EA024074B1 - Водная адъювантная композиция, содержащая неионный агент, обеспечивающий изотоничность, иммуногенная композиция и набор на её основе и способ приготовления иммуногенной композиции - Google Patents
Водная адъювантная композиция, содержащая неионный агент, обеспечивающий изотоничность, иммуногенная композиция и набор на её основе и способ приготовления иммуногенной композиции Download PDFInfo
- Publication number
- EA024074B1 EA024074B1 EA201190286A EA201190286A EA024074B1 EA 024074 B1 EA024074 B1 EA 024074B1 EA 201190286 A EA201190286 A EA 201190286A EA 201190286 A EA201190286 A EA 201190286A EA 024074 B1 EA024074 B1 EA 024074B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- composition
- antigen
- concentration
- adjuvant
- sorbitol
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 286
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 title claims abstract description 109
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 title claims abstract description 59
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 title claims abstract description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 4
- 239000000556 agonist Substances 0.000 claims abstract description 36
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 claims abstract description 22
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 claims abstract description 22
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 claims abstract description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 21
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 92
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 92
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 90
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 54
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 54
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims description 54
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 53
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 45
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 36
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 25
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 24
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 23
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 claims description 8
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 claims description 8
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 claims description 6
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 2
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 claims description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 2
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 abstract 2
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 abstract 1
- 108010060804 Toll-Like Receptor 4 Proteins 0.000 abstract 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 abstract 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 62
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 48
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 31
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 31
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 28
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 26
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 26
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 26
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 21
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 19
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 18
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 18
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 17
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 15
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000000039 congener Substances 0.000 description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 14
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 13
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 13
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 13
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 13
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 13
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 13
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 12
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 12
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 11
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 11
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 10
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 10
- 230000004044 response Effects 0.000 description 10
- -1 sodium chloride Chemical class 0.000 description 10
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 9
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 9
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 9
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 9
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 9
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 8
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 7
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 7
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 7
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 7
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000004695 Polyether sulfone Substances 0.000 description 6
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 6
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 6
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 6
- YHHSONZFOIEMCP-UHFFFAOYSA-O phosphocholine Chemical compound C[N+](C)(C)CCOP(O)(O)=O YHHSONZFOIEMCP-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 6
- 229920006393 polyether sulfone Polymers 0.000 description 6
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 6
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 5
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 5
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 5
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- 102100034613 Annexin A2 Human genes 0.000 description 4
- 108090000668 Annexin A2 Proteins 0.000 description 4
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 4
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- VDZOOKBUILJEDG-UHFFFAOYSA-M tetrabutylammonium hydroxide Chemical compound [OH-].CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC VDZOOKBUILJEDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 3
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 3
- OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N (22E)-(24xi)-24-methylcholesta-5,22-dien-3beta-ol Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)C=CC(C)C(C)C)C1(C)CC2 OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 description 2
- SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 0.000 description 2
- OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 7-Dehydrostigmasterol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CC(CC)C(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100004408 Arabidopsis thaliana BIG gene Proteins 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 101100485279 Drosophila melanogaster emb gene Proteins 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 102100029095 Exportin-1 Human genes 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- SUHOOTKUPISOBE-UHFFFAOYSA-N O-phosphoethanolamine Chemical compound NCCOP(O)(O)=O SUHOOTKUPISOBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 2
- 101100485284 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) CRM1 gene Proteins 0.000 description 2
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 2
- 101150094313 XPO1 gene Proteins 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- LGJMUZUPVCAVPU-UHFFFAOYSA-N beta-Sitostanol Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCC(CC)C(C)C)C1(C)CC2 LGJMUZUPVCAVPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K dioxido-sulfanylidene-sulfido-$l^{5}-phosphane Chemical compound [O-]P([O-])([S-])=S NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 108700002148 exportin 1 Proteins 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 239000008350 hydrogenated phosphatidyl choline Substances 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 229940042880 natural phospholipid Drugs 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 150000008105 phosphatidylcholines Chemical class 0.000 description 2
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 2
- 229960000502 poloxamer Drugs 0.000 description 2
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 2
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 2
- 230000000601 reactogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000008348 synthetic phosphatidyl choline Substances 0.000 description 2
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- RQOCXCFLRBRBCS-UHFFFAOYSA-N (22E)-cholesta-5,7,22-trien-3beta-ol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CCC(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 RQOCXCFLRBRBCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CITHEXJVPOWHKC-UUWRZZSWSA-N 1,2-di-O-myristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC CITHEXJVPOWHKC-UUWRZZSWSA-N 0.000 description 1
- KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 0.000 description 1
- IJFVSSZAOYLHEE-SSEXGKCCSA-N 1,2-dilauroyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCC IJFVSSZAOYLHEE-SSEXGKCCSA-N 0.000 description 1
- YFWHNAWEOZTIPI-DIPNUNPCSA-N 1,2-dioctadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC YFWHNAWEOZTIPI-DIPNUNPCSA-N 0.000 description 1
- NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 0.000 description 1
- HTSGKJQDMSTCGS-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(4-chlorophenyl)-2-(4-methylphenyl)sulfonylbutane-1,4-dione Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)C(C(=O)C=1C=CC(Cl)=CC=1)CC(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 HTSGKJQDMSTCGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IJFVSSZAOYLHEE-UHFFFAOYSA-N 2,3-di(dodecanoyloxy)propyl 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCC IJFVSSZAOYLHEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ISDBCJSGCHUHFI-UMZPFTBHSA-N 2,3-di-O-phytanyl-sn-glycerol Chemical compound CC(C)CCC[C@@H](C)CCC[C@@H](C)CCC[C@@H](C)CCOC[C@@H](CO)OCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C ISDBCJSGCHUHFI-UMZPFTBHSA-N 0.000 description 1
- SPSSULHKWOKEEL-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trinitrotoluene Chemical compound CC1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O SPSSULHKWOKEEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019737 Animal fat Nutrition 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N Arginine Chemical compound OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N D-arabinitol Chemical compound OC[C@@H](O)C(O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N Ergosterol Natural products CC(C)[C@@H](C)C=C[C@H](C)[C@H]1CC[C@H]2C3=CC=C4C[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@@H]3CC[C@]12C DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N 0.000 description 1
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100039250 Essential MCU regulator, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 101000813097 Homo sapiens Essential MCU regulator, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 101000756628 Mus musculus Actin, cytoplasmic 1 Proteins 0.000 description 1
- BZQFBWGGLXLEPQ-UHFFFAOYSA-N O-phosphoryl-L-serine Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(O)=O BZQFBWGGLXLEPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 101150113550 Prl3d1 gene Proteins 0.000 description 1
- JVWLUVNSQYXYBE-UHFFFAOYSA-N Ribitol Natural products OCC(C)C(O)C(O)CO JVWLUVNSQYXYBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- HZYXFRGVBOPPNZ-UHFFFAOYSA-N UNPD88870 Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)=CCC(CC)C(C)C)C1(C)CC2 HZYXFRGVBOPPNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MECHNRXZTMCUDQ-UHFFFAOYSA-N Vitamin D2 Natural products C1CCC2(C)C(C(C)C=CC(C)C(C)C)CCC2C1=CC=C1CC(O)CCC1=C MECHNRXZTMCUDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNKAWJBJQDLSFF-YEUCEMRASA-N [2-({2,3-bis[(9z)-octadec-9-enoyloxy]propyl phosphonato}oxy)ethyl]trimethylazanium Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC SNKAWJBJQDLSFF-YEUCEMRASA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ISDBCJSGCHUHFI-UHFFFAOYSA-N archaeol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCOCC(CO)OCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C ISDBCJSGCHUHFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 229940076810 beta sitosterol Drugs 0.000 description 1
- NJKOMDUNNDKEAI-UHFFFAOYSA-N beta-sitosterol Natural products CCC(CCC(C)C1CCC2(C)C3CC=C4CC(O)CCC4C3CCC12C)C(C)C NJKOMDUNNDKEAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000003857 carboxamides Chemical class 0.000 description 1
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- UHZZMRAGKVHANO-UHFFFAOYSA-M chlormequat chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CCCl UHZZMRAGKVHANO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical class NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 229950006137 dexfosfoserine Drugs 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 229960003724 dimyristoylphosphatidylcholine Drugs 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical group 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 1
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 239000006274 endogenous ligand Substances 0.000 description 1
- 229960002061 ergocalciferol Drugs 0.000 description 1
- DNVPQKQSNYMLRS-SOWFXMKYSA-N ergosterol Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H](CC[C@]3([C@H]([C@H](C)/C=C/[C@@H](C)C(C)C)CC[C@H]33)C)C3=CC=C21 DNVPQKQSNYMLRS-SOWFXMKYSA-N 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 1
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- NLFBCYMMUAKCPC-KQQUZDAGSA-N ethyl (e)-3-[3-amino-2-cyano-1-[(e)-3-ethoxy-3-oxoprop-1-enyl]sulfanyl-3-oxoprop-1-enyl]sulfanylprop-2-enoate Chemical compound CCOC(=O)\C=C\SC(=C(C#N)C(N)=O)S\C=C\C(=O)OCC NLFBCYMMUAKCPC-KQQUZDAGSA-N 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000006277 exogenous ligand Substances 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N galactitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N glycerol 1-phosphate Chemical compound OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002327 glycerophospholipids Chemical class 0.000 description 1
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical class O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010212 intracellular staining Methods 0.000 description 1
- 238000004189 ion pair high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002356 laser light scattering Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical class O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N monothioglycerol Chemical compound OCC(O)CS PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000010494 opalescence Effects 0.000 description 1
- 201000003733 ovarian melanoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008823 permeabilization Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 1
- BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N phosphoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)COP(O)(O)=O BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 239000008349 purified phosphatidyl choline Substances 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-ZXFHETKHSA-N ribitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-ZXFHETKHSA-N 0.000 description 1
- 238000012284 sample analysis method Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- KZJWDPNRJALLNS-VJSFXXLFSA-N sitosterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CC[C@@H](CC)C(C)C)[C@@]1(C)CC2 KZJWDPNRJALLNS-VJSFXXLFSA-N 0.000 description 1
- 229950005143 sitosterol Drugs 0.000 description 1
- 239000012475 sodium chloride buffer Substances 0.000 description 1
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 150000003408 sphingolipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- HCXVJBMSMIARIN-PHZDYDNGSA-N stigmasterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)/C=C/[C@@H](CC)C(C)C)[C@@]1(C)CC2 HCXVJBMSMIARIN-PHZDYDNGSA-N 0.000 description 1
- 229940032091 stigmasterol Drugs 0.000 description 1
- 235000016831 stigmasterol Nutrition 0.000 description 1
- BFDNMXAIBMJLBB-UHFFFAOYSA-N stigmasterol Natural products CCC(C=CC(C)C1CCCC2C3CC=C4CC(O)CCC4(C)C3CCC12C)C(C)C BFDNMXAIBMJLBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 125000000185 sucrose group Chemical group 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- MECHNRXZTMCUDQ-RKHKHRCZSA-N vitamin D2 Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)/C=C/[C@H](C)C(C)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C MECHNRXZTMCUDQ-RKHKHRCZSA-N 0.000 description 1
- 235000001892 vitamin D2 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011653 vitamin D2 Substances 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
- A61K31/047—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates having two or more hydroxy groups, e.g. sorbitol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55577—Saponins; Quil A; QS21; ISCOMS
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Virology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Предложены водная адъювантная и иммуногенная композиции, содержащие агонист TLR-4 (Toll-подобного рецептора 4) и сапонин в составе липосом, и неионный агент, обеспечивающий изотоничность, где ионная сила адъювантной композиции составляет менее 100 мМ. Также предложен способ приготовления иммуногенной композиции и набор для использования в таком способе, содержащий адъювантную композицию по изобретению.
Description
Область изобретения
Настоящее изобретение относится к водным адъювантным композициям, содержащим неионный агент, обеспечивающий изотоничность и имеющим низкие концентрации соли, в частности имеющим концентрацию хлорида натрия 100 мМ или менее. Настоящее изобретение также относится к иммуногенным композициям, содержащим антиген или антигенный препарат и указанные водные адъювантные композиции.
Предшествующий уровень техники
Адъюванты иногда используют для улучшения иммунного ответа на любой заданный антиген. Тем не менее, включение адъювантов в вакцинную или иммуногенную композицию усложняет приготовление компонентов, а также усложняет распределение и приготовления вакцинной композиции. Разработчик композиции должен учитывать приготовление каждого адъювантного компонента, а также антигенного компонента. В частности, необходимо учитывать совместимость антигенного компонента с адъювантным компонентом. Это особенно необходимо в том случае, когда лиофилизированные антигены или антигенные препараты предназначены для разведения адъювантным препаратом. В этом случае важно, чтобы буфер адъювантного препарата подходил для антигена или антигенного препарата, и чтобы адъювант не затрагивал иммуногенность или растворимость антигена.
Краткое изложение сущности изобретения
Авторы настоящего изобретения обнаружили, что некоторые антигены особенно чувствительны к явлению, известному как высаливание, которое может быть определено как осаждение белка из его раствора в результате насыщения солью, такой как хлорид натрия. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что чувствительные антигены могут агрегироваться и осаждаться при низкой концентрации хлорида натрия, такой как 150 мМ.
Таким образом, согласно настоящему изобретению предложена водная адъювантная композиция, содержащая: (а) агонист ТЬК-4 (То11-подобного рецептора 4) и сапонин в составе липосом и (б) неионный агент, обеспечивающий изотоничность, где ионная сила адъювантной композиции составляет менее 100 мМ.
Предпочтительно неионный агент, обеспечивающий изотоничность, в водной адъювантной композиции по изобретению представляет собой полиол.
Более предпочтительно полиол представляет собой сорбит или сахарозу.
Предпочтительно указанный агонист ТЬК-4 в водной адъювантной композиции по изобретению представляет собой 3Э-МРБ (3-деацилированный монофосфориллипид А).
Предпочтительно указанный сапонин в водной адъювантной композиции по изобретению представляет собой ЦиЛА или его производное.
Более предпочтительно производное 0ш1А представляет собой Ц§21.
Согласно настоящему изобретению также предложена иммуногенная композиция, содержащая антиген или антигенный препарат и водную адъювантную композицию по изобретению.
Согласно настоящему изобретению также предложен способ приготовления указанной иммуногенной композиции, включающий стадию разведения лиофилизированной композиции, содержащей по меньшей мере один антиген или антигенный препарат вместе с водной адъювантной композицией по изобретению.
Согласно настоящему изобретению также предложен набор для использования в указанном способе приготовления иммуногенной композиции, содержащий (1) лиофилизированную композицию, содержащую антиген или антигенный препарат, и (2) водную адъювантную композицию по изобретению.
Предложенная водная изотоническая адъювантная композиция может быть использована для более широкого спектра белковых антигенов, включая антигены, чувствительные к высаливанию, а также нечувствительные к высаливанию.
Краткое описание графических материалов
Фиг. 1. График литической активности О §21.
Фиг. 2. Процентное содержание каждого конгенера 3Э-МРБ (3-деацилированный монофосфориллипид А) в разных композициях А§А (адъювантная система А).
Фиг. 3. Цикл сублимационной сушки, использованный для лиофилизации РКАМЬ/СрС.
Фиг. 4. Наглядное сравнение РКАМЕ (антиген, преимущественно экспрессирующийся в меланоме) и ΝΥΕ§Ο-1, разведенных в А§А (150 мМ ЫаС1) и А§А (сорбит).
Фиг. 5. Гуморальный ответ у мышей, иммунизированных РКАМЕ/СрС, приготовленными с различными адъювантными композициями, в эксперименте 1.
Фиг. 6. Противоопухолевая защита у мышей, иммунизированных РКАМЕ/СрС, приготовленными с различными адъювантными композициями, в эксперименте 1.
Фиг. 7. Гуморальный ответ у мышей, иммунизированных РКАМЕ/СрС, приготовленными с А§А (150 мМ №С1), А§А (сорбит) или жидкой композицией А§А (70 мМ №С1), в эксперименте 2.
Фиг. 8. С’Э4' ответ у мышей, иммунизированных РКАМЕ/СрС, приготовленными с А§А (150 мМ №С1), А§А (сорбит) или жидкой композицией А§А, в эксперименте 2.
- 1 024074
Фиг. 9. Противоопухолевая защита у мышей, иммунизированных РКЛМЕ/СрС, приготовленными с ΑδΑ (150 мМ ЫаС1), ΑδΑ (сорбит) или жидкой композицией ΑδΑ, в эксперименте 2.
Подробное описание изобретения
В настоящем изобретении описана замена или частичная замена агента, обеспечивающего изотоничность, который представляет собой соль, такую как хлорид натрия, в водной адъювантной композиции с неионным агентом, обеспечивающим изотоничность.
Общеизвестно, что для парентерального введения растворы должны быть физиологически изотоническими (т.е. иметь фармацевтически приемлемую осмоляльность) во избежание деформации или лизиса клеток. Агент, обеспечивающий изотоничность представляет собой соединение, которое является физиологически допустимым и придает композиции (например, иммуногенным композициям по изобретению) подходящую тоничность для предотвращения свободного прохождения воды через клеточные мембраны, находящиеся в контакте с композицией.
Известны водные адъювантные композиции, которые содержат 100 мМ хлорида натрия или более, например адъювантная система Α (ΑδΑ), раскрытая в \УО 2005/112991 и \УО 2008/142133, или липосомальные адъюванты, раскрытые в \УО 2007/068907. Как изложено в \УО 2008/142133, такие адъювантные композиции могут быть использованы в качестве разбавителя для разведения лиофилизированных композиций, содержащих антигены или антигенные препараты, перед вакцинацией. Важно, чтобы такие разведенные композиции были изотоническими, т.е. имели концентрацию соли, по существу, такую же, как в клетках организма и крови, чтобы инъекция не вызывала сморщивание или расширение клеток. Как правило, хлорид натрия используют в качестве агента, обеспечивающего изотоничность. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что некоторые антигены особенно чувствительны к высаливанию, представляющему собой процесс, в результате которого белки в растворе агрегируются или коагулируются, когда находятся растворах с высокой концентрацией соли.
Концентрация соли, при которой белковые антигены агрегируются, варьирует от белка к белку. Авторы настоящего изобретения идентифицировали группу антигенов, которые агрегируются при относительно низких концентрациях соли, например при концентрации хлорида натрия примерно 100 мМ или менее. Это означает, что некоторые известные адъювантные композиции не подходят для разведения или использования с композициями, содержащими эти антигены, поскольку происходит агрегация.
Согласно настоящему изобретению предложены водные адъювантные композиции, которые могут быть использованы с такими антигенами, т.е. антигенами, которые агрегируются при концентрациях соли хлорида натрия менее 100 мМ. Водные адъювантные композиции по изобретению содержат агонист ТЬК-4 и сапонин в липосомальной композиции и неионный агент, обеспечивающий изотоничность, где концентрация хлорида натрия в адъювантной композиции составляет менее примерно 100 мМ, например менее 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 или 15 мМ. В конкретном воплощении концентрация хлорида натрия в адъювантной композиции составляет менее 10 или 5 мМ или менее. В еще одном конкретном воплощении адъювантная композиция, по существу, не содержит хлорид натрия. По существу, не содержит означает, что концентрация хлорида натрия составляет 0 или почти 0 мМ (т.е. 1, 2 или 3 мМ).
Специалист в данной области техники легко может определить концентрацию ионов натрия (Να') и хлорид-ионов (С1-) с использованием известных методов и наборов. Например, натрий может быть определен с использованием такого набора, как набор для ферментативного анализа на натрий (номер по каталогу: ВС011ЕЛЕЕ) от Вю8ирр1у. Хлорид может быть определен с использованием такого набора, как набор для ферментативного анализа на хлорид (номер по каталогу: Вр006ЕЛЕЬ) от Вю8ирр1у.
Согласно настоящему изобретению предложена также водная изотоническая адъювантная композиция, содержащая агонист ТЬК-4, и сапонин в липосомальной композиции, и неионный агент, обеспечивающий изотоничность, где ионная сила составляет менее 100 мМ, например менее 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 или 15 мМ. В конкретном воплощении ионная сила в адъювантной композиции составляет менее 10 или 5 мМ или менее. В еще одном конкретном воплощении адъювантная композиция обладает ионной силой, которая составляет почти 0 или очень близка к 0 мМ.
Ионная сила адъюванта или иммуногенной композиции по изобретению может быть измерена с использованием способов, известных специалистам в данной области техники, например с использованием кондуктометра.
Необходимо, чтобы неионный агент, обеспечивающий изотоничность, для использования в водной адъювантной композиции по изобретению, который предназначен для объединения с антигенной композицией, был подходящим для применения у людей, а также совместимым с антигенами в антигенной композиции и совместимым также с другими компонентами адъювантной композиции.
В частности, водные адъювантные композиции должны быть такими, чтобы антигены в антигенной композиции, когда они объединены с адъювантной композицией, были способны оставаться в растворе и сохранять свою иммуногенность.
В одном из воплощений настоящего изобретения подходящие неионные агенты, обеспечивающие изотоничность, представляют собой полиолы, сахара (в частности, сахарозу, фруктозу, декстрозу или глюкозу) или аминокислоты, такие как глицин. В одном из воплощений полиол представляет собой сахарный спирт, в частности С3-6сахарный спирт. Примеры сахарных спиртов включают глицерин, эрит- 2 024074 рит, трейтол, арабит, ксилит, рибит, сорбит, маннит, дульцит и идит. В конкретном примере этого воплощения подходящий неионный агент, обеспечивающий изотоничность, представляет собой сорбит. В конкретном воплощении изобретения неионный агент, обеспечивающий изотоничность, в композициях по изобретению представляет собой сахарозу и/или сорбит.
В одном из воплощений подходящая концентрация полиола в водной адъювантной композиции составляет от примерно 3 до примерно 15% (мас./об.), в частности от примерно 3 до примерно 10% (мас./об.), например от примерно 3 до примерно 7 % (мас./об.), например от примерно 4 до примерно 6% (мас./об.). В качестве конкретного примера этого воплощения полиол представляет собой сорбит.
Водная адъювантная композиция содержит агонист То11-подобного рецептора (ТЬК) 4 и сапонин в липосомальной композиции. Это означает, что сапонин и агонист ТЬК-4 приготовлены с липосомами.
Термин липосомы в общем относится к одно- или многопластинчатым (в частности, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8-, 9- или 10-пластинчатым в зависимости от числа образованных липидных мембран) липидным структурам, вмещающим в себя водное содержимое. Липосомы и липосомные композиции известны в данной области. Липиды, которые способны образовывать липосомы, включают все вещества, обладающие жировыми или жироподобными свойствами. Липиды, которые могут составлять липиды в липосомах, могут быть выбраны из группы, включающей в себя глицериды, глицерофосфолипиды, глицерофосфинолипиды, глицерофосфонолипиды, сульфолипиды, сфинголипиды, фосфолипиды, изопренолиды, стероиды, стеарины, стерины, археолипиды, синтетические катионные липиды и углеводсодержащие липиды.
В одном из воплощений липосомы содержат фосфолипид. Подходящие фосфолипиды включают (но ими не ограничиваются) фосфохолин (РС), представляющий собой промежуточное соединение в синтезе фосфатидилхолина; природные фосфолипидные производные: яичный фосфохолин, яичный фосфохолин, соевый фосфохолин, гидрогенизированный соевый фосфохолин, сфингомиелин в качестве природных фосфолипидов; и синтетические фосфолипидные производные: фосфохолин (дидеканоил-Ьα-фосфатидилхолин [ЭЭРС], дилауроилфосфатидилхолин [ЭЬРС], димиристоилфосфатидилхолин [ЭМРС], дипальмитоилфосфатидилхолин |ЭРРС|. дистеароилфосфатидилхолин [ЭЗРС], диолеоилфосфатидилхолин [ЭОРС], 1-пальмитоил, 2-олеоилфосфатидилхолин [РОРС], диэлаидоилфосфатидилхолин [ЭЕРС]), фосфоглицерин (1,2-димиристоил-8и-глицеро-3-фосфоглицерин [ЭМРС], 1,2-дипальмитоил-8иглицеро-3-фосфоглицерин [ЭРРС], 1,2-дистеароил-8и-глицеро-3-фосфоглицерин [ЭЗРС], 1-пальмитоил2-олеоил-8и-глицеро-3-фосфоглицерин [РОРС]), фосфатидная кислота (1,2-димиристоил-8и-глицеро-3фосфатидная кислота [ЭМРА]), дипальмитоилфосфатидная кислота [ЭРРА], дистеароилфосфатидная кислота [ЭЗРА]), фосфоэтаноламин (1,2-димиристоил-8и-глицеро-3-фосфоэтаноламин [ЭМРЕ], 1,2-дипальмитоил-8и-глицеро-3 -фосфоэтаноламин [ЭРРЕ], 1,2-дистеароил-8и-глицеро-3 фосфоэтаноламин [ЭЗРЕ], 1,2-диолеоил-8и-глицеро-3-фосфоэтаноламин [ЭОРЕ]), фосфосерин, полиэтиленгликоль [РЕС] фосфолипид (тРЕС-фосфолипид, полиглицерин-фосфолипид, функционализированный фосфолипид, терминально активированный фосфолипид). В одном из воплощений липосомы содержат 1-пальмитоил-2-олеоил-глицеро-3-фосфоэтаноламин. В одном из воплощений используется высокоочищенный фосфатидилхолин, выбранный из группы, состоящей из фосфатидилхолина (яичного), гидрогенизированного фосфатидилхолина (яичного), фосфатидилхолина (соевого), гидрогенизированного фосфатидилхолина (соевого). В еще одном воплощении липосомы содержат фосфатидилэтаноламин [РОРЕ] или его производное.
Размер липосомы может варьировать от 30 нм до нескольких микрон в зависимости от фосфолипидной композиции и способа, использованного для ее приготовления. В конкретных воплощениях изобретения размер липосомы находится в диапазоне от 50 до 500 нм и в конкретных воплощениях от 50 до 200 нм. Динамическое лазерное светорассеяние является методом, используемым для измерения размера липосом, известным специалистам в данной области.
Подходящие липосомы содержат нейтральный липид, например фосфатидилхолин, который предпочтительно является некристаллическим при комнатной температуре, например фосфатидилхолин яичного желтка, диолеоилфосфатидилхолин (ЭОРС) или дилаурилфосфатидилхолин. В конкретном воплощении липосомы по настоящему изобретению содержат ЭОРС. Липосомы также могут содержать заряженный липид, который увеличивает стабильность структуры липосома-сапонин для липосом, состоящих из насыщенных липидов. В этих случаях количество заряженного липида предпочтительно составляет от 1 до 20% (мас./мас.), предпочтительно от 5 до 10%. Соотношение стерина к фосфолипиду составляет от 1 до 50% (мол./мол.), предпочтительно 20 до 25%.
Особенно подходящий сапонин для использования в настоящем изобретении представляет собой Цш1 А и его производные. Цш1 А представляет собой препарат сапонина, впервые описанный Эа18даагй е! а1. в 1974 (Заротп айщуайк, АтеЫу. £ит ГОс дс8ат!с Упикйщсйипд, νοί. 44, Зрйпдст Уейад, Ветйп, р. 243-254) как обладающий адъювантной активностью. Высокоэффективной жидкостной хроматографией (НРЬС) выделены очищенные фрагменты Онй А, которые сохраняют адъювантную активность без токсичности, ассоциированной с Цш1 А (ЕР 0362278), например ОЗ7 и ЦЗ21 (также известные как ЦА7 и ОА21). ЦЗ-21 представляет собой природный сапонин, выделенный из коры Ош11а)а каропайа Мойпа, который индуцирует С.П8+ цитотоксические Т-клетки (СТЬ), клетки Тй1 и антительный ответ с преобла- 3 024074 данием антител 1дС2а. В контексте настоящего изобретения 0821 является предпочтительным сапонином.
В подходящей форме настоящего изобретения сапониновый адъювант в иммуногенной композиции представляет собой производное 8аропапа тоПпа С|ш1 А, предпочтительно иммунологически активную фракцию 0ш1 А, такую как 08-17 или 08-21, предпочтительно 08-21.
В конкретном воплощении 0§21 используют в его менее реактогенной композиции, где он погашен экзогенным стерином, таким как, например, холестерин. Существует несколько конкретных форм менее реактогенных композиций, где 0821 погашен экзогенным холестерином. В конкретном воплощении сапонин/стерин находится в форме липосомной структуры (\О 96/33739, пример 1).
Подходящие стерины включают β-ситостерин, стигмастерин, эргостерин, эргокальциферол и холестерин. В одном из конкретных воплощений иммуногенная композиция содержит холестерин в качестве стерина. Эти стерины известны в данной области. Например, холестерин раскрыт в Мегск 1ийех, 114Ь Ей., р. 341, как природный стерин, обнаруженный в животном жире.
В тех случаях когда активная фракция сапонина представляет собой 0821, тогда соотношение О821:стерин типично составляет от 1:100 до 1:1 (мас./мас.), предпочтительно от 1:10 до 1:1 (мас./мас.) и предпочтительно от 1:5 до 1:1 (мас./мас.). Предпочтительно стерин присутствует в избытке, причем соотношение О821:стерин составляет по меньшей мере 1:2 (мас./мас.). В одном из воплощений соотношение О821:стерин составляет 1:5 (мас./мас.). Стерин предпочтительно представляет собой холестерин.
Водная адъювантная композиция содержит агонист То11-подобного рецептора 4 (ТЬК-4). Под агонистом ТЬК подразумевается компонент, способный вызывать сигнальный ответ через ТЬК-сигнальный путь, либо напрямую в качестве лиганда, либо опосредовано через образование эндогенного или экзогенного лиганда (8аЬтое е! а1., Л 2003, р. 1630-5). Агонист ТЬК-4 способен вызывать сигнальный ответ через ТЬК-4 сигнальный путь. Подходящим примером агониста ТЬК-4 является липополисахарид, предпочтительно нетоксичное производное липида А, в частности монофосфориллипид А или, более конкретно, 3-деацилированный монофосфориллипид Α (3Э-МРЬ).
3Э-МРЬ продается под наименованием МРЬ от С1ахо8тйЬК1ше Вю1одюа18 Ν.Α. и упоминается в данном документе как МРЬ или 3Э-МРЬ (см., например, патенты США № 4436727, 4877611, 4866034 и 4912094). 3Э-МРЬ стимулирует главным образом СЭ4' Т-клеточные ответы с ΙΡΝ-д (ТЫ) фенотипом. 3Э-МРЬ может быть получен способами, раскрытыми в СВ 2220211 А. Химически он представляет собой смесь 3-деацилированного монофосфориллипида А с 3, 4, 5 или 6 ацилированными цепями. В композициях по настоящему изобретению для приготовления иммуногенной композиции может быть использован 3Э-МРЬ с небольшим размером частиц. 3Э-МРЬ с небольшим размером частиц имеет такой размер частиц, который позволяет подвергать его стерилизующей фильтрации через фильтр 0,22 мкм. Такие препараты описаны в \О 94/21292. Предпочтительно для приготовления иммуногенных композиций по настоящему изобретению используют порошкообразный 3Э-МРС
Другими агонистами ТЬК-4, которые могут быть использованы, являются алкилглюкозаминидфосфаты (АСР), например агонисты, раскрытые в \О 98/50399 или в патенте США № 6303347 (где также раскрыты способы получения АСР), предпочтительно КС527 или КС529, или фармацевтически приемлемые соли АСР, которые раскрыты в патенте США № 6764840. Некоторые АСР являются агонистами ТЬК-4, и некоторые агонисты являются антагонистами ТЬК-4. Считается, что и те, и другие полезны в качестве иммуностимуляторов.
Другими подходящими агонистами ТЬК-4 являются агонисты, раскрытые в \О 2003/011223 и в \О 2003/099195, такие как соединение I, соединение II и соединение III, раскрытые на с. 4-5 в \О 2003/011223 или на с. 3-4 в \О 2003/099195, и в частности те соединения, которые раскрыты в \\'О 2003/011223 как ЕК803022, ЕК803058, ЕК803732, ЕК804053, ЕК804057т ЕК804058, ЕК804059, ЕК804442, ЕК804680 и ЕК804764. Например, один из подходящих агонистов ТЬК-4 представляет собой ЕК804057.
Водные адъювантные композиции по изобретению содержат и сапонин, и агонист ТЬК4. В конкретном примере водная адъювантная композиция содержит 0821 и 3Э-МРЬ.
Агонист ТЬК-4, такой как липополисахарид, например 3Э-МРЬ, может быть использован в количествах от 1 до 100 мкг на дозу иммуногенной композиции для человека. 3Э-МРЬ может быть использован в количестве примерно 50 мкг, например от 40 до 60 мкг, предпочтительно от 45 до 55 мкг, или от 49 до 51 мкг, или 50 мкг. В еще одном воплощении доза иммуногенной композиции для человека содержит 3Э-МРЬ в количестве примерно 25 мкг, например от 20 до 30 мкг, предпочтительно от 21 до 29 мкг, или от 22 до 28 мкг, или от 28 до 27 мкг, или от 24 до 26 мкг, или 25 мкг.
Сапонин, такой как 0821, может быть использован в количествах от 1 до 100 мкг на дозу иммуногенной композиции для человека. 0821 может быть использован в количестве примерно 50 мкг, например 40-60 мкг, предпочтительно от 45 до 55 мкг, или от 49 до 51 мкг, или 50 мкг. В еще одном воплощении доза иммуногенной композиции для человека содержит 0821 в количестве примерно 25 мкг, например от 20 до 30 мкг, предпочтительно от 21 до 29 мкг, или от 22 до 28 мкг, или от 28 до 27 мкг, или от 24 до 26 мкг, или 25 мкг.
- 4 024074
В тех случаях когда как оба агонист ТЬК-4 и сапонин присутствуют в иммуногенной композиции, тогда подходящее массовое соотношение агониста ТЬК-4 к сапонину составляет от 1:5 до 5:1, предпочтительно 1:1. Например, когда ЗН-МРЬ присутствует в количестве 50 или 25 мкг, тогда 0821 также может присутствовать в количестве соответственно 50 или 25 мкг на дозу иммуногенной композиции для человека.
Когда адъювант объединен с жидкой формой антигенной композиции, тогда адъювантная композиция будет находиться в подходящем объеме дозы для людей, который составляет приблизительно половину от конечного объема дозы, предназначенного для людей, например объем 500 мкл адъюванта для конечной дозы для людей 1 мл или объем 250 мкл для конечной дозы для людей 0,5 мл. Адъювантную композицию разбавляют при объединении с композицией антигена с получением конечной дозы вакцины для людей. Конечный объем такой дозы будет, разумеется, варьировать в зависимости от исходного объема адъювантной композиции и объема антигенной композиции, добавляемой к адъювантной композиции. В альтернативном воплощении водный адъювант используют для разведения лиофилизированной антигенной композиции. В этом воплощении подходящий объем адъювантной композиции в дозе для людей приблизительно равен конечному объему дозы для людей. Жидкую адъювантную композицию добавляют во флакон, содержащий лиофилизированную антигенную композицию, и используют для разведения лиофилизированной антигенной композиции.
Таким образом, в настоящем изобретении предложен способ приготовления иммуногенной композиции, включающий стадии разведения лиофилизированной композиции, содержащей по меньшей мере один описанный здесь антиген или антигенный препарат с водной адъювантной композицией, как определено в данном описании.
В еще одном воплощении изобретения предложен набор, содержащий (1) лиофилизированную композицию, содержащую антиген или антигенный препарат, и (2) описанную здесь водную адъювантную композицию.
В конкретном воплощении изобретения предложен набор, содержащий (1) лиофилизированную композицию, содержащую описанный здесь антиген или антигенный препарат, и (2) описанную здесь водную адъювантную композицию.
В одном из воплощений лиофилизированная композиция дополнительно содержит агонист ТЬК-9, например, как изложено в \УО 2008/142133.
В альтернативном воплощении предложен набор, где СрО не лиофилизирован совместно с антигеном. СрО может быть либо смешанным с водной адъювантной композицией, либо может находиться в отдельном флаконе в водной или лиофилизированной форме. Соответственно, в альтернативном воплощении предложен набор, содержащий (1) лиофилизированную композицию, содержащую описанный здесь антиген; (2) водную адъювантную композицию и (3) агонист ТЬК9 (например, иммуностимулирующий СрО олигонуклеотид).
Агонист ТЬК9 для применения в наборах по изобретению представляет собой иммуностимулирующий олигонуклеотид, в частности олигонуклеотид, содержащий неметилированный мотив СрО. Такие олигонуклеотиды общеизвестны и описаны, например, в \УО 96/02555, \УО 99/33488 и И8 5865462. Подходящие агонисты ТЬК9 для применения в описанных здесь иммуногенных композициях представляют собой олигонуклеотиды, содержащие СрО, возможно содержащие два или более динуклеотидных мотивов СрО, отделенных друг от друга по меньшей мере тремя, предпочтительно по меньшей мере шестью или более нуклеотидами. Мотив СрО представляет собой цитозиновый нуклеотид, за которым следует гуаниновый нуклеотид.
В одном из воплощений межнуклеотидная связь в олигонуклеотиде представляет собой фосфородитиоатную или, возможно, фосфоротиоатную связь, хотя также могут быть использованы фосфодиэфирные и другие межнуклеотидные связи, включая олигонуклеотиды со смешанными межнуклеотидными связями. Способы получения фосфоротиоатных или фосфородитиоатных олигонуклеотидов описаны в И8 5666153, И8 5278302 и \УО 95/26204. Предусмотрен олигонуклеотид, содержащий разные межнуклеотидные связи, например смешанные фосфоротиоатные фосфодиэфиры. Могут быть использованы другие межнуклеотидные связи, которые стабилизируют олигонуклеотид.
Примеры СрО олигонуклеотидов, подходящих для включения в описанные здесь иммуногенные композиции, имеют указанные ниже последовательности. В одном из воплощений эти последовательности содержат фосфоротиоат-модифицированные межнуклеотидные связи.
ΟίΙΟΟ 1(ЗЕО ГО N0:1): ТСС АТС АС6 ТТС СТС АССТТ (СрС 1826) оисо 2 (ЗЕО ГО N0:2): ТСТ ССС АСС СТС ССС САТ (СрС 1758) оиоо 3(ЗЕО ГО N0:3): АСС САТ САС СТС ССС С6Т САС ССС АСС АСС ОИСО 4 (ЗЕО ГО N0:4): ТСС ТСС ТТТ ТСТ ССТ ТТТ СТС СТТ (СрС 2006) оисо 5 (ЗЕО ГО N0:5): ТСС АТС АСС ТТС СТО АТС СТ (СрС 1668)
Альтернативные СрО олигонуклеотиды могут содержать вышеуказанные последовательности, в которых они имеют незначительные делеции или добавки.
- 5 024074
Согласно настоящему изобретению предложена также иммуногенная композиция, содержащая антиген или антигенный препарат и описанную здесь водную адъювантную композицию, где указанная иммуногенная композиция имеет концентрацию хлорида натрия менее примерно 100 мМ, например менее 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 или 15 мМ. В конкретном воплощении концентрация хлорида натрия в иммуногенной композиции составляет менее 10 или примерно 5 мМ или менее. В еще одном конкретном воплощении иммуногенная композиция, по существу, не содержит хлорид натрия. По существу, не содержит означает, что концентрация хлорида натрия составляет 0 или почти 0 мМ.
Согласно настоящему изобретению предложена также иммуногенная композиция, содержащая антиген или антигенный препарат и описанную здесь водную адъювантную композицию, где ионная сила иммуногенной композиции составляет менее 100 мМ, например менее 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 или 15 мМ. В конкретном воплощении ионная сила в иммуногенной композиции составляет менее 10 или 5 мМ или менее. В еще одном конкретном воплощении иммуногенная композиция имеет ионную силу, которая составляет 0 или почти 0 мМ.
Понятно, что если иммуногенная композиция приготовлена с использованием лиофилизированной антигенной композиции, содержащей агонист ТЬК-9, то иммуногенная композиция также содержит агонист ТЬК-9. Таким образом, в одном из воплощений предложена иммуногенная композиция, содержащая антиген или антигенный препарат, агонист ТЬК9 и агонист ТЬК-4 и сапонин в липосомальной композиции, где иммуногенная композиция имеет концентрацию соли менее примерно 100 мМ, например менее 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 или 15 мМ. В конкретном примере этого воплощения концентрация хлорида натрия в иммуногенной композиции составляет менее 10 или примерно 5 мМ или менее.
В еще одном воплощении предложена иммуногенная композиция, содержащая антиген или антигенный препарат, агонист ТЬК9 и агонист ТЬК-4 и сапонин в липосомальной композиции, где ионная сила составляет менее 100 мМ, например менее 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 или 15 мМ. В конкретном воплощении ионная сила в иммуногенной композиции составляет менее 10 или 5 мМ или менее. В еще одном конкретном воплощении иммуногенная композиция имеет ионную силу, которая составляет 0 или почти 0 мМ.
В еще одном воплощении предложена иммуногенная композиция, содержащая антиген или антигенный препарат, агонист ТЬК9 и 3П-МРЬ и 0821 в липосомальной композиции, где иммуногенная композиция имеет концентрацию соли менее примерно 100 мМ, например менее 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 или 15 мМ. В конкретном примере этого воплощения концентрация хлорида натрия в иммуногенной композиции составляет менее 10 или примерно 5 мМ или менее.
В еще одном воплощении предложена иммуногенная композиция, содержащая антиген или антигенный препарат, агонист ТЬК9 и 3П-МРЬ и 0821 в липосомальной композиции, где ионная сила составляет менее 100 мМ, например менее 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 или 15 мМ. В конкретном воплощении ионная сила в иммуногенной композиции составляет менее 10 или 5 мМ или менее. В еще одном конкретном воплощении иммуногенная композиция обладает ионной силой, которая составляет 0 или почти 0 мМ.
В еще одном воплощении предложена иммуногенная композиция, содержащая антиген или антигенный препарат и 3О-МРЬ и 0821 в липосомальной композиции и СрО олигонуклеотид, где иммуногенная композиция имеет концентрацию соли менее примерно 50 мМ, например менее примерно 40, 30, 20 или 15 мМ. В конкретном примере этого воплощения концентрация хлорида натрия в иммуногенной композиции составляет менее 10 или 5 мМ или менее.
В одном из воплощений антиген или антигенный препарат, используемый в иммуногенной композиции, представляет собой любой антиген, который осаждается, коагулируется или агрегируется после его смешивания и/или растворения в растворе, имеющем концентрацию хлорида натрия более 50, 60, 70, 80, 90 или 100 мМ.
В одном из воплощений антиген или антигенный препарат, используемый в иммуногенных композициях по изобретению, представляет собой любой антиген, который осаждается, коагулируется или агрегируется после смешивания и/или растворения в растворе, где ионная сила составляет менее 100 мМ, например менее 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 15 или 10 мМ. В конкретном воплощении антигены по изобретению осаждаются, коагулируются или агрегируются в растворах с ионной силой 5 мМ или менее.
Специалист в данной области может определить, соответствует ли антиген этому определению, путем растворения и/или смешивания антигена в таком растворе. Антиген, который не соответствует этому определению, еще будет находиться в растворе, т.е. жидкость еще будет прозрачной без осаждения, в течение 24 ч после растворения. Антиген, который осаждается, коагулируется или агрегируется после смешивания и/или растворения в растворе, можно увидеть визуально по осаждению и мутности раствора. Дополнительно, агрегация, которая не обнаруживается визуально, может быть обнаружена известными специалисту методами, которые включают 8ЕС-НРЬС (эксклюзионная высокоэффективная жидкостная хроматография), но не ограничиваются этим методом.
В еще одном воплощении антиген или антигенный препарат происходит из Ηΐν (вирус иммунодефицита человека), №188епа шешидШФк, или представляет собой опухолеспецифический антиген. В конкретном воплощении опухолеспецифический антиген выбран из РКАМЕ или ΝΥΕ8Ο-1 или его фрагмен- 6 024074 та или производного.
РКЛМЕ (также известный как ΌΆΟΕ) представляет собой антиген, который может быть использован в качестве опухолеспецифического антигена по настоящему изобретению. Антиген и его препарат описаны в патенте США № 5830753. РКЛМЕ можно найти в Лппо1а1еЛ Нитап Сеие Эа1аЬа5С Η-Ιην ИВ под номерами доступа: И65011.1, ВС022008.1, ЛК129783.1, ВС014974.2, СК608334.1, ЛЕ025440.1, СК591755.1, ВС039731.1, СК623010.1, СК611321.1, СК618501.1, СК604772.1, СК456549.1 и СК620272.1.
Также могут быть использованы слитые белки, содержащие антиген РКЛМЕ. Может быть использован РКЛМЕ или его фрагмент или производное, возможно в форме слитого белка с гетерологичным партнером слияния. В частности, антиген РКЛМЕ предпочтительно может быть использован в форме слитого белка с белком И НаеторЫ1и8 тПнеи/ае В, или его фрагментом, или его производным. Фрагмент белка И, который может быть использован, предпочтительно не включает секреторную последовательность или сигнальную последовательность. Предпочтительно белок-партнер слияния содержит аминокислоты МеСАкр-Рго на Ν-конце или в пределах Ν-конца последовательности слитого белка, где белок-партнер слияния не включает секреторную последовательность или сигнальную последовательность белка И. Например, белок-партнер слияния может содержать или состоять из приблизительно или точно аминокислот с 17 по 127, с 18 по 127, с 19 по 127 или с 20 по 127 белка И. Подходящие антигены РКЛМЕ на основе слитых белков с белком И описаны в АО 2008/087102, полное содержание которой включено в данное описание посредством ссылки.
ΝΥ^δΟ^ представляет собой еще один антиген, который может быть использован в качестве опухолеспецифического антигена по настоящему изобретению. Может быть использован ΝΥ^δΟ^, или его фрагмент, или производное, возможно в форме слитого белка с гетерологичным партнером слияния. ΝΥΈδΟ-1 описан в υδ 5804381, полнее содержание которого включено в данное описание посредством ссылки. Белок ΝΥΈδΟ-1 имеет длину приблизительно 180 аминокислот и может быть описан как состоящий из трех областей: (а) Ν-концевой области, состоящей из аминокислот примерно 1-70; (б) центральной области, состоящей из аминокислот 71-134; и (в) С-концевой области, состоящей из аминокислот 135-180. ΝΥΈδΟ-1 может быть использован в качестве слитого белка, например в качестве слитого белка с ЬЛСЕ-1, который представляет собой дополнительный СТ антиген, или его фрагментом (см. ΑΟ 2008/089074, полное содержание которой включено в данное описание посредством ссылки). При использовании фрагментов ΝΥΈδΟ-1 эти фрагменты предпочтительно включают один или более эпитопов МНС (главный комплекс гистосовместимости) класса 1 или класса 2, например фрагменты, известные как Л31, ИК1, ИК2, ИК4, ИК7, ИР4, В35, В51, СА3, С\\6 и Л2 (см. ΑΟ 2008/089074).
Еще один антиген, который может быть использован в соответствии с настоящим изобретением, хотя он по сути не чувствителен к №С1, представляет собой антиген МЛСЕ, например антиген семейства МЛСЕ-3, такой как МЛСЕ-Л3. Например, антигены МЛСЕ-3 описаны как подходящие для приготовления в комбинации с ΝΥ^δΟ^ (см. ΑΟ 2005/105139, полное содержание которой включено в данное описание посредством ссылки).
Антигены МЛСЕ, такие как МЛСЕ-Л3, можно использовать сами по себе или в форме производного, например химически модифицированного производного, и/или в форме слитого белка с гетерологичным партнером слияния. Например, антиген МЛСЕ может содержать восстановленные дисульфидные мостики с образованием свободных тиолов, которые дериватизированы, например, карбоксамидными или карбоксиметильными группами (см. ΑΟ 99/40188, полное содержание которой включено в данное описание посредством ссылки). В частности, антигены МЛСЕ предпочтительно могут быть использованы в форме слитого белка с белком И НаеторП1и8 тПнеи/ае В, или его фрагментом, или его производным. Например, приблизительно первая треть белка И или Ν-концевые 100-110 аминокислот белка И могут быть использованы в качестве партнера слияния (см. ΑΟ 99/40188).
В еще одном воплощении антиген или антигенная композиция может представлять собой производное любого из описанных здесь антигенов. Используемый здесь термин производное относится к антигену, который модифицирован относительно его природной формы. Производные по настоящему изобретению достаточно сходны с нативными антигенами, чтобы сохранять антигенные свойства и способность вызывать иммунный ответ против природного антигена. Чтобы определить, вызывает ли данное производное такой иммунный ответ, можно использовать подходящий иммунологический анализ, такой как твердофазный иммуноферментный анализ (ЕЬКЛ) или проточная цитометрия.
Используемый здесь термин фрагмент относится к фрагментам опухолеспецифического антигена или производного этого антигена, которые содержат по меньшей мере один эпитоп, например эпитоп СТЬ (цитотоксических Т-лимфоцитов), как правило, пептид по меньшей мере из 8 аминокислот. Фрагменты по меньшей мере из 8, например 8-10 аминокислот или длиной вплоть до 20, 50, 60, 70, 100, 150 или 200 аминокислот считаются входящими в объем изобретения, если фрагмент демонстрирует антигенность, т.е. если фрагмент сохраняет основные эпитопы (например, эпитопы СТЬ), и этот фрагмент способен индуцировать иммунный ответ, который перекрестно реагирует с природным опухолеспецифическим антигеном. Иллюстративными фрагментами могут быть фрагменты длиной 8-10, 10-20, 20-50, 50-60, 60-70, 70-100, 100-150, 150-200 аминокислотных остатков (включая любое значение в этих диапазонах).
- 7 024074
Согласно настоящему изобретению предложена описанная здесь иммуногенная композиция для применения в медицине, в частности в лечении и/или предупреждении заболевания. Согласно настоящему изобретению предложена также описанная здесь иммуногенная композиция для применения в иммунотерапевтическом лечении рака.
В конкретных примерах этого воплощения изобретения предложена описанная здесь иммуногенная композиция для применения в иммунотерапевтическом лечении одного или более видов рака, выбранных из группы, состоящей из рака предстательной железы, рака молочной железы, колоректального рака, рака легкого, рака поджелудочной железы, рака почки, рака яичника или меланомы.
Согласно настоящему изобретению предложен способ лечения или профилактики рака у индивидуума, нуждающемся в таком лечении или профилактике, включающий стадию введения указанному индивидууму эффективного количества описанной здесь иммуногенной композиции.
В конкретных примерах этого воплощения изобретения предложен способ лечения или профилактики рака, выбранного из группы, состоящей из рака предстательной железы, рака молочной железы, колоректального рака, рака легкого, рака поджелудочной железы, рака почки, рака яичника или меланомы.
Настоящее изобретение далее дополнительно иллюстрируется примерами, не ограничивающими его объем.
Примеры
Пример 1. Приготовление адъювантной композиции А8А (сорбит).
Готовили адъювантную композицию, содержащую 3-деацилированный МРЬ и 0821 в липосомальной композиции. Ее готовили следующим образом.
А. Способ получения липосом.
Смесь липида (такого как синтетический фосфатидилхолин), холестерина и 3-О-деацилированного МРЬ в органическом растворителе высушивали в вакууме. Затем добавляли водный раствор (такой как забуференный фосфатом физиологический раствор [100 мМ ЫаС1, 20 мМ фосфата рН 6,1]) и сосуд встряхивали до тех пор, пока не образовалась суспензия липида. Эту суспензию затем предварительно гомогенизировали с использованием смесителя с высоким усилием сдвига и затем гомогенизировали при высоком давлении до тех пор, пока размер липосом, который измеряли методом ЭБ8 (динамическое светорассеяние), не уменьшился до примерно 90±10 нм. Липосомы затем подвергали стерилизующей фильтрации.
Б. Приготовление композиции ΆδΆ.
Стадия 1. Разведение концентрированных липосом.
Να2/Κ фосфатный буфер 100 мМ рН 6,1, разведенный в 10 раз, добавляли в воду для инъекций до достижения концентрации фосфатного буфера в конечной композиции 10 мМ. Затем добавляли 30%-ный (мас./об.) раствор сорбита в воде для инъекций (^Р1) до достижения концентрации 4,7% в конечной композиции. Эту композицию перемешивали в течение 15-45 мин при комнатной температуре.
Концентрированные липосомы (изготовленные из ЭОРС (1,2-диолеил-8и-глицеро-3-фосфохолин), холестерина и МРЬ, 40, 10 и 2 мг/мл соответственно) затем добавляли в смесь до достижения концентрации 100 мкг/мл МРЬ в конечной композиции.
Смесь затем перемешивали в течение 15-45 мин при комнатной температуре.
Стадия 2. Добавление 0821.
Используя перистальтический насос, исходный 0821 (оттаявший в течение 24 ч при к.т. (комнатная температура) или в течение 2 суток при 4°С для 200 мл) добавляли со скоростью 200 мл/мин к разведенным липосомам при перемешивании с использованием магнитной мешалки до достижения концентрации 100 мкг/мл в конечной композиции. Смесь перемешивали в течение 15-45 мин.
Конечная композиция А8А содержала 100 мкг МРЬ/мл и 100 мкг 0821/мл.
Стадия 3. Измеренное значение рН составляло 6,1±0,3.
Стадия 4. Стерилизующая фильтрация.
Стерилизующую фильтрацию осуществляли при постоянной скорости 400 мл/мин на полиэфирсульфоновом (РЕ8) фильтре от РАБЬ Сотротайои.
Стадия 5. Хранение при температуре от 2 до 8°С.
Полученную адъювантную композицию, содержащую 3-О-деацилированный МРЬ и 0821 в липосомальной композиции и содержащую сорбит (обозначенную А8А (сорбит)), затем хранили при 4°С.
Пример 2. Приготовление адъювантной композиции А8А (150 мМ №С1).
А. Способ получения липосом.
Смесь липида (такого как синтетический фосфатидилхолин), холестерина и 3-деацилированного МРЬ (3Э-МРБ) в органическом растворителе высушивали в вакууме. Затем добавляли физиологический забуференный фосфатами раствор и сосуд встряхивали до тех пор, пока весь липид не оказался в суспензии. Эту суспензию затем предварительно гомогенизировали с использованием смесителя с высоким усилием сдвига и затем гомогенизировали при высоком давлении до тех пор, пока размер липосом, который измеряли методом ЭБ8. не уменьшился примерно до 90±10 нм. Липосомы затем подвергали стери- 8 024074 лизующей фильтрации на мембране РЕ8 0,22 мкм.
В. Приготовление композиции А8А.
Стадия 1. Разведение концентрированных липосом.
Να2/Κ фосфатный буфер 100 мМ рН 6,45, разведенный в 10 раз, и ЫаС1 1,5 М добавляли к воде для инъекций до достижения соответственно концентраций 10 мМ фосфата и ΝαΟ 150 мМ в конечной композиции. Эту смесь перемешивали в течение 5 мин при комнатной температуре. Концентрированные липосомы (изготовленные из ЭОРС. холестерина и МРЬ, 40, 10 и 2 мг/мл соответственно) затем добавляли к смеси до достижения концентрации 100 мкг/мл МРЬ в конечной композиции. Смесь затем перемешивали в течение 5-15 мин при комнатной температуре.
Стадия 2. Добавление 0821.
Исходный 0821 (оттаявший в течение 24 ч при к.т. или в течение 2 суток при 4°С для 200 мл) добавляли к разведенным липосомам при перемешивании с использованием магнитной мешалки до достижения концентрации 100 мкг/мл в конечной композиции. Смесь перемешивали при к.т.
Стадия 3. Измеренное значение рН составляло 6,1±0,3.
Стадия 4. Стерилизующая фильтрация.
Стерилизующую фильтрацию осуществляли на полиэфирсульфоновом (РЕ8) фильтре от РАЕЬ Сотротабои.
Стадия 5. Хранение при температуре от 2 до 8°С.
Конечная композиция А8А представляла собой 2 мг ЭОРС, 500 мкг холестерина, 100 мкг 3-О-деацилированного МРЬ, 100 мкг Р821 на 1 мл.
Пример 3. Литическая активность 0821.
Известно, что 0821 лизирует эритроциты (КВС). Адъювантную композицию А8А (сорбит), приготовленную, как описано в примере 1, тестировали, чтобы убедиться в том, что литическая активность 0821 гасится так же, как можно наблюдать с использованием эквивалентной адъювантной композиции, содержащей 150 мМ ΝαΟ (А8А (150 мМ ΝαΟΊ)).
Литическую активность 0821 измеряли гемолитическим анализом с использованием эритроцитов (КВС) цыплят. КВС центрифугировали при 550 д при 4°С. Супернатант удаляли. Осадок тщательно ресуспендировали в буфере РВ8 (забуференный фосфатами физиологический раствор) до достижения начального объема, и такую же операцию повторяли до исчезновения красной окраски супернатанта (как правило трижды). Осадок хранили при 4°С в течение максимум 3-4 суток, если его не использовали сразу же (и вновь промывали в день использования), или разводили примерно в 10 раз в буфере, если использовали в тот же день.
Непосредственно перед использованием готовили серию доз 0821 в буфере для А8А (в солевом или в сорбитном буфере в зависимости от тестируемого образца А8А) и готовили образцы адъюванта (содержащие эквивалент 50 или 90 мкг 0821, что означает эквивалент 500 или 900 мкл А8А). Конечный объем доводили до 900 мкл в стандартах и образцах соответствующим буфером (содержащим или не содержащим сорбит в зависимости от буфера тестируемого образца). Опалесценция А8А влияет на оптическую плотность (ОЭ). Готовили пустые контрольные образцы А8А, и их ОЭ вычитали из ОЭ тестируемых образцов А8А. Эти пустые контрольные образцы имели тот же самый объем А8А, как и объем тестируемых образцов, но доведенный до 1 мл буфером. В эти пустые контрольные образцы КВС не добавляли. Стандарты и образцы затем инкубировали с КВС (100 мкл разведенных КВС добавляли к 900 мкл стандартов и образцов) в течение 30 мин при комнатной температуре (к.т.). Образцы затем центрифугировали в течение 5 мин при 900д. После центрифугирования измеряли оптическую плотность при 540 нм.
Определение литической активности проводили тестированием на предельное содержание.
1. Предел обнаружения (ЬОЭ) определяли как наименьшую концентрацию 0821, приводящую к ОЭ:
выше базового уровня (ОЭ>0,1), примерно в три раза выше, чем ОЭ буфера (0 мкг Р821), в восходящей части кривой, определенной для каждого теста.
- 9 024074
2. Литическая активность 0821 удерживалась положительной в адъювантных образцах, если ΟΌ для адъювантного образца была больше, чем ΟΌ[,Ο|.).
Пример кривой 0821.
| мкг (3521 | ОР | Гашение (3521 |
| 0 | 0,029 | Нет данных |
| 0,5 | 0,052 | < ίθϋ |
| 0,6 | 0,073 | < ЮР |
| 07 | 0,091 | < ЮР |
| 0,8 | 0,096 | <ЮР |
| 0,9 | 0,12 | > 98,2% |
| 1 | 0,195 | > 98% |
| 1,1 | 0,212 | > 97,8% |
| 1,2 | 0,348 | > 97,6% |
| 1,3 | 0,479 | >97,4% |
| 1,4 | 0,612 | > 97,2% |
| 1,5 | 0,669 | > 97% |
| 2 | 1,139 | > 96% |
| 2,5 | 1,294 | > 95% |
| 3 | 1,391 | > 94% |
| 5 | 1,416 | > 90% |
| Адъювант * | 0,03 | > 98,2 % |
* Тестировали эквивалент 50 мкг (,)521.
Буфер 150 мм хлорида натрия.
Предел обнаружения в этом анализе составляет 0,9 мкг 0821 и ΟΌ 0,12.
Гашение 0821 в адъювантной композиции, содержащей 150 мМ хлорида натрия, оценивали как составляющее более 98,2% для протестированного эквивалента 50 мкг 0821. В случае тестирования эквивалента 90 мкг гашение составляет более 99%.
Гашение 0821 затем сравнивали с эквивалентной адъювантной композицией, содержащей сорбит и только 5 мМ хлорида натрия. Данные получали после хранения А8А при 4°С или после ускоренной стабилизации (7 суток при 37°С). Для А8А в сорбите построение стандартной кривой осуществляли с 0821 в буфере, содержащем сорбит.
| Образец | Момент времени | ЬОР | Гашение 0521 |
| Адъювантная композиция (А5А) 150 мМ ЫаС1 | ТО | < 1,4 | > 97,2% |
| 7 суток 37”С | < 0,9 | > 98,2% | |
| Адъювантная композиция (А5А) сорбит, 5 мМ №С! | ТО | <2 | > 97,8% |
| 7 суток 37°С | < 1 | > 96% | |
| 11 месяцев 4°С | < 2 | > 97,8%* |
Тестировали эквивалент 50 мкг (,)821. за исключением *, когда тестировали эквивалент 90 мкг ф821.
Вывод: 0821 адекватно гасится в буфере с низким содержанием хлорида натрия.
Пример 4. Конгенеры МРЬ.
С химической точки зрения ЗП-МРЬ представляет собой смесь 3-деацилированного монофосфориллипида А с 4, 5 или 6 ацилированными цепями. Каждая отдельная молекула ЗП-МРЬ называется конгенером. Важно, чтобы композиция конгенеров молекул оставалась постоянной без изменения соотношения конгенеров. Также важно, чтобы любой используемый буфер обеспечивал такую же композицию конгенеров, как в концентрированных липосомах, использованных для приготовления адъювантной композиции.
Как показано на фиг. 2, композицию конгенеров исследовали в ЗП-МРЬ концентрированных липосомах (конц. липосомы ЫР07-217, первый столбец на фиг. 2), адъювантной композиции, содержащей ЗЭ-МБЬ липосомы и 0821 в буфере 150 мМ ЫаС1 (адъювант 150 мМ ЫаС1, или А8А (150 мМ ЫаС1), второй столбец), и адъювантной композиции, содержащей ЗП-МРЬ липосомы и 0821 в сорбите и буфере 5 мМ Ναί'Ί (адъювант сорбит, или А8А (сорбит), столбцы З-7).
Композицию конгенеров также исследовали в двух партиях адъюванта А8А (сорбит) на 0 и 7 сутки после приготовления и выдержки при З7°С, чтобы убедиться в том, что с течением времени изменений нет (см. последние четыре столбца на фиг. 2).
- 10 024074
Относительное распределение тетра-, пента- и гексаацилированных конгенеров МРЬ в концентрированных липосомах или образцах А8А (сорбит) определяли методом ГР-НРЬС-Иио детекции (ионпарная высокоэффективная жидкостная хроматография с флуоресцентной детекцией) (АКЭ). И стандарты, и образцы дериватизировали дансилгидразином, который вводит флуоресцентно-активный хромофор на дисахаридный скелет. Дериватизированные образцы анализировали на обращенно-фазовой колонке С18 с использованием гидроксида тетрабутиламмония (ТВАОН) в качестве ион-парного реагента. Конгенеры, содержащие одинаковое количество жирных ацильных групп, элюировали отдельными группами (тетраацил, пентаацил и гексаацил). Распределение конгенеров определяли путем сравнения площади пика каждой группы с общей площадью пиков всех конгенеров МРЬ.
На фиг. 2 представлено процентное содержание каждого конгенера. Не обнаружено никакого значимого различия в композиции конгенеров между адъювантными буферами, и композиция родственных молекул была согласующейся с течением времени в сорбитном буфере.
Пример 5. Приготовление композиций, использованных в примерах.
5.1. Приготовление РКАМЕ с СрО (СрО 2006 использован во всех примерах).
5.1.1. Приготовление РКАМЕ с СрО с А8А (150 мМ ЫаС1) для использования в примерах 6 и 7 в экспериментах 1 и 2.
30%-ный (мас./об.) раствор сахарозы (приготовленной в воде для инъекций) добавляли в воду для инъекций до достижения концентрации сахарозы 5%. Буфер ТГ18-НС1 100 мМ рН 9,5 затем добавляли до достижения концентрации Тпз-буфера 75 мМ. Затем добавляли боратный буфер 100 мМ рН 9,8 до достижения концентрации боратного буфера 5 мМ. Затем добавляли 10%-ный (мас./об.) раствор Ро1охатег 188 (приготовленный в воде для инъекций) до достижения концентрации 0,313%. Смесь перемешивали с использованием магнитной мешалки (150 об/мин) в течение 5 мин при к.т. Затем добавляли раствор СрО в концентрации примерно 20 мг/мл (в воде для инъекций) до достижения концентрации 1050 мкг/мл в конечной композиции. Смесь перемешивали с использованием магнитной мешалки (150 об/мин) в течение 5 мин при к.т. Затем добавляли антиген РКАМЕ до достижения концентрации белка 1250 мкг/мл. Смесь перемешивали с использованием магнитной мешалки (150 об/мин) в течение 15 мин при к.т. Измеряли рН (9,51). Полученную смесь по 0,5 мл заполняли в стеклянные флаконы емкостью 3 мл, затем подвергали сублимационной сушке.
Фиг. 3 иллюстрирует цикл сублимационной сушки, использованный для РКАМЕ (продолжительность 40 ч).
Полученный после лиофилизации остаток разводили 625 мкл водной адъювантной композиции, приготовленной, как описано в примере 2, содержащей 150 мМ ЫаС1. Остаток после лиофилизации содержал 1,25-кратный избыток дозы антигена, чтобы иметь нужное соотношение антиген/адъювант после разведения конечной композицией 16 мМ Тгщ 4 мМ бората, 4% сахарозы, 0,24% Ро1охатег 188, 840 мкг/мл СрО и 1000 мкг/мл РКАМЕ.
5.1.2. Приготовление РКАМЕ с СрО для жидкой композиции (70 мМ ЫаС1) для эксперимента 1 примера 7.
Концентрированный адъювантный препарат.
РВ8, модифицированный, 10-кратно концентрированный, рН 6,1, разведенный в 10 раз, добавляли в воду для инъекций до достижения 1-кратно концентрированного буфера в конечной композиции. Предварительно смешанный раствор, приготовленный из липосом и 0821. предварительно разведенного до 400 мкг/мл, готовили отдельно. Предварительную смесь перемешивали с использованием магнитной мешалки в течение 15 мин при комнатной температуре. Концентрированные липосомы, используемые в предварительной смеси, изготовлены из 40 мг/мл ЭОРС, 10 мг/мл холестерина и 2 мг/мл 3-деацилированного МРЬ. Предварительную смесь добавляли к РВ8 до достижения концентрации МРЬ 200 мкг/мл и концентрации 0821 200 мкг/мл в конечной композиции. Смесь перемешивали с использованием магнитной мешалки в течение 15-30 мин при к.т. Затем добавляли СрО примерно 23 мг/мл до достижения конечной концентрации 1680 мкг/мл. Смесь перемешивали с использованием магнитной мешалки в течение 15-30 мин при к.т. Измеренный рН составлял 6,1±0,1. А8А фильтровали на РЕ8 фильтре 0,22 мкм и хранили при 4°С до применения.
Конечная композиция.
Сахарозу 25%, борат 25 мМ рН 9,8 и Бп1го1 10% добавляли к νΡΙ до достижения соответственно 9,25%, 5 мМ и 0,24% в конечной композиции.
Добавляли 2-кратно концентрированный препарат А8А + СрО с получением в результате 1-кратной концентрации в конечной композиции. Смесь перемешивали в течение 5 мин при к.т. Затем добавляли антиген РКАМЕ в сахарозе 3,15%, борат 5 мМ и смесь перемешивали в течение 5 мин при к.т.
5.1.3. Приготовление РКАМЕ с СрО для жидкой композиции для эксперимента 2 примера 7.
Концентрированный адъювантный препарат.
А8А для жидкой композиции готовили, как описано ниже. Фосфатный буфер 1М (рН 6,1 после 100-кратного разведения) добавляли при перемешивании с использованием магнитной мешалки к νΡΙ до достижения 45 мМ конечной концентрации с учетом концентрации фосфата 50 мМ в концентрированных липосомах. Сорбит 35% затем добавляли до достижения конечной концентрации 21,15%. Кон- 11 024074 центрированные липосомы, изготовленные из 40 мг/мл ЭОРС. 10 мг/мл холестерина и 2 мг/мл 3-деацилированного МРЬ, добавляли к смеси до достижения конечной концентрации МРЬ 450 мкг/мл. 0821 (в концентрации примерно 5000 мкг/мл) добавляли до достижения конечной концентрации 0821 450 мкг/мл. Смесь перемешивали в течение 15 мин при к.т. Измеряли рН и доводили до рН 6,1±0,1. Конечная концентрация в этом А8А составляла соответственно 450 мкг/мл для МРЬ, 450 мкг/мл для 0821, 45 мМ для фосфата, 22,5 мМ для ЫаС1, 21,15% для сорбита.
Конечная композиция.
30%-ный (мас./об.) раствор сахарозы (приготовленный в воде для инъекций) добавляли в воду для инъекций до достижения концентрации сахарозы 4% в конечной композиции. Буфер Тп5-НС1 1М рН 9,0 затем добавляли до достижения концентрации Τήδ-буфера в конечной композиции 16 мМ. Затем добавляли боратный буфер 100 мМ рН 9,8 до достижения концентрации боратного буфера в конечной композиции 4 мМ. Затем добавляли 10%-ный (мас./об.) раствор Ро1охатег 188 (приготовленный в воде для инъекций) до достижения концентрации 0,24% в конечной композиции. Смесь перемешивали с использованием магнитной мешалки (150 об/мин) в течение 5 мин при к.т. Раствор СрС в концентрации примерно 20 мг/мл (в воде для инъекций) затем добавляли до достижения концентрации 840 мкг/мл в конечной композиции. Смесь перемешивали с использованием магнитной мешалки (150 об/мин) в течение 5 мин при к.т. Затем добавляли буфер для антигена РКАМЕ (борат 5 мМ-сахароза 3,15% рН 9,8) до достижения концентрации антигена РКАМЕ 1000 мкг/мл. Антиген РКАМЕ затем добавляли до достижения концентрации белка 8 мкг/мл в конечной композиции. Смесь перемешивали с использованием магнитной мешалки (150 об/мин) в течение 15 мин при к.т. 4,5-кратно концентрированную А8А в сорбите добавляли до достижения конечных концентраций 100 мкг/мл МРЬ и 0821. Измеряли рН (±8,0).
5.1.4. Приготовление РКАМЕ с СрС для А8А (сорбит) и А8А (сахароза) для эксперимента 1 примера 7.
30%-ный (мас./об.) раствор сахарозы (приготовленный в воде для инъекций) добавляли в воду для инъекций до достижения концентрации сахарозы в композиции 5%, затем добавляли боратный буфер 100 мМ рН 9,8 до достижения концентрации боратного буфера в этой композиции 5 мМ, затем добавляли буфер ТТ18-НС1 100 мМ рН 9,0, разведенный 20-кратно, до достижения концентрации Τήδ-буфера в этой композиции 5 мМ. Затем добавляли 10%-ный (мас./об.) раствор Ро1охатег 188 (приготовленный в воде для инъекций) до достижения концентрации в композиции 0,3%. Смесь перемешивали с использованием магнитной мешалки (150 об/мин) в течение 5 мин при к.т. Затем добавляли раствор СрС в концентрации примерно 20 мг/мл (в воде для инъекций) до достижения концентрации 1050 мкг/мл в композиции. Смесь перемешивали с использованием магнитной мешалки (150 об/мин) в течение 5 мин при к.т. Затем добавляли антиген РКАМЕ до достижения концентрации белка 1250 мкг/мл в конечной композиции. Смесь перемешивали с использованием магнитной мешалки (150 об/мин) в течение 15 мин при к.т. Измеренное значение рН составляло 9,4. Полученную смесь заполняли по 0,5 мл в стеклянные флаконы емкостью 3 мл, затем подвергали сублимационной сушке.
А8А (сорбит) готовили, как указано в примере 1, с некоторыми небольшими отличиями: концентрация сорбита составляла 4,6%, и 0821 предварительно разводили до 400 мкг/мл, после чего добавляли к разведенным концентрированным липосомам.
А8А (сахароза) готовили, как указано в примере 1, со следующими отличиями: сорбит заменяли сахарозой (использовали 30%-ный (мас./об.), исходный раствор сахарозы, и конечная концентрация сахарозы составляла 8,3%) и 0821 предварительно разводили до 400 мкг/мл, затем добавляли к разведенным концентрированным липосомам.
Полученный после лиофилизации остаток разводили 625 мкл водной адъювантной композиции, и конечная композиция содержала 4 мМ Τήδ, 4 мМ борат, 4% сахарозы, 0,24% Ро1охатег 188, 840 мкг/мл СрС и 1000 мкг/мл РКАМЕ.
5.1.5. Приготовление РКАМЕ с СрС для А8А (сорбит) для эксперимента 2 примера 7.
30%-ный (мас./об.) раствор сахарозы (приготовленный в воде для инъекций) добавляли в воду для инъекций до достижения концентрации в композиции 5%, затем добавляли буфер ТЙ8-НС1 1 М рН 9,0, разведенный 50-кратно, до достижения концентрации Τήδ-буфера в этой композиции 20 мМ, затем добавляли боратный буфер 100 мМ рН 9,8, разведенный 20-кратно до достижения концентрации боратного буфера в этой композиции 5 мМ. Затем добавляли 10%-ный (мас./об.) раствор Ро1охатег 188 (приготовленный в воде для инъекций) до достижения концентрации в композиции 0,3%. Смесь перемешивали с использованием магнитной мешалки (150 об/мин) в течение 5 мин при к.т. Затем добавляли раствор СрС в концентрации примерно 20 мг/мл (в воде для инъекций) до достижения концентрации 1050 мкг/мл в композиции. Смесь перемешивали с использованием магнитной мешалки (150 об/мин) в течение 5 мин при к.т. Затем добавляли антиген РКАМЕ до достижения концентрации белка 1250 мкг/мл в конечной композиции. Смесь перемешивали с использованием магнитной мешалки (150 об/мин) в течение 15 мин при к.т. Измеренное значение рН составляло 9,1. Полученную смесь заполняли по 0,5 мл в стеклянные флаконы емкостью 3 мл, затем подвергали сублимационной сушке.
- 12 024074
А§А (сорбит) готовили, как описано в примере 1. Полученный после лиофилизации остаток разводили 625 мкл водной адъювантной композиции, и конечная композиция содержала 16 мМ ТгН. 4 мМ борат, 4% сахарозы, 0,24% Ро1охатег 188, 840 мкг/мл СрС и 1000 мкг/мл РКАмЕ.
5.2. Приготовление ΝΥ^§01 с СрС.
5.2.1. Приготовление ΝΥΈ§01 с СрС для примера 6.
Να/Κ2 фосфатный буфер 200 мМ рН 6,3, разведенный в 20 раз, добавляли при перемешивании с использованием магнитной мешалки к воде для инъекций до достижения концентрации 12,5 мМ в конечной композиции. Затем к смеси добавляли следующие эксципиенты в следующей последовательности: монотиоглицерин в концентрации 10% (мас./об.), до достижения конечной концентрации 0,3125%, Ро1охатег 188 в концентрации 5% (мас./об.), до достижения концентрации 0,0625%, сахарозу 25% до достижения конечной концентрации 5% и основание Ь-аргинин 287 мМ до достижения концентрации 6,25 мМ. СрС в количестве примерно 20 мг/мл затем добавляли к этой смеси до достижения концентрации 1050 мкг/мл в конечной композиции. Смесь перемешивали с использованием магнитной мешалки (примерно 150 об/мин) при комнатной температуре в течение 10 мин. Измеряли рН, его значение было 7,1±0,3. Перемешивание с использованием магнитной мешалки ускоряли для создания вихревого перемешивания. Затем добавляли ΝΥΈ§01 до достижения конечной концентрации 750 мкг/мл. Перемешивание с использованием магнитной мешалки затем замедляли до примерно 150 об/мин и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин. Отбирали аликвоту для определения конечного рН (который должен составлять 7,02). Конечный продукт затем подвергали сублимационной сушке. Полученный после лиофилизации остаток разводили 625 мкл буфера для А§А (150 мМ ΝαΟ и сорбит).
Пример 6. Предотвращение высаливания в адъювантной композиции, содержащей в качестве буфера сорбит.
Фиг. 4 демонстрирует, что уменьшение концентрации соли до 5 мМ и включение сорбита в адъювантную композицию предотвращает высаливание как РКАМЕ, так и NΥ-Ε§Ο-1 в иммуногенных композициях (приготовленных, как описано в примере 5.1.1 и 5.2.1 соответственно).
На фиг. 4:
1. Антиген РКАМЕ, разведенный в буфере для А§А 150 мМ №С1.
2. Антиген РКАМЕ, разведенный в буфере для А§А сорбит.
3. Антиген КУЕ§0-1, разведенный в буфере для А§А 150 мМ №О.
4. КУЕ§0-1 антиген разведенных в буфере для А§А сорбит.
Фиг. 4 представляет собой фотографическое сравнение РКАМЕ и КУЕ§0-1, разведенных в А§А (150 мМ ΝαΟ) и А§А (сорбит). Как можно видеть, РКАМЕ, разведенный в А§А (150 мМ ΝαΟ), выглядит мутным по сравнению с РКАМЕ, разведенным в А§А (сорбит). Аналогично, ΝΥΈ§0, разведенный в А§А (150 мМ ΝαΟ), выглядит мутным по сравнению с антигеном NΥ-Ε§Ο, разведенным в А§А (сорбит).
Пример 7. Мышиная модель ίη У1уо.
Эксперимент 1.
Семь групп по 20 самок мышей СВ6Р1 (гибрид мышей С57ВЬ/6 и ВгйЬ/С) в возрасте 6-8 недель дважды иммунизировали внутримышечно (каждые две недели альтернативными инъекциями в левую и правую икроножную мышцу) белком РКАМЕ, приготовленным в фиксированной дозе А§А + СрС, соответствующей 1/10 дозы для человека (50 мкл, содержащие 5 мкг МРЬ, 5 мкг 0§21 и 42 мкг СрС7909). Через 14 суток после последней иммунизации четырем группам мышей (η=8 в каждой группе) подкожно вводили 105 опухолевых клеток СТ26-РКАМЕ, как описано ниже. Семь групп мышей представляли собой:
группа 1: буфер, группа 2: совместно лиофилизированный РКАМЕ + СрС, ресуспендированный в классическом А§А (150 мМ ΝαΟ), в котором белок РКАМЕ осаждается, группа 3: совместно лиофилизированный РКАМЕ + СрС, ресуспендированный в А§А (сахароза), группа 4: совместно лиофилизированный РКАМЕ + СрС, ресуспендированный в А§А (сахароза, инкубация в течение 48 ч при 25°С), группа 5: совместно лиофилизированный РКАМЕ + СрС, ресуспендированный в А§А (сорбит), группа 6: РКАМЕ + А§А - жидкая композиция, содержащая 70 мМ ΝαΟ + СрС, группа 7: РКАМЕ + А§А - жидкая композиция, содержащая 70 мМ ΝαΟ + СрС (+ полоксамер). Через 7 суток после последней иммунизации анализировали клеточный ответ по способности
Т-клеток секретировать цитокины (η=4 группы по 3 мыши).
Все мыши получали по 0,4 мкг РКАМЕ в 1/10 дозы для человека адъювантной системы А§А + СрС (5 мкг МРЬ, 5 мкг Ц§21 и 42 мкг СрС).
Результаты.
Рост опухоли.
Средний рост опухоли с течением времени по результатам измерений площади поверхности (мм2) (+§Ό (стандартное отклонение)) на группу представлен на фиг. 6. РКАМЕ, приготовленный с А§А (150 мМ ΝαΟ) + СрС и РКАМЕ в жидкой композиции А§А, обеспечивают меньшую противоопухоле- 13 024074 вую защиту (больший рост опухоли) по сравнению с РКАМЕ АЗЛ (сорбит) + СрС.
Клеточный ответ (через 7 суток после 2 иммунизации, п=4 группы по 3 мыши на группу).
Частота С.П4 и СЭ8 Т-клеток, способных продуцировать цитокины, такие как ΙΡΝγ и ΤΝΡα, после иммунизации мышей опухолевым антигеном РКЛМЕ АЗА-СрС свидетельствует о способности различных композиций вызывать функциональный клеточный ответ. Через 7 суток после второй иммунизации процентное содержание С.П4 и СЭ8 Т-клеток, продуцирующих цитокины (ΙΡΝγ и ΤΝΡα), измеряли методом окрашивания внутриклеточных цитокинов (1СЗ) на клетках селезенки иммунизированных мышей.
% СЭ4. продуцирующих ΙΡΝγ и ΤΝΡα (среднее значение ± стандартное отклонение), представлен на фиг. 5.
В этом эксперименте измеримый С.П8 ответ не обнаружен.
Показано, что белок РКЛМЕ, приготовленный в АЗА (150 мМ №С1) + СрС, осаждается и вызывает меньший специфический Т-клеточный ответ по сравнению с РКАМЕ, приготовленным в АЗА (сорбит) + СрС. Аналогично, хороший РКАМЕ-специфический СЭ4 ответ получен, когда белок РКАМЕ приготовлен в АЗА (сорбит) + СрС и в жидкой композиции АЗА (70 мМ №С1) + СрС (статистического расхождения нет). Тестировали также гуморальный иммунный ответ, но данные после 2 инъекций не были интерпретируемыми.
Эксперимент 2.
Четыре группы по 24 самки мышей СΒ6Ρ1 (гибрид мышей С57ВЬ/6 и Ва1Ь/С) в возрасте 6-8 недель иммунизировали четыре раза внутримышечно (каждые две недели альтернативными инъекциями в левую и правую икроножную мышцу) белком РКАМЕ, приготовленным в фиксированной дозе АЗА + СрС, соответствующей 1/10 дозы для человека (50 мкл, содержащие 5 мкг МРЬ, 5 мкг СЗ21 и 42 мкг СрС7909). Через 14 суток после последней иммунизации четырем группам мышей (п=12 в каждой группе) подкожно вводили 105 опухолевых клеток СΤ26-РКЛМЕ, как описано ниже. Четыре группы мышей представляли собой:
группа 1: буфер, группа 2: совместно лиофилизированный РКАМЕ + СрС, ресуспендированный в классическом АЗА (150 мМ №С1), в котором белок РКАМЕ осаждается, группа 3: совместно лиофилизированный РКАМЕ + СрС, ресуспендированный в АЗА (сорбит), группа 4: РКАМЕ + АЗА - жидкая композиция + СрС (+ полоксамер).
Через 14 суток после последней иммунизации иммунный ответ анализировали с использованием различных считываний в соответствии со следующим:
гуморальный ответ (п=12), клеточный ответ по способности Т-клеток секретировать цитокины (п=4 группы по 3 мыши), защитный эффект против опухолевого заражения (п=12).
Все мыши получали 0,4 мкг РКАМЕ в 1/10 дозы для человека АЗА + СрС адъювантной системы (5 мкг МРЬ, 5 мкг ОЗ21 и 42 мкг СрС).
Результаты.
Рост опухолей.
Средний рост опухолей с течением времени по результатам измерений площади поверхности (мм2) (+СЭ) на группу представлен на фиг. 9. РКАМЕ, приготовленный в АЗА (150 мМ №С1) + СрС, вызывает меньшую противоопухолевую защиту (больший рост опухоли) по сравнению с РКАМЕ АЗА (сорбит) + СрС. Аналогичная защита наблюдается для РКАМЕ АЗА (сорбит) + СрС и РКАМЕ в жидкой композиции АЗА + СрС).
Анализ образца: Гуморальный ответ.
Образцы сыворотки крови мышей (п=12) тестировали методом ЕЬ1ЗА на присутствие РКАМЕспецифических антител через 14 суток после последней из 4 иммунизации, как описано ниже. Антительный ответ (общее количество 1д) оценивали методом ЕЬ1ЗА с использованием очищенного рекомбинантного белка РКАМЕ в качестве покрывающего антигена. Образцы сыворотки крови иммунизированных животных анализировали на присутствие РКАМЕ-специфических антител. Среднее геометрическое стандартных титров (п=12 мышей) ± доверительный интервал 95%, полученных после 4 иммунизации, представлено на фиг. 7. РКАМЕ/АЗА + СрС, содержащий классический АЗА (150 мМ №С1), вызывает весьма незначительный антительный ответ, тогда как РКАМЕ/АЗА + СрС, содержащий АЗА (сорбит), индуцирует очень высокие титры антител. Этот ответ аналогичен ответу, вызываемому жидкой композицией АЗА.
Клеточный ответ (через 14 суток после 4 иммунизации, п=4 группы по 3 мыши на обрабатываемую группу).
Частота СЭ4 и СЭ8 Т-клеток, способных продуцировать цитокины, такие как ΙΡΝγ и ΤΝΡα, после иммунизации мышей РКАМЕ АЗА-СрС опухолевым антигеном, свидетельствует о способности различных композиций вызывать функциональный клеточный ответ. Через 14 суток после четвертой иммунизации процентные содержания СЭ4 и СЭ8 Т-клеток, продуцирующих цитокины (ΙΡΝγ и ΤΝΡα), измеряли методом окрашивания внутриклеточных цитокинов ^СЗ) на клетках селезенки иммунизированных
- 14 024074 мышей.
% СЭ4. продуцирующих ΙΡΝγ и ΤΝΡα (среднее значение ± стандартное отклонение) представлен на фиг. 8. р-значения намного ниже 0,05, что свидетельствует о значительном различии между группой 2 и группами 3 и 4.
Измеримый ответ в виде СЭ8 в этом эксперименте не обнаружен.
Показано, что белок РК.ЛМЕ, приготовленный в ΑδΑ (150 мМ №С1) + СрС, осаждается и вызывает статистически меньший специфический Τ-клеточный ответ по сравнению с РК.ЛМЕ, приготовленным в ΆδΆ (сорбит) + СрС. И наоборот, сходный хороший РКЛМЕ-специфический СЭ4 ответ получен, когда белок РК.ЛМЕ приготовлен в ΑδΑ (сорбит) + СрС и в жидкой композиции ΑδΑ + СрС.
Метод.
Модель опухоли СΤ26-РКΑМЕ и рост опухоли.
Клеточную линию СΤ26-РКΑМЕ получали путем трансфицирования клеточной линии СТ26 карциномы ободочной кишки экспрессирующей плазмидой млекопитающего, рС^NΑ3, кодирующей кДНК для РКЛМЕ (Ιηνίίτο^βη, Саг1кЬай, СΑ). В результате селекции с С418 (200 мкг/мл) и клонирования с ограниченным разведением получили клон, экспрессирующий РКΑМЕ (СΤ26-РКΑМЕ), что определено количественной РСК (полимеразная цепная реакция) в режиме реального времени (103 копий мРНК РΚΑМЕ/копия мышиного β-актина, который находится в диапазоне уровня экспрессии РКΑМЕ опухолями человека).
Клетки СТ26-РКЛМЕ выращивали ίη νίΐτο при 37°С с 5% СО2 в среде КРМ1 с 10% фетальной телячьей сыворотки, 1% Ь-глутамина, 1% пенициллина-стрептомицина, 1% не-незаменимых аминокислот, 1% пирувата натрия и 0,1% β-меркаптоэтанола. Клетки трипсинизировали, дважды промывали в бессывороточной среде и в 200 мкл среды КРМ1 подкожно инъецировали в правый бок четырех групп мышей СВ6Р1 через 14 суток после последней иммунизации РКΑМЕ, как описано выше. Рост индивидуальной опухоли оценивали дважды в неделю. Произведение 2 основных диаметров каждой опухоли регистрировали с течением времени, и эти данные представлены как средняя площадь поверхности опухоли (мм2) в каждой группе животных.
Анализ образца: Гуморальный ответ.
Перед добавлением образцов сыворотки крови планшет для иммуноанализа покрывали антигеном РКΑМЕ в течение ночи при 4°С. После взаимодействия с сывороткой крови в течение 90 мин при 37°С биотинилированное кроличье полное антитело против мышиных иммуноглобулинов добавляли в течение 90 мин при 37°С. Комплекс антиген-антитело выявляли инкубированием со стрептавидинбиотинилированным пероксидазным комплексом в течение 30 мин при 37°С. Этот комплекс затем выявляли путем добавления тетраметилбензидина (ТМВ) в течение 10 мин при комнатной температуре и реакцию останавливали добавлением 0,2 М Η2δΟ4. Оптические плотности регистрировали при 450 нм.
Метод анализа образца: Клеточный ответ (продукция ΙΡΝγ/ΤΝΡα).
Продукцию ΙΡΝγ и ΤΝΡα СЭ4 и СЭ8 Т-клетками измеряли методом проточной цитометрии (ΓδΚ2 от ВесЮп ΌίεΚίηκοη) с использованием окрашивания внутриклеточных цитокинов (Ιί','δ) на клетках селезенки иммунизированных мышей (4 группы по 3 мыши на группу) после 2-часовой стимуляции пулом перекрывающихся 15-мерных пептидов, покрывающих всю последовательность белка РКΑМЕ.
Стимуляция Т-клеток.
Клетки селезенки иммунизированных животных повторно стимулировали пулом 123 15-мерных пептидов, перекрывающихся 11 аминокислотами, покрывающих всю последовательность РКΑМЕ. Пептиды (1 мкг/мл/пептид) смешивали с 106 Т-клеток (клетки селезенки) в течение 2 ч при 37°С в 96-луночном планшете (И-образные лунки) в конечном объеме 200 мкл КРМ1 с 5% ΡСδ (фетальная телячья сыворотка), содержащей 2 мкг/мл антитела против СЭ49й и 2 мкг/мл антитела против СЭ28.
После инкубирования добавляли 50 мкл брефелдина (1/1000) в КРМ1 5% ΡСδ.
Внутриклеточное окрашивание.
Окрашивание СЭ4/СЭ8:
клетки трансфицировали в 96-луночном планшете (конические лунки); центрифугировали при 1000 об/мин в течение 5 мин при 4°С; промывали 250 мкл буфера ΡΑСδ (ΓΒδ, 1% ΡСδ) клеточные осадки инкубировали с 50 мкл 2.4С2 1/50 в буфере ΡΑСδ в течение 10 мин при 4°С;
мкл МаЦсг Ш1х СЭ4-РЕ (разведение МаЬ: 1/200) и СЭ8РегСР (разведение МаЬ: 1/200) в буфере ΡΑСδ добавляли в течение 30 мин при 4°С;
промывали в буфере ΡΑСδ (1200КРМ-10').
Пермеабилизация клеток:
осадки инкубировали с 200 мкл раствора суЮНх-еуЮРегт в течение 20 мин при 4°С;
промывали раствором ре^т\VΑδΗ 1х (1200КРМ-10'), раствор ре^т\VΑδΗ 10-кратно концентрированный, разведение в стерильной воде.
- 15 024074
Окрашивание внутриклеточных ΙΡΝγ и ΙΝΡα:
осадки инкубировали в течение 2 ч при 4°С с 50 мкл М1х ΙΡΝγ АРС (разведение Май: 1/50) и ΊΝΡα Р1ТС (флуоресцеинизотиоцианат) (разведение Май: 1/50) в растворе регт\УА8Н 1х;
промывали раствором регш\УА8Н 1х (1200КРМ-10'); осадки ресуспендировали в буфере РАС8;
выполняли анализ с использованием РАС8 (клеточный сортер с активацией флуоресценции). Брефелдин (Оо1ощ Р1ид): ΒΌ кат. № 555029.
Су1оПх/су1орегт: Рйагтшдеп (ΒΌ) кат. № 554722.
Буфер регт/\уа5Й: РйагтшдеЦВО) кат. № 554723.
Крысиные антитела против мышиных СЭ49й. очищенные ΝΑ ЬЕ: ΒΌ кат № 553154.
Крысиные антитела против мышиных СЭ28, очищенные ΝΑ ЬЕ: ΒΌ кат № 553295.
Крысиные антитела против мышиных СЭ8а регСр: ΒΌ кат № 553036.
Крысиные антитела против мышиных СЭ4 РЕ: ΒΌ кат № 556616.
Крысиные антитела против мышиных ΙΡΝγ АРС: ΒΌ кат № 554413.
Крысиные антитела против мышиных ТОТа Р1ТС: ΒΌ кат № 554418.
Антитела против мышиных СЭ16/СЭ32 (2.4О2) Βесΐоη Оюкпъоп кат № 553142 (0,5 мг/мл).
- 16 024074
Перечень последовательностей <110> Ьетохпе, Оотгпгдие
НепсЗегдскх, Уегопгдие <120> Новые композиции <130> УВ63569 ' <160> 5 <170> Газк5Е<2 для ВДгпйомз νθΓδίοη 4.0 <210> 1 <211> 20 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Олигонуклеотид <400> 1 кссакдасдк ксскдасдкк <210> 2 <211> 18 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Олигонуклеотид <400> 2 ксксссадсд кдсдссак <210> 3 <211> 30 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Олигонуклеотид <400> 3 ассдакдасд ксдссддкда сддсассасд <210> 4 1 <211> 24 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Олигонуклеотид <400> 4 ксдксдкккк дксдккккдк сдкк <210> 5 <211> 20 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Олигонуклеотид <400> 5 кссакдасдк Дсскдакдск
Claims (9)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Водная адъювантная композиция, содержащая:(а) агонист ТБК-4 (То11-подобного рецептора 4) и сапонин в составе липосом;(б) неионный агент, обеспечивающий изотоничность, где ионная сила адъювантной композиции составляет менее 100 мМ.
- 2. Водная адъювантная композиция по п.1, где неионный агент, обеспечивающий изотоничность, представляет собой полиол.
- 3. Водная адъювантная композиция по п.2, где полиол представляет собой сорбит или сахарозу.
- 4. Водная адъювантная композиция по любому из пп.1-3, где указанный агонист ТБК-4 представляет собой 3О-МРБ (3-деацилированный монофосфориллипид А).
- 5. Водная адъювантная композиция по любому из пп.1-4, где указанный сапонин представляет собой Рш1А или его производное.- 17 024074
- 6. Водная адъювантная композиция по п.5, где производное 0ш1Л представляет собой 0821.
- 7. Иммуногенная композиция, содержащая антиген или антигенный препарат и водную адъювантную композицию по любому из пп.1-6.
- 8. Способ приготовления иммуногенной композиции по п.7, включающий стадию разведения лиофилизированной композиции, содержащей по меньшей мере один антиген или антигенный препарат вместе с водной адъювантной композицией по любому из пп.1-6.
- 9. Набор для использования в способе приготовления иммуногенной композиции по п.8, содержащий (1) лиофилизированную композицию, содержащую антиген или антигенный препарат; и (2) водную адъювантную композицию по любому из пп.1-6.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB0910046.2A GB0910046D0 (en) | 2009-06-10 | 2009-06-10 | Novel compositions |
| PCT/EP2010/058017 WO2010142685A1 (en) | 2009-06-10 | 2010-06-08 | Adjuvant compositions comprising a non-ionic isotonicity agent |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201190286A1 EA201190286A1 (ru) | 2012-06-29 |
| EA024074B1 true EA024074B1 (ru) | 2016-08-31 |
Family
ID=40937237
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201190286A EA024074B1 (ru) | 2009-06-10 | 2010-06-08 | Водная адъювантная композиция, содержащая неионный агент, обеспечивающий изотоничность, иммуногенная композиция и набор на её основе и способ приготовления иммуногенной композиции |
Country Status (31)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20120087976A1 (ru) |
| EP (1) | EP2440242B1 (ru) |
| JP (3) | JP5647677B2 (ru) |
| KR (1) | KR101473686B1 (ru) |
| CN (2) | CN102458457B (ru) |
| AU (1) | AU2010257538B2 (ru) |
| BR (1) | BRPI1012890B1 (ru) |
| CA (1) | CA2764421C (ru) |
| CL (1) | CL2011003113A1 (ru) |
| CO (1) | CO6440528A2 (ru) |
| CY (1) | CY1115522T1 (ru) |
| DK (1) | DK2440242T3 (ru) |
| DO (1) | DOP2011000346A (ru) |
| EA (1) | EA024074B1 (ru) |
| ES (1) | ES2494442T3 (ru) |
| GB (1) | GB0910046D0 (ru) |
| HR (1) | HRP20140792T1 (ru) |
| IL (1) | IL216231A0 (ru) |
| MA (1) | MA33412B1 (ru) |
| MX (1) | MX2011013162A (ru) |
| MY (1) | MY159819A (ru) |
| NZ (1) | NZ596503A (ru) |
| PE (1) | PE20120319A1 (ru) |
| PL (1) | PL2440242T3 (ru) |
| PT (1) | PT2440242E (ru) |
| RS (1) | RS53550B1 (ru) |
| SG (1) | SG176638A1 (ru) |
| SI (1) | SI2440242T1 (ru) |
| SM (1) | SMT201400134B (ru) |
| UA (1) | UA104888C2 (ru) |
| WO (1) | WO2010142685A1 (ru) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2668775T3 (es) | 2009-06-10 | 2018-05-22 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Compuestos tetracíclicos |
| MY160110A (en) | 2010-08-20 | 2017-02-28 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Composition comprising tetracyclic compound |
| ME02380B (me) | 2010-12-14 | 2016-06-20 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Mikobakterijska antigena kompozicija |
| HUE040055T2 (hu) | 2012-09-25 | 2019-02-28 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | RET inhibitor |
| AU2015236106A1 (en) * | 2014-03-25 | 2016-10-20 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Non-toxic adjuvant formulation comprising a monophosphoryl lipid a (MPLA)-containing liposome composition and a saponin |
| US10350214B2 (en) | 2014-04-25 | 2019-07-16 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Preparation containing tetracyclic compound at high dose |
| EP3135671B1 (en) | 2014-04-25 | 2019-09-18 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Novel crystal of tetracyclic compound |
| TWI718102B (zh) | 2014-08-08 | 2021-02-11 | 日商中外製藥股份有限公司 | ４環性化合物的非晶質體 |
| JP6741596B2 (ja) | 2015-01-16 | 2020-08-19 | 中外製薬株式会社 | 併用医薬 |
| WO2017079582A1 (en) | 2015-11-06 | 2017-05-11 | Adjuvance Technologies, Inc. | Triterpene saponin analogues |
| WO2018104313A1 (en) * | 2016-12-07 | 2018-06-14 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Novel process |
| WO2019079160A1 (en) | 2017-10-16 | 2019-04-25 | Adjuvance Technologies, Inc. | TRITERPENIC SAPONIN ANALOGS |
| US11744890B2 (en) | 2017-12-01 | 2023-09-05 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Saponin extraction |
| US11591364B2 (en) | 2017-12-01 | 2023-02-28 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Saponin purification |
| IL281079B1 (en) | 2018-09-04 | 2024-08-01 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Production method for a tetracyclic compound |
| WO2024190865A1 (ja) * | 2023-03-15 | 2024-09-19 | ユナイテッド・イミュニティ株式会社 | 脂質粒子 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996033739A1 (en) * | 1995-04-25 | 1996-10-31 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Vaccines containing a saponin and a sterol |
| WO1999056776A2 (en) * | 1998-05-07 | 1999-11-11 | Corixa Corporation | Adjuvant composition and methods for its use |
| US6869607B1 (en) * | 1998-01-30 | 2005-03-22 | Intercell Ag | Vaccine formulations |
| WO2008142133A1 (en) * | 2007-05-24 | 2008-11-27 | Glaxosmithkline Biologicals S.A | Lyophilised antigen composition |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5804381A (en) | 1996-10-03 | 1998-09-08 | Cornell Research Foundation | Isolated nucleic acid molecule encoding an esophageal cancer associated antigen, the antigen itself, and uses thereof |
| ES2162139T5 (es) * | 1993-03-23 | 2008-05-16 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Composiciones de vacuna que contienen monofosforil-lipido a 3-o-desacilado. |
| HU228467B1 (en) | 1998-02-05 | 2013-03-28 | Smithkline Beecham Biolog | Tumor-associated antigen derivatives from the mage family, and nucleic acid sequences encoding them, used for the preparation of fusion proteins and of compositions for vaccination |
| JP3765232B2 (ja) | 2000-11-16 | 2006-04-12 | 株式会社ジェイテクト | 電動式パワーステアリング装置及びこれに用いる歯車の製造方法 |
| GB0409940D0 (en) | 2004-05-04 | 2004-06-09 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
| GB0411411D0 (en) * | 2004-05-21 | 2004-06-23 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccines |
| WO2006056142A1 (fr) * | 2004-11-29 | 2006-06-01 | Changchun Huapu Biotechnology Co., Ltd. | Desoxynucleotides cpg a brin unique a utiliser comme adjuvant |
| US9931397B2 (en) * | 2005-06-27 | 2018-04-03 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Immunogenic composition |
| TWI457133B (zh) * | 2005-12-13 | 2014-10-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | 新穎組合物 |
| JP2010532656A (ja) | 2007-01-15 | 2010-10-14 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | 癌退縮抗原ｎｙ−ｅｓｏ−１およびｌａｇｅ−１を含む融合タンパク質 |
| US20080187535A1 (en) | 2007-01-15 | 2008-08-07 | Normand Blais | Vaccine |
| GB0910045D0 (en) * | 2009-06-10 | 2009-07-22 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Novel compositions |
-
2009
- 2009-06-10 GB GBGB0910046.2A patent/GB0910046D0/en not_active Ceased
-
2010
- 2010-06-08 PE PE2011002071A patent/PE20120319A1/es not_active Application Discontinuation
- 2010-06-08 AU AU2010257538A patent/AU2010257538B2/en active Active
- 2010-06-08 KR KR1020127000650A patent/KR101473686B1/ko active IP Right Grant
- 2010-06-08 PT PT107210361T patent/PT2440242E/pt unknown
- 2010-06-08 SI SI201030689T patent/SI2440242T1/sl unknown
- 2010-06-08 MY MYPI2011005958A patent/MY159819A/en unknown
- 2010-06-08 US US13/377,425 patent/US20120087976A1/en not_active Abandoned
- 2010-06-08 SG SG2011089315A patent/SG176638A1/en unknown
- 2010-06-08 WO PCT/EP2010/058017 patent/WO2010142685A1/en active Application Filing
- 2010-06-08 NZ NZ596503A patent/NZ596503A/xx not_active IP Right Cessation
- 2010-06-08 EA EA201190286A patent/EA024074B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2010-06-08 CA CA2764421A patent/CA2764421C/en active Active
- 2010-06-08 BR BRPI1012890-5A patent/BRPI1012890B1/pt active IP Right Grant
- 2010-06-08 MA MA34506A patent/MA33412B1/fr unknown
- 2010-06-08 UA UAA201113798A patent/UA104888C2/ru unknown
- 2010-06-08 DK DK10721036.1T patent/DK2440242T3/da active
- 2010-06-08 CN CN201080024992.1A patent/CN102458457B/zh active Active
- 2010-06-08 CN CN201410497386.1A patent/CN104367997B/zh active Active
- 2010-06-08 PL PL10721036T patent/PL2440242T3/pl unknown
- 2010-06-08 RS RSP20140476 patent/RS53550B1/en unknown
- 2010-06-08 MX MX2011013162A patent/MX2011013162A/es active IP Right Grant
- 2010-06-08 JP JP2012514447A patent/JP5647677B2/ja active Active
- 2010-06-08 ES ES10721036.1T patent/ES2494442T3/es active Active
- 2010-06-08 EP EP10721036.1A patent/EP2440242B1/en active Active
-
2011
- 2011-11-09 IL IL216231A patent/IL216231A0/en active IP Right Grant
- 2011-11-11 DO DO2011000346A patent/DOP2011000346A/es unknown
- 2011-12-07 CL CL2011003113A patent/CL2011003113A1/es unknown
- 2011-12-12 CO CO11170871A patent/CO6440528A2/es active IP Right Grant
-
2014
- 2014-08-20 HR HRP20140792AT patent/HRP20140792T1/hr unknown
- 2014-08-29 CY CY20141100698T patent/CY1115522T1/el unknown
- 2014-09-15 SM SM201400134T patent/SMT201400134B/xx unknown
- 2014-09-26 JP JP2014196018A patent/JP5977789B2/ja active Active
-
2016
- 2016-05-16 JP JP2016097525A patent/JP6261647B2/ja active Active
-
2017
- 2017-07-10 US US15/645,473 patent/US20180021417A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996033739A1 (en) * | 1995-04-25 | 1996-10-31 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Vaccines containing a saponin and a sterol |
| US6869607B1 (en) * | 1998-01-30 | 2005-03-22 | Intercell Ag | Vaccine formulations |
| WO1999056776A2 (en) * | 1998-05-07 | 1999-11-11 | Corixa Corporation | Adjuvant composition and methods for its use |
| WO2008142133A1 (en) * | 2007-05-24 | 2008-11-27 | Glaxosmithkline Biologicals S.A | Lyophilised antigen composition |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA024074B1 (ru) | Водная адъювантная композиция, содержащая неионный агент, обеспечивающий изотоничность, иммуногенная композиция и набор на её основе и способ приготовления иммуногенной композиции | |
| US10434167B2 (en) | Non-toxic adjuvant formulation comprising a monophosphoryl lipid A (MPLA)-containing liposome composition and a saponin | |
| CN103781469B (zh) | 含有佐剂的以muc1为基础的糖脂肽疫苗 | |
| JP2012529465A (ja) | 低塩化ナトリウム濃度を有する免疫原性組成物 | |
| US10702594B2 (en) | Dried saponin liposomal composition | |
| US20200061186A1 (en) | Novel process | |
| KR19990082360A (ko) | 수두 대상포진 바이러스 유전자 63 생성물에 대한 백신 | |
| EP1361862B1 (en) | Liposome-mediated dna administration | |
| US20230104171A1 (en) | Engineered Alum-binding SARS-CoV-2 Immunogens | |
| Gregory | Development of a Liposomal Vaccination System for Immunity-Modulating Antitumor Therapy | |
| Graser et al. | Development of a Liposomal Vaccination System for Immunity-Modulating Antitumor Therapy |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ KG MD TJ TM |