EA027628B1 - Производные пирролотриазинона - Google Patents

Abstract

Соединения формулы Iв которой X, Rи Y имеют значения, указанные в п.1, являются ингибиторами танкиразы и PARP-1 и могут применяться, среди прочего, для лечения заболеваний, таких как злокачественное новообразование, сердечно-сосудистые заболевания, поражения центральной нервной системы и различные формы воспаления.

Description

Задачей изобретения является обнаружение новых соединений, которые обладают ценными свойствами, в частности таких, которые можно применять для получения лекарственных средств.

Настоящее изобретение относится к бициклическим пиразиноновым производным, которые ингибируют активность танкираз (ΤΑΝΚ) и поли(АЭР-рибоза)полимеразы РАКР-1. Таким образом, соединения согласно настоящему изобретению пригодны для лечения заболеваний, таких как злокачественное новообразование, рассеянный склероз, сердечно-сосудистые заболевания, поражения центральной нервной системы и различные формы воспаления. Настоящее изобретение также обеспечивает способы получения этих соединений, фармацевтические композиции, которые содержат эти соединения, и способы лечения заболеваний с использованием фармацевтических композиций, которые содержат эти соединения.

Ядерный фермент поли(АЭР-рибоза) полимераза-1 (РАКР-1) является представителем семейства ферментов РАКР. Это семейство ферментов роста включает РАКР, такие как, например: РАКР-1, РАКР2, РАКР-3 и УаиИ-РАКР; и танкиразы (ΤΑNΚ), такие как, например: ΤΑNΚ-1 и ΤΑNΚ-2. РАКР также обозначается как поли(аденозин5'-дифосфорибоза) полимераза или РАК8 (поли(АОР-рибоза)синтетаза).

Полагают, что ΤΑNΚ-1 необходима для полимеризаций связанной с митотическим веретеном поли(АЭР-рибозы). Поли(АЭР-рибозил)ирующая активность ΤΑNΚ-1 должна быть решающей для точного образования и поддержания биполярности веретена. Кроме того, полагают, что РАКР активность ТАЫК1 необходима для нормального разделения теломер перед анафазой. Интерференция с танкиразной РАКР активностью приводит к аберрантному митозу, который вызывает временную остановку клеточного цикла, возможно, вследствие активации контрольной точки веретена, с последующей клеточной гибелью. Таким образом, полагают, что ингибирование танкираз имеет цитотоксическое действие на пролиферирующие опухолевые клетки (УО 2008/107478).

Ингибиторы РАКР описаны М. Кои1еаи и др. в №йигс Кс\зс\У5. том 10, 293-301 в клинических исследованиях злокачественных новообразований (табл. 2, с. 298).

В соответствии с обзором НогуаФ и 8/аЬо (Игид №\\ъ Рсгкрсс! 20(3), Арп1 2007, 171-181) в самых последних исследованиях было показано, что РАКР ингибиторы усиливают гибель раковых клеток главным образом в связи с их препятствованием репарации ДНК на различных уровнях. В самых последних исследованиях также было показано, что РАКР ингибиторы ингибируют ангиогенез, либо путем ингибирования экспрессии фактора роста, либо путем ингибирования индуцированных фактором роста клеточных пролиферативных ответов. Эти данные также могут оказывать влияния на характер противораковых эффектов РАКР ингибиторов ίη-νίνο.

Также в исследовании ТсШоп и др. (Еиг. 1. Сапссг, 2007, 43 (14) 2124-2133) было показано, что РАКР ингибиторы аннулируют индуцированную УЕОР или плацентным фактором роста миграцию и предотвращают образование трубочкообразных сетей в клеточных системах, и повреждают ангиогенез ίη-νίνο.

В исследовании также показано, что индуцированный фактором роста ангиогенез является дефектным у РАКР-1 кпоск-оШ мышей. Результаты исследования обеспечивают подтверждение для нацеливания РАКР на анти-ангиогенез, добавляя новые терапевтические показания к применению РАКР ингибиторов при лечении злокачественного новообразования.

Хорошо известно, дефекты в консервативных путях передачи сигналов играют ключевую роль в происхождении и поведении по существу всех злокачественных новообразований (Е.А.Рсагоп, Сапссг Сс11, том 16, изд. 5, 2009, 366-368). Уп! путь является мишенью для противораковой терапии. Ключевой особенностью Уп! пути является регулированный протеолиз (деградация) β-катенина с помощью комплекса, разрушающего β-катенин. Белки, такие как УТХ, АРС или Ах1п, задействованы в процесс разложения. Правильное разложение β-катенина является важным для избегания несоответствующей активации Уп! пути, которая наблюдается при многих злокачественных новообразованиях. Танкиразы ингибируют активность Ахш и, следовательно, ингибируют разложение β-катенина. В результате этого, ингибиторы танкиразы повышают разложение β-катенина. В недавнем издании журнала №1игс были предложены не только важные новые сведения относительно белков, регулирующих Уп! передачу сигналов, но и дополнительно подтвержден подход антагонизации уровней β-катенина и локализации с помощью небольших молекул (Ниапд и др., 2009; №Ш.1гс, том 461, 614-620). Соединение ХАУ939 ингибирует рост ΌΕΌ-1-раковых клеток. Авторы обнаружили, что ХАУ9393 блокирует Уп!-стимулированное накопление β-катенина путем повышения уровней белков АХШ1 и АХШ2. В последующей работе авторами было показано, что ХАУ939 регулирует уровни АХШ посредством ингибирования танкираз 1 и 2 (ΤΝΚ81 и ΤΝΚ82), которые обе являются членами семейства белков поли(АЭР-рибоза) полимеразы (РАКР) (8.1. Н81ао и др., ВюсЫшю 90, 2008, 83-92).

Было обнаружено, что соединения в соответствии с изобретением и их соли обладают чрезвычайно ценными фармакологическими свойствами, а также хорошей переносимостью.

Настоящее изобретение, в особенности, относится к соединениям формулы I, которые ингибируют танкиразу 1 и 2, к композициям, которые содержат эти соединения, и к способам их применения для ле- 1 027628 чения заболеваний и осложнений, индуцированных ΤΑΝΚ.

Кроме того, соединения формулы I могут использоваться для выделения и исследования активности или экспрессии ΤΑΝΚ. Дополнительно, они особенно пригодны для применения в методах диагностики заболеваний, связанных с нерегулированной или нарушенной активностью ΤΑΝΚ.

Хозяин или пациент может принадлежать к любому из видов млекопитающих, например, к видам приматов, в частности, к людям; грызунам, включая мышей, крыс и хомяков; кроликам, лошадям, коровам, собакам, кошкам и т.д. Животные модели представляют интерес для экспериментальных исследований, обеспечивая модель для болезней человека.

Чувствительность определенной клетки к лечению с помощью соединений в соответствии с данным изобретением может определяться с помощью анализов ίη-νίίτο. Типично, к культуре клеток прибавляют соединение в соответствии с данным изобретением при различных концентрациях в течение периода времени, который является достаточным для того, чтобы позволить активным агентам, таким, как анти 1дМ, индуцировать клеточный ответ, такой как экспрессия поверхностного маркера, обычно от одного часа до одной недели. Ιη-νίΐτο анализ может осуществляться при использовании культивируемых клеток, полученных из крови или из образца биопсии. Количество экспрессированного поверхностного маркера оценивают с помощью проточной цитометрии при использовании специфических антител, которые узнают маркер.

Доза варьирует в зависимости от используемого специфического соединения, специфического заболевания, состояния пациента, и т.д. Терапевтическая доза типично является достаточной для того, чтобы значительно уменьшить численность нежелательной клеточной популяции в целевой ткани при поддержании жизнеспособности пациента. Лечение в общем случае продолжается до возникновения значительного снижения, например, снижения, которое составляет, по крайней мере, 50% клеточной нагрузки, и может продолжаться до отсутствия существенного обнаружения нежелательных клеток в организме.

Известный уровень техники

Другие производные пирролотриазина описаны в качестве промежуточных соединений в АО 2004/087056 и в АО 2008/092861.

Краткое изложение сущности изобретения Изобретение относится к соединениям формулы I

в которой

X означает N или СК¹,

К¹ означает Н, Р, С1, СН₃, СН₂ОН, СН₂С1, СН₂Вг, СР₃, СНР₂ или СН₂Р, К² означает Н или А,

Υ означает Аг¹, Не!¹ или Сус,

Аг¹ означает фенил или нафтил, который незамещен или моно-, ди- или тризамещен посредством

На1, А, [С(К²)₂]_рОК², [С(К²)2]рЖК²>2,

ΝΚ СОА. ΝΚ8О₂А, [С(К²Ь]р8О2ЖК²)2, [С(К²)2]рНе!²

NΟ^, ΟΝ, [С(К²)2]рСООК² [С(К²)2]рСОЖК²)2,

МНСООА, МНСО^К²)₂, СНО и/или СОА,

8(О)пА, СОНе!³, ()|(ίΚί;|..ΝίΙ%, О[С<К²)2]_РА1², О|С(К)ЛНе!

Аг² означает фенил, который незамещен или моно- или дизамещен посредством На1, А, [С(К²)2]рОК², [С(К²Ь]рЖК²)2, [С(К²)2]рНе!³, ΝΘ2, ΟΝ, [С(К²Ь]рСООК, [С(К²Ь]рЖК²)2, ВДК²)2СОА, \К8ОА. [С(К²)2]р8О2ЖК²)2, 8(О)пА, СОНе!³, ОКТНУЮ·, О[С(К²)2]рНе!³, ΝΙ1СООА N 1СО\(К),

СНО и/или СОА,

Не!¹ означает пирролидинил, азетидинил, тетрагидроимидазолил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиразолил, тетрагидропиранил, пиперидинил, морфолинил, гексагидропиридазинил, гексагидропиримидинил, [1,3]диоксоланил, пиперазинил, фурил, тиенил, пирролил, имидазолил, пиразолил, оксазолил, изоксазолил, оксадиазолил, тиазолил, триазолил, тетразолил, пиридил, пиримидил, пиридазинил, индолил, изоиндолил, бензимидазолил, индазолил, хинолил, 1,3-бензодиоксолил, бензотиофенил, бензофуранил, имидазопиридил или фуро[3,2-Ь]пиридил, каждый из которых незамещен или моно- или дизамещен посредством На1, А, [С(К²)2]рОК², [С(К²)2]^(К²)2, [С(К²)2]_рНе!², [С(К²)2]рАг², \О;. ϋΝ, [С(К²)2]рСООК², [С(К²)2]_рСО^К²)2, МКСОА МК8ОА. [С(К²)2]_р8О^(К²)2, 8(О)пА, СОНе!³, О[С(К²)2]^(К²)₂,

О[С(К²)2]рАг², О[С(К²)2]_рНе!², ΝΙ1СООА ΝΙ 1СО\(К), СНО, СОА, =8, =ΝΚ и/или =О,

Сус означает циклический алкил, содержащий 3, 4, 5, 6 или 7 атомов С, который может быть незамещен или монозамещен посредством А, На1, СN или Аг² или Не!²,

Не!² означает пирролидинил, азетидинил, тетрагидроимидазолил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиразолил, тетрагидропиранил, пиперидинил, морфолинил, гексагидропиридазинил, гексагидропиримидинил, [1,3]диоксоланил, пиперазинил, фурил, тиенил, пирролил, имидазолил, пиразолил, оксазолил, изоксазолил, оксадиазолил, тиазолил, триазолил, тетразолил, пиридил, пиримидил, пиридазинил, индолил, изоиндолил, бензимидазолил, индазолил, хинолил, 1,3-бензодиоксолил, бензотиофенил, бензофура- 2 027628 нил, имидазопиридил или фуро[3,2-Ь]пиридил, каждый из которых незамещен или моно- или дизамещен посредством На1, А.

|С(К)ДСООК [С(К²)ДрОК² [С(К²)2]рСОМ(К²)2, [С(К²)2]рМ(К²)2, [С(К²)2]рНе1³,

ХН'СОА. ЫК²8О₂А, [С(К²)ДрОНе!³ [С(К²)2]р8О2М(К²)2, [С(К²)2]рАг², N0, СЫ, 8(О)_ПА, СОНе!³,

О[С(К²)2]тЫ(К²)2, О[С(К²)2]рАг², О[С(К²)2]_рНе!³, ЫНСООА, ЫНСОЫ(К)2, СНО, СОА, =8, =ΝΚ и/или =О, Не!³ означает дигидропирролил, пирролидинил, азетидинил, оксетанил, тетрагидроимидазолил, дигидропиразолил, тетрагидропиразолил, тетрагидрофуранил, дигидропиридил, тетрагидропиридил, пиперидинил, морфолинил, гексагидропиридазинил, гексагидропиримидинил, [1,3]диоксоланил, тетрагидропиранил или пиперазинил, каждый из которых незамещен или моно- или дизамещен посредством На1, СЫ, ОК², СООК², СОЫ(К), 8(О)ПА, 8(О)_пАг, СОА, А и/или =О,

А означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий 1-10 атомов С, где одна или две СН- и/или СН₂-группы, не расположенные рядом, могут быть заменены на атомы Ν, О и/или 8 и где 1-7 атомов Н могут быть заменены на Р или С1,

На1 означает Р, С1, Вг или I, п означает 0, 1 или 2, т означает 1, 2 или 3, р означает 0, 1, 2, 3 или 4, при условии, что, если К¹ отсутствует, то Υ не означает 4-фторфенил, 3-бромфенил или 5-хлор-2фторфенил, и их фармацевтически применимым сольватам, солям, таутомерам и стереоизомерам, включая их смеси во всех соотношениях.

Изобретение также относится к оптически активным формам (стереоизомерам), энантиомерам, рацематам, диастереомерам и гидратам и сольватам этих соединений.

Изобретение относится к соединениям формулы I и их таутомерам формулы 1а

в которой X, К¹ и Υ имеют значения, указанные для соединений формулы I.

Кроме того, изобретение относится к фармацевтически приемлемым производным соединений формулы I.

Термин сольваты соединений обозначает аддукты молекул инертного растворителя на соединениях, которые образуются благодаря их силе взаимного притяжения. Сольваты представляют собой, например, моно- или дигидраты или алкоголяты.

Подразумевается, что изобретение также относится к сольватам солей.

Термин фармацевтически приемлемые производные обозначает, например, соли соединений в соответствии с изобретением, а также так называемые пролекарства соединений.

Как используется в настоящей заявке и если специально не указано иначе, термин пролекарство обозначает производное соединения формулы I, которое может быть гидролизовано, окислено или подругому реагировать в биологических условиях (ίη-νίΐΓΟ или ίη-νίνο) с обеспечением активного соединения, в частности соединения формулы I. Примеры пролекарств включают, но не ограничиваются только ими, производные и метаболиты соединения формулы I, которые включают биогидролизируемые компоненты, такие как биогидролизируемые амиды, биогидролизируемые сложные эфиры, биогидролизируемые карбаматы, биогидролизируемые карбонаты, биогидролизируемые уреиды и биогидролизируемые аналоги фосфата. В определенных вариантах осуществления, пролекарства соединений с карбоксильными функциональными группами представляют собой низшие алкиловые сложные эфиры карбоновой кислоты. Карбоксилатные сложные эфиры легко образуются путем эстерификации любых фрагментов карбоновой кислоты, присутствующих в молекуле. Пролекарства типично можно приготавливать, используя хорошо известные методы, такие как методы, описанные в Вигдег '5 Мей1С1па1 СЬет15!гу апй Игид 01$соуегу 6-ое изд. (Иопа1й 1. АЬгайат ред., 2001, \УПеу) и Ие51дп апй АррЬсайоп о£ Ргойгидк (Н.Випйдаагй ред., 1985, Натооой Асайетю РиЬНкЬеге Ст!Ь).

Выражение эффективное количество обозначает количество лекарственного средства или фармацевтического активного компонента, которое вызывает в ткани, системе, животном или человеке биологическую или медицинскую ответную реакцию, которую предполагает или желает получить, например, исследователь или лечащий врач.

Дополнительно, выражение терапевтически эффективное количество обозначает то количество, которое имеет следующие последствия по сравнению с соответствующим субъектом, который не получал этого количества:

улучшение лечения, излечение, предотвращение или элиминация заболевания, синдрома, состояния, жалобы, расстройства или побочных действий, или также уменьшение прогрессирования заболевания, жалобы или расстройства.

Термин терапевтически эффективное количество также охватывает количества, которые эффек- 3 027628 тивны для повышения нормальной физиологической функции.

Изобретение также относится к применению смесей соединений формулы I, например, смесей двух диастереомеров, например, в соотношении 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:10, 1:100 или 1:1000.

Особенно предпочтительными являются смеси стереоизомерных соединений.

Таутомеры относятся к изомерным формам соединения, которые находятся в равновесии друг с другом. Концентрации изомерных форм будут зависеть от окружения, в котором находится соединение, и могут отличаться в зависимости от того, например, будет ли соединение представлять собой твердое вещество или находится в органическом или водном растворе.

Изобретение относится к соединениям формулы I и их солям и к способу получения соединений формулы I и их фармацевтически применимых солей, сольватов, таутомеров и стереоизомеров, который отличается тем, что

а) соединение формулы II

в которой К¹ и Υ имеют значения, указанные в п.1, подвергают реакции с ΝΗ₃, неорганическим основанием или алкоголятом щелочного металла, или б) радикал превращают в другой радикал Υ путем

I) превращения атома галогена в сложноэфирную группу,

II) превращения сложноэфирной группы в спиртовую группу,

III) превращения галогенированного фенильного кольца в реакции сочетания Сузуки в арилированное фенильное кольцо, и/или основание или кислоту формулы I превращают в одну из его(ее) солей.

Выше и ниже радикалы К¹ и Υ имеют значения, указанные для формулы I, если специально не указано иное.

А означает алкил, который является неразветвленным (линейным) или разветвленным, и содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 атомов С. А предпочтительно означает метил, более того, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил или трет-бутил, более того, также пентил, 1-, 2- или 3-метилбутил, 1,1-, 1,2- или 2,2-диметилпропил, 1-этилпропил, гексил, 1-, 2-, 3- или 4-метилпентил, 1,1-, 1,2-, 1,3-, 2,2-,

2.3- или 3,3-диметилбутил, 1- или 2-этилбутил, 1-этил-1-метилпропил, 1-этил-2-метилпропил, 1,1,2-или 1,2,2-триметилпропил, более того предпочтительно, например, трифторметил.

А особенно предпочтительно означает алкил, содержащий 1, 2, 3, 4, 5 или 6 атомов С, предпочтительно метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, гексил, трифторметил, пентафторэтил или 1,1,1-трифторэтил.

Кроме того, А предпочтительно означает СН₂ОСН₃, СН₂СН₂ОН или СН₂СН₂ОСН₃.

Циклический алкил, содержащий 3-7 атомов С, предпочтительно означает циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил или циклогептил.

X предпочтительно означает Ν, СН, ССР₃ или ССН₃.

К¹ особенно предпочтительно означает Н, Р, С1 или СН₃.

К² особенно предпочтительно означает Н или СН₃.

Аг¹ предпочтительно означает о-, м- или п-толил, о-, м- или п-этилфенил, о-, м- или п-пропилфенил, о-, м- или п-изопропилфенил, о-, м- или п-трет-бутилфенил, о-, м- или п-гидроксифенил, о-, м- или пнитрофенил, о-, м- или п-аминофенил, о-, м- или п-Щ-метиламино)фенил, о-, м- или п-Щ-метиламинокарбонил)фенил, о-, м- или п-метоксифенил, о-, м- или п-этоксифенил, о-, м- или п-этоксикарбонилфенил, о-, м- или п-ЩХ-диметиламино)фенил, о-, м- или п-ЩХ-диметиламинокарбонил)фенил, о-, м- или п-Щ-этиламино)фенил, о-, м- или п-ЩХ-диэтиламино)фенил, о-, м- или п-фторфенил, о-, м- или п-бромфенил, о-, м- или и-хлорфенил, о-, м- или п-(метилсульфонамидо)фенил, о-, м- или и-(метилсульфонил)фенил, о-, м- или п-цианофенил, о-, м- или п-карбоксифенил, о-, м- или п-метоксикарбонилфенил, о-, м- или п-формилфенил, о-, м- или п-ацетилфенил, о-, м- или п-аминосульфонилфенил, о, м- или п-[2-(морфолин-4-ил)этокси]фенил, о-, м- или п-[3-ЩХ-диэтиламино)пропокси]фенил, более того, предпочтительно 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- или 3,5-дифторфенил, 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- или 3,5дихлорфенил, 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- или 3,5-дибромфенил, 2,4- или 2,5-динитрофенил, 2,5- или 3,4диметоксифенил, 3-нитро-4-хлорфенил, 3-амино-4-хлор-, 2-амино-3-хлор-, 2-амино-4-хлор-, 2-амино-5хлор- или 2-амино-6-хлорфенил, 2-нитро-4-Х^диметиламино- или 3-нитро-4-Х^диметиламинофенил.

2.3- диаминофенил, 2,3,4-, 2,3,5-, 2,3,6-, 2,4,6- или 3,4,5-трихлорфенил, 2,4,6-триметоксифенил, 2гидрокси-3,5-дихлорфенил, п-йодфенил, 3,6-дихлор-4-аминофенил, 4-фтор-3-хлорфенил, 2-фтор-4бромфенил, 2,5-дифтор-4-бромфенил, 3-бром-6-метоксифенил, 3-хлор-6-метоксифенил, 3-хлор-4- 4 027628 ацетамидофенил, 3-фтор-4-метоксифенил, 3-амино-6-метилфенил, 3-хлор-4-ацетамидофенил или 2,5диметил-4-хлорфенил.

Аг¹ более того, предпочтительно означает фенил, который монозамещен посредством На1, А, [С(В²)2]рНе!² или [С(К²)2]_рСООК²

Ат предпочтительно означает о-, м- или п-толил, о-, м- или п-этилфенил, о-, м- или п-пропилфенил, о-, м- или п-изопропилфенил, о-, м- или п-трет-бутилфенил, о-, м- или п-гидроксифенил, о-, м- или инитрофенил, о-, м- или п-аминофенил, о-, м- или п-(Ы-метиламино)фенил, о-, м- или п-(Ы-метиламинокарбонил)фенил, о-, м- или п-метоксифенил, о-, м- или п-этоксифенил, о-, м- или п-этоксикарбонилфенил, о-, м- или п-(Ы,М-диметиламино)фенил, о-, м- или п-(Ы,М-диметиламинокарбонил)фенил, о-, мили п-(Ы-этиламино)фенил, о-, м- или п-(Ы,М-диэтиламино)фенил, о-, м- или п-фторфенил, о-, м- или пбромфенил, о-, м- или п-хлорфенил, о-, м- или п-(метилсульфонамидо)фенил, о-, м- или и-(метилсульфонил)фенил, о-, м- или п-цианофенил, о-, м- или п-карбоксифенил, о-, м- или п-метоксикарбонилфенил, о-, м- или п-формилфенил, о-, м- или п-ацетилфенил, о-, м- или п-аминосульфонилфенил, о-, м- или п-[2(морфолин-4-ил)этокси]фенил, о-, м- или п-[3-(Ы,М-диэтиламино)пропокси]фенил, более того, предпочтительно 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- или 3,5-дифторфенил, 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- или 3,5-дихлорфенил, 2,3, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- или 3,5-дибромфенил, 2,4- или 2,5-динитрофенил, 2,5- или 3,4-диметоксифенил, 3нитро-4-хлорфенил, 3-амино-4-хлор-, 2-амино-3-хлор-, 2-амино-4-хлор-, 2-амино-5-хлор- или 2-амино-6хлорфенил, 2-нитро-4-Ы,М-диметиламино- или 3-нитро-4-Ы,М-диметиламинофенил, 2,3-диаминофенил, 2,3,4-, 2,3,5-, 2,3,6-, 2,4,6- или 3,4,5-трихлорфенил, 2,4,6-триметоксифенил, 2-гидрокси-3,5-дихлорфенил, п-йодфенил, 3,6-дихлор-4-аминофенил, 4-фтор-3-хлорфенил, 2-фтор-4-бромфенил, 2,5-дифтор-4бромфенил, 3-бром-6-метоксифенил, 3-хлор-6-метоксифенил, 3-хлор-4-ацетамидофенил, 3-фтор-4метоксифенил, 3-амино-6-метилфенил, 3-хлор-4-ацетамидофенил или 2,5-диметил-4-хлорфенил.

Аг² более того, предпочтительно означает фенил, который незамещен или монозамещен посредством [С(К²)2]рОК².

Не!¹ предпочтительно означает пирролидинил, азетидинил, тетрагидроимидазолил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиразолил, тетрагидропиранил, пиперидинил, морфолинил, гексагидропиридазинил, гексагидропиримидинил, [1,3]диоксоланил, пиперазинил, фурил, тиенил, пирролил, имидазолил, пиразолил, оксазолил, изоксазолил, оксадиазолил, тиазолил, триазолил, тетразолил, пиридил, пиримидил, пиридазинил, индолил, изоиндолил, бензимидазолил, индазолил, хинолил, 1,3-бензодиоксолил, бензотиофенил, бензофуранил, имидазопиридил или фуро[3,2-Ь]пиридил, каждый из которых незамещен или моноили дизамещен посредством А, [С(К²)2]рОК², [С(К²)2]_рНе!² и/или [С(К²)₂]_рАт².

Не!¹ особенно предпочтительно означает пирролидинил, пиперидинил или пиразолил, каждый из которых незамещен или монозамещен посредством А.

Не!² предпочтительно означает пирролидинил, азетидинил, тетрагидроимидазолил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиразолил, тетрагидропиранил, пиперидинил, морфолинил, гексагидропиридазинил, гексагидропиримидинил, [1,3]диоксоланил, пиперазинил, фурил, тиенил, пирролил, имидазолил, пиразолил, оксазолил, изоксазолил, оксадиазолил, тиазолил, триазолил, тетразолил, пиридил, пиримидил, пиридазинил, индолил, изоиндолил, бензимидазолил, индазолил, хинолил, 1,3-бензодиоксолил, бензотиофенил, бензофуранил, имидазопиридил или фуро[3,2-Ь]пиридил, каждый из которых незамещен или моноили дизамещен посредством А, [С(К²)2]рОК², [С(К²)2]_рНе!³ и/или [С(К²)₂]_рОНе!³.

Не!² особенно предпочтительно означает пирролидинил, пиперидинил или пиразолил, каждый из которых монозамещен посредством А.

Не!³ предпочтительно означает дигидропирролил, пирролидинил, азетидинил, оксетанил, тетрагидроимидазолил, дигидропиразолил, тетрагидропиразолил, тетрагидрофуранил, дигидропиридил, тетрагидропиридил, пиперидинил, морфолинил, гексагидропиридазинил, гексагидропиримидинил, [1,3]диоксоланил, тетрагидропиранил или пиперазинил.

Не!³ особенно предпочтительно означает пирролидинил, пиперидинил, морфолинил или тетрагидропиранил.

На1 предпочтительно означает Р, С1 или Вг, а также I, особенно предпочтительно Р или С1.

Для всего изобретения, все радикалы, которые встречаются более одного раза, могут быть одинаковыми или различными, то есть они независимы друг от друга.

Соединения формулы I могут иметь один или несколько хиральных центров и поэтому могут встречаться в различных стереоизомерных формах. Формула I охватывает все эти формы.

Соответственно изобретение относится, в частности, к соединениям формулы I, в которой по меньшей мере один из указанных радикалов имеет одно из предпочтительных значений, указанных выше. Некоторые предпочтительные группы соединений могут быть изображены с помощью следующих подформул Ы-И, которые соответствуют формуле I и в которых радикалы, не определенные более подробно, имеют значения, указанные для формулы I, но в которых в I; Аг¹ означает фенил, который монозамещен посредством На1, А, [С(К²)₂]_рНе!² или [С(К²)2]рСООК²;

в ГЬ Не!¹ означает пирролидинил, пиперидинил или пиразолил, каждый из которых незамещен или монозамещен посредством А;

- 5 027628 в 1с Не!² означает пирролидинил, пиперидинил или пиразолил, каждый из которых монозамещен посредством А ;

в И К¹ означает Н, Р, С1 или СН₃,

К² означает Н,

X означает Ν, СН, ССР₃ или ССН₃,

Υ означает Аг¹, Не!¹ или Сус,

Аг¹ означает фенил, который монозамещен посредством На1, А, [С(К²)2]рНе!² или [С(К²)2]_рСООК²,

Не!¹ означает пирролидинил, пиперидинил или пиразолил, каждый из которых незамещен или монозамещен посредством А,

Сус означает циклический алкил, содержащий 3, 4, 5, 6 или 7 атомов С, который может быть незамещен или монозамещен посредством А, На1, СN или Аг² или Не!²,

Не!² означает пирролидинил, пиперидинил или пиразолил, каждый из которых монозамещен посредством А,

А означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий 1-10 атомов С, где одна или две СН- и/или СН₂-группы, не расположенные рядом, могут быть заменены на О-атомы и где 1-7 атомов Н могут быть заменены на Р или С1,

На1 означает Р, С1, Вг или I, р означает 0 или 1 при условии, что, если К¹ означает СН₂ОН, то Аг¹ не означает 2,4-дихлорфенил; и включают их фармацевтически применимые соли, сольваты, таутомеры и стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях.

Соединения формулы I, а также исходные вещества для их получения могут, кроме того, быть получены при помощи методов, известных рег 8е, как описано в литературе (например, в стандартных работах, таких как НоиЬеп-\Уеу1. МеОюбеп бег огдашзсйеп СИенне [Методы органической химии], СеогдТЫеше-Уег1ад, Штутгарт), точнее, в условиях реакций, которые известны и являются пригодными для указанных реакций. Также при этом можно применять разнообразные модификации, которые известны рег 8е, но о которых здесь подробно не упоминается.

Исходные соединения формулы II как правило, известны. Тем не менее, если они являются новыми, то их можно получить с помощью методов, известных рег 8е.

Соединения формулы I предпочтительно можно получить по реакции соединения формулы II с ΝΉ₃, неорганическим основанием или алкоголятом щелочного металла.

Неорганическое основание предпочтительно представляет собой гидроксид, карбонат или бикарбонат щелочного металла или другую соль слабой кислоты и щелочных металлов, предпочтительно калия, натрия, кальция или цезия.

Алкоголят щелочного металла предпочтительно представляют собой соль спирта, предпочтительно метанола или этанола, и щелочных металлов, предпочтительно калия, натрия, кальция или цезия.

В зависимости от применяемых условий, время реакции находится в интервале от нескольких мин до 14 дней, температура реакции находится в рамках между приблизительно -10° и 140°, обычно между 30° и 130°, в частности между приблизительно 60° и приблизительно 120°. Реакцию проводят в инертном растворителе.

Примерами пригодных инертных растворителей являются углеводороды, такие как гексан, петролейный эфир, бензол, толуол или ксилол; хлорированные углеводороды, такие как трихлорэтилен, 1,2дихлорэтан, четыреххлористый углерод, хлороформ или дихлорметан; спирты, такие как метанол, этанол, изопропанол, н-пропанол, н-бутанол или трет-бутанол; простые эфиры, такие как диэтиловый эфир, диизопропиловый эфир, тетрагидрофуран (ТГФ) или диоксан; простые гликолевые эфиры, такие как монометиловый или моноэтиловый эфир этиленгликоля, диметиловый эфир этиленгликоля (диглим); кетоны, такие как ацетон или бутанон; амиды, такие как ацетамид, диметилацетамид или диметилформамид (ДМФА); нитрилы, такие как ацетонитрил; сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид (ДМСО); сероуглерод; карбоновые кислоты, такие как муравьиная кислота или уксусная кислота; нитросоединения, такие как нитрометан или нитробензол; сложные эфиры, такие как этилацетат, или смеси вышеуказанных растворителей.

Особое предпочтение отдают метанолу.

Более того, соединения формулы I можно получить с помощью превращения радикала Υ в другой радикал Υ путем

I) превращения атома галогена в сложноэфирную группу,

II) превращения сложноэфирной группы в спиртовую группу,

III) превращения галогенированного фенильного кольца в реакции сочетания Сузуки в арилированное фенильное кольцо.

Стадия I)

Превращения атома галогена в сложноэфирную группу предпочтительно проводят с помощью монооксида углерода, предпочтительно в органическом растворителе; предпочтительно в метаноле и/или

- 6 027628 толуоле при обычных условиях.

Предпочтительно реакцию проводят под давлением, предпочтительно 2-4 бар.

Предпочтительно добавляют комплекс палладия и/или железа, предпочтительными комплексами являются (1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцен)дихлорпалладий(П) или 1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцен.

В зависимости от применяемых условий время реакции находится в интервале от нескольких минут до 14 дней, температура реакции находится в рамках между приблизительно 40° и 140°, обычно между 60° и 130°, в частности между приблизительно 90° и приблизительно 110°.

Стадия II)

Превращения сложноэфирной группы в спиртовую группу предпочтительно проводят в присутствии хлорида церия(Ш) с помощью алкилмагнийхлорида в ТГФ при обычных условиях или с помощью алюмогидрида лития в ТГФ.

Стадия III)

Превращение галогенированного фенильного кольца в арилированное фенильное кольцо проводят при условиях, обычных для сочетания Сузуки.

Стадия IV)

Превращение галогенированной алкильной группы в алкильную группу предпочтительно проводят с помощью ПЛ1Н₄ в ТГФ или с помощью цинка в уксусной кислоте при обычных условиях.

Сложные эфиры можно омылить, например, применяя уксусную кислоту или применяя ΝαΟΗ или КОН в воде, смеси вода/ТГФ или вода/диоксан, при температурах между 0 и 100°.

Фармацевтические соли и другие формы

Указанные соединения в соответствии с изобретением могут применяться в своей заключительной, несолевой форме. С другой стороны, настоящее изобретение также охватывает применение таких соединений в форме их фармацевтически приемлемых солей, которые могут быть получены с помощью разнообразных органических и неорганических кислот и оснований в соответствии со способами, хорошо известными в данной области техники. Фармацевтически приемлемые солевые формы соединений формулы I получают, главным образом, при использовании традиционных способов. В случае, если соединение формулы I содержит карбоксильную группу, то его приемлемая соль может быть образована с помощью реакции соединения с приемлемым основанием для получения соответствующей соли присоединения основания. Примерами таких оснований являются гидроксиды щелочных металлов, включая гидроксид калия, гидроксид натрия и гидроксид лития; гидроксиды щелочно-земельных металлов, такие как гидроксид бария и гидроксид кальция; алкоксиды щелочных металлов, например, этанолят калия и пропанолят натрия; а также различные органические основания, такие как пиперидин, диэтаноламин и Νметилглутамин. Сюда также включены соли алюминия соединений формулы I. Для некоторых соединений формулы I соли присоединения кислоты могут быть образованы путем обработки указанных соединений фармацевтически приемлемыми органическими и неорганическими кислотами, например, гидрогалогенидами, такими, как гидрохлорид, гидробромид или гидройодид; другими минеральными кислотами, и их соответствующими солями, такими как сульфат, нитрат или фосфат и др.; и алкил- и моноарилсульфонатами, такими, как этансульфонат, толуолсульфонат и бензолсульфонат; и другими органическими кислотами и их соответствующими солями, такими, как ацетат, трифторацетат, тартрат, малеат, сукцинат, цитрат, бензоат, салицилат, аскорбат и др. Таким образом, фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты соединений формулы I включают следующие соли, но не ограничиваются только ими: ацетат, адипат, альгинат, аргинат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат (безилат), бисульфат, бисульфит, бромид, бутират, камфорат, камфорсульфонат, каприлат, хлорид, хлорбензоат, цитрат, циклопентанпропионат, диглюконат, дигидрофосфат, динитробензоат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, галактерат (из слизевой кислоты), галактуронат, глюкогептаноат, глюконат, глутамат, глицерофосфат, гемисукцинат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гиппурат, гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, 2-гидроксиэтансульфонат, йодид, изетионат, изобутират, лактат, лактобионат, малат, малеат, малонат, манделат, метафосфат, метансульфонат, метилбензоат, моногидрофосфат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, нитрат, оксалат, олеат, пальмоат, пектинат, персульфат, фенилацетат, 3-фенилпропионат, фосфат, фосфонат, фталат.

Кроме того, основные соли соединений в соответствии с изобретением включают, но не ограничиваются только ими, соли алюминия, аммония, кальция, меди, железа(Ш), железа(П), лития, магния, марганца(Ш), марганца(П), калия, натрия и цинка. Предпочтительными среди перечисленных выше солей являются аммонийные; соли щелочных металлов - натрия и калия; и соли щелочно-земельных металлов кальция и магния. Соли соединений формулы I, которые имеют происхождение от фармацевтически приемлемых органических нетоксических оснований, включают, но не ограничиваются только ими, соли первичных, вторичных и третичных аминов, замещенных аминов, также включая природные замещенные амины, циклические амины и основные ионообменные смолы, например, аргинин, бетаин, кофеин, хлорпрокаин, холин, Ν,Ν'-дибензилэтилендиамин (бензатин), дициклогексиламин, диэтаноламин, диэтиламин, 2-диэтиламиноэтанол, 2-диметиламиноэтанол, этаноламин, этилендиамин, Ν-этилморфолин, Ν- 7 027628 этилпиперидин, глюкамин, глюкозамин, гистидин, гидрабамин, изопропиламин, лидокаин, лизин, меглумин, Ν-метил-Э-глюкамин, морфолин, пиперазин, пиперидин, полиаминные смолы, прокаин, пурины, теобромин, триэтаноламин, триэтиламин, триметиламин, трипропиламин и трис-(гидроксиметил)метиламин (трометамин).

Соединения в соответствии с настоящим изобретением, которые включают основные азотсодержащие группы, могут быть кватернизированы с помощью таких агентов, как (Ц-Сд-алкилгалогениды, например, метил-, этил-, изопропил-и трет-бутилхлорид, бромид и йодид; ди-(С1-С₄)-алкилсульфаты, например, диметил-, диэтил- и диамилсульфат; (С₁₀-С₁₈)-алкилгалогениды, например, децил-, додецил-, лаурил-, миристил- и стеарилхлорид, бромид и йодид; и арил-(С₁-С₄)-алкилгалогениды, например, бензилхлорид и фенетилбромид. Указанные соли позволяют получать как растворимые в воде, так и растворимые в масле соединения в соответствии с изобретением.

Предпочтительные фармацевтические соли, указанные выше, включают, но не ограничиваются только ими, ацетат, трифторацетат, безилат, цитрат, фумарат, глюконат, гемисукцинат, гиппурат, гидрохлорид, гидробромид, изетионат, манделат, меглумин, нитрат, олеат, фосфонат, пивалат, фосфат натрия, стеарат, сульфат, сульфосалицилат, тартрат, тиомалат, тозилат и трометамин.

Особенно предпочтительными являются гидрохлорид, дигидрохлорид, гидробромид, малеат, мезилат, фосфат, сульфат и сукцинат.

Кислотно-аддитивные соли основных соединений формулы I получают путем приведения в контакт формы свободных оснований с достаточным количеством желаемой кислоты для получения соли традиционным способом. Свободное основание можно регенерировать путем приведения в контакт солевой формы с основанием и выделения свободного основания традиционным способом. Формы свободного основания в некоторой степени отличаются от своих соответствующих солевых форм своими определенными физическими свойствами, такими, как растворимость в полярных растворителях, однако во всем остальном соли являются эквивалентными своим соответствующим формам свободных оснований для целей настоящего изобретения.

Как было указано, фармацевтически приемлемые соли присоединения основания соединений формулы I образуют с металлами или аминами, такими, как щелочные металлы и щелочно-земельные металлы или органические амины. Предпочтительные металлы представляют собой натрий, калий, магний и кальций. Предпочтительные органические амины представляют собой Ν,Ν'-дибензилэтилендиамин, хлорпрокаин, холин, диэтаноламин, этилендиамин, Ν-метил-Э-глюкамин и прокаин.

Соли присоединения основания кислых соединений в соответствии с изобретением получают путем приведения в контакт формы свободной кислоты с достаточным количеством желаемого основания для получения соли традиционным способом. Форма свободной кислоты может быть регенерирована путем приведения в контакт солевой формы с кислотой и выделения формы свободной кислоты известным способом. Формы свободной кислоты в некоторой степени отличаются от своих соответствующих солевых форм определенными физическими свойствами, такими, как растворимость в полярных растворителях, однако во всем остальном соли являются эквивалентными своим соответствующим формам свободных кислот для целей настоящего изобретения.

Если соединение в соответствии с изобретением включает более чем одну группу, которая способна к образованию фармацевтически приемлемых солей этого типа, то изобретение также охватывает составные соли. Примеры типичных составных солевых форм включают, но не ограничиваются только ими, битартрат, диацетат, дифумарат, димеглумин, дифосфат, динатрий и тригидрохлорид.

В свете описанного выше можно увидеть, что выражение фармацевтически приемлемая соль в контексте данной заявки предназначено для обозначения активного компонента, который включает соединение формулы I в форме одной из его солей, особенно в том случае, если указанная солевая форма обеспечивает указанному активному компоненту улучшенные фармакокинетические свойства по сравнению со свободной формой указанного активного компонента или любой другой солевой формой указанного активного компонента, которые использовались ранее. Фармацевтически приемлемая солевая форма активного компонента может также изначально обеспечивать желаемое фармакокинетическое свойство указанному активному компоненту, которым он ранее не обладал, а также может даже положительно влиять на фармакодинамику указанного активного компонента в отношении его терапевтической активности в организме.

Изотопы

Далее также предполагается, что соединение формулы I включает его изотопно-меченные формы. Изотопно-меченная форма соединения формулы I является идентичной указанному соединению, за исключением того факта, что один или более атомов указанного соединения были замещены атомом или атомами, которые имеют атомную массу или атомное число, отличное от атомной массы или атомного числа упомянутого атома, которое обычно существует в природе. Примеры изотопов, которые являются легко доступными коммерчески и которые могут быть введены в соединение формулы I хорошо известными способами, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, фтора и хлора, например, ²Н, ³Н, ¹³С, ¹⁴С, ¹⁵Ν, ¹⁸О, ¹⁷О, ³¹Р, ³²Р, ³⁵§, ¹⁸Р и ³⁶С1 соответственно. Соединение формулы I, его пролекарственная форма или фармацевтически приемлемая соль, которые содержат один или более ука- 8 027628 занных выше изотопов и/или другие изотопы других атомов также составляют объем настоящего изобретения. Изотопно-меченное соединение формулы I может использоваться в ряде способов. Например, меченное изотопами соединение формулы I, например, в которое введен радиоактивный изотоп, такой как ³Н или ¹⁴С, будет полезным в анализах исследования распределения лекарственного средства и/или субстрата в ткани. Такие радиоактивные изотопы, например, тритий (³Н) и углерод-14 (¹⁴С), являются особенно предпочтительными вследствие простоты получения и высокой способности к выявлению. Введение более тяжелых изотопов, например, дейтерия (²Н), в соединение формулы I, будет обеспечивать терапевтические преимущества, основывающиеся на большей метаболической стабильности указанного соединения, меченного изотопами. Большая метаболическая стабильность проявляется непосредственно в повышении времени полураспада ίη-νίνο или снижении требуемой дозы, что при большинстве условий будет составлять предпочтительное воплощение указанного изобретения. Меченное изотопом соединение формулы I обычно получают путем осуществления методик, раскрытых в схемах синтеза и в описании, относящемся к ним, в разделах, касающихся примеров и способов получения, описанных в данной заявке, путем замены немеченого изотопами реагента его соответствующим легко доступным реагентом, меченным изотопом.

Дейтерий (²Н) также может быть введен в соединение формулы I с целью изменения окислительного метаболизма соединения путем первичного кинетического изотопного эффекта. Первичный кинетический изотопный эффект представляет собой изменение скорости химической реакции, которое происходит по причине замещения изотопного ядра, что, в свою очередь, вызывается изменением энергий основного состояния, что необходимо для образования ковалентной связи после указанного изотопного замещения. Замещение тяжелым изотопом обычно приводит к снижению энергии основного состояния для химической связи, вызывая, таким образом, уменьшение скорости скорость-лимитирующей стадии разрушения связи. Когда происходит разрушение связи в или поблизости участка седлообразной конфигурации вдоль координаты реакции образования нескольких продуктов, коэффициент распределения продуктов может существенно изменяться. Например, в случае, если дейтерий связывается с атомом углерода в положении, в котором не происходит обмен, различия скорости к_м/к_с=2-7 являются типичными. Такое отличие в скорости, которое успешно применяется к соединению формулы I, чувствительному к окислению, может в значительной степени влиять на профиль указанного соединения ίη-νίνο и приводить к улучшению фармакокинетических свойств.

В процессе обнаружения и совершенствования терапевтических агентов специалист в данной области ищет пути оптимизации фармакокинетических параметров при сохранении желательных ίη-νίίτο свойств. Является рациональным предположить, что многие соединения со слабыми фармакокинетическими профилями страдают неустойчивостью к окислительному метаболизму. Анализы ίη-νίίτο микросом печени, которые сейчас являются доступными, обеспечивают ценную информацию о процессе окислительного метаболизма такого типа, что, в свою очередь, позволяет получить рациональную модель меченных дейтерием соединений формулы I с улучшенной стабильностью вплоть до резистентности к такому окислительному метаболизму. Таким образом, получают значительное улучшение фармакокинетических профилей соединений формулы I, что может быть количественно выражено в величинах увеличения периода полураспада ίη-νίνο (ί/2), в концентрации при максимальном терапевтическом эффекте (С_тах), площадью под кривой ответа на определенную дозу (АИС) и Р; в величинах уменьшения клиренса, дозы и материальных затрат.

Приведенное далее предназначено для иллюстрации сказанного выше: соединение формулы I, которое имеет многочисленные потенциальные сайты для окислительного метаболизма, например, атомы водорода бензила и атомы водорода, соединенные с атомом азота, получают как серии аналогов, в которых различные комбинации атомов водорода заменяются атомами дейтерия так, что некоторые, большинство или все указанные атомы водорода заменяются на атомы дейтерия. Определение периода полураспада обеспечивает подходящее и точное определение степени улучшения резистентности к окислительному метаболизму. Таким образом определяют, что период полураспада исходного соединения может быть продлен вплоть до 100% как результат такого замещения водорода дейтерием.

Замещение водорода дейтерием в соединении формулы I может также использоваться для достижения благоприятного изменения профиля метаболитов исходного соединения как пути уменьшения или устранения нежелательных токсических метаболитов. Например, когда токсический метаболит возникает при окислительном расщеплении углерод-водородной связи С-Н, то с достаточной вероятностью предполагается, что меченый дейтерием аналог значительно уменьшит или устранит выработку нежелательного метаболита, даже в случае, когда отдельное окисление не является лимитирующей скорость стадией. Дополнительная информация, относящаяся к уровню техники в отношении замещения водорода дейтерием, может быть найдена, например, в работе Нан/Пк и др., ί. Огд. СЬет. 55, 3992-3997, 1990; Ке1бег и др., ί. Огд. СЬет. 52, 3326-3334, 1987; Рο5ίе^, Αάν. Огид Кек. 14, 1-40, 1985; ОШейе и др., ВюсЬет15Ьу 33 (10) 2927-2937, 1994; и китам и др. Са^с^ηοдеηе5^5 16 (4), 683-688, 1993.

Кроме того, изобретение относится к лекарственным средствам, содержащим по меньшей мере одно соединение формулы I и/или его фармацевтически приемлемые производные, сольваты и стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях, и необязательно наполнители и/или вспомогательные

- 9 027628 вещества.

Фармацевтические составы могут вводиться в виде дозированных единиц, которые содержат заранее установленное количество активного компонента на дозированную единицу. Такая единица может включать, например, от 0.5 мг до 1 г, предпочтительно от 1 до 700 мг, более предпочтительно от 5 до 100 мг, соединения в соответствии с изобретением, в зависимости от состояния, подвергаемого лечению, способа введения, а также возраста, веса тела и состояния пациента, или фармацевтические составы могут вводиться в виде дозированных единиц, которые содержат заранее установленное количество активного компонента на дозированную единицу. Предпочтительными составами дозированных единиц являются те, которые содержат суточную дозу или часть суточной дозы, как указано выше, или соответствующую ей порцию активного компонента. Фармацевтические составы этого типа также могут быть получены способом, который хорошо известен в области фармацевтики.

Фармацевтические составы могут адаптироваться для введения при помощи любого подходящего способа, например, путем перорального (включая буккальное или подъязычное), ректального, назального, местного (включая буккальное, подъязычное или трансдермальное), вагинального или парентерального (включая подкожное, внутримышечное, внутривенное или внутрикожное) введения. Такие препараты могут быть приготовлены с помощью любого способа, известного в области фармацевтики, например, путем объединения активного компонента с наполнителем(ями) или вспомогательным(ыми) веществом(ами).

Фармацевтические составы, адаптированные для перорального введения, могут вводиться в виде отдельных единиц, таких как, например, капсулы или таблетки; порошки или гранулы: растворы или суспензии в водных или неводных жидкостях; пищевых пен или пенистых пищевых продуктов; или жидких эмульсий масло-в-воде или жидких эмульсий вода-в-масле.

Так, например, в случае перорального введения в виде таблетки или капсулы, активный компонент может быть объединен с пероральным, нетоксичным и фармацевтически приемлемым инертным наполнителем, таким как, например, этанол, глицерин, вода и т.п. Порошки получают путем измельчения соединения до подходящего небольшого размера и смешивания его с фармацевтическим наполнителем, измельченным аналогичным способом, таким как, например, пищевой углеводород, такой как, например, крахмал или маннит. Также можно добавлять ароматизатор, консервант, диспергирующее вещество и краситель.

Капсулы получают путем приготовления порошковой смеси, как описано выше, и заполнения ею желатиновых капсул определенной формы. Перед заполнением капсул к порошковой смеси можно добавлять скользящие и смазывающие вещества, такие как, например, высокодисперсная кремниевая кислота, тальк, стеарат магния, стеарат кальция или полиэтиленгликоль в твердой форме. Для улучшения доступности лекарственного средства, заключенного в капсулу, также можно добавлять дезинтегрирующее вещество или солюбилизатор, такой как, например, агар-агар, карбонат кальция или карбонат натрия.

Дополнительно, если это является желательным или необходимым, в смесь также можно добавлять подходящие связующие, смазывающие вещества, дезинтеграторы, а также красители. Подходящие связующие включают крахмал, желатин, природные сахара, такие как, например, глюкоза или бета-лактоза, подсластители, полученные из кукурузы, природных и синтетических смол, такие как, например, аравийская камедь, трагакантовая камедь или альгинат натрия, карбоксиметилцеллюлоза, полиэтиленгликоль, воски и т.п. Смазывающие вещества, которые могут применяться в таких дозированных формах, включают олеат натрия, стеарат натрия, стеарат магния, бензоат натрия, ацетат натрия, хлорид натрия и т.п. Дезинтеграторы включают, но не ограничиваются только ими, крахмал, метилцеллюлозу, агар, бентонит, ксантановую камедь и т.п. Лекарственные средства в виде таблеток получают, например, путем приготовления порошковой смеси, гранулирования или сухого прессования смеси, добавления смазывающего вещества и дезинтегратора и прессования полученной смеси в таблетки. Порошковую смесь готовят путем смешивания соединения, измельченного подходящим образом, с разбавителем или основанием, как описано выше, и необязательно со связующим, таким как, например, карбоксиметилцеллюлоза, альгинат, желатин или поливинилпирролидон, замедлителем растворения, таким как, например, парафин, усилителем поглощения, таким как, например, четвертичная соль, и/или абсорбентом, таким как, например, бентонит, каолин или дикальцийфосфат. Порошковую смесь можно гранулировать путем смачивания связующим, таким как, например, сироп, крахмальная паста, слизь акации или растворы целлюлозы или полимерных веществ, и прессования ее через сито. В качестве альтернативы грануляции, порошковую смесь можно пропускать через таблетировочную машину, получая куски неправильной формы, которые распадаются, образуя гранулы. Гранулы можно замасливать путем добавления стеариновой кислоты, стеарата, талька или минерального масла для предотвращения слипания в таблетировочной литейной форме. После этого смазанную смесь спрессовывают, получая таблетки. Соединения в соответствии с изобретением также можно объединять с сыпучим инертным наполнителем и затем подвергать прямому прессованию, получая таблетки без осуществления стадий грануляции или сухого прессования. Таблетки также можно покрывать прозрачным или светонепроницаемым защитным слоем, состоящим из шеллакового запечатывающего слоя, слоя сахара или полимерного вещества и глянцевого слоя воска. К этим по- 10 027628 крытиям также можно добавлять красители для возможности различения между разными дозируемыми единицами.

Жидкости для перорального введения, такие как, например, раствор, сиропы и эликсиры, могут быть приготовлены в виде дозируемых единиц таким образом, чтобы они содержали заранее установленное количество соединения. Сиропы могут быть получены путем растворения соединения в водном растворе с подходящим ароматизатором, тогда как эликсиры готовят с применением нетоксичного спиртового наполнителя. Суспензии могут быть приготовлены путем диспергирования соединения в нетоксичном наполнителе. Также можно добавлять солюбилизаторы и эмульсификаторы, такие как, например, этоксилированные изостеариловые спирты и полиоксиэтиленовые эфиры сорбита, консерванты, ароматические добавки, такие как, например, масло мяты перечной, или натуральные заменители сахара или сахарин, или другие искусственные заменители сахара и т.п.

Составы для перорального введения в виде дозированных единиц могут быть инкапсулированы в микрокапсулы, если это является желательным. Также состав может быть приготовлен таким образом, чтобы пролонгировать или замедлить высвобождение, например, путем применения покрытий или заделывания требуемого вещества в полимеры, воск и т.п.

Соединения формулы I и их соли, сольваты и физиологически функциональные производные также могут вводиться в виде липосомных систем доставки, таких как, например, небольшие однослойные пузырьки, большие однослойные пузырьки и многослойные пузырьки. Липосомы могут быть образованы с помощью различных фосфолипидов, таких как, например, холестерин, стеариламин или фосфатидилхолины.

Соединения формулы I и их соли, сольваты и физиологически функциональные производные также могут доставляться с использованием моноклональных антител в качестве индивидуальных носителей, к которым присоединены молекулы соединения. Соединения также могут быть соединены с растворимыми полимерами в качестве нацеливающих носителей лекарственных средств. Такими полимерами могут являться поливинилпирролидон, сополимер пирана, полигидроксипропилметакриламидофенол, полигидроксиэтиласпартамидофенол или полиэтиленоксидполилизин, замещенный пальмитоиловыми радикалами. Кроме того, соединения можно связывать с биоразлагаемыми полимерами, которые пригодны для обеспечения контролируемого высвобождения лекарственного средства, например полимолочной кислотой, поли-эпсилон-капролактоном, полигидроксимасляной кислотой, полиортоэфирами, полиацеталями, полидигидроксипиранами, полицианоакрилатами и перекрестно-сшитыми или амфипатическими блок-сополимерами гидрогелей.

Фармацевтические составы, адаптированные для трансдермального введения, могут вводиться в виде независимых пластырей для удлиненного, тесного контакта с эпидермисом реципиента. Таким образом, например, активный компонент может доставляться из пластыря путем ионофореза, как в общем описано в РЬагтасеийса1 КекеатсЬ, 3(6), 318 (1986).

Фармацевтические соединения, адаптированные для местного введения, могут быть приготовлены в виде мазей, кремов, суспензий, лосьонов, порошков, растворов, паст, гелей, спреев, аэрозолей или масел.

Для лечения глаз или других наружных тканей, например рта и кожи, предпочтительно применяются составы в виде местной мази или крема. Для приготовления состава в виде мази, активный компонент может применяться с парафиновым или смешивающимся с водой мазевым основанием. Альтернативно, для получения крема активный компонент может быть приготовлен с основой для крема типа масло-вводе или основой вода-в-масле.

Фармацевтические составы, адаптированные для местного введения в глаза, включают глазные капли, в которых активный компонент растворен или суспендирован в подходящем носителе, предпочтительно в водном растворителе.

Фармацевтические составы, адаптированные для местного введения в полость рта, включают лепешки, пастилки и жидкости для полоскания рта.

Фармацевтические составы, адаптированные для ректального введения, могут вводиться в виде суппозиториев или клизм.

Фармацевтические составы, адаптированные для назального введения, в которых носитель представляет собой твердое вещество, включают крупный порошок, имеющий размер частичек, например, в интервале 20-500 микрон, который вводится путем вдыхания, то есть путем быстрого вдоха через нос из контейнера, содержащего порошок, который придерживают возле носа. Подходящие составы для введения в виде назального спрея или носовых капель с жидкостью в качестве носителя включают растворы активного вещества в воде или в масле.

Фармацевтические составы, адаптированные для введения путем ингаляции, включают тонкоизмельченные частички в виде пыли или тумана, которые могут быть получены с помощью различных диспергирующих устройств под давлением с аэрозолями, распылителей или инсуффляторов.

Фармацевтические составы, адаптированные для вагинального введения, могут вводиться в виде пессариев, тампонов, кремов, гелей, паст, пен или аэрозолей.

Фармацевтические составы, адаптированные для парентерального введения, включают водные или

- 11 027628 неводные стерильные растворы для инъекций, содержащие антиоксиданты, буферы, бактериостатические вещества и растворенные вещества, с помощью которых состав поддерживается изотоническим по отношению к крови реципиента, подвергаемого лечению; и водные или неводные стерильные суспензии, которые могут содержать суспензионную среду и загустители. Составы могут вводиться с помощью емкостей для однократного или многократного введения, например, запечатанных ампул и флаконов, и храниться в лиофилизированном состоянии, при этом непосредственно перед введением необходимо только добавить стерильную жидкость-носитель, например, воду для инъекций. Растворы и суспензии для инъекций, приготовленные согласно рецептуре, могут быть приготовлены из стерильных порошков, гранул и таблеток.

Также является очевидным, что дополнительно к предпочтительным вышеописанным составляющим, составы также могут содержать другие вещества, которые используются в данной области для конкретных типов составов; например, составы, пригодные для перорального введения, могут содержать ароматизаторы.

Терапевтически эффективное количество соединения формулы I зависит от многих факторов, включая, например, возраст и вес животного, определенное состояние, которое необходимо лечить, и его тяжесть, природу лекарственного средства и способ введения, и в конечном счете оно может быть определено лечащим врачом или ветеринаром. Тем не менее, эффективное количество соединения в соответствии с изобретением, как правило, находится в интервале от 0.1 до 100 мг/кг веса тела реципиента (млекопитающего) в сутки и предпочтительно обычно находится в интервале от 1 до 10 мг/кг веса тела в сутки. Следовательно, действующее суточное количество для взрослого млекопитающего весом 70 кг обычно может составлять от 70 до 700 мг, причем это количество может вводиться в виде отдельной дозы один раз в день или обычно в виде циклов частичных доз (таких как, например, два, три, четыре, пять или шесть раз) в день, таким образом, что общая суточная доза является аналогичной. Эффективное количество его соли, сольвата или физиологически функционального производного может быть определено в виде доли эффективного количества соединения в соответствии с изобретением рег 5С Также можно предположить, что аналогичные дозы пригодны для лечения других состояний, описанных выше.

Комбинированное лечение этого типа можно осуществлять с помощью одновременного, последовательного или раздельного дозирования индивидуальных компонентов лечения. В комбинированных продуктах такого типа применяются соединения в соответствии с изобретением.

Кроме того, изобретение относится к лекарственным средствам, содержащим по меньшей мере одно соединение формулы I и/или его фармацевтически приемлемые соли, сольваты и стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях, и по меньшей мере один дополнительный активный компонент лекарственного средства.

Изобретение также относится к комплекту (набору), состоящему из отдельных упаковок:

(а) эффективного количества соединения формулы I и/или его фармацевтически приемлемых солей, сольватов и стереоизомеров, включая их смеси во всех соотношениях, и

(б) эффективного количества дополнительного активного компонента лекарственного средства.

Комплект включает подходящие емкости, такие как коробки, индивидуальные бутылки, пакеты или ампулы. Комплект может включать, например, отдельные ампулы, каждая из которых содержит эффективное количество соединения формулы I и/или его фармацевтически приемлемых солей, сольватов и стереоизомеров, включая их смеси во всех соотношениях, и эффективное количество дополнительного активного компонента лекарственного средства в растворенной или лиофиллизированной форме.

Лечение, как используется в настоящей заявке, обозначает облегчение, полностью или частично, симптомов, связанных с нарушением или заболеванием, или замедление, или остановку дальнейшего прогрессирования или ухудшения этих симптомов, или предотвращение или профилактику заболевания или нарушения у субъекта, имеющего риск развития такого заболевания или нарушения.

Термин эффективное количество применительно к соединению формулы (I) может обозначать количество, способное облегчать, полностью или частично, симптомы, связанные с нарушением или заболеванием, или замедлять или останавливать дальнейшее прогрессирование или ухудшение этих симптомов, или предотвращать или обеспечивать профилактику заболевания или нарушения у субъекта, имеющего заболевание или с риском развития заболевания, описанного в настоящей заявке, такого как воспалительные состояния, иммунологические состояния, злокачественные новообразования или метаболические состояния.

В одном варианте осуществления эффективное количество соединения формулы (I) представляет собой количество, которое ингибирует танкиразу в клетке, например, ίη-νίίτο или ίη-νίνο. В некоторых вариантах осуществления, эффективное количество соединения формулы (I) ингибирует танкиразу в клетке на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 99%, по сравнению с активностью танкиразы в необработанной клетке. Эффективное количество соединения формулы (I), например, в фармацевтической композиции, может находиться на уровне, который превышает желательный эффект; например, от приблизительно 0,005 мг/кг веса тела субъекта до приблизительно 10 мг/кг веса тела субъекта в единичной лекарственной форме как для перорального, так и для парентерального введения.

- 12 027628

Применение

Соединения согласно настоящему изобретению пригодны в качестве фармацевтически активных компонентов для млекопитающих, в особенности для людей, для лечения злокачественного новообразования, рассеянного склероза, сердечно-сосудистых заболеваний, поражений центральной нервной системы и различных форм воспаления.

Настоящее изобретение охватывает применение соединений формулы I и/или их физиологически приемлемых солей и сольватов для приготовления лекарственного средства для лечения или предотвращения злокачественного новообразования, рассеянного склероза, сердечно-сосудистых заболеваний, поражений центральной нервной системы и различных форм воспаления.

Примеры воспалительных заболеваний включают ревматоидный артрит, псориаз, контактный дерматит, аллергическая реакция замедленного типа и другие.

Также охватывается применение соединений формулы I и/или их физиологически приемлемых солей и сольватов для приготовления лекарственного средства для лечения или предотвращения заболевания, индуцированного танкиразой, или состояния, индуцированного танкиразой у млекопитающего, при котором в этом способе терапевтически эффективное количество соединения в соответствии с изобретением вводят больному млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении. Терапевтическое количество изменяется в зависимости от конкретного заболевания и легко может быть определено специалистом в данной области.

Выражение заболевания или состояния, индуцированные танкиразой относится к патологическим состояниям, которые зависят от активности одной или нескольких танкираз. Заболевания, связанные с активностью танкиразы, включают злокачественное новообразование, рассеянный склероз, сердечнососудистые заболевания, поражения центральной нервной системы и различные формы воспаления.

Настоящее изобретение, в особенности, относится к соединениям формулы I и их фармацевтически приемлемым солям, сольватам, таутомерам и стереоизомерам, включая их смеси во всех соотношениях, для применения для лечения заболеваний, при которых ингибирование, регуляция и/или модуляция ингибирования танкиразы играет роль.

Настоящее изобретение, в особенности, относится к соединениям формулы I и их фармацевтически приемлемым солям, сольватам, таутомерам и стереоизомерам, включая их смеси во всех соотношениях, для применения для ингибирования танкиразы.

Настоящее изобретение, в особенности, относится к соединениям формулы I и их фармацевтически приемлемым солям, сольватам, таутомерам и стереоизомерам, включая их смеси во всех соотношениях, для применения для лечения злокачественного новообразования, рассеянного склероза, сердечнососудистых заболеваний, поражений центральной нервной системы и различных форм воспаления.

Настоящее изобретение, в особенности, относится к способам лечения или предотвращения злокачественного новообразования, рассеянного склероза, сердечно-сосудистых заболеваний, поражений центральной нервной системы и различных форм воспаления, которые включают введение субъекту, который в этом нуждается, эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, таутомера, стереоизомера или сольвата.

Характерные злокачественные новообразования, для лечения или предотвращения которых являются полезными соединения формулы I, включают, но не ограничиваются таковыми, рак головы, шеи, глаз, рта, горла, пищевода, бронхов, гортани, глотки, груди, костей, легких, ободочной кишки, прямой кишки, желудка, предстательной железы, мочевого пузыря, матки, шейки матки, молочной железы, яичников, яичек или других репродуктивных органов, кожи, щитовидной железы, крови, лимфатических узлов, почек, печени, поджелудочной железы, головного мозга, центральной нервной системы, солидных опухолей и злокачественного перерождения крови.

Характерные сердечно-сосудистые заболевания, для лечения или предотвращения которых являются полезными соединения формулы I, включают, но не ограничиваются таковыми, рестеноз, атеросклероз и его последствия, такие как инсульт, инфаркт миокарда, ишемические повреждения сердца, легких, кишечника, почек, печени, поджелудочной железы, селезенки или мозга.

Настоящее изобретение относится к способу лечения пролиферативного, аутоиммунного, противовоспалительного или инфекционного заболевания или нарушения, который включает введение субъекту, который в этом нуждается, терапевтически эффективного количества соединения формулы I.

Предпочтительно настоящее изобретение относится к способу, где заболевание представляет собой злокачественное новообразование.

Особенно предпочтительно настоящее изобретение относится к способу, где заболевание представляет собой злокачественное новообразование, где введение является одновременным, последовательным или чередующимся с введением по меньшей мере одного другого активного лекарственного средства.

Описанные соединения формулы I могут вводиться в комбинации с другими известными лекарственными средствами, включая противораковые средства. Как используется в настоящем изобретении, термин противораковое средство относится к любому средству, которое вводят пациенту со злокачественным новообразованием для лечения рака.

Противораковое лечение, определенное в данном документе, может применяться в виде монотера- 13 027628 пии, или, дополнительно к соединению по изобретению, можно также применять обычные хирургические методы или радиотерапию или химиотерапию. Такая химиотерапия может включать один или несколько следующих классов противоопухолевых средств:

(I) антипролиферативные/противоопухолевые/повреждающие ДНК лекарственные средства и их комбинации, которые применяются в медицинской онкологии, такие как алкилирующие средства (например, цисплатин, карбоплатин, циклофосфамид, азотный иприт, мельфалан, хлорамбуцил, бусульфан и нитрозомочевины); антиметаболиты (например, антифолаты, такие как фторпиримидины, такие как 5фторурацил и тегафур, ралтитрексед, метотрексат, арабинозид цитозина, гидроксимочевина и гемцитабин); противоопухолевые антибиотики (например, антрациклины, такие как адриамицин, блеомицин, доксорубицин, дауномицин, эпирубицин, идарубицин, митомицин-С, дактиномицин и митрамицин); антимитотические средства (например, алкалоиды барвинка, такие как винкристин, винбластин, виндезин и винорелбин и таксоиды, такие как таксол и таксотер); ингибиторы топоизомеразы (например, эпиподофиллотоксины, такие этопозид и тенипозид, амсакрин, топотекан, иринотекан и камптотецин); и средства, влияющие на дифференциацию клеток (например, ретиноевая кислота, полностью находящаяся в транс-конфигурации, 13-цис-ретиноевая кислота и фенретинид);

(II) цитостатические средства, такие как антиэстрогены (например, тамоксифен, торемифен, ралоксифен, дролоксифен и йодоксифен), ингибиторы рецептора эстрогена (например, фульвестрант); антиандрогены (например, бикалутамид, флутамид, нилутамид и ципротерон ацетат), антагонисты ЬНКН или агонисты ЬНКН (например, гозерелин, лейпрорелин и бузерелин), прогестогены (например, мегестрол ацетат), ингибиторы ароматазы (например, анастрозол, летрозол, воразол и эксеместан) и ингибиторы 5а-редуктазы, такие как финастерид;

(III) средства, которые ингибируют инвазию злокачественных клеток (например, ингибиторы металлопротеиназы, такие как маримастат, и ингибиторы функции рецептора урокиназного активатора плазминогена);

(IV) ингибиторы действия фактора роста, например, такие ингибиторы включают антитела к фактору роста, антитела к рецептору фактора роста (например, анти-етЬЬ2 антитело трастузумаб [Нетсерйи™ ] и анти-егЬЬ1 антитело цетуксимаб [С225]), ингибиторы фарнезилтрансферазы, ингибиторы тирозинкиназы и ингибиторы серин/треонин киназы, например, ингибиторы семейства фактора роста эпидермиса (например, ингибиторы БОРК семейства тирозинкиназ, такие как ^(3-хлор-4-фторфенил)-7-метокси-6(3-морфолинопропокси)хиназолин-4-амин (гефитиниб, ΑΖΌ1839), ^(3-этинилфенил)-6,7-бис(2-метоксиэтокси)хиназолин-4-амин (эрлотиниб, О8Н774) и 6-акриламидо^-(3-хлор-4-фторфенил)-7-(3-морфолинопропокси)хиназолин-4-амин (СЕ 1033)), например, ингибиторы семейства фактора роста производных тромбоцитов и, например, ингибиторы семейства фактора роста гепатоцитов;

(V) антиангиогенные вещества, такие как те, которые ингибируют действие фактора роста эндотелия сосудов (например, антитело к фактору роста клеток эндотелия сосудов бевацизумаб [Ауакйи™], соединения, которые описаны в опубликованных международных заявках на патент \УО 97/22596, \УО 97/30035, \УО 97/32856 и \УО 98/13354) и соединения, которые действуют по другому механизму (например, линомид, ингибиторы действия интегрина ανβ3 и ангиостатин);

(VI) вещества, повреждающие сосуды, такие как комбретастатин А4 и соединения, описанные в международных заявках на патент \УО 99/02166, \УО 00/40529, \УО 00/41669, \УО 01/92224, \УО 02/04434 и \\'О 02/08213;

(VII) антисмысловая терапия, например, такая, которая направлена на вышеперечисленные мишени, такая как ΣδΣδ 2503, антисмысловая терапия на основе гена Как;

(VIII) способы генной терапии, включая, например, способы замены аберрантных генов, такие как способы аберрации р53 или аберрации ВКСА1 или ВКСА2, ΟΌΕΡΤ (пролекарственная терапия, направленная на ген фермента), способы с использованием деаминазы цитозина, тимидинкиназы или бактериальной нитроредуктазы и способы повышения устойчивости пациента к химиотерапии или радиотерапии, такие как генная терапия резистентности ко многим лекарственным средствам; и (IX) способы иммунотерапии, включая, например, способы повышения иммуногенности опухолевых клеток пациента в условиях ех νίνο и ίη-νίνο, такие как трансфекция цитокинами, такими как интерлейкин 2, интерлейкин 4 или фактор стимуляции колоний гранулоцитов-макрофагов, способы снижения активности Т-клеток, способы с использованием трансфектированных иммунных клеток, таких как цитокин-трансфектированные дендритные клетки, способы с использованием цитокин-трансфектированных линий опухолевых клеток и способы с использованием анти-идиотипичных антител.

Лекарственные средства, приведенные ниже в табл. 1, предпочтительно, но не исключительно, комбинируют с соединениями формулы I.

- 14 027628

Таблица 1

Алкилирующие агенты	Циклофосфамид Ломустин Τ/5Υ^Η Прокарбазин Ифосфамид . , Алтретамин Мелфалан „ . , „ Эстрамустин фосфат Гексаметилмеламин ъ, _ Мехлороэтамин Тиотепа _ ν - Стрептозоцин Хлорамбуцил ~ г _ Темозоломид Дакарбазин _ ,, Семустин Кармустин
Платиновые агенты	Карбоплатин Цисплатин ΖΒ-0473 (АпогМЕВ) Оксалиплатин Лобаплатин (Ае1ета) Спироплатин Сатраплатин (.Ιοίιηδοη Карбоксифталатоплатинум МаПЬеу) Тетраплатин ВВК-3464 Ормиплатин (Нойгпапп-Ьа КосЬе) Ипроплатин 3Μ-11355 (Зитйото) АР-5280 (Ассезз)
Антиметаболиты	. Томудекс Азацитидин _ ·* _ , Триметрексат Гемцитабин _ , Капецитабин Деоксикоформицнн . . Флударабин 5- фторурацил π . Пентостатин Флоксуридин _ . Ралтитрексед 2-хлордезоксиаденозин „ ... Гидроксимочевина 6- Меркаптопурин дец„табин (8ирегОеп) тт иогУанин Клофарабин (Βίοεηνϊδΐοη) Цитарабин Ирофулвен (ΜΟΙ РЬаггиа) 2-фтордезоксицитидин Ζ1Τ ' . ' . У РМВС (Нойтапп-Ьа Метотрексат КосЬе) Идатрексат Этинилцитидин (ТаНю)
Ингибиторы топоизомеразы	Амсакрин Рубитекан (ЗирегОеп) Эпирубицин Эксатекан мезилат Этопозид (ВайсЫ) Тенипозид или Хинамед (СЬешОепех) митоксантрон Гиматекан (51§та- Таи) Иринотекан (СРТ-11) Дифломотекан (ВеаиГоиг- 7-этил-М- 1рзеп) гидроксикамптотецин ТАЗ-ЮЗ (ТаШо) Топотекан Элзамитруцин (Зресйит) Дексразоксанет 1-107088 (Мегск & Со) (ТороТаг§е1) ΒΝΡ-1350 (ВюЫшпепк) Пиксантрон (ЫоуизрЬаггпа) СКЭ-602 (СЬоп§ Кип Аналог ребеккамицина Вап§) (Ехе И х 18) КХУ-2170 (Куохуа Накко)

| ВВК-3576 (МоуизрЬаггпа)
Противоопухолевые антибиотики	Дактиномицин (Актиномицин В) . , ' - ' Амонафид Доксорубицин . , ,. ν3 . Азонафид (Адриамицин) . „ _ Антрапиразол Деоксирубицин _ г 2? _ Оксантразол Валрубицин тт „ _ Лозоксантрон Даунорубицин _ г , . Блеомицин сульфат (Дауномицин) (Бленоксан) Эпирубицин ' _ . Блеомициновая кислота Терарубицин „ . Т1 _ Блеомицин А Идарубицин Блеомицин В у идазон Митомицин С Пликамицинп ΜΕΝ-10755 (Мепапш) Порфиромицин ОРХ-ЮО (Сет Цианоморфолинодокео- РЬагтасе;,;са|з) рубицин Митоксантрон (Новантрон)
Антимитотические агенты	Паклитаксел 8В 408075 Доцетаксел (СНахоЗткЬКНпе) Колхицин Е7010 (АЬЬоН) Винбластин РО-ТХЬ (Се11 ТЬегареиНсз) Винкристин ΙΟΝ 5109 (Вауег) Винорелбин А 105972 (АЪЬоИ) Виндезин А 204197 (АЪЪоП) Доластатин 10 (ΝΟΙ) Ш 223651 (ВАЗР) Ризоксин (РиДзахуа) В 24851 (А8ТА МесНса) Мивобулин (ХУагпег- ЕК-86526 (Е1за1) ЬатЬеП) Комбретастатин А4 (ВМЗ) Цемадотин (ВАЗР) Изогомогалихондрин-В КРК 109881Α (Ανβηίίδ) (РЬагтаМаг) ΤΧϋ 258 (Ανβηΐίδ) ΖΌ 6126 (АзИагепеса) Эпотилон В (ΝοχΉΓΐί$) РЕО-Паклитаксел (Εηζοη) Т 900607 (Ти1апк) ΑΖ10992 (АзаЫ) Т 138067 (Ти1апк) !ϋΝ-5109 (1п4епа) Криптофицин 52 (ЕИ Ы11у) АУЬВ (РгезЫеЫ Винфлунин (РаЬге) КеигоРЬаппа) Ауристатин РЕ (Те^коки Азаэпотилон В (ВМ8) Ноппопе) ΒΝΡ-7787 (ВюЫитепк) ВМ5 247550 (ВМ5) СА-4-пролекарство ВМЗ 184476 (ВМЗ) (ΟΧίΟΕΝΕ) ВМЗ 188797 (ВМЗ) Доластатин-Ю (ΝγΗ) Таксопрексин (Рго1агга) СА-4 (ΟΧίΟΕΝΕ)
Ингибиторы ароматазы	Аминоглутетимид Эксеместан Летрозол Атаместан (ВюМесПстез) Анастразол ΥΜ-511 (УатапоисЫ)

- 15 027628

|Форместан
Ингибиторы тимидилат-синтазы	Пеметрексед (ЕЙ ЬН1у) Нолатрексед (Ех11ша$) Ζϋ-9331 (ВТС) СоРас1ог™ (ВюКеуз)
Антагонисты ДНК	Трабектедин (РЬагтаМаг) Глуфосфамид (Вах1ег Мафосфамид (Вах1ег 1ШегпаНопа!) 1п1егпаНопа1) Альбумин + 32Р (1зо1оре Апазиквон (8рес1гит ЗоШНопз) РЬагтасеиНсак) Тимектацин (ΝεννΒίοΐΐοδ) 06-бензилгуанин (РаП§еп1) Эдотреотид (МохагПз)
Ингибиторы фарнезил- трансферазы	Арглабин (ΝυΟηοοΙοίη' „ . . , о т , . Типифарниб (ДоЬпзоп & Π Λ й/о и · ЬЬПЗОП) РкпГьуР1111 С 6ПП£ Периллиловый спирт (ЭОК ΒΑΥ-43-9006 (Вауег) ВюРЬаппа)
Ингибиторы насоса	СВТ-1 (СВА РЬагта) Зосуквидар Тариквидар (Хепоуа тригидрохлорид (Е1, Ь.Ну) М8-209 (8сЬепп§ АО) ^Р^Р ДИЦИТраТ
Ингибиторы гистонацетил- трансферазы	Тацединалин (РЛгег) Пивалоилоксиметил 8АНА (Αίοη РЬагта) бутират (Тйап) М8-275 (ЗсЬеппд АО) Депсипептид (РицзаАа)
Ингибиторы металлопротеиназы Ингибиторы рибонуклеозид- редуктазы	Неовастат (Аекгпа смт _3 (Со||аОепех) ЬаЬогаюпеа) ВМ8-275291 (СеШесЬ) Маримастат (ВпПзЬ _ - ;. ' . Тезацитабин (Ανβηίιβ) '°ес ’ . Дидокс (Мо1еси1ез Гог Галлия мальтолат (ТЛап) „ ' Триапин (У.оп) Неа1Л)
ΤΝΡ-альфа агонисты/ антагонисты	Вирулизин (Ьогиз ТЬегареиНсз) Ревимнд (Се1§епе) СЭС-394 (Се1еепе)
Антагонисты рецептора эндотелинА	хпР1пеЛ7а';АЬ7ЬО‘) г УМ-598 (УатапоисЫ) Ζϋ-4054 (Аз1гагепеса) ' 7
Агонисты рецептора ретиноевой кислоты	Фенретинид (ДоЬпзоп & ДоЬпзоп) Алитретиноин (1л£ап<1) ЬОЭ-1550 (Ыдапб)
Иммуномодуляторы | Интерферон Дексосомная терапия

	Онкофаг (Ап11£еп1сз) (Апозуз) ОМК (Рго§ешсз) Пентрикс (Аиз(гаНап Сапсег Аденокарциномная ТесЬпо1о§у) вакцина (Βΐοηιΐη) ДЗР-154 (Тгадеп) СТР-37 (Ανί ВюРЬагша) Раковая вакцина (1п1егсе11) ДКХ-2 (1ттипо-Кх) Норелин (Вюз1аг) РЕР-005 (РерНп В1о1есЬ) ВЬР-25 (Вюпмга) Синхроваксные вакцины МОУ (Рго^егнсз) (СТЬ 1ттипо) β-Алетин (Όονείβίΐ) Меланомная вакцина (СТЬ СЬЬ-тера (Уазо^еп) 1ттипо) р21-КАЗ вакцина (ОетУах)
Гормональные и антигормональные агенты	Эстрогены Конъюгированные Преднизон эстрогены Метилпреднизолон Этинилэстрадиол Преднизолон хлортрианизен Аминоглутетимид Иденестрол Леупролид Г идроксипрогестерон Г озерелин капроат Леупорелин Медроксипрогестерон Бикалутамид Тестостерон Флутамид Тестостерон пропионат Октреотид Флуоксиместерон Нилутамид Метилтестостерон Митотан Диэтилстилбестрол Р-04 (Νονο§εη) Мегестрол 2-Метоксиэстрадиол Тамоксифен (Еп1геМеб) Торемофин Арзоксифен (ЕН ЬШу) Дексаметазон
Фотодинамические агенты	8с(спсс8^ИН Ρά-Бактериофеофорбид Тералюкс (Уеба) х . Лютеции-Тексафирин (ТЬега1есЬпо1ое1ез) ζη, .. ч л. г- « (РЬагтасусксз) Мотексафин-Гадолиний ' ' .. . Гиперицин (РЬагтасусисз)
Ингибиторы тирозинкиназы	Иматиниб (ΝονβΓΐίδ) Кахалнд Р (РЬагтаМаг) Лефлуномид СЕР-701 (СерЬа1оп) (8и£еп/РЬагтас1а) СЕР-751 (СерЬа1оп) ΖΏ1839 (АзХгагепеса) ΜΕΝ518 (МШетит) Эрлотиниб (Опсо^епе РКС412 (ИоуагНз) Зтепсе) Феноксодиол О Канертьюниб (Рйгег) Трастузумаб (ОепеШесЬ) Скваламин (Оепаега) С225 (1тС1опе) 8115416 (РЬагтас1а) гЬи-МаЬ (ОепеШесЬ) 8116668 (РЬагтапа) МЭХ-Н210 (Медагех)

- 16 027628

	ΖΏ4190 (Аз1га7епеса) 2С4 (Оепеп1есЬ) ΖΏ6474 (АзИагепеса) ΜΏΧ-447 (Мейагех) Ваталаниб (Ыоуэгйз) АВХ-ЕОР (АЬ^етх) ΡΚΙ166 (ΝοναΠίβ) 1МС-1С11 (1тС1опе) ОУУ2016 (О1ахо5тНЬК1те) ЕКВ-509 (АУуеШ) ЕКВ-569 (1Ууе1Ь)
Разные агенты	5К-27897 (ССК-А ВСХ-1777 (ΡΝΡ ингибитор, ингибитор, Запой- ВюСгуз!) 8уп1Ье1аЬо) Ранпирназа (стимулятор Токладезин (цАМФ- рибонуклеазы, А1£асе11) агонист, КлЬарЬагт) Галарубицин (ингибитор Алвоцидиб (ΟϋΚ синтеза РНК, ϋοηβ-Α) ингибитор, Λνβηύδ) Тирапазамин СУ-247 (СОХ-2 ингибитор, (восстанавливающий агент, Ку Ме<Нса1) 5ΚΙ1п1егпайопа1) Р54 (СОХ-2 ингибитор, Ν-Ацетилцистеин РЬуШрЬагт) (восстанавливающий агент, СарСеП™ (СУР450 гатЬоп) стимулятор, Вауапап К-Флурбипрофен Νοπϋο) (ингибитор ΝΡ-каппаВ, ССЗ-ЮО (§а13 антагонист, Епсоге) О1усоОепезуз) ЗСРА (ингибитор ΝΡ- С17ЭТ иммуноген каппаВ, Асйуе Вю1есЬ) (ингибитор гастрина, Сеокальцитол (агонист АрЫоп) рецептора витамина ϋ, Ьео) Эфапроксирал 131-Ι-ΤΜ-601 (ДНК (оксигенатор, АНоз антагонист, ТгапзМо1еси1аг) ТЬегареийсз) Эфлорнитин (ОЭС Р1-88 (ингибитор ингибитор, 1ЬЕХ Опсо1о§у) гепараназы, Рго§еп) Минодроновая кислота Тесмилифен (антагонист (ингибитор остеокласта, гистамина, ΥΜ УатапоисЫ) ВюЗЫепсез) Индисулам (р53 Гистамин (агонист стимулятор, Е1за1) рецептора гистамина Н2, Аплидин (РРТ ингибитор, Мах1т) РЬагтаМаг) Тиазофурин (ΙΜΡϋΗ Ритуксимаб (ΟΏ20 ингибитор, КНэарЬагт) антитело, Оепеп1есЬ) Циленгитид (антагонист Гемтузумаб (СЭЗЗ интегрина, Мегск КОаА) антитело, Ά'νείΗ Ауегз!) 8К-31747 (1Ь-1 антагонист, РО2 (промотор 8апой-8уп1Ье1аЬо) гематопоеза, РЬагта§епез1з) СС1-779 (ингибитор тТОК 1ттипо1™ (триклозановая киназы, 5Ууе1Ь) жидкость для промывания Эксисулинд (РЭЕ-У ротовой полости, Εηάο) ингибитор, СеП Райтауз) Триацетялуридин СР-461 (ΡϋΕ-У ингибитор, (уридиновое пролекарство, СеП Ра1Ь\уауз) АУе11з1аГ)
	АС-2037 (ΟΑΚΤ 3Ν-4071 (саркомный агент, ингибитор, Рйгег) 81§па1иге ВюЗЫепсе) АУХ-иК1 (ингибитор ТгапзМЮ-107™ активатора плазминогена, (иммунотоксин, К5 Ψίΐβχ) Βΐοηιβάίχ) ΡΒΙ-1402(ΡΜΝ РСК-3145 (промотор стимулятор, РгоМейс апоптоза, Ргосуоп) ЫГеЗс1епсез) Доранидазол (промотор Бортезомиб (ингибитор апоптоза, Ро1а) протеасомы, МШепшит) СНЗ-828 (цитотоксический ЗКЬ-172 (стимулятор Т- агент, Ьео) клеток, ЗК РЬагта) Транс-ретиновая кислота ТЬК-286 (ингибитор (дифференциатор, ΝΙΗ) глутатион-8 трансферазы, МХ6 (промотор апоптоза, Тейк) ΜΑΧΙΑ) РТ-100 (агонист фактора Апомин (промотор роста, Ροίηΐ ТЬегареийсз) апоптоза, 1ЬЕХ Опсо1о§у) Мидостаурин (РКС Уроцидин (промотор ингибитор, Иоуэгйз) апоптоза, ВютсЬе) Бриостатин-1 (РКС Ко-31-7453 (промотор стимулятор, СРС Вю1есЬ) апоптоза, Ьа КосНе) СОА-П (промотор Бросталлицин (промотор апоптоза, ЕуегПГе) апоптоза, РЬагтас1а) 5ϋΧ-101 (промотор апоптоза, 8а1тесНх) Цефлатонин (промотор апоптоза, СНетОепех)

Следующие сокращения относятся соответственно к определениям, приведенным ниже водн. (водн), ч (час), г (грам), л (литр), мг (миллиграм), МГц (мегагерц), мин. (минута), мм (милиметр), ммоль (милимоль), мМ (милимолярный), т.пл. (температура плавления), экв. (эквивалент), мл (милилитр), мкл (микролитр), ΆΟΝ (ацетонитрил), АсОН (уксусная кислота), СЭС1з (дейтерированный хлороформ), ΟΌβΟΏ (дейтерированный метанол), СΗзСN (ацетонитрил), с-йех (циклогексан), ЭСС (дициклогексил карбодиимид), ДХМ (дихлорметан), Э1С (диизопропил карбодиимид), ΏΙΕΆ (диизопропилэтиламин), ДМФА (диметилформамид), ДМСО (диметилсульфоксид), ДМСО-й_б (дейтерированный диметилсульфоксид), ЕЭС (1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид), ЭРИ (электрораспылительная ионизация), ЕЮАс (этилацетат), ΕΪ2Ο (простой диэтиловый эфир), ΕΐΟΗ (этанол), НАТи гексафторфосфат (диметиламино-([1,2,3]триазоло[4,5-Ь]пиридин-3-илокси)метилен]-диметиламмония), ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография), ϊ-ΡγΟΗ (2-пропанол), К2СО3 (карбонат калия), ЖХ (жидкостная

- 17 027628 хроматография), МеОН (метанол), Мд§О₄ (сульфат магния), МС (масс-спектрометрия), МТВЕ (метилтрет-бутиловый эфир), ΝαΗί'.Ό₃ (бикарбонат натрия), ΝαΒΗ₄ (борогидрид натрия), ΝΜΜ (Νметилморфолин), ЯМР (ядерный магнитный резонанс), РуВОР (гексафторфосфат бензотриазол-1-илокси-трис-пирролидино-фосфония), КТ (комнатная температура), Κί (время удержания), §РЕ (твердофазная экстракция), ТВТИ (тетрафторборат 2-(1-Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония), ТЕА (триэтиламин), ТФУ (трифторуксусная кислота), ТГФ (тетрагидрофуран), ТСХ (тонкослойная хроматография), УФ (ультрафиолет).

Описание исследований ίη-νίΐΓΟ

Сокращения

ΟδΤ = глутатионы-трансфераза

РРЕТ = резонансный перенос энергии флуоресценции

НТРЕ® = (гомогенная флуоресценция с временным разрешением)

ΗΕΡΕδ = буфер 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазин - этансульфоновая кислота

ОТТ = дитиотреитол

ΒδΑ = бычий сывороточный альбумин ί',ΉΑΡδ = детергент;

ί',ΉΑΡδ = 3-[(3-холамидопропил)диметиламмонио]-1-пропансульфонат

Стрептавидин-ХЬей® представляет собой высококачественный конъюгат стрептавидин-ХЬ665, для которого были оптимизированы условия сочетания для получения конъюгата с улучшенными характеристиками для некоторых исследований, в частности тех, для которых требуется высокая чувствительность.

Тестирование биохимической активности танкираз 1 и 2: Исследование аутопарсилирования

Исследование аутопарсилирования осуществляют за две стадии: ферментативная реакция, в которой ΟδΤ-меченая танкираза-1, соотв. танкираза-2 переносит биотинилированную ΑΌΡ-рибозу на себя из биотинилированного ΝΑΌ в качестве ко-субстрата и реакция обнаружения, где анализируют РВЕТ с временным разрешением между меченными криптатом анти-ОБТ, которые связаны с ΟδΤ меткой фермента и Х1ей® меченным - стрептавидин связанным биотин-парсилированным остатком. Аутопарсилирующую активность определяют непосредственно путем повышения НТКР сигнала.

Исследование аутопарсилирования осуществляют в формате анализа на 384 лунок НТКР® (СавЬю, Собо1е1, Ргапсе) в микротитровальных низкообъемных планшетах на 384 лунки Огешег пЬ и используют для экрана с высокой пропускной способностью. 250 нМ ОδΤ-меченную танкиразу-1 (1023-1327 а/к), соответственно приблизительно 250 нМ ОδΤ-меченную танкиразу-2 (873-1166 а/к) и 5 мкМ Ью-ΝΑΌ (Βίοίοβ, Ьбе 8С1епсе Въ® Вгетеп, Оегтапу) в качестве ко-субстрата инкубируют в общем объеме 5 мкл (50 мМ ΗΕΡΕδ, 4 мМ Мд-хлорид, 0.05% Р1итойс Р-68, 1.4 мМ ОТТ, 0.5% ДМСО, рН 7.7) при отсутствии или в присутствии тестируемого соединения (10 концентраций разведения) в течение 90 мин при 30°С. Реакцию останавливают путем добавления 1 мкл 50 мМ ЕЭТА раствора. Добавляют 2 мкл раствора для обнаружения (1.6 мкМ δΑ-ΧΕτιΙ® (ОвЬю, Собо1е1, Ргапсе), 7.4 нМ Ακ^-Οδ^Κ® (Еи-меченные антиО8Т, С18Ью, Собо1е1, Ргапсе) в 50 мМ ΗΕΡΕδ, 800 мМ КР, 0.1% ΒδΑ, 20 мМ ЕПТ^ 0.1% ^ΑΡδ, рН 7.0). После инкубирования в течение 1 ч при комнатной температуре НТКР измеряют с помощью многорежимного планшет-ридера Етйюп (Регкт Е1тег ΡΑδ Оегтапу ОтЬН) при длине волны возбуждения 340 нм (лазерный режим) и длинах волн эмиссии 615 и 665 нм. Определяют соотношение сигналов эмиссии. Полное используемое значение представляло реакцию без ингибитора. Используемое значение фармакологического нуля представляло собой ΧΑν-939 (Тоспв) в конечной концентрации 5 мкМ. Ингибирующие значения ЦС50) определяют, используя либо программу δутуx Α88ау Ехр1огег®, либо Сопбов8ео® от ОепеЭйа.

Измерение клеточного ингибирования танкиразы

Поскольку было описано, что танкиразы модулируют клеточный уровень Α\Β·ι2 (Ниапд и др., 2009; №Циге), то повышение уровня Α\Β·ι2 используют в качестве анализируемых данных для определения клеточного ингибирования танкираз в анализе на основе Ьиттех.

Клетки клеточной линии карциномы ободочной кишки ΌΡΌ1 высевают в планшеты на 96 лунок при плотности 1.5 х10⁴ клеток на лунку. На следующий день, клетки обрабатывают серийными разведениями тестируемого соединения за семь стадий в виде трех повторов с конечной концентрацией ДМСО 0.3%. Через 24 ч, клетки лизируют в лизирующем буфере (20 мМ Тп8/НС1 рН 8.0, 150 мМ №С1, 1% ΝΡ40, 10% глицерин) и лизаты очищают путем центрифугирования через фильтровальный планшет на 96 лунок (0.65 мкм). Белок Α.\πι2 выделяют из клеточных лизатов путем инкубирования с моноклональным анти-Α\^η2 антителом (Κ&Ό δу8ΐет8 #ΜΑΒ6078), которое связывается с флуоресцентными карбоксишариками. После этого, связанный Α\πι2 специфически обнаруживают с помощью поликлонального антиΑ\πι2 антитела (Се11 δ^дηа1^ηд #2151) и подходящего РЕ-флуоресцентного вторичного антитела. Количество выделенного Α\ίιτ2 белка определяют с помощью прибора Ьиттех²⁰⁰ (Титте\ Согрогабоп) в соответствии с инструкциями производителя путем подсчитывания 100 событий на лунку. Ингибирование танкиразы тестируемыми соединениями приводит к более высоким уровням Α\ίι·ι2, которые прямо кор- 18 027628 релируют с повышением обнаруживаемой флуоресценции. В качестве контролей клетки обрабатывают только растворителем (нейтральный контроль) и сравнительным ингибитором танкиразы !\УК-2 (3Е-06 М), который служит в качестве контроля для максимального повышения Άχίη2. Для анализа, полученные данные нормализуют по отношению к необработанному контролю с растворителем и подгоняют для определения значений ЕС₅₀, используя программное обеспечение А55ау Ехр1огег (Ассе1гу5).

Описание исследования РАКР1

Тестирование биохимической активности РАКР-1. Исследование аутопарсилирования

Исследование аутопарсилирования осуществляют за две стадии: ферментативная реакция, в которой Ηίδ-меченная Рагр-1 переносит биотинилированную АОР-рибозу/АОР-рибозу на себя с биотинилированного ΝΆΌ/ΝΆΌ в качестве ко-субстрата и реакция обнаружения, где анализируют РКЕТ с временным разрешением между меченным криптатом анти-Ηίδ антителом, связанным с Η15 меткой фермента и Х1еп1® меченным-стрептавидин связанным биотин-парсилированным остатком. Аутопарсилирующую активность определяют непосредственно путем повышения НТКР сигнала.

Исследование аутопарсилирования осуществляют в формате анализа на 384 лунок НТКР® (ΟίδΒίο, Собо1е1. Ргапсе) в микротитровальных низкообъемных планшетах на 384 лунки Огешег пЬ. 35 нМ Ηΐ5меченную Рагр-1 (человеческая, рекомбинантная, Εηζο ЫГе 8аепсе5 ОтЬК Ьоггасй, Оегтапу) и смесь 125 нМ Ыо-ΝΛΌ (Вю1од, ЫГе 5шепсе 1п51., Вгетеп, Оегтапу) и 800 нМ ΝΑΌ в качестве ко-субстрата инкубируют в общем объеме 6 мкл (100 мМ Τή5/ΗΟ, 4 мМ Мд-хлорид, 0,01% ЮЕРАЬ® СА630, 1 мМ ΌΤΤ, 0,5% ДМСО, рН 8, 13 нг/мкл активированной ДНК (ВР8 Вю5аепсе, 8ап О1едо, И8)) при отсутствии или в присутствии тестируемого соединения (10 концентраций разведения) в течение 150 мин при 23°С. Реакцию останавливают путем добавления 4 мкл раствора стоп/обнаружение (70 нМ 8А-Х1еп1® (С15Ью, Собо1е1, Ргапсе), 2.5 нМ анти-Ш5-К® (Еи-меченные анти-Ш5, С15Ью, Собо1е1, Ргапсе) в 50 мМ ЖРЕ8, 400 мМ КР, 0.1% В8А, 20 мМ ЕОТА, ρΗ 7.0). После инкубирования в течение 1 ч при комнатной температуре ΗΤΚΕ измеряют с помощью многорежимного планшет-ридера Епу15юп (Регкш Е1тег ЬА8 Оегтапу ОтЬЩ при длине волны возбуждения 340 нм (лазерный режим) и длинах волн эмиссии 615 и 665 нм. Определяют соотношение сигналов эмиссии. Полное используемое значение представляло реакцию без ингибитора. Используемое значение фармакологического нуля представляло собой О1арапЬ (ЬС1аЬ5, ^оЬигп, И8) в конечной концентрации 1 мкМ. Определяют ингибирующие значения (1С50), используя либо программу 8утух А55ау Ехр1огег®, либо Сопбо55ео® от ОепеОаРа

Описание ЕЬ18А исследования ΤΝΚ81 и ΤΝΚ82

Тестирование биохимической активности ΤΝΚ 1 и 2: активности ЕЬ18А (исследование аутопарсилирования)

Для анализа аутопарсилирующей активности ΤΝΚ8 1 и 2 осуществляют ЕЬ18А: На первой стадии О8Т меченную ΤΝΚ8 захватывают на покрытом глутатионом планшете. После этого осуществляют анализ активности с биотинилированным NΑ^ при отсутствии /в присутствии соединений. В процессе ферментативной реакции О8Т меченная ΤΝΚ8 переносит биотинилированную АОР-рибозу на себя с биотинилированного NΑ^ в качестве ко-субстрата. Для обнаружения добавляют конъюгат стрептавидин-ΗΚР, который связывается с биотинилированной ΤΝΚ8 и таким образом захватывается на планшеты.

Определяют количество биотинилированной соотв. аутопарсилированной ΤΝΚ8 с люминесцентным субстратом для ИКР. Уровень сигнала люминесценции прямо коррелируется с количеством аутопарсилированной ΤΝΚ8 и, следовательно, с активностью ΤΝΚ8.

Активность ЕЬ18А осуществляют в микротитровальных планшетах на 384 лунки, покрытых глутатионом (планшеты для захвата Ехрге55, покрытые глутатионом, Вюса1, ^дейе^, Оегтапу). Планшеты предварительно уравновешивают с помощью РВ8. Затем планшеты инкубуют с 50 мкл 20 нг/лунку О8Тмеченной Тпк5-1 (1023-1327 а/к, собственного производства), соответственно О8Т-меченной Тпк5-2 (8731166 а/к, собственного производства) в буфере для анализа (50 мМ ЖРЕ8, 4 мМ Мд-хлорид, 0.05% Р1игошс Р-68, 2 мМ ΌΤΤ, рН 7.7) в течение ночи при 4°С. Планшеты промывают 3 раза с помощью РВ8Тгееп-20. Лунки блокируют путем инкубирования при комнатной температуре в течение 20 мин с 50 мкл блокирующего буфера (РВ8, 0.05% Т\уееп-20, 0.5% В8А). После этого планшеты промывают 3 раза с помощью РВ8-Т\уееп-20. Ферментативную реакцию осуществляют в 50 мкл реакционного раствора (50 мМ ЖРЕ8, 4 мМ Мд-хлорид, 0.05% Р1игошс Р-68, 1.4 мМ ОТТ, 0.5% ДМСО, рН 7.7) с 10 мкМ Ью^АО (Вю1од, ЬГе 5аепсе 1п51., Вгетеп, Оегтапу) в качестве ко-субстрата при отсутствии или присутствии тестируемого соединения (10 концентраций разведения) в течение 1 ч при 30°С. Реакцию останавливают путем промывания 3 раза с РВ8-Т\уееп-20. Для обнаружения добавляют 50 мкл 20 нг/мкл стрептавидин, ΗΚΓ конъюгата (МоВГТес, Оойшдеп, Оегтапу) в РВ8/0.05%Т^ееп-20/0.01%В8А и планшеты инкубируют в течение 30 мин при комнатной температуре. После трехразового промывания РВ8-Т\уееп-20 добавляют 50 мкл 8ирег81дпа1 ЕЫ8А РетЮ Махипит чувствительного субстратного раствора (ТйегтоР15Йег8с1епРйс (Р1егсе), Вопп, Оегтапу). После инкубирования в течение 1 мин при комнатной температуре, измеряют люминесцентные сигналы с помощью многорежимного планшет-ридера ЕтШюп (Регкш Е1тег ЬА8 Оегтапу ОтЬЩ при 700 нм. Полное используемое значение представляло реакцию без ингибитора. Используемое значение фармакологического нуля представляло собой ХАУ-939 (Тосг15) в конечной кон- 19 027628 центрации 5 мкМ. Определяют ингибирующие значения (1С50), используя либо программу §утух Аккау Ехр1огег®, либо Сопбоккео® от СепеЭа1а.

Выше и ниже, все температуры указаны в градусах Цельсия °С. В последующих примерах обычная обработка обозначает: при необходимости добавляют воду, рН устанавливают, при необходимости, на значение от 2 до 10, в зависимости от состава конечного продукта, смесь экстрагируют этилацетатом или дихлорметаном, фазы разделяют, органическую фазу высушивают над сульфатом натрия и упаривают, и остаток очищают при помощи хроматографии на силикагеле и/или кристаллизации. Кй значения на силикагеле; элюент: этилацетат/метанол 9:1.

ВЭЖХ/МС условия А колонка: СЬготоШЬ Рейогтапсе ΚΘΌ КР-18е, 50 х 4.6 мм² градиент: А:Б = 96:4 - 0:100 за 2.8 мин.

скорость потока: 2.40 мл/мин элюент А: вода + 0.05% муравьиной кислоты элюент Б: ацетонитрил + 0.04% муравьиной кислоты длина волны: 220 нм масс-спектроскопия: положительный режим

ВЭЖХ/МС условия Б колонка: СЬготоШЬ Рейогтапсе ΚΘΌ КР-18е, 100 х 3 мм² градиент: А:Б = 99:1 - 0:100 за 3.5 мин скорость потока: 2.0 мл/мин элюент А: вода + 0.05% муравьиной кислоты элюент Б: ацетонитрил + 0.04% муравьиной кислоты длина волны: 220 нм масс-спектроскопия: положительный режим

ВЭЖХ/МС условия В колонка: СЬготоШЬ Рейогтапсе ΚΘΌ КР-18е, 100 х 3 мм² градиент: А:Б = 99:1 - 0:100 за 1.8 мин скорость потока: 2.0 мл/мин элюент А: вода + 0.05% муравьиной кислоты элюент Б: ацетонитрил + 0.04% муравьиной кислоты длина волны: 220 нм масс-спектроскопия: положительный режим ¹Н ЯМР записывали на спектрометре Вгикег ЭРХ-300, ΌΚΧ-400 или ΑνΐΙ-400, используя остаточный сигнал дейтерированного растворителя в качестве внутреннего стандарта. Химические сдвиги (δ) представлены в виде м.д. относительного остаточного сигнала растворителя (δ = 2.49 м.д. для ЯМР в ДМСО-б₆). ¹Н ЯМР данные представлены следующим образом: химический сдвиг (мультиплетность, константы взаимодействия, и количество водородов). Мультиплетность сокращали следующим образом: к (синглет), б (дублет), ΐ (триплет), с| (квартет), т (мультиплет), Ьг (широкий).

Микроволновую химию осуществляют в однорежимном микроволновом реакторе ЕтгукТМ Ορΐίт1кег от Регкопа1 СкетШгу.

Пример 1

Синтез 2-п-толил-3Н-пирроло[2,1-й][1,2,4]триазин-4-она (А1)

Триэтиламин (277 мкл, 2.00 ммоль) добавляют к суспензии амида 1-амино-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты (250 мг, 2.00 ммоль) в ацетонитриле (4.0 мл). При внешнем охлаждении льдом добавляют по каплям раствор 4-метилбензоилхлорида (264 мкл, 2.00 ммоль) в дихлорметане (0.6 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 ч. Растворители упаривают и остаток вносят в дихлорметан и насыщенный раствор ЫаНСО₃. Образуется осадок, который отфильтровывают, промывают водой и сушат в вакууме с получением амида 1-(4-метилбензоиламино)-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты в виде белых кристаллов; ВЭЖХ/МС 1.57 мин (А), [М+Н] 244;

^!Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ [м.д.] 11.42 (к, 1Н), 7.83 (б, 1=8.1, 2Н), 7.42 (к, 1Н), 7.32 (б, 1=8.0, 2Н), 6.96 (т, 1Н), 6.83 (бб, 1=4.2, 1.8, 1Н), 6.78 (Ьк, 1Н), 6.08 (бб, 1=4.1, 2.8, 1Н), 2.38 (к, 3Н).

Суспензию амида 1-(4-метилбензоиламино)-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты (111 мг, 0.457 ммоль) в 25%-ном водном растворе аммиака (0.7 мл) нагревают до 100°С в закрытом реакционном сосуде и перемешивают при этой температуре в течение 40 ч. Реакционной смеси дают охладиться до комнатной температуры и продувают азотом. Добавляют 1 н. водный раствор хлористо-водородной кислоты до достижения значения рН 2. Твердые вещества отфильтровывают и промывают водой. Хроматография

- 20 027628 на колонке с силикагелем смесью метанол/дихлорметан в качестве элюента дает 2-п-толил-3Н-пирроло[2,1-£][1,2,4]триазин-4-он в виде белых кристаллов; ВЭЖХ/МС 2.45 мин (Б), [М+Н] 226;

Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-й₆) δ [м.д.] 11.89 (5, 1Н), 7.88 (й, 1=8.3, 2Н), 7.65 (йй, 1=2.6, 1.7, 1Н), 7.34 (й, 1=8.0, 2Н), 6.93 (йй, 1=4.3, 1.6, 1Н), 6.58 (йй, 1=4.3, 2.7, 1Н), 2.38 (5, 3Н).

Пример 2

Синтез сложного метилового эфира 4-(4-оксо-3,4-дигидропирроло[2,1-£][1,2,4]триазин-2-ил)бензойной кислоты (А2)

Триэтиламин (554 мкл, 4.00 ммоль) добавляют к суспензии амида 1-амино-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты (501 мг, 4.00 ммоль) в ацетонитриле (8.0 мл). Затем медленно добавляют суспензию метил 4хлоркарбонилбензоата (264 мкл, 2.00 ммоль) в дихлорметане (4.0 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 ч. Растворители упаривают и остаток растирают с водой. Твердое вещество отфильтровывают, промывают водой и сушат в вакууме с получением метил 4-[(2карбамоилпиррол-1-ил)карбамоил]бензоата в виде белых кристаллов; ВЭЖХ/МС 1.45 мин (В), [М+Н] 288.

Натрий (65.3 мг, 2.84 ммоль) растворяют в метаноле (5.0 мл). Затем добавляют 4-[(2-карбамоилпиррол-1-ил)карбамоил]бензоат (544 мг, 1.90 ммоль). Смесь облучают в микроволновом реакторе при 150°С в течение 1 ч. Растворитель упаривают и остаток растирают с водой. Твердое вещество отфильтровывают и промывают водой. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем смесью метанол/дихлорметан в качестве элюента с получением сложного метилового эфира 4-(4-оксо-3,4-дигидропирроло[2,1-£][1,2,4]триазин-2-ил)бензойной кислоты в виде белого пушистого твердого вещества; ВЭЖХ/МС 1.72 мин (В), [М+Н] 270;

Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-й₆) δ [м.д.] 12.10 (5, 1Н), 8.13 (й, 1=8.6, 2Н), 8.09 (й, 1=8.5, 2Н), 7.70 (т, 1Н), 6.96 (йй, 1=4.2, 1.5, 1Н), 6.62 (йй, 1=4.2, 2.7, 1Н), 3.90 (5, 3Н).

Аналогично получают следующие соединения:

2-(4-трет-бутилфенил)-3Н-пирроло[2,1-£][1,2,4]триазин-4-он (А3)

ВЭЖХ/МС 2.05 мин (В), [М+Н] 268;

Ή ЯМР (500 МГц, ДМСО-й₆) δ [м.д.] 11.87 (5, 1Н), 7.92 (й, 1=8.5, 2Н), 7.66 (йй, 1=2.5, 1.7, 1Н), 7.55 (й, 7=8.5, 2Н), 6.93 (йй, 1=4.3, 1.6, 1Н), 6.58 (йй, 1=4.2, 2.7, 1Н), 1.32 (5, 9Н).

2-(1-ацетилпиперидин-4-ил)-3Н-пирроло[2,1-£][1,2,4]триазин-4-он (А4)

ВЭЖХ/МС 1.41 мин (А), [М+Н] 261;

Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-й₆) δ [м.д.] 11.54 (5, 1Н), 7.52 (йй, 1=2.4, 1.8, 1Н), 6.84 (йй, 1=4.3, 1.6, 1Н), 6.51 (йй, 1=4.3, 2.7, 1Н), 4.45 (й, 1=13.0, 1Н), 3.91 (й, 1=13.8, 1Н), 3.09 (т, 1Н), 2.76 (т, 1Н), 2.59 (!й, 1=12.8, 2.2, 1Н), 2.02 (5, 3Н), 1.93 (ΐ, 1=13.1, 2Н), 1.70 (дй, 1=12.4, 4.7, 1Н), 1.54 (дй, 1=12.4, 3.8, 1Н).

Соединение №	Названые и/или структура
А8	2-{4-пирролидин-1 -илфени л)-ЗН-пирроло[2,1 - £] [ 1,2,4]триазин-4-он
А9	2-циклогексил-ЗН-пирроло[2,1-д[1,2,4]триазин-4-он О
А 10	2-( 1-трет-бутилпиразол-4-ил)-ЗН-пирроло[2,1 -ί][ 1,2,4]триазин-4-он О 4% 4

Пример 3

Синтез 2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)фенил]-3Н-пирроло[2,1-£][1,2,4]триазин-4-она (А5)

- 21 027628

К суспензии сложного метилового эфира 4-(4-оксо-3,4-дигидропирроло[2,1-Т|[1,2,4]триазин-2ил)бензойной кислоты (109 мг, 0.405 ммоль) в ТГФ (1.6 мл) добавляют хлорид церия(Ш) (110 мг, 0.445 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем добавляют хлорид метилмагния (20%-ный раствор в ТГФ, 617 мкл, 1.70 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре еще в течение часа. К реакционной смеси осторожно добавляют воду. Смесь распределяют между 1 н. НС1 и дихлорметаном. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и упаривают.

Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем смесью циклогексан/этилацетат в качестве элюента с получением 2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)фенил]-3Н-пирроло[2,1-Г|[1,2,4]триазин-4-она в виде бежевого порошка; ВЭЖХ/МС 1.58 мин (В), [М+Н] 270;

'II ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ [м.д.] 11.88 (к, 1Н), 7.92 (ά, >8.5, 2Н), 7.66 (т, 1Н), 7.61 (ά, >8.5, 2Н), 6.93 (άά, >4.2, 1.5, 1Н), 6.58 (άά, >4.2, 2.7, 1Н), 5.13 (к, 1Н), 1.46 (к, 6Н).

Следующее соединение получают аналогично:

2-[4-(1-этил-1-гидроксипропил)фенил]-3Н-пирроло[2,1-1] [1,2,4]триазин-4-он (А14)

ВЭЖХ/МС 1.82 мин (В), [М+Н] 298;

'II ЯМР (400 МГц, ДМСО-6₆) δ [м.д.] 11.89 (к, 1Н), 7.96-7.88 (т, 2Н), 7.65 (άά, ί = 2.6, 1.7 Гц, 1Н), 7.56-7.48 (т, 2Н), 6.93 (άά, > 4.3, 1.7 Гц, 1Н), 6.58 (άά, ί = 4.3, 2.6 Гц, 1Н), 4.67 (к, 1Н), 1.86-1.66 (т, 4Н), 0.66 (ί, > 7.3 Гц, 6Н).

Пример 4

Синтез 2-(4-бромфенил)-3Н-пирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-4-она (А6) и 2-[4-(1-метил-1Н-пиразол4-ил)фенил]-3Н-пирроло[2,1-!][1,2,4]триазин-4-она (А7)

Триэтиламин (3.10 мл, 22.4 ммоль) добавляют к суспензии амида 1-амино-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты (1.25 г, 10.0 ммоль) в дихлорметане (13 мл). Затем медленно добавляют 4-бромбензоилхлорид (2.19 г, 10.0 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь промывают водой и 1 н. НС1. Органическую фазу упаривают с получением сырого амида 1-(4-бромбензоиламино)-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты в виде светло-оранжевого твердого вещества, которое используют как таковое в следующей реакции; ВЭЖХ/МС 1.56 мин (В), [М+Н] 308/310.

Сырой продукт, полученный на предыдущей стадии, суспендируют в метаноле (30 мл) и добавляют 2 н. водный раствор ЫаОН (15 мл, 30 ммоль). Смесь перемешивают при 80°С в течение 6 дней. Метанол из реакционной смеси отгоняют в вакууме и получающуюся водную суспензию подкисляют водным раствором хлористоводородной кислоты (25% по массе). Получающееся твердое вещество отфильтровывают, промывают водой и сушат. Остаток кристаллизуют из 2-пропанола с получением 2-(4-бромфенил)3Н-пирроло[2,1-£][1,2,4]триазин-4-она в виде не совсем белого твердого вещества; ВЭЖХ/МС 1.85 мин (В), [М+Н] 290/292;

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-6₆) δ [м.д.] 12.04 (к, 1Н), 7.92 (ά, >8.7, 2Н), 7.75 (ά, >8.7, 2Н), 7.68 (άά, >2.6, 1.7, 1Н), 6.95 (άά, >4.3, 1.6, 1Н), 6.60 (άά, >4.3, 2.7, 1Н).

Суспензию 2-(4-бромфенил)-3Н-пирроло[2,1-£][1,2,4]триазин-4-она (58.0 мг, 0.200 ммоль), 1-метил4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразола (45.8 мг, 0.22 ммоль) и гидрокарбоната натрия (20.2 мг, 0.24 ммоль) в 0.4 мл ДМФА и 0.2 мл воды продувают азотом и нагревают до 40°С. Затем

- 22 027628 добавляют бис(трифенилфосфин) - хлорид палладия(11) (2.8 мг, 0.004 ммоль). Реакционную смесь нагревают до 80°С и перемешивают при этой температуре в течение 18 ч. Смеси дают охладиться до комнатной температуры и добавляют избыток воды. Получающийся осадок отфильтровывают, промывают водой и сушат в вакууме. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем смесью метанол/дихлорметан в качестве элюента с получением 2-[4-(1-этил-1Н-пиразол-4-ил)фенил]-3Н-пирроло[2,1-Т|[1,2,4]триазин-4-она в виде не совсем белых кристаллов; ВЭЖХ/МС 1.64 мин (В), [М+Н] 292;

^!Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆) δ [м.д.] 11.91 (к, 1Н), 8.27 (к, 1Н), 7.98 (т, 3Н), 7.73 (6, 1=8.5, 2Н), 7.66 (аа, 1=2.5, 1.7, 1Н), 6.93 (аа, 1=4.3, 1.6, 1Н), 6.59 (аа, 1=4.3, 2.7, 1Н), 3.88 (к, 3Н).

Пример 5

Альтернативный синтез сложного метилового эфира 4-(4-оксо-3,4-дигидропирроло[2,11][1,2,4]триазин-2-ил)бензойной кислоты (А2)

Раствор 2-(4-бромфенил)-3Н-пирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-4-она (325 мг, 1.12 ммоль) и триэтиламина (170 мг, 1.68 ммоль) в метаноле (10 мл) и толуоле (6 мл) в автоклаве продувают азотом. Добавляют (1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен)дихлорпалладий(11) (28 мг, 0.034 ммоль) и 1,1-бис-(дифенилфосфино)ферроцен (25 мг, 0.045 ммоль). Затем автоклав заполняют монооксидом углерода и нагревают до 100°С. Автоклав выдерживают при этой температуре в течение 16 ч при давлении монооксида углерода 2-4 бар. Автоклав доводят до атмосферного давления. Реакционную смесь упаривают и остаток кристаллизуют из 2-пропанола с получением сложного метилового эфира 4-(4-оксо-3,4-дигидропирроло[2,11][1,2,4]триазин-2-ил)бензойной кислоты в виде светло-оранжевого порошка; ВЭЖХ/МС 1.73 мин (В), [М+Н] 270.

Пример 6

Синтез 2-[4-(1 -гидрокси-1 -метилэтил)фенил] -6-метил-3Н-пирроло [2,1-ί][ 1,2,4]триазин-4-она (А11)

А11:

ВЭЖХ/МС 2.29 мин (Б), [М+Н] 284;

^!Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-а₆) δ [м.д.] 11.84 (к, 1Н), 7.95-7.84 (т, 2Н), 7.65-7.55 (т, 2Н), 7.47 (ф 1= 1.1 Гц, 1Н), 6.75 (а, 1= 1.8 Гц, 1Н), 5.15 (к, 1Н), 2.19 (к, 3Н), 1.45 (к, 6Н).

Аналогично получали следующее соединение: 6-фтор-2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)фенил]-3Нпирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-4-он (А12)

- 23 027628

Пример 7

Синтез 6-метил-2-[4-(1-метилпиразол-4-ил)фенил]-3Н-пирроло-[2,1-£][1,2,4]триазин-4-она (А13)

А13:

ВЭЖХ/МС 2.40 мин (Б), [М+Н] 306;

'II ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆) δ [м.д.] 11.79 (5, 1Н), 8.26 (5, 1Н), 8.00-7.92 (т, 3Н), 7.75-7.67 (т, 2Н), 7.46 (άά, 1= 1.9, 0.9 Гц, 1Н), 6.73 (άά, 1= 1.8, 0.8 Гц, 1Н), 3.88 (5, 3Н), 2.20 (5, 3Н).

Пример 8

Синтез 2-{4-[1-(2-гидроксиэтокси)-1-метилэтил]фенил}-3Н-пирроло[2,1-£][1,2,4]триазин-4-она (А15)

К суспензии 2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)фенил]-3Н-пирроло[2,1Я][1,2,4]триазин-4-она (53.9 мг, 0.20 ммоль) в этан-1,2-диоле (0.7 мл) добавляют моногидрат толуол-4-сульфоновой кислоты (3.8 мг, 20 мкмоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 7 дней при температуре окружающей среды. К реакционной смеси добавляют воду. Получающийся осадок отфильтровывают, промывают водой и сушат в вакууме. Его хроматографируют на колонке с силикагелем смесью циклогексан/этилацетат в качестве элюента с получением 2-{4-[1-(2-гидроксиэтокси)-1-метилэтил]-фенил}-3Н-пирроло[2,1-£]] [1,2,4]триазин-4-она в виде белых кристаллов; ВЭЖХ/МС 2.18 мин (Б), [М+Н] 314;

'II ЯМР (400 МГц, ДМС’О-ά,·,) δ [м.д.] 11.91 (5, 1Н), 8.00-7.91 (т, 2Н), 7.66 (άά, 1=2.6, 1.6 Гц, 1Н), 7.63-7.55 (т, 2Н), 6.94 (άά, I = 4.3, 1.7 Гц, 1Н), 6.59 (άά, 1= 4.3, 2.6 Гц, 1Н), 4.55 (!, 1= 5.7 Гц, 1Н), 3.50 (ЦД= 5.6 Гц, 2Н), 3.19 (!, 1= 5.6 Гц, 2Н), 1.50 (5, 6Н).

Пример 9

Синтез 2-[4-(1-амино-1-метилэтил)фенил]-3Н-пирроло[2,1-£][1,2,4]триазин-4-она (А16)

К суспензии 2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)фенил]-3Н-пирроло[2,1Я][1,2,4]триазин-4-она (135 мг, 0.50 ммоль) и азида натрия (71.5 мг, 1.1 ммоль) в дихлорметане (1 мл) по каплям добавляют раствор трифторуксусной кислоты (316 мкл, 4.1 ммоль) в дихлорметане (0.6 мл) при внешнем охлаждении льдом. Реакционную смесь перемешивают в течение 3 дней при комнатной температуре. Добавляют воду (5 мл) и 25%-ный водный аммиак (0.5 мл). Органическую фазу отделяют, а водную фазу экстрагируют дихлорметаном. Объединенные органические фазы сушат над сульфатом натрия и упаривают с получением 2[4-(1-азидо-1-метилэтил)фенил]-3Н-пирроло[2,1-£][1,2,4]триазин-4-она в виде белого твердого вещества; ВЭЖХ/МС 1.98 мин (В), [М+Н] 295.

К раствору 2-[4-(1-азидо-1-метилэтил)фенил]-3Н-пирроло[2,1-Г][1,2,4]триазин-4-она (115 мг, 0.39 ммоль) в 2 мл ТГФ добавляют цинковую пыль (128 мг, 1.96 ммоль) и уксусную кислоту (225 мкл, 3.93 ммоль) и смесь перемешивают в течение 18 ч при комнатной температуре. Суспензию разбавляют ТГФ и подкисляют небольшим количеством 25%-ной хлористоводородной кислоты. Смесь фильтруют с отсасыванием. Фильтрат промывают насыщенным раствором карбоната натрия и насыщенным раствором хлорида натрия. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток очищают с по- 24 027628 мощью препаративной ВЭЖХ с получением соли-формиата 2-[4-(1-амино-1-метилэтил)фенил]-3Нпирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-4-она в виде белого твердого вещества; ВЭЖХ/МС 1.25 мин (В), [Μ-ΝΗ₂]+ 252; 'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-й₆) δ [м.д.] 8.32 (5, 1Η), 8.01-7.93 (т, 2Η), 7.73-7.67 (т, 2Н), 7.66 (йй, 1= 2.7, 1.7 Гц, 1Н), 6.93 (йй, 1= 4.3, 1.7 Гц, 1Η), 6.59 (йй, 1= 4.3, 2.6 Гц, 1Н), ΝΗ-протоны невидимы.

Пример 10

Синтез 6-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)фенил]-2-метил-5Н-1,5,7,7а-тетраазаинден-4-она (А17)

Суспензию хлорида аммония (6.69 г, 125 ммоль) в диэтиловом эфире (250 мл) охлаждают до -5°С и медленно добавляют 32%-ный водный аммиак (10.4 мл, 84 ммоль). Затем по каплям добавляют водный раствор гипохлорита натрия (активный хлор 6-14%, 185 мл) в течение 10 мин. Смесь перемешивают в течение 20 мин при -5°С. Отделенную органическую фазу промывают солевым раствором, сушат над хлоридом кальция при -60°С в течение 1 ч и фильтруют с получением прибл. 0.45 М раствора хлорамина в диэтиловом эфире (270 мл), который используют непосредственно на следующей стадии.

К раствору сложного этилового эфира 5-метил-2Н-пиразол-3-карбоновой кислоты (4.63 г, 30.0 ммоль) в 60 мл ДМФА добавляют трет-бутилат калия (6.73 г, 60.0 ммоль) в атмосфере азота. После перемешивания при комнатной температуре в течение 20 мин, медленно добавляют вышеупомянутый раствор хлорамина (270 мл, прибл. 120 ммоль), после чего смесь перемешивают в течение 10 мин при комнатной температуре. Реакционную смесь фильтруют с отсасыванием и остаток промывают третбутилметиловым эфиром. Фильтрат распределяют между насыщенным раствором бисульфита натрия и трет-бутилметиловым эфиром. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем смесью циклогексан/этилацетат в качестве элюента с получением двух изомеров:

Изомер, элюируемый первым: сложный этиловый эфир 2-амино-5-метил-2Н-пиразол-3-карбоновой кислоты в виде коричневого масла; ВЭЖХ/МС 1.82 мин (Б), [М+Н] 170;

'II ЯМР (500 МГц, ДМСО-й₆) δ [м.д.] 6.72 (Ьз, 2Η), 6.49 (5, 1Η), 4.27 (ц, 1 = 7.1 Гц, 2Н), 2.13 (5, 3Н),

1.29 (1, 1= 7.1 Гц, 3Н).

Изомер, элюируемый вторым: сложный этиловый эфир 1-амино-5-метил-1Н-пиразол-3-карбоновой кислоты в виде бежевого твердого вещества; ВЭЖХ/МС 1.70 мин (Б), [М+Н] 170;

'II ЯМР (500 МГц, ДМСО-й₆) δ [м.д.] 6.46 (з, 1Η), 6.44 (з, 2Η), 4.23 (ц, 1=7.1 Гц, 2Н), 2.23 (з, 3Н), 1.27 (1, 1= 7.1 Гц, 3Н).

К раствору сложного этилового эфира 2-амино-5-метил-2Н-пиразол-3-карбоновой кислоты (310 мг, 1.83 ммоль) в дихлорметане (4 мл) добавляют триэтиламин (887 мкл, 6.40 ммоль). Затем медленно добавляют раствор 4-бромбензоилхлорида (803 мг, 3.66 ммоль) в дихлорметане (2 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 18 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь распределяют между водой и дихлорметаном. Органический слой промывают 1 н. НС1, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем смесью циклогексан/этилацетат в качестве элюента с получением сложного этилового эфира 2-(4-бромбензоиламино)-5-метил-2Н-пиразол-3-карбоновой кислоты в виде коричневого масла; ВЭЖХ/МС 2.10 мин (А), [М+Н] 352/354.

К раствору сложного этилового эфира 2-(4-бромбензоиламино)-5-метил-2Н-пиразол-3-карбоновой кислоты (444 мг, 1.26 ммоль) в метаноле (6.5 мл) добавляют 32%-ный водный аммиак (10 мл, 80.6 ммоль) и получающийся желтый раствор нагревают до 60°С и перемешивают при этой температуре в

- 25 027628 течение 3 дней. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и упаривают. Остаток вносят в воду, твердые вещества отфильтровывают, промывают водой и сушат в вакууме с получением смеси амида 2-(4-бромбензоиламино)-5-метил-2Н-пиразол-3-карбоновой кислоты [ВЭЖХ/МС 1.90 мин (Б), [М+Н] 323/325; 2.40 мин (В), [М+Н] 305/307] и 6-(4-бромфенил)-2-метил-5Н-1,5,7,7а-тетраазаинден-4она в виде белого твердого вещества, которую используют как таковую на следующей стадии.

К раствору сырого вышеупомянутого продукта (209 мг) в 2-пропаноле (4.4 мл) добавляют 2 н. ЫаОН (1.61 мл, 3.2 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 18 ч при 80°С. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и нейтрализуют 2 н. НС1. Получающийся осадок отфильтровывают, промывают водой и сушат. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем смесью циклогексан/этилацетат с получением 6-(4-бромфенил)-2-метил-5Н-1,5,7,7а-тетраазаинден-4-она в виде белого твердого вещества; ВЭЖХ/МС 2.39 мин (Б), [М+Н] 305/307;

'Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-б₆) δ [м.д.] 12.66 (Ь5, 1Н), 7.93 (б, 1= 8.6 Гц, 2Н), 7.77 (б, 1= 8.6 Гц, 2Н), 6.86 (5, 1Н), 2.37 (5, 3Н).

Раствор 6-(4-бромфенил)-2-метил-5Н-1,5,7,7а-тетраазаинден-4-она (55 мг, 0.18 ммоль) и триэтиламина (38 мкл, 0.28 ммоль) в метаноле (5 мл) и ТГФ (5 мл) в автоклаве продувают азотом. Добавляют (1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцен)дихлорпалладий(11) (4.5 мг, 0.005 ммоль) и 1,1-бис-(дифенилфосфино)ферроцен (25 мг, 0.007 ммоль). Затем автоклав заполняют монооксидом углерода и нагревают до 100°С. Автоклав выдерживают при этой температуре в течение 16 ч при давлении монооксида углерода 2-4 бар. Автоклав доводят до атмосферного давления. Реакционную смесь упаривают и остаток кристаллизуют из метанола с получением сложного метилового эфира 4-(2-метил-4-оксо-4,5-дигидро-1,5,7,7атетраазаинден-6-ил)бензойной кислоты в виде светло-серого твердого вещества; ВЭЖХ/МС 2.19 мин (Б), [М+Н] 285.

Суспензию сложного метилового эфира 4-(2-метил-4-оксо-4,5-дигидро-1,5,7,7а-тетраазаинден-6ил)бензойной кислоты (40 мг, 0.14 ммоль) в ТГФ (0.6 мл) продувают азотом и добавляют хлорид церия(111) (38 мг, 0.15 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем добавляют хлорид метилмагния (20%-ный раствор в ТГФ, 190 мкл, 0.58 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 мин. Реакционную смесь распределяют между ТГФ и насыщенным раствором хлорида натрия. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем смесью дихлорметан/метанол в качестве элюента с получением 6-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)фенил]-2-метил-5Н-1,5,7,7а-тетраазаинден-4-она в виде белого порошка; ВЭЖХ/МС 1.70 мин (Б), [М+Н] 285;

ΊI ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ [м.д.] 12.55 (5, 1Н), 7.99-7.91 (т, 2Н), 7.69-7.61 (т, 2Н), 6.86 (5, 1Н), 5.18 (5, 1Н), 2.38 (5, 3Н), 1.48 (5, 6Н).

Пример 11

Альтернативный синтез 6-фтор-2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)фенил]-3Н-пирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-4-она (А12)

Суспензию хлорида аммония (1.34 г, 25 ммоль) в диэтиловом эфире (50 мл) охлаждают до -5°С и медленно добавляют 32%-ный водный аммиак (2.08 мл, 16.8 ммоль). Затем по каплям добавляют водный раствор гипохлорита натрия (активный хлор 6-14%, 37 мл) в течение 10 мин. Смесь перемешивают в течение 20 мин при -5°С. Отделенную органическую фазу промывают солевым раствором и сушат над хлоридом кальция при -60°С в течение 2 ч. Хлорид кальций отфильтровывают и промывают диэтиловым эфиром с получением в качестве фильтрата прибл. 0.45 М раствора хлорамина в диэтиловом эфире (110

- 26 027628 мл), который используют непосредственно на следующей стадии.

К раствору сложного этилового эфира 4-фтор-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты (1.57 г, 10.0 ммоль) в 20 мл ДМФА добавляют трет-бутилат калия (2.24 г, 20.0 ммоль) в атмосфере азота. После перемешивания при комнатной температуре в течение 90 мин медленно добавляют вышеупомянутый раствор хлорамина (110 мл, прибл. 25 ммоль), после чего смесь перемешивают в течение 5 мин при комнатной температуре. Реакционную смесь распределяют между насыщенным раствором бисульфита натрия и третбутилметиловым эфиром. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем смесью циклогексан/дихлорметан в качестве элюента с получением сложного этилового эфира 1-амино-4-фтор-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты в виде белого твердого вещества; ВЭЖХ/МС 2.21 мин (Б), [М+Н] 173;

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-к₆) δ [м.д.] 7.05 (άά, 1= 3.2, 2.5 Гц, 1Н), 6.48 (ά, 1= 2.5 Гц, 1Н), 6.31 (5, 2Н), 4.23 (ц, 1= 7.1 Гц, 2Н), 1.28 (ΐ, 1= 7.1 Гц, 3Н).

Следующие соединения получают аналогично:

сложный метиловый эфир 1-амино-4-хлор-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты; белое твердое вещество; ВЭЖХ/МС 2.20 мин (Б), [М+Н] 175; 'II ЯМР (400 МГц, ДМСОД₆) δ [м.д.] 7.18 (ά, 1= 2.3 Гц, 1Н), 6.69 (ά, 1= 2.3 Гц, 1Н), 6.34 (5, 2Н), 3.76 (5, 3Н).

Сложный этиловый эфир 1-амино-5-метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты; желтое масло; ВЭЖХ/МС 1.77 мин (В), [М+Н] 169.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСОД₆) δ [м.д.] 6.64 (ά, 1= 4.3 Гц, 1Н), 6.09 (5, 2Н), 5.80 (άά, 1= 4.2, 0.8 Гц, 1Н), 4.20 (ц, 1= 7.1 Гц, 2Н), 2.19 (5, 3Н), 1.26 (ΐ, I = 7.1 Гц, 3Н).

К раствору сложного этилового эфира 1-амино-4-фтор-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты (1.18 г, 6.88 ммоль) в дихлорметане (14 мл) добавляют триэтиламин (3.34 мл, 24.1 ммоль). Затем порциями добавляют 4-бромбензоилхлорид (3.02 г, 13.8 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 18 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь распределяют между водой и дихлорметаном. Органический слой промывают 1 н. НС1, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем смесью циклогексан/этилацетат в качестве элюента с получением сложного этилового эфира 1-(4-бромбензоиламино)-4-фтор-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты в виде белого твердого вещества; ВЭЖХ/МС 2.78 мин (Б), [М+Н] 355/357.

К раствору сложного этилового эфира 1-(4-бромбензоиламино)-4-фтор-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты (533 мг, 1.50 ммоль) в метаноле (8 мл) добавляют 32%-ный водный аммиак (6.8 мл, 172 ммоль) и получающийся желтый раствор нагревают до 80°С и перемешивают при этой температуре в течение 3 дней. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и упаривают с получением смеси амида

1- (4-бромбензоиламино)-4-фтор-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты [ВЭЖХ/МС 2.22 мин (Б), [М+Н] 326/328; 2.78 мин (В), [М+Н] 308/310] и 2-(4-бромфенил)-6-фтор-3Н-пирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-4-она в виде светло-желтого твердого вещества, которое используют как таковое на следующей стадии.

К раствору смеси амида 1-(4-бромбензоиламино)-4-фтор-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты и 2-(4бромфенил)-6-фтор-3Н-пирроло[2,1-Г][1,2,4]триазин-4-она (317 мг) в 2-пропаноле (8 мл) добавляют 2 н. ЫаОН (2.82 мл, 5.6 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 3 дней при 80°С. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и нейтрализуют 2 н. НС1. Получающийся осадок отфильтровывают, промывают водой и кристаллизуют из 2-пропанола с получением 2-(4-бромфенил)-6-фтор-3Нпирроло[2,1-£][1,2,4]триазин-4-она в виде белого твердого вещества; ВЭЖХ/МС 2.77 мин (Б), [М+Н] 308/310.

Раствор 2-(4-бромфенил)-6-фтор-3Н-пирроло[2,1-Г][1,2,4]триазин-4-она (462 мг, 1.50 ммоль) и триэтиламина (320 мкл, 2.27 ммоль) в метаноле (10 мл) и толуоле (10 мл) в автоклаве продувают азотом. Добавляют (1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен)дихлорпалладий(П) (37 мг, 0.045 ммоль) и 1,1-бис(дифенилфосфино)ферроцен (34 мг, 0.06 ммоль). Затем автоклав заполняют монооксидом углерода и нагревают до 105°С. Автоклав выдерживают при этой температуре в течение 16 ч при давлении монооксида углерода 2-4.5 бар. Автоклав доводят до атмосферного давления. Реакционной смеси дают достичь комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают метанолом и сушат в вакууме с получением сложного метилового эфира 4-(6-фтор-4-оксо-3,4-дигидропирроло[2,1-Г][1,2,4]триазин-2-ил)бензойной кислоты в виде белого порошка; ВЭЖХ/МС 2.53 мин (Б), [М+Н] 288.

Суспензию сложного метилового эфира 4-(6-фтор-4-оксо-3,4-дигидропирроло[2,1-Г][1,2,4]триазин2- ил)бензойной кислоты (394 мг, 1.37 ммоль) в ТГФ (5.8 мл) продувают азотом и добавляют хлорид церия(Ш) (373 мг, 1.51 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем добавляют хлорид метилмагния (3.0 М в ТГФ, 1.92 мл, 5.75 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакционную смесь распределяют между ТГФ и насыщенным раствором хлорида натрия. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия, упаривают и кристаллизуют из трет-бутилметилового эфира с получением 6-фтор-2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)фенил]3Н-пирроло[2,1-£][1,2,4]триазин-4-она в виде белого порошка; ВЭЖХ/МС 2.29 мин (Б), [М+Н] 288;

Ίί ЯМР (400 МГц, ДМСОД₆) δ [м.д.] 12.14 (5, 1Н), 7.89 (ά, 1= 8.5 Гц, 2Н), 7.77 (άά, 1= 3.2, 2.1 Гц, 1Н), 7.65-7.58 (т, 2Н), 6.79 (ά, 1= 2.1 Гц, 1Н), 5.15 (5, 1Н), 1.46 (5,6Н).

- 27 027628

Следующие соединения получают аналогично:

6-хлор-2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)фенил]-3Н-пирроло[2,1-£][1,2,4]триазин-4-он (А18)

ВЭЖХ/МС 1.79 мин (В), [М+Н] 304;

'II ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆) δ [м.д.] 12.13 (5, 1Н), 7.93-7.88 (т, 2Н), 7.88 (ά, 1= 1.9 Гц, 1Н), 7.657.58 (т, 2Н), 6.97 (ά, 1= 1.9 Гц, 1Н), 5.15 (5, 1Н), 1.46 (5, 6Н);

2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)фенил]-7-метил-3Н-пирроло[2,1-£][1,2,4]триазин-4-он (А19)

ВЭЖХ/МС 2.39 мин (Б), [М+Н] 284;

'II ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆) δ [м.д.] 11.78 (5, 1Н), 7.98-7.90 (т, 2Н), 7.65-7.57 (т, 2Н), 6.86 (ά, 1= 4.2 Гц, 1Н), 6.40 (ά, 1= 4.2 Гц, 1Н), 5.13 (5, 1Н), 2.46 (5, 3Н), 1.46 (5, 6Н).

Пример 12

Синтез 2-[4-(1 -гидрокси-1 -метилэтил)фенил] -7-трифторметил-3Н-пирроло [2,1-ί][ 1,2,4]триазин-4она (А20)

К суспензии 2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)фенил]-3Н-пирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-4-она (135 мг, 0.50 ммоль) и бис-(трифторметилсульфинилокси)цинка (497 мг, 1.50 ммоль) в двухфазной смеси дихлорметана (2.0 мл) и воды (0.8 мл) добавляют трет-бутилгидропероксид (70%-ный раствор в воде, 342 мкл, 2.50 ммоль) при внешнем охлаждении льдом.

Смеси дают достичь комнатной температуры. Добавляют диметилсульфоксид (1.0 мл) и смесь перемешивают в течение 18 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавляют дихлорметаном и добавляют насыщенный раствор гидрокарбоната натрия. Твердое вещество отфильтровывают и органическую фазу фильтрата отделяют. Водную фазу фильтрата экстрагируют дихлорметаном. Объединенные органические фазы сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем смесью циклогексан/этилацетат в качестве элюента с получением 2-[4-(1-гидрокси-1метилэтил)фенил]-7-трифторметил-3Н-пирроло[2,1-£][1,2,4]триазин-4-она в виде белого порошка; ВЭЖХ/МС 1.89 мин (В), [М+Н] 338;

'II ЯМР (400 МГц, ДМСОД₆) δ [м.д.] 12.43 (5, 1Н), 7.95-7.88 (т, 2Н), 7.69-7.62 (т, 2Н), 7.12 (ά, 1= 4.6 Гц, 1Н), 7.03 (ά, 1= 4.6 Гц, 1Н), 5.18 (5, 1Н), 1.47 (5, 6Н).

Пример 13

Синтез 2-[4-(1-гидроксициклопентил)фенил]-3Н-пирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-4-она (А21)

Реакционную пробирку объемом 15 мл продувают азотом, и в нее загружают сухой ТГФ (2.5 мл), стружку магния (55.5 мг, 2.28 ммоль) и хлорид церия(111) (20.5 мг, 0.084 ммоль). Суспензию охлаждают до 0°С и добавляют 1,4-дибромбутан (157 мкл, 1.33 ммоль). Суспензии дают достичь комнатной температуры, перемешивают в течение 30 мин при этой температуре и снова охлаждают до 0°С. Затем по каплям добавляют раствор сложного метилового эфира 4-(4-оксо-3,4-дигидропирроло[2,1-£][1,2,4]триазин-2ил)бензойной кислоты (113 мг, 0.42 ммоль) в ТГФ (1 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре. Реакционную смесь гасят насыщенным раствором хлорида аммония и распределяют между этилацетатом и водой. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем смесью циклогексан/этилацетат в качестве

- 28 027628 элюента с получением 2-[4-(1-гидроксициклопентил)фенил]-3Н-пирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-4-она в виде белого твердого вещества; ВЭЖХ/МС 1.75 (В), [М+Н] 296; ^!Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆) δ [м.д.] 11.92 (к, 1Н), 7.98-7.89 (т, 2Н), 7.67 (аа, 1= 2.7, 1.7 Гц, 1Н), 7.65-7.59 (т, 2Н), 6.94 (аа, 1= 4.3, 1.7 Гц, 1Н), 6.60 (аа, 1= 4.3, 2.6 Гц, 1Н), 4.94 (к, 1Н), 1.95-1.85 (т, 6Н), 1.83-1.74 (т, 2Н).

Фармакологические данные

Таблица 2. Ингибирование танкираз некоторыми репрезентативными соединениями формулы I

Соединение №	1С5« танкираза 1 (ферментативное исследование)	1С50 танкираза 2 (ферментативное исследование)	ЕС50 танкираза 1/2 (клеточное исследование)
А Г	А	А
А2	А	А	Б
АЗ	А	Б	Б
А4
А5	А	А	Б
Аб	А	А
А7	А	Б	Б
А11	А	А	Б
А12	А	А	Б
А 13	А	А	Б
А14	А	А	А
”А15	А	А	Б
А 16	Б	Б
А 17	Б	Б	В
А 18	А	А	Б
А19	А	А	А
”А20	Б	В
А21	А	А	Б

1С₅₀: < 0.3 мкМ = А 0.3-3 мкМ = Б 3-50 мкМ = В

Соединения, представленные в табл. 2 являются особенно предпочтительными соединениями в соответствии с изобретением.

Таблица 3. Ингибирование танкираз некоторыми репрезентативными соединениями формулы I

Соединение №	1С50 РАКР	1С50 ΤΝΚ51 ЕЫЗА	1С50 ΤΝΚ82 ЕЫ8А
А1		А	А
А5	В	А	А
А7	В	А	А
АП	Б	А	А
А12	Б	А	А
А13	В	А	А
А14	В	А	А
А15	в	А	А
А17		Б	Б
А18	в	А	А
А19”
А21	в	А	А

1С₅₀: < 0.3 мкМ = А 0.3-3 мкМ = Б 3-50 мкМ = В

Соединения, представленные в табл. 3 являются особенно предпочтительными соединениями в соответствии с изобретением.

Следующее примеры относятся к лекарственным средствам.

Пример А. Флаконы для инъекций рН раствора 100 г активного компонента формулы I и 5 г №₂НРО₄ в 3 л бидистиллированной воды устанавливают на 6.5, используя 2 н. соляную кислоту, стерилизуют фильтрацией, переносят во флаконы для инъекций, лиофилизируют в стерильных условиях и запечатывают в стерильных условиях. Каждый флакон для инъекций содержит 5 мг активного компонента.

Пример Б. Суппозитории

Смесь 20 г активного компонента формулы I расплавляют с 100 г соевого лецитина и 1400 г какаового масла, разливают в пресс-формы и позволяют охладиться. Каждый суппозиторий содержит 20 мг активного компонента.

Пример В. Раствор

Раствор приготавливают из 1 г активного компонента формулы I, 9.38 г NаН₂РО₄ · 2 Н₂О, 28.48 г №₂НРО₄ · 12 Н₂О и 0.1 г бензалконийхлорида в 940 мл бидистиллированной воды. рН раствора устанавливают на 6.8 и объем раствора доводят до 1 л и стерилизуют путем облучения. Этот раствор может использоваться в форме глазных капель.

Пример Г. Мазь

500 мг активного компонента формулы I смешивают с 99.5 г вазелина в асептических условиях.

Пример Д. Таблетки

Смесь 1 кг активного компонента формулы I, 4 кг лактозы, 1.2 кг картофельного крахмала, 0.2 кг талька и 0.1 кг стеарата магния спрессовывают для получения таблеток обычным способом таким образом, чтобы каждая таблетка содержала 10 мг активного компонента.

- 29 027628

Пример Б. Драже

Таблетки спрессовывают аналогично примеру Д и затем покрывают обычным способом покрытием из сахарозы, картофельного крахмала, талька, трагаканта и красителя.

Пример Ж. Капсулы кг активного компонента формулы I помещают в твердые желатиновые капсулы обычным способом таким образом, чтобы каждая капсула содержала 20 мг активного компонента.

Пример 3. Ампулы

Раствор 1 кг активного компонента формулы I в 60 л бидистиллированной воды стерилизуют фильтрацией, переносят в ампулы, лиофилизируют в стерильных условиях и запечатывают в стерильных условиях. Каждая ампула содержит 10 мг активного компонента.

Claims (5)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Соединения формулы I

   О в которой X означает Ν, СН, ССР₃ или ССН₃,

   К¹ означает Н, Р, С1 или СН₃,

   К² означает Н,

   Υ означает Аг¹, Не!¹ или Сус,

   Аг¹ означает фенил, который монозамещен посредством На1, А, [С(К²)2]рНе!² или [С(К²)2]_рСООК²,

   Не!¹ означает пирролидинил, пиперидинил или пиразолил, каждый из которых незамещен или монозамещен посредством А,

   Сус означает циклический алкил, содержащий 3, 4, 5, 6 или 7 атомов С, который может быть незамещен или монозамещен посредством А, На1, СN или Аг² или Не!²,

   Не!² означает пирролидинил, пиперидинил или пиразолил, каждый из которых монозамещен посредством А,

   А означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий 1-10 атомов С, где одна или две СН- и/или СН₂-группы, не расположенные рядом, могут быть заменены на О-атомы и где 1-7 атомов Н могут быть заменены на Р или С1,

   На1 означает Р, С1, Вг или I, р означает 0 или 1, при условии, что если К¹ означает Н, то Υ не означает 4-фторфенил, 3-бромфенил или 5-хлор-2фторфенил, и их фармацевтически приемлемые соли.
2. 2. Соединения по п.1, выбранные из группы

   Хе Название А1” 2-«-толил-ЗН-пирроло[2,1-Г|[1,2,41триазин-4-он А2” сложный метиловый эфир 4-(4-оксо-3.4-дигидропирроло[2,1ГЦ’1,2,4‘|триазин-2-ил)-бензойной кислоты АЗ” 2-(4-/ире//!-бутилфенил)-ЗН-пирролоГ2,1-{1Г1,2,41триазин-4-он А4” 2-(1-ацетилпиперидин-4-ил)-ЗН-пирроло[2,1-Г|ГБ2,41триазин-4-он А5” 2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)-фенил]-ЗН-пирроло[2,1-Г] Г1,2,41триазин-4-он А6” 2-(4-бромфенил)-ЗН-пирроло[2,1-£][1,2,41триазин-4-он А7” 2-[4-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-фенил]-ЗН-пирроло- Г2.1-£1Г1,2,41триазин-4-он А8” 2-(4-пирролидин-1-илфенил)-ЗН-пирролоГ2,1-£1[1,2,41триазин-4-он А9” 2-циклогексил-ЗН-пирролоГ2,1-{1[1,2,41триазин-4-он ”А10 2-(1-/ире/и-бутилпиразол-4-ил)-ЗН-пирролоГ2,1-Г1Г1,2,41триазин-4-он АН 2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)фенил]-6-метил-ЗН-пирроло[2,1- Г|Г1,2,41триазин-4-он ”А12 6-фтор-2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)фенил]-ЗН-пирроло[2,1- Г1Г1,2,41триазин-4-он ”А13 6-метил-2-[4-(1-метилпиразол-4-ил)фенил]-ЗН-пирроло- Г2.1-£1Г1,2,41триазин-4-он ”А14 2-[4-( 1-этил-1-гидроксипропил)-фенил]-ЗН-пирроло[2,1-Г][ 1,2,4]триазин4-он ”А15 2-{4-[1-(2-гидроксиэтокси)-1-метилэтил]-фенил }-ЗН-пирроло[2,1Г|Г1,2,41триазин-4-он ”А16 2-[4-( 1-амино-1-метилэтил)-фенил1-ЗН-пирроло[2,1-Г|[Б2,41триазин-4-он ”А17 6-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)-фенил]-2-метил-5Н-1,5,7,7 атетраазаинден-4-он ”А18 6-хлор-2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)-фенил]-ЗН-пирроло[2,1- Г|Г1,2,41триазин-4-он А19 2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)-фенил]-7-метил-ЗН-пирроло[2,1- Г1Г1,2,41триазин-4-он ”А20 2-[4-(1-гид рокси-1-метилэтил)-фенил]-7-трифторметил-ЗН-пиррол о[2,1 Г|Г1,2,41триазин-4-он ”А21 2-[4-(1-гидроксициклопентил)-фенил]-ЗН-пирроло[2,1-Г][1,2,4]триазин-4он

   и их фармацевтически приемлемые соли.
3. 3. Способ получения соединений формулы I по пп.1, 2 и их фармацевтически приемлемых солей, отличающийся тем, что соединение формулы II

   - 30 027628 в которой X, К¹ и Υ имеют значения, указанные в п.1, подвергают реакции с ΝΉ₃, неорганическим основанием или алкоголятом щелочного металла и/или основание или кислоту формулы I превращают в одну из его (ее) солей.
4. 4. Способ получения соединений формулы I по пп.1, 2 и их фармацевтически приемлемых солей, отличающийся тем, что радикал Υ превращают в другой радикал Υ путем:

   I) превращения атома галогена в сложноэфирную группу,

   II) превращения сложноэфирной группы в спиртовую группу,

   III) превращения галогенированного фенильного кольца в реакции сочетания Сузуки в арилированное фенильное кольцо, и/или основание или кислоту формулы I превращают в одну из его (ее) солей.
5. 5. Лекарственное средство, содержащее по меньшей мере одно соединение формулы I по п.1 и/или его фармацевтически приемлемые соли и необязательно фармацевтически приемлемый носитель, наполнитель или среду для лекарственного средства.