGA (SEQ ID NO: 570)
FD 7D VH GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGCAGAGGTGAAAAAGCCCGGGGAGTCTCTGAGGATCTCCTGTAAGGGTTCTGGATACAGCTTTACCAGCTACTGGATCAGCTGGGTGCGCCAGATGCCCGGGAAAGGCCTGGAGTGGATGGGGAGGATTGATCCTAGTGACTCTTATACCAACTACAGCCCGTCCTTCCAAGGCCACGTCACCATCTCAGCTGACAAGTCCATCAGCACTGCCTACCTGCAGTGGAGCAGCCTGAAGGCCTCGGACACCGCCATGTATTACTGTGCGAGACATTCTGATTGTAGTAGTACCAGCTGCTATTTCGTCGATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA (SEQ ID NO: 571)
VL TCCTATGAGCTGACTCAGCCACCCTCGGTGTCAGTGTCCCCAGGACAGACGGCCAGGATCACCTGCTCTGGAGATGCATTGCCAAAGCAATATGCTTATTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTGATATATAAAGACAGTGAGAGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAGCTCAGGGACAACAGTCACGTTGACCATCAGTGGAGTCCAGGCAGAAGACGAGGCTGACTATTACTGTCAATCAGCAGACAGCAGTGGTACTTATGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID NO: 572)
FJ 10B VH CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCCGGAGCAGAGGTGAAAAAGCCCGGGGAGTCTCTGAGGATCTCCTGTAAGGGTTCTGGATACAGCTTTACCAGCTACTGGATCAGCTGGGTGCGCCAGATGCCCGGGAAAGGCCTGGAGTGGATGGGGAGGATTGATCCTAGTGACTCTTATACCAACTACAGCCCGTCCTTCCAAGGCCACGTCACCATCTCAGCTGACAAGTCCATCAGCACTGCCTACCTGCAGTGGAGCAGCCTGAAGGCCTCGGACACCGCCATGTATTACTGTGCGAGACTAGACCCCCGTTATGGGCCCGACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 573)
VL GCCATCCGGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTGGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCCATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATGAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAAATCAGA (SEQ ID NO: 574)
FB 9D VH CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGAGCAGAAGTGAAAAAGCCCGGGGAGTCTTTGAAGATCTCCTGTCAGGGTTCTGGATACAGGTTTAACAGTTATTGGATCGCCTGGGTGCGCCAAATGCCCGGGAAAGGCCTGGAGTGGATGGGGAGCATCTTTCCTACTGACTCTGATGTCAGATATAACCCGTCCTTCCAAGGCCAGGTCACCATTTCGGCCGACAAGTCCATCAGTTTCGCCTACCTGCAGTGGAGCAGCCTGAAGGCCTCGGACACCGCCATATATTATTGTGCGAGACATTGGGCCAGTATGGTTCGGGGAGTAATTCGTGCCAGTCATTATTATGGCATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 575)
VL CAGCCTGTGCTGACTCAGCCTCCCTCCGCGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCAGTCACCATCTCCTGCTCTGGAGCCAGCAGTGACATTGGTAAATATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCTCCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCCTGATTTATGAGGTCACTAAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGGGCTCCAGGCTGACGATGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCTTATGCATTTGGAGGCAGCGACACCCGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID NO: 576)
FB 1E VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGAGCAGAAGTGAAAAAGCCCGGGGAGTCTCTGAAGATCTCCTGTCAGGGTTCTGGATACAGGTTTAATAGTTATTGGATCGCCTGGGTGCGCCAGATGCCCGGGAAAGGCCTGGAGTGGATGGGGAGCATCTTTCCTACTGACTCTGATATCAGATATAACCCGTCCTTCCAAGGCCAGGTCACCATCTCAGCCGACAAGTCCATCAGTATCGCCTACCTGCAGTGGAGCAGCCTGAAGGCCTCGGACACCGCCATATATTATTGTGCGAGACATTGGGCCAGTATGGTTCGGGGAGTAATTCGTGCCAGTCATTATTATGGCATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 577)
VL CAGTCTGTGCTGACTCAGCCTCCCTCCGCGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCAGTCACCATCTCCTGCTCTGGAGCCAGCAGTGACATTGGTGATTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCTCCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCCTGATTTATGAGGTCACTAAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGGGCTCCAGGCTGACGATGAGGCTGATTACTACTGCAGCTCTTATGCATTTGGAGGCAGCGACATCCGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGGCCGTCCTA (SEQ ID NO: 578)
EZ 7A VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGAGCAGAGGTGAAAAAGCCCGGGGAGTCTCTGAAGATCTCCTGTAAGGGTTCTGGATACAGCTTTACCAGCTACTGGATCGGCTGGGTGCGCCAGATGCCCGGGAAAGGCCTGGAGTGGATGGGGATCATCTATCCTGGTGACTCTGATACCAGATACAGCCCGTCCTTCCAAGGCCAGGTCACCATCTCAGCCGACAAGTCCATCAGCACCGCCTACCTGCAGTGGAGCAGCCTGAAGGCCTCGGACACCGCCATGTATTACTGTGCGAGAGGATGGGTTTATCGGGGCTTCCCTTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA (SEQ ID NO: 579)
VL CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTCGCTCAGTGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCAGTCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGATGTTGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGATGTCAGTAAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCTGCTCATATGCAGGCAGCTACACTTTGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID NO: 580)
VH 以及 VL 的胺基酸序列
FM 7B VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYAMHWVRQAPGQRLEWMGWINTGNGNTKYSQKFQGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDPTYCSSTSCYPFSWFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1)
VL NFMLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSTGDHSWVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 2)
FD 8B VH EVQLLESGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTLTELSMHWVRQAPGKGLEWMGGFDPEDGETIYAQKFQGRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCATAAAINCSSTSCYYYYYYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 3)
VL DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSQSLVHSDGNTYLSWLQQRPGQPPRLLIYKISSRFSGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCTQATQFPYTFGQGTKVDIK (SEQ ID NO: 4)
EW 9B VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDGVVPAANLMISLEDYYYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 5)
VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGGGTKVDIK (SEQ ID NO: 6)
FN 12A VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGCSSTSCPSNLYYYYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 7)
VL QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSALVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 8)
FG 12C VH EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGSIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKDMRVHDYGDYYFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 9)
VL SYELTQPPSVSVAPGKTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVIYYDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHPVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 10)
FI 1C VH EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRSNRFLIAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO:11)
VL QSALTQPASVSGSPGQTITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTLVVFGGGTKLTVP (SEQ ID NO: 12)
FI 4A VH EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRFSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSGSYIYFADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAIYYCATYLFGDSHTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 13)
VL QSVLTQPHSVSESPGKTVTISCTGSSGSIASNYVQWYQQRPGSAPTTVIYEDNQRPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQSYDSSNLHWVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 14)
FD 1E VH EVQLLESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASLAAAGPETYYYYGMDVWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 15)
VL SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYACWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSVVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 16)
FD 11E VH EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASLAAAGPETYYYYGMDVWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 17)
VL SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYACWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSVVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 18)
FN 2C VH EVQLLESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFNFNNYGMHWVRQAPGKGLEWVATISYEGSKKFYVDSVKGRFTISKDNSKNTLYLQMNSLRVDDTAFYYCAKRREIFWLGEPPLSDAFDFWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 19)
VL QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSGSNIGAGYDVHWYQFLPGTAPQLLIYGNNNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGSVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 20)
EY 6A VH EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASAFTFSSYDMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDGGKLWVYYFDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 21)
VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTLALTFGGGTKVDIK (SEQ ID NO: 22)
EY 6A-1* VH EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASAFTFSSYDMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDGGKLWVYYFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:23)
VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTLALTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 24)
FD 11D VH EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKEGAGSGWYRHHKPGYYFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 25)
VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPLTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 26)
EW 9C VH EVQLVESGGGVVQPGASLRLSCVASGFTFNNFGFHWVRQAPGKGLEWLAVISYEGSKTYYAESLKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARATSIFWFGEGRNWFDPWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 27)
VL EIVLTQSPGTVSLSAGERATLSCRASQNVGTDLAWYVQRPGQAPRLLIYDTSNKATGIPARFSGRGSGTDFTLTIDSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGGGTKVEIR (SEQ ID NO: 28)
EW 9C-1* VH EVQLVESGGGVVQPGASLRLSCVASGFTFNNFGFHWVRQAPGKGLEWLAVISYEGSKTYYAESLKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARATSIFWFGEGRNWFDPWGQGALVTVSS (SEQ ID NO: 29)
VL EIVMTQSPGTVSLSAGERATLSCRASQNVGTDLAWYVQRPGQAPRLLIYDTSNRATGIPARFSGRGSGTDFTLTIDSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 30)
FD 1D VH EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAGSGSYLNWFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 31)
VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPITFGQGTRLEIK (SEQ ID NO: 32)
FG 7A VH EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSHSGSYRASLDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 33)
VL DIQLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPLYTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 34)
FM 1A VH EVQLLESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGAVGATRGFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 35)
VL SYELTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDQGVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 36)
FD 11A VH EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKGPDILTGYYNYYYYGMDVWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 37)
VL QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGFYVVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 38)
FN 8C VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARERTYYDILTGYRHYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 39)
VL SYELTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHWVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 40)
FD 5E VH EVQLVESGGVVVQPGGSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSLISWDGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKDSVRFRYYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 41)
VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGPGTKVDIK (SEQ ID NO: 42)
FD 5D VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSYISSSSSTIYYADPVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPGGITAAGTSVLFGYYGMDVWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 43)
VL DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPITWTFGQGTKVDIK (SEQ ID NO: 44)
FI 3A VH EVQLLESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTVSSNYMSWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDHVRPGMNIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 45)
VL AIRMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYDNLPVTFGGGTKVDIK (SEQ ID NO: 46)
FD 10A VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMHWVRQAPGKGLVWVSRINSDGSSTSYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCANMAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 47)
VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPITFGQGTRLEIK (SEQ ID NO: 48)
FJ 4E VH QVQLVESGPGLVKPSETLSLTCSVSGGSISSGTYYWSWIRQQPGKGLEWIGYIYNTGRPYYNPFLKSRITISVDSSKNQFSLKLTSVTAADTAVYYCARDEYDSSDSGIQGHWFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 49)
VL AIRMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQNINSFLNWYQQKPGKGPNLLIYGAFTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQQSYSTPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 50)
FJ 1C VH QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGYSISSGYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYHSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDKALLWFGELFTNLFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 51)
VL QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEANYYCSSYTSSSTLVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 52)
EW 8B VH VQLVQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSGYYWGWIRQPPGKGLEWIANFYFTGSVYSNPSLKSRVTISVDTSKNQLSLKLSYLTAADTAVYYCARQEVWGGFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 53)
VL EIVLTQSPGTLSLSPGERVTLSCRASQSLGSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYFCQQYGSSPTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 54)
FD 11C VH EVQLLESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREYYYGSETKKYYYYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 55)
VL SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYACWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 56)
FD 7C VH QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDYRFGELFGRFAWFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 57)
VL DIQLTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPRAFGPGTKVEIR (SEQ ID NO: 58)
FD 7D VH EVQLVESGAEVKKPGESLRISCKGSGYSFTSYWISWVRQMPGKGLEWMGRIDPSDSYTNYSPSFQGHVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARHSDCSSTSCYFVDAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 59)
VL SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPKQYAYWYQQKPGQAPVLVIYKDSERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADSSGTYVVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 60)
FJ 10B VH QVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYSFTSYWISWVRQMPGKGLEWMGRIDPSDSYTNYSPSFQGHVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARLDPRYGPDYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 61)
VL AIRMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIHAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTMSSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTFGGGTKVEIR (SEQ ID NO: 62)
FB 9D VH QVQLVESGAEVKKPGESLKISCQGSGYRFNSYWIAWVRQMPGKGLEWMGSIFPTDSDVRYNPSFQGQVTISADKSISFAYLQWSSLKASDTAIYYCARHWASMVRGVIRASHYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 63)
VL QPVLTQPPSASGSPGQSVTISCSGASSDIGKYNYVSWYQQLPGKAPKLLIYEVTKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQADDEADYYCSSYAFGGSDTRVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 64)
FB 1E VH EVQLVESGAEVKKPGESLKISCQGSGYRFNSYWIAWVRQMPGKGLEWMGSIFPTDSDIRYNPSFQGQVTISADKSISIAYLQWSSLKASDTAIYYCARHWASMVRGVIRASHYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 65)
VL QSVLTQPPSASGSPGQSVTISCSGASSDIGDYNYVSWYQQLPGKAPKLLIYEVTKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQADDEADYYCSSYAFGGSDIRVFGGGTKLAVL (SEQ ID NO: 66)
EZ 7A VH EVQLVESGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARGWVYRGFPYYGMDVWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 67)
VL QSALTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCCSYAGSYTLVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 68)
* EY 6A及EW 9C都有一對額外的表現載體。
表4 SARS-CoV-2棘蛋白反應性人類單株抗體重鏈可變區以及輕鏈可變區互補決定區(CDRs)的胺基酸序列。
單株抗體 重鏈 CDR1 (HCDR1) 重鏈 CDR2 (HCDR2) 重鏈 CDR3 (HCDR3) 輕鏈 CDR1 (LCDR1) 輕鏈 CDR2 (LCDR2) 輕鏈 CDR3 (LCDR3)
FM 7B GYTFTSYA (SEQ ID No: 69) INTGNGNT (SEQ ID No: 70) ARDPTYCSSTSCYPFSWFDP (SEQ ID No: 71) NIGSKS (SEQ ID No: 72) DDS (SEQ ID No: 73) QVWDSTGDHSWV (SEQ ID No: 74)
FD 8B GYTLTELS (SEQ ID No: 75) FDPEDGET (SEQ ID No: 76) ATAAAINCSSTSCYYYYYYYGMDV (SEQ ID No: 77) QSLVHSDGNTY (SEQ ID No: 78) KIS (SEQ ID No: 79) TQATQFPYT (SEQ ID No: 80)
EW 9B GYTFTSYY (SEQ ID No: 81) INPSGGST (SEQ ID No: 82) AREDGVVPAANLMISLEDYYYYGMDV (SEQ ID No: 83) QSVSSY (SEQ ID No: 84) DAS (SEQ ID No: 85) QQRSNWPLT (SEQ ID No: 86)
FN 12A GGTFSSYA (SEQ ID No: 87) IIPILGIA (SEQ ID No: 88) ARSGCSSTSCPSNLYYYYYGMDV (SEQ ID No: 89) SSNIGNNY (SEQ ID No: 90) DNN (SEQ ID No: 91) GTWDSSLSALV (SEQ ID No: 92)
FG 12C GFTFDDYA (SEQ ID No: 93) ISWNSGSI (SEQ ID No: 94) AKDMRVHDYGDYYFDY (SEQ ID No: 95) NIGSKS (SEQ ID No: 96) YDS (SEQ ID No: 97) QVWDSSSDHPV (SEQ ID No: 98)
FI 1C GFTFSDYY (SEQ ID No: 99) ISSSGSTI (SEQ ID No: 100) ARRSNRFLIAFDI (SEQ ID No: 101) SSDVGGYNY (SEQ ID No: 102) EVS (SEQ ID No: 103) SSYTSSSTLVV (SEQ ID No: 104)
FI 4A GFTFSRFS (SEQ ID No: 105) ISSSGSYI (SEQ ID No: 106) ATYLFGDSHTY (SEQ ID No: 107) SGSIASNY (SEQ ID No: 108) EDN (SEQ ID No: 109) QSYDSSNLHWV (SEQ ID No: 110)
FD 1E GFTFSSYS (SEQ ID No: 111) ISSSSSYI (SEQ ID No: 112) ASLAAAGPETYYYYGMDV (SEQ ID No: 113) KLGDKY (SEQ ID No: 114) QDS (SEQ ID No: 115) QAWDSSVV (SEQ ID No: 116)
FD 11E GFTFSSYS (SEQ ID No: 117) ISSSSSYI (SEQ ID No: 118) ASLAAAGPETYYYYGMDV (SEQ ID No: 119) KLGDKY (SEQ ID No: 120) QDS (SEQ ID No: 121) QAWDSSVV (SEQ ID No: 122)
FN 2C GFNFNNYG (SEQ ID No: 123) ISYEGSKK (SEQ ID No: 124) AKRREIFWLGEPPLSDAFDF (SEQ ID No: 125) GSNIGAGYD (SEQ ID No: 126) GNN (SEQ ID No: 127) QSYDSSLSGSV (SEQ ID No: 128)
EY 6A AFTFSSYD (SEQ ID No: 129) ISYDGSNK (SEQ ID No: 130) AKDGGKLWVYYFDY (SEQ ID No: 131) QSISSY (SEQ ID No: 132) AAS (SEQ ID No: 133) QQSYSTLALT (SEQ ID No: 134)
EY 6A-1* AFTFSSYD (SEQ ID No: 135) ISYDGSNK (SEQ ID No: 136) AKDGGKLWVYYFDY (SEQ ID No: 137) QSISSY (SEQ ID No: 138) AAS (SEQ ID No: 139) QQSYSTLALT (SEQ ID No: 140)
FD 11D GFTFSSYG (SEQ ID No: 141) ISYDGSNK (SEQ ID No: 142) AKEGAGSGWYRHHKPGYYFDY (SEQ ID No: 143) QSVSSSY (SEQ ID No:144) GAS (SEQ ID No: 145) QQYGSSPLT (SEQ ID No: 146)
EW 9C GFTFNNFG (SEQ ID No: 147) ISYEGSKT (SEQ ID No: 148) ARATSIFWFGEGRNWFDP (SEQ ID No: 149) QNVGTD (SEQ ID No: 150) DTS (SEQ ID No: 151) QQRSNWPLT (SEQ ID No: 152)
EW 9C-1* GFTFNNFG (SEQ ID No: 153) ISYEGSKT (SEQ ID No: 154) ARATSIFWFGEGRNWFDP (SEQ ID No: 155) QNVGTD (SEQ ID No: 156) DTS (SEQ ID No: 157) QQRSNWPLT (SEQ ID No: 158)
FD 1D GFTFSSYA (SEQ ID No: 159) ISYDGSNK (SEQ ID No: 160) ARAGSGSYLNWFDP (SEQ ID No: 161) QSVSSY (SEQ ID No: 162) DAS (SEQ ID No: 163) QQRSNWPIT (SEQ ID No: 164)
FG 7A GFTFSSYA (SEQ ID No: 165) ISYDGSNK (SEQ ID No: 166) ARSHSGSYRASLDY (SEQ ID No: 167) QSVSSSY (SEQ ID No: 168) GAS (SEQ ID No: 169) QQYGSSPLYT (SEQ ID No: 170)
FM 1A GFTFSSYG (SEQ ID No: 171) IWYDGSNK (SEQ ID No: 172) AREGAVGATRGFDY (SEQ ID No: 173) NIGSKS (SEQ ID No: 174) DDS (SEQ ID No: 175) QVWDSSSDQGV (SEQ ID No: 176)
FD 11A GFTFSSYG (SEQ ID No: 177) IWYDGSNK (SEQ ID No: 178) AKGPDILTGYYNYYYYGMDV (SEQ ID No: 179) SSNIGAGYD (SEQ ID No: 180) GNS (SEQ ID No: 181) QSYDSSLSGFYVV (SEQ ID No: 182)
FN 8C GFTFSSYG (SEQ ID No: 183) ISYDGSNK (SEQ ID No: 184) ARERTYYDILTGYRHYYGMDV (SEQ ID No: 185) NIGSKS (SEQ ID No: 186) DDS (SEQ ID No: 187) QVWDSSSDHWV (SEQ ID No: 188)
FD 5E GFTFDDYA (SEQ ID No: 189) ISWDGGST (SEQ ID No: 190) AKDSVRFRYYYGMDV (SEQ ID No: 191) QSVSSY (SEQ ID No: 192) DAS (SEQ ID No: 193) QQRSNWPLT (SEQ ID No: 194)
FD 5D GFTFSSYS (SEQ ID No: 195) ISSSSSTI (SEQ ID No: 196) ASPGGITAAGTSVLFGYYGMDV (SEQ ID No: 197) QSLLHSNGYNY (SEQ ID No: 198) LGS (SEQ ID No: 199) MQALQTPITWT (SEQ ID No: 200)
FI 3A GFTVSSNY (SEQ ID No: 201) IYSGGST (SEQ ID No: 202) ARDHVRPGMNI (SEQ ID No: 203) QDISNY (SEQ ID No: 204) DAS (SEQ ID No: 205) QQYDNLPVT (SEQ ID No: 206)
FD 10A GFTFSSYW (SEQ ID No: 207) INSDGSST (SEQ ID No: 208) ANMAFDI (SEQ ID No: 209) QSVLYSSNNKNY (SEQ ID No: 210) WAS (SEQ ID No: 211) QQYYSTPIT (SEQ ID No: 212)
FJ 4E GGSISSGTYY (SEQ ID No: 213) IYNTGRP (SEQ ID No: 214) ARDEYDSSDSGIQGHWFDP (SEQ ID No: 215) QNINSF (SEQ ID No: 216) GAF (SEQ ID No: 217) QQSYSTPWT (SEQ ID No: 218)
FJ 1C GYSISSGYY (SEQ ID No: 219) IYHSGST (SEQ ID No: 220) ARDKALLWFGELFTNLFDY (SEQ ID No: 221) SSDVGGYNY (SEQ ID No: 222) EVS (SEQ ID No: 223) SSYTSSSTLV (SEQ ID No: 224)
EW 8B GGSISSSGYY (SEQ ID No: 225) FYFTGSV (SEQ ID No: 226) ARQEVWGGFDI (SEQ ID No: 227) QSLGSSY (SEQ ID No: 228) GAS (SEQ ID No: 229) QQYGSSPT (SEQ ID No: 230)
FD 11C GGSISSSSYY (SEQ ID No: 231) IYYSGST (SEQ ID No: 232) AREYYYGSETKKYYYYYGMDV (SEQ ID No: 233) KLGDKY (SEQ ID No: 234) QDS (SEQ ID No: 235) QAWDSSTV (SEQ ID No: 236)
FD 7C GGSISSYY (SEQ ID No: 237) IYYSGST (SEQ ID No: 238) ARDYRFGELFGRFAWFDP (SEQ ID No: 239) QSVSSN (SEQ ID No: 240) GAS (SEQ ID No: 241) QQYNNWPRA (SEQ ID No: 242)
FD 7D GYSFTSYW (SEQ ID No: 243) IDPSDSYT (SEQ ID No: 244) ARHSDCSSTSCYFVDAFDI (SEQ ID No: 245) ALPKQY (SEQ ID No: 246) KDS (SEQ ID No: 247) QSADSSGTYVV (SEQ ID No: 248)
FJ 10B GYSFTSYW (SEQ ID No: 249) IDPSDSYT (SEQ ID No: 250) ARLDPRYGPDYYGMDV (SEQ ID No: 251) QSISSY (SEQ ID No: 252) AAS (SEQ ID No: 253) QQSYSTPLT (SEQ ID No: 254)
FB 9D GYRFNSYW (SEQ ID No: 255) IFPTDSDV (SEQ ID No: 256) ARHWASMVRGVIRASHYYGMDV (SEQ ID No: 257) SSDIGKYNY (SEQ ID No: 258) EVT (SEQ ID No: 259) SSYAFGGSDTRV (SEQ ID No: 260)
FB 1E GYRFNSYW (SEQ ID No: 261) IFPTDSDI (SEQ ID No: 262) ARHWASMVRGVIRASHYYGMDV (SEQ ID No: 263) SSDIGDYNY (SEQ ID No: 264) EVT (SEQ ID No: 265) SSYAFGGSDIRV (SEQ ID No: 266)
EZ 7A GYSFTSYW (SEQ ID No: 267) IYPGDSDT (SEQ ID No: 268) ARGWVYRGFPYYGMDV (SEQ ID No: 269) SSDVGGYNY (SEQ ID No: 270) DVS (SEQ ID No: 271) CSYAGSYTLV (SEQ ID No: 272)
* EY 6A及EW 9C都有一對額外的表現載體。
表5及表6顯示，SARS-CoV-2核鞘反應性單株抗體可能至少係從32個株群(clonal group)發展而來的，這些株群可以其重鏈VDJ重組內容(VDJ rearrangement)以及輕鏈VJ重組內容(VJ rearrangement)所定義。它們的平均核苷酸體細胞突變(somatic mutation)在重鏈可變區為22±30個突變，在輕鏈可變區為13±18個突變。
表6所示為32株SARS-CoV-2核鞘反應性單株抗體的重鏈可變區以及輕鏈可變區的核苷酸及胺基酸序列。表7所示為SARS-CoV-2核鞘反應性人類單株抗體的重鏈可變區以及輕鏈可變區的互補決定區(CDRs)的胺基酸序列。
透過免疫螢光分析，SARS-CoV-2核鞘反應性抗體EW 4C、EY 2A以及EY 3B可結合於以多聚甲醛固定並以Triton X-100穿孔的感染SARS-CoV-2的細胞。
表5 SARS-CoV-2核鞘反應性人類單株抗體重鏈與輕鏈可變結構域的基因使用情況。
單株抗體 H-L VH JH DH rf VH 連接序列 Mut # aa Sub VL JL VL 連接序列 Mut # aa Sub
EZ 9B H-
Figure 02_image007
 1-2*06 F 5*02 F 4-17*01 F 3 CAREGPTVTWWFDPW 0 0 3-21*02 F 3*02 F CQVWDSSSDHPSWVF 0 0
EZ 11C H-
Figure 02_image007
 1-24*01 F 5*02 F 4-17*01 F 3 CATTTVTTPTANWFDPW 0 0 1-51*02 F 2*01或3*01 F CGTWDSSLRQVVF 3 1
FD 9B H-
Figure 02_image007
 3-7*01 F 2*01 F 2-21*01 F 1 CVKFGRSEGLFW 21 17 7-46*01 F 2*01或3*01或3*02 F CFLTYVGARRLF 6 4
EZ 11A H-
Figure 02_image007
 3-7*01 F 4*02 F 1-26*01 F 3 CARDDYSGSYYWEFDYW 0 0 4-69*01 F 3*02 F CQTWGTGIWVF 0 0
EW 10C H-
Figure 02_image009
 3-7*03 F 4*02 F 4-23*01 ORF 1 CARGRTLGDW 25 15 2-30*02 F 3*01 F CMQGTHWPPITF 3 1
EY 12B H-
Figure 02_image007
 3-9*01 F 3*01 F 5-12*01 F 3 CAKGRSGYGHTAFDVW 16 11 1-40*01或02 F 2*01或3*01 F CQSYDSSLSASVF 9 6
EZ 8C H-
Figure 02_image007
 3-21*01 F 3*02 F 5-18*01 F 3 CARELTSYGSHDAFDIW 15 9 2-14*01 F 2*01或3*01 F CSSYTTTDSVVF 11 6
EY 9C H-
Figure 02_image007
 3-21*01 F 4*03 F 2-21*01 F 2 CATWGGAPFDYW 12 9 2-23*01或02或03 F 2*01或3*01 F CCSYAGGRTFNVLF 12 10
EZ 8B H-
Figure 02_image007
 3-23*04 F 5*01或02 F 3-16*01 F 2 CAKDLGYYGSGSSW 4 2 3-1*01 F 3*02 F CQAWDSSTAVF 0 0
FD 3E H-
Figure 02_image009
 3-30*03或18或3-30-5*01 F 6*02 F 3-10*01 F 2 CAKDPHYYGSGSYYNQLRGYYYYGMDVW 1 1 2-29*02 F 4*01 F CMQGIHLP#TF 0 0
EW 1A H-
Figure 02_image007
 3-33*01或06 F 3*01 F 6-13*01 F 3 CARDGQHLAPFAMDVW 32 17 2-14*01 F 3*02 F CNSFVSGDSWVF 27 17
FD 5B H-
Figure 02_image007
 3-33*01或06 F 4*02 F 5-24*01 ORF 3 CARDERRESYNFVLDYW 6 3 2-8*01 F 1*01 F CSSYAGSNNPFVF 1 1
EW 9A H-
Figure 02_image007
 3-33*01或06 F 6*02 F 3-9*01 F 2 CAKDMWALYDILTGYYTPYYYYGMDVW 1 1 3-25*03 F 3*02 F CQSADSSGTYWVF 1 1
FD 8C H-
Figure 02_image009
 3-49*05 F 4*02 F 3-3*01 F 2 CTRNDFWSGYYPDYW 0 0 2-30*02 F 4*01 F CMQGTHWP#LTF 0 0
EW 5A H-
Figure 02_image007
 3-64*05或3-64D*06 F 2*01 F 3-3*01 F 2 CVKDRGSVIRDFDVW 37 23 7-43*01 F 2*01或3*01或3*02 F CLLYCGGGQLF 21 13
EZ 9C H-
Figure 02_image007
 3-64D*06 F 4*02 F 6-19*01 F 1 CGKGLLSASGGLPIDDW 34 20 1-51*01 F 3*02 F CATWDSSLSAGVF 5 3
EZ 9A H-
Figure 02_image007
 3-74*01 F 4*02 F 4-11*01 ORF 2 CARDVNRYPDYW 29 18 2-14*01 F 3*02 F CCSYVNNGAWVF 28 13
EY 12A H-
Figure 02_image007
 4-30-4*01 F 2*01 F 3-9*01 F 2 CARGMTQDDILTGFNRPHWYFDLW 22 12 1-40*01 F 2*01或3*01 F CQSFDSSLSDFVVF 8 6
FD 4E H-
Figure 02_image007
 4-31*03 F 4*02 F 1-26*01 F 3 CARGRGSYLAGGNYYFDYW 0 0 6-57*01 F 3*02 F CQSYDSSN#VF 2 2
FD 4C H-
Figure 02_image007
 4-31*03 F 4*02 F 6-13*01 F 1 CARVRSSSSWYFDYW 2 1 2-14*01 F 3*02 F CSSYTSKWVF 4 2
EW 4C H-
Figure 02_image007
 4-38-2*02 F 1*01 F 3-16*01 F 2 CVRGTYGSGLHW 49 24 7-46*01 F 3*02 F CFLSHNDAWVF 17 12
FD 6D H-
Figure 02_image009
 4-38-2*02 F 3*01或02 F 3-22*01 F 2 CARDRLLAVHYDSRGYLVDYW 22 10 4-1*01 F 1*01 F CQQYYDIPRTF 12 6
EY 5A H-
Figure 02_image007
 4-59*01 F 4*02 F 4-23*01 ORF 3 CARGPGPATGGSLDYW 23 16 1-44*01 F 7*01 F CSAWDDSLNGPVF 7 5
EZ 7B H-
Figure 02_image009
 4-59*13 F 3*02 F 1-26*01 F 3 CARRVFGPVLPSKLGGSYWGGGAFDIW 1 1 4-1*01 F 3*01 F CQQYYSTPLTF 0 0
EZ 4C-1 H-
Figure 02_image009
 4-61*01或03 F 4*02 F 3-3*01 F 1 CARAPSAPFGGLFDWILPKGINNW 24 15 1-5*03 F 2*03 F CQQYNGYSYSF 17 8
EZ 4C-2 H-
Figure 02_image007
 4-61*01或03 F 4*02 F 3-3*01 F 1 CARAPSAPFGGLFDWILPKGIDNW 22 13 1-41*01 ORF 3*02 F C*IA*HSSPR#WVF (2nd-CYS 104 not identified) 14 8
FD 4B H-
Figure 02_image007
 4-61*01或03 F 5*02 F 3-3*01 F 1 CARAPSAPFGGLFDWILPKGIDSW 24 13 1-41*01 ORF 3*02 F C*IA*HSSPR#WVF (2nd-CYS 104 not identified) 14 8
EY 8A H-
Figure 02_image007
 4-61*02 F 6*02 F 5-12*01 F 3 CAKGHVISGYDDYYYYYGMDVW 1 1 3-25*03 F 3*02 F CQSADSSGTYWVF 0 0
EY 2A H-
Figure 02_image009
 5-51*01 F 4*02 F 6-13*01 F 1 CVRQERGSNTWYAGNSW 44 22 2-28*01或2D-28*01 F 2*02 F CMQALQTPGTF 14 7
EY 3B H-
Figure 02_image009
 5-51*01 F 4*02 F 6-13*01 F 1 CVRQERGSNTWYAGNSW 41 21 2-28*01或2D-28*01 F 2*02 F CMQALQTPGTF 13 7
EZ 4A H-
Figure 02_image009
 5-51*01 F 4*02 F 6-13*01 F 2 CARSPIAADLFDYW 0 0 1-33*01或1D-33*01 F 3*01 F CQQYDNLLFTF 0 0
EZ 8B H-
Figure 02_image009
 3-23*04 F 5*01或02 F 3-16*01 F 2 CAKDLGYYGSGSSW 4 2 3-7*04 ORF 1*01 F CQQDYNS#TF 1 1
縮寫：H，重鏈；K，kappa；
Figure 02_image011
，lambda；VH ，重鏈可變結構域的可變基因片段；DH ，重鏈可變結構域的多樣性基因片段；JH ，連接重鏈可變結構域的基因片段；Mut，核苷酸突變的數量；Sub，胺基酸取代的數量；VL ，輕鏈可變結構域的可變基因片段；JL ，連接輕鏈可變結構域的基因片段。
表6 該30株SARS-CoV-2核鞘反應性人類單株抗體的重鏈可變區(VH )以及輕鏈可變區(VL )的核苷酸與胺基酸序列。
VH 以及 VL 的核苷酸序列
EZ 9B VH GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCGGCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGACGGATCAACCCTAACAGTGGTGGCACAAACTATGCACAGAAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAGGGGCCTACGGTGACTTGGTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID No: 581)
VL TCCTATGAGCTGACACAGCCACCCTCGGTGTCAGTGGCCCCAGGACAGACGGCCAGGATTACCTGTGGGGGAAACAACATTGGAAGTAAAAGTGTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTCGTCTATGATGATAGCGACCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCAGGGTCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTACTGTCAGGTGTGGGATAGTAGTAGTGATCATCCTTCTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID No: 582)
EZ 11C VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGTTTCCGGATACACCCTCACTGAATTATCCATGCACTGGGTGCGACAGGCTCCTGGAAAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGTTTTGATCCTGAAGATGGTGAAACAATCTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCGAGGACACATCTACAGACACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCAACAACTACGGTGACTACCCCAACCGCAAACTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID No: 583)
VL CAGTCTGCCCTGACTCAGCCGCCCTCAGTGTCTGCGGCCCCAGGACAGAAGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATCTATGAAAATAATAAGCGACCCTCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTCAGCCACCCTGGGCATCACCGGACTCCAGACTGGGGACGAGGCCGATTATTACTGCGGAACATGGGATAGCAGCCTGCGTCAGGTAGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID No: 584)
FD 9B VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGGCACTGGATTCAGCTTTAGTAGATATTGGATGAATTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCCAACATGGACCCAGATGGAGGTGCGAAATACTATCTGGACTCTGTGAAGGGGCGATTCACCATCTCCGGAGACAACGCCAAGAACTCATTGTATCTGCAAATGAACAGACTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGTCAAATTCGGGCGGTCGGAAGGCTTGTTTTGGGGCCGTGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID No: 585)
VL CAGGCTGTGGTGACCCAGGAGCCCTCACTGACTGTGTCCCCAGGAGGGACAGTCACTCTCACCTGTGGCTCCAGCACTGGAGCTGTCACCAGTGGTCATTATCCCTACTGGTTCCAGCAGAAGCCTGGCCAAGCCCCCAGGACACTGATTTATGATACAAGCAACAAACACTCCTGGACACCTGCCCGATTCTCAGGCTCCCTCCTTGGGGGCAAAGCTGCCCTGACCCTTTCGGGTGCGCAGCCTGAGGATGAGGCTGACTATTACTGCTTCCTCACCTATGTTGGTGCTCGGAGGTTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID No: 586)
EZ 11A VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTAGCTATTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCCAACATAAAGCAAGATGGAAGTGAGAAATACTATGTGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGATGACTATAGTGGGAGCTACTATTGGGAATTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID No: 587)
VL CAGCCTGTGCTGACTCAATCGCCCTCTGCCTCTGCCTCCCTGGGAGCCTCGGTCAAGCTCACCTGCACTCTGAGCAGTGGGCACAGCAGCTACGCCATCGCATGGCATCAGCAGCAGCCAGAGAAGGGCCCTCGGTACTTGATGAAGCTTAACAGTGATGGCAGCCACAGCAAGGGGGACGGGATCCCTGATCGCTTCTCAGGCTCCAGCTCTGGGGCTGAGCGCTACCTCACCATCTCCAGCCTCCAGTCTGAGGATGAGGCTGACTATTACTGTCAGACCTGGGGCACTGGCATTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID No: 588)
EW 10C VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCGGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAACAAGTACAAGATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCCAACATAAAGGAAGATGGAAGTGAGAAAAACTATGTGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAGGAACTCAGTATATATGCACCTGAACAACTTGAGAGTCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGGCGGACCCTCGGCGACTGGGGCCAGGGAACCACGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID No: 589)
VL GCCATCCGGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCTTGGACAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTCAAAGCCTCGTGCACAGTGATGGAAACACCTACTTGAATTGGTTTCAGCAGAGGCCAGGCCAATCTCCAAGGCGCCTAATTTATAAGGTTTCTAACCGGGACTCTGGGGCCCCAGACAGATTCAGCGGCAGTGGGTCAGGCACTGATTTCACACTGAAAATCAGCAGGGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTATTGCATGCAAGGTACACACTGGCCTCCGATTACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA (SEQ ID No: 590)
EY 12B VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGGGGAGACTTGGTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTGATTATTTTGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGTTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTCGTTGGAATAGTGAAACCATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAAATCACTGTATCTGGAAATGAACAGTCTGAGAAGTGAGGACACGGCCTTCTATTACTGTGCAAAAGGTCGGAGTGGCTACGGCCACACTGCTTTTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA (SEQ ID No: 591)
VL CAGTCTGCCCTGACTCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCACTGGGAGCAGCTCCAACATCGGGGCAAATTATGATGTACACTGGTATCAGCGGCTTCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATCTATGATAACAACAATCGGCCCTCGGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCGCTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCCAGTCCTATGACAGCAGCCTGAGTGCTTCAGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID No: 592)
EZ 8C VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTTCCTATACCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCTTTATTGCTAATAGTGATTACAAGTTCTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAGCTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGAACTAACCAGTTATGGTTCCCACGATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA (SEQ ID No: 593)
VL CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAACACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCTTGATTTATGAGGTCACTAATCGGCCCTCAGGGGTTTCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGCCAATGTGGCGTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATACAACCACCGACTCCGTGGTTTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID No: 594)
EY 9C VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGAATTCACCTTCAGTAGCTATACCTTGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTACTAGTAGTGCTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAAGTCACTGTCTCTGCAAATGAACAGCCTGACAGCCGAGGACACGGCTGTCTATTACTGTGCGACTTGGGGCGGTGCCCCCTTTGACTACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCA (SEQ ID No: 595)
VL CAGTCTGTGCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACGGTCGATCACCATCTCCTGCACTGAAACCAGCAGTGATGTTGGGACTTATAACCTTGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTTTGACGACAATAAGCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACAATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCTGCTCATATGCAGGTGGTAGGACCTTCAATGTGCTATTCGGCGGCGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID No: 596)
EZ 8B VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAAGATCTGGGGTACTATGGTTCGGGGAGTTCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID No: 597)
VL TCCTATGAGCTGACTCAGCCACCCTCAGTGTCCGTGTCCCCAGGACAGACAGCCAGCATCACCTGCTCTGGAGATAAATTGGGGGATAAATATGCTTGCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCCAGTCCCCTGTGCTGGTCATCTATCAAGATAGCAAGCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACAGCCACTCTGACCATCAGCGGGACCCAGGCTATGGATGAGGCTGACTATTACTGTCAGGCGTGGGACAGCAGCACTGCGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID No: 598)
FD 3E VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAAAGATCCCCATTACTATGGTTCGGGGAGTTATTATAACCAGCTGAGGGGATACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID No: 599)
VL GATATTGTGATGACCCAGACTCCACTCTCTCTGTCCGTCACCCCTGGACAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAAGTCTAGTCAGAGCCTCCTGCATAGTGATGGAAAGACCTATTTGTATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCACAGCTCCTAATCTATGAAGTTTCCAGCCGGTTCTCTGGAGTGCCAGATAGGTTCAGTGGCAGCGGGTCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAGCCGGGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCATGCAAGGTATACACCTTCCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGTGGAGATCAAA (SEQ ID No: 600)
EW 1A VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGTCGTCCCTGAGACTCTCCTGTGAAACGTCTGGTTTCACCTTCAGTGGACATGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGCTGGCACAAATCTGGTTCGATGGAAGTGAAAAATACTATGCAGATTCCGTGAAGGGTCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAAAATCCTATATATGCAAATGAACAGCCTGAGAGTCCAAGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGATGGGCAACATCTGGCACCTTTCGCTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA (SEQ ID No: 601)
VL CAGTCTGTGCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCAATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGCCTCTAACCGTGTTTCCTGGTACCAACACTCCCCAGGCGAAGCCCCCAAACTCATCATTTATCAGGTCACTGTTCGGCCCTCAGGGGTGTCTGATCGCTTCTCTGGCTCGAAGTCCGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCGGACTGAGGACGAGGCTGAATATTACTGCAACTCATTTGTAAGCGGTGACTCTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGACCGTCCTA (SEQ ID No: 602)
FD 5B VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATGGTATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTCTATTACTGTGCGAGAGATGAACGTAGAGAGTCCTACAATTTCGTGTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID No: 603)
VL CAGTCTGTGCTGACTCAGCCTCCCTCCGCGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCAGTCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGCTGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGAGGTCAGTAAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGCAGGCAGCAACAACCCCTTTGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGTCCTA (SEQ ID No: 604)
EW 9A VH GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATGGTATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAAAGATATGTGGGCCTTATACGATATTTTGACTGGTTATTATACACCCTACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID No: 605)
VL TCCTATGAGCTGACACAGCCACCCTCGGTGTCAGTGTCCCCAGGACAGACGGCCAGGATCACCTGCTCTGCAGATGCATTGCCAAAGCAATATGCTTATTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTGATATATAAAGACAGTGAGAGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAGCTCAGGGACAACAGTCACGTTGACCATCAGTGGAGTCCAGGCAGAAGACGAGGCTGACTATTACTGTCAATCAGCAGACAGCAGTGGTACTTATTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID No: 606)
FD 8C VH GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTAAAGCCAGGGCGGTCCCTGAGACTCTCCTGTACAGCTTCTGGATTCACCTTTGGTGATTATGCTATGAGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTAGGTTTCATTAGAAGCAAAGCTTATGGTGGGACAACAGAATACGCCGCGTCTGTGAAAGGCAGATTCACCATCTCAAGAGATGATTCCAAAAGCATCGCCTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAAACCGAGGACACAGCCGTGTATTACTGTACTAGGAACGATTTTTGGAGTGGTTATTATCCAGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID No: 607)
VL GATATTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCTTGGACAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTCAAAGCCTCGTACACAGTGATGGAAACACCTACTTGAATTGGTTTCAGCAGAGGCCAGGCCAATCTCCAAGGCGCCTAATTTATAAGGTTTCTAACCGGGACTCTGGGGTCCCAGACAGATTCAGCGGCAGTGGGTCAGGCACTGATTTCACACTGAAAATCAGCAGGGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCATGCAAGGTACACACTGGCCCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAAGTGGATATCAAAC (SEQ ID No: 608)
EW 5A VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCGGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGCGACTCTCCTGTTCAGTCTCTGGATTCCCCTTCGGAACATATGCTATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCCGGGAAGGGGCTAGATTATGTTTCAGCTATTAATAATGATGGGAGTATTACATACTACGCAGACTCAGTGAGGGGCAGATTCACCGTCTCCAGAGACAATTCCGAGAACACTCTATATCTTCGACTGAGCGGTCTGAGACCTGACGACACGGCTATCTATTATTGTGTGAAAGATCGGGGCTCCGTTATTCGGGACTTCGACGTCTGGGGCCGTGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID No: 609)
VL CAGACTGTGGTGACTCAGGAGCCCTCACTGACTGTCTCCCCAGGAGGGACAGTCACTCTCACCTGTGCTTCCAGTACTGGAACAGTCACCAGTGATTACTATCCAAACTGGTTCCAGCAGAAGCCTGGACAGGCACCCAGGCCTCTGATTTTCGGTACAGCCTACAGACACTCCTGGACCCCTGCCCGATTCTCAGGCTCCCTCCTTGGGGGCAAAGCTGCCCTGACAGTGTCAGATGTGCAGCCTGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCTGCTCTACTGTGGTGGTGGTCAGCTTTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID No: 610)
EZ 9C VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTTCAGCCTCTGGATTCACCCTCAATGGCTATGCTATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAAGGACTGGAGTATGTTTCAAGTCTTTCTAATCGTGGAGATAATACACGCTACGCAGAGTCCGTGAAGGGCAGATTCCTCATCTCCAGAGACATTGCCAAGGACACGCTTTATCTTCAGATGAGCAGTCTGAGACCTGAGGACACGGCTGTCTATTACTGTGGGAAAGGCCTTTTGTCTGCCAGTGGGGGATTGCCGATTGACGACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID No: 611)
VL CAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGCGGCCCCAGGACAGAAGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCTGGTACCAGCAGTTCCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATTTATGACAATAATAAGCGACCCTCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTCAGCCACCCTGGGCATTACCGGCCTCCAGACTGGGGACGAGGCCGCTTATTACTGCGCAACATGGGATAGCAGCCTGAGTGCTGGGGTGTTCGGCGGAGGGGCCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID No: 612)
EZ 9A VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGGGGAGGCTTAGTTCAGCCTGGGGAGTCACTGAGAGTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACTACTGGATGCACTGGGTCCGCCAAGTCCCAGGAAAGGGGCCGGTGTGGGTCTCAATTATTAATACTGATGGAAGTATCACAAGATATGTGGACTCCGTGAGGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACGGTGCATCTGCAAATGAACAGCCTGACAGCCGAGGACACGGCTATATATTATTGTGCAAGAGATGTCAATAGGTACCCTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID No: 613)
VL CAGTCTGCCCTGACTCAGCCCGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGGCAGTCGATCACCATTTCCTGCACTGGAACCTACAGTGACGTTGGTTATTATAACTATGTCTCCTGGTATCAACAACAGCCCGGCAAGGCCCCCAAAGTCATCATTCATGGGGACATTAATCGGCCCTTTGGAGTTTCTAATCGCTTTTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACAATCTCTGGGCTCCAGGCCGAGGACGAGGCTGATTATTTCTGCTGCTCATATGTAAATAATGGCGCTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGTTGACCGTCCTA (SEQ ID No: 614)
EY 12A VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCGGGCCCCGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCCGGTGGCTCCATCAGCAGTGGTGGTTACTACTGGAGTTGGATCCGCCAGCCCCCAGGAAAGGGCCTGGAGTTGATTGGGTACACCGATTACACTGGGAAGACCCTCTACAACCCATCCCTCAAGAGTCGACTTACCATATCAGTGGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGTTGAGGTCTGTGACTGCCGCAGACACGGCCGTCTATTACTGTGCCAGAGGGATGACGCAAGACGATATTTTGACTGGTTTTAATAGGCCTCACTGGTATTTCGATCTCTGGGGCCGTGGCAGTCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID No: 615)
VL CAGTCTGTGCTGACTCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCACTGGGAGCAGCTCCAACATCGGGGCAGGTTATGATGTACACTGGTACCAGCAGCTTCCAGGAACAGCCCCCAAAGTCGTCATCTATCGTAACATGAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCACTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCCAGTCCTTTGACAGCAGCCTGAGTGATTTTGTGGTTTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID No: 616)
FD 4C VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTGGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGATTGGGTACATCTATTACAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGCCGAGTTACCATATCAGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTCCGGTCTAGCAGCAGCTGGTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID No: 617)
VL CAGTCTGTGCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGATGTCAGTAAGCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATACAAGCAAATGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID No: 618)
EW 4C VH GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCGGGCCCAGGGCTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCAGTGTCTCTGCTGACTCCTTCAAAAAAGGTTACTATTGGGGCTGGATCCGGCAGCCCCCTGGGAAGGGATTGGAATCGATTGTCAATTCTTTTGATTCCGGGACCACCCGCTATAATCCGTCCCTCTGGGGTCGAGCCACCGTATCAGACATGTCCAAGTGGCACTTCTCCCTGAAGTTGACCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCCGTTTATTATTGTGTCCGGGGAACATATGGTTCGGGCCTTCACTGGGGCCAGGGAATCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID No: 619)
VL CAGACTGTGGTGACCCAGGAGCCCTCACTGACTGTGTCCCCAGGAGGGACAGTCACTCTCACTTGTGGCTCCAGCGTTGGAACTGTCGCCAGTGGTCATTATCCCTACTGGGTCCAGCAGAAGCCTGGCCAAGCCCCCAGGACACTGATTTATGATACAGACAACAAACAATCCTGGACCCCTGCCCGGTTCTCAGGCTCCCTCCTTGGGGGCAAGGCTGCCCTGACCCTTTCGGGTGCGCAGCCTGAGGATGAGGCTGACTATTACTGCTTTCTCTCCCATAATGATGCTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGTTGACCGTCCTT (SEQ ID No: 620)
FD 6D VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCGGGCCCGGGACTGGTGAAGGTTTCGGAGACCCTGTTCCTCACCTGCACTGTCTCTGGGTACTCCATCGGCAGTGGTAACTACTGGGGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGGTTCTGGAGTGGATTGGGAGTACTTACCACAGTGGGACCACCTACTACAATCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTTGACTCGTCCAAGAATCAGTTCTCCCTGAAGCTGACCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATCGGCTATTAGCTGTCCATTATGACAGCCGTGGTTATTTAGTTGACTACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA (SEQ ID No: 621)
VL GCCATCCGGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAGTCCAGCCAGAGTATTTTTTACAGCTCCAACAATAAGAACTATTTAGCTTGGTACCAGCACAAACCGGGACAGCCTCCTAAGCTCCTCATTTACTGGGCATCTACCCGGGAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCAATTTATTACTGTCAGCAATATTATGATATTCCTCGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAGA (SEQ ID No: 622)
EY 5A VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGGGACCCTGTTCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAATTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGGCACTAGAGTGGATTGGGTTTATTTATTCCAATGGGAACACTGATTACAACCCCTCCCTCCAGAGTCGAGTCACCATATCGGGAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAACCTGAGGTCTGTTACCGCTGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGGCCGGGGCCGGCTACGGGGGGTAGTCTTGACTACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA (SEQ ID No: 623)
VL AATTTTATGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAATAAATACTGTAAACTGGTACCAGCACCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAACCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCAGTCTGAGGATGAGGCTGATTATTATTGTTCAGCATGGGATGACAGCCTGAATGGTCCTGTGTTCGGAGGAGGCACCCAGCTGACCGTCCTC (SEQ ID No: 624)
EZ 7B VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCGAGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGCCCCCGGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGTATATCTATTACAGTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAAGGGTTTTCGGCCCCGTCCTCCCTTCCAAACTGGGTGGGAGCTACTGGGGGGGAGGTGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA (SEQ ID No: 625)
VL GACATCCAGTTGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAGTCCAGCCAGAGTGTTTTATACAGCTCCAACAATAAGAACTACTTAGCTTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGCCTCCTAAGCTGCTCATTTACTGGGCATCTACCCGGGAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAATATTATAGTACTCCCCTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAGGTGGAAATCAGA (SEQ ID No: 626)
EZ 4C kappa VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCGTCAGTAGTGGTAATAACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGGCACTGGAGTGGATTGGATATATCTATTACAGTGGGAGCACCAAGTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATGTCTGTAGGCACGTCCAAGAATCAATTCTCTCTGAAAGTGAACTCTGTGACGGCTGCGGACACGGCCATGTATTACTGTGCCAGAGCCCCCTCGGCTCCCTTTGGGGGACTTTTTGACTGGATATTACCTAAAGGGATTAACAACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID No: 627)
VL GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGACCAGTCAGAGTATTCGTAGCTGGTTGGCCTGGTATCAACAAAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTTTGAGGCATCTACTTTAGAAAGTGGGGTCCCAGAGAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGGCGGAATTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGTATAATGGTTATTCTTACAGTTTTGGCCAGGGGACCAAGGTGGAAATCAGA (SEQ ID No: 628)
EZ 4C lambda VH GTTCAGCTGGTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCGTCAGTAGTGGTAATAACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGGCACTGGAGTGGATTGGATATATCTATTACAGTGGGAGCACCAAGTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATGTCTGTAGACACGTCCAAGAATCAATTCTCTCTGAAAGTGAACTCTGTGACGGCTGCGGACACGGCCATGTATTACTGTGCCAGAGCCCCCTCGGCTCCCTTTGGGGGACTTTTTGACTGGATATTACCTAAAGGGATTGACAACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID No: 629)
VL CAGTCTGCCCTGACTCAGCCGCCTTCAGTGTCTGCCGCCCCAGGACAGAAGGTCACCATCTCCTACTCTGGAAACAGCTCCGACATGGGGACTTATGCGGTATCTTGGTAACAGCGACTCCCAGGAACAGCCCCCAAACTCTTCATCTGTGAAGAGAATAAGCGACCCCCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACTTCAGCCACCCTGGGCATCACTGGCCTCTGGCCTGAGGACGAGGCCGATTATTGCTAAATAGCATGACATAGCAGCCCGAGACTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAG (SEQ ID No: 630)
FD 4B VH CAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCGTCAGTAGTGGTAATAACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGGCACTGGAGTGGATTGGATATCTCTATTACAGTGGGAGCACCAAGTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATGTCTGTAGACACGTCCAAGAATCAATTCTCTCTGAAAGTGAACTCTGTGACGGCTGCGGACACGGCCATGTATTATTGTGCCAGAGCCCCCTCGGCTCCCTTTGGGGGACTTTTTGACTGGATATTACCTAAAGGGATTGACAGCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID No: 631)
VL CAGTCTGCCCTGACTCAGCCGCCTTCAGTGTCTGCCGCCCCAGGACAGAAGGTCACCATCTCCTACTCTGGAAACAGCTCCGACATGGGGACTTATGCGGTATCTTGGTAACAGCGACTCCCAGGAACAGCCCCCAAACTCTTCATCTGTGAAGAGAATAAGCGACCCCCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACTTCAGCCACCCTGGGCATCACTGGCCTCTGGCCTGAGGACGAGGCCGATTATTGCTAAATAGCATGACATAGCAGCCCGAGACTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAG (SEQ ID No: 632)
EY 8A VH GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTGGTAGTTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGCCCGCCGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGCGTATCTATACCAGTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAAAGGACATGTTATTAGTGGCTACGATGATTACTACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID No: 633)
VL TCCTATGAGCTGACTCAGCCACCCTCGGTGTCAGTGTCCCCAGGACAGACGGCCAGGATCACCTGCTCTGGAGATGCATTGCCAAAGCAATATGCTTATTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTGATATATAAAGACAGTGAGAGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAGCTCAGGGACAACAGTCACGTTGACCATCAGTGGAGTCCAGGCAGAAGACGAGGCTGACTATTACTGTCAATCAGCAGACAGCAGTGGTACTTATTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID No: 634)
EY 2A VH CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGAGCAGAGGTGACAAAGCCCGGGGACTCTCTGATAATCTCCTGTAAGGGCTCTGGATATGCATTTACTCAATACTGGATCGGCTGGGTGCGCCAGAAGCCCGGGAAAGGCCTGGAGTGGATGGCCATGGTTTATCCCGATTCCTCTGCCGTCTTTGCCGGTGGTGCCTCTGGCGTCAGATATAGGCCGCCCTTCCAAGGCCAGGTCACCATATCAGCCGACACGTCCGTCAACACCGCCTACCTGCAGTGGGACAGCCTGAAGGCCTCGGACACCGCCATGTACTATTGTGTAAGACAGGAACGTGGGAGCAATACTTGGTACGCGGGAAACTCCTGGGGCCAGGGAACTCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID No: 635)
VL GATATTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCAGCCCTGGAGAGCCGGCCTCCATCTCCTGTAGGTCTAGTCAGAGCCTCCTCCATACTGATGCATACAACTATTTGGATTGGTACCTGCAAAAGCCAGGGCAGTCTCCACAACTCCTGATCTATTTGGGTTCTACTCGGGCCTCCGGGGTGCCTGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACAGACTTTACACTGAAAATCAGTAGCGTGAAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCATGCAAGCTCTACAAACTCCGGGCACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA (SEQ ID No: 636)
EY 3B VH GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGAGCAGAGGTGACAAAGCCCGGGGAGTCTCTGATAATCTCCTGTAAGGGGTCTGGATATGCATTTACTCAATACTGGATCGGCTGGGTGCGCCAGAAGCCCGGGAAAGGCCTGGAGTGGATGGCCATGGTGTATCCCGATTCCTCTGCCGTCTTTGCCGGTGGTGCCTCTGGCGTCAGATATAGGCCGCCCTTCCAAGGCCAGGTCACCATCTCAGCCGACACGTCCGTCAACACCGCCTACCTGCAGTGGGACAGCCTGAAGGCCTCGGACACCGCCATGTACTATTGTGTAAGACAGGAACGTGGGAGCAACACTTGGTACGCGGGAAACTCCTGGGGCCAGGGAACTCTGGTCACCGTCTTCTCA (SEQ ID No: 637)
VL GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCAGCCCTGGAGAGCCGGCCTCCATCTCCTGTAGGTCTAGTCAGAGCCTCCTCCATACTGATGCATACAACTATTTGGATTGGTACCTGCAAAAGCCAGGGCAGTCTCCACAGCTCCTGATCTATTTGGGTTCTACTCGGGCCTCCGGGGTGCCTGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACAGACTTTACACTGAAAATCAGTAGCGTGAAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCATGCAAGCTCTACAAACTCCGGGCACTTTTGGCCAGGGGACCAAGGTGGAAATCAGA (SEQ ID No: 638)
EZ 4A VH GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCAGAGGTGAAAAAGCCCGGGGAGTCTCTGAAGATCTCCTGTAAGGGTTCTGGATACAGCTTTACCAGCTACTGGATCGGCTGGGTGCGCCAGATGCCCGGGAAAGGCCTGGAGTGGATGGGGATCATCTATCCTGGTGACTCTGATACCAGATACAGCCCGTCCTTCCAAGGCCAGGTCACCATCTCAGCCGACAAGTCCATCAGCACCGCCTACCTGCAGTGGAGCAGCCTGAAGGCCTCGGACACCGCCATGTATTACTGTGCGAGATCGCCTATAGCAGCAGACCTGTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID No: 639)
VL GACATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTAGCAACTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTACGATGCATCCAATTTGGAAACAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAACAGTATGATAATCTCTTATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAGGTGGAGATCAAA (SEQ ID No: 640)
VH 以及 VL 的胺基酸序列
EZ 9B VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGRINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAREGPTVTWWFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID No: 273)
VL SYELTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHPSWVFGGGTKLTVL (SEQ ID No: 274)
EZ 11C VH EVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTLTELSMHWVRQAPGKGLEWMGGFDPEDGETIYAQKFQGRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCATTTVTTPTANWFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID No: 275)
VL QSALTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYENNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLRQVVFGGGTKLTVL (SEQ ID No: 276)
FD 9B VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAGTGFSFSRYWMNWVRQAPGKGLEWVANMDPDGGAKYYLDSVKGRFTISGDNAKNSLYLQMNRLRAEDTAVYYCVKFGRSEGLFWGRGTLVTVSS (SEQ ID No: 277)
VL QAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGHYPYWFQQKPGQAPRTLIYDTSNKHSWTPARFSGSLLGGKAALTLSGAQPEDEADYYCFLTYVGARRLFGGGTKLTVL (SEQ ID No: 278)
EZ 11A VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDYSGSYYWEFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID No: 279)
VL QPVLTQSPSASASLGASVKLTCTLSSGHSSYAIAWHQQQPEKGPRYLMKLNSDGSHSKGDGIPDRFSGSSSGAERYLTISSLQSEDEADYYCQTWGTGIWVFGGGTKLTVL (SEQ ID No: 280)
EW 10C VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNKYKMTWVRQAPGKGLEWVANIKEDGSEKNYVDSVKGRFTISRDNARNSVYMHLNNLRVEDTAVYYCARGRTLGDWGQGTTVTVSS (SEQ ID No: 281)
VL AIRMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVHSDGNTYLNWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRDSGAPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGTHWPPITFGPGTKVDIK (SEQ ID No: 282)
EY 12B VH EVQLVESGGDLVQPGRSLRLSCAASGFTFDYFAMHWVRQVPGKGLEWVSGIRWNSETIGYADSVKGRFTISRDNAKKSLYLEMNSLRSEDTAFYYCAKGRSGYGHTAFDVWGQGTMVTVSS (SEQ ID No: 283)
VL QSALTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGANYDVHWYQRLPGTAPKLLIYDNNNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAIAGLQAEDEADYYCQSYDSSLSASVFGGGTKLTVL (SEQ ID No: 284)
EZ 8C VH EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYTMNWVRQAPGKGLEWVSSFIANSDYKFYADSVKGRFTISRDNAKSSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARELTSYGSHDAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID No: 285)
VL QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLLIYEVTNRPSGVSDRFSGSKSANVASLTISGLQAEDEADYYCSSYTTTDSVVFGGGTKLTVL (SEQ ID No: 286)
EY 9C VH EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASEFTFSSYTLNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSAYIYYADSVKGRFTISRDNAKKSLSLQMNSLTAEDTAVYYCATWGGAPFDYWGQGTMVTVS (SEQ ID No: 287)
VL QSVLTQPASVSGSPGRSITISCTETSSDVGTYNLVSWYQQHPGKAPKLMIFDDNKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCCSYAGGRTFNVLFGGGTKLTVL (SEQ ID No: 288)
EZ 8B VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDLGYYGSGSSWGQGTLVTVSS (SEQ ID No: 289)
VL SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYACWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTAVFGGGTKLTVL (SEQ ID No: 290)
FD 3E VH EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPHYYGSGSYYNQLRGYYYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID No: 291)
VL DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLLHSDGKTYLYWYLQKPGQSPQLLIYEVSSRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGIHLPHFRRRDQVEIK (SEQ ID No: 292)
EW 1A VH EVQLVESGGGVVQPGSSLRLSCETSGFTFSGHAMHWVRQAPGKGLEWLAQIWFDGSEKYYADSVKGRFTISRDNSKKILYMQMNSLRVQDTAVYYCARDGQHLAPFAMDVWGQGTMVTVSS (SEQ ID No: 293)
VL QSVLTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGASNRVSWYQHSPGEAPKLIIYQVTVRPSGVSDRFSGSKSGNTASLTISGLRTEDEAEYYCNSFVSGDSWVFGGGTKVTVL (SEQ ID No: 294)
FD 5B VH EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDERRESYNFVLDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID No: 295)
VL QSVLTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDAGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSYAGSNNPFVFGTGTKVTVL (SEQ ID No: 296)
EW 9A VH EVQLLESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDMWALYDILTGYYTPYYYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID No: 297)
VL SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSADALPKQYAYWYQQKPGQAPVLVIYKDSERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADSSGTYWVFGGGTKLTVL (SEQ ID No: 298)
FD 8C VH EVQLVESGGGLVKPGRSLRLSCTASGFTFGDYAMSWFRQAPGKGLEWVGFIRSKAYGGTTEYAASVKGRFTISRDDSKSIAYLQMNSLKTEDTAVYYCTRNDFWSGYYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID No: 299)
VL DIVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVHSDGNTYLNWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGTHWPRSLSAEGPKWISN (SEQ ID No: 300)
EW 5A VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCSVSGFPFGTYAMHWVRQAPGKGLDYVSAINNDGSITYYADSVRGRFTVSRDNSENTLYLRLSGLRPDDTAIYYCVKDRGSVIRDFDVWGRGTLVTVSS (SEQ ID No: 301)
VL QTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCASSTGTVTSDYYPNWFQQKPGQAPRPLIFGTAYRHSWTPARFSGSLLGGKAALTVSDVQPEDEADYYCLLYCGGGQLFGGGTKLTVL (SEQ ID No: 302)
EZ 9C VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCSASGFTLNGYAMHWVRQAPGKGLEYVSSLSNRGDNTRYAESVKGRFLISRDIAKDTLYLQMSSLRPEDTAVYYCGKGLLSASGGLPIDDWGQGTLVTVSS (SEQ ID No: 303)
VL QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQFPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEAAYYCATWDSSLSAGVFGGGAKLTVL (SEQ ID No: 304)
EZ 9A VH EVQLVESGGGLVQPGESLRVSCAASGFTFSNYWMHWVRQVPGKGPVWVSIINTDGSITRYVDSVRGRFTISRDNAKNTVHLQMNSLTAEDTAIYYCARDVNRYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID No: 305)
VL QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTYSDVGYYNYVSWYQQQPGKAPKVIIHGDINRPFGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYFCCSYVNNGAWVFGGGTKLTVL (SEQ ID No: 306)
EY 12A VH EVQLVESGPGLVKPSQTLSLTCAVSGGSISSGGYYWSWIRQPPGKGLELIGYTDYTGKTLYNPSLKSRLTISVDTSKNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARGMTQDDILTGFNRPHWYFDLWGRGSLVTVSS (SEQ ID No: 307)
VL QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKVVIYRNMNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSFDSSLSDFVVFGGGTKLTVL (SEQ ID No: 308)
FD 4C VH EVQLVESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRSSSSWYFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID No: 309)
VL QSVLTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSKWVFGGGTKLTVL (SEQ ID No: 310)
EW 4C VH EVQLVESGPGLVKPSETLSLTCSVSADSFKKGYYWGWIRQPPGKGLESIVNSFDSGTTRYNPSLWGRATVSDMSKWHFSLKLTSVTAADTAVYYCVRGTYGSGLHWGQGILVTVSS (SEQ ID No: 311)
VL QTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSVGTVASGHYPYWVQQKPGQAPRTLIYDTDNKQSWTPARFSGSLLGGKAALTLSGAQPEDEADYYCFLSHNDAWVFGGGTKLTVL (SEQ ID No: 312)
FD 6D VH EVQLVESGPGLVKVSETLFLTCTVSGYSIGSGNYWGWIRQPPGKVLEWIGSTYHSGTTYYNPSLKSRVTISVDSSKNQFSLKLTSVTAADTAVYYCARDRLLAVHYDSRGYLVDYWGQGTMVTVSS (SEQ ID No: 313)
VL AIRMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSIFYSSNNKNYLAWYQHKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAIYYCQQYYDIPRTFGQGTKVEIR (SEQ ID No: 314)
EY 5A VH EVQLVESGPGLVKPSGTLFLTCTVSGGSISNYYWSWIRQPPGKALEWIGFIYSNGNTDYNPSLQSRVTISGDTSKNQFSLNLRSVTAADTAVYYCARGPGPATGGSLDYWGQGTMVTVSS (SEQ ID No: 315)
VL NFMLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGINTVNWYQHLPGTAPKLLIYGNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSTSLAISGLQSEDEADYYCSAWDDSLNGPVFGGGTQLTVL (SEQ ID No: 316)
EZ 7B VH EVQLVESSPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARRVFGPVLPSKLGGSYWGGGAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID No: 317)
VL DIQLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPLTFGPGTKVEIR (SEQ ID No: 318)
EZ 4C kappa VH EVQLVESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSVSSGNNYWSWIRQPPGKALEWIGYIYYSGSTKYNPSLKSRVTMSVGTSKNQFSLKVNSVTAADTAMYYCARAPSAPFGGLFDWILPKGINNWGQGTLVTVSS (SEQ ID No: 319)
VL EIVLTQSPSTLSASVGDRVTITCRTSQSIRSWLAWYQQKPGKAPKLLIFEASTLESGVPERFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNGYSYSFGQGTKVEIR (SEQ ID No: 320)
EZ 4C lambda VH VQLVQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSVSSGNNYWSWIRQPPGKALEWIGYIYYSGSTKYNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSLKVNSVTAADTAMYYCARAPSAPFGGLFDWILPKGIDNWGQGTLVTVSS (SEQ ID No: 321)
VL QSALTQPPSVSAAPGQKVTISYSGNSSDMGTYAVSW-QRLPGTAPKLFICEENKRPPGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLWPEDEADYC-IA-HSSPRLGCSAEGPS-PS- (SEQ ID No: 322)
FD 4B VH QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSVSSGNNYWSWIRQPPGKALEWIGYLYYSGSTKYNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSLKVNSVTAADTAMYYCARAPSAPFGGLFDWILPKGIDSWGQGTLVTVSS (SEQ ID No: 323)
VL QSALTQPPSVSAAPGQKVTISYSGNSSDMGTYAVSW-QRLPGTAPKLFICEENKRPPGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLWPEDEADYC-IA-HSSPRLGCSAEGPS-PS- (SEQ ID No: 324)
EY 8A VH EVQLVESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGSYYWSWIRQPAGKGLEWIGRIYTSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAKGHVISGYDDYYYYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID No: 325)
VL SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPKQYAYWYQQKPGQAPVLVIYKDSERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADSSGTYWVFGGGTKLTVL (SEQ ID No: 326)
EY 2A VH QVQLVESGAEVTKPGDSLIISCKGSGYAFTQYWIGWVRQKPGKGLEWMAMVYPDSSAVFAGGASGVRYRPPFQGQVTISADTSVNTAYLQWDSLKASDTAMYYCVRQERGSNTWYAGNSWGQGTLVTVSS (SEQ ID No: 327)
VL DIVMTQSPLSLPVSPGEPASISCRSSQSLLHTDAYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISSVKAEDVGVYYCMQALQTPGTFGQGTKLEIK (SEQ ID No: 328)
EY 3B VH EVQLVESGAEVTKPGESLIISCKGSGYAFTQYWIGWVRQKPGKGLEWMAMVYPDSSAVFAGGASGVRYRPPFQGQVTISADTSVNTAYLQWDSLKASDTAMYYCVRQERGSNTWYAGNSWGQGTLVTVFS (SEQ ID No: 329)
VL EIVLTQSPLSLPVSPGEPASISCRSSQSLLHTDAYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISSVKAEDVGVYYCMQALQTPGTFGQGTKVEIR (SEQ ID No: 330)
EZ 4A VH EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARSPIAADLFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID No: 331)
VL DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYDNLLFTFGPGTKVEIK (SEQ ID No: 332)
表7 該32株SARS-CoV-2核鞘反應性人類單株抗體重鏈可變區與輕鏈可變區互補決定區(CDRs)的胺基酸序列。
單株抗體 重鏈 CDR1 (HCDR1) 重鏈 CDR2 (HCDR2) 重鏈 CDR3 (HCDR3) 輕鏈 CDR1 (LCDR1) 輕鏈 CDR2 (LCDR2) 輕鏈 CDR3 (LCDR3)
EZ 9B GYTFTGYY(SEQ ID No: 333) INPNSGGT (SEQ ID No: 334) AREGPTVTWWFDP (SEQ ID No: 335) NIGSKS (SEQ ID No: 336) DDS (SEQ ID No: 337) QVWDSSSDHPSWV (SEQ ID No: 338)
EZ 11C GYTLTELS (SEQ ID No: 339) FDPEDGET (SEQ ID No: 340) ATTTVTTPTANWFDP (SEQ ID No: 341) SSNIGNNY (SEQ ID No: 342) ENN (SEQ ID No: 343) GTWDSSLRQVV (SEQ ID No: 344)
FD 9B GFSFSRYW (SEQ ID No: 345) MDPDGGAK (SEQ ID No: 346) VKFGRSEGLF (SEQ ID No: 347) TGAVTSGHY (SEQ ID No: 348) DTS (SEQ ID No: 349) FLTYVGARRL (SEQ ID No: 350)
EZ 11A GFTFSSYW (SEQ ID No: 351) IKQDGSEK (SEQ ID No: 352) ARDDYSGSYYWEFDY (SEQ ID No: 353) SGHSSYA (SEQ ID No: 354) LNSDGSH (SEQ ID No: 355) QTWGTGIWV (SEQ ID No: 356)
EW 10C GFTFNKYK (SEQ ID No: 357) IKEDGSEK (SEQ ID No: 358) ARGRTLGD (SEQ ID No: 359) QSLVHSDGNTY (SEQ ID No: 360) KVS (SEQ ID No: 361) MQGTHWPPIT (SEQ ID No: 362)
EY 12B GFTFDYFA (SEQ ID No: 363) IRWNSETI (SEQ ID No: 364) AKGRSGYGHTAFDV (SEQ ID No: 365) SSNIGANYD (SEQ ID No: 366) DNN (SEQ ID No: 367) QSYDSSLSASV (SEQ ID No: 368)
EZ 8C GFTFSSYT (SEQ ID No: 369) FIANSDYK (SEQ ID No: 370) ARELTSYGSHDAFDI (SEQ ID No: 371) SSDVGGYNY (SEQ ID No: 372) EVT (SEQ ID No: 373) SSYTTTDSVV (SEQ ID No: 374)
EY 9C EFTFSSYT (SEQ ID No: 375) ISTSSAYI (SEQ ID No: 376) ATWGGAPFDY (SEQ ID No: 377) SSDVGTYNL (SEQ ID No: 378) DDN (SEQ ID No: 379) CSYAGGRTFNVL (SEQ ID No: 380)
EZ 8B GFTFSSYA (SEQ ID No: 381) ISGSGGST (SEQ ID No: 382) AKDLGYYGSGSS (SEQ ID No: 383) KLGDKY (SEQ ID No: 384) QDS (SEQ ID No: 385) QAWDSSTAV (SEQ ID No: 386)
FD 3E GFTFSSYG (SEQ ID No: 387) ISYDGSNK (SEQ ID No: 388) AKDPHYYGSGSYYNQLRGYYYYGMDV (SEQ ID No: 389) QSLLHSDGKTY (SEQ ID No: 390) EVS (SEQ ID No: 391) MQGIHLPH (SEQ ID No: 392)
EW 1A GFTFSGHA (SEQ ID No: 393) IWFDGSEK (SEQ ID No: 394) ARDGQHLAPFAMDV (SEQ ID No: 395) SSDVGASNR (SEQ ID No: 396) QVT (SEQ ID No: 397) NSFVSGDSWV (SEQ ID No: 398)
FD 5B GFTFSSYG (SEQ ID No: 399) IWYDGSNK (SEQ ID No: 400) ARDERRESYNFVLDY (SEQ ID No: 401) SSDAGGYNY (SEQ ID No: 402) EVS (SEQ ID No: 403) SSYAGSNNPFV (SEQ ID No: 404)
EW 9A GFTFSSYG (SEQ ID No: 405) IWYDGSNK (SEQ ID No: 406) AKDMWALYDILTGYYTPYYYYGMDV (SEQ ID No: 407) ALPKQY (SEQ ID No: 408) KDS (SEQ ID No: 409) QSADSSGTYWV (SEQ ID No: 410)
FD 8C GFTFGDYA (SEQ ID No: 411) IRSKAYGGTT (SEQ ID No: 412) TRNDFWSGYYPDY (SEQ ID No: 413) QSLVHSDGNTY (SEQ ID No: 414) KVS (SEQ ID No: 415) MQGTHWPRSL (SEQ ID No: 416)
EW 5A GFPFGTYA (SEQ ID No: 417) INNDGSIT (SEQ ID No: 418) VKDRGSVIRDFDV (SEQ ID No: 419) TGTVTSDYY (SEQ ID No: 420) GTA (SEQ ID No: 421) LLYCGGGQL (SEQ ID No: 422)
EZ 9C GFTLNGYA (SEQ ID No: 423) LSNRGDNT (SEQ ID No: 424) GKGLLSASGGLPIDD (SEQ ID No: 425) SSNIGNNY (SEQ ID No: 426) DNN (SEQ ID No: 427) ATWDSSLSAGV (SEQ ID No: 428)
EZ 9A GFTFSNYW (SEQ ID No: 429) INTDGSIT (SEQ ID No: 430) ARDVNRYPDY (SEQ ID No: 431) YSDVGYYNY (SEQ ID No: 432) GDI (SEQ ID No: 433) CSYVNNGAWV (SEQ ID No: 434)
EY 12A GGSISSGGYY (SEQ ID No: 435) TDYTGKT (SEQ ID No: 436) ARGMTQDDILTGFNRPHWYFDL (SEQ ID No: 437) SSNIGAGYD (SEQ ID No: 438) RNM (SEQ ID No: 439) QSFDSSLSDFVV (SEQ ID No: 440)
FD 4C GGSISSGGYY (SEQ ID No: 441) IYYSGST (SEQ ID No: 442) ARVRSSSSWYFDY (SEQ ID No: 443) SSDVGGYNY (SEQ ID No: 444) DVS (SEQ ID No: 445) SSYTSKWV (SEQ ID No: 446)
EW 4C ADSFKKGYY (SEQ ID No: 447) SFDSGTT (SEQ ID No: 448) RGTYGSGLH (SEQ ID No: 449) VGTVASGHY (SEQ ID No: 450) DTD (SEQ ID No: 451) FLSHNDAWV (SEQ ID No: 452)
FD 6D GYSIGSGNY (SEQ ID No: 453) TYHSGTT (SEQ ID No: 454) ARDRLLAVHYDSRGYLVDY (SEQ ID No: 455) QSIFYSSNNKNY (SEQ ID No: 456) WAS (SEQ ID No: 457) QQYYDIPRT (SEQ ID No: 458)
EY 5A GGSISNYY (SEQ ID No: 459) IYSNGNT (SEQ ID No: 460) ARGPGPATGGSLDY (SEQ ID No: 461) SSNIGINT (SEQ ID No: 462) GNN (SEQ ID No: 463) SAWDDSLNGPV (SEQ ID No: 464)
EZ 7B GGSISSYY (SEQ ID No: 465) IYYSGST (SEQ ID No: 466) ARRVFGPVLPSKLGGSYWGGGAFDI (SEQ ID No: 467) QSVLYSSNNKNY (SEQ ID No: 468) WAS (SEQ ID No: 469) QQYYSTPLT (SEQ ID No: 470)
EZ 4C kappa GGSVSSGNNY (SEQ ID No: 471) IYYSGST (SEQ ID No: 472) ARAPSAPFGGLFDWILPKGINN (SEQ ID No: 473) QSIRSW (SEQ ID No: 474) EAS (SEQ ID No: 475) QQYNGYSYS (SEQ ID No: 476)
EZ 4C lambda GGSVSSGNNY (SEQ ID No: 477) IYYSGST (SEQ ID No: 478) ARAPSAPFGGLFDWILPKGIDN (SEQ ID No: 479) SSDMGTYA (SEQ ID No: 480) EEN (SEQ ID No: 481) IA-HSSPRLGC (SEQ ID No: 482)
FD 4B GGSVSSGNNY (SEQ ID No: 483) LYYSGST (SEQ ID No: 484) ARAPSAPFGGLFDWILPKGIDS (SEQ ID No: 485) SSDMGTYA (SEQ ID No: 486) EEN (SEQ ID No: 487) IA-HSSPRLGC (SEQ ID No: 488)
EY 8A GGSISSGSYY (SEQ ID No: 489) IYTSGST (SEQ ID No: 490) AKGHVISGYDDYYYYYGMDV (SEQ ID No: 491) ALPKQY (SEQ ID No: 492) KDS (SEQ ID No: 493) QSADSSGTYWV (SEQ ID No: 494)
EY 2A GYAFTQYW (SEQ ID No: 495) VYPDSSAV (SEQ ID No: 496) SDTAMYYCVRQERGSNTWYAGNS (SEQ ID No: 497) QSLLHTDAYNY (SEQ ID No: 498) LGS (SEQ ID No: 499) MQALQTPGT (SEQ ID No: 500)
EY 3B GYAFTQYW (SEQ ID No: 501) VYPDSSAV (SEQ ID No: 502) SDTAMYYCVRQERGSNTWYAGNS (SEQ ID No: 503) QSLLHTDAYNY (SEQ ID No: 504) LGS (SEQ ID No: 505) MQALQTPGT (SEQ ID No: 506)
EZ 4A GYSFTSYW (SEQ ID No: 507) IYPGDSDT (SEQ ID No: 508) ARSPIAADLFDY (SEQ ID No: 509) QDISNY (SEQ ID No: 510) DAS  (SEQ ID No: 511) QQYDNLLFT (SEQ ID No: 512)
實施例2 抗SARS-CoV-2的單株抗體的中和試驗
1. 基於定量PCR的中和試驗
使用感染SARS-CoV-2的Vero E6細胞來進行單株抗體上清液的中和活性檢測。簡言之，將Vero E6細胞以每孔104 個細胞的濃度預接種在一96孔微孔盤中。第二天，將單株抗體上清液與等體積的100 TCID50 病毒製備液混合，並於37°C下作用1小時。然後，將該混合物加入接種的Vero E6細胞中，並於37°C下培養5天。每個實驗均設置細胞對照、病毒對照以及病毒反滴定。於第5天，從每個孔中收集培養上清液，並萃取病毒RNA，透過針對SARS-CoV-2的E基因的即時反轉錄PCR進行測定。即時反轉錄PCR的Ct循環閾值被作為SARS-CoV-2 RNA複製數的指標，循環閾值較低的樣本對應於較高的病毒複製數。
2. 基於細胞病變(Cytopathic effect, CPE)的中和試驗
將懸浮於10% FBS的Dulbecco氏改良Eagle氏培養基(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium, DMEM)中的Vero E6細胞添加至96孔微孔盤中，並於37°C以及5% CO2 下培養過夜以達到單層細胞層滿孔(confluent monolayer)。以病毒生長培養液(virus growth medium, VGM：含有2% FBS的DMEM)清洗後，將以VGM進行二倍序列稀釋的單株抗體，以100 µg/ml為起始濃度分別添加到每個二重複試驗的微孔中。將微孔盤立即轉移到BSL-3實驗室，並加入含有100 TCID50 SARS-CoV-2的病毒懸浮液。將微孔盤於37°C以及5% CO2 下進一步培養三天，並使用ImageXpress Nano自動細胞影像系統觀察並記錄細胞的細胞病變形態。
3. 病毒斑減少中和試驗(Plaque Reduction Neutralization Test, PRNT)
將96孔微孔盤中單層的Vero E6細胞與SARS CoV-2以及以2倍序列稀釋的抗體(三重複)在室溫下培養3小時。 然後，移除病毒抗體混合液，並加入覆蓋層。細胞於37°C、5% CO2 下培養24小時，然後於4°C下以4%多聚甲醛固定30分鐘。然後將固定的細胞以0.2% Triton-X-100穿孔，並以與辣根過氧化物酶共軛(horseradish peroxidase-conjugated)的抗病毒蛋白抗體於室溫下染色 1 小時。然後添加TMB基質以觀察病毒溶斑。使用來自COVID-19患者的恢復期血清作為實驗對照。
4. 光斑形成單元微量中和試驗(Fluorescent focus-forming units microneutralization assay, FMNT)
簡言之，該中和試驗法用來測量減少Vero細胞感染SARS-CoV-2後所形成光斑單元達50%的中和抗體濃度。在與Vero 細胞培養之前，將抗體的三倍序列稀釋液與一固定病毒量的SARS-CoV-2預作用(三重複)。含羧甲基纖維素的覆蓋層可用於防止形成衛星焦點。感染後20小時，將細胞層以多聚甲醛固定，並使用抗SARS-CoV-2核鞘單株抗體EY 2A對核鞘抗原進行染色。然後，以與過氧化物酶共軛的二級抗體及基質顯影後，透過酵素連結免疫吸收點讀數器(enzyme-linked immune absorbent spot reader)計數顯影光斑點。在GraphPad Prism中使用四參數邏輯回歸(Hill方程)分析數據。
5. 競爭性結合實驗
簡言之，將0.5 µg/ml的RBD類病毒顆粒(virus like particles, VLPs)固著在NUNC盤上(每孔50 µl)，置於4ºC下過夜，以300 µl含有5% (w/v)的乾燥脫脂奶粉的PBS洗滌並阻隔，在測定前先置於室溫下1小時。使用EZ-Link Sulfo-NHS-LC-生物素 (21237; Life Technologies公司)對單株抗體進行生物素化，然後與競爭性單株抗體(至少10倍濃度以上)混合併轉移到該經阻隔處理的 NUNC盤上作用1小時。然後加入以PBS/0.1% BSA (37525；Thermo Fisher Scientific公司)以1:1,600 稀釋的第二層鏈黴親和素(Streptavidin)-HRP (S911，Life Technologies公司)，並再作用1小時。然後洗滌該盤，在以1 M H2 SO4 停止反應之前，透過添加POD基質(11484281001，Roche公司)作用5分鐘以產生訊號。使用Clariostar微量盤讀取儀(BMG, Labtech公司)測量吸光度(OD450 )。計算4重複實驗孔測量的平均值以及95%信賴區間。競爭被測量為：(X-最小結合/(最大結合-最小結合)，其中X為在競爭性單株抗體存在下生物素化單株抗體的結合。最小結合為生物素化單株抗體的自我競爭或背景結合值。最大結合為在非競爭性單株抗體(抗流感N1神經胺酸酶單株抗體)存在下生物素化單株抗體的結合。
6. ACE2阻斷試驗
使用兩種分析方法來確定單株抗體對ACE2與RBD結合作用的阻斷。在第一種分析方法中RBD被固著在微孔盤上，而在第二種分析方法中ACE2被固著在為微孔盤上。
在第一種ACE2阻斷試驗中，RBD-VLP (Spycatcher-mi3 VLP顆粒與Spytagged-RBD重組蛋白共軛)(Bruun，2018年)如競爭性結合試驗所述包覆在 ELISA微孔盤上。使用EZ-link Sulfo-NHS-生物素(A39256；Life Technologies公司)對在Expi293F細胞(Life Technologies公司)中表現的重組ACE2-Fc (18-615)蛋白進行生物素化，並使用Zebaspin脫鹽管柱(Thermo Fischer公司)將緩衝液更換為PBS。以半對數連續稀釋之單株抗體進行二重複或三重複試驗，連續稀釋會從稀釋在30 µl PBS/0.1% BSA緩衝液中的1 µM單株抗體開始，並將30 µl大約0.2 nM (40 ng/ml)的生物素化ACE2-Fc混合加入抗體稀釋液中。將50 µl的混合物轉移至以PBS清洗過的RBD-VLP包覆的微孔盤上，並於室溫下作用1小時。然後將稀釋至1:1600的鏈黴親和素-HRP二級抗體(S911，Life Technologies公司)加入至以PBS清洗過的微孔盤中，並於室溫下作用1小時。然後將微孔盤以PBS清洗四次，透過添加POD基質(11484281001，Roche公司)作用5分鐘以產生訊號，然後以1 M H2 SO4 停止反應。使用Clariostar微量盤讀取儀(BMG, Labtech公司)測量吸光度(OD450 )。對照抗體(非阻斷性抗流感N1單株抗體)孔或不混合單株抗體的生物素-ACE2-Fc將用於獲取最大訊號，而只含PBS/BSA緩衝液的微量孔來獲取最小訊號。結果以生物素化ACE2與RBD的結合%作圖，結合% = {(X - Min)/(Max - Min)}*100，其中 X = 單株抗體的測量值，Min = 只有緩衝液，Max = 只有生物素-ACE2-Fc。使用GraphPad Prism 8的非線性回歸分析計算單株抗體對ACE2與RBD結合的50%抑制濃度。
如前所述 (Huo，2020年；Zhou，2020年)進行第二種ACE2阻斷試驗。簡言之，利用使用慢病毒載體將表現密碼子優化的人類ACE2 cDNA (NM_021804.1)穩定轉染至MDCK-SIAT1細胞，並經過分選而建立可在細胞表面表達ACE2的MDCK-ACE2細胞。在測定前一天將MDCK-ACE2細胞(每孔3 x 104 個)固著在平底96孔微孔盤上。使用EZ-link Sulfo-NHS-生物素(A39256; Life Technologies公司)對RBD-6H (340-538; NITN.GPKK)進行生物素化。在U型底96孔微孔盤中以30 µl體積進行抗體與對照的連續半對數稀釋(從1 µM開始)，加入30 µl生物素化RBD (25 nM)並混合，然後將50 µl混合物轉移到已固著MDCK-ACE2細胞的孔中。1 小時後，加入以PBS/0.1% BSA (37525；Thermo Fisher Scientific公司)按1:1,600倍數稀釋的第二層鏈黴親和素-HRP抗體(S911，Life Technologies公司)並再作用1小時。然後將微孔盤以PBS清洗四次，並透過添加POD基質(11484281001，Roche公司)產生訊號，然後於5分鐘後以1 M H2 SO4 停止反應。使用Clariostar微量盤讀取儀(BMG, Labtech公司)測量吸光度(OD450 )。對照抗體(非阻斷性抗流感N1抗體)孔用於獲取最大訊號，而只加入PBS的微量孔來獲取背景訊號。結果以生物素化RBD與ACE2的結合%作圖。如上所述測定單株抗體對ACE2與RBD結合的50%抑制濃度。
7. 統計
進行雙尾Mann-Whitney檢驗以比較兩個獨立組別之間的差異。使用線性回歸分析計算50%有效濃度(EC50 )。小於0.05的p值被認為具有顯著性。以Microsoft Excel以及GraphPad Prism軟體呈現圖表。
8. 結果
基於培養了5天的SARS-CoV-2感染後Vero E6細胞的上清液中SARS-CoV-2的定量PCR檢測，結果顯示EW 9C、EY 6A、FD 5D、FD 11A，以及FI 3A單株抗體作用下，病毒訊號減少(圖4A、圖4B，以及表8)，表示這些單株抗體具有中和SARS-CoV-2的效力。使用野生型SARS-CoV-2病毒進行的病毒斑減少中和試驗(表9)進一步證實了這一點，EW 9C以及EY 6A單株抗體的ND50 分別約為7.1以及10.8 µg/mL (根據 Grist (Grist，1966年)計算) )。
表8 EW 9C、EY 6A、FD 5D、FD 11A，以及FI 3A單株抗體的中和作用數據。
培養5天後，培養上清液的Ct 值 *
不含單株抗體的病毒對照組上清液 13.0  
抗-S2 EW 9C上清液 22.7 減少病毒約832倍
抗-RBD EY 6A上清液 22.7 減少病毒約832倍
抗-RBD FD 5D上清液 18.8 減少病毒約56倍
抗-RBD FD 11A上清液 23.0 減少病毒約1024倍
培養5天後，培養上清液的Ct 值 *
不含單株抗體的病毒對照組上清液 13.9  
抗-RBD FI 03A上清液 27.2 減少病毒約10085倍
* 相較於不含單株抗體的病毒對照組上清液的Ct值，Ct值的增加顯示病毒複製數減少。每增加一單位表示單株抗體的存在導致病毒複製數減少2倍。Ct值增加約10倍 = 病毒複製數減少約1,024 倍。
表9 EW 9C以及EY 6A單株抗體在病毒斑減少中和試驗中針對SARS-CoV-2的50%病毒斑抑制中和濃度(NC50 )。
識別號 描述 NC50 (µg/ml)
陽性對照 恢復期血清 1:784
EW 9C 抗SARS-CoV-2棘蛋白的單株抗體 7.1
EY 6A 抗SARS-CoV-2 RBD的單株抗體 10.8
透過病毒斑減少中和試驗(PRNT)系統性地篩選所有能中和野生型SARS-CoV-2病毒的抗棘糖蛋白單株抗體(表10)。共鑑定出分佈在棘糖蛋白不同區域的14種中和抗體：13種中的3種在S1次單元(非RBD)，9 種中的6種在S2次單元，10 種中的5種在RBD。EC50 濃度作為效力的衡量標準，範圍自0.05 nM至大約133.33 nM (8 ng/ml – 約20 µg/ml)。微量中和試驗(FMNT)證實中和作用，該試驗測量了螢光焦點形成單位的減少，結果總結在表10、圖6A以及圖6B 中。中和試驗結果顯示，那些抗SARS-CoV-2 RBD單株抗體(FD 11A、FI 3A、FI 1C、FD 5D，以及EY 6A)對野生型SARS-CoV-2最有效。
五株中和單株抗體(FD 11A、FI 3A、FI 1C、FD 5D，以及EY 6A)能部分或完全阻斷RBD與ACE2之間的相互作用(表10、圖7A、圖7B)。最有效的中和抗體通常能阻斷RBD與ACE2作用(例如在第2群中的FI 3A，在第3群中的FD 11A)，而且單株抗體FI 3A與FD 11A能各自獨立地與RBD結合(表11)。單株抗體EY 6A已被證明可以在部分抑制的程度下影響RBD與ACE2的結合動力學，並且在ACE2固著的阻斷試驗分析中，單株抗體EY 6A對ACE2的結合具有中等影響。FI 3A、FD 11A 與EY 6A三個代表性的中和病毒單株抗體彼此獨立結合於RBD，顯示RBD存在至少三個獨立的中和抗原決定位(表9)。此外，這五株針對RBD的中和單株抗體(FD 11A、FI 3A、FI 1C、FD 5D，以及EY 6A)都具有相當於種系(germline)的重鏈與輕鏈可變區基因序列。
對SARS-CoV-2 S2次單元具有特異性的六株單株抗體在PRNT分析中顯示出中度的中和作用(表10)。抗體FB 1E、FJ 4E，以及EW 9C具有中等中和能力(EC50 為36-133.33 nM)，且與普通感冒β冠狀病毒OC43的棘糖蛋白發生交叉反應，並顯示出具有高體細胞突變的記憶型細胞的序列特徵。這顯示與OC43相關的地方性或流行性β冠狀病毒引發的記憶型B細胞反應，可能生成中和SARS-CoV-2的抗體，但該免疫記憶在抗SARS-CoV-2中和抗體反應上所扮演的角色可能不大。其他三株對SARS-CoV-2 S2次單元具有特異性的中和抗體FD 10A、FG 7A，以及FM 1A其重鏈與輕鏈可變區基因序列上接近種系，並且與其他β冠狀病毒沒有明顯的交叉反應(表1)。FD 10A在PRNT分析中表現出有效的中和活性，在8.33 nM濃度時能完全抑制SARS-CoV-2感染所誘發的細胞病變。
定義13種結合非RBD S1區域的單株抗體(表1)，其中3種在重鏈與輕鏈可變區基因序列上接近種系，並具有中和作用。FJ 1C表現出強的中和作用(EC50 55.5 nM)，而 FD 11E (EC50 70 nM)以及FD 1E (EC50 110 nM)表現出中度的中和作用(表10)。
表10. 34種SARS-CoV-2棘蛋白反應性人類單株抗體的功能。
抗體 結構域 IFA 以PRNT a 測定的中和作用EC50 (nM) 以FMNT b 測定的中和作用 EC50 (nM) ACE2 阻斷 c RBD 錨定 ACE2 阻斷 c ACE2 錨定
FD 11A RBD pos 0.05 3.68 + +++
FI 3A RBD pos 8.67 0.51 ++++ ++++
FI 1C RBD pos 16.67 2.24 ++ +++
FD 5D RBD pos 133.33 partial + +++
EY 6A RBD pos 133.33 22.50 neg ++
EY 6A-1 * RBD pos 133.33 22.50 neg ++
EZ 7A RBD pos neg neg neg neg
FI 4A RBD pos neg neg + neg
FJ 10B RBD neg neg neg neg neg
FM 7B RBD pos neg neg neg neg
FN 12A RBD pos neg neg neg neg
FJ 1C NTD pos 55.50 partial    
FD 11E 非RBD S1 pos 70.00 neg    
FD 1E 非RBD S1 pos 110.00 neg    
EW 8B 非RBD S1 neg neg neg    
FD 11D NTD pos neg partial    
FD 11C 非RBD S1 pos neg partial    
FD 7D 非RBD S1 neg neg neg    
FD 8B 非RBD S1 neg neg neg    
FD 7C NTD pos neg 35.60    
FG 12C 非RBD S1 pos neg neg    
FN 8C 非RBD S1 neg neg neg    
FD 5E 非RBD S1 pos neg neg    
EW 9B 非RBD S1 neg neg neg    
FD 10A S2 pos 111.13 neg    
FB 1E# S2 pos 36.00 neg    
FJ 4E# S2 neg 75.33 neg    
EW 9C# S2 pos 133.33 neg    
EW 9C-1#* S2 pos 133.33 neg    
FG 7A S2 pos 133.33 neg    
FM 1A S2 neg 133.33 neg    
FB 9D# S2 pos neg neg    
FD 1D S2 pos neg neg    
FN 2C# S2 pos neg neg    
             
對照            
CR3022 RBD   42.00   neg neg
BS 1A Flu H3   neg   neg neg
a 使用野生型SARS-CoV-2進行病毒斑減少中和試驗(PRNT)，並使用線性回歸分析確定50%最大有效濃度 (EC50 )。b 以野生型SARS-CoV-2進行光斑形成單元微量中和試驗(FMNT)，並使用邏輯回歸模型確定50%最大有效濃度(EC50 )。 部分中和：100 nM (測試的最高濃度)的單株抗體中和至少約40%的病毒。c 相較於ACE2-Fc，抗RBD單株抗體的ACE2阻斷活性：+，部分；++，IC50 ＞ ACE2-Fc；+++，IC50 ~= ACE2-Fc；++++，IC50 ＜ ACE2-Fc。 * EY 6A以及EW 9C都有一對額外的表現載體。 # 記憶表型。 縮寫：IFA，免疫螢光；RBD，受體結合結構域；PRNT，病毒斑減少中和試驗；FMNT，光斑形成單元微量中和試驗；ACE2，血管收縮素轉換酶 2；pos，陽性；neg，陰性。
表11. 抗SARS-CoV-2 RBD人類單株抗體的競爭性結合分析。
抗體 VH 中和 b 分群 FI 4A- 生物素 EY 6A- 生物素 CR3022- 生物素 VHH72-Fc- 生物素 ACE2-Fc- 生物素 FI 3A- 生物素 FI 1C- 生物素 H11-H4-Fc- 生物素 FN 12A- 生物素 FD 5D- 生物素 FD 11A- 生物素 FJ 10B- 生物素 FM 7B- 生物素 EZ 7A- 生物素
FI 4A 3-21 - 1 100 13 -3 27 28 2 2 -1 14 -12 -7 13 4 2
EY 6A 3-30 + 1 103 100 103 108 -13 1 -2 3 4 22 -5 8 0 -3
CR3022*   + 1 103 95 100 107 -1 -3 5 0 -6 45 0 15 10 -1
VHH72-Fc*   + 1 103 63 50 100 129 -1 8 -6 -5 15 15 13 2 -4
ACE2-Fc*   +   100 -4 -5 60 100 40 31 8 10 85 67 3 6 0
FI 3A 3-53 + 2 -27 -1 -3 -20 141 100 97 85 194 -3 -19 21 3 -1
FI 1C 3-11 + 2 -2 2 4 -17 119 76 100 95 223 20 -4 7 5 1
H11-H4-Fc*   + 2 -9 -6 -3 -18 143 66 105 100 217 110 -12 7 0 1
FN 12A 1-69 - 3 -7 -4 0 -1 4 7 29 -5 100 118 71 7 65 -1
FD 5D 3-33 + 3 0 0 -6 35 10 2 6 -8 38 100 100 91 58 15
FD 11A 3-48 + 3 -19 -4 -7 21 5 2 -3 -11 28 114 77 -2 3 7
FJ 10B 5-10 - 4 15 15 8 -2 6 1 24 16 3 86 12 100 94 98
FM 7B 1-3 - 4 16 14 5 -19 -5 -5 37 32 40 116 6 103 100 99
EZ 7A 5-51 - 4 0 2 -3 -2 7 4 3 -8 3 16 4 101 63 100
                                   
陰性對照                                  
EW 8B   -           0         0 0      
EW 9C   +           0         0 0      
Z3B2*   -   0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
a 競爭性抑制：顯示抑制百分比，具有 ≥ 75% 阻斷、50-74% 阻斷，以及 ＜ 50% 阻斷的值分別以黑色、灰色以及淺灰色突出顯示。b 在PRNT試驗中，抗SARS-CoV-2 RBD人類單株抗體對野生型SARS-CoV-2的中和作用(+ = 陽性，- = 陰性)。 * 對SARS以及SARS-CoV-2具交叉反應性之抗RBD單株抗體CR3022作為陽性對照。與人類IgG1 Fc相鍵連的的對SARS以及SARS-CoV-2具交叉反應性之抗RBD奈米抗體VHH72以及H11-H4亦作為陽性對照。ACE2-Fc亦作為陽性對照。抗流感單株抗體Z3B2則作為陰性對照。
實施例3 抗SARS-CoV-2的單株抗體雞尾酒(FD 11A+FI 3A)的體內保護效果
1. 實驗動物與研究設計
在敘利亞倉鼠模型中評估本發明之單株抗體雞尾酒(以下稱為抗體雞尾酒)對SARS-CoV-2的預防及治療的功效。簡言之，將32隻8週齡雌性黃金敘利亞倉鼠(國家實驗研究院國家實驗動物中心，台北，台灣)隨機分為8組(n=4隻)，其中4組進行預防性實驗，另外4組進行治療性實驗。
在預防性實驗中，在每隻倉鼠以鼻內攻毒1 x 105 TCID50 SARS-CoV-2 (hCoV-19/Taiwan/4/2020)前一天，動物透過腹膜內注射接受單劑(0.4 mg/kg、4 mg/kg，或40 mg/kg)的單株抗體雞尾酒或40 mg/kg的同種型單株抗體陰性對照(Z3B2，抗流感血凝素人類IgG1單株抗體(Huang 等人，2019年))。攻毒後每天測量每隻動物的體重，並以每隻動物的初始體重將數據標準化。在病毒攻毒後第4天犧牲動物，收集右肺及氣管用於組織病理學評估以及病毒量分析。
在治療性實驗中，在每隻倉鼠以鼻內攻毒1 x 105 TCID50 SARS-CoV-2 (hCoV-19/Taiwan/4/2020)後三小時，透過腹膜內注射單劑(0.4 mg/kg、4 mg/kg，或40 mg/kg)的單株抗體雞尾酒或40 mg/kg的同種型單株抗體陰性對照以治療動物。攻毒後每天測量每隻動物的體重，並以每隻動物的初始體重將數據標準化。在病毒攻毒後第4天犧牲動物，用於組織病理學評估以及病毒量分析。
2. 病毒量(半數組織培養感染劑量(TCID50 )與定量反轉錄PCR測定)
將右肺組織稱重並在2 ml PBS中均質化。以600xg 離心5分鐘後，收集澄清的上清液用於病毒負荷量檢測以及活病毒滴定(TCID50 分析)。針對病毒負荷量檢測，以RNeasy Mini套組(Qiagen公司)萃取組織勻質液中的總RNA。進行用於檢測SARS-CoV-2外膜(E)以及核鞘(N)基因的定量反轉錄PCR (qRT-PCR) 以確定病毒量(每µg病毒核酸拷貝數)。另外，針對TCID50 分析，將每個樣品進行10倍連續稀釋後，將連續稀釋液接種到Vero E6細胞單層中並培養4至7天以觀察細胞病變效應(CPE)。病毒量(TCID50 /mL)以Reed-Münch方法計算。
3. 組織病理學
收集肺及氣管並在以10% PBS緩衝的甲醛中固定24小時，然後加工成石蠟包埋的組織塊。4 µm厚的組織切片以蘇木精及伊紅(haematoxylin and eosin, H&E)染色以進行顯微鏡檢查。
4. 統計
以未配對的兩側t檢驗計算組別間的統計顯著性。
5. 結果
在預防性實驗中，在以SARS-CoV-2攻毒之前給予單劑40或4 mg/kg的單株抗體雞尾酒可完全防止體重減輕(圖7A，左圖)。在研究結束時(攻毒感染4天後)，這種保護效果還包含肺部病毒量的大幅下降(圖7A，右圖；圖8A及圖8B)。有注意到一些給予4 mg/kg單株抗體雞尾酒處理的動物在其肺部中仍具有相當病毒量(圖7A，右圖)；然而，相較於病毒量低很多的動物，該組動物的體重沒有顯著減輕(圖7A，左圖)。施用0.4 mg/kg單株抗體雞尾酒可防止體重急劇下降，但該組經過處理的動物在研究結束時體重沒有明顯增加(圖7A，左圖)。除此之外，給予0.4 mg/kg單株抗體雞尾酒的動物的肺部中可觀察到高病毒量(圖8A及圖8B)。
在治療性實驗中，所有劑量的動物體重逐漸增加，同種型單株抗體陰性對照處理的動物的體重沒有顯著下降(圖7B，左圖)。然而，注意到給予40或4 mg/kg單株抗體雞尾酒的動物體重增加更為明顯(圖7B，左圖)。數據顯示，給予40或4 mg/kg單株抗體雞尾酒的動物肺部病毒量較低；相較之下，以給予0.4 mg/kg單株抗體雞尾酒或同種型單株抗體陰性對照的動物在肺部則具有相似的高病毒量(圖7B，右圖；圖8A及圖8B)。
在預防性實驗中，相較於以0.4 mg/kg單株抗體雞尾酒或同種型單株抗體陰性對照處理的動物，給予40或4 mg/kg單株抗體雞尾酒的動物肺部發炎或壞死的數量明顯減少(圖9A、表12及表13)。給予40 mg/kg單株抗體雞尾酒的動物中，可發現肺部發炎完全恢復，相較於給予4 mg/kg單株抗體雞尾酒的動物，發炎程度顯著降低。此外，還發現氣管黏膜下層局部可出現最小程度至輕微的發炎。相較於0.4 mg/kg單株抗體雞尾酒或同種型單株抗體陰性對照組，給予40或4 mg/kg單株抗體雞尾酒的動物的急性氣管發炎程度顯著降低，而且在給予40 mg/kg的單株抗體雞尾酒的動物中發現其發炎已完全恢復。在治療性實驗中也觀察到類似的肺部及氣管組織病理學發現(圖9B、表12及表13)。
表12 在預防性及治療性實驗中，在SARS-CoV-2感染後4天以單株抗體雞尾酒處理的倉鼠的肺部及氣管病理發生率的總結。
器官 組織病理學發現 預防性1
組別
同種型單株抗體陰性對照 0.4 mg/kg 單株抗體雞尾酒 4 mg/kg 單株抗體雞尾酒 40 mg/kg 單株抗體雞尾酒
肺部          
右肺 (3肺葉)        
  聚集、肺泡巨噬細胞、多處局部性、最小程度至輕微3 4/44 4/4 0/4 0/4
  發炎/壞死、多處局部性、最小程度至中度/重度 4/4 4/4 3/4 0/4
  出血、多處局部性、最小程度至中度/重度 4/4 4/4 0/4 0/4
           
氣管          
  發炎、黏膜下層、多處局部性、最小程度至輕微 2/3 4/4 1/4        0/4
           
器官 組織病理學發現 治療性2
組別
同種型單株抗體陰性對照 0.4 mg/kg 單株抗體雞尾酒 4 mg/kg 單株抗體雞尾酒 40 mg/kg 單株抗體雞尾酒
肺部          
右肺 (3肺葉)        
  聚集、肺泡巨噬細胞、多處局部性、最小程度至輕微3 4/4 4/4 0/4 0/4
  發炎/壞死、多處局部性、最小程度至中度/重度 4/4 4/4 4/4 0/4
  出血、多處局部性、最小程度至中度/重度 4/4 4/4 0/4 0/4
           
氣管          
  發炎、黏膜下層、多處局部性、最小程度至輕微 4/4 4/4 3/4        0/4
           
1 預防性實驗：在SARS-CoV-2感染前1天透過腹腔注射施用同種型單株抗體對照或單株抗體雞尾酒。2 治療性實驗：在SARS-CoV-2感染後3小時透過腹腔注射施用同種型單株抗體對照或單株抗體雞尾酒。3 病變程度根據嚴重程度自1至5級分級：1 = 最小 (＜ 1%)；2 = 輕微 (1-25%)；3 = 中等 (26-50%)；4 = 中度/重度 (51-75%)；5 = 嚴重/高度 (76-100%)。4 發生率：受影響的倉鼠/檢查的倉鼠總數(n = 3-4)。
表13在預防性及治療性實驗中，在SARS-CoV-2感染後4天以單株抗體雞尾酒處理的倉鼠的肺部及氣管發炎評分的總結。
器官 發炎評分 預防性1  
組別  
同種型單株抗體陰性對照 0.4 mg/kg 單株抗體雞尾酒 4 mg/kg 單株抗體雞尾酒 40 mg/kg 單株抗體雞尾酒  
肺部          
右肺 (3肺葉)        
  聚集、肺泡巨噬細胞、多處局部性3 1.1±0.64 1.3±0.7 0.0±0.0 0.0±0.0
  發炎或壞死、多處局部性 2.8±1.1 2.4±1.0 0.3±0.5*,a 0.0±0.0*,a,b
  出血、多處局部性 1.8±0.9 1.7±0.8 0.0±0.0 0.0±0.0
           
  小計平均分數4 1.9±1.1 1.8±1.0 0.1±0.3*,a 0.0±0.0*,a,b
氣管          
  發炎、黏膜下層、多處局部性 1.0±0.0 1.5±0.5 0.3±0.4*,a 0.0±0.0*,a
           
器官 發炎評分 治療性2  
組別  
同種型單株抗體陰性對照 0.4 mg/kg 單株抗體雞尾酒 4 mg/kg 單株抗體雞尾酒 40 mg/kg 單株抗體雞尾酒  
肺部          
右肺 (3肺葉)        
  聚集、肺泡巨噬細胞、多處局部性 1.4±0.5 1.3±0.4 0.0±0.0*,a 0.0±0.0
  發炎或壞死、多處局部性 2.3±0.6 2.0±0.4 0.8±0.7*,a 0.0±0.0*,a,b
  出血、多處局部性 1.8±0.4 1.7±0.4 0.0±0.0*,a 0.0±0.0
           
  小計平均分數 1.8±0.6 1.7±0.5 0.3±0.6*,a 0.0±0.0*,a,b
氣管          
  發炎、黏膜下層、多處局部性 2.0±0.0 2.0±0.7 0.8±0.4*,a 0.0±0.0*,a,b
           
1 預防性實驗：在SARS-CoV-2感染前1天透過腹腔注射施用同種型單株抗體對照或單株抗體雞尾酒。2 治療性實驗：在SARS-CoV-2感染後3小時透過腹腔注射施用同種型單株抗體對照或單株抗體雞尾酒。3 最終數值分數的計算方法為，將每個等級的受影響倉鼠的數量之和除以檢查的倉鼠總數 (n = 4)。4 小計平均分數的計算方法為，以受影響倉鼠每個病變每個等級的數量之和除以檢查的倉鼠總數 (n = 4)。 * 相較於同種型對照組具有統計學上的顯著差異，p ＜ 0.05。a 在預防性及治療性實驗中，給予0.4 mg/kg單株抗體雞尾酒的組別與以4或40 mg/kg單株抗體雞尾酒的組別之間的統計學上的顯著差異，分別為p ＜ 0.05。b 在預防性及治療性實驗中，給予4 mg/kg單株抗體雞尾酒的組別與以40 mg/kg單株抗體雞尾酒的組別之間的統計學上的顯著差異，分別為p ＜0.05。
綜上所述，敘利亞倉鼠的研究顯示，根據組織病理學檢查，使用40或4 mg/kg單株抗體雞尾酒進行預防或治療可顯著降低肺部病毒量並減輕SARS-CoV-2病毒引發的肺部與氣管發炎。
總之，本發明產生一群組SARS-CoV-2棘蛋白與核鞘蛋白反應性人類單株抗體，並在重鏈與輕鏈的可變結構域中描述了它們的抗原特異性及基因訊息的特徵。這些人類單株抗體具有巨大的潛力，可作為針對SARS-CoV-2的預防或治療分子，以及用於檢測臨床樣本中病毒的診斷試劑。
當然，在不脫離本發明之範圍的情況下，可對本發明之上述實施例進行許多變更及修改。因此，為了促進科學及有用領域的進步，公開本發明且目的僅在於由所附申請專利範圍的範圍來限制。
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當結合附圖閱讀時，將更好地理解本發明之前述概述以及以下詳細描述。為了說明本發明，於附圖中顯示目前較佳實施例。然而，應當理解的是，本發明不限於所示之精確排列及方法。
於圖式中：
圖1為說明產生對SARS-CoV-2棘蛋白具有反應性以及對SARS-CoV-2核鞘蛋白具有反應性的人類單株抗體的圖示。
圖2為說明以ELISA測量抗SARS-CoV-2棘蛋白的單株抗體與SARS-CoV-2棘蛋白的結合活性以及Kd值的折線圖。將能與SARS-CoV-2以及SARS-CoV發生交叉反應的SARS-CoV-2治療性抗體 (CR3022)納入作為對照。OD值表示為平均值±平均值的標準誤差。進行非線性回歸分析以獲得Kd值。
圖3A至圖3J為一組線形圖，顯示透過流式細胞儀測量的抗SARS-CoV-2受體結合結構域(receptor-binding domain, RBD)單株抗體與SARS-CoV-2 RBD的結合活性及Kd值(圖3A為FM 7B單株抗體，圖3B為FN 12A單株抗體，圖3C為FI 1C單株抗體，圖3D為FI 4A單株抗體，圖3E為EY 6A單株抗體，圖3F為FD 11A單株抗體，圖3G為FD 5D單株抗體，圖3H為FI 3A單株抗體，圖3I為FJ 10B單株抗體，以及圖3J為EZ 7A單株抗體)。圖3K所示為作為陰性對照的抗流感病毒H3單株抗體BS-1A與SARS-CoV-2 RBD的結合活性及Kd 值。結合百分比表示為平均值±平均值的標準誤差。進行非線性回歸分析以獲得Kd值。
圖4A為顯示在基於E基因的即時反轉錄PCR測定中感染SARS-CoV-2的Vero E6細胞上清液中病毒訊號的Ct值的線形圖。擴增曲線的右移代表EY 6A單株抗體作用所導致的Ct值增加亦即病毒訊號降低，顯示抗體中和SARS-CoV-2的能力。圖4B為顯示在基於E基因的即時反轉錄PCR測定中感染SARS-CoV-2的Vero E6 細胞上清液中病毒訊號的Ct值的線形圖。擴增曲線的右移代表FI 3A單株抗體作用所導致的Ct值增加亦即病毒訊號降低，顯示中和SARS-CoV-2的能力。
圖5A所示為抗SARS-CoV-2 RBD單株抗體(FD 11A、FI 3A、FI 1C、FD 5D，以及EY 6A)對野生型SARS-CoV-2的中和作用(亦參閱表10)。根據光斑形成單位微量中和法(fluorescent focus-forming units microneutralization method, FMNT)對指定的抗體進行中和試驗。抗體組之光斑形成單位量與對照組(無抗體)之光斑形成單位量均經過正規化校正後進行分析，以獲得相對感染百分比。灰色區域為對照組之平均相對感染百分比± 1標準偏差。圖中各點顯示為各抗體實驗組該濃度之平均相對感染百分比± 1標準偏差。曲線僅在抗體的數據符合標準劑量反應(Hill)方程式(n=3)時顯示。圖5B所示為抗SARS-CoV-2 S1-非RBD抗體(FJ 1C、FD 11D、FD 11C，以及FD 7C)對野生型SARS-CoV-2的中和作用(亦參閱表10)。根據光斑形成單位微量中和法(參閱方法)對指定的抗體進行中和試驗。抗體組之光斑形成單位量與對照組(無抗體)之光斑形成單位量均經過正規化校正後進行分析，以獲得相對感染百分比。灰色區域為對照組之平均相對感染百分比± 1標準偏差。圖中各點顯示為各抗體實驗組該濃度之平均相對感染百分比± 1標準偏差。曲線僅在抗體的數據符合標準劑量反應(Hill)方程式(n=3)時顯示。
圖6A所示為以抗SARS-CoV-2 RBD抗體滴定進行血管收縮素轉換酶2 (ACE2)阻斷試驗，並以固著有RBD-VLP的微量盤進行測定(亦參閱表8)。圖6B所示為以抗SARS-CoV-2 RBD抗體滴定進行ACE2阻斷試驗(亦參閱表10)，並以固著有ACE2的微量盤進行測定。已與人類IgG1 Fc相鍵連的抗SARS-CoV-2 RBD奈米抗體VHH72以及ACE2-Fc於本試驗中作為陽性對照。本試驗為二重複實驗並且重複執行兩次。IC50 ，50%抑制濃度。
圖7A所示為本發明之單株抗體雞尾酒在敘利亞倉鼠模型中對野生型SARS-CoV-2感染的預防性作用。圖7A的左圖所示為在鼻內攻毒前一天以單劑(0.4 mg/kg、4 mg/kg，或40 mg/kg)的單株抗體雞尾酒或以40 mg/kg的同種型單株抗體陰性對照處理的動物的體重變化(與第0天體重比較) 。圖7A的右圖所示為以半數組織培養感染劑量(median tissue culture infectious dose, TCID50 )測定法測量的肺部病毒量。圖7B所示為單株抗體雞尾酒在敘利亞倉鼠模型中對野生型SARS-CoV-2感染的治療性效果。圖7B的左圖所示為在鼻內攻毒後三小時以單劑(0.4 mg/kg、4 mg/kg，或40 mg/kg)的單株抗體雞尾酒或40 mg/kg的同種型單株抗體陰性對照處理的動物的體重變化(與第0天體重比較)。圖7B的右圖所示為以TCID50 測定法測量的肺部病毒量。數據代表平均值±平均值的標準誤差(standard error of the mean, SEM)(每組n = 4隻)。抗流感病毒神經胺酸酶人類IgG1單株抗體Z2B3作為同種型單株抗體對照。組間的統計顯著性以未配對的兩側 t 檢驗(unpaired two-sided t test)計算。P 值：*p ＜ 0.05；ns 表示不顯著。
圖8A所示為在SARS-CoV-2攻毒感染後第4天，倉鼠(每組 n = 4隻)的肺部中檢測到的的病毒量 (每µg病毒核酸拷貝數，基於外膜(E)蛋白基因的定量反轉錄PCR測定)。圖8B所示為在SARS-CoV-2攻毒感染後第4天，倉鼠(每組 n = 4隻)的肺部中檢測到的核鞘(N)蛋白基因的病毒RNA (每µg病毒核酸拷貝數，基於核鞘(N)蛋白基因的定量反轉錄PCR測定)。誤差槓代表平均值的標準偏差。
圖9A所示為在SARS-CoV-2攻毒感染後第四天，以40 mg/kg、4 mg/kg，以及0.4 mg/kg的單株抗體雞尾酒預防性處理的倉鼠的肺部與氣管的組織病理學發現。圖9B所示為在SARS-CoV-2攻毒感染後第四天，以40 mg/kg、4 mg/kg，以及0.4 mg/kg的單株抗體雞尾酒治療性處理的倉鼠的肺部與氣管的組織病理學發現。H&E染色。40 倍、100 倍、400 倍。

Claims (18)

  1. 一種抗新型冠狀病毒(Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2, SARS-CoV-2)的單株抗體或其抗原結合片段，包括 (i) 一重鏈可變區 (heavy chain variable region, VH )，其包含 (a) 一第一重鏈互補決定區(first heavy chain complementarity determining region, HCDR1)，具有與 SEQ ID NO: 69、SEQ ID NO: 75、SEQ ID NO: 81、SEQ ID NO: 87、SEQ ID NO: 93、SEQ ID NO: 99、SEQ ID NO: 105、SEQ ID NO: 111、SEQ ID NO: 117、SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 135、SEQ ID NO: 141、SEQ ID NO: 147、SEQ ID NO: 153、SEQ ID NO: 159、SEQ ID NO: 165、SEQ ID NO: 171、SEQ ID NO: 177、SEQ ID NO: 183、SEQ ID NO: 189、SEQ ID NO: 195、SEQ ID NO: 201、SEQ ID NO: 207、SEQ ID NO: 213、SEQ ID NO: 219、SEQ ID NO: 225、SEQ ID NO: 231、SEQ ID NO: 237、SEQ ID NO: 243、SEQ ID NO: 249、SEQ ID NO: 255、SEQ ID NO: 261、SEQ ID NO: 267、SEQ ID NO: 333、SEQ ID NO: 339、SEQ ID NO: 345、SEQ ID NO: 351、SEQ ID NO: 357、SEQ ID NO: 363、SEQ ID NO: 369、SEQ ID NO: 375、SEQ ID NO: 381、SEQ ID NO: 387、SEQ ID NO: 393、SEQ ID NO: 399、SEQ ID NO: 405、SEQ ID NO: 411、SEQ ID NO: 417、SEQ ID NO: 423、SEQ ID NO: 429、SEQ ID NO: 435、SEQ ID NO: 441、SEQ ID NO: 447、SEQ ID NO: 453、SEQ ID NO: 459、SEQ ID NO: 465、SEQ ID NO: 471、SEQ ID NO: 477、SEQ ID NO: 483、SEQ ID NO: 489、SEQ ID NO: 495、SEQ ID NO: 501，或 SEQ ID NO: 507所示之胺基酸序列約 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100%相同的一胺基酸序列； (b) 一第二重鏈互補決定區(HCDR2)，具有與SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 88、SEQ ID NO: 94、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 112、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 136、SEQ ID NO: 142、SEQ ID NO: 148、SEQ ID NO: 154、SEQ ID NO: 160、SEQ ID NO: 166、SEQ ID NO: 172、SEQ ID NO: 178、SEQ ID NO: 184、SEQ ID NO: 190、SEQ ID NO: 196、SEQ ID NO: 202、SEQ ID NO: 208、SEQ ID NO: 214、SEQ ID NO: 220、SEQ ID NO: 226、SEQ ID NO: 232、SEQ ID NO: 238、SEQ ID NO: 244、SEQ ID NO: 250、SEQ ID NO: 256、SEQ ID NO: 262、SEQ ID NO: 268、SEQ ID NO: 334、SEQ ID NO: 340、SEQ ID NO:346、SEQ ID NO: 352、SEQ ID NO: 358、SEQ ID NO: 364、SEQ ID NO: 370、SEQ ID NO: 376、SEQ ID NO: 382、SEQ ID NO: 388、SEQ ID NO: 394、SEQ ID NO: 400、SEQ ID NO: 406、SEQ ID NO: 412、SEQ ID NO: 418、SEQ ID NO: 424、SEQ ID NO: 430、SEQ ID NO: 436、SEQ ID NO: 442、SEQ ID NO: 448、SEQ ID NO: 454、SEQ ID NO: 460、SEQ ID NO: 466、SEQ ID NO: 472、SEQ ID NO: 478、SEQ ID NO: 484、SEQ ID NO: 490、SEQ ID NO: 496、SEQ ID NO: 502，或SEQ ID NO: 508所示之胺基酸序列約 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100%相同的一胺基酸序列；以及 (c) 一第三重鏈互補決定區(HCDR3)，具有與SEQ ID NO: 71、SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 83、SEQ ID NO: 89、SEQ ID NO: 95、SEQ ID NO: 101、SEQ ID NO: 107、SEQ ID NO: 113、SEQ ID NO: 119、SEQ ID NO: 125、SEQ ID NO: 131、SEQ ID NO: 137、SEQ ID NO: 143、SEQ ID NO: 149、SEQ ID NO: 155、SEQ ID NO: 161、SEQ ID NO: 167、SEQ ID NO: 173、SEQ ID NO: 179、SEQ ID NO: 185、SEQ ID NO: 191、SEQ ID NO: 197、SEQ ID NO: 203、SEQ ID NO: 209、SEQ ID NO: 215、SEQ ID NO: 221、SEQ ID NO: 227、SEQ ID NO: 233、SEQ ID NO: 239、SEQ ID NO: 245、SEQ ID NO: 251、SEQ ID NO: 257、SEQ ID NO: 263、SEQ ID NO: 269、SEQ ID NO: 335、SEQ ID NO: 341、SEQ ID NO:347、SEQ ID NO: 353、SEQ ID NO: 359、SEQ ID NO: 365、SEQ ID NO: 371、SEQ ID NO: 377、SEQ ID NO: 383、SEQ ID NO: 389、SEQ ID NO: 395、SEQ ID NO: 401、SEQ ID NO: 407、SEQ ID NO: 413、SEQ ID NO: 419、SEQ ID NO: 425、SEQ ID NO: 431、SEQ ID NO: 437、SEQ ID NO: 443、SEQ ID NO: 449、SEQ ID NO: 455、SEQ ID NO: 461、SEQ ID NO: 467、SEQ ID NO: 473、SEQ ID NO:479、SEQ ID NO: 485、SEQ ID NO: 491、SEQ ID NO: 497、SEQ ID NO: 503，或SEQ ID NO: 509所示之胺基酸序列約 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100%相同的一胺基酸序列；以及 (ii) 一輕鏈可變區 (light chain variable region, VL )，其包含 (a)  一第一輕鏈互補決定區(first light chain complementarity determining region, LCDR1)，具有與SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 84、SEQ ID NO: 90、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 108、SEQ ID NO: 114、SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 138、SEQ ID NO: 144、SEQ ID NO: 150、SEQ ID NO: 156、SEQ ID NO: 162、SEQ ID NO: 168、SEQ ID NO: 174、SEQ ID NO: 180、SEQ ID NO: 186、SEQ ID NO: 192、SEQ ID NO: 198、SEQ ID NO: 204、SEQ ID NO: 210、SEQ ID NO: 216、SEQ ID NO: 222、SEQ ID NO: 228、SEQ ID NO: 234、SEQ ID NO: 240、SEQ ID NO: 246、SEQ ID NO: 252、SEQ ID NO: 258、SEQ ID NO: 264、SEQ ID NO: 270、SEQ ID NO: 336、SEQ ID NO: 342、SEQ ID NO: 348、SEQ ID NO: 354、SEQ ID NO: 360、SEQ ID NO: 366、SEQ ID NO: 372、SEQ ID NO: 378、SEQ ID NO: 384、SEQ ID NO: 390、SEQ ID NO: 396、SEQ ID NO: 402、SEQ ID NO: 408、SEQ ID NO: 414、SEQ ID NO: 420、SEQ ID NO: 426、SEQ ID NO: 432、SEQ ID NO: 438、SEQ ID NO: 444、SEQ ID NO: 450、SEQ ID NO: 456、SEQ ID NO: 462、SEQ ID NO: 468、SEQ ID NO: 474、SEQ ID NO: 480、SEQ ID NO: 486、SEQ ID NO: 492、SEQ ID NO: 498、SEQ ID NO: 504，或SEQ ID NO: 510所示之胺基酸序列約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同的一胺基酸序列； (b) 一第二輕鏈互補決定區(LCDR2)，具有與SEQ ID NO: 73、SEQ ID NO: 79、SEQ ID NO: 85、SEQ ID NO: 91、SEQ ID NO: 97、SEQ ID NO: 103、SEQ ID NO: 109、SEQ ID NO: 115、SEQ ID NO: 121、SEQ ID NO: 127、SEQ ID NO: 133、SEQ ID NO: 139、SEQ ID NO: 145、SEQ ID NO: 151、SEQ ID NO: 157、SEQ ID NO: 163、SEQ ID NO: 169、SEQ ID NO: 175、SEQ ID NO: 181、SEQ ID NO: 187、SEQ ID NO: 193、SEQ ID NO: 199、SEQ ID NO: 205、SEQ ID NO: 211、SEQ ID NO: 217、SEQ ID NO: 223、SEQ ID NO: 229、SEQ ID NO: 235、SEQ ID NO: 241、SEQ ID NO: 247、SEQ ID NO: 253、SEQ ID NO: 259、SEQ ID NO: 265、SEQ ID NO: 271、SEQ ID NO: 337、SEQ ID NO: 343、SEQ ID NO: 349、SEQ ID NO: 355、SEQ ID NO: 361、SEQ ID NO: 367、SEQ ID NO: 373、SEQ ID NO: 379、SEQ ID NO: 385、SEQ ID NO: 391、SEQ ID NO: 397、SEQ ID NO: 403、SEQ ID NO: 409、SEQ ID NO: 415、SEQ ID NO: 421、SEQ ID NO: 427、SEQ ID NO: 433、SEQ ID NO: 439、SEQ ID NO: 445、SEQ ID NO: 451、SEQ ID NO: 457、SEQ ID NO: 463、SEQ ID NO: 469、SEQ ID NO: 475、SEQ ID NO: 481、SEQ ID NO: 487、SEQ ID NO: 493、SEQ ID NO: 499、SEQ ID NO: 505，或SEQ ID NO: 511所示之胺基酸序列約 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100%相同的一胺基酸序列；以及 (c)  一第三輕鏈互補決定區(LCDR3)，具有與SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO: 86、SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO: 110、SEQ ID NO: 116、SEQ ID NO: 122、SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 134、SEQ ID NO: 140、SEQ ID NO: 146、SEQ ID NO: 152、SEQ ID NO: 158、SEQ ID NO: 164、SEQ ID NO: 170、SEQ ID NO: 176、SEQ ID NO: 182、SEQ ID NO: 188、SEQ ID NO: 194、SEQ ID NO: 200、SEQ ID NO: 206、SEQ ID NO: 212、SEQ ID NO: 218、SEQ ID NO: 224、SEQ ID NO: 230、SEQ ID NO: 236、SEQ ID NO: 242、SEQ ID NO: 248、SEQ ID NO: 254、SEQ ID NO: 260、SEQ ID NO: 266、SEQ ID NO: 272、SEQ ID NO: 338、SEQ ID NO: 344、SEQ ID NO: 350、SEQ ID NO: 356、SEQ ID NO: 362、SEQ ID NO: 368、SEQ ID NO: 374、SEQ ID NO: 380、SEQ ID NO: 386、SEQ ID NO: 392、SEQ ID NO: 498、SEQ ID NO: 404、SEQ ID NO: 410、SEQ ID NO: 416、SEQ ID NO: 422、SEQ ID NO: 428、SEQ ID NO: 434、SEQ ID NO: 440、SEQ ID NO: 446、SEQ ID NO: 452、SEQ ID NO: 458、SEQ ID NO: 464、SEQ ID NO: 470、SEQ ID NO: 476、SEQ ID NO: 482、SEQ ID NO: 488、SEQ ID NO: 494、SEQ ID NO: 500、SEQ ID NO: 506，或SEQ ID NO: 512所示之胺基酸序列約 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100%相同的一胺基酸序列。
  2. 如請求項1所述之單株抗體或抗原結合片段，其中 (i) 該重鏈可變區(VH )包含與SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 49、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 57、SEQ ID NO: 59、SEQ ID NO: 61、SEQ ID NO: 63、SEQ ID NO: 65、SEQ ID NO: 67、SEQ ID NO: 273、SEQ ID NO: 275、SEQ ID NO: 277、SEQ ID NO: 279、SEQ ID NO: 281、SEQ ID NO: 283、SEQ ID NO: 285、SEQ ID NO: 287、SEQ ID NO: 289、SEQ ID NO: 291、SEQ ID NO: 293、SEQ ID NO: 295、SEQ ID NO: 297、SEQ ID NO: 299、SEQ ID NO: 301、SEQ ID NO: 303、SEQ ID NO: 305、SEQ ID NO: 307、SEQ ID NO: 309、SEQ ID NO: 311、SEQ ID NO: 313、SEQ ID NO: 315、SEQ ID NO: 317、SEQ ID NO: 319、SEQ ID NO: 321、SEQ ID NO: 323、SEQ ID NO: 325、SEQ ID NO: 327、SEQ ID NO: 329，或SEQ ID NO: 331所示之胺基酸序列約 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100%相同的一胺基酸序列；以及 (ii) 該輕鏈可變區(VL )包含與SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 274、SEQ ID NO: 276、SEQ ID NO: 278、SEQ ID NO: 280、SEQ ID NO: 282、SEQ ID NO: 284、SEQ ID NO: 286、SEQ ID NO: 288、SEQ ID NO: 290、SEQ ID NO: 292、SEQ ID NO: 294、SEQ ID NO: 296、SEQ ID NO: 298、SEQ ID NO: 300、SEQ ID NO: 302、SEQ ID NO: 304、SEQ ID NO: 306、SEQ ID NO: 308、SEQ ID NO: 310、SEQ ID NO: 312、SEQ ID NO: 314、SEQ ID NO: 316、SEQ ID NO: 318、SEQ ID NO: 320、SEQ ID NO: 322、SEQ ID NO: 324、SEQ ID NO: 326、SEQ ID NO: 328、SEQ ID NO: 330，或SEQ ID NO: 332所示之胺基酸序列約 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100%相同的一胺基酸序列。
  3. 一種醫藥組合物，包含至少一種如請求項1所述之單株抗體或其抗原結合片段。
  4. 如請求項3所述之醫藥組合物，進一步包括至少一種藥學上可接受的載體。
  5. 一種用於檢測一樣品中新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)存在的套組，包含至少一種如請求項1所述之單株抗體或其抗原結合片段。
  6. 如請求項5所述之套組，其中該至少一種如請求項1所述之單株抗體或其抗原結合片段包含一可檢測的標記物。
  7. 根據請求項6所述之套組，其中該可檢測的標記物選自一酶標記物、一螢光標記物、一金屬標記物，以及一放射性標記物。
  8. 根據請求項6所述之套組，其中該可檢測的標記物選自金奈米顆粒、有色乳膠微珠、磁性顆粒、碳奈米顆粒，以及硒奈米顆粒。
  9. 根據請求項5所述之套組，其中該套組為一免疫測定套組，該免疫測定套組係選自由酵素結合免疫吸附分析法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)、放射性免疫測定法(radioimmunoassay, RIA)、螢光免疫測定法(fluorescence immunoassay, FIA)、發光免疫測定法(luminescence immunoassay, LIA)，以及免疫螢光測定法(immunoluminometric assay, ILMA)所組成之群組。
  10. 如請求項9所述之套組，其中該免疫測定為一三明治式測定法或一側向流動測定形式。
  11. 一種在一懷疑含有新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)的樣品中檢測該新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)之方法，包括將該樣品與至少一種如請求項1所述之單株抗體或其抗原結合片段接觸，並分析該抗體與該樣品的結合。
  12. 如請求項11所述之方法，其中該樣品為尿液、糞便或取自呼吸道。
  13. 如請求項12所述之方法，其中該取自呼吸道的樣品為鼻咽(nasopharyngeal, NP)或鼻(nasal, NS)拭子。
  14. 如請求項11所述之方法，其中該SARS-COV-2係透過一三明治式免疫測定或側向流動測定所檢測。
  15. 一種如請求項1所述之單株抗體或其抗原結合片段在製備用於預防或治療由血管收縮素轉化酶2 (angiotensin-converting enzyme 2, ACE2)媒介的疾病的藥物中之用途。
  16. 如請求項15所述之用途，其中該由ACE2媒介的疾病為新型冠狀病毒(SARS-COV-2)感染。
  17. 一種核酸，包含一編碼一重鏈可變區(heavy chain variable region, VH )、一輕鏈可變區(light chain variable region, VL )或兩者的核苷酸序列，其中該VH 與VL 如請求項1所述。
  18. 一種分離的宿主細胞，包含如請求項17所述之核酸。
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