EA023168B1

EA023168B1 - Ингибитор катепсина с

Info

Publication number: EA023168B1
Application number: EA201391155A
Authority: EA
Inventors: Кристофер Э. Нейпп; Майкл Р. Палович
Original assignee: Глэксосмитклайн Интеллекчуал Проперти Дивелопмент Лимитед
Priority date: 2011-02-11
Filing date: 2012-02-09
Publication date: 2016-04-29
Also published as: JP2014506577A; KR20140048857A; CN103491777B; TW201302736A; BR112013020510A2; DOP2013000182A; US9187461B2; AR085163A1; AU2012214405B2; PE20140999A1; JP5931929B2; WO2012109415A1; IL227814A0; EP2672821B1; MX2013009279A; US20140364476A1; EA201391155A1; CA2827157A1; NZ614540A; ZA201306074B

Abstract

Раскрываются 4-амино-2-бутенамиды формулы (I), обладающие фармакологической активностью, фармацевтические композиции, содержащие их, и способы лечения заболеваний, опосредуемых ферментом катепсином С, таких как хроническое обструктивное заболевание легких.

Description

Настоящее изобретение относится к некоторым 4-амино-2-бутенамидам, которые являются ингибиторами катепсина С, фармацевтическим композициям, содержащим данные соединения, и к их применению в лечении заболеваний, опосредуемых ферментом катепсином С, таких как хроническое обструктивное заболевание легких.

Предпосылки изобретения

Катепсины представляют собой семейство ферментов, входящее в папаиновое подсемейство цистеинпротеаз. В научной литературе описаны катепсины В, С, Р, Н, К, Ь, δ, V и X. Катепсин С также известен в литературе как дипептидилпептидаза, или ОРРЬ.

Ряд опубликованных недавно исследований начали описывать роль катепсина, которую он играет в некоторых воспалительных процессах. См., например, Аб1Й8оп е! а1., ТЬе 1оигиа1 οί СНшса1 1иуе8ЙдаЬои 109:363-371 (2002): Тгап е! а1., АгеЫуек οί ВюсЬет18йу аиб ВюрЬу818с8, 403:160-170 (2002); ТЫе1е е! а1., ТЬе 1онгпа1 οί 1ттипо1оду, 158:5200-5210 (1997); Вьбеге е! а1., ТЬе 1онгпа1 οί Вю1одюа1 СЬет18!гу, 277:32339-32347 (2002); МаЬее е! а1., ТЬе 1онгпа1 οί 1ттипо1оду, 160:5880-5885; МсСшге е! а1., ТЬе .Тоигиа1 οί Вю1одюа1 СЬет18!гу, 268:2458-2467 и РаЙ8 е! а1., ΡΕΒδ Ьейег8, 369:326-330 (1995). Из данных публикаций следует, что катепсин С соэкспрессируется в гранулах с некоторыми серинпротеазами и функционирует, перерабатывая проформы данных протеаз в активные формы, которые затем высвобождаются из гранул воспалительных клеток и пополняют участки воспаления. Будучи активированными, данные протеазы выполняют ряд функций, включая разрушение различных компонентов внеклеточного матрикса, что вместе может способствовать распространению повреждения ткани и хронического воспаления.

Например, хроническое обструктивное заболевание легких (СОРИ) является хроническим воспалительным заболеванием, с участием катепсина С. Хронический бронхит и эмфизема обычно случаются вместе у СОРИ пациентов. Хронический бронхит обычно характеризуется хроническим влечением за собой кашля, тогда как эмфизема обычно характеризуется постоянным расширением воздушных пространств, периферическим к концевым бронхиолам, и разрушением стенок воздушных путей.

Курение является важным фактором риска развития СОРИ. Подвергание действию сигаретного дыма и других вредных частиц и газов может приводить в результате к хроническому воспалению легких. В ответ на такое действие воспалительные клетки, такие как СГО8' Т-клетки, макрофаги и нейтрофилы, пополняют данную область. Данные, пополнившие воспалительные клетки, высвобождают протеазы, которые, как считают, играют важную роль к этиологии заболеваний с помощью ряда механизмов. Считается, что протеазы, вовлеченные в данный процесс, включают нейтрофильную эластазу (ΝΕ) серинпротеаз, катепсин С и протеиназу 3, все высвободившиеся из нейтрофилов, гранзимы А и В, высвобождаемые из цитотоксических Т-клеток или природных клеток убийц; и химазы, высвобождаемые из клеток молочной железы. Катепсин С, по-видимому, вовлечен в активирование всех данных ферментов. В дополнение, мыши, нокаутированные катепсином С, устойчивы к расширению воздушного пространства легких и инфильтрации воспалительных клеток и в сигаретном дыме, и подверженных действию озона моделях СОРИ. См., Сиау е! а1., Сиггеи! Торю8 ίη Мейюша1 СЬет18йу, 2010, 10, 708-716; см. также Ройойи е! а1. (2008), 1пйаттайоп Ке8еагсЬ, 57 (δυρρ1 2), δ. 104.

Ревматоидный артрит (КА) является еще одним хроническим заболеванием, при котором может играть роль катепсин С. Нейтрофилы пополняются в участке воспаления сустава и высвобождения катепсина С, ΝΕ и протеиназы 3, которые, считается, являются ответственными частично за разрушение хряща, связанное с КА (Ни, Υ. и РЬат, С.Т. (2005), АйЬьтЙ8 КЬеит, 52:2553-2558).

Другие состояния, при которых может играть роль катепсин С, включают остеоартрит, астму и рассеянный склероз. См., например, Ма!8Ш, К.; Υиуата, Ν.; Акайуа. М.; Υο8ΐιί<Γι. Ν.Η; Маеба, М.; δη^ίΐη, Υ.; Ι/иЬага. К., Иепййсайоп οί ап айетайуе 8рйсшд уапап! οί са!Ьер8ш С/б1рерЦбу1-рерЦба8е I, Сепе. 293 (1-2):1-7, 2002 1ип 26; ^о1!ег8, Р.Т; Ьа1д-^еЬ8!ег, М.; СаидЬеу, С.Н., И1рерйбу1 рерйба8е I с1еауе8 та!йх-а88оаа!ей рго!еьп8 апб 18 е\рге88еб таш1у Ьу та8! се118 т погта1 бод аиуау8, Атепсап 1оигпа1 οί Ке8рйа!огу Се11 & Мо1еси1аг Вю1оду, 22 (2):183-90, 2000.

Одним из путей лечения данных состояний является ингибирование активности серинпротеаз, вовлекаемых в воспалительный процесс, особенно активности ΝΕ. См. например, ОЬЬауа8Й1, №и!горЫ1 е1а8!а8е 1пЙ1Ьйог8 а8 !геа!теп! ίοτ СОРИ, Ехрей Орт. 1пуе8Йд. Ишд8, 11(7):965-980 (2002); δЬаρ^^ο, №ийорЫ1 Е1а8!а8е: Ра!Ь С1еагег, Ра!Ьодеп Кй1ег, ог 1и8! Ра!Ьо1од1с?, Ат. 1. Ке8ри. Се11 Мо1. Вю1. 26:266268 (2002). Ввиду роли, которую катепсин С играет в активировании некоторых серинпротеаз, особенно ΝΕ, желательно получить соединения, которые ингибируют их активность, которые тем самым ингибируют активность серинпротеазы. Таким образом, существует потребность в идентификации соединений, которые ингибируют катепсин С, которые могут использоваться в лечении множества состояний, опосредуемых катепсином С.

Имеются дополнительные активности катепсина С, которые также могут быть связаны с этиологией заболеваний. Было продемонстрировано, что катепсин С участвует в миграции нейтрофилов при разви- 1 023168 тии аневризм аорты за счет механизма, который до конца не выяснен (Радапо, М.В. с1 а1. (2007), ΡΝΑδ, 104:2855-2860). Таким образом, болезненными процессами, которые вовлекают миграцию нейтрофилов, так же как и высвобождением протеолитических ферментов, можно управлять с помощью ингибирования катепсина С. Катепсин С также в высокой степени экспрессируется в легочном эпителии, где он может участвовать в переработке других ферментов, еще не идентифицированных. Сообщается также, что катепсин С расщепляет калликреин-4, который, как считают, участвует в созревании зубной эмали (Туе, С.Е. е! а1. (2009), 1. Эеп1а1 Кек. 88: 323-327). Наконец, катепсин С сам по себе высвобождается из клеток и может участвовать в разложении матриксных белков.

Краткое содержание изобретения

Настоящее изобретение включает новые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли:

где К¹ и К², взятые вместе с азотом, к которому они присоединены, представляют 5-6-членное насыщенное или ненасыщенное кольцо, необязательно конденсированное с фенильной группой; и

К³ представляет собой (С₁-С₆)алкил или (С₃-С₆)циклоалкил(С₁-С₄)алкил.

Настоящее изобретение также направлено на применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли при предотвращении, регулировании или лечении респираторного или воспалительного заболевания, такого как хроническая обструктивная болезнь легких или ринит.

В дополнительном аспекте изобретение относится к фармацевтически приемлемой готовой форме композиции, включающей соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый наполнитель.

Краткое описание фигур

Фиг. 1 показывает накопление общих лейкоцитов в бронхоальвеолярной жидкости для санации С57ВЬ/6 мышей после перорального введения дважды в день соединений примера 1 и 2 в указанных дозах в течение последних 6 недель во время 18-недельного воздействия сигаретного дыма.

Фиг. 2 показывает накопление нейтрофилов в бронхоальвеолярной жидкости для санации С57ВЬ/6 мышей после перорального введения дважды в день соединений примера 1 и 2 в указанных дозах в течение последних 6 недель во время 18-недельного воздействия сигаретного дыма.

Фиг. 3 показывает накопление мононуклеарных клеток в бронхоальвеолярной жидкости для санации С57ВЬ/6 мышей после перорального введения дважды в день соединений примера 1 и 2 в указанных дозах в течение последних 6 недель во время 18-недельного воздействия сигаретного дыма.

Подробное описание изобретения

Термины и их определение.

Используемый здесь термин алкил обозначает углеводородный радикал с прямой или разветвленной цепью, имеющий указанное число атомов углерода. Используемые здесь термины (С1-С₄)алкил и (С1-С6)алкил обозначают алкильную группу, имеющую по меньшей мере от 1 и до 4 или 6 атомов углерода соответственно. Примеры таких алкильных групп с прямой или разветвленной цепью, используемых в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются ими, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, изопентил, н-гексил, и разветвленные аналоги н-гексила.

Используемый здесь термин циклоалкил относится к неароматическому, насыщенному, циклическому углеводородному кольцу, содержащему указанное число атомов углерода. Термин (С3-С6)циклоалкил относится к неароматическому циклическому углеводородному кольцу, имеющему от 3 до 6 кольцевых атомов углерода. Примеры (С₃-С₆)циклоалкильных групп, используемых в настоящем изобретении, включают циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил.

Подходящим образом К¹ и К², взятые вместе с азотом, к которому они присоединены, представляют 5-6-членное насыщенное или ненасыщенное кольцо, необязательно конденсированное с фенильным фрагментом. В выбранном воплощении К¹ и К², взятые вместе с азотом, к которому они присоединены, представляют 1Н-индол-1-ил или 2,3-дигидро-1Н-индол-1-ил. В еще одном воплощении К¹ и К², взятые вместе с азотом, к которому они присоединены, представляют 2,3-дигидро-1Н-индол-1-ил.

Подходящим образом К³ представляет собой (С1-С₆)алкил или (С₃-С₆)циклоалкил(С1-С₄)алкил.

В выбранных воплощениях К³ представляет собой этил, изобутил или втор-бутил. В дополнительных выбранных воплощениях К³ представляет собой циклопропилметил, циклобутилметил, циклопентилметил или циклогексилметил. В еще одном выбранном воплощении К³ представляет собой циклопропилметил.

Одним конкретным воплощением изобретения является соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль, где

К¹ и К², взятые вместе с азотом, к которому они присоединены, представляют собой 5-6-членное насыщенное или ненасыщенное кольцо, необязательно сконденсированное с фенильным фрагментом;

- 2 023168

К³ представляет собой (С1-С₆)алкил или (Сз-Сб)циклоалкил(С1-С₂)алкил.

Еще одним конкретным воплощением изобретения является соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль, где

К¹ и К², взятые вместе с азотом, к которому они присоединены, представляют собой 2,3-дигидро1Н-индол-1-ил;

К³ представляет собой (С₁-С₆)алкил или (С₃-С₆)циклоалкил(С₁-С₂)алкил.

Конкретными соединениями формулы (I) являются

4-амино-И-[(1§,2Е)-4-(2,3-дигидро-1Н-индол-1-ил)-1-этил-4-оксо-2-бутен-1-ил]тетрагидро-2Нпиран-4-карбоксамид и

4-амино-И-[(1§,2Е)-4-(2,3-дигидро-1Н-индол-1-ил)-1-(2-метилпропил)-4-оксо-2-бутен-1ил]тетрагидро-2Н-пиран-4-карбоксамид или их фармацевтически приемлемые соли.

Когда описываемое соединение или его соль называют по его наименованию или изображают структурно, следует понимать, что соединение или его соль могут существовать в кристаллических формах, некристаллических формах или их смеси. Соединение или соль могут также проявлять полиморфизм (т.е. способность находиться в различных кристаллических формах). Данные различные кристаллические формы обычно называют полиморфами. Следует понимать, что, когда дается название или изображается структура, соединение также включает все его полиморфы. Полиморфы имеют тот же химический состав, но отличаются по уплотнению, геометрическому расположению и другим описательным свойствам кристаллического твердого состояния. Полиморфы, следовательно, могут иметь различные физические качества, такие как вид, плотность, твердость, деформируемость, стабильность и свойства растворения. Полиморфы обычно обнаруживают различные точки плавления, ИК-спектры и характер рентгеновской порошковой дифракции, которые могут использоваться для идентификации. Специалисты в данной области понимают, что различные полиморфы могут получаться, например, путем изменения или регулирования условий, используемых при кристаллизации/перекристаллизации соединения.

Вследствие их потенциального использования в медицине соли соединений формулы (I) предпочтительно являются фармацевтически приемлемыми. Подходящие фармацевтически приемлемые соли могут включать аддитивные соли кислот или оснований. Данное изобретение предусматривает также превращение одной фармацевтически приемлемой соли соединения данного изобретения, например гидрохлоридной соли, в другую фармацевтически приемлемую соль соединения данного изобретения, например сульфатную соль.

Используемый здесь термин фармацевтически приемлемое(ая) обозначает соединение, которое является подходящим для фармацевтического применения. Соли соединений изобретения, которые являются подходящими для применения в медицине, являются теми, в которых противоион или ассоциируемый растворитель является фармацевтически приемлемым. Однако соли и сольваты, имеющие не фармацевтически приемлемые противоионы или ассоциируемые растворители, охватываются объемом настоящего изобретения, например, для применения в качестве промежуточных соединений при получении других соединений изобретения и их солей и сольватов.

Соединения формулы (I) имеют один или более атомов азота, достаточно основных для образования фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей с помощью обработки подходящей кислотой. Подходящие кислоты включают фармацевтически приемлемые неорганические кислоты и фармацевтически приемлемые органические кислоты. Характерные представители фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей включают ацетатную, аспартатную, бензолсульфонатную, бензоатную, бикарбонатную, битартратную, бромидную, кальций эдетатную, камзилатную, карбонатную, хлоридную, цитратную, дигидрохлоридную, эдетатную, эдизилатную, эстолатную, эзилатную, формиатную, фумаратную, галактуронатную, глюцептатную, глюконатную, глутаматную, гликоллиларсанилатную, гексаноатную, гидробромидную, гидрохлоридную, гидроксинафтоатную, йодидную, изетионатную, молочную, лактобионатную, малатную, малеатную, манделатную, мезилатную, метилсульфатную, мукатную, напсилатную, нитратную, памоатную, пантотенатную, фосфат/дифосфатную, полигалактуронатную, пропионатную, салицилатную, стеаратную, субацетатную, сукцинатную, сульфатную, таннатную, тартратную, теоклатную и тозилатную соли.

Другие виды соединений изобретения имеют кислотную функциональную группу, достаточно кислотную для образования солей. Представители солей включают фармацевтически приемлемые соли металлов, такие как соли натрия, калия, лития, кальция, магния, алюминия и цинка; карбонаты и бикарбонаты фармацевтически приемлемых катионов металлов, таких как натрий, калий, литий, кальций, магний, алюминий и цинк; фармацевтически приемлемых органических первичных, вторичных и третичных аминов, включающих алифатические амины, ароматические амины, алифатические диамины и гидроксиалкиламины, такие как метиламин, этиламин, 2-гидроксиэтиламин, диэтиламин, триэтиламин, этилендиамин, этаноламин, диэтаноламин, циклогексиламин, триэтаноламин, холин, аргинин, лизин и гистидин.

В объем изобретения входят все возможные стехиометрические и не стехиометрические формы солей соединений формулы (I).

- 3 023168

Соединения изобретения ингибируют фермент катепсин С и могут быть полезны при лечении состояний, при которых патология приписывается (по меньшей мере, частично) вовлечению в процесс катепсина С, или при состояниях, при которых ингибирование катепсина С дает некоторое клиническое преимущество, даже хотя патология (даже частично) и не является следствием действия катепсина С. Примеры таких состояний включают СОРЭ, ревматоидный артрит, остеоартрит, астму и рассеянный склероз. Соответственно, в еще одном аспекте изобретение направлено на способы лечения таких состояний.

Способы лечения согласно изобретению предусматривают введение эффективного количества соединения изобретения пациенту, нуждающемуся в этом.

Используемый здесь термин лечение в отношении состояния обозначает (1) улучшение состояния, подвергаемого лечению, или одного или более биологических проявлений подвергаемого лечению состояния; (2) препятствие (а) одному или более моментов в биологическом каскаде, которые ведут или являются ответственными за подвергаемое лечению состояние, или (Ь) одному или более биологических проявлений подвергаемого лечению состояния; или (3) снятие одного или более симптомов или эффектов, ассоциируемых с подвергаемым лечению состоянием.

Эффективное количество обозначает количество лекарства или фармацевтического агента, которое вызывает биологическую или медицинскую ответную реакцию ткани, системы, животного или человека, которой добивается, например, исследователь или клиницист. Кроме того, термин терапевтически эффективное количество обозначает любое количество, которое по сравнению с субъектом, который не принимал такое количество, дает в результате улучшение лечения, излечение, предотвращение или улучшение состояния заболевания, расстройства или побочного эффекта или снижение степени прогрессирования заболевания или расстройства. Данный термин также охватывает количества, эффективные для усиления нормальных физиологических функций.

Используемый здесь термин пациент относится к человеку или животному.

Соединения изобретения могут вводиться любым подходящим способом введения, включая как системное введение, так и местное введение. Системное введение предусматривает пероральное введение, парентеральное, трансдермальное, ректальное введение и введение с помощью ингаляции. Парентеральное введение относится к способам введения, иным, чем энтеральное, трансдермальное или с помощью ингаляции, и представляет собой местное введение с помощью инъекции или инфузии. Парентеральное введение включает внутривенную, внутримышечную и подкожную инъекцию или инфузию. Ингаляция относится к введению в легкие пациента, будь то ингаляция через рот или через носовые проходы. Местное введение включает применение к коже, а также внутриглазное, ушное, внутривлагалищное и внутриназальное введение.

Соединения изобретения могут вводиться за один раз или в соответствии с режимом дозировки, при котором ряд доз вводятся с варьированием интервалов времени в течение заданного периода времени. Например, дозы могут вводиться один, два, три или четыре раза в день. Дозы могут вводиться до тех пор, пока не будет достигнут желаемый терапевтический эффект, или независимо от достижения терапевтического эффекта. Подходящие режимы дозировки для соединения изобретения зависят от фармакокинетических свойств данного соединения, таких как абсорбция, распределение и период полуразложения, которые могут быть определены специалистом. В дополнение, подходящие режимы дозировки, включая вводимое количество и длительность введения при таких режимах для соединений изобретения, зависят от подвергаемого лечению состояния, тяжести данного состояния, возраста и физического состояния пациента, которого лечат, медицинской истории болезни пациента, характера сопутствующей терапии, конкретного способа выбранного введения, желаемого терапевтического эффекта и аналогичных факторов, известных и проверенных специалистом. Далее, таким специалистам очевидно понятно, что подходящие режимы дозировки могут требовать регулировки режима дозировки в зависимости от ответной реакции отдельного пациента на данный режим, или на протяжении времени, при котором пациент нуждается в изменении режима. Типичные суточные дозы составляют в интервале от 1 до 1000 мг.

Изобретение включает применение соединений изобретения для приготовления композиции для лечения или улучшения состояния болезней, опосредуемых ферментом катепсином С, у субъекта, нуждающегося в этом, при котором композиция представляет смесь одного или более соединений изобретения и необязательного фармацевтически приемлемого наполнителя.

Изобретение дополнительно предоставляет применение соединений изобретения в качестве активных терапевтических веществ, в частности для лечения заболеваний, опосредуемых катепсином С. Конкретно, изобретение предусматривает применение соединений изобретения для лечения СОРИ, ревматоидного артрита, остеоартрита, астмы и рассеянного склероза.

В еще одном аспекте изобретение включает применение соединений изобретения в производстве медикаментов для использования в лечении указанных выше расстройств.

- 4 023168

Композиции.

Перед введением пациенту соединения изобретения обычно, но необязательно, формируются в фармацевтическую композицию. Соответственно, в соответствии с еще одним аспектом изобретение направлено на фармацевтическую композицию, включающую соединение изобретения и фармацевтически приемлемый наполнитель.

Фармацевтическая композиция изобретения может быть получена и упакована в массовую форму, при этом эффективное количество соединения изобретения может экстрагироваться, а затем даваться пациенту в таком виде, как порошок, сиропы и растворы для инъекций. Альтернативно, фармацевтическая композиция изобретения может получаться и упаковываться в единичной дозированной форме, в которой каждая физически дискретная единица содержит эффективное количество соединения изобретения. При получении формы дозированных единиц фармацевтические композиции изобретения в типичном случае содержат от 1 до 1000 мг.

Фармацевтические композиции изобретения обычно содержат одно соединение изобретения. Однако согласно некоторым воплощениям фармацевтические композиции изобретения содержат более одного соединения изобретения. Например, в некоторых воплощениях фармацевтические композиции изобретения содержат два соединения изобретения. В дополнение, фармацевтические композиции изобретения могут необязательно дополнительно включать одно или более дополнительных фармацевтически активных соединений. Фармацевтические композиции изобретения обычно содержат более одного фармацевтически приемлемого наполнителя. Однако в некоторых воплощениях фармацевтические композиции изобретения содержат один фармацевтически приемлемый наполнитель.

Используемый здесь термин фармацевтически приемлемый наполнитель обозначает материал, композицию или наполнитель, включаемые в назначаемую форму или композицию, которая является безопасной при введении пациенту. Каждый наполнитель должен быть совместим с другими ингредиентами фармацевтической композиции во избежание ситуаций, когда при смешивании компонентов возникали бы взаимодействия, которые существенно снижали бы эффективность соединений изобретения при введении пациенту, и взаимодействия, которые давали бы в результате фармацевтические композиции, которые не являются фармацевтически приемлемыми. Кроме того, каждый наполнитель, конечно, должен быть достаточно высокой чистоты, чтобы сделать композицию фармацевтически приемлемой.

Соединения изобретения и фармацевтически приемлемый наполнитель или наполнители обычно формируют в дозировочную форму, адаптируемую для введения пациенту желаемым способом введения. Например, дозировочные формы включают формы, приспосабливаемые для (1) перорального введения, такие как таблетки, капсулы, каплеты, пилюли, пастилки, порошки, сиропы, эликсиры, суспензии, растворы, эмульсии, саше и облатки; (2) парентерального введения, такие как стерильные растворы, суспензии и порошки для переустройства; (3) трансдермального введения, такие как трансдермальные пластыри; (4) ректального введения, например в виде свечей; (5) ингаляции, такой как в виде аэрозолей и растворов; и (6) местного введения, например в виде кремов, мазей, лосьонов, растворов, паст, спреев, пен и гелей.

Подходящие фармацевтически приемлемые наполнители варьируют в зависимости от выбранной конкретно дозировочной формы. В дополнение, подходящие фармацевтически приемлемые наполнители могут выбираться для конкретного действия и могут служить в виде композиции. Например, определенные фармацевтически приемлемые наполнители могут выбираться по их способности облегчать получение однородных дозировочных форм. Некоторые фармацевтически приемлемые наполнители могут выбираться по их способности облегчать получение стабильных дозировочных форм. Некоторые фармацевтически приемлемые наполнители могут выбираться по их способности облегчать перенос или транспортировку соединения или соединений изобретения, введенных пациенту из одного органа или части тела в другой орган или часть тела. Некоторые фармацевтически приемлемые наполнители могут выбираться по их способности усиливать восприимчивость пациента.

Подходящие фармацевтически приемлемые наполнители включают следующие типы наполнителей: разбавители, наполнители, связующие, дезинтегрирующие агенты, смазки, агенты, способствующие скольжению, гранулирующие агенты, агенты покрытий, смачивающие агенты, растворители, сорастворители, суспендирующие агенты, эмульгаторы, подсластители, вкусовые или придающие запах агенты, маскирующие вкус или запах агенты, окрашивающие агенты, антиотвердители, увлажнители, хелатирующие агенты, пластификаторы, увеличивающие вязкость агенты, антиоксиданты, консерванты, стабилизаторы, поверхностно-активные вещества и буферные агенты. Специалисты понимают, что некоторые фармацевтически приемлемые наполнители могут выполнять более одной функции и могут служить для альтернативных действий в зависимости от того, много ли наполнителя присутствует в готовой рецептурной форме и какие другие ингредиенты присутствуют в готовой форме.

Специалисты обладают знаниями и квалификацией в данной области, чтобы иметь возможность выбрать подходящие фармацевтически приемлемые наполнители в соответствующих количествах для использования в изобретении. Кроме того, существует ряд источников, которые доступны специалистам и которые описывают фармацевтически приемлемые наполнители и могут быть полезными при выборе подходящих фармацевтически приемлемых наполнителей. Примерами источников являются РспипдЮпА

- 5 023168

РНагтасеикса1 Баепсез (Маск РиЪИзНшд Сотрапу), Тке НапбЪоок οί РНагтасеикса1 АббФуез (Со\усг РиЪИзЫпд Мтйеб) и Тке НапбЪоок οί РНагтасеикса1 Ехс1р1еп1з ((Не Атепсап Ркагтасеикса1 Аззошайоп апб (Не РНагтасеикса1 Ргезз).

Фармацевтические композиции изобретения получают с использованием приемов и методов, известных специалистам в данной области. Некоторые из используемых в данной области методов описываются в РепипдЮп'з РНагтасеибса1 Баепсез (Маск РиЪИзЫпд Сотрапу).

Согласно одному аспекту изобретение направлено на твердую оральную дозировочную форму, такую как таблетка или капсула, включающую эффективное количество соединения изобретения и разбавитель или наполнитель. Подходящие разбавители и наполнители включают лактозу, сахарозу, декстрозу, маннит, сорбит, крахмал (например, кукурузный, картофельный и прежелатинизированный крахмал), целлюлозу и их производные (например, микрокристаллическую целлюлозу), сульфат кальция и двухосновный фосфат кальция. Оральная твердая дозировочная форма может дополнительно включать связующее. Подходящие связующие включают крахмал (например, кукурузный, картофельный и прежелатинизированный крахмал), желатин, аравийскую камедь, альгинат натрия, альгиновую кислоту, трагакант, гуаровую смолу, повидон и целлюлозу и ее производные (например, микрокристаллическую целлюлозу). Оральная твердая дозировочная форма может дополнительно включать дезинтегрирующий агент. Подходящие дезинтегрирующие агенты включают кросповидон, натрий-крахмалгликолят, кроскармеллозу, альгиновую кислоту и натрий-карбоксиметилцеллюлозу. Оральная твердая дозировочная форма может дополнительно включать лубрикант. Подходящие лубриканты включают стеариновую кислоту, стеарат магния, стеарат кальция и тальк.

Согласно еще одному аспекту изобретение направлено на дозировочную форму, приспособленную для введения пациенту ингаляцией. Например, соединение изобретения может вводиться ингаляцией в легкие в виде сухого порошка, аэрозоля, суспензии или раствора.

Сухие порошковые композиции для доставки в легкие с помощью ингаляции включают соединение изобретения в виде тонко измельченного порошка вместе с одним или более фармацевтически приемлемыми наполнителями в виде тонкоизмельченных порошков. Фармацевтически приемлемые наполнители, особенно подходящие для использования в сухих порошках, известны специалистам в данной области и включают лактозу, крахмал, маннит и моно-, ди- и полисахариды.

Сухой порошок может вводиться пациенту из ингалятора в виде резервуара с сухим порошком (КНР1), имеющего резервуар, подходящий для хранения множества (не отмеренных доз) медикамента в форме сухого порошка. КНР1 обычно включают средства для отмеривания каждой дозы медикамента из резервуара в доставочное положение. Например, отмеривающие средства могут включать мерную чашку, которая является подвижной из первого положения, в котором чашка может заполняться медикаментом из резервуара, во второе положение, в котором отмеренная доза медикамента становится доступной для ингаляции пациенту.

Альтернативно, сухой порошок может быть представлен в капсулах (например, желатиновых или пластиковых), картриджах или блистерных упаковках для использования в многодозовом ингаляторе сухого порошка (МЭР1). МЭР1 представляют собой ингаляторы, в которых медикамент включен в многодозовую упаковку, содержащую (или иначе несущую) множество определенных доз (или их часть) медикамента. Когда сухой порошок представлен в виде блистерной упаковки, она обычно включает множество блистеров для содержания медикамента в форме сухого порошка. Блистеры обычно располагаются упорядоченным образом для легкого высвобождения из него медикамента. Например, блистеры могут располагаться на блистерной упаковке в форме диска или блистеры могут быть продолговатыми по форме, например, включать полоску или ленту. Каждая капсула, картридж или блистер может, например, содержать от 20 мкг до 10 мг соединения изобретения.

Аэрозоли могут образовываться с помощью суспендирования или растворения соединения по изобретению в жидком газе-вытеснителе. Подходящие жидкие газы-вытеснители включают галогенуглероды, углеводороды и другие ожижженные газы. Характерные представители жидких газов-вытеснителей включают трихлорфторметан (пропеллент 11), дихлорфторметан (пропеллент 12), дихлортетрафторэтан (пропеллент 114), тетрафторэтан (НРА-134а), 1,1-дифтороэтан (НРА-152а), дифторметан (НРА-32), пентафторэтан (НРА-12), гептафторпропан (НРА-227а), перфторпропан, перфторбутан, перфторпентан, бутан, изобутан и пентан. Аэрозоли, включающие соединение по изобретению, обычно вводят пациенту с помощью ингалятора с отмеренными дозами (ΜΌΙ). Такие устройства известны специалистам в данной области.

Аэрозоль может содержать дополнительные фармацевтически приемлемые наполнители, обычно используемые с многодозовыми ингаляторами, такие как поверхностно-активные вещества, лубриканты, сорастворители и другие наполнители, для улучшения физической стабильности рецептурной формы, для улучшения технических характеристик клапана, для улучшения стабильности или вкуса.

Суспензии и растворы, содержащие соединение изобретения, могут также вводиться пациенту с помощью распылителя. Растворителем или суспензионным агентом, используемым для распыления, может быть любая фармацевтически приемлемая жидкость, такая как вода, водный солевой или физиологический раствор, спирты или гликоли, например этанол, изопропиловый спирт, глицерин, пропиленгли- 6 023168 коль, полиэтиленгликоль и пр. или их смеси. Солевые растворы используют соли, которые почти или совсем не обладают фармакологической активностью после введения. Для данной цели могут использоваться как неорганические соли, такие как соли щелочного металла или аммонийные соли, например хлорид натрия, хлор калия, так и органические соли, такие как калиевые, натриевые и аммониевые соли органических кислот, например аскорбиновой, лимонной, уксусной, винной и пр.

К суспензии или раствору могут добавляться другие фармацевтически приемлемые наполнители. Соединение изобретения может быть добавлением неорганической кислоты, например соляной, азотной, серной и/или фосфорной кислоты; органической кислоты, например аскорбиновой, лимонной, уксусной и винной кислоты и др.; комплексообразующего агента, такого как ΕΌΤΑ или лимонной кислоты и их солей; или антиоксиданта, такого как витамин Е или аскорбиновая кислота. Для стабилизации соединения изобретения могут использоваться по одному или вместе. Могут добавляться консерванты, такие как хлорид бензалкония или бензойная кислота и ее соли. Могут добавляться поверхностно-активные вещества, особенно для улучшения физической стабильности суспензий. Они включают лецитин, динатрийдиоксилсульфосукцинат, олеиновую кислоту и сорбитановые сложные эфиры.

Способы получения.

Соединения формулы (I) могут быть получены с использованием синтетических процедур, проиллюстрированных на схемах, приведенных ниже, или с помощью приемов, известных квалифицированному химику-органику. Приемы синтеза, предоставленные на данных схемах, применимы для получения соединений изобретения, имеющих множество различных К¹ -К³ групп с применением соответствующих предшественников, которые, если понадобится, подходящим образом защищены, для достижения совместимости с показанными здесь реакциями. Последующее снятие защиты, если необходимо, дает соединения описанного здесь в общем типа. Хотя схемы показаны с соединениями только формулы (I), они являются иллюстративными для процессов, которые могут использоваться для получения соединений изобретения.

Наименования соединений произведены с использованием компьютерной программы наименования ЛСП/Штс Рго У6.02, доступной от Айуапсей СНстМгу Осус1ортсп1. 1пс., 110 Уопдс 81гсс1. 14* Р1оог, Τοτοηΐο, Ойагю, Сапайа, М5С 1Τ4 (1и1р//\у\у\у.асй1аЪ5.сот/).

Как показано на схеме 1, соединения формулы (I) могут быть получены с помощью многостадийной последовательности реакций, из Вос-защищенной α-аминокислоты, такой как промышленно доступная (2§)-2-({[(1,1-диметилэтил)окси]карбонил}амино)бутановая кислота или

Х-(трет-бутоксикарбонил)-Е-лейцин. Образование соответствующего амидного производного, такого как амид АсгигсЪ, с использованием соответствующего амина или соли амина, такой как гидрохлорид Ν,Ο-диметилгидроксиламина, с соответствующим реагентом сочетания, таким как 1,1'-карбонилдиимидазол, и соответствующим основанием, таким как ΌΙΡΕΑ, в соответствующем растворителе, таком как СН₂С1₂, с последующим восстановлением соответствующим восстанавливающим агентом, таким как ЬгА1Н₄, в соответствующем растворителе, таком как Εΐ₂Ο, дает требуемый альдегид. Образование еноата с соответствующим олефинирующим реагентом, таким как метил (трифенилфосфоранилиден)ацетат, в соответствующем растворителе, таком как Εΐ₂Ο, сопровождается сложноэфирным гидролизом соответствующим реагентом, таким как ЫОН, в соответствующем растворителе, таком как ТНР, МсОН и вода. Данная реакция сопровождается образованием амидной связи соответствующим ациклическим или циклическим амином и соответствующим реагентом или реагентами сочетания, такими как Т3Р® или ВОР реагент, и соответствующим основанием, таким как Εΐ₃Ν или ΌΙΡΕΑ, в соответствующем растворителе, таком как СН₂С1₂ или БМР. Вос снятие защиты соответствующим реагентом, таким как ТРА, сопровождается сочетанием освобожденного амина с 4-((третбутоксикарбонил)амино)тетрагидро-2Н-пиран-4-карбоновой кислотой, соответствующим реагентом или реагентами сочетания, такими как Т3Р®, и соответствующим основанием, таким как Εΐ₃Ν, в соответствующем растворителе, таком как СН₂С1₂. Вос снятие защиты соответствующим реагентом, таким как НС1, приводит в результате к образованию желаемых соединений формулы (I), которые могут быть выделены в форме соответствующей соли или превращены в свободное основание с использованием общепринятых приемов.

- 7 023168

a) НС1-НИ(ОСН₃)СН₃, ΌΙΡΕΆ, 1,1'-карбонилдиимидазол, СН₂С1₂;

b) ЫЛ1Н₄, Е1₂О;

c) РИТГОНСО2СН3, ΕΪ2Ο;

6) ЫОН, ТНР, МеОН, вода;

е) НИК¹ К², Т3Р®, ЕЮЛс, Εΐ₃Ν, СН₂С1₂ или 11\КК\ ВОР реагент, ΌΙΡΕΆ, ИМР; ί) ТРА, СН₂С1₂;

д) 4-((трет-бутоксикарбонил)амино)тетрагидро-2Н-пиран-4-карбоновая кислота, Т3Р®, ΕΏΑ^ Εΐ₃Ν, СН₂С1₂;

Ь) НС1, изопропанол.

Примеры синтеза

Изобретение будет описано с помощью следующих примеров, которые являются всего лишь иллюстративными и не должны рассматриваться как ограничивающие объем настоящего изобретения. Все температуры даны в градусах Цельсия, все растворители имеют наивысшую, доступную чистоту, а все реакции проходят в безводных условиях в атмосфере аргона (Аг) или азота (Ν₂), когда необходимо.

Для тонкослойной хроматографии использовали тонкослойные пластины с силикагелем АпаЬесЬ СР и силикагелем Ε. Мегск 60 Р-254. Обе, флэш и гравитационную, хроматографии осуществляли на Ε. Мегск Кте8е1де1 60 (230-400 меш) силикагеле. СотЫР1а8Ь® систему, используемую для очистки в данном изобретении, закупали у фирмы Есо. 1пс. СошЫИакЬ® очистку осуществляли с использованием предварительно наполненных силикагелем колонок, детектора с УФ-длиной волны 254 нм и множества растворителей или сочетаний растворителей. Препаративную НРЬС выполняли с использованием препаративной системы СШоп с варьируемой длиной волны УФ-детекции или АдПеШ Ма88 Ииес1е6 АШоРтер (МИАР) системы и с масс-, и УФ-детекцией с варьируемой длиной волны. При очистке использовали множество колонок с обращенной фазой, например Ьипа 5и С18(2) 100А, §ипРпе С18, ХВпбде С18 с выбором подложки колонки в зависимости от условий, используемых при очистке. Соединения элюируют с использованием градиента СН₃СИ и воды. В нейтральных условиях использовали СН₃СИ и водный градиент без всякого дополнительного модификатора, в кислотных условиях использовали кислотный модификатор, обычно 0,1% ТРА (добавляемую и к СН₃СИ, и к воде), и в основных условиях использовали основный модификатор, обычно 0,1% ИН₄ОН (добавляемый к воде). Аналитическую НРЬС проводили с использованием системы АдПеШ с варьируемой длиной волны УФ-детекции с использовании хроматографии с обращенной фазой с СН₃СИ и водным градиентом с 0,05 или 0,1% ТРА модификатором (добавляемым к каждому растворителю). ЬС-М§ определяли с использованием или РЕ §шех 8шд1е Циа6тиро1е ЬС/М§ АР1-150а, или \Уа1ег5 Ζφ инструментов. Соединение анализировали с использованием колонки с обращенной фазой, например, ТЬегто АциакП/Ациакй С18, АсциЪу ИРЬС С18, ТЬегто НурегеП Со16, элюируемой с использованием СН₃СИ и водного градиента с кислотным модификатором, таким как 0,02% ТРА или 0,1% муравьиная кислота.

Спектры ЯМР (ядерно-магнитного резонанса) регистрировали при 400 МГц с использованием Вгикег ΑVΑNСΕ 400 или Вгискег ИРХ400 спектрометра. СИС1₃ представляет дейтериохлороформ, ИМ§О-6₆ представляет гексадейтериодиметилсульфоксид и МеОИ представляет тетрадейтериометанол. Химические сдвиги приводятся в частях на миллион (δ) вниз от внутреннего стандарта тетраметилсилана (ТМ§) или калиброванные до остаточного протонного сигнала в ЯМР растворителе (например, СНС1₃ в СИС1₃). Сокращения для ЯМР данных являются следующими: 8 = синглет, 6 = дублет, I = триплет,

- 8 023168 с| = квартет, т = мультиплет, 66 = дублет дублетов, 61 = дублет триплетов, арр = видимый, Ьг = уширенный. 1 обозначает константу ЯМР сочетания, измеряемую в герцах. Точки плавления определяли с использованием устройства Е1ес1то1Ьетта1 9100 (Е1ес1то1Ьетта1 Еидтеегшд Ы6.).

Нагревание реакционных смесей с микроволновыми облучениями осуществляли на δπιίΐΐι СгеаЮт (закупаемом у Рет8оиа1 СЬетМгу. РохЬото, МА, владельцем которой теперь является Вю1аде), Еттук ОрИпи/ег (закупаемом у Рет8опа1 СЬетМгу) или Ехр1огег (закупаемом у СЕМ, МайЬете, ЫС) микроволнах.

Картриджи или колонки, содержащие основанные на полимерах функциональный группы (кислота, основание, хелаторы металлов и др.), могут использоваться как часть обработки соединений. Аминовые колонки или картриджи используются для нейтрализации или подщелачивания кислотных реакционных смесей или продуктов. Они включают ΝΗ2 аминопропил 8РЕ-е6 8РЕ картриджи, доступные от АррЬеб 8ератайои8, и диэтиламино 8РЕ картриджи, доступные от ипйе6 СЬетка1 ТесЬпо1од1е8, 1пс.

Сокращения перечислены в таблице ниже. Все другие сокращения такие, как описаны в АС8 5>1у1е Ош6е (Атепсап СЬетка1 8оае1у, АакЫпдЮп, ОС, 1986).

Таблица сокращений

ВОР реагент: гексафторфосфат бензотриазол-1-илокси- трис(диметиламино)фосфония	®ТЗР: ангидрид пропанфосфоновой кислоты
ЕСзИ: триэтиламин	СН₂С1₂: дихлорметан
ΏΙΡΕΑ: Ν,Ν-диизопропилэтиламин	ΏΜ3Ο: диметилсульфоксид
ТЕА: трифторуксусная кислота	ТНЕ: тетрагидрофуран
НС1: соляная кислота	ΏΜΕ: Ν,Ν-диметилформамид
ИаНСО₃: бикарбонат натрия	ЕЕОАс: этилацетат
На₂5О₄: сульфат натрия	ЕС₂О: диэтиловый эфир
ЫА1Н₄: литийалюминийгидрид	МеОН: метанол
мл: миллилитр(ы)	СЩСИ: ацетонитрил
Мин: минута(ы)	ад.: водный
ч . : час(ы)	М: молярный

г: грамм(ы)	Ммоль: миллимоль(и)
мг: миллиграмм(ы)	ЕТ(КТ): комнатная температура

Промежуточные соединения

Промежуточное соединение 1.

1,1 -Диметилэтил-(( 18)-1-{ [метил(метилокси)амино] карбонил} пропил)карбамат

К раствору (28)-2-({[(1,1-диметил)окси]карбонил}амино)бутановой кислоты (2,50 г, 12,3 ммоль) в ТНР (15,0 мл) добавляли 1,1'-карбонилдиимидазол (2,39 г, 14,8 ммоль) порциями на протяжении около 10 мин. После перемешивания 30 мин при КТ добавляли раствор гидрохлорида Ν,Ο-диметилгидроксиламина (1,32 г, 13,5 ммоль) и Э1РЕА (2,36 мл, 13,5 ммоль) в ДМФ (4,0 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при КТ с последующим концентрированием в вакууме. Остаток разбавляли Е1ОАс (50 мл) и промывали 1 М водн. НС1 (2x20 мл), насыщенным водным ЫаНСО₃(2x20 мл) и солевым раствором (20 мл). Органический слой сушили над Ыа₂8О₄, фильтровали и концентрировали в вакууме, получая указанное в заголовке соединение (2,60 г, 88%) в виде прозрачного бесцветного масла.

ЬС-М8 т/ζ 247 (М+Н)+, 0,94 мин (время удержания).

Промежуточное соединение 2.

1,1 -Диметилэтил-[( 18)-1 -формилпропил]карбамат

К раствору ЫА1Н₄ (0,453 г, 11,9 ммоль) в Е1₂О (20 мл) при 0°С добавляли по каплям раствор

1,1-диметилэтил-((18)-1-{[метил(метокси)амино]карбонил}пропил)карбамат (2,67 г, 10,8 ммоль) в Е1₂О

- 9 023168 (15 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин при 0°С и гасили ЕЮАс (6,5 мл) с последующим 5% водным бисульфатом калия (6,5 мл). Реакционную смесь промывали 1 М водн. НС1 (3x10 мл), насыщенным водным ЫаНСО₃ (3x10 мл) и солевым раствором (10 мл). Органический слой сушили над №-ь8О.-|. фильтровали и концентрировали в вакууме, получая указанное в заголовке соединение в виде прозрачного бесцветного масла.

Промежуточное соединение 3.

Метил-(2Е,48)-4-({[(1,1-диметилэтил)окси]карбонил}амино)-2-гексеноат

К перемешиваемому раствору метил (трифенилфосфоранилиден)ацетата (4,35 г, 13,0 ммоль) в ЕьО (25 мл) при комнатной температуре добавляли раствор промежуточного соединения 2 в ЕьО (15 мл). Реакционную смесь перемешивали на протяжении ночи при комнатной температуре. Твердое вещество удаляли фильтрованием и раствор концентрировали в вакууме. Очистка с помощью флэшхроматографии на колонке (0-50% ЕЮАс/гексаны) давала указанное в заголовке соединение (1,44 г, 55% на протяжении двух стадий) в виде прозрачного бесцветного масла.

ЬС-М8 т/ζ 244 (М+Н)+, 0,98 мин (время удержания).

Промежуточное соединение 4.

(2Е,48)-4-({[(1,1-Диметилэтил)окси]карбонил}амино)-2-гексеновая кислота

ЫОН (2,95 г, 123 ммоль) добавляли к раствору метил (2Е,48)-4-({[(1,1диметилэтил)окси]карбонил}амино)-2-гексеноата (6 г, 24,66 ммоль) в ТГФ (50 мл), МеОН (10,00 мл) и воде (50,0 мл). Реакционную смесь перемешивали на протяжении ночи при комнатной температуре. Спустя 18,5 ч реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления ТГФ и МеОН. Добавляли воду (40 мл) и водную смесь доводили до рН 3 с помощью 6 М водного НС1, измеряемого с помощью рН бумаги.

Добавляли ЕЮАс (80 мл), слои разделяли и водный слой экстрагировали ЕЮАс (2x40 мл). Объединенные органические слои сушили над Ыа₂8О₄, концентрировали при пониженном давлении и сушили в глубоком вакууме, получая 6,09 г указанного в заголовке соединения.

ЬС-М8 т/ζ 230 (М+Н)+, 0,77 мин (время удержания).

Промежуточное соединение 5.

1,1 -Диметилэтил-[( 18,2Е)-4-(2,3-дигидро-1Н-индол-1 -ил)-1 -этил-4-оксо-2-бутен-1 -ил]карбамат

Раствор 50 мас.% Т3Р® в ЕЮАс (22,00 мл, 37,0 ммоль) добавляли по каплям с помощью воронки к раствору (2Е,48)-4-({[(1,1-диметилэтил)окси]карбонил}амино)-2-гексеновой кислоты (5,65 г, 24,64 ммоль), 2,3-дигидро-1Н-индола (2,76 мл, 24,64 ммоль) и Е1₃Ы (11 мл, 7 9 ммоль) в СН₂С1₂ (90 мл) при 0°С (температура бани). Гасили добавлением по каплям насыщенного водного ЫаНСО₃ (50 мл). Слои разделяли и реакционную смесь промывали 10% лимонной кислотой (1x50 мл). Органический слой концентрировали в токе азота и остаток очищали с помощью флэш-хроматографии на колонке, получая 7,21 г (89%) указанного в заголовке соединения.

ЬС-М8 т/ζ 331 (М+Н)+, 1,05 (время удержания).

Промежуточное соединение 6.

Трифторацетат [(18,2Е)-4-(2,3-дигидро-1Н-индол-1 -ил)-1 -этил-4-оксо-2-бутен-1 -ил] амина

ТЕА (25 мл, 324 ммоль) добавляли к раствору 1,1-диметилэтил [(18,2Е)-4-(2,3-дигидро-1Н-индол-1ил)-1-этил-4-оксо-2-бутен-1-ил]карбамата (7,21 г, 21,82 ммоль) в СН₂С1₂ (25 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре. Спустя 3,5 ч добавляли СН₂С1₂ (200 мл) и реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и сушили в глубоком вакууме.

ЬС-М8 т/ζ 231 (М+Н)+, 0,69 (время удержания).

- 10 023168

Промежуточное соединение 7.

1,1-Диметилэтил[4-({[(1§,2Е)-4-(2,3-дигидро-1Н-индол-1-ил)-1-этил-4-оксо-2-бутен-1ил]амино}карбонил)тетрагидро-2Н-пиран-4-ил]карбамат

Раствор 50 мас.% Т3Р® в ЕЮАс (1,3 мл, 2,184 ммоль) добавляли по каплям к раствору трифторацетата [(18,2Е)-4-(2,3-дигидро-1Н-индол-1-ил)-1-этил-4-оксо-2-бутен-1-ил]амина (500 мг, 1,452 ммоль), 4-((трет-бутоксикарбонил)амино)тетрагидро-2Н-пиран-4-карбоновой кислоты (356 мг, 1,452 ммоль) и Εΐ₃Ν (1 мл, 7,21 ммоль) в СН₂С1₂ (5 мл) при 0°С (температура бани). Ледяную баню удаляли и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре. Спустя 1 ч 20 мин реакционную смесь промывали насыщенным водным NаНСΟ₃ (1x5 мл) и 10% уксусной кислотой (1x5 мл). Органический слой концентрировали в токе азота, а остаток очищали с помощью флэш-хроматографии на колонке, получая 251 мг (38%) указанного в заголовке соединения.

ЬС-М8 т/ζ 458 (М+Н)+, 0,96 (время удержания).

Промежуточное соединение 8.

Ν²-{ [(1,1 -Диметилэтил)окси] карбонил} -Ν¹ -метил-Ν¹ -(метилокси) -Ь-лейцинамид

К раствору ^(трет-бутоксикарбонил)-Ь-лейцина (3,00 г, 13,0 ммоль) в ТГ'Ф (25,0 мл) добавляли 1,1'-карбонилдиимидазол (2,52 г, 15,6 ммоль) порциями на протяжении примерно 10 мин. После перемешивания 1 ч при комнатной температуре добавляли раствор гидрохлорида Ν,Ο-диметилгидроксиламина (1,39 г, 14,3 ммоль) и ΌΙΡΕΑ (2,49 мл, 14,3 ммоль) в ДМФ (6,0 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 2,5 ч при комнатной температуре с последующим концентрированием в вакууме. Остаток разбавляли ЕЮАс (50 мл) и промывали 1 М водн. НС1 (2x20 мл), насыщенным водным NаНСΟ₃ (2x20 мл) и солевым раствором (20 мл). Органический слой сушили над Ν;·ι₂δΟ.·|. фильтровали и концентрировали в вакууме, получая указанное в заголовке соединение (2,34 г, 66%) в виде прозрачного бесцветного масла.

ЬС-М8 т/ζ 275 (М+Н)+, 1,17 мин (время удержания).

Промежуточное соединение 9.

1,1 -Диметилэтил[( 18)-1 -формил-3 -метилбутил] карбамат

К раствору ЫА1Н₄ (0,356 г, 9,38 ммоль) в Е1₂О (20 мл) при 0°С добавляли по каплям раствор ^-{[{1,1-диметилэтил)окси]карбонил}-Л¹-метил-П¹-(метилокси)-Е-лейцинамида (2,34 г, 8,53 ммоль) в Е1₂О (15 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин при 0°С и гасили ЕЮАс (6 мл) с последующим 5% водным бисульфатом калия (6 мл). Реакционную смесь промывали 1 М водн. НС1 (2x10 мл), насыщенным водным NаНСΟ₃ (2x10 мл) и солевым раствором (10 мл). Органические слой сушили над №₂8О₄, фильтровали и промывали 1 М водн. НС1 (2x10 мл) и концентрировали в вакууме, получая указанное в заголовке соединение в виде прозрачного бесцветного масла.

Промежуточное соединение 10.

Метил(2Е,48)-4-({ [(1,1 -диметилэтил)окси] карбонил}амино)-6-метил-2-гептеноат

К перемешиваемому раствору метил(трифенилфосфоранилиден)ацетата (3,42 г, 10,2 ммоль) в Е1₂О (25 мл) при комнатной температуре добавляли раствор промежуточного соединения 9 в Е1₂О (15 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 ч при комнатной температуре. Твердое вещество удаляли фильтрованием и раствор концентрировали в вакууме. Очистка с помощью флэш-хроматографии на колонке (0-50% ЕЮАс/гексаны) давала указанное в заголовке соединение (1,74 г, 75% на протяжении двух стадий) в виде прозрачного бесцветного масла.

ЬС-М8 т/ζ 272 (М+Н)+, 1,22 мин (время удержания).

- 11 023168

Промежуточное соединение 11.

(2Е,48)-4-({[(1,1-Диметилэтил)окси]карбонил}амино)-6-метил-2-гептеновая кислота

К раствору метил (2Е,48)-4-({[(1,1-диметилэтил)окси]карбонил}амино)-6-метил-2-гептеноата (5,00 г, 18,43 ммоль) в ТГФ (15 мл), МеОН (15,0 мл) и воды (15 мл) добавляли ЫОН (2,206 г, 92,00 ммоль). После перемешивания в течение 2 ч при комнатной температуре реакционную смесь концентрировали в вакууме. Реакционную смесь подкисляли 6 М водн. НС1 до рН 5, а затем экстрагировали ЕЮАс. Органический слой промывали водой, сушили над Ыа₂8О₄, фильтровали и концентрировали в вакууме, получая указанное в заголовке соединение (4,7 г, 99%) в виде белого полутвердого вещества.

ЬС-М8 т/ζ 158 (М+Н-Вос)+, 0,94 мин (время удержания).

Промежуточное соединение 12.

1,1-Диметилэтил[(18,2Е)-4-(2,3-дигидро-1Н-индол-1-ил)-1-(2-метилпропил)-4-оксо-2-бутен-1ил]карбамат

К раствору (2Е,48)-4-({[(1,1-диметилэтил)окси]карбонил}амино)-6-метил-2-гептеновой кислоты (4,70 г, 18,26 ммоль) в ДМФ (30,0 мл) добавляли ВОР реагент (8,08 г, 18,26 ммоль) и О1РЕА (6,38 мл, 36,5 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 5 мин добавляли 2,3-дигидро1Н-индол (2,053 мл, 18,26 ммоль) перемешивание продолжали на протяжении ночи. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали ЕЮАс. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над Ыа₂ЗО₄, фильтровали, концентрировали в вакууме и очищали с помощью флэш-хроматографии на колонке (0-20% ЕЮАс/гексаны), получая указанное в заголовке соединение (4,83 г, 74%) в виде белого твердого вещества.

ЬС-М8 т/ζ 359 (М+Н)+, 1,18 мин (время удержания).

Промежуточное соединение 13.

Трифторацетат[(18,2Е)-4-(2,3-дигидро-1Н-индол-1-ил)-1-(2-метилпропил)-4-оксо-2-бутен-1ил]амина

К раствору 1,1-диметилэтил[(18,2Е)-4-(2,3-дигидро-1Н-индол-1-ил)-1-(2-метилпропил)-4-оксо-2бутен-1-ил]карбамата (3,21 г, 8,95 ммоль) в СН₂С1₂ (10,0 мл) добавляли ТРА (10 мл, 130 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 17,5 ч при комнатной температуре, а затем концентрировали при пониженном давлении и сушили в глубоком вакууме, получая указанное в заголовке соединение.

ЬС-М8 т/ζ 259 (М+Н)+, 0,76 мин (время удержания).

Промежуточное соединение 14.

1,1-Диметилэтил[4-({[(18,2Е)-4-(2,3-дигидро-1Н-индол-1-ил)-1-(2-метилпропил)-4-оксо-2-бутен-1ил]амино}карбонил)тетрагидро-2Н-пиран-4-ил]карбамат

Раствор 50 мас.% Т3Р® в ЕЮАс (1,2 мл, 2,016 ммоль) добавляли по каплям к раствору трифторацетата [(18,2Е)-4-(2,3-дигидро-1Н-индол-1-ил)-1-(2-метилпропил)-4-оксо-2-бутен-1-ил]амина (500 мг, 1,343 ммоль), 4-((трет-бутоксикарбонил)амино)тетрагидро-2Н-пиран-4-карбоновой кислоты (329 мг, 1,343 ммоль) и Е1₃Ы (0,93 мл, 6,71 ммоль) в СН₂С1₂ (5 мл) при 0°С (температура бани). Ледяную баню удаляли и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре. Спустя 1 ч 20 мин реакционную смесь промывали насыщенным водным ЫаНСО₃ (1x5 мл) и 10% лимонной кислотой (1x5 мл). Органический слой концентрировали в токе азота, а остаток очищали с помощью флэш-хроматографии на колонке, получая 204 мг (31%) указанного в заголовке соединения.

ЬС-М8 т/ζ 486 (М+Н)+, 1,07 мин (время удержания).

- 12 023168

Соединения формулы (I)

Пример 1.

Г идрохлорид 4 -амино -Ν-[(1δ,2Ε)-4-(2,3 -дигидро - 1Н-индо л-1 -ил) -1 -этил-4 -оксо-2 -буте н-1ил]тетрагидро-2Н-пиран-4-карбоксамида

Раствор концентрированной водн. НС1 (0,23 мл, 2,76 ммоль) добавляли к раствору 1,1-диметилэтил [4-({[(1§,2Е)-4-(2,3-дигидро-1Н-индол-1-ил)-1-этил-4-оксо-2-бутен-1-ил]амино}карбонил)тетрагидро-2Нпиран-4-ил]карбамата (251 мг, 0,549 ммоль) в изопропаноле (2,5 мл). Реакционную колбу снабжали воздушным конденсатором и нагревали до 65°С (температура бани) в течение 1 ч 45 мин. Растворитель выпаривали при пониженном давлении. К остатку добавляли воду и смесь концентрировали при пониженном давлении при 65°С. К остатку добавляли воду (2 мл) и смесь лиофилизовали, получая 193,3 мг (89%) указанного в заголовке соединения.

ЬС-М8 т/ζ 358 (М+Н)+, 0,68 (время удержания).

Ή ЯМР (400 МГц, метанол-б₄) δ (ррт) 8,14 (ушир.с, 1Н); 7,25 (д, 1=7,03 Гц, 1Н); 7,18 (т, 1=7,53 Гц, 1Н); 7,02-7,09 (м, 1Н); 6,83 (дд, 1=15,18, 6,65 Гц, 1Н); 6,49 (д, 1=14,8 Гц, 1Н); 4,56 (д, 1=7,28 Гц, 1Н); 4,22 (ушир.с, 2Н); 3,95 (д, 1=7,53 Гц, 1Н); 3,88-3,94 (м, 1Н); 3,71-3,78 (м, 2Н); 3,23 (ушир.с, 2Н); 2,39-2,46 (м, 2Н); 1,79-1,86 (м, 2Н); 1,75 (с, 1Н); 1,72 (д, 1=8,28 Гц, 1Н); 1,00 (т, 1=7,40 Гц, 3Н).

Пример 2.

Гидрохлорид 4-амино^-[(18,2Е)-4-(2,3-дигидро-1Н-индол-1-ил)-1-(2-метилпропил)-4-оксо-2бутен-1-ил]тетрагидро-2Н-пиран-4-карбоксамида

Раствор концентрированной водн. НС1 (0,22 мл, 2,64 ммоль) добавляли к раствору 1,1-диметилэтил [4-({[(1§,2Е)-4-(2,3-дигидро-1Н-индол-1-ил)-1-(2-метилпропил)-4-оксо-2-бутен-1ил]амино}карбонил)тетрагидро-2Н-пиран-4-ил]карбамата (251 мг, 0,517 ммоль) в изопропаноле (2,5 мл). Реакционную колбу снабжали воздушным конденсатором и реакционную смесь нагревали до 65°С (температура бани). Спустя 1 ч 45 мин растворитель выпаривали при пониженном давлении при 60°С. К остатку добавляли воду (5 мл) и смесь концентрировали при пониженном давлении при 65°С. К остатку добавляли воду (2 мл), и смесь лиофилизовали, получая 130,6 мг (60%) указанного в заголовке соединения.

ЬС-М8 т/ζ 386 (М+Н)+, 0,79 (время удержания).

Ή ЯМР (400 МГц, метанол-й₄) δ част/млн. 8,15 (д, 1=7,03 Гц, 1Н); 7,25 (д, 1=7,03 Гц, 1Н); 7,18 (т, 1=7,65 Гц, 1Н); 7,06 (т, 1=7,91 Гц, 1Н); 6,81 (дд, 1=15,18, 6,40 Гц, 1Н); 6,49 (ушир.с, 1Н); 4,73-4,85 (м, 2Н); 4,21 (т, 1=8,28 Гц, 2Н); 3,91-3,97 (м, 2Н); 3,70-3,77 (м, 2Н); 3,25-3,21 (м, 2Н); 2,35-2,48 (м, 2Н); 1,82 (д, 1=14,31 Гц, 2Н); 1,63-1,71 (м, 2Н); 1,50-1,57 (м, 1Н); 0,98 (дд, 1=11,92, 6,40 Гц, 6Н).

Биологическая предпосылка.

Биологический анализ(ы)).

Соединения формулы (I) являются ингибиторами катепсина С, которые непосредственно ингибируют активность серинпротеаз, которые активируются катепсином С, таким как ΝΕ. Соединения формулы (I), следовательно, могут применяться при лечении С'ОРЭ и других состояний, вовлекающих катепсин С и/или такие серинпротеазы. Биологическая активность соединения формулы (I) может быть определена с использованием любого подходящего анализа на определение соединения-кандидата как ингибитора катепсина С или на определение способности соединения-кандидата предотвращать опосредуемое катепсином С активирование определенных серинпротеаз, а также подходящие ткани и модели ίη νίνο.

А. Люминесцентный анализ жизнеспособности, основанный на транспептидировании лейцинлейцин-О-метил (ЬЬОМ) клеток

Принцип.

Было показано, что катепсин С катализирует транспептидирование дипептидил-метил-О-сложных эфиров в липосомах из линейных моноцитных клеток НЬ60, И937 или ТНР1, вызывая мембранолитический эффект, что приводит в результате к гибели клеток (ΌΕ ТЫе1е, Р. Ыркку ΡΝΑ8 1990. Уо1. 87, р. 8387). Данный механизм использовали для оценки активности катепсина С в клетках в присутствии соединений изобретения.

- 13 023168

Замороженные НЬ-60 клетки повторно суспендировали при 1,25х10⁵ клеток/мл в свежей предварительно подогретой Ιδοονβ'δ модифицированной Ои1Ьессо8' среде (ΕΜΌΜ, содержит 25 мМ глутамат) с 20% ΡΒδ. Данную суспензию распределяли (8 мкл) в белые низкообъемные 384-луночные планшеты. На планшеты предварительно помещали 100 нл соединения при наибольшей концентрации 2,5 мМ и серийно разбавляли 1:3. Контрольные и холостые лунки содержали 100 нл ДМСО. В каждую лунку затем добавляли 2 мкл свежего 1,25 мМ раствора лейцин-лейцин-О-метил (ЬЬОМ, ВасЬет) в ΙΜΌΜ плюс 25 мМ ΗΕΡΕδ (конечная концентрация ΕΕΟΜ 250 мкМ). Планшеты накрывали и инкубировали в течение 4 ч при 37°С в 5% СО₂ инкубаторе, затем удаляли и уравновешивали до комнатной температуры в течение 10 мин. Жизнеспособность клеток определяли с помощью Се11ТНег-С1о люминесцентного анализа (Рготеда) в соответствии с инструкциями производителя. Жизнеспособность клеток сравнивали с контролями, не содержащими ΕΕΟΜ (100%).

B. Анализ ίη νίίτο рекомбинантного катепсина С.

Активность рекомбинантного человеческого катепсина С измеряли с помощью расщепления фторогенного субстрата, Н^ег-Туг-АМС. Вкратце, 24 пМ катепсина С инкубировали с испытуемым соединением (например, ингибитором) в буфере, состоящем из 50 мМ ацетата натрия, 30 мМ хлорида натрия, мл ί'ΉΛΡδ. 1 мМ дитиотреитола, 1 мМ ΕΌΤΑ, рН 5,5 при комнатной температуре в течение 1 ч. После одночасового инкубирования испытуемого соединения с катепсином С начинали анализ на активность добавлением равного объема 0,010 мМ Η^Γ-Τ\τ-ΑΜί’ в том же буфере. Спустя 1 ч анализ на активность прекращали добавлением 1/5 объема 100 мкМ Е-64. Продукт реакции измеряли на счетчике флуоресценции при длине волны возбуждения 360 нм и длине волны эмиссии 460 нм и оборудованном 400 нм дихроичным зеркалом.

В среднем по двум экспериментам соединения примеров 1 и 2, каждое, показывали 50% ингибирование катепсина С при концентрации менее чем 1 нМ.

C. Подвергание мышей действию сигаретного дыма в ίη νίνο анализе.

Подвергание мышей действию сигаретного дыма и лечение лекарственным средством.

Начиная с возраста 3-4 недели самок мышей С57ВЬ/6 Саскюп ЬаЬогаФгу, Ваг НагЬог, ΜΕ) подвергали действию только через нос 4% сигаретного дыма от 3Р4Р сигарет (Со11еде о! АдпсиИиге, РеГегепсе С?1даге11е Ргодгат, ишуегЩу оГ Кейиску) в течение 2 ч/день, 5 дней/неделю в течение 18 недель. Дым генерировали Ваитдайпег-1аедег СδΜ 2070ί курительным устройством (СН Тес1то1още5 1пс., ХУебРеооЧ N1). Во время подвергания воздействию дыма или воздуха (бутафорский контроль) мышей содержали в трубках из нержавеющей стали, содержащих носовые конические вставки из нержавеющей стали. Через ч после окончательного подвергания действию дыма собирали бронхоальвеолярный лаваж (ВАЬ) жидкость (п=3 на группу с лечением). Во время конечных 6 недель 18-недельного подвергания действию мышам вводили перорально лекарственное средство или только наполнитель (1% метилцеллюлоза/25 мМ цитрат, рН 4,0) дважды в день) с интервалами 11 и 13 ч), 7 дней/неделя. Мыши, подвергаемые бутафорскому воздействию, получали только наполнитель, тогда как мыши, подвергаемые действию дыма, получали одно из следующих лечебных средств: один наполнитель, соединение примера 1 в количестве 1, 10 или 30 мг/кг или соединение примера 2 - 1, 10 или 30 мг/кг. Мыши получали первую ежедневную дозу лекарства или одного наполнителя за 1 ч до начала подвергания действию дыма/имитации.

Бронхоальвеолярный лаваж.

Мышей подвергали эвтаназии с использованием в.п. инъекции 0,1 мл Ра1а1 Р1и8 (УойесЬ РЬагтасейюак, ОеагЬогп, ΜΙ) и в трахеи вставляли трубчатые канюли РЕ90 с 3-дюймовой длиной (ВО, РгапкИп Ьакез, N1), к которым присоединяли притупленную иглу 21-калибра, соединенную с 3-сторонним запорным краном (Вах1ег НеаЬЬсаге, ПеетйеМ, 1Ь). Вводили четырежды 1 мл аликвоты холодного ледяного ΡΒδ и последовательно удаляли отдельно через канюлю, ВАЬ жидкость центрифугировали при 140 хд в течение 2 мин. Клеточные пеллеты собирали от четырех аликвот и с использованием гемоцитометра подсчитывали все клетки. Дифференциальный клеточный анализ проводили на цитоцентрифугах с использованием штамма ХУпдЫ-Сешъа.

Статистический анализ.

Данные представлены на фиг. 1-3 в виде среднего + δ.Ε.Μ. Статическую значимость определяли с использованием одностороннего ΑΝΟνΑ с ВопГеггой пост-тестом. Величины р<0,05 считали значимыми. * р<0,05; ** р<0,01; *** р<0,001. Показанные процентные величины указывают процентное ингибирование в окне между животными, обработанными наполнителем/подвергнутыми действию дыма, и животными, обработанными наполнителем/подвергнутыми бутафорскому действию.

Полагают, что соединения изобретения полезны в терапии, определенной выше, и не проявляют неприемлемых или неблагоприятных эффектов при использовании в соответствии с допустимым терапевтическим режимом.

Представленные выше примеры и анализ даны для иллюстрации изобретения и не ограничивают его. Объем заявленного изобретения ограничивается нижеприведенной формулой изобретения.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль где К¹ и К², взятые вместе с азотом, к которому они присоединены, представляют 5-6-членное насыщенное или ненасыщенное кольцо, необязательно конденсированное с фенильной группой; и

К³ представляет собой (С1-С₆)алкил или (С₃-С₆)циклоалкил(С1-С₄)алкил.
2. Соединение по п.1, которое представляет собой 4-амино-Щ(1§,2Е)-4-(2,3-дигидро-1Н-индол-1ил)-1-этил-4-оксо-2-бутен-1-ил]тетрагидро-2Н-пиран-4-карбоксамид или его фармацевтически приемлемую соль.
3. Соединение по п.1, которое представляет собой гидрохлорид 4-амино-^[(1§,2Е)-4-(2,3-дигидро1Н-индол-1-ил)-1-этил-4-оксо-2-бутен-1-ил]тетрагидро-2Н-пиран-4-карбоксамида.
4. Соединение по п.1, которое представляет собой 4-амино-Щ(1§,2Е)-4-(2,3-дигидро-1Н-индол-1ил)-1-(2-метилпропил)-4-оксо-2-бутен-1-ил]тетрагидро-2Н-пиран-4-карбоксамид или его фармацевтически приемлемую соль.
5. Соединение по п.1, которое представляет собой гидрохлорид 4-амино-^[(1§,2Е)-4-(2,3-дигидро1Н-индол-1-ил)-1-(2-метилпропил)-4-оксо-2-бутен-1-ил]тетрагидро-2Н-пиран-4-карбоксамида.
6. Фармацевтическая композиция для лечения хронического обструктивного заболевания легких, включающая соединение или его фармацевтически приемлемую соль по любому из пп.1-5 и фармацевтически приемлемый наполнитель.
7. Способ получения композиции по п.6, включающий смешивание соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.1-5 с фармацевтически приемлемым наполнителем.
8. Способ лечения хронического обструктивного заболевания легких, включающий введение пациенту эффективного количества соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.1-5.
9. Способ лечения хронического обструктивного заболевания легких, включающий введение пациенту фармацевтической композиции по п.6.
10. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.1-5 для лечения хронического обструктивного заболевания легких.
11. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.1-5 для производства лекарственного средства для лечения хронического обструктивного заболевания легких.