EA026119B1 - Новое антитело против рецептора il-23 человека - Google Patents

Abstract

Задачей настоящего изобретения является получение антитела против IL-23R человека, обладающего превосходной активностью и/или перекрестной реактивностью по сравнению с обычно применяемыми антителами против IL-23R, и средства для использования антитела для профилактики или лечения различных заболеваний, в патогенез которых вовлечен IL-23R человека. Антитело против IL-23R человека, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:5, 9, 13, 17, 21, 25 или 29, и вариабельную область легкой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:7, 11, 15, 19, 23, 27 или 31.

Description

Настоящее изобретение относится к новому антителу против рецептора 1Б-23 человека. В частности, новое антитело против рецептора 1Ь-23 человека по настоящему изобретению обладает превосходной активностью и/или межвидовой перекрестной реактивностью по сравнению с обычными антителами против рецептора 1Ь-23 человека.

Уровень техники

Интерлейкин-23 (также называемый 1Б-23) представляет собой цитокин, продуцируемый дендритными клетками и тому подобными, и представляет собой гетеродимерный цитокин, состоящий из двух субъединиц, т.е. субъединицы р19, которая является компонентом, специфичным для 1Ь-23, и субъединицы р40, которая также является компонентом 1Ь-12 (непатентный документ 1). 1Ь-23 связывается с рецептором 1Ь-23 (также называемым 1Б-23К) для передачи сигналов в клетки (непатентный документ

2). 1Б-23К является гетеродимерным рецептором, состоящим из субъединицы 1Б-23К и субъединицы 1Б12Κβ1, которая также является компонентом рецептора 1Ь-12. Также известно, что рецептор 1Ь-12 является комплексом субъединицы ΙΤ-23Κβ1 и субъединицы 1Ь-12КД2, и что 1Ь-23 не связывает рецептор 1Ь12 (непатентный документ 1).

Известно, что 1Ь-23 тесно связан с заболеваниями, в том числе, псориазом, воспалительными заболеваниями кишечника (ΙΒΌ), такими как болезнь Крона (С'Э) или неспецифический язвенный колит (ИС), системной красной волчанкой (§БЕ), ревматоидным артритом (КА), анкилозирующим спондилоартритом (Л§), болезнью Бехчета и увеитом. Псориаз является хроническим нарушением кератинизации кожи, и в коже пациентов с псориазом наблюдается возрастание экспрессии 1Б-23 (непатентный документ 3).

Воспалительное заболевание кишечника (ΙΒΌ) является хроническим рецидивирующим заболеванием, которое проявляется в виде болезни Крона (СО) или неспецифического язвенного колита (ИС), и вызывает ухудшение функционирования или структуры пищеварительного тракта. Известно, что макрофаги собственной пластинки в местах воспаления кишечника пациентов с СО активно продуцируют 1Ь23 (непатентный документ 4), и считается, что макрофаги собственной пластинки индуцируют цитокины, включая 1Б-21. 1Б-22 и 1Б-17. из иммунных клеток и тому подобные, способствуя воспалительной патологии ΙΒΌ (непатентный документ 5).

Системная красная волчанка (8БЕ) вызывает различные симптомы, проявляющиеся в различных местах по всему организму, из-за стимуляции иммунной системы, таким образом, одновременно или последовательно вызывая симптомы, которые, как считается, связаны воспалением, включая жар и систематическую болезнь, а также различные симптомы, которые происходят в суставах, коже, интестинальных органах и т. д. Сообщалось о том, что имеет место положительная корреляция между патологией §БЕ и количеством 1Б-23К-позитивных Т-лимфоцитов (непатентный документ 6). Также известно, что ГБ-23 в крови §БЕ пациентов значительно выше, чем у нормальных индивидов (непатентный документ 7). Из этого следует, что 1Б-23 вовлечен в §БЕ.

Анкилозирующий спондилоартрит (А§) является хроническим воспалительным заболеванием, которое в основном вызывает повреждения в позвонке и крестцово-подвздошных суставах. Известно, что 1Б-23 в крови пациентов с А§ значительно выше, чем у нормальных индивидов, что указывает на то, что 1Б-23 вовлечен в патологию А§ (непатентный документ 8).

Болезнь Бехчета является хроническим воспалительным заболеванием, характеризуемым воспалением кровеносных сосудов различных размеров, а именно васкулитом, и считается, что нарушение иммунной системы и активация нейтрофилов задействованы в патологии. Это рецидивирующее нарушение кровеносных сосудов может продолжаться в течение от нескольких дней до нескольких месяцев, и может повторяться несколько раз в год. У пациентов с болезнью Бехчета 1Б-23 в значительной мере коррелировал с активностью заболевания, и стимуляция экспрессии 1Б-23 наблюдалась в сыворотке пациентов, имеющих увеит, патология которого связана с патологией болезни Бехчета (непатентный документ 9), что указывает на то, что 1Б-23 задействован в этой патологии.

Ревматоидный артрит (КА) является хроническим аутоиммунным заболеванием, которое вызывает деформацию суставов и сильную боль. 1Б-23 возрастает в синовии и сыворотке пациентов с КА (непатентный документ 10), и уровень 1Б-23 в сыворотке пациентов, которым введен блокатор ΤΝΕ, который является лекарственным средством для лечения КА, коррелирует со степенью патологии (непатентный документ 11). Также антитело против 1Б-23К в синовиальной мембране пациентов с КА ингибирует продуцирование ΤΝΕ-α и 1Б-6 (непатентный документ 12), что указывает на то, что 1Б-23 вовлечен в патологию.

Таким образом, если может быть разработано моноклональное антитело, которое обладает активностью специфичного связывания с рецептором 1Б-23 для ингибирования различных действий 1Б-23, можно предполагать, что оно может использоваться для лечения, профилактики или диагностики различных заболеваний, в которых 1Б-23 вовлечен в патологию заболевания.

Антитела, которые изучались до настоящего времени и которые, как сообщалось, проявляли эффект ингибирования функционирования рецептора ГБ-23 человека, включают мышиное моноклональное анти- 1 026119 тело т2()Э7 (патентный документ 1) или его гуманизированное моноклональное антитело Нит20Э7 (патентный документ 1), крысиное моноклональное антитело 8В10 (патентный документ 1) или его гуманизированное моноклональное антитело (патентный документ 2). Из них Ьит20И7 было исследовано наиболее подробно, и стал очевиден его эффект на фактические клеточные ответы из результатов экспериментов, основанных на ингибировании сигнального пути клеток Κι! 225, которые являются хорошо известными культивируемыми клетками, экспрессирующими рецептор 1Ь-23.

Однако обычно применяемые антитела, по-видимому, не обладают достаточной нейтрализующей активностью в отношении сигнального пути 1Ь-23 в клетках с точки зрения эффективности.

Главные факторы, которые определяют эффективную дозу лекарственного средства на основе антитела, включают активность антитела для ингибирования связывания лиганд-рецептор и количества антигена, представленного в организме. Возрастание активности антитела для ингибирования связывания, по-видимому, является существенным усовершенствованием, которое приводит к снижению дозировки антитела, приводя в результате к снижению материальной тяжести или медицинских расходов пациентов. Также, даже если антитело обладает высокой связывающей активностью по отношению к антигену (лиганд, рецептор и т.д.), это не означает, что антитело может в высокой степени проявлять требуемую нейтрализующую активность. Причина состоит в том, что антитело должно занимать соответствующий сайт антигена для того, чтобы антитело сильно ингибировало связывание лиганд-рецептор. Другими словами, эффективность нейтрализующей активности антитела является важной при оценке эффекта лекарственного средства на основе антитела.

Также очень важной в разработке лекарственных препаратов является оценка безопасности с использованием животных. Международный стандарт 1СН-86, относящийся к разработке лекарственных препаратов содержит следующее описание: Программы оценки безопасности обычно должны включать два соотносящихся вида. Однако в некоторых обоснованных случаях одних соотносящихся видов может быть достаточно (например, когда только одни соотносящиеся виды могут быть идентифицированы, или где биологическая активность биофармацевтического препарата хорошо изучена). Как описано выше, в разработке лекарственных препаратов требуется исследование на одном или более типов видов животных кроме человека; однако, для того, чтобы осуществить исследование на видах животных при разработке лекарственного средства на основе антитела, требуется, чтобы антитело обладало перекрестной реактивностью с антигенами, полученными из видов животных, отличных от человека. Однако обычно не бывает легко получить моноклональное антитело, которое обладает высокой селективностью и сохраняет высокую активность, проявляя межвидовую перекрестную реактивность.

Следовательно, требуется получение антитела против рецептора 1Ь-23 человека, которое обладает сильной нейтрализующей активностью по сравнению с обычными антителами и демонстрирует межвидовую перекрестную реактивность для применения в лечении, профилактики или диагностике различных заболеваний посредством введения антитела людям.

Материалы, использованные при экспертизе заявки

Патентный документ

Патентный документ 1. №0 2008/106134.

Патентный документ 2. №0 2010/027767.

Непатентный документ

Непатентный документ 1. Орртапп В. е! а1., ПптипПу. 2000 Νον; 13(5):715-25.

Непатентный документ 2. РагЬат С. е! а1., 1 1ттипо1. 2002 Ет 1; 168(11):5699-708.

Непатентный документ 3. Ьее Е. е! а1., 1 Ехр Мей. 2004 1ап 5; 199(1):125-30.

Непатентный документ 4. Катайа Ν. е! а1., 1 С1ш ПщеП 2008; 118:2269-2280.

Непатентный документ 5. §агга М. е! а1., 1пГ1атт Во\\е1 Όίδ. 2010 Ос!; 16(10):1808-1813.

Непатентный документ 6. Ριι\νίρίΐΌΐη Н е! а1., ЛпНгПй Ке8 ТЬег. 2010 Νον 29; 12(6):К215.

Непатентный документ 7. Мок Μ.Υ. е! а1., 1 КЬеита!о1. 2010 Ос!; 37 (10):2046-52.

Непатентный документ 8. Ме1 Υ. е! а1., С1ш КЬеита!о1. 2011 РеЬ; 30(2):269-73.

Непатентный документ 9. НаЫЬадаЫ Ζ. е! а1., Мой КЬеита!о1. 2010 Арг; 20(2):154-9.

Непатентный документ 10. Κιιιι Н.К. е! а1., КЬеита!о1оду (ОхГогй). 2007 Тт; 46(1):57-6.

Непатентный документ 11. Кадеуата Υ. е! а1., КЬеита!о1 1п!. 2007 Иес; 28 (2):137-43.

Непатентный документ 12. НШуег Р. е! а1., КЬеита!о1оду (ОхГогй). 2009 Иес; 48(12):1581-9. Сущность изобретения

Задача, решаемая изобретением

Задачей настоящего изобретения является получение антител против 1Ь-23К человека, обладающих превосходной активностью и/или межвидовой перекрестной реактивностью по сравнению с обычными антителами против 1Ь-23К человека.

Средство для решения задач

Соответственно настоящее изобретение содержит следующие изобретения в качестве медицинских и промышленно пригодных веществ и способов:

(1) Антитело против 1Ь-23К человека, выбранное из любого из следующих 1)-7):

1) антитело против 1Ь-23К человека, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, состоящую

- 2 026119 из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:5, и вариабельную область легкой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:7;

2) антитело против ГО-23К человека, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:9, и вариабельную область легкой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:11;

3) антитело против ГО-23К человека, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:13, и вариабельную область легкой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:15;

4) антитело против ГО-23К человека, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:17, и вариабельную область легкой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:19;

5) антитело против ГО-23К человека, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:21, и вариабельную область легкой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:23;

6) антитело против ГО-23К человека, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:25, и вариабельную область легкой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:27; и

7) антитело против ГО-23К человека, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:29, и вариабельную область легкой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:31.

(2) Антитело против ГО-23К человека по (1) выше, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:5, и вариабельную область легкой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:7.

(3) Антитело против ГО-23К человека по (1) выше, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:9, и вариабельную область легкой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:11.

(4) Антитело против ГО-23К человека по (1) выше, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:13, и вариабельную область легкой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:15.

(5) Антитело против ГО-23К человека по (1) выше, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:17, и вариабельную область легкой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:19.

(6) Антитело против ГО-23К человека по (1) выше, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:21, и вариабельную область легкой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:23.

(7) Антитело против ГО-23К человека по (1) выше, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:25, и вариабельную область легкой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:27.

(8) Антитело против ГО-23К человека по (1) выше, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:29, и вариабельную область легкой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:31.

(9) Антитело против ГО-23К человека по любому из (1)-(8) выше, где константная область тяжелой цепи антитела является константной областью Ι§γ 1 человека.

(10) Антитело против ГО-23К человека по любому из (1)-(8) выше, где константная область легкой цепи антитела является константной областью 1дк человека.

(11) Антитело против ГО-23К человека по любому из (1)-(8) выше, где константная область тяжелой цепи антитела является константной областью Ιβγ1 человека, и константная область легкой цепи антитела является константной областью 1дк человека.

(12) Антитело против ГО-23К человека по (2) выше, содержащее тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:33, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:35.

(13) Антитело против ГО-23К человека по (3) выше, содержащее тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:37, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:39.

(14) Антитело против ГО-23К человека по (4) выше, содержащее тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:41, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:43.

(15) Антитело против ГО-23К человека по (5) выше, содержащее тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:45, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:47.

(16) Антитело против ГО-23К человека по (6) выше, содержащее тяжелую цепь, состоящую из ами- 3 026119 нокислотной последовательности 8ЕЦ ГО N0:49, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:51.

(17) Антитело против ГО-23К человека по (7) выше, содержащее тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:53, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:55.

(18) Антитело против ГО-23К человека по (8) выше, содержащее тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:57, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:59.

(19) Полинуклеотид, содержащий последовательность, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи антитела по любому из (1)-(18) выше.

(20) Полинуклеотид, содержащий последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи антитела по любому из (1)-(18) выше.

(21) Вектор экспрессии, содержащий полинуклеотид по (19) и/или (20) выше.

(22) Клетка-хозяин, трансформированная вектором экспрессии по (21) выше.

(23) Клетка-хозяин по (22) выше, в котором клетка-хозяин выбрана из группы, состоящей из следующих (а) и (Ь):

(a) клетка-хозяин, трансформированная вектором экспрессии, содержащим полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует вариабельную область тяжелой цепи антитела по любому из (1)-(18) выше и полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует вариабельную область легкой цепи антитела; и (b) клетка-хозяин, трансформированная вектором экспрессии, содержащим полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует вариабельную область тяжелой цепи антитела по любому из (1)-(18) выше, и вектор экспрессии, содержащий полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует вариабельную область легкой цепи антитела.

(24) Способ получения антител против ГО-23К человека по любому из (1)-(18) выше, при этом способ содержит стадию культивирования клетки-хозяина по (22) или (23) выше и экспрессирование антитела против ГО-23К человека.

(25) Агент для лечения псориаза, содержащий антитело против ГО-23К человека по любому из (1)(18) выше.

(26) Способ профилактики или лечения псориаза, содержащий стадию введения терапевтически эффективного количества антитела против ГО-23К человека по любому из (1)-(18) выше.

(27) Антитело против ГО-23К человека по любому из (1)-(18) выше, для использования при профилактики или лечении псориаза.

Эффекты изобретения

Настоящее изобретение относится к антителу против ГО-23К человека, обладающему превосходной активностью и/или межвидовой перекрестной реактивностью по сравнению с обычно применяемыми антителами против ГО-23К человека. Антитела против ГО-23К человека по настоящему изобретению обладают сильным эффектом подавления иммунных клеток посредством ингибирования функционирования ГО-23К человека, и подходят для профилактики или лечения различных заболеваний, в которых ГО-23 человека вовлечен в патологию заболевания. Также такие антитела против ГО-23К человека по настоящему изобретению предоставляют значительные усовершенствования в клинических применениях, такие как снижение дозировки, увеличение интервала введения, усовершенствование способа введения (например, подкожная инъекция) и тому подобные и вносят значительный вклад в эффективность лечения и улучшение соблюдения больным режима и схемы лечения. Кроме того, антитела обладают межвидовой перекрестной реактивностью по отношению к антигенам, полученным из животных (в особенности животных, которые используются в разработке лекарственных препаратов) кроме человека, и таким образом предоставляют возможность проведения испытаний на безопасность с использованием животных, которые требуются для антитела в составе лекарственного средства. Таким образом, антитела вносят большой вклад в обеспечение безопасности людей, которым они введены.

Варианты осуществления изобретения

Ниже настоящее изобретение будет описано подробно.

Авторы настоящего изобретения в значительной мере продемонстрировали изобретательность и внимательность для получения антитела против ГО-23К человека и в результате преуспели в продуцировании антитела против ГО-23К человека, обладающего превосходной активностью и/или межвидовой перекрестной реактивностью по сравнению с обычными антителами против ГО-23К человека.

Основная структура молекулы антитела является общей для всех классов антител, и имеет тяжелую цепь, имеющую молекулярную массу 50000-70000, и легкую цепь, имеющую молекулярную массу 20000-30000. Тяжелая цепь обычно состоит из полипептидной цепи, содержащей около 440 аминокислот. Тяжелые цепи имеют структуры, характерные для различных классов, и называются γ, μ, α, δ и ε цепи, соответствуя 1дС. 1дМ, 1дА, Ι§Ό и 1дЕ. Кроме того, Ι§0 встречается в виде Ι§01, 1дО2, Ι§03, и Ι§04, и соответствующие цепи называются γ1, γ2, γ3 и γ4 соответственно. Легкая цепь обычно состоит из по- 4 026119 липептидной цепи, содержащей около 220 аминокислот, два типа которой, тип Ь и тип К, известны, и называются λ и к цепи соответственно. С точки зрения пептидной конфигурации основной структуры молекулы антитела две гомологичные тяжелые цепи и две гомологичные легкие цепи связаны дисульфидными связи (8-8 связи) и нековалентными связями, и молекулярная масса составляет от 150000 до 190000. Два вида легких цепей способны к сопряжению с любой тяжелой цепью. Каждая молекула антитела всегда состоит из двух идентичных легких цепей и двух идентичных тяжелых цепей.

Имеются четыре внутрицепных 8-8 связи в тяжелой цепи (пять связей для μ и ε цепи) и две в легкой цепи; образуется одна петля на 100-110 аминокислотных остатков, и эта пространственная структура является одинаковой для петель и называется структурный элемент или домен. Для обеих тяжелых цепей и легких цепей аминокислотная последовательность домена, расположенного на их Ν-конце, не является константной, даже в сравнительном стандарте того же класса (подкласса) тех же видов животных, и этот домен называется вариабельная область. Каждый из доменов называется вариабельная область тяжелой цепи (Ун) и вариабельная область легкой цепи (У_ъ) соответственно. Аминокислотная последовательность на их С-конце является почти константной в каждом классе или подклассе, и называется константная область (каждый из доменов называется С_н1, С_н2, С_н3 и Сь соответственно).

Сайт антигенной детерминанты антитела образован с У_н и У_ъ, и специфичность связывания зависит от аминокислотной последовательности этого сайта. С другой стороны, биологические активности, такие как связывание с комплементом или различными клетками отражают различия в структуре константной области между различными классами 1д. Вариабельность в вариабельных областях легкой цепи и тяжелых цепей главным образом ограничена тремя маленькими гипервариабельными областями, присутствующими в обеих цепях, и эти области называются определяющие комплементарность области (СИК; СИК1, СИК2 и СИК3 начиная с ^концевой стороны). Оставшийся участок вариабельной области называется каркасная область (РК) и является относительно константным.

Антитело против 1Ь-23К человека, успешно сконструированное авторами настоящего изобретения, является антителом против 1Ь-23К человека, обладающим любой из следующих особенностей:

1) Антитело против 1Ь-23К человека, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕО ГО N0:5, и вариабельную область легкой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕО ГО N0:7.

2) Антитело против ГО-23К человека, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8ЕО ГО N0:9, и вариабельную область легкой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:11.

3) Антитело против ГО-23К человека, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:13, и вариабельную область легкой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:15.

4) Антитело против ГО-23К человека, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:17, и вариабельную область легкой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:19.

5) Антитело против ГО-23К человека, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:21, и вариабельную область легкой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:23.

6) Антитело против ГО-23К человека, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:25, и вариабельную область легкой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:27.

7) Антитело против ГО-23К человека, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:29, и вариабельную область легкой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:31.

В частности, авторы настоящего изобретения сконструировали антитела с использованием технологии разработки человеческих моноклональных антител, Уе1ос1ттипе [технология антител мыши Уе1ос1ттипе; Кедепегоп 1пс. (патент США N0. 6596541)], и скринировали антитела с использованием тестов на различные биологические активности и физические свойства, посредством этого достигая идентификацию антитела против ГО-23К человека по настоящему изобретению. В технологии Уе1ос1ттипе трансгенная мышь, у которой вариабельные области тяжелой цепи и легкой цепи эндогенного иммуноглобулина замещены соответствующими вариабельными областями человека, стимулирована мишеневым антигеном (например, ГО-23К человека), и у мыши, которая экспрессирует антитела, отобраны лимфатические клетки.

Осуществляли слитие лимфатических клеток с миеломными клетками мыши для получения гибридомы. Гибридомные клетки скринировали для идентификации гибридомных клеток, которые вырабатывают такие антитела, которые специфично связывают мишеневый антиген. Антитела, которые выработаны в настоящем документе, представляют собой антитела, имеющие вариабельные области антител человека и константные области антител мыши (также называемые химерные антитела). Затем, если антитело, которое специфично связывает мишеневый антиген идентифицировано, ДНК, которая кодирует

- 5 026119 вариабельные области тяжелой цепи и легкой цепи антитела, выделяют из гибридомных клетки и соединяют с ДНК, кодирующей константные области тяжелой цепи и легкие цепи требуемого класса антител человека соответственно. Полученная в результате ДНК, кодирующая тяжелую цепь и легкую цепь антитела, экспрессируется в клетках (например, клетки СНО) для продуцирования молекулы антитела. Тяжелая цепь и легкая цепь антитела, продуцируемые вышеприведенным способом, являются тяжелой цепью и легкой цепью полностью человеческого антитела, полученного из гена иммуноглобулина человека.

Антитело против 1Ь-23К человека по настоящему изобретению может быть легко получено специалистом в данной области на основании информации о последовательности его вариабельной области тяжелой цепи и вариабельной области легкой цепи, раскрытой в настоящем документе, с использованием общеизвестного в данной области способа. Предпочтительно антитело против 1Ь-23К человека по настоящему изобретению может быть получено как полностью человеческое антитело соединением его вариабельной области тяжелой цепи и вариабельной области легкой цепи с константной областью тяжелой цепи и константной областью легкой цепи антитела человека соответственно. В частности, получены фрагмент гена вариабельной области тяжелой цепи с основной последовательностью, которая кодирует аминокислоту вариабельной области тяжелой цепи антитела по настоящему изобретению (8ЕО ГО N0:5, 8ЕО ГО N0:9, 8ЕО ГО N0:13, 8ЕО ГО N0:17, 8ЕО ГО N0:21, 8ЕО ГО N0:25 или 8ЕО ГО N0:29), и фрагмент гена вариабельной области легкой цепи с последовательностью оснований, которая кодирует аминокислоту вариабельной области легкой цепи антитела по настоящему изобретению (8Е0 ГО N0:7, 8Е0 ГО N0:11, 8ЕО ГО N0:15, 8ЕО ГО N0:19, 8ЕО ГО N0:23, 8ЕО ГО N0:27 или 8ЕО ГО N0:31). Затем, гены вариабельной области соединяются с геном константной области в соответствующем классе антител человека для получения гена полностью человеческого антитела. После этого этот ген антитела соединяется с соответствующим вектором экспрессии и вводится в культивируемую клетку. В заключение, эта культивируемая клетка культивируется, посредством чего из культурального супернатанта может быть получено моноклональное антитело.

Фрагменты гена, которые кодируют аминокислоты вариабельной области тяжелой цепи и вариабельной области легкой цепи антитела по настоящему изобретению, могут быть синтезированы с использованием способа синтеза гена, известного в данной области, на основании, например, последовательности оснований, сконструированной на основании аминокислотных последовательностей вариабельной области тяжелой цепи и вариабельной области легкой цепи. Примеры этого способа синтеза гена включают различные способы, известные специалисту в данной области, такие как способ синтеза гена антитела, описанный в \У0 90/07861. Также, когда фрагмент гена вариабельной области антитела по настоящему изобретению получен, в установленный сайт фрагмента гена может быть введена мутация, посредством этого получая другие антитела по настоящему изобретению. Примеры способа введения мутации включают различные способы, известные специалисту в данной области, такие как сайтнаправленный мутагенез (Сиггеи! Рго1оео18 ίη Мо1еси1аг Вю1оду сбй. Аи8иЬе1 е! а1. (1987) РиЫЫг 1ойи \УПсу & 8ои8 8ес!юп 8.1-8.5).

Затем вышеописанные фрагменты гена вариабельной области соединяются с геном константной области антитела человека для получения гена полностью человеческого антитела. Хотя любой подкласс константной области (например, константная область тяжелой цепи, такой как γ1, γ2, γ3 или γ4 цепь, или константная область легкой цепи, такая как λ или к цепь) может быть выбран в качестве константной области используемого антитела человека, предпочтительно могут быть использованы 1§γ1 человека в качестве константной области тяжелой цепи и 1§к человека в качестве константной области легкой цепи.

После получения этого полностью человеческого гена антитела, введения гена антитела в вектор экспрессии, введения вектора экспрессии в культивируемые клетки, культивирования культивируемых клеток может быть выполнена очистка антитела и тому подобное с использованием различных способов, известных в данной области.

Примеры вектора экспрессии, который соединен с геном антитела, полученного таким образом, включают 08 вектор рЕЕ6.4 или рЕЕ12.4 (Бои/а Вю1още5). но не ограничены особым образом, при условии, что они могу экспрессировать ген антитела. Также может быть использован вектор экспрессии уже имеющий ген константной области 1§ человека, такой как Α0-γ1 или А0-к (например, см. \У0 94/20632).

Вышеописанный вектор экспрессии вводится в культивируемые клетки, например, кальций фосфатным способом или способом электропорации и тому подобными.

Примеры культивируемых клеток, в которые вводится вектор экспрессии, включают культивируемые клетки, такие как клетки СН0-К18У, клетки СН0ГО044 и клетки 293, и такие клетки могут быть культивированы общепринятыми способом.

После вышеописанного культивирования антитело, накопленное в культуральном супернатанте, может быть очищено различной колоночной хроматографией, например, различными колоночными хроматографическими процессами с использованием колонки с белком А или белком 0.

Антитело против ГО-23К человека по настоящему изобретению является антителом, связывающимся с ГО-23К человека. Примеры способа измерения связывающей активности полученного антитела против ГО-23К человека по отношению к ГО-23К человека включают способы, такие как ЕЬ18А или РАС8.

- 6 026119

Например, при использовании ЕЫ§Л слитый белок внеклеточного домена 1Ь-23К человека (8ЕО ГО N0:1) и иммуноглобулина Ре иммобилизовали на планшете для ЕЬ18А, и туда добавляли антитело против ГО-23К человека, и позволяли взаимодействовать. Затем слитому белку позволяли прореагировать с вторичным антителом, таким как антитело против 1§0, меченное ферментом, таким как пероксидаза хрена (ИКР), и промывали. Затем, активность измеряли с использованием детектирующего активность реагента [например, ВМ-хемилюминесцентный субстрат для ЕЬ18А (Ρ0Ό) (КосЬе Οίαβηοδίίοδ). когда использована метка НКР] или подобного, посредством этого подтверждая связывание вторичного антитела. В дополнение, антитело по настоящему изобретению включает антитело, также связывающееся с ГО-23К обезьяны, и таким образом может быть измерена связывающая активность для этого белка.

Кроме того, антитело против ГО-23К человека по настоящему изобретению обладает нейтрализующей активностью против ГО-23К человека. В используемом в настоящем документе значении нейтрализующая активность антитела означает активность для ингибирования любой биологической активности, происходящей от ГО-23К, связыванием с ГО-23К, и может быть определена по одной или более биологическим активностям ГО-23К в виде показателя. Примеры такой нейтрализующей активности включают активность ингибирования пролиферации клеток КЬ 225, которые являются восприимчивыми к ГО-23К клетками, и активность ингибирования стимулированного ГО-23 человека 8ТАТ3 фосфорилирования, и нейтрализующая активность может быть определена с использованием способа, описанного в примерах далее.

Примеры способов для различных видов устойчивости (например, тепловая устойчивость, устойчивость в течение длительного периода и устойчивость в высокой концентрации) антитела против ГО-23К человека включают дифференциальную сканирующую калориметрию или способ измерения образования агрегатов во время хранения антитела.

Предпочтительно антитело против ГО-23К человека по настоящему изобретению может быть легко получено синтезированием ДНК, содержащей последовательность оснований, кодирующую аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи 8Е0 ГО N0:5, 9, 13, 17, 21, 25 или 29, и ДНК, содержащей последовательность оснований, кодирующую аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи 8Е0 ГО N0:7, 11, 15, 19, 23, 27 или 31, и соединением ДНК с генами подходящего класса константной области антитела человека, предпочтительно геном константной области 1ду1 человека для тяжелой цепи и геном константной области 1§к человека для легкой цепи, для конструирования гена полностью человеческого антитела с использованием способа, известного в данной области, и введением гена антитела в вектор экспрессии, введением вектора экспрессии в культивируемую клетку, культивированием культивируемой клетки, и очисткой антитела, собранного из культивируемой клетки, с использованием различных способов, известных в данной области. Предпочтительно ДНК, содержащая последовательность оснований, кодирующую аминокислотные последовательности вариабельной области тяжелой цепи 8Е0 ГО N0:5, 9, 13, 17, 21, 25 или 29, содержит последовательности оснований 8Е0 ГО N0:4, 8, 12, 16, 20, 24 или 28 соответственно. Предпочтительно ДНК, содержащая последовательность оснований, кодирующую аминокислотные последовательности вариабельной области легкой цепи 8Е0 ГО N0:7, 11, 15, 19, 23, 27 или 31, содержит последовательности оснований 8Е0 ГО N0:6, 10, 14, 18, 22, 26 или 30 соответственно.

Предпочтительная тяжелая цепь антитела против ГО-23К человека по настоящему изобретению, содержащая вариабельную область тяжелой цепи 8Е0 ГО N0:5, и константную область 1§γ 1 человека, является тяжелой цепью, состоящей из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:33. Предпочтительная легкая цепь антитела против ГО-23К человека по настоящему изобретению, содержащая вариабельную область легкой цепи 8Е0 ГО N0:7, и константную область 1§к человека, является легкой цепью, состоящей из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:35. Предпочтительно ДНК, содержащая последовательность оснований, кодирующую тяжелую цепь антитела против ГО-23К человека, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:33, содержит последовательность оснований 8Е0 ГО N0:32. Предпочтительно ДНК, содержащая последовательность оснований, кодирующую легкую цепь антитела против ГО-23К человека, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:35, содержит последовательность оснований 8Е0 ГО N0:34. Примеры антитела против ГО-23К человека по настоящему изобретению, которое содержит тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:33, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:35, включают полностью человеческое антитело 25-3, как описано в примерах далее.

Предпочтительная тяжелая цепь антитела против ГО-23К человека по настоящему изобретению, содержащая вариабельную область тяжелой цепи 8Е0 ГО N0:9, и константную область 1§γ 1 человека, является тяжелой цепью, из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:37. Предпочтительная легкая цепь антитела против ГО-23К человека по настоящему изобретению, содержащая вариабельную область легкой цепи 8Е0 ГО N0:11, и константную область 1§к человека, является легкой цепью, состоящей из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:39. Предпочтительно ДНК, содержащая последовательность оснований, кодирующую тяжелую цепь антитела против ГО-23К человека, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:37, содержит последовательность оснований 8Е0 ГО

- 7 026119

N0:36. Предпочтительно ДНК, содержащая последовательность оснований, кодирующую легкую цепь антитела против 1Ь-23К человека, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:39, содержит последовательность оснований 8Е0 ГО N0:38. Примеры антитела против ГО-23К человека по настоящему изобретению, которое содержит тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:37, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:39, включают полностью человеческое антитело 30-15, как описано в примерах далее.

Предпочтительная тяжелая цепь антитела против ГО-23К человека по настоящему изобретению, содержащая вариабельную область тяжелой цепи 8Е0 ГО N0:13, и константную область 1§γ1 человека, является тяжелой цепью, состоящей из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:41. Предпочтительная легкая цепь антитела против ГО-23К человека по настоящему изобретению, содержащая вариабельную область легкой цепи 8Е0 ГО N0:15, и константную область 1§к человека, является легкой цепью, состоящей из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:43. Предпочтительно ДНК, содержащая последовательность оснований, кодирующую тяжелую цепь антитела против ГО-23К человека, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:41, содержит последовательность оснований 8Е0 ГО N0:40. Предпочтительно ДНК, содержащая последовательность оснований, кодирующую легкую цепь антитела против ГО-23К человека, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:43, содержит последовательность оснований 8Е0 ГО N0:42. Примеры антитела против ГО-23К человека по настоящему изобретению, которое содержит тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:41, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:43, включают полностью человеческое антитело 30-16, как описано в примерах далее.

Предпочтительная тяжелая цепь антитела против ГО-23К человека по настоящему изобретению, содержащая вариабельную область тяжелой цепи 8Е0 ГО N0:17 и константную область 1§γ 1 человека, является тяжелой цепью, состоящей из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:45. Предпочтительная легкая цепь антитела против ГО-23К человека по настоящему изобретению, содержащая вариабельную область легкой цепи 8Е0 ГО N0:19, и константную область 1дк человека, является легкой цепью, состоящей из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:47. Предпочтительно ДНК, содержащая последовательность оснований, кодирующую тяжелую цепь антитела против ГО-23К человека, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:45, содержит последовательность оснований 8Е0 ГО N0:44. Предпочтительно ДНК, содержащая последовательность оснований, кодирующую легкую цепь антитела против ГО-23К человека, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:47, содержит последовательность оснований 8Е0 ГО N0:46. Примеры антитела против ГО-23К человека по настоящему изобретению, которое содержит тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:45, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:47, включают полностью человеческое антитело 30-18, как описано в примерах далее.

Предпочтительная тяжелая цепь антитела против ГО-23К человека по настоящему изобретению, содержащая вариабельную область тяжелой цепи 8Е0 ГО N0:21 и константную область 1§γ 1 человека, является тяжелой цепью, состоящей из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:49. Предпочтительная легкая цепь антитела против ГО-23К человека по настоящему изобретению, содержащая вариабельную область легкой цепи 8Е0 ГО N0:23, и константную область 1дк человека, является легкой цепью, состоящей из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:51. Предпочтительно ДНК, содержащая последовательность оснований, кодирующую тяжелую цепь антитела против ГО-23К человека, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:49, содержит последовательность оснований 8Е0 ГО N0:48. Предпочтительно ДНК, содержащая последовательность оснований, кодирующую легкую цепь антитела против ГО-23К человека, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:51, содержит последовательность оснований 8Е0 ГО N0:50. Примеры антитела против ГО-23К человека по настоящему изобретению, которое содержит тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:49, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:51, включают полностью человеческое антитело 32-28, как описано в примерах далее.

Предпочтительная тяжелая цепь антитела против ГО-23К человека по настоящему изобретению, содержащая вариабельную область тяжелой цепи 8Е0 ГО N0:25, и константную область 1§γ 1 человека, является тяжелой цепью, состоящей из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:53. Предпочтительная легкая цепь антитела против ГО-23К человека по настоящему изобретению, содержащая вариабельную область легкой цепи 8Е0 ГО N0:27, и константную область 1дк человека, является легкой цепью, состоящей из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:55. Предпочтительно ДНК, содержащая последовательность оснований, кодирующую тяжелую цепь антитела против ГО-23К человека, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:53, содержит последовательность оснований 8Е0 ГО N0:52. Предпочтительно ДНК, содержащая последовательность оснований, кодирующую легкую цепь антитела против ГО-23К человека, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:55, содержит последовательность оснований 8Е0 ГО N0:54. Примеры антитела против ГО-23К человека по настоящему изобретению, которое содержит тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0:53, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности

- 8 026119 §ЕЦ ГО N0:55, включают полностью человеческое антитело 34-58, как описано в примерах далее.

Предпочтительная тяжелая цепь антитела против ГО-23К человека по настоящему изобретению, содержащая вариабельную область тяжелой цепи §ЕЦ ГО N0:29, и константную область Ι§γ 1 человека, является тяжелой цепью, состоящей из аминокислотной последовательности §ЕЦ ГО N0:57. Предпочтительная легкая цепь антитела против ГО-23К человека по настоящему изобретению, содержащая вариабельную область легкой цепи §ЕЦ ГО N0:31, и константную область 1дк человека, является легкой цепью, состоящей из аминокислотной последовательности §ЕЦ ГО N0:59. Предпочтительно ДНК, содержащая последовательность оснований, кодирующую тяжелую цепь антитела против ГО-23К человека, состоящую из аминокислотной последовательности §ЕЦ ГО N0:57, содержит последовательность оснований §ЕЦ ГО N0:56. Предпочтительно ДНК, содержащая последовательность оснований, кодирующую легкую цепь антитела против ГО-23К человека, состоящую из аминокислотной последовательности §ЕЦ ГО N0:59, содержит последовательность оснований §ЕЦ ГО N0:58. Примеры антитела против ГО-23К человека по настоящему изобретению, которое содержит тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности §ЕЦ ГО N0:57, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности §ЕЦ ГО N0:59, включают полностью человеческое антитело 32-36, как описано в примерах далее.

Настоящее изобретение также содержит фрагменты антитела против ГО-23К человека, такие как одноцепочечный фрагмент вариабельной области (бсРу), РаЬ, РаЬ' и Р(аЬ')₂, который содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи антитела по настоящему изобретению и сохраняет активность антитела. Любой специалист в данной области может сконструировать слитое антитело антитело против ГО-23К человека или фрагмент антитела и другой пептид или белок и может также сконструировать модифицированное антитело со связанным с ним модифицирующим агентом на основании настоящего изобретения. Другой пептид или белок, используемый для слияния не ограничен особым образом, при условии, что он не снижает активность связывания антитела; примеры такового включают сывороточный альбумин человека, различные пептиды-метки, создающий искусственную спираль пептид, связывающие мальтозу белки, глутатион-§-трансферазу, различные токсины, другие пептиды или белки, способные стимулировать мультимеризацию, и тому подобные. Модифицирующий агент, используемый для модификации, не ограничен особым образом, при условии, что он не снижает активность связывания антитела; примеры такового включают полиэтиленгликоль, сахарные цепи, фосфолипиды, липосомы, низкомолекулярные соединения и тому подобное.

Антитело по изобретению против ГО-23К человека, полученного таким образом может быть при необходимости дополнительно очищено и затем может быть получено в соответствии с общепринятым способом. Оно может быть использовано для лечения заболеваний, включая псориаз, ревматоидный артрит, системную красную волчанку (§ЬЕ), воспалительные заболевания кишечника (ΙΒΌ), такие как болезнь Крона или язвенный колит, анкилозирующий спондилоартрит (А§), болезнь Бехчета, увеит рак и тому подобные, в которых 1Б-23К вовлечен в патологию заболевания.

Антитело против 1Б-23К человека по настоящему изобретению может быть предпочтительно использовано в качестве средства для лечения псориаза. Примеры состава этого средства для лечения и тому подобные включают парентеральные составы, такие как инъецируемые средства и средства для вливания, которые предпочтительно вводятся внутривенным введением, подкожным введением и тому подобными. В процессе составления носители или добавки, которые подходят для этих составов, могут быть использованы в фармацевтически приемлемом диапазоне.

Количество антитела против 1Б-23К человека по изобретению, добавленного в вышеописанный состав, варьируется в зависимости от выраженности симптома или возраста пациента, лекарственной формы используемого состава или титра связывания антитела и тому подобного; например, может быть использовано приблизительно от 0,001 до 100 мг/кг антитела.

Настоящее изобретение также относится к полинуклеотиду, содержащему последовательность, кодирующую антитело против ГО-23К человека по настоящему изобретению, и вектору экспрессии, содержащему эту последовательность. Настоящее изобретение также относится к полинуклеотиду, содержащему последовательность, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи антитела против 1Б-23К человека по настоящему изобретению, и полинуклеотиду, содержащему последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи антитела против 1Б-23К человека по настоящему изобретению, и вектору экспрессии, содержащему любой из двух полинуклеотидов или оба вместе. Вектор экспрессии по настоящему изобретению не ограничен особым образом, при условии, что он может экспрессировать ген, который кодирует антитело по настоящему изобретению или вариабельную область его тяжелой цепи и/или вариабельную область легкой цепи, в различных клетках-хозяина прокариотических клеток и/или эукариотических клеток, и вырабатывает эти полипептиды. Примеры такового включает плазмидные векторы, вирусные векторы (например, аденовирус, ретровирус) и тому подобные. Предпочтительно вектор экспрессии по настоящему изобретению содержит полинуклеотид, содержащий или последовательность, кодирующую тяжелую цепь или легкую цепь вышеописанного антитела по настоящему изобретению, или как полинуклеотид, содержащий последовательность, кодирующую тяжелую цепь антитела по настоящему изобретению, так и полинуклеотид, содержащий последовательность, кодирующую

- 9 026119 легкую цепь антитела по настоящему изобретению.

Вектор экспрессии по настоящему изобретению может содержать ген, который кодирует антитело против 1Ь-23К человека по настоящему изобретению, или ген, который кодирует вариабельную область тяжелой цепи антитела против 1Ь-23К человека по настоящему изобретению и/или ген, который кодирует вариабельную область легкой цепи антитела против 1Ь-23К человека по настоящему изобретению, и промотор, функционально связанный с геном. Примеры промотора для экспрессии гена, кодирующего антитело по настоящему изобретению, или гена, кодирующего вариабельную область его тяжелой цепи и/или гена, кодирующего вариабельную область его легкой цепи в бактерии включает промотор Тгр, промотор 1ас, промотор гесА, промотор ХРЬ, промотор 1рр, промотор 1ас и тому подобные, когда хозяин является бактерией рода ЕксйейсЫа. Примеры промотора для экспрессии в дрожжах включают РН05 промотор, РОК промотор, ОАР промотор и АЭН промотор, и некоторые примеры промотора для экспрессии в роде ВасШик включают промотор 8Ь01, промотор 8Р02, промотор репР и тому подобные. Когда хозяин является эукариотической клеткой, такой как клетка млекопитающего, примеры промотора включают полученный из 8У40 промотор, ретровирусный промотор, промотор теплового шока и тому подобные.

Когда в качестве клетки-хозяина использована бактерия, в частности, ЕксйейсЫа сой, вектор экспрессии по настоящему изобретению может дополнительно содержать инициирующий кодон, стопкодон, область терминатора и реплицируемый блок. Когда в качестве клетки-хозяина использованы дрожжи, клетка животного или клетка насекомого, вектор экспрессии по настоящему изобретению может содержать инициирующий кодон и стоп-кодон. В этом случае, он может содержать энхансерную последовательность, некодирующие области на 5'-конце и З'-конце гена, который кодирует антитело по настоящему изобретению или вариабельную область тяжелой цепи или вариабельную область легкой цепи такового, последовательность сигнала секреции, сплайсинговое соединение, область полиаденилирования, реплицируемый блок или тому подобное. Также он может содержать маркер отбора, который часто используется (например, ген устойчивости к тетрациклину, ген устойчивости к ампициллину, ген устойчивости к канамицину, ген устойчивости к неомицину, ген редуктазы дигидрофолиевой кислоты) в соответствии с предполагаемым применением.

Настоящее изобретение также относится к трансформанту, вводимому с геном, кодирующим антитело по настоящему изобретению или вариабельную область тяжелой цепи антитела по настоящему изобретению и/или вариабельную область легкой цепи антитела по настоящему изобретению. Такой трансформант может быть получен, например, трансформированием клетки-хозяина вектором экспрессии по настоящему изобретению. Клетка-хозяин, которая используется для получения трансформанта, не ограничена особым образом, при условии, что она является подходящей для вышеупомянутого вектора экспрессии и является трансформируемой; примеры таковой включают различные клетки, такие как природные клетки или искусственно созданные линии клеток, обычно используемые в области техники настоящего изобретения (например, бактерии (бактерии рода ЕксйейсЫа, бактерии рода ВасШик), дрожжи (род Зассйаготусек, род РюЫа и тому подобные), клетки животных или клетки насекомых (например, ЗГ9) и тому подобные. Трансформация может быть выполнена, по сути, любым известным способом.

Предпочтительно трансформант по настоящему изобретению является или клеткой-хозяин, трансформированной вектором экспрессии, содержащим полинуклеотид, содержащий последовательность, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи антитела по настоящему изобретению, и полинуклеотид, содержащий последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи антитела по настоящему изобретению, или клеткой-хозяина, трансформированной вектором экспрессии, содержащим полинуклеотид, содержащий последовательность, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи антитела по настоящему изобретению, и вектором экспрессии, содержащим полинуклеотид, содержащий последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи антитела по настоящему изобретению. Более предпочтительно трансформант по настоящему изобретению является клеткой-хозяина, трансформированной вектором экспрессии, содержащим полинуклеотид, содержащий последовательность, кодирующую тяжелую цепь вышеописанного антитела по настоящему изобретению, и полинуклеотид, содержащий последовательность, кодирующую легкую цепь антитела по настоящему изобретению, или клеткой-хозяина, трансформированной вектором экспрессии, содержащим полинуклеотид, содержащий последовательность, кодирующую тяжелую цепь вышеупомянутого антитела по настоящему изобретению, и вектором экспрессии, содержащим полинуклеотид, содержащий последовательность, кодирующую легкую цепь антитела по настоящему изобретению.

Настоящее изобретение также относится к способу получения антитела против 1Ь-23К человека по настоящему изобретению, при этом способ содержит экспрессирование в клетке-хозяине гена, кодирующего антитело по настоящему изобретению, или гена, кодирующего вариабельную область тяжелой цепи антитела по настоящему изобретению и/или гена, кодирующего вариабельную область легкой цепи антитела по настоящему изобретению, то есть, с использованием такого трансформанта. Предпочтительно клетка-хозяин, которая использована в способе выше, является клеткой-хозяином, трансформированной вектором экспрессии настоящего изобретения, описанным выше, и вектор экспрессии может отдельно или одновременно содержать полинуклеотид, содержащий последовательность, кодирующую вариа- 10 026119 бельную область тяжелой цепи антитела по настоящему изобретению и полинуклеотид, содержащий последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи антитела по настоящему изобретению.

При продуцировании антитела против 1Ь-23К человека по настоящему изобретению трансформант может быть культивирован в питательной среде. Питательная среда предпочтительно содержит источник углерода и источник неорганического азота или источник органического азота, которые требуются для роста трансформанта. Примеры источника углерода включают глюкозу, декстран, растворимый крахмал, сахарозу и тому подобные; примеры источника неорганического азота или источника органического азота включают соли аммония, нитраты, аминокислоты, жидкий кукурузный экстракт, пептон, казеин, мясной экстракт, соевый жмых, картофельный экстракт и тому подобные. Если требуется, другие нутриенты (например, неорганические соли (например, хлорид кальция, дигидрофосфат натрия, хлорид магния), витамины, антибиотики (например, тетрациклин, неомицин, ампицилин, канамицин и тому подобные) и тому подобное) могут быть включены в составы.

Культивирование трансформанта выполняется известным, по сути, способом. Выбраны соответствующие условия культивирования, например, температура, рН среды и время культивирования. Например, когда хозяин является клеткой животного, среда МЕМ, содержащая приблизительно 5%-20% фетальной бычьей сыворотки (§с1еисе, Уо1.122, р.501, 1952), среда ΌΜΕΜ (Уио1о§у, Уо1.8, р.396, 1959), среда КРМН640 (1. Ат. Меб. Аккос, Уо1.199, р.519, 1967), среда 199 (Ргос. 8ос. Ехр. Βίοί. Меб., Уо1.73, р.1, 1950) и тому подобные могут быть использованы в качестве среды. рН среды составляет предпочтительно приблизительно 6-8, культивирование обычно выполняется при приблизительно 30°С-40°С в течение приблизительно 15-72 ч, и при необходимости могут осуществляться аэрация или встряхивание. Когда хозяин является клеткой насекомого могут быть применены, например, среда Грейса, содержащая фетальную бычью сыворотку (Ргос. ЫаИ. Асаб. δα. И8А, Уо1.82, р. 8404, 1985) и тому подобные, и ее рН составляет предпочтительно приблизительно 5-8.

Культивирование обычно выполняется при приблизительно 20°С-40°С в течение 15-100 ч, и при необходимости могут осуществляться аэрация или встряхивание. Когда хозяин является, к примеру, бактерией, актиномицетами, дрожжами или нитчатым грибом, подходящей является жидкая среда, содержащая вышеописанные источники нутриентов. Среда с рН 5-8 является предпочтительной. Когда хозяин является Е. сой, предпочтительные примеры среды включают среду ЬВ, среду М9 (МШег е1 а1., Ехр. Мо1. Сепе1. Со1б 8рппд НагЬог ЬаЬога1огу, р.431, 1972) и тому подобные. В этом случае, культивирование обычно может быть осуществлено при 14-43°С в течение приблизительно 3-24 ч, при осуществлении при необходимости аэрации или встряхивания. Когда хозяин является бактерией рода ВасШик, культивирование обычно может быть осуществлено при 30-40°С в течение приблизительно 16-96 ч, при этом при необходимости могут осуществляться аэрация или встряхивание. Когда хозяин является дрожжами, примеры среды включают минимальную среду Буркхолдера (ВокЬап, Ргос. №ιΐ1. Асаб δα И8А Уо1.77, р.4505, 1980), и рН среды желательно составляет 5-8. Культивирование обычно осуществляется при приблизительно 20-35°С в течение приблизительно 14-144 ч, и при необходимости могут осуществляться аэрация или встряхивание.

Антитело против 1Б-23К человека по настоящему изобретению может быть получено, предпочтительно выделено и очищено, из культивированного трансформанта, как описано выше. Примеры способа выделения и очистки включают способы, основанные на различии в растворимости, такие как способы высаливания и растворительного осаждения, основанные на различиях в молекулярной массе, такие как диализ, ультрафильтрация, гель-фильтрация и электрофорез в полиакриламидном геле с добавлением додецилсульфата натрия; способы, основанные на различиях в электрическом заряде, такие как ионообменная хроматография и гидроксиапатитная хроматография; способы, основанные на специфической аффинности, такие как аффинная хроматография; способы, основанные на различиях в гидрофобности, такие как обращенно-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография; способы, основанные на различиях в изоэлектрической точке, такие как изоэлектрическое фокусирование; и тому подобные.

Хотя настоящее изобретение было в целом описано выше, в настоящем документе предоставлены конкретные примеры, исключительно для лучшего понимания настоящего изобретения. Такие примеры представлены только в иллюстративных целях и не ограничивают объем настоящего изобретения.

Примеры

Процедуры, предполагающие применение набора или реагента и тому подобного, осуществляли в соответствии с приложенным протоколом, если не указано иное.

Пример 1. Получение слитых белков 1Б-23К человека и обезьяны-Рс мыши

Авторы настоящего изобретения создали слитый белок последовательности внеклеточной области последовательности 1Ь-23К человека (непатентный документ 1, аминокислоты в положениях 24-353 δΕΟ ΙΌ N0:1) с Рс-областью иммуноглобулина мыши для того, чтобы использовать белок в качестве антигена и материала для скрининга для конструирования антитела против 1Ь-23К. В частности, внеклеточную область последовательности 1Ь-23К человека амплифицировали посредством ПЦР с использованием праймеров ΕΌ14-1 (δΕΟ ΙΌ N0:2) и ΕΌ14-2 (δΕΟ ΙΌ N0:3), и встраивали по ЕсоК1 и Β§1ΙΙ сайтам в рРиБЕ-т1§О2А-Рс2 ДпутоОеп), который является вектором для экспрессии Рс слитого белка мыши,

- 11 026119 посредством этого получая вектор экспрессии с Рс мыши, слитым с ГЬ-23К. В настоящем описании ген, амплифицированный посредством ПЦР, содержал два ЕсоК1 сайта в праймере последовательности ΕΌ14-1 и последовательность гена ГЬ-23К человека, фрагмент гена, в котором ЕсоК1 сайт в ГЬ-23К человека не был расщеплен, получали частичным расщеплением и электрофорезом в агарозном геле и вводили в вектор экспрессии. Сконструированный вектор вводили в клетки РгееЦПе 293 (Гиуйгодеи) с использованием фектина 293 (Чпуйгодсп). который является реагентом для введения гена, и клетки культивировали бессывороточной системе культивирования с использованием среды для экспрессии РгееЦПе 293 (Гиуйтодеи), после чего собирали культуральный супернатант, содержащий слитый белок ГЬ-23К человека-Рс мыши. Белок очищали из собранного культурального супернатанта с использованием колонки ΗίТгарА (СЕ НеаЙЬсате .Гараи) и системы АКТА (ОЕ НеаЙЬсате Гараи), которая представляет собой систему для очистки белка, и использовали в эксперименте, описанном далее. Слитый белок ГР-23К обезьяны-Рс мыши также получали, используя такой же способ.

Пример 2. Получение клеток 293, экспрессирующих ГЬ-23К

Авторы настоящего изобретения получали клетки, экспрессирующие полноразмерный ГБ-23К человека для того, чтобы использовать его в качестве клеточного антигена для тестирования связывающей активности антитела против ГБ-23К и получения антитела. Полноразмерный ген ГБ-23К человека (непатентный документ 1, вся длина 8ЕЦ ГО N0:1) амплифицировали посредством ПЦР с использованием праймеров АА26-Р\у (8ЕЦ ГО N0:60) и АА10-4 (8ЕЦ ГО N0:61), и фрагмент гена вводили в вектор рСР2.1-Т0Р0 (Гиу1Гтодеи), который является клонирующим вектором. После секвенирования фрагмент гена рекомбинировали с вектором рсОКА3.1 (Гиуйтодеи), который является вектором для экспрессии в клетках млекопитающих. Вектор вводили в клетки 293, которые являются широко известными культивируемыми клетками человека с использованием ЫроГесГатте 2000 (Гиуйтодеи). Клетки селективно культивировали с содержащей С418 средой КРМГ1640, и затем моноклонировали способом серийных разведении. Затем клон, проявляющий высокую экспрессию белка, отбирали анализом проточной цитометрией с использованием меченного флуоресцентным красителем антитела против ГЬ-23К человека (Р&И ЗуЧешЦ посредством этого получая клетки, экспрессирующие ГЬ-23К человека.

Пример 3. Конструирование гибридомы, продуцирующей антитело против ГЬ-23К

Авторы настоящего изобретения иммунизировали мышь Уе1осГштиие слитым белком ГЬ-23К человека-Рс или клетками, экспрессирующими ГЬ-23К человека, полученными в примерах 1 и 2 соответственно вместе с адъювантом, вызывающим иммунный ответ, для того, чтобы получить антитело против ГЬ-23К человека. Мышь иммунизировали несколько раз и последний раз иммунизировали, когда титр антитела крови возрастал. У иммунизированной мыши отбирали селезенку или лимфатический узел и тому подобное в соответствии с обычным способом, и оттуда получали лимфоциты и сливали с клеткой миеломы мыши 8Р2/0, посредством этого образуя гибридому. Готовили образцы с серийным разведением гибридомы и подвергали моноклонированию. Каждый из клонов подвергали культивированию в увеличенном масштабе, и затем среду заменяли бессывороточной средой для гибридомы СО (Гиуйтодеи), с последующим культивированием в течение 5 дней. Антитело очищали от полученного культурального супернатанта с использованием спин-колонки с белком С (Рго-СЬет).

Пример 4. Анализ ЕЬГ§А

Авторы настоящего изобретения использовали антиген ЕЬГ§А для измерения антиген-специфичной связывающей активности антитела. Слитый белок человеческий или обезьяний ГЬ-23К-РС иммобилизовывали на 384-луночном планшете Махкогр (Νικία Гис.) с концентрацией 500 нг/мл. Добавляли туда блокирующий агент (В1осктд 0ие; ΝκαιΡκ Те^цке, Гис.) и оставляли стоять при комнатной температуре в течение 1 ч, после чего два раза промывали промывочным буфером [ТРВ§: забуференный фосфатом физиологический раствор (РВ§), содержащий 0,05% Тетееи-20], и образцы очищенного антитела надлежащим образом серийно разводили и добавляли туда. Инкубацию осуществляли при комнатной температуре в течение 1 ч, после чего четыре раза промывали ТРВ§, и добавляли меченное НКР кроличье антитело против Гд мыши (ΌΑΚΟ), которое было разбавлено в 2000 раз буфером для разбавления. Инкубацию осуществляли при комнатной температуре в течение 1 ч, и после этого четыре раза промывали промывочным буфером. Добавляли субстрат ВМ для хемилюминесценции (РОИ) для ЕЬГ§А (РосЬе ОГадиокйск), который является реагентом для детектирования хемилюминесценции, и величину хемилюминесценции измеряли счетчиком Еиу18юи (Реткш Е1тег). Каждое антитело тестировали в двух опытах, и ЕС50 анализировали подбором кривой. В этом тесте слитое антитело, полученное заменой Рс-области известного гуманизированного антитела против ГЬ-23К человека 1шт20О7 (патентный документ 1)

Рс-областью мыши (далее называемое Ьит20О7-тЕс), использовали в качестве сравнительного антитела. Также, причина, почему 1шт20О7 сливали с Рс-областью мыши для получения слитого белка, заключалась в использовании антитела против Гд мыши в качестве вторичного антитела, и Рс-область мыши могла быть распознана антителом против Гд мыши, посредством этого предоставляя возможность измерения активности.

В результате было обнаружено, что антитела (химерные антитела), названные 25-3, 30-15, 30-16, 3018, 32-28, 34-58 и 32-36, имели высокую связывающую активность по отношению к ГЬ-23К человека, подобную 1шт20О7-тРс (табл. 1). Также по отношению к ГБ-23Р обезьяны 1шт20О7-тРс не демонстри- 12 026119 ровал связывающей активности по отношению к 1Ь-23К обезьяны, тогда как все семь антител демонстрировали высокую связывающую активность с 1Ь-23К обезьяны (табл. 2).

Таблица 1. Связывающие активности антител против 1Ь-23К человека по отношению к 1Ь-23К человека

	ЕС50 (нг/мл)
25-3 (химерные)	21
30-15 (химерные)	17
30-16 (химерные)	19
30-18 (химерные)	14
32-28 (химерные)	18
34-58 (химерные)	17
32-36 (химерные)	23
1тшп2 0Р7-тГс	14

Таблица 2. Связывающие активности антител против 1Ь-23К человека по отношению к 1Ь-23К обезьяны

Пример 5. Определение последовательностей антител

Для семи антител, идентифицированных вышеописанным анализом, авторы настоящего изобретения клонировали гены, кодирующие тяжелую цепь и легкую цепь антител из гибридом. Выделяли РНК из каждой из гибридом и преобразовывали в кДНК с использованием набора для амплификации кДНК (набор для амплификации кДНК ЗМАКТег КАСЕ; ОоШссН). Затем вариабельные области тяжелой цепи и легкой цепи удлиняли и амплифицировали посредством ПЦР. Продукты ПЦР секвенировали напрямую секвенатором (АВ1 РК1ЗМ 3100; Аррйей ВюцЧепъ). Также ПЦР продукты рекомбинировали с ПЦР продуктом вектора для субклонирования, такого как рСК3.1-ТОРО (1пу|1годеп). и затем анализировали их последовательности гена, посредством этого определяя их последовательности.

Определенная последовательность оснований вариабельной области тяжелой цепи 25-3 показана в ЗЕф ГО N0:4, и ее аминокислотная последовательность показана в §Еф ГО N0:5. Последовательность оснований вариабельной области легкой цепи 25-3 показана в §Еф ГО N0:6, и ее аминокислотная последовательность показана в §Еф ГО N0:7.

Определенная последовательность оснований вариабельной области тяжелой цепи 30-15 показана в §Еф ГО N0:8, и ее аминокислотная последовательность показана в §Еф ГО N0:9. Последовательность оснований вариабельной области легкой цепи 30-15 показана в §Еф ГО N0:10 и ее аминокислотная последовательность показана в §Еф ГО N0:11.

Определенная последовательность оснований вариабельной области тяжелой цепи 30-16 показана в §Еф ГО N0:12, и ее аминокислотная последовательность показана в §Еф ГО N0:13. Последовательность оснований вариабельной области легкой цепи 30-16 показана в §Еф ГО N0:14, и ее аминокислотная последовательность показана в §Еф ГО N0:15.

Определенная последовательность оснований вариабельной области тяжелой цепи 30-18 показана в §Еф ГО N0:16, и ее аминокислотная последовательность показана в §Еф ГО N0:17. Последовательность оснований вариабельной области легкой цепи 30-18 показана в §Еф ГО N0:18, и ее аминокислотная последовательность показана в §Еф ГО N0:19.

Определенная последовательность оснований вариабельной области тяжелой цепи 32-28 показана в §Еф ГО N0:20, и ее аминокислотная последовательность показана в §Еф ГО N0:21. Последовательность оснований вариабельной области легкой цепи 32-28 показана в §Еф ГО N0:22, и ее аминокислотная последовательность показана в §Еф ГО N0:23.

- 13 026119

Определенная последовательность оснований вариабельной области тяжелой цепи 34-58 показана в 8ЕО ГО N0:24, и ее аминокислотная последовательность показана в 8Е0 ГО N0:25. Последовательность оснований вариабельной области легкой цепи 34-58 показана в 8Е0 ГО N0:26, и ее аминокислотная последовательность показана в 8Е0 ГО N0:27.

Определенная последовательность оснований вариабельной области тяжелой цепи 32-36 показана в 8Е0 ГО N0:28, и ее аминокислотная последовательность показана в 8Е0 ГО N0:29. Последовательность оснований вариабельной области легкой цепи 32-36 показана в 8Е0 ГО N0:30, и ее аминокислотная последовательность показана в 8Е0 ГО N0:31.

Пример 6. Конструирование полностью человеческих антител

Вариабельные области каждого из вышеописанных антител получали из человека, и их константные области получали из мыши. Таким образом, авторы настоящего изобретения сконструировали векторы экспрессии, содержащие гены как тяжелой цепи, так и легкой цепи с использованием вектора 08 (Τοη/а Βίοίοβίοδ). и сконструировали полностью человеческое антитела. В частности, сигнальную последовательность присоединяли к 5'-концу гена вариабельной области тяжелой цепи антител, и ген константной области 1§γ1 человека [Мап 8ипд Со с1 а1., (1992) 1 1ттипо1. Уо1. 148(4): 1149-1154] присоединяли к 3'-концу, и ген тяжелой цепи встраивали в 08 вектор рЕЕ6.4. Также, сигнальную последовательность присоединяли к 5'-концу вариабельной области легкой цепи антител, и ген константной области кцепи человека (Мап 8ипд Со с1 а1., как указано выше) присоединяли к 3'-концу, и гены легкой цепи встраивали в 08 вектор рЕЕ12.4.

Последовательность оснований тяжелой цепи сконструированного полностью человеческого антитела 25-3 показана в 8Е0 ГО N0:32, и ее аминокислотная последовательность показана в 8Е0 ГО N0:33. Последовательность оснований легкой цепи полностью человеческого антитела 25-3 показана в 8Е0 ГО N0:34, и ее аминокислотная последовательность показана в 8Е0 ГО N0:35.

Последовательность оснований тяжелой цепи сконструированного полностью человеческого антитела 30-15 показана в 8Е0 ГО N0:36, и ее аминокислотная последовательность показана в 8Е0 ГО N0:37. Последовательность оснований легкой цепи полностью человеческого антитела 30-15 показана в 8Е0 ГО N0:38, и ее аминокислотная последовательность показана в 8Е0 ГО N0:39.

Последовательность оснований тяжелой цепи сконструированного полностью человеческого 30-16 показана в 8Е0 ГО N0:40, и ее аминокислотная последовательность показана в 8Е0 ГО N0:41. Последовательность оснований легкой цепи полностью человеческого антитела 30-16 показана в 8Е0 ГО N0:42, и ее аминокислотная последовательность показана в 8Е0 ГО N0:43.

Последовательность оснований тяжелой цепи сконструированного полностью человеческого антитела 30-18 показана в 8Е0 ГО N0:44, и ее аминокислотная последовательность показана в 8Е0 ГО N0:45. Последовательность оснований легкой цепи полностью человеческого антитела 30-18 показана в 8Е0 ГО N0:46, и ее аминокислотная последовательность показана в 8Е0 ГО N0:47

Последовательность оснований тяжелой цепи сконструированного полностью человеческого антитела 32-28 показана в 8Е0 ГО N0:48, и ее аминокислотная последовательность показана в 8Е0 ГО N0:49. Последовательность оснований легкой цепи антитела человека 32-28 показана в 8Е0 ГО N0:50, и ее аминокислотная последовательность показана в 8Е0 ГО N0:51.

Последовательность оснований тяжелой цепи сконструированного полностью человеческого антитела 34-58 показана в 8Е0 ГО N0:52, и ее аминокислотная последовательность показана в 8Е0 N0:53. Последовательность оснований легкой цепи полностью человеческого антитела 34-58 показана в 8Е0 ГО N0:54, и ее аминокислотная последовательность показана в 8Е0 ГО N0:55.

Последовательность оснований тяжелой цепи сконструированного полностью человеческого антитела 32-36 показана в 8Е0 ГО N0:56, и ее аминокислотная последовательность показана в 8Е0 N0:57. Последовательность оснований легкой цепи полностью человеческого антитела 32-36 показана в 8Е0 ГО N0:58, и ее аминокислотная последовательность показана в 8Е0 ГО N0:59.

Используя вышеописанные 08 векторы со встроенными генами тяжелой цепи и легкой цепи каждого из антител соответственно осуществляли экспрессию антител двумя способами, транзиторной экспрессией и конститутивной экспрессией. Для транзиторной экспрессии, приблизительно 1000000 клеток/мл клеток Егссь1у1с 293 (1пуйгодеп), культивированных в среде для экспрессии Егссь1у1с 293 (ΙιτνίΙΐΌдсп), трансфицировали обоими вышеописанными векторами экспрессии тяжелой цепи и легкой цепи с использованием фектина 293 (Пп'Пгодсп) и культивировали в течение 3-7 дней. Культуральный супернатант очищали с использованием белка А или белка 0 Рго1си5, и получали очищенное антитело каждого из полностью человеческих антител. Для конститутивной экспрессии вышеописанные 08 векторы со встроенными генами тяжелой цепи и легкой цепи каждого из антител соответственно расщепляли рестрикционными ферментами №0 и ΡνυΙ и лигировали друг с другом с использованием набора ЫдайопСот'сшспсс (NIРР0N0ЕNЕ) или Ыдайоп-Ыдй (Τ0Υ0Β0), посредством этого конструируя 08 векторы, в которые встроены оба гена тяжелой цепи и легкой цепи. Векторы экспрессии кодируют полноразмерные тяжелую цепь и легкую цепь и глутаминсинтетазу, и антитела экспрессировали трансфекцией в клетках СН0-К18У. Культуральные супернатанты очищали с использованием колонки с белком А или белком 0 (0Е НсаИйсагс 1арап), посредством этого получая очищенное антитело каждого из полностью

- 14 026119 человеческих антител. (Пример 7: анализ ЕЫ§Л)

Авторы настоящего изобретения использовали антиген ЕЬ18А для измерения антиген-специфичной связывающей активности полностью человеческого антитела, сконструированного в примере 6. Слитый белок человеческий или обезьяний 1Ь-23К-Рс иммобилизовывали на 384-луночном планшете Мах18отр (Кипе 1пс.) с концентрацией 500 нг/мл. Добавляли туда блокирующий агент (В1оскт§ Опе; ЫасаЫ Тс5С|ис. 1пс.) и оставляли при комнатной температуре в течение 1 ч, и затем два раза промывали промывочным буфером [ТРВ8: содержащий 0,05% Т\уееп-20 забуференный фосфатом физиологический раствор (РВ§)], и каждый из очищенных образцов надлежащим образом серийно разводили и добавляли туда. Инкубацию осуществляли при комнатной температуре, и затем промывали четыре раза ТРВ8, и меченное НИР антитело против 1уС человека (ΌΑΚΟ), которое было в 2000 раз разбавлено буфером для разбавления, добавляли в качестве вторичного антитела. Инкубацию осуществляли при комнатной температуре в течение 1 ч, после чего промывали четыре раза промывочным буфером. Добавляли туда субстрат ВМ для хемилюминесценции ЕЬ18А (РОИ) (КосЬе П1адпо8Йс8), который является реагентом для детектирования хемилюминесценции, и величину хемилюминесценции измеряли счетчиком Епуыоп (Реткт Е1тег). Каждое из антител тестировали по два раза, и анализировали ЕС50 подбором кривой.

В результате было обнаружено, что полностью человеческое антитело для каждого из 7 антител, идентифицированных в примере 4 обладало высокой связывающей активностью по отношению к 1Ь-23К человека (табл. 3). Также, в отношении связывания с 1Ь-23К обезьяны, было обнаружено, что 1ιιιιη20Ό7 не демонстрировал связывающей активности по отношению к 1Ь-23К обезьяны, тогда как все 7 полностью человеческих антител обладали высокой связывающей активностью по отношению к 1Ь-23К обезьяны (табл. 4).

Таблица 3. Связывающие активности полностью человеческих антител против 1Ь-23К человека по отношению к 1Ь-23К человека

	ЕС50 (нг/мл)
25-3 (полностью человеческое)	19, 5
30-15 (полностью человеческое)	11, 8
30-16 (полностью человеческое}	16, 5
30-18 (полностью человеческое)	13, 6
32-23 (полностью человеческое}	13, 1
34-58 (полностью человеческое)	14, 6
32-36 (полностью человеческое}	21, 8
Нит20С7	48,5

Таблица 4. Связывающие активности полностью человеческого антитела против 1Ь-23К человека по отношению к 1Ь-23К обезьяны

	ЕС50 (нг/мл)
25-3 (полностью человеческое)	11,2
30-15 (полностью человеческое)	7, 6
30-16 (полностью человеческое)	10,8
30-18 (полностью человеческое)	8, 4
32-28 (полностью человеческое)	17, 1
34-58 (полностью человеческое)	14,8
32-36 (полностью человеческое)	33,1
1ΐίΐΓη2 0ϋ7	>10000

Пример 8. Анализ для ингибирования индуцированной 1Ь-23 человека клеточной пролиферации Κίΐ-225

Авторы настоящего изобретения исследовали ингибиторную активность клеточной пролиферации, используя клетки Κίΐ-225 (непатентный документ 1), которые пролиферируют под влиянием 1Ь-23 для того, чтобы измерить антиген-специфичные нейтрализующие активности полностью человеческого антитела. В этом исследовании клетки Κίΐ-225, субкультивированные в присутствии 1Ь-2, промывали три раза КРМ1 1640, содержащей 10% РВ8 и 1 % пенициллина/стрептомицина для удаления 1Ь-2, и затем готовили клеточную суспензию, имеющую клеточную концентрацию 75000 клеток/мл с той же средой и распределяли в 96-луночный планшет с 100 мкл/лунка. Серию из четырех разбавлений образцов очищенного антитела готовили с той же средой до 2000 нг/мл, и разбавление добавляли к клеткам и перемешивали перемешивателем для планшетов. 1Ь-23 человека (Нитап/уте) добавляли к конечной концентрации 2 нг/мл, перемешивали и затем инкубировали при 37°С при 5% СО₂ в течение 5 дней. Группы, содержащие только среду вместо образца антитела, служили в качестве контрольных групп, в которых

- 15 026119 содержащую 1Ь-23 группу использовали в качестве 100% контроля и не содержащую 1Ь-23 группу использовали в качестве 0% контроля. Затем осуществляли количественное определение с использованием Сс11ТПсг-С1о (Рготеда) который является а реагентом для измерения количества пролиферирующих клеток, и величину 1С₅₀ анализировали подбором кривой.

В результате можно обнаружить, что все 7 полностью человеческих антител имели высокую нейтрализующую активность против индуцируемой ГО-23Р человека пролиферации по сравнению с т20Э7 и 1шт20О7 (табл. 5).

Таблица 5. Ингибиторные активности полностью человеческого антитела против ГО-23Р человека по отношению к индуцируемой 1Ь-23 человека пролиферации клетки Κίΐ-225

	1С50 (нг/мл)
25-3 (полностью человеческое)	3, 5
30-15 (полностью человеческое)	1,4
30-16 (полностью человеческое)	2, 3
30-18 (полностью человеческое)	3, 3
32-28 (полностью человеческое)	1/ 4
34-58 (полностью человеческое)	3, 7

32-36 (полностью человеческое)	6/ 7
М2СЮ7	24
Ηυπι20ϋ7	55

Пример 9. Анализ ГО-23-стимулированного 8ТАТ3 фосфорилирования в цельной крови человека

Авторы настоящего изобретения определили возможность ингибирования активации сигнальной молекулы 8ТАТ3, вызванной 1Ь-23 и ГО-23Р. В этом тесте нейтрализующая активность в клинических применениях может быть более точно измерена посредством использования биологических образцов, отобранных у нормальных индивидов.

Каждое из очищенных антител добавляли к цельной крови человека, после чего осуществляли преинкубацию при 37°С в течение 10 мин. Затем туда добавляли 1Ь-23 человека (Нитап/уте: конечная концентрация: 10 нг/мл) или растворитель, после чего осуществляли инкубацию при 37°С в течение 20 мин. Охлажденный во льду РАС8 буфер (2% РС8-содержащий РВ8) добавляли для остановки реакции, и осуществляли центрифугирование для удаления супернатанта. Меченное АРС антитело против СИ4 (ВИ В1О8С1епее8) добавляли для окрашивания клеток крови, и затем добавляли буфер Р1ю5Ло\у Ьуке/Их (ВИ В1о8С1епее) для лизиса и фиксации клеток. Клетки крови промывали, после чего добавляли метанол для пермеабилизации клеток. Затем, клетки крови промывали, и добавляли меченное ФЭ антитело против фосфорилированного 8ТАТ3 (ВИ Вю5С1епсе) для окрашивания клеток. Клетки промывали и затем суспендировали в буфере РАС8. Флуоресценцию, вызванную распознаванием антителом фосфорилированного 8ТАТ3, измеряли измерительной системой РАС8СаПЬиг (ВИ Вю5С1епсе) с использованием канала, установленного на фракцию лимфоцитов СИ4. Величину, полученную вычитанием соотношения фосфорилированных 8ТАТ3-позитивных клеток в отсутствии 1Ь-23 из соотношения в присутствии 1Ь-23, рассчитывали как соотношение индуцированных 1Ь-23 фосфорилированных 8ТАТ3-позитивных клеток.

В результате можно увидеть, что полностью человеческие антитела имеют высокую сигнальную ингибиторную активность в цельной крови человека, и среди них полностью человеческое антитела, в особенности, 25-3, 32-28 и 34-58, имеют высокую сигнальную ингибиторную активность по сравнению с Ьит20И7 (табл. 6).

Таблица 6. Анализ ГО-23-стимулированного фосфорилирования в цельной крови человека

	1С50 (нг/мл)
25-3 (полностью человеческое)	0,7
30-15 (полностью человеческое)	13
30-16 (полностью человеческое)	4, 5
32-28 (полностью человеческое)	0, 16
34-58 (полностью человеческое)	0,51
32-36 (полностью человеческое)	8, 2
Ьит20Ю7	10

Промышленная применимость

Антитела против 1Ь-23К человека по настоящему изобретению могут использоваться для профилактики или лечения различных заболеваний, в патологию которых вовлечен 1Ь-23 человека.

- 16 026119

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ <110> АзЬе11аз РНагта 1пс.

<120> НОВОЕ АНТИТЕЛО ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА И.-23 ЧЕЛОВЕКА <130> АР12015А00 <150> ЗР 2011-81982 <151> 2011-04-01 <160> 61 <170> РаЬепЬ1п νθΓδΐοη 3.5 <210> 1 <211> 629 <212> БЕЛОК <213> Ното зарЬепз <400> 1

МеЬ Азп С1п 1

7а1

ТНг 11е С1п Тгр 5

Азр А1а 7а1 11е А1а Ьеи Туг 11е

10

15

Ьеи

РНе

5ег

Тгр

Суз

НЬз

С1у

С1у

11е

ТНг

Азп

11е

Азп

Суз

5ег

С1у

20

25

30

НЬз

11е

Тгр

7а1

С1и

Рго

А1а

ТНг

11е

РНе

Ьуз

МеЬ

С1у

МеЬ

Азп

11е

35

40

45

5ег

11е

Туг

Суз

С1п

А1а

А1а

11е

Ьуз

Азп

Суз

С1п

Рго

Агд

Ьуз

Ьеи

50

55

60

НЬз

РНе

Туг

Ьуз

Азп

С1у

11е

Ьуз

С1и

Агд

РНе

С1п

11е

ТНг

Агд

11е

65

70

75

80

Азп

Ьуз

ТНг

ТНг

А1а

Агд

Ьеи

Тгр

Туг

Ьуз

Азп

РНе

Ьеи

С1и

Рго

НЬз

85

90

95

А1а

5ег

МеЬ

Туг

Суз

ТНг

А1а

С1и

Суз

Рго

Ьуз

НЬз

РНе

С1п

С1и

ТНг

100

105

110

Ьеи

11е

Суз

С1у

Ьуз

Азр

11е

5ег

5ег

С1у

Туг

Рго

Рго

Азр

11е

Рго

115

120

125

Азр

С1и

7а1

ТНг

Суз

7а1

11е

Туг

С1и

Туг

5ег

С1у

Азп

МеЬ

ТНг

Суз

130

135

140

- 17 026119

ТНг Тгр Αδη 145

А1а

С1у

^у5 150

Ьеи ТНг Туг

11е Αδρ ТНг ^уδ Туг να1 να1

155

160

Ηίδ

νθ1

^у5

5ег

Ьеи

С1и

ТНг

С1и

С1и

С1и

С1п

С1п

Туг

Ьеи

ТНг

5ег

165

170

175

5ег

Туг

11е

Αδη

11е

5ег

ТНг

Αδρ

5ег

Ьеи

С1п

С1у

С1у

^у5

^у5

Туг

180

185

190

Ьеи

Vа1

Тгр

να1

С1п

Α1α

Α1α

Αδη

Α1α

Ьеи

С1у

МеА

С1и

С1и

5ег

^у5

195

200

205

С1п

Ьеи

С1п

11е

Ηίδ

Ьеи

Αδρ

Αδρ

11е

να1

11е

Рго

5ег

Α1α

Α1α

να1

210

215

220

11е

5ег

Агд

Α1α

С1и

ТНг

11е

Αδη

Α1α

ТНг

να1

Рго

^у5

ТНг

11е

11е

225

230

235

240

Туг

Тгр

Αδρ

5ег

С1п

ТНг

ТНг

11е

С1и

^у5

να1

5ег

Суδ

С1и

МеА

Αγ§

245

250

255

Туг

^у5

А1а

ТНг

ТНг

Αδη

С1п

ТНг

Тгр

Αδη

να1

^у5

С1и

РНе

Αδρ

ТНг

260

265

270

Αδη

РНе

ТНг

Туг

να1

С1п

С1п

5ег

С1и

РНе

Туг

Ьеи

С1и

Рго

Αδη

11е

275

280

285

^уδ

Туг

να1

РНе

С1п

να1

Αγ§

Суδ

С1п

С1и

ТНг

С1у

^у5

Αγ§

Туг

Тгр

290

295

300

С1п

Рго

Тгр

5ег

5ег

Рго

РНе

РНе

Ηίδ

^у5

ТНг

Рго

С1и

ТНг

να1

Рго

305

310

315

320

С1п

νθ1

ТНг

5ег

^у5

Α1α

РНе

С1п

Ηίδ

Αδρ

ТНг

Тгр

Αδη

5ег

С1у

Ьеи

325

330

335

ТНг

νθ1

А1а

5ег

11е

5ег

ТНг

С1у

Ηίδ

Ьеи

ТНг

5ег

Αδρ

Αδη

Αγ§

С1у

340

345

350

Αδρ

11е

С1у

Ьеи

Ьеи

Ьеи

С1у

МеА

11е

να1

РНе

Α1α

να1

МеА

Ьеи

5ег

355

360

365

11е

Ьеи

5ег

Ьеи

11е

С1у

11е

РНе

Αδη

Αγ§

5ег

РНе

Αγ§

ТНг

С1у

11е

370

375

380

- 18 026119

1_уз Агд 385

Агд

11е

Ьеи

Ьеи 390

Ьеи

11е Рго

Ьуз

Тгр 395

Ьеи

Туг

С1и

Азр

11е 400

Рго

Азп

Ме!

Ьуз

Азп

5ег

Азп

να1

να1

Ьуз

Ме!

Ьеи

С1п

С1и

Азп

5ег

405

410

415

С1и

Ьеи

Ме!

Азп

Азп

Азп

5ег

5ег

С1и

С1п

να1

Ьеи

Туг

να1

Азр

Рго

420

425

430

Ме!

11е

ТНг

С1и

11е

Ьуз

С1и

11е

РНе

11е

Рго

С1и

Н1з

Ьуз

Рго

ТНг

435

440

445

Азр

Туг

Ьуз

Ьуз

С1и

Азп

ТНг

С1у

Рго

Ьеи

С1и

ТНг

Агд

Азр

Туг

Рго

450

455

460

С1п

Азп

5ег

Ьеи

РНе

Азр

Азп

ТНг

ТНг

να1

να1

Туг

11е

Рго

Азр

Ьеи

465

470

475

480

Азп

ТНг

С1у

Туг

Ьуз

Рго

С1п

11е

5ег

Азп

РНе

Ьеи

Рго

С1и

С1у

5ег

485

490

495

ΗΪ3

Ьеи

5ег

Азп

Азп

Азп

С1и

11е

ТНг

5ег

Ьеи

ТНг

Ьеи

Ьуз

Рго

Рго

500

505

510

νθΐ

Азр

5ег

Ьеи

Азр

5ег

С1у

Азп

Азп

Рго

Агд

Ьеи

С1п

Ьуз

Н1з

Рго

515

520

525

Азп

РНе

А1а

РНе

5ег

να1

5ег

5ег

να1

Азп

5ег

Ьеи

5ег

Азп

ТНг

11е

530

535

540

РНе

Ьеи

С1у

С1и

Ьеи

5ег

Ьеи

11е

Ьеи

Азп

С1п

С1у

С1и

Суз

5ег

5ег

545

550

555

560

Рго

Азр

11е

С1п

Азп

5ег

να1

С1и

С1и

С1и

ТНг

ТНг

Ме!

Ьеи

Ьеи

С1и

565

570

575

Азп

Азр

5ег

Рго

5ег

С1и

ТНг

11е

Рго

С1и

С1п

ТНг

Ьеи

Ьеи

Рго

Азр

580

585

590

С1и

РНе

να1

5ег

Суз

Ьеи

С1у

11е

να1

Азп

С1и

С1и

Ьеи

Рго

5ег

11е

595

600

605

- 19 026119

Αδη ТНг Туг РНе Рго С1п Αδη 11е Ьеи С1и 5ег Ηΐδ РНе Αδη Агд 11е 610 615 620

5ег Ьеи Ьеи С1и ^уδ 625 <210> 2 <211> 42 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетический праймер <400> 2 аасакдаакк сдддааккас ааакакааас кдскскддсс ас 42 <210> 3 <211> 41 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетический праймер <400> 3 аскскадакс кдксксскск дккдксадаа дкааддкдсс с 41 <210> 4 <211> 357 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ген νΗ антитела против И-23К человека <400> 4 саддкдсадс кдсаддадкс дддсссадда саддкдаадс скксасадас сскдкссскс 60 асскдскскд кскскддкдд скссаксдас адкддкдакс аскаскддас скддакссдс 120 саасассскд дддаддксск ддадкддакк ддскасакск аккссадкдд дсасасскас 180 касадсссдк сссксаадад ксдасккасс акдксаккад асасдкскаа даассадккс 240 кссскдаддс кдадскскдк даскдссдсд дасасддссд кккаккаскд кдсдададкк 300 ддкдаскасд адкддкксда сасскддддс садддаассс кддксассдк сксскса 357 <210> 5 <211> 119 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность

- 20 026119 <220>

<223> νΗ антитела против И-23К человека <400> 5

С1п Vа1 С1п Ьеи С1п С1и 5ег

С1у

Рго С1у С1п Vа1 Ьуз Рго 5ег С1п

1

5

10

15

ТНг

Ьеи

5ег

Ьеи

ТНг

Суз

5ег

Vа1

5ег

С1у

С1у

5ег

11е

Азр

5ег

С1у

20

25

30

Азр

ΗΪ3

Туг

Тгр

ТНг

Тгр

11е

Агд

С1п

ΗΪ3

Рго

С1у

С1и

Vа1

Ьеи

С1и

35

40

45

Тгр

11е

С1у

Туг

11е

Туг

5ег

5ег

С1у

ΗΪ3

ТНг

Туг

Туг

5ег

Рго

5ег

50

55

60

Ьеи

Ьуз

5ег

Агд

Ьеи

ТНг

Мек

5ег

Ьеи

Азр

ТНг

5ег

Ьуз

Азп

С1п

РНе

65

70

75

80

5ег

Ьеи

Агд

Ьеи

5ег

5ег

Vа1

ТНг

А1а

А1а

Азр

ТНг

А1а

Vа1

Туг

Туг

85

90

95

Суз

А1а

Агд

Vа1

С1у

Азр

Туг

С1и

Тгр

РНе

Азр

ТНг

Тгр

С1у

С1п

С1у

100

105

110

ТНг

Ьеи

Vа1

ТНг

Vа1

5ег

5ег

115 <210> 6 <211> 342 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ген VI антитела против И-23К человека <400> 6 дасаксдкда кдасссадкс кссадасксс скддскдкдк саскдддсда дадддссасс 60 аксааскдса адкссадсса даскакккка кассскксса акаакакдаа ккасккаддк 120 кддкассадс адададсадд асадксксск аддскдскса кккаскдддс акскасссдд 180 даакссдддд кссскдассд акксадкддс адсдддкскд ддасадаккк сасксккасс 240 аксадсадсс кдсаддскда адакдкддса дкккаккаск дксаасаака ккакадкадк 300 сккссдасдк ксддссаадд дассааддкд даааксааас дд 342

- 21 026119 <210> 7 <211> 114 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> VI антитела против И-23К человека <400> 7

Азр

11е

Vа1

Мек

ТНг

С1п

5ег

Рго

Азр

5ег

Ьеи

А1а

Vа1

5ег

Ьеи

С1у

1

5

10

15

С1и

Агд

А1а

ТНг

11е

Азп

Суз

Ьуз

5ег

5ег

С1п

ТНг

11е

Ьеи

Туг

Рго

20

25

30

5ег

Азп

Азп

Мек

Азп

Туг

Ьеи

С1у

Тгр

Туг

С1п

С1п

Агд

А1а

С1у

С1п

35

40

45

5ег

Рго

Агд

Ьеи

Ьеи

11е

Туг

Тгр

А1а

5ег

ТНг

Агд

С1и

5ег

С1у

Vа1

50

55

60

Рго

Азр

Агд

РНе

5ег

С1у

5ег

С1у

5ег

С1у

ТНг

Азр

РНе

ТНг

Ьеи

ТНг

65

70

75

80

11е

5ег

5ег

Ьеи

С1п

А1а

С1и

Азр

Vа1

А1а

Vа1

Туг

Туг

Суз

С1п

С1п

85

90

95

Туг

Туг

5ег

5ег

Ьеи

Рго

ТНг

РНе

С1у

С1п

С1у

ТНг

Ьуз

Vа1

С1и

11е

100

105

110

1_уз Агд <210> 8 <211> 351 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ген νΗ антитела против И-23К человека <400> 8 саддкссаас кддкасадкс кддддскдад дкдаадаадс скддддсскс аакдааддкс ксскдсаадд кккссддака сасссксаак дааккаксса кксаскдддк дсдасаадск сскддаааад ддсккдадкд дакдддаддк кккдаксскд аасакддкда аасадкскас

120

180

- 22 026119 дсасадаасЬ Ьссаддасад адЬсассЬЬд ассдаддаса саЬссасада сасдЬссЬас аЬдддасЬда асаассЬдад аЬсЬдаЬдас асддссдЬсЬ аЬЬасЬдЬдс адсадааЬсс

ЬасддЬдасЬ асдадЬЬсЬд дддссадддд асссЬддЬса ссдЬсЬссЬс а

240

300

351 <210> 9 <211> 117 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> νΗ антитела против И-23К человека <400> 9

С1п Vа1 С1п Ьеи Vа1 С1п 5ег

С1у

А1а С1и Vа1 Ьуз Ьуз Рго С1у А1а

1

5

10

15

5ег

МеЬ

Ьуз

Vа1

5ег

Суз

Ьуз

Vа1

5ег

С1у

Туг

ТНг

Ьеи

Азп

С1и

Ьеи

20

25

30

5ег

11е

НЬз

Тгр

Vа1

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1у

Ьеи

С1и

Тгр

МеЬ

35

40

45

С1у С1у

РНе

Азр

Рго

С1и

НЬз

С1у

С1и

ТНг

Vа1

Туг

А1а

С1п

Азп

РНе

50

55

60

С1п

Азр

Агд

Vа1

ТНг

Ьеи

ТНг

С1и

Азр

ТНг

5ег

ТНг

Азр

ТНг

5ег

Туг

65

70

75

80

МеЬ

С1у

Ьеи

Азп

Азп

Ьеи

Агд

5ег

Азр

Азр

ТНг

А1а

Vа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

А1а

С1и

5ег

Туг

С1у

Азр

Туг

С1и

РНе

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТНг

Ьеи

100

105

110

Vа1

ТНг

Vа1

5ег

5ег

115 <210> 10 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ген VI антитела против ТЬ-23К человека

- 23 026119 <400> 10

дасакссада	кдасссадкс	кссакскксс	дкдкскдсак	скдкаддада	сададксасс	60
аксасккдкс	дддсдадкса	дддкаккаас	ааскддккад	сскддкакса	дсадааасса	120
дддааадссс	скааддксск	аакскакаск	дсдкссадкк	кдсааадкдд	ддксссакса	180
аддкксадсд	дсадкддакс	кдддасадак	кксаскскса	ссаксадсад	сскдсадсск	240
даадаккккд	саасккакка	ккдксаасад	дскаасадкс	асссдкддас	дкксддссаа	300
дддассаадд	кддаааксаа	асдд				324

<210> 11 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> VI антитела против И-23К человека <400> 11

Азр

11е

С1п

Мек

ТНг

С1п

5ег

Рго

5ег

5ег

Vа1

5ег

А1а

5ег

Vа1

С1у

1

5

10

15

Азр

Агд

Vа1

ТНг

11е

ТНг

Суз

Агд

А1а

5ег

С1п

С1у

11е

Азп

Азп

Тгр

20

25

30

Ьеи

А1а

Тгр

Туг

С1п

С1п

Ьуз

Рго

С1у

Ьуз

А1а

Рго

Ьуз

Vа1

Ьеи

11е

35

40

45

Туг

ТНг

А1а

5ег

5ег

Ьеи

С1п

5ег

С1у

Vа1

Рго

5ег

Агд

РНе

5ег

С1у

50

55

60

5ег

С1у

5ег

С1у

ТНг

Азр

РНе

ТНг

Ьеи

ТНг

11е

5ег

5ег

Ьеи

С1п

Рго

65

70

75

80

С1и

Азр

РНе

А1а

ТНг

Туг

Туг

Суз

С1п

С1п

А1а

Азп

5ег

Нтз

Рго

Тгр

85

90

95

ТНг

РНе

С1у

С1п

С1у

ТНг

Ьуз

Vа1

С1и

11е

Ьуз

Агд

100

105

<210> 12 <211> 351 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

- 24 026119 <223> Ген νΗ антитела против П-23К человека <400> 12 саддГссадд ГддГдсадГс ГддддсГдад дГдаадаадс сГддддссГс адГдааддГс 60

ГссГдсааад ГГГссдддГа сасссГсаГГ дааГГадсса ГасаГГдддГ дсдасаддГГ 120 ссГддаааад дасГГдадГд даГдддаддГ ГГГдаГссГд аасаГддГда аасааГсГас 180 дсасадаадГ Гссадддсад адГсассаГд ассдаадаса саГсГасада сасадссГас 240 аГддаасГда асаассГдад аГсГдаддас асддссдГаГ аГГаГГдГдс ГаГаГГадад 300 дсГддГдасс ГГдасГдсГд дддссаддда асссГддГса ссдГсГссГс а 351 <210> 13 <211> 117 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> νΗ антитела против Н-23К человека <400> 13

С1п Vа1 С1п Vа1 Vа1 С1п 5ег

С1у

А1а С1и Vа1 1_уз 1_уз Рго С1у А1а

1

5

10

15

5ег

Vа1

1_у5

Vа1

5ег

Суз

Ьуз

Vа1

5ег

С1у

Туг

ТНг

Беи

11е

С1и

Беи

20

25

30

А1а

11е

ΗΪ5

Тгр

Vа1

Агд

С1п

Vа1

Рго

С1у

Ьуз

С1у

Беи

С1и

Тгр

МеГ

35

40

45

С1у

С1у

РНе

Азр

Рго

С1и

Н1з

С1у

С1и

ТНг

11е

Туг

А1а

С1п

Ьуз

РНе

50

55

60

С1п

С1у

Агд

Vа1

ТНг

МеГ

ТНг

С1и

Азр

ТНг

5ег

ТНг

Азр

ТНг

А1а

Туг

65

70

75

80

МеГ

С1и

Беи

Азп

Азп

Беи

Агд

5ег

С1и

Азр

ТНг

А1а

Vа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

11е

Беи

С1и

А1а

С1у

Азр

Беи

Азр

Суз

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТНг

Беи

100

105

110

Vа1

ТНг

Vа1

5ег

5ег

115

- 25 026119 <210> 14 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ген VI антитела против И-23К человека <400> 14

дасакссада	кдасссадкс	кссакскксс	дкдкскдсак	садкдддада	сададксасс	60
аксасккдкс	дддсдадкса	дддааккадс	ааскддккад	сскддкакса	дсадааасса	120
дддааадссс	скааддксск	дакскакаск	дсакссадкк	касааадкдд	ддксссакса	180
аддкксадсд	дсадкддакс	кдддасадак	кксаскскса	ссдксадсдд	сскдсадсск	240
даадаккккд	даасккакка	ккдксаасад	дскаасадкк	ксссакксас	ккксддссск	300
дддассааад	кддакаксаа	асдд				324

<210> 15 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> VI оТ апк1-Нитап И-23К апк1Ьобу <400> 15

Азр

11е

С1п

Мек

ТНг

С1п

5ег

Рго

5ег

5ег

Vа1

5ег

А1а

5ег

Vа1

С1у

1

5

10

15

Азр

Агд

Vа1

ТНг

11е

ТНг

Суз

Агд

А1а

5ег

С1п

С1у

11е

5ег

Азп

Тгр

20

25

30

Ьеи

А1а

Тгр

Туг

С1п

С1п

Ьуз

Рго

С1у

Ьуз

А1а

Рго

Ьуз

Vа1

Ьеи

11е

35

40

45

Туг

ТНг

А1а

5ег

5ег

Ьеи

С1п

5ег

С1у

Vа1

Рго

5ег

Агд

РНе

5ег

С1у

50

55

60

5ег

С1у

5ег

С1у

ТНг

Азр

РНе

ТНг

кеи

ТНг

Vа1

5ег

С1у

Ьеи

С1п

Рго

65

70

75

80

С1и

Азр

РНе

С1у

ТНг

Туг

Туг

Суз

С1п

С1п

А1а

Азп

5ег

РНе

Рго

РНе

85

90

95

ТНг

РНе

С1у

Рго

С1у

ТНг

Ьуз

Vа1

Азр

11е

Ьуз

Агд

100 105

- 26 026119 <210> 16 <211> 351 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ген 7Н антитела против И-23К человека <400> 16 саддЬссаас ЬддЬасадЬс ЬддддсЬдаа дЬдаадаадс сЬддддссЬс адЬдааддЬс 60

ЬссЬдсаадд ЬЬЬссддаЬа сасссЬсааЬ дааЬЬаЬсса ЬЬсасЬдддЬ ЬсдасаддсЬ 120 ссЬддаааад ддсЬЬдадЬд даЬдддаддЬ ЬЬЬдаЬссЬд аасаЬадЬда аасасЬсЬас 180 дсасаааасЬ Ьссаддасад асЬсассЬЬд ассдаддаса саЬссасада аасадссЬдЬ 240 аЬддадсЬда асадссЬдад аЬсЬдаЬдас асддссдЬсЬ аЬЬасЬдЬдс адсадааЬсс 300

ЬасддЬдасЬ асдааЬЬсЬд дддссадддд асссЬддЬса ссдЬсЬссЬс а 351 <210> 17 <211> 117 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> 7Н антитела против И-23К человека <400> 17

С1п

7а1

С1п

Ьеи

7а1

С1п

5ег

С1у

А1а

С1и

7а1

Ьуз

Ьуз

Рго

С1у

А1а

1

5

10

15

5ег

7а1

Ьуз

7а1

5ег

Суз

Ьуз

7а1

5ег

С1у

Туг

ТНг

Ьеи

Азп

С1и

Ьеи

20

25

30

5ег

11е

НЬз

Тгр

7а1

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1у

Ьеи

С1и

Тгр

МеЬ

35

40

45

С1у

С1у

РНе

Азр

Рго

С1и

НЬз

5ег

С1и

ТНг

Ьеи

Туг

А1а

С1п

Азп

РНе

50

55

60

С1п

Азр

Агд

Ьеи

ТНг

Ьеи

ТНг

С1и

Азр

ТНг

5ег

ТНг

С1и

ТНг

А1а

Суз

65

70

75

80

МеЬ

С1и

Ьеи

Азп

5ег

Ьеи

Агд

5ег

Азр

Азр

ТНг

А1а

7а1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

- 27 026119

А1а А1а С1и 5ег Туг С1у Азр Туг С1и РНе Тгр С1у С1п С1у ТНг Ьеи 100 105 110

7а1 ТНг 7а1 5ег 5ег 115 <210> 18 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ген VI антитела против И-23К человека <400> 18

дасаТссада	ТдасссадТс ТссаТсТТсс дТдТсТдсаТ	сТдТаддада	сададТсасс	60
аТсасТТдТс	дддсдадТса ддаТаТТадс адсТддТТад	ссТддТаТса	дсадааасса	120
ддаааадссс	сТааддТссТ даТсТаТасТ дсаТссадТТ	ТдсааадТдд	ддТсссаТса	180
аддТТсадсд	дсадТддаТс ТдддасадаТ ТТсасТсТса	ссаТсадсад	ссТдсадссТ	240
даадаТТТТд	саасТТаТТа ТТдТсаасад дсТаасадТс	асссдТддас	дТТсддссаа	300
дддассаадд	ТддаааТсаа асдд			324
<210> 19
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VI антитела против И-23К человека
<400> 19
Азр 11е С1п	МеТ ТНг С1п 5ег Рго 5ег 5ег Vа1	5ег А1а 5ег	Vа1 С1у
1	5 10		15
Азр Агд Vа1	ТНг 11е ТНг Суз Агд А1а 5ег С1п	Азр 11е 5ег	5ег Тгр
	20 25	30
Ьеи А1а Тгр	Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а	Рго Ьуз Vа1	Ьеи 11е
35	40	45
Туг ТНг А1а	5ег 5ег Ьеи С1п 5ег С1у Vа1 Рго	5ег Агд РНе	5ег С1у
50	55	60
5ег С1у 5ег	С1у ТНг Азр РНе ТНг Ьеи ТНг 11е	5ег 5ег Ьеи	С1п Рго
65	70 75		80

- 28 026119

С1и	Αδρ РНе А1а ТНг Туг Туг Суδ С1п С1п А1а Αδη 5ег Ηΐδ Рго Тгр
85	90	95
ТНг	РНе С1у С1п С1у ТНг ^уδ	Vа1 С1и 11е	^уδ Αιγ
	100	105

<210>	20
<211>	348
<212>	ДНК

<213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ген νΗ антитела против ΙΦ-23Κ человека <400> 20 саддкссакс кддкасадкс кдддаскдад дкдаддаадс скддддсскс адкдааддкс 60 ксскдсаадд кккссддака сасссксаак дааккддсса кксаскдддк дсдасаддск 120 ссаддаааад ддсккдадкд дакдддаддк кккдаксскд аасакддкда аакаакскас 180 дсасададдк кссадддсад адксассскд сссдаддаса саксаасада сасадсскас 240

ФФддассФдФ ксаасскдад дкскдаадас асддссдкак акккскдкдс аасадаадса 300 дссссскккд аскаккдддд ссадддаасс скддксаксд ксксскса 348 <210> 21 <211> 116 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> νΗ антитела против ΙΦ-23Κ человека <400> 21

С1п Vа1 Ηΐδ Феи Vа1

С1п 5ег

С1у ТНг С1и Vа1 Αιγ ^уδ Рго С1у Α^

1

5

10

15

5ег

Vа1

^у5

Vа1

5ег

Суδ

^уδ

Vа1

5ег

С1у

Туг

ТНг

Феи

Αδη

С1и

Феи

20

25

30

Α^

11е

Ηΐδ

Тгр

Vа1

Αι-д

С1п

Α^

Рго

С1у

^у5

С1у

Феи

С1и

Тгр

Мек

35

40

45

С1у

С1у

РНе

Αδρ

Рго

С1и

Ηΐδ

С1у

С1и

11е

11е

Туг

Α^

С1п

Αι-д

РНе

50

55

60

- 29 026119

С1п 65

С1у Агд

Уа1 ТНг

Ьеи Рго С1и Авр ТНг 5ег ТНг Авр ТНг А1а

Туг 80

70

75

Ьеи

Авр

Ьеи

РНе

Авп

Ьеи

Агд

5ег

С1и

Авр

ТНг

А1а

Уа1

Туг

РНе

Сув

85

90

95

А1а

ТНг

С1и

А1а

А1а

Рго

РНе

Авр

Туг

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТНг

Ьеи

Уа1

100

105

110

11е Уа1 5ег 5ег 115 <210> 22 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ген УЬ антитела против И-23К человека <400> 22

дасакссада	кдасссадкс	кссккссасс	скдкскдсдк	скдкаддада	сададксасс	60
аксасккдсс	дддссадкса	дадксккадк	адккддккдд	сскддкакса	дсадааасса	120
дддааадссс	скааасксск	дакскакаад	дсдкскадкк	кадааадкдд	ддксссакса	180
аддкксадсд	дсадкддакс	кдддасадас	кксаскскса	ссаксадсад	сскдсадсск	240
дакдаккккд	саасккакка	скдссаасад	какдакаккк	акссксддас	дкксддссаа	300
дддассаадд	кддаааксаа	дсдд				324

<210> 23 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> УЬ антитела против И-23К человека <400> 23

Авр

11е

С1п

Мек

ТНг

С1п

5ег

Рго

5ег

ТНг

Ьеи

5ег

А1а

5ег

Уа1

С1у

1

5

10

15

Авр

Агд

Уа1

ТНг

11е

ТНг

Сув

Агд

А1а

5ег

С1п

5ег

Ьеи

5ег

5ег

Тгр

20

25

30

Ьеи

А1а

Тгр

Туг

С1п

С1п

1_ув

Рго

С1у

1_ув

А1а

Рго

1_ув

Ьеи

Ьеи

11е

40 45

- 30 026119

Туг Ьуз 50

А1а

5ег 5ег

Ьеи С1и 5ег С1у Vа1 Рго 5ег

Агд

РНе

5ег

С1у

55

60

5ег

С1у

5ег

С1у

ТНг

Азр

РНе

ТНг

Ьеи

ТНг

11е

5ег

5ег

Ьеи

С1п

Рго

65

70

75

80

Азр

Азр

РНе

А1а

ТНг

Туг

Туг

Суз

С1п

С1п

Туг

Азр

11е

Туг

Рго

Агд

85

90

95

ТНг

РНе

С1у

С1п

С1у

ТНг

Ьуз

Vа1

С1и

11е

Ьуз

Агд

100

105

<210> 24 <211> 348 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ген νΗ антитела против И-23К человека <400> 24 саддкссакс кддкасадкс кдддаскдад дкдаддаадс скддддсскс адкдааддкс 60 ксскдсаадд кккссддака сасссксаак дааккддсса кксаскдддк дсдасаддск 120 сскддаааад ддсккдаакд дакдддаддк кккдаксскд аасакддкда ааккакскас 180 дсасададдк кссадддсад ааксассскд сссдаддаса саксаасада сасадсскас 240 акддасскдд ксаасскдад акскдаддас асддссдкдк акккскдкас аасадаадса 300 дссссскккд аскаккдддд ссадддаадс скддксаксд ксксскса 348 <210> 25 <211> 116 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> νΗ антитела против И-23К человека <400> 25

С1п Vа1 Н1з Ьеи Vа1 С1п 5ег С1у ТНг С1и Vа1 Агд Ьуз Рго С1у А1а

1	5		10	15
5ег Vа1	Ьуз Vа1 5ег Суз	Ьуз Vа1 5ег	С1у Туг ТНг Ьеи Азп	С1и Ьеи
	20	25	30

- 31 026119

А1а 11е

Ηΐ^ 35

Тгр

Vа1 Агд

С1п А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Мек

40

45

С1у

С1у

РНе

Азр

Рго

С1и

Ηΐ^

С1у

С1и

11е

11е

Туг

А1а

С1п

Агд

РНе

50

55

60

С1п

С1у

Агд

11е

ТНг

Ьеи

Рго

С1и

Азр

ТНг

5ег

ТНг

Азр

ТНг

А1а

Туг

65

70

75

80

Мек

Азр

Ьеи

Vа1

Азп

Ьеи

Агд

5ег

С1и

Азр

ТНг

А1а

Vа1

Туг

РНе

Суз

85

90

95

ТНг

ТНг

С1и

А1а

А1а

Рго

РНе

Азр

Туг

Тгр

С1у

С1п

С1у

5ег

Ьеи

Vа1

100

105

110

11е Vа1 5ег 5ег 115 <210> 26 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ген VI антитела против И-23К человека <400> 26

дасакссада	кдасссадкс	кссккссасс	скдкскдсдк	скдкаддада	сададксасс	60
аксасккдсс	дддссадкса	дадксккадк	ааккддккдд	сскддкакса	дсадааасса	120
дддааадссс	скааасксск	дакскакаад	дсдкскадкк	кадааадкдд	ддксссакса	180
аддкксадсд	дсадкддакс	кдддасадас	кксаскскса	ссаксадсдд	сскдсадсск	240
дакдаккккд	саасккакка	скдссаасад	какдакаккк	акссксддас	дкксддссаа	300
дддассаадд	кддаааксаа	асдд				324

<210> 27 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> VI антитела против И-23К человека <400> 27

Азр 11е С1п Мек ТНг С1п 5ег Рго 5ег ТНг Ьеи 5ег А1а 5ег Vа1 С1у 1 5 10 15

- 32 026119

Азр

Агд

Vа1

ТНг 20

11е ТНг Суз Агд

А1а 5ег С1п 5ег Геи 5ег Азп Тгр

25

30

Ьеи

А1а

Тгр

Туг

С1п

С1п

Ьуз

Рго

С1у

Ьуз

А1а

Рго

Ьуз

Геи

Геи

11е

35

40

45

Туг

1_уз

А1а

5ег

5ег

Геи

С1и

5ег

С1у

Vа1

Рго

5ег

Агд

РНе

5ег

С1у

50

55

60

5ег

С1у

5ег

С1у

ТНг

Азр

РНе

ТНг

Геи

ТНг

11е

5ег

С1у

Геи

С1п

Рго

65

70

75

80

Азр

Азр

РНе

А1а

ТНг

Туг

Туг

Суз

С1п

С1п

Туг

Азр

11е

Туг

Рго

Агд

85

90

95

ТНг

РНе

С1у

С1п

С1у

ТНг

Ьуз

Vа1

С1и

11е

Ьуз

Агд

100

105

<210> 28 <211> 348 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ген νΗ антитела против П-23К человека <400> 28 саддГссада ГддГасааГс ГддддсГдад дГдаададдс сГддддссГс адГдааддГс 60

ГссГдсаадд ГГГссддаГа сасссГсааГ дааГГаддса ГасасГдддГ дсдасаддсГ 120 ссГддаааад ддсГГдадГд даГдддаддГ ГГГдаГссГд аасаГддГаа ааГааГсГас 180 дсасададдГ Гссадддсад асГсассаГд сссдаддаса саГсГасада сасадссГас 240 аГддаасГда дсадссГдас аГсГдаддас асддссдГдГ аГГасГдГдс сасадГддсГ 300 дссссссГГд асГасГдддд ссадддаасс сГддГсассд ГсГссГса 348 <210> 29 <211> 116 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> νΗ антитела против Н-23К человека <400> 29

- 33 026119

С1п

να1

С1п

Ме!

να1

С1п

5ег

С1у

А1а

С1и

να1

Ьуз

Агд

Рго

С1у

А1а

1

5

10

15

5ег

να1

1_у5

να1

5ег

Суз

Ьуз

να1

5ег

С1у

Туг

ТНг

Ьеи

Азп

С1и

Ьеи

20

25

30

С1у

11е

ΗΪ5

Тгр

να1

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1у

Ьеи

С1и

Тгр

Ме!

35

40

45

С1у

С1у

РНе

Азр

Рго

С1и

ΗΪ3

С1у

Ьуз

11е

11е

Туг

А1а

С1п

Агд

РНе

50

55

60

С1п

С1у

Агд

Ьеи

ТНг

Ме!

Рго

С1и

Азр

ТНг

5ег

ТНг

Азр

ТНг

А1а

Туг

65

70

75

80

Ме!

С1и

Ьеи

5ег

5ег

Ееи

ТНг

5ег

С1и

Азр

ТНг

А1а

να1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

ТНг

να1

А1а

А1а

Рго

Ееи

Азр

Туг

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТНг

Ьеи

να1

100

105

110

ТНг νθΐ 5ег 5ег 115 <210> 30 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ген VI антитела против И-23К человека <400> 30

даса!ссада	!дасссад!с	!сс!!ссасс	с!д!с!дса!	с!д!аддада	садад!сасс	60
а!сас!!дсс	дддссад!са	дад!а!!ад!	адс!дд!!дд	сс!дд!а!са	дсадааасса	120
дддааадссс	с!ааас!сс!	да!с!а!аад	дсд!с!ад!!	!адааад!дд	дд!ссса!са	180
ада!!садсд	дсад!дда!с	!дддасадаа	!!сас!с!са	сса!садсад	сс!дсадсс!	240
да!да!!!!д	сдас!!а!!а	с!дссаасад	!а!да!а!!!	а!!сд!ддас	д!!сддссаа	300
дддассаадд	!ддааа!саа	ссдд				324

<210> 31 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность

- 34 026119 <220>

<223> νί антитела против П-23К человека <400> 31

Азр

11е

С1п

Ме!

ТНг

С1п

5ег

Рго

5ег

ТНг

Ьеи

5ег

А1а

5ег

να1

С1у

1

5

10

15

Азр

Агд

να1

ТНг

11е

ТНг

Суз

Агд

А1а

5ег

С1п

5ег

11е

5ег

5ег

Тгр

20

25

30

Ьеи

А1а

Тгр

Туг

С1п

С1п

Ьуз

Рго

С1у

Ьуз

А1а

Рго

Ьуз

Ьеи

Ьеи

11е

35

40

45

Туг

Ьуз

А1а

5ег

5ег

Ьеи

С1и

5ег

С1у

να1

Рго

5ег

Агд

РНе

5ег

С1у

50

55

60

5ег

С1у

5ег

С1у

ТНг

С1и

РНе

ТНг

Ьеи

ТНг

11е

5ег

5ег

Ьеи

С1п

Рго

65

70

75

80

Азр

Азр

РНе

А1а

ТНг

Туг

Туг

Суз

С1п

С1п

Туг

Азр

11е

Туг

5ег

Тгр

85

90

95

ТНг

РНе

С1у

С1п

С1у

ТНг

Ьуз

να1

С1и

11е

Азп

Агд

100

105

<210> 32 <211> 1350 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ген Н-цепи антитела против П-23К человека <400> 32

садд!дсадс	!дсаддад!с	дддсссадда	садд!даадс	с!!сасадас	сс!д!ссс!с	60
асс!дс!с!д	!с!с!дд!дд	с!сса!сдас	ад!дд!да!с	ас!ас!ддас	с!дда!ссдс	120
саасассс!д	дддадд!сс!	ддад!дда!!	ддс!аса!с!	а!!ссад!дд	дсасасс!ас	180
!асадсссд!	ссс!саадад	!сдас!!асс	а!д!са!!ад	асасд!с!аа	даассад!!с	240
!ссс!даддс	!дадс!с!д!	дас!дссдсд	дасасддссд	!!!а!!ас!д	!дсдадад!!	300
дд!дас!асд	ад!дд!!сда	сасс!ддддс	садддаассс	!дд!сассд!	с!сс!садсс	360
!ссассаадд	дссса!сдд!	с!!ссссс!д	дсассс!сс!	ссаададсас	с!с!дддддс	420
асадсддссс	!дддс!дсс!	дд!сааддас	!ас!!ссссд	аассдд!дас	дд!д!сд!дд	480

- 35 026119

аасЬсаддсд	сссЬдассад	сддсдЬдсас	ассЬЬсссдд	сЬдЬссЬаса	дЬссЬсадда	540
сЬсЬасЬссс	ЬЬадЬадсдЬ	ддЬдассдЬд	сссЬссадса	дсЬЬдддсас	ссадассЬас	600
аЬсЬдсаасд	ЬдааЬсасаа	дсссадсаас	ассааддЬдд	асаадааадЬ	Ьдадсссааа	660
ЬсЬЬдЬдаса	ааасЬсасас	аЬдсссассд	Ьдсссадсас	сЬдаасЬссЬ	ддддддассд	720
ЬсадЬсЬЬсс	ЬсЬЬсссссс	аааасссаад	дасасссЬса	ЬдаЬсЬсссд	дассссЬдад	780
дЬсасаЬдсд	ЬддЬддЬдда	сдЬдадссас	даадасссЬд	аддЬсаадЬЬ	саасЬддЬас	840
дЬддасддсд	ЬддаддЬдса	ЬааЬдссаад	асааадссдс	дддаддадса	дЬасаасадс	900
асдЬассдЬд	ЬддЬсадсдЬ	ссЬсассдЬс	сЬдсассадд	асЬддсЬдаа	Ьддсааддад	960
ЬасаадЬдса	аддЬсЬссаа	сааадсссЬс	ссадссссса	Ьсдадаааас	саЬсЬссааа	1020
дссааадддс	адссссдада	ассасаддЬд	ЬасасссЬдс	ссссаЬсссд	ддаЬдадсЬд	1080
ассаадаасс	аддЬсадссЬ	дассЬдссЬд	дЬсаааддсЬ	ЬсЬаЬсссад	сдасаЬсдсс	1140
дЬддадЬддд	ададсааЬдд	дсадссддад	аасаасЬаса	адассасдсс	ЬсссдЬдсЬд	1200
дасЬссдасд	дсЬссЬЬсЬЬ	ссЬсЬасадс	аадсЬсассд	Ьддасаадад	саддЬддсад	1260
саддддаасд	ЬсЬЬсЬсаЬд	сЬссдЬдаЬд	саЬдаддсЬс	Ьдсасаасса	сЬасасдсад	1320
аададссЬсЬ	сссЬдЬсЬсс	дддЬаааЬда				1350

<210> 33 <211> 449 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Н-цепь антитела против И-23К человека <400> 33

С1п 7а1 С1п Ьеи С1п

С1и 5ег

С1у Рго С1у С1п 7а1 Ьуз Рго 5ег С1п

1

5

10

15

ТНг

Ьеи

5ег

Ьеи

ТНг

Суз

5ег

7а1

5ег

С1у

С1у

5ег

11е

Азр

5ег

С1у

20

25

30

Азр

НЬз

Туг

Тгр

ТНг

Тгр

11е

Агд

С1п

НЬз

Рго

С1у

С1и

7а1

Ьеи

С1и

35

40

45

Тгр

11е

С1у

Туг

11е

Туг

5ег

5ег

С1у

НЬз

ТНг

Туг

Туг

5ег

Рго

5ег

50

55

60

- 36 026119

Ьеи 65

Ьуз

5ег

Агд Ьеи

ТНг 70

МеЬ 5ег Ьеи Азр ТНг 5ег Ьуз Азп С1п РНе

75

80

5ег

Ьеи

Агд

Ьеи

5ег

5ег

Vа1

ТНг

А1а

А1а

Азр

ТНг

А1а

Vа1

Туг

Туг

85

90

95

Суз

А1а

Агд

Vа1

С1у

Азр

Туг

С1и

Тгр

РНе

Азр

ТНг

Тгр

С1у

С1п

С1у

100

105

110

ТНг

Ьеи

Vа1

ТНг

Vа1

5ег

5ег

А1а

5ег

ТНг

Ьуз

С1у

Рго

5ег

Vа1

РНе

115

120

125

Рго

Ьеи

А1а

Рго

5ег

5ег

Ьуз

5ег

ТНг

5ег

С1у

С1у

ТНг

А1а

А1а

Ьеи

130

135

140

С1у

Суз

Ьеи

Vа1

Ьуз

Азр

Туг

РНе

Рго

С1и

Рго

Vа1

ТНг

Vа1

5ег

Тгр

145

150

155

160

Азп

5ег

С1у

А1а

Ьеи

ТНг

5ег

С1у

Vа1

НЬз

ТНг

РНе

Рго

А1а

Vа1

Ьеи

165

170

175

С1п

5ег

5ег

С1у

Ьеи

Туг

5ег

Ьеи

5ег

5ег

Vа1

Vа1

ТНг

Vа1

Рго

5ег

180

185

190

5ег

5ег

Ьеи

С1у

ТНг

С1п

ТНг

Туг

11е

Суз

Азп

Vа1

Азп

НЬз

Ьуз

Рго

195

200

205

5ег

Азп

ТНг

Ьуз

Vа1

Азр

Ьуз

Ьуз

Vа1

С1и

Рго

Ьуз

5ег

Суз

Азр

Ьуз

210

215

220

ТНг

НЬз

ТНг

Суз

Рго

Рго

Суз

Рго

А1а

Рго

С1и

Ьеи

Ьеи

С1у

С1у

Рго

225

230

235

240

5ег

Vа1

РНе

Ьеи

РНе

Рго

Рго

Ьуз

Рго

Ьуз

Азр

ТНг

Ьеи

МеЬ

11е

5ег

245

250

255

Агд

ТНг

Рго

С1и

Vа1

ТНг

Суз

Vа1

Vа1

Vа1

Азр

Vа1

5ег

НЬз

С1и

Азр

260

265

270

Рго

С1и

Vа1

Ьуз

РНе

Азп

Тгр

Туг

Vа1

Азр

С1у

Vа1

С1и

Vа1

НЬз

Азп

275

280

285

А1а

Ьуз

ТНг

Ьуз

Рго

Агд

С1и

С1и

С1п

Туг

Азп

5ег

ТНг

Туг

Агд

Vа1

290

295

300

- 37 026119

Vа1 305

5ег

Vа1

Геи

ТНг Vа1 310

Геи Ηίδ С1п Αδρ Тгр Геи Αδη С1у ^уδ С1и

315

320

Туг

^у5

Суδ

^у5

Vа1

5ег

Αδη

^у5

Α^

Геи

Рго

Α^

Рго

11е

С1и

^у5

325

330

335

ТНг

11е

5ег

^у5

Α^

^у5

С1у

С1п

Рго

Αι-д

С1и

Рго

С1п

Vа1

Туг

ТНг

340

345

350

Геи

Рго

Рго

5ег

Αι-д

Αδρ

С1и

Геи

ТНг

^у5

Αδη

С1п

Vа1

5ег

Геи

ТНг

355

360

365

Суδ

Геи

Vа1

^у5

С1у

РНе

Туг

Рго

5ег

Αδρ

11е

Α^

Vа1

С1и

Тгр

С1и

370

375

380

5ег

Αδη

С1у

С1п

Рго

С1и

Αδη

Αδη

Туг

^у5

ТНг

ТНг

Рго

Рго

Vа1

Геи

385

390

395

400

Αδρ

5ег

Αδρ

С1у

5ег

РНе

РНе

Геи

Туг

5ег

^у5

Геи

ТНг

Vа1

Αδρ

^у5

405

410

415

5ег

Αι-д

Тгр

С1п

С1п

С1у

Αδη

Vа1

РНе

5ег

Суδ

5ег

Vа1

МеА

Ηίδ

С1и

420

425

430

Α^

Геи

Ηίδ

Αδη

Ηίδ

Туг

ТНг

С1п

^у5

5ег

Геи

5ег

Геи

5ег

Рго

С1у

435

440

445

^уδ <210> 34 <211> 663 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ген 1-цепи антитела против И-23К человека <400> 34 дасаАсдАда АдасссадАс АссадасАсс сАддсАдАдА сасАдддсда дадддссасс аАсаасАдса адАссадсса дасАаААААа АасссААсса аАааАаАдаа ААасААаддА

АддАассадс адададсадд асадАсАссА аддсАдсАса АААасАдддс аАсАасссдд дааАссдддд АсссАдассд аААсадАддс адсдддАсАд ддасадаААА сасАсААасс

120

180

240

- 38 026119

аксадсадсс	кдсаддскда	адакдкддса	дкккаккаск	дксаасаака	ккакадкадк	300
сккссдасдк	ксддссаадд	дассааддкд	даааксааас	ддаскдкддс	кдсассакск	360
дкскксакск	ксссдссакс	кдакдадсад	ккдааакскд	дааскдсскс	кдккдкдкдс	420
скдскдаака	асккскаксс	садададдсс	ааадкасадк	ддааддкдда	каасдссскс	480
сааксдддка	асксссадда	дадкдксаса	дадсаддаса	дсааддасад	сасскасадс	540
сксадсадса	ссскдасдск	дадсааадса	даскасдада	аасасааадк	скасдсскдс	600
даадксассс	аксадддсск	дадсксдссс	дксасааада	дскксаасад	дддададкдк	660

кад 663 <210> 35 <211> 220 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ь-цепь антитела против И-23К человека <400> 35

Азр 11е 1

7а1 Мек ТНг С1п 5ег Рго Азр 5ег

Ьеи

А1а 7а1

5ег

Ьеи 15

С1у

5

10

С1и

Агд

А1а

ТНг

11е

Азп

Суз

Ьуз

5ег

5ег

С1п

ТНг

11е

Ьеи

Туг

Рго

20

25

30

5ег

Азп

Азп

Мек

Азп

Туг

кеи

С1у

Тгр

Туг

С1п

С1п

Агд

А1а

С1у

С1п

35

40

45

5ег

Рго

Агд

Ьеи

Ьеи

11е

Туг

Тгр

А1а

5ег

ТНг

Агд

С1и

5ег

С1у

7а1

50

55

60

Рго

Азр

Агд

РНе

5ег

С1у

5ег

С1у

5ег

С1у

ТНг

Азр

РНе

ТНг

Ьеи

ТНг

65

70

75

80

11е

5ег

5ег

Ьеи

С1п

А1а

С1и

Азр

7а1

А1а

7а1

Туг

Туг

Суз

С1п

С1п

85

90

95

Туг

Туг

5ег

5ег

Ьеи

Рго

ТНг

РНе

С1у

С1п

С1у

ТНг

Ьуз

7а1

С1и

11е

100

105

110

Ьуз

Агд

ТНг

7а1

А1а

А1а

Рго

5ег

7а1

РНе

11е

РНе

Рго

Рго

5ег

Азр

115

120

125

- 39 026119

С1и

С1п 130

Ьеи

Ьуз

5ег С1у ТНг А1а 5ег Vа1 Vа1 Суз

Ьеи

Ьеи

Азп

Азп

135

140

РНе

Туг

Рго

Агд

С1и

А1а

Ьуз

Vа1

С1п

Тгр

Ьуз

Vа1

Азр

Азп

А1а

Ьеи

145

150

155

160

С1п

5ег

С1у

Азп

5ег

С1п

С1и

5ег

Vа1

ТНг

С1и

С1п

Азр

5ег

Ьуз

Азр

165

170

175

5ег

ТНг

Туг

5ег

Ьеи

5ег

5ег

ТНг

Ьеи

ТНг

Ьеи

5ег

Ьуз

А1а

Азр

Туг

180

185

190

С1и

Ьуз

Н1з

Ьуз

Vа1

Туг

А1а

Суз

С1и

Vа1

ТНг

Н1з

С1п

С1у

Ьеи

5ег

195

200

205

5ег

Рго

Vа1

ТНг

Ьуз

5ег

РНе

Азп

Агд

С1у

С1и

Суз

210

215

220

<210> 36 <211> 1344 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ген Н-цепи антитела против И-23К человека <400> 36

саддкссаас	кддкасадкс	кддддссдад	дкдаадаадс	скддддсскс	аакдааддкс	60
ксскдсаадд	кккссддака	сасссксаак	дааккаксса	кксаскдддк	дсдасаадск	120
сскддаааад	ддсккдадкд	дакдддаддк	кккдаксскд	аасакддкда	аасадкскас	180
дсасадааск	кссаддасад	адксассккд	ассдаддаса	сакссасада	сасдксскас	240
акдддаскда	асаасскдад	акскдакдас	асддссдкск	аккаскдкдс	адсадааксс	300
касддкдаск	асдадккскд	дддссаддда	ассскддкса	ссдксксскс	адсскссасс	360
аадддсссак	сддксккссс	сскддсассс	ксскссаада	дсасскскдд	дддсасадсд	420
дссскдддск	дсскддксаа	ддаскасккс	сссдаассдд	кдасддкдкс	дкддааскса	480
ддсдссскда	ссадсддсдк	дсасассккс	ссддскдксс	касадксскс	аддаскскас	540
ксссккадка	дсдкддкдас	сдкдсссксс	адсадсккдд	дсасссадас	скасакскдс	600
аасдкдаакс	асаадсссад	саасассаад	дкддасаада	аадккдадсс	саааксккдк	660
дасааааскс	асасакдссс	ассдкдссса	дсасскдаас	ксскдддддд	ассдксадкс	720

- 40 026119

кксскскксс	ссссаааасс	сааддасасс	сксакдакск	сссддасссс	кдаддксаса	780
кдсдкддкдд	кддасдкдад	ссасдаадас	сскдаддкса	адкксааскд	дкасдкддас	840
ддсдкддадд	кдсакаакдс	саадасааад	ссдсдддадд	адсадкасаа	садсасдкас	900
сдкдкддкса	дсдкссксас	сдксскдсас	саддаскддс	кдаакддсаа	ддадкасаад	960
кдсааддкск	ссаасааадс	ссксссадсс	сссаксдада	ааассакскс	сааадссааа	1020
дддсадсссс	дадаассаса	ддкдкасасс	скдсссссак	сссдддакда	дскдассаад	1080
аассаддкса	дсскдасскд	сскддксааа	ддсккскакс	ссадсдасак	сдссдкддад	1140
кдддададса	акдддсадсс	ддадаасаас	касаадасса	сдссксссдк	дскддасксс	1200
дасддсксск	кскксскска	садсаадскс	ассдкддаса	ададсаддкд	дсадсадддд	1260
аасдксккск	сакдскссдк	дакдсакдад	дскскдсаса	ассаскасас	дсадаададс	1320
скскссскдк	скссдддкаа	акда				1344

<210> 37 <211> 447 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Н-цепь антитела против И-23К человека <400> 37

С1п

Vа1

С1п

Ьеи

Vа1

С1п

5ег

С1у

А1а

С1и

Vа1

Ьуз

Ьуз

Рго

С1у

А1а

1

5

10

15

5ег

Мек

Ьуз

Vа1

5ег

Суз

Ьуз

Vа1

5ег

С1у

Туг

ТНг

Ьеи

Азп

С1и

Ьеи

20

25

30

5ег

11е

Н1з

Тгр

Vа1

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1у

Ьеи

С1и

Тгр

Мек

35

40

45

С1у

С1у

РНе

Азр

Рго

С1и

Н1з

С1у

С1и

ТНг

Vа1

Туг

А1а

С1п

Азп

РНе

50

55

60

С1п

Азр

Агд

Vа1

ТНг

Ьеи

ТНг

С1и

Азр

ТНг

5ег

ТНг

Азр

ТНг

5ег

Туг

65

70

75

80

Мек

С1у

Ьеи

Азп

Азп

Ьеи

Агд

5ег

Азр

Азр

ТНг

А1а

Vа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

- 41 026119

А1а А1а С1и 5ег

Туг

С1у Азр Туг С1и РНе Тгр С1у С1п С1у ТНг

Ьеи

100

105

110

Vа1

ТНг

Vа1

5ег

5ег

А1а

5ег

ТНг

Ьуз

С1у

Рго

5ег

Vа1

РНе

Рго

Ьеи

115

120

125

А1а

Рго

5ег

5ег

Ьуз

5ег

ТНг

5ег

С1у

С1у

ТНг

А1а

А1а

Ьеи

С1у

Суз

130

135

140

Ьеи

Vа1

Ьуз

Азр

Туг

РНе

Рго

С1и

Рго

Vа1

ТНг

Vа1

5ег

Тгр

Азп

5ег

145

150

155

160

С1у

А1а

Ьеи

ТНг

5ег

С1у

Vа1

Н1з

ТНг

РНе

Рго

А1а

Vа1

Ьеи

С1п

5ег

165

170

175

5ег

С1у

Ьеи

Туг

5ег

Ьеи

5ег

5ег

Vа1

Vа1

ТНг

Vа1

Рго

5ег

5ег

5ег

180

185

190

Ьеи

С1у

ТНг

С1п

ТНг

Туг

11е

Суз

Азп

Vа1

Азп

Н1з

Ьуз

Рго

5ег

Азп

195

200

205

ТНг

Ьуз

Vа1

Азр

Ьуз

Ьуз

Vа1

С1и

Рго

Ьуз

5ег

Суз

Азр

Ьуз

ТНг

Н1з

210

215

220

ТНг

Суз

Рго

Рго

Суз

Рго

А1а

Рго

С1и

Ьеи

Ьеи

С1у

С1у

Рго

5ег

Vа1

225

230

235

240

РНе

Ьеи

РНе

Рго

Рго

Ьуз

Рго

Ьуз

Азр

ТНг

Ьеи

Мек

11е

5ег

Агд

ТНг

245

250

255

Рго

С1и

Vа1

ТНг

Суз

Vа1

Vа1

Vа1

Азр

Vа1

5ег

Н1з

С1и

Азр

Рго

С1и

260

265

270

Vа1

Ьуз

РНе

Азп

Тгр

Туг

Vа1

Азр

С1у

Vа1

С1и

Vа1

Н1з

Азп

А1а

Ьуз

275

280

285

ТНг

Ьуз

Рго

Агд

С1и

С1и

С1п

Туг

Азп

5ег

ТНг

Туг

Агд

Vа1

Vа1

5ег

290

295

300

Vа1

Ьеи

ТНг

Vа1

Ьеи

Н1з

С1п

Азр

Тгр

Ьеи

Азп

С1у

Ьуз

С1и

Туг

Ьуз

305

310

315

320

Суз

Ьуз

Vа1

5ег

Азп

Ьуз

А1а

Ьеи

Рго

А1а

Рго

11е

С1и

Ьуз

ТНг

11е

325

330

335

- 42 026119

5ег Ьуз А1а

Ьуз 340

С1у С1п

Рго Агд С1и Рго С1п Vа1 Туг ТНг Ьеи Рго

345

350

Рго

5ег

Агд

Азр

С1и

Ьеи

ТНг

Ьуз

Азп

С1п

Vа1

5ег

Ьеи

ТНг

Суз

Ьеи

355

360

365

Vа1

Ьуз

С1у

РНе

Туг

Рго

5ег

Азр

11е

А1а

Vа1

С1и

Тгр

С1и

5ег

Азп

370

375

380

С1у

С1п

Рго

С1и

Азп

Азп

Туг

Ьуз

ТНг

ТНг

Рго

Рго

Vа1

Ьеи

Азр

5ег

385

390

395

400

Азр

С1у

5ег

РНе

РНе

Ьеи

Туг

5ег

Ьуз

Ьеи

ТНг

Vа1

Азр

Ьуз

5ег

Агд

405

410

415

Тгр

С1п

С1п

С1у

Азп

Vа1

РНе

5ег

Суз

5ег

Vа1

МеГ

Н1з

С1и

А1а

Ьеи

420

425

430

Н1з

Азп

Н1з

Туг

ТНг

С1п

Ьуз

5ег

Ьеи

5ег

Ьеи

5ег

Рго

С1у

Ьуз

435

440

445

<210> 38 <211> 645 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ь-цепь антитела против Н-23К человека <400> 38

дасаГссада	ГдасссадГс	ГссаГсГГсс	дГдГсГдсаГ	сГдГаддада	сададГсасс	60
аГсасГГдГс	дддсдадГса	дддГаГГаас	аасГддГГад	ссГддГаГса	дсадааасса	120
дддааадссс	сГааддГссГ	ааГсГаГасГ	дсдГссадГГ	ГдсааадГдд	ддГсссаГса	180
аддГГсадсд	дсадГддаГс	ГдддасадаГ	ГГсасГсГса	ссаГсадсад	ссГдсадссГ	240
даадаГГГГд	саасГГаГГа	ГГдГсаасад	дсГаасадГс	асссдГддас	дГГсддссаа	300
дддассаадд	ГддаааГсаа	асддасГдГд	дсГдсассаГ	сГдГсГГсаГ	сГГсссдсса	360
ГсГдаГдадс	адГГдаааГс	ГддаасГдсс	ГсГдГГдГдГ	дссГдсГдаа	ГаасГГсГаГ	420
сссадададд	ссааадГаса	дГддааддГд	даГаасдссс	ГссааГсддд	ГаасГсссад	480
дададГдГса	сададсадда	садсааддас	адсассГаса	дссГсадсад	сасссГдасд	540
сГдадсааад	садасГасда	дааасасааа	дГсГасдссГ	дсдаадГсас	ссаГсадддс	600

- 43 026119 скдадсксдс ссдксасааа дадскксаас аддддададк дккад

645 <210> 39 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ь-цепь антитела против И-23К человека <400> 39

Азр 1

11е С1п

Мек ТНг 5

С1п 5ег Рго 5ег 5ег Vа1 5ег А1а 5ег Vа1 С1у

10

15

Азр

Агд

Vа1

ТНг

11е

ТНг

Суз

Агд

А1а

5ег

С1п

С1у

11е

Азп

Азп

Тгр

20

25

30

Ьеи

А1а

Тгр

Туг

С1п

С1п

Ьуз

Рго

С1у

Ьуз

А1а

Рго

Ьуз

Vа1

Ьеи

11е

35

40

45

Туг

ТНг

А1а

5ег

5ег

Ьеи

С1п

5ег

С1у

Vа1

Рго

5ег

Агд

РНе

5ег

С1у

50

55

60

5ег

С1у

5ег

С1у

ТНг

Азр

РНе

ТНг

Ьеи

ТНг

11е

5ег

5ег

Ьеи

С1п

Рго

65

70

75

80

С1и

Азр

РНе

А1а

ТНг

Туг

Туг

Суз

С1п

С1п

А1а

Азп

5ег

Ηΐ^

Рго

Тгр

85

90

95

ТНг

РНе

С1у

С1п

С1у

ТНг

Ьуз

Vа1

С1и

11е

Ьуз

Агд

ТНг

Vа1

А1а

А1а

100

105

110

Рго

5ег

Vа1

РНе

11е

РНе

Рго

Рго

5ег

Азр

С1и

С1п

Ьеи

Ьуз

5ег

С1у

115

120

125

ТНг

А1а

5ег

Vа1

Vа1

Суз

Ьеи

Ьеи

Азп

Азп

РНе

Туг

Рго

Агд

С1и

А1а

130

135

140

Ьуз

Vа1

С1п

Тгр

Ьуз

Vа1

Азр

Азп

А1а

Ьеи

С1п

5ег

С1у

Азп

5ег

С1п

145

150

155

160

С1и

5ег

Vа1

ТНг

С1и

С1п

Азр

5ег

Ьуз

Азр

5ег

ТНг

Туг

5ег

Ьеи

5ег

165

170

175

- 44 026119

5ег ТНг Ьеи ТНг

Ьеи 5ег

Ьуз

А1а

Азр 185

Туг С1и

Ьуз

Ньз 1_уз 190

Vа1

Туг

180

А1а

Суз

С1и

Vа1

ТНг

Ньз

С1п

С1у

Ьеи

5ег

5ег

Рго

Vа1

ТНг

Ьуз

5ег

195

200

205

РНе

Азп

Агд

С1у

С1и

Суз

210 <210> 40 <211> 1344 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ген Н-цепи антитела против И-23К человека <400> 40

саддТссадд	ТддТдсадТс	Тддддссдад	дТдаадаадс	сТддддссТс	адТдааддТс	60
ТссТдсааад	ТТТссдддТа	сасссТсаТТ	дааТТадсса	ТасаТТдддТ	дсдасаддТТ	120
ссТддаааад	дасТТдадТд	даТдддаддТ	ТТТдаТссТд	аасаТддТда	аасааТсТас	180
дсасадаадТ	Тссадддсад	адТсассаТд	ассдаадаса	саТсТасада	сасадссТас	240
аТддаасТда	асаассТдад	аТсТдаддас	асддссдТаТ	аТТаТТдТдс	ТаТаТТадад	300
дсТддТдасс	ТТдасТдсТд	дддссаддда	асссТддТса	ссдТсТссТс	адссТссасс	360
аадддсссаТ	сддТсТТссс	ссТддсассс	ТссТссаада	дсассТсТдд	дддсасадсд	420
дсссТдддсТ	дссТддТсаа	ддасТасТТс	сссдаассдд	ТдасддТдТс	дТддаасТса	480
ддсдсссТда	ссадсддсдТ	дсасассТТс	ссддсТдТсс	ТасадТссТс	аддасТсТас	540
ТсссТТадТа	дсдТддТдас	сдТдсссТсс	адсадсТТдд	дсасссадас	сТасаТсТдс	600
аасдТдааТс	асаадсссад	саасассаад	дТддасаада	аадТТдадсс	саааТсТТдТ	660
дасаааасТс	асасаТдссс	ассдТдссса	дсассТдаас	ТссТдддддд	ассдТсадТс	720
ТТссТсТТсс	ссссаааасс	сааддасасс	сТсаТдаТсТ	сссддасссс	ТдаддТсаса	780
ТдсдТддТдд	ТддасдТдад	ссасдаадас	ссТдаддТса	адТТсаасТд	дТасдТддас	840
ддсдТддадд	ТдсаТааТдс	саадасааад	ссдсдддадд	адсадТасаа	садсасдТас	900
сдТдТддТса	дсдТссТсас	сдТссТдсас	саддасТддс	ТдааТддсаа	ддадТасаад	960
ТдсааддТсТ	ссаасааадс	ссТсссадсс	сссаТсдада	ааассаТсТс	сааадссааа	1020
дддсадсссс	дадаассаса	ддТдТасасс	сТдсссссаТ	сссдддаТда	дсТдассаад	1080
аассаддТса	дссТдассТд	ссТддТсааа	ддсТТсТаТс	ссадсдасаТ	сдссдТддад	1140

- 45 026119 кдддададса акдддсадсс ддадаасаас касаадасса сдссксссдк дскддасксс дасддсксск кскксскска садсаадскс ассдкддаса ададсаддкд дсадсадддд аасдксккск сакдскссдк дакдсакдад дскскдсаса ассаскасас дсадаададс скскссскдк скссдддкаа акда

1200

1260

1320

1344 <210> 41 <211> 447 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Η-цепь антитела против ΙΦ-23Κ человека <400> 41

С1п Vа1 1

С1п Vа1

Vа1 С1п 5ег С1у Α^ С1и Vа1 ^уδ ^уδ Рго С1у Α^

5

10

15

5ег

Vа1

Vа1

5ег

Суδ

^уδ

Vа1

5ег

С1у

Туг

ТНг

Феи

11е

С1и

Феи

20

25

30

Α^

11е

Ηΐδ

Тгр

Vа1

Αι^

С1п

Vа1

Рго

С1у

^у5

С1у

Феи

С1и

Ερ

Мек

35

40

45

С1у С1у

РНе

Αδρ

Рго

С1и

Ηΐδ

С1у

С1и

ТНг

11е

Туг

Α^

С1п

^у5

РНе

50

55

60

С1п

С1у

Αι^

Vа1

ТНг

Мек

ТНг

С1и

Αδρ

ТНг

5ег

ТНг

Αδρ

ТНг

Α^

Туг

65

70

75

80

Мек

С1и

Феи

Αδη

Αδη

Феи

Αι^

5ег

С1и

Αδρ

ТНг

Α^

Vа1

Туг

Туг

Суδ

85

90

95

Α^

11е

Феи

С1и

Α^

С1у

Αδρ

Феи

Αδρ

Суδ

Ερ

С1у

С1п

С1у

ТНг

Феи

100

105

110

Vа1

ТНг

Vа1

5ег

5ег

Α^

5ег

ТНг

^у5

С1у

Рго

5ег

Vа1

РНе

Рго

Феи

115

120

125

Α^

Рго

5ег

5ег

^у5

5ег

ТНг

5ег

С1у

С1у

ТНг

Α^

Α^

Феи

С1у

Суδ

130

135

140

Феи

Vа1

^у5

Αδρ

Туг

РНе

Рго

С1и

Рго

Vа1

ТНг

Vа1

5ег

Ερ

Αδη

5ег

145

150

155

160

- 46 026119

С1у А1а

Ьеи

ТНг 5ег 165

С1у 7а1

НЬз

ТНг РНе Рго 170

А1а

7а1

Ьеи

С1п 175

5ег

5ег

С1у

Ьеи

Туг

5ег

Ьеи

5ег

5ег

7а1

7а1

ТНг

7а1

Рго

5ег

5ег

5ег

180

185

190

Ьеи

С1у

ТНг

С1п

ТНг

Туг

11е

Суз

Азп

7а1

Азп

НЬз

Ьуз

Рго

5ег

Азп

195

200

205

ТНг

Ьуз

7а1

Азр

Ьуз

Ьуз

7а1

С1и

Рго

Ьуз

5ег

Суз

Азр

Ьуз

ТНг

НЬз

210

215

220

ТНг

Суз

Рго

Рго

Суз

Рго

А1а

Рго

С1и

Ьеи

Ьеи

С1у

С1у

Рго

5ег

7а1

225

230

235

240

РНе

Ьеи

РНе

Рго

Рго

Ьуз

Рго

Ьуз

Азр

ТНг

Ьеи

МеЬ

11е

5ег

Агд

ТНг

245

250

255

Рго

С1и

7а1

ТНг

Суз

7а1

7а1

7а1

Азр

7а1

5ег

НЬз

С1и

Азр

Рго

С1и

260

265

270

7а1

Ьуз

РНе

Азп

Тгр

Туг

7а1

Азр

С1у

7а1

С1и

7а1

НЬз

Азп

А1а

Ьуз

275

280

285

ТНг

Ьуз

Рго

Агд

С1и

С1и

С1п

Туг

Азп

5ег

ТНг

Туг

Агд

7а1

7а1

5ег

290

295

300

7а1

Ьеи

ТНг

7а1

Ьеи

НЬз

С1п

Азр

Тгр

Ьеи

Азп

С1у

Ьуз

С1и

Туг

Ьуз

305

310

315

320

Суз

Ьуз

7а1

5ег

Азп

Ьуз

А1а

Ьеи

Рго

А1а

Рго

11е

С1и

Ьуз

ТНг

11е

325

330

335

5ег

Ьуз

А1а

Ьуз

С1у

С1п

Рго

Агд

С1и

Рго

С1п

7а1

Туг

ТНг

Ьеи

Рго

340

345

350

Рго

5ег

Агд

Азр

С1и

Ьеи

ТНг

Ьуз

Азп

С1п

7а1

5ег

Ьеи

ТНг

Суз

Ьеи

355

360

365

7а1

Ьуз

С1у

РНе

Туг

Рго

5ег

Азр

11е

А1а

7а1

С1и

Тгр

С1и

5ег

Азп

370

375

380

- 47 026119

С1у 385

С1п Рго

С1и Авп

Авп Туг 1_ув ТНг ТНг Рго Рго Уа1

Ьеи

Авр

5ег 400

390

395

Авр

С1у

5ег

РНе

РНе

Ьеи

Туг

5ег

1_ув

Ьеи

ТНг

Уа1

Авр

1_ув

5ег

Агд

405

410

415

Тгр

С1п

С1п

С1у

Авп

Уа1

РНе

5ег

Сув

5ег

Уа1

Мек

Н1в

С1и

А1а

Ьеи

420

425

430

Н1в

Авп

Н1в

Туг

ТНг

С1п

1_ув

5ег

Ьеи

5ег

Ьеи

5ег

Рго

С1у

1_ув

435

440

445

<210> 42 <211> 645 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ген Ь-цепи антитела против И-23К человека <400> 42

дасакссада	кдасссадкс	кссакскксс	дкдкскдсак	садкдддада	сададксасс	60
аксасккдкс	дддсдадкса	дддааккадс	ааскддккад	сскддкакса	дсадааасса	120
дддааадссс	скааддксск	дакскакаск	дсакссадкк	касааадкдд	ддксссакса	180
аддкксадсд	дсадкддакс	кдддасадак	кксаскскса	ссдксадсдд	сскдсадсск	240
даадаккккд	даасккакка	ккдксаасад	дскаасадкк	ксссакксас	ккксддссск	300
дддассааад	кддакаксаа	асддаскдкд	дскдсассак	скдкскксак	скксссдсса	360
кскдакдадс	адккдааакс	кддааскдсс	кскдккдкдк	дсскдскдаа	каасккскак	420
сссадададд	ссааадкаса	дкддааддкд	дакаасдссс	кссааксддд	каасксссад	480
дададкдкса	сададсадда	садсааддас	адсасскаса	дссксадсад	сассскдасд	540
скдадсааад	садаскасда	дааасасааа	дкскасдсск	дсдаадксас	ссаксадддс	600
скдадсксдс	ссдксасааа	дадскксаас	аддддададк	дккад		645

<210> 43 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ь-цепь антитела против И-23К человека <400> 43

- 48 026119

Азр 1

11е С1п Ме!

ТНг 5

С1п

5ег Рго 5ег 5ег Vа1 5ег А1а 5ег Vа1 С1у

10

15

Азр

Агд

Vа1

ТНг

11е

ТНг

Суз

Агд

А1а

5ег

С1п

С1у

11е

5ег

Азп

Тгр

20

25

30

Ьеи

А1а

Тгр

Туг

С1п

С1п

Ьуз

Рго

С1у

Ьуз

А1а

Рго

Ьуз

Vа1

Ьеи

11е

35

40

45

Туг

ТНг

А1а

5ег

5ег

Ьеи

С1п

5ег

С1у

Vа1

Рго

5ег

Агд

РНе

5ег

С1у

50

55

60

5ег

С1у

5ег

С1у

ТНг

Азр

РНе

ТНг

Ьеи

ТНг

Vа1

5ег

С1у

Ьеи

С1п

Рго

65

70

75

80

С1и

Азр

РНе

С1у

ТНг

Туг

Туг

Суз

С1п

С1п

А1а

Азп

5ег

РНе

Рго

РНе

85

90

95

ТНг

РНе

С1у

Рго

С1у

ТНг

Ьуз

Vа1

Азр

11е

Ьуз

Агд

ТНг

Vа1

А1а

А1а

100

105

110

Рго

5ег

Vа1

РНе

11е

РНе

Рго

Рго

5ег

Азр

С1и

С1п

Ьеи

Ьуз

5ег

С1у

115

120

125

ТНг

А1а

5ег

Vа1

Vа1

Суз

Ьеи

Ьеи

Азп

Азп

РНе

Туг

Рго

Агд

С1и

А1а

130

135

140

Ьуз

Vа1

С1п

Тгр

Ьуз

Vа1

Азр

Азп

А1а

Ьеи

С1п

5ег

С1у

Азп

5ег

С1п

145

150

155

160

С1и

5ег

Vа1

ТНг

С1и

С1п

Азр

5ег

Ьуз

Азр

5ег

ТНг

Туг

5ег

Ьеи

5ег

165

170

175

5ег

ТНг

Ьеи

ТНг

Ьеи

5ег

Ьуз

А1а

Азр

Туг

С1и

Ьуз

Н1з

Ьуз

Vа1

Туг

180

185

190

А1а

Суз

С1и

Vа1

ТНг

Н1з

С1п

С1у

Ьеи

5ег

5ег

Рго

Vа1

ТНг

Ьуз

5ег

195

200

205

РНе

Азп

Агд

С1у

С1и

Суз

<210> 44 <211> 1344

210

- 49 026119 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ген Н-цепи антитела против П-23К человека <400> 44

садд!ссаас	!дд!асад!с	!ддддс!даа	д!даадаадс	с!ддддсс!с	ад!даадд!с	60
!сс!дсаадд	!!!ссдда!а	сассс!саа!	даа!!а!сса	!!сас!ддд!	!сдасаддс!	120
сс!ддаааад	ддс!!дад!д	да!дддадд!	!!!да!сс!д	ааса!ад!да	аасас!с!ас	180
дсасаааас!	!ссаддасад	ас!сасс!!д	ассдаддаса	са!ссасада	аасадсс!д!	240
а!ддадс!да	асадсс!дад	а!с!да!дас	асддссд!с!	а!!ас!д!дс	адсадаа!сс	300
!асдд!дас!	асдад!!с!д	дддссадддд	ассс!дд!са	ссд!с!сс!с	адсс!ссасс	360
аадддссса!	сдд!с!!ссс	сс!ддсассс	!сс!ссаада	дсасс!с!дд	дддсасадсд	420
дссс!дддс!	дсс!дд!саа	ддас!ас!!с	сссдаассдд	!дасдд!д!с	д!ддаас!са	480
ддсдссс!да	ссадсддсд!	дсасасс!!с	ссддс!д!сс	!асад!сс!с	аддас!с!ас	540
!ссс!!ад!а	дсд!дд!дас	сд!дссс!сс	адсадс!!дд	дсасссадас	с!аса!с!дс	600
аасд!даа!с	асаадсссад	саасассаад	д!ддасаада	аад!!дадсс	сааа!с!!д!	660
дасаааас!с	асаса!дссс	ассд!дссса	дсасс!даас	!сс!дддддд	ассд!сад!с	720
!!сс!с!!сс	ссссаааасс	сааддасасс	с!са!да!с!	сссддасссс	!дадд!саса	780
!дсд!дд!дд	!ддасд!дад	ссасдаадас	сс!дадд!са	ад!!саас!д	д!асд!ддас	840
ддсд!ддадд	!дса!аа!дс	саадасааад	ссдсдддадд	адсад!асаа	садсасд!ас	900
сд!д!дд!са	дсд!сс!сас	сд!сс!дсас	саддас!ддс	!даа!ддсаа	ддад!асаад	960
!дсаадд!с!	ссаасааадс	сс!сссадсс	ссса!сдада	ааасса!с!с	сааадссааа	1020
дддсадсссс	дадаассаса	дд!д!асасс	с!дссссса!	сссддда!да	дс!дассаад	1080
аассадд!са	дсс!дасс!д	сс!дд!сааа	ддс!!с!а!с	ссадсдаса!	сдссд!ддад	1140
!дддададса	а!дддсадсс	ддадаасаас	!асаадасса	сдсс!сссд!	дс!ддас!сс	1200
дасддс!сс!	!с!!сс!с!а	садсаадс!с	ассд!ддаса	ададсадд!д	дсадсадддд	1260
аасд!с!!с!	са!дс!ссд!	да!дса!дад	дс!с!дсаса	ассас!асас	дсадаададс	1320
с!с!ссс!д!	с!ссддд!аа	а!да				1344

<210> 45 <211> 447 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность

- 50 026119 <220>

<223> Н-цепь антитела против И-23К человека <400> 45

С1п Vа1 1

С1п

Ьеи Vа1 5

С1п 5ег С1у А1а С1и Vа1 10

Ьуз

Ьуз

Рго

С1у 15

А1а

5ег

Vа1

Ьуз

Vа1

5ег

Суз

Ьуз

Vа1

5ег

С1у

Туг

ТНг

Ьеи

Азп

С1и

Ьеи

20

25

30

5ег

11е

Н1з

Тгр

Vа1

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1у

Ьеи

С1и

Тгр

Мек

35

40

45

С1у

С1у

РНе

Азр

Рго

С1и

Н1з

5ег

С1и

ТНг

Ьеи

Туг

А1а

С1п

Азп

РНе

50

55

60

С1п

Азр

Агд

Ьеи

ТНг

Ьеи

ТНг

С1и

Азр

ТНг

5ег

ТНг

С1и

ТНг

А1а

Суз

65

70

75

80

Мек

С1и

Ьеи

Азп

5ег

Ьеи

Агд

5ег

Азр

Азр

ТНг

А1а

Vа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

А1а

С1и

5ег

Туг

С1у

Азр

Туг

С1и

РНе

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТНг

Ьеи

100

105

110

Vа1

ТНг

Vа1

5ег

5ег

А1а

5ег

ТНг

Ьуз

С1у

Рго

5ег

Vа1

РНе

Рго

Ьеи

115

120

125

А1а

Рго

5ег

5ег

Ьуз

5ег

ТНг

5ег

С1у

С1у

ТНг

А1а

А1а

Ьеи

С1у

Суз

130

135

140

Ьеи

Vа1

Ьуз

Азр

Туг

РНе

Рго

С1и

Рго

Vа1

ТНг

Vа1

5ег

Тгр

Азп

5ег

145

150

155

160

С1у

А1а

Ьеи

ТНг

5ег

С1у

Vа1

Н1з

ТНг

РНе

Рго

А1а

Vа1

Ьеи

С1п

5ег

165

170

175

5ег

С1у

Ьеи

Туг

5ег

Ьеи

5ег

5ег

Vа1

Vа1

ТНг

Vа1

Рго

5ег

5ег

5ег

180

185

190

Ьеи

С1у

ТНг

С1п

ТНг

Туг

11е

Суз

Азп

Vа1

Азп

Н1з

Ьуз

Рго

5ег

Азп

195

200

205

- 51 026119

ТНг Ьуз

Vа1 Азр

Ьуз

Ьуз Vа1 215

С1и Рго Ьуз 5ег

Суз 220

Азр

Ьуз

ТНг

Н1з

210

ТНг

Суз

Рго

Рго

Суз

Рго

А1а

Рго

С1и

Ьеи

Ьеи

С1у

С1у

Рго

5ег

Vа1

225

230

235

240

РНе

Ьеи

РНе

Рго

Рго

Ьуз

Рго

Ьуз

Азр

ТНг

Ьеи

Мек

11е

5ег

Агд

ТНг

245

250

255

Рго

С1и

Vа1

ТНг

Суз

Vа1

Vа1

Vа1

Азр

Vа1

5ег

Н1з

С1и

Азр

Рго

С1и

260

265

270

Vа1

Ьуз

РНе

Азп

Тгр

Туг

Vа1

Азр

С1у

Vа1

С1и

Vа1

Н1з

Азп

А1а

Ьуз

275

280

285

ТНг

Ьуз

Рго

Агд

С1и

С1и

С1п

Туг

Азп

5ег

ТНг

Туг

Агд

Vа1

Vа1

5ег

290

295

300

Vа1

Ьеи

ТНг

Vа1

Ьеи

Н1з

С1п

Азр

Тгр

Ьеи

Азп

С1у

Ьуз

С1и

Туг

Ьуз

305

310

315

320

Суз

Ьуз

Vа1

5ег

Азп

Ьуз

А1а

Ьеи

Рго

А1а

Рго

11е

С1и

Ьуз

ТНг

11е

325

330

335

5ег

Ьуз

А1а

Ьуз

С1у

С1п

Рго

Агд

С1и

Рго

С1п

Vа1

Туг

ТНг

Ьеи

Рго

340

345

350

Рго

5ег

Агд

Азр

С1и

Ьеи

ТНг

Ьуз

Азп

С1п

Vа1

5ег

Ьеи

ТНг

Суз

Ьеи

355

360

365

Vа1

Ьуз

С1у

РНе

Туг

Рго

5ег

Азр

11е

А1а

Vа1

С1и

Тгр

С1и

5ег

Азп

370

375

380

С1у

С1п

Рго

С1и

Азп

Азп

Туг

Ьуз

ТНг

ТНг

Рго

Рго

Vа1

Ьеи

Азр

5ег

385

390

395

400

Азр

С1у

5ег

РНе

РНе

Ьеи

Туг

5ег

Ьуз

Ьеи

ТНг

Vа1

Азр

Ьуз

5ег

Агд

405

410

415

Тгр

С1п

С1п

С1у

Азп

Vа1

РНе

5ег

Суз

5ег

Vа1

Мек

Н1з

С1и

А1а

Ьеи

420

425

430

Н1з

Азп

Н1з

Туг

ТНг

С1п

Ьуз

5ег

Ьеи

5ег

Ьеи

5ег

Рго

С1у

Ьуз

435

440

445

- 52 026119 <210> 46 <211> 645 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ген Ь-цепи антитела против И-23К человека <400> 46

дасаГссада	ГдасссадГс	ГссаГсГГсс	дГдГсГдсаГ	сГдГаддада	сададГсасс	60
аГсасГГдГс	дддсдадГса	ддаГаГГадс	адсГддГГад	ссГддГаГса	дсадааасса	120
ддаааадссс	сГааддГссГ	даГсГаГасГ	дсаГссадГГ	ГдсааадГдд	ддГсссаГса	180
аддГГсадсд	дсадГддаГс	ГдддасадаГ	ГГсасГсГса	ссаГсадсад	ссГдсадссГ	240
даадаГГГГд	саасГГаГГа	ГГдГсаасад	дсГаасадГс	асссдГддас	дГГсддссаа	300
дддассаадд	ГддаааГсаа	асддасГдГд	дсГдсассаГ	сГдГсГГсаГ	сГГсссдсса	360
ГсГдаГдадс	адГГдаааГс	ГддаасГдсс	ГсГдГГдГдГ	дссГдсГдаа	ГаасГГсГаГ	420
сссадададд	ссааадГаса	дГддааддГд	даГаасдссс	ГссааГсддд	ГаасГсссад	480
дададГдГса	сададсадда	садсааддас	адсассГаса	дссГсадсад	сасссГдасд	540
сГдадсааад	садасГасда	дааасасааа	дГсГасдссГ	дсдаадГсас	ссаГсадддс	600
сГдадсГсдс	ссдГсасааа	дадсГГсаас	аддддададГ	дГГад		645

<210> 47 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ь-цепь антитела против И-23К человека <400> 47

Азр

11е

С1п

МеГ

ТНг

С1п

5ег

Рго

5ег

5ег

Vа1

5ег

А1а

5ег

Vа1

С1у

1

5

10

15

Азр

Агд

Vа1

ТНг

11е

ТНг

Суз

Агд

А1а

5ег

С1п

Азр

11е

5ег

5ег

Тгр

20

25

30

Ьеи

А1а

Тгр

Туг

С1п

С1п

Ьуз

Рго

С1у

Ьуз

А1а

Рго

Ьуз

Vа1

Ьеи

11е

35

40

45

Туг

ТНг

А1а

5ег

5ег

Ьеи

С1п

5ег

С1у

Vа1

Рго

5ег

Агд

РНе

5ег

С1у

55 60

- 53 026119

5ег С1у 5ег С1у 65

ТНг

Азр РНе ТНг Ьеи ТНг 11е 5ег 5ег Ьеи С1п Рго

70

75

80

С1и

Азр

РНе

А1а

ТНг

Туг

Туг

Суз

С1п

С1п

А1а

Азп

5ег

Ньз

Рго

Тгр

85

90

95

ТНг

РНе

С1у

С1п

С1у

ТНг

Ьуз

Vа1

С1и

11е

Ьуз

Агд

ТНг

Vа1

А1а

А1а

100

105

110

Рго

5ег

Vа1

РНе

11е

РНе

Рго

Рго

5ег

Азр

С1и

С1п

Ьеи

Ьуз

5ег

С1у

115

120

125

ТНг

А1а

5ег

Vа1

Vа1

Суз

Ьеи

Ьеи

Азп

Азп

РНе

Туг

Рго

Агд

С1и

А1а

130

135

140

Ьуз

Vа1

С1п

Тгр

Ьуз

Vа1

Азр

Азп

А1а

Ьеи

С1п

5ег

С1у

Азп

5ег

С1п

145

150

155

160

С1и

5ег

Vа1

ТНг

С1и

С1п

Азр

5ег

Ьуз

Азр

5ег

ТНг

Туг

5ег

Ьеи

5ег

165

170

175

5ег

ТНг

Ьеи

ТНг

Ьеи

5ег

Ьуз

А1а

Азр

Туг

С1и

Ьуз

Ньз

Ьуз

Vа1

Туг

180

185

190

А1а

Суз

С1и

Vа1

ТНг

Ньз

С1п

С1у

Ьеи

5ег

5ег

Рго

Vа1

ТНг

Ьуз

5ег

195

200

205

РНе

Азп

Агд

С1у

С1и

Суз

210 <210> 48 <211> 1341 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ген Н-цепи антитела против И-23К человека <400> 48 саддТссаТс ТддТасадТс ТдддасТдад дТдаддаадс сТддддссТс

ТссТдсаадд ТТТссддаТа сасссТсааТ дааТТддсса ТТсасТдддТ ссаддаааад ддсТТдадТд даТдддаддТ ТТТдаТссТд аасаТддТда дсасададдТ Тссадддсад адТсасссТд сссдаддаса саТсаасада адТдааддТс дсдасаддсТ ааТааТсТас сасадссТас

120

180

240

- 54 026119

ЬЬддассЬдЬ	ЬсаассЬдад	дЬсЬдаадас	асддссдЬаЬ	аЬЬЬсЬдЬдс	аасадаадса	300
дсссссЬЬЬд	асЬаЬЬдддд	ссадддаасс	сЬддЬсаЬсд	ЬсЬссЬсадс	сЬссассаад	360
ддсссаЬсдд	ЬсЬЬсссссЬ	ддсасссЬсс	Ьссаададса	ссЬсЬддддд	сасадсддсс	420
сЬдддсЬдсс	ЬддЬсаадда	сЬасЬЬсссс	даассддЬда	сддЬдЬсдЬд	даасЬсаддс	480
дсссЬдасса	дсддсдЬдса	сассЬЬсссд	дсЬдЬссЬас	адЬссЬсадд	асЬсЬасЬсс	540
сЬЬадЬадсд	ЬддЬдассдЬ	дсссЬссадс	адсЬЬдддса	сссадассЬа	саЬсЬдсаас	600
дЬдааЬсаса	адсссадсаа	сассааддЬд	дасаадааад	ЬЬдадсссаа	аЬсЬЬдЬдас	660
аааасЬсаса	саЬдсссасс	дЬдсссадса	ссЬдаасЬсс	Ьддддддасс	дЬсадЬсЬЬс	720
сЬсЬЬссссс	саааасссаа	ддасасссЬс	аЬдаЬсЬссс	ддассссЬда	ддЬсасаЬдс	780
дЬддЬддЬдд	асдЬдадсса	сдаадасссЬ	даддЬсаадЬ	ЬсаасЬддЬа	сдЬддасддс	840
дЬддаддЬдс	аЬааЬдссаа	дасааадссд	сдддаддадс	адЬасаасад	сасдЬассдЬ	900
дЬддЬсадсд	ЬссЬсассдЬ	ссЬдсассад	дасЬддсЬда	аЬддсаадда	дЬасаадЬдс	960
ааддЬсЬсса	асааадсссЬ	сссадссссс	аЬсдадаааа	ссаЬсЬссаа	адссаааддд	1020
садссссдад	аассасаддЬ	дЬасасссЬд	сссссаЬссс	дддаЬдадсЬ	дассаадаас	1080
саддЬсадсс	ЬдассЬдссЬ	ддЬсаааддс	ЬЬсЬаЬссса	дсдасаЬсдс	сдЬддадЬдд	1140
дададсааЬд	ддсадссдда	даасаасЬас	аадассасдс	сЬсссдЬдсЬ	ддасЬссдас	1200
ддсЬссЬЬсЬ	ЬссЬсЬасад	саадсЬсасс	дЬддасаада	дсаддЬддса	дсаддддаас	1260
дЬсЬЬсЬсаЬ	дсЬссдЬдаЬ	дсаЬдаддсЬ	сЬдсасаасс	асЬасасдса	даададссЬс	1320
ЬсссЬдЬсЬс	сдддЬаааЬд	а				1341

<210> 49 <211> 446 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Н-цепь антитела против И-23К человека <400> 49

С1п

Vа1

НЬз

Ьеи

Vа1

С1п

5ег

С1у

ТНг

С1и

Vа1

Агд

Ьуз

Рго

С1у

А1а

1

5

10

15

5ег

Vа1

Ьуз

Vа1

5ег

Суз

Ьуз

Vа1

5ег

С1у

Туг

ТНг

Ьеи

Азп

С1и

Ьеи

20

25

30

- 55 026119

А1а 11е Н1з Тгр Vа1 35

Агд С1п А1а Рго С1у 40

Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр 45

Ме!

С1у

С1у

РНе

Азр

Рго

С1и

Н1з

С1у

С1и

11е

11е

Туг

А1а

С1п

Агд

РНе

50

55

60

С1п

С1у

Агд

Vа1

ТНг

Ьеи

Рго

С1и

Азр

ТНг

5ег

ТНг

Азр

ТНг

А1а

Туг

65

70

75

80

Ьеи

Азр

Ьеи

РНе

Азп

Ьеи

Агд

5ег

С1и

Азр

ТНг

А1а

Vа1

Туг

РНе

Суз

85

90

95

А1а

ТНг

С1и

А1а

А1а

Рго

РНе

Азр

Туг

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТНг

Ьеи

Vа1

100

105

110

11е

Vа1

5ег

5ег

А1а

5ег

ТНг

Ьуз

С1у

Рго

5ег

Vа1

РНе

Рго

Ьеи

А1а

115

120

125

Рго

5ег

5ег

Ьуз

5ег

ТНг

5ег

С1у

С1у

ТНг

А1а

А1а

Ьеи

С1у

Суз

Ьеи

130

135

140

Vа1

Ьуз

Азр

Туг

РНе

Рго

С1и

Рго

Vа1

ТНг

Vа1

5ег

Тгр

Азп

5ег

С1у

145

150

155

160

А1а

Ьеи

ТНг

5ег

С1у

Vа1

Н1з

ТНг

РНе

Рго

А1а

Vа1

Ьеи

С1п

5ег

5ег

165

170

175

С1у

Ьеи

Туг

5ег

Ьеи

5ег

5ег

Vа1

Vа1

ТНг

Vа1

Рго

5ег

5ег

5ег

Ьеи

180

185

190

С1у

ТНг

С1п

ТНг

Туг

11е

Суз

Азп

Vа1

Азп

Н1з

Ьуз

Рго

5ег

Азп

ТНг

195

200

205

Ьуз

Vа1

Азр

Ьуз

Ьуз

Vа1

С1и

Рго

Ьуз

5ег

Суз

Азр

Ьуз

ТНг

Н1з

ТНг

210

215

220

Суз

Рго

Рго

Суз

Рго

А1а

Рго

С1и

Ьеи

Ьеи

С1у

С1у

Рго

5ег

Vа1

РНе

225

230

235

240

Ьеи

РНе

Рго

Рго

Ьуз

Рго

Ьуз

Азр

ТНг

Ьеи

Ме!

11е

5ег

Агд

ТНг

Рго

245

250

255

С1и

Vа1

ТНг

Суз

Vа1

Vа1

Vа1

Азр

Vа1

5ег

Н1з

С1и

Азр

Рго

С1и

Vа1

260

265

270

- 56 026119

^уδ РНе Αδη

Тгр Туг

Vа1 Αδρ С1у Vа1 С1и Vа1 Ηίδ Αδη Α^

^Υδ

ТНг

275

280

285

^у5

Рго

Αι-д

С1и

С1и

С1п

Туг

Αδη

5ег

ТНг

Туг

Αι-д

Vа1

Vа1

5ег

Vа1

290

295

300

Ьеи

ТНг

Vа1

Ьеи

Ηίδ

С1п

Αδρ

Тгр

Ьеи

Αδη

С1у

^уδ

С1и

Туг

^Υδ

Суδ

305

310

315

320

^уδ

Vа1

5ег

Αδη

^Υδ

Α^

Ьеи

Рго

Α^

Рго

11е

С1и

^Υδ

ТНг

11е

5ег

325

330

335

^уδ

Α^

С1у

С1п

Рго

Αι-д

С1и

Рго

С1п

Vа1

Туг

ТНг

Ьеи

Рго

Рго

340

345

350

5ег

Αι-д

Αδρ

С1и

Ьеи

ТНг

^Υδ

Αδη

С1п

Vа1

5ег

Ьеи

ТНг

Суδ

Ьеи

Vа1

355

360

365

^уδ

С1у

РНе

Туг

Рго

5ег

Αδρ

11е

Α^

Vа1

С1и

Тгр

С1и

5ег

Αδη

С1у

370

375

380

С1п

Рго

С1и

Αδη

Αδη

Туг

^Υδ

ТНг

ТНг

Рго

Рго

Vа1

Ьеи

Αδρ

5ег

Αδρ

385

390

395

400

С1у

5ег

РНе

РНе

Ьеи

Туг

5ег

^Υδ

Ьеи

ТНг

Vа1

Αδρ

^Υδ

5ег

Αι-д

Тгр

405

410

415

С1п

С1п

С1у

Αδη

Vа1

РНе

5ег

Суδ

5ег

Vа1

МеА

Ηίδ

С1и

Α^

Ьеи

Ηίδ

420

425

430

Αδη

Ηίδ

Туг

ТНг

С1п

^Υδ

5ег

Ьеи

5ег

Ьеи

5ег

Рго

С1у

^Υδ

435

440

445

<210>	50
<211>	645
<212>	ДНК
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Ген	Ь-цепи антитела против И-23К человека
<400>	50
дасаАссада	АдасссадАс	АссААссасс сАдАсАдсдА сАдАаддада	сададАсасс	60
аАсасААдсс	дддссадАса	дадАсААадА адААддААдд ссАддАаАса	дсадааасса	120

- 57 026119

дддааадссс	сГааасГссГ	даГсГаГаад	дсдГсГадГГ	ГадааадГдд	ддГсссаГса	180
аддГГсадсд	дсадГддаГс	Гдддасадас	ГГсасГсГса	ссаГсадсад	ссГдсадссГ	240
даГдаГГГГд	саасГГаГГа	сГдссаасад	ГаГдаГаГГГ	аГссГсддас	дГГсддссаа	300
дддассаадд	ГддаааГсаа	дсддасГдГд	дсГдсассаГ	сГдГсГГсаГ	сГГсссдсса	360
ГсГдаГдадс	адГГдаааГс	ГддаасГдсс	ГсГдГГдГдГ	дссГдсГдаа	ГаасГГсГаГ	420
сссадададд	ссааадГаса	дГддааддГд	даГаасдссс	ГссааГсддд	ГаасГсссад	480
дададГдГса	сададсадда	садсааддас	адсассГаса	дссГсадсад	сасссГдасд	540
сГдадсааад	садасГасда	дааасасааа	дГсГасдссГ	дсдаадГсас	ссаГсадддс	600
сГдадсГсдс	ссдГсасааа	дадсГГсаас	аддддададГ	дГГад		645

<210> 51 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ь-цепь антитела против Н-23К человека <400> 51

Азр

11е

С1п

МеГ

ТНг

С1п

5ег

Рго

5ег

ТНг

Ьеи

5ег

А1а

5ег

Vа1

С1у

1

5

10

15

Азр

Агд

Vа1

ТНг

11е

ТНг

Суз

Агд

А1а

5ег

С1п

5ег

Ьеи

5ег

5ег

Тгр

20

25

30

Ьеи

А1а

Тгр

Туг

С1п

С1п

Ьуз

Рго

С1у

Ьуз

А1а

Рго

Ьуз

Ьеи

Ьеи

11е

35

40

45

Туг

Ьуз

А1а

5ег

5ег

Ьеи

С1и

5ег

С1у

Vа1

Рго

5ег

Агд

РНе

5ег

С1у

50

55

60

5ег

С1у

5ег

С1у

ТНг

Азр

РНе

ТНг

Ьеи

ТНг

11е

5ег

5ег

Ьеи

С1п

Рго

65

70

75

80

Азр

Азр

РНе

А1а

ТНг

Туг

Туг

Суз

С1п

С1п

Туг

Азр

11е

Туг

Рго

Агд

85

90

95

ТНг

РНе

С1у

С1п

С1у

ТНг

Ьуз

Vа1

С1и

11е

Ьуз

Агд

ТНг

Vа1

А1а

А1а

100

105

110

- 58 026119

Рго 5ег Уа1 РНе

11е РНе Рго Рго 120

5ег Авр С1и

С1п

Ьеи 125

1_ув

5ег

С1у

115

ТНг

А1а

5ег

Уа1

Уа1

Сув

Ьеи

Ьеи

Авп

Авп

РНе

Туг

Рго

Агд

С1и

А1а

130

135

140

1_ув

Уа1

С1п

Тгр

1_ув

Уа1

Авр

Авп

А1а

Ьеи

С1п

5ег

С1у

Авп

5ег

С1п

145

150

155

160

С1и

5ег

Уа1

ТНг

С1и

С1п

Авр

5ег

1_ув

Авр

5ег

ТНг

Туг

5ег

Ьеи

5ег

165

170

175

5ег

ТНг

Ьеи

ТНг

Ьеи

5ег

1_ув

А1а

Авр

Туг

С1и

1_ув

Н1в

1_ув

Уа1

Туг

180

185

190

А1а

Сув

С1и

Уа1

ТНг

Н1в

С1п

С1у

Ьеи

5ег

5ег

Рго

Уа1

ТНг

1_ув

5ег

195

200

205

РНе

Авп

Агд

С1у

С1и

Сув

210 <210> 52 <211> 1341 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ген Н-цепи антитела против И-23К человека <400> 52

саддкссакс	кддкасадкс	кдддаскдад	дкдаддаадс	скддддсскс	адкдааддкс	60
ксскдсаадд	кккссддака	сасссксаак	дааккддсса	кксаскдддк	дсдасаддск	120
сскддаааад	ддсккдаакд	дакдддаддк	кккдаксскд	аасакддкда	ааккакскас	180
дсасададдк	кссадддсад	ааксассскд	сссдаддаса	саксаасада	сасадсскас	240
акддасскдд	ксаасскдад	акскдаддас	асддссдкдк	акккскдкас	аасадаадса	300
дссссскккд	аскаккдддд	ссадддаадс	скддксаксд	кскссксадс	скссассаад	360
ддсссаксдд	ксккссссск	ддсасссксс	кссаададса	сскскддддд	сасадсддсс	420
скдддскдсс	кддксаадда	скаскксссс	даассддкда	сддкдксдкд	даасксаддс	480
дссскдасса	дсддсдкдса	сасскксссд	дскдксскас	адкссксадд	аскскасксс	540
сккадкадсд	кддкдассдк	дссскссадс	адсккдддса	сссадасска	сакскдсаас	600
дкдааксаса	адсссадсаа	сассааддкд	дасаадааад	ккдадсссаа	аксккдкдас	660

- 59 026119

аааасксаса	сакдсссасс дкдсссадса сскдаасксс кддддддасс	дксадксккс	720
сксккссссс	саааасссаа ддасассскс акдакскссс ддасссскда	ддксасакдс	780
дкддкддкдд	асдкдадсса сдаадассск даддксаадк ксааскддка	сдкддасддс	840
дкддаддкдс	акаакдссаа дасааадссд сдддаддадс адкасаасад	сасдкассдк	900
дкддксадсд	кссксассдк сскдсассад даскддскда акддсаадда	дкасаадкдс	960
ааддксксса	асааадссск сссадссссс аксдадаааа ссакскссаа	адссаааддд	1020
садссссдад	аассасаддк дкасассскд сссссакссс дддакдадск	дассаадаас	1080
саддксадсс	кдасскдсск ддксаааддс ккскакссса дсдасаксдс	сдкддадкдд	1140
дададсаакд	ддсадссдда даасааскас аадассасдс сксссдкдск	ддаскссдас	1200
ддскссккск	ксскскасад саадсксасс дкддасаада дсаддкддса	дсаддддаас	1260
дкскксксак	дскссдкдак дсакдаддск скдсасаасс аскасасдса	даададсскс	1320
кссскдкскс	сдддкааакд а		1341
<210> 53
<211> 446
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Η-цепь антитела против И-23К человека
<400> 53
С1п Vа1 Η^з	; Ьеи Vа1 С1п 5ег С1у ТНг С1и Vа1 Агд Ьуз Рго	ι С1у А1а
1	5 10	15
5ег Vа1 Ьуз	; Vа1 5ег Суз Ьуз Vа1 5ег С1у Туг ТНг Ьеи Азп	ι С1и Ьеи
	20 25 30
А1а 11е Η^з	; Тгр Vа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и	ι Тгр Мек
35	40 45
С1у С1у РНе	: Азр Рго С1и Η^з С1у С1и 11е 11е Туг А1а С1п	ι Агд РНе
50	55 60
С1п С1у Агд	; 11е ТНг Ьеи Рго С1и Азр ТНг 5ег ТНг Азр ТНг	А1а Туг
65	70 75	80
Мек Азр Ьеи	ι Vа1 Азп Ьеи Агд 5ег С1и Азр ТНг А1а Vа1 Туг	РНе Суз

90 95

- 60 026119

ТНг ТНг С1и А1а А1а Рго РНе Азр Туг Тгр С1у С1п С1у 5ег Ьеи Vа1

100

105

110

11е

Vа1

5ег

5ег

А1а

5ег

ТНг

Ьуз

С1у

Рго

5ег

Vа1

РНе

Рго

Ьеи

А1а

115

120

125

Рго

5ег

5ег

Ьуз

5ег

ТНг

5ег

С1у

С1у

ТНг

А1а

А1а

Ьеи

С1у

Суз

Ьеи

130

135

140

Vа1

Ьуз

Азр

Туг

РНе

Рго

С1и

Рго

Vа1

ТНг

Vа1

5ег

Тгр

Азп

5ег

С1у

145

150

155

160

А1а

Ьеи

ТНг

5ег

С1у

Vа1

НЬз

ТНг

РНе

Рго

А1а

Vа1

Ьеи

С1п

5ег

5ег

165

170

175

С1у

Ьеи

Туг

5ег

Ьеи

5ег

5ег

Vа1

Vа1

ТНг

Vа1

Рго

5ег

5ег

5ег

Ьеи

180

185

190

С1у

ТНг

С1п

ТНг

Туг

11е

Суз

Азп

Vа1

Азп

НЬз

Ьуз

Рго

5ег

Азп

ТНг

195

200

205

Ьуз

Vа1

Азр

Ьуз

Ьуз

Vа1

С1и

Рго

Ьуз

5ег

Суз

Азр

Ьуз

ТНг

НЬз

ТНг

210

215

220

Суз

Рго

Рго

Суз

Рго

А1а

Рго

С1и

Ьеи

Ьеи

С1у

С1у

Рго

5ег

Vа1

РНе

225

230

235

240

Ьеи

РНе

Рго

Рго

Ьуз

Рго

Ьуз

Азр

ТНг

Ьеи

МеЬ

11е

5ег

Агд

ТНг

Рго

245

250

255

С1и

Vа1

ТНг

Суз

Vа1

Vа1

Vа1

Азр

Vа1

5ег

НЬз

С1и

Азр

Рго

С1и

Vа1

260

265

270

Ьуз

РНе

Азп

Тгр

Туг

Vа1

Азр

С1у

Vа1

С1и

Vа1

НЬз

Азп

А1а

Ьуз

ТНг

275

280

285

Ьуз

Рго

Агд

С1и

С1и

С1п

Туг

Азп

5ег

ТНг

Туг

Агд

Vа1

Vа1

5ег

Vа1

290

295

300

Ьеи

ТНг

Vа1

Ьеи

НЬз

С1п

Азр

Тгр

Ьеи

Азп

С1у

Ьуз

С1и

Туг

Ьуз

Суз

305 310 315 320

- 61 026119

^уδ

Vа1

5ег

Αδη

^уδ Α^ 325

Феи Рго Α^ Рго 11е С1и 330

^Υδ

ТНг

11е 335

5ег

Α^

С1у

С1п

Рго

Αι-д

С1и

Рго

С1п

Vа1

Туг

ТНг

Феи

Рго

Рго

340

345

350

5ег

Αι-д

Αδρ

С1и

Феи

ТНг

^Υδ

Αδη

С1п

Vа1

5ег

Феи

ТНг

Суδ

Феи

Vа1

355

360

365

^уδ

С1у

РНе

Туг

Рго

5ег

Αδρ

11е

Α^

Vа1

С1и

Ερ

С1и

5ег

Αδη

С1у

370

375

380

С1п

Рго

С1и

Αδη

Αδη

Туг

^Υδ

ТНг

ТНг

Рго

Рго

Vа1

Феи

Αδρ

5ег

Αδρ

385

390

395

400

С1у

5ег

РНе

РНе

Феи

Туг

5ег

^Υδ

Феи

ТНг

Vа1

Αδρ

^Υδ

5ег

Αι-д

Ερ

405

410

415

С1п

С1п

С1у

Αδη

Vа1

РНе

5ег

Суδ

5ег

Vа1

Мек

Ηΐδ

С1и

Α^

Феи

Ηΐδ

420

425

430

Αδη

Ηΐδ

Туг

ТНг

С1п

^Υδ

5ег

Феи

5ег

Феи

5ег

Рго

С1у

^Υδ

435

440

445

<210> 54 <211> 645 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ген Ф-цепи антитела против ΙΦ-23Κ человека <400> 54

дасакссада	кдасссадкс	кссккссасс	скдкскдсдк	скдкаддада	сададксасс	60
аксасккдсс	дддссадкса	дадксккадк	ааккддккдд	сскддкакса	дсадааасса	120
дддааадссс	скааасксск	дакскакаад	дсдкскадкк	кадааадкдд	ддксссакса	180
аддкксадсд	дсадкддакс	кдддасадас	кксаскскса	ссаксадсдд	сскдсадсск	240
дакдаккккд	саасккакка	скдссаасад	какдакаккк	акссксддас	дкксддссаа	300
дддассаадд	кддаааксаа	асддаскдкд	дскдсассак	скдкскксак	скксссдсса	360
кскдакдадс	адккдааакс	кддааскдсс	кскдккдкдк	дсскдскдаа	каасккскак	420
сссадададд	ссааадкаса	дкддааддкд	дакаасдссс	кссааксддд	каасксссад	480
дададкдкса	сададсадда	садсааддас	адсасскаса	дссксадсад	сассскдасд	540

- 62 026119 скдадсааад садаскасда дааасасааа дкскасдсск дсдаадксас ссаксадддс скдадсксдс ссдксасааа дадскксаас аддддададк дккад

600

645 <210> 55 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ь-цепь антитела против И-23К человека <400> 55

Азр 1

11е С1п

Мек ТНг 5

С1п 5ег Рго 5ег ТНг Ьеи 5ег А1а 5ег Vа1 С1у

10

15

Азр

Агд

Vа1

ТНг

11е

ТНг

Суз

Агд

А1а

5ег

С1п

5ег

Ьеи

5ег

Азп

Тгр

20

25

30

Ьеи

А1а

Тгр

Туг

С1п

С1п

Ьуз

Рго

С1у

Ьуз

А1а

Рго

Ьуз

Ьеи

Ьеи

11е

35

40

45

Туг

Ьуз

А1а

5ег

5ег

Ьеи

С1и

5ег

С1у

Vа1

Рго

5ег

Агд

РНе

5ег

С1у

50

55

60

5ег

С1у

5ег

С1у

ТНг

Азр

РНе

ТНг

Ьеи

ТНг

11е

5ег

С1у

Ьеи

С1п

Рго

65

70

75

80

Азр

Азр

РНе

А1а

ТНг

Туг

Туг

Суз

С1п

С1п

Туг

Азр

11е

Туг

Рго

Агд

85

90

95

ТНг

РНе

С1у

С1п

С1у

ТНг

Ьуз

Vа1

С1и

11е

Ьуз

Агд

ТНг

Vа1

А1а

А1а

100

105

110

Рго

5ег

Vа1

РНе

11е

РНе

Рго

Рго

5ег

Азр

С1и

С1п

Ьеи

Ьуз

5ег

С1у

115

120

125

ТНг

А1а

5ег

Vа1

Vа1

Суз

Ьеи

Ьеи

Азп

Азп

РНе

Туг

Рго

Агд

С1и

А1а

130

135

140

Ьуз

Vа1

С1п

Тгр

Ьуз

Vа1

Азр

Азп

А1а

Ьеи

С1п

5ег

С1у

Азп

5ег

С1п

145

150

155

160

С1и

5ег

Vа1

ТНг

С1и

С1п

Азр

5ег

Ьуз

Азр

5ег

ТНг

Туг

5ег

Ьеи

5ег

165

170

175

- 63 026119

5ег ТНг Ьеи ТНг

Ьеи 5ег

Ьуз

А1а

Азр 185

Туг С1и

Ьуз

Н1з 1_уз 190

Vа1

Туг

180

А1а

Суз

С1и

Vа1

ТНг

Н1з

С1п

С1у

Ьеи

5ег

5ег

Рго

Vа1

ТНг

Ьуз

5ег

195

200

205

РНе

Азп

Агд

С1у

С1и

Суз

210 <210> 56 <211> 1341 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ген Η-цепи антитела против И-23К человека <400> 56

саддГссада	ГддГасааГс	Гддддссдад	дГдаададдс	сГддддссГс	адГдааддГс	60
ГссГдсаадд	ГГГссддаГа	сасссГсааГ	дааГГаддса	ГасасГдддГ	дсдасаддсГ	120
ссГддаааад	ддсГГдадГд	даГдддаддГ	ГГГдаГссГд	аасаГддГаа	ааГааГсГас	180
дсасададдГ	Гссадддсад	асГсассаГд	сссдаддаса	саГсГасада	сасадссГас	240
аГддаасГда	дсадссГдас	аГсГдаддас	асддссдГдГ	аГГасГдГдс	сасадГддсГ	300
дссссссГГд	асГасГдддд	ссадддаасс	сГддГсассд	ГсГссГсадс	сГссассаад	360
ддсссаГсдд	ГсГГсссссГ	ддсасссГсс	Гссаададса	ссГсГддддд	сасадсддсс	420
сГдддсГдсс	ГддГсаадда	сГасГГсссс	даассддГда	сддГдГсдГд	даасГсаддс	480
дсссГдасса	дсддсдГдса	сассГГсссд	дсГдГссГас	адГссГсадд	асГсГасГсс	540
сГГадГадсд	ГддГдассдГ	дсссГссадс	адсГГдддса	сссадассГа	саГсГдсаас	600
дГдааГсаса	адсссадсаа	сассааддГд	дасаадааад	ГГдадсссаа	аГсГГдГдас	660
аааасГсаса	саГдсссасс	дГдсссадса	ссГдаасГсс	Гддддддасс	дГсадГсГГс	720
сГсГГссссс	саааасссаа	ддасасссГс	аГдаГсГссс	ддассссГда	ддГсасаГдс	780
дГддГддГдд	асдГдадсса	сдаадасссГ	даддГсаадГ	ГсаасГддГа	сдГддасддс	840
дГддаддГдс	аГааГдссаа	дасааадссд	сдддаддадс	адГасаасад	сасдГассдГ	900
дГддГсадсд	ГссГсассдГ	ссГдсассад	дасГддсГда	аГддсаадда	дГасаадГдс	960
ааддГсГсса	асааадсссГ	сссадссссс	аГсдадаааа	ссаГсГссаа	адссаааддд	1020
садссссдад	аассасаддГ	дГасасссГд	сссссаГссс	дддаГдадсГ	дассаадаас	1080

- 64 026119

саддксадсс	кдасскдсск ддксаааддс ккскакссса дсдасаксдс сдкддадкдд	1140
дададсаакд	ддсадссдда даасааскас аадассасдс сксссдкдск ддаскссдас	1200
ддскссккск	ксскскасад саадсксасс дкддасаада дсаддкддса дсаддддаас	1260
дкскксксак	дскссдкдак дсакдаддск скдсасаасс аскасасдса даададсскс	1320
кссскдкскс	сдддкааакд а	1341

<210> 57 <211> 446 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Н-цепь антитела против И-23К человека <400> 57

С1п 7а1 С1п 1

Мек

7а1 С1п 5ег С1у 5

А1а С1и 7а1 Ьуз Агд Рго С1у А1а

10

15

5ег

7а1

Ьуз

7а1

5ег

Суз

Ьуз

7а1

5ег

С1у

Туг

ТНг

Ьеи

Азп

С1и

Ьеи

20

25

30

С1у

11е

Н1з

Тгр

7а1

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1у

Ьеи

С1и

Тгр

Мек

35

40

45

С1у

С1у

РНе

Азр

Рго

С1и

Н1з

С1у

Ьуз

11е

11е

Туг

А1а

С1п

Агд

РНе

50

55

60

С1п

С1у

Агд

Ьеи

ТНг

Мек

Рго

С1и

Азр

ТНг

5ег

ТНг

Азр

ТНг

А1а

Туг

65

70

75

80

Мек

С1и

Ьеи

5ег

5ег

Ьеи

ТНг

5ег

С1и

Азр

ТНг

А1а

7а1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

ТНг

7а1

А1а

А1а

Рго

Ьеи

Азр

Туг

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТНг

Ьеи

7а1

100

105

110

ТНг

7а1

5ег

5ег

А1а

5ег

ТНг

Ьуз

С1у

Рго

5ег

7а1

РНе

Рго

Ьеи

А1а

115

120

125

Рго

5ег

5ег

Ьуз

5ег

ТНг

5ег

С1у

С1у

ТНг

А1а

А1а

Ьеи

С1у

Суз

Ьеи

130

135

140

- 65 026119

7а1 145

Ьуз

Азр

Туг РНе

Рго 150

С1и Рго 7а1 ТНг 7а1 5ег Тгр Азп 5ег С1у

155

160

А1а

Ьеи

ТНг

5ег

С1у

7а1

НЬз

ТНг

РНе

Рго

А1а

7а1

Ьеи

С1п

5ег

5ег

165

170

175

С1у

Ьеи

Туг

5ег

Ьеи

5ег

5ег

7а1

7а1

ТНг

7а1

Рго

5ег

5ег

5ег

Ьеи

180

185

190

С1у

ТНг

С1п

ТНг

Туг

11е

Суз

Азп

7а1

Азп

НЬз

Ьуз

Рго

5ег

Азп

ТНг

195

200

205

Ьуз

7а1

Азр

Ьуз

Ьуз

7а1

С1и

Рго

Ьуз

5ег

Суз

Азр

Ьуз

ТНг

НЬз

ТНг

210

215

220

Суз

Рго

Рго

Суз

Рго

А1а

Рго

С1и

Ьеи

Ьеи

С1у

С1у

Рго

5ег

7а1

РНе

225

230

235

240

Ьеи

РНе

Рго

Рго

Ьуз

Рго

Ьуз

Азр

ТНг

Ьеи

МеЬ

11е

5ег

Агд

ТНг

Рго

245

250

255

С1и

7а1

ТНг

Суз

7а1

7а1

7а1

Азр

7а1

5ег

НЬз

С1и

Азр

Рго

С1и

7а1

260

265

270

Ьуз

РНе

Азп

Тгр

Туг

7а1

Азр

С1у

7а1

С1и

7а1

НЬз

Азп

А1а

Ьуз

ТНг

275

280

285

Ьуз

Рго

Агд

С1и

С1и

С1п

Туг

Азп

5ег

ТНг

Туг

Агд

7а1

7а1

5ег

7а1

290

295

300

Ьеи

ТНг

7а1

Ьеи

НЬз

С1п

Азр

Тгр

Ьеи

Азп

С1у

Ьуз

С1и

Туг

Ьуз

Суз

305

310

315

320

Ьуз

7а1

5ег

Азп

Ьуз

А1а

Ьеи

Рго

А1а

Рго

11е

С1и

Ьуз

ТНг

11е

5ег

325

330

335

Ьуз

А1а

Ьуз

С1у

С1п

Рго

Агд

С1и

Рго

С1п

7а1

Туг

ТНг

Ьеи

Рго

Рго

340

345

350

5ег

Агд

Азр

С1и

Ьеи

ТНг

Ьуз

Азп

С1п

7а1

5ег

Ьеи

ТНг

Суз

Ьеи

7а1

355

360

365

Ьуз

С1у

РНе

Туг

Рго

5ег

Азр

11е

А1а

7а1

С1и

Тгр

С1и

5ег

Азп

С1у

370

375

380

- 66 026119

С1п Рго 385

С1и Азп Азп

Туг Ьуз ТНг ТНг Рго Рго Vа1

Ьеи

Азр

5ег

Азр 400

390

395

С1у

5ег

РНе

РНе

Ьеи

Туг

5ег

Ьуз

Ьеи

ТНг

Vа1

Азр

Ьуз

5ег

Агд

Тгр

405

410

415

С1п

С1п

С1у

Азп

Vа1

РНе

5ег

Суз

5ег

Vа1

Ме!

Н1з

С1и

А1а

Ьеи

Н1з

420

425

430

Азп

Н1з

Туг

ТНг

С1п

Ьуз

5ег

Ьеи

5ег

Ьеи

5ег

Рго

С1у

Ьуз

435

440

445

<210> 58 <211> 645 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ген Ь-цепи антитела против И-23К человека <400> 58

даса!ссада	!дасссад!с	!сс!!ссасс	с!д!с!дса!	с!д!аддада	садад!сасс	60
а!сас!!дсс	дддссад!са	дад!а!!ад!	адс!дд!!дд	сс!дд!а!са	дсадааасса	120
дддааадссс	с!ааас!сс!	да!с!а!аад	дсд!с!ад!!	!адааад!дд	дд!ссса!са	180
ада!!садсд	дсад!дда!с	!дддасадад	!!сас!с!са	сса!садсад	сс!дсадсс!	240
да!да!!!!д	сдас!!а!!а	с!дссаасад	!а!да!а!!!	а!!сд!ддас	д!!сддссаа	300
дддассаадд	!ддааа!саа	ссддас!д!д	дс!дсасса!	с!д!с!!са!	с!!сссдсса	360
!с!да!дадс	ад!!дааа!с	!ддаас!дсс	!с!д!!д!д!	дсс!дс!даа	!аас!!с!а!	420
сссадададд	ссааад!аса	д!ддаадд!д	да!аасдссс	!ссаа!сддд	!аас!сссад	480
дадад!д!са	сададсадда	садсааддас	адсасс!аса	дсс!садсад	сассс!дасд	540
с!дадсааад	садас!асда	дааасасааа	д!с!асдсс!	дсдаад!сас	сса!садддс	600
с!дадс!сдс	ссд!сасааа	дадс!!саас	аддддадад!	д!!ад		645

<210> 59 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Ген Ь-цепи антитела против И-23К человека

- 67 026119 <400> 59

Азр 1

11е С1п МеТ

ТНг 5

С1п 5ег

Рго 5ег

ТНг 10

Ьеи 5ег А1а

5ег

Vа1 15

С1у

Азр

Агд

Vа1

ТНг

11е

ТНг

Суз

Агд

А1а

5ег

С1п

5ег

11е

5ег

5ег

Тгр

20

25

30

Ьеи

А1а

Тгр

Туг

С1п

С1п

Ьуз

Рго

С1у

Ьуз

А1а

Рго

Ьуз

Ьеи

Ьеи

11е

35

40

45

Туг

Ьуз

А1а

5ег

5ег

Ьеи

С1и

5ег

С1у

Vа1

Рго

5ег

Агд

РНе

5ег

С1у

50

55

60

5ег

С1у

5ег

С1у

ТНг

С1и

РНе

ТНг

Ьеи

ТНг

11е

5ег

5ег

Ьеи

С1п

Рго

65

70

75

80

Азр

Азр

РНе

А1а

ТНг

Туг

Туг

Суз

С1п

С1п

Туг

Азр

11е

Туг

5ег

Тгр

85

90

95

ТНг

РНе

С1у

С1п

С1у

ТНг

Ьуз

Vа1

С1и

11е

Азп

Агд

ТНг

Vа1

А1а

А1а

100

105

110

Рго

5ег

Vа1

РНе

11е

РНе

Рго

Рго

5ег

Азр

С1и

С1п

Ьеи

Ьуз

5ег

С1у

115

120

125

ТНг

А1а

5ег

Vа1

Vа1

Суз

Ьеи

Ьеи

Азп

Азп

РНе

Туг

Рго

Агд

С1и

А1а

130

135

140

Ьуз

Vа1

С1п

Тгр

Ьуз

Vа1

Азр

Азп

А1а

Ьеи

С1п

5ег

С1у

Азп

5ег

С1п

145

150

155

160

С1и

5ег

Vа1

ТНг

С1и

С1п

Азр

5ег

Ьуз

Азр

5ег

ТНг

Туг

5ег

Ьеи

5ег

165

170

175

5ег

ТНг

Ьеи

ТНг

Ьеи

5ег

Ьуз

А1а

Азр

Туг

С1и

Ьуз

Ньз

Ьуз

Vа1

Туг

180

185

190

А1а

Суз

С1и

Vа1

ТНг

Ньз

С1п

С1у

Ьеи

5ег

5ег

Рго

Vа1

ТНг

Ьуз

5ег

195

200

205

РНе

Азп

Агд

С1у

С1и

Суз

210

- 68 026119 <210> 60 <211> 39 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетический праймер <400> 60 сассаГдааГ саддГсасГа ГГсааГддда ГдсадГааГ 39 <210> 61 <211> 44 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетический праймер <400> 61 асаГадсддс сдссГасГГГ ГссаададГд аааГссГаГГ даад 44

Claims (14)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Антитело против 1Ь-23К человека или фрагмент антитела против 1Ь-23К, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности §Еф ГО N0:5, и вариабельную область легкой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности §Еф ГО N0:7.
2. 2. Антитело против ГО-23К человека или фрагмент антитела против ГО-23К по п.1, в котором константная область тяжелой цепи антитела или фрагмента антитела является константной областью 1§γ1 человека.
3. 3. Антитело против ГО-23К человека или фрагмент антитела против ГО-23К по п.1, в котором константная область легкой цепи антитела или фрагмента антитела является константной областью 1§к человека.
4. 4. Антитело против ГО-23К человека или фрагмент антитела против ГО-23К по п.1, в котором константная область тяжелой цепи антитела или фрагмента антитела является константной областью 1§γ1 человека и константная область легкой цепи антитела или фрагмента антитела является константной областью 1дк человека.
5. 5. Фрагмент антитела против ГО-23К по любому из пп.1-4, где фрагмент представляет собой одноцепочечный фрагмент вариабельной области, РаЬ, РаЬ' и Р(аЬ')₂.
6. 6. Антитело против ГО-23К человека по п.1, содержащее тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности §Еф ГО N0:33, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности §Еф ГО N0:35.
7. 7. Полинуклеотид, содержащий последовательность, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи антитела по п.1.
8. 8. Полинуклеотид, содержащий последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи антитела по п.1.
9. 9. Вектор экспрессии, содержащий полинуклеотид по п.7 и/или 8.
10. 10. Клетка-хозяин для получения антитела против ГО-23К человека или фрагмента антитела против ГО-23К, где указанная клетка-хозяин выбрана из группы, состоящей из следующих (а) и (Ь):

    (а) клетка-хозяин, трансформированная вектором экспрессии, содержащим полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует вариабельную область тяжелой цепи антитела или фраг- 69 026119 мента антитела по п.1, и полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует вариабельную область легкой цепи антитела или фрагмента антитела по п.1; и (Ь) клетка-хозяин, трансформированная вектором экспрессии, содержащим полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует вариабельную область тяжелой цепи антитела или фрагмента антитела по п.1, и вектором экспрессии, содержащим полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует вариабельную область легкой цепи антитела или фрагмента антитела по п.1.
11. 11. Клетка-хозяин для получения антитела против 1Ь-23К человека, где указанная клетка-хозяин выбрана из группы, состоящей из следующих (а) и (Ь):

    (a) клетка-хозяин, трансформированная вектором экспрессии, содержащим полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует тяжелую цепь антитела по п.6, и полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует легкую цепь антитела или фрагмента антитела по п.6; и (b) клетка-хозяин, трансформированная вектором экспрессии, содержащим полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует тяжелую цепь антитела по п.6, и вектором экспрессии, содержащим полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует легкую цепь антитела по п.6.
12. 12. Антитело против 1Ь-23К человека или фрагмент антитела против 1Ь-23К, полученные способом, включающим культивирование клетки-хозяина, чтобы обеспечить экспрессию антитела или фрагмента антитела, где клетку-хозяин выбирают из группы, состоящей из следующих (а) и (Ь):

    (a) клетка-хозяин, трансформированная вектором экспрессии, содержащим полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует вариабельную область тяжелой цепи антитела или фрагмента антитела по п.1, и полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует вариабельную область легкой цепи антитела или фрагмента антитела по п.1; и (b) клетка-хозяин, трансформированная вектором экспрессии, содержащим полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует вариабельную область тяжелой цепи антитела или фрагмента антитела по п.1, и вектор экспрессии, содержащий полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует вариабельную область легкой цепи антитела или фрагмента антитела по п.1.
13. 13. Антитело против 1Ь-23К человека или фрагмент антитела по п.12, где фрагмент представляет собой одноцепочечный фрагмент вариабельной области, РаЬ, РаЬ' и Р(аЬ')₂.
14. 14. Антитело против 1Ь-23К человека, полученное способом, включающим культивирование клетки-хозяина, чтобы обеспечить экспрессию антитела, где клетку-хозяин выбирают из группы, состоящей из следующих (а) и (Ь):

    (a) клетка-хозяин, трансформированная вектором экспрессии, содержащим полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует тяжелую цепь антитела по п.6, и полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует легкую цепь антитела по п.6; и (b) клетка-хозяин, трансформированная вектором экспрессии, содержащим полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует тяжелую цепь антитела по п.6, и вектор экспрессии, содержащий полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует легкую цепь антитела по п.6.