EA026398B1 - Новые композиции для лечения хронических язв - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к композициям, содержащим вещества природного происхождения, для применения в лечении или предупреждении начала или обострения диабетических язв стопы.

Description

Изобретение относится к композициям, содержащим вещества природного происхождения для применения в лечении или предупреждении начала или обострения диабетических язв стопы.

Состояние предшествующего уровня техники настоящего изобретения

Сахарный диабет широко известен как одна из главных причин смертности и инвалидности во всем мире. Сахарный диабет характеризуется краткосрочными и долгосрочными отрицательными эффектами. Контроль содержания сахара в крови представляет собой лучшее профилактическое лечение для уменьшения и задержки долгосрочных отрицательных эффектов сахарного диабета, но это не всегда возможно, и в зависимости от различных факторов, таких как длительность высокого содержания сахара в крови, физиологии пациента и формы и серьезности заболевания, будут появляться долгосрочные нежелательные эффекты.

Три важных долгосрочных нежелательных эффекта представляют собой ретинопатию, нефропатию и нейропатию. Ретинопатия влияет на сетчатку и вызывает потерю зрения на финальных стадиях заболевания. Нефропатия влияет на почки и вызывает нарушение их функционирования, в то время как нейропатия приводит к потере чувствительности в конечностях, прежде всего в ногах. В качестве вторичного отрицательного эффекта невропатия нервов стоп вызывает появление хронических ран (язв), часто зараженных бактериями и другими патогенными инфекциями. Лечение этих ран, как правило, не характеризуется удачным исходом и, зачастую, приводит к частичной или полной ампутации стопы.

Среди лиц с сахарным диабетом 15% будут характеризоваться наличием язв стопы в процессе их жизни, а также приблизительно 14-24% лицам с язвой стопы потребуется ампутация. Таким образом, не удивительно, что сахарный диабет представляет собой основную нетравматическую причину ампутаций нижних конечностей. Несмотря на попытки избежать ампутации в последнее десятилетие количество случаев ампутации нижних конечностей у лиц с сахарным диабетом растет.

По классификации Вагнера различают пять стадий или типов диабетических язв стопы: стадия или тип I поверхностные, неинфицированные (кожа, подкожный слой); стадия или тип II глубокие, неинфицированные (сухожилия, мышцы, кости); стадия или тип III глубокие, инфицированные; стадия или тип IV ишемические поражения (ограниченный некроз или гангрена пальца стопы); стадия или тип V обширная гангрена стопы (радикальная хирургия).

Среди известных способов лечения хронических ран, таких как диабетические язвы, известны гидротерапия, лечение ультразвуком, применение высвобождающих оксид азота гидрогелей и кислород под повышенным давлением. Однако известные способы лечения характеризуются некоторыми недостатками. Некоторые из них представляют собой очень дорогостоящие и поэтому не представляют собой легко доступные, другие характеризуются схемами лечения, которые очень болезненны для пациента. Очень часто известные способы лечения не достаточно эффективны, а хронические раны (язвы) характеризуются очень высокой частотой рецидивов.

Таким образом, задача настоящего изобретения заключается в создании новых композиций для лечения и профилактики хронических язв, в частности, чтобы избежать образования диабетических язв стопы, которые эффективны (т.е. с минимальным риском рецидива) и удобны для применения.

Краткое раскрытие настоящего изобретения

Неожиданно было обнаружено, что местное применение композиций, содержащих пчелиный воск, экстракт зверобоя, экстракт лозы красного винограда, экстракт конского каштана, экстракт центеллы, экстракт иглицы колючей, экстракт алоэ представляет собой эффективное средство для лечения или предупреждения возникновения или обострения диабетических язв стопы (или открытых поражений кожи). Выбранные компоненты оказались абсолютно нетоксичными и хорошо переносимыми и позволили получить композицию, которая проявляет сочетание смягчающих и лечебных эффектов, которые оказались эффективными в лечении и профилактике таких хронических ран, как, например, диабетические язвы стопы.

Таким образом, объект настоящего изобретения представляет собой композицию, содержащую пчелиный воск, экстракт зверобоя, экстракт лозы красного винограда, экстракт конского каштана, экстракт центеллы, экстракт иглицы колючей, экстракт алоэ, для применения в лечении или предупреждении возникновения или обострения диабетических язв стопы. Кроме того, дополнительные преимущества, а также особенности и способы использования согласно настоящему изобретению будут очевидны из следующего подробного описания некоторых его предпочтительных вариантов осуществления, приведенных в качестве примера, а не в целях ограничения. Будет сделана ссылка на фигуры прилагаемых графических материалов.

- 1 026398

Подробное описание графических материалов

На фиг. 1 представлена фотография синдрома диабетической стопы пациента с сахарным диабетом, возрастом 73 года, чья степень тяжести состояния, предрасполагающего к язвам, по схеме оценивания, описанной в примере 2, составляла 1, т.е. очень сухая кожа с открытыми трещинами на уровне пятки.

На фиг. 2 представлена фотография той же диабетической стопы, показанной на фиг. 1, после лечения композицией согласно настоящему изобретению, степень тяжести кожной аномалии после лечения по схеме оценивания, описанной в примере 2, составляла 3 (следовательно, улучшение +2), т.е. очень сухая кожа без трещин.

Подробное описание настоящего изобретения

Настоящее изобретение относится к композициям для применения в лечении или профилактике хронических ран, подобных, например, диабетическим язвам стопы.

Такая композиция благодаря своему защитному, смягчающему и лечебному действию оказывается особенно эффективной в лечении, профилактике и замедлении развития таких хронических язв до более тяжелых стадий.

Настоящая композиция также оказывает воздействие на барьерный эффект соответствующей зоны, позволяя сохранить целостность гидролипидного слоя кожи, косвенно вызывая следующие эффекты:

увлажняющее/смягчающее действие; болеутоляющее, противовоспалительное действие; улучшающее микроциркуляцию действие.

Барьерный эффект композиции согласно настоящему изобретению обеспечивается также другими компонентами композиции, позволяющими оставаться в контакте на раздраженной коже большую продолжительность времени, предотвращая быстрое вымывание их биологическими жидкостями (нагноений, пот), и, следовательно, делает возможным для композиции продолжать свое влияние в течение более длительного времени и наилучшим образом.

Согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения описанная в настоящем документе композиция эффективна в лечении диабетических язв стопы типа I, способствуя регрессии от указанной стадии или замедлению развития или, относительные язв типа I, предотвращая развитие язв типа I к язвам типа II.

Основные компоненты композиции, которые представляют собой используемые активные компоненты, представляют собой пчелиный воск, экстракт зверобоя, экстракт лозы красного винограда, экстракт конского каштана, экстракт центеллы, экстракт иглицы колючей, экстракт алоэ, к которым могут быть добавлены другие описанные ниже компоненты.

Экстракт лозы красного винограда. Вид νίίίκ у1игГега содержит очень большое количество различных видов лозы; некоторые из них, из-за своеобразного оттенка листьев, определяются как лоза красного винограда. Для получения экстракта лозы красного винограда в соответствии с настоящим изобретением могут быть использованы полученные из листьев растительные материалы. Экстракт может быть получен по меньшей мере из одного из нескольких сортов, принадлежащих к виду νίΐίκ уийГега. подпадающих под определение лозы красного винограда. Таким образом, следует понимать, что в настоящем описании термин лоза красного винограда или лоза следует рассматривать как обозначение любой из многих разновидностей растений, принадлежащих к видам νίΐίκ у1шГега, обычно определяемых как лоза красного винограда.

Содержание экстракта листьев лозы красного винограда в композиции может варьировать в диапазоне от 0,01 до 2% от общей массы композиции, например, составлять от 0,05 до 0,2% от общей массы композиции. Используемый в композиции экстракт может представлять собой, например, лиофилизированный экстракт, жидкий экстракт, глицериновый экстракт, гликолевый экстракт.

Экстракт конского каштана (или ЛекеШик ЫрросакШиит). Экстракт конского каштана можно использовать, например, в виде сухого экстракта семян. Содержащийся в композиции экстракт конского каштана может составлять от 0,01 до 10% от общей массы композиции, предпочтительно находится в количестве в диапазоне от 0,2 до 1% от общей массы композиции.

Пчелиный воск в основном состоит из мирицина (мирициловый пальмитат и мирициловый спирт), церотовой кислоты и их сложных эфиров и парафинов с высоким содержанием углерода, полученных из меда центрифугированием, используемых в качестве смягчающего вещества, эмульгатора и пленкообразующего вещества в косметических составах. Содержание пчелиного воска в составе может составлять от 0,01 до 7% от общей массы композиции, предпочтительно он содержится в количестве, составляющем от 0,2 до 5% от общей массы композиции. Можно использовать желтый воск из сот Άρίκ теШГега.

Экстракт зверобоя может представлять собой экстракт перфорированного зверобоя, также известного как зверобой продырявленный, который представляет собой один из видов, принадлежащих к роду Нурепсит, содержит большое количество различных классов веществ: такие производные нафтодиантрона, как гиперицин, псевдогиперицин и изогиперицин, и такие производные флорогуцинола, как гиперфорин. Он также содержит такие флавоноиды, как гиперозид, рутин, кверцетин, кверцитрин и изокверцитрин, процианидины, эфирные масла и ксантаны.

Для подготовки экстракта в качестве сырьевого материала использовали цветущие верхушки.

- 2 026398

Конечно, экстракт может быть получен по меньшей мере из одного из многих сортов, принадлежащих к видам Нурепсит регГога1ит (перфорированного зверобоя) Таким образом, следует понимать, что в настоящем описании термин Нурепеит регГогаОпп. или перфорированный зверобой, или зверобой следует толковать как указание на любую из многих разновидностей растений, принадлежащих к виду Нурепеит регГогаОпп.

Конечный экстракт может быть приготовлен, например, в виде сухого, мягкого, лиофилизированного экстракта, предпочтительно в виде масляного экстракта в соответствии со способами, известными в настоящей области техники. Зверобой, в соответствии с традицией, представляет собой масляный экстракт, полученный настаиванием цветущих верхушек свежего зверобоя в подсолнечном масле под воздействием солнечного света. Воздействие солнца позволяет полностью преобразовать гиперицин и повысить содержание флавоноидов в масляном растворе, указанные флавоноиды оказывают антиоксидантное и успокаивающее действие. Продукты разложения гиперицина отдают маслу свой краснокоричневый цвет, в то время как химическое соединение гиперфорин, похоже, отвечает за защитные свойства масла.

Сухие растительные экстракты могут быть получены путем общего испарения растворителя при температуре ниже 50°С, предпочтительно ниже 40°С, чтобы не изменять активные вещества.

Экстракт содержащегося в композиции зверобоя может составлять от 3 до 10% от общей массы композиции, и предпочтительно он содержится в количестве от 5 до 6% от общей массы композиции.

Во всех случаях, в которых использование растительного масла указано выше для получения экстрактов, такое масло может быть также в форме эмульсии типа: масло в воде, вода в масле или также масло в геле или гель в масле.

Экстракт алоэ. В композициях может быть использован экстракт любого растения рода А1ое; предпочтительно, будут использоваться экстракты алоэ вера (или А1ое ВагЬабеп815 МШег). Гель алоэ содержится в паренхиме свежих листьев растения алоэ вера. С помощью процесса сушки распылением получают продукт с особенно высокой концентрацией полисахаридов (в среднем 200-кратное по сравнению с экстрагируемым из листьев гелем). Полисахариды алоэ состоят из мономеров глюкозы, маннозы и глюкоманнана.

Гель алоэ может образовывать пленку на тканях (как слизистых, так и кожных).

В исследовании ίη νίίτο была продемонстрирована способность полисахаридных и флавоноидных компонентов геля алоэ защищать линолевую кислоту от перекисного окисления. Наличие экстракта алоэ внутри помады способствует осуществлению эффекта защиты и восстановления целостности кожи.

Экстракт, подобный, например, сухому экстракту лиственного геля, может быть получен из листьев, как известно в настоящей области техники. Содержащийся в композиции экстракт алоэ может составлять от 0,01 до 3% от общей массы композиции, и предпочтительно он содержится в количестве от 0,1 до 0,5% от общей массы композиции.

Экстракт иглицы колючей содержит различные соединения, такие как сапогенины (рускогенины), фитостерины, жирные кислоты, простые и сложные сахара, небольшое количество эфирного масла, дубильные вещества и флавоноиды. Экстракт используемой иглицы колючей может быть, например, в виде лиофилизированного экстракта, жидкого экстракта, глицеринового экстракта, гликолевого экстракта. Проведенные авторами настоящего изобретения конкретные исследования позволили выделить наличие в лиофилизированном экстракте иглицы колючей полисахариды, характеризующиеся высокой молекулярной массой (> 25000 Да) в хорошей концентрации. Они действуют синергически с таковыми алоэ, усиливая их способности образовывать защитную пленку.

Содержащийся в композиции экстракт иглицы колючей может составлять от 0,01 до 5% от общей массы композиции, и предпочтительно он содержится в количестве от 0,5 и 1,2% от общей массы композиции.

Экстракт центеллы. В композициях может быть использован экстракт любого растения рода СейеНа; предпочтительно будут использоваться лиофилизированные экстракты, полученные из листьев СейеНа ακίαίίοα. Содержащийся в композиции экстракт центеллы может составлять от 0,01 до 5% от общей массы композиции, и предпочтительно он содержится в количестве от 0,1 до 1% от общей массы композиции.

Композиции согласно настоящему изобретению могут дополнительно содержать другие растительные компоненты с полезными эффектами, такие как, например, масла, характеризующиеся косвенным увлажняющим эффектом, такие как, например, масло жожоба или т.п.

Масло жожоба. Масло жожоба представляет собой подобное жидкому воску масло из семян растения жожоба (или §1ттопЙ51а сЫпепз15), полученному с помощью процесса холодного прессования свежих семян. Оно, по существу, состоит из смеси сложных эфиров длинноцепочечных (С40 и С44) жирных кислот с жирными спиртами и без молекул глицерина. Оно представляет собой очень стабильное, не окисляемое масло и не становится прогорклым даже после неоднократной термообработки. Масло жожоба восстанавливает кожный липидный барьер, обеспечивая очень хорошее не окклюзивное смягчающее действие и косвенный увлажняющий эффект. Легко абсорбируется кожей, потому что оно состоит из небольших молекул, характеризующихся линейной структурой с относительно высокой по- 3 026398 лярностью и потому что оно характеризуется высоким сродством к секрету сальных желез благодаря наличию жирных кислот, аналогичных тем, которые присутствуют в липидной пленке. Масло составляет приблизительно 50% семян жожоба по массе и может быть экстрагировано из семян в соответствии с техниками извлечения растительного масла из семян, известных в настоящей области техники.

Содержание масла жожоба в композиции может варьировать в диапазоне от 2 до 12% от общей массы композиции, предпочтительно оно содержится в количестве от 6 до 8% от общей массы композиции.

Композиции могут также содержать один или несколько ароматизаторов и/или красителей, таких как, например, эфирные масла, выбранные из следующих: эфирное масло лаванды, эфирное масло мелалеуки, эфирное масло мяты перечной, лимона, розового дерева, кипариса. Добавление этих средств дает композициям дополнительное преимущество в виде ароматизации зоны, соответствующей ране (язве), и/или окраски композиции.

Конечно, существую также десятичные числа между каждым целым числом указанных в настоящем описании выше диапазонов.

Композиция может быть в форме геля, мази, крема, помады, порошка, эмульсии типа масло в воде, эмульсии типа вода в масле, эмульсии типа масло в геле или эмульсии типа гель в масле или любой другой композиции, пригодной для местного введения. Эмульсия масло в воде определяется как эмульсия, в которой диспергирующая фаза представляет собой фазу водного типа и дисперсная фаза масляного типа, в то время как в противном случае она относится к эмульсии типа вода в масле.

Композиция может дополнительно содержать один или несколько носителей, разбавителей, вспомогательных веществ, эмульгаторов, смягчающих веществ, консервантов, показателей консистенции, регуляторов рН, антиоксидантов (таких как, например, витамины, токоферолы и другие антиоксиданты, известные в настоящей области техники), пригодных для изготовления составов для местного применения (фармацевтических или медицинских изделий), например, таких как глицерин, ксантановая камедь, сорбат калия, силикат натрия, цетеариловый глюкозид, цетеариловый спирт, цетиловый стеариловый спирт, гидрогенизированное касторовое масло, моностеараты глицерина, дикаприлил карбонат, лимонная кислота, стеариновая кислота, диметикон, триэтаноламин, мочевина, глицерилолеат, карбомер.

Такие композиции могут быть получены в соответствии с техниками, известными в настоящей области техники, путем использования вышеописанных соединений, например, путем смешивания отдельных соединений непосредственно в процессе приготовления композиции либо путем добавления к носителям и/или разбавителям и/или вспомогательным веществам смеси полученных ранее соединений.

Композиция в соответствии с настоящим описанием может быть выполнена в форме фармацевтической композиции или медицинского изделия в соответствии с любым одним из классов, описанных в Директиве по медицинским приборам 93/42/ЕЕС (включающей также вещества, а не только приборы в механическом смысле этого слова), или в любой другой форме в соответствии с нормативными положениями страны, в которой указанная композиция будет производиться.

При производстве в виде фармацевтической композиции используемые компоненты, а также вспомогательные вещества будут характеризоваться степенью чистоты, фармацевтически приемлемой для желаемого использования (местного, в данном случае). Такая степень чистоты может быть использована также для компонентов и вспомогательных веществ для приготовления композиции в качестве медицинского изделия или композиции, содержащейся в медицинском изделии.

Согласно одному варианту осуществления медицинское изделие может представлять собой медикаментозный пластырь, медикаментозную марлю или медикаментозный бинт для применения на область, соответствующую ране (язве). Под термином медикаментозный в настоящем описании подразумевается, что пластырь, марля или бинт содержат композиции в соответствии с настоящим изобретением, например, марля пропитана помадой, мазью или кремом.

В настоящем описание предусмотрен также способ лечения и профилактики хронических ран, в частности диабетических язв стопы, предусматривающий местное введение нуждающимся в этом пациентам эффективных количеств описанной в настоящем документе композиции.

Согласно неограничивающему примеру описанного в настоящем документе способа лечения, композицию согласно настоящему изобретению можно вводить один или несколько раз в день путем локального (местного) применения на участках, которые будут обрабатывать в течение периода времени, составляющего от 3 до 6 недель или даже больше.

Примеры композиций

Согласно неограничивающим вариантам осуществления композиция согласно настоящему изобретению может содержать вышеописанные активные компоненты в процентах по массе, как те, что представлены ниже; остальные компоненты будут представлять собой средства, пригодные для изготовления желаемой конечной формы, которая может представлять собой, например, эмульсию типа масло в воде, эмульсию типа вода в масле, эмульсию типа масло в геле или эмульсию типа гель в масле, множественные эмульсии, аэрозоли и безводные составы (помада, гель, паста, крем, мазь). Некоторые из этих средств приведены далее как примеры возможного варианта осуществления, но следует понимать, что они могут быть заменены другими средствами, обладающими аналогичной активностью, широко

- 4 026398 используемыми в настоящей области технике, или только носителями. Для большей точности авторы настоящего изобретения могут напомнить, что активные компоненты, которые всегда должны присутствовать в композиции согласно настоящему изобретению, представляют собой пчелиный воск, экстракт зверобоя, экстракт лозы красного винограда, экстракт конского каштана, экстракт центеллы. экстракт иглицы колючей, экстракт алоэ, и такие компоненты также представляют собой основные в представленных ниже примерах композиции.

Сокращение лэ означает лиофилизированный экстракт.

Представленные в настоящем документе проценты следует понимать как проценты по массе по отношению к общей массе композиции. Остальная часть, в достаточном количестве до 100%, будет состоять из подходящих вспомогательных веществ, основное из которых, как правило, составляет вода.

Пример 1.

Лоза красного винограда, лэ 0,05-4%;

Конский каштан, лэ 0,2-1%;

Центелла, лэ 0,1-1%;

Иглица колючая, лэ 0,2-1,2%;

Алоэ, сухой экстракт 0,1-0,5%;

Пчелиный воск 0,2-1%;

Масло зверобоя 5-6%;

Цетеарил глюкозид 2-6%;

Цетилстеариловый спирт 0,5-10%;

Ксантановая камедь 0,01-1%;

Сорбат калия 0,01-1%;

Бензиловый спирт 0,01-2%;

Дикаприлил карбонат 0,5-10%;

Деионизированная вода 20-70%;

Масло жожоба 6-8%;

Эфирное масло мяты перечной 0,01-2%.

Пример 2.

Пчелиный воск 0,1-1%;

Масло зверобоя 6-8%;

Лоза красного винограда, лэ 0,05-2%;

Конский каштан, лэ 0,2-1%;

Центелла, лэ 0,1-0,5%;

Иглица колючая, лэ 0,5-1,2%;

Алоэ, сухой экстракт 0,1- 0,5%;

Масло жожоба 6-8%;

Эфирное масло мяты перечной 0,2-0,6%;

Чайное дерево, эфирное масло 0,2-0,6%.

Композиция согласно настоящему изобретению может быть получена путем смешивания, с помощью обычных техник в соответствии с подробным описанием, активных компонентов и необязательных указанных выше дополнительных компонентов, и соответствующих средств, пригодных для получения композиций для местного применения, до (в достаточном количестве) 100% массы композиции. Такие средства могут представлять собой, например, носители, разбавители, эмульгаторы, смягчающие вещества, консерванты, антиоксиданты. Никаких конкретных протоколов получения не требуется, так как обычные протоколы пригодны для получения композиции в любой форме, указанной в настоящем описании.

В приведенных выше примерах в качестве дополнительных компонентов (носителей, разбавителей, эмульгаторов, смягчающих веществ, консервантов, антиоксидантов) к указанным в тексте активным ингредиентам используют цетеариловый глюкозид, цетилстеариловый спирт, ксантановую камедь, сорбат калия, бензиловый спирт, дикаприлил карбонат, масло жожоба, масло мяты перечной, деионизированную воду в достаточном количестве до 100%, для примера 1, и масло жожоба, масло мяты перечной, деионизированную воду в достаточном количестве до 100% для примера 2.

Очевидно, что композиция согласно настоящему изобретению может содержать дополнительные носители, разбавители, эмульгаторы, смягчающие вещества, консерванты, антиоксиданты, пригодные для состава, которые будут дополнены в основном водой, например, деионизированной водой и/или деминерализованной водой, возможно, стерилизованной, и одним или несколькими из следующих: цетеариловый спирт, цетеариловый глюкозид, глицерилмоностеарат, бегениловый спирт, стеароилглутамат натрия, цетилстеариловый спирт, каприлил карбонат, каприловый/каприновый триглицерид, токоферолы, дегидроацетат натрия, лимонная кислота, глицерин, ксантановая камедь, сорбат калия, силикат натрия, бензиловый спирт.

Предпочтительно вода будет составлять от 50 до 60% от массы композиции. Далее, предусмотрены примеры, получение и экспериментальные результаты, полученные с описанной в настоящем документе

- 5 026398 композицией.

Примеры получения не представляют собой ограничивающие настоящее описание, но служат для иллюстрации некоторые из возможных вариантов его осуществления.

Примеры и экспериментальные результаты

Пример 1. Получение помады примера композиции 1.

В сосуде соответствующего размера липофильную фазу, состоящую из масел, эмульгаторов, показателей консистенции и жирорастворимых активных средств, доводили до температуры 70-75°С при перемешивании.

В сосуде соответствующего размера гидрофильную фазу, состоящую из воды, реологических добавок и водорастворимых активных веществ, доводили до температуры 70-75°С при перемешивании.

При достижении необходимой температуры обе фазы объединяли под вакуумом и при перемешивании. Все охлаждали и добавляли термолабильные компоненты, такие как, например, консерванты и эфирные масла, всегда при соответствующем перемешивании.

Пример 2. Исследования, связанные с введением помады примера композиции 1 пациентам, страдающим от синдрома диабетической стопы.

Исследование и сбор данных.

Были набраны 38 информированных пациентов с диабетическими язвами стопы. Для каждого пациента проводили фотографическую документацию кожных зон стопы, относящихся к язвам, до начала лечения, и определяли значение на основании тяжести язв в соответствии со схемами оценивания, сообщаемыми в дальнейшем в настоящем документе:

1) очень сухая, с открытыми трещинами на уровне пятки;

2) очень сухая, с закрытыми трещинами пятки;

3) очень сухая, без трещин;

4) умеренно сухая;

5) здоровая, но с зонами небольшой сухости в зонах давления;

6) здоровая и увлажненная.

Похоже, что преобладающая особенность при состояниях синдрома диабетической стопы заключается в обезвоживании кожи, поскольку эта особенность присутствует во всех состояниях 1-5.

Пациентов разделяли на две однородные группы, каждая из которых состояла из 19 пациентов. Пациентов первой группы лечили в течение одного месяца композицией согласно настоящему изобретению. Вторую группу лечили в течение того же периода времени коммерчески доступной композицией, характеризующейся барьерным и защитным действием, содержащей масляный экстракт зверобоя и масло жожоба и лиственный гель алоэ вера. В конце лечения рассматриваемые зоны стопы снова фотографировали, а значения снова определяли в соответствии с той же схемой оценивания. Далее, полученные результаты сообщали в конце лечения.

Значения оценки каждого пациента, принадлежащего к группе, суммировались до лечения, и эту общую оценку сверяли с суммой значений оценки каждого пациента, принадлежащего к группе после лечения, для того, чтобы получить общую информацию о состоянии кожи стопы в рассматриваемой группе.

Результаты, полученные с композицией согласно настоящему изобретению.

Обследованные пациенты: 19.

Численная общая сумма до лечения: 45 (среднее состояние: 2,36).

Конечное численное значение после лечения: 91.

Увеличение: +46.

Таким образом, среднее значение состояния стопы, составляющее приблизительно 2,36, превратилось в среднее значения состояния, равное приблизительно 4,78.

Результаты, полученные с композицией, характеризующейся барьерным/защитным эффектом.

Обследованные пациенты: 19.

Численная общая сумма до лечения: 48.

Конечное численное значение: 61.

Увеличение: +13.

Таким образом, среднее значение состояния стопы, равное приблизительно 2,5, превратилось в среднее значение состояния, равное приблизительно 3,2.

Похоже, очевидно, что в группе, обработанной композицией согласно настоящему изобретению, наблюдается улучшение, которое приблизительно в 3 раза больше, чем в группе, обработанной коммерческим соединением, несмотря на то, что указанное соединение содержит некоторые активные ингредиенты, совпадающие с описанной в настоящем документе композицией. Очевидно, что наличие комбинации активных ингредиентов, выбранной авторами настоящего изобретения, представляет собой заметное усовершенствование по отношению к существующему уровню техники.

3. Сравнительное исследование барьерного эффекта.

Как поясняется во вступительной части заявки, композиция согласно настоящему изобретению оказалась абсолютно нетоксичной и хорошо переносимой и позволила получить композицию, которая про- 6 026398 являет сочетание смягчающих и лечебных эффектов, которые доказали свою эффективность в лечении и профилактике хронических ран, таких как, например, диабетические язвы стопы. Ее барьерный эффект позволяет сохранить целостность кожного гидролипидного слоя, оказывая защитное действие, и позволяет также другим компонентам композиции оставаться адгезированными в течение более длительного времени в контакте с раздраженной кожей, предотвращая быстрое их смывание биологическими жидкостями (нагноения, пот), тем самым позволяя композиции осуществлять ее эффект в течение более длительного периода времени и наилучшим образом.

Затем оценивали барьерный эффект композиции по п. 1 формулы изобретения и приведенного в качестве иллюстрации примера композиции 1 и 2, и, следовательно, содержащей в качестве активных ингредиентов пчелиный воск, экстракт зверобоя, экстракт лозы красного винограда, экстракт конского каштана, экстракт центеллы, экстракт иглицы колючей, экстракт алоэ, и, параллельно, влияние композиции, лишенной каждого из ее компонентов.

Представленные ниже данные доказывают, что сочетание компонентов, выбранных авторами настоящего изобретения, осуществляет очень высокий барьерный эффект по отношению к композиции, лишенной одного из компонентов.

Оценочные испытания проводили следующим образом, с помощью способа, разработанного для имитации ίη νίΐτο защитного действия веществ и составов, которые наносятся на кожу и слизистые оболочки ίη νίνο, образуя изоляционную пленку против факторов окружающей среды.

Разработка использует принцип, благодаря которому клетки, подвергнутые контакту с воспалительным средством, продуцируют и секретируют провоспалительные медиаторы (цитокины) во внеклеточную среду в количестве, коррелирующим со степенью вызванного воспаления. Чем больше количество воспалительного средства, которое достигает клеток, тем большее количество цитокинов высвобождается.

Разработка предусматривает установку двух камер, физически разделенных полупроницаемой мембраной, позволяющей транзит достаточно малых растворенных веществ.

В нижней камере, состоящей из содержащих лунки с клеточной культурой планшетов, растут клетки НиБе (номер ВЗ РКС 41, приобретенные в институте зоопрофилактики в Брешиа), в то время как в верхнюю камеру, содержащую вкладыш для сложных клеточных культур (трансвелы), помещают воспалительное средство.

На поверхность полупроницаемой мембраны разделяющего две камеры вкладыша до введения воспалительного средства в верхнюю камеру, располагали в слоях тонкую пленку образца, чтобы оценить любой барьерный эффект (БЭ) к свободному транзиту воспалительного средства.

В зависимости от изолирующих способностей образца, может наблюдаться уменьшение миграции воспалительного средства из верхней камеры и, соответственно, меньшее стимулирование клеток к продукции цитокинов. Степень воспалительной реакции оценивают через полуколичественною дозировку цитокинов, высвобожденных в культуральную среду нижней камеры, в частности интерлейкина 6 (ИЛ6).

Аналогичный эксперимент, в котором образец не расположен в слоях на мембране, используется в качестве контроля, что дает возможность измерить эффект воспалительного средства без барьера через полупроницаемую мембрану.

Кроме того, используют внутренний контрольный образец, в котором культуральные клетки предварительно обрабатывали веществом, индуцирующим высвобождение маркера, и образец наносят на полупроницаемую мембрану в отсутствие указанного вещества, затем осуществляют одно или несколько измерений количества маркера в культуральной среде указанного внутреннего контрольного образца. Во внутреннем контрольном образце, следовательно, сначала клетки подвергают стимулированию индуцирующим веществом, а затем проверяют, характеризуется ли образец, возможно пересекающий мембрану и проходящий в клетки, вынуждаемый вышеуказанной средой, каким-либо эффектом снижения высвобождения маркера, не связанный с барьерным эффектом. Например, когда воспалительное средство используется в качестве индуцирующего вещества, внутренний контрольный образец позволяет понять, происходит ли уменьшение концентрации цитокинов в культуральной среде из-за барьерного эффекта, или характеризуется ли образец, возможно проходящий в клетки, вынуждаемый вышеуказанной средой, каким-либо эффектом снижения воспалительного ответа независимо от барьерного эффекта.

Барьерный эффект (БЭ) выражают в виде процента снижения высвобождения ИЛ-6 и получают путем сравнения с положительным контролем, в котором две камеры отделены друг от друга тем же образом или полупроницаемой мембраной без барьера, создаваемого образцом.

4.1. Получение клеточной культуры.

Для каждого исследуемого образца линию клеток Нийе высевали в лунки планшета для культуры клеток, одну для исследования барьерного эффекта (В.Т.) и еще одну для внутреннего контроля, плотностью 40000 клеток/мл в среде МЕМ, дополненной бычьей сывороткой в концентрации 10% (РВ8); 1 мл клеточной суспензии на лунку.

Клетки обрабатывали образцом (ЗАМ), положительным контролем (С+) (воспалительное средство без образца) и отрицательным контролем (С-) (только среда). Каждое исследование проводили в трех

- 7 026398 повторах.

Планшеты инкубировали при 37°С в течение ночи (22-24 ч).

4.2. Получение вкладышей для сложных клеточных культур.

Вкладыши для сложных клеточных культур (вкладыши для клеточных культур (ВееГои Бюкпъоп)) располагали на других планшетах и вносили на каждый из них определенное количество коллагена, 0,1 мг/мл. Планшеты инкубировали при 37°С в течение ночи (22-24 ч).

День 2.

4.3. Проверка состояния и уровня конфлюентности клеток.

Для того чтобы приступить к исследованию требуется конфлюентность >95%.

4.4. Послойная сушка коллагена.

Из двух планшетов (В.Т. и 1.С.) с вкладышами удаляют коллаген и вкладыши оставляют под потоком воздуха в вытяжном шкафу на время, необходимое для их полного высушивания (10^15 мин).

4.5. Исследование барьерного эффекта (Ь.1.).

Описанные ниже стадии выполняют в культуральном планшете для В.Т.

Закладка слоя образца в В.Т.

На полупроницаемую мембрану образца вносили 100 мкл основанной на 0,5% альгинате композиции и оставляли для наслаивания в течение 20 мин, в то время как во вкладыши С+ и С- ничего не добавляли. Через 20 мин избыток отбирали и осуществляли промывание мембран с помощью РВ8 в соответствии с режимами, указанными в протоколе.

Добавление ЛПС (противовоспалительного средства) к вкладышам В.Т.

После того, как слои образцов высыхали, в первые три вкладыша 8ΑΜ и в три С+ вносили 300 мкл ЛПС (мембранного липополисахарида) в концентрации 1 мкг/мл, тогда как в остальные три С- добавляли 300 мкл 5% РВ8 ΜΕΜ. Вкладыши помещали в соответствующие лунки с клетками и планшеты инкубировали в течение 1 ч при 37°С в атмосфере, обогащенной 5% СО₂, в течение ночи (22-24 ч).

Через 1 ч после завершения инкубации вкладыши удаляли и выбрасывали, и планшеты ставили обратно инкубировать в течение ночи (22-24 ч).

4.6. Исследование внутреннего контрольного образца (1.С.).

Исследование внутреннего контрольного образца проводили одновременно с ВТ.

Воздействие на клетки 1.С. ЛПС.

После высыхания в первые шесть вкладышей 1.С, три для анализа образца, 8ΑΜ, и три для С+, вносили 300 мкл раствора ЛПС, тогда как в остальные три С- добавляли 300 мкл среды.

Вкладыши с ЛПС и ΜΕΜ затем помещали в лунки с клетками 1.С. и оставляли на 1 ч для инкубации.

Удаление ЛПС и сушка мембран 1.С.

Через 1 ч инкубации вкладыши удаляли из лунок с клетками и переносили в пустой планшет, в то время как планшет с клетками убирали в инкубатор.

Все еще присутствующий раствор ЛПС удаляли из вкладышей, их подвергали быстрому промыванию стерильной сверхчистой водой и оставляли высыхать.

Закладка слоя образца в 1.С.

На полупроницаемую мембрану трех вкладышей для образца наносили 100 мкл основанной на 0,5% альгинате композиции и оставляли для наслоения на 20 мин, в то время как во вкладыши С+ и С- ничего не добавляли. Через 20 мин избыток образца удаляли, а промывание мембраны осуществляли с помощью РВ8 в соответствии с режимами, указанными в протоколе.

Добавление ЛПС к вкладышам 1.С.

После того, как вкладыши с образцами были готовы, 300 мкл среды добавляли ко всем вкладышам (8ΑΜ, С+, С-). Вкладыши помещали в соответствующие лунки с клетками и планшеты ставили на инкубацию на 1 ч при 37°С.

После завершения 1 ч инкубации вкладыши удаляли и выбрасывали, и планшеты ставили обратно инкубировать в течение ночи (22-24 ч).

День 3.

4.7. Сбор супернатанта и иммуноферментный анализ.

Через 22-24 ч супернатанты собирали из планшетов В.Т. и 1.С. для проведения исследования ЕЫ8А и полуколичественного анализа ИЛ-6.

Оценка барьерного эффекта (БЭ).

БЭ вещества или соединения выражают как % уменьшения высвобождения цитокина ИЛ-6 клетками, на которых воздействовали ЛПС и проводили испытание образца, по отношению к положительному контролю (С+), в котором клетки подвергали воздействию только ЛПС.

БЭ=% снижения высвобождения цитокина ИЛ-6 = 100 - [(пг/мкл цитокинов, высвобожденных из образца/пг/мкл цитокинов, высвобожденных из С+)х 100].

В представленной ниже табл. 1 показаны различные составы исследуемых композиций, в которых А представляет собой состав согласно п.1, пример композиции 1 (сопоставимые данные получали с при- 8 026398 мером состава 2), в то время как композиции с А1 по А9 соответствуют составу А, каждый раз без активного ингредиента, замененного водой.

А1 = А - пчелиный воск;

А2 = А - зверобой;

А3 = А - лоза красного винограда;

А4 = А - конский каштан;

А5 = А - центелла азиатская;

А6 = А - иглица колючая;

А7 = А - алоэ.

Таблица 1

Активные ингредиенты, %	состав А	состав А1	состав А2	состав АЗ	состав А4	состав А5	состав А6	состав А7
Органический пчелиный воск	0.5	0	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
Масло зверобоя		7	0	7	7	7	7	7
Лоза красного винограда, лэ	о,1	0,1	0.1	0	ОД	0.1	0.1	0,1
Конский каштан, лэ	0,5	0,5	0,5	0,5	0	0,5	0,5	0,5
Центелла. лэ	0,2	0,2	0.2	0,2	0.2	0	0.2	0.2
Иглица колючая, лэ	0,8	0,8	0,8	0,8	0,8	0,8	0	0,8
Алоэ, сухой экстракт	0,2	0,2	0.2	0,2	0.2	0.2	0.2	0
Масло жожоба		7	7	7	7	7	7	7
Эфирное масло мяты перечной	0,5	0,5	0.5	0,5	0.5	0.5	0.5	0.5
Эфирное масло мелалеуки	0.5	0,5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
Вспомогательные вещества, %	26,1	26,1	26,1	26,1	26,1	26,1	26,1	26,1
Лимонная кислота, бензиловый спирт, дикаприлкарбонат, цетеариловый спирт, цетеариловый глюкозид, глицерилстеарат, стеароилглутам ит, триглицериды калри ловой/каприново й кислоты, масло семян НеНапШя апп шик токоферол, дегидроацетат натрия, глицерин, ксантановая камедь, сорбат калия, силикат натрия
Деионизированная вода	В дост. кол-ве до 100	В дост. кол-ве до 100	В дост. кол-ве до 100	В дост. кол-ве до 100	В дост. кол-ве до 100	В дост. кол-ве до 100	В дост. кол-ве до 100	В дост. кол-ве до 100

Полученные данные, приведенные в табл. 2 ниже, показывают, что все исследованные образцы (т.е. композиция по п.1, лишенная компонента) характеризуются более или менее заметным барьерным эффектом.

Результаты свидетельствуют, в частности, о том, что намного более эффективный барьерный эффект (ингибирование высвобождения цитокина ИЛ-6, равное 82%) наблюдается с композицией согласно настоящему изобретению, по сравнению со всеми другими составами, в которых один из компонентов полного состава отсутствует.

- 9 026398

Таблица 2

Чистый барьерный эффект	% ингибирования высвобождения цитокина ИЛ-6
1) Композиция А (заявленная композиция)	82
2) Композиция А1 (композиция А без органического пчелиного воска)	46
3) Композиция А2 (композиция А без масла зверобоя)	36
4) Композиция АЗ (композиция А без ЛЭ лозы красного винограда)	64
5) Композиция А4 (композиция А без ЛЭ конского каштана)	33
6) Композиция А5 (композиция А без ЛЭ центеллы)	65
7) Композиция Аб (композиция А без ЛЭ иглицы колючей)	57
8) Композиция А7 (композиция А без сухого экстракта алоэ)	20

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Claims (16)

1. Композиция, содержащая пчелиный воск, экстракт зверобоя, экстракт лозы красного винограда, экстракт конского каштана, экстракт центеллы, экстракт иглицы колючей, экстракт алоэ, для применения в лечении или предотвращении начала или обострения диабетических язв стопы.

2. Композиция по п.1, в которой указанные диабетические язвы стопы представляют собой диабетические язвы стопы первой степени тяжести.

3. Композиция по п.1 или 2, дополнительно содержащая масло жожоба.

4. Композиция по любому из пп.1-3, дополнительно содержащая один или несколько ароматизаторов и/или красителей.

5. Композиция по п.4, в которой указанное одно или несколько ароматизирующих средств выбирают из эфирных масел, выбранных из эфирного масла лаванды, эфирного масла мелалеуки, эфирного масла мяты перечной.

6. Композиция по любому из пп.1-5, в которой указанный экстракт центеллы азиатской представляет собой масляный экстракт листьев.

7. Композиция по любому из пп.1-6, в которой указанный экстракт зверобоя представляет собой масляный экстракт цветов, и/или листьев, и/или стеблей.

8. Композиция по любому из пп.3-7, в которой указанное масло жожоба представляет собой масло семян.

9. Композиция по любому из пп.1-8, в которой указанный пчелиный воск представляет собой желтый воск из сот Άρίδ теШГега.

10. Композиция по любому из пп.1-9, представленная в виде геля, мази, крема, помады, порошка, спрея, эмульсии типа масло в воде, эмульсии типа вода в масле, эмульсии типа масло в геле, эмульсии типа гель в масле, суспензии.

11. Композиция по любому из пп.1-10, в которой указанный экстракт зверобоя содержится в концентрации от 3 до 10% по массе композиции.

12. Композиция по любому из пп.1-11, в которой указанный экстракт центеллы азиатской содержится в концентрации от 0,01 до 2% по массе композиции.

13. Композиция по любому из пп.3-12, в которой указанное масло жожоба содержится в концентрации от 2 до 12% по массе композиции.

14. Композиция по любому из пп.1-13, в которой указанный пчелиный воск содержится в концентрации от 0,1 до 3% по массе композиции.

15. Медицинское изделие, содержащее композицию по любому из пп.1-14.

16. Медицинское изделие по п.15, представленное в форме медикаментозного пластыря, медикаментозной марли, медикаментозного бинта.