EA014435B1

EA014435B1 - Кондиционированная композиция крови и способ ее получения

Info

Publication number: EA014435B1
Application number: EA200870222A
Authority: EA
Inventors: Юлио Райнекке; Петер Велинг
Original assignee: Ортоген Аг
Priority date: 2006-02-03
Filing date: 2007-02-02
Publication date: 2010-12-30
Also published as: MX2008009807A; KR20080100425A; EP1984006A1; HRP20090684T1; RS51247B; DE102006005016A1; UA90048C2; EP2156841A1; PL1984006T3; ATE446100T1; DE502007001793D1; PT1984006E; BRPI0707360A2; EP1984006B1; ES2335446T3; CA2640002A1; AU2007213996A1; WO2007090569A1; US20090047242A1; EA200870222A1

Abstract

Данное изобретение относится к способу получения кондиционированных композиций крови, которые содержат индуцированные факторы, а также к кондиционированным композициям крови, изготавливаемым с помощью способа, и к его применению для лечения или профилактики заболевания тела человека или животного.

Description

Данное изобретение относится к способу получения кондиционированных композиций крови, которые содержат индуцированные факторы или цитокины, а также к кондиционированным композициям крови и их применению для лечения или профилактики болезни тела человека или животного.

Уровень техники

Известно, что компоненты крови, прежде всего белки, факторы или цитокины, такие как эритропоэтин, инсулин или интерферон, которые содержатся в крови, соответственно в сыворотке крови, являются эффективными терапевтически или профилактически. Известные факторы, такие как антагонист рецептора интерлейкин-1 (1Ь-1К.а), тормозят действие вызывающих воспаление процессов. Кроме того, известно, что такие компоненты крови частично создаются самой кровяной тканью, соответственно, выделяются из клеток крови в плазменной фазе крови.

Создание или выделение определенных компонентов крови, таких как факторы или цитокины, можно, например, увеличивать посредством инкубации из взятой из тела человека или животного цельной крови. Затем после инкубации имеется часто более высокая концентрация определенных факторов в инкубированной крови. Затем эти компоненты крови можно при необходимости изолировать. Кроме того, содержащую индуцированные факторы кровь можно освобождать от клеточных составляющих частей и в качестве так называемой индуцированной сыворотки крови (повторно) вводить в тело человека или животного.

Процесс увеличения получения или выделения компонентов крови, таких как факторы или цитокины, называется индукцией. Известный способ индукции компонентов крови в цельной крови состоит, по существу, в том, что получают цельную кровь из тела человека или животного, и затем ее инкубируют в модифицированном одноразовом шприце, в котором находятся специально обработанные хромовой смесью стеклянные шарики, в течение определенного времени в культуральных условиях (Меуег с1 а1. 1ийатш. тех.. 52 (2003): 1-4). Затем отделяют клеточные составляющие части, так что получают кондиционированную сыворотку крови, в которой индуцированы факторы или цитокины. Таким образом, из венозной цельной крови человека получают сыворотку, в которой увеличена доля антагониста рецептора интерлейкина-1 (1Ь-1Ка), интерлейкина-4 (1Ь-4) и интерлейкина-10 (1Б-10) по сравнению со свежевзятой цельной кровью. При этом длительность инкубации цельной крови составляет 24 ч, температура инкубации около 37°С.

Полученные таким образом составы сыворотки крови применяют для лечения различных воспалительных заболеваний и аутоиммунных болезней, например ревматоидного артрита. Установлено, что, например, ревматоидный артрит может быть смягчен или излечен с помощью локального и/или систематического применения таких кондиционированных композиций сыворотки крови. Однако эффективность терапии требует улучшения.

Кроме того, имеются другие заболевания, например повреждения мышц, которые, по меньшей мере, в животной модели можно лечить посредством локального, соответственно, систематического применения полученных методом генной инженерии цитокинов, таких как 1Ь-1К.а или аналогичных. Полученные известным образом составы сыворотки крови в этом случае не проявляют или проявляют лишь недостаточное действие. При этом повреждения мышц как раз в области спортивной медицины являются частыми; они имеют долю вплоть до 30% приобретаемых за счет спорта болезней или повреждений. Свыше 90% этих повреждений мышц вызываются либо ушибом, либо экстремальной нагрузкой на растяжение мышцы. Эти повреждения регулярно приводят к сильным болям, а затем к невозможности продолжения тренировок, соответственно, к невозможности дальнейшего занятия спортом в течение кратковременного или длительного периода времени. Поэтому уровень техники нуждается в улучшении.

Серьезным заболеванием лошади является хроническое или периодическое воспаление глаз (лошадиный рецидивный увеит, ЕК.И). В соответствии с сегодняшним уровнем техники при этом хроническом воспалении исходят из того, что аллергия против так называемых лептоспир, а также острая или хроническая лептоспирная инфекция имеют значение для возникновения хронического воспаления глаз. В Германии степень заражения этими паразитными организмами составляет до 80%. У части инфицированных животных проявляются различные картины болезни, среди них также хроническое воспаление глаз. При этом решающим для возникновения болезни кажется наличие или отсутствие переносимости иммунной системы животного лептоспир как паразитных организмов.

У лошадей может возникать хромота вследствие массивного воспаления, соответственно раздражения сухожильного влагалища. Другой причиной хромоты могут быть также дегенеративные изменения внутри сухожильной ткани, так называемые повреждения жил (Соге Ьекюпк). Они также приводят к массивным воспалительным реакциям. Симптомы воспалений и хромоты лечат, как правило, гликокортикоидами (кортизон), клеточными мацератами (АСе11®), концентратами тромбоцитов (Ойеокш®, Маде11ап® и т.д.) или же клеточными препаратами из костного мозга или жировой ткани (стволовыми клетками).

Картина болезни нейродермит вызывается чрезмерной реакцией иммунной системы. Однако часто применяемая сегодня терапия с применением содержащих кортизон мазей сопровождается некоторыми

- 1 014435 побочными явлениями.

Кроме того, у населения часто появляются воспаления, соответственно, раздражения, ирритации нервной системы в большинстве случаев неизвестного происхождения. При этом часто возникающим симптомом являются боли в спине. При этом боли как причину воспаления можно часто лечить лишь симптоматически посредством введения анальгетиков, соответственно гликокортикоидов (таких как триамцинолон).

Эндометриоз является заболеванием, при котором клетки, соответственно ткани из слизистой оболочки матки, поселяются в брюшной полости и там приводят в большинстве случаев к доброкачественным опухолям. Эта опухоль в большинстве случаев является чувствительной к гормонам и вызывает, в зависимости от гормонального состояния, сильные боли. Оперативное вмешательство или гормональное лечение могут помогать против связанных с этой болезнью жалоб. Однако регулярно случаются возвраты и рецидивы. Опухоли могут становиться настолько хроническими, что срастаются другие органы и возникают сильные хронические боли. Симптомы можно часто делать выносимыми лишь с помощью сильных анальгетиков. Примерно 10% всех женщин между половой зрелостью и менопаузой заболевают эндометриозом и развиваются более или менее сильные симптомы. Экстремальное проявление этой болезни может приводить к бесплодию.

Поэтому существует потребность в улучшенных альтернативных и легко получаемых композициях биологически активных веществ для эффективного лечения указанных выше заболеваний, а также других заболеваний, которые можно лечить с помощью имеющихся в крови факторов или цитокинов и способах их получения. Положенная в основу данного изобретения техническая задача состоит, прежде всего, в создании улучшенного способа получения кондиционированной композиции крови, которая содержит определенные индуцированные факторы или цитокины и может эффективно применяться для лечения и профилактики.

Положенная в основу изобретения техническая задача решена, по существу, за счет создания способа получения кондиционированной композиции крови из крови, при этом способ имеет, по меньшей мере, следующие стадии.

На стадии (а) известным образом отбирают кровь, предпочтительно венозную цельную кровь, из тела человека или животного, предпочтительно свежую с помощью венепункции. В предпочтительно непосредственно следующей стадии (Ь) взятую кровь инкубируют по меньшей мере в одном модифицированном сосуде для индукции факторов или цитокинов в составе крови, т. е. для инициирования создания и выделения таких факторов и цитокинов в ткани крови. Согласно изобретению температура при инкубации крови в модифицированном сосуде составляет от 10 до 40°С, предпочтительно от 25 до 40°С, более предпочтительно около 37°С. На стадии (с) получают в модифицированном сосуде кондиционированную композицию крови, которая богата определенными индуцированными факторами или цитокинами.

Согласно изобретению при инкубации крови применяют по меньшей мере один модифицированный сосуд, который характеризуется тем, что он имеет внутреннюю поверхность на 1 мл инкубированной крови, по меньшей мере 100 мм²/мл, в частности 104 мм²/мл или больше, 123 мм²/мл или больше, 131 мм²/мл или больше, 224 мм²/мл или больше или 283 мм²/мл или больше. В одном предпочтительном варианте выполнения сосуд имеет внутреннюю поверхность от примерно 200 до примерно 750 мм²/мл, особенно предпочтительно от примерно 250 до примерно 650 мм²/мл.

Сосуд предпочтительно имеет объем заполнения 5 мл или больше, 10 мл или больше, 50 мл или больше, 60 мл или больше или 100 мл или больше. Если, например, предусмотрено взятие и инкубация примерно 50 мл крови, то внутренняя поверхность модифицированного сосуда должна составлять согласно изобретению по меньшей мере примерно 6600 мм² (66 см²), предпочтительно от примерно 10000 до примерно 37500 мм² (100-375 см²). Если, например, предусмотрено взятие и инкубация примерно 10 мл крови, то внутренняя поверхность модифицированного сосуда должна составлять согласно изобретению по меньшей мере примерно 2300 мм² (23 см²), предпочтительно от примерно 2500 до примерно 7500 мм² (25-75 см²).

Под внутренней поверхностью понимается та поверхность внутри сосуда, которая находится при инкубации в контакте с подлежащей кондиционированию композицией крови, т. е., по существу, смачивается им.

Таким образом, изобретение предусматривает, что кровь, взятую из тела человека или животного, инкубируют в специально модифицированном сосуде с определенным коэффициентом внутренней поверхности 200 мм²/мл или больше. Авторами изобретения было неожиданно установлено, что с помощью способа согласно изобретению после сравнительно короткого времени можно получать в модифицированном сосуде кондиционированную композицию крови, которая содержит большую долю определенных индуцированных факторов и в которой имеется с высокой концентрацией фактор 1Ь-6. При этом способ согласно изобретению неожиданным образом приводит к получению состава крови, который имеет большое профилактическое и терапевтическое действие. Так, например, можно эффективно лечить воспалительные заболевания суставов, воспаление глаз у лошадей, повреждения сухожилий, повреждения нервов, эндометриоз, нейродермит, а также повреждения мышц посредством введения полученной

- 2 014435 кондиционированной композиции крови согласно изобретению в больной организм или в, или на заболевший орган.

С помощью способа согласно изобретению можно, например, получать кондиционированную композицию крови из свежеотобранной цельной крови доноров, в которой имеется доля 1Ь-б более 2000 пг/мл. По сравнению с этим в некондиционированной цельной крови доля Ш-б составляет от примерно 0,5 до примерно 0,15 пг/мл. Таким образом, с помощью изобретения достигается, как правило, увеличение от примерно в 200 раз до примерно 4000 раз содержания 1Ь-б.

Наряду с особенно важным фактором 1Ь-б, в кондиционированной композиции крови получают высокую долю других терапевтически и профилактически эффективных компонентов, таких как факторы и цитокины. К ним относятся, наряду с известными факторами 1Ь-4, 1Ь-10 и 1Ь-1Ка, неожиданным образом также такие факторы, как интерлейкин-13 (1Ь-13), интерлейкин-1 (1Ь-1), прежде всего 16-1 β, фактор некроза опухоли (ΤΝΡ), инсулиноподобный фактор роста (1СТ), трансформирующий фактор роста (ТОТ), тромбоцитарный фактор роста (ΡΌ6Ρ), фактор роста фибробластов (РОТ), гепатоцитный фактор роста (НОР). Таким образом, в полученной согласно изобретению кондиционированной композиции крови предпочтительно имеется смесь (коктейль) различных эффективно индуцированных факторов или цитокинов. Не вдаваясь в теорию, именно смесь факторов и цитокинов, получаемая согласно изобретению, представляет терапевтически и профилактически высокоэффективную композицию биологически активных веществ.

При этом указанные выше биологически активные вещества могут находиться в композиции крови также в виде везикул, микровезикул или экзосом. Под везикулами и микровезикулами понимаются субклеточные составляющие части, которые, среди прочего, могут быть перевязаны мембранной поверхностью иммунных клеток. Под экзосомами понимаются субклеточные составляющие части, которые представляют везикулообразные структуры в нанометровом диапазоне и возникают за счет впячивания так называемых мультивезикулярных тел и секреции иммунными клетками.

Под композицией крови в данном случае понимается композиция из крови, состоящая, прежде всего, из плазмы крови, сыворотки и кровяных клеток, которая содержит по меньшей мере один компонент, выбранный из протеинов, таких как факторы и цитокины. В данном случае под композицией крови понимается также композиция сыворотки крови. Композиция сыворотки крови отличается от композиции крови, прежде всего, тем, что композиция сыворотки крови не содержит (больше) клеточных составляющих частей. Кондиционированную композицию сыворотки крови получают из полученной согласно изобретению кондиционированной композиции крови, например, за счет того, что из композиции крови отделяют клеточные составляющие части с помощью центрифугирования, фильтрации и других подходящих мер, так что получают не содержащий клетки раствор из плазмы крови и сывороточных составляющих частей, который содержит, по меньшей мере, индуцированные факторы и цитокины.

В соответствии с этим, в одном предпочтительном варианте выполнения в дополнительной стадии полностью или по существу полностью отделяют клеточные составляющие части из полученной кондиционированной композиции крови, так что получают кондиционированную сыворотку крови. Кондиционированную сыворотку крови можно применять так же, как полученную согласно изобретению композицию крови, и она обеспечивает, как правило, те же технические преимущества согласно изобретению. Специалист в зависимости от области применения и целесообразности будет применять кондиционированную композицию сыворотки крови или кондиционированную композицию цельной крови. Предпочтительно применять кондиционированную композицию сыворотки крови.

Инкубацию крови по меньшей мере в одном модифицированном сосуде предпочтительно проводят так долго, пока не продвинется достаточно далеко индукция факторов и цитокинов. Индуцированные факторы или цитокины вырабатываются и выделяются тканью крови, по существу, с момента времени начала инкубации, так что эффективное количество индуцированных факторов или цитокинов аккумулируется в кондиционированной композиции крови.

В одном варианте выполнения изобретения появление 1Ь-б в композиции крови указывает на успешную и достаточно далеко продвинувшуюся индукцию. При этом доля 1Ь-б составляет, в частности, по меньшей мере 30 пг/мл. В модифицированном сосуде инкубацию проводят так долго, пока не будет достигнута доля 1Ь-б, равная по меньшей мере 30 пг/мл в композиции крови. В других предпочтительных вариантах выполнения инкубацию продолжают так долго, пока доля в композиции крови не достигнет по меньшей мере 200 пг/мл, предпочтительно 500 пг/мл, особенно предпочтительно 1000 пг/мл.

В другом варианте выполнения инкубацию выполняют в течение 3б ч или меньше. В другом варианте выполнения инкубацию выполняют в течение 9 ч или меньше. В другом варианте выполнения инкубацию выполняют в течение от 2 ч или больше до 3б ч или меньше, предпочтительно до 9 ч или меньше.

В другом варианте выполнения инкубация крови происходит при пониженном парциальном давлении кислорода (рО₂). В частности, парциальное давление кислорода во время инкубации составляет менее 5 кПа, предпочтительно менее 3 кПа. В одном предпочтительном варианте выполнения инкубация крови в модифицированном сосуде происходит без доступа кислорода.

В предпочтительном варианте выполнения модифицированный сосуд в своем внутреннем про

- 3 014435 странстве имеет особые структуры с большой поверхностью, так что следующая из (внешней) геометрии сосуда внутренняя структура увеличивается с помощью особых структур. Увеличение поверхности с помощью особых структур составляет предпочтительно от 10 до примерно 200%, в одном варианте выполнения от 10 до 100%. К этим структурам предпочтительно относятся структуры с большим отношением поверхности к объему, такие как шарики или волокна, а также другие частицы, такие как мука и гранулят, или комбинации таких структур. Поверхность этих структур является предпочтительно гладкой. В качестве альтернативного решения в некоторых случаях можно использовать структуры с шершавой поверхностью.

Специалист может выбирать количество и форму внутренних структур в зависимости от области применения и целесообразности. Понятно, что при этом форму и количество добавляемых внутренних структур выбирают так, что сумма поверхностей добавленных внутренних структур и внутренняя поверхность модифицированного сосуда так согласованы друг с другом, что сохраняется предусмотренное согласно изобретению отношение поверхности к объему (коэффициент поверхности).

Модифицированный сосуд предпочтительно имеет не пирогенную внутреннюю поверхность. Модифицированный сосуд предпочтительно выполнен из не содержащего пирогенные вещества материала.

Если применяются имеющие форму частиц внутренние структуры, такие как шарики, волокна, мука, гранулят или их смеси, то они предпочтительно содержат или состоят из материалов, выбранных из металлов, оксидов металлов или пластмасс и их смесей. Предпочтительными примерами для этого являются стекло, корунд, кварц, полистирол, поливинилхлорид, полиэтилен и полипропилен, а также их смеси. Эти материалы предпочтительно не являются пирогенными.

По меньшей мере один модифицированный сосуд предпочтительно содержит в своем внутреннем пространстве стеклянные шарики, особенно предпочтительно из не пирогенного боросиликатного стекла, при этом стеклянные шарики имеют (средний) диаметр от 0,5 до 5 мм, предпочтительно 1,5, 2,5 или

3,5 мм. Особенно предпочтительно в подлежащий модификации сосуд добавляют в зависимости от емкости сосуда стеклянные шарики в количестве от примерно 10 до 500. Если, например, предусмотрен сосуд для размещения примерно 50 мл крови, то предпочтительно добавляют примерно 30-300 шариков, в частности примерно 50-250 шариков, которые имеют диаметр предпочтительно 3,5 мм.

В одном особенно предпочтительном варианте выполнения применяют известный преимущественно из трансфузионной медицины сосуд для взятия, соответственно хранения, крови, такой как шприц, пробирки для крови или пакеты для крови, которые модифицируют посредством добавления определенного количества таких внутренних структур, так что получают модифицированный сосуд с увеличенной внутренней поверхностью. В соответствии с этим, изобретение предусматривает применение для получения кондиционированной композиции крови по меньшей мере одного модифицированного сосуда с большой внутренней поверхностью с коэффициентом поверхности согласно изобретению, который имеет внутренние структуры, выбранные из шариков, волокон, муки, гранулята, частиц или их комбинаций.

Специалист может, естественно, принимать другие или дополнительные меры для получения модифицированного сосуда с увеличенной внутренней поверхностью, который можно использовать согласно изобретению. В другом предпочтительном варианте выполнения предусмотрен сосуд, внутренние стенки которого имеют впячивания, полости и/или выступы, так что достигается отношение поверхности к объему (коэффициент поверхности) согласно изобретению.

В одном предпочтительном варианте выполнения модифицированный сосуд имеет эластичные стенки, которые обеспечивают взятие крови предпочтительно без попадания воздуха из тела человека или животного, когда, по существу, еще не содержащий воздуха модифицированный сосуд расширяется лишь при входе потока крови, так что в сосуде не может возникать нежелательное воздушное пространство. Понятно, что количество и поверхность предусмотренных для увеличения его внутренней поверхности внутренних структур не ориентированы на максимальную емкость эластичного сосуда, а на объем подлежащей инкубации композиции крови.

Такой эластичный сосуд предпочтительно выбирают из предусмотренных в медицине для переливания крови пакетов для крови, которые предпочтительно являются одинарными, двойными, тройными или множественными пакетными системами. В то время как одинарная пакетная система характеризуется тем, что имеет, как правило, по меньшей мере одно отверстие для заполнения, соответственно опустошения, двойные, тройные и множественные пакеты представляют системы нескольких связанных друг с другом пакетов, которые находятся в контакте друг с другом предпочтительно с помощью шлангового соединения.

Предпочтительно такие пакеты просто состоят из двух сваренных поверх друг друга эластичных пленок.

В особенно предпочтительном варианте выполнения используемый согласно изобретению по меньшей мере один модифицированный сосуд является пакетом для крови или пакетной системой для крови, которая модифицирована посредством заполнения согласно изобретению выбранным количеством частиц выбранного вида, предпочтительно стеклянными шариками.

Сосуд предпочтительно является пакетной системой, которую применяют в качестве двухкамерной пакетной системы для крови для центрифугирования с целью разделения составляющих частей крови в

- 4 014435 свежевзятой крови. Если сосуд модифицирован согласно изобретению посредством заполнения стеклянными шариками, то в нем можно осуществлять способ получения кондиционированной композиции крови. Затем из кондиционированной крови в пакетной системе для крови отделяют компоненты крови, так что получают не содержащую твердые составляющие части крови кондиционированную композицию сыворотки крови.

Предпочтительная двухкамерная пакетная система для крови содержит по меньшей мере один первичный сосуд и по меньшей мере один вторичный сосуд, которые образуют систему сообщающихся сосудов. Первичный сосуд и вторичный сосуд соединены друг с другом по меньшей мере через один, в частности, закрываемый переход. В связи с данным изобретением под первичным сосудом понимается предпочтительно сосуд, т. е. емкость, в который вводится подлежащая кондиционированию и затем при необходимости разделению на отдельные компоненты композиция крови, инкубируется и при необходимости подвергается первому фракционированию. Особенно предпочтительно первичный сосуд, вторичный сосуд и переход зафиксированы на одной общей несущей пластине. Особенно предпочтительно переход выполнен с возможностью закрывания с помощью по меньшей мере одного прерывателя, который может быть выполнен в виде клапана, крана и/или пробки. Под вторичным сосудом понимается предпочтительно сосуд, т.е. емкость, в который вводится полностью или частично разделенная в первичном сосуде полностью или частично на свои отдельные компоненты жидкость или суспензия и подвергается второму фракционированию. Каждый из этих сосудов предпочтительно снабжен по меньшей мере одним, в частности, закрываемым отводом и/или подводом, в частности, для подвода, т. е. введения, соответственно, реаппликации компонентов крови и/или отвода, т.е. извлечения, компонентов крови. Дополнительные внутренние структуры согласно изобретению, такие как стеклянные шарики, предпочтительно предусмотрены, соответственно заполнены в первичный сосуд.

В одном предпочтительном варианте выполнения пакет, соответственно пакетная система, для крови используется для отделения твердых составляющих частей крови от кондиционированной композиции сыворотки крови с помощью центрифугирования в центробежном стакане. Он предпочтительно выполнен так, что выполненный предпочтительно в виде эластичного пакета сосуд расширяется при центрифугировании так, что стенки сосуда частично и/или полностью упираются во внутреннюю стенку центробежного стакана. Предпочтительно применять стерильный стакан. За счет этого особенно предпочтительно уменьшается нагрузка на растяжение стенок сосуда и получаемых клеток во время центрифугирования. Предпочтительное применение центробежного стакана позволяет также использовать механически более легкий, более тонкий и менее стабильный материал стенок для предпочтительно эластичного пакета.

В одном предпочтительном варианте выполнения способа инкубированная композиция крови является аллогенной композицией крови, которую берут в виде цельной крови у человеческого или животного донора и после выполнения способа согласно изобретению в виде кондиционированной композиции крови, предпочтительно в виде кондиционированной композиции сыворотки крови, можно вводить человеческому донору. В одном варианте выполнения композиция крови является аутологичной, т. е. организм донора и организм реципиента являются идентичными. В этом особенно предпочтительном варианте выполнения могут проявляться все преимущества аутологичного донорства. Специалист может выбирать вид и идентичность донора в зависимости от применения и целесообразности. При этом можно учитывать обычно известные критерии и преимущества, которые относятся к аутологичному донорству.

В одном альтернативном варианте выполнения композиция крови является гетерологичной. То есть она берется из чужого организма. Для этого некондиционированную композицию крови берут из животного организма, например у свиньи, в виде цельной крови, и после выполнения способа согласно изобретению вводят кондиционированную композицию крови подлежащему лечению индивиду, который принадлежит к другому виду, например лошади, человеку или спортсмену.

Другой аспект изобретения относится к созданию кондиционированной композиции крови, которую можно получить или предпочтительно получена с помощью способа согласно изобретению. Её можно применять согласно изобретению для лечения, облегчения, исцеления или профилактики болезни тела человека или животного. Согласно изобретению такая композиция крови содержит индуцированные при выполнении способа согласно изобретению факторы интерлейкина-6 в количестве по меньшей мере 30 пг/мл, предпочтительно более 200, 1000, 5000, 10000 пг/мл, предпочтительно от 30 до 20000 пг/мл. Понятно, что полученная с помощью способа согласно изобретению композиция крови наряду с интерлейкином-6 имеет в качестве индуцированных факторов другие индуцированные факторы. Неожиданным образом было установлено, что именно получаемая согласно изобретению композиция индуцированных факторов проявляет в смеси преимущества и действия согласно изобретению.

Предпочтительным является кондиционированная композиция, которая наряду с интерлейкином-6 (1Ь-6) имеет по меньшей мере один дополнительный компонент, выбранный из антагониста рецептора интерлейкина-1 (1Ь-1Ва), интерлейкина-4 (1Ь-4), интерлейкина-13 (1Ь-13), интерлейкина-1 (1Ь-1), интерлейкина-10 (1Ь-10), фактора некроза опухоли (ТЛЕ), инсулиноподобного фактора роста (1СЕ), трансформирующего фактора роста (ТСЕ), тромбоцитарного фактора роста (ΡΌΟΕ), фактора роста фибробластов (ЕСЕ) и гепатоцитного фактора роста (НСЕ).

- 5 014435

В одном варианте выполнения кондиционированная композиция крови содержит долю антагониста рецептора интерлейкина-1 (1Ь-1Ва) от 30 до 50000 пг/мл. В другом варианте выполнения кондиционированная композиция крови содержит долю интерлейкина-4 (1Ь-4) от 2 до 100 пг/мл. В другом варианте выполнения кондиционированная композиция крови содержит долю интерлейкина-13 (ГС-13) от 2 до 100 пг/мл. В другом варианте выполнения кондиционированная композиция крови содержит долю интерлейкина-1 (ГС-1) от 5 до 1000 пг/мл. В другом варианте выполнения кондиционированная композиция крови содержит долю интерлейкина-10 (1С-10) от 5 до 1000 пг/мл. В другом варианте выполнения кондиционированная композиция крови содержит долю фактора некроза опухоли (ΤΝΒ) от 5 до 1000 пг/мл. В другом варианте выполнения кондиционированная композиция крови содержит долю инсулиноподобного фактора роста (ЮР) от 100 до 150000 пг/мл. В другом варианте выполнения кондиционированная композиция крови содержит долю трансформирующего фактора роста (ТОР) от 10 до 20000 пг/мл. В другом варианте выполнения кондиционированная композиция крови содержит долю тромбоцитарного фактора роста (ΡΌΟΡ) от 100 до 100000 пг/мл. В другом варианте выполнения кондиционированная композиция крови содержит долю фактора роста фибробластов (РОР) от 50 до 10000 пг/мл. В другом варианте выполнения кондиционированная композиция крови содержит долю гепатоцитного фактора роста (НОР) от 50 до 10000 пг/мл.

Неожиданным образом как раз имеющаяся в получаемой кондиционированной композиции крови смесь индуцированных факторов и цитокинов действует особенно эффективно терапевтически и профилактически. Согласно изобретению кондиционированная композиция крови, соответственно получаемая из неё кондиционированная композиция сыворотки крови, применяется особенно эффективно при ряде болезней, соответственно недугах тела человека или животного, которые она лечит, излечивает или облегчает, соответственно обеспечивает профилактику этих болезней и недугов.

Получаемая согласно изобретению кондиционированная композиция крови, соответственно кондиционированная композиция сыворотки крови, применяется при заболеваниях мышц, при заболеваниях опорно-двигательного аппарата, а также воспалениях и раздражениях нервной системы, прежде всего заболеваниях сухожильного аппарата, таких как повреждения сухожилий, воспаления сухожильного влагалища, повреждения связок и дегенерация связок, а также для быстрого исцеления, облегчения, соответственно, профилактики аллергий, непереносимости продуктов питания или лечебных средств, заболеваний с участием иммунной системы, прежде всего аутоиммунных заболеваний, в частности ревматоидного форменного контура, а также болезней, обусловленных нейродермитом, и для лечения и излечения хронических ран, в частности диабетических язв, лечения эндометриоза, а также лечения хронического воспаления глаз и регенерации, соответственно, облегчения болей от раздражения сухожилий у лошади. К заболеваниям мышц относятся мышечные заболевания, которые вызываются повреждениями мышц при операциях на мышцах в связи с разрывом мышечных волокон при дегенерации мышц, при дефектах мышц, при атрофии мышц, при разрыве мышц, дистрофии мышц, соответственно, усталостью мышц или болью в мышцах.

Поэтому данное изобретение относится к применению композиции крови согласно изобретению и получаемой из него кондиционированной композиции сыворотки крови для лечения или профилактики недуга тела человека или животного. Недуг тела человека или животного, который можно предпочтительно лечить, облегчать, излечивать или же предотвращать, выбирается из болезней ревматоидной группы, болезней опорно-двигательного аппарата, а также болезней, которые связаны с иммунной системой, а также болезней, которые вызывают острые и хронические боли.

Понятно, что для адекватного лечения соответствующих болезней специалист выбирает соответствующий целесообразный вид применения для введения кондиционированной композиции крови согласно изобретению. Кондиционированную композицию крови или композицию сыворотки крови инъецируют или вливают в тело и/или соответствующий орган, такой как сустав, мышца, сухожилия, кожа или нерв, а именно предпочтительно внутривенно, внутриартериально, подкожно, внутрикожно, под слизистую оболочку, местно, интратекально, периспинально, в и/или у центральных нервов, в и/или у периферийных нервов, внутрисуставно и/или внутримышечно.

Поэтому согласно другому аспекту изобретения кондиционированная композиция крови применяется для получения лекарственного средства для лечения или профилактики болезней тела человека или животного. Эти болезни указаны выше.

Наряду с этим, предусмотрено применение композиции крови согласно изобретению также в качестве нетерапевтического косметического средства, в качестве так называемого средства против старения. Было установлено за счет систематического и/или местного применения смягчаются или излечиваются телесные сопутствующие возрасту явления, прежде всего указанные выше симптомы, или же можно улучшать внешний вид: кожу, волосы, ногти. Согласно другому аспекту изобретения композиция крови согласно изобретению применяется для получения косметических средств.

Наконец, данное изобретение относится также к способу лечения или профилактики указанного выше заболевания тела человека или животного, который содержит, по меньшей мере, следующую стадию: введение кондиционированной композиции крови согласно изобретению в тело человека или животного в терапевтически или профилактически эффективной дозе. Дозу и вид введения выбирает спе

- 6 014435 циалист в зависимости от области применения и целесообразности.

Примеры выполнения

Изобретение поясняется ниже более подробно с помощью последующих примеров и чертежа, при этом примеры следует понимать как не имеющие ограничительного характера. Специалист может из примеров понять основной принцип изобретения и связанные с ним технические преимущества. Он может переносить основные принципы и технические преимущества на другие, в явном виде не указанные области.

На чертеже схематично показан предпочтительный вариант выполнения устройства согласно изобретению, состоящего из выполненного в виде эластичного пакета сосуда 10 с предпочтительно полукруглым нижним участком 14 и предпочтительно сужающимся верхним участком 15 по меньшей мере с одним подводом и/или отводом 11, который входит в воронкообразный верхний участок 15 сосуда. На его нижнем конце, который входит в просвет сосуда 10, предпочтительно предусмотрен манжетный клапан 13, т.е. вибрационный клапан.

Пример 1. Набор для получения кондиционированной композиции крови из цельной крови.

Составляется стерилизуемый набор для одноразового использования, который содержит следующее:

пакетную систему для инкубации крови и для отделения твердых составляющих частей крови (чертеж, табл. 1 и 2), снабженную шариками из боросиликатного стекла (примерно 200 штук) с диаметром

3,5 мм, канюлю калибра 20 для заправки противосвертывающего средства в шприц для взятия крови, шприц объемом 60 мл для взятия крови, канюлю типа бабочка для взятия крови, шприц объемом 60 мл для размещения кондиционированной композиции сыворотки крови.

Все компоненты являются одноразовыми, упакованными и гамма-стерилизованными и снабжены общей стерильной верхней упаковкой.

В табл. 1 и 2 приведены материалы для применяемых компонентов.

Таблица 1

Компоненты	Материал, поставщик
Пакет (10)	Пленка Цгака)	для	пакета: ПВХ компаунд	3222 (Зо1уау
Внутренние структуры	200 шариков из боросиликатного стекла, диаметр 3,5 мм (Оигап®)

- 7 014435

Таблица 2

Набор для получения кондиционированной композиции крови

Компоненты	Материал, поставщик
Устройство, согласно изобретению	Смотри таблицу 1
Канюля типа бабочка, 1,1x19 мм	Закрывающий колпачок Адаптер ЬЪ Соединительная головка крыльев Шланг Канюля Защитный шланг	РЕ АВЗ, прозрачный РУС РУС 60 ЗН А 130 638/13 РЕ
Канюля, 1,1x40 мм	Соединительная головка Защитный колпачок Канюля	РР РР Нержавеющая сталь по ϋΙΝ ΕΝ 130 9626
Шприц, 60 мл	Цилиндр Шток поршня Пробка поршня	РР РР Природный каучук
Шприц, 10 мл (12 см³)	Цилиндр Шток поршня Пробка поршня	РР РР РР
Перфузионная трубка, 1,5 м, 1,0x2,7 мм	Штырь ЬЬ Колпачок Гнездо Ш Колпачок Шланг: Внутренний слой Средний слой Наружный слой	АВЗ КК 2802 РЕ, полупрозрачный РУС АВЗ, красный N0 РЕ ЕУА РУС
Блистерная упаковка, 0,9x206x500 мм	РЕТ-САС
Запечатывающая бумага	Тууек 10МР/1073В

Пример 2. Получение кондиционированной композиции сыворотки крови из цельной крови.

a. Взятие крови.

Взятие крови осуществляется с помощью шприца Луерлока объемом 60 мл. Шприц медленно заполняют цельной кровью до отметки 60 мл. Следует обращать внимание на отсутствие пузырьков, чтобы в шприце действительно находилось точно 60 мл крови.

b. Заполнение пакетной системы и инкубация.

Содержимое шприца медленно и полностью через подвод/отвод 11 наливают в выполненный в виде пакета эластичный сосуд 10. В сосуде расположено примерно 200 шариков из боросиликатного стекла (Эигап®) с диаметром 3,5 мм.

Шприц после заполнения отвинчивают и соединение (12) пакета снова закрывают новым закрывающим колпачком.

Сосуд 10 оставляют при температуре около 37°С в течение 9-36 ч предпочтительно в висячем положении. При этом происходит инкубация взятой крови в сосуде с увеличивающими внутреннюю поверхность шариками. Увеличенная внутренняя поверхность составляет примерно 350 мм² на 1 мл инкубируемой крови.

c. Отделение твердых составляющих частей крови.

В стерильной центробежной подвеске в центробежный стакан устанавливают сосуд 10. После контролирования правильной балансировки веса выполняют центрифугирование при примерно 2500 об/мин в течение примерно 3 мин. После завершения центрифугирования, при котором происходит отделение клеточных составляющих частей крови от жидких составляющих частей, осторожно извлекают центробежный стакан вместе с сосудом 10.

За счет центрифугирования клетки крови главным образом эритроциты (ΕΖ) собираются в нижнем участке сосуда 10. Центрифугирование отделяет сыворотку от сгустка крови. Сыворотку переводят во второй пакет и затем при необходимости подвергают центрифугированию второй раз. Через отборное соединение подвода/отвода 11 отбирают кондиционированную композицию сыворотки. Затем отвинчивают заполненный шприц.

Пример 3. Анализ кондиционированной композиции сыворотки крови.

Было подготовлено четыре опытных набора А, В, О, Ό и Е, которые применялись одинаково для

- 8 014435 инкубации цельной крови.

В наборе А коммерчески доступный пакет для крови (Ο8ΤΕΟΚΙΝ, ОпЬоцеп, Дюссельдорф), который, по существу, описан в примерах 1 и 2, заполняли 210 шариками из боросиликатного стекла (Эигап®) с диаметром 3,5 мм. За счет добавления внутренних структур внутренняя поверхность модифицированного сосуда составляет в целом примерно 18125 мм². При инкубации 50 мл крови отношение поверхности к объему (коэффициент поверхности) модифицированного сосуда составляет примерно 360 мм²/мл.

В другом наборе В использовали ту же пакетную систему для крови, что и в наборе А, однако без заполнения дополнительными внутренними структурами. Незаполненная пакетная система для крови имеет внутреннюю поверхность примерно 10000 мм². При 50 мл крови это соответствует коэффициенту поверхности примерно 200 мм²/мл.

В другом наборе С использовали ту же пакетную систему для крови, что и в наборе А, и заполняли 780 шариками с диаметром 3,5 мм. В этом случае внутренняя поверхность составляет в целом примерно 40000 мм². При 50 мл крови это соответствует коэффициенту поверхности примерно 800 мм²/мл.

В другом наборе Ό другую систему отбора крови, которая имеет, по существу, цилиндрическую форму, заполняли 36 стеклянными шариками с диаметром 1,5 мм. В этом случае внутренняя поверхность составляет в целом примерно 4050 мм². При 10 мл заполняемой крови это соответствует коэффициенту поверхности примерно 405 мм²/мл.

В другом наборе Е систему отбора крови, которая имеет, по существу, цилиндрическую форму, заполняли 62 стеклянными шариками с диаметром 3,5 мм. В этом случае внутренняя поверхность составляет в целом примерно 6200 мм². При 10 мл заполняемой крови это соответствует коэффициенту поверхности примерно 620 мм²/мл.

Во всех испытаниях отбирали свежую венозную цельную кровь и заполняли в сосуды наборов А, В и С. Сосуды подвергали инкубации при температуре примерно 37°С в течение 24 ч (1=24 ч). Дополнительно к этому в качестве контроля примерно 10 мл свежей цельной крови тех же доноров обрабатывали непосредственно после отбора крови (1=0 ч).

После окончания времени инкубации определяли количество компонентов крови 1Б-1Ка, 1Б-6, ΤΝΡα и 1Б-1 β в композиции крови. Результаты приведены в табл. 3.

Таблица 3

Фактор/ цитокин, в пг/мл	1 = 0ч	1 = 24ч
А 360 мм²/мл	В 200 мм²/мл	С 800 мм²/мл	ϋ 405 мм²/мл	Е 620 мм²/мл
1Ь-1Ка	323,7	8592	6626	-*	2663	7836
1Ь-6	3,7	2830	1571		847,5	2933
ТЛРа	19,9	718,3	204,5	-*	31,54	569,8
ТЬ-Ιβ	1,00	396,6	92,69	-*	16,81	154,8

* - лизиз клеток, отсутствие измерения

В то время как наборы А и В показывают явную индукцию анализируемых факторов в композиции крови, в наборе С во время инкубации произошел гемолиз. Это показывает, что сила индукции зависит от коэффициента поверхности; при большем коэффициенте поверхности (большей внутренней поверхности) получают большую долю индуцированных цитокинов. Одновременно существует верхняя граница коэффициента поверхности; при преодолении критической величины происходит гемолиз. Гемолизированную композицию крови нельзя больше использовать. При больших коэффициентах поверхности вблизи критической величины можно подавлять гемолиз в определенных пределах за счет сокращения времени инкубации с 24 до 6-9 ч (данные не показаны).

Пример 4. Цитокиновый профиль кондиционированной композиции крови.

В дополнительном наборе цилиндрический сосуд для отбора крови заполняли для увеличения внутренней поверхности 36 стеклянными шариками из боросиликатного стекла (Эигап®) с диаметром

1,5 мм. Инкубации подвергали 50 мл свежевзятой цельной крови. Коэффициент поверхности составлял примерно 405 мм²/мл.

В сосуде для отбора крови кровь подвергали инкубации при температуре примерно 37°С в течение 3, 9 и 24 ч. Затем определяли содержание цитокинов РОЕ, 1Б-4, 1Б-10, П.-1 β, ΤΝΡ, 1Б-6, П,-11\а и ΤΟΡβ.

Результаты

Уже после 3 ч инкубации проявилось явное увеличение содержания цитокинов в кондиционированной композиции крови. В табл. 4 измеренные после 24 ч (1=24 ч) величины противопоставляются величинам, измеренным непосредственно после отбора крови (1=0 ч).

- 9 014435

Таблица 4

Фактор/цитокин, в пг/мл	Ь=0 ч	Ь=2 4 ч
ЕСЕ	0,1	2,0
1Ь-4	5,4	7,9
1Б-10	7,9	55,4
ΙΙ,-Ιβ	3,9	409
ΤΝΕ	б, 0	536
1Ь-6	—	3444
1Ъ-1Ка	241,9	9975
ΤΌΕβ	18313	36696

Пример 5. Лечение нейродермита.

Для лечения нейродермита полученную согласно изобретению кондиционированную композицию крови вводили пациентам в виде инъекций, а также внутрисуставных инъекций. При этом инъецировали 2 мл кондиционированной композиции крови в течение 3 недель с перерывами в 2-3 дня. Улучшение симптомов нейродермита можно было установить в течение 3 дней. Повторное обострение болезни примерно после 2,5 месяцев было успешно излечено также с помощью 3 инъекций.

У других пациентов, у которых применялись внутрисуставные инъекции, первично для лечения болей в коленях (обусловленные артрозом и болями в мениске) также улучшались симптомы нейродермита в ходе 6 инъекций. После этого больше не происходило обострения нейродермита.

Пример 6. Лечение воспаления или раздражения нервной системы.

В этом применении с помощью полученной согласно изобретению кондиционированной композиции крови лечили пациентов с болями в спине (п=30), которые в течение по меньшей мере последних 6 месяцев страдали хроническими вызванными радикулитом болями в спине, с помощью локальных инъекций у корешка нерва (эпидурально-перидуральная инъекция по Кремеру и др.). Боли ослабли в течение нескольких недель, и действие сохранялось в среднем еще после 6 месяцев. При этом был установлен, по меньшей мере, одинаковый или слегка улучшенный результат по сравнению с пациентами, которых лечили с помощью той же техники инъекций 5 или 10 мг гликокортикоида (триамцинолона) в качестве сравнительного вещества.

Пример 7. Лечение эндометриоза.

Пациенток (п=4), которые страдали болезненным эндометриозом, лечили с помощью внутриперитональной инъекции 4 мл, полученной согласно изобретению кондиционированной композиции сыворотки крови непосредственно в вызванную эндометриозом ткань опухоли и/или в брюшную полость. После этого сначала связанного с сильными болями применения наступало явное уменьшение болей. Это действие продолжалось и приводило почти к полному отсутствию боли на следующий день. В качестве продолжения терапии продолжали лечение с помощью подкожных инъекций по 2 мл кондиционированной сыворотки крови. До настоящего времени еще не наблюдалось ни одного рецидива, соответственно, возобновления болей. Тормозящее боли действие кондиционированной композиции крови согласно изобретению неожиданным образом намного превосходит действие обычных анальгетиков.

Пример 8. Хроническое воспаление глаз у лошади.

Для лечения хронического воспаления глаз у лошади (лошадиного рецидивного увеита, ΕΚϋ), полученную согласно изобретению кондиционированную композицию крови инъецировали в глаз (под слизистую оболочку), соответственно закапывали в глаз (местно), 6 лошадям, из которых каждые 3 лошади лечились в двух различных ветеринарных лечебницах. Внутри периода времени после лечения вплоть до 10 месяцев не было обнаружено ни одного рецидива у этих лошадей.

Пример 9. Регенерация и уменьшение болей при раздражении сухожилий у лошади.

В другом применении кондиционированной композиции крови проводили лечение лошадей с хромотой, обусловленной массивным раздражением сухожильного влагалища, сопровождающимся образованием излияния в сухожильном влагалище, посредством инъекций 3 мл кондиционированной сыворотки крови согласно изобретению в сухожильное влагалище. Для этого сначала в первой стадии пунктировали истечение для уменьшения давления на ткань и удаления воспалительных веществ. После первой инъекции уменьшилась в течение одной недели как хромота, так и установленное на второй неделе количество излияния. После четырех недель, т. е. одну неделю после инъекции третьей и последней дозы в сухожильное влагалище, была установлена почти полная ремиссия как хромоты, так и излияния.

Такие же инъекции в так называемые повреждения жил (Соге Ьезюпз) и/или подкожные повреждения (8ирегйе1а1 1е8юпз), т.е. дегенеративные изменения внутри сухожильной ткани, приводили также к явной ремиссии этих клинических симптомов. В некоторых случаях наблюдалось заполнение дефекта снова коллагенными волокнами.

- 10 014435

Пример 10. Лечение ран у лошади.

14-летний хромающий на нескольких суставах мерин страдал уже несколько недель из-за персистирующей раны над левым передним копытом. Кондиционированную композицию крови согласно изобретению капали на эту рану (3 капли на поверхность около 1x3 см). Затем рану забинтовали. После заключительного осмотра (после трех нанесений с интервалом в одну неделю) по прошествии 4 недель было установлено, что открытая поверхность раны уменьшилась примерно на одну треть.

Claims

1. Способ получения кондиционированной композиции крови из крови, содержащий стадии:

(a) отбора крови из тела человека или животного;

(b) инкубации взятой крови в модифицированном сосуде с внутренней поверхностью при температуре от 10 до 40°С для кондиционирования крови, при этом индуцируются факторы, и при этом модифицированный сосуд имеет внутреннюю поверхность от 200 до 750 мм² на 1 мл инкубированной крови; и (c) получения в модифицированном сосуде кондиционированной композиции крови с индуцированными факторами.

2. Способ по п.1, причем возникновение доли интерлейкина-6 в композиции крови, составляющей по меньшей мере 30 пг на 1 мл, указывает успешную индукцию.

3. Способ по любому из пп.1 или 2, причем инкубацию выполняют в течение 2-36 ч.

4. Способ по любому из пп.1-3, причем парциальное давление кислорода (рО₂) во время инкубации составляет меньше 5 кПа.

5. Способ по любому из пп.1-4, причем в дополнительной стадии отделяют клеточные составляющие части из кондиционированной композиции крови и получают кондиционированную композицию сыворотки крови.

6. Способ по любому из пп.1-5, причем модифицированный сосуд имеет внутренние структуры с большой поверхностью, которые выбраны из шариков, волокон, муки, гранулята, частиц и их комбинаций.

7. Способ по п.6, при этом внутренние структуры содержат по меньшей мере один материал, выбранный из металла, оксида металла и пластмассы, стекла, корунда, кварца, полистирола, поливинилхлорида, полиэтилена, полипропилена или их комбинаций.

8. Способ по любому из пп.1-7, причем модифицированный сосуд имеет в своем внутреннем пространстве стеклянные шарики, которые имеют диаметр от 0,5 до 5 мм.

9. Способ по любому из пп.1-8, причем модифицированный сосуд имеет эластичные стенки сосуда для отбора крови, не содержащей воздуха, из тела человека или животного.

10. Способ по п.9, причем сосуд выбран из пакетов для крови для трансфузионной медицины.

11. Способ по п.10, причем сосуд выбран из систем одинарных, двойных, тройных или множественных пакетов.

12. Способ по любому из пп.9-11, причем эластичные стенки сосуда имеют небольшую проницаемость для кислорода.

13. Способ по любому из пп.1-12, причем композиция крови является аллогенной.

14. Способ по любому из пп.1-13, причем композиция крови является аутологичной.

15. Способ по любому из пп.1-14, причем композиция крови является гетерологичной.

16. Композиция крови, полученная с помощью способа по любому из пп.1-15, для лечения или профилактики заболевания тела человека или животного, содержащая 30-20000 пг/мл интерлейкина-6 (1Ь-6).

17. Композиция крови по п.16, содержащая по меньшей мере один дополнительный компонент, выбранный из антагониста рецептора интерлейкина-1 (1Ь-1К.а), интерлейкина-4 (1Ь-4), интерлейкина-13 (1Б-13), интерлейкина-1 (ΣΠ-1), интерлейкина-10 (1Б-10), фактора некроза опухоли (ΤΝΡ), инсулиноподобного фактора роста (1ОБ), трансформирующего фактора роста (ТСБ), тромбоцитарного фактора роста (РЭСБ).

фактора роста фибробластов (БОБ) и гепатоцитного фактора роста (НОБ).

18. Композиция крови по любому из пп.16 или 17, дополнительно содержащая по меньшей мере один компонент, выбранный из везикул, микровезикул, экзосом ίΚΝΑ или их смеси.

19. Композиция крови по любому из пп.16-18, причем доля антагониста рецептора интерлейкина-1 (1Ь-1К.а) составляет от 30 до 50000 пг/мл.

20. Композиция крови по любому из пп.16-19, причем доля интерлейкина-4 (!Ь-4) составляет от 2

- 11 014435 до 100 пг/мл.

21. Композиция крови по любому из пп.16-20, причем доля интерлейкина-13 (Ш-13) составляет от 2 до 100 пг/мл.

22. Композиция крови по любому из пп.16-21, причем доля интерлейкина-1 (Ш-1) составляет от 5 до 1000 пг/мл.

23. Композиция крови по любому из пп.16-22, причем доля интерлейкина-10 (Ш-10) составляет от 5 до 1000 пг/мл.

24. Композиция крови по любому из пп.16-23, причем доля фактора некроза опухоли (ΤΝΡ) составляет от 5 до 1000 пг/мл.

25. Композиция крови по любому из пп.16-24, причем доля инсулиноподобного фактора роста (ЮР) составляет от 100 до 150000 пг/мл.

26. Композиция крови по любому из пп.16-25, причем доля трансформирующего фактора роста (ТОР) составляет от 10 до 20000 пг/мл.

27. Композиция крови по любому из пп.16-26, причем доля тромбоцитарного фактора роста (ΡΌΟΕ) составляет от 100 до 100000 пг/мл.

28. Композиция крови по любому из пп.16-27, причем доля фактора роста фибробластов (РСР) составляет от 50 до 10000 пг/мл.

29. Композиция крови по любому из пп.16-28, причем доля гепатоцитного фактора роста (НОР) составляет от 10 до 10000 пг/мл.

30. Применение композиции крови по любому из пп.16-29 для лечения или профилактики заболевания тела человека или животного, выбранного из заболеваний мышц, заболеваний сухожильного аппарата, аллергий, непереносимости продуктов питания, непереносимости лечебных средств, заболеваний с участием иммунной системы, псориаза, хронических ран, таких как диабетические язвы.

31. Применение по п.30, причем заболевание мышц является повреждением мышц, операцией мышц, разрывом волокон мышц, дегенерацией мышц, дефектом мышц, атрофией мышц, разрывом мышц, дистрофией мышц, усталостью мышц или болью в мышцах.

32. Применение по любому из пп.30 или 31, причем лечение мышечного заболевания включает регенерацию мышечной ткани.

33. Применение композиции крови по любому из пп.16-29 для лечения или профилактики заболевания тела человека или животного, выбранного из нейродермита, воспалений или раздражений нервной системы, эндометриоза, хронического воспаления глаз у лошади.

34. Применение по любому из пп.30-33, причем композиции крови при необходимости вместе с фармацевтическими вспомогательными средствами инъецируют в тело или в пораженный орган.

35. Применение композиции крови по любому из пп.16-19 для получения лекарственного средства для лечения или профилактики одного из охарактеризованных в пп.30-33 заболеваний тела человека или животного.

36. Применение композиции крови по любому из пп.16-29 в качестве косметического средства.