EA028183B1 - Cx3cr1-связывающие полипептиды - Google Patents

Cx3cr1-связывающие полипептиды Download PDF

Info

Publication number
EA028183B1
EA028183B1 EA201400964A EA201400964A EA028183B1 EA 028183 B1 EA028183 B1 EA 028183B1 EA 201400964 A EA201400964 A EA 201400964A EA 201400964 A EA201400964 A EA 201400964A EA 028183 B1 EA028183 B1 EA 028183B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
δεο
polypeptide
amino acid
domain
single variable
Prior art date
Application number
EA201400964A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201400964A1 (ru
Inventor
Санджая Сингх
Алиса К. Уотерман
Эрик Депла
Тон Лареманс
Диане Ван Хорик
Седрик Йозеф Неотере Верверкен
Original Assignee
Бёрингер Ингельхайм Интернациональ Гмбх
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=47884535&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA028183(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Бёрингер Ингельхайм Интернациональ Гмбх filed Critical Бёрингер Ингельхайм Интернациональ Гмбх
Publication of EA201400964A1 publication Critical patent/EA201400964A1/ru
Publication of EA028183B1 publication Critical patent/EA028183B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/521—Chemokines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
    • C07K14/7158—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons for chemokines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/22—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from camelids, e.g. camel, llama or dromedary
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/35—Valency
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)

Abstract

В изобретении описаны CX3CR1-связывающие полипептиды, в частности полипептиды, которые содержат конкретные иммуноглобулиновые домены. Описаны также нуклеиновые кислоты, кодирующие указанные полипептиды; способы получения указанных полипептидов, клетки-хозяева, которые экспрессируют или обладают способностью экспрессировать указанные полипептиды, композиции, содержащие указанные полипептиды, и применения указанных полипептидов или указанных композиций, в частности, для профилактических, терапевтических и диагностических целей.

Description

Настоящее изобретение относится к СХ3СК1-связывающим полипептидам, в частности полипептидам, которые содержат специфические иммуноглобулиновые домены. Изобретение относится также к нуклеиновым кислотам, которые кодируют указанные полипептиды; к способам получения указанных полипептидов; к клеткам-хозяевам, которые экспрессируют или обладают способностью экспрессировать указанные полипептиды; к композициям, которые содержат указанные полипептиды; и к применениям указанных полипептидов или указанных композиций, в частности, для профилактических, терапевтических и диагностических целей.
Предпосылки создания изобретения
СХ3СК1 представляет собой сопряженный с О-белком интегральный мембранный белок, который является хемокиновым рецептором. Он экспрессируется, главным образом, на таких клеточных типах как моноциты, дендритные клетки и Т-клетки, которые ассоциированы с инициацией и развитием атеросклеротических бляшек. На моноцитах имеет место его повышающая регуляция с помощью окисленных липидов, и он опосредует миграцию указанных клеток в бляшки и их выживание внутри бляшек. Его уникальный лиганд фракталкин (ΡΚΝ) экспрессируется на поверхности сосудистых эндотелиальных и гладкомышечных клеток в областях повреждений, в которых он модулирует адгезию лейкоцитов. В результате протеолитического расщепления фракталкин высвобождается также в кровоток, где он функционирует в качестве хемотаксического агента.
Установлено, что у людей вариант СХ3СК1 (У2491/Т280М) с пониженной активностью ассоциирован с более низким риском сердечно-сосудистого заболевания (коронарная болезнь сердца, цереброваскулярная болезнь или заболевание периферических сосудов) (МсИеттой, Сие Кек 89, 2001, с. 401), заболевания коронарной артерии (ангиографическое проявление стеноза) (МсИеттой, 1. С1ш. 1иуек1. 111, 2003, с. 1241) и окклюзивного заболевания сонной артерии (ОЫ1атЙ1, §йоке 35, 2004, с. 1276). СХ3СК1 локализуется совместно с фракталкином, что проявляется по усиленному иммуноокрашиванию поликлональными антителами в атеросклеротических бляшках (\Уопд. Сатйюуакс. Ра1Н. 11, 2002, с.332). В областях артерий, в которых отсутствуют бляшки, не обнаружено никакого окрашивания фракталкина.
В нескольких независимых проведенных на мышах генетических исследованиях продемонстрировано благоприятное действие дефицита СХ3СК1 на атеросклероз. Более низкие уровни повреждений дуги аорты и брюшной аорты, а также снижение накопления моницитов/макрофагов в бляшках обнаружено в опытах на двух независимо выведенных линиях мышей СХ3СК1-/-ароЕ-/-, выращенных на корме с высоким содержанием жира (СотЪаЛете, Сйси1айоп, 107, 2003, с. 1009; Бекшк, 1. С1ш. 1иуекк 111, 2003, с 333).
Установлено, что СХ3СК1 принимает участие в сердечнососудистых заболеваниях, и модуляция его активности может представлять собой перспективную терапию. Поэтому существует необходимость в молекулах, являющихся антагонистами СХ3СК1, обладающих благоприятными фармакологическими свойствами, которые можно применять в качестве терапевтических агентов для лечения заболеваний, в частности, сердечнососудистых заболеваний, у людей.
Таким образом, одной из задач, положенных в основу настоящего изобретения, было разработать молекулы, обладающие антагонистической активностью в отношении СХ3СК1 (анти-СХ3СК1 антагонистические молекулы), в частности, молекулы, обладающие антагонистической активностью в отношении СХ3СК1, для которых характерна высокая аффинность связывания с СХ3СК1.
Другой задачей, положенной в основу настоящего изобретения, было разработать молекулы, обладающие антагонистической активностью в отношении СХ3СК1, которые являются высоко специфическими в отношении СХ3СК1.
Еще одной задачей, положенной в основу настоящего изобретения, было разработать антагонисты СХ3СК1, обладающие высокой активностью.
Другой задачей, положенной в основу настоящего изобретения, было разработать антагонисты СХ3СК1, обладающие благоприятными биодоступностью и временем полужизни.
Еще одной задачей, положенной в основу настоящего изобретения, было разработать антагонисты СХ3СК1, обладающие благоприятными биофизическими свойствами.
В качестве других задач настоящего изобретения рассматривали комбинации, включающие любые из указанных выше задач.
Краткое изложение сущности изобретения
Настоящее изобретение относится к полипептидам, которые связываются с человеческим СХ3СК1 и обладают способностью блокировать связывание человеческого фракталкина с человеческим СХ3СК1. В одном из объектов изобретения полипептид представляет собой иммуноглобулин, который содержит антигенсвязывающий домен, содержащий три гипервариабельных участка СИК1, СИК2 и СИК3, где указанный иммуноглобулин связывается с человеческим СХ3СК1 и обладает способностью блокировать связывание человеческого фракталкина с человеческим СХ3СК1. Согласно следующему объекту изобретения полипептид содержит один или несколько анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, где указанный полипептид обладает способностью блокировать связывание человеческого фракталкина с человеческим СХ3СК1.
- 1 028183
В одном из объектов изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, отличается одним или несколькими следующими свойствами:
связывается с высокой аффинностью с человеческим СХ3СК1; блокирует связывание растворимого фракталкина с человеческим СХ3СК1; ингибирует индуцированный фракталкином хемотаксис;
ингибирует индуцированную фракталкином интернализацию рецептора СХ3СК1;
обладает перекрестной реактивностью с СХ3СК1 обезьян циномолгус (супо), при этом величина
Е/1С50, характеризующая связывание и функциональное ингибирование человеческого СХ3СК1, в 10 раз превышает соответствующую величину для супоСХ3СК1.
Согласно следующему объекту изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен и дополнительно содержит удлиняющий время полужизни фрагмент, например альбуминсвязывающий фрагмент, молекулу полиэтиленгликоля или Рс-домен. Согласно следующему объекту изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит два или большее количество анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов. В одном из объектов изобретения два анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновых единичных вариабельных домена связаны ковалентно через линкерный пептид. В одном из объектов изобретения два анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновых единичных вариабельных домена в полипептиде, предлагаемом в настоящем изобретении, имеют одинаковую аминокислотную последовательность. В другом объекте изобретения два анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновых единичных вариабельных домена в полипептиде, предлагаемом в настоящем изобретении, имеют различные аминокислотные последовательности. В одном из объектов изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит два анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновых единичных вариабельных домена и дополнительно содержит удлиняющий время полужизни фрагмент, например, альбуминсвязывающий фрагмент, молекулу полиэтиленгликоля или Рс-домен.
В одном из объектов изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит первый анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, ковалентно связанный с альбуминсвязывающим фрагментом с помощью первого линкерного пептида, где указанный альбуминсвязывающий фрагмент дополнительно ковалентно связан со вторым анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновым единичным вариабельным доменом с помощью второго линкерного пептида.
В одном из объектов изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, ковалентно связанный с Рсдоменом с помощью линкерного пептида. В одном из объектов изобретения указанный полипептид, содержащий анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, ковалентно связанный с Рс-доменом с помощью линкерного пептида, имеет форму димера, например, связанного дисульфидными мостиками.
Полипептиды, предлагаемые в настоящем изобретении, применяют для лечения, облегчении и/или диагностирования ассоциированных с СХ3СК1 заболеваний, нарушений или состояний, в частности, сердечнососудистых заболеваний, таких как атеросклероз.
Следующим объектом настоящего изобретения являются:
Вариант осуществления изобретения 1:
Иммуноглобулин, содержащий антигенсвязывающий домен, который содержит три гипервариабельных участка СИК1, СИК2 и СИК3, где указанный иммуноглобулин связывается с человеческим СХ3СК1 и обладает способностью блокировать связывание человеческого фракталкина с человеческим СХ3СК.1.
Вариант осуществления изобретения 2:
Полипептид, содержащий один или несколько анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, где указанный полипептид обладает способностью блокировать связывание человеческого фракталкина с человеческим СХ3СК1.
Вариант осуществления изобретения 3:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 2, в котором указанный анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен практически состоит из четырех каркасных участков (РК1, РК2, РК3 и РК4) и трех гипервариабельных участков (СИК1, СИК2 и СЭК3).
Вариант осуществления изобретения 4:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 3, в котором указанный анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен имеет структуру РК1 - СИК1 - РК2 - СИК2 - РК3 СИК3 - РК4.
Вариант осуществления изобретения 5:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 2-4, в котором указанный антиСХ3СК1 иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен представляет собой домен антитела.
- 2 028183
Вариант осуществления изобретения 6:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 5, в котором указанный анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен представляет собой УН, УЬ, УНН, камелизированный УН, или УНН, который является оптимизированным в отношении стабильности, эффективности, технологичности и/или сходства с человеческими каркасными участками.
Вариант осуществления изобретения 7:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 1-6, где указанный полипептид обладает аффинностью к человеческому СХ3СК1, что характеризуется:
а) величиной ЕС5о, более низкой или равной 10 нМ, более низкой или равной 5нМ, более низкой или равной 2,5нМ, или более низкой или равной 1 нМ, по данным, полученным путем анализа клеточного связывания с помощью РАС8; или
б) величиной 1С50, более низкой или равной 10 нМ, более низкой или равной 5 нМ, более низкой или равной 2,5нМ, или более низкой или равной 1 нМ, по данным, полученным с помощью РЛС8 в условиях конкуренции.
Вариант осуществления изобретения 8:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 1-7, где указанный полипептид блокирует связывание человеческого фракталкина с человеческим СХ3СК1, что характеризуется величиной 1С50, более низкой или равной 300 нМ, или более низкой или равной 100 нМ, или более низкой или равной 20 нМ, или более низкой или равной 10 нМ, или более низкой или равной 5 нМ, или более низкой или равной 2,5 нМ, или более низкой или равной 1 нМ.
Вариант осуществления изобретения 9:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 1-8, где указанный полипептид ингибирует индуцированный фракталкином хемотаксис, опосредуемый человеческим СХ3СК1, что характеризуется величиной 1С50, более низкой или равной 500 нМ, или более низкой или равной 100 нМ, или более низкой или равной 75 нМ, или более низкой или равной 50 нМ, или более низкой или равной 10М, или более низкой или равной 5 нМ.
Вариант осуществления изобретения 10:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 1-9, где указанный полипептид ингибирует интернализацию фракталкина, опосредуемую человеческим СХ3СК1, что характеризуется величиной 1С50, более низкой или равной 10 нМ, или более низкой или равной 5 нМ, или более низкой или равной 1 нМ.
Вариант осуществления изобретения 11:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 3-10, в котором указанный СГОР3 имеет аминокислотную последовательность Акр-Хаа1-Агд-Агд-О1у-Тгр-Хаа2-Хаа3-Хаа4-Хаа5 (8ЕЦ ГО N0: 197), в которой:
Хаа1 обозначает Рго, А1а или О1у;
Хаа2 обозначает Акр или Аки;
Хаа3 обозначает ТЪг или 8ег;
Хаа4 обозначает Агд, Ьук, А1а или О1у и
Хаа5 обозначает Туг или Рйе.
Вариант осуществления изобретения 12:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 3-11, в котором:
а) Хаа1 обозначает Рго, А1а или О1у; Хаа2 обозначает Акр или Акп; Хаа3 обозначает ТЪг; Хаа4 обозначает Агд или Ьук; и Хаа5 обозначает Туг, и/или
б) в котором указанный СГОР3 выбран из любой из 8ЕЦ ГО N0: 186-190.
Вариант осуществления изобретения 13:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 3-12, в котором указанный СГОР3 имеет аминокислотную последовательность Акр-Рго-Агд-Агд-О1у-Тгр-Акр-ТЪг-Агд-Туг (8ЕЦ ГО N0: 186).
Вариант осуществления изобретения 14:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 3-10, в котором:
I) указанный СГОР1:
а) имеет аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 141;
б) имеет аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0: 141;
в) имеет аминокислотную последовательность, которая имеет 2 или 1 аминокислотных(ое) различия (е) с аминокислотной последовательностью 8ЕЦ ГО N0: 141, в которой в положении 2 8 заменен на Т или О; в положении 6 8 заменен на К; положении 7 N заменен на Т; и/или в положении 9 М заменен на К; или
г) имеет аминокислотную последовательность, выбранную из любой одной из 8ЕЦ ГО N0: 141-145 и 213;
- 3 028183
II) С1Ж2:
а) имеет аминокислотную последовательность 8Εφ ΙΌ N0: 164;
б) имеет аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70% идентична аминокислотной последовательности 8Εφ ΙΌ N0: 164;
в) имеет аминокислотную последовательность, которая имеет 4, 3, 2 или 1 аминокислотных(ое) различия(е) с аминокислотной последовательностью 8Εφ ΙΌ N0: 164, в которой в положении 1 С заменен на А, Ь, V или 8; в положении 3 N заменен на Ό, 8, О. С или Т; в положении 4 8 заменен на Т, К, С или Р; в положении 5 V заменен на А;
в положении 6 С заменен Ό; в положении 7 I заменен на Т или V; в положении 8 Т заменен на А; и/или в положении 9 К заменен на К; или
г) имеет аминокислотную последовательность, выбранную из любой одной из 8Еф ГО N0: 162-175 и 214-221; и III) указанный СОКЗ:
а) имеет аминокислотную последовательность 8Еф ГО N0: 186;
б) имеет аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70% идентична аминокислотной последовательности 8Еф ГО N0: 186;
в) имеет аминокислотную последовательность, которая имеет 3, 2 или 1 аминокислотных(ое) различия(е) с аминокислотной последовательностью 8Еф ГО N0: 186, в которой в положении 2 Р заменен на А или С; в положении 7 Ό заменен на N и/или в положении 9 К заменен на К; или
г) имеет аминокислотную последовательность, выбранную из любой одной из 8Еф ГО N0: 186-190.
Вариант осуществления изобретения 15:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 3-10, в котором:
I) указанный СГОР1 имеет аминокислотную последовательность 8Еф ГО N0: 146;
II) указанный СГОР2 имеет аминокислотную последовательность, которая: а) по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности 8Еф ГО N0: 176 или б) имеет аминокислотную последовательность 8Ε0 ГО N0: 176 или 177; и
III) указанный СГОК3 имеет аминокислотную последовательность 8Еф ГО N0: 191.
Вариант осуществления изобретения 16:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 3-10, в котором:
I) указанный СГОК1:
а) имеет аминокислотную последовательность 8Еф ГО N0: 147; или
б) имеет аминокислотную последовательность, которая имеет 6, 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислотных(ое) различия(е) с аминокислотной последовательностью 8Еф ГО N0: 147, в которой в положении 1 С заменен на К, К или А; в положении 2 Т заменен на I, Р, 8 или Ь; в положении 3 I заменен на V или Т; в положении 4 Р заменен на Ь; в положении 5 8 заменен на К или Ό; в положении 6 N заменен на 8, Т или Ό; и/или в положении 7 N заменен на Т или Υ; или
в) имеет аминокислотную последовательность, выбранную из любой одной из 8Еф ГО N0: 147-161;
II) указанный СГОР2:
а) имеет аминокислотную последовательность 8Еф ГО N0: 179; или
б) имеет аминокислотную последовательность, которая имеет 4, 3, 2 или 1 аминокислотных(ое) различия(е) с аминокислотной последовательностью 8Еф ГО N0: 179, в которой в положении 3 8 заменен на Т или С; в положении 4 N заменен на 8 или I; в положении 5 8 заменен на Т; в положении 6 С заменен на Υ; и/или в положении 8 Т заменен на А; или
в) имеет аминокислотную последовательность, выбранную из любой одной из 8Еф ГО N0: 178-185;
III) указанный СГОР3:
а) имеет аминокислотную последовательность 8Еф ГО N0: 192; или
б) имеет аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична аминокислотной последовательности 8Еф ГО N0: 192; или
в) имеет аминокислотную последовательность, которая имеет 2 или 1 аминокислотных(ое) различия(е) с аминокислотной последовательностью 8Еф ГО N0: 192, в которой
- 4 028183 в положении 2 А заменен на О; в положении 8 Т заменен на 8; в положении 9 А заменен на О; и/или в положении 10 Υ заменен на Р; или
г) имеет аминокислотную последовательность, выбранную из любой одной из 8ЕР ГО N0: 192-196.
Вариант осуществления изобретения 17:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 3, в котором аминокислотные последовательности указанных СЭК1, С’1)Р2 и С’1)Р3 представлены в:
141, 162 и 186 соответственно; или
8Е(} ГО N0 8Εζ) ГО N0 8ЕС) ГО N0 ЗЕ(} ГО N0 8Εζ) ГО ΝΟ 5Е(} ГО N0 8Е(} ГО N0 5Е(2 ГО N0 8Е(} ГО N0 8Ες ГО N0 ЗЕ<3 ГО N0 ЗЕ(} ГО N0 8Р(/) ГО N0 ЗЕ(} ГО N0 8Е(2 ГО N0 ЗЕО ГО N0 8Е(3 ГО N0 8Е(3 ГО N0 8Е<2 ГО N0 8Е(3 ГО ΝΟ ЗРф ГО ΝΟ 8Е(3 ГО N0 8Εζ) ГО N0 8Е(2 ГО N0 8Е(^ ГО N0 8Е(3 ГО N0 ЗЕО ГО N0
141, 163 и 187 соответственно; или 141, 164 и 186 соответственно; или 141, 166 и 186 соответственно; или 141, 167 и 186 соответственно; или 141, 167 и 189 соответственно; или 141, 168 и 186 соответственно; или 141, 168 и 187 соответственно; или 141, 169 и 190 соответственно; или 141, 170 и 186 соответственно; или 141, 171 и 186 соответственно; или 141, 174 и 186 соответственно; или
141, 175 и 187 соответственно; или
142, 165 и 188 соответственно; или
142, 173 и 188 соответственно; или
143, 164 и 186 соответственно; или
144, 172 и 187 соответственно; или
145, 172 и 187 соответственно; или 141, 214 и 186 соответственно; или 141,215и186 соответственно; или 141,216и 186 соответственно; или 141, 217 и 186 соответственно; или 141, 218 и 186 соответственно; или 141, 219 и 186 соответственно; или 141, 220 и 186 соответственно; или 213, 221 и 186 соответственно; или
213,214и 186 соответственно.
Вариант осуществления изобретения 18:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 3, в котором аминокислотные последовательности указанных СЭК1, С’1)Р2 и С’1)Р3 представлены в:
8Е(^ ГО N0: 146, 176 и 191, соответственно; или
8Е(2 ГО N0: 146, 177 и 191, соответственно.
Вариант осуществления изобретения 19:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 3, в котором аминокислотные последовательности указанных СЭК1, С’1)Р2 и С’1)Р3 представлены в:
- 5 028183
8ЕЦ Ю N0 8Е(3 ГО N0 8Е(} ГО N0 8110 ГО N0 ЗЕО ГО N0 ЗЕО ГО N0 ЗЕО ГО N0 ЗЕО ГО N0 ЗЕО ГО N0 ЗЕО ГО N0 ЗЕО ГО N0 ЗЕО ГО N0 ЗЕО ГО N0 ЗЕО ГО N0 ЗЕО ГО N0 ЗЕО ГО N0 ЗЕО ГО N0 ЗЕО ГО ΝΟ ЗЕО ГО N0 ЗЕО Ю N0 ЗЕО ГО N0 ЗЕО ГО N0 ЗЕО ГО N0 ЗЕО ГО ΝΟ
147, 178 и 192 соответственно; или 147, 179 и 192, соответственно; или
147, 179 и 194 соответственно; или
148, 179 и 193 соответственно; или
149, 179 и 192 соответственно; или 149, 180 и 192 соответственно; или 149, 181 и 192 соответственно; или 149, 183 и 192 соответственно; или
149, 185 и 192 соответственно; или
150, 179 и 194 соответственно; или
150, 182 и 194 соответственно; или
151, 179 и 193 соответственно; или 151, 182 и 194 соответственно; или
151, 184 и 196 соответственно; или
152, 179 и 195 соответственно; или
153, 179 и 194 соответственно; или
154, 182 и 194 соответственно; или
155, 179 и 195 соответственно; или
156, 181 и 192 соответственно; или
157, 179 и 194 соответственно; или
158, 179 и 192 соответственно; или
159, 178 и 192 соответственно; или
160, 179 и 194 соответственно; или
161, 179 и 194 соответственно.
Вариант осуществления изобретения 20:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 3, в котором аминокислотные последовательности указанных СОК1, С0К2 и СОКЗ представлены в: ЗЕО ГО N0: 141, 164 и 186 соответственно или ЗЕО ГО N0: 141, 162 и 186 соответственно.
Вариант осуществления изобретения 21:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 3, в котором аминокислотные последовательности указанных СОК1, С0К2 и СОКЗ представлены в: ЗЕО ГО N0: 213, 214 и 186 соответственно или ЗЕО ГО N0: 141, 162 и 186 соответственно.
Вариант осуществления изобретения 22:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 2-10, в котором указанный антиСХ3СК1 иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен представляет собой УНН-домен, который содержит такие последовательности, как:
а) аминокислотная последовательность ЗЕО ГО N0: 3;
б) аминокислотная последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности ЗЕО ГО N0: 3;
в) аминокислотная последовательность, которая имеет 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислотных(ое) различия(е) с аминокислотной последовательностью ЗЕО ГО N0: 3; или
г) аминокислотная последовательность, представленная в любой одной из ЗЕО ГО N0: 1-48, 121140 или 222-224.
Вариант осуществления изобретения 23:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 2-10, в котором указанный антиСХ3СК1 иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен представляет собой УНН-домен, который содержит такие последовательности, как:
а) аминокислотная последовательность ЗЕО ГО N0: 49;
б) аминокислотная последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности ЗЕО ГО N0: 49;
в) аминокислотная последовательность, которая имеет 5, 4, 3,2 или 1 аминокислотных(ое) разли- 6 028183 чия(е) с аминокислотной последовательностью БЕЦ ГО N0: 49; или
г) аминокислотная последовательность, представленная в любой одной из БЕЦ ГО N0: 49-52. Вариант осуществления изобретения 24:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 2-10, в котором указанный антиСХ3СК1 иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен представляет собой АНН-домен, который содержит такие последовательности, как:
а) аминокислотная последовательность БЕЦ ГО N0: 67;
б) аминокислотная последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности БЕЦ ГО N0: 67;
в) аминокислотная последовательность, которая имеет 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислотных(ое) различия(е) с аминокислотной последовательностью БЕЦ ГО N0: 67; или
г) аминокислотная последовательность, представленная в любой одной из БЕЦ ГО N0:53-120. Вариант осуществления изобретения 25: Полипептид по варианту осуществления изобретения 2, в котором указанный анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен содержит последовательность, представленную в БЕЦ ГО N0: 1 или БЕЦ ГО N0: 3.
Вариант осуществления изобретения 26: Полипептид по варианту осуществления изобретения 2, в котором указанный анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен содержит последовательность, представленную в любой одной из БЕЦ ГО N0: 121-140 или БЕЦ ГО N0: 222-224.
Вариант осуществления изобретения 27: Полипептид по одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, который гуманизирован и/или оптимизирован в отношении стабильности, эффективности, технологичности и/или сходства с человеческими каркасными участками.
Вариант осуществления изобретения 28:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 27, который гуманизирован и/или последовательность которого оптимизирована в одном или нескольких из следующих положений (нумерация по Кэботу): 1, 11, 14, 16, 74, 83, 108.
Вариант осуществления изобретения 29: Полипептид по варианту осуществления изобретения 28, содержащий одну или несколько из следующих мутаций: ЕГО, Б11Ь, А14Р, Е16С, А74Б, К83К, Ц108Ь.
Вариант осуществления изобретения 30: Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 3-29, в котором:
I) РК1 выбран из БЕЦ ГО N0: 198-204;
II) РК2 выбран из БЕЦ ГО N0: 205-208;
III) РК3 выбран из БЕЦ ГО N0: 209-210; и/или
IV) РК4 выбран из БЕЦ ГО N0: 211-212.
Вариант осуществления изобретения 31:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 3-30, который гуманизирован и/или последовательность которого оптимизирована в одном или большем количестве из следующих положений (нумерация по Кэботу): 52, 53.
Вариант осуществления изобретения 32:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 31, содержащий одну или большее количество из следующих мутаций: №2Б, Б53Т.
Вариант осуществления изобретения 33:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 3-32, в котором СБК2 выбран из БЕЦ ГО N0: 214-221.
Вариант осуществления изобретения 34:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 2-33, в котором указанный антиСХ3СК1 иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен содержит последовательность, представленную в любой из БЕЦ ГО N0: 138-140 или 222-224.
Вариант осуществления изобретения 35:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 22-26, в котором АПН-домен состоит из любой одной из указанных аминокислотных последовательностей.
Вариант осуществления изобретения 36:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 2-35, в котором указанный иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен перекрестно блокирует связывание по меньшей мере одного из иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, имеющих БЕЦ ГО N0: 1-120, 121140 и 222-224, с СХ3СК.1.
Вариант осуществления изобретения 37:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 2-35, в котором связывание указанного иммуноглобулинового единичного вариабельного домена с СХ3СК1 перекрестно блокируется по меньшей мере одной из аминокислотных последовательностей БЕЦ ГО N0: 1-120, 121-140 и 222-224.
Вариант осуществления изобретения 38:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 2-37, где полипептид содержит также удлиняющий время полужизни фрагмент.
- 7 028183
Вариант осуществления изобретения 39:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 38, в котором удлиняющий время полужизни фрагмент ковалентно связан с указанным полипептидом и выбран из группы, включающей альбуминсвязывающий фрагмент, такой как антиальбуминовый иммуноглобулиновый домен, трансферринсвязывающий фрагмент, такой как антитрансферриновый иммуноглобулиновый домен, молекулу полиэтиленгликоля, рекомбинантную молекулу полиэтиленгликоля, человеческий сывороточный альбумин, фрагмент человеческого сывороточного альбумина, альбуминсвязывающий пептид или Ре-домен.
Вариант осуществления изобретения 40:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 38 или 39, в котором удлиняющий время полужизни фрагмент состоит из антиальбуминового иммуноглобулинового единичного вариабельного домена.
Вариант осуществления изобретения 41:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 40, в котором иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен выбран из УНН-домена, гуманизированного УНН-домена, камелизированного УН-домена, доменного антитела, однодоменного антитела и/или ЙАЪ.
Вариант осуществления изобретения 42:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 41, в котором антиальбуминовый иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен выбран из 8ЕО ГО N0: 230-232.
Вариант осуществления изобретения 43:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 2-39, где указанный полипептид сцеплен с Рс-областью (такой как человеческая Рс, например, представленная в 8Е0 ГО N0: 252) необязательно через приемлемый линкер или шарнирную область.
Вариант осуществления изобретения 44:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 2-39, где указанный полипептид дополнительно сцеплен с одним или несколькими константными доменами (например, 2 или 3 константными доменами, которые можно применять в качестве части и/или для формирования Рс-области), с Рсобластью и/или с одним или несколькими участками антител, фрагментами или доменами, которые придают одну или несколько эффекторных функций полипептиду, предлагаемому в изобретении, и/или могут придавать способность связываться с одним или несколькими Рс-рецепторами, необязательно через приемлемый линкер или шарнирную область.
Вариант осуществления изобретения 45:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 2-37, где указанный полипептид дополнительно содержит второй иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, предпочтительно второй анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен.
Вариант осуществления изобретения 46:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 45, в котором указанный первый и указанный второй иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены ковалентно связаны с помощью линкерного пептида.
Вариант осуществления изобретения 47:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 45 или 46, в котором указанный второй иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен практически состоит из четырех каркасных участков (РК1-РК4) и трех гипервариабельных участков (СГОВ1-СГОВ3).
Вариант осуществления изобретения 48:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 45-47, в котором указанный первый и указанный второй иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены представляют собой домены антитела.
Вариант осуществления изобретения 49:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 45-48, в которой указанные первый и второй иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены представляют собой УН, УЬ, УНН, камелизированный УН или УНН, оптимизированный в отношении стабильности, эффективности, технологичности и/или сходства с человеческими каркасными участками.
Вариант осуществления изобретения 50:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 45-49, в котором указанные СНК1-СНК3 указанного второго иммуноглобулинового единичного вариабельного домена представлены в одном из вариантов осуществления изобретения 11-21.
Вариант осуществления изобретения 51:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 45-50, в котором указанный первый и указанный второй иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены содержат одинаковый СГОВ3.
Вариант осуществления изобретения 52:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 51, в котором СЭК.3 представлен в одном из вариантов осуществления изобретения 11-13.
- 8 028183
Вариант осуществления изобретения 53:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 45-53, в котором указанный первый и указанный второй иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены содержат одинаковые С1)Н1. С1Ж2 и СОКУ
Вариант осуществления изобретения 54:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 53, в котором указанные СГОК1-СГОК3 представлены в одном из вариантов осуществления изобретения 11-21.
Вариант осуществления изобретения 55:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 45-54, в котором указанный первый и указанный второй иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены содержат одинаковый УНН-домен.
Вариант осуществления изобретения 56:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 45-55, в котором указанный УННдомен представлен в одном из вариантов осуществления изобретения 22-37.
Вариант осуществления изобретения 57:
Полипептид, содержащий первый и иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, который содержит СЭК1, СЭК2 и СЭК3, представленные в 8ЕЦ ГО N0: 141, 164 и 186 или 8ЕЦ ГО N0: 141, 162 и 186, и второй иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, представленный в одном из вариантов осуществления изобретения 2-37.
Указанный полипептид может представлять собой, в частности, полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 45-56.
Вариант осуществления изобретения 58:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 57, в котором указанный первый иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен содержит СОК!, СГОК2 и СГОК3, представленные в 8ЕЦ ГО N0: 213, 214 и 186, 8ЕЦ ГО N0: 213, 221 и 186 или 8ЕЦ ГО N0: 141, 162 и 186.
Вариант осуществления изобретения 59:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 57 или 58, в котором указанный второй иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен содержит СГОК1, СГОК2 и СЭК3, представленные в 8ЕЦ ГО N0: 141, 164 и 186 или 8ЕЦ ГО N0: 141, 162 и 186.
Вариант осуществления изобретения 60:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 57 или 58, в котором указанный второй иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен содержит СГОК1, СГОК2 и СГОК3, представленные в 8ЕЦ ГО N0: 213, 214 и 186, 8ЕЦ ГО N0: 213, 221 и 186 или 8ЕЦ ГО N0: 141, 162 и 186.
Вариант осуществления изобретения 61:
Полипептид, содержащий первый иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, в котором указанный первый иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен представляет собой УННдомен, который содержит последовательность, представленную в 8ЕЦ ГО N0: 1 или 8ЕЦ ГО N0: 3, и второй иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен по одному из вариантов осуществления изобретения 2-37.
Указанный полипептид может представлять собой, в частности, полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 45-60.
Вариант осуществления изобретения 62:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 61, в котором указанный первый иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен представляет собой УНН-домен, содержащий последовательность, представленную в любой одной из 8ЕЦ ГО N0: 121-140 или 222-224.
Вариант осуществления изобретения 63:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 61 или 62, в котором указанный второй иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен представляет собой УНН-домен, содержащий последовательность, представленную в 8ЕЦ ГО N0: 1 или 8ЕЦ ГО N0: 3.
Вариант осуществления изобретения 64:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 63, в котором указанный второй иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен представляет собой УНН-домен, содержащий последовательность, представленную в любой одной из 8ЕЦ ГО N0: 121-140 или 222-224.
Вариант осуществления изобретения 65:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 45-64, где полипептид содержит дополнительно удлиняющий время полужизни фрагмент.
Вариант осуществления изобретения 66:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 65, в котором удлиняющий время полужизни фрагмент ковалентно связан с указанным полипептидом и выбран из группы, включающей альбуминсвязывающий фрагмент, такой как антиальбуминовый иммуноглобулиновый домен, трансферринсвязывающий фрагмент, такой как антитрансферриновый иммуноглобулиновый домен, молекулу полиэтиленгликоля, рекомбинантную молекулу полиэтиленгликоля, человеческий сывороточный альбумин,
- 9 028183 фрагмент человеческого сывороточного альбумина, альбуминсвязывающий пептид или Ре-домен.
Вариант осуществления изобретения 67:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 66, в котором указанный удлиняющий время полужизни фрагмент состоит из антиальбуминового иммуноглобулинового единичного вариабельного домена.
Вариант осуществления изобретения 68:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 67, в котором иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен выбран из УНН-домена, гуманизированного УНН-домена, камелизированного УН-домена, доменного антитела, однодоменного антитела и/или 6АЪ.
Вариант осуществления изобретения 69:
Полипептид по варианту осуществления изобретения 68, в котором антиальбуминовый иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен выбран из 8ЕС ГО N0: 230-232.
Вариант осуществления изобретения 70:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 45-64, где указанный полипептид сцеплен с Рс-областью (такой как человеческая Рс, например, представленная в §ЕЦ ГО N0: 252) необязательно через приемлемый линкер или шарнирную область.
Вариант осуществления изобретения 71:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 45-66, где указанный полипептид дополнительно сцеплен с одним или несколькими константными доменами (например, 2 или 3 константными доменами, которые можно применять в качестве части и/или для формирования Рс-области), с Рсобластью и/или с одним или несколькими участками антител, фрагментами или доменами, которые придают одну или несколько эффекторных функций полипептиду, предлагаемому в изобретении, и/или могут придавать способность связываться с одним или несколькими Рс-рецепторами, необязательно через приемлемый линкер или шарнирную область.
Вариант осуществления изобретения 72: Полипептид, содержащий любую одну из аминокислотных последовательностей §ЕЦ ГО N0: 225-227.
Вариант осуществления изобретения 73: Полипептид, содержащий любую одну из аминокислотных последовательностей §ЕЦ ГО N0: 249 или 277-281.
Вариант осуществления изобретения 74: Полипептид, содержащий любую одну из аминокислотных последовательностей §ЕЦ ГО N0: 257-262.
Вариант осуществления изобретения 75: Полипептид, содержащий любую одну из аминокислотных последовательностей §ЕЦ ГО N0: 253 или 254.
Вариант осуществления изобретения 76: Полипептид, содержащий любую одну из аминокислотных последовательностей §ЕЦ ГО N0: 263 или 266.
Вариант осуществления изобретения 77: Полипептид, содержащий любую одну из аминокислотных последовательностей §ЕЦ ГО N0: 267-276 и 282.
Вариант осуществления изобретения 78: Молекула нуклеиновой кислота, содержащая область, которая кодирует полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 1-77.
Вариант осуществления изобретения 79: Экспрессионный вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по варианту осуществления изобретения 78.
Вариант осуществления изобретения 80:
Клетка-хозяин, несущая экспрессионный вектор, который содержит молекулу нуклеиновой кислоты, где указанная молекула нуклеиновой кислоты содержит область, которая кодирует полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 1-77, где указанная клетка-хозяин обладает способностью экспрессировать полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 1-77, и где указанная клетка-хозяин представляет собой прокариотическую или эукариотическую клетку.
Вариант осуществления изобретения 81: Фармацевтическая композиция, содержащая (I) в качестве действующего вещества один или несколько из полипептидов по одному из вариантов осуществления изобретения 1-77 и (II) фармацевтически приемлемый носитель, и необязательно (III) разбавитель, эксципиент, адъювант и/или стабилизатор.
Вариант осуществления изобретения 82: Способ получения полипептида по одному из вариантов осуществления изобретения 1-77, заключающийся в том, что осуществляют стадии, на которых культивируют клетку-хозяина в условиях, обеспечивающих экспрессию полипептида по одному из вариантов осуществления изобретения 1-77, где указанная клетка-хозяин несет экспрессионный вектор, который содержит молекулу нуклеиновой кислоты, где указанная молекула нуклеиновой кислоты содержит область, которая кодирует полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 1-77, и где указанная клетка-хозяин представляет собой прокариотическую или эукариотическую клетку;
выделяют указанный полипептид; и очищают указанный полипептид.
Вариант осуществления изобретения 83:
Способ применения полипептида по одному из вариантов осуществления изобретения 1-77 для лечения, предупреждения или облегчения заболевания, нарушения или состояния, в частности у человека.
- 10 028183
Вариант осуществления изобретения 84:
Способ по варианту осуществления изобретения 83, в котором указанное заболевание, нарушение или состояние представляет собой ассоциированное с СХ3СК.1 заболевание, нарушение или состояние.
Вариант осуществления изобретения 85:
Способ по варианту осуществления изобретения 83, в котором указанное заболевание, нарушение или состояние представляет собой атеросклероз.
Вариант осуществления изобретения 86:
Инъецируемая фармацевтическая композиция, содержащая полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 1-77, где указанную композицию можно применять для внутривенной или подкожной инъекции человеку.
Вариант осуществления изобретения 87:
Способ предупреждения и/или лечения заболевания или нарушения, которое ассоциировано с СХ3СК.1, заключающийся в том, что вводят индивидууму, который нуждается в этом, в фармацевтически активном количестве по меньшей мере один полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 1- 77.
Вариант осуществления изобретения 88:
Способ по варианту осуществления изобретения 85, заключающийся также в том, что вводят дополнительное терапевтическое средство, выбранное из группы, включающей статин, антитромбоцитарное средство, антикоагулянт, противодиабетическое средство и гипотензивное средство.
Вариант осуществления изобретения 89:
Способ ингибирования связывания СХ3СК.1 с фракталкином в клетке млекопитающего, заключающийся в том, что вводят в клетку полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 1-77, ингибируя тем самым передачу сигналов, опосредуемую фракталкином.
Вариант осуществления изобретения 90:
Способ детекции и/или количественной оценки уровней СХ3СК.1 в биологическом образце, заключающийся в том, что приводят в контакт образец с полипептидом по одному из вариантов осуществления изобретения 1-77 и определяют связывание полипептида с СХ3СК.1.
Вариант осуществления изобретения 91:
Способ диагностирования ассоциированного с СХ3СК.1 нарушения или решения вопроса о том, имеет ли пациент риск развития ассоциированного с СХ3СК.1 нарушения, заключающийся в том, что приводят в контакт биологический образец из организма пациента с полипептидом по одному из вариантов осуществления изобретения 1-77 и определяют связывание полипептида с СХ3СК.1 для оценки уровня экспрессии или концентрации СХ3СК.1.
Вариант осуществления изобретения 92:
Полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 1-77, предназначенный для применения для лечения, предупреждения или облегчения заболевания, нарушения или состояния, в частности у человека.
Вариант осуществления изобретения 93:
Полипептид, предназначенный для применения согласно варианту осуществления изобретения 92, где заболевание, нарушение или состояние представляет собой ассоциированное с СХ3СК.1 заболевание, нарушение или состояние.
Вариант осуществления изобретения 94:
Полипептид, предназначенный для применения согласно варианту осуществления изобретения 92, где заболевание, нарушение или состояние выбирают из кардио- и цереброваскулярных атеросклеротических нарушений, заболевания периферических артерий, рестеноза, диабетической нефропатии, гломерулонефрита, человеческого серповидного гломерулонефрита, 1дА-нефропатии, мембранозной нефропатии, волчаночного нефрита, васкулита, включая пурпуру Геноха-Шенлейна и гранулематоз Вегенера, ревматоидного артрита, остеоартрита, отторжения трансплантата, системного склероза, нейродегенеративных нарушений и демиелинизирующего заболевания, рассеянного склероза (РС), болезни Альцгеймера, легочных заболеваний, таких как ХОЗЛ, астма, нейропатической боли, связанной с воспалением боли или рака.
Вариант осуществления изобретения 95:
Полипептид, предназначенный для применения согласно варианту осуществления изобретения 92, где заболевание, нарушение или состояние представляет собой атеросклероз.
Вариант осуществления изобретения 96:
Применение полипептида по одному из вариантов осуществления изобретения 1-77 для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения, предупреждения или облегчения заболевания, нарушения или состояния у человека.
Вариант осуществления изобретения 97:
Способ по варианту осуществления изобретения 87, в котором заболевание или нарушение выбирают из кардио- и цереброваскулярных атеросклеротических нарушений, заболевания периферических артерий, рестеноза, диабетической нефропатии, гломерулонефрита, человеческого серповидного гломе- 11 028183 рулонефрита, 1дА-нефропатии, мембранозной нефропатии, волчаночного нефрита, васкулита, включая пурпуру Геноха-Шенлейна и гранулематоз Вегенера, ревматоидного артрита, остеоартрита, отторжения трансплантата, системного склероза, нейродегенеративных нарушений и демиелинизирующего заболевания, рассеянного склероза (РС), болезни Альцгеймера, легочных заболеваний, таких как ХОЗЛ, астма, нейропатической боли, связанной с воспалением боли или рака.
Вариант осуществления изобретения 98:
Способ по варианту осуществления изобретения 87, в котором заболевание, нарушение или состояние представляет собой атеросклероз.
Вариант осуществления изобретения 99:
Диагностический набор или диагностический способ, включающий полипептид по одному из вариантов осуществления изобретения 1-77, или его применение.
Вариант осуществления изобретения 100:
Диагностический набор или диагностический способ по варианту осуществления изобретения 99, предназначенный для диагностирования по меньшей мере одного из кардио- и цереброваскулярных атеросклеротических нарушений, заболевания периферических артерий, рестеноза, диабетической нефропатии, гломерулонефрита, человеческого серповидного гломерулонефрита, 1дА-нефропатии, мембранозной нефропатии, волчаночного нефрита, васкулита, включая пурпуру Геноха-Шенлейна и гранулематоз Вегенера, ревматоидного артрита, остеоартрита, отторжения трансплантата, системного склероза, нейродегенеративных нарушений и демиелинизирующего заболевания, рассеянного склероза (РС), болезни Альцгеймера, легочных заболеваний, таких как ХОЗЛ, астма, нейропатической боли, связанной с воспалением боли или рака.
Подробное описание изобретения Определения
Указанные выше и другие объекты и варианты осуществления изобретения должны стать очевидными после ознакомления с дополнительным описанием, в котором:
а) Если не указано или не определено иное, то все применяемые понятия употребляются в их обычном значении, принятом в данной области, которое очевидно специалистам в данной области. В качестве ссылки можно указать, например, стандартные руководства, такие как ЗатЬгоок и др., Мо1еси1аг С1ои1ид: А ЬаЬога1огу Мапиа1, 2-е изд., тома 1-3, изд-во Со1б 8ргшд НагЬог ЬаЬога1огу Рге§5, 1989; Ье^т, Оеиек IV, изд-во ОхГогб Ишуегейу Рге§5, №\ν Уогк, 1990, и КоШ и др., 1ттиио1о§у (2-е изд.), изд-во Со\\ег Мебюа1 РиЬНкЫид, Бомбой, №\ν Уогк, 1989, а также документы, касающиеся общего уровня техники, процитированные в настоящем описании; кроме того, если не указано иное, то все методы, стадии, процессы и манипуляции, которые не описаны конкретно в деталях, можно осуществлять (и их осуществляли) хорошо известными методами, что должно быть очевидно специалисту в данной области. И в этом случае также в качестве ссылки можно, например, указать на известные руководства, сведения, касающиеся общего уровня техники, указанные выше, и дополнительные процитированные в них ссылки.
б) Если не указано иное, то понятия иммуноглобулин и последовательность иммуноглобулина, если их используют в контексте настоящего описания касательно состоящего только из тяжелых цепей антитела или канонического состоящего из 4 цепей антитела, применяют в качестве общих понятий, которые включают полноразмерное антитело, его индивидуальные цепи, а также все его области, домены или фрагменты (включая (но, не ограничиваясь только ими) антигенсвязывающие домены или фрагменты, такие как νΗΗ-домены или νΗ/νΕ-домены соответственно). Кроме того, понятие последовательность в контексте настоящего описания (например, в понятиях типа последовательность иммуноглобулина, последовательность антитела, последовательность (единичного) вариабельного домена, последовательность νΗΗ или последовательность белка), как это обычно принято, относится как к соответствующим аминокислотным последовательностям, так и к последовательностям нуклеиновых кислот или нуклеотидным последовательностям, которые их кодируют, если из контекста не следует более ограниченная интерпретация.
в) Понятие домен (область) (полипептида или белка) в контексте настоящего описания относится к складчатой белковой структуре, которая обладает способностью сохранять свою третичную структуру, независимо от остального белка. Как правило, домены ответственны за отдельные функциональные свойства белков и во многих случаях их можно добавлять, удалять или переносить в другие белки без потери функции оставшейся части белка и/или домена.
г) Понятие иммуноглобулиновый домен в контексте настоящего описания относится к глобулярной области цепи антитела (такой, например, как цепь канонического состоящего из 4 цепей антитела или состоящего из тяжелых цепей антитела) или к полипептиду, который состоит практически из указанной глобулярной области. Иммуноглобулиновые домены отличаются тем, что они сохраняют присущую иммуноглобулину складчатую структуру молекул антитела, которая представляет собой 2-слойный сэндвич, состоящий примерно из 7 антипараллельных бета-цепей, образующих две бета-складки, необязательно стабилизированные с помощью консервативного дисульфидного мостика.
д) Понятие иммуноглобулиновый вариабельный домен в контексте настоящего описания относится к иммуноглобулиновому домену, состоящему практически из четырех каркасных участков, как
- 12 028183 они определены в данной области, и обозначены ниже как каркасный участок 1 или РК1; каркасный участок 2 или РК2; каркасный участок 3 или РК3 и каркасный участок 4 или РК4 соответственно; указанные каркасные участки перемежаются тремя гипервариабельными участками, или СОК, как они определены в данной области, и обозначены ниже как гипервариабельный участок 1 или СЭКТ; гипервариабельный участок 2 или СЭК2 и гипервариабельный участок 3 или СЭК3 соответственно. Таким образом, общую структуру или последовательность вариабельного домена иммуноглобулина можно обозначать как: РК1 - СЭК1 - РК2 - СЭК2 - РК3 - СЭК3 - РК4. Именно вариабельный(ые) домен(ы) иммуноглобулина придает(ют) специфичность антителу в отношении антигена, поскольку он(они) несут антигенсвязывающий центр.
е) Понятия «иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен» и «единичный вариабельный домен» в контексте настоящего описания относится к иммуноглобулиновому вариабельному домену, который обладает способностью специфически связываться с эпитопом антигена без спаривания с дополнительным иммуноглобулиновым вариабельным доменом. Одним из примеров иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов согласно настоящему изобретению являются доменные антитела, такие как единичные вариабельные домены УН и УЪ (УЛ-домены и УЪ-домены). Другим примером иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов являются УНН-домены (или просто УНН) из представителей верблюдовых, как указано ниже в настоящем описания.
В свете вышеуказанных определений антигенсвязывающий домен канонического состоящего их 4 цепей антитела (такого как молекула 1дС. 1дМ, 1дА, Ι§Ό или 1дЕ; известная в данной области) или РаЬфрагмента, Р(аЬ')2-фрагмента, Ρν-фрагмента, такого как связанный дисульфидным мостиком Ρν или 8еРу-фрагмент, или димерного антитела (диабоди) (которые все известны в данной области), выведенный из указанного канонического состоящего из 4 цепей антитела, не следует рассматривать как иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, поскольку в этих случаях связывание с соответствующим эпитопом антигена в норме не может осуществляться с помощью одного (единичного) иммуноглобулинового домена, а должно происходить посредством спаривания (ассоциации) иммуноглобулиновых доменов, таких как вариабельные области легкой и тяжелой цепей, т.е. с помощью пары УН-УЪ иммуноглобулиновых доменов, которые совместно связываются с эпитопом соответствующего антигена.
е1) УНН-домены, которые обозначают также как УНН, УНН-домены, фрагменты УНН-антитела и УНН-антитела, впервые были описаны как антигенсвязывающие иммуноглобулиновые (вариабельные) домены состоящих из тяжелых цепей антител (т.е. антител, в которых отсутствуют легкие цепи, Натет8-Са81егтаи С, АШгНоисй Т, МиуМегшаик 8., КоЬшкои О., Нашего С, 8оида Е.В., ВеибаЬтаи Ν., Нашего К. в: №йига11у осситид аийЬоФек йееоИ оГ ПдШ ейайъ; №Циге 363, 1993, сс. 446-448). Понятие УНН-домен было выбрано для того, что можно было отличать эти вариабельные домены от вариабельных доменов тяжелых цепей, которые присутствуют в канонических состоящих из 4 цепей антителах (они обозначены далее как УН-домены (области) или УН-домены (области)) и от вариабельных доменов легких цепей, которые присутствуют в канонических состоящих из 4 цепей антителах (они обозначены далее как У[-домены (области) или УЪ-домены (области)). УНН-домены могут специфически связываться с эпитопом без дополнительного антигенсвязывающего домена (в отличие от УН- или УЪдоменов в каноническом состоящем из 4 цепей антителе, в котором для распознавания эпитопа требуется присутствие УЪ-домена в сочетании с УН-доменом). УНН-домены представляют собой небольшие, сильные и эффективные распознающие антиген структуры (единицы), образованные единичным иммуноглобулиновым доменом.
В контексте настоящего изобретения понятия УНН-домен, УНН, УНН-домен, фрагмент УННантитела, УНН-антитело, а также №тоЬойу® и домен №тоЬойу® (№тоЬойу (нанободи) является товарным знаком компании АЬ1уих КУ.; Гент, Бельгия) применяют взаимозаменяемо, и они относятся к иммуноглобулиновым единичным вариабельным доменам (которые имеют следующее строение: РК1ΟΌΚ1-ΡΚ2-ΟΌΚ2-ΡΚ3-ΟΌΚ3-ΡΚ4, и которые специфически связываются с эпитопом, не требуя присутствия второго иммуноглобулинового вариабельного домена), и они отличаются от УН-доменов наличием так называемых отличительных остатков, остатков-маркеров, как они определены, например, в \УО 2009/109635, фиг. 1.
Аминокислотные остатки УНН-домена нумеруют согласно общей номенклатуре Кэбота для УНдоменов (8ециеисе оГ рго1еш8 оГ 1ттипо1одюа1 ПИегеШ, изд-во И8 РиЬйс НеаИЬ 8егоюе8, №Н ВеШекба, МО, публикация № 91), в том виде, в котором ее применяют для УНН-доменов верблюдовых, например, как продемонстрировано на фиг. 2 у КтесЬтаии и МиуИеттаиз, 1. 1ттиио1. МеОюйк 231, 1999, сс. 25-38. Согласно этой нумерации
РК1 содержит аминокислотные остатки, присутствующие в положениях 1-30,
СОК1 содержит аминокислотные остатки, присутствующие в положениях 31-35,
РК2 содержит аминокислотные остатки, присутствующие в положениях 36-49,
СОК2 содержит аминокислотные остатки, присутствующие в положениях 50-65,
РК3 содержит аминокислотные остатки, присутствующие в положениях 66-94,
СЭК3 содержит аминокислотные остатки, присутствующие в положениях 95-102 и
РК4 содержит аминокислотные остатки, присутствующие в положениях 103-113.
- 13 028183
Однако следует отметить, что, как хорошо известно для УН-доменов и для УНН-доменов, общее количество аминокислотных остатков в каждом СОК может варьироваться и может не соответствовать общему количеству аминокислотных остатков, указанных в номенклатуре Кэбота (т.е. одно или несколько положений согласно номенклатуре Кэбота может быть незанятым в фактической последовательности, или фактическая последовательность может содержать большее количество аминокислотных остатков, чем количество остатков, которое должно присутствовать согласно номенклатуре Кэбота). Это означает, что, в целом, нумерация по Кэботу может как соответствовать, так и не соответствовать фактической нумерации аминокислотных остатков в фактической последовательности.
В данной области известны альтернативные методы нумерации аминокислотных остатков УНдоменов, указанные методы также можно применять аналогичным образом к УНН-доменам. Однако в настоящем описании, формуле изобретения и на чертежах нумерация соответствует номенклатуре Кэбота, и ее применяют к описанным выше УНН-доменам, если специально не указано иное.
Общее количество аминокислотных остатков в УНН-домене, как правило, составляет от 110 до 120, чаще от 112 до 115. Однако следует отметить, что для целей настоящего изобретения можно применять также как более короткие, так и более длинные последовательности.
Другие структурные характеристики и функциональные свойства УНН-доменов и полипептидов, содержащих их, можно обобщить следующим образом:
УНН-домены (которые созданы природой таким образом, что они могут функционально связываться с антигеном без присутствия или без какого-либо взаимодействия с вариабельным доменом легкой цепи) могут функционировать как единичная относительно небольшая функциональная антигенсвязывающая структурная единица, домен или полипептид. Это отличает УНН-домены от УН-и УЬдоменов канонических состоящих из 4-цепей антител, которые сами по себе, как правило, не пригодны для практического применения в виде единичных антигенсвязывающих белков или иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, а нуждаются в объединении в той или иной форме для создания функциональной антигенсвязывающей единицы (как, например, фрагменты канонических антител, такие как РаЪ-фрагменты в 8сРу, который состоит из УН-домена, ковалентно связанного с УЪ-доменом).
Благодаря их уникальным свойствам применение УНН-доменов - либо индивидуально, либо в качестве части более крупного полипептида - обладает рядом важных преимуществ по сравнению с применением канонических УН- и УЪ-доменов, 8сРу или фрагментов канонических антител (таких как РаЪ- или Р(аЪ')2-фрагменты):
только один домен необходим для связывания антигена с высокой аффинностью и высокой селективностью, поэтому отсутствует как необходимость в наличии двух отдельных доменов, так и необходимость в требовании, чтобы эти два домена находились в правильной пространственной конформации и конфигурации (т.е. необходимость в применении специально созданных линкеров, как в случае 8сРу);
УНН-домены можно экспрессировать с одного гена и при этом отсутствует необходимость в посттрансляционном фолдинге или модификации;
УНН-домены легко можно конструировать в многовалентных и мультиспецифических форматах (что подробно обсуждено ниже в настоящем описании);
УНН обладают высокой растворимостью и не имеют тенденции к агрегации (что имеет место в случае полученных из антител мышей антигенсвязывающих доменов, описанных у \Уагй и др., №-Цигс 341, 1989, сс. 544-546));
УНН-домены обладают высокой устойчивостью к нагреванию, рН, протеазам и другим денатурирующим агентам или условиям и поэтому их можно получать, хранить или транспортировать без применения охлаждающего оборудования, что позволяет экономить затраты, время и сберегать окружающую среду;
УНН-домены можно легко и относительно дешево получать, в том числе в даже в требуемом масштабе. Например, УНН-домены и полипептиды, содержащие их, можно получать с использованием ферментации микроорганизмов (что более подробно описано ниже) и для этой цели не требуется применения экспрессионных систем млекопитающих, что имеет место в случае фрагментов канонических антител;
УНН-домены являются относительно небольшими (примерно 15 кДа или в 10 раз меньше, чем канонический 1дО) по сравнению с каноническими состоящими из 4 цепей антителами и их антигенсвязывающими фрагментами, и поэтому для них характерна высокая (более высокая) способность проникать в ткани и их можно вводить в более высоких дозах, чем дозы канонических состоящих из 4 цепей антител и их антигенсвязывающих фрагментов;
УНН-домены могут обладать так называемой способностью связываться с сайтом, расположенном в расщелине (бороздке) (в том числе благодаря их удлиненной СОКЗ-петле, в отличие от канонических УН-доменов), и поэтому для них являются доступными также мишени и эпитопы, которые не доступны для канонических, состоящих из 4 цепей антител и их антигенсвязывающих фрагментов.
Методы получения УНН-доменов, связывающихся со специфическим антигеном или эпитопом, описаны ранее, например, в \У0 2006/040153 и \У0 2006/122786. Как описано подробно в указанных документах, УНН-домены, выведенные из представителей верблюдовых, можно гуманизировать путем
- 14 028183 замены одного или нескольких аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности исходной последовательности УНН на один или несколько аминокислотных остатков, которые присутствуют в соответствующем(их) положении(ях) в УН-домене канонического, состоящего из 4 цепей человеческого антитела. Гуманизированный VΗΗ-домен может содержать одну или несколько полностью человеческих последовательностей каркасных участков и в еще более конкретном варианте осуществления изобретения может содержать последовательности человеческих каркасных участков, выведенные из ПР-29, ПР47, ПР-51 или их фрагментов необязательно в сочетании с ΐΗ-последовательностями, такими как ΙΗ5.
е2) Доменные антитела, которые обозначают также как ЭаЬ или ДАЬ (понятия доменные антитела и ДАЬ являются товарным знаком группы компаний С1ахо8тДЬК1ше), описаны, например, у \УагД Ε.8. и др. в: ВтДтд асДуйек о£ а гереДойе о£ кшд1е иптипоДоЬиПп уапаЫе Дотатк кесге!еД £гот ЕксДеДсЫа соН, №Циге 341, 1989, сс. 544-546; у Но11 Ь.Г и др. в: Поташ аиНЬоФек: рго1етк £ог Легару, ΤΗΚ\Ι)8 ίη Вю1есЬио1оду 21(11), 2003, сс. 484-490 и в \\'0 2003/002609.
Доменные антитела в основном соответствуют \Н- или V^-доменам антител из представителей млекопитающих, не относящихся к верблюдовым, в частности человеческих состоящих из 4 цепей антител. Для придания способности связываться с эпитопом в виде единичного антигенсвязывающего домена, т.е. без спаривания с УЪ- или \Н-доменом соответственно, требуется осуществлять специфическую селекцию в отношении указанных антигенсвязывающих свойств, например, с использованием библиотек человеческих последовательностей единичных \Н- или V^-доменов. Доменные антитела подобно ΥΚΗ имеют молекулярную массу, составляющую от примерно 13 до примерно 16 кДа, если их выводят из полностью человеческих последовательностей, и они не нуждаются в гуманизации, например, для терапевтического применения на людях. Также как и в случае VΗΗ-доменов, их можно с успехом экспрессировать также в прокариотических системах экспрессии, что приводит к существенному снижению общей стоимости производства.
Доменные антитела, а также VΗΗ-домены, можно подвергать процессу созревания аффинности путем интродукции одного или нескольких изменений в аминокислотную последовательность одного или нескольких СПК, указанные изменения приводят к повышенной аффинности образовавшегося иммуноглобулинового единичного вариабельного домена к соответствующему антигену по сравнению с соответствующей родительской молекулой. Молекулы иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов с созревшей аффинностью, предлагаемые в изобретении, можно получать методами, известными в данной области, например, описанными у Магкк и др., Вю1есЬио1оду 10, 1992, сс. 779-783 или у ВагЬак и др., Ргос. №ιΙ. АсаД. δοί, И8А 91, 1994, сс. 3809-3813.; 8Ыег и др., Сеие 169, 1995, сс. 147-155; Υе1ΐоη и др., Iттиηо1. 155, 1995, сс. 1994-2004; Дасккои и др., I. Iттиио1. 154(7), 1995, сс. 3310-3319 и у На\\ки15 и др., I. МоГ Вю1. 226(3), 1992, сс. 889-896; у К.8. ДоЬикои и К.Е. На\\кД15 в: АГДШу тайгаДои о£ аиДЬоЛек икшд рДаде Д|5р1ау, изд-во 0хТогД ийуегкйу Ргекк, 1996.
е3) Кроме того, что также должно быть очевидно специалисту в данной области, можно трансплантировать один или несколько указанных выше СПК в другие каркасы, включая (но, не ограничиваясь только ими) человеческие каркасы или неиммуноглобулиновые каркасы. Приемлемые каркасы и методики такой трансплантации СПК известны в данной области.
ж) Понятия эпитоп и антигенная детерминанта, которые можно применять взаимозаменяемо, относятся к участку макромолекулы, такой как полипептид, который распознается антигенсвязывающими молекулами, такими как канонические антитела или полипептиды, предлагаемые в изобретении, и более конкретно антигенсвязывающими центрами указанных молекул. Эпитопы представляют собой минимальный сайт связывания для иммуноглобулина и поэтому представляют собой специфическую мишень для иммуноглобулина.
Часть антигенсвязывающей молекулы (такой как каноническое антитело или полипептид, предлагаемый в изобретении), которая распознает эпитоп, называют паратопом.
з) Понятие бипараптопная (антиген)связывающая молекула или бипаратопный полипептид в контексте настоящего описания означает полипептид, который содержит первый иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен и второй иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, как они определены в настоящем описании, при этом два указанных вариабельных домена обладают способностью связываться с двумя различными эпитопами одного антигена, при этом указанные эпитопы в норме не связываются одновременно одним моноспецифическим иммуноглобулином, таким, например, как каноническое антитело или один иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен. Бипараптопные полипептиды могут состоять из вариабельных доменов, которые обладают различными эпитопными специфичностями, и не содержат общие пары комплементарных вариабельных доменов, которые связываются с одним и тем же эпитопом. Следовательно, два вариабельных домена не конкурируют друг с другом за связывание с мишенью.
и) Считается, что полипептид (такой как иммуноглобулин, антитело, иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, полипептид, предлагаемый в изобретении, или в целом антигенсвязывающая молекула или ее фрагмент), который может связываться с или специфически связываться с, обладает аффинностью к и/или специфичностью к определенному эпитопу, антигену или белку (или по меньшей мере одному его участку, фрагменту или эпитопу), действует против или является направ- 15 028183 ленным против указанного эпитопа, антигена или белка, или является связывающей молекулой в отношении указанного эпитопа, антигена или белка или, как говорят, является анти-эпитопным, антиантигенным или анти-белковым (например, анти-СХ3СК1).
к) Как правило, понятие специфичность относится к ряду антигенов или эпитопов различных типов, с которыми конкретная антигенсвязывающая молекула или антигенсвязывающий белок (такой как иммуноглобулин, антитело, иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен или полипептид, предлагаемый в изобретении) может связываться. Специфичность антигенсвязывающего белка можно определять на основе его аффинности и/или авидности. Аффинность, характеризующаяся константной равновесия реакции диссоциации комплекса антиген: антигенсвязывающий белок (ΚΌ), является мерой силы связывания между эпитопом и антигенсвязывающим центром антигенсвязывающего белка: чем меньше величина ΚΌ, тем выше сила связывания между эпитопом и антигенсвязывающей молекулой (альтернативно этому, аффинность можно выражать в виде константы аффиннности (ΚΑ), которая представляет собой 1/ΚΌ). Как должно быть очевидно специалисту в данной области (например, после ознакомления с представленным ниже описанием), аффинность можно определять хорошо известным методом в зависимости от специфичности представляющего интерес антигена. Авидность представляет собой меру силы связывания между антигенсвязывающей молекулой (такой как иммуноглобулин, антитело, иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен или полипептид, предлагаемый в изобретении) и соответствующего антигена. Авидность связана как с аффинностью между эпитопом и его антигенсвязывающим центром антигенсвязывающей молекулы, так и с количеством соответствующих сайтов связывания, которые присутствует в антигенсвязывающей молекуле.
л) Аминокислотные остатки обозначают согласно стандартному трехбуквенному или однобуквенному коду аминокислот, что хорошо известно и является общепризнанным в данной области. При сравнении двух аминокислотных последовательностей понятие аминокислотное различие (различие в аминокислотах) относится к инсерциям, делециям или заменам указанного количества аминокислотных остатков в определенном положении референс-последовательности по сравнению со второй последовательностью. В случае замен(ы) указанные(ая) замены(а) предпочтительно должны(а) представлять собой консервативные(ую) аминокислотные(ную) замены(у), это означает, что аминокислотный остаток заменяют на другой аминокислотный остаток сходного химического строения, который оказывает незначительное влияние или практически не оказывает влияния на функцию, активность или другие биологические свойства полипептида. Указанные консервативные аминокислотные замены хорошо известны в данной области, например, они описаны в \У0 98/49185, при этом консервативные аминокислотные замены предпочтительно представляют собой замены, при которых одну из аминокислот из следующих групп (1)-(У) заменяют на другой аминокислотный остаток, входящий в эту же группу: (I) небольшие алифатические неполярные или имеющие невысокую полярность остатки: А1а, Зег, ТЬг, Рго и С1у; (II) полярные отрицательно заряженные остатки и их (незаряженные) амиды: Акр, Аки, С1и и С1и; (III) полярные положительно заряженные остатки: Н15, Агд и Ьук; (IV) крупные алифатические неполярные остатки: Ме1, Ьеи, Не, Уа1 и Сук; и (V) ароматические остатки: РЬе, Туг и Тгр. Наиболее предпочтительными являются следующие аминокислотные замены:
- 16 028183
А1а на О1у или на Зег;
Агд на Ьуз;
Азп на О1п или на Шз;
Азр на О1и;
Суз на Зег;
О1п на Азп;
О1и на Азр;
О1у на А1а или на Рго;
Шз на Азп или на О1п;
Не на Ьеи или на Уа1;
Ьеи на Не или на Уа1;
Ьуз на Агд, на О1п или на О1и;
Ме1 на Ьеи, на Туг или на Не;
РЬе на Ме1, на Ьеи или на Туг;
Зег на ТЬг;
ТЬг на Зег;
Тгр на Туг;
Туг на Тгр или на РЬе;
Уа1 на Не или на Ьеи.
м) Молекула нуклеиновой кислоты или пептида рассматривается как практически выделенная (находится в практически выделенной форме), например, из ее нативного биологического источника и/или реакционный среды или среды для культивирования, из которой ее получают, когда она отделена по меньшей мере от одного компонента, с которым она обычно ассоциирована в указанном источнике или указанной среде, такого как другая нуклеиновая кислота, другой белок/полипептид, другой биологический компонент или макромолекула или по меньшей мере один загрязнитель, примесь или минорный компонент. В частности, молекула нуклеиновой кислоты или полипептида рассматривается как практически выделенная, когда степень ее чистоты повышена по меньшей мере в 2 раза, в частности по меньшей мере в 10 раз, более предпочтительно по меньшей мере в 100 раз и вплоть до 1000 раз или более. Молекула нуклеиновой кислоты или полипептида, которая находится в практически выделенной форме, предпочтительно является практически гомогенной, что определяют с помощью приемлемого метода, такого как приемлемый хроматографический анализ, электрофорез в полиакриламидном геле.
н) Идентичность последовательностей, например, двух последовательностей иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, означает процент аминокислот, идентичных для двух указанных последовательностей. Его можно рассчитывать или определять согласно методу, изложенному в разделе ί) на с. 49 и с. 50 \Ь0 2008/020079. Сходство последовательностей означает процент аминокислот, которые либо идентичны, либо представляют собой консервативные аминокислотные замены.
Специфичность в отношении мишени
Полипептиды, предлагаемые в изобретении, обладают специфичностью в отношении человеческого СХ3СК1. Так, полипептиды, предлагаемые в изобретении, предпочтительно связываются с человеческим СХ3СК1 (8ЕР ГО N0: 255). В одном из объектов изобретения полипептиды, предлагаемые в настоящем изобретении, связываются также с СХ3СК1 обезьян циномолгус (8ЕР ГО N0: 256).
Полипептиды, предлагаемые в изобретении
Изобретение относится к новым фармацевтически активным агентам, предназначенным для предупреждения, лечения, облегчения и/или диагностирования ассоциированных с СХ3СК1 заболеваний, нарушений или состояний, таких как сердечно-сосудистые заболевания. В частности, изобретение относится к полипептидам, которые связываются с человеческим СХ3СК1 и обладают способностью блокировать связывание человеческого фракталкина с человеческим СХ3СК1. В одном из объектов изобретения полипептид представляет собой иммуноглобулин, содержащий антигенсвязывающий домен, который содержит три гипервариабельных участка С1Ж1, С1Ж2 и С1Ж.3. где указанный иммуноглобулин связывается с человеческим СХ3СК1 и обладает способностью блокировать связывание человеческого фракталкина с человеческим СХ3СК1. В предпочтительном объекте изобретения полипептид содержит один или несколько анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, где указанный полипептид обладают способностью блокировать связывание человеческого фракталкина с человеческим СХ3СК1.
В одном из объектов изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, отличается
- 17 028183 одним или несколькими из следующих свойств:
связывается с высокой аффинностью с человеческим СХ3СК1, что характеризуется, например, величиной ЕС50, более низкой или равной 1 нм, более низкой или равной 5 нМ, более низкой или равной 2,5 нМ или более низкой или равной 1 нМ, по данным, полученным путем анализа клеточного связывания с помощью РАС8;
блокирует связывание человеческого фракталкина с человеческим СХ3СК1, что характеризуется, например, величиной 1С50, более низкой или равной 300 нМ, или более низкой или равной 100 нМ, или более низкой или равной 20 нМ, или более низкой или равной 10 нМ, или более низкой или равной 5нМ, или более низкой или равной 2,5 нМ или более низкой или равной 1 нМ;
ингибирует индуцированный фракталкином хемотаксис, опосредуемый человеческим СХ3СК1, что характеризуется, например, величиной 1С50, более низкой или равной 500 нМ, или более низкой или равной 100 нМ, или более низкой или равной 75 нМ, или более низкой или равной 50 нМ, или более низкой или равной 10 нМ, или более низкой или равной 5 нМ; обнаруженная эффективность ингибирования превышает или равна 15% или превышает или равна 50%, или превышает или равна 80%, или превышает или равна 95%;
ингибирует индуцированную фракталкином интернализацию, опосредуемую человеческим СХ3СК1, что характеризуется, например, величиной 1С50, более низкой или равной 10 нМ или более низкой или равной 5 нМ;
обладает перекрестной реактивностью с СХ3СК1 обезьян циномолгус (супо), при этом величина Е/1С50, характеризующая связывание и функциональное ингибирование человеческого СХ3СК1, в 10 раз превышает соответствующую величину для супоСХ3СК1.
В другом объекте изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, дополнительно содержит удлиняющий время полужизни фрагмент, например, альбуминсвязывающий фрагмент, молекулу полиэтиленгликоля или Рс-домен. В другом объекте изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит два или большее количество анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов. В одном из объектов изобретения два анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновых единичных вариабельных домена ковалентно связаны с помощью линкерного пептида. В одном из объектов изобретения два анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновых единичных вариабельных домена в полипептиде, предлагаемом в настоящем изобретении, имеют одинаковую аминокислотную последовательность. В другом объекте изобретения два анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновых единичных вариабельных домена в полипептиде, предлагаемом в настоящем изобретении, имеют различные аминокислотные последовательности. В одном из объектов изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит два анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновых единичных вариабельных домена и дополнительно содержит удлиняющий время полужизни фрагмент, например, альбуминсвязывающий фрагмент, молекулу полиэтиленгликоля или Рс-домен.
В одном из объектов изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит первый анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, ковалентно связанный с альбуминсвязывающим фрагментом с помощью первого ликерного пептида, в котором указанный альбуминсвязывающий фрагмент дополнительно ковалентно связан со вторым анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновым единичным вариабельным доменом с помощью второго линкерного пептида.
В одном из объектов изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, ковалентно связанный с Рсдоменом с помощью линкерного пептида. В одном из объектов изобретения указанный полипептид, содержащий анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, ковалентно связанный с Рс-доменом с помощью линкерного пептида, образует димер, например, посредством связывания дисульфидными мостиками.
Полипептиды, предлагаемые в настоящем изобретении, получают согласно изложенному ниже методу. В целом, единичные вариабельные домены, предлагаемые в настоящем изобретении, идентифицировали в библиотеке, экспрессирующей единичные вариабельные домены (УНН), выведенные из ламы, иммунизированной ДНК, которая кодирует человеческий СХ3СК1. Осуществляли пэннинг фаговой библиотеки на содержащих НСХ3СР1 вирусных липидных частицах и осуществляли скрининг связывания фага в отношении его способности конкурировать за связывание с рецептором с меченным с помощью красителя А1с\а-Г1ног фракталкином (ΑΡ-ΡΚΝ). Репрезентативные единичные вариабельные домены, предлагаемые в настоящем изобретении, описаны более подробно ниже.
В одном из объектов изобретения иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, предлагаемый в настоящем изобретении, практически состоит из четырех каркасных участков (РК1, РК2, РК3 и РК4) и трех гипервариабельных участков (С.НР1. С.НР2 и С.НР3). В частности, иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен имеет структуру РК1-СОК1-РК2-СНК2-РК3-СНК3-РК4. В одном из объектов изобретения иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен представляет собой домен антитела.
В одном из объектов изобретения С.НР3 полипептида, предлагаемого в настоящем изобретении, в частности, иммуноглобулинового единичного вариабельного домена, предлагаемого в настоящем изо- 18 028183 бретении, имеет аминокислотную последовательность Акр-Хаа1-Агд-Агд-О1у-Тгр-Хаа2-Хаа3-Хаа4-Хаа5, представленную в δΕΟ ГО N0: 197, в которой:
Хаа1 обозначает Рго, А1а или О1у;
Хаа2 обозначает Акр или Аки;
Хаа3 обозначает ТЬг или §ег;
Хаа4 обозначает Агд, Бук, А1а или О1у и
Хаа5 обозначает Туг или РЬе.
В одном из объектов изобретения СИК3 полипептида, предлагаемого в настоящем изобретении, в частности, иммуноглобулинового единичного вариабельного домена, предлагаемого в настоящем изобретении, имеет аминокислотную последовательность Акр-Хаа1-Агд-Агд-О1у-Тгр-Хаа2-Хаа3-Хаа4-Хаа5, представленную в δΕΟ ГО N0: 197, в которой:
Хаа1 обозначает Рго, А1а или О1у;
Хаа2 обозначает Акр или Акп;
Хаа3 обозначает ТЬг;
Хаа4 обозначает Агд или Бук; и
Хаа5 обозначает Туг.
В одном из объектов изобретения СИК3 полипептида, предлагаемого в настоящем изобретении, в частности, иммуноглобулинового единичного вариабельного домена, предлагаемого в настоящем изобретении, имеет аминокислотную последовательность Акр-Рго-Агд-Агд-О1у-Тгр-Акр-ТЬг-Агд-Туг, представленную в δΕΟ ГО N0: 186.
В другом объекте изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, в частности, иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, предлагаемый в настоящем изобретении, имеет следующие СГОКЕ СГОК2 и СГОК3:
СИК1:
а) имеет аминокислотную последовательность ОδIΡδδNАМА (δΕΟ ГО N0: 141); или
б) имеет аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична аминокислотной последовательности δΕΟ ГО N0: 141; или
в) имеет аминокислотную последовательность, которая имеет 2 или 1 аминокислотных(ое) различия(е) с аминокислотной последовательностью δΕΟ ГО N0: 141, в которой в положении 2 δ заменен на Т или О; в положении 6 δ заменен на К; в положении 7 N заменен на Т; и/или в положении 9 М заменен на Κ; или
г) имеет аминокислотную последовательность, выбранную из любой одной из δΕΟ ГО N0: 141-145 и 213;
СГОК2:
а) имеет аминокислотную последовательность 01ЖУ01ТК (δΕΟ ΙΌ N0: 164); или
б) имеет аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70% идентична аминокислотной последовательности δΕΟ ГО N0: 164; или
в) имеет аминокислотную последовательность, которая имеет 4, 3, 2 или 1 аминокислотных(ое) различия(е) с аминокислотной последовательностью δΕΟ ГО N0: 164, в которой в положении 1 О заменен на А, Б, V или δ; в положении 3 N заменен на И, δ, О- О или Т; в положении 4 δ заменен на Т, Κ, О или Р; в положении 5 V заменен на А;
в положении 6 О заменен на И; в положении 7 I заменен на Т или V; в положении 8 Т заменен на А; и/или в положении 9 Κ заменен на К; или
г) имеет аминокислотную последовательность, выбранную из любой одной из δΕΟ ГО N0: 162-175 и 214-221; и
СГОК3:
а) имеет аминокислотную последовательность ИРККОХУИТКУ (δΕΟ ΙΌ N0: 186); или
б) имеет аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70% идентична аминокислотной последовательности δΕΟ ГО N0: 186; или
в) имеет аминокислотную последовательность, которая имеет 3, 2 или 1 аминокислотных(ое) различия(е) с аминокислотной последовательностью δΕΟ ГО N0: 186, в которой в положении 2 Р заменен на А или О; в положении 7 И заменен на N и/или в положении 9 К заменен на Κ; или
г) имеет аминокислотную последовательность, выбранную из любой одной из δΕΟ ГО N0: 186-190.
В другом объекте изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, в частности,
- 19 028183 иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, предлагаемый в настоящем изобретении, имеет следующие СЭК1, С1Ж2 и СЭК3, в которых:
указанный СЭК1 имеет аминокислотную последовательность ΟΚΤΡδδΥΑΜΟ (δΕΡ ΙΌ N0: 146); указанный С1Ж2 имеет аминокислотную последовательность, которая
а) по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности ΟΙδΟδΑδΚΚΥ (δΕΡ ΙΌ N0: 176), или
б) имеет аминокислотную последовательность δΕΡ П) N0: 176 или 177; и указанный С1Ж3 имеет аминокислотную последовательность δΝδΥΡΚνρΡΏΥ (δΕΡ ΙΌ N0: 191).
В другом объекте изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, в частности, иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, предлагаемый в настоящем изобретении, имеет следующие СЭК1, С1Ж2 и С1Ж3:
указанный СЭК1:
а) имеет аминокислотную последовательность ОΤIРδNNΑΜО (δΕΡ П) N0: 147); или
б) имеет аминокислотную последовательность, которая имеет 6, 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислотных(ое) различия(е) с аминокислотной последовательностью δΕΡ П) N0: 147, в которой в положении 1 О заменен на Κ, К или А; в положении 2 Т заменен на Ι, Ρ, δ или Ь; в положении 3 Ι заменен на V или Т; в положении 4 Р заменен на Ь; в положении 5 δ заменен на К или I); в положении 6 N заменен на δ, Т или Ώ; и/или в положении 7 N заменен на Т ил Υ; или
в) имеет аминокислотную последовательность, выбранную из любой одной из δΕΡ П) N0: 147-161; указанный СЭК2:
а) имеет аминокислотную последовательность δIδNδОδΤN (δΕΡ П) N0: 179); или
б) имеет аминокислотную последовательность, которая имеет 4, 3, 2 или 1 аминокислотных(ое) различия(е) с аминокислотной последовательностью δΕ(9 П) N0: 179, в которой в положении 3 δ заменен на Т или О; в положении 4 N заменен на δ или Ι; в положении 5 δ заменен на Т; в положении 6 О заменен на Υ; и/или в положении 8 Т заменен на А; или
в) имеет аминокислотную последовательность, выбранную из любой одной из δΕΡ П) N0: 178-185; указанный С1Ж3:
а) имеет аминокислотную последовательность ОАККСЛААТЛУ (δΕΡ П) N0: 192); или
б) имеет аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична аминокислотной последовательности δΕ(9 П) N0: 192; или
в) имеет аминокислотную последовательность, которая имеет 2 или 1 аминокислотных(ое) различия(е) с аминокислотной последовательностью δΕΡ П) N0: 192, в которой в положении 2 А заменен на О; в положении 8 Т заменен на δ; в положении 9 А заменен на О; и/или в положении 10 Υ заменен на Р; или
г) имеет аминокислотную последовательность, выбранную из любой одной ИЗ δΕΡ П) N0: 192-196. В другом объекте изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, в частности, иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, предлагаемый в настоящем изобретении, имеет следующие СЭК1, С1Ж2 и С1Ж3:
8Е<3 ГО N0: 141, 162 и 186 соответственно; или 8Е<3 ГО N0: 141, 163 и 187 соответственно; или
- 20 028183
ЗЕО ГО ΝΟ: 141, 164 и 186 соответственно; или ЗЕО ГО N0: 141, 166 и 186 соответственно; или ЗЕО ГО N0: 141, 167 и 186 соответственно; или ЗЕО ГО N0: 141, 167 и 189 соответственно; или ЗЕО ГО N0: 141, 168 и 186 соответственно; или ЗЕО ГО N0: 141, 168 и 187 соответственно; или ЗЕО ГО N0: 141, 169 и 190 соответственно; или 8Е0 ГО N0: 141, 170 и 186 соответственно; или ЗЕО ГО N0: 141, 171 и 186 соответственно; или ЗЕО ГО N0: 141, 174 и 186 соответственно; или ЗЕО ГО N0: 141, 175 и 187 соответственно; или ЗЕО ГО N0: 142, 165 и 188 соответственно; или ЗЕО ГО N0: 142, 173 и 188 соответственно; или ЗЕО ГО N0: 143, 164 и 186 соответственно; или ЗЕО ГО N0: 144, 172 и 187 соответственно; или ЗЕО ГО N0: 145, 172 и 187 соответственно; или ЗЕО ГО N0: 141, 214 и 186 соответственно; или ЗЕО ГО N0: 141, 215 и 186 соответственно; или ЗЕО ГО N0: 141,216и186 соответственно; или ЗЕО ГО N0: 141, 217 и 186 соответственно; или ЗЕО ГО N0: 141, 218 и 186 соответственно; или ЗЕО ГО N0: 141, 219 и 186 соответственно; или ЗЕО ГО N0: 141, 220 и 186 соответственно; или ЗЕО ГО N0: 213, 221 и 186 соответственно; или ЗЕО ГО N0: 213, 214 и 186 соответственно.
В другом объекте изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, в частности, иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, предлагаемый в настоящем изобретении, имеет следующие СЭК1, С1Ж2 и С1Ж3:
ЗЕО ГО N0: 146, 176 и 191 соответственно; или ЗЕО ГО N0: 146, 177 и 191 соответственно.
В другом объекте изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, в частности, иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, предлагаемый в настоящем изобретении, имеет следующие СЭК1, С1Ж2 и С1Ж3:
- 21 028183
ЗЕ(^ ГО N0; 147, 178 и 192 соответственно; или ЗЕ(^ ГО ΝΟ: 147, 179 и 192 соответственно; или $Е(} ГО N0: 147, 179 и 194 соответственно; или ЗЕ(^) ГО N0: 148, 179 и 193 соответственно; или ЗЕ() ГО N0: 149, 179 и 192 соответственно; или 5Е(} ГО ΝΟ; 149, 180 и 192 соответственно; или ЗЕ() ГО N0: 149, 181 и 192 соответственно; или 5Е(3 ГО N0: 149, 183 и 192 соответственно; или 8Е(} ГО N0: 149, 185 и 192 соответственно; или ЗЕ() ГО ΝΟ: 150, 179 и 194 соответственно; или ЗЕ<3 ГО N0: 150, 182 и 194 соответственно; или ЗЕ(^ ГО N0: 151, 179 и 193 соответственно; или ЗЕ<) ГО N0: 151, 182 и 194 соответственно; или ЗЕ() ГО ΝΟ: 151, 184 и 196 соответственно; или 3Εζ) ГО N0: 152, 179 и 195 соответственно; или 8Е() ГО N0; 153, 179 и 194 соответственно; или ЗЕ(2 ГО N0: 154, 182 и 194 соответственно; или ЗЕ(2 ГО ΝΟ: 155, 179 и 195 соответственно; или 8Е<3 ГО ΝΟ: 156, 181 и 192 соответственно; или 8Е(2 ГО N0: 157, 179 и 194 соответственно; или ЗЕ(2 ГО N0: 158, 179 и 192 соответственно; или ЗЕ(2 ГО ΝΟ: 159, 178 и 192 соответственно; или ЗЕ(2 ГО N0: 160, 179 и 194 соответственно; или 8Е0 ГО N0: 161, 179 и 194 соответственно.
В другом объекте изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, в частности, иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, предлагаемый в настоящем изобретении, имеет 0ΌΚ1, С1Ж2 и 0ΌΚ3, представленные в
8Е(3 ГО ΝΟ: 141, 164 и 186; или ЗЕ(} ГО N0: 141, 162 и 186.
В другом объекте изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, в частности, иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, предлагаемый в настоящем изобретении, имеет 0ΌΚ1, С1Ж2 и 0ΌΚ3, представленные в
8Е(3 ГО ΝΟ: 213, 214 и 186; или ЗЕ(3 ГО N0: 213, 221 и 186; или ЗЕ(2 ГО N0: 141, 162 и 186.
Репрезентативные полипептиды, предлагаемые в настоящем изобретении, которые имеют СЭИ, указанные выше, представлены в табл. 1, 2, 3 (репрезентативные полипептиды из семейств 101, 9 и 13 соответственно) и в табл. 4 (репрезентативные полипептиды оптимизированных вариантов из семейства 101).
- 22 028183
Таблица 1. Семейство 101
Нанотело 8Е(3 СОК1* δΕ<3 ΟϋΚΙ 0ϋΚ2* δΕ(5 ΟϋΚ2 ΟϋΚ3* δΕΟ СОКЗ
СХЗСК1ВН РМР66В02 1 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΑΙΝδνονΤ К 162 ϋΡΚΚΟΧνϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВП РМР54А12 2 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 νίΝδνΟΙΤ К 163 ϋΑΚΚΟΑνϋ ΤΚΥ 187
СХЗСК1ВП РМР54АЗ 3 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΟΙΝδνΟΙΤ К 164 ϋρκκοχνο ΤΚΥ 186
СХЗСКЛВИ РМР54А4 4 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΟΙΝδνΟΙΤ К 164 ΟΡΚΚΟν/ϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВП РМР54А5 5 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΟΙΝδνΟΙΤ К 164 ΟΡΚΚΟΧνϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВП РМР54А7 6 ΟΤΙΡδδΝΑ МА 142 ΟΙΝδνϋΙΤ К 165 ΩΡΚΚΟν/Ν ΤΚΥ 188
СХЗСК1ВИ РМР54В1 7 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΟΙΝδνΟΙΤ К 164 ϋΡΚΚΟλνϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВИ РМР54В2 8 ΟΤΙΡδδΝΑ МА 142 ΟΙΝδνϋΙΤ К 165 ΩΡΚΚΟν/Ν ΤΚΥ 188
СХЗСК1ВИ РМР54ВЗ 9 ΟδΙΡδδΝΑΜΑ 141 ΑΙΝδνΟΙΤ К 166 ΟΡΚΚΟΨΟ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВИ РМР54В5 10 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΟΙΝδνΟΙΤ К 164 ϋΡΚΚΟ\νϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВН ΡΜΡ54Ώ5 11 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΜΝδνΟΙΤ К 167 ϋΟΚΚΟ\νϋ ΤΚΥ 189
СХЗСК1ВП РМР54О8 12 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΟΙΝδνΟΙΤ К 164 ϋΡΚΚΟ\νθ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВП РМР54Р6 13 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΑΙΝδνΟΙΤ К 166 ϋΡΚΚΟ\νϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВП РМР54ОЗ 14 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΜΝδνοιτ К 167 ϋΡΚΚΟλνϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВП РМР54Н1 15 ΟΤΙΡδδΝΑ МА 142 ΟΙΝδνϋΙΤ К 165 ϋΡΚΚΟλνΝ ΤΚΥ 188
СХЗСК1ВП РМР54Н4 16 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 νίΝδνΟΙΤ К 163 ϋΑΚΚΟλνϋ ΤΚΥ 187
СХЗСК1ВН РМР61Р10 17 ΟΤΙΡδδΝΑ МА 142 ΟΙΝδνϋΙΤ К 165 ΏΡΚΚΟΨΝ ΤΚΥ 188
СХЗСК1ВП РМР6Ю1 18 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΠΝδνΟΙΤ К 167 ϋΡΚΚΟΨϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВН РМР6Ю5 19 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΜΝδνΟΙΤ К 167 ϋΡΚΚΟΨϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВП РМР61Е2 20 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΟΙΝδνΟΙΤ К 164 ϋΡΚΚΟν/ϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВП РМР61Р11 21 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΑΙΝδνΟΙΤ К 166 ϋΡΚΚΟΨϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВП РМР61О2 22 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ίΙΝδνΟΙΤ К 167 ϋΡΚΚΟ\νϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВП РМР61С.З 23 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΑΙΝδνΟΙΤ К 166 ϋΡΚΚΟ\νϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВП РМР61О4 24 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΑΙΝδνΟΙΤ К 166 ϋρκκοχνο ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВП РМР61Р4 25 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 νΐΝΤνΟΙΤ К 168 ϋΑΚΚΟ\νϋ ΤΚΥ 187
СХЗСК1ВИ РМР61А11 26 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 νίΝδνΟΙΤ К 163 ϋΑΚΚΟλνΟ ΤΚΥ 187
СХЗСК1ВП РМР61В2 27 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 νΐΝΤνΟΙΤ К 168 ϋΑΚΚΟΧνϋ ΤΚΥ 187
СХЗСК1ВП РМР61С9 28 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 υοδΑΟΐτ к 169 ϋΑΚΚΟ\νΝ ΤΚΥ 190
СХЗСК1ВН РМР65Н02 29 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΑΙΝδνΟΙΤ к 166 ϋΡΚΚΟΧνϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВН РМР65Е11 30 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΟΙΝδνΟΙΑ К 170 ϋΡΚΚΟΨϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВН РМР65Е10 31 ΟδΙΡδδΝΑ КА 143 ΟΙΝδνΟΙΤ К 164 ϋΡΚΚΟλνϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВИ РМР65Е05 32 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΟΙΝδνΟΙΤ К 164 ϋΡΚΚΟΨϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВП РМР65В11 33 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 νίΝΚνΟΙΤ К 171 ϋΡΚΚΟΧνϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВН РМР65В07 34 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΑΙΝδνΟΙΤ К 166 ϋΡΚΚΟ\νϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВН РМР65В09 35 ΟδΙΡδΚΝΑ МА 144 δΙΝδνΟΙΤ К 172 ϋΑΚΚΟΧνϋ ΤΚΥ 187
СХЗСК1ВП РМР65Н01 36 ΟΟΙΡδΚΝΑ МА 145 δΙΝδνΟΙΤ к 172 ϋΑΚΚΟλνϋ ΤΚΥ 187
СХЗСК1ВИ РМР65О07 37 ΟΤΙΡδδΝΑ МА 142 ΟΙΝδνϋΙΤ к 173 ϋΡΚΚΟΨΝ ΤΚΥ 188
СХЗСК1ВП РМР66Н08 38 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΜΝδνΟΙΤ К 167 ϋΡΚΚΟ\νϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВИ РМР66Н04 39 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΑΙΝδνΟΙΤ К 166 ΟΡΚΚΟν/ϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВН РМР66Р02 40 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ίΙΝδνΟΙΤ К 167 ϋΡΚΚΟΨϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВН РМР66Е11 41 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΑΙΝδνΟΤΤ К 174 ΟΡΚΚΟλνϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВН РМР66Ш0 42 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΜΝδνΟΙΤ К 167 ϋΡΚΚΟΨΟ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВН ΡΜΡ66Ώ08 43 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΟΙΝδνΟΙΤ К 164 ϋΡΚΚΟλνϋ ΤΚΥ 186
- 23 028183
СХЗСК1ВП РМР66А04 44 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΜΝδνΟΙΤ К 167 ΒΡΚΚΟΥνΒ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВП РМР66В04 45 ΟΤΙΡδδΝΑ МА 142 ΟΙΝδνϋΙΤ К 165 ΒΡΚΚΟΥνΝ ΤΚΥ 188
СХЗСК1ВП РМР66В02 46 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 νίΝδνΟΙΤ К 163 ΒΑΚΚΟΥνΒ ΤΚΥ 187
СХЗСК1ВИ РМР66В06 47 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 δΐϋδνοιτ К 175 ΒΑΚΚΟΥνΒ ΤΚΥ 187
СХЗСК1ВП РМР66О01 48 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΜΝδνΟΙΤ К 167 ΒΟΚΚΟΥνΒ ΤΚΥ 189
*СВК-последовательности определяли согласно АнйЪобу Епщпееппд, т. 2 под ред. Копе1егшапп и ВиЪе1, изд-во Зрппдег Уег1ад Не1Йе1Ъег§ ВегНп. 2010. Номера последовательностей в таблице (ЗЕр) соответствуют номерам последовательностей в перечне последовательностей, прилагаемом к настоящей заявке.
Таблица 2. Семейство 9
Нанотело δΕ(} СВК1* δΕ(} СВК1 СВК2* 8ΕΟ СВК2 СБКЗ* δΕζ) СВКЗ
СХЗСК1ВП ΡΜΡ11Η11 49 ΟΚΤΡδδΥΑ ΜΟ 146 ΟΙδΟδΑδΚ ΚΥ 176 δΝδΥΡΚνζ) ΡΒΥ 191
СХЗСК1ВП ΡΜΡ12Β6 50 ΟΚΤΡδδΥΑ ΜΟ 146 ΟΙδΟδΑδΚ ΚΥ 176 δΝδΥΡΚνζ) ΡΒΥ 191
СХЗСК1ВП ΡΜΡ12Ο9 51 ΟΚΤΡδδΥΑ ΜΟ 146 ΟΙδΟδΟδΚ ΚΥ 177 δΝδΥΡΚνΐ) ΡΒΥ 191
СХЗСК1ВН ΡΜΡ15Ο11 52 ΟΚΤΡδδΥΑ ΜΟ 146 ΟΙδΟδΟδΚ ΚΥ 177 δΝδΥΡΚνΟ ΡΒΥ 191
*СВК-последовательности определяли согласно АпНЪобу Епщпееппд, т. 2, под ред. Копе!егшапп и ВйЪе1, изд-во Зрппдег Уег1ад Не1бе1Ъег§ ВегНп, 2010. Номера последовательностей в таблице (ЗЕр) соответствуют номерам последовательностей в перечне последовательностей, прилагаемом к настоящей заявке.
Таблица 3. Семейство 13
Нанотело δΕΟ СВК1* δΕ(5 СВК1 СВК2* 8ЕЦ СБК2 СВКЗ* δΕ() СВКЗ
СХЗСК1ВП ΡΜΡ18Ε6 53 ΟΤΙΡδΝΝΑ ΜΟ 147 δΙδδδΟδΤΝ 178 ΒΑΚΚΟΥΥΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВП РМР12С2 54 ΟΤΙΡδΝΤΑ ΜΟ 148 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ΒΑΚΚΟΥνΝ δΟΥ 193
СХЗСК1ВП ΡΜΡ18Α10 55 ΟΙΙΡδΝΝΑ ΜΟ 149 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ΒΑΚΚΟΥνΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВП ΡΜΡ18Α2 56 ΟΙΙΡδΝΝΑ ΜΟ 149 δΙΟδΤΥδΤ Ν 180 ΒΑΚΚΟΥνΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВИ ΡΜΡ18Α8 57 ΚΤΙΡΚδΝΑ ΜΟ 150 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ΒΑΚΚΟΥνΝ ΤΟΥ 194
- 24 028183
схзсклвп РМР18А9 58 ΟΙΙΡδΝΝΑ МО 149 δΙδδΤΥδΤΝ 181 ϋΑΚΚΟΨΝ ΤΑΥ 192
СХЗСКЛВП РМР18В7 59 ΟΤΙΡΚδΝΑ МС 151 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ϋΑΚΚΟΨΝ δΟΥ 193
СХЗСК1ВИ РМР18В9 60 ΟΤΙΡδΝΝΑ МО 147 δΙδδδΟδΤΝ 178 ϋΑΚΚΟΨΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВП РМР18С6 61 ΟΤΙΡδΝΝΑ МО 147 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ϋΑΚΚΟΧΥΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВИ РМР18С9 62 ΟΙΙΡδΝΝΑ МО 149 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ϋΑΚΚΟΨΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВП ΡΜΡΙδϋΙ 63 ΟΙΙΡδΝΝΑ МО 149 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ΩΑΚΚΟ\νΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВП ΡΜΡίδϋΙΟ 64 ΟΤΙΡδΝΝΑ МО 147 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ϋΑΚΚΟΨΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВП ΡΜΡ18ϋ12 65 ΟΤΙΡδΝΝΑ МО 147 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ϋΑΚΚΟΨΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВН ΡΜΡ18Ρ1 66 ΟΤΙΡδΝΝΑ МО 147 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ΏΑΚΚΟΧΥΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВП ΡΜΡ18Ρ5 67 ΟΤΙΡδΝΝΑ МО 147 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ϋΑΚΚΟΨΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВП ΡΜΡ18Ρ6 68 ΟΤΙΡδΝΝΑ МО 147 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ϋΑΚΚΟΨΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВП ΡΜΡ18Ρ9 69 ΟΤΙΡΚΤΝΑ МО 152 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ΟΟΚΚΟΨΝ ΤΟΥ 195
СХЗСК1ВИ ΡΜΡ18Ο5 70 ΚΤΙΡΚδΝΑ МО 150 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ϋΑΚΚΟΨΝ ΤΟΥ 194
СХЗСК1ВП ΡΜΡ18Η1 71 ΟΤΙΡδΝΝΑ МО 147 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ϋΑΚΚΟν/Ν ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВП ΡΜΡ18ΡΠ0 72 ΚΤΙΡΚδΝΑ МО 153 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ϋΑΚΚΟΨΝ ΤΟΥ 194
СХЗСК1ВП ΡΜΡ18Η7 73 ΟΙΙΡδΝΝΑ МО 149 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ϋΑΚΚΟΨΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВП ΡΜΡ18Η9 74 ΟΤΙΡδΝΝΑ МС 147 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ϋΑΚΚΟΨΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВН ΡΜΡ20Β3 75 ΟΙΙΡδΝΝΑ МО 149 δΙΟδΤΥδΤ Ν 180 ΏΑΚΚΟΧνΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВП РМР20С12 76 ΟΤΙΡΚδΝΑ МО 151 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ϋΑΚΚΟΨΝ δΟΥ 193
СХЗСК1ВП РМР20СЗ 77 ΟΙΙΡδΝΝΑ МО 149 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ϋΑΚΚΟν/Ν ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВП РМР20С6 78 ΟΤΙΡδΝΝΑ МО 147 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ϋΑΚΚΟΨΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВИ ΡΜΡ20Ώ8 79 ΟΤΤΡΚδΝΑ МО 154 δΙΤΝδΟδΤ Ν 182 ϋΑΚΚΟν/Ν ΤΟΥ 194
СХЗСК1ВИ ΡΜΡ20Ε11 80 ΚΤΙΡΚδΝΑ МО 150 δΙΤΝδΟδΤ Ν 182 ϋΑΚΚΟΧνΝ ΤΟΥ 194
СХЗСК1ВН ΡΜΡ20Ε5 81 ΟΤΙΡδΝΝΑ МО 147 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ΩΑΚΚΟΨΝ ΤΟΥ 194
СХЗСК1ВП ΡΜΡ20Ρ3 82 ΟΤΙΡδΝΝΑ МО 147 δΙδδδΟδΤΝ 178 ϋΑΚΚΟ\νΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВП ΡΜΡ20Ρ4 83 ΑΤΙΡΚδΝΑ МО 155 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ϋΟΚΚΟΨΝ ΤΟΥ 195
СХЗСК1ВН ΡΜΡ20Ρ5 84 ΑΤΙΡΚδΝΑ МО 155 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ϋΟΚΚΟΨΝ ΤΟΥ 195
- 25 028183
СХЗСК1ВП РМР21В6 85 ΟΤΙΡδΝΝΑ МО 147 8Ι3Ν3Ο3Τ N 179 βΑΚΚΟΧΥΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВП РМР24А12 86 ΟΙΙΡδΝΝΑ МО 149 8Ι8Ν8Ο3Α N 183 ϋΑΚΚΟΨΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВП РМР24А6 87 ΟΤΙΡδΝΝΑ МО 147 δΙδΝδΟδΤ N 179 ϋΑΚΚΟΨΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВИ РМР24В9 88 ΟΤΙΡΚ3ΝΑ МО 151 3Ι3Ι3Ο3ΤΝ 184 ΟΑΚΚΟΨΝ ΤΟΡ 196
СХЗСК1ВП РМР24ОЗ 89 ΟΙΙΡδΝΝΑ МО 149 δΙδδΤΥδΤΝ 181 ϋΑΚΚΟΨΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВП РМР24Р7 90 ΟίΙΡδΝΝΑ МО 156 δΙδδΤΥδΤΝ 181 ϋΑΚΚΟΨΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВИ РМР28В4 91 ΑΤΙΡΚδΝΑ МО 155 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ϋΟΚΚΟν/Ν ΤΟΥ 195
СХЗСК1ВП РМР28Р1 92 ΟΙΙΡδΝΝΑ МО 149 δΙΟδΤΥδΤ Ν 180 ϋΑΚΚΟΨΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВП РМР28Р6 93 ΟΙΙΡδΝΝΑ МО 149 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ΩΑΚΚΟν/Ν ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВП РМР28Р9 94 ΟΤΙΡδΝΝΑ МО 147 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ϋΑΚΚΟΨΝ ΤΟΥ 194
СХЗСК1ВИ РМР29А5 95 ΟΤΙΡδΝΝΑ МО 147 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ϋΑΚΚΟΧΥΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВП РМР29О5 96 ΟΤΙΡΚ3ΝΑ МО 151 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ϋΑΚΚΟΨΝ δΟΥ 193
СХЗСК1ВП РМР29ЕЗ 97 ΚΤΙΡΚδΝΑ МО 153 3Ι3Ν3Ο3Τ Ν 179 ϋΑΚΚΟΨΝ ΤΟΥ 194
СХЗСК1ВИ РМР29Е7 98 ΚΤΙΡΚ3ΝΑ МО 153 3Ι3Ν8Ο8Τ Ν 179 ϋΑΚΚΟΧΥΝ ΤΟΥ 194
СХЗСК1ВП РМР29ОЮ 99 ΟΤΙΡΚ3ΝΑ МО 151 δΙΤΝδΟδΤ Ν 182 ϋΑΚΚΟΧΥΝ ΤΟΥ 194
СХЗСК1ВН РМР29О7 100 ΟΙΙΡδΝΝΑ МО 149 δΙΤΝΤΟδΤ Ν 185 ϋΑΚΚΟλΥΝ ΤΑΥ 192
СХЗСКЛВИ РМР29Н1 101 ΟΤΙΡδΝΝΑ МО 147 3Ι8Ν3Ο3Τ Ν 179 ϋΑΚΚΟΧΥΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВИ РМР37А8 102 ΚΤΙΡΚ3ΝΑ МО 150 3Ι3Ν3Ο3Τ Ν 179 ϋΑΚΚΟΧνΝ ΤΟΥ 194
СХЗСК1ВИ РМР37В9 103 ΟΤΙΡδΝΝΑ МО 147 3Ι3Ν8Ο3Τ Ν 179 ΩΑΚΚΟΎΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВП РМР37С12 104 Ο8ΙΡΚ3ΝΑ МО 157 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ϋΑΚΚΟΧΥΝ ΤΟΥ 194
СХЗСК1ВП РМР37С7 105 ΚΤΙΡ3ΝΝΑ МО 158 3Ι3Ν3Ο3Τ Ν 179 ϋΑΚΚΟΧΥΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВИ ΡΜΡ37Ώ9 106 ΟΤνΡδΝΝ АМО 159 δΙδδδΟδΤΝ 178 ϋΑΚΚΟΨΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВИ РМР37Е12 107 ΚΡΙΡΚ3ΝΑ МО 160 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ϋΑΚΚΟΧΥΝ ΤΟΥ 194
СХЗСК1ВН РМР41В10 108 ΟΤΙΡδΝΝΑ МО 147 3Ι8Ν3Ο3Τ Ν 179 ϋΑΚΚΟΧΥΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВИ РМР41В11 109 ΟΤΙΡδΝΝΑ МО 147 8Ι8Ν8Ο3Τ Ν 179 ϋΑΚΚΟΧΥΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВН РМР41В8 110 ΟΙΙΡδΝΝΑ МО 149 δΙΟδΤΥδΤ Ν 180 ϋΑΚΚΟΨΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВН РМР41С10 111 ΚΤΙΡΚ3ΝΑ МО 150 3Ι3Ν3Ο3Τ Ν 179 ϋΑΚΚΟν/Ν ΤΟΥ 194
СХЗСК1ВП РМР41Р9 112 ΟΙΙΡδΝΝΑ МО 149 δΙΟδΤΥδΤ Ν 180 ϋΑΚΚΟΧΥΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВП РМР41Н10 113 ОЬТЬООУ АМО 161 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ϋΑΚΚΟΧΥΝ ΤΟΥ 194
СХЗСК1ВП РМР46В5 114 ΚΤΙΡΚ3ΝΑ МО 150 8Ι3Ν3Ο3Τ Ν 179 ϋΑΚΚΟΨΝ ΤΟΥ 194
СХЗСК1ВП РМР46ОЗ 115 ΟΤΙΡδΝΝΑ МО 147 8Ι3Ν3Ο3Τ Ν 179 ϋΑΚΚΟλΥΝ ΤΟΥ 194
СХЗСК1ВИ РМР46Н5 116 ΟΙΙΡδΝΝΑ МО 149 δΙδδΤΥδΤΝ 181 ϋΑΚΚΟΨΝ ΤΑΥ 192
СХЗСК1ВИ РМР48В8 117 ΚΤΙΡΚδΝΑ МО 153 3Ι3Ν3Ο3Τ Ν 179 ϋΑΚΚΟΨΝ ΤΟΥ 194
СХЗСК1ВН РМР48О11 118 ΚΤΙΡΚδΝΑ МО 150 3Ι3Ν3Ο3Τ Ν 179 ϋΑΚΚΟΨΝ ΤΟΥ 194
СХЗСК1ВИ РМР48С8 119 ΚΤΙΡΚδΝΑ МО 150 3Ι3Ν3Ο3Τ Ν 179 ϋΑΚΚΟΨΝ ΤΟΥ 194
СХЗСК1ВН РМР48Н9 120 ΟΤΙΡδΝΝΑ МО 147 δΙδΝδΟδΤ Ν 179 ϋΑΚΚΟΨΝ ΤΑΥ 192
*СБК-последовательности определяли согласно «АпйЪоду Епдтееппд», т. 2, под ред. Копе1егшапп и БиЪе1, изд-во Зрппдег Уег1ад НеЫе1Ъегд ВегНп, 2010. Номера последовательностей в таблице (ЗЕО) соответствуют номерам последовательностей в перечне последовательностей, прилагаемом к настоящей заявке.
- 26 028183
Таблица 4. Оптимизированные варианты
Нанотело БЕЦ СОК1 БЕЦ СБК1 СБК2 8Е() СБК2 СБКЗ 8Ε() СБКЗ
СХЗСК1ВП РМР66В02 1 Ο8ΙΡ88ΝΑ МА 141 ΑΙΝδνονΤ К 162 БРККОХУБ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВП 043 121 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΑΙΝδνονΤ К 162 ϋΡΚΚΟλνϋ ΤΚΥ 186
схзсктвп 045 122 Ο8ΙΡ58ΝΑ МА 141 ΑΙΝδνονΤ К 162 ϋΡΚΚΟΨΟ ΤΚΥ 186
СХЗСКТВП 047 123 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΑΙΝδνονΤ К 162 ϋΡΚΚΟΨϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВП 048 124 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΑΙΝδνονΤ К 162 БРККОХУБ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВП 049 125 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΑΙΝδνονΤ К 162 ϋΡΚΚΟλΥϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВН 050 126 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΑΙΝδνονΤ К 162 ϋΡΚΚΟ\νϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВП 061 127 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΑΙΝδνονΤ К 162 ΟΡΚΚΟΨϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВН 056 128 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΑΙΝδνονΤ К 162 ϋΡΚΚΟΨϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВП 057 129 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΑΙΝδνονΤ К 162 ϋΡΚΚΟΨΏ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВП 060 130 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΑΙΝδνονΤ К 162 ϋΡΚΚΟΨϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВП 065 131 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΑΙδδνΟνΤ К 214 ϋΡΚΚΟΨΟ ΤΚΥ 186
Нанотело БЕЦ ΟϋΚΙ БЕЦ ΟϋΚΙ ΟϋΚ2 БЕЦ СБК2 СБКЗ БЕЦ СБКЗ
СХЗСК1ВП 067 132 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΑΙ()8νθνΤ К 215 ΌΡΚΚΟλνΟ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВП 068 133 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΑΙΟδνονΤ К 216 БРККОХУБ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВИ 074 134 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΑΙΤδνΟνΤ К 217 ϋΡΚΚΟ\νϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВН 118 135 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΑΙΝΤνΟνΤ К 218 ΟΡΚΚΟΨϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВИ 129 136 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΑΙΝΟνονΤ К 219 ϋΡΚΚΟΧνϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВИ 158 137 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΑΙΝΡνΟνΤ К 220 ϋΡΚΚΟ\νϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВП 306 138 ΟδΙΡδδΤΑ МА 213 А1Б8УСУТ К 214 ΟΡΚΚΟΧνϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВП 307 139 ΟδΙΡδδΤΑ МА 213 ΑΙδΤνονΤ К 221 ϋΡΚΚΟΨϋ ΤΚΥ 186
СХЗСК1ВН 308 140 ΟδΙΡδδΝΑ МА 141 ΑΙΝδνονΤ К 162 ϋΡΚΚΟΧνϋ ΤΚΥ 186
*СОК-последовательности определяли согласно АпЦЪойу Епдтееппд, т. 2, под ред. КопеЛегтапп и ОиЪе1, изд-во Брппдег Аег1ад Не1Йе1Ъег§ ВегНп, 2010. Номера последовательностей в таблице (БЕ^) соответствуют номерам последовательностей в перечне последовательностей, прилагаемом к настоящей заявке.
Следующим объектом настоящего изобретения являются полипептиды, имеющие один или несколько АНН-доменов.
В одном из объектов изобретения АНН-домен, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит или практически состоит из последовательности, представленной в:
а) аминокислотной последовательности БЕС ГО N0: 3; или
б) аминокислотных последовательностях, которые по меньшей мере на 90% идентичны аминокислотной последовательности БЕС ГО N0: 3; или
в) аминокислотных последовательностях, которые имеют 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислотных^) различия(е) с аминокислотной последовательностью БЕС ГО N0: 3, или
г) любой одной из аминокислотных последовательностей БЕС ГО N0: 1-48 или БЕС ГО N0: 121140, или БЕП ГО N0: 222-224.
В другом объекте изобретения АНН-домен, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит или практически состоит из последовательности, представленной в:
а) аминокислотной последовательности БЕС ГО N0: 49; или
б) аминокислотных последовательностях, которые по меньшей мере на 95% идентичны аминокислотной последовательности БЕС ГО N0: 49; или
в) аминокислотных последовательностях, которые имеют 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислотных(ое) различия(е) с аминокислотной последовательностью БЕС ГО N0: 49, или
г) любой одной из аминокислотных последовательностей БЕС ГО N0: 49-52.
В другом объекте изобретения АНН-домен, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит или практически состоит из последовательности, представленной в:
а) аминокислотной последовательности БЕС ГО N0: 67; или
- 27 028183
б) аминокислотных последовательностях, которые по меньшей мере на 90% идентичны аминокислотной последовательности 81%) ГО ΝΟ: 67; или
в) аминокислотных последовательностях, которые имеют 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислотных^) различия(е) с аминокислотной последовательностью 81%) ГО ΝΟ: 67, или
г) любой одной из аминокислотных последовательностей 81%) ГО ΝΟ: 53-102.
В другом объекте изобретения νΗΗ-домен, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит или практически состоит из аминокислотной последовательности, представленной в любой одной из 81 %) ГО ΝΟ: 121-140 или 81%) ГО ΝΟ: 222-224.
В другом объекте изобретения νΗΗ-домен, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит или практически состоит из аминокислотной последовательности, представленной в любой одной из 81 %) ГО ΝΟ: 138-140.
В другом объекте изобретения νΗΗ-домен, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит или практически состоит из аминокислотной последовательности, представленной в любой одной из 81 %) ГО ΝΟ: 222-224.
Репрезентативные νΗΗ-домены, предлагаемые в настоящем изобретении, представлены ниже в табл. 5, а репрезентативные оптимизированные νΗΗ-домены, предлагаемые в настоящем изобретении, представлены ниже в табл. 6:
Таблица 5. νΗΗ-домены
81%) ГО ΝΟ: 1-48 представляют собой νΗΗ-домены семейства 101. 81%) ГО ΝΟ: 49-52 представляют собой νΗΗ-домены семейства 9. 81%) ГО ΝΟ: 53-120 представляют собой νΗΗ-домены семейства 13.
схзсктвп РМР66В02 ЕУ(ЩУЕ8СОО8УрАОЕ5ТКС8САА8О81Р85ПАМА\У ΥΚρΑΡΟΚΚΚϋΕνΑΑΙΝδνονΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚΌ ΝΑΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΌΡΚΚΟλνΟΤΚΥ νοοοτοντνδδ δΕς ΙΌ ΝΟ: 1
СХЗСКТВП РМР54А12 ΕνρΕνΕδΟΟΟδνρΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑν ΥΚΟΑΡΟΚρΚΟΕνΑνίΝδνΟΙΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΟΌ ΝΑΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΏΤΑνΥΥΟΤδΌΑΚΚΟνΌΤΚΥ χνοοοτοντνδδ δΕ(2 Ш ΝΟ: 2
СХЗСК1ВП РМР54АЗ ΕνΟΕνΕδΟΟΟδνΟΑΟΕδΕΚΕδΕΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑν ΥΚΟΑΡΟΚΟΚΟΕνΑΟΙΝδνΟΙΤΚΥΑΌδνΚΟΚΡΤΙδΚΌΝ ΑΚΝΤνΥΕς>ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΌΡΚΚ6νθΤΚΥν οοοτςντνδδ δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 3
СХЗСК1ВП РМР54А4 ΕνΟΕνΕδΟΚΟδνρΑΟΕδΕΚΕδΌΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑν ΥΚρΑΡΟΚρΚΌΕνΑΟΙΝδνΟΙΤΚΥΑΌδνΚΟΚΡΤΙδΚΌΝ ΑΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΌΤΑνΥΥΟΤδΌΡΚΚΟνΟΤΚΥν οοοτοντνδδ δΕ(} ΙΌ ΝΟ: 4
СХЗСК1ВП РМР54А5 ΕνΟΕνΕδΟΟΟδνρΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑν ΥΚρΑΡΟΚΟΚΟΕνΑΟΙΝδνΟΙΤΚΥΑΌδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝ ΑΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΌΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟνΌΤΚΥν ορατίντνδδ δΕ(2 ΙΌ ΝΟ: 5
СХЗСК1ВН РМР54А7 Ενζ>ΕνΕδΟΟΟδνζ)ΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟΤΙΡδδΝΑΜΑ\ν ΥΚρΑΡΟΚρΚΌΕνΑΟΙΝδνΟΙΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚΌΝ ΑΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΌΤΑνΥΥΟΤδΌΡΚΚΟνΝΤΚΥν αοοτοντνδδ δΕζ> ΙΌ ΝΟ: 6
СХЗСК1ВН РМР54В1 ΕνθΕνΕδΟΟΟδνρΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑ\ν ΥΚρΑΡΟΚρΚΟΕνΑΟΙΝδνΟΙΤΚΥΑΌδνΚΟΚΡΤΙδΚΌΝ ΑΚΝΤΑΥΕςΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟνΟΤΚΥν οροτρντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 7
СХЗСК1ВИ РМР54В2 Εν0ΤνΕδΟ66δν0ΑΟΕδΕΚΕδ0ΑΑδαΤΙΡδδΝΑΜΑ\Υ ΥΚρΑΡΟΚρΚΌΕνΑΟΙΝδνΟΙΤΚΥΑΌδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝ ΑΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΌΤΑνΥΥΟΤδΌΡΚΚΟνΝΤΚΥν οοοτκντνδδ δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 8
СХЗСК1ВП РМР54ВЗ ΕνΟΤνΕδΟΟΟδνςΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑν ΥΚρΑΡΟΚρΚΟΕνΑΑΙΝδνΟΙΤΚΥΑΌδνΚΟΚΡΤΙδΚΌΝ ΑΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΌΡΚΚΟνΌΤΚΥν οοοτρντνδδ δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 9
СХЗСК1ВП РМР54В5 ΕνΟΕνΕδΟΟΟδνςΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑν ΥΚΟΑΡακρΚΌΕνΑΟΙΝδνΟΙΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚΌΝ ΑΚΝΤΑΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδϋΡΚΚΟνΟΤΚΥν οοοτκντνδδ δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 10
СХЗСК1ВП ΡΜΡ54Ό5 ΕνρτνΕδΟΟΟδνςΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑν ΥΚρΑΡΡΟΚρΚΌΕνΑΕΙΝδνΟΙΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδδΌ ΝΑΚΝΤνΥΕΕΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΟΚΚΟνϋΤΚΥ νοοοτςντνδδ δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 11
СХЗСК1ВП ΡΜΡ54Ό8 ΕνρΕνΕδΟΟΟδνΟΑΟΟδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑν ΥΚΟΑΡΟΚρΚΌΕνΑΟΙΝδνΟΙΤΚΥΑΌδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝ ΑΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΌΤΑνΥΥΟΤδΌΡΚΚΟνΟΤΚΥν οοοτι,ντνδδ δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 12
- 28 028183
СХЗСК1ВП РМР54Р6 Κνζ)ΕνΕδΟΟΟδν<3ΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑ\ν ΥΚ(5ΑΡΟΚ<3ΚΟΕνΑΑ[ΝδνθΙΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝ ΑΚΝΤνΥΕς>ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟ\νϋΤΚΥΨ Οζ)ΟΤΕντνδδ δΕ(} Ю ΝΟ: 13
СХЗСК1ВП РМР54ОЗ ΕνςΕνΕδαΟΟδνςΑΟΕδΕΚΕδΕΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑλν ΥΚρΑΡΟΚςΚΟΕνΑΕΙΝδνΟΙΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝ ΑΚΝΤνΥΕ(3ΜΝδΕΚΡΕΏΤΑνΥΥΕΤδΟΡΚΚΟ\νθΤΚΥ\ν ОРСТЬУТУББ δΕ(} Ιϋ ΝΟ: 14
СХЗСК1ВИ РМР54Н1 Ενς>ΕνΕδΟΟΟδν(3Α6ΕδΕΚΕδΕΑΑδαΤΙΡδδΝΑΜΑ\ν ΥΚς)ΑΡΟΚ(3ΚΟΕνΑΟΙΝδνθΙΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤνδΚΟ ΝΑΚΝΤνΥΕςΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΕΤδϋΡΚΚΟΨΝΤΚΥ \νο(3οτς>ντνδδ δΕζ) ГО ΝΟ: 15
СХЗСК1ВН РМР54Н4 Εν(}ΕνΕδΟΟΟδνς)ΑΟΕδΕΚΕδΕΑΑδαδΙΡδδΝΑΜΑ\ν ΥΚρΑΡΟΚςΚΟΕνΑνίΝδνΟΙΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΟϋ ΝΑΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδϋΑΚΚΟΨΟΤΚΥ λνΟΟΟΤΈντνδδ δΕζ) Ю ΝΟ: 16
схзсклвп РМР61Р10 ΚνςΕνΕδΟαΟδνρΑΟΕδΕΚΕδΕΑΑδΟΤΙΡδδΝΑΜΑλν ΥΚρΑΡΟΚΟΚΟΕνΑΟΙΝδνϋΙΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚϋΝ ΑΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΕΤδϋΡΚΚΟ\νΝΤΚΥ\ν α(2οτ(2ντνδδ δΕ(} Ю ΝΟ: 17
схзсклвп РМР6Ю1 ΕνρΕνΕδΟΟΟδνρΑΟΕδΕΚΕδΕΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑλΥ ΥΚρΑΡΟΚρΚϋΕνΑΕΙΝδνΟΙΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝ ΑΚΝΤνΥΕζ)ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΕΤδΟΡΚΚα\νθΤΚΥ\ν οοοτρντνδδ δΕ(} Ю ΝΟ: 18
СХЗСК1ВН РМР6Ю5 Κνζ)ΕνΕδΟΟΟδνζ)ΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑ\ν ΥΚΟΑΡΟΚρΚΟΕνΑΕΙΝδνΟΙΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝ ΑΚΝΤνΥΕζ)ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟ\νθΤΚΥ\ν θ(3οτρντνδδ δΕ<3 Ю ΝΟ: 19
СХЗСК1ВИ РМР61Е2 ΕνρΕνΕδΟΟΟδν()ΑΟΕδΕΚΕδΕΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑ\ν ΥΚζ)ΑΡΟΚζ)ΚΟΕνΑΟΙΝδνθΙΤΚ ΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚϋΝ ΑΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΜΑνΥΥΕΤδΟΡΚΚΟΧνΟΤΚΥ \νας>οτοντνδδ δΕ(} Ю ΝΟ: 20
СХЗСК1ВП РМР61Р11 Κν<3ΕνΕδΟΟΟδν9ΑΟΕδΕΚΕδΕΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑ\ν ΥΚ<3ΡΡΟΚ(}ΚΟΕνΑΑΙΝδνθΙΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙΡΚΟΝ ΑΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΕΤδΟΡΚΚΟΨϋΤΚΥΧν οοοτοντνδδ 8Εζ) ГО ΝΟ: 21
СХЗСК1ВП РМР61С2 ΕνρΕνΚδΟΟΟδνρΑΟΕδΕΚΕδΕΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΧν ΥΚ(2ΑΡΟΚ(3ΚΟΕνΑΕΙΝδναΐΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝ ΑΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΕΤδΟΡΚΚΟλνϋΤΚΥΧν σροτς>ντνδδ δΕ(} Ш ΝΟ: 22
СХЗСК1ВИ РМР61СЗ ΚνρΕνΕδ0α0δΜ(3Α0ΕδΕΚΕδΕΑΑδ0δΙΡδδΝΑΜΑ\ν ΥΚς)ΑΡΟΚρΚΟΕνΑΑΙΝδνθΙΤΚΎΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝ ΑΚΝΤνΥΕρΜΜδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟΨϋΤΚΥ ψθ(3ατ(3ντνδδ δΕ<3 ГО ΝΟ: 23
СХЗСК1ВП РМР61О4 ΚνρΕνΕδΟΟΟδνρΑΟΟδΕΚΕδΕΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΑΥ ΥΚρΑΡΟΚρΚϋΕνΑΑΙΝδνΟΙΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚϋΝ ΑΚΝΤνΥΕρΜΜδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΕΤδϋΡΚΚΟν/ΟΤΚΥ \УСЮОТ(2УТУ88 3Ε<2 ГО ΝΟ: 24
СХЗСК1ВП РМР61Р4 Ενί^νΕδαΟΟδνρΑΟΑδΕΚΕδΕΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΧν ΥΚρΑΡΟΚρΚΟΕνΑνίΝΤναΐΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΟ ΝΑΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΕΤδϋΑΚΚΟλνΏΤΚΥ \УО(}ОТЬУТУБ8 δΕ(} Ю ΝΟ: 25
СХЗСК1ВИ РМР61А11 Ενζ^νΕδΚΟΟδνΟΑΟΕδΕΚΕδΕΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑνν ΥΚρΑΡΟΚρΚϋΕνΑνίΝδνΟΙΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΟΟ ΝΑΚΝΤνΥΕ(}ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΕΤδΟΑΚΚΟ\νϋΤΚΥ \νο<3οτ(}ντνδδ δΕ<3 Ю ΝΟ: 26
- 29 028183
СХЗСК1ВП РМР61В2 ΕνΟΕνΕδΚ,ΟΟδνΟΑΟΑδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΙΥ ΥΚρΑΡΟΚςΚΟΕνΑνΐΝΤνθΙΤΚΥΑΟδνΚΟΚ.ΡΤΙδΚΌ ΝΑΚΝΤνΥΕςΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΑΚΚΟΧνΟΤΚΥ \νος>οτς>ντνδδ δΕΟ ГО ΝΟ: 27
СХЗСК.1ВП РМР61С9 ΕνΟΕνΚδΟΟΟδνΟΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝ ΑΜΑΨ ΥΚΟΑΕΟΚΟΚΟΕνΑΟΟδΑΟΙΤΚΥΑΟδνκαΚΡΤΙδΚΌΝ ΑΚΝΤνΥΕ0ΜΝΚΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑδΟΑΚΚΟ\νΝΤΚΥ ν/οςοτΕντνδδ δΕΟ ΙΟ ΝΟ: 28
СХЗСК1ВП РМР65Н02 ΕνθΡνΕδΟΟΟδνθΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑ\ν ΥΚρΑΡΟΚρΚΟΕνΑΑΙΝδνΟΙΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚϋΝ ΑΚΝΤνΗΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδϋΡΚΚΟΨΟΤΚΥΨ ΟΟΟΊΈντνδδ δΕΟ ΙΟ ΝΟ: 29
СХЗСК1ВИ РМР65Е11 ЕУ(ЗЕУЕ8ОООЗУРАОЕ8ЕКЕ8САА8С81Р88КАМА\У ΥΚΟΑΡΟΚΟΚΌΕνΑΟΙΝδνΟΙΑΚΥΑΟδνΚΟΚΚΠδΚΌ ΝΑΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδϋΡΚΚΟλνΟΤΚΥ χνοοοτρντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 30
СХЗСК1ВП РМР65Е10 ΕνΟΕνΕδΟΟΟδνΟΑΟΕδΕΚ,ΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΚΑλν ΥΚΟΑΡΟΚΟΚΌΕνΑΟΙΝδνΟΙΤΚΎΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚΌΝ ΑΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟΧνϋΤΚΥΧν О0ОТЬУТУ88 δΕΟ ΙΟ ΝΟ: 31
СХЗСК.1ВП РМР65Е05 ΚνΟΕνΕδΟΟΟδνρΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑλν ΥΚρΑΡΟΚρΚΟΕνΑΟΙΝδνΟΙΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝ ΑΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟλνΟΤΚΥλν οοοτίντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 32
СХЗСК1ВП РМР65В11 ΕνρΕνΚδΟΟΟδνΟΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑλν ΥΚρΑΡΟΚρΚΌΕνΑνίΝΚνΟΙΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚΕ) ΝΑΚΝΤνΥΕ<3ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥ(3ΤδΟΡΚ.ΚΟ\νθΤΚΎ χνοοοτοντνδδ δΕΟ ΙΟ ΝΟ: 33
СХЗСК1ВН РМР65В07 ΕνΟΕνΕδΟΟΟδνΟΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΨ ΥΡΟΑΡΟΚΟΡΟΕνΑΑΙΝδνΟΙΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚϋΝ ΑΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟλνϋΤΚΥΧν О0ОТЬУТУ88 δΕΟ Ιθ ΝΟ: 34
СХЗСК1ВИ РМР65В09 ΕνΟΕνΕδΟΟΟδνΟΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδΚΝΑΜΑΙΥ ΥΚρΑΡΟΚρΚΟΕνΑδΙΝδνΟΙΤΚΥΟϋδνΚΟΚΡΤΙΞΚΟΝ ΑΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΑΚΚΟΧνϋΤΚΎ λΥΟΟΟΊΈντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 35
СХЗСК1ВН РМР65Н01 ΕνΟΕνΕδΟΟΟδνΟΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟΟΙΡδΚΝΑΜΑΧΥ ΥΚΟΑΡΟΚΟΚΟΕνΑδΙΝδνΟΙΤΚΥΟϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝ ΑΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΑΚΚΟΧνϋΤΚΥ \νος>ατς>ντνδδ δΕΟ Ιϋ ΝΟ: 36
СХЗСК1ВП РМР65О07 ЕУ0ЬУЕ8ООО8У0АОЕ8ЬК.Е8САА8ОТ1Р88НАМААУ ΥΚΟΑΡΟΚΟΚϋΕνΑΟΙΝδνΟΙΤΡ ΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚΌΝ ΑΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟλνΝΤΚΥΑΥ οοοτοντνδδ δΕΟ Ιθ ΝΟ: 37
СХЗСК1ВИ РМР66Н08 ΕνΟΕνΕδΟΟΟδνΟΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΨ ΥΚ0ΑΡΟΚ0Κ.ΟΕνΑΗΝ8νθΙΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙ5ΚΙ)Ν ΑΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟΧνϋΤΚΥΧν οοοτοντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 38
СХЗСК1ВИ РМР66Н04 ΕνΟΕνΕδΟΟΟδνΟΑΟΟδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑλν ΥΚ(3ΑΡΟΚ(5ΚΕ>ΕνΑΑΙΝδνθΙΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙ8ΚΟΝ ΑΚΝΤνΥΕΟΜΜδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟλνϋΤΚΥ (νοοοτΈντνδδ δΕΟ Ιθ ΝΟ: 39
СХЗСК.1ВИ РМР66Р02 ΕνΟΕνΕδΟΟΟδνρΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΨ ΥΚΟΑΡΟΚΟΚϋΤνΑΕΙΝδνΟΙΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝ ΑΚΝΤνΥΙ_0ΜΝδΤΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΡΟ\νϋΤΚΥ\ν οοοτοντνδδ δΕΟ Ιϋ ΝΟ: 40
- 30 028183
СХЗСК1ВП РМР66Е11 ЕУ0ЬУЕ8ООС8У(ЗАОЕ5ЕКЬ5САА5О51Р55НАМААУ ΥΚρΑΡΟΚΟΚΟΕνΑΑΙΝδνΟΤΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚϋ ΝΑΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥεΤδϋΡΚΚΟΥνΟΤΚΥ χνοοοτρντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 41
СХЗСК1ВП РМР66Ш0 Ενς>ΕνΕδΟΟΟδνς)ΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑ\ν ΥΚΟΑΕΟΚΟΚΟΕνΑΕΙΝδνΟΙΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚϋΝ ΑΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟΥνΟΤΚΥΧν οοοτςντνδδ 8ΕΟ Ю ΝΟ: 42
СХЗСК1ВП ΡΜΡ66ϋΟ8 Εν9ΕΜΕδΟΟΟδν0ΑΟΕδΕΚΕδΌΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΨ ΥΚρΑΡΟΚΟΚΟΕνΑΟΙΝδνΟΙΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝ ΑΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΡΟΎΟΤΕΥΥν οοοτρντνδδ δΕζ) Ю ΝΟ: 43
СХЗСК1ВП ΡΜΡ66Α04 ΕνΟΕνΕδΟΟΟδνΟΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΥν ΥΚρΑΕΟΚςΚΟΕνΑΕΙΝδνΟΙΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝ ΑΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟ\νϋΤΚΥ\ν αοοτΈντνδδ δΕ(} Ю ΝΟ: 44
СХЗСК1ВП ΡΜΡ66ϋΟ4 ΚνΟΕνΕδΟΟΟδνΟΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟΤΙΡδδΝΑΜΑΥν ΥΡΟΑΡΟΚΟΡΟΕνΑΟΙΝδνϋΙΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝ ΑΚΝΤνΥΙ^ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟΨΝΤΚΎΨ ΟρΟΤΈντνδδ δΕΟ Ш ΝΟ: 45
СХЗСК4ВИ ΡΜΡ66Ώ02 ΕνθΡνΕδΟΟΟδνθΑΟΕ8ΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑ\ν ΥΚρΑΡΟΚΟΚΟΕνΑνίΝδνΟΙΤΚΥΑΟδνΚΟΚ-ΡΤΤδΟΟ ΝΑΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδϋΑΚΚΟΥνΟΤΚΥ λνοοοτρντνδδ 8ЕС) Ю ΝΟ: 46
СХЗСК4ВП ΡΜΡ66ϋΟ6 ΕνΟΕνΕδΟΟΟδνΟΑΟΕδΕΚΡδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΧν ΥΚΟΑΡΟΚρΚΟΕνΑδΙϋδνΟΙΤΚΥΚΟδνΚΟΚΡΤΙδΚϋΝ ΑΚΝΤνΥΕςΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΑΚΚΟΥνΟΤΚΎ \ναοοτ(3ντνδδ δΕ(3 Ю ΝΟ: 47
СХЗСК.1ВП ΡΜΡ66Ο01 ΕΜΟΕνΕδΟΟΟδνρΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΥν ΥΚρΑΡΟΚρΚϋΕνΑΕΙΝδνΟΙΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚϋΝ ΑΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδϋΟΚΚ-ΟΧνΟΤΚΥ γνοοοτρντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 48
СХЗСК1ВП ΡΜΡ11Η11 ЕУ0ЕУЕ8ОООЬУрАОО8ЕКЬ8СУА8ОКТР88УАМО \УРКрАР0КЕКАРУА018О8А8К-КУУАО8УК0КРТУ8 ΚΟΝΑΚΝΤνΥΕ<3ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑδΝδΥΡΚνς) Ρϋγγοροτρντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 49
СХЗСК1ВП ΡΜΡ12Β6 ЕУ(5ЕУ08ОООЕУ0А0О8Ы<Е8СУА8ОКТР88УАМО \УРКЦАР0КЕКАРУА018О8А8ККУУАО8УКОК.РТУ8 ΚΟΝΑΚΝΤνΥΕςΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑδΝδΥΡΚνΟ Ρϋγγοςοτι^ντνδδ δΕΟ ΙΟ ΝΟ: 50
СХЗСК1ВП ΡΜΡ12Ο9 ЕУрЕУЕ8ОООЬУ9РОО8ЕКЬ8СУА8СКТР88УАМО^У ΡΡΟΑΡΟΚΕΡΕΡνΑΟΙδΟδΟδΡΚΥΥΑϋδνΚΟΡΡΤΙδΡΟ ΝΑΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΚΑνΥΥΟΑΑδΝδΥΡΚνρΡϋ γγοροτοντνδδ δΕΟ Ш ΝΟ: 51
СХЗСК4ВН РМР15С11 ЕУ9ЕУЕ8ОООЬУ0АОО8ЕКЬ8СУА8ОКТР88УАМО ΥνΡΚΟΑΡΟΚΕΚΕΡνΑΟΙδΟδΟδΚΚΥΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚ ϋΝΑΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΚΑνΥΥΟΑΑδΝδΥΡΚνΟΡ ϋγγοοοτοντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 52
СХЗСК1ВИ ΡΜΡ18Ε6 ΚνρρνΕδΟΟΟΕνΟΡΟΟδΕΚΕδΟΑΤδΟΤΙΡδΝΝΑΜΟν/ ΥΚςΑΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδδδΟδΤΝΥΑϋδνΚΟΚΡΤνδΚΟ ΝΟΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤΕϋΑΚΚΟΧνΝΤΑΥ ΥΥΟΟΟΑΟντνδδ δΕ(2 Ю ΝΟ: 53
СХЗСК1ВП РМР12С2 ЕУ(ЗЬУЕ8ОООЕУ(ЗРОО8и<Е8САТ8ОТ1Р8МТАМОАУ ΥΚρΑΡΟΚΚΚΟίνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑΟδνΚΟΚΡΤνδΚΌ ΝϋΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤνΟΑΚΚαΥνΝδΟ Υ\ΥΟΟΟΤ(3ντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 54
- 31 028183
СХЗСК1ВН РМР18А10 ЕУ0ЕУЕ8ОООЬУ0РОО8ЕКЬ8САТ5ОИР8ИИАМО\У ΥΚ(3ΑΡΟΚΚΚΕ)ΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑΟδΑΚΟΚΡΤνδΚΈ) ΝυΚΝΤΟΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤνΟΑΚΚΟΧνΝΤΑ γχνοοοτοντνδδ δΕζ) Ю ΝΟ: 55
СХЗСК1ВП РМР18А2 ΕνρΕνΕδΟΟΟννΟΡΟΟδΕΚΕδΟνΤδΟΙΙΡδΝΝΑΜΟΨ ΥΚςθΡαΚΚΚΌΕνΑδΙΟδΤΥδΤΝΥΑΟδνΚΟΚ.ΡΤνδΚ.0 ΝϋΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤΙΟΑΚΚΟΨΝΤΑΥ χνοοοτρντνδδ δΕ(3 ГО ΝΟ: 56
СХЗСК1ВП РМР18А8 ΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνρΡΟΟδΕΚΕδΟΑΤδΚΤΊΡΚδΝΑΜΟΧν ΥΚΟΑΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑϋδνΚΟΚΡΤνδΚΟ ΝϋΚΝΤΟΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤΙΟΑΚΚΟΧνΝΤΟΥ χνοροτςντνδδ δΕ<3 Ю ΝΟ: 57
СХЗСК1ВП РМР18А9 ΕνρΕνΕδΟΟΟννΟΡΟΟδΕΚΕδΟνΤδΟΠΡδΝΝΑΜΟΨ ΥΚρΟΡΟΚΚΚϋΕνΑδΙδδΤΥδΤΝΥΑϋδνΚΟΚΡΤνδΚΟ ΝϋΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕϋΤΟνΥΥΟΤΙΟΑΚΡΟΧνΝΤΑΥ χνοοοτρντνδδ 8ΕΟ ГО ΝΟ: 58
СХЗСК1ВП РМР18В7 ΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνρΡΟΟδΕΚΕδΟΑΤδΟΤΙΡΚδΝΑΜΟΨ ΥΚρΑΡΟΚΚΚϋΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑΟδνΚΟΚΡΤνδΚϋ ΝΟΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤνΟΑΡΚΟν/ΝδΟ γ\νο<3θτοντνδδ 8Εζ) ГО ΝΟ: 59
СХЗСК1ВП РМР18В9 Εν<3ΕνΕδΚΟΟΕνζ)ΡΟΟδΕΚΕδΟΑΤδΟΤΙΡδΝΝΑΜΟλν ΥΚΟΑΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδδδΟδΤΝΥΑϋδνΚΟΡΡΤνδΚΌ N^ΚNΤΟΥ^^ΜNδ^ΚΡΕ^ТСVΥΥСΤ^^ΑΚΚΟ\УNΤΑΥ χνοροτοντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 60
СХЗСК1ВИ РМР18С6 ΕνρΕΜΕδΟΟΟΕνρΡΟΟδΕΚΕδΟΑΤδΟΤΙΡδΝΝΑΜΟΨ ΥΚ9ΑΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑϋδνΚΟΚΡΤνδΚΟ ΝΟΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕϋΤΟνΥΥΟΤνΟΑΚΚΟν/ΝΤΑ γχνοοοτοντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 61
СХЗСК1ВП РМР18С9 ΕνρΕνΕδΟΟΟΕνΟΡΟΟδΕΚΕδΟΑΤδΟΙΙΡδΝΝΑΜΟλν ΥΚρΑΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑΟδνΚΟΚΡΤνδΚϋ ΝΟΚΝΤΟΥΕρΜΝδΕΚΡΕϋΤΟνΥΥΟΤνΟΑΚΚΟΨΝΤΑ γψοςοτοντνδδ 8Ε0 ГО ΝΟ: 62
СХЗСК1ВП РМР18И1 ΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνρΡΟΟδΕΚΕδϋΑΤδΟΙΙΡδΝΝΑΜΟΧν ΥΚΡΑΡΟΚΚΚΌΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑΟδνΚΟΚΡΤνδΚΟ ΝΟΚδΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤνΟΑΚΚΟΨΝΤΑΥ χνοροτοντνδδ 8Ε(} Ю ΝΟ: 63
СХЗСК1ВП РМР18И10 ΕνρΕνΕδΟΟΟΕνΟΡΟΟδίΟΕδΟΑΤδΟΤΙΡδΝΝΑΜΟΧν ΥΚρΑΡΟΚΚΚϋΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑϋδνΚΟΚΡΤνδΚΟ ΝΟΚΝΤΟΥΕςΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤνΟΑΚΚΟΧνΝΤΑ γ\νοροτ(}ντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 64
СХЗСК1ВП РМР18И12 Εν(3ΕνΕδΟΟΟΕνρΡΟΟδΕΚΕδΟΤΤδΟΤΙΡδΝΝΑΜΟ\ν ΥΚΡΑΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑϋδνΚΟΚΡΤνδΚΟ ΝϋΚΝΤΟΥΕΟΜΝΝΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤΕΟΑΚΚΟΧνΝΤΑ γν/οοοτςντνδδ 5Ε() ГО ΝΟ: 65
СХЗСК1ВП РМР18Р1 ΚνρΕνΕδΟΟΟΕνςΡΟΟδΕΚΕδΟΑΤδΟΤΙΡδΝΝΑΜΟΧν ΥΚΟΑΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑΟδνΚΟΡΡΤνδΚΌ ΝϋΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥϋΤνΟΑΚΚΟν/ΝΤΑ γχνοοοτςντνδδ δΕΟ Ιϋ ΝΟ: 66
СХЗСК1ВИ РМР18Р5 ΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνρΡΟΟδΕΚΕδΟΑΤδΟΤΙΡδΝΝΑΜΟΧν ΥΡΟΑΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑϋδνΚΟΚΡΤνδΚϋ ΝϋΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤνϋΑΚΚΟΧνΝΤΑ γχνοοοτοντνδδ δΕ(} ГО ΝΟ: 67
СХЗСК1ВП РМР18Р6 Εν(3ΕνθδΟΟΟΕν9ΡαθδΕΚ.ΕδΟΑΤδΟΤΙΡδΝΝΑΜΟ\ν ΥΚΡΑΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑϋδνΚΟΚΡΤνδΚΟ ΝΟΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤνΟΑΚΚΟλΥΝΤΑ γχναι^οτρντνδδ δΕ(} ГО ΝΟ: 68
- 32 028183
СХЗСК1ВП РМР18Р9 Εν0ΕνΕ5ΟΟΟΕν(3ΡΟΟ5ΕΚΕ50ΑΤ5ΟΤΙΡΚΤΝΑΜΟ\ν ΥΚΟΑΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑϋδνΚΟΚΡΤνδΚΟ ΝϋΚΝΤΑΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤΙΟΟΚΚΟν/ΝΤΟΥ χνοοοτοντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 69
СХЗСК1ВП РМР18О5 ΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνρΡΟΟδΕΚΕδΟΑΤδΚΤΙΡΚδΝΑΜΟίν ΥΚΡΑΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑϋδνΚΟΚΡΤνδΚΏ ΝΟΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤνϋΑΚΚΟΧΥΝΤΟ γχνοοοτοντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 70
СХЗСК1ВИ РМР18Н1 ΕνρΕνΕδΟΟΟΕν()ΡΟΟδΕΚΕδΟΑΤδΟΤΙΡδΝΝΑΜΟ\ν ΥΚΟΑΕΟΚΚΚΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑϋδνΚΟΚΡΤνδΚΟ ΝΟΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤνϋΑΚΚσν/ΝΤΑ γψοοοτοντνδδ δΕΟ Ж ΝΟ: 71
СХЗСК1В11 РМР18Н10 ΕνΟΕνΕδΟΟΟΡνρΡΟΟδΕΚΕδΟΑΤδΚΤΙΡΚδΝΑΜΟΧν ΥΚΟΑΡΟΚΚΚϋΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑϋδνΚΟΚΡΤνδΚΟ ΝΟΚΝΤΟΥΡΟΜΝδΕΚΡΕΟΤσνΥΥΟΤνΟΑΚΚΟΧνΝΤΟ γν/οοοτοντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 72
СХЗСК1ВП РМР18Н7 ΕνςΕνΕδΚΟΟΕνρΡΟΟδΕΚΡδΟΑΤδΟΙΙΡδΝΝΑΜΟΧν ΥΚΟΑΡΟΚΚΚϋΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑϋδνΚΟΚΡΤνδΚΟ ΝΟΚΝΤ<3ΥΕ(5ΜΝδΕΚΡΕΟΤθνΥΥΟΤνθΑΚΚΟ\νΝΤΑ γχνοοοτοντνδδ δΕΟ ΙΟ ΝΟ: 73
СХЗСК1ВИ РМР18Н9 ΕνΟΡνΚδΟΟΟΕνΟΡΟΟδΕΚΕδΟΤΤδΟΤΙΡδΝΝΑΜΟΧν ΥΚΟΑΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑϋδνΚΟΚΡΤνδΚΟ ΝΟΚΝΤΟΥΕΟΜΝΝΡΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤΕΟΑΚΚΟΧνΝΤΑ γψοοοτοντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 74
СХЗСК1ВИ РМР20ВЗ Ενς>ΕνΕδαθΟΡνθΑΟΟδΡΡΕδθνΤδΟΙΙΡδΝΝΑΜΟ\ν ΥΚρΟΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙΟδΤΥδΤΝΥΑΟδνκαΚΡΤνδΚϋ ΝϋΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕϋΤΟ νΥΥΟΤΙΩΑΚΚΟν/ΝΤΑ Υ ν/οοοτρντνδδ δΕΟ ГО ΝΟ: 75
СХЗСК1ВП РМР20С12 ΕνΟΡνΕδΟΟΟΕνΟΡΟΟδΕΚΡδΟΑΤδΟΤΙΡΚδΝΑΜΟίν ΥΚΟΑΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑΟδνΚΟΚΡΤνδΚϋ ΝΟΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤνϋΑΚΚΟΧνΝδΟ γχνοςοτκντνδδ δΕΟ ΙΟ ΝΟ: 76
СХЗСК1ВИ РМР20СЗ ΚνρΡνΕδΟΟΟΕνΟΡΟΟδΕΚΕδΟΑΤδΟΙΙΡδΝΝΑΜΟΨ ΥΚΟΑΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑϋδνΚΟΚΡΤνδΚΟ ΝϋΚΝΤΟΥΕρΜΝδΡΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤνΟΑΚΚΟΧνΝΤΑ γ\νοοοτοντνδδ δΕΟ ГО ΝΟ: 77
СХЗСКЛВП РМР20С6 Ενζ)ΕνΕδΟ6ΟΕν0ΑΟΟδΕΚΕδ0ΑΤδΟΤΙΡδΝΝΑΜΟ\ν ΥΚΟΑΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑϋδνΚΟΚΡΤνδΚΟ ΝϋΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤνϋΑΚΚΟν/ΝΤΑ γχνοοοτοντνδδ δΕΟ ΙΟ ΝΟ: 78
СХЗСК1ВП ΡΜΡ20ϋ8 ΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνΟΡΟΚδΕΚΕδΟΑΤδΟΤΤΡΚδΝΑΜΟΧν ΥΚΟαΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙΤΝδΟδΤΝΥΑϋδνκαΚΡΤνδΚΟ ΝϋΚΝΤΟΥΕΟΜδδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤΕΟΑΚΚΟΐνΝΤΟΥ χνοοοτοντνδδ δΕΟ ΙΟ ΝΟ: 79
СХЗСК1ВП РМР20Е11 ΕνΟΕνΕδΟαΟΕνΟΡΟΟδΕΚΕδΟΑΤδΚΤΙΡΚδΝΑΜΟΎ ΥΚΟΟΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙΤΝδΟδΤΝΥΑϋδνΚΟΚΡΤνδΚΟ ΝΟΚΝΤΟΥΡΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤνϋΑΚΚΟΨΝΤΟ γψοςοτοντνδδ δΕΟ ΙΟ ΝΟ: 80
СХЗСК1ВИ РМР20Е5 ΚνθΕνΕδΟΟΟΕνζ)ΡαθδΕΚΕδΟΑΤδΟΤΙΡδΝΝΑΜΟ\ν ΥΚΟνΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑϋδνΚΟΚΡΤνδΚΟ ΝϋΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤνΟΑΚΚΟν/ΝΤΟ γψοοοτοντνδδ δΕΟ ΙΟ ΝΟ: 81
СХЗСК1ВИ РМР20РЗ ΕνθΕνΕδΟΟΟΕνς>ΡΟΟδΕΚΕδΟΑΤδΟΤΙΡδΝΝΑΜΟ\ν ΥΚΟΑΡΟΚΚΚϋΕνΑδΙδδδΟδΤΝΥΑΟδνΚΟΚΡΤνδΚϋ ΝΟΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤΈϋΑΚΚΟΧνΝΤΑΥ χνοοοτοντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 82
- 33 028183
СХЗСК1ВИ РМР20Р4 ЕУ<ЗЬУЕ5ОООЬУРРОО5ЕКЬ5САТ8АТ1РК8НАМО\У ΥΚΟΑΡΟΚΚΚΌΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑΟδνΚΟΚΡΤνδΚΌ ΝΟΚΝΤΑΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΌΤΟνΥΥΟΤΙΟΟΚΚΟΨΝΤΟΥ χνοοοτοντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 83
СХЗСК1ВИ РМР20Р5 Εν0ΕνΕ3ΟΟΟΕν0ΡΟΟ3ΕΡΕ3ΟΑΤ3ΑΤΙΡΚ3ΝΑΜΟ\ν ΥΚρΑΡΟΚΚΚΌΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑΟδνΚΟΚδΤνδΚΌ ΝΟΚΝΤΑΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΌΤΟνΥΥΟΤΙΟΟΚΚΟΨΝΤΟΥ χνοοοτοντνδδ δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 84
СХЗСК1ВП РМР21В6 ΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνΟΡΟΟδΕΚΕδΟΑΤδΟΤΙΡδΝΝΑΜΟν/ ΥΚΟΑΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑΌδνΚΟΚΡΤνδΚΌ ΝΟΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΌΜΟνΥΥΟΤνΟΑΚΚΟΨΝΤΑ γχνοοοτοντνδδ 3Εζ) ΙΌ ΝΟ: 85
СХЗСКЛВП РМР24А12 Εν0ΕνΕδΟΟΟΕνς)ΡΟΟδΡΡΕδΟΑΤδΟΙΙΡδΝΝΑΜΟ\ν ΥΚΟΑΡΟΚΚΚΌΕνΑδΙδΝδΟδΑΝΥΑΟδνΚΟΚΡΤνδΚΌ ΝΌΚΝΤΟΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤνΌΑΚΚΟΧνΝΤΑ Υλναοατοντνδδ δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 86
СХЗСК1ВИ РМР24А6 ΕνθΕνΕδΟΟΟΕνς>ΡΟΟδΕΡΡδΟΤΤδΟΤΙΡδΝΝΑΜΟ\ν ΥΚρΑΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑΌδνΚΟΚΡΤνδΟΌ ΝΟΚΝΤΟΥΕΟΜΝΝΕΚΡΕΌΤΟνΥΥΟΤΕΌΑΚΚΟΧνΝΤΑ γψοςοτςντνδδ 8Ε0 ΙΌ ΝΟ: 87
СХЗСК1ВП РМР24В9 ΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνΟΡΟΟδΕΚΕδΟΑΤδΟΤΙΡΚδΝΑΜΟΨ ΥΚρΑΡΟΚΚΚΌΕνΑδΙδΙδΟδΤΝΥΑΟδνΚΟΚΡΤνδΚΌΝ ΌΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΰνΥΥΟΤνΟΑΚΚΟλΥΝΤΟΡ χνοοοτοντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 88
СХЗСК1ВП ΡΜΡ24Ό3 ΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνρΡΟΟδΕΚΕδΟνΤδΟΙΙΡδΝΝΑΜΟΧν ΥΚρΟΡΟΚΚΚΌΕνΑδΙδδΤΥδΤΝΥΑΌδνΚΟΚΡΤνδΚϋ ΝΟΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤΙΟΑΚΚΟλΥΝΤΑΥ ν/οοοτρντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 89
СХЗСК1ВИ РМР24Р7 ΕνΟΕΜΕδΟΟΟΜνρνΟΟδΕΚΕδΟΤΑδΟΠΡδΝΝΑΜΟ ΧνΥΚΟΟΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδδΤΥδΤΝΥΑΌδνΚΟΚΡΤνδΚ ΌΝΟΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤΙΟΑΚΚΟΨΝΤΑ Υλνοοοτρντνδδ δΕΟ ΙΟ ΝΟ: 90
СХЗСК1ВП РМР28В4 Εν(3ΕνΕδαθΟΕνρΡΟΟδΕΚΕδΟΑΙ3ΑΊΊΡΚδΝΑΜΟ\ν ΥΚΟΑΡΟΚΚΚΌΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑΌδνΚΟΚΡΤνδΚΟ ΝΟΚΝΤΑΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤΙΌΟΚΚΟν/ΝΤΟΥ ιναοοτοντνδδ 8Ε0 ГО ΝΟ: 91
СХЗСК1ВИ РМР28Р1 ΕΜρΕνΕ300θνν<3Ρ0Ο3ΕΚΕ30νΤ30ΙΙΡ3ΝΝΑΜ0\ν ΥΚΟΟΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙΟδΤΥδΤΝΥΑΌδνΚΟΚΡΤνδΚΌ ΝΌΚΝΤΟΥΕζ)ΜΝ8ΕΚΡΕΟΤθνΥΥΟΤΙΟΑΚΚΟ\νΝΤΑΥ χνοοατρντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 92
СХЗСК1ВИ РМР28Р6 ΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνρΡΟΟδΕΚΕδΟΑΤδΟΙΙΡδΝΝΑΜΟΨ ΥΚΟΑΡΟΚΚΚϋΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΗΑΌδνΚΟΚΡΤνδΚΟ ΝΌΚΝΤΟΥΕρΜΝδΕΚΡΕυΤΟνΥΥΟΤνΌΑΚΚΟΧνΝΤΑ γχνοοοτοντνδδ δΕΟ ΙΟ ΝΟ: 93
СХЗСК1ВП РМР28Р9 ΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνΟΡΟΟδΕΚΕδΟΑΤδΟΤΙΡδΝΝΑΜΟΧν ΥΚΟνΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑΟδνΚΟΚΡΤνδΚΌ ΝΌΚΝΤΟΥΕ(3ΜΝ3ΕΚΡΕϋΤθνΥΥΟΤνθΑΚΚΟ\νΝΤΟ γινοοοτοντνδδ δΕΟ Ιθ ΝΟ: 94
СХЗСК1ВП РМР29А5 Εν0ΕνΕ3ΚΟΟΕνς>ΡΟΟ3ΕΚΕ30ΑΤ3ΟΤΙΡ3ΝΝΑΜΟ\ν ΥΚςΑΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑΌδνΚΌΚΡΤνδΚΟ ΝΌΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΌΤΟνΥΥΟΤνΟΑΚΚΟΧνΝΤΑ γχνοςοτοντνδδ δΕΟ ΙΟ ΝΟ: 95
СХЗСК1ВИ ΡΜΡ29Ό5 КУрЕУЕЗООСЕУОРООЗЕКЕЗСАТЗОТ1РКЗКАМО\У ΥΚΟΑΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑΌδνΚΟΚΡΤνδΚΌ ΝΟΚΝΤΟΥΕς>ΜΝ3ΕΚΡΕΟΤθνΥΥ0ΤνθΑΚΚΟλνΝ3Ο γ\νος>οτς)ντν33 δΕΟ Ю ΝΟ: 96
- 34 028183
СХЗСК1ВП РМР29ЕЗ ЕУрЬУЕ8ЕООЬУ0РОО8Ы<ЕРСАТ8КТ1РК.8ХАМО^ ΥΚ0ΑΡΟΚΚΚΕ)ΕνΑ3Ι3Ν3Ο3ΤΝΥΑΟδνΚΌΚΡΤν3Κ.Ο ΝΌΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΌΤΟνΥΥΟΤνΟΑΚΚΟνΝΤΟ γνοροτοντνδδ 3Εζ) Ю ΝΟ: 97
СХЗСК1ВП РМР29Е7 ЕУ0ЬУЕ8ОСОЬУ0РОО8ЕРЕ8САТ8КТ1РР8ХАМС^ Υ^ΑΡΟΚΚΚΟΕνΑΞΙδΝδΟδΤΝΥΑϋδνΚΟΚΡΤνδΚΌ ΝΌΚΝΤ0ΥΕ9ΜΝδΕΚΡΕ0Τ0νΥΥ0Τν0ΑΚ.Κ0νΝΤ0 γνοροτοντνδδ 8Ε0 Ю ΝΟ: 98
СХЗСК1ВН РМР29ОЮ ΕνΟΕΜΕδΟΟΟΕνΟΡΟΟδΕΚΕδΟΑΤδΟΤΙΡΚδΝΑΜΟν ΥΚ()ΰΡαΚΚΚΕ>ΕνΑ3ΙΤΝ3Ο3ΤΝΥΑΟ8νΚΟΚΡΤν3Κτ> ΝΌΚΝΤΟΥΕρΜδδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤΕΌΑΚΚΟνΝΤΟΥ νοοοτοντνδδ 8ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 99
СХЗСК1ВИ РМР29О7 ЕУ()ЬУЕЗОООЕУ0РООЗЕКЕЗСАТ8О11РЗПНАМОАУ ΥΚΟΟΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙΤΝΤΟδΤΝΥΑΌδνΚΟΚΡΤνδΚΌ ΝΌΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΌΤΟνΥΥετνΟΑΚΚΟνΝΤΑ γνοοοτοντνδδ 8ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 100
СХЗСК1ВИ РМР29Н1 ΕνΟΕνΕδΟΟΟΙΛ^ΑΟαδΕΚΕδΟΤΤδΟΤΙΡΞΝΝΑΜαν ΥΚρΑΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑϋδνΚΟΚΡΤνδΚΌΝ ΌΚΝΤΟΥΕΟΜΝΝΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤΕΌΑΚΚΟνΝΤΑ γνο<3οτοντνδ8 8ΕΟ Ю ΝΟ: 101
СХЗСК1ВП РМР37А8 ЕУ0ЬУЕЗОООЬУ0РОО8ЕКЕ8САТ8КТ1РР8ХАМО\У ΥΚΟΑΡΟΚΚΚ-ΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑΌδΑΚΟΚΡΤνδΚΌ ΝΟΚΝΤΟΥΕρΜΝδΕΚΡΕΌΤΟνΥΥΟΤνΟΑΚΚΟνΝΤΟ γναςοτρντνδδ 3Εζ) ГО ΝΟ: 102
СХЗСК1ВИ РМР37В9 ΕνΟΕνΕΞαΟΕνΟΡΟΟδΕΚΕδϋΑΤδΟΤΙΡδΝΝΑΜΟνΥ Κ.()ΑΡΟΚΚΚΌΕνΑ3Ι8Ν8Ο8ΤΝΥΑΟ3νΚΟΚΡΤν8ΚΕ)Ν ΟΚΝΤΟΥΕρΜΝ8ΕΚΡΕΌΤθνΥΥετνθΑΚ.Κ.θνΝΤΑΥ νος>οτς)ντν33 8ΕΟ ΙΌ ΝΟ: 103
СХЗСК1ВН РМР37С12 ЕУ0ЬУЕ8ОООЬУрАОО8Ы<Е8СУА8О81РК8КАМО\¥ ΥΚ0ΑΡΟΚΚΚΕ)ΕνΑ3Ι3Ν3Ο3ΤΝΥΑΟ3νΚΟΚ.ΡΤν8ΚΕ> ΝϋΚΝΤΟΥΕρΜΝΞΕΚΡΕϋΤΟνΥΥΟΤΙΟΑΚΚΟνΝΤΟΥ \УОООТ(ЗУТУ38 8Ε0 Ю ΝΟ: 104
СХЗСК1ВИ РМР37С7 Εν0ΕνΕ3ΟΟΟΕν0ΡΟΟ3ΕΚΕ80ΑΤ3ΙΠΊΡ3ΝΝΑΜΟ\ν ΥΚΟΑΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑΌδνΚΟΚΡΤνδΚϋ ΝΌΚΝΤ0ΥΕ<)ΜΝ3ΕΚΡΕ0Τ0νΥΥ(:τν0ΑΚ.Κ0νΝΤΑ γ\νοοοτοντνδ8 8ΕΟ Ю ΝΟ: 105
СХЗСК1ВИ ΡΜΡ37Ό9 ΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνΟΡΟΟδΕΚΕδΟΑΤδΟΤνΡδΝΝΑΜΟν ΥΚρΑΡΟΚΚΚΕ)ΕνΑ3Ι388Ο3ΤΝΥΑΟ3νΚΟΚΡΤν3ΚΕ> ΝΟΚΝΤΌΥΕζ)ΜΝ8ΕΚΡΕΟΤθνΥΥΟΤΕΟΑΚ.Κ.θνΝΤΑΥ νοροτοντνδδ 8Ε<) ΙΌ ΝΟ: 106
СХЗСК1ВИ РМР37Е12 ΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνΟΡΟΟδΕΕΕδΰΑΤδΚΡΙΡΕδΝΑΜΟν ΥΚΟΑΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑΌδνΚΟΚΡΤνδΚΟ ΝΟΚΝΤΟΥΕ9ΜΝ8ΕΚΡΕΌΤθνΥΥΟΤνθΑΚ.Κ.θνΝΤΟ γνοοοτοντνδδ 8ЕЦ Ю ΝΟ: 107
СХЗСК1ВП РМР41В10 Εν0ΕνΕ3Ε6ΟΕνζ)ΡΟΟ3ΕΚΕ3(3ΤΤ3ΟΤΙΡ3ΝΝΑΜα\Υ ΥΚρΑΡΟΚΚΚΌΕνΑ8Ι3Ν3Ο3ΤΝΥΑΟ3νΚΟΚ.ΡΤν3ΚΈ) ΝΌΚΝΤΟΥΕ9ΜΝΝΕΚΡΕΌΤθνΥΥΟΤΕΟΑΚ.ΚθνΝΤΑ γναοοτοντνδδ 8Ε0 ΙΌ ΝΟ: 108
СХЗСК1ВП РМР41В11 ΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνΟΡΟΟδΕΚΕδΟΑΤδΟΤΙΡδΝΝΑΜΟν ΥΚ()ΑΡΟΚΚΚΈ)ΕνΑ3Ι3Ν8ΟδΤΝΥΑΟ3νΚΟΚΡΤν8ΚΙ) ΝΌΚΝΤΟΥΕΡΜΝΞΡΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤνΟΑΚΚΟνΝΤΑ γνοοοτ(3ντν33 8Ε0 ΙΌ ΝΟ: 109
СХЗСК1ВН РМР41В8 ЕУОЕУЕЗЕСеУУОРООЗЕКЕЗСУТЗОНРЗНКАМОХУ ΥΚΟΟΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙΟδΤΥδΤΝΥΑΟδνΚΟΚ,ΡΤνδΚϋ ΝΟΚΝΤΟΥΕ9ΜΝδΕΚΡΕΟΤθνΥΥΟΤΙΟΑΚΚθνΝΤΑΥ νοοοτρντνδδ 3Ε<) ΙΌ ΝΟ: 110
- 35 028183
СХЗСК1ВН РМР41С10 ΕΜΟΕνΕδΟΟΟΕνΟΡΟΟδΕΚΕδΟΑΤδΚΤΙΡΚδΝΑΜΟΧν ΥΚζ)ΑΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑΟδνΚΟΚΡΤνδΚΟ ΝΌΚδΤΟΥΕ()ΜΝδΕΚΡΕΟΤσνΥΥ<3ΤνθΑΚΚα\νΝΤ6Υ \νοοοτοντνδδ δΕΌ Ю ΝΟ: 111
СХЗСК1ВИ РМР41Р9 ΕνρΕνΕδοοαννρραΕδΕΚΕδεντδοπΡδΝΝΑΜονν ΥΚΌΟΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙΟδΤΥδΤΝΥΑΟδνΚΟΚΡΤνδΚϋ ΝΟΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤΙΟΑΚΚΟλΥΝΤΑΥ ΑΥΟφΟΤΡντνδδ δΕ<3 Ю ΝΟ: 112
СХЗСК1ВП РМР41Н10 ΚνΟΕνΕδΟΟΟΕνΟΡΟϋδΕΚΕδΟΑΑδΟΕΤΕΟΟΥΑΜΟ \νΥΒρΑΡΟΚΚΚΕ>ΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑΟδνΚΟΚΡΤνδΚ ΟΝϋΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤΙΟΑΚΚΟΧνΝΤΟ ΥλνΟφΟΤΌντνδδ δΕ<} Ю ΝΟ: 113
СХЗСК.1ВП РМР46В5 ΚνρΕνΕδΟΟΟΕνρΡΟΟδΕΚΙ^ΑΤδΚΤΙΡΚδΝΑΜΟλν ΥΚρΑΡΟΚΚΚΌΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑΟδνΚΟΚΡΤνδΚΌ ΝΟΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤΙϋΑΚΚΟλνΝΤΟΥ λΥΟφΟΤΟντνδδ δΕΟ Ш ΝΟ: 114
СХЗСК.1ВИ ΡΜΡ46ϋ3 ΕνρΡνΕδ600Ενζ)Ρ06δΡΚΡδ€ΑΤδ0ΤΙΡδΝΝΑΜ0\ν ΥΚΌνΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑϋδνΚΟΚΡΤνδΚΏ ΝΟΚΝΤΟΥΕΚΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥϋΤνΟΑΚΚΟΧνΝΤΟ γχνοοοτοντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 115
СХЗСК1ВП РМР46Н5 ΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνΟΑΟΟδΕΚΕδΟνΤδΟΙΙΡδΝΝΑΜΟΧν ΥΚρΟΡΟΚΚΚΒΡνΑδΙδδΤΥδΤΝΥΑΟδνΚΌΚΡΤνδΚΌ ΝϋΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤΙΟΑΚΚΟλνΝΤΑΥ ν/οοοτρντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 116
СХЗСК1ВИ РМР48В8 ΕνθΕνΕδΟΟΟΕνθΡΟΟδΕΚΕδΟΑΤδΚΤΙΡΚ.δΝΑΜΟ\ν ΥΚ0ΑΡΟΚΚΚΤ>ΕνΑδϊδΝδΟδΤΝΥΤΟδνΚΟΚ.ΡΤνδΚ1) ΝΟΚΝ'Ι'ΟΥΕ9ΜΝδΕΚΡΕΕ)Ι'ανΥΥ€Ίνΐ)ΑΚΚ(ί\νΝΤ(ί ΥΧνΟφΟΤφντνδδ δΕΟ Ιϋ ΝΟ: 117
СХЗСК.1ВП РМР48Ш1 ΚνρΕνΕδΟΟΟΕνς)ΡΟΟδΕΚΕδΟΑΤδΚΤΙΡΚ.δΝΑΜ6\ν ΥΚΌΑΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑϋδνΚΟΚΡΤνδΚϋ ΝΟΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤνΟΑΚΚΟλΥΝΤΟ γχνοοοτοντνδδ δΕΟ ΙΟ ΝΟ: 118
СХЗСК1ВИ РМР48О8 ΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνΟΡΟΟδΕΚΕδΟΑΤδΚΤΙΡΚδΝΑΜΟλΥ ΥΚρΑΡΟΚΚΚ,ΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑΌδνΚΟΚΡΑνδΚΟ ΝΟΚΝΤΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕϋΤΟνΥΥΟΤνΟΑΚΚΟΧνΝΤΟ Υλνοροτοντνδδ δΕζ) Ю ΝΟ: 119
СХЗСК1ВИ РМР48Н9 ΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνΟΡΟΟδΕΚΕδΟΑΤδΟΤΙΡδΝΝΑΜΟ^ ΥΚφΑΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδΝδΟδΤΝΥΑΟΡνΚΟΚΡΤνδΚΟ ΝϋΚΝΤΟΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΤΟνΥΥετνΟΑΚΚΟλνΝΤΑ γχνοοοτοντνδδ δΕΟ ΙΟ ΝΟ: 120
Таблица 6. Оптимизированные VΗΗ-домены
СХЗСК1ВН 043 ЕУ0ЬУЕ5ООО5У0РОЕ8ЬК.Ь5САА8О81Р88КАМААУ ΥΚΟΑΡΟΚΚΚΟΕνΑΑΙΝδνονΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΟ ΝδΚΝΤνΥΕ0ΜΝδΕΚΡΕΌΤΑνΥΥεΤδϋΡΚΚΟ\νϋΤΚΥ χνοοοτρντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 121
СХЗСК1ВН 045 ΟνΟΕνΕδΟΟΟδνΟΡΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΧν ΥΚΟΑΡΟΚΚΚΕ>ΕνΑΑΙΝδνθνΤΚΥΑΟδνΚΟΚΕΤΙδΚ.Ο ΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟλνΟΤΚΥ \УОООТЬУТУ88 δΕΟ ΙΟ ΝΟ: 122
СХЗСК1ВП 047 ΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνΟΡΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΧν ΥΚΟΑΡΟΚΚΚΟΕνΑΑΙΝδνονΤΚΥΑΟδνΚΟΚΕΤΙδΚϋ Ν5ΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚ.ΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚ.ΚΟλνθΤΚΎ χνοοοτρντνδδ δΕΟ ГО ΝΟ: 123
- 36 028183
СХЗСК1ВП 048 ΕνρΕνΕδΟΟΟδνΟΡΟΟδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΨ ΥΚρΑΡΟΚΚΚϋΕνΑΑΙΝδνΟνΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΟ ΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚ.ΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚ.Κ.ΟΨΕ>ΤΚΎ ΨΟΟΟΤΕντνδδ 3Εζ) ГО ΝΟ: 124
СХЗСК1ВП 049 Εν<3ΕνΕδΟΟΟδνςΡΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑ\ν ΥΚρΑΡΟΚρΚΟΕνΑΑΙΝδνονΤΚΥΑΟδνΚΟΚ,ΡΤΙδΚΟ ΝδΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟΧνΟΤΚΥ ψοςοτΕντνδδ δΕζ) Ю ΝΟ: 125
СХЗСК1ВП 050 ΕνςφνΕδΟΟΟδνΟΡΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΥν ΥΚρΑΡΟΚΚΚΕΕνΑΑΙΝδνΟνΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΒ ΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟΥνΟΤΚΥ \νο(2θΤΕντνδδ 3Ε<3 Ю ΝΟ: 126
СХЗСК1ВН 061 ΕνρΕνΕδαΟΟΕνΟΡΟΟδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΥΥ ΥΚρΑΡΟΚΚΚΟΕνΑΑΙΝδνΟνΤΚΎΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΙ) ΝδΚΝΤνΥΙ^ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟΧνΟΤΚΥ γναοοτΈντνδδ 3Ε<3 Ю ΝΟ: 127
СХЗСК1ВИ 056 ΕνρΕνΕδΟΟΟΕνρΡΟΟδΕΚΕδϋΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΥν ΥΚΡΑΡΟΚρΚΟΕνΑΑΙΝδνΟνΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚϋ ΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟΥνΟΤΚΥ γνοροτΕντνδδ ЗЕО Ιϋ ΝΟ: 128
СХЗСК1ВП 057 Εν(5ΕνΕδΟΟΟΕν<3ΡΟΟδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΥν ΥΚΡΑΡΟΚΚΚΕΕνΑΑΙΝδνΟνΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΟ ΝδΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟΥνϋΤΚΥ ΥνορΟΤΕντνδδ 3Ε<3 Ю ΝΟ: 129
СХЗСК1ВП 060 Εν9ΕνΕδΟΟΟΕνζ)ΡΟΟδΕΚ.ΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑ\ν ΥΚςΑΡΟΚρΚΕΕνΑΑΙΝδνθνΤΚΥΑΟδνκαΚ.ΡΤίδΚ.0 ΝδΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟΧνΟΤΚΥ γνοροτΕντνδδ 3Ε<2 Ю ΝΟ: 130
СХЗСК.1ВП 065 Εν(2ΕνΕδΟΟΟδνς)ΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΥν Υ^ΑΡΟΚΚΚΟΕνΑΑΙδδνονΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚϋ ΝΑΚΝΤνΥΕςΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟλΥΟΤΚΎ χνοοοτΕντνδδ ЗЕЦ Ю ΝΟ: 131
СХЗСК1ВИ 067 ΕνΟΕνΕδΟΟΟδνΟΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑλν ΥΚΟΑΡΟΚΚΚΟΕνΑΑΙΟδνΟνΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΟ ΝΑΚΝΤνΥΕ9ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟ\νϋΤΚΥ \νο<}οτΕντνδδ 3Ε<3 ГО ΝΟ: 132
СХЗСК1ВП 068 ΕνρΕνΕδΟΟΟδνΟΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΥν ΥΚρΑΡΟΚΚΚΟΕνΑΑΙΟδνΟνΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚϋ ΝΑΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδϋΡΚΚΟΥνϋΤΚΥ ΨΟζΙΟΤΕντνδδ 3Ε<3 ГО ΝΟ: 133
СХЗСК.1ВП 074 ΕνΟΕνΕδΟΟΟδνΟΑΟΕδΕΚΕδϋΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΥν ΥΚρΑΡΟΚΚΚΟΕνΑΑΙΤδνονΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚΒ ΝΑΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟΥνΟΤΚΥ ΨΟρΟΤΕντνδδ ЗЕЦ Ю ΝΟ: 134
СХЗСК1ВП 118 Εν()ΕνΕδΟΟΟδνζ)ΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΥν ΥΚρΑΡΟΚΚ.ΚΟΕνΑΑΙΝΤνθνΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚ.ϋ ΝΑΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟλνΟΤΚΥ ΨΟρΟΤΕντνδδ ЗЕЦ ГО ΝΟ: 135
СХЗСК.1ВН 129 ΕνΟΕνΕδΟΟαδνΟΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΥν ΥΚΡΑΡΟΚΚΚΟΕνΑΑΙΝΟνΟνΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΟ ΝΑΚΝΤνΥΕ9ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟΥΥΟΤΚΥ ΧνΟΟΟΤΕντνδδ ЗЕЦ ГО ΝΟ: 136
СХЗСК1ВИ 158 ΕνρΕνΕδΟΟΟδνΐ^ΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΧν ΥΚΡΑΡΟΚΚΚΟΕνΑΑΙΝΡνονΤΚΎΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΟ ΝΑΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥεΤδϋΡΚΚΟΥνΟΤΚΥ λνθ(}ΟΤΕντνδδ 3Εζ) ГО ΝΟ: 137
СХЗСК.1ВП 306 ΟνςΕνΕδαΟΟΕνρΡΟΟδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΤΑΜΑΧν ΥΚρΑΡΟΚΚΚΟΕνΑΑΙδδνονΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΟ ΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδϋΡΚΚΟΧνϋΤΚΥ ψοοοτΕντνδδ ЗЕЦ Ю ΝΟ: 138
СХЗСК1ВП 307 ϋνζ)ΕνΕδΟΟΟΕν9ΡΟΟδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΤΑΜΑ\ν ΥΚζ)ΑΡΟΚΚ.ΚΕ)ΕνΑΑΙδΤνθνΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚΟ ΝδΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥϋΤδΟΡΚΚΟΨΟΤΚΎ χνοοοτΕντνδδ 5Εζ) ГО ΝΟ: 139
СХЗСК.1ВП 308 ΟνΟΕνΕδΟΟΟΕνΟΡΟΟδΕΚΕδΌΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑν/ ΥΚρΑΡΟΚΚΚΒΕνΑΑΙΝδνονΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΟ ΝδΚΝΤνΥΕ<3ΜΝδΕΚΡΕϋΤΑνΥΥ(:Τ3ΟΡΚΚΟλνθΤΚΥ \νθζ)ΟΤΕντν33 3Εζ) Ю ΝΟ: 140
СХЗСК1ВИ 00306 (ϋΙΕ) ΕνρΕνΕδΟΟΟΕνρΡΟΟδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΤΑΜΑΥν ΥΚΟΑΡΟΚΚΚϋΕνΑΑΙδδνΟνΤΚΥΑΟδνκαΚΡΤΙδΚΌ ΝδΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΕΤδΟΡΚΚΟΥνϋΤΚΥ χνοοοτΕντνδδ 8Εζ) Ιϋ ΝΟ: 222
СХЗСК.1ВП 00307 (ϋΙΕ) ΕνρΕνΕδΟΟΟΕνρΡΟΟδΕΚ,ΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΤΑΜΑΥν ΥΚρΑΡΟΚΚΚΟΕνΑΑΙδΤνονΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΟ ΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥσΤδΟΡΚΚΟν/ΟΤΚΥ ΨΟρΟΤΕντνδδ 8Ε() ГО ΝΟ: 223
СХЗСК1ВИ 00308 (ϋΙΕ) ΕνρΕνΕδΟΟΟΕνςΡΟΟδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΧν ΥΚ.ρΑΡΟΚΚΚΟΕνΑΑΙΝδνθνΤΚΥΑϋδνΚΟΚ.ΡΤΙδΚ.0 ΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟΥνϋΤΚΥ \νθζ)ΟΤΕντν33 ЗЕЦ ГО ΝΟ: 224
В другом объекте изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, в частности, иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, предлагаемый в настоящем изобретении, гуманизируют и/или оптимизируют в отношении его стабильности, эффективности, технологичности и/или сходства с человеческими каркасными участками. Например, полипептид гуманизируют и/или оптимизируют его последовательность в одном или нескольких следующих положениях (согласно нумерации по Кэботу): 1, 11, 14, 16, 74, 83, 108. В одном из объектов изобретения полипептид содержит одну или несколько следующих мутаций: ЕЮ, З11Ь, А14Р, Е16С, А74З, К83К, ^108^.
В одном из объектов изобретения один или несколько каркасных участков в полипептиде, предлагаемом в настоящем изобретении, в частности, последовательность иммуноглобулинового единичного вариабельного домена, предлагаемого в настоящем изобретении, гуманизируют и/или оптимизируют. В одном из объектов изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, в частности, им- 37 028183 муноглобулиновый единичный вариабельный домен, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит каркасные участки (ЕК), например, представленные ниже:
I) ЕК1, выбранный из любой одной из 8Е^ ГО N0: 198-204;
II) ЕК2, выбранный из любой одной из 8Е^ ГО N0: 205-208;
III) ЕК3, выбранный из любой одной из 8Е^ ГО N0: 209-210; и/или
IV) ЕК4, выбранный из любой одной из 8Е^ ГО N0: 211-212.
Последовательности человеческих каркасных участков иммуноглобулинов (ЕК), которые можно применять также в качестве последовательностей каркасных участков для иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, описанных выше, известны в данной области. В данной области известны также методы гуманизации каркасных участков иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, выведенных из видов, отличных от человека.
В другом объекте изобретения последовательность одного или нескольких СЭК-участков полипептида, предлагаемого в настоящем изобретении, в частности в иммуноглобулиновом единичном вариабельном домене, предлагаемом в настоящем изобретении, гуманизируют и/или оптимизируют. В одном объекте изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, в частности иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, предлагаемый в настоящем изобретении, гуманизируют и/или оптимизируют его последовательность в одном или в большем количестве следующих положений (нумерация согласно Кэботу): 52, 53.
В другом объекте изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, в частности, иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит одну или большее количество следующих мутаций: N528, 853Т.
В другом объекте изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, в частности иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит СЭК2, выбранный из любой одной из 8Е^ ГО N0: 214-221.
Репрезентативные гуманизированные и/или оптимизированные последовательности, предлагаемые в настоящем изобретении, представлены выше в табл. 4 и 6 и ниже в табл. 7.
Таблица 7. Варианты с оптимизированной последовательностью
В табл. 7 а представлены ЕК1-СПК1-ЕК2-СКБ2 вариантов с оптимизированной последовательностью, в табл. 7б представлены ЕК3-СПК3-ЕК4-СПК4 указанных вариантов. Номера последовательностей в таблицах (8Е^) соответствуют номерам последовательностей в перечне последовательностей, прилагаемом к настоящей заявке.
Таблица 7а. Варианты с оптимизированной последовательностью (ЕК1-СПК1-ЕК2-СПК2)
Нанотело 8Еф РК1 ЗЕф РК1 ΟϋΚΙ 8Εζ> ΟϋΚΙ ΡΚ2 8Εφ ΡΚ2 ΟϋΚ2 8Ε0 ΟϋΚ2
СХЗСК1 ΒΙΙΡΜΡ6 6В02 1 ЕУОЬУЕЗ ОООЗУфА ОЕЗЬКЕЗ СААЗ 198 Ο8ΙΡ38 ΝΑΜΑ 141 \УУКф ΑΡΟΚΚ КОЬУА 205 ΑΙΝδν οντκ 162
СХЗСКЛ ΒΙΙ043 121 ЕУрЕУЕЗОООЗУфРОЕЗЬКЕЗСААЗ 199 Ο3ΙΡ58 ΝΑΜΑ 141 \ΥΥΚφ ΑΡΟΚΚ КОЬУА 205 ΑΙΝδν οντκ 162
СХЗСК1 ΒΙΙ045 122 ϋνρΐ УЕЗ ОООЗУфР СЕЗЬКЬЗ СААЗ 200 Ο8ΙΡ83 ΝΑΜΑ 141 ΨΥΚφ ΑΡΟΚΚ КОЬУА 205 ΑΙΝδν οντκ 162
СХЗСК1 ΒΙΙ047 123 ЕУЦЬУЕЗ ОООРУфР ОЕЗЬКЬЗ СААЗ 201 Ο8ΙΡ88 ΝΑΜΑ 141 ЗУУКф ΑΡΟΚΚ КОЬУА 205 ΑΙΝδν οντκ 162
СХЗСК1 ВП048 124 ЕУЦЬУЕЗ ОООЗУфР ССЗЕКЬЗ СААЗ 202 Ο8ΙΡ83 ΝΑΜΑ 141 \νγκο ΑΡΟΚΚ КОЬУА 205 ΑΙΝδν οντκ 162
СХЗСК1 ΒΙΙ049 125 ЕУОЬУЕЗ ОООЗУфР СЕЗЬКЬЗ СААЗ 199 Ο8ΙΡ88 ΝΑΜΑ 141 ΨΥΚφ ΑΡΟΚφ КОЬУА 206 ΑΙΝδν οντκ 162
СХЗСК1 ΒΙΙ050 126 ЕУфЬУЕЗ ОООЗУфР ОЕЗЬКЬЗ СААЗ 199 Ο8ΙΡ88 ΝΑΜΑ 141 ΨΥΚφ ΑΡΟΚΚ КЕЬУА 207 ΑΙΝδν οντκ 162
СХЗСКЛ Β1Ι061 127 ЕУОЬУЕЗ сооьурр ООЗЬКЬЗ СААЗ 203 Ο8ΙΡ88 ΝΑΜΑ 141 ΨΥΚφ ΑΡΟΚΚ КОЬУА 205 ΑΙΝδν οντκ 162
СХЗСК1 ΒΙΙ056 128 ЕУЦЬУЕЗ ОООЬУОР ООЗЬКЬЗСААЗ 203 Ο3ΙΡ83 ΝΑΜΑ 141 ΨΥΚφ Αροκς КОЬУА 206 ΑΙΝδν οντκ 162
СХЗСК1 ΒΙΙ057 129 ЕУфЬУЕЗ ОООЬУОР ООЗЬКЬЗ СААЗ 203 Ο8ΙΡ88 ΝΑΜΑ 141 \νΥΚφ ΑΡΟΚΚ КЕЬУА 207 ΑΙΝδν οντκ 162
СХЗСК1 Β1Ι060 130 ЕУЦЬУЕЗ ОООЬУЦР ООЗЬКЬЗ СААЗ 203 Ο8ΙΡ88 ΝΑΜΑ 141 \νΥΚφ ΑΡΟΚφ КЕЬУА 208 ΑΙΝδν οντκ 162
СХЗСК1 ВН065 131 ЕУфЬУЕЗ ОООЗУфА ОЕЗЬКЬЗ СААЗ 198 Ο8ΙΡ88 ΝΑΜΑ 141 ψγκς ΑΡΟΚΚ КОЬУА 205 ΑΙδδν οντκ 214
СХЗСК1 В11067 132 ЕУфЬУЕЗ ОООЗУЦА ОЕЗЬКЬЗ СААЗ 198 ΟδΙΡδδ ΝΑΜΑ 141 \νΥΚφ ΑΡΟΚΚ КОЬУА 205 Αίςδν οντκ 215
- 38 028183
СХЗСК1 ΒΙ1068 133 ЕУОЬУЕ8 ΟΟΟδνφΑ СЕЗЬКЬЗ САА8 198 ΟδΙΡδδ ΝΑΜΑ 141 \νγκο ΑΡΟΚΚ КОЬУА 205 ΑΙΟδν οντκ 216
СХЗСК1 ΒΙΙ074 134 ΕνφΡνΕδ οοοδνςΑ ΟΕδΡΚΡδ ΟΑΑδ 198 ΟδΙΡδδ ΝΑΜΑ 141 ΨΥΚφ ΑΡΟΚΚ КЭЬУА 205 ΑΙΤδν οντκ 217
СХЗСК1 ΒΙΙ118 135 ΕνφΕνΕδ ΟΟΟδνφΑ ΟΕδΕΚΡδΟΑΑδ 198 ΟδΙΡδδ ΝΑΜΑ 141 ΨΥΚφ ΑΡΟΚΚ КОЬУА 205 ΑΙΝΤν οντκ 218
СХЗСК1 ΒΙΙ129 136 ΕνζφνΕδ ΟΟΟδνφΑ ΟΕδίΚίδ ΟΑΑδ 198 ΟδΙΡδδ ΝΑΜΑ 141 ΎΥΚΟ ΑΡΟΚΚ КОЬУА 205 ΑΙΝΟ νοντ К 219
СХЗСК1 ВП158 137 ΕνζφνΕδ ΟΟΟδνφΑ ΟΕδΕΚΡδ ΟΑΑδ 198 ΟδΙΡδδ ΝΑΜΑ 141 ν/γκς ΑΡΟΚΚ ΚϋΡνΑ 205 ΑΙΝΡν οντκ 220
СХЗСК1 ΒΙΙ306 138 ϋνφΕνΕδ ОООЬУЦР ΟΟδΣΚΡδ ΟΑΑδ 204 ΟδΙΡδδ ΤΑΜΑ 213 ΧΥΥΚΟ ΑΡΟΚΚ ΚΟίνΑ 205 ΑΙδδν οντκ 214
СХЗСК.1 ΒΙΙ307 139 ϋνΩίνΕδ ОООЬУЦР ΟΟδΕΚίδ ΟΑΑδ 204 ΟδΙΡδδ ΤΑΜΑ 213 ν/γκο ΑΡΟΚΚ КОЬУА 205 ΑΙδΤν οντκ 221
СХЗСК1 Β1Ι308 140 ΟνΟίνΕδ ОООРУЦР ΟΟδίΚίδ ΟΑΑδ 204 ΟδΙΡδδ ΝΑΜΑ 141 ΧΥΥΚφ ΑΡΟΚΚ КОЬУА 205 ΑΙΝδν οντκ 162
Т аблица . 7Б. Варианты с оптимизированной последовательностью (НН3-СРН3 -РК4)
Нанотело 5Ε0 РКЗ δΕζ) ΡΚ3 ΟϋΚ3 δΕζ) ΟϋΚ3 ΡΚ4 δΕ<3 ΡΚ4
СХЗСК1 ΒΙΙΡΜΡ6 6Β02 1 ΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδ ΚϋΝΑΚΝΤνΥΕί) ΜΝδίΚΡΕΟΤΑν ΥΥΟΤδ 209 ϋΡΚΚΟλν ϋΤΚΥ 186 λνοροτί} ντνδδ 211
СХЗСК1 ΒΙΙ043 121 ΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδ ΚϋΝδΚΝΤνΥΕ(3 ΜΝδΕΚΡΕϋΤΑν ΥΥΟΤδ 210 ϋΡΚΚΟλν ϋΤΚΥ 186 ΨΟΟΟίΤΕ ντνδδ 212
СХЗСК1 ΒΙΙ045 122 ΥΑΏδνΚΟΚΡΤΙδ ΚϋΝδΚΝΤνΥΙΛ) ΜΝδΕΚΡΕϋΤΑν ΥΥΟΤδ 210 ϋΡΚΚΟλν ϋΤΚΥ 186 \νθζ)ΟΤΕ ντνδδ 212
СХЗСК.1 ΒΙΙ047 123 ΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδ ΚϋΝδΚΝΤνΥΕί} ΜΝδΕΚΡΕϋΤΑν ΥΥΟΤδ 210 ϋΡΚΚΟλν ϋΤΚΥ 186 \¥Οζ)ΟΤΕ ντνδδ 212
СХЗСК1 ΒΙΙ048 124 ΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδ ΚϋΝδΚΝΤνΥΕζ) ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑν ΥΥΟΤδ 210 ϋΡΚΚΟλν ϋΤΚΥ 186 УУСЮОТЕ ντνδδ 212
- 39 028183
СХЗСК1 ΒΙΙ049 125 ΥΑΒδνΚΟΚΡΤΙδ Κ.ΏΝδΚΝΤνΥ1Λ) ΜΝδΕΚΡΕΒΤΑν ΥΥΟΤδ 210 ВРККОХУ ΒΤΚΥ 186 ХУСЦОТБ ντνδδ 212
СХЗСК1 ΒΙ1050 126 ΥΑΒδνΚΟΚΡΤΙδ ΚΒΝδΚΝΤνΥΕζ) ΜΝδΕΚΡΕΒΤΑν ΥΥΟΤδ 210 ВРККОХУ ΒΤΚΥ 186 ХУСЦОТЬ ντνδδ 212
СХЗСК1 ΒΙ1061 127 ΥΑΒδνΚΟΚΡΤΙδ ΚΒΝδΚΝΤνΥΕζ} ΜΝδΕΚΡΕΒΤΑν ΥΥΟΤδ 210 ВРККОХУ ΒΤΚΥ 186 ХУОЦОТБ ντνδδ 212
СХЗСК1 ΒΙΙ056 128 ΥΑΒδνΚΟΚΡΤΙδ ΚΒΝδΚΝΤνΥΙ^ ΜΝδΕΚΡΕΒΤΑν ΥΥΟΤδ 210 ВРККОХУ ΒΤΚΥ 186 ХУОЦОТЬ ντνδδ 212
СХЗСК1 ΒΙΙ057 129 ΥΑΒδνΚΟΚΡΤΙδ ΚΒΝδΚΝΤνΥΕζ) ΜΝδΕΚΡΕΒΤΑν ΥΥΟΤδ 210 ВРККОХУ ΒΤΚΥ 186 ХУСЦОТБ ντνδδ 212
СХЗСК1 ΒΙΙ060 130 ΥΑΒδνΚΟΚΡΤΙδ ΚΒΝ8ΚΝΤνΥΕ() МИЗЬКРЕВТАУ ΥΥΟΤδ 210 ВРККОХУ ΒΤΚΥ 186 ХУСЦОТБ ντνδδ 212
СХЗСК1 ΒΙΙ065 131 ΥΑΒδνΚΟΚΡΤΙδ ΚΒΝΑΚΝΤνΥΕ<3 ΜΝδΕΚΡΕΒΤΑν ΥΥΟΤδ 209 ВРККОХУ ΒΤΚΥ 186 ХУОООТБ ντνδδ 212
СХЗСК1 ΒΙΙ067 132 ΥΑΒδνΚΟΚΡΤΙδ ΚΒΝΑΚΝΤνΥΕ() ΜΝδΕΚΡΕΒΤΑν ΥΥΟΤδ 209 ВРККОХУ ΒΤΚΥ 186 ХУСрОТБ ντνδδ 212
СХЗСК1 ΒΙ1068 133 ΥΑΒδνΚΟΚΡΤΙδ ΚΒΝΑΚΝΤνΥΕ() ΜΝδΕΚΡΕΒΤΑν ΥΥΟΤδ 209 ВРККОХУ ΒΤΚΥ 186 ХУОС^ОТБ ντνδδ 212
СХЗСК1 ВП074 134 ΥΑΒδνΚΟΚΡΤΙδ ΚΒΝΑΚΝΤνΥΕζ) ΜΝδΕΚΡΕΒΤΑν ΥΥΟΤδ 209 ВРККОХУ ΒΤΚΥ 186 ХУСЦОТБ ντνδδ 212
СХЗСК1 Β1Ι118 135 ΥΑΒδνΚΟΚΡΤΙδ ΚΒΝΑΚΝΤνΥΕ() ΜΝδΕΚΡΕΒΤΑν ΥΥΟΤδ 209 ВРККОХУ ΒΤΚΥ 186 ХУОЦОТЬ ντνδδ 212
СХЗСК1 ΒΙ1129 136 ΥΑΒδνΚΟΚΡΤΙδ ΚΒΝΑΚΝΤνΥΕί) ΜΝδΕΚΡΕΒΤΑν ΥΥΟΤδ 209 ВРККОХУ ΒΤΚΥ 186 ХУОЦОТЬ ντνδδ 212
СХЗСК1 ВП158 137 ΥΑΒδνΚΟΚΡΤΙδ ΚΒΝΑΚΝΤνΥΕ() ΜΝδΕΚΡΕΒΤΑν ΥΥΟΤδ 209 ВРККОХУ ΒΤΚΥ 186 ХУСЦОТБ ντνδδ 212
СХЗСК.1 ВП306 138 ΥΑΒδνΚΟΚΡΤΙδ ΚΒΝδΚΝΤνΥΕΟ ΜΝδΕΚΡΕΒΤΑν ΥΥΟΤδ 210 ВРККОХУ ΒΤΚΥ 186 ХУСЦОТБ ντνδδ 212
СХЗСК1 ΒΙΙ307 139 ΥΑΒδνΚΟΚΡΤΙδ ΚΒΝδΚΝΤνΥΕί) ΜΝδΕΚΡΕΒΤΑν ΥΥΟΤδ 210 ВРККОХУ ΒΤΚΥ 186 ХУОООТБ ντνδδ 212
СХЗСК1 ВП308 140 ΥΑΒδνΚΟΚΡΤΙδ ΚΒΝδΚΝΤνΥίρ ΜΝδΕΚΡΕΒΤΑν ΥΥΟΤδ 210 ВРККОХУ ΒΤΚΥ 186 ХУСЦОТБ ντνδδ 212
В одном из объектов настоящего изобретения полипептид, предлагаемый в изобретении, может дополнительно содержать модификации, такие как гликозильные остатки, модифицированные аминокислотные боковые цепи и т.п.
Специалисту в данной области должно быть очевидно, что для фармацевтического применения на людях мишенью полипептидов, предлагаемых в изобретении, предпочтительно должен быть человеческий СХ3СК1, в то время как для применения в ветеринарии мишенью полипептидов, предлагаемых в изобретении, предпочтительно должен быть СХ3СК1 из вида, подлежащего лечению.
Специалисту в данной области должно быть очевидно, что иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены, входящие в полипептиды, предлагаемые в изобретении, в том случае, когда их применяют в качестве терапевтического агента на людях, предпочтительно представляют собой гуманизированные иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены.
Согласно изобретению иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен может представлять собой доменное антитело, т.е. содержащее АЬ или АН антитело, и/или АНН-домены, описанные выше, и/или любой другой вид иммуноглобулинового единичного вариабельного домена, например, камелизированный АН, при условии, что указанные иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены представляют собой анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены.
- 40 028183
В одном из объектов изобретения иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен практически состоит из любой последовательности доменного антитела или последовательности УНН-домена, описанной выше. В частности, иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен практически состоит из последовательностей УНН-домена.
В другом объекте изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит два или большее количество анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов. В другом объекте изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит два антиСХ3СК1 иммуноглобулиновых единичных вариабельных домена, например, анти-СХ3СК1 УНН. В одном из объектов изобретения два анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновых единичных вариабельных домена в полипептиде, предлагаемом в настоящем изобретении, имеют одинаковую аминокислотную последовательность. В другом объекте изобретения два анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновых единичных вариабельных домена в полипептиде, предлагаемом в настоящем изобретении, имеют различные аминокислотные последовательности.
Согласно другому варианту осуществления изобретения по меньшей мере два иммуноглобулиновых единичных вариабельных домена, которые присутствуют в полипептиде, предлагаемом в изобретении, могут быть связаны друг с другом либо непосредственно (т.е. без применения линкера), либо через линкер. Линкер предпочтительно представляет собой пептидный линкер, и согласно изобретению он должен быть выбран так, чтобы он давал возможность связываться по меньшей мере двум иммуноглобулиновым единичным вариабельным доменам с СХ3СК1, либо в одной и той же молекулы СХ3СК1, либо в двух различных молекулах.
Выбор приемлемых линкеров среди прочего должен зависеть от эпитопов, и, в частности, от расстояния между эпитопами на СХ3СК1, с которыми связываются иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены, и он должен быть очевиден специалисту в данной области на основе представленного описания необязательно после некоторых ограниченных общепринятых экспериментов.
Кроме того, когда два или большее количество анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов представляют собой доменные антитела или УНН-домены, то их можно также связывать друг с другом через третье доменное антитело или УНН-домен (где два или большее количество иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов могут быть соединены непосредственно с третьим доменным антителом или УНН-доменом или через приемлемые линкеры). Указанное третье доменное антитело или указанный УНН-домен может представлять собой, например, доменное антитело или УНН-домен, обеспечивающий удлиненное время полужизни, что будет дополнительно представлено в настоящем описании. Например, последнее доменное антитело или последний УНН-домен может представлять собой доменное антитело или УНН-домен, которое/который обладает способностью связываться с (человеческим) сывороточным белком, таким как (человеческий) сывороточный альбумин или (человеческий) трансферрин, что будет дополнительно указано в настоящем описании.
Альтернативно этому два или большее количество анти-СХ3СК1 иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов можно соединять в серии (либо непосредственно, либо с помощью приемлемого линкера) и третье (одно) доменное антитело или третий УНН (которые могут обеспечивать увеличенное время полужизни, как указано выше) можно соединять непосредственно или с помощью линкера с одной из этих двух или большего количества вышеуказанных иммуноглобулиновых последовательностей.
Приемлемые линкеры представлены в настоящем описании в сочетании со специфическими полипептидами, предлагаемыми в изобретении, и они могут, например, содержать (но, не ограничиваясь только ею) аминокислотную последовательность, где аминокислотная последовательность предпочтительно состоит из 5 или большего количества аминокислот, 7 или большего количества аминокислот, 9 или большего количества аминокислот, 11 или большего количества аминокислот, 15 или большего количества аминокислот или по меньшей мере из 17 аминокислот, например, примерно из 20-40 аминокислот. Однако, хотя верхний предел не имеет решающего значения, но его выбирают, исходя из соображений пригодности, например, для биофармацевтического производства таких полипептидов.
Линкерная последовательность может представлять собой встречающуюся в естественных условиях последовательность или не встречающуюся в естественных условиях последовательность. Для применения в терапевтических целях линкер предпочтительно является неиммуногенным для индивидуума, которому вводят полипептид, предлагаемый в изобретении.
Одной из пригодных групп линкерных последовательностей являются линкеры, выведенные из шарнирной области тяжелой цепи антител, описанные в \УО 1996/34103 и \УО 1994/04678.
Другими примерами являются полиаланиновые линкерные последовательности, такие как А1а-А1аА1а.
Другими предпочтительными примерами линкерных последовательностей являются 01у/8етлинкеры различной длины, такие как (§1ух8егу)2-линкеры, включая (§1у48ет)3, (§1у48ет)4, (§1у48ет), (§1у38ет), §1у3 и (§1у38ет2)3.
Если полипептид, предлагаемый в изобретении, модифицируют путем присоединения полимера, например полиэтиленгликольного (ПЭГ) остатка, то линкерная последовательность предпочтительно включает аминокислотный остаток, такой как цистеин или лизин, что позволяет осуществлять указанную
- 41 028183 модификацию, например, ПЭГилирование, в линкерной области.
Примерами линкеров являются
00008 (5 ОЗ-линкер, ЗЕ(} ГО N0: 233),
8008008 (708-линкер, 8Е<3 ГО N0: 234),
ООООСООО8 (8О8-линкер, 8Е<2 ГО N0; 235),
000030008 (9ОЗ-линкер, 8Е(} ГО N0; 236),
0000800008 (1008-линкер, 8Е<3 ГО N0: 237),
000080000800008 (15О8-линкер, ЗЕО ГО N0; 238),
000080000800000008 (18О8-линкер, 8Е(3 ГО N0: 239),
00008000080000800008 (2008-линкер, 8Е(2 ГО ΝΟ: 240), 0000800008000080000800008 (25О8-линкер, 8Е<2 ГО N0: 241), 000080000800008000080000800008 (3008-линкер, ЗЕ(} ГО N0; 242), 00008000080000800008000080000800008 (3508-линкер, ЗЕ(} ГО N0; 243),
ЕРК8С0КТНТСРРСР (01-линкер из шарнирной области, ЗЕ<3 ГО N0; 244), О0О08ООС8ЕРК8СОКТНТСРРСР (908-01-линкер из шарнирной области, 8Е(2 ГО ΝΟ: 245),
ЕРКТРКР()РААА (верхняя длинная шарнирная область антител ламы, ЗЕ() ГО N0; 246),
ЕЕКТРЕООТТНТСРКСРЕРК8СОТРРРСРК.СРЕРК8СОТРРРСРКСРЕРК8СОТРРР СРК.СР (03-шарнирная область, 5Е() ГО ΝΟ: 247),
ААА (А1а-линкер, 8Е(^ ГО N0; 248).
Кроме того, линкер может представлять собой также поли(этиленгликольный) фрагмент, что описано, например, в Ш0 2004/081026.
Примеры полипептидов, содержащих или состоящих из двух или большего количества антиСХ3СК1 иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, представлены (но, не ограничиваясь только ими) в табл. 8а.
Таблица 8а. Двухвалентные анти-СХ3СК1 полипептиды
СХЗСК.1 ΒΙΙ007 ΕνρΡνΕδΟΟΟΕνΟΑΟΟδΡΚΕδΟνΑδΟΚΤΡδδΥΑΜΟΧνΡ Κ.ρΑΡΟΚΕΚΑΡνΑΟΙδΟδΑδΚΚΥΥΑΟδνΚΟΚ.ΡΤνδΚΌΝ ΑΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΰΑΑδΝδΥΡΚνρΡΟΥΥ ΟρΟΤρντνδδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟ 000δ0006δΚνς)ΕνΕδ000ΕνρΡ00δΕΚΕδ€ΑΤδ0ΤΙΡ δΝΝΑΜΟ\νΥΚ(3ΑΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδδδΟδΤΝΥΑΟδνΚ6Κ ΡΤνδΚΕ)Ν0ΚΝΤ0ΥΕ(3ΜΝδΕΚΡΕ0Τ0νΎΥ(3ΤΕ0ΑΚΚ0 ΨΝΤΑΥΧνΟΟΟΑΟντνδδ δΕ(3 ГО ΝΟ: 267
СХЗСК1 ВП009 ΚνρΕνΕδΟΟΟΡνρΡΟΟδΕΚΕδεΑΤδΟΤΙΡδΝΝΑΜΟΨΥ Κ(3ΑΡΟΚΚΚΟΕνΑδΙδδδΟδΤΝΥΑΟδνΚΟΚΡΤν5ΚΟΝΟΚ NΤΟΥ^^ΜNδ^ΚΡΕ^ΤΟVΥΥСΤ^^ΑΚ.Κ.Ο\VNΤΑΥ^VΟ^ ΟΑρντνδδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟαδΟΟΟΟδΟΟΟ ΟδΟΟΟΟδΕνρΡνΕδΟΟΟΕν(2Α6ΟδΡΚΡδ€νΑδΟΚΤΡδδ ΥΑΜα\νΡΚ<3ΑΡΟΚΕΚΑΡνΑΟΙδΟδΑδΚΚΥΥΑΟδνΚΟΚΡ ΤνδΚΟΝΑΚΝΤνΥΕρΜΝδΡΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑδΝδΥΡΚν ρρϋγγοροτρντνδδ δΕζ) Ш N0: 268
СХЗСК1 ΒΙΙ012 Εν(3ΕνΕδΟΟΟδν<3ΑΟΟδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑ\νΎ ΚΟΑΡΟΚρΚΟΡνΑΟΙΝδνΟΙΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝΑΚ ΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥ(:ΤδΟΡΚΚΟ\νθΤΚΥ\νθ(30 ΤΕντνδδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδ ΟΟΟΟδΚν9ΡνΕδΟΟΟΕνρΡΟΟδΡΚ.ΡδαΑΤδΟΤ1ΡδΝΝΑ ΜΟ\νΥΚΡΑΡΟΚΚΚΟΡνΑδΙδδδΟδΤΝΥΑΟδνΚΟΚΡΤνδ ΚΟΝΟΚΝΤΟΥΡί^ΜΝδΡΚΡΕΟΤΟνΥΥΟΤΡΟΑΚΚΟΨΝΤΑ Υ\Υ0ζ)0Α(3ντνδδ δΕί^ Ю ΝΟ: 269
СХЗСК1 ВП016 ΕνρΡνΕδΟΟΟδνρΑΟΕδΡΚΡδΟΑΑδΟδ1ΡδδΝΑΜΑ\νΥ Κ(3ΑΡΟΚ(2ΚΟΡνΑνΐΝδν6ΙΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΟΟΝΑΚ ΝΤνΥΙΛ>ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥ0ΤδΟΑΚΚΟ\νθΤΚΎ\νθζ)Ο τρντνδδοοοοδοοοοδοαοοδοοοοδοαοοδθοοο δΟΟΟΟδΕν(3ΡνΕδΟΟΟδνρΑΟΕδΡΚΡδ€ΑΑδΟδΙΡδδΝ ΑΜΑΧνΥΚ,ρΑΡΟΚρΚΟΕνΑνίΝδνΟΙΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙ δΟΟΝΑΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕϋΤΑνΥΥεΤδΟΑΚΚΟν/ΟΤ κγλνοροτςντνδδ δΕζ) Ю ΝΟ: 270
СХЗСК1 ВП017 Εν(3ΕνΕδΟΟΟδνζ)ΑΟΕδΕΚΕδΕΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑ\νΥ Κ.ρΑΡΡΟΚρΚΟΕνΑΠΝδνθΙΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδδΟΝΑ ΚΝΤνΥΕΕΜΝδΕΚΡΕΟΤΑν ΥΥΟΤδΟΟΚΚΟ\νθΤΚΥ\νθ<3 ατρντνδδοοοοδοοοοδοοοοδοοοοδοαοοδοοο ΟδΟΟΟΟδΕν<3ΕνΕδΟΟΟδν<3ΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδ ΝΑΜΑΨΥΚρΑΡΡΟΚρΚΟΕνΑΠΝδνΟΙΤΚΥΑΌδνΚΟΚΡ ΤΙδδϋΝΑΚΝΤνΥΕΕΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΟΚΚΟλνΟ τκΥλναροτρντνδδ δΕ(2 Ю ΝΟ: 271
- 42 028183
СХЗСЮ ΒΙΙ018 ЕУ(ЗЬУЕ8ООО8УрАОЕ5ЫЩ8САА8О51Р55ХАМА\УУ ΚΟΑΡΟΚΚΚΟΕνΑΑΙΝδνονΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚΌΝΑ ΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΌΡΚΚΟ\νθΤΚΥ\νθ(2 οτρντνδδοοοοδοοοοδοοοοδοοαοδοοοαδοοο 0δ0α00δΕνρΕνΕδ000δν()Α0ΕδΕΚΕδ0ΑΑδ0δΙΡδδ ΝΑΜΑνΥΚΟΑΡΟΚΚΚΌΕνΑΑΙΝδνονΤΚΥΑΌδνΚΟΚΡ ΤΙδΚΌΝΑΚΝΤνΥΕΡΜΝδΕΚΡΕΌΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟνΌ τκΎνοοοτοντνδδ δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 272
схзсю ΒΙΙ019 ΕΜΟΕνΕδΟΟΟδνςΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑνΥ ΚΟΑΡΟΚρΚΌΕνΑΠΝδνΟΙΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝΑΚ ΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΌΤΑνΥΥΟΤδΟΟΚΚΟνΌΤΚΥνορΟ τοντνδδοοοοδοοοοδοοοοδοοοοδοοοοδοοοο δΟΟΟΟδΕΜ(3ΕνΕδΟΟΟδνρΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝ ΑΜΑνΥΚΟΑΡΟΚΟΚΌΕνΑΕΙΝδνθΙΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙ δΚΌΝΑΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΌΟΚΚΟνΟΤ κγνοοοτοντνδδ δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 273
схзсю ΒΙΙ020 ΕνΟΕνΕδΟΟΟδνρΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑνΥ Κ(2ΑΡΟΚ<3ΚΕ)ΕνΑΟΙΝδνθΙΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚΤ)ΝΑΚ ΝΤΑΥΕρΜΝδΕΚΡΕΌΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟνΌΤΚΥναρΟ τΕντνδδΟοοαδοοοοδοοοοδοοοοδοοααδοαοοδ ΟαΟΟδΕνρΕνΕδΟΟΟδνςΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑ ΜΑνΥΚρΑΡΟΚρΚΌΕνΑΟΙΝδνΟΙΤΚΥΑΌδνΚΟΚΡΤΙδ Κ,ΟΝΑΚΝΤΑΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΌΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟνΟΤΚ γνοοοτΕντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 274
СХЗСЮ ΒΙΙ026 ΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνΟΑΟΟδΕΚΕδΟνΑδΟΚΤΡδδΥΑΜΟνΡ ΚρΑΡΟΚΕΚΑΡνΑΟΙδΟδΑδΚΚΥΥΑΌδνΚΟΚΡΤνδΚΌΝ ΑΚΝΤνΥΕΡΜΝδΕΚΡΕΌΤΑνΥΥΟΑΑδΝδΥΡΚνΟΡΌΥΥ οροτοντνδδοοοοδοοοοδαοοοδοοοοδοοοοδσ ΟΟΟδΟΟΟΟδΕνΟΕνΕδΟΟΟδνΟΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡ δδΝΑΜΑνΥΚρΑΡΟΚΚΚΌΕνΑΑΙΝδνονΤΚΥΑΌδνΚΟ ΚΡΤΙδΚΈ>ΝΑΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟ νϋτκγνοροτοντνδδ δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 275
СХЗСЮ ΒΙΙ027 ΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνΟΑΟΟδΕΚΕδΟνΑδσΚΤΡδδΥΑΜΟνΡ ΚΟΑΡΟΚΕΚΑΡνΑΟΙδΟδΑδΚ.ΚΥΥΑΟδνΚΟΚΡΤνδΚΌΝ ΑΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΌΤΑνΥΥΟΑΑδΝδΥΡΚνΟΡΌΥΥ ΟΟΟΤρντνδδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟ ОСО8СООО8ЕУ(ЩУЕ8ООО8УрАСЕ8ЕК.Е8САА8О81Р δδΝΑΜΑνΥΚΟΑΡΟΚΟΚΌΕνΑΟΙΝδνΟΙΤΚΥΑΌδνΚΟ ΚΡΤΙδΚΌΝΑΚΝΤΑΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΌΡΚΚΟ νθΤΚΎνθ<3ΟΊΈντνδδ δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 276
СХЗСЮ ВП006 Εν<3ΕνΕδΟΟ6ΕνρΑΟ6δΕΚΕδ0νΑδΟΚΤΡδδΥΑΜθνΡ ΚςΑΡΟΚΕΚΑΡνΑΟΙδΟδΑδΚΚΥΥΑΟδνΚΟΚΡΤνδΚΌΝ ΑΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΌΤΑνΥΥΟΑΑδΝδΥΡΚνρΡΌΥΥ αρατΕντνδδοοοοδοοοοδοοοοδοοαοδοοαοδο ΟΟΟδΟΟΟ6δΕνς>ΕνΕδΟΟΟΕνς)ΑΟΟδΕΚΕδ0νΑδΟΚΤ ΡδδΥΑΜΟνΡΚρΑΡΟΚΕΚΑΡνΑΟΙδΟδΑδΚΚΥΥΑΌδνΚ ΟΚΡΤνδΚΕ>ΝΑΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΌΤΑνΥΥΟΑΑδΝδΥ ρκνρρϋΥΥοραΊΈντνδδ δΕ<3 Ю ΝΟ: 282
В другом варианте осуществления изобретения по меньшей мере два иммуноглобулиновых единичных вариабельных домена полипептида, предлагаемого в изобретении, соединены друг с другом через другой фрагмент (необязательно посредством одного или двух линкеров), такой как другой полипептид, который в предпочтительном, но не ограничивающем объем изобретения варианте осуществления изобретения, может представлять собой дополнительный иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, описанный выше. Указанный фрагмент может либо являться практически неактивным, либо может обладать биологической активностью, такой как улучшение требуемых свойств полипептида, либо может придавать полипептиду одно или несколько дополнительных требуемых свойств. Например, фрагмент может (но, не ограничиваясь только этим) удлинять время полужизни белка или полипептида и/или снижать их иммуногенность или улучшать любое другое требуемое свойство.
В одном из объектов изобретения полипептид, предлагаемый в изобретении, включает, прежде всего, если он предназначен для применения в качестве терапевтического агента, фрагмент, который удлиняет время полужизни полипептида, предлагаемого в изобретении, в сыворотке или другой общей воде организма пациента. Понятие время полужизни определяют как время, необходимое для снижения концентрации (модифицированного) полипептида на 50% ΐη у1уо, например, в результате расщепления полипептида и/или клиренса, и/или секвестрования с помощью естественных механизмов.
Согласно другому варианту осуществления изобретения два иммуноглобулиновых единичных вариабельных домена можно сливать с молекулой сывороточного альбумина, как описано, например, в Ш() 01/79271 и \ΥΟ 03/59934.
Альтернативно этому указанный удлиняющий время полужизни фрагмент можно ковалентно связывать или сливать с указанным полипептидом, и он может представлять собой (но, не ограничиваясь только ими) Рс-область, остаток альбумина, фрагмент остатка альбумина, альбуминсвязывающий остаток, такой как антиальбуминовый иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, трансферринсвязывающий остаток, такой как антитрансферриновый иммуноглобулиновый единичный вариабельный, полиоксиалкиленовую молекулу, такую как молекула полиэтиленгликоля, альбуминсвязывающий пептид или производное гидроксиэтилкрахмала (ΗΕ8).
В другом объекте изобретения полипептид, предлагаемый в изобретении, содержит фрагмент, который связывается с антигеном, присутствующим в крови, таким как сывороточной альбумин, сывороточные иммуноглобулины, тироксинсвязывающий белок, фибриноген или трансферрин, что приводит к
- 43 028183 удлинению времени полужизни ΐη νινο образовавшегося полипептида, предлагаемого в изобретении. Согласно одному из вариантов осуществления изобретения указанный фрагмент представляет собой альбуминсвязывающий иммуноглобулин и более конкретно альбуминсвязывающий иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, такой как альбуминсвязывающий УНН-домен.
В другом варианте осуществления изобретения полипептид, предлагаемый в изобретении, содержит фрагмент, который связывается с сывороточным альбумином, где указанный фрагмент представляет собой альбуминсвязывающий пептид, описанный, например, в публикациях международных заявок на патент ПО 2008/068280 и ПО 2009/127691.
Указанный альбуминсвязывающий иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен (который обозначают также как антиальбуминовый иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен), если он предназначен для применения на людях, должен предпочтительно связываться с человеческим сывороточным альбумином и предпочтительно представляет собой гуманизированный альбуминсвязывающий УНН-домен.
Иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены, которые связываются с человеческим сывороточным альбумином, известны в данной области и описаны более подробно, например, в ПО 2006/122786. Наиболее предпочтительный альбуминсвязывающий УНН-домен состоит из или содержит аминокислотную последовательность, представленную в любой одной из ЗЕО ΙΌ ΝΌ: 230-232:
Таблица 8б
АЬВ-1 АУ<ЗЬУЕ5ОООЬУрРОК5ЬКЬ5САА5ОРТРК.5РОМ5 ΧννκρΑΡΟΚΕΡΕΨνδδΙδΟδΟδϋΤΕΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙ δΚΟΝΑΚΤΤΕΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤΙΟΟδΕδΚδ δς>οτζ)ντνδδ δΕζ) ГО ΝΟ: 230
АЬВ-11 (гуманизированная версия АЬВ-1) Εν(^νΕδΟΟΟΒνζ)ΡΟΝδΒΚΕδΟΑΑδΟΡΤΡδδΡΟΜδ \ννΚζ)ΑΡΟΚΟΕΕ\ννδδΙδΟ5ΟδΟΊΈΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙ δΚΟΝΑΚΤΤΕΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΏΤΑνΥΥΟΤΙΟΟδΕδΚδ δςοτρντνδδ δΕ() Ю ΝΟ: 231
АЬВ-2 Αν(3ΕνΕδθαθΕν()Ο6ΟδΕΚΕΑ0ΑΑδΕΚΙΡΟΕΝΕΜ ΟλνΥΚΟΟΡΟΝΕΚΕΕνΑΤατνΟΟδΤΝΥΑΟδνΚΟΚΡ ΤΙδΜΟΥΤΚζ)ΤνΥΕΗΜΝδΕΚΡΕΟΤΟίΥΥΟΚΙΚΚΤ\ν ΗδΕΕ\ΥΟζ)ΟΤζ)ντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 232
Согласно одному из вариантов осуществления изобретения полипептид, предлагаемый в изобретении, можно связывать с одним или несколькими участками антитела, фрагментами или доменами, которые придают одну или несколько эффекторных функций полипептиду, предлагаемому в изобретении, и/или могут придавать способность связываться с одним или несколькими Ее-рецепторами. Для этой цели, например (но, не ограничиваясь только указанным), участки антитела могут представлять собой или содержать СН2- и/или СН3-домены антитела, например, из тяжелой цепи антитела (что описано выше), и более предпочтительно из канонического человеческого состоящего из 4 цепей антитела; в частности полипептид, предлагаемый в изобретении, можно связывать с Ес-областью, например, из человеческого 1дО, из человеческого 1дЕ или другого человеческого 1д. Например, в ПО 94/04678 описаны состоящие из тяжелой цепи антитела, содержащие верблюжий УНН-домен или его гуманизированное производное, в котором СН2- и/или СН3-домен антитела из представителей верблюдовых заменен человеческим СН2и/или СН3-доменами с образованием иммуноглобулина, который состоит из двух тяжелых цепей, каждая из которых содержит - необязательно гуманизированный - УНН-домен и человеческие СН2- и СН3домены (но не СН1-домен), указанный иммуноглобулин обладает эффекторной функцией, обусловленной СН2- и СН3-доменами, может функционировать без присутствия каких-либо легких цепей и обладает удлиненным временем полужизни по сравнению с соответствующими УНН-доменами без указанной модификации.
В одном из объектов изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит два анти-СХ3СК1 УНН и УНН, способный связываться с сывороточным альбумином. В одном из объектов изобретения УНН сливают с помощью линкерных пептидов. Репрезентативные примеры указанных полипептидов, предлагаемых в настоящем изобретении, представлены ниже.
В одном из объектов изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит первый анти-СХ3СК1 УНН, слитый с первым линкерным пептидом, который в свою очередь слит с УНН, обладающим способностью связываться с сывороточным альбумином, который в свою очередь слит со вторым линкерным пептидом, который в свою очередь слит со вторым анти-СХ3СК1 УНН. В одном из объектов изобретения первый или второй линкерный пептид представляет собой 9ОЗ-линкер, в одном из объектов изобретения первый и второй линкерный пептид представляют собой 9ОЗ-линкер. В одном из объектов изобретения УНН, который обладает способностью связываться с сывороточным альбумином, обладает способностью связываться с человеческим сывороточным альбумином. В одном из объектов изобретения УНН, который обладает способностью связываться с сывороточным альбумином, имеет аминокислотную последовательность, представленную в ЗЕО ГО NО: 231. В одном из объектов изобретения первый и второй анти-СХ3СК1 УНН имеют одинаковую аминокислотную последовательность. В одном из объектов изобретения первый или второй анти-СХ3СК1 УНН имеет С1ЖЕ С1Ж2 и С1Ж3. представленные в
- 44 028183
ЗЕ(2 ГО N0: 213, 214 и 186; или 8Е(} ГО N0: 213, 221 и 186; или 8Е<3 ГО N0: 141, 162 и 186.
В одном из объектов изобретения первый и второй анти-СХ3СК1 АНН имеет СВК1, С1Ж2 и СВК3, представленные в
ЗЕ(^ ГО N0; 213, 214 и 186; или ЗЕ(} ГО N0: 213, 221 и 186; или 8Εζ) ГО N0: 141, 162 и 186.
В одном из объектов изобретения первый или второй анти-СХ3СК1 АНН имеет аминокислотную последовательность, представленную в любой одной из БИО ГО N0: 138-140 или БИО ГО N0: 222-224. В одном из объектов изобретения первый и второй анти-СХ3СК1 АНН имеют одинаковую аминокислотную последовательность, где указанная аминокислотная последовательность представляет собой последовательность, представленную в любой одной из БИО ГО N0: 138-140 или БИО ГО N0: 222-224.
Примерами полипептидов, предлагаемых в настоящем изобретении, являются (но, не ограничиваясь только ими) полипептиды, представленные в любой одной из БИО ГО N0: 225-227, 249 или 277-281.
Таблица 9
СХЗСКЛВП 00312 ОУ0ЬУЕ5ОО0ЬУ()РСО5ЬКЬ5САА5О51Р55ТАМА \νΥΚ()ΑΡ0ΚΚΚΌΕνΑΑΙδδν0νΤΚΎΑ05νΚ0ΚΡΤΙδ ΚΕ)ΝδΚΝΤνΥΕ<3ΜΝδΕΚ.ΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚ.ΚΟ\νΈ) ΤΚ,ΥΧνΟΟΟΤΕντνδδΟΟΟΟδΟΟΟδΕνρΕνΕδΟΟΟΕ νρΡΟΝδΕΚΕδΟΑΑδΟΡΤΡδδΡΟΜδλννΚ()ΑΡαΚΟΕΕ ΧΥνδδΙδΟδΟδϋΤΕΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚΌΝΑΚΤΤΕΥΕζ) ΜΝδΕΚ.ΡΕΟΤΑνΥΥΟΤΙΟΟδΕδΚδδ()ΟΤΕντνδδΟΟ ΟΟδΟΟΟδΕν()ΕνΕδΟΟΟΕν()ΡΟΟδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡ δδΤΑΜΑ\νΥΚ()ΑΡΟΚΚΚΈ>ΕνΑΑΙδδνθνΤΚΥΑΟδν ΚΟΚΡΤΙδΚϋΝδΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΟΤδΟ ΡΚΚΟΨϋΤΚΥΨΟΟΟΤΕντνδδ δΕ<) Ю ΝΟ: 225
СХЗСК1ВП 00313 ΟνρΕνΕδΟΟΟΕνρΡΟΟδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΤΑΜΑ ΨΥΚρΑΡΟΚΚΚΟΕνΑΑΙδΤνονΤΚΥΑϋδνΚΟΚ-ΡΤΙδ ΚΟΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚ,ΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟΧνΟ ТКУХУОрОТЬУ 1 У88ОООО8ООО8ЕУ9ЕУЕ8ОООЕ ν()ΡΟΝδΕΚΕδΟΑΑδΟΡΤΡ3δΡΟίΜδ\ννΚ()ΑΡαΚΟΕΕ ΧννδδΙδΟδΟδϋΤΕΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝΑΚΤΤΕΥΕρ ΜΝδΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΟΤΙΟΟδΕδΚδδρΟΤΕντνδδΟΟ ΟΟδΟΟΟδΕν()ΕνΕδΟΟΟΕν()ΡΟΟδΕΚΕδϋΑΑδΟδΙΡ 83ТАМА\УУКЦАРОКККОЕУАА18ТУСгУТКУАО8У ΚαΚΡΤΙδΚΟΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΟΤδΟ ΡΚ.Κ.ΟΧνϋΤΚΥλνθς)ΟΤΕντνδδ δΕζ) Ю ΝΟ: 226
СХЗСКЛВП 00314 ϋν()ΕνΕδΟΟΟΕν(3ΡΟΟδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑ ΧΥΥΚΡΑΡΟΚΚ,ΚΟΕνΑΑΙΝδνονΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδ ΚΟΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟΧΥΟ ΤΚΎΑν090ΤΕντνδδ0000δ0α0δΕν()ΕνΕδ000Ε νρΡΟΝδΕΚΕδΟΑΑδΟΡΤΡδ8ΡΟΜδ\ννΚ()ΑΡΟίΚαΕΕ ΧννδδΙδΟδΟδΟΤΕΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚ,ΟΝΑΚΤΤΕΥΕρ ΜΝ5ΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΟΤΙΟΟδΕδΚδδ()ΟΤΕντνδδΟΟ ΟΟδΟΟΟδΕνρΕνΕδΟΟΟΕνρΡΟΟδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡ δδΝΑΜΑΨΥΚςΑΡΟΚΚΚΌΕνΑΑΙΝδνονΤΚΥΑΟδν ΚΟΚΡΤΙδΚϋΝδΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟ ΡΚ.Κ.Ο\νϋΤΚΥ\ΥΟ()αΤΕντνδδ 8ЕЦ Ю ΝΟ: 227
СХЗСКЛВП 032 Εν()ΕνΕδΟΟΟδν()ΑΟίΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑ ΨΥΚ^ΑΡΟΚΚΚΟΕνΑΑΙΝδνΟνΤΚΥΑΟδνΚΟΚΈΤΙδ ΚΟΝΑΚΝΤνΥΕζ)ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚ.ΟΧνθ ΤΚΥΧνΟΟΟΤΟντνδδΟΟΟΟδΟΟΟδΕνρΕνΕδΟΟΟδ νρΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑν/ΥΚρΑΡΟΚΚΚΒ ΕνΑΑΙΝδνονΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝΑΚΝΤνΥΕρ ΜΝδΡΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟ\νθΤΚΥ\νθ()ΟΤ(3ν ΤνδδΟΟΟΟδΟΟΟδΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνρΡΟΝδΕΚΕδΟ ΑΑδΟΡΤΡδδΡΟΜδΨνΚ.(3ΑΡΟΚΟΕΕ\ννδδΙδΟδΟδΟ ΤΕΥΑΟδνΚΟΚ.ΡΤΙδΚΟΝΑΚΤΤΕΥΕ()ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑ νΥΥΟΊΊΟΟδΕδΚδδ()ΟΤΕντνδδ δΕ<3 Ю ΝΟ: 277
СХЗСКЛВП 034 Εν()ΕνΕδΟΟΟδν(3ΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑ ΧνΥΚΡΑΡΟΚΚΚϋΕνΑΑΙΝδνΟνΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδ ΚΌΝΑΚΝΤνΥΕ<3ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδϋΡΚ.Κ.ΟΧνθ ΤΚΥΧΥΟΟΟΤρντνδδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδ ΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΕνςΕνΕδΟΟΟδνΟΑΟΕδΕΚ ΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑ\νΎΚ.ζ)ΑΡΟΚΚΚΈ)ΕνΑΑΙΝδν ΟνΤΚΥΑϋδνΚΟΚΈΤΙδΚΌΝΑΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕ ΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟ\νθΤΚΥ\νθ(30Τ()ντνδδαθΟ ΟδΟΟΟδΕνρΕνΕδΟΟΟΕνί^ΡΟΝδΕΚΕδΟΑΑδΟΡΤΡ δδΡ6Μδ\ννΚ()ΑΡΟΚΟΕΕ\ννδδΙδΟδΟδΟΤΕΥΑΟδν ΚΟΚΡΤΙδΚΟΝΑΚΤΤΕΥΕςΜΝδΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΟΤΙΟ ΟδΕδΚδδ()ΟΤΕντνδδ δΕ() Ю ΝΟ: 278
- 45 028183
схзсклвп 036 ЕУрЬУЕ8ССС8УрАСЕ8ЬКЬ8САА8С81Р88МАМА ΧνΥΚρΑΡΟΚΚΚϋΕνΑΑΙΝδνΟνΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδ ΚΟΝΑΚΝΤνΥΕ<3ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟ\νθ ткуу/соотеутуззссосзоосзеуоеуебоосе ν(2ΡΟΝδΕΚΕδΟΑΑδΟΡΤΡδδΡΟΜ8Ψνκς>ΑΡΟΚΟΕΕ ΧννδδΙδΟδΟδΟΊΈΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝΑΚΤΤΕΥΕΟ ΜΝδΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΟΤΙΟΟδΕδΚδδρΟΤΕντνδδΟΟ ОО8ООО8ЕУ9ЬУЕ8СОО8У9АСЕ8ЬКЕ8САА8О81Р δδΝΑΜΑΧνΥΚρΑΡΟΚΚΚΟΕνΑΑΙΝδνΟνΤΚΥΑϋδν ΚΟΚΡΤΙδΚΟΝΑΚΝΤνΥΕ(3ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟ ΡΚΚΟ\ΥΟΤΚΥ\νθς>ΟΤΕντνδδ δΕ<3 Ю ΝΟ: 249
СХЗСК1ВП 040 ΕνρΕνΕ8ΟΟΟδνζ)ΑΟΕδΕΚΕδ0ΑΑ8ΟδΙΡδδΝΑΜΑ ΨΥΚρΑΡΟΚΚΚΟΕνΑΑΙΝδνΟνΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδ ΚΟΝΑΚΝΤνΥΙΛ>ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟ\νθ ТКУ\УО<)ОТРУТУ88ОООО8ООО8ЕУ(ЗЕУЕ8ООО8 νΟΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΨΥΚΟΑΡΟΚΚΚϋ ΕνΑΑΙΝδνονΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝΑΚΝΤνΥΕς ΜΝδΕΚΡΕοτΑνγγετδΟΡΚκοψοτκΥλνορατςν τνδδοοοοδοοοοδοοοοδοοοοδοαοοδοαοοδ ОООО8ЕУрЕУЕ8ОООЕУ(ДЧЖ8ЕКЕ8САА8ОРТР8 δΡΟΜδΨνκρΑΡΟΚΟΕΕΧννδδΙδΟδΟδϋΤΕΥΑΟδνΚ ΟΚΡΤΙδΚϋΝΑΚΤΤΕΥΕρΜΝδΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΟΤΙΟΟδ ΕδΚδδΟΟΊΈντνδδ δΕς Ιϋ ΝΟ: 279
СХЗСК1ВИ 041 Ενζ)ΕνΕδΟΟΟδν(3ΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδαδΙΡδδΝΑΜΑ ΨΥΚρΑΡΟΚΚΚϋΕνΑΑΙΝδνονΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδ ΚΟΝΑΚΝΤνΥΕ(2ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟ\νθ τκΥλνοροτρντνδδοοοοδοοοοδααοοδοοοοδ ОООО8ОООО8ОООС8ЕУрЕУЕ8ООС8У9АОЕ8ЕК ΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΨΥΚΡΑΡΟΚΚΚϋΕνΑΑΙΝδν 0νΤΚΥΑϋδνΚ0ΚΡΤ1δΚ0ΝΑΚΝΤνΥΕ(2ΜΝδΕΚΡΕ ΟΤΑνΥΥ0ΤδΟΡΚΚ0\νθΤΚΥ\ν0(2ΟΤρντνδδΟΟ6 οδοοοοδοοαοδοοοοδΟοοοδοσοοδοοοοδΕν ΡΕνΕδΟΟΟΕνρΡΟΝδΕΚΕδϋΑΑδΟΡΤΡδδΡΟΜδΧνν Κ(2ΑΡΟΚ6ΕΕ\ννδδΙδΟδΟδΟΤΕΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚΟ ΝΑΚΤΤΕΥΕ(5ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤΙΟΟδΕδΚδδ(56 ΤΈντνδδ 8Ε0 ГО ΝΟ: 280
СХЗСК1ВИ 042 ΕνρΕνΕδΟΟΟδνΟΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑ \ΥΥΚρΑΡΟΚΚΚΟΕνΑΑ1ΝδνθνΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδ ΚΟΝΑΚΝΤνΥΕ(3ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟ\νθ τκγχναρατρντνδδαοοοδαοαοδοοαοδαοοαδ ΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνςΡΟΝδΕΚ ΕδΟΑΑδΟΡΤΡ8δΡΟΜδλννΚ<2ΑΡΟΚΟΕΕ\ννδδΙδΟδ ΟδϋΤΕΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝΑΚΤΤΕΥΕςΜΝδΕΚΡΕ ΟΤΑνΥΥΟΊΊ06δΕδΚδδ(20ΤΕντνδδΟΟΟΟδΟΟΟΟ 8ОООО8ОООО8ОООО8ОООО8ОООО8ЕУ(2ЕУЕ8О ΟΟδν(3ΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑ\νΥΚζ)ΑΡΟΚ ΚΚΟΕνΑΑΙΝδνονΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝΑΚΝΤν ΥΕ9ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟΑνθΤΚΥ\νθ(20 τρντνδδ 8ЕЦ Ιϋ ΝΟ: 281
В другом объекте изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит анти-СХ3СК1 УНН и Ес-домен. В одном из объектов изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит анти-СХ3СК1 УНН, слитый с линкерным пептидом, который в свою очередь слит с Ес-доменом. В одном из объектов изобретения линкерный пептид представляет собой 1508линкер. В одном из объектов изобретения Ес-домен имеет аминокислотную последовательность, представленную в 8ЕС) ГО N0: 250 или 252. В одном из объектов изобретения УНН имеет СЭК1, СГОК2 и СГОК3, представленные в
8Е0 ГО N0: 213, 214 и 186; или 5Е<3 ГО N0: 213, 221 и 186; или ЗЕр ГО N0: 141, 162 и 186.
В одном из объектов изобретения УНН имеет аминокислотную последовательность, представленную в любой одной из 8ЕС) ГО N0: 138-140 или 8ЕС) ГО N0: 222-224. В одном из объектов изобретения полипептид находится в форме димера, при этом, например, димер образуется с помощью одного или нескольких дисульфидных мостиков.
Примерами полипептидов, предлагаемых в настоящем изобретении, являются (но, не ограничиваясь только ими) полипептиды, представленные в любой одной из 8ЕС) ГО N0: 251, 253 или 254.
- 46 028183
Таблица 10
мышиный Рс-домен РРСКСРАРНЕЬСОР8УР1РРРК1КОУЬМ18Е8Р1УТСУ ννΑνδΕΟΟΡϋνρίδν/ΡνΝΝνΕνΗΤΑί^ΤρΤΗΚΕΟΥ ΝδΤΕΚννδΑΕΡΙζ>Ης>0\νΜδΟΚΕΡΚΟΚνΝΝΚϋΕΡΑ ΡΙΕΚΤΙδΚΡΚΟδνΚΑΡρνΥνΕΡΡΡΕΕΕΜΤΚΚρνΤΕΤ ΟΜνΤΟΡΜΡΕϋΙΥνΕΧνΤΝΝΟΚΤΕΕΝΥΚΝΤΕΡνΕΟδ ΟΟδΥΡΜΥδΚΕΚνΕΚΚΝΧννΕΚΝδΥδΟδννΗΕΟΕΗΝ ΗΗΤΤΚδΡδΚΤΡΟΚ δΕΟ Ю ΝΟ: 250
66В02-тРс Εν(3ΕνΕδΟΟΟδν(3ΑΟΕδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑ λνΥΚρΑΡΟΚΚΚ,ϋΕνΑΑΙΝδνονΤΚΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδ ΚΟΝΑΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟλνϋ ТКУ\У60СТЕУТУ88СОСС8СССС8СССС8РРСКС ΡΑΡΝΕΕΟΟΡδνΡΙΡΡΡΚΙΚϋνΕΜΙδΕδΡίνΤΟνννΑν δΕϋΟΡθνζ)Ιδ\νΡνΝΝνΕνΗΤΑ(2Τ(3ΤΗΚΈΟΥΝδΤΕΚ. ννδΑΕΡΙΟΗρον/ΜδΟΚΕΡΚΟΚνΝΝΚΟΕΡΑΡΙΕΚΤΙ 8КРКО8УКАР0УУУЬРРРЕЕЕМТКК0УТЬТСМУТО ΡΜΡΕΟΙΥνΕ\νΤΝΝΟΚΤΕΕΝΥΚΝΤΕΡνΕΟδϋΟδΥΡ ΜΥδΚΕΚ.νΈΚΚΝ\ννΕΚΝδΥδΟδννΡΙΕΟΕΗΝΗΡΙΤΤΚ 8Ρ8ΚΤΡΟΚ δΕΟ Ю ΝΟ: 251
человеческий Рс-домен СРРСРАРЕААООР8УРЕРРРКРКОТЬМ18КТРЕУТС νννονδΗΕϋΡΕνΚΡΝΨΥνΟΟνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕΟ ΥΝδΤΥΚννδνΕΤνΕΗρϋΧνΕΝΟΚΕΥΚΟΚνδΝΚΑΕΡ ΑΡΙΕΚΤΙδΚΑΚΟ9ΡΚΕΡ9νΥΤΕΡΡδΚΕΕΜΤΚΝ9νδΕ ΤΟΕνΚΟΡΥΡδΟΙΑνΕΧνΕδΝΟρΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕϋδ ΟΟδΡΡΕΥδΚΡΤνϋΚδΚΛνΟΟΟΝνΡδΟδνΜΗΕΑΕΗΝ НУТ0К8Ь8Ь8РОК δΕΟ Ю ΝΟ: 252
3060-ЬРс ΟνΟΕνΕδΟΟΟΕνΟΡΟΟδΕΚυδΟΑΑδΟδΙΡδδΤΑΜΑ ΨΥΚ9ΑΡΟΚΚΚΕ>ΕνΑΑΙδδνθνΤΚΥΑυδνΚΟΚ.ΡΤΙδ ΚΟΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδϋΡΚΚΟΨΟ ΤΚΥΐνοςΟΤΕντνδδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΡΡΟΡ АРЕААООР8УРЬРРРКРКОТЬМ18КТРЕУТСУУУОУ δΗΕΟΡΕνΚΡΝΨΥνϋΟνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕρΥΝδΤΥ ΚννδνΕΤνΕΗςΟΧνΕΝΟΚΕΥΚΟΚνδΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚ ΤΙδΚΑΚΟΟΡΚΕΡΟνΥΤΕΡΡδΚΕΕΜΤΚΝΟνδΕΤΟΕνΚ ΟΡΥΡδΟΙΑνΕΧνΕδΝΟρΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕϋδϋΟδΡΡΕ ΥδΚΕΤνϋΚδΚ\νς>ς)ΟΝνΡδΟδνΜΗΕΑΕΗΝΗΥΤΟΚδ ίδίδΡΟΚ δΕΟ ΙΟ ΝΟ: 253
307Ц-ЬРс ОУ0ЬУЕ8ОООЕУ0РОО8ЬКЕ8САА8О81Р88ТАМА ΎΥΚΟΑΡΟΚΚΚΟΕνΑΑΙδΤνΟνΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδ ΚΟΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδϋΡΚΚΟΧνΟ ΤΚΥΑΥαςίΟΤΕνΤνδδΟΟΟΟδαΟΟΟδΟΟΟΟδΟΡΡΟΡ АРЕААООР8УРЬРРРКРКОТЬМ18КТРЕУТСУУУОУ δΗΕϋΡΕνΚΡΝΨΥνΟΟνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕΟΥΝδΤΥ Κννδνί,ΤνΕΗΟΟν/ΕΝΟΚΕΥΚΟΚνδΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚ ΤΙδΚΑΚΟ9ΡΚΈΡ(}νΥΤΕΡΡδΚΕΕΜΤΚΝς)νδΕΤΟΕνΚ ΟΡΥΡδϋΙ ΑνΕΎΕδΝΟΟΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΟδϋΟδΡΡΕ ΥδΚΕΤνθΚδΚ\νρς>ΟΝνΡδΟδνΜΗΕΑΕΗΝΗΥΤ(3Κδ Ь8Ь8РОК δΕΟ Ю ΝΟ: 254
Полипептид, предлагаемый в изобретении, можно модифицировать для улучшения его свойств. В одном из объектов изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, можно модифицировать с целью повышения его стабильности при хранении. В одном из объектов изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, можно модифицировать с целью облегчения его экспрессии в конкретной системе-хозяине. Например, можно модифицировать первый кодон полипептида, предлагаемого в настоящем изобретении. В одном из объектов изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, начинается с глутаминовой кислоты (д1и) в качестве его первой аминокислоты. В другом объекте изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, начинается с аспарагиновой кислоты (азр) в качестве его первой аминокислоты, например, для снижения образования пироглутамата на Ν-конце в процессе хранения и повышения тем самым стабильности продукта. В другом объекте изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, начинается с аланина (а1а) или валина (уа1) в качестве его первой аминокислоты, например, для облегчения экспрессии полипептида в прокариотической экспрессионной системе, такой как ЕзсНепсЫа со1г Указанную модификацию полипептида, предлагаемого в настоящем изобретении, осуществляют с помощью методик, известных в данной области.
Репрезентативные примеры полипептидов, предлагаемых в настоящем изобретении, с модифицированным первым кодоном, представлены в любой одной из 8Ер ΙΌ N0: 257-262 и 263-266 и в табл. 11 и 12, ниже:
- 47 028183
Таблица 11
СХЗСК1ВП 00312 (01 А) АУ0ЕУЕ8ОООЕУ0РОО8ЕКЕ8САА8О81Р88ТАМА ΥνΥΚς>ΑΡΟΚΡΚΕ>ΕνΑΑΙ55νανΤΚΥΑΟ5νΚΟΡΡΤΙ5 ΚΟΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟλνϋ ΤΚΥΨΟρΟΤΕντνδδΟΟΟΟδΟΟΟδΕνΟΕνΕδΟΟΟΕ ν0ΡΟΝ8ΕΚΕδΟΑΑ8ΟΡΤΡ88ΡΟΜδ\ννΚ0ΑΡΟΚΟΕΕ ΥΥνδδΙδΟδΟδΟΤΕΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚΌΝΑΚΤΤΕΥΕ(3 ΜΝδΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΟΤΙΟΟδΕδΚδδρΟΤΕντνδδΟΟ 0080008ЕУ(ЗЕУЕ8000ЕУОР008ЕКЕ8САА8081Р 88ТАМА\УУК0АРОКККОЕУАА188УОУТКУАО8У ΚΟΚΡΤΙδΚΟΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδϋ ΡΚΚ.Ο\νϋΤΚΥΨΟ0ΟΤΕντνδδ 8ΕΟ Ю ΝΟ: 257
СХЗСК.1ВН 00313 (О1А) АУ0ЬУЕ8ОООЕУ0РОО8ЕКЕ8САА8О81Р88ТАМА \УУКРАРОКККОЕУАА18ТУОУТКУАО8УКОКРТ18 ΚΟΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟΥΥΟ τκΎΥνος>οτΕντνδδθοαοδαοαδΕνς>ΕνΕδθοαΕ νρΡΟΝδΕΚ.ΕδΌΑΑδΟΡΤΡδδΡΟΜδ\ννκς>ΑΡΟΚΟΕΕ ΥννδδΙδΟδΟδϋΤΕΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝΑΚΤΤΕΥΕΟ ΜΝδΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΟΤΙΟΟδΕδΚδδΟΟΤΕντνδδΟΟ ОО8ООО8ЕУ0ЕУЕ8ОООЬУ0РОО8ЕКЕ8САА8О81Р 88ТАМА\УУК9АРОКККОЕУАА18ТУОУТКУА08У ΚΟΚΡΤΙδΚΟΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδϋ ρκκον/οτκγχνοοοτΕντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 258
СХЗСК1ВП 00314 (01 А) АУрЕУЕ8ОООЕУ0РОО8ЕКЕ8САА8О81Р88КАМА ΥνΥΚρΑΡΟΚΚΚϋΕνΑΑΙΝδνονΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδ ΚϋΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟλνϋ ΤΚΥΥνΟΟΟΤΕντνδδΟΟΟΟδΟΟΟδΕνΟΕνΕδΟΟΟΕ νθΡΟΝ8ΕΚΕδΟΑΑδΟΡΤΡ88ΡΟΜδ\ννΚΟΑΡΟΚΟΕΕ Υνν8δΙδΟδΟδΟΤΕΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚΕ>ΝΑΚΤΤΕΥΕ<3 ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤΙΟΟδΕδΚδδςΟΤΕντνδδΟΟ ОО8ООО8ЕУ0ЕУЕ8ОООЕУ0РОО8ЕКЕ8САА8О81Р δδΝΑΜΑ\νΥΚ(}ΑΡΟΚΚΚΟΕνΑΑΙΝδνθνΤΚΥΑΟδν ΚΟΚΈΤΙδΚΌΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟ ρκκον/οτκγγνοοοτΕντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 259
СХЗСК4ВП 00312 (О IV) У0ЬУЕ8ОООЕУ0РОО8ЕКЕ8САА8О81Р88ТАМААУ УК0АРОКККОЕУАА188УОУТКУАО8УКОКРТ18К ΟΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδϋΡΚΚΟΥΥΟΤ КУ\УО0СТЕУТУ88СООО8ООО8ЕУ0ЕУЕ8ОООЬУ ΟΡΟΝδΕΚΕδΟΑΑδΟΡΤΡδδΡΟΜδΨνΚΟΑΡΟΚΟΕΕΨ νδδΙδΟδΟδΟΤΕΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝΑΚΤΤΕΥΕΟΜ ΝδΕΚΡΕΏΤΑνΥΥΟΤΙΟΟδΕδΚδδΟΟΤΕντνδδΟΟΟΟ 8ООО8ЕУ0ЕУЕ8ОООЕУ0РОО8ЕКЕ8САА8О81Р88 ΤΑΜΑΆΎΚΟΑΡΟΚΚΚΌΕνΑ ΑΙδδ УОУТК ΥΑϋδνΚΟ ΚΡΤΙδΚΟΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΏΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚ κογνοτκγχνοοοτρντνδδ δΕΟ ΙΟ ΝΟ: 260
СХЗСКЛВП 00313 (О IV) У0ЕУЕ8СООЕУ0РОО8ЕКЕ8САА8С81Р88ТАМА^У ΥΚΟΑΡΟΚΚΚΟΕνΑΑΙδΤνΟνΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚ ΟΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΡΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΡΚΟν/ϋΤ кухуооотеутуззоооозооозеуоеуезоооеу (2ΡΟΝδΕΚΕδΟΑΑδΟΡΤΡδδΡΟΜδ\ννΚ(2ΑΡΟΚαΕΕ\ν νδδΙδΟδΟδΟΤΕΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚϋΝΑΚΤΤΕΥΕΟΜ ΝδΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΟΤΙΟΟδΕδΚδδΟΟΤΕντνδδΟΟΟΟ 8ООО8ЕУ0ЕУЕ8ОООЕУ0РОО8ЕКЕ8САА8О81Р88 ΤΑΜΑΥνΥΡΟΑΡΟΚΚΡϋΕνΑΑΙδΤνΟνΤΚΥΑΟδνΚ ΟΚΡΤΙδΚΟΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΟΤδΟΡ κκοχνοτκγγνοοοτΕντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 261
СХЗСКЛВП 00314 (О IV) νΐ^νΕδΟΟΟΕνί^ΡΟΟδΕΚΕδΟΑΑδΟδΙΡδδΝΑΜΑΥν УК0АРОКККОЕУААШ8УОУТКУАО8УКОКРТ18К ΟΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟΧΥΟΤ ΚΥΨΟςΟΤΕντνδδΟΟΟΟδΟΟΟδΕνρΕνΕδΟΟΟΕν ΟΡΟΝδΕΚΕδΟΑΑδΟΡΤΡδδΡΟΜδΥννΚΟΑΡΟΚΟΕΕΥΥ νδδΙδΟδΟδΟΤΕΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚϋΝΑΚΤΤΕΥΕΟΜ ΝδΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΟΤΙΟΟδΕδΚδδΟΟΤΕντνδδΟΟΟΟ 8ООО8ЕУ0ЕУЕ8ОООЕУ0РОО8ЕКЕ8САА8О81Р88 ΝΑΜΑ\νΥΚ0ΑΡΟΚΚΚΟΕνΑΑΙΝδνθνΤΚΥΑϋδνΚ ΟΚΡΤΙδΚϋΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΟΤδΟΡ κκογνϋτκγχνοοοτΕντνδδ δΕΟ Ю ΝΟ: 262
- 48 028183
Таблица 12
ЗОбИ-ЬРс (О1А) АУ0ЬУЕ8ОООЬУ0РОО8ЬКЬ8САА8О81Р88ТАМААУУ ΚΟΑΡΟΚΚΚΟΕνΑΑΙδδνονΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝδΚ ΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚ.ΡΕΟΤΑνΥΥ<3ΤδΟΡΚΚΟ\νθΤΚΥ\νθΟΟ ТЕУТУ88ОООО8ОООО8ОООО8СРРСРАРЕААООР8УР ЕРРРКРКОТЕМ18К.ТРЕУТСУУУОУ8НЕОРЕУКРИ\УУ νϋΟνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕΟΥΝδΤΥΚννδνΕΤνΕΗΟΟλνΕ ΝΟΚΕΥΚΟΚνδΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙδΚΑΚΟΟΡΚΕΡΟνΥΤΕΡ ΡδΚΕΕΜΤΚΝΟνδΕΤΟΕνκαΡΥΡδϋΙΑνΕΨΕδΝΟΟΡΕΝ ΝΥΚΤΤΡΡνΕΟδϋΟδΡΡΕΥδΚΕΤνΟΚδΚΧνΟΟΟΝνΡδΟδ νΜΗΕΑΕΗΝΗΥΤΟΚδΕδΕδΡΟΚ δΕΟ ΙΟ ΝΟ: 263
3070-ЬРс (О1А) АУ0ЬУЕ8ОООЕУ0РОО8ЕКЬ8САА8С81Р88ТАМА\УУ ΚΟΑΡΟΚΚΚΟΕνΑΑΙδΤνανΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝδ ΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδϋΡΚΚΟΨΟΤΚΎΧνΟΟ ОТЬУТУ88ОООО8ОООО8ОООО8СРРСРАРЕААООР8 УРЬРРРКРКОТЬМ18КТРЕУТСУУУОУ8НЕОРЕУКРИ\У УУООУЕУНИАКТКРКЕЕ0УИ8ТУКУУ8УЕТУЕН0О\У ΕΝΟΚΕΥΚΟΚνδΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙδΚΑΚΟΟΡΚΕΡΟνΥΤΕ РР8КЕЕМТКИ0У8ЬТСЬУКОРУР8О1АУЕ\УЕ8ИО0РЕИ ИУКТТРРУЕО8ОО8РРЕУ8КЕТУОК8К\У00ОИУР8С8 УМНЕАЬНИНУТОК8Ь8Ь8РОК δΕΟ Ю ΝΟ: 264
ЗОбИ-ЬРс (οιν) У0ЬУЕ8ОООЕУ0РОО8ЬКЬ8САА8О81Р88ТАМА\УУК. ΟΑΡΟΚΚΚϋΕνΑΑΙδδνΟνΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝδΚ ΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤδΟΡΚΚΟΑΥΟΤΚΥλνΟΟα ТЬУТУ88ОООО8ОООО8ОООО8СРРСРАРЕААООР8УР ЕРРРКРКОТЕМ18КТРЕУТСУУУОУ8НЕОРЕУКРИ\УУ УООУЕУНИАКТКРКЕЕОУИ8ТУК.УУ8УЕТУЬНОО\УЬ ΝΟΚΕΥΚΟΚνδΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙδΚΑΚΟΟΡΚΕΡΟνΥΤΕΡ ΡδΚ,ΕΕΜΤΚΝΟνδΕΤΟΕνΚΟΡΥΡδΟΙΑνΕΧνΕδΝΟΟΡΕΝ ΝΥΚΤΤΡΡνΕΟδΟΟδΡΡΕΥδΚΕΤνϋΚδΚ\νθΟΟΝνΡδΟδ νΜΗΕΑΕΗΝΗΥΤΟΚδΕδΕδΡΟΚ δΕΟ Ю ΝΟ: 265
307И-ЬРс (О IV) У0ЕУЕ8ОООЕУ0РОО8ЬКЬ8САА8О81Р88ТАМ ΑΨΥΚ ΟΑΡΟΚΚΚΟΕνΑΑΙδΤνονΤΚΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝδΚ ИТУУЕ0МИ8ЕК.РЕОТАУУУСТ8ОРККО\УОТКУ\УО0О ТЕУТУ88ОООО8ОООО8ОООО8СРРСРАРЕААООР8УР ЕРРРКРКОТЬМ18КТРЕУТСУУУОУ8НЕОРЕУКРИ\УУ УООУЕУНИАКТКРКЕЕ0УИ8ТУК.УУ8УЕТУЕН0О\УЕ ΝΟΚΕΥΚΟΚνδΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙδΚΑΚΟΟΡΚΕΡΟνΥΤΕΡ Р8К.ЕЕМТКИ0У8ЕТСЕУКОРУР8О1АУЕ\УЕ8ИО0РЕИ ИУКТТРРУЕО8ОО8РРЕУ8КЕТУОК8К\У00ОИУР8С8 УМНЕАЬНИНУТ0К8Е8Ь8РОК δΕΟ ΙΟ ΝΟ: 266
Еще в одном объекте изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, отличается наличием одного или нескольких из следующих свойств:
связывается с высокой аффинностью с человеческим СХ3СК1; ингибирует связывание растворимого фракталкина с человеческим СХ3СК1; ингибирует индуцированный фракталкином хемотаксис;
ингибирует индуцированную фракталкином интернализацию человеческого рецептора СХ3СК1; обладает перекрестной реактивностью с СХ3СК1 обезьян циномолгус (супо), при этом величина
Ε/ΙΟ50, характеризующая связывание и функциональное ингибирование человеческого СХ3СК1, в 10 раз превышает соответствующую величину для супоСХ3СК1.
Таким образом, в одном из объектов изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, обладает аффинностью к человеческому СХ3СК1, что характеризуется величиной ΙΟ50, меньшей или равной 10 нМ, или меньшей или равной 5 нМ, или меньшей или равной 2,5 нМ или меньшей или равной 1 нМ, по данным, полученным с помощью РΑСδ в условиях конкуренции.
В другом объекте изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, обладает аффинностью к человеческому СХ3СК1, что характеризуется величиной ЕС50, меньшей или равной 10 нМ, или меньшей или равной 5 нМ, или меньшей или равной 2,5 нМ, или меньшей или равной 1 нМ, по данным, полученным путем анализа клеточного связывания с помощью РΑСδ.
В другом объекте изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, блокирует связывание человеческого СХ3СК1 с человеческим фракталкином на 50% или более, или на 60% или более, или на 70% или более, или на 80% или более, или на 90% или более, или на 95% или более, по данным, полученным с помощью РΑСδ в условиях конкуренции с использованием человеческого фракталкина.
В другом объекте изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, блокирует связывание человеческого фракталкина с человеческим СХ3СК1, что характеризуется величиной ΙΟ50, меньшей или равной 300 нМ, или меньшей или равной 100 нМ, или меньшей или равной 20 нМ, или меньшей или равной 10нМ, меньшей или равной 5нМ, меньшей или равной 2,5нМ или меньшей или равной 1 нМ по данным, полученным с помощью РΑСδ в условиях конкуренции с использованием человеческого фракталкина.
В другом объекте изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, ингибирует индуцированный фракталкином хемотаксис, опосредуемый человеческим СХ3СК1, на 10% или более, или на 30% или более, или на 40% или более, или на 50% или более, или на 60% или более, или на 70%
- 49 028183 или более, или на 80% или более, или на 90% или более.
В следующем объекте изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, ингибирует индуцированный фракталкином хемотаксис, опосредуемый человеческим СХ3СК1, что характеризуется величиной 1С50, меньшей или равной 500 нМ, или меньшей или равной 100 нМ, или меньшей или равной 75 нМ, или меньшей или равной 50 нМ, или меньшей или равной 10 нМ, или меньшей или равной 5 нМ.
В следующем объекте изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, ингибирует индуцированную фракталкином интернализацию человеческого рецептора СХ3СК1, что характеризуется величиной 1С50, меньшей или равной 10 нМ, или меньшей или равной 5 нМ, или меньшей или равной 1 нМ.
Согласно другому варианту осуществления изобретения приводящая к удлинения времени полужизни модификация полипептида, предлагаемого в изобретении (указанная модификация снижает также иммуногенность полипептида), заключается в присоединении пригодного фармакологически приемлемого полимера, такого как поли(этиленгликоль) (ПЭГ) с прямой или разветвленной цепью или его производные (например, метоксиполи(этиленгликоль) или мПЭГ). Как правило, можно использовать любую приемлемую форму ПЭГилирования, такую как ПЭГилирование, известное в данной области для антител и фрагментов антител (включая (но, не ограничиваясь только ими) доменные антитела и ксГуфрагменты); в качестве ссылки можно указать, например, СЬартаи, №1. Бю1есйио1., 54, 2002, сс. 531545; Vе^оηеке и Нагпк, Аду. Эгид Эейу. Кеу. 54, 2003, сс. 453-456; Нагпк и Сйекк, №1. Кеу. Эгид. Эшсоу. 2, 2003; У0 2004/060965 и υδ 6875841.
Кроме того, в продажу поступают различные реагенты для ПЭГилирования полипептидов, например, от фирм №к!аг Тйегареийск, США или N0Ρ Согрогайои, Япония, такие как продукты серии δυηЪпдй1® ΕА, серии δΗ, серии МА, серии СА и серии ΜΕ, такие как δиηЪ^^дйί® МΕ-100МА, δиηЪ^^дйί® ΜΕ-200МА и διιηΙπ^Ηΐ®: ΜΕ-400ΜА.
Предпочтительно применяют сайтнаправленное ПЭГилирование, в частности через остаток цистеина (см., например, Уапд и др., Рго1ет Εηд^ηее^^ηд 16, 2003, сс. 761-770). Например, для этой цели ПЭГ можно присоединять к остатку цистеина, который в естественных условиях присутствует в полипептиде, предлагаемом в изобретении, полипептид, предлагаемый в изобретении, можно модифицировать так, чтобы в него можно было вводить один или несколько остатков цистеина для присоединения ПЭГ, или аминокислотную последовательность, содержащую один или несколько остатков цистеина, предназначенных для присоединения ПЭГ, можно сливать с N и/или С-концом и/или ПЭГ можно присоединять к линкерной области, соединяющей два или большее количество доменов полипептида, предлагаемого в изобретении, для всех указанных подходов можно применять методики конструирования белков, хорошо известные специалисту в данной области.
Предпочтительно для полипептидов, предлагаемых в изобретении, применяют ПЭГ с молекулярной массой, превышающей 5 кДа, например превышающей 10 кДа, но более низкой чем 200 кДа, например, более низкой чем 100 кДа; например, составляющей от 20 до 80 кДа.
Касательно ПЭГилирования следует отметить, что, как правило, изобретение относится также к любому полипептиду, предлагаемому в изобретении, который ПЭГилирован в одном или нескольких аминокислотных положениях, предпочтительно таким образом, что ПЭГилирование (1) удлиняет время полужизни ίη У1уо; или (2) снижает иммуногенность; или (3) обеспечивает одно или несколько дополнительных ценных свойств, хорошо известных для ПЭГилирования; или (4) не оказывает существенного воздействия на аффинность полипептида к СХ3СК1 (например, не снижает указанную аффинность более чем на 50% и более предпочтительно более чем на 10% при определении с помощью приемлемого анализа, описанного в данной области, например, анализа, описанного в представленных ниже примерах); и/или (5) не оказывает влияния на любое другое из требуемых свойств полипептидов, предлагаемых в изобретении. Приемлемые ПЭГ-группы и методы их присоединения, как специфические, так и неспецифические, хорошо известны специалисту в данной области.
Согласно наиболее предпочтительному варианту осуществления изобретения ПЭГилированный полипептид, предлагаемый в изобретении, включает один ПЭГ-остаток линейного ПЭГ с молекулярной массой 40 или 60 кДа, при этом остаток ПЭГ присоединен к полипептиду в линкерной области, в частности, присоединен к остатку Сук в положении 5 О58-линкерного пептида, как представлено в δΕρ Ιϋ N0: 235.
Предпочтительными примерами ПЭГилированных полипептидов, предлагаемых в изобретении, являются пептиды, ПЭГилированные с помощью одного из указанных выше реагентов для ПЭГилирования, такого как 'ЪииЪпдй!® ΜΕ-400ΜА, химическая формула которого представлена ниже
- 50 028183 который имеет среднюю молекулярную массу 40 кДа.
Терапевтические применения
Одним из объектов настоящего изобретения является полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, или фармацевтическая композиция, которая содержит указанный полипептид, предназначенный/предназначенная для применения в качестве лекарственного средства.
Одним из объектов настоящего изобретения является применение полипептида, предлагаемого в настоящем изобретении, или фармацевтической композиции, содержащей указанный полипептид, для лечения или профилактики кардио- и цереброваскулярных атеросклеротических нарушений, заболевания периферических артерий, рестеноза, диабетической нефропатии, гломерулонефрита, человеческого серповидного гломерулонефрита, 1дА-нефропатии, мембранозной нефропатии, волчаночного нефрита, васкулита, включая пурпуру Геноха-Шенлейна и гранулематоз Вегенера, ревматоидного артрита, остеоартрита, отторжения трансплантата, системного склероза, нейродегенеративных нарушений и демиелинизирующего заболевания, рассеянного склероза (РС), болезни Альцгеймера, легочных заболеваний, таких как ХОЗЛ, астма, нейропатической боли, связанной с воспалением боли или рака.
Другим объектом настоящего изобретения является применение полипептида, предлагаемого в настоящем изобретении, или фармацевтической композиции, содержащей указанный полипептид, для лечения или профилактики атеросклероза.
Другим объектом настоящего изобретения является применение полипептида, предлагаемого в настоящем изобретении, или фармацевтической композиции, содержащей указанный полипептид, для лечения или профилактики атеросклероза путем предупреждения и/или снижения образования новых атеросклеротических повреждений или бляшек и/или путем предупреждения или замедления развития существующих повреждений и бляшек.
Другим объектом настоящего изобретения является применение полипептида, предлагаемого в настоящем изобретении, или фармацевтической композиции, содержащей указанный полипептид, для лечения или профилактики атеросклероза путем изменения состава бляшек для снижения риска разрушения бляшек и атеротромботических случаев.
Одним из объектов настоящего изобретения является также способ лечения или снижения риска кардио- и цереброваскулярных атеросклеротических нарушений, заболевания периферических артерий, рестеноза, диабетической нефропатии, гломерулонефрита, человеческого серповидного гломерулонефрита, 1дА-нефропатии, мембранозной нефропатии, волчаночного нефрита, васкулита, включая пурпуру Геноха-Шенлейна и гранулематоз Вегенера, ревматоидного артрита, остеоартрита, отторжения трансплантата, системного склероза, нейродегенеративных нарушений и демиелинизирующего заболевания, рассеянного склероза (РС), болезни Альцгеймера, легочных заболеваний, таких как ХОЗЛ, астма, нейропатической боли, связанной с воспалением боли или рака, у индивидуума, который имеет риск указанного заболевания или состояния, заключающийся в том, что вводят индивидууму в терапевтически эффективном количестве полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, или фармацевтическую композицию, содержащую указанный полипептид.
Одним из объектов настоящего изобретения является также способ лечения или снижения риска атеросклероза у индивидуума, который страдает или имеет риск указанного заболевания или состояния, заключающийся в том, что вводят индивидууму в терапевтически эффективном количестве полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, или фармацевтическую композицию, содержащую указанный полипептид.
Одним из объектов настоящего изобретения является также способ лечения или снижения риска атеросклероза, путем предупреждения и/или снижения образования новых атеросклеротических повреждений или бляшек и/или путем предупреждения или замедления развития существующих повреждений и бляшек у индивидуума, который страдает или имеет риск указанного заболевания или состояния, заключающийся в том, что вводят индивидууму в терапевтически эффективном количестве полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, или фармацевтическую композицию, содержащую указанный полипептид.
Одним из объектов настоящего изобретения является также способ лечения или снижения риска атеросклероза, путем изменения состава бляшек таким образом, чтобы снижать риск разрушения бляшек и атеротромботических случаев у индивидуума, который страдает или имеет риск указанного заболевания или состояния, заключающийся в том, что вводят индивидууму в терапевтически эффективном количестве полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, или фармацевтическую композицию, содержащую указанный полипептид.
В одном из объектов изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, показан для применения при лечении или профилактике заболевания или нарушения, ассоциированного с СХ3СК.1.
В одном из объектов изобретения полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении, показан для применения при лечении или профилактике заболеваний или нарушений, при которых желательной является модуляция активности СХ3СИ1-рецептора. Одном из объектов настоящего изобретения является также способ лечения или снижения риска заболеваний или состояний, при которых антагонистиче- 51 028183 ское действие в отношении СХ3СК1-рецептора оказывает благоприятное воздействие, заключающийся в том, что вводят индивидууму, который страдает или имеет риск указанного заболевания или состояния, полипептид, предлагаемый в настоящем изобретении.
Ожидается, что профилактика является наиболее важной для лечения индивидуумов, которые имели эпизод или рассматриваются как имеющие повышенный риск рассматриваемого заболевания или состояния. К индивидуумам, имеющим риск развития конкретного заболевания или состояния, как правило, относятся индивидуумы, у которых в семейном анамнезе встречается указанное заболевание или состояние, или у которых с помощью генетического тестирования или скрининга установлена высокая чувствительность к развитию указанного заболевания или состояния.
В контексте настоящего изобретения понятие предупреждение, лечение и/или облегчение включает не только предупреждение и/или лечение, и/или облегчение заболевания, но, как правило, включает также предупреждение возникновения заболевания, замедление или реверсию развития заболевания, предупреждение или замедление возникновения одного или нескольких симптомов, ассоциированных с заболеванием, уменьшение и/или облегчение одного или нескольких симптомов, ассоциированных с заболеванием, снижение серьезности и/или продолжительности любого из симптомов, ассоциированных с ним, и/или предупреждение дополнительного повышения серьезности заболевания и/или любых симптомов, ассоциированных с ним, предупреждение, снижение или реверсию любого физиологического повреждения, вызванного заболеванием, и, как правило, любое фармакологическое действие, которые является благоприятным для пациента, подлежащего лечению.
Подлежащий лечению индивидуум представляет собой млекопитающее и более конкретно человека. Как должно быть очевидно специалисту в данной области, индивидуум, подлежащий лечению, должен представлять собой прежде всего индивидуума, который страдает или имеет риск заболеваний, нарушений или состояний, упомянутых в настоящем описании.
Специалисту в данной области должно быть очевидно, что указанные выше способы лечения заболевания включают приготовление лекарственного средства, предназначенного для лечения заболевания. Кроме того, очевидно, что полипептиды, предлагаемые в изобретении, можно применения в качестве действующего вещества в лекарственном средстве или фармацевтической композиции, предназначенном/предназначенной для лечения указанных выше заболеваний. Таким образом, изобретение относится также к применению полипептида, предлагаемого в изобретении, для приготовления фармацевтической композиции, предназначенной для предупреждения, лечения и/или облегчения любого из упомянутых выше заболеваний, нарушений или состояний. Изобретение относится также к полипептиду, предлагаемому в изобретении, для терапевтического или профилактического применения и, в частности, для предупреждения, лечения и/или облегчения любого из упомянутых выше заболеваний, нарушений или состояний. Изобретение относится также к фармацевтической композиции, предназначенной для предупреждения, лечения и/или облегчения любого из упомянутых выше заболеваний, нарушений или состояний, где указанная композиция содержит по меньшей мере один полипептид, предлагаемый в изобретении.
Полипептиды, предлагаемые в изобретении, и/или содержащие их композиции можно вводить пациенту, который нуждается в этом, любым приемлемым путем в зависимости от подлежащей применению конкретной фармацевтической формы или композиции. Так, полипептиды, предлагаемые в изобретении, и/или содержащие их композиции можно вводить в эффективном количестве или эффективной дозе внутривенно, подкожно, внутримышечно, внутрибрюшинно, трансдермально, орально, подъязычно (например, в форме подъязычной таблетки, спрея или капли, помещаемых под язык, которые адсорбируются через слизистые мембраны в капиллярную сеть под языком), (внутри)назально (например, в форме назального спрея и/или в виде аэрозоля), местно, с помощью суппозитория, путем ингаляции в стекловидное тело (прежде всего для лечения сухой ΆΜΌ (дегенерация желтого пятна) или глаукомы), или любым другим приемлем путем.
Полипептиды, предлагаемые в изобретении, и/или содержащие их композиции вводят согласно схеме лечения, которая пригодна для предупреждения, лечения и/или облегчения заболевания, нарушения или состояния, подлежащего предупреждению, лечению или облегчению. Как правило, клиницист может определять приемлемую схему лечения в зависимости от таких факторов, как заболевание, нарушение или состояние, подлежащее предупреждению, лечению или облегчению, серьезность заболевания, серьезность его симптомов, конкретный полипептид, предлагаемый в изобретении, подлежащий применению, конкретный путь введения фармацевтической формы или композиции, подлежащей применению, возраст, пол, диета, общее состояние пациента и аналогичные факторы, хорошо известные клиницисту. Как правило, схема лечения должна включать введение одного или нескольких полипептидов, предлагаемых в изобретении, или одной или нескольких композиций, содержащих их, в терапевтически и/или профилактически эффективных количествах или дозах.
Как правило, для предупреждения, лечения и/или облегчения любого из упомянутых выше заболеваний, нарушений или состояний и в зависимости от конкретного заболевания, нарушения или состояния, подлежащего лечению, эффективности конкретного подлежащего применению полипептида, предлагаемого в изобретении, конкретного пути введения и конкретной применяемой фармацевтической
- 52 028183 формы или композиции полипептиды, применяемые в изобретении, как правило, можно вводить в количестве, составляющем от 0,005 до 20,0 мг на килограмм веса тела в дозе, предпочтительно от 0,05 до 10,0 мг/кг/дозу и более предпочтительно от 0,5 до 10 мг/кг/дозу, либо непрерывно (например, путем инфузии) или в виде единичных доз (таких, например, как ежедневные, еженедельные или ежемесячные дозы; ср. ниже), но их можно в значительной степени изменять, прежде всего в зависимости от указанных выше параметров.
Для профилактических применений композиции, содержащие полипептиды, предлагаемые в изобретении, можно вводить также в аналогичных или несколько более низких дозах. Дозу может также регулировать каждый лечащий врач в случае любого осложнения.
В зависимости от конкретного полипептида, предлагаемого в изобретении, и его специфических фармакокинетических и других свойств, его можно вводить ежедневно, каждый второй, третий, четвертый, пятый или шестой день, еженедельно, ежемесячно и т.п. Схема введения может включать пролонгированное еженедельное применение. Под пролонгированным подразумевают применение в течение периода времени, составляющего по меньшей мере две недели и предпочтительно несколько месяцев или лет.
Эффективность полипептидов, предлагаемых в изобретении, и содержащих их композиций можно тестировать с использованием любого приемлемого анализа ίη νίίτο, клеточного анализа, анализа ίη νινο и/или на хорошо известных животных моделях, или с помощью любой их комбинации в зависимости от специфического представляющего интерес заболевания. Приемлемые анализы и животные модели очевидны специалисту в данной области, и они представляют собой анализы, применяемые ниже в примерах.
Для фармацевтического применения полипептиды, предлагаемые в изобретении, можно приготавливать в виде фармацевтического препарата, содержащего (I) по меньшей мере один полипептид, предлагаемый в изобретении, и (II) по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель, эксципиент, адъювант и/или стабилизатор, и (III) необязательно один или несколько дополнительных фармацевтически активных полипептидов и/или соединений. Под фармацевтически приемлемым подразумевается, что соответствующий продукт не обладает какими-либо биологическими или другими нежелательными побочными действиями при введении индивидууму и не оказывает вредного действия при взаимодействии с любым из остальных компонентов фармацевтической композиции (такой, например, как фармацевтическое действующее вещество), в которую он входит. Конкретные примеры можно обнаружить в стандартных справочниках, таких как Кеш1п§1оп'8 Ркагтасеи11са1 Зиепсек, 18-ое изд., издво Маск РиЫЫйпд Сотрапу, США, 1990. Например, полипептиды, предлагаемые в изобретении, можно включать в препаративную форму и вводить любым методом, хорошо известным для канонических антител и фрагментов антител и других фармацевтически активных белков. Так, согласно следующему варианту осуществления изобретения изобретение относится к фармацевтической композиции или препарату, которая/который содержит по меньшей мере один полипептид, предлагаемый в изобретении, и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель, эксципиент, адъювант и/или стабилизатор и необязательно одну или несколько дополнительных фармацевтически активных субстанций.
Например, указанная препаративная форма может представлять собой (но, не ограничиваясь только указанной) форму, пригодную для орального введения, для парентерального введения (например, путем внутривенной, внутримышечной, внутриоболочечной, внутрипросветной или внутрибрюшинной инъекции или внутривенной инфузии), для местного, для подъязычного введения, для введения путем ингаляции, с помощью кожного пластыря, путем имплантации, с помощью суппозитория, для трансдермального, назального введения, введения в стекловидное тело, ректального или вагинального введения и т.п. Указанные приемлемые формы введения, которые могут быть твердыми, полутвердыми или жидкими, в зависимости от пути введения, а также методы и носители, применяемые при их получении, должны быть очевидны специалисту в данной области.
Фармацевтические препараты для парентерального введения, такого как внутривенная, внутримышечная, подкожная инъекция или внутривенная инфузия, могут представлять собой, например, стерильные растворы, суспензии, дисперсии, эмульсии или порошки, содержащие действующее вещество, и которые можно применять для инфузии или инъекции необязательно после дополнительной стадии растворения или разведения. Приемлемыми носителями или разбавителями для таких препаратов являются, например (но, не ограничиваясь только ими) стерильная вода и фармацевтически приемлемые водные буферы и растворы, такие как забуференный фосфатом физиологический раствор, раствор Рингера, раствор декстрозы, раствор Хэнкса; водные растворы масел; глицерин; этанол; гликоли, такие как пропиленгликоль, или также минеральные масла, животные масла и растительные масла, например, арахисовое масло, соевое масло, а также их приемлемые смеси.
Растворы действующего вещества или его солей могут содержать также консерванты для предупреждения роста микроорганизмов, такие как антибактериальные и противогрибковые агенты, например, парабены, хлорбутанол, фенол, сорбиновая кислота, тимеросал (тиомерсал) и т.п. Во многих случаях может оказаться предпочтительным включать изотонические агенты, например, сахара, буферы или хло- 53 028183 рид натрия. Требуемую текучесть можно поддерживать, например, путем образования липосом, путем поддерживания требуемого размера частиц в случае дисперсий или путем применения поверхностноактивных веществ. Можно добавлять также другие агенты, замедляющие абсорбцию, например, моностеарат алюминия и желатин.
Во всех случаях конечная лекарственная форма должна быть стерильной, текучей и стабильной в условиях производства и хранения. Стерильные инъецируемые растворы получают путем включения действующего вещества в требуемом количестве в соответствующий растворитель при необходимости с различными другими перечисленными выше ингредиентами, с последующей стерилизацией фильтрацией. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных инъецируемых растворов предпочтительными методами получения являются методы вакуумной сушки и сушки вымораживанием, которые позволяют получать порошок действующего вещества плюс любого дополнительного ингредиента, присутствующего раньше в стерилизованных фильтрацией растворах.
Как правило, предпочтительными являются водные растворы или суспензии. В целом, приемлемыми формами для терапевтических белков, таких как полипептиды, предлагаемые в изобретении, являются забуференные растворы белка, например, растворы, включающие белок в приемлемой концентрации (например, от 0,001 до 400 мг/мл, предпочтительно от 0,005 до 200 мг/мл, более предпочтительно от 0,01 до 200 мг/мл, более предпочтительно 1,0-100 мг/мл, например, 1,0 мг/мл (ί.ν.-введение) или 100 мг/мл (Ус-введение), и водный буфер, такой как забуференный фосфатом физиологический раствор, рН 7,4, другие фосфатные буферы, рН 6,2-8,2, гистидиновые буферы, рН 5,5-7,0, сукцинатные буферы, рН 3,2-6,6 и цитратные буферы, рН 2,1-6,2, и необязательно соли (например, №С1) и/или сахара или многоатомные спирты (такие как трегалоза, маннит или глицерин) для придания изотоничности раствору.
Предпочтительными забуференными растворами белка являются растворы, включающие полипептид, предлагаемый в изобретении, в концентрации 0,05 мг/мл, растворенный в 25 мМ фосфатном буфере, рН 6,5, для достижения изотоничности которого добавляют трегалозу в концентрации 220 мМ. Кроме того, в указанные растворы можно включать другие агенты, такие как поверхностно-активное вещество, например Твин-20 или Твин-80 в концентрации 0,02%. Формы для подкожного введения могут включать полипептид, предлагаемый в изобретении, в существенно более высоких концентрациях, например, вплоть до 100 мг/мл или даже превышающих 100 мг/мл. Однако, как должно быть очевидно специалисту в данной области, ингредиенты и их количества, указанные выше, представляют собой только один предпочтительный вариант. Другие варианты и их модификации должны быть очевидны специалисту в данной области или их легко можно определять на основе представленного выше описания.
Полипептиды, предлагаемые в изобретении, можно вводить также с помощью приемлемого депо, препаративных форм с медленным высвобождением или пролонгированным высвобождением, например, пригодных для инъекции, с использованием контролирующих высвобождение устройств для имплантации под кожу и/или с использованием дозирующего насоса или других устройств, применение которых для введения фармацевтически активных субстанций или действующих веществ хорошо известно. Кроме того, полипептиды, предлагаемые в изобретении, можно включать в форму в виде геля, крема, спрея, капель, пластыря или пленки, которые при их нанесении на кожу обеспечивают проникновение действующего вещества через кожу.
Кроме того, по сравнению с каноническими антителами или фрагментами антител одним из основных преимуществ применения полипептидов, предлагаемых в изобретении, является то, что их легко можно вводить с помощью путей, отличных от парентерального введения, и легко включать в препаративные формы для такого введения. Например, как описано в международной заявке на патент \У0 2004/041867, указанные полипептиды можно включать в формы, предназначенные для орального, интраназального, внутрилегочного и трансдермального введения.
Другим вариантом осуществления изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая по меньшей мере один полипептид, предлагаемый в изобретении, который указан в настоящем описании, и по меньшей мере одно другое терапевтическое средство, выбранное из группы, включающей статины, антитромбоцитарные средства, антикоагулянты, противодиабетические средства и гипотензивные средства.
Указанная фармацевтическая комбинация может необязательно содержать также разбавитель, эксципиент, адъювант и/или стабилизатор.
Когда две или большее количество субстанций или действующих веществ подлежат применению в виде компонента комбинированной схемы лечения, то их можно вводить посредством одинакового пути введения или разных путей введения, практически одновременно или в различное время (например, практически одновременно, последовательно или согласно чередующейся схеме). Когда субстанции или действующие вещества подлежат одновременному введению посредством одинакового пути введения, то их можно вводить в виде различных фармацевтических препаратов или композиций или в виде компо- 54 028183 нента объединенного фармацевтического препарата или композиции. Кроме того, когда два или большее количество активных субстанций или действующих веществ подлежат применению в качестве компонента комбинированной схемы лечения, то каждую из субстанций или действующих веществ можно вводить в таком же количество и согласно такой же схеме, что и применяемые при индивидуальном применении соединения или действующего вещества, и указанное совместное применение может приводить к получению синергетического действия или может не приводить к нему. Однако, когда совместное применение двух или большего количество активных субстанций или действующих веществ приводит к получению синергетического действия, то может оказаться возможным также уменьшать количество одного, нескольких или всех субстанций или действующих веществ, подлежащих введению, все еще достигая при этом требуемого терапевтического действия. Это может быть ценным, например, для избегания, ограничения или снижения любых нежелательных побочных действий, которые ассоциированы с применением одной или нескольких субстанций или действующих веществ, когда их используют в принятых количествах, все еще достигая при этом требуемого фармацевтического или терапевтического действия.
Таким образом, следующим вариантом осуществления изобретения является способ лечения заболеваний и нарушений, указанных выше, заключающийся в том, что вводят индивидууму в эффективном количестве одновременно, раздельно или последовательно по меньшей мере один полипептид, предлагаемый в изобретении, и по меньшей мере одно средство, выбранное из группы, включающей статин, антитромбоцитарное средство, антикоагулянт, противодиабетическое средство и гипотензивное средство.
Согласно другому объекту изобретения полипептид, предлагаемый в изобретении, приготавливают так, чтобы его можно было вводить в сочетании с другими лекарственными средствами, применяемыми для лечения заболеваний и нарушений, указанных выше, где другие лекарственные средства выбраны из группы, включающей статин, антитромбоцитарное средство, антикоагулянт, противодиабетическое средство и гипотензивное средство.
Согласно еще одному объекту изобретения, лекарственные средства, применяемые для лечения указанных выше заболеваний и нарушений, где лекарственные средства выбраны из группы, включающей статин, антитромбоцитарное средство, антикоагулянт, противодиабетическое средство и гипотензивное средство, приготавливают так, чтобы их можно было вводить в сочетании с полипептидом, предлагаемым в изобретении.
Согласно еще одному объекту изобретения полипептид, предлагаемый в изобретении, применяют в сочетании с устройством, пригодным для введения полипептида, таким как шприц, ручка-инъектор или другое устройство.
Следующим вариантом осуществления изобретения является способ диагностирования заболевания, нарушения или состояния, опосредуемого дисфункцией СХ3СК1, заключающийся в том, что осуществляют стадии, на которых:
а) получают образец из организма индивидуума и
б) приводят в контакт ш У'Иго образец с указанным выше полипептидом, предлагаемым в изобретении, и
в) определяют связывание указанного полипептида с указанным образцом и
г) сравнивают связывание, определенное на стадии (в), со стандартом, где различие в связывании относительно указанного образца является диагностическим признаком заболевания, нарушения или состояния, характеризующегося дисфункцией СХ3СК1.
Таким образом, другим вариантом осуществления изобретения является способ диагностирования заболевания, нарушения или состояния, опосредуемого дисфункцией СХ3СК1, заключающийся в том, что осуществляют стадии, на которых:
а) получают образец из организма индивидуума и
б) приводят в контакт образец с указанным выше полипептидом, предлагаемым в изобретении, и
в) определяют количество СХ3СК1 в образце; и
г) сравнивают количество, определенное на стадии (в), со стандартом, где различие в количестве относительно указанного образца является диагностическим признаком заболевания, нарушения или состояния, характеризующегося дисфункцией СХ3СК1.
Указанные выше диагностические способы можно применять для мониторинга эффективности терапевтического лечения индивидуума.
Другим вариантом осуществления изобретения является набор для диагностирования заболевания, нарушения или состояния, опосредуемого дисфункцией СХ3СК1, для применения в указанном выше способе, указанный набор содержит по меньшей мере один полипептид, предлагаемый в изобретении, и необязательно одну или несколько сред, средства детекции и/или агенты для визуализации ш уПго или ш У1уо, а также необязательно инструкции по применению. Приемлемыми агентами для визуализации ш У1уо являются 99тТс, 'Эи, 123Ц а для визуализации магнитного резонанса - парамагнитные соединения.
Изобретение относится также к набору, содержащему по меньшей мере один полипептид, предла- 55 028183 гаемый в изобретении, и дополнительно один или несколько других компонентов, выбранных из группы, включающей другие лекарственные средства, которые применяют для лечения описанных выше заболеваний и нарушений, и описанные выше устройства.
Изобретение относится также к способам получения полипептидов, предлагаемых в изобретении, указанные способы, как правило, включают стадии, на которых:
культивируют клетки-хозяева, содержащие нуклеиновую кислоту, которая может кодировать полипептид, предлагаемый в изобретении (далее в контексте настоящего описания «нуклеиновая кислота, предлагаемая в изобретении»), в условиях, которые позволяют осуществлять экспрессию полипептида, предлагаемого в изобретении; и, извлекают или выделяют полипептид, экспрессируемый клетками-хозяевами из культуры; и необязательно дополнительно очищают и/или модифицируют, и/или включают в препаративную форму полипептид, предлагаемый в изобретении.
Нуклеиновая кислота, предлагаемая в изобретении, может представлять собой геномную ДНК, кДНК или синтетическую ДНК (такую как ДНК с наиболее часто встречающимися кодонами, которая специально адаптирована для экспрессии в выбранной клетке-хозяине или организме-хозяине). Согласно одному из вариантов осуществления изобретения нуклеиновая кислота, предлагаемая в изобретении, находится в практически выделенной форме, как указано выше в настоящем описании.
Нуклеиновая кислота, предлагаемая в изобретении, может иметь также форму вектора, может присутствовать в векторе и/или представлять собой часть вектора, такого, например, как плазмида, космида или УАС. Вектор может представлять собой, прежде всего, экспрессионный вектор, т.е. вектор, который может обеспечивать экспрессию полипептида ίη νίίΓΟ и/или ίη νίνο (т.е. в приемлемой/приемлемом клетке-хозяине, организме-хозяине и/или экспрессионной системе). Указанный экспрессионный вектор, как правило, содержит по меньшей мере одну нуклеиновую кислоту, предлагаемую в изобретении, которая функционально связана с одним или несколькими приемлемыми регуляторными элементами, такими как промотор(ы), энхансер(ы), терминатор(ы) и т.п. Конкретные примеры регуляторных элементов и других элементов, пригодных или необходимых для экспрессии полипептидов, предлагаемых в изобретении, таких как промоторы, энхансеры, терминаторы, факторы интеграции, маркеры для селекции, сигнальные или лидерные последовательности, репортерные гены и т.п., описаны, например, на сс. 131-133 νθ 2006/040153.
Нуклеиновые кислоты, предлагаемые в изобретении, можно создавать или получать хорошо известным методом (например, путем автоматического синтеза ДНК и/или методом рекомбинантной ДНК) на основе информации об аминокислотных последовательностях полипептидов, предлагаемых в изобретении, которая представлена в настоящем описании, и/или их можно выделять из пригодного встречающегося в естественных условиях источника.
Следующим вариантом осуществления изобретения является хозяин или клетка-хозяин, который/которая экспрессирует или обладает способностью экспрессировать полипептид, предлагаемый в изобретении; и/или содержит нуклеиновую кислоту, которая кодирует полипептид, предлагаемый в изобретении. В конкретном предпочтительном варианте осуществления изобретения указанные клеткихозяева представляют собой бактериальные клетки, клетки дрожжей, клетки грибов или клетки млекопитающих.
Приемлемыми бактериальными клетками являются клетки грамотрицательных штаммов бактерий, таких как штаммы ЕксЕепсЫа со1г, Рго1еик и Ркеиботопак, и грамположительных штаммов бактерий, таких как штаммы ВасШик, З1гер1отусек, З1арЕу1ососсик и Ьас1ососсик. Приемлемыми грибными клетками являются клетки видов ТпсНойеппа. Ыеигокрога и АкрегдШик. Приемлемыми клетками дрожжей является клетки видов ЗассЕаготусек (например, ЗассЕаготусек сегеуыае), ЗсЕ|/окассЕаготусек (например, 5>с1й/окассЕаготусек ротЬе), Рю1йа (например, Рю1йа ракЮпк и Рю1йа теИапоИса) и Напкепи1а.
Приемлемыми клетками млекопитающих являются, например, СНО-клетки, ВНК-клетки, НеЬаклетки, СОЗ-клетки, ЫЗ0-клетки, НЕК-клетки и т.п. Однако можно использовать также клетки амфибий, клетки насекомых, клетки растений и любые другие клетки, которые применяют в данной области для экспрессии гетерологичных белков.
Для производства в промышленном масштабе предпочтительными гетерологичными хозяевами для (промышленного) производства терапевтических продуктов, содержащих включающие иммуоглобулиновые единичные вариабельные домены полипептиды и белки, являются штаммы Е. соП, РюНа ракЮпк и З. сегеуыае, которые пригодны для крупномасштабной экспрессии, производства и ферментации, и прежде всего для крупномасштабной экспрессии, производства и ферментации (био)фармацевтических продуктов.
Выбор конкретной экспрессионной системы зависит, в частности, от требований к определенным пост-трансляционным модификациям, более конкретно к гликозилированию. Для получения полипептида, предлагаемого в изобретении, для которого гликозилирование является желательным или необходимым, требуется применять для экспрессии клетки-хозяева млекопитающих, обладающие способностью гликозилировать экспрессируемый белок. В этом плане специалисту в данной области должно быть очевидно, что полученная схема гликозилирования (т.е. вид, количество и положение присоединенных ос- 56 028183 татков) должна зависеть от клетки или клеточной линии, применяемой для экспрессии.
Полипептиды, предлагаемые в изобретении, можно получать либо в клетке, согласно описанному выше методу, либо внутриклеточно (например, в цитозоле, периплазме или в тельцах включения), а затем выделять из клеток-хозяев и необязательно дополнительно очищать; либо их можно получать внеклеточно (например, в виде секретируемых в среду, в которой культивируют клетки-хозяева), а затем выделять из культуральной среды и необязательно дополнительно очищать.
Другие методы и реагенты, которые применяют для получения полипептидов с помощью рекомбинантной ДНК, такие как специфические приемлемые экспрессионные векторы, методы трансформации или трансфекции, маркеры для селекции, методы индукции экспрессии белков, условия культивирования и т.п., известны в данной области. Аналогично этому, методики выделения и очистки белков, применяемые в методе производства полипептида, предлагаемого в изобретении, хорошо известны специалисту в данной области.
Получение полипептидов, предлагаемых в изобретении, посредством ферментации в общепринятых рекомбинантных организмах-хозяевах, таких как Е. сой и дрожжи, является эффективным по стоимости по сравнению с каноническими антителами, для которых требуются также дорогостоящее оборудование для культивирования клеток млекопитающих. Кроме того, можно достигать высоких уровней экспрессии, и выход полипептидов, предлагаемых в изобретении, составляет от 1 до 10 г/л (Е. сой) и вплоть до 10 г/л (дрожжи) и более.
Примеры
Создание линий клеток СНО, ВаГ/3, Сак и НЕК293, сверхэкспрессирующих СХ3СК1 человека или СХ3СК1 обезьян циномолгус
СНО- и ВаГ/3-клетки, сверхэкспрессирующие СХ3СК1 человека или обезьян циномолгус, создавали с использованием методик, известных в данной области. Создавали также клетки, экспрессирующие человеческий ССК2 или ССК5, с использованием методик, известных в данной области.
Для экспрессии человеческого СХ3СК1 кДНК клонировали в рС^NА3.1(+)-ηео, а для мышиного СХ3СК1 применяли рс^NА-^ЕЗТ40-иео.
Аминокислотные последовательности человеческого СХ3СК1 и СХ3СК1 обезьян циномолгус представлены в 8ЕО ГО N0: 255 и ЗЕЦ ГО N0: 256 соответственно.
Для создания клеток верблюжьей почки (Сай), сверхэкспрессирующих человеческий СХ3СК1 или мышиный СХ3СК1, встраивали путем электропорации в родительские клетки Сай плазмиды рС^NА3.1(+)-иео-ЬСX3СК1 или рс^NА-^ЕЗТ40-пео-тСX3СК1 соответственно. Для всех вариантов для отбора трансфектантов добавляли 1 мг/мл генетицина (фирма 1пуПгодеп, Карлсбад, шт. Калифорния, США).
Клетки почки человеческого эмбриона (НЕК293), сверхэкспрессирующие СХ3СК1 человека или СХ3СК1 обезьян циномолгус, создавали путем опосредуемой липидом трансфекции родительской клеточной линии НЕК293 плазмидами рС^NА3.1(+)-иео-ЬСX3СК1 или суСХ3СК1 соответственно с использованием реагента Ридеие (фирма Косйе). Эти клетки применяли в качестве временных трансфектантов и их самих не подвергали селекции. В целом, метод состоял в следующем: высевали по 2х10Е6 клеток в колбы Т75 и инкубировали в течение ночи до трансфекции. После удаления культуральной среды клетки трансфектировали соответствующими плазмидами (9 мкг) и Ридеие (27 мкл) согласно инструкциям производителя. Через 48 ч после трансфекции клетки собирали и замораживали для дальнейшего применения.
Пример 1. Иммунизация с использованием СХ3СК1 индуцирует гуморальный иммунный ответ у лам
1.1 Иммунизации
После одобрения Комитетом по этике (Университет Антверпена, Бельгия, ИА2008А1, 2008/096, 2007/068), иммунизировали 9 лам (обозначены №№ 368, 369, 370, 381, 382, 384, 312, 313 и 314).
Иммунизировали шесть лам (312, 313, 314, 381, 382 и 384), осуществляя 4 внутримышечные инъекции (2 мг/дозу еженедельно или с двухнедельными интервалами) плазмидным вектором рУАХ1йиСХ3СК1 (фирма 1пуПгодеп, Карлсбад, шт. Калифорния, США). Трем ламам (381, 382 и 384) вводили последовательно путем 4 подкожных инъекций сверхэкспрессирующие человеческий СХ3СК1 Сайклетки, созданные согласно описанному выше методу. Клетки ресуспендировали в Ό-ЗФР и выдерживал на льду до инъекции.
Еще трех лам (обозначены №№ 368, 369 и 370) иммунизировали согласно стандартным протоколам, вводя путем 4 подкожных инъекций сверхэкспрессирующие человеческий СХ3СК1 Сай-клетки, созданные согласно описанному выше методу. Клетки ресуспендировали в Ό-ЗФР и выдерживали на льду до инъекции.
Затем этим ламам вводили путем двух инъекций рекомбинантный СХ3СК1 КТ/ЕС3-фрагмент, сшитый с БСА (табл. 13). Пептиды заказывали на фирме №оМРЗ (Ро1урерййедтоир, Страсбург, Франция) и сшивали с БСА согласно стандартным протоколам.
- 57 028183
Таблица 13. Последовательности пептидных фрагментов, применяемых для бустерной иммунизации
Фрагмент Последовательность 5Εζ) ГО ΝΟ:
СХЗСК1- ΝΤ Ас-Ме1-Акр-Сг1п-РЪе-Рго-О1и-5ег-Уа1-ТЬг-О1и-А5п-РЪе-О1и-Туг-А5р-А5р- Ьеи-А1а-О1и-А1а-Су8-ИН2 228
СХЗСК1- ЕСЗ Ас-Ьук-Ееи-Туг-Акр-РЪе-РЬе-Рго-Вег-Сук-Акр-МеТАгд-Ьук-Азр-Ееи- Аг§-Ьеи-ИН2 229
Для первой инъекции применяли форму в полном адъюванте Фрейнда (фирма Όΐίοο, Детройт, шт. Мичиган, США), а для последующих инъекций применяли форму в неполном адъюванте Фрейнда (фирма Όΐίοο, Детройт, шт. Мичиган, США).
1.2 Оценка индуцированных иммунных ответов у лам
Для оценки индукции иммунных ответов у животных на человеческий СХ3СК1 с использованием ЕЫ8А или ГАС8, собирали образцы сыворотки у лам 312, 313 и 314в день 0 (не иммунная) и в различные моменты времени согласно протоколу иммунизации (время сбора лимфоцитов периферической крови [РВЕ]).
В целом, метод состоял в следующем:
Иммобилизовали нейтравидин (2 мкг/мл) в течение ночи при 4°С в 96-луночном планшете Мах1когЬ (фирма Шпс, Висбаден, Германия). Лунки блокировали раствором казеина (1%) в ЗФР. Затем захватывали биотинилированный рекомбинантный NТ-фрагмент (фирма Ро1урерййе, Страсбург, Франция) или биотинилированные ЕСЗ-фрагменты СХ3СК1 (фирма Ро1урерййе, Страсбург, Франция) в концентрации 2 мкг/мл. После добавления разведений сыворотки выявляли специфически связанные иммуноглобулины, используя конъюгированное с пероксидазой из хрена (НКР) козье антитело к иммуноглобулину лам (фирма ВеФу1 ЬаЬогаФпек 1пс., Монтгомери, шт. Техас, США), и последующая ферментативная реакция в присутствии субстрата ТМВ 0пе (3,3',5,5'-тетраметилбензидин) (фирма Рготеда, Мюнхен, Германия), продемонстрировала, что после иммунизаций пептидами индуцировался выраженный гуморальный иммунный ответ против СХ3СК1.
Кроме того, сывороточные титры иммунизированных клетами животных подтверждали с помощью ГАС8-анализа на находящихся на стадии активного роста СНО-клетахк, сверхэкспрессирующих человеческий СХ3СК1. Ответы в виде сывороточного титра СХ3СК1 для лам 368, 369 и 370 определяли, отбирая образцы сыворотки после четырех иммунизации клетками (день 49), четырех иммунизации клетками и одной бустер-инъекции пептидом (день 77) и четырех иммунизации клетками и двух бустер-инъекций (день 81). Клетки собирали и промывали перед инкубацией с разведениями сыворотки. Для детекции использовали козье антитело к иммуноглобулину лам (фирма ВеФу1 ЬаЬогаФпек 1пс., Монтгомери, шт. Техас, США), а затем ослиное антикозье антитело, сшитое с РЕ (фикоэритрин) (фирма 1асккоп ЬаЬогаФпек, графство Суффолк, Великобритания), и получали результаты анализа с помощью устройства ГАС8Аггау (фирма ΒΌ Вюкшепсек). Обобщенные результаты полученных сывороточных ответов, которые определяли либо с помощью ЕЫ8А, либо с помощью ГАС8, представлены в табл. 14 и 15.
Таблица 14. Анализ сывороточных титров у животных, иммунизированных клетками/пептидом
ЕЫ8А РАС5
Лама Иммуноген ΝΤ- рекомбинант ЕСЗ- рекомбинант После иммунизации клетками После бустериммунизации пептидом
368 Сакь ЪиСХЗСК.1 + ΝΤ/ЕСЗ- пептнд + +/-
369 Сакл- ЪиСХЗСКЛ + ΝΤ/ЕСЗ- пептид + +/- + +
370 СакГ ЬиСХЗСК.1 + ΝΤ/ЕСЗ- пептид ++ ++ +
Таблица 15 Анализ сывороточных титров у животных, иммунизированных ДНК/клетками
ЕЫ8А РАС8
Лама Иммуноген ΝΤ- рекомбинант ЕСЗ- рекомбинант После иммунизации клетками После бустериммунизации пептидом
381 ДНК + Сакь ЬиСХЗСК.1 ++ + ++ ++
382 ДНК + Сакь ЬиСХЗСК.1 + - - -
384 ДНК + Сакь ЬиСХЗСКЛ ++ - - -
У лам, иммунизированных только ДНК (312, 313 и 314), сывороточные титры не определяли.
- 58 028183
Пример 2. Клонирование популяций содержащих только тяжелую цепь фрагментов антител и получение фага
После последней инъекции каждого из подвидов иммуногена получали образцы иммунных тканей иммунизированных лам в качестве источника В-клеток, которые продуцировали антитела с тяжелой цепью. У каждой из лам 312, 313 и 314 собирали по два 150-миллилитровых образца крови через 4 и 8 дней после последней инъекции антигена. У лам 368, 369 и 370 собирали по четыре 150-миллилитровых образца крови через 5 и 7 дней после последней иммунизации клетками и дополнительно через 4 и 8 дней после последней иммунизации пептидом. Затем получали две биопсии лимфатических узлов через 12 дней после последней иммунизации клетками и через 12 дней после последней иммунизации пептидом. У лам 381, 382 и 384 собирали по пять 150-миллилитровых образцов крови через 8 дней после последней иммунизации ДНК и дополнительно через 4 дня после первой бустер-иммунизации клетками, через 8 и 11 дней после второй бустер-иммунизации клетками и через 8 дней после последней иммунизации клетками. Затем через 8 дней после второй иммунизации клетками получали одну биопсию лимфатического узла.
Из образцов крови получали лимфоциты периферической крови (РВЬ), используя фиколл-пак согласно инструкциям производителя (фирма Атегкйат Вюкс1епсек, Пискатавей, шт. Нью-Джерси, США). Из РВЬ и биопсии лимфатических узлов (ЬК) экстрагировали общую РНК, которую применяли в качестве исходного материала для амплификации с помощью ОТ-ПЦР кодирующих νΗΗ ДНК-сегментов.
Для каждой иммунизированной ламы конструировали библиотеку путем объединения общей РНК, выделенной из образцов, полученных после определенного подвида схемы иммунизации, т.е. после иммунизации одним из типов иммуногенов, и для некоторых лам образцы из различных животных объединяли в одну библиотеку (табл. 16).
Таблица 16. Объединение различных образцов для создания библиотеки
Название библиотеки Лама Образец
368-РВЫ +2+ЫЧ-У-100209 368 РВЬ 1 и 2, ЬИ
369+370-РВЫ+2+и4-У-100209 369, 370 РВЬ 1 и 2, ЬИ
368-РВЬЗ+4-У-280909 368 РВЬ 3 и 4
369-РВЬЗ+4-У-070409 369 РВЬ 3 и 4
370-РВЬЗ+4-У-070409 370 РВЬ 3 и 4
381-РВЫ-У-180310 381 РВЬ 1
382-РВЫ-У-180310 382 РВЫ
384-РВЫ-У-180310 384 РВЫ
381 -РВЬ1+2+3+4+5+Ы4-У-280909 381 РВЬ 1, 2, 3, 4, 5 и ЬИ
3 82-РВЬ1+2+3+4+5+ЬИ-У-280909 382 РВЬ 1, 2, 3, 4, 5 и ЬИ
384-РВЫ+2+3+4+5+Ьп-У-280909 384 РВЬ 1, 2, 3, 4, 5 и ЬИ
312+313+314-РВЫ +2-У-220210 312, 313 и314 РВЬ 1 и 2
312-РВЫ+2-У-180310 312 РВЬ 1 и 2
313-РВЫ+2-У-180310 313 РВЬ 1 и 2
314-РВЫ+2-У-180310 314 РВЬ 1 и 2
В целом, метод состоял в следующем: популяцию амплифицированных с помощью ПЦР νΗΗ клонировали с использованием специфических сайтов рестрикции в векторе, созданном для облегчения фагового дисплея библиотеки νΗΗ. Вектор выводили из риС119, и он содержал промотор Ьас2, последовательность, кодирующую белок д111 фага М13, ген, обусловливающий устойчивость к ампициллину или карбенициллину, сайт множественного клонирования и гибридную лидерную последовательность д111ре1В (рАХ050). В рамке считывания с кодирующей последовательностью νΗΗ вектор кодировал Сконцевую с-тус-метку и И|к6-метк\·. Фаги получали согласно стандартным протоколам и хранили после стерилизации фильтрацией при 4°С или при -80°С в 20%-ном глицерине для последующего применения.
Пример 3. Селекция СХ3СК1-специфических νΗΗ с помощью фагового дисплея
Популяцию νΗΗ, полученную из всех лам и клонированную в виде фаговой библиотеки, применяли в различных стратегиях селекции, используя разнообразные условия селекции. Варьирующие параметры включали: I) форму презентации белка СХ3СК1 (на различных клеточных основах или на липосомах-νΐ,Р (вирусоподобные частицы), II) метод презентации антигена (в растворе при применении клеток или в покрытии на планшетах при применении V^Р), III) концентрацию антигена, ГУ) применяемый ортолог (человеческий или обезьян циномолгус), ν) количество циклов селекции и ν^ различные методы элюции (неспецифическая с использованием трипсина или специфическая с использованием лиганда фракталкина). Все селекции с использованием твердой фазы с покрытием осуществляли в 96-лучночных планшетах Мах1когр (фирма Жис, Висбаден, Германия).
Селекции осуществляли следующим образом: препараты антигена СХ3СК1, предназначенные для селекции в форматах селекции в твердой или жидкой фазе, презентовали согласно описанному выше методу в нескольких концентрациях. После инкубации в течение 2 ч с фаговыми библиотеками с последующей интенсивной отмывкой связанные фаги элюировали с использованием трипсина (1 мг/мл) в течение 15 мин. Когда для элюции фага применяли трипсин, то протеазную активность сразу же нейтрализовали, используя 0,8мМ протеазный ингибитор АВδΚ В качестве контроля параллельно осуществляли селекции без антигена.
Сборы фага применяли для заражения Е. сой, которых затем в свою очередь применяли для полу- 59 028183 чения фага для следующего цикла селекции (сохранение (спасение) фага). После второго цикла селекции сборы фага применяли для заражения Е. соН, которые затем высевали на агаровые пластины (ЬВ+ашр+глюкоза (2%)) для анализа индивидуальных клонов УНН. Для скрининга продукта селекции в отношении специфических связывающих агентов индивидуальные колонии изымали из агаровых пластин и выращивали в объеме 1 мл в 96-луночных планшетах с глубокими лунками. Контролируемую Рас/ экспрессию УНН индуцировали, добавляя ИПТГ (конечная концентрация 1мМ) в отсутствии глюкозы. Получали экстракты содержимого периплазматического пространства (периплазматические экстракты) (в объеме ~80 мкл) согласно стандартным методам.
Пример 4. Скрининг периплазматических экстрактов с помощью РАСЗ-анализа в условиях конкуренции с использованием СХ3СК1-фракталкина
Периплазматические экстракты подвергали скринингу с помощью РАСЗ-анализа в условиях конкуренции с использованием человеческого СХ3СК1/человеческого фракталкина для оценки блокирующей активности экспрессированных УНН. Человеческий СХ3СК1 презентовали на СНО-клетках, сверхэкспрессирующих СХ3СК1. Применяли как систему, в которой использовали клетки, собранные на фазе активного роста культуры, так и систему, в которой использовали замороженные клетки. В качестве идентифицирующего реагента применяли фракталкин (фирма Κ&Ό ЗуМету Миннеаполис, шт. Миннесота, США), меченный с помощью а1еха647 (А647-фракталкин) с уровнем мечения, равным 1. Для осуществления анализа сначала проводили серии титрования меченого фракталкина в отношении СНОРиСХ3СК1-клеток для определения величины ЕС50, характеризующей связывание. Сначала скрининг осуществляли в присутствии более высокой концентрации фракталкина (3нМ) для повышения робастности анализа. Для повышения до максимума чувствительности скрининга для последующего скрининга была выбрана концентрация, соответствующая ЕС30 (1нМ). В целом, метод состоял в следующем: 50 мкл периплазматического экстракта добавляли к 6 нМ меченому фракталкину (50 мкл) и 200000 СН0РиСХ3СК1-клеткам. После инкубации в течение 1 ч при 4°С клетки отмывали трижды перед считыванием результатов с помощью устройства РАСЗАггау (фирма Вес!оп Эгоктзоп). Сначала дискриминационное окно устанавливали на интактные клетки, что определяли на основе профиля рассеяния. Затем устанавливали дискриминационное окно на мертвые клетки на основе их профиля флуоресценции после окрашивания ΡΙ (йодид пропидия) (фирма Зфта, Сент-Луис, США). Профиль флуоресценции для метки а1еха647 определяли для каждого образца и использовали для расчета блокирующей способности. В качестве контролей применяли такие же условия, но в отсутствии УНН в периплазматическом экстракте, или в присутствии известного несоответствующего УНН, и включали образцы, в которых присутствовал «холодный» (немеченый) фракталкин в избыточном количестве. Для каждого образца определяли блокирование в процентах, используя контрольные образцы для определения анализируемого окна.
С помощью указанного скрининга отбирали УНН, и анализ их последовательности позволил выявить 120 уникальных УНН, принадлежащих к 3 различным В-клеточным линиям дифференцировки. Общее количество вариантов, обнаруженных для каждой В-клеточной линии дифференцировки, представлено в табл. 17.
Таблица 17. Параметры селекции, применяемые для идентификации специфических в отношении человеческого СХ3СК1 УНН, принадлежащих к В-клеточных линиям дифференцировки
В-клеточная линия дифференцировки Репрезентативный УНН, ГО Кол-во вариантов Библиотеки
9 СХЗСК1ВП11Н11 4 368-РВЫ+2+ЬМ-У- 100209
13 СХЗСКЛВП 18Е06 68 368-РВЬ1+2+ЬН-У- 100209 368-РВЛЗ+4-У-280909
101 СХЗСК1ВП66В02 48 312+313+314-РВЫ+2- У-220210 314-РВЫ+2-У-180310
Обзор процедур селекции и характеристик на начальной стадии скрининга всех УНН представлены в табл. 18.
- 60 028183
Таблица 18. Условия скрининга и результат первичного скрининга ЬиСХ3СК1-специфических VΗΗ
УНН, ГО Семейство Библиотека Селекции Блокада (в %)
Первый ЦИКЛ Второй ц икл
СХЗСК1ВП РМР11Н11 9 368- РВЫ+2+ΡΝ- У-100209 ВА/РЗ_ЬСХЗ СК1 Полный (трипсин) СНО- К1_ЬСХЗСК 1 Полный (трипсин) 99,0
СХЗСК1ВП РМР18Е6 13 368-РВБЗ+4- У-280909 ВА/РЗ_ЬСХЗ СКЛ Полный (трипсин) сно- К1_ЬСХЗСК. 1 Полный (трипсин) 53,1
СХЗСКЛВИ РМР54А12 101 312+313+314 -РВЫ+2-У- 220210 УЬРзЬСХЗСК.1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзьсхзсю (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) 93,8
СХЗСК1ВП РМР54АЗ 101 312+313+314 -РВЫ+2-У- 220210 УЬРзЬСХЗСКЛ (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) 90,8
СХЗСКЛВИ РМР54А4 101 312+313+314 -РВЫ+2-У- 220210 УЬРзНСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзЬСХЗСГО (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) 86,6
СХЗСК1ВП РМР54А5 101 312+313+314 -РВЫ+2-У- 220210 УЬРзНСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) 92,5
СХЗСК1ВП РМР54А7 101 312+313+314 -РВЫ+2-У- 220210 УЬРзЬСХЗСК.1 (10 ед.) Полный (трипсин) УЬРзЬСХЗСК1 (10 ед.) Полный (трипсин) 68,9
СХЗСК.1ВП РМР54В1 101 312+313+314 -РВЫ+2-ν- 220210 УЬРз- НСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРз- ЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) 92,1
СХЗСК1ВП РМР54В2 101 312+313+314 -РВЫ+2-У- 220210 УЬРзЬСХЗСК.1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРз- ЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) 65,3
СХЗСК1ВП РМР54ВЗ 101 312+313+314 -РВЫ+2-У- 220210 УЬРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРз- ЬСХЗСК.1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) 90,1
схзсклви РМР54В5 101 312+313+314- РВЫ+2-У- 220210 УЬРз- ЬСХЗСК.1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УРРз-ЬСХЗСМ (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) 92,6
СХЗСКЛВИ РМР54Э5 101 312+313+314 -РВЫ+2-У- 220210 УЬРзьсхзскл (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРз- ЬСХЗСК! (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) 87,8
СХЗСКЛВИ РМР54О8 101 312+313+314 -РВЫ+2-У- 220210 УЬРзьсхзскл (10 ед.) Полный (трипсин) УЬРз- ЬСХЗСК! (10 ед.) Полный (трипсин) 64,1
СХЗСК1ВП РМР54Р6 101 312+313+314 -РВЫ+2-У- 220210 УЬРзНСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзЬСХЗСК.1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) 96,6
СХЗСК1ВП РМР54ОЗ 101 312+313+314 -РВЫ+2-ν- 220210 УЬРзЬСХЗСК.1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) 74,7
СХЗСК1ВН РМР54Н1 101 312+313+314 -РВЫ+2-У- 220210 УЬРзьсхзскл (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзьсхзсго (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) 74,6
СХЗСК1ВП РМР54Н4 101 312+313+314 -РВЫ+2-У- 220210 УЬРзЬСХЗСК.1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзьсхзсго (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) 96,0
СХЗСКЛВИ РМР61Р10 101 314-РВЫ+2- У-180310 УЬРзьсхзскл (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) 73,5
- 61 028183
СХЗСКЛВИ РМР6ГО1 101 314-РВ1Л+2- У-180310 УЬРз- ЬСХЗСК.1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) 68,4
СХЗСКЛВИ РМР6ГО5 101 314-РВЫ+2- ν-180310 УЬРзНСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) 94,9
СХЗСК1ВИ РМР61Е2 101 314-РВЫ+2- ν-180310 УЬРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРз- ЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) 70,3
СХЗСК1ВП РМР61Р11 101 314-РВЫ+2- У-180310 УЬРзНСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) 96,5
СХЗСК1ВИ РМР61О2 101 314-РВЫ+2- ν-180310 УЬРзНСХЗСК1 (.10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬР8ЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) 82,0
СХЗСК1ВИ РМР61СЗ 101 314-РВЫ+2- ν-180310 УЬРзНСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬР8ЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) 92,1
СХЗСК1ВП РМР61О4 101 314-РВЫ+2- ν-180310 УЬРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзЬСХЗСКЛ (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) 94,5
СХЗСК1ВП РМР61Р4 101 314-РВЫ+2- ν-180310 УЬРзНСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРз- ЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) 94,4
СХЗСК1ВИ РМР61А11 101 314-РВЫ+2- ν-180310 УЬРзНСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) 78,0
СХЗСКЛВИ РМР61В2 101 314-РВЫ+2- ν-180310 УЬРз- НСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) 94,5
СХЗСК1В11 РМР61С9 101 314-РВЫ+2ν-180310 УЬРзНСХЗСК1 (10 ед.) Полный (трипсин) УЬРзЬСХЗСК1 (10 ед.) Полный (трипсин) 69,4
СХЗСКЛВИ РМР65Н02 101 312+313+314 -РВЫ+2-У- 220210 УЬРзНСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) #Ν/Α
СХЗСК1ВП РМР65Е11 101 312+313+314 -РВЫ+2-У- 220210 УЬРз- ЬСХЗСКЛ (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзЬСХЗСКЛ (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) #Ν/Α
СХЗСК1ВП РМР65Е10 101 312+313+314 -РВЫ+2-У- 220210 УЬРз- НСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) #Ν/Α
СХЗСК1ВН РМР65Е05 101 312+313+314 -РВЫ+2-ν- 220210 УЬРз- ЬСХЗСК.1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРз- ЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) #Ν/Α
СХЗСК1ВП РМР65В11 101 312+313+314 -РВЫ+2-У- 220210 УЬРз- НСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) #Ν/Α
СХЗСК1ВИ РМР65В07 101 312+313+314 -РВЫ+2-У- 220210 УЬРзНСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) #Ν/Α
СХЗСКЛВИ РМР65В09 101 312+313+314 -РВЫ+2-У- 220210 УЬРз- НСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРз- ЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) #Ν/Α
СХЗСКЛВИ РМР65Н01 101 312+313+314 -РВЫ+2-У- 220210 УЬРзНСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) #Ν/Α
- 62 028183
СХЗСК1ВП РМР65О07 101 312+313+314 -РВЫ+2-ν- 220210 УЬРз- НСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) #Ν/Α
СХЗСКЛВИ РМР66Н08 101 314-РВИ1+2- ν-180310 УИРзНСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) #Ν/Α
СХЗСК1ВП РМР66Н04 101 314-РВЫ+2- ν-180310 УИРзНСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) #Ν/Α
СХЗСК1ВП РМР66Р02 101 314-РВЫ+2- ν-180310 УЬРзНСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УИРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) #Ν/Α
СХЗСК1ВП РМР66Е11 101 314-РВЫ+2- ν-180310 УИРзНСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) #Ν/Α
СХЗСК1ВП РМР66ОЮ 101 314-РВЫ+2- ν-180310 УЬРзНСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) #Ν/Α
СХЗСКЛВИ РМР66И08 101 314-РВЫ+2- ν-180310 УЬРзНСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) #Ν/Α
СХЗСК1ВП РМР66В02 101 314-РВЫ+2- ν-180310 УЬРзНСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УИРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) #Ν/Α
СХЗСК1ВП РМР66А04 101 314-РВЫ+2- ν-180310 УИРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) #Ν/Α
СХЗСК1ВП РМР66И04 101 314-РВЫ+2- У-180310 УИРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) #Ν/Α
СХЗСК1ВП ΡΜΡ66Ώ02 101 314-РВЫ+2- ν-180310 УИРзНСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УЬРз- ЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) #Ν/Α
СХЗСКЛВИ РМР66И06 101 314-РВЫ+2- ν-180310 УЬРзНСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УИРзЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) #Ν/Α
СХЗСК1ВП РМР66О01 101 314-РВЫ+2ν-180310 УЬРзНСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) УИРз- ЬСХЗСК1 (10 ед.) ЬРгас (2мкМ) #Ν/Α
Аминокислотные последовательности всех полученных уникальных УНН представлены в перечне последовательностей и выше (указанные СОК и каркасные участки).
Пример 5. Характеризация очищенных УНН
Обладающие ингибирующим действием анти-СХ3СК1 УНН, отобранные в результате скрининга, описанного в примере 4, дополнительно очищали и характеризовали. Отобранные УНН экспрессировали в штамме Е. соН ТО1 в виде меченных с помощью с-тус, №§6 белков. Экспрессию индуцировали путем добавления 1 мМ ИПТГ и давали протекать в течение 4 ч при 37°С. После центрифугирования клеточных культур получали периплазматические экстракты путем замораживания-оттаивания дебриса. Указанные экстракты применяли в качестве исходного продукта и УНН очищали с помощью ТМАС (аффинная хроматография на иммобилизованном металле) и гель-фильтрации (ЗЕС), получая продукт чистотой 95% по данным ДСН-ПААГ.
Ингибирование с помощью анти-СХ3СК1 УНН связывания человеческого фракталкина с человеческим СХ3СК.1, экспрессируемым на БА/Г3-клетках
Блокирующую активность УНН в отношении лиганда фракталкина оценивали с помощью ЕАСЗанализа в условиях конкуренции с использованием человеческого СХ3СК1 согласно методу, изложенному в примере 4. Применяли либо СН0-ЬиСХ3СК1-клетки, либо ВА/Е3-ЬиСХ3СК1-клетки, либо кратковременно трансфектированные НЕК293Т-клетки. Варьировали также количество меченого лиганда в различных сериях конкурентного анализа. Величины Κ'\0. характеризующие способность УНН блокировать взаимодействие человеческого фракталкина с человеческим СХ3СК1, представлены в таблице 19.
- 63 028183
Таблица 19. Активность и эффективность УНН по данным ЕАС8 в условиях конкуренции с лигандом
УНН, ГО Семейство Клеточная линия 1С50 Блокада (в %) Количество повторов
11Н11 9 СНО-ЬиСХЗСКТ 1,7 Е-8 100 4
18Е06 13 СНО-ЬиСХЗСКЛ 1,8 Е-9 33 4
54А12 101 СНО-ЬиСХЗСКТ 2,1 Е-9 104 2
54Ώ08 101 СНО-НиСХЗСКТ 1,5 Е-8 101 2
54А07 101 СНО-ЬиСХЗСКТ 1,1 Е-8 78 2
54Б05 101 СНО-ЬиСХЗСК1 2,7 Е-9 102 2
54В03 101 СНО-ЬиСХЗСК1 2,5 Е-8 108 1
54003 101 СНО-ЬиСХЗСК1 5,6 Е-8 107 1
11Н11 9 ВА/РЗ-ЬиСХЗСК1 8,1 Е-9 100 3
18Е06 13 ВА/РЗ-ЬиСХЗСК1 2,8 Е-9 71 3
54А12 101 ВА/РЗ-ЬиСХЗСК1 4,0 Е-9 100 4
54ϋ08 101 ВА/РЗ-ЬиСХЗСК1 3,8 Е-8 99 1
54А07 101 ВА/РЗ-ЬиСХЗСК1 1,5 Е-8 81 4
54ϋ05 101 ВА/РЗ-ЬиСХЗСК1 5,5 Е-9 99 1
54В03 101 ВА/РЗ-ЬиСХЗСК1 3,3 Е-8 99 1
54003 101 ВА/РЗ-ЬиСХЗСК1 9,8 Е-8 98 1
54А12 101 НЕК293-ЬиСХЗСК1 6,8 Е-9 96 5
54ϋ08 101 НЕК293-ЬиСХЗСК1 8,4 Е-8 95 2
54Α07 101 НЕК293-ЬиСХЗСК1 2,3 Е-8 52 2
54ϋ05 101 НЕК293-ЬиСХЗСК1 5,3 Е-9 94 5
54Β03 101 НЕК293-ЬиСХЗСК1 6,7 Е-8 92 2
54003 101 НЕК293-ЬиСХЗСК1 2,7Е-7 89 2
61Ε02 101 НЕК293-ЬиСХЗСК1 8,2 Е-8 98 2
61Β04 101 НЕК293-ЬиСХЗСК1 5,7 Е-8 97 2
61Β02 101 НЕК293-ЬиСХЗСК1 1,0 Е-8 94 2
54Η01 101 НЕК293-ЬиСХЗСК1 1,0 Е-8 64 2
54Α04 101 НЕК293-ЬиСХЗСК1 4,9 Е-8 100 2
61Ρ11 101 НЕК293-ЬиСХЗСК1 4,6 Е-8 96 2
61003 101 НЕК293-ЬиСХЗСК1 6,0 Е-8 96 2
61004 101 НЕК293-ЬиСХЗСК1 4,2 Е-8 96 2
66Β02 101 НЕК293-ЬиСХЗСК1 2,5 Е-9 102 2
66001 101 НЕК293-ЬиСХЗСК1 1,4 Е-8 99 2
Ингибирование с помощью анти-СХ3СК1 УНН индуцированного человеческим фракталкином хемотаксиса БА/Г3-клеток, сверхэкспрессирующих человеческий СХ3СК1
Для оценки ингибирования индуцированного фракталкином хемотаксиса осуществляли анализ хемотаксиса с помощью одноразовой камеры СИетоТх с размером пор 5 мкм (фирма №игоргоЪе, Гейтерсбург, США). Клетки собирали на стадии активного роста культуры и промывали перед применением в среде для анализа, ΚΡΜΣ (фирма СШсо, Карлсбад, США), дополненной 0,1% БСА. Нижнюю часть камеры заполняли 320пМ человеческим фракталкином, используя общий объем 300 мкл. После наложения мембраны 0,13Е6 клеток помещали поверх мембраны в общем объеме 70 мкл. Хемотаксису давали проходить в течение 3 ч при 37°С в увлажняющей камере с СО2. После указанного периода инкубации мембрану удаляли и ресуспендировали клетки в нижней части камеры. Количество АТФ, присутствующего в лунках, определяли с помощью набора СеПТНет-СПо (фирма Рготеда, Мэдисон, шт. Висконсин, США). Считывание осуществляли с помощью устройства (фирма Регкт Е1тег, шт. Массачусетс, США) с набором стандартов для определения люминисценции. Осуществляли серии титрований в трех повторностях и каждый планшет содержал также контрольные образцы в трех повторностях. В качестве контроля использовали образец без УНН, а также образец, в котором на дно камеры не добавляли человеческий фракталкин. Обобщение результатов представлено в табл. 20.
Таблица 20. Активность и эффективность УНН в отношении блокирования индуцированного фракталкином хемотаксиса
Оценка перекрестной реактивности анти-СХ3СК1 УНН с СХ3СК1 обезьян циномолгус
Сначала для оценки перекрестной реактивности с рецептором обезьян циномолгус применяли основанную на использовании ЕАС8 систему связывания. Для этой цели УНН инкубировали с соответствующими клетками в течении 30 мин при 4°С с последующими тремя стадиями отмывки, а затем инку- 64 028183 бировали с идентифицирующими реагентами. Для детекции использовали мышиное антитело к с-тус (фирма 8его1ес, МСА2200), а затем козье антимышиное антитело, сцепленное с РЕ (фирма Заскзои 115116-071), каждый раз инкубацию осуществляли в течение 30 мин при 4°С с тремя последующими стадиями отмывки. Результаты анализа представлены в табл. 21.
Таблица 21. Величины ЕС50, характеризующие связывание соответствующего УНН с человеческим СХ3СК1 или СХ3СК1 обезьян циномолгус
УНН, го Семейство ЕС50 (М) человеческий ЕС50 (М) циномолгус Отношение Количество повторов
11Н11 9 8,0 Е-10 ΝΑ ΝΑ 2
18Е06 13 1,5 Е-9 1,4 Е-8 9 2
54А12 101 3,5 Е-8 1,1 Е-7 3,3 1
54А07 101 5,4 Е-7 3,0 Е-8 о,1 1
54Ό05 101 8,4 Е-10 5,0 Е-8 59,6 1
Для идентифицированных позднее УНН осуществляли РАС8-анализ в условиях конкуренции в присутствии человеческого фракталкина с использованием СХ3СК1 человека или обезьян циномолгус, экспрессированных в НЕК293Т-клетках. И человеческим, и обезьяньим рецептором кратковременно трансфектировали НЕК293Т-клетки и результаты трансфекции сопоставляли на основе связывания меченого лиганда, т.е. человеческого фракталкина. Конкуренцию оценивали, используя концентрацию фракталкина, соответствующую ЕС30, таким образом, чтобы полученные величины 1С50 можно было с успехом применять для расчета величины Κι, т.е. меры аффинности (табл. 22). Эксперимент осуществляли согласно методу, описанному в примере 4. Соотношение величин 1С50 для СХ3СК1 обезьян циномолгус и человека применяли для оценки возможных различий в величине аффинности к СХ3СК1 обоих видов.
Таблица 22. Эффективность и активность УНН при оценке с помощью конкурентного РАС8 в отношении СХ3СК1 человека и обезьян циномогус
УНН, ГО Семейство Человеческий Циномолгус Отношение Количество повторов
1С50(М) Блокада (в %) 1С50 (М) Блокада (в %)
54А12 101 6,8 Е-9 96 6,7 Е-8 94 9,85 5
54Ό08 101 8,4 Е-8 95 7,2 Е-8 91 0,85 2
54А07 101 2,3 Е-8 52 2,8 Е-7 69 12,3 2
54Ό05 101 5,3 Е-9 94 6,4 Е-8 91 12,25 5
54В03 101 6,7 Е-8 92 4,7 Е-7 95 7,05 2
54003 101 2,7Е-7 89 4,7 Е-7 89 1,74 2
61Е02 101 8,2 Е-8 98 4,6 Е-8 96 0,55 2
61В04 101 5,7 Е-8 97 8,7 Е-8 93 1,53 2
61В02 101 1,0 Е-8 94 4,5 Е-8 92 4,37 2
54Н01 101 1,0 Е-8 64 6,8 Е-8 92 6,48 2
54А04 101 4,9 Е-8 100 3,1 Е-8 91 0,64 2
61Р11 101 4,6 Е-8 96 1,6 Е-7 95 3,58 2
61003 101 6,0 Е-8 96 3,0 Е-7 89 5,02 2
61004 101 4,2 Е-8 96 2.0 Е-7 100 4,8 2
66В02 101 2,5 Е-9 102 1,9 Е-8 97 7,5 2
66001 101 1,4 Е-8 99 1,2 Е-7 100 8,29 2
Связывание УНН к человеческому СХ3СК1 с человеческим ССК2, человеческим ССК5 или мышиным СХ3СК1
Специфичность в отношении ЬиСХ3СК1-рецептора оценивали, осуществляя эксперимент по связыванию с оценкой с помощью РАС8 с использованием родительских клеток СНО-К1 или СНО-клеток, экспрессирующих ЬиССК2, ЬиССК5 или т§СХ3СК1. УНН инкубировали с соответствующими клеточными линиями в течение 30 мин при 4°С с последующими тремя стадиями отмывки, а затем инкубировали с идентифицирующими реагентами. Для детекции использовали мышиное антитело к с-тус (фирма 8его1ес, МСА2200), а затем козье антимышиное антитело, сцепленное с РЕ (фирма 1аск§ои 115-116-071), каждый раз инкубацию осуществляли в течение 30 мин при 4°С с тремя последующими стадиями отмывки. Для каждой клеточной линии включали в качестве контроля качества специфическое для рецептора антитело. Кроме того, в качестве положительного контроля каждый УНН в наиболее высокой концентрации инкубировали также с СНО-клетками, экспрессирующими ЬиСХ3СК1. Не удалось обнаружить связывание с т§СХ3СК1, ЬиССК2 или ЬиССК5.
Определение группировки эпитопов
Осуществляли эксперимент по связыванию в условиях конкуренции для решения вопроса о том, связываются ли УНН с перекрывающимися эпитопами на СХ3СК1. Для этой цели УНН 66В02, меченный а1еха647, применяли в РАС8 в условиях конкуренции с использованием ВА/Р3, экспрессирующих ЬиСХ3СК1. Репрезентативные УНН из трех функциональных семейств применяли в качестве конкурентов меченого 66В02 за связывание. Полученные величины 1С50 представлены в табл. 23.
- 65 028183
Таблица 23. Группировка эпитопов по данным РАС8 в условиях конкуренции
УНН, го Семейство 1С50(М) Блокада(в %)
11Н11 9 4,9Е-09 100
18Е06 13 2,ЗЕ-09 100
66В02 101 1,5Е-09 100
Поскольку было обнаружено полное ингибирование связывания 66В02 при использовании всех репрезентативных νΗΗ из различных блокирующих лиганд семейств, то можно заключить, что все функциональные семейства связываются в достаточной близости друг от друга, в результате чего они конкурируют за связывание с 66В02.
Пример 6. Форматирование νΗΗ с получением двухвалентных молекул
Конструирование двухвалентных молекул
Для повышения активности и/или эффективности полученных в результате селекции νΗΗ конструировали двухвалентные молекулы с помощью генной инженерии. Два νΗΗ генетически связывали с помощью 35О5-линкера между двумя конструктивными элементами и затем экспрессировали в Е.сой согласно методу, описанному выше для одновалентных νΗΗ. Создавали различные двухвалентные конструкции, которые представлены в табл. 24.
Таблица 24. Репрезентативные двухвалентные форматы
Конструкция, ГО УНН, идентификационный № Семейство Линкер УНН идентификационный № Семейство
СХЗСЮВН007 СХЗСЮВП11Н11 9 3508 СХЗСЮВИ18Е6 13
СХЗСЮВИ009 СХЗСЮВИ18Е6 13 3508 СХЗСЮВП11Н11 9
СХЗСЮВП012 СХЗСЮВП54О08 101 3508 СХЗСЮВП18Е06 101
СХЗСЮВП016 СХЗСК1ВП54А12 101 3508 СХЗСЮВИ54А12 101
СХЗСЮВИ017 СХЗСЮВИ54О5 101 3508 СХЗСЮВП54О5 101
СХЗСЮВН018 СХЗСЮВП66В02 101 3508 СХЗСЮ ВП66В02 101
СХЗСЮВИ019 СХЗСЮ ΒΙΙ66Ο01 101 3508 СХЗСЮ ΒΙΙ66Ο01 101
СХЗСЮВН020 СХЗСЮВП54В5 101 3508 СХЗСЮВП54В5 101
СХЗСЮВИ026 СХЗСЮВП11Н11 9 3508 СХЗСЮ ΒΙΙ66Β02 101
СХЗСЮВП027 СХЗСЮВП11Н11 9 3508 СХЗСЮВП54В5 101
Ингибирование с помощью анти-СХ3СК1 УИН связывания человеческого фракталкина с человеческим СХ3СК1, экспрессируемым на ВА/Г3-клетках
Изучали ингибирование связывания лиганда с человеческим СХ3СК1 для различных форматов согласно методу, описанному в примере 4. Для этой характеризации использовали клеточную линию ВА/Р3-йиСХ3СК1, для которой продемонстрирована стабильная экспрессия человеческого СХ3СК1рецептора. Применяли меченный с помощью а1еха647 лиганд фракталкин в концентрации, соответствующей ЕС30, с получением тем самым величин 1С50, которые отражают величины Κΐ. Обобщение полученных данных представлено в табл. 25.
Таблица 25. Активность двухвалентных форматов в отношении конкуренции с лигандом
Конструкция, ГО Клеточная линия 1С5о (М) Блокада(в %) Количество повторов
СХЗСЮВП007 СНО-ЬиСХЗСЮ 3,8 Е-10 100 2
СХЗСЮВП009 СНО-ЬиСХЗСЮ 7,0 Е-10 91 2
СХЗСЮВП012 СНО-ЬиСХЗСЮ 8,0 Е-10 93 1
СХЗСЮВП016 НЕК293-ЬиСХЗСЮ 1,9 Е-10 102 2
СХЗСЮВИ017 НЕК293-ЬиСХЗСЮ 3,1 Е-10 99 2
СХЗСЮВИ018 НЕК293-ЬиСХЗСЮ 3,0 Е-10 102 2
СХЗСЮВП019 НЕК293-ЬиСХЗСЮ 2,9 Е-10 100 2
СХЗСЮВП020 НЕК293-ЬиСХЗСЮ 2,2 Е-10 102 2
СХЗСЮВП026 ВА/РЗ-ЬиСХЗСЮ 7,0 Е-10 100 3
СХЗСЮВП027 ВА/РЗ-ЬиСХЗСЮ 6,7 Е-10 100 3
Ингибирование с помощью анти-СХ3СК1 УНН индуцированного человеческим фракталкином хемотаксиса ВА/Г3-клеток, сверхэкспрессирующих человеческий СХ3СК1
Аналогично методу, описанному для одновалентных анти-СХ3СК1 νΗΗ, оценивали ингибирование индуцированного фракталкином хемотаксиса ВА/Р3-йиСХ3СК1-клеток двухвалентными конструкциями. Применяли схему анализа, идентичную описанной выше, и полученные результаты обобщены в табл. 26.
- 66 028183
Таблица 26. Ингибирование индуцированного фракталкином хемотаксиса двухвалентными конструкциями УНН
Конструкция, ГО Клеточная линия 1С5о(М) Блокада(в %) Количество повторов
СХЗСК.1ВИ007 ВА/РЗ-ЬиСХЗСК.1 4 Е-9 101 5
СХЗСК.1ВН009 ВА/РЗ-ЬиСХЗСК.1 2 Е-8 79 5
СХЗСК1ВИ012 ВА/РЗ-ЬиСХЗСКЛ 4 Е-9 78 1
СХЗСК1ВП016 ВА/РЗ-ЬиСХЗСК.1 2 Е-9 88 3
СХЗСК1ВИ017 ВА/РЗ-ЬиСХЗСК.1 3 Е-9 89 3
СХЗСК1ВИ018 ВА/РЗ-НиСХЗСК1 6Е-10 98 6
СХЗСК1ВП019 ВА/РЗ-ЬиСХЗСК.1 2 Е-9 85 3
СХЗСК1ВИ020 ВА/РЗ-ЬиСХЗСК.1 2 Е-9 85 3
СХЗСК.1ВИ026 ВА/РЗ-ЬиСХЗСК.1 3 Е-10 98 1
СХЗСК1ВП027 ВА/РЗ-ЬиСХЗСК.1 9 Е-10 98 1
Оценка перекрестной реактивности анти-СХ3СК1 УИН с СХ3СК1 обезьян циномолгус
Кроме того, оценивали перекрестную реактивность двухвалентных конструкций с СХ3СИ1 обезьян циномолгус и сравнивали с реактивностью в отношении человеческого рецептора. Как описано ранее, использовали либо оценку связывания (табл. 27), либо оценку конкуренции с лигандом (таблица 28) с применением трансфектированных НЕК293Т-клеток. Кратковременно трансфектированные клетки разделяли на партии в зависимости от уровня экспрессии в них рецептора.
Таблица 27. Связывание двухвалентных конструкций с СХ3СИ1 человека и обезьян циномолгус
Конструкция, ГО Клеточная линия ЕС50 (М) человеческий ЕС50 (М) циномолгус Отношение Количество повторов
СХЗСК.1ВП007 НЕК293Т 3,1 Е-10 4,8 Е-8 154 2
СХЗСК.1ВП009 НЕК293Т 2,0 Е-9 6,8 Е-9 3.3 2
СХЗСК1ВП012 НЕК293Т 5,6 Е-11 6,3 Е-11 1.1 1
Таблица 28. Конкуренция с лигандом двухвалентных конструкций при оценке с использованием СХ3СИ1 человека или обезьян циномолгус
Конструкция, ГО Клеточная линия Человеческий Циномолгус Отношение Количество повторов
1С50 (М) Блокада(в %) 1С50 (М) Блокада (в %)
СХЗСК1ВП016 НЕК293Т 1,9 Е10 102 6,9 Е-10 98 3,67 2
СХЗСК1ВП017 НЕК293Т 3,1 Е10 99 1,6 Е-9 95 5,34 2
СХЗСК1ВП018 НЕК293Т 3,0 Е11 102 1,0 Е-10 97 3,33 2
СХЗСК1ВП019 НЕК293Т 2,9 Е10 100 8,2 Е-10 96 2,86 2
СХЗСК1ВИ020 НЕК293Т 2,2 Е10 102 3,2 Е-10 97 1,47 2
Пример 7. Исследование длины линкера и удлинения времени полужизни
Оценка длины линкера и позиционирования а1Ь11 УНН Поскольку длина линкера, применяемого в двухвалентном формате, может оказывать значительное воздействие на полученную активность, оценивали линкеры, имеющие различную длину.
Кроме того, для увеличения времени полужизни ιη νί\·Ό форматированных молекул (νθ 06/122787) включали А1Ь1 1, т.е. нанотело, связывающееся с человеческим сывороточным альбумином. Создавали различные форматы, включающие вариации в длине применяемых линкеров, а также позиционировании в них различных составляющих УНН. Обобщение о применяемых форматах представлено в табл. 29. Таблица 29. Конструкции, применяемые при исследования удлинения времени полужизни и длины линкера
Конструкция, ГО УНН, идентификационный № Линкер УНН, идентификационный № Линкер УНН, идентификационный №
СХЗСК1ВП032 СХЗСК1ВИ66В02 908 СХЗСК1ВП66В02 908 А1Ы1
СХЗСК.1ВП034 СХЗСК1ВИ66В02 3508 СХЗСК1ВИ66В02 908 А1Ы 1
СХЗСК1ВН036 СХЗСКЛВП66В02 908 А1Ы 1 908 СХЗСК1ВП66В02
СХЗСК1ВП040 СХЗСК1ВП66В02 908 СХЗСК.1ВП66В02 3508 А1Ы 1
СХЗСК1ВП041 СХЗСК1ВП66В02 3508 СХЗСК1ВИ66В02 3508 А1Ы 1
СХЗСК1ВИ042 СХЗСК1ВП66В02 3508 А1Ы1 3508 СХЗСК.1ВП66В02
Кодирующие последовательности форматированных УНН клонировали в созданной в лаборатории заявителей плазмиде, обеспечивающей экспрессию в Р1сЕ1а рак£опк и секрецию в среду для культивирования. Экспрессионный вектор выводили из Р1С2а (фирма ΙηνΐίΐΌ^η), и он содержал промотор АОХ1 для сильно регулируемой индуцированной метанолом экспрессии, ген, обусловливающий устойчивость к 2еост™, сайт множественного клонирования и секреторный сигнал α-фактора. После трансформации выращивали экспрессионные культуры и экспрессию УНН индуцировали путем добавления метанола и давали протекать в течение 48 ч при 30°С.
Активность указанных различных форматов оценивали, используя анализ конкуренции с лигандом, описанный выше. С учетом того, что применяли лиганд в концентрации, более низкой чем ЕС50, полученные величины 1С50 эквиваленты величинам Κί. Данные о полученных величинах Κι для различных
- 67 028183 форматов обобщены в табл. 30.
Таблица 30. Активность форматов с удлиненным временем полужизни в анализе конкуренции с лигандом
Конструкция, ГО Клеточная линия 1С5о (М) Блокада(в %) Количество повторов
СХЗСК1ВП032 ВА/РЗ-ЬиСХЗСК1 5,8 Е-10 99 2
СХЗСК1ВП034 ВА/РЗ-ЬиСХЗСК1 5,2 Е-10 99 2
СХЗСК1ВП036 ВА/РЗ-ЬиСХЗСК1 5,6 Е-10 99 2
СХЗСК1ВП040 ВА/РЗ-ЬиСХЗСК1 5,9 Е-10 104 1
СХЗСК1ВП041 ВА/РЗ-ЬиСХЗСК1 6,4 Е-10 102 1
СХЗСК.1 ΒΙΙ042 ВА/РЗ-ЬиСХЗСК1 8,9 Е-10 100 1
Воздействие человеческого сывороточного альбумина на активность Связывание человеческого сывороточного альбумина (ЧСА) с аГЫ1 УНН может влиять на активность формата и поэтому анализ конкуренции с лигандом повторяли в присутствии ЧСА. В целом, метод состоял в следующем: для того, чтобы дать возможность связываться ЧСА с а1Ь 11 УНН, изучаемые конструкции и фракталкин предварительно инкубировали с ЧСА в течение 30 мин перед добавлением к клеткам. Кроме того, клетки ресуспендировали с РАС8-буфере, дополненном ЧСА. Конечная применяемая концентрация ЧСА превышала в 50 раз наиболее высокую из применяемых концентраций УНН. Затем давали в течение 2 ч проходить
4.
связыванию в условиях конкуренции и осуществляли также метод, описанный в примере
Конструкция, ГО Клеточная линия 1С50 (М) Блокада(в %) Количество повторов
СХЗСК1ВИ032 ВА/РЗ-ЬиСХЗСК1 1,4 Е-9 100 2
СХЗСК1ВП034 ВА/РЗ-ЬиСХЗСК1 1,3 Е-9 100 2
СХЗСК1ВПО36 ВА/РЗ-ЬиСХЗСК1 1,4 Е-9 100 2
Потенциальное воздействие ЧСА оценивали также с использованием адаптированного анализа хемотаксиса, включая в анализ ЧСА в различных концентрациях. И в этом случае применяемая концентрация ЧСА в 50 раз превышала наиболее высокую из концентраций применяемой конструкции и к конструкциям добавляли ЧСА в течение 30 мин до начала анализа. Буфер для анализа дополняли также ЧСА, в результате чего ЧСА присутствовал в течение всего времени эксперимента. Согласно описанному выше методу применяли одноразовую камеру СЬетоТх с размером пор 5 мкм (фирма №игоргоЬе, Гейтерсбург, шт. Мэриленд, США). Клетки собирали на фазе активного роста культуры и отмывали до применения в среде для анализа ΚΡΜΙ (фирма СЛсо, Карлсбад, США), дополненной 0,1% БСА и 62,5мкМ ЧСА (фирма 8фта, А8763). Дно камеры заполняли 320пМ человеческим фракталкином, используя общий объем 300 мкл. После наложения мембраны 0,13Е6 клеток помещали поверх мембраны в общем объеме 70 мкл.
Хемотаксису давали проходить в течение 3 ч при 37°С в увлажняющей камере с С02. После указанного периода инкубации мембрану удаляли и клетки в нижнем отделе камеры ресуспендировали. Количество АТФ, присутствующего в лунках, определяли с помощью набора СеПТйег-С1о (фирма Рготеда, Мэдисон, шт. Висконсин, США). Считывание осуществляли с помощью устройства (фирма Регкш Е1тег, Валтам, шт. Массачусетс, США) с набором стандартов для определения люминисценции. Осуществляли серии титрований в трех повторностях, и каждый планшет содержал также контрольные образцы в трех повторностях. В качестве контроля использовали образец без УНН, а также образец, в котором на дно камеры не добавляли человеческий фракталкин. Обобщение результатов представлено в табл. 31.
Таблица 31. Индуцированный фракталкином хемотаксис в присутствии ЧСА
Конструкция, ГО Клеточная линия 1С50 (М) Блокада (в %) Количество повторов
СХЗСК1ВП032 ВА/РЗ-ЬиСХЗСК1 6Е-10 98 2
СХЗСК1ВП034 ВА/РЗ-ЬиСХЗСКЛ 9Е-10 100 2
СХЗСК1ВП036 ВА/РЗ-ЬиСХЗСК.1 6Е-10 102 2
Ингибирование интернализации фракталкина форматированными двухвалентными полипептидами с удлиненным временем полужизни
Осуществляли дополнительные функциональные анализы для демонстрации антагонистистической активности двухвалентных полипептидов с удлиненным временем полужизни. Оценивали способность полипептидов ингибировать интернализацию А647-фракталкина в клетки СНО 1шСХ3СК1. В целом, метод состоял в следующем: высевали 1Е4 клеток/лунку в черные 96-луночные планшеты с прозрачным дном (фирма ΒΌ, Франклин-Леикс, шт. Нью-Джерси, США) и выращивали в течение ночи. Клетки однократно промывали и затем уравновешивали в буфере для анализа (НВ88 с кальцием и магнием (фирма СпЬсо), дополненный 10мМ НЕРЕ8 и 0,1% БСА). Добавляли форматированные полипептидные конструкции и планшеты инкубировали в течение 15 мин при 37°С. Затем добавляли А647-фракталкин в конечной концентрации 8нМ и клетки инкубировали в течение 60 мин при 37°С. Среду удаляли и клетки фиксировали в течение 10 мин с помощью 3,7%-ного раствора формальдегида (фирма Ро1у§с1епсе8, Варрингтон, шт. Пенсильвания, США). Клетки однократно отмывали ЗФР и ядра метили с помощью красителя Хёхста (фирма Ше ТесЬио1од1е8, Град-Айленд, шт. Нью-Йорк, США). Для количественной оценки интерализированного меченого фракталкина клетки визуализировали, используя систему для биовизуализации ΒΌ Ра11тау. Сегментацию изображений осуществляли путем идентификации меченых клеточных ядер и рисуя окружность размером 3 пикселя вокруг указанной метки. Среднюю интенсивность А647 измеряли в цитоплазматическом кольце. Установлено, что форматированные полипептиды эффективно ингибировали интернализацию фракталкина, что обобщено в табл. 32.
Таблица 32. Ингибирование интернализации А647-фракталкина
- 68 028183
Конструкция, Ю Клеточная линия 1С50 (М) Количество повторов
СХЗСК1В1Ю32 СНО-ЬиСХЗСК1 4,0 Е-10 5
СХЗСК1ВП034 СНО-ЬиСХЗСК1 7,4 Е-10 3
СХЗСК1ВН036 СНО-ЬиСХЗСК1 4,9 Е-10 8
СХЗСК1В1Ю40 СНО-ЬиСХЗСК.1 1,0 Е-9 3
СХЗСК.1ВП041 СНО-ЬиСХЗСК1 1,1 Е-9 2
СХЗСК1В1Ю42 СНО-йиСХЗСК1 8,5 Е-10 2
У анти-СХ3СК1 форматированных двухвалентных полипептидов с удлиненным временем полужизни отсутствует агонистическая активность.
Для подтверждения того, что двухвалентные анти-СХ3СК1 полипептиды с удлиненным временем полужизни не обладают агонистической активностью, СХ3СК1ВП036 оценивали в отношении индукции притока кальция в СНО йиСХ3СК1-клетки. Фракталкин опосредовал повышение уровней кальция в цитозоле в этих клетках СХ3СК1-зависимым образом, а конструкция СХ3СК1ВП036 ингибировала этот ответ.
СΗ0 йиСХ3СК1-клетки высевали из расчета 5Е4-клеток/лунку в черные 96-луночные планшеты с прозрачным дном (фирма ВО) и выращивали в течение ночи. Клетки инкубировали с красителем Са1сшт-4 /2мМ пробенцид (фирма Мо1еси1аг 1)е\лсек, Саннивейл, шт. Калифорния, США) в ΙΙΗδδ, дополненном 20мМ ΗΕРΕδ, в течение 60 мин при 37°С. Для демонстрации антагонизма полипептид СХ3СК1ВП036 предварительно инкубировали с клетками в течение 15 мин перед добавлением фракталкина, используя его в концентрации, соответствующей Ε^0. Осуществляли мониторинг мобилизации кальция с помощью системы РЫРК® ТеДа (фирма Мо1еси1аг Оехлсек) согласно инструкциям производителя. Для определения агонистического действия не осуществляли предварительную инкубацию с полипептидом, а вместо этого применяли СХ3СК1ВП036, а не стимуляцию фракталкином. В то время как СХ3СК1ВП036 ингибировал опосредуемый фракталкином приток кальция с КА, 1,3 нМ, не обнаружено никакого повышения в цитозоле уровней кальция, когда добавляли только полипептид в концентрациях вплоть до 1 мкМ.
Пример 8. Исследование форматов с удлиненным временем полужизни, полученных с использованием мышиного Рс-домена
Для изучения альтернативных средств для удлинения времени полужизни получали 66В02 νΗΗдомен в виде слитого белка с Рс-доменом мышиного ^О2 (66В02-тРс). Мутацию, приводящую к замене аспарагиновой кислоты на аланин (Э265А), встраивали в СН2-домен для аннулирования потенциальной Рс-опосредуемой эффекторной функции в этой конструкции (ВаиШио, I. ЖтииоР, 181, 2008, сс. 66646669). 66В02-тРс экспрессировали в ΗΕΚ293Т-клеτках или Ж0-клетках и очищали с помощью аффинной хроматографии на белке А с последующей ионообменной хроматографией. Оценивали активность указанной молекулы, используя форматы анализа, которые описаны в примере 7. Результаты обобщены в табл. 33.
Таблица 33. Активность 66В02-тРс
Анализ Клеточная линия 1С5О (М) Количество повторов
анализ в условиях конкуренции с лигандомв ВА/РЗ-ЬиСХЗСК.1 5,7 Е-10 2
Анализ хемотаксиса ВА/РЗ-ЬиСХЗСК.1 8,9 Е-10 3
Анализ Клеточная линия 1С50 (М) Количество повторов
Анализ интернализации лиганда СНО-ЬиСХЗСК1 5,2 Е-10 5
Анализ притока кальция СНО-ЬиСХЗСК.1 9,8 Е-10 5
Хотя конструкция 66В02-тРс эффективно ингибировала индуцированную фракталкином активацию СХ3СК1, она не проявляла агонистической активности. Не обнаружено никакого повышения уровней кальция в цитозоле, когда эту молекулу добавляли в концентрациях вплоть до 1 мкМ.
Пример 9. Ингибирование развития бляшек на мышиной модели атеросклероза двухвалентными полипептидами с удлиненным временем полужизни
Создание мышей линии Аро Е-/ с встроенным человеческим СХ3СК1
С учетом отсутствия перекрестной реактивности идентифицированных νΗΗ с мышиным СХ3СК1 (пример 5) создавали мышиную линию с встроенным человеческим СХ3СК1 (йи СХ3СК1 К^ на фирме ТасошсАЛетД (Кельн, Германия) для тестирования указанных молекул на мышиных моделях заболеваний. Применяли стратегию, которая позволяет осуществлять экспрессию человеческого хемокинового рецептора под контролем соответствующего мышиного промотора, нарушая при этом экспрессию эндогенного мышиного белка. В целом, метод состоял в следующем: создавали обеспечивающий направленный перенос вектор, в котором кодирующую область мышиного СХ3СК1 в экзоне 2 заменяли на полную открытую рамку считывания человеческого СХ3СК1 и фланкировали маркерами селекции и сайтами
- 69 028183
1охР. Обеспечивающий направленный перенос вектор интродуцировали в мышиные ЕЗ-клетки и клоны, полученные в результате успешной гомологичной рекомбинации, применяли для создания химерных мышей. Этих мышей скрещивали с высокоэффективной линией мышей Р1р-йе1е1ег для удаления маркера селекции и переноса зародышевой линии. Затем полученных в результате мышей линии Ни СХ3СК.1 ΚΙ на основе С57ВБ/6 скрещивали с мышами линии Аро Е'Л (фирма ТНе 1аскзоп БаЬога1огу, Бар-Харбор, шт. Мэн, США) с получением мышей линии Ни СХ3СК.1 ΚΙ Аро Е . Мышиная модель Аро Е представляет собой робастный метод выявления процесса экстенсивного формирования атеросклеротических бляшек, который в целом в значительной степени совпадает с заболеванием человека с точки зрения сайтспецифической локализации формирования бляшек, гистологического состава и известных факторов риска (холестернин, воспаление, гипертензия и т.д.).
Оценка анти-СХ3СК1 двухвалентных полипептидов с удлиненным временем полужизни на модели атросклероза, созданной на мышах Аро Е-/-
Самок мышей линии Ни СХ3СК.1К1 АроЕ содержали на корме с высоким содержанием жиров/высоким содержанием холестерина, содержащем 1,5% холестерина, в течение 16 недель, начиная с четырехнедельного возраста. Через 10 недель животным вводили путем 1.р.-инъекции наполнитель (20мМ цитрат натрия, рН 6,0, 115мМ №С1), 66В02-тРс из расчета 10 мг/кг один или два раза в неделю или 30 мг/кг СХ3СК.1ВП036 дважды в неделю в течение 6 недель. Животных анестезировали посредством газовой анестезии и осуществляли перфузию с помощью 0,9% физиологического раствора. Нисходящую часть аорты до бифуркации подвздошной артерии осторожно изымали и фиксировали в формалине. Затем ее вскрывали с помощью продольного разреза и окрашивали Суданом 1У в течение 15 мин, затем 70%-ным метанолом в течение 2 мин. Сосуды промывали в потоке текущей воды и покрывали ЗФР. Ткани фотографировали с помощью цифровой камеры, используя программное обеспечение ЗР0Т Аскапсес) (фирма ЗР0Т 1тадшд Зо1ийоп8, Стерлинг-Хайтс, шт. Мичиган, США). Окрашивание жиров в процентах определяли с помощью программного обеспечения для анализа изображений (1таде-Рго Р1и8, фирма МеШаСуЬегпейсз, Роквилл, шт. Мэриленд, США) и выражали в виде процента позитивного окрашивания сосуда. Результаты этого исследования обобщены в табл. 34.
Таблица 34. Количественная оценка размера бляшек в нисходящей части аорты у самок мышей линии Ни СХ3СЕ1 ΚΙ Аро Е- -
Группа Доза Кол-во животных % площади бляшек Снижение площади бляшек (в %)
контроль(10 недель) Ν/Α 6 3,4 Ν/Α
контроль (16 недель) наполнитель 17 14,8 Ν/Α
66В02-тРс 10 мг/кг (1 χнеделю) 17 13,0 16
66В02-тРс 10 мг/кг (2хнеделю) 17 10,3 39 (р<0,05)
СХЗСК1ВП036 30 мг/кг (2 χ неделю) 17 10,1 41 (р<0,05)
Обе конструкции, как 66В02-тРс, так и СХ3СК.1ВП036, значимо ингибировали развитие бляшек при дозировании дважды в неделю. Это коррелировало с зоной распространения, поскольку, как удалось установить, уровни этих молекул в плазме поддерживались в течение опыта. При дозировании 66В02тРс один раз в неделю уровни в плазме не поддерживались, и это коррелировало с отсутствием значимой эффективности, обнаруженной после лечения в течение 6 недель. На активность молекул не оказывали существенного воздействия ни уровни в плазме холестерина, ни уровни триглицеридов.
Пример 10. Оптимизация последовательности родительского УНН
В целом, в процессе оптимизации последовательности УНН родительские последовательности УНН дикого типа изменяли путем мутации с получением последовательностей УНН, которые обладают более высокой степенью идентичности с человеческими консенсусными последовательностями зародышевой линии УН3-ДН. Конкретные аминокислоты в каркасных участках, которые являются различными между УНН и человеческой консенсусной последовательностью зародышевой линии УН3-ДН, изменяли на человеческую копию таким образом, чтобы сохранять без изменения структуру белка, его активность и стабильность. Для изучения этого, все последовательности оптимизированных вариантов сравнивали с родительским УНН с помощью трех различных анализов: (I) определение температуры плавления (Тпл) с помощью анализа термального сдвига (ТНегта1 ЗЫй Аззау) (ТЗА), (II) анализ активности ίη νίΐΐΌ с помощью РАСЗ-анализа в конкурентных условиях в присутствии фракталкина, и для некоторых конструкций (III) анализ активности ίη νίΐΐΌ на основе анализа индуцированного фракталкином хемотаксиса.
Мутация каркасных остатков
Для оптимизации последовательности исследовали следующие мутации: Ε1Ό, З11Б, А14Р, Е16С, К44СС Ό46Ε, А74З, Κ83Κ. и Р108Б. Индивидуальные мутанты, которые создавали в родительской последовательности СХ3СК.1ВП66В02, представлены в табл. 35.
Таблица 35. Мутации, изученные в процессе оптимизации последовательности 66В02
- 70 028183
Номер клона Интродуцированные мутации
С100СХЗСК.1ВП043 А14Р,А745,К83К,О108Ь
С100СХЗСК1ВП045 ЕЮ,А14Р,А745,К83К,О108Ь
С100СХЗСК1ВП047 811Ь,А14Р,А748,К83К,О108Ь
С100СХЗСК.1ВП048 А14Р,Е16О,А748,К83К,0Ю8Ь
С100СХЗСК1ВП049 А14Р,К44О,А748,К83К,О108Ь
С100СХЗСК1ВП050 А14Р,О46Е,А748,К83К,0Ю8Ь
С100СХЗСК1ВП061 811Ь,А14Р,Е16О,А748,К83К,0108Ь
С100СХЗСК1ВП056 811Ь,А14Р,Е16О,К440,А748,К83К,0108Ь
С100СХЗСК1ВИ057 511Ь,А14Р,Е16О,О46Е,А745,К83К,0Ю8Е
С100СХЗСК4ВП060 811Ь,А14Р,Е16О,К.440,046Е,А748,К83К,0Ю8Ь
Все конструкции клонировали в экспрессионном векторе Е. сой и экспрессировали в Е. сой в виде меченных с помощью тус/Ηίδ белков в среду ТВ, используя объем культуры 0,25-0,5 л. Экспрессию индуцировали, добавляя 1мМ ИПТГ, и давали проходить в течение 4 ч при 37°С и 250 об/мин. Клетки пеллетировали и получали периплазматические экстракты путем цикла замораживания-оттаивания и ресуспендировали в д-ЗФР. Указанные экстракты применяли в качестве исходного продукта для аффинной хроматографии на иммобилизованном металле (ГМЛС), используя неочищенные колонки Ишйар РР (фирма ΟΕ йеаййсаге). Нанотела элюировали из колонки с помощью 250 мМ имидазода и затем обессоливали в противотоке ά-ЗФР. Чистоту и целостность нанотел подтверждали с помощью ДСН-ПААГ в восстанавливающих условиях.
Как представлено в обобщенном виде в табл. 36, мутации А14Р, Α74δ, К83К и Р108Й не оказывали заметного воздействия на активность по данным РΑСδ в условиях конкуренции. Аналогично этому, дополнительные мутации Ε1Ό, δ11Κ и Ε16Ο не оказывали воздействия на активность. С другой стороны, интродукция либо К44Р, либо Ό46Ε приводила к значительному снижению активности, что было даже еще более выраженном при интродукции обеих мутаций.
Таблица 36. Активность конструкций с оптимизированной последовательностью по данным РΑСδ в условиях конкуренции с лигандом
Номер клона 1С50 Блокада(в %) Тпл при рН 7
СХЗСК1ВИ66В02 2,6Е-09 101,0 65,66
С100СХЗСК1ВН043 2,2Е-09 101 66,49
С100СХЗСК1ВП045 2,2Е-09 101,2 66,07
С100СХЗСК1ВИ047 2,ЗЕ-09 101,2 66,49
С100СХЗСК1ВП048 1,9Е-09 101,2 67,74
С100СХЗСК1ВП049 1,8Е-08 101,2 66,07
С100СХЗСК1ВП050 1,7Е-08 101,1 71,90
С100СХЗСК1ВП061 1,4Е-09 98,9 68,57
С100СХЗСК1ВИ056 1,6Е-08 101,1 68,57
С100СХЗСК1ВП057 1,4Е-08 99,4 74,39
С100СХЗСК1ВП060 1,9Е-07 98,4 74,81
Кроме того, оценивали температуру плавления, на основе которой можно прогнозировать стабильность νΗΗ. Большинство индивидуальных мутаций оказывали ограниченное действие или не оказывали его вообще, за исключением мутации Ό46Ε, которая приводила к повышению температуры плавления примерно на 6°С. Интродукция объединенных мутаций также повышала термостабильность (ср. 057 и 060).
Из-за значительных воздействий на активность при оценке с помощью РΑСδ в условиях конкуренции с лигандом мутации К440 и Ό46Ε не включали в конечную последовательность.
Мутация СИК-остатков
На основе анализа методом компьютерного моделирования (ίη зШсо) родительской последовательности прогнозировалось, что сайт гликозилирование находится в положении 52. Для изучения этого вопроса создавали две библиотеки; одну для положения 52 и одну для положения 53, которые конструировали так, чтобы они включали все возможные аминокислоты в соответствующем положении. Библиотеки подвергали скринингу в виде периплазматических экстрактов с использованием РΑСδ в условиях конкуренции с лигандом. Сначала приготавливали серии разведений периплазматического материала, полученного при изучении родительской последовательности, и отбирали три разведения для дополнительного скрининга. Первую точку разведения (двукратного) выбирали для получения полной блокады взаимодействия лиганда, а две другие точки разведения (128- и 512-кратные) должны обеспечивать 70%ную и 40%-ную блокаду соответственно. После получения периплазматических экстрактов из библиотеки все образцы разделяли на два, и один из них подвергали тепловой обработке. Затем как необработанные, так и подвергнутые тепловой обработке три точки разведения образцов анализировали с использованием РΑСδ в условиях конкуренции с лигандом. Влияние мутации можно оценивать путем сравнения полученной блокады с блокадой, полученной в результате применения родительской последовательности. Анализ подвергнутых тепловой обработке образцов позволял определять потенциальное воздействие мутации на стабильность.
Основываясь на первоначальных результатах скрининга, для дальнейшей характеризации отбирали
- 71 028183 семь мутаций. Данные об активности, полученные с помощью ГАС8 в условиях конкуренции с лигандом, представлены в табл. 37.
Таблица 37. Удаленный сайт гликозилирования в положении 52
Конструкция 1С50 (М) Блокада(в %) Тпл при рН 7
С100СХЗСК1ВП66В02 2,5Е-09 98,0 65,66
СХЗСК.1ВП66В02 (N528, О108Ь) 1,7Е-09 98,0 66,07
СХЗСК1ВП66В02 (N520, 0Ю8Ь) 2,1Е-09 97,9 59,83
СХЗСК1ВП66В02 (N520, 0Ю8Ь) Ι,ΙΕ-09 98,0 59,83
СХЗСК.1ВП66В02 (Ν52Τ, 0108Ь) 2,8Е-09 98,0 66,07
СХЗСК.1ВИ66В02 (853Т, 0108Ь) 1,ЗЕ-09 98,1 66,07
СХЗСК1ВИ66В02 (8530, (}108Ь) 1,2Е-09 98,3 64,83
СХЗСК1ВП66В02 (353Р, 0108Ь) 8,0Е-10 98,2 66,91
На основе этого анализа, сравнительного анализа первичной структуры последовательностей с человеческой референс-последовательностью и на основе анализа с использованием прогностической программы, позволяющей распознавать Т-клеточные эпитопы, при создании изобретения приято решение о включении мутаций N528 и 853Т в последовательность.
Для более подробного анализа стабильности создавали дополнительную библиотеку для положения 32. Осуществляли скрининг в отношении конкуренции с лигандом, аналогичный описанному выше. И в этом варианте подвергали скринингу три разведения периплазматических экстрактов и полученный % блокады сравнивали с установленным для родительской последовательности. После анализа различных мутаций выбирали замену Ы32Т и включали в конечный вариант оптимизированной последовательности.
Пример 11. Анализ оптимизированных вариантов
В конечном цикле характеризации конструкций определяли характеристики конструкций, перечисленных в табл. 38.
Таблица 38. Варианты с оптимизированной последовательностью лидерного УНН 66В02
Номер клона Интродуцированная мутация 8Е0 ГО N0:
СХЗСК1ВИООЗО6 СХЗСК1 ΒΙΙ66Β02(Ε1 ϋ,δΐ 1 Ь,А 14Ρ,Ε16Ο,Ν32Τ,Ν523,Α743,Κ86Κ.,ζ)11ЗЬ) 138
СХЗСК1ВИООЗО7 СХЗСК1В1166В02(ЕШ,811Ε,Α14Ρ,Ε16Ο,Ν32Τ,Ν52δ,853Τ,Α74δ,Κ86Κ,ςΐ 13Ь) 139
СХЗСК1ВИООЗО8 СХЗСК1ВП66В02(ЕШ,811Ь,А14Р,Е16О,А748,К86К,01 13Ь) 140
СХЗСК1ВП00312 СХЗСК1ВИ66В02(ЕШ,811Ε,Α14Ρ,Ε16Ο,Ν32Τ,Ν528,Α743,Κ86Κ,ςΐ 131.)-908А1Ы1-903- СХЗСК1ВИ66В02(811Ε,Α14Ρ,Ε16Ο,Ν32Τ,Ν52δ,Α74δ,Κ86Κ,Ο113Ь) 225
СХЗСК1ВИОО313 СХЗСК.1ВН66В02(ЕГО,311Ι.,Α14Ρ,Ε16Ο,Ν32Τ,Ν528,853Τ,Α748,Κ86Κ,(}1131.)9ОЗ-А1Ы 1-903- СХЗСК.1 ВП66В02(311Ε,Α14Ρ,Ε16Ο,Ν32Τ,Ν528,853Τ,Α74δ,Κ86Κ,0113Ь) 226
СХЗСК1ВИ00314 СХЗСК1В1166В02(ЕГО,8111.,А14Р,Е160,А748,К.86К,(21131.)-903'А1Ы1-903- СХЗСК1 ВИ66В02(81 1 ί,Α 14Р,Е 16О,А748,К86К.,0113Б) 227
Осуществляли эксперимент с анализом с помощью ГАС8 в условиях конкуренции согласно описанному выше методу, а также определяли температуру плавления. Полученные данные представлены в табл. 39.
Таблица 39. Результаты анализа с помощью ГАС8 в условиях конкуренции и величины Тпл оптимизированных вариантов последовательности .
Конструкция 1С50 (М) Блокада(в %) Тпл при рН 7
С100СХЗСК1ВИ66В02 2,5Е-09 98,0 65,05
СХЗСК1ВПООЗО6 1,7Е-09 97,0 68,54
СХЗСК1ВИООЗО7 1,9Е-09 97,0 68,13
СХЗСК1ВИ00308 1,6Е-09 97,0 68,13
СХЗСК1ВИ00312 4.6Е-10 100,0 59,37
СХЗСК1ВИ00313 4.0Е-10 100,0 58,88
СХЗСК1ВП00314 6,5Е-10 100,0 58,40
Указанные конструкции характеризовали также в отношении индуцированного фракталкином хемотаксиса согласно описанному выше методу (табл. 40).
Таблица 40. Индуцированный лигандом хемотаксис при использовании вариантов с оптимизированной последовательностью
Конструкция 1С50(М) Блокада(в %) η
С100СХЗСК1ВП66В02 3.6Е-08 91 3
СХЗСК1В11ООЗО6 6,ЗЕ-08 95 2
СХЗСК1ВПООЗО7 6,ЗЕ-08 100 2
СХЗСК1ВПООЗО8 4.4Е-08 89 2
СХЗСК1ВН00312 2,7Е-09 99 3
СХЗСК1ВПОО313 2,7Е-09 99 3
СХЗСК.1ВП00314 3,6Е-09 100 3
Отобранные конструкции оценивали также в отношении ингибирования индуцированной А647фракталкином интернализации в СНО ЪиСХ3СК1-клетки. Результаты обобщены в табл. 41.
- 72 028183
Таблица 41. Индуцированная лигандом интернализация при использовании вариантов с оптимизированной последовательностью
Конструкция 1С50 (М) N
СХЗСК1ВП00312 5,5 Е-10 1
СХЗСК1ВП00313 3,ЗЕ-10 6
У анти-СХ3СК1 полипептида с удлиненным временем полужизни с оптимизированной последовательностью отсутствует агонистическая активность.
Для подтверждения того, что анти-СХ3СК1 полипептиды с удлиненным временем полужизни с оптимизированной последовательностью не обладают агонистической активностью, СХ3СК1ВП00313 оценивали в отношении индукции притока кальция в СНО НиСХ3СК1-клетки. Хотя предварительная инкубация с СХ3СК1ВП00313 ингибировала опосредуемый фракталкином приток кальция с ГС50 1,3 нМ, не было обнаружено никакого повышения уровней кальция в цитозоле, когда пептид добавляли индивидуально в концентрациях вплоть до 1 мкМ.
Пример 12. Исследование форматов с удлиненным временем полужизни, полученных с использованием человеческого Рс-домена
Для изучения альтернативных средств для удлинения времени полужизни получали УНН-домены с оптимизированными последовательностями СХ3СК1ВП00306 и СХ3СК1ВП00307 в виде слитых белков с Рс-доменом человеческого ^01 (3060-ЬРс и 3070-йРс). Две мутации встраивали в СН2-домен для аннулирования потенциальной Рс-опосредуемой эффекторной функции в этой конструкции. 306Э-ЬРс и 307Э-ЬРс экспрессировали в НЕК293Т-клетках или №0-клетках и очищали с помощью аффинной хроматографии на белке А с последующей ионообменной хроматографией. Оценивали функциональную активность указанных молекул, используя форматы анализа, которые описаны в примере 7. Результаты обобщены в табл. 42.
Таблица 42. Активность слитых с НРс белков
Анализ Клеточная линия 3060-ЬРс, 1С50 3060-ЬРс, кол-во повторов 3070-ЬРс, 1С50 3070-ЬРс, кол-во повторов
Конкуренция с лигандом ВА/РЗ- ЬиСХЗСК.1 6,9 Е-10 2 7,0 Е-10 2
Хемотаксис ВА/РЗ- ЬиСХЗСКЛ 2,9 Е-9 2 3,0 Е-9 3
Интернализация лиганда сно- ЬиСХЗСК.1 4,8 Е-10 3 3,7 Е-10 3
Приток кальция сно- ЬиСХЗСК! 1,3 Е-9 3 3,2 Е-9 3
Хотя указанные молекулы эффективно ингибировали опосредуемую фракталкином активацию СХ3СК1, они не проявляли агонистической активности. Не обнаружено никакого повышения в цитозоле уровней кальция, когда эти нанотела добавляли в концентрациях вплоть до 1 мкМ.
Пример 13. Ингибирование развития бляшек на мышиной модели атеросклероза анти-СХ3СК1 нанотелом с оптимизированной последовательностью
Самок мышей линии Ни СX3СΚ1КI АроЕ-/- содержали на корме с высоким содержанием жиров/высоким содержанием холестерина, содержащем 1,5% холестерина, в течение 16 недель, начиная с четырехнедельного возраста. Через 10 недель животным вводили путем 1.р.-инъекции наполнитель (20 мМ цитрат натрия, рН 6,0, 115мМ №С1), СХ3СК1ВП00313 из расчета 30 мг/кг один или два раза в неделю или СХ3СК1ВП036 из расчета 30 мг/кг дважды в неделю в течение 6 недель. Животных умерщвляли посредством газовой анестезии и определяли площадь бляшек в нисходящей части аорты согласно описанному выше методу. Результаты этого исследования обобщены в табл. 43.
Таблица 43. Количественная оценка размера бляшек в нисходящей части аорты у самок мышей линии Ни ,.СХ3СК1 КТ Аро Е-/-
Группа Доза Кол-во животных % площади бляшек Снижение площади бляшек (в %)
контроль (10 недель) Ν/Α 6 2,4 Ν/Α
контроль (16 недель) наполнитель 18 12,0 Ν/Α
СХЗСК1ВП00313 30 мг/кг (1 ^неделю) 17 10,7 13
СХЗСК1ВП00313 30 мг/кг (2 χ неделю) 18 5,9 62 (р<0,01)
Группа Доза Кол-во животных % площади бляшек Снижение площади бляшек (в %)
СХЗСК1ВП036 30 мг/кг (2 χ неделю) 17 6,8 52 (р<0,01)
Как СХ3СК1ВП00313, так и СХ3СК1ВП036 значительно ингибировали развитие бляшек при дозировании дважды в неделю. Это коррелировало с зоной распространения, поскольку, как удалось установить, уровни этих молекул в плазме должны поддерживаться в течение опыта. При дозировании СХ3СК1ВП00313 один раз в неделю уровни в плазме не поддерживались, и это коррелировало с отсутствием выраженной эффективности, обнаруженной после лечения в течение 6 недель. На активность моле- 73 028183 кул не оказывали существенного воздействия ни уровни в плазме холестерина, ни уровни триглицеридов.
Пример 14. Нанотело связывается с первичными СО14+-клетками человека и обезьян циномолгус в цельной крови
Анализ РАС8 в условиях конкуренции анти-СХ3СК1 нанотела с форматированной оптимизированной последовательностью
Для подтверждения связывания анти-СХ3СК1 нанотела, имеющего форматированную оптимизированную последовательность, с человеческими первичными клетками, с помощью РАС8-анализа в условиях конкуренции было продемонстрировано, что конструкция СХ3СК1В1100313 конкурировала с меченным А647 СХ3СК1В11018 (А647-018) за связывание с СО14+-клетками в цельной крови. В целом, метод состоял в следующем: мышиное антитело к человеческому ί'.Ό14, конъюгированное в еР1иог 450 (фирма еВюкшеисе, Сан-Диего, шт. Калифорния, США), разводили в соотношении 1:10 в обработанной ЭДТК цельной кровью здорового донора. Добавляли по 40 мкл/лунку в 96-луночный полистирольный круглодонный планшет, после чего добавляли по 10 мкл/лунку конструкцию СХ3СК1В1100313, разведенную в буфере для окрашивания, дополненном БСА (фирма ВО Рйагт1идеи), в конечной концентрации от 100нМ до 0,002пМ и образцы инкубировали в течение 20 мин при комнатной температуре. Затем добавляли по 10 мкл/лунку А647-018 в буфере для окрашивания с получением конечной концентрации 1нМ (что соответствует ЕС80 связывания А647-018) и образцы инкубировали в течение еще 20 мин при комнатной температуре. Затем добавляли по 220 мкл/лунку раствора 1-81ер Ρίχ/Ьуке (фирма еВюкаеисе). После инкубации в течение 10 мин при комнатной температуре клетки пеллетировали, отмывали дважды буфером для окрашивания и ресуспендировали в указанном буфере. Образцы анализировали с помощью проточного цитометра ВО Ь8К II. Медианную интенсивность флуоресценции для А1ехаР1иог 647 оценивали в дискриминационном окне, установленном на СО14-позитивную клеточную популяцию. Установлено, что конструкция СХ3СК1В1100313 эффективно ингибировала связывание А647-018 с СЭ14позитивными клетками в человеческой крови, что характеризовалось величиной 1С50 0,35нМ (и=8).
Для подтверждения связывания анти-СХ3СК1 нанотела, имеющего форматированную оптимизированную последовательность, с первичными клетками обезьян циномолгус с помощью РАС8-анализа в условиях конкуренции было продемонстрировано, что конструкция СХ3СК1В1100313 конкурировала с меченным А647 СХ3СК1В11018 (А647-018) за связывание с СЭ14' -клетками в цельной крови обезьян циномолгус. Применяемый метод был аналогичен описанному ранее за исключением того, что конечная концентрация А647-018 составляла 3 нМ (что соответствует ЕС80 связывания А647-018) и буфер для лизиса АСК (фирма ЫГе Тесйио1од1ек) применяли вместо раствора 1-81ер Ρίχ/Ьуке. Перед анализом клетки ресуспендировали в буфере для окрашивания, дополненном 1% формальдегида. Установлено, что конструкция СХ3СК1В1100313 эффективно ингибировала связывание А647-018 с СО14-позитивными клетками в крови обезьян циномолгус, что характеризовалось величиной 1С50, равной 0,43 нМ (и=4).
Пример 15. Изучение фармакокинетики (ФК) на обезьянах циномолгус
Фармакокинетическое исследование проводили на необработанных (наивных) самцах обезьян циномолгус (Масаса Гаксюи1апк (яванский макак -крабоед) возрастом 2-5 лет, вес тела которых составлял 2,4-3,5 кг. Обезьян подразделяли на четыре группы обработки. Группу 1 (и=3) обрабатывали 0,2 мг/кг СХ3СК1В1100313 ΐ.ν.; группу 2 (и=3) обрабатывали 2 мг/кг СХ3СК1В1100313 ΐ.ν.; группу 3 (и=3) обрабатывали 2 мг/кг СХ3СК1В1100313 к.с. и группу 4 (и=3) обрабатывали 5 мг/кг СХ3СК1В1100313 ΐ.ν. Конструкцию СХ3СК1В1100313 вводили в виде раствора с концентрацией 2 мг/мл в цитратном буфере (20 мМ цитрат натрияе/115мМ хлорид натрия, рН 6,0). Для ФК-анализа образцы крови отбирали в течение 6 недель из периферической вены в пробирки-сепараторы для сыворотки.
Образцы сыворотки анализировали, используя формат М8Э (фирма Меко 8са1е ОЪсоуегу). В целом, метод состоял в следующем: биотинилированное антитело к нанотелу связывали со стандартным стрептавидиновым планшетом (фирма Меко 8са1е О|5соуегу, Роквилл, шт. Мэриленд, США). Планшеты отмывали 0,05% Твин 20 в забуференном фосфатом физиологическом растворе и блокировали с помощью 5% (мас./об) БСА 8егаСаге (фирма 8егаСаге ЫГе 8шеисек, Милфорд, шт. Массачусетс, США) перед инкубацией с образцами сыворотки. Для детекции СХ3СК1В1100313 применяли меченное серой нанотело к нанотелу и планшеты анализировали с помощью устройства 8есЮг 1тадег 2400 (фирма Меко 8са1е Э|ксоуегу). В качестве стандартов применяли различные концентрации СХ3СК1В110313, составляющие от 5000 до 0,5 нг/мл, в 5%-ной обезьяньей сыворотке. Привлечение к мишени оценивали путем мониторинга уровней свободного СХ3СК1 на находящихся в дискриминационном окне СЭ14' -моноцитах. Указанный анализ является аналогом РАС8-анализа в условиях конкуренции, который описан в примере 14, за исключением того, что дополнительно не вводили СХ3СК1В1100313. Осуществляли также мониторинг образцов сыворотки в отношении присутствия античеловеческих антител приматов (РАНА), так как они могут влиять на оценку ФК и свободного СХ3СК1.
Для детекции РАНА применяли устройство РойеВю ΚΕΌ96. В целом, метод состоял в следующем: биотинилованное нанотело СХ3СК1В110313 иммобилизовали на стрептавидиновых сенсорах. Затем объединенную сыворотку необработанных обезьян применяли в качестве отрицательного контроля для расчета отсекающего значения (контрольная сыворотка с минимальным рабочим разведением) (определено
- 74 028183 как превышающее в 2 раза средней сигнал связывания в необработанной сыворотке). Все образцы сыворотки разводили в 20 раз буфером и принимали, что РАНА-ответ является положительным, если сигнал связывание превышал указанное отсекающее значение.
Данные для моментов времени после детекции РАНА исключали из ФК/ФД (фармакодинамика) анализа. Данные ФК-анализа обобщены ниже в табл. 44.
Таблица 44. Фармакокинетические параметры СХ3СК1ВН00313
Доза (мг/кг) СЬ (мл/день/кг) П/2 (дни) мкт (дни) Стандартизованная относительно дозы величина АиС(0-14 дней) (нМхдни) Р%
IV, 0,2 113 1 1 **
IV, 2,0 9 ± 1 9±2 8 ± 2 56530
IV, 5,0 ** ** ** 58604
8С, 2,0 54
** недостаточно данных для характеризации конечной фазы Клиренс и время полужизни при введении дозы 2,0 мг/кг ΐ.ν. составляли 9,4 мл/день/кг и 9,6 дней соответственно. При дозе 0,2 мг/кг ΐ.ν. клиренс оказался существенно более высоким (113 мл/день/кг), что согласовывалось с таким фармакокинетическим параметром, как способное к насыщению мишень-опосредованное распределение (лекарственного средства) (ΤΜΌ). Величины АиС(0-14 дней), стандартизованные относительно дозы, сравнивали для доз 2 и 5 мг/кг ΐ.ν. и полученные данные позволили предположить, что ΤΜΌнасыщение имеет место при дозе 2 мг/кг. Экспозиция через 2 недели либо после ΐ.ν.-, либо после з.с- введения нанотела, составляла > 70 нМ, а биодоступность после з.с-введения составляла 54%. При экспозиции отслеживался свободный рецептор, при этом зона распространения, охватывающая более 90% мишеней, поддерживалась при экспозициях > 10 нМ.
- 75 028183
<110> БЁРИНГЕР Переченьι ИНГЕЛЬХАЙМ последовательностей ИНТЕРНАЦИОНАЛЕ ГМБХ
<120> СХЗСК1-связывающие полипептиды
<130> 09-0569
<150> 61/603,622
<151> 2012-02- 27
<160> 282
<170> РаЬепЫп , версия 3.5
<210> 1
<211> 118
<212> РРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 1
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег Ые РЬе Зег Зег Азп
20 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1
35 40 45
А1а А1а Ые Азп Зег Уа1 С1у Уа1 ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз
50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг Ые Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи
65 70 75 80
61п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг
- 76 028183
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЪг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг 100 105 110
С1п Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115 <210> 2 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 2
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег Не РЪе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а Меб А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а УаЬ 11е Азп Зег Уа1 С1у 11е ТЪг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЪе ТЪг 11е Зег С1у Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЪг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
61п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 85 90 95
Зег Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азр ТЪг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг 100 105 110
- 77 028183
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 3 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 3
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег Не РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго 51у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а О1у 11е Азп Зег Уа1 С1у 11е ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115
- 78 028183 <210> 4 <211> 118 <212> ΡΚΤ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 4
С1и Уа1 61п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у Агд С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РНе Зег Зег Азп
20 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд 61п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1
35 40 45
А1а С1у Не Азп Зег Уа1 С1у 11е ТНг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз
50 55 60
С1у Агд РНе ТНг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТНг Уа1 Туг Ьеи
65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТНг
85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТНг Агд Туг Тгр С1у С1п СТу ТНг
100 105 110
О1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> !
<211> 118
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
- 79 028183 <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 5
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег Не РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а МеН А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи 5/а1 35 40 45
А1а С1у 11е Азп Зег Уа1 С1у 11е ТНг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РНе ТНг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТНг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
61п МеН Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТНг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТНг Агд Туг Тгр С1у С1п 61у ТНг 100 105 110
Ьеи Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 115 <210> 6 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 6
- 80 028183
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у ТНг 11е РНе Зег Зег Азп
20 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд 61п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1
35 40 45
А1а С1у Не Азп Зег Уа1 Азр 11е ТНг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз
50 55 60
С1у Агд РПе ТНг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТНг Уа1 Туг Ьеи
65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг
85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азп ТНг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТНг
100 105 110
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 <210> 7 <211> 118 <212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 7
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и
1 5 10 15
- 81 028183
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег Не РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а С1у 11е Азп Зег Уа1 С1у 11е ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг А1а Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
61п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 <210> 8 <211> 118 <212> РРТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 8
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у ТЬг 11е РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1
- 82 028183
- 83 028183
С1у Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд О1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 10 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 10
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а С1у 11е Азп Зег Уа1 С1у 11е ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг А1а Туг Ьеи 65 70 75 80
- 84 028183
С1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п 61у ТЬг 100 105 110
Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 11 <211> 119 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 11
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и
10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег Не РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а Меб А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи 35 40 45
Уа1 А1а Ьеи 11е Азп Зег Уа1 С1у 11е ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 50 55 60
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Зег Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг 65 70 75 80
Ьеи С1и Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95
- 85 028183
ТЬг Зег Азр 61у Агд Агд С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр 61у С1п 61у 100 105 110
ТЬг 61п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 12 <211> 118 <212> РРТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 12
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 1 5
61у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1у 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а 20
Зег С1у Зег 11е РЬе Зег Зег Азп 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд О1п А1а 35 40
Рго С1у Ьуз О1п Агд Азр Ьеи Уа1 45
А1а С1у 11е Азп Зег Уа1 С1у 11е 50 55
ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 60
С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр 65 70
Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и 85
Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр 100
ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 105 110
Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
- 86 028183
115 <210> 13 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 13
Ьуз Уа1 61п Ьеи Уа1 С1и Зег 61у С1у С1у Зег \7а1 С1п А1а С1у С1и
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег Не РЪе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд 61п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а А1а 11е Азп Зег \7а1 С1у 11е ТЪг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЪе ТЪг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЪг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЪг А1а \7а1 Туг Туг Суз ТЪг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЪг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг 100 105 110
Ьеи Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115 <210> 14 <211> Ιίί
- 87 028183 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 14
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЪе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а Меб А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Ьеи 11е Азп Зег Уа1 С1у 11е ТЪг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЪе ТЪг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЪг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЪг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг 100 105 110
Ьеи Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115 <210> 15 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела
- 88 028183 <400> 15
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у ТНг 11е РНе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а МеН А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи А/а1 35 40 45
А1а С1у 11е Азп Зег Уа1 Азр 11е ТНг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
61у Агд РНе ТНг Уа1 Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТНг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеН Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТНг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азп ТНг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТНг 100 105 110
С1п Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 115 <210> 16 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 16
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 61п А1а 61у С1и 15 10 15
- 89 028183
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Уа1 11е Азп Зег Уа1 С1у 11е ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег С1у Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а УаЬ Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Зег Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 17 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 17
Ьуз Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у ТЬг 11е РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
- 90 028183
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а С1у 11е Азп Зег Уа1 Азр 11е ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
61п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азп ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 18 <211> 118 <212> РРТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> Ιί
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а РЬе С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
- 91 028183
А1а Ьеи Не Азп Зег Уа1 С1у 11е ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 19 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 19
Ьуз Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у 61у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а РЬе С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Ьеи 11е Азп Зег Уа1 61у 11е ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи
- 92 028183
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТНг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТНг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТНг 100 105 110
С1п Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 115 <210> 20 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 20
О1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у О1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РНе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а С1у 11е Азп Зег Уа1 С1у 11е ТНг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РНе ТНг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТНг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
61п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр МеЬ А1а Уа1 Туг Туг Суз ТНг 85 90 95
- 93 028183
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТНг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТНг 100 105 110
С1п Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 115 <210> 21 <211> 118 <212> РРТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 21
Ьуз Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у О1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег Не РНе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а Меб А1а Тгр Туг Агд С1п Рго Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а А1а Не Азп Зег \7а1 С1у 11е ТНг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РНе ТНг 11е РНе Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТНг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТНг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТНг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТНг 100 105 110
- 94 028183
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 22 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 22
С1и Уа1 61п Ьеи Уа1 Ьуз Зег С1у 1 5
С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а 20
Зег 61у Зег Не РЬе Зег Зег Азп 25 30
А1а Меб А1а Тгр Туг Агд С1п А1а 35 40
Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 45
А1а Ьеи Не Азп Зег Уа1 С1у 11е 50 55
ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 60
С1у Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр 65 70
Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 75 80
61п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и 85
Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр 100
ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 105 110
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115
- 95 028183 <210> 23 <211> 118 <212> ΡΚΤ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 23
Ьуз \7а1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 1 5
С1у С1у Зег МеЬ 61п А1а С1у С1и
15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а 20
Зег С1у Зег 11е РЪе Зег Зег Азп 25 30
А1а МеЪ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а 35 40
Рго С1у Ьуз 61п Агд Азр Ьеи Уа1 45
А1а А1а 11е Азп Зег Уа1 С1у 11е 50 55
ТЪг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 60
61у Агд РЪе ТЪг 11е Зег Агд Азр 65 70
Азп А1а Ьуз Азп ТЪг Уа1 Туг Ьеи 75 80
61п МеЪ МеЪ Зег Ьеи Ьуз Рго С1и 85
Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр 100
ТЪг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг 105 110
С1п Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115 <210> 24 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность
- 96 028183 <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 24
Ьуз Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег О1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег Не РНе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а Мер А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а А1а 11е Азп Зег Уа1 С1у 11е ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РНе ТНг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеО МеЪ Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТНг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
С1п Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115
<210> 25
<211> 118
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 25
- 97 028183
С1и 1 Уа1 С1п Ьеи Уа1 5 С1и Зег С1у С1у 61у 10 Зег Уа1 С1п А1а С1у 15 А1а
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 61у Зег 11е РЬе Зег Зег Азп
20 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1
35 40 45
А1а Уа1 11е Азп ТЬг Уа1 С1у 11е ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз
50 55 60
61у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи
65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг
85 90 95
Зег Азр А1а Агд Агд 61у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п 61у ТЬг
100 105 110
Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 26 <211> 118 <212> ΡΚΤ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 26
61и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег Агд С1у С1у Зег Уа1 61п А1а С1у С1и
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 61у Зег 11е РЬе Зег Зег Азп
- 98 028183
А1а Меб А1а Тгр Туг Агд Θΐη А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Уа1 11е Азп Зег Уа1 С1у Не ТЪг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЪе ТЪг Не Зег 61у Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЪг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 85 90 95
Зег Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азр ТЪг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг 100 105 110
С1п Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115 <210> 27 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 27
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег Агд С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у А1а
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег Не РЪе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а Меб А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
- 99 028183
А1а Уа1 Не Азп ТНг Уа1 С1у Не ТНг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РНе ТНг Не Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТНг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТНг 85 90 95
Зег Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азр ТНг Агд Туг Тгр С1у 61п С1у ТНг 100 105 110
С1п Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 115 <210> 28 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 28
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 Ьуз Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег Не РНе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а МеН А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Ьеи С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Ьеи Не Азр Зег А1а С1у Не ТНг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
- 100 028183
С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Агд Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а 85 90 95
Зег Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТЬг Ьуз Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 29 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 29
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а А1а 11е Азп Зег Уа1 С1у 11е ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Шз Ьеи 65 70 75 80
- 101 028183
Θΐη Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЪг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг 100 105 110
Ьеи Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115 <210> 30 <211> 118 <212> РРТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 30
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 1 5
С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и
15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а 20
Зег С1у Зег 11е РЪе Зег Зег Азп 25 30
А1а Меб А1а Тгр Туг Агд С1п А1а 35 40
Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 45
А1а С1у Не Азп Зег Уа1 С1у 11е
55
А1а Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 60
С1у Агд РЪе ТЪг 11е Зег Агд Азр 65 70
Азп А1а Ьуз Азп ТЪг Уа1 Туг Ьеи 75 80
С1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и 85
Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр
ТЪг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг
- 102 028183
Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 31 <211> 118 <212> РРТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 31
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 61и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а Ьуз А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а С1у Не Азп Зег Уа1 С1у 11е ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
61у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115
103 028183 <210> 32 <211> 118 <212> ΡΚΤ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 32
Ьуз Уа1 61η Ьеи Уа1 61и Зег 61у 61у 61у Зег Уа1 61п А1а 61у 61и 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег Не РНе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а МеР А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго 61у Ьуз 61п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а 61у Не Азп Зег Уа1 61у 11е ТНг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
61у Агд РНе ТНг Не Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТНг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Мер Азп Зег Ьеи Ьуз Рго 61и Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТНг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТНг Агд Туг Тгр 61у С1п С1у ТНг 100 105 НО
Ьеи Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 115 <210> 33 <211> 118 <212> РКТ
- 104 028183 <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 33
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 Ьуз Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и
10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РНе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Уа1 11е Азп Ьуз Уа1 С1у 11е ТНг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
СТу Агд РНе ТНг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТНг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТНг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТНг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТНг 100 105 110
С1п Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 115 <210> 34 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела
- 105 028183 <400> 34
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 61у 61у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а А1а 11е Азп Зег Уа1 С1у 11е ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 35 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 35
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у 61у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и 15 10 15
- 106 028183
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег Не РНе Зег Агд Азп 20 25 30
А1а МеН А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи УаЬ 35 40 45
А1а Зег 11е Азп Зег УаЬ С1у Не ТНг Ьуз Туг С1у Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РНе ТНг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТНг УаЬ Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеН Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТНг 85 90 95
Зег Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азр ТНг Агд Туг Тгр 61у С1п С1у ТНг 100 105 110
Ьеи Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 115 <210> 36 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 36
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и
10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у С1у 11е РНе Зег Агд Азп 20 25 30
- 107 028183
А1а Меб А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег 11е Азп Зег Уа1 61у 11е ТЬг Ьуз Туг 61у Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Зег Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 37 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 37
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег 61у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у 61и
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у ТЬг 11е РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а Меб А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а С1у 11е Азп Зег Уа1 Азр 11е ТЬг Агд Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз
- 108 028183
55 60
С1у Агд РЪе ТЪг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЪг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд 01у Тгр Азп ТЪг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг 100 105 110
С1п Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115 <210> 38 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 38
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 61у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и
10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЪе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а Меб А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Ьеи 11е Азп Зег Уа1 С1у 11е ТЪг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЪе ТЪг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЪг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
- 109 028183
С1п МеЪ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЪг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг 100 105 110
С1п Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115 <210> 39 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 39
С1и Уа1 Θΐη Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 1 5
С1у С1у Зег Уа1 61п А1а С1у С1у 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а 20
Зег С1у Зег 11е РЪе Зег Зег Азп 25 30
А1а МеЪ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а 35 40
Рго 61у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 45
А1а А1а 11е Азп Зег Уа1 С1у 11е 50 55
ТЪг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 60
С1у Агд РЪе ТЪг 11е Зег Агд Азр 65 70
Азп А1а Ьуз Азп ТЪг Уа1 Туг Ьеи 75 80
С1п МеЬ МеЪ Зег Ьеи Ьуз Рго С1и 85
Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 90 95
- 110 028183
Зег Азр Рго Агд 100 Агд С1у Тгр Азр ТНг 105 Агд Туг Тгр С1у С1п но С1у ТНг
Ьеи Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег
115
<210> 40
<211> 118
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 40
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РНе Зег Зег Азп
20 25 30
А1а Мер А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз 61п Агд Азр Ьеи Уа1
35 40 45
А1а Ьеи 11е Азп Зег Уа1 С1у 11е ТНг Ьуз Туг А1а С1у Зег Уа1 Ьуз
50 55 60
С1у Агд РНе ТНг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТНг Уа1 Туг Ьеи
65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТНг
85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТНг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТНг
100 105 но
- 111 028183
61п Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 115 <210> 41 <211> 118 <212> РРТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 41
61и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег 61у 1 5
61у 61у Зег Уа1 С1п А1а 61у 61и 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а 20
Зег 61у Зег 11е РНе Зег Зег Азп 25 30
А1а МеН А1а Тгр Туг Агд 61п А1а 35 40
Рго 61у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 45
А1а А1а Не Азп Зег Уа1 61у ТНг 50 55
ТНг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 60
С1у Агд РНе ТНг 11е Зег Агд Азр 65 70
Азп А1а Ьуз Азп ТНг Уа1 Туг Ьеи 75 80
С1п МеН Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и 85
Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТНг 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд 61у Тгр Азр 100
ТНг Агд Туг Тгр 61у 61п 61у ТНг 105 110
С1п Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 115 <210> 42
- 112 028183 <211> 118 <212> ΡΚΤ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 42
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 61у Зег 11е РАе Зег Зег Азп
20 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Ьеи С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1
35 40 45
А1а Ьеи 11е Азп Зег Уа1 С1у 11е ТАг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз
50 55 60
С1у Агд РАе ТАг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТАг Уа1 Туг Ьеи
65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТАг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТАг
85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТАг Агд Туг Тгр С1у 61п С1у ТАг
100 105 110
С1п Уа1 ТАг Уа1 Зег Зег
115
<210> 43
<211> 118
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
- 113 028183 <223> Последовательность нанотела <400> 43
С1и Уа1 С1п Ьеи МеЬ С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и
10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а С1у 11е Азп Зег Уа1 С1у 11е ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 44 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 44
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у О1у Зег Уа1 О1п А1а С1у С1и
- 114 028183 ίο
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Ьеи С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Ьеи 11е Азп Зег Уа1 С1у 11е ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 45 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 45
Ьуз Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у ТЬг 11е РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
- 115 028183
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а С1у 11е Азп Зег Уа1 Азр Не ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азп ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 46 <211> 118 <212> РРТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 46
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег Не РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
- 116 028183
А1а Уа1 11е Азп Зег Уа1 С1у 11е ТНг Ъуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РНе ТНг ТНг Зег С1у Азр Азп А1а Ьуз Азп ТНг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Мер Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТНг 85 90 95
Зег Азр А1а Агд Агд 61у Тгр Азр ТНг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТНг 100 105 110
61п Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 115 <210> 47 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 47
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 61и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и
10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РНе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а Мер А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег 11е Азр Зег Уа1 С1у 11е ТНг Ьуз Туг Агд Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
- 117 028183
С1у Агд РЪе ТЪг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЪг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 85 90 95
Зег Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азр ТЪг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг 100 105 110
С1п \/а1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115 <210> 48 <211> 118 <212> РРТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 48
С1и Меб С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у
5
С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а 20
Зег С1у Зег 11е РЪе Зег Зег Азп 25 30
А1а Меб А1а Тгр Туг Агд С1п А1а 35 40
Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 45
А1а Ьеи 11е Азп Зег Уа1 С1у 11е 50 55
ТЪг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 60
61у Агд РЪе ТЪг 11е Зег Агд Азр 65 70
Азп А1а Ьуз Азп ТЪг Уа1 Туг Ьеи 75 80
С1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и
Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЪг
- 118 028183
Зег Азр С1у Агд Агд С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у 61п С1у ТЬг 100 105 110
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 49 <211> 120 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 49
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у 61у Ьеи Уа1 С1п А1а С1у С1у
10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз Уа1 А1а Зег С1у Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30
А1а МеЬ С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1и Агд А1а РЬе Уа1 35 40 45
А1а С1у 11е Зег С1у Зег А1а Зег Агд Ьуз Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 50 55 60
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр Азп А1а Агд Азп ТЬг Уа1 Туг 65 70 75 80
Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95
А1а А1а Зег Азп Зег Туг Рго Ьуз Уа1 С1п РЬе Азр Туг Туг С1у С1п 100 105 110
- 119 028183
С1у ТЬг С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 <210> 50 <211> 120 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 50
С1и Уа1 С1п Ьеи УаЬ С1п Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п А1а СЬу С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз Уа1 А1а Зег С1у Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30
А1а МеН С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а Рго С1у Агд 61и Агд А1а РЬе Уа1 35 40 45
А1а СЬу 11е Зег С1у Зег А1а Зег Агд Ьуз Туг Туг А1а Азр Зег УаЬ 50 55 60
Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр Азп А1а Агд Азп ТЬг Уа1 Туг 65 70 75 80
Ьеи С1п МеН Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95
А1а А1а Зег Азп Зег Туг Рго Ьуз Уа1 С1п РЬе Азр Туг Туг СЬу С1п 100 105 110
СЬу ТЬг С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120
- 120 028183 <210> 51 <211> 120 <212> ΡΚΤ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 51
С1и Уа1 Θΐη Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 61у С1у Ьеи Уа1 Θΐη Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз Уа1 А1а Зег С1у Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30
А1а МеЬ С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1и Агд С1и РЬе Уа1 35 40 45
А1а С1у 11е Зег С1у Зег С1у Зег Агд Ьуз Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 50 55 60
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Агд Азп ТЬг Уа1 Туг 65 70 75 80
Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр Агд А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95
А1а А1а Зег Азп Зег Туг Рго Ьуз Уа1 С1п РЬе Азр Туг Туг С1у С1п 100 105 110
С1у ТЬг С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 <210> 52 <211> 120 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность
- 121 028183 <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 52
С1и Уа1 61п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п А1а С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз Уа1 А1а Зег С1у Агд ТЪг РЪе Зег Зег Туг 20 25 30
А1а Меб С1у Тгр РЪе Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1и Агд С1и РЪе Уа1 35 40 45
А1а С1у 11е Зег С1у Зег С1у Зег Агд Ьуз Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 50 55 60
Ьуз С1у Агд РЪе ТЪг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Агд Азп ТЪг Уа1 Туг 65 70 75 80
Ьеи С1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр Агд А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95
А1а А1а Зег Азп Зег Туг Рго Ьуз Уа1 61п РЪе Азр Туг Туг С1у С1п 100 105 110
С1у ТЪг С1п Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115 120 <210> 53 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 53
- 122 028183
Ьуз Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 61п Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТЬг Зег С1у ТЬг 11е РЬе Зег Азп Азп 20 25 30
А1а Меб С1у Тгр Туг Агд 61п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег 11е Зег Зег Зег С1у Зег ТЬг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
61у Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Ьеи Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТЬг А1а Туг Тгр 61у С1п С1у А1а 100 105 110
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 54 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 54
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 61и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15
- 123 028183
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТНг Зег С1у ТНг 11е РНе Зег Азп ТНг 20 25 30
А1а МеН С1у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег ТНг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТНг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТНг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
61п МеН Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТНг 61у Уа1 Туг Туг Суз ТНг 85 90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп Зег С1у Туг Тгр С1у 61п С1у ТНг 100 105 110
61п Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 115 <210> 55 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 55
С1и Уа1 61п Ьеи Уа1 61и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 61п Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТНг Зег С1у 11е 11е РНе Зег Азп Азп 20 25 30
А1а МеН С1у Тгр Туг Агд 61п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1
- 124 028183
35 40 45
А1а Зег ' 11е Зег Азп Зег С1у Зег ТЪг Азп Туг А1а Азр Зег А1а Ьуз
50 55 60
С1у Агд РЪе ТЪг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЪг 61у Туг Ьеи
65 70 75 80
С1п МеЪ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЪг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЪг
85 90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТЪг А1а Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг
100 105 но
С1п Уа1 ТЪг \7а1 Зег Зег
115
<210> 56
<211> 118
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 56
61и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у 61у Уа1 Уа1 С1п Рго С1у С1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз Уа1 ТЪг Зег С1у Не 11е РЪе Зег Азп Азп
20 25 30
А1а МеЬ С1у Тгр Туг Агд С1п С1у Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1
35 40 45
А1а Зег 11е С1у Зег ТЪг Туг Зег ТЪг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз
50 55 60
- 125 028183
С1у 65 Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег 70 Агд Азр Азп Азр Ьуз 75 Азп ТЬг С1у Туг Ьеи 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЬг
85 90 95
11е Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТЬг А1а Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг
100 105 110
Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 57
<211> 118
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 57
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТЬг Зег Агд ТЬг 11е РЬе Агд Зег Азп
20 25 30
А1а МеЬ С1у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1
35 40 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег ТЬг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз
50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг С1у Туг Ьеи
70 75 80
- 126 028183
Θΐη Мек Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
11е Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТЬг С1у Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 58 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 58
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Уа1 Уа1 С1п Рго 61у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз Уа1 ТЬг Зег С1у 11е 11е РЬе Зег Азп Азп 20 25 30
А1а МеЪ С1у Тгр Туг Агд О1п С1у Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег 11е Зег Зег ТЬг Туг Зег ТЬг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
- 127 028183
Не Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТЬг А1а Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 59 <211> 118 <212> РРТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 59
61и Уа1 Θΐη Ьеи Уа1 61и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 61п Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТЬг Зег С1у ТЬг Не РЬе Агд Зег Азп 20 25 30
А1а МеЬ С1у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег Не Зег Азп Зег С1у Зег ТЬг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
61п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд 61у Тгр Азп Зег С1у Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 НО
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
- 128 028183
115 <210> 60 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 60
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег Агд 1 5
С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго 61у С1у 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТНг 20
Зег С1у ТНг 11е РНе Зег Азп Азп 25 30
А1а Мер 61у Тгр Туг Агд С1п А1а 35 40
Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 45
А1а Зег 11е Зег Зег Зег О1у Зег 50 55
ТНг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 60
С1у Агд РНе ТНг Уа1 Зег Агд Азр 65 70
Азп Азр Ьуз Азп ТНг С1у Туг Ьеи 75 80
С1п Мер Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и 85
Азр ТНг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТНг 90 95
Ьеи Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп 100
ТНг А1а Туг Тгр С1у С1п С1у ТНг 105 110
61п Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 115 <210> 61 <211> 118
- 129 028183 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 61
С1и Уа1 С1п Ьеи МеН С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи \/а1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТНг Зег 61у ТНг 11е РНе Зег Азп Азп 20 25 30
А1а Мер 01у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег ТНг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РНе ТНг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТНг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Мер Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТНг 61у Уа1 Туг Туг Суз ТНг 85 90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТНг А1а Туг Тгр С1у С1п С1у ТНг 100 105 110
С1п Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 115 <210> 62 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела
- 130 028183 <400> 62
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи Уа1 С1п Рго СЬу СЬу 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТЬг Зег СЬу 11е 11е РЬе Зег Азп Азп 20 25 30
А1а МеН С1у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег СЬу Зег ТЬг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
СЬу Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг СЬу Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеН Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг СТу Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд СЬу Тгр Азп ТЬг А1а Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 63 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 63
С1и Уа1 СТп Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у СЬу Ьеи Уа1 С1п Рго СЬу СЬу 15 10 15
- 131 028183
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТЪг Зег С1у 11е 11е РЪе Зег Азп Азп 20 25 30
А1а Меб О1у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег ТЪг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЪе ТЪг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Зег ТЪг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго 61и Азр ТЪг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 85 90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТЪг А1а Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг 100 105 110
61п Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115 <210> 64 <211> 118 <212> РРТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 64
С1и Уа1 61п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у
Зег Ьеи С1у Ьеи Зег Суз А1а ТЪг Зег С1у ТЪг 11е РЪе Зег Азп Азп 20 25 30
- 132 028183
А1а МеА С1у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег ТАг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РАе ТАг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТАг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
61п МеА Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТАг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТАг 85 90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТАг А1а Туг Тгр С1у С1п С1у ТАг 100 105 110
С1п Уа1 ТАг Уа1 Зег Зег 115 <210> 65 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 65
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 О1п Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз ТАг ТАг Зег С1у ТАг 11е РАе Зег Азп Азп 20 25 30
А1а МеА С1у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
- 133 028183
А1а Зег 11е Зег Азп Зег СТу Зег ТЬг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
СЬу Агд РЬе ТЬг УаЬ Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
СЬп МеЬ Азп Азп Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг СЬу УаЬ Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Ьеи Азр АЬа Агд Агд С1у Тгр Азп ТЬг АЬа Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг 100 105 110
СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115 <210> 66 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 66
Ьуз УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СТу 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа ТЬг Зег С1у ТЬг 11е РЬе Зег Азп Азп 20 25 30
АЬа МеЬ СЬу Тгр Туг Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи УаЬ 35 40 45
АЬа Зег 1Ье Зег Азп Зег СЬу Зег ТЬг Азп Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз 50 55 60
СТу Агд РЬе ТЬг УаЬ Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг СЬу Туг Ьеи
- 134 028183
С1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЪг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 85 90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТЪг А1а Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг 100 105 110
О1п Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115 <210> 67 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 67
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТЪг Зег С1у ТЪг 11е РЪе Зег Азп Азп 20 25 30
А1а Меб 61у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег ТЪг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЪе ТЪг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЪг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЪг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 85 90 95
- 135 028183
Уа1 Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп Тпг А1а Туг Тгр С1у С1п С1у Тпг 100 105 110
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег . И5 <210> 68 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 68
С1и Уа1 О1п Ьеи Уа1 Азр Зег С1у 1 5
С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТЬг 20
Зег С1у ТЬг 11е РЬе Зег Азп Азп 25 30
А1а МеЬ 61у Тгр Туг Агд С1п А1а 35 40
Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег 50 55
ТЬг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 60
61у Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр 65 70
Азп Азр Ьуз Азп ТЬг С1у Туг Ьеи 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и 85
Азр ТЬг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп 100
ТЬг А1а Туг Тгр О1у С1п С1у ТЬг 105 110
- 136 028183
61п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 69 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 69
61и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у 61у Ьеи Уа1 61п Рго 61у 61у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТЬг Зег С1у ТЬг 11е РЬе Агд ТЬг Азп 20 25 30
А1а Меб 61у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго 61у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег ТЬг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
61у Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг А1а Туг Ьеи 65 70 75 80
61п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг 61у Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
11е Азр С1у Агд Агд С1у Тгр Азп ТЬг С1у Туг Тгр 61у 61п С1у ТЬг 100 105 110
61п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115
- 137 028183 <210> 70 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 70
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 61у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТНг Зег Агд ТЬг 11е РНе Агд Зег Азп 20 25 30
А1а МеН С1у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи \Га1 35 40 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег ТНг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РНе ТНг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТНг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеН Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТНг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТНг 85 90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТНг С1у Туг Тгр С1у С1п С1у ТНг 100 105 110
С1п Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 115 <210> 71 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность
- 138 028183 <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 71
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТЬг Зег С1у ТЬг Не РЬе Зег Азп Азп 20 25 30
А1а МеЬ С1у Тгр Туг Агд С1п А1а Ьеи С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег Не Зег Азп Зег С1у Зег ТЬг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
О1у Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
УаЬ Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТЬг А1а Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 72 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 72
- 139 028183
С1и 1 Уа1 С1п Ьеи Уа1 5 С1и Зег С1у С1у С1у 10 Ьеи Уа1 С1п Рго С1у 15 С1у
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТНг Зег Ьуз ТНг Не РНе Агд Зег Азп
20 25 30
А1а Мер С1у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1
35 40 45
А1а Зег Не Зег Азп Зег С1у Зег ТНг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз
50 55 60
С1у Агд РНе ТНг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТНг С1у Туг Ьеи
65 70 75 80
С1п Мер Азп Зег Ьеи Ьуз Рго 61и Азр ТНг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТНг
85 90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТНг С1у Туг Тгр С1у С1п С1у ТНг
100 105 но
С1п Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег
115
<210> 73 <211> 118 <212> ΡΚΤ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 73
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег Агд С1у О1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТНг Зег С1у 11е 11е РНе Зег Азп Азп
- 140 028183
20 25 30
А1а МеЬ С1у Тгр Туг Агд 35 С1п А1а Рго О1у Ьуз Ьуз 40 Агд Азр Ьеи Уа1 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег 50 С1у Зег ТЬг Азп Туг А1а 55 60 Азр Зег Уа1 Ьуз
С1у 65 Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег 70 Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп 75 ТЬг С1у Туг Ьеи 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз 85 Рго С1и Азр ТЬг С1у Уа1 90 Туг Туг Суз ТЬг 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд 61у Тгр Азп ТЬг А1а Туг Тгр 100 105 С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 74 <211> 118 <212> РРТ <213> Искусственная последовательность <220> <223> Последовательность нанотела <400> 74 С1у С1п 61у ТЬг 110
С1и 1 Уа1 С1п Ьеи Уа1 Ьуз 5 Зег 61у С1у С1у Ьеи Уа1 10 С1п Рго С1у С1у 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз 20 ТЬг ТЬг Зег С1у ТЬг 11е 25 РЬе Зег Азп Азп 30
А1а МеЬ С1у Тгр Туг Агд 35 С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз 40 Агд Азр Ьеи Уа1 45
- 141 028183
- 142 028183
С1у Агд 65 РЬе ТЬг Уа1 Зег 70 Агд Азр Азп Азр Ьуз 75 Азп ТЬг С1у Туг Ьеи 80
С1п МеН Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЬг
85 90 95
11е Азр А1а Агд Агд СЬу Тгр Азп ТЬг А1а Туг Тгр СЬу С1п СЬу ТЬг
100 105 110
Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 76
<211> 118
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 76
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи Уа1 С1п Рго СЬу СЬу
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТЬг Зег СЬу ТЬг 11е РЬе Агд Зег Азп
20 25 30
А1а МеН СЬу Тгр Туг Агд С1п А1а Рго СЬу Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1
35 40 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег СЬу Зег ТЬг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз
50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг СЬу Туг Ьеи
65 70 75 80
- 143 028183
01п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп Зег С1у Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
Агд Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 77 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 77
Ьуз Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 1 5
С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТЬг 20
Зег О1у 11е 11е РЬе Зег Азп Азп 25 30
А1а МеЬ С1у Тгр Туг Агд С1п А1а
40
Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег О1у Зег 50 55
ТЬг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 60
С1у Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр 65 70
Азп Азр Ьуз Азп ТЬг С1у Туг Ьеи 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго О1и 85
Азр ТЬг О1у Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп
ТЬг А1а Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг
- 144 028183
100 105 НО
С1п Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115 <210> 78 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 78
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 1 5
61у С1у Ьеи Уа1 С1п А1а С1у С1у 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТЪг 20
Зег С1у ТЪг Не РЪе Зег Азп Азп 25 30
А1а МеЬ С1у Тгр Туг Агд С1п А1а 35 40
Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 45
А1а Зег Не Зег Азп Зег С1у Зег 50 55
ТЪг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 60
С1у Агд РЪе ТЪг Уа1 Зег Агд Азр 65 70
Азп Азр Ьуз Азп ТЪг 61у Туг Ьеи 75 80
С1п МеЪ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и 85
Азр ТЪг О1у Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп 100
ТЪг А1а Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг 105 НО
С1п Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115
- 145 028183 <210> 79 <211> 118 <212> ΡΚΤ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 79
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у Агд 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТЪг Зег С1у ТЪг ТЪг РЪе Агд Зег Азп 20 25 30
А1а Меб С1у Тгр Туг Агд 61п С1у Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег 11е ТЪг Азп Зег С1у Зег ТЪг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЪе ТЪг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЪг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Меб Зег Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЪг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 85 90 95
Ьеи Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТЪг С1у Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг 100 105 110
С1п Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115 <210> 80 <211> 118 <212> РКТ
- 146 028183 <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 80
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу Ь 5 ЬО Ь5
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа ТЬг Зег Агд ТЬг ЬЬе РЬе Агд Зег Азп 20 25 30
АЬа МеЬ СЬу Тгр Туг Агд СЬп СЬу Рго СЬу Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи УаЬ 35 40 45
АЬа Зег ЬЬе ТЬг Азп Зег СЬу Зег ТЬг Азп Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз 50 55 60
СЬу Агд РЬе ТЬг УаЬ Зег Агд Азр Азп Азр Агд Азп ТЬг СЬу Туг Ьеи 65 70 75 80
СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг СЬу УаЬ Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
УаЬ Азр АЬа Агд Агд СЬу Тгр Азп ТЬг СЬу Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг ЬОО Ь05 ЬЬО
СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег ЬЬ5 <2Ь0> 8Ь <2ЬЬ> ЬЬ8 <2Ь2> РКТ <2ЬЗ> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела
- 147 028183 <400> 81
Ьуз 1 Уа1 С1п Ьеи Уа1 5 С1и Зег 61у С1у С1у 10 Ьеи Уа1 С1п Рго С1у 15 С1у
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТНг Зег С1у ТНг 11е РНе Зег Азп Азп
20 25 30
А1а Мер С1у Тгр Туг Агд С1п Уа1 Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1
35 40 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег ТНг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз
50 55 60
С1у Агд РНе ТНг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТНг С1у Туг Ьеи
65 70 75 80
С1п Мер Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТНг 61у Уа1 Туг Туг Суз ТНг
85 90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд 61у Тгр Азп ТНг С1у Туг Тгр С1у С1п 61у ТНг
100 105 110
С1п Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег
115
<210> 82
<211> 118
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 82
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у
1 5 10 15
- 148 028183
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТАг Зег С1у ТАг 11е РАе Зег Азп Азп 20 25 30
А1а МеА С1у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег 11е Зег Зег Зег С1у Зег ТАг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РАе ТАг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТАг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеА Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТАг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТАг 85 90 95
Ьеи Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТАг А1а Туг Тгр С1у С1п С1у ТАг 100 105 110
С1п Уа1 ТАг Уа1 Зег Зег 115 <210> 83 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 83
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТАг Зег А1а ТАг 11е РАе Агд Зег Азп 20 25 30
- 149 028183
А1а Меб С1у 35 Тгр Туг Агд С1п А1а 40 Рго С1у Ьуз Ьуз Агд 45 Азр Ьеи Уа1
А1а Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег ТЬг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз
50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг А1а Туг Ьеи
65 70 75 80
61п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЬг
85 90 95
11е Азр С1у Агд Агд С1у Тгр Азп ТЬг С1у Туг Тгр 61у 61п С1у ТЬг
100 105 но
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 <210> 84 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 84
С1и Уа1 61п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТЬг Зег А1а ТЬг 11е РЬе Агд Зег Азп
20 25 30
А1а Меб 61у Тгр Туг Агд 61п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1
35 40 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег 61у Зег ТЬг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз
- 150 028183
55 60
С1у Агд Зег ТЪг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЪг А1а Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЪг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 85 90 95
Не Азр С1у Агд Агд С1у Тгр Азп ТЪг С1у Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг 100 105 110
С1п Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115 <210> 85 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 85
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 61у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТЪг Зег 61у ТЪг 11е РЪе Зег Азп Азп 20 25 30
А1а Меб С1у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег ТЪг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЪе ТЪг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЪг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
- 151 028183
С1п МеН Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр МеН С1у Уа1 Туг Туг Суз ТНг 85 90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТНг А1а Туг Тгр С1у С1п С1у ТНг 100 105 110
С1п Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 115 <210> 86 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 86
С1и \7а1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 1 5
С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТНг 20
Зег С1у 11е 11е РНе Зег Азп Азп 25 30
А1а МеН С1у Тгр Туг Агд С1п А1а 35 40
Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег 50 55
А1а Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 60
С1у Агд РНе ТНг Уа1 Зег Агд Азр 65 70
Азп Азр Ьуз Азп ТНг С1у Туг Ьеи 75 80
С1п МеН Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и 85
Азр ТНг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТНг 90 95
- 152 028183
Уа1 Азр А1а Агд 100 Агд 61у Тгр Азп ТЬг 105 А1а Туг Тгр С1у С1п но С1у ТЬг
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 87
<211> 118
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 87
С1и Уа1 61п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз ТЬг ТЬг Зег С1у ТЬг 11е РЬе Зег Азп Азп
20 25 30
А1а МеЬ С1у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1
35 40 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег ТЬг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз
50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег 61у Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг С1у Туг Ьеи
65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Азп Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЬг
85 90 95
Ьеи Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТЬг А1а Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг
100 105 110
- 153 028183
СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 115 <210> 88 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 88
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу 1 5
СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа ТЬг 20
Зег СЬу ТЬг Ые РЬе Агд Зег Азп 25 30
АЬа МеЬ СЬу Тгр Туг Агд СЬп АЬа 35 40
Рго СЬу Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи УаЬ 45
АЬа Зег Ые Зег Ые Зег СЬу Зег 50 55
ТЬг Азп Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз 60
СЬу Агд РЬе ТЬг УаЬ Зег Агд Азр 65 70
Азп Азр Ьуз Азп ТЬг СЬу Туг Ьеи 75 80
СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи 85
Азр ТЬг СЬу УаЬ Туг Туг Суз ТЬг 90 95
УаЬ Азр АЬа Агд Агд СЬу Тгр Азп 100
ТЬг СЬу РЬе Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг 105 110
СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 115 <210> 89
- 154 028183
<211> 118
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 89
С1и Уа1 С1п Ьеи УаЬ О1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз Уа1 ТЬг Зег С1у 11е 11е РЬе Зег Азп Азп
20 25 30
А1а МеЬ С1у Тгр Туг Агд С1п С1у Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1
35 40 45
А1а Зег 11е Зег Зег ТЬг Туг Зег ТЬг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз
50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг С1у Туг Ьеи
65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЬг
85 90 95
11е Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТЬг А1а Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг
100 105 110
Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 90 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
- 155 028183 <223> Последовательность нанотела <400> 90
С1и Уа1 С1п Ьеи МеЬ С1и Зег С1у С1у С1у МеЬ Уа1 С1п Уа1 61у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз ТЬг А1а Зег С1у Ьеи 11е РЬе Зег Азп Азп 20 25 30
А1а МеЬ 61у Тгр Туг Агд С1п С1у Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег 11е Зег Зег ТЬг Туг Зег ТЬг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
11е Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТЬг А1а Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 91 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 91
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у 61у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у
- 156 028183
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а 11е Зег А1а ТЪг 11е РЪе Агд Зег Азп
20 25 30
А1а Меб О1у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1
35 40 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег ТЪг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз
50 55 60
С1у Агд РЪе ТЪг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЪг А1а Туг Ьеи
65 70 75 80
С1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЪг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЪг
85 90 95
11е Азр С1у Агд Агд 61у Тгр Азп ТЪг С1у Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг
100 105 но
С1п Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег
115
<210> 92
<211> 118
<212> РКТ
<213> Искусственная : последовательность
<220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 92
61и Меб С1п Ьеи Уа1 С1и Зег О1у С1у С1у Уа1 Уа1 С1п Рго 61у С1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз Уа1 ТЪг Зег С1у 11е 11е РЪе Зег Азп Азп
20 25 30
- 157 028183
А1а МеЬ С1у Тгр Туг Агд С1п С1у Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег 11е С1у Зег ТЬг Туг Зег ТЬг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго О1и Азр ТЬг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
11е Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТЬг А1а Туг Тгр 61у С1п С1у ТЬг 100 105 110
Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 93 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 93
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег 61у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТЬг Зег С1у 11е 11е РЬе Зег Азп Азп 20 25 30
А1а МеЬ С1у Тгр Туг Агд О1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
- 158 028183
А1а Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег ТЬг Азп Ηίδ А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
СЬу Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг СТу Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг СЬу Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд СЬу Тгр Азп ТЬг А1а Туг Тгр С1у С1п СЬу ТЬг 100 105 110
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 94 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 94
С1и Уа1 С1п Ьеи 17а1 С1и Зег С1у С1у СЬу Ьеи Уа1 С1п Рго СЬу С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТЬг Зег СЬу ТЬг 11е РЬе Зег Азп Азп 20 25 30
А1а МеЬ СЬу Тгр Туг Агд С1п Уа1 Рго СЬу Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег ТЬг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
- 159 028183
С1у Агд Рпе ТАг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТАг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеА Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТАг 61у Уа1 Туг Туг Суз ТАг 85 90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТАг С1у Туг Тгр С1у С1п С1у ТАг 100 105 110
С1п Уа1 ТАг Уа1 Зег Зег 115 <210> 95 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 95
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 61и Зег Агд 1 5
С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТАг 20
Зег 61у ТАг 11е РАе Зег Азп Азп 25 30
А1а МеА С1у Тгр Туг Агд С1п А1а 35 40
Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег 50 55
ТАг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 60
С1у Агд РАе ТАг Уа1 Зег Агд Азр 65 70
Азп Азр Ьуз Азп ТАг С1у Туг Ьеи 75 80
С1п МеА Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и
Азр ТАг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТАг
- 160 028183
90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТЪг А1а Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг 100 105 110
С1п Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115 <210> 96 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 96
Ьуз Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 1 5
С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТЪг 20
Зег С1у ТЪг 11е РЪе Агд Зег Азп 25 30
А1а МеЬ С1у Тгр Туг Агд С1п А1а 35 40
Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 45
А1а Зег Не Зег Азп Зег С1у Зег 50 55
ТЪг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 60
С1у Агд РЪе ТЪг Уа1 Зег Агд Азр 65 70
Азп Азр Ьуз Азп ТЪг С1у Туг Ьеи 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и 85
Азр ТЪг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп 100
Зег 61у Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг 105 110
- 161 028183
СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 115 <210> 97 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 97
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬи СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Рго Суз АЬа ТЬг Зег Ьуз ТЬг Ые РЬе Агд Зег Азп 20 25 30
АЬа МеЬ СЬу Тгр Туг Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи УаЬ 35 40 45
АЬа Зег Ые Зег Азп Зег СЬу Зег ТЬг Азп Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз 50 55 60
СЬу Агд РЬе ТЬг УаЬ Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг СЬу Туг Ьеи 65 70 . 75 80
СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг СЬу УаЬ Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
УаЬ Азр АЬа Агд Агд СЬу Тгр Азп ТЬг СЬу Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг 100 105 110
СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 115
- 162 028183 <210> 98 <211> 118 <212> ΡΚΤ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 98
01и Уа1 01η Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 61у 61у Ьеи Уа1 С1п Рго 61у 01у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТНг Зег Ьуз ТНг 11е РНе Агд Зег Азп 20 25 30
А1а Мер С1у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд С1у Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег ТНг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
О1у Агд РНе ТНг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТНг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Мер Азп Зег Ьеи Ьуз Рго О1и Азр ТНг О1у Уа1 Туг Туг Суз ТНг 85 90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТНг С1у Туг Тгр С1у С1п С1у ТНг 100 105 110
С1п Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 115 <210> 99 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность
- 163 028183 <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 99
С1и Уа1 С1п Ьеи Меб С1и Зег С1у 61у 61у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТЪг Зег С1у ТЪг 11е РЪе Агд Зег Азп 20 25 30
А1а Меб С1у Тгр Туг Агд С1п С1у Рго 61у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег 11е ТЪг Азп Зег С1у Зег ТЪг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЪе ТЪг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЪг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Меб Зег Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЪг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 85 90 95
Ьеи Азр А1а Агд Агд О1у Тгр Азп ТЪг С1у Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг 100 105 110
С1п Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115 <210> 100 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 100
- 164 028183
С1и 1 Уа1 С1п Ьеи Уа1 5 С1и Зег С1у С1у С1у 10 Ьеи Уа1 С1п Рго С1у 15 С1у
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТНг Зег С1у IΣ θ 11е РНе Зег Азп Азп
20 25 30
А1а МеН С1у Тгр Туг Агд С1п С1у Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1
35 40 45
А1а Зег Ые ТНг Азп ТНг С1у Зег ТНг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз
50 55 60
С1у Агд РНе ТНг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Агд Азп ТНг Уа1 Туг Ьеи
65 70 75 80
С1п МеН Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТНг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТНг
85 90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТНг А1а Туг Тгр С1у С1п С1у ТНг
100 105 но
С1п Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег
115
<210> 101
<211> 118
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 101
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п А1а С1у С1у
1 5 10 15
- 165 028183
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз ТЬг ТЬг Зег С1у ТЬг Не РЬе Зег Азп Азп 20 25 30
А1а Меб С1у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег Не Зег Азп Зег С1у Зег ТЬг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Меб Азп Азп Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Ьеи Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТЬг А1а Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 102 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 102
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТЬг Зег Агд ТЬг Не РЬе Агд Зег Азп 20 25 30
А1а Меб С1у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1
- 166 028183
А1а Зег 11е Зег Азп Зег 61у Зег ТНг Азп Туг А1а Азр Зег А1а Ьуз 50 55 60
С1у Агд РНе ТНг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТНг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Мер Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТНг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТНг 85 90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТНг С1у Туг Тгр С1у С1п С1у ТНг 100 105 110
С1п Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 115 <210> 103 <211> 117 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 103
С1и Уа1 О1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у Зег
Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТНг Зег С1у ТНг 11е РНе Зег Азп Азп А1а 20 25 30
Мер С1у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 А1а 35 40 45
Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег ТНг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз С1у 50 55 60
- 167 028183
Агд 65 РЬе ТЬг УаЬ Зег Агд 70 Азр Азп Азр Ьуз Азп 75 ТЬг СЬу Туг Ьеи СЬп 80
МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг СЬу УаЬ Туг Туг Суз ТЬг УаЬ
85 90 95
Азр АЬа Агд Агд СЬу Тгр Азп ТЬг АЬа Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг СЬп
100 105 110
УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115 <210> 104 <2Ы> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 104
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп АЬа СЬу СЬу
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз УаЬ АЬа Зег СЬу Зег Ые РЬе Агд Зег Азп
20 25 30
АЬа МеЬ СЬу Тгр Туг Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи УаЬ
35 40 45
АЬа Зег Ые Зег Азп Зег СЬу Зег ТЬг Азп Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз
50 55 60
СЬу Агд РЬе ТЬг УаЬ Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг СЬу Туг Ьеи
65 70 75 80
- 168 028183
С1п МеЬ Азп Зег Ъеи 85 Ъуз Рго С1и Азр ТЬг 90 С1у Уа1 Туг Туг Суз 95 ТЬг
11е Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТЬг С1у Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг
100 105 но
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 105
<211> 118
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 105
С1и Уа1 С1п Ъеи Уа1 С1и Зег С1у О1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у
1 5 10 15
Зег Ъеи Агд Ъеи Зег Суз А1а ТЬг Зег Агд ТЬг 11е РЬе Зег Азп Азп
20 25 30
А1а МеЬ С1у Тгр Туг Агд 61п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1
35 40 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег ТЬг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз
50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг С1у Туг Ьеи
65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ъеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЬг
85 90 95
- 169 028183
Уа1 Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТЬг АЬа Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
С1п Уа1 ТЬг УаЬ Зег Зег 115 <210> 106 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 106
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у СЬу С1у Ьеи Уа1 С1п Рго СЬу С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа ТЬг Зег С1у ТЬг УаЬ РЬе Зег Азп Азп 20 25 30
АТа МеЬ СЬу Тгр Туг Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи УаЬ 35 40 45
АЬа Зег Не Зег Зег Зег СЬу Зег ТЬг Азп Туг АЬа Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
СЬу Агд РЬе ТЬг УаЬ Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг СЬу УаЬ Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Ьеи Азр АЬа Агд Агд СЬу Тгр Азп ТЬг АЬа Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг 100 105 110
СТп УаЬ ТЬг Уа1 Зег Зег
- 170 028183
115 <210> 107 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 107
С1и Уа1 Θΐη Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТЬг Зег Ьуз Рго Ые РЬе Агд Зег Азп 20 25 30
А1а МеЬ С1у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег Ые Зег Азп Зег С1у Зег ТЬг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
61п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТЬг С1у Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 108 <211> 118
- 171 028183 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 108
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1и С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз ТЬг ТЬг Зег С1у ТЬг 11е РЬе Зег Азп Азп 20 25 30
А1а МеЬ С1у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег ТЬг Азп Туг А1а Азр Зег УаЬ Ьуз 50 55 60
61у Агд РЬе ТЬг УаЬ Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Азп Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Ьеи Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТЬг А1а Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 109 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела
- 172 028183 <400> 109
61и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у
10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТЬг Зег С1у ТЬг 11е РЬе Зег Азп Азп 20 25 30
А1а МеЬ С1у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег ТЬг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Рго Ьуз Рго С1и Азр ТЬг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд 61у Тгр Азп ТЬг А1а Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 110 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела
- 173 028183
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз Уа1 ТАг Зег С1у 11е 11е РАе Зег Азп Азп
20 25 30
А1а МеА 61у Тгр Туг Агд С1п С1у Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1
35 40 45
А1а Зег 11е С1у Зег ТАг Туг Зег ТАг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз
50 55 60
С1у Агд РАе ТАг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТАг С1у Туг Ьеи
65 70 75 80
С1п МеА Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТАг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТАг
85 90 95
11е Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТАг А1а Туг Тгр С1у С1п С1у ТАг
100 105 но
Рго Уа1 ТАг Уа1 Зег Зег
115
<210> 111
<211> 118
<212> РКТ
<213> Искусственная [ последовательность
<220>
<223> Последовательность нанотела
<4 00> 111
С1и МеА С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТАг Зег Агд ТАг 11е РАе Агд Зег Азп
20 25 30
- 174 028183
АЬа МеЪ С1у Тгр Туг Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи УаЬ 35 40 45
АЬа Зег Не Зег Азп Зег СЬу Зег ТЪг Азп Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз 50 55 60
СЬу Агд РЪе ТЪг УаЬ Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Зег ТЪг СЬу Туг Ьеи 65 70 75 80
СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЪг СЬу УаЬ Туг Туг Суз ТЪг 85 90 95
УаЬ Азр АЬа Агд Агд СЬу Тгр Азп ТЪг СЬу Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЪг 100 105 110
СЬп УаЬ ТЪг Уа1 Зег Зег 115 <210> 112 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 112
СЬи Уа1 С1п Ьеи УаЬ СЬи Зег С1у СЬу СЬу УаЬ Уа1 СЬп Рго СЬу СЬи 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз УаЬ ТЪг Зег СЬу 11е 11е РЪе Зег Азп Азп 20 25 30
АЬа МеЬ С1у Тгр Туг Агд СЬп СЬу Рго СЬу Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи УаЬ 35 40 45
- 175 028183
А1а Зег 11е С1у Зег ТНг Туг Зег ТНг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РНе ТНг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТНг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеР Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТНг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТНг 85 90 95
11е Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТНг А1а Туг Тгр С1у С1п 61у ТНг 100 105 110
Рго Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 115 <210> 113 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 113
Ьуз Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у Азр 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Ьеи ТНг Ьеи Азр Азр Туг 20 25 30
А1а Мер С1у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег ТНг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТНг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТНг С1у Туг Ьеи
- 176 028183
Θΐη Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЪг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 85 90 95
11е Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТЪг С1у Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг 100 105 110
С1п Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115 <210> 114 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 114
Ьуз Х/а1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 61у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТЪг Зег Агд ТЪг 11е РЪе Агд Зег Азп 20 25 30
А1а Меб С1у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег ТЪг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЪе ТЪг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЪг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЪг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 85 90 95
- 177 028183
Ые Азр АЬа Агд 100 Агд СЬу Тгр Азп ТЬг 105 СЬу Туг Тгр СЬу СЬп 110 СЬу ТЬг
СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 115
<211> 118
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 115
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа ТЬг Зег СЬу ТЬг Ые РЬе Зег Азп Азп
20 25 30
АЬа МеЬ СЬу Тгр Туг Агд СЬп УаЬ Рго СЬу Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи УаЬ
35 40 45
АЬа Зег Ые Зег Азп Зег СЬу Зег ТЬг Азп Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз
50 55 60
СЬу Агд РЬе ТЬг УаЬ Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг СЬу Туг Ьеи
65 70 75 80
Агд МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг СЬу УаЬ Туг Туг Суз ТЬг
85 90 95
УаЬ Азр АЬа Агд Агд СЬу Тгр Азп ТЬг СЬу Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 110
- 178 028183
С1п Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115 <210> 116 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 116
61и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п А1а С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз Уа1 ТЪг Зег С1у 11е 11е РЪе Зег Азп Азп 20 25 30
А1а Меб С1у Тгр Туг Агд С1п О1у Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег 11е Зег Зег ТЪг Туг Зег ТЪг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЪе ТЪг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЪг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЪг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 85 90 95
11е Азр А1а Агд Агд 61у Тгр Азп ТЪг А1а Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг 100 105 110
Рго Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115
- 179 028183 <210> 117 <211> 118 <212> ΡΚΤ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 117
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТЬг Зег Ьуз ТЬг 11е РЬе Агд Зег Азп 20 25 30
А1а Меб С1у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег ТЬг Азп Туг ТЬг Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТЬг С1у Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 118 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность
- 180 028183 <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 118
Ьуз Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТНг Зег Агд ТНг 11е РНе Агд Зег Азп 20 25 30
А1а Мер С1у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег ТНг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РНе ТНг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТНг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Мер Азп Зег Ьеи Ьуз Рго 61и Азр ТНг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТНг 85 90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТНг С1у Туг Тгр С1у С1п С1у ТНг 100 105 110
С1п Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 115 <210> 119 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 119
- 181 028183
СЬи 1 УаЬ СЬп Ьеи УаЬ 5 СЬи Зег СЬу СЬу СЬу 10 Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу 15 СЬу
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа ТЬг Зег Агд ТЬг Не РЬе Агд Зег Азп
20 25 30
АЬа МеЬ СЬу Тгр Туг Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи УаЬ
35 40 45
АЬа Зег Не Зег Азп Зег СЬу Зег ТЬг Азп Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз
50 55 60
СЬу Агд РЬе АЬа УаЬ Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг СЬу Туг Ьеи
65 70 75 80
СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг СЬу УаЬ Туг Туг Суз ТЬг
85 90 95
УаЬ Азр АЬа Агд Агд СЬу Тгр Азп ТЬг СЬу Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 110
СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 120
<211> 118
<2Ь2> РКТ
<2ЬЗ> ί Искусственная : последовательность
<220>
<223> : Последовательность нанотела
<400> 120
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу
Ь 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа ТЬг Зег СЬу ТЬг Не РЬе Зег Азп Азп
- 182 028183
А1а МеЬ С1у Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а Зег Ые Зег Азп Зег С1у Зег ТЬг Азп Туг А1а Азр РЬе Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг С1у Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Уа1 Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТЬг А1а Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 121 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 121
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п Рго С1у СИ
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег Ые РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
- 183 028183
А1а А1а 50 11е Азп Зег УаЬ С1у 55 УаЬ ТЬг Ьуз Туг А1а 60 Азр Зег Уа1 Ьуз
С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи
65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг
85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг
100 105 но
Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 122
<211> 118
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 122
Азр Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 О1п Рго С1у С1и
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЬе Зег Зег Азп
20 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи УаЬ
35 40 45
А1а А1а 11е Азп Зег Уа1 С1у Уа1 ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз
50 55 60
- 184 028183
С1у 65 Агд РНе ТНг 11е Зег 70 Агд Азр Азп Зег Ьуз 75 Азп ТНг Уа1 Туг Ьеи 80
С1п МеН Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТНг
85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТНг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТНг
100 105 но
Ьеи Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег
115 <210> 123 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 123
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1и
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РНе Зег Зег Азп
20 25 30
А1а МеН А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1
35 40 45
А1а А1а 11е Азп Зег \/а1 С1у Уа1 ТНг Ьуз Туг А1а Азр Зег \/а1 Ьуз
50 55 60
С1у Агд РНе ТНг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТНг Уа1 Туг Ьеи
65 70 75 80
- 185 028183
Θΐη МеЬ Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и Азр Тпг А1а Уа1 Туг Туг Суз Тпг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 ' 105 110
Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 124 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 124
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 1 5
С1у С1у Зег Уа1 С1п Рго С1у 61у 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а 20
Зег С1у Зег Не РЬе Зег Зег Азп 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а 35 40
Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 45
А1а А1а Не Азп Зег Уа1 С1у Уа1 50 55
ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 60
С1у Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр 65 70
Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и 85
Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр
ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п 61у ТЬг
- 186 028183
100
105
НО
Ьеи УаЬ ТЪг УаЬ Зег Зег 115 <210> 125 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 125
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Зег УаЬ СЬп Рго СЬу СЬи 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу Зег Не РЪе Зег Зег Азп 20 25 30
АЬа МеЬ АЬа Тгр Туг Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬп Агд Азр Ьеи УаЬ 35 40 45
АЬа АЬа Не Азп Зег УаЬ СЬу УаЬ ТЪг Ьуз Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз 50 55 60
СЬу Агд РЪе ТЪг Не Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЪг УаЬ Туг Ьеи 65 70 75 80
СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи Азр ТЪг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЪг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд СЬу Тгр Азр ТЪг Агд Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЪг 100 105 110
Ьеи УаЬ ТЪг УаЬ Зег Зег 115
- 187 028183 <210> 126 <2Ы> 118 <212> ΡΚΤ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 126
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Зег УаЬ СЬп Рго СЬу СЬи 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу Зег Ые РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
АЬа МеЬ АЬа Тгр Туг Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз Агд Агд СЬи Ьеи УаЬ 35 40 45
АЬа АЬа Ые Азп Зег УаЬ СЬу УаЬ ТЬг Ьуз Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз 50 55 60
СЬу Агд РЬе ТЬг Ые Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи 65 70 75 80
СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд СЬу Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг 100 105 110
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 115 <210> 127 <211> 118 <212> РКТ
- 188 028183 <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 127
61и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 61у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег О1у Зег 11е РНе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а МеР А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а А1а 11е Азп Зег Уа1 С1у Уа1 ТНг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РНе ТНг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТНг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеР Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТНг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТНг Агд Туг Тгр С1у 61п С1у ТНг 100 105 110
Ьеи Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 115 <210> 128 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела
- 189 028183 <400> 128
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЪе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а Меб А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а А1а 11е Азп Зег Уа1 О1у Уа1 ТЪг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЪе ТЪг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЪг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Меб Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЪг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг 100 105 110
Ьеи Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115 <210> 129 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 129
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15
- 190 028183
Зег Ъеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег Ые РЪе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а Меб А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд С1и Ьеи Уа1 35 40 45
А1а А1а 11е Азп Зег Уа1 С1у Уа1 ТЪг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЪе ТЪг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЪг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Меб Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЪг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг 100 105 110
Ьеи Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115 <210> 130 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 130
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 61и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 61п Рго С1у С1у
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЪе Зег Зег Азп 20 25 30
- 191 028183
А1а МеБ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд С1и Ьеи Уа1 35 40 45
А1а А1а 11е Азп Зег Уа1 С1у Уа1 ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеБ Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 131 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 131
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 61у Зег 11е РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а МеБ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а А1а 11е Зег Зег Уа1 С1у Уа1 ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз
- 192 028183
50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи
65 70 75 80
С1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг
85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд 61у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг
100 105 110
Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 1
115
<210> 132
<211> 118
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 132
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЬе Зег Зег Азп
20 25 30
А1а Меб А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1
35 40 45
А1а А1а 11е С1п Зег Уа1 С1у Уа1 ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз
50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи
65 70 75 80
- 193 028183
С1п МеА Азп Зег Ьеи 85 Ьуз Рго С1и Азр ТАг 90 А1а Уа1 Туг Туг Суз 95 ТАг
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТАг Агд Туг Тгр С1у С1п 61у ТАг
100 105 но
Ьеи Уа1 ТАг Уа1 Зег Зег
115
<210> 133
<211> 118
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 133
С1и Уа1 61п Ьеи Уа1 61и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РАе Зег Зег Азп
20 25 30
А1а МеА А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1
35 40 45
А1а А1а 11е С1у Зег Уа1 С1у Уа1 ТАг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз
50 55 60
С1у Агд РАе ТАг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТАг Уа1 Туг Ьеи
65 70 75 80
С1п Мер Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТАг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТАг
85 90 95
- 194 028183
Зег Азр Рго Агд 100 Агд С1у Тгр Азр ТНг 105 Агд Туг Тгр О1у С1п но О1у ТНг
Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 134
<211> 118
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 134
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РНе Зег Зег Азп
20 25 30
А1а Мер А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1
35 40 45
А1а А1а 11е ТНг Зег Уа1 С1у Уа1 ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз
50 55 60
С1у Агд РНе ТНг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТНг Уа1 Туг Ьеи
65 70 75 80
С1п МеР Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТНг
85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд 61у Тгр Азр ТНг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТНг
100 105 но
- 195 028183
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 115 <210> 135 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 135
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Зег УаЬ СЬп АЬа СЬу СЬи 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу Зег Не РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
АЬа МеЬ АЬа Тгр Туг Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз Агд Агд Азр Ьеи УаЬ 35 40 45
АЬа АЬа Не Азп ТЬг УаЬ СЬу УаЬ ТЬг Ьуз Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз 50 55 60
СЬу Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи 65 70 75 80
СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд СЬу Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг 100 105 110
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 115 <210> 136
- 196 028183
<211> 118
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 136
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Зег УаЬ СЬп АЬа СЬу СЬи
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу Зег Ые РЬе Зег Зег Азп
20 25 30
АЬа МеЬ АЬа Тгр Туг Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз Агд Агд Азр Ьеи УаЬ
35 40 45
АЬа АЬа Ые Азп СЬу УаЬ СЬу УаЬ ТЬг Ьуз Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз
50 55 60
СЬу Агд РЬе ТЬг Ые Зег Агд Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи
65 70 75 80
СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЬг
85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд СЬу Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 по
Ьеи УаЬ ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 137 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
- 197 028183 <223> Последовательность нанотела <400> 137
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Зег УаЬ СЬп АЬа СЬу СЬи 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу Зег Не РЪе Зег Зег Азп 20 25 30
АЬа МеЪ АЬа Тгр Туг Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз Агд Агд Азр Ьеи УаЬ 35 40 45
АЬа АЬа Не Азп Рго УаЬ СЬу УаЬ ТЪг Ьуз Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз 50 55 60
СЬу Агд РЪе ТЪг Не Зег Агд Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЪг УаЬ Туг Ьеи 65 70 75 80
СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЪг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЪг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд СЬу Тгр Азр ТЪг Агд Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЪг 100 105 110 .
Ьеи УаЬ ТЪг УаЬ Зег Зег 115 <210> 138 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 138
Азр УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу
- 198 028183
10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи 20 Зег Суз А1а А1а Зег 25 С1у Зег 11е РЬе Зег 30 Зег ТЬг
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1
35 40 45
А1а А1а 11е Зег Зег Уа1 С1у Уа1 ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз
50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи
65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг
85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг
100 105 110
Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 139
<211> 118
<212> РКТ
<213> Искусственная : последовательность
<220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 139
Азр Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у 61у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЬе Зег Зег ТЬг
20 25 30
- 199 028183
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а А1а 11е Зег ТЬг Уа1 С1у Уа1 ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п 01у ТЬг 100 105 110
Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 140 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 140
Азр Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд 61п А1а Рго 61у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
- 200 028183
А1а А1а 11е Азп Зег Уа1 С1у Уа1 ТНг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РНе ТНг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТНг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеН Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТНг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТНг Агд Туг Тгр С1у 61п 61у ТНг 100 105 110
Ьеи Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 115 <210> 141 <211> 10 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность СОК <400> 141
С1у Зег 11е РНе Зег Зег Азп А1а МеН А1а 15 10 <210> 142 <211> 10 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность СОК <400> 142
С1у ТНг 11е РНе Зег Зег Азп А1а МеН А1а 15 10
- 201 028183
<210> 143
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СЬК
<400> 143
С1у Зег 11е РНе Зег Зег Азп А1а Ьуз А1а
1 5 10
<210> 144
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СЬК
<400> 144
С1у Зег 11е РНе Зег Агд Азп А1а Мер А1а
1 5 10
<210> 145
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СЬК
<400> 145
С1у С1у 11е РНе Зег Агд Азп А1а Мер А1а 15 10
<210> 146
<211> 10
<212> РКТ
- 202 028183
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СОК
<400> 146
СЬу Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг АЬа МеЬ СЬу 15 10
<210> 147
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СОК
<400> 147
СЬу ТЬг Не РЬе Зег Азп Азп АЬа МеЬ СЬу
1 5 10
<210> 148
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СОК
<400> 148
СЬу ТЬг Не РЬе Зег Азп ТЬг АЬа МеЬ СЬу
1 5 10
<210> 149
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СОК
- 203 028183 <400> 149
С1у Не Не РЪе Зег Азп Азп А1а Меб С1у
1 5 10
<210> 150
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СОК
<400> 150
Агд ТЪг Не РЪе Агд Зег Азп А1а Меб С1у
1 5 10
<210> 151
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СОК
<400> 151
С1у ТЪг Не РЪе Агд Зег Азп А1а Меб С1у
1 5 10
<210> 152
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СОК
<400> 152
С1у ТЪг Не РЪе Агд ТЪг Азп А1а Меб С1у 15 10
- 204 028183
<210> 153
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СЬК
<400> 153
Ьуз ТЪг 11е РЪе Агд Зег Азп А1а Меб С1у
1 5 10
<210> 154
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СЬК
<400> 154
С1у ТЪг ТЪг РЪе Агд Зег Азп А1а Меб С1у
1 5 10
<210> 155
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СЬК
<400> 155
А1а ТЪг 11е РЪе Агд Зег Азп А1а Меб С1у
1 5 10
<210> 156
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
- 205 028183 <220>
<223> Последовательность СЬК
<400> 156
СЬу Ьеи Не РЪе Зег Азп Азп АЬа МеЬ СЬу
1 5 10
<210> 157
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СЬК
<400> 157
СЬу Зег Не РЪе Агд Зег Азп АЬа МеЬ СЬу
1 5 10
<210> 158
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СЬК
<400> 158
Агд ТЪг Не РЪе Зег Азп Азп АЬа МеЬ СЬу
1 5 10
<210> 159
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СЬК
<400> 159
- 206 028183
С1у ТЬг Уа1 РЬе Зег Азп Азп А1а МеЬ С1у
1 5 10
<210> 160
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СОК
<400> 160
Ьуз Рго 11е РЬе Агд Зег Азп А1а МеЬ С1у
1 5 10
<210> 161
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СОК
<400> 161
С1у Ьеи ТЬг Ьеи Азр Азр Туг А1а МеЬ С1у
1 5 10
<210> 162 '
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СОК
<400> 162
А1а 11е Азп Зег Уа1 С1у Уа1 ТЬг Ьуз
5
- 207 028183
<210> 163
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СЬК
<400> 163
УаЬ Ые Азп Зег УаЬ СЬу ЬЬе ТЬг Ьуз
1 5
<210> 164
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СЬК
<400> 164
СЬу ЬЬе Азп Зег УаЬ СЬу ЬЬе ТЬг Ьуз
1 5
<210> 165
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СЬК
<400> 165
СЬу ЬЬе Азп Зег УаЬ Азр ЬЬе ТЬг Ьуз
1 5
<210> 166
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
- 208 028183 <220>
<223> Последовательность СРК
<400> 166
А1а 11е Азп Зег Уа1 С1у 11е ТЬг Ьуз
1 5
<210> 167
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СРК
<400> 167
Ьеи 11е Азп Зег Уа1 С1у 11е ТЬг Ьуз
1 5
<210> 168
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СРК
<400> 168
Уа1 11е Азп ТЬг Уа1 С1у Т1е ТЬг Ьуз
1 5
<210> 169
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СРК
<400> 169
- 209 028183
Ьеи 11е Азр Зег А1а С1у 11е ТЬг Ьуз
1 5
<210> 170
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СЬК
<400> 170
С1у Т1е Азп Зег Уа1 С1у 11е А1а Ьуз
1 5
<210> 171
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СЬК
<400> 171
Уа1 11е Азп Ьуз Уа1 С1у 11е ТЬг Ьуз
1 5
<210> 172
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СЬК
<400> 172
Зег 11е Азп Зег Уа1 61у 11е ТЬг Ьуз
1 5
<210> 173
- 210 028183
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СРК
<400> 173
СЬу ЬЬе Азп Зег УаЬ Азр ЬЬе ТЬг Агд
1 5
<210> 174
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СОК
<400> 174
АЬа ЬЬе Азп Зег УаЬ СЬу ТЬг ТЬг Ьуз
1 5
<210> 175
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СОК
<400> 175
Зег Не Азр Зег УаЬ СЬу ЬЬе ТЬг Ьуз
1 5
<210> 176
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
- 211 028183
<223> Последовательность СЬК
<400> 176
С1у 11е Зег С1у Зег А1а Зег Агд Ьуз Туг
1 5 10
<210> 177
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СЬК
<400> 177
С1у 11е Зег С1у Зег С1у Зег Агд Ьуз Туг
1 5 10
<210> 178
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СЬК
<400> 178
Зег 11е Зег Зег Зег С1у Зег ТНг Азп
1 5
<210> 179
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СЬК
<400> 179
Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег ТНг Азп
- 212 028183
1 5
<210> 180
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СЭК
<400> 180
Зег 11е С1у Зег ТНг Туг Зег ТНг Азп
1 5
<210> 181
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СОК
<400> 181
Зег 11е Зег Зег ТНг Туг Зег ТНг Азп
1 5
<210> 182
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СОК
<400> 182
Зег 11е ТНг Азп Зег 61у Зег ТНг Азп
1 5
<210> 183
<211> 9
- 213 028183 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность СОК <400> 183
Зег 11е Зег Азп Зег С1у Зег А1а Азп 1 5 <210> 184 <211> 9 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность СОК <400> 184
Зег 11е Зег 11е Зег С1у Зег ТЪг Азп 1 5 <210> 185 <211> 9 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность СОК <400> 185
Зег 11е ТЪг Азп ТЪг С1у Зег ТЪг Азп 1 5 <210> 186 <211> 10 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность СРК
- 214 028183 <400> 186
Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг
1 5 10
<210> 187
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СРК
<400> 187
Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг
1 5 10
<210> 188
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СРК
<400> 188
Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азп ТЬг Агд Туг
1 5 10
<210> 189
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СРК
<400> 189
Азр С1у Агд Агд С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг 15 10
- 215 028183
<210> 190
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СЬК
<400> 190
Азр АЬа Агд Агд СЬу Тгр Азп ТЪг Ьуз Туг
1 5 10
<210> 191
<211> Ы
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СЬК
<400> 191
Зег Азп Зег Туг Рго Ьуз УаЬ СЬп РЪе Азр Туг
1 5 10
<210> 192
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СОК
<400> 192
Азр АЬа Агд Агд СЬу Тгр Азп ТЪг АЬа Туг
1 5 10
<210> 193
<211> 10
<212> РКТ
- 216 028183
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СОК
<400> 193
Азр А1а Агд Агд О1у Тгр Азп Зег С1у Туг
1 5 10
<210> 194
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СОК
<400> 194
Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп ТЪг С1у Туг
1 5 10
<210> 195
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СОК
<400> 195
Азр С1у Агд Агд С1у Тгр Азп ТЪг С1у Туг 15 10
<210> 196
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СОК
- 217 028183 <400> 196
Азр АЬа Агд Агд СЬу Тгр Азп ТЬг СЬу РЬе 15 10 <210> 197 <211> 10 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность СОК <220>
<221> М13С_ЕЕАТиКЕ <222> (2)..(2) <223> X = Рго, АЬа или СЬу <220>
<221> М13С_ЕЕАТиКЕ <222> (7)..(7) <223> X = Азр или Азп <220>
<221> МЬЗС_ЕЕАТиКЕ <222> (8)..(8) <223> X = ТЬг или Зег <220>
<221> МЬЗС_ЕЕАТиКЕ <222> (9)..(9) <223> X = Агд, Ьуз, АЬа или СЬу <220>
<221> МЬЗС_ЕЕАТиКЕ <222> (10)..(10) <223> X = Туг или РЬе <400> 197
Азр Хаа Агд Агд СЬу Тгр Хаа Хаа Хаа Хаа 15 10 <210> 198
- 218 028183 <211> 25 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность каркасного участка <400> 198
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 01и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и
10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 20 25 <210> 199 <211> 25 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность каркасного участка <400> 199
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 61п Рго С1у С1и 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 20 25 <210> 200 <211> 25 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность каркасного участка <400> 200
Азр Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п Рго 61у С1и
- 219 028183
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 20 25 <210> 201 <211> 25 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность каркасного участка <400> 201
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у 61у Ьеи Уа1 61п Рго С1у С1и 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 20 25 <210> 202 <211> 25 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность каркасного участка <400> 202
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п Рго С1у С1у
10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 20 25 <210> 203 <211> 25 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность
- 220 028183 <220>
<223> Последовательность каркасного участка <400> 203
С1и Уа1 С1п Ьеи УаЬ С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 20 25 <210> 204 <211> 25 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность каркасного участка <400> 204
Азр УаЬ С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 20 25 <210> 205 <211> 14 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность каркасного участка <400> 205
Тгр Туг Агд С1п А1а Рго 61у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 А1а 15 10 <210> 206 <211> 14
- 221 028183 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность каркасного участка <400> 206
Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 А1а 15 10 <210> 207 <211> 14 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность каркасного участка <400> 207
Тгр Туг Агд С1п А1а Рго О1у Ьуз Агд Агд С1и Ьеи Уа1 А1а 15 10 <210> 208 <211> 14 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность каркасного участка <400> 208
Тгр Туг Агд Θΐη А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд С1и Ьеи Уа1 А1а 15 10 <210> 209 <211> 39 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность каркасного участка
- 222 028183 <400> 209
Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а 15 10 15
Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи С1п МеБ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг 20 25 30
А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг Зег 35 <210> 210 <211> 39 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность каркасного участка ' <400> 210
Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп Зег 15 10 15
Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи С1п МеБ Азп Зег Ьеи Агд Рго 61и Азр ТЬг 20 25 30
А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг Зег 35
<210> 211
<211> 11
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность каркасного участка
<400> 211
- 223 028183
Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 1 5 10
<210> 212
<211> Ы
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность каркасного участка
<400> 212
Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 15 10
<210> 213
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СОК
<400> 213
СЬу Зег Не РЬе Зег Зег ТЬг АЬа МеЬ АЬа
1 5 10
<210> 214
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СОК
<4 0 0> 214
АЬа Не Зег Зег УаЬ СЬу УаЬ ТЬг Ьуз
1 5
<210> 215
- 224 028183
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СЬК
<400> 215
А1а 11е С1п Зег Уа1 С1у Уа1 ТЬг Ьуз
1 5
<210> 216
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СЬК
<400> 216
А1а 11е С1у Зег Уа1 С1у Уа1 ТЬг Ьуз
1 5
<210> 217
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СЬК
<400> 217
А1а 11е ТЬг Зег Уа1 С1у Уа1 ТЬг Ьуз
1 5
<210> 218
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
- 225 028183
<223> Последовательность СОК
<400> 218
А1а Не Азп ТНг Уа1 С1у Уа1 ТНг Ьуз
1 5
<210> 219
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СОК
<400> 219
А1а Не Азп С1у Уа1 С1у Уа! ТНг Ьуз
1 5
<210> 220
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СОК
<400> 220
А1а Не Азп Рго Уа1 С1у Уа1 ТНг Ьуз
1 5
<210> 221
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность СОК
<400> 221
А1а Не Зег ТНг Уа1 С1у Уа1 ТНг Ьуз
- 226 028183 <210> 222 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 222
С1и Уа1 Θΐη Ьеи Уа1 61и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РНе Зег Зег ТНг 20 25 30
А1а Мер А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго 61у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а А1а 11е Зег Зег Уа1 С1у Уа1 ТНг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РНе ТНг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТНг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Мер Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТНг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТНг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТНг 100 105 110
Ьеи Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 115 <210> 223 <211> 118
- 227 028183 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 223
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу Зег Не РЪе Зег Зег ТЪг 20 25 30
АЬа МеЬ АЬа Тгр Туг Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз Агд Агд Азр Ьеи УаЬ 35 40 45
АЬа АЬа Не Зег ТЪг УаЬ СЬу УаЬ ТЪг Ьуз Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз 50 55 60
СЬу Агд РЪе ТЪг Не Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЪг УаЬ Туг Ьеи
70 75 80
СЬп МеЪ Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи Азр ТЪг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЪг
90 95
Зег Азр Рго Агд Агд СЬу Тгр Азр ТЪг Агд Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЪг 100 105 110
Ьеи УаЬ ТЪг УаЬ Зег Зег 115 <210> 224 <211> 118 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела
- 228 028183 <400> 224
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у
10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЪе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а Меб А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а А1а 11е Азп Зег УаЬ С1у Уа1 ТЪг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЪе ТЪг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЪг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Меб Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЪг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг 100 105 110
Ьеи Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115 <210> 225 <211> 369 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 225
Азр Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15
- 229 028183
- 230 028183
- 231 028183 <210> 226 <211> 369 <212> ΡΚΤ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 226
Азр Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 61у Зег 11е РЬе Зег Зег ТЬг 20 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а А1а 11е Зег ТЬг Уа1 С1у Уа1 ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у Зег С1и 115 120 125
Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у 61у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у Азп Зег 130 135 140
Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 61у РЬе ТЬг РЬе Зег Зег РЬе С1у
- 232 028183
145 150 155 160
Ме! Зег Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр УаЬ Зег 165 170 175
Зег Ые Зег СЬу Зег СЬу Зег Азр ТЬг Ьеи Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз 180 185 190
СЬу Агд РЬе ТЬг Ые Зег Агд Азр Азп АЬа Ьуз ТЬг ТЬг Ьеи Туг Ьеи 195 200 205
СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЬг 210 215 220
Ые СЬу СЬу Зег Ьеи Зег Агд Зег Зег СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ 225 230 235 240
Зег Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ 245 250 255
СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу Зег Ьеи Агд Ьеи Зег 260 265 270
Суз АЬа АЬа Зег СЬу Зег Ые РЬе Зег Зег ТЬг АЬа МеЬ АЬа Тгр Туг 275 280 285
Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз Агд Агд Азр Ьеи УаЬ АЬа АЬа Ые Зег ТЬг 290 295 300
УаЬ СЬу УаЬ ТЬг Ьуз Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг Ые 305 310 315 320
Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи 325 330 335
- 233 028183
Агд Рго С1и Азр 340 ТЪг А1а Уа1 Туг Туг 345 Суз ТЪг Зег Азр Рго 350 Агд Агд
С1у Тгр Азр ТЪг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг Ьеи Уа1 ТЪг Уа1 Зег
355 360 365
Зег
<210> 227
<211> 369
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 227
Азр Уа1 С1п Ьеи Уа1 61и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЪе Зег Зег Азп
20 25 30
А1а Меб А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго 61у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1
35 40 45
А1а А1а 11е Азп Зег Уа1 С1у Уа1 ТЪг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз
50 55 60
С1у Агд РЪе ТЪг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЪг Уа1 Туг Ьеи
65 70 75 80
С1п Меб Азп Зег Ьеи Агд Рго О1и Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЪг
85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЪг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг
- 234 028183
100
105 110
Ьеи Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег С1у С1у 115 120
С1у С1у Зег С1у С1у С1у Зег 61и 125
Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег 61у С1у 130 135
С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у Азп Зег 140
Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 145 150
С1у РНе ТНг РНе Зег Зег РНе С1у 155 160
Мер Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго 165
С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1 Зег 170 175
Зег 11е Зег С1у Зег С1у Зег Азр 180
ТНг Ьеи Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 185 190
С1у Агд РНе ТНг 11е Зег Агд Азр 195 200
Азп А1а Ьуз ТНг ТНг Ьеи Туг Ьеи 205
С1п Мер Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и 210 215
Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТНг 220
11е С1у С1у Зег Ьеи Зег Агд Зег 225 230
Зег С1п С1у ТНг Ьеи Уа1 ТНг Уа1 235 240
Зег Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у 245
С1у С1у Зег С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1
250 255
61и Зег С1у С1у 61у Ьеи Уа1 С1п 260
Рго 61у 61у Зег Ьеи Агд Ьеи Зег 265 270
Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РНе 275 280
Зег Зег Азп А1а МеР А1а Тгр Туг 285
- 235 028183
Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз Агд Агд Азр Ьеи УаЬ АЬа АЬа ЬЬе Азп Зег 290 295 300
УаЬ СЬу УаЬ ТЬг Ьуз Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг Не 305 310 315 320
Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи 325 330 335
Агд Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЬг Зег Азр Рго Агд Агд 340 345 350
СЬу Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег 355 360 365
Зег <210> 228 <211> 21 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Ν-концевая последовательность СХЗСК1 <400> 22!
МеЬ Азр СЬп РЬе Рго СЬи Зег УаЬ ТЬг СЬи Азп РЬе СЬи Туг Азр Азр
Ьеи АЬа СЬи АЬа Суз 20 <210>
<211>
<212>
<213>
229
РКТ
Искусственная последовательность
- 236 028183 <220>
<223> СХЗСК1-ЕСЗ <400> 229
Ьуз Ьеи Туг Азр РЬе РЬе Рго Зег Суз Азр МеЬ Агд Ьуз Азр Ьеи Агд
Ьеи <210> 230 <211> 115 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 230
А1а Уа1 С1п Ьеи УаЬ С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у Азп
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 61у РЬе ТЬг РЬе Агд Зег РЬе 20 25 30
С1у МеЬ Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1и Рго С1и Тгр Уа1 35 40 45
Зег Зег 11е Зег С1у Зег 61у Зег Азр ТЬг Ьеи Туг А1а Азр Зег УаЬ 50 55 60
Ьуз 61у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз ТЬг ТЬг Ьеи Туг 65 70 75 80
Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95
- 237 028183
ТАг 11е 61у С1у Зег Ьеи Зег Агд Зег Зег 61п С1у ТАг С1п Уа1 ТАг 100 105 110
Уа1 Зег Зег 115 <210> 231 <211> 115 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 231
61и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у Азп
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РАе ТАг РАе Зег Зег РАе 20 25 30
С1у МеА Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1 35 40 45
Зег Зег 11е Зег С1у Зег 61у Зег Азр ТАг Ьеи Туг А1а Азр Зег Уа1 50 55 60
Ьуз С1у Агд РАе ТАг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз ТАг ТАг Ьеи Туг 65 70 75 80
Ьеи С1п МеА Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и Азр ТАг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95
ТАг 11е С1у С1у Зег Ьеи Зег Агд Зег Зег С1п С1у ТАг Ьеи Уа1 ТАг 100 105 110
Уа1 Зег Зег
- 238 028183
115 <210> 232 <211> 117 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 232
А1а Уа1 61п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п С1у С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи А1а Суз А1а А1а Зег С1и Агд 11е РЬе Азр Ьеи Азп 20 25 30
Ьеи МеЬ С1у Тгр Туг Агд С1п С1у Рго С1у Азп С1и Агд С1и Ьеи Уа1 35 40 45
А1а ТЬг Суз 11е ТЬг Уа1 С1у Азр Зег ТЬг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 50 55 60
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг Ые Зег МеЬ Азр Туг ТЬг Ьуз С1п ТЬг Уа1 Туг 65 70 75 80
Ьеи НЬз МеЬ Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и Азр ТЬг С1у Ьеи Туг Туг Суз 85 90 95
Ьуз Ые Агд Агд ТЬг Тгр ΗΪ3 Зег С1и Ьеи Тгр С1у С1п С1у ТЬг С1п 100 105 110
Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 233 <211> 5
- 239 028183
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкерная последовательность
<400> 233
С1у С1у С1у С1у Зег 1 5
<210> 234
<211> 7
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкерная последовательность
<400> 234
Зег С1у С1у Зег С1у С1у Зег 1 5
<210> 235
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкерная последовательность
<4 0 0> 235
С1у С1у С1у 61у Зег С1у С1у С1у Зег 1 5
<210> 236
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкерная последовательность
- 240 028183 <400> 236
СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу Зег 1 5
<210> 237
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкерная последовательность
<400> 237
СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег 15 10
<210> 238
<211> 15
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкерная последовательность
<4 00> 238
СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег 15 10 15
<210> 239
<211> 18
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкерная последовательность
<400> 239
СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу СЬу СЬу 15 10 15
- 241 028183
61у Зег <210> 240 <211> 20 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Линкерная последовательность <400> 240
С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у 61у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у 15 10 15
С1у С1у С1у Зег 20 <210> 241 <211> 25 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Линкерная последовательность <400> 241
С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у 61у С1у Зег С1у 61у С1у С1у Зег С1у 15 10 15
С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег 20 25 <210> 242 <211> 30 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность
- 242 028183 <220>
<223> Линкерная последовательность <400> 242
С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у 15 10 15
С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег 20 25 30 <210> 243 <211> 35 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Линкерная последовательность <400> 243
С1у С1у 61у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у 61у С1у С1у Зег С1у 15 10 15
С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у 20 25 30
С1у 61у Зег 35 <210> 244 <211> 15 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Линкерная последовательность <400> 244
С1и Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг НЬз ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго 15 10 15
- 243 028183 <210> 245 <211> 24 <212> ΡΚΤ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Линкерная последовательность <400> 245
С1у 61у С1у С1у Зег С1у С1у С1у Зег С1и Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз 15 10 15
ТНг Шз ТНг Суз Рго Рго Суз Рго 20 <210> 246 <211> 12 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Линкерная последовательность <400> 246
О1и Рго Ьуз ТНг Рго Ьуз Рго С1п Рго А1а А1а А1а 15 10 <210> 247 <211> 62 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Линкерная последовательность <400> 247
С1и Ьеи Ьуз ТНг Рго Ьеи С1у Азр ТНг ТНг Ηίδ ТНг Суз Рго Агд Суз 15 10 15
- 244 028183
Рго СЬи Рго Ьуз Зег Суз Азр ТЬг Рго Рго Рго Суз Рго Агд Суз Рго 20 25 30
СЬи Рго Ьуз Зег Суз Азр ТЬг Рго Рго Рго Суз Рго Агд Суз Рго СЬи 35 40 45
Рго Ьуз Зег Суз Азр ТЬг Рго Рго Рго Суз Рго Агд Суз Рго 50 55 60 <210> 248 <211> 3 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Линкерная последовательность <400> 248
АЬа АЬа АЬа
Ь <2Ь0> 249 <211> 369 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 249
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Зег УаЬ СЬп АЬа СЬу СЬи 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу Зег Ые РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
АЬа МеЬ АЬа Тгр Туг Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз Агд Агд Азр Ьеи УаЬ 35 40 45
- 245 028183
АЬа АЬа ЬЬе Азп Зег УаЬ СЬу УаЬ ТЬг Ьуз Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз 50 55 60
СЬу Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи 65 70 75 80
СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд СЬу Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг 100 105 110
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу Зег СЬи 115 120 125
УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу Азп Зег 130 135 140
Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу РЬе ТЬг РЬе Зег Зег РЬе СЬу 145 150 155 160
МеЬ Зег Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр УаЬ Зег 165 170 175
Зег Ые Зег СЬу Зег СЬу Зег Азр ТЬг Ьеи Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз 180 185 190
СЬу Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп АЬа Ьуз ТЬг ТЬг Ьеи Туг Ьеи 195 200 205
СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЬг 210 215 220
Ые СЬу СЬу Зег Ьеи Зег Агд Зег Зег СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ
- 246 028183
225 230 235 240
Зег Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у 61у С1у Зег С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 245 250 255
С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у 61и Зег Ьеи Агд Ьеи Зег 260 265 270
Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РНе Зег Зег Азп А1а Мер А1а Тгр Туг 275 280 285
Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 А1а А1а 11е Азп Зег 290 295 300
Уа1 С1у Уа1 ТНг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз С1у Агд РНе ТНг 11е 305 310 315 320
Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТНг Уа1 Туг Ьеи 61п Мер Азп Зег Ьеи 325 330 335
Ьуз Рго С1и Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТНг Зег Азр Рго Агд Агд 340 345 350
С1у Тгр Азр ТНг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТНг Ьеи Уа1 ТНг Уа1 Зег 355 360 365
Зег <210> 250 <211> 223 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Мышиный Рс-домен
- 247 028183 <400> 250
Рго Рго Суз Ьуз Суз Рго А1а Рго Азп Ьеи Ьеи С1у С1у Рго Зег УаЬ 15 10 15
РЪе 11е РЪе Рго Рго Ьуз 11е Ьуз Азр Уа1 Ьеи Меб 11е Зег Ьеи Зег 20 25 30
Рго 11е Уа1 ТЪг Суз Уа1 Уа1 Уа1 А1а Уа1 Зег С1и Азр Азр Рго Азр 35 40 45
Уа1 С1п 11е Зег Тгр РЪе Уа1 Азп Азп Уа1 С1и Уа1 ΗΪ3 ТЪг А1а С1п
55 60
ТЪг С1п ТЪг Н1з Агд С1и Азр Туг Азп Зег ТЪг Ьеи Агд Уа1 УаЬ Зег 65 70 75 80
А1а Ьеи Рго 11е С1п Ηίδ С1п Азр Тгр Меб Зег С1у Ьуз С1и РЪе Ьуз 85 90 95
Суз Ьуз Уа1 Азп Азп Ьуз Азр Ьеи Рго А1а Рго 11е С1и Агд ТЪг 11е 100 105 110
Зег Ьуз Рго Ьуз С1у Зег Уа1 Агд А1а Рго С1п Уа1 Туг Уа1 Ьеи Рго 115 120 125
Рго Рго С1и С1и С1и Меб ТЪг Ьуз Ьуз С1п Уа1 ТЪг Ьеи ТЪг Суз Меб 130 135 140
Уа1 ТЪг Азр РЪе Меб Рго С1и Азр 11е Туг Уа1 С1и Тгр ТЪг Азп Азп 145 150 155 160
С1у Ьуз ТЪг С1и Ьеи Азп Туг Ьуз Азп ТЪг С1и Рго Уа1 Ьеи Азр Зег 165 170 175
Азр С1у Зег Туг РЪе Меб Туг Зег Ьуз Ьеи Агд Уа1 С1и Ьуз Ьуз Азп
- 248 028183
180 185 190
Тгр УаЬ СЬи Агд Азп Зег Туг Зег Суз Зег УаЬ УаЬ НЬз СЬи СЬу Ьеи
195 200 205
НЬз Азп НЬз НЬз ТЪг ТЪг Ьуз Зег РЪе Зег Агд ТЪг Рго СЬу Ьуз
210 215 220
<210> 251
<211> 356
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Нанотело с Гс-доменом
<400> 251
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Зег УаЬ СЬп АЬа СЬу СЬи
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу Зег Ые РЪе Зег Зег Азп
20 25 30
А1а МеЬ АЬа Тгр Туг Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз Агд Агд Азр Ьеи УаЬ
35 40 45
АЬа АЬа Не Азп Зег УаЬ СЬу УаЬ ТЪг Ьуз Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз
50 55 60
СЬу Агд РЪе ТЪг Не Зег Агд Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЪг УаЬ Туг Ьеи
65 70 75 80
СЬп МеЪ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЪг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЪг
85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд СЬу Тгр Азр ТЪг Агд Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЪг
100 105 110
- 249 028183
- 250 028183
290
295
300
Рго УаЬ Ьеи Азр Зег Азр СЬу Зег Туг РЬе МеЬ Туг Зег Ьуз Ьеи Агд 305 310 315 320
УаЬ СЬи Ьуз Ьуз Азп Тгр УаЬ СЬи Агд Азп Зег Туг Зег Суз Зег УаЬ 325 330 335
УаЬ НЬз СЬи СЬу Ьеи НЬз Азп НЬз НЬз ТЬг ТЬг Ьуз Зег РЬе Зег Агд 340 345 350
ТЬг Рго СЬу Ьуз 355 <210> 252 <211> 222 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Человеческий Гс-домен <400> 252
Суз Рго Рго Суз Рго АЬа Рго СЬи АЬа АЬа СЬу СЬу Рго Зег УаЬ РЬе 15 10 15
Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ Ые Зег Агд ТЬг Рго 20 25 30
СЬи УаЬ ТЬг Суз УаЬ УаЬ УаЬ Азр УаЬ Зег НЬз СЬи Азр Рго СЬи УаЬ 35 40 45
Ьуз РЬе Азп Тгр Туг УаЬ Азр СЬу УаЬ СЬи УаЬ НЬз Азп АЬа Ьуз ТЬг 50 55 60
Ьуз Рго Агд СЬи СЬи СЬп Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд УаЬ УаЬ Зег УаЬ 65 70 75 80
- 251 028183
Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Нгз С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз С1и Туг Ьуз Суз 85 90 95
Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго 11е 61и Ьуз ТЬг 11е Зег 100 105 110
Ьуз А1а Ьуз 61у С1п Рго Агд С1и Рго С1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго 115 120 125
Зег Агд С1и С1и МеБ ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 130 135 140
Ьуз С1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 С1и Тгр С1и Зег Азп С1у 145 150 155 160
С1п Рго С1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр 165 170 175
С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр 180 185 190
С1п С1п С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеБ Нгз С1и А1а Ьеи Нгз 195 200 205
Азп Нгз Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у Ьуз 210 215 220 <210> 253 <211> 355 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Нанотело с Гс-доменом <400> 253
- 252 028183
Азр Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЬе Зег Зег ТЬг 20 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а А1а 11е Зег Зег Уа1 С1у Уа1 ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег С1у С1у 01 у 01 у Зег С1у С1у 01 у 01 у Зег 115 120 125
С1у О1у О1у С1у Зег Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и А1а А1а О1у 130 135 140
С1у Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ 145 150 155 160
11е Зег Агд ТЬг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Шз 165 170 175
С1и Азр Рго С1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр 01у Уа1 С1и Уа1 180 185 190
- 253 028183
НЬз Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и С1и С1п Туг Азп Зег ТЬг Туг 195 200 205
Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи НЬз С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у 210 215 220
Ьуз С1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго 11е 225 230 235 240
С1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз С1у 61п Рго Агд С1и Рго С1п Уа1 245 250 255
Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд С1и С1и МеЬ ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег 260 265 270
Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз С1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 61и 275 280 285
Тгр С1и Зег Азп С1у С1п Рго С1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго 290 295 300
Уа1 Ьеи Азр Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 305 310 315 320
Азр Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1п С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ 325 330 335
НЬз 61и А1а Ьеи НЬз Азп НЬз Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег 340 345 350
Рго С1у Ьуз 355 <210> 254
- 254 028183 <2Ы> 355 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Нанотело с Гс-доменом
<400> 254
Азр УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу Зег Ые РЬе Зег Зег ТЬг
20 25 30
АЬа МеЬ АЬа Тгр Туг Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз Агд Агд Азр Ьеи УаЬ
35 40 45
АЬа АЬа Ые Зег ТЬг УаЬ СЬу УаЬ ТЬг Ьуз Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз
50 55 60
СЬу Агд РЬе ТЬг Ые Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи
65 70 75 80
СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЬг
85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд СЬу Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 110
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег
115 120 125
СЬу СЬу СЬу СЬу Зег Суз Рго Рго Суз Рго АЬа Рго СЬи АЬа АЬа СЬу
130 135 140
СЬу Рго Зег УаЬ РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ
145 150 155 160
- 255 028183
- 256 028183
350
340
345
Рго 61у Ьуз 355 <210> 255 <211> 355 <212> РКТ <213> Ното заргепз <400> 255
МеЬ Азр С1п РЬе Рго С1и Зег Уа1 ТЬг С1и Азп РЬе С1и Туг Азр Азр 15 10 15
Ьеи А1а С1и А1а Суз Туг 11е С1у Азр 11е Уа1 Уа1 РЬе С1у ТЬг Уа1 20 25 30
РЬе Ьеи Зег 11е РЬе Туг Зег Уа1 11е РЬе А1а 11е С1у Ьеи Уа1 С1у 35 40 45
Азп Ьеи Ьеи Уа1 УаЬ РЬе А1а Ьеи ТЬг Азп Зег Ьуз Ьуз Рго Ьуз Зег 50 55 60
УаЬ ТЬг Азр 11е Туг Ьеи Ьеи Азп Ьеи А1а Ьеи Зег Азр Ьеи Ьеи РЬе 65 70 75 80
УаЬ А1а ТЬг Ьеи Рго РЬе Тгр ТЬг Шз Туг Ьеи 11е Азп С1и Ьуз С1у 85 90 95
Ьеи НЬз Азп А1а МеЬ Суз Ьуз РЬе ТЬг ТЬг А1а РЬе РЬе РЬе 11е С1у 100 105 110
РЬе РЬе С1у Зег 11е РЬе РЬе 11е ТЬг Уа1 11е Зег 11е Азр Агд Туг 115 120 125
Ьеи А1а 11е Уа1 Ьеи А1а А1а Азп Зег МеЬ Азп Азп Агд ТЬг Уа1 С1п
- 257 028183
130 135 140
Ηίδ С1у Уа1 ТНг Не Зег Ьеи С1у Уа1 Тгр А1а А1а А1а 11е Ьеи Уа1 145 150 155 160
А1а А1а Рго С1п РНе МеН РНе ТНг Ьуз С1п Ьуз С1и Азп С1и Суз Ьеи 165 170 175
С1у Азр Туг Рго С1и Уа1 Ьеи С1п С1и 11е Тгр Рго Уа1 Ьеи Агд Азп 180 185 190
Уа1 С1и ТНг Азп РНе Ьеи С1у РНе Ьеи Ьеи Рго Ьеи Ьеи 11е МеН Зег 195 200 205
Туг Суз Туг РНе Агд 11е 11е С1п ТНг Ьеи РНе Зег Суз Ьуз Азп Нхз 210 215 220
Ьуз Ьуз А1а Ьуз А1а 11е Ьуз Ьеи 11е Ьеи Ьеи Уа1 Уа1 11е Уа1 РНе 225 230 235 240
РНе Ьеи РЬе Тгр ТНг Рго Туг Азп Уа1 МеН 11е РНе Ьеи С1и ТНг Ьеи 245 250 255
Ьуз Ьеи Туг Азр РНе РНе Рго Зег Суз Азр МеН Агд Ьуз Азр Ьеи Агд 260 265 270
Ьеи А1а Ьеи Зег Уа1 ТНг С1и ТНг Уа1 А1а РНе Зег Ηίδ Суз Суз Ьеи 275 280 285
Азп Рго Ьеи 11е Туг А1а РНе А1а С1у С1и Ьуз РНе Агд Агд Туг Ьеи 290 295 300
Туг Ηίδ Ьеи Туг С1у Ьуз Суз Ьеи А1а Уа1 Ьеи Суз С1у Агд Зег Уа1 305 310 315 320
- 258 028183
259 028183
- 260 028183
Туг Ηίδ Ьеи Туг С1у Ьуз Суз Ьеи А1а Уа1 Ьеи Суз С1у Агд Зег Уа1 305 310 315 320
Ηίε Уа1 Азр РНе Зег Рго Зег С1и Зег С1п Агд Зег Агд С1п С1у Зег 325 330 335
Уа1 Ьеи Зег Зег Азп РНе ТНг Туг Шз ТНг Зег Азр С1у Азр А1а Зег 340 345 350
Ьеи Ьеи Ьеи 355 <210> 257 <211> 369 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 257
А1а Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у
10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РНе Зег Зег ТНг 20 25 30
А1а Мер А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго О1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а А1а 11е Зег Зег Уа1 С1у Уа1 ТНг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РНе ТНг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТНг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
- 261 028183
- 262 028183
Суз А1а А1а Зег С1у Зег Не РЪе Зег Зег ТЪг А1а Меб А1а Тгр Туг 275 280 285
Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 А1а А1а 11е Зег Зег 290 295 300
Уа1 С1у Уа1 ТЪг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз С1у Агд РЪе ТЪг 11е 305 310 315 320
Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЪг Уа1 Туг Ьеи С1п Меб Азп Зег Ьеи 325 330 335
Агд Рго С1и Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЪг Зег Азр Рго Агд Агд 340 345 350
С1у Тгр Азр ТЪг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг Ьеи Уа1 ТЪг Уа1 Зег 355 360 365
Зег <210> 258 <211> 369 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 258
А1а Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЪе Зег Зег ТЪг 20 25 30
- 263 028183
- 264 028183
11е С1у С1у Зег Ьеи Зег Агд Зег Зег С1п С1у ТЪг Ьеи Уа1 ТЪг Уа1 225 230 235 240
Зег Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у Зег С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 245 250 255
С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у Зег Ьеи Агд Ьеи Зег 260 265 270
Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЪе Зег Зег ТЪг А1а Меб А1а Тгр Туг 275 280 285
Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 А1а А1а 11е Зег ТЪг 290 295 300
Уа1 61у Уа1 ТЪг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз С1у Агд РЪе ТЪг 11е 305 310 315 320
Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЪг Уа1 Туг Ьеи С1п Меб Азп Зег Ьеи 325 330 335
Агд Рго С1и Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЪг Зег Азр Рго Агд Агд 340 345 350
С1у Тгр Азр ТЪг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг Ьеи Уа1 ТЪг Уа1 Зег 355 360 365
Зег <210> 259 <211> 369 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
- 265 028183 <223> Последовательность нанотела <400> 259
А1а Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 1 5
С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а 20
Зег С1у Зег Не РАе Зег Зег Азп 25 30
А1а МеА А1а Тгр Туг Агд С1п А1а 35 40
Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 45
А1а А1а 11е Азп Зег Уа1 С1у Уа1
55
ТАг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 60
С1у Агд РАе ТАг Не Зег Агд Азр 65 70
Азп Зег Ьуз Азп ТАг Уа1 Туг Ьеи 75 80
С1п МеА Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и 85
Азр ТАг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТАг 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд 61у Тгр Азр 100
ТАг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТАг 105 НО
Ьеи Уа1 ТАг Уа1 Зег Зег О1у С1у 115 120
С1у С1у Зег С1у 61у С1у Зег 61и 125
Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у 130 135
61у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у Азп Зег 140
Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 145 150
С1у РАе ТАг РАе Зег Зег РАе С1у 155 160
МеА Зег Тгр 7а1 Агд С1п А1а Рго 165
С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр \7а1 Зег 170 175
- 266 028183
- 267 028183
Зег <210> 260 <211> 368 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 260
УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу 1 5
СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу Зег 10 15
Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег 20
СЬу Зег Ые РЪе Зег Зег ТЪг АЬа 25 30
МеЬ АЬа Тгр Туг Агд СЬп АЬа Рго 35 40
СЬу Ьуз Агд Агд Азр Ьеи УаЬ АЬа 45
АЬа Ые Зег Зег УаЬ СЬу УаЬ ТЪг 50 55
Ьуз Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз СЬу 60
Агд РЪе ТЪг ЬЬе Зег Агд Азр Азп 65 70
Зег Ьуз Азп ТЪг УаЬ Туг Ьеи СЬп 75 80
МеЬ Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи Азр 85
ТЪг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЪг Зег 90 95
Азр Рго Агд Агд СЬу Тгр Азр ТЪг 100
Агд Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЪг Ьеи 105 110
УаЬ ТЪг УаЬ Зег Зег СЬу СЬу СЬу 115 120
СЬу Зег СЬу СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ 125
- 268 028183
61п Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу Азп Зег Ьеи 130 135 140
Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу РЬе ТЬг РЬе Зег Зег РЬе СЬу МеЬ 145 150 155 160
Зег Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр УаЬ Зег Зег 165 170 175
Ые Зег СЬу Зег СЬу Зег Азр ТЬг Ьеи Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз СЬу 180 185 190
Агд РЬе ТЬг Ые Зег Агд Азр Азп АЬа Ьуз ТЬг ТЬг Ьеи Туг Ьеи СЬп 195 200 205
МеЬ Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЬг Ые 210 215 220
СЬу СЬу Зег Ьеи Зег Агд Зег Зег СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег 225 230 235 240
Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи 245 250 255
Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз 260 265 270
АЬа АЬа Зег СЬу Зег Ые РЬе Зег Зег ТЬг АЬа МеЬ АЬа Тгр Туг Агд 275 280 285
СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз Агд Агд Азр Ьеи УаЬ АЬа АЬа Ые Зег Зег УаЬ 290 295 300
СЬу УаЬ ТЬг Ьуз Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг Ые Зег 305 310 315 320
- 269 028183
Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТНг Уа1 Туг Ьеи С1п Мер Азп Зег Ьеи Агд 325 330 335
Рго С1и Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТНг Зег Азр Рго Агд Агд С1у 340 345 350
Тгр Азр ТНг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТНг Ьеи Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 355 360 365 <210> 261 <211> 368 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 261
Уа1 С1п Ьеи Уа1 61и Зег С1у С1у 61у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у Зег 15 10 15
Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег Не РНе Зег Зег ТНг А1а 20 25 30
МеР А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 А1а 35 40 45
А1а Не Зег ТНг Уа1 С1у Уа1 ТНг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 61у 50 55 60
Агд РНе ТНг Не Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТНг Уа1 Туг Ьеи С1п 65 70 75 80
МеР Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТНг Зег 85 90 95
- 270 028183
- 271 028183
С1п А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 А1а А1а 11е Зег ТЬг Уа1 290 295 300
С1у Уа1 ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег 305 310 315 320
Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи С1п Меб Азп Зег Ьеи Агд 325 330 335
Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг Зег Азр Рго Агд Агд С1у 340 345 350
Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 355 360 365 <210> 262 <211> 368 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 262
Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у Зег 15 10 15
Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЬе Зег Зег Азп А1а 20 25 30
Меб А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 А1а 35 40 45
А1а 11е Азп Зег Уа1 С1у Уа1 ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз С1у 50 55 60
- 272 028183
Агд РЪе ТЪг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЪг Уа1 Туг Ьеи С1п 65 70 75 80
Меб Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЪг Зег 85 90 95
Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЪг Агд Туг Тгр С1у 61п С1у ТЪг Ьеи 100 105 110
Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег С1у С1у О1у С1у Зег С1у С1у С1у Зег С1и Уа1 115 120 125
С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи УаЬ С1п Рго 61у Азп Зег Ьеи 130 135 140
Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЪе ТЪг РЪе Зег Зег РЪе С1у Меб 145 150 155 160
Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1 Зег Зег 165 170 175
11е Зег С1у Зег С1у Зег Азр ТЪг Ьеи Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз С1у 180 185 190
Агд РЪе ТЪг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз ТЪг ТЪг Ьеи Туг Ьеи С1п 195 200 205
Меб Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз· ТЪг 11е 210 215 220
С1у С1у Зег Ьеи Зег Агд Зег Зег С1п С1у ТЪг Ьеи Уа1 ТЪг Уа1 Зег 225 230 235 240
Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у Зег С1и УаЬ С1п Ьеи УаЬ С1и 245 250 255
- 273 028183
Зег СЬу СЬу СЬу 260 Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу 265 СЬу Зег Ьеи Агд Ьеи 270 Зег Суз
АЬа АЬа Зег СЬу Зег Ые РЬе Зег Зег Азп АЬа МеЬ АЬа Тгр Туг Агд
275 280 285
СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз Агд Агд Азр Ьеи УаЬ АЬа АЬа Ые Азп Зег УаЬ
290 295 300
СЬу УаЬ ТЬг Ьуз Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг Ые Зег
305 310 315 320
Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Агд
325 330 335
Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЬг Зег Азр Рго Агд Агд СЬу
340 345 350
Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
355 360 365
<210> 263 <2Ы> 355 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 263
АЬа УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу Зег Ые РЬе Зег Зег ТЬг
20 25 30
- 274 028183
- 275 028183
Ьуз С1и Туг Ьуз Суз Ьуз УаЬ Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго 11е 225 230 235 240
С1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз С1у С1п Рго Агд С1и Рго С1п Уа1 245 250 255
Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд С1и С1и МеЬ ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег 260 265 270
Ьеи ТЬг Суз Ьеи УаЬ Ьуз С1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 С1и 275 280 285
Тгр 61и Зег Азп С1у С1п Рго С1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго 290 295 300
Уа1 Ьеи Азр Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 305 310 315 320
Азр Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1п С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ 325 330 335
Шз С1и А1а Ьеи НЬз Азп НЬз Туг ТЬг 61п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег 340 345 350
Рго С1у Ьуз 355 <210> 264 <211> 355 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 264
- 276 028183
А1а Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи УаЬ С1п Рго С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЬе Зег Зег ТЬг 20 25 30
А1а МеЪ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а А1а 11е Зег ТЬг Уа1 С1у УаЬ ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 100 105 110
Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег С1у С1у С1у 61у Зег С1у С1у С1у С1у Зег 115 120 125
С1у С1у С1у С1у Зег Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и А1а А1а С1у 130 135 140
С1у Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ 145 150 155 160
11е Зег Агд ТЬг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Шз 165 170 175
С1и Азр Рго С1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у УаЬ С1и Уа1 180 185 190
- 277 028183
НЬз Азп АЬа Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд СЬи СЬи СЬп Туг Азп Зег ТЬг Туг 195 200 205
Агд УаЬ УаЬ Зег УаЬ Ьеи ТЬг УаЬ Ьеи НЬз СЬп Азр Тгр Ьеи Азп СЬу 210 215 220
Ьуз СЬи Туг Ьуз Суз Ьуз УаЬ Зег Азп Ьуз АЬа Ьеи Рго АЬа Рго Ые 225 230 235 240
СЬи Ьуз ТЬг Ые Зег Ьуз АЬа Ьуз СЬу СЬп Рго Агд СЬи Рго СЬп УаЬ 245 250 255
Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд СЬи СЬи МеЬ ТЬг Ьуз Азп СЬп УаЬ Зег 260 265 270
Ьеи ТЬг Суз Ьеи УаЬ Ьуз СЬу РЬе Туг Рго Зег Азр Ые АЬа УаЬ СЬи 275 280 285
Тгр СЬи Зег Азп СЬу СЬп Рго СЬи Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго 290 295 300
УаЬ Ьеи Азр Зег Азр СЬу Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг УаЬ 305 310 315 320
Азр Ьуз Зег Агд Тгр СЬп СЬп СЬу Азп УаЬ РЬе Зег Суз Зег УаЬ МеЬ 325 330 335
НЬз СЬи АЬа Ьеи НЬз Азп НЬз Туг ТЬг СЬп Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег 340 345 350
Рго СЬу Ьуз 355 <210> 265
- 278 028183 <211> 354 <212> ΡΚΤ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела < 4 0 0 > 265
Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег 61у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у Зег 15 10 15
Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 61у Зег 11е РЬе Зег Зег ТЬг А1а 20 25 30
МеН А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 А1а 35 40 45
А1а 11е Зег Зег Уа1 61у Уа1 ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз С1у 50 55 60
Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи С1п 65 70 75 80
МеН Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг Зег 85 90 95
Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у 61п С1у ТЬг Ьеи 100 105 110
Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у 61у С1у Зег С1у 115 120 125
61у С1у С1у Зег Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и А1а А1а С1у С1у 130 135 140
Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеН 11е 145 150 155 160
- 279 028183
- 280 028183
340 345 350
СЬу Ьуз <210> 266 <211> 354 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 266
УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу 1 5
СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу Зег 10 15
Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег 20
СЬу Зег Ые РЪе Зег Зег ТЪг АЬа 25 30
МеЬ АЬа Тгр Туг Агд СЬп АЬа Рго 35 40
СЬу Ьуз Агд Агд Азр Ьеи УаЬ АЬа 45
АЬа Ые Зег ТЪг УаЬ СЬу УаЬ ТЪг 50 55
Ьуз Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз СЬу 60
Агд РЪе ТЪг Ые Зег Агд Азр Азп 65 70
Зег Ьуз Азп ТЪг УаЬ Туг Ьеи СЬп 75 80
МеЪ Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи Азр 85
ТЪг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЪг Зег 90 95
Азр Рго Агд Агд СЬу Тгр Азр ТЪг 100
Агд Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЪг Ьеи 105 110
УаЬ ТЪг УаЬ Зег Зег СЬу СЬу СЬу 115 120
СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу 125
- 281 028183
С1у С1у С1у Зег Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и А1а А1а С1у С1у 130 135 140
Рго Зег Уа1 РНе Ьеи РНе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТНг Ьеи Мер 11е 145 150 155 160
Зег Агд ТНг Рго С1и Уа1 ТНг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Шз С1и 165 170 175
Азр Рго С1и Уа1 Ьуз РНе Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у Уа1 С1и Уа1 Шз 180 185 190
Азп А1а Ьуз ТНг Ьуз Рго Агд С1и 61и С1п Туг Азп Зег ТНг Туг Агд 195 200 205
Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТНг Уа1 Ьеи Шз С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз 210 215 220
С1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго 11е С1и 225 230 235 240
Ьуз ТНг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз С1у С1п Рго Агд С1и Рго С1п Уа1 Туг 245 250 255
ТНг Ьеи Рго Рго Зег Агд С1и С1и Мер ТНг Ьуз Азп 61п Уа1 Зег Ьеи 260 265 270
ТНг Суз Ьеи Уа1 Ьуз С1у РНе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 61и Тгр 275 280 285
С1и Зег Азп С1у С1п Рго С1и Азп Азп Туг Ьуз ТНг ТНг Рго Рго Уа1 290 295 300
Ьеи Азр Зег Азр С1у Зег РНе РНе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТНг Уа1 Азр
- 282 028183
305
310
315
320
Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1п С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ Шз 325 330 335
С1и А1а Ьеи Низ Азп Низ Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 340 345 350
С1у Ьуз <210> 267 <211> 273 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 267
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у 61у Ьеи Уа1 С1п А1а С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз Уа1 А1а Зег С1у Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30
А1а МеЬ С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1и Агд А1а РЬе Уа1 35 40 45
А1а С1у 11е Зег С1у Зег А1а Зег Агд Ьуз Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 50 55 60
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр Азп А1а Агд Азп ТЬг Уа1 Туг 65 70 75 80
Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95
- 283 028183
А1а А1а 5ег Азп Зег Туг Рго Ьуз Уа1 С1п РЬе Азр Туг Туг С1у С1п 100 105 110
С1у ТЬг С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у 115 120 125
С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у 61у С1у С1у 130 135 140
Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег Ьуз Уа1 С1п Ьеи Уа1 145 150 155 160
С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у Зег Ьеи Агд Ьеи Зег 165 170 175
Суз А1а ТЬг Зег 61у ТЬг 11е РЬе Зег Азп Азп А1а МеЬ С1у Тгр Туг 180 185 190
Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 А1а Зег 11е Зег Зег 195 200 205
Зег С1у Зег ТЬг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг Уа1 210 215 220
Зег Агд Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг 61у Туг Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи 225 230 235 240
Ьуз Рго С1и Азр ТЬг С1у Уа1 Туг Туг Суз ТЬг Ьеи Азр А1а Агд Агд 245 250 255
С1у Тгр Азп ТЬг А1а Туг Тгр С1у С1п 61у А1а 61п Уа1 ТЬг Уа1 Зег 260 265 270
Зег
- 284 028183 <210> 268 <211> 273 <212> ΡΚΤ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 268
Ьуз Уа1 С1п Ьеи \7а1 С1и Зег С1у 1 5
С1у 61у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у
15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТЪг 20
Зег С1у ТЪг 11е РЪе Зег Азп Азп 25 30
А1а Меб С1у Тгр Туг Агд С1п А1а 35 40
Рго С1у Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи Уа1 45
А1а Зег 11е Зег Зег Зег С1у Зег 50 55
ТЪг Азп Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 60
С1у Агд РЪе ТЪг Уа1 Зег Агд Азр 65 70
Азп Азр Ьуз Азп ТЪг С1у Туг Ьеи 75 80
С1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и 85
Азр ТЪг 61у Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 90 95
Ьеи Азр А1а Агд Агд С1у Тгр Азп 100
ТЪг А1а Туг Тгр С1у С1п С1у А1а 105 110
С1п Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег С1у С1у 115 120
С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег 125
61у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у 130 135
С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у 140
- 285 028183
С1у 145 С1у С1у Зег С1у С1у 150 С1у С1у Зег С1и Уа1 155 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег 160
С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п А1а С1у С1у Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз Уа1
165 170 175
А1а Зег 61у Агд ТЪг РЪе Зег Зег Туг А1а Меб С1у Тгр РЪе Агд 61п
180 185 190
А1а Рго С1у Ьуз С1и Агд А1а РЪе Уа1 А1а С1у 11е Зег С1у Зег А1а
195 200 205
Зег Агд Ьуз Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 61у Агд РЪе ТЪг Уа1 Зег
210 215 220
Агд Азр Азп А1а Агд Азп ТЪг Уа1 Туг Ьеи С1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз
225 230 235 240
Рго С1и Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а А1а Зег Азп Зег Туг Рго
245 250 255
Ьуз Уа1 С1п РЪе Азр Туг Туг С1у С1п С1у ТЪг С1п Уа1 ТЪг Уа1 Зег
260 265 270
Зег
<210> 269
<211> 271
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 269
- 286 028183
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 61и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РНе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а МеР А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а С1у 11е Азп Зег Уа1 С1у 11е ТНг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТНг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТНг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Мер Азп Зег Ьеи Ьуз Рго 61и Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТНг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТНг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТНг 100 105 110
Ьеи Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 61у О1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег 115 120 125
С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег 61у С1у С1у С1у Зег С1у 130 135 140
С1у С1у С1у Зег С1у 61у 61у С1у Зег Ьуз Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег 145 150 155 160
С1у С1у 61у Ьеи Уа1 61п Рго С1у О1у Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а 165 170 175
ТНг Зег С1у ТНг 11е РЬе Зег Азп Азп А1а Мер С1у Тгр Туг Агд С1п 180 185 190
- 287 028183
АЬа Рго СЬу Ьуз Ьуз Агд Азр Ьеи УаЬ АЬа Зег ЬЬе Зег Зег Зег СЬу 195 200 205
Зег ТЬг Азп Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг УаЬ Зег Агд 210 215 220
Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг СЬу Туг Ьеи СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго 225 230 235 240
СЬи Азр ТЬг СЬу УаЬ Туг Туг Суз ТЬг Ьеи Азр АЬа Агд Агд СЬу Тгр 245 250 255
Азп ТЬг АЬа Туг Тгр СЬу СЬп СЬу АЬа СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 260 265 270 <210> 270 <211> 271 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 270
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Зег УаЬ СЬп АЬа СЬу СЬи 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу Зег Ые РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
АЬа МеЬ АЬа Тгр Туг Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬп Агд Азр Ьеи УаЬ 35 40 45
АЬа УаЬ Ые Азп Зег УаЬ СЬу Ые ТЬг Ьуз Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз 50 55 60
- 288 028183
СЬу Агд РЬе ТЬг Ые Зег СЬу Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи 65 70 75 80
СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Зег Азр АЬа Агд Агд СЬу Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг 100 105 110
СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег 115 120 125
СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу 130 135 140
СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег 145 150 155 160
СЬу СЬу СЬу Зег УаЬ СЬп АЬа СЬу СЬи Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа 165 170 175
АЬа Зег СЬу Зег Ые РЬе Зег Зег Азп АЬа МеЬ АЬа Тгр Туг Агд СЬп 180 185 190
АЬа Рго СЬу Ьуз СЬп Агд Азр Ьеи УаЬ АЬа УаЬ Ые Азп Зег УаЬ СЬу 195 200 205
Ые ТЬг Ьуз Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг Ые Зег СЬу 210 215 220
Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго 225 230 235 240
СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЬг Зег Азр АЬа Агд Агд СЬу Тгр 245 250 255
- 289 028183
Азр ТАг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТАг С1п Уа1 ТАг Уа1 Зег Зег 260 265 270 <210> 271 <211> 273 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 271
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у
5
61у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а 20
Зег С1у Зег 11е РАе Зег Зег Азп 25 30
А1а МеА А1а Тгр Туг Агд С1п А1а 35 40
Рго Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи 45
Уа1 А1а Ьеи 11е Азп Зег Уа1 С1у 50 55
11е ТАг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 60
Ьуз С1у Агд РАе ТАг 11е Зег Зег 65 70
Азр Азп А1а Ьуз Азп ТАг Уа1 Туг 75 80
Ьеи С1и МеА Азп Зег Ьеи Ьуз Рго 85
С1и Азр ТАг А1а Уа1 Туг Туг Суз 90 95
ТАг Зег Азр С1у Агд Агд С1у Тгр 100
Азр ТАг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у 105 110
ТАг С1п Уа1 ТАг Уа1 Зег Зег С1у 115 120
61у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у 125
- 290 028183
Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег 130 135 140
СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи 145 150 155 160
Зег СЬу СЬу СЬу Зег УаЬ СЬп АЬа СЬу СЬи Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз 165 170 175
АЬа АЬа Зег СЬу Зег Ые РЪе Зег Зег Азп АЬа МеЪ АЬа Тгр Туг Агд 180 185 190
СЬп АЬа Рго Рго СЬу Ьуз СЬп Агд Азр Ьеи УаЬ АЬа Ьеи Ые Азп Зег 195 200 205
УаЬ СЬу Ые ТЪг Ьуз Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз СЬу Агд РЪе ТЪг Ые 210 215 220
Зег Зег Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЪг УаЬ Туг Ьеи СЬи МеЬ Азп Зег Ьеи 225 230 235 240
Ьуз Рго СЬи Азр ТЪг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЪг Зег Азр СЬу Агд Агд 245 250 255
СЬу Тгр Азр ТЪг Агд Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЪг СЬп УаЬ ТЪг УаЬ Зег 260 265 270
Зег <210>
<211>
<212>
<213>
272
271
РКТ
Искусственная последовательность <220>
- 291 028183 <223> Последовательность нанотела <400> 272
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 61п А1а С1у С1и 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а Меб А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго 61у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а А1а 11е Азп Зег Уа1 С1у Уа1 ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр 61у С1п С1у ТЬг 100 105 110
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 61у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег 115 120 125
С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у 130 135 140
С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег 145 150 155 160
С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а 165 170 175
- 292 028183
А1а Зег С1у Зег 11е РЬе Зег Зег Азп А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п 180 185 190
А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 А1а А1а 11е Азп Зег Уа1 С1у 195 200 205
Уа1 ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 61у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд 210 215 220
Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго 225 230 235 240
С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр 245 250 255
Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 260 265 270 <210> 273 <211> 271 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 273
С1и МеЬ С1п Ьеи Уа1 О1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
- 293 028183
А1а Ьеи Не Азп Зег УаЬ С1у Не ТЪг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЪе ТЪг Не Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЪг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 85 90 95
Зег Азр С1у Агд Агд С1у Тгр Азр ТЪг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг 100 105 110
С1п Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег 115 120 125
С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у 130 135 140
С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1и Меб С1п Ьеи Уа1 С1и Зег 145 150 155 160
С1у С1у С1у Зег Уа1 61п А1а С1у С1и Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а 165 170 175
А1а Зег 61у Зег Не РЪе Зег Зег Азп А1а Меб А1а Тгр Туг Агд С1п 180 185 190
А1а Рго С1у Ьуз С1п Агд Азр Ьеи Уа1 А1а Ьеи Не Азп Зег Уа1 С1у 195 200 205
Не ТЪг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз С1у Агд РЪе ТЪг Не Зег Агд 210 215 220
Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЪг Уа1 Туг Ьеи 61п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго 225 230 235 240
- 294 028183
СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЬг Зег Азр СЬу Агд Агд СЬу Тгр 245 250 255
Азр ТЬг Агд Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 260 265 270 <210> 274 <211> 271 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 274
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу 1 5
СЬу СЬу Зег УаЬ СЬп АЬа СЬу СЬи 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа 20
Зег СЬу Зег Ые РЬе Зег Зег Азп 25 30
АЬа МеЬ АЬа Тгр Туг Агд СЬп АЬа 35 40
Рго СЬу Ьуз СЬп Агд Азр Ьеи УаЬ 45
АЬа СЬу Ые Азп Зег УаЬ СЬу Ые 50 55
ТЬг Ьуз Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз 60
СЬу Агд РЬе ТЬг Ые Зег Агд Азр 65 70
Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг АЬа Туг Ьеи 75 80
СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи 85
Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЬг 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд СЬу Тгр Азр 100
ТЬг Агд Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг 105 110
- 295 028183
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег 115 120 125
СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу 130 135 140
СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег 145 150 155 160
СЬу СЬу СЬу Зег УаЬ СЬп АЬа СЬу СЬи Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа 165 170 175
АЬа Зег СЬу Зег Ые РЬе Зег Зег Азп АЬа МеЬ АЬа Тгр Туг Агд СЬп 180 185 190
АЬа Рго СЬу Ьуз СЬп Агд Азр Ьеи УаЬ АЬа СЬу Ые Азп Зег УаЬ СЬу 195 200 205
Ые ТЬг Ьуз Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг Ые Зег Агд 210 215 220
Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг АЬа Туг Ьеи СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго 225 230 235 240
СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЬг Зег Азр Рго Агд Агд СЬу Тгр 245 250 255
Азр ТЬг Агд Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 260 265 270 <210>
<211>
<212>
<213>
275
273
РКТ
Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела
- 296 028183 <400> 275
С1и Уа1 С1п Ьеи УаЬ С1и Зег 61у С1у С1у Ьеи Уа1 О1п А1а С1у С1у 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз Уа1 А1а Зег С1у Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30
А1а МеЬ С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз 01и Агд А1а РЬе УаЬ 35 40 45
А1а 61у 11е Зег С1у Зег А1а Зег Агд Ьуз Туг Туг А1а Азр Зег УаЬ 50 55 60
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр Азп А1а Агд Азп ТЬг Уа1 Туг 65 70 75 80
Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95
А1а А1а Зег Азп Зег Туг Рго Ьуз Уа1 С1п РЬе Азр Туг Туг С1у С1п 100 105 110
С1у ТЬг С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у 61у 115 120 125
С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у 130 135 140
Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у О1у С1у Зег С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 145 150 155 160
С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и Зег Ьеи Агд Ьеи Зег 165 170 175
- 297 028183
Суз АЬа АЬа Зег СЬу Зег Ые РЪе Зег Зег Азп АЬа МеЬ АЬа Тгр Туг 180 185 190
Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз Агд Агд Азр Ьеи УаЬ АЬа АЬа Ые Азп Зег 195 200 205
УаЬ СЬу УаЬ ТЪг Ьуз Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз СЬу Агд РЪе ТЪг Ые 210 215 220
Зег Агд Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЪг УаЬ Туг Ьеи СЬп МеЪ Азп Зег Ьеи 225 230 235 240
Ьуз Рго СЬи Азр ТЪг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЪг Зег Азр Рго Агд Агд 245 250 255
СЬу Тгр Азр ТЪг Агд Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЪг СЬп УаЬ ТЪг УаЬ Зег 260 265 270
Зег <210> 276 <211> 273 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 276
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп АЬа СЬу СЬу
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз УаЬ АЬа Зег СЬу Агд ТЪг РЪе Зег Зег Туг 20 25 30
АЬа МеЪ СЬу Тгр РЪе Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬи Агд АЬа РЪе УаЬ
- 298 028183
- 299 028183
Зег Агд 225 Азр Азп А1а Ьуз 230 Азп ТЬг А1а Туг Ьеи 235 С1п МеН Азп Зег Ьеи 240
Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг Зег Азр Рго Агд Агд
245 250 255
С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег
260 265 270
Зег
<210> 277
<211> 369
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 277
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у 61у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЬе Зег Зег Азп
20 25 30
А1а МеН А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1
35 40 45
А1а А1а 11е Азп Зег Уа1 С1у Уа1 ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз
50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи
65 70 75 80
С1п МеН Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг
- 300 028183
- 301 028183
Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу РЬе ТЬг РЬе Зег Зег РЬе СЬу МеЬ 275 280 285
Зег Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр УаЬ Зег Зег 290 295 300
ЬЬе Зег СЬу Зег СЬу Зег Азр ТЬг Ьеи Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз СЬу 305 ЗЬО 315 320
Агд РЬе ТЬг Ые Зег Агд Азр Азп АЬа Ьуз ТЬг ТЬг Ьеи Туг Ьеи СЬп 325 330 335
МеЬ Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЬг Ые 340 345 350
СЬу СЬу Зег Ьеи Зег Агд Зег Зег СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег 355 360 365 <210> 278 <211> 395 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 278
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Зег УаЬ СЬп АЬа СЬу СЬи 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу Зег Ые РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
АЬа МеЬ АЬа Тгр Туг Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз Агд Агд Азр Ьеи УаЬ
- 302 028183
- 303 028183
Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго 225 230 235 240
СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЬг Зег Азр Рго Агд Агд СЬу Тгр 245 250 255
Азр ТЬг Агд Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег СЬу 260 265 270
СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу 275 280 285
СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу Азп Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа 290 295 300
Зег СЬу РЬе ТЬг РЬе Зег Зег РЬе СЬу МеЬ Зег Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа 305 310 315 320
Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр УаЬ Зег Зег Ые Зег СЬу Зег СЬу Зег 325 330 335
Азр ТЬг Ьеи Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг Ые Зег Агд 340 345 350
Азр Азп АЬа Ьуз ТЬг ТЬг Ьеи Туг Ьеи СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Агд Рго 355 360 365
СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЬг Ые СЬу СЬу Зег Ьеи Зег Агд 370 375 380
Зег Зег СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 385 390 395 <210> 279 <211> 395 <212> РКТ
- 304 028183 <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 279
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у
5
С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а 20
Зег С1у Зег 11е РЬе Зег Зег Азп 25 30
А1а МеР А1а Тгр Туг Агд С1п А1а 35 40
Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 45
А1а А1а 11е Азп Зег Уа1 С1у Уа1
55
ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 60
С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр 65 70
Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 75 80
С1п МеР Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и 85
Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр 100
ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п 61у ТЬг 105 110
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег С1у С1у 115 120
С1у С1у Зег С1у С1у С1у Зег С1и
125
Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег 61у С1у 130 135
С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и Зег 140
Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 145 150
С1у Зег 11е РЬе Зег Зег Азп А1а 155 160
- 305 028183
МеЬ А1а Тгр Туг Агд О1п А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 А1а 165 170 175
А1а 11е Азп Зег Уа1 С1у Уа1 ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз О1у 180 185 190
Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи О1п 195 200 205
МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг Зег 210 215 220
Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг С1п 225 230 235 240
Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у 245 250 255
С1у С1у С1у Зег 61у С1у С1у 61у Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у 260 265 270
С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 275 280 285
С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у Азп Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а 290 295 300
Зег С1у РЬе ТЬг РЬе Зег Зег РЬе С1у МеЬ Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а 305 310 315 320
Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1 Зег Зег 11е Зег С1у Зег С1у Зег 325 330 335
Азр ТЬг Ьеи Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд 340 345 350
- 306 028183
Азр Азп А1а Ьуз ТЪг ТЪг Ьеи Туг Ьеи С1п Меб Азп Зег Ьеи Агд Рго 355 360 365
С1и Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 11е С1у С1у Зег Ьеи Зег Агд 370 375 380
Зег Зег 61п 61у ТЪг Ьеи Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 385 390 395 <210> 280 <211> 421 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 280
С1и Уа1 61п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у О1и 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег 11е РЪе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а Меб А1а Тгр Туг Агд 61п А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а А1а 11е Азп Зег Уа1 С1у Уа1 ТЪг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
61у Агд РЪе ТЪг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЪг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЪг 85 90 95
- 307 028183
- 308 028183
С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег 61у С1у 61у 290 295 300
С1у Зег С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 61п Рго 305 310 315 320
С1у Азп Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЬе ТЬг РЬе Зег 325 330 335
Зег РЬе С1у МеБ Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и 340 345 350
Тгр Уа1 Зег Зег 11е Зег С1у Зег С1у Зег Азр ТЬг Ьеи Туг А1а Азр 355 360 365
Зег Уа1 Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз ТЬг ТЬг 370 375 380
Ьеи Туг Ьеи С1п МеБ Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг 385 390 395 400
Туг Суз ТЬг 11е С1у С1у Зег Ьеи Зег Агд Зег Зег С1п С1у ТЬг Ьеи 405 410 415
Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 420 <210> 281 <211> 421 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела <400> 281
- 309 028183
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и 15 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег Ые РЬе Зег Зег Азп 20 25 30
А1а МеЬ А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 35 40 45
А1а А1а Ые Азп Зег Уа1 С1у Уа1 ТЬг Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 50 55 60
С1у Агд РЬе ТЬг Ые Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг 1/а1 Туг Ьеи 65 70 75 80
С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 85 90 95
Зег Азр Рго Агд Агд 51у Тгр Азр ТЬг Агд Туг Тгр 61у С1п С1у ТЬг 100 105 110
С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег 115 120 125
61у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у 130 135 140
С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1и Уа1 С1п Ьеи 1/а1 С1и Зег 145 150 155 160
С1у 61у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у Азп Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а 165 170 175
А1а Зег С1у РЬе ТЬг РЬе Зег Зег РЬе 61у МеЬ Зег Тгр Уа1 Агд С1п 180 185 190
- 310 028183
А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр 195 200
Уа1 Зег Зег 11е Зег С1у Зег С1у 205
Зег Азр ТАг Ьеи Туг А1а Азр Зег 210 215
Уа1 Ьуз С1у Агд РАе ТАг 11е Зег 220
Агд Азр Азп А1а Ьуз ТАг ТАг Ьеи 225 230
Туг Ьеи С1п МеА Азп Зег Ьеи Агд 235 240
Рго С1и Азр ТАг А1а Уа1 Туг Туг 245
Суз ТАг 11е С1у С1у Зег Ьеи Зег 250 255
Агд Зег Зег С1п С1у ТАг Ьеи Уа1 260
ТАг Уа1 Зег Зег С1у 61у С1у С1у 265 270
Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у
275 280
С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег 285
С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у 290 295
С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1и 300
Уа1 С1п Ьеи Уа1 61и Зег С1у С1у 305 310
С1у Зег Уа1 С1п А1а С1у С1и Зег 315 320
Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 325
С1у Зег 11е РАе Зег Зег Азп А1а 330 335
МеА А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго 340
С1у Ьуз Агд Агд Азр Ьеи Уа1 А1а 345 350
А1а 11е Азп Зег Уа1 С1у Уа1 ТАг
355 360
Ьуз Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз С1у 365
Агд РАе ТАг 11е Зег Агд Азр Азп 370 375
А1а Ьуз Азп ТАг Уа1 Туг Ьеи С1п 380
- 311 028183
Меб Азп Зег Ъеи Ъуз Рго С1и Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЪг Зег
385 390 395 400
Азр Рго Агд Агд С1у Тгр Азр ТЪг Агд Туг Тгр С1у С1п С1у ТЪг С1п
405 410 415
Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег
420 <210> 282 <211> 275 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность нанотела
<400> 282
С1и Уа1 1 С1п Ъеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ъеи Уа1 С1п А1а О1у С1у 5 10 15
Зег Ъеи Агд Ъеи Зег Суз Уа1 А1а Зег С1у Агд ТЪг РЪе Зег Зег Туг 20 25 30
А1а Меб С1у Тгр РЪе Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз 61и Агд А1а РЪе Уа1 35 40 45
А1а С1у 50 11е Зег С1у Зег А1а Зег Агд Ьуз Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 55 60
Ъуз С1у 65 Агд РЪе ТЪг Уа1 Зег Агд Азр Азп А1а Агд Азп ТЪг Уа1 Туг 70 75 80
Ъеи С1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95
- 312 -

Claims (47)

1. Полипептид, включающий анти-СХЗСК1 (анти-СХЗ хемокиновый рецептор 1) иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, где указанный анти-СХЗСК1 иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен состоит преимущественно из четырех каркасных областей (РК1, РК2, РКЗ и РК4) и трех областей, определяющих комплементарность (СИК1, С1Ж2 и СИКЗ), и где указанная СИКЗ область имеет аминокислотную последовательность Л8р-Рго-Лг§-Лг§-О1у-Тгр-Л8р-ТЬг-Лг§-Туг (8ЕР ГО N0: 186), а указанный полипептид содержит С1Ж1, С1Ж2 и СОКЗ области, которые имеют аминокислотные последовательности, представленные в
8ЕР ГО N0: 21З, 221 и 186 соответственно; или
8ЕР ГО N0: 141, 162 и 186 соответственно; или
8ЕР ГО N0: 141, 164 и 186 соответственно; или
8ЕР ГО N0: 141, 166 и 186 соответственно; или
8ЕР ГО N0: 141, 167 и 186 соответственно; или
8ЕР ГО N0: 141, 168 и 186 соответственно; или
- З1З 028183 δΕΟ ΙΌ N0: 141, 170 и 186 соответственно; или δΕΟ ΙΌ N0: 141, 171 и 186 соответственно; или δΕΟ ΙΌ N0: 141, 174 и 186 соответственно; или δΕΟ ΙΌ N0: 143, 164 и 186 соответственно; или δΕΟ ΙΌ N0: 141, 214 и 186 соответственно; или δΕΟ ΙΌ N0: 141, 215 и 186 соответственно; или δΕΟ ΙΌ N0: 141, 216 и 186 соответственно; или δΕΟ ΙΌ N0: 141, 217 и 186 соответственно; или δΕΟ ΙΌ N0: 141, 218 и 186 соответственно; или δΕΟ ΙΌ N0: 141, 219 и 186 соответственно; или δΕΟ ΙΌ N0: 141, 220 и 186 соответственно; или δΕΟ ΙΌ N0: 213, 214 и 186 соответственно.
2. Полипептид по п.1, который включает СНЕЕ ΕΌΕ2 и ί'.'ΌΕ3. которые имеют аминокислотные последовательности, представленные в δΕΟ ΙΌ N0: 141, 164 и 186 соответственно, δΕΟ ΙΌ N0: 141, 162 и 186 соответственно, δΕΟ ΙΌ N0: 213, 214 и 186 соответственно или δΕΟ ΙΌ N0: 213, 221 и 186 соответственно.
3. Полипептид по одному из пп.1-2, в котором указанный анти-СХ3СЕ1 иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен представляет собой УНН-домен, который включает последовательность, представленную в:
а) аминокислотной последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 3;
б) аминокислотной последовательности, выбранной из любой последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 1, 35, 7, 9, 10, 12-14, 18-24, 29-34, 38-44, 121-140 или 222-224.
4. Полипептид по п.3, где указанный анти-СХ3СЕ1 иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен включает последовательность, представленную в δΕΟ ΙΌ N0: 1, δΕΟ ΙΌ N0: 3, δΕΟ ΙΌ N0: 121-140 или δΕΟ ΙΌ N0: 222-224.
5. Полипептид по любому из пп.1-4, где указанный анти-СХ3СЕ1 иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен представляет собой домен УН, УЬ, УНН, камелизированный УН или УНН, оптимизированный в отношении стабильности, эффективности, технологичности и/или сходства с человеческими каркасными участками.
6. Полипептид по п.1, который дополнительно включает удлиняющий время полураспада фрагмент, где указанный удлиняющий время полураспада фрагмент ковалентно связан с указанным полипептидом и выбран из группы, включающей альбуминсвязывающий фрагмент, такой как антиальбуминовый иммуноглобулиновый домен, трансферринсвязывающий фрагмент, такой как антитрансферриновый иммуноглобулиновый домен, молекулу полиэтиленгликоля, рекомбинантную молекулу полиэтиленгликоля, человеческий сывороточный альбумин, фрагмент человеческого сывороточного альбумина, альбуминсвязывающий пептид или Ре-домен.
7. Полипептид по п.6, в котором указанный удлиняющий время полураспада фрагмент состоит из антиальбуминового иммуноглобулинового единичного вариабельного домена.
8. Полипептид по п.7, в котором иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен выбран из УНН-домена, гуманизированного УНН-домена, камелизированного УН-домена, доменного антитела, однодоменного антитела и/или бЛЬ.
9. Полипептид по п.8, в котором антиальбуминовый иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен содержит последовательность, выбранную из любой из δΕΟ ΙΌ N0: 230-232.
10. Полипептид по п.1, который включает также второй иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен.
11. Полипептид по п.10, в котором указанный второй иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен содержит второй анти-СХ3СЕ1 иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен.
12. Полипептид по п.10, в котором указанные первый и второй иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены представляют собой домены УН, УЬ, УНН, камелизированные УН или УНН, оптимизированные в отношении стабильности, эффективности, технологичности и/или сходства с человеческими каркасными участками.
13. Полипептид по п.11, в котором указанный второй иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен включает СОЕ1, ί'.'ΌΕ2 и СОЕ3, аминокислотные последовательности которых представлены в δΕΟ ΙΌ N0: 213, 221 и 186 соответственно; или δΕΟ ΙΌ N0: 141, 162 и 186 соответственно; или δΕΟ ΙΌ N0: 141, 164 и 186 соответственно; или δΕΟ ΙΌ N0: 141, 166 и 186 соответственно; или δΕΟ ΙΌ N0: 141, 167 и 186 соответственно; или δΕΟ ΙΌ N0: 141, 168 и 186 соответственно; или δΕΟ ΙΌ N0: 141, 170 и 186 соответственно; или δΕΟ ΙΌ N0: 141, 171 и 186 соответственно; или
- 314 028183 δΕΟ ΙΌ N0: 141, 174 и 186 соответственно; или δΕΟ ΙΌ N0: 143, 164 и 186 соответственно; или δΕΟ ΙΌ N0: 141, 214 и 186 соответственно; или δΕΟ ΙΌ N0: 141, 215 и 186 соответственно; или δΕΟ ΙΌ N0: 141, 216 и 186 соответственно; или δΕΟ ΙΌ N0: 141, 217 и 186 соответственно; или δΕΟ ΙΌ N0: 141, 218 и 186 соответственно; или δΕΟ ΙΌ N0: 141, 219 и 186 соответственно; или δΕΟ ΙΌ N0: 141, 220 и 186 соответственно; или δΕΟ ΙΌ N0: 213, 214 и 186 соответственно.
14. Полипептид по п.13, в котором указанные первый и второй иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены содержат одинаковые СГОКЕ СГОК2 и СГОК3.
15. Полипептид по п.14, в котором указанные первый и второй иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены содержат νΗΗ-домен, который имеет аминокислотную последовательность, представленную в:
а) аминокислотной последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 3 или
б) аминокислотной последовательности, выбранной из любой последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 1, 35, 7, 9, 10, 12-14, 18-24, 29-34, 38-44, 121-140 или 222-224.
16. Полипептид по п.15, в котором указанные первый и второй иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены включают одинаковый νΗΗ-домен.
17. Полипептид, включающий первый иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен и второй иммноглобулиновый единичный вариабельный домен, каждый из которых содержит СГОКЕ СГОК2 и СГОК3. имеющие аминокислотные последовательности, представленные в δΕΟ ΙΌ N0: 141, 164 и 186 или δΕΟ ΙΌ N0: 141, 162 и 186, или δΕΟ ΙΌ N0: 213, 214 и 186, или δΕΟ ΙΌ N0: 213, 221 и 186.
18. Полипептид, включающий первый иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен и второй иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, в котором каждый первый и второй указанные иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены представляют собой νΗΗ-домен, каждый из которых включает последовательность, представленную в δΕΟ ΙΌ N0: 1, δΕΟ ΙΌ N0: 3 или в любой из δΕΟ ΙΌ N0: 121-140 или 222-224.
19. Полипептид по одному из пп.10-18, который дополнительно включает удлиняющий время полураспада фрагмент.
20. Полипептид по п.19, в котором указанный удлиняющий время полураспада фрагмент ковалентно связан с указанным полипептидом и выбран из группы, включающей альбуминсвязывающий фрагмент, такой как антиальбуминовый иммуноглобулиновый домен, трансферринсвязывающий фрагмент, такой как антитрансферриновый иммуноглобулиновый домен, молекулу полиэтиленгликоля, рекомбинантную молекулу полиэтиленгликоля, человеческий сывороточный альбумин, фрагмент человеческого сывороточного альбумина, альбуминсвязывающий пептид или Ре-домен.
21. Полипептид по п.20, в котором указанный удлиняющий время полураспада фрагмент состоит из антиальбуминового иммуноглобулинового единичного вариабельного домена.
22. Полипептид по п.21, в котором иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен выбран из νΗΗ-домена, гуманизированного νΗΗ-домена, камелизированного νΗ-домена, доменного антитела, однодоменного антитела и/или бЛЪ.
23. Полипептид по п.22, в котором антиальбуминовый иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен выбран из δΕΟ ΙΌ N0: 230-232.
24. Полипептид, включающий аминокислотную последовательность, выбранную из любой последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 225-227 или 257-262.
25. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид по одному из пп.1-24.
26. Вектор экспрессии, включающий молекулу нуклеиновой кислоты по п.25.
27. Клетка-хозяин, включающая молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид по одному из пп.1-24, где указанная клетка-хозяин обладает способностью экспрессировать указанный полипептид.
28. Фармацевтическая композиция для лечения ассоциированного с СХ3СК1 заболевания, нарушения или состояния, которая включает (Ι) полипептид по одному из пп.1-24 и (ΙΙ) фармацевтически приемлемый носитель, и необязательно (ΙΙΙ) разбавитель, наполнитель, адъювант и/или стабилизатор.
29. Фармацевтическая композиция по п.28, где указанная фармацевтическая композиция пригодна для внутривенной или подкожной инъекции человеку.
30. Способ получения полипептида по одному из пп.1-24, включающий стадии, на которых культивируют клетку-хозяина в условиях, обеспечивающих экспрессию полипептида по одному из пп.1-24, где указанная клетка-хозяин несет экспрессионный вектор, который включает молекулу нуклеиновой кислоты, где указанная молекула нуклеиновой кислоты содержит область, которая кодирует полипептид по одному из пп.1-24, а указанная клетка-хозяин представляет собой прокариотическую или эукариотическую клетку.
- 315 028183
31. Способ по п.30, который дополнительно включает следующие этапы: выделения указанного полипептида и очистки указанного полипептида.
32. Применение полипептида по одному из пп.1-24 для лечения, профилактики или облегчения заболевания, нарушения или состояния человека.
33. Применение полипептида по п.32, где указанное заболевание, нарушение или состояние выбрано из кардио или цереброваскулярных атеросклеротических нарушений, заболевания периферических артерий, рестеноза, диабетической нефропатии, гломерулонефрита, человеческого серповидного гломерулонефрита, 1дА-нефропатии, мембранозной нефропатии, волчаночного нефрита, васкулита, включая пурпуру Геноха-Шенлейна и гранулематоз Вегенера, ревматоидного артрита, остеоартрита, отторжения трансплантата, системного склероза, нейродегенеративных нарушений и демиелинизирующего заболевания, рассеянного склероза (РС), болезни Альцгеймера, легочных заболеваний, таких как ХОЗЛ, астма, нейропатической боли, связанной с воспалением боли или рака.
34. Применение полипептида по п.33, где указанное заболевание, нарушение или состояние представляет собой атеросклероз.
35. Применение полипептида по одному из пп.1-24 для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения, профилактики или облегчения заболевания, нарушения или состояния человека.
36. Диагностический набор, включающий полипептид по одному из пп.1-24.
37. Диагностический набор по п.36, предназначенный для диагностирования по меньшей мере одного из кардио или цереброваскулярных атеросклеротических нарушений, заболевания периферических артерий, рестеноза, диабетической нефропатии, гломерулонефрита, человеческого серповидного гломерулонефрита, 1дА-нефропатии, мембранозной нефропатии, волчаночного нефрита, васкулита, включая пурпуру Геноха-Шенлейна и гранулематоз Вегенера, ревматоидного артрита, остеоартрита, отторжения трансплантата, системного склероза, нейродегенеративных нарушений и демиелинизирующего заболевания, рассеянного склероза (РС), болезни Альцгеймера, легочных заболеваний, таких как ХОЗЛ, астма, нейропатической боли, связанной с воспалением боли или рака.
38. Полипептид, включающий аминокислотную последовательность ЗЕО ГО N0: 225.
39. Полипептид, включающий аминокислотную последовательность ЗЕО ГО N0: 226.
40. Полипептид, включающий аминокислотную последовательность ЗЕО ГО N0: 227.
41. Полипептид, включающий аминокислотную последовательность ЗЕО ГО N0: 258.
42. Полипептид, включающий аминокислотную последовательность ЗЕО ГО N0: 261.
43. Фармацевтическая композиция, включающая (I) полипептид по п.38 и (II) фармацевтически приемлемый носитель, и необязательно (III) разбавитель, наполнитель, адъювант и/или стабилизатор.
44. Фармацевтическая композиция, включающая (I) полипептид по п.39 и (II) фармацевтически приемлемый носитель, и необязательно (III) разбавитель, наполнитель, адъювант и/или стабилизатор.
45. Фармацевтическая композиция, включающая (I) полипептид по п.40 и (II) фармацевтически приемлемый носитель, и необязательно (III) разбавитель, наполнитель, адъювант и/или стабилизатор.
46. Фармацевтическая композиция, включающая (I) полипептид по п.41 и (II) фармацевтически приемлемый носитель, и необязательно (III) разбавитель, наполнитель, адъювант и/или стабилизатор.
47. Фармацевтическая композиция, включающая (I) полипептид по п.42 и (II) фармацевтически приемлемый носитель, и необязательно (III) разбавитель, наполнитель, адъювант и/или стабилизатор.
EA201400964A 2012-02-27 2013-02-25 Cx3cr1-связывающие полипептиды EA028183B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261603622P 2012-02-27 2012-02-27
PCT/US2013/027580 WO2013130381A1 (en) 2012-02-27 2013-02-25 Cx3cr1-binding polypeptides

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201400964A1 EA201400964A1 (ru) 2015-02-27
EA028183B1 true EA028183B1 (ru) 2017-10-31

Family

ID=47884535

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201400964A EA028183B1 (ru) 2012-02-27 2013-02-25 Cx3cr1-связывающие полипептиды

Country Status (27)

Country Link
US (6) US9035029B2 (ru)
EP (2) EP2820046B1 (ru)
JP (1) JP6101715B2 (ru)
KR (1) KR102008136B1 (ru)
CN (3) CN115925938A (ru)
AP (1) AP2014007791A0 (ru)
AR (1) AR090158A1 (ru)
AU (1) AU2013226340B2 (ru)
CA (1) CA2862182A1 (ru)
CL (1) CL2014002072A1 (ru)
EA (1) EA028183B1 (ru)
EC (1) ECSP14020402A (ru)
GE (1) GEP201706773B (ru)
HK (1) HK1205154A1 (ru)
IL (3) IL311502A (ru)
IN (1) IN2014DN05756A (ru)
MD (1) MD4548C1 (ru)
MX (1) MX349192B (ru)
NZ (1) NZ627260A (ru)
PE (1) PE20141859A1 (ru)
PH (1) PH12014501912A1 (ru)
SG (1) SG11201405283SA (ru)
TN (1) TN2014000360A1 (ru)
TW (1) TWI598361B (ru)
UA (1) UA115781C2 (ru)
UY (1) UY34644A (ru)
WO (1) WO2013130381A1 (ru)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9556273B2 (en) 2010-03-29 2017-01-31 Vib Vzw Anti-macrophage mannose receptor single variable domains for targeting and in vivo imaging of tumor-associated macrophages
US9101674B2 (en) 2010-03-29 2015-08-11 Vib Vzw Targeting and in vivo imaging of tumor-associated macrophages
CN115925938A (zh) 2012-02-27 2023-04-07 阿布林克斯有限公司 Cx3cr1结合多肽
US9637542B2 (en) * 2013-08-21 2017-05-02 Boehringer Ingelheim International Gmbh CX3CR1-targeting imaging agents and their use in the diagnosis and treatment of disease
RU2609627C2 (ru) * 2014-09-26 2017-02-02 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" Высокоаффинные и агрегационно стабильные антитела на основе вариабельных доменов vl и производного vhh
BR112018001161A2 (pt) * 2015-07-23 2018-09-18 Inhibrx Lp proteínas de fusão de ligação a gitr multiespecíficas e multivalentes
EP3402507A4 (en) * 2016-01-11 2019-08-07 Inhibrx, Inc. MULTIVALENT AND MULTISPECIFIC OX40-BINDING FUSION PROTEINS
SG11201807548SA (en) * 2016-03-08 2018-09-27 Maverick Therapeutics Inc Inducible binding proteins and methods of use
US20200071408A1 (en) * 2016-11-29 2020-03-05 National Center Of Neurology And Psychiatry Prophylactic agent, onset-suppressing agent or therapeutic agent for progressive immune demyelinating diseases
US20190367623A1 (en) * 2017-01-17 2019-12-05 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of treating neurodegenerative diseases by inducing disease-associated microglia (dam) cells
IL273119B2 (en) 2017-09-08 2023-10-01 Maverick Therapeutics Inc Binding proteins are activated under limited conditions
BR112021002164A2 (pt) 2018-08-13 2021-08-03 Inhibrx, Inc. polipeptídeos de ligação a ox40 e usos dos mesmos
CN114390938A (zh) 2019-03-05 2022-04-22 武田药品工业有限公司 受约束的条件性活化的结合蛋白
CN110675421B (zh) * 2019-08-30 2022-03-15 电子科技大学 基于少量标注框的深度图像协同分割方法
WO2022165434A2 (en) * 2021-02-01 2022-08-04 The General Hospital Corporation Fc-enhanced antibodies for prevention and treatment of ebola virus infection
US20240117038A1 (en) 2022-07-18 2024-04-11 Ablynx N.V. Cx3cr1-binding compounds, methods and uses thereof

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001060406A1 (en) * 2000-02-18 2001-08-23 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic methods that target fractalkine or cx3cr1
US20020192212A1 (en) * 2001-03-19 2002-12-19 Toshio Imai Uses of anti-CX3CR1 antibody, anti-fractalkine antibody and fractalkine
WO2012078633A2 (en) * 2010-12-07 2012-06-14 Philadelphia Health And Education Corporation, D/B/A Drexel University College Of Medicene Methods of inhibiting metastasis from cancer

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT1498427E (pt) 1992-08-21 2010-03-22 Univ Bruxelles Imunoglobulinas desprovidas de cadeias leves
EP0739981A1 (en) 1995-04-25 1996-10-30 Vrije Universiteit Brussel Variable fragments of immunoglobulins - use for therapeutic or veterinary purposes
US6329516B1 (en) 1997-04-28 2001-12-11 Fmc Corporation Lepidopteran GABA-gated chloride channels
US20040010134A1 (en) 2000-04-12 2004-01-15 Rosen Craig A. Albumin fusion proteins
ATE477280T1 (de) 2001-06-28 2010-08-15 Domantis Ltd Doppelspezifischer ligand und dessen verwendung
JP4123856B2 (ja) 2001-07-31 2008-07-23 日油株式会社 生体関連物質の修飾剤およびポリオキシアルキレン誘導体の製造方法
US20050069962A1 (en) 2001-10-12 2005-03-31 Archer Robert M Antibody complexes and methods for immunolabeling
WO2003059934A2 (en) 2001-12-21 2003-07-24 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
JP2005528921A (ja) 2002-06-10 2005-09-29 メタボレックス インコーポレーティッド Ｃｘ３ｃｒ１修飾物質を用いる糖尿病の治療および診断の方法
AU2003286002B2 (en) 2002-11-08 2011-06-16 Ablynx N.V. Single domain antibodies directed against tumour necrosis factor-alpha and uses therefor
DE60329627D1 (de) 2002-12-31 2009-11-19 Nektar Therapeutics Al Corp Hydrolysestabile maleimidendgruppen-enthaltende polymere
ATE414106T1 (de) 2003-06-30 2008-11-15 Domantis Ltd Pegylierte single-domain-antikörper (dab)
WO2005103684A2 (en) 2004-04-20 2005-11-03 Bayer Healthcare Ag Diagnostics and therapeutics for diseases associated with cx3c chemokine receptor 1 (cx3cr1)
WO2006040153A2 (en) 2004-10-13 2006-04-20 Ablynx N.V. Single domain camelide anti -amyloid beta antibodies and polypeptides comprising the same for the treatment and diagnosis of degenarative neural diseases such as alzheimer's disease
WO2006046739A1 (ja) 2004-10-29 2006-05-04 Eisai R & D Management Co., Ltd. 炎症性疾患治療剤
MX363423B (es) 2005-05-18 2019-03-22 Ablynx Nv Nanobodiestm (nanocuerpos) mejorados contra el factor alfa de necrosis del tumor.
AU2006278260B2 (en) 2005-08-08 2012-03-08 Onconon, Llc. Antibody compositions, methods for treating neoplastic disease and methods for regulating fertility
EP2500352A1 (en) * 2005-08-19 2012-09-19 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
CA2666599A1 (en) 2006-08-18 2008-02-21 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against il-6r and polypeptides comprising the same for the treatment of diseases and disorders associated with il-6-mediated signalling
WO2008028977A2 (en) * 2006-09-08 2008-03-13 Ablynx N.V. Serum albumin binding proteins with long half-lives
US20080267949A1 (en) 2006-12-05 2008-10-30 Ablynx N.V. Peptides capable of binding to serum proteins
JP2011525476A (ja) 2008-03-05 2011-09-22 アブリンクス エン．ヴェー． 新規の抗原結合二量体複合体、その製造方法及び使用
CA2721202A1 (en) 2008-04-17 2009-10-22 Hilde Adi Pierrette Revets Peptides capable of binding to serum proteins and compounds, constructs and polypeptides comprising the same
SI2285408T1 (sl) 2008-06-05 2019-02-28 Ablynx N.V. Aminokislinska zaporedja usmerjena proti proteinom ovojnicam virusa in polipeptidi, ki zaporedja vsebujejo za zdravljenje virusnih bolezni
WO2010070394A1 (en) 2008-12-17 2010-06-24 Universite Pierre Et Marie Curie-Paris Vi Modulators of the cx3cr1 receptor and therapeutic uses thereof
US20110085969A1 (en) 2009-10-09 2011-04-14 Rollo F David Chelator-targeting ligand conjugates for cardiovascular imaging
WO2011042398A1 (en) * 2009-10-09 2011-04-14 Ablynx Nv Immunoglobulin single variable domain directed against human cxcr4 and other cell associated proteins and methods to generate them
CN115925938A (zh) 2012-02-27 2023-04-07 阿布林克斯有限公司 Cx3cr1结合多肽
US9637542B2 (en) 2013-08-21 2017-05-02 Boehringer Ingelheim International Gmbh CX3CR1-targeting imaging agents and their use in the diagnosis and treatment of disease

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001060406A1 (en) * 2000-02-18 2001-08-23 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic methods that target fractalkine or cx3cr1
US20020192212A1 (en) * 2001-03-19 2002-12-19 Toshio Imai Uses of anti-CX3CR1 antibody, anti-fractalkine antibody and fractalkine
WO2012078633A2 (en) * 2010-12-07 2012-06-14 Philadelphia Health And Education Corporation, D/B/A Drexel University College Of Medicene Methods of inhibiting metastasis from cancer

Non-Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
D.-J. OH, DURSUN B., HE Z., LU L., HOKE T. S., LJUBANOVIC D., FAUBEL S., EDELSTEIN C. L.: "Fractalkine receptor (CX3CR1) inhibition is protective against ischemic acute renal failure in mice", AJP: RENAL PHYSIOLOGY, AMERICAN PHYSIOLOGICAL SOCIETY, vol. 294, no. 1, pages F264 - F271, XP055065138, ISSN: 03636127, DOI: 10.1152/ajprenal.00204.2007 *
D'HAESE JAN G; DEMIR IHSAN EKIN; FRIESS HELMUT; CEYHAN GÜRALP O: "Fractalkine/CX3CR1: why a single chemokine-receptor duo bears a major and unique therapeutic potential.", EXPERT OPINION ON THERAPEUTIC TARGETS, INFORMA HEALTHCARE, GB, vol. 14, no. 2, 1 February 2010 (2010-02-01), GB, pages 207 - 219, XP009170047, ISSN: 1744-7631, DOI: 10.1517/14728220903540265 *
FENG L, ET AL.: "PREVENTION OF CRESCENTIC GLOMERULONEPHRITIS BY IMMUNONEUTRALIZATIONOF THE FRACTALKINE RECEPTOR CX3CR1 RAPID COMMUNICATION", KIDNEY INTERNATIONAL, NATURE PUBLISHING GROUP, LONDON, GB, vol. 56, no. 02, 1 August 1999 (1999-08-01), LONDON, GB, pages 612 - 620, XP000978830, ISSN: 0085-2538, DOI: 10.1046/j.1523-1755.1999.00604.x *
J. K. HARRISON, FONG, SWAIN, CHEN, YU, SALAFRANCA, GREENLEAF, IMAI, PATEL: "Mutational Analysis of the Fractalkine Chemokine Domain. BASIC AMINO ACID RESIDUES DIFFERENTIALLY CONTRIBUTE TO CX3CR1 BINDING, SIGNALING, AND CELL ADHESION", JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, AMERICAN SOCIETY FOR BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY, vol. 276, no. 24, 8 June 2001 (2001-06-08), pages 21632 - 21641, XP055065074, ISSN: 00219258, DOI: 10.1074/jbc.M010261200 *
JANUSZ WESOLOWSKI ; VANINA ALZOGARAY ; JAN REYELT ; MANDY UNGER ; KARLA JUAREZ ; MARIELA URRUTIA ; ANA CAUERHFF ; WELBECK DANQUAH : "Single domain antibodies: promising experimental and therapeutic tools in infection and immunity", MEDICAL MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY ;, SPRINGER, BERLIN, DE, vol. 198, no. 3, 16 June 2009 (2009-06-16), Berlin, DE, pages 157 - 174, XP019740594, ISSN: 1432-1831, DOI: 10.1007/s00430-009-0116-7 *
JIMMY JIANHENG ZHOU, YUAN MIN WANG1*, VINCENT W S LEE2, RICHARD K S PHOON2, GEOFF YU ZHANG1, YA WANG2, THIAN KUI TAN2, MIN HU1, LU: "DEC205-DC targeted DNA vaccines to CX3CR1 and CCL2 are potent and limit macrophage migration", INT J CLIN EXP MED, vol. 5, no. 1, 31 January 2012 (2012-01-31), pages 24 - 33, XP055065154 *
MUYLDERMANS S: "SINGLE DOMAIN CAMEL ANTIBODIES: CURRENT STATUS", JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 74, no. 04, 1 January 2001 (2001-01-01), AMSTERDAM, NL, pages 277 - 302, XP008019929, ISSN: 0168-1656 *
WONG B W C, WONG D, MCMANUS B M: "CHARACTERIZATION OF FRACTALKINE (CX3CL1) AND CX3CR1 IN HUMAN CORONARY ARTERIES WITH NATIVE ATHEROSCLEROSIS, DIABETES, MELLITUS, AND TRANSPLANT VASCULAR DISEASE", CARDIOVASCULAR PATHOLOGY, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 11, no. 06, 1 November 2002 (2002-11-01), AMSTERDAM, NL, pages 332 - 338, XP009055403, ISSN: 1054-8807, DOI: 10.1016/S1054-8807(02)00111-4 *
XIAOJUN ZHANG, WEI HAIMING; WANG HUI; TIAN ZHIGANG: "Involvement of interaction between Fractalkine and CX3CR1 in cytotoxicity of natural killer cells against tumor cells", ONCOLOGY REPORTS, vol. 15, 1 February 2006 (2006-02-01), pages 485 - 488, XP055065141 *

Also Published As

Publication number Publication date
EP2820046A1 (en) 2015-01-07
US9458235B2 (en) 2016-10-04
US20180030141A1 (en) 2018-02-01
BR112014021080A2 (pt) 2017-07-04
US20240026013A2 (en) 2024-01-25
CN104245735B (zh) 2018-02-23
CN108610421B (zh) 2022-08-19
EA201400964A1 (ru) 2015-02-27
US11384151B2 (en) 2022-07-12
TN2014000360A1 (en) 2015-12-21
ECSP14020402A (es) 2015-11-30
AU2013226340A1 (en) 2014-07-31
UA115781C2 (uk) 2017-12-26
US9035029B2 (en) 2015-05-19
GEP201706773B (en) 2017-11-27
MX2014009864A (es) 2014-10-24
PE20141859A1 (es) 2014-12-17
IL234018B2 (en) 2023-05-01
MD4548B1 (ru) 2018-01-31
US20230046772A1 (en) 2023-02-16
TW201348256A (zh) 2013-12-01
AP2014007791A0 (en) 2014-07-31
US20130224224A1 (en) 2013-08-29
IL234018A0 (en) 2014-09-30
AR090158A1 (es) 2014-10-22
WO2013130381A1 (en) 2013-09-06
CA2862182A1 (en) 2013-09-06
CN115925938A (zh) 2023-04-07
MD20140104A2 (ru) 2015-02-28
US9783612B2 (en) 2017-10-10
US20160355595A1 (en) 2016-12-08
EP2820046B1 (en) 2022-06-15
CL2014002072A1 (es) 2015-01-23
UY34644A (es) 2013-09-02
US20150239971A1 (en) 2015-08-27
AU2013226340B2 (en) 2017-06-22
IL291571A (en) 2022-05-01
US10385134B2 (en) 2019-08-20
CN104245735A (zh) 2014-12-24
JP6101715B2 (ja) 2017-03-22
EP4050027A3 (en) 2022-11-30
IN2014DN05756A (ru) 2015-04-10
SG11201405283SA (en) 2014-10-30
HK1205154A1 (en) 2015-12-11
CN108610421A (zh) 2018-10-02
US20190322753A1 (en) 2019-10-24
MX349192B (es) 2017-07-18
KR20140130685A (ko) 2014-11-11
IL234018B1 (en) 2023-01-01
MD4548C1 (ru) 2018-08-31
IL311502A (en) 2024-05-01
JP2015509368A (ja) 2015-03-30
PH12014501912A1 (en) 2014-11-24
NZ627260A (en) 2015-10-30
TWI598361B (zh) 2017-09-11
EP4050027A2 (en) 2022-08-31
IL291571B1 (en) 2024-04-01
KR102008136B1 (ko) 2019-08-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA028183B1 (ru) Cx3cr1-связывающие полипептиды
JP2020018298A (ja) Ｃｌｄｎ１８．２及びｃｄ３に対する抗体コンストラクト
EP2853543B1 (en) Anti-blys antibody
EA022796B1 (ru) Антитело, способное связывать тимусный стромальный лимфопоэтин, нуклеиновая кислота, его кодирующая, экспрессирующий вектор, клетка-хозяин, гибридома, способ получения антитела и его применение
EA009746B1 (ru) ВАРИАНТЫ УЧАСТКА Fc
EA018073B1 (ru) Антитела к il-25
US11780916B2 (en) GIPR antibody and GLP-1 fusion protein thereof, and pharmaceutical composition and application thereof
CN114641495A (zh) Gipr抗体及其与glp-1的融合蛋白质，以及其药物组合物和应用
JP2017513854A (ja) Ｗｉｓｐ１に結合する抗原結合タンパク質
US20210388049A1 (en) Novel Rationally Designed Protein Compositions
US10995142B2 (en) Monoclonal antibody FnAb8 and application thereof
WO2013103783A1 (en) Murine il-13 antibodies
WO2022022709A1 (zh) 一种SIRPα-Fc融合蛋白
US20210163614A1 (en) Apj antibody, fusion protein thereof with elabela, and pharmaceutical compositions and use thereof
US20140302024A1 (en) Serum amyloid p-antibody fusion proteins
CN106957364B (zh) 一种单克隆抗体FnAb12及其应用
CN116874599A (zh) 靶向人dll3的嵌合抗原受体t细胞及其应用
BR122021000901B1 (pt) Polipeptídeo, seu método de fabricação, célula hospedeira bacteriana, de levedura ou fúngica, composição farmacêutica, kit de diagnóstico, e método de diagnóstico
BR122021000924B1 (pt) Polipeptídeo, seu método de fabricação, célula hospedeira bacteriana, de levedura ou fúngica, composição farmacêutica, kit de diagnóstico, e método de diagnóstico
BR112014021080B1 (pt) Polipeptídeo, seu método de fabricação, célula hospedeira bacteriana, de levedura ou fúngica, composição farmacêutica, kit de diagnóstico, e método de diagnóstico

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ KG TJ TM

PC4A Registration of transfer of a eurasian patent by assignment
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): BY KZ