EA009680B1 - Иммуномодулирующие гетероциклические соединения - Google Patents

Иммуномодулирующие гетероциклические соединения Download PDF

Info

Publication number
EA009680B1
EA009680B1 EA200501370A EA200501370A EA009680B1 EA 009680 B1 EA009680 B1 EA 009680B1 EA 200501370 A EA200501370 A EA 200501370A EA 200501370 A EA200501370 A EA 200501370A EA 009680 B1 EA009680 B1 EA 009680B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
mmol
added
vacuo
cinnolin
oxo
Prior art date
Application number
EA200501370A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200501370A1 (ru
Inventor
Йен Ричард Мэтьюс
Original Assignee
Эвидекс Лимитед
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GB0305876A external-priority patent/GB0305876D0/en
Priority claimed from GB0319429A external-priority patent/GB0319429D0/en
Application filed by Эвидекс Лимитед filed Critical Эвидекс Лимитед
Publication of EA200501370A1 publication Critical patent/EA200501370A1/ru
Publication of EA009680B1 publication Critical patent/EA009680B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P41/00—Drugs used in surgical methods, e.g. surgery adjuvants for preventing adhesion or for vitreum substitution
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Surgery (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)

Abstract

Соединение 4-(6-фтор-3-оксо-1,3-дигидропиразоло[4,3-с]циннолин-2-ил)-N-(2,2-дифторэтил)бензамид формулы (А)или его фармацевтически и/или ветеринарно приемлемая соль могут быть использованы для изготовления иммуноингибирующих средств.

Description

Настоящее изобретение относится к новым гетероциклическим соединениям, способам их получения, применению для получения лекарственных средств для клинического лечения медицинских состояний, на которые может благотворно воздействовать иммуномодуляция, например аутоиммунного заболевания, ревматоидного артрита, рассеянного склероза, диабета, астмы, трансплантации, системной красной волчанки и псориаза. Более конкретно, настоящее изобретение относится к новым гетероциклическим соединениям, которые являются антагонистами СЭ80, способными ингибировать взаимодействие между СЭ80 и СО28, пригодными для иммуноингибирования.
Уровень техники
Иммунная система обладает способностью контролировать гомеостаз между активацией и инактивацией лимфоцитов с помощью различных регуляторных механизмов в процессе и после иммунного ответа. Среди этих механизмов есть такие, которые специфически ингибируют и/или выключают иммунный ответ. Так, когда антиген представлен молекулами МНС к Т-клеточному рецептору, Т-клетки становятся соответствующим образом активированными только в присутствии дополнительных костимулирующих сигналов. В отсутствие этих дополнительных сигналов активации лимфоцитов нет и индуцируется либо состояние функциональной инактивации, называемое анергией, либо толерантность, или Тклетки специфически удаляются с помощью апоптоза.
Один такой костимулирующий сигнал включает взаимодействие СЭ80 на специализированных антиген- презентирующих клетках с СО28 на Т-клетках, и показано, что этот сигнал важен для полной Тклеточной активации. (Ъсп5с1ю\у с1 а1. (1996) Аппи. Рет. 1ттипо1, 14, 233- 258). Поэтому было бы желательно получить соединения, которые ингибируют взаимодействие СО80/СЭ28.
Раскрытие изобретения
Согласно настоящему изобретению предлагается соединение 4-(6-фтор-3-оксо-1,3дигидропиразоло[4,3-с]циннолин-2-ил)-Ы-(2,2-дифторэтил)бензамид формулы (А)
Р или его фармацевтически и/или ветеринарно приемлемая соль, которые могут быть использованы для изготовления иммуноингибирующих средств.
Соединение общей формулы (А) представляет собой антагонист СЭ80. Он ингибирует взаимодействие между СЭ80 и СЭ80 и, следовательно, активацию Т клеток, тем самым модулируя иммунный ответ.
Изобретение включает применение соединения формулы (А) или его приемлемой фармацевтически или приемлемой в ветеринарии соли для производства лекарственных препаратов для лечения состояний, на которые может благотворно воздействовать иммуномодуляция, и в частности, для иммуноингибирования.
Способ иммуномодуляции, и в частности, иммуноингибирования, у млекопитающих, включая людей, заключающийся во введении млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, эффективную иммуномодулирующую дозу лекарственных препаратов, содержащих соединения формулы (А) или его приемлемой фармацевтически или приемлемой в ветеринарии соли.
Состояния, на которые благотворно воздействует иммуномодуляция, включают острый рассеянный энцефаломиелит, недостаточность надпочечников, аллергический васкулит и гранулематоз, амилоидоз, анкилозирующий спондилоартрит, астму, аутоиммунную болезнь Аддисона, аутоиммунную алопецию, аутоиммунный хронический активный гепатит, аутоиммунную гемолитическую анемию, аутоиммунную ИеиПодепа, аутоиммунную тромбоцитопеническую пурпуру, болезнь Бехчета, церебеллярную дегенерацию, хронический активный гепатит, хроническую воспалительную демиелинизирующую полирадикулоневропатию, хроническую нейропатию с моноклональной гаммопатией, классический узелковый полиартериит, врождённую гиперплазию надпочечников, криопатии, герпетиформный дерматит, диабет, миастенический синдром Итон-Ламберта, энцефаломиелит, приобретенный буллёзный эпидермолиз, узелковую эритему, глютензависимую энтеропатию, синдром Гудпасчера, синдром Гийена-Барре, тиреоидит Хашимото, гипертиреоз, идиопатический гемохроматоз, идиопатический мембранозный гломерулонефрит, изолированный васкулит центральной нервной системы, болезнь Кавасаки, болезнь минимальных изменений (почек), смешанные васкулиты, смешанную соединительнотканную болезнь, мультифокальную моторную невропатию с блоком проведения импульсов, рассеянный склероз, тяжёлую псевдопаралитическую миастению, синдром пляшущих глаз, пемфигоид, пузырчатку, злокачественную
- 1 009680 анемию, полимиозит/дерматомиозит, послеинфекционные артритиды, первичный билиарный склероз, псориаз, реактивные артритиды, болезнь Рейтера, ретинопатию, ревматоидный артрит, склерозирующий холангид, синдром Сёгрена, синдром негнущегося человека, подострый тиреоидит, системную красную волчанку, системные некротизирующие васкулиты, системный склероз (склеродермию), арто-артериит (болезнь Такаясу), височный артериит, облитерирующий тромбоангиит, типа I и типа II аутоиммунный полигландулярный синдром, язвенный колит, увеит, гранулёматоз Вегенера.
Соли солеобразующих соединений по изобретению включают физиологически приемлемые соли присоединения кислоты ил основные соли. Пригодные соли присоединения кислоты получают из кислот, образующих нетоксические соли. Примеры включают соли: ацетат, аспартат, бензоат, безилат, бикарбонат/карбонат, бисульфат/сульфат, борат, камзилат, цитрат, эдизилат, эзилат, формиат, фумарат, глюцептат, глюконат, глюкуронат, гексафторфосфат, гибензат, гидрохлорид/хлорид, гидробромид/бромид, гидройодид/йодид, изетионат, лактат, малат, малеат, малонат, мезилат, метилсульфат, нафтилат, 2-напсилат, никотинат, нитрат, оротат, оксалат, пальмитат, памоат, фосфат/гидрофосфат/дигидрофосфат, сахарат, стеарат, сукцинат, тартрат, тозилат и трифторацетат, соответствующие основные соли получают из оснований, образующих нетоксические соли. Примеры включают соли алюминия, аргинина, бензатина, кальция, холина, диэтиламина, диоламина, глицина, лизина, магния, меглумина, оламина, калия, натрия, трометамина и цинка.
Методы
Предлагаемое соединение относится к соединениям общей формулы (I)
где К4 обозначает сложноэфирную или амидную группу;
радикал К4Х предпочтительно находится в положении 4 фенильного кольца;
X может обозначать, например, связь или -СН2- или -СН2СН2- радикал;
К3 может обозначать, например, Н, Т, С1, метил, метокси или метилендиокси;
Κι может обозначать, например, Н, Т, С1, метил, метокси или метилендиокси.
В данном изобретении К3 обозначает фтор, в положении 6 циклической системы 3-оксо-1,3дигидро-2Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-2-ила.
К4 обозначает кислотную карбоксильную группу (-СООН) или сложноэфирную группу (эфир данной кислоты), или С(=О)ХК6К7, -ЫК7С(=О)ОК6 или -ΝΚ-ί.’(=ϋ)ΘΚ6. все по определению выше.
Когда К4 обозначает сложноэфирную группу, примеры включают сложноэфирные группы -СООК, где Κ обозначает метил, этил, н- или изопропил, н-, вт- или трет- бутил, или бензил.
К6, в тех случаях, когда он присутствует, обозначает Н или радикал формулы -(А1к)т-О, где т, А1к и О имеют значение по определению выше. Если т обозначает 1, А1к может обозначать, например, линейный или разветвлённый С1-С6 алкиленовый радикал, такой как -СН2-, -СН2СН2-, -СН2СН2СН2- и -СН2СН(СН3)СН2. А1к может также обозначать, например, двухвалентный радикал циклопропилен, циклопентилен или циклогексилен. Радикал А1к, необязательно, может быть замещённым, например иметь заместители ОН, оксо, СТ3, метокси или этокси. Радикал А1к, необязательно, может содержать гетероатом, например, в виде простой эфирной, тиоэфирной или аминосвязи.
Группа О может, например, обозначать водород; -ΝΚ9Κ10, где К9 и К10 могут быть одинаковыми или различными и выбираются из водорода, метила, этила, н- или изопропила или трет- бутила; сложноэфирную группу, например метиловый, этиловый или бензиловый эфир; или необязательно замещённую арильную, арилокси, циклоалкильную, циклоалкенильную или гетероциклическую группу, например, фенильную, фенокси, циклопентильную, циклогексильную, фурильную, тиенильную, хинуклидильную, пиперидильную или пиперазинильную группу.
К7, в тех случаях, когда он присутствует, обозначает Н или С1-С6 алкил, например метил, этил, нили изопропил, н-, вт- или трет- бутил; или К6 и К7, вместе с атомом или с атомами, с которыми они связаны, образуют моноциклический гетероцикл, содержащий 5, 6 или 7 атомов в цикле.
В настоящем изобретении К4 обозначает ί.’(=ϋ)ΝΚ6Κ-.
Соединения в которых К4 представляет собой амидную группу -С(=О)МК6К7, можно получать по реакции соответствующего амина ΒΝΚ6Κ- с соединением формулы (II) с амидированием кислотной карбоксильной группы:
- 2 009680
символы К.1 означает Р, К3 отсутствует, X обозначает связь, Кб и К7 имеют значение по определению, данному выше, в связи с формулой (Ι).
Соединения (ΙΙ) (т.е. соединения (Ι), в которых К4 означает кислотную карбоксильную группу) можно получать по реакции соединения формулы (ΙΙΙ) с гидразином формулы (IV)
В результате этой реакции может получиться смесь изомеров положения (ΙΙΑ) и (ΙΙΒ)
Соединения (Ι), в которых К4 обозначает сложноэфирную или амидную группу, можно также получать из интермедиата (ΙΙΙ) по реакции с соответствующим гидразином (ΙΥΑ)
где К4 обозначает сложноэфирную или амидную группу. В результате реакции может получиться смесь сложноэфирных или амидных аналогов карбоновых кислот (ΙΙΑ) и (ΙΙΒ), из которой можно выделить нужный изомер сложного эфира или амида. Или же, карбоновую кислоту (ΙΙ) можно просто этерифицировать или амидировать.
Соединение по изобретению относится к подгруппе соединений общей формулы (!С)
где X и К4 имеют значение по определению выше. В этой подгруппе радикал К4Х- может находиться в положении 4 фенильного ядра. Эта подгруппа включает, в частности, соединения, в которых X обозначает связь, а К4 обозначает -С(=О)ИК.6К7, где К6 и К7 имеют значение по определению выше. Например, в таких соединениях Кб может обозначать хинуклидил, а К7 может обозначать водород.
К6 и К7 имеют значение по определению выше. Например, в таких соединениях К6 может обозначать хинуклидил, а К7 может обозначать водород.
Соединением по изобретению является 4-(6-фтор-3-оксо-1,3-дигидропиразоло[4,3-с]циннолин-2ил)-Ы-(2,2-дифторэтил)бензамид формулы (А)
- 3 009680
или его применимые в фармацевтике или в ветеринарии соль.
Как указывалось выше, изобретение включает применение соединения формулы (А) и его применимых в фармацевтике или в ветеринарии солей для изготовления иммуноингибирующих средств. Ясно, что для таких средств конкретный уровень дозы для каждого конкретного пациента будет зависеть от ряда факторов, включая активность конкретного применяемого соединения, возраст, вес тела, общее состояние здоровья, пол, питание, время введения, способ введения, скорость экскреции, комбинацию лекарственных препаратов и причину и тяжесть конкретного заболевания, подлежащего лечению. Оптимальные уровни доз и частота приёма доз определяется клиническими испытаниями.
Иммуноингибирующие средства для перорального применения могут быть в виде таблеток, капсул, порошков, гранул, лепёшек, жидких или гелеобразных препаратов, таких как растворы или суспензии для перорального или местного применения или стерильные растворы или суспензии для парентерального применения. Таблетки и капсулы для перорального применения могут быть в виде выпускаемой стандартной дозы и могут содержать обычные эксципиенты, такие как связующие, например сироп, аравийская камедь, желатин, сорбит, смола трагаканта или поливинилпирролидон; наполнители, например лактозу, сахар, маисовый крахмал, фосфат кальция, сорбит или глицин; смазку для таблетирования, например стеарат магния, тальк, полиэтиленгликоль или оксид кремния; вещества, способствующие измельчению, например картофельный крахмал, или приемлемые поверхностно-активные вещества, такие как лаурилсульфат натрия. Таблетки могут быть покрыты оболочкой в соответствии с методами, хорошо известными в обычной фармацевтической практике. Оральные жидкие препараты могут быть, например, в форме водных или масляных суспензий, растворов, эмульсий, сиропов или эликсиров, или могут выпускаться в сухом виде (в виде твёрдого продукта), который перед употреблением восстанавливается в присутствии воды или другого подходящего носителя. Такие жидкие препараты могут содержать обычные добавки, такие как суспендирующие агенты, например сорбит, сироп, метилцеллюлозу, сироп глюкозы, желатин, гидрированные пищевые жиры; эмульгаторы, например лецитин, сорбитан моноолеат или аравийская камедь; неводные носители (которые могут включать пищевые масла), например миндальное масло, фракционированное кокосовое масло, маслообразные эфиры, такие как глицерин, пропиленгликоль или этиловый спирт; консерванты, например метил- или пропиловый эфир пгидроксибензойной кислоты или сорбиновая кислота, и при желании, обычные добавки, придающие вкус и запах, или красители.
Для местного применения на коже лекарственный препарат может быть приготовлен в виде крема, лосьона или мази. Составы крема или мази, которые можно использовать для лекарственного препарата, являются обычными составами, хорошо известными в технике, например, описанными в стандартных учебниках по фармации, таких как ВтйШ Р1аттасорое1а.
Для местного применения в офтальмологии лекарственный препарат можно приготовить в виде раствора или суспензии в подходящем стерильном водном или неводном носителе. Могут также быть включены добавки, например, буферы, такие как метабисульфит натрия или динатрия эдеат; консерванты, включая бактерицидные и фунгицидные агенты, такие как фенил-ртуть ацетат или нитрат, бензалкония хлорид или хлоргексидин, и загустители, такие как гипромеллоза.
Активный ингредиент можно вводить также парентерально в стерильной среде. В зависимости от применяемого носителя и используемой концентрации лекарственный препарат может быть в носителе в суспендированном или растворённом виде. Предпочтительно, адъюванты, такие как местные анестетики, консерванты и буферизующие агенты, могут быть растворены в носителе.
В описании могут быть использованы следующие сокращения:
ДМФА Диметилформамид
ДМАА Диметилацетамид
ДМСО Диметилсульфоксид
НВТи Гексафторфосфат О-бензотриазол-1-ил-Ы,Х,Х',Х'-тетраметилурония
ВЭЖХ Высокоэффективная жидкостная хроматография
ЖХ-МС (ЬСМ8) Жидкостная хроматография-масс-спектрометрия ЯМР Спектроскопия ядерного магнитного резонанса
- 4 009680
Пример 1.
Стадия 1. Получение (фенилгидразон)малоновой кислоты:
Моногидрат мезоксалата натрия (5,00 г, 27,8 ммоля) растворяют в 1М соляной кислоте (50 мл), получают бесцветный мутный раствор. К этой смеси при перемешивании при комнатной температуре по каплям прибавляют фенилгидразин (3,00 г, 2,72 мл, 27,8 ммоля). Образуется жёлтый осадок, через 90 мин его отфильтровывают и промывают водой (50 мл). Осадок растирают со смесью этилацетат/гексан [1:1], отфильтровывают и сушат в вакууме. Титульное соединение выделяют в виде жёлтого порошка (4.74 г, 22,7 ммоля, 82%). ЬСМ8: т/ζ 207 [М-Н]+.
Или же продукт можно экстрагировать из водной фазы этилацетатом (2x250 мл), органическую фазу сушить сульфатом магния, отфильтровать и растворитель отогнать в вакууме.
Стадия 2. Получение (фенилгидразон)малоноилдихлорида (дихлорангидрида (фенилгидразон)малоновой кислоты)
(Фенилгидразон)малоновую кислоту (1,00 г, 4,80 ммоля) смешивают в атмосфере инертного газа с сухим хлороформом (15 мл), получают жёлтую суспензию. Смесь перемешивают при комнатной температуре и порциями прибавляют пятихлористый фосфор (2,19 г, 10,5 ммоля). Реакционную смесь кипятят в течение 1,5 ч, получают зелёный раствор. Смесь охлаждают до комнатной температуры и прибавляют гексан (15 мл). Образуется зелёный осадок, его отфильтровывают и сушат в вакууме. Титульное соединение выделяют в виде порошка зелёного цвета (645 мг, 2,63 ммоля, 53%).
Стадия 3. Получение метилового эфира 4-гидроксициннолин-3-карбоновой кислоты
Дихлорангидрид (фенилгидразон)малоновой кислоты (2,45 г, 0,01 ммоля) в инертной атмосфере смешивают с 1,2-дихлорэтаном (15 мл), получают жёлтую суспензию. Прибавляют по каплям четырёххлористый титан (1,89 г, 1,09 мл), образуется коричневый раствор. Смесь кипятят в течение ночи и и прибавляют метанол (15 мл). Продолжают перемешивание ещё в течение 30 мин и летучие отгоняют в вакууме. Прибавляют воду (100 мл) и полученную суспензию экстрагируют н-бутанолом (2x50 мл). Объединённые органические вытяжки промывают водой (2x20 мл) и упаривают в вакууме. Титульное соединение выделяют в виде твёрдого вещества зелёного цвета (1,04 г, 5,10 ммоля, 51%). ЬСМ8: т/ζ 205 [М+Н]+.
Стадия 4. Получение метилового эфира 4-хлорциннолин-3-карбоновой кислоты
К метиловому эфиру 4-гидроксициннолин-3-карбоновой кислоты (0,50 г, 2,45 ммоля) по каплям в атмосфере инертного газа прибавляют хлористый тионил (8,15 г, 5 мл). Смесь кипятят 1,5 ч, охлаждают до комнатной температуры и избыток хлористого тионила отгоняют в вакууме. К остатку прибавляют толуол (5 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Осадок отфильтровывают и сушат в вакууме. Титульное соединение выделяют в виде твёрдого вещества бурого (коричневого) цвета (248 мг, 1,11 ммоля, 45%). ЬСМ8: т/ζ 223 [М+Н]+.
Стадия 5. Получение 4-(3-оксо-1,3-дигидро-2Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-2-ил)бензойной кислоты
- 5 009680
4-Гидроксибензойную кислоту (68,4 мг, 0,45 ммоля) при комнатной температуре смешивают с этанолом (5 мл), получают суспензию кремового цвета. Прибавляют метиловый эфир 4-хлорциннолин-3карбоновой кислоты (100 мг, 0.45 ммоля) и смесь нагревают при 45-50°С в течение 1 ч. Охлаждают до комнатной температуры и растворитель отгоняют в вакууме. К остатку прибавляют этилацетата (10 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Осадок отфильтровывают и сушат в вакууме. Титульное соединение получают в виде коричневого порошка (120 мг, 0,39 ммоля, 86%). ЬСМ8: т/ζ 307 [М+Н]+.
Ή ЯМР [ДМСО-бб]: δ 7,69-7,77 (м, 1НарШ); 7,81-7,90 (м, 2НарШ); 8,05 (д, 1 = 8,85 Гц, 2НарШ); 8,20 (д, 1 = 7,92 Гц, 1Нарил); 8,33 (д, 1 = 8,85 Гц, 2НарШ); 14,64 (с, ΝΗ).
Или же реакцию можно проводить при комнатной температуре. В этом случае для проведения реакции может потребоваться более продолжительное время, 2-3 ч.
Пример 2. Получение №[(диметиламино)пропил]-4-(3-оксо-1,3-дигидро-2Н-пиразоло[4,3-с]цин-
4-(3-Оксо-1,3-дигидро-2Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-2-ил)бензойную кислоту (25 мг, 0,08 ммоля) перемешивают в ДМФА (1 мл). Прибавляют диизопропилэтиламин (8.2 мг, 10,0 мкл, 0,09 ммоля), а затем НВТи (30,3 мг, 0,08 ммоля). Перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Продукт очищают препаративной ВЭЖХ. Титульное соединение выделяют в виде твёрдого вещества красного цвета (12,6 мг, 0,032 ммоля, 40%). ЬСМ8: т/ζ 391 [М+Н]+.
Пример 3. Получение №бензил-4-(3-оксо-1,3-дигидро-2Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-2-ил)бензамида
4-(3-Оксо-1,3-дигидро-2Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-2-ил)бензойную кислоту (52 мг, 0,17 ммоля) смешивают с ДМФА (2 мл). Прибавляют диизопропилэтиламин (22 мг, 29 мкл, 0,17 ммоля) и бензиламин (18,2 мг, 18,6 мкл, 0,17 ммоля), а затем НВТИ (64,5 мг, 0,17 ммоля). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 ч. Продукт очищают препаративной ВЭЖХ. Титульное соединение выделяют в виде твёрдого вещества красного цвета (6,6 мг, 0,02 ммоля, 10%). ЬСМ8: т/ζ 396 [М+Н]+.
Пример 4.
Стадия 1. Получение 4-(3-оксо-1,3-дигидро-2Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-2-ил)бензоилхлорида
К 4-(3-оксо-1,3-дигидро-2Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-2-ил)бензойной кислоте (2,36 г, 7,70 ммоля)
- 6 009680 прибавляют хлористый тионил (90 мл). Смесь кипятят в течение 2 ч под азотом. Получают тёмнокрасный раствор, охлаждают до комнатной температуры и избыток хлористого тионила отгоняют в вакууме. К остатку прибавляют толуол (30 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре под азотом до прекращения выпадения осадка. Осадок отфильтровывают и промывают толуолом (2x30 мл). Титульное соединение выделяют в виде твёрдого вещества красного цвета (2,20 г, 6,77 ммоля, 88%). ЬСМ8: т/ζ 321 [М+Н]+ (метиловый эфир, полученный в результате того, что образец готовили в метаноле).
Стадия 2. Получение Ы-[(циклогексиламино)пропил]-4-(3-оксо-1,3-дигидро-2Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-2-ил)бензамида
4-(3-Оксо-1,3-дигидро-2Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-2-ил)бензоилхлорид (97 мг, 0,30 ммоля) растворяют в сухом ДМАА (2 мл). Прибавляют диизопропилэтиламин (39 мг, 53 мкл, 0,60 ммоля), а затем Ы-циклогексил-1,3-пропандиамин (52 мг, 0,60 ммоля). Смесь перемешивают в течение 30 мин. Прибавляют воду, получают тёмно-красную суспензию. Экстрагируют н-бутанолом (2x20 мл). Объединённые органические вытяжки промывают водой и упаривают в вакууме до тех пор, пока не начнёт выпадать осадок. Прибавляют гексан (20 мл) и этилацетата (10 мл), осадок отфильтровывают и сушат в вакууме. Продукт выделяют в виде темно-красного порошка (82 мг, 0,18 ммоля, 62%). ЬСМ8: т/ζ 445 [М+Н]+.
Пример 5.
Стадия 1. Получение [(2-фторфенил)гидразон]малоновой кислоты
Моногидрат мезоксалата натрия (2,21 г, 12,3 ммоля) растворяют в 1М соляной кислоте (50 мл), получают бесцветный мутный раствор. К этой смеси при перемешивании при комнатной температуре порциями прибавляют 2-фторфенилгидразина гидрохлорид (2,00 г, 12,3 ммоля). Образуется жёлтый осадок, к смеси прибавляют воду (50 мл) и продолжают перемешивание в течение ночи. Прибавляют этилацетат (150 мл), интенсивно перемешивают до растворения осадка. Фазы разделяют и водный слой промывают этилацетатом (50 мл). Объединённые органические вытяжки сушат сульфатом магния, фильтруют и растворитель отгоняют в вакууме. Титульное соединение выделяют в виде жёлтого порошка (2,55 г, 11,7 ммоля, 92%). ЬСМ8: т/ζ 227 [М+Н]+.
Стадия 2. Получение дихлорангидрида [(2-фторфенил)гидразон]малоновой кислоты ([(2фторфенил)гидразон] малоноилдихлорида):
(2-Фторфенилгидразон)малоновую кислоту (1,33 г, 5,88 ммоля) смешивают в атмосфере инертного газа с сухим хлороформом (20 мл), получают жёлтую суспензию. Смесь перемешивают при комнатной температуре и порциями прибавляют пятихлористый фосфор (2,69 г, 12,9 ммоля). Реакционную смесь кипятят в течение 2 ч, получают тёмно-жёлтый раствор. Смесь охлаждают до комнатной температуры и упаривают в вакууме, пока не начнёт выпадать осадок. Осадок отфильтровывают, промывают гексаном (30 мл) и сушат в вакууме. Титульное соединение выделяют в виде порошка жёлтого цвета (760 мг, 2,89 ммоля, 49%).
Стадия 3. Получение метилового эфира 8-фтор-4-гидроксициннолин-3-карбоновой кислоты:
Дихлорангидрид (2-фторфенилгидразон)малоновой кислоты (19,4 г, 74 ммоля) в инертной атмосфере смешивают с 1,2-дихлорэтаном (100 мл), получают жёлтую суспензию. Прибавляют по каплям четырёххлористый титан (13.9 г, 8.08 мл, 74 ммоля), образуется коричневый раствор. Смесь кипятят в течение
- 7 009680 ночи. Прибавляют дополнительное количество четырёххлористого титана (13,9 г, 8,08 мл, 74 ммоля) и продолжают нагревать ещё в течение 24 ч. Реакционную смесь охлаждают до 0-5°С и по каплям прибавляют метанол (50 мл). Продолжают перемешивание при комнатной температуре ещё в течение 1 ч и летучие отгоняют в вакууме. Прибавляют воду (300 мл) и полученную суспензию экстрагируют этилацетатом (3x100 мл). Объединённые органические вытяжки сушат сульфатом магния, фильтруют и упаривают в вакууме. Получают твёрдое вещество жёлтого цвета (12 г, сырой продукт). ЬСМ8: т/ζ 223 [М+Н]+.
Стадия 4. Получение 4-(6-фтор-3-оксо-1,3-дигидро-2Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-2-ил)бензойной кислоты
Сырой эфир 8-фтор-4-гидроксициннолин-3-карбоновой кислоты из предыдущей стадии (1,00 г, 4,95 ммоля) растворяют в хлористом тиониле (50 мл). Раствор кипятят 2-3 ч до прекращения выделения газа. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и избыточный хлористый тионил отгоняют в вакууме. Сырой интермедиат сушат азеотропной перегонкой с толуолом (3x25 мл). Получают темнокоричневое твёрдое вещество, к которому прибавляют этанол (25 мл). Прибавляют 4-гидразинбензойную кислоту (640 мг, 4,21 ммоля) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Осадок отфильтровывают, суспендируют в 1М НС1 (100 мл), фильтруют, промывают гексаном (50 мл) и сушат в вакууме. Продукт выделяют в виде твёрдого вещества коричневого цвета (890 мг сырого продукта). ЬСМ8: т/ζ 325 [М+Н]+.
Пример 6.
Стадия 1. Получение хлорангидрида 4-(6-фтор-3-оксо-1,3-дигидро-2Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-2ил)бензойной кислоты
Сырую 4-(6-фтор-3-оксо-1,3-дигидро-2Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-2-ил)бензойную кислоту из предыдущей стадии (1,45 г) растворяют в хлористом тиониле (50 мл). Раствор 2 нагревают при 70°С 2-3 ч до прекращения выделения газа. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и избыточный хлористый тионил отгоняют в вакууме. Остаток сушат азеотропной перегонкой с толуолом (2x20 мл), получают твёрдое вещество. Осадок отфильтровывают, промывают толуолом и сушат в вакууме. Продукт выделяют в виде жёлтого порошка (670 мг, 1,95 ммоля). ЬСМ8: т/ζ 339 [М+Н]+ (метиловый эфир, полученный в результате приготовления образца в метаноле).
Стадия 2. Получение 4-(6-фтор-3-оксо-1,3-дигидро-2Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-2-ил)-Ы(пирролидин-1 -илбутил)бензамида
4-(6-Фтор-3-оксо-1,3-дигидро-2Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-2-ил)бензоилхлорид (100 мг, 0,29 ммоля) растворяют в сухом ДМАА (2 мл). Прибавляют диизопропилэтиламин (75 мг, 101 мкл, 0,58 ммоля), а затем 1-(4-аминобутил)пирролидин (41 мг). Перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Прибавляют воду (5 мл) и н-бутанол (5 мл). Фазы разделяют. Органическую фазу промывают водой (2x5 мл). Летучие отгоняют в вакууме. Продукт выделяют в виде порошка коричневого цвета (50 мг, 0,11
- 8 009680 ммоля, 37%). ЬСМ8: т/ζ 463 [М+Н]+.
Пример 7. Получение 4-(6-фтор-3-оксо-1,3-дигидро-2Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-2-ил)-М-(1,2,2,6,6пентаметилпиперидин-4-ил)бензамида
4-(6-Фтор-3-оксо-1,3-дигидро-2Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-2-ил)бензоилхлорид (100 мг, 0,29 ммоля) растворяют в сухом ДМАА (2 мл). Прибавляют диизопропилэтиламин (75 мг, 101 мкл, 0,58 ммоля), а затем 4-амино-1,2,2,6,6-пентаметилпиперидин (49 мг, 0,29 ммоля). Перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Прибавляют воду (5 мл) и н-бутанол (5 мл). Фазы разделяют. Органическую фазу промывают водой (2x5 мл) и раствор упаривают в вакууме. Титульное соединение выделяют в виде твёрдого вещества темно-красного цвета (50 мг, 0,105 ммоля, 36%). ЬСМ8: т/ζ 477 [М+Н]+.
Пример 8.
Стадия 1. Получение 2-(4-нитрофенил)-1,2-дигидро-3Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-3-она
К метиловому эфиру 4-гидроксидиннолин-3-карбоновой кислоты (10,0 г, 49 ммолей) в атмосфере инертного газа по каплям прибавляют хлористый тионил (326 г, 200 мл). Смесь кипятят 2,5 ч, охлаждают до комнатной температуры и избыток хлористого тионила отгоняют в вакууме. К остатку прибавляют толуол (100 мл) и отгоняют в вакууме. Эту процедуру повторяют, добавляя и отгоняя ещё 100 мл толуола.. Получают коричневый полужидкий остаток, его растворяют в метаноле (200 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Нагревают при 40-45°С в течение 1 ч и охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, растирают с этанолом (100 мл) и сушат в вакууме. Титульное соединение выделяют в виде твёрдого вещества бурого (коричневого) цвета (8,42 г, 27,4 ммоля, 70%). ЬСМ8: т/ζ 308 [М+Н]+.
Стадия 2. Получение 2-(4-аминофенил)-1,2-дигидро-3Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-3-она
2-(4-Нитрофенил)-1,2-дигидро-3Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-3-он (11,4 г, 37,2 ммоля) суспендируют в смеси этанола (100 мл) и воды (100 мл). Добавляют порошок железа (11,1 г, 200 ммолей) и хлористый алюминий (5,34 г, 100 ммолей). Смесь нагревают при 80°С в течение ночи, охлаждают до комнатной температуры и подщелачивают до рН 9-10, добавляя карбонат калия. Осадок удаляют фильтрованием через слой целита (Се1йе®). Фильтрат экстрагируют н-бутанолом (2x200 мл). Объединённые органические вытяжки упаривают в вакууме, получают твёрдый остаток красного цвета. Растирают с метанолом (100 мл), отфильтровывают и сушат в вакууме. Титульное соединение получают в виде тёмно-красного порошка (5,58 г, 20,1 ммоля, 57%). ЬСМ8: т/ζ 278 [М+Н]+.
Стадия 3. Получение Ы-[3-(диметиламино)пропил]-М-[4-(3-оксо)-1,3-дигидро-2Н-пиразоло[4,3с]циннолин-2-ил)фенилмочевины
- 9 009680
2-(4-Аминофенил)-1,2-дигидро-3Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-3-он (44 мг, 6 ммоля) суспендируют в толуоле (0,5 мл) в атмосфере азота при 0-5°С. Прибавляют ДМАА (0,5 мл), а затем Ν,Ν'карбонилдиимидазол (26 мг, 0,16 ммоля). Смесь перемешивают в течение 1 ч при 0-5°С, а затем смешивают с раствором 3-диметиламинопропиламина (18 мг, 0,18 ммоля) в толуоле (0,5 мл). Перемешивание продолжают в течение 1 ч и продукт очищают препаративной ВЭЖХ. Титульное соединение выделяют в виде порошка тёмно-красного цвета (2,6 мг, 6 мкмолей, 4%). ЕСМ8:т/х406|М+Н|'.
Пример 9. Получение этилового эфира 4-(3-оксо-1,3-дигидро-2Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-2ил)бензойной кислоты
Титульное соединение получают по методике, описанной в примере 1, стадия 5, но вместо 4гидразинбензойной кислоты берут её этиловый эфир. М8: МН+ = 335,2
Результаты Анализ биомолекулярных взаимодействий В1Асоге
Биотинилированная человеческая молекула СЭ80 (НСЭ80-ВТ) представляет собой рекомбинантную растворимую форму мебраносвязанной рецепторной молекулы (СЭ80). которая связывается с СЭ28 для инициации Т-клеточной активации. Взаимодействие между ΟΌ80 и СЭ28 интенсивно исследовалось (СоШи8 с1 а1, 2002). Биотинилированная человеческая молекула НЬА-А2-1ах представляет собой рекомбинантную растворимую форму мембраносвязанной рецепторной молекулы, которую используют в данном примере в качестве контрольного белка, при этом не предполагается, что она реагирует с соедине ниями.
Система В1Асоге 851™ используется для скрининга соединений из вышеприведённых примеров 14. Сенсорный чип СМ5 серии 8 помещают на В1Асоге 851™. Стрептавидин присоединяют по карбоксиметильной группе на поверхности обычной реакцией присоединения аминов. Поверхность чипа активируют с помощью 0,2 М ЕЭС/0,05 М ΝΠ8 с последующим связыванием стрептавидина (0,25 мг/мл в 10 мМ ацетата натрия рН 5,0) и насыщением незанятых сайтов с помощью 1М этилендиамина.
Сенсорный чип В1Асоге 851 имеет два раздельных сенсорных участка для иммобилизации белков. 11СО80-ВТ иммобилизуют на покрытой стрептавидином поверхности одного сенсорного участка до тех пор, пока не наблюдается ответ около 3000 КН. Белок для контроля неспецифического связывания соединения иммобилизуют на втором сенсорном участке. Контрольный белок, применяемый в этих экспериментах, представляет собой биотинилированную растворимую форму человеческого НЬА белка.
Ряды разведения соединений (1000-0,05 нМ) готовят в рабочем буфере (10 нМ, рН 7,4, 140 мМ №С1, 0,005 Р20; 5% ДМСО).
В1Асоге 851™ пропускают при скорости потока 30 мкл/мин, используя рабочий буфер. Вводят (инъецируют) растворы соединений и стандарта ДМСО для корректировки данных с учётом влияния растворителя. Данные записываются автоматически и их анализируют с помощью программного обеспечения В1Асоге 851 Еуа1иа1юи.
Взаимодействие между СВ80 и эндогенным белковым лигандом (ί.Ό28) является высокоспецифическим, но сравнительно слабым, с Кс 4750 нМ и скоростью выключения (оГГ-га1е) выше 0,2 с-1. В случае соединений из примеров 2, 3, 4, 6, 7 наблюдается более высокая аффинность к и более продолжительное время пребывания на СЭ80, чем на СЭ28, при этом значения Кс составляют менее 100 нМ и скорости выключения (оГГ-га1е) 2х10-2, это указывает, что циннолины способны эффективно конкурировать с эндогенным лигандом. Взаимодействие циннолинов с контрольным белком не обнаруживается.
- 10 009680
Ссылки
СоШп8 Α.ν. е1 а1. (2002) ΙιηιηιιηίΙν 17, 201-210, ТНе шкегаскюп ргорегбек ок со811тц1акогу то1еси1е§ геуЩкеб.
Ингибирование продуцирования интерлейкина-2 (1Ь-2) человеческими Т клетками Лигкак Метод
Человеческие клетки Кар помещают (диспенсер) с концентрацией 2х105 клеток в лунке в среде КРМ1-1640, дополненной 10% фетальной телячьей сыворотки, 1% пенициллина/стрептомицина, 1% глутамина (среда КДРМ1) в 96-луночном И-образном (круглодонном) микротитрационном планшете. Исследуемые соединения (раствор в 100% ДМСО) разводят в восемь раз до нужной конечной концентрации в среде КРМ1 и добавляют до требуемой конечной концентрации до общего объёма 200 мкл в лунке. После инкубации в течение 20 мин при 37°С добавляют Т клетки 1шкак в концентрации 2х105 клеток/лунка. К культурам прибавляют моноклональное антитело к СЭ3 (ИСНТ1, Κ&Ό ЗуЧепъ) с конечной концентрацией 1 мкг/мл, и, где указано, добавляют также моноклональное антитело к СО28 (СО28.2, ΒΌРНапшпдеп) в концентрации 2,5 мкл/мл. Клетки культивируют при 37°С в течение 5 ч, после чего планшеты центрифугируют и супернатанты собирают для анализа ЕЫ8А 1Ь-2 с использованием парного набора 1Ь-2 ЕН-рап (ΌΙΑί'ΕΟΝΕ Кекеагсй, Вехапсоп. Ргапсе) в соответствии с инструкциями производителя.
Анализ методом гомогенной время-разрешённой флуоресценции
Вещества, полученные в описанных выше примерах, испытывают методом гомогенной времяразрешённой флуоресценции (НТКЕ) в бесклеточной среде с целью определения их активности в качестве ингибиторов взаимодействия СЭ80-СЭ28.
По методике анализа европий и аллофикоцианин (АРС) ассоциируются с СЭ28 и СВ80 опосредованно (через линкерные антитела) с образованием комплекса, который помещает европий и АРС в непосредственной близости, вызывая сигнал. Комплекс содержит следующие шесть белков: флуоресцентную метку 1, линкерное антитело 1, слитый белок СО28, слитый белок СЭ80, линкерное антитело 2 и флуоресцентную метку 2. В нижеприведённой таблице эти реагенты описаны более подробно.
Флуоресцентная метка 1 Антитело против кроличьего 1ц<3. меченое европием (1 мкг/мл)
Линкерное антитело 1 Кроличий специфичный к мышиному Рс фрагменту (3 мкг/мл)
Гибридный белок СО28 Гибридный белок СБ28- мышиный фрагмент Рс (0.48 мкг/мл)
Г ибридный белок СО80 Гибридный белок СЭ80- мышиный фрагмент РаЬ (С215) (1.9 мкг/мл)
Линкерное антитело 2 С«Мк- биотин: биотинилироанный 1е,С козы, специфичный к цепи каппа мышиного иммуноглобулина (2 мкг/мл)
Флуоресцентная метка 2 8А- АРС: аллофикоцианин меченый стрептавидином (8 мкг/мл)
При образовании комплекса европий и АРС сближаются (находятся в тесной близости) и возникает сигнал.
Неспецифическое взаимодействие измеряют, заменяя мышиный ЕаЬ фрагмент (С215) на гибридный белок СЭ80-мышиный ЕаЬ фрагмент (1,9 мкг/мл). Анализ проводят в чёрных 384-луночных планшетах при конечном объёме 30 мкл. Буфер для анализа: 50 мМ Тгк-НСк 150 мМ №-1С1 рН 7,8, содержащий 0,1% В8А (вес./об.), добавляемый непосредственно перед применением.
Соединения добавляют к вышеуказанным реагентам в серийных концентрациях в интервале 100 мкМ-1,7 нМ. Реакционную смесь инкубируют в течение 4 ч при комнатной температуре. Производят двойные измерения с помощью счётчика \Уа11ас Шског 1420 Ми1ШаЬе1 Соипкег.
Первое измерение: возбуждение 340 нм, эмиссия 665 нм, время запаздывания 50 мкс, время отображения 200 мкс.
Второе измерение: возбуждение 340 нм, эмиссия 615 нм, время запаздывания 50 мкс, время ото
- 11 009680 бражения 200 мкс. При подсчёте делаются поправки на флуоресцентный переход, гашение и флуоресцентный фон. ЕС50 активность испытуемых соединений регистрируются следующим образом:
ЕС50:* >10мкМ, ** = 1-10мкМ, *** <10мкМ.
Соединение из примеров 1-8 имеют следующую активность в описанном выше анализе НТКЕ: Пример 1*
Пример 2***
Пример 3****
Пример 4***
Пример 5*
Пример 6***
Пример 7***
Пример 8***
Пример 9**
Дополнительные примеры
Дополнительные примеры соединений по изобретению синтезируют методами, аналогичными методам, приведённым выше в примерах 1-8. Структура синтезированных соединений показана в следующей таблице вместе с их активностью в описанном выше анализе НТКЕ.
Таблица
О
ΗΝ-Ν
1 Пример | Νο X \ν к В' М8 МН+ Актив- ность
9а. н СН2СН2ОМе к 364.2 **
10. н н 446.2 ***
11. н - ΟΗ2ΟΗ2ΝΜθ2 н 377.1
12. н н 419.1 ***
13. н н 433.1
14. н н 442.0 ★
15. н - РН н 382.0 **
- 12 009680
16. Η Η 463.0 *
17. Η Η 448.8 **
18. Η Κ> Η 403.1 ПАЙ.
19. Η НЭ Η 410.0 *
20. Η Η 411.0
21. Η Η 441.2 **
22. Η ' ο Η 431.1 **
23. Η χ-ο Η 414.1 ***
24. Η Η 402.2
25 Η ι, — Η 418.4 *
26. Η Η 418.2 | ί ***
27. Η X/..- Η 418.2 *
28. Η ^°Ά ο , Η 417.9
29. Η он Η 378.0 ***
- 13 009680
30. ί Η .............0 Η Η 445.2 ***
31. Η / I ο Ул Ллх Η 479.0 **
32. Η ΛΟ Η 445.2 **★
33. Η Λ Η 376.2 **
34. Η XV Η 420.0 **
35. Η Η Η I 400.0 I *·*
36. Η 0 ' 1 ί Η 418.0 * *** ί
37. Η ^ΌΛ) Η 508.1
38. Η Η 444.2 *
39. Η ο Η 441.1
40. Η Η 467.2 ★*
41. Η Η 424.1 ! I
42. Η η γΛ 0 Η 496.9 *♦
I 43. Η ; Η !404 1 | **
- 14 009680
44. Η Η 480.0 *
45. Η ΟΕΙ ζ ΟΕί Η 421.8 **
46. Η - Εί Η 334.2
47. I Η Η 425.0 **♦
48. Η ΟΗ2ΟΗ2ΝΗΜβ Η 363.0 ***
49. Η ΟΗ2ΟΗ2ΝΗΕ1 Η 377.1 *·**
50. Η Η 394.2 **
51. Η СН2СН2ОН Η 350.2 | ***
52. Η СН2СН2СН2ШМе Η 377.2
53. Η СН2СН2СН2О|Рг Η 406.2 *«*
54. Η СН2СН2СН2СН2ЫН2 Η 377.2 ***
55. Η ΥΥ Η 390.2
56. Η Η 414.1 Ίι Ί:
57. Η О Η 388.2 ** I
58. Η - СНаСНгСНгГКпВиЬ Η 475.2
59. Η - циклододесид Η 472.2 *
60. Η - ΟΗ2ΟΗ2ΝΕί2 Η 405.1 ·***
61. Η 33 / Η 417.2 ***
62. Η о Η 402.2
63. Η - СН2СН2ОРп Η 426.0
64. Η —ОСЕ? Η 480.2 **
65. Η Η 475.2 **
I 66. Η 0 Ύ'ΌΚ 'ί Η ί 406.1 **
- 15 009680
67. Η СН2СН2СН20пВи Н 420.0 ***
68. Η Н 459.3
69. Η / ΕΪ Н 417.3 I **-«
70. Η Υ 1 (к-изомер) н 362.3 **-*
71. Η 1 (8- изомер) н 362.3
72. Η - СН(Е!)2 н 376.3
73. Η - СН2СН2СН2СН2РГ| н 438.4
74. Η - СО..Е1 н 492.2
' СО2Е1
75. Η χ> н 416.3 **
76. Η н 411.2 **
77. Η - СН2СН2ЗЕ1 н 394.2 ***
78. Η - Циклопропил н 346.2 *и
79. Η н 417.3
80. Η н 479.3
81. Η - н 447.2
82. Η СН2СН2СН(СНЦСН3 н 376.2
83. Η - I циклопентил н 374.2 **
84. Η - I . н-пропил н 348.2
85. Η - I СН2СН21Ви н 390.3
86. Η н 479,3
87. Η - I СН2 -циклогептил | к 416.4 * |
- 16 009680
88. Η Η 390.3 «*
89. Η * Ε< Η 376.3 ***
90. Η Η 480.2 ΐ*
91. Η Ле Η Η 477.1 ***
92. Η ** Η 432.4 ί *
93. Η 0 . Η 420.1 ί **
94. Η Η 465.3 ***
95. Η и Ν Η 411.4
96. Η γ-Λ Η 404.3 **
97. Η I Η 463.0 **
98. Η Η 465.4 **
99. Η , I он Η 434.4 **
100. Η Η 400.3 *
101. Η /—’Ν Ν—4 —У Χ--/ ο Η 518.4 *·»π»
- 17 009680
1 102. Η - / \ικ н 418.4 **
103. г Η ΧΖζ / н 445.4 ***
104. Η λ—ζ ο н 461.4 *-»г
105. Η γ-Ο н 438.4 *
106. Η \ - °— Μ ο— н I 394.3 **
107. Η н 376.3 А*
108. Η .—Λ Η н 391.4 *★*-
109. Η Η н 393.4 ·***
110. Η н 405.5 ***
111. I н снгснгснгон н 364.4 ★*
112. Η - СНгСНгСНгСНгСНгОН н 392.4
113. Η - н-гексмл н 390.4
114. Η н 489.4 ★ й-
115. Η Λ н 378.4 Ай
116. Η - 0 н 406.4 *
117. Η о I — н н 505.5 А*
- 18 009680
118. ’ Η ο Η 406.4 **
119. Η Η 378.4 **
120. Η γθ Η 416.4 **
121, Η - Η 442.4 I I ж* I
122. Η Η 442.4 *·
123. Η ΝΗ χχο Η 494.3
124. Η ΝΗ ' I I Η 405.3 *
125. Η ΝΗ -^Ό Η 432.3 ** :
126. Η ΝΗ Η 429.3 1
127. Η ΝΗ ' I Η 403.3 ί Α-
128, Η ΝΗ СН2СН2СН2ОЕ1 Η 407.2
129. Η ΝΗ /4 \/ Η 1 ) 461.3 |
130. Η ΝΗ ΟΗ2ΟΗ2ΝΜθ2 I Η 392.2 ИНГ*
131. Η ΝΗ аллил Η 361.3
132. Η ΝΗ Η 434.3
133. Η ΝΗ СНгСНгСНгОМе Η 393.2
134. Η ι ΝΗ .......-X’ Η Η 460.3
- 19 009680
135. Η ΝΗ Н 474.3
136. Η ΝΗ 0 Н 420.1 А
137. Η ΝΗ ОН Н 449.2 **
138. Η ΝΗ Н 377.3
: 139. Η ΝΗ ϊΡγ н 363.3 **
140. Η ΝΗ СН2СН2ОМе н 379.3 *-*
141. Η ΝΗ ΟΗ2ΟΗ2ΝΗιΡγ н 406.2 ААА
142. Η ΝΗ СН2СН2ИНМе н 378.2 ААА
143. Η ΝΗ ϋΗ2ΌΗ2ΝΗΕί н I 392.2 ***
144. Η ΝΗ СН2СН2ЫНпРг н 406.2
145. Η ΝΗ СН2СН2ОСН2СН2ОН н 409.2 ***
146. Η ΝΗ СН2СН2ОН н 365.2 ААА
147. Η ΝΗ СН2СН2РЬ н 425.3 А*
148. Η ΝΗ СНгСН2СН2НН|Рг н 420.2 ААА
149. Η ΝΗ СН2СН2СН2О|Рг н 421.2 А*
150. Η ΝΗ СН2СНгСН2ОН н 379.2 **А
151. Η ΝΗ СН2СН2СН2СН2СН2ОН н 407.2 **
152. Η ΝΗ >Χ/ΝΗ н 490.1 *
153. Η ΝΗ н 405.3 А А
154. Η ΝΗ О н 393.1 X*
155. Η ΝΗ , \' О н 470.3
156. Η ΝΗ О н 421.2
157. I Η ΝΗ о н 378.1 АА
- 20 009680
158. Η ΝΗ Ο ηΑ- Η 421.1 *♦
159. Η ΝΗ СН2СН2СН2ОС12Нг5 Η 547.3 I ***
160. Η ΝΗ СК2СН2СН2ОпВи Η 435.2 *
161. Η ΝΗ СНгСН2СНгЗМе Η 409.2 **
162, Η ΝΗ Εί Η 432.3 ***
163. Η ΝΗ 0 I Η Η 519.9 ★ ★
164. Η ΝΗ к СГ ΟΕί Η 461.2 *
165. Η ΝΗ ΑΓ Η 375.2 1 ** 1
166. Η ΝΗ ρ Η 405.2 **
167. Η ΝΗ χΧ Η 377.3
168. Η ΝΗ Η 462.4
169. Η ΝΗ Η 430.3
170. Η ΝΗ СНгСН2СНО Η 377.2 Λ-
171. Η ΝΗ Η 393.3 ***
172. Η ΝΗ X_ОМе Μ Η Η 494.3 Λ ★
173. ΝΗ Η 391.3 **
174. Η ΝΗ Η 393.2 *·*
175. Η ΝΗ χίο- ι Η 435.2
I 176. Η - I ΟΗ2ΌΗ2ΟΗ2ΝΕί2 Η 419.4 **·*·
- 21 009680
177. Η ΝΗ ηΒιι Η 377.4 X*
178. Η ΝΗ СН2СН2ЗМе Η 395.3 **
179. Η ΝΗ ^~Ο Η 448.4 *★*
180. Η ΝΗ ΟΙ Η 1 523.3 *
181. Η ΝΗ Η 419.4 *
182. Η ΝΗ ο 1 Η I ί 464.3 **
183. Η ΝΗ -ο Η 418.4 *Γ*
184. Η ΝΗ Η 426.3 **
185. Η ΝΗ Η 434.4
186. Η ΝΗ ЖО Η 460.4 1
187. Η ΝΗ СН(Е1)2 Η 391.4 **
188. Η ΝΗ СНгСНгСНгСНгРК Η 453.4 *
189. Η ΝΗ ΟγΟΕί Ο Η 507.5 :
190. Η ΝΗ Он 1 Η 419.4
191. Η ΝΗ , 1 Η 406.4 7?
192. Η ΝΗ 0 Η 435.4 ★
193. I Η ΝΗ Η 454.5 ***
- 22 009680
194. Η ΝΗ Ύο Η 431.5 *
195. Η ΝΗ А Η 405.4 ★*
196. Η ΝΗ Η 426.4 **
ι 197. Η ΝΗ Η 494.5 **
198. Η ΝΗ Η 405.4 **
199. Η ΝΗ Η ; 415.5 ★
200. Η ΝΗ СНзСНгЗСНгРН Η 471.4
201. Η ΝΗ Η 457.5 *
202. Η ΝΗ >1: Η 457.4 ★
203. Η ΝΗ Η 391.4 ·*
204. Η ΝΗ СНгЦиклогептил Η 431.5 ★
205. Η ΝΗ ο Η 435.4 *
206. Η ΝΗ СНгСНгН/пВиЬ Η 476.5 ***
207. Η ΝΗ Η 405.4 **
208. Η ΝΗ СН2СН2ОРп | Η 441.4 *★
209. Η ΝΗ ιι I н 2 1 433.4
- 23 009680
210. Η ΝΗ 1 Η 393.4 ***
211. Η ΝΗ Η 495.5 *
212. Η ΝΗ Ο- ο ь Η 509.4 1 I
213. Η ΝΗ . ΛΑ Η Η | 478.5 **
214. Η ΝΗ ~\2ν. Η 480.4 ***
215. Η ΝΗ Ο Η 435.4 *
216. Η ΝΗ 0 Η 449.4
217. Η ΝΗ Η 426.4 ★*
218. Η ΝΗ Η 419.5
219. Η ΝΗ Η 540.5 **
220. Η ΝΗ 0 1 Η 492.5 ★
221. Η ΝΗ η: Η 405.5 *
222. Η ΝΗ . Η ν-'- ν ' 0 Η 1 434.4 ***
223. и Η ΝΗ Η 1 449,4 ί ’*
- 24 009680
224. Η ΝΗ Η 522.5 ·*·**
225. Η ΝΗ ~“Ο, Η 471.4 ·*
226. Η ΝΗ Η 437.4 *
227. Η ΝΗ Η 576.4
228. Η ΝΗ Η 446.4 ***
229. Η ΝΗ ^-ο Η 432.4 ***
230. Η ΝΗ ^Ον Η 383.3 *
231. Η ΝΗ Η 429.4 ***
232. 6-Ε - СНгСНгСНгЫМег Η 409.4 ***
233. 6-Ε Η 449.4
234. 6-Ε χΧ Η 477.4 ***
235. 6-Ε Η Η 463.4 *»★
236. Η | - | ί 'Χ'——ΟΜ= МеО Η I 456.4 I : I I *
- 25 009680
237. Η * — ΝΜβ2 Η 439.4
238. Η Η 390.3 **
239. Η - циклобутил Η 360.4 Ιτ*
240. Η ОМе Η 426.4 ***
241. Η - н-6утил Η 362.4 **
242. Η ./-0 Η 386.4 ***
243. Η - ΪΡγ Η 348.4 ·***
244. Η Η 402.4 **
245. Η - ; н-гептил Η 404.4
246. Η - аллил Η 346.3 *-*-*
г 247. Η - СН2СН2СН2ОМе Η 378.4 **-*
248. Η Η 464.3 «
249. Η Η 464.3 *
250. Η \ Η 414.3
251. Η - н-пентил Η 376.4 *
252. Η ΡΟ Η 422.3 *
253. Η γ Η ί 442.3 *
254. Η Ε Η 508.2 *
255. Η Η 416.3 | *
- 26 009680
268. Η Η н 1 1 ΐ 449.4
269. Η - ΟΗ2ΟΗ2ΝΗπΡγ н 391.4 *-**
270. Η - СН2СН2Рп н 410.4 *
271. Η СНгСН2СН2СН2СН2СН2МН2 н 405.4 ***
272. Η - ''-θ н 414.4 *
273. I η - СНгСНгСН2ОС12Н2б н 532.6 *
274. ) Η - СН2СН2СН25СНз н 394.4
275. I Η 9 г0- о н 446.4 **
276. Η - СН(Е1)СН2ОСН2РИ н 468.4 **
277. Η я н 390.3 *·*
278. Η у- н 415.4
279. Η - СН2СН2МНпВи н 405.4 *-*-ж
280. Η - ΟΗ2ΟΗ2ΝΗΟΗ2ΟΗ2ΝΕ12 н 448.5 ***
281. Η - СН2СН2ЫНСН2Рп н 439.4 ***
282. Η ΝΗ Е( н 349.4 ***
283. Η ΝΗ н 457.4 * [
284. Η ΝΗ <Х1Р н 429.3 ★
285. Η ΝΗ ‘ н н 415.3
' 286. | ( Η ΝΗ Η I 455.3 « 1
- 27 009680
- 28 009680
300. Η ΝΗ Α”ΝΗ н 433.5
301. Η ΝΗ н 460.5
302. Η ΝΗ Η να·ν·° I _ ο н 486.4 *
303. Η ΝΗ ' ΟΕί н 476.4 ★
304. Η ΝΗ СН(СНз)СН2СН2Р11 н 453.4 *
305. Η ΝΗ н 433.5 «
306. Η ΝΗ СН2СН(ОМе)2 н 409.4 **<
307. Η ΝΗ СН2СН(ОЕ1)2 н 437.5 **
308. Η ΝΗ СН2СН(СНз)СН2СНз н 391.4 **
309. Η ΝΗ СН(СНз)СН2СН3 н 377.4
310. Η ΝΗ Ак н 432.4 ***
311. Η - СН2СНР2 н 370.4
312. Η - СН2 СН2СРз н 402.4 ж**
313. Η А н 440.5 **
314. Η А+ н 412.5 I ***
I 315. Η н 422.5 **
- 29 009680
1 316. Η я н 402.5
317. Η Яг н 416.5
318. Η н 442.5 ЛтЬ-й· I I
319. Η н 362.5 ★**
320. Η I - СН2Зг(СН3)э н 392.5 *
321. Η I - СН(СН3)СН2СН2СНз н 376.5
322. Η СН(СНз)СН2СНгСН2СНз н 390.5 ***
323. 6-Ρ . Л —\ N н 497.6 ·***
324. 6-Ρ ΝΗ СН2СН2М(СНз)2 н 410.5
325. 8-Ρ н 449.3 ***
326. 8-Ρ - ΟΗ2ΌΗ2Ν(Εί)2 н 423.3
327. 8-Ρ н 435.3
328. 8-Ρ Ля н 497.3 ϊτ**
329. 8-Ρ СНгСНгСНгИ/Вик н 493.4
330. 8-Ρ - ΟΗ2ΟΗ2ΟΗ2Ν(Εί)2 н 437,3
331. 8-Ρ н 435.5
332. 8-Ρ жэ н 463.3 *·**
333. 6-Ρ - СН2СН=СНСНз н 378.2
334. I 6-Ρ ί н I 525.3 ***
- 30 009680
335. 6-Е | - Н 479.3 *тг*
336. 6-Е Н 517.4 ***
337. 6-Е 4---ί РЬ н 511.3 ***
338. Н н 447.3 ***
339. Н .........С н 445.3
340. 6-Е н 378.2
341. 6-Е - СН2СН2ЫНпРг к 409.3 ***
342. 6-Е - ΟΗ2ΟΗ2Ν(Εί)2 н 423.3 •χΊϊΊγ
343. 6-Е н 435.3 ж**
344. 6-Е ΟΗ2ΟΗ2ΝΗηΒυ н 423.3
345. 6-Р СНгСНгСНгГХпВик н 493.4 *»*
346. 6-Е ΟΗ2ΟΗ2ΟΗ2Ν(Εί)2 н 437.3
347. 6-Е ΟΗ2ΟΗ2ΝΗΟΗ2Ρ1 н 457.3
348. б-Е СН2СН2СН2К1Н1Рг н 423.3 ***
349. 6-Е 43- н 421.3
350. 6-Е н 451.3 ***
351. 6-Е - СН2СН2СН2СН2Ь1Н2 н 395.3
352. 6-Е н 435.3
353. 6-Е н 433.3 -**-Й
354. 6-Е - СНгСН2СН2ОпВи ‘ Н 1 438.3 ЛНгя
355. | 6-Е - СН2СН2СН21МНМе | н 395.3
- 31 009680
356. 6-Е | - СНгСН214НМе ! Н 381.3 ***
357. 6-Е - ΟΗ2ΟΗ2ΝΗΕί н 395.3 *-**
358. 6-Е *ХО н 463.4 ***
359. 6-Е Н н 1 ί 481.3 ***
360. 6-Е н 462.2 1 *-* 1
361. 6-Е н 488.3 *ж·*
362. 6-Е ^ХХ н 442.3
363. 6-Е ^ХХс( н 462.2 *♦
364. 6-Е н 462.2
365. 6-Е н 506.2, 508.2 *
- 366. 6-Р н 1 442.3
367. 6-Е н 442.3 **
368. 6-Е н 506.2, 508.2 ί «А
- 32 009680
- 33 009680
382. 8-Е “ __ н Η 463.3 ***
383. 8-Е СН2СН2МНЕ1 Η 409.3 ***
384. 8-Е СНгСНгИНВи Η 423.3
385. 8-Е ΟΗ2ΟΗ2ΟΗ2ΝΗϊΡγ Η 423.3
386. 8-Е СН2СН2СН2СН2ОН Η 396.3 ***
387. 9-Е СНгСНгСНгГКМе^ Η 409.2 »**
388. 9-Е Η 449.2 ***
389. 9-Е н Η 463.3 ***
390. 9-Е \ -А—( ν— Η 477.3 *-** 5
391. 9-Е О Η 421.2 ***
392. 9-Е - ΟΗ2ΟΗ2ΟΗ2Ν(Εί)2 Η 437.2
393. 9-Г Η 435.2 **★
394. 9-Е Ύ Η 463.2
395. 9-Е - ΟΗ2ΟΗ2ΟΗ2ΝΗΪΡγ Η 423.2 ***
396, 9-Е - СН2СН2СН211НМе Η 395.2 Λτ*·*
397. 9-Е О Η 451.2 I ί
398. 9-Е | - СН2СН2СН2Ы(пВи)2 Η 493.3
399, 9-Е Η 1 ) ί 483.2 ***
400. 9-Е - 1Ви Η 380.2
401. 9-Е I ρ Η 433.2 ***
- 34 009680
| 402? 9-Е -ΟΌ 475.2 *★
403. 9-Е I ΖΕ 1 Н 463.3
404. 9-Р Н 437.2 ИНГ*
405. 9-Р αΟ~νη2 Н 421.2 ***
406. 8Ме - СНгСН2СН2Н1(Ме)2 Н 405.3
407. 8Ме Н - н 459.3 л-*·*
408. 8Ме -г/ N— н 473.4 ***
409. 8Ме н 445.3
410. 6-Р αΟ“νη2 н 421.3
411. 6-С1 - СН2СН2СН2М(Ме)г н 425.3 *·** - . ί
412. 6-С| н н 479.2 ***
413. 6-С! н 465.3
414. 6,8сНЕ ΟΗ2ΟΗ2ΟΗ2Ν(Μβ)2 н 427.3
415. I 6,8- ФР н н 481.3
- 35 009680
1 416. 6,8άίΡ Η 467.2 . ΤΤ*
417. 6-Ρ Н Η ***
418. 8- МеО СН2СН2СН2К1НМе Η 407.2 ***
419. 6-Ρ ^^0 I Η 481.2 **Α
420. 6-Ρ Η 437.2 ***
421. I 6-Ρ 475.2 **
422. 6-Ε - СНгСР2СЕ2СР3 Η 456.1
423. 6-Ε - СН2СН2СР3 Η 420.1 **-*
424. 6-Ρ χ> Η 378.1
425. 6-Ρ “Ю Η 392.2 + **
426. 6-Ρ СН2СНгР Η 370.1 ***
427. 8-Ρ \ -Λ-τζ Η 477.3 ***
428. 6,9άίΡ - СН2СН2СН2МНМе Η 413.2
429. 6,9άίΡ Η Η 481.3 ***
430. 6,9άΙΡ Η 467.2 г **♦
- 36 009680
431. 6,9сОЕ Тл Ν— Н 495.3 44·*
432. 6-Е - ОН2СН2СН2СН2М(Е0Ме Н 437.2 ***
433. 6-Е - СН2СН2СН2СН2М(Е!)2 н 451.3 ***
434. 6-Е н 1 465.2 I ***
435. 6-Е СН2СН2СН2СН2Ы(Ме)СН2СН=СН2 1 н 449.2 ***
436. 6-Е 1 н 491.4 *-**
437. 6-Е - СНгСНгСНгСНгЕ н 398.2 I ***
438. 6-Е .......-,о 1 н 471.2 **
439. 6-Е н 463.3 «**-
440. 6-Е —“г—\|Н н 407.2 **-*
441. 6-Е мн2 н 409.3 ***
442. 6-Е “ ί СНгСНгСНгИНпРг н 423.2 ***
443. 6-Е ^Г~( \ ΝΗ2 н 409.2 **-*
444. 6-Е -\^Лн н 421.1 4**
445. 6-Е - ΟΗ2ΟΗ2ΟΗ2ΝΗ2 1 н 381.2 ***
446. 3-0 ΟΗ2ΟΗ2ΟΗ2Ν(Μβ)2 | Н | 425.2
- 37 009680
447. 8-С Η 493.2 ***
448. 8-С! Η 479.3 ***
449. 8-С1 Η 465.2 *»-*
450. 6-Е - Εΐ Η 352.2 *·*-*
451. 6-Е Ж Η 463.3 *?**
452. 6-Е - Εΐ πΡγ 394.2 «*
453. 6-Е Η 435.2 Й·*·*
454. 6-Е .........../О Η 477.3 ***
455. 6-Е - СН21Ви Η 394.2
456. 6-Е Ж Η 503.3 ***
457. 6-Е Η 539.3
458. 6-Е Η Η 471.2
459. 6-Е - СН2СН2СН2СН2М(СНгСН=СН2)2 Η 475.3 ***
460. 6-Е Λ - 1 ? ! Η 493.3 ***
- 38 009680
1 461. 6-Е А 422.2 ***
462. 6-Е н 477.3 **-*
463. 6-Е А 406.2 I ***
464. 6-Е н 477.3
465. 6-Е -£г 406.2
466. 6-Е .............А н 519.2 ***
467. 6-Е - СН2СЕ2СЕ2Н н 438.1 ***
466. 6-Е н 491.3 ***
469, 6-Е ^А^/Х н 503.3 ***
470. 6-Е н 531.3 ***
471. 6-Е ^0Ν^τ-ρ н 481.2
472. 6-Е н 449.3 <ГЖ1{
473. 8-Е - СН2СГ2Н н 388.1 ·**·*
474. 6-Е - аллил аллил 404.2 **
475. 6-Е | - | СН2СН2СЕ=СЕ2 | Н 432.1 **
- 39 009680
476. 6-Ε Η I 507.3 ***
477. 6-Ε ,Д Η 491.3
478. 6-Ε Η 465.3 ***
479. 6-Ε Η Η 451.2 **★
480. 6-Ε Η 465.2
481. 6-Ε Η 465.2 ***
482. 6-Ε Η 363.1 **Γ*
483. 6-Ε Η 461.3 ***
484. 6-Ε ΧΖ/Ά-^,ρ Ε Η 515.3
485. 6-Ε Ε Η 416.2 • Μ I
486, 6-Ε , у--ΞΝ Η 377.1 **★
487. 6-Ε - С(СН2ОН)3 Η 428.2
488. 6-Ε •Χξ^'ΑΐΗ Η 393.1 ***
489. 6-Ε 421.2
- 40 009680
490. 6-Е -/Τ^ΝΗ 407.1 (Ыгй*
491. 6-Е - СНгСОИНг н 381.2 ААА
492. 6-Е - /---\ Р ' Р н 454.1 *А*
493. θ-ρ Х\-^^-р н 398.1 *А*
494. 6-Е о 420.2 А*
495. 6-Р СТЭ 446.2
496. 6-Г -00 446.2
497. 6-Е н 439.1 А*
498. 6-Р |Рг н ί I I 419.2 ААА ί
499. 6-Р н 421.2 ААА
500. 6,9б(Р - СН2СНР2 н 406.2 ААА
501. 6-Р О- н 422.2 АА*
502. I 6-Р н ί 396.2 ААА
- 41 009680
Примеры результатов испытаний вышеуказанных соединений в анализе ингибирования продуцирования интерлейкина-2 (1Ь-2) человеческими Т клетками 1игка1. описанном выше, приведены ниже:
- 42 009680
Νο Примера (см. Концентрация Таблицу) соединения (мкМ)
Процент ингибирования (относительно ДМСО = ; 0%) |
478 10 56.0
376 10 56.7
353 10 77.4
429 10 58.8
349 10 79.5
68 10 71.7
235 10 59.3
288 30 72
162 30 54.4
350 10 74.2
381 10 48.5
442 10 58.9
482 10 39.2
472 10 58.4
453 10 55.7
53 30 63.8
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Claims (2)

1. Соединение этил)бензамид формулы (А)
4-(6-фтор-3-оксо-1,3-дигидропиразоло [4,3-с]циннолин-2-ил)-Ы-(2,2-дифтор или его фармацевтически и/или ветеринарно приемлемая соль.
2. Применение соединения по п.1 для изготовления иммуноингибирующих средств.
EA200501370A 2003-03-14 2004-03-10 Иммуномодулирующие гетероциклические соединения EA009680B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB0305876A GB0305876D0 (en) 2003-03-14 2003-03-14 Immuno inhibitory heterocyclic compounds
GB0319429A GB0319429D0 (en) 2003-08-19 2003-08-19 Immuno Inhibitory Heterocyclic compounds
PCT/GB2004/001008 WO2004081011A1 (en) 2003-03-14 2004-03-10 Immunomodulating heterocyclic compounds

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200501370A1 EA200501370A1 (ru) 2006-08-25
EA009680B1 true EA009680B1 (ru) 2008-02-28

Family

ID=32992598

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200702435A EA014080B1 (ru) 2003-03-14 2004-03-10 Иммуномодулирующие гетероциклические соединения
EA200501370A EA009680B1 (ru) 2003-03-14 2004-03-10 Иммуномодулирующие гетероциклические соединения

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200702435A EA014080B1 (ru) 2003-03-14 2004-03-10 Иммуномодулирующие гетероциклические соединения

Country Status (20)

Country Link
US (3) US7276505B2 (ru)
EP (2) EP2284172A1 (ru)
JP (1) JP4892338B2 (ru)
KR (1) KR101133959B1 (ru)
AT (1) ATE489388T1 (ru)
BR (1) BRPI0408365B8 (ru)
CA (1) CA2519063C (ru)
DE (1) DE602004030225D1 (ru)
DK (1) DK1603917T3 (ru)
EA (2) EA014080B1 (ru)
EC (1) ECSP056104A (ru)
HK (1) HK1090921A1 (ru)
IL (1) IL170389A (ru)
MX (1) MXPA05009667A (ru)
NO (1) NO332136B1 (ru)
NZ (1) NZ541973A (ru)
PL (2) PL383655A1 (ru)
PT (1) PT1603917E (ru)
SI (1) SI1603917T1 (ru)
WO (1) WO2004081011A1 (ru)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2284172A1 (en) * 2003-03-14 2011-02-16 MediGene Ltd. Immunomodulating heterocyclic compounds
GB0325644D0 (en) * 2003-11-04 2003-12-10 Avidex Ltd Immuno ihibitory pyrazolone compounds
GB0411770D0 (en) * 2004-05-26 2004-06-30 Avidex Ltd Immuno inhibitory heterocyclic compouds
DK1776366T3 (da) * 2004-08-09 2009-02-16 Medigene Ltd Immunomodulerende oxopyrazolocinnoliner som CD80-inhibitorer
WO2007017289A2 (en) * 2005-08-10 2007-02-15 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Acyltryptophanols for fertility control
GB0603522D0 (en) * 2006-02-22 2006-04-05 Avidex Ltd Kinase inhibition
AU2007227681A1 (en) 2006-03-15 2007-09-27 Wyeth N-substituted-azacyclylamines as histamine-3 antagonists
CN101432261A (zh) 2006-05-19 2009-05-13 惠氏公司 作为组织胺-3拮抗剂的n-苯甲酰基-吡咯烷-3-基胺和n-苄基-吡咯烷-3-基胺
EP2047848A4 (en) * 2006-07-05 2010-06-09 Univ Tokyo METHOD FOR THE TREATMENT OF GENETIC DISEASES BASED ON A NONSENSE MUTATION
PE20081152A1 (es) 2006-10-06 2008-08-10 Wyeth Corp Azaciclilaminas n-sustituidas como antagonistas de histamina-3
AR067549A1 (es) 2007-07-16 2009-10-14 Wyeth Corp Compuesto de oxazol,tiazol e imidazol, composicion farmaceutica que lo comprende , proceso para la preparacion del compuesto , uso del compuesto y metodos para la inhibicion del receptor h3 y para el tratamiento de un trastorno cognitivo relacionado con o afectado por el receptor de histamina -3 (h3
EP2020404A1 (en) * 2007-08-01 2009-02-04 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Cyanomethyl substituted N-Acyl Tryptamines
MX2010003155A (es) 2007-10-04 2010-04-01 Hoffmann La Roche Derivados de ciclopropil aril amida y uso de los mismos.
GB201021104D0 (en) 2010-12-13 2011-01-26 Univ Leuven Kath Novel compounds for the treatment of neurodegenerative diseases
EP2676666A1 (en) 2012-06-20 2013-12-25 Eidgenössische Technische Hochschule Zürich (ETH) Compounds for use in diagnosis or therapy of vulnerable atherosclerotic plaques
EP2883883A1 (en) 2013-12-16 2015-06-17 Cardio3 Biosciences S.A. Therapeutic targets and agents useful in treating ischemia reperfusion injury
AU2015315177A1 (en) * 2014-09-10 2017-03-16 Epizyme, Inc. Substituted pyrrolidine carboxamide compounds
WO2018110669A1 (en) 2016-12-15 2018-06-21 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Activator of trek (twik related k+ channels) channels

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4591589A (en) * 1985-01-16 1986-05-27 Roussel Uclaf 2-aryl pyrazolo[4,3-c]cinnolin-3-ones

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB629412A (en) 1946-12-24 1949-09-20 Geigy Ag J R Manufacture of metallisable monoazo dyestuffs of the pyrazolone series
US3576637A (en) * 1967-04-20 1971-04-27 Konishiroku Photo Ind Lith-type of emulsion containing pyrozolone
JPS61161285A (ja) * 1984-12-28 1986-07-21 ルセル−ユクラフ ピラゾロ〔４，３−ｃ〕シンノリン−３−オンの誘導体、それらの塩類、これらの製造法、薬剤としての使用、これらを含有する組成物及び中間体生成物
DE3626221A1 (de) 1986-08-02 1988-02-04 Agfa Gevaert Ag Farbfotografisches aufzeichnungsmaterial zur herstellung farbiger aufsichtsbilder
US4906644A (en) 1986-11-20 1990-03-06 Mitsubishi Kasei Corporation Lipid-peroxide formation inhibiting composition and novel compounds useful therefor
DE3903993A1 (de) * 1989-02-10 1990-08-16 Basf Ag Diarylsubstituierte heterocyclische verbindungen, ihre herstellung und arzneimittel daraus
AR006520A1 (es) 1996-03-20 1999-09-08 Astra Pharma Prod Derivados de 2-arilpirazolisoquinolina y cinolinona y procedimiento para su preparacion.
GB9713707D0 (en) 1997-06-27 1997-09-03 Merck Sharp & Dohme Therapeutic agents
SE0102404D0 (sv) * 2001-07-04 2001-07-04 Active Biotech Ab Novel immunomodulating compounds
WO2003004485A1 (en) 2001-07-05 2003-01-16 Takeda Chemical Industries, Ltd. Benzo-fused 5-membered hetrocycle compounds, process for preparation of the same, and use thereof
US7566711B2 (en) * 2001-10-12 2009-07-28 Choongwae Pharma Corporation Reverse-turn mimetics and method relating thereto
EP1562944B1 (en) 2002-11-22 2007-02-14 Active Biotech AB Pyrazoloquinolines with immunomodulating activity
ATE425164T1 (de) 2002-12-16 2009-03-15 Active Biotech Ab Tetrazyklische immunmodulierende verbindungen
EP2284172A1 (en) * 2003-03-14 2011-02-16 MediGene Ltd. Immunomodulating heterocyclic compounds
GB0325644D0 (en) * 2003-11-04 2003-12-10 Avidex Ltd Immuno ihibitory pyrazolone compounds
GB0411770D0 (en) * 2004-05-26 2004-06-30 Avidex Ltd Immuno inhibitory heterocyclic compouds
DK1776366T3 (da) * 2004-08-09 2009-02-16 Medigene Ltd Immunomodulerende oxopyrazolocinnoliner som CD80-inhibitorer
US20060221590A1 (en) * 2005-03-31 2006-10-05 Edoardo Campini System and method for Advanced Mezzanine Card connection
GB0603522D0 (en) * 2006-02-22 2006-04-05 Avidex Ltd Kinase inhibition

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4591589A (en) * 1985-01-16 1986-05-27 Roussel Uclaf 2-aryl pyrazolo[4,3-c]cinnolin-3-ones

Also Published As

Publication number Publication date
WO2004081011A1 (en) 2004-09-23
BRPI0408365B1 (pt) 2018-11-21
PT1603917E (pt) 2011-02-04
KR20050121681A (ko) 2005-12-27
PL1603917T3 (pl) 2011-12-30
DK1603917T3 (da) 2011-02-28
PL383655A1 (pl) 2008-04-14
EP2284172A1 (en) 2011-02-16
EA200501370A1 (ru) 2006-08-25
US7276505B2 (en) 2007-10-02
NZ541973A (en) 2009-06-26
ECSP056104A (es) 2006-03-01
DE602004030225D1 (de) 2011-01-05
CA2519063A1 (en) 2004-09-23
SI1603917T1 (sl) 2011-04-29
EP1603917A1 (en) 2005-12-14
CA2519063C (en) 2011-05-10
JP4892338B2 (ja) 2012-03-07
NO20054710L (no) 2005-12-13
BRPI0408365A (pt) 2006-03-21
JP2006520372A (ja) 2006-09-07
IL170389A (en) 2013-08-29
AU2004220310A1 (en) 2004-09-23
MXPA05009667A (es) 2006-01-27
KR101133959B1 (ko) 2012-04-09
US8309552B2 (en) 2012-11-13
ATE489388T1 (de) 2010-12-15
EA014080B1 (ru) 2010-08-30
EP1603917B1 (en) 2010-11-24
NO20054710D0 (no) 2005-10-13
US20080045527A1 (en) 2008-02-21
EA200702435A1 (ru) 2008-06-30
BRPI0408365B8 (pt) 2021-05-25
US20090312334A1 (en) 2009-12-17
HK1090921A1 (en) 2007-01-05
US7598247B2 (en) 2009-10-06
US20070021428A1 (en) 2007-01-25
NO332136B1 (no) 2012-07-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA009680B1 (ru) Иммуномодулирующие гетероциклические соединения
RU2710928C2 (ru) Антагонисты рецептора flt3
SK18182002A3 (sk) Deriváty glutaramidu substituované cyklopentylskupinou ako inhibítory neutrálnej endopeptidázy
US8163757B2 (en) Immuno inhibitory pyrazolone compounds
IE61924B1 (en) Imidazoline derivative and preparation thereof
WO2017143874A1 (zh) 一种取代的恶二唑类化合物及包含该化合物的组合物及其用途
WO2019031472A1 (ja) 新規アントラニル酸系化合物、並びにそれを用いたＰｉｎ１阻害剤、炎症性疾患の治療剤及び癌の治療剤
RU2279433C2 (ru) Новое соединение для лечения импотенции
AU692024B2 (en) Furan derivatives for inhibiting pneumocystis carinii pneumonia, giardia lamblia and cryptosporidium parvum
EP3402780A1 (en) Mast-cell modulators and uses thereof
JP2009510150A (ja) Ｌｆａ−１メディエーターとしてのテトラヒドロ−ピロリジノン化合物
JP4852537B2 (ja) 免疫抑制へテロ環化合物
US6528514B1 (en) IgE antibody production inhibitors and autoimmune diseases inhibitors
JP4763697B2 (ja) Ｃｄ８０抑制剤としての免疫調整性オキソピラゾロシンノリン類
WO2011058943A1 (ja) Ｍｃｈ ｒ１アンタゴニスト活性を有する化合物とｎｐｙ ｙ５受容体アンタゴニスト活性を有する化合物を組み合わせてなる医薬組成物
CA2289517A1 (en) Novel sulfonamide derivatives
JP2016540756A (ja) 筋障害及び疼痛の治療並びに痙直（ｓｐａｓｔｉｃｉｔｙ）及び振戦の制御に有用なベンズアミド誘導体
US6303608B1 (en) 2-{4-[4-(4,5-dichloro-2-methylimidazol-1-yl)butyl]-1-piperazinyl}-5-fluoropyrimidine, its preparation and its therapeutic use
JP2002201172A (ja) ベンズアミド誘導体及びその用途
JP2023551319A (ja) ５－ｈｔ７セロトニン受容体活性阻害用ビフェニルピロリジン及びビフェニルジヒドロイミダゾール誘導体並びにこれを有効成分として含む薬学組成物
TW202417429A (zh) 用於抑制yap-tead交互作用的新穎雜雙環化合物及包含其之藥學組成物
AU2004220310B2 (en) Immunomodulating heterocyclic compounds
JPH0717506B2 (ja) 免疫グロブリンｅに起因する疾患治療剤
JPS6126790B2 (ru)
JP2002155083A (ja) ヒドラジド誘導体

Legal Events

Date Code Title Description
TC4A Change in name of a patent proprietor in a eurasian patent

Designated state(s): AM AZ BY KG MD TJ TM

MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): BY RU