EA029226B1

EA029226B1 - Дефект гена ckx3 и по крайней мере одного другого гена ckx в растении или растительной клетке, которые приводят к улучшенным признакам

Info

Publication number: EA029226B1
Application number: EA201200100A
Authority: EA
Inventors: Томас Шмюллинг; И Маннс Изабель Бартрина; Томас Вернер
Original assignee: Томас Шмюллинг; И Маннс Изабель Бартрина; Томас Вернер
Priority date: 2009-07-10
Filing date: 2010-07-09
Publication date: 2018-02-28
Also published as: EA201200100A1; EP2451959A1; AU2010270138A1; BR112012000642A2; ZA201200175B; WO2011004003A1; AU2010270138B2; DK2451959T3; CA2767490C; JP2012532594A; LT2451959T; CN102549161A; US20120167254A1; CA2767490A1; PT2451959T; UA106621C2; EP2451959B1; PL2451959T3; JP5758889B2; ES2621992T3

Abstract

Данное изобретение является направленным на изолированные клетки растений и трансгенные растения, которые включают дефект по крайней мере в одном CKX3 гене и в одном дополнительном гене, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу и является отличным от CKX3, а также на способы получения таких трансгенных растений и на способы повышения урожайности семян у растения и/или высоты растения.

Description

изобретение относится к изолированной растительной клетке, которая включает нарушение, по крайней мере, в:

ί) эндогенном СКХ3 гене, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕО ГО Ыо. 1 или ее ортологом;

и

ίί) одном дополнительном эндогенном гене, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу и

- 1 029226

является отличным от гена, который определен в ί);

где указанные нарушения ингибируют экспрессию и/или активность продукта по крайней мере

двух нарушенных генов цитокининоксидазы/дегидрогеназы по сравнению с соответствующей контрольной растительной клеткой, которая не имеет таких нарушений.

Во второму аспекте данное изобретение является направленным на трансгенное растение, которое включает нарушения, по крайней мере, в:

ί) эндогенном СКХ3 гене, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕО ГО Νο. 1 или ее ортологом;

и

ίί) одном дополнительном эндогенном гене, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу и является отличным от гена, который является определенным в ί);

где указанные нарушения ингибируют экспрессию и/или активность продукта по крайней мере двух нарушенных генов цитокининоксидазы/дегидрогеназы по сравнению с соответствующим контрольным растением, которое не имеет таких нарушений. При этом является понятным, что для целей данного изобретения термин "трансгенное растение" охватывает не только растение, которое включает нарушение согласно изобретению как такое, но также относится к любому его потомству, независимо от номера поколения, то есть, термин "трансгенное растение" охватывает потомство первого поколения, а также потомство Х поколения, при условии, что указанное потомство все еще включает нарушения согласно изобретению, которые охватываются родительским трансгенным растением.

В третьем аспекте изобретение относится к способу повышения урожайности семян у растения и/или повышения высоты растения и/или увеличения толщины стебля по сравнению с соответствующим контрольным растением, где способ включает введение в растение нарушения, по крайней мере, в:

и

где указанные нарушения ингибируют экспрессию и/или активность продукта, по крайней мере, двух нарушенных генов цитокининоксидазы/дегидрогеназы по сравнению с соответствующим контрольным растением, которое не имеет таких нарушений.

В четвертом аспекте данное изобретение является направленным на способ получения растения с повышенной урожайностью семян и/или высотой растения по сравнению с соответствующим контрольным растением, которое включает нарушение у растения, по крайней мере, в:

и

и) одном дополнительном эндогенном гене, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу и является отличным от гена, который является определенным в ί);

Данное изобретение также относится к изолированной растительной клетке, которая включает нарушение, по крайней мере, в:

ί) эндогенном СКХ3 гене, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕО ГО Νο. 1 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80%, или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с 8ЕО ГО Νο. 1 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот 8ЕО ГО Νο. 1, преимущественно 100 аминокислот 8ЕО ГО Νο. 1, более преимущественно вдоль полной длины последовательности 8Еф ГО Νο. 1;

и

ίί) по крайней мере в одном дополнительном эндогенном гене, который представляет собой:

а) СКХ1 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную

последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕО ГО Νο. 13 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с одной из 8ЕО ГО Νο. 13 вдоль беспрерывной аминокис- 2 029226

лотной последовательности из 50 аминокислот δΕΟ ΙΌ Νο. 13, преимущественно 100 аминокислот δΕΟ ГО Νο. 13, более преимущественно вдоль полной длины δΕΟ ГО Νο. 13;

b) СКХ2 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕΟ ГО Νο. 2 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с δΕΟ ГО Νο. 2 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот δΕΟ ГО Νο. 2, преимущественно 100 аминокислот δΕΟ ГО Νο. 2, более преимущественно вдоль полной длины δΕΟ ГО Νο. 2;

c) СКХ4 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕΟ ГО Νο. 3 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с δΕΟ ГО Νο. 3 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот δΕΟ ГО Νο. 3, преимущественно 100 аминокислот δΕΟ ГО Νο. 3, более преимущественно вдоль полной длины δΕΟ ГО Νο. 3;

ά) СКХ5 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕΟ ГО Νο. 4 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с δΕΟ ГО Νο. 4 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот δΕΟ ГО Νο. 4, преимущественно 100 аминокислот δΕΟ ГО Νο. 4, более преимущественно вдоль полной длины δΕΟ ГО Νο. 4;

е) СКХ6 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕΟ ГО Νο. 5 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с δΕΟ ГО Νο. 5 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот δΕΟ ГО Νο. 5, преимущественно 100 аминокислот δΕΟ ГО Νο. 5, более преимущественно вдоль полной длины δΕΟ ГО Νο. 5;

или

ί) СКХ7 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕΟ ГО Νο. 6 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с δΕΟ ГО Νο. 6 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот δΕΟ ГО Νο. 6, преимущественно 100 аминокислот δΕΟ ГО Νο. 6, более преимущественно вдоль полной длины δΕΟ ГО Νο. 6;

где указанные нарушения ингибируют экспрессию и/или активность продукта, по крайней мере, двух нарушенных генов цитокининоксидазы/дегидрогеназы по сравнению с соответствующей контрольной растительной клеткой, которая не имеет таких нарушений.

Данное изобретение также относится к трансгенному растению, которое включает нарушение, по крайней мере, в:

ί) эндогенном СКХ3 гене, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕΟ ГО Νο. 1 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, которая включает полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с δΕΟ ГО Νο. 1 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот δΕΟ ГО Νο. 1, преимущественно 100 аминокислот δΕΟ ΙΌ Νο. 1, более преимущественно вдоль полной длины δΕΟ ΙΌ Νο. 1;

и

последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕΟ ГО Νο. 13 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по

- 3 029226

крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней

мере 90% идентичностью последовательности с 5>ЕО ГО Νο. 13 вдоль беспрерывной аминокислотной

последовательности из 50 аминокислот ЯЕЩ ГО Νο. 13, преимущественно 100 аминокислот 5Еф ГО Νο.

13, более преимущественно вдоль полной длины 5>ЕО ГО Νο. 13;

b) СКХ2 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 5>ЕО ГО Νο. 2 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с ЯЕЩ ГО Νο. 2 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот ЯЕЩ ГО Νο. 2, преимущественно 100 аминокислот 5Еф ГО Νο. 2, более преимущественно вдоль полной длины ЯЕЩ ГО Νο. 2;

c) СКХ4 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 5>ЕО ГО Νο. 3 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с ЯЕЩ ГО Νο. 3 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот ЯЕЩ ГО Νο. 3, преимущественно 100 аминокислот 5Еф ГО Νο. 3, более преимущественно вдоль полной длины ЯЕЩ ГО Νο. 3;

б) СКХ5 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 5>ЕО ГО Νο. 4 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с ЯЕЩ ГО Νο. 4 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот ЯЕЩ ГО Νο. 4, преимущественно 100 аминокислот 5Еф ГО Νο. 4, более преимущественно вдоль полной длины ЯЕЩ ГО Νο. 4;

е) СКХ6 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 5>ЕО ГО Νο. 5 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с ЯЕЩ ГО Νο. 5 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот ЯЕЩ ГО Νο. 5, преимущественно 100 аминокислот 5Еф ГО Νο. 5, более преимущественно вдоль полной длины ЯЕЩ ГО Νο. 5;

или

ί) СКХ7 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 5>ЕО ГО Νο. 6 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с ЯЕЩ ГО Νο. 6 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот ЯЕЩ ГО Νο. 6, преимущественно 100 аминокислот 5Еф ГО Νο. 6, более преимущественно вдоль полной длины ЯЕЩ ГО Νο. 6;

Изолированная растительная клетка согласно изобретению и/или трансгенное растение согласно изобретению могут включать нарушение, по крайней мере, в:

ί) эндогенном СКХ3 гене, который включает последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с ЯЕЩ ГО Νο. 7 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с 5>ЕО ГО Νο. 7 на протяжении беспрерывной последовательности нуклеиновой кислоты из 300 нуклеотидов 5>ЕО ГО Νο. 7, преимущественно 500 нуклеотидов 5>ЕО ГО Νο. 7, более преимущественно вдоль полной длины 5Еф ГО Νο. 7;

и

а) СКХ1 ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 5>ЕО ГО Νο. 14 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который включает последовательность нуклеино- 4 029226

вой кислоты по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80%

или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с 8ЕО ΙΌ Νο. 14 вдоль беспрерывной последовательности нуклеиновой кислоты из 300 нуклеотидов 8ЕО ГО Νο. 14, преимущественно 500 нуклеотидов последовательности 8ЕО ГО Νο. 14, более преимущественно вдоль полной длины 8ЕО ГО Νο.

14;

b) СКХ2 ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕО ГО Νο. 8 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с 8ЕО ГО Νο. 8 вдоль беспрерывной последовательности нуклеиновой кислоты из 300 нуклеотидов последовательности 8ЕО ГО Νο. 8, преимущественно 500 нуклеотидов 8ЕО ГО Νο. 8, более преимущественно вдоль полной длины 8ЕО ГО Νο. 8;

c) СКХ4 ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕО ГО Νο. 9 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с 8ЕО ГО Νο. 9 вдоль беспрерывной последовательности нуклеиновой кислоты из 300 нуклеотидов 8ЕО ГО Νο. 9, преимущественно 500 нуклеотидов 8ЕО ГО Νο. 9, более преимущественно вдоль полной длины 8ЕО ГО Νο. 9;

ά) СКХ5 ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕО ГО Νο. 10 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80%, или по крайней мере 90% идентичностью последовательности к 8ЕО ГО Νο. 10 вдоль беспрерывной последовательности нуклеиновой кислоты из 300 нуклеотидов 8ЕО ГО Νο. 10, преимущественно 500 нуклеотидов 8ЕО ГО Νο. 10, более преимущественно вдоль полной длины 8ЕО ГО Νο. 10;

е) СКХ6 ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕО ГО Νο. 11 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с 8ЕО ГО Νο. 11 вдоль беспрерывной последовательности нуклеиновой кислоты из 300 нуклеотидов последовательности 8ЕО ГО Νο. 11, преимущественно 500 нуклеотидов 8ЕО ГО Νο. 11, более преимущественно вдоль полной длины 8ЕО ГО Νο. 11;

или

ί) СКХ7 ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕО ГО Νο. 12 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с 8ЕО ГО Νο. 12 вдоль беспрерывной последовательности нуклеиновой кислоты из 300 нуклеотидов последовательности 8ЕО ГО Νο. 12, преимущественно 500 нуклеотидов 8ЕО ГО Νο. 12, более преимущественно вдоль полной длины 8ЕО ГО Νο. 12;

где указанные нарушения ингибируют экспрессию и/или активность продукта по крайней мере двух нарушенных генов цитокининоксидазы/дегидрогеназы по сравнению с соответствующим контрольным растением или клеткой контрольного растения, которое не имеет таких нарушений.

Преимущественно изолированная растительная клетка согласно изобретению и/или трансгенное растение согласно изобретению включает нарушение в:

ί) по крайней мере, эндогенном СКХ3 гене, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕО ГО Νο. 1 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с 8ЕО ГО Νο. 1 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот 8ЕО ГО Νο. 1, преимущественно 100 аминокислот последовательности 8ЕО ГО Νο. 1, более преимущественно вдоль полной длины 8ЕО ГО Νο. 1;

и

ίί) эндогенном СКХ5 гене, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕО ГО Νο. 4 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последова- 5 029226

тельность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или

по крайней мере 90% идентичностью последовательности с 8ΕΟ ГО Νο. 4 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности с 50 аминокислот последовательности 8ΕΟ ГО Νο. 4, преимущественно

100 аминокислот 8ΕΟ ГО Νο. 4, более преимущественно вдоль полной длины 8Еф ГО Νο. 4.

ί) эндогенном СКХ3 гене, который включает последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ΕΟ ГО Νο. 7 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности к 8ΕΟ ГО Νο. 7 вдоль беспрерывной последовательности нуклеиновой кислоты из 300 нуклеотидов последовательности 8ΕΟ ГО Νο. 7, преимущественно 500 нуклеотидов 8ΕΟ ГО Νο. 7, более преимущественно вдоль полной длины 8Еф ГО Νο. 7;

и

ίί) эндогенном СКХ5 гене, который включает последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ΕΟ ГО Νο. 10 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности к 8ΕΟ ГО Νο. 10 вдоль беспрерывной последовательности нуклеиновой кислоты из 300 нуклеотидов последовательности 8ΕΟ ГО Νο. 10, преимущественно 500 нуклеотидов 8ΕΟ ГО Νο. 10, более преимущественно вдоль полной длины 8ΕΟ ГО Νο. 10.

В изолированной растительной клетке согласно изобретению и/или в трансгенном растении согласно изобретению одно, больше одного или все нарушения согласно изобретению могут быть улучшены с помощью структурного нарушения, антисмысловой супрессии полинуклеотидного гена, молчания гена, индуцированного двухцепочечной РНК, методик на основе рибозима, геномных нарушений, тиллинга и/или гомологической рекомбинации.

В изолированной клетке растения согласно изобретению и/или в трансгенном растении согласно изобретению одно, больше одного или все нарушения согласно изобретению могут быть гомозиготными нарушениями.

Трансгенное растение согласно изобретению является преимущественно выбранным из семейства Вга881сасеае, более преимущественно из рода Вга881са или ΑπιΕίάορδίδ.

Данное изобретение является также направленным на клетку, орган, ткань или трансгенный материал для размножения, которые происходят от трансгенного растения согласно изобретению. Трансгенный материал для размножения охватывает части трансгенного растения согласно изобретению, такие как семена, клубни, корнеплоды, расширенные стержневые корни или плоды, которые происходят от трансгенного растения согласно изобретению.

Данное изобретение также является направленным на способ повышения урожайности семян растения и/или увеличение высоты растения по сравнению с соответствующим контрольным растением, при этом способ включает введение в растение нарушения, по крайней мере, в:

ί) эндогенном СКХ3 гене, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ΕΟ ГО Νο. 1 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80%, или по крайней мере 90% идентичностью последовательности к 8ΕΟ ГО Νο. 1 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот 8ΕΟ ГО Νο. 1, преимущественно 100 аминокислот последовательности 8ΕΟ ГО Νο. 1, более преимущественно вдоль полной длины 8Еф ГО Νο. 1;

и

ίί) по крайней мере одном дополнительном эндогенном гене, который представляет собой:

a) СКХ1 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ΕΟ ГО Νο. 13 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с 8ΕΟ ГО Νο. 13 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот 8ΕΟ ГО Νο. 13, преимущественно 100 аминокислот 8Еф ГО Νο. 13, более преимущественно вдоль полной длины 8ΕΟ ГО Νο. 13;

b) СКХ2 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ΕΟ ГО Νο. 2 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по

- 6 029226

мере 90% идентичностью последовательности с 8ЕЦ ΙΌ Νο. 2 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот 8ЕЦ ГО Νο. 2, преимущественно 100 аминокислот 8ЕЦ ГО Νο. 2,

более преимущественно вдоль полной длины 8ЕЦ ГО Νο. 2;

с) СКХ4 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕЦ ГО Νο. 3 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с 8ЕЦ ГО Νο. 3 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот 8ЕЦ ГО Νο. 3, преимущественно 100 аминокислот 8ЕЦ ГО Νο. 3, более преимущественно вдоль полной длины 8ЕЦ ГО Νο. 3;

й) СКХ5 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕЦ ГО Νο. 4 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с 8ЕЦ ГО Νο. 4 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот 8ЕЦ ГО Νο. 4, преимущественно 100 аминокислот 8ЕЦ ГО Νο. 4, более преимущественно вдоль полной длины 8ЕЦ ГО Νο. 4;

е) СКХ6 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕЦ ГО Νο. 5 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с 8ЕЦ ГО Νο. 5 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот 8ЕЦ ГО Νο. 5, преимущественно 100 аминокислот 8ЕЦ ГО Νο. 5, более преимущественно вдоль полной длины 8ЕЦ ГО Νο. 5;

или

ί) СКХ7 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕЦ ГО Νο. 6 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с 8ЕЦ ГО Νο. 6 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот 8ЕЦ ГО Νο. 6, преимущественно 100 аминокислот 8ЕЦ ГО Νο. 6, более преимущественно вдоль полной длины 8ЕЦ ГО Νο. 6;

В дополнительном аспекте данное изобретение является направленным на способ получения растения, преимущественно трансгенного растения, с повышенной урожайностью семян и/или высотой растения по сравнению с соответствующим контрольным растением, которое включает нарушение в растении, по крайней мере, в:

ί) эндогенном СКХ3 гене, который кодирует

цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕЦ ГО Νο. 1 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности к 8ЕЦ ГО Νο. 1 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот 8ЕЦ ГО Νο. 1, преимущественно 100 аминокислот 8ЕЦ ГО Νο. 1, более преимущественно вдоль полной длины 8ЕЦ ГО Νο. 1;

и

ίί) по крайней мере, в одном дополнительном эндогенном, который представляет собой:

последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕЦ ГО Νο. 13 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с 8ЕЦ ГО Νο. 13 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот 8ЕЦ ГО Νο. 13, преимущественно 100 аминокислот 8ЕЦ ГО Νο.

- 7 029226

13, более преимущественно вдоль полной длины 5Еф ΙΌ Νο. 13;

b) СКХ2 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 5Еф ГО Νο. 2 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с 5Еф ГО Νο. 2 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот 5Еф ГО Νο. 2, преимущественно 100 аминокислот 5Еф ГО Νο. 2, более преимущественно вдоль полной длины 5Еф ГО Νο. 2;

c) СКХ4 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 5Еф ГО Νο. 3 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с 5Еф ГО Νο. 3 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот 5Еф ГО Νο. 3, преимущественно 100 аминокислот 5Еф ГО Νο. 3, более преимущественно вдоль полной длины 5Еф ГО Νο. 3;

б) СКХ5 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 5Еф ГО Νο. 4 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с 5Еф ГО Νο. 4 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот 5Еф ГО Νο. 4, преимущественно 100 аминокислот 5Еф ГО Νο. 4, более преимущественно вдоль полной длины 5Еф ГО Νο. 4;

е) СКХ6 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 5Еф ГО Νο. 5 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с 5Еф ГО Νο. 5 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот 5Еф ГО Νο. 5, преимущественно 100 аминокислот 5Еф ГО Νο. 5, более преимущественно вдоль полной длины 5Еф ГО Νο. 5;

или

ί) СКХ7 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 5Еф ГО Νο. 6 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с 5Еф ГО Νο. 6 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот 5Еф ГО Νο. 6, преимущественно 100 аминокислот 5Еф ГО Νο. 6, более преимущественно вдоль полной длины 5Еф ГО Νο. 6;

В способах согласно изобретению преимущественно:

ί) по крайней мере, эндогенный СКХ3 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 5Еф ГО Νο. 1 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности к 5Еф ГО Νο. 1 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот 5Еф ГО Νο. 1, преимущественно 100 аминокислот 5Еф ГО Νο. 1, более преимущественно вдоль полной длины 5Еф ГО Νο. 1;

ίί) эндогенный СКХ5 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 5Еф ГО Νο. 4 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности к 5Еф ГО Νο. 4 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот 5Еф ГО Νο. 4, преимущественно 100 аминокислот 5Еф ГО Νο. 4, более преимущественно вдоль полной длины 5Еф ГО Νο. 4, могут преимущественно быть

- 8 029226

нарушены.

В способе согласно изобретению преимущественно:

ί) эндогенный СКХ3 ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕЦ ГО Νο. 7 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности к 8ЕЦ ГО Νο. 7 вдоль беспрерывной последовательности нуклеиновой кислоты из 300 нуклеотидов 8ЕЦ ГО Νο. 7, преимущественно 500 нуклеотидов с 8ЕЦ ГО Νο. 7, более преимущественно вдоль полной длины 8ЕЦ ГО Νο. 7;

и

ίί) по крайней мере, один дополнительный эндогенный ген представляет собой:

a) СКХ1 ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕЦ ГО Νο. 14 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с 8ЕЦ ГО Νο. 14 вдоль беспрерывной последовательности нуклеиновой кислоты из 300 нуклеотидов 8ЕЦ ГО Νο. 14, преимущественно 500 нуклеотидов 8ЕЦ ГО Νο. 14, более преимущественно вдоль полной длины 8ЕЦ ГО Νο. 14;

b) СКХ2 ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕЦ ГО Νο. 8 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности к 8ЕЦ ГО Νο. 8 вдоль беспрерывной последовательности нуклеиновой кислоты из 300 нуклеотидов 8ЕЦ ГО Νο. 8, преимущественно 500 нуклеотидов 8ЕЦ ГО Νο. 8, более преимущественно вдоль полной длины 8ЕЦ ГО Νο. 8;

c) СКХ4 ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕЦ ГО Νο. 9 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности к 8ЕЦ ГО Νο. 9 вдоль беспрерывной последовательности нуклеиновой кислоты из 300 нуклеотидов 8ЕЦ ГО Νο. 9, преимущественно 500 нуклеотидов 8ЕЦ ГО Νο. 9, более преимущественно вдоль полной длины 8ЕЦ ГО Νο. 9;

ά) СКХ5 ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕЦ ГО Νο. 10 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности к 8ЕЦ ГО Νο. 10 вдоль беспрерывной последовательности нуклеиновой кислоты из 300 нуклеотидов 8ЕЦ ГО Νο. 10, преимущественно с 500 нуклеотидов 8ЕЦ ГО Νο. 10, более преимущественно вдоль полной длины 8ЕЦ ГО Νο. 10;

е) СКХ6 ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕЦ ГО Νο. 11 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности к 8ЕЦ ГО Νο. 11 на протяжении беспрерывной последовательности нуклеиновой кислоты из 300 нуклеотидов 8ЕЦ ГО Νο. 11, преимущественно 500 нуклеотидов 8ЕЦ ГО Νο. 11, более преимущественно вдоль полной длины 8ЕЦ ГО Νο. 11;

или

ί) СКХ7 ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕЦ ГО Νο. 12 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности к 8ЕЦ ГО Νο. 12 вдоль беспрерывной последовательности нуклеиновой кислоты из 300 нуклеотидов 8ЕЦ ГО Νο. 12, преимущественно с 500 нуклеотидов 8ЕЦ ГО Νο. 12, более преимущественно вдоль полной длины 8ЕЦ ГО Νο. 12;

являются нарушенными.

В другом желательном способе согласно изобретению:

ί) эндогенный СКХ3 ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕЦ ГО Νο. 7 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности к 8ЕЦ ГО Νο. 7 на протяжении беспрерывной последовательности нуклеиновой кислоты из 300 нуклеотидов 8ЕЦ ГО Νο. 7, преимущественно 500 нук- 9 029226

леотидов ЗЕЦ ГО Νο. 7, более преимущественно вдоль полной длины δΕΟ ГО Νο. 7; и

и) эндогенный СКХ5 ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕΟ ГО Νο. 10 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности к δΕΟ ГО Νο. 10 вдоль беспрерывной последовательности нуклеиновой кислоты из 300 нуклеотидов δΕΟ ГО Νο. 10, преимущественно 500 нуклеотидов δΕΟ ГО Νο. 10, более преимущественно вдоль полной длины δΕΟ ГО Νο. 10, являются нарушенными.

В способах согласно изобретению преимущественно одно, больше одного или все нарушения представляют собой гомозиготные нарушения.

Данное изобретение является также направленным на изолированные растительные клетки или трансгенные растения, которые получены или могут быть получены с помощью одного из способов согласно изобретению.

В одном воплощении по крайней мере одно из нарушений в изолированных клетках растения согласно изобретению или в трансгенном растении согласно изобретению получают путем введения по крайней мере одной полинуклеотидной последовательности, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую по крайней мере приблизительно 70%, по крайней мере приблизительно 75%, по крайней мере приблизительно 80%, по крайней мере приблизительно 85%, по крайней мере приблизительно 90%, по крайней мере приблизительно 95%, по крайней мере приблизительно 99%, приблизительно 99,5% или большую идентичность последовательности с δΕΟ ΙΌ Νο. 14 (СКХ1), δΕΟ ΙΌ Νο. 7 (СКХ3), δΕΟ ΙΌ Νο. 8 (СКХ2), δΕΟ ΙΌ Νο. 9 (СКХ4), δΕΟ ΙΌ Νο. 10 (СКХ5), δΕΟ ΙΌ Νο. 11 (СКХ6), δΕΟ ГО Νο. 12 (СКХ7) или ее субпоследовательностью, или ее комплементом, в растительной клетке, так, что, по крайней мере, одна полинуклеотидная последовательность является связанной с промотором в смысловой или антисмысловой ориентации. В другом воплощении нарушения вводят в растительную клетку или трансгенное растение согласно изобретению путем введения по крайней мере одной полинуклеотидной последовательности, конфигурированной для молчания или угнетения РНК.

В другом воплощении одно, больше одного или все нарушения по крайней мере в одном из упомянутых выше эндогенных генов включают инсерцию одного или более транспозонов, при этом одно, больше одного или все нарушения могут включать одну или более точечных мутаций по крайней мере в одном из упомянутых выше эндогенных генов.

Одно, больше одного или все нарушения по крайней мере в одном из упомянутых выше эндогенных генов могут представлять собой гомозиготные нарушения. Альтернативно, одно, больше одного или все нарушения по крайней мере в одном из упомянутых выше эндогенных генов могут представлять собой гетерозиготные нарушения. В некоторых воплощениях нарушения по крайней мере в одном из упомянутых выше эндогенных генов могут включать гомозиготные нарушения, гетерозиготные нарушения или комбинацию гомозиготных и гетерозиготных нарушений.

Если не определено иное, то все технические и научные термины, которые используются в данной заявке, имеют такое же значение, как в общем случае понимается средним специалистом в данной области техники, к которой относится изобретение. В описании и пунктах формулы данного изобретения будет использоваться следующая терминология в соответствии с определениями, приведенными ниже.

Как используется в данном описании и приложенных пунктах формулы, сингулярные формы "любой", "один" и "этот" включают формы единственного числа и множества, если в контексте ясно не указано иное. Таким образом, например, ссылки на "любую клетку" включает одну клетку и любую комбинацию двух или более клеток и т.д.

Термин "растение" в общем случае относится к любому из указанных ниже: цельные растения, части или органы растения (например, листья, стебля, корни и т.п.), вегетативные органы / структуры проростков (например, листья, стебли и клубни), корни, цветы и цветковые органы / структуры (например, прицветник, чашелистики, лепестки, тычинки, плодолистики, пыльники и семенной зачаток), семена (включая завязь, эндосперм и покровы семян), плод (зрелая завязь), растительную ткань (например, проводящую ткань, основную паренхиму и подобные им), каллусы тканевой культуры и клетки растений (например, клетки устьиц, яйцеклетки, трихомы и подобные им), а также их потомство. Термин "растение" в общем случае означает все эти организмы, которые являются способными к фотосинтезу. В термин "растение" согласно объему данного изобретения включаются все роды и виды высших и низших растений царства растений. Зрелые растения означают растения на любой стадии развития, более высокой, чем стадия проростка. Проросток означает молодое незрелое растение на ранней стадии развития. Однолетние, многолетние, однодольные и/или двудольные растения являются желательными. Преимущество предоставляется растениям следующего семейства растений: Вга881сасеае, в частности растениям рода Вга881са и ΑκιΟίάορδίδ.

Термин "растительная клетка", как используется в данной заявке, дополнительно включает, но без ограничении, клетки, полученные из или выявленные в растении или его части: семена, культуры, сус- 10 029226

пензионные культуры, завязи, меристематические участки, ткань каллусов, листья, корни, побеги, гаметофиты, спорофиты, пыльцу и микроспоры. Клетки растений могут также предусматривать включение модифицированных клеток, таких как протопласты, полученные из упомянутых выше тканей.

Термин "нарушение" или "нарушенный", как используется в данной заявке, означает, что ген может быть структурно нарушенным для включения по крайней мере одной мутации или структурного изменения так, что нарушенный ген является неспособным к направлению эффективной экспрессии продукта функционального гена полного размера. Термин "нарушение" или нарушенный" также охватывает ситуацию, когда нарушенный ген или один из его продуктов может функционально ингибироваться или инактивироваться так, что ген или не экспрессируется или является неспособным к эффективной экспрессии полноразмерного и/или полностью функционального генного продукта. Функциональное ингибирование или инактивация может быть вызвана структурным нарушением и/или прерыванием экспрессии на уровне транскрипции или трансляции. Функциональное ингибирование или инактивация может быть также достигнута, например, с помощью способов, таких как антисмысловая супрессия полинуклеотидного гена, индуцированное РНК молчание гена, методики на основе рибозима и подобные им. Ингибирование экспрессии и/или активности может быть результатом, например, антисмысловых конструкций, смысловых конструкций, конструкций молчания РНК, РНК интерференции, геномных нарушений (например, транспозонов, тиллинга, гомологической рекомбинации и т.п.) и/или подобных им. Нарушение с помощью функционального ингибирования также охватывает ингибирование гена или одного из его продуктов путем взаимодействия с химическим соединением, преимущественно химическим соединением, которое специфически взаимодействует с указанным геном или генным продуктом. Ингибирование экспрессии и/или активности может измеряться путем определения присутствия и/или количества транскрипта (например, с помощью Нозерн-блоттинга или методик ПЦР с обратной транскриптазой) и/или путем определения присутствия и/или количества полипептида полной длины или его укороченной формы, которая кодируется указанным геном, например, с помощью ЕЫ§Л или Вестернблоттинга), и/или с помощью определения присутствия и/или количества цитокининоксидазной/дегидрогеназной активности продукта нарушенного гена цитокининоксидазы/дегидрогеназы. Термин "нарушение" или "нарушенный", как используется в данной заявке, является предназначенным для понимания того, что нарушение также охватывает нарушение, которое является эффективным только в части растения, в конкретном типе клеток или ткани, подобной, например, репродуктивной меристеме верхушек побегов. Нарушения можно достичь путем взаимодействия с кодирующим участком или влияния на кодирующий участок, некодирующий участок, и/или на регуляторный участок, подобный промоторному участку конкретного гена.

Термин "трансгенный" относится к растению, которое имеет встроенные последовательности нуклеиновой кислоты, включая, но без ограничения, гены, полинуклеотиды, ДНК, РНК и т.п. и/или изменения в них (например, мутации, точечные мутации или подобные им), которые были введены в растение, по сравнению с растением, в которое не были внесены такие изменения, с помощью процессов, которые не являются существенно биологическими процессами для получения растений. Таким образом, термин "трансгенное растение" охватывает не только растение, которое включает неэндогенные нуклеиновые кислоты, но также очевидным образом относится к растениям, которые несут мутации в эндогенном гене, например, точечные мутации, которые были введены в указанное трансгенное растение по сравнению с растением, в которое такие изменения не были внесены, с помощью процессов, которые не являются существенно биологическими процессами для получения растений.

Термин "эндогенный" относится к любому гену или последовательности нуклеиновой кислоты, которая уже является присутствующей в данной клетке или организме, подобному, например, растению. Термин "экзогенный" относится к любому гену или последовательностям нуклеиновой кислоты, которые не являются эндогенными.

Термин "мобильный элемент" (ТЕ) или "мобильный генетический элемент" представляет собой последовательность ДНК, которая может передвигаться с одного места размещения к другому в клетке. Движение мобильного элемента может происходить от эписомы к эписоме. Мобильные элементы характеризуются присутствием инвертированных последовательностей повтора при употреблении во множестве. Мобилизация опосредствуется ферментативно с помощью "транспозазы". Структурно мобильный элемент классифицируется как "транспозон" (ΤΝ) или "элемент инсерции последовательности" (Ιδ елемент) на основе присутствия или отсутствия соответственно генетических последовательностей в дополнение к тем, которые являются необходимыми для передвижения элемента. Мини-транспозон или миниΙδ элемент типично не содержит последовательностей, которые кодируют транспозазу.

Термин "нуклеиновая кислота" или "полинуклеотид" типично используется в значении, которое является признанным в области техники для ссылки на полимер рибонуклеиновой кислоты (РНК) или дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) или его аналог, например, нуклеотидный полимер, который включает модификации нуклеотидов, пептидно-нуклеиновое соединение или подобные им. В некоторых воплощениях нуклеиновая кислота может представлять собой полимер, который включает множество типов мономеров, например, субъединицы, как РНК, так и ДНК. Нуклеиновая кислота может представлять собой, например, хромосому или хромосомный сегмент, вектор (например, экспрессионный вектор),

- 11 029226

экспрессионную кассету, оголенный полимер ДНК или РНК, продукт полимеразной цепной реакции (ПЦР), олигонуклеотид, зонд и т.п. Нуклеиновая кислота может быть, например, одноцепочечной и/или двухцепочечной. Если не указано другое, то некоторые последовательности нуклеиновой кислоты согласно изобретению необязательно включают или кодируют комплементарные последовательности, в дополнение к любой последовательности, которая четко указана.

Термин "полинуклеотидная последовательность", "последовательность нуклеиновой кислоты" или "нуклеотидная последовательность" относится к последовательности соседних нуклеотидов в одной нуклеиновой кислоте или к представлению ее, например, в виде строки символов. То есть "полинуклеотидная последовательность" представляет собой полимер нуклеотидов (олигонуклеотид, ДНК, нуклеиновую кислоту и т.п.) или строку символов, которая представляет нуклеотидный полимер, в зависимости от контекста. Из любой указанной полинуклеотидной последовательности может быть определена либо данная нуклеиновая кислоты, либо комплементарная полинуклеотидная последовательность (например, комплементарная нуклеиновая кислота).

Термин "субпоследовательность" или "фрагмент" представляет собой любую часть полной последовательности.

"Экспрессионная кассета" представляет собой конструкцию нуклеиновой кислоты, например, вектор, такой как плазмида, вирусный вектор и т.п., способные к продукции транскриптов и, потенциально, полипептидов, которые кодируются полинуклеотидной последовательностью. Экспрессионный вектор является способным к продукции транскриптов в экзогенной клетке, например бактериальной клетке или в растительной клетке, ίη νίνο или ίη νίίτο, например, в культивированных растительных протопластах. Экспрессия продукта может быть или конститутивной, или индуцибельной в зависимости, например, от выбранного промотора. Антисмысловые, смысловые конфигурации или конфигурации интерференции или молчания РНК, которые не транслируются или не могут транслироваться, четко включаются этим определением. В контексте экспрессионного вектора, как говорится, промотор является "оперативно связанным" или "функционально связанным" с полинуклеотидной последовательностью, если он является способным к регуляции экспрессии ассоциированной полинуклеотидной последовательности. Этот термин также применяют к альтернативным конструкциям экзогенного гена, таким как экспрессированные или интегрированные трансгены. Подобно этому, термин "оперативно или функционально связанный" применяют в соответствующей мере к альтернативным или дополнительным последовательностям регуляции транскрипции, таким как энхансеры, ассоциированные с полинуклеотидной последовательностью.

Полинуклеотидная последовательность, последовательность нуклеиновой кислоты или ген, как говорят, "кодирует" смысловую или антисмысловую молекулу РНК, или молчащую, или интерферирующую молекулу РНК, или полипептид, если полинуклеотидная последовательность может быть транскрибирована (в сплайсированной или в несплайсированной форме) и/или транслирована в РНК или полипептид, или их субпоследовательность. Квалифицированный специалист в данной области техники является хорошо знакомым с вырожденностью генетического кода, который позволяет получать ряд других последовательностей нуклеиновой кислоты, которые кодируют одну и ту же аминокислотную последовательность или полипептид, и не сложно определить, кодирует ли данная последовательность нуклеиновой кислоты данную аминокислотную последовательность или полипептид.

"Экспрессия гена" или "экспрессия нуклеиновой кислоты" означает транскрипцию ДНК в РНК (необязательно включая модификацию РНК, например, сплайсинг), трансляцию РНК в полипептид (что возможно включает дальнейшую модификацию полипептида, например, пост-трансляционную модификацию), или как транскрипцию, так и трансляцию, как указано в контексте.

Термин "ген" или "генная последовательность" широко используется относительно любой нуклеиновой кислоты, ассоциированной с биологической функцией. Гены типично включают кодирующие последовательности и/или регуляторные последовательности, которые являются необходимыми для экспрессии таких кодирующих последовательностей. Термин "ген" относится к специфической геномной последовательности, а также к кДНК или мРНК, которые кодируются такой геномной последовательностью. Гены также включают неэкспрессируемые сегменты нуклеиновой кислоты, которые, например, образуют последовательности для других белков. Неэкспрессированные регуляторные последовательности включают промоторы и энхансеры, с которыми связываются регуляторные белки, такие как белки, которые связывают факторы транскрипции, что приводит к транскрипции соседних или более отдаленных последовательностей.

"Полипептид" представляет собой полимер, который включает два или более аминокислотных остатка (например, пептид или белок). Полимер может дополнительно включать элементы, отличные от аминокислот, такие как метки, группы для гашения, блокирования, или подобный им, а также может необязательно включать модификации, такие как гликозилирование или подобные ему. Аминокислотные остатки полипептида могут быть природными или неприродными и могут быть незамещенными, немодифицированными, замещенными или модифицированными.

Как используется в данной заявке, термин "ген цитокининоксидазы/дегидрогеназы" относится к гену, который кодирует полипептид с цитокининоксидазной/ дегидрогеназной активностью. Цитокининоксидаза/дегидрогеназа представляет собой фермент, который катализирует химическую реакцию:

- 12 029226

Ж-диметилалиладенин + акцептор + Н₂О т=^ аденин + 2-еналь + восстановл. акцептор

Три субстрата для этого фермента представляют собой Ж-диметилаллиладенин, акцептор и Н₂О, в то время как три его продукта представляют собой аденин, 2-еналь и восстановленный акцептор. Преимущественно термин "цитокининоксидазная/дегидрогеназная активность" охватывает активность данного полипептида для катализа окислительно-восстановительной реакции по крайней мере с одним из цитокининов как субстрата. Квалифицированный специалисту в данной области техники являются хорошо известными средства и способы для определения, обладает ли данный полипептид цитокининоксидазной/дегидрогеназной активностью или нет, и для определения уровня цитокининоксидазной/дегидрогеназной активности конкретного полипептида или зонда в абсолютных значениях и/или относительного другого полипептида или зонда. В литературе существует множество методик для исследования данного полипептид на такую активность, см., например, ЕС 1.5.99.12. Более преимущественно термин "цитокининоксидазная/дегидрогеназная активность" охватывает активность данного полипептида в отношении катализа окислительно-восстановительной реакции по крайней мере с одним из цитокининов как субстрата, преимущественно с активностью не менее чем 30% активности А(ск\3 (СКХ3 с последовательностью 8Еф ГО Νο. 1), преимущественно не менее чем 50% активности А(ск\3.

Термин "ортолог", как используется в данной заявке, относится к гену из видов, преимущественно отличных от ΆιπΒίάορδίδ (какапа, которые демонстрируют наивысшее сходство, преимущественно наивысшую идентичность последовательности, к указанному гену ΆιπΒίάορδίδ (какапа, поскольку оба гена имеют происхождение от общего анцесторного эндогенного гена, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу и включает последовательность (полипептида или нуклеиновой кислоты) по крайней мере с 80%, по крайней мере 85%, по крайней мере 90%, по крайней мере 95% или по крайней мере 99% идентичностью последовательности с данной последовательностью соответствующего ортолога, с которым его сравнивают, преимущественно вдоль определенной длины последовательности. Более желательно, когда термин "ортолог" обозначает эндогенный ген, который имеет происхождение от видов, отличных от Λπιόίύορδίδ (какапа, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу и включает последовательность по крайней мере с 80%, по крайней мере 85%, по крайней мере 90%, по крайней мере 95% или по крайней мере 99% идентичности последовательности с данной последовательностью ЛтаЫάορδίδ (какапа, с которой его сравнивают, преимущественно вдоль определенной длины последовательности.

Термин "рекомбинантный" указывает на то, что материал (например, клетка, нуклеиновая кислота или белок) был искусственно или синтетически (неприродным) изменен с помощью вмешательства человека. Изменение может осуществляться на материале в его природной среде или состоянии, или на материале, который является выделенным из природной среды. Например, "рекомбинантная нуклеиновая кислота" представляет собой такую, которая образована путем рекомбинации нуклеиновой кислоты, например, во время клонирования, ДНК перестановки или других процедур; "рекомбинантный полипептид" или "рекомбинантный белок" представляет собой полипептид или белок, который является полученным путем экспрессии рекомбинантной нуклеиновой кислоты. Примеры рекомбинантных клеток включают клетки, которые содержат рекомбинантные нуклеиновые кислоты и/или рекомбинантные полипептиды.

Термин "вектор" относится к средствам, с помощью которых нуклеиновая кислота может размножаться и/или переноситься между организмами, клетками или клеточными компонентами. Векторы включают плазмиды, вирусы, бактериофаги, провирусы, фагемиды, транспозоны, искусственные хромосомы и подобные им, которые реплицируются автономно или могут интегрироваться в хромосому хозяйской клетки. Вектор может также представлять собой оголенный РНК полинуклеотид, оголенный ДНК полинуклеотид, полинуклеотид, который состоит как из ДНК, так и РНК, в пределах той же цепи, конъюгированную с полилизином ДНК или РНК, конъюгированную с пептидом ДНК или РНК, конъюгированную с липосомой ДНК или подобные им, которые не являются такими, которые автоматически реплицируются.

В контексте данного изобретения термин "изолированный" относится к биологическому материалу, такому как нуклеиновая кислота или полипептид, который является существенно свободным от компонентов, которые в норме его сопровождают или взаимодействуют с ним в его естественной окружающей среде. Изолированный материал необязательно включает материал, который не выявляют с материалом в его естественной среде обитания, например, в клетке. Например, если материал находится в естественной окружающей среде, такой как клетка, то этот материал помещают в таком положении в клетке (например, геноме или генетическом элементе), которое является ненативным по отношению к материалу, который оказывается в этой естественной окружающей среде. Например, существующие в природе нуклеиновые кислоты (например, кодирующая последовательность, промотор, энхансер и т.п.) становятся изолированными тогда, когда они вводятся с помощью средств, которые не существуют в природе, в локус генома (например, вектор, такой как плазмида, или вирусный вектор или ампликон), который не является нативным для этой нуклеиновой кислоты. Изолированная растительная клетка, например, может находиться в окружении (например, в системе культуры клеток или быть очищенной из культуры клеток), отличном от естественного окружения растительной клетки дикого типа (например, цельного рас- 13 029226

тения). "Промотор", как используется в данной заявке, включает ссылку на участок ДНК, который размещается выше начала транскрипции и является втянутой в узнавание и связывание РНК полимеразы и других белков для инициации транскрипции. "Растительный промотор" представляет собой промотор, способный к инициации транскрипции в растительных клетках. Типичные растительные промоторы включают, но без ограничения, те, которые получены из растений, растительных вирусов и бактерий, которые включают гены, экспрессирующиеся в растительных клетках, таких как АдтоЪас1етшт или Ρΐιίζοόίιιιη. Примеры промоторов, связанных с контролем развития, включают промоторы, которые преимущественно инициируют транскрипцию в некоторых тканях, таких как листья, корни или семена, или пространственно в участках, таких как эндосперм, завязь или участки меристемы. Такие промоторы называются "преобладающими для ткани" или "специфическими для ткани".

Временно регулированный промотор направляет экспрессию в определенное время, такое как от 0 до 25 дней после оплодотворения. Промотор "преобладающий для типа клеток" в основном направляет экспрессию в определенных типах клеток в одном или более органов, например, клетках сосудов в корнях или в листьях. "Индуцибельный" промотор представляет собой промотор, который находится под контролем окружающей среды и может быть способным к индукции или способным к дерепрессии. Примеры условий окружающей среды, которые могут влиять на транскрипцию с помощью индуцибельных промоторов, включают анаэробные условия или присутствие света. Специфические для тканей, специфические для типов клеток и индуцибельные промоторы составляют класс "некоститутивных" промоторов.

"Конститутивный" промотор представляет собой промотором, который является активным при большинстве условий окружающей среды и во всех или почти во всех тканях, на всех или почти на всех стадиях развития.

"Трансформация", как используется в данной заявке, представляет собой процесс, с помощью которого клетка "подвергается трансформации" с помощью экзогенной ДНК, когда такая экзогенная ДНК является введенной в клеточную мембрану. Экзогенная ДНК может быть или может не быть интегрирована (ковалентно связана) в хромосомную ДНК, составляя геном клетки. У прокариотов и дрожжей, например, экзогенная ДНК может поддерживаться в виде эписомального элемента, такого как плазмида. Что касается высших эукариотических клеток, то стабильно трансформированная или трансфицированная клетка представляет собой такую, в которой экзогенная ДНК была интегрирована в хромосому так, что она наследуется дочерними клетками при репликации хромосомы. Эта стабильность демонстрируется способностью эукариотической клетки давать начало линиям клеток или клонам, которые включают популяцию дочерних клеток, которые содержат эту экзогенную ДНК.

Для целей данного изобретения "идентичность" последовательности объективно определяется с помощью любого из ряда способов. Квалифицированный специалист в данной области техники является хорошо осведомленным с этими способами и может выбрать приемлемый способ без чрезмерных усилий. Разные способы для определения взаимосвязи между двумя или более последовательностями (например, идентичности, сходства и/или гомологии) являются доступными и хорошо известными в области техники. Способы включают, например, ручное сравнение, компьютерное сравнение последовательностей и их комбинации. Ряд алгоритмов (которые обычно предусматривают применение компьютера) для осуществления выравнивания последовательности являются широко доступными или могут быть получены специалистом. Эти способы включают, например, алгоритм локальной гомологии διηίΐΐι и \Уа(еттаи (1981) Αάν. Арр1. Ма1й. 2: 482; алгоритм гомологического выравнивания №ей1етап и ХУшъсН (1970) 1. Мо1. ΒίοΙ. 48: 443; метод поиска на сходство Реагкоп и Ыртаи (1988) Ргос. Ыа11. Асай. δα. (И8А) 85: 2444; и/или компьютеризированные реализации этих алгоритмов (например, САР, ΒΕδΤΡΙΤ, РА8ТА и ТРА8ТА в νίκ^ηκίη Сепейск 8оП\\аге Раскаде Ке1еаке 7.0, СепеИск Сотри1ет Сгоир, 575 8аеисе Ότ., Майкоп, VI).

Например, программное обеспечение для проведения анализа идентичности последовательности (и сходства последовательности) при использовании ВЬА8Т алгоритма является описанным у А11кс1ш1 и др. (1990) 1. Мо1. Вю1. 215: 403-410. Это программное обеспечение есть общедоступным, например, через Национальный центр для биотехнологической информации в сети Интернет на исЫ. п1т. ηίΠ. дον. Этот алгоритм предусматривает первую идентификацию пар последовательностей с высоким баллом (Н8Рк) путем идентификации коротких кодовых групп с длиной V в заданной последовательности, которые или совпадают, или удовлетворяют некоторое положительное пороговое значение Т, когда выравниваются с кодовой группой той же длины в базе данных последовательности. Т относится к пороговому значению близкой кодовой группы. Эти начальные близкие хиты кодовой группы выполняют роль затравки для начала проведения поисков для выявления более длинных хитов Н8Рк, которые содержат их. Хиты кодовой группы потом удлиняют в оба направления вдоль каждой последовательности настолько, насколько может быть повышен кумулятивный балл выравнивания. Кумулятивные баллы подсчитывают при использовании для нуклеотидных последовательностей параметров М (премиальный балл для пар совпадающих остатков; всегда > 0) и N (штрафной балл за несовпадение остатков; всегда < 0). Для аминокислотных последовательностей матрица замен используется для подсчета кумулятивного балла. Удлинение хитов кодовой группы в каждом направлении перерывают тогда, когда: кумулятивный балл выравнива- 14 029226

ния величины Х снижается с его максимально достигнутого значения; кумулятивный балл снижается до нуля или ниже благодаря накоплению одного или больше выравниваний остатков с негативным баллом; или достигается конец последовательности. Параметры ВЬА8Т алгоритма V, Т и X определяют чувствительность и скорость выравнивания. Программа ВЬА8ТЫ (для нуклеотидных последовательностей) использует как параметры по умолчанию длину кодовой группы (XV) 11, ожидание (Е) 10, пороговое значение 100, М=5, N=-4, и сравнение обеих цепей.

Для аминокислотных последовательностей программа ВЬА8ТР (ВЬА8Т Рго1е1п) как параметры по умолчанию использует длину кодовой группы (V) 3, ожидание (Е) 10, и ВЬО8ИМ62 матрикс замен (см., НеткоГГи Нетко£Г (1989) Ргос. ЫаЙ. Асаб. 8ск И8А 89: 10915).

Дополнительно, ВЬА8Т алгоритм осуществляет статистический анализ сходства между двумя последовательностями (см., например, КагНи и А118сНи1 (1993) Ргос. Ыаб. Асаб. 8ск И8А 90: 5873-5787). Одна из оценок сходства, которое обеспечивается ВЬА8Т алгоритмом, представляет собой наименьшую сумму вероятностей (р(Ы)), что обеспечивает показатель вероятности, при котором сравнение между двумя нуклеотидными или аминокислотными последовательностями будет возникать случайно. Например, нуклеиновая кислота считается подобной референтной последовательности (и, таким образом, в данном контексте гомологичной), если наименьшая сумма вероятностей при сравнении исследуемой нуклеиновой кислоты с референтной нуклеиновой кислотой является меньшей чем приблизительно 0,1, или меньшей чем приблизительно 0,01, и/или даже меньшей чем приблизительно 0,001.

Другой пример полезного алгоритма выравнивания последовательности представляет собой РШЕИР. РШЕИР осуществляет множественное выравнивание последовательностей из группы родственных последовательностей при использовании прогрессивного попарного выравнивания. Можно построить дерево, которое показывает взаимосвязи группировок, которые используются для проведения выравнивания. РГЬЕИР использует симплификацию метода прогрессивного выравнивания Репд и ИооШбе (1987) 1. Мо1. Еуо1. 35: 351-360. Используемый способ является подобным способу, который описывается Нфдпъ и 8Нагр (1989) САВ1О85: 151-153. Программа может выравнивать, например, вплоть до 300 последовательностей с максимальной длиной 5000 символов. Процедура множественного выравнивания начинается с попарного сравнения двух наиболее подобных последовательностей, которое обеспечивает получение кластера двух выровненных последовательностей. Этот кластер может потом выравниваться со следующей наиболее родственной последовательностью или кластером выровненных последовательностей. Два кластера последовательностей могут быть выровнены с помощью простого удлинения попарного выравнивания двух индивидуальных последовательностей. Заключительное выравнивание достигается с помощью серий прогрессивных попарных выравниваний. Эта программа может также использоваться для построения дендограммы или представления в виде дерева взаимоотношений группировок. Эта программа осуществляется при использовании предварительно определенных специфических последовательностей и их координат аминокислот или для участков сравнения последовательностей.

Дополнительный пример алгоритма, который является приемлемым для множественных выравниваний последовательностей ДНК или аминокислот, представляет собой программу С^υ8ТА^V (ТНотркоп, 1. Ό. и др. (1994) Ыис1. Ас1б§. Кек. 22: 4673-4680). С^υ8ТА^V осуществляет множественное попарное сравнение между группами последовательностей и объединяет их во множественное выравнивание на основе их гомологии. Штрафные баллы за открытия пробела (Оар) и удлинение пробела (Оар) могут составлять, например, 10 и 0,05, соответственно. Для аминокислотных выравниваний может использоваться алгоритм ВЬО8ИМ как матрица веса белков. См., например, НешкоГГ и НешкоГГ (1992) Ргос. Ыа(1. Асаб. 8с1. И8А 89: 10915-10919.

Изолированная растительная клетка или трансгенное растение согласно изобретению могут быть получены с помощью традиционных способов, подобных, например, трансформации. Трансформация растительных клеток и протопластов может осуществляться существенно путем любого из различных путей, которые являются известными квалифицированному специалисту в области молекулярной биологии растений, включая, но без ограничения, способы, описанные в данной заявке. См., в общем случае МеШобк ш Еп/утокду, том 153 (КесотЪшай ΌΝΛ часть Ό) XVII и Огокктап (ред.) 1987, Асабетк Ргекк. Как используется в данной заявке, термин "трансформация" означает изменение генотипа хозяйского растения или растительной клетки путем введения последовательности нуклеиновой кислоты, например, "гетерологической", "экзогенной" или "чужеродной" последовательности нуклеиновой кислоты. Гетерологические последовательности нуклеиновой кислоты не должны обязательно иметь происхождение от разных источников, однако они могут, в определенной степени, быть внешними относительно клетки, в которую они вводятся. В дополнение к Вегдег, АикиЪе1 и 8атЪгоок, полезные общие ссылки для клонирования растительных клеток, культивирования и регенерации включают 1опек (ред.) (1995) Р1ап1 Оепе ТгапкГег апб Ехргеккюп Ргоксо1к-Ме1Ьобк ш Мо1еси1аг Вю1о§у, том 49 Нитапа Ргекк То\\а1а Νί; Раупе и др. (1992) Р1ап1 Се11 апб Т1ккие СиНиге ш Пцшб 8ук1етк 1оНп Χνί^ν & 8оп5, 1пс. Ые\у Уогк, ΝΥ (Раупе); и ОатЪогд и РкШрк (ред.) (1995) Р1ап1 Се11, Т1ккие апб Огдап СиНиге; Рипбатеп1а1 МеШобк 8ргтдег ЬаЪ Мапиа1, 8ргтдег-Уег1ад (Вег1т Не1бе1Ъегд Ые\у Υο^к) (ОатЪогд). Разные среды для культуры клеток являются описанными в Абак и Рагкк (ред.) ТНе НапбЪоок оГ МкгоЪю1одка1 Меб1а (1993) СКС Ргекк, Воса Какп, РЬ (Абак). Дополнительная информация относительно культуры растительных клеток может быть

- 15 029226

найдена в коммерческой литературе, такой как Ьйе 8с1спсс КекеагсЬ Се11 СиИиге Са1а1одие (1998) от δίβта-ЛИпсН. 1пс (δΐ Ьошк, МО) Пдта-Егссс) и, например, Р1ап1 СиИиге Са1а1одие и дополнение (1997) также от δ^дта-Α1б^^сЬ, 1пс. (δΐ Ьошк, МО) (δ^дта-РССδ). Дополнительные подробности относительно культуры растительных клеток могут быть найдены в Сгоу, (ред.) (1993) Р1ап1 Мо1еси1аг Вю1оду Вюк δαепййс РиЬйкЬегк, ОхЕогб, и. К.

Одно, более одного или все нарушения по крайней мере в одном из упомянутых выше эндогенных генов могут быть улучшенные путем введения и экспрессии в растительной клетке или растении трансгенной полинуклеотидной последовательности, например, в антисмысловой и смысловой конфигурации, или в конфигурации молчания или интерференции РНК и т.п., где трансгенная полинуклеотидная последовательность включает последовательность нуклеиновой кислоты, которая представляет собой или является комплементарной:

a) последовательности или субпоследовательности эндогенного СКХ3 гена, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕΟ ГО Ыо. 1 или ее ортологом;

b) последовательности или субпоследовательности эндогенного СКХ1 гена, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность δΕΟ ГО Ыо. 13 или ее ортолог;

c) последовательности или субпоследовательности эндогенного СКХ2 гена, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕΟ ГО Ыо. 2 или ее ортологом;

б) последовательности или субпоследовательности эндогенного СКХ4 гена, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕΟ ГО Ыо. 3 или ее ортологом;

е) последовательности или субпоследовательности эндогенного СКХ5 гена, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕΟ ГО Ыо. 4 или ее ортологом;

Е) последовательности или субпоследовательности эндогенного СКХ6 гена, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕΟ ГО Ыо. 5 или ее ортологом;

д) последовательности или субпоследовательности эндогенного СКХ7 гена, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕΟ ГО Ыо. 6 или ее ортологом;

или

Н) последовательности или субпоследовательности эндогенного гена, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, по крайней мере, с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с такой δΕΟ ГО Ыо. 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 13 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот, преимущественно 100 аминокислот, более преимущественно вдоль полной длины;

и включает промотор, ингибируя, таким образом, экспрессию и/или активность, по крайней мере, нарушенного гена цитокининоксидазы/дегидрогеназы по сравнению с соответствующей контрольной растительной клеткой или растением, которое не имеет таких нарушений (например, его нетрансгенной родительской формой или нетрансгенным растением тех же видов).

Трансгенная полинуклеотидная последовательность может быть введена с помощью методик, включая, но без ограничения, например, электропорацию, бомбардировку микрочастицами, опосредствованный ЛдгоЬас1егшт перенос, или с помощью других доступных способов. В некоторых аспектах данного изобретения полинуклеотид является связанным с промотором в смысловой ориентации или в антисмысловой ориентации или является конфигурированным для молчания или интерференции РНК.

Релевантная литература, которая описывает применение гомологично зависимого гена молчания, включает: .Тогдепкеп, Тгепбк Вю1есЪпо1. 8 (12): 340-344 (1990); Р1ауе11, Ргос. Ыаб. Асаб. δα. (υδΑ) 91: 3490-3496 (1994); Ршпедап и др., Вю/ТесЬпо1оду 12: 883-888 (1994); ЫеийиЬег и др., Мо1. Оеп. ОепеЕ 244: 230-241 (1994); Р1ауе11 и др. (1994) Ргос. Ыаб. Асаб. δα. υδΑ 91: 3490-3496; 1огдепкеп и др. (1996) Р1ап1 Мо1. Вю1. 31: 957-973; 1ойапкеп и СатпдЕоп (2001) Р1ап1 РйукюЕ 126: 930-938; Вгош и др. (2002) Р1ап1 Се11 14: 1417-1432; δΐоиΕ^С8б^^к и др. (2002) Р1ап1 Ркукюк 129: 1723- 1731; Уи и др. (2003) РкуЮскашкпу 63: 753-763; и патенты США № 5034323, 5283184 и 5942657.

Альтернативно, другой подход к генному молчанию может быть таким при использовании антисмысловой технологии (КЩНкКш и др. в Р1ап1 Мо1. Се11. Вю1. 6: 221-246 (1989); Ьш и др. (2002) Р1ап1 РЬу8ю1. 129: 1732-1743 и патенты США № 5759829 и 5942657). Применение антисмысловой нуклеиновой кислоты является хорошо известным в области техники. Антисмысловая нуклеиновая кислота имеет участок комплементарности с целевой нуклеиновой кислотой, например, некоторой геномной генной последовательностью, мРНК или кДНК. Антисмысловая нуклеиновая кислота может представлять собой РНК, ДНК, ПНК или любую другую приемлемую молекулу. Может образовываться дуплекс между ан- 16 029226

тисмысловой последовательностью и ее комплементарной смысловой последовательностью, которая приводит к инактивации гена. Антисмысловые нуклеиновые кислоты могут ингибировать генную экспрессию путем образования дуплекса с РНК, которая транскрибируется из гена, путем образования триплекса с дуплексом ДНК и т.п. Антисмысловая нуклеиновая кислота может быть получена с помощью ряда хорошо известных методик (например, с помощью химического синтеза антисмысловой РНК или олигонуклеотида (с необязательным включением нуклеотидов и/или связей, которые повышают резистентность к разложению или улучшают поглощение клеткой) или путем ίη νίΐΓο транскрипции). Антисмысловые нуклеиновые кислоты и их применение описываются, например, в ИЗР 6242258, что относится к Наке1Юп и А1ехапбег (5 июня 2001 г.) под названием "Способы для селективной регуляции транскрипции ДНК и РНК и трансляции с помощью фотоактивации"; ИЗР 6500615; ИЗР 6498035; И8Р 6395544; ИЗР 5563050; Е. ЗсЬисЬ и др. (1991) Зутр 3οο. Ехр Βίο1 45: 117-127; бе Ьапде и др., (1995) Сигг Τορ МюгоЬю1 Iттиηο1 197: 57-75; НатбЮп и др. (1995) Сигг Τορ МюгоЬго1 Iттиηο1 197: 77-89; Ршпедап и др., (1996) Ргос Ν;·ιΐ1 Асаб Зс1 ИЗА 93: 8449-8454; ИЫтапп и А. Рерап (1990), СЬет. Кеу. 90: 543; Р. Ό. ί'.’οο1< (1991), Апй-Сапсег Эгид ЭеУдп 6: 585; ί. Οοο6Ηιί16. Вюсмуидай СЬет. 1 (1990) 165; и, З. Ь. Веаисаде и Κ. Р. 1уег (1993), ТейаЬебгоп 49: 6123; и Р. Ескк1ет, ред. (1991), ΟЬдοηисЬοΐ^бек апб Апа^диек-А Ргасйса1 АрргоасЬ, ΙΚΕ Ргекк.

Каталитические молекулы РНК или рибозимы могут также использоваться для ингибирования экспрессии определенных выбранных генов. Является возможным сконструировать рибозимы, которые специфически попарно соединяются виртуально с любой желательной целевой РНК и расщепляют фосфодиэфирный скелет в специфическом размещении, инактивируя, таким образом, функционально целевую РНК. При осуществлении такого расщепления сам рибозим не изменяется и является, таким образом, способным к рециркуляции и расщеплению других молекул. Включение последовательностей рибозима в антисмысловую РНК обеспечивает активность расщепления РНК, повышая, таким способом, активность конструкций. Был идентифицирован ряд классов рибозимов. Например, один класс рибозимов имеет происхождение от ряда маленьких кольцевых РНК, которые являются способными к саморасщеплению и репликации в растениях. Эти РНК могут подвергаться репликации или самостоятельно (вироидные РНК) или с помощью хелперного вируса (сателлитные РНК). Примеры РНК включают РНК из вироида солнечной пятнистости авокадо и сателлитные РНК из вируса кольцевой пятнистости табака, вируса нестойкой полосатости люцерны, вируса крапчатости бархатистого табака, вируса крапчатости Зο1апит [юбО'КЕит и вируса крапчатости подземного клевера. Конструирование и применение нацеленных, специфических для РНК рибозимов было описано. См., например, НакеКЛ' и др. (1988) Шипе, 334: 585591.

Другой способ для инактивации определенного выбранного гена путем ингибирования экспрессии представляет собой смысловую экспрессию. Введение экспрессионных кассет, в которых нуклеиновая кислота конфигурируется в смысловой ориентации по отношению к промотору, было продемонстрировано как эффективное средство, с помощью которого блокируется транскрипция желательного целевого гена. См., например, Ν;·ιρο1ί и др. (1990), ТЬе Р1ай Се11 2: 279-289, и патенты США № 5034323, 5231020 и 5283184.

Нарушение согласно изобретению могут также быть получены при использовании РНК молчания или интерференции (РНК1), которые могут также называться посттранскрипционным генным молчанием (РТСЗ) или косупрессией. В контексте данного изобретения "молчание РНК" (также называется как РНК1 или опосредствованная РНК интерференция) относятся к любому механизму, с помощью которого присутствие одноцепочечной или, типично, двухцепочечной РНК в клетке приводит к ингибированию экспрессии целевого гена, который включает последовательность, идентичную или почти идентичную такой для РНК, включая, но без ограничения, РНК интерференцию, репрессию трансляции целевой мРНК, которая транскрибируется из целевого гена без изменения стабильности мРНК и транскрипционное молчание (например, гистонное ацетилирование и образование гетерохроматина, что приводит к ингибированию транскрипции целевой мРНК). При "интерференции РНК" присутствие одноцепочечной или двухцеопчечной РНК в клетке приводит к эндонуклеолитическому расщеплению, а потом - к деградации целевой мРНК.

В одном воплощении трансген (например, последовательность и/или субпоследовательности гена или кодирующей последовательности, которые представляют интерес) вводятся в растительную клетку для нарушения одного или более генов с помощью молчания или интерференции РНК (РНК1). Например, последовательность или субпоследовательность (трансген) включают небольшие субпоследовательности, например, приблизительно такие, которые составляют 21-25 основ в длину, большие субпоследовательности, например, приблизительно 25-100 или приблизительно 100-2000 (или приблизительно 2001500, приблизительно 250-1000 и т.п.) основ в длину, и/или цельную кодирующую последовательность или ген, выбранный из, или такой, который является комплементарным:

a) последовательности или субпоследовательности эндогенного СКХ3 гена, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с ЗЕф ΙΌ Νο. 1 или ее ортологом;

b) последовательности или субпоследовательности эндогенного СКХ1 гена, который кодирует ци- 17 029226

токининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность 8Еф ГО Νο. 13 или ее ортолог;

с) последовательности или субпоследовательности эндогенного СКХ2 гена, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8Ε0 ГО Νο. 2 или ее ортологом;

ά) последовательности или субпоследовательности эндогенного СКХ4 гена, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8Еф ГО Νο. 3 или ее ортологом;

е) последовательности или субпоследовательности эндогенного СКХ5 гена, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8Ε0 ГО Νο. 4 или ее ортологом;

ί) последовательности или субпоследовательности эндогенного СКХ6 гена, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8Еф ГО Νο. 5 или ее ортологом;

д) последовательности или субпоследовательности эндогенного СКХ7 гена, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8Еф ГО Νο. 6 или ее ортологом;

или

1ι) последовательности или субпоследовательности эндогенного гена, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, по крайней мере, с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с такой 8ΕΟ ГО Νο. 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 13 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот, преимущественно 100 аминокислот, более преимущественно вдоль полной длины;

Преимущественно трансген включает участок в последовательности или субпоследовательности, который составляет приблизительно 21-25 основ в длину, по крайней мере, с 80%, по крайней мере, 90% или, по крайней мере, 99% идентичностью с субпоследовательностью одной из последовательностей 81+) ГО Νο. 7, 8, 9, 10, 11, 12 или 14.

Применение РНК! для ингибирования генной экспрессии в ряде типов клеток (включая, например, растительные клетки) и организмов, например, путем экспрессии РНК шпильки (ствол-петля) или двух цепей интерферирующей РНК, например, является хорошо описанным в литературе, как способы для определения приемлемой(ых) интерферирующей(их) РНК для нацеливания на желательный ген и для получения таких интерферирующих РНК. Например, интерференция РНК является описанной например, в публикациях патентных заявок США 20020173478, 20020162126 и 20020182223 в ί'^οπί и Масшс (2000), "Рο8ΐ-ί^аη8С^^ρΐ^οηа1 депе 811епсшд асго88 1<ίι^άοιη8" Сеие8 Эеу., 10: 638-643; Сиги Т. (2000), "Α 811епсе 1На1 8реак8 νο1ите8" №Ииге 404: 804-808; НатпюпД и др., (2001), "Рο8ΐ-ί^аи8С^^рι^οпа1 Сепе §Пепсшд Ьу ^οиЬ1е-8ί^апάеά ΡΝΑ" №Ииге Кеу. Сеп. 2: 110-119; Νηροΐί и др., (1990) "1п1го0ис1юп οί а ска^пе 8уп1На8е депе ίιιίο РеШта ге8иЙ8 т геуегаЫе Μ-8ΐιρρΐΌ88ίοιι οί 1ιοιηο^οιΐ8 депе8 ш 1гауа8." Р1ап1 Се11 2: 279289; и т.п.

Полинуклеотидная(ые) последовательность (последовательности) или субпоследовательность (субпоследовательности), которые экспрессируются для индукции РНКц могут экспрессироваться, например, под контролем конститутивного промотора, индуцибельного промотора или специфического для ткани промотора. Экспрессия при использовании специфического для ткани промотора может быть желательной в некоторых воплощениях.

Одно, более одного или все нарушения по крайней мере в одном из упомянутых выше эндогенных генов могут вводиться, например, путем инактивации генов с помощью транспозона. Например, этап инактивации включает получение одной или больше мутаций в гене, который представляет собой:

ί) эндогенный СКХ3 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ΕΟ ГО Νο. 1 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с 8ΕΟ ГО Νο. 1 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот 8ΕΟ ГО Νο. 1, преимущественно 100 аминокислот 8ΕΟ ГО Νο. 1, более преимущественно вдоль полной длины 8Εφ ΙΌ Νο. 1;

и/или

последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ΕΟ ГО Νο. 13 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней

- 18 029226

мере 90% идентичностью последовательности с δΕΟ ΙΌ Νο. 13 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот δΕΟ ΙΌ Νο. 13, преимущественно 100 аминокислот δΕΟ ΙΌ Νο. 13, более преимущественно вдоль полной длины δΕΟ ΙΌ Νο. 13;

b) СКХ2 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕΟ ΙΌ Νο. 2 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, по крайней мере, с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с δΕΟ ΙΌ Νο. 2 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот δΕΟ ΙΌ Νο. 2, преимущественно 100 аминокислот δΕΟ ΙΌ Νο. 2, более преимущественно вдоль полной длины δΕΟ ΙΌ Νο. 2;

c) СКХ4 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕΟ ΙΌ Νο. 3 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с δΕΟ ΙΌ Νο. 3 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот δΕΟ ΙΌ Νο. 3, преимущественно 100 аминокислот δΕΟ ΙΌ Νο. 3, более преимущественно вдоль полной длины δΕΟ ΙΌ Νο. 3;

б) СКХ5 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕΟ ΙΌ Νο. 4 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с δΕΟ ΙΌ Νο. 4 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот δΕΟ ΙΌ Νο. 4, преимущественно 100 аминокислот δΕΟ ΙΌ Νο. 4, более преимущественно вдоль полной длины δΕΟ ΙΌ Νο. 4;

е) СКХ6 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕΟ ΙΌ Νο. 5 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, по крайней мере, с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с δΕΟ ΙΌ Νο. 5 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот δΕΟ ΙΌ Νο. 5, преимущественно 100 аминокислот δΕΟ ΙΌ Νο. 5, более преимущественно вдоль полной длины δΕΟ ΙΌ Νο. 5;

или

ί) СКХ7 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕΟ ΙΌ Νο. 6 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, по крайней мере, с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с δΕΟ ΙΌ Νο. 6 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот δΕΟ ΙΌ Νο. 6, преимущественно 100 аминокислот δΕΟ ΙΌ Νο. 6, более преимущественно вдоль полной длины δΕΟ ΙΌ Νο. 6;

где одна или более мутаций в последовательности гена включают одну или более инсерций транспозона и где нарушения ингибируют экспрессию и/или активность, по крайней мере, нарушенного гена цитокининоксидазы/дегидрогеназы по сравнению с соответствующей контрольной растительной клеткой или растением, которое не имеет таких нарушений. Например, одна или более мутаций включают гомозиготное нарушение в одном или более генов, упомянутых выше, одна или больше мутаций включают гетерозиготное нарушение в одном или более генов, упомянутых выше, или комбинацию как гомозиготных, так и гетерозиготных нарушений.

Транспозоны сначала были идентифицированы в кукурузе ВагЬага МсС1шЮск в конце 1940-х. Семейство мутаторных генов мобильных генетических элементов, например, мобильные генетические элементы мутаторных генов (Ми) Робертсона, типично используются в мутагенезе растительных генов, поскольку они являются присутствующими в большом количестве копий (10-100) и преимущественно встраиваются внутрь или вблизи генов.

Мобильные генетические элементы могут быть классифицированы в два широких класса на основе способа их перестановки. Они обозначаются как класс Ι и класс ΙΙ; оба имеют применение в мутагенах и как векторы для доставки. Класс Ι мобильных генетических элементов перегруппировывается с помощью промежуточного соединения РНК и использует обратные транскриптазы, то есть они представляют собой ретроэлементы. Существует по крайней мере три типа класса Ι мобильных генетических элементов, например, ретротранспозоны, ретропозоны, δ^ηе-подобные элементы. Ретротранспозоны типично

- 19 029226

содержат ЬТК и гены, которые кодируют вирусные белки оболочки (дад) и обратную транскриптазу, гены РНКазы Н, интегразы и полимеразы (ρο1). Многочисленные транспозоны были описаны у видов растений. Такие ретротранспозоны мобилизуются и перемещаются с помощью промежуточного соединения РНК в реакциях, которые катализируются с помощью обратной транскриптазы и РНКазы Н, которая кодируются транспозоном. Примеры попадают в Ту1-копии и Ту3-дурзу группы, а также в 8шеподобные и Ьше-подобные классификации. Более подробное обсуждение может быть найдено у Китаг и ВеппеРеп (1999) Р1ап1 ΚοίΓοϋΉηδροδοηδ ίη Аппиа1 Ре\зе\у οί ОепеИсв 33: 479.

Кроме того, мобильные генетические элементы на основе ДНК, такие как Ас, Тат1 и Еп/8рт, также могут быть найдены в разных видах растений и могут использоваться в изобретении.

Транспозоны (и Ι8 элементы) представляют собой общие средства для введения мутаций в растительные клетки. Эти мобильные генетические элементы доставляются к клеткам, например, с помощью полового скрещивания, после этого перестановки подвергают селекции, а полученные в результате инсерции мутанты подвергаются скринингу, например, на фенотип, который представляет интерес. Нарушенные гены могут потом вводиться в другие растения путем скрещивания изолированных или трансгенных растений с растением, которое не имеет нарушений, например, путем полового скрещивания. Любая из ряда стандартных методик разведения может использоваться в зависимости от видов, которые подвергаются скрещиванию. Размещение ΤΝ в геноме изолированного или трансгенного растения может определяться с помощью известных способов, например, секвенирования фланкирующих участков, как обсуждается в данной заявке. Например, реакция ПЦР может использоваться для амплификации последовательности, которая потом может быть диагностически секвенирована для подтверждения ее происхождения. Необязательно, мутанты, полученные в результате инсерции, подвергают скринингу на желательный фенотип, такой как ингибирование экспрессии или активности гена, который представляет интерес, по сравнению с контрольным растением.

Тиллинг может также использоваться для идентификации нарушения согласно данному изобретению. Тиллинг представляет собой индуцированные нацеливаниям локальные повреждения в геномах (ТагдеБпд 1пйисей Ε^ηϊ Ьевюпв ίη Сегютех). См., например, МсСа11ит и др., (2000), "ТагдеИпд 1пйисей Аса1 Ьевюпв Ιη Сегютех (ТЮТШС) Рэг Р1ап1 Рипс1юпа1 Сетюн-псв" Р1ап1 РНувюКду 123: 439-442; Мсса11ит и др., (2000), "ТагдеЮй всгеетпд ίοτ шбисеб ιηιιΐπΐίοηβ" №-Ииге ВУесЬто^ду, 18: 455-457; и С.о1ЬеП и др., (2001), "ШдИлИгоидИрШ 8сгеетпд Γογ 1пйисей Ροίηΐ МиЮюпв" Р1ап1 РБувюБду 126: 480-484.

Тиллинг соединяет высокую плотность мутаций с быстрым чувствительным определением мутаций. Типично, этилметансульфонат (ЕМ8) используется для мутагенеза семян растений. ЕМ8 алкилирует гуанин, что типично приводит к неправильному спариванию. Например, семена замачивают приблизительно в 10-20 мМ растворе ЕМ8 в течение приблизительно 10-20 ч; семена промывают и потом высевают. Растения этого поколения являются известными как М1. М1 растения потом подвергают самоопылению. Мутации, присутствующие в клетках, которые образуют репродуктивные ткани, наследуются следующим поколением (М2). Типично, М2 растения подвергают скринингу на мутацию в желательном гене и/или на специфические фенотипы.

Например, ДНК из М2 растений объединяют и мутации в гене, который представляет интерес, определяют путем выявления образования гетеродуплексов. Типично, ДНК получают из каждого растения М2 и объединяют. Желательный ген подвергают амплификации с помощью ПЦР.

Объединенный образец потом денатурируют и подвергают отжигу для того, чтобы позволить осуществить формирование гетеродуплексов. Если мутация является присутствующей в одном из растений, то продукты ПЦР будут относиться к двум типам: дикому типу и мутантному. Пулы, которые включают гетеродуплексы, идентифицируют путем разделения продуктов ПЦР реакции, например, с помощью денатурирующей высокоэффективной жидкостной хроматографии (ЭРИРЬС). ЭРИРЬС определяет несоответствие в гетеродуплексах, созданные путем расплавления и отжига гетероалельной ДНК. Хроматографию проводят при нагревании ДНК. Гетеродуплексы имеют более низкую температурную стабильность и образуют расплавляющие пузырьки, которые приводят к более быстрому движению в хроматографической колонке. Когда гетеродуплексы являются присутствующими дополнительно к ожидаемым гомодуплексам, то будет наблюдаться двойной пик. В результате этого идентифицируют пулы, которые несут мутацию в гене, который представляет интерес. Индивидуальные ДНК из растений, которые составляют объединенную популяцию, могут быть потом идентифицированные и секвенированы. Необязательно, растение, которое содержит желательную мутацию в гене, который представляет интерес, может скрещиваться с другими растениями для удаления фоновых мутаций.

Другие способы мутагенеза также могут использоваться для введения нарушения согласно изобретению. Способы для введения генетических мутаций в растительные гены и селекции растений с желательными признаками являются хорошо известными. Например, семена или другой семенной материал может обрабатываться с помощью мутагенного химического вещества в соответствии со стандартными методиками. Такие химические вещества включают, но без ограничения, следующие: диэтил сульфат, этиленимин, и нитрозо-И-этилмочевину. Альтернативно, может использоваться ионизирующее излучение от различных источников, такое как рентгеновские лучи или гамма-лучи.

Могут использоваться другие способы определения для выявления мутаций в гене, который пред- 20 029226

ставляет интерес, например, капиллярный электрофорез (например, постоянный капиллярный электрофорез с денатурирующим агентом и одноцепочечный конформационный полиморфизм). В другом примере гетеродуплексы могут определяться при использовании ферментативного способа восстановления несоответствий (например, СЕЬ I эндонуклеаза из сельдерея). СЕЬ I узнает несоответствия и расщепляет точно с З'-стороны несоответствия. Точное положение основания несоответствия может быть определено с помощью разрезания при использовании фермента для восстановления несоответствия, после чего осуществляют, например, денатурирующий гель-электрофорез. См., например, О1еуко\У51б и др., (1998), "МШаОоп беЮсОоп и8шд а ηονβΐ ρΐαηΐ епбопис1еа8е". Νυοίοίο Λοίά Ке8. 26: 4597-4602; и Со1Ъег1 и др., (2001), "ШдЪ-ТЪгоидЪрк δс^ееη^ηд £ог 1пбисеб РоиН Ми1айоп8". Р1ап1 РЪу8ю1оду 126: 480-484.

Растение, которое содержит желательное(ые) нарушение(ия) согласно изобретению, может скрещиваться с другими растениями для введения нарушений в другое растение. Это осуществляют при использовании стандартных методик разведения.

Гомологическая рекомбинация может также использоваться для введения нарушения согласно изобретению. Гомологическая рекомбинация была продемонстрирована у растений. См., например, Риска и др. (1994), Ехрепепба 50: 277-284; διχΏ^ώ-ι и др. (1994), ЕМВОк 13: 484- 489; Ойппда и др. (1993), Ргос. Ναίΐ. Асаб. 8οΐ. υδΑ 90: 7346-7350; Кетрш и др. (1997) Уинге 389: 802-803; и Тегаба и др., (2002), "ЕШаек депе 1агдебп§ Ъу Ъото1одои8 гесотЫпабоп ш псе" №Ыге Вю1есбпо1оду, 20 (10): 1030-1034.

Гомологическая рекомбинация может использоваться для индукции нацеленных генных модификаций с помощью специфического нацеливания на ген, который представляет интерес, ш νί\Ό. Мутации в выбранных частях последовательности выбранного гена (включая размещенные выше 5', размещенные ниже 3' и внутригенные участки), такого как, например:

ί) эндогенный СКХ3 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ №. 1 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности к δΕρ ΙΌ №. 1 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот δΕρ ΙΌ №. 1, преимущественно 100 аминокислот δΕρ ΙΌ №. 1, более преимущественно вдоль полной длины δΕρ ΙΌ №. 1;

и/или

ίί) по крайней мере один дополнительный эндогенный ген, который представляет собой:

a) СКХ1 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ №. 13 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с δΕρ ΙΌ №. 13 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот δΕρ ΙΌ №. 13, преимущественно 100 аминокислот δΕρ ΙΌ №. 13, более преимущественно вдоль полной длины δΕρ ΙΌ №. 13;

b) СКХ2 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ №. 2 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с δΕρ ΙΌ №. 2 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот δΕρ ΙΌ №. 2, преимущественно 100 аминокислот δΕρ ΙΌ №. 2, более преимущественно вдоль полной длины δΕρ ΙΌ №. 2;

c) СКХ4 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ №. 3 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с δΕρ ΙΌ №. 3 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот δΕρ ΙΌ №. 3, преимущественно 100 аминокислот δΕρ ΙΌ №. 3, более преимущественно вдоль полной длины δΕρ ΙΌ №. 3;

б) СКХ5 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ №. 4 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с δΕρ ΙΌ №. 4 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот δΕρ ΙΌ №. 4, преимущественно 100 аминокислот δΕρ ΙΌ №. 4,

- 21 029226

более преимущественно вдоль полной длины 8ЕЦ ΙΌ Νο. 4;

е) СКХ6 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную

последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕЦ ГО Νο. 5 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с 8ЕЦ ГО Νο. 5 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот 8ЕЦ ГО Νο. 5, преимущественно 100 аминокислот 8ЕЦ ГО Νο. 5, более преимущественно вдоль полной длины 8ЕЦ ГО Νο. 5;

или

ί) СКХ7 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу что включает полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕЦ ГО Νο. 6 или ее ортологом, где ортолог преимущественно представляет собой эндогенный ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность по крайней мере с 45%, по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 80% или по крайней мере 90% идентичностью последовательности с 8ЕЦ ГО Νο. 6 вдоль беспрерывной аминокислотной последовательности из 50 аминокислот 8ЕЦ ГО Νο. 6, преимущественно 100 аминокислот 8ЕЦ ГО Νο. 6, более преимущественно вдоль полной длины 8ЕЦ ГО Νο. 6;

осуществляют ίη νίίτο и вводят в желательное растение при использовании стандартных методик.

Мутированный ген будет взаимодействовать с целевым геном дикого типа таким образом, что у трансгенных растений будет возникать гомологическая рекомбинация и нацеленная замена гена дикого типа.

Изолированные клетки растений и/или трансгенные растения согласно изобретению, которые употребляются человеком и животными, могут также использоваться, например, непосредственно или после получения, которое является известным как такое, пищевых или кормовых продуктов.

Изобретение дополнительно относится к применению описанных выше изолированных клеток растений и/или трансгенных растений согласно изобретению и клеток, культур клеток, частей, таких как, например, корни, листья и т.п., в случае организмов трансгенного растения, и трансгенного материала для размножения, такого как семена, клубни, корнеплоды/разросшиеся стержневые корни или плоды, которые происходят от них, для получения пищевых или кормовых продуктов, фармацевтических средств или чистых химических агентов.

Далее данное изобретение будет дополнительно описано с помощью примеров.

Фигуры

Фиг. 1 показывает положение инсерций Т-ДНК и транспозонов в скх мутантах. Инсерционные мутанты были идентифицированы с помощью ПЦР скрининга, и сайт инсерции определяли с помощью секвенирования ДНК предельных фрагментов. Черные квадраты представляют экзоны, белые квадраты представляют интроны, а треугольники показывают инсерции Т-ДНК. С, ΟΛΒΙ-КАТ Т-ДНК-коллекция; 8, 8а1к Т-ДНК-коллекция; Т, Τοπόυ Меза Т-ДНК-коллекция; Ζ, ΖΙΟΙΑ коллекция транспозонов.

Фиг. 2 демонстрирует характеристику алелли инсерции скх Т-ДНК и транспозона. Отсутствие экспрессии СКХ гена в инсерционных мутантах. РНК из 10-дневных проростков использовали как матрицу для ПЦР анализа с обратной транскриптазою. Актин 2 подвергали амплификации как контроль.

Фиг. 3 показывает содержание цитокинина в соцветиях скх3 скх5 мутанта и растения дикого типа. Собирали 0,5 г соцветий ΑταόίύορίΑ на образец и объединяли 30 ΌΑΟ. Собирали пять независимых биологических образцов для каждого генотипа. Представленные данные представляют собой средние значения содержания цитокинина [пмоль/г сырой массы] ± стандартное отклонение.; η=5. ίζ, транс-зеатин; ίζτ; транс-зеатин рибозид; Ιζπηρ, транс-зеатин рибозид 5'-монофосфат; ίζ9Ο, транс-зеатин 9-глюкозид; Ιζτοβ. транс-зеатин рибозид О-глюкозид; ίρ, Ц(А²изопентил)аденин; ίρτ, А^-(Д²изопентил)аденозин; 1ргтр, Ν⁶(Д²изопентил)аденозин 5'-монофосфат; ίρ9Ο, А^-(Д²изопентил)аденин 9-глюкозид.

Фиг. 4 показывает сравнение морфологии проростков из растений дикого типа и скх мутантов. Количество стручков, образованных растением дикого типа и скх мутантами на основном стебле на протяжении одного жизненного цикла. Растения дикого типа формировали 54,7 стручков (100%). Высота растения ΑπιόίύορίΑ дикого типа и скх мутантов в конце периода цветения. Высота растений дикого типа составляла 39,5 см (100%). Данные представляют собой средние значения ± стандартное отклонение (η=13-17). *, Р<0,01 по сравнению с диким типом; ·=Ρ<0,01 по сравнению с скх3.

Фиг. 5 показывает фенотип цветов и урожайность семян скх мутантов. а, Ь, стадия 13 цветов (а) и соответствующий инецей (Ь) Слева направо являются представленными дикий тип, скх3, скх5 и скх3 скх5. с, поверхность лепестков скх мутантов, стадия 14 цветов, 39 ΌΑΟ (η=30). й, количество семенных зачатков на гинецей (η=12). е, урожайность семян дикого типа и скх3 скх5 в условиях ростовой камеры (η=30). Данные представляют собой средние значения ± стандартное отклонение *, Р<0,01 по сравнению с диким типом.

Фиг. 6 показывает количество стручков, образованных растением дикого типа и скх мутантами, на

- 22 029226

основном стебле на протяжении одного жизненного цикла (п=15). Растения дикого типа формировали 54,7 стручков (100%). Данные представляют собой средние значения ± стандартное отклонение *, Р < 0,01 по сравнению с диким типом. ·, Р<0,01 по сравнению с скхЗ.

Фиг. 7 показывает молодые семенные зачатки растения дикого типа и скхЗ скх5 мутанта. Определение стадий семенных зачатков согласно ЗсНпсП/ и др. Прямоугольник шкалы: 10 мкм. Количество семенных зачатков увеличивается у скхЗ скх5 мутантов по сравнению с растениями дикого типа.

Примеры

Способы

Растительный материал и условия выращивания

Колумбийский (Со1-0) экотип АгаЫбор818 кйаПапа использовали как дикий тип. Инсерционные мутанты Т-ДНК скх2-81 (8АЬК_068485), скхЗ-81 (8АЬК_050938), скх4-81 (8АЬК_055204), скх5-81 (8АЬК_064309), и скх6-81 (8АЬК_070071) были получены из лаборатории геномного анализа Института Солка (Л1оп8о и др., (2003) Заепсе 301, 653-657), инсерционный транспозоновый мутант ск.\4-/ был получен из ΖΙΟΙΆ коллекции транспозонов (Ваитапп Е., Ее/а1б ί.. Заеб1ет Н., Зсйик В., \νί8ΐη;πι Е. (1998) Зиссе88Ги1 Рсг-Ьа8еб теуете депейс 8сгееп8 И8шд ап Еп-1-тШадеш8еб ЛтаЫбор818 (ЕаПапа рори1абоп депега1еб У1а 8шд1е-8ееб бе8сепЕ Тйеогебса1 апб Лррйеб Оепейс8 97: 729-734), скх5-О2 (линия щ. номер 332В10) и скх7-О1 (линия щ. номер 363С02) были получены из ОАВ1-КАТ коллекции (Ко88о, М.О., Ы, Υ., 311Ыюу, Ν., Кс188, В., Оеккег, К., и Vе^88Ηаа^. В. (2003) Р1апк Мо1. Вю1. 53, 247-259) и скх7-Т1 (ЗА1Ь_515_А07) был от Тоггеу Ме8а Ре8еагск ЕъШШе (сейчас Синджента). Для проверки инсерции ТДНК использовали геномный праймер 1 и праймер левой границы, а также использовали геномный праймер 1 и 2 гомозиготных линий (табл. 1). Двойные мутанты получали путем скрещивания, а инсерции подтверждали с помощью геномной ПЦР при использовании специфических для гена и Т-ДНК предельных праймеров (табл. 1). Мутантную линию скх4-/ не использовали как партнер для скрещивания. Растения выращивали в вегетационных домиках в почве при 22°С при условиях длинного светового дня (16 ч света/8 ч темноты). Для измерения урожайности семена растений выращивали в ростовых камерах (Регщуа1 АК-66Ь) в почве при 24°С при ~100 мкЭ и 65% влажности при условиях длинного светового дня.

Анализ экспрессии СКХ

Общую РНК экстрагировали из проростков в соответствии Уег/оегб и др. (Уег/оегб и др., 1989). РНК обрабатывали ДНКазой I, свободной от РНК (Реттеп1а8, δΐ. Ьеоп-Ко!, Оегтапу) при 37°С на протяжении 30 мин. Один микролитр 25 мМ ЭДТА прибавляли при 65°С на протяжении 10 мин. РНК (0,5 мкг) использовали для реакции ОТ-ПЦР. Все используемые пары праймеров охватывали соответствующий сайт инсерции Т-ДНК (табл. 2). Во всех реакциях ОТ-ПЦР праймеры для Актина 2 использовали как контроли. ОТ-ПЦР осуществляли при использовании набора для одноэтапной ОТ-ПЦР (Ц1адеп, Нббеп, Оегтапу) согласно инструкциям производителя. ПЦР включала 35 циклов по 30 с при 94°С, 30 с при 57°С и 2 мин при 72°С.

Сканирующая электронная микроскопия

Сканирующую электронную микроскопию проводили так, как описано Ктиркоуа и др. (Ктиркоуа, Е., Епте^еек Р., Раи1у, М., и ЗсйтиШпд, Т. (2007) Р1апк I. 50, 735-750) при использовании ЬЕО 430 микроскопа ^е188, ОЬегкосйеи, Оегтапу).

Измерение цитокинина

Растения выращивали в почве до тех пор, пока основные соцветия не достигали приблизительно 10 см в высоту (приблизительно 30 ОАО). Для каждого образца собирали ~0,5 г соцветий от стадии 1 до стадии 15 цветков (Зтукй, Ό.Κ., Во/тап, ТЬ. и Меуего/ίίζ, Е.М. (1990) Р1апк Се11 2, 755-767), и отбирали пять независимых образцов для каждого генотипа. Содержание цитокинина определяли с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии - электрораспылительной тандемной масс-спектрометрии Щоуак, О., Наи8етоуа, Е., Атакотоуа, Р., ЭоК/ак К., и Зктпаб, М. (2008) РНу1оскет181гу 69, 2214-2224).

Площадь лепестков

Площадь лепестков измеряли, исходя из цифровых изображений отпрепарированных органов при использовании программы Зсюп 1таде (Зсюп Согрогабоп Ртебебск, Магу1апб, ИЗА).

Определение заключительной высоты растения и параметров урожайности

Заключительную высоту растения и количество стручков на основном стебле определяли после окончания цветения. Для анализа урожайности семян растения помещали в бумажные пакеты после окончания цветения. После высушивания растений на протяжении дополнительных трех недель определяли общий вес семян.

Световая микроскопия

Для подсчета семенных зачатков и изучения гинецеи очищали и готовили для микроскопического исследования так, как описано (Ма1ату и ВепГеу, 1997). Все образцы оценивали с помощью Ахю8кор 2 р1и8 микроскопа ^е188, 1епа, Оегтапу).

- 23 029226

Подсчет и разделение семенных зачатков

Получали семенные зачатки растений дикого типа и скх3 скх5 мутантов, анализировали и разделяли так, как описано у ЗскпеИ/ и др. (1995). Развитие семенных зачатков растений дикого типа у АшМ^рδΐδ ШаНапа: исследование при использовании светового микроскопа очищенных тотальных препаратов ткани. Р1ап1 I. 7, 731-749.

Оказалось, что способность плацентарной ткани инициировать завязи увеличивается у скх3 скх6 мутантов по сравнению с растениями дикого типа, что приводит к более высокому общему количеству и плотности семенных зачатков и семян в плодолистиках.

Таблица 1. Праймеры, которые используются для инсерций Т-ДНК и которые представлены на фиг. 1

геномный праймер 1	геномный праймер 2	Левосторонний праймер инсерции Т-ДНК
скх2- бААТббТббААТТббТббТС '	бСбАбСАТбТСААСАТТТСА	ТббТТСАСбТАбТбббССАТСб
⁵¹ (δΕΟΙϋΝο. 15)	(δΕΟΙϋΝο. 16)	(δΕΟΙϋΝο. 17)
скхЗ- ТСААДАбССТСССААТТбТС.	СТССССТАААСАССбАСТТС	ТббТТСАССТАбТССбССАТСб
⁵¹ (δΕΟΙϋΝο. 18)	(5ЕО Ιϋ Νο. 19)	(5ЕО Ιϋ Νο. 20)
СкХ4- СТСГбССбСТТСТСАСбАСТТСббТА	САТАААСССТббАбСбАААССТАбАб	ТббТТСАСбТАбТбббССАТСб
⁵¹ (δΕΟΙϋΝο. 21)	(δΕΟΙϋΝο. 22)
скх4- СААббТААААСТСАСАСбССАТААСС	САТАААСССТббАбСбАААССТАбАб	ОАОСОТСООТССССАСАСТТСТАТАС
² (5ЕЦЮ Νο. 24)	(δΕΟΙϋΝο. 25)	(δΕΟΙϋΝο. 26)
скХ5- ТТбТТбСАбСААСбАССААССбДТАДТбЛ	' ААТб6ТАТАТТбТбАТ6АСА6бТбА6АТб	ТббТТСАСбТАбТбббССАТСб”'
⁵¹ (δΕΟΙϋ Νο. 27)	(δΕΟΙϋΝο. 28)	(δΕΟΙϋΝο. 29)
скх5- ААТ66ТАТАТТ6Т6АТ6АСА66Т6А6АТ6	ТТСТТбСАбСААСбАССААССбАТААТбА	АТАТТбАССАТСАТАСТСАТТбС
^С2 (δΕΟΙϋΝο. 30)	(δΕΟΙϋΝο. 31)	(δΕΟΙϋΝο. 32)
скхб- АСССТ6ТССАА6АДТ6СТТСА	ТбТббАТТССССТССТССАТА	ТббТТСАСбТАбТбббССАТСб
⁵² (δΕΟΙϋΝο. 33)	(δΕΟΙϋΝο. 34)	(δΕΟΙϋΝο. 35)

скх7- ТТА6СС6ТСС6АТСААТСТС	С66ААААТСТАС66АТ66Т6	АТАТТб АССАТСАТАСТСАТТб С
⁶¹ (5Е0. ΙΟ Νο. 36)	(δΕΟΙϋΝο. 37)	(δΕΟΙϋΝο. 38)
скх7- бСТАбТААбТСЛбЛАСЛЛСбДбТСАТС	ПАбССёТеСОАТСААТСТС ' “*’(ЛСИ(ТГГСАОАЛАТСОАТАААТАСЮСТТОС1ТСС
^Τ1 (5ЕО Ю Νο. 39)	(5ЕОГО Νο. 40)	(δΕΟΙϋΝο. 41)

Таблица 2. Праймер, который используется для анализов ОТ-ПЦР и который представлен на фиг. 2

асНп2 ТАСААССАССТТССТбТТСС САТТСАТССТСССАТССАСА

(5ЕО. Ю Νο. 60) (5Е0. Ю Νο. 61)

- 24 029226

Перечень последовательностей

<110> ШМЮЛЛИНГ, Томас

<120> Нарушение гена СКХЗ и, по крайней мере, одного другого гена СКХ растении или растительной клетке, которое приводит к улучшенным признакам

<130> Р663409ЕР

<160> 61

<170> РаЬепЫп νβΓδίοη 3.3

<210> 1

<211> 523

<212> Белок

<213> АгаЫйорзгз РПаПапа

<400> 1

Мер А1а Зег Туг Азп Ьеи Агд Зег С1п Уа1 Агд Ьеи Не А1а 11е ТЬг

10

15

11е Уа1 11е 11е 11е ТЬг Ьеи Зег ТЬг Рго 11е ТЬг ТЬг Азп ТЬг Зег

Рго С1п Рго Тгр Азп 11е Ьеи Зег Низ Азп С1и РЬе А1а С1у Ьуз Ьеи

ТЬг Зег Зег Зег Зег Зег Уа1 С1и Зег А1а А1а ТЬг Азр РЬе С1у Ηί

Уа1 ТЬг Ьуз 11е РЬе Рго Зег А1а Уа1 Ьеи 11е Рго Зег Зег Уа1 С1и

Азр 11е ТЬг Азр Ьеи 11е Ьуз Ьеи Зег РЬе Азр Зег С1п Ьеи Зег РЬе

Рго Ьеи А1а А1а Агд С1у Низ С1у Низ Зег НЬз Агд С1у С1п А1а Зег 100 105 110

А1а Тгр Ьеи Тгр 11е С1и Уа1 Ьеи Азп Ьуз ТЬг Ьеи С1и Ьеи 61у Ьеи 145 150 155 160

ТЬг Рго Уа1 Зег Тгр ТЬг Азр Туг Ьеи Туг Ьеи ТЬг Уа1 С1у С1у ТЬг 165 170 175

РЬе Зег С1и РЬе ТЬг Агд Азр 61п 61и Агд Уа1 11е Зег Ьуз ТЬг Азр 260 265 270

С1у Уа1 Азр РЬе Ьеи 61и С1у Зег 11е МеЬ Уа1 Азр Низ С1у Рго Рго 275 280 285

Азр Азп Тгр Агд Зег ТЬг Туг Туг Рго Рго Зег Азр Нтз Ьеи Агд 11е 290 295 300

А1а Зег МеЬ Уа1 Ьуз Агд Низ Агд Уа1 Х1е Туг Суз Ьеи С1и Уа1 Уа1 305 310 315 320

Азр Уа1 ТЬг Туг МеЬ Азр РЬе Ьеи Азп Агд Уа1 Агд ТЬг С1у С1и Ьеи 355 360 365

Ьеи РЬе Уа1 Рго Ьуз ТЬг С1п 11е Зег Ьуз РЬе Азр Азр С1у \7а1 РЬе 385 390 395 400

Ьуз С1у 11е 11е Ьеи Агд Азп Азп 11е ТЬг Зег С1у Рго Уа1 Ьеи Уа1 405 410 415

- 25

029226

РЬе 4 65

Суз 61и Азр

А1а Азп 470

Мер С1у

Уа1

Ые

С1п Туг Ьеи Рго Туг 475

Шз 480

Зег

С1п

С1и

С1у

Тгр

Уа1

Агд

Шз

РЬе

С1у

Рго

Агд

Тгр

Азп

Ые

485

490

495

РЬе

Уа1

С1и

Агд

Ьуз

Туг

Ьуз

Туг

Азр

Рго

Ьуз

Мер

Ые

Ьеи

Зег

Рго

500

505

510

С1у

С1п

Азп

Ые

РЬе

61п

Ьуз

Ые

Азп

Зег

515

520

<210>

2

<211>

501

<212>

Белок

<213>

АгаЫЭорзхз

РЬаЫапа

<400>

2

Мер

А1а

Азп

Ьеи

Агд

Ьеи

Мер

Ые

ТЬг

Ьеи

Ые

ТЬг

Уа1

Ьеи

Мер

Ые

1

5

10

15

ТЬг

Ьуз

Зег

Азп

С1у

Ые

Ьуз

Ые

Азр

Ьеи

Рго

Ьуз

Зег

Ьеи

Азп

20

25

30

Ьеи

ТЬг

Ьеи

Зег

ТЬг

Азр

Рго

Зег

Ые

Зег

А1а

Зег

Шз

Азр

35

40

45

РЬе

С1у

Азп

Ые

ТЬг

Уа1

ТЬг

Рго

С1у

61у

Уа1

Ые

Суз

Рго

Зег

50

55

60

Зег

ТЬг

А1а

Азр

Ые

Зег

Агд

Ьеи

61п

Туг

А1а

Азп

С1у

Ьуз

65

70

75

80

Зег

ТЬг

РЬе

С1п

Уа1

А1а

Агд

С1у

С1п

С1у

Шз

Зег

Ьеи

Азп

С1у

85

90

95

С1п

А1а

Зег

Уа1

Зег

С1у

Уа1

Ые

Уа1

Азп

Мер

ТЬг

Суз

Ые

ТЬг

100

105

110

Азр

Уа1

Зег

Ьуз

Азр

Ьуз

Туг

А1а

Азр

Уа1

А1а

С1у

115

120

125

ТЬг

Ьеи

Тгр

Уа1

Азр

Уа1

Ьеи

Ьуз

ТЬг

А1а

С1и

Ьуз

С1у

Уа1

Зег

130

135

140

Рго

Уа1

Зег

Тгр

ТЬг

Азр

Туг

Ьеи

Шз

Ые

ТЬг

Уа1

С1у

ТЬг

Ьеи

145

150

155

160

Зег

Азп

С1у

Ые

С1у

С1п

Уа1

РЬе

Агд

Азп

61у

Рго

Ьеи

Уа1

165

170

175

Зег Азп Уа1 Ьеи С1и Ьеи Азр Уа1 Ые ТЬг С1у Ьуз С1у С1и МеР Ьеи 180 185 190

ТЬг Суз Зег Агд С1п Ьеи Азп Рго С1и Ьеи РЬе Туг С1у Уа1 Ьеи С1у 195 200 205

С1у Ьеи С1у С1п РЬе С1у 11е 11е ТЬг Агд А1а Агд 11е Уа1 Ьеи Азр 210 215 220

Н1з А1а Рго Ьуз Агд А1а Ьуз Тгр РЬе Агд Мер Ьеи Туг Зег Азр РЬе 225 230 235 240

ТЬг ТЬг РЬе ТЬг Ьуз Азр С1п С1и Агд Ьеи 11е Зег Мер А1а Азп Азр 245 250 255

11е С1у Уа1 Азр Туг Ьеи С1и С1у 61п 11е РЬе Ьеи Зег Азп С1у Уа1 260 265 270

Уа1 Азр ТЬг Зег РЬе РЬе Рго Рго Зег Азр С1п Зег Ьуз Уа1 А1а Азр 275 280 285

Ьеи Уа1 Ьуз С1п Шз С1у 11е 11е Туг Уа1 Ьеи С1и Уа1 А1а Ьуз Туг 290 295 300

Туг Азр Азр Рго Азп Ьеи Рго 11е 11е Зег Ьуз Уа1 11е Азр ТЬг Ьеи 305 310 315 320

ТЬг Ьуз ТЬг Ьеи Зег Туг Ьеи Рго С1у РЬе 11е Зег Мер Шз Азр Уа1 325 330 335

А1а Туг РЬе Азр РЬе Ьеи Азп Агд Уа1 Шз Уа1 61и С1и Азп Ьуз Ьеи 340 345 350

Агд Зег Ьеи 61у Ьеи Тгр С1и Ьеи Рго Шз Рго Тгр Ьеи Азп Ьеи Туг 355 360 365

Уа1 Рго Ьуз Зег Агд 11е Ьеи Азр РЬе Шз Азп С1у Уа1 Уа1 Ьуз Азр 370 375 380

11е Ьеи Ьеи Ьуз С1п Ьуз Зег А1а Зег С1у Ьеи А1а Ьеи Ьеи Туг Рго 385 390 395 400

ТЬг Азп Агд Азп Ьуз Тгр Азр Азп Агд МеР Зег А1а Мер 11е Рго С1и 405 410 415

11е Азр 61и Азр Уа1 11е Туг 11е 11е С1у Ьеи Ьеи С1п Зег А1а ТЬг 420 425 430

26

029226

РЬе

Суз Ьуз 450

Азр

Зег

С1у

11е Ьуз 455

11е

Ьуз

С1п

Туг 460

Ьеи МеЬ Шз Туг

ТЬг

Зег

Ьуз

С1и

Азр

Тгр

Не

С1и

Ηίδ

РЬе

С1у

Зег

Ьуз

Тгр

Азр

465

470

475

480

РЬе

Зег

Ьуз

Агд

Ьуз

Азр

Ьеи

РЬе

Азр

Рго

Ьуз

Ьеи

Зег

Рго

485

490

495

61у

С1п

Азр

Не

РЬе

500

<210> 3

<211> 524

<212> Белок

<21

3>

АгаЬ

313

ЬЬа1

1апа

<40

0>

3

МеЬ

ТЬг

Азп

ТЬг

Ьеи

Суз

Ьеи

Зег

Ьеи

Не

ТЬг

Ьеи

Не

ТЬг

Ьеи

РЬе

1

5

10

15

Не

Зег

Ьеи

ТЬг

Рго

ТЬг

Ьеи

Не

Ьуз

Зег

Азр

С1и

С1у

Не

Азр

Уа1

20

25

30

РЬе

Ьеи

Рго

Не

Зег

Ьеи

Азп

Ьеи

ТЬг

Уа1

Ьеи

ТЬг

Азр

Рго

РЬе

Зег

35

40

45

Не

Зег

А1а

Зег

Шз

Азр

РЬе

С1у

Азп

Не

ТЬг

Азр

С1и

Азп

Рго

50

55

60

61у

А1а

Уа1

Ьеи

Суз

Рго

Зег

ТЬг

С1и

Уа1

А1а

Агд

Ьеи

65

70

75

80

Агд

РЬе

А1а

Азп

С1у

Е1у

РЬе

Зег

Туг

Азп

Ьуз

С1у

Зег

ТЬг

Зег

Рго

85

90

95

А1а

Зег

ТЬг

РЬе

Ьуз

Уа1

А1а

Агд

С1у

С1п

61у

Шз

Зег

Ьеи

Агд

100

105

110

С1у

С1п

А1а

Зег

А1а

Рго

С1у

Уа1

Азп

МеЬ

ТЬг

Суз

Ьеи

115

120

125

А1а

МеЬ

А1а

Ьуз

Рго

А1а

Уа1

Не

Зег

А1а

Азр

С1у

ТЬг

130

135

140

Туг

А1а

Азр

Уа1

А1а

С1у

ТЬг

МеЬ

Тгр

Уа1

Азр

Уа1

Ьеи

Ьуз

А1а

145

150

155

160

А1а

Уа1

Азр

Агд

С1у

Уа1

Зег

Рго

Уа1

ТЬг

Тгр

ТЬг

Азр

Туг

Ьеи

Туг

165

170

175

Ьеи

Зег

Уа1

С1у

ТЬг

Ьеи

Зег

Азп

А1а

С1у

Не

С1у

С1п

ТЬг

180 185 190

РЬе Агд Ηίδ С1у Рго С1п Не Зег Азп Уа1 Нтз С1и Ьеи Азр Уа1 11е 195 200 205

ТЬг С1у Ьуз С1у С1и МеЬ МеЬ ТЬг Суз Зег Рго Ьуз Ьеи Азп Рго 61и 210 215 220

Ьеи РЬе Туг С1у Уа1 Ьеи С1у С1у Ьеи С1у 61п РЬе 61у Не 11е ТЬг 225 230 235 240

Агд А1а Агд Не А1а Ьеи Азр Н1з А1а Рго ТЬг Агд Уа1 Ьуз Тгр Зег 245 250 255

Агд 11е Ьеи Туг Зег Азр РЬе Зег А1а РЬе Ьуз Агд Азр С1п С1и Агд 260 265 270

Ьеи Не Зег МеЬ ТЬг Азп Азр Ьеи С1у Уа1 Азр РЬе Ьеи С1и С1у 61п 275 280 285

Ьеи МеЬ МеЬ Зег Азп С1у РЬе Уа1 Азр ТЬг Зег РЬе РЬе Рго Ьеи Зег 290 295 300

Азр Е1п ТЬг Агд Уа1 А1а Зег Ьеи Уа1 Азп Азр ΗΪ3 Агд 11е Не Туг 305 310 315 320

Уа1 Ьеи С1и Да1 А1а Ьуз Туг Туг Азр Агд ТЬг ТЬг Ьеи Рго Не Не 325 330 335

Азр С1п Уа1 Не Азр ТЬг Ьеи Зег Агд ТЬг Ьеи С1у РЬе А1а Рго С1у 340 345 350

РЬе МеЬ РЬе Уа1 С1п Азр Уа1 Рго Туг РЬе Азр РЬе Ьеи Азп Агд Уа1 355 360 365

Агд Азп С1и С1и Азр Ьуз Ьеи Агд Зег Ьеи С1у Ьеи Тгр С1и Уа1 Рго 370 375 380

ΗΪ3 Рго Тгр Ьеи Азп Не РЬе Уа1 Рго С1у Зег Агд Не 61п Азр РЬе 385 390 395 400

Низ Азр С1у Уа1 Не Азп С1у Ьеи Ьеи Ьеи Азп 61п ТЬг Зег ТЬг Зег 405 410 415

С1у Уа1 ТЬг Ьеи РЬе Туг Рго ТЬг Азп Агд Азп Ьуз Тгр Азп Азп Агд 420 425 430

МеЬ Зег ТЬг МеЬ ТЬг Рго Азр С1и Азр Уа1 РЬе Туг Уа1 Не С1у Ьеи 435 440 445

Ьеи С1п Зег А1а С1у С1у Зег С1п Азп Тгр С1п С1и Ьеи С1и Азп Ьеи

27

029226

450 455 460

Азп Азр Ьуз Уа1 465

Не С1п 470

РЬе Суз 61и

Азп

Зег 475

С1у

Не Ьуз

Не Ьуз 480

СЬи

Туг

Ьеи

Мер

Нтз

Туг

ТЬг

Агд

Ьуз

С1и

Азр

Тгр

Уа1

Ьуз

Нтз

РЬе

485

490

495

61у

Рго

Ьуз

Тгр

Азр

РЬе

Ьеи

Агд

Ьуз

11е

МеЬ

РЬе

Азр

Рго

500

505

510

Ьуз

Агд

Ьеи

Зег

Рго

С1у

С1п

Азр

Не

РЬе

Азп

515

520

<210> <211>

4 540

<212>

Белок

<213>

АгаЬтЬорзтз

ЬЬаНапа

<400>

4

МеЬ

Азп

Агд

С1и

МеЬ

ТЬг

Зег

РЬе

Ьеи

ТЬг

РЬе

А1а

11е

1

5

10

15

Суз

Ьуз

Ьеи

Не

А1а

Уа1

С1у

Ьеи

Азп

Уа1

61у

Рго

Зег

61и

Ьеи

20

25

30

Ьеи

Агд

Не

С1у

А1а

Не

Азр

Уа1

Азр

С1у

Нтз

РЬе

ТЬг

Уа1

Нтз

Рго

35

40

45

Зег

Азр

Ьеи

А1а

Зег

Уа1

Зег

Азр

РЬе

С1у

МеЬ

Ьеи

Ьуз

Зег

Рго

50

55

60

С1и

Рго

Ьеи

А1а

Уа1

Ьеи

Нтз

Рго

Зег

А1а

С1и

Азр

Уа1

А1а

65

70

75

80

Агд

Ьеи

Уа1

Агд

ТЬг

А1а

Туг

С1у

Зег

А1а

ТЬг

А1а

РЬе

Рго

Уа1

Зег

85

90

95

А1а

Агд

С1у

Нтз

С1у

Нтз

Зег

Не

Азп

С1у

С1п

А1а

С1у

Агд

100

105

но

Азп

С1у

Уа1

С1и

МеЬ

Азп

Нтз

С1у

Уа1

ТЬг

С1у

ТЬг

Рго

Ьуз

115

120

125

Рго

Ьеи

Уа1

Агд

Рго

Азр

С1и

МеЬ

Туг

Уа1

Азр

Уа1

Тгр

С1у

С1и

130

135

140

Ьеи

Тгр

Уа1

Азр

Уа1

Ьеи

Ьуз

ТЬг

Ьеи

С1и

Нтз

С1у

Ьеи

А1а

Рго

145

150

155

160

Ьуз

Зег

Тгр

ТЬг

Азр

Туг

Ьеи

Туг

Ьеи

ТЬг

Уа1

С1у

ТЬг

Ьеи

Зег

165

170

175

Азп А1а С1у Не Зег 61у С1п А1а РЬе Нтз Нтз С1у Рго С1п Не Зег 180 185 190

Азп Уа1 Ьеи С1и Ьеи Азр Уа1 Уа1 ТЬг С1у Ьуз С1у С1и Уа1 МеЬ Агд 195 200 205

Суз Зег С1и С1и С1и Азп ТЬг Агд Ьеи РЬе Нтз С1у Уа1 Ьеи С1у С1у 210 215 220

Ьеи С1у 61п РЬе С1у 11е 11е ТЬг Агд А1а Агд 11е Зег Ьеи С1и Рго 225 230 235 240

А1а Рго С1п Агд Уа1 Агд Тгр 11е Агд Уа1 Ьеи Туг Зег Зег РЬе Ьуз 245 250 255

\/а1 РЬе ТЬг С1и Азр С1п С1и Туг Ьеи Не Зег МеЬ Нтз С1у С1п Ьеи 260 265 270

Ьуз РЬе Азр Туг Уа1 С1и С1у РЬе Уа1 11е Уа1 Азр С1и С1у Ьеи Уа1 275 280 285

Азп Азп Тгр Агд Зег Зег РЬе РЬе Зег Рго Агд Азп Рго Уа1 Ьуз Не 290 295 300

Зег Зег Уа1 Зег Зег Азп С1у Зег \/а1 Ьеи Туг Суз Ьеи С1и 11е ТЬг 305 310 315 320

Ьуз Азп Туг Нтз Азр Зег Азр Зег С1и 11е \/а1 Азр С1п С1и Уа1 С1и 325 330 335

Не Ьеи Мер Ьуз Ьуз Ьеи Азп РЬе 11е Рго ТЬг Зег Уа1 РЬе ТЬг ТЬг 340 345 350

Азр Ьеи С1п Туг А/а1 Азр РЬе Ьеи Азр Агд Уа1 Нтз Ьуз А1а С1и Ьеи 355 360 365

Ьуз Ьеи Агд Зег Ьуз Азп Ьеи Тгр 61и Уа1 Рго Нтз Рго Тгр Ьеи Азп 370 375 380

Ьеи РЬе Уа1 Рго Ьуз Зег Агд Не Зег Азр РЬе Азр Ьуз С1у Уа1 РЬе 385 390 395 400

Ьуз С1у 11е Ьеи С1у Азп Ьуз ТЬг Зег С1у Рго Не Ьеи Не Туг Рго 405 410 415

МеЬ Азп Ьуз Азр Ьуз Тгр Азр С1и Агд Зег Зег А1а Уа1 ТЬг Рго Азр 420 425 430

С1и С1и Уа1 РЬе Туг Ьеи Уа1 А1а Ьеи Ьеи Агд Зег А1а Ьеи ТЬг Азр 435 440 445

28

029226

Е1у С1и С1и 450	ТЬг С1п Ьуз	Ьеи 455	61и	Туг	Ьеи	Ьуз	Азр 460	С1п	Азп	Агд	Агд
Не Ьеи С1и 465	РЬе Суз 61и 470	С1п	А1а	Ьуз	Не	Азп 475	Уа1	Ьуз	Е1п	Туг	Ьеи 480
Рго Шз Шз	А1а ТЬг С1п 485	61и	С1и	Тгр	Уа1 490	А1а	Нхз	РЬе	С1у	Азр 495	Ьуз
Тгр Азр Агд	РЬе Агд Зег 500	Ьеи	Ьуз	А1а 505	61и	РЬе	Азр	Рго	Агд 510	Нхз	Не
Ьеи А1а ТЬг 515	С1у С1п Агд	Не	РЬе 520	С1п	Азп	Рго	Зег	Ьеи 525	Зег	Ьеи	РЬе
Рго Рго Зег 530	Зег Зег Зег	Зег 535	Зег	А1а	А1а	Зег	Тгр 540
<210> 5 <211> 533 <212> Белок <213> АгаЬхдорзхз РЬаПапа
<400> 5
Мер Зег Туг 1	Ьеи Шз А1а 5	Зег	Ьеи	Ьеи	Агд 10	Ьуз	Агд	ТЬг	Мер	Ьеи 15	Не
Уа1 Агд Зег	РЬе ТЬг Не 20	Ьеи	Ьеи	Ьеи 25	Зег	Суз	Не	А1а	РЬе 30	Ьуз	Ьеи
А1а Суз Суз 35	РЬе Зег Зег	Зег	Не 40	Зег	Зег	Ьеи	Ьуз	А1а 45	Ьеи	Рго	Ьеи
Уа1 С1у Шз 50	Ьеи 61и РЬе	С1и 55	Шз	Уа1	Нхз	Шз	А1а 60	Зег	Ьуз	Азр	РЬе
61у Азп Агд 65	Туг С1п Ьеи 70	Не	Рго	Ьеи	А1а	Уа1 75	Ьеи	Нхз	Рго	Ьуз	Зег 80
Уа1 Зег Азр	Не А1а Зег 85	ТЬг	Не	Агд	Шз 90	Не	Тгр	Мер	Мер	С1у 95	ТЬг
Шз Зег Е1п	Ьеи ТЬг Уа1 100	А1а	А1а	Агд 105	С1у	Агд	С1у	Нхз	Зег 110	Ьеи	61п
С1у С1п А1а 115	С1п ТЬг Агд	Шз	Е1у 120	Не	Уа1	Не	Нхз	Мер 125	С1и	Зег	Ьеи
Шз Рго С1п	Ьуз Ьеи С1п	Уа1	Туг	Зег	Уа1	Азр	Зег	Рго	А1а	Рго	Туг

130 135 140

Уа1 Азр Уа1 Зег 61у С1у С1и Ьеи Тгр Не Азп 11е Ьеи Нхз С1и ТЬг 145 150 155 160

Ьеи Ьуз Туг С1у Ьеи А1а Рго Ьуз Зег Тгр ТЬг Азр Туг Ьеи Шз Ьеи 165 ПО 175

ТЬг Уа1 Е1у С1у ТЬг Ьеи Зег Азп А1а 61у 11е Зег С1у С1п А1а РЬе 180 185 190

Агд Нхз С1у Рго С1п 11е Зег Азп Уа1 Нхз 61п Ьеи С1и Не Уа1 ТЬг 195 200 205

С1у Ьуз С1у С1и 11е Ьеи Азп Суз ТЬг Ьуз Агд С1п Азп Зег Азр Ьеи 210 215 220

РЬе Азп С1у Уа1 Ьеи С1у 61у Ьеи С1у 61п РЬе С1у Не Не ТЬг Агд 225 230 235 240

А1а Агд 11е А1а Ьеи С1и Рго А1а Рго ТЬг Мер Уа1 Ьуз Тгр 11е Агд 245 250 255

Уа1 Ьеи Туг Ьеи Азр РЬе А1а А1а РЬе А1а Ьуз Азр С1п 61и С1п Ьеи 260 265 270

Не Зег А1а С1п С1у Нхз Ьуз РЬе Азр Туг Не С1и С1у РЬе Уа1 Не 275 280 285

Не Азп Агд ТЬг С1у Ьеи Ьеи Азп Зег Тгр Агд Ьеи Зег РЬе ТЬг А1а 290 295 300

С1и С1и Рго Ьеи С1и А1а Зег С1п РЬе Ьуз РЬе Азр С1у Агд ТЬг Ьеи 305 310 315 320

Туг Суз Ьеи С1и Ьеи А1а Ьуз Туг Ьеи Ьуз С1п Азр Азп Ьуз Азр Уа1 325 330 335

Не Азп С1п С1и Уа1 Ьуз С1и ТЬг Ьеи Зег С1и Ьеи Зег Туг Уа1 ТЬг 340 345 350

Зег ТЬг Ьеи РЬе ТЬг ТЬг С1и Уа1 А1а Туг С1и А1а РЬе Ьеи Азр Агд 355 360 365

Уа1 Нхз Уа1 Зег С1и Уа1 Ьуз Ьеи Агд Зег Ьуз 61у С1п Тгр С1и Уа1 370 375 380

Рго Нхз Рго Тгр Ьеи Азп Ьеи Ьеи Уа1 Рго Агд Зег Ьуз Не Азп С1и 385 390 395 400

РЬе А1а Агд С1у Уа1 РЬе С1у Азп Не Ьеи ТЬг Азр ТЬг Зег Азп С1у 405 410 415

29

029226

- 30 029226

Ьеи РЬе Уа1 Зег Ьуз Агд Азр Не С1у Азр РЬе Азп Агд ТЬг Уа1 РЬе

385 390 395 400

Ьуз С1и Ьеи Уа1 Ьуз Азп С1у νβΐ Азп С1у Рго МеЬ Ьеи Уа1 Туг Рго

405 410 415

Ьеи Ьеи Агд Зег Агд Тгр Азр Азр Агд ТЬг Зег Уа1 Уа1 11е Рго С1и 420 425 430

С1и С1у С1и 11е РЬе Туг 11е Уа1 А1а Ьеи Ьеи Агд РЬе Уа1 Рго Рго 435 440 445

Суз А1а Ьуз Уа1 Зег Зег Уа1 61и Ьуз МеЬ Уа1 А1а С1п Азп С1п С1и 450 455 460

11е 7а1 Низ Тгр Суз νβΐ Ьуз Азп С1у 11е Азр Туг Ьуз Ьеи Туг Ьеи

465 470 475 480

Рго Низ Туг Ьуз Зег С1п С1и С1и Тгр 11е Агд Низ РЬе С1у Азп Агд

485 490 495

Тгр Зег Агд РЬе Уа1 Азр Агд Ьуз А1а МеЬ РЬе Азр Рго МеЬ А1а 11е 500 505 510

Ьеи Зег Рго С1у С1п Ьуз 11е РЬе Азп Агд Зег Ьеи

515	520
<210> 7 <211> 3342 <212> ДНК <213> АгаЬи<Зорзиз ЬЬаНапа
<400> 7 аЬддсдадЬЬ	аЬааЬсЬЬсд	ЬЬсасаадЬЬ	сдЬсЬЬаЬад	сааЬаасааЬ	адЬааЬсаЬс	60
аЬЬасЬсЬсЬ	саасЬссдаЬ	сасаассаас	асаЬсассас	аассаЬддаа	ЬаЬссЬЬЬса	120
сасаасдааЬ	Ьсдссддааа	асЬсассЬсс	ЬссЬссЬссЬ	ссдЬсдааЬс	адссдссаса	180
даНЬсддсс	асдЬсассаа	ааЪсЬЬсссЬ	ЬссдссдЬсЬ	ЬааЬсссЬЬс	сЬссдЬЬдаа	240
дасаЬсасад	аЬсЬсаЬааа	асЬсЬсЬЬЬЬ	дасЬсЬсаас	ЬдЬсЬЬНсс	ЬЬЬадссдсЬ	300
сдЬддЬсасд	дасасадсса	ссдЬддссаа	дссЬсддсЬа	аадасддадЬ	ЬдЬддЬсаас	360
аЬдсддЬсса	ЬддЬааассд	ддаЬсдаддЬ	аЬсааддЬдЬ	сЬаддассЬд	ЬНаЬаЬдЬЬ	420
дасдЬддасд	сЬдсдЬддсЬ	аЬддаЬЬдад	дЬдЬЬдааЬа	ааасЬЬЬдда	дЬЬадддЬЬа	480
асдссддЬЫ;	сЬЬддасдда	ЬЬаНЬдЬаЬ	НаасадЬсд	дЬдддасдЬЬ	аЬсааасддс	540
ддааЬЬадЬд	дасааасдЬЬ	ЬсддЬасддЬ	ссасадаЬса	сЬааЬдЬЬсЬ	ададаЬддаЬ	600
дНаЬЪасЬд	дЬасдЬасса	сдаЬсЬНЫ;	сасасадада	ЬЬаааааааа	садЬааЬадЬ	660
даЬЬЬЬаасЬ	ЬсдЬасдЬЫ	сЬдаЬадаса	асааадаасЬ	ЬсдЬасдЫЬ	ЬЬсдаадЬЬЬ	720
ЬЬЬсдЬсЬЫ;	НсаННад	аЬсЬдсдсдд	ссаЬНЬЬдд	ЬЬаЬдсЬаЬЬ	дЬНдЬЬЬдЬ	780

аНдЪЬЪдЪс	ЪсЬдИЬаЬЬ	ЬаЬЬЬсЬсда	асЬЬдЬЬдаЬ	адсЬЬЬЬсЫ:	сЬЬЬЬсасас	840
аЬсааЬсЬаа	ЬсассЬЬНЬ	ЬддЬсЬЬаад	аЬЬадааада	адаЬасддас	ЬаддЬааааа	900
ЬаддЬддЬЬд	ЬааасдЬада	сдсаЬЬаааа	аааЬаЬЬддЬ	ЬЬЬЬНаЬЬЬ	ЬЬЬдаЬаадс	960
ааааЬЬддЬд	дЬЬддЬсЬаа	даЬЬаЬааас	ЬЬдаЬаЬЬаа	ЬдсаааддЬс	даЬсЬадсаа	1020
ЬадаадаЬЬа	аЬсааЬаЬЬс	ЬЬддЬдЬЬЬЬ	аасаасадаЬ	ίаЬЬЬсаЬса	ЬЬааааЬсдЬ	1080
дааасааада	ааЬЬЬЬддЬа	дЬаЬасаЬЬа	сдЬдЬадЬЬЬ	ЬдЬЬадЬЬЬа	ЬЬаааааааа	1140
ЬадЬаЬаЬад	ЬЬЬЬдЬЬааа	асдсдаЬЬЬа	ЬЬЬадЬааса	саЬЬадЬаЬа	ЬЬасасдЬЬЬ	1200
аассаасЬаа	асЬЪЪЪЬЬЫ;	ЬЬдааЬааЬЬ	аЬдЬЬсЬаЬа	ЪЪЪсЪЪасЪс	аааЬЬаЬдса	1260
ааЬЬЬсдЬдд	аЬЬсдаадЬс	аааЬЬЬсЬдс	даааЬЬЬаса	ЬддЬсаЬаЬа	ЬЬаЬаааасЬ	1320
дЬЬсаЬаЬаа	сссддЬдаас	ааасадасаа	ЬЬаадддЬЬЬ	дааЬддЬЬас	ддсддЬЬддд	1380
дсддасасаа	ссдЬсааЬад	аЬсадассдЬ	ЬЬЬЬЬаЬЬЬа	ссаЪЪсаЬса	аЬЬаЬаЬЬсс	1440
дсадЬддЬЬЬ	ддддЬааааа	аааЬадаада	ааассдсадс	ддассааЬЬс	саЬассдЬЬЬ	1500
ЬЬасаЬасаа	аЬааасаЬдд	Ьдсдсаасдд	ЬЬЬаЬЬдЬсс	дссЬсааааа	ЬдаааЬддас	1560
Ьааассдсад	аЬаааЬЬада	ссдсЬЬЬдЬс	сдсЬдссЬсс	аЬЪсаЬадас	Ьааааааааа	1620
саассааааа	аааааЬддЬс	ссасдсссаЬ	даЬЬЬЬасас	даддЬЬЬсЬЬ	дЬддсдЬаад	1680
дасаааасЬс	аааадЬЬсаЬ	аасдЬЬЬддЬ	ссЬаассадд	ЬдЬааЬддаЬ	ЬаадЬаасад	1740
ЬсааЬЬЬЬсЬ	ЬаЬЬаЬадсЬ	дЬаЬссаЬЬа	ЬдЬссасаЬа	ЬдсаЬссаЬа	ЬасаНасас	1800
ЬдЬЬддЬсЬс	аадЬдЬадЬЬ	адаЬЬасдаа	дасЬЬЬсаад	ЬЬссаЬЬЬЬЬ	ЬддЬЬаддад	1860
аЬааасаЬаа	ЬЫааЬдаЬа	ссдасЬЬЬад	сасЬсЬаддс	Ьсаааасаад	Ьасадаадад	1920
ааЬадЬЬЬЬа	НЬсааасЬс	дЫдсаНдЬ	ЪдЪаЪсааЬЬ	ааЬЬдЬдЬЬа	дЬсЬЬЬдЬаЬ	1980
аЬЬсЬЬасаЬ	аасддЬссаа	дЫЬдЬЬдаа	аЬадЬЬЬасЬ	ЬасЬааасЬЬ	ЬЬссЬааЬдд	2040
ддЬсаааЬЬЬ	ЬаЬЬЬЬаЬад	дааааддада	даЬЬдсаасЬ	ЬдЬЬссаадд	асаЬдаасЬс	2100
ддаЬсЬНЬс	НсдсддЬдЬ	ЬаддаддЬЬЬ	дддЬсааЬЬс	ддсаНаЬаа	саададссад	2160
ааЬЬааасН	даадЬадсЬс	сдаааадддЬ	аЬдЬЬаааЬЬ	ЬдЬаааЬЬаЬ	дсаасЬасад	2220
ааааЬЬсЬаЬ	даааЬЬЬаЬд	ааЬдаасаЬа	ЬаЬдсаЬЬЬЬ	ЬддаЬЬЬЬЬд	ЬаддссаадЬ	2280
ддЬЬааддЬЬ	ЬсЬаЬасаЬа	даЬЬЬсЪссд	ааЬЬсасаад	адаЬсаадаа	сдадЬдаЬаЬ	2340
сдаааасдда	сдд+дЬадаЬ	ЬЬсНадаад	дЬЬссаЬЬаЬ	ддЬддассаЬ	ддсссассдд	2400
аЬаасЬддад	аЬссасдЬаЬ	ЬаЬссассдЬ	ссдаЪсасЬЪ	даддаЬсдсс	ЬсааЬддЬса	2460
аасдасаЬсд	ЬдЬсаЬсЬас	ЬдссНдаад	ЬсдЬсаадЬа	ЬЬасдасдаа	асЫсЪсааЪ	2520
асасадЬсаа	сдаддЬссдЬ	асаЬасаЬас	ааЬсаЬаааЬ	саЬасаЬдЬа	ЬааЬЬдддад	2580
аЬсЬЬЬаЬдс	аЬЬаЬЬсааЬ	ЬаЬаЬЬааЬЬ	ЬасЬЬЬадЬЬ	аЬЬЬаасЬЬа	ЬдсаддаааЬ	2640
ддаддадЬЬа	адсдаЬадЬЬ	ЬааассаЬдЬ	аададддЬЫ:	аЬдЬасдада	аадаЬдЬдас	2700
дЬаЬаЬддаЬ	ЬЬссЬааасс	дадЬЬсдаас	сддададсЬа	аассЬдаааЬ	ссаааддсса	2760
аЬдддаЬдН	ссасаЬссаЬ	ддсЬЬааЬсЬ	сЬЬсдЬасса	аааасЬсааа	ЬсЬссаааЬЬ	2820

31

029226

РдаРдаРддР	дРРРРРаадд	дРаРРаРссР	аадаааРаас	аРсасРадсд	дРссРдРРсР	2880
РдРРРаРссР	аРдааРсдса	асаадРаадР	РРаасРсдаР	аРРдсааааР	РРасРаРсРа	2940
саРРРРсдРР	РРддааРссд	аааРаРРсРР	асаадсРааР	РРРаРдсддс	дРРРРРаддР	3000
ддааРдаРсд	даРдРсРдсс	дсРаРасссд	аддаадаРдР	аРРРРаРдсд	дРадддРРРР	3060
РаадаРссдс	дддРРРРдас	ааРРдддадд	сРРРРдаРса	адаааасаРд	даааРасРда	3120
адррррдрда	ддаРдсРааР	аРдддддРРа	РасааРаРсР	РссРРаРсаР	РсаРсасаад	3180
ааддаРдддР	РадасаРРРР	ддрссдаддр	ддааРаРРРР	сдРададада	аааРаРаааР	3240
аРдаРсссаа	ааРдаРаРРа	Рсассдддас	ааааРаРаРР	РсааааааРа	аасРсдадРР	3300
адасдаРааР	РааРссРаРР	дррадрсдрр	сРсассасРР			3342

<2Ю> 8

<211> 2991

<212> ДНК

<213> АгаЫйорзтз РЬаНапа

<400> 8
аРддсРааРс	РРсдРРРааР	даРсасРРРа	аРсасддРРР	РааРдаРсас	саааРсаРса	60
аасддРаРРа	аааРРдаРРР	ассРаааРсс	сРРаассРса	сссРсРсРас	сдаРссРРсс	120
аРсаРсРссд	садссРсРса	РдасРРсдда	аасаРаасса	ссдрдасссс	сддсддсдРа	180
аРсРдссссР	ссРссассдс	РдаРаРсРсР	сдРсРссРсс	ааРасдссдс	ааасддаааа	240
адРасаРРсс	аадРадсддс	РсдРддссаа	ддссасРссР	Рааасддсса	адссРсддРс	300
Рссддсддад	РааРсдРсаа	сардасдрдр	аРсасРдасд	РддРддРРРс	аааадасаад	360
аадРасдсРд	асдРддсддс	сдддасдРРа	РдддРддаРд	РдсРРаадаа	дасддсддад	420
аааддддрдр	сдссддРРРс	РРддасддаР	РаРРРдсаРа	РаассдРсдд	аддаасдРРд	480
РсдааРддРд	дааРРддРдд	РсаадРдРРР	сдааасддРс	сРсРРдРРад	РаасдРссРР	540
дааРРддасд	РРаРРасРдд	РасдсаРсРР	сРааасРРРд	аРдРасаРас	аасаасаааа	600
асрдрррррд	РРРРаРадРа	РРРРРсаРРР	РРРдРассаР	аддРРРРаРд	РРРРаРадРР	660
дРдсРааасР	РсРРдсасса	сасдРаадРс	РРсдааасас	ааааРдсдРа	асдсаРсРаР	720
аРдРРРРРРд	РасаРаРРда	аРдРРдРРса	РдадаааРаа	адРааРРаса	РаРасасаса	780
РРРаРРдРсд	РасаРаРаРа	ааРааРРааа	дасаааРРРР	сасааРРддР	адсдРдРРаа	840
РРРдддаРРР	РРдРааРдРа	саРдсаРдас	дсаРдсаРаР	ддадсРРРРс	ддРРРРсРРа	900
дарррдрдра	дРаРРРсааа	РаРаРсаРРР	аРРРРсРРРс	дааРааадад	дРддРаРаРР	960
РРРааааРад	саасаРРРса	дааРРРРРсР	РРдааРРРас	асРРРРРааа	РРдРРаРРдР	1020
РааРаРддаР	РРРдааРааа	РааРРРсадд	даааддрдаа	аРдРРдасаР	дсрсдсдаса	1080
дсРааассса	дааРРдРРсР	арддадрдрр	аддаддРРРд	ддРсааРРРд	дааРРаРаас	1140
дададссада	аРРдРРРРдд	ассаРдсасс	РааасдддРа	сдРаРсаРса	РаРРРРасса	1200
РРРдРРРРад	РсадсаРРса	РРРРРсаРРа	дРааРРссдР	РРсааРРРсР	аааРРРРРРР	1260
адРсааРада	аааРдаРРсР	РаРдРсадад	сРРдаРРаРР	РадРдаРРРР	РаррдадаРа	1320

аааРааааРа	РаассРаасд	даааРааРРа	РРРРасРааР	сддаРааРдР	сРдаРРаааа	1380
саРРРРаРда	РаРРасасРа	адададРРад	адасдРаРдд	арсасаааас	аРдаадсРРР	1440
сРРадаРддР	аРссРаааас	РааадРРадд	РасаадРРРд	дааРРРаддР	саааРдсРРа	1500
адРРдсаРРа	аРРРдаасаа	ааРсРаРдса	РРдааРаааа	аааадаРаРд	даРРаРРРРа	1560
РааадРаРад	РссРРдРааР	ссРаддасРР	дРРдРсРааР	СРРдРсРРаР	дсдРдсаааР	1620
сРРРРРдаРд	РсааРаРаРа	аРссРРдРРР	аРРададРса	адсРсРРРса	РРадРсаасР	1680
асРсаааРаР	асРссааадР	РРадааРаРа	дРсРРсРдас	РааРРадааР	сРРасаассд	1740
аРааасдРРа	саарррддрр	аРсаРРРРаа	аааасадаРР	РддРсаРааР	аРасдаРдас	1800
дРРсРдРРРР	адРРРсаРсР	аРРсасаааР	РРРаРаРааР	РаРРРРсаад	ааааРаРРда	1860
ааРасРаРас	РдРааРаРдд	РРРсРРРаРа	РаРдРдРдРа	РаааРРаааР	дддаРРдРРР	1920
РсРсРаааРд	аааррдрдра	ддссаааРдд	РРРсддаРдс	РсРасадРда	РРРсасаасР	1980
РРРасааадд	ассаадаасд	РРРдаРаРса	аРддсааасд	аРаРРддадР	сдасРаРРРа	2040
дааддРсааа	РаРРРсРаРс	ааасддРдРс	дРРдасассР	сРРРРРРссс	ассРРсадаР	2100
сааРсРааад	РсдсРдаРсР	адрсаадсаа	сасддРаРса	РсРаРдРРсР	РдаадРадсс	2160
аадРаРРаРд	аРдаРсссаа	РсРссссаРс	аРсадсаадд	РасРасасаР	РРасаРРРРс	2220
аРсаРсдРРР	РРаРсаРасс	аРаадаРаРР	РаааРдаРРс	аРсаРРдсас	сасаРРаада	2280
РаРРсаРсаР	саРсаРсдРР	асаРРРРРРР	РРдсаРсРРа	РдсРРсРсаР	ааРсРасРаР	2340
РдРдРаддРР	аРРдасасаР	Раасдаааас	аРРаадРРас	РРдсссдддР	РсаРаРсааР	2400
дсасдасдрд	дссРасРРсд	аРРРсРРдаа	ссдРдРасаР	дрсдаадааа	аРааасРсад	2460
аРсРРРддда	РРаРдддаас	РРссРсаРсс	РРддсРРаас	сРсРасдРРс	сРаааРсРсд	2520
даРРсРсдаР	РРРсаРаасд	дрдррдрсаа	адасаРРсРР	сРРаадсааа	ааРсадсРРс	2580
дддасРсдсР	сРРсРсРаРс	саасааассд	дааРаадРас	аРасРРсРсР	РсаРРсаРаР	2640
РРаРсРРсаа	даассааадР	аааРаааРРР	сРаРдаасРд	аРРаРдсРдР	РаРРдРРада	2700
РдддасааРс	дРаРдРсддс	даРдаРасса	дадаРсдаРд	аадаРдРРаР	аРаРаРРаРс	2760
ддасРасРас	ааРссдсРас	сссаааддаР	сРРссадаад	РддададсдР	Раасдадаад	2820
аРааРРаддР	РРРдсаадда	РРсаддРаРР	аадаРРаадс	ааРаРсРааР	дсаРРаРасР	2880
адрааадаад	аРРддаРРда	дсаррррдда	РсааааРддд	аРдаРРРРРс	даададдааа	2940
даРсРаРРРд	аРсссаадаа	асРдРРаРсР	ссадддсаад	асаРсРРРРд	а	2991

<210> 9

<211> 2782

<212> ДНК

<213> АгаЫйорзтз РЬаНапа

<400> 9
аРдасРааРа	сРсРсРдРРР	аадссРсаРс	асссРааРаг	ι сдсРРРРРаР аадРРРаасс	60
ссаассРРаа	РсаааРсада	РдадддсаРР	дардррррс!	: РасссаРаРс асРсаассРР	120

32

029226

асддЪсс+аа ссдаЬсссЫ сЬссаЪсЬсЬ дссдсЪ + сЬс асдасЬ + сдд ЪаасаЬаасс 180

дасдааааЬс ссддсдссдЕ сс+сЪдсссЪ ЬссЪссасса сддадд+ддс СсдЬсЪсс+с	240
сдЪЪЪсдс+а асддадда+Ъ сЬс+ЪасааЬ аааддсЬсаа ссадссссдс дЬс+асЪЬЪс	300
ааадЪддсЪд с+сдаддсса аддссасЬсс сОссдЪддсс аадсс+сЬдс асссддаддЬ	360
д+сдЬсд+да аса+дасдЬд ЪсЪсдссаЬд дсддсЪааас садсддсддб ЪдЬЪаЪсРсд	420
дсадасддда сЪЪасдсЕда сд+ддс+дсс дддасда+дЬ дддЬддаЪдЪ Ъс+дааддсд	480
дсддЪдда+а даддсдЬс+с дссддЫаса ЪддасддаЫ аЫОдЬаЪсЬ садсдОсддс	540
дддасдЫдЪ сдаасдс+дд аа+сддЪддЬ садасдСЫа дасасддссс ЕсадаЪЪадЪ	600
аасд+ОсаОд адсЬЪдасдЬ ЬаНассддЪ асд1ааа1ас саааасЪЬса сЪаа+сЬсдЪ	660
1асаа11111 ЪааЪЪЬЪЪ+д д+ааЪа+ааа ЫЫдЬасдд сЪсаас+сЫ: ааЫзаадааЪ	720
дааасадЬа! с+аЬдаЪсСЪ сЪадаЕдсЬс ШШ1дП ЬдсаадсСЫ; ааЫдЪад+а	780
аса + садсда Ьа+а+аЪа+с асаЪдсаЬд·!: дкаЬсаПда Ьда^аа+а-Ьа Ъаа'ЬдЪЬЬЪа	840
дЕ+асаааЫ Ъда+Ъс+саа ддЪаааас+с асасдссаЬа ассадЬаЪаа аасОссаааа	900
аЬсасд+Ыа-Ь дд+садаааЪ аса+а+ссЫ: саПаасадС адЪЪаЬдс+а ЪааЬЬ'ЬдЬда	960
ЬЬа+ааа+аа сОссддад+Ъ ЪдЫасасааЬ асЬаааШс аддааааддЪ даааЪда+да	1020
тдс[сгсс ааадр+ааас ссЬдааПд! исСаЬддадЬ ЬЫааддаддГ ЫдддЬсаа!	1080
ЬсддЬа+ЬаЬ аасдадддсс аддаЪЬдсдЬ Одда+са+дс асссасаадд дЬаЬд+аЪса	1140
ЕдсаЬсЬа+а д+д+аа+саа ШаЬааШ ЬааЬдОадОд дЬссЪааа+с сааааЫЬда	1200
Ш;да11Сдд ЪЪддаасд+а сд+а-еа+а-еа а(ааад!сааа аддс1даЫ1 Ъдаадасдаа	1260
Ы1а1а1ас1 ШадЫдаа! ЪаааЪс+даО 1£1дсЪ1асд ьтаПада ЫсЪдсдЪаа	1320
£аааасс1ад дасЫдс+сд адЪдЬааЪс! ЪдЪсЫааЬдс ЫдсаааЪсЬ ЬдО+даЪдЬс	1380
ааЬаЬс+аа! сттаП а+аЪЫассс!; гсдЬаадт (аада+а+ад·!: Штааас	1440
ЕдсЪаЪаааЪ ЪдЬдЪасдЕа ОадасЪЫад аЪааааадЫ дЬддЪсдсЫ; дсасс+а-ЬЫ	1500
д111а1сдс1 аЪадЪдаЪЪс аааддЬсЬа! аЬаЪдаЫасЬ ЬддЪЫЪЪсО ППдааааа	1560
аа1адасса1 асаа + ссаад даадаЬдаЪс ОЪааа+ддас ЬааОЬЪаОдд аЬаЪаааЫад	1620
а+а+асаааЕ сОдсадд+да ааЪддЪсЬсд саЪасЬсЪас ад1дас1(ас1 сддсЬЪЪ + аа	1680
аададассаа дадсдббЪаа ЪаЪсаабдас саа-Ьда^сЬс ддадббдасб Ыббддаадд	1740
1саас11а1д аОдОсааа+д дсЫасд + ада сассЬсШс ПсссасШ ссдаЬсааас	1800
аададЪсдса Ьс+сЪЪд+да аЪдассассд даЬсаЪсЬа! дЫсЪсдаад ЬадссаадЕа	1860
ЫаСдасада ассасссЬ + с ссаПаШда ссадд+асЪа аааОссаЪ+а ИсаЪдаЪда	1920
ЫаЪсЫсас асаа + садЪа ЪсаЪсассаа МассаОса! сасПдЬса! аЬаЬдаЪсса	1980
аадЬаааЬаЪ а+сасаЬдаЬ а+аааЪаааЬ сдПсааасс 1 1 11+ Ъ ΐ ί; 0 а аадаа+аааа	2040
дааиаПП саадсаЪЬас ЪсаЬасасаЪ сЪасдааЬса ссд+дассаЪ аЬа+аасса!	2100
асдсЫаЫа ааЪааЬса + Ъ ЪдЬЫадЪа дд!да!1дас асд!1аад1а даас!с!адд	2160
111сдс1сса ддд111а1д! 1сд1асаада 1д11ссд1а1 11сда111с1 1даассд1д1	2220
ссдааасдаа даада!ааас 1сада1с111 аддас!а!дд даад!1сс1с а!сса1ддс1	2280
1ааса1с111 д!сссдддд! с!сдаа!сса адаИИса! да!дд1д11а 11аа1ддсс1	2340
1с11с1ааас сааасс!саа с11с1дд1д! 1ас1с1с11с 1а1сссасаа ассдааасаа	2400
д!ааа1а111 ас11111да1 111д1111а1 11дааад1а1 а!сссаа!аа 1д1а1д11аа	2460
а11д11ааса адааИ1а11 11а11аа1ад а!ддаасаас сдса!д1саа сда!дасасс	2520
ддасдаада! д111111а1д 1да1сдда11 ас!дсаа1са дс!дд!дда! с!саааа11д	2580
дсаадаасИ даааа!с!са асдасаадд! 1а11сад111 1д1даааас1 сдддааПаа	2640
даНааддаа 1а111да1дс ас!а1асаад аааадаада! 1ддд11ааас а1111ддасс	2700
аааа!ддда! да111111аа дааадаааа! 1а1д111да1 сссаааадас 1а11д1с1сс	2760
аддасаадас а1а!11аа11 аа	2782

<210> 10 <211> 2817 <212> ДНК <213> АгаЫборзтз НаПапа
<400> 10 а!даа!сд1д ааа!дасд!с аадс!11с11 с1сс1дасд! 1сдсса1а1д 1ааас1да1с	60
а!адссд!дд д!с1ааасд! дддссссад! дадс!сс1сс дса!сддадс са!ада!д1с	120
дасддссас! 1сассд1сса сссИссдас 11адсс1ссд 1с1сс1сада с!1сдд1а1д	180
с!даад!сас с!даададсс а!1ддссд!д с11са1сса! са!сддссда адасд!ддса	240
сдас!сд!са даасадсИа сддИсадсс асддсдШс сддЮЮадс ссдаддссас	300
ддссаИсса 1ааасддаса адссдсддсд дддаддаасд д!д1дд1дд! 1дааа1даас	360
сасддсд!аа ссдддасдсс саадссас!с д!ссдассдд а!дааа!д1а 1д1дда1д1а	420
1дддд1ддад ад11а1ддд! сда!д1д11д аадаааасд! 1ддадса1дд сИадсасса	480
ааа!са!дда сдда11ас11 д!а!с1аасс д!1ддадд!а сас!с1ссаа 1дсаддаа1с	540
ад!дд!саад с1111сасса 1дд1сс1саа а!1ад1аасд 1сс11дадс1 сдасд!1д!а	600
ас1дд11ад! аНааааса! 1саад11са1 а1а!111ааа 1дс1111д1с 1даад1111а	660
с!аа!аасаа дааа!1да1а ссааааад!а дддаааддад адд!да!дад а!дс1садаа	720
даададааса сааддс!а11 сса!ддад11 С11дд1дда1 1адд1саа11 1ддда1са1с	780
ас!сдадсас даа!с1с1с! сдаассадс! ссссаааддд 1аа1а11111 11аа1дас1а	840
дс!а!саааа а!ссс!ддсд дд!сса1асд 11д1аа1с11 111ад11111 ас1д!1да1д	900
д1а111111а 1а1а1111дд а!аа!аааас сс!аааа!дд 1а1а11д1да 1дасадд1да	960
да!дда!асд дд1а11д1а! 1сдадс11са аад!д111ас ддаддассаа дад!ас11аа	1020
1с1саа1дса 1дд1саа11а аадШдаП асд!ддаадд 1111д1да11 д!ддасдаад	1080
дас!сд1саа сааНддада 1с11с111с1 1с1с1ссасд 1аассссд1с аада1с1сс!	1140
с!д11ад11с саасддс!с! д1111д1а!1 дссПдада! сассаадаас 1ассасдас1	1200

33

029226

ссдас!ссда	аа1сд11да!	садд!сас11	1са11а11са	сИадааааа	адсда!а111	1260
1са111111а	1а11да1даа	1а1с1ддаад	даШаасдс	1а1дсдас1а	11дддааа1с	1320
а!1а!даааа	аа1а111ад!	11а1а1да11	дааад!дд!с	1сса1ад1а1	1111д11д1д	1380
1едас111а!	1а1аас11аа	аШддаада	ддаса!даад	аадаадссад	ададда!с!а	1440
садада!с!а	дс1111ссас	с!даас11аа	1аа1дсаса1	11а1а1аа11	аИШсИс	1500
11с1ааад11	1ад111а1са	с!адсдаа11	аа!са1дд11	ас!аа11аад	1ад1ддасад	1560
дд!са!ддас	сас!сас1са	ссааа!аа!д	а!1сс1с111	ас!с11аад!	11аа1111аа	1620
1аааассаас	1с1ас1ддаа	1с11аас11а	1сс11дд111	1дд1аддс11	11а1адсаас	1680
асддИ 1111	1аа1111сс1	а11ссада11	11д1а1а11а	аа!д1сда11	111111С111	1740
11д111садд	аадИдада!	1с1да1даад	аааНдаа! 1	1са1ассдас	а!сдд1с111	1800
асаасддаИ	1асаа1а1д1	ддас!11с1с	дассддд!ас	асааддссда	а!1даадс1с	1860
сдд!ссаада	а!11а1ддда	ддИссасас	сса!ддс!са	асс!с11сд!	дссаааа!са	1920
адаа!с!с1д	ас!1сда1аа	аддсд!111с	аадддсаИ!	1дддааа1аа	аасаад!ддс	1980
сс!а11с11а	1с1асссса1	даасааадас	аад!аад1с!	1даса11асс	аИдаИас!	2040
ас11с1ааа!	11с11с1с1а	даааааадаа	1аааасдад1	111дса11дс	а!дса!дсаа	2100
ад11асас11	д!дддда11а	а!1ад1дд1с	саадаааааа	ад!11д1саа	ааИдааааа	2160
аас!адасас	д!дд!аса1д	дда!1д1ссд	ааааасдИд	1ссаса1д1д	са!сдаасса	2220
дс!аада11д	асаасаасас	11сд1сддс1	сд!а111с1с	11111д1111	д!дассааа!	2280
ссда!дд!сс	ада11ддд11	1а111д1111	1аад11сс1а	даас!са!дд	1ддд1ддд1с	2340
ссаа1сада!	1с1сс1адас	сааассда!с	1саасдаасс	с1ссдсаса!	са11да11а1	2400
1аса11аа1а	1ада1а11д1	сд!1дс1дас	д!д!сд!аа!	11да1д11а1	1д1сада1дд	2460
дасдададда	деЮадссд!	даеуееддаЬ	даддаау111	1с1а1с1дд1	ддс!с1а11д	2520
ада!садс11	1аасддасдд	1даададаса	садаадс!ад	ад!а!с1даа	ада!садаас	2580
сд1сдда1с!	1ддад11с1д	1даасаадсс	аада!саа!д	1даадсад1а	1с11сс1сас	2640
сасдсаасас	аддаададбд	дд!ддс1са!	Шддддаса	ад!ддда!сд	дИсадаадс	2700
11аааддс1д	ад!11да1сс	дсдасаса!а	с!сдс1ас1д	д!сададаа!	сШсаааас	2760
сса1с111д!	с111д111сс	1ссд1сд1сд	1с11с11сд1	садсддсИс	а!дд!да	2817

<210> 11

<211> 1975

<212> ДНК

<213> АгаЫаорзтз ЪЬаНапа

<400> 11 а!дадс1а!с	1аса1дсаад	сс!сс!садд	аааадаасса	1дс11а1ад1	аадаадШс	60
асса!с11дс	Нс1садс1д	са!адсс111	аад11ддс11	дс!дс11с1с	1адсадса11	120
1 с11с! Ида	аддсдсИсс	сс!ад!аддс	саШддад!	11дааса1д1	сса!сасдсс	180

1ссааада11 11ддааа1сд а!ассад!1д а!ссс111дд сдд!с11аса 1сссааа1сд 240

д!аадсдаса 1сдсс1саас да!асдасас а!с1дда!да 1дддсас1са ИсасадсИ 300

асад!ддсад сдададд!сд 1ддаса11са с!ссааддсс аадс!сааас аадаса!дда 360

а11д11а!ас аса!ддаа!с ас!сса!ссс садаадсбдс адд!с!асад 1д1дда11сс 420

сс1дс1сса!	а1д11да1д!	д!с1дд1дд!	дадс!д!дда	1аааса1111	дса!дадасс	480
с!саад!асд	ддсНдсасс	аааа!са!дд	асддаИасс	1дса111аас	1д1адд1дд1	540
ас!с1д1сса	а!дс1ддаа!	аадсддссад	дсаИссдас	а!ддассаса	да!садсаа!	600
дИсаНаас	1ддада11д1	сасаддИад	ИсададИд	сад1а11сд!	дИИдааад	660
са!адас1с!	а1а!дд!1дд	1дас1а11аа	сааса!даад	адаИсссда	даа!адс!ас	720
ссас1аа1д!	са!дсс1а11	1а11дас1дс	аддааааддс	дада!сс!аа	ас!д!асааа	780
даддсадаас	адсдасИа!	11аа1дд1д1	1с11дд1дд1	11адд1сад1	11ддса1са1	840
аасдсдддса	адааЪадса!	1ддаассадс	ассаасса!д	д!ааасаа!а	аа!ааа!ааа	900
ааасНаааа	ас!даасасд	сд1д1д1сс!	сс!аас1с!д	1а1аа1ддас	адд!аааа!д	960
да!аадад!д	11а1асс1дд	аИИдсадс	1111дссаад	дассаададс	аас!аа!а1с	1020
1дсссадддс	сасаааИсд	а!1аса1ада	адддИ1д!д	а!аа!аааса	ддасаддсс!	1080
сс!даасадс	1ддадд11д1	сШсассдс	адаададсс!	Надаадсаа	дссааИсаа	1140
д!Ида!дда	аддас!с1д!	а!1д1с1дда	дс1адссаад	1а111даадс	аада!аасаа	1200
адасд!аа!с	аассадд!да	даааасадад	1адаадсаа1	сдд!адаа!с	11с111дд1а	1260
да!даса11с	а!1ддаас1д	аааа!а!а1а	1а1а111д1с	саа!ссадда	ад!дааадаа	1320
асаИа!сад	адс!аадс!а	сд!дасд!сд	асас!д111а	саасддадд!	адса!а!даа	1380
дсаНсНдд	асаддд!аса	1д1д1с1дад	д!аааас!сс	да!сдааадд	дсад!дддад	1440
д!дссаса!с	са!ддс!даа	сс!сс1дд!а	ссаадаадса	ааа!саа!да	аШдсаада	1500
дд!д1а111д	даааса!ас!	аасдда!аса	адсаасддсс	сад!са1сд!	с!асссад!д	1560
аасааа!саа	ад!аадааад	ааадааадаа	ададс1ад!с	а1да11Ид1	ИсИИсас	1620
НдНдасаа	аасаааадса	1д11дд1дад	садд!дддас	аа!саааса!	садсад!аас	1680
ассддаддаа	дадд!аНс!	асс!дд!ддс	да!сс!ааса	1сддса1с1с	саддд!сддс	1740
аддааадда!	ддад!адаад	ада!с11дад	дсддаасада	адаа!ас!дд	ааИсад!да	1800
адаадсаддд	а!адддНда	адсад!а1с!	дссасаИас	асдасаадад	аадад!ддад	1860
а!ссса111с	ддддасаад!	ддддадааН	ГдГдаддадд	ааа!ссада!	а!да1сса!1	1920
ддсааИсИ	дсдсс!ддсс	ассдааИИ	Гсааааддса	д!с1са1ас!	са!да	1975
<210> 12 <211> 3211 <212> ДНК <213> АгаЫйорзгз 1ЪаЫапа
<400> 12 а!да1адс11	аса!адаасс	а!ас11с11д	даааасдасд	ссдаддс!дс	с!с1дссдсс	60

34

029226

ассдссдссд дааааРсРас ддаЬддЬдН ЬсРдадЬсас ЫаасаЬсса аддадаааЪс 120

ЫаЬдЬддЬд дадсЬдсддс ддаЬаЬсдсс дддадада+ΐ ЬЬддсддсаР даасЬдРдЬд 180

аадссЬсЬЬд срдрддрдад ассадЬддда ссддаадаЬа Рсдссддадс ддрдааадсд 240

дсЬсРдаддЬ садаЬааасР аасддЬддсд дсдсдрддаа асддссаЬЬс ЬаЬсаасддЬ 300

саадссаЬдд сддааддадд асЬсдЫдЬс даЬаЬдадЬа ссасддсдда дааЬсаШх 360

даддЬРддЫ: аЫЬаСссдд сддРдаЬдсс асддсдПГд ЬРдаЪдЬсЬс сддаддддса 420

РЬаЬдддаад аГдбаПдаа асддЪдсдП ЬсддадЬасд дЬРРддсРсс даддРсЬРдд 480

ассдаиаЬс НдддНаас ддрдддаддЬ асдНдЬсаа а+дссддсдЬ РадЬддЬсаа 540

дсдПссдН асддассаса дасдЬсаааР дЬаасддадЬ ЬддасдЬсдЬ ЬасдддаааЬ 600

ддрдасдрсд РЬасЫадсЬс ддадаЬРдад ааЬРсададс ЬаЫсЫсбс РдРРРРаддЬ 660

ддРсЬЬддЬс адЬНддРаР саРсассада дсРадддРРР РдсРасадсс адсРссРдаР 720

аРддРдааРа сНаааасса асааРаРааа РаасааРсРс адРРаРаРаР аРаРаРаРРР	780
РсРсРааРсс ааРсаааааР аадаРаРРРд дРссаРааРа РаааРдаРРд РРдРдРРадд	840
РдадаРддаР аададРадРа РасассдадР РсдаРдадРР сасРсаадас дссдадрддс	900
РадРаадРса даадаасдад РсаРсдРРсд аРРасдРдда аддаРРсдРд РРРдРсаасд	960
дрдсрдассс ддРРаасдда Рддссаасад РРссссРсса сссддассас дадРРРдасс	1020
сдасссдасР ассасааРсР РдсдддРсдд РРсРРРаРРд ссРсдаасРс ддРсРРсасР	1080
асададасРс сдаНссаас РсаассаРРд асааддРааР аа1аас111д адааасРРРа	1140
ГаасатИ садаааРРса адаассдЦс абсШШд аРсРаасддс ддрддаадар	1200
РсРдаРдРРс РадааасРРР дрррдассда ааНдассН адаРРдаадР дрдаадррда	1260
сссдИЫа! РРсасРаасР дРРаРасдас асдРадРРса РаРаддассд РРРРсадаРР	1320
РсРсдассРс саРдаРРаса сааасаРаса аПсаааааа садРааааад аРдаРааРаа	1380
РааРааРаРа ЦдШадН ааддаааРаР ааРадддРдд дааадддааР РаРасадРсР	1440
сНдксШс рдсаРааРаР дааасРдасд адасаРРдРд РааРдРаРсР ЬсдаШзЬдд	1500
аРРдРсРдас ардааааааа РаРРРарРРд сРРсРсРсРа аРдсссРРдР сдРаассасд	1560
НаНасдаа ааддасаРРР дЬсИсдШ 11 с Р Р1111Р 11д11дс111	1620
1д11д1с111 с!са!дааас аса1а!111а ада!сас111 дсс11111с1 ас1саа11а!	1680
РРадаРРааа ссаасасд!д 1дасд1д1сс а!1дд1сд1д сдд!а!ддда сд!аадд!1д	1740
ааа!сд1аа! 1д1адса1д1 ааасдШс! д!ад!аааас а!1да1да1а 1да111сааа	1800
сдд!сссддс 1аааа1с1дд ссаРсдРРРР а!а!ддаа1с а!с1а1д1а! д!ассдааа!	1860
ассссс!дас РдаРРРРРРР сса1111111 д!д!ададдд 1ддадада11 да!сддасдд	1920
с!аада111а а!даадда!1 аадаИсдад д!ада!с1дс сд!асд11да с11111ас1а	1980
сдад!сааас дд!садаада аа!сдсдаад дадаасдд!а сд!дддааас дсс1сассс!	2040
РддсРсаасс 1с11сд1д1с даадсдадас а!сддада11 1саа1сддас дд!д!1сааа	2100
даас!1д1са адаасддад! саа!дд!сса а1дс11д1д! асссас!с11 дсдаадсадд	2160
1даа1а11дс 1с1с1с11сс 1с1с1111аа с!аддассса 1с11111а11 ррдддррада	2220
сааддсасс! а!с1аааада с!аааадаад а!сдд!с1ад 111ад1111а 1ддса1д1д1	2280
11а1сасд1д 1да1да11ад 1сд1дса1дс 11ааас1ааа ааааддс!сс асаад!сдса	2340
ад!сд!д1да 1саасааа11 д!сдссаа!д 1ддсасасд1 д1с!11с11с ад!сссс1сд	2400
РсаРРРРРРР 1асссд1асд дддРРРРаад 1асаа1аааа дРРддааРРР ад!д!дд1сд	2460
111ада1111 д!аддсдада 1аааааааад аа!ас!ааас 1аа1асда1д ссд!а11адд	2520
1а11асдд11 ддд!ддд!да сдда!а!д1а 11д1аассд1 сдРРааддРР адсд!са1а!	2580
адддааадад а!дааа111д 1адддассса а!а!даас1а асдРРаааРР 1111а1111а	2640
са!11с1ааа а1адсс!111 д1адд11ас! дааддд!ад! 11сд1с111а 1а1д!111ас	2700
111а1д1дда ааа!дада11 1дс1дд1аса аа!ад!адас д!аадааа!д ааассаа!сд	2760
1дадсааадд дссассаааа 1д111а1111 11а11с1ссд а1111111а1 ддаааа!д!с	2820
РРРРдРРсса 111ада111а д!ддд1а111 д!111а1аа1 а!даа1да11 ааа!аа1аа!	2880
11дд11дд11 111а1садд1 ддда!да!сд дасд!ссд!д д!1а!ассдд аадааддада	2940
да!а11с1ас а11д1ддса! 1дс11сдд11 сд!дссдссд 1д1дсдааад 1с1с11сдд1	3000
ададаааа!д д!адс!сааа ассаадада! сдИсаЦдд 1д1д1саааа асддааНда	3060
РРасаааРРд 1а1с11сс1с аРРасаадРс 1саададдаа 1дда11сдсс аРРРРддааа	3120
ссда!дд!сд адаРРРдРРд аРаддааадс 1а1д111да1 ссса!ддс!а 1ас111сасс	3180
ддд!саааад а!111саа1а дд!с1с111д а	3211

<210> 13 <211> 575 <212> Белок <213> АгаЫборзЬз РЬаНапа
<400> 13

Ме! С1у Ьеи ТЬг 5ег Зег Ьеи Агд РЬе Ηίδ Агд С1п Азп Азп Ьуз ТЬг 15 10 15

РЬе Ьеи С1у Не РЬе Мер 11е Ьеи Уа1 Ьеи Зег Суз 11е Рго С1у Агд 20 25 30

ТЬг Азп Ьеи Суз Зег Азп Ηίδ Зег Уа1 Зег ТЬг Рго Ьуз С1и Ьеи Рго 35 40 45

Зег Зег Азп Рго Зег Азр 11е Агд Зег Зег Ьеи Уа1 Зег Ьеи Азр Ьеи 50 55 60

61и С1у Туг 11е Зег РЬе Азр Азр Уа1 Ηίδ Азп Уа1 А1а Ьуз Азр РЬе 65 70 75 80

61и С1у Туг 11е Зег РЬе Азр Азр Уа1 Ηίδ Азп Уа1 А1а Ьуз Азр РЬе 65 70 75 80
С1у Азп Агд Туг С1п Ьеи Рго Рго Ьеи А1а 11е Ьеи НЬз Рго Агд Зег

35

029226

<210> 14

<211> 2236

<212> ДНК

<213> АгаЫпорзхз дЬаНапа

<400> 14

аТдддаЫда ссЕсаРссЪЪ асддддссад адасааааса асаадасддд ссЬсддааЕс

ИсаЪдаРсЪ дддодсдаад сЕдЕабасса ддЪадаасса адсддддддс саадсаддсд

дИадЪассс саааадааН ассЪЕсЕЕса ааЕссЕЪсад аЕаНсдЕЕс сОсаООаддд

дсасОададд дддаддддда дадаадсддс дасдадддсс асаадддддс сааддасддд

60

120

180

240

- 36 029226

ддсаасадаЬ ассадЬЬасс ассНГддса аЬЬсЬасаЬс сааддЪсадЬ 1ШдаШ(:

ЪсаЬсдаЬда РдаадсаРаР адРасаРсЬд ддсРссассЪ саааЬсИас адЬадсадсР

ададдссаРд дРсасРсдсР Рсааддасаа дсРсРадсРс аРсааддРдР РдРсаРсааа

аРддадРсас РРсдаадРсс РдаРаРсадд аРРРаРаадд ддаадсаасс аРаРдРРдаР

дРсРсаддРд дРдаааРаРд даРааасаРР сРасдсдада сРсРааааРа сддГсНГса

ссааадРссР ддасадасРа ссРРсаРРРд ассдРРддад дРасасРаРс РааРдсРдда

аРсадсддРс аадсаЫсаа дсаРддассс саааРсааса асдРсРасса дсРададаРР

дРРасаддРа РРРсаРРсаР дсРРРаРсРс РдсддРадРс РсаааааааР аРдсассРдР

ааадааРаРс саРсРсРРса Рдадсааааа сасРдасдас РРРаааРааР РРРРдасРаР

аааасаадад РдсаРаддса сааардрдаа аРаРдсааса сасааРРдРа асРРдсасса

адаааааадр РаРаааааса аасаасРдаР аадсааРаРа РРРссааРаР РРааРсаддд

аааддадаад РсдРаассРд РРсРдадаад сддааРРсРд аасРРРРсРР садРдРРсРР

ддсдддсРРд дасадРРРдд сараарсасс сдддсасдда РсРсРсРРда ассадсассд

саРаРддРаа адРРсРаРсР РдаасааадР РсааасааРа РасдсРаРда РРсРаадаас

састсс^д асасадРсаа аРаасРРРРа аРаддРРааа РддаРсаддд РасРсРасРс

РдасРРРРсР дсаРРРРсаа дддассаада аРаРсРдаРР Рсдааддада ааасРРРРда

РРасдРРдаа ддаРРРдРда РааРсааРад аасадассРР сРсааРааРР ддсдаРсдРс

аРРсадРссс аасдаРРсса сасаддсаад садаРРсаад РсадаРддда ааасЬста

РРдссРадаа дРддРсаааР аРРРсаассс адаадаадсР адсРсРаРдд аРсаддРаад

аРдРдааадс ааРаРаРаас РадасРРадР ррссасадад адсРссаааР саассдгЬдд

сРасРадссР асРаасаРаа РдааРддРРд ссдрдсадда аасРддсаад ПасШсад

адРРаааРРа РаРРссаРсс асРРРдРРРР саРсРдаадР дссаРаРаРс дадРРРсРдд

аРсдсдРдса РаРсдсадад адаааасРаа дадсаааддд РРРаРдддад дИссасаас

ссРддсРдаа РсРссРдаРР ссРаададса дсаРаРасса аРРРдсРаса даадгтса

асаасаРРсР сасаадсаас аасаасддрс сРаРссРРаР РРаРссадРс ааРсааРсса

адРаадРдад сааааРдсса ааадсааард сдРссадРда РРсРдаааса 1аааиас;а

ассаРаРсса асаРРРРдРд дРРРсаддРд даадааасар асаШПда РаасРссааа

РдаадаРаРа РРсРаРсРсд РадссРРРсР ссссРсРдса дРдссаааРР ссРсадддаа

ааасдаРсРа дадРассРРР Рдааасаааа ссааададРР аРдаасРРсР дсдсадсадс

ааассРсаас дрдаадсадр аРРРдсссса РРаРдааасР сааааададр ддаааРсаса

сРРРддсааа адаРдддааа саШдсаса даддааасаа дссРасдасс сРсРадсдаР

РсРадсассР ддссааадаа РаРРссаааа дасаасадда аааРРаРсРс ссаРссаасР

сдсааадРса ааддсаасад даадРссРса ааддРассаР РасдсаРсаа РасРдссдаа

ассРадаасР дРаРаа

<210> 15

<211> 20

<212> ДНК

<213> синтетическая <220>

<223> праймер

<400> 15

дааРддРдда аррддрддрс

<210> 16

<211> 20

<212> ДНК

<213> синтетическая

<220>

<223> праймер

<400> 16

дсдадсардр саасаШса

<210> 17

<211> 22

<212> ДНК

<213> синтетическая

<220>

<223> праймер

<400> 17

РддРРсасдР адРдддссаР сд

300

360

420

480

540

600

660

720

780

840

900

960

1020

1080

1140

1200

1260

1320

1380

1440

1500

1560

1620

1680

1740

1800

1860

1920

1980

2040

2100

2160

2220

2236

20

22

<210> 18

<211> 20

<212> ДНК

<213> синтетическая

<220>

<223> праймер

<400> 18

РсаааадссР сссааРРдРс

<210> 19

<211> 20

<212> ДНК

<213> синтетическая

<220>

<223> праймер

<400> 19

сРсддсРааа дасддадррд

<210> 20

<211> 22

<212> ДНК

<213> синтетическая

<220>

<223> праймер

20

37

029226

<400> 20

ЕддРРсасдЕ ад+дддссаЕ сд 22

<210> 21

<211> 26

<212> ДНК

<213> синтетическая

<220>

<223> праймер

<400> 21

с+сЕдссдсЕ ЪсЕсасдас! ЬсддЕа 26

<210> 22

<211> 26

<212> ДНК

<213> синтетическая

<220>

<223> праймер

<400> 22

са+ааэсссЪ ддадсдааас сЪадад 26

<210> 23

<211> 22

<212> ДНК

<213> синтетическая

<220>

<223> праймер

<400> 23

ЪддЪЕсасд! ад+дддссаЪ сд 22

<210> 24

<211> 26

<212> ДНК

<213> синтетическая

<220> '

<223> праймер

<400> 24

сааддЕаааа сЪсасасдсс аЕаасс 26

<210> 25

<211> 26

<212> ДНК

<213> синтетическая

<220>

<223> праймер

<400> 25

саЪааасссЪ ддадсдааас сбадад

<210> 26 <211> 26 <212> ДНК

<213> синтетическая

<220>

<223> праймер

<400> 26

дадсдРсдд! ссссасасИ сЕаЕас 26

<210> 27

<211> 29

<212> ДНК

<213> синтетическая

<220>

<223> праймер

<400> 27

ЫдИдсадс аасдассаас сдаЪаа+да 29

<210> 28

<211> 29

<212> ДНК

<213> синтетическая

<220>

<223> праймер

<400> 28

аа^ддРаЕаС ЕдЕдаЕдаса ддрдада+д 29

<210> 29

<211> 22

<212> ДНК

<213> синтетическая

<220>

<223> праймер

<400> 29

ЕддИсасдР адрдддссар сд 22

<210> 30

<211> 29

<212> ДНК

<213> синтетическая

<220>

<223> праймер

<400> 30

аа+ддЕаРа! 1дРда1даса ддЪдада+д 29

<210> 31

<211> 29

<212> ДНК

<213> синтетическая

<220>

<223> праймер

<400> 31

АдОдсадс аасдассаас сдараа + да 29

38

029226

- 39 029226

<213> синтетическая

<220>

<223> праймер

<400> 43

адЬсссдаад сРдаЪРЪЫд 20

<210> 44

<211> 20

<212> ДНК

<213> синтетическая

<220>

<223> праймер

<400> 44

сГсддс+ааа дасддадЪЪд 20

<210> 45

<211> 26

<212> ДНК

<213> синтетическая .

<220>

<223> праймер

<400> 45

ааЬадд+дд!: ЬдЬааасдЪа дасдса 26

<210> 46

<211> 26

<212> ДНК

<213> синтетическая

<220>

<223> праймер

<400> 46

с+с + дссдс!: Ъс+сасдасЪ Ъсдд+а 26

<210> 47

<211> 26

<212> ДНК

<213> синтетическая

<220>

<223> праймер

<400> 47

саЪааасссС ддадсдааас с+адад 26

<210> 48

<211> 26

<212> ДНК

<213> синтетическая

<220>

<223> праймер

<400> 48

сЪс+дссдсЪ Ьс+сасдасЪ ЪсддЪа 26

<210> 49

<211> 26

<212> ДНК

<213> синтетическая

<220>

<223> праймер

<400> 49

саРааасссР ддадсдааас с+адад

<210> 50

<211> 20

<212> ДНК

<213> синтетическая

<220>

<223> праймер

<400> 50

дсасдаа+сЬ сЕсЕсдаасс 20

<210> 51

<211> 19

<212> ДНК

<213> синтетическая

<220>

<223> праймер

<400> 51

сдсЬдасдаа даадасдас

<210> 52

<211> 20

<212> ДНК

<213> синтетическая

<220>

<223> праймер

<400> 52

дсасдааЪсЬ с+с+сдаасс 20

<210> 53

<211> 20

<212> ДНК

<213> синтетическая

<220>

<223> праймер

<400> 53

аааНсЬ’дд ассддадсРР 20

<210> 54

<211> 21

<212> ДНК

<213> синтетическая

<220>

<223> праймер

- 40 029226

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Изолированная растительная клетка для выращивания растения с улучшенной урожайностью и/или высотой в сравнении с соответствующим контрольным растением, имеющая дефект:

ΐ) в эндогенном СКХ3 гене, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕР ГО Νο. 1 или ее орто логом; и

ΐΐ) по крайней мере в одном дополнительном эндогенном гене, который представляет собой:

a) СКХ1 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕР ГО Νο. 13 или ее ортологом;

b) СКХ2 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕР ГО Νο. 2 или ее ортологом;

c) СКХ4 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕР ГО Νο. 3 или ее ортологом;

й) СКХ5 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕР ГО Νο. 4 или ее ортологом;

- 41 029226

е) СКХ6 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8Е0 ГО Νο. 5 или ее ортологом; или

ί) СКХ7 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8Е0 ГО Νο. 6 или ее ортологом,

где указанные дефекты ингибируют экспрессию и/или активность продукта по крайней мере двух дефектных генов цитокининоксидазы/дегидрогеназы по сравнению с соответствующей контрольной растительной клеткой, которая не имеет таких дефектов.
2. Растение с улучшенной урожайностью и/или высотой в сравнении с соответствующим контрольным растением, имеющее дефект:

ί) в эндогенном СКХ3 гене, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8Е0 ГО Νο. 1 или ее ортологом; и

ίί) по крайней мере в одном дополнительном эндогенном гене, который представляет собой:

a) СКХ1 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8Е0 ГО Νο. 13 или ее ортологом;

b) СКХ2 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8Е0 ГО Νο. 2 или ее ортологом;

c) СКХ4 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8Е0 ГО Νο. 3 или ее ортологом;

б) СКХ5 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8Е0 ГО Νο. 4 или ее ортологом;

е) СКХ6 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8Е0 ГО Νο. 5 или ее ортологом; или

ί) СКХ7 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8Е0 ГО Νο. 6 или ее ортологом,

где указанные дефекты ингибируют экспрессию и/или активность продукта по крайней мере двух дефектных генов цитокининоксидазы/дегидрогеназы по сравнению с соответствующим контрольным растением, которое не имеет таких дефектов.
3. Изолированная растительная клетка по п.1 или растение по п.2, имеющие дефект в:

ί) эндогенном СКХ3 гене, включающем последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8Е0 ГО Νο. 7 или ее ортологом;

ίί) СКХ1 гене, включающем последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8Е0 ГО Νο. 14 или ее ортологом;

ίίί) СКХ2 гене, включающем последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8Е0 ГО Νο. 8 или ее ортологом;

ίν) СКХ4 гене, включающем последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8Е0 ГО Νο. 9 или ее ортологом;

ν) СКХ5 гене, включающем последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8Е0 ГО Νο. 10 или ее ортологом;

νί) СКХ6 гене, включающем последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕО ГО Νο. 11 или ее ортологом; и

νίί) СКХ7 гене, включающем последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕО ГО Νο. 12 или ее ортологом.
4. Изолированная растительная клетка по п.1 или растение по п.2, имеющие дефект в:

ί) эндогенном СКХ3 гене, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕО ГО Νο. 1 или ее ортологом; и

ίί) эндогенном СКХ5 гене, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕО ГО Νο. 4 или ее ортологом.
5. Изолированная растительная клетка или растение по п.3, имеющие дефект:

ί) в эндогенном СКХ3 гене, включающем последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с 8ЕО ГО Νο. 7 или ее ортологом; и

ίί) в эндогенном СКХ5 гене, включающем последовательность нуклеиновой кислоты, которая явля- 42 029226

ется идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ №. 10 или ее ортологом.
6. Изолированная растительная клетка по любому из пп.1, 3-5 или растение по любому из пп.2-5, где один, более одного или все дефекты генов получены в результате нарушения их структуры путем подавления экспрессии генов при использовании антисмыслового полинуклеотида или двухцепочечной ДНК, методик на основе рибозима, методики тиллинга и/или гомологической рекомбинации.
7. Изолированная растительная клетка по любому из пп.1, 3-6 или растение по любому из пп.2-6, где один, более одного или все дефекты генов представляют собой гомозиготные дефекты.
8. Растение по любому из пп.2-7, выбранное из семейства Вга881сасеае, преимущественно из родов Вга881са или АгаЫбор818.
9. Орган, ткань или материал для размножения, которые имеют происхождение от растения по любому из пп.2-8, имеющие дефект:

ί) в эндогенном СКХ3 гене, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ №. 1 или ее ортологом; и

ίί) по крайней мере в одном дополнительном эндогенном гене, который представляет собой:

a) СКХ1 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ №. 13 или ее ортологом;

b) СКХ2 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ №. 2 или ее ортологом;

c) СКХ4 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ №. 3 или ее ортологом;

б) СКХ5 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ №. 4 или ее ортологом;

е) СКХ6 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ №. 5 или ее ортологом; или

ί) СКХ7 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ №. 6 или ее ортологом,

где указанные дефекты ингибируют экспрессию и/или активность продукта по крайней мере двух дефектных генов цитокининоксидазы/дегидрогеназы по сравнению с соответствующими контрольными органами, тканями или материалами для размножения, которые не имеют таких дефектов.
10. Способ повышения урожайности семян растения и/или увеличения высоты растения по сравнению с соответствующим контрольным растением, включающий генерацию дефекта:

ί) в эндогенном СКХ3 гене, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ №. 1 или ее ортологом; и

ίί) по крайней мере в одном дополнительном эндогенном гене, который представляет собой:

a) СКХ1 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ №. 13 или ее ортологом;

b) СКХ2 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ №. 2 или ее ортологом;

c) СКХ4 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ №. 3 или ее ортологом;

б) СКХ5 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ №. 4 или ее ортологом;

е) СКХ6 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ №. 5 или ее ортологом; или

ί) СКХ7 ген, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ №. 6 или ее ортологом,

где указанные дефекты ингибируют экспрессию и/или активность продукта по крайней мере двух дефектных генов цитокининоксидазы/дегидрогеназы по сравнению с соответствующим контрольным

- 43 029226

растением, которое не имеет таких дефектов.
11. Способ получения растения с повышенной урожайностью семян и/или высотой по сравнению с соответствующим контрольным растением, включающий генерацию дефекта:

ι) в эндогенном СКХ3 гене, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ Ыо. 1 или ее ортологом; и

ίί) по крайней мере в одном дополнительном эндогенном гене, который представляет собой:

a) СКХ1 ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ Ыо. 13 или ее ортологом;

b) СКХ2 ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ Ыо. 2 или ее ортологом;

c) СКХ4 ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ Ыо. 3 или ее ортологом;

б) СКХ5 ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ Ыо. 4 или ее ортологом;

с) СКХ6 ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ Ыо. 5 или ее ортологом; или

ί) СКХ7 ген, который включает последовательность нуклеиновой кислоты, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ Ыо. 6 или ее ортологом,

где указанные дефекты ингибируют экспрессию и/или активность продукта по крайней мере двух дефектных генов цитокининоксидазы/дегидрогеназы по сравнению с соответствующим контрольным растением, которое не имеет таких дефектов.
12. Способ по любому из пп.10, 11, включающий генерацию дефекта:

ι) в эндогенном СКХ3 гене, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ Ыо. 1 или ее ортологом; и

ίί) в эндогенном СКХ5 гене, который кодирует цитокининоксидазу/дегидрогеназу, включающую полипептидную последовательность, которая является идентичной или имеет по крайней мере 95% идентичности с δΕρ ΙΌ Ыо. 4 или ее ортологом.
13. Способ по любому из пп.10-12, где один, более одного или все дефекты генов представляют собой гомозиготные дефекты.
14. Растение с улучшенной урожайностью и/или высотой по сравнению с соответствующим контрольным растением, полученное с помощью способа по любому из пп.10-13.

- 44 029226