EA018841B1 - Соединения на основе лантибиотиков, обладающие противомикробной активностью - Google Patents

Abstract

Согласно настоящему изобретению предложены производные актагардина, актагардина В и дезоксиактагардина В формулыгде Х1 обозначает остаток Leu, Val или Ile; Х2 обозначает остаток Leu, Val или Ile; Rпредставляет собой алкильную или гетероалкильную группу, содержащую по меньшей мере один гидроксильный заместитель; Rпредставляет собой водород или алкильную или гетероалкильную группу, возможно содержащую в качестве заместителей замещённую по меньшей мере одним гидроксильным заместителем, или Rи Rвместе с атомом азота образуют гетероциклическую группу, содержащую по меньшей мере один гидроксильный заместитель, причем гетероциклическая группа возможно дополнительно содержит один или более гетероатомов; Z представляет собой остаток аминокислоты, -NRR, -NRCOR, -NRC(O)OR; -NRSOR, -NRSOR; -NRC(S)NRR, -NRC(NR)NRRили -N=R, причем R, R, R, R, R, Rи Rнезависимо представляют собой водород или возможно содержащую заместители группу, которая выбрана из алкила, гетероалкила, арила, гетероарила, аралкила и гетероалкила, при условии, что Rне представляет собой водород и Y представляет собой -S- или -S(O)-. Соединения находят применение в лечении микробных инфекций.

Description

Изобретение относится к соединениям на основе лантибиотиков, обладающим противомикробной активностью, способам их получения и к их применению.

Уровень техники

Обладающие свойствами антибиотиков пептиды, содержащие лантионин, или лантибиотики, представляют собой группу природных продуктов, секретируемых различными грамположительными бактериями. Отличительной особенностью структуры данного класса соединений является присутствие тиоэфирных аминокислот лантионина и метиллантионина, образующихся в определенных процессах биосинтеза, влияющих на синтезируемые рибосомами линейные пептиды-предшественники.

Лантибиотики подразделяют на два класса: тип А и тип В. Лантибиотики типа А в целом представляют собой вытянутые амфифильные соединения, сохраняющие в своей структуре крупные линейные участки. Примерами лантибиотиков типа А являются низин и субтилин. Низин и родственные молекулы могут связываться с липидом II, незаменимым промежуточным продуктом в синтезе клеточной стенки бактерии. Кроме того, лантибиотики типа А способны образовывать поры в плазматических мембранах. Считается, что мощная противомикробная активность лантибиотиков типа А обусловлена сочетанием их способности к связыванию с липидом II и способности к образованию пор.

Лантибиотики типа В обычно представляют собой пептиды меньшего размера, сложенные и поперечно сшитые в глобулярные структуры и не содержащие протяженных линейных пептидных участков. Примерами лантибиотиков типа В являются мерсацидин, актагардин и циннамицин. Подобно лантибиотикам типа А они обладают противомикробной активностью, которая, как считают, в основном является следствием их способности связывать липид II, так как они не способны образовывать поры в мембранах бактерии. Мерсацидин и актагардин обладают мощной противомикробной активностью в отношении ряда грамположительных организмов, включая виды §1тер1ососсик, Еп1етососсик и С1ок1пбшт.

Обзоры можно найти в ЗаЫ апб В1егЬаит (1998), Аппиа1 Рем М1стоЫо1. 52:41-79; уап Ктаау, бе Уок, Шехен апб Кшретк, №11. Ргоб. Рер. 1999, 16, 575; СНа11ег|ее, Раи1, Х1е апб уап бег Оопк, Скет. Рем 2005, 105, 633.

Сообщалось, что актагардин и его аналоги продуцируют два вида актинопланов; А. датЬабтепкй и А. Идштае [Ратепй, Радапу Ветеба, I. АпИЬюбск, 1976, 29, 501; патент США 6022851]. Актагардин образуется из препропептида, С-концевая часть которого включает полипептидную последовательность ЗЗСУУСТЕТШССТУбСАС. Данный полипептид подвергается последующей модификации поперечными сшивками, образующими вторичную и третичную структуру: поперечная сшивка 1-6, лантионин (ЗетСук); поперечная сшивка 7-12, бета-метиллантионин (Тйт-Сук); поперечная сшивка 9-17, бетаметиллантионин (Тйт-Сук); поперечная сшивка 14-19, бета-метиллантионинсульфоксид (Тйт-Сук). Также совместно образуется аналог ^ттеттап, Ме1хдег апб 1ипд, Еиг.1. Вюскет 1995, 228, 786], в котором поперечная сшивка 14 и 19 не окислена, т.е. она представляет собой бета-метиллантионин, а не бетаметиллантионинсульфоксид, и в настоящем тексте называется деоксиактагардин.

Другой вариант, называемый в настоящем изобретении дезоксиактагардин В, является производным пропептида с последовательностью С-конца ЗЗСУУСТЕТШССТЬУСАС без сульфоксида на поперечной сшивке между остатками 14 и 19, также был выделен из А. кдипае (как обсуждается в заявке того же заявителя, находящейся на рассмотрении патентного ведомства РСТ/СВ2007/000138 (УО 2007/083112), которая полностью включена в настоящее изобретение посредством ссылки).

- 1 018841

Далее показаны структуры актагардина и дезоксиактагардина В.

Актагардин Дезоксиакта гардин В

В патенте США 6022851 описано выделение актагардина и родственных форм из изолированных штаммов А. §агЬа01пеп818 и А. Пдипае.

Краткое описание изобретения

Настоящее изобретение относится к соединениям на основе лантибиотиков, обладающим противомикробной активностью, способам их получения и к применению таких соединений. Такие соединения обладают спектром противомикробной активности, близким к спектру актагардина, и представляют собой новые и полезные альтернативы этому лантибиотику. Согласно одному аспекту настоящего изобретения предложены новые производные актагардина, актагардина В и дезоксиактагардина В. В другом аспекте соединения согласно настоящему изобретению получают путем модификации С-конца и возможно Ν-конца лантибиотиков, вариантов и производных лантибиотиков. Соединения согласно настоящему изобретению могут иметь улучшенную противомикробную активность по сравнению с соединениями актагардином, актагардином В и дезоксиактагардином В, являющимися их предшественниками.

В настоящем изобретении также предложены фармацевтические композиции, содержащие соединение согласно настоящему изобретению и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

В дополнительном аспекте настоящего изобретения предложено применение соединений и композиций согласно настоящему изобретению в терапии. В частности, настоящее изобретение обеспечивает способы лечения или профилактики у субъекта микробной инфекции, которые включают введение указанному субъекту соединения или композиции согласно настоящему изобретению. Соединение или композицию можно вводить перорально, ректально, внутривенно, вагинально, внутримышечно или локально. В наиболее предпочтительном варианте соединения и композиции согласно настоящему изобретению вводят перорально. Инфекция может представлять собой бактериальную инфекцию. В предпочтительном случае инфекция представляет собой инфекцию, вызываемую микроорганизмами рода ϋίοδΐηά1иш, предпочтительно С1о81гМшш реНлпдепз, С1о81гМшш ШйтсПе, С1о81гМшш 1е1ап1 или С1о81гМшш ЬоШйпиш, в наиболее предпочтительном случае инфекцию С. йййсйе. Эти способы предлагают новые и полезные альтернативы способам лечения с применением лантибиотика типа А, ванкомицина или метронидазола.

Соединения, описанные в настоящем изобретении, их производные и их варианты могут быть селективными в отношении С. йййсйе. Данные соединения могут иметь пониженную по сравнению с ванкомицином или метронидазолом активность против других представителей флоры кишечника, в частности ВИИоЬас1егшш зрр. и Вас1егоМе8 зрр.

Соединения, описанные в настоящем изобретении, обладают активностью против С. ШйтсПе, близкой к ванкомицину, и обеспечивают новые и полезные альтернативы ванкомицину в способе лечения или профилактики у субъекта микробной инфекции.

Соединения, описанные в настоящем изобретении, могут обладать повышенной устойчивостью к разрушению ферментами по сравнению с низином. В частности, такие соединения могут обладать повышенной по сравнению с низином устойчивостью к действию кишечного сока. Структуры лантибиоти

- 2 018841 ков типа В, на которых основаны настоящие соединения, являются более компактными, чем соединения типа А, и они не содержат протяженных линейных участков, характерных для соединений А-форм. Следовательно, они менее чувствительны к протеолизу и поэтому с большей вероятностью достигают очага инфекции, такого как бактериальная инфекция нижних отделов кишечника.

Также предложено применение соединений и композиций согласно настоящему изобретению в качестве противомикробных агентов для использования ίη νίνο или ίη νίΐτο.

Согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения предложены способы синтеза соединений согласно настоящему изобретению из лантибиотиков или их вариантов и/или производных.

Краткое описание графических материалов

Фиг. 1 демонстрирует эффективность соединения III ίη νίνο в модели тифлита у хомяков, ассоциируемой с С.бЛйсПе.

Фиг. 2 демонстрирует эффективность соединения I ίη νίνο в модели тифлита у хомяков, ассоциируемой с С.бЛйсПе.

На фиг. 3 показана реакция образования соединения I по данным аналитической ВЭЖХ (высокоэффективной жидкостной хроматографии). На фиг. 3(а)-(с) показано превращение дезоксиактагардина В в моноамидное соединение I и незначительное количество диамида в ходе реакции.

Фиг. 4 демонстрирует устойчивость (а) низина и мерсадицина и (Ь) соединений I и III в имитации желудочного сока (ИЖС).

Фиг. 5 демонстрирует устойчивость (а) низина и мерсадицина и (Ь) соединения III в имитации кишечного сока (ИКС).

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение относится к соединениям на основе лантибиотиков, в частности, лантибиотиков типа В, таких как актагардин, актагардин В и дезоксиактагардин В.

Соединения на основе лантибиотиков согласно настоящему изобретению могут обладать улучшенной растворимостью и/или другими физико-химическими свойствами и/или биологической активностью по сравнению с исходными лантибиотиками, производными которых они являются. Улучшенная растворимость обеспечивает значительные преимущества при создании композиций соединений согласно настоящему изобретению, предназначенных для перорального и внутривенного введения. Более того, повышение растворимости обеспечивает условия для получения более высоких концентраций антибиотика в месте действия, что способствует увеличению эффективности.

Соединения

Согласно первому аспекту настоящего изобретения предложено соединение формулы (I)

о = о в котором А представляет собой боковую цепь аминокислоты Ьеи, Уа1 или Не;

В представляет собой Ьеи, Уа1 или боковую цепь аминокислоты Не;

X представляет собой -НКЗК² или фармацевтически приемлемую соль такого соединения, а Υ, Ζ, В¹ и В² определены ниже.

- 3 018841

В качестве альтернативы, структуру соединения удобно представить следующим образом:

где Х1 обозначает остаток Ьеи, Уа1 или 11е;

Х2 обозначает остаток Ьеи, Уа1 или 11е;

К¹ представляет собой алкильную или гетероалкильную группу, содержащую в качестве заместителя по меньшей мере один гидроксил;

К² представляет собой водород или алкильную или гетероалкильную группу, возможно содержащую в качестве заместителей один или более гидроксилов, или К¹ и К² вместе с атомом азота образуют гетероциклическую группу, содержащую меньшей мере один гидроксильный заместитель, отличающуюся тем, что гетероциклическая группа возможно дополнительно содержит один или более гетероатомов;

Ζ представляет собой остаток аминокислоты, -ЫК³К⁴, -ЫК⁵С0К⁶, -ИК.⁵С(0)0К⁶; -МК.⁵80К⁶, -ИК.⁵80₂К⁶; -\К'С(8)\К⁶К , -\К'С(\К')\К⁶К или -Ы=К⁹, где К³, К⁴, К⁵, К⁶, К⁷, К⁸ и К⁹ независимо представляют собой водород или возможно содержащую заместители группу, которая выбрана из алкила, гетероалкила, арила, гетероарила, аралкила и гетероаралкила, при условии, что К⁹ не является водородом;

Υ представляет собой -8- или -8(0)-;

или фармацевтически приемлемая соль.

Согласно дополнительному аспекту изобретения предложены варианты и биологически активные производные таких соединений.

Определения

Указание на то, что Ζ представляет собой группу -ΝΗ₂, обозначает, что данная группировка представляет собой Ν-конец остатка аланина в положении 1 указанного соединения. Указание на то, что Ζ представляет собой остаток аминокислоты, обозначает, что эта группировка представляет собой аминокислоту, обычно обозначаемую специалистами в данной области, как Хаа(0), связанную с аланином в положении 1 амидной связью. Если указано, что группа Ζ представляет собой -ΝΚ³Κ.⁴, -ΝΚ⁵ΟΘΒ⁶, -ΝΚ⁵Ο(Θ)ΘΒ⁶, -ΝΚ⁵8ΘΒ⁶, -ИК.⁵80₂К⁶, -ИК⁵С(8)ИК⁶К⁷, -ΝΒ⁵Ο(ΝΒ⁸)ΝΚ⁶Β⁷ или -Ν Η', это обозначает, что данные группы представляют собой модификации Ν-конца аланина в положении 1.

Из вышеприведённого представления формулы (I) очевидно, что остатки аминокислот обозначены соответствующим трёхбуквенным кодом. ЛЬи относится к остатку аминокислоты, производному 4аминомасляной кислоты, что станет ясным из структурной формулы.

Очевидно, обозначение -ΝΚ?Κ.²(-Χ) относится к группе, связанной с остатком аланина в положении 19 амидной связью, т.е. если атом азота, к которому присоединены К? и К², образует часть амидной группы. Тогда понятно, что эта группа является модификацией С-конца аланина в положении 19.

Также следует принять во внимание, что если указано, что Ζ представляет собой остаток аминокислоты, то это относится к группе -ИК⁵С0К⁶, где К⁶ представляет собой функциональные аминогруппу и группу боковой цепи аминокислоты. Например, если остаток аминокислоты представляет собой глицин, то К⁶ представляет собой -ΟΗ2ΝΗ2. Обычно для остатка аминокислоты К⁶ является С1-7алкильной группой, содержащий аминозаместитель и возможно другие соответствующие заместители.

Если Х1 и Х2 представляют собой Уа1 и 11е соответственно и Υ представляет собой -8(0)-, то соединение может быть обозначено как производное актагардина.

Если Х1 и Х2 представляют собой Ьеи и Уа1 соответственно и Υ представляет собой -8-, то соединение может быть обозначено как производное дезоксиактагардина В.

Если Х1 и Х2 представляют собой Ьеи и Уа1 соответственно, Υ представляет собой -8-, Ζ представляет собой -ΝΗ₂, К¹ представляет собой -СН₂СН₂ОН и К² представляет собой водород, тогда соединение также может быть обозначено как деокси-актагардин В И-[2-этаноламин]монокарбоксамид.

Алкил. Термин алкил в настоящем изобретении относится к одновалентной группировке, полученной удалением атома водорода от атома углерода в углеводороде, содержащем от 1 до 20 атомов углерода (если не оговорено другое), и которая может быть насыщенной или ненасыщенной (например, частично ненасыщенной, полностью ненасыщенной).

Гетероалкил. Термин гетероалкил в настоящем изобретении относится к алкильной группе, в которой один или более атомов углерода замещены гетероатомами Ν, 8 или О.

В описании алкильных групп префиксы (например, С_1-4, С₁.₇, С₁.₂₀, С_2-7, С_3-7 и т.д.) указывают на число атомов углерода или диапазон числа атомов углерода. Например, термин С_3-4алкил в настоящем

- 4 018841 изобретении относится к алкильной группе, содержащей от 1 до 4 атомов углерода. Примеры алкильных групп алкилов: С₁_₄алкил (низший алкил), С_1-7алкил и С_1-20алкил. Следует иметь в виду, что первый префикс может варьироваться в зависимости от некоторых ограничений; например, для ненасыщенных алкильных групп первый префикс должен быть по меньшей мере 2; для циклических алкильных групп первый префикс должен быть по меньшей мере 3 и т.д.

Примеры (незамещённых) насыщенных алкильных групп включают, но не ограничиваются перечисленными, метил (С₁), этил (С₂), пропил (С₃), бутил (С₄), пентил (С₅), гексил (С₆), гептил (С₇), октил (С₈), нонил (С₉), децил (С₁₀), ундецил (С₁₁), додецил (С₁₂), тридецил (С₁₃), тетрадецил (С₁₄), пентадецил (С15) и эйкодецил (С20).

Примеры (незамещённых) насыщенных линейных алкильных групп включают, но не ограничиваются перечисленными, метил (С₁), этил (С₂), н-пропил (С₃), н-бутил (С₄), н-пентил (амил) (С₅), н-гексил (С₆) и н-гептил (С₇).

Примеры (незамещённых) насыщенных разветвлённых алкильных групп включают, но не ограничиваются перечисленными, изопропил (С₃), изобутил (С₄), втор-бутил (С₄), трет-бутил (С₄), изопентил (С5) и нео-пентил (С5).

Циклоалкил. Термин циклоалкил в настоящем изобретении относится к алкильной группе, являющейся одновременно циклической группой; т.е. одновалентной группировкой, полученной удалением атома водорода от атома алициклического кольца или карбоциклического кольца карбоциклического соединения, причем указанное карбоциклическое кольцо может быть насыщенным или ненасыщенным (например, частично ненасыщенным, полностью ненасыщенным), причем указанная группировка включает от 3 до 20 атомов углерода (если специально не оговорено), включая от 3 до 20 атомов кольца. Предпочтительно каждое кольцо содержит от 3 до 7 атомов кольца. Примеры циклоалкильных групп включают С_3-20циклоалкил, С_3-15циклоалкил, С_3-10циклоалкил, С_3-7циклоалкил.

Гетероциклил. Термин гетероциклил в настоящем изобретении относится к одновалентной группировке, полученной удалением атома водорода от атома кольца гетероциклического соединения, причем указанная группировка содержит от 3 до 20 атомов кольца (если не указано другое), из которых от 1 до 10 представляют собой гетероатомы кольца. В предпочтительном случае каждое кольцо содержит от 3 до 7 атомов кольца, из которых от 1 до 4 являются гетероатомами кольца.

В настоящем описании префиксы (например, С_3-20, С_3-7, С_5-6 и т.д.) указывают на число атомов кольца или на диапазон числа атомов кольца, будь то атомы углерода или гетероатомы. Например, термин С_5-6гетероциклил в настоящем изобретении относится к гетероциклилу, содержащему 5 или 6 атомов кольца. Примеры гетероциклилов включают С3-20гетероциклил, С5-20гетероциклил, С_3-15гетероциклил, С_5-15гетероциклил, С_3-12гетероциклил, С_5-12гетероциклил, С_3-10гетероциклил, С_5-10гетероциклил, С_3-7гетероциклил, С_5-7гетероциклил и С_5-6гетероциклил.

Примеры моноциклических гетероциклилов включают, но не ограничиваются перечисленными, группы, являющиеся производными:

Ν₁: азиридина (С₃), азетидина (С₄), пирролидина (тетрагидропиррола) (С₅), пирролина (например, 3пирролина, 2,5-дигидропиррола) (С₅), 2Н-пиррола или 3Н-пиррола (изопиррола, изоазола) (С₅), пиперидина (С6), дигидропиридина (С6), тетрагидропиридина (С6), азепина (С7);

О₁: оксирана (С₃), оксетана (С₄), оксолана (тетрагидрофурана) (С₅), оксола (дигидрофурана) (С₅), оксана (тетрагидропирана) (С6), дигидропирана (С6), пирана (С6), оксепина (С7);

8ι: тиирана (С₃), тиетана (С₄), тиолана (тетрагидротиофена) (С₅), тиана (тетрагидротиопирана) (С₆), тиепана (С7);

О2: диоксолана (С5), диоксана (С6) и диоксепана (С7);

О₃: триоксана (С₆);

Ν2: имидазолидина (С5), пиразолидина (диазолидина) (С5), имидазолина (С5), пиразолина (дигидропиразола) (С5), пиперазина (С6);

Ν₁Ο₁: тетрагидрооксазола (С₅), дигидрооксазола (С₅), тетрагидроизоксазола (С₅), дигидроизоксазола (С5), морфолина (С6), тетрагидрооксазина (С6), дигидрооксазина (С6), оксазина (С6);

Ν₁8₁: тиазолина (С₅), тиазолидина (С₅), тиоморфолина (С₆);

Ν₂Ο₁: оксадиазина (С₆);

О₁8₁: оксатиола (С₅) и оксатиана (тиоксана) (С₆) и

Ν₁Ο₁8₁: оксатиазина (С₆).

Примеры замещённых (неароматических) моноциклических гетероциклилов включают производные сахаридов, например фураноз (С5), таких как арабинофураноза, ликсофураноза, рибофураноза и ксилофураноза и пираноз (С6), таких как аллопираноза, альтропираноза, глюкопираноза, маннопираноза, гулопираноза, идопираноза, галактопираноза и талопираноза.

В¹ и В² вместе с атомом азота амидной связи могут образовывать гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гидроксильный заместитель. Гетероциклил может представлять собой группу, выбранную из примеров Ν₁, приведенных выше. Гетероциклил может содержать один или более дополнительных гетероатомов. Кроме того, гетероциклил может являться группой, выбранной из примеров Ν₂, Ν₁Ο₁, Ν₁8₁, Ν₂Ο₁ и Ν₁Ο₁8₁, приведенных выше.

- 5 018841

Арил. Термин арил в настоящем изобретении относится к одновалентной группировке, полученной удалением атома водорода из ароматического кольца ароматического соединения, причём указанное соединение может включать одно кольцо или два или более колец (например, конденсированных).

Гетероарил. Термин гетероарил в настоящем изобретении относится к арильной группе, в которой один или более атомов углерода заменены на гетероатом Ν, 8, О или другой. В этом случае удобно обозначать группу как С_5-2огетероарильная группа, где С_5-2о обозначает атомы кольца, будь то атомы углерода или гетероатомы. В предпочтительном случае каждое кольцо включает от 5 до 7 атомов кольца, из которых от 0 до 4 являются гетероатомами кольца.

Аралкил. Термин аралкил в настоящем изобретении относится к алкильной группе, определённой выше, содержащей в качестве заместителя одну или более, предпочтительно одну, арильную группу, определение которой дано выше.

Гетероаралкил. Термин гетероаралкил в настоящем изобретении относится к алкильной группе, определённой выше, содержащей в качестве заместителя одну или более, предпочтительно одну, арильную группу, определённую выше, причем один или более атомов углерода в алкильной и/или арильной группе заменен на, без ограничения, гетероатомы Ν, 8, О.

С_5-20арил. Термин С_5-20арил в настоящем изобретении относится к одновалентной группировке, полученной удалением атома водорода от атома ароматического кольца С5-20ароматического соединения, содержащего в кольце от 5 до 20 атомов, причем по меньшей мере одно из указанных колец представляет собой ароматическое кольцо. В предпочтительном случае каждое кольцо содержит от 5 до 7 атомов в кольце.

Примеры С_5-20арильных групп, не содержащих гетероатомов в кольце (т.е. С_5-20карбоарильные группы) включают, но не ограничиваются перечисленными, производные бензола (т.е. фенил) (С₆), нафталина (С₁₀), антрацена (С₁₄), фенантрена (С₁₄) и пирена (С1₆).

Примеры С5-20гетероарильных групп, содержащих конденсированные кольца, включают, но не ограничиваются перечисленными, С₉ гетероарильные группы, являющиеся производными бензофурана, изобензофурана, бензотиофена, индола, изоиндола; С₁₀ гетероарильные группы, являющиеся производными хинолина, изохинолина, бензодиазина, пиридопиридина; С₁₄ гетероарильные группы, являющиеся производными акридина и ксантена.

Указанные группы, сами по себе или в качестве части другого заместителя, возможно могут содержать в качестве заместителей одну или более групп, которые выбраны из них самих и дополнительных перечисленных ниже заместителей.

Галоген: -Р, -С1, -Вг и -I.

Гидроксил: -ОН.

Эфир: -ОК, где К представляет собой эфирный заместитель, например, С_1-7алкильную группу (также называемую С_1-7алкоксигруппой), Сз_-20гетероциклильную группу (также называемую С_3-20гетероциклилоксигруппой), либо С_5-20арильную группу (также называемую С_5-20арилоксигруппой), предпочтительно С_1-7алкильную группу.

Нитро: -ΝΟ₂.

Циано (нитрил, карбонитрил): -СК

Ацил (кетогруппа): -С(=О)К, где К представляет собой ацильный заместитель, например Н, С_1-7алкильную группу (также называемую С_1-7алкилацильной группой или С_1-7алканоильной группой), С_3-20гетероциклил (также называемую С_3-20гетероциклилацил) или С_5-20арильную группу (также называемую С_5-20арилацильной группой), в предпочтительном случае С_1-7алкильную группу. Примеры ацильных групп включают, но не ограничиваются перечисленными, -С(=О)СН3 (ацетил), -С(=О)СН2СН3 (пропионил), -С(=О)С(СН₃)₃ (бутирил) и -С(=О)Рй (бензоил, фенон).

Карбоксильная группа (карбоновая кислота): -СООН.

Сложный эфир (карбоксилат, эфир карбоновой кислоты, оксикарбонил): -С(=О)ОК, где К представляет собой сложноэфирный заместитель, например С_1-7алкильную группу, С_3-20гетероциклил или С_5-20арильную группу, предпочтительно С_1-7алкильную группу. Примеры сложноэфирных групп включают, но не ограничиваются перечисленными, -С(=О)ОСН3, -С(=О)ОСН2СН3, -С(=О)ОС(СН3)3 и -С(=О)ОРй.

Амидная группа (карбамоил, карбамил, аминокарбонил, карбоксамид): -С(=О)КК¹К², в которой К¹ и К² представляют собой независимо заместители у амина, определённые для аминогрупп. Примеры амидогрупп включают, но не ограничиваются перечисленными, -С(=О)КН₂, -С(=О)КНСН₃, -С(=О)К(СН₃)₂, -С(=О)КНСН₂СН₃ и -С(=О)К(СН₂СН₃)₂, а также амидогруппы, в которых К¹ и К² вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклическую структуру, такую как, например, пиперидинокарбонил, морфолинокарбонил, тиоморфолинокарбонил и пиперазинилкарбонил.

Амино: -КК¹К², где К¹ и К² представляют собой независимо заместители, например водород, С_1-7алкильную группу (также называемую С_1-7алкиламиногруппой или ди-С_1-7алкиламиногруппой), С_3-20гетероцикл, С_5-20арильную группу, предпочтительно Н или С_1-7алкильную группу, или, в случае циклической аминогруппы, К¹ и К², вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклическое кольцо, содержащее от 4 до 8 атомов кольца. Примеры аминогрупп включают, но не

- 6 018841 ограничиваются перечисленными, -ΝΗ₂, -ΝΗί.Ή₃. -№НСН(СН₃)₂, -Ы(СН₃)₂, -Ы(СН₂СН₃)₂ и -ΝΗΡ11. Примеры циклических аминогрупп включают, но не ограничиваются перечисленными, азиридинил, азетидинил, пирролидинил, пиперидиновую группу, пиперазинил, пергидродиазепинил, морфолиногруппу и тиоморфолиногруппу. В частности, циклические аминогруппы могут замещаться содержать в кольце любые заместители, определённые в настоящем изобретении, например карбоксил, карбоксилат и амидо.

Ациламидогруппа (ациламиногруппа): -МК¹С(=О)К², где В¹ представляет собой заместитель у амида, например, водород, С1-7алкильную группу, С3-20гетероциклил или С5-20арильную группу, предпочтительно Н или С1-7алкильную группу, в наиболее предпочтительном случае Н, и К² представляет собой заместитель у ацильной группы, например С1-7алкильную группу, С3-20гетероциклили С5-20арильную группу, в предпочтительном случае С1-7алкильную группу. Примеры ациламидных групп включают, но не ограничиваются перечисленными, -МНС(=О)СН₃, -МНС(=О)СН₂СН₃ и -МНС(=О)РЕ. К¹ и К² могут вместе образовать циклическую структуру, как, например, сукцинимидил, малеимидил и фталимидил

сукцинимидил малеимидил фталимидил

Аминокарбонилокси: -ОС(=О)ИК?К², в которой К¹ и К² независимо представляют собой заместители аминогруппы, определённые для аминогрупп. Примеры аминокарбонилоксигрупп включают, но не ограничиваются перечисленными, -ОС(=О)ИН₂, -ОС(=О)ИНМе, -ОС(=О)ИМе₂ и -ОС(=О^ЕЬ.

Уреидо: -^К^СОИ^К³, где К² и К³ независимо представляют собой заместители у аминогрупп, определённые для аминогрупп, и К¹ представляет собой заместитель у уреидогруппы, например водород, С_1-7алкильную группу, С_3-20гетероциклильную группу или С_5-20арильную группу, предпочтительно водород или С_1-7алкильную группу. Примеры уреидогрупп включают, но не ограничиваются перечисленными, -1МНСО]МН₂, -\1Ι(Ό\1Ι\Κ\ -\11С‘О\11ЕР -МНСОММе₂, -МНСОМЕ!.^ -ММеСОМН₂,

-ММеСОЯНМе, -\\1еС‘О\11ЕР -ММеСОММе₂, -\\1еСО\ЕР и -ΝΙΚΌΝΙΙΡΙι.

Гуанидиногруппа: -МН-С(=МН)МН₂.

Тетразолил: пятичленное ароматическое кольцо, содержащее четыре атома азота и один атом углерода

Иминогруппа: =ΝΗ, в которой К представляет собой заместитель у иминогруппы, например, водород, С_1-7алкильную группу, С_3-20гетероцикл или С_5-20арильную группу, предпочтительно Н или С_1-7алкильную группу. Примеры иминогрупп включают, но не ограничиваются перечисленными, =ИН, =ММе и =ΝΕί.

Амидин (амидиног): -С(=МК)МК₂, где каждый К представляет собой заместитель у амидина, например водород, С_1-7алкильную группу, С_3-20гетероциклилили С_5-20арильную группу, предпочтительно Н или С_1-7алкильную группу. Примерами амидиновых групп являются, без ограничения, -С(=МН)ИН₂, -С( \11)\\1е₂ и -С( \\1е)\\1е₂.

Нитрогруппа: -ΝΘ₂.

Нитрозогруппа: -МО.

Азидогруппа: -Ν3.

Цианогруппа (нитрил, карбонитрил): -СМ.

Изоцианогруппа: -МС.

Цианат: -ОСМ

Изоцианат: -МСО.

Тиоцианогруппа (тиоцианатогруппа): -80

Ацилокси (обращенный эфир): -ОС(=О)К, в которой К представляет собой заместитель у ацилоксигруппы, например С_1-7алкильную группу, С_3-20гетероциклильную группу или С_5-20арильную группу, предпочтительно С_1-7алкильную группу. Примеры ацилоксигрупп включают, но не ограничиваются перечисленными, -ОС(=О)СН₃ (ацетокси), -ОС(=О)СН₂СН₃, -ОС(=О)С(СН₃)₃, -ОС(=О)РЦ -ОС(=О)СбН₄Е и -ОС( (ΜΊΕΡΙι.

Изотиоцианогруппа (изотиоцианато): -ИС8.

Тиол: -8Н.

Тиоэфир (сульфид): -8К, где К представляет собой заместитель у тиоэфирной группы, например С₁₇алкильную группу (также называемую С_1-7алкилтиогруппой), С_3-20гетероциклил или С_5-20арильную группу, предпочтительно С_1-7алкильную группу. Примеры С_1-7алкилтиогрупп включают, но не ограничиваются перечисленными, -8СН₃ и -8СН₂СН₃.

Дисульфид: -88-К, где К представляет собой заместитель у дисульфидной группы, например

- 7 018841

С_1-7алкильную группу, С_3-20гетероцикл или С_5-20арильную группу, предпочтительно С_1-7алкильную группу (также в настоящем изобретении называемую С_1-7алкилдисульфидами). Примеры С_1-7алкилдисульфидных групп включают, но не ограничиваются перечисленными, -88СН₃ и -88СН₂СН₃.

Сульфин (сульфинил, сульфоксид): -8(=О)В, в которой В представляет собой заместитель сульфина, например С_1-7алкильную группу, С_3-20гетероциклильную группу или С_5-20арильную группу, предпочтительно С_1-7алкильную группу. Примеры сульфиновых групп включают, но не ограничиваются перечисленными, -8(=О)СН₃ и -8(=О)СН₂СН₃.

Сульфоксид (сульфинил): -8(=О)В, где В представляет собой заместитель сульфоксида, например С_1-7алкильную группу, С_3-20гетероциклил, или С_5-20арильную группу, предпочтительно С_1-7алкильную группу. Примеры сульфоксидных групп включают, но не ограничиваются перечисленными, -8(=О)СН₃ и -8(=О)СЩСНз.

Сульфонил (сульфон): -8(=О)₂В, где В представляет собой заместитель у сульфона, например С_1-7алкильную группу, С_3-20гетероциклильную группу или С_5-20арильную группу, предпочтительно С1-7алкильную группу. Примеры сульфоновых групп включают, но не ограничиваются перечисленными, -8(=О)₂СН₃ (метансульфонил, мезил), -8(=О)₂СР₃, -8(=О)₂СН₂СН₃ и 4-метилфенилсульфонил (тозил).

Тиоамидо (тиокарбамил): -С(=8)ИВ¹В², в которой В¹ и В² независимо представляют собой заместители аминогруппы, определённые выше для аминогрупп. Примеры амидогрупп включают, но не ограничиваются перечисленными, -С(=8)ИН₂, -С(=8)ИНСН₃, -С(=8)Ы(СН₃)₂ и -С(=8)ИНСН₂СН₃.

Сульфонаминогруппа: -ИВ¹8(=О)2В, в которой В¹ представляет собой заместитель аминогруппы, определённый выше для аминогрупп, В представляет собой заместитель у сульфонаминогруппы, например С1-7алкильную группу, С_3-20гетероциклилили С_5-20арильную группу, предпочтительно С_1-7алкильную группу. Примеры сульфонаминогрупп включают, но не ограничиваются перечисленными, -ИН8(=О)2СНз, -N118( О)₇Р11 и -\(С11_;)8( О)_;С..Н,.

Сульфиновая кислота (сульфиногруппа): -8(=О)ОН, -8О₂Н.

Сульфоновая кислота (сульфогруппа): -8(=О)₂ОН, -8О₃Н.

Сульфинат (сложный эфир сульфиновой кислоты): -8(=О)ОВ; где В представляет собой заместитель сульфината, например С_1-7алкильную группу, С_3-20гетероциклильную группу или С_5-20арильную группу, предпочтительно С_1-7алкильную группу. Примеры сульфинатных групп включают, но не ограничиваются перечисленными, -8(=О)ОСН₃ (метоксисульфинил; метиловый эфир сульфиновой кислоты) и -8(=О)ОСН₂СН₃ (этоксисульфинил; этиловый эфир сульфиновой кислоты).

Сульфонилоксигруппа: -О8(=О)₂В, где В представляет собой заместитель у сульфонилоксигруппы, например С_1-7алкильную группу, С_3-20гетероциклил или С_5-20арильную группу, предпочтительно С1-7алкильную группу. Примеры сульфонилоксигрупп включают, но не ограничиваются перечисленными, -О8(=О)₂СН₃ (мезилат) и -О8(=О)₂Сн₂СН₃ (эзилат).

Сульфат: -О8(=О)₂ОВ; где В представляет собой заместитель сульфата, например С_1-7алкильную группу, С_3-20гетероциклил или С_5-20арильную группу, предпочтительно С_1-7алкильную группу. Примеры сульфатных групп включают, но не ограничиваются перечисленными, -О8(=О)₂ОСН₃ и -8О(=О)2ОСЩСНз.

Сульфамил (сульфамоил; амид сульфиновой кислоты; сульфинамид): -8(=О)ИВ¹В², где В¹ и В² независимо представляют собой заместители аминогруппы, определённые выше для аминогрупп. Примеры сульфамильных групп включают, но не ограничиваются перечисленными. -8(=О)ИН₂, -8(=О)ЫН(СН₃), -8(=О)Ы(СН₃)₂, -8(=О)ИН(СН₂СН₃), -8(=О)Ы(СН₂СН₃)₂ и -8(=Θ)ΝΗΡΚ

Сульфонамидогруппа (сульфинамоил; амид сульфоновой кислоты; сульфонамид): -8(=О)₂ЫВ¹В², в которой В¹ и В² независимо представляют собой заместители аминогруппы, определённые выше для аминогрупп. Примеры сульфонамидогрупп включают, но не ограничиваются перечисленными, -8(=О)2ИН2, -8(=О)2ИН(СНз), -8( О);\(СН_;), -8( ОуМ 1(С1 РС11 + -8( О)_;\(СН_;СН_;); и -8( О)_;\11ΡΙ1.

Сульфаминогруппа: -ИВ¹8(=О)2ОН, где В¹ представляет собой заместитель аминогруппы, уже определенный для аминогрупп. Примеры сульфаминогрупп включают, но не ограничиваются перечисленными, -ΝΗ8(==О)2ОН и -Ы(СН₃)8(=О)₂ОН.

Сульфонаминогруппа: -ИВ¹8(=О)2В, в которой В¹ представляет собой заместитель аминогруппы, определённый выше для аминогрупп, В представляет собой заместитель сульфонаминогруппы, например С1-7алкильную группу, С_3-20гетероциклильную группу или С_5-20арильную группу, предпочтительно С_1-7алкильную группу. Примеры сульфонаминогрупп включают, но не ограничиваются перечисленными, -ИН8(=О)₂СН₃ и -\(СН_;)8( ОрС.Н,.

Сульфинаминогруппа: -ИВ¹8(=О)В, где В¹ представляет собой заместитель аминогруппы, определённый выше для аминогрупп, В представляет собой заместитель сульфинаминогруппы, например С_1-7алкильную группу, С_3-20гетероциклильную группу или С_5-20арильную группу, предпочтительно С1-7алкильную группу. Примеры сульфинаминогрупп включают, но не ограничиваются перечисленными, -ЛН8(=О)СНз и -Ы(СНз)8(=О)СбН5.

Фосфиногруппа (фосфин): -РВ₂, в которой В представляет собой заместитель фосфиногруппы, например -Н, С_1-7алкильную группу, С_3-20гетероциклильную группу или С_5-20арильную группу, предпочтительно -Н, С_1-7алкильную группу или С_5-20арильную группу. Примеры фосфиногрупп включают, но не

- 8 018841 ограничиваются перечисленными, -РН₂, -Р(СН₃)₂, -Р(СН₂СН₃)₂, -Р(трет-Ви)₂ и -Р(Рк)₂.

Фосфогруппа: -Р(=О)₂.

Фосфинил (фосфиноксид): -Р(=О)Я₂, где Я представляет собой заместитель фосфинильной группы, например С1_-7алкильную группу, С_3-20гетероциклильную группу или С_5-20арильную группу, предпочтительно С1_-7алкильную группу или С_5-20арильную группу. Примеры фосфонильных групп включают, но не ограничиваются перечисленными, -Р(=О)(СН₃)₂, -Р(=О)(СН₂СН₃)₂, -Р(=О)(трет-Ви)₂ и -Р(=О)(Рй)₂.

Фосфоновая кислота (фосфонокислота): -Р(=О)(ОН)2.

Фосфонат (сложный эфир фосфоновой кислоты): -Р(=О)(ОЯ)₂ где Я представляет собой заместитель фосфонатной группы, например -Н, С_1-7алкильную группу, С_3-20гетероциклильную группу или С5-20арильную группу, предпочтительно -Н, С1-7алкильную группу или С5-20арильную группу. Примеры фосфонатных групп включают, но не ограничиваются перечисленными, -Р(=О)(ОСН3)2, -Р(=О)(ОСН2СНз)2, -Р(=О)(О-трет-Ви)2 и -Р(=О)(ОРЬ)₂.

Фосфорная кислота (фосфоноокси кислота): -ОР(=О)(ОН)2.

Фосфат (сложный эфир фосфоноокси кислоты): -ОР(=О)(ОЯ)₂, в котором Я представляет собой заместитель фосфата, например -Н, С_1-7алкильную группу, С_3-20гетероциклили С_5-20арильную группу, предпочтительно -Н, С_1-7алкильную группу или С_5-20арильную группу. Примеры фосфатных групп включают, но не ограничиваются перечисленными, -ОР(=О)(ОСН₃)₂, -ОР(=О)(ОСН₂СН₃)₂, -ОР(=О)(О-трет-Ви)₂ и -ОР(=О)(ОРЬ)₂.

Фосфористая кислота: -ОР(ОН)2.

Фосфит: -ОР(ОЯ)2, где Я представляет собой заместитель у фосфита, например -Н, С1-7алкильную группу, С3-20гетероцикл или С5-20арильную группу, предпочтительно -Н, С1-7алкильную группу или С_5-20арильную группу. Примеры фосфитных групп включают, но не ограничиваются перечисленными, -ОР(ОСНз)2, -ОР(ОСН2СНз)2, -ОР(О-трет-Ви)2 и -ОР(ОРЬ)₂.

Фосфорамидит: -ОР(ОЯ¹)-ИЯ²2, где Я¹ и Я² представляют собой заместители фосфорамидитной группы, например -Н, (при необходимости замещённую) С1-7алкильную группу, С_3-20гетероциклильную группу или С_5-20арильную группу, предпочтительно -Н, С_1-7алкильную группу или С_5-20арильную группу. Примеры фосфорамидитных групп включают, но не ограничиваются перечисленными, -ОР(ОСН₂СН₃)\(СН_;)_;. -ОР(ОСН₂СН₃)-Ы(изо-Рг)₂ и -ОР(ОСН_;СН;С\)-\(1-Рг)_;.

Фосфорамидат: -ОР(=О)(ОЯ¹)-ЫЯ², где Я¹ и Я² представляют собой заместители у фосфорамидатной группы, например -Н, (при необходимости замещённую) С_1-7алкильную группу, С_3-20гетероциклильную группу или С_5-20арильную группу, предпочтительно -Н, С_1-7алкильную группу или С5-20арильную группу. Примеры фосфорамидатных групп включают, но не ограничиваются перечисленными, -ОР( О)(ОСН_;СН_;)-\(СН_;), -ОР( О)(ОС1РСН_;)-\(изо-РгР и -ОР( О)(ОСН;СН_;С\)-\(изоРг)2.

Силил: -81Я₃, где Я представляет собой заместитель у силила, например -Н, С_1-7алкильную группу, С3-20гетероциклильную группу или С5-20арильную группу, предпочтительно -Н, С1-7алкильную группу или С5-20арильную группу. Примеры силильных групп включают, но не ограничиваются перечисленными, -81Н₃, -81Н₂(СН₃), -81Н(СН₃)₂, -81(СН₃)₃, -8ί(Εΐ)₃, -81(изо-Рг)₃, -81(трет-Ви)(СН₃)₂ и -81((Ви)₃.

Оксисилил: -81(ОЯ)₃, в которой Я представляет собой заместитель у оксисилильной группы, например -Н, С_1-7алкильную группу, С_3-20гетероциклильную группу или С_5-20арильную группу, предпочтительно -Н, С_1-7алкильную группу или С_5-20арильную группу. Примеры оксисилильных групп включают, но не ограничиваются перечисленными, -81(ОН)₃, -81(ОМе)₃, -81(ОЕ()₃ и -81(О-трет-Ви)₃.

Силоксигруппа (силиловый эфир): -О81Я₃, где 81Я₃ представляет собой силильную группу, как обсуждалось выше.

Оксисилоксигруппа: -О81(ОЯ)₃, где О81(ОЯ)₃ представляет собой оксисилильную группу, как обсу ждалось выше.

Во многих случаях заместители сами содержат заместители.

Как упоминалось выше, группы, образующие перечисленные заместители, например алкил, гетероциклил и арил, сами могут содержать заместители. Таким образом, указанные определения охватывают заместители у замещённых групп.

Предпочтительные соединения.

Ниже описываются предпочтительные соединения согласно первому аспекту изобретения.

В предпочтительном случае Х1 представляет собой Ьеи и Х2 представляет собой Уа1 или 11е или Х1 представляет собой Уа1 и Х2 представляет собой Уа1 или 11е. В наиболее предпочтительном случае Х1 представляет собой Ьеи и Х2 представляет собой Уа1 или Х1 представляет собой Уа1 и Х2 представляет собой 11е.

Я¹, Я², Я³, Я⁴, Я⁵, Я⁶, Я⁷, Я⁸, Я⁹ и Я¹⁰, возможно, содержат соответствующие заместители, в некоторых вариантах реализации эти группы являются незамещёнными или несодержащими дополнительно соответствующих заместителей.

В случае, когда Я¹ или Я² является алкильной группой, алкильная группа может представлять собой С_1-7алкильную группу, в наиболее предпочтительном случае С_1-4алкильную группу. Алкильная группа Я¹ или Я² предпочтительно является полностью насыщенной.

- 9 018841

К¹ или К² могут содержать один, два, три, четыре, пять, шесть или семь атомов углерода.

В случае, когда К¹ и К² вместе с атомом азота из амида образуют гетероциклическую группу, и если данная группа дополнительно содержит один или более гетероатомов, в предпочтительном случае гетероатомы не находятся в соседних положениях гетероциклического кольца.

Если К¹ и К² вместе с атомом азота амидной группы образуют гетероциклическую группу и если указанная группа дополнительно содержит один или более гетероатомов, гетероциклическая группа в предпочтительном случае является Сз_-20гетероциклической группой. В предпочтительном варианте гетероциклическая группа является С_5-10гетероциклической группой. Гетероциклическая группа может содержать 5, 6 или 7 атомов в кольце.

Как К¹, так и К² могут содержать один или более гидроксильных заместителей. Между собой К¹ и К² могут иметь два или более гидроксильных заместителя. В предпочтительном случае К¹ имеет один, два или три гидроксильных заместителя.

К¹ и К² могут быть одинаковыми.

В предпочтительном варианте К¹ является алкильной группой. Предпочтительно К² представляет собой водород.

Если К¹ или К² является гетероалкильной группой, содержащей гидроксильный заместитель, указанный гидроксильный заместитель является заместителем на атоме углерода гетероалкильной группы.

Если К¹ или К² представляет собой алкильную или гетероалкильную группу, содержащую два или более гидроксильных заместителей, каждый атом углерода алкильной или гетероалкильной группы имеет один заместитель.

В одном варианте реализации алкильная группа К¹ или К² является ациклической. В одном варианте реализации группа алкильная группа К¹ или К² является линейной.

В одном варианте реализации К¹ или К² содержит заместители или соответствующие дополнительные заместители. Заместитель может представлять собой одну или более из групп, которые выбраны из группы, состоящей из карбоксильной группы, сложноэфирной группы, ацилоксигруппы, амидогруппы, ациламидогруппы, арила и гетероарила. В предпочтительном случае заместитель представляет собой одну или более группу, которые выбраны из группы, состоящей из карбоксильных, сложноэфирных, ацилокси-, арильных и гетероарильных групп.

В предпочтительном варианте К¹ или К² независимо представляют собой один из заместителей, приведённых ниже, где * обозначает точку присоединения к атому азота:

Дополнительно или в качестве альтернативы К¹ или К² могут быть независимо выбраны из одного из приведённых ниже заместителей, где * обозначает точку присоединения к атому азота:

В одном варианте реализации группа К¹ независимо выбрана из одного из любого из приведенных выше наборов заместителей. В этом варианте реализации К² предпочтительно представляет собой водо род.

В качестве альтернативы К¹ и К² вместе с атомом азота, т.е. X, могут представлять собой заместитель, выбранный из приведённой ниже группы, где * обозначает точку присоединения к углероду карбонила С-конца:

- 10 018841

Дополнительно или в качестве альтернативы В¹ или В² могут быть независимо выбраны из приведенных ниже заместителей, где * обозначает точку присоединения к атому азота:

предпочтительно В¹ представляет собой -СН₂СН₂ОН.

В одном из вариантов реализации Ζ представляет собой -ΝΗ₂, аминокислоту или -ИВ⁵СОВ⁶. В предпочтительном варианте Ζ представляет собой -ΝΗ₂ или аминокислоту.

В одном варианте реализации Ζ представляет собой -ΝΒΪΟΒ⁶, В⁵ представляет собой водород.

В случае, если Ζ представляет собой остаток аминокислоты, остаток аминокислоты представляет собой предпочтительно остаток природной аминокислоты, кодируемой генетическим кодом, или остаток Ό-изоформы такой аминокислоты, более предпочтительно остаток аминокислоты, выбранный из группы 11е-, Ьук-, РЬе-, Уа1-, С1и-, Акр-, Ηίκ-, Ьеи, Агд-, 8ет- и Тгр-. Согласно одному из аспектов остаток аминокислоты может быть выбран из группы 11е-, Ьук-, РЬе-, Уа1-, С1и-, Акр-, Ηίκ-, Ьеи-, Агд- и 8ет-. Такие варианты могут быть получены путем химического присоединения остатка к соединениям, в которых Ζ представляет собой -ΝΗ₂, по описанию к патенту США 6022851, который включен в настоящее изобретение посредством ссылки. Следует принимать во внимание, что при химическом присоединении кислоты допускается нахождение аминокислоты в Ь- или Ό-конфигурации. Это относится к Э-А1а. и дополнительно к Ό-формам других аминокислот, таких как были упомянуты выше.

Остаток аминокислоты может являться модифицированным остатком природной аминокислоты, таким как остатки, образующиеся в результате посттрансляционной модификации, например остатков серина, цистеина и треонина. Остаток в составе соединений согласно настоящему изобретению может быть выбран из дегидрированных аминокислот, из группы, показанной ниже:

Вторую из этих структур можно назвать остатком дегидроаминомасляной кислоты. Дополнительно выбран из циклических остатков, показанных в нижеприведённой остаток аминокислоты может быть группе:

Следует учесть, что синтез этих циклических структур обычно включает циклизацию остатков боковой цепи серина, треонина или цистеина с амидным карбонилом, типично, но не обязательно, соседнего аминокислотного остатка.

Таким образом, показанные выше структуры включают часть соседних групп, таких как соседние аминокислоты. Альтернативно, соседняя группа может быть производной из группы, совместной с ос

- 11 018841 татками серина, треонина или цистеина, образующей амидную связь у остатка Ν-конца. Это доказывается ретросинтезом в нижеприведённом примере для оксазолинового аминокислотного остатка, производного из остатка серина, который связывается амидной связью с соседней группой остатка Ν-конца серина:

он

Звёздочка (*) обозначает положение атома углерода в оксазолине, полученного из углерода карбонила в соседней группе. Ретросинтез показан исключительно в иллюстративных целях, и обсуждавшиеся выше посттрансляционно модифицированные остатки аминокислот можно приготовить из альтернативных предшественников.

Остаток аминокислоты может являться остатком не встречающейся в природе аминокислоты или редкой природной аминокислоты. Аминокислота может быть выбрана из группы, состоящей из селеносерина, аминомасляной кислоты, аминоизомасляной кислоты, бутилглицина, цитруллина, циклогексилаланина, диаминопропионовой кислоты, гомосерина, гидроксипролина, норлейцина, норвалина, орнитина, пеницилламинопироглутаминовой кислоты, саркозина, статина, тетрагидроизохинолин-3-карбоновой кислоты и тиенилаланина. Могут быть выбраны Ь- или Ό-формы.

Аминокислота может являться α-, β- или γ-аминокислотой. Аминогруппа аминокислоты может быть моно- или диалкилированной. Если Ζ представляет собой остаток аминокислоты, аминогруппа аминокислоты может быть модифицирована. Так, Ν-конец может являться группой, выбранной из -ΝΒ³Β⁴, -Ν'Β’ί'ΘΒ'. -ΝΚ⁵Ο(Θ)ΘΒ⁶, -ΝΒ⁵8ΘΒ⁶, -ΝΒ⁵8Θ₂Β⁶, -\Β’(·(8)ΝΒΒ и -ΝΒΪ(ΝΒ⁸)ΝΒ⁶Β⁷, где Β³, Β⁴, Β⁵, Β⁶, Β⁷ и Β⁸ определены выше.

Если Ζ представляет собой остаток аминокислоты, остаток аминокислоты может также представлять собой защищенный остаток аминокислоты. Защитные группы для аминогрупп могут быть выбраны из группы, состоящей из Етос, Вос, Ас, Вп и Ζ (или СЬх). Боковая цепь также может быть защищена соответствующим образом. Защитные группы для боковых цепей могут быть выбраны из группы, состоящей из Ртс, РЫ, ΘίΒιι. Тй, Аст, тМ(. (Ви. Вос, ВЭбс. 2-С1Тг(. (Βιιΐΐιίο. Νρνδ. М18, ΝΘ₂, То5. ΘΒζΙ, ОсНх, Аст, ρМеΒζ1, ρМеΘΒζ, Θ^χ, Вот, Όηρ, 2-ί.Ί-Ζ. Βζ1, Еог и 2-ВгЛ по выбору для данной боковой цепи.

Стандартные и нестандартные аминокислоты и их защищенные варианты, а также способы снятия защитных групп хорошо известны. Многие из них приведены в каталоге Мегск №уаЬюскет™ Рсадспй кот РерНбе апб ΗίβΙι-ΤΙιΐΌΐίβΙιριΠ 8уп(11С515 (2006/7) (содержание которого полностью включено в настоящую заявку в виде ссылки).

Одна из групп Β³ и Β⁴ может являться группой при возможно содержащей в качестве заместителя алкил, гетероалкил, арил, гетероарил, аралкил или гетероаралкил.

Группы Β³ и Β⁴, обе, могут представлять собой водород.

Если Ζ представляет собой -ΝΗ₂, т.е. Β³ и Β⁴, обе, представляют собой водород, такая группа может находиться в защищенной форме. Защитная группа может быть выбрана из группы, состоящей из Етос, Вос, Ас, Вп и Ζ (или ί'Τζ). Могут применяться другие защитные группы, такие как те, которые описаны ниже в части, касающейся защищённных форм.

В предпочтительном случае Β⁵ представляет собой водород.

В предпочтительном случае Ζ представляет собой -ΝΗ₂, аминокислоту или -ΝΒΧ'ΘΒ⁶. Если Ζ представляет собой -ΝΒΧ'ΘΡ⁶. предпочтительно Β⁵ представляет собой водород и Β⁶ представляет собой аралкильную группу, замещённую гидроксилом, в наиболее предпочтительном случае аралкильную группу, замещённую в алкильной части группы. Β⁶ может являться -ί.Ή(ΘΗ)Ρ1ι (т.е. Ζ модифицирована остатком миндальной кислоты).

Β⁹ представляет собой предпочтительно группу, возможно содержащую заместитель, выбранный из алкила, гетероалкила, арила, гетероарила, аралкила и гетероалкила.

Предпочтительными соединениями согласно первому аспекту настоящего изобретения являются перечисленные ниже соединения:

соединение I: дезоксиактагардин В №[2-этаноламино]монокарбоксамид;

соединение II: дезоксиактагардин В №[4-бутаноламино]монокарбоксамид;

соединение III: актагардин №[2-этаноламино]монокарбоксамид;

соединение IV: дезоксиактагардин В (3-амино-1,2-пропандиол)монокарбоксамид;

соединение V: дезоксиактагардин В (2-амино-1,3-пропанол)монокарбоксамид;

соединение VI: дезоксиактагардин В [трис-(гидроксиметил)метиламино]монокарбоксамид;

соединение VII: дезоксиактагардин В (1-амино-2-пропанол)монокарбоксамид;

соединение VIII: дезоксиактагардин В (1-амино-3-пропанол)монокарбоксамид;

соединение IX: (^)-фенилаланил-(Θ)-дезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид;

соединение X: (^)-триптофанил-(Θ)-дезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид; соединение X: (^)-аланил-(Θ)-дезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид;

соединение XII: (^)-аланил-(Θ)-дезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид;

- 12 018841 соединение XIII: (Ь)-изолейцинил-(О)-дезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид; соединение XIV: (Ь)-лейцинил-(О)-дезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид; соединение XV: Ν-фенилацетилдезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид;

соединение XVI: Ν-ацетилдезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид; соединение XVII: Ν-манделилдезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид;

соединение XVIII: дезоксиактагардин В (^№бис-(2-гидроксиэтил)этилендиамино)монокарбоксамид.

Дополнительно или в качестве альтернативы предпочтительные соединения согласно первому аспекту настоящего изобретения могут быть выбраны из нижеперечисленных соединений:

соединение XX: дезоксиактагардин В №[2-гидрокси-2-фенилэтиламин]монокарбоксамид; соединение XXI: дезоксиактагардин В (Ь-серин метиловый эфир)монокарбоксамид;

соединение XXII: дезоксиактагардин В (№(2-гидроксиэтил)этилендиамин)монокарбоксамид; соединение XXIII: дезоксиактагардин В (2-гидроксипиперазин)монокарбоксамид.

Дополнительно или альтернативно предпочтительные соединения согласно первому аспекту настоящего изобретения могут быть выбраны из нижеперечисленных соединений:

соединение XXX: (Ь)-аланил-(О)-дезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид; соединение XXXI: (О)-аланил-(О)-дезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид; соединение XXXII: (Ь)-изолейцинил-(О)-дезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид; соединение XXXIII: (Ь)-лейцинил-(О)-дезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид; соединение XXXIV: Ν-фенилацетилдезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид; соединение XXXV: Ν-ацетилдезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид;

Соединение XXXVI: Ν-манделилдезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид. Наиболее предпочтительными соединениями являются:

соединение I: дезоксиактагардин В №[2-этаноламин]монокарбоксамид;

соединение III: актагардин №[2-этаноламино]монокарбоксамид.

Наиболее предпочтительные соединения имеют улучшенную противомикробную активность по сравнению с соединениями актагардина и дезоксиактагардина В, из которых они получены.

Настоящее изобретение также обеспечивает варианты, производные и предшественники соединений формулы (I). Их подробно обсуждают ниже.

Варианты

Вариант соединения формулы (I) включает соединение, в котором один или более, например от 1 до 5, например 1, 2, 3 или 4 аминокислот заменены другой аминокислотой. В предпочтительном варианте указанная аминокислота находится в положении, выбранном из положений 2, 3, 4, 5, 8, 10, 11, 13, 15, 16 или 18 соединения формулы (I).

Замены могут представлять собой замену одной аминокислоты на другую аминокислоту, встречающуюся в природе, и могут быть консервативными или неконсервативными заменами. Консервативные замены включают замены, приведенные ниже в таблице, при которых аминокислоты одного и того же блока во второй колонке и предпочтительно на той же строке третьей колонки могут заменять друг друга:

В качестве альтернативы аминокислота может быть заменена на одну из описанных выше модифицированных неприродных или редких природных аминокислот.

Вариант соединения согласно настоящему изобретению включает соединение с одной или более поперечными сшивками, причем одна или более поперечных сшивок представляет собой мостик, не являющийся тиониновым мостиком. Альтернативные мостики включают, если это приемлемо, дисульфидные мостики и амидные и сложноэфирные мостики (так называемые макролактамные и макролактонные варианты соответственно).

Производные

Производные соединений согласно настоящему изобретению (включая варианты) представляют собой производные, в которых одна или более боковая цепь аминокислоты соединения согласно настоящему изобретению была модифицирована, например этерификацией, амидированием или окислением.

Производные соединений согласно настоящему изобретению могут являться моноамидными производными по одной из карбоксильных функциональных группактагардина. Производное соединение может включать соединение, в которой карбоксильная функциональная группа боковой цепи внутреннего остатка, какого как С1и11, превращена из -СООН в группу -СООР¹⁰, в которой К¹⁰ представляет собой

- 13 018841 водород, (С₁-С₄)алкил или (С₁-С₄)алкокси(С₂-С₄)алкил. В качестве альтурнативы карбоксильная функциональная группа боковой цепи внутреннего остатка, например остатка С1и11. может быть превращена из -СООН в группу -ί,ΌΝΒ'Β². где В¹ и В² имеют значения, определенные выше для заместителей С концевого амида.

Соединение (I) показано с поперечными сшивками: поперечная сшивка 1-6, лантионина (8ег-Су§); поперечная сшивка 7-12, бета-метиллантионина (Тйг-Сук); и поперечная сшивка 9-17, бетаметиллантионина (Тйг-Сук). В одном варианте реализации изобретения одна, две или три из этих поперечных сшивок могут являться тионинсульфоксидными поперечными сшивками.

Другие формы

Вышеупомянутые соединения и полипептиды-предшественники включают хорошо известные ионные формы, формы солей, сольватов и защищенные формы. Например, ссылки на карбоновую кислоту (-СООН) также включают анионную (карбоксилатную) форму (-СОО^-), её соль или сольват, а также обычные защищенные формы. Аналогично, ссылка на аминогруппу включает её протонированную форму (-Ν⁺ΗΒ¹Β²), соль или сольват аминогруппы, например соль хлороводородной кислоты, а также обычные защищенные формы аминогруппы. Аналогично, ссылка на гидроксильную группу также включает её анионную форму (-О^-), соль или сольват, а также традиционные защитные формы гидроксильной группы.

Например, ссылка на карбоксилсодержащую боковую цепь глутаминовой кислоты (С1и), представляющей собой остаток в соединении согласно настоящему изобретению, включает её карбоксилатную форму. Если Ζ представляет собой -ΝΗ₂, ссылка на эту группу включает протонированную форму данной аминогруппы.

Изомеры, соли, сольваты, защищенные формы и пролекарства.

Некоторые соединения могут существовать в одной или более конкретных геометрических, оптических, энантиомерных, диастереомерных, эпимерных, стереоизомерных, таутомерных, конформационных или аномерных форм, включая, но не ограничиваясь перечисляемыми, цис- и транс-формы; Е- и Ζформы; с-, ΐ- и г-формы; эндо- и экзо-формы; В-, 8- и мезо-формы; Ό- и Ь-формы; б- и 1-формы; (+)- и (-)формы; кето-, енольные и енолятные формы; син- и антиформы; синклинальные и антиклинальные формы; α- и β-формы; аксиальные и экваториальные формы; формы лодки, кресла, твист-формы, формы конверта и формы полукресла и их комбинации, в дальнейшем в общем называемые изомерами (или изомерными формами).

Например, описанные в настоящем изобретении остатки аминокислот могут существовать в одной из конкретных стереоизомерных форм. Аналогично группы В¹ и В² могут существовать в одной из конкретных стереоизомерных форм, если такие формы существуют. Подобным образом группы В³ В⁴, В⁵, В⁶, В⁷, В⁸, В⁹ и В¹⁰ могут существовать в любой конкретной стереоизомерной форме, если такая форма существует.

Если соединение или его полипептидный предшественник согласно настоящему изобретению включает остаток дигидроаминомасляной кислоты, данный остаток может существовать либо в цис-, либо в транс-форме.

Если соединение находится в кристаллической форме, оно может существовать в разнообразных полиморфных формах.

Следует отметить, что кроме обсуждаемых ниже таутомерных форм из понятия изомеры, применяемого в настоящем изобретении, исключены структурные (или конституционные) изомеры (т.е. изомеры, которые различаются связями между атомами, а не просто расположением атомов в пространстве). Например, упоминание метоксигруппы, -ОСН₃, не следует толковать как упоминание его структурного изомера, гидроксиметильной группы, -СН2ОН. Аналогично, упоминание орто-хлорфенила не должно толковаться, как упоминание его структурного изомера, мета-хлорфенила. Однако ссылка на класс структур может включать структурные изомерные формы, входящие в этот класс (например, С_1-7алкил включает н-пропил и изопропил; бутил включает н-, изо-, втор- и трет-бутил; метоксифенил включает орто-, мета- и параметоксифенил).

Вышеупомянутое исключение не относится к таутомерным формам, например кето-, енольным- и енолятным-формам, как, например, в следующих таутомерных парах: кетон/енол, имин/енамин, амид/иминоспирт, амидин/амидин, нитрозо/оксим, тиокетон/ентиол, Ν-нитрозо/гидроксиазо и нитро/ацинитро.

Следует отметить, что в понятие изомер включено соединение с одним или более изотопов в качестве заместителей. Например, Н может иметь форму любого изотопа, включая ¹Н, ²Н (Ό) и ³Н (Т); С может иметь форму любого изотопа, включая ¹²С, ¹³С и ¹⁴С; О может иметь форму любого изотопа, включая ¹⁶О и ¹⁸О и т.п.

Если не указано другое, ссылка на конкретное соединение включает все такие изомерные формы, включая (полностью или частично) рацематы и другие их смеси. Способы приготовления (например, асимметрический синтез) и разделения (например, частичная кристаллизация и хроматографические средства) таких изомерных форм либо хорошо известны специалистам в данной области, либо легко могут быть получены путем адаптации способов, изложенных в настоящем изобретении, или известных

- 14 018841 способов, известным образом.

Если не указано другое, ссылка на конкретное соединение также включает его ионные формы, формы солей, сольватов и защищенные формы, например, обсуждаемые ниже, а также различные полиморфные формы указанного соединения.

Удобным или желательным может быть получение, очистка и/или обращение с соответствующей солью активного соединения, например фармацевтически приемлемой солью. Примеры фармацевтически приемлемых солей приводятся в Вегде, с1 а1., Рйагтасеийса11у Ассер1аЫе 8айк , 1. Рйагт. 8οΐ., 66, 119 (1977).

Например, если соединение является анионным или включает функциональную группу, которая может стать анионной (например, -СООН может быть превращена в анионную -СОО^-), соль может быть образована с соответствующим катионом. Примеры приемлемых неорганических катионов включают, но не ограничиваются перечисленными, ионы щелочных металлов, такие как №Г и К⁺, катионы щелочноземельных металлов, такие как Са²⁺ и Мд²⁺, и другие катионы, такие как А1³⁺. Примеры приемлемых органических катионов включают, но не ограничиваются перечисленными, ион аммония (т.е. ΝΗ4⁺) и замещённые ионы аммония (например, ΝΗ3Κ'. ΝΗ₂Ε₂'. ΝΗΚ₃'. ΝΚ₄ ⁺). Примерами приемлемых замещённых ионов аммония являются ионы, являющиеся проиводными из: этиламина, диэтиламина, дициклогексиламина, триэтиламина, бутиламина, этилендиамина, этаноламина, диэтаноламина, пиперазина, бензиламина, фенилбензиламина, холина, меглумина и трометамина, а также аминокислоты, такие как лизин и аргинин. Примером общераспространённой четвертичной соли аммония является Ν(ΟΗ₃)₄ ⁺.

Если соединение является катионным или включает функциональную группу, которая может быть превращена в катионную (например, -ΝΗ₂ может стать -ΝΗ₃ ⁺), может быть образована соль с приемлемым анионом. Примеры приемлемых неорганических анионов включают, но не ограничиваются перечисленными, производные следующих неорганических кислот: хлористо-водородной, бромистоводородной, йодисто-водородной, серной, сернистой, азотной, азотистой, фосфорной и фосфористой. Примеры приемлемых органических анионов включают, но не ограничиваются перечисленными, производные следующих органических кислот: уксусной, пропионовой, янтарной, гликолевой, стеариновой, пальмитиновой, молочной, малоновой, памоевой, винной, лимонной, глюконовой, аскорбиновой, малеиновой, гидроксималеиновой, фенилуксусной, глутаминовой, аспарагиновой, бензойной, коричной, пировиноградной, салициловой, сульфаниловой, 2-ацетоксибензойной, фумаровой, толуолсульфоновой, метансульфоновой, этансульфоновой, этандисульфоновой, щавелевой, изетионовой, валериановой и глюконовой. Примеры приемлемых полимерных анионов включают, но не ограничиваются перечисленными, производные следующих полимерных кислот: дубильной кислоты, карбоксиметилцеллюлозы.

Может оказаться удобным или желательным приготовить, очистить и/или использовать соответствующий сольват активного соединения. Термин сольват употребляется в настоящем изобретении в своём обычном значении и относится к комплексу растворённого вещества (например, соли активного соединения) и растворителя. Если растворителем является вода, сольват традиционно называют гидратом, например моногидратом, дигидратом, тригидратом и т.д.

Может оказаться целесообразным приготовить, очистить и/или использовать активное соединение в химически защищенной форме. Понятие химически защищенная форма в настоящем описании имеет обычное химическое значение и относится к соединению, в котором одна или более реакционноспособных функциональных групп защищены от нежелательных химических реакций, т.е. эти группы существуют в виде защищенной или защитной группы (также известной под названием замаскированной или маскирующей группы или блокированной или блокирующей группы). Защита реакционноспособной функциональной группы позволяет проводить реакции, в которых задействованы незащищённые реакционноспособные функциональные группы, не затрагивая защищенную группу, защитная группа может быть удалена обычно на более поздней стадии, практически без влияния на остальную часть молекулы. См., например, Рго1ес1|уе Сгоирк ίη Огдашс ЗупЛеЧ (Т. Сгееи и Р. \Уи1к; 3гй Εάίίίοη; ίοΐιη Уйеу аий 8оик, 1999).

Например, аминогруппа может быть защищена, как ранее описано для Ζ, представляющего собой -ΝΗ₂. Дополнительно аминогруппа может быть защищена в виде амида или уретана, например в виде метиламида (-ΝΗΟΟ-ΟΗ₃); бензилоксиамида (-ΝΗΟΟ-ΟΟΗ₂0₆Η₅, -ΝΗ-СЬх); трет-бутоксиамида (-ΝΗΟΟОС(СН₃)₃, -ΝΗ-Вос); 2-дифенил-2-пропоксиамида (-ΝΗ^-Ο^^^^^^^, -ΝΗ-Врос), в виде 9флуоренилметоксиамида (-ΝΗ-Етос), в виде 6-нитровератрилоксиамида (-NΗ-Nνοс), в виде 2триметилсилилэтилоксиамида (-ΝΗ-Теос), в виде 2,2,2-трихлорэтилоксиамида (-ΝΗ-Тгос), в виде аллилоксиамида (-ΝΗ-АИос), в виде 2(-фенилсульфонил)этилоксиамида (-ΝΗ-Ркес) или, если это приемлемо, в виде нитроксида (>Ν-Ο·).

Например, карбоксильная группа карбоновых кислот может быть защищена, как описано ранее для остатка аминокислоты. Например, карбоксильная группа карбоновой кислоты может быть защищена путем образования сложного эфира, например: С_1-7алкилового эфира (например, метилового эфира; третбутилового эфира); С_1-7галогеналкилового эфира (например, С_1-7тригалогеналкилового эфира); три-С_1-7алкилсилил-С_1-7алкилового эфира или С_5-20арил-С_1-7алкилового эфира (например, бензилового эфира; нитробензилового эфира) или амида, например метиламида.

- 15 018841

Например, гидроксильная группа может быть защищена в форме эфирной (-ΟΒ) или сложноэфирной (-Οί.'(=Ο)Β) группы, например эфирной: трет-бутилэфирной; бензильной, бензгидрильной (дифенилметильной) или тритильной (трифенилметильной); триметилсилильной или третбутилдиметилметилсилильной или сложноэфирной ацетилированной (-ОС(=О)СН₃, -ОАс) группы.

Например, альдегидная или кетонная группа может быть защищена путем превращения в ацеталь или кеталь соответственно, в которых карбонильная группа (>С=О) превращена в диэфир (>Ο(ΟΚ)_;), посредством реакции, например, с первичным спиртом. Альдегидную или кетонную группу легко регенерировать гидролизом в большом избытке воды в присутствии кислоты.

Может оказаться удобным или желательным приготовить, очистить и/или использовать соединение в форме пролекарства. Термин пролекарство в настоящем изобретении относится к соединению, которое в ходе метаболизма (например, ίη νίνο) образует желаемое активное соединение. Обычно пролекарство является неактивным, или менее активным, чем желаемое активное соединение, но может обеспечить преимущества при обращении, введении или полезные метаболические свойства.

Например, некоторые пролекарства представляют собой сложные эфиры активного соединения (например, физиологически приемлемого метаболически лабильного сложного эфира). В ходе метаболизма сложноэфирная группа (-ί’(=Ο)ΟΒ) расщепляется с образованием активного лекарственного средства. Некоторые сложные эфиры могут быть образованы посредством этерификации, например, карбоксильных групп (-СООН) исходного соединения, включающей, если это возможно, предварительную защиту любых других реакционноспособных групп, присутствующих в исходном соединении, с последующим снятием защиты, если это необходимо. Примеры таких метаболически лабильных сложных эфиров включают, но не ограничиваются перечисленными, такие эфиры, в которых В представляет собой С_1-20алкил (например -Ме, -Εΐ); С_1-7аминоалкил (например аминоэтил; 2-(^№диэтиламино)этил; 2(4-морфолино)этил); и ацилокси-С1-7алкил (например, ацилоксиметил; ацилоксиэтил; например пивалоилоксиметил; ацетоксиметил; 1-ацетоксиэтил; 1-(1-метокси-1-метил)этилкарбонилоксиэтил; 1(бензоилокси)этил; изопропоксикарбонилоксиметил; 1-изопропоксикарбонилоксиэтил; циклогексилкарбонилоксиметил; 1-циклогексилкарбонилоксиэтил; циклогексилоксикарбонилоксиметил; 1циклогексилоксикарбонилоксиэтил; (4-тетрагидропиранилокси)карбонилоксиметил; 1-(4тетрагидропиранилокси)карбонилоксиэтил; (4-тетрагидропиранил)карбонилоксиметил и 1-(4тетрагидропиранил)карбонилоксиэтил).

Дополнительные приемлемые формы пролекарств включают фосфоновые и гликолевые соли. В частности, гидроксильные группы (-ОН), можно встраивать в фосфонатные пролекарства реакцией с хлордибензилфосфитом с образованием после гидрирования фосфонатной группы -О-Р(=О)(ОН)₂. Эта группа при метаболизме отщепляется под действием ферментов фосфатаз с образованием активного лекарственного средства с гидроксилом.

Также некоторые пролекарства под действием ферментов активируются с образованием активного соединения или соединения, которое после дополнительной химической реакции дает активное соединение. Например, пролекарство может быть производным углевода или другим конъюгатом с гликозидом или может быть сложноэфирным производным аминокислоты.

Способы получения соединений согласно настоящему изобретению

Авторами настоящего изобретения ранее были описаны способы получения соединений лантибиотиков, а также их производных, вариантов и предшественников. Имеется более ранняя родственная заявка тех же авторов РСТ/СВ2007/000138 (νΟ 2007/083112), находящаяся параллельно на рассмотрении, и содержание которой полностью включено в настоящее изобретение посредством ссылки. Соединения, указанные в данном документе, могут быть использованы в качестве исходных материалов для соединений, описанных в настоящем изобретении.

В частности, настоящее изобретение ссылается на следующие разделы родственной заявки изобретателей, находящейся на рассмотрении:

Конструкт экспрессии;

Рекомбинантный вектор экспрессии;

Кассеты экспрессии;

Библиотеки экспрессии;

Клетка-хозяин, включая клетку-хозяина, продуцирующую лантибиотик и непродуцирующую клетку;

Получение соединений согласно настоящему изобретению и

Примеры 1-4 и 7.

Соединения, описанные в настоящем изобретении, можно применять в качестве исходных материалов для синтеза других соединений согласно настоящему изобретению.

Соединения актагардина для применения согласно настоящему изобретению могут быть получены из известных аналогов актагардина. В предпочтительном случае соединения актагардина согласно настоящему изобретению получают из актагардина, актагардина В и дезоксиактагардина В. Данные лантибиотики можно рассматривать как исходные лантибиотики или исходный материал для получения лантибиотиков.

- 16 018841

Соединение актагардина может быть получено путем экспрессии нуклеиновой кислоты, например в виде конструкта экспрессии, кодирующего полупептид-предшественник, введенного в рекомбинантном векторе экспрессии в клетку-хозяина, которая содержит соответствующий ген лантибиотика, такой как ген ЬапА, если это необходимо, вместе со связанными генами кластера, необходимыми для превращения полипептида-предшественника в аналог актагардина. Варианты соединения актагардина могут быть получены соответствующей модификацией гена ЬапЛ с применением способов, по существу известных специалистам в данной области.

Ген ЬапО, который, как было показано, является частью актагардинового кластера генов, кодирует белок, ответственный за окисление дезоксиформы аналогов актагардина в актагардин, в котором Υ представляет собой -8(О)-. Модификация этого гена может обеспечить образование производных соединений с альтернативной структурой поперечных сшивок. Модификация гена ЬапО также позволяет менять соотношения относительных уровней окисленной (Υ=-8(Ο)) и восстановленных форм (Υ=-8-), продуцируемых в клетке-хозяине.

Считается, что ген ЬаиМ, который, как было показано, является частью актагардинового кластера генов, кодирует белок, необходимый для превращения полипептида-предшественника в аналог лантибиотика. Модулирование этого гена и других генов, кодирующих модифицикацию белков, может обеспечить продуцирование производных соединений с альтернативными структурами поперечных сшивок. Модулирование этих генов может также обеспечить продуцирование соединений, обладающих или сохраняющих последовательность аминокислот, присоединённых к Ν-концу аналога актагардина, такую как лидерная последовательность.

Обычно соединения, продуцируемые культурой клеток, будут содержать на Ν-конце свободный амин (т.е. ζ представляет собой -ΝΗ₂) и свободную карбоксильную группу в С-конце (т.е. X представляет собой -ОН). Эти концы можно дериватизировать, как будет подробно описано ниже. Если аналог актагардина содержит модифицированный Ν-конец, обычно в исходном материале Ν-конец будет представлять собой свободный амин. Следует принимать во внимание, что соединения, продуцируемые культурой клеток, могут содержать также модифицированный Ν-конец. Таким образом, соединение для использования в качестве исходного материала может представлять собой соединение, в котором Ζ представляет собой -ЯНК³, где К³ определено как для аналогов по формуле (I).

В тех случаях, когда настоящее изобретение предусматривает использование соединений, полученных из актагардина, в качестве исходного материала, причем Х1 и Х2 представляют собой Ьеи и Уа1 соответственно, в качестве клетки-хозяина может выступать А. йдипае ΝΟΙΜΒ 41362 без какой-либо дополнительной модификации.

Если клетки-хозяева продуцируют смесь аналогов исходного материала, например такие, в которых Υ представляет собой -8- или -8(О)-, продукты можно выделить, применяя стандартную технологию разделения, например при посредстве ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография), например как описано в патенте США 6022851 для получения актагардина и А1а-актагардина.

В зависимости от культуры клетки исходный материал для лантибиотика может быть выделен из клетки-хозяина немодифицированным. Выделенные и модифицированные соединения могут быть изготовлены в форме фармацевтической композиции, возможно в форме фармацевтически приемлемой соли.

В качестве альтернативы, исходный материал для получения лантибиотиков или их предшественников, вариантов и производных, может быть получен посредством химического синтеза пептидов, например твердофазного синтеза пептидов (ТФСП). Эти технологии хорошо известны специалистам в данной области. Однако в предпочтительном случае исходный материал для изготовления лантибиотиков получают из культуры клеток.

Соединения согласно настоящему изобретению могут быть представлены, по существу, в изолированной форме. Изолированными соединениями согласно настоящему изобретению будут считаться такие изолированные соединения, определённые выше, которые свободны или по существу свободны от связанного с ними материала, такого как полипептиды, из которых были получены данные соединения. Естественно, соединения могут быть изготовлены с разбавителями и вспомогательными веществами, но считаться изолированными практических целей.

Соединение согласно настоящему изобретению также может находиться, по существу, в очищенной форме, что обычно относится к препарату, в котором более 90%, например 95, 98 или 99%, соединений представляют собой соединение согласно настоящему изобретению.

Соединения согласно настоящему изобретению получают путём осуществления взаимодействия исходного материала для получения лантибиотиков, содержащих карбоксильный С-конец, 2-6-кратным молярным избытком соответствующей аминоалкильной или аминогетероалкильной группы, в приемлемом органическом растворителе, таком как диметилформамид, при температуре обычно между 0°С и комнатной температурой и в присутствии подходящего конденсирующего агента. Типичными примерами конденсирующих агентов являются производные карбодиимида, такие как дициклогексилкарбодиимид, фосфоазидаты, такие как ΌΡΡΑ (дифенилфосфорилазид) или сочетающие агенты на основе бензотриазола, такие как РуВор™, НАТИ (гексафторфосфат 2-(1Н-7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3тетраметилурония) или ТВТИ (тетрафторборат О-(бензотриазол-1-ил)-ЫА№,№-тетраметилурония).

- 17 018841

Соединения согласно настоящему изобретению, в которых Ζ представляет собой аминокислоту или -кК⁵С0К⁶, могут быть получены из материала для получения лантибиотиков, содержащего аминогруппу в Ν-конце, посредством реакции сочетания с соответствующей карбоновой кислотой в присутствии связывающего агента, такого как дициклогексилкарбодиимид, фосфоазидаты, такие как ΌΡΡΆ или сочетающие агенты на основе бензотриазола, такие как РуВор™, НАТи или ТВТИ. Для запуска реакции обычно используют органические аминооснования, такие как триэтиламин или диизопропилэтиламин.

В альтернативном варианте в качестве реагентов для взаимодействия с Ν-концом лантабиотика можно использовать предварительно полученные активированные производные соответствующей кислоты, такие как пентафторфениловые эфиры. Для запуска реакции добавляют катализатор, такой как Н0ВР Типичным растворителем является диметилформамид.

Если карбоновая кислота, которую используют в реакции сочетания с лантибиотиком, дополнительно содержит функциональные группы, способные помешать реакции сочетания, могут применяться подходящие защитные группы, известные специалистам в данной области. Например, можно использовать защитные группы Ртос или 1Вос для аминокислотных производных, предназначенных для сочетания с Ν-концом лантибиотика.

Соединения согласно настоящему изобретению, где Ζ представляет собой КК³К⁴, могут быть получены из лантибиотика, содержащего на Ν-конце аминогруппу, посредством реакции сочетания с альдегидом или кетоном в органическом растворителе, таком как дихлорметан, диметилсульфоксид или уксусная кислота в присутствии подходящего восстанавливающего агента, такого как боргидрид натрия или триацетоксиборгидрид натрия. Указанные восстанавливающие агенты можно применять в растворе или связанными с подходящей смолой, такой как полистирол. В зависимости от условий реакции, того, что используется: нетон или альдегид и соотношения реагентов, применяемых в реакции, можно получить как моно-, так и диалкилированный Ν-конец. В альтернативном варианте реакция может быть осуществлена в отсутствие восстанавливающего агента. В этом случае можно получать соединения согласно настоящему изобретению, где Ζ представляет собой -Ν=Ρ⁹.

Соединения согласно настоящему изобретению, где Ζ представляет собой -кК⁵С(0)0К⁶, -ЫК⁵80К⁶, -кК⁵802К⁶, -NК⁵С(8)NК⁶К⁷ или -NК⁵С(NК⁸)NК⁶К⁷, можно получить из исходного материала для производства лантибиотиков с аминогруппой на Ν-конце посредством реакций сочетания, с соответствующим образом активированной группой замещаемого реагента. Так соединения, в которых Ζ представляет собой -ЫК⁵С(0)0К⁶, можно приготовить, применяя С1С(0)0К⁶ и т.п. Соединения, в которых Ζ представляет собой КК⁵802К⁶, могут дополнительно содержать функциональную группу, защищенную защитной группой. Защитная группа может быть удалена соответствующим образом после проведения реакции сочетания.

Соединения согласно изобретению, в которых Ζ отличается от -ΝΗ₂ (т.е. соединения, где К³ и К⁴ не являются водородом), могут быть получены из исходных материалов, модифицированных либо по С-, либо по Ν-концу. Затем может быть модифицирован другой конец с получением соединения согласно настоящему изобретению. Так последовательность замещений может или начинаться с модификации Νконца с последующей модификацией С-конца, или наоборот. Если возникают проблемы, связанные с региоселективностью, например, если заместитель на С-конце обладает свойствами, характерными для аминогруппы, может применяться подходящая стратегия защиты.

Так исходный материал лантибиотика, в котором Ν-конец соединения представляет собой остаток аминокислоты, -ХКЧГ -1ХК⁵С0К⁶, -ХК'С(0)0К⁶; -1ХК⁵80К⁶, -1ХК⁵80₂К⁶, -ХК'СЩХК'К ,

-ΝΑ^νΡνρΑ⁷ или -Ν=Ρ⁹ (как было определено выше в настоящем описании по отношению к соединениям согласно настоящему изобретению), может эквивалентно сочетаться с аминоспиртами у С-конца.

Авторы настоящего изобретения обнаружили, что в условиях реакции сочетания, применяемых для сочетания аминоспирта с карбоксилом С-конца исходного лантибиотика, может модифицироваться также карбоксильная группа в боковой цепи остатка аминокислоты, например глутаминовой кислоты. Соединения такого рода, в которых модификации подвергаются и С-конец, и боковая цепь, также входят в объем настоящего изобретения. Если была модифицирована боковая цепь аминокислоты, для того чтобы изменить количество полученного продукта, можно путем соответствующего изменения реакционных условий. В альтернативном варианте, для того чтобы обеспечить целостность боковой цепи, может применяться стратегия защиты и снятия защиты. Подходящие защитные группы для аминокислотных остатков боковой цепи хорошо известны и включают в себя вышеупомянутые защитные группы.

Идентификацию продуктов реакции можно проводить, применяя ЖХ-МС (жидкостную хроматографию с масс-спектрометрическим детектором). За прохождением реакции можно следить посредством ВЭЖХ; см., например, фиг. 3. ВЭЖХ можно применять для отслеживания расхода исходного материала, появления продукта, а также побочных продуктов или продуктов разложения (если они появятся).

Продукты и исходный материал можно анализировать методом ЯМР-спектроскопии. Соостветствующие технологии были ранее описаны авторами настоящего изобретения в РСТ/СВ2007/000138 (\У0 2007/083112). Структура соединения на основе лантибиотика может быть подтверждена с применением стандартных технологий, таких как СО8Υ (двумерная корреляционная ЯМР), НМВС (гетероядерная корреляция многих связей), ТОС8Υ (спектроскопия полной корреляции), Н8ОС (гетероядерная од

- 18 018841 ноквантовая когерентность) и ΝΟΕ8Υ (ядерная спектроскопия с применением эффекта Оверхаузера).

Фармацевтически приемлемая соль

Фармацевтически приемлемая соль может являться солью присоединения кислоты, в которой основание сохраняет биологическую эффективность и свойства соединения и которая является фармацевтически приемлемой. Такие соли включают соли, образованные хлористо-водородной кислотой, бромисто-водородной кислотой, серной кислотой, азотной кислотой, фосфорной кислотой и т.п., и органическими кислотами, такими как уксусная кислота, пропионовая кислота, гликолевая кислота, пировиноградная кислота, щавелевая кислота, малеиновая кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, винная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, коричная кислота, миндальная кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, паратолуолсульфокислота, салициловая кислота и т.п.

Соли также включают соли с основаниями, такие как соли щелочных или щелочно-земельных металлов.

Дополнительно или в качестве альтернативы соли могут быть образованы с любым из соединений, такими как Ν-метил-Э-глюкамин, Ь-аргинин, Ь-тирозин, холин и трис-(гидроксиметил)аминометан.

Фармацевтические композиции

Соединения согласно настоящему изобретению на основе лантибиотиков можно вводить в композиции с одним или более фармацевтически приемлемых ингредиентов, хорошо известных специалистам в данной области, включая, но не органичиваясь перичисленными, фармацевтически приемлемые носители, адъюванты, эксципиенты, разбавители, наполнители, буферные системы, консерванты, антиоксиданты, лубриканты, стабилизаторы, солюбилизаторы, сурфактанты (например, смачивающие агенты), маскирующие агенты, красители, ароматизаторы и подсластители. Композиция может дополнительно содержать другие активные агенты, например другие терапевтические или профилактические агенты. Так настоящее соединение дополнительно предлагает фармацевтические композиции, определённые выше, и способы, предусматривает получение фармацевтической композиции путём смешивания по меньшей мере одного активного соединения, определённого выше, с одним или более другими фармацевтическими приемлемыми ингредиентами, хорошо известными специалистам в данной области, например носителями, адъювантами, эксципиентами и т.д. При изготовлении в виде дискретных единиц (например, таблеток и т.д.) каждая единица содержит заранее определённое количество (дозу) активного соединения.

Термин фармацевтически приемлемый в настоящем изобретении относится к соединениям, ингредиентам, материалам, композициям, лекарственнным формам и т.д., которые, как известно специалистам в области медицины, пригодны к применению в контакте с тканями субъекта (например, человека) и не обладают чрезмерной токсичностью, раздражающим действием, аллергической реакцией и не вызывают другие проблемы или осложнения, при сравнении разумным отношением польза/риск. Каждый носитель, адъювант, эксципиент и т.д. также должен быть приемлемым в смысле совместимости с другими ингредиентами композиции.

Композиции могут быть изготовлены в форме, подходящей для любого приемлемого способа и средства введения. Фармацевтически приемлемые носители или разбавители включают таковые, применяющиеся в комположениях, пригодных для орального, ректального, назального, локального (включая буккальное и подъязычное), вагинального, парентерального (включая подкожное, внутримышечное, внутивенное, интрадермальное интратекальное, эпидуральное) введения. Композиции могут быть удобно представлены в дозированной лекарственной форме и могут быть получены любым способом, известным специалистам в области фармацевтики. Такие способы включают стадию приведения в контакт активного ингредиента с носителем, который содержит один или более вспомогательных ингредиентов. В целом композиции получены путем равномерного приведения в тесный контакт активного ингредиента с жидкими носителями или тонкоизмельчёнными твёрдыми носителями или теми и другими, и затем при необходимости формования продукта.

В твёрдых комположениях можно применять традиционные нетоксичные твёрдые носители, например маннитол, лактозу, целлюлозу, производные целлюлозы, крахмал, стеарат магния, сахаринат натрия, тальк, глюкозу, сахарозу, карбонат магния, и т.п., все они - фармацевтического качества. Вышеуказанное активное соединение может быть изготовлено в форме суппозиториев, с применением в качестве носителя, например, полиалкиленгликоля, ацетилированных триглицеридов и т.п. Жидкие фармацевтические композиции, пригодные для введения могут быть, например, изготовлены путем растворения, диспергирования, и так далее, определённого выше активного соединения и возможно фармацевтических адъювантов в носителе, таком, например, как вода, водный раствор декстрозы, глицерин, этанол и т.п., с образованием раствора или суспензии. Если это желательно, фармацевтическая композиция, предназначенная для введения, может также содержать незначительные количества нетоксичных вспомогательных веществ, таких как смачивающие или эмульгирующие агенты, буферные агенты для доведения рН, и т.п., например ацетат натрия, монолаурат сорбита, натриевая соль триэтаноламиноацетата, триэтаноламиноолеат и т.д. Существующие способы приготовления таких лекарственных форм известны или станут очевидными специалистам в данной области; например, см. ВеттдЮп: ТЬе 8с1еисе апб Ргасбсе о£ РЬаг

- 19 018841 тасу, 201й Ебйюп, 2000, риЬ. Ырртсой, Аййатз & АПкнъ. Композиция или лекарственная форма, предназначенные для введения, будут в любом случае содержать активное соединение(я) в количестве, эффективном для смягчения симптомов у субъекта, подвергаемого лечению.

Могут быть получены лекарственные формы или композиции, содержащие активный ингредиент в диапазоне от 0,25 до 95%, добавляя для баланса нетоксичный носитель.

Для орального введения изготавливают фармацевтически приемлемую нетоксичную композицию посредством добавления обычных наполнителей, таких, например, как маннитол, лактоза, целлюлоза, производные целлюлозы, кросскармелллоза натрия, крахмал, стеарат магния, сахаринат натрия, тальк, глюкоза, сахароза, карбонат магния и т.п. - все компоненты фармацевтического качества. Такие композиции могут иметь форму растворов, суспензий, таблеток, пилюль, капсул, порошков, форм замедленного высвобождения и т.п. Такие композиции могут содержать 1-95% активного ингредиента, более предпочтительно 2-50%, наиболее предпочтительно 5-8%.

Парентеральное введение обычно осуществляют путем инъекции либо подкожной, либо внутремышечной, либо внутривенной. Инъекционные формы могут быть получены в традиционном виде, либо жидких растворов, либо суспензий, твёрдых форм, пригодных для растворения или суспендирования в жидкости перед инъекцией или в виде эмульсий. Дополнительно, если желательно вводимые фармацевтические композиции могут также содержать незначительные количества нетоксичных вспомогательных веществ, таких как смачивающие или эмульгирующие агенты, агенты для доведения рН и т.п., таких как, например, ацетат натрия, монолаурат сорбита, триэтаноламиноолеат, натриевая соль триэтаноламиноацетата и т.д.

Для местного применения фармацевтически приемлемые композиции могут быть изготовлены в форме подходящей мази или геля, содержащих активный компонент, суспендированный или растворённый в одном или более носителях. Носители для местного введения соединений согласно данному изобретению включают, но не ограничиваются перечисленными, минеральное масло, жидкий вазелин, белый вазелин, пропиленгликоль, полиоксиэтилен, полиоксипропиленовое соединение, эмульгирующий парафин и воду. В альтернативном варианте, фармацевтически приемлемые композиции могут быть изготовлены в форме подходящего лосьона или крема, содержащего активные компоненты, суспендированные или растворённые в одном или более фармацевтически приемлемых носителях. Подходящие носители включают, но не ограничиваются перечисленными, минеральное масло, моностеарат сорбита, полисорбат 60, цетиловые эфиры парафина, цетеариловый спирт, 2-октилдодеканол, бензиловый спирт и воду.

Процентное содержание активного соединения, содержащегося в такой композиции для парентерального или местного введения, в значительной степени зависит от его конкретной природы, а также от активности соединения и потребностей субъекта. Однако можно применять процентные содержания активного ингредиента от 0,1 до 10% мас./мас., причем указанные значения будут выше, если композиция представляет собой твердое вещество, которое разбавляют до указанных процентных содержаний. В предпочтительном случае в растворе будет содержаться от 0,2-2% мас./мас. активного агента в растворе.

Дополнительные сведения, касающиеся подходящих носителей, адъювантов, наполнителей и т.д. можно найти в стандартных фармацевтических текстах, например, ИепнпдЮп: Тйе 8аепсе и Ртасйсе о£ Рйатшасу, 20!й Ебйюп, 2000, риЬ. Ырртсой, Аййатк & АПкнъ и НапбЬоок о£ Рйатшасеи!юа1 Е\с1р1еп15. 2пб ебйюп, 1994.

Введение соединений

Соединения на основе лантибиотиков и композиции согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту в рамках медицинского лечения или профилактики. Субъект может представлять собой животное или человека. Животное может быть млекопитающим или другим позвоночным.

Таким образом, предлагается соединение согласно настоящему изобретению для применения у субъекта в способе его лечения или профилактики. Также предлагается применение соединения согласно настоящему изобретению для производства лекарственного средства для применения у субъекта в способе его лечения или профилактики.

В частности, соединения согласно настоящему изобретению могут применяться для лечения у субъекта микробной, типично, бактериальной инфекции.

Термин микробная инфекция относится к инвазии патогенных микробов в организм хозяинаживотного. Данный термин включает избыточный рост количества микробов, которые присутствуют в организме животного в нормальных условиях. В более общем смысле микробная инфекция может представлять собой ситуацию, в которой присутствие популяции(ий) микробов наносит вред хозяинуживотному. Таким образом, животное страдает от микробной инфекции, если избыточные количества популяции микробов присутствуют в организме или на теле животного, или если присутствие микробной популяции(ий) наносит вред клеткам или тканям животного.

Инфекция может являться инфекцией желудочно-кишечного тракта, предпочтительно кишечника и в наиболее предпочтительном случае толстой кишки. В частности, в одном из аспектов настоящего изобретения предлагается способ лечения бактериальной инфекции. В предпочтительном случае инфекция является инфекцией С1ойпбшш, предпочтительно инфекцией С1ойпбшш регйтдепк, С1ойпбшш бЖсйе,

- 20 018841

С1ок!пбшт ΙοΙαηί или С1ок!пбшт Ьо1и1тит, в наиболее предпочтительном случае - инфекцией С. ШГПсПе. Эти способы предлагают новые и полезные альтернативы способам лечения с применением лантибиотиков типа А, ванкомицина или метронидазола.

Бактериальная инфекция может являться инфекцией Еп1егососсик кр., 81гер1ососсик крр., 81арйу1ососсик крр. или С1ок1пбшт ШГПсПе.

Настоящее изобретение также обеспечивает способ лечения заболевания, вызванного бактериальной инфекцией кишечника и в предпочтительном случае толстой кишки. Способ можно использовать для лечения псевдомембранозного колита или диареи, ассоциируемой с С1ок1пбшт бййсйе (СЭАЭ). В предпочтительном случае инфекция является инфекцией С1ок1пбшш, предпочтительно инфекцией С1ок1пбшш регГппдепк, С1ок!пбшт бгГйсйе, С1ок!пбшт 1е1ап1 или С1ок!пбшт Ьо1и1тит, в наиболее предпочтительном случае инфекцией С. бййсйе.

Настоящее изобретение также обеспечивает способ лечения или профилактики у субъекта, включающий стадию введения субъекту соединения или композиции согласно настоящему изобретению. В предпочтительном варианте соединение или композицию вводят орально.

Настоящее изобретение также относится к лечению или профилактике инфекции С1ок1пбшш άίΓΠсПе, НейсоЬас1ег ру1оп или энтерококков, устойчивых к ванкомицину (УВЕ). В предпочтительном варианте изобретение относится к инфекции С1ок!пбшт бййсйе.

Настоящее изобретение также относится к лечению инфекции, которая не была устранена путем лечения активным соединением, предпочтительно соединением, не являющимся лантибиотиком типа В. Другим активным соединением может являться ванкомицин.

Если соединение согласно настоящему изобретению вводят инфицированному субъекту с инфекцией, которая не была устранена путем лечения другим активным соединением, лантибиотик типа В можно вводить через 1 сутки, 1 неделю или 1 месяц после введения другого активного соединения.

Соединения и композиции также можно применять для системного лечения бактериемии (включая бактериемию, связанную с постановкой катетера), пневмонии, инфекции кожи и кожных структур (включая инфекцию в месте хирургии), эндокардита и остеомиелита. Эти и другие способы лечения могут быть направлены против болезнетворных агентов, таких как стафилококки, стрептококки, энтерококки. Соединения согласно настоящему изобретению или содержащие их композиции также можно использовать для местного лечения кожных инфекций, включая акне, т.е. РгорюшЬас1епит аспек. Соединения и содержащие их композиции также можно применять для лечения глазных инфекций, таких как конъюнктивит.

Соединения также можно применять для лечения или предотвращения кожных инфекций в местах ран или ожогов. Кроме того, соединения и композиции, раскрытые в настоящем изобретении, можно применять в целях профилактики. Их можно применять у субъектов с риском инфекции (например, у пациентов, поступающих в клинику) или у здоровых медиков или другого персонала по уходу, подвергающемуся риску стать носителями таких инфекций.

В наиболее предпочтительном случае соединения и композиции можно применять для лечения суперинфекции кишечника, вызываемой С1ок1пбшш бгГйсйе, включая полирезистентные С. бгГйсйе (псевдомембранозный колит). Соединение или композицию можно вводить орально. Также можно лечить инфекции кишечника, связанные с Не1юоЬас1ег ру1оп.

Настоящее изобретение также обеспечивает способ лечения заболевания, связанного с С1ок1пбшш ЭгГйсйе, С'ЭАЭ. Полное устранение симптомов С'ЭАЭ к концу лечения можно принять опорожнение кишечника менее чем три раза в день (вне зависимости от того, являются ли каловые массы оформленными или неоформленными) при отсутствии сопутствующей лихорадки, повышенной концентрации лейкоцитов или боли в области живота.

Способ лечения может касаться бактериальной инфекции, включая кожную инфекцию, инфекцию, относящуюся к слизистой оболочке, кишечную или системную инфекцию.

Соединения согласно изобретению можно вводить энтерально (орально), парентерально (внутримышечно или внутривенно), ректально, вагинально или локально (местно). Соединения можно вводить в форме растворов, порошков (таблеток, капсул, включая микрокапсулы), мазей (кремов или гелей) или суппозиториев. Возможными вспомогательными веществами для композиций этого типа являются обычные в фармацевтической практике жидкие или твёрдые наполнители и модификаторы, растворители, эмульгаторы, лубриканты, отдушки, красители и/или буферные вещества.

В качестве подходящей дозы вводят 0,1-1000, предпочтительно 0,2-100 мг/кг массы тела. Введение можно осуществлять в лекарственной форме, содержащей, по меньшей мере, эффективное ежедневное количество соединений согласно изобретению, например 30-3000, предпочтительно 50-1000 мг. В предпочтительном варианте эффективное количество вводимого соединения составляет от около 100 до около 2000 мг на пациента ежедневно.

Ниже со ссылками на прилагаемые графические материалы и исключительно с целью иллюстрации дополнительно подробно описана экспериментальная основа настоящего изобретения, включая наилучший способ осуществления.

- 21 018841

Синтез соединений на основе лантибиотиков

Были получены нижеследующие соединения, в которых исходный лантибиотик и группы Х1, Х2, Ζ, и К¹ и К² имели следующий вид:

Соединение	Лантибиотик	Х1	Х2	Υ	Ζ	Η1
1	Дезоксиакта гардин В	Ьеи	νβΙ	-5-	νη2		Η
II	Дезоксиакта гардин В	Ьеи	νβΙ	-5-	νη2		Η
III	Акта гардин	νβΐ	Не	5(0)-	νη2		Η
IV	Дезоксиакта гардин В	Ьеи	Уа1	-5-	νη2	ОН	Η
V	Дезоксиакта гардин В	Ьеи	Уа1	-5-	νη2	X»	Η
VI	Дезоксиактагарди н В	Ьеи	Уа1	-8-	νη2	,χ он	Η
VII	Дезоксиактагардин В	Ьеи	Уа1	-8-	νη2		Η
VIII	Дезоксиактагарди н В	Ьеи	Уа1	-8-	νη2		Η
XVIII	Дезоксиактагарди н В	Ьеи	νβΙ	-8-	νη2	он /	Η
IX	Дезоксиактагардин В	Ьеи	Уа1	-8-	РНе		Η
X	Дезоксиактагардин В	Ьеи	Уа!	-8-	-Туг		Η

Звёздочка обозначает точку присоединения К¹ к атому азота, который связан амидной связью с остатком аланина в положении 19.

Также были получены нижеследующие соединения, в которых исходный лантибиотик и группы Х1, Х2, Ζ, К¹ и К² имели следующий вид:

Соединение	Лантиобиотик	Х1	Х2	Υ	Ζ	К’
XX	Дезоксиа кта га рди и В	Ьеи	Уа1	5-	νη2	%	н
XXI	Дезоксиактагардин 8	Ьеи	Уа1	8-	νη2	χχ но^	Н
XXII	Дезоксиактагардин В	Ьеи	Уа1	8-	νη2	Η	Н
XXIII	Дезоксиактагардин В	Ьеи	Уа!	8-	νη2	нсА-^	н

Получение соединений Ι-νΙΙΙ, XVIII и ΧΧ-ΧΧΙΙΙ

Общая методика 1.

К раствору лантиобиотика (например, актагардина, актагардина В или дезоксиактагардина В) (200 мг, 108 нмоль), подходящего аминоспирта (330 нмоль) и диизопропилэтиламина (410 нмоль) в сухом диметилформамиде (2 мл) порциями добавляли раствор гексафторфосфата бензотриазол-1-ил-окси-триспирролидинофосфония (РуВор™) (125 мг, 258 нмоль) в сухом диметилформамиде (1,5 мл). Для отслеживания хода реакции смесь исследовали методом ВЭЖХ, добавляя дополнительные аликвоты раствора РуВор™ до полного расходования исходного материала. Анализ посредством ВЭЖХ на этой стадии также показал присутствие различных количеств (5-20%) диамида (см. фиг. 3). После завершения реакции смесь разбавляли 30% ацетонитрилом в 20 мМ Κρί (фосфат калия) водного фосфатного буфера, рН 7 (10 мл) и моноамид очищали посредством препаративной ВЭЖХ в условиях, представленных в табл. 1. Нужные фракции концентрировали до 25% их первоначального объёма и удаляли соли нанесением на предварительно кондиционированную колонку С18 Вопб Е1иЬ (500 мг), которую затем промывали, по

- 22 018841 следовательно элюируя двумя свободными объёмами колонки 30, 40, 70 и 90% водного метанола. После упаривания соответствующих фракций целевые продукты были получены в виде белых твёрдых веществ. Образцы проанализировали посредством ЖХ-МС в условиях, описанных ниже.

Таблица 1

Условия препаративной ВЭЖХ для разделения лантиобиотика (например, актагардина, актагардина В или дезоксиактагардина В) и аминоспиртового дериватизированного продукта

Колонка	Сарко! НРЬСВЭЖХ Ш С18 - Βϋ5 - Η Ι_5 - 26052 15 см х 20 мм
Растворитель А	30% ацетонитрила в 20 мМ фосфата калия, рН 7,0
Растворитель в	65% ацетонитрила в 20 мМ фосфата калия, рН 7,0
детектировдни Θ	268 нм
Расход	10 мл/мин
время (Т)» о мин	100% А
Т = 1 мин	100% А
Т = 19мин	25% В
Т я 20 мин	100% В
Ϊ = 2® мин	100% В
Т я 26 мин	100% А
Т = 30 мин	100% А
Отбор	старт 8 мин; конец 20 мин; фракции по 1 минуте

Соединение I: дезоксиактагардин В №[2-этаноламин]монокарбоксамид.

Был получен путем осуществления реакции сочетания дезоксиактагардина В и этаноламина согласно общей методике 1. Выход 18 мг, выход 85%. [М+2Н²⁺] рассчитано 979,0, найдено 980,2.

Соединение II: дезоксиактагардин В №[4-бутаноламино].

Был получен путем осуществления реакции сочетания дезоксиактагардина В и бутаноламина согласно общей методике 1. Выход 9 мг, 43%. [М+2Н²⁺] рассчитано 972,50, найдено 979,92.

Соединение III: актагардин №[2-этаноламин]монокарбоксамид.

Был получен путем осуществления реакции сочетания дезоксиактагардина В и этаноламина согласно общей методике 1. Выход 11 мг, 53%. [М+2Н²⁺] рассчитано 966,5, найдено 966,1.

Соединение IV: дезоксиактагардин В (3-амино-1,2-пропандиол)монокарбоксамид.

Был получен путем осуществления реакции сочетания дезоксиактагардина В и 3-амино-1,2пропандиола согласно общей методике 1. Выход 18 мг, 87%. [М+2Н²⁺] рассчитано 973,5, найдено 973,9.

Соединение V: дезоксиактагардин В (2-амино-1,3-пропанол)монокарбоксамид.

Был получен путем осуществления реакции сочетания дезоксиактагардина В и 2-амино-1,3пропанола согласно общей методике 1. Выход 20 мг, 96% Выход. [М+2Н²⁺] рассчитано 973,5, найдено 973,9.

Соединение VI: [трис-(гидроксиметил)метиламино]дезоксиактагардин В монокарбоксамид.

Был получен путем осуществления реакции сочетания дезоксиактагардина В и трис(гидроксиметил)метиламина согласно общей методике 1. Выход 13 мг, 69% Выход. [М+2Н²⁺] рассчитано 988,5, найдено 988,6.

Соединение VII: дезоксиактагардин В (1-амино-2-пропанол)монокарбоксамид.

Был получен путем осуществления реакции сочетания дезоксиактагардина В и 1-амино-2пропанола согласно общей методике 1. Выход 16 мг, 78%. [М+2Н²⁺] рассчитано 965,5, найдено 965,6.

Соединение VIII: дезоксиактагардин В (1-амино-3-пропанол)монокарбоксамид.

Был получен путем осуществления реакции сочетания дезоксиактагардина В и 1-амино-3пропанола согласно общей методике 1. Выход 19 мг, 87%. [М+2Н²⁺] рассчитано 965,5, найдено 965,3.

Соединение XVIII: дезоксиактагардин В (^№бис-(2-гидроксиэтил)этилендиамино)монокарбоксамид.

Был получен путем осуществления реакции сочетания дезоксиактагардина В и Ν,Ν-6ηο-(2гидроксиэтил)этилендиамина согласно общей методике 1. Выход 48%. [М+2Н²⁺] рассчитано 1002,0, найдено 1002,3.

Соединение XX: дезоксиактагардин В №[2-гидрокси-2-фенилэтиламино]монокарбоксамид.

Был получен путем осуществления реакции сочетания дезоксиактагардина В и №[2-гидрокси-2фенилэтиламина] согласно общей методике 1. [М+2Н²⁺] рассчитано 995,5, найдено 995,8.

- 23 018841

Соединение XXI: дезоксиактагардин В (метиловый эфир Ь-серина)монокарбоксамид.

Был получен путем осуществления реакции сочетания дезоксиактагардина В и метилового эфира Ьсерина согласно общей методике 1. [М+2Н²⁺] рассчитано 987,5, найдено 98б,9.

Соединение XXII: дезоксиактагардин В (М-(2-гидроксиэтил)этилендиамино)монокарбоксамид.

Был получен путем осуществления реакции сочетания дезоксиактагардина В и М-(2гидроксиэтил)этилендиамина согласно общей методике 1. [М+2Н²⁺] рассчитано 980, найдено 979,8.

Соединение XXIII: дезоксиактагардин В (2-гидроксипиперазино)монокарбоксамид.

Был получен путем осуществления реакции сочетания дезоксиактагардина В и 2гидроксипиперазина согласно общей методике 1. [М+2Н²⁺] рассчитано 978,5, найдено 977,7.

Получение соединений IX и X.

Общая методика 2 на примере (Ь)-триптофанил-(О)-дезоксиактагардин В

М-(9-флуоренилметоксикарбонил)триптофан-О-пентафторфениловый эфир (80 мг, 135 нмоль) добавляли к раствору гидрата 1-гидроксибензотриазола (18 мг, 135 нмоль) в сухом диметилформамиде (1 мл). Затем смесь добавляли к раствору дезоксиактагардина В (50 мг, 27 нмоль) в сухом диметилформамиде (0,5 мл). Смесь оставляли при комнатной температуре на 15 мин, по истечении этого времени весь исходный материал был израсходован. Добавляли воду (0,05 мл) и пиперидин (0,1 мл) и смесь оставляли при комнатной температуре на 1 ч. Реакционную смесь разбавляли 30% водным метанолом и полученную белую суспензию наносили на короткую колонку С18 массой 1 г для твердофазной экстракции. Материал элюировали фракциями 40, 50, 60 и 70% водного метанола. Фракцию б0% упаривали досуха, получая твёрдого вещество буроватого оттенка. Выход 35 мг (63%), [М+2Н²⁺] рассчитано 1030,0, найдено 1030,1.

Соединение X: (Ь)-триптофанил-(О)-дезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид.

Был получен путем осуществления реакции сочетания (Ь)-триптофанил-(О)-дезоксиактагардина В (50 мг) и этаноламина согласно общей методике 1. Выход 23 мг, 45%. [М+2Н²⁺] рассчитано 1051,5, найдено 1051,8.

(Ь)-Фенилаланил-(О)-дезоксиактагардин В.

Был получен путем осуществления реакции сочетания дезоксиактагардина В и М-(9флуренилметоксикарбонил)фенилаланин-О-пентафторфенилового эфира согласно общей методике 2. Выход 65%. [М+2Н²⁺] рассчитано 1010,5, найдено 1011,0.

Соединение IX: (Ь)-фенилаланил-(О)-дезоксиактагардина В (этаноламин)монокарбоксамид.

Был получен путем осуществления реакции сочетания (Ь)-фенилаланил-(О)-дезоксиактагардина В (50 мг) и этаноламина согласно общей методике 1. Выход 23 мг, 45%. [М+2Н²⁺] рассчитано 1032,0, найдено 1032,2.

Соединения XI-XVIII и XXX-XXXVI могут быть получены аналогично вышеописанным способам. Высокоэффективная жидкостная хроматография.

Анализы посредством ВЭЖХ проводили, применяя систему серии Не\\1е11 Раскагб 1050 при нижеописанных параметрах:

Колонка: гогЬах 8В-С18, 4,6x150 мм, 5 мкм

Подвижная фаза А: 30% ацетонитрила в 20 мМ буферном растворе на основе фосфата калия рн 7,0.

Подвижная фаза В: 65% ацетонитрила в 20 мМ буферном растворе на основе фосфата калия рН 7,0.

Расход:	1 мл/мин
Градиент:
Время 0 мин	100% А		0%	В
Время 10 мин	0%	А		100% В
Время 11 мин	0%	А		100% в
Время 11,2 мин	100% А		0%	в
Время цикла 15 мин
Объём инжекции:	10 мкл
Детектирование:	210 нм

Высокоэффективная жидкостная хроматография с масс-спектрометрическим детектором (ВЭЖХМС).

Анализы ВЭЖХ-МС проводили на хроматографе системы НеМей Раскагб™ 1050 серии НРЬС, связанном с М1сго-шакк™ Р1аПогш ЬС (управляемым программой МаккЬупх™ версия 3,5) при следующих параметрах:

Колонка: АдПеп! 2огЬах™ 8В-С18 150x4,6 мм 5 мкм

Расход: 1 мл/мин.

Подвижная фаза: А 10% ацетонитрила, 0,1% муравьиной кислоты 90% воды; В 90% ацетонитрила, 0,1% муравьиной кислоты, 90% воды.

- 24 018841

Линейный градиент А в В через 10 мин, выдержка 1 мин, В-А.

Длина волны: 200-400 нм.

Объём инжекции: 10 мкл.

Расщепление потока после колонки: 1:10.

Масс-спектрометр: Мюготакк™ Р1аЛ0гт ЬС.

Способ: Ионизация электрораспылением, положительный.

Расход азота: 380 л/ч.

Напряжение на капилляре: 40 В. Смещение линзы сепаратора: 5 В.

Пример 1. Растворимость аминоспиртовых производных.

Обычно соединения согласно настоящему изобретению выделяли с применением фосфатных буферных смесей. Растворимость дезоксиактагардина В в воде по данным измерений составила 4,5 г/л, в то время как растворимость в воде соответствующего этаноламидного производного соединения I составила 15 г/л.

Пример 2. Антимикробная активность аминоспиртовых производных.

Соединения согласно настоящему изобретению демонстрируют антимикробную активность ίη νίίτο и ίη νίνο. Наиболее активными они оказались против Еп1егососс1 крр., ЗИгерЮсоес! крр. и ΟοκΙπάίιιιη άίίϊίс11е (табл. 2-4А) и некоторые соединения демонстрируют повышенную активность, улучшенную по сравнению с исходным лантиобиотиком.

Тест на восприимчивость для всех аэробных организмов за исключением 8ΐ^ерΐοсοсси8 рηеитοη^ае проводили при двухкратном разбавлении в бульоне Мюллера-Хинтона, если не указано другое, дополненном 50 мкг/мл Са²⁺. Испытание восприимчивости для 8. рηеитοп^ае проводили при двухкратном разбавлении в сердечно-мозговом бульоне, если не указано другое, дополненном 50 мкг/мл Са²⁺. Активно растущие культуры в бульоне разбавляли до концентрации 10⁵-10⁶ СЕИ/мл (колониеобразующих единиц/мл, доводя ΟΌ₆₀₀ (оптическую плотность при 600 нм) до 0,2-0,3). Их затем дополнительно разбавляли 1:100 в свежем стерильном бульоне. Испытания проводили в двойной повторности на стерильном планшете для микротитрования с 96 лунками при общем объёме 200 мкл (160 мкл бульона, 20 мкл антимикробного агента, 20 мкл инокулята) в диапазоне концентраций от 64 до 0,06 мкг/мл. Планшеты инкубировали с доступом воздуха, со встряхиванием, в течение 18-20 ч при 37°С. Минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) определяли как наименьшую концентрацию лекарственного средства, которое остановило видимый рост. Клинические штаммы СЪбйпбшт ШГПсПе испытали в анаэробном агаре νίΙΕίηκ^Μ^ΐΌη при анаэробных условиях. Во всех случаях в качестве референтного антибиотика применяли ванкомицин.

Таблица 2

Значения МИК (мкг/мл) для актагардина, дезоксиактагардина В, ванкомицина и соединений Ι-ΥΙΙΙ против панели общераспространённых патогенов

Соединение	Акта.	Дезоксиакта. В	1	II	III	IV	V	VI	VII	νιυ	Ванк.
Микорорганизм
Е. йес/ит 7131121	>64	64	8	>64	>64	>64	>64	>64	>64	>64	>64
Е. (аеаигг: 19579	16	32	16	32	16	16	16	16	16	16	4
Е. /аесаНз 29212	4	32	4	8	4	32	32	32	8	16	4
5. аигеиз	32	8	4	8	16	32	32	32	32	32	1
КЗЗ
3. аигеиз 8Н1000	16	32	4	8	8	16	16	16	16	32	2
8. ерк/егтз 11047	32	16	8	8	32	64	64	64	64	64	2
М. 1и1еиз 4698	1	1	0,25	8	1	8	16	16	16	32	2
8. рпеипктае Кб	4	4	2	8	4	16	16	16	64	64	>64

В приведенной выше таблице Акта. обозначает Актагардин; Дезоксиакта. В обозначает дезоксиактагардин В; Ванк. обозначает Ванкомицин.

- 25 018841

Таблица 3

Значения МИК (мкг/мл) для актагардина, дезоксиактагардина В, ванкомицина и соединений I и II против панели 81арйу1осси8, еп!егососс1 и 81гер1ососс1

	Акта гардин	Дезоксиактагардин- В	1	III
Среднечувствительный к Ванкомицину 8(ар^у1оссиз аигеиз
8. аигеиз У99	32	32	32	16
8. аигеиз ΜΙ	более32	6олее32	32	32
8. аигеиз МиЗ	32	32	32	32
8. аигеиз 26	32	32	более32	32
8. аигеиз МибО	32	32	более32	32
8. аигеиз 2	32	32	32	32
8. аигеиз ЬМ	более32	более32	более32	болеезг
' Резистентный к Метициллину аигеиз
8. аигеиз 12232	16	16	32	8
3. аигеиз ί?36	16	16	16	16
8. аигеиз Р34	16	16	16	8
8. аигеиз К39	32	32,	6олее32	болев32
8. жгеж К40	32	32	32	32
5. аигеиз ννζι	32	32	болеезг	32
8. аигеиз ¥У74	32	32	32	32
8. аигеиз Ш96	32	32	более32	болеезг
8. аигеиз	32	32	болеезг	болеезг
8. аигеиз УУ98	16	16	32	32
8, аигеиз №99	6олее32	более32	32	32
Чувствительный к Метициллину 5йрЛуйэссув аигеиз
8. жшоСИб	6олее32	более32	более32	более32
8. аигеиз 620	32	32	более32	32
8. аигеиз 622	32	32	более32	32
8, аигеиз 623	32	32	болеезг	32
8. аигеиз 628	16	16	32	16
8. аигеиз 630	32	32	болеезг	32
8. аигеиз 631	более32	бопееЗ?	более32	болееЗЗ
8. аигеиз 632	32	32	болеезг	32
3. аигеиз 633	32	32	болеезг	32
8. аигеиз 635	32	32	более32	более32
8. аигедаЗНЮОО	16	16	32	16
Чувствительный к Метициллину ЗГарЛу/ососсиз ерШегтМз
8 ерМетйЯз СР105001	более32	| болеезг	болеезг	болееЗЗ

- 26 018841

5. ерМегткНз СРЮ5002	более32	более32	более32	более32
3. ерйет?/(У15 СКЮ5003	32	32	более32	32
5. ер1дегткНз СКЮ5004	более32	более32	более32	32
5. ерЮегткИз СПЮ5005	6олее32	более32	более32	более32
3. ерМегткНз СКЮ5006	более32	более32	более32	более32
5. ерМет/сНз ΘΡΙ.05007	более32	32	более32	более32
5. βρίάβπηίϋίε СРЮ5008	более32	более32	более32	более32
3. θριύβοπίόιε 6РЮ5009	более32	более32	более32	более32
3. ерМегткИз 6РЮ5010	более32	более32	более32	более32
Резистентный к Метициллину 31арйу1ососси$ ерШегт/сИа
3. ерЮегтЯз 7755298	более32	более32	более32	более32
8. ерЮеггтсНз 7865688	более32	более32	более32	более32
8. ер/Регт/О/з 7753921	более32	более32	более32	6олее32
3. ерЮегткИз ΘΡΙ.05011	более32	более32	более32	более32
3. βρίάθπηίύίβ СР1.05013	более32	более32	более32	бол ее 32

- 27 018841

5. ерЮегткНз 6КЮ5014	более32	5олее32	болеезг	болеезг
5. арЮегткИз 6КШ5015	более32	более32	более32	более32
£. ерИегткй'з СКЮ5017	более32	более32	более32	более32
5. ерМегткИз СКЮ5019	6олее32	более32	более32	более32
5. ерМегткНз СЕЮ5020	32	32	32	32
Чувствительные к Ванкомицину энтерококки
Е. ГаесаПз 7754422	32	32	8	8
Е. /аеаит 7865229	более32	более32	более32	более32
Е. (аеаит 19579	16	16	32	16
Е. /аесаИз ΟΡΙ.05022	16	16	16	,8
Е. (аесаПз СРЮ5023	8	8	8	8
Е. /аесаПз СКЮ5024	16	16	8	8
Е. ГаесаНз ОР1_05026	16	16	16	8
Е. /аесаНз СКЮ5027	8	8	16	8
Е. ГаесаНз ΘΡί.05029	8	8	16	4
Е. ГаесаНз	8	8	8	4

- 28 018841

6ΡΙ.05030
Резистентные к Ванкомицину энтерококки
Е. Гаес/ит 7662769	более32	более32	более32	более32
Е. Гаесшт 7634337	более32	более32	более32	более32
Е. Гаес/ит 7865532	более32	более32	более32	более32
Е. (аеаит 9709024	более32	более32	более32	более32
Е. ГаесаНз 6ΚΙ.05031	4	4	4	4
Е. ГаесаНз СКЬ05032	4	4	4	4
Е. Таес/ит 9710577	более32	более32	более32	более32
Е. ГаесаПз СРЮ5033	8	8	8	8,4
Е. (аесаНз СНЬ05034	32,16	32,16	более32	16
Е. (аесаПз СРЮ5035	32,16	32,16	более32	16
Пиогенные стрептококки
3. руодепез 7755441	20.5	20.5	20.5	<0.5
5. руодепез 7713283	1	20.5	1	20.5
5. руодепез	20.5	20.5	20.5	20.5

- 29 018841

7865844
8. руодепез 7755255	£0.5	£0.5	<0.5	<0.5
8. руодепез 7755584	<0.5	£0.5	1	<0.5
3. руодепез СРХ05045	£0.5	£0.5	1	£0.5
8. руодепез 7865253	<0.5	<0.5	<0.5	£0.5
8. руодепез 7865289	£0.5	<0.5	1	<0.5
8. руодепез СК1.05041	<0.5	£0.5	1	£0.5
3. руодепез 6КЮ5042	£0.5	£0.5	<0.5	£0.5
Стрептококки У|пс1апз
8. тШз 1 7722543	8	8	8	4
5. огай'57862912.1	8	8	32	8
8. тШз 1 7863547	4	4	4	4
3. заНуапиз 6ΚΙ.05064	2	2	1	1
3. сол8(е//а(иа 6КЮ5065	более32	более32	более32	более32
8. тШз СРШ5062	8	8	16	8
8. тШз 6КЮ5067	16	16	8	16
8. асиЗотттиз 7862865	4	4	4	4

Таблица 4 Значения МИК (мкг/мл) для актагардина, дезоксиактагардина В, ванкомицина и соединений 1-У111 против С1о81пбшт б|ГПсПе

С1оз1псПит ОМсИе	Акта.	Дезоксиакта. В	I	II	III	IV	V	VI	VII	VIII	Ванк.
С.сИ№сЯе 37779	4	4	2	-	2	2	-	-	2	2	1
с.отспе 19126	4	4	2	-	2	2	4	4	4	2	1
с.спгпспе В32	4	4	2	-	2	-	-	-	-	-	1
С.сИГЯсНе Е16	4	4	2	-	2	-	-	-	-	-	1
С.(Шс11е Е4	2	4	1	-	1	-	-	-		-	1
С.'Л/ИсИе Р24	4	4	1	-	2	-	-	-	-	-	1
С.<й№сйе 027С	1	4	0.5		1		-		-	-	0.5
С.сИЮсйе 0278М	2	4	0.5	-	1	-	-	-	-	-	0.5
СхИКсйе Р49	2	4	1	-	1	-	-	-	-	-	0.5
С.ОМсНе Р59	2	4	2	-	1	-	-	-	-	-	1
С.ОЖсПе Р62	2	4	0.5	-		-	-	-	-	-	0.5
С.сИШсНе Е101	4	4	2	-	2	-	-		-	-	1

В приведенной выше таблице Акта. обозначает Актагардин; Дезоксиакта. В обозначает дезоксиактагардин В; Ванк. обозначает Ванкомицин.

- 30 018841

В дополнение были проведены испытания активности соединений XX-XXIII в отношении С1оь(г1б1ит б1ГПс11е, и значения МИК приведены ниже.

Таблица 4А

Активность лантиобиотиков типа В против С. бгГйсйе

С1оз(псИит сН/Г/сИе	й	и	ЙН	ин
С.еНМсНе 19126	2	4	2	4
С.сНШсИе 37779	2	4	2	4
С.сшпсПе 027С	2	2	2	4
Ο.ύίΗίαίθ 630	2	4	2	2

Пример 3. Эффективность антибиотиков типа В в модели тифлита, связанного с С.бййсйе, у хомяков.

Эффективность ίη νί\Ό двух соединений согласно настоящему изобретению (соединения I и III) в лечении инфекций, ассоциируемых с С. бййсйе, оценивали на стандартной модели СЭЛЭ. тифлита хомяков, индуцированного клиндамицином. Результаты показаны на фиг. 1 и 2.

В первом эксперименте (фиг. 1) в группах по 6 животных животным вводили приблизительно по 10⁷ клеток С. бййсйе штамм ΥΡΣ 10463, и 24 ч спустя дозу 10 мг/кг клиндамицина фосфата подкожно. Ещё через 24 ч группам животных вводили плацебо, ванкомицин или соединение III 3 раза в сутки ежедневно по 50 мг/кг/сутки.

Описанная процедура приводила к развитию у подопытных животных инфекции С.бгГйсйе, от которой все животные, получавшие только плацебо, погибли в течение 3 суток. Напротив, все животные, получавшие ванкомицин или соединение III, выжили в течение всего 5-дневного периода введения препаратов, демонстрируя тем самым защитные эффекты данного соединения.

Во втором эксперименте (фиг. 2) группы по 6 хомяков сначала получали по 10 мг/кг клиндамицина фосфата подкожно, и затем через 24 ч приблизительно по 10⁷ клеток С. б1ГГ1сНе штамма АТСС ВАА1382. Ещё через 24 ч животные в группах получали ежедневно три раза в день по 50 мг/кг/сутки, либо плацебо, либо ванкомицина или соединения I. Процедура, описанная для второго эксперимента, позволяет вызвать инфекцию С. бййсйе, от которой животное может быть излечено с помощью эффективного антибиотика. Как показывает фиг. 2, соединение I продемонстрировало эффективность лечения, равную эффективности принятого в настоящее время в качестве клинического стандарта ванкомицина.

Пример 4. Активность лантиобиотиков типа В против других микроорганизмов кишечника.

Соединения, предложенные в настоящем изобретении, имеют повышенную селективность к патогенным бактериям по сравнению с ванкомицином. Эти соединения, возможно, имеют повышенную селективность в отношении С'Чойпбшт бгГйсйе по сравнению с флорой кишечника, такой как В|ПбоЬас(егшт крр. и Вас(егснбе5 §рр.

Осуществляли оценку активности некоторых соединений (дезоксиактагардина, ванкомицина и соединения III) против ряда разновидностей обычно существующих в составе кишечной флоры и сравнивали с ванкомицином (табл. 5). Было обнаружено, что соединения имеют низкую активность в отношении В|ПбоЬас(епит врр. и Вас(его1бе5 §рр., поэтому можно предположить, что в отличие от ванкомицина они на уровнях терапевтических доз не оказывают существенного влияния на флору кишечника.

- 31 018841

Таблица 5 Активность лантиобиотики типа В против организмов, обычных для флоры кишечника

Организм	Минимальная ингибирующая концентрация (МИК) мкг/мл
Дезоксиактагардин В	III	Ванкомицин
Е. соП ОС2 (более мембрановосприимчивый)	более64	более64	более64
Е. соН АТСС 25922	более64	5олее64	более64
Е. Таеаит (У8Е) АТСС 19579	64	16	0,5
Е. ГаесаНз (УЗЕ) АТСС 29212	8	4	4
Е. Гаес/ит (УРЕ) (изолирован клинически)	более64	64	более64
Е. ГаесаНз (УРЕ) (изолирован клинически)	4	4	более64
В/ЛИоЬас(епит аМезсепИз ЫСТС 11814	16	32	1
ВЖ0оЬас1епит 1опдит ЫСТС 11818	16	32	1-2
Вас1агсМез ГгадШз ЫСТС 9343	более64	более64	32
Вас1егоЮаз (МаМаот/сгоп 1МСТС 10582	более64	более64	64

Пример 5. Устойчивость лантиобиотиков типа В в имитациях желудочной и кишечной жидкостей.

Соединения на основе лантиобиотиков, предложенные в настоящем изобретении, при необходимости имеют, по сравнению с лантиобиотиками типа А, такими как низин, повышенную устойчивость к разложение ферментами. В частности, указанные соединения, возможно, имеют устойчивость к кишечному соку, повышенную по сравнению с лантибиотиками типа А.

Низин, мерсацидин, соединение I и соединение III тестировали на восприимчивость к разрушению ферментами в желудке. Низин, мерсацидин и соединение III тестировали на восприимчивость к разложению ферментами в кишечнике. Для определения 8СБ (устойчивости к жидкостям желудка) и 8ГР (устойчивости к жидкостям кишечника) использовали стандартные растворы И8Р (Фармакопеи США) для имитаций желудочных и кишечных жидкостей, а их активность подтвердили путем сравнения с альбумином бычьей сыворотки (Нйдет с1 а1., С1ш. Ехр. ^тииок 2001, 123, 387-94). Соединения инкубировали в 8СБ или 8ГР при 37°С, а их концентрации измеряли посредством аналитической ВЭЖХ (УФдетектирование при 210 нм). Потенциальное разложение, деградацию каждого соединения также качественно отслеживали измерением антимикробной активности против Мтстососсик 1и1еи8 ίη νίΐτο.

Фиг. 4 показывает концентрацию (а) низина и мерсацидина, и (Ь) соединений I и III, в имитированной желудочной жидкости как функцию времени. В тестированных соединениях заметная деградация в 8СБ отсутствовала.

Напротив, низин, как видно на фиг. 5 (а), быстро разрушался в 8ГР (при времени полупревращения около 15 мин). Быстрое разрушение низина в данной среде подтверждает клиническое наблюдение об очень ограниченной эффективности низина при лечении инфекций толстого кишечника, в отсутствие защиты соединения от разрущающих ферментов посредством тщательного подбора рецептуры.

Фиг. 5 (Ь) также показывает, что соединение III, по существу, устойчиво в 8ГР, и что для данных соединений метаболическая нестабильность вряд ли является фактором, оказывающим влияние на их эффективность в лечении инфекций толстого кишечника, ассоциируемых с С. Й|ГПсПе. Данные по концентрациям, полученные посредством ВЭЖХ, подтверждают результаты исследования активности ίη νίΐτο в отношении М. 1и1еи5. которая для мерсацидина и и дезоксиактагардина В осталась постоянной в продолжение всего эксперимента.

Пример 6. Устойчивость антибиотиков типа В ίη νίνο.

Для лечения кишечных инфекций С1о8йтйшт ФГйсйе неабсорбирующимся антибиотиком, вводимым орально, очень важно, чтобы соединение было устойчиво пищеварительным ферментам и метаболизму под действием кишечной флоры, так чтобы в месте инфекции, обычно - толстой кишке, могли бы

- 32 018841 достигаться высокие концентрации. Хотя имитации желудочных и кишечных жидкостей на моделях ίη νίίΐΌ могут в первом приближении обеспечить сведения об устойчивости соединения в желудочнокишечном тракте, эксперименты ίη νί\Ό могут обеспечить более прямые доказательства того, что соединение достигло места инфекции.

Крысам самцам 8ргадие-Оау1еу орально вводили соединение I в дозе 100 мг/кг. В течение 48 ч (через 24 и 48 ч после введения) в двух партиях собирали кал и мочу. В течение первых 24 ч периодически брали пробы крови.

Анализ различных биологических образцов исходного соединения показал, что по меньшей мере 35% соединения I выделяется с калом неизменённым, что указывает на то, что в толстом кишечнике могут достигаться высокие концентрации лантиобиотика типа В. После перорального введения плазме или моче не было обнаружено материала, относящегося к соединении I, что согласуется с низкой абсорбцией желудком или кишечником.

Специалистам в данной области будет очевидно, что в способах и комположениях согласно настоящему изобретению можно сделать много модификаций и вариаций, не выходя за рамки сущности и объема изобретения. Таким образом, подразумевается, что настоящее изобретение покрывает модификации и вариации изобретения, при условии, что они подпадают в объём притязаний пунктов прилагаемой формулы изобретений и их эквивалентов.

Ссылки

Содержание нижеследующих источников полностью включено в настоящее изобретение посредством ссылок.

Патент США 6022851.

РСТ/СВ2007/000138 (№Ο 2007/083112).

Вегде, е1 а1., I. Рйагт. 8ск 1997, 66, 1-19.

Сйайедее, Раи1, Х1е апй νаи йег Иоик, СЬет. Кеу. 2005, 105, 633.

Ш1дег е1 а1., С1ш. Ехр. Iттиηο1. 2001, 123, 387-94.

νаи Кгаау, йе Уок, Зйехеп апй Кшрегк, №11. Ргой. Кер. 1999, 16, 575.

Рагей1, Радаш, Вегейа, ί. АпйЬюйск 1976, 29, 501.

8аЫ апй В1егЬаит Аиииа1 Вес. МюгоЬюк 1998, 52, 41-79.

Ζ^тте^таη. Ме1хдег апй Лтд, Еиг.Е ВюсЛет. 1995, 228, 786.

Мегск №уаЬюс11ет^|Л1 са1а1од 'КеадеШк £ог Рер11йе апй ШдЛ-ТйгоидЛрШ ЗупШеЛк' (2006/7).

КетшдЮп: ТЛе 8аепсе апй Ргасйсе о£ Рйагтасу, 20(Н Ей111оп, 2000, риЬ. Ырршсой, ХУйкатк & У11к1пк.

Рго1ес1|уе Сгоирк ίη Οι^ηηκ ЗугИкеЛк (Т. Сгееп апй Р. ХУп1к; 3гй Еййюп; .Гойи ХУйеу апй Зопк, 1999).

Claims (26)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Соединение формулы обладающее противомикробной активностью, где

   Х1 обозначает остаток Ьеи, Уа1 или 11е;

   Х2 обозначает остаток Ьеи, Уа1 или 11е;

   К¹ представляет собой С1_-20алкильную или С1_-20гетероалкильную группу, замещенную одним, двумя или тремя гидроксильными заместителями и замещенную или незамещенную группой, выбранной из карбокси, сложного эфира, ацилоксиамидо, ациламидо, С_5-7арила и С_5-20гетероарила;

   К² представляет собой водород или С1_-20алкильную или С1_-20гетероалкильную группу, замещенную или не замещенную по меньшей мере одним гидроксильным заместителем, или

   К¹ и К² вместе с атомом азота образуют С5-7гетероциклическую группу, причем К¹ и К², взятые вместе, содержат один или два гидроксильных заместителя, причем указанная гетероциклическая группа дополнительно содержит или не содержит один или более гетероатомов, и указанная гетероциклическая группа дополнительно замещена или не замещена С1-20алкильной группой;

   Ζ представляет собой аминокислотный остаток или -ΝΗ₂, который представляет собой Ν-конец аланинового остатка в положении 1;

   Υ представляет собой -8- или -8(Ο)-;

   - 33 018841 или вариант указанного соединения, в котором 1, 2, 3 или 4 аминокислоты замещены другой аминокислотой, или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения или варианта.
2. 2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что Х1, Х2 выбраны из группы, состоящей из Ьеи-Ьеи, Ьеи-Уа1, Ьеи-Пе, Уа1-Ьеи, Уа1-11е, Пе-Ьеи, 11е-Уа1 и 11е-11е.
3. 3. Соединение по п.1 или его вариант, отличающееся тем, что Ζ представляет собой аминокислоту, выбранную из группы А1а, 11е-, Ь1е, Ьук-, Рйе-, Уа1-, 61и-, Акр-, Ηίκ-, Ьеи-, Агд-, 8ег- и Тгр-, причем указанные аминокислоты имеют Ό- или Ь-конфигурацию.
4. 4. Соединение по любому из пп.1-3 или его вариант, отличающееся тем, что В² представляет собой водород.
5. 5. Соединение по любому из пп.1-4 или его вариант, отличающееся тем, что Х1 представляет собой Ьеи; Х2 представляет собой Уа1 или 11е или Х1 представляет собой Уа1 и Х2 представляет собой Уа1 или 11с.
6. 6. Соединение по любому из пп.1-5 или его вариант, отличающееся тем, что В¹ представляет собой С1_-7алкильную группу, замещенную одним, двумя или тремя гидроксильными заместителями и, возможно, замещенную группой, выбранной из карбокси, сложного эфира, ацилоксиамидо, ациламидо.
7. 7. Соединение по любому из пп.1-6 или его вариант, отличающееся тем, что В¹ выбран из группы, состоящей из:

   где * обозначает место присоединения к атому азота.
8. 8. Соединение по любому из пп.1-7 или его вариант, отличающееся тем, что В¹ представляет собой -СН2СН2ОН.
9. 9. Соединение по любому из пп.1-5, отличающееся тем, что В¹ выбран из группы, состоящей из:

   - 34 018841 где * обозначает место присоединения к карбонильному углероду на С-конце.
10. 10. Соединение по п.1, отличающееся тем, что соединение выбрано из группы, состоящей из следующих соединений:

    соединение I: дезоксиактагардин В Ы-[2-этаноламин]монокарбоксамид;

    соединение II: дезоксиактагардин В Ы-[4-бутаноламино]монокарбоксамид;

    соединение III: актагардин Ы-[2-этаноламин]монокарбоксамид;

    соединение IV: дезоксиактагардин В (3-амино-1,2-пропандиол)монокарбоксамид;

    соединение V: дезоксиактагардин В (2-амино-1,3-пропанол)монокарбоксамид;

    соединение VI: дезоксиактагардин В [трис-(гидроксиметил)метиламин]монокарбоксамид; соединение VII: дезоксиактагардин В (1-амино-2-пропанол)монокарбоксамид;

    соединение VIII: дезоксиактагардин В (1-амино-3-пропанол)монокарбоксамид;

    соединение IX: (Ь)-фенилаланил-(О)-дезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид; соединение X: (Ь)-триптофанил-(О)-дезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид; соединение XI: (Ь)-аланил-(О)-дезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид;

    соединение XII: (Э)-аланил-(О)-дезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид; соединение XIII: (Ь)-изолейценил-(О)-дезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид; соединение XIV: (Ь)-лейцинил-(О)-дезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид; соединение XV: Ν-фенилацетилдезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид;

    соединение XVI: Ν-ацетилдезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид; соединение XVII: Ν-манделилдезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид;

    соединение XVIII: дезоксиактагардин В (^№бис-(2-гидроксиэтил)этилендиамино)монокарбоксамид;

    соединение XX: дезоксиактагардин В №[2-гидрокси-2-фенилэтиламино]монокарбоксамид; соединение XXI: дезоксиактагардин В (Ь-серин метиловый эфир)монокарбоксамид;

    соединение XXII: дезоксиактагардин В (№(2-гидроксиэтил)этилендиамин)монокарбоксамид; соединение XXIII: дезоксиактагардин В (2-гидроксипиперазин)монокарбоксамид;

    соединение XXX: (Ь)-аланил-(О)-дезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид; соединение XXXI: (Э)-аланил-(О)-дезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид; соединение XXXII: (Ь)-изолейцинил-(О)-дезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид; соединение XXXIII: (Ь)-лейцинил-(О)-дезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид; соединение XXXIV: Ν-фенилацетилдезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид; соединение XXXV: Ν-ацетилдезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид и соединение XXXVI: Ν-манделилдезоксиактагардин В (этаноламин)монокарбоксамид.
11. 11. Соединение по п.1, представляющее собой соединение I: дезоксиактагардин В №[2-этаноламин]монокарбоксамид.
12. 12. Соединение или его вариант по любому из пп.1-11, причем указанный вариант отличается тем, что 1, 2, 3 или 4 аминокислоты находятся в положениях, выбранных из положений 2, 3, 4, 5, 8, 10, 11, 13, 15, 16 или 18 в указанном соединении.
13. 13. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение или его вариант по любому из пп.1-12

    - 35 018841 и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
14. 14. Применение соединения или его варианта по любому из пп.1-12 в терапии.
15. 15. Применение соединения или его варианта по любому из пп.1-12 для лечения или профилактики микробной инфекции у субъекта.
16. 16. Применение по п.15, отличающееся тем, что микробная инфекция представляет собой бактериальную инфекцию.
17. 17. Применение по п.16, отличающееся тем, что бактериальная инфекция представляет собой инфекцию Еп!егососси8 φ.. 81гсрЮсосси5 §ρρ, 81арйу1ососси5 §ρρ. или ОоЧпбшт ШГПсПе.
18. 18. Применение по п.17, отличающееся тем, что бактериальная инфекция представляет собой инфекцию С1ойпбшт ШГйсйе.
19. 19. Применение фармацевтической композиции по п.13 для лечения или профилактики микробной инфекции у субъекта.
20. 20. Применение по п.19, отличающееся тем, что микробная инфекция представляет собой бактериальную инфекцию.
21. 21. Применение по п.20, отличающееся тем, что бактериальная инфекция представляет собой инфекцию Еп!егососси8 §ρ., §ρρ, 8ΐаρйу1ососси8 §ρρ. или С1оййбшт ШГПсПе.
22. 22. Применение по п.21, отличающееся тем, что бактериальная инфекция представляет собой инфекцию С1ойпбшт ШГйсйе.
23. 23. Способ лечения или профилактики микробной инфекции у субъекта, включающий введение указанному субъекту соединения по любому из пп.1-11, варианта по п.12 или фармацевтической композиции по п.13.
24. 24. Способ по п.23, отличающийся тем, что микробная инфекция представляет собой бактериальную инфекцию.
25. 25. Способ по п.24, отличающийся тем, что бактериальная инфекция представляет собой инфекцию

    Еп!егососси8 §ρ., §ρρ, 8ΐаρйу1ососси8 §ρρ. или ОоЧпбшт бййсйе.
26. 26. Способ по п.25, отличающийся тем, что бактериальная инфекция представляет собой инфекцию С1ойпбшт бййсйе.