CN110563739A

CN110563739A - 具有选择性抗肺癌作用的鬼臼毒素类化合物p-x及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN110563739A
Application number: CN201810567932.2A
Authority: CN
Inventors: 王鹏龙; 吴高荣; 郭文博; 成钢
Original assignee: Fireworks Beijing Technology Co Ltd
Current assignee: Fireworks Beijing Technology Co Ltd
Priority date: 2018-06-05
Filing date: 2018-06-05
Publication date: 2019-12-13

Abstract

本发明提供了一类具有结构通式1的化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明大部分衍生物对肿瘤细胞A549、MCF‑7和HepG2的抑制作用均强于阳性药依托泊苷和阿霉素，其中化合物鬼臼毒素‑Boc‑L‑肌氨酸(P‑02)在肿瘤与正常之间都表现出较好的选择性，尤其是对肺癌A549细胞。其对A549、MCF‑7、HepG2和L‑02的IC₅₀分别是9.5±0.03nM、132.6±24.1nM、96.4±1.3nM、160.2±4.7nM，其选择性指数SI(IC₅₀ ^L‑02/IC₅₀ ^A549)、SI(IC₅₀ ^MCF‑7/IC₅₀ ^A549)、SI(IC₅₀ ^HepG2/IC₅₀ ^A549)分别是16.9、14.0、10.1，而阳性药依托泊苷和阿霉素在L‑02与A549的选择性指数仅仅为0.2和0.5。

Description

具有选择性抗肺癌作用的鬼臼毒素类化合物P-X及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种化合物及其制备方法和应用，具体一种具有选择性抗肺癌活性的化合物及其制备方法和应用，属于药物化学领域。

背景技术

恶性肿瘤是目前严重威胁人类生命和健康的重大疾病之一，据美国癌症协会在CA：A Cancer Journal for Clinicians杂志上发表的2018年癌症统计：在美国，2018年新增癌症患者1735350人，609640人死于癌症，其中肺癌患者的死亡数目最高，达到154050人。同时，中国国家癌症中心主任陈万青指出肺癌在中国是众多癌症之中的头号杀手。目前，手术、放疗和化疗是治疗肿瘤的常用方法。放疗、化疗在杀伤肿瘤细胞的同时也杀伤正常细胞，对人体副作用大，因此寻找高效低毒、选择性强的肿瘤治疗方法一直是肿瘤研究的热点。

鬼臼毒素主要从小檗科鬼臼属植物美洲鬼臼、印度鬼臼、桃儿七等植物的茎或根中提取分离出来的。具有明显的抗肿瘤、驱虫、抗病毒的作用，但由于鬼臼毒素毒副作用大、水溶性差，其衍生物依托泊苷存在明显的胃肠道反应、骨髓抑制、多药耐药和缺乏对健康组织的特异性选择问题，使其临床应用受到限制。课题组前期借鉴中药配伍原则和药物化学拼合原理，辅以计算机辅助药物设计方法，在中药中的抗肿瘤活性成分中引入氨基酸及川芎嗪，通过综合初步药效学评价发现所合成的部分化合物的抗肿瘤作用及选择性得到明显增强，因此，本发明应用药物拼合，选取鬼臼毒素和氨基酸及川芎嗪相拼合，以期获得选择性高、抗肿瘤作用强、毒副作用小的药物。

本发明以鬼臼毒素为原料，运用药物化学的相关合成方法在鬼臼毒素中引入氨基酸和川芎嗪，合成了本发明化合物(22种鬼臼毒素-氨基酸-川芎嗪衍生物)；对该类化合物的活性评价主要围绕抗肿瘤(尤其肺癌)方面展开，分别测试了类似物对3种癌症细胞系(A549、MCF-7、HepG2)和正常细胞系(L-02)的细胞毒活性。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种具有结构通式1的化合物及其制备方法。

本发明的目的之二是提供通式1的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明的目的之三是提供一种具有选择性抗肺癌作用的化合物。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

具有通式1结构的化合物或其药学上可接受的盐，

注明：通式1中虚线代表a构型；

进一步，本发明化合物编号及结构式如下：

进一步，所述化合物可加入制剂领域常规辅料制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、口服液、注射剂等常规剂型。

本发明所述化合物的制备方法包括如下步骤：

本发明化合物按如下方法制备：

化合物P-01的制备方法：将鬼臼毒素溶于有机溶剂，与Boc-L-甘氨酸在催化剂作用下生成P-01；

化合物P-02的制备方法：将鬼臼毒素溶于有机溶剂，与Boc-L-肌氨酸在催化剂作用下生成P-02；

化合物P-03的制备方法：将鬼臼毒素溶于有机溶剂，与Boc-L-丙氨酸在催化剂作用下生成P-03；

化合物P-04的制备方法：将鬼臼毒素溶于有机溶剂，与Boc-L-苯丙氨酸在催化剂作用下生成P-04；

化合物P-05的制备方法：将鬼臼毒素溶于有机溶剂，与Boc-L-脯氨酸在催化剂作用下生成P-05；

化合物P-06的制备方法：将鬼臼毒素溶于有机溶剂，与Boc-L-亮氨酸在催化剂作用下生成P-06；

化合物P-07的制备方法：将鬼臼毒素溶于有机溶剂，与Boc-L-异亮氨酸在催化剂作用下生成P-07；

化合物P-08的制备方法：将P-01溶于有机溶剂，在脱保护剂作用下生成P-08；

化合物P-09的制备方法：将P-02溶于有机溶剂，在脱保护剂作用下生成P-09；

化合物P-10的制备方法：将P-03溶于有机溶剂，在脱保护剂作用下生成P-10；

化合物P-11的制备方法：将P-04溶于有机溶剂，在脱保护剂作用下生成P-11；

化合物P-12的制备方法：将P-05溶于有机溶剂，在脱保护剂作用下生成P-12；

化合物P-13的制备方法：将P-06溶于有机溶剂，在脱保护剂作用下生成P-13；

化合物P-14的制备方法：将P-07溶于有机溶剂，在脱保护剂作用下生成P-14；

化合物P-15的制备方法：将P-08溶于有机溶剂，与川芎嗪酸在催化剂作用下生成P-15；

化合物P-16的制备方法：将P-09溶于有机溶剂，与川芎嗪酸在催化剂作用下生成P-16；

化合物P-17的制备方法：将P-10溶于有机溶剂，与川芎嗪酸在催化剂作用下生成P-17；

化合物P-18的制备方法：将P-11溶于有机溶剂，与川芎嗪酸在催化剂作用下生成P-18；

化合物P-19的制备方法：将P-12溶于有机溶剂，与川芎嗪酸在催化剂作用下生成P-19；

化合物P-20的制备方法：将P-13溶于有机溶剂，与川芎嗪酸在催化剂作用下生成P-20；

化合物P-21的制备方法：将P-14溶于有机溶剂，与川芎嗪酸在催化剂作用下生成P-21；

化合物P-22的制备方法：将鬼臼毒素溶于有机溶剂，与川芎嗪酸在催化剂作用下生成P-22；

其中，上述反应在0℃至50℃下进行；所述有机溶剂是二氯甲烷；所述催化剂为4-二甲氨基吡啶(DMAP)、1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)、1-羟基苯并三唑(HOBt)；所用的脱保护剂为三氟乙酸(TFA)。

进一步，上述制备方法中，相应的原料与Boc-L-氨基酸的摩尔比为1∶1.2；相应的原料与川芎嗪酸的摩尔比为1∶1.2；相应的原料与催化剂的摩尔比为1∶0.1～1∶2.5。

本发明反应路线：

路线1川芎嗪酸(TMPA)的合成

反应条件和试剂：(a)KMnO₄，37℃.24h.

路线2 P-01～P-22的合成

反应条件和试剂：(a)Boc-L-amino acids，EDCI，DMAP，room temperature，12h；(b)TFA in dry DCM，0℃，4h；(c)3，5，6-trimethylpyrazine-2-carboxylic acid，EDCI，HOBt，DIPEA，room temperature，4h.

本发明还提供式1化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

进一步，所述肿瘤为肺癌、乳腺癌、肝癌细胞系。

本发明还提供一种药物组合物，该组合物包含以治疗有效量存在的式1化合物或其药学可接受的盐与至少一种药学可接受的赋形剂的混合物。

进一步，所述组合物还包含至少一种常规抗癌药。

更进一步，所述抗癌药选自环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、紫杉醇、阿霉素、依托泊苷、伊立替康、奥沙利铂、顺铂或健择。

本发明还提供治疗癌症的方法，包括给予患者给药有效量的式1化合物或其药学上可接受的盐。

为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的赋形剂，例如填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂等，填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等，崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等，润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等，助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等，粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等，甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等，矫味剂包括：甜味剂及各种香精，防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等。

本发明所述“药学可接受的”表示化合物或组合物必须在化学上和/或毒理学上与制剂中包含的其他成分相容。

所述“治疗有效量”表示本发明化合物治疗或预防特定疾病或症状；减弱、改善或消除特定疾病的一种或多种症状；或预防或延迟特定疾病或症状的发作的量。

本发明化合物具有明显抑制肿瘤细胞系(A549、MCF-7、HepG-2)生长的活性但对人正常肝细胞(L-02)系毒性较小。大部分化合物的抗肿瘤活性均强于阳性药依托泊苷和阿霉素，其中，化合物P-02不仅在肿瘤与肿瘤之间，而且在肿瘤与正常之间都表现出较高的选择性。其对肺癌(A549)的抑制作用最强，其选择性指数SI(IC₅₀ ^L-02/IC₅₀ ^A549)、SI(IC₅₀ ^MCF-7/IC₅₀ ^A549)、SI(IC₅₀ ^HepG2/IC₅₀ ^A549)分别为16.9、14.0、10.1，而依托泊苷和阿霉素在L-02与A549的选择性指数仅仅为0.2和0.5。

实验例1 MTT法观察本发明化合物P-X对肿瘤细胞和正常细胞增殖影响

1.仪器与材料

Thermo 3111型CO₂培养箱；HFsafe生物安全柜；Multiskan GO酶标仪；京立牌LD5-2B型台式低速离心机；Olympus IX71倒置荧光显微镜改良型RPMI-1640、DMEM培养基、胎牛血清、0.25％胰蛋白酶溶液、噻唑蓝、磷酸盐缓冲液(赛默飞世尔生物化学制品北京有限公司)；二甲基亚砜(DMSO)；

人肺癌细胞系A549；人乳腺癌细胞系MCF-7；人肝癌细胞系HepG2；人正常肝细胞系L-02。

实验药物：本发明化合物P-X_1-22(分别按实施例2-23制备)；阳性药物依托泊苷、阿霉素。

2.方法

2.1不同细胞株的培养

A549、MCF-7和HepG2细胞培养在含10％胎牛血清的DMEM培养液中，放置于37℃、5％的CO₂培养箱中温育。细胞均呈贴壁状态生长，在倒置显微镜下观察生长状况，待细胞数量适量时传代培养。

L-02细胞培养在含10％胎牛血清的1640培养液中，放置于37℃、5％的CO₂培养箱中温育。细胞均呈贴壁状态生长，在倒置显微镜下观察生长状况，待细胞数量适量时传代培养。

2.2初筛细胞抑制率

取对数生长期的A549、MCF-7、HepG2和L-02细胞进行试验，胰蛋白酶消化后轻轻吹打制成单细胞悬液，计数后调整细胞浓度为3×10⁴cells·mL^-1，以每孔100μL细胞液的数量接种于96孔培养板中，随后置于含5％CO₂的37℃培养箱中培养24h使细胞贴壁。每孔分别加入100μL用新鲜培养基稀释好的待测化合物，使药物最终浓度为0.5nM、5nM、50nM、500nM、5×10³nM、5×10⁴nM。设置细胞对照组及空白对照组，药物组每浓度设置4个复孔，细胞对照组和空白对照组设置12个复孔。培养箱中继续培养72h后，将培养液吸出，加入200μL新鲜培养液，再每孔加20μL 5mg·mL^-1MTT继续孵育4h，弃去上清，再加150μLDMSO，振荡10min，酶标仪490nm波长测得吸光度值并记录结果，抑制率％＝[1-(A给药-A空白)/(A正常-A空白)]×100％。本部分实验重复三次。

3.结果

P-01～P-22以及阳性药(依托泊苷、阿霉素)对3种肿瘤细胞系(A549、MCF-7和HepG2)和人正常肝细胞(L-02)的IC₅₀值如表1所示。

由表1可以看出，大部分衍生物对肿瘤细胞A549、MCF-7和HepG2的抑制作用均强于阳性药依托泊苷和阿霉素，其中化合物P-02(鬼臼毒素-Boc-L-肌氨酸)在肿瘤与肿瘤、肿瘤与正常之间都表现出较好的选择性，尤其是对A549细胞。其对A549、MCF-7、HepG2和L-02的IC₅₀分别是9.5±0.03nM、132.6±24.1nM、96.4±1.3nM、160.2±4.7nM，其选择性指数SI(IC₅₀ ^L-02/IC₅₀ ^A549)、SI(IC₅₀ ^MCF-7/IC₅₀ ^A549)、SI(IC₅₀ ^HepG2/IC₅₀ ^A549)分别是16.9、14.0、10.1。

构效关系分析表明，不同性质的鬼臼毒素衍生物表现出不同的生物活性。脱完保护基的鬼臼毒素-氨基酸衍生物活性比不脱保护的大部分化合物都增强，但是不表现出选择性；接上川芎嗪以及不脱保护的大部分化合物都表现出较好地选择性。

表1 鬼臼毒素衍生物P-X对不同肿瘤细胞株、L-02细胞的IC₅₀值

4.结论

本发明化合物表现出抑制肿瘤细胞系(A549、MCF-7和HepG2)增殖的活性。大部分化合物抗肿瘤活性均强于阳性药依托泊苷和阿霉素。其中，化合物P-02对A549表现出较好的选择性，其选择性指数SI(IC₅₀ ^L-02/IC₅₀ ^A549)、SI(IC₅₀ ^MCF-7/IC₅₀ ^A549)、SI(IC₅₀ ^HepG2/IC₅₀ ^A549)分别是16.9、14.0、10.1。表明该类化合物可用于抗肿瘤药物的研究。

实验例2 Annexin V-FITC/PI双染法观察本发明化合物P-02对肿瘤细胞和正常细胞凋亡影响

1.仪器与材料

Thermo 3111型CO₂培养箱；HFsafe生物安全柜；京立牌LD5-2B型台式低速离心机；Olympus IX71倒置荧光显微镜；流式细胞仪；改良型RPMI-1640、DMEM培养基、胎牛血清、0.25％胰蛋白酶溶液、磷酸盐缓冲液(赛默飞世尔生物化学制品北京有限公司)；AnnexinV-FITC/PI试剂盒(索莱宝生物技术有限公司)。

人肺癌细胞系A549；人正常肝细胞系L-02。

实验药物：本发明化合物P-02。

2.方法

2.1不同细胞株的培养

A549细胞培养在含10％胎牛血清的DMEM培养液中，放置于37℃、5％的CO₂培养箱中温育。细胞均呈贴壁状态生长，在倒置显微镜下观察生长状况，待细胞数量适量时传代培养。

2.2Annexin V-FITC/PI双染法检测化合物P-02对A549及L-02的凋亡影响

取对数生长期的A549和L-02细胞进行试验，胰蛋白酶消化后轻轻吹打制成单细胞悬液，计数后调整细胞浓度为3×10⁴cells·mL^-1_以每孔1.6mL细胞液的数量接种于6孔培养板中，随后置于含5％CO₂的37℃培养箱中培养24h使细胞贴壁。每孔分别加入1.6mL用新鲜培养基稀释好的待测化合物，使药物最终浓度为10nM、100nM、200nM。设置细胞对照组，对照组、药物组每浓度设置3个复孔。培养箱中继续培养72h后，将培养液及细胞收集，2400r/min离心10min，弃去上清液，加入1mLPBS重悬细胞，2400r/min离心10min，弃去上清液，加入1mLbinding buffer重悬细胞，2400r/min离心10min，弃去上清液，加入200μLbindingbuffer重悬细胞，加入5μL Annexin V-FITC混匀，室温孵育10min，再加入5μLPI混匀，室温孵育5min，流式细胞仪检测。

3.结果

P-02对A549和L-02不同浓度下的凋亡情况如表2所示。由表2可知，P-02对A549的凋亡呈现浓度依赖关系，随着给药浓度的增加(10、100、200nM)，凋亡率逐渐增加，由对照组的7.1％逐渐上升到12.2％、87.6％、94.9％；但是在给药浓度为10nM和100nM时，P-02对L-02的凋亡不明显，凋亡率由对照组的3.6％逐渐上升到5.9％、12.7％；在给药浓度为100nM时，P-02对A549及L-02的早期凋亡率分别为84.6％和10.6％，由此可以看出，化合物P-02在A549及L-02之间表现出较好地选择性。

表2；P-02对A549和L-02不同浓度下的凋亡情况

注明：Q1区代表机械损伤；Q2区代表晚期凋亡；Q3区代表正常；Q4区代表早期凋亡。

4.结论

本发明化合物P-02在A549及L-02之间表现出较好地选择性，表明该化合物可用于抗肿瘤药物的研究。

实验例3 PI单染法观察本发明化合物P-02对肿瘤细胞和正常细胞周期影响

1.仪器与材料

Thermo 3111型CO₂培养箱；HFsafe生物安全柜；京立牌LD5-2B型台式低速离心机；Olympus IX71倒置荧光显微镜；流式细胞仪；改良型RPMI-1640、DMEM培养基、胎牛血清、0.25％胰蛋白酶溶液、磷酸盐缓冲液(赛默飞世尔生物化学制品北京有限公司)；周期试剂盒(碧云天生物技术有限公司)。

人肺癌细胞系A549；人正常肝细胞系L-02。

实验药物：本发明化合物P-02。

2.方法

2.1不同细胞株的培养

2.2 PI单染法检测化合物P-02对A549及L-02的周期影响

取对数生长期的A549和L-02细胞进行试验，胰蛋白酶消化后轻轻吹打制成单细胞悬液，计数后调整细胞浓度为3×10⁴cells·mL^-1，以每孔1.6mL细胞液的数量接种于6孔培养板中，随后置于含5％CO₂的37℃培养箱中培养24h使细胞贴壁。每孔分别加入1.6mL用新鲜培养基稀释好的待测化合物，使药物最终浓度为5nM、10nM、100nM。设置细胞对照组，对照组、药物组每浓度设置3个复孔。培养箱中继续培养72h后，将培养液及细胞收集，2400r/min离心10min，弃去上清液，加入1mLPBS重悬细胞，2400r/min离心10min，弃去上清液，再加入1mL70％冷乙醇重悬细胞，4℃固定12h，2400r/min离心10min，弃去上清液，加入1mLPBS重悬细胞，2400r/min离心10min，弃去上清液，加入500μL PI染液混匀，37℃孵育30min，流式细胞仪检测。

3.结果

P-02对A549和L-02不同浓度下的周期影响情况如表3所示。由表3可知，随着给药浓度增高(5、10、100nM)，A549细胞的S期值明显上升，从24.48％上升到47.13％，而G₀/G₁和G₂/M降低，说明P-02能阻碍A549的S期，抑制细胞增殖。但是随着给药浓度增加，L-02的S和G₂/M未发生明显变化，仅G₀/G₁上升一点，说明P-02对L-02的周期影响不大，从而表明化合物P-02在A549与L-02之间表现出较好地选择性。

表3；P-02对A549和L-02不同浓度下的周期影响情况

4.结论

本发明化合物P-02在A549及L-02之间表现出较好地选择性，与前期实验结果相符，表明该化合物可用于抗肿瘤药物的研究。

具体实施方式

实施例1川芎嗪酸的制备

称取川芎嗪10.0g悬浮于100mL蒸馏水中，分三次加入11.618gKMnO₄，37℃搅拌24h，待反应完全，将反应液冷却、过滤，滤液用36％的盐酸调pH 1-2，随后用乙酸乙酯萃取三次，无水硫酸钠干燥，旋干，丙酮重结晶即得。

实施例2鬼臼毒素-Boc-L-甘氨酸(P-01)的制备

称取300mg(0.724mmol)PPT、0.868mmol Boc-L-甘氨酸置于反应瓶中，加入20mL二氯甲烷，随后加入1.085mmol EDCI，0.145mmol DMAP，常温搅拌12h，TLC监测PPT反应完全，停止反应；将反应液转移至分液漏斗，依次用15mL水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后将产物于硅胶柱上分离，得白色固体，即化合物P-01。Yield：93.2％；m.p.：141.6℃，[a]_D＝-97.71(c 0.3275mg/mL，MeOH)；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)1.44(s，9H，3×-CH₃of Boc)，2.85(m，1H)，2.93(dd，1H，J＝4.5，4.5Hz)，3.75(s，6H，2×-OCH₃ of PPT)，3.80(s，3H，-OCH₃of PPT)，4.00(m，2H)，4.19(m，1H)，4.39(m，1H)，4.60(d，1H，J＝2.0Hz)，5.95(d，1H，J＝5.0Hz)，5.98(s，2H，-OCH₂O-of PPT)，6.37(s，2H)，6.53(s，1H)，6.77(s，1H)；¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)28.4，38.7，42.8，43.8，45.7，56.3(-OCH₃)，60.9(-OCH₃)，71.4，74.7，80.6，101.8(-OCH₂O-)，107.2，108.2，109.9，127.8，132.6，134.8，137.3，147.8，152.8，155.9，171.1(-COO-)，173.7(-COO-of PPT)；HRMS(ESI)m/z：[M+Na]⁺594.1961，calcd.for C₂₉H₃₃NO₁₁571.2054.

实施例3鬼臼毒素-Boc-L-肌氨酸(P-02)的制备

称取300mg(0.724mmol)PPT、0.868mmol Boc-L-肌氨酸置于反应瓶中，加入20mL二氯甲烷，随后加入1.085mmol EDCI，0.145mmol DMAP，常温搅拌12h，TLC监测PPT反应完全，停止反应；将反应液转移至分液漏斗，依次用15mL水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后将产物于硅胶柱上分离，得白色固体，即化合物P-02。Yield：90.3％；m.p.：108.1℃，[a]_D＝-105.49(c 0.2275mg/mL，MeOH)；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)1.45(s，9H.3×-CH₃of Boc)，2.84(m，1H)，2.94(dd，1H，J＝4.5，4.5Hz)，2.96(s，3H，-CH₃of sar)，3.75(s，6H，2×-OCH₃of PPT)，3.80(s，3H，-OCH₃of PPT)，4.03(s，2H)，4.21(m，1H)，4.40(m，1H)，4.60(d，1H，J＝4.5Hz)，5.95(d，1H，J＝9.0Hz)，5.97(s，2H，-OCH₂O-of PPT)，6.37(s，2H)，6.53(s，1H)，6.80(s，1H)；¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)28.4，36.1，38.8，43.8，45.7，51.1，56.1(-OCH₃)，60.9(-OCH₃)，71.5，74.4，80.7，101.7，107.2，108.1(-OCH₂O-)，109.9，128.0，132.5，135.0，137.3，148.4，152.8，156.2，170.8(-COO-)，173.8(-COO-ofPPT)；HRMS(ESI)m/z：[M+NH₄]⁺603.2540，calcd.for C₃₀H₃₅NO₁₁585.2210.

实施例4鬼臼毒素-Boc-L-丙氨酸(P-03)的制备

称取300mg(0.724mmol)PPT、0.868mmol Boc-L-丙氨酸置于反应瓶中，加入20mL二氯甲烷，随后加入1.085mmol EDCI，0.145mmol DMAP，常温搅拌12h，TLC监测PPT反应完全，停止反应；将反应液转移至分液漏斗，依次用15mL水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后将产物于硅胶柱上分离，得白色固体，即化合物P-03。Yield：95.4％；m.p.；130.2℃，[a]_D＝-130.56(c 0.3600mg/mL，MeOH)；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)1.41(s，3H，-CH₃of ala)，1.43(s，9H，3×-CH₃of Boc)，2.82(m，1H)，2.92(dd，1H，J＝4.5，4.5Hz)，3.75(s，6H，2×-OCH₃of PPT)，3.80(s，3H，-OCH₃of PPT)，4.18(m，1H)，4.36(m，1H)，4.60(d，1H，J＝4.0Hz)，4.96(d，1H，J＝6.0Hz)，5.29(s，1H)，5.98(d，2H，J＝3.5Hz，-OCH₂O-ofPPT)，6.38(s，2H)，6.53(s，1H)，6.81(s，1H)；¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)18.2，28.4，38.7，43.9，45.6，49.8，56.2(-OCH₃)，60.9(-OCH₃)，71.2，74.4，80.4，101.8，109.8(-OCH₂O-)，128.0，132.4，134.9，137.2，148.4，152.8，155.3，173.7(-COO-)，174.0(-COO-ofPPT)；HRMS(ESI)m/z：[M+Na]⁺608.2113，calcd.for C₃₀H₃₅NO₁₁585.2210.

实施例5鬼臼毒素-Boc-L-苯丙氨酸(P-04)的制备

称取300mg(0.724mmol)PPT、0.868mmol Boc-L-苯丙氨酸置于反应瓶中，加入20mL二氯甲烷，随后加入1.085mmol EDCI，0.145mmol DMAP，常温搅拌12h，TLC监测PPT反应完全，停止反应；将反应液转移至分液漏斗，依次用15mL水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后将产物于硅胶柱上分离，得白色固体，即化合物P-04。Yield：89.2％：m.p.：121.6℃，[a]_D＝-109.89(c 0.2275mg/mL，MeOH)；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)1.46(s，9H，3×-CH₃of Boc)，2.64(m，1H)，2.90(dd，1H，J＝5.0，5.0Hz)，3.14(m，2H)，3.77(s，6H，2×-OCH₃of PPT)，3.84(s，3H，-OCH₃of PPT)，4.18(m，1H)，4.50(m，1H)，4.60(d，1H，J＝5.0Hz)，4.67(m，1H)，5.29(s，1H)，5.04(d，1H，J＝5.0Hz)，6.00(d，2H，J＝5.0Hz，-OCH₂O-ofPPT)，6.38(s，2H)，6.54(s，1H)，6.69(s，1H)，7.27(s，1H，-CH＝)，7.29(s，2H，-CH＝CH-)，7.37(m，2H，-CH＝CH-)；¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)28.4，38.1，38.6，43.8，45.7，55.0，56.3(-OCH₃)，60.9(-OCH₃)，71.3，74.7，80.6，101.8，107.4，108.1，109.8(-OCH₂O-)，127.7，127.8，128.9，129.3，132.4，135.0.135.6(-CH＝)，137.3，148.4，152.8，155.2，172.6(-COO-)，173.7(-COO-of PPT)；HRMS(ESI)m/z：[M+Na]⁺684.2413，calcd.forC₃₆H₃₉NO₁₁661.2523.

实施例6鬼臼毒素-Boc-L-脯氨酸(P-05)的制备

称取300mg(0.724mmol)PPT、0.868mmol Boc-L-脯氨酸置于反应瓶中，加入20mL二氯甲烷，随后加入1.085mmol EDCI，0.145mmol DMAP，常温搅拌12h，TLC监测PPT反应完全，停止反应；将反应液转移至分液漏斗，依次用15mL水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后将产物于硅胶柱上分离，得白色固体，即化合物P-05。Yield：94.0％；m.p.：208.2℃，[a]_D＝-84.21(c 0.2850mg/mL，MeOH)；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)1.44(m，9H，3×-CH₃of Boc)，1.96(m，2H，-CH₂of pro)，2.29(m，2H，-CH₂of pro)，2.80(m，1H)，2.94(m，1H)，3.43(m，2H，-CH₂of pro)，3.75(s，6H，2×OCH₃of PPT)，3.79(s，3H，-OCH₃of PPT)，4.15(m，1H)，4.21(m，1H)，4.37(m，1H)，4.48(m，1H)，4.60(d，1H，J＝5.0Hz)，5.98(m，2H，-OCH₂O-of PPT)，6.37(s，2H)，6.54(d，1H，J＝10Hz)，6.85(m，1H)；¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)24.9，28.4，30.1，38.8，43.8，45.6，56.1(-OCH₃)，59.4，60.8(-OCH₃)，71.4，73.6，74.4，80.4，101.7，107.2，108.0，109.8(-OCH₂O-)，128.4，132.3，135.1，137.1，148.2，152.7，154.5，173.5(-COO-)，173.9(-COO-of PPT)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺612.2454，[M+Na]⁺634.2267，calcd.for C₃₂H₃₇NO₁₁611.2367.

实施例7鬼臼毒素-Boc-L-亮氨酸(P-06)的制备

称取300mg(0.724mmol)PPT、0.868mmol Boc-L-亮氨酸置于反应瓶中，加入20mL二氯甲烷，随后加入1.085mmol EDCI，0.145mmol DMAP，常温搅拌12h，TLC监测PPT反应完全，停止反应；将反应液转移至分液漏斗，依次用15mL水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后将产物于硅胶柱上分离，得白色固体，即化合物P-06。Yield：89.5％；m.p.：153.2℃，[a]_D＝-124.77(c 0.2725mg/mL，MeOH)；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.95(d，6H，2×-CH₃of leu，J＝6.5Hz)，1.42(s，9H，3×-CH₃of Boc)，1.55(m，2H，-CH_2-)，1.71(m，1H)，2.80(s，1H)，2.94(dd，1H，J＝4.5，4.5Hz)，3.75(s，6H，2×-OCH₃of PPT)，3.80(s，3H，-OCH₃of PPT)，4.18(m，1H)，4.35(m，1H)，4.61(d，1H，J＝4.5Hz)，4.84(d，1H，J＝7.5Hz)，5.95(s，1H)，5.98(s，2H，-OCH₂O-of PPT)，6.38(s，2H)，6.53(s，1H)，6.84(s，1H)；¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)22.9，25.1，28.4，38.7，41.3，43.9，45.6，52.7，56.2(-OCH₃)，60.9(-OCH₃)，71.3，74.2，80.4，101.7，107.3，109.0，109.8(-OCH₂O-)，128.1，132.3，135.0，137.2，148.4，152.8，155.6，173.7(-COO-)，174.2(-COO-of PPT)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺628.2768，[M+NH₄]⁺645.3023，[M+Na]⁺650.2582，calcd.for C₃₃H₄₁NO₁₁627.2680.

实施例8鬼臼毒素-Boc-L-异亮氨酸(P-07)的制备

称取300mg(0.724mmol)PPT、0.868mmol Boc-L-异亮氨酸置于反应瓶中，加入20mL二氯甲烷，随后加入1.085mmol EDCI，0.145mmol DMAP，常温搅拌12h，TLC监测PPT反应完全，停止反应；将反应液转移至分液漏斗，依次用15mL水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后将产物于硅胶柱上分离，得白色固体，即化合物P-07。Yield：90.5％；m.p.：109.4℃，[a]_D＝-119.40(c 0.3350mg/mL，MeOH)；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.91(m，3H，-CH₃of iso)，0.96(d，3H，-CH₃of iso，J＝6.5Hz)，1.44(s，9H，3×-CH₃of Boc)，1.85(m，2H)，2.16(s，1H)，2.81(m，1H)，2.94(dd，1H，J＝4.5，4.5Hz)，3.75(s，6H，2×-OCH₃of PPT)，3.80(s，3H，-OCH₃of PPT)，4.20(m，1H)，4.30(m，1H)，4.36(m，1H)，4.60(d，1H，J＝5.0Hz)，4.99(d，1H，J＝8.5Hz)，5.98(d，2H，-OCH₂O-of PPT，J＝6.5Hz)，6.37(s，2H)，6.53(s，1H)，6.85(s，1H)；¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)11.6，15.7，25.6，28.4，37.8，38.8，43.8，45.7，56.2(-OCH₃)，58.4，60.9(-OCH₃)，71.4，74.5，80.4，101.8，107.4，108.1，109.8(-OCH₂O-)，128.0，132.3，135.0，137.3，148.4，152.8，155.7，173.2(-COO-)，173.6(-COO-ofPPT)；HRMS(ESI)m/z：[M+Na]⁺650.2565，[M+K]⁺666.2310，calcd.for C₃₃H₄₁NO₁₁627.2680.

实施例9鬼臼毒素-L-甘氨酸(P-08)的制备

称取200mg(0.350mmol)化合物P-01，溶于10mL二氯甲烷中，冰浴条件下缓慢加入1mL三氟乙酸，每半小时监测一次反应，待反应完成时，将反应液用饱和碳酸氢钠中和，加入50mL二氯甲烷萃取，有机层用无水硫酸钠脱水，减压浓缩后将产物于硅胶柱上分离，得白色固体，即化合物P-08。Yield：50.5％；m.p.：122.3℃，[a]_D＝-80.00(c 0.2500mg/mL，MeOH)；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)2.84(m，1H)，2.94(dd，1H，J＝5.0，5.0Hz)，3.56(m，2H，-CH₂-of gly)，3.74(s，6H，2×-OCH₃of PPT)，3.79(s，3H，-OCH₃of PPT)，4.20(m，1H)，4.38(m，1H)，4.59(d，1H，J＝4.0Hz)，5.92(s，1H)，5.97(d，2H，-OCH₂O-of PPT，J＝3.5Hz)，6.37(s，2H)，6.53(s，1H)，6.74(s，1H)；¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)38.7，40.9，43.8，45.7，56.3(-OCH₃)，60.9(-OCH₃)，71.4，74.4，101.8，107.0，108.2，109.9(-OCH₂O-)，128.0，132.5，134.9，137.3，148.4，152.8，173.7(-COO-)，174.5(-COO-of PPT)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺472.1594，calcd.for C₂₄H₂₅NO₉471.1529.

实施例10鬼臼毒素-L-肌氨酸(P-09)的制备

称取200mg(0.341mmol)化合物P-02，溶于10mL二氯甲烷中，冰浴条件下缓慢加入1mL三氟乙酸，每半小时监测一次反应，待反应完成时，将反应液用饱和碳酸氢钠中和，加入50mL二氯甲烷萃取，有机层用无水硫酸钠脱水，减压浓缩后将产物于硅胶柱上分离，得白色固体，即化合物P-09。Yield：55.2％；m.p.：157.8℃，[a]_D＝-122.03(c0.2950mg/mL，MeOH)；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)2.57(s，3H，-CH₃of sar)，2.82(m，1H)，2.93(dd，1H，J＝4.5，4.5Hz)，3.58(m，2H，-CH₂of sar)，3.75(s.6H，2×-OCH₃of PPT)，3.80(s，3H，-OCH₃of PPT)，4.19(m，1H)，4.41(m，1H)，4.59(s，1H)，5.93(m，1H)，5.97(s，2H，-OCH₂O-of PPT)，6.37(s，2H)，6.53(s，1H)，6.78(s，1H)；¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)41.0，43.8，45.7，52.0(-CH₂of sar)，56.3(-OCH₃)，60.9(-OCH₃)，71.3，74.6，78.7，101.8，107.1，108.3，109.9(-OCH₂O-)，127.9，132.6，134.9，137.4，148.4，152.8，171.8(-COO-)，173.6(-COO-of PPT)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺486.1755，calcd.for C₂₅H₂₇NO₉485.1686.

实施例11鬼臼毒素-L-丙氨酸(P-10)的制备

称取200mg(0.341mmol)化合物P-03，溶于10mL二氯甲烷中，冰浴条件下缓慢加入1mL三氟乙酸，每半小时监测一次反应，待反应完成时，将反应液用饱和碳酸氢钠中和，加入50mL二氯甲烷萃取，有机层用无水硫酸钠脱水，减压浓缩后将产物于硅胶柱上分离，得白色固体，即化合物P-10。Yield：61.2％：m.p.：190.5℃，[a]_D＝-109.43(c 0.2650mg/mL，MeOH)；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)1.37(d，3H，-CH₃of ala，J＝2.0Hz)，2.84(m，1H)，2.92(dd，1H，J＝4.0，4.0Hz)，3.72(m，1H，-CH-of ala)，3.75(s，6H，2×-OCH₃of PPT)，3.81(s，3H，-OCH₃of PPT)，4.20(m，1H)，4.34(m，1H)，4.60(d，1H，J＝5.0Hz)，5.90(d，1H，J＝9.5Hz)，5.98(d，2H，-OCH₂O-of PPT，J＝5.5Hz)，6.38(s，2H)，6.54(s，1H)，6.76(s，1H)；¹³CNMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)21.0(-CH₃of ala)，38.8，43.9，45.6，50.2(-CH-)，56.3(-OCH₃)，60.9(-OCH₃)，71.3，74.3，101.8，107.0，108.2，109.9(-OCH₂O-)，128.1，132.5，134.8，137.3，148.4，152.8，173.6(-COO-)，177.0(-COO-of PPT)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺486.1751，calcd.for C₂₅H₂₇NO₉485.1686.

实施例12鬼臼毒素-L-苯丙氨酸(P-11)的制备

称取200mg(0.302mmol)化合物P-04，溶于10mL二氯甲烷中，冰浴条件下缓慢加入1mL三氟乙酸，每半小时监测一次反应，待反应完成时，将反应液用饱和碳酸氢钠中和，加入50mL二氯甲烷萃取，有机层用无水硫酸钠脱水，减压浓缩后将产物于硅胶柱上分离，得白色固体，即化合物P-11。Yield：45.3％；m.p.：145.7℃，[a]_D＝-120.00(c 0.2250mg/mL，MeOH)；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)2.65(m，1H)，2.91(dd.1H，J＝5.0，5.0Hz)，3.00(dd，1H，J＝7.0，7.0Hz)，3.10(dd，1H，J＝6.0，6.0Hz)，3.77(s，6H，2×-OCH₃of PPT)，3.84(s，3H，-OCH₃of PPT)，3.95(m，1H)，4.05(m，1H，-CH-of phe)，4.13(m，1H)，4.60(d，1H，J＝5.0Hz)，5.85(d，1H，J＝1.0Hz)，5.99(d，2H，-OCH₂O-of PPT，J＝1.0Hz)，6.38(s，2H)，6.55(s，1H)，6.66(s，1H)，7.21(s，1H，-CH＝of phe)，7.24(s，2H)，7.28(m，2H)；¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)38.7，41.2，43.8，45.7，55.9(-OCH₃)，60.9(-OCH₃)，71.4，74.4，101.8，107.2，108.2，109.9(-OCH₂O-)，127.5，128.0，128.9，129.3，135.2，134.9，136.5，137.4，148.4，152.8，173.7(-COO-)，175.5(-COO-of PPT)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺562.2064，calcd.for C₃₁H₃₁NO₉561.1999.

实施例13鬼臼毒素-L-脯氨酸(P-12)的制备

称取200mg(0.327mmol)化合物P-05，溶于10mL二氯甲烷中，冰浴条件下缓慢加入1mL三氟乙酸，每半小时监测一次反应，待反应完成时，将反应液用饱和碳酸氢钠中和，加入50mL二氯甲烷萃取，有机层用无水硫酸钠脱水，减压浓缩后将产物于硅胶柱上分离，得白色固体，即化合物P-12。Yield：47.4％；m.p：＞220℃.[a]_D＝-115.79(c 0.1900mg/mL.MeOH)；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)1.81(m，2H，-CH₂of pro).2.0(m.1H，-NH)，2.16(s，2H，-CH₂of pro)，2.81(m，2H，-CH₂of pro)，2.94(dd，1H，J＝5.0，5.0Hz)，2.99(m，1H)，3.75(s，6H，2×-OCH₃of PPT)，3.80(s，3H，-OCH₃of PPT)，3.94(m，1H，-CH-of pro)，4.06(m，1H)，4.19(m，1H)，4.32(m，1H)，4.60(m，1H)，5.98(m，2H，-OCH₂O-of PPT)，6.38(d，2H，J＝5Hz)，6.53(s，1H)，6.77(m，1H)；¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)25.6，30.6，40.8，43.8，45.6，47.1，56.3(-OCH₃)，59.7，60.9(-OCH₃)，101.8，107.1，108.2，109.9(-OCH₂O-)，128.1，134.9，137.3，147.8，148.4，152.8，173.6(-COO-)，175.8(-COO-of PPT)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺512.1907，calcd.for C₂₇H₂₉NO₉511.1842.

实施例14鬼臼毒素-L-亮氨酸(P-13)的制备

称取200mg(0.319mmol)化合物P-06，溶于10mL二氯甲烷中，冰浴条件下缓慢加入1mL三氟乙酸，每半小时监测一次反应，待反应完成时，将反应液用饱和碳酸氢钠中和，加入50mL二氯甲烷萃取，有机层用无水硫酸钠脱水，减压浓缩后将产物于硅胶柱上分离，得白色固体，即化合物P-13。Yield：54.6％；m.p.：104.3℃，[a]_D＝-120.00(c 0.1750mg/mL，MeOH)；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.92(m，6H，2×-CH₃of leu)，1.47(m，1H，-CH-ofleu)，1.80(m，2H，-CH₂of leu)，2.83(m，1H)，2.94(dd，1H，J＝4.5，4.5Hz)，3.61(m，1H)，3.75(s，6H，2×-OCH₃of PPT)，3.80(s，3H，-OCH₃of PPT)，4.20(m，1H)，4.32(m，1H)，4.60(d，1H，J＝4.0Hz)，5.92(d，1H，J＝9.0Hz)，5.97(d，2H，-OCH₂O-of PPT.J＝7Hz)，6.38(s，2H)，6.54(s，1H)，6.76(s，1H)；¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)23.1，24.9，38.8，43.8，45.6，53.0，56.2(-OCH₃)，60.9(-OCH₃)，71.4，74.1，101.8，107.1，108.2，109.9(-OCH₂O-)，128.1，132.5，134.8，137.3，148.4，152.8，173.6(-COO-)，177.1(-COO-of PPT)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺528.2229，calcd.for C₂₈H₃₃NO₉527.2155.

实施例15鬼臼毒素-L-异亮氨酸(P-14)的制备

称取200mg(0.319mmol)化合物P-07，溶于10mL二氯甲烷中，冰浴条件下缓慢加入1mL三氟乙酸，每半小时监测一次反应，待反应完成时，将反应液用饱和碳酸氢钠中和，加入50mL二氯甲烷萃取，有机层用无水硫酸钠脱水，减压浓缩后将产物于硅胶柱上分离，得白色固体，即化合物P-14。Yield：59.7％；m.p.：135.3℃，[a]_D＝-133.33(c 0.1950mg/mL，MeOH)；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.88(m，3H，-CH₃of iso)，0.96(d，3H，-CH₃of iso，J＝7.0Hz)，1.41(m，2H，-CH₂-of iso)，2.15(s，1H，-CH-of iso)，2.81(m.1H)，2.94(dd，1H，J＝3.5，4.5Hz)，3.51(d，1H，-CH-of iso，J＝4.5Hz)，3.74(s，6H，2×-OCH₃of PPT)，3.80(s，3H，-OCH₃of PPT)，4.22(m，1H)，4.33(m，1H)，4.60(d，1H，J＝4.5Hz)，5.90(d，1H，J＝9.5Hz)，5.98(d，2H，-OCH₂O-of PPT，J＝7.0Hz)，6.37(s，2H)，6.53(s，1H)，6.76(s，1H)；¹³CNMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)11.8，15.8，25.1，38.9，39.6，43.8，45.6，56.2(-OCH₃)，59.2，60.9(-OCH₃)，71.5，74.1，101.8，108.2，109.8(-OCH₂O-)，128.2，132.4，134.9，137.3，148.3，152.8，173.6(-COO-)，176.2(-COO-of PPT)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺528.2225，calcd.for C₂₈H₃₃NO₉527.2155.

实施例16鬼臼毒素-L-甘氨酸-川芎嗪(P-15)的制备

称取30mg(0.180mmol)川芎嗪酸、0.27mmol HOBt和0.27mmol EDCI置于反应瓶中，加入25mL二氯甲烷，室温搅拌半小时后，加入0.216mmol化合物P-08、0.45mmol DIPEA，继续搅拌4h，TLC监测川芎嗪酸反应完全，停止反应：将反应液转移至分液漏斗，加入50mL水，25mL二氯甲烷萃取三次，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后将产物于硅胶柱上分离，得白色固体，即化合物P-15。Yield：88.7％；m.p.：149.3℃，[a]_D＝-92.93(c 0.2475mg/mL，MeOH)；¹HNMR(400MHz，CDCl₃)：δ(ppm)2.53(d，6H，2×-CH₃of TMP，J＝16Hz，)，2.87(s，1H)，2.89(s，3H，-CH₃of TMP)，2.92(dd，1H，J＝4Hz，4Hz)，3.72(s，6H，2×-OCH₃of PPT)，3.75(s，2H)，3.81(s，3H，-OCH₃of PPT)，4.20(m，1H)，4.31(m，2H)，4.44(m，1H)，4.61(m，1H)，5.97(s，1H)，5.98(s，2H，-OCH₂O-of PPT)，6.37(s，2H)，6.53(s，1H)，6.83(s，1H)，8.50(m，1H，-NH-)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ(ppm)21.6，22.2，22.9(-CH₃of TMP)，38.7，41.7，43.8，45.7，56.3(-OCH₃)，60.9(-OCH₃)，71.4，75.0，101.8，107.2，108.2，109.8(-OCH₂O-)，127.8，132.6，134.8，137.3，147.8，148.1，148.4，151.8，152.8，155.0，165.7(-CONH-)，170.7(-COO-)，173.6(-COO-of PPT)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺620.2216，calcd.forC₃₂H₃₃N₃O₁₀619.2166.

实施例17鬼臼毒素-L-肌氨酸-川芎嗪(P-16)的制备

称取30mg(0.180mmol)川芎嗪酸、0.27mmol HOBt和0.27mmol EDCI置于反应瓶中，加入25mL二氯甲烷，室温搅拌半小时后，加入0.216mmol化合物P-09、0.45mmol DIPEA，继续搅拌4h，TLC监测川芎嗪酸反应完全，停止反应：将反应液转移至分液漏斗，加入50mL水，25mL二氯甲烷萃取三次，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后将产物于硅胶柱上分离，得白色固体，即化合物P-16。Yield：87.9％；m.p.：115.4℃.[a]_D＝-95.37(c 0.2925mg/mL，MeOH)；¹HNMR(400MHz，CDCl₃)：δ(ppm)2.51(s，3H，-CH₃of sar)，2.56(d，6H，2×-CH₃of TMP，J＝8Hz)，3.01(s，3H，-CH₃of TMP)，3.73(s，2H)，3.75(s，6H，2×-OCH₃of PPT)，3.81(s，3H，-OCH₃ofPPT)，4.22(m，1H)，4.32(m，1H)，4.45(s，1H)，4.62(m，1H)，5.98(m，3H)，6.39(s，2H)，6.55(s，1H)，6.87(s，1H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ(ppm)20.4，21.5，22.1(-CH₃of TMP)，37.9，38.8，43.9，45.7，49.7，56.4(-OCH₃)，60.9(-OCH₃)，71.4，74.9，101.8，107.9，108.3，110.0(-OCH₂O-)，127.9，132.6，134.9，137.4，144.5，147.9，148.5，149.0，152.6，152.8，152.9，169.1(-CONH-)，169.6(-COO-)，173.7(-COO-of PPT)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺634.2375，calcd.for C₃₃H₃₅N₃O₁₀633.2322.

实施例18鬼臼毒素-L-丙氨酸-川芎嗪(P-18)的制备

称取30mg(0.180mmol)川芎嗪酸、0.27mmol HOBt和0.27mmol EDCI置于反应瓶中，加入25mL二氯甲烷，室温搅拌半小时后，加入0.216mmol化合物P-10、0.45mmol DIPEA，继续搅拌4h，TLC监测川芎嗪酸反应完全，停止反应：将反应液转移至分液漏斗，加入50mL水，25mL二氯甲烷萃取三次，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后将产物于硅胶柱上分离，得白色固体，即化合物P-17。Yield：89.8％；m.p.：218.1℃，[a]_D＝-60.38(c 0.2650mg/mL，MeOH)；¹HNMR(400MHz，CDCl₃)：δ(ppm)1.59(d，3H，-CH₃of ala.J＝8Hz)，2.57(d，6H，2×-CH₃of TMP，J＝12Hz)，2.83(m，1H)，2.88(s，3H，-CH₃of TMP)，2.92(m，1H)，3.71(s，6H，2×-OCH₃of PPT)，3.73(s，1H)，3.80(s，3H，-OCH₃of PPT)，4.21(m，1H)，4.42(m，1H)，4.60(s，1H)，4.75(m，1H)，5.98(s，3H)，6.37(s，2H)，6.53(s，1H)，6.89(s，1H)，8.40(d，1H，-NH-，J＝4Hz)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ(ppm)18.1，21.6，22.2，22.9，38.7，41.5，43.9，45.6，56.2(-OCH₃)，60.9(-OCH₃)，71.3，74.7，101.8，107.3，108.1，109.8(-OCH₂O-)，128.0，132.4，134.9，137.3，138.0，147.9，148.0，151.8，152.8，154.9，165.1(-CONH-)，173.6(-COO-)，173.7(-COO-ofPPT)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺634.2380，calcd.for C₃₃H₃₅N₃O₁₀633.2322.

实施例19鬼臼毒素-L-苯丙氨酸-川芎嗪(P-18)的制备

称取30mg(0.180mmol)川芎嗪酸、0.27mmol HOBt和0.27mmol EDCI置于反应瓶中，加入25mL二氯甲烷，室温搅拌半小时后，加入0.216mmol化合物P-11、0.45mmol DIPEA，继续搅拌4h，TLC监测川芎嗪酸反应完全，停止反应；将反应液转移至分液漏斗，加入50mL水，25mL二氯甲烷萃取三次，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后将产物于硅胶柱上分离，得白色固体，即化合物P-18。Yield：90.4％；m.p.：117.6℃，[a]_D＝-79.01(c 0.2025mg/mL，MeOH)；¹HNMR(400MHz，CDCl₃)：δ(ppm)2.50(s，3H，-CH₃of TMP)，2.57(s，3H，-CH₃of TMP)，2.89(s，3H，-CH₃of TMP)，2.94(m，2H)，3.26(d，2H，J＝4Hz)，3.68(s，6H，2×-OCH₃of PPT)，3.81(s，3H，-OCH₃of PPT)，4.08(d，2H，J＝8Hz)，4.57(m，1H)，5.05(m，1H)，5.85(d，1H，J＝8Hz)，5.98(s，2H，-OCH₂O-of PPT)，6.33(s，2H)，6.51(s，1H)，6.70(s，1H)，7.24(m，5H)，8.53(d，1H，-NH-，J＝8Hz)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ(ppm)21.5，22.1，22.8，38.2，38.6，43.7，45.7，53.7，56.2(-OCH₃)，60.9(-OCH₃)，71.4，74.9，101.7，107.5，108.1，109.7(-OCH₂O-)，127.8，127.9，128.9，129.3，132.4，134.9，135.6，137.3，138.1，147.8，148.1，148.4，152.8，154.9，164.9(-CONH-)，172.3(-COO-)，173.7(-COO-of PPT)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺710.2691，calcd.for C₃₉H₃₉N₃O₁₀709.2635.

实施例20鬼臼毒素-L-脯氨酸-川芎嗪(P-19)的制备

称取30mg(0.180mmol)川芎嗪酸、0.27mmol HOBt和0.27mmol EDCI置于反应瓶中，加入25mL二氯甲烷，室温搅拌半小时后，加入0.216mmol化合物P-12、0.45mmol DIPEA，继续搅拌4h，TLC监测川芎嗪酸反应完全，停止反应；将反应液转移至分液漏斗，加入50mL水，25mL二氯甲烷萃取三次，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后将产物于硅胶柱上分离，得白色固体，即化合物P-19。Yield：85.3％；m.p.：＞220℃，[a]_D＝-85.98(c 0.2675mg/mL.MeOH)；¹HNMR(400MHz，CDCl₃)：δ(ppm)2.02(m，2H，-CH₂of pro)，2.48(s，3H，CH₃of TMP)，2.56(d.6H，2×-CH₃of TMP，J＝8Hz)，2.94(m，2H，-CH₂of pro)，3.54(m，2H，-CH₂of pro)，3.74(s，6H，2×-OCH₃of PPT)，3.81(s，3H，-OCH₃of PPT)，4.08(m，1H)，4.20(m，1H)，4.40(m，1H)，4.61(s，1H)，4.70(m，1H)，5.97(m，3H)，6.41(s，2H)，6.52(s，1H)，7.09(s，1H，-NH-)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ(ppm)20.7，21.5，22.1，25.3，29.6，38.6，43.9，45.7，48.6，56.3(-OCH₃)，59.3，60.9(-OCH₃)，71.3，74.7，101.7，107.6，108.3，109.7(-OCH₂O-)，128.4，132.1，135.1，137.3，144.7，147.9，148.3，148.6，152.6，152.7，152.8，166.7(-CONH-)，172.9(-COO-)，173.8(-COO-of PPT)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺660.2529，calcd.for C₃₅H₃₇N₃O₁₀659.2479.

实施例21鬼臼毒素-L-亮氨酸-川芎嗪(P-20)的制备

称取30mg(0.180mmol)川芎嗪酸、0.27mmol HOBt和0.27mmol EDCI置于反应瓶中，加入25mL二氯甲烷，室温搅拌半小时后，加入0.216mmol化合物P-13、0.45mmol DIPEA，继续搅拌4h，TLC监测川芎嗪酸反应完全，停止反应：将反应液转移至分液漏斗，加入50mL水，25mL二氯甲烷萃取三次，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后将产物于硅胶柱上分离，得白色固体，即化合物P-20。Yield：82.8％；m.P.：100.3℃，[a]_D＝-94.73(c 0.2750mg/mL.MeOH)；¹HNMR(400MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.99(s，6H，2×-CH₃of leu)，1.40(m，1H)，1.76(s，2H，-CH₂-)，2.57(d，6H，2×-CH₃of TMP，J＝12Hz)，2.74(m，1H)，2.89(s，3H，-CH₃of TMP)，2.96(m，1H)，3.71(s，6H，2×-OCH₃of PPT)，3.77(s，1H)，3.81(s，3H，-OCH₃of PPT)，4.21(m，1H)，4.40(m，1H)，4.61(s，1H)，4.74(m，1H)，5.99(s，3H)，6.38(s，2H)，6.53(s，1H)，6.94(s，1H)，8.33(d，1H，-NH-，J＝4Hz)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ(ppm)21.6，22.1，22.2，22.9，25.3，38.7，41.3，43.9，45.7，51.4，56.2(-OCH₃)，60.9(-OCH₃)，71.4，74.6，101.8，107.5，108.1，109.7(-OCH₂O-)，128.0，132.3，134.9，137.3，138.1，147.9，148.1，151.8，152.8，154.9，165.3(-CONH-)，173.7(-COO-)，173.8(-COO-of PPT)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺676.2843，calcd.forC₃₆H₄₁N₃O₁₀675.2792.

实施例22鬼臼毒素-L-异亮氨酸-川芎嗪(P-21)的制备

称取30mg(0.180mmol)川芎嗪酸、0.27mmol HOBt和0.27mmol EDCI置于反应瓶中，加入25mL二氯甲烷，室温搅拌半小时后，加入0.216mmol化合物P-14、0.45mmol DIPEA，继续搅拌4h，TLC监测川芎嗪酸反应完全，停止反应；将反应液转移至分液漏斗，加入50mL水，25mL二氯甲烷萃取三次，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后将产物于硅胶柱上分离，得白色固体，即化合物P-21。Yield：90.1％；m.p.：101.6℃，[a]_D＝-56.30(c 0.3375mg/mL.MeOH)；¹HNMR(400MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.96(m.3H，-CH₃of iso)，1.03(d，3H，-CH₃of iso，J＝4Hz)，1.42(s，2H)，2.05(m，1H)，2.57(d，6H，2×-CH₃of TMP，J＝12Hz)，2.85(m，1H)，2.89(s，3H，-CH₃of TMP)，2.97(m，1H)，3.71(s，6H，2×-OCH₃of PPT)，3.77(s，1H)，3.81(s，3H，-OCH₃ofPPT)，4.23(m，1H)，4.40(m，1H)，4.61(s，1H)，4.75(m，1H)，5.98(m，3H)，6.38(s，2H)，6.53(s，1H)，6.92(s，1H)，8.51(d，1H，-NH-，J＝8Hz)：¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ(ppm)11.7，15.9，21.7，22.2，23.0，25.9，37.8，38.8，43.8，45.7，56.2(-OCH₃)，57.0，60.9(-OCH₃)，71.5，74.7，101.8，107.5，108.1，109.8(-OCH₂O-)，128.0，132.3，134.9，137.3，138.2，147.9，148.0，148.5，151.8，152.8，154.9，165.2(-CONH-)，172.8(-COO-)，173.6(-COO-ofPPT)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺676.2855，calcd.for C₃₆H₄₁N₃O₁₀675.2792.

实施例23鬼臼毒素-川芎嗪(P-22)的制备

称取200mg(0.483mmol)PPT、0.579mmol川芎嗪酸置于反应瓶中，加入20mL二氯甲烷，随后加入0.724mmol EDCI，0.097mmol DMAP，常温搅拌12h，TLC监测PPT反应完全，停止反应；将反应液转移至分液漏斗，依次用15mL水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后将产物于硅胶柱上分离，得白色固体，即化合物P-22。Yield：93.2％；m.p.：120.8℃，[a]_D＝-124.37(c 0.2975mg/mL，MeOH)；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ(ppm)2.58(d，6H，2×-CH₃of TMP，J＝12Hz)，2.74(s，3H，-CH₃of TMP)，3.02(m，2H)，3.77(s，6H，2×-OCH₃of PPT)，3.81(s，3H，-OCH₃of PPT)，4.32(m，1H)，4.48(m，1H)，4.65(s，1H)，5.99(d，2H，-OCH₂O-ofPPT，J＝8Hz)，6.18(d，1H，J＝8Hz)，6.45(s，2H)，6.57(s，1H)，6.91(s，-NH-，1H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ(ppm)21.7，22.4，22.9，38.8，44.0，45.9，56.3(-OCH₃)，60.9(-OCH₃)，71.6，75.1，101.8，107.4，108.2，109.9(-OCH₂O-)，128.1，132.7，134.9，137.3，139.0，147.8，148.4，149.8，151.1，152.8，155.1，166.7(-COO-)，173.7(-COO-of PPT)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺563.2003，calcd.for C₃₀H₃₀N₂O₉562.1951.

实施例24

取实施例2～23任一制备的化合物10g，加入注射剂(包括冻干粉针剂和无菌分装干粉针剂)适当辅料，按注射剂(包括冻干粉针剂和无菌分装干粉针剂)工艺制备成抗肿瘤药注射剂。

实施例25

取实施例2～23任一制备的化合物10g，加入片剂(包括缓控释片、骨架片、包衣片、分散片等)适当辅料，按片剂(包括缓控释片、骨架片、包衣片、分散片等)工艺制备成抗肿瘤药片剂。

实施例26

取实施例2～23任一制备的化合物10g，加入胶囊剂适当辅料，按胶囊剂工艺制备成抗肿瘤药胶囊剂。

实施例27

取实施例2～23任一制备的化合物10g，加入乳剂(包括微孔、纳米乳等)适当辅料，按乳剂(包括微乳、纳米乳等)工艺制备成抗肿瘤药乳剂。

实施例28

取实施例2～23任一制备的化合物10g，加入颗粒剂适当辅料，按颗粒剂工艺制备成抗肿瘤药颗粒剂。

实施例29

取实施例2～23任一制备的化合物10g，加入缓释控释剂适当辅料，按缓释控释剂工艺制成抗肿瘤药缓释控释剂。

实施例30

取实施例2～23任一制备的化合物10g，加入口服液适当辅料，按口服液工艺制备成抗肿瘤药口服液。

实施例31

取实施例2～23任一制备的化合物10g，加入脂质体剂型适当辅料，按脂质体工艺制备成抗肿瘤药脂质体剂型。

Claims

1.具有抗肿瘤作用的通式1化合物，

其中，R选自以下结构的一种；

2.具有选择性抗肺癌作用的化合物鬼臼毒素-Boc-L-肌氨酸(P-02)，结构如下

3.如权利要求2所述的所述化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，加入制剂领域常规辅料制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、口服液、注射剂等常规剂型。

4.如权利要求2所述的化合物的制备方法，其特征在于，该方法为：

包括如下步骤：

将鬼臼毒素溶解于有机溶剂中，在催化剂的作用下与Boc-L-肌氨酸发生反应生成化合物P-02。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于反应室温下进行；所述有机溶剂是二氯甲烷；所述催化剂为4-二甲氨基吡啶(DMAP)、1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)。

6.如权利要求1、2任一所述化合物或其药学上可接受的盐在制备抗癌药物中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述癌症为肺癌、乳腺癌、肝癌，尤其是肺癌。

8.药物组合物，其特征在于，所述组合物包含以治疗有效量存在的权利要求1和2化合物或其药学可接受的盐与至少一种药学可接受的赋形剂的混合物。

9.如权利要求8所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包含至少一种常规抗癌药。

10.如权利要求9所述的组合物，其特征在于，所述抗癌药选自环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、紫杉醇、阿霉素、依托泊苷、伊立替康、奥沙利铂、顺铂或健择。